Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос :  ea201400969a*\id

больше ...
Термины запроса в документе


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к композициям и способам лечения болезни Паркинсона и связанных с ней нарушений. Более конкретно, изобретение относится к новым комбинаторным способам лечения болезни Паркинсона и связанных с ней нарушений, нацеленным на сеть агрегатов альфа-синуклеина. В особенности изобретение относится к соединениям, которые раздельно или в комбинации(комбинациях) могут эффективно защищать нейроны от агрегатов альфа-синуклеина. Изобретение также относится к способам получения лекарственного средства или комбинации лекарственных средств для лечения болезни Паркинсона и к способам лечения болезни Паркинсона или связанных с ней нарушений.


1411710
НОВЫЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к композициям и способам лечения болезни Паркинсона и связанных с ней нарушений. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым комбинаторным терапиям болезни Паркинсона и связанных с ней нарушений.
Предшествующий уровень техники
Паркинсонизм или синдромы паркинсонизма представляют собой группу прогрессирующих, многоцентровых нейродегенеративных заболеваний, основные особенности которых представляют собой тремор в покое, ригидность, брадикинезию и постуральную неустойчивость. Болезнь Паркинсона (PD) представляет собой наиболее распространенную форму паркинсонизма и второе по распространенности нейродегенеративное заболевание после болезни Альцгеймера. В промышленно развитых странах распространенность БП оценивают примерно в 0,3% от общей численности населения, наиболее подвержены риску пожилые люди (по оценкам может быть затронуто 4% населения старше 80). Средний возраст наступления заболевания составляет около 60 лет, хотя может иметь место и раннее начало заболевания (в возрасте 20 лет) (1).
PD часто классифицируют как двигательное расстройство. Тремор в покое представляет собой наиболее распространенный и обычный среди самых ранних развивающихся симптомов. Также на ранних стадиях обычно возникает брадикинезия, затрудняя осуществление таких задач как письмо или одевание. Сообщалось, что гиперкинетические двигательные расстройства могут представлять собой побочные эффекты, вызываемые некоторыми видами лечения болезни Паркинсона. В связи с этим, патент США 5,952,389 раскрывает применение акампросата для облегчения леводопа-индуцированных гиперкинетических двигательных расстройств. Ограничение вторичных эффектов лекарственных средств, однако, отличается и оторвано от лечения заболевания или связанных с ним симптомов. Ригидность возникает и прогрессирует до скованности и сопротивления движению всего тела, снижения способности двигаться. На поздних стадиях, заболевание прогрессирует до постуральной неустойчивости, приводящей к нарушению равновесия и частым падениям. Могут возникать и другие двигательные симптомы, такие как нарушение походки или нарушения глотания. При отсутствии
лечения, двигательные симптомы могут привести к тому, что в среднем через десять лет пациент будет прикован к постели (2, 3).
На более поздних стадиях заболевания, PD вызывает множество недвигательных симптомов, которые характеризуются сильными индивидуальными различиями. Затем инвалидность значительно усугубляется развитием вегетативных и психоневрологических расстройств. Может развиваться нарушение речи, познания, настроения, поведения и/или мышления, что приведет в конечном итоге к деменции. Другие распространенные симптомы включают сенсорные проблемы, эмоциональные проблемы и проблемы со сном. Такие нарушения уменьшают продолжительность жизни пораженного заболеванием индивидуума, и показатели смертности у людей с PD примерно в два раза выше (2-4).
PD представляет собой идиопатическое заболевание и его патофизиология также все еще плохо изучена (4). Однако, по меньшей мере, 5% случаев PD могут быть отнесены к генетическим изменениям. Мутации в таких генах, как SNCA (альфа-синуклеин), PRKN (паркин), LRRK2 (обогащенная лейциновыми повторами киназа 2), PINK1 (PTEN-индуцированная предполагаемая киназа 1), DJ-1 и АТР13А2 и одиннадцать генных локусов (PARK1-PARK11), связаны с наследственной PD (5). Считается, что DJ1 представляет собой повсеместно распространённый, отвечающий на окислительно-восстановительные изменения цитопротекторный белок, подтверждая тем самым ключевую роль окислительного стресса в PD (28), что дополнительно свидетельствует о защитной роли фактора, индуцируемого гипоксией, в защите дофаминергических клеток чёрного вещества головного мозга от окислительного стресса, нарушения функций митохондрий и гомеостаза железа (29). Предполагается, что помимо генетических факторов, в возникновении PD принимают участие многие факторы экологического риска, но ни для одного из них не были получены неоспоримые доказательства. Воздействие металлов, пестицидов или гербицидов, таких как оранжевое вещество (Agent Orange), представляет собой наиболее часто воспроизводящийся фактор риска. С другой стороны, похоже, что курение и потребление кофеина защищает людей от PD (1).
Патофизиология PD характеризуется четырьмя особенностями (4):
(i) Синуклеинопатия характеризуется аномальным накоплением в головном мозге во включениях, называемых тельцами Леви, белка альфа-синуклеина. Распределение телец Леви по всему мозгу варьируется от одного индивидуума к другому, но часто напрямую связано с проявлением и степенью клинических симптомов.
(ii) Глутамат представляет собой самый распространенный возбуждающий нейротрансмиттер в нервной системе млекопитающих. При патологических состояниях, его аномальное накопление в синаптической щели приводит к сверхактивация
(i)
глутаматных рецепторов. Аномальное накопление глутамата в синаптической щели приводит к сверхактивация глутаматных рецепторов, что приводит к патологическим процессам и, в конце концов, в гибели нервных клеток. Этот процесс, называемый эксайтотоксичностью, обычно наблюдают в нейрональных тканях при острых и хронических неврологических нарушениях. Становится очевидным, что эксайтотоксичность вовлечена в патогенез болезни Паркинсона.
(ш) Недостаток дофаминергической активности связан с гибелью образующих дофамин клеток в черном веществе, области среднего мозга. В результате происходит потеря контроля мышечного движения и тонуса, что приводит к двигательным симптомам PD.
(iv) На более поздних стадиях заболевания также происходит дегенерация NANC (неадренергических, нехолинергических), серотонинергических и холинергических нервных клеток, что приводит к не двигательным симптомам PD.
Поскольку не существует никаких доступных биологических тестов, то диагностика PD основана главным образом на наблюдении клинических симптомов и исключении других нарушений с аналогичными клиническими особенностями (3). Для окончательного диагноза требуется посмертное подтверждение. Для обнаружения изменений в дофаминергических нейронах и для исключения других заболеваний может быть полезно проведение неврологического исследования с помощью нейровизуализации. Положительный терапевтический ответ на леводопу представляет собой другой диагностический критерий. После проведения диагностики, прогрессирование и тяжесть заболевания оценивают с помощью шкалы стадий, такой как Единая шкала оценки болезни Паркинсона.
Назначение предшественника дофамина леводопы (L-DOPA) представляет собой наиболее широко применяемое лечение, особенно на ранних стадиях (6). Лекарственное средство предоставляет дофаминергическим нейронам недостающий нейромедиатор, таким образом, снижая двигательные симптомы. Однако, большая часть лекарственного средства метаболизирует, прежде чем достигает гематоэнцефалического барьера, вызывая множество побочных эффектов, в особенности, эффектов в области желудочно-кишечного тракта (таких как анорексия, тошнота или рвота), дискинезию и психиатрические симптомы (7). Поэтому для предотвращения явления дискинезии, L-DOPA обычно назначают в комбинации с карбидопой или бенсеразидом (ингибиторами периферической допа-декарбоксилазы) и также часто вместе с ингибиторами катехол-О-метилтрансферазы, такими как энтакапон. Данные лекарственные средства направлены на предотвращение метаболизма L-DOPA до того момента, как она достигнет мозга,
повышение активности лекарственного средства (6). Хотя., агонисты дофамина, такие как перголид, каберголин, апоморфин или лизурид, и ингибиторы моноаминоксидазы-В (вовлеченной в катаболический распад допамина), такие как селегилин или разагилин, менее эффективны в отношении двигательных симптомов, их широко применяют на ранних стадиях заболевания. Не смотря на то, что они менее эффективны, они могут быть полезны для отсрочки применения леводопы и тем самым наступления дискинезии (7).
Другие лекарственные средства, такие как антихолинергические препараты и агонисты никотинового ацетилхолинового рецептора могут быть полезными, но их эффективность для PD остается не подтвержденой (7). Современные исследования также сосредоточены на нейропротективных способах лечения, ко ни одно из них не представило доказательств противодействия дегенерации. Они нацелены на апоптоз (омигапил, СЕР-1347), глутаматные рецепторы, аденозиновый А2А рецептор, кальциевые каналы (исрадипин), факторы роста (GDNF), альфа-синуклеин и воспаление (8).
Текущие фармацевтические исследования демонстрируют растущий интерес к генной терапии и трансплантация нервной ткани (8).
В WO 2009/133128, WO 2009/133141, WO 2009/133142, WO 2011/054759, WO 2009/068668, WO 2009/153291 раскрывают потенциальные способы лечения ряда нейродегенеративных заболеваний, среди которых и PD.
PD до сих пор остается неизлечимой болезнью и эффективного модифицирующего заболевание способа лечения еще не обнаружено. Следовательно, современные способы лечения направлены на облегчение симптомов и способствуют замедлению прогрессии заболевания.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к новым терапевтическим методам и композициям для лечения паркинсонизма. Изобретение, в частности, вытекает из идентификации комбинаций лекарственных средств, которые обеспечивают улучшенный терапевтический эффект и клинические преимущества субъектам, имеющим состояние паркинсонизма, в особенности, субъектам с болезнью Паркинсона.
В частности, цель изобретения относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона, включающим одно, предпочтительно, по меньшей мере, два лекарственных средства, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
Дополнительная цель изобретения представляет собой способ лечения паркинсонизма, в особенности болезни Паркинсона, у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту, по меньшей мере, двух лекарственных препаратов, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
Предпочтительные примеры комбинаций лекарственных средств для применения в изобретение включают, например, баклофен и акампросат, баклофен и цинакалцет, мексилетин и цинакалцет, торасемид и баклофен или торасемид и сульфизоксазол. В предпочтительном воплощении, композиции и способы дополнительно включают леводопу.
Композиции в изобретении могут дополнительно включать один или несколько
фармацевтически приемлемый(приемлемых) носитель(носителей) или
эксципиент(эксципиентов), и их можно вводить субъекту многократно. Предпочтительные композиции вводят перорально. Кроме того, лекарственные средства могут быть составлены или введены совместно, раздельно или последовательно.
Изобретение подходит для лечения паркинсонизма у любого субъекта, представляющего собой млекопитающее, в особенности, у субъекта, представляющего собой человека, на любой стадии заболевания. Изобретение может быть применено, например, для задержки развития заболевания, для снижения, задержки или предотвращения тремора, гипокинезии (например, брадикинезии, акинезии, ригидности) постуральной неустойчивости и/или боли, и/или для увеличения показателя выживаемости.
Краткое описание чертежей
Фигура 1: Влияние комбинированной терапии, основанной на цинакалцете и мексилетине, на глутаматную токсичность в кортикальных нейронах. Глутаматная интоксикация в значительной степени предотвращается комбинацией цинакалцета (64 пМ) и мексилетина (25,6 пМ), в то время как, в тех же концентрациях, цинакалцет и мексилетин раздельно не оказывают существенного влияния на интоксикацию. *: р <0,001, значительно отличаются от глутаматной интоксикации; (ANOVA + апостериорные тест Даннетта).
