EA200870129A1 20091030 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2009\TIT_PDF/200870129 Титульный лист описания [PDF] EAPO2009/PDF/200870129 Полный текст описания EA200870129 20061228 Регистрационный номер и дата заявки US60/754,889 20051229 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2006/062674 Номер международной заявки (PCT) WO2007/076524 20070705 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [eaa] EAA20905 Номер бюллетеня [RU] ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ IL-23, КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБЫ И ПРИМЕНЕНИЕ Название документа A61K 39/395, G01N 33/567 Индексы МПК [US] Бенсон Жаклин, Картон Джилл, Каннингхэм Марк, Орловски Евгения И. (US), Раухенбергер Роберт (DE), Свит Рэймонд Сведения об авторах [US] СЕНТОКОР, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea200870129a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

Человеческое антитело против IL-23p19, включая выделенные нуклеиновые кислоты, которые кодируют по меньшей мере одно антитело против IL-23p19, векторы, клетки-хозяева и способы их получения и применение в диагностических и/или терапевтических композициях, способах и устройствах.

 


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:
антитело против IL-23p19, включая выделенные нуклеиновые кислоты, которые кодируют по меньшей мере одно антитело против IL-23p19, векторы, клетки-хозяева и способы их получения и применение в диагностических и/или терапевтических композициях, способах и устройствах.

 


2420-153185ЕА/052 ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ IL-23, КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБЫ И
ПРИМЕНЕНИЕ ОПИСАНИЕ
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к антителам, в том числе к определенным участкам или вариантам, специфичным, по меньшей мере, к одному белку IL-2 3 или его фрагменту, а также к антиидиотилическим антителам и нуклеиновым кислотам, кодирующим антитела против IL-23pl9, комплементарным им нуклеиновым кислотам, векторам, клеткам-хозяевам, и к способам их получения и применения, включающим терапевтические составы, введение и устройства.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Интерлейкин (IL)-12 представляет собой секретируемый гетеродимерный цитокин, состоящий из 2 связанных дисульфидной связью гликозилированных белковых субъединиц, обозначаемых как р35 и р40 из-за их приблизительной молекулярной массы. IL-12 продуцируется, главным образом, антигенпредставляющими клетками и запускает клеточно-опосредуемый иммунитет посредством связывания двухцепочечного рецепторного комплекса, который экспрессируется на поверхности Т-клеток или естественных киллерных (NK) клеток. Цепь рецептора для IL-12 бета-1 (IL-12R.pi) связывается с суСъединицей р40 IL-12, обеспечивая первичное взаимодействие между IL-12 и его рецептором. Однако внутриклеточную передачу сигнала (например, фосфорилирование STAT4) и активацию несущих рецептор клеток обеспечивает связывание посредством IL-12p35 второй цепи рецептора, IL-12RP2 (Presky et al, 1996). Полагают, что передача сигнала IL-12 одновременно с представлением антигена активирует
дифференцировку Т-клеток в направлении фенотипа Т-хелперов 1 (Thl), характеризующегося продукцией интерферона гамма (IFNy) (Trinchieri, 2003). Полагают, что Thl-клетки обеспечивают иммунитет против некоторых внутриклеточных патогенов, образуют фиксирующие комплемент язотипы антител и осуществляют опухолевый иммунологическиг: надзор. Таким образом, полагают,
что IL-12 является важным компонентом для механизмов иммунной защиты хозяина.
Было открыто, что белковая субъединица р40 IL-12 также может связываться с отдельной белковой субъединицей, обозначаемой как р19, с образованием нового цитокина, IL-23 (Oppman et al, 2000). Также IL-23 передает сигнал через двухцепочечный рецепторный комплекс. Поскольку субъединица р4 0 является общей для IL-12 и IL-23, то цепь IL-12R(bl также является общей для IL-12 и IL-23. Однако специфичную для IL-23 внутриклеточную передачу сигнала (например, фосфорилирование STAT3) и последующую продукцию IL-17 Т-клетками обеспечивает связывание IL-23pl9 со вторым компонентом рецепторного комплекса для IL-23, IL-23R (Parhara et al, 2002; Aggarwal et al. 2003).. Последние исследования показали, что биологические функции IL-2 3 отличаются от функций IL-2, несмотря на структурное сходство между двумя цитокинами (Langrish et al, 2005) .
Нарушенная регуляция IL-12 и популяций Thl-клеток ассоциирована со многими опосредуемыми иммунной системой заболеваниями, поскольку нейтрализация IL-12 антителами является эффективной для лечения псориаза, рассеянного склероза (PC), ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, инсулин-зависимого сахарного диабета (1 типа) и увеита в моделях на животных (Leonard et al, 1995; Hong et al, 1999; Malfait et al, 1998; Davidson et al, 1998) . Однако поскольку эти исследования были нацелены на общую субъединицу р40, in vivo происходила нейтрализация как IL-12, так и IL-23. Таким образом, было неясно, IL-12 или IL-23 опосредовал заболевание, или необходимо ли ингибировать оба цитокина для достижения подавления заболевания. Последние исследования подтвердили, с помощью дефицитных по IL-23pl9 мышей или специфичной нейтрализации IL-23 антителами, что ингибирование IL-23 может обеспечить положительный результат, эквивалентный стратегиям против IL-12p4 0 (Cua et al, 2003, Murphy et al, 2003, Benson et al 2(04). Таким образом, накапливаются доказательства специфичной роли IL-23 в опосредуемом иммунной
системой заболевании. Нейтрализация IL-23 без ингибирования каскадов IL-12 затем может обеспечить эффективное лечение опосредуемого иммунной системой заболевания с ограниченным влиянием на важный механизм иммунной защиты хозяина. Это может представлять собой значительное усовершенствование по сравнению с современными способами лечения. СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к выделенным антителам млекопитающих, включая человека, которые связывают субъединицу р19 IL-23, антителам против IL-23pl9 (также обозначаемым как антитела к IL-23pl9), иммуноглобулинам, фрагментам, продуктам расщепления и другим определенным их участкам и вариантам, а также к композициям антител против IL-23pl9, антиидиотипическим антителам, кодирующим или комплементарным нуклеиновым кислотам, векторам, клеткам-хозяевам, композициям, сочетаниям, составам, устройствам, трансгенным животным, трансгенным растениям и к способам их получения и применения.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к выделенным молекулам нуклеиновых кислот, содержащим полинуклеотид, кодирующий специфичные антитела против IL-2 3pl9 или антиидиотипические антитела, содержащие по меньшей мере одну их определенную последовательность, домен, участок или вариант, комплементарным этому полинуклеотиду или
гибридизующимся с ним. Кроме того, настоящее изобретение относится к рекомбинантным векторам, содержащим указанные молекулы нуклеиновых кислот антител против IL-23pl9, клеткам-хозяевам, содержащим такие нуклеиновые кислоты и/или рекомбинантные векторы, а также к способам получения и/или применения таких нуклеиновых кислот антител, векторов и/или клеток-хозяев.
Также настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному способу экспрессии по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 или антиидиотипического антитела против IL-23р19 в клетке-хозяине, включающему культивирование клетки-хозяина,, как описано в настоящем документе, в условиях, при которых по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9
экспрессируется в поддающиеся выявлению и/или выделению количествах.
Также настоящее изобрете ние относится по меньшей мере к одной композиции, содержащей (а) выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против IL-23pl9, и/или антителе, как описано в настоящем документе; и (Ь) пригодный и/или фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
Кроме того, настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному способу или композиции антитела против IL-23pl9 для введения терапевтически эффективного количества з целях модулирования или лечения по меньшей мере одного связанного с IL-23pl9 состояния в клетке, ткани, органе, у животного или у пациента, и/или до, после или в процессе связанного с ним состояния, как известно в данной области и/или как описано в настоящем документе.
Также настоящее изобретение относится по меньшей мере к одной композиции, устройству и/или способу доставки терапевтически или профилактически эффективного количества по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 в соответствии с настоящим изобретением.
Кроме того, настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному способу или композиции антитела против IL-23pl9 для диагностики по меньшей мере одного связанного с IL-23pl9 состояния в клетке, ткани, органе, у животного или у пациента, и/или до, после или в процессе связанного с ним состояния, как известно в данной области и/или как описано в настоящем документе.
Также настоящее изобретение относится по меньшей мере к одной композиции, устройству и/или способу доставки для диагностики по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, в соответствии с настоящим изобретением.
Также предусмотрено медицинское устройство, содержащее пс меньшей мере одно выделенное антитело против IL-23pl9 по этому изобретению, где устройство является пригодным для контактирования или введения по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, антиидиотипического антитела против IL-23pl9,
молекулы нуклеиновой кисл> : ты, соединения, белка и/или композиции.
Также предусмотрено изделие для фармацевтического или диагностического применения у человека, содержащее упаковочный материал и контейнер, содержащий раствор или лиофилизированную форму по меньшей мере одного выделенного антитела млекопитающего против IL-23pl9 по настоящему изобретению. Изделие необязательно может содержать контейнер в качестве компонента устройства или системы для доставки.
Кроме того, настоящее изобретение относится к любому описанному в настоящем документе изобретению.
ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ
На фиг.1А показано, что человеческие антитела против IL-23р19 специфично связываются hrIL-23 и не связываются с hrlL-12 или мономером hrp40. Показано, что антитело против IL-12/IL-23 р40 связывает IL-23, IL-12 и мономер р40.
На фиг.1В показано, что человеческие антитела против IL-2 3р19 связываются с IL-23, но не с IL-2 3 мыши или его субъединицами.
На фиг.2 показывание связывание IL-23 с двумя иммобилизованными на планшете антителами против IL-23pl9 по этому изобретению.
На фиг.ЗА показано, что антитела MOR04083 и MOR04190 блокируют нормальное связывание IL-23/IL-23R.
На фиг.ЗВ показано, что антитела MOR04083 и MOR04190 не блокируют нормальное связывание IL-23/lL-12R(31.
На фиг.ЗС показано, что антитела MOR04083, MOR04190 и MOR04217 не ингибируют связывание IL-12 с IL-12R(31-Fc.
На фиг.4 показано, что антитела против IL-23pl9 MOR04083 и MOR04190 по этому изобретению ингибируют опосредуемое hrIL-23 фосфорилироЕание STAT 3.
На фиг.5А показано, что антитела против IL-23pl9 MOR04083 и MOR04190 по этому изобретению ингибируют опосредуемую рекомбинантным hrIL-23 продукцию IL-17.
На фиг.. 5В показано, что антитела против IL-23pl9 MOR04083 и MOR04190 по этому изобретению ингибирует опосредуемую
нативным hrIL-23 продукцию IL-17.
Фиг.5С показано, что антитела против IL-23pl9 MOR04083 и MOR04190 по этому изобретешь ингибирует опосредуемую нативным IL-23 яванской макаки продукцию IL-17.
На фиг.6 показано, что антитела против IL-23pl9 MOR04083 и MOR0 4190 по этому изобретению не ингибируют опосредуемую hrlL-12 продукцию IFNy.
На фиг.7А-С показано, что антитела против IL-23pl9 MOR04083, MOR04190 и MOR04217 по этому изобретению перекрестно конкурируют друг с другом за связывания с huIL-23.
На фиг.8 показано, чтс антитела против IL-23pl9 MOR05028, 05038, 05С40, 05042, 05045, 05049 и 05053 по этому изобретению ингибируют опосредуемую рек шбинантным hrIL-23 продукцию IL-17.
На фиг.9 показано, чтс антитела против IL-23pl9 MOR05028, 05038, 05040, 05042, 05045, 05049 и 05053 по этому изобретению блокируют нормальное связывание IL-23/IL-23R.
На фиг. 10 показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 375 9EQ/QS по этому изобретению специфично связываются с hrIL-2 3 и не связываются с hrIL-12 или мономером hrp4 0, аналогично мышиному моноклональному антителу против IL-23pl9, mAb23A. Показано, что антитело против IL-12/lL-23p40 mAb 12А связывает IL-23, IL--12 и мономер р40.
На фиг. НА показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q,/EV и 37 5 9EQ/Q? по этому изобретению блокируют нормальное связывание IL-23/IL-23R.
Фиг. 11В показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3759EQ/QS по этому изобретению не блокируют нормальное связывание IL-23/lL-12Rf31.
На фиг. 11 С показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3759EQ/QS по этому изобретению не ингибирует связывание IL-12 с IL-12R(31-Fc.
На фиг. 12 показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3759EQ/QS по этому изобретению не ингибируют индуцируемую IL-12 продукцию^ iNFy из клеток NK92MI.
На фиг. 13 показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3759EQ/QS по этому изобретению ингибируют опосредуемую
рекомбинантным hrIL-23 продукцию IL-17.
На фиг. 14 показано, чтс антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3759EQ/Qb по этому изобретению ингибируют опосредуемую нативным hrIL-23 продукцию IL-17.
На фиг. 15 показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3 75 9EQ/0° по этому изобретению ингибируют опосредуемую нативным IL-23 яванской макаки продукцию IL-17.
На фиг.1бА показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 37 5 9EQ/Q?' по этому изобретению и тАЬ23А конкурируют за связывание IL-2 3 с иммобилизованным гаАЬ23А.
На фиг. 16В показано, что антитела против IL-23pl9 5040Q/EV и 3759EQ//QS по этому изобретению и, в меньшей степени, тАЬ23А конкурируют за связывание IL-23 с иммобилизованным mAb 5 04 0Q/EV.
На фкг.1бС показано, ijTO антитела против IL-23pl9 5040
Q/EV
и 37 5 9ЕО/0:э по этому изобретению и тАЬ2 3А конкурируют за связывание IL-23 с иммобилизованным mAb 2159BQ/QS. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к выделенным, рекомбинантным и/или синтетическим антителам против IL-23pl9, включая, но не ограничиваясь ими, антиидиотипические антитела млекопитающих (например, человека) против IL-23pl9 к ним, а также к композициям и кодирующим молекулам нуклеиновых кислот, содержащим по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 или антиидиотипическое антитело. Кроме того, настоящее изобретение относится, но не ограничивается ими, к способам получения и применения таких нуклеиновых кислот и антител, и антиидиотипических антител, в том числе к диагностическим и терапевтическим композициям, способам и устройствам.
Как используют в настоящем документе, "антитело против IL-23р19", "антитело к IL-23pl9", "участок антитела против IL-23р19" или "фрагмент антитела против IL-23pl9" и/или "вариант антитела против IL-23pl9" и т.п., включает любой белок или пептид, содержащий молекулу, которая содержит по меньшей мере часть молекулы иммуноглобулина, такую как, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере один определяющий комплементарность
участок (CDR) тяжелой или легкой цепи или его связывающий лиганд участок, вариабельный участок тяжелой цепи или легкой цепи, константный участок тяжелой цепи или легкой цепи, каркасная область, или их любой участок, или по меньшей мере один участок рецептора для IL-23 или связывающего белка, который может быть встроен в антитело по настоящему изобретению. Такое антитело необязательно дополнительно воздействует на специфичный лиганд, например, но не ограничиваясь этим, таким образом, что такое антитело модулирует, снижает, повышает, осуществляет антагонизм, осуществляет агонизм, смягчает, ослабляет, блокирует, ингибирует, устраняет и/или предотвращает по меньшей мере один вид активности IL-23 или егс связывание или один вид активности рецептора для IL-23 или его связывание in vitro, in situ и/или in vivo. В качестве неограничивающего примера, пригодное антитело против IL-23pl9, определенный участок или вариант по настоящему изобретению, могут связывать по меньшей мере одну молекулу IL-13, или ее определенные участки, варианты или домены. Пригодное антитело против IL-23pl9, определенный участок или вариант также необязательно могут воздействовать по меньшей мере на один вид активности или функцию IL-23pl9, такие как, но не ограничиваясь ими, синтез РНК, ДНК или белка, высвобождение IL-23, передача сигнала рецептора для IL-23, расщепление мембранного IL-23, активность IL-23, продукция и/или синтез IL-23.
Кроме того, подразумевают, что термин "антитело" включает антитела, их фрагменты расщепления, определенные участки и варианты, включающие, но не ограничивающиеся ими, миметики антител или содержащие участки антител, которые имитируют структуру и/или функцию антитела или определенного его фрагмента или участка, включая, но не ограничиваясь ими, одноцелочечные антитела, антитела из одного домена и их фрагменты. Функциональные фрагменты включают антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с IL-23pl9 человека. Например, к этому изобретению относятся фрагменты антител, способные связываться с IL-23pl9 или его участками, включая, но не
ограничиваясь ими, фрагменты Fab (например, посредством расщепления папаином), Fab' (например, посредством расщепления пепсином или частичного восстановления) и F(ab')2 (например, посредством расщепления пепсином), facb (например, посредством расщепления плазмином) , pFc' (например, посредством расщепления пепсином или плазмином), Fd (например, посредством расщепления пепсином, частичного восстановления и повторной агрегации), Fv или scFv (например, посредством способов молекулярной биологии)
(см., например, Colligan, Immunology, выше).
Такие фрагменты можно получать ферментативным расщеплением, синтетическими или рекомбинантными способами, которые известны в данной области и/или как описано в настоящем документе. Также антитела можно получать в виде многообразных укороченных форм с использованием генов антител, в которые встроены един или несколько стоп-кодонов выше природного стоп-кодона. Например, можно сконструировать комбинированный ген, кодирующий участок тяжелой цепи F(ab')2, включающий последовательности ДНК, кодирующие домен Сн1 и/или шарнирную область тяжелой цепи. Различные участки антител можно соединять вместе хим:ически посредством общепринятых способов их или можно получать в виде непрерывного белка с использованием способов генетической инженерии.
Как используют в настоящем документе, подразумевают, что термин "антитело человека" включает антитела, имеющие вариабельные и константные участки, образованные из близко сходных последовательностей иммуноглобулинов эмбрионального типа человека. Антитела человека по этому изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые
последовательностями иммуноглобулинов эмбрионального типа
(например, мутации, внесенные случайным или сайт-направленным мутагенезом in vitro или посредством соматической мутации in vivo) . Таким образом, как используют в настоящем документе, термин "антитело человека" относится к антителу, в котором по существу каждая часть белк i (например, CDR, каркасная область, домены CL, Сн (например, Сн1, Сн2, Сн3), шарнирная область, (VL, VH) ) является по существу сходной с антителом человека
эмбрионального типа. Антитеза человека классифицируют на группы на основе сходства их аминокислотных последовательностей, см. например, http://people.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s/. Таким
образом, с: использованием поиска сходства последовательностей можно выбрать антитело со сходной линейной последовательностью', в качестве матрицы для создания "гуманизированных антител".
"Гуманизация" (также называемая перестройкой или пересадкой CDR) в настоящее время является общепринятым способом снижения иммуногеиности моноклональных антител (mAb) из ксеногенетических источников (обычно грызунов) и улучшения эффекторных функций (ADCC, активация комплемента, связывание Clq). Сконструированное mAb получают с использованием способов молекулярной биологии, однако простая пересадка CDR определяющих комплементармость участков (CDR) грызунов в человеческие каркасные области часто приводит к потере аффинности связывания и/или специфичности исходного mAb. В целях гуманизации антитела, конструкция гуманизированного антитела включает изменения, такие как консервативные аминокислотные замены в остатках CDR и обратная замена остатков с mAb грызуна на каркасные области человека (обратные мутации). Положения можно определить и идентифицировать сравнением последовательностей для структурного анализа или анализом модели гомологии ЗБ-структуры вариабельных участков. В процессе созревания аффинности совсем недавно использовали фаговые библиотеки для варьирования аминокислот в выбранных положениях. Аналогично использовали множество подходов для выбора наиболее пригодных каркасных областей человека для пересадки в них CDR грызунов. По мере возрастания совокупности данных об известных параметрах для структур антител, повышается детализация и уточнение этих способов. Можно использовать консенсусные или эмбриональные последовательности из отдельного антитела или фрагменты каркасных последовательностей в каждом вариабельном участке легкой или тяжелой цепи из нескольких различных mAb. Другим подходом к гуманизации является модификация только поверхностных остатков последовательностей грызунов остатками, наиболее часто встречающимися в mAb человека, и он называется
"изменением поверхности" или "гиперхимеризацией". Известные последовательности Ig описаны, например,
www. ncbi . nlm. nih. gov/entrez/query. f cgi ;
www. ncbi .nih. gov/igblast; www. atcc . org/phage/hdb.html ;
www. kabatdatabase.com/top.html ;
www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;
www.appliedbiosystems.com; www.biodesign.com;
antibody.bath.ac.uk; www.unizhxh; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), все из которых включены в настоящий документ Б качестве ссылок в полном объеме. Часто, антитело человека или гуманизированное антитело является по существу неиммуногенным у человека.
Аналогично антителами, обозначаемыми как антитела приматов (обезьяны, бабуина, шимпанзе и т.д.), грызунов (мыши, крысы, кролика, морской свинки, хомяка и т.п.) и других млекопитающих, обозначают такие антитела, специфичные для вида, подрода, рода, подсемейства и семейства. Кроме того, химерные антитела могут включать любое сочетание из указанных выше антител. Такие изменения или отклонения необязательно и предпочтительно сохраняют или снижают иммуногенность у человека или других видов по сравнению с немодифицированными антителами. Таким образом, антитело человека отличается от химерного или гуманизированного антитела.
Следует отметить, что антитело человека можно получать с помощью не относящегося к человеку животного или прокариотической или эукариотической клетки, которые способны экспрессировать функционально перестроенные гены
иммуноглобулина человека (например, тяжелую цепь и/или легкую цепь). Кроме того, когда антитело человека представляет собой одноцелочечное антитело или антитело с одним доменом, оно может содержать линкерный пептид, который отсутствует в природных антителах человека. Например, Fv может содержать линкерный пептид, такой как от двух до приблизительно восьми остатков глицина или других аминокислотных остатков, которые соединяют вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой
цепи. Такие линкерные петгиды рассматривают как пептиды человеческого происхождения.
Также можно использовать биспецифичные, гетероспецифичные, гетероконъюгированные или сходные антитела, которые представляют собой моноклснальные антитела, предпочтительно антитела человека или гуманизированные антитела, которые обладают специфичностью связывания в отношении по меньшей мере двух различных антигенов. В данном случае, один из видов специфичности связывания представляет собой специфичность связывания в отношении по меньшей мере одной белковой субъединицы IL-23pl9, а другой представляет собой специфичность связывания в отношении любого другого антигена. Способы получения биспецифичных антител известны в данной области. Обычно рекомбинантная продукция биспецифичных антител основана на коэкспрессии двух пар тяжелая цепь-легкая цепь иммуноглобулина, где две тяжелых цепи обладают различными видами специфичности (Milstein and Cuello, Nature 305:537 (1983)). Вследствие случайной сборки тяжелых и легких цепей иммуноглобулина, эти гибридомы (квадромы) продуцируют потенциальную смесь из 10 различных молекул антител, где только одна из них обладает правильной биспецифичной структурой. Очистку требуемой молекулы обычно проводят посредством стадий аффинной хроматографии. Сходные способы описаны, например, в WO 93/08829, патентах США No, 6210668, 6193967, 6132992, 6106833, 6060285, 6037453, 6010902, 5989530, 5959084, 5959083, 5932448, 5833985, 5821333, 5807706, 5643759, 5601819, 5582996, 5496549, 4676980, WO 91/00360, WO 92/00373, ЕР 03089, Traunecker et al, EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al. , Methods in Enzymology 121:210 (1986), все из которых включены в настоящий документ в полном объеме.
Антитела против IL-23pl9, пригодные в способах и композициях по настоящему изобретению, необязательно могут характеризоваться высокой аффинностью связывания с IL-23pl9 и, необязательно и предпочтительно, обладают низкой токсичностью. В частности, для настоящего изобретения являются пригодными антитело, определенный фрагмент или вариант по этому
изобретению, где отдельные компоненты, такие как вариабельный участок, константный участок и каркасная область, отдельно и/или совместно, необязательно и предпочтительно обладают низкой иммуногенностью. Антитела, которые можно использовать в соответствии с этим изобретением, необязательно характеризуются способностью в отношении лечения ими пациентов в течение длительных периодов времени с поддающимся определению уменьшением симптомов и низкой и/или приемлемой токсичностью. Низкая или приемлемая иммуногенность и/или высокая аффинность, а также другие пригодные свойства могут приводить к достижению терапевтических результатов. В настоящем документе "низкую иммуногенность" определяют как возникновение поддающихся титрованию уровней антител к антителу против IL-23pl9 у пациентов, которых лечили антителом против IL-23pl9, встречающееся менее чем у 25% пациентов, которых лечили, предпочтительно менее чем у 10% пациентов, которых лечили рекомендованной дозой в течение рекомендованного курса лечения в процессе периода лечения.
Выделенные нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению можно использовать для продукции по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 или его определенного варианта, которые можно использовать для определения эффекта в клетке, ткани, органе или у животного (в том числе млекопитающих и человека), для диагностики, мониторинга, модулирования, лечения, смягчения, способствования предотвращению
заболеваемости, или уменьшения симптомов по меньшей мере одного связанного с IL-23 состояния, выбранного, но не ограничивающегося ими, по меньшей мере из одного из иммунного нарушения или заболевания, сердечнососудистого нарушения или заболевания, инфекционного, злокачественного и/или
неврологического нарушения или заболевания, или другого известного или описанного связанного с IL-23 состояния.
Такой способ может включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9, в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в
таком модулировании, лечении, смягчении, профилактике или снижении симптомов, эффектов или механизмов. Эффективное количество может включать количество, составляющее
приблизительно от 0,001 до 500 мг/кг при однократном (например, болюсном), многократном или постоянном введении, или количество для достижения концентрации в сыворотке 0,01-5000 мкг/мл сыворотки при однократном, многократном или постоянном введении, или любой эффективный диапазон или значение в этом диапазоне, как осуществляют и определяют с использованием известных способов, как описано в настоящем документе или известно в данной области.
Антитела! по настоящему изобретению - продукция и получение
По меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 по настоящему изобретению необязательно можно продуцировать с помощью' клеточной линии, смешанной клеточной линии, иммортализованной клетки или клональной популяции
иммортализованных клеток, которые хорошо известны в данной области. См., например, Ausube1, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (19872 001); Sambrook, et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al. , eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan et al. , Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).
Антитела, специфичные к белкам IL-23pl9 человека или их фрагментам, можно получать из рекомбинантных библиотек антител человека с использованием пригодного антигена, такого как выделенный белок IL-23pl9 и/или его часть (включая синтетические молекулы, такие как синтетические пептиды). Другие специфичные или общие антитела, включая, но не ограничиваясь ими, антитела млекопитающих, можно индуцировать аналогичным образом. Получение антигенов и выделение антител из библиотек человека можно проводить с использованием любого пригодного способа.
В одном подходе рекомбинантное антитело получают посредством фагового дисплея с использованием библиотек антител (Hoogenboom HR. Overview of antibody phage-display technology and its applications. Methods in Molecular Biology. 178:1-37, 2002). В предпочтительном подходе, рекомбинантный Fab человека выделяют из библиотеки HuCal Gold(tm), разработанной MorphoSys, AG (KretzschmaLr, 2002), а затем повышают его активность посредством кассетного разнообразия CDR (Knappik et al., 2000; Krebs et al., 2001).
Рекомбинантные антителе человека, выделенные из библиотек фагового дисплея можно конструировать, заменяя определенные остатки конкретными аминокислотами, соответствующими
консенсусным или специфичным последовательностям антител человека. Эти последовательности идентифицируют сравнением с базами данных известных антител человека эмбрионального типа или подвергшихся реаранжировке антител.
Известные последовательности Ig человека описаны, например, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi;
www.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.hrml;
www.rrffc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php; www.kabatdatabase.com/top.html;
ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat; www.imgt.cines.fr.8104/;
www.biochem.unizh.ch/antibody/index.html; www.sciquest.com;
www.abeam.com; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;
www.public . iastate . edu/~pedro/research__tools .html; www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html; mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html;
www.immunologylink.com; pathbox. wustl.edu/~hcenter/index.html; www.appliedbiosystems.com; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody; www.m.ehime-u.ac.jp/-yasuhito/Elisa.html; www.biodesign.com; www.cancerresearchuk.org; www.biotech.ufl.edu; www.isac -
net.org; baserv.uci.kun.nl/~j raats/linksl.html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu. edu; www.mrc-cpe.cam.ac.uk;
www. ibt. unam.mx/vir/V_mice . html; http : //www. bioinf . org . uk/abs ;
антитело.bath.ас.uk; www.unizh.ch;
www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s;
www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html;
www.path.cam.ac.uk/~rnrc7/humanisation/TAHHP.html;
www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html;
www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.j erini.de;
Rabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), нее из которых включены в настоящий документ в качестве ссылок ь полном объеме.
Такие замененные аминокислоты можно использовать для снижения иммуногенности или снижения, усиления или модификации связывания, аффинности, скорости ассоциации, скорости диссоциации, авидности, специфичности, времени полужизни или любого другого пригодного свойства, как известно в данной области. Как правило, остатки CDR прямо и наиболее существенно вовлечены во влияние на связывание антигена. Необязательно, антитела можно конструировать с сохранением высокой аффинности к антигену и других полезных биологических свойств. Для достижения этой цели, антитела человека необязательно можно получать посредством процесса анализа исходных
последовательностей и различных концептуальных
сконструированных продуктов с использованием трехмерных моделей исходных, сконструированных и человеческих последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулинов широко доступны и известны специалистам в данной области. Доступными являются компьютерные программы, которые иллюстрируют и воспроизводят возможные трехмерные конформационные структуры выбранных
последовательностей иммуноглобулинов-кандидатов. Исследование этих воспроизведенных данных дает возможность анализа вероятной роли остатков в функционировании последовательности иммуноглобулина-кандидата, т.е., анализа остатков, которые влияют на способность иммуноглобулина-кандидата связывать свой антиген. Таким образом, остатки можно выбирать и комбинировать из исходных и эталонных юследовательностей, чтобы достигать требуемого свойства антитела, такого как аффинность к антигену(ам)-мишени. Альтернативно или дополнительно указанным
выше способам, конструирование можно проводить эмпирически с помощью кассетного разнообразия CDR и выбора по требуемой активности, таких как описано для системы MorphoSys HuCAL (Knappik et al, 2000; Krebs et al., 2001).
Кроме того, антителе против IL-23pl9 по настоящему изобретению может содержась каркасную область легкой цепи человека эмбрионального типа. В конкретных вариантах осуществления, последовательность эмбрионального типа легкой цепи выбрана из человеческих последовательностей VK, включая, но не ограничиваясь ими, Al , А10, All, А14, А17, А18, А19, А2, А20, А23, А26, А27, A3, АЗО, А5, А7, В2, ВЗ, LI, L10, Lll, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24 , L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, 01, Oil, 012, 014, 018, 02, 04 и 08. В определенных вариантах осуществления, эта каркасная область легкой цепи человека эмбрионального типа выбрана из Vl-11, VI-13, Vl-16, Vl-17, Vl-18, Vl-19, Vl-2, Vl-20, Vl-22, Vl-3, V1-4, Vl-5, VI-7, VI-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-45, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4 и V5-6. См. РСТ WO 2005/005604 для описания различных последовательностей эмбрионального типа.
В других вариантах осуществления, антитело против IL-23 по настоящему изобретению может содержать каркасную область тяжелой цепи человека эмбрионального типа. В конкретных вариантах осуществления, эта каркасная область тяжелой цепи человека эмбрионального типа выбрана из VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1 и VH7-81. См. РСТ WO 2005/005604 для описания различных последовательностей эмбрионального типа.
В конкретных вариантах осуществления вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи содержит каркасную область или по меньшей мере часть каркасной области (например, содержащую 2 или 3 субфрагмента, таких как FR2 и
FR3) . В определенных вариантах осуществления, по меньшей мере FRL1, FRL2, FRL3 или FRL4 шляются полностью человеческими. В других вариантах осуществления по меньшей мере FRH1, FRH2, FRH3, или FRH4 являются полностью человеческими. В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере FRL1, FRL2, FRL3 или FRL4 представляют собой последовательности эмбрионального типа
(например, эмбрионального типа человека) или содержат консенсусные последовательности человека для определенной каркасной области (широко доступные из источников известных последовательностей Ig человека, описанных выше). В других вариантах осуществления по меньшей мере FRH1, FRH2, FRH.3 или FRH4 представляют собой последовательности эмбрионального типа
(например, эмбрионального типа человека) или содержат консенсусные последовательности человека для определенной каркасной области. В предпочтительных вариантах осуществления каркасная область представляет собой полностью человеческую каркасную область.
Конструирование антител по настоящему изобретению можно проводить с использованием любого известного способа, такого как, но не ограничиваясь ими, способы, описанные в Winter
(Jones et al., Nature 321:522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285 (1992); Presta et al. , J. Immunol. 151:2623
(1993), патентах США No: 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323, 5,766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089, 5225539; 4816567, РСТ/: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, ЕР 229246, все из которых включены в настоящий документ в качестве ссылок в полном объеме, включая приведенные в них ссылки.
В определенных вариантах осуществления антитело содержит измененный (например, мутантный) Fc-участок. Например, в некоторых вариантах осуществления Fc-участок изменен для снижения или повышения эффекторных функций антитела. В
некоторых вариантах осуществпения Fc-участок представляет собой изотип, выбранный из IgM, IgA, IgG, IgE или другого изотипа.
Альтернативно или дополнительно, может быть полезным комбинирование модификаций аминокислот с одной или несколькими дополнительными модификациями аминокислот, которые изменяют связывание Clq и/или функцию комплементзависимой
цитотоксичности Fc-участка связывающей IL-23pl9 молекулы. Представляющий особый интерес исходный полипептид может представлять собой полипептид, который связывается с Clq и проявляет комплементзависимую цитотоксичность (CDC).
Полипептиды с предварительно существующей активностью в отношении связывания с Clq, кроме того, необязательно обладающие способностью принимать участие в CDC, можно модифицировать, чтобы один или оба из этих видов активности усиливались. Модификации аминокислот, которые приводят к изменению Clq и/или модифицируют его функцию
комплементзависимой цитотсксичности, описаны, например, в WO0042072, которая включена в настоящий документ в качестве ссылки.
Как описано выше, можно сконструировать Fc-участок антитела против IL-23pl9 пс настоящему изобретению с измененной эффекторной функцией, например, посредством модификации связывания Clq и/или связывания FcyR и, таким образом, изменения активности в отношении комплементзависимой цитотоксичности (CDC) и/или активности в отношении антителозависимой клеточно-опосредуемой цитотоксичности (ADCC). "Эффекторные функции" отвечают за активацию или снижение биологической активности (например, у субъекта) . Примеры эффекторных функций включают, но не ограничиваются ими: связывание Clq; комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание Fc-рецептора; антителозависимую цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; снижение активности рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора; BCR) и т.д. Для таких эффекторных функций может быть необходимым, чтобы Fc-участок был объединен со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела), и их можно оценивать с
использованием различных способов анализа (например, способов анализа связывания Fc, способов анализа ADCC, способов анализа CDС и т.д.).
Например, можно получить вариант Fc-участка антитела против IL-23pl9 с повышенным связыванием Clq и с повышенным связыванием FcyRHI (например, обладающий повышенной активностью в отношении ADCC и повышенной активностью в отношении CDC). Альтернативно, если необходимо снизить или устранить эту эффекторную функцию, можно сконструировать вариант Fc-участка со сниженной активностью в отношении CDC и/или со сниженной активностью в отношении ADCC. В других вариантах осуществления можно повысить только один из этих видов активности, и, необязательно, также снизить другой вид активности (например, получить вариант Fc-участка с повышенной активностью в отношении ADCC, но со сниженной активностью в отношении CDC, и наоборот).
Также в конструируемые молекулы можно вносить мутации для изменения их взаимодействия с неонатальным Fc-рецептором (FcRn) и улучшения их фармакокинетических свойств. Описана коллекция Fc-вариантов человека с повышенным связыванием с FcRn (Shields et al., (2001). High resolution mapping of the binding site on human IgGl for FcyRI, FcyRII, FcyRIII, and FcRn and design of IgGl variants with improved binding to the FcyR, J- Biol. Chem. 276:6591-6604).
Другой тип аминокислотных замен способствует изменению паттерна гликозилирования Fc-участка антитела человека против IL-23pl9. Гликозилирование Fc-участка, как правило, является либо N-связанным, либо 0-связанным. N-связанное
гликозилирование относится к присоединению углеводной группы к боковой цепи остатка аспарагина. О-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из Сахаров N-ацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы к
гидроксиаминокислоте, наиболее часто к серину или треонину, хотя также можно использовать 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин. Распознаваемые последовательности для
ферментативного присоединения углеводной группы к пептидным
последовательностям с боковой цепью аспарагина представляют собой асларагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где X представляет собой любую аминокислоту, за исключением пролина. Таким образом, наличие любой из этих пептидных последовательностей в полипептиде формирует потенциальный участок гликозилирования.
Паттерн гликозилирования можно изменять, например, удалением одного или нескольких участка(ов) гликозилирования, находящегося в полипептид'5, и/или добавлением одного или нескольких участков гликозилирования, которые отсутствуют в полипептиде. Добавление участков гликозилирования к Fc-участку антитела человека против 11_-23р19 удобно проводить посредством изменения аминокислотной последовательности, чтобы она содержала одну или несколько из описанных выше трипептидных последовательностей (для участка N-гликозилирования).
Иллюстративный вариант по гликозилированию обладает аминокислотной заменой остатка Asn 297 тяжелой цепи. Изменение также можно проводить добавлением одного или нескольких остатков серина или треонина к последовательности исходного полипептида (для участков О-гликозилирования), или его заменой. Кроме того, замена Asn 2 97 на Ala может привести к удалению одного из участков гликозилирования.
В определенных вариантах осуществления антитело человека против 11,-23р19 по настоящему изобретению экспрессируют в клетках, которые экспрессируют бета -(1,4)-N-
ацетилглюкозаминилтрансферазу III (GnT III) , чтобы GnT III присоединяла GlcNAc к антителу человека против IL-23pl9. Способы продукции антител таким образом представлены в WO/9954342, WO/03011878, патентной заявке 20030003097А1 и в Umana et al., Nature Biotechnology, 17:176-180, Feb. 1999.
Скрининг антител в отношении специфичного связывания со сходными белками или фрагментами удобно проводить с использованием библиотек пептидного дисплея. Этот способ включает скрининг крупных коллекций пептидов в отношении отдельных членов, обладающих требуемой функцией или структурой. Скрининг антител в библиотеках пептидного дисплея хорошо
известен в данной области. Длина воспроизводимых пептидных последовательностей может сэставлять от 3 до 5000 или более аминокислот, часто длина составляет 5-100 аминокислот, и часто длина составляет приблизительно от 8 до 25 аминокислот. 3 дополнение к способам получения пептидных библиотек прямым химическим синтезом описано несколько способов рекомбинантных ДНК. Один тип включает воспроизведение пептидной последовательности на поверхности бактериофага или клетки. Каждый бактериофаг или клетка содержит нуклеотидную последовательность, кодиоующую конкретную подлежащую
воспроизведению пептидную последовательность. Такие способы описаны в патентных заявках РСТ No. 91/17271, 91/18980, 91/19818 и 93/08278.
Другие системы для получения библиотек пептидов обладают признаками как химического синтеза, так и рекомбинантных способов in vitro. См., публикации патентных заявок РСТ No. 92/05258, 92/14843 и 96/19256. См. также патенты США No. 5658754 и 5643768. Библиотеки пептидного дисплея, векторы и наборы для скрининга коммерчески доступны у таких поставщиков, как Invitrogen (Carlsbad, СА) , и Cambridge antibody Technologies (Cambridgeshire, UK). См., например, патенты США No. 4704692, 4939666, 4946778, 5260203, 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, 5767260, 5856456, выданные Enzon; 5223409, 5403484, 5571698, 5837500, выданные Dyax, 5427908, 558 0717, выданные Affymax; 58 857 93, выданный Cambridge antibody Technologies; 5750373, выданный Genentech, 5618920, 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, 5698417, выданные Xoma, Colligan, выше; Ausubel, выше или Sambrook, выше.
Также антитела по настоящему изобретению можно получать с использованием по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело против IL-23pl9, для создания трансгенных животных или млекопитающих, таких как козы, коровы, лошади, овцы, кролики и т.п., которые продуцируют такие антитела в их молоке. Таких животных можно создавать с использованием известных способов. См., например, но не ограничиваясь ими, патенты США No. 5827690; 5849992; 4873316; 5849992; 5994616;
5565362; 5304489 и т.п., в:::е из которых включены в настоящий документ в качестве ссылок Е. полном объеме.
Антитела по настоящем/ изобретению, кроме того, можно получать с использованием то меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело против IL-23pl9, для получения трансгенных растений и культивируемых клеток растений (например, но не ограничиваясь ими, табака и маиса), которые продуцируют такие антитела, определенные участки или варианты в отделах растений или в клетках, культивируемых из них. В качестве неограничивающего примера, трансгенные листья табака, экспрессирующие рекомбинанткые белки, успешно использовали для получения крупных количеств рекомбинантных белков, например, с использованием индуцибельного промотора. См., например, Cramer et al. , Curr. Top. Microbol. Immunol. 24 0:95-118 (1999) и ссылки, приведенные в ней. Также трансгенный маис использовали для экспрессии на коммерческих уровнях продукции белков млекопитающих с биологической активностью, эквивалентных белкам, которые получают в других рекомбинантных системах или очищают из природных источников. См., например, Hood et al. , Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) и ссылки, приведенные в ней. Антитела, в том числе фрагменты антител, такие как одноцепочечные антитела (scFv), также продуцировали в больших количествах из семян трансгенных растений, в том числе из семян растений и из клубней картофеля. См., например, Conrad et al. , Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) и ссылки, приведенные в ней. Таким образом, антитела по настоящему изобретению также можно получать с использованием трансгенных растений, в соответствии с известными способами. См. также, например, Fischer et al. , Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Oct., 1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al. , Plant Physiol. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940944 (1994); и ссылки, приведенные в них.
Антитела по этому изобретению могут связывать IL-23pl9 человека с аффинностью (КЕ) , находящейся в широком диапазоне. В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере одно mAb человека по настоящему изобретению необязательно может
связывать IL-23pl9 человека с высокой аффинностью. Например, mAb человека или другое mAb может связывать IL-23pl9 человека с KD, равной или меньшей чем приблизительно 1СГ7 М, такой как, но не ограничиваясь ими, 0,1-9,9 (или любой диапазон или значение внутри этого диапазона) X 1СГ7, 1СГ8, 1СГ9, 1СГ10, 1СГ11, 10"12, 10" 13, 10~14 10~15 или любой диапазон или значение внутри этого диапазона, как определяют посредством поверхностного плазмонного резонанса или способа Kinexa, как применяют специалисты в данной области. В одном варианте осуществления, антитела по этому изобретению связывают IL-23pl9 человека с KD между приблизительно 4 и приблизительно 4 4 00 пМ.
Аффинность или авидность антитела по отношению к антигену можно определять экспериментально с использованием любого пригодного способа. (См., например, Berzofsky, et al, "Antibody-Antigen Interactions", в Fundamental Immunology, Paul, W.E., Ed., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W.H. Freeman and Company: New York, NY (1992) ; и способы, описанные в них) . Измеренная аффинность конкретного взаимодействия антитело-антиген может варьировать при измерении в различных условиях (например, концентрация соли, рН) . Таким образом, измерения аффинности и других параметров связывания антигена (например, KD, К0п/ Koff) предпочтительно проводят в стандартных растворах антитела и антигена и стандартном буфере, таком как буфер, описанный в настоящем документе.
Конкурентные анализы можно проводить с антителом по настоящему изобретению в целях определения белков, антител и других антагонистов, которые конкурируют за связывание IL-23pl9 с антителом по настоящему изобретению и/или обладают общим участком эпитопа. Эти анализы, как хорошо известно специалистам в данной области, оценивают конкуренцию между антагонистами или лигандами за ограниченное количество участков связывания на белке, например, р19. Белок и/или антитело иммобилизуют или переводят в нерастворимую форму до или после конкуренции и образец, связанный с субъециницей р19 отделяют от несвязанного образца, например, отстаиванием (где белок/антитело были предварительно переведены в нерастворимую форму) или
центрифугированием (где белок/антитело осаждали после конкурентной реакции). Также конкурентное связывание можно определять по наличию изменения функции посредством связывания или отсутствия связывания антитела с белком, например, по наличию ингибирования или усиления ферментативной активности, например, метки. Можно использовать ELISA и другие функциональные способы анализа, как хорошо известно в данной области.
Определенные варианты осуществления антител против IL-23р19 по этому изобретению имеют последовательности, представленные в таблицах последовательностей, ниже. Например, антитело против IL-23pl9 по этому изобретению обладает последовательностями одного из CDR1 легкой цепи SEQ ID N0:46-51; последовательностями одного из CDR2 легкой цепи SEQ ID N0:52-57; последовательностями одного из CDR3 легкой цепи SEQ ID N0:58-79; последовательностями одного из CDR1 тяжелой цепи SEQ ID N0:1-6; последовательностями одного из CDR2 тяжелой цепи SEQ ID N0:7-39 и 146; и/или последовательностями одного из CDR3 тяжелой цепи SEQ ID N0:4 0-45.
Молекулы нуклеиновых кислот
С использованием представленной в настоящем документе информации, например, последовательностей нуклеотидов, кодирующих по меньшей мере 70-100% смежных аминокислот по меньшей мере одного из вариабельных участков легкой цепи антител по этому изобретению (например, SEQ ID N0:136-138 и 142-14 4) и по меньшей мере одного из вариабельных участков тяжелой цепи антител по этому изобретению (например, SEQ ID N0:133-135 и 139-141), их определенных фрагментов, вариантов или консенсусных последовательностей, или депонированного вектора, содержащего по меньшей мере одну из этих последовательностей, можно получать молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, кодирующую по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 с использованием способов, описанных в настоящем документе или известных в данной области.
