Настоящее изобретение относится к изопропиловому эфиру 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты, его фармацевтически приемлемым солям, сольватам и гидратам, которые являются модуляторами метаболизма глюкозы. В соответствии с этим соединения по настоящему изобретению применимы в лечении связанных с метаболизмом нарушений и как следствие осложнений, таких как диабет и ожирение.

[0001] Соединение формулы (I)

[0002] Фармацевтическая композиция, включающая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или гидрат, и фармацевтически приемлемый носитель.

[0003] Способ лечения связанного с метаболизмом нарушения у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата, или фармацевтической композиции по п.2.

[0004] Способ по п.3, в котором указанное нарушение, связанное с метаболизмом, выбрано из группы, состоящей из диабета I типа, диабета II типа, неадекватной толерантности к глюкозе, невосприимчивости к инсулину, гипергликемии, гиперлипидемии, гипертриглицеридемии, гиперхолестеринемии, дислипидемии и синдрома X.

[0005] Способ по п.3, в котором указанное нарушение, связанное с метаболизмом, представляет собой диабет II типа.

[0006] Способ по п.3, в котором указанное нарушение, связанное с метаболизмом, представляет собой гипергликемию.

[0007] Способ по п.3, в котором указанное нарушение, связанное с метаболизмом, представляет собой дислипидемию.

[0008] Способ по п.3, в котором указанное нарушение, связанное с метаболизмом, представляет собой синдром X.

[0009] Способ лечения ожирения у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.2.

[0010] Способ снижения потребления пищи индивидуумом, включающий введение указанному индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.2.

[0011] Способ индуцирования чувства сытости у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.2.

[0012] Способ контролирования или снижения прироста веса у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.2.

[0013] Способ по любому из пп.3-12, в котором указанный индивидуум является человеком.

[0014] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении нарушения, связанного с метаболизмом.

[0015] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении диабета I типа, диабета II типа, неадекватной толерантности к глюкозе, невосприимчивости к инсулину, гипергликемии, гиперлипидемии, гипертриглицеридемии, гиперхолестеринемии, дислипидемии или синдрома X.

[0016] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении диабета II типа.

[0017] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении гипергликемии.

[0018] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении дислипидемии.

[0019] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении синдрома X.

[0020] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в лечении ожирения.

[0021] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в снижении потребления пищи индивидуумом.

[0022] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в индуцировании чувства сытости у индивидуума.

[0023] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата для получения лекарственного средства для использования в контролировании или снижении прироста веса у индивидуума.

[0024] Применение по любому из пп.21-23, в котором указанный индивидуум является человеком.

[0025] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата в способе лечения человеческого или животного организма посредством терапии.

[0026] Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата в способе лечения связанного с метаболизмом нарушения человеческого или животного организма посредством терапии.

[0027] Способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или гидрата и фармацевтически приемлемого носителя.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к изопропиловому эфиру 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты, его фармацевтически приемлемым солям, сольватам и гидратам, которые являются модуляторами метаболизма глюкозы. В соответствии с этим, соединения по настоящему изобретению применимы в лечении связанных с метаболизмом нарушений и как следствие осложнений, таких как диабет и ожирение.

Предшествующий уровень техники

Сахарный диабет является серьезным заболеванием, затрагивающим свыше 100 миллионов человек во всем мире. В Соединенных Штатах, где свыше 12 миллионов диабетиков, каждый год диагностируется при этом 600000 новых случаев.

Сахарный диабет представляет собой диагностический термин для группы нарушений, характеризующихся отклоняющимся от нормы гомеостазом глюкозы, приводящим к повышенному содержанию сахара в крови. Существует много типов диабета, но два самых распространенных представляют собой Тип I (также именуемый как инсулинозависимый сахарный диабет или IDDM) и Тип II (также именуемый как инсулинонезависимый сахарный диабет или NIDDM).

Этиология различных типов диабета неодинакова; однако, каждый человек с диабетом имеет совокупно две особенности: сперхпродуцирование глюкозы печенью и небольшую способность или отсутствие способности транспорта глюкозы из крови в клетки, где она становится первостепенным источником энергии для организма.

Люди, у которых нет диабета, полагаются на инсулин, гормон, вырабатываемый поджелудочной железой, для транспорта глюкозы из крови в клетки организма. Однако у людей, имеющих диабет, либо не продуцируется инсулин, либо не используется эффективно тот инсулин, который продуцируется, поэтому в их клетки глюкоза перемещаться не может. Глюкоза накапливается в крови, создавая патологическое состояние, называемое гипергликемией, и со временем может породить серьезные проблемы со здоровьем.

Диабет представляет собой синдром с взаимосвязанными метаболическим, сосудистым и невропатическим компонентами. Метаболический синдром, обычно характеризующийся гипергликемией, включает в себя изменения в углеводном, жировом и белковом метаболизме, вызванные отсутствующей или заметно пониженной секрецией инсулина и/или неэффективным действием инсулина. Сосудистый синдром включает в себя отклонения от нормы в кровеносных сосудах, приводящие к сердечно-сосудистым, относящимся к сетчатке глаза и к почечным осложнениям. Отклонения от нормы в периферической и вегетативной нервных системах также являются составной частью диабетического синдрома.

Приблизительно от 5 до 10% людей, имеющих диабет, имеют IDDM. Эти индивиды не продуцируют инсулин и поэтому должны инъецировать инсулин для поддержания нормального уровня глюкозы в крови. IDDM характеризуется низкими или невыявляемыми уровнями продуцирования эндогенного инсулина, вызванными разрушением инсулинпродуцирующих β-клеток поджелудочной железы, характеристикой, по которой исключительно быстро IDDM различается от NIDDM. IDDM, некогда названный юношеским диабетом, одинаково поражает молодых и более старших, взрослых людей.

Приблизительно от 90 до 95% людей с диабетом имеют Тип II (или NIDDM). Пациенты с NIDDM продуцируют инсулин, но клетки их организмов являются инсулиноустойчивыми: клетки не реагируют должным образом на гормон, поэтому глюкоза накапливается у них в крови. NIDDM характеризуется относительной диспропорцией между продуцированием эндогенного инсулина и потребностью в инсулине, приводящей к повышенным уровням глюкозы в крови. В отличие от IDDM, всегда существует продуцирование некоторого количества эндогенного инсулина при NIDDM; многие пациенты с NIDDM имеют нормальный или даже повышенный уровни инсулина в крови, в то время как другие пациенты с NIDDM имеют неполноценное продуцирование инсулина (Rotwein, R. et. al. N.Engl.J.Med. 308, 65-71 (1983)). Большинство людей, у которых диагностировали NIDDM, - в возрасте 30 лет или старше, и половина из всех новых случаев диагностируются в возрасте 55 лет и старше. В сравнении с людьми с белым цветом кожи и азиатами NIDDM чаще встречается среди коренных американцев, афроамериканцев, латиноамериканцев и испаноговорящего населения. Кроме того, начало может протекать без явных симптомов или даже клинически не проявляться, затрудняя установление диагноза.

Первичные патологические изменения при NIDDM остаются неуловимыми. Многое говорит о том, что первичная невосприимчивость к инсулину периферических тканей является инициирующим актом. Генетические эпидемиологические исследования подтвердили эту точку зрения. Аналогично этому отклоняющееся от нормы выделение инсулина представляло собой доказательство первичного повреждения при NIDDM. Вероятно, что оба явления представляют существенный вклад в процесс заболевания (Rimoin, D.L., et. al. Emery and Rimoin's Principles and Practice of Medical Genetics 3 ^nd Ed. 1: 1401-1402 (1996)).

Большинство людей с NIDDM имеют образ жизни с недостаточной физической активностью и ожирение, их вес примерно на 20% больше рекомендуемого при их росте и телосложении. Кроме того, ожирение характеризуется гиперинсулинемией и невосприимчивостью к инсулину, отличительным признаком, сопутствующим NIDDM, гипертензией и атеросклерозом.

Ожирение и диабет находятся в числе наиболее распространенных проблем человеческого здоровья в промышленно развитых обществах. В промышленно развитых странах треть населения имеют по меньшей мере 20% избыточный вес. В Соединенных Штатах процент тучных людей возрос с 25% в конце 1970-х до 33% в начале 90-х. Ожирение является одним из наиболее существенных факторов риска при NIDDM. Определения ожирения различаются, но обычно вес субъекта, по меньшей мере, превышающий на 20% рекомендуемый вес для его/ее роста и телосложения, рассматривается как ожирение. Риск развития NIDDM утраивается в случае субъектов с 30% избыточным весом, и три четверти пациентов с NIDDM имеют избыточный вес.

Ожирение, которое является результатом дисбаланса между получаемыми калориями и расходуемой энергией, хорошо коррелируется с невосприимчивостью к инсулину и диабетом у подопытных животных и человека. Однако молекулярные механизмы, которые задействованы в синдромах ожирения-диабета, не ясны. В начальный период развития ожирения возрастание выделения инсулина компенсирует невосприимчивость к инсулину и защищает пациентов от гипергликемии (Le Stunff, et. al. Diabetes 43, 696-702 (1989)). Однако спустя несколько десятилетий, нарушается (3-клеточная функция и развивается инсулинонезависимый диабет у приблизительно 20% тучного населения (Pederson, P. Diab. Metab. Rev. 5, 505-509 (1989)) и (Brancati, F.L., et. al., Arch. Intern. Med. 159, 957-963 (1999)). Учитывая его широкое распространение в современных обществах, ожирение, таким образом, становится лидирующим фактором риска в случае NIDDM (Hill, J.O., et. al., Science 280, 1371-1374 (1998)). Однако факторы, которые провоцируют часть пациентов к изменению выделения инсулина под влиянием накопления жира, остаются неизвестными.

Относится ли кто-либо к категории избыточного веса или к ожирению, обычно определяется на основе индекса массы тела (BMI), который вычисляется путем деления массы тела (кг) на величину роста в квадрате (м ² ). Таким образом, единицы измерения BMI - это кг/м ² , и возможно вычислить пределы BMI, соответствующие минимальной смертности в каждой декаде жизни. Избыточный вес распознается, когда BMI находится в пределах 25-30 кг/м ² , и ожирение - когда BMI превышает 30 кг/м ² (см. нижеприведенную таблицу). Существуют проблемы с таким распознаванием, связанные с тем, что не принимается во внимание количественное соотношение в массе тела, такое как отношение мышц к жиру (жировой ткани). Учитывая это, ожирение также можно распознать, основываясь на содержании жира в организме: превышающее 25 и 30% у мужчин и женщин соответственно.

Классификация по весу в зависимости от индекса массы тела (BMI)

По мере того, как BMI увеличивается, существует повышенный риск смерти от различных причин, которые независимы от других факторов риска. Наиболее часто встречающимися заболеваниями при ожирении являются сердечно-сосудистое заболевание (в особенности, гипертензия), диабет (ожирение отягощает развитие диабета), заболевание желчного пузыря (в особенности, рак) и заболевания репродуктивной системы. Исследования показали, что даже небольшое снижение массы тела может способствовать существенному снижению риска развития ишемической болезни сердца.

Ожирение в значительной степени повышает также риск развития сердечно-сосудистого заболевания. Коронарная недостаточность, атероматозное заболевание и сердечная недостаточность - на первом плане сердечно-сосудистых осложнений, вызванных ожирением. Предположительно, что если все население имело бы идеальный вес, то риск коронарной недостаточности понизился бы на 25% и риск сердечной недостаточности и повреждений сосудов головного мозга - на 35%. Распространенность коронарной болезни удваивается для объектов младше 50-летнего возраста, у которых 30% избыточный вес. Пациенты с диабетом сталкиваются с 30% сокращением продолжительности жизни. После 45-летнего возраста люди с диабетом с вероятностью в три раза большей, чем люди без диабета, подвержены существенному сердечному заболеванию, и с вероятностью в пять раз большей подвержены инсульту. Эти полученные данные подчеркивают взаимосвязь между факторами риска NIDDM и коронарной болезни сердца, и потенциальной значимостью всеобъемлющего подхода к профилактике этих патологических состояний, основанного на профилактике ожирения (Perry, I.J., et. al., BMJ 310, 560-564 (1995)).