Фигура 2: Влияние основанной на сульфизоксазоле и торасемиде комбинированной терапии на глутаматную токсичность в кортикальных нейронах. Глутаматная интоксикация в значительной степени предотвращается комбинацией
сульфизоксазола (6,8 нМ) и торасемида (400 нМ) в то время как, в тех же концентрациях, сульфизоксазол и торасемид раздельно не оказывают существенного влияния на интоксикацию.*: р <0,001, значительно отличаются от глутаматной интоксикации; (ANOVA + апостериорные тест Даннетта).
Фигура 3: Влияние комбинированной терапии, основанной на баклофене и акампросате, на глутаматную токсичность в кортикальных нейронах, глутаматная интоксикация в значительной степени предотвращается комбинацией баклофена (400 нМ) и акампросата (1,6 нМ), в то время как, в тех же концентрациях, баклофен и акампросат раздельно не оказывают существенного влияния на интоксикацию. *: р <0,001, значительно отличаются от глутаматной интоксикации; (ANOVA+ апостериорный тест Даннетта).
Фигура 4: Защитный эффект комбинации баклофена и акампросата в отношении ишемического повреждения. В то же время никакой существенной защиты не было получено, если баклофен (80 нМ) или акампросат (0,32 нМ) применяли раздельно, существенное защиту (*: р <0,0001) наблюдали для комбинации двух лекарственных средств, в тех же концентрациях.
Фигура 5: Защитный эффект комбинации цинакалцета и мексилетина в отношении ишемического повреждения. Никакой существенной защиты не наблюдали, если цинакалцет (64 пМ) или мексилетин (25,6 пМ) применяли раздельно, в то время как существенную защиту (*: р <0,0001) наблюдали для комбинации двух лекарственных средств в тех же концентрациях.
Фигура 6: Защитный эффект комбинации торасемида и сульфизоксазола в отношении ишемического повреждения. Комбинация сульфизоксазола (1,36 нМ) и торасемида (80 нМ) индуцирует существенное защиту (*: р <0,0001), на 110% выше, по сравнению с защитой, полученной при применении одного торасемида, в то время как никакой защиты не было получено, если применяли один сульфизоксазол.
Фигура 7: Влияние комбинированной терапии, основанной на баклофене и акампросате, на вызываемое 60HDA повреждение в дофаминергических нейронах. Увеличение степени защиты коррелирует с ростом концентрации смесей. Значительный защитный эффект наблюдали по увеличению выживаемости ТН-нервных клеток на 34% при дозе 1 (16 нМ и 64 пМ, соответственно), на 46% при дозе 2 (80 нМ и 144 пМ) и на 51% при дозе 3 (400 нМ и 1600 пМ) (***: р <0,0001; *: р <0,001: значительно отличаются от клеток, подвергнутых интоксикации под действием 60HDA (ANOVA + тест Даннетта)).
Фигура 8: Влияние комбинированной терапии, основанной на баклофене и торасемиде, на вызываемое 60HDA повреждение в дофаминергических нейронах.
Значительный защитньгй эффект наблюдали по увеличению выживаемости ТН-нервных клеток, на 50% при низкой дозе 1 (80 нМ и 16 нМ, соответственно), на 62% со средней дозой 2 (240 нМ и 48 нМ) и на 58% с высокой дозой 3 (720 нМ и 144 нМ) (***: р <0,0001: значительно отличаются от клеток, подвергнутых интоксикации под действием 60HDA (ANOVA + тест Даннетта)).
Фигура 9: Влияние комбинированной терапии, основанной на цинакалцете и мексилетине, на вызываемое 60HDA повреждение в дофаминергических нейронах. Все протестированные концентрации обеспечивают существенную защиту от 60HDA. Действительно, значительный защитный эффект наблюдали по увеличению выживаемости ТН-нервных клеток на 36% при дозе 1 (64 пМ и 5 пМ, соответственно), на 38% при дозе 2 (64 пМ и 26 пМ) и на 48% при дозе 3 (1600 пМ и 64 пМ) (***: р <0,0001; *: р <0,001: значительно отличаются от подвергнутых интоксикации под действием 60HDA клеток (ANOVA + тест Даннетта)).
Фигура 10: Тест на время инициации, влияние комбинированной терапии, основанной на баклофене и акампросате, на вызванное 60HDA стереотаксическое повреждение в левой компактной части черного вещества (substantia nigra pars compacta). Левая лапа: нет существенных изменений. Правая лапа: инъекция 60HDA сильно пролонгировала время инициации в результате смерти нервных клеток в левой substantia nigra. Лечение с помощью баклофена-акампросата очень хорошо защищает от 60HDA-индуцируемой акинезии, и этот эффект получают при самой слабой дозе 1 (баклофен-акампросат, доза 1: 0,6 мг/кг/два раза в сутки и 0,04 мг/кг/два раза в сутки, соответственно; доза 2: 1,5 мг/кг/два раза в сутки и 0,1 мг/кг/два раза в сутки; доза 3: 3,75 мг/кг/два раза в сутки и 0,25 мг/кг/два раза в сутки; ***: р <0,0001; **: р <0,001; *: р <0,05: значительно отличаются от клеток, подвергнутых интоксикации под действием 60HDA (ANOVA + тест Даннетта)).
Фигура 11: Тест на время реакции, влияние комбинированной терапии, основанной на баклофене и акампросате, на вызванное 60HDA стереотаксическое повреждение в левой substantia nigra pars compacta. Левая лапа: нет существенных изменений. Правая лапа: инъекция 60HDA сильно пролонгировала время реакции в результате смерти нервных клеток в левой substantia nigra. Лечение с помощью баклофена-акампросата очень хорошо защищает от бОНОА-индуцируемой акинезии, и этот эффект получают от самой слабой дозы 1. Дозы 2 и 3 почти полностью снимают бОНОА-индуцируемую акинезию (баклофен-акампросат, доза 1: 0,6 мг/кг/два раза в сутки и 0,04 мг/кг/два раза в сутки; доза 2: 1,5 мг/кг/два раза в сутки и ОД мг/кг/два раза в сутки; дозаЗ: 3,75 мг/кг/два раза в сутки и 0,25 мг/кг/два раза в сутки; ***: р <0,0001; **: р <0,001;
*: р <0,05: значительно отличаются от клеток, подвергнутых интоксикации под действием 60HDA (ANOVA + теста Даннетта)).
Подробное описание осуществления изобретения
Цель настоящего изобретения заключается в обеспечении новых терапевтических подходов для лечения паркинсонизм, более конкретно болезнь Паркинсона. В частности изобретение раскрывает новое применение лекарственных средств и комбинации лекарственных средств и способы, которые позволяют эффективно корректировать такие заболевания и могут быть применены у любого субъекта, представляющего собой млекопитающее.
Паркинсонизм определяют как группу прогрессирующих нейродегенеративных нарушений, которые характеризуется тремором в покое и/или брадикинезией, связанной с ригидностью, постуральной неустойчивостью, потерей постуралъных рефлексов, согнутой позой и/или феноменом примерзания (когда ноги временно "приклеены" к земле). Примеры состояний паркинсонизма включают болезнь Паркинсона, прогрессирующий супрануклеарный паралич, множественную системную атрофию, кортикобазальную ганглионарную дегенерацию, болезнь диффузных телец Леви, Паркинсон-деменцию, сцепленные с Х-хромосомой дистонию-паркинсонизм и вторичный паркинсонизм (как следствие экологической этиологии, например, токсинов, лекарственных средств, постэнцефалитический, опухоли мозга, травмы головы, гидроцефалии при нормальном давлении).
Болезнь Паркинсона является наиболее распространенной формой паркинсонизма. Болезнь Паркинсона ("PD") представляет собой нейродегенеративное нарушение, которое приводит к двигательным и недвигательным проявлениям: и характеризуется обширной дегенерацией дофаминергических нервных клеток в нигростриарной системе. Двигательные проявления PD обусловлены дегенерацией дофаминергических нервных клеток в substantia nigra. Они включают тремор, гипокинезию (например, брадикинезию, акинезию, ригидность), постуральную неустойчивость, нарушенную походку и нарушения глотания. Недвигательные симптомы включают вегетативные и психоневрологические нарушения, такие как аносмия или нарушения сна. В контексте изобретения, термин PD включает любое из вышеперечисленных проявлений заболевания.
Как применен в настоящем документе, термин "лечение" включает лечение, предупреждение, профилактику, замедление или уменьшение симптомов спровоцированных паркинсонизмом или возникающих по причине паркинсонизма, предпочтительно болезни Паркинсона. Термин лечение также обозначает замедление или
задержку в наступлении тремора, уменьшение боли, снижение или уменьшение брадикинезии, акинезии, ригидности, постуральной неустойчивости, нарушенной походки, аносмии и/или нарушения сна, и/или увеличение выживаемости. Термин лечение включает, в особенности, контроль прогрессирования заболевания и связанных с ним двигательных и недвигательных симптомов. Термин лечение, в особенности, включает: i) защиту от токсичности, вызываемой альфа-синуклеином, или уменьшение или замедление указанной токсичности, и/или ii) защиту дофаминергических нервных клеток от токсичности, возникающей в результате нарушенной аккумуляции глутамата, окислительного стресса, митохондриальной дисфункции или нейровоспаления, или уменьшение или замедление указанной токсичности у подвергаемого лечению субъекта.
В контексте данного изобретения наименование конкретного лекарственного средства или соединения предназначено для включения не только конкретно названной молекулы, но также любой ее фармацевтически приемлемой соли, гидрата, производного, изомера, рацемата, конъюгата, пролекарства или производного любой химической чистоты.
Термин "комбинация или комбинаторное лечение/терапия" обозначает лечение, в котором субъекту вводят, по меньшей мере, два или более лекарственных средства совместно, для того чтобы вызвать биологический эффект. В комбинированной терапии в соответствии с данным изобретением, по меньшей мере, два лекарственных средства могут быть введены совместно или раздельно, одновременно или последовательно. Хотя, по меньшей мере, два лекарственных средства могут быть введены с помощью разных путей и протоколов. В результате, хотя они и могут быть составлены совместно, лекарственные средства комбинации также могут быть составлены раздельно.
Некоторые биологические процессы, такие как окислительный стресс, митохондриальные дисфункции и нейровоспаление сопровождаются аккумуляцией агрегированного альфа-синуклеина, что приводит к дегенерации дофаминергических нервных клеток. С другой стороны, аномальное накопление пгутамата в синаптической щели приводит к сверхактивации глутаматаных рецепторов, чго в результате ведет к патологическим процессам и, в конце концов, к смерти нервных клеток. Данный процесс, известный как эксайтотоксичность, в настоящее время признается в качестве важного этиологического фактора, вовлеченного в развитии болезни Паркинсона.
Авторам изобретения удалось установить сеть, лежащую в основе агрегации альфа-синуклеина, которая представляет собой основную функциональную сеть, влияющую на болезнь Паркинсона. Авторы изобретения идентифицировали функциональные модули, состоящие из нескольких белков-мишеней, в рамках сети агрегации альфа-синуклеина.
Такие белки функционально относятся к генезису и контролю болезни Паркинсона и паркинсонизма, и представляют собой ценные мишени для терапий и, в особенности, для комбинационных терапий.
Таким образом, изобретение относится к применению конкретных лекарственных средств, которые, раздельно или преимущественно в комбинации(комбинациях), модулируют вышеуказанные пути лечения паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона.
