Применение соединения для производства лекарственного средства для лечения бактериальных инфекций при условии, что бактериальная инфекция не является микобактериальной инфекцией, где указанное соединение является соединением формулы (Ia) или (Ib), его фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной солью или аддитивной солью с основанием, его четвертичным амином, его стереохимически изомерной формой, его таутомерной формой или его N-оксидом, R ¹ является водородом, галогеном, алкилом или пиридинилом; р является целым числом, равным 1, 2 или 3; R ² является гидрокси; алкилокси, необязательно замещенным амино или моно- или ди(алкил)амино или радикалом структура которого представлена в описании; моно- или ди(алкил)амино, где алкил необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из алкилокси или фенила, или морфолинила, или 2-оксопирролидинила; фенил; Het, или радикалом, структура которого представлена в описании; R ³ является Ar или Het; q равно целому числу, равному нулю, 1, 2, 3 или 4; X является прямой связью или CH ₂ ; R ⁴ и R ⁵ , каждый независимо, является алкилом; R ⁶ является водородом или радикалом, структура которого указана в описании; и R ¹¹ является водородом или алкилом; R ⁷ является водородом или фенилом; R ⁸ является водородом; R ⁹ является оксо; R ¹⁰ является алкилом, гидроксилом, аминокарбонилом, Ar, Het, алкилом, замещенным одним или двумя Het, алкилом, замещенным одной или двумя фенильными группами, Het-C(=O)-; алкил является прямым или разветвленным насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; или является циклическим насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 3 до 6 атомов углерода; или является циклическим насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 3 до 6 атомов углерода, присоединенным к прямому или разветвленному насыщенному углеводородному радикалу, имеющему от 1 до 6 атомов углерода; где каждый атом углерода может быть необязательно замещен гидрокси, алкилокси или оксо; Ar является гомоциклом, выбранным из группы, включающей фенил или нафтил, каждый из которых необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, где каждый заместитель независимо выбирают из группы, включающей галоген или алкилкарбонил; Het является моноциклическим гетероциклом, выбранным из группы, включающей имидазолил, фуранил, тиенил, триазолил, пиридинил; или бициклическим гетероциклом, выбранным из группы, включающей 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, индазолил, бензофуранил или бензо[1,3]диоксолил; галоген является заместителем, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, бром и йод, и при условии, что если R ⁷ является водородом, то указанный ниже радикал также может находиться в положении 4 хинолинового кольца.

[0001] Применение соединения для производства лекарственного средства для лечения бактериальных инфекций, где указанное соединение представляет собой соединение формулы (Ia) и (Ib)

[0002] Применение по п.1, где R1 является водородом, галогеном или пиридинилом.

[0003] Применение по п.2, где R1 является галогеном.

[0004] Применение по любому из предшествующих пунктов, где р равно 1.

[0005] Применение по любому из предшествующих пунктов, где R2 представляет собой алкилокси; Het; фенил; моно- или ди(алкил)амино, где алкил необязательно может быть замещен одним или двумя фенильными группами; радикалом формулы

[0006] Применение по п.5, где R2 является алкилокси.

[0007] Применение по любому из предшествующих пунктов, где R3 является нафтилом, фенилом или Het, где каждый нафтил или фенил необязательно замещен 1 или 2 заместителями.

[0008] Применение по п.7, где R3 является нафтилом, фенилом, 3,5-дигалогенфенилом, тиенилом, фуранилом или бензофуранилом.

[0009] Применение по любому из предшествующих пунктов, где q равно 1.

[0010] Применение по любому из предшествующих пунктов, где R6 является бензилом или фенилом.

[0011] Применение по любому из предшествующих пунктов, где R7 является водородом.

[0012] Применение по любому из предшествующих пунктов, где X является прямой связью.

[0013] Применение по любому из пп.1-12, где X является CH2.

[0014] Применение по любому из предшествующих пунктов, где соединением является соединение формулы (Ia).

[0015] Применение по любому из предшествующих пунктов, где алкил представляет собой С1-С6алкил.

[0016] Применение по любому из предшествующих пунктов, где бактериальной инфекцией является инфекция, вызванная грамположительной бактерией.

[0017] Соединение, выбранное из

[0018] Комбинация (a) соединения, выбранного из соединений, определенных в п.17, и (b) одного или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами.

[0019] Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество (a) соединения, выбранного из соединений, определенных в п.17, и (b) одного или более антибактериальных средств при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами.

[0020] Применение комбинации по п.18 или фармацевтической композиции по п.19 для лечения бактериальной инфекции.

[0021] Продукт, содержащий (a) соединение, выбранное из соединений, определенных в п.17, и (b) одно или более антибактериальных средств при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами, в виде объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения бактериальной инфекции.

[0022] Применение по любому из пп.1-16 и 20, где бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную стафилококками, энтерококками или стрептококками.

[0023] Применение по любому из пп.1-16 и 20, где бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную устойчивыми к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA), устойчивыми к метициллину коагуляза-отрицательными стафилококками (MRCNS), устойчивыми к пенициллину Streptococcus pneumoniae и мультирезистентными Enterococcus faecium.

[0024] Применение по любому из пп.1-16 и 20, где бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную Streptococcus pneumoniae и мультирезистентными Enterococcus faecium.

[0025] Применение по любому из пп.1-16 и 20, где бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную устойчивыми к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA).

Данное изобретение относится к применению производных хинолина для производства лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции.

Устойчивость к антибиотикам первого поколения стала первоочередной проблемой. Некоторые важные примеры включают устойчивые к пенициллину Streptococcus pneumoniae, устойчивые к ванкомицину энтерококки, устойчивые к метициллину Staphylococcus aureus, устойчивые ко многим препаратам сальмонеллы.

Последствия устойчивости к антибиотикам являются тяжелыми. Инфекции, вызываемые устойчивыми микробами, не поддаются лечению, что приводит к более длительному периоду заболевания и увеличивает риск смерти. Неудачные результаты лечения также приводят к более длительным периодам инфективности, что повышает количество инфицированных людей, бывающих в общественных местах и, тем самым, подвергающих население риску получения инфекции устойчивыми штаммами. Больницы являются критическим звеном проблемы устойчивости к антимикробным средствам во всем мире. Сочетание восприимчивых пациентов, интенсивного и пролонгированного применения антимикробных средств и перекрестная инфекция приводят к инфекции с высокоустойчивыми бактериальными патогенами.

Самолечение антимикробными средствами является еще одним важным фактором, приводящим к устойчивости. Антимикробные средства, принимающиеся при самолечении, могут быть ненужными, часто принимаются в неправильной дозе или могут не содержать адекватные количества активного вещества.

Соблюдение пациентом рекомендованного лечения также является большой проблемой. Пациенты забывают принимать лекарственные средства, прерывают лечение, когда начинают чувствовать себя лучше, или не могут принять полный курс, тем самым создавая идеальную среду для адаптации микробов, а не их гибели.

Из-за возникающей устойчивости к множественным антибиотикам врачи сталкиваются с инфекциями, для лечения которых эффективной терапии не существует. Заболеваемость, смертность и финансовые затраты на такие инфекции являются причиной возрастающих нагрузок на системы здравоохранения во всем мире.

Поэтому существует крайняя необходимость в новых соединениях для лечения бактериальных инфекций, особенно для лечения инфекций, вызываемых устойчивыми штаммами.

Замещенные хинолины уже описаны в US 5965572 (Соединенные Штаты Америки) для лечения устойчивых к антибиотикам инфекций и в WO 00/34265 для ингибирования роста бактериальных микроорганизмов. В WO 2004/011436, WO 2005/070924, WO 2005/070430 и WO 2005/075428 описаны замещенные производные хинолина, обладающие активностью против микобактерий, в частности против Mycobacterium tuberculosis. Одно конкретное соединение из данных замещенных производных хинолина описано в Science (1005), 307, 223-227. Ни в одной из этих публикаций не описано применение замещенных производных хинолина в соответствии с данным изобретением.

Сущность изобретения

Данное изобретение относится к применению соединения для производства лекарственного средства для лечения бактериальных инфекций, где указанное соединение представляет собой соединение формулы (Ia) и (Ib)

его фармацевтически приемлемую кислотно-аддитивную соль или аддитивную соль с основанием, его четвертичный амин, его стереохимически изомерную форму, его таутомерную форму или его N-оксид, где

R ¹ является водородом, галогеном, алкилом или пиридинилом;

p является целым числом, равным 1, 2 или 3;

R ² является гидрокси; алкилокси, необязательно замещенным амино или моно- или ди(алкил)амино или радикалом формулы

где Z является CH ₂ , и t является целым числом, равным 1 или 2, и пунктирная линия означает необязательную связь; моно- или ди(алкил)амино, где алкил необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из алкилокси или фенила, или морфолинила, или 2-оксопирролидинила; фенил; Het, или радикалом формулы

где Z является CH ₂ , CH-R ¹⁰ , O, N-R ¹⁰ ; t является целым числом, равным 1 или 2; и пунктирная линия является необязательной связью; R ³ является Ar или Het;

q равно целому числу, равному нулю, 1, 2, 3 или 4;

X является прямой связью или CH ₂ ;

R ⁴ и R ⁵ каждый независимо является алкилом;

R ⁶ является водородом или радикалом формулы

где s является целым числом, равным нулю или 1;

r является целым числом, равным 1, 2, 3, 4 или 5; и R ¹¹ является водородом или алкилом;

R ⁷ является водородом или фенилом;

R ⁸ является водородом;

R ⁹ является оксо;

R ¹⁰ является алкилом, гидроксилом, аминокарбонилом, Ar, Het, алкилом, замещенным одним или двумя Het, алкилом, замещенным одной или двумя фенильными группами, Het-C(=O)-;

алкил является прямым или разветвленным насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; или является циклическим насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 3 до 6 атомов углерода; или является циклическим насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 3 до 6 атомов углерода, присоединенным к прямому или разветвленному насыщенному углеводородному радикалу, имеющему от 1 до 6 атомов углерода; где каждый атом углерода может быть необязательно замещен гидрокси, алкилокси или оксо;

Ar является гомоциклом, выбранным из группы, включающей фенил или нафтил, каждый из которых необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, где каждый заместитель независимо выбирают из группы, включающей галоген или алкилкарбонил;

Het является моноциклическим гетероциклом, выбранным из группы, включающей имидазолил, фуранил, тиенил, триазолил, пиридинил; или бициклическим гетероциклом, выбранным из группы, включающей 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, индазолил, бензофуранил или бензо[1,3]диоксолил;

галоген является заместителем, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, бром и йод, и при условии, что если R ⁷ является водородом, то радикал

также может находиться в положении 4 хинолинового кольца; и при условии, что бактериальная инфекция не является микобактериальной инфекцией.

Настоящее изобретение также относится к соединению, выбранному из

его фармацевтически приемлемой кислотно-адитивной соли или аддитивной соли с основанием, его четвертичному амину, его стереохимически изомерной форме или его N-оксиду.

Настоящее изобретение также относится к комбинации (а) соединения, выбранного из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерных форм или N-оксида этих соединений, и (b) одного или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами.

Ещё одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество (a) соединения, выбранного из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерных форм или N-оксида этих соединений, и (b) одного или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами.

