Настоящее изобретение относится к ингибиторам синтазы оксида азота (NOS) общей формулы (I) (где значения заместителей определены в описании и формуле изобретения), в частности, к ингибиторам, селективно ингибирующим нейронную синтазу оксида азота (nNOS) в присутствии других изоформ NOS. Ингибиторы NOS по изобретению, одни или в сочетании с другими фармацевтически активными средствами, могут применяться для лечения или предупреждения состояний, таких как, например, удар, повреждение, вызванное реперфузией, нейродегенеративное расстройство, травма головы, CABG, мигрень с предвестником припадка и без него, мигрень с аллодинией, центральная постинсультная боль (CPSP), невропатическая боль, толерантность, вызванная морфином/опиоидами, и гипералгезия.

[0001] Соединение формулы

[0002] Соединение по п.1, где

[0003] Соединение по п.1 или 2, где R5A представляет собой тиометокси, тиоэтокси, тио-н-пропилокси, тиоизопропилокси, тио-н-бутилокси, тиоизобутилокси, тио-трет-бутилокси, фенил, бензил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-фуранил, 3-фуранил, 2-оксазол, 4-оксазол, 5-оксазол, 2-тиазол, 4-тиазол, 5-тиазол, 2-изоксазол, 3-изоксазол, 4-изоксазол, 2-изотиазол, 3-изотиазол и 4-изотиазол.

[0004] Соединение по п.1 или 2, где R6A представляет собой метил, фторметил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, тиометокси, тиоэтокси, тио-н-пропилокси, тиоизопропилокси, тио-н-бутилокси, тиоизобутилокси, тио-трет-бутилокси, фенил, бензил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-фуранил, 3-фуранил, 2-оксазол, 4-оксазол, 5-оксазол, 2-тиазол, 4-тиазол, 5-тиазол, 2-изоксазол, 3-изоксазол, 4-изоксазол, 2-изотиазол, 3-изотиазол и 4-изотиазол.

[0005] Соединение по п.1 или 2, где один или несколько заместителей из числа R1, R2 и R3 не являются Н.

[0006] Соединение по п.1 или 2, где R1 представляет собой (CH2)m1X1, где X1 выбирают из группы, состоящей из

[0007] Соединение по п.1 или 2, где R3 представляет собой (CH2)m3X3, где X3 выбирают из группы, состоящей из

[0008] Соединение по п.1 или 2, где R1 представляет собой (CH2)m3X1, где X1 выбирают из группы, состоящей из

[0009] Соединение по п.1 или 2, где R3 представляет собой (CH2)m3X3, где X3 выбирают из группы, состоящей из

[0010] Соединение по п.6, где R2 представляет собой

[0011] Соединение по п.1 или 2, где указанное соединение выбирают из группы, включающей 2-этил-1-(1Н-индол-5-ил)изотиомочевину; N-(1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксамидин; N-[1-(2-диметиламиноэтил)-1Н-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидин; N-{1-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил]-1Н-индол-6-ил}тиофен-2-карбоксамидин; 1-[1-(2-диметиламиноэтил)-1Н-индол-6-ил]-2-этилизотиомочевину; N-[1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидин; N-(1-фенетил-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксамидин; N-[3-(2-диметиламиноэтил)-1Н-индол-5-ил]тиофен-2-карбоксамидин; N-(1-{2-[2-(4-бромфенил)этиламино]этил}-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксамидин; (+)-N-{1-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил]-1Н-индол-6-ил}тиофен-2-карбоксамидин; (-)-N-{1-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил]-1Н-индол-6-ил}тиофен-2-карбоксамидин; N-[1-(1-метилазепан-4-ил)-1Н-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидин и N-[1-(2-пиперидин-1-илэтил)-1Н-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидин.

[0012] Соединение по п.1, где R1 или R3 представляет собой

[0013] Соединение по п.1, где указанное соединение селективно ингибирует нейронную синтазу оксида азота (nNOS) относительно эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) или индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS).

[0014] Соединение по п.12, где указанное соединение селективно ингибирует nNOS относительно как eNOS, так и iNOS.

[0015] Соединение по п.1 или 2, имеющее формулу

[0016] Соединение по пп.1 или 2, имеющее формулу

[0017] Соединение, выбранное из группы, состоящей из

[0018] Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из

[0019] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из предшествующих пунктов и фармацевтически приемлемый наполнитель.

[0020] Лекарственное средство, содержащее эффективное количество соединения по п.1, для лечения состояния, вызванного действием синтазы оксида азота (NOS) у млекопитающего, в частности человека.

[0021] Лекарственное средство по п.20, где указанное состояние представляет собой мигрень (с предвестником припадка или без него), головную боль типа хронического напряжения (СТТН), мигрень с аллодинией, невропатическую боль, постинсультную боль, хроническую головную боль, хроническую боль, острое повреждение спинного мозга, диабетическую невропатию, тригеминальную невралгию, диабетическую нефропатию, воспалительное заболевание, удар, повреждение, вызванное реперфузией, травму головы, кардиогенный шок, неврологическое повреждение, ассоциированное с CABG, НСА, деменцию, ассоциированную со СПИД, нейротоксичность, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, ALS, болезнь Гентингтона, рассеянный склероз, нейротоксичность, вызванную метамфетамином, наркоманию, толерантность, зависимость, гипералгезию или синдром отмены, вызванные морфином/опиоидом, толерантность, зависимость или синдром отмены этанола, эпилепсию, тревогу, депрессию, гиперактивность с дефицитом внимания или психоз, в частности, где указанное состояние представляет собой удар, повреждение, вызванное реперфузией, нейродегенерацию, травму головы, неврологическое повреждение, ассоциированное с CABG, мигрень (с предвестником припадка или без него), мигрень с аллодинией, головную боль типа хронического напряжения, невропатическую боль, постинсультную боль, гипералгезию, вызванную опиоидами, или хроническую боль.

[0022] Лекарственное средство по п.20, где указанное соединение представляет собой 3,5-замещенный индол, и указанное состояние представляет собой мигрень или головную боль типа хронического напряжения.

[0023] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее опиоид, который, в частности, представляет собой алфентанил, буторфанол, бупренорфин, декстроморамид, дезоцин, декстропропоксифен, кодеин, дигидрокодеин, дифеноксилат, эторфин, фентанил, гидрокодон, гидроморфон, кетобемидон, лоперамид, леворфанол, левометадон, меперидин, мептазинол, метадон, морфин, морфин-6-глюкуронид, налбуфин, налоксон, оксикодон, оксиморфон, пентазоцин, петидин, пиритрамид, пропоксилфен, ремифентанил, сулфентанил, тилидин или трамадол.

[0024] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее антидепрессант.

[0025] Лекарственное средство по п.24, где указанный антидепрессант представляет собой

[0026] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее антиэпилептическое средство, в частности, где указанное антиэпилептическое средство представляет собой карбамазепин, флупиртин, габапентин, ламотригин, окскарбазепин, фенитоин, ретигабин, топирамат или вальпроат.

[0027] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), в частности, где указанное NSAID представляет собой ацеметацин, аспирин, целекоксиб, деракоксиб, диклофенак, дифлунизал, этензамид, этофенамат, эторикоксиб, фенопрофен, флуфенаминовую кислоту, флурбипрофен, лоназолак, лорноксикам, ибупрофен, индометацин, изоксикам, кебузон, кетопрофен, кеторолак, напроксен, набуметон, нифлумовую кислоту, сулиндак, толметин, пироксикам, меклофенамовую кислоту, мефенамовую кислоту, мелоксикам, метамизол, мофебутазон, оксифенбутазон, парекоксиб, фенидин, фенилбутазон, пироксикам, пропацетамол, пропифеназон, рофекоксиб, салициламид, супрофен, тиапрофеновую кислоту, теноксикам, вальдекоксиб, 4-(4-циклогексил-2-метилоксазол-5-ил)-2-фторбензолсульфонамид, N-[2-(циклогексилокси)-4-нитрофенил]метансульфонамид, 2-(3,4-дифторфенил)-4-(3-гидрокси-3-метилбутокси)-5-[4-(метилсульфонил)фенил]-3(2Н)-пиридазинон или 2-(3,5-дифторфенил)-3-[4-(метилсульфонил)фенил]-2-циклопентен-1-он).

[0028] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее антиаритмическое средство, антагонист GABA-B или агонист альфа-2-адренергического рецептора.

[0029] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее агонист 5HT1B/1D серотонина, в частности, где указанный агонист 5HT1B/1D серотонина представляет собой элетриптан, фловатриптан, наратриптан, ризатриптан, суматриптан или золмитриптан.

[0030] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее антагонист N-метил-D-аспартата, в частности, где указанный антагонист N-метил-D-аспартата представляет собой амантадин; аптиганель; безонпродил; будипин; конантокин G; делуцемин; дексанабинол; декстрометорфан; декстропропоксифен; фелбамат; флуорофелбамат; гациклидин; глицин; ипеноксазон; каитоцефалин; кетамин; кетобемидон; ланицемин; ликостинел; мидафотел; мемантин; D-метадон; D-морфин; милнаципран; нерамексан; орфенадрин; ремацемид; сульфазоцин; FPL-12495 (метаболит рацемида); топирамат; ( αR)- α-амино-5-хлор-1-(фосфонометил)-1Н-бензимидазол-2-пропановую кислоту; 1-аминоциклопентанкарбоновую кислоту; [5-(аминометил)-2-[[[(5S)-9-хлор-2,3,6,7-тетрагидро-2,3-диоксо-1Н,5Н-пиридо[1,2,3-de]хиноксалин-5-ил]ацетил]амино]фенокси]уксусную кислоту; α-амино-2-(2-фосфоноэтил)циклогексанпропановую кислоту; α-амино-4-(фосфонометил)бензолуксусную кислоту; (3E)-2-амино-4-(фосфонометил)-3-гептеновую кислоту; 3-[(1E)-2-карбокси-2-фенилэтенил]-4,6-дихлор-1Н-индол-2-карбоновую кислоту; соль 8-хлор-2,3-дигидропиридазино[4,5-b]хинолин-1,4-дион-5-оксида 2-гидрокси-N,N,N-триметилэтанаминия; N'-[2-хлор-5-(метилтио)фенил]-N-метил-N-[3-(метилтио)фенил]гуанидин; N'-[2-хлор-5-(метилтио)фенил]-N-метил-N-[3-(R)-метилсульфинил]фенил]гуанидин; 6-хлор-2,3,4,9-тетрагидро-9-метил-2,3-диоксо-1Н-индено[1,2-b]пиразин-9-уксусную кислоту; 7-хлортиокинуреновую кислоту; (3S,4aR,6S,8aR)-декагидро-6-(фосфонометил)-3-изохинолинкарбоновую кислоту; (-)-6,7-дихлор-1,4-дигидро-5-[3-(метоксиметил)-5-(3-пиридинил)-4-Н-1,2,4-триазол-4-ил]-2,3-хиноксалиндион; 4,6-дихлор-3-[(Е)-(2-оксо-1-фенил-3-пирролидинилиден)метил]-1Н-индол-2-карбоновую кислоту; (2R,4S)-рел-5,7-дихлор-1,2,3,4-тетрагидро-4-[[(фениламино)карбонил]амино]-2-хинолинкарбоновую кислоту; (3R,4S)-рел-3,4-дигидро-3-[4-гидрокси-4-(фенилметил)-1-пиперидинил]-2Н-1-бензопиран-4,7-диол; 2-[(2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил)амино]ацетамид; 1,4-дигидро-6-метил-5-[(метиламино)метил]-7-нитро-2,3-хиноксалиндион; [2-(8,9-диоксо-2,6-диазабицикло[5.2.0]нон-1(7)-ен-2-ил)этил]фосфоновую кислоту; (2R, 6S)-1,2,3,4,5,6-гексагидро-3-[(2S)-2-метоксипропил]-6,11,11-триметил-2,6-метано-3-бензазоцин-9-ол; 2-гидрокси-5-[[(пентафторфенил)метил]амино]бензойную кислоту; 1-[2-(4-гидроксифенокси)этил]-4-[(4-метилфенил)метил]-4-пиперидинол; 1-[4-(1Н-имидазол-4-ил)-3-бутинил]-4-(фенилметил)пиперидин; 2-метил-6-(фенилэтинил)пиридин; 3-(фосфонометил)-L-фенилаланин или 3,6,7-тетрагидро-2,3-диоксо-N-фенил-1Н,5Н-пиридо[1,2,3-de]хиноксалин-5-ацетамид.

[0031] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее антагонист холецистокинина В или антагонист вещества Р.

[0032] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее противовоспалительное соединение, в частности, где указанное противовоспалительное соединение представляет собой аспирин, целекоксиб, кортизон, деракоксиб, дифлунизал, эторикоксиб, фенопрофен, ибупрофен, кетопрофен, напроксен, преднизолон, сулиндак, толметин, пироксикам, мефенамовую кислоту, мелоксикам, фенилбутазон, рофекоксиб, супрофен, вальдекоксиб, 4-(4-циклогексил-2-метилоксазол-5-ил)-2-фторбензолсульфонамид, N-[2-(циклогексилокси)-4-нитрофенил]метансульфонамид, 2-(3,4-дифторфенил)-4-(3-гидрокси-3-метилбутокси)-5-[4-(метилсульфонил)фенил]-3(2Н)-пиридазинон или 2-(3,5-дифторфенил)-3-[4-(метилсульфонил)фенил]-2-циклопентен-1-он.

[0033] Лекарственное средство по п.20, дополнительно включающее DHP-чувствительный антагонист кальциевых каналов L-типа, омега-конотоксинчувствительный антагонист кальциевых каналов N-типа, антагонист кальциевых каналов P/Q-типа, антагонист аденозинкиназы, агонист аденозинового рецептора A1, антагонист аденозинового рецептора А2а, агонист аденозинового рецептора A3, ингибитор аденозиндеаминазы, ингибитор переноса аденозиннуклеозида, агонист ваниллоидного рецептора VR1, агонист СВ1/СВ2 каннабиноида, антагонист рецептора АМРА, антагонист каинатного рецептора, блокатор натриевых каналов, агонист никотинацетилхолиновых рецепторов, средство, открывающее калиевые каналы KATP, калиевые каналы Kv1.4, активированные Са2+ калиевые каналы, калиевые каналы SK, калиевые каналы BK, калиевые каналы IK или калиевые каналы KCNQ2/3, антагонист M3 мускарина, агонист M1 мускарина или частичный агонист/антагонист М2/M3 мускарина, или антиоксидант.

[0034] Соединение по п.15, где X представляет собой S.

[0035] Соединение по п.16, где X представляет собой S.

[0036] Соединение по п.1, имеющее формулу

[0037] Соединение по п.1, где R5 представляет собой R5AC(NH)NH(CH2)r5 или R5BNHC(S)NH(CH2)r5; R6, R2 и R1 представляют собой Н; и R3 представляет собой (CH2)m3X3.

[0038] Соединение по п.1, где R5B представляет собой тиометокси, тиоэтокси, тио-н-пропилокси, тиоизопропилокси, тио-н-бутилокси, тиоизобутилокси, тио-трет-бутилокси.

[0039] Соединение по п.1, где R6B представляет собой тиометокси, тиоэтокси, тио-н-пропилокси, тиоизопропилокси, тио-н-бутилокси, тиоизобутилокси, тио-трет-бутилокси, фенил, бензил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-фуранил, 3-фуранил, 2-оксазол, 4-оксазол, 5-оксазол, 2-тиазол, 4-тиазол, 5-тиазол, 2-изоксазол, 3-изоксазол, 4-изоксазол, 2-изотиазол, 3-изотиазол или 4-изотиазол.

Предпосылки создания изобретения

Настоящее изобретение относится к новым замещенным индолам, обладающим активностью ингибирования синтазы оксида азота (NOS), к фармацевтическим и диагностическим композициям, содержащим их, и к их применению в медицине, в частности, в качестве соединений для лечения удара, повреждения, вызванного реперфузией, нейродегенеративных расстройств, травмы головы, неврологического поврежедения, ассоциированного с обходным шунтом венечной артерии (CABG), мигрени с предвестником припадка и без него, мигрени с аллодинией, головной боли типа хронического напряжения (СТТН), невропатической боли, постинсультной боли и хронической боли.

Оксид азота (NO) играет различные роли как в нормальных, так и в патологических процессах, включая регуляцию кровяного давления, в нейротрансмиссии и в макрофаговых защитных системах (Snyder et al., Scientific American, May, 1992: 68). NO синтезируется тремя изоформами синтазы оксида азота конститутивной формой в эндотелиальных клетках (eNOS), конститутивной формой в нейронах (nNOS) и индуцируемой формой, обнаруженной в макрофагах (iNOS). Указанные ферменты представляют собой гомодимерные белки, которые катализируют пятиэлектронное окисление L-аргинина с образованием NO и цитрулина. Роль NO, продуцируемого каждой изоформой NOS, по-своему уникальна. Сверхстимуляция или сверхэкспрессия отдельных изоформ NOS, в особенности nNOS и iNOS, играет роль при некоторых расстройствах, включая септический шок, артрит, диабет, повреждение, вызванное ишемией-реперфузией, боль и различные нейродегенеративные заболевания (Kerwin et al., J. Med. Chem., 38: 4343, 1995), в то время как ингибирование функции eNOS приводит к нежелательным эффектам, таким как усиленная активация лейкоцитов и тромбоцитов, гипертензия и усиленный атерогенез (Valance and Leiper, Nature Rev. Drug Disc., 2002, 1, 939).

Ингибиторы NOS имеют возможность применения в качестве терапевтических средств при многих расстройствах. Однако сохранение физиологически важной функции синтазы оксида азота предполагает желательность разработки изоформоселективных ингибиторов, которые ингибируют преимущественно nNOS по сравнению с eNOS.

Сущность изобретения

Обнаружено, что некоторые 5- и 6-амидинзамещенные соединения индола являются ингибиторами синтазы оксида азота (NOS) и являются ингибиторами, в частности, изоформы nNOS.

Изобретение относится к соединению формулы

или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарству, где в указанной формуле R ¹ представляет собой Н, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; каждый из R ² и R ³ представляет собой, независимо, Н, Hal, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, необязательно замещенный мостиковый C _2-9 -гетероциклил, необязательно замещенный мостиковый C _1-4 -алкгетероциклил, необязательно замещенный С _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; каждый из R ⁴ и R ⁷ представляет собой, независимо, Н, F, C _1-6 -алкил или C _1-6 -алкокси; R ⁵ представляет собой Н, R ^5A C(NH)NH(СН ₂ ) _r5 или R ^5A NHC(S)NH(CH ₂ ) _r5 , где r ⁵ равен целому числу от 0 до 2, R ^5A представляет собой необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, необязательно замещенный C _2-9 -гетероциклил, необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил, необязательно замещенный C _1-6 -тиоалкокси, необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкарил, необязательно замещенный арилоил или необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкгетероциклил; и R ⁶ представляет собой Н или R ^6A C(NH)(СН ₂ ) _r6 или R ^6A NHC(S)NH(СН ₂ ) _r6 , где r ⁶ равен целому числу от 0 до 2, R ^6A представляет собой необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, необязательно замещенный С _2-9 -гетероциклил, необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил, необязательно замещенный

C _1-6 -тиоалкокси, необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкарил, необязательно замещенный арилоил или необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкгетероциклил; где один, но не оба, из R ⁵ и R ⁶ представляет собой Н.

В некоторых воплощениях R ¹ представляет собой Н, необязательно замещенный С _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; каждый из R ² и R ³ представляет собой, независимо, Н, Hal, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, С _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; каждый из R ⁴ и R ⁷ представляет собой, независимо, Н, F, C _1-6 -алкил или C _1-6 -алкокси; R ⁵ представляет собой Н или R ^5A C(NH)NH(СН ₂ ) _r5 , где r ⁵ равен целому числу от 0 до 2, R ^5A представляет собой необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный С _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, необязательно замещенный С _2-9 -гетероциклил, необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил, необязательно замещенный C _1-6 -тиоалкокси, необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкарил или необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкгетероциклил; и R ⁶ представляет собой Н или R ^6A C(NH)(CH ₂ ) _r6 , где r ⁶ равен целому числу от 0 до 2, R ^6A представляет собой необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, необязательно замещенный C _2-9 -гетероциклил, необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил, необязательно замещенный C _1-6 -тиоалкокси, необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкарил или необязательно замещенный C _1-4 -тиоалкгетероциклил.

R ^5A или R ^6A представляет собой, например, метил, фторметил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, тиометокси, тиоэтокси, тио-н-пропилокси, тиоизопропилокси, тио-н-бутилокси, тиоизобутилокси, тио-трет-бутилокси, фенил, бензил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-фуранил, 3-фуранил, 2-оксазол, 4-оксазол, 5-оксазол, 2-тиазолил, 4-тиазол, 5-тиазол, 2-изоксазол, 3-изоксазол, 4-изоксазол, 2-изотиазол, 3-изотиазол и 4-изотиазол.

В некоторых воплощениях один или несколько заместителей из числа R ¹ , R ² и R ³ не являются Н. Например, R ¹ , R ² и R ³ представляет собой (СН ₂ ) _m1 X ¹ , где X ¹ выбирают из группы, состоящей из

где

каждый из R ^1A и R ^1B представляет собой, независимо, Н, необязательно замещенный С _1-6 -алкил, необязательно замещенный С _3-8 -циклоалкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, С _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; каждый из R ^1C и R ^1D представляет собой, независимо, Н, ОН, CO ₂ R ^1E или NR ^1F R ^1G , где каждый из R ^1E , R ^1F и R ^1G представляет собой, независимо, Н, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный С _3-8 -циклоалкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, C _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил, или R ^1C и R ^1D вместе с атомом углерода, с которым они связаны, представляют собой С=O; Z ¹ представляет собой NR ^1H , NC(O)R ^1H , NC(O)OR ^1H , NC(O)NHR ^1H , NC(S)R ^1H , NC(S)NHR ^1H , NS(O) ₂ R ^1H , O, S, S(O) или S(O) ₂ , где R ^1H представляет собой Н, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный С _3-8 -циклоалкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, C _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; m1 равен целому числу от 2 до 6; n1 равен целому числу от 1 до 4; p1 равен целому числу от 0 до 2; и q1 равен целому числу от 0 до 5. В другом примере R ¹ , R ² и R ³ представляет собой (CH ₂ ) _m X ¹ , где X ¹ выбирают из группы, состоящей из

где

каждый из R ^3C и R ^3D представляет собой, независимо, Н, ОН, CO ₂ R ^3E или NR ^3F R ^3G , где каждый из R ^3E , R ^3F и R ^3G представляет собой, независимо, Н, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный С _3-8 -циклоалкил, необязательно замещенный С _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, С _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил, или R ^3C и R ^3D вместе с атомом углерода, с которым они связаны, представляют собой С=O; Z ³ представляет собой NC(NH)R ^3H , где R ^3H представляет собой Н, необязательно замещенный C _1-6 -алкил, необязательно замещенный С _3-8 -циклоалкил, необязательно замещенный C _6-10 -арил, необязательно замещенный C _1-4 -алкарил, С _2-9 -гетероциклил или необязательно замещенный C _1-4 -алкгетероциклил; m3 равен целому числу от 2 до 6; n3 равен целому числу от 1 до 4; p3 равен целому числу от 0 до 2; и q3 равен целому числу от 0 до 5. R ² или R ³ также могут иметь формулу

где каждый из R ^2J2 , R ^2J3 , R ^2J4 , R ^2J5 , R ^2J6 и R ^2J7 представляет собой, независимо, C _1-6 -алкил; ОН; C _1-6 -алкокси; SH; C _1-6 -тиоалкокси; Halo; NO ₂ ; CN; CF ₃ ; OCF ₃ ; NR ^2Ja R ^2Jb , где каждый из R ^2Ja и R ^2Jb представляет собой, независимо, Н или C _1-6 -алкил; C(O)R ^2Jc , где R ^2Jc представляет собой Н или C _1-6 -алкил; CO ₂ R ^2Jd , где R ^2Jd представляет собой Н или C _1-6 -алкил; тетразолил; С(О)NR ^2Je R ^2Jf , где каждый из R ^2Je и R ^2Jf представляет собой, независимо, Н или C _1-6 -алкил; OC(O)R ^2Jg , где R ^2Jg представляет собой C _1-6 -алкил; NHC(O)R ^2Jh , где R ^2Jh представляет собой Н или C _1-6 -алкил; SO ₃ H; S(О) ₂ NR ^2Ji R ^2Jj , где каждый из R ^2Ji и R ^2Jj представляет собой, независимо, Н или C _1-6 -алкил; S(O)R ^2Jk , где R ^2Jk представляет собой C _1-6 -алкил; и S(O) ₂ R ^2Jl , где R ^2Jl представляет собой C _1-6 -алкил. R ¹ или R ³ могут иметь формулу

где Z представляет собой NR ^X , о равен целому числу от 0 до 3, р равен целому числу от 1 до 2, q равен целому числу от 0 до 2, r равен целому числу от 0 до 1, s равен целому числу от 1 до 3, u равен целому числу от 0 до 1, и t равен целому числу от 5 до 7, и где указанный заместитель R ¹ или R ³ содержит 0-6 двойных углерод-углеродных связей или 0-1 двойную связь углерод-азот.

Соединения по изобретению могут иметь формулы

где X представляет собой О или S.

Предпочтительно соединение по изобретению в анализе in vitro селективно ингибирует нейронную синтазу оксида азота (nNOS) относительно эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) или индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS) или той и другой. Предпочтительно значения IC ₅₀ или K _i , наблюдаемые для соединения при испытании, по меньшей мере в 2 раза меньше в анализе nNOS, чем в анализах eNOS и/или iNOS. Предпочтительнее значения IC ₅₀ или K _i , по меньшей мере, меньше в 5 раз. Наиболее предпочтительно значения IC ₅₀ или K _i меньше в 20 раз или даже в 50 раз. В одном воплощении значения IC ₅₀ или K _i меньше в число раз от 2 до 50.

В другом воплощении изобретения соединения формулы I, где R ⁵ представляет собой R ^5A C(NH)NH(СН ₂ ) _r5 или R ^5A NHC(S)NH(СН ₂ ) _r5 , R ⁶ , R ² и R ¹ представляют собой Н, и R ³ представляет собой (CH ₂ ) _m1 X ¹ , также связывается с серотониновыми рецепторами 5HT1D/1B. Предпочтительно, значения IC ₅₀ или K _i составляют от 10 до 0,001 мкмоль/л. Предпочтительнее значения IC ₅₀ или K _i меньше 1 мкмоль/л. Наиболее предпочтительно значения IC ₅₀ или K _i меньше 0,1.

В данном описании описываются конкретные примеры соединений.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим соединение по изобретению и фармацевтически приемлемый наполнитель.

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения состояния у млекопитающего, такого как, например, человек, вызванного действием синтазы оксида азота (NOS), и в частности, nNOS, который включает введение млекопитающему эффективного количества соединения по изобретению. Примеры состояний, которые можно предупреждать или лечить, включают мигрень (с предвестником припадка или без него), головную боль типа хронического напряжения (СТТН), мигрень с аллодинией, невропатическую боль, постинсультную боль, хроническую головную боль, хроническую боль, острое повреждение спинного мозга, диабетическую невропатию, тригеминальную невралгию, диабетическую нефропатию, воспалительное заболевание, удар, повреждение, вызванное реперфузией, травму головы, кардиогенный шок, неврологическое повреждение, ассоциированное с CABG, НСА, деменцию, ассоциированную со СПИДом, нейротоксичность, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, ALS, болезнь Гентингтона, рассеянный склероз, нейротоксичность, вызванную метамфетамином, наркоманию, толерантность, зависимость, гипералгезию или синдром отмены, вызванные морфином/опиоидами, толерантность, зависимость или синдром отмены этанола, эпилепсию, тревогу, депрессию, гиперактивность с дефицитом внимания и психоз. Соединения по изобретению особенно применимы для лечения удара, повреждения, вызванного реперфузией, нейродегенерации, травмы головы, неврологического повреждения, ассоциированного с CABG, мигрени (с предвестником припадка или без него), мигрени с аллодинией, головной боли типа хронического напряжения, невропатической боли, постинсультной боли, гипералгезии, вызванной опиоидами, или хронической боли. В частности, 3,5-замещенные соединения индола применимы для лечения мигрени с предвестником припадка или без него и СТТН.

Соединение по изобретению также можно использовать в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими средствами для предупреждения или лечения одного из вышеуказанных состояний. Примеры классов терапевтических средств и некоторые конкретные примеры средств, применимых в сочетании с соединением по изобретению, приводятся в табл. 1.

К другим средствам, применимым в сочетании с соединением по изобретению, относятся антиаритмические средства; DHP-чувствительные антагонисты кальциевых каналов L-типа; омега-конотоксин(циконотид)чувствительные антагонисты кальциевых каналов N-типа; антагонисты кальциевых каналов P/Q-типа; антагонисты аденозинкиназы; агонисты аденозиновых рецепторов А ₁ ; антагонисты аденозиновых рецепторов A _2a ; агонисты аденозиновых рецепторов А ₃ ; ингибиторы аденозиндеаминазы; ингибиторы переноса аденозиннуклеозидов; агонисты ванилоидных рецепторов VR1; антагонисты вещества P/NK ₁ ; агонисты каннабиоидов СВ1/СВ2; антагонисты GABA-B; антагонисты АМРА и каината, антагонисты метаботропных глутаматных рецепторов; агонисты альфа-2-адренергических рецепторов; агонисты никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (nAChR); антагонисты холецистокинина В; блокаторы натриевых каналов; средство, открывающее калиевые каналы К _АТФ , калиевые каналы K _v1.4 , Ca ²⁺ -активированные калиевые каналы, калиевые каналы SK, калиевые каналы ВК, калиевые каналы IK или калиевые каналы KCNQ2/3 (например, ретигабин); агонисты 5НТ1А; мускариновые антагонисты M3, агонисты M1, частичные агонисты/антагонисты М2/M3 и антиоксиданты.

Таблица 1. Лечебные средства, применимые в сочетании с соединениями по изобретению

В любом из соединений по настоящему изобретению могут присутствовать асимметричные или хиральные центры. В настоящем изобретении рассматриваются различные стереоизомеры и их смеси. Отдельные стереоизомеры соединений по настоящему изобретению получают синтетически из коммерчески доступных исходных материалов, которые содержат асимметричные или хиральные центры, или получая смеси энантиомеров с последующим расщеплением способами, хорошо известными специалистам в данной области техники. Примерами таких способов расщепления являются (1) присоединение рацемической смеси энантиомеров, обозначаемой (+/-), к хиральному вспомогательному веществу, разделение полученных диастереомеров перекристаллизацией или хроматографией и высвобождение оптически чистого продукта из вспомогательного вещества, или (2) непосредственным разделением смеси оптических энантиомеров на хиральной хроматографической колонке. Энантиомеры в данном описании обозначаются символами "R" или "S", в зависимости от конфигурации заместителей около хирального атома углерода. С другой стороны, энантиомеры обозначают как (+) или (-), в зависимости от того, вращает ли раствор энантиомера плоскость поляризованного света по часовой стрелке или против часовой стрелки, соответственно.

В соединениях по настоящему изобретению также могут существовать геометрические изомеры. Настоящее изобретение рассматривает различные геометрические изомеры и их смеси, являющиеся результатом расположения заместителей около двойной углерод-углеродной связи, и такие изомеры обозначают как Z- или Е-конфигурации, где обозначение "Z" представляет заместители на одной и той же стороне двойной углерод-углеродной связи, и обозначение "Е" представляет заместители на противоположных сторонах двойной углерод-углеродной связи. Также признано, что для структур, в которых возможны таутомерные формы, описание одной таутомерной формы эквивалентно описанию обеих форм, если не указано иное. Например, амидиновые структуры формул C(=NR ^Q )NHR ^T и -C(NHR ^Q )=NR ^T , где R ^T и R ^Q различны, эквивалентны таутомерным структурам, и описание одной по своему существу включает другую.

Понятно, что специалист в данной области техники может выбрать заместители и картины замещения в соединениях по изобретению для получения соединений, которые являются химически устойчивыми и которые можно легко синтезировать методами, известными в технике, а также способами, представленными ниже, из легко доступных исходных веществ. Если заместитель сам является замещенным несколькими группами, понятно, что такие несколько групп могут находиться у одного и того же атома углерода или у различных атомов углерода до тех пор, пока получают устойчивую структуру.

Другие особенности и преимущества изобретения будет очевидны из последующего описания и формулы изобретения.

Определения

Термины "ацил" или "алканоил", используемые в данном описании как взаимозаменяемые, представляют алкильную группу, определенную в данном описании, или водород, присоединенный к основной молекулярной группе через карбонильную группу, определенную в данном описании, и примерами являются формил, ацетил, пропионил, бутаноил и подобные группы. Примеры незамещенных ацильных групп включают от 2 до 7 атомов углерода.

Термины "С _х-у -алкарил" или "С _х-у -алкиленарил", используемые в данном описании, представляют химический заместитель формулы -RR', где R представляет собой алкиленовую группу с х-у атомами углерода, и R' представляет собой арильную группу, определенную в данном описании в другом месте. Подобным образом, терминами "С _х-у -алкгетероарил", "С _х-у -алкиленгетероарил" обозначается химический заместитель формулы -RR", где R представляет собой алкиленовую группу с х-у атомами углерода, и R" представляет собой гетероарильную группу, определенную в данном описании в другом месте. Другие группы, предваряемые префиксами "алк-" или "алкилен-", определяются таким же образом. Примеры незамещенных алкарильных групп содержат от 7 до 16 атомов углерода.

Термин "алкциклоалкил" представляет циклоалкильную группу, присоединенную к основной молекулярной группе через алкиленовую группу.

Термин "алкенил", используемый в данном описании, представляет одновалентные линейные или разветвленные группы из, если не указано иное, 2-6 атомов углерода, содержащие одну или несколько двойных углерод-углеродных связей, и примерами являются этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, 2-метил-1-пропенил, 1-бутенил, 2-бутенил и подобные группы.

Термин "алкгетероциклил" представляет гетероциклическую группу, присоединенную к основной молекулярной группе через алкиленовую группу. Примеры незамещенных алкгетероциклильных групп содержат от 3 до 14 атомов углерода.

Термин "алкокси" представляет химический заместитель формулы -OR, где R представляет собой алкильную группу с 1-6 атомами углерода, если не указано иное.

Термин "алкоксиалкил" представляет алкильную группу, замещенную алкоксигруппой. Примеры незамещенных алкоксиалкильных групп содержат от 2 до 12 атомов углерода.

Термины "алкил" и префикс "алк-", используемые в данном описании, включают как линейные, так и разветвленные насыщенные группы с 1-6 атомами углерода, если не указано иное. Примерами алкильных групп являются метил, этил, н- и изопропил, н-, втор-, изо- и трет-бутил, неопентил и подобные группы, которые могут быть, необязательно, замещены одним, двумя, тремя или, в случае алкильных групп с двумя или большим числом атомов углерода, четырьмя заместителями, выбранными, независимо, из группы, состоящей из (1) алкокси с одним-шестью атомами углерода; (2) алкилсульфинила с одним-шестью атомами углерода; (3) алкилсульфонила с одним-шестью атомами углерода; (4) амино; (5) арила; (6) арилалкокси; (7) арилоила; (8) азидо; (9) карбоксальдегида; (10) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода; (11) галогена; (12) гетероциклила; (13) (гетероцикл)окси; (14) (гетероцикл)оила; (15) гидроксила; (16) N-защищенного амино; (17) нитро; (18) оксо; (19) спироалкила с тремя-восемью атомами углерода; (2) тиоалкокси с одним-шестью атомами углерода; (21) тиола; (22) -CO ₂ R ^A , где R ^A выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (23) -C(O)NR ^B R ^C , где каждый из R ^B и R ^C выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (с) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (24) -SO ₂ R ^D , где R ^D выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (25) -SO ₂ NR ^E R ^F , где каждого из R ^E и R ^F выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (с) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; и (26) -NR ^G R ^H , где каждого из R ^G и R ^H выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) N-защитной группы; (с) алкила с одним-шестью атомами углерода; (d) алкенила с двумя-шестью атомами углерода; (е) алкинила с двумя-шестью атомами углерода; (f) арила; (g) алкарила, где алкиленовая группа состоит из одного-шести атомов углерода; (h) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода и (i) алкциклоалкила, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода, и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода, при условии, что две группы не связываются с атомом азота через карбонильную группу или сульфонильную группу.

Термин "алкилен", используемый в данном описании, представляет насыщенную двухвалентную углеводородную группу, образованную от линейного или разветвленного насыщенного углеводорода удалением двух атомов водорода, и его примерами являются метилен, этилен, изопропилен и подобные группы.

Термин "алкилсульфинил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, соединенную с основной молекулярной группой через группу -S(О)-. Примеры незамещенных алкилсульфинильных групп содержат от 1 до 6 атомов углерода.

Термин "алкилсульфонил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, соединенную с основной молекулярной группой через группу -SO ₂ -. Примеры незамещенных алкилсульфонильных групп содержат от 1 до 6 атомов углерода.

Термин "алкилсульфинилалкил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, определенную в данном описании, замещенную алкилсульфинильной группой. Примеры незамещенных алкилсульфинилалкильных групп содержат от 2 до 12 атомов углерода.

Термин "алкилсульфонилалкил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, определенную в данном описании, замещенную алкилсульфонильной группой. Примеры незамещенных алкилсульфонилалкильных групп содержат от 2 до 12 атомов углерода.

Термин "алкинил", используемый в данном описании, представляет одновалентные линейные или разветвленные группы с двумя-шестью атомами углерода, содержащие тройную углерод-углеродную связь, и его примерами являются этинил, 1-пропинил и подобные группы.

Термин "амидин", используемый в данном описании, представляет группу -C(=NH)NH ₂ .

Термин "амино", используемый в данном описании, представляет группу -NH ₂ .

Термин "аминоалкил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, определенную в данном описании, замещенную аминогруппой.

Термин "арил", используемый в данном описании, представляет моно- или бициклическую систему с одним-двумя ароматическими циклами, и его примерами являются фенил, нафтил, 1,2-дигидронафтил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, флуоренил, инданил, инденил и подобные группы, и арил може быть, необязательно, замещен одни, двумя, тремя, четырьмя или пятью заместителями, выбранными, независимо, из группы, состоящей из (1) алканоила с одним-шестью атомами углерода; (2) алкила с одним-шестью атомами углерода; (3) алкокси с одним-шестью атомами углерода; (4) алкоксиалкила, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (5) алкилсульфинила с одним-шестью атомами углерода; (6) алкилсульфинилалкила, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (7) алкилсульфонила с одним-шестью атомами углерода; (6) алкилсульфонилалкила, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (9) арила; (10) амино; (11) аминоалкила с одним-шестью атомами углерода; (12) гетероарила; (13) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (14) арилоила; (15) азидо; (16) азидоалкила с одним-шестью атомами углерода; (17) карбоксальдегида; (18) (карбоксальдегид)алкила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (19) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода; (20) алкциклоалкила, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода, и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода; (21) галогена; (22) галогеналкила с одним-шестью атомами углерода; (23) гетероциклила; (24) (гетероциклил)окси; (25) (гетероциклил)оила; (26) гидрокси; (27) гидроксиалкила с одним-шестью атомами углерода; (28) нитро; (29) нитроалкила с одним-шестью атомами углерода; (30) N-защищенного амино; (31) N-защищенного аминоалкила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (32) оксо; (33) тиоалкокси с одним-шестью атомами углерода; (34) тиоалкоксиалкила, где алкильная и алкиленовая группа содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (35) -(СН ₂ ) _q CO ₂ R ^A , где q равен целому числу от нуля до четырех, и R ^A выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (36) -(CH ₂ ) _q CONR ^B RC, где q равен целому числу от нуля до четырех, и где R ^B и R ^C выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (с) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (37) -(СН ₂ ) _q SO ₂ R ^D , где q равен целому числу от нуля до четырех, и R ^D выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (38) -(СН ₂ ) _q SO ₂ NR ^E R ^F , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где каждый из R ^E и R ^F выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (c) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (39) -(СН ₂ ) _q NR ^G R ^H , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где каждый из R ^G и R ^H выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) N-защитной группы; (с) алкила с одним-шестью атомами углерода; (d) алкенила с двумя-шестью атомами углерода; (е) алкинила с двумя-шестью атомами углерода; (f) арила; (g) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (h) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода и (i) алкциклоалкила, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода, и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода, при условии, что две группы не соединяются с атомом азота через карбонильную группу или сульфонильную группу; (40) тиола; (41) перфторалкила; (42) перфторалкокси; (43) арилокси; (44) циклоалкокси; (45) циклоалкилалкокси и (46) арилалкокси.

Термин "арилалкокси", используемый в данном описании, представляет алкарильную группу, присоединенную к основной молекулярной группе через атом кислорода. Примеры незамещенных арилалкоксигрупп содержат от 7 до 16 атомов углерода.

Термин "арилокси" представляет химический заместитель формулы -OR', где R' представляет собой арильную группу с 6-18 атомами углерода, если не указано иное.

Термины "арилоил" и "ароил", как используемые в данном описании как взаимозаменяемые, представляют арильную группу, присоединенную к основной молекулярной группе через карбонильную группу. Примеры незамещенных арилоильных групп содержат от 7 до 11 атомов углерода.

Термин "азидо" представяет группу N ₃ , которая также может быть представлена как N=N=N.

Термин "азидоалкил" представяет азидогруппу, присоединенную к основной молекулярной группе через алкильную группу.

Термин "мостиковый гетероциклил" представляет гетероциклическое соединение, описанное в данном описании в другом месте, имеющее мостиковую полициклическую структуру, в которой один или несколько атомов углерода и/или гетероатомов соединяют мостиковой связью два несоседних члена одноядерного цикла. Примером мостиковой гетероциклильной группы является хинуклидинильная группа.

Термин "мостиковый алкгетероциклил" представляет гетероциклическое соединение, описанное иначе в данном описании в другом месте, присоединенное к основной молекулярной группе через алкиленовую группу.

Термин "карбонил", используемый в данном описании, представляет группу С(О), которая также может быть представлена как С=O.

Термин "карбоксальдегид" представляет группу СНО.

Термин "карбоксальдегидалкил" представляет карбоксальдегидную группу, присоединенную к основной молекулярной группе через алкиленовую группу.

Термин "циклоалкил", используемый в данном описании, представляет одновалентную насыщенную или ненасыщенную неароматическую циклическую углеводородную группу, содержащую от трех до восьми атомов углерода, если не указано иное, и примерами являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, бицикло[2.2.1]гептил и подобные группы. Циклоалкильные группы в данном изобретении могут быть, необязательно, замещены (1) алканоилом с одним-шестью атомами углерода; (2) алкилом с одним-шестью атомами углерода; (3) алкокси с одним-шестью атомами углерода; (4) алкоксиалкилом, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (5) алкилсульфинилом с одним-шестью атомами углерода; (б) алкилсульфинилалкилом, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (7) алкилсульфонилом с одним-шестью атомами углерода; (8) алкилсульфонилалкилом, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (9) арилом; (10) амино; (11) аминоалкилом с одним-шестью атомами углерода; (12) гетероарилом; (13) алкарилом, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (14) арилоилом; (15) азидо; (16) азидоалкилом с одним-шестью атомами углерода; (17) карбоксальдегидом; (18) (карбоксальдегид)алкилом, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (19) циклоалкилом с тремя-восемью атомами углерода; (20) алкциклоалкилом, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода; (21) галогеном; (22) галогеналкилом с одним-шестью атомами углерода; (23) гетероциклилом; (24) (гетероциклил)окси; (25) (гетероциклил)оилом; (26) гидрокси; (27) гидроксиалкилом с одним-шестью атомами углерода; (28) нитро; (29) нитроалкилом с одним-шестью атомами углерода; (30) N-защищенным амино; (31) N-защищенным аминоалкилом, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (32) оксо; (33) тиоалкокси с одним-шестью атомами углерода; (34) тиоалкоксиалкилом, где алкильная и алкиленовая группа содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (35) -(СН ₂ ) _q CO ₂ R ^A , где q равен целому числу от нуля до четырех, и R ^A выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (36) -(CH ₂ ) _q CONR ^B R ^C , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где R ^B и R ^C выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (с) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (37) -(СН ₂ ) _q SO ₂ R ^D , где q равен целому числу от нуля до четырех, и R ^D выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (38) -(СН ₂ ) _q SO ₂ NR ^E R ^F , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где каждый из R ^E и R ^F выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (с) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода;

(39) -(CH ₂ ) _q NR ^G R ^H , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где каждый из R ^G и R ^H выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) N-защитной группы; (с) алкила с одним-шестью атомами углерода; (d) алкенила с двумя-шестью атомами углерода; (е) алкинила с двумя-шестью атомами углерода; (f) арила; (g) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (h) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода и (i) алкциклоалкила, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода, при условии, что две группы не соединяются с атомом азота через карбонильную группу или сульфонильную группу; (40) тиолом; (41) перфторалкилом; (42) перфторалкокси; (43) арилокси; (44) циклоалкокси; (45) циклоалкилалкокси и (46) арилалкокси.

Термины "циклоалкилокси" или "циклоалкокси", используемые в данном описании как взаимозаменяемые, представляют циклоалкильную группу, определенную в данном описании, присоединенную к основной молекулярной группе через атом кислорода. Примеры незамещенных циклоалкилоксигрупп содержат 3-8 атомов углерода.

Термин "эффективное количество" или "достаточное количество" средства, используемый в данном описании, означает, что количество является достаточным для получения благоприятных или желательных результатов, таких как клинические результаты, и как таковое "эффективное количество" зависит от ситуации, в которой его применяют. Например, в ситуации введения средства, которое ингибирует NOS, эффективным количеством средства является, например, количество, достаточное для достижения уменьшения активности NOS по сравнению с реакцией, получаемой без введения средства.

Термины "галогенид" или "галоген" или "Hal" или "гало", используемые в данном описании, представляют бром, хлор, иод или фтор.

Термин "гетероарил", используемый в данном описании, представляет подгруппу гетероциклов, определенных в данном описании, которые являются ароматическими, т.е. они содержат 4n+2 pi электронов в моно- или полициклической системе.