В предпочтительном воплощении, настоящее изобретение, более конкретно, относится к композициям и способам применения комбинации лекарственных средств, которые ингибируют активность, по меньшей мере, двух различных белков, вовлеченных в сеть агрегации альфа-синуклеина. Терапевтические подходы изобретения эффективны для защиты нервных клеток, в особенности, для защиты дофаминергических нервных клеток в среднем мозге и, более конкретно, в substantia nigra.
Более конкретно, изобретение относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона (PD), включающим, по меньшей мере, два лекарственных средства, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиций с замедленным высвобождением.
Действительно, авторы изобретения неожиданно обнаружили, что эти соединения демонстрируют защитное действие в отношении глутаматной токсичности, представляющей собой известную причину смерти нервных клеток при болезни Паркинсона и паркинсонизме. Соединения и комбинационные терапии изобретения также демонстрируют защитное действие при ишемическом стрессе, который имеет общие физиологические характеристики с болезнью Паркинсона (в частности, митохондриальные дисфункции и окислительный стресс). Более конкретно, соединения настоящего изобретения, в особенности, эффективны in vivo и in vitro против окислительного стресса, который представляет собой один из компонентов альфа-синуклеиновой токсичности для дофаминергических нервных клеток.
Изобретение также относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона (PD), включающему введение нуждающемуся в этом субъекту, по меньшей мере, двух соединений, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиций с замедленным высвобождением.
Термин "пролекарство", как применен в настоящем документе, относится к любым
функциональным производным (или предшественникам) соединений настоящего изобретения, которые, при введении в биологическую систему, генерирует указанные соединения в результате, например, спонтанной химической реакции(реакций), катализируемой ферментами химической реакции(реакций), и/или метаболической химической реакции(реакций). Пролекарства обычно неактивны или менее активны, по сравнению с получаемыми лекарственными средствам, и могут быть применены, например, для улучшения физико-химических свойств лекарственного средства, направления лекарственного средства в конкретную ткань, для улучшения фармакокинетических и фармакодинамических свойств лекарственного средства и/или для снижения нежелательных побочных эффектов. Некоторые из распространенных функциональных групп, которые доступны при создании пролекарства включают, но не ограничиваются, карбоксильные, гидроксильные группы, аминогруппы, фосфатные/фосфонатные и карбонильные группы. Пролекарства, полученные, как правило, путем модификации данных групп, включают, но не ограничиваются, сложные эфиры, карбонаты, карбаматы, амиды и фосфаты. Конкретное техническое руководство по выбору подходящих пролекарств общеизвестно (29-33). Кроме того, получение пролекарств могут быть осуществлено с помощью традиционных способов, известных специалистам в этой области техники. Способы, которые MOiyr быть применены для синтеза других пролекарств, описаны в многочисленных обзорах на эту тему (9; 14-20). Например, арбаклофен плакарбил приведен в руководстве "ChemID plus Advance database)) (вебсайт: chem.sis.nlm.nih.gov/chemidplus/), и арбаклофен плакарбил представляет собой хорошо известное пролекарство баклофена (21-22). Конкретные примеры пролекарства баклофена приведены в работе Hanafi et al, 2011 (26), в особенности сложные эфиры баклофена и сложные эфиры баклофена и карбаматов, которые особенно интересны для адресного направления в CNS. Таким образом, такие пролекарства в особенности подходят для композиций данного изобретения. Арбаклофен плакарбил, как упоминалось выше, также представляет собой хорошо известное пролекарство и, следовательно, может быть применено вместо баклофена в композициях изобретения. Другие пролекарства баклофена можно найти в следующих патентных заявках: WO2010102071, US2009197958, WO2009096985, WO2009061934, WO2008086492, US2009216037, WO2005066122, US2011021571, WO2003077902 и WO2010120370.
Подходящие пролекарства для акампросата, такие как неопентилсульфонильные сложные эфиры пантоевой кислоты, неопентилсульфонильные сложные эфиры пролекарств или маскированные карбоновой кислотой неопентилсульфонильные сложные эфиры пролекарств акампросата, в частности, приведены в WO2009033069,
WO2009033061, WO2009033054 WO2009052191, WO2009033079, US 2009/0099253, US 2009/0069419, US 2009/0082464, US 2009/0082440 и US 2009/0076147.
Пролекарства, как описаны выше, могут быть применены вместо раскрытых в этом документе соединений изобретения.
Термин "производное" соединений включает любую молекулу, которая
функционально и структурно относится к указанному соединению, такую как кислота,
амид, сложный эфир, простой эфир, ацетилированный вариант, гидроксилированный
вариант или алкилированый(С1-С6) вариант таких соединений. Термин производное
также включает структурно родственное соединения, утратившие один или более
заместителей, как указаны выше. Например, гомотаурин представляет собой
деацетилированное производное акампросата. Предпочтительные производные
соединений представляют собой молекулы, имеющие значительную степень сходства с
указанными соединениями, как определено с помощью известных способов. Подобные
соединения вместе с их индексом сходства с родительской молекулой можно найти в
многочисленных базах данных, таких как PubChem
(http://pubchem.ncbi.mm.nih.gov/search/) или DrugBank (http://vvww.dragbank.ca/). В более предпочтительном воплощении, производные должны иметь индекс сходства Танимото выше, чем 0,4, предпочтительно, выше, чем 0,5, более предпочтительно, выше, чем 0,6, еще более предпочтительно, выше, чем 0,7 с исходным лекарственным средством. Индекс сходства Танимото широко используют для определения степени структурного сходства между двумя молекулами. Индекс сходства Танимото может быть вычислен с помощью программного обеспечения, такого как Small Molecule Subgraph Detector (23-24), доступного в Интернете (httpV/vww.ebi.ac.uk/momto Обе предпочтительные производные должны структурно и функционально близки исходному соединению, т.е. они также должны сохранять, по меньшей мере, часть активности исходного лекарственного средства, более предпочтительно, они должны обладать защитной активностью в отношении дофаминергических нервных клеток от 60HDA-индуцированного стресса и/или глутаматной токсичности и/или ишемического стресса (как проиллюстрировано в экспериментальной части).
Термин "производные" также включает метаболиты лекарственного средства, например, молекулу, возникающую в результате (биохимической) модификации(модификаций) или преобразования указанного лекарственного средства после введения в организм, обычно под действием специализированных энзиматических систем, и которая демонстрирует или сохраняет биологическую активность лекарственного средства. Было раскрыто, что метаболиты ответственны за большую часть
терапевтического действия исходного лекарственного средства. В специфическом воплощении, термин "метаболит", как применен в настоящем документе, обозначает модифицированное или преобразованное лекарственное средство, которое сохраняет, по меньшей мере, часть активности исходного лекарственного средства, предпочтительно, которое обладает защитной активностью в отношении дофаминергических нервных клеток от бОНБА-индуцированного стресса и/или глутаматной токсичности и/или ишемического стресса. Примеры метаболитов включают гидроксилированные формы торасемида, возникающие в результате метаболизма лекарственного средства в печени (27).
Термин "соль" относится к фармацевтически приемлемым и относительно нетоксичным, неорганическим или органическим кислотно-аддитивным солям соединений настоящего изобретения. Получение соли с фармацевтической точки зрения заключается в составлении пары между кислотной, основной или цвиттерионной молекулой лекарственного средства и противоионом для создания варианта соли лекарственного средства. В реакции нейтрализации могут быть применены разнообразные типы химических соединений. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли изобретения включают соли, полученные путем взаимодействия основных соединений, функционирующих как основание, с неорганической или органической кислотой с образованием солей, например, солей уксусной кислоты, азотной кислоты, винной кислоты, соляной кислоты, серной кислоты, ортофосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты или лимонной кислоты. Фармацевтически приемлемые соли изобретения также включают соли, в которых основные соединения функционируют в качестве кислоты и взаимодействует с соответствующим основанием с образованием, например, натриевых, калиевых, кальциевых, магниевых, аммонийных солей или холиновых солей. Хотя большинство солей данного активного ингредиента представляют собой биоэквиваленты, некоторые из них могут, среди прочего, обладать повышенной растворимостью или биодоступностью. В настоящее время выбор соли представляет собой обычную стандартную операцию в процессе разработки лекарственного средства как описано в руководстве Н. Stahl и C.G Wermuth (25).
В предпочтительном воплощении, обозначение соединения предназначено для обозначения соединения per se, а также любой его фармацевтически приемлемой соли, гидрата, изомера, рацемата.
Приведенная ниже таблица 1 обеспечивает нелимитируюпще примеры CAS номера соединений для применения в изобретении, а также соли(солей), производных,
В предпочтительном воплощении, применяют композицию с замедленным высвобождением соединений.
Авторы изобретения обнаружили, что акампросат, баклофен, цинакалцет, мексилетин, сульфизоксазол и торасемид особенно эффективны при коррекции
молекулярных путей агрегации альфа-синуклеина.
Как раскрыто в примерах, молекулы изобретения обладают сильным, неожиданным влиянием на биологические процессы, вовлеченные в паркинсонизм, в особенности на болезнь Паркинсона, и представляют собой новые терапевтические подходы для данной патологии. В особенности, композиции изобретения обеспечивают неожиданный эффект в отношении глутаматной токсичности. Кроме того, лекарственные средства и комбинация лекарственных средств изобретения увеличивают выживание дофаминергических нервных клеток в условиях бОЬГОА-индуцированного окислительного стресса, а также ишемического стресса, и индуцируют защитный эффект в отношении двигательных и недвигательных проявлений PD. Таким образом, терапевтические подходы изобретения эффективны для защиты нервных клеток, в особенности, для защиты дофаминергических нервных клеток в среднем мозге и, в особенности, в substantia nigra как было продемонстрировано in vivo.
В предпочтительном воплощении, настоящее изобретение относится к композициям и способам лечения паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона, с применением соединений, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида.
Комбинация лекарственных средств, которая модулирует активность, по меньшей мере, двух различных белков, которые вовлечены в сеть агрегации альфа-синуклеина, составляют особенно предпочтительный вариант изобретения. Действительно, авторы изобретения обнаружили, что вышеупомянутые лекарственные средства, при введении в комбинации, действуют синергически для эффективной защиты дофаминергических нервных клеток. В особенности, композиции изобретения обладают неожиданным эффектом в отношении глутаматной токсичности, индуцируемой ишемией гибели клеток и окислительного стресса. Такой сильный и неожиданный эффект на биологические процессы, вовлеченные в паркинсонизм, в особенности, в болезнь Паркинсона, делает эти новые комбинаторные терапевтические подходы к данной патологии особенно интересными.
Изобретение, таким образом, также относится к композициям и способам лечения паркинсонизм, в особенности, болезни Паркинсона с применением, по меньшей мере, двух лекарственных средств, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида.
Композиции и способы изобретения приводят к положительной динамике течения PD посредством их воздействия на двигательные, а также на недвигательные симптомы заболевания. Терапевтические подходы изобретения обеспечивают эффективную защиту
нервных клеток, в особенности, дофаминергических нервных клеток, от окислительного стресса, митохондриальной дисфункции, эксайтотоксических нарушений, нейровоспаления или апоптоза. В особенности, они могут обеспечить защиту нервных клеток substantia nigra от токсичности агрегированного альфа-синуклеина и снизить скорость или степень потери дофаминергических клеток и, таким образом, влиять на ход прогрессии заболевания.
