Изобретение относится к области медицины и биологии, конкретно - к новым биологически активным веществам. Задача изобретения - создание новых иммуностимулирующих и интерфероногенных средств. Поставленная задача решена путем применения в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств солей 3,5-диметил-1-адамантиламмония и водорастворимых карбоксилсодержащих (со)полимеров общей формулы

где m и n - мольные %, m=100-n, а карбоксилсодержащие сополимеры выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота, сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты. Приведены результаты сравнительного определения иммуностимулирующей и интерфероногенной активности и токсичности соединений. Они показали достаточно высокую заявленную активность (более высокую, чем "полирем"), при этом выгодно отличаются характером противовирусного пролонгированного действия, что позволяет использовать указанные полимерные соли в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств для щадящего лечения, а также для профилактики вирусных заболеваний. Описан общий способ синтеза и примеры синтеза каждого из предложенных средств. Полученные соединения однозначно идентифицируются методами ИК-спектроскопии, элементного анализа и потенциометрического титрования.

 

(57) Реферат / Формула:
относится к области медицины и биологии, конкретно - к новым биологически активным веществам. Задача изобретения - создание новых иммуностимулирующих и интерфероногенных средств. Поставленная задача решена путем применения в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств солей 3,5-диметил-1-адамантиламмония и водорастворимых карбоксилсодержащих (со)полимеров общей формулы

где m и n - мольные %, m=100-n, а карбоксилсодержащие сополимеры выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота, сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты. Приведены результаты сравнительного определения иммуностимулирующей и интерфероногенной активности и токсичности соединений. Они показали достаточно высокую заявленную активность (более высокую, чем "полирем"), при этом выгодно отличаются характером противовирусного пролонгированного действия, что позволяет использовать указанные полимерные соли в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств для щадящего лечения, а также для профилактики вирусных заболеваний. Описан общий способ синтеза и примеры синтеза каждого из предложенных средств. Полученные соединения однозначно идентифицируются методами ИК-спектроскопии, элементного анализа и потенциометрического титрования.

 

---

(12) МЕЖДУНАРОДНАЯ ЗАЯВКА, ОПУБЛИКОВАННАЯ В СООТВЕТСТВИИ С ДОГОВОРОМ О ПАТЕНТНОЙ КООПЕРАЦИИ (РСТ)
(19) ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
Международное бюро
(43) Дата международной публикации: 2 февраля 2006 (02.06.2006)
РСТ
IIII11IIIIII III IIIIII III [1
(10) Номер международной публикации:
WO 2006/011823 А1
(51) Международная патентная классификация : А61К 31/785, А61Р 31/00
(21) Номер международной заявки: PCT/RU2004/000242
(22) Дата международной подачи:
24 июня 2004 (24.06.2004)
(25) Язык подачи:
(26) Язык публикации:
русский русский
(71) Заявитель (для всех указанных государств, кроме
(US): АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "ОЛАЙН-ФАРМ" [LV/LV]; 2114, Олайне, ул. Рупницу, д. 5 (LV) [AKCIJU SABIEDRIBA "OLAINFARM", Olaines (LV)].
(72) Изобретатели; и
(75) Изобретатели/Заявители (только для (US): МАРЧУ-КОВ Валерий Александрович [RU/RU]; 193076 Санкт-Петербург, Рыбацкий пр., д. 5, корп. 1, кв. 49 (RU) [MARCHUKOV, Valery Aleksandrovich, StPetersburg (RU)]; СЕЛЪКОВ Сергей Алексеевич [RU/RU]; 197198 Санкт-Петербург, ул. Блохи-на, д. 5/2, кв. 2 (RU) [SELKOV, Sergei Alekseevich, St.Petersburg (RU)]; ЧЕРНОБРОВЫЙ Александр Николаевич [LV/LV]; 2114 Олайне, ул. Парка, д. 1, кв. 13 (LV) [CHERNOBROVY, Aleksandr Nikolae-vich, Olaine (LV)]; СЕЛЮТИН Александр Васильевич [RU/RU]; 195196 Санкт-Петербург, ул. Таллинская, д. 10, кв. 36 (RU) [SELJUTIN, Aleksandr Vasilievich, St.Petersburg (RU)]; СОКОЛОВ Дмитрий Игоревич [RU/RU]; 195269 Санкт-Петербург, Светлановский пр., д. 62, корп. 1, кв. 220 (RU) [SOKOLOV, Dmitry Igorevich, St.Petersburg (RU)].
(74) Агент: ПЕИЗНЕР Бен Абович; 196620 Санкт-Петербург, Павловск, Медвежий пер., д. 5, кв. 14 (RU) [PEIZNER, Ben Abovich, St.Petersburg (RU)].
(81) Указанные государства (если не указано иначе, для каждого вида национальной охраны): АЕ, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, BW, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NA, N1, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, YU, ZA, ZM, ZW.
(84) Указанные государства (если не указано иначе, для каждого вида региональной охраны): ARIPO патент (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW), евразийский патент (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), европейский патент (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IT, LU, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR), патент OAPI (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Опубликована
С отчётом о международном поиске.
