EA200601648A1 20070427 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2007\TIT_PDF/200601648 Титульный лист описания [PDF] EAPO2007/PDF/200601648 Полный текст описания EA200601648 20050407 Регистрационный номер и дата заявки US60/560,128 20040407 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2005/011739 Номер международной заявки (PCT) WO2005/116086 20051208 Номер публикации международной заявки (PCT) EAA1 Код вида документа [eaa] EAA20702 Номер бюллетеня [RU] ГЛЮКОЗАМИН И ОБЩИЕ ПРОЛЕКАРСТВА ГЛЮКОЗАМИН/ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ АГЕНТ, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ Название документа A01N 43/04, A61K 31/70 Индексы МПК [US] Капомаччиа Энтони Си., Гарнер Соломон Т., мл., Бич Дж. Уоррен Сведения об авторах [US] ЗЕ ЮНИВЕРСИТИ ОФ ДЖОРДЖИЯ РИСЕРЧ ФАУНДЕЙШН, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea200601648a*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

Предложены общие пролекарства глюкозамина, и производных, и аналогов глюкозамина, и противовоспалительного агента, их композиции и способы, например, лечения расстройств и состояний путем введения этих композиций. Также предложены композиции глюкозамина, и производных, и аналогов глюкозамина для местного применения.

 


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:
общие пролекарства глюкозамина, и производных, и аналогов глюкозамина, и противовоспалительного агента, их композиции и способы, например, лечения расстройств и состояний путем введения этих композиций. Также предложены композиции глюкозамина, и производных, и аналогов глюкозамина для местного применения.

 


PCT/US2005/011739 МПК7 A01N 43/04, A61K 31/76
ГЛЮКОЗАМИН И ОБЩИЕ ПРОЛЕКАРСТВА ГЛЮКОЗАМИН/ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ АГЕНТ, КОМПОЗИЦИИ И
СПОСОБЫ
Настоящая заявка притязает на приоритет согласно предварительной заявки США № 60/560128, поданной 7 апреля 2004, которая включена в данное описание изобретения посредством ссылки во всей своей полноте.
Заявление о правах государства
Настоящее изобретение было выполнено при поддержке государства в виде гранта GM066321-01, введенного Национальным институтом здоровья (National Institutes of Health). Государство может обладать определенными правами в отношении настоящего изобретения.
Предшествующий уровень техники
По оценкам, 21 миллионов взрослых людей только в Соединенных Штатах живут с остеоартритом, одним из наиболее распространенных типов артрита. Остеоартрит, также называемый дегенеративным поражением суставов, вызван разрушением хряща, соединительной ткани, играющей роль амортизатора для концов костей в суставе. Остеоартрит характеризуется болью, повреждением сустава и ограниченным движением в суставе. Данное заболевание обычно имеет место у человека в преклонном возрасте и чаще всего поражает руки и более крупные несущие нагрузку суставы. Кроме того, в случае указанного заболевания факторами риска являются возраст, пол (женщины) и ожирение.
Исследователи обнаружили, что при дегенерации хряща с усиленной деградацией матрикса хряща связаны провоспалительные цитокины IL-1f3 и TNFa (Sandy et al., Biochem. J., 335: 59-66 (1998); Seguin et al., J. Cell Physiol., 197: 356-369 (2003)). Эти процессы также коррелируют с уменьшением экспрессии гена матрикса хряща и синтезов in vitro (Gouze et al., FEBS Letters, 510: 166-170 (2002); Shikhman etal., J. Immunol. 166: 5155-5160 (2001)).
Аминомоносахарид глюкозамин, обычно присутствующий в хрящевой и соединительной тканях, способствует поддержанию прочности, гибкости и эластичности этих тканей. Глюкозамин является предшественником молекулы
глюкозамингликана, которая задействована в образовании и восстановлении хряща. In vivo глюкозамин обычно превращается в N-ацетилглюкозамин. В последние годы глюкозамин широко использовался для лечения симптомов остеоартрита в моделях у человека и животных, осуществляя роль противовоспалительного средства в уменьшении опухания суставов и уровней боли сравнимо с наблюдаемым уменьшением при использовании нестероидных противовоспалительных лекарственных препаратов (NSAID) (Lopes, Curr. Med. Res. Opin., 8: 145:149 (1982); Muller-Fassbendeer et al., Osteoarthritis Cartilage, 2: 61-69 (1994); Ruane et al., Br. J. Community Nurs., 7: 148-152 (2002)). Некоторые исследователи также пришли к заключению, что глюкозамин противодействует дегенеративным эффектам, которые оказывает IL-1B на синтез протеогликана (Sandy et al., Biochem. J., 335: 59-66 (1998); Gouze et al., FEBS Letters, 510: 166-170 (2002)), поскольку глюкозамин уменьшает выработку оксида азота, индуцируемую IL-1B и TNFa (Shikhman et al., J. Immunol., 166: 5155-5160 (2001)), и подавляет синтез циклооксигеназы-2 (СОХ-2) хондроцитами человека в ответ на IL-1B (Largo et al., Osteoarthritis Cartilage, 11: 290-298 (2003)). Таким образом, глюкозамин может также использоваться в терапии болезней, ассоциированных с дегенерацией хрящевых тканей, таких как остеоартрит.
Использование глюкозамина завоеЕюло популярность после того, как оно было описано в книге The Arthritis Cure by Jason Theodasakis, MD, et al., (St. Martin's Press. New York, NY. 1997). С 1997 no 2002 год темп ежегодного прироста рынка глюкозамина превысил 36,4 % (Chemical Market Reporter, vol. 264(1), July 14, 2003). В настоящее время глюкозамин и его метаболиты, согласно Dietary Supplement Health and Education Act (DSHEA) 1994 года классифицируются не как лекарственные средства, а как пищевые/диетические агенты. Пероральные препараты ^ацетил-Р-глюкозамина и исходного соединения глюкозамина в форме соли (сульфат, гидрохлорид и т.д.) представляет собой имеющиеся в продаже нутрицевтики, и их обычно вводят в сочетании с хондротинсульфатом, который также представляет собой легкодоступный нутрицевтик. Сообщалось, что глюкозамин и хондротин являются эффективными в пероральном лечении остеоартрита, однако они не проходили тщательных исследований, необходимых для утверждения их в качестве фармацевтических средств Управлением по санитарному надзору за
качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) (Theodasakis et al., The Arthritis Cure, 1st Edition, St. Martin's Press. New York, NY. 1997; McAlindon et al., JAMA, 283: 469-1475 (2000)). Национальный институт здоровья (Bethesda, MD, USA) проводит многоцентровые исследования GAIT (Интервенционные клинические испытания глюкозамин/хондротин при артрите), в которых в настоящее время оценивается эффективность перорально вводимых пероральных агентов глюкозамина и хондротина (Интервенционные клинические испытания глюкозамин/хондротин при артрите (GAIT), Национальный Центр комплементарной и альтернативной Медицины (NCCAM) и Национальный институт артрита и костно-мышечных и кожных заболеваний (NIAMS), сентябрь 1999).
В то время как пероральное вЕгедение является наиболее широко признанным способом введения глюкозамина, также исследовалась эффективность глюкозамина, вводимого подкожно. Например, в настоящее время существует одобренное FDA терапевтическое лечение SYNVISC (Genzyme Corp., Naarden, the Netherlands) для местного лечения боли, ассоциированной с остеоартритом колена. Лечение включает инъекцию раствора, содержащего гиалорунат натрия (гликозаминогликан), в пораженный сустав. Однако, SYNVISC в настоящее время утверждено только для лечения колена.
Нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID) эффективны в уменьшении воспаления, и их часто используют для лечения симптомов остеоартрита. Однако, NSAID могут проявлять нежелательные побочные эффекты. Предпринимались попытки улучшения фармацевтических свойств NSAID, таких как проникающая способность, растворимость и стабильность, путем создания "пролекарств" NSAID. Пролекарство представляет собой предшественник лекарственного средства. Термин "пролекарство" использовалось для описания соединения, которое состоит из одного активного лекарственного соединения и второго, неактивного, соединения. Пролекарство является неактивным в качестве фармакологического агента, пока оно не подвергается химическому превращению, например посредством метаболических процессов, после введения пациенту. При превращении из пролекарства получается активный
фармацевтический агент и неактивное соединение, которое обычно бывает инертным после превращения.
Представление о пролекарстве первоначально было сформулировано в Albert (Nature 182 (4633): 421-423 (1958)). Первоначальные задачи синтеза и усовершенствования пролекарств состояли в улучшении стабильности лекарственных средств и в целевой доставке лекарственного средства для перорально и внутривенно вводимых лекарственных средств. Стабильность является существенной для активности лекарственного средства, и стабильность лекарственных средств, неустойчивых к воде и ферментам, обычно достигается путем защиты лекарственного средства от химического гидролиза и ферментативного разрушения после введения лекарственного средства. Целевая доставка пролекарств основана на улучшении растворимости и проникающей способности лекарственного средства и особенно полезна при введении лекарственного средства, ассоциированного с липидными мембранами, с целью проникновения через очень гидрофобный гематоэнцефалический барьер.
В наиболее традиционной форме пролекарства используется сложноэфирная связь, образуемая в процессе синтеза при реакции карбоновой кислоты со спиртом или фенолом, для модификации in vivo метаболитического пути исходного лекарственного средства. Кроме влияния на метаболизм исходного лекарственного средства, сложноэфирное пролекарство может обладать другими преимуществами, например уменьшенные побочные эффекты. Например, если нестероидные противовоспалительное лекарственное средство (NSAID) изготовить в виде пролекарства, то боли в желудке можно уменьшить по сравнению с NSAID, которое вводят само по себе. Положительные свойства, связанные с использованием пролекарств, включают, например, присутствие стабильной ковалентной сложноэфирной связи, меньшую собственную активность по сравнению с исходным лекарственным средством, меньшую токсичность и лучшую кинетику высвобождения в месте связывания для обеспечения эффективных уровней лекарственных средств.
"Общие пролекарства", представляющие собой разновидность пролекарства, могут быть описаны как сочетание двух лекарственных средств, обладающих разными фармакологическими активностями. Такая идея
возникает из практики клинического совместного введения двух лекарственных средств для улучшения фармакологической активности или предупреждения клинических побочных эффектов (патент США № 4278679). Общие пролекарства синтезируют исходя из фармакологической задачи улучшения эффективности каждого лекарственного средства, оптимизации доставки и понижения токсичностей.
В общих пролекарствах каждый лекарственный компонент функционирует в качестве "про" части по отношении к другому. Подобно пролекарству, общее пролекарство превращается в составляющие его активные лекарственные средства внутри организма посредством ферментативных и/или неферментативных реакций. Общие пролекарства можно классифицировать как, например, пролекарства, связанные с носителем, пролекарства-биопредшественники или химически активированные пролекарства, в зависимости от их составляющих и композиции (Albert, Nature, 182 (4633): 421-423 (1958); Rao, Н Surya Prakash (доступно в Интернете на ias.ac.in/resonance/Feb2003/pdf/feb200319-27.pdf), Capping Drugs: Development of Prodrugs. February, 2003). Предполагается, что в месте действия побочные эффекты исходного лекарственного средства будут замаскированы, что позволит лекарственному средству работать более эффективно (Albert, Nature, 182 (4633): 421-423 (1958)). Общие пролекарства, в отношении фармацевтической и фармакологической активностей, таких как абсорбция, распределение, метаболизм и выделение, обычно аналогичны пролекарствам одного активного агента. Задача, стоящая перед общими пролекарствами, состоит том, чтобы оба активных лекарственных средства достигали своих соответствующих мест действия с обеспечением желательных фармакологических эффектов с минимизацией при этом побочных метаболических и/или токсикологических явлений.
В течение многих лет до того как термины "пролекарство" и "общее пролекарство" стали использоваться в научных кругах, пациентам вводили комбинированные лекарственные средства в качестве терапевтических агентов (Singh et al., Indian J. Pharm. Sci, 56 (3): 69-79 (1994)), например это относится к получению сульфасалазина, представляющему собой современные достижения в области пролекарств антибиотиков. По существу, это приводило к комбинациям (3-лактамных антибиотиков и агентов, потенцирующих их, с
получением, например, ампициллин-мециллинама и ампициллин-сульбактама с образованием сультамициллина и цефалоспоринов двойного действия, а также других агентов, обычно не упоминаемых как общие пролекарства (Singh et al., Indian J. Pharm. Sci, 56 (3): 69-79 (1994)).
Одним из примеров общего пролекарства является натрий фосфат эстрамустина (EMCYT, Pharmacia, La Roche), разработанный в начале1970-х годов в качестве противоопухолевого агента, который демонстрирует некоторые свойства общих пролекарств (Wang et al., Biochem. Pharmacol., 55(9):1427-33 (1998); Sheridan et al., Cancer. Surv., 11:239-254 (1991); Ohsawa et al., Gan To Kagaku Ryoho., Apr;15(4 Pt 2-1): 1065-71 (1998); Forsgren et al., Urol Nephrol Suppl., 107:56-58 (1988)). Эстрамустин обычно используют в лечении метастатической карциномы простаты. Эстрамустин селективно захватывают положительные рецепторы эстрогена и затем, как показано на Фиг. 1, уретановая связь гидролизуется с получением 17-альфаэстрадиола, который замедляет рост клеток простаты, и нор-азотного иприта в качестве слабого алкилирующего агента.
Исследование пролекарств продолжается, в качестве примера можно привести синтез общих пролекарств 5-фторурацил/цитарабин, предназначенных для ослабления механизмов резистентности при изучении доставки лекарственных средств, представляющих собой один нуклеозид (Menger et al., J. Org. Chem., 62: 9083-9088 (1997)). Исследователи, например Bhosale и соавторы, предпринимали попытки получения общих пролекарств ибупрофен/парацетамол и ибупрофен/салициламид. Целью этой работы было получение пролекарств NSAIDS для снижения ассоциированных побочных эффектов (Bhosale et al., Indian J. Pharm. Sci., 66(2):158-163 (2003)). Их подход являлся уникальным с точки зрения перспективы получения общих пролекарств, в отношении физико-химических модификаций, направленных на упрощение доставки NSAID, очень похожих на сульфасалазин, в настоящее время больше используемый в качестве терапевтического средства для лечения неспецифического язвенного колита, состоящего из сульфапиридина и 5-аминосалициловой кислоты, ковалентно связанных посредством азо-связи (Klotz et al., Adv. Drug Deliv. Rev., 57 (2): 267-279(2005); Lim et al., Rev. Gastroenterol. Disord., 4(3); 104-117 (2004); Baker et al., Rev. Gastroenterol. Disord., 4(2):86-91 (2004); и Diculescu et al., Rom. J. Gastroenterol., 12 (4): 283-286
(2003)). Структуры сульфасалазина (Фиг. 2А),
5-фторурацил/цитарабина (Фиг. 2В), ибупрофен/парацетамола (Фиг. 2С) и ибупрофен/салициламида(Фиг. 2D) представлены на Фиг. 2.
Краткое изложение сущности изобретения
Идея "общего пролекарства" является сравнительно новой в медицинской химии, фармацевтике и доставке лекарственных средств. Общее пролекарство состоит из двух лекарственных соединений, которые связаны ковалентно, например сложноэфирной связью (Ueda et al., Mem. Inst. Sci Ind. Res. Osaka Univ., 47: 43-54 (1990); Imai et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 265: 328333 (1994); Fukuhara et al., Chirality, 8: 494-502 (1996); Fukuhara et al., Biol. Pharm. Bull., 18: 140-147 (1995); и Otagiri et al., J. Con. Release, 62: 223-229 (1999)). При ковалентном связывании лекарственные компоненты становятся фармацевтически неактивными, однако связь обеспечивает некоторое преимущества общему пролекарству, например улучшенную доставку ковалентно связанных лекарственных средств по сравнению с доставкой каждого из лекарственных средств отдельно. Сложноэфирная связь легко разрушается эстеразой млекопитающих, таким образом обеспечивая высвобождение каждого из лекарственных компонентов in vivo. Каждый из лекарственных компонентов, таким образом, становится фармакологически активным. Соответственно, после введения пациенту, расщепление общего пролекарства дает возможность каждому из лекарственных компонентов, фармацевтически активированных посредством расщепления, осуществлять свое соответствующее предполагаемое фармакологическое действие. В общих пролекарствах каждый компонент облегчает доставку другого компонента.
В одном аспекте в настоящем изобретении предложено соединение, которое функционирует в качестве общего пролекарства. Это соединение включает два фармацевтически активных вещества. В частности, настоящее изобретение направлено на соединение, включающее первый компонент, ковалентно связанный со вторым компонентом, где указанное соединение имеет формулу I:
в которой R1, R2, R3 и R4 каждый независимо представляет собой Н или органическую группу; L представляет собой возможную линкерную группу; и X представляет собой противовоспалительный агент. В предпочтительном воплощении R1, R2, R3 и R4 каждый независимо представляет собой Н; L представляет собой ацетильную группу; и X представляет собой ибупрофен или кетопрофен.
