EA 013160B1 20100226 Номер и дата охранного документа EA200702397 20060503 Регистрационный номер и дата заявки EP05076037.0 20050503 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EP2006/004117 20060503 Номер международной заявки (PCT) WO2006/117197 20061109 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа EAb21001 Номер бюллетеня [RU] ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ТЕТРАГИДРОПИРИМИДИНЫ Название документа [8] C07D239/06, [8] A61K 31/505, [8] A61P 35/00 Индексы МПК [ES] Реес Бенитес Хосе Фернандо, [ES] Куэвас Марчанте Мария Дель Кармен, [ES] Монтальво Лобо Дэвид, [ES] Мартин Лопес Ма Хесус, [ES] Матео Урбано Мария Кристина, [ES] Франсесч Сольосо Андрес Сведения об авторах [ES] ФАРМА МАР, С.А. (ES) Сведения о патентообладателях [ES] ФАРМА МАР, С.А. (ES) Сведения о заявителях US 2743255 A US 4292429 A KOURANY-LEFOLL E. ET AL.: "Phloeodictines A1-A7 and C1-C2, antibiotic and cytotoxic guanidine alkaloids from the New Caledonian sponge phloeodictyon sp.". TETRAHEDRON, vol. 50, no. 11, 14 March, 1994 (1994-03-14), pages 3415-3426, XP002391145, cited in the application, the whole document Цитируемые документы
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000013160b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

Противоопухолевые соединения формулы I, где X является О, S или NR a , которые получены из семейства Meandrinidae, род Meandrina, вид meandrites, или их производные являются пригодными в качестве противоопухолевых агентов


Формула

[0001] Соединение общей формулы I

[0002] Соединение по п.1, имеющее следующую формулу II:

[0003] Соединение по п.1 или 2, где Y является замещенным или незамещенным C1-C6-алкиленом и X является NH.

[0004] Соединение по п.3, где Y является незамещенным С4-алкиленом.

[0005] Соединение по п.1, где R1, R2, R3 и R5, каждый независимо, выбирают из группы, состоящей из Н, NO2, CN, COO-алкила, замещенного или незамещенного C1-C6-алкила или замещенного или незамещенного C2-C6-ацила.

[0006] Соединение по п.5, где R1, R2, R3 и R5 представляют собой Н.

[0007] Соединение по п.2, где R1, R2 и R3, каждый независимо, выбран из группы, состоящей из Н, NO2, CN, замещенного или незамещенного C1-C6-алкила или замещенного или незамещенного C2-C6-ацила.

[0008] Соединение по п.5, где R1, R2, R3 представляют собой Н.

[0009] Соединение по любому из пп.1-8, где R4 является

[0010] Соединение по п.9, где n целое число от 1 до 8, m целое число от 1 до 5 и двойная связь находится между C1-C2 и тройная связь находится между C3-C4.

[0011] Соединение по п.1 или 2, имеющее следующее формулу:

[0012] Соединение по п.1 или 2, имеющее следующее формулу:

[0013] Соединение по п.1, имеющее следующее формулу:

[0014] Соединение по любому из предшествующих пунктов, где соединение представляет собой трифторацетатную соль.

[0015] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль, таутомер или стереоизомер и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

[0016] Применение соединения по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера или стереоизомера для получения лекарственного средства.

[0017] Применение по п.16, где лекарственное средство предназначено для лечения рака.


Полный текст патента

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к новым противоопухолевым соединениям, содержащим их фармацевтическим композициям и их применению в качестве противоопухолевых агентов.

Уровень техники изобретения

Kourany-Lefoll et al. (J. Org. Chem. 1992, 57, 3832-3835) описали биологическую активность флоеодиктина А (1) и флоеодиктина В (2), первых природных членов бициклических 1,2,3,4-тетрагидро-6Н-пирроло[1,2- α]пиримидиниевых кольцевых систем, полученных из неописанного вида глубоководных губок Phloeodictyon sp.

Описано, что соединения 1 и 2 проявляют значительную активность против некоторых бактерий со следующими соответствующими значениями MIC (минимальная доза ингибирования) (мк/мл): Streptococcus fecalis (5, > 15), Staphylococcus aureus (1, 3), Escherichia coli (1, 30) и Pseudomonas aeruginosa (10, > 30).

Помимо этого, данные алкалоиды проявляют цитотоксичность in vitro против клеток карциномы носоглотки человека с IC 50 1,5 и 11,2 мк/мл для соединений 1 и 2 соответственно.

Также Kourany-Lefoll et al. (Tetrahedron 1994, 50, 3415-3426) позже описали пирроло[1,2- α]пиримидины, названные флоеодиктины A1-A7 (3-9) и C1-C2 (10 и 11), выделенные при дальнейшем поиске биоактивных агентов из подобных видов губок.

Все соединения проявляли in vitro противобактериальную активность и были умеренно цитотоксичны против клеток KB

Смеси флоеодиктинов А, В, А1-А7 и С1-С2 имеют широкий спектр активности со следующими соответствующими значениями MIC (мк/мл): Staphylococcus aureus (3, 30, 1, 3), Escherichia coli (3, 30, 3, > 30), Pseudomonas aeruginosa (30, > 30, 30, > 30), Clostridium perfringens (30, > 30, 1, > 100), Bacteroides fragilis (1, > 30, 3, > 100) и Peptococcus assaccharolyticus (10, > 30, 3, > 100). Помимо этого, данные соединения также проявляют цитотоксичность in vitro против клеток карциномы носоглотки человека с IC 50 2,2, 3,5, 0,6 и 1,8 мк/мл для флоеодиктина А, В, А1-А7 и С1-С2 соответственно.