В отношении двухбуквенных кодов, кодов языков и других сокращений см. "Пояснения к кодам и сокращениям", публикуемые в начале каждого очередного выпуска Бюллетеня РСТ.
(54) Title: IMMUNISTIMULATIVE AND INTERFERONOGENOUS AGENT
(54) Название изобретения: ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ И ИНТЕРФЕРОНОГЕННОЕ СРЕДСТВО
(57) Abstract: The invention relates to medicine and biology, more specifically to novel biologically active substances. The aim ?J| of said invention is to develop novel immunostimulative and interferonogenous agents. The aim is attained by the use of the
immunostimulative and interferonogenous agents in the form of 3,5-dimethyl-l-adamanthylommonia salts and water-soluble iH carboxyl-containing (co)polymers of general formula (I), wherein m and n are molar percentages, m=100-n and carboxyl-(c) containing copolymers are selected from a polyvinylamine-cuccinic acid, vinyl alcohol and an N-vinylaminecuccinic acid
copolymer and an N-vinylpyrrolidon and an N-vinylaminecuccinic acid copolymer group. The results of the comparative assays О of the immunostimulative and interferonogenous activity and the toxicity of compositions are also disclosed. Said assays prove (r) the sufficiently high activity of the inventive agents (greater than this of polyrem ) which are also favourably distinctive in
terms of the antiviral sustained action thereof, whereby making it possible to use said polymer salts in the form of the О immunostimulative and interferonogenous agents for smooth treatment and prevention of viral diseases. A general synthesis ^ method and examples of synthesis for each inventive agent is also disclosed. The thus produced compounds are unambiguously
identifiable by infrared spectroscopy, elemental analysis and potentiometric titration methods.
[Продолжение на след. странице]
WO 2006/011823 Al I 111 III III III ill III III Hill Hill llll III lllll 111 llll III
(57) Реферат: Изобретение относится к области медицины и биологии, конкретно - к новым биологически активным веществам. Задача изобретения - создание новых иммуностимулирующих и интерфероногенных средств. Поставленная задача решена путем применения в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств солей 3,5 -диметил-1-адамантиламмония и водорастворимых карбоксилсодержащих (со)полимеров общей формулы
[Rl]m [R2Jn I
COO HjN
где тип- мольные %, т=100-п, а карбоксилсодержащие сополимеры выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота, сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты. Приведены результаты сравнительного определения иммуностимулирующей и интерфероногенной активности и токсичности соединений. Они показали достаточно высокую заявленную активность (более высокую, чем "полирем"), при этом выгодно отличаются характером противовирусного пролонгированного действия, что позволяет использовать указанные полимерные соли в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств для щадящего лечения, а также для профилактики вирусных заболеваний. Описан общий способ синтеза и примеры синтеза каждого из предложенных средств. Полученные соединения однозначно идентифицируются методами ИК - спектроскопии, элементного анализа и потенциометрического титрования.
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
5 Иммуностимулирующее и интерфероногенное средство
Область техники.
Изобретение относится к области биологии и медицины, к созданию ю новых биологически активных веществ и предназначено для использования в качестве иммуностмулирующих и интерфероногенных средств в лечебных, профилактических и исследовательских целях.
Уровень техники.
Известны многие иммуностимулирующие и интерфероногенные средства, описанные, как в справочных изданиях (см., например, М.Д.Машковский "Лекарственные средства, М. "Новая волна", 2002 г.; Ю.Ф.Крылов "Энциклопедия лекарств/регистр лекарственных средств
20 России", М., 2000 г), так и в специальной литературе. Наиболее известные из этих средств - Ларифан, Ридостин, Кагоцел, Рогаксин, Гозалидон, Саврац, Мегасин, Амиксин, Циклоферон, Неовир, Амплиген, Полудан, Полигуацил. Из препаратов предложенных в последнее время следует отметить Полирем - противовирусное средство, который обладает
25 интерфероногенными свойствами и способностью усиливать цитотоксическую функцию лимфоцитов (натуральных киллеров).
Многие из них широко и эффективно используются в медицинской практике, например, Ликопид и Циклоферон успешно применяются при терапии широкого спектра вирусных инфекций. При этом, как и все
зо лекарственные средства, иммуностимулирующие и интерфероногенные средства помимо лечебного эффекта оказывают различные по силе, направленности и длительности побочные действия. Кроме того, длительный прием одного и того же средства ведет к привыканию
WO 2006/011823 PCT/RU2004/000242
организма, эффективность его действия со временем заметно снижается.
Поэтому происходит постоянный поиск новых средств, более
эффективных, менее токсичных, имеющих более длительное и
направленное действие и меньшие побочные последствия. Поиск 5 проводится среди различных классов природных и синтетических
соединений и, в том числе, в ряду производных адамантана
Известен препарат "мемантин", представляющий собой гидрохлорид
3,5-диметил-1-адамантиламина и рекомендуемый при болезни Паркинсона
(М.Д.Машковский "Лекарственные средства", в 2-х т.. "Новая волна", Ю 2002, Т.1, С.143).
Препарат "мидантан" ( гидрохлорид 1-адамантиламина) применяют
для лечения паркинсонизма. Кроме того, он проявляет противовирусное
действие в отношении вируса гриппа типа А (там же, Т.1, С.142).