Первый компонент, представленный замещенной циклической структурой, связанной с X, противовоспалительным агентом, посредством линкера L, предпочтительно представляет собой глюкозамин, или производное, или аналог глюкозамина. Второй компонент, X, представляет собой противовоспалительный агент, предпочтительно нестероидный противовоспалительный агент (NSAID). Линкер L может присутствовать или отсутствовать в соединении, имеющем формулу I. Если линкер L присутствует, первый компонент считается опосредованно связанным со вторым компонентом. Если линкер L отсутствует, то первый компонент считается непосредственно связанным со вторым компонентом. Связь между первым и вторым компонентами, независимо от того, является ли она опосредованной или непосредственной, представляет собой ковалентную связь.
Связь между первым и вторым компонентом является расщепляемой связью. Например, связь может быть гидролизуемой и/или может быть ферментативно расщепляемой. Предпочтительно, связь расщепляется в физиологических условиях, таких как условия, имеющиеся в организме млекопитающего, особенно в организме человека. Если используется линкер L, связь между первым компонентом и L является расщепляемой, и/или связь между L и вторым компонентом, X, является расщепляемой.
Кроме того, для облегчения доставки активных компонентов, связывание компонентов может придать защитный эффект общему пролекарству, таким
образом уменьшая или предупреждая нежелательное расщепление, обычно под действием желудочных кислот, и/или побочное действие одного или обоих лекарственных средств до расщепления общего пролекарства in vivo. Такой защитный эффект, присущий общему пролекарству, может быть особенно желательным, если одним из лекарственных средств является NSAID, с точки зрения побочных действий, обычных для таких лекарственных средств. Общие пролекарства по настоящему изобретению могут также демонстрировать профили растворимости в воде/липидах, отличающиеся от профилей каждого лекарственного средства по отдельности, что может дополнительно способствовать улучшениям в изготовлении и/или доставке лекарственных средств.
В данном изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция, которая включает соединение формулы I. В одном из воплощений изобретения предложена композиция, которая включает соединение формулы I, как описано выше, и фармацевтически приемлемый носитель. Композиция предпочтительно приготовлена в виде препарата для местного применения.
В другом аспекте, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, которая включает терапевтически эффективное количество соединения формулы II:
где R1, R2, R3, R4 и R5 каждый независимо представляет собой Н или органическую группу; и фармацевтически приемлемый носитель, где композиция приготовлена в виде препарата для местного применения. В предпочтительном воплощении каждый из R1, R2, R3 и R4 представляет собой Н, и R5 представляет собой ацетильную группу. Соединение формулы II предпочтительно представляет собой глюкозамин, или производное, или аналог глюкозамина. Хотя глюкозамин и его производные обычно доставляются перорально, в качестве, например, нутрицевтиков, и в меньшей степени
доставляются чрескожно, настоящее изобретение преимущественно обеспечивает местную доставку глюкозамина и производных глюкозамина или их ацетилированных аналогов.
Возможно, местное и/или чрескожное применение глюкозамина, или его производного, или его аналога, может сопровождаться совместным введением противовоспалительного агента, такого как NSAID. При совместном введении противовоспалительный агент и глюкозамин, включая их производные и аналоги, могут быть, хотя и не обязательно, ковалентно связаны с образованием общего пролекарства, как более подробно описано в данном описании изобретения.
В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения и/или предупреждения расстройства или состояния у млекопитающего, который включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества композиции по изобретению. Этот способ может включать терапевтическое, профилактическое и/или косметическое использование. В одном из воплощений изобретение направлено на способ облегчения состояния, которое поддается лечению глюкозамином, включающий введение млекопитающему, предпочтительно человеку, эффективного количества соединения формулы I или II, как описано в данном описании изобретения. В другом воплощении изобретение направлено на способ облегчения состояния, которое поддается лечению противовоспалительным агентом, включающий введение млекопитающему эффективного количества соединения формулы I или II, как описано в данном описании изобретения.
Краткое описание графических материалов
На Фиг. 1 изображена структура натрия фосфата эстрамустина (EMCYT) и прогруппировок.
На Фиг. 2A-2D показаны структуры некоторых моделей пролекарств. На Фиг. 2А изображена структура пролекарства сульфасалазина; на Фиг. 2В изображена структура предполагаемой модели общего пролекарства 5-фторурацил/цитарабин; на Фиг. 2С изображена структура предполагаемой модели общего пролекарства ибупрофен/парацетамол; и на Фиг. 2D изображена структура предполагаемой модели общего пролекарства ибупрофен/салициламид.
На Фиг. ЗА и ЗВ показаны структуры индометацина и глюкаметацина соответственно.
На Фиг. 4 показана типичная схема синтеза общего пролекарства по изобретению, связанного спейсером.
На Фиг. 5 показана схема синтеза непосредственно связанного общего пролекарства по изобретению.
На Фиг. 6 показана схема синтеза связанного спейсером общего пролекарства по изобретению, которое включает гликозаминогликан и NSAID.
На Фиг. 7 показана схема синтеза непосредственно связанного общего пролекарства, которое включает гликозаминогликан и NSAID.
На Фиг. 8 показана термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) общего пролекарства, синтезированного согласно схеме на Фиг. 4 (соединение 6).
На Фиг. 9 показана расширенная DSC-термограмма общего пролекарства, синтезированного согласно схеме на Фиг. 4 (соединение 6).
На Фиг. 10 показана DSC-термограмма общего пролекарства, синтезированного согласно схеме на Фиг. 5 (соединение 9).
На Фиг. 11 показана DSC-термограмма общего пролекарства, синтезированного согласно схеме на Фиг. 5 (соединение 9), показывающая сублимацию, фазовый переход и процесс разложения соединения.
На Фиг. 12 показан график зависимости площади пика от времени, как функции от концентрации для исследовании диффузии, для композиций (а) глюкозамина HCI, (б) N-ацетилглюкозамина и (с) глюкозамина пентаацетила.
На Фиг. 13 представлен собой график влияния DMSO (диметилсульфоксида) на суммарное проникновение N-ацетилглюкозамина через сброшенную змеиную кожу.
На Фиг. 14 представлена гистограмма, показывающая накопление N-ацетилглюкозамина через сброшенную змеиную кожу из фосфатного буфера (рН 5,5), включающего 2%, 5%, 10%, 25% и 50% этанола в процентах к объему водной фазы и этанола, содержащего NAG.
На Фиг. 15 представлена зависимость, демонстрирующая влияние концентрации этанола на суммарное проникновение N-ацетилглюкозамина при 37,5°С через сброшенную змеиную кожу при 2%, 5%, 10%, 25% и 50% этанола в процентах к объему водной фазы и этанола, содержащего NAG.
На Фиг. 16 представлен график, показывающий влияние смеси соевый лецитин-витамин Е на проникновение N-ацетилглюкозамина через сброшенную змеиную кожу.
На Фиг. 17 представлен график, показывающий физико-химические данные, полученные при проникновение N-ацетилглюкозамина через сброшенную змеиную кожу в носителях Pluronic гель-органическая фаза.
Подробное описание иллюстративных воплощений
Млекопитающие, как люди, так и животные, обычно страдают некоторыми заболеваниями, ассоциированными с разрушением хряща и соединительной ткани сустава, такими как остеоартрит, которые могут вызывать боль, опухание, тугоподвижность и ограниченную подвижность пораженного сустава. Терапию подобных симптомов обычно проводили посредством лечения противовоспалительными агентами, такими как NSAID. Противовоспалительные агенты подробно описаны с точки зрения их фармакологических, токсикологических и биофармацевтических свойств в лечении боли и воспаления, ассоциированных с заболеваниями, такими как остеоартрит.
Введение NSAID может, однако, вызывать некоторые вредные побочные эффекты у некоторых пациентов. Например, NSAID могут вызывать расстройство желудка, язву желудка и/или кишечные кровотечения. Кроме того, субъекты с некоторыми состояния, такими как заболевание щитовидной железы, диабеты, сердечные заболевания, высокое кровяное давление и аллергии, а также субъекты, которые вскоре должны подвергнуться хирургическому вмешательству (включая стоматологическую хирургию), и беременные женщины могут страдать от серьезных побочных эффектов, вызванных приемом NSAID. Кроме того, противовоспалительные лекарственные средства не лечат исходную причину заболевания, например, разрушение хряща и соединительных тканей.
В настоящее время глюкозамин исследуют с точки зрения возможности лечения заболеваний, характеризующихся разрушением, например, хряща и соединительных тканей. Существует доказательство того, что лечение глюкозамином не только облегчает боль при, например, остеоартрите, но и также может лечить само заболевание, поскольку, как было показано, оно замедляет развитие разрушения и вызывает повторный рост хрящевой ткани.
Таким образом ожидается, что глюкозамин будет эффективным в лечении остеоартрита, хотя в настоящее время в Соединенных Штатах он не регламентирован в качестве активного фармацевтического ингредиента (API).
Глюкозамин обычно вводят перорально, однако считается, что он обладает недостаточной биодоступностью в качестве перорально вводимого нутрицевтика. Считается, что только небольшой процент активного ингредиента (например 12-13%) доступен для пораженной ткани после перорального введения.
Также исследовались чрескожные инъекции глюкозамина. Например, SYNVISC, устройство для введения производного гиалуроновой кислоты, имеющегося у Genzyme Corp. (Naarden, the Netherlands), является терапевтическим средством, одобренным FDA только для местного лечения боли, ассоциированной с остеоартритом колена. SYNVISC часто вводят пациентам "вне метки", т.е. вводят в другие (например неапробированные) суставы, таким образом обеспечивая случайные свидетельства того, что глюкозамин является эффективным для лечения остеоартрита. Однако инъекция лекарственного средства имеет собственные возможные проблемы, такие как инфекция в месте введения, неприятие инъекции пациентом, сложность введения и т.д. Таким образом, существует необходимость в улучшенных лекарственных формах, обеспечивающих большую биодоступность глюкозамина, его производных и аналогов, и требуются более эффективные способы доставки к пораженным участках у пациента.
В настоящем изобретении предложены эффективная доставка глюкозамина, включая его производные и аналоги, возможно доставляемого в форме общего пролекарства с противовоспалительным агентом к суставам, пораженным заболеваниями, ассоциированными с дегенерацией хряща и соединительной ткани.
При использовании в данном описании изобретения подразумевается, что термин "глюкозамин" относится к глюкозамину, производным глюкозамина, аналогам глюкозамина и метаболитам глюкозамина, если не указано иное.
При использовании в данном описании изобретения подразумевается, что термин "органическая группа" означает углеводородную группу (возможно содержащая элементы, отличные от углерода и водорода, такие как кислород, азот, сера и кремний), которую можно классифицировать как алифатическую
группу, циклическую группу или комбинацию алифатических и циклических групп (например алкарильные и аралкильные группы).
Термин "алифатическая группа" означает насыщенную или ненасыщенную прямую или разветвленную углеводородную группу. Этот термин используют, чтобы охватить, например, алкильную, алкенильную и алкинильную группы. Термин "алкильная группа" означает насыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу, включающую, например, метил, этил, изопропил, mpem-бутил, гептил, додецил, октадецил, амил, 2-этилгексил и подобные. Термин "алкенильная группа" означает ненасыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу с одной или несколькими углерод-углерод двойными связями, такую как винильная группа. Термин "алкинильная группа" означает ненасыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу с одной или несколькими углерод-углерод тройными связями. Термин "циклическая группа" означает углеводородную группу с замкнутым кольцом, которая может быть классифицирована как алициклическая группа, ароматическая группа или гетероциклическая группа. Термин "алициклическая группа" означает циклическую углеводородную группу, имеющую свойства, напоминающие свойства алифатических групп. Термин "ароматическая группа" или "арильная группа" означает моно- или полициклическую ароматическую углеводородную группу. Термин "гетероциклическая группа" означает углеводород с замкнутым циклом, в котором один или более атомов в кольце представляют собой элемент, отличающийся от углерода (например азот, кислород, сера и подобные). Группа, которая может быть такой же, или может отличаться от другой группы, также упоминается как "независимо" какая-либо.
В настоящем изобретении предложено новое соединение, которое представляет собой общее пролекарство, объединяющее первый компонент, глюкозамин, или производное, или аналог глюкозамина, и второй компонент, противовоспалительный агент. В настоящем изобретении также преложена фармацевтическая композиция, включающая соединение, представляющее собой общее пролекарство, для облегчения доставки активных агентов. Как только общее пролекарство доставляется посредством композиции и расщепляется in vivo, первый компонент и второй компонент переходят в активное состояние и совместно обеспечивают терапевтические преимущества
NSAID и глюкозамина и его аналогов и производных, таких как гликозаминогликаны. Боль можно облегчать, например, посредством СОХ-1/СОХ-2-механизмов ингибирования посредством нестероидного противовоспалительного агента, доставляемого в качестве компонента общего пролекарства, с дополнительным преимуществом, состоящим в том, что противовоспалительный агент доставляется местно, и по существу все потенциальные побочные эффекты, особенно желудочно-кишечные побочные эффекты уменьшаются или исчезают. Поддержание и/или восстановление тканей посредством регуляции клеточных событий и/или физиологических процессов, таких как взаимодействие клетка-клетка и клетка-матрикс и пролиферация/дифференциация клеток, можно управляться при помощи, например, гликозаминогликана или сложного эфира гликозаминогликана в качестве другого компонента общего пролекарства.
Кроме того, не будучи связанным какой-либо определенной теорией, противовоспалительный компонент общего пролекарства может способствовать чрескожной доставке глюкозамина, таким образом увеличивая биодоступность глюкозамина при расщеплении общего пролекарства in vivo. Кроме того, противовоспалительный агент сам по себе также обеспечивает лечение пораженных участков.
Соединение, представляющее собой общее пролекарство по настоящему изобретению, представлено формулой I:
где каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой Н или органическую группу, как определено выше, X представляет собой противовоспалительный агент, и L представляет собой возможную линкерную группу. Если линкер L отсутствует, то противовоспалительный агент X непосредственно связан с первым компонентом. Линкерные группы представляют собой группы любого типа, такие чтобы первый компонент (слева
от линкера L в формуле I) был ковалентно связан со вторым компонентом X (справа от линкера L в формуле I), и где линкерная группа может быть расщеплена, либо между N(H)-L связью, L-X связью и/или внутри линкера L, in vivo таким образом, чтобы первый компонент и второй компонент стали активными. Обычно линкерная группа представляет собой органическую группу, как определено выше. Предпочтительные линкерные группы включают ацилоксиэфиры и альфа-гидроксильные сложные эфиры.
Первый компонент соединения, представляющего собой общее пролекарство, обеспечивает глюкозаминовую часть общего пролекарства. Хотя любой глюкозамин указанной выше структуры пригоден для использования в соединениях, представляющих собой общее пролекарство по настоящему изобретения, некоторые глюкозамины могут обеспечивать предпочтительные воплощения. Такие глюкозамины включают, без ограничения ими, глюкозамин, глюкозамина пентаацетат, глюкозамин-1-фосфат, глюкозамин-6-фосфат, N-ацетил-Р-О-глюкозамин,
N-ацетилглюкозамин-б-фосфат, 1М-ацетилглюкозамин-1 -фосфат, уридин-дифосфат-М-ацетилглюкозамин, 2-амино-2-дезокси-1,3,4,6-ацетил-В-0-глюкопираноза, ацетилированный аналог 2-амино-2-дезокси-1,3,4,6-ацетил-В-0-глюкопиранозы, 2-ацетамидо-2-дезокси-Р-0-глюкопираноза-1,3,4,6-тетраацетат, ацетилированный аналог 2-ацетамидо-2-дезокси-В-0-глюкопираноза-1,3,4,6-тетраацетата и N-ацетилглюкозамин (NAG). Особенно предпочтительные воплощения общих пролекарств по настоящему изобретению включают амино-2-дезокси-1,3,4,6-ацетил-Р-0-глюкопиранозу, 2-ацетамидо-2-дезокси-Р-Р-глюкопираноза-1,3,4,6-тетраацетат и N-ацетилглюкозамин (NAG).
Как указано выше, общие пролекарства по настоящему изобретению включают в качестве второго компонента противовоспалительный агент, ковалентно присоединенный к глюкозаминовому компоненту, как более подробно описано ниже.