US 4292429 описывает активность

1-[2-[2-(2-хлорфенил)-2-имидазолин-1-ил]этил]-3-(п-толил)мочевины,

1-[2-[2-(4-пиридил)-2-имидазолин-1-ил]этил]-3-(4-карбоксифенил)мочевины и

1-[2-[2-(хлороанилинометил)-2-имидазолин-1-ил]этил]-3-(п-толил)мочевины

против эпидермоидной карциномы, индуцированной диэтилнитрозамином (DAENA) в легких, трахеи и гортани у сирийских золотистых хомячков или против асцитной карциномы Эрлиха у мышей.

С другой стороны, были описаны некоторые другие 1,2-дизамещенные циклические амиды, не имеющие отношения к данному уровню техники. В частности, US 2743255 описывает процесс получения смол, которые являются ценными в качестве химических реагентов

Рак является лидером в качестве причин смерти у животных и людей. В целях получения активных и безопасных противоопухолевых агентов для лечения пациентов, страдающих от рака, предпринимались и предпринимаются различные меры. Задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является обеспечение нижеуказанными соединениями, которые пригодны для лечения рака.

Сущность изобретения

В одном аспекте настоящее изобретение касается соединений общей формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров или стереоизомеров

где R 1 , R 2 , R 3 и R 5 , каждый независимо, выбран из группы, состоящей из Н, NO 2 , CN, COO-алкила, замещенного или незамещенного C 1 -C 12 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкенила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинила и замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -ацила;

Y выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкилена, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкенилена и замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинилена;

X выбран из группы, состоящей из О, S и NR a ;

R a выбран из группы, состоящей из Н, NO 2 , CN, COO-алкила, замещенного или незамещенного C 1 -C 12 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкенила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинила и замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -ацила;

R 4 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C 1 -C 30 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 30 -алкенила, замещенного или незамещенного C 2 -C 30 -алкинила и замещенного или незамещенного C 4 -C 30 -алкенинила; и

пунктирная линия обозначает необязательно дополнительную связь, которая расположена при N a -C b , если отсутствует R 1 , при C b -X, если отсутствует R 5 или при C b -N c , если отсутствует R 2 ;

за исключением соединения R формулы

Настоящее изобретение также относится к выделению соединений формулы I из мозаичного коралла семейства Meandrinidae, род Meandrina, вид meandrites и образованию производных из этих соединений.

В другом аспекте настоящее изобретение также направленно на использование соединений формулы I, включая соединение R, или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров или стереоизомеров для лечения рака или для получения лекарственного средства для лечения рака.

В другом аспекте настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I, включая соединение R, или их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры или стереоизомеры совместно с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Подробное описание предпочтительного варианта осуществления изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы I, согласно вышеприведенному определению.

В этих соединениях заместители могут быть выбраны согласно следующим указаниям.

Алкильные, алкиленовые и алкоксильные группы предпочтительно имеют от 1 до 30 атомов углерода. Еще один предпочтительный класс алкильных, алкиленовых или алкоксильных групп имеет от 1 до 12 атомов углерода, особенно предпочтительные алкильные, алкиленовые и алкоксильные группы имеют от 1 до 6 атомов углерода и особенно наиболее предпочтительные алкильные, алкиленовые и алкоксильные группы имеют от 1 до 4 атомов углерода. Особенно предпочтительными алкильными группами в соединениях настоящего изобретения являются метил, этил, пропил, включая изопропил, и бутил. Особенно предпочтительными алкоксильными группами в соединениях настоящего изобретения являются метокси, этокси, пропокси, включая изопропокси, и бутокси, включая трет-бутил. Другой особенно наиболее предпочтительный класс алкильных и алкиленовых групп имеет от 4 до 12 атомов углерода, хотя более предпочтительно от 5 до 8 атомов углерода. Особенно предпочтительными алкильными группами в соединениях настоящего изобретения являются пентил, гексил, гептил или октил. Другой предпочтительный класс алкильных групп имеет от 1 до 20 атомов углерода, хотя более предпочтительно от 6 до 18 атомов углерода. Используемый в данном описании термин алкил, если не определено иначе, относится как к циклическим, так и нециклическим группам, хотя циклические группы должны содержать, по крайней мере, кольцо из трех углеродных членов.

Алкенинильная группа определяется как алкильная группа, содержащая одну или более двойных связей и одну или более тройных связей, и предпочтительными алкенинильными группами являются такие группы, которые имеют от 4 до 30 атомов углерода. Еще один предпочтительный класс алкенинильных групп имеет от 6 до 18 атомов углерода.

Предпочтительные алкенильные, алкинильные, алкениленовые и алкиниленовые группы в соединениях настоящего изобретения имеют одно или более ненасыщенных звеньев и от 2 до примерно 30 атомов углерода. Еще один предпочтительный класс алкенильных, алкинильных, алкениленовых и алкинилиновых групп имеет от 4 до примерно 20 атомов углерода и наиболее предпочтительно от 6 до 18 атомов углерода. Термины алкенил, алкинил, алкенилен и алкинилин, используемые в данном описании, относятся как к циклическим, так и нециклическим группам, хотя циклические группы должны содержать, по крайней мере, кольцо из трех углеродных членов. Другие предпочтительные классы алкенильных, алкинильных, алкениленовых и алкиниленовых групп в соединениях настоящего изобретения имеют от 2 до 12 атомов углерода, еще более предпочтительно от 2 до 6 атомов углерода.