Молекулы нуклеиновых кислот по настоящему изобретению могут находиться в форме РНК, такой как мРНК, гяРНК, тРНК или
любая другая форма, или в форме ДНК, включая, но не ограничиваясь ими, кДНК и геномную ДНК, получаемых клонированием или синтетиче :ким способом продукции, или любым их сочетанием. ДНК может представлять собой трехцепочечную, двухцепочечную или одноцепочечную ДНК или любое их сочетание. Любой участок по меньшей мере одной цепи ДНК или РНК может представлять собой кодирующую цепь, также известную как смысловая цепь, или он может представлять собой некодирующую цепь, также называемую антисмысловой цепью.
Выделенные молекулы нуклеиновых кислот по настоящему изобретению могут включать молекулы нуклеиновых кислот, содержащие открытую рамку считывания (ORF), необязательно с одним или нескольким нитронами, например, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере для одного определенного участка по меньшей мере одного CDR, такого как CDR1, CDR2 и/или CDR3 по меньшей мере одной легкой цепи (например, SEQ ID N0:46-51, 5257 или 58-79) или по меньшей мере одной тяжелой цепи (например, SEQ ID N0:1-6, 7-39 или 40-45); молекулы нуклеиновых кислот, содержащие кодирующую последовательность для антитела против IL-23pl9 или вариабельного участка (например, вариабельных участков легкой цепи SEQ ID N0:82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 и 128-132 и вариабельных участков тяжелой цепи SEQ ID N0:80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127 и 147); и молекулы нуклеиновых кислот, которые содержат нуклеотидную
последовательность, по существу отличающуюся от нуклеотидных последовательностей, описанных выше, но которая, тем не менее, вследствие вырожденности генетического кода, кодирует по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9, как описано в настоящем документе и/или известно в данной области. Безусловно, генетический код хорошо известен в данной области. Таким образом, получение вырожденных вариантов нуклеиновых кислот, которые кодируют специфичные антитела против IL-23pl9 по настоящему изобретению, является обычной задачей для специалиста в данной области. См., например, Ausubel, et al. , выше, и такие варианты нуклеиновых кислот относятся к настоящему изобретению.
Как указано в настоящем документе, молекулы нуклеиновых кислот по настоящему изобретению, которые содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против IL-23pl9, могут включать, но не ограничиваться ими, молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие аминокислотную последовательность фрагмента антитела отдельно; кодирующую последовательность для целого антитела или его участка; кодирующую последовательность для антитела, фрагмента или участка, а также дополнительные
последовательности, такие как кодирующая последовательность по меньшей мере для одного сигнального лидерного или слитого пептида с наличием или отсутствием вышеупомянутых дополнительных кодирующих последовательностей, таких как по меньшей мере один интрон, совместно с дополнительными некодирующими последовательностями, включая, но не
ограничиваясь ими, некодир;/ющие 5'- и 3'-последовательности, такие как транскрибируемые нетранслируемые последовательности, которые участвуют в транскрипции, процессинге мРНК, включая сигналы сплайсинга и полнаденилирования (например, связывание рибосом и стабилизация мРНК); дополнительную кодирующую последовательность, которая кодирует дополнительные
аминокислоты, такие как аминокислоты, которые обеспечивают дополнительную функциональность. Таким образом, кодирующая антитело последовательность может быть слитой с маркерной последовательностью, кодирующей пептид, который облегчает очистку слитого антитела, содержащего фрагмент или участок антитела.
Полинуклеотиды, селективно гибридизующиеся с полинуклеотидом,
описанном в настоящем документе
Настоящее изобретение относится к выделенным нуклеиновым кислотам, которые гибридизуются в селективных условиях гибридизации с полинуклеотидом, описанном в настоящем документе,. Таким образом, полинуклеотиды этого варианта осуществления можно использовать для выделения, выявления и/или количественного определения нуклеиновых кислот, содержащих такие полинуклеотиды. Напоимер, полинуклеотиды по настоящему изобретению можно использ > вать для выявления, выделения или
амплификации неполных или полноразмерных клонов в депонированной библиотеке. Е некоторых вариантах осуществления, полинуклеотиды представляют собой геномные последовательности или последовательности кДНК, выделенные из библиотеки нуклеиновых кислот человека или млекопитающих, или в ином случае комплементарные им.
Предпочтительно, библиотека кДНК содержит по меньшей мере 8 0% полноразмерных последовательностей, предпочтительно по меньшей мере 85% или 90% полноразмерных последовательностей, и, более предпочтительно, по меньшей мере 95% полноразмерных последовательностей. Библиотеки кДНК могут быть
унифицированными для повышения репрезентации редких последовательностей. Для последовательностей, обладающих сниженной идентичностью последовательностей относительно комплементарных последовательностей, как правило, но не исключительно, используют условия гибридизации низкой или умеренной строгости. Условия умеренной или высокой строгости необязательно можно использовать для последовательностей с более высокой идентичностью. Условия низкой строгости делают возможной селективную гибридизацию последовательностей, обладающих приблизительно 7 0% идентичностью
последовательностей, и их можно использовать для выявления ортологических или паралогических последовательностей.
Необязательно, полинуклеотиды по этому изобретению кодируют по меньшей мере часть антитела, кодируемого полинуклеотидами, описанными в настоящем документе. Полинуклеотиды по этому изобретению включают последовательности нуклеиновых кислот, которые можно использовать для селективной гибридизации с полинуклеотидом, кодирующим антитело по настоящему изобретению. См., например, Ausubel, выше; Colligan, выше, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Конструирование нуклеиновых кислот
Выделенные нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению можно получать с использованием (а) рекомбинантных способов, (Ь) способов синтеза, (с) способов очистки и/или (d) их
сочетаний, как хорошо известно в данной области.
Нуклеиновые кислоты для удобства могут содержать последовательности, в дополнение к полинуклеотиду по настоящему изобретению. Например, для упрощения выделения полинуклеотида в нуклеиновую кислоту можно встраивать полилинкер, содержащий один или несколько участков для рестрикции эндонуклеазами. Также для упрощения выделения транслированного полинуклеотида по настоящему изобретению можно встраивать транслируемые последовательности. Например, гексагистидиновая маркерная последовательность обеспечивает удобный способ очистки белков по настоящему изобретению. Нуклеиновая кислота по настоящему изобретению, за исключением кодирующей последовательности, необязательно представляет собой вектор, адаптер или линкер для клонирования и/или экспрессии полинуклеотида по настоящему изобретению.
К таким клонирующим и/или экспрессирующим
последовательностям можно добавлять дополнительные
последовательности для оптимизации их функционирования в отношении клонирования и/или экспрессии, для упрощения выделения полинуклеотида, или для повышения встраивания полинуклеотида в клетку. Применение векторов для клонирования, экспрессирующих векторов, адаптеров и линкеров хорошо известно в данной области. (См., например, Ausubel, выше; или Sambrook, выше) .
Рекомбинантные способы конструирования нуклеиновых кислот
Композиции выделенных нуклеиновых кислот по этому изобретению, таких как РНК, кДНК, геномная ДНК или любое их сочетание, можно получать из биологических источников с использованием любого количества способов клонирования, известных специалистам в данной области. В некоторых вариантах осуществления, для выявления требуемой последовательности в библиотеке кДНК или геномной ДНК, используют олигонуклеотидные зонды, которые в строгих условиях селективно гибридизуются с полинуклеотидами по настоящему изобретению. Выделение РНК и конструирование библиотек кДНК и геномных библиотек хорошо известно средним специалистам в данной области. (См., например,
Ausubel, выше; или Sambrook, выше)
Способы скрининга и выделения нуклеиновых кислот
Скрининг библиотеки кДНК или геномной библиотеки можно проводить о использованием зонда на основе последовательности полинуклеотида по настоящему изобретению, такой как последовательности, описанные в настоящем документе. Зонды можно использовать для гибридизации с последовательностями геномной ДНК или кДНК в целях выделения гомологичных генов в одном и том же или в различных организмах. Специалисты в данной области поймут, что для анализа можно использовать различные степени строгости гибридизации; и строгими могут быть либо гибридизация, либо среда. По мере того, как условия гибридизации становятся Солее строгими, для того, чтобы произошло формирование дуплекса, степень комплементарности между зондом и мишенью допжна повышаться. Степень строгости можно контролировать с помощью одного или нескольких из температуры, ионной силы, рН и наличия частично денатурирующего растворителя, такого как формамид. Например, строгость гибридизации удобно изменять посредством изменения полярности раствора реагирующего вещества, например, посредством изменения концентрации формамида в диапазоне от 0% до 50%. Степень комплементарности (идентичности последовательностей), требуемая для поддающегося детекции связывания, варьирует в соответствии со строгостью среды для гибридизации и/или среды для промывания. Оптимально, степень комплементарности составляет 100%, или 70-100%, или любой диапазон или значение внутри этого диапазона. Однако следует понимать, что небольшие отклонения в последовательностях зондов и праймеров можно компенсировать снижением строгости среды для гибридизации и/или промывания.
Способы амплификации РНК или ДНК хорошо известны в данной области и их можно использовать в соответствии с настоящим изобретением без излишнего экспериментирования, исходя из указаний и рекомендаций, представленных в настоящем документе.
Известные способы амп.: ификации ДНК или РНК включают, но не ограничиваются ими, полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и связанные с ней процессы амплификации (см., например, патенты
США No. 4683195, 4683202, 4 е 00159, 4965188, выданные Mullis, et al; 4795699 и 4921794, выданные Tabor, et al; 5142033, выданный Innis; 5122464, выданный Wilson, et al. ; 5091310, выданный Innis; 5066584, выданный Gyllensten, et al; 4889818, выданный Gelfand, et al; 4 994370, выданный Silver, et al; 4766067, выданный E.iswas; 4 656134, выданный Ringold) и опосредованную РНК амплификацию, в которой используют антисмысловую РНК к последовательности-мишени а качестве матрицы для синтеза двухцепочечной ДНК (патент "ША No. 5130238, выданный Malek, et al, с торговым названием NASBA), полное содержание всех из этих ссылок включено в настоящее описание в качестве ссылок. (См., например, Ausubel, выше; ИЛУ Sambrook, выше) .
Например, технологию полимеразной цепной реакции (ПЦР) можно использовать для амплификации последовательностей полинуклеотидов по настоящему изобретению и связанных с ними генов непосредственно из библиотек геномной ДНК или кДНК. ПЦР и другие способы амплификации in vitro также могут быть пригодны, например, для клонирования последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют подлежащие экспрессии белки, для получения нуклеиновых кислот для применения в качестве зондов в целях детекции наличия требуемой мРНК в образцах, для секвенирования нуклеиновых кислот или для других целей. Примеры способов, достаточные для указания специалистам в данной области способов амплификации in vitro можно найти в Berger, выше, Sambrook, выше и Ausubel, выше, а также Mullis, et al. , в патенте США No. 4683202 (1987); и Innis, et al. , PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Коммерчески доступные наборы для амплификации геномной ДНК посредством ПЦР известны в данной области. См., например, Advantage-GC Genomic PCR Kit (Clontech). Кроме того, для повышения выхода длинных продуктов ПЦР можно использовать, например, белок гена 32 Т4 (Boehringer Mannheim).
Синтетические способы конструирования нуклеиновых кислот
Выделенные нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению также можно получать прямым химическим синтезом с помощью
известных способов (см., например, Ausubel, et al. , выше) . Химический синтез, как правило, приводит к получению одноцепочечного олигонуклеотида, который может быть превращен в двухцепочечную ДНК посредством гибридизации с комплементарной последовательностью или посредством полимеризации с помощью ДНК-полимеразы с использованием одной цепи в качестве матрицы. Специалист в данной области поймет, что, несмотря на то, что химический синтез ДНК может ограничиваться последовательностями приблизительно из 100 или более оснований, более длинные последовательности можно получать посредством лигирования более коротких последовательностей.
Рекомбинантные экспрессирующие кассеты
Настоящее изобретение, кроме того, относится к рекомбинантным экспрессируюшим кассетам, содержащим нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению. Последовательность нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, например, последовательность кДНК или геномную последовательность, кодирующую антитело по настоящему изобретению, можно использовать для конструирования рекомбинантной экспрессирующей кассеты, которую можно вводить по меньшей мере в одну требуемую клетку-хозяина. Рекомбинантная экспрессирующая кассета, как правило, содержит полинуклеотид по настоящему изобретению, функционально связанный с регуляторными последовательностями инициации транскрипции, которые регулируют трансляцию полинуклеотида в предназначенной для этого клетке-хозяине. Для регуляции экспрессии нуклеиновых кислот по настоящему изобретению можно использовать как гетерологичные, так и негетерологичные (т.е., эндогенные) промоторы.
В некоторых вариантах осуществления выделенные нуклеиновые кислоты, которые служат в качестве промотора, энхансера или других элементов, можно встраивать в соответствующее положение (выше, ниже или в интроне) негетерологичной формы полинуклеотида по настоящему изобретению таким образом, чтобы активировать или подавлять экспрессию полинуклеотида по настоящему изобретению. Например, эндогенные промоторы можно изменять in vivo или in vitro посредством внесения мутаций,
делеций и/или замен.
Векторы и клетки-хозяева
Также настоящее изобретение относится к векторам, которые включают выделенные молекулы нуклеиновых кислот по настоящему изобретению, к клеткам-хозяевам с рекомбинантными векторами, которые получены способами генетической инженерии, и к продукции по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 с помощью рекомбинантных способов, которые хорошо известны в данной области. См., например, Sambrook, et al., выше; Ausubel, et al. , выше, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Полинуклеотиды необязательно можно связывать с вектором, содержащим селективный маркер, для размножения в хозяине. Как правило, плазмидный вектор вводят в преципитате, таком как преципитат с фосфатом кальция, или в комплексе с заряженным липидом. Если вектор представляет собой вирус, он может быть упакован in vitro с использованием соответствующей упаковывающей клеточной линии, а затем трансдуцирован в клетки-хозяева .
Вставка ДНК должна быть функционально связана с пригодным промотором. Экспрессирующие конструкции, кроме того, содержат участки инициации, терминации транскрипции и, в
транскрибируемой области, участок связывания рибосомы для трансляции. Кодирующая часть зрелых транскриптов,
экспрессируемых конструкциями, предпочтительно включает кодон инициации трансляции в начале и терминирующий кодон (например, UAA, UGA или UAG) , расположенный соответствующим образом на конце мРНК, подлежащей трансляции, при этом UAA и UAG являются предпочтительными для экспрессии в клетках млекопитающих или в эукариотических клетках.
Экспрессирующие векторы предпочтительно, но необязательно, включают по меньшей мере один селективный маркер. Такие маркеры включают, но не ограничиваются ими, например, гены устойчивости к метотрексату (МТХ), дигицрофолатредуктазе (DHFR, патенты США No. 4399216; 4634665; 4656134; 4956288; 5149636; 5179017), ампициллину, неомицину G418), микофеноловой кислоте или
глутаминсинтетазе (GS, патенты США No. 5122464; 5770359; 5827739) для культуры еукариотических клеток, и гены устойчивости к тетрациклину или ампициллину для культивирования в Е. coli и других бактериях или прокариотических организмах (приведенные выше патенты включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме). Пригодные культуральные среды и условия культивирования для описанных выше клеток-хозяев известны в данной области. Пригодные векторы будут полностью очевидны специалисту в данной области. Введение векторной конструкции в клетку-хозяина можно проводить с помощью трансфекции посредством фосфата кальция, опосредуемой DEAE-декстраном трансфекции, опосредуемой катионными липидами трансфекции, электропорации, трансдукции, инфицирования или других известных способов. Такие способы описаны в данной области, как, например, Sambrook, выше, главы 1-4 и 16-18; Ausubel, выше, главы 1, 9, 13, 15, 16.
По меньшей мере одно антитело по настоящему изобретению можно экспрессировать в модифицированной форме, такой как слитый белок, и оно может включать не только секреторные сигналы, но также и дополнительные гетерологичные функциональные участки. Например, для повышения стабильности и устойчивости в клетке-хозяине в процессе очистки или в процессе последующей обработки и хранения к N-концу антитела можно добавлять участок из дополнительных аминокислот, в частности, из заряжешных аминокислот. Также для упрощения очистки в антитело по настоящему изобретения можно встраивать пептидные группы. Такие участки можно удалять перед окончательным получением антитела или по меньшей мере одного его фрагмента. Такие способы описаны в многих стандартных лабораторных руководствах, таких как Sambrook, выше, главы 17.29-17.42 и 18.1-18.74; Ausubel, выше, главы 16, 17 и 18.
Специалисты в данной области знают множество экспрессиэующих систем, доступных для экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей белок по настоящему изобретению. Альтернативно нуклеиновые кислоты по настоящему изобретению можно экспрессировать в клетке-хозяине посредством запуска
экспрессии (посредством манипулирования) в клетке-хозяине, которая содержит эндогенную ДНК, кодирующую антитело по настоящему изобретению. Такие способы хорошо известны в данной области, например, как описано в патентах США No. 5580734, 5641670, 5733746 и 5733761, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Иллюстративными примерами культур клеток, пригодных для продукции антител, их определенных участков или вариантов, являются клетки млекопитающих. Системы клеток млекопитающих часто находятся в виде монослоев клеток, хотя также используют суспензии клеток млекопитающих или биореакторы с клетками млекопитающих. В данной области разработан ряд пригодных линий клеток-хозяев, способных экспрессировать неизмененные
гликозилированные белки, и они включают клеточные линии COS-1
(например, АТСС CRL 1650), COS-7 (например, АТСС CRL-16 51), НЕК293, ВНК21 (например, АТСС CRL-10), СНО (например, АТСС CRL 1610) и BSC-1 (например, АТСС CRL-26), клетки Cos-7, клетки СНО, клетки hep G2, РЗХ63Ag8.653, SP2/0-Agl4, клетки 293, клетки HeLa и сходные с ними, которые свободно доступны, например, в American Type Culture Collection, Manassas, Va
(www.atcc.org). Предпочтительные клетки-хозяева включают клетки лимфоидного происхождения, такие как клетки миеломы и лимфомы. Особенно предпочтительные клетки-хозяева представляют собой клетки РЗХ63Ад8.653 (регистрационный номер АТСС CRL-1580) и клетки SP2/0-Agl4 (регистрационный номер АТСС CRL-1851). В особенно предпочтительном варианте осуществления,
рекомбинантная клетка представляет собой клетку РЗХ63АЬ8.653 или клетку SP2/0-Agl4.
Экспрессирующие векторы для этих клеток могут включать одну или несколько из следующих последовательностей для контроля экспрессии, таких как, но не ограничиваясь ими, ориджин репликации; промотор (например, поздний или ранний промоторы SV4 0, промотор CMV (патенты США No. 5168 062; 5385839), промотор tk HSV, промотор pgk (фосфоглицераткиназы) , промотор EF-1-альфа (патен? США No. 5266491), по меньшей мере один промотор иммуноглобулина человека); энхансер и/или
информационные участки ДЛУ процессинга, такие как участки связывания рибосом, участки сплайсинга РНК, участки полиаденилирования (например, участок присоединения поли-А большого T-Ag SV4 0) и последовательности терминаторов транскрипции. См., например, Ausubel et al., выше; Sambrook, et al. , выше. Другие клетки, пригодные для продукции нуклеиновых кислот или белков по настоящему изобретению известны и/или являются доступными, например, в American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas (www.atcc.org) или в других известных или коммерческих источниках..
Если используют эукариотические клетки-хозяева, то, как правило, в вектор встраивают последовательности
полиаденилирования или терминации транскрипции. Примером последовательности терминатора является последовательность полиаденилирования из гена бычьего гормона роста. Также в вектор могут быть включены последовательности для правильного сплайсинга транскрипта. Примером последовательности для сплайсинга является интрон VP1 из SV40 (Sprague, et al. , J. Virol. 45:773-781 (1983)). Кроме того, в вектор могут быть включены последовательности генов для контроля репликации в клетке-хозяине, как известно в данной области.
Очистка антитела
Антитело против IL-23pl9 можно выделять из рекомбинантных клеточных культур и очищать хорошо известными способами, включая, но не ограничиваясь ими, очистку с помощью белка А, осаждение сульфатом аммония или этанолом, экстракцию кислотой, анионную или катионообменную хроматографию, хроматографию с фосфоцеллюлозой, хроматографию гидрофобного взаимодействия, аффинную хроматографию, хроматографию с гидроксилапатитом и хроматографию с лектином. Также для очистки можно использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию ("ВЭЖХ"). См., например, Colligan, Current Protocols in Immunology, or Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (19972001), например, главы 1, 4, 6, 8, 9, 10, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном
объеме.
Антитела по настоящему изобретению включают природные очищенные продукты, продукты процессов химического синтеза и продукты, получаемые рекомбинантными способами из
эукариотического хозяина, включая, например, дрожжи, высшее растение, клетки насекомых или млекопитающих. В зависимости от хозяина, используемого в способе рекомбинантной продукции, антитело по настоящему изобретению может быть гликозилированным или может быть негликозилирзванным, при этом гликозилированное антитело является предпочтительным. Такие способы описаны во множестве стандартных лабораторных руководствах, таких как Sambrook, выше, разделы 17.37-17.42; Ausubel, выше, главы 10, 12, 13, 16, 18 и 20, Colligan, Protein Science, выше, главы 1214, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Антитела против IL-23pl9
Антитело против IL-23pl9 в соответствии с настоящим изобретением включает любой белок или пептид, содержащий молекулу, которая содержит по меньшей мере часть молекулы иммуноглобулина, такую как, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере один связывающий лиганд участок (LBP) , такой как, но не ограничиваясь ими, определяющий комплементарность участок (CDR) тяжелой или легкой цепи или его связывающий лиганд участок, вариабельный участок тяжелой или легкой цепи, каркасная область (например, FR1, FR2, FR3, FR4 или их фрагмент, кроме того, необязательно содержащие по меньшей мере одну замену, вставку или делецию), константный участок тяжелой или легкой цепи, (например, содержащий по меньшей мере один СН1, шарнирная область 1, шарнирная область 2, шарнирная область 3, шарнирная область 4, СН2, или СНЗ или их фрагмент, кроме того, необязательно содержащие по меньшей мере одну замену, вставку или делецию), или любая их часть, которая может быть встроена в антитело по настоящему изобретению. Антитело по этому изобретению может включать антитело любого млекопитающего, или может быть получено из любе го млекопитающего, такого как, но не ограничиваясь ими, человек, мышь, кролик, крыса, грызун, примат
или любое их сочетание, и т.л.
Выделенные антитела по настоящему изобретению содержат аминокислотные последовательности антител, описанных в настоящем документе, кодируемые любым пригодным
полинуклеотидом, или любое выделенное или полученное антитело. Предпочтительно, антитело человека или антигенсвязывающий фрагмент связывает IL-23pl9 человека и, таким образом, частично или значительно нейтрализует по меньшей мере один вид биологической активности белка. Антитело или его определенный участок или вариант, который частично или значительно нейтрализует по меньшей мере один вид биологической активности по меньшей мере одного белка или фрагмента IL-23, может связывать белок или фрагмент и, таким образом, ингибировать активность, опосредуемую связыванием IL-23 с рецептором для IL-23 или другими зависимыми от IL-2 3 или опосредуемыми IL-2 3 механизмами. Как используют в настоящем документе, термин "нейтрализующее антитело" относится к антителу, которое может ингибировать зависимую от IL-23 активность приблизительно на 20-120%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% или более, в зависимости от способа анализа. Способность антитела против IL-23pl9 ингибировать зависимую от IL-23 активность предпочтительно оценивают посредством по меньшей мере одного пригодного способа анализа белка IL-23 или рецептора для IL-23, как описано в настоящей заявке и/или как известно в данной области. Антитело человека по этому изобретению может представлять собой антитело любого класса (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD и т.д.) или изотипа и может содержать легкую цепь каппа или лямбда. В одном варианте осуществления антитело человека содержит тяжелую цепь или определенный фрагмент IgG, например, по меньшей мере одного из изотипов IgGl, IgG2, IgG3 или IgG4 (например, yl, у2, уЗ, у 4) . Антитела этого типа можно получать с использованием трансгенной мыши или другого трансгенного не относящегося к человеку млекопитающего, содержащего трансгены по меньшей мере одной легкой цепи человека (например, IgG, IgA и IgM), как описано в
настоящем документе и/или как известно в данной области. 3 другом варианте осуществления антитело человека против IL-23pl9 человека содержит тяжелую цель IgGl и легкую цепь IgGl.
По меньшей мере одн:) антитело по этому изобретению связывает по меньшей мере один определенный эпитоп, специфичный по меньшей мере для одного белка IL-23pl9, его субъединицы, фрагмента, участка или любого их сочетания. По меньшей мере один эпитоп может содержать по меньшей мере один участок для связывания антитела, который содержит по меньшей один мере один участок белка, при этом эпитоп предпочтительно состоит по меньшей мере из одного внеклеточного, растворимого, гидрофильного, внешнего или цитоплазматического участка белка. По меньшей мере один определенный эпитоп может содержать любое сочетание по меньшей мере из одной аминокислотной последовательности по меньшей мере из от 1-3 аминокислот до целого определенного участка соседних аминокислот из аминокислот 93-105 SEQ ID N0:145 (которые содержат начальную сигнальную последовательность из 19 аминокислотных остатков для субъединицы белка р19), например, аминокислотные остатки 93, 93-94, 93-95, 93-96, 97-99, 100-102 SEQ ID N0:145 и т.д, которые включают любые участки и сочетания этих последовательностей.
Как правило, антитело человека или антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий участок, который содержит по меньшей мере один определяющий комплементарность участок (CDR1, CDR2 и CDR3) или вариант по меньшей мере одного вариабельного участка тяжелой цепи и по меньшей мере одного определяющего комплементарность участка человека (CDR1, CDR2 и CDR3) или вариант по меньшей мере одного вариабельного участка легкой цепи. Необязательно, последовательности CDR могут быть получены из
последовательностей эмбрионального типа человека или они могут обладать близким сходством с последовательностями
эмбрионального типа. Например, можно использовать CDR из синтетической библиотеки, полученной из естественных мышиных CDR. В качестве неограничивающего примера, антитело или
антигенсвязывающий участок или вариант могут содержать по меньшей мере один из CDR3 тяжелых цепей, например, выбранных из SEQ ID N0:46-51, 52-57 или 58-79. В конкретном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент может обладать антигенсвязывающим участком, который содержит по меньшей мере часть по меньп.ей мере одного CDR тяжелой цепи (т.е., CDRI., CDR2 и/или CDR3) , обладающего аминокислотной последовательностью соответствующих CDR (т.е. CDRI, CDR2 и/или CDR3) (например, CDR, описанных в настоящем документе). В другом конкретном варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий участок или вариант может обладать антигенсвязывающим участком, который содержит по меньшей мере часть по меньшей мере одного CDR легкой цепи (т.е., CDRI, CDR2 и/или CDR3) (например, CDR, списанных в настоящем документе).
В предпочтительном варианте осуществления, три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента можно получать химическим связыванием совместно различных участков (например, CDR, каркасной области) антитела с использованием общепринятых способов, получением и экспрессией (одной или нескольких) молекул нуклеиновой кислоты, которые кодируют антитело с использованием общепринятых способов технологии рекомбинантных ДНК или с использованием любого другого пригодного спо:оба.
Антитело против IL-23plc- может содержать по меньшей мере один вариабельный участок тяжелой или легкой цепи, имеющий определенную аминокислотную последовательность. Например, в предпочтительном варианте осуществления, Антитело против IL-23р19 содержит по меньшей мере один из по меньшей мере одного вариабельного участка тяжелой цепи, необязательно выбранного из SEQ ID N0:80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127 и 147 и/или по меньшей мере одного вариабельного участка легкой цепи, необязательно выбранного из SEQ ID N0:82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 и 128-132. Антитела, которые связываются с IL-23pl9 человека и которые содержат определенный вариабельный участок тяжелой или легкой цепи можно получать с использованием пригодных способов. Антитело, определенный участок или вариант
можно экспрессировать с использованием кодирующей нуклеиновой кислоты или ее участка в пригодной клетке-хозяине.
Коды аминокислот
Аминокислоты, которые зходят в состав антител против IL-23р19 по настоящему изобретению, часто приводят в сокращенном виде. Обозначения аминокислот могут быть представлены посредством обозначения аминокислоты с помощью ее однобуквенного кода, ее трехбуквенного кода, названия или кодона(ов) из трех нуклеотидов, как хорошо понятно в данной области (см. Alberts, В., et al. , Molecular Biology of The Cell, Third Ed., Garland Publishing, Inc., New York, 1994). Антитело против IL-23pl9 по настоящему изобретению может включать одну или несколько аминокислотных замен, делеций или вставок либо вследствие поиродных мутаций, либо вследствие воздействия человека, как описано в настоящем описании. Аминокислоты в антителе против IL-23pl9 по настоящему изобретению, которые необходимы для функционирования, можно выявлять известными в данной области способами, такими как сайт-направленный мутагенез или сканирующий аланином мутагенез (например, Ausubel, выше, главы 8, 15; Cunningham and Wells, Science 244:1081-1085 (198Cj))- В последнем способе в каждый остаток молекулы вносят единичные мутации с заменой на аланин. Затем полученные молекулы тестируют на биологическую активность, такую как, но не ограничиваясь этим, по меньшей мере один вид нейтрализующей IL-23 активности. Участки, которые важны для связывания антитела, также можно выявлять посредством структурного анализа, такого как кристаллизация, ядерный магнитный резонанс или фотоаффинное мечение (Smith, et al. , J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992) и de Vos, et al. , Science 255:306-312 (1992) ) .
Антитела против IL-23pl9 по настоящему изобретению могут включать, но не ограничиваться ими, по меньшей мере один участок, последовательность или сочетание, выбранные из от 5 до всех соседних аминокислот вариабельного участка
последовательностей SEQ ID N0:82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 и 128-132 и SEQ ID N0:80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127 и
147 .
Неограничивающие варианты, которые могут усиливать или поддерживать по меньшей мере один из перечисленных видов активности,, включают, но не ограничиваются ими, любой из указанных выше полипептидоЕ, далее содержащих по меньшей мере одну мутанию, соответствующую по меньшей мере одной замене в остатках, варьирующих зреди описанных аминокислотных последовательностей варианте в.
Антитело против IL-23pl9 далее может необязательно содержать полипептид с аминокислотной последовательностью, которая отличается от последовательностей, описанных в настоящем описании (например, с одной или несколькими консервативными заменами в последовательностях, представленных в настоящем описании). Также, более конкретно, настоящее изобретение включает варианты аминокислотной последовательности вариабельного участка легкой цепи SEQ ID N0:82-85, 93-98, 100, 102, 113-1.16 и 128-132 или аминокислотной последовательности вариабельного участка SEQ ID N0:80, 81, 86-92, 99, 101, 103112, 117-127 и 147.
Как поймут специалисты, настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному биологически активному антителу по настоящему изобретению. Биологически активные антитела обладают специфичной активностью по меньшей мере 20%, 30% или 40%, и, предпочтительно, по меньшей мере 50%, 60% или 70%, и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере 80%, 90% или 95%-1000% или более относительно активности нативного (несинтетического), эндогенного или сходного и известного антитела. Способы анализа и количественного определения показателей ферментативной активности и субстратной специфичности хорошо известны специалистам в данной области.
В другом аспекте это изобретение относится к антителам человека и антигенсвязывающим фрагментам, как описано в настоящем документе, которые модифицированы посредством ковалентного присоединения органической группы. Такая модификация может приводить к получению антитела или антигенсвязывающего фрагмента с улучшенными
фармакскинетическими свойствами (например, повышенным периодом полураспада в сыворотке in vivo). Органическая группа может представлять собой линейную или разветвленную гидрофильную полимерную группу, группу жирной кислоты или группу сложного эфира жирной кислоты. В конкретных вариантах осуществления гидрофильная полимерная группа может обладать молекулярной массой, составляющей от приблизительно 8 00 до приблизительно 120000 Дальтон и может представлять собой полиалкангликоль
(например, полиэтиленгликол!: (PEG) , полипропиленгликоль (PPG) ) , углеводный полимер, полимер из аминокислот или
поливинилпирролидон, и группа жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты может содержать от приблизительно восьми до приблизительно сорока атомоь углерода.
Модифицированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты по этому изобретению могут содержать одну или несколько органических групп, которые ковалентно связаны, прямо или непрямо, с антителом. Каждая органическая группа, которая связана с антителом или антигенсвязывающим фрагментом по этому изобретению, может независимо представлять собой гидрофильную полимерную группу, группу жирной кислоты или группу сложного эфира жирной кислоты. Как используют в настоящем документе, термин "жирная кислота" зключает монокарбоновые кислоты и дикарбоновые кислоты. "Гидрофильная полимерная группа", в качестве используемого в настоящем документе термина, относится к органическому полимеру, который является более растворимым в воде, чем в октане. Например, полилизин более растворим в воде, чем в октане. Таким образом, антитело, модифицированное посредством ковалентного присоединения полилизина, относится к этому изобретению. Гидрофильные полимеры, пригодные для модификации антител по этому изобретению могут быть линейными или разветвленными, и включают, например, полиалкангликоли
(например, PEG, монометоксиполиэтиленгликоль (mPEG), PPG и т.п.), углеводы (например, декстран, целлюлозу, олигосахариды, полисахариды и т.п.), полимеры гидрофильных аминокислот
(например, полилизин, полиаргинин, полиаспартат и т.п.), оксиды полиалканов (например, оксид полиэтилена, оксид полипропилена и
т.п.) и поливинилпирролидон. Предпочтительно, гидрофильный полимер, который модифицирует антитело по этому изобретению, обладает молекулярной ма::сой от приблизительно 800 до приблизительно 150000 Дальтон в качестве отдельного молекулярного элемента. Напоимер, можно использовать PEG500o и PEG2oooo; где подстрочный знак представляет собой среднюю молекулярную массу полимера в дальтонах. Гидрофильная полимерная группа может быть замещена от одной до шести алкильными группами, группами жирных кислот или группами сложных эфиров жирных кислэт. Гидрофильные полимеры, которые замещены жирной кислотой или группой сложного эфира жирной кислоты, можно получать, используя пригодные способы. Например, полимер, содержащий аминогруппу, можно присоединять к карбоксилату жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты, и активированный карбоксилат (например, активированный посредством N, N-карбонилдиимидазола) на жирной кислоте или сложном эфире жирной кислоты можно присоединять к гидроксильной группе на полимере.
Жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот, пригодные для модификации антител по этому изобретению могут быть насыщенными или могут содержать один или несколько ненасыщенных элементов. Жирные кислоты, которые пригодны для модификации антител по этому изобретению, включают, например, н-додеканоат (С12, лаурат) , н-тетрадеканоат (Ci4, миристат) , н-октадеканоат (Cis, стеарат), н-эйкозаноао (С2ог арахидат), н-докозаноат (С22, бегенат) , н-триаконтаноат (С30) , н-тетраконтаноат (С40), цис-Д9-октадеканоат (С18, олеат) , полностью цис-Д5,8,11,14 -эйкозатетраеноат (С20, арахидонат), октандиовую кислоту, тетрадекандиовую кислоту, октадекандиовую кислоту,
докозандиовую кислоту и т.п. Пригодные сложные эфиры жирных кислот включают моноэфиры дикарбоновых кислот, которые содержат линейную или разветвленную группу низшего алкила. Группа низшего алкила может содержать от одного до приблизительно двенадцати, предпочтительнс , от одного до приблизительно шести атомов углерода.
Модифицированные антитела человека и антигенсвязывающие
фрагменты можно получать с использованием пригодных способов, таких как реакция с одним или несколькими модифицирующими веществами, "Модифицирующее вещество", в качестве используемого в настоящем документе термина, относится к пригодной органической группе (например, к группе гидрофильного полимера, жирной кислоты, сложного эфира жирной кислоты), которая содержит активирующую группу. "Активирующая группа"
представляет собой химическую группу или функциональную группу, которая в соответствующих условиях может реагировать со второй химической группой, образуя, таким образом, ковалентную связь между модифицирующим веществом и второй химической группой. Например, реагирующие с аминами группы включают электрофильные группы, такие как тозилат, мезилат, гало (хлор, бром, фтор, йод), сложные эфиры N-гидроксисукцинимидила (NHS), и т.п. Активирующие группы, которые могут реагировать с тиолами, включают, например, малеинимид, йодацетил, акрилолил, пиридилдисульфиды, тиол 5-тиол-2-нитробензойной кислоты (TNB-тиол) и т.п. Альдегидную функциональную группу можно присоединять к содержащим амин или гидразид молекулам, и азидная группа может реагировать с тривалентной фосфорной группой с образованием связей фосфорамидата или фосфоримида. Пригодные способы встраивания активирующих групп в молекулы известны в данной области (см. например, Hermanson, G.T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). Активирующая группа может быть прямо связана с органической группой (например, с группой гидрофильного полимера, жирной кислоты, сложного эфира жирной кислоты), или через линкерную группу, например, двухвалентную группу С1-С12, где один или несколько атомов углерода могут быть замещены гетероатомом, таким как кислород, азот или сера. Пригодные линкерные группы включают, например, тетраэтиленгликоль, -(СН2)3-, -NH- (СН2) 6-NH-, -(CH2)2-NH- и -CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH-NH-. Модифицирующие вещества, которые содержат линкерную группу можно получать, например, посредством проведения реакции моно-Вос-алкилдиамина (например, моно-Вос-этилендиамин, моно-Вос-диаминогексан) с жирной кислотой в присутствии 1-этил-3-(3
диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) с образованием амидной связи между свободным амином и карбоксилатом жирной кислоты. Защитную группу Вое можно удалять из продукта посредством обработки трифторуксусной кислотой (TFA), что делает доступным первичный амин, который можно присоединять к другому карбоксилату, как описано, или который можно подвергать реакции с малеиновым ангидридом, и полученный продукт подвергать циклизации с получением активированного малеимидо-производного жирной кислоты. (См., например, Thompson, et al, WO 92/16221, полное описание которой включено в настоящее описании в качестве ссылки).
Модифицированные антитела по этому изобретению можно получать посредством проведения реакции антитела человека или антигенсвязывающего фрагмента с модифицирующим веществом. Например, органические группы можно присоединять к антителу не специфичным в отношении участка способом с использованием реагирующего с амином модифицирующего вещества, например, сложного эфира NHS и PEG. Модифицированные антитела человека или антигенсвязывающие фрагменты также можно получать восстановлением дисульфидных связей (например, дисульфидных связей между цепями) антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Восстановленное антитело или антигенсвязывающий фрагмент затем можно подвергать реакции с реагирующим с тиолом модифицирующим веществом с получением модифицированного антитела по этому изобретению. Модифицированные антитела человека и антигенсвязывающие фрагменты, содержащие органическую группу, которая связана с определенными участками антитела по настоящему изобретению, можно получать с использованием пригодных способов, таких как обратный протеолиз (Fisch et al, Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen et al, Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran et al, Protein Set 6 (10):2233-2241 (1997); Itoh et al, Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996); Capellas et al, Biotechnol Bioeng., 56 (4):456-463 (1997)), и способов, описанных в Hermanson, G.T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996). Композиции антиидиотипических антител к антителам против IL-
47 23р19
В дополнение к монокленальным антителам против IL-23pl9, настоящее изобретение также относится к антиидиотипическому (анти-Id) антителу, специфичному к таким антителам по этому изобретению. Анти-Id-антитело представляет собой антитело, которое распознает определенные детерминанты, как правило, ассоциированные с антигенсвязывающим участком другого антитела. Анти-Id можно получать посредством иммунизации животного того же вида и генетического типа (например, линии мыши), в качестве источника Id-антитела, антителом или его содержащим CDR участком. В иммунизированном животном происходит распознавание и ответ на идиотипические детерминанты иммунизирующего антитела и продукция анти-Id антитела. Анти-Id антитело также можно использовать в качестве "иммуногена" для индуцирования иммунного ответа у другого животного, продуцирующего так называемое анти-анти-Id антитело.
Также настоящее изобретение относится по меньшей мере к одной композиции антител против IL-23pl9, содержащей в ней по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть или более антител против IL-23pl9, как описано в настоящем документе и/или как известно в данной области, которые предоставлены в не встречающейся в природе композиции, смеси или форме. Такие композиции включают не встречающиеся в природе композиции, содержащие по меньшей мере один или два полноразмерных варианта, варианта с С- и/или N-концевой делецией, домена или фрагмента, или определенных варианта аминокислотной последовательности антитела против IL-23pl9, выбранной из группы, состоящей из 70-100% соседних аминокислот SEQ ID N0:1-132, 146 и 147 или их определенных фрагментов, доменов или вариантов. Предпочтительные композиции антител против IL-23pl9 включают по меньшей мере один или два полноразмерных участка, фрагмента, домена или варианта участков, содержащих по меньшей мере одну CDR или LBP, последовательности антитела против IL-23pl9, описанного в настоящем документе, например, 70-100% SEQ ID N0:1-132, 146 и
14 7, или их определенных фрагментов, доменов или вариантов. Следующие предпочтительные композиции содержат, например, 4 099% по меньшей мере одного из 70-100% из SEQ ID N0:1-132, 146 и 147, и т.д., или их определенные фрагменты, домены или варианты. Такие процентные содержания композиции представляют собой процентные содержания по массе, объему, концентрации, молярности или моляльности, в качестве жидких или сухих растворов, смесей, суспензии, эмульсий, частиц, порошка или коллоидных веществ, как известно в данной области или как описано в настоящем документе.
Композиции антител, содержащие дополнительные терапевтически
активные ингредиенты Композиции антитела по этому изобретению, кроме того, необязательно могут содержать эффективное количество по меньшей мере одного соединения или белка, выбранного по меньшей мере из одного противоинфекционного лекарственного средства,
лекарственного средства для сердечно-сосудистой (CV) системы, лекарственного средства для центральной нервной системы (ЦНС), лекарственного средства для автономной нервной системы (ANS), лекарственного средства для дыхательных путей, лекарственного средства для желудочно-кишечного (GI) тракта, гормонального лекарственного средства, лекарственного средства для жидкостного или электролитного баланса, гематологического лекарственного средства, противоопухолевого средства,
иммуномодулирующего лекарственного средства, лекарственного средства для глаз, ушей и носа, лекарственного средства для местного применения, диетологического лекарственного средства или сходных с ними. Такие лекарственные средства хорошо известны в данной области, включая составы, показания, дозирование и введение для каждого представленного в настоящем описании лекарственного средства (см., например, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed. , Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells et al. , ed. , Appleton & Lange, Stamford, CT, все из которых включены в настоящее описание в
качестве ссылок в полном обтеме).
Противоинфекционное лекарственное средство может
представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амебицидов или по меньшей мере одного из противопротозойных средств, противогельминтных средств, противогрибковых средств, противомалярийных, противотуберкулезных средств или по меньшей мере одного из противолепрозных средств, аминогликозидов, пенициллинов, цефалоспоринов, тетрациклинов, сульфонамидов, фторхинолонов, противовирусных средств, макролидных
противоинфэкционных среден в и прочих противоинфекционных средств. CV лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из инотропных средств, антиарптмических средств, антиангинальных средств, антигипертензивных средств, антилипидемических средств и прочих сердечно-сосудистых лекарственных средств. Лекарственное средство для ЦНС может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из ненаркотических анальгетиков, или по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из жаропонижающих средств, нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, наркотического или по меньшей мере одного из опиоидных анальгетиков, седативных гипнотических средств,
противосудорожных препаратов, антидепрессантов, седативных лекарственных средств, антипсихотических лекарственных средств, стимуляторов центральной нервной системы,
противопаркинсонических средств и прочих лекарственных средств для центральной нервной системы. Лекарственное средство для ANS может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из холинергических средств
(парасимпатомиметиков), антихолинергических средств,
адренергических средств (симпатомиметиков), адренергических блокаторов (симпатолитиков) , релаксантов скелетной мускулатуры и нервно-мышечных блокаторов. Лекарственное средство для дыхательных путей может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из антигистаминов, бронходилятаторов, отхаркивающих средств или по меньшей мере
одного из средств от кашля и прочих лекарственных средств для дыхательной системы. Лекарственное средство для GI тракта может представлять собой по меньший мере одно лекарственное средство, выбранное из антацидов или по меньшей мере одного из адсорбентов, или по мет шей мере одного из устраняющих метеоризм средств, пищеварительных ферментов, или по меньшей мере одного из растворяющих желчные камни средств, средств против диареи, слабительных средств, противорвотных средств и лекарственных средств против язвы. Гормональное лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из кортикостероидов, андрогенов, или по меньшей мере одного анаболического стероида, эстрогена или по меньшей мере одного прогестина, гонадотропина, противодиабетического лекарственного средства или по меньшей мере одного из глюкагона, гормона щитовидной железы, антагониста гормона щитовидной железы, гормона гипофиза, и лекарственного средства, подобного гормону паращитовидной железы. Лекарственное средство для жидкостного и электролитного баланса может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из диуретиков, электролитов или по меньшей мере одного замещающего раствора, подкисляющего или по меньшей мере одного подщелачивающего средства. Гематологическое лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из повышающих количество гемоглобина в крови средств, антикоагулянтов, производных крови, и тромболитических ферментов. Средства против злокачественной опухоли могут представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из алкилирующих лекарственных средств, антиметаболитов,
антибиотиков против злокачественной опухоли, средств против злокачественной опухоли, которые изменяют гормональный баланс, и прочих средств против злокачественной опухоли. Иммуномодулирующее лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из иммунодепрессантов, вакцин или по меньшей мере одного токсоида, антитоксина или по меньшей мере одного антивенина, иммунной
сыворотки и модификаторов биологического ответа. Лекарственные средство для глаз, ушей и носа может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из офтальмических противоинфекционных средств, офтальмических противовоспалительных средств, миотиков, мидриатиков,
офтальмических сосудосуживающих средств, прочих лекарственных средств для глаз, ушей и носа. Местное лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из противоинфекционных средств, скабицидов или по меньшей мере одного педикулицида или местного кортикостероида. Диетологическое лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из витаминов, минералов или калорийных средств. См., например, содержание Nursing 2 0 01 Drug Handbook, выше.