Настоящее изобретение относится к применению вышеуказанных комбинации или фармацевтической композиции для лечения бактериальной инфекции.

Кроме того, настоящее изобретение относится к продукту, содержащему (a) соединение, выбранному из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерных форм или N-оксида этих соединений, и (b) одно или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами, в виде объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения бактериальной инфекции.

Подробное описание изобретения

В рамках данного описания линии, проведенные от заместителей в кольцевые системы, означают, что связь может быть присоединена к любому подходящему атому кольца.

Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли включают терапевтические активные нетоксичные кислотно-аддитивные соли, которые могут образовывать соединения формулы (Ia) или (Ib). Такие кислотно-аддитивные соли могут быть получены обработкой основания соединений формулы (Ia) или формулы (Ib) подходящими кислотами, например неорганическими кислотами, например галогенисто-водородной кислотой, в частности хлористо-водородной кислотой, бромисто-водородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой и фосфорной кислотой; органическими кислотами, например уксусной кислотой, гидроксиуксусной кислотой, пропановой кислотой, молочной кислотой, пировиноградной кислотой, щавелевой кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, малеиновой кислотой, фумаровой кислотой, яблочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, метансульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой, цикламиновой кислотой, салициловой кислотой, п-аминосалициловой кислотой и памовой кислотой.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), содержащие кислотные протоны, также могут быть превращены в их терапевтически активные нетоксичные аддитивные соли с основанием путем обработки подходящими органическими и неорганическими основаниями. Подходящие соли с основанием включают, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, в частности соли лития, натрия, калия, магния и кальция, соли с органическими основаниями, например соли бензатина, N-метил-D-глюкамина, гибрамина, и соли с аминокислотами, например аргинином и лизином.

С другой стороны, указанные аддитивно-кислотные соли или аддитивные соли с основанием могут быть превращены в свободные формы обработкой подходящими основанием или кислотой.

Термин аддитивная соль, применяемый в рамках данной заявки, также включает сольваты, которые могут образовывать соединения по любой из формул (Ia) или (Ib), а также их соли. Такие сольваты включают, например, гидраты и алкоголяты.

Термин "четвертичный амин" в данном описании определяет четвертичные аммониевые соли, которые могут образовывать соединения формулы (I) при взаимодействии между основным азотом соединения формулы (I) и подходящим кватернизирующим агентом, таким как, например, необязательно замещенный алкилгалогенид, арилалкилгалогенид, алкилкарбонилгалогенид, Ar-карбонилгалогенид, Het-алкилгалогенид или Het-карбонилгалогенид, например метилйодид или бензилйодид. Предпочтительн, Het является моноциклическим гетероциклом, выбранным из фуранила или тиенила; или бициклическим гетероциклом, выбранным из бензофуранила или бензотиенила; где каждый моноциклический и бициклической гетероцикл может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, где каждый заместитель независимо выбирают из группы, включающей галоген, алкил и Ar. Предпочтительно кватернизирующим агентом является алкилгалогенид. Также могут применяться другие реагенты с хорошей уходящей группой, такие как алкилтрифторметансульфонаты, алкилметансульфонаты и алкил-п-толуолсульфонаты. Четвертичный амин имеет положительно заряженный азот. Фармацевтически приемлемые протвоионы включают хлор, бром, йод, трифторацетат, ацетат, трифлат, сульфат, сульфонат. Предпочтительно противоионом является йод. Выбранный противоион может быть введен с помощью ионообменных смол.

Соединения любой из формул (Ia) или (Ib) и некоторые из промежуточных соединений несомненно имеют по крайней мере один стереогенный центр в структуре, который может давать по крайней мере 2 стереохимически различные структуры.

Термин "стереохимически изомерные формы" в данном описании определяет все возможные изомерные формы, которые могут иметь соединения формулы (Ia) или (Ib). Если не указано иначе, химическое обозначение соединений означает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, где указанные смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры. Более конкретно, стереогенные центры могут иметь R- или S-конфигурацию; заместители на двухвалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут иметь либо цис-, либо транс-конфигурацию. Стереохимически изомерные формы соединений формулы (Ia) или (Ib) очевидно включены в объем данного изобретения.

На основании соглашений номенклатуры CAS, если два стереогенных центра известной абсолютной конфигурации присутствуют в молекуле, R или S обозначение присваивается (на основе правила последовательности Канна-Ингольда-Прелога) хиральному центру с наименьшим номером, ссылочному центру. Конфигурация второго стереогенного центра обозначена с применением условных обозначений [R*,R*] или [R*,S*], где R* всегда указан как ссылочный центр и [R*,R*] означает центры с одинаковой хиральностью, и [R*,S*] означает центры с неодинаковой хиральностью. Например, если хиральный центр с наименьшим номером в молекуле имеет S конфигурацию и второй центр является R, стереоидентификатор будет обозначен как S-[R*,S*]. Если применяется " α" или " β", положение заместителя высшего приоритета на асимметричном атоме углерода в кольцевой системе, имеющей наименьшей номер кольца, всегда находится в положении " α" средней плоскости, определенной кольцевой системой. Положение заместителя высшего приоритета на другом асимметричном атоме углерода в кольцевой системе, по отношению к положению заместителя высшего приоритета на ссылочном атоме, обозначено " α", если он находится на той же стороне средней плоскости, определенной в системе колец, или " β", если он находится на другой стороне средней плоскости, определенной в системе колец.

Если указана определенная стереоизомерная форма, это означает, что указанная форма практически не содержит, т.е. имеет менее чем 50%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 10%, даже более предпочтительно менее чем 5%, еще более предпочтительно менее чем 2% и наиболее предпочтительно менее чем 1% другого изомера(ов). Таким образом, если соединение формулы (Ia) или (Ib), например, обозначено как (S), это означает, что соединение практически не содержит (R) изомера.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) могут быть синтезированы в виде рацемических смесей энантиомеров, которые могут быть разделены друг с другом по известным в данной области техники методикам разделения. Рацемические соединения формулы (Ia) и (Ib) могут быть превращены в соответствующие диастеоермерные соли взаимодействием с подходящей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные соли затем разделяют, например, селективной или фракционной кристаллизацией, и энантиомеры из них высвобождают с применением щелочи. Альтернативный метод разделения энантиомерных форм соединений формулы (Ia) и (Ib) включает жидкостную хроматографию с применением хиральной постоянной фазы. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также получают из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных материалов, при условии, что реакция проходит стереоспецифически. Предпочтительно, если желателен определенный стереоизомер, указанное соединение будет синтезировано стереоспецифическими способами получения. В этих способах предпочтительно применяют энантиомерно чистые исходные материалы.

Таутомерные формы соединений формулы (Ia) или (Ib) включают такие соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых, например, енольная группа превращена в кетогруппу (кето-енольная таутомерия).

N-оксиды соединений формулы (Ia) или (Ib) включают такие соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых один или несколько атомов азота окислены до так называемого N-оксида, особенно такие N-оксиды, в которых окислен атом азота аминового радикала.

Данное изобретение также включает производные соединения (обычно называемые "пролекарства") фармакологически активных соединений в соответствии с данным изобретением, которые разлагаются in vivo с получением соединений в соответствии с данным изобретением. Пролекарства обычно (но не всегда) оказывают меньшее действие на целевой рецептор по сравнению с соединениями, до которых они разлагаются. Пролекарства особенно полезны, если желаемое соединение имеет химические или физические свойства, которые делают его введение трудным или неэффективным. Например, желаемое соединение может быть только плохо растворимым, оно может плохо транспортироваться через эпителий слизистой оболочки, или оно может иметь нежелательно короткий период полураспада в плазме. Более подробное обсуждение пролекарств можно найти в V.J. et al. "Prodrugs Delivery Systems, 1985, pp. 112-176 и Drugs, 1985, 29, pp.455-473.

Пролекарствами фармакологически активных соединений в соответствии с данным изобретением обычно являются соединения формулы (Ia) или (Ib), их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли или аддитивные соли с основанием, их стереохимически изомерные формы, из таутомерные формы и их N-оксиды, имеющие кислотную группу, которую этерифицируют или амидируют. Такими этерифицированными кислотными группами являются группы формулы -COOR ^x , где R ^x является C _1-6 алкилом, фенилом, бензилом или одной из следующих групп:

Амидированные группы включают группы формулы -CONR ^y R ^z , где R ^y является H, C _1-6 алкилом, фенилом или бензилом, и R ^x является -OH, H, C _1-6 алкилом, фенилом или бензилом.

Соединения в соответствии с данным изобретением, имеющие аминогруппу, могут быть превращены с применением кетона или альдегида, такого как формальдегид, с получением основания Манниха. Это основание будет гидролизоваться с кинетикой первого порядка в водном растворе.

Везде, где он применяется, термин "соединения формулы (Ia) или (Ib)" также включает их N-оксиды, их соли, их четвертичные амины, их таутомерные формы или их стереохимически изомерные формы.

Особый интерес представляют те соединения формулы (Ia) или (Ib), которые являются стереохимически чистыми.

Представляющий интерес вариант данного изобретения относится к соединениям формулы (Ia) или (Ib), их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям или аддитивным солям с основаниями, их четвертичным аминам, их стереохимически изомерным формам, их таутомерным формам или их N-оксидам, где

R ¹ является водородом, галогеном, алкилом или пиридинилом;

p является целым числом, равным 1, 2 или 3;

R ² является гидрокси; алкилокси, необязательно замещенным амино или моно- или ди(алкил)амино или радикалом формулы

где Z является CH ₂ , и t является целым числом, равным 1 или 2, и пунктирная линия означает необязательную связь; моно- или ди(алкил)амино, где алкил необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбирают из алкилокси или фенила, или морфолинила, или 2-оксопирролидинила; фенил; Het, или радикалом формулы

где Z является СН ₂ , CH-R ¹⁰ , О, N-R ¹⁰ ; t является целым числом, равным 1 или 2; и пунктирная линия является необязательной связью;

R ³ является Ar или Het;

q равно целому числу, равному нулю, 1, 2, 3 или 4;

X является прямой связью или CH ₂ ;

R ⁴ и R ⁵ , каждый независимо, является алкилом;

R ⁶ является водородом или радикалом формулы

где s является целым числом, равным нулю или 1; r является целым числом, равным 1, 2, 3, 4 или 5; и R ¹¹ является водородом или алкилом;

R ⁷ является водородом или фенилом;

R ⁸ является водородом;

R ⁹ является оксо;

R ¹⁰ является алкилом, гидроксилом, аминокарбонилом, Ar, Het, алкилом, замещенным одним или двумя Het, алкилом, замещенным одной или двумя фенильными группами, Het-C(=O)-;

алкил является прямым или разветвленным насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 1 до 6 атомов углерода; или является циклическим насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 3 до 6 атомов углерода; или является циклическим насыщенным углеводородным радикалом, имеющим от 3 до 6 атомов углерода, присоединенным к прямому или разветвленному насыщенному углеводородному радикалу, имеющему от 1 до 6 атомов углерода; где каждый атом углерода может быть необязательно замещен гидрокси, алкилокси или оксо;

Ar является гомоциклом, выбранным из группы, включающей фенил или нафтил, каждый из которых необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, где каждый заместитель независимо выбирают из группы, включающей галоген или алкилкарбонил;

Het является моноциклическим гетероциклом, выбранным из группы, включающей имидазолил, фуранил, тиенил, триазолил, пиридинил; или бициклическим гетероциклом, выбранным из группы, включающей 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, индазолил, бензофуранил или бензо[1,3]диоксолил; галоген является заместителем, выбранным из группы, включающей фтор, хлор, бром и йод, и при условии, что если R ⁷ является водородом, то радикал

также может находиться в положении 4 хинолинового кольца.

