Настоящее изобретение относится, в целом, к некоторым конденсированным пирролокарбазолам, включая их фармацевтические композиции и способы лечения болезней с их помощью. Настоящее изобретение также относится к промежуточным соединениям и способам получения этих конденсированных пирролокарбазолов.

[0001] Конденсированные пирролокарбазолы формулы I

[0002] Соединение по п.1, в котором кольцо А является фениленом.

[0003] Соединение по п.1, в котором кольцо А является 5-членным ароматическим кольцом, содержащим один или два атома азота.

[0004] Соединение по п.3, в котором кольцо А является пиразолиленом.

[0005] Соединение по п.1, в котором R1 является Н или C1-6 алкилом.

[0006] Соединение по п.1, в котором R2 является Н, необязательно замещенным C1-6 алкилом, необязательно замещенным С2-6 алкенилом, необязательно замещенным С2-6 алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом.

[0007] Соединение по п.6, в котором R2 является Н или необязательно замещенным алкилом.

[0008] Соединение по п.1, в котором по меньшей мере один из R3, R4, R5 и R6 является OR14; C(=O)R22; NR11C(=O)R20; NR11C(=O)OR15; OC(=O)R20 или ОС(=O)NR11R20.

[0009] Соединение по п.1, в котором R14 является бензоксазолилом, бензотиазолилом, пиримидилом, пиразинилом или триазинилом; R22 является 5-членной гетероарильной группой, содержащей по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; R20 является гетероциклоалкилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; или гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; R23 является 5-10-членным гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; или 3-10-членным гетероциклоалкилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; R24 является 5-10-членным гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; и R26 является 3-10-членным гетероциклоалкилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; где каждый из указанных R14, R22, R20, R23, R24 и R26 фрагментов является необязательно замещенным 1-3 R10 группами.

[0010] Соединение по п.1, имеющее структуру формулы II

[0011] Соединение по п.10, в котором R2 является Н, C(=O)R2a, С(=O)NR2cR2d, SO2R2b, CO2R2b, необязательно замещенным С1-6 алкилом, необязательно замещенным С2-6 алкенилом, необязательно замещенным С2-6 алкинилом или необязательно замещенным С3-10 циклоалкилом.

[0012] Соединение по п.10, в котором кольцо А является фениленом.

[0013] Соединение по п.10, в котором кольцо А является пиразолиленом.

[0014] Соединение по п.13, в котором кольцо А является

[0015] Соединение по п.13, в котором кольцо А является

[0016] Соединение по п.10, в котором R1 является Н или C1-6 алкилом.

[0017] Соединение по п.10, в котором Q является СН2СН2.

[0018] Соединение по п.10, в котором по меньшей мере один из R3, R4, R5 и R6 является OR14, где R14 является бензоксазолом, бензотиазолом, пиримидином, пиразином или триазином; C(=O)R22, где R22 является 5-членной гетероарильной группой, содержащей по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; NR11C(=O)R20, где R20 является 5-10-членным гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; NR11C(=O)OR15; OC(=O)R20, где R20 является 3-10-членным гетероциклоалкилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; или ОС(=O)NR11R20, где R20 является С3-10 циклоалкилом, где каждый из указанных R14, R22 и R20 фрагментов необязательно замещен от 1 до 3 R10 группами.

[0019] Соединение по п.10, имеющее структуру формулы III

[0020] Соединение по п.19, имеющее структуру формулы IV

[0021] Соединение по п.19, имеющее структуру формулы V

[0022] Соединение по п.19, имеющее структуру формулы VI

[0023] Соединение по пп.20-22, в котором R2 является Н, C(=O)R2a, С(=O)NR2cR2d, SO2R2b, CO2R2b, необязательно замещенным C1-6 алкилом, необязательно замещенным С2-6 алкенилом, необязательно замещенным С2-6 алкинилом или необязательно замещенным С3-10 циклоалкилом.

[0024] Соединение по п.23, в котором R2 является Н или необязательно замещенным C1-6 алкилом.

[0025] Соединение по пп.20-22, в котором по меньшей мере один из R3, R4, R5 и R6 является OR14, где R14 является бензоксазолом, бензотиазолом, пиримидином, пиразином или триазином; C(=O)R22, где R22 является 5-членной гетероарильной группой, содержащей по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; NR11C(=O)R20, где R20 является 5-10-членным гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; NR11C(=O)OR15; OC(=O)R20, где R20 является 3-10-членным гетероциклоалкилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-; или ОС(=O)NR11R20, где R20 является С3-10 циклоалкилом, где каждый из указанных R14, R22 и R20 фрагментов необязательно замещен от 1 до 3 R10 группами.

[0026] Соединение по п.25, в котором Q является СН2СН2 и R2 является Н или необязательно замещенным C1-6 алкилом.

[0027] Соединение по п.1, в котором соединения выбирают в соответствии со следующей таблицей:

[0028] Соединение по п.1, в котором соединения выбирают в соответствии со следующей таблицей:

[0029] Соединение по п.28, в котором соединения выбирают в соответствии со следующей таблицей:

[0030] Соединение по п.1, когда соединения выбирают в соответствии со следующей таблицей:

[0031] Соединение по п.1, когда соединения выбирают в соответствии со следующей таблицей:

[0032] Соединение по п.1, когда соединения выбирают в соответствии со следующей таблицей:

[0033] Соединение по п.1, когда соединением является

[0034] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 в терапевтически эффективном количестве и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.

[0035] Способ лечения заболевания предстательной железы, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

[0036] Способ по п.35, в котором заболеванием предстательной железы является рак предстательной железы или доброкачественная гиперплазия предстательной железы.

[0037] Способ лечения ангиогенного заболевания, содержащий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

[0038] Способ по п.37, в котором ангиогенное заболевание выбирают из группы, состоящей из рака солидных опухолей, гематологических опухолей, дистрофии желтого пятна, ретролетальной фиброплазии, диабетической ретинопатии, ревматоидного артрита, псориаза, эндометриоза и рестеноза.

[0039] Способ лечения патологического расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

[0040] Способ по п.39, в котором патологическое расстройство выбирают из группы, состоящей из неоплазии, хронического артрита, фиброза легких, миелофиброза, аномального заживления ран и атеросклероза.

[0041] Способ лечения нейродегенеративного заболевания или расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

[0042] Способ по п.41, в котором нейродегенеративным заболеванием или расстройством является болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, инсульт, ишемия, болезнь Хантингтона, ВИЧ деменция, эпилепсия, рассеянный склероз, периферическая нейропатия, вызванная химиотерапией, периферическая нейропатия, связанная с ВИЧ периферическая нейропатия или травма головного или спинного мозга.

[0043] Способ лечения множественной миеломы или лейкоза, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

[0044] Способ по п.43, в котором лейкозом является острый миелобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз или хронический лимфолейкоз.

Эта заявка испрашивает приоритет предварительной заявки US Provisional Application № 60/532252, зарегистрированной 23 декабря 2003 г., которая для всех целей включена в описание изобретения путем ссылки на нее.

Настоящее изобретение относится в целом к конденсированным пирролокарбазолам, включая фармацевтические композиции, диагностические наборы, эталоны для анализа или реагенты, содержащие эти соединения, и к способам применения этих соединений в качестве лекарственных средств. Изобретение также относится к промежуточным соединениям и способам получения этих новых соединений.

Публикации, цитируемые в этом описании, включены в описание путем ссылки на них.

Были получены различные синтетические органические молекулы малого размера, которые являются биологически активными и в целом известны в технике как "конденсированные пирролокарбазолы" (см. патенты США 5475110; 5591855; 5594009; 5616724 и 6630500). Кроме того, в патенте США 5705511 раскрыты соединения конденсированных пирролокарбазолов, которые обладают разнообразной функциональной фармакологической активностью. Было раскрыто, что конденсированные пирролокарбазолы применяют в целом ряде случаев, включая усиление функции и/или увеличение продолжительности жизни линии клеток нейронов, или сами по себе или в комбинации с нейротрофическим фактором(и) и/или индолокарбазолами; повышение активности, индуцированной трофическим фактором; ингибирование активности протеинкиназы С ("PKC"); ингибирование активности рецептора trk тирозинкиназы; ингибирование пролиферации клеточной линии рака предстательной железы; ингибирование клеточных путей, вовлеченных в воспалительный процесс; и повышение выживаемости нейронных клеток при риске смерти. Тем не менее, остается необходимость в новых производных пирролокарбазола, которые обладают лечебными свойствами. Настоящее изобретение направлено на эти, а также и на другие важные цели.

Настоящее изобретение в одном аспекте относится к соединениям конденсированного пирролокарбазола формулы I

и его стереоизомерным формам, смесям стереоизомерных форм, или их фармацевтически приемлемым формам солей, где составляющие элементы определены ниже.

Конденсированные пирролокарбазолы настоящего изобретения могут применяться в целом ряде случаев, включая ингибирование ангиогенеза; в качестве противоопухолевых средств; усиление функции и/или увеличение продолжительности жизни линии клеток нейронов, или сами по себе, или в комбинации с нейротрофическим фактором(ами) и/или индолокарбазолами; усиление активности, индуцированной трофическим фактором; ингибирование активности киназы, такой как trk тирозинкиназа ("trk"), рецептор киназы сосудистого эндотелиального фактора роста ("VEGFR"), предпочтительно VEGFR1 и VEGFR2, смешанное семейство киназ ("MLK"), двойная лейциновая застежка-молния, несущая киназу ("DLK"), рецептор киназы тромбоцитарного фактора роста ("PDGFR"), протеинкиназа С ("PKC"), Tie-2, или CDK-1, -2, -3, -4, -5, -6; ингибирование NGF-стимулированного trk фосфорилирования; ингибирование пролиферации клеточной линии рака предстательной железы; ингибирование клеточных путей, вовлеченных в воспалительный процесс; и повышение выживаемости нейронных клеток при риске смерти. Кроме того, конденсированные пирролокарбазолы могут применяться для ингибирования с-met, c-kit и мутированного Flt-3, содержащих внутренние тандемные дупликации в околомембранном домене. Вследствие этих разнообразных функций раскрываемые соединения находят применение для различных назначений, включая научные и лечебные цели.

В другом варианте осуществления соединения настоящего изобретения применяют для лечения или предотвращения ангиогенеза и ангиогенных заболеваний, таких как рак солидных опухолей, эндометриоз, ретинопатия, диабетическая ретинопатия, псориаз, ангиобластома, глазные заболевания или дистрофия желтого пятна. В другом варианте осуществления соединения настоящего изобретения применяют для лечения или предотвращения неоплазии, ревматоидного артрита, хронического артрита, фиброза легких, миелофиброза, анормального заживления ран, атеросклероза или рестеноза. В дополнительном варианте осуществления соединения настоящего изобретения применяют для лечения или предотвращения нейродегенеративных заболеваний и расстройств, таких как болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, инсульт, ишемия, болезнь Хантингтона, СПИД-деменция, эпилепсия, рассеянный склероз, периферическая нейропатия, индуцированная химиотерапией периферическая нейропатия, связанная со СПИДом периферическая нейропатия или травмы головного или спинного мозга. В дополнительных вариантах осуществления соединения настоящего изобретения применяют для лечения или предотвращения заболеваний предстательной железы, таких как рак предстательной железы или доброкачественная гиперплазия предстательной железы. В еще одних вариантах осуществления соединения настоящего изобретения применяют для лечения или предотвращения множественной миеломы и лейкозов, включая, но этим не ограничивая, острый миелобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз и хронический лимфолейкоз.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, которые содержат один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей и терапевтически эффективное количество соединения настоящего изобретения.

Таким образом, в первом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает новое соединение формулы I

где кольцо А вместе с углеродными атомами, к которым оно присоединено, выбирают из:

(a) фениленового кольца, в котором от 1 до 3 углеродных атомов могут быть заменены на атомы азота; и

(b) 5-членного ароматического кольца, в котором от 1 до 2 углеродных атомов могут быть заменены на атомы азота;

А ¹ и А ² независимо выбирают из Н, Н и группы, в которой А ¹ и А ² вместе образуют фрагмент, выбранный из =O;

В ¹ и В ² независимо выбирают из Н, Н и группы, в которой В ¹ и В ² вместе образуют фрагмент, выбранный из =O;

при условии, что по меньшей мере одна из пар А ¹ и А ² или В ¹ и В ² образуют =O;

когда А ¹ и А ² , В ¹ и В ² , оба взятые вместе, образуют фрагмент, выбранный из =O, кольцо А не является фениленовым кольцом, в котором 0 атомов углерода замещены атомами азота;

R ¹ является Н или необязательно замещенным алкилом, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ² выбирают из Н, С(=O)R ^2a , С(=O)NR ^2c R ^2d , SO ₂ R ^2b , CO ₂ R ^2b , необязательно замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _2-6 алкенила, необязательно замещенного С _2-6 алкинила, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила и необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-,-S- или -N-, где указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ^2a выбирают из необязательно замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _6-10 арила, OR ^2b , NR ^2c R ^2d , (CH ₂ ) _p NR ^2c R ^2d и О(CH ₂ ) _p NR ^2c R ^2d , где указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ^2b выбирают из Н и необязательно замещенного C _1-6 алкила, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ^2c и R ^2d , каждую независимо, выбирают из Н и необязательно замещенного C _1-6 алкила, или вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенный 3-13-членный гетероциклоалкил, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

по меньшей мере одну из R ³ , R ⁴ , R ⁵ и R ⁶ выбирают из OR ¹⁴ ; C(=O)R ²² ; CH=NR ²⁶ ; NR ¹¹ C(=O)R ²⁰ ; NR ¹¹ C(=O)OR ¹⁵ ; OC(=O)R ²⁰ ; OC(=O)NR ¹¹ R ²⁰ ; О-(С _1-6 алкилен)-R ²⁴ ; Z ¹ -(С _1-6 алкилен)-R ²³ , где Z ¹ выбирают из CO ₂ , O ₂ C, C(=O), NR ¹¹ C(=O) и NR ¹¹ C(=O)O; и (C _1-6 алкилен)-Z ² -(C _1-6 алкилен)-R ²³ , где Z ² выбирают из О, S(O) _y , C(=O)NR ¹¹ , NR ¹¹ C(=O), NR ¹¹ C(=O)NR ¹¹ , OC(=O)NR ¹¹ , NR ¹¹ C(=O)O;

где указанные алкиленовые группы необязательно замещены от одной до трех R ¹⁰ группами;

другие R ³ , R ⁴ , R ⁵ или R ⁶ фрагменты могут быть независимо выбраны из Н, R ¹⁰ , необязательно замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _2-6 алкенила и необязательно замещенного С _2-6 алкинила, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

Q выбирают из необязательно замещенного C _1-2 алкилена, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹⁰ выбирают из C _1-6 алкила, С _3-10 циклоалкила, С _3-10 спироциклоалкила, С _6-10 арила, 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, С _6-10 арилалкокси, F, Cl, Br, I, CN, CF ₃ , NR ^27A R ^27B , NO ₂ , OR ²⁵ , OCF ₃ , =O, =NR ²⁵ , =N-OR ²⁵ , =N-N(R ²⁵ ) ₂ , OC(=O)NHR ¹¹ , O-Si(R ¹⁶ ) ₄ , O-тетрагидропиранила, этиленоксида, NR ¹⁶ C(=O)R ²⁵ , NR ¹⁶ CO ₂ R ²⁵ , NR ¹⁶ C(=O)NR ^27A R ^27B , NHC(=NH)NH ₂ , NR ¹⁶ S(O) ₂ R ²⁵ , S(O) _y R ²⁵ , CO ₂ R ²⁵ , C(=O)NR ^27A R ^27B , C(=O)R ²⁵ , CH ₂ OR ²⁵ , (CH ₂ ) _P OR ²⁵ , CH=NNR ^27A R ^27B , CH=NOR ²⁵ , CH=NR ²⁵ , CH=NNHCH(N=NH)NH ₂ , S(=O) ₂ NR ^27A R ^27B , P(=O)(OR ²⁵ ) ₂ , OR ¹³ и моносахарида, в котором каждая гидроксильная группа моносахарида независима или является незамещенной, или заменена на Н, C _1-6 алкил, C _1-6 алкилкарбонилокси или С _1-6 алкокси;

R ¹¹ выбирают из Н и необязательно замещенного C _1-6 алкила, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹² выбирают из необязательно замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _6-10 арила и необязательно замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹³ является остатком аминокислоты после удаления гидроксильного фрагмента из ее карбоксильной группы;

R ¹⁴ является необязательно замещенным 5-10-членным гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹⁵ является необязательно замещенным C _1-6 алкилом, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹⁶ является Н или С _1-6 алкилом;