По меньшей мере одно амебицидное или противопротозойное средство может представлять собой по меньшей мере одно лекарственное средство, выбранное из атоваквона, хлороквина гидрохлорида, хлороквина фосфата, метронидазола, метронидазола гидрохлорида и пентамидина изетионата. По меньшей мере одно противогельминтное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из мебендазола, пирантела памоата и тиабендазола. По меньшей мере одно противогрибковое средство может представлять собой пс меньшей мере средство, выбранное из амфотерицина В, холестерил-сульфатного комплекса амфотерицина В, липидного комплекса амфотерицина В, липосомального амфотерицина В, флуконазола, флуцитозина, микроразмерного гризеофульвина, ультрамикроразмерного гризеофульвина,
итраконазола, кетоконазола, нистатина и тербинафина
гидрохлорида. По меньшей мере одно противомалярийное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из хлороквина гидрохлорида, хлороквина фосфата, доксицилина, гидроксихлороквина сульфата, мефлоквина
гидрохлорида, примаквина фосфата, пириметамина и пириметамина с сульфадоксином. По меньше: мере одно противотуберкулезное или противолепрозное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из клофазимина, циклосерина,
дапзона, этамбутола гидрохлорида, изониазида, пиразинамида, рифабутина, рифампина, рифапентина и стрептомицина сульфата. По меньшей мере один аминогликозид может представлять собой по меньшей ме?ре одно средстве, выбранное из амикацина сульфата, гентамицина сульфата, неомицина сульфата, стрептомицина сульфата и тобрамицина :ульфата. По меньшей мере один пенициллин может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амоксициллин/клавуланата калия, амоксициллина тригидрата, ампициллина, ампициллина натрия, ампициллина тригидрата, ампициллин натрия/сульбактама натрия, клоксациллина натрия, диклоксациллина натрия, мезлоциллина натрия, нафциллина натрия, оксициллина натрия, пенициллина G бензатина, пенициллина G калия, пенициллина G прокаина, пенициллина G натрия, пенициллина V калия, пиперациллина натрия, пиперациллин натрия/тазобактама натрия, тикарциллина динатрия и тикарциллин динатрия/клавуланата калия. По меньшей мере один цефалоспорин может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из цефаклора, цефадроксила, цефазолина натрия,, цефдинира, цефепима гидрохлорида, цефиксима, цефметазола натрия, цефоницида натрия, цефоперазона натрия, цефотаксима натрия, цефотетана динатрия, цефокситина натрия, цефподоксима проксетила, цефпрозила, цефтазидима, цефтибутена, цефтизоксима натрия, цефтриаксона натрия, цефуроксима аксетила, цефуроксима натрия, цефалексина гидрохлорида, цефалексина моногидрата, цефрадина и лоракабефа. По меньшей мере один тетрациклин может представлять собой по меньшей мере одно средстзо, выбранное из демеклоциклина гидрохлорида, доксицилина кальция, доксицилина гиклата, доксицилина гидрохлорида, доксицилина моногидрата, миноциклина гидрохлорида и
тетрациклина гидрохлорида. По меньшей мере один сульфонамид может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ко-тримоксазола, сульфадиазина, сульфаметоксазола, сульфизоксазола и ацетилсульфизоксазола. По меньшей мере один фторхинолон может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из алатрофлоксацина мезилата,
ципрофлоксацина, эноксацика, левофлоксацина, ломефлоксацина
гидрохлорида, налидиксовой кислоты, норфлоксацина, офлоксацина, спарфлоксацина и тровафлоксацина мезилата. По меньшей мере один фторхинолон может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из алатрофлоксацина мезилата,
ципрофлоксацина, эноксацинг., левофлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, налидиксовой кислоты, норфлоксацина, офлоксацина, спарфлоксацина и тровафлоксацина мезилата. По меньшей мере одно противовирусное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из абакавира сульфата, ацикловира натрия, амантадина гидрохлорида, ампренавира, цидофовира, делавирдина мезилата, диданозина, эфавиренца, фамицикловира, фомивирсена натрия, фоскарнета натрия, ганцикловира, индинавира сульфата, ламивудина, ламивудин/зидовудина, нельфинавира мезилата, невирапина, озельтамивира фосфата, рибавирина, римантидина гидрохлорида, ритонавира, саквинавира, саквинавира мезилата, ставудина, валацикловира гидрохлорида, зальцитабина, занамивира, и зидовудина. По меньшей мере одно макролидное противоинфекционное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из азитромицина, кларитромицина, диритромицина, основания эритромицина, эритромицина эстолата, эритромицина этилсукцината, эритромицина лактобионата и эритромицина стеарата. По меньшей мере одно прочее противовоспалительное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из азтреонама, бацитрацина, хлорамфеникола натрия сукцината, клиндамицина гидрохлорида, клиндамицина пальмитата гидрохлорида,
клиндамицина фосфата, имипенема и циластатина натрия, меропенема, макрокристаллов нитрофурантоина, микрокристаллов нитрофурантоина, квинупристин/дальфопристина, спектиномицина гидрохлорида, триметоприма и ванкомицина гидрохлорида. (См., например, pp. 24-214 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере одно инотропное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амринона лактата, дигоксиьа и милринона лактата. По меньшей мере одно противоаритмическое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из аденозина,
амиодарона гидрохлорида, атропина сульфата, бретилиума тозилата, дилтиазема гидрохлорида, дизопирамида, дизопирамида фосфата, эсмолола гидрохлорида, флецианида ацетата, ибутилида фумарата, лидокаина гидрохлорида, мексилетина гидрохлорида, морицизина гидрохлорида, фенитоина, фенитоина натрия, прокаинамида гидрохлорида, пропафенона гидрохлорида,
пропранолола гидрохлорида, квинидина бисульфата, квинидина глюконата, квинидина полигалактоуроната, квинидина сульфата, соталола, токаинида гидрохлорида и верапамила гидрохлорида. По меньшей мере одно антиангинальное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амлодипидина безилата, амила нитрита, бепридила гидрохлорида, дилтиазема гидрохлорида, изосорбита динитрата, изосорбита мононитрата, надолола, никардипина гидрохлорида, нифедипина, нитроглицерина, пропранолола гидрохлорида, верапамила и верапамила
гидрохлорида. По меньшей мере одно антигипертензивное средств может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ацебутолола гидрохлорида, амлодипина безилата, атенолсла, беназеприла гидрохлорида, бетоксалола гидрохлорида, бизопрслола фумарата, кандесартана цилексетила, каптоприла, картеолола гидрохлорида, карведилола, клонидина, клонидина гидрохлорида, диазоксида, дилтиазема гидрохлорида, доксазозина мезилата, эналаприлата, эналаприла малеата, эпросартана мезилата, фелодипина, фенолдопама мезилата, фосиноприла натрия, гуанабенца ацетата, гуанадрела сульфата, гуанфацина
гидрохлорида, гидралазина гидрохлорида, ирбесартана,
израдипина, лабеталола гидрохлорида, лизиноприла, лозартана калия, метилдопы, метилдопатгидрохлорида, метопролола
сукцината, метопролола тартрата, миноксидила, моэксиприла гидрохлорида, надолола, никардипина гидрохлорида, нифедипина, низолдипина, нитропруссида натрия, пентбутолола сульфата, периндоприла эрбумина, фентоламина мезилата, пиндолола, празосина гидрохлорида, пропранолола гидрохлорида, квинаприла гидрохлорида, рамиприла, телмисартана, теразозина гидрохлорида, тимолола малеата, трандолаприла, валсартана и верапамила гидрохлорида. По меньшей мере одно антилипидемическое средство
может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из аторвастатина кальция, церивастатина натрия, холестирамина, колестипсла гидрохлорида, фенофибрата
(микронизированного), флувастатина натрия, гемфиброзила, ловастатина, ниацина, правастатина натрия и симвастатина. По меньшей мере одно прочее CV лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из абциксимаба, алпростадила, арбутамина гидрохлорида,
цилостазола, клопидогрела бисульфата, дипиридамола,
эптифибатида, мидодрина гидрохлорида, пентоксифиллина, тиклопидина гидрохлорида и тирофибана гидрохлорида. (См., например, pp. 215-336 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере один ненаркотический анальгетик или жаропонижающее средство может представлять собой по меньшей мере однс средство, выбранное из ацетаминофена, аспирина, холина магния трисалицилата, дифлунизала и магния салицилата. По меньшей мере одно нестероидное противовоспалительное лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из целекоксиба, диклофенака калия, диклофенака натрия, этодолака, фенопрофена кальция, флубипрофена, ибупрофена, индометацина, индометацина натрия тригидрата, кетопрофена, каторолака трометамина, набуметона, напроксена, напроксена натрия, оксапрозина, пироксикама, рофекоксиба и сулиндака. По меньшей мере один наркотический или опиодный анальгетик может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из альфентанила гидрохлорида, бупренорфина гидрохлорида, буторфанола тартрата, кодеина фосфата, кодеина сульфата, фентанила цитрата, трансдермальной системы фентанила, фентанила для введения через слизистую оболочку, гидроморфона гидрохлорида, меперидина гидрохлорида, метадона гидрохлорида, морфина гидрохлорида, морфина сульфата, морфина тартрата, нальбуфина гидрохлорида, оксикодона гидрохлорида, оксикодона пектината, оксиморфона гидрохлорида, пентазоцина гидрохлорида, пентазоцина гидрохлорида и налоксона гидрохлорида, пентазоцина лактата, пропоксифена гидрохлорида, пропоксифена напсилата, ремифентанила гидрохлорида, суфентанила
цитрата и трамадола гидрохлорида. По меньшей мере одно седативное гипнотическое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из хлоралгидрата, эстазолама, флуразепама гидрохлорида, пентобарбитала,
пентобарбитала натрия, фенобарбитала натрия, секобарбитала натрия, темазепама, триазолама, залеплона и золпидема тартрата. По меньшей мере одно противосудорожное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ацетазоламида натрия, карбамазепина, клонезепама, клоразепата дикалия, диазепама, диналпрекса натрия, этосуксимида, фосфенитоина натрия, габапентина, ламотригина, сульфата магния, фенобарбитала, фенобарбитала натрия, фенитоина, фенитоина натрия, фенитоина натрия (длительного действия), примидона, тиагабина гидрохлорида, топирамата, вальпроата натрия и вальпроевой кислоты. По меньшей мере один антидепрессант может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амитриптилина гидрохлорида, амитриптилина памоата, амоксапина, бупропиона гидрохлорида, циталопрама гидробромида, клопирамина гидрохлорида, дезипрамина гидрохлорида, доксепина гидрохлорида, флуоксетина гидрохлорида, имипрамина гидрохлорида, имипрамина памоата, миртазапина, нефадозона гидрохлорида, нортриптилина гидрохлорида, пароксетина гидрохлорида, фенелзина сульфата, сертралина гидрохлорида, транилципромина сульфата, тримипрамина малеата и венлафаксина гидрохлорида. По меньшей мере одно седативное лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из альпразолама, буспирона гидрохлорида, хлордиазепоксида, хлордиазепоксида гидрохлорида, клоразепата дикалия, диазепама, доксепина гидрохлорида, гидроксизина эмбоната, гидроксизина гидрохлорида, гидроксизина памоата, лоразепама, мефробамата, мидазолама гидрохлорида и оксазепама. По меньшей мере одно антипсихотическое лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из хлорпромазина гидрохлорида, клозапина, рлуфеназина деканоата, флуфеназина энантата, флуфеназина гидрсхлорида, галоперидола, галоперидола деканоата, галоперидола лактата, локсапина гидрохлорида,
локсапина сукцината, мезоридазина безилата, молидона гидрохлорида, оланзапича, перфеназина, пимозида,
прохлорперазина, кветиапина фумарата, рисперидона, тиоридазина гидрохлорида, тиотиксена, тиотиксена гидрохлорида и
трифлуоперазина гидрохлорида. По меньшей мере один стимулятор центральной нервной системы может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амфетамина сульфата, кофеина, декстроамфетамина сульфата, доксапрама гидрохлорида,
метамфетамина гидрохлорига, метилфенидата гидрохлорида, модафинила, пемолина и фентормина гидрохлорида. По меньшей мере одно противопаркинсоническое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из амантадина гидрохлорида, бензтропина мезилата, биперидена гидрохлорида, биперидена лактата, бромкриптина мезилата, карбидопа-леводопы, энтакапона, леводопы, перголида мезилата, прамипексола дигидрохлорида, ропинирола гидрохлорида, селегилина
гидрохлорида, толкапона и тригексилфенидила гидрохлорида. По меньшей мере одно прочее средство для центральной нервной системы может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бупропиона гидрохлорида, донепезила гидрохлорида, дроперидола, флувоксамина малеата, карбоната лития, цитрата лития, наратриптана гидрохлорида, никотина полакрилекса, трансдермальной системы никотина, пропофола, ризатриптана бензоата, сибутамина гидрохлорида моногидрата, суматриптана сукцината, такрина гидрсхлорида и золмитриптана. (См., например, pp. 337-53 0 of Nursing 2 001 Drug Handbook).
По меньшей мере одно холинергическое средство (например, парасимпатомиметик) может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бетанехола хлорида, эдрофония хлорида, неостигмина бромида, неостигмина метилсульфата, физостигмина салицилата и пиридостигмина бромида. По меньшей мере одно антихолинергическое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из атропина сульфата, дициломина гидрохлорида, гликопирролата, хиосциамина,
хиосциамина сульфата, пропентелина бромида, скополамина, скополамина бутилбромида и скополамина гидробромида. По меньшей
мере одно адренергическое средство (симпатомиметик) может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из добутамина гидрохлорида, дофамина гидрохлорида, метараминола битартрата, норадреналина битартрата, фенилэфрина гидрохлорида, псевдоэфедрина гидрохлорида и псевдоэфедрина сульфата. По меньшей мере один адренергический блокатор (симпатолитик) может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из дигидроэрготамина мезилата, эрготамина тартрата, метисергида малеата и пропранолола гидрохлорида. По меньшей мере один релаксант скелетной мускулатуры может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из баклофена, карисопродола, хлорзоксазсна, циклобензаприна гидрохлорида, дантролена натрия, метокарбамола и тизанидина гидрохлорида. По меньшей мере один нервно-мышечный блокатор может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из атракурия безилата, цисатракурия безилата, доксакурия хлорида, мивакурия хлорида, панкурония бромида, пипекурония бромида, рапакурония бромида, рокурония бромида, сукцинила хлорида, турбокурарина хлорида и венокурония бромида. (См., например, pp. 531-84 Nursing 2 001 Drug Handbook).
По меньшей мере одно антигистаминное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бромфенирамина малеата, цетиразина гидрохлорида, хлорфенирамина малеата, клемастина фумарата, ципрогептадина гидрохлорида, дифенгидрамина гидрохлорида, фексофенадина гидрохлорида, лоратидина, прометазина гидрохлорида, прометазина теоклата и трипролидина гидрохлорида. По меньшей мере один бронходилятатор может пре:дставлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из альбутерола, альбутерола сульфата, аминофиллина, атропина сульфата, эфедрина сульфата, адреналина, адреналина битартрата, адреналина гидрохлорида, ипратропиума бромида, изопротере:нола, изопротеренола гидрохлорида, изопротеренола сульфата, левальбутерола гидрохлорида, метапротеренола сульфата, окситрифиллина, пиребутерола ацетата, сальметерола ксинафоата, тербуталина сугьфата и теофиллина. По меньшей мере одно отхаркивающее средство или средство против кашля может
представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бензонатата, кодеина фосфата, кодеина сульфата,
дектраметорафана гидробромида, дифенгидрамина гидрохлорида, гуайфенезина и гидроморфона гидрохлорида. По меньшей мере одно прочее лекарственное средство для дыхательных путей может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ацетилцистеина, беклометезона дипропионата, берактанта, будезонида, кальфактанта, кромолина натрия, дорназы альфа, эпопростенола натрия, флунизолида, флуказона пропионата, монтелукаста натрия, недокромила натрия, паливизумаба, триамцинолона ацетонида, зафирлукаста и зилеутона. (См., например, pp. 585-642 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере один антацид, адсорбент или средство, устраняющее метеоризм, может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из карбоната алюминия, гидроксида алюминия, карбоната кальция, магалдрата, гидроксида магния, оксида магния, симетикона и бикарбоната натрия. По меньшей мере один пищеварительный фермент или средство, растворяющее желчные камни, может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из панкреатина панкрелипазы и урсодиола. По меньшей одно средство против диареи может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из аттапульгита, субсалицилата висмута, кальция поликарбофила, дифеноксилата гидрохлорида и атропина сульфата, лоперамида, октреотида ацетата, настойки опиума и настойки опиума (камфорной). По меньшей мере одно слабительное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бисакодила, кальция поликарбофила, каскара саграда, ароматического жидкого экстракта каскара саграда, жидкого экстракта каскара саграда, касторового масла, докузата кальция, докузата натрия, глицерина, лактулозы, цитрата магния, гидроксида магния, сульфата магния, метилцеллюлозы, минерального масла, полиэтиленгликоля или раствора электролита, псилиума, сенны и фосфата натрия. По меньшей мере одно противоовотное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из хлорпромазина гидрохлорида, дименгидрината, долазетрона мезилата,
дронабинола, гранизетрона гпдрохлорида, меклизина гидрохлорида, метоклопрамида гидрохлорида, ондансетрона гидрохлорида, перфеназина, прохлорперазина, прохлорперазина эдизилата, прохлорперазина малеата, прометазина гидрохлорида, скополамина, триэтилперазина малеата и триметобензамида гидрохлорида. По меньшей мере одно лекарственное средство против язвы может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из циметидина, циметидина гидрохлорида, фамотидина, ланзопразола, мизопростола, низатидина, омепразола, рабепрозола натрия, рантидина висмута цитрата, ранитидина гидрохлорида и сукралоата. (См., например, pp. 643-95 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере один кортикостероид может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бетаметазона, бетаметазона ацетата или бетаметазона натрия фосфата, бетаметазона натрия фосфата, ацетата кортизона, дексаметазона, дексаметазона ацетата, дексаметазона натрия фосфата, флудроацетата кортизона, гидрокортизона, гидроацетата
кортизона, гидрокортизона ципионата, гидрокортизона натрия фосфата, гидрокортизона натрия сукцината, метилпреднизолона, метилпреднизолона ацетата, метилпреднизолона натрия сукцината, преднизолона, преднизолона ацетата, преднизолона натрия фосфата, преднизолона тебутата, преднизона, триамцинолона, триамцинолона ацетонида и триамцинолона диацетата. По меньшей мере один андроген или анаболический стероид может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из даназола, флуоксиместерона, метилтестостерона, нандролона деканоата, нандролона фенпропионата, тестостерона, тестостерона ципионата, тестостерона энантата, тестостерона пропионата и
трансдермальной системы тестостерона. По меньшей мере один эстроген или прогестин может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из этерифицированных эстрогенов, эстрадиола., эстрадиола ципионата, трансдермальной системы эстрадиол/норэтиндрона ацетата, эстрадиола валерата, эстрогенов (конъюгированных), эстропипата, этинилэстрадиола,
этинилэстрадиола и дезогестрела, этинилэстрадиола и этиндиола
диацетата, этинилэстрадиола и дезогестрела, этинилэстрадиола и этиндиола диацетата, этинилэстрадиола и левоноргестерела, этинилэстрадиола и норэтиндрона, этинилэстрадиола и норэтиндрона ацетата, этинилэстрадиола и норгестимата, этинилэстрадиола и норгестрела, этинилэстрадиола и норэтиндрона и ацетата и фумарата железа, левоноргестерела, медроксипрогестерона ацетата, местранола и норэтиндрона, норэтиндрона, норэтиндрона ацетата, норгестрела и прогестерона. По меньшей мере один гонадотропин может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ганиреликса ацетата, гонадорелина ацетата, гистрелина ацетата и менотропинов. По меньшей мере одно противодиабетическое средство или глюкагон может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из акарбозы, хлерпропамида, глимепирида, глипизида, глюкагона, глибурида, инсулина, метформина гидрохлорида, миглитола, пиоглитазона гидрохлорида, репаглинида,
розиглитазона малеата и троглитазона. По меньшей мере один гормон щитовидной железы может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из левотироксина натрия, лиотиронина натрия, лиотрикса и тироида. По меньшей мере один антагонист гормона щитовидной железы может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из метимазола, йодида калия, йодида калия (насыщенный раствор) , пропилтиоурацила, радиоактивного йода (йодид натрия 1311) и концентрированного раствора йода. По меньшей мере один гормон гипофиза может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из кортикотропина, козинотропина, десмопрессина ацетата,
леупролида ацетата, кортикотропина продленного действия, соматрема, соматропина и вазопрессина. По меньшей мере одно лекарственное средство, подобное гормону паращитовидной железы, может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из кальцифедиола, кальцитонина (человека), кальцитонина (лосося), кальцитриола, дигидротахистерола и этидроната динатрия. (См., например, pp. 696-796 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере один диуретик может представлять собой по
меньшей мере одно средство, выбранное из ацетазодамида, ацетазоламида натрия, амилорида гидрохлорида, буметанида, хлорталидсна, этакрината натрия, этакриновой кислоты, фуросемида, гидрохлортиазида, индапамида, маннита, метолазона, спиронолактона, торсемида, триамтерена и мочевины. По меньшей мере один раствор электролита или замещающий раствор может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ацетата кальция, карбоната кальция, хлорида кальция, цитрата кальция, глубионата кальция, глуцептата кальция, глюконата кальция, лактата кальция, фосфата кальция (двухосновного) , фосфата кальция (трехосновного), декстрана
(высокомолекулярного), декстрана (низкомолекулярного) ,
гетакрахмала, хлорида магния, сульфата магния, ацетата калия, бикарбоната калия, хлорида калия, глюконата калия, раствора Рингера для инъекций, раствора Рингера для инъекций (лактатного) и хлорида натрия. По меньшей мере одно подкисляющее или подщелачивающее средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бикарбоната натрия, лактата натрия и трометамина. (См., например, pp. 79783 3 Nursing 2 001 Drug Handbook).
По меньшей мере одно средство для повышения уровня гемоглобина в крови может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из фумарата железа, глюконата железа, сульфата железа, сульфата железа (высушенного), декстрана железа, сорбита железа, комплекса полисахарид-железо и комплекса глюконата железа с натрием. По меньшей мере один антикоагулянт может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ардепарина натрия, дальтепарина натрия, данапароида натрия, эноксапарина натрия, гепарина кальция, гепарина натрия и варфарина натрия. По меньшей мере одно производное крови может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из альбумина 5%, альбумина 25%, антигемофильного фактора, антиингибиторного коагулянтного комплекса, антитромбина III (человека), фактора IX (человека), комплекса фактора IX и фракций белков плазмы. По меньшей мере один тромболитический фермент может представлять собой по
меньшей мере одно средстве, выбранное из альтеплазы, анистреплазы, ретеплазы рекомбинантной), стрептокиназы и урокиназы. (См., например, pp. 834-66 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере одно алкилирующее лекарственное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бисульфана, карбоплатина, кармустина, хлорамбуцила, цисплатина, циклофосфамида, ифосфамида,
ломустина, мехлорэтамина нидрохлорида, мелфалана, мелфалана гидрохлорида, стрептозоцина, темозололмида и тиотепы. По меньшей мере один антиметаболит может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из капецитабина, кладрибина, цитарабина, слоксуридина, флударабина фосфата, фторурацила, гидроксимочевины, меркаптопурина, метотрексата, метотрексата натрия и тиогуанина. По меньшей мере одно антибиотическое противоопухолевое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из блеомицина сульфата, дактиномицина, даунорубицина липосомального цитрата, даунорубицина гидрохлорида, доксорубицина гидрохлорида, липосомального доксорубицина гидрохлорида, эпирубицина гидрохлорида, идарубицина гидрохлорида, митомицина,
пентостатина, пликамицина и валрубицина. По меньшей мере одно противоопухолевое средство, которое изменяет гормональный баланс может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из анастрозола, бикалутамида, эстрамустина фосфата натрия, экземестана, флутамида, гозерелина ацетата, лектрозола, леупролида ацетата, магестрола ацетата, нилутамида, тамоксифена цитрата, тестолактона и торемифена цитрата. По меньшей мере одно прочее противоопухолевое средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из аспарагиназы, бацилл Кальметта-Герена (BCG) (живых интравезикулярных), декарбазина, доцетаксела, этопзида, этопзида фосфата, гемцитабина гидрохлорида, иринотекана гидрохлорида, митотана, митоксантрона гидрохлорида, паклитаксела, пегаспаргазы, порфимера натрия, прокарбазина гидрохлорида, ритуксимаба, тенипозида, топотекана гидрохлорида, трастузумаба, третиноина,
винбластина сульфата, винкристина сульфата и винорелбина тартрата. (См., например, pp. 867-963 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере один иммунодепрессант может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из азатиоприна, базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба, лимфоцитарного иммуноглобулина, муромонаб-СБЗ, микофенолята мофетила,
микофенолята мофетила гидрохлорида, сиролимуса и такролимус. По меньшей ме:ре одна вакцина или токсоид может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из вакцины BCG, противохолерной вакцины, токсоидов дифтерии и столбняка
(адсорбированных), адсорбированных токсоидов дифтерии и столбняка и бесклеточной вакцины против коклюша, токсоидов дифтерии и столбняка и вакцины против коклюша с цельными клетками, вакцины против Haemophilius b на основе конъюгата, вакцины против гепатита А (инактивированной), вакцины против гепатита В (рекомбинантнсй) , трехвалентной вакцины против вируса гриппа типов А и В 1999-2000 (очищенный поверхностный антиген), трехвалентной вакцины против вируса гриппа типов А и В 1999-2000 (субвирион или очищенный субвирион) , трехвалентной вакцины против вируса гриппа типов А и В 1999-2000 (целый вирион), вакцины против вируса японского энцефалита
(инактивированной), вакцины против болезни Лайма
(рекомбинантной OspA), вакцины против вируса кори и свинки и краснухи (живой), вакцины против вируса кори и свинки и краснухи (живой аттенуированной), вакцины против вируса кори
(живой аттенуированной), вакцины на основе менингококкового полисахарида, вакцины против вируса кори (живой), вакцины против чумы, пневмококковой вакцины (поливалентный), вакцины против вируса полиомиелита (инактивированной), вакцины против вируса полиомиелита (живой, пероральной, трехвалентной), вакцины против бешенства (адсорбированной), вакцины против бешенства (диплоидные клетки человека), вакцины против вируса краснухи и свинки (живой , вакцины против вируса краснухи
(живой аттенуированной), тсксоида столбняка (адсорбированного), токсоида столбняка (жидкого), вакцины против тифа
(пероральной), вакцины против тифа (парентеральной), вакцины на основе полисахарида протии Vi тифа, вакцины против вируса ветряной оспы и вакцины против желтой лихорадки. По меньшей мере один антитоксин или активенин может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из антивенина паука черной вдовы, антитоксина против змеиного яда Crotalidae (поливалентного), антитоксина дифтерии (эквина) и антивенина Micrurus fulvius. По меньшей мере одна иммунная сыворотка может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из иммуноглобулина против цитомегаловируса (внутривенного), иммуноглобулина против гепатита В (человека), внутримышечного иммуноглобулина, внутривенного иммуноглобулина, иммуноглобулина против бешенства (человека), внутривенного иммуноглобулина против респираторно-синиитиального вируса (человека),
иммуноглобулина Rh0 (D) (человека), внутривенного
иммуноглобулина Rh0 (D) (человека), иммуноглобулина против столбняка (человека) и иммуноглобулина против varicella-zoster. По меньшей мере одно модифицирующее биологический ответ средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из альдеслейкина, эпоэтина-альфа, филграстима, глатирамера ацетата для инъекций, интерферона альфакон-1, интерферон альфа-2а (рекомбинантного), интерферона альфа-2Ь (рекомбинантного), интерферона бета-la, интерферона бета-lb (рекомбинантного), интерферона гамма-lb, левамизола гидрохлорида, опрелвекима и сарграмостима. (См., например, pp. 964-104 0 Nursing 2001 Drug Handbook).
По меньшей мере одно противоинфекционное средство для глаз может быть выбрано из бацитрацина, хлорамфеникола, ципрофлоксацина гидрохлорида, эритромицина, гентамицина сульфата, офлоксацина 0,3%, полимиксина В сульфата, сульфацетамида натрия 10%, сульфацетамида натрия 15%, сульфацетамида натрия 30%, тобрамицина и видарабина. По меньшей мере одно противовоспалительное средство для глаз может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из дексаметазона, дексаметазона натрия фосфата, диклофенака натрия 0,1%, фторметолона, олубипрофена натрия, каторолака
трометамина, преднизолона ацетата (суспензии) и преднизолона натрия фосфата (раствора). По меньшей мере один миотик может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из ацетилхолина хлорида, карбахола (внутриглазного), карбахола (местного), экотиофата йодида, пилокарпина, пилокарпина гидрохлорида и пилокарпина нитрата. По меньшей мере один мидриатик может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из атропина сульфата, циклопентолята гидрохлорида, адреналина гидрохлорида, эпинефрила бората, гоматропина гидробромида, фенилэфрина гидрохлорида, скополамина гидробромида и тропикамида. По меньшей мере одно сосудосуживающее средство дня глаз может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из нафазолина гидрохлорида, оксиметазолина гидрохлорида и тетрагидрозолина гидрохлорида. По меньшей мере одно прочее средство для глаз может представлять по меньшей мере одно собой средство, выбранное из апраклонкдина гидрохлорида, бетоксалола гидрохлорида, бримонидина тартрата, картеолола гидрохлорида, дипивефрина гидрохлорида, дорзоламида гидрохлорида, эмедастина дифумарата, флуоресцеина натрия, кетотифена фумарата, латанопроста, левобунолоia гидрохлорида, метипранолола гидрохлорида, хлорида натоия (гипертонического) и тимолола малеата. По меньшей мере одно средство для ушей может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из борной кислоты, пероксида карбамида, хлорамфеникола и конденсата олеата триэтаноламина полипептида. По меньшей мере одно лекарственное средстве для носа может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из беклометазона дипропионата, будезонида, эфедрина сульфата, адреналина гидрохлорида, флунизолида, флуказона пропионата, нафазолина гидрохлорида, оксиметазолина гидрохлорида, фенилэфрина гидрохлорида, тетрагидрозолина гидрохлорида, триамцинолона ацетонида и ксилометазолина гидрохлорида. (См., например, pp. 1041-97 Nursing 2 001 Drug Handbook).
По меньшей мере одне противоинфекционное средство для местного применения может представлять собой по меньшей мере
одно средство, выбранное из ацикловира, амфотерицина В, крема с азелаиновой кислотой, бацитрацина, бутоконазола нитрата, клиндамицина фосфата, клотримазола, эконазола нитрата, эритромицина, гентамицина сульфата, кетоконазола, мафенида ацетата, метронидазола (для местного применения) , миконазола нитрата, мупироцина, нафтифина гидрохлорида, неомицина сульфата, нитрофуразона, нистатина, сульфадиазина серебра, тербинафина гидрохлорида, терконазола, тетрациклина
гидрохлорида, тиоконазола и толнафтата. По меньшей мере один скабицид или педикулицид может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из кротамитона, линдана, перметрина и пиретринов. По меньшей мере один кортикостероид для местного применения может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из бетаметазона дипропионата, бетаметазона валерата, клобетазола пропионата, дезонида, дезоксиметазона, дексаметазона, дексаметазона натрия фосфата, дифлоразона диацетата, флуоцинолона ацетонида, флуоционида, флурандренолида, флуказона пропионата, галционида,
гидрокортизона, гидроацетата кортизона, гидрокортизона бутирата, гидрокортизона валерата, мометазона фуроата и триамцинолона ацетонида. (См., например, pp. 1098-1136 Nursing 2 001 Drug Handbook).
По меньшей мере один витамин или минерал может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из витамина А, комплекса витаминов В, цианкобаламина, фолиевой кислоты, гидроксикобаламина, лейковорина кальция, ниацина, ниацинамида, пиридоксина гидрохлорида, рибофлавина, тиамина гидрохлорида, витамина С, витамина D, хлоркальциферола, эргокальциферола, аналога витамина D, доксеркальциферола, парикальцитола, витамина Е, аналога витамина К, фитонадиона, фторида натрия, фторида натрия (местного), микроэлементов, хрома, меди, йода, марганца, селена и цинка. По меньшей мере одно калорийное средство может представлять собой по меньшей мере одно средство, выбранное из аминокислот для инфузий (кристаллических), аминокислот для инфузий в декстрозе, аминокислот для инфузий с электролитами, аминокислот для
инфузий с электролитами в декстрозе, аминокислот для инфузий при печеночной недостаточности, аминокислот для инфузий при высоком метаболическом стрессе, аминокислот для инфузий при почечной недостаточности, декстрозы, жировых эмульсий и триглицеридов средней цепи. (См., например, pp. 1137-63 Nursing 2 001 Drug Handbook).
Композиции антител против IL-23pl9 по настоящему изобретению, кроме того, могут содержать по меньшей мере одно из любых пригодных и эффективных количеств композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9, которое приводят в контакт с клеткой, тканью, органом, животным или пациентом, или вводят в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, воздействии или терапии, кроме того, необязатехъно содержащей по меньшей мере одно средство, выбранное из антагониста TNF (например, но не ограничиваясь ими, химического или белкового антагониста TNF, моноклонального или поликлонального антитела против TNF или фрагмента, растворимого рецептора для TNF (например, р55, р70 или р85) или фрагмента, их слитых полипептидов или низкомолекулярного антагониста TNF, например, связывающего TNF белка I или II (TBP-I или TBP-II), нерелимомаба, инфликсимаба, энтерацепта, CDP-571, CDP-870, афелимомаба, ленерцепта и т.п.), противоревматического средства (например, метотрексата, ауранфина, ауротиоглюкозы, азатиоприна, этанерцепта, золота натрия тиомалата, гидроксихлороквина сульфата, лефлуномида, сульфасалзина), мышечного релаксанта, наркотического средства, нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (NSAID), обезболивающего средства, анестетика, седативного средства, местного анестетика, нервно-мышечного блокатора, противомикробного средства (например, аминогликозида,
противогрибкового средства, противопаразитарного средства, противовирусного средства, карбапенема, цефалоспорина, фторхинолона, макролида, пенициллина, сульфонамида,
тетрациклина, другого противомикробного средства),
противопсориазного средства, кортикостероида, анаболического
стероида, средства против диабета, минерала, питательного вещества, средства для щитовидной железы, витамина, связанного с кальцием гормона, средства против диареи, средства против кашля, противорвотного средства, средства против язвы, слабитегльного средства, антикоагулянта, эритропоэтика
(например, эпоэтина альфа), филграстима (например, G-CSF, Neupogen), сарграмостима (GM-CSF, Leukine), средства для иммунизации, иммуноглобулина, иммунодепрессанта (например, базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба) , гормона роста, заместительного гормонального лекарственного средства, модулятора эстрогеновых рецепторов, мидриатика, средства против циклоплегии, алкилирующего средства, антиметаболита, ингибитора митоза, радиофармацевтического средства, антидепрессанта, средства против мании, антипсихотического средства,
анксиолитика, гипнотического средства, симпатомиметика, стимулирующего средства, донепезила, такрина, лекарственного средства от астмы, бета-агониста, стероида для ингаляции, ингибитора лейкотриена, метилксантина, кромолина, адреналина или аналога, дорназы альфа (пульмозим), цитокина или антагониста цитокина. Неограничивающие примеры таких цитокинов включают, но не ограничиваются ими, любой из от IL-1 до IL-23
(например, IL-I, IL-2 и т.д.). Пригодные дозы хорошо известны в данной области. См., например, Wells et al., eds. , Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Такие противоопухолевые или противоинфекционные средства также могут включать молекулы токсинов, которые ассоциированы, связаны, которые совместно составляют или совместно вводят по меньшей мере с одним антителом по настоящему изобретению. Действие токсина необязательно может быть направлено на селективное уничтожение патологической клетки или ткани. Патологическая клетка может представлять собой злокачественную или другую клетку. Такие токсины могут представлять собой, но
не ограничиваться ими, очищенный или рекомбинантный токсин или фрагмент токсина, содержащий по меньшей мере один функциональный цитотоксический домен токсина, например, выбранного по меньшей мере из одного из рицина, дифтерийного токсина, токсина змеиного яда или бактериального токсина. Термин токсин также включает как эндотоксины, так и экзотоксины, продуцируемые природными, мутантными или рекомбинантными бактериями или вирусами, которые могут вызывать любое патологическое состояние у человека и других млекопитающих, в том числе токсиновый шок, который может привести к смерти. Такие токсины могут включать, но не ограничиваться ими, термолабильный (LT) энтеротоксин энтеротоксигенных Е. coli, термостабильный энтеротоксин (ST) , цитотоксин Shigella, энтеротоксины Aeromonas, токсин-1 синдрома токсического шока (TSST-1; , стафилококковый энтеротоксин А (SEA), В (SEB) или С (SEC), стрептококковые энтеротоксины и т.п. Такие бактерии включают, но не ограничиваются ими, штаммы или виды энтеротоксигенных Е. coli (ЕТЕС) ,
энтерогеморрагических Е. coli (например, штаммы серотипа 0157:Н7), штаммы Staphylococcus (например, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes) , штаммы Shigella (например, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii и Shigella sonnei) , штаммы Salmonella (например, Salmonella typhi, Salmonella cholera-svis, Salmonella enteritidis) , штаммы Clostridium (например, Clostridium perfringens, Clostridium dificile, Clostridium botulinum) , штаммы Camphlobacter (например, Camphlobacter jejuni, Camphlobacter fetus), штаммы Heliobacter, (например, Heliobacter pylori) , штаммы Aeromonas (например, Aeromonas sobria, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae) i Pleisomonas shigelloides, Yersina enterocolitica, штаммы Vibrios (например, Vibrios cholerae, Vibrios parahemolyticus), штаммы Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa и Streptococci. См., например, Stein, ed. , INTERNAL MEDICINE, 3rd ed. , pp 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al. , eds., Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control, 2d. Ed., pp 239-254, Plenum Medical Book Co., New York
(1991); Mandell et al, Principles and Practice of Infectious Diseases, 3d. Ed., Churchill Livingstone, New York (1990); Berkow et al, eds., Tlie Merck Manual, 16th edition, Merck и Co., Rahway, NJ., 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology, 76:121-134 (1991); Marrack et al, Science, 248:705711 (1990), содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Соединения, композиции или сочетания антител против IL-23р19 по настоящему изобретению, кроме того, могут содержать по меньшей мере одно из любых пригодных дополнительных веществ, таких как, но не ограничиваясь ими, разбавитель, связующее вещество, стабилизатор, буферы, соли, липофильные растворители, консервант, адъювант или сходные с ними. Фармацевтически приемлемые дополнительные вещества являются предпочтительными. Неограничивающие примеры и способы получения таких стерильных растворов хорошо известны в данной области, такие как, но не ограничиваясь этим, Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Обычно можно выбирать фармацевтически приемлемые носители, которые являются приемлемыми для способа введения, растворимости и/или стабильности композиции антитела против IL-23р19, фрагмента или варианта, как хорошо известно в данной области или как описано в настоящем описании.
Фармацевтические эксципиенты и добавки, пригодные для композиции по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются ими, белки, пептиды, аминокислоты, липиды и углеводы (например, сахара, в том числе моносахариды, ди-, три, тетра- и олигосахариды; производные Сахаров, такие как альдиты, альдоновые кислоты, этерифицированные сахара и т.п.; и полисахариды или полимеры Сахаров), которые могут быть представлены отдельно или в сочетании, составляя отдельно или в сочетании 1-99,99% по массе или по объему. Иллюстративные белковые эксципиенты включают сывороточный альбумин, такой как сывороточный альбумин человека (HSA), рекомбинантный альбумин человека (гНА), желатин, казеин и т.п. Репрезентативные компоненты аминокислот/антител, которые также могут
функционировать с буферной емкостью, включают аланин, глицин, аргинин, бетаин, гистидин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, цистеин, лизин, лейцин, изолейцин, валин, метионин, фенилаланин, аспартам к т.п. Одной предпочтительной аминокислотой является глицин.
Углеводные эксципиенты, пригодные для применения в соответствии с этим изобретением, включают, например, моносахариды, такие как фруктоза, мальтоза, галактоза, глюкоза, D-манноза, сорбоза и т.п.; дисахариды, такие как лактоза, сахароза, трегалоза, целлобиоза и т.п.; полисахариды, такие как рафиноза, мелизитоза, мальтодекстрины, декстраны, крахмалы, и т.п.; и альдиты, такие как маннит, ксилит, мальтит, лактит, ксилит сорбит (глюцит), миоинозитол и т.п. Предпочтительные углеводные эксципиенты для применения в соответствии с настоящим изобретением представляют собой маннит, трегалозу и рафинозу.
Композиции антител против IL-23pl9 также могут включать буфер или изменяющее рН вещество; как правило, буфер представляет собой соль, полученную из органической кислоты или основания. Репрезентативные буферы включают соли органических кислот, такие как соли лимонной кислоты, аскорбиновой кислоты, глюконовой кислоты, угольной кислоты, виннокаменной кислоты, янтарной ?сислоты, уксусной кислоты или фталевой кислоты; Tris, гидрохлорид трометамина или фосфатные буферы. Предпочтительными буферами для применения в композициях по настоящему изобретению являются соли органических кислот, такие как цитрат.
Кроме того, композиции антител против IL-23pl9 по этому изобретению могут включать полимерные эксципиенты/добавки, такие как поливинилпирролидоны, фиколлы (полимерный сахар), декстраты (например, циклодекстрины, такие как 2-гидроксипропил-(3-циклодекстрин) , полиэтиленгликоли, вкусовые добавки, противомикробные средства, подсластители,
антиоксиданты, антистатические средства, поверхностно-активные вещества (например, полисорбаты, такие как "TWEEN 20" и "TWEEN 80"), липиды (например, фоефолипиды, жирные кислоты), стероиды (например, холестерин) и хелатирующие агенты (например, ЭДТА).
Эти и дополнительные известные фармацевтические эксципиенты и/или добавки, пригодные для применения в композициях антител против IL-23pl9, участков или вариантов в соответствии с этим изобретением известны в данной области, например, как приведено в "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19th ed. , Williams & Williams, (1995), и в "Physician's Desk Reference", 52nd ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), описания которых полностью включены в настоящее описание в качестве ссылок. Предпочтительные вещества носителей или эксципиентов представляют собой углеводы (например, сахариды и альдиты) и буферы (например, цитрат) или полимерные вещества. Иллюстративная молекула носителя представляет собой мукополисахарид, гиалуроновую кислоту, которые могут быть пригодны для внутрисуставной доставки.
Составы
Как указано выше, это изобретение относится к стабильным составам, которые предпочтительно содержат фосфатный буфер с физиологическим раствором или выбранной солью, а также к поддающимся хранению растворам и составам, содержащим консервант, а также к поддающимся хранению составам для многократного применения, пригодным для фармацевтического или ветеринарного применения, содержащим по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 в фармацевтически приемлемом составе. Поддающиеся хранению составы содержат по меньшей мере один известный консервант или необязательно выбранный из группы, состоящей из по меньшей мере одного из фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, нитрита фенилртути, феноксиэтанола, формальдегида, хлорбутанола, хлорида магния (например, гексагидрата), алкилпарабена (метил, этил, пропил, бутил и т.п.), хлорида бензалкония, хлорида бензетония, дегидроацетата натрия и тимеросала или их смесей в водном разбавителе. Можно использовать любую пригодную концентрацию или смесь, которые известны в данной области, такие как 0,0015%, или любой диапазон, значение, или часть в этой области. Неограничивающие примеры включают отсутствие консерванта, приблизительно 0,1-2% м-крезол (например, 0,2,
0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0% , приблизительно 0,1-3 бензиловый спирт (например, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5%), приблизительно 0,001-0,5% тимеросал (например, 0,005-1,0%), приблизительно 0,001-2,0% фенол (например, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0%), 0,0005-1,0% алкилпарабен(ы) (например, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0, 075, 0, 09, 0, 1, 0, 2, 0, 3, 0,5, 0, 75, 0, 9, 1, 0%) и т.п.
Как указано выше, это изобретение относится к изделию, содержащему упаковочный материал и по меньшей мере один флакон, содержащий раствор по меньшей мере одного антитела против IL-23р19 с предусмотренными буферами и/или консервантами, необязательно в водном разбавителе, где указанный упаковочный материал содержит этикетку, на которой указано, что такой раствор можно хранить в течение периода времени 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 часов или более. Кроме того, это изобретение относится к изделию, содержащему упаковочный материал, первый флакон, содержащий по меньшей мере одно лиофилизированное антитело против IL-23pl9, и второй флакон, содержащий водный разбавитель, состоящий из предусмотренного буфера или консерванта, где указанный упаковочный материал содержит этикетку, на которой приведена инструкция для пациента о том, что необходимо разбавить по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 антитело в водном разбавителе с получением раствора, который можно хранить в течение периода времени двадцать четыре часа или более.