Диабет также влечет за собой развитие болезни почек, глазных заболеваний и проблем с нервной системой. Болезнь почек, также называемая нефропатией, проявляется, когда почечный «фильтрационный механизм » нарушен и белок просачивается в мочу в избыточных количествах и в итоге почка перестает функционировать. Диабет также является основной причиной разрушения сетчатки на внутренней оболочке глазного яблока и повышает риск катаракты и глаукомы. В заключение, диабет тесно связан с разрушением нервов, особенно на ногах и ступнях, которое наносит ущерб, со способностью ощущать боль и способствует серьезным инфекциям. В совокупности, осложнения диабета представляют собой одну из лидирующих в США причин смерти.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение включает соединения, которые связываются с GPCR и модулируют активность GPCR, именуемые в этом документе как RUP3, и их применение. Термин RUP3, как он используется в этом документе, включает человеческую последовательность, найденную в GeneBank под регистрационным номером AY2 88416, встречающиеся в природе аллельные варианты, ортологи млекопитающих и их рекомбинантные мутанты. Предпочтительный человеческий RUP3 для использования в скрининге и тестировании соединений изобретения приведен в виде нуклеотидной последовательности Seq.ID No:1 и соответствующей аминокислотной последовательности в Seq.ID No:2, найденных в публикации РСТ № WO 2005/007647.

Один аспект настоящего изобретения относится к соединению: изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты, как показано в формуле (I)

или к его фармацевтически приемлемой соли, сольвату или гидрату.

Один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическим композициям, включающим соединение по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам лечения связанного с метаболизмом нарушения у индивидуума, включающему введение индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам лечения ожирения у индивидуума, включающим введение индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам снижения потребления пищи индивидуумом, включающим введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам индуцирования чувства сытости у индивидуума, включающим введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам контролирования или снижения прироста веса у индивидуума, включающим введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам модуляции RUP3 рецептора у индивидуума, включающим взаимодействие рецептора с соединением по настоящему изобретению. В некоторых примерах осуществления изобретения соединение представляет собой агонист RUP3 рецептора.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способы модуляции RUP3 рецептора для лечения связанного с метаболизмом нарушения.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способы модуляции RUP3 рецептора у индивидуума, включающие взаимодействие рецептора с соединением по настоящему изобретению, при котором модуляция RUP3 рецептора понижает потребление пищи индивидуумом.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способы модуляции RUP3 рецептора у индивидуума, включающие взаимодействие рецептора с соединением по настоящему изобретению, при котором модуляция RUP3 рецептора индуцирует чувство сытости у индивидуума.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способы модуляции RUP3 рецептора у индивидуума, включающие взаимодействие рецептора с соединением по настоящему изобретению, при котором модуляция RUP3 рецептора контролирует или снижает прирост веса у индивидуума.

Один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения связанного с метаболизмом нарушения.

Один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, предназначенного для снижения потребления пищи индивидуумом.

Один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, предназначенного для индуцирования чувства сытости у индивидуума.

Один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, предназначенного для контролирования или снижения прироста веса у индивидуума.

Один аспект настоящего изобретения относится к соединению по настоящему изобретению для применения в способе лечения человеческого или животного организма посредством терапии.

Один аспект настоящего изобретения относится к соединению по настоящему изобретению для применения в способе лечения связанного с метаболизмом нарушения человеческого или животного организма посредством терапии.

В некоторых примерах осуществления изобретения индивидуум представляет собой млекопитающее. В некоторых примерах осуществления изобретения млекопитающее представляет собой человека.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения относятся к таким, в которых человек имеет индекс массы тела приблизительно от 18,5 до приблизительно 45. В некоторых примерах осуществления изобретения человек имеет индекс массы тела приблизительно от 25 до приблизительно 45. В некоторых примерах осуществления изобретения человек имеет индекс массы тела приблизительно от 30 до приблизительно 45. В некоторых примерах осуществления изобретения человек имеет индекс массы тела приблизительно от 35 до приблизительно 45.

В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой диабет I типа, диабет II типа, неадекватную толерантность к глюкозе, невосприимчивость к инсулину, гипергликемию, гиперлипидемию, гипертриглицеридемию, гиперхолестеринемию, дислипидемию или синдром X. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой диабет II типа. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой гипергликемию. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой гиперлипидемию. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой гипертриглицеридемию. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой диабет I типа. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой дислипидемию. В некоторых примерах осуществления изобретения связанное с метаболизмом нарушение представляет собой синдром X.

Один аспект настоящего изобретения относится к способам получения фармацевтической композиции путем смешивания соединения по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемого носителя.

Заявитель сохраняет за собой право исключить какое-либо одно или несколько соединений из какого-либо из примеров осуществления изобретения. Заявитель, кроме того, сохраняет за собой право исключить какое-либо заболевание, патологическое состояние или нарушение из какого-либо из примеров осуществления изобретения.

Подробное описание изобретения

Изобретение описано в этом документе в подробностях с использованием терминов, определенных ниже, за исключением иначе обозначенных.

«Агонист » будет обозначать молекулу, которая взаимодействует с рецептором и активирует рецептор, такой как RUP3 рецептор, и инициирует физиологический или фармакологический ответ, характерный для этого рецептора. Например, когда молекулы активируют внутриклеточный ответ при связывании с рецептором или усиливают связывание GTP с мембранами.

«Композиция » будет обозначать материал, включающий в себя по меньшей мере два соединения или два компонента; например, и не ограничиваясь этим, фармацевтическая композиция представляет собой Композицию, включающую соединение настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.

«Контакт » или «Контактирование » будет обозначать столкновение указанных молекул либо в системе in vitro, либо в системе in vivo. Так, «контактирование » RUP3 рецептора с соединением по изобретению включает введение соединения по настоящему изобретению индивидууму, например человеку, имеющему RUP3 рецептор, а также, например, введение соединения по изобретению в образец, содержащий клеточный или более очищенный препарат, содержащий RUP3 рецептор.

«В случае необходимости лечения », как используется в этом документе, относится к заключению, сделанному лицом, осуществляющим надзор за больным (например, терапевтом, клиницистом со средним медицинским образованием, средним медработником и др. - в случае людей; ветеринаром - в случае животных, включая не относящихся к человеку млекопитающих), что индивидуум или животное нуждается в лечении или ему будет полезно лечение. Это заключение делается на основе различных факторов, которые находятся в сфере компетенции лица, осуществляющего надзор за больным, но оно включает знание того, что индивидуум болен или будет болен в результате заболевания, патологического состояния или нарушения, которое поддается излечению соединениями по изобретению. Термин «лечение » также указывается как альтернатива «профилактике ». И поэтому, обычно, «в случае необходимости лечения » указывается в отношении заключения лица, осуществляющего надзор за больным, о том, что индивидуум уже болен, соответственно, соединения по настоящему изобретению применяются для облегчения, подавления, приостановки или улучшения состояния при заболевании, патологическом состоянии или нарушении. Кроме того, фраза также указывает на заключение, сделанное лицом, осуществляющим надзор за больным, о том, что индивидуум заболеет. В этом контексте, соединения по изобретению используются в защитном или профилактическом способе.

«Индивидуум », как используется в этом документе, относится к какому-либо животному, в одном примере осуществления изобретения - к позвоночному, в другом примере осуществления изобретения - к млекопитающему (как не относящемуся к примату, так и примату), и примеры включают, но не ограничиваются только ими, корову, лошадь, овцу, свинью, курицу, индейку, куропатку, кошку, собаку, мышь, крысу, кролика, морскую свинку, прочих грызунов, обезьяну и им подобных. В другом примере осуществления изобретения - это человек и в конкретных примерах человек является младенцем, ребенком, подростком или взрослым.

В одном примере осуществления изобретения у пациента присутствует риск развития связанного с метаболизмом заболевания или нарушения. Пациент, у которого присутствует риск, включает, но не ограничивается ими, такого, у которого наследственный анамнез связанного с метаболизмом заболевания или нарушения, или такого, который находится в состоянии физического здоровья, которое накладывает на пациента риск связанного с метаболизмом заболевания или нарушения. В другом примере осуществления изобретения для пациента установлено, попечителем или неким другим, действующим по инструкции попечителя, наличие связанного с метаболизмом заболевания или нарушения.

«Ингибировать » или «ингибирование », в отношении термина «ответ », будет обозначать, что ответ уменьшается или предотвращается в присутствии соединения в отличие от отсутствия соединения.

Как используются в этом документе, термины «модулировать » или «модулирование » будут обозначать, что они имеют отношение к возрастанию или уменьшению количества, качества, ответа или эффекта специфической активности, функции или молекулы.

«Фармацевтическая композиция » будет обозначать композицию, включающую в себя по меньшей мере одно соединение по настоящему изобретению и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество/носитель. Тот, кто является средним специалистом в данной области техники, поймет и примет во внимание методы, предназначенные для получения таких композиций.

«Терапевтически эффективное количество », как используется в этом документе, относится к количеству активного соединения или фармацевтической композиции, которое вызывает биологический или медицинский ответ в тканях, системе, животном, индивидууме или человеке, требуемый исследователем, ветеринаром или медицинским доктором или другим клиницистом, который включает одно или несколько из нижеследующего:

(1) предотвращение заболевания; например, предотвращение заболевания, патологического состояния или нарушения у индивидуума, который может быть предрасположен к заболеванию, патологическому состоянию или нарушению, но пока еще не воспринимается или не проявляется патология или симптоматика заболевания;

(2) ингибирование заболевания; например, ингибирование заболевания, патологического состояния или нарушения у индивидуума, воспринимаемых или проявляемых как патология или симптоматика заболевания, патологического состояния или нарушения (т.е. купирование дальнейшего развития патологии и/или симптоматики), и

(3) улучшение состояния при заболевании; например, улучшение состояния при заболевании, патологическом состоянии или нарушении у индивидуума, у которого есть восприятие или проявление патологии или симптоматики заболевания, патологического состояния или нарушения (т.е. реверсирование/уменьшение патологии и/или симптоматики).

Соединения по настоящему изобретению

Теперь открыто, что изопропилововый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты, как показано в формуле (I), является селективным агонистом RUP3 рецептора, показывающим ЕС ₅₀ 2 нМ (человек), 1 нМ (собака), 35 нМ (яванский макак), 41 нМ (мышь) и 44 нМ (крыса). Кроме того, было открыто, что изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты обладает растворимостью в воде без ощутимого ингибирования по меньшей мере пяти цитохром-Р450 ферментов и проявляет себя как эффективное соединение для снижения уровня глюкозы в крови в oGTT модели.