R ¹⁷ выбирают из необязательно замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _6-10 арила, необязательно замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила и необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹⁸ выбирают из Н, необязательно замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _6-10 арила, необязательно замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила и необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ¹⁹ выбирают из необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила, необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, и необязательно замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ²⁰ выбирают из замещенного С _6-10 арила, замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила, необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ²¹ выбирают из замещенного C _1-6 алкила, необязательно замещенного С _2-6 алкенила, необязательно замещенного С _2-6 алкинила, замещенного С _6-10 арила, замещенного С _7-10 арилалкила, замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила и необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ²² выбирают из замещенного С _6-10 арила и замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ²³ выбирают из необязательно замещенного С _2-6 алкенила, необязательно замещенного С _2-6 алкинила, необязательно замещенного С _6-10 арила, необязательно замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила, необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, OR ²¹ , O(CH ₂ ) _p OR ²¹ , (CH ₂ ) _P OR ²¹ , SR ¹⁸ , SOR ¹⁷ , SO ₂ R ¹⁸ , CN, N(R ²⁰ ) ₂ , CHOH(CH ₂ ) _p N(R ¹¹ ) ₂ , C(=O)N(R ¹⁸ ) ₂ , NR ¹⁸ C(=O)R ¹⁸ , NR ¹⁸ C(=O)N(R ¹⁸ ) ₂ , C(=NR ¹⁸ )OR ¹⁸ , C(R ¹² )=NOR ¹⁸ , NHOR ²¹ , NR ¹⁸ C(=NR ¹⁸ )N(R ¹⁸ ) ₂ , NHCN, CONR ¹⁸ OR ¹⁸ , CO ₂ R ¹⁸ , OCOR ¹⁷ , ОС(=O)N(R ¹⁸ ) ₂ , NR ¹⁸ C(=O)OR ¹⁷ и C(=O)R ¹⁸ , в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ²⁴ выбирают из необязательно замещенного С _2-6 алкенила, необязательно замещенного С _6-10 арила, необязательно замещенного 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила, необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, CN, OR ²¹ , O(CH ₂ ) _p OR ²¹ , (CH ₂ ) _p OR ²¹ , SR ¹⁹ , SOR ¹⁷ , SO ₂ R ¹⁸ , CHOH(CH ₂ ) _P N(R ¹¹ ) ₂ , NR ¹⁸ C(=O)R ¹⁸ , NR ¹⁸ C(=O)N(R ¹⁸ ) ₂ , C(=NR ¹⁸ )OR ¹⁸ , NHOR ²¹ , NR ¹⁸ C(=NR ¹⁸ )N(R ¹⁸ ) ₂ , NHCN, С(=O)N(R ¹⁸ ) ₂ , C(=O)NR ^27A R ^27B , C(=O)NR ¹¹ R ²⁸ , С(=O)NR ¹⁸ OR ¹⁸ , С(=O)NR ¹¹ N(R ¹¹ ) ₂ , C(=O)NR ¹¹ (алкилен)NR ^27A R ^27B , CO ₂ R ¹⁸ , OCOR ¹⁷ , OC(=O)N(R ¹⁸ ) ₂ , NR ¹⁸ C(=O)OR ¹⁷ , C(=O)NR ¹¹ R ¹⁸ и C(=O)R ¹⁸ , в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ²⁵ является Н, С _1-6 алкилом, С _6-10 арилом, 5-10-членным гетероарилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, С _6-10 циклоалкилом или 3-10-членным гетероциклоалкилом, содержащим по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-;

R ²⁶ выбирают из необязательно замещенного С _3-10 циклоалкила и необязательно замещенного 3-10-членного гетероциклоалкила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в которых указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

R ^27A и R ^27B , каждую независимо, выбирают из Н и C _1-6 алкила или вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенный 3-13-членный гетероциклоалкил, содержащий по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-, в котором указанные необязательные заместители выбирают из C _1-6 алкила, С _6-10 арила и 5-10-членного гетероарила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, такой как -O-, -S- или -N-;

R ²⁸ является необязательно замещенным С _7-18 арилалкилом, в котором указанные необязательные заместители составляют от одной до трех R ¹⁰ групп;

р выбирают независимо из 1, 2, 3 и 4;

у выбирают независимо из 0, 1 и 2; и

его стереоизомер или фармацевтически приемлемую соль.

В другом варианте осуществления предполагается, что соединения формулы I, определенные в этом описании, не включают в себя любые соединения, раскрытые в публикации РСТ WO 98/07433. В частности, когда А ¹ , А ² являются =O, В ¹ , В ² являются независимо Н или ОН или В ¹ , В ² объединяются с образованием =O; кольца А и В, каждое, являются фениленом; Q является CH-R ^a и одна из R ² или R ^a является Н и другая необязательно замещена

где W необязательна замещена С ₁ алкилом или NR ^27A R ^27B ; тогда любая из R ³ , R ⁴ , R ⁵ и R ⁶ может включать OR ¹⁴ или О-(алкилен)-R ²⁴ .

Другие аспекты настоящего изобретения включают соединения формулы I, определенные в этом описании, в которых кольцо А является фениленом или 5-членным ароматическим кольцом, содержащим один атом азота, предпочтительно пиразолиленом и более предпочтительно

Дополнительные аспекты включают те соединения, в которых R ¹ является Н или необязательно замещенным алкилом. Другой аспект включает те соединения, в которых R ² является Н, C(=O)R ^2a , С(=O)NR ^2c R ^2d , SO ₂ R ^2b , CO ₂ R ^2b , необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом, и предпочтительно Н, необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом, и более предпочтительно R ² является Н или необязательно замещенным алкилом. Дополнительные аспекты включают те соединения, в которых группы А ¹ , А ² являются Н, Н и В ¹ , В ² вместе образуют =O. В еще одном аспекте изобретение включает соединения, в которых Q выбирают из необязательно замещенного С _1-2 алкилена или предпочтительно, чтобы Q являлось СН ₂ или СН ₂ СН ₂ . Дополнительные аспекты включают те соединения, в которых R ¹⁴ является бензоксазолом, бензотиазолом, пиримидином, пиразином или триазином; R ²² является 5-членной гетероарильной группой; R ²⁰ является гетероциклоалкилом или гетероарилом; R ²³ является гетероарилом или гетероциклоалкилом; R ²⁴ является гетероарилом и R ²⁶ является гетероциклоалкилом. Дополнительные аспекты настоящего изобретения включают любые комбинации указанных выше предпочтительных заместителей, такие как, например, соединение формулы I с предпочтительными фрагментами групп R ¹ и R ² , или R ¹ и Q, или R ¹ , R ² , или Q и т.д.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения включены соединения со структурой формулы II

В одном аспекте включены соединения формулы II, в которых кольцо А является фениленом или пиразолиленом, предпочтительно

Другой аспект включает те соединения, в которых R ¹ является Н или необязательно замещенным алкилом. Дополнительные аспекты включают те соединения, в которых R ² является Н, C(=O)R ^2a , C(=O)NR ^2c R ^2d , SO ₂ R ^2b , CO ₂ R ^2b , необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом, и предпочтительно Н, необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом, и более предпочтительно, чтобы R ² являлось Н или необязательно замещенным алкилом. Дополнительные аспекты включают соединения, в которых Q выбирают из необязательно замещенного C _1-2 алкилена или предпочтительно, чтобы Q являлось СН ₂ или СН ₂ СН ₂ . Дополнительные аспекты настоящего изобретения включают любую комбинацию вышеуказанных предпочтительных заместителей, такую как, например, соединение формулы II с предпочтительными фрагментами групп R ¹ и R ² , или R ¹ и Q, или R ¹ , R ² , или Q и т.д.

В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения включены соединения со структурой формулы III

в котором предпочтительно, чтобы кольцо А являлось фениленом или пиразолиленом, предпочтительно

и R ¹ является Н или необязательно замещенным алкилом;

и формулы IV

и формулы V

и формулы VI

В определенных аспектах настоящего изобретения включены соединения формул III-VI, в которых R ² является Н, C(=O)R ^2a , С(=O)NR ^2c R ^2d , SO ₂ R ^2b , CO ₂ R ^2b , необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом, и предпочтительно Н, необязательно замещенным алкилом, необязательно замещенным алкенилом, необязательно замещенным алкинилом или необязательно замещенным циклоалкилом, и более предпочтительно, чтобы R ² являлась Н или необязательно замещенным алкилом. Другие аспекты включают те соединения, в которых Q выбирают из необязательно замещенного С _1-2 алкилена или предпочтительно, чтобы Q являлось СН ₂ или СН ₂ СН ₂ . Дополнительные аспекты настоящего изобретения включают любую комбинацию вышеуказанных предпочтительных заместителей для каждой из формул III-VI.

В следующих абзацах показаны дополнительные аспекты изобретения для, по меньшей мере, R ³ , R ⁴ , R ⁵ и R ⁶ для соединений формул I-VI и их соответствующие предпочтительные варианты осуществления, описанные ранее:

1) OR ¹⁴ ; особенно те, в которых R ¹⁴ необязательно замещена бензоксазолом, необязательно замещена бензотиазолом, необязательно замещена пиримидином, необязательно замещена пиразином или необязательно замещена триазином;

2) C(=O)R ²² ; особенно те, в которых R ²² необязательно замещена 5-членной гетероарильной группой;

3) CH=NR ²⁶ ; особенно те, в которых R ²⁶ необязательно замещена гетероциклоалкилом;

4) NR ¹¹ C(=O)R ²⁰ ; особенно те, в которых R ²⁰ необязательно замещена гетероарилом;

5) NR ¹¹ C(=O)OR ¹⁵ ;

6) OC(=O)R ²⁰ ; особенно те, в которых R ²⁰ необязательно замещена гетероциклоалкилом;

7) ОС(=O)NR ¹¹ R ²⁰ ; особенно те, в которых R ²⁰ необязательно замещена циклоалкилом или необязательно замещена гетероциклоалкилом;

8) О-(алкилен)-R ²⁴ ; особенно те, в которых R ²⁴ необязательно замещена гетероциклоалкилом;

9) Z ¹ -(алкилен)-R ²³ , в которой Z ¹ выбирают из СО ₂ , О ₂ С, C(=O), NR ¹¹ , NR ¹¹ C(=O) и NR ¹¹ C(=O)O; особенно те, в которых Z ¹ является С(=O) или NR ¹¹ ;

10) (алкилен)-Z ² -(алкилен)-R ²³ , в которой Z ² выбирают из О, S(O) _y , C(=O)NR ¹¹ , NR ¹¹ C(=O), NR ¹¹ C(=O)NR ¹¹ , OC(=O)NR ¹¹ , NR ¹¹ C(=O)O; особенно те, в которых Z ² является О, C(=O)NR ¹¹ или NR ¹¹ C(=O).

Предшествующие абзацы могут быть объединены для дальнейшего обозначения предпочтительных вариантов осуществления соединений формул I-VI. Например, одна такая комбинация для R ³ , R ⁴ , R ⁵ или R ⁶ может включать OR ¹⁴ ; C(=O)R ²² ; NR ¹¹ C(=O)R ²⁰ ; NR ¹¹ C(=O)OR ¹⁵ ; OC(=O)R ²⁰ или ОС (=O)NR ¹¹ R ²⁰ .

Другая такая комбинация включает OR ¹⁴ ; C(=O)R ²² и NR ¹¹ C(=O)OR ¹⁵ .

Третья такая комбинация включает OR ¹⁴ , где R ¹⁴ является бензоксазолом, бензотиазолом, пиримидином, пиразином или триазином; C(=O)R ²² , где R ²² является 5-членной гетероарильной группой; NR ¹¹ C(=O)R ²⁰ , где R ²⁰ является гетероарилом; NR ¹¹ C(=O)OR ¹⁵ ; OC(=O)R ²⁰ , где R ²⁰ является гетероциклоалкилом; или ОС(=O)NR ¹¹ R ²⁰ , где R ²⁰ является циклоалкилом, где каждая R ¹⁴ , R ²² и R ²⁰ необязательно замещена, как установлено выше.

Следующие используемые здесь термины и выражения имеют указанные значения.

Предполагается, что в описанных и заявленных здесь формулах в случае, когда любой символ появляется более чем один раз в конкретной формуле или заместителе, его значение в каждом отдельном случае не зависит от другого.

Используемый здесь термин "около" относится к области значений ±10% определяемой величины. Например, фраза "около 50 мг" подразумевает ±10% от 50 или от 45 до 55 мг.

Используемая здесь область значений в виде "х-у", или "от х до у", или "от х по у включительно" включает целые числа х, у и целые числа, находящиеся между ними. Например, предполагается, что фразы "1-6", или "от 1 до 6", или "от 1 до 6 включительно" включают целые числа 1, 2, 3, 4, 5 и 6. Предпочтительные варианты осуществления включают каждое индивидуальное целое число в интервале, также как и любую комбинацию целых чисел. Например, предпочтительные целые числа для "1-6" могут включать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6 и т.д.

Используемые здесь "стабильное соединение" или "стабильная структура" относятся к соединению, которое достаточно устойчиво в процессе выделения в чистом виде до приемлемой степени чистоты из реакционной смеси и предпочтительно пригодно для приготовления лекарственной формы эффективного терапевтического средства. Настоящее изобретение относится только к стабильным соединениям.

Используемый здесь термин "алкил" относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей от 1 до 8 углеродных атомов, такой как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изоамил, неопентил, 1-этилпропил, 3-метилпентил, 2,2-диметилбутил, 2,3-диметилбутил, гексил, октил и т.д. Алкильный фрагмент алкилсодержащих групп, таких как алкоксильной, алкоксикарбонильной и алкиламинокарбонильной групп, имеет такое же значение, как алкил, определенный выше. Низшие алкильные группы, которые являются предпочтительными, представляют собой определенные выше алкильные группы, которые содержат от 1 до 4 углеродов. Такое обозначение как "С ₁ -С ₄ алкил" относится к алкильному радикалу, содержащему от 1 до 4 углеродных атомов.

Используемый здесь термин "алкенил" относится к линейным или разветвленным углеводородным цепям от 2 до 8 углеродных атомов, имеющим по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод. Обозначение "С ₂ -С ₈ алкенил" относится к алкенильному радикалу, содержащему от 2 до 8 углеродных атомов. Примеры алкенильных групп включают этенильную, пропенильную, изопропенильную, 2,4-пентадиенильную и т.д.

Используемый здесь термин "алкинил" относится к линейным или разветвленным углеводородным цепям от 2 до 8 углеродных атомов, имеющим по меньшей мере одну тройную связь углерод-углерод. Обозначение "С ₂ -С ₈ алкинил" относится к алкинильному радикалу, содержащему от 2 до 8 углеродных атомов. Примеры алкинильных групп включают этинильную, пропинильную, изопропинильную, 3,5-гексадиинильную и т.д.

Используемый здесь термин "алкилен" относится к линейному или разветвленному углеводороду, имеющему от 1 до 8 углеродных атомов, который образован удалением двух атомов водорода. Такое обозначение как "С ₁ -С ₄ алкилен" относится к алкиленовому радикалу, содержащему от 1 до 4 углеродных атома. Примеры включают метилен (-СН ₂ -), пропилиден (СН ₃ СН ₂ СН=), 1,2-этандиил (-СН ₂ СН ₂ -) и т.д.

Используемый здесь термин "фенилен" относится к фенильной группе с дополнительным удаленным атомом водорода, то есть к фрагменту со структурой

Используемый здесь термин "циклоалкил" относится к насыщенной или частично насыщенной моно- или бициклической алкильной кольцевой системе, содержащей от 3 до 10 углеродных атомов. Такое обозначение как "С ₅ -С ₇ циклоалкил" относится к циклоалкильному радикалу, содержащему от 5 до 7 углеродных атомов в кольце. Предпочтительные циклоалкильные группы включают те, которые содержат 5 или 6 углеродных атомов в кольце. Примеры циклоалкильных групп включают циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную, циклогексильную, циклогексенильную, циклогептильную, циклооктильную и т.д.

Используемый здесь термин "спироциклоалкил" относится к циклоалкильной группе, связанной с углеродной цепью или фрагментом углеродного кольца углеродным атомом, являющимся общим для циклоалкильной группы и углеродной цепи или фрагмента углеродного кольца. Например, С ₃ алкильная группа, замещенная R группой, где R группа является спироциклоалкильной, содержащей 5 углеродных атомов, относится к

Используемый здесь термин "арил" относится к моно- или бициклической углеводородной ароматической кольцевой системе, имеющей от 6 до 12 углеродных атомов в кольце. Примеры включают фенил и нафтил. Предпочтительные арильные группы включают фенильную и нафтильную группы. Под определение "арил" попадают конденсированные кольцевые системы, включая, например, кольцевые системы, в которых ароматическое кольцо является конденсированным к циклоалкильному кольцу. Примеры таких конденсированных кольцевых систем включают, например, индан и инден.

Используемые здесь термины "гетероцикл", "гетероциклический" или "гетероциклил" относятся к моно- ди-, три- или другой полициклической алифатической кольцевой системе, которая включает по меньшей мере один гетероатом, такой как О, N или S. Гетероатомы азота и серы могут быть необязательно окисленными, и азот может быть необязательно замещенным в неароматических кольцах. Предполагается, что гетероциклы включают гетероарильные и гетероциклоалкильные группы.

Некоторые гетероциклические группы, содержащие один или несколько атомов азота, включают пирролидиновую, пирролиновую, пиразолиновую, пиперидиновую, морфолиновую, тиоморфолиновую, N-метилпиперазиновую, индоловую, изоиндоловую, имидазоловую, имидазолиновую, оксазолиновую, оксазоловую, триазоловую, тиазолиновую, тиазоловую, изотиазоловую, тиадиазоловую, триазиновую, изоксазоловую, оксиндоловую, пиразоловую, пиразолоновую, пиримидиновую, пиразиновую, хинолиновую, изохинолиновую и тетразоловую группы. Некоторые образованные гетероциклические группы, содержащие один или более атомов кислорода, включают фурановую, тетрагидрофурановую, пирановую, бензофурановую, изобензофурановую и тетрагидропирановую группы. Некоторые гетероциклические группы, содержащие один или несколько атомов серы, включают тиофеновую, тианафтеновую, тетрагидротиофеновую, тетрагидротиапирановую и бензотиофеновые группы.

Используемый здесь термин "гетероциклоалкил" относится к циклоалкильной группе, в которой один или несколько углеродных атомов кольца заменены по крайней мере на один гетероатом, такой как -O-, -N- или -S-, и включает кольцевые системы, которые содержат насыщенную кольцевую группу, соединенную мостиковой связью или конденсированную с одной или несколькими ароматическими группами. Некоторые гетероциклоалкильные группы, содержащие как насыщенные, так и ароматические кольца, включают фталамид, фталевый ангидрид, индолин, изоиндолин, тетрагидроизохинолин, хроман, изохроман и хромен.