Компоненты общего пролекарства обычно остаются неактивными, до превращения в свои активные формы in vivo путем разрыва ковалентной связи между компонентами. Противовоспалительный агент может быть присоединен непосредственно к глюкозамину (например путем замещения одного из водородов аминогруппы), при этом при расщеплении in vivo обеспечиваются только два активных вещества, входящих в общее пролекарство
(противовоспалительный агент и глюкозамин). Альтернативно, противовоспалительный агент может быть ковалентно присоединен к глюкозамину через линкерную группу или спейсер L, например через сложноэфирную группу. При доставке такого воплощения общего пролекарства, связи между первым и/или вторым компонентами и линкерной группой расщепляются, например при помощи эстераз, присутствующих in vivo, и общее пролекарство обеспечивает два активных вещества (противовоспалительный агент и глюкозамин). Линкерные группы, если они присутствуют, предпочтительно выбирают так, чтобы линкерная группа полностью отщеплялась от глюкозамина и противовоспалительного агента, после чего линкерная группа высвобождается, и возможно разрушается, или иным образом метаболизируется.
Любой тип противовоспалительного агента, способный ковалентно связываться с глюкозамином, как описано выше, и обеспечивающий нужные воздействия на пациента, пригоден для использования в общих пролекарствах по настоящему изобретению. Такие противовоспалительные агенты включают, например, простагландины, арахидоновую кислоту, метаболиты арахидоновой кислоты, нестероидные противовоспалительные агенты и производные нестероидных противовоспалительных агентов.
Нестероидные противовоспалительные агенты (NSAID) особенно полезны с точки зрения их широкой доступности, их эффективности в качестве противовоспалительных агентов и, для некоторых NSAID, их относительно низкой стоимости. Предпочтительные NSAID, пригодные для соединений, представляющих собой общие пролекарства по настоящему изобретению, включают, без ограничения ими, например, салициловые кислоты (например ацетилсалициловую кислоту (аспирин), холина магния трисалицилат, дифлунизал, салсалат, магния салицилат, холина салицилат, холина магния салицилат, натрия салицилат), пропионовые кислоты (например фенопрофен, фенопрофен кальция, флурбипрофен, ибупрофен, кетопрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, индобуфен, индопрофен, тиопрофеновая кислота), уксусные кислоты (например диклофенак, индомецитин, глюкаметацин, сулиндак, толметин, карпрофен), еноловые кислоты (например мелоксикам, пироксикам, теноксикам, лорноксикам), фенамовые кислоты (например, меклофенамат, меклофенамат натрия, мефенамовая кислота, этофенамат),
нафтилалканоны (например набуметон), пиранокарбоновые кислоты (например этодолак), пирролы (например кеторолак, кеторолак трометамин, фенилбутазон, ремифензон), лара-аминофенолы (например ацетаминофен) и ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2) (например целекоксиб, валдекоксиб, рофекоксиб, флосулид, нимесулид). Структуры индометацина и глюкаметацина показаны на Фиг. ЗА и ЗВ соответственно. Предпочтительные NSAID для использовании в общем пролекарстве по настоящему изобретению включают ибупрофен и кетопрофен. В одном из воплощений соединение индометацин исключено из группы NSAID, используемых в общем пролекарстве по изобретению.
В изобретении также предложены фармацевтические композиции. Композиции по настоящему изобретению могут включать соединение формулы I, представляющее собой общее пролекарство, как описано выше, в фармацевтически приемлемом носителе, как более подробно описано ниже.
В изобретении также предложена композиция, которая включает глюкозамин, или производное, или аналог глюкозамина (например соединение формулы II) в препарате для местной и/или чрескожной доставки. Предполагается, что эти композиции глюкозамина для местного применения обеспечивают чрескожный транспорт/проникновение через кожную мембрану таким образом, что биодоступность глюкозамина и, следовательно, его эффективность, по сравнению с биодоступностью глюкозамина в пероральных препаратах глюкозамина может быть улучшенной.
Дополнительные композиции по настоящему изобретению могут включать глюкозамин (например соединение формулы I) в фармацевтически Приемлемом носителе, где эта композиция предпочтительно приготовлена в виде препарата для местной и/или чрескожной доставки. Эти композиции не включают общее пролекарство, однако препараты, как описано в данном описании изобретения, обеспечивают неожиданный чрескожный транспорт через кожную мембрану, что как ожидается, может увеличить биодоступность глюкозамина.
При использовании в данном описании изобретения, если не указано иное, местное введение функционально представляет собой то же, что и чрескожное введение. Без привязки к какой-либо определенной теории, местное введение глюкозамина может обеспечить большую биодоступность
активного ингредиента. Однако до настоящего момента было показано, что добиться проникновения глюкозамина через кожные мембраны трудно. В настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, включающие глюкозамин, которые обладают улучшенной проникающей способностью, таким образом обеспечивая большую биодоступность активного агента.
Некоторые пригодные композиции по изобретению включают, без ограничения ими, например, сложные эфиры гликозаминогликанов, таких как хондроитин, дерматан, гепарин, кератин и другие биологически важные протеогликаны. Примеры некоторых пригодных гликозаминогликановых сложных эфиров, которые являются компонентами соединительной ткани и хряща, включают 2-амино-1,3,4,6-ацетил-бета-0-глюкопиранозил, 2-ацетамидо-2-дезокси-бета-0-глюкопираноза-1,3,4,6-тетраацетат и 2-ацетамидо-2-дезокси-бета-О-глюкопиранозу.
Композиции по настоящему изобретению, включающие один или более чем один глюкозамин, получают, например, путем изготовления или смешивания глюкозамина(ов) в фармацевтически приемлемом носителе, например креме, геле, растворе, мази, лосьоне, суспензии, эмульсии, микроэмульсии, липосоме, пластыре для чрескожного введения и т.д. Такие крем, гель, раствор, мазь, лосьон, суспензия, эмульсия, микроэмульсия, липосома или пластырь для чрескожного введения могут включать любое число или комбинацию носителей для местного/чрескожного применения, одобренных фармакопеей США (USP) для применения для человеком или в ветеринарии, например жирные сложные эфиры, спирты, гелевые основы (например гели Pluronic), лецитин, диметилсульфоксид (DMSO), воду и т.д. для получения чрескожного и/или местного агента. Если желателен либо подкожный, или пероральный препарат, фармацевтически приемлемый носитель может включать, например, обычный физиологический раствор, раствор Pluronic F-127, или обычно рассматриваемый как безопасный (GRAS) раствор для доставки (подкожная, внутримышечная и/или внутривенная доставка), или таблетки, капсулы, порошки, суспензии, эмульсии и/или гели (пероральная доставка).
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут включать один или более чем один дополнительный компонент, подходящий
для использования в композиции, и такие компоненты, при их включении, будут обеспечивать нужные результаты (например будут обеспечивать дополнительную терапевтическую пользу для кожи или ткани, или будут способствовать, например, сохранению консистенции и стабильности композиции). Дополнительные компоненты могут включать, например, антимикробные агенты, желирующие агенты, эмульгаторы, загустители, агенты, способствующие заживлению кожи, смягчающие поверхностно-активные вещества, растворители, смазывающие вещества, воска, увлажняющие агенты, агенты, улучшающие проницаемость кожи, антиоксиданты и любые их комбинации.
Хотя очевидно, что некоторые компоненты, используемые в композициях по настоящему изобретению, могут обеспечивать более чем один эффект в композиции, в зависимости от, например, концентрации компонента (например, полоксамер может рассматриваться одновременно как желирующий агент, и как эмульгатор), следующие компоненты представляют собой типичные дополнительные компоненты, используемые в настоящих композициях.
Антимикробные агенты обычно присутствуют в композиции, чтобы содействовать сохранению композиции, и таким образом увеличивают ее срок годности. Антимикробные агенты, полезные в настоящем изобретении, включают этанол, парабены, соли парабенов, сорбиновую кислоту, сорбат калия, пропиленгликоль, глицерин и т.д. Также можно использовать комбинации указанных антимикробных агентов.
Некоторые дополнительные агенты могут быть полезны в улучшении проникновения композиции через кожные мембраны. Полезные усилители проникновения включают, например, диметилсульфоксид, этанол, полиэтиленгликоль, мочевину, диметилацетамид, лаурилсульфат натрия, спаны, твины, терпены, азон, ацетон и олеиновую кислоту. Предпочтительным усилителем проникновения сквозь кожу, особенно, например, для использования в ветеринарии, является диметилсульфоксид (DMSO). Предпочтительным усилителем проникновения сквозь кожу, особенно при использовании у пациентов-людей, является этанол.
Хотя представленные композиции сами могут обеспечивать лечение кожи в случае таких состояний как повреждение кожи, ожоги и возрастная морщинистость кожи, дополнительно к обеспечению терапевтических
эффектов в случае таких заболеваний как остеоартрит, может быть желательным включить дополнительные компоненты, обеспечивающие регенерацию кожу и/или антиоксидантное действие, для дополнительного положительного терапевтического воздействия на кожу. Такие регенерирующие кожу агенты включают, например, витамин Е, витамин Е-токоферола полиэтиленгликоля сукцинат (витамин E-TPGS), аскорбиновую кислоту, альфа-токоферол, бета-токоферол, гамма-токоферол, Aloe vera и т.д. Особенно полезным регенерирующим кожу агентом в настоящих композициях является витамин Е. Кроме того, некоторые полезные антиоксиданты включают фумаровую кислоту, яблочную кислоту, аскорбиновую кислоту, пальмитат, бутилированный гидроксиланизол, пропилгаллат, аскорбат натрия, метабисульфит натрия и т.д.
Некоторые другие дополнительные компоненты, такие как эмульгирующие агенты и загустители, могут быть использованы для обеспечения, например, стабильности и желательной консистенции композиций. Типичные эмульгирующие агенты, полезные в настоящем изобретении, включают холестерин, полоксамеры, лецитин, карбомеры, полиоксиэтиленовые эфиры, сложные эфиры жирных кислот, стеараты и т.д. Известные эмульгирующие агенты включают полоксамеры и лецитин, причем особенно предпочтительным полоксамером является Pluronic F-127. Кроме того, типичные загустители, полезные в настоящих композициях включают длинноцепочечные жирные спирты и сложные эфиры длинноцепочечных жирных спиртов.
Дополнительно к любому из указанных выше дополнительных компонентов, один или несколько противовоспалительных агентов, рассмотренных выше в связи с общими пролекарствами по настоящему изобретению, могут быть включены в качестве свободного компонента (например не связанного ковалентно с глюкозамином, или в дополнение к композиции, включающей общее пролекарство) в любую из композиций по настоящему изобретению. Кроме того, поскольку указанные противовоспалительные агенты не связаны ковалентно с глюкозамином, выбор противовоспалительного агента, присутствующего в качестве свободного агента, соответственно не ограничен.
Для обеспечения фармацевтически эффективных композиций, первый компонент композиции по настоящему изобретению (например глюкозамин, его производные и/или его аналоги) обычно присутствует в композиции в количестве по меньшей мере приблизительно 1 процент по массе, и предпочтительно по меньшей мере приблизительно 10 процентов по массе. Более того, глюкозаминовый компонент обычно присутствует в композиции в количестве не более чем приблизительно 75 процентов по массе и, предпочтительно не более чем приблизительно 40 процентов по массе.
Два основных способа синтеза общих пролекарств по изобретению показаны на Фиг. 4 и 5. Однако следует понимать, что изобретение не ограничивается каким-либо конкретным способом синтеза, и включает также другие способы синтеза. В результате осуществления каждого приведенного в качестве примера способа (Фиг. 4 и 5) получается общее пролекарство, которое представляет собой глюкозамин или его производное, такое как гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, связанный с противовоспалительным агентом, таким как NSAID, и такое приведенное в качестве примера общее пролекарство является гидролизуемым или иным способом расщепляемым. Предпочтительно связь является гидролизуемой или расщепляемой in vivo.
На Схеме 1 (Фиг. 4) схематически изображен основной синтез типичного общего пролекарства по настоящему изобретению, в котором глюкозамин связан с противовоспалительным агентом посредством спейсера (например линкера или линкерной группы), такого как алкильная цепь, связанная ковалентной связью имид-сложный эфир, ковалентно связанного с NSAID посредством образующейся структуры малонового сложного эфира. Линкерные группировки обычно расщепляются in vivo с высвобождением глюкозамина и противовоспалительного агента, а также инертной линкерной группы.
Альтернативно, общие пролекарства по настоящему изобретению можно синтезировать с получением непосредственной связи между глюкозамином или его производным и противовоспалительным агентом согласно приведенной в качестве примера схемы на Фиг. 5. Композиции, включающие общие пролекарства, синтезированные согласно общей схеме на Фиг. 5, доставляют общие пролекарства, которые предпочтительно расщепляются in vivo с
получением глюкозамина и противовоспалительного агента без высвобождения инертного компонента.
В настоящем изобретении также предложены способы лечения расстройства у млекопитающего, которые включают введение композиций по настоящему изобретению.
Соединения, композиции и способы по настоящему изобретению пригодны для лечения различных заболеваний или состояний у млекопитающих (например для введения человеку и/или в ветеринарной практике), где лечение включает купирование симптома расстройства (например боли и/или опухания сустава), ослабление причины заболевания (например восстановление разрушенного хряща и/или соединительных тканей) и/или улучшение состояния (например уменьшение появления морщин на лице).
Расстройство может быть результатом заболевания (например остеоартрита) или может быть результатом физического повреждения (например растяжений суставов или мышц). Кроме того, композиции и способы по настоящему изобретению не обязательно ограничены лечением заболевания и/или повреждения. Композиции по настоящему изобретению могут осуществлять терапевтическое или косметическое действие на поврежденную или морщинистую кожу пугем, например, нанесения композиций на морщины лица и/или другие участки повреждения кожи (например повреждения кожи, вызванного солнцем, солью и/или воздействием ветра) для осуществления успокаивающего действия на кожу (терапевтический эффект) и по меньшей мере временного уменьшения проявления морщин на коже (косметический эффект).
Таким образом, заболевания и состояния, которые можно лечить способами по настоящему изобретению, как обсуждается в данном описании изобретения, включают, без ограничения ими, артрит, остеоартрит, остеопороз, растяжение мышц, перенапряжение мышц, растяжение суставов, деформацию суставов, тендинит, бурсит, ожоги, боль в суставах, воспаление суставов, повреждение кожи, болезненность кожи, кожную боль, повреждения кожи солнцем, повреждения кожи ветром, повреждения кожи солью, рубцовую ткань, возрастную морщинистость кожи и любые их комбинации.
Способы лечения согласно настоящему изобретению включают введение фармацевтической композиции по изобретению пациенту, используя любой традиционный способ без ограничения. В предпочтительном воплощении общее пролекарство вводят пациенту местно и/или чрескожно путем местного нанесения на кожу и/или другую внешнюю или внутреннюю мембрану, как более полно описано выше. В других препаратах общее пролекарство или продукты его метаболизма доставляются в кровоток и распространяются системно путем циркуляции по кровеносной системе.
В другом воплощении изобретения общее пролекарство вводят перорально, например в форме таблеток, порошков, капсул, суспензий, эмульсий, гелей и т.д. В дополнительных воплощениях лечение расстройства достигается посредством подкожной, внутримышечной и внутривенной инъекции, как более полно описано выше.
Хотя следует понимать, что композиции по настоящему изобретению можно вводить пациенту для лечения ряда заболеваний и/или состояний, которые могут включать, без ограничения ими, терапевтические расстройства и/или косметические применения, также предполагается, что может быть включено много разных дополнительных компонентов для получения препаратов, подходящих для доставки композиции по изобретению, в зависимости от интересующего заболевания или состояния.
Например, композиции по настоящему изобретению, которые включают глюкозамин, его производное или его аналог (например композиции, которые не включают общее пролекарство) могут быть получены из различных комбинаций дополнительных компонентов, например изопропилпальмитата, изопропилмиристата, гликозаминогликана или сложного эфира гликозаминогликана, загустителя, такого как длинноцепочечные жирные спирты, сложные эфиры длинноцепочечных жирных спиртов, восков типа спермацета, неионных желирующих агентов/эмульгаторов типа полоксамеров, воды и антимикробного агента, одобренного USP, где дополнительные компоненты выбирают так, чтобы обеспечить нужные свойства композиции. Кроме того, некоторые из приведенных в качестве примеров препаратов могут обеспечивать повышенную проникающую способность, и, таким образом, повышенную биодоступность сложного эфира гликозаминогликана.
Типичные препараты включают, без ограничения ими, следующие препараты, где NSAID возможно может быть включен в любой из препаратов:
1. Изопропилпальмитат, DMSO, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
2. Изопропилпальмитат, вода, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
3. Изопропилпальмитат, витамин Е, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
4. Изопропилмиристат, полоксамер, вода, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
5. Изопропилмиристат, вода, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
6. Изопропилпальмитат, вода, лецитин, полоксамер, одобренный USP антимикробный агент, сложный эфир гликозаминогликана.
7. Витамин Е, лецитин, изопропилмиристат, сложный эфир гликозаминогликана.
8. Изопропилмиристат, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
9. Изопропилпальмитат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
10. Изопропилпальмитат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
11. Изопропилпальмитат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
12. Изопропилпальмитат, лецитин, одобренный USP антимикробный агент, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
13. Изопропилмиристат, витамин Е, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
14. Изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
15. Изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
16. Изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
17. Изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, сложный эфир гликозаминогликана.
18. Изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
19. Изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
20. Изопропилмиристат, DMSO, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
21. Изопропилмиристат, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
22. Изопропилмиристат, DMSO, этанол, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
23. Изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
24. Изопропилмиристат, DMSO, этанол, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
25. Изопропилпальмитат, DMSO, этанол, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
26. Изопропилпальмитат, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
27. Изопропилпальмитат, DMSO, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
28. Изопропилпальмитат, DMSO, этанол, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
29. Изопропилпальмитат, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
30. Изопропилпальмитат, DMSO, этанол, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
31. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана
32. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
33. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
34. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
35. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
36. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
37. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
38. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
39. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
40. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, лецитин, витамин Е, сложный эфир гликозаминогликана.
41. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
42. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
43. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, сложный эфир гликозаминогликана.
44. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
45. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
46. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, витамин Е, полоксамер, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
47. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, полоксамер, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
48. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, витамин Е, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
49. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, витамин Е, лецитин, полоксамер, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
50. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
51. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, витамин Е, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
52. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, полоксамер, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
53. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
54. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
55. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, сложный эфир гликозаминогликана.
56. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
57. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
58. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
59. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, витамин Е, сложный эфир гликозаминогликана.
60. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
61. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
62. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, сложный эфир гликозаминогликана.
63. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
64. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
65. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
66. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, этанол, лецитин, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
67. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, этанол, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
68. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
69. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, этанол, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
70. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, этанол, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
71. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
72. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
73. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
74. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
75. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, сложный эфир гликозаминогликана.
76. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, сложный эфир гликозаминогликана.
77. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
78. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
79. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
80. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
81. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
82. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
83. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, лецитин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
84. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
85. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, одобренный USP антимикробный агент, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
86. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, вода, одобренный USP антимикробный агент, полоксамер, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
87. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
88. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
89. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
90. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
91. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, витамин Е, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
92. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, DMSO, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
93. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, этанол, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
94. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
95. Изопропилмиристат, лецитин, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
96. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, этанол, DMSO, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
97. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, DMSO, витамин Е, лецитин, водный или безводный ланолин, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
98. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, этанол, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
99. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, водный или безводный ланолин, сложный эфир гликозаминогликана.
100. Изопропилмиристат, олеиновая кислота, этанол, витамин Е, полоксамер, сложный эфир гликозаминогликана.
101. Жирные сложные эфиры, сложный эфир гликозаминогликана.
102. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, цетиловый спирт, полоксамер, вода, антимикробный агент.
103. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, цетиловый спирт, антимикробный агент.
104. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, стеариновый спирт, полоксамер, вода, антимикробный агент.
105. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, стеариловый спирт, антимикробный агент.
106. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, цетостеариловый спирт, полоксамер, вода, антимикробный агент.
107. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, цетостеариловый спирт, антимикробный агент.
108. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, спермацет (или заменитель спермацета), полоксамер, вода, антимикробный агент.
109. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, спермацет (или заменитель спермацета), антимикробный агент.
110. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, цетиловые сложные эфиры, полоксамер, вода, антимикробный агент.
111. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, цетиловые сложные эфиры, антимикробный агент.
112. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, эмульгирующий воск, полоксамер, вода, антимикробный агент.
113. Изопропилпальмитат, изопропилмиристат, гликозаминогликан или сложный эфир гликозаминогликана, эмульгирующий воск, антимикробный агент.
Некоторые из указанных выше препаратов по изобретению, как и следует ожидать, окажутся более подходящими для определенных целей. Например, один препарат, усиливающий чрескожную абсорбцию композицию в суставе, таком как колено, будет, вероятнее всего, отличаться от состава, предназначенного для лечения/восстановления кожи вокруг глаз,
поврежденной солнцем, и/или морщин вокруг глаз, вызванных воздействием солнца и погоды. Для последнего применения полезно включение витамина Е для улучшения лечения кожи. Однако витамин Е может не обеспечивать никаких дополнительных преимуществ препаратам, предназначенным для проникновения через кожу или в сустав, даже если витамин Е не будет влиять на процесс проникновения через кожу.
Так, например, в качестве примеров косметических препаратов приведены препараты 1-101, тогда как в качестве примеров препаратов, пригодных для использования в лечения артрита и/или воспаленных суставов, служат, например, препараты 102-113. Необходимо понимать, что независимо от предполагаемого использования композиции, композиции и способы по настоящему изобретению не ограничиваются выбором компонентов из перечисленных препаратах 1-113.
Примеры
Настоящее изобретение проиллюстрировано следующими примерами, которые относятся к общим пролекарствам и к местному и/или чрескожному применению глюкозаминов, включая их производные и сложные эфиры, как описано выше. Подразумевается, что конкретные примеры, вещества, количества и методики, изложенные ниже, следует интерпретировать в широком смысле в соответствии с объемом и сущностью изобретения, как изложено в данное описание изобретения. Кроме того, примеры представлены для ясности понимания, и изобретение не ограничивается точными показанными и описанными подробностями; его многочисленные варианты очевидны специалисту в данной области техники.
Пример 1 - разработка и синтез общего пролекарства NSAID -глюкозамин
Объединение NSAID и глюкозамина в одном общем пролекарстве делает возможной совместную доставку указанных лекарственных средств в форме, нацеленной на заболевание, такое как остеоартрит, как при пероральном, так и при чрескожном введении. Чрескожная доставка является предпочтительной, поскольку она позволяет избежать побочных эффектов, связанных с пероральной доставкой NSAID, таких как неблагоприятные реакции на лекарственное средство и/или неблагоприятное воздействие на желудочно-кишечный тракт, часто проявляющиеся при пероральном введении NSAID
пациентам (Shi et al., Acta Pharmacol. Sin., 25 (3), 357-365 (2004); Benini et al., Pediatr. Nephrol., 19 (2): 232-234 (2004); Wiholm, Curr. Med. Res. Opin., 17 (3): 210-216 (2001); Kromann-Andersen et al., Dan. Med. Bull., 35(2): 187-192 (1988); Pietzsch et al., Int. J. Clin. Pharmacol. Ther., 40 (3): 111-115 (2002); Karch et al., JAMA, 22, 234 (12): 1236-1241 (1975)), а также явлений, связанных с метаболизмом/экскрекцией, часто наблюдаемых при введении глюкозамина (Setnikar et al., Arzneimittel-Forschung, 36 (4): 729-735 (1986); Aghazadeh-Habashi et al., Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Sci., 5 (2): 181-184 (2000); Setnikar et al., Arzneimittel-Forschung, 43 (10): 1109-13 (1993); и Setnikar et al., Arzneimittel-Forschung, 51 (9): 699-725 (2001)). Экспериментальная часть
Целью настоящего исследования был синтез общих пролекарств NSAID-глюкозамид, как соединенных непосредственно, так и соединенных через цепь. Материалы и способы
Все использованные реагенты и растворители были приобретены от Fisher Scientific. Тонкослойную хроматографию (TLC) и препаративную тонкослойную хроматографию проводили на Analtech Co. UNIPLATES. Точки плавления определяли на аппарате Фишера-Джонса и не корректировали. Спектры ядерного магнитного резонанса регистрировали на спектрометре Varian NOVA 500 МГц для 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР с тетраметилсиланом в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (б) приведены в миллионных долях (м.д.), и сигналы указаны как s (синглет), d (дуплет), t (триплет), m (мультиплет) или br (уширенный синглет). Для записи УФ-спектров использовали Beckman DU-650 и Thermo Electron Corp. AQUAMATE. Масс-спектры ESI (ионизация в электроспрее) были получены сотрудниками, работающими в комплексе масс-пектрометрии отдела химических и биологических наук университета Джоржии. Колоночную хроматографию проводили, используя силикагель > 440 меш. Дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) осуществляли на Perkin-Elmer DSC 7 с ТАС 7/DX, используя программное обеспечение PYRIS Thermal Analysis System (Rev. E/March 2002).
Синтез
Синтез моделей общих пролекарств был проведен успешно с получением соединений-продуктов 6 (Схема I, Фиг. 6) и 9 (Схема II, Фиг. 7). Исследовали способы, которые могли бы сохранить В-конформацию углевода,
защитить гидроксигруппы (ОН), чтобы обеспечить возможность амину (NH2) вступать в селективное присоединение с получением первичных промежуточных соединений 4 (Схема I, Фиг. 6) и 7 (Схема II, Фиг. 7). Соединения 1-3 (Схема I, Фиг. 6) синтезировали согласно способам, адаптированным из: Bergman et al., Chem. Ber., 1932, 975; Silva et al., J. Org. Chem., 64: 5926-5929 (1999) (Дополнительные материалы); и Charviere et al., J. Med. Chem., 46: 427-220 (2003) в качестве исходных материалов для получения соединения 6.
Схема I (Фиг. 6)
Получение 1,3,4,6-тетра-0-ацетил-2-дезокси-2-{[{[2-(4-изобутилфенил)пропаноил]окси}(фенил)ацетил]амино}-Р-0-глюкопиранозы (Соединение 6).
2-Дезокси-2-амино-1,3,4, б-тетра-О-ацетилф-О-глюкопиранозил (4)
Соединение 3 (100 г, 0,26 моль) титровали триэтиламином с получением белого осадка. Осадок фильтровали и промывали CH2CI2 (2 х 150 миллилитров (мл)). Фильтрат сушили под вакуумом в течении 24 часов. Органический слой промывали солевым раствором (2x100 мл) и сушили над Mg2S04- Растворитель удаляли при пониженном давлении в роторном испарителе, и продукт сушили в течении 24 часов под вакуумом с получением соединения 4 в виде белого твердого вещества (87,9 грамм (г), 97% выход). 1Н-ЯМР (d-ацетон) 9.21 (s, 1Н), 6.15 (d, 1Н), 5.38 (t, 1Н), 5.08 (t, 1Н), 4.31 (dd, 1Н), 4.11-4.03 (m, 2Н), 3.56 (t, 1Н), 3.03-2.05 (dd, 6Н), 2.25 (d, ЗН), 2.10-2.09 (т, ЗН). 13С-ЯМР (d-ацетон) 205.7, 170.1, 169.87, 169.39, 169.0, 95.20, 74.85, 72.28, 68.61, 61.90, 55.46, 19.98, 19.85, 19.82, 19.77. ESI для C14H2iN09: FW 347 найдено m/z 348 [М + Н+]. Т. пл. 134°С
2-дезокси-2-(2-хлор-2-фенил)ацетиламино-1,3,4, б-тетра-О-ацетилф-D-глюкопиранозил (5)
Альфа-хлорфенилацетилхлорид (20 г, 0,105 моль) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору соединения 4 (29,88 г, 0,105 моль), триэтиламина (12,4 мл, 0,90 мл) в 50 мл CH2CI2, при температуре от -10° до комнатной, в течении 24 часов. Реакционную смесь промывали HCI (1,5 н., 2x7 мл), НгО (1 х 100 мл) и рассолом (1 х 100 мл). Органический слой сушили над Mg2S04, и растворитель удаляли при пониженном давлении в роторном испарителе. Полученный сироп кристаллизовали в ледяном ацетонитриле и сушили под вакуумом в течении 24 часов с получением соединения 5 (27,4 г, 93,5%) в виде
белого твердого вещества. 1Н-ЯМР (d-ацетон) 7.80 (s, 1Н), 7.37 (s, 2Н), 7.25 (s, 2Н), 5.79 (s, 1Н), 5.33 (d, 2Н), 4.90 (s, 1Н), 4.09 (d, 2Н), 3.95 (s, 1Н), 3.84 (s, 1H), 3.17 (s, 1H) 1.87-1.64 (m, 12H). 13С-ЯМР (d-ацетон) 205.55, 16.88, 169.69, 169.18, 168.51, 167.69, 128.85, 128.61 (2C), 127.81 (2C) 91.03, 68.54, 61.70, 60.60, 53.13, 19.73, 19.70 (2C), 19.62. ESI для C14H21NO9: FW [M + H+] 499 найдено m/z 500 440 [M + Н+]. Т.пл. > 200(238)°C
1,3,4,6-тетра-0-ацетил-2-дезокси~2-{[{[2-(4-изобутилфенил)пропаноил]окси}(фенил)ацетил]амино}ф-0-алюкопираноза (6)
Соединение 5 (653 миллиграммов (мг), 1,45 ммоль) и Na соль а-метил-4-[изобутил]фенилуксусной кислоты в 10 мл безводного CH2CI2 перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Раствор промывали рассолом (2x10 мл) и упаривали на роторном испарителе с получением соединения 6 (763 мг, 93,5%) в виде белого порошка.
1H-NMR (d-ацетон) 7.73 (s, 1Н), 7.41-7.13 (m, 9Н), 5.81 (d, 2Н), 5.38 (m, 1Н), 5.04 (m, 1Н), 4.26 (s, 2Н), 4.10 (s, 1Н), 3.96 (s, 2Н), 2.48 (s, 2Н), 2.01 (s, 6Н), 1.84 (s, 6Н), 1.65 (s, Ш), 1.53 (s, ЗН), 0.90 (s, 6Н). 13С-ЯМР (d-ацетон) 205.69, 173.37, 169.61, 168.73, 168.70, 140.38, 138.43, 138.03, 129.25, 128.36, 127.31, 126.84, 91.96, 75.91, 72.54, 71.66, 68.31, 52.07, 44.61, 21.72, 19.61, 17.96: Uv 203А нм. ESI для C35H43N012 FW 669 найдено m/z 522 [М + Н+] масса/потеря (С11Н15).
Схема II (Фиг. 7)
Получение 2-дезокси-2-[2-(3-бензоилфенил)пропановой кислоты]амино-р-0-глюкопиранозил (Соединение 9)
2-дезокси-2-амино-1,3,4,6-тетра-0-триэтилсилил-(3-0-глюкопиранозил
(7)
Глюкозамина HCI (7,32 г, 33,95 ммоль) и каталитическое количество диметиламинопиридина (DMAP, кат.) перемешивали в 100 мл безводного пиридина в течение трех часов при комнатной температуре. Хлортриэтилсилан (20,47 г, 136,26 миллимоль (ммоль)) добавляли по каплям при перемешивании раствора на ледяной бане, при температуре от -5°С до комнатной в течение 16 час, и при температуре 40-45°С в течение 2 часов. Пиридин удаляли, и полученное масло промывали 250 мл этилацетата и затем 250 мл смеси 1:1 этилацетата и рассола. Конечный органический слой сушили NaS04, и растворитель удаляли выпариванием на роторном испарителе с получением
бесцветного масла, которое сушили в течение ночи под вакуумом, с получением соединения 7 (21,82 г; 97%) в виде белой пены. 1Н-ЯМР (CD3OD): 5.39 (d, 1Н), 4.83-4.80 (m, 2Н), 3.89-3.47 (m, ЗН), 3.09-3.01 (dd, 1Н), 1.04-0.53 (m, 60Н). ESI для CaoHegNOsSiV FW 636 найдено m/z 636 [M+] и 522 [М + Н+] масса/потеря (C6Hi5).
2-дезокси-2{2-(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты]амино-(5-0-глюкопиранозил (9)
Соединение 7 (28 г; 43,5 ммоль) и DMAP (кат.) перемешивали в 10 мл ацетонитрила на ледяной бане. В отдельном сосуде перемешивали (2S)-2-(3-бензоилфенил)пропионовую кислоту (11 г; 43,55 ммоль) в 10 мл ацетонитрила на ледяной бане с BuNMe2 (8,75 мл, 120 ммоль), Me2NS02CI (9,67 мл, 90 ммоль), пока раствор не становился прозрачным. Оба раствора смешивали и перемешивали при от 0°С до комнатной температуры в течение 12 часов. Ацетонитрил удаляли выпариванием на роторном испарителе. Полученный сироп промывали 2 х 150 смеси вода/ацетонитрил (1:1), и органический слой промывали 2 х 100 мл рассола. Органический слой удаляли на роторном испарителе, и полученный сироп сушили под вакуумом в течение 12 часов с получением 2-дезокси-2-(2-(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты)амино-1,3,4,6-тетра-0-триэтилсилил-В-0-глюкопиранозила (Соединение 8) (43 г), количественно: ESI для C46H8iN07Si4: FW 872 найдено m/z 857 [М+ Н+] масса/потеря СН3) в виде желтого сиропа. С соединения 8 непосредственно снимали защиту, используя mpem-бутиламмония фторид/МеОН с получением осадка, который отфильтровывали, промывали метанолом и перекристаллизовывали из горячего этанола с получением Соединения 9 (17,3 г, 85%) в виде матового твердого вещества. 1H-NMR (DMSOd6) 7.63-7.24 (m, 9Н), 6.17 (s, 1Н), 4.65 (s, 1Н), 4.56 (s, 1Н), 4.44 (s, 1Н), 4.21 (s, 1Н), 3.61 (s, 1Н), 3.45-2.10 (m, 4Н), 2.83 (d, 2Н), 2.25 (d, ЗН), 1.1 (s, ЗН). 13С-ЯМР (DMSO-d6) 197.13, 176.39, 141.67, 137.64, 137.34, 132.54, 131.73, 129.69 (2С), 128.79, 128.47, 128.41 (2С), 128.19, 95.20, 74.85, 72.28, 68.61, 61.90, 55.46, 45.09, 18.12 . ESI для C22H25N07: FW416 найдено m/z 416 [М + Н+]. Мр 164°С
Результаты
Соединения 6 и 9 разрабатывались как общие пролекарства для лечения таких расстройств как остеоартрит посредством доставки как NSAID, так и глюкозамина (или его сложного эфира или производного).