Алкильные, алкенильные, алкинильные, алкенинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые группы необязательно могут быть замещены группой, выбранной из OH, NO 2 , SH, CN, галогена, C(=O)H, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алкоксила, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алканоилоксила, необязательно замещенного C 4 -C 19 -ароилоксила, необязательно замещенного C 4 -C 16 -аралканоилоксила, галогена, необязательно замещенного C 4 -C 18 -арила, амина, моно(C 1 -C 12 -алкил)амина и ди(C 1 -C 12 -алкил)амина, необязательно замещенного гуанидина, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алкоксикарбонила, необязательно замещенного C 4 -C 11 -арилоксикарбонила, необязательно замещенного C 4 -C 11 -аралкилоксикарбанила, карбамоила, N-(C 1 -C 20 -алкил)карбамоила и N,N-ди(C 1 -C 20 -алкил)карбамоила.

Арильные группы, подходящие для соединений настоящего изобретения, включают группы с одним и несколькими кольцами, включая группы с несколькими кольцами, которые содержат разделенные или конденсированные арильные или гетероарильные кольца. Типичные арильные группы содержат от 1 до 3 колец и от 4 до примерно 18 атомов углерода в кольце. Особенно предпочтительные арильные группы включают замещенный или незамещенный фенил, нафтил, бифенил, фенантрил и антрацил.

Подходящие ацильные группы имеют от 2 до примерно 12 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до примерно 8 атомов углерода, еще более предпочтительно от 2 до примерно 6 атомов углерода и наиболее предпочтительно 2 атома углерода.

Арильная и ацильная группы могут быть замещены при одном или нескольких доступных положениях одной или несколькими группами, например OH, OR', =O, SH, SR', SOR', SO 2 R', NO 2 , NH 2 , NHR', N(R') 2 , =NR', NHCOR'N(COR') 2 , NHSO 2 R', NH(C=NH)NH 2 , NH(C=NH)NHR', NH(C=NH)NR' 2 , CN, галоген, C(=O)H, C(=O)R 4 , CO 2 H, CO 2 R', OC(=O)R 4 , где каждая из R' групп независимо выбрана из группы, состоящей из OH, NO 2 , NH 2 , SH, CN, галогена, =O, C(=O)H, C(=O)CH 3 , CO 2 H, замещенного или незамещенного C 1 -C 12 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинила или замещенного или незамещенного арила, где данные группы сами замещены, причем заместители могут быть выбраны из вышеуказанного списка.

Подходящие галоидные заместители в соединениях настоящего изобретения включают F, Cl, Br и I.

Термин «фармацевтически приемлемые соли, производные, пролекарства » относятся к любой фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру, сольвату, гидрату или любому другому соединению, которое, при введении пациенту, способно обеспечивать (прямо или косвенно) таким соединением, как описано здесь. Однако следует понимать, что фармацевтически неприемлемые соли также находятся в рамках изобретения, так как они могут быть пригодны для приготовления фармацевтически приемлемых солей. Получение солей, пролекарств и производных можно проводить способами, известными в данной области техники.

Например, фармацевтически приемлемые соли соединений, приведенных в данном описании, синтезированы исходя из исходных соединений, которые содержат основные или кислотные остатки, посредством стандартных химических методов. Например, в основном такие соли получены взаимодействием свободной кислоты или свободного основания со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде, или органическом растворителе, или в их смеси, образуя данные соединения. В основном предпочтительными являются неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Примеры кислотно-аддитивных солей включают аддитивные соли минеральных кислот, например, такие как гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, сульфат, нитрат, фосфат, и соли присоединения органических кислот, например, такие как ацетат, трифторацетат, малеат, фумарат, цитрат, оксалат, сукцинат, тартрат, соль яблочной кислоты, соль миндальной кислоты, метансульфанат и п-толуолсульфанат. Примеры основно-аддитивных солей включают неорганические соли, например, такие как натриевые, калиевые, кальциевые и аммониевые соли, и соли органических оснований, например, такие как этилендиамин, этаноламин, N,N-диалкиленэтаноламин, триэтаноламин, и основные соли аминокислот.

Термин «таутомер » относится к двум или более структурным изомерам определенного соединения, которые существуют в виде равновесных форм и быстро переходят из одной изомерной формы в другую, например, как амид-имид, лактам-лактим и т.д.

Соединения изобретения могут находиться в кристаллической форме как в виде свободных соединений, так и в виде сольватов (например, гидратов), и предполагается, что обе эти формы находятся в рамках настоящего изобретения. Способы растворения общеизвестны в данной области техники.

Соединения настоящего изобретения, представляемые вышеописанной формулой I, могут включать некоторые типы энантиомеров. Помимо этого, возможна изомерия у двойной связи, следовательно, в некоторых случаях молекула может существовать в виде (Е)- или (Z)-изомера. Одиночный изомер и смесь изомеров находятся в рамках и соответствуют сущности изобретения.

Предпочтительными соединениями изобретения являются такие, у которых Y является замещенным или незамещенным C 1 -C 6 -алкиленом, более предпочтительно замещенным или незамещенным C 1 -C 4 -алкиленом. Особенно предпочтительными являются метилен, этилен, пропилен, изопропилен и бутилен. Наиболее предпочтительной является незамещенная С 4 -алкиленовая цепь.

Особенно предпочтительны R 1 , R 2 , R 3 и R 5 , каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из H, OH, NO 2 , NH 2 , SH, CN, галогена, C(=O)H, CO 2 H, COO-алкила, замещенного или незамещенного C 1 -C 6 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 6 -ацила. В варианте осуществления изобретения все они являются Н.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения X является NR a , где NR a предпочтительно выбран из группы, состоящей из H, OH, NO 2 , NH 2 , SH, CN, галогена, C(=O)H, CO 2 H, COO-алкила, замещенного или незамещенного C 1 -C 6 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 6 -ацила, причем особенно предпочтительно наличие Н и COO-алкила.