Используемый здесь термин "гетероарил" относится к арильной группе, содержащей от 5 до 10 углеродных атомов кольца, в которой один или несколько углеродных атомов кольца заменены по меньшей мере на один гетероатом, такой как -О-, -N- или -S-. Некоторые гетероарильные группы настоящего изобретения включают пиридильную, пиримидильную, пуринильную, пирролильную, пиридазинильную, пиразинильную, триазинильную, имидазолильную, триазолильную, тетразолильную, индолильную, изоиндолильную, хинолильную, изохинолильную, хиноксалинильную, хиназолинильную, циннолинильную, фталазинильную, бензоимидазолильную, пиразолильную, тиазолильную, тиадиазолильную, изотиазолильную, оксазолильную, изоксазолильную, нафтиридильную, оксиндолильную и бензотиазолильную группы.

Используемый здесь термин "арилалкил" относится к алкильной группе, которая замещена арильной группой. Примеры арилалкильных групп включают, но этим не ограничивая, бензил, фенетил, бензгидрил, дифенилметил, трифенилметил, дифенилэтил, нафтилметил и т.д.

Используемый здесь термин "арилалкокси" относится к арилзамещенной алкоксигруппе, такой как бензилокси, дифенилметокси, трифенилметокси, фенилэтокси, дифенилэтокси и т.д.

Используемый здесь термин "моносахарид" относится к простому сахару формулы (СН ₂ О) _n . Моносахариды могут быть с прямой цепью или кольцевыми системами и могут включать фрагмент сахарозы формулы -СН(ОН)-С(=O)-. Примеры моносахаридов включают эритрозу, треозу, рибозу, арабинозу, ксилозу, ликсозу, аллозу, альтрозу, глюкозу, маннозу, гулозу, идозу, галактозу, талозу, эритулозу, рибулозу, ксилозу, псикозу, фруктозу, сорбозу, тагатозу, эритропентулозу, треопентулозу, глицеротетрулозу, глюкопиранозу, фруктофуранозу и т.д.

Используемый здесь термин "аминокислота" относится к группе, содержащей как аминогруппу, так и карбоксильную группу. Варианты осуществления аминокислот включают α-амино-, β-амино-, γ-аминокислоты. α-Аминокислоты имеет общую формулу НООС-СН(боковая цепь)-NH ₂ . Аминокислоты могут находиться в D, L или рацемической конфигурациях. Аминокислоты включают встречающиеся в природе и не встречающиеся в природе фрагменты. Встречающиеся в природе аминокислоты включают 20 стандартных α-аминокислот, обнаруженных в белках, такие как глицин, серин, тирозин, пролин, гистидин, глутамин и т.д. Присутствующие в природе аминокислоты могут также включать не- α-аминокислоты (такие как β-аланин, γ-аминомасляная кислота, гомоцистеин и т.д.), редкие аминокислоты (такие как 4-гидроксипролин, 5-гидроксилизин, 3-метилгистидин и т.д.) и небелковые аминокислоты (такие как цитруллин, орнитин, канаванин и т.д.). Не встречающиеся в природе аминокислоты хорошо известны в технике и включают аналоги природных аминокислот. См. монографию Lehninger A.L. Biochemistry, 2 ^nd ed.; Worth Publishers: New York, 1975; 71-77, чье описание включено здесь путем ссылки на соответствующий источник. Не встречающиеся в природе аминокислоты также включают α-аминокислоты, в которых боковые цепи заменены на синтетические производные. В определенных вариантах осуществления замещающие группы для соединений настоящего изобретения включают остаток аминокислоты после удаления гидроксильного фрагмента ее карбоксильной группы, то есть группы формулы -С(=O)СН(боковая цепь)-NH ₂ . Типичные боковые цепи встречающихся в природе и не встречающихся в природе α-аминокислот включают приведенные ниже в табл. А.

Таблица А

Используемый здесь термин "trk" относится к семейству высокоаффинных к нейротрофину рецепторов, содержащему на настоящий момент trk A, trk В, trk С, и другие ассоциированные с мембраной белки, с которыми нейротрофин может связываться.

Используемый здесь термин "VEGFR" относится к семейству рецепторов, высокоаффинных к сосудистому эндотелиальному фактору роста, содержащему на настоящий момент VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3 и другие ассоциированные с мембраной белки, с которыми VEGF может связываться.

Используемый здесь термин "MLK" относится к семейству высокоаффинных киназ смешанной линии, содержащему на настоящий момент MLK1, MLK2, MLK3, MLK4 α и β, DLK, LZK, ZAK α и β и другие серин/треонин киназы, классифицированные внутри этого семейства.

Используемые здесь термины "усилить, повысить" или "усиление", когда они применяются для характеристики изменения терминов "функция" или "выживание", означают, что присутствие соединения настоящего изобретения оказывает положительное воздействие на функцию и/или выживание клетки в ответ на трофический фактор по сравнению с клеткой при отсутствии соединения. Например, но не в качестве ограничения, в отношении выживания, например, холинергического нейрона соединение настоящего изобретения однозначно повышает выживаемость холинергической нейронной популяции при риске смерти (в результате, например, травмы, болезненного состояния, дегенеративного состояния или естественного развития) по сравнению с холинергической нейронной популяцией при отсутствии такого соединения, то есть когда подвергнутая лечению популяция имеет сравнительно больший период функционирования, чем популяция, не подвергавшаяся лечению. В качестве дополнительного примера и опять не с целью ограничения в отношении функции, например, сенсорного нейрона соединение настоящего изобретения однозначно усиливает функцию (например, удлинение аксона) популяции сенсорного нейрона по сравнению с популяцией сенсорного нейрона в отсутствии такого соединения, то есть когда удлинение аксона подвергнутой лечению популяции сравнительно больше, чем удлинение аксона не подвергнутой лечению популяции.

Используемые здесь термины "ингибировать" или "ингибирование" относятся к относительному снижению специфического ответа обозначенного материала (например, ферментативной активности) в присутствии соединения настоящего изобретения.

Используемые здесь термины "рак" или "злокачественный" относятся к любой злокачественной пролиферации клеток у млекопитающего. Примеры включают рак предстательной железы, доброкачественную гиперплазию предстательной железы, рак яичников, молочной железы, мозга, легких, поджелудочной железы, толстой кишки, кишечника, желудка, солидные опухоли, рак головы и шеи, нейробластому, рак почки, лимфому, лейкоз, другие распознаваемые злокачественные опухоли системы кроветворения и другие распознаваемые раки.

Используемые здесь термины "нейрон", "клетка нейронной линии" и "нейронная клетка" относятся к гетерогенной популяции нейронных типов, имеющих один или множество медиаторов и/или одну или множество функций; предпочтительно, чтобы они являлись холинергическими и сенсорными нейронами. Используемая здесь фраза "холинергический нейрон" обозначает нейрон центральной нервной системы (ЦНС) и периферической нервной системы (ПНС), нейромедиатором которого является ацетилхолин; типичными примерами являются нейроны базального переднего мозга и спинного мозга. Используемая здесь фраза "сенсорный нейрон" включает нейроны, реагирующие на раздражители внешней окружающей среды (например, температуру, движение), например, кожи, мышц и суставов; примером является нейрон DRG.

Используемый здесь термин "трофический фактор" относится к молекуле, которая непосредственно или косвенно действует на выживаемость или функцию ответа клетки на трофический фактор. Примеры трофических факторов включают цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), инсулин и инсулиноподобные факторы роста (например, IGF-I, IGF-II, IGF-III), интерфероны, интерлейкины, цитокины и нейротрофины, включая фактор роста нервов (NGF), нейротрофин-3 (NT-3), нейротрофин-4/5 (NT-4/5) и нейротропный фактор мозгового происхождения (BDNF).

Используемый здесь термин "клетка, отвечающая на трофический фактор" относится к клетке, которая включает рецептор, с которым трофический фактор может специфически связываться; примеры включают нейроны (например, холинергические и сенсорные нейроны) и ненейронные клетки (например, моноциты и опухолевые клетки).

Используемые здесь термины "активность трофического фактора" и "активность, индуцированная трофическим фактором", относятся как к эндогенным, так и экзогенным трофическим факторам, где "эндогенный" относится к обычно присутствующему трофическому фактору и "экзогенный" относится к трофическому фактору, вводимому в систему. По определению "активность, индуцированная трофическим фактором" включает активность, индуцированную (1) эндогенными трофическими факторами; (2) экзогенными трофическими факторами и (3) комбинацией эндогенных и экзогенных трофических факторов.

Используемый здесь термин "при риске смерти" в сочетании с биологическим материалом, например клеткой, такой как нейрон, относится к состоянию или условию, которые негативно воздействуют на биологический материал так, что материал имеет повышенную вероятность смерти из-за такого состояния или условия. Например, раскрытые здесь соединения могут "спасти" или повысить выживание мотонейронов, которые являются обычно при риске смерти основой модели запрограммированной гибели клетки. Аналогичным образом, например, нейрон может иметь риск смерти в силу естественного процесса старения, который служит причиной гибели нейрона, или в результате травмы, такой как травма головы, последствия которой для нейронов и/или нервной ткани могут быть связаны с риском гибели. Кроме того, например, нейрон может быть связан с риском смерти в результате болезненного состояния или условия, как в случае нейронов, связанных с риском гибели при заболевании ALS (боковом амиотрофическом склерозе). Таким образом, повышение выживаемости клетки при риске гибели при применении соединения заявляемого изобретения означает, что такое соединение понижает или предотвращает риск смерти клетки.

Используемый здесь термин "контактирование" относится к непосредственному или косвенному размещению фрагментов вместе, так что фрагменты непосредственно или косвенно вступают в физическое присоединение друг с другом, в результате чего достигается желаемый результат. Таким образом, в изобретении можно использовать "контактирование" клетки-мишени с раскрытым здесь соединением, даже если соединение и клетка необязательно физически объединяются (как, например, в случае, когда физически объединяются лиганд и рецептор), до тех пор, пока не достигается желаемый результат (например, повышение выживания клетки). Контактирование, таким образом, включает действия, такие как помещение фрагментов вместе в контейнере (например, введение раскрываемого здесь соединения в контейнер, содержащий клетки для исследований in vitro), так же как и введение соединения в конкретный организм (например, инъекция раскрываемого здесь соединения лабораторному животному для тестирования in vivo или человеку в целях терапии или лечения).

Используемый здесь термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения настоящего изобретения, эффективному для предотвращения или лечения симптомов конкретного заболевания.

Используемый здесь термин "объект" относится к теплокровному животному, такому как млекопитающее, предпочтительно человеку и ребенку, который болен или имеет вероятность заболеть одним или более описанными здесь заболеваниями или состояниями.

Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые являются на основе обоснованного медицинского заключения пригодными для контактирования с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблемных осложнений, соразмерных с соотношением "приемлемый эффект/риск".

Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к производным раскрытых соединений, когда исходное соединение модифицируют путем получения его кислых или основных солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но этим не ограничивая, соли минеральной или органической кислоты основных остатков, таких как амины, основные или органические соли кислых остатков, таких как карбоновые кислоты и подобные. Фармацевтически приемлемые соли включают обычные нетоксичные соли или соли четвертичного аммония, образованные исходными соединениями, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие обычные нетоксичные соли включают производные неорганических кислот, таких как хлористо-водородная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и подобные; и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изэтиновая и подобные.

Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения могут быть получены из исходного соединения, которое содержит основной или кислотный фрагмент, обычными химическими методами. Обычно такие соли могут быть получены взаимодействием этих соединений в форме свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде, или органическом растворителе, или в их смеси. Обычно предпочтительны такие неводные среды, как сложный эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Перечень соответствующих солей можно найти в монографии Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p.1418, раскрытие которой приводится здесь путем ссылки на соответствующий источник.

Используемый здесь термин "разовая доза" относится к однократной дозе, которая может быть введена пациенту, которая удобна при применении и может быть упакована, сохраняя физическую и химическую стабильность, которая содержит или активное соединение как таковое, или в виде фармацевтически приемлемой композиции, описанной далее.

Предполагается, что используемый здесь термин "пролекарство" включает любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают активное исходное соединение, описанное в настоящем изобретении, in vivo, когда такое пролекарство вводят млекопитающему. Так как известно, что пролекарство улучшает многочисленные требуемые качества лекарственных препаратов (например, растворимость, биологическую усвояемость, технологичность и т.д.), соединения настоящего изобретения могут быть введены в форме пролекарства. Таким образом, настоящее изобретение предусматривает пролекарства заявляемых соединений, композиции, содержащие таковые, и способы их введения. Пролекарства соединения настоящего изобретения могут быть получены модификацией функциональных групп, присутствующих в соединении, таким путем, чтобы модификации распадались или при обычной процедуре, или in vivo на исходное соединение. Поэтому пролекарства включают, например, соединения настоящего изобретения, в которых гидрокси, амино или карбоксильная группа связана с любой группой так, что когда пролекарство вводят млекопитающему, оно расщепляется с образованием свободного гидроксила, свободного амина или карбоновой кислоты соответственно. Примеры включают, но этим не ограничивая, ацетат, формиат и бензоат производные спиртовой и аминной функциональных групп и алкиловые, карбоциклические, ариловые и алкилариловые сложные эфиры, такие как метиловый, этиловый, пропиловый, изопропиловый, бутиловый, изобутиловый, втор-бутиловый, трет-бутиловый, циклопропиловый, фениловый, бензиловый и фенетиловый эфиры и подобные.

Известно, что соединения настоящего изобретения могут существовать в различных стереоизомерных формах. По существу, соединения настоящего изобретения включают их соответствующие диастереомеры или энантиомеры. Соединения обычно получают в виде рацематов, и они могут быть удобно использованы сами по себе, но могут быть, если это необходимо, и выделены или синтезированы индивидуальные диастереомеры или энантиомеры традиционными методами. Такие рацематы и индивидуальные диастереомеры или энантиомеры и их смеси образуют часть настоящего изобретения.

В технике хорошо известно, как приготовить и выделить такие оптически активные формы. Специфические стереоизомеры могут быть получены стереоспецифическим синтезом, используя энантиомерно чистые или энантиомерно обогащенные исходные материалы. Специфические стереоизомеры из исходных материалов или продуктов могут быть разделены и извлечены известными в технике методами, такими как повторное растворение рацемических форм; обычной, с обращенной фазой и хиральной хроматографией; перекристаллизацией, ферментным разделением или фракционной перекристаллизацией солей присоединения, образованных реагентами, используемыми для этой цели. Применяемые способы разделения и извлечения специфических стереоизомеров описаны в монографиях Eliel E.L., Wilen S.H. Stereochemistry of Organic Compounds; Wiley: New York, 1994, and Jacques J. et al. Enantiomers, Racemates, and Resolutions; Wiley: New York, 1981, каждая из которых включена в описание изобретения путем ссылки на соответствующие источники.

Кроме того, общепризнано, что функциональные группы, присутствующие в соединениях настоящего изобретения, могут содержать защитные группы. Например, заместители в боковой цепи аминокислоты соединений настоящего изобретения могут быть замещены защитными группами, такими как бензилоксикарбонильной или трет-бутоксикарбонильной группами. Известно, что защитные группы, по существу, являются химическими функциональными группами, которые могут селективно присоединяться к удаленным их функциональностям, таким как гидроксильные группы и карбоксильные группы. Эти группы присутствуют в химическом соединении для того, чтобы сделать такие функциональности инертными к условиям химических реакций, которым подвергается соединение. Любая из множества защитных групп может быть использована в настоящем изобретении. Предпочтительные группы для защиты лактамов включают силильные группы, такие как трет-бутилдиметилсилильные ("TBDMS"), диметоксибензгидрильные ("DMB"), ацильные, бензильные и метоксибензильные группы. Предпочтительные группы для защиты гидроксигрупп включают TBS, ацил, бензил ("Bn"), бензилокарбонил ("CBZ"), трет-бутилоксикарбонил ("Boc") и метоксиметил. Многие другие стандартные защитные группы, применяемые специалистами в этой области, могут быть найдены в монографии Greene T.W. and Wuts P.G.M., "Protective Groups in Organic Synthesis" 2d. Ed., Wiley & Sons, 1991.

Синтез

Общие направления для получения соединений примеров, приведенных в табл. 1-3 настоящего изобретения, показаны на схемах 1-4. Промежуточные соединения, используемые для получения соединений примеров, и их масс-спектральные данные приведены в табл. В. Реагенты и исходные материалы являются коммерчески доступными или легко синтезируются хорошо известными специалистам в этой области способами. Предполагается, что все способы, раскрытые в связи с настоящим изобретением, осуществляются в любом масштабе, включая миллиграмм, грамм, граммы, килограмм, килограммы или в промышленном масштабе. Все заместители в схемах синтезов, если не указано иначе, определены выше.

Таблица В

Основные методики получения пирролокарбазолов настоящего изобретения описаны в патентах США 5705511 ("'511 патент") и 6630500, публикации РСТ WO 00/47583, J. Heterocyclic Chemistry, 2001, 38, 591, and J. Heterocyclic Chemistry, 2003, 40, 135. Обычно азот в лактаме или промежуточные спиртовые группы промежуточных соединений, перечисленных в таблице В, могут быть защищены такими группами, как ацетил, замещенный силил, бензил, Boc или диметоксибензгидрол.

Промежуточное соединение I-23 (где R является водородом), используемое для получения соединений примеров в табл. 2, получали из β-кетона, 2-метил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-индазол-5-она (Peet N.P., LeTourneau M.E. Heterocycles, 1991, 32, 41), используя способы, описанные в '511 патенте и в J. Heterocyclic Chemistry, 2003, 40, 135.

Схема 1

Как показано на схеме 1, производные N1-метилпиразола в табл. 3 получали из 1-метил- α-кетона (J. Chem. Res., 1986, 1401). Промежуточные соединения N2-метилпиразола получали согласно методикам, приведенным в J. Heterocyclic Chem. 1992, 19, 1355.