Термины "гетероцикл" или "гетероциклил", используемые в данном описании как взаимозаменяемые, представляют 5-, 6- или 7-членный цикл, если не указано иное, содержащий один, два, три или четыре гетероатома, выбранные, независимо, из группы, состоящей из атомов азота, кислорода и серы. 5-Членный цикл содержит от нуля до двух двойных связей, и 6- и 7-членные циклы содержат от нуля до трех двойных связей. Термин "гетероцикл" также включает бициклические, трициклические и тетрациклические группы, в которых любой из вышеуказанных циклов гетероцикла конденсирован с одним, двумя или тремя циклами, выбранными, независимо, из группы, состоящей из арильного цикла, циклогексанового цикла, циклогексенового цикла, циклопентанового цикла, циклопентенового цикла и другого одноядерного гетероциклического цикла, такого как индолил, хинолил, изохинолил, тетрагидрохинолил, бензофурил, бензотиенил и подобные группы. Гетероциклилы включают пирролил, пирролинил, пирролидинил, пиразолил, пиразолинил, пиразолидинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиридил, пиперидинил, гомопиперидинил, пиразинил, пиперазинил, пиримидинил, пиридазинил, оксазолил, оксазолидинил, изоксазолил, изоксазолидинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиазолил, тиазолидинил, изотиазолил, изотиазолидинил, индолил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензотиазолил, бензоксазолил, фурил, тиенил, тиазолидинил, изотиазолил, изоиндазолил, триазолил, тетразолил, оксадиазолил, урицил, тиадиазолил, пиримидил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, дигидротиенил, дигидроиндолил, тетрагидрохинолил, тетрагидроизохинолил, пиранил, дигидропиранил, дитиазолил, бензофуранил, бензотиенил и подобные группы. Гетероциклические группы также включают соединения формулы

где F' выбирают из группы, состоящей из -СН ₂ -, CH ₂ O- и -O-, и G' выбирают из группы, состоящей из -С(О)- и -(C(R') (R'')) _v -, где каждый из R' и R" выбирают, независимо, из группы, состоящей из водорода или алкила с одним-четырьмя атомами углерода, и v равен одному-трем, и включают группы, такие как 1,3-бензодиоксолил, 1,4-бензодиоксанил и подобные. Любая из гетероциклических групп, указанных здесь, может быть, необязательно, замещена одним, двумя, тремя, четырьмя или пятью заместителями, выбранными, независимо, из группы, состоящей из (1) алканоила с одним-шестью атомами углерода; (2) алкила с одним-шестью атомами углерода; (3) алкокси с одним-шестью атомами углерода; (4) алкоксиалкила, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (5) алкилсульфинила с одним-шестью атомами углерода; (6) алкилсульфинилалкила, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (7) алкилсульфонила с одним-шестью атомами углерода; (8) алкилсульфонилалкила, где алкильная и алкиленовая группы содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (9) арила; (10) амино; (11) аминоалкила с одним-шестью атомами углерода; (12) гетероарила; (13) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (14) арилоила; (15) азидо; (16) азидоалкила с одним-шестью атомами углерода; (17) карбоксальдегида; (18) (карбоксальдегид)алкила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (19) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода; (20) алкциклоалкила, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода; (21) галогена; (22) галогеналкила с одним-шестью атомами углерода; (23) гетероциклила; (24) (гетероциклил)окси; (25) (гетероциклил)оила; (26) гидрокси; (27) гидроксиалкила с одним-шестью атомами углерода; (28) нитро; (29) нитроалкила с одним-шестью атомами углерода; (30) N-защищенного амино; (31) N-защищенного аминоалкила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (32) оксо; (33) тиоалкокси с одним-шестью атомами углерода; (34) тиоалкоксиалкила, где алкильная и алкиленовая группа содержат, независимо, один-шесть атомов углерода; (35) -(СН ₂ ) _q CO ₂ R ^A , где q равен целому числу от нуля до четырех, и R ^A выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (36) -(СН ₂ ) _q CONR ^B R ^C , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где R ^B и R ^C выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (с) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (37) -(СН ₂ ) _q SO ₂ R ^D , где q равен целому числу от нуля до четырех, и R ^D выбирают из группы, состоящей из (а) алкила, (b) арила и (с) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (38) -(СН ₂ ) _q SO ₂ NR ^E R ^F , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где каждый из R ^E и R ^F выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) алкила, (c) арила и (d) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (39) -(СН ₂ ) _q NR ^G R ^H , где q равен целому числу от нуля до четырех, и где каждый из R ^G и R ^H выбирают, независимо, из группы, состоящей из (а) водорода, (b) N-защитной группы; (с) алкила с одним-шестью атомами углерода; (d) алкенила с двумя-шестью атомами углерода; (е) алкинила с двумя-шестью атомами углерода; (f) арила; (g) алкарила, где алкиленовая группа содержит один-шесть атомов углерода; (h) циклоалкила с тремя-восемью атомами углерода и (i) алкциклоалкила, где циклоалкильная группа содержит три-восемь атомов углерода и алкиленовая группа содержит один-десять атомов углерода, при условии, что две группы не соединяются с атомом азота через карбонильную группу или сульфонильную группу; (40) тиола; (41) перфторалкила; (42) перфторалкокси; (43) арилокси; (44) циклоалкокси; (45) циклоалкилалкокси и (46) арилалкокси.

Термины "гетероциклилокси" и "(гетероцикл)окси", используемые в данном описании как взаимозаменяемые, представляют гетероциклическую группу, определенную в данном описании, присоединенную к основной молекулярной группе через атом кислорода.

Термины "гетероциклилоил" и "(гетероцикл)оил", используемые в данном описании как взаимозаменяемые, представляют гетероциклическую группу, определенную в данном описании, присоединенную к основной молекулярной группе через карбонильную группу.

Термин "гидрокси"или "гидроксил", используемый в данном описании, представляет группу -ОН.

Термин "гидроксиалкил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, определенную в данном описании, замещенную одной-тремя гидроксигруппами, при условии, что не более одной гидроксигруппы может присоединяться к одному атому углерода алкильной группы, и примерами являются гидроксиметил, дигидроксипропил и подобные группы.

Термины "ингибировать"или "подавлять"или "ослаблять", относящиеся к функции или активности, такой как активность NOS, обозначают ослабление функции или активности при сравнении с другими такими же условиями, за исключением состояния или параметра, представляющего интерес, или, с другой стороны, по сравнению с другим условием.

Термин "N-защищенный амино", используемый в данном описании, относится к аминогруппе, определенной в данном описании, к которой присоединена N-защитная или азотзащитная группа, определенная в данном описании.

Термины "N-защитная группа" и "азотзащитная группа", используемые в данном описании, представляют группы, предназначенные для защиты аминогруппы от нежелательных взаимодействий во время процедур синтеза. Обычно используемые N-защитные группы раскрываются в работе Greene, "Protective Groups In Organic Synthesis", 3 ^rd Edition (John Wiley & Sons, New York, 1999), включенной в данное описание в качестве ссылки. N-Защитные группы включают ацильные, ароильные или карбамильные группы, такие как формил, ацетил, пропионил, пивалоил, трет-бутилацетил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, трифторацетил, трихлорацетил, фталил, о-нитрофеноксиацетил, α-хлорбутирил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4-бромбензоил, 4-нитробензоил, и хиральные вспомогательные вещества, такие как защищенные или незащищенные D-, L- или D,L-аминокислоты, такие как аланин, лейцин, фенилаланин и т.п.; сульфонильные группы, такие как бензолсульфонил, п-толуолсульфонил и т.п.; карбаматобразующие группы, такие как бензилоксикарбонил, п-хлорбензилоксикарбонил, п-метоксибензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил, 3,5-диметоксибензилоксикарбонил, 2,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 2-нитро-4,5-диметоксибензилоксикарбонил, 3,4,5-триметоксибензилоксикарбонил, 1-(п-бифенилил)-1-метилэтоксикарбонил, α, α-диметил-3,5-диметоксибензилоксикарбонил, бензгидрилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил, диизопропилметоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, этоксикарбонил, метоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, феноксикарбонил, 4-нитрофеноксикарбонил, флуоренил-9-метоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, фенилтиокарбонил и подобные группы, арилалкильные группы, такие как бензил, трифенилметил, бензилоксиметил и т.п., и силильные группы, такие как триметилсилил и подобные группы.

Предпочтительными N-защитными группами являются формил, ацетил, бензоил, пивалоил, трет-бутилацетил, аланил, фенилсульфонил, бензил, трет-бутоксикарбонил (Boc) и бензилоксикарбонил (Cbz).

Термин "нитро", используемый в данном описании, представляет группу -NO ₂ -.

Термин "оксо", используемый в данном описании, представляет =O.

Термин "перфторалкил", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, определенную в данном описании, где каждый водородный радикал, связанный с алкильной группой, заменен на радикал фтор. Примерами перфторалкильных групп являются трифторметил, пентафторэтил и подобные группы.

Термин "перфторалкокси", используемый в данном описании, представляет алкоксигруппу, определенную в данном описании, где каждый водородный радикал, связанный с алкоксигруппой, заменен на радикал фтор.

Термин "фармацевтически приемлемая соль", используемый в данном описании, представляет соли, которые в объеме здравого суждения в медицине подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без неспецифической токсичности, раздражения, аллергической реакции и подобного и соразмерны с приемлемым соотношением польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в технике. Например, фармацевтически приемлемые соли подробно описываются в S.M. Berg et al., J, Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, 1977. Соли можно получить in situ во время конечной стадии выделения и очистки соединений по изобретению или отдельно взаимодействием группы свободного основания с подходящей органической кислотой. Характерные соли присоединения кислот включают ацетаты, адипинаты, альгинаты, аскорбаты, аспартаты, бензолсульфонаты, бензоаты, бисульфаты, бораты, бутираты, камфораты, камфорсульфонаты, цитраты, циклопентапропионаты, диглюконаты, додецилсульфаты, этансульфонаты, фумараты, глюкогептаноаты, глицерофосфаты, гемисульфаты, гептаноаты, гексаноаты, гидробромиды, гидрохлориды, гидроиодиды, 2-гидроксиэтансульфонаты, лактобионаты, лактаты, лаураты, лаурилсульфаты, малаты, малеаты, малонаты, метансульфонаты, 2-нафталинсульфонаты, никотинаты, нитраты, олеаты, оксалаты, пальмитаты, памоаты, пектинаты, персульфаты, 3-фенилпропионаты, фосфаты, пикраты, пивалаты, пропионаты, стеараты, сукцинаты, сульфаты, тартраты, тиоцианаты, толуолсульфонаты, ундеканоаты, валераты и подобные соли. Характерные соли щелочных и щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п., а также нетоксичные соли аммония, четвертичного аммония и с аминокатионами, в том числе соли аммония, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, метиламина, диметиламина, триметиламина, триэтиламина, этиламина и т.п.

Термин "фармацевтически приемлемые пролекарства", используемый в данном описании, представляет такие пролекарства соединений по настоящему изобретению, которые в объеме здравого суждения в медицине подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без неспецифической токсичности, раздражения, аллергической реакции и подобного, соразмерны с приемлемым соотношением польза/риск и эффективны для их предполагаемого применения, так же как формы цвиттер-ионов, когда это возможно, соединений по изобретению.

Термин "Ph", используемый в данном описании, обозначает фенил.

Термин "пролекарство", используемый в данном описании, представляет соединения, которые легко трансформируются in vivo в исходное соединение приведенной выше формулы, например, гидролизом в крови. Пролекарства соединений по изобретению могут представлять собой обычные сложные эфиры. Некоторые широко распространенные сложные эфиры, которые используют в качестве пролекарств, представляют собой фениловые эфиры, алифатические (С ₈ -С ₂₄ ) эфиры, ацилоксиметиловые эфиры, карбаматы и эфиры аминокислот. Например, соединение по изобретению, которое содержит группу ОН, можно ацилировать в таком положении до формы его пролекарства. Подробное обсуждение приводится в работах Т. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol.14, A.C.S. Symposium Series, Edward B. Roche, ed.; Bioreversible Carries in Drug Design, American Pharmaceutical Assotiation and Pergamon Press, 1987; и в Judkins et al., Synthetic Communications, 26(23): 4351-4367, 1996, каждая из которых включена в данное описание в качестве ссылки.

Каждый из терминов "селективно ингибирует nNOS"или "селективный ингибитор nNOS"относится к веществу, такому как, например, соединение по изобретению, которое ингибирует или связывает изоформу nNOS более эффективно, чем изоформу eNOS и/или iNOS в анализе in vitro, таком как, например, анализы, описанные в данном описании. Селективное ингибирование можно выразить в терминах величины IC ₅₀ , величины K _i или обратной величины процента ингибирования, которая меньше, когда вещество испытывают в анализе с nNOS, чем когда его испытывают в анализе с eNOS и/или iNOS. Предпочтительно величина IC ₅₀ или K _i меньше в 2 раза. Предпочтительнее величина IC ₅₀ или K _i меньше в 5 раз. Наиболее предпочтительно величина IC ₅₀ или K _i меньше в 10 раз или даже в 50 раз.

Термин "сольват", используемый в данном описании, обозначает соединение по изобретению, когда молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым в вводимой дозе. Примерами подходящих растворителей являются этанол, вода и подобные растворители. Когда растворителем является вода, молекулу называют "гидратом".

Термин "спироалкил", используемый в данном описании, представляет алкиленовый бирадикал, оба конца которого связаны с одним и тем же атомом углерода основной группы с образованием спироциклической группы.

Термин "сульфонил", используемый в данном описании, представляет группу -S(O) ₂ -.

Термин "тиоалкгетероциклил", используемый в данном описании, представляет тиоалкоксигруппу, замещенную гетероциклильной группой.

Термин "тиоалкокси", используемый в данном описании, представляет алкильную группу, присоединенную к основной молекулярной группе через атом серы. Примеры незамещенных алкилтиогрупп содержат 1-6 атомов углерода.

Термин "тиол" представляет группу -SH.

Используемый в данном описании, а также принятый в технике термин "лечение"представляет собой способ получения благоприятных или желательных результатов, таких как клинические результаты. Благоприятные или желательные результаты могут включать облегчение или уменьшение интенсивности одного или нескольких симптомов или состояний; уменьшение степени заболевания, расстройства или состояния; стабилизацию (т.е. отсутствие ухудшения) статуса заболевания, расстройства или состояния; предупреждение распространения заболевания, расстройства или состояния; задержку или замедление развития заболевания, расстройства или состояния; уменьшение интенсивности или ослабление заболевания, расстройства или состояния; и ремиссию (частичную или полную), детектируемую или недетектируемую. "Лечение" также может обозначать продление продолжительности существования по сравнению с ожидаемой продолжительностью существования, если лечение не получают. "Облегчение" заболевания, расстройства или состояния означает, что степень и/или нежелательные клинические проявления заболевания, расстройства или состояния уменьшаются и/или их развитие со временем замедляется или удлиняется по сравнению со степенью или со временем при отсутствии лечения. Термин также включает профилактическое лечение.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет собой диаграмму, показывающую нейрозащитное действие соединений 9, 12 и 18 после стимуляции NMDA крысиных корковых клеток.

Фиг. 2 представляет собой диаграмму, показывающую нейрозащитное действие соединений 9, 12 и 18 после стимуляции срезов гиппокампа крысы лишением кислорода-глюкозы (OGD).

Фиг. 3 представляет собой диаграмму, показывающую действие соединения 12 на опосредованный NMDA приток Са ²⁺ , измеренный с использованием флуоресцентного красителя Fluo-4FF, чувствительного к Са ²⁺ .

Фиг. 4 представляет собой график, показывающий действие соединения 12 на опосредованные NMDA токи целой клетки в корковых нейронах крысы.

Фиг. 5 представляет собой диаграмму, показывающую вызванное формалином облизывание лап у мышей после обработки (а) носителем, (d) соединением 12 в концентрации 5 и 10 мг/кг и (с) обработки неселективным ингибитором 7-нитроиндазолом (7-NI) в концентрации 2,5 и 5 мг/кг.

Фиг. 6 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на оценку со шпагатом (string), осуществленную через 1 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 7 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на оценку по Холлу, осуществленную через 1 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 8 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на оценку со шпагатом, осуществленную через 4 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; *Р <0,05 в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 9 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на оценку захвата (grip), осуществленную через 4 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; *Р <0,05 в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 10 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на оценку по Холлу, осуществленную через 4 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; *Р <0,05 в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 11 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на температуру тела, оцененную через 1 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 12 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на температуру тела, оцененную через 4 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; *Р <0,05 в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 13 представляет собой диаграмму, показывающую зависящее от дозы влияние соединения 12 на потерю массы тела, оцененную через 24 ч после травматического повреждения головного мозга у мышей. Соединение 12 или носитель вводят подкожно через 5 мин после травмы. Р <0,001 в сравнении с нетравмированными мышами; *Р <0,05 в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем; ns - незначимо в сравнении с травмированными мышами, обработанными носителем.

Фиг. 14 показывает действие соединения 12 (50 мкМ) на амплитуду популяционного спайка (PS) в клетках гиппокампа. Штрихи показывают PS, зарегестрированные до (слева) или через 5 мин после начала перфузии 50 мкМ соединения 12 (справа). Результаты типичные в 3 экспериментах. Каждый штрих является средним из 10 последовательно зарегистрированных потенциалов поля; возбуждение 0,03 Гц.

Фиг. 15 показывает действие соединения 12 (50 мкМ) на амплитуду популяционного спайка (PS) в клетках гиппокампа; контрольные срезы (слева), срезы, подвергнутые OGD (посередине); и срезы, подвергнутые OGD при 0,3 мМ Са ²⁺ . Каждый штрих является средним из 10 последовательно зарегистрированных потенциалов поля; возбуждение 0,03 Гц.

Фиг. 16 показывает действие обработки 0,3 мМ Са ²⁺ и ингибиторами NOS 7-NI (100 мкМ), и соединением 12. Защита и низкой концентрацией Са ²⁺ (0,3 мМ), и соединением 12 (50 мкМ) показывает сохранение популяционного спайка, в то время как обработка 7-NI (100 мкМ) не сохраняет популяционный спайк в клетках гиппокампа.

Фиг. 17 показывает действие 0,3 мМ Са ²⁺ (PROT), 7-NI (100 мкМ) или соединения 12 (50 мкМ) на сохранение митохондриального дыхания в срезах гиппокампа после 10 мин OGD.

Фиг. 18 показывает блок-схемы экспериментальных конструкций, используемых в анализах на модели лигирования спинномозговых нервов по Чангу (Chung Spinal Nerve Ligation, SNL) (тактильная аллодиния и термическая гипералгезия) для невропатической боли.

Фиг. 19 показывает действие введения 30 мг/кг, внутрибрюшинно, соединений 32(+) и 32(-) на реверсирование термической гипералгезии у крыс после лигирования спинномозговых нервов L5/L6 (модель невропатической боли по Чангу).

Фиг. 20 показывает действие введения 30 мг/кг, внутрибрюшинно, соединений 32(+) и 32(-) на реверсирование тактильной аллодинии у крыс после лигирования спинномозговых нервов L5/L6 (модель невропатической боли по Чангу).

Фиг. 21 показывает зависимость от дозы (3-30 мг/кг) действия соединения 12 на реверсирование термической гипералгезии у крыс после лигирования спинномозговых нервов L5/L6 (модель невропатической боли по Чангу).

Фиг. 22 показывает зависимость от дозы (3-30 мг/кг) действия соединения 12 на реверсирование тактильной аллодинии у крыс после лигирования спинномозговых нервов L5/L6 (модель невропатической боли по Чангу).

Фиг. 23 представляет собой диаграмму, показывающую действие ингибиторов NOS (внутривенно) или сукцината суматриптана (подкожно) на реверсирование аллодинии задних лап у крыс через 2 ч после воздействия на твердую мозговую оболочку воспалительной жидкостью.

Подробное описание

Изобретение относится к новым замещенным индолам, обладающим активностью ингибирования синтазы оксида азота (NOS), к фармацевтическим и диагностическим композициям, содержащим их, и к их применению в медицине, в частности, в качестве соединений для лечения удара, повреждения, вызванного реперфузией, нейродегенеративных расстройств, травмы головы, неврологического поврежедения, ассоциированного с обходным шунтом венечной артерии (CABG), мигрени, мигрени с аллодинией, невропатической боли, постинсультной боли и хронической боли.

Примеры 3,5-замещенных соединений индола по изобретению приводятся в таблице, следующей далее.

Таблица I. Соединения по изобретению с константами ингибирования человеческой NOS и селективного ингибирования 5HT _1D (бычье хвостатое ядро (bovine caudate)) и 5HT _1B (кора головного мозга крысы) (величины IC ₅₀ приводятся в мкМ концентрациях). Все испытываемые соединения представляют собой соли дигидрохлориды или моногидрохлориды. Соединения с более низкими IC ₅₀ являются более сильными для фермента NOS или рецепторов 5НТ1.

Примеры 1,6-замещенных соединений индола по изобретению приводятся в табл., следующей далее.

Таблица II.

Соединения по изобретению с константами ингибирования человеческой NOS(величины IC ₅₀ приводятся в мкМ концентрациях). Все испытываемые соединения представляют собой дигидрохлориды или моногидрохлориды. Соединения с более низкими IC ₅₀ являются более сильными для фермента NOS.

Способы получения соединений по изобретению

Соединения по изобретению можно получить способами, аналогичными способам, принятым в технике, например, реакционными последовательностями, показанными на схемах 1-12.

Соединение формулы IVa или IVb, где R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ и R ⁷ имеют значения, указанные где-нибудь в данном описании, можно получить в стандартных условиях алкилирования обработкой соединения формулы IIa или IIb, соответственно, содинением формулы III или его подходящим образом защищенного производного, где R ¹ имеет значения, указанные выше, за исключением того, что R ¹ не является Н, и "LG"представляет собой уходящую группу, такую как, например, хлор, бром, иод или сульфонатная группа (например, мезилатная, тозилатная или трифлатная). Условия осуществления алкилирования соединения формулы IIа или IIb содинением формулы III могут включать, например, нагревание соединения формулы II и содинения формулы III с растворителем или без него, необязательно, в присутствии подходящего основания (см. схему 1).

Схема 1.

С другой стороны, получение соединения формулы IVa или IVb, где R ² , R ³ , R ⁴ и R ⁷ имеют значения, указанные в данном описании для соединения формулы I, и R ¹ представляет собой (CH ₂ ) _m X ¹ , где X ¹ представляет собой

где R ^1A , R ^1B , R ^1C , R ^1D , Z ¹ , n1, p1 и q1 имеют значения, указанные для соединения формулы I, включает взаимодействие соединения формулы Va или Vb, где m1 имеет значения, указанные в данном описании для соединения формулы I, и LG представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, хлор, бром, иод или сульфонатная группа (например, мезилатная, тозилатная или трифлатная), с содинением формулы VI, где X ¹ имеет значения, указанные выше, в стандартных условиях алкилирования, как показано на схеме 2. С другой стороны, соединение формулы Va или Vb, где LG представляет альдегидную, сложноэфирную или ацилхлоридную группу, можно ввести во взаимодействие с соединением формулы VI. Когда LG представляет альдегидную группу, можно использовать стандартные условия аминирования с применением подходящего восстановителя, такого как NaBH ₄ , NaBH(OAc) ₃ , NaCNBH ₄ и подобного, в спиртовом растворителе, таком как этанол, с образованием соединения формулы VIIIaa или VIIIb, соответственно. Восстановительное аминирование можно осуществить в одной реакции, или имин, полученный при смешивании соединения формулы Va или Vb с соединением формулы VI, можно получить in situ, а затем осуществить восстановление подходящим восстановителем. Когда LG представляет ацилхлоридную или сложноэфирную группу, предпочтительно активный сложный эфир, такой как, например, пентафторфениловый эфир или эфир гидроксисукцинимидина, за взаимодействием соединения формулы Va или Vb с соединением формулы Х ¹ -Н или его подходящим образом защищенного производного следует восстановление полученного амида с использованием подходящего восстановителя, такого как, например, ВН ₃ . Соединения формулы Va или Vb можно получить с использованием стандартных методологий, описанных в WO 00/38677.

Схема 2.

Соединение формулы IVa или IVb или их подходящим образом защищенные производные, где R ² , R ³ , R ⁴ и R ⁷ имеют значения, указанные в данном описании для соединения формулы I, LG представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, хлор, бром, иод или сульфонатная группа (например, мезилатная, тозилатная или трифлатная) и X ³ представляет собой

где R ^3A , R ^3B , R ^3C , R ^3D , Z ³ , n3, p3 и q3 имеют значения, указанные для соединения формулы I, можно получить согласно схеме 3, например, обрабатывая соединение формулы IXa или IXb оксалилхлоридом в подходящем растворителе, таком как, например, простой эфир, с образованием соединения формулы Ха или Xb, соответственно. Последующее взаимодействие с амином Х ³ -Н с последющим восстановлением восстановителем, таким как LiAlH ₄ , согласно стандартным процедурам (Blair et al., J. Med. Chem., 43: 4701-4710, 2000; Speeter and Anthony, J. Am. Chem. Soc., 76: 6208-6210, 1954) дают соединение формулы XIa или XIb.

Схема 3.

С использованием стандартных методологий, описанных в литературе (Russell et al., J. Med. Chem., 42: 4981-5001, 1999; Cooper et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 11: 1233-1236, 2001; Stenfeld et al., J. Med. Chem., 42: 677-690, 1999), соединение формулы XIVa, XIVb, XVa или XVb или их подходящим образом защищенные производные, где R ⁴ и R ⁷ имеют значения, где-либо указанные в данном описании; X ³ представляет собой

где R ^3A , R ^3B , R ^3C , R ^3D , Z ³ , n3, p3 и q3 имеют значения, указанные где-либо в данном описании; X ³ представляет собой

где R ^2A , R ^2B , R ^2C , R ^2D , Z ² , n2, p2 и q2 имеют значения, указанные где-либо в данном описании; и LG представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, хлор, бром, иод или трифлатная группа, можно получить согласно схеме 4, обрабатывая амин Х ³ -Н или Х ² -Н соединением формулы XIIa или XIIb, или XIIIa или XIIIb, соответственно, где Y представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, хлор, бром, иод или сульфонатная группа (например, мезилатная или тозилатная). Группу Y можно получить из соответствующего спирта (т.е. Y = ОН) с использованием стандартных методов.

Схема 4.

Соединение формулы XXIa или XXIb, где LG, R ⁴ , R ⁷ , Z ¹ , p1 и q1 имеют значения, указанные где-либо в данном описании, можно получить так, как показано на схеме 5, процедурами, аналогичными процедурам, описанным ранее (см., например, Сое et al., Tett. Lett., 37(34): 6045-6048, 1996).

Схема 5.

Соответственно, соединение формулы XXIIIa или XXIIIb, где LG, R ⁴ , R ⁷ , Z ³ , p3 и q3 имеют значения, указанные где-либо в данном описании, можно получить из соединения формулы XXIIa или XXIIb так, как показано на схеме 6, процедурами, аналогичными процедурам, описанным ранее (см., например, Perregaard et al., J. Med. Chem., 35: 4813-4822, 1992; Rowley et al., J. Med. Chem., 44: 1603-1614, 2001).

Схема 6.

Соединение формулы XXVa или XXVb, где R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ и R ⁷ имеют значения, указанные при определении формулы I, можно получить восстановлением нитрогруппы соединения формулы XXIVa или XXIVb, соответственно, или защищенного подходящим образом производного, в стандартных условиях, как показано на схеме 7. В одном примере стандартные условия восстановления включают использование SnCl ₂ в полярном растворителе, таком как, например, этанол, при температуре образования флегмы. С другой стороны, соединение формулы XXVa или XXVb можно получить гидрированием соединения формулы XXIVa или XXIVb, соответственно, с использованием подходящего катализатора, такого как палладий-на-угле, в этаноле или другом растворителе или в сочетании растворителей.

Схема 7.

Как видно на схеме 8, соединение формулы XXVa или XXVb также можно получить катализируемым металлом аминированием соединения формулы XXVIa или XXVIb, соответственно, где LG представляет собой хлор, бром, иод или трифлатную группу (Wolfe et al., J. Org. Chem., 65: 1158-1174, 2000), в присутствии подходящего эквивалента аммиака, такого как бензофенонимин, LiN (SiMe ₃ ) ₂ , Ph ₃ SiNH ₂ , NaN(SiMe ₃ ) ₂ или амид лития (Huang and Buchwald, Org. Lett., 3(21): 3417-3419 2001). Примеры подходящих металлических катализаторов включают, например, катализатор на основе палладия, координированного с соответствующими лигандами. С другой стороны, подходящей уходящей группой для катализируемого металлом аминирования может быть нонафлатная группа (Anderson et al., J. Org. Chem., 68: 9563-9573, 2003) или бороновая кислота (Antilla and Buchwald, Org. Lett., 3(13): 2077-2079, 2001), когда металлом является соль меди, такая как ацетат Cu(II), в присутствии подходящих добавок, таких как 2,6-лутидин. Предпочтительной уходящей группой является бром, удаляемый в присутствии катализатора на основе палладия(0) или палладия(II). Подходящие палладиевые катализаторы включают трис-дибензилиденацетондипалладий (Pd ₂ dba ₃ ) и ацетат палладия (PdOAc ₂ ), предпочтительно Pd ₂ dba ₃ . Подходящие лиганды для палладия могут изменяться в широких пределах и могут включать, например, XantPhos, BINAP, DPEphos, dppf, dppb, DPPP, (o-бифенил)-P(трет-Bu) ₂ , (о-бифенил)-P(Су) ₂ , P(трет-Bu) ₃ , P(Cy) ₃ и другие (Huang and Buchwald, Org. Lett., 3(21): 3417-3419 (2001). Предпочтительно лиганд представляет собой Р(трет-Bu) ₃ . Аминирование, катализируемое Pd, осуществляют в подходящем растворителе, таком как ТГФ, диоксан, толуол, ксилол, DME и т.п., при температурах между комнатной температурой и температурой кипения.

Схема 8.

Соединения формулы XXIXa или XXIXb, где каждый из R ^5A или R ^6A имеет значения, указанные где-либо в данном описании, и Q представляет собой арильную группу (например, фенильную группу), C ₁ -алкарильную группу (например, нафтилметильную группу) или алкильную группу (например, метильную группу), или являются коммерчески доступными или их можно поолучить взаимодействием цианосоединения формулы XXVIIIa или XXVIIIb с тиолсодержащими соединениями формулы XXVII. В технике описаны другие примеры такой трансформации (см., например, Baati et al., Syn1ett., 6: 927-9, 1999; ЕР 262873, 1988; Collins et al., J. Med. Chem., 41: 15, 1998).

Схема 9.

Как видно на схеме 10, соединение формулы ХХХа или XXXb, где R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ^5A , R ^6A или R ⁷ имеют значения, указанные где-либо в данном описании, можно получить взаимодействием соединения формулы XXVa или XXVb с соединением формулы XXIXa или XXIXb, соответственно, где Q имеет значения, указанные выше.

Схема 10.

Как видно на схеме 11, соединение формулы XXXIIa или XXXIIb, где R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ или R ⁷ имеют значения, указанные где-либо в данном описании, можно получить взаимодействием соединения формулы XXVa или XXVb с соединением формулы XXXIa или XXXIb, соответственно, где R ^5B или R ^6B представляют собой C _1-6 -алкил, C _6-10 -арил, C _1-4 -алкарил, С _2-9 -гетероциклил, C _1-4 -алкгетероциклил, -С(О)C _1-6 -алкил, -С(О)C _6-10 -арил, -C(O)C _1-4 -алкарил, -С(О)C _2-9 -гетероциклил или -С(О)C _1-4 -алкгетероциклил.

Взаимодействие можно осуществить в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, при температуре окружающей среды или при нагревании. Для того, чтобы получить соединение XXXIIIa или XXXIIIb, соединение формулы XXXIIa или XXXIIb, где тиомочевина соединяется с карбонильной группой, гидролизуют в стандартных условиях, таких как, например, водный гидроксид натрия в тетрагидрофуране.

Схема 11.

Как видно на схеме 12, соединение формулы XXXIIIa или XXXIIIb далее можно ввести во взаимодействие с алкилирующим агентом, таким как, например, R ^5C -LG или R ^6C -LG, где R ^5C или R ^6C может представлять собой C _1-6 -алкил, C _1-4 -алкарил или C _1-4 -алкгетероциклил, и LG представляет собой уходящую группу, такую как, например, хлор, бром, иод или сульфонатная группа (например, мезилатная или тозилатная).

Схема 12.

В некоторых случаях для химических процессов, описанных выше, может потребоваться модификация, например, путем использования защитных групп, для предотвращения побочных реакций из-за реакционноспособных групп, таких как реакционноспособные группы, присоединенные в качестве заместителей. Этого можно достичь с помощью обычных защитных групп, описанных в "Protective Groups in Organic Chemistry", McOmie, Ed., Plenum Press, 1973, и в Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 3 ^rd Edition, 1999.

Соединения по изобретению и промежуточные соединения для получения соединений по изобретению можно выделить из их реакционных смесей и очистить (при необходимости) с использованием обычных методов, в том числе, экстракции, хроматографии, перегонки и перекристаллизации.

Образования соли нужного соединения достигают с использованием стандартных методов. Например, нейтральное соединение обрабатывают кислотой в подходящем растворителе, и образовавшуюся соль извлекают фильтрацией, экстракцией или любым другим подходящим способом.

Образование сольватов соединений по изобретению будет меняться в зависимости от соединения и сольвата. Вообще сольваты получают, растворяя соединение в соответствующем растворителе и извлекая сольват охлаждением или добавлением нерастворителя. Сольват типично сушат или обрабатывают азеотропно в условиях окружающей среды.

Получение оптического изомера соединения по изобретению можно осуществить взаимодействием соответствующих оптически активных исходных веществ в условиях взаимодействия, которые не будут вызывать рацемизации. С другой стороны, отдельные энантиомеры можно выделить разделением рацемической смеси с использованием стандартных методов, таких как, например, фракционная кристаллизация или хиральная ВЭЖХ.

Соединение по изобретению, меченное радиоизотопом, можно получить с использованием стандартных методов, известных в технике. Например, тритий можно включить в соединение по изобретению с использованием стандартных методов, таких как, например, гидрирование подходящего предшественника до соединения по изобретению с использованием газа трития и катализатора. С другой стороны, соединение по изобретению, содержащее радиоктивный иод, можно получить из соответствующего производного триалкилолова (подходяще триметилолова) с использованием стандартных условий иодирования, таких как [ ¹²⁵ I] в присутствии хлорамина-Т в подходящем растворителе, таком как диметилформамид. Соединение триалкилолова можно получить из соответствующего нерадиоактивного галогенсодержащего, подходяще, иодсодержащего, соединения с использованием стандартных условий катализируемого палладием станнилирования, таких как, например, использование гексаметилдиолова в присутствии тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) в инертном растворителе, таком как диоксан, и при повышенных температурах, подходяще 50-100 °С.

Фармацевтические применения

Настоящее изобретение относится ко всем применениям соединений формулы I, включая их применение в способах лечения одних или в сочетании с другим терапевтическим средством, их применение в композициях для ингибирования активности NOS, их применение в диагностических анализах и их применение в качестве исследовательских инструментов.

Соединения по изобретению обладают полезной активностью ингибирования NOS и поэтому применимы для лечения или снижения опасности заболеваний или состояний, которые ослабляются снижением активности NOS. Такие заболевания или состояния включают заболевания или состояния, при которых синтез или сверхсинтез оксида азота играет роль части, вносящей в них вклад.

Соответственно, настоящее изобретение относится к способу лечения или снижения опасности заболевания или состояния, вызванного активностью NOS, который включает введение эффективного количества соединения по изобретению в клетку или животному, нуждающемуся в этом. Такие заболевания или состояния включают, например, мигрень с предвестником припадка или без него, невропатическую боль, головную боль типа хронического напряжения, хроническую боль, острое повреждение спинного мозга, диабетическую невропатию, воспалительное заболевание, удар, повреждение, вызванное реперфузией, травму головы, кардиогенный шок, неврологическое повреждение, ассоциированное с CABG, НСА, деменцию, ассоциированную со СПИДом, нейротоксичность, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, ALS, болезнь Гентингтона, рассеянный склероз, нейротоксичность, вызванную метамфетамином, наркоманию, толерантность, зависимость, гипералгезию или синдром отмены, вызванные морфином/опиоидами, толерантность, зависимость или синдром отмены этанола, эпилепсию, тревогу, депрессию, гиперактивность с дефицитом внимания и психоз. В частности, 3,5-замещенные индолы по изобретению особенно применимы для лечения мигрени с предвестником припадка или без него и головной боли типа хронического напряжения (СТТН) и для профилактики мигрени.

Далее следует суммирование и основа для связи между ингибированием NOS и некоторыми из указанных состояний.

Мигрень

Первое исследование Асканио Собреро в 1847 о том, что небольшие количества нитроглицерина - средства, высвобождающего NO, вызывают тяжелую головную боль, привело к гипотезе о роли оксида азота при мигрени (Olesen et al., Cephalagia, 15: 94-100, 1995). Известно, что агонисты серотонергических 5HT _1D/1B , такие как суматриптан, которые клинически применяют при лечении мигрени, предупреждают кортикальное распространение депрессии в головном мозгу, характеризуемом лиссенцефалией и гиренцефалией, во время приступа мигрени, причем процесс приводит к распространению высвобождения NO. Действительно, показано, что суматриптан изменяет искусственно повышенные кортикальные уровни NO после инфузии глицерилтринитрата крысам (Read et al., Brain Res., 847: 1-8, 1999; там же, 870(1-2): 44-53, 2000). В клинических испытаниях на людях двойным слепым методом в случае мигрени наблюдали коэффициент реакции 67% после однократного внутривенно введения гидрохлорида L-N ^G -метиларгинина (L-NMMA, ингибитора NOS). Эффект не связан с простой вазоконстрикцией, так как не наблюдали действия на скорость, определенную транскраниальной доплерографией, в средней мозговой артерии (Lassen et al., Lancet, 349: 401-402, 1997). В открытом предварительном исследовании с использованием поглотителя NO гидроксикобаламина наблюдали снижение частоты приступов мигрени на 50% у 53% пациентов и также наблюдали уменьшение общей длительности приступов мигрени (van der Kuy et al., Cephalgia, 22 (7): 513-519, 2002).

Мигрень с аллодинией

Клинические исследования показали, что у 75% пациентов развивается кожная аллодиния (ненормально повышенная чувствительность кожи) во время приступов мигрени, и что ее развитие во время мигрени мешает действию против мигрени триптановых агонистов 5HT _ID/IB (Burstein et al., Ann. Neurol., 47: 614-624, 2000; Burstein et al., Brain, 123: 1703-1709, 2000). Хотя раннее (в начале приступа) введение триптанов, таких как суматриптан, может снять боль при мигрени, позднее введение суматриптана неспособно снять боль при мигрени или прекратить ненормально повышенную чувствительность кожи у больных с мигренью, уже связанной с аллодинией (Burstein et al., Ann. Neurol., DOI: 10, 1002/ana. 10785, 2003; Burstein and Jakubowski, Ann. Neurol., 55: 27-36, 2004). Развитие периферической и центральной сенсибилизации коррелирует с клиническими проявлениями мигрени. У больных с мигренью пульсация происходит через 5-20 мин после появления головной боли, в то время как кожная аллодиния начинается между 20-120 мин (Burstein et al., Brain, 123: 1703-1709, 2000). У крысы экспериментально вызванная периферическая сенсибилизация менингиальных рецепторов происходит в пределах 5-20 мин после применения воспалительной жидкости (I.S.) к твердой мозговой оболочке (Levy and Strassman, J. Physiol., 538: 483-493, 2002), в то время как центральная сенсибилизация тригименоваскулярных нейронов развивается в промежутке 20-120 минут (Burstein et al., J. Neurophisiol., 79: 964-982, 1998) после введения I.S. Параллельное действие раннего или позднего введения триптанов против мигрени, подобных суматриптану, на развитие центральной сенсибилизации показано на крысах (Burstein and Jakubowski, цит. выше). Таким образом, введение суматриптана в начале, но не поздно, предотвращает длительное возрастание вызванной I.S. спонтанной активности, наблюдаемой в центральных тригименоваскулярных нейронах (клиника коррелирует с интенсивностью боли при мигрени). Кроме того, позднее введение суматриптана крысам не предотвращает вызванную I.S. нейронную чувствительность к механической стимуляции в периорбитальной коже, не снижает порог для теплового воздействия (клиника пациентов коррелирует с механической и термической аллодинией в периорбитальной области). Напротив, раннее введение суматриптана предотвращает действие I.S., вызывающее как термическую, так и механическую гипрчувствительность. После развития центральной сенсибилизации позднее введение суматриптана реверсирует расширение дуральных рецептивных полей и повышает чувствительность в дуральной впадине (клиника коррелирует с пульсацией боли, обостренной сгибанием), в то время как раннее введение предотвращает ее развитие.

В предварительных исследованиях с соединениями против мигрени, такими как суматриптан (Kaube et al., Br. J. Pharmacol., 109: 788-792, 1993), золмитриптан (Goadsby et al., Pain, 67: 355-359, 1966), наратриптан (Goadsby et al., Br. J. Pharmacol., 328: 37-40, 1997), ризатриптан (Cumberbatch et al., Eur. J. Pharmacol., 362: 43-46, 1998) или L-471-604 (Cumberbatch et al., Br. J. Pharmacol., 126: 1478-1486, 1999), проверяли их действие на несенсибилизированные центральные тригеминоваскулярные нейроны (в нормальных состояниях), и, таким образом, не отражалось их действие при патофизиологических состояниях при мигрени. Хотя триптаны эффективны для прекращения пульсации при мигрени, вводятся ли они рано или поздно, периферическое действие суматриптана неспособно снять боль при мигрени с аллодинией после позднего введения через действие центральной сенсибилизации тригеминоваскулярных нейронов. Ограничения возможностей триптанов наводит на мысль, что улучшения при лечении боли при мигрени можно добиться, используя лекарственные средства, которые могут блокировать происходящую центральную сенсибилизацию, такие как соединения по настоящему изобретению.

Показано, что системный нитроглицерин повышает уровни nNOS и c-Fos-иммунореактивных нейронов (маркер нейронной активности) в тригеминальных хвостовых ядрах через 4 часа, что предполагает, что NO, вероятно, опосредует центральную сенсибилизацию тригеминальных нейронов (Pardutz et al., Neuroreport., 11(14): 3071-3075, 2000). Кроме того, L-NAME может ослабить экспрессию Fos в тригеминальных хвостовых ядрах после длительной (2 часа) электрической стимуляции верхнего сагиттального синуса (Hoskin et al., Neurosci. Lett., 266(3): 173-6, 1999). Вместе со способностью ингибиторов NOS блокировать острый приступ мигрени (Lassen et al., Cephalagia, 18(1): 27-32, 1998) соединения по изобретению, одни или в сочетании с другими антиноцицептивными средствами, представляют превосходных кандидатов в лекарственные средства для купирования мигрени у пациентов после развития аллодинии.

Хроническая головная боль (СТТН)

NO вносит вклад в сенсорную передачу в периферической (Aley et al., J. Neurosci., 1: 7008-7014, 1998) и центральной нервной системе (Meller and Gebhart, Pain, 52: 127-136, 1993). Важные экспериментальные доказательства показывают, что центральная сенсибилизация, вызванная длительным вводом ноцицептиков с периферии, повышает чувствительность нейронов в ЦНС и вызывается, или ассоциируется с, повышением активации NOS и синтеза NO (Bendtsen, Cephalagia, 20: 486-508, 2000; Woolf and Salter, Science, 288: 1765-1769, 2000). Показано, что экспериментальная инфузия донора NO глицирилтринитрата вызывает головную боль у пациентов. В исследовании двойным слепым методом у пациентов с головной болью типа хронического напряжения, получающих L-NMMA (ингибитор NOS), существенно уменьшалась интенсивность головной боли (Ashina and Bendtsen, J. Headache Pain, 2: 21-24, 2001; Ashina et al., Lancet, 243(9149): 287-9, 1999). Таким образом, ингибиторы NOS по настоящему изобретению можно применять для лечения головной боли типа хронического напряжения.

Острое повреждение спинного мозга, хроническая или невропатическая боль

У людей NO вызывает боль при внутрикожной инъекции (Holthusen and Arndt, Neurosci. Lett., 165: 71-74, 1994), что показывает, таким образом, прямое участие NO в появлении боли. Кроме того, ингибиторы NOS оказывают незначительное действие или не оказывают его на ноцицептивную передачу при нормальных состояниях (Meller and Gebhart, Pain, 52: 127-136, 1993). NO вовлекается в передачу и модуляцию ноцицептивной информации на периферии, спинномозговом и супраспинальном уровне (Duarte et al., Eur. J. Pharmacol., 217: 225-227, 1992; Haley et al., Neuroscience, 31: 251-258, 1992). Повреждения или дисфункции в ЦНС могут привести к развитию симптомов хронической боли, известных как центральная боль, и включают спонтанную боль, гипералгезию и механическую и холодовую аллодинию (Pagni, Textbook of Pain, Churchill Livingston, Edinburgh, 1989, pp. 634-655; Tasker, в The Management of Pain, pp. 264-283, J.J. Bonica (Ed.). Lea and Febiger, Philadelphia, PA, 1990; Casey, Pain and Central Nervous System Disease: The Central Pain Syndromes, pp. 1-11. K.L. Casey (Ed.), Raven Press, New York, 1991). Показано, что системное введение (внутрибрюшинно) ингибиторов NOS 7-NI и L-NAME облегчает симптомы, подобные хронической аллодинии, у крыс с повреждением спинного мозга (Нао and Xu, Pain, 66: 313-319, 1996). Действие 7-NI не ассоциировалось со значительным седативным эффектом и реверсировалось L-аргинином (предшественником NO). Полагают, что сохранение термической гипералгезии опосредуется оксидом азота в поясничном отделе спинного мозга и может быть блокировано интратекальным введением ингибитора синтаз оксида азота, подобного L-NAME, или растворимого ингибитора гуанилатциклазы метиленового синего (Neuroscience, 50(1): 7-10, 1992). Таким образом, ингибиторы NOS по настоящему изобретению могут применяться для лечения хронической или невропатической боли.

Диабетическая невропатия

Эндогенный метаболит полиамина агматин представляет собой метаболит аргинина, который является как ингибитором NOS, так и антагонистом канала N-метил-D-аспартата (NMDA). Агматин эффективен как на модели невропатической боли лигирования спинного нерва (SNL), так и на модели диабетичской невропатии с стрептозотоцином (Karadag et al., Neurosci. Lett., 339(1): 88-90, 2003). Таким образом, соединения, обладающие активностью ингибирования NOS, такие как, например, соединение формулы I, сочетания ингибитора NOS и антагониста NMDA должны быть эффективны при лечении диабетичской невропатии и других состояний с невропатической болью.

Воспалительные заболевания и нейровоспаление

ЛПС (LPS) - хорошо известный фармакологический инструмент, вызывает воспаление во многих тканях и активирует NK κB во всех участках головного мозга при внутривенном введении. Он также активирует провоспалительные гены при локальной инъекции в полосатое тело (Stern et al., J. Neuroimmunology, 109: 245-260, 2000). Недавно показано, что как антагонист рецепторов NMDA МК801, так и селективный ингибитор nNOS головного мозга 7-NI - оба - уменьшают активацию NK κB в головном мозгу и, таким образом, показывают ясную роль пути глутамата и NO при нейровоспалении (Glezer et al., Neuropharmacology, 45(8): 1120-1129, 2003). Таким образом, введение соединения по изобретению или одного или в сочетании с антагонистом NMDA должно быть эффективным при лечении заболеваний, возникающих при нейровоспалении.

Удар и повреждение, вызванное реперфузией

Роль NO в церебральной ишемии может быть защитной или деструктивной в зависимости от стадии развития ишемического процесса и клеточного компартмента, продуцирующего NO (Dalkara et al., Brain Pathology, 4: 49, 1994). В то время как NO, продуцируемый eNOS, вероятно благоприятен за счет действия в качестве вазодилататора, улучшающего кровоток к поврежденным областям (Huang et al., J. Cereb. Blood Flow Metab., 16: 981, 1996), NO, продуцируемый nNOS, вносит вклад в начальное метаболическое ухудшение ишемической полутени, что приводит к более обширным инфарктам (Hara et al., J. Cereb. Blood Flow Metab., 16: 605, 1996). Метаболические нарушения, происходящие во время ишемии и последующей реперфузии, приводят к экспрессии и высвобождению некоторых цитокинов, которые активируют iNOS в некоторых типах клеток, включая некоторые клетки центральной нервной системы. NO может продуцироваться iNOS на цитотоксических уровнях, и повышенные уровни iNOS вносят вклад в прогрессирующее повреждение ткани в полутени, что ведет к более обширным инфарктам (Paramentier et al., Br. J. Pharmacol., 127: 546, 1999). Показано, что ингибирование iNOS ослабляет симптомы церебрального ишемического повреждения у крыс (Am. J. Physiol., 268: R286, 1995).

Показано, что наблюдается синергическое нейрозащитное действие после комбинированного введения антагониста NMDA (например, МК-801 или LY293558) с селективными ингибиторами nNOS(7-NI или ARL17477) при глобальной церебральной ишемии (Hicks et al., Eur. J. Pharmacol., 381: 113-119, 1999). Таким образом, соединения по изобретению, вводимые или одни, или в сочетании с антагонистами NMDA, или соединения, обладающие смешанной активностью против nNOS/NMDA, могут быть эффективными при лечении состояний удара и других нейродегенеративных расстройств.

Осложнения, являющиеся результатом операции шунтирования коронарной артерии

Церебральное повреждение и когнитивная дисфункция еще остаются основными осложнениями у больных, подвергающихся операции шунтирования артерии (CABG) (Roch et al., N. Eng. J. Med., 335: 1857-1864, 1996; Shaw et al., Q. J. Med., 58: 59-68, 1986). Такое церебральное ухудшение после операции является результатом ишемии от предоперационной церебральной микроэмболии. В испытании методом слепого отбора антагониста NMDA ремацемида больные показали значительное общее послеоперационное улучшение в способности к обучению в дополнение к уменьшенным недостаткам (Arrowsmith et al., Stroke, 29: 2357-2362, 1998). С учетом вовлечения эксцитотоксичности (excitotoxicity), продуцируемой избыточным высвобождением глутамата и поступлением кальция, ожидается, что нейрозащитное средство, такое как соединение по изобретению или антагонист NMDA, или по отдельности или в сочетании, может оказать благоприятное действие, улучшающее неврологические последствия CABG.