По меньшей мере одно антитело против IL-23pl9, используемое в соответствии с настоящим изобретением, можно получать рекомбинантными способами, в том числе из клетки млекопитающего или трансгенных препаратов, или его можно очищать из других биологических источников, как описано в настоящем описании или как известно в данной области.
Количество по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 в продукте по настоящему изобретению включает количества, которые после разбавления приводят, в случае влажной/сухой системы, к концентрациям от приблизительно 1,0 мкг/мл до
приблизительно 1000 мг/мл, хотя более низкие и более высокие концентрации являются пригодными, и они зависят от предполагаемого носителя для доставки, например, составы раствора различаются для с юсоба с трансдермальным пластырем, легочного способа, способа доставки через слизистые, или осмотического способа или способа с микродозатором.
Предпочтительно водный разбавитель, кроме того, необязательно содержит фармацевтически приемлемый консервант. Предпочтительные консерванты включают консерванты, выбранные из группы, состоящей из фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, алкилпарабена (метил, этил, пропил, бутил и т.п.), хлорида бензалкония, хлорида бензетония, дегидроацетата натрия и тимеросала или их смесей. Концентрация консерванта, используемая в составе, представляет собой концентрацию, достаточную для достижения противомикробного эффекта. Такие концентрации зависят от выбранного консерванта, и их легко определит квалифицированный специалист.
В разбавитель необязательно и предпочтительно можно добавлять другие эксципиенты, например, изотонические вещества, буферы, антиоксиданты и усилители консервантов. Изотоническое вещество, такое как глицерин, широко используют в известных концентрациях. Физиологически допустимый буфер предпочтительно добавляют для обеспечения повышенного контроля рН. Составы могут охватывать широкий диапазон значений рН, такой как от приблизительно рН 4 до приблизительно рН 10, и предпочтительный диапазон составляет от приблизительно рН 5 до приблизительно рН 9, и наиболее предпочтительный диапазон составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 8,0. Предпочтительно составы по настоящему изобретению обладают рН между приблизительно 6,8 и приблизительно 7,8. Предпочтительные буферы включают фосфатные буферы, наиболее предпочтительно, фосфат натрия, в частности, фосфатно-солевой буфер (PBS).
В составы или композиции можно добавлять другие добавки, такие как фармацевтически приемлемые солюбилизаторы, такие как Tween 2 0 (лолиоксиэтилен (20) монолаурат сорбитана) , Tween 4 0 (полиоксиэтилен (20) монопальмитат сорбитана), Tween 80
(полиоксиэтилен (20) моноолеат сорбитана), Pluronic F68 (блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена) , и PEG
(полиэтиленгликоль) или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат 2 0 или 8 0 или полоксамер 184 или 18 8, полиолы Pluronic(r), другие блок-сополимеры и хелатирующие агенты, такие как EDTA и EGTA, для снижения агрегации. Эти добавки особенно пригодны Е случае, когда для введения состава используют дозатор или пластиковый контейнер. Наличие фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества снижает склонность белка к агрегации.
Составы по настоящему изобретению можно получать посредством процесса, который включает смешивание по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 и консерванта, выбранного из группы, состоящей из фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, алкилпарабена,
(метил, этил, пропил, бутил и т.п.), хлорида бензалкония, хлорида бензетония, дегидрсацетата натрия и тимеросала или их смесей в водном разбавителе. Смешивание по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 и консерванта в водном разбавителе проводят с использованием общепринятых способов растворения и смешивания:. Для получения пригодного состава, например, рассчитанное количество по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 в буферном растворе смешивают с требуемым консервантом в буферном растворе в количествах, достаточных для получения требуемой концентрации белка и консерванта. Варианты этого способа будут понятны среднему специалисту в данной области. Например, порядок добавления компонентов, использование дополнительных добавок, температура и рН, при которых получают состав, представляют собой факторы, которые можно оптимизировать для используемой концентрации и способа введения.
Заявленные составы могут быть предоставлены пациентам в виде прозрачных растворов или в виде двух флаконов, содержащих флакон по меньшей мере с одним лиофилизированным антителом против IL-23pl9, которое разбавляют находящейся во втором флаконе водой, консервантом и/или эксципиентами,
предпочтительно, фосфатным буфером и/или физиологическим раствором и выбранной солью, в водном разбавителе. Как флакон с единым раствором, так и два флакона, в случае которых требуется разбавление, можно повторно использовать несколько раз и их может быть достаточно для одного или нескольких курсов лечения пациента и таким образом, они могут обеспечить более удобную схему лечения, чем доступные в настоящее время средства.
Заявленные изделия по настоящему изобретению пригодны для введения в течение периода времени, находящегося в диапазоне от немедленного введения до двадцати четырех часов или более. Таким образом, заявленные изделия по настоящему изобретению обладают значительными преимуществами для пациента. Составы по этому изобретению необязательно могут безопасно храниться при температурах от приблизительно 2°С до приблизительно 40° С и сохранять биологическую активность белка в течение длительных периодов времени что, таким образом, позволяет указывать на этикетке на упаковке, что раствор можно хранить и/или использовать в течение периода времени 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 или 96 часов или более. Если используют поддающийся хранению разбавитель, то такая этикетка может включать указание о применении в течение вплоть до 1-12 месяцев, полугода, полутора и/или двух лет.
Растворы по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 по этому изобретению можно получать посредством процесса, который включает смешивание по меньшей мере одного антитела с водным разбавителем. Смешивание проводят с использованием общепринятых способов растворения и смешивания. Для получения пригодного разбавителя, например, рассчитанное количество по меньшей мере одного антитела в воде или буфере смешивают в количествах, достаточных для получения белка и, необязательно, консерванта или буфера в требуемых концентрациях. Варианты этого способа будут понятны среднему специалисту в данной области. Например, порядок добавления компонентов,
использование дополнительных добавок, температура и рН, при которых получают состав, представляют собой факторы, которые можно оптимизировать для используемой концентрации и способа
введения.
Заявленные продукты могут быть предоставлены пациентам в виде прозрачных растворов или в виде двух флаконов, содержащих флакон по меньшей мере с одним лиофилизированным антителом против IL-23pl9, которое разбавляют находящимся во втором флаконе водным разбавителем. Как флакон с единым раствором, так и два флакона, в случае которых требуется разбавление, можно повторно использовать несколько раз и их может быть достаточно для одного или нескольких курсов лечения пациента и таким образом, они могут обеспечить более удобную схему лечения, чем доступные в настоящее время схемы.
Заявленные продукты могут быть предоставлены не непосредственно пациентам, посредством снабжения аптек, клиник, или других таких институтов и учреждений прозрачными растворами или двумя флаконами, содержащими по меньшей мере одно лиофилизированное антитело против IL-23pl9, которое разбавляют водным разбавителем, находящимся во втором флаконе. Объем прозрачного раствора в этом случае может составлять вплоть до одного литра или даже более, что предусматривает большой резервуар, из которого меньшие порции по меньшей мере одного раствора антитела можно извлекать один или несколько раз для переноса в меньшие флаконы и распространять через аптеки или клиники среди их потребителей и/или пациентов.
Общепризнанные устройства, содержащие системы с одним флаконом, включают устройство для инъекций карандашного типа BD Pens, BD Autojector(r), Huraaject(r) NovoPen(r), B-D(r)Pen, AutoPen(r) и OptiPen(r), GenotropinPen(r), Genotronorm Pen(r), Humatro Pen(r), Reco-Pen(r), Roferon Pen(r), Biojector(r), Iject(r), J-tip Needle-Free Injector(r), Intraject(r), Medi-Ject(r), например, которые изготовлены и разработаны Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Switzerland, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oregon
(www.bioject.com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, UK, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www.mediject.com) и сходные пригодные устройства. Общепринятые устройства, содержащие систему с двумя
флаконами, включают системы для инъекций карандашного типа для разбавления лиофилизированного лекарственного средства в резервуаре для доставки оазбавленного раствора, такие как HumatroPen(r). Примеры друних пригодных устройств включают предварительно заполненные шприцы, автоматические устройства для инъекций, безыгольные у :тройства для инъекций и безыгольные устройства для внутривенных инфузий.
Продукты, заявленные в настоящей заявке, включают упаковочный материал. Упаковочный материал предусматривает, в дополнение к информации, которую требуют контролирующие органы, условия, в которых продукт можно использовать. Упаковочный материал по настоящему изобретению предусматривает инструкции для пациента о том, что необходимо разбавить по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 в водном разбавителе с получением раствора и использовать раствор в течение периода времени 2-24 часов или более для двух флаконов с жидким/сухим продуктом. В случае одного флакона с продуктом в виде раствора, на этикетке указывают, что такой раствор можно использовать в течение периода времени 2-24 часа или выше. Заявленные в настоящей заявке продукты пригодны для фармацевтического применения продукта у человека.
Составы по настоящему изобретению можно получать с помощью процесса, который включает смешивание по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 и выбранного буфера, предпочтительно, фосфатного буфера, содержащего физиологический раствор или выбранную соль. Смешивание по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 и буфера в водном разбавителе проводят с использованием общепринятых способов растворения и смешивания. Для получения пригодного состава, например, рассчитанное количество по меньшей мере одного антитела в воде или буфере объединяют с требуемым буферным веществом в воде в количествах, достаточных для получения белка и буфера в требуемых концентрациях. Варианты этого способа будут понятны среднему специалисту в данной области. Например, порядок добавления компонентов, использование дополнительных добавок, температура и рН, при которых получают состав, представляют собой факторы,
которые можно оптимизировать для используемой концентрации и способа введения.
Заявленные стабильные или поддающиеся хранению составы могут быть предоставлены пациентам в виде прозрачных растворов или в виде двух флаконов, содержащих флакон по меньшей мере с одним лисфилизированным антителом против IL-23pl9, которое разбавляют находящимся во втором флаконе консервантом или буфером и эксципиентами в водном разбавителе. Как флакон с единым раствором, так и два флакона, для которых требуется разбавление, можно повтори:" использовать несколько раз и их может быть достаточно для одного или нескольких курсов лечения пациента и таким образом, они могут обеспечить более удобную схему лечения, чем доступные в настоящее время схемы.
Другие составы или способы для стабилизации антитела против IL-23pl9 могут приводить к средству, отличному от прозрачного раствора лиофилизированного порошка, содержащего антитело. Среди непрозрачных растворов находятся составы, содержащие суспензии твердых частиц, где указанные твердые частицы представляют собой композицию, содержащую антитело против IL-23pl9, в виде структуры с непостоянными размерами и широко известной как микросфера, микрочастица, наночастица или липосома. Такие относительно гомогенные по существу сферические составы в виде твердых частиц, содержащие активное вещество, можно получать контактированием водной фазы, содержащей активное вещество, и полимера и неводной фазы с последующим выпариванием неводной фазы для обеспечения коалесценции частиц из водной фазы, как указано в U.S. 4589330. Пористые микрочастицы можно получать с использованием первой фазы, содержащей активное вещество, и полимера, диспергированного в однородном, растворителе, и с удалением указанного растворителя из суспензии посредством лиофилизации или разбавления-экстракции-осаждения, как указано в U.S. 4818542. Предпочтительные полимеры для такого осаждения представляют собой синтетические сополимеры или полимеры, выбранные из группы, состоящей из желатинового агара, крахмала, арабиногалактана, альбумина, коллагена, полигликолевой кислоты,
полимолсчной кислоты, гликолид-Ь-лактида полиэпсилон-
капролактона, сополимера эпсилон-капролактона и молочной кислоты, сополимера эпсилон-капролактона и гликолевой кислоты, поли-(3-гидроксимасляной кислоты, оксида полиэтилена,
полиэтилена,, полиалкил-2 -цианоакрилата,
полигидроксиэтилметакрилата, полиамидов, полиаминокислот, поли-2-гадроксиэтил-БЬ-аспартамида, полимера сложного эфира мочевины, поли-Ь-фенилаланин/этиленгликоль/1, 6-
диизоцианатгексана и полиметилметакрилата. Особенно
предпочтительными полимерами являются полимеры сложных эфиров, такие как полигликолевая кислота, полимолочная кислота, гликолид-Ь-лактид полиэпсилон-капролактона, сополимер эпсилон-капролактона и молочной кислоты, и сополимер эпсилон-капролактона и гликолевой ки;лоты. Растворители, пригодные для растворения полимера и/или активного вещества, включают: воду, гексафторизопропанол, метиленхлорид, тетрагидрофуран, гексан, бензол или сесквигидрат гексафторацетона. Процесс диспергирования содержащий активное вещество фазы со второй фазы может включать пропускание под давлением указанной первой фазы через отверстие в на ;адке для достижения образования капель.
Составы сухих порошкоз можно получать в результате процесса, отличного от лиофилизации, такого как высушивание распылением или экстракция растворителя посредством выпаривания или посредством осаждения кристаллической композиции с последующей одной или несколькими стадиями удаления водного или неводного растворителя. Получение высушенного распылением антитела описано в U.S. 6019968. Композиции сухих порошков на основе антитела можно получать с помощью высушивания распылением растворов и суспензий антитела и, необязательно, эксципиентов, в растворителе в условиях, позволяющих получить пригодный для вдыхания сухой порошок. Растворители могут включать полярные соединения, такие как вода и этанол, которые можно быстро высушить. Стабильность антител можно повышать посредством проведения процессов высушивания распылением в отсутствии кислорода, таких как, например, высушивание слоем
азота, или применением азота в качестве газа для высушивания. Другой относительно сухой состав представляет собой дисперсию множества перфорированных микроструктур, диспергированных в среде, которая, как правипо, содержат пропеллент на основе гидрофторалкана, как описано в W0 9916419. Стабилизированные дисперсии можно вводить в легкое пациента с использованием ингалятора с измеряемой дозой. Оборудование, пригодное для коммерческого изготовления высушенных распылением лекарственных средств изготавливают в Buchi Ltd. or Niro Corp.
По меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 либо в стабильных составах или в составах, поддающихся хранению, либо в растворах, описанных в настоящем описании, можно вводить пациенту в соответствии с настоящим изобретением посредством множества способов доставки, включая инъекцию SC или IM; трансдермальный, легочный способ, способ доставки через слизистую оболочку, способ посредством имплантата,
осмотического дозатора, кассеты, микродозатора или других способов, понятных специалисту в данной области, как хорошо известно в данной области.
Терапевтическое применение
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одного связанного с IL-23 заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или у пациента, как известно в данной области или как описано в настоящем описании, с использованием по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 по настоящему изобретению, например, посредством введения или контактирования клетки, ткани, органа, животного или пациента с терапевтически эффективным количеством антитела против IL-23pl9. Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одного связанного с IL-23 заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно заболевание из ожирения, опосредуемого иммунной системой заболевания, сердечно-сосудистого
заболевания, инфекционного заболевания, злокачественного заболевания или неврологического заболевания.
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одного связанного с IL-23 опосредуемого иммунной системой заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или у пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно заболевание из ревматоидного артрита, юзенильного ревматоидного артрита, ювенильного ревматоидного артрита с генерализованным началом, псориатического артрита, акилозирующего спондилита, язвы желудка, серонегативных артропатий, остеоартрита, остеолизиса, асептического ослабления ортопедических имплантатов,
воспалительного заболевания кишечника, язвенного колита, системной красной волчанки, антифосфолипидного синдрома, иридоциклита/увеита/оптического неврита, идиопатического
фиброза легких, системного васкулита/гранулематоза Вегенера, саркоидоза, орхита/обратных процессов при вазэктомии, аллергических/атопических заболеваний, астмы, аллергического ринита, экземы, аллергического контактного дерматита, аллергического конъюнктивита, пневмонита вследствие
гиперчувствительности, трансплантатов, отторжения
трансплантированного органа, реакции "трансплантат против хозяина", синдрома системного воспалительного ответа, септического синдрома, вызванного грамположительными
бактериями, сепсиса, вызванного грамотрицательными бактериями, негативного в отношении культуры сепсиса, вызванного грибами сепсиса, нейтропенической лихорадки, уросепсиса,
менингококкемии, травмы/геморрагии, ожогов, воздействия ионизирующей радиации, острого панкреатита, взрослого респираторного дистресс-синдрома, ревматоидного артрита, вызванного алкоголем гепатита, хронических воспалительных патологий, саркоидоза, болезни Крона, серповидно-клеточной анемии, диабета, нефроза, атопических заболеваний, реакций гиперчувствительности, аллергического ринита, сенной лихорадки, хронического ринита, конъюнктивита, эндометриоза, астмы, крапивницы, системной анафилаксии, дерматита, пернициозной анемии, гемолитического заболевания, тромбоцитопении,
отторжения трансплантата любого органа или ткани, отторжения
трансплантата почки, отторжения трансплантата сердца, отторжения трансплантата гечени, отторжения трансплантата поджелудочной железы, отторжения трансплантата легких, отторжения трансплантата костного мозга (ВМТ), отторжения аллотрансплантата кожи, отторжения трансплантата хряща, отторжения трансплантата кости, отторжения трансплантата тонкого кишечника, отторжения имплантата эмбрионального тимуса, отторжения трансплантата паращитовидной железы, отторжения ксенотрансплантата любого органа или ткани, отторжения аллотрансплантата, реакций гиперчувствительности протиЕ рецептора, болезни Грэйва, болезни Рейно, устойчивого к инсулину диабета типа В, астмы, миастении, опосредуемой антителами цитотоксичности, реакций гиперчувствительности III типа, синдрома POEMS (полиневропатия, органомегалия, эндокринопатия, моноклональн ая гаммопатия и синдром изменений кожи), полиневропатии, органомегалии, эндокринопатии,
моноклональной гаммопатии, синдрома изменений кожи, антифосфолипидного синдрома, пемфигуса, склеродермии,
смешанного заболевания соединительной ткани, идиопатической болезни Аддисона, диабета, хронического активного гепатита, первичного биллиарного цирроза, витилиго, васкулита, синдрома пост-Mi кардиотомии, гиперчувствительности IV типа, контактного дерматита, пневмонита вследствие гиперчувствительности, отторжения аллотрансплантата, гранулем вследствие
внутриклеточных организмов, чувствительности к лекарственному средству, метаболической/идиопатической болезни Вильсона, гемахроматоза, дефицита альфа-1-антитрипсина, диабетической ретинопатии, тиреоидита Хашимото, остеопороза, обследования гипоталамо-гипофизарно-надпочочениковой системы, первичного биллиарного цирроза, тиреоидита, энцефаломиелита, кахексии, кистозного фиброза, хронического заболевания легких новорожденных, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), семейного гематофагоцитарного лимфогистоцитоза, дерматологических состояний, псориаза, алопеции, нефротического синдрома, нефрита, гломерулярного нефрита, острой почечной недостаточности, гемодиализа, уремии, токсичности,
преэклампсии, терапии okt3, терапии против cd3, цитокиновой терапии, химиотерапии, лучевой терапии (например, включая, но не ограничиваясь ими, астению, анемию, кахексию и т.п.), хронической интоксикации салицилатами и т.п. См., например, Merck Manual, 12th-17th Editions, Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al, eds., Second Edition, Appleton и Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000), все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одного сердечнососудистого заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или у пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно заболевание из синдрома "оглушения" сердца, инфаркта миокарда, застойной сердечной недостаточности, инсульта, ишемического инсульта, коовоизлияния, острого коронарного синдрома, артериосклероза, атеросклероза, рестеноза,
диабетического атеросклеротического заболевания, гипертензии, артериальной гипертензии, вазоренальной гипертензии, обморока, шока, сифилиса сердечно-сосудистой системы, сердечной недостаточности, легочного сердца, первичной легочной гипертензии, аритмий сердца, эктопической экстрасистолии предсердий, трепетания предсердий, фибрилляции предсердий (постоянной или пароксизмальной), постперфузионного синдрома, воспалительного ответа на сердечно-легочный шунт, беспорядочной или многоочаговой тахикардии предсердий, регулярной тахикардии с узким QRS, определенных видов аритмий, фибрилляции желудочков, аритмий пучка Гиса, атриовентрикулярной блокады, блокады ножки пучка, ишемических нарушений миокарда, болезни коронарных артерий, стенокардии, инфаркта миокарда,
кардиомиопатии, застойной кардиомиопатии с дилятацией, кардиомиопатии с сужением, заболеваний клапанов сердца, эндокардита, заболевания перикарда, опухолей сердца, аневризмы аорты и периферических анезризм, расслоения аорты, воспаления аорты, окклюзии брюшного отдела аорты и ее ветвей, нарушений периферических сосудов, окклюзионных нарушений артерий,
периферического атеросклеротического заболевания,
облитерирующего тромбангиита, функциональных нарушений периферических сосудов, фенокена и болезни Рейно, акроцианоза, эритромеалгии, заболеваний вен, тромбоза вен, варикозного расширения вен, артериовено::: ного свища, лимфодермы, жирового отека, нестабильной стенокардии, реперфузионного повреждения, постперфузионного синдрома, повреждения вследствие ишемии-реперфузии и т.п. Такой способ необязательно может включать введение эффективного количества композиции или
фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9, в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, воздействии или терапии.
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одного связанного с IL-23 инфекционного заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно заболевание из: острой или хронической бактериальной инфекции, острого и хронического паразитарного или инфекционного процессов, включая бактериальные, вирусные и грибковые инфекции, ВИЧ инфекцию/ВИЧ невропатию, менингит, гепатит (например, А, В или С или сходные с ними), септический артрит, перитонит, пневмонию, эпиглоттит, е. coli 0157: h.7 , гемолитический уремический синдром/тромболитическую
тромбоцитопеническую пурпуру, малярию, геморрагическую лихорадку денге, лейшманиоз, лепру, синдром токсического шока, стрептококковый миозит, газовую гангрену, mycobacterium tuberculosis, mycobacterium avium intracellulare, пневмонию Pneumocystis carinii, воспалительное заболевание таза, орхит/эпидермит, легионеллу, болезнь Лайма, грипп, вирус Эпштейна-Барр, ассоциированный с вирусом гемофагоцитарный синдром, вирусный энцефалит/асептический менингит и т.п.
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения пс меньшей мере одного связанного с IL-23 злокачественного заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или у пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по
меньшей мере одно заболевание из: лейкоза, острого лейкоза, острого лимфобластного лейкоза (ALL), острого лимфоцитарногс лейкоза, В-клеточного, Т-клеточного или FAB ALL, остроге миелоидного лейкоза (AML , острого миелогенного лейкоза, хронического миелоцитарного лейкоза (CML), хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), волосатоклеточного лейкоза, миелодиспластического синдрома (MDS), лимфомы, болезни Ходжкина, злокачественной лимфомы, неходжскинской лимфомы, лимфомы Беркитта, множественной миеломы, саркомы Капоши, колоректальной карциномы, панкреатической карциномы,
назофарингеальной карциномы, злокачественного гистоцитоза, паранеопластического синдрома/гиперкальциемии при
злокачественной опухли, солидных опухолей, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака ободочной и прямой кишки, рака эндометрия, рака головы, рака шеи, наследственного неполипозного рака, лимфомы Ходжкина, рака печени, рака легкого, немелкоклеточного рака легкого, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы,
почечноклеточного рака, рака яичка, аденокарцином, сарком, злокачественной меланомы, гемангиомы, метастатизирующего заболевания, обусловленной злокачественной опухолью резорбции костей, обусловленной злокачественной опухолью болью в костях и т.п.
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одного связанного с IL-23 неврологического заболевания в клетке, ткани, органе, у животного или пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно заболевание из: нейродегенеративного заболевания, рассеянного склероза, мигренозной боли, СПИД-дементного комплекса, демиелинизирующего заболевания, такого как рассеянный склероз и острый поперечный миелит; экстрапирамидных и мозжечковых нарушений, таких как очаги повреждения в кортикоспинальной системе; нарушений базальных ганглиев; нарушений с гиперкинетическими движениями, таких как хорея Гентингтона и ^енильная хорея; индуцированных лекарственными средствами двигательных нарушений, таких как
нарушения, индуцированные лекарственными средствами, которые блокируют рецепторы для дофамина в ЦНС; гипокинетических двигательных нарушений, таких как болезнь Паркинсона; прогрессирующего супрануклеарного паралича; структурных очагов повреждения в мозжечке; спиномозжечковых дегенераций, таких как спинальная атаксия, атаксия Фридрейха, церебеллярные кортикальные дегенерации, множественные системные дегенерации (Менделя, Дежерина-Томаса, Шай-Дрэгера и Мачадо-Джозефа); системных нарушений (болезнь Рефсума, абеталипопротемия, атаксия, телеангиэктозия, митохондриальное мультисистемное нарушение); центральных демиелинизирующих нарушений, таких как рассеянный склероз, острый поперечный миелит; и нарушений мотонейрона, таких как неврогенные мышечные атрофии (клеточная дегенерация переднего рога, такая как боковой амиотрофический склероз, детская спинальная мышечная атрофия и ювенильная спинальная мышечная атрофия); болезни Альцгеймера; синдрома Дауна в среднем возрасте; диффузного заболевания с тельцами Леви; сенильной деменции по типу деменции с тельцами Леви; синдрома Вернике-Корсакова; хронического алкоголизма; болезни Крейтцфельда-Якоба; подострого склерозирующего панэнцефалита, болезни Галлервордена-Шпатца; деменции боксеров;
нейротр> авматического повреждения (например, повреждения спинного мозга, повреждения головного мозга, сотрясения мозга, повторного сотрясения мозга); боли; воспалительной боли; аутизма; депрессии; инсульта; когнитивных нарушений; эпилепсии и т.п. Такой способ необязательно может включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против TNF или определенный участок или вариант в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, воздействии или терапии. См., например, Merck Manual, 16th Edition, Merck & Company, Rahway, NJ (1992) .
Настоящее изобретение также относится к способу модулирования или лечения по меньшей мере одной связанной с IL-23 раны, травмы или повреждения ткани или сходного хронического состояния, в клетке, ткани, органе, у животного или пациента,
включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно из: телесного повреждения или травмы, ассоциированной с хирургической операцией Е полости рта, в том числе с периодонтальной хирургический операцией, удалением(ями) зуба, эндодонтическим лечением, вставкой зубных имплантатов, наложением и применением зубных протезов; или где рана выбрана из группы, состоящей из асептических ран, ушибленных ран, резаных ран, рваных ран, непроникающих ран, открытых ран, проникающих ран, сквозных оан, колющих ран, септических ран, инфекций и подкожных ран; или где рана выбрана из группы, состоящей из ишемических язв, пролежней, свищей, тяжелых укусов, термических ожогов и ран в области донорского лоскута; или где рана представляет еобой афтозную рану, травматическую рану или ассоциированную с герпесом рану.
Раны и/или язвы в норме находятся в качестве выступов на коже или на слизистой поверхности или в результате инфаркта в органе ("инсульта"). Рана м )жет быть результатом дефекта мягких тканей или очага повреждения или основного состояния. В контексте настоящего изобретения, термин "кожа" относится к самой внешней поверхности тела животного, в том числе человека, и охватывает неповрежденную или почти неповрежденную кожу, а также поврежденную поверхность кожи. Термин "слизистая оболочка" относится неповрежденной или поврежденной слизистой оболочке животного, такого как человек, и может представлять собой слизистую оболочку полости рта, щеки, уха, носа, легкого, глаза, желудочно-кишечного тракта, влагалища или прямой кишки.
В контексте настоящего изобретения термин "рана" означает телесное повреждение с разрушением нормальной целостности тканевых структур. Также подразумевают, что термин включает термины "очаг воспаления", "очаг повреждения", "некроз" и "язва". В норме, термин "очаг воспаления" является общим термином почти для любого очага повреждения кожи или слизистых оболочек и термин "язва" представляет собой локальный дефект поверхности органа или ткани или углубление, которое возникает вследствие отторжения некротической ткани. Очаг повреждения, как правило, относится к любому дефекту ткани. Некроз относится
к гибели ткани вследствие инфекции, повреждения, воспаления или инфарктов.
Термин "рана", используемый в контексте настоящего изобретения, означает любую рану (см. ниже классификацию ран) и находящуюся на любой конкретной стадии процесса заживления, Е том числе на стадии до начала какого-либо заживления или даже до получения определенного 'ранения, такого как хирургический разрез (профилактическое лечение). Примеры ран, которые можно предотвращать и/или лечить в соответствии с настоящим изобретением, например, представляют собой асептические раны, ушибленные оаны, резаные раны, рваные раны, непроникающие раны (т.е., раны, в которых нет разрушения кожи, однако есть повреждение лежащих ниже структур), открытые раны, проникающие раны, сквозные раны, колющие раны, септические раны, подкожные раны и т.д. Примерами очагов воспаления являются пролежни, афтозный стоматит, изъязвпение, герпетическая лихорадка, травматический дифтерит и т.д. Примерами язв являются, например, пептическая язва, дуоденальная язва, язва желудка, язва при подагре, диабетическая язва, гипертоническая ишемическая язва, варикозная язва, трофическая язва (венозная язва), подъязычная язва, язва подслизистой оболочки, симптоматическая язва, трофическая язва, тропическая язва и венерическая язва, например, вызванная гонореей (включая уретрит, эндоцервицит и проктит). Состояния, связанные с ранами или очагами воспаления, которые можно успешно лечить в соответствии с этим изобретением представляют собой ожоги, сибирскую язву, столбняк, газовую гангрену, скарлатину, рожу, сикоз, фолликулит, контагиозное импетиго или буллезное импетиго и т.д. Часто существует определенное совпадение в применении терминов "рана" и "язва", и "рана" и "очаг воспаления" и, более того, термины часто используют случайным образом. Таким образом, как упоминалось выше, в контексте настоящего изобретения термин "рана" включает термины "язва", "очаг повреждения", "очаг воспаления" и "инфаркт", и термины используют без проведения различий, если нет иных указаний.
Типы ран, подлежащие лечению в соответствии с этим
изобретением, также включают (i) неспецифические раны, такие как, например, хирургические, травматические, инфекционные, ишемические, термические, химические и буллезные раны; (ii) раны, специфичные для полости рта, такие как, например, постэкстракционные раны, эндодонтические раны, особенно связанные с лечением кист и абсцессов, язв и очагов повреждения бактериального, вирусного или аутоиммунного происхождения, механических, химических, термических, инфекционных и лихеноидных ран; конкретные примеры представляют собой герпетические язвы, афтозный стоматит, острый некротический язвенный гингивит и синдром жжения в полости рта; и (iii) раны кожи, такие как, например, неоплазия, ожоги (например химические, термические), очаги повреждения (бактериальный, вирусный, аутоиммунный), укусы и хирургические разрезы. Другим способом классификации является (i) небольшая потеря тканей вследствие хирургических разрезов, небольшие эрозии и небольшие укусы или (ii) значительная потеря тканей. Последняя группа включает ишемические язвы, пролежни, свищ, рваные раны, тяжелые укусы, термические ожоги и раны области донорского лоскута (в мягких и твердых тканях) и инфаркты.
Другие раны, которые представляют интерес с точки зрения настоящего изобретения, представляют собой раны, такие как ишемические язвы, пролежни, свищи, тяжелые укусы, термические ожоги и раны области донорского лоскута. Ишемические язвы и пролежни представляют собой раны, которые даже в норме заживают очень медленно, и в таких случаях, особенно, усовершенствованный и более быстрый процесс заживления, безусловно, имеет большое значение для пациента. Более того, затраты, связанные с лечением пациентов, страдающих от таких ран, значительно снижаются, если процесс заживления является усиленным и происходит более быстро.
Раны области донорского лоскута представляют собой раны, которые, например, возникают в связи с перемещением твердой ткани из одной части организма в другую часть организма, например, в связи с трансплантацией. Раны, возникающие вследствие таких операций, являются очень болезненными и
усиленное заживление, таким образом, является наиболее ценным. Термин "кожа" используют в наиболее широком смысле, охватывающем эпидермальный слой кожи и - в случаях, когда поверхность кожи является более или менее поврежденной, - также дермальный слой кожи. Помимо рогового слоя, эпидермальный слой кожи представляет собой наружный (эпителиальный слой), а более глубокий слой соединительной ткани кожи называют дермой.
Также настоящее изобретение относится к способу модулирования или лечения псориаза, псориатического артрита, болезни Крона, рассеянного склероза и оптического неврита, среди прочих заболеваний, представленных выше в качестве связанных с IL-23 заболеваний, в клетке, ткани, органе, у животного или пациента, включая, но не ограничиваясь ими, по меньшей мере одно из опосредуемого иммунной системой заболевания, сердечно-сосудистого заболевания, инфекций, злокачественного и/или неврологического заболевания. Такой способ необязательно может включать введение эффективного количества по меньшей мере одной композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, воздействии или терапии.
Любой способ по настоящему изобретению может включать введение эффективного количества композиции или
фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, воздействии или терапии. Такой способ необязательно может дополнительно включать совместное введение или комбинированную терапию для лечения такого заболевания или нарушения, где введение указанного по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, его определенного участка или варианта, кроме того, включает введение до, одновременно и/или после по меньшей мере одного средства, выбранного из по меньшей мере одного антагониста TNF (наприм.ер, но не ограничиваясь ими, химического или белкового антагониста TNF, моноклонального или поликлонального антитела
против TNF или фрагмента, растворимого рецептора для TNF (например, р55, р70 или р85) или фрагмента, его слитых полипептидов или низкомолекулярного антагониста TNF, например, связывающего TNF белка I или II (TBP-I или TBP-II), нерелимонмаба, инфликсимаба, этанерцепта (Enbrel(tm)) , адалимулаба (Humira(tm)) , CDP-571, CDP-870, афелимомаба, ленерцепта и т.п.), противоревматического сред ;тва (например, метотрексата, ауранофина, ауротиоглюкоза, азатиоприна, золота натрия тиомалата, гидроксихлорокзина сульфата, лефлуномида,
сульфасалзина), мышечного релаксанта, наркотического средства, нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (NSAID), обезболивающего средства, анестетика, седативного средства, местного анестетика, нервно-мышечного блокатора, противомикробного средства (например, аминогликозида,
противогрибкового средства, противопаразитарного средства, противовирусного средства, карбапенема, цефалоспорина,
фторхинслона, макролида, пенициллина, сульфонамида,
тетрациклина, другого противомикробного средства),
противопсориазного средства, кортикостероида, анаболического стероида, средства против диабета, минерального средства, питательного средства, средства для щитовидной железы, витамина, связанного с кальцием гормона, средства против диареи, средства против кашля, противорвотного средства, средства прютив язвы, слабительного средства, антикоагулянта, эритропоэтина (например, эпоэтина альфа), филграстима (например, G-CSF, Neupogen), сарграмостима (GM-CSF, Leukine), средства для иммунизации, иммуноглобулина, иммунодепрессанта (например, базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба) , гормона роста, заместительного гормонального лекарственного средства, модулятора рецепторов эстрогена, мидриатика, средства против циклоплегии, алкилирующего средства, антиметаболита, ингибитора митоза, радиофармацевтического средства, антидепрессанта, средства против мании, антипсихотического средства, анксиолитического средства, гипнотического средства,
симпатомиметика, стимулирующего средства, донепезила, такрина, лекарственного средства против астмы, бета-агониста, стероида
для ингаляции, ингибитора лейкотриена, метилксантина, кромолина, адреналина или аналога, дорназы альфа (пульмозима) , цитокина или антагониста цитокина. Пригодные дозы хорошо известны в данной области. См., например, Wells et al. , eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000); Nursing 2 0 01 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed. , Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Антагонисты TNF, пригодные для композиций, комбинированной терапии, совместного введения, устройств и/или способов по настоящему изобретению (кроме того, содержащих по меньшей мере одно антитело, его определенный участок и вариант по настоящему изобретению) включают, но не ограничиваются ими, антитела против TNF (например, по меньшей мере один антагонист TNF, как определено выше), их антигенсвязывающие фрагменты, и молекулы рецепторов, которые специфично связываются с TNF; соединения, которые предотвращают и/или ингибируют синтез TNF, его высвобождение TNF или его действие на клетки-мишени, такие как талидомид,, тенидап, ингибиторы фосфодиэстеразы (например, пентоксифиллин и ролипрам), агонисты рецепторов для аденозина А2Ь и усиливающие рецептор для аденозина А2Ь средства; соединения, которые предотвращают и/или ингибируют передачу сигнала рецептора для TNF, такие как ингибиторы киназы активируемого митогеном белка (MAP); соединения, которые блокируют и/или ингибируют расщепление мембранного TNF, такие как ингибиторы металлопротеиназы; соединения, которые блокируют и/или ингибируют активность TNF, такие как ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ) (например, каптоприл); и соединения, которые блокируют и/или ингибируют продукцию и/или синтез TNF, такие как ингибиторы MAP-киназы.
Как используют в настоящем описании, "антитело против фактора некроза опухоли", "антитело против TNF", "антитело
против TNFa" или фрагмент и т.п. снижает, блокирует, ингибирует, устраняет активность TNFa, или препятствует ей, in vitro, in situ и/или, предпочтительно, in vivo. Например, пригодное антитело против TNF человека по настоящему изобретению может связывать TNFa и включает антитела против TNF, их антигенсвязывающие фрагменты и их определенные мутантные формы или домены, которые специфично связываются с TNFa. Пригодное антитело против TNF или фрагмент также может снижать, блокировать, устранять, препятствовать, предотвращать и/или ингибировать синтез РНК, ДНК или белка TNF, высвобождение TNF, передачу сигнала рецептора TNF, расщепление мембранного TNF, активность TNF, продукцию и/или синтез TNF.
Примером антитела против TNF или антагониста TNF является химерное антитело сА2. Дополнительные примеры моноклональных антител против TNF, которые можно использовать в соответствии с настоящим изобретением, описаны в данной области (см. , например, патент США No. 5231024; Moller, A. et al. , Cytokine 2(3): 162-169 (1990); заявку США No. 07/943852 (поданную 11 сентября 19 92 года); Rathjen et al, международная заявка No. WO 91/02078 (опубликованная 21 февраля 1991 года); Rubin et al, патентная заявка ЕРО No. 0 218 868 (опубликованная 22 апреля 1987 года); Yone et al, патентная заявка ЕРО No. 0 288 088 (26 октября 1988 года); Liang, et al, Biochem. Biophys. Res. Comm. 737:847-854 (1986); Meager, et al, Hybridoma 5:305-311 (1987); Fendly et al. , Hybridoma 6:359-369 (1987); Bringman, et al. , Hybridoma 5:489-507 (1987); и Hirai, et al., J. Immunol. Meth. 96:57-62 (1987).
Молекулы рецептора для TNF
Предпочтительные молекулы рецептора для TNF, пригодные в соответствии с настоящим изобретением, представляют собой молекулы, которые связывают TNFa с высокой аффинностью (см., например, Feldmann et al., международную заявку No. WO 92/07076 (опубликованую 30 апреля 1992 года); Schall et al. , Cell 61:361-370 (1990); и Loetscher et al., Cell 57:351-359 (1990), все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме) и необязательно обладают низкой
иммуногенностью. В частно :ти, в соответствии с настоящим изобретением пригодными являются рецепторы клеточной поверхности для TNF массой 55 кДа (р55 TNF-R) и 75 кДа (р75 TNF-R). Укороченные формы этих рецепторов, содержащие внеклеточные домены (ECD) рецепторов или их функциональные части (см., например, Corcoran et al., Eur. J. Biochem. 223:831-84 0 (1994)), также являются пригодными в соответствии с настоящим изобретением. Уксроченные формы рецепторов для TNF, содержащие ECD, выявлены в моче и сыворотке в качестве ингибиторных связывающих TNFa белков массой 30 кДа и 4 0 кДа
(Engelmann, Н. et al, J. Biol. Chem. 255:1531-1536 (1990)). Мультимерные молекулы рецептора для TNF и слитые молекулы иммунорецептора для TNF, и производные и их фрагменты или участки, являются дополнительными примерами молекул рецептора для TNF, которые пригодны в способах и композициях по настоящему изобретению.
Мультимерные молекулы рецептора для TNF, пригодные в соответствии с настоящим изобретением, содержат целый ECD или функциональную часть ECD двух или более рецепторов для TNF, связанных с помощью одного или нескольких полипептидных линкеров или других непептидных линкеров, таких как полиэтиленгликоль (PEG). Примерами такой слитой молекулы иммунорецептора для TNF является слитый белок рецептор для TNF/IgG. Слитые молекулы иммунорецептора для TNF и способы их продукции описаны в данной области (Lesslauer et al, Eur. J. Immunol. 27:2883-2886 (1991); Ashkenazi et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535-10539 (1991); Peppel et al, J. Exp. Med. 174:1483-1489 (1991); Rolls et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:215-219 (1994); Butler et al, Cytokine 6(6):616-623
(1994); Baker et al, Eur. J. Immunol. 24:2040-2048 (1994); Beutler et al, патент США No. 5447851; и заявка США No. 08/442133 (поданная 16 мая 1995 года) , все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме). Способы получения слитых молекул иммунорецептора также можно найти в Capon et al, патент США No. 5116964; Capon et al, патент США No. 5225538; и Capon et al, Nature 337:525-531
(1989), все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Цитокины включают любые известные цитокины. См., например, Copewith.Cytokines.com. Антагонисты цитокинов включают, но не ограничиваются ими, любое антитело, фрагмент или миметик, любой растворимый рецептор, фрагмент или миметик, любой низкомолекулярный антагонист или любое их сочетание.
Терапевтические способы лечения Любой способ по настоящему изобретению может включать лечение опосредуемого IL-23 нарушения, включающее введение эффективного количества композиции или фармацевтический композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело против IL-23р19 в клетку, ткань, орган, животному или пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, воздействии или терапии. Такой способ необязательно может дополнительно включать совместное введение или комбинированную терапию для лечения таких заболеваний или нарушений, где введение указанного по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, его определенного участка или варианта, кроме того, включает введение до, одновременно и/или после по меньшей мере одного средства, выбранного из противоинфекционного лекарственного средства, лекарственного средства для сердечно-сосудистой (CV) системы, лекарственного средства для центральной нервной системы (ЦНС), лекарственного средства для автономной нервной системы (АНС), лекарственного средства для дыхательных путей, лекарственного средства для желудочно-кишечного (GI) тракта, гормонального лекарственного средства, лекарственного средства для жидкостного или электролитного баланса, гематологического лекарственного средства, противоопухолевого средства,
иммуномодулирующего лекарственного средства, лекарственного средства для глаз, ушей и носа, лекарственного средства для местного применения, диетологического лекарственного средства или сходных с ними, по меньшей мере одного антагониста TNF
(например, но не ограничиваясь ими, антитела или фрагмента против TNF, растворимого рецептора или фрагмента для TNF, их слитых белков или низкомолекулярного антагониста TNF) ,
противоревматического средства (например, метотрексата, ауранофина, ауротиоглюкозы, азатиоприна, этанерцепта, золота натрия тиомалата, гидроксихлороквина сульфата, лефлуномида, сульфасалзина), мышечного релаксанта, наркотического,
нестероидного противовоспалительного лекарственного средства (NSAID), обезболивающего средства, анестетика, седативного средства, местного анестетика, нервно-мышечного блокатора, противомикробного средства (например, аминогликозида,
противогрибкового средства, противопаразитарного средства, противовирусного средства, карбапенема, цефалоспорина, фторхинолона, макролида, пенициллина, сульфонамида,
тетрациклина, другого противомикробного средства),
противопсориазного средства, кортикостероида, анаболического стероида, относящегося к лечению диабета средства, минерального средства, питательного средства, средства для щитовидной железы, витамина, связанного с кальцием гормона, средства против диареи, средства против кашля, средства против рвоты, средства против язвы, слабительного средства, антикоагулянта, эритропоэтина (например, эпоэтина альфа), филграстима (например, G-CSF, Neupogen) , сарграмостима (GM-CSF, Leukine), средства для иммунизации, иммуноглобулина, иммунодепрессанта (например, базиликсимаба, циклоспорина, даклизумаба), гормона роста, заместительного гормонального лекарственного средства, модулятора рецепторов эстрогена, мидриатика, средства против циклоплегии, алкилирующего средства, антиметаболита, ингибитора митоза, радиофармацевтического средства, антидепрессанта, средства против мании, антипсихотического средства, анксиолитического средства, гипнотического средства,
симпатомиметика, стимулирующего средства, донепезила, такрина, лекарственных средств против астмы, бета-агониста, стероида для ингаляции, ингибитора лейкотриена, метилксантина, кромолина, адреналина или аналога, дорназы альфа (пульмозима), цитокина или антагониста цитокина. Такие лекарственные средства хорошо известны в данной области, включая составы, показания, дозирование и введение для каждого из представленных в настоящем описании (см., например, Nursing 2001 Handbook of
Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells et al. , ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме).
Как правило, лечение патологических состояний проводят посредством введения эффективного количества или дозы по меньшей мере одной композиции антитела против IL-23pl9, общее количестве которого, в среднем, находится в диапазоне по меньшей мере приблизительно от 0,01 до 500 миллиграмм по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 на килограмм пациента на дозу, и, предпочтительно, по меньшей мере приблизительно от 0,1 до 100 миллиграмм антитела/килограмм пациента для однократного или многократного введения в зависимости от специфичной активности активного вещества, содержащегося в композиции. Альтернативно эффективная сывороточная концентрация может включать концентрацию 0,1-5000 мкг/мл сыворотки для однократного или многократного введения. Пригодные дозы известны врачам и, безусловно, зависят от конкретной стадии заболевания, конкретной активности композиции, подлежащей введению, и конкретного пациента, подвергающегося лечению. В некоторых случаях для достижения требуемого терапевтического количества может быть необходимым проведение повторного введения, т.е., повторных отдельных введений конкретной контролируемой или измеренной дозы, где отдельные введения повторяют до достижения требуемой суточной дозы или эффекта.