Особенно предпочтительными соединениями изобретения являются такие, где R 4

n целое число от 1 до 12, более предпочтительно от 1 до 8;

m целое число от 1 до 10 и особенно предпочтительно от 1 до 5;

R 6 выбран из группы, состоящей из Н, OH, галогена, С(=O)H, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алкоксила, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алканоилоксила, амина, моно(C 1 -C 12 -алкил)амина, ди(C 1 -C 12 -алкил)амина, гуанидина, C 1 -C 12 -алкоксикарбонила, карбамоила, N-(C 1 -C 20 -алкил)карбамоила и N,N-ди(C 1 -C 20 -алкил)карбамоила; и

пунктирная линия обозначает дополнительную одинарную или двойную связь.

Особенно предпочтительно расположение двойной связи между C 1 -C 2 и тройной связи между C 3 -C 4 .

Особенно предпочтительно присутствие дополнительной связи, расположенной при N a -Cb, если отсутствует R 1 , при C b -X, если отсутствует R 5 , или при C b -N c , если отсутствует R 2 , и наиболее предпочтительно при C b -X, если отсутствует R 5 .

Более детально изобретение представляет соединения формулы II

где R 1 , R 2 и R 3 , каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из Н, NO 2 , CN, COO-алкила, замещенного или незамещенного C 1 -C 12 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкенила, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинила и замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -ацила;

Y выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C 1 -C 12 -алкилена, замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкенилена и замещенного или незамещенного C 2 -C 12 -алкинилена;

X выбран из группы, состоящей из О, S и NH; и

R 4 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C 1 -C 30 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 30 -алкенила, замещенного или незамещенного C 2 -C 30 -алкинила и замещенного или незамещенного C 4 -C 30 -алкенинила;

или их фармацевтически приемлемую соль, таутомер или стереоизомер.

Предпочтительными соединениями по формуле II являются такие соединения, у которых Y является замещенным или незамещенным C 1 -C 6 -алкиленом, более предпочтительно замещенным или незамещенным C 1 -C 4 -алкиленом. Особенно предпочтительными являются метилен, этилен, пропилен, изопропилен и бутилен. Наиболее предпочтительной является незамещенная С 4 -алкиленовая цепь.

Особенно предпочтительны R 1 , R 2 и R 3 , каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из Н, OH, NO 2 , NH 2 , SH, CN, галогена, C(=O)H, CO 2 H, COO-алкила, замещенного или незамещенного C 1 -C 6 -алкила, замещенного или незамещенного C 2 -C 6 -ацила. В варианте осуществления изобретения все они являются Н.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения X является NH.

Особенно предпочтительными соединениями изобретения являются такие, у которых R 4

где n целое число от 1 до 12, более предпочтительно от 1 до 8;

m целое число от 1 до 10 и особенно предпочтительно от 1 до 5;

R 6 выбран из группы, состоящей из Н, OH, галогена, С(=O)H, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алкоксила, необязательно замещенного C 1 -C 12 -алканоилоксила, амина, моно(C 1 -C 12 -алкил)амина, ди(C 1 -C 12 -алкил)амина, гуанидина, C 1 -C 12 -алкоксикарбонила, карбамоила, N-(C 1 -C 20 -алкил)карбамоила и N,N-ди(C 1 -C 20 -алкил)карбамоила; и

пунктирная линия обозначает дополнительную одинарную или двойную связь.

Особенно предпочтительно расположение двойной связи между C 1 -C 2 и тройной связи между C 3 -C 4 .

Особенно предпочтительными соединениями изобретения являются следующие:

Соединение А является морским природным продуктом, выделенным из небольшого образца мозаичного коралла семейства Meandrinidae, род Meandrina, вид meandrites 31712. Данный коралл был собран в ходе подводного погружения в Карибском море рядом с Мотагуа на глубине 40 м [UTM/NAD 1927 (североамериканская система координат 1927, зоны 15 и 16) координата X: 362642; координата Y: 1751928] и его описание следующее: колонии являются массивными структурами с меандройдной или флабелойдной формой и с полипами в известковом скелете. Размер может достигать 30 см в диаметре с бледно-желтой или коричневой окраской.

Кроме того, соединение А было синтезировано согласно процессу синтеза по схеме 1.

Схема 1

Данный процесс включает в себя следующие последовательные ключевые стадии:

a) Метилолеат был подвергнут окислительному расщеплению углерод-углеродной двойной связи, давая соответствующий альдегид 12;

b) альдегид 12 был превращен в винилиодид 13, следуя стандартным, описанным в литературе методикам;

c) реакция сочетания Соногашира между йодоалкинилом 13 и 1-октином с последующим гидролизом сложноэфирной группы енина 14 в основной среде дала кислоту 15;

d) реакция сочетания между кислотой 15 и деблокированным производным спермидина 16 при стандартных, описанных в литературе условиях приводила к соответствующему амиду 17;

e) циклизация соединения 17 в присутствии TiCl 4 давала 1,4,5,6-тетрагидропиримидиновое производное 18 и

f) реакция сочетания 18 с N,N'-бис-(трет-бутоксикарбонил)-2-метил-2-тиопсевдомочевиной с последующим снятием защитных Boc групп в соединении 19 приводила к соединению А.

Аналоги с различными функциональными группами или заместителями могут быть синтезированы из данных соединений с помощью обычных методик синтетической органической химии, которые хорошо известны специалисту в данной области. Например, с помощью гидролиза, озонолиза, эпоксидирования по Шарплесу или реакции Дильса-Альдера. Помимо этого, аналоги могут также быть синтезированы, используя методики, которые описаны в схеме 1, с подходящими интермедиатами.