Предпочтительно R ¹ является водородом, галогеном или пиридинилом, наиболее предпочтительно R ¹ является галогеном.

Предпочтительны соединения формулы (Ia) или (Ib), где р равно 1.

Предпочтительны также соединения формулы (Ia) или (Ib), где R ² представляет собой алкилокси; Het; фенил; моно- или ди (алкил)амино, где алкил необязательно может быть замещен одним или двумя фенильными группами; радикалом формулы

где Z является N-R ¹⁰ ; t является целым числом, равным 2; алкилокси, замещенным амино или моно- или ди(алкил)амино, или радикалом формулы

где Z является CH ₂ и t является целым числом, равным 2. Наиболее предпочтительно, когда R ² является алкилокси.

Предпочтительны соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ³ является нафтилом, фенилом или Het, где каждый нафтил или фенил необязательно замещен 1 или 2 заместителями. Наиболее предпочтительно R ³ является нафтилом, фенилом, 3,5-дигалогенфенилом, тиенилом, фуранилом или бензофуранилом.

Предпочтительны соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых q равно 1. Также предпочтительны соединения, в которых R ⁶ является бензилом или фенилом. Предпочтительны соединения, в которых R ⁷ является водородом. Предпочтительны соединения формулы (Ia) или (Ib), где X является прямой связью. Кроме того, предпочтительны соединения формулы (Ia) или (Ib), где X является CH ₂ .

Наиболее предпочтительным является соединение формулы (Ia).

Предпочтительны также соединения формулы (Ia) или (Ib), где алкил представляет собой C _1-6 алкил.

Настоящее изобретение относится к соединению, выбранному из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерной формы или N-оксида этих соединений.

В предпочтительном варианте предложенные соединения применяют для производства лекарственного средства для лечения бактериальных инфекций, где бактериальной инфекцией является инфекция, вызванная грамположительной бактерией. Предпочтительно бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную стафилококками, энтерококками или стрептококками. Предпочтительно также, если бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную устойчивыми к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA), устойчивыми к метициллину коагуляза-отрицательными стафилококками (MRCNS), устойчивыми к пенициллину Streptococcus pneumoniae и мультирезистентными Enterococcus faecium. Наиболее предпочтительно, если бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную устойчивыми к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA). Предпочтительно, если бактериальная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную Streptococcus pneumoniae и мультирезистентными Enterococcus faecium.

В общем, бактериальные патогены могут быть классифицированы либо как грамположительные, либо как грамотрицательные патогены. Соединения-антибиотики с активностью против обоих, грамположительных и грамотрицательных, патогенов обычно считаются антибиотиками, имеющими широкий спектр действия. Соединения в соответствии с данным изобретением считаются активными против грамположительных и/или грамотрицательных бактериальных патогенов. В частности, соединения в соответствии с данным изобретением активны против по меньшей мере одного типа грамположительных бактерий, предпочтительно против нескольких типов грамположительных бактерий, более предпочтительно против одного или нескольких видов грамположительных бактерий и/или одного или нескольких видов грамотрицательных бактерий. Также промежуточные соединения формулы (II), где W ₁ является галогеном, демонстрируют антибактериальную активность.

Соединения в соответствии с данным изобретением обладают бактерицидным или бактериостатическим действием.

Примеры грамположительных и грамотрицательных аэробных и анаэробных бактерий включают стафилококки, например S. aureus; энтерококки, например Е. faecalis; стрептококки, например S. pneumoniae, S. mutans, S. pyogens; бациллы, например Bacillus subtil is; листерии, например Listeria monocytogenes; гемофильные палочки, например Н. influenza; моракселлы, например М. catarrhalis; синегнойные палочки, например Pseudomonas aeruginosa; и эшерихии, например Е. coli. Грамположительные патогены, например стафилококки, энтерококки и стрептококки, являются особенно важными из-за развития устойчивых штаммов, которые трудно лечить и трудно ликвидировать, например, в больничной среде при их обнаружении. Примеры таких штаммов включают устойчивые к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA), устойчивые к метициллину коагуляза-отрицательные стафилококки (MRCNS), устойчивые к пенициллину Streptococcus pneumoniae и мультирезистентные Enterococcus faecium.

Соединения в соответствии с данным изобретением также обладают активностью против устойчивых бактериальных штаммов.

Соединения в соответствии с данным изобретением особенно активны против Staphylococcus aureus, включая устойчивые Staphylococcus aureus, такие как, например, устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA) и Streptococcus pneumoniae.

В частности, соединения в соответствии с данным изобретением оказывают действие на те бактерии, жизнеспособность которых зависит от правильного функционирования F1F0 АТФ синтазы. Не привязываясь к какой-либо теории, сообщают, что активность соединений в соответствии с данным изобретением заключается в ингибировании F1F0 АТФ синтазы, в частности ингибировании F0 комплекса F1F0 АТФ синтазы, более конкретно ингибировании субъединицы F0 комплекса F1F0 АТФ синтазы, что приводит к гибели бактерии через элиминацию клеточных уровней АТФ бактерии.

Где бы выше или ниже в данном описании ни было сказано, что соединения могут лечить бактериальную инфекцию, это означает, что соединения могут лечить инфекцию, вызванную одним или несколькими бактериальными штаммами.

Где бы выше или ниже в данном описании ни было сказано, что бактериальная инфекция не является микобактериальной инфекцией, это означает, что бактериальная инфекция отличается от инфекции, вызванной одним или несколькими штаммами микобактерий.

Точная дозировка и частота введения соединений в соответствии с данным изобретением зависит от конкретного применяемого соединения формулы (Ia) или (Ib), конкретного лечимого состояния, тяжести лечимого состояния, возраста, веса, пола, режима питания, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также от других лекарственных средств, которые может принимать пациент, как хорошо известно специалисту в данной области техники. Далее очевидно, что эффективная суточная доза может быть снижена или увеличена в зависимости от реакции лечимого пациента и/или в зависимости от решения терапевта, прописывающего соединения в соответствии с данным изобретением.

Соединение в соответствии с данным изобретением может вводиться в фармацевтически приемлемой форме, необязательно в фармацевтически приемлемом носителе. Соединения и композиции, содержащие соединения, могут вводиться такими способами, как местный, локальный или системный. Системное введение включает любой способ введения соединения в ткани тела, например подоболочечно, эпидурально, внутримышечно, чрескожно, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, подъязычно, ректально и перорально. Конкретная доза вводимого антибактериального средства, а также длительность лечения могут быть, при необходимости, скорректированы.

Бактериальные инфекции, которые могут быть вылечены соединениями в соответствии с данным изобретением, включают, например, инфекции центральной нервной системы, инфекции наружного уха, инфекции среднего уха, такие как острый отит среднего уха, инфекции краниальных полостей, глазные инфекции, инфекции ротовой полости, такие как инфекции зубов, десен и слизистой, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции нижних дыхательных путей, мочеполовые инфекции, желудочно-кишечные инфекции, гинекологические инфекции, общая гнойная инфекция, инфекции костей и суставов, инфекции кожи и кожных структур, бактериальный эндокардит, ожоги, антибактериальная профилактика при хирургических вмешательствах и антибактериальная профилактика у пациентов с ослабленным иммунитетом, таких как пациенты, получающие противораковую химиотерапию, или пациенты с трансплантированными органами.

Учитывая факт, что соединения формулы (Ia) или (Ib) являются активными против бактериальных инфекций, соединения в соответствии с данным изобретением могут быть объединены с другими антибактериальными средствами для эффективной борьбы с бактериальными инфекциями.

Поэтому данное изобретение относится к комбинации (a) соединения, выбранного из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерных форм или N-оксида этих соединений, и (b) одного или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами.

Кроме того, предложенное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество (a) соединения, выбранного из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерных форм или N-оксида этих соединений, и (b) одного или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами.

В ещё одном варианте предложенное изобретение относится к продукту, содержащему (a) соединение, выбранное из соединений

фармацевтически приемлемых кислотно-адитивных солей или аддитивных солей с основанием, четвертичного амина, стереохимически изомерных форм или N-оксида этих соединений, и (b) одно или более антибактериальных средств, при условии, что одно или более антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами, в виде объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения бактериальной инфекции.

Данное изобретение также относится к применению комбинации или фармацевтической композиции, таких как определены выше, для лечения бактериальной инфекции.

Фармацевтическая композиция в соответствии с данным изобретением может иметь различные фармацевтические формы для введения. В качестве подходящих композиций могут быть указаны все композиции, применяемые обычно для системного введения лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций в соответствии с данным изобретением эффективное количество конкретных соединений, необязательно в виде аддитивной соли, в качестве активного ингредиента, объединяют в однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, где носитель может принимать множество форм в зависимости от лекарственной формы, желаемой для введения. Эти фармацевтические композиции желательны в стандартной лекарственной форме, подходящей, в частности, для введения перорально или парентеральной инъекцией. Например, при приготовлении композиции в пероральной лекарственной форме может применяться любая обычная фармацевтическая среда, такая как, например, вода, гликоли, масла, спирты и подобные, для жидких пероральных композиций, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, разбавители, смазывающие агенты, связующие агенты, расщепляющие агенты и тому подобное, для порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за простоты введения таблетки и капсулы являются наиболее предпочтительной пероральной стандартной лекарственной формой, тогда применяются обычные твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель обычно включает стерильную воду, по крайней мере, большей частью, хотя могут быть добавлены другие ингредиенты, например добавки для улучшения растворимости. Могут быть приготовлены, например, растворы для инъекций, где носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также могут быть приготовлены суспензии для инъекций, в этом случае применяют подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и т.п. Также включены твердые композиции, которые превращают, непосредственно перед применением, в жидкие композиции.

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция предпочтительно содержит от 0,05 до 99 мас.%, более предпочтительно от 0,1 до 70 мас.% активных ингредиентов и от 1 до 99,95 мас.%, более предпочтительно от 30 до 99,9 мас.% фармацевтически приемлемого носителя, все проценты даны по отношению к общей массе композиции.

Массовое соотношение соединения формулы (Ia) или (Ib) и (b) другого антибактериального средства (средств), если они даны в сочетании, может быть определено специалистом в данной области. Указанное соотношение и точная дозировка и частота введения зависят от применяемых конкретного соединения формулы (Ia) или (Ib) и другого антибактериального средства (средств), конкретного лечимого состояния, тяжести лечимого состояния, возраста, веса, пола, режима питания, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также от других лекарственных средств, которые может принимать пациент, как хорошо известно специалисту в данной области. Далее очевидно, что эффективная суточная доза может быть снижена или увеличена в зависимости от реакции лечимого пациента и/или в зависимости от решения терапевта, прописывающего соединения в соответствии с данным изобретением.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) и одно или несколько антибактериальных средств могут быть объединены в одной композиции, или они могут быть приготовлены в различных композициях таким образом, чтобы их можно было вводить одновременно, раздельно или последовательно. Таким образом, данное изобретение также относится к продукту, содержащему (a) соединение формулы (Ia) или (Ib) и (b) одно или несколько других антибактериальных средств, при условии, что данные один или несколько антибактериальных средств не являются антимикобактериальными средствами, в виде объединенной композиции для одновременного, раздельного или последовательного применения для лечения бактериальной инфекции.

Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать различные другие ингредиенты, известные в данной области техники, например смазывающий агент, стабилизатор, буферный агент, эмульгатор, агент, регулирующий вязкость, поверхностно-активное вещество, консервант, вкусовую добавку или краситель.

Особенно предпочтительно готовить указанные выше фармацевтические композиции в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозирования. Стандартные лекарственные формы в данном описании включают физически отдельные единицы, подходящие для однородного дозирования, где каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примеры стандартных лекарственных форм включают таблетки (включая таблетки с насечкой или оболочкой), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, вафли, суппозитории, растворы или суспензии для инъекций и подобные, и их разделенные множества. Суточная доза соединения в соответствии с данным изобретением, конечно, варьируется в зависимости от применяемого соединения, способа введения, желаемого лечения и установленного бактериального заболевания.

Другие антибактериальные средства, которые могут быть объединены с соединениями формулы (I), являются антибактериальными средствами, известными в данной области техники. Другие антибактериальные средства включают антибиотики группы β-лактама, такие как природные пенициллины, полусинтетические пенициллины, природные цефалоспорины, полусинтетические цефалоспорины, цефамицины, 1-оксацефемы, клавулановые кислоты, пенемы, карбапенемы, нокардицины, монобактамы; тетрациклины, ангидротетрациклины, антрациклины; аминогликозиды; нуклеозиды, такие как N-нуклеозиды, C-нуклеозиды, карбоциклические нуклеозиды, бластицидин S; макролиды, такие как макролиды с 12-членным кольцом, макролиды с 14-членным кольцом, макролиды с 16-членным кольцом; ансамицины; пептиды, такие как блеомицины, грамицидины, полимиксины, бацитрацины, пептидные антибиотики с большим кольцом, содержащие лактоновые связи, актиномицины, амфомицин, капреомицин, дистамицин, эндурацидины, микамицин, неокарциностатин, стендомицин, виомицин, виргиниямицин; циклогексимид; циклосерин; вариотин; саркомицин A; новобиоцин; гризеофульвин; хлорамфеникол; митомицины; фумагиллин; монензины; пирролнитрин; фосфомицин; фусидовая кислота; D-(п-гидроксифенил) глицин; D-фенилглицин; энедиины.

Конкретные антибиотики, которые могут быть объединены с соединениями формулы (Ia) или (Ib) в соответствии с данным изобретением, включают, например, бензилпенициллин (калий, прокаин, бензатин), феноксиметилпенициллин (калий), фенетициллин калий, пропициллин, карбенициллин (динатрий, фенилнатрий, инданилнатрий), сулбенициллин, тикарциллин динатрий, метициллин натрий, оксациллин натрий, клоксациллин натрий, диклоксациллин, флуклоксациллин, ампициллин, мезлоциллин, пиперациллин натрий, амоксициллин, циклациллин, гектациллин, сулбактам натрий, талампициллин гидрохлорид, бакампициллин гидрохлорид, пивмециллинам, цефалексин, цефаклор, цефалоглицин, цефадроксил, цефрадин, цефроксадин, цефапирин натрий, цефалотин натрий, цефацетрил натрий, цефсулодин натрий, цефалоридин, цефатризин, цефоперазон натрий, цефамандол, вефотиам гидрохлорид, цефазолин натрий, цефтизоксим натрий, цефотаксим натрий, цефменоксим гидрохлорид, цефуроксим, цефтриаксон натрий, цефтазидим, цефокситин, цефметазол, цефотетан, латамоксеф, клавулановая кислота, имипенем, азтреонам, тетрациклин, хлортетрациклин гидрохлорид, деметилхлортетрациклин, окситетрациклин, метациклин, доксициклин, ролитетрациклин, миноциклин, даунорубицин гидрохлорид, доксорубицин, акларубицин, канамицин сульфат, беканамицин, тобрамицин, гентамицин сульфат, дибекацин, амикацин, микрономицин, рибостамицин, неомицин сульфат, паромомицин сульфат, стрептомицин сульфат, дигидрострептомицин, дестомицин A, гидромицин B, апрамицин, сисомицин, нетилмицин сульфат, спектиномицин гидрохлорид, астромицин сульфат, валидамицин, казугамицин, полиоксин, бластицидин S, эритромицин, эритромицин эстолат, олеандомицин фосфат, трацетилолеандомицин, китазамицин, йозамицин, спирамицин, тилозин, ивермектин, мидекамицин, блеомицин сульфат, пепломицин сульфат, грамицидин S, полимиксин B, бацитрацин, колистин сульфат, колистинметансульфонат натрий, энрамицин, микамицин, виргиниямицин, капреомицин сульфат, виомицин, энвиомицин, ванкомицин, актиномицин D, неокарциностатин, бестатин, пепстатин, монензин, лазалоцид, салиномицин, амфотерицин B, нистатин, натамицин, трихомицин, митрамицин, линкомицин, клиндамицин, клиндамицин пальмитат гидрохлорид, флавофосфолипол, циклосерин, пецилоцин, гризеофульвин, хлорамфеникол, хлорамфеникол пальмитат, митомицин C, пирролнитрин, фосфомицин, фусидовая кислота, бикозамицин, тиамулин, сикканин.

Общий метод получения

Соединения в соответствии с данным изобретением обычно могут быть получены с применением последовательности стадий, каждая из которых известна специалисту в данной области техники.

Соединения формулы (Ia), где R ² является алкокси; радикалом формулы

где t и Z такие, как определены выше; алкилокси, замещенным радикалом формулы

где t и Z такие, как определены выше; моно или ди(алкил)амино, где алкил необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, независимо выбранными из алкилокси или Ar, или Het, или морфолинила, или 2-оксопирролидинила, где указанные R ² замещены R ^2a , и указанные соединения представлены формулой (Ia-1), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (II), где W ₁ является подходящей уходящей группой, такой как, например, галоген, например хлором и подобными, с H-R ^2a или с подходящей солью R ^2a -H, необязательно в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол и подобные, ацетонитрил, и необязательно в присутствии подходящего основания, такого как, например, КОН, двукалиевый карбонат.

Соединения формулы (Ia), где R ² является Het или алкилом, где указанный R ² представлен формулой R ^2b , и указанные соединения представлены формулой (Ia-2), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с R ^2b -B(OH) ₂ в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, Pd(PPh ₃ ) ₄ , подходящего растворителя, такого как, например, диметиловый эфир или спирт, например метанол и подобные, и подходящего основания, такого как, например, двунатриевый карбонат или дикалиевый карбонат.

Соединения формулы (Ia), где R ² является Het, например пиридилом, указанный R ² представлен Het и указанные промежуточные соединения представлены формулой (Ia-3), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, Pd(PPh ₃ ) ₄ , подходящего растворителя, такого как, например, диметиловый эфир или спирт, например метанол и подобные, и подходящего основания, такого как, например, двунатриевый карбонат или дикалиевый карбонат.

Соединения формулы (Ia), где X является прямой связью, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (Ia-4), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (III), где W ₂ является подходящей уходящей группой, такой как, например, галоген, например бромом, хлором и подобными, с промежуточным соединением формулы (IV) в присутствии подходящего агента сочетания, такого как, например, н-бутиллитий, втор-BuLi, и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран, и необязательно в присутствии подходящего основания, такого как, например, 2,2,6,6-тетраметилпиперидин, NH(СН ₂ СН ₂ СН ₃ ) ₂ , N,N-диизопропиламин или триметилэтилендиамин.

Соединения формулы (Ib), где R ⁹ является оксо, могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с подходящей кислотой, такой как, например, HCl, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.

Соединение формулы (Ia) или (Ib), где X является CH ₂ , где указанные соединения представлены формулой (Ia-5) или (Ib-1), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XX) или (XXI) с промежуточным соединением формулы (IV) в присутствии подходящего агента сочетания, такого как н-BuLi, втор-BuLi, и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран, и, необязательно, подходящего основания, такого как, например, 2,2,6,6-тетраметилпиперидин, NH(CH ₂ CH ₂ CH ₃ ) ₂ , N,N-диизопропиламин или триметилэтилендиамин.

В представленных выше реакциях полученные соединения (Ia) или (Ib) могут быть выделены и, при необходимости, очищены с применением методик, широко известных в данной области техники, таких как, например, экстрагирование, кристаллизация, дистилляция, растирание и хроматография. Если соединение формулы (Ia) или (Ib) кристаллизуется, оно может быть выделено фильтрацией. Иначе, кристаллизация может быть вызвана добавлением подходящего растворителя, такого как, например, вода; ацетонитрил; спирт, такой как, например, метанол, этанол; и сочетания указанных растворителей. Альтернативно, реакционная смесь также может быть выпарена досуха с последующей очисткой остатка хроматографией (например, ВЭЖХ с обращенной фазой, флэш-хроматографией и подобными). Реакционная смесь также может быть очищена хроматографией без предварительного выпаривания растворителя. Соединение формулы (Ia) или (Ib) также может быть выделено выпариванием растворителя с последующей перекристаллизацией в подходящем растворителе, таком как, например, вода; ацетонитрил; спирт, такой как, например, метанол, и сочетания указанных растворителей.

Специалист в данной области техники поймет, какой метод может быть использован, какой растворитель является наиболее подходящим для применения, или наиболее подходящий способ выделения может быть найден экспериментальным путем.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) также могут быть получены превращением соединений формулы (Ia) или (Ib) друг в друга с применением известных в данной области техники методик реакций трансформации групп.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) могут быть превращены в соответствующие N-оксиды с применением известных в данной области техники методик превращения трехвалентного азота в его N-оксид. Указанная реакция N-окисления обычно может проводиться взаимодействием исходного материала формулы (Ia) или (Ib) с подходящей органический или неорганической перекисью. Подходящие неорганические перекиси включают, например, перекись водорода, перекиси щелочных металлов или щелочноземельных металлов, например перекись натрия, перекись калия; подходящие органические перекиси могут включать надкислоты, такие как, например, бензолкарбонадкислота или галогензамещенная бензолкарбонадкислота, например 3-хлорбензолкарбонадкислота, пероксоалкановые кислоты, например, пероксоуксусная кислота, алкилгидроперекиси, например трет-бутилгидроперекись.

Подходящими растворителями являются, например, вода, низшие спирты, например этанол и подобные, углеводороды, например толуол, кетоны, например 2-бутанон, галогенированные углеводороды, например дихлорметан, и смеси таких растворителей.

Соединения формулы (Ia), где R ¹ является галогеном, где такие соединения представлены формулой (Ia-6), могут быть превращены в соединение формулы (Ia), где R ¹ является Het, например пиридилом, где такие соединения представлены формулой (Ia-7), взаимодействием с

в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, Pd(PPh ₃ ) ₄ подходящего растворителя, такого как, например, диметиловый эфир или спирт, например метанол и подобные, и подходящего основания, такого как, например, карбонат динатрия или карбонат дикалия.