Схема 2

На схеме 2 в общих чертах показан способ получения производных карбаматного типа, таких как соединения примеров 1-2 и 70-72. В альтернативном способе получения N,N-дизамещенных карбаматов использовали в качестве промежуточного соединения нитрофенилкарбонат, который может быть обработан различными первичными или вторичными аминами. Подобным образом могут быть получены производные мочевины, О-карбамата и N-карбамата по реакции соответствующих промежуточных соединений, амина или фенола с изоцианатом или хлорформиатом, или из соответствующих нитрофенилкарбоната, нитрофенилкарбамата или трихлорметилкарбонила (см. J. Org. Chem. 2003, 68, 3733-3735).

Схема 3

На схеме 3 в общих чертах показан способ получения гетероарильных эфиров из соответствующего фенола, используя основание, такое как гидрид натрия, и гетероарилбромид или гетероарилхлорид.

Схема 4

На схеме 4 показан способ получения N-карбаматов (примеры 50-69) или амидов (примеры 74-82) из соответствующего промежуточного соединения, анилина, I-29. Промежуточные соединения, амины, I-29 получали алкилированием соответствующих цианоэфиров соответствующим алкилиодидом или алкилбромидом с последующим нитрованием и затем восстановлением на никеле Ренея с получением аминолактама. Требуемые соединения легко получали из амина.

Гетероарильные кетоны могут быть получены, используя стандартные реакции алкилирования Фриделя-Крафтса.

Примеры

Другие характерные черты изобретения станут очевидными в процессе следующих описаний типичных вариантов осуществления, приведенных в следующих табл. 1-5. Соединения в табл. 1-5 проявляют активность в описанных здесь целях при концентрациях, изменяющихся от 0,1 нМ до 10 мкМ. Эти примеры приводятся для иллюстрации изобретения, а не для его ограничения.

Таблица 1

Таблица 2

*R ¹ является Н, если не указано иначе

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Типичная методика для примеров 1 и 2.

Смесь фенольного промежуточного соединения I-14, (0,05 ммоль), изоцианата (0,05 ммоль), гидрокарбоната цезия (0,5 мг) и тетрагидрофурана (0,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. Растворитель испаряли и остаток перемешивали в течение 8 ч с этилацетатом и 3н. HCl. Этилацетат удаляли испарением и водный раствор отделяли от твердого вещества декантированием. Остаток растирали в порошок с метанолом и собирали продукт.

Пример 1. (26%) МС m/е 510 (М+1); ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 11,60 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,16 (д, 1Н), 7,63 (д, 1Н), 7,53 (с, 1Н), 7,51 (д, 1Н), 7,18 (д, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 6,77 (д, 1Н), 4,77 (с, 2Н), 4,68 (м, 1Н), 3,87 (м, 1Н), 2,98 (т, 2Н), 2,83 (т, 2Н), 1,85 (м, 2Н), 1,69 (м, 2Н), 1,52 (м, 4Н), 1,31 (д, 6Н).

Пример 2. (36%) МС m/e 524 (М+1); ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) 11,59 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,16 (д, 1Н), 7,63 (с, 1Н), 7,52 (д, 1Н), 7,17 (д, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 6,78 (д, 1Н), 4,77 (с, 2Н), 4,68 (м, 1Н), 3,00 (т, 2Н), 2,83 (т, 2Н), 1,87 (м, 2Н), 1,72 (м, 2Н), 1,56 (д, 1Н), 1,30 (д, 6Н).

Пример 3. Суспензию гидрида натрия (2,44 мг, 1,22 экв.) в 0,5 мл ТГФ перемешивали в атмосфере N ₂ при добавлении по каплям фенольного промежуточного соединения I-14, (20,6 мг, 0,05 ммоль) в 2,0 мл ТГФ-ДМФ (1:1). После 10 мин перемешивания добавляли 2-бромпиримидин (8,9 мг, 1,12 экв.) в 0,5 мл ТГФ. Смесь перемешивали при 60 °С в течение 14 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли CH ₂ Cl ₂ /MeOH, фильтровали через целит и концентрировали. Очистку осуществляли препаративной ТСХ с CH ₂ Cl ₂ /MeOH (9:1) с получением продукта (4,0 мг, 17%) (МС: 477 m/е (М+Н) ⁺ ).

Пример 4. Соединение получали согласно методике примера 3, используя фенольное промежуточное соединение I-14 и 2-хлорбензоксазол; 40 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 28%; МС: 516 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 5. Соединение получали согласно методике примера 3, используя фенольное промежуточное соединение I-14 и 2-хлорбензотиазол; 40 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 13%; МС: 531 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 6. К смеси примера 3 (25,0 мг, 0,052 ммоль) и карбоната цезия (81 мг, 5,0 экв.) в 2,0 мл CH ₃ CN добавляли н-пропилбромид (47 мкл, 10,0 экв.) в атмосфере N ₂ . После перемешивания при 90 °С в течение 14 ч смесь разбавляли CH ₂ Cl ₂ , фильтровали через целит и концентрировали. Очистка препаративной ТСХ с 95% CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала продукт (15,0 мг, 56%); МС: m/е 519 (М+1) ⁺ .

Пример 7. Соединение получали, используя методику примера 3, промежуточное соединение I-14 и 2-бромпиразин; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); МС 499 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 8. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 7 в качестве исходного материала. МС m/е 519 (М+1).

Синтез фенольных промежуточных соединений I-18 и I-19.

Смесь AlCl ₃ (800 мг, 6 ммоль) в дихлорэтане (8 мл) перемешивали при 0 °С при добавлении EtSH (1,40 мл) и затем промежуточного соединения I-41 (398 мг, 1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50 °С в течение 48 ч. К реакционной смеси добавляли 5 мл 1н. HCl и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Фильтрация давала 240 мг (63%) промежуточного соединения I-18 (МС: 385 m/е (М+1) ⁺ ). Аналогичным способом получали промежуточное соединение I-19 из метокси N-H производной.

Примеры 9 и 10. Суспензию гидрида натрия (12,2 мг, 1,22 экв.) в 0,5 мл ТГФ перемешивали в атмосфере N ₂ при добавлении по каплям фенольного промежуточного соединения I-18 (76,8 мг, 0,2 ммоль) в 4,0 мл ТГФ-ДМФ (1:1) при комнатной температуре. После 10 мин перемешивания добавляли 2-хлорбензотиазол (38 мг, 1,12 экв.) в 0,5 мл ТГФ. Смесь затем перемешивали при 60 °С в течение 40 ч, разбавляли CH ₂ Cl ₂ /MeOH, фильтровали через целит и концентрировали. Очистка препаративной ТСХ с (9:1) CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала монопродукт примера 9 (6,0 мг, выход 6%) (МС: 517 m/е (М+Н) ⁺ ) и диалкилированный продукт примера 10 (60 мг, выход 46%) (МС: 651 m/е (М+Н) ⁺ ).

Пример 11. Соединение получали согласно методике примера 10, используя фенольное промежуточное соединение I-18 и 2-хлорбензоксазол; 36 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 11%; МС: 502 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 12. Соединение получали согласно методике примера 10, используя фенольное промежуточное соединение I-19 и 2-бромпиримидин; 36 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 25%; МС: 419 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 13. Соединение получали согласно методике примера 3, используя фенольное промежуточное соединение I-22 и 2-бромпиримидин; 30 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 53%; МС: 423 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 14. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и йодэтан; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 19%; МС: 451 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 15. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и йодметан; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 28%; МС: 459 m/е (М+23) ⁺ .

Пример 16. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и циклопентилбромид; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 38%; МС: 513 m/е (М+23) ⁺ .

Пример 17. Смесь фенольного промежуточного соединения I-22 (17,2 мг, 0,05 ммоль), трет-бутоксида калия (33,7 мг, 6 экв.) и трет-бутиламмонийбромида (0,97 мг, 0,06 экв.) смешивали и перемешивали в течение 5 мин, затем добавляли 1,0 мл хлорпиразина, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и при 90 °С в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, избыток хлорпиразина испаряли и образующийся остаток разбавляли CH ₂ Cl ₂ /MeOH. Очистка препаративной ТСХ с (9:1) CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала монопродукт (11,0 мг, выход 52%) МС: 423 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 18. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и бутилбромид; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 38%; МС: 479 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 19. Соединение получали согласно методике примера 10, используя пример 13 и 2-пропилбромид; 60 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 10%; МС: 465 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 20. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и 2-циклопропилметилбромид; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 5%; МС: 477 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 21. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и 2-циклопропилметилбромид; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); МС: 507 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 22. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и изобутилбромид; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); МС: 493 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 23. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 17 и этилиодид; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); МС: 451 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 24. Соединение получали согласно методике примера 6, используя пример 13 и 1-бром-3,5-диметокситриазин; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); МС: 540 m/е (М+1) ⁺ .

Пример 25. К 25 мг (0,07 ммоль) N-этил промежуточного соединения I-23-1 в смеси метиленхлорид/нитрометан (3 мл/2 мл) медленно добавляли 2-фуроилхлорид (69 мкл, 0,7 ммоль, 10 экв.), затем хлорид алюминия (93 мг, 0,7 ммоль, 10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали, к остатку добавляли воду и несколько капель 1н. HCl и смесь экстрагировали метиленхлоридом. Объединенные органические экстракты сушили сульфатом натрия, осушающие вещества удаляли фильтрацией и растворитель удаляли выпариванием. Неочищенную смесь растворяли в смеси метанол/метиленхлорид и очищали препаративной ТСХ, элюируя смесью 10% метанол/метиленхлорид. Необходимую фракцию собирали, смешивали с метиленхлорид/метанол, фильтровали через фриттованную воронку и концентрировали. Образец сушили при 80 °С под глубоким вакуумом в течение ночи. МС m/е 451 (М+1).

Пример 26. Соединение получали способом, описанным в примере 25. МС m/е 438 (М+1).

Пример 27. К N-этил промежуточному соединению I-23-1 (25 мг, 0,07 ммоль) в нитрометане (5 мл) добавляли 2-тиофенкарбонилхлорид (75 мкл, 0,7 ммоль, 10 экв.) с последующим добавлением малыми порциями хлорида алюминия (94 мг, 0,7 ммоль, 10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь затем концентрировали, перемешивали с водой и добавляли несколько капель 1н. HCl. Продукт фильтровали, растворяли в смеси метиленхлорид/метанол и очищали препаративной ТСХ, элюируя смесью 10% метанол/метиленхлорид. Собирали требуемую фракцию, перемешивали со смесью метиленхлорид/метанол, фильтровали и концентрировали. Образец сушили при 80 °С под вакуумом в течение ночи. МС m/е 467 (М+1).

Примеры 28-49 были получены, используя общий способ, описанный для примера 27, и соответствующее N-алкил промежуточное соединение I-23, и хлорид гетероарильной кислоты с AlCl ₃ или FeCl ₃ в качестве катализатора.

Пример 28. МС m/е 423 (М+1).

Пример 29. МС m/е 465 (М+1).

Пример 30. МС m/е 479 (М+1).

Пример 31. МС m/е 495 (М+1).

Пример 32. МС m/е 463 (М+1).

Пример 33. МС m/е 509 (М+1).

Пример 34. МС m/е 481 (М+1).

Пример 35. МС m/е 530 (М+1).

Пример 36. МС m/e 495 (M+l).

Пример 37. МС m/e 479 (М+1).

Пример 38. МС m/e 574 (М+1).

Пример 39. МС m/e 481 (М+1).

Пример 40. МС m/e 481 (М+1).

Пример 41. МС m/e 608 (М+1).

Пример 42. МС m/e 588 (М+1).

Пример 43. МС m/e 536 (М+1).

Пример 44. МС m/e 520 (М+1).

Пример 45. МС m/e 509 (М+1).

Пример 46. МС m/e 592 (М+1).

Пример 47. МС m/e 550 (М+1).

Пример 48. МС m/e 550 (М+1).

Пример 49. МС m/e 570 (М+1).

Пример 50. К перемешиваемому раствору 3-амино промежуточного соединения I-29-2 (25 мг, 0,0649 ммоль) в CH ₂ Cl ₂ (5 мл) добавляли изопропилхлорформиат (1,0М в толуоле, 125 мкл, 0,125 ммоль) и пиридин (20 мкл, 0,247 ммоль). После перемешивания в течение 3 ч при комнатной температуре образующийся осадок отфильтровывали и сушили с получением 28 мг (91%) требуемого продукта. ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 9,51 (с, 1Н), 8,85 (с, 1Н), 8,36 (с, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 7,61-7,49 (м, 2Н), 4,98 (м, 1Н), 4,68 (с, 2Н), 4,51 (м, 2Н), 3,86 (с, 3Н), 3,45 (м, 2Н), 2,83 (м, 2Н), 1,80 (м, 2Н), 1,29 (м, 6Н), 0,89 (м, 3Н); МС (m/е) 472 (М+1).

Пример 51. МС m/e 458 (М+Н).

Пример 52. МС m/e 486 (М+Н).

Пример 53. МС m/e 472 (М+Н).

Пример 54. МС m/e 476 (М+Н).

Пример 55. МС m/e 492 (М+Н).

Пример 56. МС m/e 458 (М+Н).

Пример 57. МС m/e 500 (М+Н).

Пример 58. МС m/e 486 (М+Н).

Пример 59. МС m/e 486 (М+Н).

Пример 60. МС m/e 472 (М+Н).

Пример 61. МС m/e 472 (М+Н).

Пример 62. МС m/e 536 (М+Н).

Пример 63. МС m/e 490 (М+Н).

Пример 64. МС m/e 506 (М+Н).

Пример 65. МС m/e 550 (М+Н).

Пример 66. МС m/e 486 (М+Н).

Пример 68. К 25 мг (0,045 ммоль) N-п-нитрофенил промежуточного соединения добавляли 500 мкл N-пиперидинилэтанола. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 5 ч, разбавляли метиленхлоридом, промывали смесью вода/солевой раствор и сушили над сульфатом натрия. Неочищенный продукт очищали препаративной ТСХ, элюируя 8-10% МеОН/CH ₂ Cl ₂ . Чистый продукт собирали, перемешивали с растворителем, фильтровали и концентрировали. Образец сушили при 80 °С под глубоким вакуумом. ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 9,80 (с, 1Н), 8,77 (с, 1Н), 8,36 (с, 1Н), 8,10 (с, 1Н), 7,72 (д, 1Н), 7,50 (д, 1Н), 5,20 (м, 1Н), 4,78 (с, 2Н), 4,19 (м, 2Н), 3,86 (с, 3Н), 2,78 (м, 2Н), 2,41 (м, 4Н), 1,59 (д, 6Н), 1,40 (м, 10Н). МС m/e 541 (М+1).

Пример 67. Соединение получали способом, описанным для примера 68, используя N-п-нитрофенил промежуточное соединение и N-пирролидинилэтанол. МС m/e 527 (М+1).

Пример 69. Соединение получали способом, описанным для примера 68, используя N-п-нитрофенил промежуточное соединение и N-пирролидинилэтанол. МС m/e 538 (М+1).

Пример 70.

Стадия 1. О-Нитрофенилкарбонатное промежуточное соединение: Смесь фенольного промежуточного соединения I-33-1 (192 мг, 0,525 ммоль) и п-нитрофенилкарбонат (314 мг, 1,03 ммоль) в ДМФ (4 мл) нагревали до 100 °С в течение 20 ч. Растворитель удаляли на роторном испарителе, остаток экстрагировали в CH ₂ Cl ₂ и промывали водным раствором NaHCO ₃ . Органический слой сушили над MgSO ₄ , фильтровали и упаривали. Образующийся остаток очищали колоночной хроматографией (силикагель, 3% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ) с получением карбонатного промежуточного соединения (156 мг, 56%). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ 8,86 (с, 1Н), 8,34 (д, 2Н, J=9,1), 7,69 (д, 1Н, J=2,1), 7,53 (д, 2Н, J=9,1), 7,49 (д, 1H, J=8,8), 7,41 (д, 1Н, J=8,8), 6,01 (с, 1Н), 4,84 (с, 2Н), 4,62 (кв, 2Н, J=7,1), 3,96 (с, 3Н), 3,55 (т, 2Н, 8,0), 3,01 (т, 2Н, J=8,0), 1,55 (т, 3Н, J=7,1). MC m/e 538 (M+H).

Стадия 2. Суспензию карбонатного промежуточного соединения (52 мг, 97 мкмоль) в ТГФ (2 мл) обрабатывали пирролидином (20 мкл, 227 мкмоль). Смесь подогревали до 40 °С в течение 2 ч. Растворитель удаляли на роторном испарителе и остаток экстрагировали в CH ₂ Cl ₂ и промывали разбавленным водным раствором NaOH. Органический слой сушили над MgSO ₄ , фильтровали и испаряли. Полученный остаток очищали путем растирания с водой (2 ×1 мл) и эфиром (2 ×1 мл). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ 8,86 (с, 1Н), 7,55 (д, 1Н, J=2,1), 7,40 (д, 1Н, J=8,8), 7,26 (д, 1Н, J=8,8), 6,01 (с, 1Н), 4,78 (с, 2Н), 4,57 (кв, 2Н, J=7,1), 3,95 (с, 3Н), 3,65 (т, 2Н, 7,0), 3,55-3,45 (м, 4Н), 2,99 (т, 2Н, J=7,0), 2,02-1,96 (м, 4Н), 1,53 (т, 3Н, J=7,1). MC m/е 470 (М+Н).

Пример 71. MC m/e 498 (М+Н).

Пример 72. MC m/e 484 (М+Н).

Пример 73. MC m/e 555 (М+Н).