Гидрохлорид а-метил-а-(1-адамантил)метиламина, являющийся 15 субстанцией препарата "ремантадин", эффективен в отношении вируса
гриппа типа А, (там же, Т.2, С.325), но сведения об его активности для
лечения паркинсонизма отсутствуют.
Приведенный краткий обзор биологических свойств
аминопроизводных адамантана показывает, что даже неглубокое 20 структурное изменение этих гомологов и изомеров приводит к весьма
существенным и неоднозначным, заранее неочевидным для специалиста
изменениям в их свойствах.
Перечисленные средства достаточно эффективны по указанным
направлениям применения, но быстро выводятся из организма. Это 25 требует частого их приема или увеличения дозы, что вызывает
нежелательные побочные эффекты, интоксикацию организма (там же,
С.142, 143, 325).
Известно также, что эффективность терапевтического действия физиологически активного вещества в результате его присоединения к зо полимеру может существенно изменяться. Получение полимерной структуры физиологически активного вещества может приводить как к приобретению новых свойств, усилению имеющихся свойств, так и к потере физиологической активности. Так, антибактериальная активность
WO 2006/011823 PCT/RU2004/000242
продукта взаимодействия канамицина с диальдегиддекстраном, в котором антибиотик присоединен ковалентной связью, близка к активности исходного канамицина. В то же время присоединение к диальдегиддекстрану ампициллина сопровождается значительным (в 10 -
5 15 раз) снижением активности антибиотика. Различная степень снижения активности антибиотиков канамицина и ампициллина при присоединении к диальдегиддекстрану зависит от влияния структуры полимерной молекулы на гидролитическую устойчивость связи даже одного типа (Снежко В.А. и др. - Антибиотики, 1972, Т. 17, №1, С.48-52).
ю В ряде случаев полимерные аналоги могут утрачивать биологические свойства, характерные для низкомолекулярных структур. Так, например, хорошо известен своей противосиликозной активностью поли - 2 -винилпиридин - N - оксид и некоторые другие N-окиси, в то же время полимеры, содержащие N - оксидную группировку, экранированную
15 алкильным радикалом, не обладают такой активностью (Разводовский Е.Ф. в сб. Успехи химии и физики полимеров, М.:.Химия,1973, С.305).
Как показывает анализ известных разработок, частично перечисленных ниже, поиск и исследование новых полимерных соединений в ряду аминопроизводных адамантана перспективен для существенного
20 усиления биологических свойств в сравнении с исходным низкомолекулярным аминосоединением, для продления времени его эффективного действия и для расширения спектра биологической активности. Однако, к сожалению, до настоящего времени этот поиск основан не на точном теоретическом анализе, а на интуиции
25 исследователя и многочисленных опытах.
Неожиданной и удачной находкой оказались полимерные соединения адамантиламина (а.с.СССР № 523618, Мкл. C08F 8/32, 1975) и полимерные соли а - метил-а-(1-адамантил)метиламина (а. с. СССР № 640544, Мкл. C08F 220/04, C08F 8/32, 1978), обладающие
зо пролонгированным противовирусным действием в отношении вируса гриппа типа А. В частности, на основе сополимера винилового спирта с N-виниламидоянтарной кислотой и а - метил-а-(1-адамантил)метиламина получена их полимерная соль, представляющая субстанцию препарата
WO 2006/011823 PCT/RU2004/000242
"полирем". У препарата "полирем" обнаружено не только пролонгированное действие в отношении вируса гриппа А, но и (в отличие от полимерных соединений адамантиламина) противовирусная активность в отношении вирусов герпеса I и II типов, клещевого энцефалита. Он
5 индуцирует интерферон и оказывает иммуностимулирующее действие. Препарат "полирем" применяют, в основном, для профилактики и лечения указанных вирусных инфекций (патент РФ № 2071323, Мкл.6 А61 К 31/785; А61К 9/06, 9/20 "Противовирусный препарат "ПОЛИРЕМ", опубликован 10.01.1997; Ершов Ф.И. Антивирусные препараты, М.: Медицина, 1998,
ю С.141-142)
Этот препарат наиболее близок к заявляемым соединениям по назначению и химическому составу, он выбран в качестве прототипа.
Задача изобретения.
15 Задачей изобретения является создание новых полимерных
соединений, обладающих иммуностимулирующим и интерфероногенным действием.
Решение задачи.
20 Поставленная задача решена путем применения в качестве
иммуностимулирующего и интерфероногенного средства солей 3,5-диметил-1-адамантиламмония и водорастворимых карбоксилсодержащих (со)полимеров общей формулы
[Rl]m [R2]n
COO H3N
ЧСН3
где тип- мольные %, т = 100 - п , зо а карбоксилсодержащие сополимеры выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота,
сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты.