Неожиданно было открыто, что изопропилововый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси) пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты имеет ряд важных свойств. Например, было открыто, что изопропилововый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты не проявляет ощутимого ингибирования по меньшей мере пяти цитохром-Р450 ферментов. Один конкретный фермент - CYP2C9 рассматривается в качестве важнейшего цитохрома Р450, который включен в метаболическое обследование большого разнообразия терапевтических агентов, включая нестероидные противовоспалительные, пероральные антикоагулянты и пероральные гипогликемические агенты. Около 16% лекарств, находящихся в клиническом использовании, гидроксилируются под воздействием CYP2C9. Нарушение активности CYP2C9 путем метаболического ингибирования или фармацевтической изменчивости лежит в основе неблагоприятных лекарственных реакций, которые ассоциируются с ферментом. Из-за этих и других причин фермент CYP2C9 является важным и, следовательно, соединения, которые не ингибируют или действуют таким образом, что это минимально проявляют, представляются очень желательными. Неожиданно наблюдали, что изопропилововый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты не проявляет ощутимого ингибирования фермента CYP2C9 с IC ₅₀ большей, чем, приблизительно, 15 мкМ в случае фермента CYP2C9. Также наблюдали, что изопропилововый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты не проявляет ощутимого ингибирования других цитохром Р450 ферментов, таких как 1А2, 2D6 и 3А4 с IC ₅₀ для каждого большей, чем, приблизительно, 40 мкМ, и также с IC ₅₀ , приблизительно, 10 мкМ для 2С19.

Кроме того, наблюдали, что изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты обладает растворимостью в воде приблизительно 40 мг/мл.

Далее наблюдали, что изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты был очень активен по меньшей мере в одном из исследований in vivo, таком как пероральный тест на толерантность к глюкозе. Наблюдали, что это соединение имеет среднее значение ингибирования превышения уровня глюкозы на 22% (доза 0,3 мг/кг), 24% (3 мг/кг) и 70% (30 мг/кг). Эти результаты демонстрируют, что изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты является эффективным соединением и оно способно к понижению уровня глюкозы в крови дозозависимым образом.

Исходя из вышесказанного, настоящее изобретение предоставляет изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты и способы лечения нарушений, связанных с RUP3 рецептором, например, связанных с метаболизмом нарушений и их осложнений, таких как диабет и ожирение.

Один аспект настоящего изобретения относится к соединению изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты, как показано в формуле (I)

или к его фармацевтически приемлемой соли, сольвату или гидрату.

Показания и способы лечения

В дополнение к вышеуказанным полезным применениям соединений настоящего изобретения, раскрытым в этом документе, соединения по изобретению полезны в лечении дополнительных заболеваний. Не ограничиваясь только этими, они включают нижеприведенные.

Наиболее существенными патологиями при диабете II типа являются нарушенная инсулиновая сигнализация на его тканях-мишенях ( «инсулиновая устойчивость ») и неспособность инсулин-продуцирующих клеток поджелудочной железы секретировать надлежащий уровень инсулина в ответ на гипергликемический сигнал. Ныне существующая терапия для лечения последнего включает ингибиторы АТФ-чувствительных калиевых каналов β-клеток для приведения в действие механизма высвобождения эндогенных резервов инсулина, или введение экзогенного инсулина. Ни то, ни другое из этого не обеспечивает точной нормализации уровней глюкозы в крови и оба привносят риск индуцирования гипогликемии. По этим причинам существует усиленный интерес к разработке фармацевтических препаратов, функционирование которых связано с глюкозозависимым механизмом действия, т.е. усилителей сигнализации об уровне глюкозы. Физиологические сигнальные системы, которые функционируют таким образом, хорошо охарактеризованы и включают пептиды пищеварительного канала GLP1, GIP и РАСАР. Эти гормоны действуют посредством распознавания ими рецептора, связанного с G-белком, стимулируя продуцирование цАМФ в β-клетках поджелудочной железы. Повышенное содержание цАМФ не обнаруживает в результате стимуляцию высвобождения инсулина натощак или в предобеденном состоянии. Однако серии биохимических мишеней, сигнализирующих о цАМФ, включая АТФ-чувствительные калиевые каналы, потенциал-чувствительные калиевые каналы и экзоцитотическую систему, модифицируются таким образом, что инсулин-секреторный отклик на постпрандиальное стимулирующее воздействие глюкозы заметно усиливается. Таким образом, агонисты новой структуры, функционирующие так же, как все GPCR β-клеток, включая RUP3, будут также стимулировать высвобождение эндогенного инсулина и вследствие этого обеспечивать нормогликемию при диабете II типа.

Также было установлено, что повышенный цАМФ, например, как результат стимуляции GLP1, способствует пролиферации β-клеток, ингибирует отмирание β-клеток и, таким образом, оздоравливает массу островковых клеток. Этот положительный эффект на массу β-клеток, как ожидается, должен быть целебным как при диабете II типа, при котором продуцируется недостаточно инсулина, так и при диабете I типа, когда β-клетки разрушаются при неадекватном аутоимунном ответе.

Некоторые из GPCR β-клеток, включая RUP3, также присутствуют в гипоталамусе, где они модулируют чувство голода, чувство сытости, снижение потребления пищи, контролирование или снижение веса и расходования энергии. И поэтому, осуществляя свою функцию в рамках гипоталамической схемы, агонисты или обратные агонисты этих рецепторов ослабляют чувство голода, способствуют чувству сытости и таким образом модулируют вес.

Также хорошо обосновано, что метаболические заболевания оказывают негативное влияние на другие физиологические системы. Так, часто наблюдается совместное развитие множественных болезненных состояний (например, диабет I типа, диабет II типа, неадекватная толерантность к глюкозе, нечувствительность к инсулину, гипергликемия, гиперлипидемия, гипертриглицеридемия, гиперхолестеринемия, дислипидемия, ожирение или сердечно-сосудистое заболевание при «Синдроме X »), или вторичные заболевания, которые явственно проявляются как вторичные при диабете (например, болезнь почек, периферическая нейропатия). Таким образом, ожидается, что эффективное лечение диабетического патологического состояния поможет в изменении направления таких взаимосвязанных болезненных состояний.

В некоторых примерах осуществления настоящего изобретения связанное с метаболизмом нарушение предсталяет собой гиперлипидемию, диабет 1 типа, сахарный диабет 2 типа, идиопатический диабет 1 типа (Тип 1b), латентный аутоимунный диабет взрослых (LADA), рано выявленный диабет 2 типа (EOD), юношеский атипический диабет (YOAD), диабет зрелого возраста у молодых (MODY), связанный с нарушением питания диабет, гестационный диабет, коронарная болезнь сердца, ишемический инсульт, рестеноз после пластической операции на сосудах, заболевание периферических сосудов, перемежающаяся хромота, инфаркт миокарда (например, некроз и апоптоз), дислипидемия, липидемия после приема пищи, патологические состояния ослабленной толерантности к глюкозе (IGT), патологические состояния снижения концентрации глюкозы в плазме натощак, метаболический ацидоз, кетоз, артрит, ожирение, остеопороз, гипертензия, застойная сердечная недостаточность, гипертрофия левого желудочка, заболевание периферических артериальных сосудов, диабетическая ретинопатия, дегенерация желтого пятна, катаракта, диабетическая нефропатия, гломерулосклероз, хроническая почечная недостаточность, диабетическая нейропатия, метаболический синдром, синдром X, предменструальный синдром, коронарная болезнь сердца, стенокардия, тромбоз, атеросклероз, инфаркт миокарда, преходящее ишемическое нарушение мозгового кровообращения, инсульт, сосудистый рестеноз, гипергликемия, гиперинсулинемия, гиперлипидемия, гипертриглицеридемия, нечувствительность к инсулину, нарушений метаболизм глюкозы, патологические состояния ослабленной толеоантности к глюкозе, патологические состояния снижения концентрации глюкозы в плазме натощак, ожирение, эректильная дисфункция, нарушения кожи и соединительных тканей, язва нижних конечностей и язвеный колит, эндотелиальная дисфункция и нарушенная эластичность сосудов.

Фармацевтические композиции и соли

Следующий аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическим композициям, включающим в себя изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]-пиперидин-1-карбоновой кислоты, формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль, сольват или гидрат и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей. Некоторые примеры осуществления настоящего изобретия относятся к фармацевтическим композициям, включающим в себя изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты и фармацевтически приемлемый носитель.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способ получения фармацевтической композиции, предусматривающий смешивание изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемого носителя.

Лекарственные формы могут быть приготовлены каким-либо подходящим способом, обычно однородным смешиванием активного соединения с жидкими или тонкоизмельченными твердыми носителями, или и с теми, и с другими, в желаемых пропорциях и затем, если это необходимо, приданием полученной в результате смеси желаемой формы.

Обычно употребляемые вспомогательные вещества, такие как связующие агенты, наполнители, приемлемые увлажняющие агенты, таблетирующие скользящие вещества и разрыхляющие вещества, могут использоваться в таблетках и капсулах для перорального введения. Жидкие препараты для перорального введения могут быть в форме растворов, эмульсий, водных или масляных суспензий и сиропов. Альтернативно, пероральные препараты могут быть в форме сухого порошка, который можно разбавлять водой или другой жидкой средой перед применением. Дополнительные добавки, такие как суспендирующие или эмульгирующие агенты, неводные среды (включая пищевые масла), консерванты и вкусоароматизирующие вещества, и красители могут добавляться к жидким препаратам. Парентеральные лекарственные формы могут быть приготовлены путем растворения соединения изобретения в подходящей жидкой среде и стерилизующего фильтрования раствора перед наполнением, и укупоривания в предназначенные пузырек или ампулу. Вот еще несколько примеров из многих подходящих способов, хорошо известных из уровня техники для приготовления лекарственных форм.

Соединение по настоящему изобретению может быть включено в рецептуру фармацевтических композиций с использованием оборудования, хорошо известного из уровня техники. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, кроме тех, которые упомянуты в этом документе, известны из уровня техники; например, см. Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20 ^th Edition, 2000, Lippincott Williams &Wilkins, (Editors: Gennaro, A.R., et. al.).

Поскольку возможно, чтобы при использовании для лечения соединение по изобретению может, при альтернативном применении быть введено как сырьевое вещество или чистое химическое вещество, является предпочтительным, однако, присутствие соединения или активного ингредиента в виде фармацевтической лекарственной формы или композиции, дополнительно включающей фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение, таким образом, дополнительно предоставляет фармацевтические лекарственные формы, включающие в себя соединение по изобретению или фармацевтически приемлемую соль или производное его вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями их и/или профилактические ингредиенты. Носитель(и) должны быть «приемлемыми » в том смысле, что должны быть совместимыми с другими ингредиентами лекарственной формы и не должны перекрывать вредное воздействие на объект его действия.

Фармацевтические лекарственные формы включают такие, которые удобны для перорального, ректального, назального, местного (включая буккальное и сублингвальное), вагинального или парентерального (включая внутримышечное, подкожное и внутривенное) введения или в виде формы, удобной для введения ингаляцией, инсуффляцией или с помощью трансдермального пластыря. Трансдермальные пластыри распределяют лекарство с контролируемой скоростью за счет присутствия лекарства в виде эффективной абсорбции с минимумом деградации лекарства. Обычно трансдермальные пластыри включают водонепроницаемый поддерживающий слой, слой самоклеящейся пленки и удаляемый защитный слой с покровной пленкой. Средний специалист в данной области поймет и оценит технологическое оснащение, предназначенное для производства желаемого эффективного трансдермального пластыря, с учетом потребностей изобретателя.

Соединения по изобретению вместе с обычно употребляемыми адьювантами, носителями и разбавителями, могут, таким образом, быть помещены в формат фармацевтических лекарственных форм и их стандартных дозированных форм, и в такой форме могут применяться как вещества твердые, такие как таблетки или заполненные капсулы, или жидкие, такие как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры, гели или капсулы, заполненные ими же, все для перорального применения, в форме суппозиториев для ректального введения, или в форме стерильных инъекционных растворов для парентерального (включая подкожное) применения. Такие фармацевтические композиции и их стандартные дозированные формы могут включать в себя обычно применяемые ингредиенты в обычно применяемых пропорциях, с/или без дополнительных активных активных веществ или компонентов, и такие стандартные дозированные формы могут содержать какие-либо подходящие количества активного ингредиента, соизмеримые с намеченным диапазоном дневных доз, которые следует применять.