Пример 74. К 20 мг (0,052 ммоль) аминного промежуточного соединения I-29-1 в 2 мл CH ₂ Cl ₂ /12,6 мкл пиридина добавляли 28 мг (0,156 ммоль, 3 экв.) никотиноилхлорида. Реакционную смесь нагревали до 49 °С в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры, концентрировали, перемешивали с эфиром и твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество помещали в CH ₂ Cl ₂ /MeOH и очищали препаративной ТСХ, элюируя 10% MeOH/CH ₂ Cl ₂ . Чистый продукт собирали и сушили при 80 °С под глубоким вакуумом. ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) 10,53 (с, 1Н), 9,18 (с, 1Н), 8,79 (с, 2Н), 8,40 (м, 3Н), 7,83 (с, 2Н), 7,6 (м, 1Н), 5,25 (м, 1Н), 4,74 (с, 2Н), 3,87 (с, 3Н), 3,41 (м, 2Н), 2,80 (м, 2Н), 1,61 (д, 6Н). MC m/e 491 (М+1).

Примеры 75-82 были получены способом, описанным для примера 74, используя соответствующее аминное промежуточное соединение I-29 и хлорид кислоты.

Пример 75. MC m/e 496 (М+Н).

Пример 76. MC m/e 480 (М+Н).

Пример 77. МС m/e 491 (М+Н).

Пример 78. МС m/e 491 (М+Н).

Пример 79. МС m/e 510 (М+Н).

Пример 80. МС m/e 494 (М+Н).

Пример 81. МС m/e 481 (М+Н).

Пример 82. МС m/e 495 (М+Н).

Пример 83. Соединение получали, используя N-втор-бутильное промежуточное соединение I-36 и 2-тиофенкарбонилхлорид по общей методике, описанной для примера 25. МС m/e 495 (М+Н).

Пример 84. Соединение получали, используя N-втор-бутилиндазольное промежуточное соединение I-36 и 2-фуроилхлорид по общей методике, описанной для примера 25. МС m/e 479 (М+Н).

Пример 85. Соединение получали, используя промежуточное соединение I-39, по общей методике, описанной для примера 13. МС m/e 479 (М+Н).

Общая методика А для примеров 136-140.

К раствору диольного промежуточного соединения I в соответствующем спирте (0,05М) в реакционной стеклянной трубке, которую можно герметизировать, добавляли камфорсульфоновую кислоту (1,1 экв.). Реакционную трубку продували азотом и герметизировали. Реакционную смесь нагревали до 80 °С в течение 2-26 ч и следили за исчезновением исходного материала при помощи ВЭЖХ. По завершении реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в эфир. Образовавшийся осадок отфильтровывали и очищали флэш-хроматографией или препаративной ТСХ на силикагеле, используя этилацетат или смесь этилацетата и гексана, с получением чистых продуктов. Следующие примеры были получены.

Пример 136. Желтовато-коричневое твердое вещество (58% выход). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 2,03 (м, 2Н), 2,13 (м, 2Н), 2,40 (м, 2Н), 3,56 (м, 4Н), 3,72 (м, 4Н), 4,37 (с, 2Н), 4,71 (с, 4Н), 4,89 (с, 2Н), 6,12 (с, 1Н), 7,34-7,62 (6Н, м), 7,99 (с, 1Н), 9,53 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 510 (М+1) ⁺ .

Пример 137. (71% выход). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 1,97 (т, 2Н), 3,61 (т, 2Н), 3,79 (м, 4Н), 4,14 (с, 2Н), 4,41 (м, 4Н), 4,62 (с, 2Н), 4,76 (с, 2Н), 6,10 (с, 1Н), 7,28-7,57 (м, 11Н), 7,68 (с, 1H), 9,47 (д, 1Н); MC (ESI): m/e 533 (M+l) ⁺ ; 555 (M+Na) ⁺ .

Пример 138. (19% выход). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 1,66 (м, 1Н), 2,01-2,22 (м, 3Н), 2,67 (м, 1Н), 3,51 (м, 2Н), 3,74 (м, 4Н), 3,88 (м, 2Н), 4,38 (с, 2Н), 4,71 (с, 2Н), 4,72 (м, 2Н), 4,90 (с, 2Н), 6,07 (с, 1Н), 7,36 (т, 1Н), 7,44-7,68 (м, 5Н), 7,80 (с, 1Н), 9,53 (д, 1Н); MC (ESI): m/e 483 (М+1) ⁺ .

Пример 139. (21,2 мг) ¹ H ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 1,95 (м, 2Н), 2,04 (с, 3Н), 2,68 (т, 2Н), 3,49 (м, 2Н), 3,64 (т, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,66 (с, 2Н), 4,73 (м, 2Н), 4,90 (с, 2Н), 7,27-7,43 (м, 2Н), 7,48 (д, 1Н), 7,63 (д, 1Н), 7,69 (д, 1Н), 7,94 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 9,46 (д, 1Н); MC (ESI): m/e 473 (М+1) ⁺ .

Пример 140. Твердое вещество не совсем белого цвета (25% выход). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 1,93 (м, 2Н), 3,22 (с, 3Н), 3,46 (м, 4Н), 3,58 (м, 2Н), 4,49 (с, 2Н), 4,64 (с, 2Н), 4,70 (м, 2Н), 4,78 (м, 1Н), 4,87 (с, 2Н), 7,23-7,43 (м, 2Н), 7,47 (д, 1Н), 7,62 (д, 1Н), 7,70 (д, 1Н), 7,89 (с, 1Н), 8,54 (с, 1Н), 9,46 (д, 1Н).

Общая методика В для примеров 141-144.

В герметизированной реакционной трубке к суспензии диольного промежуточного соединения I (1 экв.) или в соответствующем спирте, или метиленхлориде, или хлороформе, содержащем соответствующий спирт, при комнатной температуре медленно добавляли трифторуксусный ангидрид (1-2 экв.). Трубку продували азотом и тщательно герметизировали. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1-2 ч, затем нагревали до 80 °С в течение 2-60 ч и наблюдали за исчезновением исходного материала при помощи ВЭЖХ. По окончании реакции реакционной смеси давали возможность остыть до комнатной температуры, концентрировали ее и подвергали или и растиранию остатка с эфиром, и фильтрованию образовавшегося осадка, или экстракции продукта из реакционной смеси соответствующим органическим растворителем. Твердый продукт очищали растиранием с эфиром или флэш-хроматографией на силикагеле, используя этилацетат или смесь этилацетата и гексана. Были получены следующие примеры.

Пример 141. Светло-желтое твердое вещество (17% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 1,93 (м, 2Н), 3,45 (м, 6Н), 3,58 (с, 4Н), 4,53 (с, 2Н), 4,56 (м, 1Н), 4,65 (с, 2Н), 4,74 (м, 3Н), 4,91 (с, 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 7,48 (д, 1Н), 7,63-7,71 (м, 2Н), 7,92 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 487 (М+1) ⁺ , 509 (M+Na) ⁺ .

Пример 142. Бледно-желтое твердое вещество (26% выход). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 1,33 (д, 3Н), 2,11 (м, 2Н), 3,19 (м, 1Н), 3,56-3,77 (м, 4Н), 4,30 (с, 2Н), 4,65 (м, 2Н), 4,68 (с, 2Н), 4,74 (с, 2Н), 6,07 (с, 1Н), 7,20-7,50 (м, 1Н), 7,56 (д, 1Н), 7,69 (с, 1Н), 9,48 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 517 (М+1) ⁺ , 539 (M+Na) ⁺ .

Пример 143. Оранжевый остаток (21% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 1,93 (м, 2Н), 2,30 (м, 4Н), 2,50 (м, 2Н), 3,48 (м, 6Н), 3,94 (с, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,72 (м, 4Н), 4,88 (с, 2Н), 7,33-7,43 (м, 2Н), 7,48 (д, 1Н), 7,66 (м, 2Н), 7,88 (с, 1Н), 8,57 (с, 1Н), 9,46 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 528 (М+1) ⁺ .

Пример 144. Светло-оранжевое твердое вещество (9% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 1,29 (м, 2Н), 1,39 (м, 4Н), 1,95 (м, 2Н), 2,26 (м, 4Н), 2,51 (м, 2Н), 3,47 (м, 2Н), 3,94 (с, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,72 (м, 4Н), 4,88 (с, 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 7,47 (д, 1Н), 7,66 (м, 2Н), 7,88 (с, 1Н), 8,57 (с, 1Н), 9,46 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 526 (М+1) ⁺ .

Общая методика С для примеров 145-156.

К хорошо перемешанной суспензии СН ₂ ОН промежуточных соединений I, II или III в 7 мл метиленхлорида добавляли последовательно трифторуксусный ангидрид (5 экв.) и N-метилморфолин (5 экв.) при 5 °С и в атмосфере аргона. Образовавшуюся суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и низкокипящие растворители удаляли под вакуумом. Перемешанный раствор этого тритрифторацетатного промежуточного соединения в соответствующем спирте нагревали до 80 °С в течение 6-48 ч на масляной бане. Постепенно гетерогенная реакционная смесь становилась гомогенной. Когда исходный материал уже не определялся при помощи ВЭЖХ, из реакционной смеси удаляли под вакуумом растворитель. Остаток очищали или путем растирания с водой или эфиром, или, альтернативно, флэш-хроматографией или препаративной хроматографией на пластинках на силикагеле, используя этилацетат или смесь этилацетат/гексан.

Пример 145. (12,6 мг, 44% выход). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ , 300 МГц) δ 2,18 (м, 2Н), 2,09 (м, 1Н), 3,73 (м, 4Н), 4,42 (с, 2Н), 4,76 (с, 2Н), 4,80 (м, 2Н), 4,98 (с, 2Н), 6,12 (с, 1Н), 7,23 (м, 2Н), 7,43 (м, 2Н), 7,48 (м, 2Н), 7,68 (м, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 9,56 (д, 1Н); МС (ESI): m/е 451 (М+1) ⁺ , 473 (M+Na) ⁺ .

Пример 146. Светло-оранжевое твердое вещество (35,3 мг, 74% выход). ¹ Н ЯМР (ДMCO-d ₆ , 300 МГц) δ 1,23 (м, 2Н), 1,50 (м, 4Н), 1,67 (м, 2Н), 1,93 (м, 2Н), 2,13 (м, 1Н), 3,35 (м, 2Н), 3,48 (м, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,62 (с, 2Н), 4,72 (м, 2Н), 4,89 (с, 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 7,47 (д, 1Н), 7,62-7,70 (м, 2Н), 7,90 (д, 1Н), 8,53 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 481 (М+1) ⁺ .

Пример 147. Бледно-желтое твердое вещество (31 мг, 54% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 0,05 (м, 2Н), 0,49 (м, 2Н), 1,06 (м, 1Н), 2,79 (м, 2Н), 3,82 (м, 5Н), 4,65 (м, 4Н), 4,79 (с, 2Н), 4,97 (т, 1Н), 6,80 (д, 1Н), 6,89 (с, 1Н), 7,46 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,87 (с, 1Н), 7,89 (д, 1Н), 8,36 (с, 1Н); МС (ESI): m/е 483 (М+1) ⁺ .

Пример 148. Бледно-оранжевое твердое вещество (12,4 мг, 24% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 2,79 (м, 2Н), 3,12 (т, 2Н), 3,30 (м, 2Н), 3,72 (т, 2Н), 3,82 (м, 5Н), 4,65 (м, 2Н), 4,70 (с, 2Н), 4,76 (с, 2Н), 4,97 (т, 2Н), 6,79 (д, 1Н), 6,90 (с, 1Н), 6,93 (с, 1Н), 6,97 (д, 2Н), 7,35 (с, 1Н), 7,46 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,89 (д, 2Н), 8,39 (с, 1Н); МС (ESI): m/e 539 (М+1) ⁺ .

Пример 149. Бледно-желтое твердое вещество (42,6 мг, 57% выход). ¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 2,55 (м, 2Н), 2,80 (т, 2Н), 3,86 (м, 4Н), 3,98 (с, 2Н), 4,61 (с, 1Н), 4,73 (т, 1Н), 4,80 (с, 2Н), 4,98 (т, 1Н), 6,78 (д, 1Н), 6,89 (с, 1Н), 7,50 (д, 1Н), 7,68 (д, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 8,38 (с, 1Н); МС (ECI): m/е 489 (М+1) ⁺ , 512 (M+Na) ⁺ .

Пример 150. Желтовато-коричневое твердое вещество (77% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 0,2 (м, 2Н), 0,47 (м, 2Н), 1,05 (м, 1Н), 1,94 (м, 2Н), 3,49 (м, 2Н), 4,53 (с, 2Н), 4,64 (с, 2Н), 4,75 (м, 2Н), 4,92 (с, 2Н), 7,32-7,45 (м, 2Н), 7,49 (д, 1Н), 7,62-7,77 (м, 2Н), 7,93 (с, 1Н), 8,64 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 453 (М+1) ⁺ .

Пример 151. Желтовато-коричневое твердое вещество (32% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц): δ 1,97 (м, 4Н), 3,51 (с, 2Н), 3,73 (т, 2Н), 4,56 (с, 2Н), 4,71 (с, 2Н), 4,77 (м, 2Н), 4,91 (с, 2Н), 6,98 (м, 2Н), 7,35-7,43 (м, ЗН), 7,52 (д, 1Н), 7,70 (м, 2Н), 7,96 (с, 1Н), 8,60 (с, 1Н), 9,51 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 509 (М+1) ⁺ .

Пример 152. Желтое твердое вещество (69%). ¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 1,62-2,00 (м, 8Н), 2,54 (м, 1Н), 3,38-3,50 (м, 4Н), 4,51 (с, 2Н), 4,61 (с, 2Н), 4,72 (м, 2Н), 4,89 (с, 2Н), 7,3-7,41 (м, 2Н), 7,46 (д, 1Н), 7,62-7,70 (м, 2Н), 7,89 (с, 1Н), 8,53 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н); МС (ESI): m/e 467 (М+1) ⁺ .

Пример 153. (80%) ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 1,55 (м, 3Н), 3,4-3,8 (м, 6Н), 4,14 (м, 2Н), 4,66 (с, 2Н), 4,91 (с, 2Н), 7,29-7,73 (м, 5Н), 7,98 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 9,39 (д, 1Н), 11,94 (с, 1Н).

Пример 154. (150 мг, 89% выход). ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 1,80 (м, 4Н), 3,58-3,78 (м, 4Н), 4,02 (м, 1Н), 4,18 (с, 2Н), 4.69 (с, 2Н), 4,93 (с, 2Н), 7,34-7,49 (м, 2Н), 7,56 (т, 2Н), 7,70 (д, 1Н), 7,94 (с, 1Н), 8,53 (с, 1Н), 9,39 (д, 1Н), 11,92 (с, 1Н).

Пример 155. ¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ , 300 МГц) δ 3,24 (с, 3Н), 3,47 (м, 2Н), 3,58 (м, 2Н), 4,13 (м, 2Н), 4,62 (с, 2Н), 4,89 (с, 2Н), 7,30-7,42 (м, 3Н), 7,56 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7,91 (с, 1Н), 8,51 (с, 1Н), 9,35 (д, 1Н), 11,89 (с, 1Н); МС (ESI): m/e 421 (M+Na) ⁺ .

Пример 156. (10%). МС m/e 429 (М+1); ¹ Н-ЯМР δ (ДМСО-d ₆ ) 11,79 (с, 1Н), 9,20 (д, 1Н), 8,44 (с, 1Н), 7,87 (с, 1Н), 7,52 (д, 1Н), 7,38 (д, 1Н), 7,24 (с, 1Н), 6,96 (д, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 4,61 (с, 2Н), 4,08 (с, 2Н), 3,81 (с, 4Н), 3,58 (д, 1Н), 3,52 (д, 1Н).

Пример 157. Размешанный раствор соединения примера 155 (370 мг, 0,93 ммоль) в ДМФ (20 мл) помещали под вакуум и ДМФ (10 мл) отгоняли. Смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли гидрид натрия (45 мг, 0,93 ммоль) и перемешивали в течение 30 мин. Добавляли глицидолмезилат (170 мг, 1,1 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 60 °С. Через 18 ч смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Твердое вещество растирали с метанолом, фильтровали и очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя гексан/этилацетат (1:1), затем метанол/этилацетат (10%), получая продукт (90 мг, 22% выход). МС (ESI): m/e 455 (М+1) ⁺ .

Пример 158. К размешанному раствору соединения примера 157 (80 мг, 0,18 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляли по каплям супергидрид (724 мкл, 0,72 ммоль) при 0 °С. Реакционную смесь подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Удаляли реакционный растворитель под вакуумом и добавляли 1н. HCl. Смесь перемешивали, фильтровали, растирали с метанолом и фильтровали. Твердое вещество очищали флэш-хроматографией, используя гексан/этилацетат (3:1) к этилацетату (100%). Дополнительная очистка твердого вещества включала кристаллизацию из этилацетат/метанол и затем из ацетонитрила с получением продукта (40 мг, 50% выход). МС (ESI): m/e 457 (М+1) ⁺ .