Предпочтительные дозы могут необязательно включать приблизительно 0,1-99 и/или 100-500 мг/кг/введение, или любой диапазон, значение или часть этого диапазона, или количество для достижения концентрации в сыворотке приблизительно 0,1-5000 мкг/мл на однократное введение или многократные введения, или любой диапазон, значение или часть этого диапазона. Предпочтительный диапазон дозировки анититела против IL-23pl9 по настоящему изобретению составляет от приблизительно 1 мг/кг
100
до приблизительно 3, приблизительно б или приблизительно 12 мг/кг массы тела пациента.
Альтернативно вводимые дозы могут варьировать, в зависимости от известных факторов, таких как
фармаксдинамические свойства конкретного средства, и способ и путь его введения; возраст, состояние здоровья и масса реципиента; природа и степень выраженности симптомов, тип сопутствующего лечения, частота введения, и требуемый эффект. Как правило, доза активного ингредиента может составлять приблизительно от 0,1 до 100 миллиграмм на килограмм массы тела. Как правило, доза от 0,1 до 50, и, предпочтительно, от 0,1 до 10 миллиграмм на килограмм на одно введение или форму с замедленным высвобождением является эффективной для получения требуемых результатов.
В качестве неограничивающего примера, лечение человека или животных можно проводить в виде однократного или периодического дозирования по меньшей мере одного антитела по настоящему изобретению приблизительно от 0,1 до 100 мг/кг, или любой диапазон, значение или часть этого диапазона, в сутки, в течение по меньшей мере одного периода из 1-40 суток, или, альтернативно или дополнительно, по меньшей мере одного периода из 1-52 недель, или, альтернативно или дополнительно, по меньшей мере в течение одного периода из 1-20 лет, или любого их сочетания, с использованием однократной, инфузионной или повторяющейся доз.
Дозированные формы (композиции), пригодные для внутреннего введения, как правило, содержат от приблизительно 0,001 миллиграмм до приблизительно 500 миллиграмм активного ингредиента на единицу или контейнер. В этих фармацевтических композициях активный ингредиент, как правило, находится в количестве приблизительно 0,5-99,999% по массе от общей массы композиции.
В случае парентерального введения, антитело можно составлять в виде раствора, суспензии, эмульсии, частицы, порошка или лиофилизирюванного порошка, предоставляемого совместно с фармацевтически приемлемым парентеральным носителем
101
или отдельно от него. Примерами таких носителей являются вода, физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и приблизительно 1-10% сывороточный альбумин человека. Также можно использовать липосомы и неводные носители, такие как жирные масла. Носитель или лиофилизированный порошок может содержать добавки, которые поддерживают изотоничность (например, хлорид натрия, маннит) и химическую стабильность (например, буферы и консерванты). Состав стерилизуют известными или пригодными способами.
Пригодные фармацевтические носители описаны в самом последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, которое является стандартным руководством для ссылок в данной области.
Альтернативные способы введения
В соответствии с настоящим изобретением для введения фармацевтически эффективных количеств по меньшей мере одного антитела против IL-23p". 9 в соответствии с настоящим изобретением можно использовать множество известных и разработанных способов ведения. Несмотря на то, что в последующем описании используют легочный способ введения, в соответствии с настоящим изобретением можно использовать другие способы введения с приемлемыми результатами. Антитела против IL-23pl9 по настоящему изобретению можно доставлять в носителе, в качестве раствора, эмульсии, коллоида или суспензии, или в качестве сухого порошка с использованием любого из множества устройств и способов, пригодных для введения посредством ингаляции или других способов, описанных в настоящем описании или известных в данной области.
Парентеральные составы и введение
Составы для парентерального введения могут содержать в качестве общих эксципиентов стерильную воду или физиологический раствор, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения, гидрогенизированные нафталины и т.п. Водные или масляные :успензии для инъекции можно получать с использованием пригодного эмульгатора или увлажнителя и суспендирующего вещества, в соответствии с известными
102
способами. Средства для инъекции могут представлять собой нетоксичный не перорально вводимый разбавитель, такой как водный раствор, стерильный инъецируемый раствор или суспензия в растворителе. В качестве пригодного носителя или растворителя допустимы вода, раствор Рингера, изотонический физиологический раствор и т.д.; в качестве обычного растворителя или суспендирующего растворителя можно использовать стерильное нелетучее масло. Для этих целей, можно использовать нелетучее масло и жирную кислоту любого типа, в том числе нейтральные или синтетические или полусинтетические жирные масла или жирные кислоты; нейтральные или синтетические или полусинтетические моно- или ди- или триглицериды. Парентеральное введение известно в данной области и включает, но не ограничивается ими, общепринятые способы инъекций, безыгольное устройство для инъекций с давлением газа, как описано в патенте США. No. 5851198, и лазерное перфорационное устройство, как описано в патенте США No. 5839446, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
Альтернативные способы доставки Кроме того, это изобретение относится к введению по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 посредством парентерального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрисуставного, интрабронхиального, интраабдоминального, интракапсулярного, внутрихрящевого, внутриполостного,
внутрибркхнного, внутримозжечкового, интрацеребровентрикулярного способа, введения в толстую кишку, интрацервикального, внутрижелудочного, внутрипеченочного, внутримиокардиального, внутрикостного, внутритазового, интраперикардиального,
внутрибрюшинного, интраплеврального способа, введения в простату, внутрилегочного, интраректального, интраренального, интраретинального, интраспинального, интрасиновиального,
внутригрудного, внутриматочного, внутрипузырного способа, введения внутрь пораженных тканей, болюсного, вагинального, ректального способа, буккельного, подъязычного, интраназального или чрескожного способов. По меньшей мере одну композицию антитела против IL-23pl9 можно получать для применения с
103
парентеральным (подкожным, Енутримышечным или внутривенным) или любым другим способом введения, особенно в форме жидких растворов или суспензий; для применения с вагинальным или ректальным способом введения, особенно в полутвердых формах, таких как, но не ограничиваясь ими, кремы и суппозитории; с буккальным введением или сублингвальным введением, таким как, но не ограничиваясь ими, Е форме таблеток или капсул; или с интраназальным способом, таким как, но не ограничиваясь ими, формы порошков, капель в .нос или аэрозолей или определенных средств; или с чрескожным способом, таким как, но не ограничиваясь ими, гель, мазь, лосьон, суспензия или система для доставки посредством пластыря с химическими усиливающими доставку веществами, такими как диметилсульфоксид, либо для модификации структуры кожи, либо для повышения концентрации лекарственного средства в трансдермальном пластыре (Junginger, et al. In "Drug Permeation Enhancement"; Hsieh, D. S., Eds., pp. 59-90 (Marcel Dekker, Inc. New York 1994, включенная в настоящее описании в качестве ссылки в полном объеме), или с окисляющими средствами, которые облегчают нанесение составов, содержащих белки и пептиды, на кожу (WO 98/53847), или посредством применения электрического поля для обеспечения временных транспортных путей, таких как электропорация, или для повышения подвижности заряженных лекарственных средств через кожу, таких как ионофорез, или посредством применения ультразвука, такого как сонофорез (патенты США No. 4309989 и 4767402) (приведенные выше публикации и патенты включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме).
Легочное/назальное введение 3 случае легочного введения, предпочтительно, по меньшей мере одну композицию антитела против IL-23pl9 доставляют в виде частиц с размером, эффективным для достижения наиболее низких дыхательных путей легкого или пазух. В соответствии с этим изобретением, для введения лекарственного средства посредством ингаляции по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 можно доставлять с помощью любого из множества устройств для ингаляции или назальных устройств, известных в данной области.
104
Эти устройства, способные приводить к оседанию распыленных составов в полости пазухи лли альвеолах пациента, включают ингаляторы с измеряемой дезой, устройства для распыления, генераторы сухих порошков, распылителей и т.п. Другие устройства, пригодные для обеспечения легочного или назального введения антител также известны в данной области. Во всех таких устройствах можно использовать пригодные для введения составы для измельчения антитела Е аэрозоль. Такие аэрозоли могут состоять либо из растворов как водных, так и неводных), либо из твердых частиц.
В ингаляторах с измеряемой дозой, таких как ингалятор с измеряемой дозой Ventolin(r), как правило, используется газ для распыления, и для них требуется воздействие в процессе вдыхания (См., например, WO 94/16970, WO 98/35888). В ингаляторах для сухого порошка, таких как Turbuhaler(tm) (Astra), Rotahaler(r) (Glaxo), Diskus(r) (Glaxo), ингалятор Spiros(tm) (Dura), устройства, поставляемые Inhale Therapeutics, и ингалятор для порошка Spinhaler(r) (Fisons) , осуществляют воздействие при вдохе смешанного порошка (US 4668218 Astra, ЕР 237507 Astra, WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 Inhale, WO 94/06498 Fisons, включенные в настоящее описании в качестве ссылок в полном объеме). Устройства для распыления, такие как AERx(tm) Aradigm, устройство для распыления Ultravent(r) (Mallinckrodt), и устройство для распыления Acorn II(r) (Marquest Medical Products) (US 5404871 Aradigm, WO 97/22376), все из указанных выше ссылок включены в настоящее описании в полном объеме, производят аэрозоли из растворов, в то время как ингаляторы с измеряемой дозой и т.д. формируют аэрозоли в виде мелких частиц. Подразумевают, что эти конкретные примеры коммерчески доступных устройств для ингаляции, являются репрезентативными примерами конкретных устройств, пригодных для применения на практике этого изобретения, и они не предназначены для ограничения объема этого изобретения.
Предпочтительно, композицию, содержащую по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9, доставляют посредством ингалятора с сухим порошком или устройства для распыления.
105
Существует несколько желательных характеристик устройства для ингаляции в целях введения по меньшей мере одного антитела по настоящему изобретению. Например, доставка с помощью устройства для ингаляции преимущественно является надежной,
воспроизводимой и точной. Устройство для ингаляции необязательно может доставлять частицы небольших размеров, например, менее чем приблизительно 10 мкм, предпочтительно приблизительно 1-5 мкм, для возможности правильного вдыхания. Введение композиций антитела против IL-23pl9 в качестве
аэрозоля
Аэрозоль, содержащий композицию антитела против IL-23pl9, можно получать посредством пропускания суспензии или раствора по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 через распылитель под давлением. Для достижения требуемого выхода и размера частиц размер и форму распылителя, применяемое давление и скорость подачи жидкого вещества можно подбирать. Электрораспыление можно проводить, например, с помощью электрического поля, соединенного с устройством для подачи в виде капилляра или распылителя. Предпочтительно, частицы по меньшей мере одной композиции антитела против IL-23pl9, доставленные с помощью устройства для распыления, обладают размером частиц менее приблизительно 10 мкм, предпочтительно, в диапазоне приблизительно от 1 мкм до приблизительно 5 мкм, и, наиболее предпочтительно, приблизительно от 2 мкм до приблизительно 3 мкм.
Составы по меньшей мере одной композиции антитела против IL-23pl9, пригодные для применения с устройством для распыления, как правило, включают композиции антитела в водном растворе в концентрации от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 100 мг по меньшей мере одной композиции антитела против IL-23pl9 на мл раствора или мг/г, или любой диапазон, значение или часть этого диапазона. Состав может включать вещества, такие как эксципиент, буфер, изотоническое вещество, консервант, поверхностно-активное вещество, и, предпочтительно, цинк. Также состав может включать эксципиент или вещество для стабилизации композиции антитела, такое как буфер,
106
восстановитель, объемный белок или углевод. Объемные белки, пригодные для составления композиций антитела, включают альбумин, протамин или сходные с ними. Типичные углеводы, пригодные для составления композиций антитела, включают сахарозу, маннит, лактозу, трегалозу, глюкозу или сходные с ними. Состав композиции антитела также может включать поверхностно-активное вещество, которое может снижать или предотвращать поверхностно-индуцируемую агрегацию композиции антитела, вызванную распылением раствора при образовании аэрозоля. Можно использовать различные общепринятые поверхностно-активные вещества, такие как сложные эфиры жирных кислот и спиртов полиоксиэтилена, и сложные эфиры жирных кислот сорбита полиоксиэтилена. Количества, как правило, находятся в диапазоне между 0,001 и 14% по массе состава. Особенно предпочтительные поверхностно-активные вещества для целей этого изобретения представляют собой моноолеат сорбитана полиоксиэтилена, полисорбат 80, полисорбат 20 или сходные с ними. Дополнительные вещества, известные в данной области для составления белка, такие как антитела против IL-23pl9, или определенные участки или варианты, также можно включать в состав.
Введешие композиций антитела против IL-23pl9 с помощью устройства для распыления
Композиции антитела по этому изобретению можно вводить посредством устройства для распыления, такого как струйное устройство для распыление или ультразвуковое устройство для распыления. Как правило, в струйном устройстве для распыления используют источник сжатого воздуха для создания воздушного потока через отверстие с высокой скоростью. По мере того, как газ расширяется после распылителя, создается область с низким давлением, которая прокачивает раствор композиции антитела через капиллярную трубку, соединенную с емкостью с жидкостью. При нахождении в трубке поток жидкости из капиллярной трубки разделяется на нестабильные струи и капли создавая аэрозоль. Для достижения требуемых эксплуатационных характеристик из данного струйного устройства для распыления можно использовать
107
ряд форм, скоростей потока и типов дефлектора. В ультразвуковом устройстве для распыления, используют высокочастотную электрическую энергию для достижения вибрационной механической энергии, как правило, с использованием пьезоэлектрического преобразователя. Эту энергию передают составу композиции антитела, либо непосредственно, либо посредством передающей жидкости, получая аэрозоль, включающий композицию антитела. Предпочтительно, частицы композиции антитела, доставляемые посредством устройства для распыления, обладают размером частиц менее чем приблизительно 10 мкм, предпочтительно, в диапазоне от приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм, и, наиболее предпочтительно, приблизительно от 2 мкм до приблизительно 3 мкм.
Составы по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, пригодные для применения совместно с либо струйным, либо ультразвуковым устройством для распыления, как правило, включают концентрацию от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 100 мг по меньшей мере одного белка антитела против IL-23pl9 на мл раствора. Состав может включать вещества, такие как эксципиент, буфер, изотоническое вещество, консервант, поверхностно-активное вещество, и, предпочтительно, цинк. Также состав может включать эксципиент или вещество для стабилизации композиции по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, такие как буфер, восстановитель, объемный белок или углевод. Объемные белки, пригодные для составления композиции по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 включают альбумин, протамин или сходные с ними. Типичные углеводы, пригодные для составления по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 включают сахарозу, маннит, лактозу, трегалозу, глюкозу или сходные с ними. Состав по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 также может включать поверхностно-активное вещество, которое может снижать или предотвращать поверхностно-индуцируемую агрегацию по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9, вызываемую распылением раствора при образовании аэрозоля. Можно использовать различные общепринятые поверхностно-активные вещества, такие как сложные эфиры жирных
108
кислот и спиртов полиоксиэтилена, и сложные эфиры жирных кислот сорбита полиоксиэтилена. Количества, как правило, находятся в диапазоне между приблизительно 0,001 и 14% по массе состава. Особенно предпочтительные поверхностно-активные вещества для целей этого изобретения представляют собой моноолеат сорбитана полиоксиэтилена, полисорбат 80, полисорбат 20 или сходные с ними. Также в состав можно включать дополнительные вещества, известные в данной области, для составления белка, такие как антитела против IL-23pl9, или определенные участки или варианты.
Введение композиции антитела против IL-23pl9 посредством ингалятора с измеряемой дозой
В ингаляторе с измеряемой дозой (MDI), пропеллент, по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 и любые эксципиенты или другие добавки находятся в контейнере в виде смеси, включающей сжиженный сжатый газ. Действие дозирующего клапана приводит к высвобождению смеси в качестве аэрозоля, предпочтительно содержащего частицы с размером, находящимся в диапазоне от менее чем приблизительно 10 мкм, предпочтительно, приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм, и, наиболее предпочтительно, от приблизительно 2 мкм до приблизительно 3 мкм. Требуемый размер частиц аэрозоля можно получать с использованием состава композиции антитела, изготавливаемого различными способами, известными специалистам в данной области, включающие измельчение на струйной мельнице, высушивание распылением, конденсацию в критической точке или сходные с ними. Предпочтительные ингаляторы с измеряемой дозой включают ингаляторы, изготавливаемые ЗМ или Glaxo, и в которых применяют пропеллент на основе гидрофторуглерода. Составы по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 для применения совместно с устройством для ингаляции с измеряемой дозой, как правило, включают высокодисперсный порошок, содержащий по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 в виде суспензии в неводной среде, например, суспендированное в пропелленте с помощью поверхностно-активного вещества. Пропеллент может представлять собой любое общепринятое вещество, используемое для этой цели,
109
такое как хлорфторуглерод, гидрохлорфторуглерод,
гидрофторуглерод или углеводород, в том числе трихлорфторметан, дихлордифторметан, дихлортетрафторэтанол и 1,1,1,2-
тетрафторэтан, HFA-134a (гидрофторалкан-134а) , HFA-227 (гидроф|Торалкан-227) или входные с ними. Предпочтительно, пропеллент представляет собой гидрофторуглерод. Поверхностно-активное вещество можно выбирать для стабилизации по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 в виде суспензии в пропелленте для защиты активного вещества от химической деградации и т.п. Пригодные поверхностно-активные вещества включают триолеат сорбитана, соевый лецитин, олеиновую кислоту или сходные с ними. В некоторых случаях, раствор аэрозоля является предпочтительным с использованием растворителей, таких как этанол. Дополнительные вещества, известные в данной области для составления белка, также можно включать в состав. Средний специалист в данной области поймет, что способы по настоящему изобретению можно осуществлять посредством легочного введения композиции по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 посредством устройств, которые не описаны в настоящем описании.
Пероральные составы и введение Составы для перорального введения основаны на совместном введении адъювантов (например, резорцина и неионных поверхностно-активных веществ, таких как олеиловый эфир полиоксиэтилена и эфир н-гексадецилполиэтилена) для искусственного повышения проницаемости стенок кишечника, а также на совместном введении ингибиторов ферментов (например, ингибиторов панкреатического трипсина, диизопропилфторфосфата (DFF) и тразилола) для ингибирования ферментативной деградации. Составы для доставки гидрофильных веществ, включающих белки и антитела и сочетание по меньшей мере двух поверхностно-активных веществ, предназначенные для перорального введения, введения на слизистую, для назального, легочного, вагинального, трансмембранного или ректального введения описаны в патенте США 6309663. Активный компонент соединения дозированной формы твердого типа для перорального введения можно смешивать по меньшей мере с одной добавкой, в том числе с сахарозой,
110
лактозой, целлюлозой, маннитом, трегалозой, рафинозой, мальтитом, декстраном, крахмалами, агаром, аргинатами, хитинами, хитозанами, пектинами, трагакантовой камедью, гуммиарабиком, желатином, коллагеном, казеином, альбумином, синтетическим или полусинтетическим полимером и глицеридом. Эти дозированные формы также могут содержать добавки другого типа (ОБ), например, неактивный разбавитель, смазывающее вещество, такое как стеарат магния, парааминобензойная кислота, консервант, такой как сорбиновая кислота, аскорбиновая кислота, альфа-токоферол, антиоксидант, такой как цистеин,
дезинтегрирующее вещество, связующее вещество, загуститель, буферное средство, подсластитель, вкусовую добавку, ароматизирующую добавку и т.д.
Таблеткам и пилюлям можно дополнительно придавать форму покрытых растворимой в кишечнике оболочкой препаратов. Жидкие препараты для перорального введения включают эмульсию, сироп, эликсио, суспензию и растворимые препараты, приемлемые для медицинского применения. Эти препараты могут содержать неактивные разбавители, обычно используемые в указанной области, например, воду. Также в качестве систем для доставки лекарственного средства для инсулина и гепарина описаны липосомы (патент США No. 4239754). Позднее, для доставки фармацевтических средств применили микросферы из искусственных полимеров смешанных аминокислот (протеноидов) (патент США No. 4925673) . Более того, в данной области известны соединения носителей описанные в патенте США No. 587 9681 и патенте США No. 558717 53 и используемые для пероральной доставки биологически активных веществ.
Составы и введение на слизистую оболочку
Состав для перорального введения биологически активного вещества инкапсулируют в один или несколько эксципиентов на основе биологически совместимых полимеров или сополимеров, предпочтительно, биологически деградируемого полимера или сополимера, с получением микрокапсул, которые вследствие соответствующего размера полученных микрокапсул приводят к достижению веществом скоплений лимфатических фолликулов и
Ill
захвату вещества скоплениями лимфатических фолликулов, иначе известных как "Пейеровы бляшки" или "GALT" животного без утраты эффективности при прохождении вещества через желудочно-кишечный тракт. Сходные скопления лимфатических фолликулов можно найти в бронхиальных трубках (BALT) и в толстом кишечнике. Описанные выше ткани, как правило, называют ассоциированными со слизистой оболочкой лимфоретикулярными тканями (MALT). Для всасывания через поверхности слизистых оболочек, композиции и способы введения по меньшей мере одного антитела против IL-23pl9 включают эмульсию, содержащую множество субмикронных частиц, мукоадгезивную макромолекулу, биологически активный пептид и водную однородную фазу, которая обеспечивает всасывание через поверхности посредством осуществления адгезии к слизистой оболочке частиц эмульсии (патенты США No. 5514670). Поверхности слизистых оболочек, пригодные для применения эмульсий по настоящему изобретению, могут включать корнеальный, конюнктивальной способ введения, введение на слизистую оболочку щеки, сублингвальный, назальный, вагинальный, легочный, желудочный, кишечный и ректальный способы введения. Составы для вагинального или ректального введения, например, суппозитории, в качестве эксципиентов могут содержать, например, полиалкиленгликоли, вазелин, масло какао и т.п. Составы для интраназального введения могут представлять собой твердые составы и в качестве эксиипиентов могут содержать, например, лактозу, или они могут представлять собой водные или масляные растворы в виде капель для носа. В случае введения на слизистую оболочку щеки, эксципиенты включают сахара, стеарат кальция, стеарат магния, прежелатинизированный крахмал и т.п. (патенты США No. 5849695) .
Трансдермальные составы и введение В случае чрескожного введения, по меньшей мере одно антитело против IL-23pl9 инкапсулируют в средство для доставки, такое как липосома или полимерные наночастицы, микрочастица, микрокапсула или микрссферы (в собирательном значении обозначаемые как микрочастицы, если нет иных указаний). Известно множество пригодных средств, включающих микрочастицы,
112
изготовленные из синтетических полимеров, таких как полигидроксикислоты, такие как полимолочная кислота, полигликолевая кислота и их сополимеры, полиортоэфиры, полиангидриды и полифосфазены и нейтральные полимеры, такие как коллаген, полиаминокислоты, альбумин и другие белки, альгинат и другие полисахариды и их сочетание (патенты США No. 5814599) . Введение и составы для пролонгированного введения Может быть желательной доставка соединения по настоящему изобретению субъекту в течение пролонгированных периодов времени, например, в течение периодов от одной недели до одного года при однократном введении. Можно использовать различные дозированные формы с замедленным высвобождением, депонируемые или имплантируемые дозированные формы. Например, дозированная форма может содержать фармацевтически приемлемую нетоксичную соль соединений, которая обладает низкой растворимостью в жидкостях организма, например, (а) кислотно-аддитивную соль с многоосновной кислотой, такой как фосфорная кислота, серная кислота, лимонная кислота, виннокаменная кислота, таниновая кислота, памовая кислота, альгиновая кислота, полиглутаминовая кислота, нафталин монс- или ди-сульфоновые кислоты, полигалактуроновая кислота и т.п.; (Ь) соль с поливалентным катионом металла, такого как цинк, кальций, висмут, барий, магний, алюминий, медь, кобальт, никель, кадмий и т.п., или с органическим катионом, образованным, например, из N,N'-дибензил-этилендиамина или этилендиамина; или (с) сочетание (а) и (Ь) , например, соль танната цинка. Кроме того, соединения по настоящему изобретению или, предпочтительно, относительно нерастворимая соль, такая как соли, описанные выше, может быть изготовлена в геле, например, в геле моностеарата алюминия, например, с кунжутным маслом, пригодным для инъекции. Особенно предпочтительные соли представляют собой соли цинка, соли танната цинка, соли памоата и т.п. Другой тип депонируемого состава с замедленным высвобождением для инъекций может содержать соединение или соль, диспергированную для инкапсулирования в медленно деградируемом нетоксичном неантигенном полимере, таком как полимер полимолочной кислоты и
113
полигликолевой кислоты, например, как описано в патенте США No. 3773919. Соединения или, предпочтительно, относительно нерастворимые соли, такие как соли, описанные выше, также можно изготавливать в драже на основе силастика с холестериновым матриксом, в частности, для применения у животных. Дополнительные составы с медленным высвобождением, депонируемые или имплантируемые составы, например, газовые или жидкостные липосомы, известны в литературе (патенты США No. 5770222 и "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J.R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc, N. Y., 1978).
После описания, в целом, этого изобретения, оно будет более понятным с помощью следующих примеров, которые предоставлены в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения..
Примеры
Пример 1 - Выделение человеческих специфичных антител против IL-2 3 с помощью фагового дисплея
Основные способы описаны для селекции антигенспецифичных антител из библиотек HuCAL(tm), созданных в MorphoSys (Knappik et al., 2 0 00; Krebs et al., 2 001; Rauchenberger et al, 2003). Для селекции антител против рекомбинантного IL-23 человека (hrlL-23) использовали специфичные к Vh-участку субпулы библиотеки HuCAL Gold(tm) Fab (Kretzschmar & von Ruden, 2002) . Использовали несколько различных стратегий селекции и они включают:
1. Селекцию против рекомбинантного белка hIL-23, который был иммобилизован непосредственно на пластике, с предварительной адсорбцией библиотеки на рекомбинантный белок IL-12 человека (hrIL-12), также адсорбированном непосредственно на пластике, или без нее. Рекомбинантные белки hIL-2 3 и hIL-12 были получены в Centocor.
2. Селекцию с рекомбинантным человеческим белком IL-23 в растворе, с последующим выделением связанного фага захватом белка hIL-23 иммобилизованным hrlL-12p40mAb. Селекцию проводили с предварительной адсорбцией библиотеки на рекомбинантном белке hrIL-12, захваченным тем же mAb, либо без нее.
3. Се;лекцию с химически биотинилированным белком hrIL-23 в
114
растворе, с последующим улавливанием связанного фага покрытыми SA магнитными гранулами. Селекцию проводили с белком hrIL-12, или без него в молярном избытке, в качестве конкурента.
Выделенную фагмидную ДНК превращали целиком в экспрессирующий Fab вектор, и отдельные клоны после трансформации подвергали скринингу в отношении связывания с hrIL-23 и не с hrIL-12. Секвенирование положительных клонов выявило 7 6 уникальных Fab.
Пример 2 - Охарактеризацля Fab
Получали положительные Fab и очищали как описано ранее (Knappik et al., 2000; Rrebs et al., 2001; Rauchenberger et al, 2003) и специфичность связывания с hrIL-23 но не с hrIL-12 или с субединицей р40 hrIL-12 (hrp40) подтверждали в анализах, сходных с анализами, описанными в примере 3, ниже. Подтвержденные Fab тестировали в отношении (1) ингибирования связывания hrIL-23 с человеческим рецептором для IL-23 (hlL-23R) или с человеческим рецептором для IL-12(31 (hIL-12R|31) , (2) отсутствия ингибирования связывания hrIL-12 с IL-12RIL(3l, (3) ингибирования связывания hrIL-23 с клетками TALL-104 естественным образом экспере ^сирующих IL-23R и IL-12R|31, и (4) аффинность связывания с hrIL-23, hrIL-12 и субъединицей hrp40. Специфичность и аффинность связывания приведена в таблице 1 и ингибирование связывания hrIL-23 с hIL-23R приведено в таблице 2. Fabl2A в таблице 1 представляет собой стандарт для сравнения, источником которого является специфичное к IL-12p40 mAb. IL-23R-Fc в таблице 2 представляет собой стандарт для сравнения, соответствующий внеклеточному домену IL-23R человека, слитому с Fc человека.
Главным образом, анализы ингибирования рецептора были сходными с анализами, описанными ниже в примере 4 для производных mAb для этих Fab. Один дополнительный анализ проводили для измерения ингибирования связывания rh.IL-2 3 с клетками TALL 104. Эти клетки экспрессируют как IL-23 человека, так и рецепторы для IL-12R-6eTa 1. 10 из 13 Fab-кандидатов обладали требуемым профилем активности, представляющим собой отсутствие реактивности с белками IL-12 или р40 человека в
115
любом анализе, и по меньшей мере частичным ингибированием связывания hrIL-23 с рецептором для IL-23. Последовательности CDR шести из Fab (4083, 4190, 4205, 4217, 4649 и 4658) представлены в таблице 4 (полужирный шрифт). Полные последовательности V-области для этих Fab представлены в таблице 8.
Продукция Fab в форме IgGl человека
Fab-кандидаты клонировали в векторы для структур mAb IgGl/каппа или лямбда и продуцировали временной трансфекцией в клетках НЕК293 для последующего анализа в качестве mAb. В общем, одиннадцать из 13 активных Fab показывают требуемый профиль в качестве mAb. Они являются специфичными для к IL-2 3 и по меньшей мере частично ингибируют связывание IL-2 3 человека с слитым белком человеческий IL-23R-FC (таблица 3). Анализы и их результаты приведены в следующих ниже примерах.
Пример 3 - Специфичнс > сть к субъединицам hIL-23p!9 mAb, полученного посредством фагового дисплея антитела.
Очищенные mAb мыши против hIL-2 3 оценивали в анализе улавливания ELISA в целях определения их антигенной специфичности к субъединицам. В кратком изложении, mAb против IL-23 наносили на планшеты и инкубировали со 100 нг/мл hrIL-23, hrIL-12 и hrp40, соответственно. После инкубации с биотинилированным mAb против-р4 0, связывание подвергали детекции с использованием HRP-конъюгированного стрептавидина. mAb против-р40 и mAb против IL-12 (20С2, Catalog No. 555065, BD Pharmingen, San Diego, CA) с известной специфичностью использовали в качестве контролей.
На фиг.1А и 1В показана специфичность связывания для двух из этих mAb, MOR04083 (то же что и 4083) и MOR04190 (то же что и 4190). На фиг.1А показано, что mAb специфично связывают hrlL-23, но не hrIL-12 или мономер hrp40. Поскольку для секреции из клеток млекопитающих субъединица IL-23pl9 должна ковалентно связываться с р40, mAb против IL-23, которые не распознают мономер р4 0, должны связывать либо субъединицу IL-23pl9 отдельно, либо объединенный эпитоп гетеродимера р19-р40. Таким образом, эти IL-23 mAb обозначают как mAb против IL-23pl9. При
116
сравнении, все 3 белка (hrIL-23, hrIL-12 и hrp40) связывались с mAb 12А, специфичным нейтрализующим антителом против р4 0 человека. На фиг.1В показано, что указанные mAb не связываются с мышиным IL-23 или с мышиным р40. Наоборот, иммобилизованные mAb обладают сходными кривыми связывания с hrIL-2 3 в растворе
(фиг.2), что согласуется с их сравнимой с Fab аффинностью связывания (таблица 1). Специфичность связывания этих и других mAb-кандидатов приведена в таблице 3.
Пример 4 - Ингибирование связывания рецептора для IL-23 посредством mAb против IL-23pl9
Для того чтобы показать, что mAb против IL-23pl9 представляют собой нейтрализующие антитела против субъединицы р19, mAb тестировали в отношении ингибирования ими связывания IL-23 и IL-23R. В этом эксперименте, слитый белок IL-23R-FC человека иммобилизовывали на планшете. Этот слитый белок состоит из внеклеточного домена рецептора для IL-23 человека, слитого с Fc-сегментом человека. В планшет добавляли биотинилизованный hrIL-2 3 либо отдельно, либо после предварительной инкубации с индивидуальными mAb против IL-23р19. Е качестве положительного контроля использовали растворимый IL-23R (IL-23R-FC). Связывание IL-23 выявляли с помощью HRP-конъюгированного стрептавидина. Как показано на фиг.ЗА, mAb MOR04083 и MOR04190 препятствуют связыванию IL-23/IL-23R с эффективностью, приблизительно в 3 раза меньшей эффективности растворимого IL-23R-FC Не происходило ингибирования посредством В21М, mAb с неродственной специфичностью. Напротив, когда IL-12R(31 иммобилизовывали на планшете, эти mAb не ингибировали связывание IL-23/IL-12R(31
(фиг.ЗВ)). Связывание IL-2 3 ингибировалось нейтрализующим р4 0 mAb CNTO 1275 (то же что и mAb 12А), как и ожидали. Аналогично, эти mAb не блокируют связывание IL-12/IL-12R(31 (фиг.ЗС). CNTO 1275 снова служило в качестве положительного контроля. Селективное ингибирование связывания IL-23/IL-23R и отсутствие противодействия связываник IL-12 или IL-23 с IL-12R|31 далее показывает, что эти mAb против IL-23pl9 не связывают субъединицу р4 0 и, таким образом, представляют собой
117
нейтрализующие антитела против IL-23pl9 человека. Исследования ингибирования рецептора с этими mAb обобщены в таблице 3.
Пример 5 - Нейтрализация биологической функции IL-2 3 посредством mAb против IL-23pl9
Известно, что IL-23 индуцирует внутриклеточное
фосфорилирование STAT3 и продукцию IL-17 Т-клетками. Таким образом, mAb против IL-23pl9 тестировали в отношении их способности ингибировать эти биологические функции IL-23 человека.
В одном эксперименте, естественные киллерные (NKL) клетки стимулировали hrIL-23 либо отдельно, либо после предварительной инкубации с mAb MOR04083 и MORO 190 в концентрации 20 мкг/мл и 10 мкг/мл, соответственно. MAb 12А (1 мкг/мл) представляло собой положительный контроль, и С8.3 (10 мкг/мл), нейтрализующее mAb против р4 0 человека, представляло собой отрицательный контроль. Обработанные клетки окрашивали конъюгированными с флуорохромом антителами против фосфо-БТАТЗ и анализировали посредством внутриклеточной проточной цитометрии (Фиг.4). Эти mAb полностью ингибируют фосфорилирование STAT3, хотя и с более низкой эффективностью, чем нейтрализующее mAb 12А против р40. Более низкая эффективность IL-23pl9 mAb, вероятно, отражает их относительно слабую аффинность. В другом эксперименте, свежие выделенные спленоциты мыши обрабатывали hrIL-23, предварительно инкубированным с титрованными mAb против IL-23pl9 или контрольными mAb. hrIL-23 без предварительной инкубации с антителом использовали в качестве положительного контроля. После 3 суток в культуре, клеточные супернатанты собирали и анализировали посредством ELISA с использованием двойного набора IL-17 ELISA (R &D Systems). Как показано на фиг.5А, mAb против IL-23pl9 MOR04083 и MOR04190 ингибировали опосредуемую hrIL-23 продукцию IL-17. Также эти mAb ингибировали продукцию IL-17, индуцированную нативным IL-23, продуцированным РВМС человека (фиг.5В) и яванской макаки (фиг.5С).
Для сравнения, IL-23pl9 mAb тестировали в отношении их способности ингибировать индуцируемую hrIL-12 продукцию IFNy. В
118
кратком изложении, клетки NK92MI обрабатывали IL 12, предварительно инкубированным с титрованными mAb против IL-23р19 или контрольными mAb (фиг.б). В качестве отрицательного контроля использовали IL-12 без предварительной инкубации с антителом, и в качестве положительного контроля использовали CNTO 1275. Анализ ELISA, проведенный через 24 часа после стимуляции, показал отсутствие эффекта mAb против IL-23pl9 MOR04083 и 4190 на индуцируемую IL-12 продукцию IFNy, демонстрируя, что антитела не связывают и не нейтрализуют субъединицу р4 0, общую для IL-12 и IL-23. Результаты этих анализов приведены в таблице 3.
Пример 6- Идентификация эпитопа mAb против IL-23pl9 Конкурентный анализ связывания проводили в целях определения наличия связывания mAb против IL-23pl9 со сходными или отличающимися эпитопами IL-23pl9. Результаты для mAb MOR04083, MOR04190 и MORC4217, представлены на фиг.7. mAb против IL--2 3 наносили по отдельности на планшеты для ELISA. Добавляли конкурирующие mAb, а затем добавляли
биотинилированный hrIL-23. Для положительного контроля, в качестве конкурирующего mAb использовали то же mAb, что и для нанесения ("собственная конкуренция"). Связывание IL-23 выявляли с использованием стрептавидина. Все три mAb показывают перекрестную конкуренцию в различной степени, демонстрируя связывание с пространственно разделенными участками.
Пример 7 - Созревание аффинности нейтрализующих Fab-кандидатов
Fab MOR04083, 04190, 04649 и 04658 выбирали для независимого созревания аффинности на основе указанной выше охарактеризации как Fab, так и mAb. С использованием кассетного элемента системы HuCal(tm) (Knappik et al. , 2 0 00), конструировали два варианта фаговых библиотек для каждого Fab, один для CDR3 вариабельного участка легкой цепи (VL) и другой для CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи (VH). Эти библиотеки подвергали селекции претив биотинилированного hrIL-23 в растворе при промывании и концентрации антигена различной строгости. Было выделено i5 уникальных Fab, каждый из которых
119
показывал повышенную активность связывания относительно исходного родительского Fab. После этого во втором раунде скрининга было выбрано три дополнительных Fab (52 67, 5268 и 5269; все варианты VL-CDR3 4083). Последовательности CDR исходных Fab, производные по-ле созревания из библиотек VL-CDR3 или VH-CDR2, и варианты этих последовательностей представлены в таблицах 4А и В. Полные последовательности V-области представлены в таблице 8.
Пример 8 - Продукция и охарактеризация Fab после созревания аффинности
3 8 выбранных Fab продуцировали, очищали и
охарактеризовывали по существу как описано в примерах 2-4, выше. Десять из Fabs привели к небольшому выходу и/или показали гетерогенные паттерны при гель-фильтрации, и они были исключены из последующего анализа. Остальные 28 Fab анализировали в отношении специфичности связывания, аффинности и ингибирования связывания рецептора. Все Fab были специфичными к IL-23pl9 и обладали в 10-500 раз большей аффинностью к hrIL-23, чем соответствующий исходный Fab (таблицы 5 и 6) . Все из них показали повышенные значения IC50 в отношении ингибирования связывания hrIL-23 со слитым белком IL-23R-FC и, подобно исходным Fab, не ингибировали связывание ни IL-23, ни IL-12 со слитым белком рецептора для IL-12Rbl и Fc (таблицы 5 и 6) . Как и ожидали из этих результатов, ни один Fab не ингибировал связывание hrIL-23 с клетками TALL-104, как определяли проточной цитометрией, что согласуется со сходным отсутствием ингибирования исходными Fab.
Пример 9 - Продукция и охарактеризация АЬ после созревания аффинности в форме mAb
34 из 35 выбранных Fab клонировали в структуры векторов mAb IgG/каппа или лямбда и продуцировали в виде mAb посредством временной трансфекции в клетках НЕК2 93 для последующего анализа. Все антитела оценивали в отношении ингибирования продукции IL-17, как описано в примере 5, выше (таблица 7). В большинстве случаев, каждое из производных после созревания было более эффективным, чем их соответствующее исходное
120
антитело, с повышением IC50 вплоть до 200 раз. Биохимические свойства 3 4 mAb оценивали посредством SDS-PAGE и гель-фильтрации в отношении признаков агрегации, гетерогенности цепей, и неполного образевания дисульфидных связей между тяжелыми и легкими цепями в шарнирной области.
Исходя из комбинированного анализа активности и биохимического анализа, было выбрано 7 mAb для более детального анализа, по меньшей мере по одному от каждого исходного родительского антитела. Антитела MOR05058 и 05059, полученные из библиотек разнообразия VL CDR3 MOR04 64 9, исключали из этого набора (см. примеры 10 и 11) . Все выбранные кандидаты ингибировали продукцию IL-17, индуцированную природным IL-23 из РВМС человека (фиг.8) и яванской макаки (не представлено). Как и ожидалось, все они ингибировали связывание hrIL-23 со слитым белком hrIL-23R и Fc с эффективностью, превышающей эффективность контрольного mAb против IL-23A (фиг.9). С возможным исключением MOR05053, эти выбранные mAb не ингибировали биологическую активность нативного IL-12 (не представлено) , что согласуется с отсутствием связывания тех mAb, доступных в качестве Fab, с белком hrIL-12.
Пример 10 - Продукция и охарактеризация комбинированных mAb с перекрестными цепями
Исходные Fab MOR04190, 04649 и 4658 приводили к улучшенным Fab из библиотек разнообразия как VH CDR2, так и VL CDR3. Fab, образованные из MOR04 64 9, представляли особый интерес вследствие относительно высокой активности из библиотек обоих типов. Однако исходный Fab MOR04 64 9 содержит предсказанный, но потенциально неблагоприятный участок N-связанного
гликозилирования в VH CDR2, который не представлен в каком-либо из 6 улучшенных Fab, образованных из библиотеки VH CDR2. Для удаления этого участка гликозилирования и тестирования в отношении потенциальной улучшенной активности, тяжелые цепи MOR05042 и 0504 5 экспрессировали с легкими цепями MOR05058 и 5059 в клетках НЕК293 (таблица 4С - mAb 42-58, 42-59, 45-58 и 45-59). Ни одно из сочетаний не было более эффективными антагонистами (продукция IL-17 и ингибирование связывания IL-23
с IL-23R), чем соответствующие mAb донорной цепи и посредством гель-фильтрации все из них показали большую тенденцию к агрегации (не представлено).
Пример 11 - Мутагенез с замещением выбранных mAb после созревания и их охарактеризация
Аминокислотные замены вносили в выбранные mAb в целью устранения предсказанного участка N-связанного гликозилирования и/или для соответствия N-концов вариабельных участков их наиболее близкой последовательности V-области эмбрионального типа человека. Предсказанный участок N-связанного
гликозилирования в Vh 50 58 и 5059 ("NYS" в CDR2, то же, что и в исходном Vh MOR04 64 9) устраняли замещением аргинина (4649г) или аспарагиновой кислоты (4 64 9d) аспарагином в положении 59 (прямая нумерация). Последовательности CDR этих VH-участков представлены в таблице 4А и полные последовательности V-области приведены в таблице 8. Эти варианты продуцировали временной экспрессией в клетках НЕК 2 93 и очищали аффинной хроматографией с белком А. Эти mAb показали повышенную эффективность относительно исходных антител в отношении их ингибирования продукции IL-17. Замещение аргинина в MOR05059 имело наилучший профиль, исходя из активности и биохимической охарактеризации, и это mAb назвали 3759 (таблица 4С).
MAb 5040 и 3759 выбирали в качестве наивысших позиций, исходя из их активности и биохимической охарактеризации. Аминокислотные замены вносили для соответствия
последовательности антитела эмбрионального типа человека и замену одной аминокислоты проводили в = VL-участке 504 0 для обратной мутации каркасной области до эмбрионального типа, замещая валин треонином в положении 86.
Аминокислотные последовательности, измененные по сравнению с исходным mAb, были следующими:
Антитело VH VL
5040 Е(3) на Q D(l) на Е, Е(86) на V
3759 Q(1'E(3) на EQ D(1)I(2) на QS
Замена ЕЗ на Q в VH обоих антител представляет собой обратную замену Е, внесенную при клонировании Fab в вектор для
122
mAb. В этом положении в исходных Fab находилась Q и ее можно использовать в качестве варианта для замещения Е в различных mAb. Эти варианты обозначают как 5040Q/EV и 3759EQ/QS. Составляющими V-областями 5(40Q/EV являются 5040 VH и 4190EV VL (таблица 4С) . Составляющим "''-областями 3759EQ/QS являются 4б49гЕ VH и 5059QS VL (таблица 4С) . Последовательности CDR и полных V-участков составляющих цепей обоих антител представлены в таблицах 4 и 8, соответственно. Сходные замены можно идентифицировать для любого из кандидатов посредством сравнения с их предсказанными последовательностями эмбрионального типа человека.
mAb 5040Q/EV и 3759EQ/QS продуцировали посредством временной экспрессии в клетках НЕК 29 3 и очищали аффинной хроматографией с белком А. Эти mAb полностью сохраняют специфичность к IL-23 человека относительно IL-12 и р40, как представлено на фиг.10. Эти mAb ингибируют связывание рекомбинантного IL-23 человека с IL-23R-FC и являются более эффективными, чем контроль, тАЬ23А (фиг. НА) . Как ожидалось из профиля их специфичности, они не ингибируют связывание IL-23 (фиг. 11В) или IL-12 (фиг. НС) с IL-12R(31. В соответствии с этим паттерном ингибирования рецептора, эти mAb не ингибируют индуцируемой IL-12 продукции IFNy из клеток NK92M1 (фиг.12), но они ингибируют индуцируемую как рекомбинантным (фиг.13), так и нативным (фиг.14) IL-23 продукцию IL-17 из спленоцитов мыши. Также эти mAb показывают очень сильное ингибирование индукции IL-17 нативным IL-23 яванской макаки (фиг.15), демонстрируя высокую степень перекрестной реактивности с IL-23 из яванской макаки. Также эти mAb ингибировали фосфорилирование STAT3, индуцированное в NK-клетках рекомбинантным IL-23 человека (не представлено).
mAb 504 0Q/EV и 37 5 9EQ/QS распознают близко расположенные эпитопы на IL-23, как показали по их ингибированию связывания тАВ23А (фиг.1бА) и их реципрокной конкуренции друг с другом (фиг.16В и 16С) . Эпитоп тАЬ23А был картирован на р19 человека в области I93-G105:
I93HQGLIFYEKLLG105 •
Результаты конкуренции показывают, что эпитопы для mAb
123
5040Q/EV и 3"'59EQ/QS находятся F- одном участке.