Для перорального введения фармацевтическая композиция может быть в форме, например, таблетки, капсулы, суспензии или жидкого раствора. Фармацевтическая композиция предпочтительно изготавливается в виде стандартной дозированной формы, содержащей определенное количество активного ингредиента. Примерами таких стандартных дозированных форм являются капсулы, таблетки, порошки, гранулы или суспензии, с обычно применяемыми добавками, такими как лактоза, маннит, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; со связующими веществами, такими как кристаллическая целлюлоза, производные целлюлозы, камедь, кукурузный крахмал или желатин; с разрыхляющими веществами, такими как кукурузный крахмал, картофельный крахмал или натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы; и со скользящими веществами, такими как тальк или стеарат магния. Активный ингредиент может также быть введен инъекцией композиции, в которой, например, физиологический раствор, декстроза или вода могут использоваться как фармацевтически приемлемые носители.

При применении соединений по настоящему изобретению доза может варьировать в широких пределах, и на основании опыта и знаний врача она специально расчитывается для конкретных условий и для каждого конкретного случая. Она зависит, например, от природы и тяжести болезни, которую лечат, от состояния пациента, от используемого соединения и от того, является ли состояние болезни, которую лечат, острым или хроническим, или проводится профилактика, и от того вводятся ли дополнительно другие активные соединения кроме соединений по настоящему изобретению. Например, дозы согласно настоящему изобретению включают следующие, но не ограничиваются ими, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 5000 мг, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 2500 мг, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 1000 мг, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 500 мг, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 250 мг, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 100 мг, приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 50 мг и приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 25 мг. Требуемая доза обычно может быть предоставлена в виде однократной дозы или в виде раздельных доз, вводимых через определенные интервалы, например две, три, четыре или более субдоз в день. Субдоза сама по себе может быть дополнительно разделена, например, на ряд дискретных введений с приблизительными интервалами. В зависимости от индивидуума и от того соответствующего мнения, которого придерживается лечащий пациента врач или осуществляющее надзор за пациентом лицо, может возникнуть необходимость отклониться в сторону увеличения или уменьшения от описанных в этом документе доз.

Количество соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, назначенное для применения при лечении, будет варьировать не только в зависимости от определенной выбранной соли, но также в зависимости от способа введения, природы подвергаемого лечению патологического состояния и возраста, и состояния пациента, и будет, в конечном счете, выбором фельдшера или клинического врача. Как правило, специалист в данном уровне техники понимает как экстраполировать для случая in vivo те данные, которые получены в модельной системе, обычно в модели на животном, на другой объект, такой как человек. Обычно модели на животных включают, но не ограничиваются только ими, модель диабета у грызунов в примере 1, см. ниже (также как и другие модели на животных, известные из уровня техники, такие как изложенные в Reed and Scribner in Diabetes, Obesity and Metabolism, 1, 1999, 75-86). В некоторых случаях эти экстраполяции могут основываться лишь на массе животного в соответствующей модели в сравнении с другим, таким как млекопитающее, предпочтительно человек, хотя очень часто эти экстраполяции не основываются только на массах, а включают разнообразные факторы. Типичные факторы включают, но не ограничиваются только ими, тип, возраст, вес, пол, режим питания и медицинское состояние пациента, тяжесть заболевания, способ введения, фармакологические показатели, такие, как активность, эффективность, фармакокинетика и токсикологический профиль индивидуального применяемого соединения, утилизируется ли лекарство выводящей системой, является ли состояние болезни, которую лечат, острым или хроническим, или проводится профилактика, и от того, вводятся ли другие активные соединения в добавок к соединениям по настоящему изобретению или как составная часть лекарственной комбинации. Дозовая схема лечения состояния болезни соединениями и/или композициями этого изобретения выбирается в соответствии с разнообразием факторов, как изложено выше. Таким образом, используемая фактическая дозовая схема лечения может меняться в широких пределах и, следовательно, может отклоняться от первоочередной дозовой схемы лечения, и специалист в данной области техники учтет, что доза и дозовая схема лечения вне этих типичных пределов может быть протестирована и, где уместно, могут использоваться способы этого изобретения.

Соединения по настоящему изобретению могут вводиться в большом количестве вариантов пероральных и парентеральных дозированных форм. Для специалиста в данной области техники очевидно, что нижеследующие дозированные формы могут включать в себя в качестве активного компонента как соединение по изобретению, так и фармацевтически приемлемую соль соединения по изобретению.

Для приготовления фармацевтических композиций из соединений настоящего изобретения выбор подходящего фармацевтически приемлемого носителя может быть остановлен либо на твердом веществе, на жидком веществе, либо на смеси их обоих. Твердые формы лекарственных препаратов включают порошки, таблетки, пилюли, капсулы, капсулы в крахмальной оболочке, суппозитории и дисперсные гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или несколько веществ, которые также могут выполнять роль разбавителей, вкусоароматизирующих агентов, растворителей, скользящих веществ, суспендирующих агентов, связующих веществ, консервантов, разрыхляющих таблетки агентов или инкапсулирующих материалов.

В порошках носитель представляет собой тонкоизмельченное твердое вещество, которое находится в смеси с тонкоизмельченным активным компонентом.

В таблетках активный компонент смешан с носителем, обладающим необходимой связующей способностью в подходящих пропорциях и спрессован в требуемую форму и размер.

Порошки и таблетки могут содержать различное в процентах количество активного вещества. Типичное количество, содержащееся в порошке или таблетке, может быть от 0,5 до приблизительно 90% соединения по изобретению; хотя специалист должен знать, когда необходимы количества, выходящие за этот диапазон. Подходящими носителями для порошков и таблеток являются карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, низкоплавкий воск, какао-масло и им подобные. Термин «приготовление » предназначается для обозначения технологии приготовления лекарственной формы активного соединения с инкапсулирующим материалом как носителем, обеспечивающим образование капсулы, в которой активный компонент в присутствии или в отсутствии носителей, находится в окружении носителя, который, таким образом, - во взаимодействии с ним. То же содержат в себе капсулы с крахмальной оболочкой и пастилки. Таблетки, порошки, капсулы, пилюли, капсулы с крахмальной оболочкой и пастилки могут применяться в качестве твердых форм для перорального введения.

Для приготовления суппозиториев низкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот, или какао-масло, сначала расплавляют и активный компонент гомогенно диспергируется в нем по мере того, как перемешивается. Расплавленная гомогенная смесь затем разливается в подходящие по размеру формочки, оставляется для охлаждения, и при этом для отвердевания.

Лекарственные формы, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде вагинальных суппозиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или спреев, содержащих в дополнении к активному ингредиенту такие носители, которые известны из уровня техники как подходящие.

Лекарственные препараты в жидкой форме включают растворы, суспензии и эмульсии, например водные или водно-пропиленгликолевые растворы. Например, жидкие лекарственные препараты для парентерального введения могут составляться как растворы в водных пропиленгликолевых растворах. Инъекционные лекарственные препараты, например стерильные инъекционные водные или масляные суспензии, могут быть составлены в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих и увлажняющих агентов и суспендирующих агентов. Стерильный инъекционный лекарственный препарат может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном парентерально допустимом разбавителе или растворителе, например, как раствор в 1,3-бутандиоле. Среди допустимых лекарственных сред и растворителей, которые могут применяться, - вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные, стойкие масла обычно применяются в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели любое успокаивающее стойкое масло может применяться, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, нашли применение в получении инъекционных препаратов.

Соединения, в соответствии с настоящим изобретением, могут быть составлены в лекарственные формы для парентерального введения (например, путем инъекции, например, инъекции ударной дозы вещества или непрерывной инфузии) и могут быть представлены в форме стандартной дозы лекарственного вещества в ампулах, в предварительно набранных шприцах, в контейнерах маленького объема для инфузии или в мультидозовых контейнерах с добавленными консервантами. Фармацевтические композиции могут быть получены в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных средах и могут содержать агенты для приготовления лекарственных форм, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть в форме порошка, полученного асептической изоляцией стерильного твердого вещества или путем лиофилизации из раствора, для сочетания с подходящей средой, например стерильной, апирогенной водой, перед использованием.

Водные лекарственные формы, удобные для перорального применения, могут быть приготовлены путем растворения или суспендирования активного компонента в воде и добавления подходящих красителей, вкусоароматических веществ, стабилизаторов и загустителей, которые требуются.

Водные суспензии, удобные для перорального применения, могут быть приготовлены путем диспергирования тонкоизмельченного активного компонента в воде с вязким веществом, таким как природные или синтетические камеди, смолы, метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы или другие хорошо известные суспендирующие агенты.

Также учитываются лекарственные препараты твердой формы, которые предполагается превратить, непосредственно перед использованием в лекарственные препараты жидкой формы для перорального введения. Такие жидкие формы включают растворы, суспензии и эмульсии. Эти лекарственные препараты могут содержать, в дополнение к активному компоненту, красители, вкусоароматические вещества, стабилизаторы, буферные растворы, искусственные и натуральные подсластители, диспергирующие вещества, загустители, солюбилизирующие агенты и им подобные.

Для местного введения в эпидермис соединения в соответствии с изобретением могут быть представлены в таких лекарственных формах, как мази, кремы, лосьоны или трансдермальный пластырь.

Мази и кремы, например, могут быть составлены на водной или масляной основе с добавлением подходящих загустителей и/или желирующих агентов. Лосьоны могут быть составлены на водной или масляной основе и обычно также содержат один или несколько эмульгирующих агентов, стабилизирующих агентов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов, загущающих агентов или окрашивающих агентов.

Лекарственные формы, подходящие для местного введения через рот, включают пастилки леденцовые, включающие в себя активный агент во вкусоароматической основе, обычно в сахарозе, камеди или трагакантовой камеди; пастилки включают в себя активный ингредиент на инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза, и камедь; полоскание для рта включает в себя активный ингредиент в подходящем жидком носителе.

Растворы или суспензии используются непосредственно для носовой полости обычными способами, например с помощью капельницы, пипетки или пульверизатора. Лекарственные формы могут быть предоставлены в однократной дозовой форме или в мультидозовой форме. В последнем случае с помощью капельницы или пипетки можно добиться для пациента введения соответствующего, заранее определенного объема раствора или суспензии. В случае пульверизатора этого можно достичь, например, с помощью автоматизированного распыляющего насоса с регулируемой подачей.

Введение в дыхательные пути также может быть достигнуто с помощью аэрозольной лекарственной формы, в которой активный ингредиент предоставлен в виде находящейся под давлением упаковки с подходящим пропеллентом. Если соединения по настоящему изобретению или включающие их фармацевтические композиции вводятся как аэрозоли, например, как назальные аэрозоли или путем ингаляции, то это можно осуществить, например, используя опрыскиватель, распылитель, распылительный насос, ингаляционные аппараты, дозирующие пульверизаторы или пульверизаторы сухого порошка. Фармацевтические формы для введения соединений по настоящему изобретению в виде аэрозолей могут быть приготовлены с помощью процессов, хорошо известных специалисту в данной области техники. Для их приготовления, например, могут применяться растворы или дисперсии соединений по настоящему изобретению в воде, водно/спиртовых смесях или в подходящих солевых растворах, с использованием общеупотребляемых добавок, например бензилового спирта или других подходящих консервантов, усилителей абсорбции для повышения биодоступности, солюбилизаторов, диспергирующих веществ и других, и, если целесообразно, общеупотребляемых пропеллентов, например, включая диоксид углерода, хлор-фтор-углероды (CFC), такие как дихлордифторметан, трихлорфторметан или дихлортетрафторэтан и им подобные. Аэрозоль может, что удобнее, также содержать поверхностно-активное вещество, такое как лецитин. Доза лекарства может контролироваться посредством приспособления дозирующего клапана.