В связи с этим, цель данного изобретения относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим соединения, которые выбирают из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их солей, или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением. В предпочтительном воплощении, композиция включает тораюемид или мексилетин, или его соль или пролекарство или производное любой чистоты или композицию с замедленным высвобождением.
Изобретение относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим, по меньшей мере, два соединения, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
Изобретение относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим, по меньшей мере, одно соединение, которое выбирают из акампросата, цинакалцета и торасемида, или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением, и, по меньшей мере, одно соединение, которое выбирают из баклофена, мексилетина или сульфизоксазола, или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В особенности, изобретение относится к композициям, включающим, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств, для одновременного, последовательного или раздельного введения:
баклофен и акампросат,
баклофен и цинакалцет,
цинакалцет и акампросат,
мексилетин и цинакалцет,
торасемид и баклофен, или
торасемид и сульфизоксазол,
или их соль(соли) или пролекарство(пролекарства) или производное(производные) любой чистоты или композицию с замедленным высвобождением для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона.
Изобретение также относится к способам лечения у субъекта паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона, с применением любого из вышеупомянутых лекарственных средств или композиций.
В особенно предпочтительных композициях или способах изобретения применяют баклофен и акампросат, или их соли, пролекарство, производное любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одной предпочтительной композиции или способе изобретения применяют баклофен и торасемид, или их соли, пролекарство, производное любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном конкретном воплощении, в композиции или способе изобретения применяют акампросат и цинакалцет, или соль(соли) или пролекарство(пролекарства) или производное(производные) любой чистоты или композицию с замедленным высвобождением, в которой суточная доза акампросата равна или меньше 10 мг.
Изобретение также относится к баклофену или к его соли, пролекарству, производному любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением, для применения в комбинации с акампросатом, или с его солью, пролекарством, производным любой химической чистоты или композицией с замедленным высвобождением, для лечения паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона, путем комбинированного, раздельного или последовательного введения субъекту.
Предпочтительные композиции лекарственных средств изобретения, следовательно, включают 2, 3, 4 или 5 различных лекарственных средств, более предпочтительно, 2, 3 или 4 различных лекарственных средств для комбинаторного лечения паркинсонизма, в особенности, болезни Паркинсона, у нуждающегося в этом субъекта. В предпочтительном воплощении, лекарственные средства изобретения применяют в комбинации(комбинациях) для комбинированного, раздельного или последовательного введения, с целью обеспечения наиболее эффективного действия.
Авторы изобретения дополнительно обнаружили, что комбинирование, по меньшей мере, одной комбинации лекарственных средств, которые выбирают из группы, состоящей из:
баклофена и акампросата, баклофена и цинакалцета,
мексилетина и цинакалцета, цинакалцета и акампросата, торасемида и баклофена, или торасемида и сульфизоксазола, с лекарственным средством, которое отличается от предъшущих, которое выбирают из лекарственного средства, представляющего собой акампросат, баклофен, цинакалцет, мексилетин, сульфизоксазол и торасемид, и которое усиливает терапевтическое влияние бинарной комбинации и приводит к еще более эффективной композиции для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD.
Таким образом, изобретение также относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим цинакалцет и акампросат в комбинации с лекарственным средством, которое выбирают из лекарственного средства, представляющего собой баклофен, мексилетин, сульфизоксазол и торасемид или их соли, пролекарства, производные или композиции с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
Изобретение также относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим баклофен и акампросат в комбинации с лекарственным средством, которое выбирают из цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида или их соли, пролекарства, производные или композиции с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
Изобретение дополнительно относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим баклофен и цинакалцет в комбинации с лекарственным средством, которое выбирают из акампросата, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
В воплощении, изобретение также относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим мексилетин и цинакалцет в комбинации с лекарственным средством, которое выбирают из акампросата, баклофена, сульфизоксазола и торасемида или их соли, пролекарства, производные или композиции с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
В еще одном воплощении, изобретение относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим торасемид и баклофен в
комбинации с лекарственным средством, которое выбирают из акампросата, сульфизоксазола, цинакалцета и мексилетина или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
Изобретение дополнительно относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим торасемид и сульфизоксазол в комбинации с лекарственным средством, которое выбирают из акампросата, баклофена, мексилетина и цинакалцета или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
В более конкретном воплощении, изобретение относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств: баклофен и цинакалцет и мексилетин, цинакалцет и акампросат и мексилетин, баклофен и акампросат и цинакалцет, баклофен и акампросат и торасемид, баклофен и акампросат и мексилетин, или торасемид и баклофен и цинакалцет, или их соли, пролекарства, производные или композиции с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
Дополнительная цель данного изобретения относится к применению композиций, как определено выше, для производства лекарственного средства для лечения паркинсонизм, в особенности, PD.
Как указывалось ранее, в комбинированной терапии данного изобретения, соединения или лекарственные средства могут быть составлены совместно или раздельно, и введены совместно, раздельно или последовательно.
Дополнительный объект изобретения представляет собой способ лечения паркинсонизм, в особенности, PD, способ, включающий одновременное, раздельное или последовательное введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества композиции, как описана выше.
В связи с этим, конкретный объект изобретения представляет собой способ лечения паркинсонизма, в особенности, PD, способ, включающий одновременное, раздельное или последовательное введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества комбинации лекарственного средства, как описано выше.
В предпочтительном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD, у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества композиции, по меньшей мере, одного соединения, которое выбирают из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида.
В более предпочтительном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества комбинации, по меньшей мере, двух соединений, которые выбирают из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида.
В еще более предпочтительном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD, у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества комбинации, по меньшей мере, одной из следующих комбинаций лекарственных средств, или их солей, пролекарств, производных или композиции с замедленным высвобождением:
баклофен и акампросат,
баклофен и цинакалцет,
цинакалцет и акампросат,
мексилетин и цинакалцет,
торасемид и баклофен, или
торасемид и сульфизоксазол. В другом предпочтительном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD, у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества комбинации, по меньшей мере, одной из следующих комбинаций лекарственных средств, или с их солей, пролекарств, производных или композиции с замедленным высвобождением:
баклофен и цинакалцет и мексилетин,
цинакалцет и акампросат и мексилетин,
баклофен и акампросат и цинакалцет,
баклофен и акампросат и торасемид,
баклофен и акампросат и мексилетин, или
торасемид и баклофен и цинакалцет.
Композиции изобретения, как правило, включают один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов. Кроме того, для применения в настоящем изобретении, лекарственные средства или соединения обычно смешивают с фармацевтически приемлемыми эксципиентами или носителями.
В связи с этим, дополнительная цель данного изобретения представляет собой способ получения фармацевтической композиции, способ, включающий замешивание вышеупомянутых соединений или комбинации соединений в подаодящий эксципиент или носитель.
Будучи очень эффективными in vitro и in vivo, в зависимости от субъекта или конкретного состояния, вышеупомянутые способы, композиции или комбинационные терапии могут быть дополнительно применены в сочетании или в объединении или в комбинации с дополнительными лекарственными средствами или лечениями.
Дополнительные терапии, применяемые в сочетании с лекарственным средством(средствами) или с комбинацией(комбинациями) лекарственного средства(средств) в соответствии с настоящим изобретением, могут включать одно или более лекарственное средство(средства), которое ослабляет симптомы болезни Паркинсона, одно или более лекарственное средство(средства), которое может быть применено для паллиативного лечения болезни Паркинсона или одно или более лекарственное средство(средства), которые настоящее время проходят оценку в рамках клинических испытаний для лечения болезни Паркинсона.
Следовательно, композиции изобретения могут быть скомбинированы с дофаминергическими лекарственными средствами, такими как предшественники допамина (предпочтительно, леводопа, мелеводопа), агонисты допаминовых рецепторов (предпочтительно талипексол, пирибедил, ротиготин, бромокриптин, перголид, каберголин, лизурид, прамипексол, ропинирол или апоморфин) или ингибиторами ферментов метаболизма допамина (предпочтительно, селегилин, разагилин).
Композиции изобретения также могут быть скомбинированы с другими известными способами лечения PD, дополнительными способами лечения PD, или с лечением недвигательных симптомов PD или, предпочтительно, с моносиалотетрагексозилганглиозидом, цитиколином, дроксидопой, мазатиколом, прометазином, кветиапином, проциклидином или фенадрином, домперидоном, бензтропином, тригексифенидилом, бипериденом, клозапином, дезипрамином, циталопрамом, нортриптилином, пароксетином, атомоксетином, венлафаксином, амантадином, донепезилом, ривастигмином или мемантином.
Такое применение способов, композиций или комбинаций изобретения с вышеупомянутыми терапиями позволит снизить терапевтические дозы лекарственных средств, вызьгаающих обеспокоенность и, таким образом, позволило бы уменьшить, задержать или избежать известных побочных эффектов, связанных с данными лекарственными средствами, например, дискинезии на пике дозы, наблюдаемой у пациентов, которых лечили леводопой.
В связи с этим, дополнительный объект данного изобретения относится к композициям, применяемым при лечении паркинсонизмЕ1, в особенности, PD, включающим композицию, как определена выше, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
Таким образом, конкретное воплощение данного изобретения относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим, по меньшей мере, одно соединение, которое выбирают из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида или его соли(солей), пролекарства(пролекарств), производного(производны) любой химической чистоты или композиции(композиций) с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
Предпочтительное воплощение изобретения относится к композициям для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включающим, по меньшей
мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств:
баклофен и леводопа,
торасемид и леводопа,
сульфизоксазол и леводопа,
мексилетин и леводопа, или
цинакалцет и леводопа, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
Изобретение также относится к композициям per se, включающим, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств:
баклофен и леводопа,
торасемид и леводопа,
сульфизоксазол и леводопа,
мексилетин и леводопа, или
цинакалцет и леводопа, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением, для комбинированного, раздельного или последовательного введения.
В воплощении, изобретение также относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD, у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества комбинации, по меньшей мере, двух соединений, которые выбирают из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему
одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества баклофена и акампросата или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества мексилетина и цинакалцета или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества of торасемид и баклофен или их соли, пролекарства, производные или композиции с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина,
кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества сульфизоксазола и торасемида или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества цинакалцета и акампросата или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В еще одном воплощении, изобретение относится к способу лечения паркинсонизма, в особенности, PD у нуждающегося в этом субъекта, включающему
одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту эффективного количества баклофена и цинакалцета или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, в комбинации, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из группы, состоящей из леводопы, талипексола, пирибедила, ротиготина, бромокриптина, перголида, каберголина, лизурида, прамипексола, ропинирола, апоморфина, селегилина, разагилина, моносиалотетрагексозилганглиозида, цитиколина, дроксидопы, мазатикола, прометазина, кветиапина, проциклидина или фенадрина, домперидона, бензтропина, тригексифенидила, биперидена, клозапина, дезипрамина, циталопрама, нортриптилина, пароксетина, атомоксетина, венлафаксина, амантадина, донепезила, ривастигмина и мемантина, или их солей или пролекарств или производных любой чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
В предпочтительном воплощении, композиции данного изобретения, для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, включают, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств, или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, лекарственные средства в каждой из указанных комбинации, предназначенью для комбинированного, раздельного или последовательного введения:
баклофен и акампросат и леводопа,
мексилетин и цинакалцет и леводопа,
торасемид и баклофен и леводопа,
баклофен и цинакалцет и леводопа,
цинакалцет и акампросат и леводопа, или
сульфизоксазол и торасемид и леводопа. Изобретение также относится к композициям per se, включающим, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, лекарственные средства в каждом из указанных комбинации предназначены для одновременного, раздельного или последовательного введения:
баклофен и акампросат и леводопа,
мексилетин и цинакалцет и леводопа,
торасемид и баклофен и леводопа,
баклофен и цинакалцет и леводопа,
цинакалцет и акампросат и леводопа, или
сульфизоксазол и торасемид и леводопа.