Пример 12 - Варианты кодирующих последовательностей для mAb 504C)Q/EV и 3759EQ;QS и их охарактеризация.
Кодирующую последовательность вариабельных участков антител встраивали в три различных варианта кодирующих последовательностей в целях оценки влияния на экспрессию этих белков. В первом варианте использовались кодоны, полученные из исходной библиотеки, с несколькими нуклеотидными заменами для удаления консенсусных участков сплайсинга мРНК. Второй вариант, замену кодона эмбрионального типа (GCE), конструировали выравниванием аминокислотной последовательности вариабельного участка с генами эмбрионального типа, идентифицируя наиболее близкое совпадение гена эмбрионального типа, и заменой кодонов в исходной кодирующей последовательности синонимическими кодонами, которые используют в гене эмбрионального типа. В положениях, где аминокислотный остаток не имел совпадений с генами эмбрионального типа, кодоном, который используется с наибольшей частотой в высоко экспрессируемых белках человека, заменяли исходный кодон. Третий вариант кодонов конструировали заменой исходных кодонов антитела кодоном, который используется с наибольшей частотой в высоко экспрессируемых белках человека. Каждый вариант кодона экспрессировался, как определяли посредством временной трансфекции в клетках НЕК 293 и клетках СНО. Этот результат показывает, что в этих, и вероятно других клетках-хозяевах могут быть установлены трансфектанты стабильной клеточной линии, и вариант с наиболее высокой экспрессией можно использовать для разработки продуцирующей клеточной линии. mAb оценивают, как описано в примере 11, в дополнение к другим функциональным анализам и анализам биохимических и биофизических свойств. В таблице 9 показаны вариабельные нуклеотидные последовательности тяжелой и легкой цепей для вариантов mAb 5040Q/EV и 3759EQ/QS.
Для целей этого изобретения, 70-100% аминокислотную или нуклеотидную идентичность последовательностей (т.е., 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 или любой диапазон или значение в этом диапазоне) определяют с использованием
124
пригодного компьютерного алгоритма, как известно в данной области.
Пример 13 - Антитело против IL23pl9 в модели псориаза на
мышах
Вариант mAb 3759EQ/0S оценивали в отношении его способности подавлять признаки псориаза в гуманизированной модели на мышах. Неповрежденную кожу от пациентов с псориазом трансплантировали иммунодефицитным мышам и, после приживления трансплантатов, запускали псориатический процесс посредством внутрикожной инъекции аутологичных активированных Т-клеток. Мышей лечили внутрибрюшинным введением один раз в неделю 10 мг/кг антитела. Контрольным мышам вводили носитель или циклоспорин А. Массу тела мышей оценивали раз в неделю.
После 3 недель введения, мышей умерщвляли и трансплантированные биоптаты кожи оценивали в отношении толщины эпидермы, цитокератина-16 и количеств положительных по HLA-DR и Ki-67 клеток в эпидермисе.
Это исследование показывает, что антитело против IL23pl9 является эффективным в отношении ингибирования утолщения эпидермы и пролиферации кератиноцитов (например, окрашивание Ki-67) в дозировка 10 мг/кг. Степень ингибирования была сравнима с ингибированием, достигаемым с помощью циклоспорина А. Введение антитела не было ассоциировано со значительным подавлением НЪА-DR или цитокератина-16. Введение циклоспорина А также не оказывало значимого эффекта на HLA-DR и цитокератин-16. Эти данные подтверждают, что антитело может быть эффективным для подавления гиперплазии эпидермы при псориазе. Гуманизированная модель псориаза на мышах основана на экспериментах Wrone-Smith et al. 1996 Dennal injection ofimmunocytes induces psoriasis. J. Clin. Invest. 98:1878-1887. Эта модель представляет собой единственную доступную доклиническую модель, в которой эффекты лекарственных средств на разЕ1Итие псориатического повреждения человека можно подвергать мониторингу in vivo. Для осуществления этой модели, неповрежденные биоптаты ксжи (5 мм) от пациентов-добровольцев с псориазом трансплантируют иммунодефицитным реципиентным мышам.
Одновременно, пациенты служат донорами крови, из которой выделяют мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и замораживают. РВМС стимулируют суперантигеном в течение 4 8 часов перед внутрикожнсй инъекцией в аутологичную трансплантированную кожу i 3 недели после трансплантации) . Инъецированные активированные клетки реагируют с кожей человека, что приводит к гиперпролиферации эпидермиса. Очаг повреждения характеризуется удлиненными выступами
(нерегулярными и регулярными) и выраженной гиперплазией эпидермиса кератиноцитов с измененной дифференцировкой.
Материалы и способы
Тестируемое вещество.
Молекулярная масса АЬ: 150,000 дальтон. Растворимость в воде: 2 0 мг/мл. Сопровождающий контроль: PBS. Контрольное соединение: Циклоспорин А. Молекулярная масса: 1202,63 дальтон. Поставщик: Wako GmbH. Номер партии: EWP5926. Каталожный номер: 039-16301. Условия хранения: 2-10°С.
Носитель для контрольного соединения:
Гидроксипропилцеллюлоза (НРС).
Поставщик: Nippon Soda Co., Ltd Japan. Номер партии: HPC-L 9004-64-2. Каталожный номер: NDA-1011. Условия хранения: ±21°С
Тестируемое вещество тестировали в гуманизированной модели псориаза на мышах в одном веществе состава. Соединения хранили при 4°С до применения. Циклоспорин А и раствор гидроксипропилцеллюлозы (носитель CsA) предоставляли и изготавливали в TNO. 0,5% гидроксипропилцеллюлозу изготавливали в дистиллированной воде и стерилизовали при температуре 120°С в течение 2 5 минут. После стерилизации, НРС хранили при 4°С до применения. Непосредственно перед внутрибрюшинным введением, требуемое количество CsA взвешивали и смешивали с
126
использованием ступки. Стабильную гомогенную суспензию получали смешиванием требуемого количества размолотого CsA с носителем НРС до общего объема 200 мкл на мышь (ресуспендировали в течение нескольких секунд перец введением). Мыши
Номенклатура: NiH-lystbg Foxnlnu Btkxid, код штамма 201 (гомозиготный) Источник: наиболее часто называемый NIH-III, был разработан в National Institutes of Health, Bethesda. В дополнение к гену nude, который приводит к отсутствию тимуса и Т-клеточной функции, эта мышь обладает двумя другими мутациями, важными для регуляции функции иммунной системы. Их обозначали как x-linked immune defect (xad) и beige (bg). Мыши beige имеют тяжелый дефицит естественных киллерных (NK) клеток (Roder et al, 197 9) . Мыши с мутацией x:;.d имеют функциональные дефекты в В-лимфоцитах (Scher et al, 1980) . Этот тройной дефицит оказывает тот эффект, что эти мыши могут служить в качестве хозяев для опухолевых линий, которые не будут расти или растут очень медленно у мышей nude. Пересадка мышам bg-nu-xid гемопоэтических стволовых клеток человека описана Kamel-Reid and Dick (1988). Степень Т-независимых дефицитов В-лимфоцитов и NK-клеток у NIH-III не была определена. Цвет: лишенные волос, кожа, пигментированная от светло-серого до темно-серого цвета.
Самцы мышей BNX (NIH III, гомозиготные), в возрасте 8 недель поставлялись Charles River (US) и доставлялись в TNO. Их акклиматизировали к лабораторным условиям в течение по меньшей мере 7 суток перед трансплантацией. Мышей держали в вентилируемых комнатах, с воздухообменом, составляющим 9-11 в час, и поддерживали при температуре 22 ± 3°С и относительной средней влажности 55% (40-70?). Освещение было искусственным с последовательностью 12 часов света и 12 часов темноты. Перед трансплантацией мышей по отдельности содержали в клетках из макролона 2 типа на опилках. После трансплантации мышей содержали по отдельности в вентилируемых клетках. Данные о состоянии здоровья этих мышей, полученные от поставщика, показали отсутствие патогеноЕ в этих животных.
Перед трансплантацией у мышей, их подвергали
127
акклиматизации в течение 1 нецели. После трансплантации, мышей с приживленными трансплантатами (как оценивали при макроскопическом обследовании в отношении общего внешнего вида, повреждений, ран, уплотнения и покраснения) случайным образом разделяли по группам введения. Использованные критерии рандомизации представляли собой предотвращение:
1. Объединение совпавших донорных биоптатов в группу.
2. Распределение совпавших донорных биоптатов в группы с повышающимися дозами, насколько это возможно.
Шестьдесят одну подвергпг/юся трансплантации мышь (всего из 72 подвергшихся трансплантации мышей) считали пригодными для включения в исследование и это привело к 9 группам мышей (от б до 7 мышей на группу). Затеы активированные РВМС от пациентов (0, 5х10б/'трансплантат) инъецировали в аутологичные
трансплантаты (0 сутки). Как правило, фенотипы активированных РВМС (после культивирования в течение 48 часов и перед инъекцией) как регулярно определяли проточной цитометрией (не оценивали в этом исследовании) показывают клетки CD3+ (20-85% от общей популяции клеток), клетки CD4+ (20-60% от обшей популяции CD3), клетки CD8+ (20-55% от общей популяции CD3) , CD4+CD8+ (5-20% от общей популяции CD3), клетки CD25+ (30-65% от общей популяции CD3), клетки HLA-DR+ (5-20% от общей популяции CD3), объединенные клетки CD69+HLA-DR+ (10-55% от общей популяции CD3) , клетки CD54+ (50-85% от общей популяции CD3), и клетки CD49d+ (10-60% от общей популяции CD3) . Кроме того, большинство маркеров активации и миграции, упомянутых выше, активируются по сравнению с 0 сутками или после 1 суток активации SEB in vitro.
Мышам проводили введение с -1 суток до 21 суток внутрибрюшинным введением 200 мкл соединения или носителя. В контрольной группе перорально вводили CsA. Эффект введения антитела против IL23pl9 оценивали в исследовании в течение 21 суток при еженедельном внутрибрюшинном дозировании 10 мг/кг. Мыши, которым вводили носитель (PBS), служили в качестве отрицательного контроля. Циклоспорин А (20 мг/кг, перорально) вводили один раз в сутки в течение 21 суток, и он служил в
128
качестве; положительного контроля. Массу тела измеряли раз в неделю, начиная за трое сутоь до начала лечения. Параметры исхода
- Толщина эпидермиса (мкм).
- HLA-DR (эпидермис)
- Ki-67 (эпидермис)
- Цитокератин-16 (эпидермис)
Получение биоптатов кожи и трансплантация
От всех доноров кожи получали информированное согласие. Все взрослые пациенты были диагностированы дерматологом как пациенты, страдающие псориазом. Пациенты не страдали обширным псориазом и их показатель PASI не превышал 6. Пациентам не проводили фототерапию или какую либо системную терапию (например, метотрексатом, циклоспорином или любой направленной на TNF-a терапией). Пациентов принимали в качестве доноров, если они местно применяли кортикостероиды, когда необходимо, или основные кремы для профилактики высушивания кожи. Пол, возраст или анамнез течения/анамнез жизни заболевания не были частью критериев для включения или исключения.
От каждого пациента с псориазом получали три биоптата неповрежденной кожи (диаметром 5 мм) и приблизительно 30 мл крови. После забора биоптатов кожи и удаления подкожного жира, биоптаты кожи хранили в стерильных пробирках, содержащих стерильные хирургические бинты, смоченные физиологическим раствором при температуре приблизительно +4°С. Перевозку кожи и крови в лабораторию проводили в течение 7 часов после сбора. Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из крови центрифугированием в градиенте плотности и замораживали при -14 0°С.
Биоптаты кожи трансплантировали иммунодефицитным мышам BNX на уровне поверхностного слоя кожи (задняя область шеи) после хирургического удаления кожи мышей по всей толщине. Биоптатами кожи челозека заменяли частично удаленную кожу мыши и покрывали хирургической лентой Op-sir_e (Smith and Nephew, Hoofddorp, The Netherlands) с последующим регулярным нанесением хирургической ленты. Мышей проверяли один раз в сутки в отношении целостности
129
бинтов. В случае потери или повреждения бинта, сразу использовали новый бинт.
Через три недели после трансплантации биоптаты хорошо встраивались в ткань мыши; они сохраняли все человеческие свойства и не зарастали тканью мыши. Перед разделением случайным образом мышей в различные группы по введению, биоптаты подвергали скринингу и регистрировали их общий внешний вид, повреждения или раны и отличия окраски кожи биоптатов, принадлежащих донору. После этого в исследование включали только интактные биоптаты и их случайным образом разделяли, как описано выше. Биоптаты не включали в случае повреждения/ран или в случае биоптатов, принадлежащих одному донору, значительно отличающихся по окраске ксжи. Затем в эти встроенные и включенные в исследование трансплантаты инъецировали активированные аутологичным суперантигеном РВМС (см. ниже). Донорные мононуклеарные клетки периферической крови РВМС от доноров культивировали в течение 4 8 часов в IMDM (Biowhitaker, Серия No. 2МВ0103), дополненной эмбриональной телячьей сывороткой (10%) и стимулированной 1 мкг/мл энтеротоксином В Staphylococcus (SEB; Toxin Technology, Florida, USA; Серия № 51497В), в присутствии 40 Е/мл рекомбинантного IL-2 человека (Preprotech Inc, поставляемый Tebu-bio, ьсаталожный № 200-02) . Клетки культивировали в 24-луночных культуральных планшетах с плоским дном (Costar). После культивирования в течение 4 8 часов, клетки собирали и промывали два раза PBS, содержащим 0,5% бычий сывороточный альбумин и один раз только PBS. РВМС ресуспендировали в PBS в количестве 5х106 жизнеспособных клеток на мл и 100 мкл инъецировали внутрикожно в аутологичные трансплантаты кожи для инициации аномальной псориатической дифференцировки.
Замораживание тканей биоптатов и коллекции сыворотки Для получения человеческих тканей биптатов, мышей умерщвляли асфиксией посредством С02. Биоптаты вырезали с сохранением небольшой границы прикрепленной кожи мыши. Сразу после рассечения, биоптаты погружали в Tissue-Tec и замораживали в жидком азоте для хранения в алюминиевых
130
контейнерах с этикетками. "разу после умерщвления, кровь собирали в не вызывающие коагуляции пробирки посредством пункции сердца. Образцам крови позволяли сворачиваться при комнатной температуре в течение 4 5 минут. Перед центрифугированием (1400 об./мин. в течение 10 минут при 4°С), образцы помещали в тающий лед на один час. Сразу после центрифугирования супернатанты сыворотки собирали и хранили при -80°С.
Гистологическая оценка
Проводили гистологическое окрашивание замороженных тканей. Изготавливали диагональные поперечные срезы (10 мкм), охватывающие все слои кожи (не показано: расположенные в верхней части рогового слоя и эпидермиса трансплантированного биоптата; ткани мыши формируют основу для трансплантированной кожи человека).
Окрашивание гематоксилином для определения толщины эпидермиса
Три среза, выбранных из центра биоптата окрашивали гематоксилином-эозином и оценивали при 200-кратном увеличении. Измерение толщины проводили с использованием системы для обработки и анализа изображений LeicaQWin (Leica Imaging Systems Ltd, version 2.2a, Cambridge, England). Толщину уплотнения измеряли в качестве репрезентативного примера развития повреждений. Если имелись явные уплотнения (или области между уплотнениями), одно среднее значение приводится, исходя из предположения, что эпидермис представляет собой одно длинное уплотнение. Из каждого среза результат минимум из 4 микроскопических полей включали в показатель средней толщины. Из этого среднюю толщину эпидермиса ("скоррекированную") вычисляют коррекцией по микроскопическому увеличению.
Окрашивание HLA-DR
Два ср> еза на биоптат окрашивали антителом мыши против HLA-DR человека (антиген NCL-LN3 Nova Castra, партия 109207) и оценивали при микроскопическом увеличении 4 00х. Общее количество положительных клеток в эпидермисе в репрезентативных срезах определяли и представляли в качестве количества
131
положительных по HLA-DR клеток на поле. Для каждого среза результат минимум из 4 микроскопических полей включали в показатель среднего значения. [Иммуногистохимическое
окрашивание эпидермы и дермы очага повреждения пациентов с псориазом показывает повышенн/ю экспрессию HLA-DR, обеспечивая дополнительно подтверждение гипотезы о том, что иммунологические механизмы играют важную роль в патогенезе псориаза, см. также Gotlieb er: al, J.Exp.Med, 1986] . Окрашивание Ki-67 (пролиферация кератиноцитов) Два среза окрашивали антителом мыши против Ki-67 человека (BD Biosciences 556003) и оценивали при микроскопическом увеличении 400х. Общее количество положительных клеток в эпидермисе в репрезентативных срезах определяли и представляли в качестве количества положительных по Ki-67 клеток на мм2. Для каждого среза результат минимум из 4 микроскопических полей включали в показатель среднего значения. [Ki-67 представляет собой специфичный к клеточному циклу белок, который может выявлять активно делящиеся клетки. В псориатических повреждениях кожи Ki-67 представляет собой высоко специфичный маркер гиперпролиферации кератиноцитов или эпидермиса, которая является ключевым признаком псориаза, см. также Wraight et al, J. Invest. Dermatol, 1997].
Окрашивание CK-16 (экспрессия цит о кератина 16) Один репрезентативный срез окрашивали антителом мыши против цитокератина-16 человека (Chemicon, каталожный № CBL273, exp date Feb 2007) и оценивали при микроскопическом увеличении 400х. Экспрессию цитокератина-16 в эпидермисе определяли в соответствии со способом измерения с оценкой распределения СК-16 по 3-бальной шкале, описанной de Jongh et al; J. Invest Dermatol 125:1163-1173, 2005. В соответствии с оценочной шкалой, показатель 0 соответствует отсутствию СК-16, показатель
1 соответствует неоднородному распределению СК-16 и показатель
2 соответствует непрерывному распределению СК-16. Для каждого среза биоптата оценивали полную длину эпидермиса. Определяли и представляли совокупные показатели и встречаемость на группу. [Регуляция дифференцировки кератиноцитов особенно
132
важна при псориазе и одним из важных маркеров гиперпролиферативной и дифференцирующейся псориатической кожи является цитокератин-16, см. также Bigliardi et al, J. Invest. Dermatol, 2 000].
Статистические анализы
Основные статистические анализы проводили следующим образом: значимость отличий между всеми группами по лечению тестировали с использованием вариационного анализа (AN0VA). После каждого значимого ANOVA следовали тесты LSD (наименьшего значимого отличия) с целью определения значимости отличий между группой введения и контрольной группой. Весь статистический анализ проводили с использованием статистического программного обеспечения SPSS 11.5 для Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) .
Интерпретация значений p:
- p < 0,0 5 указывает на статистически значимые отличия
- 0,05 < р < 0,10 рассматривали как тенденцию
- р > 0,10 считали незначимым
Мыши, которым вводили PBS, представлены как "Носитель". Мыши, которым вводили 2 0 мг/кг циклоспорина А, представлены как "CsA (20 мг/кг)".
Трансплантация
Для этого исследования, от каждого из 24 пациентов с псориазом получали три биоптата неповрежденной крови и от 2 6 до 30 мл крови. Таким образом, всего трансплантировали 72 биоптата. Через три недели после трансплантации 11 трансплантатов считали непригодными для включения в исследование. Таким образом, в это исследование можно было включить всего 61 мышь (85%). Для разделения случайным образом и критериев включения см. также "2.2 схема исследования" и "2.5 препараты биоптатов кожи и трансплантация".
Вследствие фонового окрашивания (даже после повторного окрашивания свежих новых образцов тканей) некоторые срезы, окрашенные по HLA-DR, нель зя было оценить. Окрашенные контроли показали отсутствие неравномерности (см. ниже) и, к сожалению, этому нет объяснения. Контроли, которые использовали,
133
представляли собой контрольный срез ткани, который показал результаты, сходные с результатами предшествующих
экспериментов, контрольный срез ткани поврежденной кожи, который показал соответствующую экспрессию HLA-DR, как в предшествующих исследованиях, и в заключение, на гистологические стекла был включен срез ткани с контрольным антителом изотипа IgG2b, который не показал ложноположительных результатов или высокого фонового окрашивания. Характеристики тестируемой модели
Гистологическая оценка мышей, которым вводили носитель, через 21 сутки после инъекции РВМС, активированных посредством SEB, показала среднюю толщину эпидермиса 176,8 ± 28,1, 29,7 ±
8.0 положительных по Ki-67 клеток на мм2 в эпидермисе, 14,9 ±
7.1 положительных по HLA-DR клеток на мм2 в эпидермисе и суммарный показатель б для экспрессии СК-16 в эпидермисе.
Введение CsA приводило к значимому снижению толщины эпидермиса до 105,5 ± 11,3 мкм (р=0,003) по сравнению с мышами, которым вводили носитель. Эти результаты соответствуют 40% снижению по сравнению с носителем. Количество положительных по Ki-67 клеток значимо снизилось до 15,6 ± 4,3 на мм2; р=0,027.
Количество положительных по HLA-DR клеток снижалось до 9,6 ± 4,6 на мм2, но этот эффект не достиг статистической значимости. Экспрессия СК-16 снизилась до суммарного показателя 3, но этот эффект не достиг значимости. Ни одно из введений не показало значимых изменений массы тела по сравнению с носителем.
Эффект лечения антителом
Толщина эпидермиса
Лечение антителом против IL23pl9 показало значительное подавление толщины эпидермиса (120,0 ± 17,4 мкм) при дозе 10 мг/кг (р=0,020).
Ki-67
Внутрибрюшинное введение антитела против L23pl9 в дозировке 10 мг/кг привелс к значимому подавлению пролиферации кератиноцитов (р=0,010)
134
HLA-DR
Введение не было ассоциировано со значительным подавлением HLA-DR.
СК-16
Хотя экспрессия СК-16 была отчетливо ассоциирована с ингибиторным эффектом после введения CsA и антитела против IL23pl9, эффект введения не достиг статистической значимости.
Заключения
В этом исследовании, антитело против IL23pl9, вводимое внутрибрюшинно один раз в неделю в дозировке 10 мг/кг, оценивали в отношении его эффекта на развитие псориаза в неповрежденной коже от пациентов с псориазом,
трансплантированной иммунодефицитным мышам.
Лечение начинали за 1 сутки до инъекции аутологичных активированных Т-клеток и продолжали до 21 суток после инъекции РВМС. Введение PBS (носитель) служило в качестве отрицательного контроля. Циклоспорин А (20 мг/кг, перорально) служил в качестве положительного контроля. Оценивали массу тела, толщину эпидермиса, пролиферацию кератиноцитов (положительные по Ki-67 клетки), показатель цитокератина-16 и количество положительных по HLA-DR клеток.
Введение CsA значимо подавляло утолщение эпидермиса и пролиферацию кератиноцитов (положительные по Ki-67 клетки) на 40% (р=0, 007) и 53% (р=0,0;?7), соответственно, по сравнению с контролем в виде носителя. Введение антитела против IL23pl9 в количестве 10 мг/кг показало значимый эффект на подавление эпидпрмального утолщения на 32% и пролиферацию кератиноцитов (Ki-67) на 41%, по сравнению с контролем в виде носителя.
Ни один из способов введения не показал значимого ингибирования экспрессии HLA-DR или СК-16. Отсутствие эффективности CsA или любого из соединений в отношении экспрессии HLA-DR может быть ассоциировано с недостаточной иммунологической активностью, как определяют, главным образом, по экспрессии HLA-DR во время умерщвления мышей, через 21 сутки после инъекции РВМС. Пс сравнению с ранее проводимыми исследованиям, результаты показывают меньшую экспрессию HLA-DR
135
без существенного объяснения. Кроме того, ни одно из соединений не показало эффекта на массу тела. Массу тела оценивали с учетом состояния животного. Снижение массы или ингибирование роста является обычным побочным эффектом, главным образом, введения мышам CsA или иммунодепрессивных средств. В общем, лечение антителом против IL23pl9 кажется перспективным подходом для лечения псориаза.
Таблица 11
Введение
Толщина эпидермиса (мкм) Среднее значение ±SEM
Ki-67 (1)
Среднее значение ±SEM
HLA-DR
(1)
Среднее значение ±SEM
Суммарный показатель и встречаемость СК-16 (2)
Масса тела в конечный момент времени (% от исходной массы) ±SD
Носитель
176.8 ± 28.1
29.7 ± 8.0
14.9 ±7.1
6 (4/7)
109.9 ± 0.7
CsA (20 мг/кг)
105.5 ± 11.3 s
15.6 ± 4.3s
9.6 + 4.6
3 (2/7)
105.9 ± 2.1
Антитело
против
IL23p19
(10 мг/кг)
120.0 ± 17.4 &
12.3 ± 3.7 *
7.9 ± 4.9
3 (2/6)
112.3 ± 1.0
1. Количество положительных клеток на мм2 эпидермиса
2. Гистологическая система оценки в соответствии с Jongh
et al; J. Invest Dermatol 125:1163-1173, 2005 Толщина эпидермиса:
ANOVA P=0,010
последующие тесты LSD:
$ p= 0,003 по сравнению с носителем
* p= 0,001 по сравнению с носителем ** р= 0,025 по сравнению носителем
# р < 0,001 по сравнению с носителем ## р= 0,0 63 по сравнению с носителем & р=0,020 по сравнению с носителем Ki-67 :
ANOVA Р=0,009
последующие тесты LSD:
$ р= 0,027 по сравнению с носителем
136
* р= 0,008 по сравнению с носителем ** р= 0,048 по сравнению с носителем
# р= 0,007 по сравнению с носителем ## р= 0,031 по сравнению с носителем & р=0,, 010 по сравнению с носителем HLA-DR :
ANOVA?=0, 7 68 СК-16:
ANOVA Р=0,57 3 BODY WEIGHT:
ANOVA P=0,691
Будет понятно, что это изобретение можно применять на практике иным образом, чем конкретно описано в предшествующем описании и примерах. Возможно множество модификаций и вариантов по настоящего изобретению с учетом представленных выше указаний, и, таким образом, они находятся в объеме прилагаемой формулы изобретения.
Таблица 1
Специфичность связывания Fab-кандидатов
Специфичный ELISA: антигены в растворе и иммобилизованным Fab
Biacore (захват Fab)
MOR0#
IL-23 CNTO
IL-23 R &D
IL-12 CNTO
IL-12 R &D
P40 R &D
IL-23 CNTO
IL-12 CNTO
4083
н/о
H/O
н/о
нет связывания
4086
H/O
H/O
H/O
нет связывания; n:3
4185
H/O
H/O '
H/O
нет связывания
4190
H/O
н/о
H/O
нет связывания
4205
140
небольшое связывание*
4217
небольшое связывание*
4235
небольшое связывание*
4491
190
нет связывания
4647
нет связывания
4649
нет связывания
4651
160
нет связывания
4655
нет связывания
4658
нет связывания
Fabl2A
1. 1
0.6
ИЗМЕНЕННАЯ СТРАНИЦА
137
Таблица 2
IC50 Fab-кандидатов в анализе hrIL 23/hIL-23R
MOR0#
IC50 [нМ]
4083
4.6 +/- 3.9
4086
Отсутствие полного ингибирования
4185
280
4190
4.8 +/- 2
4205
4217
4235
190
4491
~ 50% ингибирование
4647
2.1
4649
0.2 +/- 0.2
4651
4655
286
4658
0.7
IL-23R-FC
1.8 +/- 1.8
Таблица 3
Охарактеризация исходных антител в форме mAb
mAb
Связывание IL-23
Биохимический анализ связывания рецептора
Анализ рЭТАТЗ
Биологический мализ IL-12 ¦
NK92MI
Анализ индуцируемой IL-23 продукции IL-17
MOR#
Специфичность к субъединице hrIL-23
IL-12/IL-12RM
И.-23Л1.-12RM
IL-23/IL-23R
Результаты при указанной концентрации
IFNge
клетках
NK92M1
Нейтрализация hrlL-17
Нейтрализация нативного IL-23 человека
Нейтрализация нативного IL-23 cyno
4083 (к)
р19
+/- аПО + at20
4190 (к)
р19
+ at10
4649 т
р19
+/- at 1 + al 10
4658 Ш
р19
+/-
-/+at10
-/+
4205
р19
+ at10
N/d
N/d
N/d
4217
р19
¦1*
-at 10
N/d
-/+
N/d
N/d
4185
р19
¦/+
-at 7
N/d
N/d
N/d
4235
р19
-1*
-at 10
N/d
N/d
N/d
4090
р19
N/d
N/d
N/d
N/d
4647
р19
+/-
-at 10
N/d
N/d
4491
р19
+/-
-at10
N/d
N/d
4651
р19
+/-
-at 10
N/d
N/d
4085
р19*
-at3
N/d
N/d
40В6
р19*
-at 5
N/d
+**•
N/d
N/d
4655
р19*
-at 10
+***
N/d
N/d
4193
IL-12/IL-23f40
¦1+
-at 6
N/d
N/d
4201
IL-12/IL-23p40
+, нет титрований
N/d
N/d
N/d
4704
IL-12/IL-23p40
•1+
+ at10
N/d
N/d
ИЗМЕНЕННАЯ СТРАНИЦА
138
Символ
Описание
Отсутствие ингибирования
-/+
Небольшое ингибирование
Слабое неполное ингибирование
Ингибирование
Не связывался со связанным с His-lag hrIL-23 (от R &D Systems)
Лучше ингибирует R &D IL-12, чем CNTO IL-12
***
Вызывает гибель клеток в высокой концентрации
N/d
Не проводили
Таблица 4А
Последовательности CDR Не V-области антител-кандидатов
Клон #
H-CDR1 (SEQ ID NO:)
H-CDR2 (SEQ Ш NO:)
H-CDR3 (SEQ ГО NO:)
Примечания
4083
NYAIS (1)
GIIPMFGYANYAQKFQG (7)
DIYAGMDV (40)
Основной вариант
5028
(8)
Созревание аффинности
4190
SNYIS (2)
GIIPIFGHANYAQKFQG (9)
SKKGMYGGWTYPLMM FDL (41)
Основной вариант
5033
11Д^Р IpX^XAQKFQG (AO)
Созревание аффинности
5034
llD^l^SGA.XYAQKFQG
at)
Созревание аффинности
5036
4-1.2,),
Созревание аффинности
5037
llil
Созревание аффинности
5038
-ЩНАНЬШТШШРШШ
Созревание аффинности
5040
1SPGTG INl^Slpiii
ilil
Созревание аффинности
4190х
Z,Z2Z3Z4Z5Z6Z7ZeZ,Z10YA QKFQG!! (16)
Предсказанный
4205
NYWIS (3)
WIRPGDSDTRYSPSFEG (17)
HYYGMDY (42)
Основной вариант
4217
1.1.1.1.1 sywit (4)
VSYISSSGSSTYYADSVK G (18)
GTFWSFGNYFAN (43)
Основной вариант
4649
NYWIG (5)
IIDPSNSYTNYSPSFQG (19)
WYYKPFDV (44)
Основной вариант
4649г
(20)
Д участок гликозилирования
4649^
Плюс замены Е1
4649d
(21)
А участок гликозилирования
5041
(22)
Созревание аффинности
5042
IliFiSSSirtYSFSFQG (23)
Созревание аффинности
5043
(24)
Созревание аффинности
5044
Созревание
139
(25)
аффинности
5045
(26)
Созревание аффинности
5046
(27)
Созревание аффинности
4649х
IIX1PX2X3.';X1TX,.YSPSF QG** (2f <)
Предсказанный
4658
SFGMS (6)
NISSSGS::- TYYADSVKG (29)
YWGTPYLMQFDN (45)
Основной вариант
5039
й (30)
Созревание аффинности
5047
NIEHKYL^YATSYAASVK G (146)
Созревание аффинности
5048
G (31)
Созревание аффинности
5049
(c)a(32)
Созревание аффинности
5050
Sf МЖГ G^TYYA &PVK <3 (33)
Созревание аффинности
5051
G T34)
Созревание аффинности
5052
Q (35)
Созревание аффинности
5053
Mlj &GtyTSYJTtYAaSVK G (36)
Созревание аффинности
5054
Giiip^fA^LVAI^VK
(r)::(37
Созревание аффинности
5055
S: (38)
Созревание аффинности
5056
Ш (3 9 )
Созревание аффинности
Все антитела, экспрессированные как Fab, имеют Q в 3
остатке в Vh, а при экспрессии в качестве mAb, большинство из них имеют Е в 3 остатке.
** Хх представляет собой D или S; Х2 представляет собой S, V, D или Т; Х3 представляет собой N, S или G; Х4 представляет собой Y, W, Т, Н, V, S или А;
! ! Zi представляет собой G, I или L; Z2 представляет собой I или S; Z3 представляет собой I, Р, N или D; Z4 представляет собой Р, G или A; Z5 представляет собой I, М, Р, Т, Н, N или V; Z5 представляет собой F, I, G или L; Z7 G или I; Z8 представляет собой Н, У, N или G; Z9 представляет собой А или Т; Z10 представляет собой N, W или Y;
++ ах представляет собой S или А; а2 представляет собой Т или G; а3 представляет собой Р или L; а4 представляет собой S или N; а5 представляет собой S, М или L; а6 представляет собой I или V;
## Ъг представляет собой Т, F, D или S; Ь2 представляет
140
собой S, I, A, T, R или L; b3 представляет собой N, T, L, S или G; b4 представляет собой T, Y, S или I;
b5 представляет собой P или L; Ъх представляет собой F или
Таблица 4В
Последовательности CDR Lc V-области антител-кандидатов
Клон
L-CDR1 (SEQ ГО N0:)
L-CDR2 (SEQ ГО NO:)
L-CDR3 (SEQ ID NO:)
Примечания
4083
RASQSVLGNYLA (46)
GASSRAT (52)
HQYGSISTT (58)
Основной вариант
5267
QQYSHLLIT (59)
Созревание аффинности
5268
QQYSHISLT (60)
Созревание аффинности
5269
QQFAHILLT (61)
Созревание аффинности
4190
RASQSVSSNYLA (47)
YASRKAT (53)
QQTSNTPFT (62)
Основной вариант
4190EV
QQTSNTPFT
Плюс замены Е1 и V86
5029
QQFITYLPT (63)
Созревание аффинности
5030
QQDALSPFT (64)
Созревание аффинности
5031
QQDRGTPFT (65)
Созревание аффинности
5032
QQSLNIPFT (66)
Созревание аффинности
5057
QQDTSSPFI (67)
Созревание аффинности
4190х
(68)
Предсказанный
4205
SGSSSNIGSYYV N (48)
GNTHRPS (54)
QTYASLGPGEV (69)
Основной вариант
4217
RASQSIFYNLA (49)
GASNRAT (55)
QQYSSEPVT (70)
Основной вариант
4649
л.1
TGSSSNIGSGYD VH (50)
GNSKRPS (56)
SSWT-PSSW (71)
Основной вариант
5058
SSw'TDTPNMIV (72)
Созревание аффинности
5059
A3 Vf 1? DGL S LVV (73)
Созревание аффинности
5059gs
ASWTDGLSLVV
Плюс замены Q1, S2
4649х
a1SWTDa2a3a4a5a6V+ + (74)
Предсказанный
4658
TGTSSDVGGYNS VS (51)
SVSSRPS (57)
SSYDTNKPLW (75)
Основной вариант
5060
GSYDVYGRFYV (76)
Созревание аффинности
141
5061
SSYYFYLQRIV (77)
Созревание аффинности
5062
QTYYFSYSGPV (78)
Созревание аффинности
5063
GSWDPIFSYEV (79)
Созревание аффинности
Таблица АС
Продуцированные, очищенные и оцененные антитела
Название АЬ
VII
Fab**
MAb*
Примечания
4083
4083
4083
5028
5028
4083
5267**
4083
5267
(in
progress)
5268**
4083
5268
(in
progress)
5269**
4083
5269
(in
progress)
4190
4190
4190
5033
5033
4190
5034
5034
4190
5036
5036
4190
5037
5037
4190
5038
5038
4190
5040
5040
4190
5040^v
5040
4190ет
Обратная замена Vh-Q3 в mAb
5029**
4190
5029
5030**
4190
5030
5031**
4190
5031
5032**
4190
5032
5057**
4190
5057
4205
4205
4205
4217
4217
4217
4649
4649
4649
5041
5041
4649
5042
5042
4649
42-58
5042
5058
Пара 5058 VL с VH, лишенном участка гликозилирования CDR2
42-59
5042
5059
Пара5059 VL с VH, лишенном участка гликозилирования CDR2
5043
5043
4649
5044
5044
4649
5045
5045
4649
45-58
5045
5058
Пара 5058 VL с VH, лишенном участка гликозилирования CDR2
45-59
5045
5059
Пара 5059 VL с VH, лишенном участка гликозилирования CDR2
5046
5046
4649
5058
4649
5058
5059
4649
5058
142
3758
4649r
5058
3759
4649r
5059
3759bU'Ub
4649rc
5059ua
Обратная замена Vh-Q3 в mAb
3658
4649d
5058
3659
4649d
5059
4658
4658
4658
5039
5039
4658
5047
5047
4658
5048
5048
4658
5049
5049
4658
5050
5050
4658
5051
5051
4658
5052
5052
4658
5053
5053
4658
5054
5054
4658
5055
5055
4658
5056
5056
4658
5060
4658
5060
5061
4658
5061
5062
4658
5062
5063
4658
5063
* За исключением указанного в столбце "Примечания", положение 3 в тяжелой цепи представляло собой Q в Fab и Е в mAb.
** Легкие цепи каппа после созревания аффинности 4083 и 4190 содержат замену Т на V относительно исходных последовательностей в FW3 (FAVYYC). V представляет собой остаток эмбрионального типа в этом положении.
# Несколько Fab, приведенных в качестве Fab "после созревания аффинности", показали небольшую агрегацию в процессе очистки и, таким образом, их не оценивали. Ранее их оценивали в качестве вариантов в виде неочищенных образцов.
ИЗМЕНЕННАЯ СТРАНИЦА
143
Таблица 5
Охарактеризация Fab после созревания аффинности: специфичность, нейтрализация рецептора и аффинность
MOR0#
Библиотека
KD [пМ] SET (п:1)
IL-23/ IL-23R 1С50 [нМ] (п:1-4)
IL-23/ IL-12RP1
IL-12 (R &D)/ IL-12RP1
Специфичные ELISA
FACS (TALL-104)
4083
1600
7.1 ±8.3
O.K.
O.K.
O.K.
5028
H-CDR2
133
0.43 ±0 58
O.K.
O.K.
O.K.
5267
L-CDR3
2000
0.14
O.K.
O.K.
O.K.
H/O
5268
660
0.15
O.K.
O.K.
O.K.
H/O
5269
960
0.2
O.K.
O.K.
O.K.
H/O
4190
4400
1.3 ± 15
O.K.
O.K.
O.K.
5034
H-CDR2
126
0.4 ±0.15
O.K.
O.K.
O.K.
5036
0.32 ± 0 02
O.K.
O.K.
O.K.
5038
0.17 ±0 05
O.K.
O.K.
O.K.
4649
1100
1.2
O.K.
O.K.
O.K.
5041
H-CDR2
0.07 ±0 04
O.K.
O.K.
O.K.
5042
0.06 ±0 03
O.K.
O.K.
O.K.
5043
0.05 ± 0 03
O.K.
O.K.
O.K.
5044
0.05 ± 0 04
O.K.
O.K.
O.K.
5045
0.05 ± 0 02
O.K.
O.K.
O.K.
5046
0.08 ± 0 01
O.K.
O.K.
O.K.
5058
L-CDR3
0.11 ±0 08
O.K.
O.K.
O.K.
5059
0.69 ±072
O.K.
O.K.
O.K.
Таблица 6
Охарактеризация Fab после созревания аффинности: специфичность,
нейтрализация рецептора и аффинность
MOR0#
Библиотека
KD [пМ] SET (п:1)
IL-23/ IL-23R 1С50 [нМ] (п:1-4)
IL-23/ IL-12RP1
IL-12 (R &D)/ IL-12RP1
Специфичные ELISA
FACS (TALL-104)
4658
4300
O.K.
O.K.
O.K.
5039
H-CDR2
0.1 ±0.09
O.K.
O.K.
O.K.
5047
0.13 ±0.1
O.K.
O.K.
O.K.
5048
0.1 ±0.1
O.K.
O.K.
O.K.
5049
0.39 ± 0.62
O.K.
O.K.
O.K.
5050
0.89 ±1.15
O.K.
O.K.
O.K.
5052
0.58 ± 0.74
O.K.
O.K.
O.K.
5053
0.98 ±1.3
O.K.
O.K.
O.K.
5055
0.79 ±1.0
O.K.
O.K.
O.K.
5056
0.52 ± 0.68
O.K.
O.K.
O.K.
5060
L-CDR3
142
1.0 ± 1.14
O.K.
O.K.
O.K.
5061
1.25 ±1.49
O.K.
O.K.
O.K.
5062
1.34 ±1.5
O.K.
O.K.
O.K.
5063
0.32 ±0.25
O.K.
O.K.
O.K.