Соединения формулы (Ia-6) также могут быть превращены в соединение формулы (Ia), где R ¹ является метилом, где указанные соединения представлены формулой (Ia-8), взаимодействием с Sn(CH ₃ ) ₄ в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, Pd(PPh ₃ ) ₄ - подходящего растворителя, такого как, например, толуол.

Некоторые из соединений формулы (Ia) или (Ib) и некоторые из промежуточных соединений в соответствии с данным изобретением могут состоять из смеси стереохимически изомерных форм. Чистые стереохимически изомерные формы указанных соединений и указанных промежуточных соединений могут быть получены с применением известных в данной области техники методик. Например, диастереоизомеры могут быть разделены физическими методами, такими как селективная кристаллизация, или методами хроматографии, например противоточным распределением, жидкостной хроматографией и подобными методами. Энантиомеры могут быть получены из рацемических смесей сначала превращением указанных рацемических смесей с подходящими разделяющими агентами, такими как, например, хиральные кислоты, в смеси диастереомерных солей или соединений; затем физическим разделением указанных смесей диастереомерных солей или соединений с применением, например, селективной кристаллизации или методов хроматографии, например жидкостной хроматографии и подобных методов; и, наконец, превращением указанных разделенных диастереомерных солей или соединений в соответствующие энантиомеры. Чистые стереохимически изомерные формы также могут быть получены из чистых стереохимически изомерных форм подходящих промежуточных соединений и исходных материалов, при условии, что реакции проходят стереоспецифически.

Альтернативные методы разделения энантиомерных форм соединений формулы (Ia) или (Ib) и из промежуточных соединений включают жидкостную хроматографию, в частности жидкостную хроматографию с применением хиральной постоянной фазы.

Должно быть понятно, что в представленных выше и ниже способах получения продукты реакций могут быть выделены из реакционной среды и, при необходимости, далее очищены с применением методов, широко известных в данной области техники, таких как, например, экстрагирование, кристаллизация, дистилляция, растирание и хроматография.

Некоторые из промежуточных соединений и исходных материалов являются известными соединениями и могут быть коммерчески доступны или могут быть получены с применением известных в данной области техники методик или методик, описанных в WO 2004/011436 или WO 2005/070430, которые включены в данное описание в виде ссылок.

Промежуточные соединения формулы (II), в которых X является прямой связью, где такие промежуточные соединения представлены формулой (II-a), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (V), где W ₁ такой, как определен выше, с промежуточным соединением формулы (IV) в присутствии подходящего агента сочетания, такого как н-BuLi, втор-BuLi, и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран, и подходящего основания, такого как, например, 2,2,6,6-тетраметилпиперидин, NH(СН ₂ СН ₂ СН ₃ ) ₂ , N,N-диизопропиламин или триметилэтилендиамин.

Промежуточные соединения формулы (II), где X является СН ₂ , где такие промежуточные соединения представлены формулой (II-b), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (VI) с промежуточным соединением формулы (IV) в присутствии подходящего агента сочетания, такого как н-BuLi, втор-BuLi, и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран, и подходящего основания, такого как, например, 2,2,6,6-тетраметилпиперидин, NH (CH ₂ CH ₂ CH ₃ ) ₂ , N,N-диизопропиламин или триметилэтилендиамин.

Промежуточные соединения формулы (II), где R ¹ является водородом, где такие промежуточные соединения представлены формулой (II-c), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (V), в котором R ¹ является галогеном, где такие промежуточные соединения представлены формулой (V-a), с промежуточным соединением формулы (IV), в присутствии подходящего агента сочетания, такого как H-BuLi, втор-BuLi, и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.

Промежуточные соединения формулы (V) являются соединениями, которые либо коммерчески доступны, либо могут быть получены с применением обычных реакций, широко известных в данной области техники. Например, промежуточные соединения формулы (V), где R ⁷ является водородом, R ⁶ является радикалом формулы

где s является целым числом, равным 1, и W ₁ является хлором, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (V-b), могут быть получены согласно следующей схеме реакции (1):

Схема 1

где все переменные такие, как определены для формулы (Ia). Схема реакции (1) включает стадию (a), на которой подходящим образом замещенный анилин подвергают взаимодействию с подходящим ацилхлоридом, таким как 3-фенилпропионилхлорид, 3-фторбензолпропионилхлорид или п-хлорбензолпропионихлорид, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, и подходящего инертного к реакции растворителя, такого как метиленхлорид или этилендихлорид. Реакция может проводиться при температуре от комнатной до температуры кипения с обратным холодильником. На следующей стадии (b) продукт присоединения, полученный на стадии (a), подвергают взаимодействию с фосфорилхлоридом (POCl ₃ ) в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, N,N-диметилформамид (формилирование по Вилсмейеру-Хааку с последующей циклизацией). Реакция может проводиться при температуре от комнатной температуры до температуры кипения с обратным холодильником. Очевидно, что в представленных выше и ниже реакциях продукты реакций могут быть выделены из реакционной среды и, при необходимости, далее очищены с применением методов, широко известных в данной области техники, таких как экстрагирование, кристаллизация и хроматография. Далее очевидно, что продукты реакции, которые существуют в более чем одной энантиомерной форме, могут быть выделены из их смеси с применением известных методов, в частности препаративной хроматографией, такой как препаративная ВЭЖХ. Обычно соединения формулы (Ia) и (Ib) могут быть разделены на их изомерные формы.

Промежуточные соединения формулы (V-a), где W ₁ является хлором, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (V-a-1), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (VII) с POCl ₃ .

Промежуточные соединения формулы (VII) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (VIII) с 4-метилбензосульфонилхлоридом в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, метиленхлорид, и подходящего основания, такого как, например, карбонат дикалия.

Промежуточные соединения формулы (VIII) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (IX) с подходящим окисляющим агентом, таким как, например, 3-хлорбензолкарбонадкислота, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, метиленхлорид.

Промежуточные соединения формулы (IX), где R ⁶ является водородом и R ⁷ является фенилом, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (IX-a), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (X) с 3-хлор-1-фенил-1-пропаноном в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, хлористо-водородная кислота, гексагидрат хлорида железа, хлорид цинка, и подходящего растворителя, такого как, например, диэтиловый эфир и подходящий спирт, например этанол.

Промежуточные соединения формулы (IX), где R ⁷ является водородом и R ⁶ является радикалом формулы

где s является целым числом, равным 1, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (IX-b), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XI) в присутствии дифенилового эфира.

Промежуточные соединения формулы (XI) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XII) с промежуточным соединением формулы (XIII) в присутствии подходящего основания, такого как, например, гидроксид натрия.

Промежуточные соединения формулы (IV) являются соединениями, которые либо коммерчески доступны, либо могут быть получены с применением обычных реакций, широко известных в данной области техники. Например, промежуточные соединения формулы (IV), где q равно 1, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (IV-a), могут быть получены согласно следующей схеме реакции (2):

Схема 2

Схема реакции (2) включает стадию (a), на которой подходящий R ³ подвергают взаимодействию, с применением реакции Фриделя-Крафта, с подходящим ацилхлоридом, таким как 3-хлорпропионилхлорид или 4-хлорбутирилхлорид, в присутствии подходящей кислоты Льюиса, такой как AlCl ₃ , FeCl ₃ , SnCl ₄ , TiCl ₄ или ZnCl ₂ , и подходящего инертного к реакции растворителя, такого как метиленхлорид или этилендихлорид. Реакцию можно проводить при температуре от комнатной до температуры кипения с обратным холодильником. На следующей стадии (b) аминогруппу (например, -NR ⁴ R ⁵ ) вводят путем взаимодействия промежуточного соединения, полученного на стадии (a), с подходящим амином HNR ⁴ R ⁵ .

Промежуточные соединения формулы (IV-a) также могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XIV) с HC(=O)H и подходящей аминогруппой HNR ⁴ R ⁵ , такой как, например, NH(CH ₃ ) ₂ ∙HCl в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол, этанол и подобные, и подходящей кислоты, такой как, например, хлористо-водородная кислота.

Промежуточные соединения формулы (VI), где W ₁ является хлором, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (VI-a), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XV) с POCl ₃ в присутствии хлорида бензилтриэтиламмония (агент фазового переноса) и подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил.

Промежуточные соединения формулы (XV), где R ⁶ является радикалом формулы

где s является целым числом, равным 1, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (XV-a), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XVI) с NH ₂ -NH ₂ в присутствии подходящего основания, такого как, например, гидроксид калия, и подходящего растворителя, такого как, например, 1,2-этандиол.

Соединение

которое является промежуточным соединением формулы (XVI), может быть получено взаимодействием 1-(2-аминофенил)этанона и этилового эфира β-оксобензолпропановой кислоты.

Промежуточные соединения формулы (III), где R ² является C _1-6 алкилокси, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (III-a), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XVII) с подходящей солью C _1-6 -алкил-O в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, соответствующий C _1-6 алкил-OH.

Промежуточные соединения формулы (XVII), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (XVIII) с POCl ₃ .

Промежуточные соединения формулы (XVIII) где R ⁷ является водородом и R ⁶ является радикалом формулы

где s является целым числом, равным 0, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (XVIII-a), могут быть получены циклизаций промежуточного соединения формулы (XIX) в присутствии AlCl ₃ и подходящего растворителя, такого как, например, хлорбензол.

В промежуточных соединениях формулы (III) заместитель R ¹ может быть галогеном, и затем этот галогеновый заместитель может занимать место в уходящей группе W ₂ . Указанные промежуточные соединения формулы (III) представлены формулой

Промежуточные соединения формулы (XX), где R ² является C _1-6 алкилокси, где указанные промежуточные соединения представлены формулой (ХХ-a), могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (VI-а) с C _1-6 алкилокси Na, в присутствии подходящего спирта, такого как C _1-6 алкил-OH.

Представленные ниже примеры иллюстрируют данное изобретение, не ограничивая его.

Экспериментальная часть

Для некоторых соединений абсолютная стереохимическая конфигурация стереогенного атома(ов) углерода не определена экспериментально. В таких случаях стереохимически изомерная форма, которая выделена сначала, обозначена как "A" и вторая - как "B", без дальнейших ссылок на действительную стереохимическую конфигурацию. Однако указанные "A" и "B" изомерные формы могут быть однозначно охарактеризованы специалистом в данной области техники с применением известных в данной области методов, таких как, например, рентгеновская дифракция. Способ выделения подробно описан ниже.

Синтез соединений в соответствии с данным изобретением описан в WO 2005/070430, которая включена в данное описание в качестве ссылки.

В данном описании термин "Т.ПЛ." означает температуру плавления, "ДИПЭ" означает диизопропиловый эфир, "ДМФ" означает N,N-диметилформамид, "ТГФ" означает тетрагидрофуран, "EtOAc" означает этилацетат, "ДХМ" означает дихлорметан.

A. Получение промежуточных соединений.

Пример A1. Получение промежуточного соединения 1

Хлорид бензолпропаноила (0,488 моль) по каплям добавляют при комнатной температуре к раствору 4-бромбензоламина (0,407 моль) в Et ₃ N (70 мл) и ДХМ (700 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливают в воду и концентрированный NH ₄ OH и экстрагируют ДХМ. Органический слой сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют их диэтилового эфира. Остаток (119,67 г) помещают в ДХМ и промывают 1N HCl. Органический слой сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 107,67 г промежуточного соединения 1 (87%).