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
1) Поливиниламиносукциновая кислота (ПВАСК)
R^-CHa-CH
R2 - CH2 - CH -
n = 1 -100, лучше 5-100
CO-(CH2)2 - COOH
CO - (CH2)2
2) Сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты (BC)m - (BACK)n
R1=-CH2-CH- ; R2=-CH2-CH
n = 1-99, лучше 5-50
vJH
CO - (CH2)2
20 3) Сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты (ВП)т - (BACK)n
r1=_CH2-CH
R2= -СН2-СН
n = 1-99, лучше 5-50
H2C CO
| CO - (CH2)2 -
H2C -- CH2
Возможность получения средних и кислых солей ПВАСК с заявленными свойствами соответствуют значения п = 1-100
В сополимерах (ВС)пл - (ВАСК)п и (ВП)т - (ВАСК)п значения т и п в соответствии с реакционной способностью мономеров и используемым
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
методом получения полимеров могут быть в диапазоне п = 1-99 ит = 100-п.
Эффективный уровень комплекса иммуностимулирующей и интерфероногенной активности достигается при значениях п > 5, а
5 увеличение значений п свыше 50 мало влияет на изменение уровня активности. Поэтому для обеспечения заявляемых свойств полимерных солей необходимо и достаточно использование значения п = 5 - 50.
Предложенные соли впервые заявлены в международной заявке PCT/RU03/00417 от 23 сентября 2003 г, которая будет опубликована в
ю феврале 2005 г. В ней подробно описаны структуры этих солей, их синтез, идентификация, а также - результаты исследования биологических свойств. Авторам удалось выявить в предложенных соединениях только противовирусную активность в отношении вирусов гриппа типа А и типа В. При этом существенным преимуществом этих веществ является их
15 пролонгированное действие, позволяющее применять их для щадящего лечения и профилактики гриппа. В заявке нет никаких предположений о возможном наличии у них иммуностимулирующих и интерфероногенных свойств. Эти свойства никак на связаны с противовирусной активностью и не вытекают явным образом из известного уровня знаний в этой области.
Раскрытие сущности изобретения.
Сущность изобретения поясняеюТприведенные далее сведения, а именно:
- общий способ синтеза заявленных солей;
25 - 3 примера синтеза (для каждой из заявленных солей);
- идентификация полученных соединений;
- определение биологических свойств синтезированных солей (иммуностимулирующая активность, интерфероногенная активность и токсичность).
Общий способ синтеза предложенных солей Способ получения полимерных солей 3,5 -диметил -1-адамантил-аммония заключается во взаимодействии карбоксилсодержащего
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
(со)полимера в водной среде с 3,5 - диметил -1 - адамантиламином при 15-25 С0, при перемешивании в течение 0,5-1 ч и введении эквимольных соотношений реагентов в пересчете на фактическое или заданное содержание карбоксильных групп в (со)полимере с последующим 5 выделением из раствора путем осаждения или с применением одного из видов распылительной или сублимационной сушки.
Общий исходный реагент в синтезе полимерных солей 3,5-диметил-1-адамантиламин может быть получен и использован как промежуточный продукт в синтезе его гидрохлорида, или может быть выделен из
ю товарного гидрохлорида (мемантина) путем обработки 5%-ным водным раствором гидроксида натрия с последующей экстракцией диэтиловым эфиром или хлороформом. Затем эфир (хлороформ) отгоняют, а 3,5-диметил-1-адамантиламин перегоняют в вакууме. Полученный 3,5-диметил-1-адамантиламин не изменяет своей биологической активности и
15 представляет собой бесцветную маслянистую жидкость, нерастворимую в воде, но растворимую в диметилсульфоксиде, а также в концентрированных и разбавленных уксусной и соляной кислотах. Чистоту полученного 3,5-диметил-1-адамантиламина оценивали по данным элементного анализа и инфракрасной спектроскопии. Результаты
20 элементного анализа C12H21N:
Вычислено, %: С=80,37; Н=11,80; N=7.81. Найдено, %: С=80,41; Н=11,95; N=7.70.
В качестве второй составляющей - полимерной основы выбраны 25 композиционно однородные (по химическому составу и молекулярной массе) карбоксилсодержащие водорастворимые нетоксичные (со)полимеры :
1) поливиниламиносукциновая кислота (ПВАСК),
2) сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой зо кислоты (ВС) m - (ВАСК)п,
3) сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты (ВП) m - (BACK) n,
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
Перечисленные полимеры можно получить по известной ранее описанной методике (Николаев А.Ф. и др. Журнал прикладной химии, 1970, Т. 43, № 6, С. 1339 -1343; Николаев А.Ф. и др. Высокомолекулярные соединения, 1972, Т. 14А, № 11, С. 2368-2370).
5 Молекулярная масса используемых полимеров - в пределах 20-80 кДа, число карбоксилсодержащих звеньев в (со)полимерах от 1 до 100 моль%.
Реакцию солеобразования 3,5 - диметил-1-адамантиламина с карбоксилсодержащими полимерами проводят в водной среде при температуре 15-25 С0 при перемешивании в течение 0,5 -1 ч и введении
ю эквимольных соотношений реагентов в пересчете на фактическое (или расчетное) содержание карбоксильных групп в (со)полимере с последующим выделением солей из раствора путем осаждения в ацетон, или в метилэтилкетон, или в смесь этилового спирта и диэтилового эфира, или в смесь диэтилового эфира и бензола, или с применением одного из
15 видов распылительной или сублимационной сушки. Полученные соединения представляют собой полимерные соли поликарбоновых кислот и 3,5-диметил-1-адамантиламина (3,5 - диметил-1-адамантиламмония - (ДМААМ). Состав и строение полученных солей устанавливали по данным элементного анализа, ИК -спектроскопии,
20 потенциометрического титрования в неводной среде.