ИЗМЕНЕННАЯ СТРАНИЦА
144
Таблица 7
Охарактеризация антител после созревания аффинности в формате mAb: Ингибирование продукции IL-17 Ингибирование связывания hrIL-23 с иммобилизованным слитым белком IL-23R-FC. Значения IC50 из кривых титрования. mAb (см. таблица 4С) приведены в порядке снижения эффективности. Антитела после созревания сгруппированы в соответствии их соответствующими исходными антителами: розовый цвет (5028 от 4083); (5040, 5038, 5029, 5030, 5057, 5036, 5032, 5034, 5033 и 5037 с 4190); (5042, 5045, 5058, 5041, 5059, 5044, 5043, 5046 и 4083 с 4649); (5054, 5053, 5049, 5048, 5052, 5047, 5050, 5051, 5055, 5056, 5039, 5063, 5062 и 5061 с 4658). MAb 23А представляет собой контрольное mAb мыши против IL-23
человека
mAb
IC50, мкг/мл
5042
0.00127
5045
0.001396
5040
0.002641
5058
0.002847
5041
0.003007
5054
0.003227
5053
0.00493
5059
0.01062
5044
0.01414
5043
0.01439
5049
0.01616
5048
0.01624
5052
0.0178
5047
0.02342
5050
0.02766
5038
0.02815
5046
0.04281
5029
0.04907
тАЬ23А
0.05415
5030
0.06458
5051
0.0663
5055
0.09155
5056
0.09198
5028
0.1039
5057
0.1103
5039
0.1606
5036
0.1702
5032
0.1716
5034
0.1854
5063
0.1981
5062
0.1989
5031
0.2149
4190
0.218
4649
0.2758
5033
0.2834
5061
0.3087
5037
0.3364
4083
1.395
4658
1.956
ИЗМЕНЕННАЯ СТРАНИЦА
145
Таблица 8
Последовательности исходных mAb IL-23pl9 и их производные после созревания аффинности и сконструированные производные
Семейство MOR04083
(SEQ ID NOS: 80 & 81) 1
117
4083 УЬ (1)
QV!2LVQSGREVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYaiSWVRQAT?G0GI.EWMg6III'MFGYAWYaQKFQGRVTITADESTSra Y№LSSLRSED*?AVYYCARDIYAGMDVWGQGTXiVTVSS 5028 Vh (1|
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIP VFGfthYAQKFQGRVTITADESTSTR YMELSSLRSED"AVYYCARDIYAGMDVWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NOS: 82-85) 1
108
4083 Vk (1)
DIVLTQSPATLSbSPGERATLSCRASQSVLGNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGrDFTLTISSb EPEDFAVYYCHQYGSISTTFGQGTKVEIK
5268 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVI.GNYLAWYQQKPGQAPRLblYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAVYYCqOYshlSLTFGQGTKVEIK 5267 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVliGNYJjAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAVYYCqQYshlilTFGQGTKVEIK
5269 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSV^GNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSPATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAVYYCqQfahl11TFGQGTKVEIK
Семейство MOR04190
(SEQ ID NOS: 86-92) l
127
4190 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSKYISWVRQAPGOGLEWMGGIIPIFGHANYAQKFQGRVrirADESrSTA YMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5033 Vh (1)
QVQLVQSGAE\TOCPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGiIIPpiGnAwYAQKFQGRVTITADESTSTA YMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS 5040 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGG'CFSSNYISWVRQAPGQGIiEWMGispgtginAyYAQKFQGRVTITADESTSTA YMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5038 Vh (1) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMG-InahlGgtwYilQKFQGRVTITADESISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5034 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGlIdPnFGgAyYAQKFQGRVTITADESTSTA YMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLW3QGTLVTVSS
5036 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGlIdPvFGgAyYAQKFQGRVTITADESTSTA YMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5037 Vh (1)
OVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGlIdPmFGgAyYAQKFQGRVTITADESTSTA YMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NOS: 93-98) 1
108
4190 Vk (1)
P]:VLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLbIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFATYYCQQTSKTPFTFGQGTKVEIK 4190EVk (1)
El'VLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPE DFAvYYCQQT SNTPFTFGQGTKVEIK
5029 Vk CD
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLblYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAvYYCQQfitylpTFGQGTKVEIK
5030 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAvYYCQQdalSPFTFGQGTKVEIK
5031 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLIiIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAvYYCQQdrgTPFrFGQGTKVEIK
5032 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSL EPEDFAvYYCQQslNiPFTFGQGTKVEIK
146
MOR04205
(SEQ ID NO: 99)
116
4205 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWISWVRQAP6KGLEWMGWIRPGDSDTRYSPSFEGQVTISRDKSISTA YLQWSSLKA5DTAMYYCARHYYGMDYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 100) 1
110
4205 VI (1)
DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSYYVNWYQOLPGTAPKblilYGNTHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGL QSEDEADYYCQTYA3LGPGEVFGGGTKLTVL
MOR04217
(SEQ ID NO: 101) 1
121
4217 Vh (1)
QVQbVESGGGLVQPGGSbRLSCAASGFTFSSYWITWVRQAPGKGLEWVSYISSSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARGTFWSFGNYFANWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 102) 1
107
4217 Vk (1)
DIVLIQSPATLSLSPGERATLSCRASQSIFYbJlliAWYOOKPGQAPRLLIYGASNRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLE PEDFATYYCQQYSSEPVTFGQGTKVEIK
Семейство MOR04649
(SEQ ID NOS: 103-112) 1
117
4649 Vh (1)
QVOLVQSGAEVKKPGESbKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPSNSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSbKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVrVSS 4649d Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKCSCYSFSNYWICWVRQMPGKCLEWMCIIDPSNSYTdYSPSFQCQVTISADKSISTA YLQWSSLKA.SDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 4649r Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPSKSYTrYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 4649r? Vh (1)
eVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPSNSYTrYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKA.S0TAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5046 Vh (1)
QVQbVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPvsSwrkYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKA.SDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5044 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIsPSgStTwYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5043 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGfIsPdgShTwYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKA.SDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5041 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYHIGWVRQMPGKGLEWMGIIsPtgSvTwYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS
147
5042 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVROMPGKGbEWMGIISPtgSsTwYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5045 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESbKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIsPtgSaTwYSPSFQGQVTISADKSISTA YLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS
* Consensus N-linked glycosylation site in 46-49 Vh (SEQ ID NOS: 113-116) 1
111
4649 VL (1)
EilVLTQPPSVSGAPGORVTISCTglS^C^YpVHWYQQLPG'rAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASIAITG LQSEDEADYY^SSWT-PSSWFGGGTKLTVL 505B VL (1)
DIVLTQPPSVSGAPGORVTISCTGSSSNIGSGYDVHWYOOLPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITG LQSEDEADYYCSSWTdtPnmiVFGGGTKLTVL 5059 VL (1)
DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITG LQSEDEADYYCaSWTdglSlWFGGGTKLTVL 5059OSVL ;i>
CISVLTQPPSVSGAPGQRVTISCXGSSSNIGSGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITG LQSEDEADYYCaSWTdglSlWFGGGTKLTVL
Семейство MOR04658
(SEQ ID NOS: 1П-127) l
123
4658 Vh (1) OVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNISSS- GSSTYYADSVltGRFTISRDNSKMTLYLQMMSLRAEDTAVyYCARYWGTPYbMOFDNWGQGTLVTVSS 5048 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFrFESFGMSWVROAPGKGLEWVSNIehkfraGytTYYAagVKGRFTISRDNSKN
TLYLQMNSLR;\EDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTI,VTVSS
5050 Vh (1)
CVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSsIehVcytGytTYYAapVKGRFTlSRDNSKN TLYLQMNSLR,№DTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 5053 Vh (1)
ClVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkytsytTYYAaSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 5039 Vh 11)
OVQLWSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSKIehkylnyaTYYAaSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDHWGQGTLVTVSS 5055 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkylGyalvYAaSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLPAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 505S Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSsIehkylsyaTYYAagVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLFAEDTAVYYCARYWGTPYLMOFDNWGQGTLVTVSS 5052 Vh ID
QVQLVESGGGLVQPGGSIjRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSb'IehkylsytTf YAaSVKGRFTISRONSKN rLYLQMNSLRAEDrAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 504S Vh (1)
SVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSglehkylsytrhYAaSVKGRFTISRDNSKN TLYIiQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5051 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSqlehkylsytTlYAaSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLJ^AEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 5 054 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSglehkylSyaTZYAaSVKGRFTISRDNSKN TLYLQMNSL.'yvEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 147)
5047 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkylGyaTsYAaSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL RAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NOS: 128-132) 1
111
4658 VL (1)
DIAbTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYOQHPGKAPKLHIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASL'rlSG LQAEDEAOYYCSSYDTWKPLWFGGGTKbTVL
5061 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGKTASLriSG LQAEDEADYYCSSYyfylgriVFGGGTKLTVL
5062 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMrYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGKTASLriSG LQMDEADYYCqtYyf sysgpVFGGGTKLTVL 5060 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSnVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISG LQAEDEADYYCgSYDvygrfyVFGGGTKbTVL
5063 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISG LQAEDEADYYCgSwDpif syeVFGGGTKLTVL
148
Таблица 9
Нуклеотидные последовательности
11-23 р19 504 0Q/EV
VH— GCE (SEQ ID TTO *-l 33 ) : (Аминокислотная последовательность VH представляет собой 5040Vh)
QVQL VQS CAE VKKP G S S • 1 CAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGTCCTC GTCCACGTCG ACCACGTCAG ACCCCGACTC CACTTCTTCG GACCCAGGAG
CDRI
•VKV SCKA SGG TFS S N Y I • 51 GGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGAGG CACCTTCAGC AGCAACTACA CCACTTCCAG AGGACGTTCC GAAGACCTCC GTGGAAGTCG TCGTTGATGT
• SWV R Q Л PGQG LEW M G I 10.1 TCAGCTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATGGGGATC AGTCGACCCA CGCTGTCCGG GGACCTGTTC CCGAACTCAC CTACCCCTAG
CDR2
SPGT GIN AYY A Q К F* Q G R • 151 AGCCCTGGCA CCGGTATCAA CGCATACTAC GCACAGAAGT TCCAGGGCAG TCGGGACCGT GGCCATAGTT GCGTATGATG CGTGTCTTCA AGGTCCCGTC
•VTI TADE STS TAY M E L S • 201 AGTCACGATT ACCGCGGACG AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA TCAGTGCTAA TGGCGCCTGC TTAGGTGCTC GTGTCGGATG TACCTCGACT
CDR3
• S Ъ R SED TAVY Y С A RSK 251 GCAGCCTGAG ATCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAAGCAAG CGTCGGACTC TAGACTCCTG TGCCGGCACA TAATGACACG CTCTTCGTTC
CDR3
KGMY GGW TYP LMMF D L W • 301 AAGGGCATGT ACGGCGGCTG GACCTACCCC CTGATGATGT TCGACCTGTG TTCCCGTACA TGCCGCCGAC CTGGATGGGG GACTACTACA AGCTGGACAC
•GQG TLVT VSS 351 GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG С CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC G
149
IL-23 pl9 5040Q/EV
VH-HCO (SEQ ID N0:134): (Аминокислотная последовательность VH представляет собой 5040Vh)
QVQL VQS GAE VKKP G S S • 1 CAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTGAAGAAGC CCGGCAGCAG GTCCACGTCG ACCACGTCTC GCCGCGGCTC CACTTCTTCG GGCCGTCGTC
CDRI
•VKV SCKA SGG TFS S N Y I • 51 CGTGAAGGTG AGCTGCAAGG CCAGCGGCGG CACCTTCAGC AGCAACTACA GCACTTCCAC TCGACGTTCC GGTCGCCGCC GTGGAAGTCG TCGTTGATGT
• SWV RQA PGQG LEW MGI 101 TCAGCTGGGT GCGCCAGGCC CCCGGCCAGG GCCTGGAGTG GATGGGCATC AGTCGACCCA CGCGGTCC3G GGGCCGGTCC CGGACCTCAC CTACCCGTAG
CDR2
SPGT GIN AYY AQKF Q G R • 151 AGCCCCGGCA CCGGCATCAA CGCCTACTAC GCCCAGAAGT TCCAGGGCCG TCGGGGCCGT GGCCGTACTT GCGGATGATG CGGGTCTTCA AGGTCCCGGC
•VTI TAPE STS TAY MELS-201 CGTGACCATC ACCGCCGACG AGAGCACCAG CACCGCCTAC ATGGAGCTGA GCACTGGTAG TGGCGGCTGC TCTCGTGGTC GTGGCGGATG TACCTCGACT
• SLR SED TAVY Y С A RSK 251 GCAGCCTGCG CAGCGAGGAC ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGCAGCAAG CGTCGGACGC GTCGCTCCTG TGGCGGCACA TGATGACGCG GGCGTCGTTC
CDR3
KGMY GGW TYP LMMF D L W • 301 AAGGGCATGT ACGGCGGCTG GACCTACCCC CTGATGATGT TCGACCTGTG TTCCCGTACA TGCCGCCGAC CTGGATGGGG GACTACTACA AGCTGGACAC
•GQG TLVT VSS 351 GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG С CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC G
150
IL-23 pi9 5040Q/EV
VH-MOR (SEQ ID NO : 135) : (Аминокислотная последовательность VH представляет собой 5040Vh)
QVQL VQS GAE VKKP G S S • 1 CAGGTGCAAT TGGTTCAGTC TGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCAGCAG GTCCACGTTA ACCAAGTCAG ACCGCGCCTT CACTTTTTTG GCCCGTCGTC
CDRI
-VKV SCKA SGG TFS S N Y I • 51 CGTGAAAGTG AGCTGCAAAG CCTCCGGAGG CACTTTTTCT TCTAATTATA GCACTTTCAC TCGACGTTTC GGAGGCCTCC GTGAAAAAGA AGATTAATAT
• SWV RQA PGQG LEW M G I 101 TTTCTTGGGT GCGCCAAGCC CCTGGGCAGG GTCTCGAGTG GATGGGCATT AAAGAACCCA CGCGGTTCGG GGACCCGTCC CAGAGCTCAC CTACCCGTAA
CDR2
SPGT GIN A Y Y AQKF Q G R • 151 TCTCCTGGTA CTGGTATTAA TGCTTATTAT GCTCAGAAGT TTCAGGGTCG AGAGGACCAT GACCATAATT ACGAATAATA CGAGTCTTCA AAGTCCCAGC
•VTI TADE STS T A Y M E L S • 201 GGTGACCATT ACCGCGGATG AAAGCACCAG CACCGCGTAT ATGGAACTGA CCACTGGTAA TGGCGCCTAC TTTCGTGGTC GTGGCGCATA TACCTTGACT
¦ SLR SED TAVY Y С A RSK 251 GCAGCCTGCG TAGCGAAGAT ACGGCCGTGT ATTATTGCGC GCGTTCTAAG CGTCGGACGC ATCGCTTCTA TGCCGGCACA TAATAACGCG CGCAAGATTC
CDR3
KGMY GGW TYP LMMF D L W • 301 AAGGGTATGT ATGGTGGTTG GACTTATCCT CTTATGATGT TTGATCTTTG TTCCCATACA TACCACCAAC CTGAATAGGA GAATACTACA AACTAGAAAC
-GQG TLVT VSS 351 GGGCCAAGGC ACCCTGGTGA CGGTTAGCTC A CCCGGTTCCG TGGGACCACT GCCAATCGAG T
151
L-23 pl9 5040Q/EV
-HCO (SEQ ID N0:136) : (Аминокислотная последовательность VK представляет собой 4190
EIVL TQS PAT LSLS PGE 1 GAGATCGTGC TGACCCAGAG CCCCGCCACC CTGAGCCTGA GCCCCGGCGA CTCTAGCACG ACTGGGTCTC GGGGCGGTGG GACTCGGACT CGGGGCCGCT
CDRI
•RAT LSCR ASQ SVS SNYL 51 GCGCGCCACC CTGAGCTGCC GCGCCAGCCA GAGCGTGAGC AGCAACTACC CGCGCGGTGG GACTCGACGG CGCGGTCGGT CTCGCACTCG TCGTTGATGG
• AWY QQK PGQA PRL LIY 101 TGGCCTGGTA CCAGCAGAAG CCCGGCCAGG CCCCCCGCCT GCTGATCTAC ACCGGACCAT GGTCGTCTTC GGGCCGGTCC GGGGGGCGGA CGACTAGATG
CDR2
YASR RAT GVP ARFS GSG 15.1 TACGCCAGCC GCCGCGCCAC CGGCGTGCCC GCCCGCTTCA GCGGCAGCGG ATGCGGTCGG CGGCGCGGTG GCCGCACGGG CGGGCGAAGT CGCCGTCGCC
•SGT D F T L TIS S 3J E PEDF 201 CAGCGGCACC GACTTCACCC TGACCATCAG CAGCCTGGAG CCCGAGGACT GTCGCCGTGG CTGAAGTGGG ACTGGTAGTC GTCGGACCTC GGGCTCCTGA
CDR3
- A V Y YCQ QTSN TPF TFG 251 TCGCCGTGTA CTACTGCCAG CAGACCAGCA ACACCCCCTT CACCTTCGGC AGCGGCACAT GATGACGGTC GTCTGGTCGT TGTGGGGGAA GTGGAAGCCG
QGTK VEI К 301 CAGGGCACCA AGGTGGAGAT CAAG GTCCCGTGGT TCCACCTCTA GTTC
152
IL-23 p!9 5040Q/EV
VK-HCO (SEQ ID NO: 137): (Аминокислотная последовательность VK представляет собой 4190EU)
EIVL T С S PAT LSLS P G E • 1 GAAATTGTGT TGACACAGTC TCCAGCCACC CTGTCTTTGT CTCCAGGGGA CTTTAACACA ACTGTGTCAG AGGTCGGTGG GACAGAAACA GAGGTCCCCT
CDRI
•RAT LSCR ASQ SVS S N Y L -51 AAGAGCCACC CTCTCCTGCA GGGCCAGTCA GAGTGTTAGC AGCAACTACT TTCTCGGTGG GAGAGGACGT CCCGGTCAGT CTCACAATCG TCGTTGATGA
• AWY QQK PGQA PRL LIY 101 TAGCCTGGTA CCAACAGAAA CCTGGCCAGG CTCCCAGGCT CCTCATCTAT ATCGGACCAT GGTTGTCTTT GGACCGGTCC GAGGGTCCGA GGAGTAGATA
CDR2
YASR RAT GVP ARFS G S G • 151 TACGCATCCC GCAGGGCCAC TGGCGTGCCA GCCAGGTTCA GTGGCAGTGG ATGCGTAGGG CGTCCCGGTG ACCGCACGGT CGGTCCAAGT CACCGTCACC
•SGT DFTL T I S SLE PEDF-201 GTCTGGGACA GACTTCACTC TCACCATCAG CAGCCTAGAG CCTGAAGATT CAGACCCTGT CTGAAGTGAG AGTGGTAGTC GTCGGATCTC GGACTTCTAA
CDR3
• A V Y YCQ QTSN TPF TFG 251 TTGCAGTTTA TTACTGTCAG CAGACTTCTA ATACTCCTTT TACCTTTGGC AACGTCAAAT AATGACAGTC GTCTGAAGAT TATGAGGAAA ATGGAAACCG
QGTKVEI К 301 CAGGGTACGA AAGTTGAAAT TAAA GTCCCATGCT TTCAACTTTA ATTT
153
IL-23 pi9 5040Q/EV VK-HCO( SEQ ID N0:138) : (Аминокислотная последовательность VK представляет собой 4190EV)
EIVL TQS PAT LSLS P G E • 1 GAGATCGTGC TGACCCAGAG CCCGGCGACC CTGAGCCTGT CTCCGGGCGA CTCTAGCACG ACTGGGTCTC GGGCCGCTGG GACTCGGACA GAGGCCCGCT
CDRI
•RAT LSCR ASQ SVS SNYL 51 ACGTGCGACC CTGAGCTGCA GAGCGAGCCA GTCTGTTTCT TCTAATTATC TGCACGCTGG GACTCGAGGT CTCGCTCGGT CAGACAAAGA AGATTAATAG
• AWY QQK PGQA PRL LIY 101 TGGCTTGGTA CCAGCAGAAA CCAGGTCAAG CACCGCGTCT ATTAATTTAT ACCGAACCAT GGTCGTCTTT GGTCCAGTTC GTGGCGCAGA TAATTAAATA
CDR2
YASR RAT GVP ARFS G S G • 151 TATGCTTCTC GTCGTGCAAC TGGGGTCCCG GCGCGTTTTA GCGGCTCTGG ATACGAAGAG CAGCACGTTG ACCCCAGGGC CGCGCAAAAT CGCCGAGACC
•SGT DFTL TIS SLE PEDF 201 ATCCGGCACG GATTTTACCC TGACCATTAG CAGCCTGGAA CCTGAAGACT TAGGCCGTGC CTAAAATGGG ACTGGTAATC GTCGGACCTT GGACTTCTGA
CDR3
• A V Y YCQ QTSN TPF TFG 251 TTGCGGTGTA TTATTGCCAG CAGACTTCTA ATACTCCTTT TACCTTTGGC AACGCCACAT AATAACGGTC GTCTGAAGAT TATGAGGAAA ATGGAAACCG
QGTK VEI К 301 CAGGGTACGA AAGTTGAAAT TAAA GTCCCATGCT TTCAACTTTA ATTT
154
IL-23 pl9 3759и'° VH-GCE( SEQ IDNO: 13 9):Аминокислотная последовательность VH представляет собой 4649гБ)
EVQL VQS GAE VKKP G E S • 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGAGCAGAG GTGAAAAAGC CCGGGGAGTC CTCCACGTCG ACCACGTCAG ACCTCGTCTC CACTTTTTCG GGCCCCTCAG
CDRI
¦ L К I SCKG S G Y SFS NYWI-51 TCTGAAGATC TCCTGTAAGG GTTCTGGATA CAGCTTTAGC AACTACTGGA AGACTTCTAG AGGACATTCC CAAGACCTAT GTCGAAATCG TFGATGACCT
• GWV RQM PGKG LEW M G I 101 TCGGCTGGGT GCGCCAGATG CCCGGGAAAG GCCTGGAGTG GATGGGGATC AGCCGACCCA CGCGGTCTAC GGGCCCTTTC CGGACCTCAC CTACCCCTAG
CDR2
IDPS N S Y TRY SPSF Q G Q • 151 ATCGACCCTA GCAACTCTTA CACCAGATAC AGCCCGTCCT TCCAAGGCCA TAGCTGGGAT CGTTGAGAAT GTGGTCTATG TCGGGCAGGA AGGTTCCGGT
• V T I SADK SIS TAX LQWS-201 GGTCACCATC TCAGCCGACA AGTCCATCAG CACCGCCTAC CTGCAGTGGA CCAGTGGTAG AGTCGGCTGT TCAGGTAGTC GTGGCGGATG GACGTCACCT
• SLK ASD TAMY YCA RWY 251 GCAGCCTGAA GGCCTCGGAC ACCGCCATGT ATTACTGrGC GAGATGGTAC CGTCGGACTT CCGGAGCCTG TGGCGGTACA TAATGACACG CTCTACCATG
CDR3
YKPF D V W GQG TLVT VSS 301 TACAAGCCCT TCGACGTGTG GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG ATGTTCGGGA AGCTGCACAC CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC
• S
С G
155
IL-23 pl9 3 759ra/os VH-HCO(SEQ ID N0:140) :(Аминокислотная последовательность VH представляет собой 4649rE)
EVQL VQS G A E VKKP G E S • .1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTGAAGAAGC CCGGCGAGAG CTCCACGTCG ACCACGTCTC GCCGCGGCTC CACTTCTTCG GGCCGCTCTC
CDRI
¦ L К I SCKG S G Y SFS N Y W I • 51 CCTGAAGATC AGCTGCAAGG GCAGCGGCTA CAGCTTCAGC AACTACTGGA GGACTTCTAG TCGACGTTCC CGTCGCCGAT GTCGAAGTCG ITGATGACCT
• GWV RQM PGKG LEW M G I 101 TCGGCTGGGT GCGCCAGATG CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATGGGCATC AGCCGACCCA CGCGGTCTAC GGGCCGTTCC CGGACCTCAC CTACCCGTAG
CDR2
IDPS NS'J TRY SPSF Q G Q • 151 ATCGACCCCA GCAACAGCTA CACCCGCTAC AGCCCCAGCT TCCAGGGCCA TAGCTGGGGT CGTTGTCGA" GTGGGCGATG TCGGGGTCGA AGGTCCCGGT
•VTI SADK SIS T A Y L Q W S • 201 GGTGACCATC AGCGCCGACA AGAGCATCAG CACCGCCTAC CTGCAGTGGA CCACTGGTAG TCGCGGCTG " TCTCGTAGTC GTGGCGGATG GACGTCACCT
- SLK ASD TAMY YCA RWY 251 GCAGCCTGAA GGCCAGCGAC ACCGCCATGT ACTACTGCGC CCGCTGGTAC CGTCGGACTT CCGGTCGCT J TGGCGGTACA TGATGACGCG GGCGACCATG
CDR3
YKPF DVW GQG TLVT VSS 301 TACAAGCCCT TCGACGTGTG GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG ATGTTCGGGA AGCTGCACAC CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC
• S
351 С G
156
IL-23 pl9 sise"'"5
VH-MOR (SEQ ID N0:141): (Аминокислотная последовательность VH представляет собой 4649гБ)
EVQL VQS GAE VKKP G E S • 1 (JAGGTGCAAT TGGTTCAGAG CGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCGAAAG CiCCACGTTA ACCAAGTCTC GCCGCGCCTT CACTTTTTTG GCCCGCTTTC
CDRI
¦ L К I SCKG S G Y SFS N Y W I • 51 CCTGAAAATT AGCTGCAAAG GTTCCGGATA ТТССТГТТСТ AATTATTGGA GGACTTTTAA TCGACGTTTC CAAGGCCTAT AAGGAAAAGA TTAATAACCT
• GWV R Q M PGKG LEW MGI 101 TTGGTTGGGT GCGCCAGATG CCTGGGAAGG GTCTCGAGTG GATGGGCATT AACCAACCCA CGCGGTCTAC GGACCCTTCC CAGAGCTCAC CTACCCGTAA CDR2
IDPS NSY TRY SPSF QGQ-151 ATCGATCCGT CTAATAGCTA TACCOGOTAT TCTCCGAGCT TTCAGGGCCA TAGCTAGGCA GATTATCGAT ATGGGCGATA AGAGGCTCGA AAGTCCCGGT
•VTI SADK SIS TAY L Q W S -201 GGTGACCATT AGCGCGGATA AAAGCATTAG CACCGCGTAT CTTCAATGGA CCACTGGTAA TCGCGCCTAT TTTCGTAATC GTGGCGCATA GAAGTTACCT
• SLK ASD TAMY Y С A RWY 251 GCAGCCTGAA AGCGAGCGA"' ACGGCCATGT ATTATTGCGC GCGTTGGTAT CGTCGGACTT TCGCTCGCT?-.. TGCCGGTACA TAATAACGCG CGCAACCATA
CDR3
YKPF DVW GQG TLVT VSS 301 TATAAGCCTT TTGATGTTTG GGGCCAAGGC ACCCTGGTGA CGGTTAGCTC ATATTCGGAA AACTACAAA Z CCCGGTTCCG TGGGACCACT GCCAATCGAG
• S
351 A T
157
IL-23 pi9 3759W'0E
VL-GCE (SEQ ID NO: 142 ):(Аминокисл <> тная последовательность VL представляет собой 5059OS)
QSVL TQP PSV SGAP G Q R • 1 CAGTCTGTGC TGACGCAGCC GCCCTCAGTG TCTGGGGCCC CAGGGCAGAG GTCAGACACG ACTGCGTCGG CGGGAGTCAC AGACCCCGGG GTCCCGTCTC
CDRI
¦VTI SCTG SSS NIG S G Y D • 51 GGTCACCATC TCCTGCACTG GGAGCAGCTC CAACATCGGG AGCGGTTATG CCAGTGGTAG AGGACGTGAC CCTCGTCGAG GTTGTAGCCC TCGCCAATAC
• VHW VQQ LPGT A P К LLI 101 ATGIACACTG GTACCAGCAG CTTCCAGGAA CAGCCCCCAA ACTCCTCATC TACATGTGAC CATGGTCGTC GAAGGTCCTT GTCGGGGGTT TGAGGAGXAG
CDR2
Y G N S KRP SGV PDRF SGS-151 TATGGTAACA GCAAGCGGCC CTCAGGGGTC CCTGACCGAT TCTCTGGCTC ATACCATTGT CGTTCGCCGG GAGTCCCCAG GGACTGGCTA AGAGACCGAG
•KSG TSAS LAI TGL QSED-201 CAAGTCTGGC ACCTCAGCCT CCCTGGCCAT CACTGGGCTC CAGAGCGAGG GrTCAGACCG TGGAGTCGGA GGGACCGGTA GTGACCCGAG GTCTCGCTCC
CDR3
• EAD YYC ASWT DGL SLV 251 ATGAGGCTGA TTATTACTGC GCCAGCTGGA CCGACGGCCT GAGCCTGGTG TACTCCGACT AATAATGACG CGGTCGACCT GGCTGCCGGA CTCGGACCAC
VFGG GTK LTV L G 301 GTGTTCGGCG GCGGCACCAA GCTGACCGTG CTGGGC CACAAGCCGC CGCCGTGGTT CGACTGGCAC GACCCG
IL-23 pl9 3759H"°5
VL-HCO (SEQ ID N0:143): (Аминокислотная последовательность VL представляет собой 50 5 905)
QSVL TQP PSV SGAP G Q R ¦ 1 CA'V.ViOGTGC TGACCCAGCC CCCCAGCGTG AGCGGCGCCC CCGGCCAGCG #K!K"CACG ACTGGGTCGG GGGGTCGCAC TCGCCGCGGG GGCCGGTCGC
CDRI
¦VTI SCTG SSS NIG S G Y D • 51 CGTGACCATC AGCTGCACCG GCAGCAGCAG CAACATCGGC AGCGGCTACG GCACTGGTAG TCGACGTGGC CGTCGTCGTC GTTGTAGCCG TCGCCGATGC
• VHW Y Q Q LPGT APK LLI 101 ACGTGCACTG GTACCAGCAG CTGCCCGGCA CCGCCCCCAA GCTGCTGATC TGCACGTGAC CATGGTCGTC GACGGGCCGT GGCGGGGGTT CGACGACTAG
CDR2
YGNS KRP SGV PDRF SGS-151 TACGGCAACA GCAAGCGCCC CAGCGGCGTG CCCGACCGCT TCAGCGGCAG ATGCCGTTGT CGTTCGCGGG GTCGCCGCAC GGGCTGGCGA AGTCGCCGTC •KSG TSAS LAI TGL QSED 201 CAAGAGCGGC ACCAGCGCCA GCCTGGCCAT CACCGGCCTC CAGAGCGAGG GTTCTCGCCG TGGTCGCGGT CGGACCGGTA GTGGCCGGAG GTCTCGCTCC
CDR3
• EAD YYC ASWT DGL SLV 251 ACGAGGCCGA CTACTACTGT GCCAGCTGGA CCGACGGCCT GAGCCTGGTG TGCTCCGGCT GATGATGACA CGGTCGACCT GGCTGCCGGA CTCGGACCAC
VFGG GTK LTV LG 301 GTGTTCGGCG GCGGCACCAA GCTGACCGTG CTGGGC CACAAGCCGC CGCCGTGGTT CGACTGGCAC GACCCG
158
IL-23 pl9 3759№/и
VL-MOR (SEQ ID NO: 144 ) : (Аминокислотная последовательность VL представляет собой 5059°*)
QSVL TQP PSV SGAP G Q R • ). C CDRI
•VTI SCTG SSS NIG SGVD TGTGACCATC TCGTGTACGC GCAGCAGCAG CAACATTGGT TCTGGTTATG ACACTGGTAG AGCACATGCC CGTCGTCGTC GTTGTAACCA AGACCAATAC
• VHW Y Q Q LPGT A P К LLI 101 ATGTGCATTG GTACCAGCAG TTGCCCGGGA CGGCGCCGAA ACTTCTGATT TACACGTAAC CATGGTCGTC AACGGGCCCT GCCGCGGCTT TGAAGACTAA
CDR2
Y G N S KRP SGV PDRF SGS-2S: TATGGTAATT CTAAGCGTCC CTCAGGCGTG CCGGATCGTT TTAGCGGATC ATACCATTAA GATTCGCAGG GAGTCCGCAC GGCCTAGCAA AATCGCCTAG •KSG TSAS LAI TGL QSED 201 CAAAAGCGGC ACCAGCGCGA GCCTTGCGAT TACGGGCCTG CAAAGCGAAG GTTTTCGCCG TGGTCGCGCT CGGAACGCTA ATGCCCGGAC GTTTCGCTTC
CDR3
• EAD YYC ASWT DGL SLV ACGAAGCGGA TTATTATTGC GCTTCTTGGA CTGATGGTCT TTCTCTTGTT TGCTTCGCCT AATAATAACG ".-GAAGAACCT GACTACCAGA AAGAGAACAA
VFGG GTK LTV LG 30! GTGTTTGGCG GCGGCACGAA GTTAACCGTT CTTGGC CACAAACCGC CGCCGTGCTT CAATTGGCAA GAACCG
Таблица 10
SEQ ID NO:145 (Субъединица IL-23pl9 человека)
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr
15 10 15
Ala Gin Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gin
20 25 30
Cys Gin Gin Leu Ser Gin Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His
35 40 45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr
50 55 60
Thr Asn Asp Val Pro His lie Gin Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gin 65 70 75 80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gin Phe Cys Leu Gin Arg He His Gin Gly
85 90 95
Leu He Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp He Phe Thr Gly Glu
100 105 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gin Leu His Ala Ser Leu
115 120 125
Leu Gly Leu Ser Gin Leu Leu Gin Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr
130 135 140
Gin Gin He Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gin Pro Trp Gin Arg Leu Leu 145 150 155 160
Leu Arg Phe Lys He Leu Arg Ser Leu Gin Ala Phe Val Ala Val Ala
165 170 175
Ala Arg Val Phe Ala His Gly A.la Ala Thr Leu Ser Pro 180 185
СПИСОК П )СЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> CENTOCOR, INC.
<120> ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ПР01ИВ IL-23, КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБЫ И ПРИМЕНЕНИЕ
<130> CEN5117РСТ
<14 0> ТО BE ASSIGNED <141> 2006-12-28
<150> 60/754,889 <151> 2005-12-29
<160> 147
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1 <211> 5 <212> PRT
<213> Home sapiens <400> 1
Asn Tyr Ala lie Ser 1 5
<210> 2 <211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 2
Ser Asn Tyr lie Ser 1 5
<210> 3 <211> 5 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Asn Tyr Trp lie Ser 1 5
<210> 4 <211> 5 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Ser Tyr Trp lie Thr 1 5
<210> 5 <211> 5 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Asn Туг Trp lie Gly 1 5
<210> 6 <211> 5 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 6
Ser Phe Gly Met Ser 1 5
<210> 7 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 7
Gly lie He Pro Met Phe Gly Tyr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 8 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8
Gly Не Не Pro Val Phe Gly Phe Thr His Tyr Ala Gin Lys Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 9 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 9
Gly He He Pro He Phe Gly His Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 10 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 10
He He He Pro Pro He Gly Asn Ala Trp Tyr Ala Gin Lys Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 11 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Leu He Asp Pro Asn Phe Gly Gly
1 5 Gly
Ala Tyr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 10 15
<210> 12 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Leu He Asp Pro Val Phe Gly Gly
1 5 Gly
Ala Tyr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 10 15
<210> 13 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Leu He Asp Pro Met Phe Gly Gly Ha Tyr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 1 5 10 15
Gly
<210> 14 <211> 16 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Не Asn Ala His Leu Gly Gly Thr Trp Tyr Ala Gin Lys Phe Gin Gly 1 5 10 is
<210> 15 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
He Ser Pro Gly Thr Gly He Asn
1 5 Gly
Ala Tyr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 10 15
<210> 16 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> unsure <222> (1)
<223> Synthesized human sequenc¦: where Xaa can be G, I, or L <220>
<221> unsure <222> (2)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be I or S <220>
<221> unsure <222> (3)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be I, P, N, or D <220>
<221> unsure <222> (4)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be P, G, or A <220>
<221> unsure <222> (5)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be I, M, P, <223> T, H, N, or V
<220>
<221> unsure
<222> (6)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be F, I, G, or L
<220>
<221> unsure <222> (7)
<223> Synthesized human sequence <220>
<221> unsure <222> (8)
<223> Synthesized human sequence <220>
<221> unsure <222> (9)
<223> Synthesized human sequence <220>
<221> unsure <222> (10)
<223> Synthesized human sequence
where Xaa can G or I
where Xaa can be H, Y, N, or G
where Xaa can be A or T
where Xaa can be N, W, or Y
<400> 16
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Ala Gin Lys Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Homo
sapiens
<400> 17
Trp Не Arg Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Glu
15 10 15
Gly
<210> 18 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 18
Val Ser Tyr He Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Homo
sapiens
<400> 19
He He Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 20
<211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
Не Не Asp Pro Ser Asn Ser Tyr
1 5 Gly
Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 10 15
<210> 21 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
He He Asp Pro Ser Asn Ser Tyr
1 5 Gly
№r Asp Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 10 15
<210> 22 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
He He Ser Pro Thr Gly Ser Val Tar Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 1 5 io 15
Gly
<210> 23 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 23
He He Ser Pro Thr Gly Ser Sei Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 24 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 24
Phe He Ser Pro Asp Gly Ser His Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 25 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Не Не Ser Pro Ser Gly Ser Thr Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 26 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 26
He He Ser Pro Thr Gly Ser A] a Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 27 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 27
He He Asp Pro Val Ser Ser Trp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 28 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> unsure <222> (3)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be D or S <220>
<221> unsure <222> (5)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be S, V, D, or T <220>
<221> unsure <222> (6)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be N, S, or G <220>
<221> unsure <222> (8)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be Y, W, T, H, V, S, or A <220>
<221> unsure <222> (10)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be N, D, R, K, or W
<400> 28
Не Не Xaa Pro Xaa Xaa Ser Xaa Thr Xaa Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
15 10 15
Gly
<210> 29 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 29
Asn He Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
15 10 15
Gly
<210> 30 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 30
Asn He Glu His Lys Tyr Leu Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 31
<211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 31
Asn He Glu His Lys Phe Met GH Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Gly
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 32 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 32
Gly He Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr His Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 33 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 33
Ser He Glu His Lys Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Pro
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 34
<211> 19 <212> PRT
<213> Home sapiens <400> 34
Gin Не Glu His Lys Туг Leu Sei Tyr Thr Thr Leu Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 35 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 35
Ser He Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr Phe Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 36 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 36
Asn Не GIQ Gly Lys Tyr Thr Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 37 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 37
Gly He Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Ala Thr Leu Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 38 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 38
Asn He Glu His Lys Tyr Leu Gly Tyr Ala Thr Val Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 39 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 39
Ser He Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Gly
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 40 <211> 8 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 40
Asp He Tyr Ala Gly Met Asp Val 1 5
<210> 41 <211> 18 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 41
Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met Phe
15 10 15
Asp Leu
<210> 42 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 42
His Туг Туг Gly Met Asp Туг 1 5
<210> 43 <211> 12 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 43
Gly Thr Рле Trp Ser Phe Gly Asn Tyr Phe Ala Asn 15 10
<210> 44 <211> 8 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 44
Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val 1 5
<210> 45 <211> 12 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 45
Туг Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met: Gin Phe Asp Asn 15 10
<210> 46 <211> 12 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 46
Arg Ala Ser Gin Ser Val Leu Gly Asn Tyr Leu Ala 15 10
<210> 47 <211> 12 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 47
Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 48 <211> 13 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 48
Ser Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Tyr Tyr Val Asn 15 10
<210> 49 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 49
Arg Ala Ser Gin Ser He Phe Tyr Asn Leu Ala 15 10
<210> 50 <211> 14 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 50
Thr Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Gly Tyr Asp Val His 15 10
<210> 51
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 51
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Ser Val Ser 15 10
<210> 52 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 52
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5
<210> 53 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 53
Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr 1 5
<210> 54 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 54
Gly Asn Thr His Arg Pro Ser 1 5
<210> 55 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 55
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5
<210> 56 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 56
Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser 1 5
<210> 57 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 57
Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser 1 5
<210> 58 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 58
His Gin Tyr Gly Ser He Ser Thr Thr 1 5
<210> 59 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 59
Gin Gin Tyr Ser His Leu Leu He Thr 1 5
<210> 60
<211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 60
Gin Gin Tyr Ser His He Ser Lei.. Thr 1 5
<210> 61 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 61
Gin Gin Phe Ala His He Leu Lei. Thr 1 5
<210> 62 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 62
Gin Gin Thr Ser Asn Thr Pro Phe: Thr 1 5
<210> 63 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 63
Gin Gin Phe He Thr Tyr Leu Pre Thr
1 5
<210> 64 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 64
Gin Gin Asp Ala Leu Ser Pro Phe Thr 1 5
<210> 65 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 65
Gin Gin Asp Arg Gly Thr Pro Phe Thr 1 5
<210> 66 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 66
Gin Gin Ser Leu Asn He Pro Phe Thr 1 5
<210> 67 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 67
Gin Gin Asp Thr Ser Ser Pro Phe Thr 1 5
<210> 68 <211> 10 <212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> unsure <222> (3)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be T, F, D, or S <220>
<221> unsure <222> (4)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be S, I, A, T, R, or L <220>
<221> unsure <222> (5)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be N, T, L, S, or G
<220>
<221> unsure <222> (6)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be T, Y, S, or I <220>
<221> unsure <222> (7)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be P or L <220>
<221> unsure <222> (8)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be F or P <400> 68
Gin Gin Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Thr 1 5 10
<210> 69 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 69
Gin Thr Tyr Ala Ser Leu Gly Pro Gly Glu Val 15 10
<210> 70 <211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 70
Gin Gin Tyr Ser Ser Glu Pro Val Thr 1 5
<210> 71 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 71
Ser Ser Trp Thr Pro Ser Ser Val Val 1 5
<210> 72 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 72
Ser Ser Trp Thr Asp Thr Pro Asn Met He Val 15 10
<210> 73 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 73
Ala Ser Trp Thr Asp Gly Leu Ser Leu Val Val 1 5 10
<210> 74 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> unsure <222> (1)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be S or A <220>
<221> unsure <222> (6)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be T or G <220>
<221> unsure <222> (7)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be P or L <220>
<221> unsure <222> (8)
<223> Synthesized human sequence where Xaa can be S or N
<220>
<221> unsure
<222> (9)
<223> Synthesized
<220>
<221> unsure
<222> (10)
<223> Synthesized
human sequence where
human sequence where
Xaa can be S, M, or L
Xaa can be I or V
<400> 74
Xaa Ser Trp Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val 1 5 io
<210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Homo
sapiens
<400> 75
Ser Ser Tyr Asp Thr Asn Lys Pro Leu Val Val 1 5 io
<210> 76 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 76
Gly Ser Tyr Asp Val Tyr Gly Arc Phe Tyr Val 1 5 10
<210> 77 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 77
Ser Ser Tyr Tyr Phe Tyr Leu Gin Arg lie Val 1 5 10
<210> 78 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 78
Gin Thr Tyr Tyr Phe Ser Tyr Ser Gly Pro Val 1 5 io
<210> 79 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 79
Gly Ser Trp Asp Pro He Phe Ser Tir Glu Val
<210> 80 <211> 117 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 80
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly
1 5 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20
Ala He Ser Trp Val Arg Gin Ala
35 40 Gly Gly He He Pro Met Phe Gly 50 55
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
10 15 Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 25 30 Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 45
Tyr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 60
Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala 65 70 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85
Ala Arg Asp He Tyr Ala Gly Met 100
Val Thr Val Ser Ser 115
Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
75 80 Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
90 95 Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu 105 110
<210> 81 <211> 113 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 81
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser GH Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met.
35 40 45
Gly Gly He He Pro Phe Gly Tyr Ala Gin Lys Phe Gin Gly Arg Val
50 55 60
Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser 65 70 75 80
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp He
85 90 95
Tyr Ala Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110
Ser
<210> 82
<211> 108
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 82
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys 1-го Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Не Туг Gly Ala Ser Ser Arg Ale
50 55 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr 85
Thr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 100
Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 60
Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu
75 80 Cys His Gin Tyr Gly Ser He Ser
90 95 Val Glu He Lys 105
<210> 83 <211> 105 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 83
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro ч1а Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
He Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Tyr He Ser Leu Thr Phe
85 90 95
Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 1 15
<210> 84 <211> 103 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 34
Asp Не Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
He Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala 7hr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe "hr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Tyr He Thr Phe Gly Gin
85 90 95
Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100
<210> 85 <211> 102 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 85
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Al i Ser Gin Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
He Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin He Thr Phe Gly Gin Gly
85 90 95
Thr Lys Val Glu He Lys 100
<210> 86 <211> 127 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 86
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly He He Pro He Phe Gly His Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe
50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr GJ у Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met
100 105 110
Met Phe Asp Leu Trp Gly Gin Gl / Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 12 ) 125
<210> 87 <211> 122 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 87
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He He Pro Gly Ala Tyr Ala Gin Lys Phe Gin Gly Arg Val Thr
50 55 60
He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser 65 70 75 80
Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Lys Lys
85 90 95
Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met Phe Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 88 <211> 118 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 88
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly
1 5 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20
Tyr He Ser Trp Val Arg Gin Ala 35 4 0
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
10 15 Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 25 30 Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 45
Gly Ala Tyr Ala Gin Lys Phe Gin
50 55 Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85
Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met 100
Leu Val Thr Val Ser Ser 115
Gly Arg Val Thr He Thr Ala Asp 60
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu
75 80 Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly
90 95 Phe Asp Leu Trp Gly Gin Gly Thr 105 110
<210> 89 <211> 119 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 89
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala S-;r Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn
Туг Не Ser Trp Val Arg Gin A] a
35 4 С
Gly He Gly Tyr Ala Gin Lys Ph ъ
50 55 Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Ту:: 65 70 Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cy-: 85
Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met 100
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115
25 30 Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 45
Gin Gly Arg Val Thr He Thr Ala 60
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
75 80 Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr
90 95 Met Phe Asp Leu Trp Gly Gin Gly 105 110
<210> 90 <211> 122 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 90
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly
1 5 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20
Tyr He Ser Trp Val Arg Gin Ala
35 40 Gly He Pro Phe Gly Ala Tyr Ala
50 55 He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 65 70
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
10 15 Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 25 30 Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 45
Gin Lys Phe Gin Gly Arg Val Thr 60
?hr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser 75 80
Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala V &l Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Lys Lys
85 90 95
Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met Phe Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr VaL Ser Ser 115 120
<210> 91 <211> 122 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 91
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He Pro Phe Gly Ala Tyr Ala Gin Lys Phe Gin Gly Arg Val Thr
50 55 60
He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser 65 70 75 80
Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Lys Lys
85 90 95
Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met Phe Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 92 <211> 122 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 92
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He Pro Phe Gly Ala Tyr Ala Gin Lys Phe Gin Gly Arg Val Thr
50 55 60
He Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser 65 70 75 80
Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val myr Tyr Cys Ala Arg Ser Lys Lys
85 90 95
Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr fro Leu Met Met Phe Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 93 <211> 108 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 93
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro A .a Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ar j Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Ly. Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 4 0 4 5
He Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Ser Asn Thr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys
100 105
<210> 94 <211> 107 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 94
Glu He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
He Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Tyr Tyr Cys G n Gin Thr Ser Asn Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Va . Glu He Lys 100 105
<210> 95 <211> 101 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 95
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
He Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Phe Gly Gin Gly Thr
85 90 95
Lys Val Glu He Lys 100
<210> 96 <211> 103 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 96
Asp lie Val
Leu
Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arcs 20
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys 35 40 He Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala
50 55 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 Pro Glu Asp Phe Ala Tyr Tyr Cys 85
Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100
Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 25 30 Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 45
Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 60
Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu
75 80 Gin Gin Pro Phe Thr Phe Gly Gin 90 95
<210> 97 <211> 104 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 97
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro
1 5 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 20
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys
35 40 He Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala
50 55 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
10 15 Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 25 30 Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 45
Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 60
'; hr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Tyr Tyr Cys Gin Gin Thr Pro Phe Thr Phe Gly
85 90 95
Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100
<210> 98 <211> 104 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 98
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ua Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg •Ua Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys :)ro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
He Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala "hr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Tyr Tyr Cys Gin Gin Asn Pro Phe Thr Phe Gly
85 90 95
Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100
<210> 99 <211> 116 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 99
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly
1 5 Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly 20
Trp He Ser Trp Val Arg Gin Ala
35 40 Gly Trp He Arg Pro Gly Asp Ser
50 55 Glu Gly Gin Val Thr He Ser Ala
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
10 15 Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 25 30 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 45
Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 60
Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser 115
<210> 100 <211> 110 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 1C0
Asp He Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin
15 10 15
Arg Val Thr He Ser Cys Ser Gly S sr Ser Ser Asn He Gly Ser Tyr 20 2 5 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gin Gin be 1 Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
He Tyr Gly Asn Thr His Arg Pr j Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala He Thr Gly Leu Gin 65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Ala Ser Leu Gly
85 90 95
Pro Gly Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 101 <211> 121 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 101
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe' Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp He Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr He Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Phe Trp Ser Phe Сly Asn Tyr Phe Ala Asn Trp Gly 100 305 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 102 <211> 107 <212> PRT
<213> Komo sapiens <400> 102
Asp He Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser He Phe Tyr Asn
20 !5 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ser Ser Glu Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105
<210> 103 <211> 117 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 103
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gl\ Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gl\ Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He He Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gin Gly Gin Val Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 104 <211> 116 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 104
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He He Asp Pro Ser Asn Ser T IT Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
50 55 60
Gly Gin Val Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser 115
<210> 105 <211> 116 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 105
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 2 5 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met Fro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He He Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin
50 55 60
Gly Gin Val Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val
100 1(5 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 106 <211> 115 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 106
Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala 31u Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser
15 10 15
Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr Trp
20 ,!5 30
He Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
35 40 45
lie He Asp Pro Ser Asn Ser Tyr rlhr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin Gly
50 55 60
Gin Val Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu Gin 65 70 75 80
Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser 115
<210> 107 <211> 113 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 107
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gl/ Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 4 0 4 5
Gly He He Asp Pro Ser Thr Tyr: Ser Pro Ser Phe Gin Gly Gin Val
50 55 60
Thr He Ser Ala Asp Lys Ser Ho Ser Thr Ala Tyr Leu Gin Trp Ser 65 70 75 80
Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr
85 90 95
Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110
Ser
<210> 108
<211> 113 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 108
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 4 0
Gly He He Pro Ser Ser Thr Tyr
50 55 Thr He Ser Ala Asp Lys Ser lie 65 70 Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala 85
Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly 100
Ser
Ser Pro Ser Phe Gin Gly Gin Val 60
Ser Thr Ala Tyr Leu Gin Trp Ser
75 80 Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr
90 95 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 105 110
<210> 109 <211> 111 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 109
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly 20
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met
35 40 Gly He Pro Ser Thr Tyr Ser Pro
50 55 Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr 65 70 Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr 85
Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 25 30 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 45
Ser Phe Gin Gly Gin Val Thr He 60
Ala Tyr Leu Gin Trp Ser Ser Leu
75 80 Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys 90 95
Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
<210> 110 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 110
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met 3ro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly He He Pro Ser Thr Tyr Ser ;)ro Ser Phe Gin Gly Gin Val Thr
50 55 60
He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu Gin Trp Ser Ser 65 70 75 80
Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr Tyr
85 90 95
Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
<210> 111 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 111
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Glr Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
15 10 15
Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gl ' Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Me* Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 4 0 4 5
Gly He He Pro Ser Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin Gly Gin Val Thr
50 55 60
He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu Gin Trp Ser Ser 65 70 75 80
Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr Tyr
85 90 95
Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
<210> 112 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 112
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly
1 5 Ser Leu Lys He Ser Cys Lys Gly 20
Trp He Gly Trp Val Arg Gin Met
35 40 Gly He He Pro Ser Thr Tyr Ser
50 55 He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser 65 70
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
10 15 Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 25 30 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 45
Pro Ser Phe Gin Gly Gin Val Thr 60
'hr Ala Tyr Leu Gin Trp Ser Ser 75 80
Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met 85
Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Glr 100
Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr Tyr
90 95 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 105 110
<210> 113 <211> 109 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 113
Asp He Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin
15 10 15
Arg Val Thr He Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu He Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala He Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Thr Pro Ser
85 90 95
Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105
<210> 114 <211> 106 <212> PRT
<213> Home sapiens <400> 114
Asp He Val Leu Thr Gin Pro Pre
1 5 Arg Val Thr He Ser Cys Thr Gly 20
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gin Gin
35 40 Leu He Tyr Gly Asn Ser Lys Arg
50 55 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser 65 70 Gin Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 85
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 100
Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin
10 15 Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Gly 25 30 Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 45
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 60
Ala Ser Leu Ala He Thr Gly Leu
75 80 Tyr Cys Ser Ser Trp Thr Pro Val
90 95 Val Leu 105
<210> 115 <211> 106 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 115
Asp He Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin
15 10 15
Arg Val Thr He Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu He Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Iro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Se" Ala Ser Leu Ala He Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Trp Thr Ser Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Th.i Val Leu 100 105
<210> 116 <211> 104 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 116
Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin Arg Val
15 10 15
Thr He Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn He Gly Ser Gly Tyr Asp
20 25 30
Val His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu He
35 40 45
Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala He Thr Gly Leu Gin Ser 65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Trp Thr Ser Val Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100
<210> 117
<211> 121 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 117
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly
1 5 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala
35 40 Ser Asn He Ser Ser Ser Gly Ser 50 55
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
10 15 Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 25 30 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45
Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg 65 70 Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala 85
Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr 100
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 120
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
75 80 Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
90 95 Leu Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly 105 110 Ser
<210> 118 <211> 114 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 118
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Hy Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asn He Gly Thr Tyr Tyr Ala Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser
50 55 60
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 65 70 75 80
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro
85 90 95
Tyr Leu Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser
<210> 119 <211> 113 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 119
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly
1 5 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala
35 40 Ser He Gly Thr Tyr Tyr Ala Val
50 55 Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
10 15
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg 60
leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala
Glu Asp Thr Ala Val 85
Leu Met Gin Phe Asp 100
Ser
70 75 Tyr Tyr Cyr, Ala Arg Tyr 90
Asn Trp Gl" Gin Gly Thr 105
Trp Gly Thr Pro Tyr 95
Leu Val Thr Val Ser 110
<210> 120 <211> 114 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 120
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asn He Thr Tyr Tyr Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser
50 55 60
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 65 70 75 80
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro
85 90 95
Tyr Leu Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser
<210> 121 <211> 114 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 121
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asn He Thr Tyr Tyr Ala Ser 7a 1 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser
50 55 60
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 65 70 75 80
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro
85 90 95
Tyr Leu Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 :05 110
Ser Ser
<210> 122 <211> 114 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 122
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser G.l у Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Al i Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 4 С 4 5
Ser Asn He Gly Thr Tyr Ala Se - Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser
50 55 60
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 65 70 75 80
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro
85 90 95
Tyr Leu Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser
<210> 123 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 123
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly
1 5 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala
35 40 Ser He Thr Tyr Tyr Ala Val Lys 50 55
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
10 15 Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 25 30 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 45
Ну Arg Phe Thr He Ser Arg Asp 60
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lei..