Соединение 6 представляет собой ибупрофен, ковалентно связанный через линкер с амидом глюкозамина, и соединение 9 представляет собой молекулу кетопрофена, непосредственно связанную с глюкозамином, каждое из них представляет собой модель MP (общего пролекарства). Ожидается, что физиологические, ферментативные и гидролитические реакции будут затрагивать сложноэфирную и имид-сложноэфирную связь каждого из пролекарств, что, таким образом, делает их идеальными общими пролекарствами, используемыми против ассоциированной боли и, возможно, причины таких расстройств, как остеоартрит, при пероральном или трансдермальном введении.
Хотя глюкозамин в настоящее время не считается фармацевтическим средством в Соединенных Штатах, исследования показали, что перорально вводимый глюкозамин способствует синтезу гликозаминогликана и выработке протеогликанов, которые составляют смазывающие жидкости и поддерживающие ткани сустава (например хрящ), таким образом, например, излечивая основную причину остеоартритов (McClain et al., Diabetes, 45: 10031009 (1996); Singh et al., Diabetes, 50: 2355-2362 (2001)). Глюкоза и глюкозамин являются субстратами глюкокиназы (Singh et al., Diabetes, 50: 2355-2362 (2001)). Фосфорилированный глюкозамин, глюкозамин-6-фосфат ингибирует глюкокиназу и одновременно изменяет как метаболизм глюкозы, так и последующий метаболизм глюкозамина (Van Schaftigen et al., Biochem. J., 308: 23-29 (1995); Virkamaki et al., Diabetes, 48: 1101-1107 (1999)). В Miwa et al сообщалось, что глюкокиназа обладает низким сродством к NAG. Так, NAG-киназа опосредует фосфорилирование NAG с получением NAG-6-фосфата, который не оказывает влияния на глюкокиназную активность (Miwa et al., Enzyme Protein, 48: 135-142 (1994)). Сделан вывод, что NAG-6-фосфат не оказывает влияния на глюкокиназную активность, таким образом позволяя глюкозе и глюкозамину подвергаться метаболизму без каких-либо ограничений. С этой точки зрения биосинтезу гликозаминогликанов будет в большей степени способствовать использование NAG или некоторых других лимитирующих скорость аналогов глюкозамина, чем исходного глюкозамина (Gouze et al., FEBS Lett., 510: 166-170 (2002)). В Anastassiades et al. сообщается, что глюкозамин и его аналоги, такие как NAG, а также глюкозамин с меняющимися N-связь-цепями продемонстрировали степень роста культуры хондроцитов человека
посредством in vitro генной экспрессии в матриксе (Poustie et al., Pharmacol. Exp. Ther., 311 (2): 610-616 (2004)). С точки зрения фармацевтики и принимая во внимание патенты и заявки на патент Anastassiades (заявки на патент США №№ 20040152665 (2003) и 20020045597 (2001); публикация международной заявки на патент WO 2002017890 А2), принимаемая авторами изобретения гипотеза состоит в том, что путем защиты амида глюкозамина увеличивают период полувыведения молекулы глюкозамина, что влияет на ее активность. Влияние линкерной цепи было продемонстрировано в большом количестве исследований, описанных в литературе, таких как сочетание полимера с молекулой посредством сложноэфирной связи для увеличения ее периода полувыведения как способ модификации характеристик растворения химического вещества и/или биофармацевтических свойств (D'Souza et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 93 (8): 1962-1979 (2004)).
Препятствием полезности глюкозамина в качестве лечения некоторых заболеваний является его биодоступность, которую обычно принимают равной приблизительно 12-13%, хотя представляется, что некоторые исследования указывают на некоторый эффективный потенциал в случаях остеоартрита с тяжестью от легкой до умеренной (Setnikar et al., Arzneimittel-Forschung, 36 (4): 729-35 (1986); Biopharmaceutics & Drug Disposition, 25 (3): 109-116 (2004); Du et al., Biopharmaceutics & Drug Disposition, 25 (3): 109-116 (2004)). He желая связывать себя какой-либо определенной теорией, авторы изобретения убеждены, что эти два синтезированных общих пролекарства будут подвергаться in vivo гидролизу с получением исходных соединений. В этом случае каждое исходное соединение может обеспечить присущее ему терапевтическое действие. Не закончены исследования по определению того, являются ли профили растворения новых общих пролекарств более быстрыми по сравнению с их константами скорости гидролиза или ферментативного разрушения. Хотя это ожидается, прогнозируется, что эти скорости будут меняться, так как связи зависят от химической природы ковалентных связей, структуры соединений и условий окружающей среды in vivo/in vitro.
Соединение 6, состоящее из трех частей, может подвергаться гидролизу легче, чем состоящее из двух частей соединение 9. Молекула ибупрофена соединения 6 может подвергаться гидролизу благодаря линкерной группе. Бензильная группировка линкерной группы затем возможно может вступать в
внутримолекулярную реакцию и/или ферментативную реакцию, высвобождающую молекулу глюкозамина. Ожидается, что соединение 9, состоящее из двух частей, будет гидролизоваться в исходные соединения, кетопрофен и глюкозамин.
Эти прогнозы, однако, были сделаны на основании рассчитанных 'in silico' значениях рКа соединений 6 и 9 (Фиг. 6 и 7 соответственно). Расчеты 'in silico' рКа и logP для соединения 6 были получены как результат ACD/pKa v8.02 при использовании ACD/1-Lab онлайновой службы (доступно в Интернете на acdlabs.com) и представляют собой следующее:
0\ ^сн3
1 ~ч|2
н,с
Чб п '-7 О
4 23 J0 ? 8 24
HN Л Н3С. ХН,
н,с
32\ 20
СН, 45-3
Ионная форма: HL рКа! (HL/H+L.9) = 10,79±0,70 рКа2 (H2L/H+HL;9) = -3,67±0,70 Рассчитанный logP: б,45±0,82
Расчеты 'in silico' рКа и log Р для соединения 9 также были получены как результат ACD/pKa v8.02 при использовании ACD/I-Lab онлайновой службы и представляют собой следующее:
НО-i?
НО <"--7
2-*ОН
14 26-29
13-21 /.
I \ //
О 27-28
.30
Ионная форма: H5L рКа! (HL/H+L;9) = 15,53±0,70 рКа2 (H2L/H+HL;11) = 14,69±0,70 рКа3 (H3L/H+L;11) = 14,33±0,70 рКа4 (H4L/H+HL;10) = 13,53±0,70 рКа5 (H5L/H+L;8) = 12,03±0,70 рКа6 (H6L/H+HL;9) = -2,40±0,70 Рассчитанный logP: 3,81 ±0,48
Прогнозирующие расчёты могут обеспечить оценку биофармацевтических свойств. Представленные расчеты рКа получены на основе алгоритмов, полученных из известных значений рКа или различных химических групп. В данном описание изобретения авторы изобретения, в первую очередь, сосредотачиваются на рКа амидных и/или сложноэфирных связей. Отрицательные значения рКа амида в соединении б указывает на большое значение Ка, что подразумевает, что константа равновесия смещена вправо в сторону диссоциации имидо-сложноэфирной связи посредством расщепления гидролизного типа, которое само по себе является более пригодным для ферментативного расщепления, которое также может происходить в случае имид-сложногоэфирного соединения 6. С другой стороны, амид также имеет высокое значение рКа и, в зависимости от его ионизации, имид-сложноэфирная связь может быть гидролизована. Кроме того, обычно
предполагается, что величины рКа около 2,5-3,0 обусловлены протежированием отрицательно заряженного кислорода. Прогнозирование авторов изобретения показывает, что это возможно на карбонильном кислороде имидо-сложного эфира. Дополнительные исследования покажут, действительно ли указанные общие пролекарства обладают субстратной специфичностью, гидрофильностью и/или другим образом влияют на скорость высвобождения исходных лекарственных средств. Усовершенствование, основанное на их физико-химических свойствах, и понимание механизмов их высвобождения являются основными факторами, определяющими дальнейшие разработки общих пролекарств.
'In silico' log Р прогнозируемые значения для соединения 6 и 9 (Фиг. 6 и 7 соответственно) составляют 6,45±0,82 и 3,81 ±0,48 соответственно. В настоящее время, используя правило пяти Липинского (Du et al., Biopharmaceutics & Drug Disposition. 25(3):109-116 (2004)), соединениям б и 9 присваивают показатели 4 и 2 соответственно. Между тем, эти показатели представляют собой ранжирование растворимости на основе совокупности химических соединений, оцениваемых при интеллектуальном анализе данных, например при использовании "правила пяти" для определения "схожести лекарственных средств". "Правило пяти" определяет, что слабая абсорбция или проникающая способность наиболее вероятна в случае, если:
A) Существует более 5 доноров Н-связи (выраженных как сумма групп ОН и NH);
Б) Молекулярная масса (MWT) превышает 500;
B) LogP превышает 5 (или MLogP превышает 4,15); и
Г) Существует более 10 акцепторов Н-связей (выраженных как сумма атомов N и О).
Слабая адсорбция или проникающая способность возможна, когда ни один из компонентов не удовлетворяет более чем двум критериям. Тем не менее, большая схожесть лекарственного средства показана для соединения 9 по сравнению с соединением 6 в отношении их растворимости в воде и кишечной проникающей способности на основании "правила пяти". В свете указанного, общие пролекарства, содержащие углеводные фрагменты, соединения, подобные им потенциально попадают в классы, представляющие
собой субстраты для биологических переносчиков, которые являются исключениями из этого правила.
Настоящее исследование было изначально начато как фармацевтическое исследование для синтеза и оценки физико-химических свойств двух предложенных кандидатов общих пролекарств. Хотя характеристики растворения не обсуждались, авторы изобретения обнаружили, что данные сканирующей калориметрии (DSC) вызывают интерес. Для оценки характеристик растворения указанных общих пролекарств должна быть достигнута устойчивая кристаллическая форма, чего не смогли добиться авторы изобретения. Авторы изобретения столкнулись с часто наблюдаемыми в углеводах фазовыми переходами, такими как динамика стеклообразного состояния, которое удовлетворяет модели Tool-Narayanaswany-Moynihan (Areozzi et al., Journal of Physics: Condensed Matter, 15 (11): S1215-S1226 (2003)). Эта модель является попыткой объяснить переходы стеклообразного состояния, наблюдаемые в углеводородах и других химических веществах, таких как сахароза, трегалоза и (поли)винилпирролидон. Ее широко применяют в фармацевтической промышленности для исследования физико-химической стабильности и количественного соотношения между шириной стеклования и хрупкостью/энергией активации структурной релаксации (Pikal et al. J. of Pharm. Sci., 93(4):981-994 (2004)).
На Фиг. 8, на DSC-термограмме соединения 6, порошок, видны три перехода, являющиеся признаками полиморфов, которые склонны к термической стабильности, с фазовыми переходами при 226,93°С, 233,09°С и 237,52°С соответственно. Все термограммы при нагревании с различными скоростями согласовались друг с другом. После такого как были открыты все DSC кюветы, авторы изобретения обнаружили, что соединение сублимировалось и разложилось.
DSC-термограммы соединения 9 (Фиг. 10 и 11) было трудно получить. Определенная нескорректированная точка плавления соединение 9 составляла 164°С. Типичная DSC-термограмма соединений 6 и 9 демонстрирует экзотермическую активность (Фиг. 9 и 11) и множество точек фазовых переходов, указывающих на сублимацию, наличие которой подтверждалось при визуальной проверке. Нескорректированная точка плавления в действительности является температурой разложения на DSC-термограмме.
Визуально, соединение 6 получали в виде сиропа, который перекристаллизовывали в глубоком вакууме и/или перекристаллизацией из растворителя в виде непрозрачных кристаллов с эллиптическими поверхностями. Для получения более точного представления о соединении 6, авторы изобретения пытались использовать рентгеновскую кристаллографию, которая оказалась неуспешной из-за непрозрачности и сложности кристаллической(их) структур(ы). Не наблюдалось ни отдельного полиморфа, ни переходов в стеклообразные состояния. Гипотеза Pikal et al. о том, что "... поскольку процессы физического и химического разложения требуют подвижности атомов и молекул, а также и структурная релаксация требует подобной подвижности, процессы нестабильности коррелируют или "связаны" со структурной зависимостью " (J. Pharm. Sci., 93(4):981-994 (2004)) выглядит справедливой для соединения 6, как аморфного химического вещества.
Две модели общего пролекарства были синтезированы, следуя тем же способам и/или методологии как для пролекарств, в попытке обойти фармацевтические и фармакологические проблемы, такие как неполная абсорбция, слишком быстрая абсорбция и выделение, наблюдаемые для NSAID и глюкозамина. Конечной целью было получить NSAID и глюкозамин, достигающие места, обеспечивающего их фармакологическое действие при минимизации побочных явлений и/или действия лекарственного средства. Ожидается, что in vitro и/или in vivo исследования подтвердят достижение ожидаемой цели получения этих новых синтезированных общих пролекарств, а также их производных и/или аналогов.
Авторы изобретения также разработали и провели предварительные исследования препаратов других аналогов глюкозамина-NSAID в качестве системы доставки глюкозамина и NSAID для получения противовоспалительного эффекта, а также роста хряща. NSAID могут, например, представлять собой ибупрофен или кетопрофен.
Пример 2 - Растворимость и транспорт общего пролекарства глюкозамин-NSAID
Чрескожная доставка общего пролекарства NSAID-гликозаминогликан, такого как ибупрофен-глюкозамин, может совместно осуществляться с NSAID и гликозамингликаноподобным глюкозамином. В экспериментах, демонстрирующих транспорт глюкозамина и глюкозаминовых общих
пролекарств через сброшенную змеиную кожу, глюкозамина HCI не транспортировался через сброшенную змеиную кожу, в то время как N-ацетилглюкозамин (NAG) транспортировался очень хорошо, даже несмотря на то, что NAG имел, как считается, низкий коэффициент распределения равный 0,017 в смеси октанол/вода.
Соединение б имеет коэффициент распределения (рассчитанный in silico log Р) 6,45, и соединение 9 имеет коэффициент распределения (рассчитанный in silico log Р) 3,81, указывающий на ожидание более высокой растворимости в липидах и большей возможности транспорта. Было показано, что как ибупрофен, так и кетопрофен транспортируется через сброшенную змеиную кожу (патент США № 6368618 В1; Phar acta Helv 1996, Август, 7(3): 205-212; boll Chim. Farm. 2000 Март-Апрель, 139(2):67-72); как кетопрофен, так и ибупрофен являются растворимыми в липидах NSAID. Ожидается, что общее пролекарство NSAID-гликозаминогликан также будет переноситься через сброшенную змеиную кожу, как модель эпидермиса человека; также ожидается, что сложноэфирное пролекарство NSAID будет обладать сходными характеристиками в отношении транспорта, что указывает на большие возможности транспорта общего пролекарства.
Пример 3. Перенос глюкозаминов и глюкозаминовых солей через
кожу.
При пероральном введении глюкозамин, его производные и аналоги, например М-ацетил-О-глюкозамин, подвергаются в печени первой стадии метаболизма (Setnikar et al., Arzneimittel-Forschung, 36(4):729-35 (1986); Du et al., Biopharmaceutics & Drug Disposition, 25(3):109-116 (2004)). Однако, более позднем сообщении указано, что эти агенты могут подвергаться метаболизму по большей части в кишечнике, а не только в печени (Aghazadeh-Habashi et al., Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Sciences, 5(2): 181-184 (2002)). Известно лишь несколько фармакокинетических печатных сообщений по отложению этих агентов в суставном хряще (Setnikar et al., Arzneimittel-Forschung, 43 (10): 11091113 (1993) и Arzneimittel-Forschung, 51 (9): 699-725 (2001)), где сообщались фармокинетические характеристики глюкозамина у собак и человека. Оценивается, что приблизительно 87% исходной пероральной дозы глюкозамина абсорбируется и выделяется; < 13% широко распространяется по телу и <1% достигает суставов, пораженных остеоартритом. Известно, что
хондроитин разрушается до основных дисахаридных компонентов в кишечнике перед дальнейшем метаболизмом (Lamari et al., Biomed. Chromatogr., 16:95-102 (2002)). Хотя только небольшая часть глюкозамина достигает целевого участка суставного хряща, сообщается, что она демонстрирует высокую активность; и терапия глюкозамином и хондроитином одновременно демонстрирует терапевтическую эффективность во времени (McAlindon et al., JAMA, 283:14691475 (2000)).