Еще в одном предпочтительном воплощении, изобретение относится к композициям данного изобретения, для применения при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, которые включают, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств, или их солей, пролекарств, производных или композиций с замедленным высвобождением, лекарственные средства в каждом из указанных комбинации предназначены для комбинированного, раздельного или последовательного введения:
баклофен, цинакалцет, мексилетин и леводопа,
цинакалцет, акампросат, мексилетин и леводопа,
баклофен, акампросат, цинакалцет и леводопа,
баклофен, акампросат, торасемид и леводопа,
баклофен, акампросат, мексилетин, и леводопа, или
торасемид, баклофен, цинакалцет и леводопа. В предпочтительном воплощении, если композиции или комбинационные терапии изобретения включают предшественник допамина, они могут быть дополнительно скомбинированы, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из периферических ингибиторов допа-декарбоксилазы, ингибиторов катехол-О-метилтрансферазы или ингибиторов моноаминоксидазы. В частности, если композиции или комбинационные терапии изобретения включают предшественник допамина, они могут быть дополнительно скомбинированы, по меньшей мере, с одним соединением, которое выбирают из карбидопы, бенсеразида, толкапона, энтакапона, селегилина или разагилина.
Дополнительная цель данного изобретения заключается в применении композиции, как определена выше, для производства лекарственного средства для лечения паркинсонизм, в особенности, PD.
В еще одном воплощении, композиции или комбинационные терапии изобретения могут быть применены в сочетании с хирургическими способами лечения, применяемыми для болезни Паркинсона, такими как глубокая стимуляция мозга. В частности, хирургические способы лечения представляют собой глубокую стимуляцию мозга в области субталамического ядра или globus pallidus interna.
В связи с этим, изобретение относится к композициям, включающим, по меньшей мере, одно соединение, которое выбирают из группы, состоящей из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или его соли(солей), пролекарства(пролекарств), производного(производных) любой химической чистоты или композиции(композиций) с замедленным высвобождением, для применения
в комбинации с глубокой стимуляцией мозга в области субталамического ядра или globus pallidus interna, при лечении паркинсонизма, в особенности, PD.
Двигательные симптомы PD могут развиваться позднее, когда дофаминергическая денервация стриатума и потеря дофаминергических нервных клеток substantia nigra уже широко распространилась. Таким образом, лечение РЕ) до появления двигательных симптомов и с целью их предупреждения необходимо для того, чтобы изменить прогрессирование и течение заболевания.
В связи с этим, в предпочтительном воплощении, любые вышеупомянутые способы, композиции или комбинационные терапии могут быть применены для предупреждения, профилактики или замедления симптомов, спровоцированных или возникших как следствие болезни Паркинсона.
Комбинация раннего выявления недвигательных симптомов, наиболее предпочтительно, аносмии, способами визуализации (однофотонная эмиссионная компьютерная технология, позитронно-эмиссионная томография) для оценки изменений в стриатальном транспортере допамина, может представлять собой подходящий подход для идентификации пациентов с риском заболевания PD до появления двигательных симптомов, что, таким образом, позволяет начать нейропротекторную терапию как можно раньше.
Некоторые случаи PD могут быть отнесены к мутациям в таких генах, как SNCA (альфа-синуклеин), PRKN (паркин), LRRK2 (обогащенная лейциновыми повторами киназа 2), PINK1 (PTEN-индуцированная предполагаемая киназа 1), DJ-1 и АТР13А2 и одиннадцать генных локусов (PARK1-PARK11). В связи с этим, в предпочтительном воплощении, изобретение относится к применению вьшгеупомянутых способов, композиций или комбинационных терапий при лечении PD у субъекта, имеющего мутацию, по меньшей мере, в одном из следующих генов: SNCA, PRKN, LRRK2, PINK1, DJ-1, АТР13А2 и от PARK1 до PARK11.
Воздействие высоких концентраций или хроническое воздействие металлов, таких как марганец, медь или свинец, или химических веществ, таких как пестициды (например, паракват, ротенон и манэб), могут стать причиной паркинсонизма, в особенности, PD. В связи с этим, в предпочтительном воплощении, изобретение относится к применению вышеупомянутых способов, композиций или комбинационных терапий при лечении паркинсонизма, в особенности, PD, у субъекта, на которого воздействовали, который подозревается в том, что на него воздействовали, или который подвергается риску воздействия химическими или металлами, о которых известно, что они представляют собой факторы риска развития PD или связанных с ней нарушений.
В предпочтительном воплощении, вышеупомянутые способы, композиции или комбинационные терапии могут быть применены у субъекта с риском развития болезни Паркинсона или симптомов, связанных с болезнью Паркинсона.
Терапия в соответствии с изобретением может быть обеспечена в домашних условиях, в кабинете врача, в клинике, в поликлиническом отделении больницы или в больнице, таким образом, чтобы врач мог внимательно следить за эффективностью лечения и внести любые изменения, которые будут необходимы.
Продолжительность лечения зависит от стадии заболевания подвергаемого лечению, возраста и состояния пациента, и того, как пациент реагирует на лечение. Дозировку, частоту и способ введения каждого компонента комбинации можно контролировать независимо. Например, одно лекарственное средство может быть введено перорально, тогда как второе лекарственное средство может быть введено внутримышечно. Комбинированные терапии могут быть назначены в виде циклов "включения и выключения" (on-and-off cycles), в которые входят периоды отдыха, такие чтобы организм пациента имел шанс восстановиться от любых еще непредвиденных побочных эффектов. Лекарственные средства также могут быть составлены совместно, таким образом, чтобы одно введение доставляло все лекарственные средства.
Введение каждого лекарственного средства комбинации может быть осуществлено с помощью любых подходящих способов, которые приведуг к такой концентрации лекарственного средства, что при комбинировании с другим компонентом, появится возможность смягчить состояние пациента или эффективно лечить заболевание или нарушение.
Несмотря на то, что существует возможность введения комбинации лекарственных средств в виде чистого химического вещества, предпочтительно, применять их в виде фармацевтических композиций, также обозначаемых в этом контексте как фармацевтическая композиция. Возможные композиции включают композиции, подходящие для перорального, ректального, местного (включая трансдермальное, буккальное и подъязычное), или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) введения.
Чаще всего эти фармацевтические композиции назначаются пациенту в составе "упаковок для пациента", содержащие ряд дозирующих устройств или других средств для введения отмеренных стандартных доз для применения на протяжении различных периодов лечение в единой упаковке, обычно, в блистерной упаковке. Упаковки для пациента имеют то преимущество по сравнению с традиционными предписаниями, в которых фармацевт делит предназначенные для пациента фармацевтические средства из
бестарного нерасфасованного лекарственное средство, что пациенту всегда доступен вкладыш в упаковку, содержащийся в упаковке пациента, и, кап: правило, отсутствующий в традиционных предписаниях. Было показано, что включение вкладыша в упаковку улучшает соблюдение пациентом указаний лечащего врача. Таким образом, изобретение дополнительно включает фармацевтическую композицию, как описана ранее в настоящем документе, в комбинации с упаковочным материалом, подходящим для указанных композиций. В такой упаковке пациента предполагаемое применение композиции для комбинационного лечения может быть предложено с помощью инструкций, устройств, технических средств, приспособлений и/или других средств, помогающих применять композицию наиболее предпочтительным для лечения образом. Такие меры делают упаковку пациента особенно подходящей и приспособленной для применения при лечении с помощью комбинаций настоящего изобретения.
Лекарственное средство может содержаться, в любом соответствующем количестве, в любом подходящем веществе носителя. Лекарственное средство может быть представлено в количестве, равном вплоть до 99% по массе от общей массы композиции. Композиция может быть обеспечена в лекарственной форме, которая подходит для перорального, парентерального (например, внутривенного, внутримышечного), ректального, накожного, назального, вагинального, ингаляционного, кожного (пластырь) или глазного пути введение. Таким образом, композиция может находиться, например, в форме таблеток, капсул, пилюль, порошков, гранулятов, суспензий, эмульсий, растворов, гелей, включая гидрогелей, паст, мазей, кремов, пластырей, примочек, осмотических устройств для доставки, суппозиториев, клизм, инъекций, имплантатов, спреев или аэрозолей.
Фармацевтические композиции могут быть составлены в соответствии с фармацевтической общепринятой практикой (смотри, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000 и Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York).
Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут быть составлены так, чтобы высвобождать активное лекарственное средство в значительной степени сразу же после введение или в любое заранее определенное время или временной период после введение.
Композиции с контролируемым высвобождением включают (i) композиции, которые создают в значительной степени постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение продолжительного периода времени; (и) композиции,
которые по истечении заданного времени задержки создают в значительной степени постоянную концентрацию лекарственного средства в организме в течение продолжительного периода времени; (ш) композиции, которые поддерживают действие лекарственного средства в течение заданного периода времени путем поддержания относительно постоянного, эффективного уровня лекарственного средства в организме с сопутствующей минимизацией нежелательных побочных эффектов, связанных с колебания уровня вещества активного лекарственного средства в плазме крови; (iv) композиции, которые локализуют действие лекарственного средства, например, пространственное размещение композиции с контролируемым высвобождением рядом с пораженными тканью или органом или в пораженные ткань или орган; и (v) композиции, на которые нацелено действие лекарственного средства, с применением носителей или химических производных для доставки лекарственного средства к определенному типу клеток-мишеней.
Введение лекарственных средств в форме композиции с контролируемым высвобождением особенно предпочтительно в случаях, в которых лекарственное средство имеет (i) узкий терапевтический индекс (т.е., разница между концентрацией в плазме крови, приводящей к вредным побочным эффектам или токсическим реакциям, и концентрацией в плазме крови, приводящей к терапевтическому эффекту, мала; в общем, терапевтический индекс, TI, определяют как отношение средней летальной дозы(1Л}50) к средней эффективной дозе(ЕБ50)); (ii) узкое окно поглощения в желудочно-кишечном тракте; или (ш) очень короткий период биологического полувыведения, такой, что для поддержания уровня в плазме на терапевтическом уровне требуется частое дозирование в течение суток.
Для получения контролируемого высвобождения может быть рассмотрено любое число стратегий, в которых скорость высвобождения превосходит скорости метаболизма рассматриваемого лекарственного средства. Контролируемое высвобождение может быть получено путем соответствующего отбора различных параметров и ингредиентов композиции, включая, например, различные типы композиций и покрытий с контролируемым высвобождением. Таким образом, лекарственное средство составляют с соответствующими эксципиентами в фармацевтическую композицию, которая, при введении, высвобождает лекарственное средство контролируемым образом (композиции в виде единственной таблетки или капсулы или в виде множества таблеток или капсул, масляных растворов, суспензий, эмульсий, микрокапсул, микросфер, наночастиц, пластырей и липосом).