Деменция, ассоциированная со СПИДом

Заражение ВИЧ-1 может привести к деменции. Белок оболочки ВИЧ-1 gp-120 убивает нейроны в первичных корковых культурах при низких пикомолярных уровнях и требует внешних глутамата и кальция (Dawson et al., 90(8): 3256-3259, 1993). Такая токсичность может быть ослаблена введением соединения по изобретению или одного, или в сочетании с другим терапевтическим средством, таким как, например, антагонист NMDA.

Примеры антагониста NMDA, применимые для любого сочетания по изобретению, включают аптиганель; безонпродил; будипин; конантокин G; делуцемин; дексанабитол; фелбамат; флуорофелбамат; гациклидин; глицин; ипеноксазон; кайтоцефалин; ланицемин; ликостинел; мидафотел; милнаципрам; нерамексан; орфенадрин; ремацемид; топирамат; ( αR)- α-амино-5-хлор-1-(фосфонометил)-1Н-бензимидазол-2-пропановую кислоту; 1-аминоциклопентанкарбоновую кислоту; [5-(аминометил)-2-[[[(5S)-9-хлор-2,3,6,7-тетрагидро-2,3-диоксо-1Н-,5Н-пиридо[1,2,3-de]хиноксалин-5-ил]ацетил]амино]фенокси]уксусную кислоту; α-амино-2-(2-фосфоноэтил)циклогексанпропановую кислоту; α-амино-4-(фосфонометил)бензолуксусную кислоту; (3E)-2-амино-4(фосфонометил)-3-гептеновую кислоту; 3-[(1E)-2-карбокси-2-фенилэтенил]-4,6-дихлор-1Н-индол-2-карбоновую кислоту; соль 8-хлор-2,3-дигидропиридазино[4,5-b]хинолин-1,4-дион-5-оксида с 2-гидрокси-N,N,N-триметилэтанаминием; N'-[2-хлор-5-(метилтио)фенил]-N-метил-N-[3-(метилтио)фенил]гуанидин; N'-[2-хлор-5-(метилтио)фенил]-N-метил-N-[3-(R)-метилсульфинил]фенил]гуанидин; 6-хлор-2,3,4,9-тетрагидро-9-метил-2,3-диоксо-1Н-индено[1,2-b]пиразин-9-уксусную кислоту; 7-хлортиокинуреновую кислоту; (3S,4aR,6S,8aR)-декагидро-6-(фосфонометил)-3-изохинолинкарбоновую кислоту; (-)-6,7-дихлор-1,4-дигидро-5-[3-(метоксиметил)-5-(3-пиридинил)-4-Н-1,2,4-триазол-4-ил]-2,3-хиоксалиндион; 4,6-дихлор-3-[(Е)-(2-оксо-1-фенил-3-пирролидинилиден)метил]-1Н-индол-2-карбоновую кислоту; (2R,4S)-rel-5,7-дихлор-1,2,3,4-тетрагидро-4-[[(фениламино)карбонил]амино]-2-хинолинкарбоновую кислоту; (3R,4S)-rel-3,4-дигидро-3-[4-гидрокси-4-(фенилметил)-1-пиперидинил]-2Н-1-бензопиран-4,7-диол; 2-[(2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил)амино]ацетамид; 1,4-дигидро-6-метил-5-[(метиламино)метил]-7-нитро-2,3-хиноксалиндион; [2-(8,9-диоксо-2,6-диазабицикло[5.2.0]нон-l(7)-ен-2-ил)этил]фосфоновую кислоту; (2R, 6S)-1,2,3,4,5,6-гексагидро-3-[(2S)-2-метоксипропил]-6,11,11-триметил-2,6-метано-3-бензазоцин-9-ол; 2-гидрокси-5-[[(пентафторфенил)метил]амино]бензойную кислоту; 1-[2-(4-гидроксифенокси)этил]-4-[(4-метилфенил)метил]-4-пиперидинол; 1-[4-(1Н-имидазол-4-ил)-3-бутинил]-4-(фенилметил)пиперидин; 2-метил-6-(фенилэтинил)пиридин; 3-(фосфонометил)-L-фенилаланин и 3,6,7-тетрагидро-2,3-диоксо-N-фенил-1Н,5Н-пиридо[1,2,3-de]хиноксалин-5-ацетамид, или соединения, описанные в патентах США № № 6071966, 6034134 и 5061703.

Кардиогенный шок

Кардиогенный шок (CS) является ведущей причиной смерти среди пациентов с острым инфарктом миокарда, который совмещается с возросшими уровнями NO и цитокинов зоны воспаления. Высокие уровни NO и пероксинитирита оказывают ряд действий, включая прямое ингибирование способности к сокращению сердечной мышцы, подавление митохондриального дыхания в миокарде, изменение метаболизма глюкозы, уменьшение реактивности в отношении катахоламина и индукцию системной вазодилатации (Hochman, Circulation, 107: 2998, 2003). При клиническом исследовании 11 больных с хроническим шоком введение ингибитора NOS L-NMMA привело к повышению диуреза и кровяного давления и коэффициенту выживания 72% до 30 дней (Cotter et al., Circulation, 101: 1258-1361, 2000). Сообщается, что в испытании методом слепого отбора 30 пациентов L-NAME снижает смертность среди пациентов с 67 до 27% (Cotter et al., Eur. Heart J., 24(14): 1287-95, 2003). Подобным образом, введение соединения по изобретению, или одного или в сочетании с другим терапевтическим средством, можно применять для лечения кардиогенного шока.

Тревога и депрессия

Недавние исследования на крысах и мышах в испытании при усиленном головокружении (FST) показывают, что ингибиторы NOS имеют антидепрессантную активность для мышей (Harkin et al., Eur. J. Pharm., 372: 207-213, 1999), и что их действие опосредуется по серотонинзависимому механизму (Harkin et al., Neuropharmacology, 44(5): 616-623, 1993). 7-NI показывает анксиолитическую активность в испытании на крысах с добавлением лабиринта (Yildiz et al., Pharmacology, Biochemistry and Behavior, 65: 199-202, 2000), в то время как селективный ингибитор nNOS TRIM эффективен как на модели FST, так и в испытании на депрессию и тревогу в компартменте с чередованием освещение-темнота (Volke et al., Behavioral Brain Research, 140(1-2): 141-7, 2003). Введение соединения по изобретению пораженному индивидууму, или одного или в сочетании с другим терапевтическим средством, таким как, например, антидепрессант, можно применять для лечения тревоги или депрессии.

Гиперактивность с дефицитом внимания

Неизбирательное внимание (NSA) к окружающим раздражителям у крыс со спонтанной гипертензией (SHR) и низкой возбудимостью Naples (NHE) используют как животную модель гиперактивности с дефицитом внимания (ADHD) (Aspide et al., Behav. Brain Res., 95(1): 23-33, 1998). Такие генетически измененные животные показывают учащенные эпизоды подъема на задние лапы, которые имеют более короткую длительность, чем наблюдаемую у здоровых животных. Однократная инъекция L-NAME при 10 мг/кг продуцирует увеличение длительности стояния на задних лапах. Подобным образом с использованием нейронно более селективного 7-NINA наблюдали увеличение длительности стояния на задних лапах после быстрого введения (внутрибрюшинно), в то время как медленное высвобождение однократной дозы с высвобождением или медленное высвобождение нескольких доз (подкожно, в ДМСО) приводит к противоположному эффекту. Таким образом, введение соединения по изобретению можно применять для лечения ADHD.

Психоз

Фенциклидин (РСР) является неконкурирующим блокатором каналов NMDA, который вызывает поведенческое побочное действие у людей и млекопитающих, совпадающее с наблюдаемым у больных с психозом. На двух животных моделях психоза селективный ингибитор nNOS AR-R17477 противодействовал вызванной РСР гиперлокомоции и вызванному РСР недостатку предимпульсного ингибирования звуковой реакции испуга (Johansson et al., Pharmacol. Toxicol., 84(5): 226-33, 1999). Такие результаты предполагают вовлечение nNOS в психоз. Поэтому введение соединения по изобретению пораженному индивидууму можно применять для лечения такого заболевания или родственных заболеваний или расстройств.

Травма головы

Механизм неврологического повреждения у пациентов с травмой головы сравним с ударом и связан с эксцитотоксическим поступлением кальция при избыточном высвобождении глутамата, окислительным стрессом и образованием свободных радикалов при митохондриальной дисфункции и воспалении (Drug & Market Development, 9(3): 60-63, 1998). Животные, обработанные ингибиторами синтазы оксида азота, такими как 7-NI и 3-бром-7-нитроиндазол, показывают улучшение в неврологических недостатках после экспериментального травматического повреждения головного мозга (TBI) (Mesenge et al., J. Neurotrauma, 13: 209-14, 1996). Введение соединения по изобретению пораженному индивидууму также можно применять для лечения неврологического повреждения при повреждениях при травме головы.

Гипотермическая остановка сердца

Гипотермическая остановка сердца (НСА) является методом, используемым для защиты от ишемического повреждения во время операции на сердце, когда головной мозг чувствителен к повреждению во время прерывания кровотока. Различные нейрозащитные средства используют в качестве вспомогательных средств во время НСА, и прогнозируется, что снижение продуцирования оксида азота во время НСА приведет к улучшениям в неврологической функции. Это основывается на предыдущих исследованиях, которые показали, что глутаматная экцитотоксичность играет роль в вызванном НСА неврологическом повреждении (Redmond et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg., 107: 776-87, 1994; Redmond et al., Ann. Thorac. Surg., 59: 579-84, 1995), и что NO опосредует глутаматную экцитотоксичность (Dawson and Snyder, J. Neurosci., 14: 5147-59, 1994). При исследовании 32 собак, подвергающихся 2 часовой НСА при 18 °С, показано, что нейронный ингибитор NOS уменьшает продуцирование NO в коре, значительно снижает некроз нейронов и приводит к превосходной неврологической функции относительно контроля (Tseng et al., Ann. Thorac. Surg., 67: 65-71, 1999). Введение соединения по изобретению также можно применять для защиты пациентов от ишемического повреждения во время операции на сердце.

Нейротоксичность и нейродегенеративные заболевания

Оказывается, что митохондриальная дисфункция, глутаматная экцитотоксичность и окислительное повреждение, вызванное свободными радикалами, лежат в основе патогенеза многих нейродегенеративных заболеваний, включая боковой амиотрофический склероз (ALS), болезнь Паркинсона (PD), болезнь Альцгеймера (AD) и болезнь Гентингтона (HD) (Schultz et al., Mol. Cell. Biochem., 174(1-2): 193-197, 1997; Beal, Ann. Neurol., 38: 357-366, 1995), и NO является основным медиатором в таких механизмах. Например, показано Dawson et al., PNAS, 88(14): 6368-6371, 1991, что ингибиторы NOS, подобные 7-NI и L-NAME, предотвращают нейротоксичность, выявляемую N-метил-О-аспартатом и родственными возбудительными аминокислотами.

(a) Болезнь Паркинсона

Исследования также показали, что NO играет важную роль в нейротоксичности 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (МРТР), обычно используемой животной модели болезни Паркинсона (Matthews et al., Neurobiology of Disease, 4: 114-121, 1997). МРТР превращается в MPP+ MAO-B и быстро передается переносчиком дофамина в митохондрии дофаминсодержащих нейронов с последующей активацией nNOS, приводящей к гибели нейронов. Мутантные мыши, утратившие ген nNOS, но не ген eNOS, имеют меньше повреждений в черном веществе после инъекции МРР+ в полосатое тело. В исследованиях на приматах 7-NI проявляет глубокое нейрозащитное действие и действие против паркинсонизма после стимулирования МРТР (Hantraye et al., Nature Med., 2: 1017-1021, 1996), как неспецифический ингибитор L-NAME (T.S. Smith et al., Neuroreport., 1994, 5, 2598-2600).

(b) Болезнь Альцгеймера (AD)

Патология AD ассоциируется с β-амилоидными бляшками, инфильтрированными активированными микроглиями и астроцитами. Когда культивированные крысиные микроглии подвергают действию бета-амилоида, имеется заметное высвобождение микроглиями оксида азота, особенно, в присутствии гамма-интерферона (Goodwin et al., Brain Research, 692(1-2): 207-14, 1995). В кортикальных нейронных культурах обработка ингибиторами синтазы оксида азота обеспечивает нейрозащиту против токсичности, выявленной бета-амилоидом человека (Resink et al., Neurosci. Abstr., 21: 1010, 1995). Соответственно с глутаматной гипотезой эксцитотоксичности при нейродегенеративных расстройствах слабый антагонист NMDA амантадин укрепляет надежду на жизнь у больных PD (Uitti et al., Neurologe, 46(6): 1551-6, 1996). В предварительном исследовании с контролем плацебо пациентов с васкулярной деменцией или деменцией по типу Альцгеймера антагонист NMDA мемантин ассоциировался с улучшенными клиническими глобальными наблюдениями изменения и шкалы оценки поведения для показателей у больных пожилого и старческого возраста (Winblad and Poritis, Int. J. Geriatr. Psychiatry, 14: 135-46, 1999).

(c) Боковой амиотрофический склероз

Боковой амиотрофический склероз (ALS) является смертельным нейродегенеративным заболеванием, характеризующимся селективной гибелью двигательных нейронов. Накопленные данные предполагают, что патогенез ALS представляет собой недостаточный клиренс глутамата через переносчик глутамата, и специфическое распределение рецепторов АМРА, проницаемых для Са ²⁺ , в спинномозговых двигательных нейронах указывает на вызванную глутаматом нейротоксичность. Повышенная иммунореактивность nNOS обнаруживается в клетках спинного мозга (Sasaki et al., Acta Neuropathol. (Berl), 101(4): 351-7, 2001) и глиальных клетках (Anneser et al., Exp. Neurol., 171(2): 418-21, 2001) больных ALS, вовлекающая NO как важный фактор в патогенез ALS.

(d) Болезнь Гентингтона

Патогенез болезни Гентингтона (HD), появляющейся при мутации в белке Htt, связывают с эксцитотоксичностью, окислительным стрессом и апоптозом, при которых всегда четкую роль играет избыточный NO (Peterson et al., Exp. Neurol., 157: 1-18, 1999). Окислительное повреждение является одним из основных следствий дефектов в энергетическом метаболизме и присутствует в моделях HD после инъекции эксцитотоксинов и митохондриальных ингибиторов (A. Petersen et al., Exp. Neurol., 157: 1-18, 1999). Такая митохондриальная дисфункция ассоциируется с селективной и прогрессирующей потерей нейронов при HD (Brown et al., Ann. Neurol., 41: 646-653, 1997). NO может непосредственно ухудшить комплекс IV цепи митохондриального дыхания (Calabrese et al., Neurochem. Res., 25: 1215-41, 2000). Оказывается, что выступающие нейроны стриарной среды являются основной мишенью для генерации двигательной дисфункции при HD. Гиперфосфорилирование и активация рецепторов NMDA таких нейронов, вероятно, участвует в генерации двигательной дисфункции. Клинически показано, что антагонист NMDA амантадин улучшает хорееподобную дискинезию при HD (Verhagen Metraan et al., Neurology, 59: 694-699, 2002). С учетом роли nNOS в опосредуемой NMDA нейротоксичности, ожидается, что ингибиторы nNOS, в особенности, смешанные ингибиторы nNOS/NMDA, или комбинации лекарственных средств с активностью против nNOS и NMDA, также будут применяться при уменьшении интенсивности действия и развития HD. Например, предварительная обработка крыс 7-нитроиндазолом уменьшает стриарные повреждения, выявляемые стереотаксическими инъекциями малоната, повреждение, которое приводит к состоянию, схожему с болезнью Гентингтона (Hobbs et al., Ann. Rev. Pham. Tox., 39: 191-220, 1999). На трансгенной мышиной R6/1 модели HD, экспрессирующей человеческий мутированный экзон1 htt, повтор 116 CAG, мыши в возрасте 11, 19 и 35 недель показывают прогрессирующее возрастание перокисления липидов с нормальными уровнями супероксиддисмутазы (SOD) у мышей в 11 недель, схожими с уровнями у мышей дикого типа (WT); максимальный уровень в 19 недель выше уровня, наблюдаемого у мышей дикого типа и соответствующего ранней фазе развития заболевания; и, наконец, понижающиеся уровни в 35 недель ниже уровней, наблюдаемых у мышей дикого типа (P èrez-Sevriano et al., Brain Res., 951: 36-42, 2002). Возрастание активности SOD относят к компенсаторному нейрозащитному механизму с пониженными уровнями в 35 недель, соответствующими недосточному защитному механизму.

Сопутствующие с уровнями SOD уровни кальцийзависимой NOS были одинаковыми для 11-недельных мышей как WT, так и R6/1, но существенно повышались в 19 недель и падали в 35 недель относительно контрольных мышей WT. Уровни эксперссии nNOS также существенно возрастали относительно контроля в 19 недель, но существенно падали относительно контроля в 35 недель. Не наблюдали существенных различий в уровнях экспрессии eNOS, и невозможно было обнаружить белок iNOS во время развитя болезни. Прогрессирующая экспрессия фенотипа заболевания, измеренная по потере массы, поведению поджатию лап и горизонтальным и вертикальным перемещениям, согласуются с изменениями активности NOS и экспрессией nNOS. Наконец, действие введения L-NAME как трансгенным мышам R6/2 с HD, так и мышам WT, показало улучшенные уровни в отношении поведения поджатия лап при дозе 10 мг/кг - схожее с контролем, которое ухудшается при самой высокой дозе 500 мг/кг (Deckel et al., Brain Res., 919(1): 70-81, 2001). Улучшение в возрастании массы у мышей HD также существенно при дозе 10 мг/кг, но падает относительно контроля при высоких уровнях доз L-NAME. Такие результаты показывают, что введение соответствующей дозы ингибитора NOS, такого как, например, соединение по изобретению, может быть благоприятным при лечении HD.

(e) Рассеяный склероз (MS)

MS является демиелинизирующим заболеванием ЦНС с участием цитокинов и других медиаторов воспаления. Многие исследования предполагают, что NO и его реакционноспособное производное пероксинитрит вовлечены в патогенез MS (Acar et al., J. Neurol., 250(5): 588-92, 2003; Calabrese et al., Neurochem. Res., 28(9): 1321-8, 2003). При экспериментальных аутоиммунных энцефаломиелитах (ЕАЕ) - модели MS уровни nNOS несколько повышены в спинном мозгу крыс с ЕАЕ, и обработка 7-нитроиндазолом приводит к существенной задержке паралича при ЕАЕ (Shin, J. Vet. Sci., 2(3): 195-9, 2001).

(f) Нейротоксичность, вызванная метамфетамином

Метамфетамин нейротоксичен за счет разрушения дофаминовых нервных окончаний in vivo. Показано, что нейротоксичность, вызванную метамфетамином, можно ослабить обработкой ингибиторами NOS in vitro (Sheng et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 801: 174-186, 1996) и in vivo на животных моделях (Itzhak et al., Neuroreport., 11(13): 2943-6, 2000). Подобным образом, селективный ингибитор nNOS AR-174 77AR, введенный мышам в дозе 5 мг/кг, подкожно, способен предотвратить вызываемую метамфетамином потерю нейрофиламентного белка NF68 в головном мозгу мышей и предотвратить потерю стриарного дофамина и гомованилиновой кислоты (HVA) (Sanchez et al., J. Neurochem., 85(2): 515-524, 2003).

Введение соединения по изобретению, или одного, или в сочетании с другим терапевтическим средством, таким как, например, антагонист NMDA, можно применять для защиты или лечения любого из нейродегенеративных заболеваний, описанных в данном описании. Кроме того, соединения по изобретению можно испытать в стандартных анализах, используемых для оценки нейрозащиты (см., например, Am. J. Physiol., 268: R286, 1995).

Зависимость от химических веществ и лекарственные аддикции (т.е. зависимость от лекарственных средств, алкоголя и никотина)

Ключевой стадией в процессе вызываемой лекарственными средствами пользы и зависимости является регуляция высвобождения дофамина из мезолимбических дофаминергических нейронов. Постоянное применение кокаина изменяет экспрессию ключевого белка, регулирующего синаптический уровень дофамина - переносчика дофамина (DAT).

(а) Кокаиновая аддикция

Исследования показали, что животные надежно вводят самостоятельно стимуляторы внутривенно, и что дофамин критичен в усилении их действия. Недавно показано, что NO-содержащие нейроны солокализуются с дофамином в участках полосатого тела и в вентральной тегументальной области, и что NO может модулировать вызываемое стимулятором высвобождение дофамина (DA). Введение антагонистов дофаминовых рецепторов D1 снижает уровни верхнего окрашивания NADPH-диафоразы - маркера активности NOS, в то время как антагонисты D2 вызывают противоположный эффект. L-Аргинин - субстрат NOS также является сильным модулятором высвобождения DA. Также многие генерирующие NO агенты повышают отток DA или ингибируют повторное поглощение как in vitro, так и in vivo. Показано, что L-NAME существенно изменяет пополнение кокаина за счет уменьшения количества самостоятельного введения и повышения межреакционного времени между последовательными инъекциями кокаина (Pudiak and Bozarth, Soc. Neurosci. Abs., 22: 703, 1996). Это показывает, что ингибирование NOS можно применять при лечении кокаиновой аддикции.

(b) Вызванная морфином/опиоидами переносимость и симптомы синдрома отмены

Имеется множество свидетельств, подтверждающих роль путей как NMDA, так и NO в опиоидной зависимости у взрослых животных и детенышей. У взрослых или новорожденных грызунов, получавших инъекции сульфата морфина, развивается поведенческий синдром отмены после преципитации нальтрексоном. Симптомы синдрома отмены после инициации нальтрексоном можно ослабить введением ингибиторов NOS, таких как 7-NI или L-NAME (Zhu and Barr, Psychopharmacology, 150(3): 325-336, 2000). В родственном исследовании показано, что более селективный ингибитор nNOS 7-NI сильнее ослабляет вызванные морфином симптомы синдрома отмены, включая жевание, слюноотделение или генитальные эффекты, чем менее селективные соединения (Vaupel et al., Psychopharmacology (Berl), 118(4): 361-8, 1995).

(c) Переносимость и зависимость от этанола

Среди факторов, которые влияют на алкогольную зависимость, переносимость действий этанола является важным компонентом, поскольку она способствует чрезмерному потреблению алкогольных напитков (L ê and Kiianmaa, Psychopharmacology (Berl), 94: 479-483, 1988). В исследовании на крысах переносимость действия этанола на несогласованность движений и гипотермию развивается быстро и может быть блокирована i.c.v ведением 7-NI без изменения церебральных концентраций этанола (Wazlawik and Morato, Brain Res. Bull., 57(2): 165-70, 2002). В других исследованиях ингибирование NOS L-NAME (Rezvani et al., Pharmacol. Biochem. Behav., 50: 265-270, 1995) или i.c.v инъекцией антисмысловой nNOS (Naassila et al., Pharmacol. Biochem. Behav., 67: 629-36, 2000) уменьшало потребление этанола такими животными.

Введение соединения по изобретению, или одного, или в сочетании с другим лечебным средством, таким как, например, антагонист NMDA, можно применять для лечения зависимости от химических веществ и лекарственных аддикций.

Эпилепсия

Совместное введение 7-NI с некоторыми противосудорожными средствами, такими как карбамазепин, показывает синергическое защитное действие против возбужденных миндалинами (amygdala-kindled) припадков у крыс при концентрациях, которые не изменяют деятельность круглых палочек (roto-rod) (Borowicz et al., Epilepsia, 41(9): 112-8, 2000). Таким образом, ингибитор NOS, такой как, например, соединение по изобретению, или один, или в сочетании с другим лечебным средством, таким как, например, антиэпилептическое средство, можно применять для лечения эпилепсии или подобного расстройства. Примеры антиэпилептических средств, которые можно применять в сочетании по изобретению, включают карбамазепин, габапентин, ламотригин, оксакарбазепин, фенилоин, топирамат и вальпроат.

Диабетическая нефропатия

Выделение с мочой побочных продуктов NO повышается у крыс с диабетом после обработки стрептозотоцином, и усиленный синтез NO наводит на мысль о его вовлечении в гломерулярную гиперфильтрацию при диабете. Нейронная изоформа nNOS экспрессируется в петле Henle и mucula densa почки, и ингибирование такой изоформы с использованием 7-NI уменьшает гломерулярную фильтрацию без воздействия на почечное артериолярное давление или почечный кровоток (Sigmon et al., Gen. Pharmacol., 34(2): 95-100, 2000). Как неселективный ингибитор NOS L-NAME, так и селективный ингибитор nNOS 7-NI нормализует почечную гиперфильтрацию у животных с диабетом (Ito et al., J. Lab. Clin. Med., 138(3): 177-185, 2001). Поэтому введение соединения по изобретению можно применять для лечения диабетической нефропатии.

Комбинированные композиции и их применения

Кроме композиций, описанных выше, одно или несколько соединений по изобретению можно использовать в сочетаниях с другими лечебными средствами. Например, одно или несколько соединений по изобретению можно сочетать с другим ингибитором NOS. Примеры ингибиторов, применимых для такой цели, включают, без ограничения, ингибиторы, описанные в патенте США № 6235747, заявках на патент США, регистрационные номера 09/127158, 09/325480, 09/403177, 09/802086, 09/826132, 09/740385, 09/381887, 10/476958, 10/483140, 10/484960, 10/678369, 10/819853, 10/938891; в публикациях заявок, поданных в Международное патентное ведомство, № № WO 97/36871, WO 98/24766, WO 98/34919, WO 99/10339, WO 99/11620 и WO 99/62883.

В другом примере одно или несколько соединений по изобретению можно сочетать с антиаритмическим средством. Примеры антиаритмических средств включают, без ограничения, лидокаин и миксилетин.

Агонисты GABA-B, агонисты альфа-2-адренергических рецепторов, антагонисты холецистокинина, агонисты 5HT _1B/1D или антагонисты CGRP также можно использовать в сочетании с одним или несколькими соединениями по изобретению. Неограничивающие примеры агонистов альфа-2-адренергических рецепторов включают клонидин, дофексидин и пропанолол. Неограничивающие примеры антагонистов холецистокинина включают L-365260, CI-988, LY262691, S0509 или средства, описанные в патенте США № 5618811. Неограничивающие примеры агонистов 5HT _1B/1D , которые можно использовать в сочетании с соединением по изобретению, включают дигидроэготамин, элетриптан, фловатриптан, ризатриптан, суматриптан или золмитриптан. Неограничивающие примеры антагонистов CGRP, которые можно использовать в сочетании с соединением по изобретению, включают аналоги хинина, описанные в публикации WO9709046, непептидные антагонисты, описанные в публикациях № № WO0132648, WO0132649, WO9811128, WO9809630, WO9856779, WO0018764, или другие антагонисты, такие как SB-(+)-273779 или BIBN-4096BS.

Антагонисты вещества Р, также известные как антагонисты рецепторов NK ₁ , также применимы в сочетании с одним или несколькими соединениями по изобретению. Примеры ингибиторов, применимых для такой цели, включают, без ограничения, соединения, описанные в патентах США № № 3862114, 3912711, 4472305, 4481139, 4680283, 4839465, 5102667, 5162339, 5164372, 5166136, 5232929, 5242944, 5300648, 5310743, 5338845, 5340822, 5378803, 5410019, 5411971, 5420297, 5422354, 5446052, 5451586, 5525712, 5527811, 5536737, 5541195, 5594022, 5561113, 5576317, 5604247, 5624950 и 5635510; публикациях № № WO 90/05525, WO 91/09844, WO 91/12266, WO 92/06079, WO 92/12151, WO 92/15585, WO 92/20661, WO 92/20676, WO 92/21677, WO 92/22569, WO 93/00330, WO 93/00331, WO 93/01159, WO 93/01160, WO 93/01165, WO 93/01169, WO 93/01170, WO 93/06099, WO 93/10073, WO 93/14084, WO 93/19064, WO 93/21155, WO 94/04496, WO 94/08997, WO 94/29309, WO 95/11895, WO 95/14017, WO 97/19942, WO 97/24356, WO 97/38692, WO 98/0215.8 и WO 98/07694; европейских патентных публикациях № № 284942, 327009, 333174, 336230, 360390, 394989, 428434, 429366, 443132, 446706, 484719, 499313, 512901, 512902, 514273, 514275, 515240, 520555, 522808, 528495, 532456 и 591040.

Подходящие классы антидепрессантов, которые можно использовать в сочетании с одним или несколькими соединениями по изобретению, включают, без ограничения, ингибиторы повторного поглощения норэпинефрина, селективные ингибиторы повторного поглощения серотонина (SSRI), селективные ингибиторы повторного поглощения норадреналина/норэпинефрина (NARI), ингибиторы моноаминоксидазы (МАО), обратимые ингибиторы моноаминоксидазы (RIMA), двойные ингибиторы повторного поглощения серотонина/норадреналина (SNRI), антагонисты α-адренорецепторов, норадренергические и специфические серотонинергические антидепрессанты (NaSSA) и атипичные антидепрессанты.

Неограничивающие примеры ингибиторов повторного поглощения норэпинефрина включают третичные трициклические амины и вторичные трициклические амины, такие как, например, адиназолам, аминептин, амитриптилин, амоксапин, бутриптилин, кломипрамин, демексиптилин, дезметиламитриптилин, дезипрамин, дибензепин, диметакрин, доксепин, дотиепин, фемоксетин, флуацизин, имипрамин, имипрамина оксид, иприндол, лофепрамин, мапротилин, мелитрацен, метапрамин, норклолипрамин, нортриптилин, ноксиптилин, опипрамол, перлапин, пизотифен, пизотилин, пропизепин, протриптилин, хинупармин, тианептин, тримипрамин, тримипраминамилтриптилиноксид и их фармацевтически приемлемые соли.

Неограничивающие примеры ингибиторов повторного поглощения серотонина включают, например, флуоксетин, флувоксамин, парокселин и сертралин и их фармацевтически приемлемые соли.

Неограничивающие примеры ингибиторов повторного поглощения норадреналина/норэпинефрина включают, например, атомоксетин, бупропион, ребоксетин и томоксетин.

Неограничивающие примеры селективных ингибиторов моноаминоксидазы включают, например, изокарбоксазид, фенезин, транилципромин и селегилин и их фармацевтически приемлемые соли. Другие ингибиторы моноаминоксидазы, применимые в сочетании по изобретению, включают клоргилин, цимоксатон, бефлоксатон, брофаромин, базинаприн, BW-616U (Burroughs Wellcome), BW-1370U87 (Burroughs Wellcome), CS-722 (RS-722) (Sankyo), E-2011 (Eisai), гармин, гармалин, моклобемид, PharmaProjects 3975 (Hoechst), RO 41-1049 (Roche), RS-8359 (Sankyo), T-794 (Tanabe Seiyaku), толоксатон, K-Y 1349 (Kalir and Youdim), LY-51641 (Lilly), LY-121768 (Lilly), M &B 9303 (May & Baker), MDL 72394 (Marion Merrell), MDL 72392 (Marion Merrell), серклоремин и МО 1671 и их фармацевтически приемлемые соли. Подходящие обратные ингибиторы моноаминоксидазы, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают, например, моклобемид и его фармацевтически приемлемые соли.

Неограничивающие примеры двойных блокаторов повторного поглощения серотонина/норэпинефрина включают, например, дулоксетин, милнаципран, миртазапин, нефазодон и венлафаксин.

Неограничивающие примеры других антидепрессантов, которые можно использовать в способе по настоящему изобретению, включают адиназолам, алапроклат, аминептин, сочетание амитриптилин/хлордиазепоксид, атипамезол, азаминасерин, базинаприн, бефуралин, бифемелан, бинодалин, бипенамол, брофаромин, кароксазон, церикламин, цианопрамин, цимоксатон, циталопрам, клемепрол, кловоксамин, дазепинил, деанол, демексиптилин, дибензепин, дотиепин, дроксидопу, энефексин, эстазолам, этоперидон, фенгабин, фезоламин, флуотрацен, идазоксан, индалпин, инделоксазин, левопротилин, литоксетин, медифоксамин, метралиндол, миансерин, пинаприн, монтирелин, небрацетам, нефопрам, ниаламид, номифензин, норфлуоксетин, оротирелин, оксафлозан, пиназепам, пирлиндон, ритансерин, ролипрам, серклоремин, сетиптилин, сибутрамин, сульбутиамин, сульпирид, тенилоксазин, тозалинон, тимолиберин, тифлукарбин, тофенацин, тофизопам, толоксатон, вералиприд, викалин, зимелидин и зометрапин и их фармацевтически приемлемые соли, и траву ясменник Сент-Джонса (St. John's wort) или Hypencuin perforatum или их экстракты.

В другом примере можно использовать опиоиды в сочетании с одним или несколькими соединениями по изобретению. Примеры опиоидов, применимых для такой цели, включают, без ограничения, алфентанил, буторфанол, бупренорфин, декстроморамид, дезоцин, декстропропоксифен, кодеин, дигидрокодеин, дифеноксилат, эторфин, фентанил, гидрокодон, гидроморфон, кетобемидон, лоперамид, леворфанол, левометадон, меперидин, мептазинол, метадон, морфин, морфин-6-глюкуронид, налбуфин, нлоксан, оксикодон, оксиморфон, пентазоцин, петидин, пиритрамид, пропоксилфен, ремифентанил, сулфентанил, тилидин и трамадол.

В еще одном примере в сочетании с одним или несколькими соединениями по изобретению можно использовать противовоспалительные соединения, такие как стероидные средства и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID). Неограничивающие примеры стероидных средств включают преднизолон и кортизон. Неограничивающие примеры NSAID включают ацеметацин, аспирин, целекоксиб, деракоксиб, диклофенак, дифлунизал, этензамид, этофенамат, эторикоксиб, фенопрофен, флуфенамовую кислоту, флурбипрофен, лоназолак, лорноксмкам, ибупрофен, индометацин, изоксикам, кебузон, кетопрофен, кеторолак, напроксен, набуметон, нифлумовую кислоту, сулиндак, толметин, пироксикам, меклофенамовую кислоту, мефенамовую кислоту, мелоксикам, метамизол, мофебутазон, оксифенбутазон, парекоксиб, фенидин, фенилбутазон, пропацетамол, пропифеназон, рофекоксиб, салициламид, супрофен, тиапрофеновую кислоту, теноксикам, вальдекоксиб, 4-(4-циклогексил-2-метилоксазол-5-ил)-2-фторбензолсульфонамид, N-[2-(циклогексилокси)-4-нитрофенил]метансульфонамид, 2-(3,4-дифторфенил)-4-(3-гидрокси-3-метилбутокси)-5-[4-(метилсульфонил)фенил]-3(2Н)пиридазинон и 2-(3,5-дифторфенил)-3-[4-(метилсульфонил)фенил]-2-циклопентен-1-он). Соединения по изобретению также можно использовать в сочетании с ацетаминофеном.

Любое из вышеуказанных сочетаний можно использовать для лечения любого соответствующего заболевания, расстройства или состояния. Примеры применений сочетаний соединения по изобретению и другого лечебного средства описываются ниже.

Сочетания опиоид-ингибитор NOS при хронической невропатической боли

Повреждение нерва может привести к состояниям с аномальной болью, известным как невропатическая боль. Некоторые из клинических симптомов включают тактильную аллодинию (ноцицептивные реакции на обычно безвредные механические раздражители), гипералгезию (увеличенная интенсивность боли в ответ на обычные болезненные раздражители) и спонтанную боль. Лигирование спинномозговых нервов (SNL) у крыс является животной моделью невропатической боли, которая продуцирует спонтанную боль, аллодинию и гипералгезию, аналогичные клиническим сиптомам, наблюдаемым у больных людей (Kim and Chung, Pain, 50: 355-363, 1992; Seltzer, Neurosciences, 7: 211-219, 1995).

Невропатическая боль может быть, в частности, нечувствительной к лечению опиоидами (Bendetti et al., Pain, 74: 205-211, 1998) и рассматривается как относительно невосприимчивая к опиоидным анальгетикам (MacFarlance et al., Pharmacol. Ther., 75: 1-19, 1997; Watson, Clin. J. Pain, 16: S49-S55. 2000). Хотя повышением дозы можно преодолеть пониженную эффективность опиоидов, она ограничивается усиливающимся побочным действием и толерантностью. Известно, что введение морфина активирует систему NOS, которая ограничивает обезболивающее действие такого лекарственного средства (Machelska et al., NeuroReport, 8: 2743-2747, 1997; Wong et al., Br. J. Anaesth., 85: 587, 2000; Xiangqi and Clark, Mol. Brain. Res., 95: 96-102, 2001). Однако показано, что комбинированное системное введение морфина и L-NAME может ослабить механическую и холодовую аллодинию при субпороговых дозах, при которых ни одно из вводимых отдельно лекарственных средств не было эффективным (Ulugol et al., Neurosci. Res. Com., 30(3): 143-153, 2002). Оказывается, что действие вводимого совместно L-NAME на обезболивание морфином опосредуется nNOS, так как L-NAME теряет свою способность потенцировать обезболивание морфином у мутантных мышей с отсутствием nNOS (Clark and Xiangqi, Mol. Brain. Res., 95: 96-102, 2001). Усиленное обезболивание показано на моделях с подергиваниями хвостом и давления на лапы с использованием совместного введения L-NAME или 7-NI с мю-, дельта- или каппа-селективным агонистом опиоидов (Machelska et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 282: 977-984, 1997).

Хотя опиоиды являются важным терапевтическим средством при лечении умеренной-тяжелой боли, кроме обычного побочного действия, которое ограничивает их применимость, иногда возникает парадоксальная вызванная опиоидами гипералгезия, которая может фактически сделать пациентов более чувствительными к боли и потенциально усилить у них боль (Angst and Clark, Anesthesiology, 2006, 104(3), 570-587; Chu et al., J. Pain, 2006, 7(1), 43-48). Развитие толерантности и вызванной опиоидами гипералгезии согласуется с повышенными уровнями продуцирования NO в головном мозгу. Пониженная анальгетическая реакция на опиоиды происходит из-за апрегулированной анальгетической реакции, вызванной NO (Heinzen and Pollack, Brain Res., 2004, 1023, 175-184).

Таким образом, сочетание ингибитора nNOS с опиоидом (например, сочетания, описанные выше) может усилить обезболивание опиоидом при невропатической боли и предотвратить развитие опиоидной толерантности и вызываемой опиоидами гипералгезии.

Сочетания антидепрессант-ингибитор NOS в случае хронической боли, головной боли и мигрени

Многие антидеперссанты используются для лечения невропатической боли (McQuay et al., Pain, 68: 217-227, 1996) и мигрени (Tomkins et al., Am. J. Med., 111: 54-63, 2001) и действуют через серотонергическую или норадренергичскую систему. NO служит в таких системах в качестве нейромодулятора (Garthwaite and Boulton, Annu. Rev. Physiol., 57: 683, 1995). Показано, что 7-NI потенцирует высвобождение норадреналина (NA) агонистом никотинацетилхолиновых рецепторов DMPP через переносчик NA (Kiss et al., Neuroscience Lett., 215: 115-118, 1996). Показано, что локальное введение антидепрессантов, таких как пароксетин, тианептин и имипрамин, снижает уровни гиппокампного NO (Wegener et al., Brain Res., 959: 128-134, 2003). Возможно, что NO важен в механизме, через который антидепрессанты эффективны для лечения боли и депрессии, и что сочетание ингибитора NOS с антидепрессантом, такое как, например, сочетания, описанные выше, будет давать лучшие результаты лечения.

Сочетания ингибитора NOS и агониста 5HT1B/1D/1F серотонина или антагониста CGRP при мигрени

Введение донора NO глицерилтринитрата (GTN) вызывает немедленную головную боль у здоровых индивидуумов и приводит к отдаленным приступам мигрени у страдающих мигренью со скрытым периодом 4-6 ч (Iversen et al., Pain, 38: 17-24, 1989). У больных с приступом мигрени уровни CGRP (пептид, родственный гену кальцитонина) - сильного вазодилататора в сонной артерии коррелируют с началом и аблацией приступа мигрени (Durham, Curr. Opin. Investig. Drugs, 5(7): 731-5, 2004). Лекарственное средство против мигрени суматриптан с аффиностью к рецепторам 5НТ _1В , 5HT _1D и 5HT _1F ослабляет немедленную головную боль, вызванную GTN, и параллельно сжимает мозговую и внемозговую артерии (Iversen and Olesen, Cephalagia, 13(Suppl.13): 186, 1993). Лекарственное средство против мигрени ризатриптан также снижает уровни CGRP в плазме после ослабления головной боли при мигрени (Stepien et al., Neurol. Neurochir. Pol., 37(5): 1013-23, 2003). Поэтому как NO, так и CGRP связывают с причиной мигрени. Показано, что агонисты 5HT _1B/1D серотонина блокируют передачу сигнала NO, вызванную рецепторами NMDA, в срезах коры головного мозга (Strosznajder et al., Cephalalgia, 19(10): 859, 1999). Такие результаты предполагают, что сочетание соединения по изобретению и селективного или неселективного агониста 5HT _1B/1D/1F или антагониста CGRP, такие как сочетания, описанные выше, могли бы применяться для лечения мигрени.

Фармацевтические композиции

Соединения по изобретению предпочтительно вводят в состав фармацевтических композиций для введения людям в биологически совместимой форме, подходящей для введения in vivo. Соответственно, в другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по изобретению в смеси с подходящим разбавителем или носителем.

Соединения по изобретению можно использовать в форме свободного основания, в форме солей, сольватов и в виде пролекарств. Все формы входят в объем изобретения. Согласно способам изобретения описанные соединения, их соли, сольваты или пролекарства можно вводить пациенту в различных формах в зависимости от выбранного способа введения, что будет понятно специалистам в данной области техники. Соединения по изобретению можно вводить, например, пероральным, парентеральным, трансбуккальным, сублингвальным, назальным, ректальным способом введения, в форме пэтча, насоса или трансдермальным способом введения, и фармацевтические композиции получают соответствующим образом. Парентеральное введение включает внутривенный, внутрибрюшинный, подкожный, внутримышечный, трансэпителиальный, назальный, внутрилегочный, интратекальный, ректальный и местный способы введения. Парентеральное введение может представлять собой непрерывную инфузию в течение выбранного периода времени.

Соединение по изобретению можно вводить перорально, например, с инертным разбавителем или с усвояемым съедобным носителем, или его можно заключить в твердые или мягкие оболочечные желатиновые капсулы или спрессовать в таблетки, или его можно включить непосредственно в продукт питания. Для перорального введения для лечения соединение по изобретению можно включить вместе с наполнителем и использовать в форме таблеток, принимаемых внутрь, таблеток для медленного растворения в щечном кармане, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п.

Соединение по изобретению также можно вводить парентерально. Растворы соединения по изобретению можно получить в воде, подходящим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также можно получить в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, ДМСО и их смесях со спиртом или без него и в маслах. В обычных условиях хранения и применения такие препараты могут содержать консервант для предотвращения роста микроорганизмов. Обычные процедуры и ингредиенты для выбора и получения подходящих композиций описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciencies (2003 - 20 ^th edition) и в фармакопеи Соединенных Штатов: The National Formulary (USP 24 NF19), опубликовано в 1999.

Фармацевтические формы, подходящие для применения как инъекции, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для получения инъецируемых стерильных растворов или дисперсий для немедленного приема. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы ее можно было легко ввести шприцем.

Композиции для назального введения обычно могут быть получены в форме аэрозолей, капель, гелей и порошков. Аэрозольные композиции типично включают раствор или тонкую суспензию активного вещества в физиологически приемлемом водном или неводном растворителе и, как правило, представлены в количествах для однократной или многократных доз в стерильной форме в герметично закрытом контейнере, который может принимать форму картриджа или форму для повторного заполнения для применения с распыляющим устройством. С другой стороны, герметичный контейнер может представлять собой распределяющее устройство для однократного применения, такое как однодозовый назальный ингалятор, или аэрозольный дозатор, снабженный мерным клапаном, который предназначен для удаления после применения. Когда лекарственная форма содержит аэрозольный дозатор, она будет содержать пропеллент, который может представлять собой сжатый газ, такой как сжатый воздух, или органический пропеллент, такой как фторхлорсодержащий углеводород.

Аэрозольные лекарственные формы также могут принимать форму насоса-распылителя.

Композиции, подходящие для трансбуккального или сублингвального введения, включают таблетки, лепешки и пастилки, где активный ингредиент входит в композицию с носителем, таким как сахар, аравийская камедь, трагакант или желатин и глицерин. Композиции для ректального введения, как правило, находятся в форме суппозиториев, содержащих обычную основу для суппозиториев, такую как масло какао.

Соединения по изобретению можно вводить животному одни или в сочетании с фармацевтически приемлемыми носителями, указанными выше, доля которых определяется растворимостью и химической природой соединения, выбранным способом введения и обычной фармацевтической практикой.

Дозировка соединений по изобретению и/или композиций, содержащих соединение по изобретению, может изменяться в зависимости от многих факторов, таких как фармакодинамические свойства соединения, способ введения, возраст, состояние здоровья и масса тела реципиента, характер и степень тяжести симптомов, частота лечения и тип сопутствующего лечения, если оно применяется, и скорости клиренса соединения у животного, которое лечат. Специалист в данной области техники может определить соответствующую дозировку на основании вышеуказанных факторов. Соединения по изобретению можно вводить сначала в подходящей дозировке, которую можно регулировать при необходимости, в зависимости от клинической реакции. Как правило, удовлетворительные результаты можно получить, когда соединения по изобретению вводят человеку в суточной дозировке от 0,05 до 3000 мг (определенной в твердой форме). Предпочтительная доза находится в интервале 0,05-500 мг/кг, предпочтительнее 0,5-50 мг/кг.

Соединение по изобретению можно использовать одно или в сочетании с другими средствами, обладающими активностью против NOS, или в сочетании с другими типами лечения (которые могут или не могут ингибировать NOS) для лечения, предупреждения и/или ослабления опасности удара, невропатической боли или боли при мигрени или других расстройств, при которых благоприятно ингибирование NOS. В комбинированных способах лечения дозировки одного или нескольких лечебных соединений могут быть снижены по сравнению со стандартными дозировками, когда они вводятся одни. В таком случае дозировки объединенных соединений должны обеспечивать лечебное действие.

Кроме вышеуказанных лечебных применений соединение по изобретению также можно использовать в диагностических анализах, скрининг-анализах и в качестве исследовательского инструмента.

В диагностических анализах соединение по изобретению можно применять для идентификации или детекции активности NOS. Для такого применения соединение можно пометить радиоактивной меткой (как описано где-либо в данном описании) и ввести в контакт с популяцией клеток организма. Присутствие радиоактивной метки в клетках может указывать на активность NOS.

В скрининг-анализах соединение по изобретению можно использовать для идентификации других соединений, которые ингибируют NOS, например впервые полученных лекарственных средств. В качестве исследовательских инструментов соединения по изобретению можно использовать в ферментных анализах и анализах для исследования локализации активности NOS. Такую информацию можно использовать, например, для диагностики или мониторинга состояния или развития заболевания. В таких анализах соединение по изобретению также можно пометить радиоактивной меткой.

Приведенные дале примеры, не являющиеся ограничительными, поясняют настоящее изобретение.

Пример 1. Получение соединения 4

(a) Получение соединения 2.

1Н-Индол-5-иламин (соединение 1,100 мг, 0,757 ммоль) растворяют в безводном тетрагидрофуране (4,5 мл) в небольшой колбе, продуваемой аргоном. Добавляют по каплям бензоилизотиоцианат (123 мг, 0,757 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 60 ч. Добавляют силикагель с функциональной 3-(диэтилентриамино)пропильной группой (0,5 г), смесь перемешивают еще в течение 30 мин и смесь фильтруют с использованием в качестве элюента смеси этилацетат/гексан, 3:7. Продукт реакции (соединение 2,90 мг, выход 40,3%) получают очисткой колоночной хроматографией на силикагеле (30% этилацетата/гексан).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 6,59 (с, 1Н), 7,25-7,26 (м, 2Н), 7,51 (с, 1Н), 7,54-7,66 (м, 3H), 7,93 (м, 3H), 8,32 (ушир.с, 1Н), 9,15 (с, 1Н), 12,50 (с, 1Н).

(b) Получение соединения 3.

1-Бензоил-3-(1Н-индол-5-ил)тиомочевину (соединение 2, 90 мг, 0,305 ммоль) растворяют в безводном тетрагидрофуране (5 мл) в небольшой колбе, продуваемой аргоном. Реакционный сосуд снабжают обратным холодильником и помещают на масляную баню, предварительно нагретую до 60 °С. Добавляют водный 2 М раствор гидроксида натрия (0,6 мл) и реакционную смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 4 ч. Обработка дает соединение 3 (22 мг, выход 38,0%).

(c) Получение соединения 3.