Пример A2. Получение промежуточного соединения 2

Трихлорид фосфора (1,225 моль) по каплям добавляют при температуре 10 °C к ДМФ (0,525 моль). Затем промежуточное соединение 1 (0,175 моль) добавляют при комнатной температуре. Смесь перемешивают в течение ночи при температуре 80 °С, выливают на лед и экстрагируют ДХМ. Органический слой сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Продукт применяют без дальнейшей очистки с получением 77,62 г промежуточного соединения 2 (67%).

Пример A3

а) Получение промежуточного соединения 3

Смесь промежуточного соединения 2 (0,233 моль) в 30% MeONa в растворе MeOH (222,32 мл) и MeOH (776 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение ночи, затем выливают на лед и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент:ДХМ/циклогексан 20/80 и затем 100/0; 20-45 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 25 г промежуточного соединения 3 (33%).

Следующее соединение получают описанным выше способом.

b) Получение промежуточного соединения 4

Смесь промежуточного соединения 2 (0,045 моль) в 21% EtONa в растворе EtOH (50 мл) и EtOH (150 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 12 ч. Смесь выливают на лед и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 15,2 г промежуточного соединения 4 (98%).

Пример A4.

а) Получение промежуточного соединения 5

Хлорид алюминия (1,31 моль) добавляют при комнатной температуре к смеси N-(3-бромфенил)- α-(фенилметилен)бензолацетамида (0,1311 моль) в хлорбензоле (500 мл). Смесь перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры, выливают в ледяную воду и фильтруют. Фильтрат промывают H ₂ O, затем циклогексаном и сушат с получением 35,5 г промежуточного соединения 5 (95%).

b) Получение промежуточного соединения 6 и промежуточного соединения 7

Смесь промежуточного соединения 5 (0,2815 моль) в фосфорном трихлориде (320 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры и растворитель выпаривают досуха. Остаток помещают в H ₂ O. Смесь экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают досуха. Остаток (58,2 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: толуол/циклогексан 80/20; 15-35 мкм). Две фракции собирают, и растворитель выпаривают с получением 21 г промежуточного соединения 6 и 34,5 г промежуточного соединения 7.

c) Получение промежуточного соединения 8

Смесь промежуточного соединения 6 (0,0659 моль) и 30% MeONa в растворе MeOH (0,329 моль) в MeOH (300 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней, затем охлаждают до комнатной температуры, выливают в ледяную воду и фильтруют. Фильтрат промывают H ₂ O и сушат с получением 19 г промежуточного соединения 8 (92%).

Пример A5

а) Получение промежуточного соединения 9

Смесь 5-бром-1H-индол-2,3-диона (0,28 моль) в 3N NaOH (650 мл) перемешивают и нагревают при температуре 80 °С в течение 30 мин, затем охлаждают до комнатной температуры. Добавляют бензолпропанал (0,28 моль) и смесь перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры и подкисляют до рН 5 добавлением HOAc. Осадок отфильтровывают, промывают H ₂ O и сушат (вакуум) с получением 50 г промежуточного соединения 9 (52%).

b) Получение промежуточного соединения 10

Смесь промежуточного соединения 9 (0,035 моль) в 1,1'-оксибисбензоле (100 мл) перемешивают и нагревают при температуре 300 °С в течение 8 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Эту обработку проводят четыре раза. Четыре смеси объединяют и затем очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/МеОН 100/0, затем 99/1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 25,6 г промежуточного соединения 10 (61%).

Пример А6.

а) Получение промежуточного соединения 11

HCl/диэтиловый эфир (30 мл) добавляют к раствору 4-бромбензоламина (0,139 моль) в EtOH (250 мл) и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем добавляют гексагидрат хлорида железа (0,237 моль) и хлорид цинка (0,014 моль) и смесь перемешивают при температуре 80 °С в течение 30 мин. Добавляют 3-хлор-1-фенил-1-пропанон (0,146 моль) и смесь перемешивают при температуре 80 °С в течение одной ночи. Смесь выливают в воду и экстрагируют EtOAc. Органический слой промывают водой, затем 10% раствором K ₂ CO ₃ , сушат (MgSO ₄ ), отфильтровывают и выпаривают. Остаток (25 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/МеОН 100/0, затем 97/3) (35-70 мкм). Чистые фракции собирают и выпаривают с получением 17,5 г промежуточного соединения 11 (44%).

b) Получение промежуточного соединения 12

3-Хлорбензолкарбонадкислоту (0,12 моль) порциями добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 11 (0,0598 моль) в ДХМ (200 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одной ночи. Добавляют 10% раствор K ₂ CO ₃ , органический слой декантируют, сушат (MgSO ₄ ), отфильтровывают и выпаривают до получения объема 150 мл промежуточного соединения 12.

с) Получение промежуточного соединения 13

4-Метилбензолсульфонилхлорид (0,075 моль) порциями добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 12 (0,0598 моль) в 10% растворе K ₂ CO ₃ (150 мл) и ДХМ (150 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одной ночи. Добавляют диэтиловый эфир и фильтруют. Осадок промывают диэтиловым эфиром и выпаривают досуха с получением 14 г промежуточного соединения 13 (78%).

d) Получение промежуточного соединения 14

Смесь промежуточного соединения 13 (0,047 моль) в фосфорном трихлориде (150 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 48 ч. Смесь выпаривают, остаток помещают в NH ₄ OH и экстрагируют ДХМ. Органический слой сушат (MgSO ₄ ), отфильтровывают и выпаривают с получением 13 г промежуточного соединения 14 (87%).

Пример A7.

а) Получение промежуточного соединения 15

Смесь 1-(2-аминофенил)этанона (0,37 моль) и этилового эфира β-оксобензолпропановой кислоты (1,48 моль) перемешивают при температуре 180 °С в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок фильтруют, промывают диэтиловым эфиром и сушат. Остаток кристаллизуют из ДИПЭ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 56,6 г промежуточного соединения 15 (58%).

b) Получение промежуточного соединения 16

Смесь промежуточного соединения 15 (0,076 моль) и гидразина (0,76 моль) в 1,2-этандиоле (240 мл) перемешивают при температуре 100 °С в течение 1 ч. Добавляют КОН (0,266 моль). Смесь перемешивают при температуре 180 °С в течение ночи. Добавляют H ₂ O. Смесь подкисляют и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (12,05 г) кристаллизуют из ДИПЭ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 4,74 г промежуточного соединения 16.

с) Получение промежуточного соединения 17

Фосфорный трихлорид (0,057 моль) медленно добавляют при температуре 80 °С к смеси промежуточного соединения 16 (0,019 моль) и хлорида бензилтриэтиламмония (0,0532 моль) в ацетонитриле (50 мл). Смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель выпаривают. Смесь выливают на лед и 10% раствор Na ₂ CO ₃ и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 4,08 г промежуточного соединения 17.

d) Получение промежуточного соединения 17а

Смесь промежуточного соединения 17 (0,0153 моль) и метоксида натрия (30 мас.%, раствор в MeOH, 7 мл) в MeOH (35 мл) перемешивают при температуре 80 °С в течение 24 ч. Добавляют воду. Смесь экстрагируют EtOAc. Органический слой отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из диизопропилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат. Выход: 2,77 г промежуточного соединения 17а (69%).

Пример A8.

а) Получение промежуточного соединения 18 и промежуточного соединения 19

Смесь хлорида алюминия (0,257 моль) и хлорида 3-хлорпропаноила (0,234 моль) в 1,2-дихлорэтане (100 мл) перемешивают при температуре 0 °С. Добавляют раствор нафталина (0,234 моль) в 1,2-дихлорэтане (100 мл). Смесь перемешивают при температуре 0 °С в течение 1 ч и выливают в ледяную воду. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (56 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: циклогексан/ДХМ 60/40; 20-45 мкм). Собирают две фракции и растворитель выпаривают с получением 2 фракций, 31 г фракции 1 в виде промежуточного соединения 18 (61%) и 14 г фракции 2. Фракцию 2 помещают в ДИПЭ, затем полученный осадок фильтруют и сушат с получением 8,2 г промежуточного соединения 19.

b) Получение промежуточного соединения 20

Смесь промежуточного соединения 18 (0,0137 моль), N-метилбензолметанамина (0,015 моль) и K ₂ CO ₃ (2 г) в ацетонитриле (100 мл) перемешивают при температуре 80 °С в течение 2 ч. Добавляют Н ₂ О. Смесь экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 4,2 г промежуточного соединения 20 (100%).

Пример A9. Получение промежуточного соединения 21

Смесь 1-(3,5-дифторфенил)этанона (0,013 моль), формальдегида (0,05 моль) и гидрохлорида N-метилметанамина (0,052 моль) в концентрированной HCl (0,1 мл) в EtOH (20 мл) перемешивают при температуре 80 °С в течение 20 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Растворитель выпаривают досуха. Остаток помещают в 3N HCl. Смесь промывают диэтиловым эфиром, подщелачивают K ₂ CO ₃ и экстрагируют диэтиловым эфиром. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 2 г промежуточного соединения 21.

Пример A10.

а) Получение промежуточного соединения 22 и промежуточного соединения 23

1,6М Бутиллитий (0,12 моль) по каплям добавляют при температуре -10 °С в потоке N ₂ к раствору 2,2,6,6-тетарметилпиперидина (0,12 моль) в ТГФ (200 мл). Смесь перемешивают при температуре -10 °С в течение 20 мин и затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют смесь промежуточного соединения 2 (0,1 моль) в ТГФ (100 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 45 мин. Добавляют раствор 3-(диметиламино)-1-фенил-1-пропанона (0,1 моль) в ТГФ (100 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 1 ч, нагревают до температуры -50 °С и гидролизуют. Добавляют H ₂ O (100 мл) при температуре -50 °С. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и экстрагируют EtOAc. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток помещают в EtOAc. Осадок фильтруют, промывают EtOAc и диэтиловым эфиром и сушат в вакууме с получением 4 г промежуточного соединения 23 (8%). Маточный слой выпаривают. Остаток (26 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 97/3/0,1; 15-40 мкм). Желаемые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 1 г промежуточного соединения 22.

Следующие промежуточные соединения получают описанным выше способом.

b) Получение промежуточного соединения 24

1,6М Бутиллитий (0,0094 моль) по каплям добавляют при температуре -20 °С к смеси 2,2,6,6-тетраметилпиперидина (0,0094 моль) в ТГФ (20 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают при температуре -20 °С в течение 20 мин, затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют раствор 6-бром-2-хлор-3-фенилхинолина (0,0062 моль) в ТГФ (40 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 1 ч. Добавляют раствор промежуточного соединения 21 (0,0094 моль) в ТГФ (25 мл). Смесь перемешивают при температуре от -70 °С до комнатной температуры в течение 18 ч. Добавляют H ₂ O и EtOAc. Органический слой промывают насыщенным раствором NaCl, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (4,3 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 97/3/0,1; 10 мкм). Чистые фракции собирают, и растворитель выпаривают с получением 0,77 г промежуточного соединения 24 (23%).

Следующие промежуточные соединения получают описанным выше способом.