Пример 159. Используя общую методику для примера 158, суспензию эфира (1,45 г, 2,27 ммоль) в метиленхлориде (30 мл) охлаждали до 0 °С и по каплям добавляли DIBAL-H (диизобутилалюминийгидрид) (5,7 мл, 5,7 ммоль). Реакционную смесь подогревали до комнатной температуры в течение 2 ч, затем резко охлаждали метанолом (20 мл). Добавляли HCl (1н., 20 мл) и удаляли реакционный растворитель под вакуумом с получением продукта в виде желтого твердого вещества (1,2 г, 78% выход). Смешивали спирт (522 мг, 0,92 ммоль), трифторуксусный ангидрид (130 мкл), метоксиэтанол (4 мл) и метиленхлорид (6 мл) и нагревали до 70 °С в течение 18 ч. Дополнительно вводили трифторуксусный ангидрид (100 мкл) и нагревали в течение 24 ч. Удаляли реакционный растворитель под вакуумом и твердое вещество растирали с метанолом с получением продукта в виде желтого твердого вещества (325 мг, 91% выход). К раствору предыдущего продукта (100 мг, 0,16 ммоль) в метиленхлорид (3 мл)/метанол (1 мл)/гексаметилфосфорамид (500 мкл) добавляли карбонат цезия (212 мг, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, добавляли ацетальдегид и смесь перемешивали в течение 18 ч. Добавляли дополнительно карбонат цезия и ацетальдегид и смесь перемешивали в течение 3 ч. Смесь разбавляли метиленхлоридом, промывали водой и солевым раствором и очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя этилацетат/метиленхлорид (10%), с получением продукта (45 мг, 43% выход). Продукт (45 мг) растворяли в метиленхлориде (4 мл) и добавляли этантиол и затем трифторуксусный ангидрид при 0 °С. Через 1,5 ч удаляли реакционный растворитель под вакуумом и очищали материал флэш-хроматографией на силикагеле, используя метанол/этилацетат (10%), с получением продукта (11 мг, 37% выход). МС (ESI): m/е 443 (М+1) ⁺ .

Пример 160. К тритрифторацетату (27 мг), полученному по общей методике С, добавляли 1 мл 2-метоксиэтанола и реакционную смесь нагревали до 90 °С в герметизированной трубке в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали, продукт растирали с эфиром, собирали и сушили. ¹ Н ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ 8,38 (1Н, с), 7,89 (2Н, д), 7,66 (1Н, д), 7,47 (1Н, д), 6,90 (1Н, с), 6,81 (1Н, д), 4,98 (2Н, м), 4,79 (1Н, с), 4,67 (3Н, м), 3,96 (6Н, м), 3,82 (2Н, м), 3,62 (2Н, м), 3,50 (3Н, м), 3,10 (2Н, м), 2,79 (2Н, м). МС m/е 487 (М+1) ⁺ .

Пример 161. К аминометильному промежуточному соединению XII СЕР7668 (30 мг, 0,066 ммоль) в ТГФ (1 мл) добавляли TEA (9 мкл, 0,066 ммоль), затем бензилхлорформиат (9 мкл, 0,066 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли дополнительно TEA и бензилхлорформиат при нагревании до 50 °С. Реакционную смесь концентрировали, растворяли в этилацетате, промывали бикарбонатом натрия, рассолом и сушили над сульфатом магния.

Осушитель удаляли фильтрацией, а растворитель выпаривали. Продукт очищали препаративной ТСХ, используя 2% метанол/метиленхлорид. Продукт собирали и сушили при 80 °С в течение ночи. МС m/е 590 (М+1) ⁺ .

Пример 162. Это соединение получали, используя общую методику примера 161, используя в качестве исходного вещества 3-аминометил-N-этанольное промежуточное соединение XIII. МС m/е 540 (М+1) ⁺ .

Пример 163. Это соединение получали из промежуточного соединения XII и этилизоцианатацетата. МС m/е 513 (М+1) ⁺ .

Пример 164. Фенольное промежуточное соединение X СЕР 7143 (15 мг, 0,037 ммоль), бромэтилэтиловый эфир (66 мг, 0,57 ммоль) (добавляли 3 порциями), ацетон (7 мл) и 10н. гидроксид натрия (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. Ацетон испаряли и раствор подкисляли до рН 3. Твердое вещество собирали, растирали с гексаном и экстрагировали метиленхлоридом. Экстракт испаряли с получением продукта (0,004 г) (23%) МС m/е 471 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 11,40 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,16 (д, 1Н), 7,47 (д, 2Н), 7,11 (д, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 6,78 (д, 1Н), 4,80 (с, 2Н), 4,69 (м, 1Н), 4,24 (м, 2Н), 3,85 (м, 2Н), 3,65 (т, 2Н), 2,98 (т, 2Н), 2,81 (т, 2Н), 1,30 (д, 6Н), 1,23 (т, 3Н).

Пример 165. К смеси промежуточного соединения X (16,5 мг, 0,041 ммоль) и карбоната цезия (88 мг, 1,1 экв.) в 2,0 мл CH ₃ CN добавляли циклопентилбромид (8,0 мкл, 2,0 экв.) в атмосфере N ₂ . После перемешивания при 70 °С в течение 24 ч смесь разбавляли CH ₂ Cl ₂ , фильтровали через целит и концентрировали. Очистка на пластинке препаративной ТСХ с CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала продукт. МС m/е 533 (М+1).

Пример 166. Соединение получено гидрированием соединения примера 1С в ДМФ, используя Pd(OH) ₂ и каплю HCl. МС m/е 443 (М+1).

Пример 1С. Суспензию гидрида натрия (2,44 мг, 1,22 экв.) в 0,5 мл ТГФ перемешивали в атмосфере N ₂ при добавлении по каплям фенольного промежуточного соединения X (3-гидрокси-10-изопропокси-12,13-дигидро-6Н,7Н,14Н-нефтил(3,4-а)пирроло(3,3-а)пирроло(3,4-с)карбазол-7(7Н)он) (20,6 мг, 0,05 ммоль) в 2,0 мл ТГФ:ДМФ (1:1). После 10 мин перемешивания добавляли 2-бромпиримидин (8,9 мг, 1,12 экв.) в 0,5 мл ТГФ. Смесь перемешивали при 60 °С в течение 14 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли CH ₂ Cl ₂ /MeOH, фильтровали через целит и концентрировали. Очистку проводили на пластинке препаративной ТСХ с CH ₂ Cl ₂ /MeOH (9:1) с получением продукта (4,0 мг, 17%) (МС: 477 m/z (M+H) ⁺ ).

Общие способы синтеза примеров 167-191.

Способ А. К смеси гидроксильного промежуточного соединения (0,2 ммоль), иодида калия (3,3 мг, 0,1 экв.), N-тетрабутиламмонийбромида (0,1 экв.), гидрата гидроксида цезия (3 экв.) и 20 мг 4 Å молекулярных сит в 2,0 мл CH ₃ CN добавляли соответствующий алкилбромид или алкилиодид в атмосфере N ₂ . После перемешивания смеси при 50 °С в течение 14-72 ч реакционную смесь разбавляли CH ₃ CN, фильтровали через целит и концентрировали. Остаток разбавляли CH ₂ Cl ₂ , промывали водой и сушили над сульфатом магния. Очистка препаративной ТСХ или кристаллизация с CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала требуемые продукты.

Способ В. К смеси гидроксильного промежуточного соединения (0,2 ммоль) и карбоната цезия (3 экв.) в 2,0 мл CH ₃ CN добавляли соответствующий алкилбромид или алкилиодид в атмосфере N ₂ . После перемешивания смеси при 50-80 °С в течение 14-72 ч реакционную смесь разбавляли CH ₃ CN, фильтровали через целит и концентрировали. Остаток разбавляли CH ₂ Cl ₂ , промывали водой и сушили над сульфатом магния. Очистка препаративной ТСХ или кристаллизация с CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала требуемый продукт.

Способ С. К смеси гидроксильного промежуточного соединения (0,1 ммоль), гидроксида натрия (1,5 экв.) и N-тетрабутиламмонийбромида (0,1 экв.) в 0,5 мл CH ₂ Cl ₂ и 0,5 мл воды добавляли соответствующий алкилбромид в атмосфере N ₂ . После перемешивания смеси при комнатной температуре в течение 14-72 ч реакционную смесь концентрировали и остаток промывали водой и сушили над сульфатом магния. Очистка препаративной ТСХ с CH ₂ Cl ₂ /MeOH или кристаллизация давала требуемый продукт.

Пример 167. К смеси фенольного промежуточного соединения XV (19,5 мг, 0,05 ммоль), карбоната калия (34,6 мг, 5 экв.) и иодида калия (8,7 мг, 1,05 экв.) в 1,5 мл ацетона и 0,25 мл ДМФ добавляли бензил-2-бромэтиловый эфир (8,3 мкл, 1,05 экв.) в атмосфере N ₂ . После перемешивания смеси с обратным холодильником в течение 24 ч реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, насыщенным раствором NaCl и сушили над сульфатом магния. Очистка препаративной ТСХ с 5% CH ₂ Cl ₂ /MeOH давала требуемый продукт (10 мг, 39%). МС m/е 519 m/z (M+1) ⁺ .

Пример 168. Продукт получали сначала путем образования соединения 168I по способу А, используя фенол XV и циклопентилбромид; 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 10%; МС: m/е 453 m/z (M+1) ⁺ . Смесь соединения 168I 110 (5 мг, 0,01 ммоль), 10% Pd(OH) ₂ /C и 0,1 мл концентрированной HCl в 1,0 мл EtOH гидрировали при парциальном давлении Н ₂ 42 psi в аппарате Парра в течение 24 ч при комнатной температуре. Фильтрация и концентрирование давала 2,2 мг (27%) требуемого соединения. МС: m/е 451 m/z (M+1) ⁺ .

Пример 169. Способ С из фенола XV и эпибромгидрина; 22 ч, препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 30%; МС: m/е 463 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 170. Способ С; фенол XV и 1-бром-2-(2-метоксиэтокси)этан, 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 11%; МС: 509 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 171. Способ В; фенол XV и 2-(2-бромэтил)-1,3-диоксан, 14 ч с обратным холодильником; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 54%; МС: 521 m/z (М+1) ⁺ .

Пример 172. Способ А; фенол XV и бромметилциклопропан, 14 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 17%; МС: m/е 439 m/z (M+1) ⁺ .

Пример 173. Способ А; фенол XV и 2-бромметил-1,3-диоксолан; 64 ч; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 15%; МС: 471 m/z (M+1) ⁺ .

Пример 174. Способ В; фенол XV и N-(3-бромпропил)фталимид; 48 ч при 80 °С; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 17%; МС: m/е 494 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 175. Способ В; фенол XV и этил-2-бромпропионат; 14 ч при 80 °С; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 9%; МС: m/е 507 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 176. Способ А; фенол XV и метил-4-хлор-3-метокси-(Е)-2-бутеноат; 40 ч при 80 °С; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 21%; МС: m/е 535 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 177. Способ А; фенол XV и 1-бромпинаколон; 14 ч при 60 °С; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход 29%; МС: m/е 505 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 178. Способ А; 20 ч при 50 °С; препаративная ТСХ (10% МеОН в CH ₂ Cl ₂ ); выход (5%); МС: 449 m/z (M+Na) ⁺ .

Пример 179. Способ В (38%) МС m/е 471 (М+1); ¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,37 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,25 (т, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 6,75 (д, 1Н), 4,97 (т, 1Н), 4,77 (д, 4Н), 4,60 (т, 2Н), 4,16 (м, 2Н), 3,78 (м, 2Н), 2,45 (с, 2Н), 1,21 (т, 3Н).

Пример 180. Способ В (19%) МС m/е 476 (М+1); 1H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,56 (с, 1Н), 8,36 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,85 (м, 2Н), 7,66 (д, 1Н), 7,51 (д, 2Н), 7,48 (т, 1Н), 7,33 (м, 1Н), 7,27 (т, 1Н), 6,97 (с, 1Н), 6,85 (д, 1Н), 5,20 (с, 1Н), 4,97 (м, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,62 (м, 2Н).

Пример 181. Способ В (43%) МС m/е 443 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,36 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7.45 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 6,87 (с, 1Н), 6,77 (д, 1Н), 4,97 (т, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,61 (с, 2Н), 4,11 (с, 2Н), 3,77 (д, 2Н), 3,65 (с, 2Н), 2,73 (с, 2Н).

Пример 182. Способ В (63%) МС m/е 452 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,36 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 6,88 (с, 1Н), 6,78 (д, 1Н), 4,96 (т, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,60 (м, 2Н), 4,07 (т, 2Н), 3,78 (м, 2Н), 2,74 (м, 2Н), 2,64 (т, 2Н), 2,02 (м, 2Н).

Пример 183. Способ В (72%) МС m/е 480 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,35 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 6,85 (т, 1Н), 6,76 (т, 1Н), 4,96 (т, 1Н), 4,75 (с,2Н), 4,60 (с, 2Н), 4,00 (т, 2Н), 3,77 (д, 2Н), 2,73 (м, 2Н), 1,73 (т, 3Н), 1,52 (м, 8Н).

Пример 184. Способ В (67%) МС m/е 456 (М+1); ¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,35 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 6,87 (с, 1Н), 6,75 (д, 1Н), 4,96 (т, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,60 (т, 2Н), 4,10 (с, 2Н), 3,78 (м, 2Н), 3,70 (с, 2Н), 3,00 (м, 2Н), 2,70 (м, 2Н), 1,11 (т, 3Н).

Пример 185. Способ В (88%) МС m/е 466 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,35 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 6,77 (д, 1Н), 4,96 (т, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,61 (м, 2Н), 4,03 (т, 2Н), 3,78 (м, 2Н), 2,74 (м, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 1,73 (м, 6Н).

Пример 186. Способ В. МС m/е 516 (М+1); ¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,35 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 6,85 (с, 1Н), 6,76 (д, 1Н), 4,96 (т, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,60 (т, 2Н), 3,99 (т, 2Н), 3,78 (м, 2Н), 2,74 (м, 2Н), 1,71 (м, 2Н), 1,56 (т, 4Н), 1,42 (м, 6Н).

Пример 187. Способ В. МС m/е 438 (М+1).

Пример 188. Это соединение было получено из соединения примера 185В, этанола и газообразного хлористого водорода (85%) МС m/е 512 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,35 (с, 1Н), 7,91 (с, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,26 (т, 1Н), 6,85 (с, 1Н), 6,76 (д, 1Н), 4,75 (с, 1Н), 4,61 (м, 2Н), 4,35 (м, 2Н), 4,00 (м, 2Н), 3,79 (м, 2Н), 2,73 (м, 2Н), 2,66 (м, 2Н), 1,77 (м, 6Н), 1,33 (т, 3Н).

Пример 189. Соединение примера 188 кипятили с обратным холодильником в этаноле и концентрированной хлористо-водородной кислоте в течение 18 ч. Раствор подщелачивали с помощью гидроксида натрия до рН 10 и кипятили с обратным холодильником 4 ч. Раствор подкисляли для осаждения продукта. МС m/е 485 (М+1); ¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 12,00 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,45 (т, 1Н), 7,24 (м, 2Н), 6,85 (с, 1Н), 6,76 (д, 2Н), 4,96 (т, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,61 (м, 2Н), 3,98 (т, 1Н), 3,77 (м, 2Н), 2,73 (м, 2Н), 2,23 (м, 4Н), 1,71 (м, 8Н).

Пример 190. Продукт получали по реакции соединения примера 186 с этанолом и газообразным хлористым водородом (45%) МС m/е 512 (М+1); ¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 8,37 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,65 (д, 1Н), 7,47 (т, 1Н), 7,23 (м, 2Н), 6,86 (с, 1Н), 6,77 (д, 2H), 6,67 (с, 1Н), 4,99 (т, 1Н), 4,76 (с, 2Н), 4,61 (м, 2Н), 3,98 (т, 1Н), 3,80 (м, 2Н), 2,74 (м, 2Н), 2,02 (т, 2Н), 1,71 (м, 2Н), 1,38 (м, 8Н).

Синтез фенольного промежуточного соединения XVII СЕР 5108.

К трихлориду алюминия (1,2 г, 9 ммоль) в 12 мл безводного дихлорэтана добавляли 2 мл этантиола и затем метокси производную СЕР 3371 (500 мг, 1,47 ммоль). Смесь перемешивали при 50 °С в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрировали и перемешивали с 10 мл 1н. хлористо-водородной кислоты в течение тридцати минут. Продукт выделяли фильтрацией и сушили под вакуумом с получением 483 мг (количественный выход) серого твердого вещества, фенола. ¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 11,8 (с, 1Н), 9,53 (с, 1Н), 9,2 (д, 1Н), 8,45 (с, 1Н), 7,95 (с, 1Н), 7,6 (д, 1Н), 7,45 (дд, 1Н), 7,25 (дд, 1Н), 7,08 (с, 1Н), 6,8 (дд, 1Н), 4,85 (с, 2Н), 4,08 (с, 2Н), МС (ES+): 327 (М+1).

Пример 191 и пример 192. Фенольное промежуточное соединение XVII (25 мг, 79 мкмоль), карбонат калия (17 мг, 123 мкмоль) и этилбромацетат (17 мкл, 155 мкмоль) смешивали в 10 мл сухого ацетона. Добавляли каплю N,N-диметилформамида и смесь нагревали при 50 °С в течение трех дней. Анализ с помощью ВЭЖХ показал присутствие двух продуктов. Два продукта разделяли, используя обратимую фазу С8 высокоэффективной жидкостной хроматографии (1:1 ацетонитрил:вода с 0,1% трифторуксусной кислоты). Первый элюированный продукт был идентифицирован как моноаддукт примера 191В. 2 мг. ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 11,7 (с, 1Н), 9,25 (д, 1Н), 8,5 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 7,45 (дд, 1Н), 7,25-7,3 (м, 2Н), 7,0 (дд, 1Н), 4,93 (с, 2Н), 4,85 (с, 2Н), 4,22 (кв, 2Н), 4,15 (с, 2Н), 1,20 (т, 3Н). МС (ES+): 435 (M+Na). Время удержания: 13,03 мин (градиентное элюирование 10-95% ацетонитрил:вода (0,1% трифторуксусная кислота) при 1,6 мл/мин на Zorbax RX-C8 4,6 ×150 мм колонке). Второй элюированный продукт идентифицировали как бис-аддукт примера 192В. ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 8,3 (д, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 7,96 (д, 1Н), 7,72 (д, 1Н), 7,45 (дд, 1Н), 7,27 (дд, 1Н), 7,20 (шир.с, 1Н), 6,95 (дд, 1Н), 5,6 (с, 2Н), 5,42 (с, 2Н), 5,35 (с, 2Н), 4,25 (с, 2Н), 4,18 (кв, 2Н), 3,75 (кв, 2Н), 1,2 (м, 6Н), 2 мг. МС (ES+): 521 (M+Na).