Способ синтеза и дальнейшие примеры подробно описаны также в международной заявке PCT/RU03\00417 от 23..09.03.
Примеры синтеза заявленных солей.
Пример 1. В реактор (колбу) , снабженный мешалкой, загружают 0,858 г поли-г\1-виниламиносукциновой кислоты (ПВАСК) и 30 см3 дистиллированной воды. После растворения полимера вводят 1,074г 3,5-диметил-1-адамантиламина (ДМААМ). Исходное мольное соотношение зо BACK: ДМААМ составляет 1:1. Реакцию ведут при температуре 15 С0 в течение 1 ч, после чего в реакционную смесь приливают 30 см3 этилового спирта и продукт выделяют осаждением в смесь бензол - диэтиловый эфир (соотношение 1:3). Осадок отфильтровывают, промывают
WO 2006/011823 PCT/RU2004/000242
диэтиловым эфиром и сушат при 30-35 С°/6,65 Па. По результатам элементного анализа и потенциометрического титрования содержание ДМААМ в полученной соли 54,32 масс%, что соответствует содержанию звеньев 3,5 диметил-1-адамантил-аммониевой соли виниламиносукциновой кислоты (BACK -ДМААМ) 95% моль%. Выход продукта (ПВАСК-ДМААМ) составил 89%. Характеристическая вязкость раствора полимерной соли в HCI концентрации с (HCI) 0,1 моль/дм3 при 25 С0 имеет значение
[Ц]
OIMHCI =30см3/г.
ю Пример 2 . Процесс проводят, как описано в Примере1, но в колбу
загружают 1,0 г сополимера винилового спирта с N-виниламиносукциновой кислотой (ВС - BACK) (содержание BACK - 25 моль%, т.е. 52 масс%, 0,520 г.), и 20 см3 дистиллированной воды, затем включают мешалку. После полного растворения сополимера загружают 0,650 г 3,5-диметил-1-
15 адамантиламина (ДМААМ), исходное эквимольное соотношение BACK : ДМААМ составляет 1:1. Процесс ведут при комнатной (20-25 С0) температуре в течение 0,5 ч до полной гомогенизации водной реакционной среды. Продукт реакции выделяют осаждением из раствора в ацетон, отфильтровывают, промывают ацетоном и диэтиловым эфиром и сушат
20 при 30-35 С0 /6,65 Па. По результатам элементного анализа и потенциометрического титрования содержание ДМААМ в полученной соли - 39,42 масс%, что соответствует 25 моль% звеньев BACK - ДМААМ (звеньев 3,5-диметил-1-адамантиламмониевой соли N-виниламиносукциновой кислоты). Выход продукта (ВС -BACK - ДМААМ) - 95%.
25 Характеристическая вязкость раствора полимерной соли в HCI концентрации c(HCI) 0,1 моль/дм3 составляет при 25° С
0.1MHCI
= 14 см7г.
Пример 3 - Процесс ведут аналогично Примеру 1, но в реакционную колбу загружают 0,991 г сополимера N-винилпирролидона с зо N-винил-аминосукциновой кислотой (ВП-ВАСК) с содержанием звеньев BACK
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
27 моль% и 50 см3 дистиллированной воды. После растворения полимера вводят 0,4 г ДМААМ. Реакцию проводят при температуре 20 С0 в течение 40 минут. Продукт реакции выделяют лиофильной (сублимационной) сушкой раствора, промывают диэтиловым эфиром и сушат при 5 30-35 С°/6,65 Па. Полученная полимерная соль содержит 28,75 масс.% ДМААМ, соответствующее 27 моль% звеньев солевых ВАСК-ДМААМ в сополимере ВП -ВАСК-ДМААМ. Выход продукта - 93%. Величина характеристической вязкости раствора в HCI концентрации с(НС1) 0,1 моль/дм3 составляет при 25° С
Все полученные полимерные соли 3,5-диметил-1-адамантиламмония представляют собой белые аморфные порошки, растворимые в воде, в разбавленной уксусной и соляной кислотах, в диметилсульфоксиде. 15 Они практически нерастворимы в 95%-этиловом спирте, в диэтиловом эфире. Значения характеристической вязкости растворов полимерных солей в водном растворе HCI с концентрацией С(НС1) = 0,1 моль/дм3 при 25 С0 находятся в диапазоне 10-30 см3/г.
20 Идентификация полученных соединений.
В ИК-спектрах сухих полимерных соединений, составляющих предмет изобретения, наблюдаются полосы поглощения при 1560 - 1610 см"1, соответствующие валентным колебаниям связи С-0 ионизированной
25 группы -СОО " при образовании солевой связи, обнаруживаются полосы поглощения при 800 см"1, характеризующие наличие N+ Н3 групп аммонийной соли, и отсутствует (или снижена интенсивность относительно исходного полимера) полоса поглощения при 1720 см"1, соответствующая неионизированным -СООН группам в полимере.