Начальные данные показывают транспорт некоторых, доставляемых местно, композиций по настоящему изобретению (сложные эфиры гликозаминогликана) по сравнению с глюкозамин-содержащими кремами, имеющегося в настоящее время типа. Такие кремы обычно включают соли глюкозамина (HCI или сульфат), которые представляют собой одновалентные (незаряженные) химические вещества, которые не проходят и/или не проникают сквозь кожу без приложения электрического заряда.
Проанализированные композиции включали глюкозамина HCI, N-ацетилглюкозамин и глюкозамин-пентаацетил, как описано выше, в растворе DMSO:
Глюкозамин HCI Молекулярная формула = C14H22CINO9
Молекулярная масса = 383,7785
Состав С(43,81%) Н(5,78%) Cl(9,24%) N(3,65%)
0(37,52%)
Молярная преломляющая нет данных
способность
Молярный объем Нет данных
Парахор Нет данных
Показатель преломления Нет данных
Поверхностное натяжение Нет данных
Плотность Нет данных
Диэлектрическая постоянная Нет данных
Поляризуемость Нет данных
Масса моноизотопа = 383,098312 Да
Номинальная масса = 383 Да
= 383,783195 Да
Средняя масса
N-ацетилглюкозамин Молекулярная формула Молекулярная масса Состав
Молярная преломляющая
способность
Молярный объем
Парахор
Показатель преломления Поверхностное натяжение Плотность
Диэлектрическая постоянная Поляризуемость Масса моноизотопа Номинальная масса Средняя масса
Глюкозамин пентаацетил Молекулярная формула Молекулярная масса Состав
Молярная преломляющая
способность
Молярный объем
Парахор
Показатель преломления Поверхностное натяжение Плотность
Диэлектрическая постоянная Поляризуемость Моноизотопическая масса
= C14H21NO9 = 347,3179
С(48,41%) Н(6,09%) N(4,03%) 0(41,46%) = 77,50 ± 0,4 сантиметров (см)3
= 266,2 ± 5,0 см3
= 703,1 ± 6,0 см3
= 1,493 ±0,03
= 48,6 ±5,0 дин/см
= 1,30 ±0,1 г/см3
Нет данных
= 30,72 ±0,5x10'24 см3
= 374,121634 Да
= 347 Да
= 347,32248 Да
- C16H23NO10 = 389,3546
С(49 36%) Н(5,95%) N(3,60%) 0(41,09%) = 86,91 ± 0,4 см3
= 299,4 ± 5,0 см3
= 787,0 ± 6,0 см3
= 1,492 ±0,3
= 47,6 ± 5,0 дин/см
= 1,30 ±0,1 г/см3
Нет данных
= 34,45 ± 0,5 х Ю-24 см3
= 389,132199 Да
Номинальная масса = 389 Да
Средняя масса = 389,359811 Да
In vitro транспорт (диффузию) оценивали в экспериментах по диффузии в ячейках Франца, с использованием сброшенной змеиной кожи. Сброшенная змеиная кожа широко признана в качестве обоснованной модельной мембраны человеческой кожи для предварительных исследований проникновения из-за сходства ее состава с роговым слоем человека.
Сброшенную кожу змеи гидратировали в 0,1%-ном водном растворе азида натрия в течении 48 часов при комнатной температуре. Кожу помещали в три рецепторные ячейки Франца для рецепторов, заполненные 0,1 М фосфатным буфером, рН 7. Рецепторный раствор поддерживали при 37°С и перемешивали магнитной мешалкой. Донорные ячейки прикрепляли к каждой рецепторной ячейке, и кожу закрепляли между рецепторной и донорной ячейками, и донорные ячейки заполняли 100 миллиграммами (мг) каждого из: глюкозамина HCI (например ячейка 1), N-ацетилглюкозамина (например ячейка 2) и глюкозамина пентаацетила (например ячейка 3) в 1 миллилитре (мл) раствора DMSO. Поверхность кожи, подвергаемая диффузии, составляла 2,54 см2 (1,8 см в диаметре), а объем рецепторных ячеек составлял 6 см3. Систему оставляли уравновешиваться в течение двух часов, затем брали образцы.
Образцы объемом 20 микролитров (мкл) рецепторного раствора отбирали через интервалы времени 5, 10, 20, 40, 80, 160 и 240 минут, и замещали свежим буфером. Ал и квоты каждого образца объемом 10 мкл анализировали посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии с импульсным электрохимическим детектированием.
Как показано на Фиг. 12, не отмечалось обнаруживаемой диффузии и/или транспорта через кожную мембрану композиции HCI соли глюкозамина. Композиции сложных эфиров гликозаминогликана (N-ацетилглюкозамин и глюкозамина пентаацетил) демонстрировали немедленную и постоянную диффузию и/или транспорт от 5 до 240 минут. Анализировали объем каждой рецепторной ячейки, выявив более чем 50%-ный транспорт сложных эфиров (например, из 100 мг сложных эфиров в фазе доставки со временем были доставлены более 50 мг сложных эфиров).
Пример 4 - Чрескожная проникающая способность Ы-ацетил-D-глюкозамина.
Так как целью данного исследования была оценка чрескожной проникающей способности глюкозаминов, сложных эфиров и их производных, для оценки возможности получения чрескожного препарата для местной терапии, для анализа был выбран NAG, поскольку он представляет собой активный метаболит и пролекарство глюкозамина; а также благодаря возможности его приобретения, относительно низкой стоимости и стабильности. Он обладает следующими физическими и химическими характеристиками, которые делают его подходящим кандидатом для чрескожной доставки и подкожной абсорбции: а) высокая активность, б) приемлемая растворимость в липидах, в) низкая молекулярная масса, г) уникальный биохимический путь активного транспорта из крови в суставной хрящ (Milewski, Biochemica et Biophysica Acta, 1597:173-192 (2002)). Кроме того, полагают, что экзогенный глюкозамин сдвигает синтез гликозаминогликана в сторону получения протеогликанов за счет обхода лимитирующих скорость стадий его превращения из глюкозы в глюкозамин, и в конечном счете в N-ацетил-О-глюкозамин посредством глутамин(фруктоза-6-фосфат амидотрансферазы) (McClain et al., Diabetes, 45: 1003-1009 (1996)). Глюкоза и глюкозамин являются субстратами глюкокиназы (Singh et al., Diabetes, 50: 23552362 (2001)). Продукт фосфорилирования глюкозамина, глюкозамин-6-фосфат, ингибирует глюкокиназу и изменяет метаболизм как глюкозы, так и последующего глюкозамина (Van Schaftigen et al., Biochem. J., 308:23-29 (1995)). Miwa et al. сообщают, что глюкокиназа имеет низкое сродство к NAG (Enzyme Protein, 48:135-142 (1994)). Так, NAG-киназа опосредует фосфорилирование NAG с получением NAG-6-фосфата, который не влияет на глюкокиназную активность (Miwa et al., Enzyme Protein, 46:135-142 (1994)), что позволяет глюкозе и глюкозамину подвергаться метаболизму без каких-либо ограничений. Таким образом, предполагается, что биосинтезу гликозаминогликанов, с этой точки зрения, в большей степени способствует, в некоторых воплощениях и для некоторых определенных применений, использование NAG или некоторых других лимитирующих скорость аналогов глюкозамина, чем глюкозамина (Shikhman et al., J. Immunol., 166:5155-5160 (2001)), хотя использование глюкозамина не исключено.
Проникающую способность оценивали, используя NAG суспензии с различными известными реагентами, улучшающими мембранный транспорт,
этанолом, олеиновой кислотой, изопропилмиристатом, изопропилпальмитатом; растворов NAG в воде и фосфатном буфере, и насыщенного раствора NAG в диметилсульфоксиде (DMSO).
Соли глюкозамина и хондротина являются заряженными, очень полярными, растворимыми в воде, и являются плохими кандидатами для чрескожной абсорбции. В настоящее время существуют продукты для местного применения, содержащие указанные ингредиенты в виде солей, продаваемых в качестве нутрицевтиков для лечения остеоартрита, которые содержат ингредиенты, эффект которых при краткосрочном применении может быть ошибочно отнесен к терапевтическому. NAG - ацетилированный метаболит глюкозамина является менее полярным и нейтральным и представляется более вероятным кандидатом для чрескожной доставки и подкожной абсорбции.
Глюкозамин метаболизируется до NAG по гексозаминовому пути; глюкозамин или галактозамин вместе с уроновой кислотой включен в качестве дисахаридного элемента во все макромолекулы, требующие аминосахара, такие как кератан, дерматан, хондроитин, гилуронат и гепарин, с образованием гликозаминогликанов (GAG). GAG являются отрицательно сильно заряженными молекулами с расширенной конформацией, и демонстрируют высокую вязкость и низкую сжимаемость, идеальные для смазывающей жидкости для анатомического сустава. Большинство GAG в организме связаны с белками ядра с образованием протеогликанов или мукополисахаридов, которые являются основными компонентами кожи, ткани и хряща. (Merrick et al., J. Bio. Chem. 5: 235 (1969); Milewski "Glucosamine-6-phosphate synthase", Biochimica and Biophysica Acta, 1597: 173-192 (2002).
Материалы и способы
Химические реагенты
NAG 99,9+% чистоты получали от MP Biomedical (Aurora, Ohio). Все усиливающие реагенты, приобретенные для настоящего исследования, имели 99,9+% чистоты. Все остальные реагенты имели чистоту аналитического качества и их использовали без дополнительной очистки.
Анализ
Анализ NAG проводили, используя высокоэффективную анионообменную хроматографию с импульсным амперометрическим
детектированием (HPAE-PAD) на Dionex DX-500 ВЭЖХ (HPLC) системе (Dionex Sunnyvale, CA), которая включает градиентный насос GP40, электрохимический детектор ED40, автоматический пробоотборник AS3500 и хроматографическую рабочую станцию PEAKNET ("Optimal Setting for Pulsed Amperometric Detection of Carbohydrates Using the Dionex ED40 Electrochemical Detector," Technical Note 21, Dionex Corp., Sunnyvale, CA, USA; Clarke et al., Anal Chem, 71:2774-2781 (1999); Campo et al., J. Chrom. B, 765:151-160 (2001); LaCourse, W.R. Pulsed Electrochemical Detection in High-Performance Liquid Chromatography, John Wiley & Sons Inc. (1997)). HPAE-PAD была оснащена CARBOPAC PA20 (3 x 150 мм), хроматографической анионообменной колонкой (Dionex Sunnyvale, CA) для быстрого, с высоким разрешением, разделения моносахаридов и дисахаридов при использовании импульсного амперометрического детектирования, CARBOPAC РА20 аналитической защитной колонки (3 х 30 мм) (Dionex Sunnyvale, CA) и колонки с карбонатной ловушкой (25 х 15 мл) (Dionex Sunnyvale, CA). Подвижную фазу (А) дегазировали и готовили с деионизированной водой. Подвижную фазу (В), включавшую 0,02 н. NaOH готовили с деионизированной водой и фильтровали через 0,45 микрометровые (мкм) фильтры в аппарате для фильтрации растворителя (Waters Millipore, Milford, MA, USA), который дегазировали под вакуумом. Систему подвижной фазы использовали с градиентом концентрации 16 мМ NaOH при скорости потока 0,5 миллилитров в минуту (мл/мин). Стандартную калибровочную кривую NAG (Фиг. 13) получали с линейной регрессией и значением R2=0,9936. Каждую группу образцов пропускали с внешними стандартами. Значения концентрации образцов получали при помощи программного обеспечения PEAKNET. Эти значения сравнивали со значениями, полученными путем расчетов площади пика и высоты пика, наблюдаемых как функций уравнения стандартной кривой линейной регрессии. Чувствительность инструментов составляла приблизительно 10"4 единиц. Измерения растворимости
Избыток NAG (рКа 6,73) помещали в отдельные флаконы, содержащие 10 мл деионизированной воды, 10 мл н-гексана и 10 мл фосфатного буфера (рН 6, 6,73 и 7,4; 1 М), и перемешивали при 30°С в течении 24 часов. Растворы центрифугировали в течение 5 минут при 9000 об./мин, и надосадочную жидкость фильтровали через целлюлозо-ацетатные мембранные фильтры
(размер пор 0,45 мкм) (Dionex, Sunnyvale CA). Концентрацию NAG в каждом фильтрате определяли при помощи HPAE-PAD после соответствующего растворения.
Определение коэффициентов распределения
Коэффициент распределение масло/вода для NAG определяли, используя смесь н-гексан/фосфатный буфер (рН 5,56, 6,73 и 7,04, 0,1 М) и н-гексан/вода (Bernacki et al., J. Supramolecular Structure, 7: 235-250 (1977)). В каждом случае 5 мл н-гексана смешивали с водными растворами, содержащими NAG, и встряхивали при 37°С в течение 24 часов. Затем смесь центрифугировали, и органическую и водную фазы разделяли. Концентрацию NAG в фильтрате определяли при помощи HPAE-PAD. после соответствующего растворения
Проницаемость мембран in vivo
Сброшенную змеиную кожу использовали в качестве модели мембраны для исследований проницаемости, используя NAG суспензии в известных усилителях мембранной проницаемости: этаноле, олеиновой кислоте, изопропилмиристате, изопропилпальмитате; насыщенные растворы NAG в воде и фосфатном буфере, а также в насыщенном DMSO растворе и фосфатном буфере (рН 5,5), содержащем этанол при концентрации растворов 2%, 5%, 10%, 25% и 50%.
Кожу гидратировали в 0,1%-ном водном растворе азида натрия при комнатной температуре в течении 48 часов. Диффузионные эксперименты проводили в ячейках Франца (Franz-cell). В общем случае рецепторную ячейку заполняли 0,1 М фосфатным буфером, рН 7,4, и донорную ячейку заполняли раствором или суспензией. Для фосфатных буферных растворов (рН 5,5), содержащих этанол в концентрации 2%, 5%, 10%, 25% и 50% в донорной фазе, рецепторная фаза состояла из фосфатного буфера (рН 5,5, 0,1 М). Рецепторный раствор поддерживали при 37°С и перемешивали магнитной мешалкой.
Сброшенную кожу змеи помешали между рецепторной и донорной ячейками. Поверхность, подвергаемая диффузии, составляла 2,54 см2 (1,8 см диаметром) и объем рецепторной ячейки составлял 6 см3. Донорную ячейку покрывали пластиковой пленкой. Систему оставляли уравновешиваться при 37°С в течении двух часов перед каждым экспериментом. В донорные ячейки
добавляли 5 мл суспензии или раствора N AG-усилителя. Образцы отбирали через промежутки времени в течение 24 часов, 200 мкл образцы рецепторных растворов отбирали и замещали свежим буфером; эксперименты повторяли в трех параллелях. Количества NAG, проникающего через кожу змеи, определяли посредством HPAE-PAD. Обработка данных
Установившийся поток (Jss) NAG (мг/см2/ч) рассчитывали по увеличению его количества в рецепторной среде (Bach et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 46: 113 (1998)). Коэффициент проникновения NAG (kp) в см/ч рассчитывали, исходя из известных физико-химических параметров (Hadgraft et al., "Feasibility Assessment in Topical and Transdermal Delivery: Mathematical Models and In Vitro Studies" в Transdermal Drug Deliverv.2nd Ed. Marcel Dekker Inc., pp. 1-23 (2003)). Время запаздывания (tiag) определяли графически, исходя из графика зависимости суммарного количества лекарственного средства, высвобождающегося на единицу площади (мг/см2), от времени. Для отслеживания скорости (мг/см2) in vitro высвобождения NAG, получали квадратный корень времени (t1/2) по отношению к суммарному количеству лекарственного средства, высвобождающегося на единицу площади (мг/см2) (Guidance for Industry: SUPAC-SS Semisolid Dosage Forms. Scale-up and Postapproval Changes: Chemistry, Manufacturing and Control; In Vitro Release Testing and In Vivo Bioequivalence Documentation. US Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research, May 1997).
Результаты
Начальные исследования проникновения проводили, используя сброшенную змеиную кожу в качестве модели мембраны для кожи человека; широко признанной и достаточной модели для предварительных исследований, из-за сходства ее состава с роговым слоем человека (Itoh et. al., "Use of the Shed Snake Skin as a Model Membrane for In Vitro Percutaneous Penetration Studies: Comparison with Human Skin," Pharm. Res., 7: 1042-1047 (1990). Незначительный транспорт NAG наблюдался из суспензий улучшителей мембранной проницаемости; этанола, олеиновой кислоты, изопропилмиристата и изопропилпальмитата. Проникновение не наблюдалось из водных растворов NAG в воде или фосфатных буферных растворах ( рН 5,5, 6,0, 6,73 и 7,4; 0,1 М).