Важной чертой описанных выше соединений по формуле I и II является их биологическая активность и в особенности их цитотоксическая активность. Данное изобретение обеспечивает новыми фармацевтическими композициями соединений общей формулы I и II, которые обладают цитотоксической активностью, и их применением в качестве противоопухолевых агентов. Таким образом, далее настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие соединение данного изобретения, его фармацевтически приемлемые соли, производные, пролекарства или стереоизомеры с фармацевтически приемлемым носителем.

Примеры фармацевтических композиций включают в себя любые твердые (таблетки, пилюли, капсулы, гранулы и т.д.) или жидкие (растворы, суспензии или эмульсии) композиции для перорального, местного или парентерального применения.

Применение соединений или композиций настоящего изобретения может осуществляться любым подходящим способом, например, таким как внутривенная инфузия, с помощью препарата для перорального приема и внутрибрюшинное и внутривенное введение.

Предпочтительно, чтобы используемое время инфузии составляло до 24 ч, более предпочтительно 2-12 ч, с наибольшим предпочтением от 2-6 ч. Короткие времена инфузии, которые позволяют проводить лечение без ночевки в госпитале, являются чрезвычайно нежелательными. Однако, если необходимо, время инфузии может быть от 12 до 24 ч и даже более. Инфузия может проводиться с подходящими интервалами, например от 1 до 4 недель. Фармацевтические композиции, содержащие соединения изобретения, могут быть доставлены, например, с помощью липосом или инкапсуляции в наносферах в случае составов с замедленным высвобождением или с помощью других стандартных способов доставки.

Точные дозировки соединений будут изменяться в соответствии со спецификой лекарственной формы, способа применения и специфики места, пациента и опухоли, которую необходимо обработать. Необходимо принимать во внимание и другие факторы, такие как возраст, вес тела, пол, питание, время применения, скорость экскреции, состояние пациента, совместное применение лекарств, чувствительность реакции и тяжесть заболевания. Применение можно проводить непрерывно или периодически в пределах максимально переносимой дозы.

Соединения и композиции настоящего изобретения могут быть использованы с другими лекарственными средствами для обеспечения комбинированной терапии. Другие лекарственные средства могут составлять часть той же композиции или использоваться в качестве отдельной композиции для одновременного применения или применения в разное время.

Противоопухолевая активность данных соединений включает лейкемию, рак легких, рак толстой кишки, рак почек, рак простаты, рак яичников, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак шейки матки, саркомы и меланомы.

Примеры

Пример 1. Описание коралла и место сбора.

Образцы мозаичного коралла семейства Meandrinidae, род Meandrina, вид meandrites 31712 собирают в ходе подводного погружения в Карибском море рядом с Мотагуа на глубине 40 м [UTM/NAD 1927 (североамериканская система координат 1927, зоны 15 и 16) координата X: 362642; координата Y: 1751928].

Пример 2. Выделение соединения А.

Замороженный образец (1646 г) примера 1 измельчают в порошок и дважды тщательно экстрагируют изопропанолом. Объединенные экстракты концентрируют, получая 8,67 г сырья. Это вещество заново суспензируют в H 2 O (500 мл) и экстрагируют гексаном (3 ×500 мл, выход 1,18 г), EtOAc (3 ×500 мл, выход 87 мг) и н-BuOH (2 ×250, выход 394 мг).

Соединение А (1,2 мг) выделяют из активной н-BuOH фракции с помощью многократной полупрепаративной ВЭЖХ (SymmetryPrep C-187 мкм, 7,8 ×150 мм колонка, H 2 O (0,05% ТФК): CH 3 CN (0,05% ТФК) градиент, УФ-детекция).

Соединение А: бледно-желтое масло. HRFABMS, m/z 430,3917 [М+Н] + (посчитано для C 26 H 48 N 5 430,3910). 1 Н (500 МГц) и 13 С (125 МГц), см. табл. 1.

Таблица 1

1H и 13С ЯМР данные для соединения A (CDCl3)

*Отнесение может быть изменено.

Пример 3. Синтез соединения В

Через раствор соединения А (8,0 мг, 0,015 ммоль) в CH 2 Cl 2 :MeOH (1,0 мл:0,1 мл) барботируют поток О 3 при -78 °С до тех пор, пока смесь не станет голубой. Затем при -78 °С в течение 10 мин через реакцию барботируют поток аргона, добавляют диметилсульфид (14 мкл, 0,19 ммоль). Реакцию перемешивают при 23 °С в течение 30 мин и затем растворитель упаривают под вакуумом, получая остаток, который очищают с помощью ВЭЖХ (SymmetryPrep C-18 7 мкм, 7,8 ×150 мм колонка, H 2 O (0,1% ТФК): CH 3 CN (0,1% ТФК) градиент, УФ-детекция), получая соединение В (2,8 мг, 46%).

1 Н ЯМР (500 МГц, CD 3 OD) δ 3,51 (м, 4Н), 3,38 (т, J=6,0 Гц, 2Н), 2,55 (т, J=7,8 Гц, 2Н), 2,04 (м, 2Н), 1,75 (м, 2Н), 1,63 (м, 6Н), 1,38 (м, 14Н).

13 С ЯМР (125 МГц, CD 3 OD) δ 165,1, 162,9, 52,4, 47,1, 42,0, 39,9, 32,4, 30,8, 30,5, 30,2, 30,0, 29,9, 27,9, 26,8, 25,9, 19,9.

HRMS (MALDI): 324,2757 [М+Н] + (посчитано для C 17 H 34 N 5 O 1 324,2763).

Пример 4. Синтез соединения А.