Твердые лекарственные формы для пероралъного применения
Композиции для перорального применения включают таблетки, содержащие композиции изобретения в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Данные эксципиенты, например, могут представлять собой инертные разбавители или наполнители (например, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмалы, включая картофельный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия, фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия); гранулирующие средства и разрыхлители (например, производные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, натриевая кроскармеллоза, альгинаты или альгиновая кислоты); связующими средства (например, гуммиарабик, альгиновая кислоты, альгинат натрия, желатин, крахмал, прежелатинизированный крахмал, микрокристаллическая целлюлоза, натриевая карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, поливинилпирролидон, или полиэтиленгликоль); и смазывающие средства, средства, способствующие скольжению, и антиадгезионные средства (например, стеариновые кислоты, силикагели или тальк). Другие фармацевтически приемлемые эксципиенты могут представлять собой красители, ароматизирующие средства, пластификаторы, увлажнители, буферные вещества и им подобные.
Таблетки могут быть непокрытыми или они могут быть покрыты с помощью известных методик, необязательно, для того чтобы замедлить разрушение и поглощение в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечивая пролонгированное действие в течение более длительного периода. Покрытие может быть адаптировано для высвобождения активного вещества лекарственного средства заданным образом (например, для достижения композиции с контролируемым высвобождением), или оно может быть приспособлено для того, чтобы высвобождение активного лекарственного вещества происходило только после прохождения желудка (энтеросолюбильное покрытие). Покрытие может представлять собой сахарное покрытие, пленочное покрытие (например, на основе гидроксипропилметилцеллюлозы, метилцеллюлозы, метилгидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, акрилатных сополимеров, полиэтиленгликолей и/или поливинилпирролидона), или энтеросолюбильное покрытие (например, на основе сополимера метакриловой кислоты, ацетофталата целлюлозы, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетата сукцината гидроксипропилметилцеллюлозы, поливинилацетата фталата, шеллака и/или этилцеллюлозы). Может быть применен материал, обеспечивающий задержку во времени, такой как, например, глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат.
Твердые композиции в таблетках могут включать покрытие, приспособленное для
защиты композиции от нежелательных химических изменений, (например, химического разрушения до высвобождения активного лекарственного вещества). Покрытие может быть нанесено на твердую лекарственную форму, таким образом, как описано в руководстве Encyclopedia of Pharmaceutical Technology.
Лекарственные средства могут быть смешаны совместно в таблетку, или могут быть разделены. Например, первое лекарственное средство содержится внутри таблетки, а второе лекарственное средство находится на внешней стороне, таким образом, значительная часть второго лекарственного средства высвободится перед высвобождением первого лекарственного средства.
Композиции для перорального применения также может быть представлена в виде жевательных таблеток, или в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с инертным твердым разбавителем (например, с картофельным крахмалом, микрокристаллической целлюлозой, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином), или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с водной или масляной средой, например, с жидким парафином, или оливковым маслом. Порошки и грануляты могут быть получены с применением ингредиентов, упомянутых выше для таблеток и капсул, общепринятым способом.
Контролируемое высвобождение композиции для перорального применения, например, может быть выполнено так, чтобы высвобождать активное лекарственное средство путем регулирования растворения и/или диффузии активного лекарственного вещества.
Высвобождение с контролируемым растворением или диффузией может быть достигнуто соответствующим покрытием таблетки, капсулы, драже или гранулированной композиции лекарственных средств, или путем включения лекарственного средства в подходящую матрицу. Покрытие с контролируемым высвобождением может включать одно или несколько упомянутых выше веществ покрытий, и/или, например, шеллак, пчелиный воск, гликовакс, гидрированное касторовое масло, карнаубский воск, стеариловый спирт, глицерилмоностеарат, глицерилдистеарат, глицерилпальмитостеарат, этилцеллюлозу, акриловые смолы, dl-полимолочные кислоты, целлюлозы ацетат бутират, поливинилхлорид, поливинилацетат, винилпирролидон, полиэтилен, полиметакрилат, метилметакрилат, 2-гидроксиметакрилат, гидрогели метакрилата, 1,3-бутиленгликоль, (этиленгликоль)метакрилат и/или полиэтиленгликоли. В композиции с матрицей для контролируемого высвобождения, материал матрицы также может включать, например, гидратированную метилцеллюлозу, карнаубский воск и стеариловый спирт, карбопол 934, силикон, глицерил тристеарат, метилакрилат-метилметакрилат, поливинилхлорид,
полиэтилен и/или галогенированньгй фтороуглерод.
Композиция с контролируемым высвобождением, содержащая одно или несколько лекарственных средств заявленной комбинации, также может находиться в форме плавучей таблетки или капсулы (т.е., таблетки или капсулы, которая при пероральном введении, плавает на поверхности содержимого желудка в течение определенного периода времени). Композиция лекарственного средства(лекарственных средств) в составе плавучей таблетки может быть получена гранулированием смеси лекарственного средства(лекарственных средств) с эксципиентами и 20-75% масс/масс, гидроколлоидов, таких как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропил-метилцеллюлоза. Затем полученные гранулы могут быть спрессованы в таблетки. При контакте с желудочным соком, таблетка формирует вокруг своей поверхности барьер, представляющий собой в значительной степени влагонепроницаемый гель. Данные гелевый барьер участвует в поддержании плотности, величиной меньше единицы, тем самым позволяя таблетке сохранять плавучесть в желудочном соке.
Жидкости для перорального введения
Порошки, диспергируемые порошки или гранулы, подходящие для получения водной суспензии путем добавления воды, представляют собой удобные лекарственные формы для перорального введения. Композиция в виде суспензии обеспечивает активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим средством, суспендирующим средством и с одним или несколькими консервантами. Подходящие суспендирующие средства представляют собой, например, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлозу, альгинат натрия и им подобные.
Парентеральные композиции
Фармацевтическая композиция также может быть введена парентерально с помощью инъекции, инфузии или имплантации (внутривенной, внутримышечной, подкожной или им подобных) в лекарственных формах, композициях или через подходящие устройства для доставки или имплантаты, содержащие общепринятые, нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества. Композиция и получение такой композиции хорошо известны специалистам в области техники изготовления фармацевтических композиций.
Композиции для парентерального применения могут быть обеспечены в стандартных лекарственных формах (например, в ампулах для однократного приема), или во флаконах, содержащих несколько доз и в которые может быть добавлен подходящий консервант (смотри ниже). Композиция может быть в виде раствора, суспензии, эмульсии, устройства для инфузии или устройства доставки для имплантации, или она может быть
представлена в виде сухого порошка для разведения перед применением в воде или в другой подходящей основе. Помимо активного лекарственного средства (активных лекарственных средств), композиция может включать подходящие парентерально приемлемые носители и/или эксципиенты. Активное лекарственное средство (активные лекарственные средства) может быть включено (могут быть включены) в микросферы, микрокапсулы, наночастицы, липосомы или им подобные для контролируемого высвобождения. Композиция может включать суспендирующие, солюбилизирующее, стабилизирующие, контролирующие рН и/или диспергирующие средства.
Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут находиться в форме, подходящей для стерильной инъекции. Для получения такой композиции, подходящее активное лекарственное средство(подходящие активные лекарственные средства) растворяют или суспендируют в парентерально приемлемой жидкой основе. Среди приемлемых основ и растворителей, которые могут быть применены, можно привести воду, воду, доведенную до подходящего рН добавлением соответствующего количества соляной кислоты, гидроксида натрия или подходящего буфера, 1,3-бутандиол, раствор Рингера и изотонический раствор хлорид натрия. Еюдная композиция также может содержать один или несколько консервантов (например, метил-, этил- или н-пропил-и-гидроксибензоат). В случаях, когда одно из лекарственных средств лишь умеренно или слаборастворимо в воде, может быть добавлено улучшающее растворение средство или солюбилизирующее средство, или растворитель, может включать 10-60% масс/масс, пропиленгликоля или ему подобного соединения.
Парентеральные композиции с контролируемым высвобождением могут находиться в форме водных суспензий, микросфер, микрокапсул, магнитных микросфер, масляных растворов, масляных суспензий, или эмульсий. Альтернативно, активное лекарственное средство(активные лекарственные средства) могут быть включены в биосовместимые носители, липосомы, наночастицы, имплангаты или устройства для инфузии. Материалы для применения при получении микросфер и/или микрокапсул представляют собой, например, биоразлагаемые/ биоразрушаемые полимеры, такие как полигалактин, поли-(изобутилцианоакрилат), поли(2-гадроксиэтил-Ь-глутамин). Биосовместимые носители, которые могут быть применены при составлении парентеральной композиции с контролируемым высвобождением представляют собой углеводы (например, декстраны), белки (например, гшьбумин), липопротеины или антитела. Материалы для применения в имплантатах могуг быть небиоразлагаемые (например, полидиметилсилоксан) или биоразлагаемые (например, поли(капролактон), поли(гликолевые кислоты) или поли(ортоэфиры)).
Альтернативные пути
Несмотря на их меньшую предпочтительность и меньшее удобство могут быть рассматрены другие пути введения, и, следовательно, другие композиции. В связи с этим, для ректального применения, подходящие лекарственные формы для композиции включают суппозитории (типа эмульсии или суспензии), и ректальные желатиновые капсулы (растворы или суспензии). В типичной композиции суппозиториев, активное лекарственное средство(активные лекарственные средства) скомбинированы с соответствующей фармацевтически приемлемой основой суппозитория, такой как масло какао, сложный этерифицированные жирные кислоты, глицеринированный желатин и различные водорастворимые или диспергируемые основные полиэтиленгликоли. Могут быть включены различные добавки, усилители или поверхностно-активные вещества.
Фармацевтические композиции также могут быть введены местно на кожу, для впитывания через кожу, в лекарственных формах или композициях, содержащих общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, включая микросферы и липосомы. Композиции включают кремы, мази, лосьоны, линименты, гели, гидрогели, растворы, суспензии, наклейки, спреи, пасты, пластыри и другие типы систем доставки трансдермального лекарственного средства. Фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты могут включать эмульгаторы, антиоксиданты, буферные вещества, консерванты, увлажнители, усилители проникновения, хелатирующие средства, гелеобразующие средства, основы мазей, отдушки и защищающие кожу средства.
Консерванты, увлажнители, усилители проникновения могут представлять собой парабены, такие как метил или пропил-н-гидроксибензоат., и бензалкония хлорид, глицерин, пропиленгликоль, мочевину и т.п.
Описанные выше фармацевтические композиции для местного введения на кожу также могут быть применены в связи с местным введение на ту часть или близко к той части организма, которая подлежит лечению. Композиции могут быть приспособлены для непосредственного применения или для применения с помощью специальных приспособлений для доставки лекарственного средства, таких как повязки или, альтернативно, пластыри, аппликаторы, губки, полоски, или другие формы подходящего гибкого материала.
Дозировки и продолжительность лечения
Следует понимать, что лекарственные средства комбинации могут быть введены одновременно, или в одной и той же, или в разных фармацевтических композициях, или последовательно. При последовательном введении, задержка во введении второго (или
дополнительного) активного ингредиента не должна быть такой, чтобы приводить к потере преимущества от эффективного влияния комбинации активных ингредиентов. Минимальное требование для комбинации в соответствии с данным описанием заключается в том, что комбинация должна быть предназначена для комбинированного применения с выгодой от эффективного влияния комбинации активных ингредиентов. О предполагаемом применении комбинации можно заключить по объектам, положениям, приспособления и/или другим средствам, помогающим применять комбинацию в соответствии с изобретением.