Пример 193. Получен способом, описанным для примера 192, из бромацетонитрила: ¹ H ЯМР (d ₆ -ДМСО): δ 11,85 (с, 1Н), 9,3 (д, 1Н), 8,48 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,58 (д, 1Н), 7,4 (м, 2Н), 7,2 (дд, 1Н), 7,1 (д, 1Н), 5,2 (с, 2Н), 4,85 (с, 2Н), 4,18 (с, 2Н). МС (ES+): 366 (М+1).

Пример 194. Пример 192 (10 мг, 24 мкмоль) в 10 мл сухого тетрагидрофурана обрабатывали боргидридом лития (0,5 мл 2,0 М раствор в тетрагидрофуране, 1,0 ммоль) и нагревали при 40 °С в течение 72 ч. Затем добавляли 1 мл воды и раствор концентрировали. Неочищенное твердое вещество помещали в 1 мл ДМФ и концентрировали на 600 мг диоксида кремния. Диоксид кремния был использован в качестве поверхностного слоя для жидкостной хроматографии, элюируя 4% метанол:дихлорметан с получением 3,0 мг желтовато-коричневого твердого вещества. ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 11,8 (с, 1Н), 9,2 (д, 1Н), 8,45 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,55 (д, 1Н), 7,41 (дд, 1Н), 7,25 (м, 2Н), 6,95 (дд, 1Н), 4,85 (с, 2Н), 4,08 (с, 2Н), 4,06 (м, 2Н), 3,75 (м, 2Н), 3,56 (т, 1Н). МС (ES+): 371 (М+1).

Пример 195. Это соединение получали способом, описанным для примера 194 из соединения примера 193: ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 9,3 (д, 1Н), 8,48 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,70 (д, 1Н), 7,45 (дд, 1Н), 7,28 (м, 1Н), 7,22 (с, 1Н), 6,95 (д, 1Н), 4,9 (с, 2Н), 4,7 (шир.с, 2Н), 4,46 (с, 2Н), 4,06 (шир.с, 2Н), 3,80 (шир.с, 2Н), 3,70 (шир.с, 2Н), 3,52 (перекрывание с, 2Н). МС (ES+): 415 (М+1).

Пример 196. О-алильное промежуточное соединение получали, используя аллилбромид, как описано для примера 194: ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 11,8 (с, 1Н), 9,27 (д, 1Н), 8,48 (с, 1Н), 7,98 (д, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 7,45 (дд, 1Н), 7,30 (с, 1Н), 7,25 (м, 1Н), 7,05 (дд, 1Н), 6,10 (м, 1Н), 5,4 (дд, 1Н), 5,3 (дд, 1Н), 4,95 (с, 2Н), 4,7 (д, 2Н), 4,18 (с, 2Н). МС (ES+): 367 (М+1). O-алильное промежуточное соединение (20 мг, 55 мкмоль), тетраоксид осмия (0,1 мл 25 мг/мл раствора в четыреххлористом углероде), N-метилморфолин-N-оксид (50 мг) смешивали в 10 мл тетрагидрофурана, к которому добавляли 0,1 мл воды. Смесь перемешивали в темноте в течение 48 ч. Смесь концентрировали на 0,6 г диоксида кремния. Диоксид кремния был использован в качестве поверхностного слоя для жидкостной хроматографии при элюировании с помощью 5% метанол:дихлорметан, получая 23 мг желтого твердого вещества. ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 11,8 (с, 1Н), 9,23 (д, 1Н), 8,43 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,55 (д, 1Н), 7,40 (дд, 1Н), 7,25 (с, 1Н), 7,22 (м, 1Н), 6,95 (д, 1Н), 4,95 (д, 1Н), 4,88 (с, 2Н), 7,70 (дд, 1Н), 4,10 (с, 2Н), 4,05 (д, 1Н), 3,7-3,95 (м, 4Н). МС (ES+): 401 (М+1).

Пример 197. Пример 194 (63 мг, 153 мкмоль), диметиламин (3 мл 40% раствора в воде) и хлорид аммония (100 мг) смешивали в N,N-диметилформамиде и перемешивали при комнатной температуре в герметизированной трубке в течение 5 дней. Раствор концентрировали на 0,6 г диоксида кремния жидкостной хроматографией при среднем давлении, используя градиент 5-10% метанол:дихлорметан, получая 60 мг оранжевого твердого вещества. ¹ H ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 11,80 (с, 1Н), 9,20 (д, 1Н), 8,45 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,55 (д, 1Н), 7,40 (дд, 1Н), 7,2-7,28 (м, 2Н), 6,93 (д, 1Н), 4,90 (с, 2Н), 4,82 (с, 2Н), 4,05 (с, 2Н), 3,0 (с, 3Н), 2,83 (с, 3Н). МС (ES+): m/е 434 (M+Na).

Пример 198. Эпоксид (42 мг, 0,11 ммоль), диметиламин (3 мл 40% раствора в воде) и хлорид аммония (100 мг) смешивали в 10 мл N,N-диметилформамида и перемешивали в герметизированной трубке в течение 16 ч. Смесь концентрировали на 700 мг диоксида кремния. Диоксид кремния был использован в качестве поверхностного слоя для жидкостной хроматографии, используя градиент 15-25% метанол:дихлорметан, получая около 5 мг требуемого полярного соединения. ¹ Н ЯМР (d ₆ -ДМСО) δ 12,1 (шир.с, 1Н), 9,55 (д, 1Н), 8,45-8,52 (м, 2Н), 7,72 (д, 1Н), 7,65 (дд, 1Н), 7,35-7,5 (м, 2Н), 7,15 (д, 1Н), 5,75 (с, 2Н), 5,18 (с, 2Н), 4,15-4,35 (м, 4Н), 2,70 (м, 1Н), 2,55 (с, 6Н), 2,50 (м, 1Н). МС (ES+): m/е 428 (М+1).

Пример 199. Это соединение получали по такой же методике, как и в примере 198, используя морфолин: МС (ES+): m/е 470 (М+1).

Полезность

Соединения настоящего изобретения пригодны, в частности, в качестве лечебных средств. Особенно соединения подходят для ингибирования киназы, такой как, например, trk, VEGFR, PDGFR, PKC, MLK, DLK, Tie-2, FLT-3 и CDK1-6. Многие соединения настоящего изобретения демонстрируют улучшенные фармацевтические свойства по сравнению с теми соединениями, которые уже известны в технике, и улучшенные фармакокинетические свойства у млекопитающих. Соединения настоящего изобретения проявляют улучшенные фармацевтические свойства по сравнению с теми соединениями, которые уже известны в технике, включая повышенную двойную ингибиторную активность по MLK и DLK или повышенную двойную ингибиторную активность по VEGFR и Tie-2, наряду с улучшенными фармакокинетическими свойствами у млекопитающих.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает способ лечения или предотвращения раскрытых здесь заболеваний и расстройств, содержащий введение субъекту, при необходимости такого лечения или предотвращения заболевания, терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает способ ингибирования активности trk киназы, содержащий предоставление соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для достижения эффективного ингибирования. В частности, ингибирование trk приносит пользу, например, при заболеваниях предстательной железы, таких как рак предстательной железы и доброкачественная гиперплазия предстательной железы, также как при лечении воспаления, такого как неврологическое воспаление или хроническое воспаление суставов. В предпочтительном варианте осуществления рецептором trk киназы является trk A.

Большинство опухолевых заболеваний имеет несомненную связь с ангиогенезом, процессом, в результате которого образуются новые кровеносные сосуды. Самым мощным ангиогенным цитокином является сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) и проведено важное исследование по разработке антагонистов VEGF/VEGF рецептора (VEGFR). Ингибиторы рецептора тирозинкиназы (RTK) могли бы иметь широкий спектр противоопухолевой активности у пациентов с продвинутой стадией предварительно леченого рака молочной железы и кишечника и саркомы Капоши. Потенциально эти средства могут играть роль в лечении рака на ранней (адъювант) и терминальной стадии. Важность ангиогенеза для прогрессирующего роста и жизнеспособности солидных опухолей хорошо известна. Появляющиеся данные наводят также на мысль о вовлечении ангиогенеза в патофизиологию гематологических злокачественных заболеваний. Недавно авторы сообщили о повышенном ангиогенезе в костном мозге пациентов с острым миелобластным лейкозом (AML) и нормализации плотности микрососудов костного мозга при достижении у пациентов полной ремиссии (CR) после индукционной химиотерапии. Ангиогенез опухоли зависит от экспрессии специфических медиаторов, которые инициируют каскад событий, ведущих к образованию новых микрососудов. Среди них VEGF (сосудистый эндотелиальный фактор роста), FGF (фактор роста фибробластов) играют центральную роль в инициировании образования новых сосудов в солидных опухолях. Эти цитокины стимулируют миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток и индуцируют ангиогенез in vivo. Последние данные наводят также на мысль о важной роли этих медиаторов в гематологических злокачественных заболеваниях. Выделенные при AML бласты чрезмерно экспрессируют VEGF и VEGF рецептор 2. Таким образом, VEGF/VEGFR-2 путь может усиливать рост лейкемических бластов аутокринным и паракринным путем. Следовательно, образование новых сосудов и ангиогенные медиаторы/рецепторы могут быть перспективны для разработки стратегии антиангиогенной и антилейкемической терапии. Таким образом, в других вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ для лечения или предотвращения ангиогенных заболеваний, когда активность VEGFR киназы способствует патологическим состояниям, содержащий введение соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для приведения рецептора сосудистого эндотелиального фактора роста в контакт с эффективным для ингибирования количеством соединения. Ингибирование VEGFR приносит пользу, например, при ангиогенных заболеваний, таких как рак солидных опухолей, эндометриоз, дегенерация желтого пятна, ретинопатия, диабетическая ретинопатия, псориаз, гемангиобластома, так же, как и других глазных заболеваний и злокачественных заболеваний.

FLT3, член класса III рецептора тирозинкиназы (RTK), преимущественно экспрессируется на поверхности большинства клеток острого миелобластного лейкоза (AML) и В-клеточной линии острого лимфобластного лейкоза (ALL) в дополнение к гемопоэтическим стволовым клеткам, мозгу, плаценте и печени. Было показано, что взаимодействие FLT3 и его лиганда играет важную роль в выживании, пролиферации и дифференцировке не только нормальных гемопоэтических, но также лейкемических клеток. О мутации FLT3 гена было сначала сообщено как о внутренней тандем-дупликации (ITD) околомембранной (JM) домен-кодирующей последовательности, затем как о миссенс-мутации D835 в домене киназы. ITD- и D835-мутации в основном обнаруживаются в AML и их частота составляет приблизительно 20 и 6% у взрослых с AML соответственно. Таким образом, мутация FLT3 гена является до настоящего времени самым частым генетическим нарушением, вовлеченным в AML. Несколько крупномасштабных исследований хорошо документированных пациентов, опубликованных к настоящему времени, продемонстрировали, что ITD-мутация в большой степени связана с лейкоцитозом и неблагоприятным прогнозом. Соединение, ингибирующее FLT3 тирозинкиназы, имеет применение при лечении лейкоза. Настоящее изобретение предлагает способ для лечения заболеваний, которые характеризуются восприимчивостью к ингибированию FLT3, содержащий введение соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для ингибирования FLT3.

Тромбоцитарный фактор роста (PDGF) был одним из первых идентифицированных полипептидных факторов роста, который передает сигнал через поверхность клетки рецептора тирозинкиназы (PDGF-R) для стимулирования различных клеточных функций, включая рост, пролиферацию и дифференцировку. С того времени были идентифицированы несколько родственных генов, представляющих собой семейство лигандов (в первую очередь PDGF А и В) и их родственные рецепторы (PDGF-R альфа и бета). В настоящее время PDGF экспрессия была продемонстрирована в ряде различных солидных опухолях, от глиобластомы до рака предстательной железы. В этих различного типа опухолях биологическая роль PDGF передачи сигнала может меняться от аутокринной стимуляции роста раковых клеток до более тонких паракринных взаимодействий, включая строму и даже ангиогенез. Таким образом, в дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ для лечения или предотвращения заболеваний, при которых PDGFR активность способствует патологическим состояниям, содержащий введение соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для приведения в контакт рецептора тромбоцитарного фактора роста с эффективным для ингибирования количества соединения. Ингибирование PDGFR приносит пользу, например, при различных формах опухолей, ревматоидного артрита, хронического артрита, фиброза легких, миелофиброза, аномального заживления ран, заболеваний, приводящих к сердечно-сосудистым, таким как атеросклероз, рестеноз, рестеноз после ангиопластики и подобные.

В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ для лечения или предотвращения заболеваний, при которых MLK активность способствует патологическим состояниям, таким, как было перечислено выше, содержащий введение соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для приведения в контакт рецептора MLK с эффективным для ингибирования количества соединения. Ингибирование MLK приносит пользу, например, при формах рака, при которых MLK играют патологическую роль, а также при неврологических заболеваниях.

В еще одних вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ для лечения заболеваний, характеризующихся аберрантной активностью клеток, отвечающих на трофический фактор, который содержит введение соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для приведения в контакт рецептора трофического фактора клетки с количеством соединения, вызывающего эффективную активность. В конкретных предпочтительных вариантах осуществления активность клеток, отвечающих на трофический фактор, является ChAT активностью.

Рецепторы фактора роста фибробластов (FGFR) являются членами семейства полипептидов, синтезируемых клетками различного типа в процессах эмбрионального развития и во взрослых тканях. FGFR были обнаружены в нормальных и опухолевых клетках и они вовлечены в биологические события, которые включают митогенную и ангиогенную активность с последующей решающей ролью в дифференцировке и развитии клетки. Для активизации путей сигнальной трансдукции FGFR связывают с факторами роста фибробласта (FGF) и гепарансульфат (HS) протеогликанами с образованием биологически фундаментального тройного комплекса. Основываясь на этих соображениях, ингибиторы, способные блокировать сигнальный каскад путем непосредственного взаимодействия с FGFR, могли бы обладать противоангиогенной и, следовательно, противоопухолевой активностью. Соответственно, настоящее изобретение предлагает способ лечения заболеваний, характеризующихся аберрантной активностью клеток, отвечающих на FGF, который содержит введение соединения настоящего изобретения в количестве, достаточном для приведения в контакт FGFR с количеством соединения, вызывающего эффективную активность.

Соединения настоящего изобретения могут также обладать положительными воздействиями на функцию и выживаемость клеток, отвечающих на трофический фактор, за счет повышения выживания нейронов. Относительно выживания холинергического нейрона, соединение, например, может сохранять выживаемость популяции холинергических нейронов при риске гибели (в результате, например, травмы, болезненного состояния, дегенеративного состояния или естественного развития) по сравнению с популяцией холинергических нейронов при отсутствии такого соединения, если подвергавшаяся лечению популяция имеет относительно больший период функционирования, чем популяция, не подвергавшаяся лечению.

При ряде неврологических заболеваний нейронные клетки в условиях риска смерти погибают, повреждены, функционально неполноценны, подвергаются аксональной дегенерации и т.д. Эти нейродегенеративные заболевания и расстройства включают, но этим не ограничивая, болезнь Альцгеймера; болезни двигательного нейрона (например, боковой амиотрофический склероз); болезнь Паркинсона; церебрально-васкулярные расстройства (например, инсульт, ишемия); болезнь Хантингтона; ВИЧ деменция; эпилепсия; рассеянный склероз; периферические нейропатии, включая диабетическую нейропатию и вызванную химиотерапией периферическую нейропатию, периферическая нейропатия, связанная с ВИЧ; расстройства, вызванные возбуждающими аминокислотами; и расстройства, связанные с сотрясением или проникающими травмами головного или спинного мозга.

В других предпочтительных вариантах осуществления, соединения настоящего изобретения применяются для лечения или предотвращения множественной миеломы и лейкозов, включая, но этим не ограничивая, острый миелобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, острый лимфобластный лейкоз и хронический лимфолейкоз.

В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретения также применяется при лечении заболеваний, связанных с пониженной ChAT активностью или гибелью, повреждением мотонейронов спинного мозга, а также приносит пользу, например, при заболеваниях, связанных с апоптозом клеток центральной и периферической нервной системы, иммунной системы и при воспалительных заболеваниях. ChAT катализирует синтез нейромедиатора ацетилхолина, и он считается ферментом-маркером функционального холинергического нейрона. Функциональный нейрон также способен к выживанию. Выживание нейрона определяют количественной оценкой удельной усвояемости и ферментативного превращения красителя (например, кальцеин AM) живыми нейронами. Описанные здесь соединения могут также находить применение при лечении болезненных состояний, включающих пролиферацию опухолевых клеток, таких как многие раки.

Дополнительные варианты осуществления изобретения относятся к применению любого описанного здесь соединения, его стереоизомеров или фармацевтически приемлемых солей при лечении и/или предотвращении любых состояний, заболеваний и расстройств, описанных выше. Дополнительные варианты осуществления относятся к применению описанных здесь соединений, их стереоизомеров или фармацевтически приемлемых солей в производстве лекарственного препарата для лечения и/или предотвращения указанных состояний, расстройств и заболеваний.

Соединения настоящего изобретения имеют важные функциональные фармакологические активности, которые находят применение для различных назначений, включая как научные исследования, так и лечебные цели. Для облегчения изложения и для того, чтобы не ограничивать область полезных применений, для которых эти соединения могут быть охарактеризованы, функции соединений настоящего изобретения могут быть в целом описаны следующим образом.