Раствор метилолеата (10,0 г, 33,7 ммоль) в безводном CH 2 Cl 2 (100 мл) охлаждают до -78 °С и барботируют поток О 3 через реакционную смесь до тех пор, пока раствор не станет светло-голубым (10 мин). Через реакционную смесь барботируют аргон и медленно добавляют раствор PPh 3 (19,7 г, 75,1 ммоль) в CH 2 Cl 2 (100 мл). Реакционную смесь нагревают до 23 °С и перемешивают 18 ч. Растворитель упаривают досуха и твердое вещество растирают в порошок с холодным гексаном (80 мл). Фильтрат упаривают, получая желтое масло. Масло очищают с помощью хроматографии на силикагеле (CH 2 Cl 2 :гексан, 1:1 и затем CH 2 Cl 2 :Et 2 O, 1:1), получая два ожидаемых альдегида, нональ (4,80 г, 100%) и метил-8-формилоктанат 12 (6,28 г, 100%), оба в виде бесцветных масел.

1 Н ЯМР (300 МГц, CDCl 3 ) δ 9,76 (с, 1Н), 3,66 (с, 3Н), 2,41 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,30 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 1,61 (м, 4Н), 1,31 (м, 6Н).

13 C ЯМР (75 МГц, CDCl 3 ) δ 202,4, 173,8, 51,1, 43,5, 33,7, 28,7, 28,6, 28,5, 24,5, 21,7.

MS (APCI): 187 (M+1) + . Rf=0,2 (CH 2 Cl 2 ).

К раствору (йодометил)трифенилфосфонийиодида (39,89 г, 75,3 ммоль) в безводном ТГФ (300 мл) по каплям добавляют NaHMDS (75,3 мл, 1,0 М в ТГФ, 75,3 ммоль) и перемешивают в течение 10 мин при 23 °С. Реакционную смесь охлаждают до -60 °С и по каплям добавляют 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинон (15,3 мл, 126,4 ммоль) и немедленно охлаждают до -78 °С. К полученному раствору медленно, в течение 30 мин, прибавляют раствор метил-8-формилоктаноата 12 (5,6 г, 30,1 ммоль) в ТГФ (290 мл), перемешивают 5 мин при -78 °С и нагревают до 23 °С. Спустя 2 ч смесь разбавляют гексаном (300 мл) и промывают насыщенным раствором NaCl (300 мл). Водный слой экстрагируют гексаном (3 ×300 мл) и объединенные органические слои высушивают над Na 2 SO 4 , фильтруют и упаривают. После очистки с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (CH 2 Cl 2 :гексан, 1:1) получают (Z)-метил-10-йододек-9-еноат 13 (7,21 г, 77%) в виде бесцветного масла.

1 Н ЯМР (300 МГц, CDCl 3 ) δ 6,16-6,12 (м, 2Н), 3,66 (с, 3Н), 2,30 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,13 (м, 2Н), 1,60 (м, 2Н), 1,40-1,20 (м, 8Н).

13 C ЯМР (75 МГц, CDCl 3 ) δ 174,3, 141,3, 82,2, 51,4, 34,6, 34,0, 29,7, 29,0, 28,8, 27,8, 24,9.

MS (APCI): 184 (М-128) + . Rf=0,25 (CH 2 Cl 2 :гексан, 1:1).

К суспензии (Z)-метил-10-йододек-9-еноата 13 (7,21 г, 22,9 ммоль), Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 (1,56 г, 2,29 ммоль) и CuI (1,31 г, 6,88 ммоль) в безводном ацетонитриле:Et 3 N (170 мл, 34 мл) в течение 4 ч при -20 °С прибавляют раствор 1-октина (4,06 мл, 27,51 ммоль) в ацетонитриле:Et 3 N (50 мл, 10 мл). Реакционную смесь нагревают до 23 °С. Спустя 18 ч добавляют HCl 1н. (200 мл) и смесь экстрагируют CH 2 Cl 2 (3 ×250 мл). Объединенные органические слои высушивают над Na 2 SO 4 , фильтруют и упаривают. После очистки с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (CH 2 Cl 2 :гексан, от 10:1 до 1:1) получают (Z)-метилоктадек-9-ен-11-иноат 14 (5,41 г, 81%) в виде бесцветного масла.

1 Н ЯМР (300 МГц, CDCl 3 ) δ 5,80 (дт, J=10,3 и 7,3 Гц, 1Н), 5,43 (д, J=10,3 Гц, 1Н), 3,66 (с, 3Н), 2,35-2,23 (м, 6Н), 1,61-1,40 (м, 6Н), 1,40-1,25 (м, 12Н), 0,89 (ушир.т, 3Н).

13 C ЯМР (75 МГц, CDCl 3 ) δ 174,3, 142,4, 109,4, 94,5, 77,3, 51,4, 34,1, 31,3, 29,9, 29,1, 29,0, 28,9, 28,8, 28,7, 28,5, 24,9, 22,5, 19,5, 14,0.

MS (APCI): 293 (M+1) + . Rf=0,30 (CH 2 Cl 2 :гексан, 1:1).

К раствору (Z)-метилоктадек-9-ен-11-иноата 14 (2,26 г, 8,12 ммоль) в метаноле (8,5 мл) добавляют раствор 10 М NaOH (1,62 мл, 16,2 ммоль) при 23 °С. Раствор перемешивают в течение 3 ч, затем еще добавляют 10 М NaOH (1,62 мл, 16,2 ммоль) и спустя 2 ч прибавляют новый 10 М NaOH (1,62 мл, 16,2 ммоль). Спустя 2 ч после последнего добавления реакция завершается, и растворитель упаривают под вакуумом. Остаток разбавляют H 2 O и подкисляют с помощью 1н. HCl до рН 2. Водный слой экстрагируют CH 2 Cl 2 (2 ×200 мл), объединенные органические слои высушивают над безводным Na 2 SO 4 , фильтруют и упаривают досуха, получая (Z)-октадек-9-ен-11-иновую кислоту 15 (2,0 г, 89%) в виде бесцветного масла, которое используется без дальнейшей очистки.