(1Н-Индол-5-ил)тиомочевину (соединение 3, 22 мг, 0,116 ммоль) растворяют в ДМФА (2,5 мл). Раствор перемешивают в атмосфере аргона, добавляя по каплям этилиодид (18,1 мг, 0,116 ммоль). Добавляют карбонат калия (48,01 г, 0,347 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь обрабатывают водой (5 мл) и дихлорметаном (20 мл) и переносят в делительную воронку. Органический слой сушат (MgSO ₄ ), фильтруют, концентрируют и получают соединение 4.

Пример 2. Получение соединения 5

(а) Получение соединения 5.

1Н-Индол-5-иламин (соединение 1,59 мг, 0,45 ммоль) и гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (142,7 мг, 0,47 ммоль) растворяют в абсолютном этаноле (2,0 мл) в сухой, продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона при температуре окружающей среды в течение 17 ч. Раствор разбавляют диэтиловым эфиром (20 мл), что приводит к образованию желтовато-коричневого осадка, который собирают и промывают эфиром и сушат с отсосом, и получают соединение 5 в виде желтовато-коричневого твердого вещества (121,4 мг, соль HBr, выход 84%).

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 10,9 (с, 1Н, NH), 7,74 (д, 1Н, J=3,4), 7,63 (д, 1Н, J=4,88), 7,35 (д, 1Н, J=8,3), 7,29 (с, 1Н), 7,12 (т, 1Н, J=4,88), 7,03 (с, 1Н), 6,69 (д, 1Н, J=8,3), 6,35 ((ушир.с, 2Н), 6,35 (с, 1Н).

Пример 3. Получение соединения 9

(а) Получение соединения 7.

6-Нитроиндол (соединение 6, 95 мг, 0,59 ммоль) и гидрохлорид 1-(2-хлорэтил)пирролидина (100 мг, 0,59 ммоль) растворяют в ДМФА (3 мл) в продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь помещают на масляную баню, предварительно нагретую до 50 °С, и перемешивают в атмосфере аргона в присутствии карбоната, калия (244 мг, 1,77 ммоль) в течение 24 ч. После охлаждения реакционный сосуд помещают на ледяную баню и реакционную смесь разбавляют смесью воды со льдом (10 мл) и этилацетатом. Реакционную смесь переносят в делительную воронку и органический слой собирают. Органический слой дважды промывают рассолом и объединенные промывные жидкости повторно экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, и получают желтое масло. Продукт реакции растворяют в метаноле (2 мл) и подкисляют 2 н HCl (15 мл) и затем фильтруют для удаления нерастворившегося вещества. Реакционную смесь упаривают и оставшееся масло помещают в высокий вакуум на ночь, и получают желтое твердое вещество (соединение 7, 63 мг, выход 41,2%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ; свободное основание) δ: 8,37 (с, 1Н), 8,02 (дд, 1Н, J=2,0, 8,5), 7,64 (д, 1Н, J=8,5), 7,46 (д, 1Н, J=3,2), 6,59 (д, 1Н, J=3,2), 4,34 (т, 2Н, J=6,9), 2,92 (т, 2Н, J=6,9), 2,56 (м, 4Н), 1,82-1,74 (м, 4Н); MS (APCI+) 260,0 (М+1).

(b) Получение соединения 8.

6-Нитро-1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1H-индол (соединение 7, 63 мг, 0,243 ммоль) помещают в небольшую продуваемую аргоном колбу, снабженную обратным холодильником и стержнем для магнитной мешалки. Добавляют денатурированный абсолютный этанол (5 мл), а затем гидрат хлорида олова(II) (202 мг, 1,07 ммоль). Раствор кипятят с обратным холодильником на масляной бане в течение 1 ч. После охлаждения смесь разбавляют этилацетатом (10 мл) и водным 3М раствором гидроксида натрия (3 мл). Реакционную смесь переносят в делительную воронку и органический слой еще дважды промывают водным 3М раствором гидроксида натрия и затем промывают рассолом. Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, и получают коричневое масло. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают соединение 8 в виде коричневого масла (51,6 мг, выход 92,6%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,34 (д, 1Н, J=8,5), 6,93 (д, 1Н, J=3,2), 6,66 (с, 1Н), 6,56 (дд, 1Н, J=8,5, 2,0), 4,17 (т, 2Н, J=7,3), 2,90 (т, 2Н, J=7,3), 2,57 (м, 4Н), 1,83-1,76 (м, 4Н); MS (ESI+): 230 (М+1).

(b) Получение соединения 9.

1-(2-Пирролидин-1-илэтил)-1Н-индол-6-иламин (соединение 8, 51,6 мг, 0,225 ммоль) и гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (68 мг, 0,225 ммоль) растворяют в метаноле (4 мл) в небольшой продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 21 ч при температуре окружающей среды. Раствор упаривают, продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают соединение 9 в виде коричневого масла (86 мг, выход > 100%, примечание - продукт гигроскопичен).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ; 200 МГц) δ: 7,57 (д, 1Н, J=8,5), 7,43-7,40 (м, 2Н), 7,09-7,05 (м, 2Н), 6,99 (с, 1Н), 6,78 (дд, 1Н, J=1,6, 8,1), 6,44 (д, 1Н, J=3,2), 4,88 ((ушир.с, 2Н, NH2), 4,22 (т, 2Н, J=7,7), 2,87 (т, 2Н, J=7,7), 2,55 ((ушир.с, 4Н), 1,78 (м, 4Н).

Пример 4. Получение соединения 12

(а) Получение соединения 10.

6-Нитроиндол (соединение 6, 315,3 мг, 1,94 ммоль), карбонат калия (804 мг, 5,82 ммоль) и гидрохлорид 2-диметиламиноэтилхлорида (363 мг, 2,52 ммоль) растворяют в ДМФА (4 мл) в продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь помещают на масляную баню, предварительно нагретую до 50 °С, и перемешивают в атмосфере аргона в течение 21,5 ч. Смесь переносят в колбу и добавляют еще аликвоту гидрохлорида 2-диметиламиноэтилхлорида (363 мг, 2,52 ммоль). Колбу герметично закрывают и смесь греют еще в течение 24 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь переносят в делительную воронку и разбавляют этилацетатом (25 мл) и смесью воды со льдом (30 мл). Слои разделяют и органический слой еще дважды промывают смесью воды со льдом (2 ×20 мл). Органические экстракты сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, и получают твердое вещество. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (этилацетат/гексан, 1:1, для элюирования исходного вещества, затем 5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают соединение 10 в виде желтого масла (96,5 мг, выход 23%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,35 (с, 1Н), 7,99 (дд, 1Н, J=1,6, 8,9), 7,64 (д, J=8,9), 7,46 (д, 1Н, J=2,8), 6,59 (д, 1Н, J=2,8); MS (APCI+)234 (M+1).

(b) Получение соединения 11.

Диметил-[2-(6-нитроиндол-1-ил)этил]амин (соединение 10, 74,3 мг, 0,339 ммоль) и гидрат хлорида олова(II) (267 мг, 1,41 ммоль) помещают в небольшую продуваемую аргоном колбу, снабженную обратным холодильником и стержнем для магнитной мешалки. Добавляют денатурированный этанол (5 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником на масляной бане в течение 3 ч. Смесь разбавляют этилацетатом (20 мл) и водным 3М раствором гидроксида натрия. Реакционную смесь переносят в делительную воронку, и органический слой собирают. Органический слой еще дважды промывают водным 3М раствором гидроксида натрия (2 ×20 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле и получают соединение 11 в виде черного масла (33,5 мг, выход 48,6%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,39 (д, 1Н, J=8,5), 6,93 (д, 1Н, J=3,2), 6,64 (с, 1Н), 6,57 (д, 1Н, J=8,5), 6,37 (д, 1Н, J=3,2), 4,13 (т, 2Н, J=7,3), 2,72 (т, 2Н, J=7,3), 2,31 (с, 6Н).

(с) Получение соединения 12.

1-(2-Диметиламиноэтил)-1H-индол-6-иламин (соединение 11, 33 мг, 0,162 ммоль) и гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (53 мг, 0,178 ммоль) растворяют в метаноле в небольшой продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 27 ч при температуре окружающей среды. Растворитель выпаривают, остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана), и получают коричневое твердое вещество, которое перекристаллизовывают из этилацетата и гексана, и получают соединение 12, 17,8 мг, выход 35,2%.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,74 (д, 1Н, J=3,l), 7,60 (д, 1Н, J=5,0), 7,45 (д, 1Н, J=8), 7,24 (д, 1Н, J=2,7), 7,11 (т, 1Н, J=3,9), 6,91 (с, 1Н), 6,59 (д, 1Н, J=8), 6,34 (м, 3H), 4,19 (т, 2Н, J=6,7), 2,59 (т, 2Н, J=6,7), 2,20 (с, 6Н).

Пример 5. Получение соединения 15

(а) Получение соединения 13.

1-(2-Диметиламиноэтил)-1Н-индол-6-иламин (соединение 11, 311,4 мг, 1,532 ммоль) суспендируют в безводном тетрагидрофуране (5 мл) в продуваемой аргоном колбе. Добавление бензоилизотиоцианата (0,25 мл, 1,84 ммоль) вызывает полное растворение амина. Полученный коричневый раствор перемешивают в атмосфере аргона при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакцию гасят силикагелем с функциональной 3-(диэтилентриамино)пропильной группой (482 мг), смесь перемешивают в течение 2 ч, фильтруют и концентрируют. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (3,5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают соединение 13 (180,1 мг, выход 32,1%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 2,31 (с, 6Н), 2,70-2,77 (д, 2Н), 4,20-4,27 (д, 2Н) , 6,49-6,50 (с, 1Н) , 7,19-7,26 (м, 1Н) , 7,54-7,63 (м, 5Н), 7,89-7,93 (м, 2Н), 8,14 (с, 1Н).

(b) Получение соединения 14.

1-Бензоил-3-[1-(2-диметиламиноэтил)-1Н-индол-6-ил]тиомочевину (соединение 13, 133,6 мг, 0,365 ммоль) растворяют в безводном тетрагидрофуране (3 мл). Добавляют водный 2 н раствор гидроксида натрия (0,37 мл), колбу продувают аргоном, и смесь кипятят с обратным холодильником на масляной бане в течение ночи. После охлаждения смесь разбавляют дистиллированной водой (20 мл) и этилацетатом (50 мл) и переносят в делительную воронку. Водную фазу удаляют и собирают органическую фазу. Водную фазу повторно экстрагируют этилацетатом три раза (3 ×20 мл). Объединенные органические фракции сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, и получают соединение 14 (45,2 мг, выход 47,2%).

(c) Получение соединения 15.

[1-(2-Диметиламиноэтил)-1Н-индол-6-ил]тиомочевину (соединение 14, 45,2 мг, 0,172 ммоль) растворяют в сухом ДМФА (0,5 мл) и добавляют иодэтан (20 мкл, 0,19 ммоль). Колбу снабжают пластиковой пробкой, которую заливают парафином, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 26 ч. Раствор разбавляют этилацетатом (20 мл), причем в результате выпадает осадок. Добавляют 3 н водного раствора гидроксида натрия (2 мл) и затем смесь переносят в делительную воронку. Органический слой собирают, а водный слой экстрагируют этилацетатом (20 мл). Органические фракции объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана). Очищенный продукт растворяют в метаноле (2 мл) и добавляют 1М HCl (2 мл). Выпаривание растворителя дает соединение 15 в виде желтого масла (6,1 мг, выход соли дигидрохлорида 10,9%).

Пример 6. Получение соединения 18

(a) Получение соединения 17.

[2-(5-Бром-1Н-индол-3-ил)этил]диметиламин (соединение 16, 372,4 мг, 1,394 ммоль) (Slassi et al., патнет США № 5998438) помещают в продуваемую аргоном сухую колбу, снабженную обратным холодильником и мешалкой. Добавляют безводный тетрагидрофуран (10 мл), а затем трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (63,8 мг, 0,05 экв.) и трибутилфосфин (0,42 мл, 0,139 ммоль). Смесь перемешивают в течение 5 мин при комнатной температуре. Добавляют бис(триметилсилил)амид лития (4,2 мл, 4,2 ммоль) и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 6 ч и затем перемешивают при комнатной температуре еще в течение 15 ч. Коричневый раствор гасят, добавляя 1 М HCl (3 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин, добавляют еще 1М HCl (3 мл) для уверенности в том, что раствор кислый. Смесь переносят в делительную воронку и разбавляют дистиллированной водой (20 мл). Водную фазу экстрагируют этилацетатом (2 ×20 мл). Водную фазу подщелачивают, добавляя водный 3 М раствор гидроксида натрия (3 мл), и экстрагируют этилацетатом (3 ×20 мл). Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают соединение 17 в виде коричневатого масла (209,6 мг, выход 74,1%).

¹ Н ЯМР (CD ₃ OD) δ: 2,52-2,55 (с, 6Н), 2,86-2,89 (д, 2Н), 2,90-2,99 (д, 2Н), 6,70-6,72 (д, 1Н), 6,97 (с, 1Н), 7,02 (с, 1Н), 7,16-7,18 (д, 1Н); MS: 204,0 (М+1).

(b) Получение соединения 18.

3-(2-Диметиламиноэтил)-1Н-индол-5-иламин (соединение 17, 210 мг, 1,033 ммоль) и гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (434 мг, 1,446 ммоль) растворяют в чистом этаноле (19 мл) в небольшой продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 21 ч при температуре окружающей среды и помещают на ледяную баню для охлаждения. Медленно, при энергичном перемешивании добавляют диэтиловый эфир (50 мл), и образуется выпадающее в осадок светло-желтое вещество. Смесь перемешивают при 0 °С в течение 1 ч и затем перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Выпавшее в осадок желтое вещество собирают фильтрацией под вакуумом и промывают эфиром. Образец сушат в вакууме в течение ночи при 110 °С и получают соединение 18 в виде соли гидробромида (327,5 мг, выход 83%). Для того, чтобы получить соль HCl, гидробромид растворяют воде (20 мл) и переносят в делительную воронку, где раствор подщелачивают, добавляя водный 2 н раствор гидроксида натрия (3 мл). Смесь экстрагируют дихлорметаном (3 ×20 мл). Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2М NH ₃ в метаноле/90-95% дихлорметана) и получают свободное основание в виде коричневого масла. Масло растворяют в метаноле (5 мл) и добавляют 1М соляную кислоту (3 мл). Растворитель удаляют, масло сушат в высоком вакууме и получают соединение 18 в виде соли гидрохлорида (87,5 мг, выход 30,2%).

¹ Н ЯМР (свободное основание, CDCl ₃ ) δ: 2,31 (с, 6Н), 2,57-2,65 (т, 2Н), 2,85-2,92 (т, 2Н), 6,79-6,85 (дд, 1Н), 6,94-6,95 (д, 1Н), 7,03-7,08 (т, 1Н), 7,18 (с, 1Н), 7,19-7,22 (д, 1Н), 7,39-7,41 (т, 2Н), 8,61 (с, 1Н); MS: 313,0 (М+1).

Пример 7. Получение соединения 24

(а) Получение соединения 19.

Гидрид натрия в масле (60 мас.%, 1,088 г) помещают в сухую продуваемую аргоном колбу, снабженную мембраной и стержнем для перемешивания. При охлаждении колбы льдом медленно добавляют ДМФА (Aldrich, высушен, sure-seal ™, 50 мл). После добавления растворителя добавляют по частям в течение 10 мин 6-нитроиндол (соединение 6, 4,01 г, 24,7 ммоль). Перемешивание продолжают еще в течение 15 мин, затем добавляют через шприц этилбромацетат (3 мл, 27,2 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 26 ч и затем гасят реакцию дистиллированной водой (200 мл), образовавшееся выпавшее в осадок желтое вещество собирают фильтрацией. Осадок промывают водой (4 ×100 мл), твердое вещество сушат при пониженном давлении и получают соединение 19 (5,94 г, выход 97%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,25 (д, 1Н, J=1,5), 8,05 (дд, 1Н, J=1,5, 9), 7,70 (д, 1Н, J=9), 7,38 (д, 1Н, J=3,3), 6,68 (д, 1Н, J=3,3), 4,93 (с, 2Н), 4,26 (кв., 2Н, J=7,2), 1,30 (т, 1Н, J=7,2).

(b) Получение соединения 20.

Этиловый эфир (6-нитроиндол-1-ил)уксусной кислоты (соединение 19, 503 мг, 2,026 ммоль) растворяют в сухом толуоле (30 мл). Смесь охлаждают до -78 °С в атмосфере аргона на бане с ацетоном и сухим льдом, и исходное вещество начинает выпадать в осадок. Постепенно по стенке колбы добавляют раствор DIBAL в толуоле (1,5 мл, 1,1 экв.), и смесь становится однородной. Перемешивание продолжают в течение 2 ч при -78 °С. Реакцию гасят метанолом (1 мл) и затем добавляют насыщенный раствор калийнатрийтартрата (20 мл). Смесь переносят в делительную воронку и разбавляют этилацетатом (20 млм) и водой (10 мл). Органическую фазу промывают раствором калийнатрийтартрата (20 мл) и дополнительно 20 мл рассола и добавляют 20 мл этилацетата для того, чтобы разрушить эмульсию. Слои разделяют и органическую фазу промывают рассолом (20 мл), сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении, и получают желтое твердое вещество. Твердое вещество растворяют в дихлорметане, предварительно абсорбируют на силикагеле (5 г) и очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием набитой колонки 10 см (высота) на 3 см (диаметр) с использованием элюирующей системы этилацетат и гексан (30:70 - 2 объема колонки, 1:1 - 2 объема колонки), и получают соединение 20 (366,5 мг, выход 88,6%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 5,04 (с, 2Н), 6,71-6,73 (д, 1Н), 7,36-7,37 (д, 1Н), 7,68-7,73 (д, 1Н), 8,02-8,07 (д, 1Н), 8,18 (с, 1Н), 9,79 (с, 1Н); MS(APCI, негативный тип): 203,2.

(с) Получение соединения 21.

(6-Нитроиндол-1-ил)ацетальдегид (соединение 20, 86,5 мг, 0,424 ммоль) помещают в небольшую продуваемую аргоном колбу. Добавляют раствор 4-бромфенетиламина (127 мг, 0,636 ммоль) в сухом метаноле (3 мл). Раствор перемешивают в течение 4,5 ч и затем добавляют триацетоксиборогидрид натрия (179 мг, 0,848 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре еще в течение 24 ч. Смесь концентрируют, остаток растворяют в дистиллированной воде (5 мл) и этилацетате (15 мл) и двухфазную смесь переносят в делительную воронку. Водный слой промывают этилацетатом (15 мл). Органические слои объединяют, промывают рассолом (5 мл), сушат над MgSO ₄ , фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Продукт реакции растворяют в CH ₂ Cl ₂ и абсорбируют на диоксиде кремния, который затем сушат и помещают в верхнюю часть колонки с силикагелем. Элюирование колонки смесью этилацетат/гексан, 4:6, и затем смесью 2,5 М NH ₃ в метаноле/97,5% дихлорметана дает соединение 21 в виде коричневого твердого вещества (129,9 мг, выход 79%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 2,64-2,71 (т, 2Н), 2,75-2,86 (т, 2Н), 3,03-3,12 (т, 2Н), 4,27-4,33 (т, 2Н), 6,57-6,58 (д, 1Н), 6,93-6,98 (д, 2Н), 7,31-7,39 (т, 3H), 7,64-7,68 (д, 1Н), 8,00-8,05 (дд, 1Н), 8,34 (С, 1Н); MS: 388,0, 390,0 (М+1).

(d) Получение соединения 22.

[2-(4-Бромфенил)этил] [2-(6-нитроиндол-1-ил)этил]амин (соединение 21, 53,5 мг, 0,138 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (2 мл) и охлаждают на ледяной бане. Добавляют раствор Boc ₂ O (90 мг, 0,41 ммоль) в ТГФ (2 мл), а затем водный 2 н раствор NaOH (0,41 мл). Раствор перемешивают при комнатной температуре еще в течение 20,5 ч. Смесь разбавляют водой (20 мл) и этилацетатом (20 мл) и переносят в делительную воронку. Водный слой повторно экстрагируют этилацетатом (20 мл) и объединенные органические экстракты сушат над MgSO ₄ , фильтруют и концентрируют, и получают соединение 22 в виде желтого масла (62,9 мг, выход 99%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,28 (ушир.с, 1Н), 8,00 (д, 1Н, J=2,0, 8,9), 7,65 (д, 1Н, J=8,9), 7,38-7,25 (м, 3H), 7,0-6,8 (м, 2Н), 6,6 (д, 1Н, J=3,2), 4,36-4,24 (м, 2Н), 3,44 (м, 2Н), 3,20 (м, 1Н), 2,91 (м, 1Н), 2,68 (м, 1Н), 2,47 (м, 1Н), 1,40 (с, 4,5Н), 1,30 (4,5Н). [Примечание: наблюдают конформационные изомеры Boc].

(e) Получение соединения 23.

трет-Бутиловый эфир [2-(4-бромфенил)этил][2-(6-нитроиндол-1-ил)этил]карбаминовой кислоты (соединение 22, 58,7 мг, 0,128 ммоль) помещают в небольшую продуваемую аргоном колбу, снабженную обратным холодильником и магнитной мешалкой. Добавляют дигидрат хлорида олова(II) (143,8 мг, 0,637 ммоль), а затем абсолютный этанол (10 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником на масляной бане в течение 24 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (50 мл) и переносят в делительную воронку. Добавляют водный 3 н раствор гидроксида натрия и органическую фазу собирают. Органическую фазу еще промывают водным 3 н раствором NaOH, а затем два раза промывают рассолом (2 ×20 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают коричневое масло, которое очищают с использованием колоночной хроматографии на силикагеле, и получают соединение 23 в виде светло-желтого масла (28,3 мг, выход 48%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,40-7,37 (м, 3H), 6,95-6,7 (м, 3H), 6,6-6,5 (м, 2Н), 6,35 (д, 1Н, J=3,2), 4,18-3,95 (м, 2Н), 3,61 (ушир.с, 2Н), 3,44-3,32 (м, 2Н), 3,13-3,07 (м, 1Н), 2,93-2,78 (м, 1Н), 2,62 (м, 1Н), 2,42 (м, 1Н), 1,44 (с, 9Н).

(f) Получение соединения 24.

трет-Бутиловый эфир [2-(6-аминоиндол-1-ил)этил][2-(4-бромфенил)этил]карбаминовой кислоты (соединение 23, 24,5 мг, 0,053 ммоль) и гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (24 мг, 0,080 ммоль) растворяют в этаноле (2 мл) в небольшой продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 20 ч при комнатной температуре. Добавляют дополнительное количество реагента (8 мг, 0,027 ммоль) для гарантии полного превращения исходного вещества и продолжают перемешивание еще в течение 24 ч. Растворитель выпаривают и продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2-5% 2М NH ₃ в метаноле/98-95% дихлорметана). Продукт растворяют в CH ₂ Cl ₂ (2 мл) и добавляют 1М раствор HCl в эфире (2 мл) с последующим перемешиванием при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и получают соединение 24 (5,7 мг, выход 21,4%).

Пример 8. Получение соединения 27

(a) Получение соединения 25.

К охлажденному на льду раствору 6-нитроиндола (250 мг, 1,54 ммоль) в ДМФА (8 мл) в один прием добавляют гидрид натрия (60% суспензия в масле, 68 мг, 1,70 ммоль). Полученный темно-красный раствор перемешивают при указанной температуре в течение 30 мин и затем добавляют (2-хлорэтил)бензол (0,60 мл, 2,31 ммоль). Затем реакционную смесь греют при 110 °С в течение 5 ч. В это время добавляют карбонат калия (426 мг, 3,08 ммоль), а затем добавляют еще 2-хлорэтилбензол (0,30 мл, 2,31 ммоль) и смесь греют при 110 °С в течение 17 ч. Затем смесь снимают с бани и разбавляют водой (20 мл) и экстрагируют этилацетатом (100 мл). Органический слой отделяют, промывают рассолом и сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают коричневый остаток. Остаток подвергают колоночной хроматографии на силикагеле с использованием смеси этилацетат/гексан (10%:90%) и получают соединение 25 (310 мг, выход 76%).

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 8,42 (с, 1Н), 7,88 (дд, 1Н, J=1,5, 8,9), 7,71-7,69 (м, 2Н), 7,24-7,16 (м, 5Н), 6,61 (д, 1Н, J=2,8), 4,60 (т, 2Н, J=7,0), 3,10 (т, 2Н, J=7,0).

(b) Получение соединения 26.

Раствор 6-нитро-1-фенетил-1Н-индола (соединение 25, 235 мг, 0,88 ммоль) и дигидрат хлорида олова(II) (995 мг, 4,41 ммоль) в абсолютном этаноле (10 мл) кипятят с обратным холодильником в небольшой продуваемой аргоном колбе, снабженной обратным холодильником и стержнем для магнитной мешалки. Раствор перемешивают в течение 6 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют водным 1 н раствором гидроксида натрия (50 мл) и переносят в делительную воронку. Добавляют этилацетат (100 мл), и органическую фазу промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и фильтруют через слой силикагеля. Фильтрат концентрируют, остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (этилацетат:гексан, 1:1) и получают соединение 26 (180 мг, выход 86,6%).

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,32-7,17 (м, 6Н), 6,90 (д, 1Н, J=3), 6,63 (с, 1Н), 6,42 (дд, 1Н, J=1,1, 8,5), 6,14 (д, 1Н, J=3,), 4,19 (т, 2Н, J=7,3), 3,01 (т, 2Н, J=7,3); MS (APCI+): 237,0 (M+1).

(с) Получение соединения 27.

Смесь 1-фенетил-1Н-индол-6-иламина (соединение 26, 100 мг, 0,42 ммоль) и гидробромида фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (254 мг, 0,85 ммоль) растворяют в безводном этаноле (4 мл) и перемешивают в атмосфере аргона в течение 66 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют, разбавляют этилацетатом (50 мл) и обрабатывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и водой (20 мл). Органический слой отделяют, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают коричневый остаток, который очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана). Продукт растворяют в метаноле (10 мл), добавляют 1М соляную кислоту (2 мл) и перемешивают при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и получают соединение 27 в виде желтого твердого вещества (65 мг, выход 40,5%).

¹ Н ЯМР (свободное основание в CD ₃ OD) δ: 7,66 (д, 1Н, J=3,8), 7,58 (д, 1Н, J=4,8), 7,53 (д, 1Н, J=8,3), 7,20-7,13 (м, 4Н), 7,08-7,06 (м, 2Н), 6,99 (д, 1Н, J=3,0), 6,73 (дд, 1Н), 6,36 (д, 1Н, 3,0), 4,36 (т, 2Н, J=7,0), 3,09 (т, 2Н, J=7,0); MS (APCI+): 346,4 (M+1).

Пример 9. Получение соединений 32 и 33

(а) Получение соединений 28 и 29.

6-Нитроиндол (1,545 г, 9,52 ммоль), гидрохлорид 2-(2-хлорэтил)-1-метилпирролидина (2,28 г, 12,4 ммоль) и измельченный в порошок карбонат калия (2,55 г, 18,5 ммоль) помещают в продуваемую аргоном двугорлую колбу. Добавляют ДМФА (20 мл, Aldrich, sure-seal ™) и смесь греют при 65 °С на масляной бане в течение 46 ч. Добавляют еще гидрохлорид 2-(2-хлорэтил)-1-метилпирролидина (0,3 экв.), и продолжают нагревание еще в течение часа. Раствор охлаждают до комнатной температуры и разбавляют водой (50 мл) и этилацетатом (50 мл). Слои разделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом (2 ×50 мл). Органические экстракты объединяют, промывают рассолом (2 ×50 мл) и экстрагируют 1М раствором HCl (20 мл, 15 мл, затем 10 мл). Кислотные фракции объединяют, подщелачивают 1 н NaOH, экстрагируют этилацетатом и экстракт промывают рассолом и сушат над сульфатом магния. Образец фильтруют, концентрируют, полученное желтое масло очищают хроматографией на силикагеле (5% 2М аммиака в метаноле/95% дихлорметана) и получают два соединения - соединение 28 (1,087 г, 4,16 ммоль, выход 43,7%);

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 1,43-1,67 (м, 1Н), 1,71-1,97 (м, 4Н), 2,12-2,32 (м, 6Н), 3,06-3,10 (м, 1Н), 4,24-4,32 (м, 2Н), 6,62-6,63 (д, 1Н), 7,42-7,43 (д, 1Н), 7,66-7,68 (д, 1Н), 8,01-8,04 (дд, 1Н), 8,36-8,37 (д, 1Н); MS (позитивный): 274,0 (M+1); и

продукт перегруппировки (соединение 29, коричневое масло, 255 мг); ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,39 (с, 1Н), 8,02 (дд, 1Н, J=1,5, 6,6), 7,66 (д, 1Н, J=6,6), 7,55 (д, 1Н, J=2,3), 6,62 (д, 1Н, J=2,3), 4,72-4,65 (гептет, 1Н), 2,83-2,66 (м, 4Н), 2,46 (с, 3H), 2,32-2,15 (м, 5Н), 2,03-1,95 (м, 1Н), 1,90-1,80 (м, 1Н); MS (позитивный): 274,5 (М+1).

Расщепление энантиомеров

К раствору рацемического соединения 28 (3,76 г, 13,76 ммоль) в безводном этаноле (60 мл) при энергичном перемешивании добавляют раствор дибензоил-L-винной кислоты (2,46 г, 0,5 экв.) в безводном этаноле (60 мл). Полученный мутноватый желтый раствор охлаждают в течение 24 ч при 1 °С. Выпавшее в осадок желтое вещество собирают фильтрацией под вакуумом, промывают холодным этанолом и эфиром и сушат в высоком вакууме в течение ночи, и получают 4,1 г желтого твердого вещества в виде гранул. Фильтрат концентрируют и получают остаток. Как выпавшее в осадок вещество, так и остаток от фильтрата параллельно превращают в свободное основание следующим образом. Сырой энантиомер обрабатывают этилацетатом и водой и доводят рН до 8 насыщенным раствором гидрокарбоната натрия. Водную фазу дважды экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Остаток сушат в высоком вакууме в течение 3 ч при 75 °С, затем сушат еще в течение ночи при комнатной температуре. Оба энантиомера имеют вид коричневого масла; L-энантиомер - соединение 28(-) (2,42 г из кристаллической фракции с использованием L-дибензоилвинной кислоты), [ α _d ] ₂₀ (метанол) = -12,950 °; и D-энантиомер соединение 28(+) (остаток от фильтрата, 1,229 г), [ αd] ₂₀ (метанол) = +25,416 °.

Обогащение L-энантиомером

Обогащенный L-энантиомер (соединение 28(-), 2,42 г, 6,88 ммоль) растворяют в этаноле (37 мл), при энергичном перемешивании добавляют раствор дибензоил-L-винной кислоты (1,232 г, 3,44 ммоль) в этаноле (37 мл) и получают мутноватый оранжево-желтый раствор. Раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем в течение ночи при 1 °С. Твердое вещество собирают фильтрацией, затем промывают эфиром, твердое вещество сушат в высоком вакууме при комнатной температуре в течение 3 ч и получают 2,75 г желтого твердого вещества, т.пл. 99-110 °С. Твердое вещество перекристаллизовывают из горячего этанола (70 мл, общий объем), охлаждают до комнатной температуры, а затем охлаждают при 1 °С в течение 44 ч. Твердое вещество собирают фильтрацией, промывают холодным этанолом и затем холодным диэтиловым эфиром, сушат в высоком вакууме и получают желтое твердое вещество (1,55 г, т.пл. 99-110 °С). Твердое вещество обрабатывают этилацетатом (100 мл) и водой (50 мл) и доводят рН до 8-9 с использованием насыщенного раствора гидрокарбоната натрия. Слои разделяют, и водный слой экстрагируют этилацетатом (дважды). Объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают коричневое масло. Масло сушат в высоком вакууме при комнатной температуре в течение ночи и получают энантиомер соединение 28(-) (0,969 г); [ α _d ] ₂₀ (метанол) = -38,64 °.

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 1,59-1,47 (м, 1Н), 2,00-1,79 (м, 4Н), 2,24-2,15 (м 3H), 2,31 (с, 3H), 3,13-3,08 (м, 1Н), 4,35-4,19 (м, 2Н), 6,60 (д, 1Н, J=3,0), 7,41 (д, 1Н, J=3,2), 7,65 (д, 1Н, J=8,8), 7,99 (дд, 1Н, J=8,93, 1,91), 8,35 (с, 1Н).

Обогащение D-энантиомера

Способом, подобным обогащению L-энантиомера, получают соединение 28(+) с использованием D-(+)-дибензоилвинной кислоты с выходом 0,898 г в виде коричневого масла; [ α _d ] ₂₀ (метанол) = +40,52 °. ¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,34 (д, 1Н, J=1,5), 8,1 (1Н, дд, J=1,8, 8,4), 7,66 (д, 1Н, J=8,7), 7,40 (д, 1Н, J=3), 6,60 (д, 1Н, J=3), 4,37-4,19 (м, 2Н), 3,12-3,07 (м, 1Н), 2,31 (с, 3H), 2,28-2,15 (м, 3H), 2,02-1,70 (м, 4Н), 1,59-1, 51 (м, 1Н).

(b) Получение соединения 30.

Рацемический 1-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил]-6-нитро-1Н-индол (соединение 28, 727 мг, 2,66 ммоль) и дигидрат хлорида олова(II) (2,017 г, 10,67 ммоль) помещают в небольшую продуваемую аргоном колбу, снабженную обратным холодильником и стержнем для магнитной мешалки. Добавляют абсолютный этанол (10 мл) и раствор кипятят с обратным холодильником на масляной бане в течение 24 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Смесь разбавляют этилацетатом (50 мл) и переносят в делительную воронку. Добавляют водный 3 н раствор гидроксида натрия (50 мл) и органическую фракцию собирают. Выпавшее в осадок вещество, присутствующее в делительной воронке, удаляют вместе с водным слоем. Органическую фазу еще дважды промывают 3 н NaOH (20 мл) и затем дважды рассолом (2 ×20 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, и получают черное масло, которое очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана), и получают рацемическое соединение 30 (472,3 мг, выход 73%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 1,41-1,59 (м, 1Н), 1,71-1,79 (м, 3H), 1,86-1,98 (м, 1Н), 2,05-2,16 (м, 3H), 2,29 (с, 3H), 3,03-3,06 (т, 1Н), 3,63 (ушир.с, 2Н, -NH ₂ ), 4,00-4,08 (м, 2Н), 6,35-6,36 (д, 1Н), 6,54-6,55 (д, 1Н) 6,56-6,57 (д, 1Н), 6,90-6,91 (д, 1Н), 7,38-7,40 (д, 1Н).

Получение соединения 30(-).

В продуваемую аргоном колбу, содержащую энантиомерно расщепленный 1-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил]-6-нитро-1Н-индол (соединение 28(-), 969 г, 3,545 ммоль) и стержень для магнитной мешалки, добавляют безводный этанол (75 мл). При перемешивании быстро по частям добавляют палладий-на-угле (10%, 283 мг, 0,266 ммоль), атмосферу откачивают и заменяют водородом с использованием системы баллон/отсасывающее устройство. Систему откачивают в целом 3 раза для того, чтобы гарантировать отсутствие остаточного кислорода. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Водородную атмосферу заменяют аргоном, осуществляя продувание/заполнение, смесь фильтруют через целит и твердое вещество промывают абсолютным этанолом (25 мл). Сборник герметично закрывают и продувают аргоном и вещество используют неочищенным в последующей реакции синтеза соединения 32(-).

Получение соединения 30(+).

Способом, подобным способу получения соединения 30(-) из соединения 28(-), соединение 28(+) (870 мг, 3,183 ммоль) используют для получения соединения 30(+). После фильтрации через целит неочищенный раствор соединения 30(+) в этаноле используют для получения оптически чистого соединения 32(+).

Получение соединения 31.

Способом, подобным способу получения соединения 30 из соединения 28, соединение 31 синтезируют из соединения 29 (190 мг, 0,695 ммоль). После фильтрации через целит неочищенный раствор соединения 31 используют непосредственно для получения соединения 33.

(с) Получение рацемического соединения 32.

1-[2-(1-Метилпирролидин-2-ил)этил]-1Н-индол-6-иламин (соединение 30, 47,9 мг, 0,197 ммоль) растворяют в этаноле (3 мл) в небольшой продуваемой аргоном колбе. Добавляют гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (76,9 мг, 0,256 ммоль) и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Растворитель выпаривают и продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана), и получают свободное основание соединения 32 в виде желтого масла (52,5 мг, выход 75%). Свободное основание растворяют в метаноле (2 мл), обрабатывают 1М HCl с последующим упариванием досуха и получают соль HCl соединения 32 в виде розоватого (цвета лосося) твердого вещества (54,8 мг, выход 95,1%).

¹ Н ЯМР (свободное основание, CDCl ₃ ) δ: 1,67-1,78 (м, 1Н), 1,93-1,98 (м, 2Н), 2,04-2,19 (м, 4Н), 2,26 (с, 3H), 3,00-3,05 (т, 1Н), 4,05-4,12 (м, 2Н), 4,86 (с, 2Н), 6,43-6,44 (д, 1Н), 6,76-6,78 (д, 1Н), 6,96 (с, 1Н), 7,02-7,03 (д, 1Н), 7,05-7,07 (т, 1Н), 7,40-7,41 (д, 2Н), 7,52-7,57 (д, 1Н); MS (позитивный): 353,2 (М+1).

Получение соединения 32(-).

В продуваемую аргоном колбу, содержащую неочищенный энантиомерно расщепленный 1-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил]-1Н-индол-6-иламин (соединение 30(-), 3,545 ммоль) в безводном этаноле (100 мл), добавляют стержень для магнитной мешалки, а затем добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (1,213 г, 1,2 экв.).

После перемешивания при комнатной температуре в течение 24 ч добавляют еще тиофеновый реагент (0,202 г, 0,2 экв.). Через 18 ч реакционную смесь концентрируют и остаток обрабатывают этилацетатом (100 мл) и водой (50 мл) и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл). Водный слой проверяют и находят, что рН равен 8. Водный слой экстрагируют еще дважды этилацетатом, объединенные органические фракции последовательно промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и рассолом, фильтруют и концентрируют, и получают оранжево-коричневое масло (1,56 г). Сырой продукт реакции очищают сухой колоночной хроматографией (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) аликвотами 17 ×100 мл и получают соединение 32(-) в виде желтого масла (0,63 г). Соль HCl получают, растворяя продукт в безводном дихлорметане (10 мл) и 1М HCl в эфире (5,36 мл, 3 экв.) в атмосфере аргона.

¹ Н ЯМР (свободное основание, CDCl ₃ ) δ: 1,50-1,52 (м, 1Н), 1,67-1,82 (м, 4Н), 1,92-1,95 (м, 1Н), 2,07-2,15 (м, 3H), 2,28 (с, 3H), 3,06 (т, 1Н), 4,02-4,12 (м, 2Н), 4,87 (с, 2Н), 6,45-6,46 (д, 1Н), 6,78-6,81 (д, 1Н), 6,98 (с, 1Н), 7,04-7,05 (д, 2Н), 7,43-7,45 (д, 2Н), 7,57-7,59 (д, 1Н); MS (позитивный): 353,5 (М+1).

Получение соединения 32(+).

Способом, подобным способу получения соединения 32(-) из соединения 30(-), соединение 30 (+) используют для получения соединения 33(+) в виде желтого масла (0,715 г), которое затем превращают в соль гидрохлорид обработкой избытком 1М HCl в эфире.

¹ Н ЯМР (свободное основание, CDCl ₃ ) δ: 1,49-1,57 (м, 1Н), 1,71-1,82 (м, 4Н), 1,89-1,95 (м, 1Н), 2,07-2,15 (м, 3H), 2,29 (с, 3H), 3,04-3,06 (т, 1Н), 4,07-4,15 (м, 1Н), 4,87 (с, 2Н), 6,45-6,46 (д, 1Н), 6,78-6,81 (д, 1Н), 6,98 (с, 1Н), 7,04-7,09 (м, 2Н), 7,43-7,45 (д, 2Н), 7,57-7,59 (д, 1Н); MS (позитивный): 353,5 (М+1).

Получение соединения 33.

Способом, подобным способу получения соединения 32 из соединения 30, соединение 31 используют для получения свободного основания соединения 33 в виде бледно-розового твердого вещества (107 мг, 0,304 ммоль). Соль гидрохлорид получают, растворяя неочищенное твердое вещество (107 мг) в безводном дихлорметане (5 мл) с последующим добавлением 1М HCl в эфире (3 экв., 0,91 мл). Бледно-зеленое/бежевое твердое вещество, которое сразу же выпадает в осадок, собирают и промывают небольшим количеством дихлорметана и сушат в высоком вакууме, и получают соль гидрохлорид в виде бледно-коричневого твердого вещества (92 мг в виде дигидрохлорида).

¹ Н ЯМР (HCl соль, ДМСО-d ₆ ) δ: 11,55 (ушир.с, 1Н), 11,18 (ушир.с, 1Н), 9,74 (ушир.с, 1Н), 8,74 (ушир.с, 1Н), 8,18 (м, 2Н), 7,77-7,70 (м, 3H), 7,40 (3 полоса м, 1Н), 7,06 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 6,62 (с, 1Н), 4,94-4,77 (м, 1Н), 3,48-3,17 (м, 4Н), 2,78 (с, 3H), 2,26-1,95 (м, 6Н); MS (поз.): 353,5.

Пример 10. Получение соединения 37

(а) Получение соединения 34.

Этиловый эфир (6-нитроиндол-1-ил)уксусной кислоты (соединение 19, 3,06 г, 12,3 ммоль) растворяют в ТГФ (60 мл, Aldrich, Sure Seal ™). Раствор охлаждают до -78 °С в атмосфере аргона на бане с ацетоном и сухим льдом и постепенно по стенке колбы добавляют раствор DIBAL в толуоле (18,9 мл, 2,3 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение 44,5 ч при комнатной температуре, после чего коричневый раствор 3 н раствором гидроксида натрия (20 мл). Смесь переносят в делительную воронку и разбавляют этилацетатом (50 мл) и водой (20 мл). Слои встряхивают, разделяют и водную фазу экстрагируют этилацетатом (20 мл). Объединенные органические фракции промывают рассолом (20 мл), сушат над сульфатом магния, обрабатывают углем, фильтруют и концентрируют, и получают коричневато-желтое твердое вещество (2,10 г). Сырой продукт реакции растворяют в этилацетате, предварительно абсорбируют на силикагеле и очищают колоночной хроматографией на силикагеле (этилацетат и гексан, 3:7), и получают соединение 34 в виде желтого твердого вещества (1,18 г, выход 61%).

(b) Получение соединения 35.

2-(6-Нитроиндол-1-ил)этанол (соединение 34, 1,17 91 г, 5,72 ммоль) помещают в небольшую продуваемую аргоном колбу и растворяют в сухом ТГФ (20 мл). Добавляют триэтиламин (1,6 мл, 1,5 экв.), а затем добавляют метансульфонилхлорид (0,63 мл, 1,43 экв.). Немедленно начинается образование осадка. Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 48 ч. Реакционную смесь концентрируют и получают желтое твердое вещество. Добавляют ДМФА (15 мл) и пиперидин (10 мл) и раствор греют при 110 °С и перемешивают в течение 21 ч. Темно-желтый раствор охлаждают до комнатной температуры, переносят в делительную воронку и разбавляют водой (75 мл) и этилацетатом (25 мл). Водный слой экстаргируют этилацетатом (3 ×25 мл) и объединенные органические слои промывают рассолом (3 ×25 мл). Затем органическую фазу обрабатывают 1М соляной кислотой (50 мл), в результате чего выпадает желтый осадок. Выпавшее в осадок вещество удаляют фильтрацией и фильтрат дополнительно обрабатывают соляной кислотой (25 мл). Слои после встряхивания разделяют и водную фазу подщелачивают 10% раствором гидроксида натрия. Мутную смесь экстрагируют этилацетатом (3 ×20 мл). Объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над MgSO ₄ , фильтруют и концентрируют. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2,5% 2М NH ₃ в метаноле/97,5% дихлорметана), затем перекристаллизацией из этанола и получают соединение 35 в виде желтого твердого вещества (1,029 г, выход 66%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,37 (с, 1Н), 7,98 (дд, 1Н, J=1,67, 8,8), 7,62 (д, 1Н, J=8,8), 7,44 (д, 1Н, J=3,3), 7,25 (с, 1Н), 6,56 (д, 1Н, J=3,0), 4,28 (т, 2Н, J=6,7), 2,70 (т, 2Н, J=6,7), 2,43 (т, 4Н, J=4,9), 1,59-1,55 (м, 4Н), 1,45-1,40 (м, 2Н).

(c) Получение соединения 36.

6-Нитро-1-(2-пиперидин-1-илэтил)-1H-индол (соединение 35, 1,029 г, 3,76 ммоль) и 10% палладий-на-угле (111 мг) помещают в большую продуваемую аргоном колбу. Добавляют абсолютный этанол (20 мл) и атмосферу заменяют на водород с использованием системы баллон/отсасывающее устройство. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18,5 ч. Раствор обрабатывают углем и фильтруют через целит (слой 2 см) и промывают абсолютным этанолом (30 мл). Колбу герметично закрывают и продувают аргоном и содержимое используют неочищенным в последующей реакции.

(d) Получение соединения 37.

К неочищенному раствору 1-(1-(2-пиперидин-1-илэтил)-1Н-индол-6-иламина (соединение 36, 3,76 ммоль) в абсолютном этаноле (50 мл) добавляют гидробромид фенилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (1,185 г, 1,05 экв.). Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 24 ч при температуре окружающей среды. Добавляют дополнительно 0,1 экв. тиофенового реагента и реакционную смесь перемешивают еще в течение 24 ч. Растворитель выпаривают, масло разбавляют небольшим количеством этанола ( <5 мл), затем диэтиловым эфиром и получают выпавшее в осадок желтое вещество. Твердое вещество отделяют фильтрацией и промывают эфиром. Осадок сушат с отсосом, а затем дополнительно сушат в высоком вакууме, и получают соединение 37 в виде соли HBr (выход 983,2 мг). Свободное основание получают, растворяя твердое веещство в воде (35 мл) и добавляя 1 н раствор гидроксида натрия (10 мл). Продукт экстрагируют этилацетатом (2 ×30 мл). Объединенные органические фракции сушат анд MgSO ₄ , фильтруют и концентрируют, и получают соединение 37 в виде светло-желтого твердого вещества (708 мг).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,57 (д, 1Н, J=8,3), 7,43 (м, 2Н), 7,09 (м, 2Н), 6,99 (с, 1Н), 6,79 (д, 1Н, J=7,6), 6,44 (д, 1Н, J=3,0), 4,87 (ушир.с, 2Н), 4,20, (т, 2Н, J=7,5), 2,71 (т, 2Н, J=7,6), 2,45 (ушир.с, 4Н), 1,62-1,58 (м, 6Н) 1,46-1,40 (м, 2Н).

Пример 11. Получение N-(3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (42) и N-(3-(1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (43)

3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (39).

Раствор 5-нитроиндола (38) (0,5 г, 3,083 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают пирролидином (0,77 мл, 9,250 ммоль) и N-метил-4-пиперидоном (0,75 мл, 6,167 ммоль) при комнатной температуре. Полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 2 суток. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, твердое вещество отфильтровывают, промывают этанолом (2 ×5 мл), сушат и получают соединение (39) (0,591 г, 75%). Твердое вещество разлагается при 215 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,29 (с, 3H), 2,50-2,59 (м, 4Н), 3,06-3,08 (м, 2Н), 6,17 (ушир.с, 1Н), 7,55 (д, 1Н, J=9, 0 Гц), 7,66 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,68 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,86 (ушир.с, 1Н).

N-[3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил]тиофен-2-карбоксамидин (40) и N-[3-(1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил]тиофен-2-карбоксамидин (41). Раствор соединения 39 (0,4 г, 1,554 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают Ra-Ni (0,1 г), а затем гидразингидратом (0,48 мл, 15,546 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают при 65 °С в течение 3 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, твердое вещество отфильтровывают через слой целита и промывают смесью метанол: CH ₂ Cl ₂ (1:1, 2 ×10 мл).