зо В ИК-спектре полученных солей имеются также полосы поглощения при 1350 см"1 и 1000 см "1, характерные для адамантановой структуры.
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
Определение биологических свойств предложенных соединений.
Иммуностимулирующая активность. Определение действия предложенных соединений на функциональную активность 5 иммунокомпетентных клеток человека.
Иммунокомпетентные клетки - естественные киллеры (ЕК-клетки) относятся к системе естественной резистентности организма человека. Определение состояния данного звена иммунной системы дает важную
ю информацию о состоянии иммунного статуса организма. Для оценки состояния данного звена иммунной системы в зависимости от присутствия исследуемых соединений использовали функциональный тест-определение способности ЕК-клеток лизировать клетки-мишени культуры опухолевых миелобластов К-562, идентификацию которых проводили с
15 помощью флуоресцентной метки. Активность ЕК-клеток определяли в соответствии с количеством "убитых" ими клеток-мишеней К-562, оцениваемым по интенсивности флуоресцентного свечения в характерной для убитых клеток области и по отношению к результату в контроле (т.е. в отсутствие ЕК-клеток).
20 Уровень воздействия исследуемых препаратов на активность ЕК-
клеток оценивали по величине отношения активности ЕК-клеток, обработанных препаратами, к активности необработанных ЕК-клеток в процессе лизиса клеток-мишеней тест-культуры линии К-562. Для выбора доз и концентраций препаратов при изучении их активности
25 была предварительно определена их минимальная токсическая доза в отношении клеток-мишеней и мононуклеаров периферической крови. Эта доза не превышала 50 мкг/мл (в пересчете на ДМААМ).
В результате исследований обнаружено, что при исходной низкой функциональной активности иммунокомпетентных клеток естественных
зо киллеров (ЕК-клеток) мононуклеаров периферической крови применение предложенных солей 3,5-диметил-1-адамантиламмония приводит к ее (функциональной активности) увеличению (Таблица 1). Это характеризует существенное иммуностимулирующее действие предложенных веществ
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
Причем иммуностимулирующее действие в большей степени проявляется у полимерных соединений (ПВАСК-ДМААМ, ВС-ВАСК-ДМААМ, ВП-ВАСК-ДМААМ), и с увеличением концентрации препаратов усиливается их стимулирующее влияние на активность ЕК-клеток.
5 Таблица 1 Изменение активности ЕК-клеток в присутствии соединений 3,5-диметил-1 -адамантиламина.
№ п/п
Соединение
Относительное значение изменения активности ЕК-клеток в присутствии соединений ДМААМ при концентрациях мкг/мл (в пересчете на ДМААМ):
ГХ-ДМААМ
1,0
1,2
1,6
ПВАСК-ДМААМ
1,1
1,4
1,8
ВС-ВАСК-ДМААМ
1,1
1,4
1,8
ВП-ВАСК-ДМААМ
1,1
1.3
1,7
Интерферониндуцирующая активность предложенных соединений.
ю Способность к индукции интерферона характеризует один из уровней защитного действия организма. Индукция интерферона клетками при воздействии на них какими-либо препаратами характеризует интерферониндуцирующую активность препаратов. Для определения интерфероногенного действия препаратов
15 заявленных соединений исследовали их действие в условиях in vitro в отношении клеток естественных киллеров (ЕК-клеток) периферической крови человека (доноров) при их спонтанной и индуцированной интерфероногенной активности.
Максимальная концентрация соединений использована 50 мкг/мл (в
20 пересчете на ДМААМ), что соответствует минимальной токсической дозе препаратов для мононуклеаров периферической крови и тест-культуры. Интерферониндуцирующая активность препаратов (Таблица 2) выражена в международных единицах (ME) противовирусной активности интерферона в отношении вируса везикулярного стоматита. Её опре-
25 деляли по калибровке стандартной активности тест-интерферона ИФН-а
WO 2006/011823 PCT/RU2004/000242
Таблица 2. Интерферониндуцирующая активность мононуклеаров периферической крови (ЕК-клеток) в зависимости от присутствия соединений ДМААМ
№ п/п
Соединение-индуктор интерферона
Интерферониндуцирующая активность (МЕ/мл) ЕК-клеток в присутствии исследуемых соединений при указанных концентрациях мгк/мл (в пеоесчете на ДМААМ}
ГХ-ДМААМ
5,77
13,00
14,46
ПВАСК-ДМААМ
10,25
24,23
25,52
ВС-ВАСК-ДМААМ
9,46
23,92
25,77
ВП-ВАСК-ДМААМ
8,45
23,80
25,20
ПОЛИРЕМ
8,12
20,50
21,68
Без индуктора (спонтанная индукция)
Менее 5
Результаты определений, представленные в Таблице 2, показывают,
5 что предложенные соединения обладают достаточно эффективным уровнем индукции интерферона мононуклеарами периферической крови . При этом интерферониндуцирующая активность предложенных полимерных соединений ПВАСК-ДМААМ, ВС-ВАСК-ДМААМ, ВП-ВАСК-ДМААМ в 1,5-1,6 раза превосходит активность низкомолекулярного
ю гидрохлорида ГХ-ДМААМ.