1 Н ЯМР (300 МГц, CDCl 3 ) δ 5,79 (дт, J=10,6 и 7,3 Гц, 1Н), 5,42 (ушир.д, J=10,6 Гц, 1Н), 2,37-2,24 (м, 6Н), 1,65-1,40 (м, 6Н), 1,40-1,23 (м, 12Н), 0,88 (т, J=7,0 Гц, 3Н).

13 С ЯМР (75 МГц, CDCl 3 ) δ 179,9, 142,4, 109,4, 94,5, 77,3, 34,0, 31,3, 29,9, 29,0, 28,9 (2), 28,8, 28,7, 28,5, 24,6, 22,6, 19,5, 14,0.

MS (APCI): 279 (M+1) + . Rf=0,40 (CH 2 Cl 2 :MeOH, 10:1).

К раствору спермидина (3,0 г, 20,6 ммоль) в ТГФ (100 мл) медленно добавляют раствор 2-(Вос-оксиамино)-2-фенилацетонитрила (10,14 г, 20,6 ммоль) в ТГФ (20 мл) при 0 °С. Реакционную смесь перемешивают при 0 °С в течение 1 ч и затем растворитель упаривают под вакуумом. Остаток пропускают через силикагель и элюируют CH 2 Cl 2 :EtOAc 7:3 и затем CH 2 Cl 2 :MeOH 1:1, получая трет-бутил-4-(3-(трет-бутилкарбамат)пропил)бутилкарбамат 16 (5,3 г, > 100%) в виде бесцветного масла.

1 Н ЯМР (300 МГц, CD 3 OD) δ 3,15 (т, J=6,8 Гц, 2Н), 3,08 (т, J=6,8 Гц, 2Н), 3,00 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 1,83 (м, 2Н), 1,69 (м, 2Н), 1,55 (м, 2Н), 1,44 (ушир.с, 18Н).

MS (APCI): 346 (M+1) + . Rf=0,18 (CH 2 Cl 2 :MeOH, 8:2).

К раствору 15 (1,01 г, 3,65 ммоль) и 16 (1,89 г, 5,47 ммоль) в CH 2 Cl 2 (50 мл) при 23 °С добавляют Et 3 N (2,58 мл, 18,6 ммоль) и бензатриазол-1-илокси-трис-(диметиламино)фосфонийгексафторфосфат (2,42 г, 5,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 3 ч при 23 °С, затем разбавляют CH 2 Cl 2 и промывают 1 М HCl и насыщенным раствором NaCl. Объединенные органические слои сушат над Na 2 SO 4 , фильтруют и упаривают. Полученный остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (CH 2 Cl 2 :EtOAc от 6:1 до 3:1), выделяя соединение 17 (2,14 г, 96%) в виде бесцветного масла.

1 Н ЯМР (500 МГц, CD 3 OD) δ 5,79 (дт, J=10,5 и 7,5 Гц, 1Н), 5,40 (ушир.д, J=9,5 Гц, 1Н), 3,34 (м, 4Н), 3,07-3,01 (м, 4Н), 3,35-2,25 (м, 4Н), 1,76-1,31 (м, 16Н), 1,43 (с, 28Н), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 3Н).

13 С ЯМР (125 МГц, CD 3 OD) δ 175,5, 175,2, 158, 142,9, 110,7, 95,0, 78,4, 32,4, 30,9, 30,5, 30,4, 30,3, 30,1, 29,9, 29,9, 29,5, 28,8, 23,6, 20,1, 14,4.

MS (APCI): 628 (М+23) + .

К суспензии 17 (542 мг, 0,89 ммоль) в безводном ксилене (16 мл) при 23 °С медленно прибавляют TiCl 4 (98 мк, 0,98 ммоль). Смесь нагревают при 165 °С в течение 1 ч. После охлаждения реакционной смеси до 23 °С добавляют раствор NaOH (270 мг, 6,75 ммоль) в MeOH (15 мл), фильтруют через Celite ® и промывают MeOH (20 мл). Фильтрат концентрируют досуха, добавляют концентрированный водный раствор NaCl (50 мл) и смесь экстрагируют CH 2 Cl 2 (3 ×50 мл). Объединенные органические слои высушивают над безводным Na 2 SO 4 , фильтруют и концентрируют. Полученное вещество очищают с помощью хроматографии на NH 2 -селикагеле (CH 2 Cl 2 :MeOH от 16:1 до 1:1), получая (Z)-4-(2-(пентадек-6-ен-8-инил)-5,6-дигидропиримидин-1(4Н)-ил)бутан-1-амин 18 (131 мг, 38%) в виде желтого масла.

1 Н ЯМР (300 МГц, CD 3 OD) δ 5,80 (дт, J=10,5 и 7,6 Гц, 1H), 5,41 (д, J=10,3 Гц, 1Н), 3,49 (м, 4Н), 3,37 (м, 2Н), 2,71 (т, J=7,0 Гц, 2Н), 2,54 (т, J=7,8 Гц, 2Н), 2,32 (м, 4Н), 2,02 (м, 2Н) 1,69-1,30 (м, 22Н) 0,92 (т, J=6,8 Гц, 3Н).

13 С ЯМР (75 МГц, CDCl 3 ) δ 163,1, 142,0, 109,2, 94,3, 76,9, 51,2, 45,7, 40,9, 38,5, 31,1, 29,7, 29,4, 28,8, 28,7, 28,5, 28,3, 27,3, 27,2, 25,2, 22,3, 19,3, 19,0, 13,8. (два сигнала 13 C не наблюдались).