с) Получение промежуточного соединения 28

1,6М Бутиллитий (0,029 моль) добавляют при температуре -10 °С к раствору N-пропил-1-пропанамина (0,029 моль) в ТГФ (50 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают в течение 20 мин, затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют раствор промежуточного соединения 2 (0,024 моль) в ТГФ (30 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 1 ч. Добавляют раствор 3-(диметиламино)-1-(2-тиенил)-1-пропанона (0,029 моль) в ТГФ (20 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 1 ч, затем нагревают до температуры -20 °С и экстрагируют EtOAc. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 96/4/0,1/ 20-45 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (4,65 г) кристаллизуют из ДИПЭ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 2,7 г промежуточного соединения 28 (Т.пл. 168 °С). Маточный слой выпаривают с получением еще 1,7 г промежуточного соединения 28.

d) Получение промежуточного соединения 25

1,6М Бутиллитий (0,0112 моль) по каплям добавляют при температуре -20 °С к раствору N-(1-метилэтил)-2-пропанамина (0,0112 моль) в ТГФ (20 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают при температуре -20 °С в течение 30 мин, затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют раствор промежуточного соединения 17 (0,0094 моль) в ТГФ (20 мл). Смесь перемешивают течение 45 мин. Добавляют раствор промежуточного соединения 21 (0,0112 моль) в ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 2 ч, выливают в Н ₂ О при температуре -30 °С и экстрагируют EtOAc. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (4 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH 98/2; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (3 г) кристаллизуют из ДИПЭ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 1,94 г промежуточного соединения 25 (43%) (Т.пл.: 140 °С).

е) Получение промежуточного соединения 26

1,6М Бутиллитий (0,013 моль) по каплям добавляют при температуре -30 °С к смеси N-(1-метилэтил)-2-пропанамина (0,013 моль) в ТГФ (20 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают при температуре -20 °С в течение 30 мин, затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют раствор 2-хлор-4-метил-3-фенилхинолина (0,011 моль) в ТГФ (20 мл). Смесь перемешивают в течение 45 мин. Добавляют раствор промежуточного соединения 21 (0,013 моль) в ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 2 ч, выливают в H ₂ O и экстрагируют EtOAc. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (5 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH 98/2; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 4 г промежуточного соединения 26 (78%).

f) Получение промежуточного соединения 27

1,6М Бутиллитий в гексане (0,0075 моль) по каплям добавляют при температуре -70 °С к смеси промежуточного соединения 14 (0,0062 моль) в ТГФ (20 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 1 ч. Добавляют раствор промежуточного соединения 21 (0,0075 моль) в ТГФ (10 мл) при температуре -70 °С. Смесь перемешивают при температуре от -70 °C до комнатной температуры, затем перемешивают в течение 18 ч. Добавляют H ₂ O. Смесь экстрагируют EtOAc. Органический слой промывают насыщенным раствором NaCl, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (3 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 97/3/0,1; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 1,1 г промежуточного соединения 27 (39%).

Следующие промежуточные соединения получают описанным выше способом.

В. Получение конечных соединений.

Пример B1.

а) Получение соединения 1

1,6M Бутиллитий (0,0019 моль) по каплям добавляют при температуре -70 °С к смеси промежуточного соединения 8 (0,0016 моль) в ТГФ (5 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 1 ч. Добавляют раствор промежуточного соединения 21 (0,0019 моль) в ТГФ (2 мл). Добавляют Н ₂ О. Смесь экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/ MeOH/NH ₄ OH 98/2/0,1; 10 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,2 г соединения 1 (28%, МН+: 449).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом.

b) Получение соединения 7

Бутиллитий (0,0035 моль) по каплям добавляют при температуре -20 °С к раствору N-(1-метилэтил)-2-пропанамина (0,0034 моль) в ТГФ (10 мл) в потоке N ₂ . Смесь перемешивают при температуре -20 °С в течение 20 мин, затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют раствор промежуточного соединения (0,0029 моль) в ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 2 ч. Добавляют раствор промежуточного соединения 21 (0,0032 моль) в ТГФ (10 мл) при температуре -70 °С. Смесь перемешивают при температуре -70 °С в течение 3 ч, выливают в ледяную воду и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,4 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 99/1/0,1; 15-40 мкм). Желаемые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,968 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 98/2/0,1; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают, и растворитель выпаривают. Остаток сушат с получением 0,151 г соединения 7 (11%, масло, ЯМР подтверждает структуру).

Пример B2. а) Получение соединения 8

30%-ный раствор MeONa (2 мл) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 23 (0,002 моль) в MeOH (2 мл). Смесь перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение ночи, выливают на лед и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,62 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 95/5/0,1; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Полученный остаток (0,39 г) кристаллизуют из ДИПЭ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,15 г соединения 8 (Т.пл. 66 °C).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом.

b) Получение соединения 17

Смесь промежуточного соединения 25 (0,0004 моль) и пирролидина (0,0021 моль) перемешивают при температуре 90 °С в течение ночи, затем выливают в H ₂ O и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,18 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 98/2/0,1; 10 мкм). Желаемую фракцию собирают и растворитель выпаривают с получением 0,043 г соединения 17 (20%, МН+: 516).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом.

с) Получение соединения 21

Смесь промежуточного соединения 26 (0,0006 моль), фенилбороновой кислоты (0,0019 моль), Pd(PPh ₃ ) ₄ (0,00006 моль) и Na ₂ CO ₃ (0,0032 моль) в диметиловом эфире (10 мл) перемешивают при температуре 90 °C в течение ночи, выливают в H ₂ O и экстрагируют CH ₂ Cl ₂ . Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,48 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: CH ₂ Cl ₂ /CH ₃ OH 99/1; 10 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Выход: 0,054 г соединения 21 (16%, Т.пл. 173 °С).

d) Получение соединения 22

Смесь промежуточного соединения 24 (0,0003 моль), имидазола (0,0018 моль) и K ₂ CO ₃ (0,0011 моль) в ацетонитриле (10 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 48 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Добавляют H ₂ O. Смесь экстрагируют EtOAc. Органический слой промывают насыщенным водным раствором NaCl, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,23 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: CH ₂ Cl ₂ /CH ₃ OH/ NH ₄ OH 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Выход: 0,09 г соединения 22 (42%) (Т.пл. 136 °С).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом.

е) Получение соединения 42

Смесь промежуточного соединения 27 (0,0005 моль), 3-(1,3,2-диоксаборинан-2-ил)пиридина (0,0008 моль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,0005 моль) и 2M раствор K ₂ CO ₃ (0,0027 моль) в диметиловом эфире (7 мл) и MeOH (3 мл) перемешивают при температуре 100 °С в течение 18 ч в потоке N ₂ , затем охлаждают до комнатной температуры. Добавляют H ₂ O.

Смесь экстрагируют EtOAc. Органический слой промывают насыщенным водным раствором NaCl, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,34 г) помещают в 2-пропанон (6 мл). Добавляют щавелевую кислоту. Смесь перемешивают. Осадок отфильтровывают и сушат при температуре 60 °С в вакууме с получением 0,29 г соединения 42 в виде соли этандикислоты (1:2) (80%, Т.пл. 151 °C).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом.

f) Получение соединения 45

Смесь промежуточного соединения 37 (0,0007 моль) в N-метилметанамине (10 мл) и ацетонитриле (10 мл) перемешивают при температуре 90 °С в течение 12 ч, выливают в смесь H ₂ O/K ₂ CO ₃ и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Полученную фракцию (0,25 г) перемешивают при температуре 90 °С в течение 72 ч и очищают хроматографией на колонке с кромасилом (элюент: ДХМ/МеОН 99/1; 10 мкм). Фракцию желаемого продукта собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,08 г) растворяют в смеси щавелевая кислота/2-пропанол и превращают в соль этандикислоты (1:2,5). Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,07 г соединения 45 (14%, Т.пл. 136 °С).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом.

g) Получение соединения 48

Смесь KOH (0,0011 моль) в 1-пиперидинэтаноле (2 мл) перемешивают при температуре 80 °С до исчезновения KOH. Добавляют промежуточное соединение 23 (0,0009 моль). Смесь перемешивают при температуре 80 °С в течение ночи, выливают на лед и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (2,49 г) кристаллизуют из ДИПЭ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,308 г соединения 48 (Т.пл.: 131 °С).

Следующее конечное соединение получают описанным выше способом.

h) Получение соединения 50

Смесь промежуточного соединения 23 (0,000137 моль), N-метилметанамина (0,000412 моль, 3 экв.) и K ₂ CO ₃ (3 экв.) в ацетонитриле (2 мл) перемешивают при температуре 80 °С в течение 12 ч, выливают в H ₂ O и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Полученную фракцию очищают хроматографией на колонке с силикагелем, затем фракцию желаемого продукта собирают и растворитель выпаривают с получением 0,07 г соединения 50 (54,79%, МН+: 518).

Следующие конечные соединения получают описанным выше способом

Пример B3.

а) Получение соединения 64

Смесь соединения 9 (0,0003 моль), 3-(1,3,2-диоксаборинан-2-ил)пиридина (0,0006 моль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,00003 моль) и 2М раствора K ₂ CO ₃ (0,0015 моль) в диметиловом эфире (6 мл) и MeOH (2 мл) перемешивают при температуре 100 °С в течение 18 ч в потоке N ₂ , затем охлаждают до комнатной температуры. Добавляют H ₂ O. Смесь экстрагируют EtOAc. Органический слой промывают насыщенным раствором NaCl, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,14 г) помещают в 2-пропанон (2 мл). Добавляют щавелевую кислоту (2 эквивалента). Смесь перемешивают в течение 10 мин. Осадок фильтруют, промывают 2-пропаноном и сушат при температуре 70 °С в вакууме с получением 0,077 г соединения 64 в виде соли этандикислоты (1:1,5) (38%, Т.пл.: 156 °С).

Следующее конечное соединение получают описанным выше способом.

b) Получение соединения 66

Смесь соединения 8 (0,0003 моль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,00003 моль), 2M раствора Na ₂ CO ₃ (0,0019 моль) и 3-(1,3,2-диоксаборинан-2-ил)пиридина (0,0011 моль) в диметиловом эфире (6 мл) перемешивают при температуре 100 °C в течение ночи, затем выливают в H ₂ O и экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток очищают хроматографией на колонке с кромасилом (элюент: толуол/2-пропанол/NH ₄ OH 80/20/1; 10 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,1 г, 51%) кристаллизуют из смеси ДИПЭ/ацетонитрил. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,057 г соединения 66 (Т.пл.: 180 °C).

Следующее конечное соединение получают описанным выше способом.

с) Получение соединения 68

Смесь соединения 10 (0,0007 моль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,00007 моль) и тетраметилстаннана (0,016 моль) в толуоле (6 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Добавляют H ₂ O. Смесь экстрагируют ДХМ. Органический слой отделяют, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: ДХМ/MeOH/NH ₄ OH 95/5/0,3/ 20 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,038 г соединения 68 (11%, МН+: 447).

Пример B4. Получение соединения 69

Смесь промежуточного соединения 32 (0,0016 моль) в 6N HCl (5 мл) и ТГФ (10 мл) перемешивают при температуре 80 °С в течение 48 ч, затем охлаждают до комнатной температуры, выливают в 10% раствор K ₂ CO ₃ и экстрагируют EtOAc. Органический слой промывают насыщенным раствором NaCl, сушат (MgSO ₄ ), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из смеси диэтиловый эфир/2-пропанон. Осадок отфильтровывают и сушат. Часть этой фракции (0,3 г из 0,6 г (44%)) помещают в горячий 2-пропанон. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,2 г соединения 69 (15%, Т.пл.: 190 °С).