Теоретически эффективное количества лекарственных средств в комбинации данного изобретения включает, например, количества, которые эффективны для ослабления симптомов болезни Паркинсона, остановки или замедления прогрессирования заболевания, как только оно начало проявляется клинически, или предупреждения или уменьшения риска развития заболевания.
Хотя активные лекарственные средства настоящего изобретения могут быть введены в разделенных дозах, например, два или три раза в день, единая суточная доза каждого лекарственного средства в комбинации предпочтительна, при этом наиболее предпочтительна единая суточная доза всех лекарственных средств в единой фармацевтической композиции (стандартная лекарственная форма).
Введение можно проводить от одного до нескольких раз в день в течение от нескольких дней до нескольких лет, и может быть даже на протяжении всей жизни пациента. Хроническое или, по меньшей мере, периодически повторяемое долгосрочное введение указывается для большинства случаев.
Термин "стандартная лекарственная форма" относится к физически дискретным единицам, (таким как капсулы, таблетки или шприцы с загруженными цилиндрами) подходящий в качестве единичных доз для людей, каждая: единица, содержащая заданное количество активного материала или материалов, рассчитанное на получение желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем.
Количество каждого лекарственного средства в предпочтительной стандартной лекарственной композиции зависит от некоторых факторов, включающих способ введения, массу организма и возраст пациента, стадию заболевания, риск потенциальных побочных эффектов с учетом общего состояния здоровья человека, подлежащего лечению. Кроме того, фармакогеномая (влияние генотипа на фармакокинетический, фармакодинамический профиль или профиль эффективности терапевтического средства) информация о конкретном пациенте может повлиять на применяемую дозу.
Кроме случаев, когда отвечают на особые случаи ухудшения, в которых могут
потребоваться повышенные дозировки, предпочтительные дозировки каждого лекарственного средства в комбинации будут обычно лежать в диапазоне доз не превышающем дозировки, обычно предписанные для долгосрочного поддержания лечения или для которых доказана безопасность в фазе 3 клинических исследований.
Одно замечательное преимущество изобретения заключается в том, что в комбинированной терапии каждое соединение может быть применено в низких дозах, оказывая при этом, в комбинации, существенный клинический эффект на пациента. Комбинированная терапия может действительно быть эффективной в дозах, в которых индивидуально соединения имеют низкий эффект или не проявляют эффекта. Соответственно, особое преимущество изобретения заключается в возможности применять суб-оптимальные дозы каждого соединения, т.е. дозы, который ниже, чем обычно назначаемые терапевтические дозы, предпочтительно 1/2 терапевтической дозы, более предпочтительно, 1/3,1/4, 1/5 или еще более предпочтительно 1/10 терапевтической дозы. В конкретных примерах применяют дозы настолько низкие, как 1/20, 1/30, 1/50, 1/100 от терапевтической дозы или даже ниже.
В таких субтерапевтических дозировках, соединения не будут проявлять никаких побочных эффектов, в то время как комбинация(комбинации) в соответствии с изобретением полностью эффективна(эффективны) при лечении болезни Паркинсона.
Предпочтительные дозировки соответствуют количествам от 1% вплоть до 50% от количеств, обычно назначаемых для долгосрочного лечения.
Наиболее предпочтительные дозировки могут соответствовать количествам от 1% вплоть до 10% от количеств, обычно назначаемых для долгосрочного лечения.
Конкретные примеры дозировок лекарственных средств (количество эквивалентное активной молекуле) для применения в изобретении приведены ниже:
акампросат: 1000 мг или менее в день, предпочтительно, менее чем 500 мг в день, предпочтительно, менее чем 400 мг в день, более предпочтительно, менее чем 200 мг в день, более предпочтительно, менее чем 50 мг в день, еще более предпочтительно, от примерно 1 до 50 мг в день, или даже менее чем 10 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения.
баклофен: 150 мг или менее в день, предпочтительно, менее чем 100 мг в день, более предпочтительно, менее чем 50 мг в день, более предпочтительно, менее чем 30 мг в день, еще более предпочтительно, от 0,01 мг до 30 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения.
цинакалцет: 150 мг или менее в день, предпочтительно, менее чем 100 мг в день, предпочтительно, менее чем 50 мг в день, более предпочтительно, менее чем 36 мг в
день, и еще более предпочтительно, от 0,01 до 25 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения,
мексилетин: 120 мг или менее в день, предпочтительно, менее чем 60 мг в день, более предпочтительно, менее чем 30 мг в день, более предпочтительно, менее чем 15 мг в день, еще более предпочтительно, от 6 до 15 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения,
торасемид: 4 мг или менее в день, предпочтительно, менее чем 2 мг в день, более предпочтительно, менее чем 1 мг в день, более предпочтительно, менее чем 0,5 мг в день, и еще более предпочтительно, от 0,05 до 0,5 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения,
сульфизоксазол 800 мг или менее в день, предпочтительно, менее чем 400mg, более предпочтительно, менее чем 200 мг в день, более предпочтительно, менее чем 100 мг в день, еще более предпочтительно, менее чем 20 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения,
леводопа 1,5 г или менее в день, предпочтительно, менее чем 750 мг в день, более предпочтительно, менее чем 375 мг в день, еще более предпочтительно, менее чем 100 мг в день, такие дозировки в особенности подходят для перорального введения.
Следует понимать, что количество лекарственного средства или комбинация фактически введенного лекарственного средства должна быть определена лечащим врачом, в свете соответствующих обстоятельств, включая состояние или условия подлежащие лечению, конкретный состав, который будет введен, возраст, массу и реакцию индивидуального пациента, тяжесть симптомов пациента и выбранный путь введения. Следовательно, вышеупомянутые диапазоны дозировки предназначены для обеспечения общего руководства и поддержки идей, излагаемых в настоящем документе, но не предназначены для ограничения объема изобретения.
Следующие примеры приведены в целях иллюстрации, а не с целью ограничения.
Примеры
Все процедуры на животных были проведены в соответствии с рекомендациями Национального института здравоохранения (NIH) по уходу и использованию лабораторных животных, и одобрены Национальным советом по проведению экспериментов на животных.
Предупреждение глутаматной токсичности на нейронах
В патогенез болезни Паркинсона вовлечена глутаматная токсичность. В этом наборе экспериментов, соединения-кандидаты были протестированы на их способность
предотвращать или снижать токсические эффекты глутаматной токсичности на нейронах. Лекарственные средства исходно были протестированы индивидуально, с последующим анализом их комбинаторного действия. Получение нервных клеток
Эффективность комбинаций лекарственных средств изобретения оценивали на первичной культуре кортикальных нейронов.
Кортикальные нейроны крысы культивировали, как: описано в работе Singer et al. (30). Коротко, беременных самок крыс с 15-дневной беременностью забивали путем смещения шейных позвонков (крысы породы Wistar) и зародышей извлекали из матки. Кору головного мозга извлекали и помещали в ледяную среду Лейбовица (L15), содержащую 2% пенициллина 10000 ЕдУмл и стрептомицина 10 мг/мл и 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА). Кору головного мозга разрушали трипсином в течение 20 мин при 37°С (0,05%). Реакцию останавливали добавлением модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM), содержавшей ДНКазу 1, степени чистоты II, и 10% эмбриональной сыворотки теленка (FCS). Клетки затем механически разделяли с помощью 3-х серийных прохождений через 10-миллилитровую пипетку и центрифугировали при 515 х g в течение 10 мин при +4°С. Супернатант отбрасывали и осадок клеток ресуспендировали в культуральной среде определенного состава, состоявшей из среды Neurobasal, дополненной В27 (2%), L-глутамином (0,2 мМ), 2%-м раствором PS и 10 нг/мл BDNF. Жизнеспособные клетки подсчитывали с помощью цитометра Нойбауэра, применяя тест на вытеснение трипанового синего. Клетки высевали с плотностью, равной 30000 клетки/лунку, в 96-луночные планшеты (лунки были предварительно покрыты поли-Ь-лизином (10 мкг/мл)) и культивировали при +37°С в увлажненной воздушной атмосфере (95%)/С02 (5%).
Исследование глутаматной токсичности
Нейропротекторное влияние соединений устанавливали путем количественной оценки нейритной сети (иммуноокрашивание нейрофиламентов, Neurofilament immunostaining (NF)), которая специфически выявляет глутаматергические нейроны.
Через 12 дней культивирования нейронов, лекарственные средства комбинаций-кандидатов растворяют в культуральной среде (+0,1% DMSO). Комбинации-кандидаты затем преинкубируют с нейронами в течение 1-го часа перед глутаматным повреждением. Через час после инкубации, на 20 мин добавляют глутамат, до конечной концентрации, равной 40 мкМ, в присутствии комбинаций-кандидатов, чтобы избежать дополнительного разбавления лекарственного средства. В конце инкубации, среду заменяют средой с комбинацией-кандидатом, но без глутамата. Культуру фиксируют 24 часа после
глутаматного повреждения. В качестве положительного коюроля применяли МК801 (дизоцилпина гидроген малеат, 77086-22-7 - 20 мкМ).
После пермеабилизации с сапонином (""Sigma""), метки блокировали в течение 2-х часов PBS, содержавшей 10% козьей сыворотки, затем клетки инкубировали с мьштиными первичными моноклональными антитела против антител к нейрофиламентам (Neurofilament (NF, "Sigma")). Данные антитела проявляли с помощью козьих антител к IgG мыши, конъюгированных с Alexa Fluor 488.
Ядра клеток метили флуоресцентным маркером (раствор Hoechst, "SIGMA"), и количественно определяли нейритную сеть. Для анализа выживания нейронов в 3-х различных культурах применяли шесть лунок на условие.
Результаты
Все протестированные комбинации лекарственных средств обеспечивают защитный эффект кортикальных нейронов от глутаматной токсичности. Результаты показаны в приведенной ниже таблице 2.
Как проиллюстрировано на фигурах 1-3, комбинации изобретения очень хорошо защищают нейроны от глутаматной токсичности в описанных выше экспериментальных условиях. Примечательно, что эффективную защиту отмечали при применении лекарственного средства в такой концентрации, в которой лекарственные средства при раздельном применении не обладают защитным эффектом или обладают сниженным защитным эффектом.
Действительно, как проиллюстрировано на фигуре 1, комбинация мексилетин-цинакалцет эффективно защищает нейроны от глутаматной токсичности, в то же время никакой защиты не было получено при применении лекарственных средств по отдельности. Комбинация баклофен-акампросат (фигура 3) обеспечивала защитный эффект от глутаматной токсичности на кортикальных нейронах. Комбинация баклофена и акампросата индуцировала улучшение на более чем 200% по сравнению с одним акампросатом и более чем на 47% по сравнению с баклофеном, примененным отдельно.
А- Защитный эффект от индуцируемой ишемией/гипоксией гибели нейрональных клеток
Получение кортикальных нейрональных клеток крысы Клетки получали, как описано ранее.
Исследования кислородной и глюкозной депривации (модель ишемии in vitro)
Нейропротекторное влияние соединения оценивается путем количественного измерения нейритного сети (иммуноокрашивание нейрофиламентов (NF)) с помощью МАР2 антител. Рилузол, нейропротекторное лекарственное средство (Riluteck(r), 5 мкм), применяли в качестве положительного контроля.