Объединенные органические слои упаривают, и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 1:9), и получают свободный амин (0,35 г, выход количественный) в виде пены. Раствор амина (0,18 г, 0,791 ммоль) в сухом этаноле (10 мл) обрабатывают гидрохлоридом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,45 г, 1,583 ммоль) при комнатной температуре, и смесь перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают, и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют, и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×30 мл). Объединенные CH ₂ Cl ₂ -слои промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в смеси метанол: CH ₂ Cl ₂ , 5:95-1:9) и получают соединение 40 (0,165 г, 62%) и 41 (0,02 г, 8%).

Соединение 40. Твердое вещество, т.пл. 203-205 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,26 (с, 3H), 2,50-2,56 (м, 4Н), 3,00-3,02 (м, 2Н), 6,04 (с, 1Н), 6,23 (ушир.с, 1Н), 6,66 (дд, 1Н, J=1,2, 8,8 Гц), 7,09 (дд, 1Н, J=3,9, 5,1 Гц), 7,21 (с, 1Н), 7,31 (дд, 2Н, J=2,4, 5,4 Гц), 7,59 (д, 1Н, J=4,2 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,6 Гц), 10,93 (С, 1Н); ESI-MS m/z (%): 337 (М ⁺ , 100).

Соединение 41. Твердое вещество, т.пл. 148-150 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,62-1,79 (м, 2Н), 1,90-1,94 (м, 2Н), 2,04-2,12 (м, 2Н), 2,23 (с, 3H), 2,63-2,72 (м, 1Н), 2,86-2,89 (м, 2Н), 6,28 (ушир.с, 1Н), 6,63 (дд, 1Н, J=1,8, 8,7 Гц), 6,98 (с, 1Н), 7,02 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 7,09 (дд, 1Н, J=3,9, 5,1 Гц), 7,27 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,59 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,6 Гц), 10,60 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 339 (М ⁺ , 100).

Соль дигидрохлорид N-[3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил]тиофен-2-карбоксамидина (42).

Раствор соединения 40 (0,155 г, 0,460 ммоль) в этаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (1,5 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение 1 ч. Продукт реакции перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 42 (0,13 г, 69%) в виде твердого вещества, т.пл. 215-218 °С.

Соль дигидрохлорид N-[3-(1-метилпиперидин-4-ил)-1H-индол-5-ил]тиофен-2-карбоксамидина (43). Раствор соединения 41 (0,015 г, 0,044 ммоль) в этаноле (3 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,13 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение 1 ч. Продукт реакции перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 43 (0,012 г, 67%) в виде пены.

Пример 12. N-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (46) и N-(3-(l-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (47)

3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (39).

Подробности эксперимента см., пожалуйста, в примере 11.

N-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксамидин (44) и N-(3-(1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксамидин (45).

Раствор соединения 39 (0,4 г, 1,554 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают Ra-Ni (0,1 г), а затем гидразингидратом (0,48 мл, 15,546 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают при 65 °С в течение 3 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, твердое вещество отфильтровывают через слой целита и промывают смесью метанол: CH ₂ Cl ₂ (1:1, 2 ×10 мл). Объединенные органические слои упаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают свободный амин (0,35 г, выход количественный) в виде твердого вещества. Раствор амина (0,17 8 г, 0,747 ммоль) в сухом этаноле (10 мл) обрабатывают гидробромидом бензилфуран-2-карбимидотиоата (0,44 г, 1,495 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ : CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×30 мл). Объединенные CH ₂ Cl ₂ -слои промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в смеси метанол: CH ₂ Cl ₂ , 5:95-1:9) и получают соединение 44 (0,16 г, 67%) и 45 (0,02 г, 8%).

Соединение 44.

Твердое вещество, т.пл. 161-163 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,28 (с, 3H), 2,50-2,57 (м, 4Н), 3,03-3,05 (м, 2Н), 6,04 (с, 1Н), 6,63 (с, 1Н), 6,73 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 7,15 (с, 1Н), 7,31-7,34 (м, 3H), 7,82 (с, 1Н), 10,99 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 321 (М ⁺ , 100).

Соединение 45.

Твердое вещество, т.пл. 85-87 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,81-1,90 (м, 2Н), 1,99-2,03 (м, 2Н), 2,40-2,60 (м, 5Н), 2,81-2,88 (м, 1Н), 3,12-3,15 (м, 2Н), 6,81 (с, 1Н), 6,93 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,20 (с, 1Н), 7,41-7,47 (м, 3H), 7,58 (ушир.с, 1Н), 8,09 (с, 1Н), 11,01 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 323 (М ⁺ , 100).

Соль дигидрохлорид N-[3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил]фуран-2-карбоксамидина (46).

Раствор соединения 44 (0,145 г, 0,452 ммоль) в этаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (1,35 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение 1 ч. Продукт реакции перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 46 (0,135 г, 76%) в виде твердого вещества, т.пл. 212-215 °С.

Соль дигидрохлорид N-[3-(1-метилпиперидин-4-ил)-1H-индол-5-ил]фуран-2-карбоксамидина (47). Раствор соединения 45 (0,015 г, 0,046 ммоль) в этаноле (2 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,14 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение 1 ч. Продукт реакции перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 47 (0,01 г, 56%) в виде пены.

Пример 13. N-((3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)метил)тиофен-2-карбоксимидамид (51)

3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонитрил (49)

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки, содержащую оранжевый раствор 5-цианоиндола (48) (250 мг, 1,76 ммоль) в абсолютном этаноле (10 мл), добавляют 1-метил-4-пиперидон (0,43 мл, 3,50 ммоль) и пирролидин (0,44 мл, 5,27 ммоль). Реакционный сосуд снабжают обратным холодильником и переносят на масляную баню, предварительно нагретуют до 80 °С. Реакционную смесь перемешивают при указанной температуре в течение 44 ч. Когда исходного вещества более не остается (ТСХ, 5% NH ₃ в метаноле/95% CH ₂ Cl ₂ ), реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, а затем дополнительно охлаждают в холодильнике. Так как осадок не образуется, реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и получают оранжевое масло. Масло снова растворяют в этаноле (20 мл) и удаляют растворитель при пониженном давлении. Такую процедуру повторяют еще раз, и затем конечный остаток обрабатывают этанолом и оставляют в холодильнике на 2 ч. Образовавшееся выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией под вакуумом и промывают гексаном (205 мг бледно-желтого твердого вещества, соединение 49, 48,7%).

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 11,90 (ушир.с, NH), 8,51 (с, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,77-7,74 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,68-7,65 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 6,41 (с, 1Н), 3,53 (с, 2Н), 3,27-3,26 (д, J=2,4 Гц, 2Н), 2,79-2,77 (д, J=4,5 Гц, 2Н), 2,72-2,71 (д, J=1,5 Гц, 3H).

(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)метанамин (50)

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную обратным холодильником и стержнем для магнитной мешалки, содержащую 49 (105 мг, 0,442 ммоль), добавляют алюмогидрид лития (34 мг, 0,896 ммоль), а затем абсолютный ТГФ (5 мл). Образуется небольшое количество газа. Как только образование пузырьков прекратится, реакционную смесь переносят на масляную баню, нагретую до 75 °С. Реакционную смесь перемешивают при указанной температуре в течение 18 ч. Реакцию последовательно гасят водой (0,1 мл), 3 н раствором NaOH (0,1 мл) и водой (0,3 мл) и затем смесь фильтруют через слой целита. Слой промывают ТГФ, и фильтрат концентрируют, и получают желтое масло соединение 50 (106 мг, 99%).

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 10,95 (ушир.с, NH), 7,74 (с, 1Н), 7,32-7,31 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 7,30-7,27 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 7,08-7,05 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 6,14 (с, 1Н), 3,77 (с, 2Н), 3,29 (с, 2Н), 3,06-3,05 (д, J=2,7 Гц, 2Н), 2,57-2,56 (д, J=4,5 Гц, 2Н), 2,51-2,50 (д, J=1,2 Гц, 2Н), 2,29 (с, 3H), 1,75 (ушир.с, 2NH).

Дигидрохлорид N-(3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)метил)тиофен-2-карбоксимидамида (51)

Реакционную смесь в продуваемом Ar реакционном сосуде, снабженном стержнем для магнитной мешалки, содержащую раствор соединения 50 (58 мг, 2,55 ммоль) и гидрохлорид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (145 мг, 5,08 ммоль) в абсолютном этаноле (5 мл), перемешивают при комнатной температуре в течение 41 ч. Когда все исходное вещество прореагирует (20% 2М NH ₃ в метаноле/80% CH ₂ Cl ₂ ), реакционную смесь концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток обрабатывают этилацетатом (10 мл) и 3 н раствором NaOH (10 мл), и затем смесь переносят в делительную воронку. Водную фазу еще дважды экстрагируют этилацетатом (2 ×10 мл). Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над MgSO ₄ , фильтруют и концентрируют, и получают бледно-желтое твердое вещество (35 мг). Продукт реакции абсорбируют на силикагеле и очищают колоночной хроматографией (25-30% 2М NH ₃ в метаноле/CH ₂ Cl ₂ ), и получают бледно-желтое твердое вещество (23 мг). Продукт растворяют в метаноле и обрабатывают 1М HCl в эфире. Реакционную смесь перемешивают в течение 25 мин и затем концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в этаноле (3 мл) и разбавляют эфиром (35 мл), и получают выпавшее в осадок вещество, которое собирают фильтрацией. Осадок промывают эфиром (2 ×10 мл) и сушат в высоком вакууме. Выход - 17 мг бледно-желтого твердого вещества, соединение 51 (21%).

¹ Н ЯМР (свободное основание в ДМСО-d ₆ ) δ: 11,04 (ушир.с, NH), 7,86 (с, 1Н), 7,68-7,67 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 7,64 (с, 1Н), 7,36-7,35(д, J=2,7 Гц, 1Н), 7,32 (с, 1Н), 7,15-7,14 (д, J=1,2, 1Н), 7,13-7,11 (т, J=4,2, 1Н), 6,13 (с, 1Н), 4,47 (с, 2H), 3,31 (с, 2Н), 3,05-3,04 (д, J=2,7 Гц, 2Н), 2,58-2,56 (д, J=4,5 Гц, 2Н), 2,29 (с, 3H); ESI-MS m/z(%): 351 (М+, 100).

Пример 14. N-(3-(3-(Диметиламино)пропил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (56)

3-(5-Бром-1Н-индол-5-ил)-N,N-диметилпропанамид (53)

В 250-мл продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки, содержащую желтый раствор 5-броминдол-3-пропионовой кислоты (52) (3,00 г, 11,19 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (2,36 г, 12,31 ммоль), 1-гидроксибензотриазол (1,51 г, 11,17 ммоль) и гидрохлорид диметиламина (912 мг, 11,19 ммоль) в ДМФА (20 мл), добавляют триэтиламин (4,7 мл, 25,83 ммоль), что приводит к образованию осадка. Реакцию контролируют ТСХ (этилацетат:гексан, 1:1). Через 2 ч иглу для продувки аргоном удаляют и добавляют еще гидрохлорид диметиламина (0,3 экв.). Через 20 ч в общей сложности ТСХ показывает полное израсходование исходного вещества. Реакционную смесь разбавляют водой (40 мл) и этилацетатом (40 мл). Реакционную смесь переносят в делительную воронку и продукт реакции экстрагируют в органический слой. Органический слой снова экстрагируют водой (20 мл) для удаления ДМФА, а затем 2 н раствором NaOH (20 мл) и рассолом (15 мл). Желтый органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают бело-розовое твердое вещество. Продукт очищают колоночной хроматографией на силикагеле (этилацетат/гексан, 9:1). Выход - 1,407 г чистого соединения 53.

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 11,00 (ушир.с, NH), 7,68-7,67 (д, 1Н, J=1,5), 7,31-7,28 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,72-7,14 (тд, 2Н, J= 1,8, 8,4 Гц), 2,93-2,81 (м, 8Н), 2,64-2,59 (т, J=7,5 Гц, 2Н).

3-(5-Бром-1Н-индол-3-ил)-N,N-диметилпропан-1-амин (54)

В продуваемую аргоном 250-мл круглодонную колбу, снабженную обратным холодильником и стержнем для магнитной мешалки, содержащую 53 (1,283 г, 4,35 ммоль), добавляют алюмогидрид лития (412 мг, 10,86 ммоль). Добавляют безводный тетрагидрофуран (15 мл), что приводит к образованию газа. Колбу помещают на масляную баню, нагретую до 65 °С, и перемешивают содержимое в течение 16 ч в атмосфере аргона. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и гасят последовательно водой (1,1 мл), 3 н раствором NaOH (1,7 мл) и водой (3,3 мл). Смесь фильтруют для удаления твердого вещества, бледно-желтый фильтрат концентрируют и получают желтое масло. Сушка в высоком вакууме дает бледно-желтое твердое вещество соединение 54. Выход - 1,193 г бледно-желтого твердого вещества (97,5%).

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 7,65-7,64 (д, 1Н, J=1,5), 7,30-7,27 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,167 (с, 1Н), 7,14-7,09 (кв., 1Н, J=6,9, 8,4 Гц), 2,67-2,62 (т, J=7,5, 2Н), 2,25-2,20 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,12 (с, 8Н).

3-(3-(Диметиламино)пропил)-1Н-индол-5-амин (55)

В продуваемый аргоном сосуд, снабженный стержнем для магнитной мешалки, содержащий 54 (324 мг, 1,15 ммоль), подают через канюлю раствор Pd ₂ (dba) ₃ (53 мг, 0,058 ммоль) и раствор три-трет-бутилфосфина (0,34 мл, 10%, 0,11 ммоль) в сухом ТГФ (8 мл). Колбу снабжают обратным хоолодильником и добавляют 1М раствор литийгексаметилдисилазана в ТГФ (3,45 мл, 3,45 ммоль). Реакционную смесь помещают в металлический нагревательный блок и нагревают до температуры образования флегмы. Реакционную смесь перемешивают при такой температуре в течение 16 ч. ТСХ (10% 2М раствора аммиака в метаноле, 90% дихлорметана) показывает, что все исходное вещество прореагировало.

Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, и гасят реакцию 1М соляной кислотой (15 мл). Кислую реакционную смесь подщелачивают 3 н раствором гидроксида натрия (8 мл) и обрабатывают этилацетатом (3 ×10 мл). Органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и обрабатывают углем. Фильтрация через целит с последующим концентрированием и дополнительной сушкой в высоком вакууме дает темно-желтое масло. Очистку продукта осуществляют с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле, 95-90% дихлорметана). Выход - 162 мг коричневого масла, соединение 55 (65%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,76 (ушир.с, NH), 7,17-7,14 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 6,92-6,90 (дд, 2Н, J=2,1, 4,5 Гц), 6,67-6,64 (дд, 1Н, J=2,1, 8,4 Гц), 2,73-2,68 (т, J=7,5, 2Н), 2,41-2,36 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,26 (с, 8Н).

N-3-(3-(Диметиламино)пропил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (56)

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, содержащую 55 (340 мг, 1,56 ммоль), добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (669 мг, 2,35 ммоль). Два вещества суспендируют в абсолютном этаноле (10 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. ТСХ (10% 2М раствора аммиака в метаноле, 90% дихлорметана) показывает, что весь исходный амин прореагировал. Реакционную смесь разбавляют эфиром (80 мл) и легкое желтое вещество, выпавшее в осадок, собирают фильтрацией под вакуумом. Осадок промывают эфиром (50 мл), и он становится маслом на пористом стеклянном фильтре. Используют этанол для пропускания продукта сквозь фильтр в круглодонную колбу (50 мл). Колбу снабжают стержнем для перемешивания и добавляют DOWEX-66 (5,5 г). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат концентрируют и получают желтую пену. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле, 95-90% дихлорметана) и получают желтое масло. Масло растворяют в метаноле (5 мл) и перемешивают во время добавления 1М раствора хлороводорода в эфире (3 мл). После перемешивания в течение 2 ч реакционную смесь концентрируют на роторном испарителе. Полученную желтую пену дополнительно сушат на линии с высоким вакуумом. Выход - 347 мг желтой пены, соединение 56.

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 11,44 (ушир.с, 1Н), 11,26 (с, 1Н), 10,62 (ушир.с, 1Н), 9,66 (ушир.с, 1Н), 8,61 (ушир.с, 1Н), 8,18-8,17 (д, 2Н, J=4,2 Гц), 7,65 (с, 1Н), 7,54-7,51 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,41-7,36 (кв., 2Н, J=4,5 Гц), 7,13-7,09 (дд, J=1,2, 8,7 Гц, 1Н), 3,10-3,04 (т, J=7,5, 2Н), 2,79-2,74 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,72 (с, 6Н), 2,05 (м, 2Н), ESI-MS m/z (%): 327 (М ⁺ , 100).

Пример 15. Получение N-((3-(2-(диметиламино)этил)-1Н-индол-5-ил)метил)тиофен-2-карбоксимидамида (59)

3-(2-(Диметиламино)этил)-1Н-индол-5-карбонитрил (57)

[2-(5-Бром-1Н-индол-3-ил)этил]диметиламин (16) (500,0 мг, 1,872 ммоль) (патент США № 5998438) помещают в продуваемую аргоном высушенную в сушильном шкафу колбу, снабженную стержнем для перемешивания. Добавляют последовательно цианид цинка (395,0 мг, 3,368 ммоль, 1,8 экв.), цинковый порошок (14,7 мг, 0,225 ммоль, 0,12 экв.) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (42,9 мг, 0,0468 ммоль, 0,025 эквивалента), а затем добавляют безводный N,N-диметилформамид (15 мл). Добавляют раствор три-трет-бутилфосфина в гексане (10 мас.%, 189,0 мг, 280 мкл, 0,05 эквивалента) и смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре и затем греют на масляной бане при 60 °С в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры смесь переносят в делительную воронку и разбавляют дистиллированной водой (15 мл). Водную фазу экстрагируют этилацетатом (3 ×30 мл). Объединенные органические экстракты сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (10% 2 М NH ₃ в метаноле/90% дихлорметана) и получают 3-(2-(диметиламино)этил)-1Н-индол-5-карбонитрил (57) в виде желтого остатка (150 мг, выход 37,6%).

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 2,21 (с, 6Н), 2,54 (м, 2Н), 2,84 (т, 2Н), 7,36-7,41 (м, 2Н), 7,49 (д, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 11,38 (ушир.с, 1Н).

2-(5-(Аминометил)-1Н-индол-3-ил)-N,N-диметилэтанамин (58)

Алюмогидрид лития (40,0 мг, 1,055 ммоль, 1,5 эквивалента) помещают в продуваемую аргоном высушенную в сушильном шкафу колбу, снабженную стержнем для перемешивания и обратным холодильником. Добавляют безводный диэтиловый эфир (5 мл) и снова перемешивают. 3-(2-(Диметиламиноэтил)-1Н-индол-5-карбонитрил (57) (150,0 мг, 0,703 ммоль, 1,0 эквивалент) растворяют в отдельной сухой колбе в смеси безводного диэтилового эфира (5 мл) и безводного тетрагидрофурана (5 мл) и полученный раствор добавляют по каплям к раствору алюмогидрида лития, и полученную смесь кипятят с обратным холодильником. Через 30 мин реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и гасят последовательно дистиллированной водой (50 мкл), водным 3 н раствором гидроксида натрия (75 мкл) и дистиллированной водой (150 мкл). Раствор фильтруют и концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (10-15-20% 2М NH ₃ в метаноле/90-85-80% дихлорметана) и получают 2-(5-(аминометил)-1Н-индол-3-ил)-N,N-диметилэтанамин (58) в виде бледно-желтого остатка (73 мг, выход 47,8%).

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 2,21 (с, 6Н), 2,53 (м, 2Н), 2,78 (т, 2Н), 3,79 (с, 2Н), 7,02-7,05 (д, 1Н), 7,09 (с, 1Н), 7,24 (д, 1Н), 7,44 (с, 1Н), 10,66 (ушир.с, 1Н), MS: 218 (М+1), 201 (M+1-NH ₃ ).

N-((3-(2-(Диметиламино)этил)-1Н-индол-5-ил)метил)тиофен-2-карбоксимидамид (59).

[2-(5-Аминометил)-1Н-индол-3-ил)этил]диметиламин (58) (70 мг, 0,322 ммоль) и гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (160,7 мг, 0,564 ммоль, 1,75 экв.) растворяют в безводном этаноле (5 мл) в небольшой продуваемой аргоном колбе. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 20 ч при комнатной температуре, после чего удаляют растворитель. Сырой остаток растворяют в воде (10 мл) и переносят в делительную воронку, где раствор подщелачивают (рН 9-10), добавляя водный 1 н раствор гидроксида натрия. Смесь экстрагируют этилацетатом (3 ×20 мл). Объединенные органические экстракты промывают дистиллированной водой и рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают сырой остаток. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (10-25% 2М NH ₃ в метаноле/90-75% дихлорметана), и получают свободное основание в виде бесцветного/белого остатка (36 мг, выход 34,3%). Свободное основание растворяют в метаноле (5 мл) и добавляют 1М HCl в диэтиловом эфире (3 эквивалента). Растворитель удаляют, масло сушат в высоком вакууме и получают N-((3-(2-(диметиламино)этил)-1Н-индол-5-ил)метил)тиофен-2-карбоксимидамид (59) в виде соли дигидрохлорида.

¹ Н ЯМР (свободное основание, ДМСО-d ₆ ) δ: 2,21 (с, 6Н), 2,53 (м, 2Н), 2,79 (т, 2Н), 4,39 (с, 2Н), 7,06-7,10 (м, 3H), 7,26 (д, 1Н), 7,51 (с, 1Н), 7,52 (м, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 10,65 (ушир.с, 1Н), MS: 327 (М+1).

Пример 16. N-(3-(1-Этилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (62)

3-(1-Этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (60)

Раствор 5-нитроиндола (38) (0,5 г, 3,083 ммоль) в сухом этаноле (15 мл) обрабатывают пирролидином (0,65 мл, 9,250 ммоль) и N-этил-4-пиперидоном (0,8 мл, 6,167 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 3 суток. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и выпаривают растворитель. Сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и промывают эфиром (3 ×10 мл), и получают соединение 60 (0,35 г, 42%) в виде твердого вещества, т.пл. 188-190 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,07 (т, 3H, J=7,2 Гц), 2,41-2,50 (м, 4Н), 2,63 (т, 2Н, J=5,1 Гц), 3,10-3,15 (м, 2Н), 6,18 (с, 1Н), 7,55 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,65 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,69 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,86 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 272 (М ⁺ , 100),

N-(3-(1-Этилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (61)

Раствор 3-(1-этил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индола (60) (0,1 г, 0,368 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают 10% Pd-C (0,02 г), продувают газом водородом и перемешивают в течение 3 ч в атм. водорода (давление в баллоне). Твердое вещество отфильтровывают с использованием слоя целита, который промывают сухим этанолом (2 ×5 мл).

Объединенный этанольный слой обрабатывают гидрохлоридом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,21 г, 0,7 37 ммоль) и перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество отфильтровывают и растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ : CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают N-(3-(1-этилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (61) (0,085 г, 66%) в виде твердого вещества, т.пл. 150-152 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,01 (т, 3H, J=6, 9 Гц), 1,59-1,75 (м, 2Н), 1,90-2,05 (м, 4Н), 2,35 (кв., 2Н), 2,65-2,73 (м, 1Н), 2,94-2,97 (м, 2Н), 6,23 (ушир.с, 1Н), 6,62 (дд, 1Н, J=1,2, 8,4 Гц), 6,97 (с, 1Н), 7,02 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 7,09 (т, 1Н, J=4,2 Гц), 7,26 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,58 (д, 1Н, J=5,4 Гц), 7,70 (д, 1Н, J=3,6 Гц), 10,59 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 353 (М ⁺ , 100).

Соль дигидрохлорид N-(3-(1-этилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (62).

Раствор N-(3-(1-этилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (61) (0,07 г, 0,198 ммоль) в этаноле (2 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,59 мл, 0,595 ммоль) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают после перемешивания в течение 15 мин и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 62 (0,067 г, 80%) в виде твердого вещества, т.пл. 254-256 °С.

Пример 17. N-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамотиоил)бензамид (64)

3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (39)

Подробности эксперимента обсуждаются в примере 11.

N-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамотиоил)бензамид (63).

Раствор соединения 3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индола (39)

(1,0 г, 3,866 ммоль) в сухом метаноле (20 мл) обрабатывают Ni Ренея (0,3 г) и затем гидразингидратом (1,21 мл, 38,866 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают при 65 °С в течение 2 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, и смесь фильтруют через слой целита для удаления твердого вещества. Слой целита промывают метанолом (2 ×10 мл). Объединенную органическую фракцию выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают свободный амин 3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-амин (0,78 г, 88%) в виде твердого вещества. Раствор амина (0,78 г, 3,431 ммоль) в ацетоне (20 мл) обрабатывают бензоилизотиоцианатом (0,53 мл, 3,946 ммоль) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивают в течение ночи. Растворитель выпаривают, сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией (2М раствор аммиака в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 63 (1,23 г, 92%) в виде твердого вещества, т.пл. 182-184 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,28 (с, 3H), 2,50-2,58 (м, 4Н), 3,00-3,10 (м, 2Н), 6,09 (с, 1Н), 7,26 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 7,40 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,44 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 7,54 (т, 2Н, J=7,5 Гц), 7,66 (т, 1Н, J=7,2 Гц), 7,99 (д, 2Н, J=7,5 Гц), 8,15 (с, 1Н), 11,24 (с, 1Н), 11,48 (с, 1Н), 12,58 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 391 (М ⁺ , 76), 289 (74), 348 (100).

Соль гидрохлорид N-(3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамотиоил)бензамида (64).

Раствор соединения 63 (0,08 г, 0,204 ммоль) в метаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,6 мл, 0,614 ммоль) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают в вакууме после перемешивания в течение 15 мин и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 64 (0,075 г, 80%) в виде твердого вещества, т.пл. 197-199 °С.

Пример 18. Получение этил-3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамимидотиоата (67)

N-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамотиоил)бензамид (63). Синтез описан в примере 17.

N-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиомочевина (65). Раствор соединения 63 (1,12 г, 2,868 ммоль) в ТГФ (20 мл) обрабатывают 2 н раствором NaOH (3,1 мл, 6,309 ммоль) при комнатной температуре, и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и растворитель выпаривают. Сырой остаток разбавляют водой (20 мл) и этилацетатом (20 мл). Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают, промывают водой (10 мл), EtOAc (10 мл) и эфиром (2 ×10 мл) и сушат в вакууме, и получают соединение 65 (0,65 г, 79%), т.пл. 209-211 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,27 (с, 3H), 2,50-2,56 (м, 4Н), 3,00-3,08 (м, 2Н), 6,05 (с, 1Н), 6,98 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,32-7,40 (м, 3H), 1,61 (с, 1Н), 9,51 (с, 1Н), 11,15 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 287 (М+, 71), 249 (46), 244 (100).

Этил-3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамимидотиоат (66).

Раствор соединения 65 (0,2 г, 0,698 ммоль) в ацетоне (10 мл) обрабатывают иодметаном (0,33 мл, 4,189 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и растворитель выпаривают. Сырой остаток разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл) и соединение экстрагируют в CH ₂ Cl ₂ (3 ×20 мл). Объединеный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Выпаривание растворителя и очистка сырого вещества колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) дают соединение 66 (0,055 г, 25%) в виде твердого веещства, т.пл. 77-79 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,20-1,30 (м, 3H), 2,28 (с, 3H), 2,50-2,57 (м, 4Н), 2,90-2,96 (м, 2Н), 3,02-3,06 (м, 2Н), 5,98-6,04 (м, 2Н), 6,60-6,63 (м, 1Н), 7,17-7,35 (м, 4Н), 10,90 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%):: 315 (М+, 66), 311 (78), 249 (100).

Соль дихлорид этил-3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамимидотиоата (67). Раствор соединения 66 (0,05 г, 0,159 ммоль) в метаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,47 мл, 0,447 ммоль) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают в вакууме после перемешивания в течение 15 мин, сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 67 (0,04 г, 66%) в виде твердого вещества, т.пл. 190-192 °С.

Пример 19. N-3-(1-Бензоилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (70)

(4-(5-Нитро-1Н-индол-3-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-ил)(фенил)метанон (68)

Раствор 5-нитроиндола (38) (0,5 г, 3,083 ммоль) в сухом этаноле (15 мл) обрабатывают пирролидином (0,77 мл, 9,250 ммоль) и 1-бензоил-4-пиперидоном (1,0 г, 4,933 ммоль) при комнатной температуре, и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 3 суток. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и твердое вещество отфильтровывают. Продукт реакции промывают холодным этанолом (2 ×10 мл) и сушат в вакууме, и получают соединение 68 (1,05 г, 98%) в виде твердого вещества, т.пл. 280-282 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,55-2,61 (м, 2Н), 3,54-3,58 (м, 1Н), 3,86-3,90 (м, 1Н), 4,15-4,34 (м, 2Н), 6,14-6,30 (м, 1Н), 7,39-7,55 (м, 5Н), 7,67 (д, 1Н, J=9,6 Гц), 7,72 (с, 1Н), 8,03 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 8,70-8,78 (м, 1Н), 11,94 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 348 (М ⁺ , 100), 276 (83), 244 (40).

Соль дигидрохлорид N-3-(1-бензоилпиперидин-4-ил)-1H-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (70).

Раствор соединения 1 (0,2 г, 0,575 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают Pd-C (0,02 г), продувают газом водородом и перемешивают в течение ночи (14 ч) в атм. водорода (давление в баллоне). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают сухим этанолом (2 ×5 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидрохлоридом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,32 г, 1,157 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (50 мл). Твердое вещество обрабатывают смесью насыщ. Раствор NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (40 мл, 1:1). Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (10 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 69 (0,07 г, 28%) в виде свободного основания. Твердое вещество, т.пл. 135-137 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,57-1,65 (м, 2Н), 1,89-2,06 (м, 2Н), 2,92-3,08 (м, 2Н), 3,18-3,25 (м, 1Н), 3,64-3,69 (м, 1Н), 4,58-4,64 (м, 1Н), 6,22 (с, 1Н), 6,63 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,01-7,10 (м, 3H), 7,27 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,40-7,45 (м, 6Н), 7,58 (д, 1Н, J=4,8 Гц), 7,70 (д, 1Н, J=3,6 Гц), 10,65 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 429 (М ⁺ , 100), 412 (46).

Раствор соединения 69 (0,06 г, 0,140 ммоль) в метаноле (3 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,42 мл, 0,420 ммоль) и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 70 (0,053 г, 76%) в виде твердого вещества, т.пл. 180-183 °С.

Пример 20. N-(3-(Пиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (73).

3-(1-Бензил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (71)

Раствор 5-нитроиндола (38) (1,0 г, 6,167 ммоль) в сухом этаноле (20 мл) обрабатывают пирролидином (1,54 мл, 18,501 ммоль) и N-бензил-4-пиперидоном (2,2 мл, 12,3 ммоль) при комнатной температуре, и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 4 суток. Реакционную смесь приводят до комнатной температуре и выпаривают растворитель. Сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 71 (0,925 г, 45%) в виде твердого вещества, т.пл. 168-170 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,51-2,55 (м, 2Н), 2,66 (т, 2Н, J=5,4 Гц), 3,12-3,18 (м, 2Н), 3,60 (с, 2Н), 6,17 (с, 1Н), 7,23-7,38 (м, 5Н), 7,55 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,65 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=2,1, 8,7 Гц), 8,68 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,87 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 334 (М ⁺ , 100).

Соль дигидрохлорид N-3-(пиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (73).

Раствор соединения 71 (0,3 г, 0,8 99 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают Pd-C (0,03 г) и HCO ₂ NH ₄ (0,28 г, 4,499 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 24 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и фильтруют через слой целита, который промывают метанолом (2 ×15 мл). Объединенный метанольный слой упаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают промежуточный амин.

Раствор амина в сухом этаноле (10 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,51 г, 1,799 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (50 мл). Твердое вещество расвторяют в смеси насыщ. раствор NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (40 мл, 1:1). Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2M NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 72 (0,04 г, 14%) в виде твердого вещества, т.пл. 112-115 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 6,39 (ушир.с, 1Н), 6,76 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,10 (дд, 1Н, J=3,6, 4,9 Гц), 7,41-7,44 (м, 2Н), 7,61 (д, 1Н, J=4,8 Гц), 7,68 (д, 2Н, J=6,3 Гц), 7,74 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 7,96 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 8,49 (д, 2Н, J=6,0 Гц), 11,53 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 319 (М ⁺ , 100).

Раствор свободного основания соединения 72 (0,035 г, 0,109 ммоль) в метаноле (3 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,32 мл, 0,329 ммоль) и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 73 (0,031 г, 72%) в виде соли дигидрохлорида. Твердое вещество, т.пл. 183-185 °С.

Пример 21. Метил-3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамимидотиоат (75)

1-(3-(1-Метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиомочевина (64)

Подробности эксперимента смотри в примере 17.

Метил-3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамимидотиоат (74).

Раствор соединения 64 (0,2 г, 0,698 ммоль) в ацетоне (10 мл) обрабатывают иодметаном (0,26 мл, 4,189 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение ночи (14 ч). Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и растворитель выпаривают. Сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (10 мл) и соединение экстрагируют в CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединеный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (10 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 74 (0,04 г, 19%) в виде твердого вещества, т.пл. 260-262 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,29 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,50-2,59 (м, 4Н), 3,06 (ушир.с, 2Н), 6,01 (с, 1Н), 6,64 (ушир.с, 1Н), 7,22-7,30 (м, 3H), 10,91 (с, 1Н)/ ESI-MS m/z (%): 301 (М ⁺ , 36), 285 (55), 258 (66), 242 (100).

Соль дигидрохлорид метил-3-(1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-илкарбамимидотиоата (75).

Раствор соединения 74 (0,035 г, 0,116 ммоль) в метаноле (3 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,34 мл, 0,349 ммоль) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают в вакууме после перемешивания в течение 15 мин, остаток сушат и получают соединение 75 (0,03 г, 70%) в виде полутвердого вещества.

Пример 22. N-3-(1-(Имино(тиофен-2-ил)метил)пиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (77)

3-(1-Бензил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (71).

Подробности эксперимента смотри в примере 20.

N-3-(1-(Имино(тиофен-2-ил)метил)пиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (76).

Раствор соединения 71 (0,17 г, 0,509 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают Pd-C (0,02 г), продувают газом, водородом и перемешивают в течение ночи (14 ч) в атм. водорода (давление в баллоне). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают сухим этанолом (2 ×5 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,32 г, 1,019 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (50 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (40 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (10 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырой продукт очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают соединение 77 (0,06 г, 27%) в виде твердого вещества, т.пл. 115-117 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,66-1,77 (м, 2Н), 1,99-2,03 (м, 2Н), 3,04-3,16 (м, 3H), 3,97-4,01 (м, 2Н), 6,23 (ушир.с, 1Н), 6,64.(дд, 1Н, J=1,2, 8,4 Гц), 7,03 (с, 1Н), 7,07-7,10 (м, 2Н), 7,17 (т, 1Н, J=3,9 Гц), 7,28 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,43 (д, 1Н, J=3,9 Гц), 7,58 (д, 1Н, J=4,5 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,6 Гц), 7,78 (д, 1Н, J=4,5 Гц), 10,65 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 434 (М+, 47), 325 (100), 242 (34).

Соль дигидрохлорид N-3-(1-(имино(тиофен-2-ил)метил)пиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (77). Раствор соединения 76 (0,055 г, 0,115 ммоль) в метаноле (3 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (0,34 мл, 0,345 ммоль) и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 77 (0,051 г, 80%) в виде твердого вещества, т.пл. 123-125 °С.

Пример 23. N-(3-(4-(1-Метиламино)циклогексил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (84)

5-Нитро-3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)-1Н-индол (78).

Раствор 5-нитроиндола (38) (0,2 г, 1,233 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают КОН (0,56 г) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 10 мин добавляют моноэтиленкеталь 1,4-циклогександиона (0,48 г, 3,083 ммоль) и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 36 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и растворитель выпаривают. Сырой продукт реакции разбавляют водой (25 мл) и продукт экстрагируют в этилацетат (2 ×25 мл). Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной флэш-хроматографией (этилацетат) и получают соединение 78 (0,25 г, 68%) в виде твердого вещества, т.пл. 175-177 °С.

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 1,91 (т, 2Н, J=6,6 Гц), 2,49 (ушир.с, 2Н), 2,49-2,66 (м, 2Н), 3,96-4,00 (м, 4Н), 6,12 (т, 1Н, J=3,9 Гц), 7,22 (д, 1Н, J=2,4 Гц), 7,32 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 8,05 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,36 (ушир.с, 1Н), 8,78 (д, 1Н, J=2,1 Гц); ESI-MS m/z (%): 301 (М ⁺ , 100).

4-(5-Нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енон (79).

Раствор соединения 78 (0,1 г, 0,332 ммоль) в ацетоне (5 мл) обрабатывают 10% соляной кислотой (5 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение 6 ч. Ацетон выпаривают и сырое вещество подщелачивают с использованием раствора NH ₄ OH (20 мл). Продукт реакции экстрагируют в CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл), промывают рассолом (10 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Слой CH ₂ Cl ₂ упаривают и получают соединение 79 (0,075 г, 88%) в виде твердого вещества, т.пл. 210-212 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,59 (т, 2Н, J=6,9 Гц), 2,90 (т, 2Н, J=6, 6 Гц), 3,11-3,12 (м, 2Н), 6,24 (т, 1Н, J=3,6 Гц), 7,57 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,76 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 8,03 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,71 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,95 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 257 (M ⁺ , 100).

N-Метил-4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енамин (80).

Раствор соединения 79 (0,07 г, 0,273 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (3 мл) обрабатывают АсОН (0,015 мл, 0,273 ммоль), гидрохлоридом метиламина (0,018 г, 0,273 ммоль) и NaBH(OAC) ₃ (0,086 г, 0,409 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение ночи (14 ч). Реакционную смесь подщелачивают 2 н раствором NaOH (25 мл) и продукт реакции экстрагируют в этилацетат (2 ×20 мл). Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 80 (0,074 г, выход количественный) в виде твердого вещества, т.пл. 208-210 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,44-1,53 (м, 1Н), 1,97-2,01 (м, 2Н), 2,35 (с, 3H), 2,40-2,57 (м, 3H), 2,60-2,70 (м, 1Н), 6,13 (ушир.с, 1Н), 7,54 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,63 (с, 1Н), 8,00 (д, 1Н, J=7,5 Гц), 8,67 (с, 1Н), 11,85 (ушир.с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 272 (М ⁺ , 100).

трет-Бутилметил(4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енил)карбамат (81).

Раствор соединения 80 (0,1 г, 0,368 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (3 мл) обрабатывают Et ₃ N (0,1 мл, 0,7 37 ммоль), а затем (Вос) ₂ O (0,084 г, 0,387 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают в течение ночи (16 ч). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (EtOAc:гексан, 1:1) и получают соединение 81 (0,135 г, выход количественный) в виде твердого вещества, т.пл. 224-226 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,42 (с, 9Н), 1,81-1,87 (м, 2Н), 2,29-2,45 (м, 2Н), 2,60-2,70 (м, 2Н), 2,74 (с, 3H), 4,10-4,16 (м, 1Н), 6,17 (ушир.с, 1Н), 7,55 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,66 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=2,4, 9,0 Гц), 8,68 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,87 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 394 (M, Na ⁺ , 100), 316 (44), 272 (82).

трет-Бутил-4-(5-амино-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енил(метил)карбамат (82).

Раствор соединения 81 (0,5 г, 1,364 ммоль) в 2М растворе NH ₃ в метаноле (20 мл) обрабатывают Pd-C (0,05 г) и продувают газом водородом. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) в атм. водорода (давление в баллоне). Раствор фильтруют через слой целита, который промывают смесью метанол:CH ₂ Cl ₂ (1:1, 2 ×20 мл). Растворитель выпаривают и сырой продукт очищают колоночной хроматографией (EtOAc:гексан, 1:1), и получают соединение 82 (0,46 г, выход количественный) в виде твердого вещества при соотношении диастереомеров 1:2.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,38, 1,41 (2с, 9Н), 1,46-1,84 (м, 6Н), 2,02-2,17 (м, 2Н), 2,53-2,57 (м, 1Н), 2,60-2,72 (2с, 3H), 3,82-3,85 (м, 1Н), 4,41 (ушир.с, 2Н), 6,42-6,50 (м, 1Н), 6,66-6,68 (м, 1Н), 6,85-6,87,6,99-7,06 (2м, 2Н), 10,23, 10,28 (2с, 1Н) ; ESI-MS m/z (%): 366 (M,Na ⁺ , 8), 344 (МН ⁺ , 10), 288 (100).

трет-Бутилметил(4-(5-тиофен-2-карбоксимидоамидо)-1Н-индол-3-ил)циклогексил)карбамат (83). Раствор соединения 82 (0,44 г, 1,281 ммоль) в сухом этаноле (20 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,73 г, 2,5 62 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2 М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают соединение 83 (0,425 г, 73%) в виде пены при соотношении диастереомеров 1:2.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 1,38-1,56 (м, 11Н), 1,64-1,82 (м, 4Н), 2,06-2,18 (м, 2Н), 2,62-2,70 (м, 4Н), 3,80-3,90 (м, 1Н), 6,27 (ушир.с, 1Н), 6,62-6,66 (м, 1Н), 6,95-7,11 (м, 3H), 7,22-7,29 (м, 1Н), 7,59 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,6 Гц), 10,59, 10,63 (2с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 453 (МН ⁺ , 100).

Соль дигидрохлорид N-(3-(4-(1-метиламино)циклогексил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (84).

Соединение 83 (0,2 г, 0,441 ммоль) обрабатывают 1 н раствором HCl при комнатной температуре и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют и промывают водой (5 мл). Растворитель выпаривают и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 84 (0,175 г, 94%) в виде твердого вещества при соотношении диастереомеров 1:2.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,52-1,56 (м, 2Н), 1,81-2,16 (м, 6Н), 2,50 (с, 3H), 2,75-2,80 (м, 1Н), 3,00-3,05 (м, 1Н), 7,08 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 7,24-7,40 (м, 2Н), 7,50 (д,. 1Н, J=8,7 Гц), 7,70-7,72 (м, 1Н), 8,15-8,19 (м, 2Н), 8,58 (ушир.с, 1Н), 9,19 (ушир.с, 2Н), 9,65 (ушир.с, 1Н), 11,21, 11,26 (2с, 1Н), 11,43 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 353 (МН ⁺ для свободного основания, 100) 322 (85); ESI-МСВР, вычислено для C ₂₀ H ₂₅ N ₄ S (МН ⁺ для свободного основания). Вычислено 353,1808; наблюдают 353,1794.

Пример 24. N-(3-(Пиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (88)

трет-Бутил-4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (85).

Раствор 5-нитроиндола (38) (2,0 г, 12,334 ммоль) в сухом этаноле (20 мл) обрабатывают пирролидином (3,08 мл, 37,002 ммоль) и затем N-Boc-4-пиперидоном (4,91 г, 24,668 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 3 суток. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, выпаривают растворитель, сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией (этилацетат:гексан, 1:3) и получают соединение 85 (4,2 г, выход количественный) в виде твердого вещества, т.пл. 210-212 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,36-1,43 (м, 11Н), 3,57 (т, 2Н, J=5,7 Гц), 4,08 (с, 2Н), 6,20 (с, 1Н), 7,56 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,71 (с, 1Н), 8,02 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,71 (д, 1Н, J=2,1, Гц), 11,93 (С, 1Н); ESI-MS m/z (%): 366 (M,Na ⁺ , 100), 288 (52).

трет-Бутил-4-(5-амино-1Н-индол-3-ил)пиперидин-1-карбоксилат (86).

Раствор соединения 85 (0,5 г, 1,456 ммоль) в 2М растворе NH ₃ в метаноле (15 мл) обрабатывают Pd-C (0,05 г) и продувают газом водородом. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение ночи. Раствор фильтруют через слой целита, который промывают смесью метанол:CH ₂ Cl ₂ (1:1, 2 ×20 мл). Объединенный органический слой выпаривают и получают соединение 86 (0,46 г, выход количественный) в виде твердого вещества, т.пл. 205-207 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,41-1,53 (м, 11Н), 1,87-1,91 (м, 2Н), 2,73-2,85 (м, 3H), 4,03-4,07 (м, 2Н), 4,43 (с, 2Н), 6,45 (дд, 1Н, J=1,8, 8,4 Гц), 6,69 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 6,90 (д, 1Н, J=2,4 Гц), 7,01 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 10,28 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 338 (M,Na ⁺ , 23), 316 (МН ⁺ , 11), 216 (100).

трет-Бутил-4-(5-(тиофен-2-карбоксимидамидо)-1Н-индол-3-ил)пиперидин-1-карбоксилат (87).

Раствор соединения 86 (0,454 г, 1,426 ммоль) в сухом этаноле (25 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,81 г, 2,853 ммоль) при комнатной температуре, и полученный раствор перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают и сырое вещество разбавляют смесью насыщ. раствора NaHCO ₃ (25 мл) и CH ₂ Cl ₂ (50 мл). Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный органический слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 3:97) и получают соединение 87 (0,6 г, выход количественный) в виде пены.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,40-1,56 (м, 11Н), 1,90-1,94 (м, 2Н), 2,86-2,94 (м, 3H), 4,02-4,06 (м, 2Н), 6,26 (с, 1Н), 6,64 (дд, 1Н, J=1,2, 8,4 Гц), 6,99 (с, 1Н), 7,05 (д, 1Н, J=1,8 Гц), 7,09 (дд, 1Н, J=3,6, 4,9 Гц), 7,27 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,59 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 10,63 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 425 (MH ⁺ , 100).

Соль дигидрохлорид N-(3-(пиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (88).

Раствор соединения 87 (0,3 г, 0,441 ммоль) обрабатывают 1 н раствором HCl (20 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют и промывают водой (5 мл). Водный слой упаривают и сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 88 (0,29 г, 72%) в виде твердого вещества. Разлагается при 230 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,90-2,10 (м, 4Н), 3,00-3,13 (м, 3H), 3,31-3,35 (м, 2Н), 7,11 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,28 (д, 1Н, J=1,8 Гц), 7,39 (т, 1Н, J=4,5 Гц), 7,53 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,77 (с, 1Н), 8,16-8,20 (м, 2Н), 8,58 (с, 1Н), 9,18 (ушир.с, 2Н), 9,68 (с, 1Н), 11,29 (с, 1Н), 11,49 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 325 (МН ⁺ , свободное основание, 100), 242 (34), 163 (70); МСВР, вычислено для C ₁₈ H ₂₁ N ₄ S (MH ⁺ ). Вычислено 325,1494; найдено 325,1481.

Пример 25. N-(3-(8-Метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ен-3-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (90)

3-(8-Метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ен-3-ил)-5-нитро-1Н-индол (89).

Раствор 5-нитроиндола (38) (0,5 г, 3,083 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (10 мл) обрабатывают тропиноном (0,85 г, 6,617 ммоль), а затем 2М H ₃ PO ₄ в ледяной уксусной кислоте (5 мл) при 100 °С и полученный раствор перемешивают при той же температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, выливают в охлажденный льдом 10% раствор NH ₄ OH (50 мл) и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 89 (0,27 г, 31%) в виде твердого вещества, т.пл. 234-236 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,51-1,60 (м, 1Н), 1,79-1,86 (м, 1Н), 1,95-2,14 (м, 4Н), 2,32 (с, 3H), 2,76-2,83 (м, 1Н), 3,43 (т, 1Н, J=5,4 Гц), 6,31 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,54 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,61 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=2,1/ 9,0 Гц), 8,68 (д, 1Н, J=2,4 Гц), 11,86 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 284 (МН ⁺ , 100).

N-(3-(8-Метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ен-3-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (90).

Раствор соединения 89 (0,25 г, 0,882 ммоль) в сухом этаноле (10 мл) обрабатывают Pd-C (0,02 5 г) и продувают газом - водородом. Реакционную смесь перемешивают в атм. водорода (давление в баллоне) в течение ночи (14 ч). Твердое вещество офильтровывают через слой целита, который промывают этанолом (2 ×5 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,5 г, 1,7 64 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 24 ч. Этанол выпаривают, сырое вещество подщелачивают насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл) и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 90 (0,14 г, 44%) в виде твердого вещества, т.пл. 93-95 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,60-1,65 (м, 1Н), 1,84-1,90 (м, 1Н), 2,02-2,26 (м, 4Н), 2,41 (с, 3H), 2,83-2,89 (м, 1Н), 3,46-3,55 (м, 1Н), 6,20 (ушир.с, 2Н), 6,67 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 7,10 (с, 1Н), 7,23-7,31 (м, 3H), 7,60-7,72 (м, 2Н), 10,99 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 363 (МН ⁺ , 65), 182 (100), 119 (48); ESI-MCBP, вычислено для C ₂₁ H ₂₃ N ₄ S (MH ⁺ ). Вычислено 363,1633; наблюдают 363,1637.