A. Ингибирование ферментативной активности.

B. Воздействие на функцию и/или выживание клеток, отвечающих на трофический фактор.

C. Ингибирование реакций, связанных с воспалением.

D. Ингибирование клеточного роста, связанного с гиперпролиферативными состояниями.

E. Ингибирование эволюционно запрограммированной гибели мотонейтрона.

Ингибирование ферментативной активности может быть определено, используя, например, анализы VEGFR ингибирования (например, VEGFR2 ингибирования), MLK ингибирования (например, MLK1, MLK2 или MLK3 ингибирования), ингибирования PDGFR киназы, NGF-стимулированного trk фосфорилирования, PKC ингибирования или ингибирования trk тирозинкиназы. Воздействие на функцию и/или выживание клеток, отвечающих на трофический фактор, например клеток нейронной линии, может быть установлено, используя любой из следующих анализов: (1) анализ культивированной спинно-мозговой холин-ацетилтрансферазы ("ChAT"); (2) анализ удлинение аксона культивированного заднего корешка нервного узла ("DRG"); (3) анализ ChAT активности культивированного нейрона базального переднего мозга ("BFN"). Ингибирование связанной с воспалением реакции может быть установлено, используя mRNA анализ с индоламин-2,3-диоксигеназой ("IDO"). Ингибирование клеточного роста, связанного с гиперпролиферативными состояниями, может быть определено измерением роста соответствующих клеточных линий, таких как линии АТ2 в случае рака предстательной железы. Ингибирование эволюционно запрограммированной гибели мотонейтрона может быть оценено in ovo, используя соматические мотонейроны эмбриона цыпленка, чьи клетки подвергаются естественно происходящей гибели между 6 и 10 днями жизни эмбриона, и анализируя ингибирование под действием раскрытых здесь соединений такой естественно протекающей гибели клетки.

Ингибирование ферментативной активности соединениями настоящего изобретения может быть определено, используя, например, следующие анализы:

Анализ ингибирования VEGFR.

Анализ ингибирования MLK.

Анализ ингибирования активности РKC.

Анализ ингибирования активности trkA тирозинкиназы.

Анализ ингибирования Tie-2.

Анализ ингибирования CDK1-6.

Ингибирование NGF-стимулированного фосфорилирования trk при подготовке популяций клеток.

Анализ ингибирования рецептора тромбоцитарного фактора роста (PDGFR).

Описания анализов, которые могут быть использованы в связи с настоящим изобретением, приводятся ниже. Они не предназначаются, и их не следует истолковывать в качестве ограничений объема заявки.

Ингибирование активности trkA тирозинкиназы

Выбранные соединения настоящего изобретения тестировали на их способность ингибировать активность киназы бакуловирусо-экспрессивного человеческого trkA цитоплазматического домена, используя анализ на основе ELISA, как описано ранее (Angeles et al., Anal. Biochem. 236: 49-55, 1996). Вкратце, 96-луночный микротитрационный планшет покрывали раствором субстрата (рекомбинантная человеческая фосфолипаза С- γ1/связанный с глутатион-S-трансферазой белок (Rotin et al., EMBO J., 11: 559-567, 1992). Исследования ингибирования проводили в 100 мкл анализируемых смесей, содержащих 50 мМ Hepes, pH 7,4, 40 мкМ АТР, 10 мМ MnCl ₂ , 0,1% BSA, 2% ДМСО, и различные концентрации ингибитора. Реакцию инициировали добавлением trkA киназы и инкубировали в течение 15 мин при 37 °С. Затем добавляли антитела к фосфотирозину (UBI), затем вторичные фермент-коньюгированные антитела, козьи антимышиные IgG (Bio-Rad), меченные щелочной фосфатазой. Активность связанного фермента измеряли с помощью системы детектирования с усилителем (Gibco-BRL). Данные по ингибированию анализировали, используя сигмоидальное уравнение (переменная крутизна) доза-ответная реакция в программе GraphPad Prism. Концентрация, которая приводила к 50% ингибированию активности киназы, носит название "IC ₅₀ ".

Ингибирование активности рецептора киназы сосудистого эндотелиального фактора роста

Выбранные соединения настоящего изобретения испытывали в качестве ингибиторов активности рецептора киназы бакуловирусо-экспрессивного VEGF (человеческого flk-1, KDR, VEGFR2) домена киназы, используя методику, описанную для анализа trkA киназы, ELISA, описанную выше. Реакционную смесь киназы, состоящую из 50 мМ Hepes, pH 7,4, 40 мкМ АТР, 10 мМ MnCl ₂ , 0,1% BSA, 2% ДМСО и различные концентрации ингибитора, переносили на PLC- γ/GST-покрытые планшеты. Добавляли VEGFR киназу и инкубировали в течение 15 мин при 37 °С. Детектирование фосфорилированного продукта осуществляли добавлением антифосфотирозинового антитела (UBI). Вторичные фермент-конъюгированные антитела вводили для поглощения антитело-фосфорилированного PLC- γ/GST комплекса. Активность связанного фермента измеряли с помощью системы детектирования с усилителем (Gibco-BRL). Данные по ингибированию анализировали, используя сигмоидальное уравнение (переменная крутизна) доза-ответная реакция в программе GraphPad Prism.

Ингибирование активности киназы-1 различных линий

Активность киназы MLK1 оценивали, используя Millipore Multiscreen TCA в "in-plate" формате, описанный для протеинкиназы С (Pitt & Lee, J. Biomol. Screening, 1: 47-51,1996). Вкратце, каждая 50-мкл смесь для анализа содержала 20 мМ Hepes, рН 7,0, 1 мМ EGTA, 10 мМ MgCl ₂ , 1 мМ DTT, 25 мМ β-глицерофосфата, 60 мкМ АТР, 0,25 MKCi [ γ- ³² P]ATP, 0,1% BSA, 500 мкг/мл миелин основного белка (UBI#13-104), 2% ДМСО, 1 мкМ тестируемого соединения и 1 мкг/мл бакуловирусный GST-MLK1 _KD . Образцы инкубировали в течение 15 мин при 37 °С. Реакцию останавливали добавлением ледяной 50% ТСА и белки осаждались в течение 30 мин при 4 °С. Планшеты затем промывали ледяной 25% ТСА. Добавляли сцинтилляционный коктейль Supermix, оставляли на 1-2 ч для установления равновесия перед проведением подсчета с использованием сцинтилляционного счетчика Wallace MicroBeta 1450 PLUS.

Анализ двойной лециновой застежки-молнии, несущей киназу

Соединения тестировали на их способность ингибировать активность киназы рекомбинантного бакуловирусного человеческого DLK, содержащей домен киназы и лециновую застежку-молнию. Активность измеряли на 384-луночных планшетах FluoroNunc (Cat # 460372), используя флуоресцентный индикатор с временным разрешением (PerkinElmer Application Note 1234-968). Планшеты покрывали 30 мкл белкового субстрата MKK7 (Merritt et al. 1999) при концентрации 20 мкг/мл в Tris забуференном физиологическом растворе (TBS). Каждые анализируемые 30 мкл содержали 20 мМ MOPS (рН 7,2), 15 мМ MgCl ₂ , 0,1 мМ Na ₃ VO ₄ , 1 мМ DTT, 5 мМ EGTA, 25 мМ β-глицерофосфата, 0,1% BSA, 100 мкМ АТР и 2,5% ДМСО. Реакции инициировали добавлением 10 нг/мл GST-hDLK _KD/LZ . Для определения IC ₅₀ , для каждого соединения получали кривую ответной реакции из 10 точек. Планшеты инкубировали при 37 °С в течение 30 мин и реакции останавливали добавлением 100 мМ EDTA. Продукт детектировали, используя меченый европием антифосфотреонин (Wallac#AD0093; разбавленный 1:10000 в 3% BSA/T-TBS). После фиксации в течение ночи при 4 °С добавляли 50 мкл раствора для активации (Wallac # 1244-105) и планшет осторожно взбалтывали в течение 5 мин. Затем измеряли флуоресценцию полученного раствора, используя режим флуоресценции с временным разрешением (TRF) в Multilabel Reader (Victor2 Model # 1420-018 или Envision Model # 2100). Данные по ингибированию анализировали, используя программу GraphPad PRISM. См. также Merritt S.E., Mata M., Nihalani D., Zhu С., Hu X. and Holzman L.B. (1999) The Mixed Lineage Kinase DLK utilizes MKK7 and not MKK4 as Substrate. J. Biol. Chem. 214, 10195-10202.

Анализ Tie-2 тирозинкиназы

Соединения тестировали на их способность ингибировать активность киназы рекомбинантного бакуловирусного человеческого His ₆ -Tie2 цитоплазматического домена, используя модификацию анализа ELISA, описанного для trkA (Angeles et al., 1996). A 384-луночный планшет использовали для одноточечного скрининга, в то время как IC ₅₀ получали на 96-луночных планшетах. Для одноточечного скрининга каждый со штриховым кодом 384-луночный Costar High Binding планшет (Cat # 3703) покрывали 50 мкл/лунка 10 мкг/мл раствором субстрата (рекомбинантный человеческий GST-PLC- γ; Rotin et al., 1992) в Tris-забуференном физиологическом растворе (TBS). Tie2 активность измеряли в анализируемых 50-мкл смесях, содержащих 50 мМ HEPES (рН 7,2), 40 мкМ АТР, 10 мМ MnC1 ₂ , 2,5% ДМСО, 0,05% BSA и 200 нг/мл His ₆ -Tie2 _CD . Для определений IC ₅₀ анализы проводили, как описано выше, но в 96-луночных планшетах Costar High Binding (Cat # 3703) и с удвоенными объемами. Для каждого соединения получали кривую ответной реакции из 10 точек. Реакцию киназы проводили при 37 °С в течение 20 мин. Детектируемое антитело, N1-Eu антифосфотирозин (РТ66) антитело (Wallac # AD0041), добавляли при 1:2000 разбавлении в блокирующий буфер [3% BSA в TBS с 0,05% Tween-20 (TBST)]. После инкубации в течение одного часа при 37 °С добавляли 50 мкл усиливающего раствора (Wallac # 1244-105) и планшет осторожно взбалтывали. Затем измеряли флуоресценцию полученного раствора, используя режим флуоресценции с временным разрешением (TRF) в Multilabel Reader (Victor2 Model # 1420-018 or Envision Model # 2100). Данные по ингибированию анализировали, используя программу ActivityBase и IC ₅₀ кривые получали, используя программу XLFit. Цитируются следующие публикации:

1. Angeles T.S., Steffler С., Bartlett В.A., Hudkins R.L., Stephens R.M., Kaplan D.R. and Dionne С.А. (1996) Enzyme-linked immunosorbent assay for trkA tyrosine kinase activity. Anal. Biochem. 236, 49-55.

2. Rotin D., Margolis В., Mohammadi M., Daly R.J., Daum G., Li N., Fischer E.H., Burgess W.H., Ullrich A., Schlessinger J. (1992) SH2 domains prevent tyrosine dephosphorylation of the EGF receptor: identification of Tyr992 as the high-affinity binding site for SH2 domains of phospholipase C- γ. EMBO J. 11,559-567.

Доза и приготовления лекарственного средства

Для терапевтических целей соединения настоящего изобретения могут быть введены любым способом, который приводит к контакту активного вещества с местом воздействия вещества в теле объекта. Соединения могут быть введены любыми традиционными способами, доступными для применения в сочетании с фармацевтическими препаратами, или в качестве индивидуальных терапевтических средств, или в комбинации с другими терапевтическими средствами, такими как, например, болеутоляющие средства. Соединения настоящего изобретения предпочтительно вводить в терапевтически эффективных количествах для лечения описанных здесь болезней и расстройств у субъекта, который в этом нуждается.

Терапевтически эффективное количество может быть легко определено лечащим врачом, специалистом в этой области, путем использования традиционных методик. Эффективная доза будет изменяться в зависимости от ряда факторов, включая вид и степень развития заболевания или расстройства, общее состояние здоровья конкретного пациента, относительную биологическую эффективность выбранного соединения, лекарственную форму действующего вещества с соответствующими наполнителями и способ введения. Обычно соединения вводят при более низких уровнях дозы с постепенным повышением, пока не достигнется желаемый эффект.

Обычный диапазон изменения величины дозы составляет от 0,01 до 100 мг/кг массы тела в день, с предпочтительной дозой от 0,01 до 10 мг/кг массы тела в день. Предпочтительная дневная доза для взрослых людей составляет около 25, 50, 100 и 200 мг, для ребенка - в соответствующем эквиваленте. Соединения могут быть введены в виде одной или более разовых доз. Разовая доза может изменяться в интервале от 1 до 500 мг, вводимая от одного до четырех раз в день, предпочтительно от 10 до 300 мг два раза в день. В другом способе описания эффективной дозы пероральная разовая доза является дозой, которая необходима для достижения уровня от 0,05 до 20 мкг/мл в сыворотке крови субъекта и предпочтительно от 1 до 20 мкг/мл.

Соединения настоящего изобретения могут вводиться в фармацевтические композиции путем смешивания с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями.

Наполнители выбирают на основе выбранного способа введения и стандартных фармацевтических подходов, описанных, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20 ^th ed.; Gennaro A.R., Ed.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2000. Композиции могут приготавливать для регулируемого и/или замедленного высвобождения активного вещества (веществ) в виде лекарственных форм быстрорастворимых, модифицированного высвобождения или замедленного высвобождения. В таких композициях с регулируемым высвобождением или продолжительным высвобождением могут использоваться, например, биологически совместимые, биоразлагаемые лактидные полимеры, лактид/гликолид сополимеры, полиоксиэтилен-полиоксипропилен сополимеры или другие твердые или полутвердые полимерные матрицы, известные в технике.

Композиции могут быть получены для введения пероральным способом; парентеральным способом, включая внутривенно, внутримышечно и подкожно; локально или трансдермальным способом; трансмукозным способом, включая ректальный, вагинальный, сублингвальный и буккальный; офтальмическим способом или ингаляционным способом. Предпочтительно, чтобы композиции готовили для перорального введения, особенно в виде таблеток, капсул или сиропов; для парентерального введения, особенно в виде жидких растворов, суспензий или эмульсий; для интраназального введения, особенно в виде порошков, каплей для носа или аэрозолей; или для местного введения, такие как кремы, мази, растворы, суспензии, аэрозоли, порошки и подобные.

Для перорального введения таблетки, пилюли, порошки, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать один или несколько из следующих компонентов: разбавители или наполнители, такие как крахмал или целлюлоза; связующие, такие как микрокристаллическая целлюлоза, желатин или поливинилпирролидоны; вещества, вызывающие дезинтеграцию, такие как крахмал или производные целлюлозы; вещества, увеличивающие скольжение, такие как тальк или стеарат магния; глиданты, такие как коллоидный диоксид кремния; подсластители, такие как сахароза или сахарин; или ароматизаторы, такие как с запахом мяты или вишни. Капсулы могут содержать любой из вышеперечисленных наполнителей и могут дополнительно содержать полутвердый или жидкий носитель, такой как полиэтиленгликоль. Твердые пероральные лекарственные формы могут иметь покрытие из сахара, шеллака или кишечно-растворимое покрытие. Жидкие формы могут быть в виде водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов, эликсиров и т.д. или могут быть представлены в виде сухого продукта для восстановления водой или другим подходящим носителем перед применением. Такие жидкие формы могут содержать традиционные добавки, такие как поверхностно-активные вещества, суспендирующие агенты, эмульгаторы, разбавители, подсластители и ароматизаторы, красители и консерванты.

Композиции могут также быть введены парентерально. Фармацевтические препараты, приемлемые для применения в виде инъекций, включают, например, стерильные водные растворы или суспензии. Водные носители включают смеси спиртов и воды, буферные среды и т.п. Неводные растворители включают спирты и гликоли, такие как этанол и полиэтиленгликоль; масла, такие как растительные масла; жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот и т.п. Другие компоненты могут быть добавлены, включая поверхностно-активные вещества, такие как гидроксипропилцеллюлоза; изотонические вещества, такие как хлорид натрия; добавки, восполняющие потери жидкости и питательных веществ; добавки, восполняющие потери электролита; вещества, которые регулируют высвобождение активных соединений, такие как моностеарат алюминия и различные сополимеры; антибактериальные средства, такие как хлорбутанол или фенол; буферы и т.п. Парентеральные препараты могут быть помещены в ампулы, одноразовые шприцы или флаконы для нескольких доз. Другие потенциально пригодные парентеральные системы доставки для активных соединений включают частицы этилен-винилацетат сополимера, осмотические насосы, имплантируемые инфузионные системы и липосомы.

Другие возможные способы введения включают составы для ингаляции, которые включают такие средства, как сухие порошки, аэрозоли или капли. Они могут быть водными растворами, содержащими, например, полиоксиэтилен-9 лауриловый эфир, гликохолат и дезоксихолат, или масляные растворы для введения в форме капель в нос или в виде геля, применяемого интраназально. Составы для местного применения могут быть в форме мази, крема или геля. Обычно эти формы включают носитель, такой как вазелин, ланолин, стеариловый спирт, полиэтиленгликоли или их комбинации, и или эмульгатор, такой как натрийлаурилсульфат, или гелеобразующее вещество, такое как трагакант. Составы, удобные для трансдермального введения, могут быть представлены в виде отдельных пластырей, в резервуаре или микрорезервуарной системе, в виде адгезионной системы с регулируемой диффузией или матричной системы дисперсионного типа. Составы для буккального введения включают, например, пастилки или лепешки и могут также включать ароматизирующую основу, такую как сахаразу или камедь, и другие наполнители, такие как гликохолат. Составы, удобные для ректального введения, предпочтительно представлены в качестве суппозиториев с одноразовой дозой, с носителем на основе твердого вещества, такого как масло какао, и могут включать салицилат.

Для специалистов в этой области очевидно, что возможны многочисленные модификации и варианты настоящего изобретения в свете вышеизложенных идей. И в силу этого следует понимать, что в объеме прилагаемой формулы изобретения, изобретение может быть применено иным способом, чем здесь конкретно описано, и предполагается, что все эти варианты подпадают под объем изобретения.