В лекарственных формах, предназначенных для введения в дыхательные пути, включая внутриназальные лекарственные формы, соединение будет иметь малый размер частиц, например порядка 10 мкм и менее. Такой размер частиц может быть получен с помощью способов, известных из уровня техники, например путем очень тонкого измельчения. Если требуется, то могут применяться лекарственные формы, адаптированные под замедленное высвобождение активного ингредиента.

Альтернативно, активные ингредиенты могут быть предоставлены в форме сухого порошка, например порошкообразной смеси вещества в подходящей порошкообразной основе, такой как лактоза, крахмал, производные крахмала, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза и поливинилпирролидон (PVP).

Обычно порошкообразный носитель образует гель в назальной полости. Порошкообразная композиция может быть представлена в стандартной дозированной форме, например в капсулах или контейнерах из, например, желатина, или в виде пластыря в блистерной упаковке, из которой порошок может быть введен с помощью ингалятора.

Фармацевтические препараты предпочтительны в виде стандартной дозированной формы. В такой форме лекарственный препарат может подразделяться на стандартные дозы, содержащие соответствующие количества активного компонента. Стандартная дозированная форма может быть в виде расфасованного лекарственного препарата, упаковок, содержащих дискретные количества лекарственной формы, таких как расфасованные таблетки, капсулы и порошки в пузырьках и ампулах. Также стандартная дозированная форма может быть сама по себе в виде капсулы, таблетки, капсулы с крахмальной оболочкой или пастилки для рассасывания, или она может быть в виде соответствующего количества чего-либо из них в расфасованной форме.

Таблетки или капсулы для перорального введения, или жидкости для внутривенного введения представляют собой предпочтительные композиции.

Соединения в соответствии с изобретением могут, необязательно, быть фармацевтически приемлемыми солями, включая фармацевтически приемлемые соли, полученные посредством добавления кислоты, полученные из фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот, включая неорганические и органические кислоты.

Полученные посредством добавления кислоты соли можно получить как целевой продукт в синтезе соединения. В качестве альтернативы, свободное основание можно растворить в подходящем растворителе, содержащем соответствующую кислоту, и выделить соль упариванием растворителя или иным образом разделяя соль и растворитель. Соединения этого изобретения могут образовывать сольваты со стандартными низкомолекулярными растворителями с использованием способов, известных специалисту в данной области техники.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способ получения фармацевтической композиции для «комбинированной терапии », включающий в себя смешивание по меньшей мере одного соединения настоящего изобретения вместе по меньшей мере с одним фармацевтическим агентом, как описано в этом документе, и вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

В некоторых примерах осуществления изобретения фармацевтические агенты выбираются из группы, состоящей из: сульфонилмочевин, меглитинидов, бигуанидов, ингибиторов α-глюкозидазы, агонистов рецептора- γ (например, PPAR- γ) активации пролиферации пероксисом, инсулина, аналогов инсулина, ингибиторов HMG-CoA редуктазы, лекарств, понижающих холестерин (например, фибраты, которые включают: фенофибрат, безафибрат, гемфиброзил, клофибрат и им подобные; вещества, усиливающие экскрецию желчной кислоты, которые включают: холестирамин, колестипол и им подобные; и ниацин), антиагрегантных агентов (например, аспирин и антагонисты рецептора аденозин дифосфата, которые включают: клопидогрель, тиклопидин и им подобные), ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента, антагонистов рецептора ангиотензина II и адипонектина.

Замечено, что когда модуляторы RUP3 рецептора используются как активные ингредиенты в фармацевтической композиции, то не предполагается ее применение только для людей, но также возможно применение и для других нечеловекообразных млекопитающих. Действительно, последние достижения в области медицинской помощи животным указывают на то, что сделано заключение по использованию активных агентов, таких как модуляторы RUP3 рецептора, для лечения ожирения у домашних животных (например, у кошек и собак) и по использованию модуляторов RUP3 рецептора для других домашних животных, у которых заболевание или расстройство не является очевидным (например, животных, предназначенных для получения продуктов питания, таких как коровы, куры, рыба и др.). Таким образом, средние специалисты в данной области техники полностью доверяют соглашению по применению таких соединений в таких ситуациях.

Комбинированная терапия

В контексте настоящего изобретения соединение, как это описано в данном документе, или его фармацевтическая композиция, могут применяться для модуляции активности RUP3 рецептора в случае им обусловленных заболеваний, патологических состояний и/или нарушений, как в этом документе описано. Примеры модуляции активности RUP3 рецептора в случае им обусловленных заболеваний включают лечение связанных с метаболизмом нарушений. Связанные с метаболизмом нарушения включают, но не ограничиваются только ими, гипергликемию, диабет 1 типа, сахарный диабет 2 типа, и сопутствующие им патологические состояния, такие как, но не ограничиваясь только ими, коронарная болезнь сердца, ишемический инсульт, рестеноз после пластической операции на сосудах, заболевание периферических сосудов, перемежающаяся хромота, инфаркт миокарда (например, некроз и апоптоз), дислипидемия, липидемия после приема пищи, патологические состояния ослабленной толерантности к глюкозе (IGT), патологические состояния снижения концентрации глюкозы в плазме натощак, метаболический ацидоз, кетоз, артрит, ожирение, остеопороз, гипертензия, застойная сердечная недостаточность, гипертрофия левого желудочка, заболевание периферических артериальный сосудов, диабетическая ретинопатия, дегенерация желтого пятна, катаракта, диабетическая нефропатия, гломерулосклероз, хроническая почечная недостаточность, диабетическая нейропатия, метаболический синдром, синдром X, предменструальный синдром коронарная болезнь сердца, стенокардия, тромбоз, атеросклероз, инфаркт миокарда, преходящее ишемическое нарушение мозгового кровообращения, инсульт, сосудистый рестеноз, гипергликемия, гиперинсулинемия, гиперлипидемия, гипертриглицеридемия, нечувствительность к инсулину, нарушеный метаболизм глюкозы, патологические состояния ослабленной толерантности к глюкозе, патологические состояния снижения концентрации глюкозы в плазме натощак, ожирение, эректильная дисфункция, нарушения кожи и соединительных тканей, язва нижних конечностей и язвеный колит, эндотелиальная дисфункция и нарушеная эластичность сосудов. В некоторых примерах осуществления изобретения связанные с метаболизмом нарушения включают диабет I типа, диабет II типа, неадекватную толерантность к глюкозе, нечувствительность к инсулину, гипергликемию, гиперлипидемию, гипертриглицеридемию, гиперхолестеринемию, дислипидемию и синдром X. Другие примеры модуляции активности RUP3 рецептора опосредованных заболеваний включают лечение ожирения и/или избыточного веса путем снижения потребления пищи, стимулирование насыщения (т.е. чувства сытости), контролирования прибавки веса, снижения массы тела и/или воздействия на метаболизм таким образом, что потребитель теряет вес и/или поддерживает вес.

Помимо того, что соединения по изобретению могут вводиться как единственный активный фармацевтический агент (т.е. монотерапия), они также могут использоваться в комбинации с другими фармацевтическими агентами (т.е. комбинированная терапия) для лечения заболеваний/патологических состояний/нарушений, описанных в этом документе. Исходя из вышесказанного, другой аспект настоящего изобретения включает способы лечения связанного с метаболизмом нарушения, включая нарушение, связанное с весом, такое как ожирение, включающие в себя введение индивидууму, нуждающемуся в профилактике и/или лечении, терапевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения в комбинации с одним или несколькими дополнительными фармацевтическими агентами, как описано в этом документе.

Подходящие фармацевтические агенты, которые могут использоваться в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, включают агенты против ожирения, такие как ингибиторы секреции аполипопротеина-В/белка микросомального переноса триглицеридов (аро-В/МТР), MCR-4 агонисты, агонисты холецистокинина-А (ССК-А), ингибиторы обратного захвата серотонина и норэпинефрина (например, сибутрамин), симпатомиметические агенты, агонисты β3 адренергического рецептора, агонисты допамина (например, бромокриптин), аналоги рецептора меланоцитстимулирующего гормона, антагонисты каннабиноид 1 рецептора [например, SR141716:N-(пиперидин-1-ил)-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид], антагонисты гормона концентрирования меланина, лептоны (ОВ белок), аналоги лептина, агонисты рецептора лептина, антагонисты галанина, ингибиторы липазы (такие как тетрагидролипстатин, т.е Орлистат), анорексигенные агенты (такие как агонист бомбезина), антагонисты Нейропептида-Y, тиромиметические агенты, дигидроэпиандростерон или его аналоги, агонисты или антагонисты глюкокортикоидного рецептора, антагонисты орексинового рецептора, антагонисты урокортинсвязывающего белка, агонисты глюкагоноподобного пептид-1 рецептора, цилиарные нейтротрофические факторы (такие как Axokine ™, доступный от Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY и от Procter &Gamble Company, Cincinnati, OH), человеческие агути-связанные белки (AGRP), антагонисты грелинового рецептора, антагонисты или обратные агонисты гистамин 3 рецептора, агонисты нейромедин U рецептора, норадренергические анорексигенные агенты (например, фендермин, мазиндол и им подобные) и препараты для подавления аппетита (например, бупропион).

Другие агенты против ожирения, включающие агенты, описанные ниже, хорошо известны или полностью будут наглядно освещены в текущем раскрытии изобретения для любого среднего специалиста в данной области техники.

В некоторых примерах осуществления изобретения агенты против ожирения выбираются из группы, состоящей из орлистата, сибутрамина, бромокриптина, эфедрина, лептина и псевдоэфедрина. В следующем примере осуществления изобретения, соединения настоящего изобретения и комбинированные средства вводятся в сочетании с физической нагрузкой и/или разумной диетой.

Понятно, что масштаб комбинированной терапии соединениями настоящего изобретения с другими агентами против ожирения, анорексигенными агентами, подавляющими аппетит соединениями и родственными им соединениями, не ограничивается тем, что перечислено выше, но включает в принципе любую комбинацию с любым фармацевтическим агентом или с фармацевтической композицией, пригодной для лечения избыточного веса и ожирения индивидуумов.

Понятно, что масштаб комбинированной терапии соединениями настоящего изобретения с другими фармацевтическими агентами не ограничивается тем, что перечислено в этом документе, выше или ниже, но включает в принципе любую комбинацию с любым фармацевтическим агентом или фармацевтической композицией, пригодной для лечения заболеваний, патологических состояний или нарушений, которые сопряжены с нарушениями, связанными с метаболизмом.