Важно отметить, что полимерные соединения ДМААМ имеют большую интерфероногенную активность, чем ПОЛИРЕМ (прототип), испытанный в тех же условиях для сравнения.
Таким образом, предложенные полимерные соединения обладают
15 заметным иммуностимулирующим и интерфероногенным действием. Они перспективны для коррекции активности иммунокомпетентных клеток мононуклеаров периферической крови - естественных киллеров и интерферониндуцирующей активности мононуклеаров крови, то есть для повышения уровня функциональной активности иммунной системы
20 человека.
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
Определение токсических свойств соединений.
Уровень токсичности заявленных соединений оценивали по общепринятому показателю острой токсичности - среднесмертельной 5 (среднелетальной) дозы препарата ЛД50. Изучение проведено при однократном пероральном введении белым мышам обоего пола линии "Balb" массой 18-20 г и белым крысам линии "Вистар" массой 130 - 250 г (самки) и 225-370 г (самцы). Препараты вводили мышам в диапазоне доз 250 - 1100 мг/кг, а крысам в диапазоне 480 - 2315 мг/кг. ю Установлено, что значения ЛД50 заявленных полимерных соединений
ДМААМ для мышей находятся в диапазоне от 445 до 806 мг/кг, а для крыс в диапазоне от 647 до 1180 мг/кг в зависимости от качественного и количественного состава полимерных солей.
Эти результаты показали, что заявленные полимерные соли 15 обладают меньшей токсичностью по сравнению с мемантином (ЛД50 для мышей 363 мг/кг) при введении животным препаратов с эквимольной дозой содержания в них 3,5-диметил-1-адамантиламина.
Предложенные соли в соответствии с установленными для мышей и крыс показателями токсичности относятся к малотоксичным соединениям
Промышленная применимость.
Приведенные в разделах "раскрытие сущности изобретения" и "определение биологических свойств предложенных солей" сведения
25 доказывают, что синтез заявленных солей вполне осуществим описанными в заявке средствами. Полученные соединения однозначно идентифицируются методами ИК-спектроскопии, элементного анализа и потенциометрического титрования. Предложенные соединения имеют высокую иммуностимулирующую и интерфероногенную активность. Эта
зо активность заметно выше, чем у прототипа - полирема.
В процессе сравнительных исследований авторами впервые выявлена некоторая иммуностимулирующая и интерфероногенная активность низкомолекулярного соединения из предложенных соединений
WO 2006/011823 PCT/RU2004/000242
- гидрохлорида 3,5-диметил - 1 - адамантиламина, которая значительно ниже активности предложенных полимеров.
Таким образом предложенные средства соответствуют всем требованиям, предъявляемым к изобретению - они новы, неочевидны для специалиста (имеют изобретательский уровень) и промышленно применимы.
WO 2006/011823
PCT/RU2004/000242
Формула изобретения. 1. Применение полимерных солей 3,5-диметил-1-адамантиламмония и водорастворимых карбоксилсодержащих (со)полимеров общей формулы
где тип- мольные%, т = 100 - п, а карбоксилсодержащие (со)полимеры выбраны из группы: поливиниламиносукциновая кислота,
сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты, сополимер N-винилпирролидона и N-виниламиносукциновой кислоты, в качестве иммуностимулирующих и интерфероногенных средств
2. Применение по п.1, отличающееся тем, что в качестве карбоксилсодержащего полимера выбрана поливиниламиносукциновая кислота (ПВАСК), где п = 1-100 моль%, лучше п = 5 - 100 моль%,
3. Применение по п.1, отличающееся тем, что в качестве карбоксилсодержащего полимера выбран сополимер винилового спирта и N-виниламиносукциновой кислоты (ВС)гп - (ВАСК)п, где п = 1-99 моль%, лучше п = 5 - 50 моль%,
4. Применение по п.1, отличающееся тем, что в качестве карбоксилсодержащего полимера выбран сополимер N-винилпирролидона, и N-виниламиносукциновой кислоты (ВП)т - (ВАСК)п, где п = 1-99 моль%, лучше п = 5 - 50 моль%,
5. Лекарственное средство, отличающееся тем, что в качестве иммуностимулирующего и интерфероногенного вещества использовано соединение по. любому из пп. 1 - 4
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
mtemational application No.
PCT/RU 2004/000242
A. CLASSIFICATION OF SUBJECT MATTER
A61K 31/785, A61P 31/00
According to International Patent Classification (IPC) or to both national classification and IPC
B. FIELDS SEARCHED
Minimum documentation searched (classification system followed by classification symbols)
Л6 I К 3 1/785, 3 1/79, 31/13, 31/14, Аб IP 31/00, C07C 211/62, C08F 20/64, 8/44, 26/10
Documentation searched other than minimum documentation to the extent that such documents are included in the fields searched Electronic data base consulted during the international search (name of data base and, where practicable, search terms used)
C. DOCUMENTS CONSIDERED TO BE RELEVANT
Category*
Citation of document, with indication, where appropriate, of the relevant passages
Relevant to claim No.