MS (APCI): 388 (M+1) + . Rf=0,32 (Si-NH 2 , CH 2 Cl 2 :MeOH, 8:1).

К раствору 18 (18 мг, 0,046 ммоль) в безводном ТГФ (0,6 мл) при 23 °С добавляют 1,3-бис-(трет-бутоксикарбонил)-2-метил-2-тиопсевдомочевину (20 мг, 0,069 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 65 °С в течение 5 ч, затем охлаждают до 23 °С. Упаривание под вакуумом дает вещество, которое очищают хроматографией на силикагеле (CH 2 Cl 2 :MeOH от 99:1 до 9:1), получая 19 (7,8 мг, 28%) в виде бесцветного масла.

1 Н ЯМР (300 МГц, CD 3 OD) δ 5,79 (дт, J=11,0 и 7,5 Гц, 1Н), 5,41 (м, 1Н), 3,52 (м, 4Н), 3,41 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 3,37 (т, J=6,0 Гц, 2Н), 2,55 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,31 (тд, J=7,0 и 2,0 Гц, 2Н), 2, 7 (т, J=7,0 Гц, 2Н), 2,02 (м, 2Н), 1,72 (м, 2Н), 1,61 (м, 4Н), 1,52 (с, 9Н), 1,46 (с, 9Н), 1,49-1,28 (м, 8Н), 0,91 (t, J=7,0 Гц, 3Н).

13 С ЯМР (75 МГц, CD 3 OD) δ 165,0, 164,5, 157,7, 154,2, 142,8, 110,8, 95,1, 84,5, 80,4, 78,4, 52,5, 47,1, 40,9, 39,9, 32,5, 32,4, 30,9, 30,1, 30,0, 29,59, 28,6, 28,55, 27,9, 27,1, 25,8, 23,7, 20,1, 20,0, 14,4.

MS (APCI): 630 (M+1) + . Rf=0,10 (CH 2 Cl 2 :MeOH, 94:6).

Раствор 19 (22 мг, 3,65 ммоль) в этиленгликоле (2,2 мл) нагревают при 200 °С в течение 2 мин. Реакционную смесь охлаждают до 23 °С, разделяют между CH 2 Cl 2 и насыщенным водным раствором NaCl, капая 3 М NaOH (pH 14). Водный органический слой экстрагируют CH 2 Cl 2 и объединенные органические слои высушивают над Na 2 SO 4 , фильтруют и упаривают под вакуумом, получая 31 мг неочищенного соединения А, которое подвергают очистке с помощью ВЭЖХ (SymmetryPrep C-18 7 мкл, 7,8 ×150 мм колонка, Н 2 О (0,1% ТФК):CH 3 CN (0,1% ТФК) градиент, УФ-детекция), получая соединение А (6,1 мг, 32%), которое по всем параметрам идентично соединению, полученному в примере 2.

Пример 5. Определение биологической активности для противоопухолевого исследования.

Конечным этапом настоящих исследований является оценка торможения роста «in vitro » культуры опухолевых клеток под действием продолжительного воздействия исследуемых образцов на клетки (табл. 2).

Таблица 2

Линии клеток

Ингибирование роста клеток при колориметрическом анализе

Колориметрический тип анализа, с использованием реакции сульфородамина В (SRB), был адаптирован для количественного измерения роста и выживаемости клеток [используемый метод описан Philip Skehan et al. (1990), New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening, J. Natl. Canser Inst. 82: 1107-1112].

В данном типе анализа используют 96-луночные микроплашки клеточных культур диаметром 9 мм (Mosmsnn, 1983; Faircloth, 1988). Большинство линий клеток получены от Американской коллекции типовых культур (АТСС), происходящих от различных типов рака человека.

Клетки выдерживают при 1640 об/мин с 10% FBS, смешивают с 0,1 г/л пенициллина и 0,1 г/л стрептомицинсульфата и затем инкубируют при 37 °С, 5% CO 2 и 98% влажности. Для экспериментов клетки собирают из субконфлюэнтных культур, используя трипсин, и перед выращиванием ресуспензируют в свежей среде.

Клетки высеивают в 96-луночные микротитровальные плашки из расчета 5 ×10 3 клеток в лунке в 195 мк аликвоте среды и их оставляют присоединяться к поверхности плашки, инкубируя в течение 18 ч в среде без лекарства. После этого образцы добавляют в различные 5 мк аликвоты в диапазоне от 10 до 10 -8 мкг/мл, растворенные в ДМСО:EtOH:фосфатно-буферный физиологический раствор (0,5:0,5:99). После 48-часового воздействия измеряют противоопухолевый эффект по SRB методике: клетки фиксируют добавлением 50 мкл холодной 50% (вес./об.) трихлоруксусной кислоты (ТХК) и инкубируют в течение 60 мин при 4 °С. Плашки промывают деионизированной водой и высушивают. В каждую микротитровальную лунку добавляют 100 мкл раствора SRB (0,4% вес./об. в 1% уксусной кислоты) и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Не связавшийся SRB удаляют, промывая 1% уксусной кислотой. Плашки сушат на воздухе и связанный остаток растворяют в Tris буфере. Оптическую плотность регистрируют с помощью автоматического спектрофотометрического устройства при одной длине волны 490 нм.

Значения среднего +/- стандартного отклонения данных рассчитываются, исходя из трех лунок. Могут быть рассчитаны некоторые параметры клеточного ответа: GI=ингибирование роста, TGI=полное ингибирование роста (цитотоксический эффект) и LC=гибель клеток (цитотоксический эффект).

Табл. 3 иллюстрирует данные биологической активности соединений А, В и 19.

Таблица 3

Данные активности (молярные)