Пример 26. (R)-N-(3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (97)

5-(2,5-Диметил-1Н-пиррол-1-ил)-1Н-индол (92).

(Macor et al., J. Org. chem., 1994, 59(24), 7496). В 250-мл продутую аргоном круглодонную колбу, содержащую стержень для магнитной мешалки и раствор 5-аминоиндола (91) (15,00 г, 113 ммоль) в безводном толуоле (50 мл), добавляют ацетонилацетон (25,4 мл, 216 ммоль, 1,9 экв.). Колбу снабжают ловушкой Дина-Старка с резервуаром емкостью 10 мл, наполненным толуолом. Самую верхнюю часть колбы и конденсирующий отвод ловушки обертывают фольгой и реакционный сосуд помещают на масляную баню, предварительно нагретую до температуры 125 °С. Темно-коричневый раствор перемешивают в непрерывном токе аргона при указанной температуре в течение 45 мин и затем выпускают растворитель из резервуара ловушки. Через 4 ч в общей сложности ТСХ (5% этилацетата, 95% гексана) показывает, что реакция завершилась. Реакционную смесь постепенно в течение ночи охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь выливают на слой селикагеля и пропускают через него растворитель фильтрацией под вакуумом. Диоксид кремния промывают гексаном (200 мл). В фильтрате почти сразу же начинает образовываться белое выпадающее в осадок вещество. Диоксид кремния снова промывают раствором 6% диэтилового эфира и 94% гексана (800 мл). Собирают кристаллическое вещество при обеих промывках и объединяют фильтраты. Слой промывают эфиром (150 мл) и фильтрат объединяют с промывными жидкостями. Объединенные фильтраты концентрируют и получают коричневое масло. Масло очищают на Biotage SP-1 (0-8% эфира в гексане). ТСХ показывает, что все продукты идентичны (белые твердые вещества) и продукты объединяют. Выход - 17,10 г белого твердого вещества, соединение 92 (72%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,26 (ушир.с, NH), 7,48-7,48 (д, 1Н, J=1,2 Гц), 7,46-7,43 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,31-7,29 (т, 1Н, J=2,7), 7,04-7,00 (дд, 1Н, J=2,1, 8,4), 6,61 (с, 1Н), 5,92 (с, 2Н), 2,05 (с, 6Н), MS-ESI m/z (%): 211 (М ⁺ , 100).

(R)-Бензил-2-(2,5-диметил-1Н-пиррол-1-ил)-1Н-индол-3-карбонил)пирролидин-1-карбоксилат (94)

(Macor et al., J. Org. chem., 1994, 59(24), 7496)

(a) Получение (R)-бензил-2-(хлоркарбонил)пирролидин-1-карбоксилата (93).

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, содержащую N-(бензилоксикарбонил)-D-пролин (10,00 г, 40,1 ммоль), добавляют безводный дихлорметан (120 мл). Прозрачную реакционную смесь обрабатывают ДМФА (0,5 мл). Добавляют постепенно оксалилхлорид (5,25 мл, 60,2 ммоль), что приводит к бурному выделению газа. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и сушат в течение ночи в высоком вакууме, и получают масло. Вещество используют как оно есть на следующей стадии.

(b) В продуваемую аргоном 500-мл круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки и содержащую 92 (16,86 г, 80,2 ммоль), добавляют безводный бензол (100 мл). Раствор помещают на ледяную баню и перемешивают в течение 10 мин. Добавляют 3 н раствор этилмагнийбромида в диэтиловом эфире (28 мл, 84 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин, получая в результате темно-желтый раствор. Постепенно через канюлю в течение 5 мин добавляют раствор 93 в бензоле (50 мл). Реакционную смесь перемешивают на ледяной бане в течение 2 ч, причем смесь приобретает темно-красный цвет. Реакционную смесь переносят в делительную воронку и обрабатывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл) и этилацетатом (50 мл). Водный слой становится молочным и прозрачным. Добавление еще раствора бикарбоната натрия (30 мл) не вызывает растворения выпавшего в осадок вещества, однако граница между фазами становится более явной. Водный слой удаляют и органический слой сливают в виде желтого раствора декантацией. Водный слой фильтруют для удаления твердого вещества и полученный бесцветный раствор еще дважды обрабатывают этилацетатом (2 ×30 мл). Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют, и получают желтое масло. Масло обрабатывают эфиром (100 мл). После перемешивания в течение 15 мин образуется не совсем белое твердое вещество. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч. Образовавшееся выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией под вакуумом и сушат в высоком вакууме. Вещество очищают фильтрацией через слой силикагеля с использованием в качестве элюента этилацетата. Выход - 9,5 г белого твердого вещества, соединение 94 (из осадка).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 9,54, 9,20 (2с, 1Н), 8,29-8,28 и 8,15-8,15 (2д, 1Н, J=1,2 Гц), 7,81-7,80 и 7,76-7,75 (2д, 1Н, J=2,7 Гц), 7,42-7,30 (м, 4Н), 7,13-6,93 (м, 3H), 5,90 (ушир.с, 2Н), 5,25-4,97 (м, 3H), 3,80-3,58 (м, 2Н), 2,41-2,20 (м, 1Н), 2,16-1,88 (м, 2Н), 2,04-1,99 (д, 8Н), 1,64 (м, 1Н), MS-ESI m/z (%) 442 (М ⁺ , 100).

(R)-5-(2,5-Диметил-1Н-пиррол-1-ил)-3-((1-метилпирролидин-2-ил) метил)-1H-индол (95)

(Macor et al., J. Org. chera., 1994, 59 (24), 7496).

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, содержащую стержень для магнитной мешалки и раствор алюмогидрида лития (1,93 г, 50,9 ммоль) в безводном ТГФ (20 мл), добавляют раствор 94 (5,00 г, 11,3 ммоль) в безводном ТГФ (30 мл). Колбу снабжают обратным холодильником и помещают на масляную баню. Реакционную смесь нагревают до 75 °С и перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 4,5 ч. Реакцию проверяют на завершение ТСХ (10% 2М NH ₃ в метаноле, 90% CH ₂ Cl ₂ ) и смесь постепенно охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь охлаждают дополнительно, помещая колбу на ледяную баню, и затем добавляют по частям твердый декагидрат сульфата натрия (20 г). Реакционную смесь разбавляют холодной водой (50 мл), затем этилацетатом (50 мл), и смесь перемешивают в атмосфере аргона в течение 17 ч. Реакционную смесь переносят в делительную воронку. Оставшееся в колбе твердое вещество промывают как водой, так и этилацетатом и промывные жидкости переносят в воронку. Водный слой еще дважды экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом натрия и концентрируют после декантации, и получают желтое масло. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (10% 2М NH ₃ в метаноле, 90% CH ₂ Cl ₂ ) и получают нужный продукт, а также некоторое количество извлеченного исходного вещества. Выход - 1,827 г белого твердого вещества, соединение 95 (52,5%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,26 (ушир.с, 1Н), 7,45-7,44 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 7,41-7,38 (д, 1Н, 8,7 Гц), 7,13-7,12 (д, 1Н, J=2, 1 Гц), 7,02-6,99 (дд, 1Н, J=1,8, 8,1 Гц), 5,92 (ушир.с, 2Н), 3,49 (с, 1Н), 3,20-3,12 (м, 2Н), 2,68-2,61 (кв., 1Н, J=9,3, 14,1 Гц), 2,52-2,40 (м, 1Н), 2,44 (с, 3H), 2,28-2,19 (кв., 1Н, J=9, 17,1 Гц), 2,05 (ушир.с, 6Н), 1,89-1,56 (м, 4Н), MS-ESI m/z (%): 308 (М ⁺ , 100).

(R)-3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-амин (96) (Macor et al., J. Org. chem., 1994, 59(24), 7496).

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки и содержащую желтый раствор 95 (1,80 г, 5,85 ммоль) в безводном 2-пропаноле (50 мл) и воде (15 мл), добавляют в один прием твердый гидрохлорид гидроксиламина (8,14 г, 117,1 ммоль). Добавляют через шприц триэтиламин (8,15 мл, 58,5 ммоль) и колбу снабжают обратным холодильником. Сосуд помещают на масляную баню и нагревают до температуры образования флегмы. Реакционную смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение 5 ч. ТСХ (10% 2М NH ₃ в метаноле, 90% CH ₂ Cl ₂ ) показывает, что все еще присутствует некоторое количество исходного вещества. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь снова кипятят с обратным холодильником еще в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и постепенно добавляют гранулы гидроксида натрия (2,34 г, 58,5 ммоль). Реакционную смесь энергично перемешивают в течение 17,5 ч, и органический раствор становится желтым с образованием выпадающего в осадок белого вещества. Реакционную смесь фильтруют через целит, затем целит промывают 2-пропанолом (40 мл) и фильтрат концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией (10% 2М NH ₃ в метаноле, 90% CH ₂ Cl ₂ ) с использованием слоя силикагеля приблизительно 10 см в диаметре и высотой 15 см получают оранжевое масло. Полученный продукт обрабатывают рассолом (5 мл) и этилацетатом (20 мл). Органический слой перед декантацией сушат над безводным сульфатом натрия. Концентрирование дает оранжевое масло соединение 96 (815 мг, 60%).

Дигидрохлорид (R)-N-(3-((1-метиллирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (97).

В продуваемую аргоном круглодонную колбу загружают 96 (350 мг, 1,53 ммоль) и гидроиодид метилтиофен-2-карбимидотиоата (870 мг, 3,05 ммоль), а затем абсолютный этанол (10 мл). Реакционную смесь перемешивают с использованием стрежня для магнитной мешалки в течение 18 ч при комнатной температуре. ТСХ (10% 2М раствора амииака в метаноле/90% дихлорметана) показывает, что весь исходный амин прореагировал. Реакционную смесь обрабатывают эфиром (70 мл) и обрадовавшееся выпавшее в осадок желтое вещество собирают фильтрацией под вакуумом и промывают эфиром. Осадок промывают на фильтре с использованием 1 н раствора гидроксида натрия (10 мл) и затем этилацетата (20 мл). Полученный фильтрат переносят в делительную воронку и после встряхивания водную фазу удаляют. Органические фракции собирают, а водную еще дважды промывают этилацетатом (2 ×10 мл). Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают желтое масло. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле/90-95% дихлорметана) и получают желтое масло. Очищенный продукт растворяют в безводном дихлорметане (5 мл) и обрабатывают 1М раствором хлороводорода в эфире (5 мл). После перемешивания в течение 30 минут выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией под вакуумом. Осадок промывают эфиром, сушат с отсосом и затем сушат в высоком вакууме, и получают соединение 97 (470 мг желтого твердого вещества, 74,7%).

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 10,587 (с, 1Н), 7,71-7,70 (д, J=3 Гц, 1Н), 7,59-7,58 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 7,28-7,25 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 7,11-7,10 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 7,07-7,06 (д, J=1,5 Гц, 1Н), 6,93 (с, 1Н), 6,64-6,62 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 6,21 (ушир.с, 2Н), 3,18-3,16 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 3,03-2,94 (м, 2Н), 2,44-2,33 (м, 4Н), 2,14-2,05 (м, 1Н), 1,71-1,30 (м, 4Н), ESI-MS m/z (%): 339 (М+1, 100).

Пример 27. N-(3-(4-(Метиламино)циклогекс-1-енил)-1H-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (100)

трет-Бутилметил(4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енил)карбамат (81).

Подробности синтеза см. в примере 23.

трет-Бутил-4-(5-амино-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енил(метил)карбамат (98).

Раствор соединения 81 (0,5 г, 1,346 ммоль) в сухом метаноле (20 мл) обрабатывают гидразингидратом (0,41 мл, 13,461 ммоль), а затем Ni Ренея (0,1 г) и полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют через слой целита и промывают его смесью CH ₂ Cl ₂ :метанол (1:1, 3 ×20 мл). Объединенный органический слой упаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (EtOAc:гексан, 1:1) и получают соединение 98 (0,43 г, 94%) в виде пены.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,38-1,41 (м, 11Н), 1,76-1,86 (м, 2Н), 2,14-2,42 (м, 2Н), 2,73 (с, 3H), 4,05-4,15 (м, 1Н), 4,49 (с, 2Н), 6,00 (ушир.с, 1Н), 6,48 (дд, 1Н, J=1,8, 8,2 Гц), 6,99 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 7,05 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,16 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 10,60 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 364 (M+Na ⁺ , 7), 342 (МН ⁺ , 11), 286 (100).

трет-Бутилметил(4-(5-(тиофен-2-карбоксимидоамидо)-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енил)карбамат (99).

Раствор соединения 98 (0,415 г, 1,215 ммоль) в сухом этаноле (20 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,693 г, 2,430 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают и сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (25 мл) и CH ₂ Cl ₂ (50 мл). Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный органический слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 99 (0,37 г, 68%) в виде пены.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 0,85 (т, 1Н, J=7,2 Гц), 1,20-1,26 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,77-1,87 (м, 2Н), 2,22-2,40 (м, 2Н), 2,72 (с, 3H), 4,06-4,16 (м, 1Н), 6,06 (с, 1Н), 6,28 (ушир.с, 1Н), 6,66 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,10 (т, 1Н, J=4,2 Гц), 7,22 (с, 1Н), 7,25-7,32 (м, 2Н), 7,60 (д, 1Н, J=4,8 Гц), 7,72 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 10,94 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 451 (МН ⁺ , 100).

N-(3-(4-(Метиламино)циклогекс-1-енил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (100).

Раствор соединения 99 (0,35 г, 0,776 ммоль) обрабатывают 20% ТФК в CH ₂ Cl ₂ (20 мл) при 0 °С. Продолжают перемешивание в течение 1 ч при той же температуре. Растворитель выпаривают, сырое вещество разбавляют 10% водн. NH ₃ (15 мл) и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (3 ×20 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (10 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 100 (0,2 г, 74%) в виде твердого вещества, т.пл. 167-169 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,39-1,47 (м, 2Н), 1,88-1,96 (м, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,40-2,46 (м, 1Н), 2,57-2,61 (м, 1Н), 6,01 (с, 1Н), 6,19 (ушир.с, 2Н), 6,65 (дд, 1Н, J=1,5, 8,2 Гц), 7,09 (дд, 1Н, J=4,2, 4,9 Гц), 7,20 (с, 1Н), 7,28-7,31 (м, 2Н), 7,59 (д, 1Н, J=4,2 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 10,87 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 351 (МН ⁺ , 66), 320 (54), 160 (63), 119 (100); ESI-МСВР, вычислено для C ₂₀ H ₂₃ N ₄ S (МН ⁺ ). Вычислено 351,1654; наблюдают 351,1637.

Пример 28. (S)-N-(3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (105)

a) 5-(2,5-Диметил-1Н-пиррол-1ил)-1H-индол (92).

Подробности эксперимента см. в примере 26.

b) (S)-Бензил-2-(5-(2,5-диметил-1Н-пиррол-1ил)-1Н-индол-3-карбонил)пирролидин-1-карбоксилат (102). (Macor et al., J. Org. chem., 1994, 59(24), 7496).

Способом, подобным синтезу 94, пример 26, соединение 102 выделяют в виде не совсем белой пены (4,35 г, 49%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 9,46, 9,12 (2c, 1H), 8,28-8,28 и 8,16-8,16 (2д, 1Н, J=1,2 Гц), 7,86-7,85 и 7,78-7,77 (2д, 1Н, J=2,7 Гц), 7,44-7,34 (м, 4Н), 7,14-6,96 (м, 3H), 5,90 (ушир.с, 2Н), 5,25-4,97 (м, 3H), 3,80-3,58 (м, 2Н), 2,41-2,20 (м, 1Н), 2,16-1,88 (м, 2Н), 2,04-1,99 (д, 8Н), 1,64 (м, 1Н), MS-ESI m/z (%): 442 (М ⁺ , 100).

(S)-5-(2,5-Диметил-1Н-пиррол-1ил)-3-((1-метилпирролидин-2-ил)метил)-1H-индол (103). (Macor et al., J. Org. chem., 1994, 59(24), 7496).

Способом, подобным синтезу 95, пример 26, соединение 103 выделяют в виде белой пены, 1,26 г (44%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,11 (ушир.с, 1Н), 7,45-7,44 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 7,41-7,38 (д, 1Н, 8,7 Гц), 7,12-7,11 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 7,03-6,99 (дд, 1Н, J=1,8, 8,1 Гц), 5,92 (ушир.с, 2Н), 3,18-3,09 (м, 2Н), 2,65-2,57 (кв., 1Н, J=9,3, 14,1 Гц), 2,42 (с, 4Н), 2,28-2,19 (кв., 1Н, J=9, 17,1 Гц), 2,05 (с, 6Н), 1,89-1,56 (м, 4Н).

(S)-3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-амин (104).

Способом, подобным синтезу 96, пример 26, соединение 104 выделяют в виде коричневого масла, 149 мг (86%). ¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) согласуется с приведенным ранее в литературе (Macor et al., J. Org. chem., 1994, 59(24), 7496).

(S)-N-(3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (105).

Способом, подобным синтезу 97, пример 26, обработка 105 гидроиодидом метилтиофен-2-карбимидотиоата в этаноле дает после очистки конечный продукт в виде оранжевого твердого вещества (62 мг, 77%).

¹ Н ЯМР (HCl соль) (ДМСО-d ₆ ) (11,45 (д, J=19,8 Гц, 1Н), 10,89 (м, 1Н), 9,69 (ушир.с, 1Н), 8,63 (ушир.с, 1Н), 8,19-8,17 (д, J=4,2 Гц, 2Н), 7,72-7,69 (м, 1Н), 7,56-7,53 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 7,48-7,47 (д, J=1,5 Гц, 1Н), 7,41-7,38 (т, J=4,5 Гц, 1Н), 7,17-7,14 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 3,58 (м, 2Н), 3,43-3,37 (м, 1Н), 3,17 (с, 1Н), 3,11-2,99 (м, 2Н), 2,81-2,80 (д, J=4,8 Гц, 3H), 2,10-1,70 (м, 5Н), 1,28-1,23 (м, 3H), 0,90-0,85 (м, 2Н), ESI-MS: МН ⁺ = 339 (100).

Пример 29. Получение (R)-N-(3-((1-метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамида (106)

(R)-3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-амин (96).

Подробности эксперимента см. в примере 26.

(R)-N-(3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (106).

Способом, подобным синтезу 97, пример 26, с использованием гидробромида бензилфуран-2-карбимидотиоата получают названное в заголовке соединение 106 (коричневое твердое вещество, 86 мг, выход 51,8%).

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 10,68 (с, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 7,31-7,28 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 7,28 (с, 1Н), 7,11 (с, 1Н), 7,07-7,06 (д, J=2,7 Гц, 1Н), 6,74-6,71 (д, J=6,9 Гц, 1Н), 6,65 (с, 1Н), 3,18-3,16 (д, J=4,5 Гц, 1Н).

Пример 30. Дигидрохлорид (S)-N-(3-((1-метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамида (107)

(S)-3-((1-Метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-амин (104).

Подробности эксперимента см. в примере 28.

Дигидрохлорид (S)-N-(3-((1-метилпирролидин-2-ил)метил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамида (107).

Способом, подобным синтезу соединения 105, пример 28, с использованием гидробромида бензилфуран-2-карбимидотиоата получают названное в заголовке соединение 107 в виде оранжевого твердого вещества (63 мг, 25%).

¹ Н ЯМР (di-HCl соль) (ДМСО-d ₆ ) δ: 11,60 (с, 1Н), 11,41-11,40 (д, J=1,2 Гц, 1Н), 11,09 (ушир.с, 1Н), 9,71 (ушир.с, 1Н), 8,66 (ушир.с, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,99-7,97 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,70 (с, 1Н), 7,55-7,52 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,48-7,47 (д, J=1,8 Гц, 1Н), 7,13-7,10 (дд, J=1,8, 9 Гц, 1Н), 6,94-6,92 (дд, J=1,2, 3,6 Гц, 1Н), 3,74 (м, 3H), 3,61-3,54 (м, 3H), 3,17 (с, 1Н), 3,43-3,37 (дд, J=4,8, 13,8 Гц, 1Н), 3,17 (с, 2Н), 3,12-2,98 (м, 2Н), 2,80-2,79 (д, J=4,5 Гц, 3H), 2,10-1,70 (м, 5Н), 1,28-1,23 (м, 3H), 0,90-0,85 (м, 2Н).

Пример 31. N-(3-(1-Метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (110) и N-(3-(1-метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (111)

а) N-Бензил-3-(1-метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-амин (108). Macor J.E. et al., J. Med. Chem., 37, 2509-2512 (1994).

(b) N-Бензил-3-(1-метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-амин (110).

N-Бензил-3-(1-метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-амин 108 (500 мг, 1,637 ммоль) растворяют в безводном этаноле (10 мл) в колбе, продуваемой сухим аргоном. Быстро добавляют влажный гидроксид палладия, 20 мас.% на угле (560 мг, 0,796 ммоль), атмосферу в колбе откачивают вакуумным насосом и заменяют на водород из баллона. Атмосферу откачивают из колбы и заменяют водородом еще дважды, и смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре. Через 48 ч тонкослойная хроматорафия в системе растворителей (10% 2М NH ₃ в метаноле/90% CH ₂ Cl ₂ ) показывает приблизительно 80-85% конверсию в 109 3-(1-метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-амин. Смесь фильтруют через слой целита для удаления нерастворимых веществ, слой промывают безводным этанолом (10 мл), растворитель выпаривают и соединение недолго сушат с вакуумным насосом. Сырой амин растворяют в безводном этаноле (20 мл) и раствор делят на две части. Половину этанольного раствора 109 (10 мл) загружают в небольшую колбу, продуваемую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (350 мг, 1,227 ммоль), реакционную смесь перемешивают в атмосфере Ar при температуре окружающей среды в течение 96 ч, после чего растворитель выпаривают, и остаток обрабатывают H ₂ O и этилацетатом, и добавляют 1М раствор гидроксида натрия для доведения рН до 9. Смесь переносят в делительную воронку и органический слой собирают. Водный слой дополнительно экстрагируют этилацетатом, объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют, остаток очищают хроматографией на силикагеле (от 5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана до 15% 2М NH ₃ в метаноле/85% дихлорметана) и получают бледно-желтое твердое вещество 110 (96 мг, выход 36,2%).

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 10,59 (ушир.с, 1Н), 7,71 (д, 1Н, J=3,2), 7,59 (д, 1Н, J=5,1), 7,27 (д, 1Н, J =8,5), 7,14-7,05 (2 ×м, 2Н), 7,02 (с, 1Н), 6,64 (дд, 1Н, J=8,3, 1,5), 6,27 (ушир.с, 2Н), 3,56-3,45 (м, 1Н), 2,93 (т, 1Н, J=8,4), 2,72-2,65 (м, 1Н), 2,58-2,50 (м, 2Н), 2,31 (с, 3H), 2,28-2,15 (м, 1Н), 1,98-1,86 (м, 1Н); MS (ESI+): 325 (М+1, 100%). ESI-MCBP, вычислено для C ₁₈ H ₂₁ N ₄ S (MH ⁺ ). Вычислено 325,1488; наблюдают 325,1481.

с) N-(3-(1-Метилпирролидин-3-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (111).

Оставшуюся половину этанольного раствора 109 (10 мл, см. выше) загружают в небольшую колбу, продуваемую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидробромид бензилфуран-2-карбоксимидотиоата (366 мг, 1,227 ммоль), реакционную смесь перемешивают в атмосфере Ar при температуре окружающей среды в течение 24 ч, после чего растворитель выпаривают и остаток обрабатывают H ₂ O и этилацетатом, и добавляют 1М раствор гидроксида натрия для доведения рН до 9. Смесь переносят в делительную воронку и органический слой собирают. Водный слой дополнительно экстрагируют этилацетатом, объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют, остаток очищают хроматографией на силикагеле (от 5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана до 20% 2М NH ₃ в метаноле/80% дихлорметана) и получают бледно-желтую пену 111 (170 мг, выход 67,4%).

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 10,61 (ушир.с, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,27 (д, 1Н, J=8,5), 7,17-7,04 (2 ×м, 3H), 6,68 (д, 1Н, J=8,2), 6,62 (с, 1Н), 6,40 (ушир.с, 1Н), 3,55-3,44 (м, 1H), 2,94 (т, 1Н, J=8,3), 2,74-2,66 (м, 1Н), 2,59-2,50 (м, 2Н), 2,31 (с, 3H), 2,28-2,16 (м, 1Н), 1,97-1,86 (м, 1Н); MS(ESI+): 309 (М+1, 100%). ESI-MCBP, вычислено для C ₁₈ H ₂₁ N ₄ O (MH ⁺ ) 309,1717; наблюдают 309,1709.

Пример 32. N-(3-(4-(Диметиламино)циклогекс-1-енил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (114)

5-Нитро-3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)-1Н-индол (78).

Раствор 5-нитроиндола (38) (3,0 г, 18,501 ммоль) в сухом метаноле (50 мл) обрабатывают КОН (5,6 г) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 10 мин добавляют моноэтиленкеталь 1,4-циклогександиона (7,22 г, 46,253 ммоль) и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 36 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и растворитель выпаривают. Сырое вещество разбавляют водой (50 мл) и выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают и промывают водой (2 ×10 мл). Осадок сушат в вакууме и получают соединение 78 (4,7 г, 85%) в виде твердого вещества. Спектральные данные см., пожалуйста, в примере 23.

4-(5-Нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енон (79).

Раствор соединения 78 (4,7 г, 15,650 ммоль) в ацетоне (50 мл) обрабатывают 10% соляной кислотой (50 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение ночи. Ацетон выпаривают и сырое вещество подщелачивают с использованием 10% водн. раствора NH ₄ OH (100 мл). Выпавшее в осадок вещество промывают 10% раствором NH ₄ OH (2 ×10 мл) и водой (2 ×10 мл). Продукт сушат в вакууме и получают соединение 79 (4,0 г, выход количественный) в виде твердого вещества. Спектральные данные см., пожалуйста, в примере 23.

N,N-Диметил-4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енамин (112).

Раствор соединения 79 (1,0 г, 3,902 ммоль) в сухом 1,2-дихлорэтане (10 мл) обрабатывают гидрохлоридом N,N-диметиламина (0,31 г, 3,902 ммоль), АсОН (0,22 мл, 3,902 ммоль) и NaBH(OAC) ₃ (1,24 г, 5,853 ммоль) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивают в течение ночи (14 ч). Реакционную смесь разбавляют 1 н раствором NaOH (30 мл), и продукт реакции экстрагируют в этилацетат (2 ×50 мл). Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 112 (0,73 г, 66%) в виде коричневого твердого вещества, т.пл. 234-236 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,43-1,57 (м, 1Н), 1,98-2,06 (м, 1Н), 2,12-2,23 (м, 7Н), 2,39-2,62 (м, 4Н), 6,15 (т, 1Н, J=1,5 Гц), 7,54 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,62 (с, 1Н), 8,00 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,67 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,82 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 286 (МН ⁺ , 100).

3-(4-(Диметиламино)циклогекс-1-енил)-1Н-индол-5-амин (113).

Раствор соединения 112 (0,21 г, 0,735 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают Ra-Ni (0,05 г) и затем гидразингидратом (0,22 мл, 7,359 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь помещают на предварительно нагретую масляную баню и кипятят с обратным холодильником в течение 5 мин. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют через слой целита, который промывают метанолом (2 ×10 мл). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 113 (0,185 г, выход количественный) в виде пены, т.пл. 63-65 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,40-1,52 (м, 1Н), 1,97-2,02 (м, 1Н), 2,08-2,57 (м, 11Н), 4,47 (с, 2Н), 5,99 (ушир.с, 1Н), 6,47 (дд, 1Н, J=1,8, 8,4 Гц), 6,99 (д, 1Н, J=0,9 Гц), 7,04 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,13 (д, 1Н, J=2,4 Гц), 10,55 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 256 (MH ⁺ , 100), 211 (41).

N-(3-(4-(Диметиламино)циклогекс-1-енил)-1H-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (114).

Раствор соединения 113 (0,18 г, 0,704 ммоль) в сухом этаноле (10 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,4 г, 1,409 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают и сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл), и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 1:9), и получают соединение 114 (0,24 г, 90%) в виде твердого вещества, т.пл. 113-115 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,42-1,53 (м, 1Н), 1,97-2,02 (м, 1Н), 2,08-2,22 (м, 8Н), 2,31-2,60 (м, 3H), 6,03 (с, 1Н), 6,21 (ушир.с, 2Н), 6,65 (дд, 1Н, J=1,2, 8,4 Гц), 7,09 (т, 1Н, J=4,2 Гц), 7,20 (с, 1Н), 7,28-7,31 (м, 2Н), 7,58 (д, 1Н, J=4,5 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 10,88 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 365 (МН ⁺ , 39), 320 (38), 183 (76), 160 (100); ESI-MCBP, вычислено для C ₂₁ H ₂₅ N ₄ S (MH ⁺ ) 365,1813; наблюдают 365,1794.

Пример 33. N-(3-(4-(Диметиламино)циклогексил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (116)

N,N-Диметил-4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енамин (112).

Полные подробности эксперимента и спектральные данные см. в примере 32.

N-(3-(4-(Диметиламино)циклогексил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (116). Раствор соединения 112 (0,43 г, 1,506 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают 10% Pd-C (0,04 г) и продувают газом водородом при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивают при той же температуре в атмосфере водорода (давление в баллоне) в течение ночи (14 ч). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают сухим этанолом (2 ×5 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,85 г, 3,013 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают, сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл) и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 1:9), и получают соединение 116 (0,4 г, 72%, в двух стадиях) в виде желтого твердого вещества, т.пл. 104-106 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,39-1,60 (м, 3H), 1,66-1,72 (м, 1Н), 1,82-1,94 (м, 3H), 2,05-2,08 (м, 1Н), 2,23 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,64-2,71 (м, 1Н), 2,91-2,96 (м, 1Н), 6,48 (ушир.с, 1Н), 6,64 (дд, 1Н, J=1,5, 8,4 Гц), 6,99-7,05 (м, 2Н), 7,10 (т, 1Н, J=4,2 Гц), 7,27 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,60 (д, 1Н, J=5,4 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 10,57 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 367 (МН ⁺ , 31), 322 (18), 184 (100); ESI-MCBP, вычислено для C ₂₁ H ₂₇ N ₄ S (MH ⁺ ). Вычислено 367,1965; наблюдают 367,1950.

Пример 34. N-(3-(4-(Этиламино)циклогексил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (121)

4-(5-Нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енон (79).

Полные подробности эксперимента и спектральные данные см. в примере 23.

N-Этил-4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енамин (117). Раствор соединения 79 (1/0 г, 3,902 ммоль) в сухом 1,2-дихлорметане (10 мл) обрабатывают гидрохлоридом этиламина (0,31 г, 3,902 ммоль), ледяной уксусной кислотой (0,22 мл, 3,902 ммоль) и NaBH (OAc) ₃ (1,24 г, 5,853 ммоль) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивают в течение ночи (14 ч). Реакционную смесь разбавляют 1 н раствором NaOH (30 мл) и продукт реакции экстрагируют этилацетатом (2 ×50 мл). Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:9) и получают соединение 117 (1,08 г, 97%) в виде темно-желтого твердого вещества, т.пл. 177-179 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,03 (т, 3H, J=6,9 Гц), 1,39-1,52 (м, 2Н), 1,94-2,00 (м, 2Н), 2,40-2,80 (м, 3H), 3,16 (с, 2Н), 4,07 (ушир.с, 1Н), 6,13 (с, 1Н), 7,54 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,62 (с, 1Н), 8,00 (дд, 1Н, J=2,4, 9,0 Гц), 8,67 (д, 1Н, J=2,4 Гц), 11,83 (ушир.с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 286 (МН ⁺ , 100).

трет-Бутилэтил(4-(5-нитро-1Н-индол-3-ил)циклогекс-3-енил)карбамат (118).

Раствор соединения 117 (1,05 г, 3,679 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (20 мл) обрабатывают Et ₃ N (1,02 мл, 7,359 ммоль), а затем (Вос) ₂ O (0,84 г, 3,863 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают в течение ночи (14 час). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 1:1) и получают соединение 118 (1,1 г, 78%) в виде желтого твердого вещества, т.пл. 217-219 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,09 (т, 3H, J=6,9 Гц), 1,42 (с, 9Н), 1,83-1,96 (м, 2Н), 2,27-2,43 (м, 2Н), 2,56-2,62 (м, 2Н), 3,14-3,18 (м, 2Н), 4,05 (ушир.с, 1Н), 6,16 (с, 1Н), 7,55 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,64 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=2,1, 8,7 Гц), 8,67 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,85 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 408 (M+Na, 95), 386 (МН ⁺ , 9), 330 (73), 286 (100).

трет-Бутил-4-(5-амино-1Н-индол-3-ил)циклогексил(этил)карбамат (119).

Раствор соединения 118 (0,55 г, 1,427 ммоль) в 2М растворе NH ₃ в метаноле (10 мл) обрабатывают Pd-C (0,05 г) и продувают газом - водородом. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) в атмосфере водорода (давление в баллоне). Раствор фильтруют через слой целита с использованием промывок метанолом (2 ×10 мл). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 2,5:97,5) и получают соединение 119 (0,43 г, 84%) в виде твердого вещества при соотношении диастереомеров 2:3.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 0,99, 1,07 (2т, 3H, J=7,2, 6,6 Гц), 1,37-1,51 (м, 11Н), 1,63-1,78 (м, 4Н), 2,01-2,18 (м, 2Н), 2,98-3,04 (м, 1Н), 3,11-3,17 (м, 2Н), 3,68-3,80 (м, 1Н), 4,52 (ушир.с, 2Н), 6,44-6,47 (м, 1Н), 6,66-6,70 (м, 1Н), 6,86-6,88, 6,99-7,06 (2м, 2Н), 10,23, 10,27 (2с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 380 (M+Na, 6), 358 (МН ⁺ , 5), 302 (100), 258 (54); ESI-MCBP, вычислено для C ₂₁ H ₃₂ N ₃ O ₂ (МН ⁺ ). Вычислено 358,2507; наблюдают 358,2489.

трет-Бутилэтил(4-(5-тиофен-2-карбоксимидамидо)-1Н-индол-3-ил) циклогексил) карбамат (120).

Раствор соединения 119 (0,4 г, 1,119 ммоль) в сухом этаноле (20 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,63 г, 2,239 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают, остаток разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл) и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×25 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией на силикагеле (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 120 (0,4 г, 60%) в виде желтого твердого вещества при соотношении цис-транс-диастереомеров 2:3.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 0,98-1,08 (м, 3H), 1,38-1,56 (м, 11Н), 1,68-1,85 (м, 4Н), 2,05-2,18 (м, 2Н), 3,02-3,17 (м, 3H), 3,70-3,76 (м, 1Н), 6,31 (ушир.с, 2Н), 6,62-6,67 (м, 1Н), 6,96-7,01 (м, 1Н), 7,09-7,11 (м, 1Н), 7,22-7,30 (м, 2Н), 7,60 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,70-7,72 (м, 1Н), 10,59, 10,62 (2с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 467 (МН ⁺ , 100).

N-(3-(4-(Этиламино)циклогексил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (121).

Соединение 120 (0,26 г, 0,557 ммоль) обрабатывают 1 н соляной кислотой при комнатной температуре, и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют и промывают водой (5 мл). Растворитель выпаривают, сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 121 (0,23 г, 94%) в виде твердого вещества при соотношении диастереомеров 2:3.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,22-1,29 (м, 3H), 1,53-1,62 (м, 2Н), 1,80-2,16 (м, 6Н), 2,74-3,23 (м, 4Н), 7,08 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,24-7,52 (м, 3H), 7,68-7,72 (м, 1Н), 8,14-8,18 (м, 2Н), 8,59 (с, 1Н), 8,97-9,09 (м, 2Н), 9,64 (с, 1Н), 11,20, 11,27 (2с, 1Н), 11,42 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 367 (МН ⁺ для свободного основания, 18), 322 (100), 184 (19), 119 (39); ESI-MCBP, вычислено для C ₂₁ H ₂₇ N ₄ S (MH ⁺ , свободное основание). Вычислено 367,1959; наблюдают 367,1950.

Пример 35. N-(3-(1-Азабицикло[2.2.2]окт-2-ен-3-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (125), N-(3-(хинуклидин-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (126) и N-(3-(хинуклидин-3-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (127)

(a) 3-(5-Нитро-1Н-индол-3-ил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-2-ен 1 (122). Schiemann et al., заявка на патент США US2004/012935 А1.

(b) N-(3-(1-Азабицикло[2.2.2]окт-2-ен-3-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (125) и N-(3-(хинуклидин-3-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (126).

3-(5-Нитро-1Н-индол-3-ил)-1-азабицикло[2.2.2]окт-2-ен (соединение 122, 250 мг, 0,928 ммоль) растворяют в безводном метаноле (10 мл) в колбе, продуваемой сухим аргоном. Быстро добавляют палладий, 10% на активированном угле (49,2 мг, 0,0463 ммоль) и атмосферу в колбе откачивают вакуумным насосом и заменяют на водород из баллона. Атмосферу откачивают из колбы и заменяют водородом еще дважды, и смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре. Через 17 ч тонкослойная хроматография в системе растворителей (20% 2М NH ₃ в метаноле/80% CH ₂ Cl ₂ ) показывает полное израсходование исходного вещества 122 и смесь 2 новых продуктов - соединения 2, 3-(1-азабицикло[2.2.2]окт-2-ен-3-ил)-1Н-индол-5-амина (123) и 3,3-(хинуклидин-3-ил)-1Н-индол-5-амина (124) в соотношении 60/40 по ТСХ. Смесь фильтруют через слой целита для удаления нерастворимых веществ, слой промывают безводным метанолом (10 мл) и раствор двух аминов делят на две части. Одну половину метанольного раствора 123 и 124 загружают в небольшую колбу, продутую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (172 мг, 0,603 ммоль), реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона при температуре окружающей среды в течение 24 ч, после чего растворитель выпаривают и остаток обрабатывают H ₂ O и этилацетатом, и добавляют 1М раствор гидроксида натрия для доведения рН до 9. Смесь переносят в делительную воронку и органический слой собирают. Водный слой дополнительно экстрагируют этилацетатом, объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют, остаток очищают хроматографией на силикагеле (от 10% 2М NH ₃ в метаноле/90% дихлорметана до 20% 2М NH ₃ в метаноле/80% дихлорметана) и получают 2 продукта: бледно-желтое твердое вещество 125 (50 мг, выход 31,0%);

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 11,37 (ушир.с, 1Н), 7,75 (д, 1Н, J=2,7), 7,72 (д, 1Н, J=2,5), 7,65 (д, 1Н, J=3,8), 7,40 (д, 1Н, J=8,5), 7,19 (м, 1Н), 7,15-7,12 (м, 1Н), 6,84 (с, 1Н), 6,79-6,76 (м, 1Н), 6,50 (ушир.с, 2Н), 2,97-2,81 (м, 3H), 1,99-1,86 (м, 2Н), 1,73-1,60 (м, 2Н); MS (ESI+): 349 (М+1, 40%). ESI-MCBP, вычислено для C ₂₀ H ₂₁ N ₄ S (МН ⁺ ) 349,1495, наблюдают 349,1481; и бледно-желтое твердое вещество 126 (65 мг, выход 40,1%);

¹ H ЯМР (ДМСО) δ: 10,72 (ушир.с, 1Н), 7,71 (д, 1Н, J=3,4), 7,59 (д, 1Н, J=5,2), 7,30-7,25 (2 ×м, 2Н), 7,09 (дд, 1Н, J=5,2, 3,8), 6,92 (с, 1Н), 6,65 (дд, 1Н, J=8,3, 1,5), 6,20 (ушир.с, 2Н), 3,32-3,19 (м, 2Н), 3,05-2,99 (м, 2Н), 2,95-2,90 (м, 2Н), 2,84-2,72 (м, 1Н), 1,98-1,79 (2 ×м, 2Н), 1,72-1,57 (м, 2Н), 1,37-1,26 (м, 1Н); MS(ESI+): 351 (М+1, 10%), 176 (М++ двойной заряд, 100%). ESI-MCBP, вычислено для C ₂₀ H ₂₃ N ₄ S (МН ⁺ ) 351,1651, наблюдают 351,1637.

N-(3-(Хинуклидин-3-ил)-1Н-индол-5-ил)фуран-2-карбоксимидамид (127).

Раствор, содержащий 123 и 124 (10 мл, 0,465 ммоль) в метаноле (см. выше), загружают в небольшую колбу, продуваемую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидробромид бензилфуран-2-карбоксимидотиоата (207 мг, 0,696 ммоль), реакционную смесь перемешивают в атмосфере аргона при температуре окружающей среды в течение 48 ч, после чего растворитель выпаривают, остаток обрабатывают H ₂ O и этилацетатом и добавляют 1М раствор гидроксида натрия для доведения рН до 9. Смесь переносят в делительную воронку и органический слой собирают. Водный слой дополнительно экстрагируют этилацетатом, объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют, остаток дважды очищают хроматографией на силикагеле (от 10% 2М NH ₃ в метаноле/90% дихлорметана до 30% 2М NH ₃ в метаноле/70% дихлорметана) и получают бежевое твердое вещество 127 (51 мг, выход 32,9%).

¹ H ЯМР (ДМСО) δ: 10,76 (ушир.с, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,31-7,28 (2 ×м, 2Н), 7,09 (ушир.с, 1Н), 6,99 (с, 1Н), 6,70 (д, 1Н), 6,61 (с, 1Н), 3,47-3,27 (м, 2Н), 3,09-2,95 (2 ×м, 4Н), 2,85-2,79 (м, 1Н), 1,97-1,81 (2 ×м, 2Н), 1,78-1,58 (2 ×м, 2Н), 1,44-1,33 (м, 1Н); MS (ESI+): 335 (М+1, 20%), 168 (М++ двойной заряд, 100%). ESI-MCBP, вычислено для C ₂₀ H ₂₃ N ₄ O (МН ⁺ ) 335,1866, наблюдают 335,1882.

Пример 36. N-(3-(3-Фтор-1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (134)

трет-Бутил-4-(триметилсилилокси)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (129).

Раствор соединения 128 (6,0 г, 30,112 ммоль) в сухом ДМФА (12 мл) обрабатывают триметилсилилхлоридом (4,58 мл, 36,135 ммоль) и Et ₃ N (10,07 мл, 72,271 ммоль) при комнатной температуре (осторожно, образуется пена) и полученный раствор перемешивают при 80 °С в течение 16 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и разбавляют гексаном (100 мл). Гексановый слой промывают холодным насыщенным раствором NaHCO ₃ (3 ×20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (EtOAc:гексан, 1:9) и получают соединение 129 (4,53 г, 55%) в виде жидкости со значительным содержанием исходного вещества (2,6 г).

¹ H ЯМР сравним с литературными данными (J. Med. Chem., 1999, 42, 2087-2104).

трет-Бутил-3-фтор-4-оксопиперидин-1-карбоксилат (130).

Раствор соединения 129 (4,5 г, 15,578 ммоль) в сухом ацетонитриле (175 мл) обрабатывают Selectofluor ™ (6,46 г, 18,236 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор перемешивают в течение 75 мин при той же температуре. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (500 мл), промывают некрепким рассолом (300 мл, вода:крепкий рассол 1:1), крепким рассолом (100 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (этилацетат -5% метанола в этилацетате), и получают соединение 130 (3,18 г, 85%) в виде сиропа.

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 1,50 (с, 9Н), 2,46-2,64 (м, 2Н), 3,20-3,37 (м, 2Н), 4,13-4,20 (м, 1Н), 4,44-4,48 (м, 1Н), 4,72-4,77, 4,88-4,93 (2м, 1Н).

¹ Н ЯМР сравним с литературными данными (J. Med. Chem., 1999, 42, 2087-2104).

3-(3-Фтор-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (131).

Раствор 5-нитроиндола (38) (1,0 г, 6,167 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (10 мл) при 90 °С обрабатывают соединением 130 (1,33 г, 6,167 ммоль) в ледяной АсОН (5 мл) и 1М H ₃ PO ₄ в ледяной АсОН (5 мл) и полученный раствор перемешивают при той же температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, выливают в охлажденный льдом 15% водный раствор аммиака (100 мл) и продукт реакции экстрагируют этилацетатом (2 ×50 мл). Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (25 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:99-5:95) и получают соединение 131 (0,75 г, 47%) в виде желтого твердого вещества, т.пл. 205-207 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 2,35 (ушир.с, 1Н), 2,86-3,06 (м, 1Н), 3,19-3,26 (м, 1Н), 3,35-3,58 (м, 2Н), 5,28 (д, 1Н, J=49,5 Гц), 6,53-6,56 (м, 1Н), 7,58 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,74 (с, 1Н), 8,02 (дд, 1Н, J=2,4, 9,0 Гц), 8,68 (д, 1Н, J=2,4 Гц), 11,94 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 262 (МН ⁺ , 100), 233 (50).

3-(3-Фтор-1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1H-индол (132). Раствор соединения 131 (0,2 г, 0,765 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают формальдегидом (0,07 мл, 0,918 ммоль, 37% в воде), АсОН (0,1 мл, 1,913 ммоль) и NaBH ₃ CN (0,057 г, 0,918 ммоль) при 0 °С. Полученную смесь приводят к комнатной температуре и перемешивают в течение 3 ч. Реакционную смесь подщелачивают 1 н раствором NaOH (25 мл), и продукт реакции экстрагируют этилацетатом (2 ×25 мл).

Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 1:99-1:9), и получают соединение 132 (0,2 г, 95%) в виде желтого твердого вещества, т.пл. 94-96 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО- δ ₆ ) δ: 2,32 (с, 3H), 2,48-2,63 (м, 1Н), 2,78-2,87 (м, 1Н), 3,03-3,12 (м, 1Н), 3,38-3,48 (м, 1Н), 5,45 (д, 1Н, J=48,9 Гц), 6,48-6,50 (м, 1Н), 7,58 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,75 (с, 1Н), 8,03 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,68 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,96 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 276 (МН ⁺ , 100).

3-(3-Фтор-1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-амин (133).

Раствор соединения 132 (0,175 г, 0,635 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают гидразингидратом (0,198 мл, 6,357 ммоль) и затем Ra-Ni (~0,05 г) при комнатной температуре. Реакционную смесь помещают на предварительно нагретую масляную баню и кипятят с обратным холодильником в течение 2 мин. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют через слой целита, который промывают метанолом (3 ×10 мл). Объединенный метанольный слой упаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 133 (0,07 г, 45%) в виде твердого вещества, т.пл. 176-178 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,30 (с, 3H), 2,40-2,56 (м, 1Н), 2,73-2,83 (м, 1Н), 2,99-3,08 (м, 1Н), 3,30-3,42 (м, 1Н), 4,51 (с, 2Н), 5,37 (д, 1Н, J=48,9 Гц), 6,22-6,26 (м, 1Н), 6,51 (дд, 1Н, J=1,8, 8,5 Гц), 6,97 (д, 1Н, J=1,8 Гц), 7,08 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,27 (т, 1Н, J=1,8 Гц), 10,72 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 246 (МН ⁺ , 12), 203 (100).

N-(3-(3-Фтор-1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (134).

Раствор соединения 133 (0,062 г, 0,252 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,144 г, 0,505 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 20 ч. Растворитель выпаривают, и сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл), и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 0:100-1:9) и получают соединение 134 (0,052 г, 58%) в виде твердого вещества, т.пл. 127-129 °С

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 2,29 (с, 3H), 2,42-2,57 (м, 1Н), 2,72-2,81 (м, 1Н), 3,00-3,09 (м, 1Н), 3,32-3,42 (м, 1Н), 5,41 (д, 1Н, J=49,2 Гц), 6,30-6,40 (м, 3H), 6,69 (дд, 1Н, J=1,2, 8,4 Гц), 7,10 (т, 1Н, J=3,9 Гц), 7,22 (с, 1Н), 7,34 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,42 (с, 1Н), 7,60 (д, 1Н, J=4,8 Гц), 7,73 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 11,05 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 355 (МН ⁺ , 100), 335 (21), 312 (33); ESI-МСВР, вычислено для C ₁₉ H ₂₀ FN ₄ S(MH ⁺ ) 355,1391; наблюдают 355,1387.