Некоторые примеры осуществления настоящего изобретения включают способы лечения заболевания, нарушения, патологического состояния или их совокупности, как описано в этом документе, включающие в себя введение индивидууму в случае необходимости такого лечения терапевтически эффективного количества или дозы соединения по настоящему изобретению в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из: препаратов сульфонилмочевины (например, глибурид, глипизид, глимепирид и других препаратов сульфонилмочевины, известных из уровня техники), меглитинидов (например, репаглинид, натеглинид и других меглитинидов, известных из уровня техники), бигуанидов (например, бигуаниды, включающие фенформин, метформин, буформин и бигуаниды, известные из уровня техники), ингибиторов α-глюкозидазы [например, акарбоза, N-(1,3-дигидрокси-2-пропил)валиоламин (генетическое название воглибоза), миглитол и ингибиторы α-глюкозидазы, известные из уровня техники], агонистов рецептора- γ активации пролиферации пероксисом (т.е. PPAR- γ) (например, розиглитазон, пиоглитазон, тезаглитазар, нетоглитазон, GW-409544, GW-501516 и PPAR- γ агонисты, известные из уровня техники), инсулина, аналогов инсулина, ингибиторов HMG-CoA редуктазы (например, розувастатин, правастатин и его натриевая соль, симвастатин, ловастатин, аторвастатин, флювастатин, церивастатин, розувастатин, питавастатин, BMS «суперстатин » и ингибиторы HMG-CoA редуктазы, известные из уровня техники), понижающих холестерин лекарств (например, фибраты, которые включают: безафибрат, беклобрат, бинифибрат, циплофибрат, клинофибрат, клофибрат, клофибриновая кислота, этофибрат, фенофибрат, гемфиброзил, никофибрат, пирифибрат, ронифибрат, симфибрат, теофибрат и фибраты, известные из уровня техники; вещества, усиливающие экскрецию желчной кислоты, которые включают: холестирамин, колестипол и им подобные; и ниацин), антиагрегантных агентов (например, аспирин и антагонисты рецептора аденозин дифосфата, которые включают: клопидогрель, тиклопидин и им подобные), ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (например, каптоприл, эналаприл, аласеприл, делаприл; рамиприл, лизиноприл, имидаприл, беназеприл, керонаприл, цилазаприл, эналаприлат, фозиноприл, мовелтоприл, периндоприл, куинаприл, спираприл, темокаприл, трандолаприл и ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента, известные из уровня техники), антагонистов рецептора ангиотензина II [например, лозартан(и форма калиевой соли)], антагонистов рецептора ангиотензина II, известных из уровня техники, адипонектина, ингибиторов синтеза сквалена {например, (S)- α-[бис(2,2-диметил-1-оксопропокси)метокси]фосфинил]-3-феноксибензолбутансульфоновая кислота, монокалиевая соль (BMS-188494) и ингибиторы синтеза сквалена, известные из уровня техники, и им подобных. В некоторых примерах осуществления изобретения способы настоящего изобретения включают соединения настоящего изобретения и фармацевтические агенты, вводимые раздельно. В дополнительных примерах осуществления изобретения соединения по настоящему изобретению и фармацевтические агенты вводятся вместе.

Подходящие фармацевтические агенты, которые могут применяться в сочетании с соединениями по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются только ими, агонистов амилина (например, прамлинтид), стимуляторов секреции инсулина (например, агонисты GLP-1; эксендин-4; инсулинотропин (NN2211); ингибиторы дипептилпептидазы (например, NVP-DPP-728), ингибиторы ацил-СоА-холестеролацетилтрансферазы (например, эзитимиб, эфлуцимиб и им подобные соединения), ингибиторов абсорбции холестерина (например, эзетимиб, памакезид и им подобные соединения), ингибиторов белка переноса эфиров холестерина (например, СР-529414, JTT-705, CETi-1 и им подобные соединения), ингибиторов белка микросомального переноса триглицеридов (например, имплитапид и ему подобные соединения), модуляторов холестерина (например, NO-1886 и ему подобные соединения), модуляторов желчной кислоты (например, GT103-279 и ему подобные соединения), модуляторов инсулинового сигнального пути, подобных ингибиторам белковой тирозинфосфатазы (РТР-азы), ненизкомолекулярные вещества-миметики, и ингибиторов глутамин-фруктозо-6-фосфат амидотрансферазы (GFAT), соединения, влияющие на нарушение регуляции продуцирования глюкозы в печени, подобные ингибиторам глюкозо-6-фосфатазы (G6P-аза), ингибиторов фруктозо-1,6-бисфосфатазы (F-1,6-ВР-аза), ингибиторов гликогенфосфорилазы (GP), антагонистов глюкагонового рецептора и ингибиторов фосфоенолпируваткарбоксикиназы (РЕРСК), ингибиторов пируватдегидрогеназокиназы (PDHK), усилителей чувствительности к инсулину, усилителей секреции инсулина, ингибиторов опорожнения желудка, α ₂ -адренергических антагонистов и агонистов ретиноид-Х-рецептора (RXR).

В соответствии с настоящим изобретением, комбинации могут использоваться путем смешивания соответствующих активных компонентов, соединения настоящего изобретения и фармацевтического агента, либо всех вместе, либо независимо друг от друга с физиологически приемлемым носителем, вспомогательным веществом, связующим веществом, разбавителем и др., как описано выше в этом документе, и введения смеси или смесей либо перорально, либо непврорально в качестве фармацевтической композиции. Когда соединение или смесь соединений по настоящему изобретению вводятся как комбинированная терапия с другим активным соединением, терапевтические агенты могут быть созданы в виде лекарственной формы, как отдельные фармацевтические композиции, даваемые единовременно, или в различное время, или как терапевтические агенты, которые можно давать как одиночную композицию.

Другие вспомогательные системы

Другой объект настоящего изобретения имеет отношение к радиоактивно меченным соединениям, которые будут полезны не только для радиодиагностической визуализации, но также в испытаниях как in vitro, так и in vivo, по локализации и проведению количественного анализа RUP3 рецептора в образцах ткани, включая человеческую, и для идентификации лигандов RUP3 рецептора путем подавления связывания радиоактивно меченного соединения. Это следующий объект изобретения для развития новых испытаний RUP3 рецептора, которые включают такие радиоактивно меченные соединения.

Настоящее изобретение охватывает изотопно меченное соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемые соли. «Изотопно меченные » или «радиоактивно меченные » соединения - это такие, которые идентичны соединениям, раскрытым в этом документе, но фактически - это такие, где один или более атомов заменены или замещены атомами, имеющими атомную массу или атомный номер, отличающиеся от атомной массы или атомного номера, обычно встречающихся в природе (т.е. находящихся в природе). Подходящие радионуклиды, которые могут быть включены в соединения по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются только ими, Н (также записываемый как D дейтерий), ³ H (также записываемый как Т тритий), ¹¹ С, ¹¹ C, ¹⁴ C, ¹³ N, ¹⁵ N, ¹⁵ O, ¹⁷ O, ¹⁸ O, ¹⁸ F, ³⁵ S, ³⁶ Cl, ⁸² Br, ⁷⁵ Br, ⁷⁶ Br, ⁷⁷ Br, ¹²³ I, ¹²⁴ I, ¹²⁵ I и ¹³¹ I. Радионуклид, который включен в рассматриваемые в данный момент радиоактивно меченные соединения, будет зависеть от специфического применения этого радиоактивно меченного соединения. Например, для исследований конкурентного связывания радиоактивно меченного RUP3 рецептора in vitro в большинстве случаев наиболее используемыми будут соединения, которые включают ³ Н, ¹⁴ С, ⁸² Br, ¹²⁵ I, ¹³¹ I, ³⁵ S. Для применения в области радиодиагностической визуализации в большинстве случаев наиболее используемыми будут ¹¹ C, ¹⁸ F, ¹²⁵ I, ¹²³ I, ¹²⁴ I, ¹³¹ I, ⁷⁶ Br, ⁷⁶ Br или ⁷⁷ Br.

Понятно, что «радиоактивно меченное » или «меченное соединение » представляет собой соединение по настоящему изобретению, которое включает по меньшей мере один радионуклид, в некоторых примерах осуществления изобретения радионуклид выбирается из группы, состоящей из ³ Н, ¹⁴ С, ¹²⁵ I, ³⁵ S и ⁸² Br.

Определенные изотопно меченные соединения настоящего изобретения пригодны в исследованиях распределения соединения и/или субстрата в тканях. В некоторых примерах осуществления изобретения радионуклид ³ Н и/или ¹⁴ С изотоп пригодны в этих исследованиях. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е. ² Н), может давать определенные терапевтические преимущества, являющиеся результатом большей метаболической стабильности (например, возрастание in vivo времени полураспада или снижение требуемой дозы) и поэтому может быть предпочтительным в некоторых обстоятельствах. Изотопно меченные соединения по настоящему изобретению в большинстве случаев могут быть получены в результате нижеследующих методик, аналогичных тем, которые раскрыты в вышеприведенных схемах и нижеприведенных примерах, путем использования изотопно меченного реагента вместо неизотопно меченного реагента. Другие синтетические способы, которые пригодны, обсуждаются ниже. Кроме того, следует понимать, что все атомы, представленные в соединениях по изобретению, могут быть либо наиболее часто встречающимся изотопом таких атомов, либо наиболее редкими радиоизотопами, либо нерадиоактивными изотопами.

Синтетические способы включения радиоактивных изотопов в органические соединения применимы для соединений по изобретению и хорошо известны из уровня техники. Эти синтетические способы могут применяться для промежуточного соединения или для конечного соединения, например, включение активных уровней трития в соединения по настоящему изобретению представлено нижеследующим.

A. Каталитическое восстановление тритийсодержащим газом. Эта методика обычно дает продукты с высокой специфической активностью и требует галогенированных или ненасыщенных исходных соединений.

B. Восстановление [ ³ Н]меченным натрийборогидридом. Эта методика достаточно дорогая и требует исходное соединение, содержащее восстанавливаемые функциональные группы, такие как альдегиды, кетоны, лактоны, сложные эфиры и им подобные.

C. Восстановление [ ³ Н]меченным литийалюмогидридом. Эта методика предоставляет возможность получить продукты с почти теоретически расчитанными специфическими активностями. Она также требует исходных соединений, содержащих восстанавливаемые функциональные группы, такие как альдегиды, кетоны, лактоны, сложные эфиры и им подобные.

D. Подвергание воздействию тритийсодержащим газом для введения радиоактивной метки. Эта методика включает процедуру воздействия на исходные соединения, содержащие обмениваемые протоны, тритийсодержащим газом в присутствии подходящего катализатора.

E. N-метилирование с использованием [ ³ Н]меченного метилиодида. Эта методика обычно применяется для получения O-метил или N-метил [ ³ Н]меченных продуктов путем обработки соответствующих исходных соединений [ ³ Н]меченным метилиодидом с высокой специфической активностью. Этот способ в большинстве случаев приводит к высшей специфической активности, такой как, например, приблизительно 70-90 Ки/ммоль.

Радиоактивно меченное RUP3 рецепторное соединение настоящего изобретения может использоваться в скрининговых испытаниях для идентификации/оценки соединений. В обычных условиях вновь синтезированное или идентифицируемое соединение (т.е., тестируемое соединение) можно оценить по его способности снижать связывание «радиоактивно меченного соединения » настоящего изобретения с RUP3 рецептором. Соответственно способность тестируемого соединения конкурировать с «радиоактивно меченным соединением » настоящего изобретения за связывание с RUP3 рецептором напрямую коррелирует с его сродством к связыванию.

Меченные соединения по настоящему изобретению связываются с RUP3 рецептором. В одном из примеров осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 500 мкМ, еще в одном примере осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 100 мкМ, еще в одном примере осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 10 мкМ, еще в одном примере осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 1 мкМ, опять же еще в одном примере осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 0,1 мкМ, опять же еще в одном примере осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 0,01 мкМ и опять же еще в одном примере осуществления изобретения меченное соединение имеет IC ₅₀ менее чем 0,001 мкМ.

Как следует признать, стадии способов настоящего изобретения не нуждаются в осуществлении какое-либо определенное число раз или в какой-либо определенной последовательности. Дополнительные объекты, преимущества и новые признаки этого изобретения станут очевидными для специалиста в данной области техники при изучении нижеследующих примеров, которые предназначены в качестве иллюстраций и не предназначены для ограничения объема изобретения.

Примеры

Пример 1. Воздействия in vivo агонистов RUP3 на гомеостаз глюкозы у крыс.