Исходя из количественной корреляции с выбором коэффициентов распределения NAG, приведенных в Таблице 1, ожидалось проникновение NAG из вышеупомянутых суспензий или водных растворов улучшителей мембранной проницаемости.
Таблица 1. Экспериментально определенные коэффициенты распределения N-ацетил-О-глюкозамина (NAD) (рКа 6,73) и коэфициент проникновения (кр)
н-гексан/буфер, рН 5,5
н-гексан/буфер, рН 6,0
н-гексан/ буфер, рН 6,73
н-гексан/ буфер, рН 7,4
октанол/ вода
(см/ч)
0,252
0,194
0,092
0,091
0,017
0,731
1Й Bernacki et al., J. Supramolecular Structure, 7:235-250 (1997)
DMSO выбирали для оценки в качестве эталона сравнения улучшителя проницаемости из-за его физических свойств и хорошо задокументированных характеристик улучшения (Franz et al., "Dimethyl sulfoxide" в Percutaneous Enhancers Ed. Smith, E. W., Maibach, H.I, CRC Press, Inc., страницы 112-127 (1995)). Описано, что улучшители нарушают межклеточные липиды рогового слоя путем увеличения распределения лекарственного средства в роговом слое с сопутствующим увеличением проникновения лекарственного средства через участки соединения клеток посредством чрескожной абсорбции (Barry, J. Control Rel., 15:237-248 (1991); Williams et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 9: 305-353 (1992); Sinha et al., Drug Dev. Ind. Pharm., 26: 1131-1140 (2002)). График зависимости суммарной концентрации NAG на единицу площади (мг/см2) от времени1'2 (час7*) показывает, что in vitro скорость высвобождения NAG составляет 73,48 мкг/см2 (Фиг. 13) с высокой линейностью транспорта, и, таким образом, не демонстрирует времени задержки, как показано в Таблице 2. В качестве допущения принимют, что высокая полярность NAG и низкий коэффициент его проникновения, как показано в Таблице 3, вносит вклад в невозможность ешл эффективного переноса посредством одного улучшителя проницаемости или в водном растворе.
Таблица 2. Физико-химические данные, полученные для проникновения N-ацетилглюкозамина (NAG) через сброшенную змеиную кожу с помощью насыщенного раствора диметилсульфоксида (DMSO) в донорной фазе и фосфатного буфера, рН 7,4, в рецепторной фазе.
Параметр
Jss (мг/см^/ч)
73,48
tlag (Ч)
Скорость in vitro высвобождения (мг/см2)
186,64
0,9736
Таблица 3. Физико-химические данные, полученные для проникновения N-ацетилглюкозамина (NAG) через сброшенную змеиную кожу с помощью фосфатных буферных растворов (рН 5,5), содержащих этанол в концентрации 2%, 5%, 10%, 25% и 50%, в донорной фазе, и фосфатного буфера, рН 5,5, в рецепторной фазе.
Параметр (% этанола)
Jss (мг/см2/ч)
112,61
119,53
211,61
205,93
77,96
Скорость in vitro высвобождения (мг/см2)
286,03
303,61
537,49
523,06
198,02
tlag (Ч)
0,9778
0,8751
0,7966
0,9924
0,9836
Исследования показывают, что DMSO позволяет транспортировать NAG немедленно и непрерывно с линейным увеличением концентрации с течением времени, как видно на Фиг. 13, где показано влияние DMSO на суммарное проникновение NAG при 37,5°С через сброшенную змеиную кожу (суммарная концентрация в зависимости от времени1'2, каждая точка соответствует среднему +/- стандартное отклонение, п=3).
Также исследовали включенный NAG в смеси этанол/буферный раствор при различных концентрациях. Известно, что этанол как улучшитель способствует чрескожному проникновению и подкожной абсорбции многих
лекарственных средств (Berner et al., "Alcohols, Percutaneous Penetration Enhancers" в Alcohols Eds. Smith, E.W., Maibach, H.I. CRC Press, Boca Raton, FL страницы 45-60 (1995)). Коэффициент распределения масло/вода увеличивается с уменьшением рН буферного раствора, как показано в таблице 1. Не наблюдался чрескожный транспорт NAG из фосфатного буфера или этанола, в которых он хорошо растворим или незначительно растворим соответственно. Его проникновение из фосфатного буфера (рН 5,5), содержащего этанол в концентрации 2%, 5%, 10%, 25% и 50%, наблюдали в условиях погружения, как показано на Фиг. 14, где изображено накопление NAG через сброшенную змеиную кожу в рецепторных ячейках типа Франца из фосфатного буфера (рН 5,5) через 24 часа. Суммарная концентрация растворов, содержащих 5%, 10% и 25% этанола, была очень похожей 24 часа, в то время как доставка NAG при 2% и 50% этанола в буферных растворах была значительно меньше (Фиг. 15 показывает влияние концентрации этанола на суммарное проникновение NAG при 37,5°С через сброшенную змеиную кожу, зависимость суммарной концентрации от времени1'2). При концентрации этанола в буфере выше 50%, NAG осаждается. Значения потока для 10% и 25%-ной концентрации этанола аналогичны, в то время как для 5%, оно составляет половину обоих этих значений. Графически, каждое из них имело слегка отличающийся линейный профиль проникновения вплоть до приблизительно середины эксперимента В конце, в конечной точке 24 часа, каждый раствор доставил аналогичное количество NAG.
Эти результаты в целом показывают, что термодинамические эффекты и растворимость влияют на проникновение NAG в зависимости от использования 100% DMSO (Kurihara-Bergstrom et al., J. Inv. Derma., 89: 274-280 (1987)) и различных концентраций этанола в буферных растворах. Поток NAG in vitro и скорость высвобождения из этанола в буферных растворах в целом превышает соответствующие значения высвобождения, полученные из DMSO. Это свидетельствует о том, что 5-25%-ная концентрации этанола в качестве улучшителя в средствах доставки является подходящей исходной точкой для изготовления препаратов из чрескожно доставляемой/подкожной абсорбируемой композиции NAG.
Настоящее исследование также показывает, что DMSO является улучшителем кожного проникновения NAG. DMSO обычно используют для
доставки лекарственных средств в ветеринарии (Magnusson et al., Adv. Drug Del. Rev., 50: 205-227 (2001)). Использование DMSO в NAG может быть полезным для лечения локализованного остеоартрита у животных, поскольку DMSO не является одобренным FDA эксципиентом для использования у человека в местных/чрескожно доставляемых фармацевтических продуктах. Кроме того, неопубликованные предварительные результаты, полученные в лаборатории авторов изобретения, показывают, что NAG может обладать достаточной проникающей способностью из других средств доставки лекарственных средств. Ожидается, что в процессе дальнейших in vitro исследований будут определены другие препараты NAG, которые будут эффективно демонстрировать чрескожную доставку для подкожной абсорбции.
Пример 5 - Проникновение N-ацетилглюкозамина (NAG) через сброшенную змеиную кожу в Pluronic гель-органических препаратах.
Целью данного исследования была дополнительная оценка проникновения NAG через сброшенную змеиную кожу в pluronic гель-органических препаратах. Каждый из указанных pluronic гелевых препаратов содержал компонент лецитин-изопропилпальмитат и/или лецитин-витамин Е в качестве улучшителя и органическую фазу. Изопропилпальмитат является хорошо исследованным улучшителем. Имеются немногочисленные опубликованные сообщения, относящиеся к влиянию витамина Е и соевого лецитина, улучшающим проникновение, если не считать патенты и заявки на патент, описывающие различные лекарственные формы.
Для настоящих исследований в качестве предпочтительного соединения был выбран NAG, несмотря на то, что в смеси октанол-вода он имеет коэффициент распределения 0,017 (рН 7,4) (Bernacki et al., J. Supramolecular Structure, 7: 235-250 (1997)). Mahjour и соавторы (Journal of Controlled Release, 14(3):243-52 (1990)) исследовали влияние лецитинов на in vitro проницаемость кожи для различных лекарственных средств с различными коэффициентами распределения NAG в смеси октанол-вода. Они обнаружили, что лецитины сои улучшают проникновение всех лекарственных средств, включая прокатерол и оксиморфон, оба из которых имеют в смеси октанол-вода относительно низкий коэффициент распределения -0.37 (рН 7,7) и 0,0 (рН 7,4) соответственно. Наиболее впечатляющим из обнаруженного было то, что улучшающий эффект соевых лецитинов был максимальным для прокатерола, имеющего наиболее
низкий коэффициентом распределения из всех изученных лекарственных средств (Mahjour et al., Journal of Controlled Release, 14(3): 243-52 (1990)). Что касается витамина E, предполагается, что он действует в качестве улучшителя проникновения путем встраивания в двойной липидный слой рогового слоя, что изменяет проницаемость мембраны (Trivedi et al., European Journal of Pharmaceutical Sciences, 3(4):241-243 (1995)).
Витамин E обладает двойным действием в биологических мембранах, как антиоксидант и как стабилизатор мембраны. Со структурной точки зрения, считается, что гидроксильные группы хроманольного кольца витамина Е расположены в окружении полярной головки фосфолипидной мембраны, тогда как фитильные цепи встраиваются к липидным ацильным цепям. Triverdi и соавторы наблюдали улучшение проникновения, обусловленное витамином Е (European Journal of Pharmaceutical Sciences, 3(4): 241-243 (1995)). Их вывод состоял в том, что общее улучшение проницаемости рогового слоя является умеренным. Этот вызвано ограниченным включением витамина Е в богатую керамидами двухслойную структуру. Таким образом, их окончательное заключение состояло в том, что в целом улучшающий эффект витамина Е "... не будет огромным, но не смотря на это будет заметным" (Triverdi et al., European Journal of Pharmaceutical Sciences, 3(4): 241-243 (1995)).
Экспериментальная часть
Материалы
NAG приобретали у MP Biommedicals, Inc (Aurora, OH). Poloxamer 407 (PLURONIC F127; полиэтилен-полипропиленгликоль), соевый лецитин и изопропилпальмитат закупали у Spectrum Chemical Mfg. Corp. (Cardena, CA). Витамин E (смешанный токоферольный комплекс) приобретали у Solgar Vitamin and Herb (Leonia, NJ). Воду, используемую для получения дважды перегоняли и деионизировали при помощи системы очистки Millipore (Continental Water Systems Corp., El Paso, TX).
Приготовление носителя
Двадцати процентные гели poloxamer 407 (PLURONIC F127; полиэтилен-полипропиленгликоль) получали стандартными способами, например растворяя полоксамер в холодной воде при охлаждении в течение 24 часов для получения фазы геля pluronic. NAG вводили в эту фазу геля pluronic. Конечные
составы препараты получали путем эмульгирования выбранной органической фазы с фазой геля pluronic при использовании шприцов с наконечником Люэра. In vitro исследования проникновения через мембраны Сброшенную змеиную кожу использовали в качестве модельной мембраны для указанных исследований проникновения, при использовании гелевых полутвердых препаратов NAG. Кожу гидратировали в 0,1%-ном водном растворе азида натрия при комнатной температуре в течении 48 часов. Проводили эксперименты по диффузии в ячейках Франца. В общем случае рецепторные ячейки заполняли 0,1 М фосфатным буфером, рН 7,4. Рецепторный раствор поддерживали при 37°С и перемешивали магнитной мешалкой. Кожу змеи располагали между рецепторной и донорной ячейками. Поверхность, подвергаемая диффузии составляла 2,54 см2 (диаметр 1,8 см), и объем рецепторных ячеек составлял (3 см3. Донорную ячейку закрывали пластиковой пленкой. Систему оставляли уравновешиваться при 37°С в течение двух часов перед каждым экспериментов. В донорные ячейки помещали 5 мл полутвердого pluronic-органо-гелевого препарата NAG. Образцы (N=3) отбирали через определенные интервалы времени в течение 48 часов, 200 мкл образцы рецепторных растворов отбирали и замещали свежим буфером, эксперименты повторяли в трех параллелях. Количество NAG, которое проникало через кожу змеи определяли посредством HPAE-PAD. HPAE-PAD (ВЭЖХ) анализ
Анализ NAG проводили в Университете штата Джоржия в Центре комплексных исследований углеводов. Применяли высокоэффективную анионообменную хроматографию с импульсным амперометрическим детектированием (HPAE-PAD) (Dionex Sunnyvale, CA); на Dionex DX-500 ВЭЖХ (HPLC) системе, состоящей из градиентной помпы Р40, электрохимического детектора ED40, автоматического пробоотборник AS3500 и хроматографической рабочей станции PeakNet. HPAE-PAD была оснащена CARBOPAC РА20 (3 х 150 мм), аналитической анионообменной колонкой (Dionex Sunnyvale, CA) для быстрого, высокого разрешения моносахаридов и дисахаридов с использованием импульсного амперометрического детектирования, CARBOPAC РА20 аналитической защитной колонки (3 х 30 мм) и колонкой с карбонатной ловушкой (25 х 15 мл). Подвижную фазу (А) дегазировали и готовили с деионизированной водой. Подвижную фазу (В),
состоявшую из 0,02 н. NaOH, готовили с деионизированной водой и фильтровали через 0,45 мкм фильтры в аппарате для фильтрации растворителя (Waters Millipore, Milford, MA, USA), который дегазировали под вакуумом. Систему подвижной фазы пропускали с градиентом концентрации 16 мМ NaOH при скорости потока 0,5 мл/мин. Стандартную калибрационную кривую NAG (Фиг. 16, показывающая влияние смеси соевый лецитин-витамин Е на проникновение NAG через сброшенную змеиную кожу, суммарная концентрация (п=3) на единицу площади +/- стандартное отклонение, как функция от времени172) получали с линейной регрессией и значением R2=0,9936. Каждую серию образцов пропускали с внешними стандартами. Значения концентрации образца получали при помощи программного обеспечения PEAKNET. Эти значения сравнивали со значениями, полученными путем расчета площади пика и высоты пика, наблюдаемых как функций уравнения линейной регрессии стандартной кривой. Инструментальная чувствительность составляла приблизительно 10"4 единиц. Обработка данных
Установившийся поток (Jss) NAG (мг/см2/ч) рассчитывали по увеличению его количества в рецепторной среде (Bach et al., Eur. J. Pharm. and Biopharm. 46:1-13 (1998)). Коэффициенты проникновения NAG (kp) в см/ч рассчитывали из известных физико-химических параметров (Hadgraft et al., "Feasibility Assessment in Topical and Transdermal Delivery: Mathematical Models and In Vitro Studies" в Transdermal Drug Delivery. 2nd Ed. Marcel Dekker, Inc., pp. 1-23 (2003)). Время запаздывания (tiag) определяли графически, исходя из графика зависимости суммарного количества лекарственного средства, высвобождающегося на единицу площади (мг/см2), от времени. Для отслеживания скорости (мг/см2) in vitro высвобождения NAG, получали квадратный корень времени (t1/2) по отношению к суммарному количеству лекарственного средства, высвобождающегося на единицу площади (мг/см2) (Guidance for Industry: SUPAC-SS Semisolid Dosage Forms. Scale-up and Postapproval Changes: Chemistry, Manufacturing and Control; In Vitro Release Testing and In Vivo Bioequivalence Documentation. US Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research, May 1997).
Результаты
Изначально транспорт NAG наблюдали из суспензий (100 мг/мл) лецитин-изопропилпальмитат, витамин Е и лецитин-витамин Е (1:1). Незначительный (ниже предела определения) транспорт наблюдался из всех указанных суспензий, за исключением проникновения NAG из смешанной суспензии лецитин-витамина Е (1:1), как показано на Фиг. 17, где приведены физико-химические данные, полученные для проникновения NAG через сброшенную змеиную кожу в носителях pluronic гель-органическая фаза, суммарная концентрация (п=3) на единичную площадь +/- стандартное отклонение, как функция от времени1'2 (IA: 1:1 масс/масс, pluronic гель: органическая фаза IA (лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)); НА: 4:1 масс/масс, pluronic гель:органическая фаза НА (лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)); IIIA: 0,93:0,07 масс/масс, pluronic гелыорганическая фаза IIIA (лецитин:витамин Е (0,93:0,07 масс/масс.)); IB: 1:1 масс/масс, pluronic гельюрганическая фаза IB (лецитин:изопропилпальмитат (1:1 масс/масс.)); ИВ: 1:1 масс/масс, pluronic гелыорганическая фаза ИВ (лецитин:изопропилпальмитат (1:1 масс/масс); IIIB: 0,93:0,07 масс/масс. pluronic гель:органическая фаза IB (лецитин:изопропилпальмитат (1:1 масс/масс.)).