Пример B4. а) Получение соединения 70

н-Бутиллитий (0,0022 моль) медленно добавляют при температуре -20 °С к смеси диизопропиламина (0,0022 моль) в ТГФ (10 мл) в атмосфере N ₂ . Смесь перемешивают в течение 20 мин и затем охлаждают до температуры -70 °С. Добавляют раствор промежуточного соединения 17а (0,0019 моль) в ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч. Добавляют раствор 3-(диметиламино)-1-(1-нафталенил)-1-пропанона (0,0028 моль) в ТГФ (10 мл) при температуре -70 °С. Смесь перемешивают в течение 1 ч. Добавляют H ₂ O. Смесь экстрагируют EtOAc. Органический слой отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,13 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: CH ₂ Cl ₂ /iPrOH/NH ₄ OH 96/4/0,2; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Выход: 0,04 г соединения 70 (4%; МН+: 491).

b) Получение соединения 71

Соединения получают по методике B5a). Остаток (1 г) очищают хроматографией на колонке с силикагелем (элюент: CH ₂ Cl ₂ /MeOH/NH ₄ OH 99/1/0,1; 15-40 мкм). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,32 г, 37%) кристаллизуют из диизопропилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат. Выход: 0,133 г соединения 71 (15%, температура плавления: 123 °С).

С. Аналитические методы.

Массу соединений регистрировали с применением ЖХ/МС (жидкостной хроматомасс-спектрометрии). Применяли три метода, описанных ниже. Данные приведены в табл. 1 ниже.

ЖХ/МС - метод 1.

ЖХ/МС анализ проводят (ионизация электрораспылением с регистрацией положительных ионов, режим сканирования от 100 до 900 а.е.м.) на колонке Kromasil C18 (Interchim, Montlucon, FR; 5 мкм, 4,6 ×150 мм) со скоростью потока 1 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 30% 6,5 мМ ацетата аммония +40% ацетонитрила +30% муравьиной кислоты (2 мл/л); подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) применяют для получения градиентных условий от 100% A в 1 минуту до 100% В в 4 мин, 100% В в 5 мин до 100% А в 3 мин и переуравновешивание со 100% А в течение 2 мин.

ЖХ/МС - метод 2.

ЖХ/МС анализ проводят (ионизация электрораспылением с регистрацией положительных и отрицательных ионов (импульсный режим), режим сканирования от 100 до 1000 а.е.м.) на колонке Kromasil C18 (Interchim, Montlugon, FR; 3,5 мкм, 4,6 ×100 мм) со скоростью потока 0,8 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 35% 6,5 мМ ацетата аммония +30% ацетонитрила +35% муравьиной кислоты (2 мл/л); подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) применяют для получения градиентных условий от 100% А в 1 минуту до 100% В в 4 мин, 100% В со скоростью потока 1,2 мл/мин в 4 минуты до 100% А при 0,8 мл/мин в 3 мин и переуравновешивание со 100% А в течение 1,5 мин.

ЖХ/МС - метод 3.

ЖХ/МС анализ проводят (ионизация электрораспылением с регистрацией положительных ионов, режим сканирования от 100 до 900 а.е.м.) на колонке Xterra MS C18 (Waters, Milford, MA; 5 мкм, 4,6 ×150 мм) со скоростью потока 1 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 85% 6,5 мМ ацетата аммония +15% ацетонитрила; подвижная фаза В: 20% 6,5 мМ ацетата аммония +80% ацетонитрил) применяют для получения градиентных условий от 100% А в 3 мин до 100% В в 5 мин, 100% B со скоростью потока 1,2 мл/мин в 6 мин до 100% А при 0,8 мл/мин в 3 мин и переуравновешивание со 100% А в течение 3 мин.

Таблица 1. Применяемые аналитические методы

Фармакологические примерыПриготовление бактериальных суспензий для проведения тестирования на чувствительность

Бактерии, применяемые в данном исследовании, выращивают в течение ночи в колбах, содержащих 100 мл бульона Mueller-Hinton (Becton Dickinson - № по каталогу 275730) в стерильной деионизированной воде, при встряхивании, при температуре 37 °С. Исходные растворы (0,5 мл/пробирка) хранят при температуре -70 °С до применения. Титрование бактерий проводят в титровальных микропланшетах и определяют колониеобразующие единицы (КОЕ). Для тестирования на чувствительность применяют уровень инокулума приблизительно 100 КОЕ.

Тестирование на антибактериальную чувствительность: определение IC90.Анализ титровальных микропланшетов

Плоскодонные стерильные 96-луночные пластиковые титровальные микропланшеты наполняют 180 мкл стерильной деионизированной воды с добавлением 0,25% АБС. Далее исходные растворы (7,8 × конечная тестовая концентрация) соединений добавляют в объеме 45 мкл в колонку 2. Проводят серийные пятикратные разведения (45 мкл в 180 мкл) непосредственно в титровальных микропланшетах от колонки 2 до колонки 11. Необработанные контрольные образцы с (колонка 1) и без (колонка 12) инокулума добавляют в каждый титровальный микропланшет. В зависимости от типа бактерий, приблизительно от 10 до 60 КОЕ на лунку бактериального инокулума (100 TCID ₅₀ ), в объеме 100 мкл 2,8 × бульон Mueller-Hinton, добавляют в ряды с A по H, за исключением колонки 12. Тот же объем бульона без инокулума добавляют в колонку 12 в ряды с A по H. Культуры инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч в нормальной атмосфере (инкубатор с наружным клапаном и непрерывной вентиляцией). В конце периода инкубирования, через день после посева, рост бактерий количественно анализируют с применением флюорометрического метода. Для этого ресазурин (0,6 мг/мл) добавляют в объеме 20 мкл во все лунки через 3 ч после посева и планшеты повторно инкубируют в течение ночи. Изменение цвета от голубого до розового указывает на рост бактерий. Данные флуоресценции получают с помощью флуориметра с компьютерным управлением (Cytofluor Biosearch) при возбуждении с длиной волны 530 нм и эмиссии с длиной волны 590 нм. Процент ингибирования роста соединениями рассчитывают стандартными методами. IC ₉₀ (выраженные в мкг/мл) определяют как 90% ингибирующую концентрацию роста бактерий. Результаты показаны в табл. 2.

Метод разведения агара

Значения MIC ₉₉ (минимальная концентрация для получения 99%-ного ингибирования роста бактерий) могут быть определены с применением стандартного метода разведения агара по стандартам NCCLS, где применяемая среда содержит агар Mueller-Hinton. (Clinical laboratory standard institute. 2005. Methods for dilution Antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grows Aerobically: approved standard, sixth edition)

Анализ по времени гибели

Бактерицидная или бактериостатическая активность соединений может быть определена с помощью анализа по времени гибели с применением метода микроразведения бульона. (Zurenko, G.E. et al. In vitro activities of U-100592 and U-100766, novel oxazolidinone antibacterial agents. Antimicrob. Agents Chemother. 40, 839-845 (1996)). В анализе по времени гибели Staphylococcus aureus и устойчивых к метициллину S. aureus (MRSA) исходный инокулум S. aureus и MRSA составляет 10 ⁶ КОЕ/мл в бульоне Muller Hinton. Антибактериальные соединения применяют в концентрации от 0,1 до 10 величины MIC (т.е. IC ₉₀ , определенной в анализе титровальных микропланшетов). Лунки, не содержащие антибактериального агента, составляют контроль роста культуры. Планшеты, содержащие микроорганизм и тестируемые соединения, инкубируют при температуре 37 °С. Через 0, 4, 24 и 48 ч инкубирования образцы вынимают для определения количества жизнеспособных микроорганизмов серийным разведением (от 10 ^-1 до 10 ^-6 ) в стерильном ФРФБ и помещением (200 мкл) в агар Mueller Hinton. Планшеты инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч и определяют количество колоний. Кривые гибели могут быть построены нанесением на график log ₁₀ КОЕ на миллилитр в зависимости от времени. Бактерицидное действие обычно определяют как 3-log ₁₀ снижение в количестве КОЕ на мл по сравнению с необработанным инокулумом. Потенциальный эффект переноса лекарственных средств удаляют серийным разведением и подсчетом колоний при максимальном разведении, использованном для посева. Эффект переноса не обнаруживается при разведении 10 ^-2 , применяемом для посева. Это дает ограничение определения 5 ×10 ² КОЕ/мл или <2,7 log КОЕ/мл.

Определение клеточных уровней АТФ

Для анализа изменений общей клеточной концентрации АТФ (с применением набора ATP bioluminescence Kit, Roche) анализы проводят путем выращивания штамма культуры S. Aureus (АТСС29213) в 100 мл колбах Mueller Hinton и инкубирования в инкубаторе с шюттль-аппаратом в течение 24 часов при температуре 37 °С (300 об/мин). Измеряют OD ₄₀₅ нм и рассчитывают КОЕ/мл. Разводят культуры до 1 ×10 ⁶ КОЕ/мл (конечная концентрация для измерения АТФ: 1 ×10 ⁵ КОЕ/100 мкл на лунку) и добавляют тестируемое соединение в концентрациях от 0,1 до 10 величины MIC (т.е. IC ₉₀ , определенной в анализе титровальных микропланшетов). Инкубируют эти пробирки в течение 0,30 и 60 мин при 300 об/мин и температуре 37 °C. Применяют 0,6 мл суспензии бактерий из пробирок с защелкивающимися крышками и добавляют в новые 2 мл пробирки Eppendorf. Добавляют 0,6 мл реагента для лизиса клеток (набор Roche), встряхивают на максимальной скорости и инкубируют в течение 5 минут при комнатной температуре. Охлаждают на льду. Нагревают люминометр до 30 °С (Luminoskan Ascent Labsystems с впрыскивателем). Наполняют одну колонку (= 6 лунок) 100 мкл одного и того же образца. Добавляют 100 мкл реагента люциферазы в каждую лунку с применением системы впрыскивания. Измеряют люминесценцию в течение 1 с.

Таблица 2. Значения IC ₉₀ (мкг/мл), определенные согласно анализу титровальных микропланшетов

BSU 43639 означает Bacillus subtilis (ATCC43639); ECO 25922 означает Escherichia coli (ATCC25922); ECO 35218 означает Escherichia coli (ATCC35218); ECO 1403 означает Escherichia coli (ATCC1403); EFA 14506 означает Enterococcus faecalis (ATCC14506); EFA 29212 означает Enterococcus faecalis (ATCC29212); LMO 49594 означает Listeria monocytogenes (ATCC49594); РАЕ 27853 означает Pseudomonas aeruginosa (ATCC27853); SMU 33402 означает Streptococcus mutans (ATCC33402); SPN 6305 означает Streptococcus pneumoniae (ATCC6305); SPY 8668 означает Streptococcus pyogens (ATCC8668); STA 43300 означает Staphylococcus aureus (ATCC43300); STA 25923 означает Staphylococcus aureus (ATCC25923); STA 29213 означает Staphylococcus aureus (ATCC29213); STA RMETH означает устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA) (клинический штамм из University of Antwerp). АТСС означает Американская коллекция типовых культур.