Пример 37. N-(3-(3-Фтор-1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (137)

3-(3-Фтор-1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)-5-нитро-1H-индол (132). Подробности эксперимента см. в примере 36.

3-(3-Фтор-1-метилпиперидин-4-ил)-5-нитро-1Н-индол (135).

Раствор соединения 132 (0,22 г, 0,799 ммоль) в ТФК (5 мл) обрабатывают триэтилсиланом (0,22 мл, 1,438 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение 4 ч. Реакционную смесь осторожно переносят в стакан, содержащий насыщ. раствор NaHCO ₃ (50 мл), и продукт реакции экстрагируют этилацетатом (2 ×20 мл). Объединенный этилацетатный слой промывают рассолом (10 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 2,5:97,5), и получают транс-диастереоизомеры (смесь энантиомеров) соединения 135 (0,102 г, 46%) в виде твердого вещества, т.пл. 105-107 °С.

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,80-1,96 (м, 2Н), 2,02-2,15 (м, 2Н), 2,29 (с, 3H), 2,78-2,81 (м, 1Н), 2,98-3,09 (м, 1Н), 3,16-3,21 (м, 1Н), 4,62 (дддд, 1Н, J=48,6, 4,8, 9,9, 9,9 Гц), 7,50-7,54 (м, 2Н), 7,98 (дд, 1Н, J=2,1, 9,0 Гц), 8,54 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,71 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 278 (МН ⁺ , 100).

3-(3-Фтор-1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-амин (136).

Раствор соединения 135 (0,09 г, 0,324 ммоль) в сухом метаноле (3 мл) обрабатывают гидразингидратом (0,1 мл, 3,245 ммоль) и затем Ra-Ni (~0,05 г) при комнатной температуре. Реакционную смесь помещают на предварительно нагретую масляную баню и кипятят с обратным холодильником в течение 5 мин. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют через слой целита, который промывают метанолом (2 ×10 мл). Объединенный метанольный слой упаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 136 (0,08 г, выход количественный) в виде полутвердого вещества.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,78-1,86 (м, 2Н), 1,95-2,07 (м, 2Н), 2,26 (с, 3H), 2,69-2,78 (м, 2Н), 3,11-3,17 (м, 1Н), 4,41 (с, 2Н), 4,68 (дддд, 1Н, J=4,5, 9,9, 9,9, 48,7 Гц), 6,45 (дд, 1Н, J=2,1, 8,5 Гц), 6,71 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 6,93-7,04 (м, 2Н), 10,36 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 248 (МН ⁺ , 100).

N-(3-(3-Фтор-1-метилпиперидин-4-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (137).

Раствор соединения 136 (0,07 г, 0,283 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,16 г, 0,5 66 ммоль) при комнатной температуре и перемешивают в течение ночи (16 ч). Растворитель выпаривают, сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (25 мл) и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 137 (0,09 г, 90%) в виде твердого вещества, т.пл. 115-117 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,79-2,09 (м, 4Н), 2,26 (с, 3H), 2,74-2,90 (м, 2Н), 3,13-3,17 (м, 1Н), 4,68 (дддд, 1Н, J=4,8, 9,6, 9,6, 48,5 Гц), 6,23 (ушир.с, 2Н), 6,65 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 6,99 (с, 1Н), 7,09 (т, 1Н, J=4,2 Гц), 7,17 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 7,28 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,59 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,70 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 10,72 (с, 1Н); ESI-MS m/z (%): 357 (МН ⁺ , 100), 179 (52); ESI-MCBP, вычислено для C ₁₉ H ₂₂ FN ₄ S (MH ⁺ ); вычислено 357,1547; наблюдают 357,1543.

Пример 38. N-(3-(1,2,3,5,8,8а-гексагидроиндолозин-7-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (142)

Гексагидроиндолозин-7(1Н)-он (140).

Получают согласно WO 0000487А1, US 5874427, WO 0017198A1.

3-(1,2,3,5,8,8а-Гексагидроиндолозин-7-ил)-5-нитро-1Н-индол (141).

Раствор соединения 38 (0,4 г, 2,466 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают КОН (1,12 г) при 0 °С и перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Добавляют соединение 140 (0,44 г, 3,206 ммоль) в метаноле (5 мл) и полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 30 ч. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и растворитель выпаривают. Сырое вещество разбавляют водой (20 мл) и экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество перекристаллизовывают из этанола и получают соединение V (0,2 г, 29%) в виде твердого вещества, т.пл. 205-207 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,41-1,52 (м, 1Н), 1,70-1,80 (м, 2Н), 1,98-2,15 (м, 2Н), 2,20-2,40 (м, 2Н), 2,61-2,72 (м, 1Н), 2,86-2,91 (м, 1Н), 3,10-3,15 (м, 1Н), 3,66 (дд, 1Н, J=4,2, 16,5 Гц), 6,20 (с, 1Н), 7,55 (д, 1Н, J=9,0 Гц), 7,67 (с, 1Н), 8,01 (дд, 1Н, J=1,8, 9,0 Гц), 8,69 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 11,87 (с, 1Н); ESI-MS (m/z, %) 284 (МН ⁺ , 100).

N-(3-(1,2,3,5,8,8а-гексагидроиндолозин-7-ил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (142).

Раствор соединения 141 (0,12 г, 0,423 ммоль) в сухом метаноле (5 мл) обрабатывают Ra-Ni (~0,05 г) и гидразингидратом (0,13 мл, 4,235 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 мин на предварительно нагретой масляной бане. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре, фильтруют через слой целита, который промывают метанолом (2 ×20 мл). Объединенный метанольный слой упаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в МеОН:CH ₂ Cl ₂ , 95:5) и получают 3-(1,2,3,5,8,8а-гексагидроиндолизин-7-ил)-1Н-индол-5-амин (0,087 г, 81%) в виде твердого вещества, т.пл. 208-210 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,33-1,48 (м, 1Н), 1,67-1,79 (м, 2Н), 1,94-2,13 (м, 2Н), 2,16-2,26 (м, 2Н), 2,58-2,65 (м, 1Н), 2,85 (д, 1Н, J=15,6 Гц), 3,08-3,17 (м, 1Н), 3,59 (дд, 1Н, J=4,5, 15,7 Гц), 4,49 (с, 2Н), 6,01 (д, 1Н, J=4,5 Гц), 6,48 (дд, 1Н, J=1,8, 9,1 Гц), 7,01 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 7,05 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,17 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 10,60 (с, 1Н); ESI-MS (m/z, %) 254 (МН ⁺ , 62), 185 (100).

Раствор амина (0,053 г, 0,209 ммоль) в сухом этаноле (3 мл) обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,12 г, 0,418 ммоль) при комнатной температуре, и раствор перемешивают в течение 24 ч. Растворитель выпаривают, сырое вещество разбавляют насыщ. раствором NaHCO ₃ (20 мл), и продукт реакции экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×20 мл). Объединный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (15 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в МеОН: CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают соединение 142 (0,06 г, 79%) в виде твердого вещества, т.пл. 122-124 °С.

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,38-1,46 (м, 1Н), 1,70-1,78 (м, 2Н), 1,93-2,12 (м, 2Н), 2,20-2,28 (м, 2Н), 2,62-2,72 (м, 1Н), 2,83 (д, 1Н, J=15,9 Гц), 3,07-3,13 (м, 1Н), 3,59 (дд, 1Н, J=4,5, 16,0 Гц), 6,07 (д, 1Н, J=3,9 Гц), 6,22 (ушир.с, 2Н), 6,66 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 7,09 (дд, 1Н, J=3,9, 4,9 Гц), 7,22 (с, 1Н), 7,30-7,32 (м, 2Н), 7,58 (д, 1Н, J=4,5 Гц), 7,71 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 10,92 (с, 1Н); ESI-MS (m/z, %) 363 (МН ⁺ , 20), 294 (100), 182 (15); ESI-MCBP, вычислено для C ₂₁ H ₂₃ N ₄ S (MH ⁺ ); вычислено 363,1655; наблюдают 363,1637.

Пример 39. (R)-N-(3-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамид (147)

Получение 5-(2,5-диметил-1Н-пирроли-1-ил)-1Н-индол (92).

Подробности эксперимента см. в примере 26.

Получение (S)-бензил-2-(2-хлор-2-оксоэтил)пирролидин-1-карбоксилата (143)

i) Получение (S)-2-(1-(бензилоксикарбонил)пирролидин-2-ил)уксусной кислоты.

В реакционный сосуд, снабженный стержнем для магнитной мешалки, добавляют гидрохлорид L-B-гомопролина (250 мг, 1,51 ммоль) в виде не совсем белого твердого вещества. Сосуд закрывают мембраной и крышкой и помещают на баню со смесью воды со льдом. Добавляют 2 н раствор гидроксида натрия (1,45 мл), и соль растворяется с образованием коричневого раствора. Мембрану протыкают 2 шприцами, причем один содержит бензилхлорформиат (280 мкл, 1,96 ммоль), а второй - 1,1 мл 2 н раствора гидроксида натрия (2,20 ммоль). Добавляют 3-ю иглу для создания давления. Две жидкости добавляют альтернативно с небольшим промежутком времени для достижения сохранения постоянного рН. После добавления всех реагентов реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч на бане со смесью воды со льдом. Реакционную смесь переносят в делительную воронку и добавляют эфир (5 мл). Эфирный слой удаляют и водный слой подкисляют до рН 3, добавляя 1М соляную кислоту. Водный слой экстрагируют этилацетатом (3 ×5 мл). Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом натрия, декантируют и концентрируют, и получают желтое масло. Выход 264 мг (66%).

¹ H ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 12,22 (ушир.с, 1Н), 7,35 (м, 5Н), 5,07 (с, 2Н), 4,05-4,02 (т, J=7,2 Гц, 2Н), 3,32-2,63 (м, 1Н), 2,31-2,28 (м, 1Н), 1,99 (с, 2Н), 1,90-1,68 (м, 4Н), 1,20-1,15 (т, J=7,2 Гц, 1Н).

ii) В продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки, добавляют (S)-2-(1-(бензилоксикарбонил)пирролидин-2-ил)уксусную кислоту (235 мг, 0,893 ммоль), а затем безводный дихлорметан (5 мл). Реакционную смесь обрабатывают безводным ДМФА (2 капли 5 мкл). Ток аргона прекращают и реакционный сосуд снабжают баллоном. Добавляют в два приема оксалилхлорид (0,12 мл, 1,38 ммоль), что приводит к бурному выделению газа. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч перед тем, как смесь концентрируют досуха при пониженном давлении и остаток сушат в течение ночи в высоком вакууме.

Получение (S)-бензил-2-(2-(5-(2,5-диметил-1Н-пиррол-1-ил)-1H-индол-3-ил)-2-оксоэтил)пирролидин-1-карбоксилат (144).

Способом, подобным синтезу соединения 94, пример 26, выделяют соединение 144 в виде желтого твердого вещества (240 мг, 59%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,72 и 8,44 (2с, 1Н), 8,26 и 8,11 (2м, 1Н), 7,45-7,39 (м, 7Н), 7,44-7,34 (м, 4Н), 7,11-7,09 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 5,89 (ушир.с, 2Н), 5,19 (с, 2Н), 4,36 (м, 1Н), 3,49 (с, 1Н), 3,50-3,41 (м, 2Н), 2,03 (с, 6Н), 2,00-1,90 (м, 5Н), MS-ESI m/z (%): 456 (М ⁺ , 100).

Получение (R)-5-(2,5-диметил-1Н-пиррол-1-ил)-3-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил)1H-индол (145). В продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки и содержащую раствор 144 (210 мг, 0,461 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл), добавляют алюмогидрид лития (79 мг, 2,08 ммоль). Колбу снабжают обратным холодильником и помещают на масляную баню. Реакционную смесь нагревают до 75 °С и перемешивают при кипячении с обратным холодильником в токе аргона в течение 4,5 ч. Реакция завершается, как показывает ТСХ (10% 2М NH ₃ в МеОН, 90% CH ₂ Cl ₂ ), и смесь постепенно охлаждают до комнатной температуры. Реакцию гасят, добавляя воду (0,2 мл), 3 н раствор гидроксида натрия (0,3 мл) и воду (0,6 мл). Реакционную смесь фильтруют через целит и обрабатывают этилацетатом (10 мл). Водный слой еще дважды экстрагируют этилацетатом (2 ×10 мл).

Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом натрия, декантируют и концентрируют после декантации, и получают коричневое масло. Продукт очищают колоночной хроматографией на силикагеле (от этилацетат/гексан, 1:1, до 5% 2М NH ₃ в МеОН, 95% CH ₂ Cl ₂ ) и получают нужный продукт в виде желтого масла, соединение 145. Выход 105 мг (71%).

¹ Н ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,09 (ушир.с, 1Н), 7,44-7,43 (д, 1Н, J=1,5 Гц), 7,41-7,38 (д, 1Н, 8,7 Гц), 7,08 (д, 1Н, J=2,1 Гц), 7,03-7,00 (дд, 1Н, J=1,8, 8,1 Гц), 5,91 (ушир.с, 2Н), 3,49 (с, 1Н), 3,15-3,10 (м, 2Н), 2,86-2,65 (м, 3H), 2,34 (с, 4Н), 2,03 (ушир.с, 6Н), 1,90-1,52 (м, 4Н), MS-ESI (m/z, %) 322 (М ⁺ , 100).

Получение (R)-3-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил)1Н-индол-5-амина (146).

В продуваемую аргоном круглодонную колбу, снабженную стержнем для магнитной мешалки и содержащую желтый раствор 145 (94 мг, 0,292 ммоль) в безводном 2-пропаноле (6 мл) и воде (2 мл), добавляют в один прием гидрохлорид гидроксиламина (406 мг, 5,84 ммоль). Добавляют через шприц триэтиламин (407 мкл, 2,92 ммоль) и колбу снабжают обратным холодильником. Реакционный сосуд помещают на масляную баню и нагревают до температуры образования флегмы. Реакционную смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение 6 ч. ТСХ (10% 2 М NH ₃ в МеОН, 90% CH ₂ Cl ₂ ) показывает, что реакция завершилась, и тогда реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Постепенно добавляют гранулы гидроксида натрия (120 мг, 3,0 ммоль). Реакционную смесь энергично перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через целит, затем промывают целит 2-пропанолом (40 мл) и абсорбируют фильтрат на силикагеле. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией (5-10% 2М NH ₃ в МеОН, 90% CH ₂ Cl ₂ ) с использованием слоя силикагеля приблизительно 15 мм в диаметре и 30 мм высотой и получают оранжевое твердое вещество. Полученный продукт обрабатывают рассолом (5 мл) и этилацетатом (10 мл). Органический слой перед декантацией сушат над безводным сульфатом натрия. Концентрирование дает оранжевое масло соединение 146. Выход 48 мг оранжевого масла (68%).

¹ Н ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 10,19 (с, 1Н), 7,02-6,99 (д, J=5,4 Гц, 1Н), 6,90-6,89 (д, J=2,1 Гц, 1Н), 6,64-6,63 (д, J=1,5 Гц, 1Н), 6,47-6,43 (дд, J=1,8, 8,7 Гц, 1Н), 4,42 (ушир.с, 1Н), 2,97-2,90 (м, 1Н), 2,59 (м, 2Н), 2,20 (с, 3H), 2,05-1,97 (м, 4Н), 1,69-1,40 (м, 4Н).

Получение (R)-N-(3-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (147).

В продуваемую аргоном круглодонную колбу загружают 146 (40 мг, 0,164 ммоль) и гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (94 мг, 0,329 ммоль), а затем абсолютный этанол (3 мл). Реакционную смесь перемешивают с использованием стержня для магнитной мешалки в течение 60 ч при комнатной температуре. ТСХ (10% 2М раствора аммиака в метаноле/90% дихлорметана) показывает, что весь исходный амин прореагировал. Реакционную смесь обрабатывают эфиром (50 мл). Образовавшееся выпавшее в осадок желтое вещество собирают фильтрацией под вакуумом и промывают эфиром. Осадок смывают с фильтра метанолом. Остаток концентрируют и очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2 М раствора аммиака в метаноле/95-90% дихлорметана), и получают желтое масло. Очищенный продукт растворяют в безводном метаноле (3 мл) и обрабатывают 1М раствором хлороводорода в эфире (5 мл). После перемешивания в течение 30 мин выпавшее в осадок вещество собирают фильтрацией под вакуумом. Осадок промывают эфиром и затем смывают с фильтра метанолом. Фильтрат концентрируют и сушат в высоком вакууме. Выход 21 мг желтого твердого вещества, соединение 147 (30%). Т.пл. 212 °С.

¹ H ЯМР (MeOD-d ₃ ) δ: 8,09 (ушир.с, 2Н), 7,76 (с, 1Н), 7,59 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 7,41 (ушир.с, 1Н), 7,35 (с, 1Н), 7,19 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 3,67 (ушир.м, 1Н), 3,19 (ушир.м, 1Н), 3,1-2,8 (ушир.м, 2Н), 2,91 (с, 3H), 2,46 (ушир.м, 2Н), 2,2-1,8 (ушир.м, 5Н). МС (TOF+): точно вычисл. для C ₂₀ H ₂₅ N ₄ S 353,1794 (МН ⁺ ); найдено 353,1782.

Пример 40. Получение гидрохлорида N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидина (151)

1-(3-Хлорпропил)-6-нитро-1Н-индол (148).

Гидрид натрия (1,96 г, 49,337 ммоль, 60% суспензия в минеральном масле) обрабатывают ДМФА (60 мл), а затем 6-нитроиндолом (6) (2,0 г, 12,334 ммоль) в ДМФА (20 мл) в течение 5 мин при 0 °С. После перемешивания в течение 15 мин раствор обрабатывают 1-хлор-3-иодпропаном (3,9 мл, 37,002 ммоль), реакционную смесь приводят к комнатной температуре и перемешивают в течение 3 ч. Реакцию гасят крепким рассолом (80 мл) и водой (80 мл) и смесь охлаждают до 0 °С. Твердое вещество отфильтровывают, промывают водой (50-75 мл) и сушат, и получают сырой продукт реакции. Сырой продукт перекристаллизовывают из горячей смеси толуол (10 мл)/гексан (5 мл) и получают соединение 148 (2,637 г, 90%) в виде твердого вещества, т.пл. 85-87 °С.

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 2,28-2,36 (м, 2Н), 3,46 (т, 2Н, J=5,7 Гц), 4,45 (т, 2Н, J=6,6 Гц), 6,62 (д, 1Н, J=2,7 Гц), 7,43 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 7,66 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 8,02 (дд, 1Н, J=1,8, 7,9 Гц), 8,36 (д, 1Н, J=0,9 Гц).

1-(3-Морфолин-4-илпропил)-6-нитро-1Н-индол (149). Раствор соединения 148 (2,35 г, 9,845 ммоль) в сухом CH ₃ CN (40 мл) обрабатывают K ₂ CO ₃ (13,6 г, 98,458 ммоль), KI (16,3 г, 98,458 ммоль) и морфолином (8,58 мл, 98,458 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи (15 ч). Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и выпаривают растворитель. Смесь разбавляют водой (100 мл) и экстрагируют зтилацетатом (2 ×50 мл). Объединный этилацетатный слой промывают водой (25 мл) и рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают при пониженном давлении, сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией (EtOAc:2M NH ₃ в метаноле/CH ₂ Cl ₂ , 1:1) и получают соединение 14 9 (2,85 г, выход количественный) в виде сиропа.

¹ Н-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 1,97-2,06 (м, 2Н), 2,23 (т, 2Н, J=6,3 Гц), 2,38 (ушир.с, 4Н), 3,75 (т, 4Н, J=4,5 Гц), 4,33 (т, 2Н, J=6, б Гц), 6,59 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 7,39 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 7,64 (д, 1Н, J=8,7 Гц), 8,00 (дд, 1Н, J=1,8, 8,7 Гц), 8,42 (ушир.с, 1Н).

N-[1-(3-Морфолин-4-илпропил)-1Н-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидин (150).

Раствор соединения 149 (2,0 г, 6,912 ммоль) в абс. этаноле (20 мл) обрабатывают Pd-C (0,25 г), продувают газом водородом и перемешивают в атм. водорода (давление в баллоне). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают абс. этанолом (2 ×20 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидроиодидом метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (3,94 г, 13,824 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (250 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ : CH ₂ Cl ₂ (100 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×50 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (25 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырой продукт очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают соединение 150 (2,438 г, 92%) в виде пены.

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,83-1,91 (м, 2Н), 2,19 (т, 2Н, J=6, 6 Гц), 2,30 (ушир.с, 4Н), 3,56 (т, 4Н, J=4,8 Гц), 4,14 (т, 2Н, J=6,6 Гц), 6,34-6,35 (м, 3H), 6,58 (дд, 1Н, J=1,2, 8,2 Гц), 6,95 (ушир.с, 1Н), 7,09 (дд, 1Н, J=3,9, 5,1 Гц), 7,21 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 7,44 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 7,59 (д, 1Н, J=3,9 Гц), 7,72 (дд, 1Н, J=0,9, 3,6 Гц).

Соль гидрохлорид N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидина (151).

Раствор соединения 150 (0,65 г, 1,7 63 ммоль) в метаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (5,3 мл, 5,291 ммоль) при 0 °С. Реакционную смесь приводят к комнатной температуре и перемешивают в течение 30 мин. Растворитель выпаривают, и сырой продукт реакции перекристаллизовывают из этанола/эфира, и получают соединение 151 (0,66 г, 85%) в виде твердого вещества, т.пл. 100-105 °С. ESI-MC m/z (%): 369 (М ⁺ , 100).

Пример 41. Получение дигидрохлорида N-(1-(3-диэтиламино)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (153)

Получение 1-(3-хлорпропил)-6-нитро-1Н-индола (148).

Процедура описана в примере 40 (выход 796,6 мг, превышает 100%).

Получение N,N-диэтил-(6-нитро-1Н-индол-1-ил)пропан-1-амина (152).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, с использованием диэтиламина в качестве нуклеофильного соединения. Продукт реакции очищают с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (2,5-5% 2М раствора аммиака в метаноле, 97,5-95% дихлорметана). Выход 145,1 мг соединения 152 в виде темно-желтого масла (83,9%).

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,37 (с, 1Н), 8,02-7,99 (дд, J=2,1,9 Гц, 1Н), 7,66-7,63 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,43-7,42 (д, J=3 Гц, 1Н), 6,60-6,58 (д, J=3 Гц, 1Н), 4,32-4,27 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,57-2,50 (кв., J=7,1 Гц, 4Н), 2,43-2,39 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 2,07-1,98 (квинтет, J=6,6 Гц, 2Н), 1,03-0,99 (т, J=6,9 Гц, 6Н).

Получение ионообменной смолы амберлита, используемой для получения свободного основания. В 100-мл воронку Бюхнера с крупными отверстиями добавляют ионообменную смолу амберлит IRA-900 (15,25 г, приблиз. 15 ммоль), суспендированную в воде (50 мл). Воронку помещают под вакуум для уплотнения твердого вещества. Твердое вещество промывают водой (50 мл) и растворитель удаляют фильтрацией под вакуумом. Получают 10% раствор гидроксида натрия (12,5 г в 100 мл) и добавляют к смоле 25-мл порциями. Смолу перемешивают стеклянной палочкой в течение 30 с после добавления каждой порции перед началом вакуумирования. После 4 промывок основанием смолу промывают водой 50-мл порциями до тех пор, пока рН не станет нейтральным по рН-бумаге (приблизит. 400 мл воды). Смолу сушат в вакууме в течение 2 мин. Используют денатурированный этанол (2 ×50 мл) для промывки смолы при перемешивании, а затем абсолютный этанол (3x50 мл). Конечный продукт сушат в высоком вакууме в течение 15 мин. Выход 12,95 г желтых гранул.

Получение дигидрохлорида N-(1-(3-диэтиламино)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (153).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, соединение 150. После выделения соли HI осаждением соль растворяют в этаноле. К раствору добавляют амберлитовую смолу (3,00 г) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (30 мл) и фильтруют. Фильтрат концентрируют и получают желтое масло. Вещество абсорбируют на силикагеле и очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5% 2М раствора аммиака в метаноле, 95% дихлорметана). Находят анализом методом ¹ Н-ЯМР, что полученное желтое масло является нужным продуктом соединением 152. Масло растворяют в безводном дихлорметане (5 мл) и переносят в реакционный сосуд, продуваемый аргоном. Раствор обрабатывают 1М раствором хлороводорода в эфире (3 мл), и соль немедленно выделяется в виде масла. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин и фильтруют. Сосуд и фильтр промывают этилацетатом и фильтрат отбрасывают. Желтовато-коричневое масло, которое остается в реакционном сосуде, растворяют в метаноле, и раствор пропускают через фильтр. Фильтр промывают метанолом и все органические фракции объединяют и концентрируют, и получают желтое масло. Дополнительная сушка в высоком вакууме дает желтое масло, соединение 153. Выход - 80,1 мг желтого масла.

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,74-7,73 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 7,61-7,60 (д, J=4,5, 1Н), 7,47-7,44 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,27 (с, NH), 7,22-7,21 (д, J=3 Гц, 1Н), 7,11-7,08 (т, J=4,8 Гц, 1Н), 6,92 (с, 1Н), 6,60-6,57 (дд, J=1,2,8,4 Гц, 1Н), 6,34-6,33 (д, J=3 Гц, 2Н), 4,16-4,12 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,46 (с, 4Н), 2,36-2,31 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 1,93-1,83 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н), 1,67 (с, 4Н) MW 353.

Пример 42. Получение дигидрохлорида N-(1-(3-(пирролидин-1-ил)пропил)-1H-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (155)

Получение 1-(3-хлорпропил)-6-нитро-1Н-индола (148).

Процедура описана в примере 40 (выход 796,6 мг, превышает 100%).

Получение 1-(3-хлорпропил)-6-нитро-1Н-индола (154).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, с использованием пирролидина в качестве нуклеофильного соединения. Продукт реакции очищают с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (2,5-5% 2М раствора аммиака в метаноле, 97,5-95% дихлорметана). Выход 148,1 мг соединения 154 в виде темно-желтого масла (86,3%).

¹ Н-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,43 (с, 1Н), 8,02-7,98 (дд, J=2,1,9 Гц, 1Н), 7,66-7,63 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,43-7,42 (д, J=3 Гц, 1Н), 6,60-6,59 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 4,36-4,31 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,49 (ушир.с, 4Н), 2,41-2,37 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 2,10-2,01 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н), 1,85-1,81 (м, 4Н).

Получение дигидрохлорида N-(1-(3-(пирролидин-1-ил)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (155).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, соединение 150. После выделения соли HI осаждением (193,5 г) соль растворяют в этаноле. К раствору добавляют обработанную амберлитовую смолу (3,00 г) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (30 мл) и фильтруют. Фильтрат концентрируют и получают желтое масло. Вещество абсорбируют на силикагеле и очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле, 95-90% дихлорметана). Находят анализом методом ¹ Н-ЯМР, что полученное желтое масло является нужным продуктом - соединением 154. Масло растворяют в безводном дихлорметане (5 мл) и переносят в реакционный сосуд, продуваемый аргоном. Раствор обрабатывают 1М раствором хлороводорода в эфире (3 мл), и соль немедленно выделяется в виде масла. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин и фильтруют. Сосуд и фильтр промывают этилацетатом и фильтрат отбрасывают. Желтовато-коричневое масло, которое остается в реакционном сосуде, растворяют в метаноле, и раствор пропускают через фильтр. Фильтр промывают метанолом и все органические фракции объединяют и концентрируют, и получают желтое масло. Дополнительная сушка в высоком вакууме дает желтое твердое вещество, соединение 155. Выход - 116 мг желтого твердого вещества.

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,73-7,72 (д, J=3, б Гц, 1Н), 7,60-7,59 (д, J=4,5, 1Н), 7,46-7,43 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,21-7,20 (д, J=3 Гц, 1Н), 7,11-7,08 (т, J=4,8 Гц, 1Н), 6,92 (с, 1Н), 6,60-6,57 (дд, J=1,2, 8,4 Гц, 1Н), 6,34-6,33 (д, J=3 Гц, 2Н), 4,16-4,12 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,46 (с, 4Н), 2,36-2,31 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 1,93-1,83 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н), 1,67 (с, 4Н). MW 353.

Пример 43. Получение дигидрохлорида N-(1-(3-(диметиламино)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксамидамида (157)

Получение 1-(3-хлорпропил)-6-нитро-1Н-индола (148).

Процедура описана в примере 40 (выход 796,6 мг, превышает 100%).

Получение N,N-диметил-3-(6-нитро-1Н-индол-1-ил)пропан-1-амина (156).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, с использованием диметиламина в качестве нуклеофильного соединения. Продукт реакции очищают с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (2,5-5% 2М раствора аммиака в метаноле, 97,5-95% дихлорметана). Выход 121,4 мг соединения 156 в виде темно-желтого масла (88,3%).

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,41-8,40 (д, J=1,8 Гц, 1Н), 8,02-7,99 (дд, J=2,1, 9 Гц, 1Н), 7,66-7,63 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,43-7,42 (д, J=3 Гц, 1Н), 6,60-6,59 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 4,33-4,29 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,23-2,19 (м, 8Н), 2,43 (с, 3H), 2,05-1,96 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н).

Получение дигидрохлорида N-(1-(3-(диметиламино)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксамидамида (157).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, соединение 150. После выделения соли HI осаждением (186,6 г) соль растворяют в этаноле. К раствору добавляют обработанную амберлитовую смолу (3,00 г) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (30 мл) и фильтруют. Фильтрат концентрируют и получают желтое масло. Вещество абсорбируют на силикагеле и очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле, 95-90% дихлорметана). Соль дигидрохлорид получают с использованием процедуры, описанной в примере 40, соединение 151. Выход - 61,7 мг соединения 157 в виде желто-оранжевого твердого вещества.

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,74-7,73 (д, J=3, 9 Гц, 1Н), 7,61-7,59 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 7,46 -7,43 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,21-7,20 (д, J=3 Гц, 1Н), 7,11-7,09 (т, J=4,8 Гц, 1Н), 6,91 (с, 1Н), 6,60-6,58 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 6,35-6,34 (д, J=3 Гц, 3H), 4,14-4,10 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,19-2,15 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 2,12 (с, 6Н), 1,89-1,80 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н), 1,75 (с, 2Н), ESI-MS m/z (%): 327 (М ⁺ , 100).

Пример 44. Получение дигидрохлорида N-(1-(3-(метиламино)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (159)

Получение 1-(3-хлорпропил)-6-нитро-1Н-индола (148).

Процедура описана в примере 40 (выход 796,6 мг, превышает 100%).

Получение N-метил-3-(6-нитро-1Н-индол-1-ил)пропан-1-амина (158).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, с использованием метиламина в качестве нуклеофильного соединения. Продукт реакции очищают с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (2,5-5% 2М раствора аммиака в метаноле, 97,5-95% дихлорметана). Выход 91,7 мг соединения 158 в виде темно-желтого масла (94,1%).

¹ Н-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,40-8,39 (д, J=1,8 Гц, 1Н), 8,02-7,99 (дд, J=2,1, 9 Гц, 1Н), 7,66-7,63 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,42-7,41 (д, J=3 Гц, 1Н), 6,60-6,59 (д, J=3,3 Гц, 1Н), 4,36-4,31 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,59-2,54 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 2,43 (с, 3H), 2,07-1,98 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н).

Получение дигидрохлорида N-(1-(3-(метиламино)пропил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (159).

Взаимодействие осуществляют так, как описано в примере 40, соединение 150. После выделения соли HI осаждением (121,9 г) соль растворяют в этаноле. К раствору добавляют обработанную амберлитовую смолу (3,00 г) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 35 мин. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (15 мл) и фильтруют. Фильтрат концентрируют и получают желтое масло. Вещество абсорбируют на силикагеле и очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле, 95-90% дихлорметана). Реакционную смесь превращают в соль гидрохлорид получают с использованием процедуры, описанной в примере 40 для соединения 151. Выход - 87,2 мг соединения 159 в виде желто-оранжевого твердого вещества.

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,74-7,73 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,61-7,59 (д, J=4,5, 1Н), 7,46-7,43 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,21-7,20 (д, J=3 Гц, 1Н), 7,11-7,09 (т, J=4,8 Гц, 1Н), 6,92 (с, 1Н), 6,60-6,57 (дд, J=1,2, 8,4 Гц, 1Н), 6,34-6,33 (д, J=3 Гц, 2Н), 4,17-4,12 (т, J=6, 9 Гц, 2Н), 2,46-2,41 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 2,25 (с, 3H), 1,87-1,83 (квинтет, J=6,7 Гц, 2Н), ESI-MS m/z (%): 327 (М ⁺ , 100).

Пример 45. Получение N-(2-бензил-1-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил)-1H-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксамидамида (164)

Получение соединения 160.

6-Нитроиндол (6) (1,0 г, 6,167 ммоль) подвергают обработке, описанной в Organic Synthesis. Coll. Vol.6, p.104, и сырой продукт реакции суспендируют в кипящем гексане, фильтруют и сушат, и получают соединение 160.

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,29 (м, 1Н), 8,02 (дд, 1Н, J=1,9, 8,8), 7,68 (д, 1Н, J=8,5), 7,41 (д, 1Н, J=3,1), 7,31 (м, 3H), 7,13, (м, 2Н), 6,65 (д, 1Н, J=3,0), 5,40 (с, 2Н), MS(ESI+): 253 (М+1, 100%).

Получение соединения 161.

Раствор 1-бензил-6-нитро-1Н-индола (соединение 160, 0,5 г, 1,982 ммоль) обрабатывают полифосфорной кислотой, как описано в Synthetic Communications, 27(12), 2033-2039 (1997), сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле (этилацетат:гексан, 2:8) и получают соединение 161 (115 мг, 23,0%).

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 8,25-8,10 (2 ×м, 2Н), 7,99 (дд, 1Н, J=2,1, 8,9), 7,56 (д, 1Н, J=8,7), 7,45-7,12 (м, 5Н), 6,44 (д, 1Н, J=1,6), 4,19 (с, 2Н), MS (ESI+): 253 (М+1, 100%).

Получение соединения 162.

2-Бензил-6-нитро-1Н-индол (соединение 161, 110 мг, 0,436 ммоль), гидрохлорид 2-(2-хлорэтил)-1-метилпирролидина (88,3 мг, 0,479 ммоль) и измельченный в порошок карбонат калия (180,8 мг, 1,308 ммоль) помещают в продуваемую аргоном колбу. Добавляют ДМФА (5 мл, Aldrich, sure seal ™) и смесь греют при 65 °С на масляной бане в течение 20 ч. Раствор охлаждают до комнатной температуры и разбавляют водой (10 мл) и этилацетатом (25 мл). Слои разделяют и водную фазу экстрагируют этилацетатом (2 ×25 мл). Органические экстракты объединяют, промывают рассолом (2 ×10 мл) и сушат над сульфатом магния. Образец фильтруют, концентрируют и полученный сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием 10-15-мл порциями системы растворителей (2,5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают желтый остаток 162 (47 мг, выход 29,7%).

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ 8,25 (с, 1Н), 8,00 (дд, 1Н, J=1,9, 8,8), 7,55 (д, 1Н, J=8,7), 7,37-7,17 (м, 5Н), 6,36 (с, 1Н), 4,19 (д, 2Н, J=3,4), 4,12 (м, 2Н), 3,12 (м, 1Н), 2,26 (с, 3H), 2,20 (м, 1Н), 2,01-1,85 (м, 2Н), 1,84-1,66 (м, 2Н), 1,63-1,40 (м, 3H); MS (ESI+): 274,5 (М+1, 100%).

Получение соединения 164.

2-Бензил-1-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)-6-нитро-1Н-индол (соединение 162, 40 мг, 0,110 ммоль) растворяют в безводном этаноле (5 мл) в сухой продуваемой аргоном колбе. Быстро добавляют 10 мас.% палладий на активированном угле (11,7 мг, 0,011 ммоль) и атмосферу в колбе откачивают вакуумным насосом и заменяют на водород из баллона. Атмосферу откачивают из колбы и заменяют водородом еще дважды, и смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре. Через 3 часа тонкослойная хроматорафия в системе растворителей (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) показывает полную конверсию в соединение 163 2-бензил-1-(2-(1-метилпирролидин-2-ил)этил)-1Н-индол-6-амин, которое используют без выделения. Смесь фильтруют через слой целита для удаления нерастворимых веществ, слой промывают безводным этанолом (5 мл) и этанольный раствор амина 163 загружают в небольшую колбу, продуваемую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (40,8 мг, 0,143 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в атмосфере Ar при температуре окружающей среды в течение 48 ч. Добавляют дополнительное количество гидроиодида метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,3 экв.) и перемешивание продолжают еще в течение 18 ч. Добавляют еще одну порцию гидроиодида метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (0,3 экв.) и перемешивание продолжают еще в течение 18 ч, после чего смесь концентрируют и остаток очищают хроматографией на силикагеле (от 2,5% 2М NH ₃ в метаноле/97,5% дихлорметана до 5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана), и получают желтое масло - соединение 164 (38 мг, выход 78,0%);

¹ H-ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,72 (д, 1Н, J=3,2), 7,59 (д, 1Н, J=4,7), 7,38 (д, 1Н, J=8,1), 7,35-7,20 (м, 5Н), 7,09 (м, 1Н), 6,77 (с, 1Н), 6,56 (д, 1Н, J=7,4), 6,36 (ушир.с, 2Н), 6,14 (с, 1Н), 4,14 (с, 2Н), 3,96 (т, 2Н, J=7,9), 2,94-2,86 (м, 1Н), 2,09 (с, 3H), 2,06-1,94 (м, 2Н), 1,89-1,78 (м, 1Н), 1,69-1,51 (м, 3H), 1,45-1,35 (м, 2Н); MS (ESI+): 443 (М+1, 70%), 219 (100%).

Пример 46. Получение N-(1-(4-(1Н-имидазол-1-ил)бутил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (168)

Получение соединения 165.

К гидриду натрия (0,987 г, 24,68 ммоль) в 100-мл продуваемой аргоном колбе, снабженной стержнем для перемешивания, в атмосфере аргона добавляют безводный ДМФА (10 мл) и смесь охлаждают до 0 °С на ледяной бане. Постепенно к смеси NaH добавляют раствор 6-нитроиндола (6) (1,00 г, 6,17 ммоль) в ДМФА (10 мл), по завершении добавления ледяную баню убирают и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ~5 мин. В другую высушенную в сушильном шкафу продуваемую аргоном колбу, снабженную стержнем для перемешивания, загружают 1-хлор-4-иодбутан (2,26 мл, 18,51 ммоль) и ДМФА (10 мл). Раствор индола добавляют через канюлю в раствор хлорбутана в течение 10 мин и смесь перемешивают при RT. Через 20 мин реакционную смесь помещают на ледяную баню и гасят реакцию рассолом (10 мл). Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и водой и переносят в делительную воронку. Органический слой отделяют и водный слой дополнительно экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают коричневое масло. Сырой продукт реакции очищают хроматографией на силикагеле (20% этилацетата/80% гексана) и получают соединение 165 (1,52 г, 97,6%).

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 8,57 (д, 1Н, J= 1,8), 7,93-7,88 (м, 1Н), 7,84 (д, 1Н, J=3,0), 7,75-7,72 (м, 1Н), 6,67 (д, 1Н, J=3,0), 4,39 (т, 2Н, J=7,0), 3,66 (т, 2Н, J=6,6), 1,95-1,82 (м, 2Н), 1,73-1,64 (м, 2Н); MS (ESI+): 253 (М+1, 100%).

Получение соединения 166.

В высушенную, как описано выше, продуваемую аргоном 50-мл колбу, снабженную стержнем для перемешивания и обратным холодильником, загружают 1Н-имидазол (0,673 г, 9,893 ммоль), иодид калия (1,642 г, 9,893 ммоль) и карбонат калия (1,367 г, 9,893 ммоль) в виде твердых веществ. В колбу загружают 1-(4-хлорбутил)-6-нитро-1Н-индол (соединение 165, 0,250 г, 0,989 ммоль) в виде раствора в ацетонитриле (5 мл), и начинают перемешивание. Смесь греют при 50 °С в течение 16 ч и затем кипятят с обратным холодильником течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, разбавляют дихлорметаном (10 мл) и фильтруют через слой целита. Слой дополнительно промывают дихлорметаном, раствор концентрируют и получают сырое желтое твердое вещество. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием системы растворителей (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают желтый остаток соединения 166 (182 мг, выход 64,7%).

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 8,54 (д, 1Н, J=1,5), 7,94-7,88 (м, 1Н), 7,81 (д, 1Н, J=3,0), 7,74-7,72 (м, 1Н), 7,59 (с, 1Н), 7,12 (с, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 6,66 (д, 1Н, J=3,0), 4,35 (т, 2Н, J=6,4), 3,97 (т, 2Н, J=6,4), 1,76-1,61 (м, 4Н); MS (ESI+): 307 (М+Na, 100%).

Получение соединения 168.

1-(4-(1Н-Имидазол-1-ил)бутил)-6-нитро-1Н-индол (соединение 166, 145 мг, 0,510 ммоль) растворяют в безводном этаноле (7 мл) в сухой продуваемой аргоном колбе. Быстро добавляют 10 мас.% палладий на активированном угле (54,2 мг, 0,051 ммоль) и атмосферу в колбе откачивают вакуумным насосом и заменяют на водород из баллона. Атмосферу откачивают из колбы и заменяют водородом еще дважды, и смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре. Через 3 ч тонкослойная хроматорафия в системе растворителей (10% 2М NH ₃ в метаноле/90% дихлорметана) показывает полную конверсию в соединение 167 1-(4-(1Н-имидазол-1-ил)бутил)-1Н-индол-6-амин, которое используют без выделения. Смесь фильтруют через слой целита для удаления нерастворимых веществ, слой промывают безводным этанолом (7 мл) и этанольный раствор амина 167 загружают в небольшую колбу, продуваемую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (189,1 мг, 0,663 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в атмосфере Ar при температуре окружающей среды в течение 20 ч, после чего раствор разбавляют диэтиловым эфиром (100 мл), что приводит к образованию липкого твердого вещества, которое не выделяется фильтрацией. В результате продукт смывают с воронки метанолом, объединяют с фильтратом, растворители выпаривают, и остается сырой остаток. Остаток обрабатывают H ₂ O и этилацетатом и добавляют 3М раствор гидроксида натрия для доведения рН до 9. Смесь переносят в делительную воронку и органический слой собирают. Водный слой дополнительно экстрагируют этилацетатом и объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют, остаток очищают хроматографией на силикагеле (2,5% 2М NH ₃ в метаноле/97,5% дихлорметана) и получают желтое твердое вещество соединение 168 (101 мг, выход 54,5%);

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,74 (д, 1Н, J= 3,0), 7,60 (д, 1Н, J=5,2), 7,56 (с, 1Н), 7,45 (д, 1Н, J=8,3), 7,21 (д, 1Н, J=3,0), 7,13-7,06 (м, 2Н), 6,92 (с, 1Н), 6,85 (с, 1Н), 6,59 (д, 1Н, J=8,0), 6,42-6,30 (ушир., 2 ×м, 3H), 4,17-4,06 (м, 2Н), 3,99-3,92 (м, 2Н), 1,75-1,58 (м, 4Н); MS (ESI+): 364 (М+1, 100%).

Пример 47. Получение N-(1-(4-(диметиламино)бутил)-1Н-индол-6-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (171)

Получение соединения 165. 1-(4-Хлорбутил)-6-нитро-1Н-индол.

Полные подробности эксперимента и спектральные данные см., пожалуйста, в примере 46.

Получение соединения 169.

В высушенную в сушильном шкафу продуваемую аргоном 50-мл колбу, снабженную стержнем для перемешивания и обратным холодильником, загружают гидрохлорид диметиламина (0,806 г, 9,893 ммоль), иодид калия (1,642 г, 9,893 ммоль) и карбонат калия (1,367 г, 9,893 ммоль) в виде твердых веществ. В колбу загружают 1-(4-хлорбутил)-6-нитро-1Н-индол (соединение 165, 0,250 г, 0,989 ммоль) в виде раствора в ацетонитриле (5 мл) и начинают перемешивание. Смесь греют при 50 °С в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют 3-4 мл безводного ацетонитрила из-за потери некоторого количества растворителя и затем кипятят с обратным холодильником течение 8 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры в течение уикэнда. После протекания реакции в общей сложности в течение 88 ч реакционную смесь разбавляют дихлорметаном (10 мл) и фильтруют через слой целита. Слой дополнительно промывают дихлорметаном, раствор концентрируют и получают сырое желтое твердое вещество. Продукт реакции очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием системы растворителей (от 5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана до 10% 2М NH ₃ в метаноле/90% дихлорметана) и получают 2 продукта, основной из которых в виде желтого масла представляет собой соединение 169 (100 мг, выход 38,8%).

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 8,54 (д, 1Н, J=1,5), 7,93-7,88 (м, 1Н), 7,83 (д, 1Н, J=3,0), 7,74-7,71 (м, 1Н), 6,66 (д, 1Н, J=3,0), 4,34 (т, 2Н, J=7,1), 2,18 (т, 2Н, J=7,0), 2,06 (с, 6Н), 1,78 (квинтет, 2Н, J=7,5), 1,36 (квинтет, 2Н, J=7,5); MS (ESI+): 262 (M+1, 100%).

Получение соединения 171.

N,N-Диметил-1-(4-(6-нитро-1Н-индол-1-ил)бутан-1-амин (соединение 169, 88 мг, 0,337 ммоль) растворяют в безводном этаноле (5 мл) в сухой продуваемой аргоном колбе. Быстро добавляют 10 мас.% палладий на активированном угле (35,8 мг, 0,033 ммоль) и атмосферу в колбе откачивают вакуумным насосом и заменяют на водород из баллона. Атмосферу откачивают из колбы и заменяют водородом еще дважды и смесь перемешивают в атмосфере водорода при комнатной температуре. Через 3 ч тонкослойная хроматорафия в системе растворителей (10% 2М NH ₃ в метаноле/90% дихлорметана) показывает полную конверсию в соединение 170 1-(4-(диметиламино)бутил)-1Н-индол-6-амин, которое используют без выделения. Смесь фильтруют через слой целита для удаления нерастворимых веществ, слой промывают безводным этанолом (5 мл) и этанольный раствор амина 170 загружают в небольшую колбу, продуваемую аргоном, снабженную стержнем для магнитной мешалки. В колбу добавляют гидроиодид метилового эфира тиофен-2-карбоксимидотиовой кислоты (124,9 мг, 0,438 ммоль), и реакционную смесь перемешивают в атмосфере Ar при температуре окружающей среды в течение 20 ч, после чего раствор разбавляют диэтиловым эфиром (100 мл), что приводит к образованию липкого твердого вещества, которое не выделяется фильтрацией. В результате продукт смывают с воронки метанолом, объединяют с фильтратом, растворители выпаривают, и остается сырой остаток. Остаток обрабатывают H ₂ O и этилацетатом, и добавляют 3М раствор гидроксида натрия для доведения рН до 9. Смесь переносят в делительную воронку, и органический слой собирают. Водный слой дополнительно экстрагируют этилацетатом и объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют, остаток очищают хроматографией на силикагеле (5% 2М NH ₃ в метаноле/95% дихлорметана) и получают желтое масло соединение 171 (102 мг, выход 89,0%).

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 7,73 (д, 1Н, J=3,4), 7,60 (д, 1Н, J=5,1), 7,45 (д, 1Н, J=8,2), 7,22 (д, 1Н, J=3,0), 7,13-7,06 (м, 1Н), 6,91 (с, 1Н), 6,58 (д, 1Н, J=8,2), 6,39-6,28 (ушир., 2 ×м, 3H), 4,10 (т, 2Н, J=6,9), 2,16 (т, 2Н, J=7,0), 2,05 (с, 6Н), 1,73 (квинтет, 2Н, J=7,5), 1,37 (квинтет, 2Н, J=7,5); MS(ESI+): 341 (M+1, 100%).

Пример 48. Получение дигидрохлорида N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидина (173)

1-(3-Морфолин-4-илпропил)-6-нитро-1Н-индол (149).

Подробности эксперимента см., пожалуйста, в примере 40.