Для сравнения, линейный транспорт наблюдался для смешанной суспензии лецитин-витамин Е (1:1). Зарегистрировали скорость высвобождения NAG = 12,71 мкг/мг/см2, установившийся поток Jss = 4,23 мг/см2/ч и коэффициент его проникновения кр = 5,012 х 10"3 (Таблица 4).
Таблица 4. Физико-химические данные, полученные для проникновения N-ацетилглюкозамина (NAG) в лецитин-витамин pluronic органо-гелевом фазовом носителе через сброшенную змеиную кожу
Носитель
Jss
(мг/см2/ч)
Скорость
высвобождения (мг/см2)
кр (см/ч)
t|ag(4 <)
Лецитин-витамин Е (1:1)
4,23 мг/см2/ч
13,71 м кг/см12
5,012x103
Для pluronic органо-гелей каждый носитель был составлен из pluronic геля и органической фазы, как показано в Таблице 5, вместе с соответствующими физико-химическими данными, полученными для проникновения N-ацетил-глюкозамина (NAG). Каждый носитель NAG имел
время задержки, как показано в Таблице 5. График зависимости суммарной концентрации от времени для получения tiag не показан. Как показано на Фиг. 17, график зависимости суммарной концентрации на единицу площади от квадратного корня от времени обеспечивает сопоставление всех носителей. В целом графически pluronic гелевые препараты, содержащие органическую фазу из смеси лецитина и изопропилпальмитата превосходили pluronic гель, содержащий носители органической фазы лецитин и витамин Е. Препарат IIIA, который содержал pluronic гель со смесью лецитин-витамин Е в отношении 0,93:0,07, обладал наилучшей скоростью высвобождения, устойчивостью потока и значениями коэффициента проникновения (Таблица 5).
Данные показывают, что при уменьшении фазы органического улучшителя, проникновение NAG увеличивается, как для состава IIIA, так и состава 1MB. Однако скорости высвобождения составов НВ и 1MB сравнимы. Соответственно, в неуказанных в данном описании изобретения экспериментах в исключительно водных носителях NAG не переносился.
Таблица 5. Физико-химические данные, полученные для проникновения NAG через сброшенную змеиную кожу в носителях pluronic-органическая фаза
Носитель
Графическое обозначение
Органическая фаза
Jss
(мг/см2/ч)
Скорость
высвобождения
(мг/см2)
кр (см/ч)
tlag (Ч)
Pluronic
гель:органическая фаза IA
Лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)
1,01
6,88
3,2x10"3
6,45
Pluronic
гелыорганическая фаза НА
Лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)
1,01
8,94
3,1x10"3
3,98
Pluronic
гель:органическая фаза IIIA
IIIA
Лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)
10,3
74,9
3,2x10"3
0,85
Pluronic
гель:органическая фаза IB (1:1)
Лецитин:изопропилпальмитат Е (1:1 масс/масс.)
2,16
14,6
3,1x10"3
5,33
Pluronic
гель:органическая фаза ПВ(4:1)
IIB
Лецитин:изопропилпальмитат Е (1:1 масс/масс.)
6,98
38,5
2,5x10"3
6,98
Pluronic
гель:органическая фаза 1MB (0,93:0,7)
1MB
Лецитин:изопропилпальмитат Е (1:1 масс/масс.)
4,46
43,1
6,8x10"3
2,49
6 А
Полное описание всех указанных в данном описании изобретения патентов, патентных заявок, предварительных заявок на патенты, публикаций и материалов, доступных в электронной форме, включены в данное описание изобретения посредством ссылок. Приведенное выше подробное описание и примеры представлены исключительно для ясности понимания. Из них не следуют никакие ограничения. Изобретение не ограничивается точными показанными и описанными подробностями; многие варианты очевидны специалисту в данной области техники и, как подразумевается, включены в объем изобретения, определенного формулой изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, содержащее первый компонент, ковалентно связанный со вторым компонентом, причем указанное соединение имеет формулу I:
(I)
где
каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой Н или органическую группу;
L представляет собой возможную линкерную группу; и X представляет собой противовоспалительный агент.
2. Соединение по п. 1, где противовоспалительный агент выбран из группы, состоящей из нестероидного противовоспалительного агента и производного нестероидного противовоспалительного агента.
3. Соединение по п. 2, где нестероидный противовоспалительный агент выбран из группы, состоящей из дифлунизала, ацетилсалициловой кислоты, холина магния трисалицилата, салсалата, диклофенака, этодолака, индометацина, глюкаметацина, сулиндака, толметина, фенопрофена, ибупрофена, кетопрофена, напроксена, оксапрозина, флурбиопрофена, мефенамовой кислоты, меклофенамата, фенилбутазона, пироксикама, мелоксикама, набуметона, пирпрофена, индобуфена, тиапрофеновой кислоты, ацетаминофена, карпрофена, этофенамата, теноксикама, холина магния салицилата, холина салицилата, фенопрофена кальция, индопрофена, кеторолака, кеторолака трометамина, салицилата магния, меклофенамата натрия, салицилата натрия, лорноксикама, нимесулида, ремифензона, флосулида, рофекоксиба, целекоксиба и валдекоксиба.
4. Соединение по п. 1, где противовоспалительный агент выбран из группы, состоящей из простагландина, арахидоновой кислоты и метаболита арахидоновой кислоты.
5. Соединение по любому из пп. 1-4, где L, если она присутствует, представляет собой органическую группу.
6. Соединение по любому из пп. 1-5, где первый компонент выбран из группы, состоящей из глюкозамина, глюкозамина пентаацетата, глюкозамин-1-фосфата, глюкозамин-6-фосфата, 1М-ацетил-р-0-глюкозамина, N-ацетилглкжозамин-б-фосфата, М-ацетилглюкозамин-1-фосфата, уридиндифосфат-М-ацетилглюкозамина, 2-амино-2-дезокси-1,3,4,6-ацетил-В-0-глюкопиранозы, ацетилированного аналога 2-амино-2-дезокси-1,3,4,6-ацетил-В-D-глюкопиранозы, 2-ацетамидо-2-дезокси-В-0-глюкопираноза-1,3,4,6-тетраацетата, ацетилированного аналога 2-ацетамидо-2-дезокси-В-0-глюкопираноза-1,3,4,6-тетраацетата и N-ацетилглюкозамина.
7. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения по любому из пп. 1-6 и фармацевтически приемлемый носитель.
8. Фармацевтическая композиция по п. 7, дополнительно содержащая один или более дополнительных компонентов, выбранных из группы, состоящей из противомикробного агента, желирующего агента, эмульгирующего агента, загустителя, агента, способствующего заживлению кожи, смягчающего средства, поверхностно-активного вещества, растворителя, смазывающего вещества, воска, увлажняющего агента, агента, улучшающего проницаемость кожи, антиоксиданта и их комбинаций.
9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где противомикробный агент выбран из группы, состоящей из этанола, парабена, солей парабена, сорбиновой кислоты, сорбата калия, пропиленгликоля, глицерина и их комбинаций.
10. Фармацевтическая композиция по п. 8, где агент, способствующий заживлению кожи, выбран из группы, состоящей из витамина Е, аскорбиновой кислоты, альфа- токоферола, бета-токоферола, гамма-токоферола, Aloe vera, витамин E-E-TPGS (токоферола полиэтиленгликоля сукцината) и их комбинаций.
11. Фармацевтическая композиция по п. 8, где эмульгирующий агент выбран из группы, состоящей из холестерина, полоксамеров, лецитина, карбомеров, полиоксиэтиленовых эфиров, сложных эфиров жирных кислот, стеаратов и их комбинаций.
12. Фармацевтическая композиция по п. 8, где агент, улучшающий проницаемость кожи выбран из группы, состоящей из диметилсульфоксида, этанола, полиэтиленгликоля, мочевины, диметилацетамида, лаурилсульфата натрия, спанов, твинов, терпенов, азона, ацетона, олеиновой кислоты и их комбинаций.
13. Фармацевтическая композиция по п. 8, где антиоксидант выбран из группы, состоящей из фумаровой кислоты, яблочной кислоты, аскорбиновой кислоты, пальмитата, бутилированногс гидроксиланизола, пропилгаллата, аскорбата натрия, метабисульфита натрия и их комбинаций.
14. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 7-13, приготовленная в виде препарата для местного применения.
15. Фармацевтическая композиция по п. 14, где носитель выбран из мази, геля, крема, раствора, лосьона, суспензии, микроэмульсии, эмульсии, липосомы или чрескожного пластыря.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 7-13, приготовленная в виде препарата для подкожного, внитримышечного или внутривенного введения.
17. Фармацевтическая композиция по пп. 7-13, приготовленная в виде препарата для перорального введения.
18. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 7-17, где первый компонент присутствует в композиции в количестве от приблизительно 1 процента по массе до приблизительно 75 процентов по массе.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы II:
где каждый из R1, R2, R3, R4 и R5 независимо представляет собой Н или органическую группу; и фармацевтически приемлемый носитель;
(П)
где композиция приготовлена в виде препарата для местного применения.
20. Фармацевтическая композиция по п. 19, дополнительно содержащая по меньшей мере один противовоспалительный агент.
21. Фармацевтическая композиция по п. 19 или 20, где носитель выбран из группы, состоящей из мази, геля, крема, раствора, лосьона, суспензии, микроэмульсии, эмульсии, липосомы или чрескожного пластыря.
22. Способ лечения или предупреждения расстройства или состояния у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества композиции по любому из пп. 7-21.
23. Способ по п. 22, где расстройство или состояние выбрано из группы, состоящей из артрита, остеоартрита, остеопороза, растяжения мышц, перенапряжения мышц, растяжения суставов, деформации суставов, тендинита, бурсита, ожогов, боли в суставах, воспаления суставов, повреждения кожи, болезненности кожи, кожной боли, повреждения кожи солнцем, повреждения кожи ветром, повреждения кожи солью, рубцовой ткани, возрастной морщинистости кожи и их комбинаций.
24. Способ по п. 22 или 23, где лечение расстройства или состояния включает облегчение по крайней мере одного симптома этого расстройства.
25. Способ по любому из пп. 22-24, при котором введение композиции включает местное введение.
26. Способ по п.25, где композиция приготовлена в виде препарата для использования в качестве косметического средства.
27. Способ по любому пп. 22-25, где введение композиции включает подкожное, внутримышечное или внутривенное введение.
28. Способ по любому пп. 22-25, где введение композиции включает пероральное введение.
29. Способ по любому пп. 22-28, где млекопитающее представляет собой человека.
30. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения формулы II:
где
каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой Н, и
R5 представляет собой ацетильную группу; и
фармацевтически приемлемый носитель; причем указанная композиция приготовлена в виде препарата для местного применения.
31. Фармацевтическая композиция по п. 30, дополнительно включающая противовоспалительный агент.
32. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения, содержащего первый компонент, ковалентно связанный со вторым компонентом, причем указанное соединение имеет формулу I:
где:
каждый из R1, R2, R3 и R4 представляет собой Н,
L представляет собой ацетильную группу, и
X представляет собой ибупрофен или кетопрофен; и фармацевтически приемлемый носитель; причем указанная композиция приготовлена в виде препарата для местного применения.
33. Способ облегчения состояния, поддающегося лечению глюкозамином, включающий:
введение млекопитающему эффективного количества соединения, содержащего первый компонент, ковалентно связанный со вторым компонентом, причем указанное соединение имеет формулу I:
(I)
где
каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой Н или органическую группу,
L представляет собой возможную линкерную группу, и
X представляет собой противовоспалительный агент.
34. Способ облегчения болезненного состояния, поддающегося излечению противовоспалительным агентом, включающий:
введение млекопитающему эффективного количества соединения, содержащего первый компонент, ковалентно связанный со вторым компонентом, причем указанное соединение имеет формулу I:
(I)
где
каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой Н или органическую группу,
L представляет собой возможную линкерную группу, и X представляет собой противовоспалительный агент.
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 1
ОР03Маг
Эстрамустина натрий фосфат Emcyt(r) 17-альфаэстрадиол
NH+CI-
Азиридан
нор-азотныи иприт
актуальньш алкилирующий агент
2 Глюкозамин и общие пролекарства
глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 2
D. ибупрофен/салициламид ^' СУльФасалазин
Фиг. 3
А. Индометацин в Глюкаметацин
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 4
Глюкозамина НС1
НО-\
НО*
НО NHfl2
Ацетил- и пропионил- связанные продукты
О О NHR2 ^=0 R,
Rl = СОСНСН3Вг/СОСН2Вг
R2 = СОСНСН3/СОСН2
R3 = NSAID карбоциклический анион
i) 1н. NaOH, параметоксибензальдегид/0°С -ком.темп. 1 час и)пиридин (безвод.), уксусный ангидрид/ком.темп. 24 ч iii) ацетон (дефлегмация) и 5 н. HCI iv) пиридин ( 8 ч) или триэтиламин (1,2 экв) в метаноле и двухфазной смеси хлористый метилен/вода 1:1 рН 9 v) бромацетилбромид или бромпропионилбромид, LiCI/DMF (9% масс), пиридин/бромацетилбромид или бромпропионилбромид (1:1) vi) NSAID, DMF, DCC/HOBT/DMF, CH2CI2 vii) вода/бикарбонат натрия.
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Ri = OSiEt3
R2 = NSAID карбоциклический анион
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 6
i) 1н. NAOH, пара-метоксибензальдегид/0оС - ком.темп. 1 ч ii) пиридин (безводный), уксусный ангидрид/ком.темп. 24 часа iii) ацетон (дефлегмация) и 5 н. HCI iv) триэтиламин, вода v) хлорфенилацетилхлорид (линкер), триэтиламин vi) NSAID, СН2С12.
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
i) Трихлорэтилсилан, пиридин (безводный) и) NSAID, Me2NS02CI, MeCN, BuNMe2,DMAP iii) TBAF, метанол
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Термический анализ на Perkin Elmer
0.5541 ¦ I
JO 50 IOO iso зоо
Температура (°C)
ФИГ. 8
1) удерживали в течение 1,0 мин при 25,00°С 2) нагревали от 25,00°С до 290,00°С при 15,00°С/мин 3) Охлаждали от 290.00С0 до 25,00°С при 25,00°С/мин
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Термический анализ на Perkin Elmer
200 210 220 230 240 250 200 270 2К" 290 ЗСС
Температура (°С) Фиг. 9
1) удерживали в течение 1,0 мин при 25,00°С 2) нагревали от 25,00°С до 290,00°С при 15,00°С/мин 3) Охлаждали от 290,00С° до 25,00°С при 25,00°С/мин
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Термический анализ на Perkin Elmer
25 -10 60 ВО 100 120 МО 160 100 200.
Температура (°С)
Фиг. 10
1) удерживали в течение 1,0 мин при 25,00°С 2) нагревали от 25,00°С до 290,00°С при 15,00°С/мин 3) Охлаждали от 290,000° до 25,00°С при 25,00°С/мин
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Термический анализ на Perkin Elmer
; 1 i *
ЙО i : I i • -I
30 *0 CO SC 11" • 120 "-"С" 162 W 200 220 2Л"
Температура (°C)
Фиг. 11
1) удерживали в течение 1,0 мин при 30,00°С 2) нагревали от 30,00°С до 290,00°С при 15,00°С/мин 3) Охлаждали от 290,00С° до 30,00°С при 40,00°С/мин
11 Глюкозамин и общие пролекарства
глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 12
Зависимость площади пика от времени как функция от концентрации
Время (мин)
12 Глюкозамин и общие пролекарства
глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 13
13 Глюкозамин и общие пролекарства
глкжозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 14
О " 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000
Накопление через 24 часа (мг)
14 Глюкозамин и общие пролекарства
глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 15
точка представляет собой среднее ± ст.откл. п=3, 2% этанола: ¦ , 5% этанола: ¦; 10% этанола: Л; 25% этанола: О; 50% этанола: х
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 16
Глюкозамин и общие пролекарства глюкозамин/противовоспалительный агент, композиции и способы
Фиг. 17
600
0 t 2Ч3 4 5 6 7 8
Время (квадр. корень из ч)
Фиг. 17. [IA: pluronic гель: органическая фаза IA [лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)] (1:1); ПАИ: pluronic гель: органическая фаза IIA [лецитин:витамин Е (1:1 масс/масс.)] (4:1); ШАФ: pluronic гель: органическая фаза ШВ [лецитин:витамин Е (0,93:0,07 масс/масс.)] (0,93:0,07); IB: pluronic гель: органическая фаза Ш [лецитин:изопропилпальмитат (1:1 масс/масс.)] (1:1); ГШ*: pluronic гель: органическая фаза 1ГВ [лецитин:изопропилпальмитат (1:1 масс/масс.)]; ШВ*:. pluronic гель: органическая фаза ШВ [лецитин:изопропилпальмитат Е(1:1 масс/масс.)] (0,93:0,07)]