Общая методика. Пероральный тест на толерантность к глюкозе (oGTT).

Самцы крыс линии Спраг-Доули (Harlan, San Diego, CA), весящие около 350-375 г, голодали 16 ч и случайным образом были сформированы группы (n=6) для получения агониста RUP3 в количествах 0,3, 3 или 30 мг/кг. Соединения вводили перорально путем питания зондовой иглой (пероральный прием внутрь, объем 2 мл/кг). В нулевой момент времени уровни глюкозы в крови оценивались с использованием глюкометра (Accu-Chek Advantage, Roche Diagnostics), и крысам вводили либо наполнитель (20% гидроксипропил-бета-циклодекстрин), либо тестируемое соединение. Через тридцать минут после введения тестируемого соединения уровни глюкозы в крови опять оценивали и крысам вводили декстрозу перорально в дозе 3 г/кг. Измерения глюкозы в крови затем проводили через 30 мин, 60 мин и 120 мин после этого момента времени. Таблица 1 показывает средний процент ингибирования превышения содержания глюкозы для каждого тестируемого соединения, вычисленный для шести животных в исследуемой группе. Эти результаты демонстрируют, что агонист RUP3, изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты [формула (I)] понижал содержание глюкозы в крови после введения пробы с глюкозой.

Таблица 1. Средний % ингибирования превышения содержания глюкозы

Пример 2. Испытание связывания с рецептором.

В дополнение к способам, описанным в этом документе, другой способ оценки тестируемого соединения заключается в определении сродства к связыванию с RUP3 рецептором. Этот вид испытаний обычно требует радиоактивно меченный лиганд RUP3 рецептора. При отсутствии использования известных лигандов RUP3 рецептора и его радиоактивно меченного производного, соединения формулы (I) могут быть помечены радиоактивными изотопами и использованы в испытаниях по оценке сродства тестируемого соединения к RUP3 рецептору.

Радиоактивно меченное RUP3 соединение формулы (I) может использоваться в скрининговых испытаниях для идентификации/оценки соединений. В обычных условиях вновь синтезированное или идентифицируемое соединение (т.е., тестируемое соединение) можно оценить по его способности снижать связывание «радиоактивно меченного соединения формулы (I) » с RUP3 рецептором. Соответственно, способность «радиоактивно меченного соединения формулы (I) » конкурировать с радиоактивно меченным RUP3 лигандом за связывание с RUP3 рецептором напрямую коррелирует со сродством тестируемого соединения к связыванию с RUP3 рецептором.

Протокол испытаний по определению рецепторного связывания с RUP3

А. Получение RUP3 рецептора.

293 клетки (человеческих почек, АТСС), случайным образом трансфицированные 10 мкг человеческого RUP3 рецептора и 60 мкл липофектамина (на 15-см планшете), выращивались на планшете 24 ч (75% синхронизация роста) с заменой среды и удалением ее с использованием 10 мл/на планшету Hepes-EDTA буфера (20 мМ Hepes + 10мМ EDTA, рН 7,4). Клетки затем центрифугировали в Beckman Coulter центрифуге 20 мин, 17000 об/мин (JA-25.50 ротор). Затем осадок в центрифужной пробирке ресуспендировали в 20 мМ Hepes + 1мМ EDTA, рН 7,4 и гомогенизировали в 50-мл Dounce гомогенизаторе и опять центрифугировали. После удаления супернатанта осадок в центрифужной пробирке хранили при -80 °С до применения в испытании по связыванию. Когда применяли в испытании, мембраны размораживали на льду в течение 20 мин и затем добавляли 10 мл инкубационного буфера (20 мМ Hepes, 1 мМ MgCl ₂ , 100 мМ NaCl, рН 7,4). Мембраны затем встряхивали для ресуспендирования сырого мембранного осадка центрифужной пробирки и гомогенизировали на Brinkmann PT-3100 Polytron гомогенизаторе в течение 15 с при значении параметра настройки прибора 6. Концентрацию мембранного белка определяли, используя метод Брэдфорда.

В. Испытание связывания.

Для общего связывания весь объем, 50 мкл соответственно разбавленных мембран (разбавленных в испытательном буфере, содержащем 50 мМ Трис HCl (рН 7,4), 10 мМ MgCl ₂ и 1 мМ EDTA; 5-50 мкг белка), добавляли в 96-луночный полипропиленовый микротитровочный планшет, с последующим добавлением 100 мкл испытательного буфера и 50 мкл радиоактивно меченного RUP3 лиганда. Для неспецифического связывания 50 мкл испытательного буфера добавляли вместо 100 мкл и дополнительно 50 мкл 10 мкМ охлажденного RUP3 добавляли перед добавлением 50 мкл Радиоактивно меченного RUP3 лиганда. Планшеты затем инкубировали при комнатной температуре 60-120 мин. Реакцию связывания останавливали фильтрованием испытуемых планшет через фильтрационные планшеты Microplate Devices GF/C Unifilter с 96-луночными Brandell планшетами - коллекторами клеток, с последующей промывкой охлажденными 50 мкл Трис HCl, рН 7,4, содержащими 0,9% NaCl. Затем дно фильтрационной планшеты герметизировалось, в каждую лунку добавляли 50 мкл Optiphase Supermix, верхняя часть планшет герметизировалась и планшеты подсчитывались на Trilux MicroBeta сцинтилляционном счетчике. Для сравнительного изучения соединения вместо добавления 100 мкл исследуемого буфера, 100 мкл соответственно разбавленного тестируемого соединения добавляли в соответствующие лунки, после чего добавляли 50 мкл радиоактивно меченного RUP3 лиганда.

С. Расчеты.

Тестируемые соединения сначала испытывались при 1 и 0,1 мкМ, и затем в интервале концентраций, выбранных близко к таким, которые являются средней дозой, способной вызвать 50% ингибирование связывания радиоактивно меченного RUP3 лиганда (т.е. IC ₅₀ ). Специфическое связывание в отсутствии тестируемого соединения (В ₀ ) представляет собой разность: общее связывание (В _т ) минус неспецифическое связывание (NBS), и подобным образом специфическое связывание (в присутствии тестируемого соединения) (В) представляет собой разность: замещающее связывание (B _D ) минус неспецифическое связывание(NBS). IC ₅₀ определяли по кривой ингибирования для зависимости logit-log plot от В/В ₀ в зависимости от концентрации тестируемого соединения.

K _i считали, используя преобразование Cheng и Prustoff:

K _i =IC ₅₀ /(1+[L] /K _D )

где [L]- это концентрация радиоактивно меченного RUP3 лиганда, использованная в испытаниях, и K _D - это константа диссоциации радиоактивно меченного RUP3 лиганда, определенная независимо в тех же самых условиях связывания.

Пример 3. CYP методика.

Скрининговые испытания ингибирования Р450 осуществляли на 96-луночных микротитровочных планшетах с использованием кДНК-экспрессированных человеческих ферментов (CYP1A2, 2С9, 2С19, 2D6 и 3А4). Тестируемые соединения (растворенные в ацетонитриле) последовательно разбавляли фосфатным буфером (рН 7,4), содержащим электрон-генерирующую систему (глюкозо-6-фосфат, NADP ⁺ и глюкозо-6-фосфат дегидрогеназу). Ферментативную реакцию инициировали добавлением индивидуальных Р450 ферментов, предварительно смешанных с флуоресцирующими Р450-специфическими субстратами, и останавливали путем добавления ацетонитрила (или NaOH для DBF испытаний) к реакционной смеси после инкубации при 37 °С данный промежуток времени. Флуоресценцию метаболитов измеряли на флуоресцентном устройстве для считывания планшет Biotek. Результаты выражали как процент ингибирования в сравнении с контролем (без тестируемого соединения). IC ₅₀ величины устанавливали из кривой концентрационной зависимости. Субстраты Р450, использованные для испытаний, включали дибензилфлюоресцеин (DBF, для CYP2C9, 2С19 и 3А4), 3-циано-7-этоксикумарин (СЕС, для CYP1A2), 3-[2-(N,N-диэтил-N-метиламино)этил]-7-метокси-4-метилкумарин (АММС, для CYP2D6), бензилоксихинолин (BQ) и 7-бензилокси-4-трифторметилкумарин (BFC, для CYP3A4).

В случае изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты наблюдали значения IC ₅₀ для следующих ферментов более чем приблизительно 15 мкМ (CYP2C9), более чем приблизительно 40 мкМ (1А2), более чем приблизительно 40 мкМ (2D6), более чем приблизительно, 40 мкМ (3А4), и приблизительно 10 мкМ (2С19).

Интерпретация данных

Тестируемые соединения классифицировали на три категории на основании их IC ₅₀ величин. Тестируемое соединените с IC ₅₀ больше, чем 10 мкМ назвали слабым ингибитором. Если соединение имеет IC ₅₀ менее, чем 1 мкМ, оно классифицируется, как сильный ингибитор, и средний ингибитор имеет промежуточное значение IC ₅₀ . Соединение, классифицированное как слабый ингибитор (IC ₅₀ > чем, приблизительно, 10 мкМ), характеризуется небольшой способностью к взаимодействиям лекарство-лекарство.

Пример 4.

Соединения по изобретению и их синтезы дополнительно иллюстрируются нижеследующими примерами. Нижеследующие примеры предоставлены для дополнительного определения изобретения, однако, без ограничения изобретения до небольшого объема этих примеров. Соединения, описанные в этом документе, названы в соответствии с CS Chem Draw Ultra Version 7.0.1. В определенных примерах использованы общепринятые названия и понятно, что эти общепринятые названия будут понятны для специалиста в данной области техники.

Химия. Спектры протонного ядерного магнитного резонанса ( ¹ Н-ЯМР) регистрировали на приборе Varian Mercury Vx-400, снабженном 4 автоматически переключаемыми ядерными датчиками и z-градиентом, или на приборе Bruker Avance-400, снабженном QNP (квадратурным ядерным датчиком) или BBI (широкополосной инверсией) и z-градиентом. Химические сдвиги даны в миллионных долях (м.д.) с указанием погрешности сигнала растворителя. Сокращения, используемые в ЯМР, следующие: с = синглет, д = дублет, т = триплет, кв = квартет, м = мультиплет, ушир. = уширенный сигнал. Коротковолновое облучение осуществляли с использованием Emyrs Synthesizer (Personal Chemistry). Тонкослойную хроматографию (ТСХ) осуществляли на силикагеле 60 F ₂₅₄ (Merck), препаративную тонкослойную хроматографию (преп. ТСХ) осуществляли на пластинках с PK6F силикагелем 60 А 1 мм (Whatman), и колоночную хроматографию осуществляли на силикагелевой колонке, используя Кизельгель 60, 0,063-0,200 мм (Merck). Упаривание проводили в вакууме на роторном испарителе Buchi. Celite 545 ® использовали для фильтрования палладия.

Жидкостная хроматография/масс-спектрометрия (LCMS).

1) Хроматография под давлением (PC): ВЭЖХ-насосы: LC-10AD VP, Shimadzu Inc.; ВЭЖХ система контроля: SCL-10A VT, Shimadzu Inc.; УФ-детектор: SPD-10A VP, Shimadzu Inc.; автоматический пробоотборник: СТС НТР, PAL, Leap Scientific; масс-спектрометр: API 150EX с турбогенератором ионораспыления, AB/MDS Sciex; программное обеспечение: Analyst 1.2.

2) Мас.сп.: ВЭЖХ-насосы: LC-8A VP, Shimadzu Inc.; ВЭЖХ система контроля: SCL-10A VP, Shimadzu Inc.; УФ-детектор: SPD-10A VP, Shimadzu Inc.; автоматический пробоотборник: 215 Liquid Handler, Gilson Inc.; Масс-спектрометр: API 150EX с турбогенератором ионораспыления, AB/MDS Sciex; Программное обеспечение: Masschrom 1.5.2.