RU 2071323 CI (SANKT-PETERBURGSKY GOSUDARSTVENNY TEKHNOLOGICHESKY INSTITUT (TEKHNICHESKY UNIVERSITET) et al.) 10. 01. 1997
RU 2185822 C2 (OBSCHESTVO S OGRANICHENNOI OTVETSTVENNOSTIJU "FARMAGEN") 27. 07. 2002
RU 99113462 A {KORNING INKORPOREITED), 20.05.2001, (the abstract)
US 6613507 В1 (YU-AN CHANG) 02. 09. 2003
Kozcletskaia K. N. et al. "Structure and antiviral activity adamantane-containing polymer preparation", Vopr Virusol. 2003 Sep-Oct; 48(5): 19-26 (реферат) Найдено 2005-03-01. Found 2005-03-01. Found from data base MEDLINE.
DE 40 14672 A (MUELLER WERNER E G PROF DR et al.) 14. 11. 1991
RU 2219916 C2 (MERTS FARMA GMBKH UND КО, KGaA) 27. 12. 2003
1-5
1-5 1-5 1-5
1-5 1-5
"A"
"E" "L"
"O"
Special categories of cited documents:
document defining the general state of the art which is not considered to be of particular relevance
earlier document but published on or after the international filing date
document which may throw doubts on priority claim(s) or which is cited to establish the publication date of another citation or other special reason (as specified)
document referring to an oral disclosure, use, exhibition or other means
document published prior to the international filing date but later than the priority date claimed
"T" later document published after the international filing date or priority date and not in conflict with the application but cited to understand the principle or theory underlying the invention
"X" document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered novel or cannot be considered to involve an inventive step when the document is taken alone
"Y" document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered to involve an inventive step when the document is combined with one or more other such documents, such combination being obvious to a person skilled in the art
" &" document member of the same patent family
Date of the actual completion of the international search 23 February 2005 (23.02.2005)
Date of mailing of the international search report 17 March 2005 (17.03.2005)
Name and mailing address of the ISA/ Facsimile No.
Authorized officer Telephone No.
FormPCT7ISA/210 (second sheet) (July 1992)
ОТЧЕТ О МЕЖДУНАРОДНОМ ПОИСКЕ
Международная заявка № PCT/RU 2004/000242
А. КЛАССИФИКАЦИЯ ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ:
Согласно международной патентной классификации (МПК-7)
А61К 31/785, А61Р 31/00
В. ОБЛАСТИ ПОИСКА:
Проверенный минимум документации (система классификации и индексы) МПК-7: Аб I К 3 1/785, 3 1/79, 3 1/13, 3 1/14, Аб IР 31/00, С07С 211/62, C08F 20/64, 8/44, 26/10
Другая проверенная документация в той мере, в какой она включена в поисковые подборки:
Электронная база данных, использовавшаяся при поиске (название базы и, если, возможно, поисковые термины): MEDLINE
С. ДОКУМЕНТЫ, СЧИТАЮЩИЕСЯ РЕЛЕВАНТНЫМИ:
Категория* Ссылки на документы с указанием, где это возможно, релевантных частей Относится к пункту №
RU 2071323 С1 (САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ (ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ) и др.) 10. 01. 1997
RU 2185822 С2 (ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "ФАРМАГЕН") 27. 07. 2002
RU 991 13462 А (КОРЫИНГ ИНКОРПОРЕЙТЕД) 20. 05. 2001 (реферат)
US 6613507 В1 (YU-AN CHANG) 02. 09. 2003
Kozcletskaia К. N. et al. "Structure and antiviral activity adamantane-containing polymer preparation", Vopr Virusol. 2003 Sep-Oct; 48(5): 19-26 (реферат) Найдено 2005-03-01. Найдено из базы данных MEDLINE.
DE 4014672 A (MUELLER WERNER Е G PROF DR et al.) 14. 11. 1991
1 <и 2219916 С2(МЕРЦФАРМАГМБХУНДКО. КГаА) 27. 12.2003
1-5
1-5 1-5 1-5
1-5
юслидуюшис документы указаны в продолжении графы С.
данные о патентах-аналогах указаны в приложении
* Особые категории ссылочных документов:
Л документ, определяющий общий уровень техники
\1 более ранний документ или патент, но опубликованный на дату
международной подачи пли после нее О документ, относящийся к устному раскрытию, экспонированию и т.д.
I1 документ, опуилпконаиньш до даты международной подачи, но после даты испрашиваемого приоритета и т.д.
Т более поздний документ, опубликованный после даты приоритета и приведенный для понимания иззобретения
X документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий новизну и изобретательский уровень
Y документ, порочащий изобретательский уровень в сочетании с одним или несколькими документами той же категории
& документ, являющийся патентом-аналогом
Дата действительного завершения международного поиска: 2S февраля 2005 (28. 02. 2005)
Дата отправки настоящего отчета о международном поиске 17 марта 2005 (17. 03.2005)
Наммснопапмс ч адрес Международного поискового органа Федеральный институт промышленной собственности Pel). 123995, Москва. Г-59, ГСП-5, Бережковская наб., 30.1 Факс: 243-3337, телетайп: 114818 ПОДАЧА
Уполномоченное лицо:
И. Агапитова Телефон №240-25-91
Форма PCT/ISA/210 (второй лист)(январь 2004)
1 I Further documents are listed in the continuation of Box С. | | See patent family annex.