65 70
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85
Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin 100
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
75 80 Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu
90 95 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 105 110
<210> 124 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 124
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser He Thr Tyr Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp
50 55 60
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 65 70 75 80
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu
85 90 95
Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
<210> 125 <211> 11.2
<212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 125
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gl • Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Al.. Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser He Thr Tyr Ala Ser Val Ly; Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp
50 55 60
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 65 70 75 80
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu
85 90 95
Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
<210> 126 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 126
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 Ser He Thr Tyr Ala Ser Val Lys
50 55 Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85
Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin 100
Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp 60
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
75 80 Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu
90 95 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 105 110
<210> 127 <211> 112 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 127
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala .Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 2.5 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser He Thr Tyr Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp
50 55 60
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 65 70 75 80
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu
85 90 95
Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 135 110
<210> 128 <211> 111 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 128
Asp Не Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin
15 10 15
Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met He Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Thr Asn
85 90 95
Lys Pro Leu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
loo ::05 no
<210> 129 <211> 104 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 129
Asp He Ala Leu Thr Gin Pro Ala S. :r Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15
Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly 20
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gin Gin
35 40 Met He Tyr Ser Val Ser Ser Arg
50 55 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr 65 70 Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 85
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100
Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 25 30 His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 45
Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 60
Ala Ser Leu Thr He Ser Gly Leu
75 80 Tyr Cys Ser Ser Tyr Val Phe Gly 90 95
<210> 130 <211> 102 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 130
Asp He Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin
15 10 15
Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met He Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr T\r Cys Tyr Val Phe Gly Gly Gly 85 90 95
Thr Lys Leu Thr Val Leu 100
<210> 131 <211> 104 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 131
Asp He Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin
15 10 15
Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met He Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Tyr Asp Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100
<210> 132 <211> 103 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 132
Asp He Ala Leu Thr Gin Pro Al i Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin
15 10 15
Ser He Thr He Ser Cys Thr Gl" Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gin Glr. His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 4 0 4 5
Met He Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Asp Val Phe Gly Gly
85 90 95
Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100
<210> 133 <211> 381 <212> ДНК <213> Homo sapiens
<400> 133
caggtgcagc
tggtgcagtc
tggggctgag
gtgaagaagc
ctgggtcctc
ggtgaaggtc
tcctgcaagg
cttctggagg
caccttcagc
agcaactaca
tcagctgggt
gcgacaggcc
120
cctggacaag
ggcttgagtg
gatggggatc
agccctggca
ccggtatcaa
cgcatactac
180
gcacagaagt
tccagggcag
agtcacgatt
accgcggacg
aatccacgag
cacagcctac
240
atggagctga
gcagcctgag
atctgaggac
acggccgtgt
attactgtgc
gagaagcaag
300
aagggcatgt
acggcggctg
gacctacccc
ctgatgatgt
tcgacctgtg
gggccagggc
360
accctggtga
ccgtgagcag
381
<210> 134 <211> 381
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 134
caggtgcagc
tggtgcagag
cggcgccga i
gtgaagaagc
ccggcagcag
cgtgaaggtg
agctgcaagg
ccagcggcgg
caccttcagi:
agcaactaca
tcagctgggt
gcgccaggcc
120
cccggccagg
gcctggagtg
gatgggcat!
agccccggca
ccggcatcaa
cgcctactac
180
gcccagaagt
tccagggccg
cgtgaccatc
accgccgacg
agagcaccag
caccgcctac
240
atggagctga
gcagcctgcg
cagcgaggac
accgccgtgt
actactgcgc
ccgcagcaag
300
aagggcatgt
acggcggctg
gacctacccc
ctgatgatgt
tcgacctgtg
gggccagggc
360
accctggtga
ccgtgagcag
381
<210> 135 <211> 381 <212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 135
caggtgcaat
tggttcagtc
tggcgcggaa
gtgaaaaaac
cgggcagcag
cgtgaaagtg
agctgcaaag
cctccggagg
cactttttct
tctaattata
tttcttgggt
gcgccaagcc
120
cctgggcagg
gtctcgagtg
gatgggcatt
tctcctggta
ctggtattaa
tgcttattat
180
gctcagaagt
ttcagggtcg
ggtgaccatt
accgcggatg
aaagcaccag
caccgcgtat
240
atggaactga
gcagcctgcg
tagcgaagat
acggccgtgt
attattgcgc
gcgttctaag
300
aagggtatgt
atggtggttg
gacttatcct
cttatgatgt
ttgatctttg
gggccaaggc
360
accctggtga
cggttagctc
381
<210> 136 <211> 324 <212> ДНК <213> Homo sapiens
<400> 136
gagatcgtgc tgacccagag ccccgccac: : ctgagctgcc gcgccagcca gagcgtgaq z cccggccagg ccccccgcct gctgatcta : gcccgcttca gcggcagcgg cagcggcac : cccgaggact tcgccgtgta ctactgccag cagggcacca aggtggagat caag
ctgagcctga gccccggcga gcgcgccacc 60 agcaactacc tggcctggta ccagcagaag 120 tacgccagcc gccgcgccac cggcgtgccc 180 gacttcaccc tgaccatcag cagcctggag 240 cagaccagca acaccccctt caccttcggc 300
324
<210> 137 <211> 324 <212> ДНК <213> Homo sapiens
<400> 137
gaaattgtgt "gacacagtc tccagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gccaggttca crtggcagtgg gtctgggaca cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagggtacga aagttgaaat taaa ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 agcaactact tagcctggta ccaacagaaa 120 tacgcatccc gcagggccac tggcgtgcca 180 gacttcactc tcaccatcag cagcctagag 240 cagacttcta atactccttt tacctttggc 300
324
<210> 138 <211> 324 <212> ДНК <213> Homo sapiens
<400> 133
gagatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagctgca gagcgagcca gtctgtttct ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg cctgaagact ttgcggtgta ttattgccag cagggtacga aagttgaaat taaa ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 tctaattatc tggcttggta ccagcagaaa 120 tatgcttctc gtcgtgcaac tggggtcccg 180 qattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cagacttcta atactccttt tacctttggc 300
324
<210> 139 <211> 351 <212> ДНК <213> Homo sapiens
<400> 139
gaggtgcagc
tggtgcagtc
tggagcagag
gtgaaaaagc
ccggggagtc
tctgaagatc
tcctgtaagg
gttctggata
cagctttagc
aactactgga
tcggctgggt
gcgccagatg
120
cccgggaaag
gcctggagtg
gatggggat z
atcgacccta
gcaactctta
caccagatac
180
agcccgtcct
tccaaggcca
ggtcaccat z
tcagccgaca
agtccatcag
caccgcctac
240
ctgcagtgga
gcagcctgaa
ggcctcgga :
accgccatgt
attactgtgc
gagatggtac
300
tacaagccct
tcgacgtgtg
gggccaggg::
accctggtga
ccgtgagcag
351
<210> 140
<211> 351
<212> ДНК
<213> Homo
sapiens
<400> 140
gaggtgcagc
tggtgcagag
cggcgccgag
gtgaagaagc
ccggcgagag
cctgaagatc
agctgcaagg
gcagcggcta
cagcttcagc
aactactgga
tcggctgggt
gcgccagatg
120
cccggcaagg
gcctggagtg
gatgggcatc
atcgacccca
gcaacagcta
cacccgctac
180
agccccagct
tccagggcca
ggtgaccatc
agcgccgaca
agagcatcag
caccgcctac
240
ctgcagtgga
gcagcctgaa
ggccagcgac
accgccatgt
actactgcgc
ccgctggtac
300
tacaagccct
tcgacgtgtg
gggccagggc
accctggtga
ccgtgagcag
351
<210> 141 <211> 351 <212> ДЕК <213> Homo sapiens
<400> 141
gaggtgcaat
tggttcagag
cggcgcggaa
gtgaaaaaac
cgggcgaaag
cctgaaaatt
agctgcaaag
gttccggata
ttccttttct
aattattgga
ttggttgggt
gcgccagatg
120
cctgggaagg
gtctcgagtg
gatgggcat t
atcgatccgt
ctaatagcta
tacccgctat
180
tctccgagct
ttcagggcca
ggtgaccat t
agcgcggata
aaagcattag
caccgcgtat
240
cttcaatgga
gcagcctgaa
agcgagcga t
acggccatgt
attattgcgc
gcgttggtat
300
tataagcctt
ttgatgtttg
gggccaagq z
accctggtga
cggttagctc
351
<210> 142
<400> 142
ООО
<210> 143
<211> 336
<212> ДНК
<213> Homo
sapiens
<400> 143
cagtctgtgc
tgacgcagcc
gccctcagtg
tctggggccc
cagggcagag
ggtcaccatc
tcctgcactg
ggagcagctc
caacatcggg
agcggttatg
atgtacactg
gtaccagcag
120
cttccaggaa
cagcccccaa
actcctcatc
tatggtaaca
gcaagcggcc
ctcaggggtc
180
cctgaccgat
-ctctggctc
caagtctggc
acctcagcct
ccctggccat
cactgggctc
240
cagagcgagg
atgaggctga
ttattactgc
gccagctgga
ccgacggcct
gagcctggtg
300
gtgttcggcg
gcggcaccaa
gctgaccgtg
ctgggc
336
<210> 144 <211> 336 <212> ДНК <213> Homo sapiens
<400> 144
cagagcgtgc tgacccagcc tcgtgtacgg gcagcagcag ttgcccggga cggcgccgaa ccggatcgtt: ttagcggatc caaagcgaag acgaagcgga gtgtttggcc gcggcacgaa
gccttcagt.g agtggcgcac caacattg <'t tctggttatg acttctgatt tatggtaatt caaaagcgqc accagcgcga ttattattcc gcttcttgga gttaaccgt t cttggc caggtcagcg tgtgaccatc 60 atgtgcattg gtaccagcag 120 ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180 gccttgcgat tacgggcctg 240 ctgatggtct ttctcttgtt 300
336
<210> 145 <211> 189 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 145
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr
15 10 15
Ala Gin Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gin
20 25 30
Cys Gin Gin Leu Ser Gin Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His
35 40 45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr
50 55 60
Thr Asn Asp Val Pro His He Gin Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gin 65 70 75 80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gin Phe Cys Leu Gin Arg He His Gin Gly
85 90 95
Leu He Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp He Phe Thr Gly Glu
100 105 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gin Leu His Ala Ser Leu
115 120 125
Leu Gly Leu Ser Gin Leu Leu Gin Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr
130 135 140
Gin Gin He Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gin Pro Trp Gin Arg Leu Leu
145 150 Leu Arg Phe Lys He Leu Arg Sei 165
Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala 180
155 160 Leu Gin Ala Phe Val Ala Val Ala
170 175 Ala Thr Leu Ser Pro 185
<210> 146 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 146
Asn He Glu His Lys Tyr Leu Gly Tyr Ala Thr Ser Tyr Ala Ala Ser
15 10 15
Val Lys Gly
<210> 147 <211> 114 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 147
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asn He Gly Thr Tyr Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser
50 55 60
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 65 70 75 80
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro
85 90 95
Tyr Leu Met Gin Phe Asp Asn Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser
159
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Выделенное антитело против IL-23pl9, где указанное антитело является полностью человеческим, полученным посредством фагового дисплея, и связывается с IL-23pl9 человека или его фрагментом.
2. Выделенное антитело по п.1, где указанное антитело связывается с IL-23pl9 человека на одном или более аминокислотных остатках 93-105 SEQ ID N0:145.
3. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее, по меньшей мере, один вариабельный участок легкой цепи, причем указанный вариабельный участок легкой цепи содержит, по меньшей мере, один член группы, состоящей из:
аминокислотной последовательности определяющего
комплементарность участка легкой цепи 1 (CDRL1), выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:46-51;
аминокислотной последовательности CDRL2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:52-57; и
аминокислотной последовательности CDRL3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:58-79.
4. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее, по меньшей мере, один вариабельный участок тяжелой цепи, причем указанный вариабельный участок тяжелой цепи содержит, по меньшей, мере один член группы, состоящей из:
аминокислотной последовательности определяющего
комплементарность участка тяжелой цепи 1 (CDRH1), выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:1-6;
аминокислотной последовательности CDRH2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:7-39 и 14 6; и
аминокислотной последовательности CDRH3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:40-4 5.
5. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее вариабельный участок легкой цепи по п.З и вариабельный участок тяжелой цепи по п.4.
6. Выделенное антитело против IL-23pl9 по п.5, дополнительно содержащее, по меньшей мере, одну каркасную область человека рядом, по меньшей мере, с одним определяющим
160
комплементарность участком.
7. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее, пс меньшей мере, один вариабельный участок легкой цепи, причем указанный вариабельный участок содержит:
аминокислотную последовательность определяющего
комплементарность участка легкой цепи 1 (CDRL1), выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:46-51;
аминокислотную последовательность CDRL2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:52-57; и
аминокислотную последовательность CDRL3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:58-79.
8. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее, по меньшей мере, один вариабельный участок тяжелой цепи, причем указанный вариабельный участок тяжелой цепи содержит:
аминокислотную последовательность определяющего
комплементарность участка тяжелой цепи 1 (CDRH1), выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:1-6;
аминокислотную последовательность CDRH2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:7-39 и 146; и
аминокислотную последовательность CDRH3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:40-45.
9. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее вариабельный участок легкой цепи по п. 7 и вариабельный участок тяжелой цепи по п.8.
10. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 и 128-132.
11. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0:80, 81, 8692, 99, 101, 103-112, 117-127 и 147.
12. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее вариабельный участок легкой цепи по п.10 и вариабельный участок тяжелой цепи по п.11.
13. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее
161
аминокислотную последовательн )сть вариабельного участка легкой цепи, имеющую, по меньшей мере, 95% идентичность с любой из аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID N0:82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 и 128132 .
14. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, имеющую, по меньшей мере, 95% идентичность с любой из аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117127 и 147.
15. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее вариабельный участок легкой цнпи по п.13 и вариабельный участок тяжелой цепи по п.14.
16. Антитело, которое конкурентно связывает IL-23pl9 с выделенным антителом против 11,-23р19 по любому из п. п. 1-15.
17. Антитело против IL-23pl9 по любому из п.п.1-16, где указанное антитело связывает IL-23pl9, по меньшей мере, с одной аффинностью, выбранной из, пс меньшей мере, 10"9 М, по меньшей мере, 10~10 М, по меньшей мере, 10"11 М, и, по меньшей мере, 10~12 М, по меньшей мере, 10~13 М, по меньшей мере, 10~14 М, и, по меньшей мере, 1СГ15 М, как определено посредством поверхностного плазмонного резонанса или методом Kinexa.
18. Антитело против IL-23pl9 по любому из п.п.1-15, где указанное антитело по существу модулирует, по меньшей мере, один вид активности, по меньшей мере, одного полипептида IL-23.
19. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая, по меньшей мере, одно выделенное антитело против IL-23pl9 по любому из п.л.1-15.
20. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая, по меньшей мере, одну из:
нуклеотидной последовательности вариабельного участка легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:136-138 и 142-144; и
нуклеотидной последовательности вариабельного участка тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:133
162
135 и 139-141.
21. Выделенный вектор нуклеиновой кислоты, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.п.19 или 20.
22. Прокариотическая или эукариотическая клетка-хозяин, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.п.19 или 2 0.
23. Клетка-хозяин по п.22, где указанная клетка-хозяин представляет собой, по меньшей мере, одну клетку, выбранную из клеток COS-1, COS-7, НЕК293, ВНК21, СНО, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, клеток миеломы или лимфомы, или любую их производную, иммортализованную или трансформированную клетку.
24. Способ продукции, по меньшей мере, одного антитела против IL-23pl9, включающий трансляцию молекулы нуклеиновой кислоты по п. п. 19 или 20 в условиях in vitro, in vivo или in situ, чтобы антитело против IL-23pl9 экспрессировалось в поддающихся выявлению и выделению количествах.
25. Композиция, содержащая, по меньшей мере, одно выделенное антитело против IL-23pl9 по любому из п.п.1-15 и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
26. Композиция по п.25, дополнительно содержащая, по меньшей мере, одно соединение или полипептид, выбранные из поддающейся детекции метки или репортера, антагониста TNF, противоинфекционного лекарственного средства, лекарственного средства для сердечно-сосудистой (CV) системы, лекарственного средства для центральной нервной системы (ЦНС) , лекарственного средства для автономной нервной системы (ANS), лекарственного средства для дыхательных путей, лекарственного средства для желудочно-кишечного (GI) тракта, гормонального лекарственного средства, лекарственного средства для баланса жидкостей или электролитов, гематологического лекарственного средства, антинеопластического лекарственного средства, иммуномодулирующего лекарственного средства, лекарственного средства для глаз, ушей или носа, местного лекарственного средства, диетологического лекарственного средства, цитокина и антагониста цитокина.
163
27. Антиидиотипическое антитело или фрагмент, которые специфично связываются, по меньшей мере, с одним антителом против IL-23pl9 по любому из т.п.1-15.
28. Способ диагностики или лечения связанного с IL-23 состояния в клетке, ткани, органе или у животного, включающий контактирование композиции, юдержащей эффективное количество, по меньшей мере, одного антитела по любому из п.п.1-15, с указанной клеткой, тканью, органом или животным, или введение ее в них.
29. Способ по п.28, где связанное с IL-23 состояние выбрано из группы, состоящей из псориаза, псориатического артрита, болезни Крона, рассеянного склероза, оптического неврита и клинически изолированного синдрома.
30. Способ по п.29, где указанное эффективное количество составляет приблизительно 0,001-50 мг/килограмм указанных клеток, ткани, органа или животного.
31. Способ по п.29, где указанное контактирование или указанное введение представляют собой, по меньшей мере, один способ, выбранный из парентерального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрисуставного, интрабронхиального, интраабдоминального, внутрикапсулярного, внутрихрящевого, внутриполостного, внутрибрюшного, внутримозже;чкового, интрацеребровентрикулярного, внутрикишечного, интрацервикального, внутрижелудочного, внутрипеченочного, интрамиокардиального, внутрикостного, внутритазового, интраперикардиального, интраперитониального, интраплеврального, внутрипростатического, внутрилегочного, интраректального, интраренального, интраретинального, интраспинального, интрасиновиального, внутригрудного, внутриматочного, внутрипузырного, интралезионального, болюсного, вагинального, ректального, буккального, сублингвального, интраназального и трансдермального способов.
32 Способ по п.2 9, дополнительно включающий введение до, одновременно или после указ шного контактирования или введения, по меньшей мере, одной композиции, содержащей эффективное количество, по меньшей мере, одного соединения или полипептида,
164
выбранных из поддающейся детекции метки или репортера, противоинфекционного лекарственного средства, лекарственного средства для сердечно-сосудистой (CV) системы, лекарственного средства для центральной нервной системы (ЦНС), лекарственного средства для автономной нернной системы (ANS), лекарственного средства для дыхательных п'/тей, лекарственного средства для желудочно-кишечного (GI) тракта, гормонального лекарственного средства, лекарственного средства для баланса жидкостей или электролитС'В, гематологического лекарственного средства, антинеопластического лекарственного средства,
иммуномодулирующего лекарственного средства, лекарственного средства для глаз, ушей или носа, местного лекарственного средства, диетологического лекарственного средства, цитокина и антагониста цитокина.
33. Медицинское устройство, содержащее антитело против IL-23р19 по любому из п.п.1-15, где указанное устройство является пригодным для контактирования или введения указанного антитела против IL-23pl9, по меньшей мере, одним способом, выбранным из парентерального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрисуставного, интрабронхиального, интраабдоминального, внутрикапсулярного, внутрихрящевого, внутриполостного, внутрибрюшного, внутримозжечкового, интрацеребровентрикулярного, внутрикишечного, интрацервикального, внутрижелудочного, внутрипеченочного, интрамиокардиального, внутрикостного, внутритазового, интраперикардиального, интраперитониального, интраплеврального, внутрипростатического, внутрилегочного, интраректального, интраренального, интраретинального, интраспинального, интрасиновиального, внутригрудного, внутриматочного, внутрипузырного, интралезионального, болюсного, вагинального, ректального, буккального, сублингвального, интраназального и трансдермального способов.
34. Изделие для фармацевтического или диагностического применения у человека, содержащее упаковочный материал и контейнер, содержащий раствор или лиофилизированную форму антитела против IL-23pl9 по любому из п.п.1-15.
165
35. Изделие по п.34, где указанный контейнер представляет собой компонент устройства или системы для парентеральной, подкожной, внутримышечной, внутривенной, внутрисуставной, интрабронхиальной, интраабдоминальной, внутрикапсулярной, внутрихрящевой, внутоиполостной, внутрибрюшной, внутримозжечковой, интрацеребровентрикулярной, внутрикишечной, интрацервикальной, внутрижелудочной, внутрипеченочной, интрамиокар> диальной, внутрикостной, внутритазовой, интраперикардиальной, интраперитониальной, интраплевральной, внутрипростатической, внутрилегочной, интраректальной, интраренальной, интраретинальной, интраспинальной, интрасиновиальной, внутригрудной, внутриматочной, внутрипузырной, интралезис нальной, болюсной, вагинальной, ректальной, буккальной, сублингвальной, интраназальной и трансдермальной доставки.
36. Способ продукции выделенного антитела против IL-23pl9 по любому из п.п.1-15, включающий предоставление клетки-хозяина или трансгенного животного или трансгенного растения или растительной клетки, способных экспрессировать поддающиеся выделению количества указанного антитела.
37. Антитело против IL-23pl9, продуцируемое способом по
п. 36.
38. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее аминокислотную последовательность вариабельного участка легкой цепи, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:136-138 и 142-144.
39. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее аминокислотную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID N0:133-135 и 139-141.
40. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее последовательность вариабельного участка легкой цепи по п. 38 и последовательность вариабельного участка тяжелой цепи по п. 39.
41. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее последовательность вариабельного участка легкой цепи, кодируемую нуклеотидной последовательностью, имеющей, по
166
меньшей мере, 95% идентичность с любой из нуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID N0:136-138 и 142-144.
42. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее последовательность вариабельного участка тяжелой цепи, кодируемую нуклеотидной последовательностью, имеющей, по меньшей мере, 95% идентичность с любой из нуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID N0:133-135 и 139-141.
43. Выделенное антитело против IL-23pl9, содержащее последовательность вариабельного участка легкой цепи по п. 41 и последовательность вариабельного участка тяжелой цепи по п.42.
44. Антитело, которое конкурентно связывает IL-23pl9 с выделенным антителом против IL-23pl9 по любому из п.п.38-43.
45. Антитело против IL-23pl9 по любому из п.п.38-43, где указанное антитело связывает IL-23pl9, по меньшей мере, с одной аффинностью, выбранной из, по меньшей мере, 1СГ9 М, по меньшей мере 1(Г10 М, по меньшей мере, 10"11 М и, по меньшей мере, 10~12 М, по меньшей мере, 10~13 М, по меньшей мере, 10~14 М и, по меньшей мере, 1СГ15 М, как определено посредством поверхностного плазмонного резонанса или методом Kinexa.
46. Антитело против IL-23pl9 по любому из п.п.38-43, где указанное антитело по существу модулирует, по меньшей мере, один вид активности, по меньшей мере, одного полипептида IL-23.
47. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность по любому из п.п.38, 39, 41 и 42.
48. Выделенный вектор нуклеиновой кислоты, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.47.
49. Прокариотическая или эукариотическая клетка-хозяин, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.47.
50. Клетка-хозяин по п.49, где указанная клетка-хозяин представляет собой, по меньшей мере, одну клетку, выбранную из клеток COS-1, C0S-7, НЕК2 93, ВНК21, СНО, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, клето? миеломы или лимфомы, или их любую производную, иммортализованную или трансформированную клетку.
167
51. Способ продукции, по меньшей мере, одного антитела против IL-2 3pl9, включающий трансляцию молекулы нуклеиновой кислоты по п. 47 в условиях ir: vitro, in vivo или in situ, чтобь: антитело против IL-23pl9 экспрессировалось в поддающихся детекции или выделению количествах.
52. Композиция, содержащая, по меньшей мере, одно выделенное антитело против IL-23pl9 по любому из п.п.38-43 и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
53. Композиция по п.52, дополнительно содержащая, по меньшей мере, одно соединение или полипептид, выбранные из поддающейся детекции метки или репортера, антагониста TNF, противоинфекционного лекарственного средства, лекарственного средства для сердечно-сосудистой (CV) системы, лекарственного средства для центральной нервной системы (ЦНС), лекарственного средства для автономной нервной системы (ANS) , лекарственного средства для дыхательных путей, лекарственного средства для желудочно-кишечного (GI) тракта, гормонального лекарственного средства, лекарственного средства для баланса жидкостей или электролитов, гематологического лекарственного средства, антинеопластического лекарственного средства, иммуномодулирующего лекарственного средства, лекарственного средства для глаз, ушей или носа, местного лекарственного средства, диетологического лекарственного средства, цитокина и антагониста цитокина.
54. Антиидиотипическое антитело или фрагмент, которые специфично связываются, по меньшей мере, с одним антителом против IL-23pl9 по любому из п.п.38-43.
55. Способ диагностики или лечения связанного с IL-23 состояния в клетке, ткани, органе или у животного, включающий
контактирование композиции, содержащей эффективное количество, по меньшей мере, одного антитела по любому из п.п.38-4 3, с указанной клеткой, тканью, органом или животным, или введение ее в них.
56. Способ по п.55, где связанное с IL-23 состояние выбрано из группы, состоящей из псориаза, псориатического
168
артрита, болезни Крона, рассеянного склероза, оптического неврита и клинически изолированного синдрома.
57. Способ по п.55, где указанное эффективное количество составляет приблизительно 0,001-50 мг/килограмм указанных клеток, ткани, органа или животного.
58. Способ по п.55, тде указанное контактирование или указанное введение представляет собой, по меньшей мере, один способ, выбранный из парентерального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрисуставного, интрабронхиального, интрааСдоминального, внутрикапсулярного, внутрихрящевого, внутриполостного, внутрибрюшного, внутримозжечкового, интрацеребровентрикулярного, внутрикишечного, интрацервикального, внутрижелудочного, внутрипеченочного, интрамиокардиального, внутрикостного, внутритазового, интраперикардиального, интраперитониального, интраплеврального, внутрипростатического, внутрилегочного, интраректального, интраренального, интраретинального, интраспинального, интрасиновиального, внутригрудного, внутриматочного, внутрипузырного, интралезионального, болюсного, вагинального, ректального, буккального, сублингвального, интраназального и трансдермального способов.
5 9 Способ по п.55, дополнительно включающий введение до, одновременно или после указанного контактирования или введения, по меньшей мере, одной композиции, содержащей эффективное количество, по меньшей мере, одного соединения или полипептида, выбранных из поддающейся детекции метки или репортера, противоинфекционного лекарственного средства, лекарственного средства для сердечно-сосудистой (CV) системы, лекарственного средства для центральной нервной системы (ЦНС), лекарственного средства для автономной нервной системы (ANS), лекарственного средства для дыхательных путей, лекарственного средства для желудочно-кишечного (GI) тракта, гормонального лекарственного средства, лекарственного средства для баланса жидкостей или электролитов, гематологического лекарственного средства, антинеопластического лекарственного средства,
иммуномодулирующего лекарственного средства, лекарственного
169
средства для глаз, ушей или носа, местного лекарственного средства, диетологического лекарственного средства, цитокина и антагониста цитокина.
60. Медицинское устройство, содержащее антитело против IL-23р19 по любому из п.п.38-43, где указанное устройство является пригодным для контактирования или введения указанного антитела против IL-23pl9, по меньшей мере, одним способом, выбранным из парентерального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрисуставного, интрабрснхиального, интраабдоминального, внутрикапсулярного, внутрихрящевого, внутриполостного, внутрибрюшного, внутримозжечкового, интрацеребровентрикулярного, внутрикишечного, интрацервикального, внутрижелудочного, внутрипеченочного, интрамиокардиального, ьнутрикостного, внутритазового, интраперикардиального, интраперитониального, интраплеврального, внутрипростатического, внутрилегочного, интраректального, интраренального, интраретинального, интраспинального, интрасиновпального, внутригрудного, внутриматочного, внутрипузырного, интралезионального, болюсного, вагинального, ректального, буккального, сублингвального, интраназального и трансдермального способов.
61. Изделие для фармацевтического или диагностического применения у человека, содержащее упаковочный материал и контейнер, содержащий раствор или лиофилизированную форму антитела против IL-23pl9 по любому из п.п.38-43.
62. Изделие по п.61, где указанный контейнер представляет собой компонент устройства или системы для парентеральной, подкожной, внутримышечной, внутривенной, внутрисуставной, интрабронхиальной, интраабдоминальной, внутрикапсулярной, внутрихрящевой, внутриполостной, внутрибрюшной, внутримозжечковой, интрацеребровентрикулярной, внутрикишечной, интрацервикальной, внутрижелудочной, внутрипеченочной, интрамиокардиальной, внутрикостной, внутритазовой, интраперикардиальной, инграперитониальной, интраплевральной, внутрипростатической, внутрилегочной, интраректальной, интраренального, интраретинальной, интраспинальной,
170
интрасиновиальной, внуг: ригруднои, внутриматочной,
внутрипузырнои, интралезионсльнои, болюсной, вагинальной
ректальной, буккальной, суолингвальной, интраназальнои и
трансдермальной доставки.
63. Способ продукции выделенного антитела против IL-23pl9 по любому из п.п. 38-43, в-слючающий предоставление клетки-хозяина или трансгенного жиьотного или трансгенного растения или растительной клетки, способных экспрессировать поддающиеся выделению количества указанного антитела.
64. Антитело против IL 23р19, продуцируемое способом по
п. 63.
65. Любое описанное здес з изобретение.
По доверенности
153185
Фиг. 1А
IL-23/IL-12/p40 ELISA
mAb наносили на планшеты, цитокины использовали в концентрации 100 нг/мл, связывание цитокинов выявляли с помощью mAb 12В-биотина
Q О
О-"
MOR04190 MOR04083 Neg.cntrl глАЫ2А
Фиг. 1В Связывание цитокина с иммобилизованными на планшете mAb в ELISA
mAb наносили на планшеты, цитокины использовали в концентрации 100 нг/мл, связывание содержащего р40 цитокина человека выявляли с помощью mAb 12В-биотина, связывание содержащего р40 цитокина мыши выявляли с помощью 17.8-биотина 3.5-1
¦ИСМГ01275
l-IC15.6
2.5-1 Ш MOR04083
Q О
1.5-
0.5
HMOR04190
hp40mp19 mlL-23 mlL-12 m(p40)2 mp40hp19
2/24
Фиг. 2
Связывание биотинилированного IL-23 с иммобилизованными на планшете mAb против IL-23
2.0ч
IO"2
ю-1 10° ю1 bt.IL.-23, нг/мл
¦MOR04190
¦MOR04083 (проводили отдельно)
3/24
Фиг. ЗА
IL-23bt./IL-23R-Fc BRBA в присутствии тАи MOR
4/24
Фиг. ЗВ
Связывание IL-23 с иммобилизованным на планшете IL-12piR-Fc в присутствии mAb
использовали 20 нг/мл bt.IL-23
MOR04083 ^~MOR04190
-A-IL-23 без mAb CNT01275 Neg.mAb
-r~
10"1
I I I
10° 101 102
mAb, мкг/мл
5/24
Фиг. ЗС
Связывание IL-12flL-12Rbl-Fc в присутствии mAb против 1L-23
mAb использовали в концентрации 30 мкг/мл
6/24
7/24
. 5А
Индуцируемая IL-23 продукция IL-17 в присутствии mAb против IL-23
mAb, мкг/мл
8/24
Фиг. 5В
Индуцируемая нативным IL-23 продукция JL-17 из спленоцитов мыши в присутствии или отсутствии mAb против IL-23 человека. РВМС СМ человека (серия 1/99, 0,5%) использовали в качестве источника hIL-23
9/24
Фиг. 5С
Индуцируемая супо РВМС СМ продукция IL-17 из спленоцитов мыши в присутствии mAb против IL-23
человека
10/24
Фиг. 6
Индуцируемая IL-12 продукция IFNg из клеток NK92MI в присутствии mAb против IL-23
450350-
1 2I50H 5 15050-
MOR04083 MOR04190
CNT01275
IL-12 без mAb Без IL-12
0.001 0.01 0.1 1 10 100
mAb, МКГ/МЛ
11/24
Фиг. 7А
Фиг. 7В
Конкурентный анализ mAb против IL-23
Конкурентный анализ mAb против IL-23
О О 1.71.2" 0.70.2* 10
MOR04083 иммобилизовывали на планшете в концентрации 5 мкг/мл, bt.IL-23 испол]. повали в концентрации 20 нг/мл
MOR04190 иммобилизовывали на планшете в концентрации 5 мкг/мл. bt.IL-23 использовали в концентрации 20 нг/мл
0.5-S
-•*~'MOR04083 -MOR04190 HNS- Neg.mAb
-is- IL-23 без mAb ~*-MOR04217
ю-2
....."
ю-1
-г-
10° -т~
101 —1
102
Ab МКГ/MJI
0.8-5 0.70.60.50.40.30.2 0.1-
0.04-"И
Конкурентный анализ mAb против IL-23
MOR04217 иммобилизовывали на п. 1аншете в концентрации 5 мкг мл, bt.IL-23 использовали в концентрации 20 нг/мл
-*~4083
Nsg.mAb ~(r)~ 1L-23 без mAb
.....Г '
10*
10° АЬ мкг/мл
101 -""
10*
0.40.30.20.1-
0.0-
MOR04190 ¦~3*-Neg.rnAb нв- IL-23 без mAb -"*-MOR04217
10-:
10^
—"Г
10"
10s
T" 101 102
Ab мкг/мл
Фиг. 7C
12/24
Фиг. 8
Анализ продукции IL-17 в присутствии mAb MOR, спленоциты мыши, нативный IL-23 человека
2000-1
mAb, мкг/мл
13/24
Фиг. 9
Связывание IL-23 с иммобилизованным на планшете IL-23R-Fc в присутствии mAb MOR
Использовали 20 нг/мл lL-23bt
mAb, мкг/мл
14/24
Фиг. 10
IL-23/IL-12/p40
mAb наносили на планшеты, цитокины использовали в концентрации 100, связывание цитокинов выявляли посредством mAb 12В
^CNTOIL- ^R &DIL- ^SCNTOIL- EZ^R &D ||_- ^R &D
IL23
15 24
Фиг. 11А
Связывание IL-23 с иммобилизованным на планшете TL-23R-FC в присутствии mAb против IL-23pl9
Использовали 20 нг/мл IL-23bt
16/24
Фиг. ПВ
Связывание IL-23 с иммобилизованным на планшете IL-12p1-Fc в присутствии mAb против IL-23p19
Использовали 20 нг/мл IL-23bt
тАЬ23А -*-5040Q/EV -•-3759EC"QS ~**~mAb12A Neg. mAb
"WlL-28 отдельно
mAb, мкг/мл
17/24
Фиг. ПС
Связывание IL-12 с иммобилизованным на планшете IL-12p1-Fc в присутствии mAb против 11_-23р19
Использовали 10 нг/мл IL-12, связывание выявляли с помощью anti-IL-12/23p40 (СЗЗО) -bt
1.75 ¦ 1.50 ¦ 1.25
.11.00 ¦
'0.75 0.50 ¦ 0.25 ¦ 0.00
IO"4
10^
ю-2
ю-1
¦"¦I 10°
mAb, МКГ/МЛ
~"~ тАЬ23А -*-5040Q/EV -"-3759EQ'QS
•~J"~-mAb12A ~"™ Neg. mAb -•-•IL-12 отдельно
10г
18/24
Фиг. 12
Индуцируемая нативным IL-12 продукция IFNg из клеток NK92MI в присутствии mAb против IL-23p19
19/24
Фиг. 13
Индуцируемая rhlL-23 продукция IL-17 из спленоцитов мыши в присутствии mAb против IL-23p19
mAb мкг/мл
20/24
Фиг. 14
Индуцируемая нативным IL-23 человека продукция IL-17 из спленоцитов мыши в присутствии mAb против 11_-23р19
mAb мкг/мл
21/24
Фиг. 15
Индуцируемая нативным IL-23 супо продукция IL-17 из спленоцитов мыши в присутствии mAb против 11_-23р19
22/24
Фиг. 16А
Конкурентный анализ mAb против IL-23
тАЬ23А иммобилизовывали на планшете в концентрации 5 мкг/мл, bt.IL-23 использовали в концентрации 20 нг/мл
АЬ мкг/мл
23/24
Фиг. 16В
Конкурентный анализ mAb против IL-23
504CP'EV иммобилизовывали на планшете в концентрации 5 мкг/мл, bt.IL-23 использовали в концентрации 20 нг/мл
АЬ мкг/мл
24/24
Конкурентный анализ mAb против IL-23
3759EQ/QS иммобилизовывали на планшете в концентрации 5 мкг/мл, bt.IL-23 использовали в концентрации 20 нг/мл
1.4 -|
АЬ мкг/мл
ЕВРАЗИЙСКОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО
ЕАПВ/ОП-2
ОТЧЕТ О ПАТЕНТНОМ ПОИСКЕ
(статья 15(3) ЕАПК и правило 42
Номер евразийской заявки: 200870129
Дата подачи:
28 декабря 2006 (28.12.2006)
Дата испрашиваемого 29 декабря 2005 (29.12.2005)
Название изобретения. Человеческие антитела против IL
- 23, композиции, способы и применение
Заявитель:
СЕНТОКОР, ИНК
Г~) Некоторые пункты формулы не подлежат поиску (см. раздел I дополнительного листа) Г"] Единство изобретения не соблюдено (см. раздел II дополнительного листа)
А. КЛАССИФИКАЦИЯ ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ
С07К16/24 (2006.01) C12N15/13 (2006.01) C12N15/63 (2006.01) C12N1/21 (2006.01) C12N5/10 (2006.01) А61К39/395 (2006.01) GO 1N 33/53 (2006.01) А61Р37/02 (2006.01)
Согласно Международной патентной классификации (МПК) или национальной классификации и МПК
Б. ОБЛАСТЬ ПОИСКА:
Минимум просмотренной документации (система классификации и индексы МПК)
С07К 16/24, C12N 15/13, 15/63, 1/21, 5/10, AM К 39/395, G01N 33/53, А61Р 37/02
Другая проверенная документация в той мере, в
какой она включена в область поиска:
В. ДОКУМЕНТЫ, СЧИТАЮЩИЕСЯ РЕЛЕВАНТНЫМИ
Категория*
Ссылки на документы с указанием, где
это возможно, релевантных частей
Относится к пункту №
US 2005137385 Al (BENSON JACQUELINE et al.) 23.06.2005, описание, параграф [0015], [0080], [0138], форму ла, п. 23-25
1,25, 27, 28,33-37
US 2005112127 Al (GILES - KOMAR JILL et al.) 26.06.2005
1-65
US 6046012 A (HOFFMAN LA ROCHE) 04 04.2000
1-65
[""^последующие документы указаны в продолжении графы В
IJ данные о патентах-аналогах указаны в приложении
* Особые категории ссылочных документов:
"А" документ, определяющий общий уровень техники
"Е" более ранний документ, но опубликованный на дату подачи евразийской заявки или после нее
"О" документ, относящийся к устному раскрытию, экспонированию и т.д.
"Р" документ, опубликованный до даты подачи евразийской
заявки, но после даты испрашиваемого приоритета "D" документ, приведенный в евразийской заявке
"Т" более поздний документ, опубликованный после даты приоритета и приведенный для понимания изобретения
"X" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету
поиска, порочащий новизну или изобретательский уровень,
взятый в отдельности "Y" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету
поиска, порочащий изобретательский уровень в сочетании с
другими документами той же категории " &" документ, являющийся патентом-аналогом "L" документ, приведенный в других целях
Дата действительного завершения патентного поиска:
18 ноября 2008 (18.11.2008)
Наименование и адрес Международного поискового органа: Федеральный институт промышленной собственности
РФ, 123995,Москва, Г-59, ГСП-5, Бережковская наб., д. 30-1.Факс: 243-3337, телетайп: 114818 ПОДАЧА
Уполномоченное лицо : Телефон № (499) 240-25-91
Т.Владимирова