Пример 4.1. Получение изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты (способ А)

Раствор изопропилового эфира 4-(6-хлор-5-метилпиримидин-4-илокси)пиперидин-1-карбоновой кислоты (6,28 г, 20,0 ммоль, см. WO2005/007647 для получения) и 2-метилпиридин-3-ола (2,73 г, 25 ммоль) в безводном DMF (20 мл), содержащем K ₂ CO ₃ (5,5 г, 40 ммоль) нагревали при 150 °С 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через целит и растворитель удаляли из фильтрата при высоком вакууме. Остаток, растворенный в этилацетате (75 мл), промывали 1н NaOH (2 ×50 мл), затем - водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Органический экстракт сушили над MgSO ₄ и растворитель удаляли.

Остаток растворяли в диэтиловом эфире (50 мл) и обрабатывали 1н. HCl/диэтиловый эфир (4 мл). Образовывался черный осадок, с которого декантировали бесцветный супернатант. Добавляли дополнительные 1н HCl/диэтиловый эфир (16 мл) к раствору, в результате происходило образование белого осадка. Его отделяли фильтрованием, получая соль: гидрохлорид изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества (7,42 г, выход 88%): Масс-сп. m/z 387,2; ¹ H-ЯМР (DMSO-d ₆ ) δ 8,61 (д, 1Н, J=5,4 Гц), 8,28 (с, 1Н), 8,19 (д, 1Н, J=8,2 Гц), 7,77 (т, 1Н, J=8,3 Гц), 5,33 (м, 1Н), 4,79 (м, 1Н), 3,65 (м, 2Н), 3,35 (м, 2Н), 2,50 (с, 3Н), 2,19 (с, 1Н), 1,96 (м, 2Н), 1,67 (м, 2Н), 1,20 (д, 6Н, J=6,2 Гц).

Пример 4.2. Получение изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты (способ В).

Стадия А. Получение 4-хлор-5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидина.

К смеси 2-метилпиридин-3-ола (2 г, 18,32 ммоль) и 4,6-дихлор-5-метилпиримидина (2,98 г, 18,32 ммоль) добавляли DMA (15 мл). Полученный раствор перемешивали один час при -8 °С и добавляли одной порцией карбонат калия (2,53 г, 18,32 ммоль), заметная экзотермическая реакция при этом не наблюдалась (температура после добавления была -7,2 °С). Смесь оставляли, чтобы она нагрелась до комнатной температуры (на 2 ч) и затем перемешивали еще дополнительно 3 ч (протекание реакции контролировали с использованием LCMS). Неочищенную смесь охлаждали до 0 °С; медленно добавляли холодную воду (3 °С, 15 мл). Температуру повышали до 16 °С, твердое вещество отфильтровывали при 1,7 °С и трижды промывали холодной водой (3 °С, 3 ×15 мл) и сушили в вакуумном сушильном шкафу при 50 °С 24 ч. Твердое вещество собирали, получали 4-хлор-5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидина (3,5833 г, 89,5%). LCMS: 236-238 (МН) ⁺ , 200,1, 155-155,7, 119,2. ЯМР (400 МГц, δ м.д., ДМСО d ₆ ): 8,4 (1Н, с), 8 (1Н, дд, J), 7,65 (1Н, дд, J), 7,35 (1Н, дд, J), 2,42 (3Н, с), 2,3 (3Н, с).

Стадия В. Получение изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты.

К смеси изопропилового эфира 4-гидроксипиперидин-1-карбоновой кислоты (1,3364 г, 7,146 ммоль) и 4-хлор-5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидина (1,683 г, 7,146 ммоль) добавляли THF (8,8 мл). Полученный в результате раствор охлаждали до 0 °С и медленно добавляли трет-бутоксид калия (1М в THF, 7,2 мл), температуру поддерживали ниже 5 °С. Неочищенную смесь ославляли нагреться до 15 °С (3 ч) и расходование исходных веществ контролировали с использованием LCMS. Смесь разбавляли, используя гептан (16 мл) и концентрировали до 5 мл. Гептан (11 мл) добавляли и соли фильтровали и промывали гептаном (16 мл). Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, что приводило к получению неочищенного бесцветного маслообразного вещества (2,75 г, количественный выход). LCMS: 387 (МН) ⁺ , 218,1, 170, 128,1. ЯМР (400 МГц, δ м.д., ДМСО d ₆ ): 8,36 (1Н, дд, J), 8,23 (1Н, с), 7,56 (1Н, дд, J), 7,31 (1Н, дд, J), 5,32, (1Н, м), 4,78 (1Н, септ., J), 3,65 (2Н, м), 3,35 (2Н, м), 2,28 (3Н, с), 2,17 (3Н, с), 1,95 (2Н, м), 1,65 (2Н, м), 1,19 (6Н, д, J). Масло опять растворяли в смеси гептана (16 мл) и изопропанола (4,8 мл), медленно добавляли HCl (4н. в диоксане, 3 мл). Полученную в результате смесь нагревали до 80 °С 15 мин и затем охлаждали до 1 °С; белое твердое вещество отфильтровывали, промывали гептаном (2 ×16 мл) и сушили в вакуумном сушильном шкафу при 50 °С 24 ч. Требуемое соединение собирали (2,3288 г, выход 77%). LCMS: 387,5 (МН) ⁺ , 218,1, 170,1, 128,1. ЯМР (400 МГц, 5 м.д., ДМСО d ₆ ): 8,53 (1Н, дд, J), 8,17(1Н, с), 8,12 (1Н, дд, J), 7,75 (1Н, дд, J), 5,35 (1Н, м), 4,95 (1Н, септ., J), 3,78 (2Н, м), 3,42 (2Н, м), 2,85 (3Н, с), 2,23 (3Н, с), 2,05 (2Н, м), 1,8 (2Н, м), 1,25 (6Н, д, J).

Пример 5. Протокол для RUP3 «доза-эффект » в меланофорах.

Меланофоры поддерживались в культуре, как опубликовано в Potenza, M.N., Lerner, M.R. Pigment Cell Research, Vol. 5, 372-378, 1992, и трансфецировались с вектором экспресии RUP3 (pCMV) с помощью электропорации. После электропорации трансфицированные клетки высевались на 96-луночные планшеты для испытаний. Клетки затем оставляли для роста на 48 ч с целью дать им возможность восстановиться после процедуры электропорации и достичь максимальных уровней экспрессии рецептора.

В день испытания среду для роста клеток заменяли несодержащим сыворотку буфером с 10 нМ мелатонина. Мелатонин действует через посредство эндогенного Gi-связанного GPCR в меланофорах, снижая внутриклеточные уровни цАМФ. В ответ на пониженные уровни цАМФ меланофоры перемещают свой пигмент к центру клетки. Конечный эффект от этого заключается в существенном снижении показателя абсорбции клеточного монослоя в лунке, измеренного при 600-650 нм.

После часовой инкубации в мелатонине клетки становятся полностью агрегированными с пигментом. Для этого момента получают показатель базовой линии абсорбции. Ряд разбавленных растворов тестируемых соединений затем добавляется к планшете и те соединения, которые стимулируют продуцирование RUP3, повышают внутриклеточные уровни цАМФ. В ответ на эти повышенные уровни цАМФ меланофоры перемещают свой пигмент обратно на периферию клетки. Спустя один час простимулированные клетки содержат полностью диспергированный пигмент. Клеточный монослой в состоянии диспергированного пигмента поглощает значительно больше света в диапозоне 600-650 нм. Измеренное возрастание абсорбции в сравнении с показателем базовой линии позволяет количественно оценить степень стимуляции рецептора и построить линию графика в координатах доза-ответ.

Соединение изопропиловый эфир 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси] пиперидин-1-карбоновой кислоты, как показано в формуле (I), является сильнодействующим агонистом RUP3 рецептора для ряда различных биологических видов, EC ₅₀ =2 нМ (человек), 1нМ (собака), 35 нМ (яванский макак), 41 нМ (мышь) и 44 нм (крыса).

Пример 6. Определение растворимости в воде для изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты.

В стеклянные пузырьки объемом 1 мл (n=2) добавляли крайне возможное количество изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты и 100 мкл воды, которая была профильтрована через ультратонкий фильтр системы получения чистой воды, с образованием суспензии. Содержимое пузырька перемешивали 30 с, используя прибор для встряхивания VWR mini vortexter и последующую обработку ультразвуком (Branson 1510) в течение 1 мин. Пузырьки помещали в баню с постоянной температурой (т.е., приблизительно, 25 °С) и оставляли для установления равновесия не менее, чем на 12 ч. Полученные в результате суспензии переливали в пробирки Эппендорфа, каждая из которых была снабжена 0,2 мкм нейлоновым фильтром (Costar 8168), и центрифугировали 10 мин при 14000 об/мин. Супернатант из каждой пробирки Эппендорфа собирали и разбавляли ацетонитрилом, степени чистоты для ВЭЖХ, с коэффициетом разбавления 200, 400 или 500. Каждый раствор анализировали методов ВЭЖХ.

В качестве примера, нижеследующее испытание с помощью ВЭЖХ применяли для определения растворимости в воде для изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты:

ВЭЖХ приборная система: Waters 2795; стационарная фаза: колонка Xterra ^R , MC C18, 3,5 мкм, 4,6 ×50 мм; подвижная фаза: линия А: деионизированная, профильтрованная через ультратонкий фильтр вода; линия В: 1,0% NH ₄ OH; линия С: 100% ацетонитрил степени чистоты для ВЭЖХ; градиент: А: от 80 до 0% в течение 8 мин; В: постоянно 10% в течение 8 мин; С: от 10 до 90% в течение 8 мин; скорость потока: 1,50 мл/мин; температура колонки: 40 °С ±5 °С; Температура образца: 25 °С ±5 °С.

Фотодиодный матричный детектор: Waters 2996 с УФ-лампой: 3D регистрация данных; начальная длина волны: 210 нм; конечная длина волны: 320 нм.

Обрабатываемая длина волны: 220 нм.

Количественную оценку осуществляли путем сравнения площади пика ВЭЖХ-хроматограммы каждого из тестируемых растворов с площадью пика, взятой из стандартного графика зависимости концентрации от площади пика для стандартов известных концентраций. Согласно общепринятому, стандартные концентрации изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси] пиперидин-1-карбоновой кислоты выбирались так, чтобы они попадали в пределы линейного интервала зависимости концентрации от абсорбции для применяемого УФ-детектора. Стандартная концентрация изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты разбавлялась в серийном образце для получения калибровочной кривой. Разбавление осуществлялось путем добавления ацетонитрила подвижной фазы. Каждый насыщенный равновесный раствор изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метилпиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты, полученный после фильтрования тестируемых растворров из пузырька, разбавляли ацетонитрилом с коэффициетом разбавления 200, 400 или 500 для достижения линейного интервала стандартного графика.

Таким образом, растворимость в воде для изопропилового эфира 4-[5-метил-6-(2-метил-пиридин-3-илокси)пиримидин-4-илокси]пиперидин-1-карбоновой кислоты наблюдали, приблизительно 40 мг/мл.

Тот, кто является специалистом в данной области техники, подтвердит, что различные модификации, добавления, замещения и изменения для иллюстративных примеров, изложенные в этом документе, могут быть осуществлены без отклонения от сущности изобретения и поэтому рассматриваются в пределах объема изобретения. Все документы, на которые ссылались выше, включая, но не ограничиваясь ими, публикации в открытой печати и предварительные и обычные патентные заявки, включены в этот документ как ссылки целиком и полностью.