Соль дигидрохлорид N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]тиофен-2-карбоксамидина (173). Раствор соединения 149 (0,25 г, 0,864 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают Pd-C (0,025 г), продувают газом водородом и перемешивают в течение ночи (15 ч) в атм. водорода (давление в баллоне). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают сухим этанолом (2 ×20 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидробромидом бензилового эфира тиофен-3-карбоксимидотиовой кислоты (0,54 г, 1,728 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×30 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырой продукт очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают соединение 172 в виде свободного основания.

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,83-1,92 (м, 2Н), 2,19 (т, 2Н, J=6,9 Гц), 2,30 (ушир.с, 4Н), 3,56 (т, 4Н, J=4,5 Гц), 4,13 (т, 2Н, J=6,9 Гц), 6,05 (ушир.с, 2Н), 6,34 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 6,57 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 6,93 (ушир.с, 1Н), 7,20 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 7,44 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,54 (дд, 1Н, 3=2,1, 4,8 Гц), 7,63 (д, 1Н, J=5,4 Гц), 8,12 (дд, 1Н, J=1,2, 3,0 Гц); ESI-MS (m/z, %): 369 (М ⁺ , 100). Раствор полученного выше свободного основания в метаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (2,6 мл, 2,592 ммоль) и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, сырой продукт реакции перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 172 (0,287 г, 75%) в виде твердого вещества, т.пл. 105-108 °С.

Пример 49. Получение дигидрохлорида N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]фуран-2-карбоксамидина (175)

1-(3-Морфолин-4-илпропил)-6-нитро-1Н-индол (149).

Подробности эксперимента смотреть в примере 40.

Соль дигидрохлорид N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1Н-индол-6-ил]фуран-2-карбоксамидина (173).

Раствор соединения 149 (0,25 г, 0,864 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают Pd-C (0,025 г), продувают газом водородом и перемешивают в течение ночи (15 ч) в атм. водорода (давление в баллоне). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают сухим этанолом (2 ×20 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидробромидом бензилфуран-2-карбимидотиоата (0,51 г, 1,728 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ : CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют, и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×30 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают и сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле: CH ₂ Cl ₂ , 5:95), и получают соединение 174 в виде свободного основания. Пена;

¹ H-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ 1,83-1,92 (м, 2Н), 2,19 (т, 2Н, J=6,9 Гц), 2,30 (ушир.с, 4Н), 3,56 (т, 4Н, J=4,2 Гц), 4,13 (т, 2Н, J=6,9 Гц), 6,00-6,20 (м, 2Н), 6,33 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 6,55-6,62 (м, 2Н), 6,98 (ушир.с, 1Н), 7,09 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 7,20 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 7,43 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 7,78 (ушир.с, 1Н); ESI-MS (m/z, %): 353 (М ⁺ , 100).

Раствор полученного выше свободного основания в метаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (2,6 мл, 2,592 ммоль) и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 175 (0,262 г, 71%) в виде твердого вещества, т.пл. 87-90 °С.

Пример 50. Получение дигидрохлорида N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]фуран-3-карбоксамидина (177)

1-(3-Морфолин-4-илпропил)-6-нитро-1Н-индол (149).

Подробности эксперимента смотрите в примере 40.

Соль дигидрохлорид N-[1-(3-морфолин-4-илпропил)-1H-индол-6-ил]фуран-3-карбоксамидина (177).

Раствор соединения 149 (0,25 г, 0,864 ммоль) в сухом этаноле (5 мл) обрабатывают Pd-C (0,025 г), продувают газом водородом и перемешивают в течение ночи (15 ч) в атм. водорода (давление в баллоне). Реакционную смесь фильтруют через слой целита, который промывают сухим этанолом (2 ×20 мл). Объединенный этанольный слой обрабатывают гидробромидом бензилфуран-3-карбимидотиоата (0,51 г, 1,728 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Растворитель выпаривают и продукт реакции высаживают эфиром (100 мл). Твердое вещество растворяют в смеси насыщ. раств. NaHCO ₃ :CH ₂ Cl ₂ (50 мл, 1:1). Орг. слой отделяют и водный слой экстрагируют CH ₂ Cl ₂ (2 ×30 мл). Объединенный CH ₂ Cl ₂ слой промывают рассолом (20 мл) и сушат (Na ₂ SO ₄ ). Растворитель выпаривают, сырое вещество очищают колоночной хроматографией (2М NH ₃ в метаноле:CH ₂ Cl ₂ , 5:95) и получают соединение 176 в виде свободного основания. Пена;

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d ₆ ) δ: 1,85-1,91 (м, 2Н), 2,19 (т, 2Н, J=6,6 Гц), 2,30 (ушир.с, 4Н), 3,56 (т, 4Н, J=4,2 Гц), 4,13 (т, 2Н, J=6,3 Гц), 6,00-6,07 (м, 2Н), 6,34 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 6,56 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 6,90-6,92 (м, 2Н), 7,20 (д, 1Н, J=3,0 Гц), 7,43 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,70 (ушир.с, 1Н), 8,22 (ушир.с, 1Н); ESI-MS (m/z, %): 353 (М ⁺ , 100).

Раствор полученного выше свободного основания в метаноле (5 мл) обрабатывают 1 н HCl в эфире (2,6 мл, 2,5 92 ммоль) и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, сырое вещество перекристаллизовывают из этанола/эфира и получают соединение 177 (0,286 г, 78%) в виде твердого вещества, т.пл. 95-98 °С.

Пример 51. Получение гидрохлорида N-(3-(3-морфолинопропил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (181)

Получение 3-(5-бром-1Н-индол-3-ил)-N-морфолинпропанамида (178).

В продуваемый аргоном сосуд со стержнем для магнитной мешалки загружают 5-броминдол-3-пропионовую кислоту (52) (542 мг, 2,02 ммоль), гидрохлорид 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (426 мг, 2,22 ммоль) и 1-гидроксибензотриазол (273 мг, 2,02 ммоль). Добавляют безводный ДМФА (5 мл), затем морфолин (0,18 мл, 2,06 ммоль) и триэтиламин (0,65 мл, 4,66 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 21,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляют смесью воды со льдом (10 мл) и этилацетатом (10 мл). Реакционную смесь переносят в делительную воронку и продукт реакции экстрагируют в органический слой. Водную фазу еще дважды экстрагируют этилацетатом (2 ×10 мл). Объединенные органические фракции промывают рассолом (10 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, и получают коричневое масло. Дополнительная сушка в высоком вакууме дает бледно-оранжевое твердое вещество - соединение 178. Выход оранжевого твердого вещества 541 мг (79,4%).

¹ H ЯМР (ДМСО) δ: 11,00 (ушир.с, NH), 7,68-7,67 (д, 1Н, J=1,5), 7,31-7,28 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,72-7,14 (тд, 2Н, J=1,8, 8,4 Гц), 2,93-2,81 (м, 8Н), 2,64-2,59 (т, J=7,5 Гц, 2Н).

Получение 4-(3-(5-бром-1Н-индол-3-ил)пропил)морфолина (179).

В продуваемый аргоном сосуд со стержнем для магнитной мешалки, содержащий соединение 178 (518 мг, 1,54 ммоль), добавляют алюмогидрид лития (146 мг, 3,84 ммоль), а затем безводный тетрагидрофуран (15 мл). Сосуд помещают в металлический нагревательный блок и нагревают до температуры образования флегмы. После перемешивания при кипячении с обратным холодильником в течение 21 ч реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Реакцию в охлажденной смеси последовательно гасят водой (0,15 мл), 3 н раствором гидроксида натрия (0,25 мл) и водой (0,45 мл). Реакционную смесь фильтруют через целит для удаления нерастворимого твердого вещества, бледно-желтый фильтрат концентрируют и получают бледно-желтое масло. Сушка в высоком вакууме дает бледно-желтое твердое вещество - соединение 179. Выход бледно-желтого твердого вещества 407 мг (82%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,99 (с, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 7,28-7,20 (м, 1Н), 6,99 (с, 1Н), 3,76-3,73 (т, J=4,5 Гц, 4Н), 2,77-2,72 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,46-2,39 (м, 6Н), 1,94-1,91 (м, 2Н).

Получение 3-(3-морфолинопропил)-1Н-индол-5-амина (180).

В продуваемый аргоном сосуд, снабженный стержнем для магнитной мешалки, загружают раствор соединения 179 (407 мг, 1,26 ммоль) в безводном ТГФ (8 мл). Оранжевый раствор обрабатывают твердым Pd ₂ (dba) ₃ (58 мг, 0,063 ммоль), что приводит к образованию темно-красной реакционной смеси. Добавляют раствор три-трет-бутилфосфина (10%, 0,37 мл, 0,13 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляют 1М раствор бис(триметилсилил)амида лития в ТГФ (3,78 мл, 3,78 ммоль) и желто-коричневый раствор помещают в металлический нагревательный блок и нагревают до температуры образования флегмы. Реакционную смесь перемешивают при такой температуре в течение 16 ч. ТСХ (10% 2М раствора аммиака в метаноле, 90% дихлорметана) показывает, что все исходное вещество прореагировало. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и гасят реакцию 1М соляной кислотой (15 мл). Кислую реакционную смесь экстрагируют этилацетатом (3 ×10 мл). Водную фазу подщелачивают 3 н раствором гидроксида натрия (8 мл) и обрабатывают этилацетатом (3 ×10 мл). Органические фракции промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и обрабатывают углем. Фильтрация через целит, концентрирование и последующая сушка в высоком вакууме дают темно-желтое масло. Очистку продукта реакции осуществляют с использованием колоночной хроматографии на силикагеле (5-10% 2М раствора аммиака в метаноле, 95-90% дихлорметана). Выход 102 мг коричневого масла, соединение 180 (31,2%).

¹ H ЯМР (CDCl ₃ ) δ: 7,72 (ушир.с, NH), 7,17-7,14 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 6,92-6,89 (дд, 2Н, J=2,1, 4,5 Гц), 6,67-6,64 (дд, J=2,1, 8,4 Гц, 1Н), 3,77-3,74 (т, J=4,5 Гц, 4Н), 2,74-2,69 (т, J=7,5, 2H), 2,49-2,43 (м, 6Н), 1,97-1,89 (м, 2Н).

Получение гидрохлорида N-(3-(3-морфолинопропил)-1Н-индол-5-ил)тиофен-2-карбоксимидамида (181).

В продуваемый аргоном сосуд, снабженный стержнем для магнитной мешалки, загружают раствор 180 (28 мг, 0,108 ммоль) в абсолютном этаноле (3 мл). Добавляют в один прием гидроиодид метилтиофен-2-карбимидотиоата (62 мг, 0,217 ммоль) в виде желтого твердого вещества. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 17 ч. Реакция завершается по ТСХ (10% 2М раствора аммиака в метаноле, 90% дихлорметана). Реакционную смесь разбавляют эфиром (15 мл) и выпавшее в осадок твердое вещество собирают фильтрацией под вакуумом. Осадок промывают эфиром (10 мл). Продукт реакции собирают, промывая фильтр метанолом (10 мл) и собирая фильтрат. Фильтрат возвращают в реакционный сосуд и добавляют DOWEX-66 (3 г). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат концентрируют и получают коричневое твердое вещество. Твердое вещество растворяют в дихлорметане (10 мл) и обрабатывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 мл). Органическую фазу обрабатывают рассолом, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат обрабатывают 1М раствором хлороводорода в эфире (3 мл). После перемешивания в течение 1 часа реакционную смесь концентрируют в роторном испарителе и затем сушат на линии высокого вакуума. Полученное желтое твердое вещество сушат на горячей вакуумной линии. Выход 45 мг желтого твердого вещества, соединение 181 (96%).

¹ Н ЯМР (ДМСО) δ: 10,91 (ушир.с, 1Н), 7,96 (с, 2Н), 7,42-7,39 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,36 (с, 1Н), 7,29-7,25 (т, J=4,5 Гц, 1Н), 7,24 (с, 1Н), 6,92-6,89 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 3,58 (с, 4Н), 2,72-2,67 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,38 (м, 6Н), 1,83-1,78 (м, 2Н), MS(ESI+): 369 (МН+, 100%).

Анализы ингибирования NOS in vitro

Обнаружено, что соединения формулы I по настоящему изобретению проявляют селективное ингибирование нейронной изоформы NOS(nNOS). Соединения могут быть проверены специалистом в данной области техники на их эффективность при преимущественном ингибировании nNOS по сравнению с iNOS и/или eNOS, например, с использованием способов, описанных в данном описании ниже в примерах 11а и 11b.

Пример 52а. Анализ ферментов nNOS (крысиной), eNOS(бычьей) и iNOS (мышиной)

Изоформы NOS, используемые в данном примере, представляют собой рекомбинантные ферменты, экспрессированные в Е. coli. Крысиную nNOS экспрессируют и очищают, как описано ранее (Roman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 8428-8432, 1995). Бычью изоформу eNOS изолируют так, как сообщается в литературе (Martasek et al., Biochem. Biophys. Res. Comraun., 219: 259-365, 1996), и мышиную макрофаговую iNOS экспрессируют и изолируют согласно процедуре Hevel et al. (J. Biol. Chem., 266: 22789-22791, 1991). Величины IC ₅₀ и процент ингибирования NOS соединениями по изобретению определяют в начальных условиях изменения скорости с помощью анализа с захватом гемоглобина, как описано ранее (Hevel and Marietta, Methods Enzymol., 133: 250-258, 1994). В данном анализе оксид азота реагирует с оксигемоглобином с образованием метгемоглобина, который детектируют при 401 нм (е = 19700 М ^-1 см ^-1 ) на спектрофотометре Perkin-Elmer Lambda 10, УФ/вид. свет. Анализы осуществляют с использованием различных концентраций испытываемых соединений. Смеси для анализов для nNOS или eNOS содержат 10 мМ L-аргинина, 1,6 мМ CaCl ₂ , 11,6 мг/мл калмодулина, 100 мМ NADPH, 6,5 мМ ВН ₄ и 3 мМ оксигемоглобина в 100 мМ Hepes (pH 7,5). Смеси для анализов для iNOS содержат 10 мМ L-аргинина, 100 мМ NADPH, 6,5 мМ ВН ₄ и 3 мМ оксигемоглобина в 100 мМ Hepes (pH 7,5). Все анализы проводят в конечном объеме 600 мкл и инициируют ферментом. Результаты для примеров соединений по изобретению приводятся в табл. 2а. Такие результаты показывают селективность соединений по изобретению в отношении ингибирования nNOS.

Таблица 2а. Селективное ингибирование NOS соединениями по изобретению

Пример 52b. Анализ ферментов nNOS (человека), eNOS(человека) и iNOS (человека)

Рекомбинантные человеческую индуцируемую NOS(iNOS), человеческую эндотелиальную конститутивную NOS(eNOS) или человеческую нейронную конститутивную NOS(nNOS) получают в инфицированных бакуловирусом клетках Sf9 (ALEXIS). В радиометрическом методе активность синтазы NO определяют, измеряя конверсию [ ³ Н]L-аргинина в [ ³ Н]L-цитрулин. Для того чтобы определить iNOS, 10 мкл фермента добавляют к 100 мкл 100 мМ HEPES, рН 7,4, содержащей 1 мМ CaCl ₂ , 1 мМ ЭДТК, 1 мМ дитиотреитола, 1 мкМ FMN, 1 мкМ FAD, 10 мкМ тетрагидробиоптерина, 120 мкМ NADPH и 100 мкМ СаМ. Для того чтобы определить eNOS или nNOS, 10 мкл фермента добавляют к 100 мкл 40 мМ HEPES, рН=7,4, содержащей 2,4 мМ CaCl ₂ , 1 мМ MgCl ₂ , 1 мг/мл BSA, 1 мМ ЭДТК, 1 мМ дитиотреитола, 1 мкМ FMN, 1 мкМ FAD, 10 мкМ тетрагидробиоптерина, 1 мкМ NADPH и 1,2 мкМ СаМ.

Для того, чтобы измерить ингибирование фермента, 15 мкл раствора испытываемого соединения добавляют к раствору для анализа фермента с временем последующей предварительной инкубации 15 мин при комнатной температуре. Реакцию инициируют добавлением 20 мкл L-аргинина, содержащего 0,25 мкКи [ ³ Н]-аргинина/мл и 24 мкМ L-аргинина. Общий объем реакционной смеси в каждой лунке 150 мкл. Реакции осуществляют при 37 °С в течение 45 мин. Реакцию прекращают, добавляя 20 мкл охлажденного на льду буфера, содержащего 100 мМ HEPES, 3 мМ EGTA, 3 мМ ЭДТК, рН = 5,5. [ ³ Н]L-Цитрулин отделяют DOWEX (ионообменная смола DOWEX 50 W X 8-400, SIGMA) и удаляют DOWEX вращением в центрифуге при 12000 g в течение 10 мин. Добавляют 70 мкл аликвоту супернатанта к 100 мкл сцинтилляционной жидкости и проводят подсчет для образцов в жидкостном сцинтилляционном счетчике (1450 Microbeta Jet, Wallac). Специфическая активность NOS приводится как разность между активностью, извлеченной из испытываемого раствора, и активностью, наблюдаемой в контрольном образце, содержащем 240 мМ ингибитора L-NMMA. Все анализы осуществляют, по меньшей мере, дважды. Стандартные отклонения составляют 10% или менее. Результаты для примеров соединений по изобретению приводятся в табл. 2b. Такие результаты снова показывают селективность соединений по изобретению в отношении ингибирования nNOS.

Таблица 2b. Селективное ингибирование NOS соединениями по изобретению

Исследования нейрозащиты

Нейротоксичное действие глутамата через активацию рецепторов NMDA и приток Са ²⁺ вносит вклад в разрушение нейронов при некоторых неврологических заболеваниях (Choi, J. Neurobiol., 23: 1261, 1992; Dingledine et al., Trends Pharmacol. Sci., 11: 334-338, 1990; Meldrum and Garthwaite, Trends Pharmacol. Sci., 11: 379-387, 1990). Таким образом, соединения, которые предотвращают гибель клеток, связанную с активацией рецепторов NMDA, или непосредственно через антагонизм к NMDA (примеры 12-15), или косвенно через блокирование синтеза NO, опосредуемого NMDA, являются кандидатами в нейрозащитные средства для лечения нейродегенеративных заболеваний.

Пример 53. Нейрозащита корковых клеток крысы от стимуляции NMDA

Согласно процедуре, описанной ранее (Tremblay et al., J. Neurosci., 20(19): 7183-92, 2000), испытываемые соединения добавляют для 60-минутной предварительной инкубации к культурам корковых нейронов крысы, на которые затем воздействуют в течение 30 мин 25 мкМ NMDA в буфере. Через 24 ч культуры обрабатывают иодидом пропидия, и определяют % гибели клеток и сравнивают с контрольными клетками. Как видно на фиг. 1, соединения 9, 12 и 18 защищают нейроны от гибели после стимуляции NMDA, что указывает на их эффективность как нейрозащитных средств.

Пример 54. Нейрозащита гиппокампных срезов крысы после кислород-глюкозной депривации (OGD)

С учетом того, что во время удара, ишемии и травмы головной мозг лишается кислорода и питательных веществ, OGD представляет более "физиологический"инсульт для корковых культур и, таким образом, является релевантной моделью нейрозащиты. Нейронные культуры подвергают 90-минутной гипоксии в безглюкозном буфере с соединением 9, 12 или 18 или без него. Используют 60-минутный период предварительной инкубации с соединением 12 в культурах, обрабатываемых таким соединением. Через 24 ч используют иодид пропидия для определения гибели клеток. Как видно на фиг. 2, соединение 12 в концентрации 25 мкМ защищает нейроны от 90-минутного OGD-инсульта, что указывает на его эффективность как нейрозащитного средства.

Пример 55. Действие соединения 12 на индуцированный NMDA приток Са ²⁺

Для того чтобы измерить внутриклеточные концентрации [Са ²⁺ ] в нейронных культурах, клетки нагружают флуоресцентным Са ²⁺ -чувствительным красителем Fluo-4FF. Флуоресценцию считывают на планшет-ридере до и после 15-минутного применения NMDA (25 мкМ). NMDA индуцирует быстрое транзиторное повышение [Ca ²⁺ ] _i . Как видно на фиг. 3, соединение 12 вызывает зависящее от дозы (10-15 мкМ) ингибирование индуцированного NMDA притока Са ²⁺ , что указывает на его эффективность как антагониста NMDA и как нейрозащитного средства.

Пример 56. Действие соединения 12 на индуцированные NMDA токи в цельных клетках корковых нейронов крысы

Исследование действия соединения 12 на индуцированные NMDA токи в цельных клетках корковых нейронов крысы осуществляют согласно процедурам, описанным в литературе (Mealing et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, 297(3), 906-14). Как видно на фиг. 4, соединение 12 эффективно блокирует индуцируемые NMDA токи в цельных клетках корковых нейронов крысы в зависимости от дозы, что показывает его эффективность как антагониста NMDA и как нейрозащитного средства.

Пример 57. Действие ингибиторов NOS на вызываемое формалином облизывание лап у мышей

Индуцируемые формалином гипералгезия и воспаление. На экспериментальной модели длительной воспалительной ноцицепции, связанной с длительными внутриклеточными изменениями ноцицептивного процессинга на уровне спинного мозга, мышей или крыс подвергают субплантарной инъекции формалина в лапу (Chapman et al., Brain Res., 697: 258-262, 1995; Meller and Gebhart, Pain, 52: 127-136, 1993). Существует две фазы спонтанного ноцицептивного поведения. Первая фаза (фаза I) длится примерно 5 мин, после чего следует вторая фаза (фаза II), длящаяся приблизительно 40 мин, характеризующаяся постоянным подергиванием или облизыванием инъецированной лапы (Fu et al., Neuroscience, 101(4): 1127-1135, 2000). Более длительные периоды после инъекции формалина приводят к развитию аллодинии и гипералгезии (1-4 недели). Ранее показано, что 7-NI обнаруживает антиноцицептивную активность на мышах без повышения кровяного давления (Moore et al., Br. J. Pharmacol., 102: 198-202, 1992). Таким образом, соединения, обладающие активностью ингибирования nNOS, должны быть эффективными для лечения боли при воспалении и невропатической боли - симптомов аллодинии и гипералгезии, являющихся результатами воспаления.

Испытываемые соединения, включая соединение 12 и 7-NI, растворяют в смеси 1% ДМСО/2% твина 80/0,9% NaCl. Самцов или самок мышей, полученных от ICR, массой 23 ± 2 г, помещают в садки АРЕС ® и выдерживают в среде с регулируемой температурой (22-24 °С) и влажностью (60-80%) с 12-час циклами чередования освещение-темнота в течение 1 недели до использования. Обеспечивают свободный доступ к стандартному лабораторному корму и водопроводной воде. Испытываемые вещества вводят внутрибрюшнинно 6 группам по 5 мышей, полученных от ICR, массой 23 ± 2 г, за 30 мин до субплантарной инъекции формалина (0,02 мл, 1%). Уменьшение времени облизывания задней лапы, вызываемого формалином, регистрируют на протяжении следующих 20-30 мин (фаза II). Как видно на фиг. 5, введение как соединения 12, так и 7-NI приводит к уменьшению частоты облизывания лапы у подопытных мышей, что указывает на эффективность данного соединения в качестве средства лечения боли.

Пример 58. Нейрозащитное действие соединения формулы 12 на мышиной модели травматического повреждения головного мозга (TBI)

Испытание с травматическим повреждением головного мозга

Самцам мышей Swiss (Iffa Credo, Франция) массой 21-24 г перед экспериментом дают воду и корм ad IIbidum. Модель травматического повреждения головного мозга (TBI), используемая в эксперименте, близка к модели травмы головы, описанной Hall (J. Neurosurg., 62: 882-887, 1985), и модифицирована согласно Mesenge (J. Neurotrauma, 13: 209-214, 1996). Мышей берут за кожу на шее со стороны спины и помещают голову под травматический аппарат, причем подбородок плотно опирается на основание аппарата. Затем массу повреждения освобождают для свободного падения для удара, причем регулятор остается поверх головы. Массу 50 г бросают с высоты 24 см, что приводит к повреждению с ударом 1200 г/см. Повреждение сразу же вызывает потерю сознания, что подтверждается утратой рефлекса выпрямления и утратой любого болевого рефлекса. Потеря сознания длится 2-5 мин. В первые секунды после травмы погибает 20-30% мышей. Отсроченной смертности или прострации среди выживших мышей не имеется, причем подопытные животные пьют воду и едят корм схоже с контрольными животными.

Оценка неврологических расстройств

Неврологические проверки осуществляют слепым методом через 1, 4 и 24 ч после TBI на нетравмированных мышах, обработанных соединением 12, контрольных мышах, обработанных одним носителем, и травмированных мышах, обработанных соединением 12. Сенсорно-двигательный статус оценивают вслепую испытанием на захват и испытанием со шпагатом, как описано в Холл, (J. Neurosurg., 62: 882-887, 1985). Каждую мышь берут за хвост и помещают на натянутый шпагат длиной 60 см, подвешенный между двумя вертикальными стойками высотой 40 см, над столом с мягкой обивкой. Оценку захвата определяют как длительность периода (в секундах), во время которого мышь остается на шпагате каким-либо образом, который ограничивается 30 с. В испытании на шпагате с оценками от 0 (совсем плохо) до 5 (нормально) оценивают путь, когда мышь может висеть и двигаться по шпагату, приняты следующие оценочные критерии: 0 - мышь падает в течение 30-секундного периода оценки; 1 - мышь висит на шпагате в течение 30-секундного периода оценки с использованием только одной лапы; 2 - мышь висит на шпагате с использованием четырех лап по меньшей мере 5 с; 3 - мышь висит на шпагате с использованием четырех лап и хвоста по меньшей мере 5 с; 4 - мышь висит на шпагате с использованием четырех лап и хвоста и передвигается по меньшей мере 5 с и 5 - мышь достигает одной из вертикальных стоек во время 30-секундного периода оценки.

Через час после TBI не наблюдают существенного улучшения в оценке со шпагатом (фиг. 6, табл. 3) или в оценках по Холлу (фиг. 7, табл. 4) у контрольных мышей или обработанных мышей. Однако через 4 ч после TBI имеется существенное улучшение в оценках со шпагатом (фиг. 8, табл. 5) для группы, обработанной 3 и 6 мг/кг, и в оценке захвата для группы, обработанной 3 мг/кг, с тенденцией к улучшению в группе, обработанной 6 мг/кг (фиг. 9, табл. 6). Существенное улучшение в оценке по Холлу наблюдают для группы, обработанной 6 мг/кг, через 4 ч после TBI (фиг. 10, табл. 7). Несущественную тенденцию к улучшению наблюдают через 24 ч в оценках со шпагатом, захвата и по Холлу для обработанных групп относительно контроля после однократной подкожно дозы соединения 12. Такие результаты указывают на нейрозащитное действие соединения 12 после травматического повреждения головного мозга.

Температура тела и потеря массы. Температуру тела и потерю массы регистрируют для травмированных мышей, для обработанных травмированных мышей и контрольных мышей через 1, 4 и 24 ч после повреждения. Через один час после TBI отмечают существенное снижение температуры тела у травмированных мышей без различия в температуре между обоработанными и контрольными мышами (фиг. 11, табл. 8). Через 4 ч после TBI у необработанных животных имеется существенное повышение температуры тела до 37,1, в то время как средняя температура тела у обработанных мышей схожа с температурой у нетравмированных мышей (фиг. 12, табл. 9). Через 24 ч травмированные контрольные мыши и мыши, обработанные низкой дозой (1 мг/кг), имеют более низкую температуру тела, чем нетравмированные мыши или травмированные мыши, обработанные 3 и 6 мг/кг.

Травмированные мыши имеют значительную потерю массы тела через 24 ч после TBI относительно нетравмированных мышей (фиг. 13, табл. 10). Однако существенное улучшение массы тела наблюдают для мышей в группе, обработанной 3 мг/кг. Снижение массы тела и скорости роста является характерным вторичным явлением, связанным с острой травмой головного мозга, частично из-за гиперкатаболизма поврежденной ткани головного мозга (J.L. Pepe and С.A. Barba, J. Head Trauma Rehabil., 14: 462-474, 1999; Y.P. Tang et al., J. Neurotrauma, 14: 851-862, 1997). Следовательно, уменьшение потери массы тела является дополнительным показателем нейрозащитного действия соединения 12 после травматического повреждения головного мозга.

Пример 59. Нейрозащита в СА1 срезов гиппокампа после OGD

Препараты срезов головного мозга являются ценным инструментом для исследования механизма, лежащего в основе нейротоксичности, и оценки защитного потенциала новых нейрозащитных терапевтических средств. Например, показано, что ингибиторы оксида азота ослабляют вызванное OGD повреждение (Izumi et al., Neuroscience Letters, 210: 157-160, 1996) и блокируют предварительные условия гипоксии (Centeno et al., Brain Research, 836: 62-69, 1999) в тонких срезах гиппокампа крысы. Такие препараты дают возможность точного регулирования нейронной окружающей среды, причем таким образом возможны как ионные, так и фармакологические манипуляции, невозможные in vivo. Модель гиппакампного среза особенно применима при исследовании вызванной ишемией нейротоксичности, так как его нейроны СА1 относятся к числу наиболее чувствительных к нейронному повреждению. Кроме того, гиппокампный срез сохраняет физиологические взаимодействия нейроны - глиальные клетки и синаптическую схему и сохраняет функциональную жизнеспособность значительно долее 6 ч. Ортодромная стимуляция входа коллатералей Шеффера в нейроны в СА1 и последующее измерение потенциалов полей вблизи пирамидальных тел нейронов СА1 является выбранным способом для оценки жизнеспособности на такой модели (см. фиг. 14).

Повреждение головного мозга можно оценить в срезах головного мозга инкубацией свежих срезов головного мозга в хлориде 2,3,5-трифенилтетразолия (ТТС). ТТС, который является бесцветным, восстанавливается митохондриальной сукцинатдегидрогеназой в живой ткани до красного продукта формазана. Затем сочетания фотографий или сканирования и анализа изображений используют для измерения площадей нормальной (красный цвет) и поврежденной (неокрашенная) ткани на каждой лицевой поверхности и оценки степени повреждения.

Метод окрашивания ТТС дополнительно усовершенствован Experimental Stroke Group at IBS (Study Host: University of Ottawa, Canada) с использованием растворителя для экстрагирования окрашенного формазаном продукта из срезов ткани и его измерения спектрфотометрически, причем таким образом получают простую объективную оценку повреждения (Preston and Webster, J. Neurosci. Meth., 94(2): 187-92, 1999). Watson et al. (J. Neurosci. Meth., 53: 203-208, 1994) показали корреляцию между ТТС и продуктом реакции и амплитудой спайка популяции. Модифицированный варант метода Preston and Webster применяют к срезам гиппокампа в сочетании с измерениями потенциалов полей аплитуды спайка популяции для скрининга на нейрозащитное действие соединений по изобретению, таких как, например, соединение 12.

Получение срезов

Самцам крыс Wistar массой 180-200 г дают наркоз галотаном и осуществляют декапитацию. Их головные мозги извлекают и помещают в искусственную спинномозговую жидкость (ACSF) при 5 °С в пределах 60 с после декапитации. Состав ACSF следующий (в мМ): 127 NaCl, 2 KCl, 1,2 KH ₂ PO ₄ , 26 NaHCO ₃ , 2 MgSO ₄ , 2 CaCl ₂ , 10 глюкозы, уравновешен 95% O ₂ /5% CO ₂ , рН 7,4. Головной мозг рассекают и иссекают гиппокамп и нарезают на срезы толщиной 400 мкм с использованием ножа McIlwain Tissue (Mickle Laboratory Engineering Co., Gomshall, GB). Срезы делают приблизительно на 1 мм от рострального конца гиппокампа и собирают приблизительно 12 срезов с каждого гиппокампа. Срезы распределяют на группы с чередованием с тем, чтобы каждая группа содержала срезы со всех иссеченных участков гиппокампа. Срезы гиппокампа помещают на платформу из нейлоновой сетки в камеры для инкубации сопряженного типа (6-8 срезов на платформу; 1 платформа на камеру) на 90 мин при 35 °С. ACSF в таких камерах и атмосферу над ней непрерывно обрабатывают газом 95% O ₂ /5% CO ₂ . В некоторых случаях после первых 60 мин периода стабилизации срезы получают предтравматическую обработку переносом срезов на их нейлоновой сетчатой платформе в другую камеру на 30 мин инкубации в соответствующей ACSF. Срезы, которые подвергают 10-мин кислород-глюкозной депривации (OGD), переносят на их нейлоновых сетчатых платформах в камеры для инкубации и атмосферу над сетками непрерывно обрабатывают газом 95% N ₂ /5% CO ₂ . После такого 10-мин повреждения платформы, содержащие срезы, возвращают в их первоначальные камеры для инкубации и выдерживают в течение 4 ч.

Группы обработки

Для каждого эксперимента готовят три контрольные группы: контроль live (4 ч после мнимого повреждения), контроль dead (4 ч после 10 мин повреждения OGD) и контроль protection (4 ч после 10 мин повреждения OGD в 0,3 мМ Са с 30-мин предварительной инкубацией). Эксперименты, в которых срезы контроля live не выживают, контроля dead не погибают или контроля protection существенно не лучше, чем в контрольной dead группе, полностью исключают.

(а) Сохранение вызванных потенциалов полей. Эффективность синаптического переноса в таких срезах оценивают с использованием электрофизиологических методов. Срезы переносят в сопряженную регистрирующую камеру (Haas et al., J. Neurosci. Meth., 1: 323-325, 1979) и перфузируют со скоростью 1 мл/мин при 35 ±0,5 °С. Ортодромные потенциалы полей вызывают стимуляцией коллатералей Шеффера концентрическим двухполюсным вольфрамовым электродом. Стимуляция включает длящиеся 2 мс импульсы постоянного тока с интервалами 30 с. Вызванные потенциалы (ЕР) регистрируют в СА1 из sratum pyrimidale с использованием стеклянных микропипеток (2-5 мегом), наполненных 150 мМ NaCl. Амплитуду спайка популяции (PS) измеряют из отклонения ниже пика на полпути между 2 положительными пиками. Амплитуду PS оптимизируют, регулируя отводящий электрод в срезе, как правило, на глубину примерно 50 мкм. В срезах, в которых PS меньше 3 мВ по амплитуде, делают 2-ую и, при необходимости, 3-ю попытку получения более устойчивого PS перемещением отводящего электрода в пределах СА1. В таблицу вносят самую большую амплитуду PS из таких нескольких попыток регистрации.

В контрольных срезах соединение 12 при 50 мкМ на амплитуду PS не влияет (фиг. 14, контроль слева, соединение 12 справа). На фиг. 15 штрихи показывают PS, зарегестрированные с контрольных срезов (слева), срезов, подвергнутых OGD (посередине), и срезов, подвергнутых OGD в 0,3 мМ Са ²⁺ . Каждый штрих является средним из 10 последовательно зарегистрированных потенциалов поля; возбуждение 0,03 Гц. Срезы гиппокампов, не подвергавшиеся травме OGD (контроль live), имеют амплитуду PS 3,5 ±0,5 мВ (n=12). Срезы, подвергавшиеся 10-мин OGD (контроль dead), показывают сокращение волокон, но не PS (n=5), в то время как срезы, подвергавшиеся такой же травме, но инкубированные в 0,3 мМ Са ²⁺ 30 мин перед и во время травмы (контроль protective), имеют амплитуду PS 1,4 ±0,3 мВ (n=3) (фиг. 16).

Срезы, инкубированные в одном 0,05% ДМСО (максимальная концентрация носителя, используемого для 7-NI) и подвергавшиеся OGD как в группах обработки, имеют амплитуды PS, существенно не отличающиеся от контрольной dead группы. Срезы, инкубированные с 100 мкМ 7-NI, показывают сокращение волокон, но не PS(n=3). Срезы, обработанные 50 мкМ соединения 12, имеют амплитуды PS 2,1 ±1,5 мВ (n=3). Все эти результаты указывают на нейрозащитное действие соединения 12.

(b) Сохранение метахондриальной метаболической активности соединением 12 с использованием окрашивания ТТС. Срезы гиппокампа, подвергнутые 10-мин OGD (контроль dead), сохраняют 25 ±5% (n=5 групп из 4-5 срезов) от поглощения срезов, не подвергавшихся травме (контроль live - нормализован к 100%), в то время как срезы, предварительно инкубированные в 0,3 мМ кальции 30 мин перед и во время OGD, сохраняют 107 ±27% (n=5) их поглощения (контроль protective). Срезы, инкубированные в одном 0,05% ДМСО (максимальная концентрация носителя, используемого для 7-NI) и подвергавшиеся OGD как в группах обработки, имеют поглощение, существенно не отличающееся от контрольной dead группы (данные не приводятся). Срезы, инкубированные с 100 мкМ 7-NI, сохраняют 81 ±18% (n=5) их поглощения, в то время как срезы, обработанные 50 мкМ соединения 12, сохраняют 92 ±18% (n=8) их поглощения (см. фиг. 17). Такие результаты снова указывают на нейрозащитное действие соединения 12.

Пример 60. Эффективность на моделях состояний предполагаемой боли, подобной невропатической

Эффективность соединений изобретения для лечения невропатической боли оценивают с использованием стандартной модели предполагаемой антигипералгезивной и антиалодиннической активности, вызванных различными способами, каждый из которых подробнее описан ниже.

(а) Модель Чанга вызванной травмой боли, подобной невропатической боли. Экспериментальные решения анализа модели лигирования спинномозгового нерва SNL по Чангу отображены на фиг. 18. Повреждение, лигирование, нерва осуществляют согласно способу, описанному Kim and Chung (Kim and Chung, Pain, 50: 355-363, 1992). Данный метод продуцирует признаки невропатической дизестезии, включая тактильную аллодинию, термическую гипералгезию и защитную фиксацию поврежденной лапы. Крысам дают наркоз галотаном и вскрывают позвоночник в участке L4-S2. Вскрывают спинномозговые нервы L5 и L6, осторожно изолируют и туго лигируют шелковым кетгутом 4-0 дистально к DRG. После достижения уверенности в гомеостатической устойчивости раны зашивают и животным дают возможность восстанавливаться в отдельных клетках. Ложно оперированных крыс получают идентичным способом за исключением того, что спинномозговые нервы L5/L6 не лигируют. Всех крыс, обнаруживающих признаки двигательного расстройства, умервщляют. После периода восстановления после хирургического вмешательства крысы показывают повышенную чувствительность к болезненным и обычно безболезненным раздражителям.

После одной стандартной дозы (10 мг/кг), инъецированной IP согласно описанной процедуре, имеется явное антигипералгезивное действие селективных в отношении nNOS соединений 32 (-), 32 (+) (см. фигуру 19) и 12 (см. фиг. 21). Введение соединений 32 (-), 32 (+) и 12 подопытным животным также проявляется в реверсировании тактильной гипертезии (см. фиг. 20 и 22, соответственно). На данной модели невропатической боли наблюдают четкое различие между двумя энантиомерами соединения 32.

Пример 61. Экспериментальная модель мигрени

Животные. Самцов крыс Sprague Dawley (275-300 г) закупают у Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, IN). Животным предоставляют свободный доступ к корму и воде. Животных выдерживают при 12-часовом чередовании циклов освещения (от 7 ч д.п. до 7 ч п.п.) и темноты (от 7 ч п.п. до 7 ч д.п.). Все процедуры проводят согласно установкам и рекомендациям Международной ассоциации по изучению боли и руководству Национального института здоровья и применению подопытных животных, также одобренным Комитетом по охране и использованию животных Университета Аризоны.

Подготовка операции

Кануляция для вызывания мигрени. Самцам крыс Sprague Dawley дают наркоз с использованием кетамина/ксилазина (80 мг/кг, внутрибрюшинно), верхнюю часть головы бреют с использованием машинки для стрижки грызунов (Oster Golden A5, ширина/размер лезвий 50) и обритые участки очищают бетадином и 70% этанолом. Животных помещают в стереотаксический аппарат (Stoelting, модель 51600) и поддерживают температуру тела 37 °С с использованием греющей подстилки под животными. В выбритом и очищенном участке головы делают 2-см разрез с использованием скальпеля с лезвием #10 и любое кровотечение останавливают с использованием стерильных ватных тампонов. Местоположение брегмы и срединные костные швы идентифицируют как координаты и делают небольшое отверстие 1 мм в диаметре с использованием ручной дрели без разрушения твердой мозговой оболочки, но достаточно глубокое, чтобы воздействовать на твердую мозговую оболочку. Делают еще два отверстия (1 мм в диаметре) в 4-5 мм от предыдущего места для того, чтобы установить винты из нержавеющей стали (Small Parts #A-MPX-080-3F), закрепляющие канюлю, через которую можно доставлять воспалительную жидкость для того, чтобы вызвать экспериментальную мигрень.

Модифицированную интрацеребровентрикулярную (ICV) канюлю (Plastic One #C313G) помещают в отверстие без пенетрации в или сквозь твердую мозговую оболочку. ICV канюлю модифицируют, обрезая ее до длины 1 мм от нижней части пластиковой резьбы с использованием мотоинструмента Dremel, и подпиливают для удаления любых металлических заусениц. Как только модифицированная канюля для вызывания мигрени станет на место, вокруг нее и винтов из нержавеющей стали размещают зубную акриловую смолу для того, чтобы гарантировать, что канюля установлена надежно. Как только зубная акриловая смола высохнет (т.е. через 10-15 мин), крышку канюли закрепляют сверху для того, чтобы избежать попадания загрязнений в канюлю, и кожу снова зашивают с использованием шелкового кетгута 3-0. Животным дают инъекцию антибиотика (амикацин С, 5 мг/кг, внутримышечно), извлекают из стереотаксической рамки и дают восстанавливаться от наркоза на подогреваемой подстилке. Животных помещают в чистую отдельную клетку на восстановительный период в 5 суток.

Инъекции

Подкожные инъекции.

Подкожные инъекции (подкожно) осуществляют, взяв животное в руки и вводя съемную иглу для инъекций 25 размера на 1-см ³ шприце одноразового применения в абдоминальную область животного, убеждаясь, что игла остается между мышцей и кожей животного. Инъекции соединений осуществляют в течение 5 с и отмечают как положительные по развитию выпячивания кожи в месте инъекции. Пероральную доставку осуществляют с использованием иглы для внутризондового питания размером 18, присоединенной к 1-см ³ шприцу.

Инъекции канюлей для вызывания мигрени.

Канюлю для инъекций (Plastics One C313G, обрезанную для подгонки к модифицированным ICV канюлям), соединенную со шприцем 25:1 Hamilton (1702SN) трубочкой tygon (Cole-Palmer, 95601-14), используют для инъекции раствора 10:1 медиаторов воспаления в твердую мозговую оболочку.

Поведенческое испытание.

Не использовавшихся ранее животных за день до операции для вызывания мигрени помещают в подвешенные плексигласовые камеры (дл. 30 см × шир. 15 см × выс. 20 см) с дном из проволочной сетки (1 см ² ) и выдерживают для акклиматизации в испытательных камерах в течение 30 мин.

Пороги чувствительности задних лап на невредные тактильные раздражители у крыс

Пороги сгибания лап в ответ на тактильные раздражители определяют по реакции на зондирование калиброванными нитями фон Фрея (Stoelting, 58011). Нити фон Фрея применяют перпендикулярно к плоской поверхности задней лапы животного до тех пор, пока она слегка не согнется, и выдерживают 3-6 с. На положительную реакцию указывает резкое сгибание лапы. Определяют 50% порог сгибания лапы непараметрическим методом Диксона (1980). Применяют первый зонд, эквивалентный 2,00 г, и если реакция на радражитель отрицательная, увеличивают нагрузку на один инкремент, в то время как в случае положительной реакции уменьшают на один инкремент. Раздражитель дифференцированно усиливают до тех пор, пока не получат положительную реакцию, а затем ослабляют до тех пор, пока не получат отрицательный результат. Такой способ "вверх-вниз"повторяют до определения трех изменений в поведении. Картину положительных и отрицательных реакций вносят в таблицу. Определяют 50% порог сгибания лапы как (10 ^[Xf+kM] )/10000, где Xf = величина последней используемой нити фон Фрея, k = показатель Диксона для положительной/отрицательной картины и М = среднее (log) различие между раздражителями. В эксперименте используют только не использовавшихся ранее животных с исходными показателями 11-15 г. Пятнадцать грамм используют как максимальный порог. Через пять дней после операции для вызывания мигрени животных повторно испытывают на пороговую чувствительность сгибания лап с использованием той же подготовки и процедуры фон Фрея, указанной выше. Данные переводят в % "антиаллодинии" по формуле

% активности = 100 × (величина после мигрени - базовая величина)/(15 г - базовая величина).

Во всех исследованиях используют только животных, которые не демонстрируют различия в их тактильной гиперчувствительности по сравнению с их показателями перед операцией по вызыванию мигрени.

После установления базовой величины порогов чувствительности сгибания лап отдельных животных извлекают из испытательной камеры, снимают крышку с канюли для вызывания мигрени, и животные получают инъекцию или смеси медиаторов воспаления (1 мМ гистамина, 1 мМ 5-НТ [серотонина], 1 мМ брадикинина, 1 мМ PGE ₂ ) или носителя в объеме 10 мкл через канюлю для вызывания мигрени в течение 5-10 с. Коктейль медиаторов воспаления (IM) заново готовят в день каждого эксперимента. Крышку канюли для вызывания мигрени возвращают на место, отдельных животных снова помещают в их соответствующие испытательные камеры и измеряют пороги сгибания лап с интервалами в 1 ч в течение 6 ч. Результаты переводят в % "антиаллодинии" по формуле

% активности = 100 × (величина после IM - базовая величина до IM)/(15 г - базовая величина до IM).

Результаты с выбранными соединениями по изобретению, полученные с использованием такой модели, приводятся на фиг. 23. Применение воспалительной жидкости (IS) к твердой мозговой оболочке приводит к падению порога сгибания задних лап после раздражения нитями фон Фрея. Введение сукцината суматриптана (1 мг/кг, подкожно) за 5 мин до добавления жидкости приводит к предотвращению развития аллодинии задних лап при измерении через два часа после введения IS. Подобным образом, неселективный ингибитор NOS L-NMMA (10 мг/кг, внутривенно) или 42 и 97 (6 мг/кг, внутривенно) за 10 минут до IS предотвращают развитие аллодинии задних лап. Таким образом, неселективные ингибиторы NOS, такие как L-NMMA, или более селективные ингибиторы nNOS(например, соединение 97), или смешанные соединения nNOS/5HTlD/lB (например, соединение 42), должны быть эффективны для лечения мигрени.

Пример 62. Анализы связывания 5HT1D/1B серотонина

Анализы связывания 5-HT1D (радиолиганд агонист) осуществляют с использованием мембран бычьих хвостатых ядер согласно способам Heuring and Peroutka (J. Neurosci., 1987, 7: 894-903). Анализы связывания 5-НТ1В (кора головного мозга крысы) (радиолиганд агонист) осуществляют согласно способу Hoyer et al. (Eur. J. Pharmacol., 1995, 118: 1-12). Для цели осуществления анализа специфическое связывание лиганда с рецепторами определяют как различие между общим связыванием и неспецифическим связыванием, определенным в присутствии избытка немеченного лиганда. Результаты выражают в виде процента от контрольного специфического связывания, полученного в присутствии испытываемых соединений. Величины IC ₅₀ (концентрация, вызывающая полумаксимальное ингибирование контрольного специфического связывания) и коэффициенты Хилла (n _H ) определяют нелинейным регрессионным анализом конкурентных кривых с использованием подбора кривой для уравнения Хилла и константы ингибирования (K _i ) вычисляют из уравнения Cheng Prusoff (K _i = IC ₅₀ /(1+(L/K _D )), где L = концентрация радиолиганда в анализе и K _D = аффинность радиолиганда к рецептору).

Другие воплощения

Хотя настоящее изобретение описано со ссылкой на представленные предпочтительные примеры, следует иметь в виду, что изобретение не ограничивается раскрытыми примерами. Напротив, подразумевается, что изобретение охватывает различные модификации и эквивалентные варианты, соответствующие сущности и объему прилагаемой формулы изобретения.

Все публикации, патенты и заявки на патенты, включенные в данное описание, включены в него в качестве ссылок, как если бы каждая из указанных публикаций, патентов и заявок на патент включалась бы в данное описание в качестве ссылки по отдельности. Когда обнаруживается, что термин, используемый в данной заявке, определяется иначе в документе, включенном в данное описание в качестве ссылки, определением для данного термина должно служить определение, приведенное в данном описании.

Другие воплощения охватываются формулой изобретения.