Через 10 дней роста культуры нейронов, лекарственные средства кандидаты растворяли в культуральной среде (+0,1% DMSO) и затем преинкубировали с нейронами в течение 1-го часа перед депривацией кислорода и глюкозы. Через один час после инкубации с лекарственным средством кандидатом, среду удаляли и добавляли свежую среду без глюкозы. Данная среда состояла из DMEM без глюкозы ("Invitrogen"), дополненной 2% В27, 0,2 мМ L-глутамином, раствором 1% PS, 10 нг/мл BDNF. Клетки переносили в анаэробный инкубатор с 95% N2 и 5% СО2 при 37°С.
Через 2 часа, в культуральную среду добавляли 25 мМ D-глюкозу и клетки переносили в классический инкубатор с 95% воздуха /5% СО;, при 37°С. Через 24 часа реперфузии кислорода и глюкозы, клетки фиксировали с помощью холодного раствора этанола/уксусной кислоты в течение 5-ти минут.
После пермиабилизации с сапонином ("Sigma"), клетки блокировали в течение 2-х часов с PBS, содержащей 10% козлиную сыворотку, затем клетки инкубировали с мышиными моноклональными антителами к МАР2 (МАР2, "Sigma"). Данные антитела выявляли с помощью козьих антител к IgG мыши, конъюгированных с Alexa Fluor 488 ("Molecular probe)".
Ядра клеток метили флуоресцентным маркером (раствор Hoechst, "SIGMA"). Шесть лунок на условие применяли для анализа выживания нейронов в 3-х различных культурах.
Шесть лунок на условие применяют для анализа выживания нейронов в 3-х различных культурах. Для каждого условия регистрировали 2x10 изображений на лунку и анализировали с помощью InCell Analyzer ТМ 1000 (GE Healthcare) с 20-кратным увеличением.
Результаты
Как было продемонстрировано в приведенной ниже таблице 3, все заявленные комбинации лекарственных средств обеспечивали защитный эффект от индуцированной
Кроме того, фигуры 4-6 показывают, что комбинационные терапии изобретения очень хорошо защищают нейроны от кислородной и глюкозной депривации. Как было продемонстрировано на фигурах 4-6, эффективную защиту наблюдали при применении лекарственного средства в концентрации, в которой лекарственные средства, примененные отдельно, не обладали заметным защитным эффектом. Например, при ишемии наблюдали значительное защитное влияние комбинации баклофена (80 нМ) /акампросата (0,32 нМ) или комбинации цинакалцета (64 пМ) /мексилетина (25,6 пМ) или торасемида (80 нМ) /сульфизоксазола (1,36 нМ), в то же время не получали никакой существенной защиты, если баклофен, акампросат, цинакалцет, мексилетин, торасемид и сульфизоксазол применяли в тех же концентрациях, но раздельно.
Данные результаты, следовательно, демонстрируют мощное и синергическое влияние комбинационных терапий на окислительный стресс и митохондриальные дисфункции или апоптоз, которые лежат в основе ишемического состояния, а также болезни Паркинсона.
В- Нейропротекторное влияние лекарственных средств на вызываемое 6ohda повреждение на дофаминергических нейронах
6-гидроксидопамин (6-OHDA) представляет собой нейротоксическое лекарственное средство, которое избирательно разрушает дофаминергические нейроны в результате генерации активных форм кислорода в клетках. Вызываемая 60HDA токсичность широко применяют в исследованиях паркинсонизма in vitro и in vivo.
Культура мезэнцефалических дофаминергических нейронов
Дофаминергические нейроны крысы культивировали, как описано в работе Schinelli et al. (31). Беременных самок крыс, 15 дней беременности, забивали смещением шейных позвонков (крысы породы Wistar; Janvier) и зародышей извлекали из матки. У эмбрионов извлекали средний мозг и помещали в ледяную среду Лейбовица (L15; "PanBiotech"), содержавшую 2% пенициллина-стрептомицина (PS; "PanBiotech") и 1%
бычьего сывороточного альбумина (БСА; "PanBiotech"). Дня получения клеток применяли только вентральные части изгиба среднего мозга, поскольку именно эта область развивающегося мозга богата дофаминергическими нейронами. Препараты среднего мозга разрушали обработкой трипсином в течение 20 мин при 37°С (Trypsin EDTA IX; "PanBiotech"). Реакция останавливали добавлением модифицированной по способу Дульбекко средой Игла (DMEM; "PanBiotech"), содержавшей ДНКазу 1, степень чистоты II (0,1 мг/мл; "PanBiotech") и 10% эмбриональной сыворотки теленка (FCS; "Invitrogen"). Клетки затем механически разделяли с помощью 3-х серийных прохождений через 10-миллилитровую пипетку и центрифугировали при 180 х g в течение 10 мин при +4°С на слое БСА (3,5%) в среде L15. Супернатант отбрасывали и осадок клеток ресуспендировали в культуральной среде определенного состава, состоявшей из среды Neurobasal ("Invitrogen"), дополненной В27 (2%; "Invitiogen"), L-глутамином (2 мМ; "PanBiotech") и 2% раствором PS и 10 нг/мл нейротрофического фактора головного мозга (BDNF, "PanBiotech") и 1 нг/мл глиального нейротрофического фактора (GDNF, "PanBiotech"). Жизнеспособные клетки подсчитывали с помощью цитометра Нойбауэра, применяя тест на вытеснение трипанового синего. Клетки высевали с плотностью, равной 40000 клетки/лунку в 96-луночные планшеты (предварительно покрытые поли-Ь-лизином ("Greiner")) и культивировали при 37°С в увлажненной воздушной (95%) /С02 (5%) атмосфере. Половину среды заменяли каждые 2 дня свежей средой. От пяти до шести процентов от популяции нейронов составляли дофаминергические нейроны. Влияние 6-OHDA и тестируемых соединений
На 6-ой день культивирования, среду удаляли, добавляли свежую среду, не содержавшую 60HDA или содержавшую 60HDA в следующих концентрациях: 20 мкМ в течение 48 часов, разведенный в контрольной среде. Тестируемые соединения преинкубировали в течение 1-го часа перед внесением 6-OHDA на 48 часов.
Оценка конечных точек: измерение общего числа ТН-положительных нейронов После 48 часов интоксикации под действием 60HDA, клетки фиксировали с помощью раствор 4% параформальдегида ("Sigma") в PBS, рН = 7,3 в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки снова дважды промывали в PBS, и затем пермеабилизовали и неспецифические места блокировали в течение 15 мин при комнатной температуре раствором PBS, содержавшем 0,1% сапонин ("Sigma") и 1% FCS. Затем, клетки инкубировали в течение 2-х часов при комнатной температуре с моноклональными антителами к тирозингидроксилазе, полученными в мышах (ТН, "Sigma"), в разведении 1/1000 в PBS, содержавшие 1% FCS, 0,1% сапонин. Данные антитела проявляли с помощью козьих антител к IgG мыши, конъюгированных с Alexa
Fluor 488 ("Molecular Probes") в разведении 1/800 в PBS, содержавшие 1% FCS, 0,1% сапонин, в течение 1-го часа при комнатной температуре.
Для каждого условия, получали 2 х 10 изображений (представляющих ~ 80% от общей площади лунки) на лунку с помощью InCell AnalyzerTM 1000 (GE Healthcare) с 10-кратным увеличением. Все изображения делали в одинаковых условиях. Анализ числа ТН-положительных нейронов проводили с применением программы Developer ("GE Healthcare))).
Данные выражены в процентах от контрольных условий (нет интоксикация, нет 60HDA = 100%) для того, чтобы выразить вызываемое 60HDA повреждение. Все величины выражены как среднее +/- SEM (стандартная ошибка среднего) из 3-х культур (п = 6 лунок на условие на культуру). Статистический анализ состоял в ANOVA с последующими тестами Даннетта и PLSD Fisher, если было возможно применение программы Statview, версия 5.0.
Результаты
Нейропротекторный эффект наблюдали для комбинаций изобретения в тест на выживание ТН-нейронов после 48-часового вызываемого 6-OHDA повреждения на дофаминергических нейронах.
48-часовая инкубация мезенцефалических нейронов с 6-OHDA (20 мкМ) вызывает значительную интоксикацию дофаминергических нервных клеток (приблизительно -33% ТН-нейронов) во всех экспериментах (контроль, фигуры 7-9).
В качестве положительного контроля применяли BDNF. Предварительная обработка в течение 1-го часа в присутствии BDNF в концентрации 1,85 нМ значительно защищает дофаминергическая нейроны от данного вызываемого 6-OHDA повреждения.
Как продемонстрировано в приведенной ниже таблице 4, все заявленные комбинации лекарственных средств обеспечивали защитный эффект от вызываемого 60HDA повреждения в дофаминергических нейронах.
Как продемонстрировано на фигурах 7-9, баклофен-акампросат, баклофен-торасемид, мексилетин-цинакалцет успешно защищают дофаминергические нейроны от вызываемой 6-OHDA интоксикации, зависимым от дозы образом.
акампросат и цинакалцет
баклофен и цинакалцет
С- Влияние на потерю дофаминергических нейронов in vivo и на двигательные симптомы
Содержание животных и хирургическая процедура
Крыс линии Вистар (5 недель) применяли после периода акклиматизации, занимавшего, по меньшей мере, 5 дней. Операция была выполнена под анестезией с применением кетамина (50 мг/кг) и ксилазина (10 мг/кг). Животные получали одностороннюю инъекцию 12 мкг 6-OHDA ("Sigma-Aldrich"), растворенного в 6 мкл стерильного 0,9%-ного раствора NaCl, содержавшего 0,1% аскорбиновой кислоты (для зашиты 6-OHDA от окисления), со скоростью тока, равной 1 МБЛ/МИН, В левую substantia nigra pars compacta. Стереотаксические координаты места инъекция были следующими: переднезадний + 2,2 мм, латеральный 2,0 мм, спинобрюшной + 3 мм с отметкой на резце на + 5,0 мм выше межушной плоскости, в соответствии со стереотаксическим атласом крысы, предложенным De Groot (1959) (32).
Обработка лекарственным средством(лекарственными средствами)
Первое введение лекарственного средства (или основы) проводили за день перед стереотаксической инъекцией 6-OHDA (для пораженных групп) или основы и на протяжении всех 15-ти дней, предшествовавших поведенческим тестам. При проведении исследования и для каждого животного, объем P.O. введений определяли на основе средней массы тела животных соответствующей группы. Массы тела определяли дважды в неделю и объем введения, таким образом, был соответственно скорректирован.
Основы и соединения вводили два раза в день через P.O. путь, утром и днем; два введения разделяли восемь часов (+/- 30 мин), примерно в 9:30 утром и примерно в 17:30 вечером.
В день проведения поведенческих тестов, лекарственные средства вводили примерно за 1 час для группы, обработанной L-DOPA, и примерно за 2 часа (+/- 15 мин) для комбинации лекарственных средств до проведения поведенческого теста, для каждого животного.
Поведенческий тест
Каждый тест проводили перед осуществлением хирургической операции (за 2 или 3 дня) для определения величины базального уровня. Оценку поведенческой функции выполняли через 15 дней после хирургической инъекции 6-OHDA, применяя два различных теста.
Тест на время инициации: Обученный лаборант закреплял животное напротив
плоской поверхности. Только одной из двух передних конечностей позволяли свободно перемещаться. Время который был необходимо инициировать движение к плоской поверхности регистрировали, применяя 180 сек в качестве точки отрыва (33).
Тест на шагание: Экспериментатор удерживал крысу, и только одну из двух передних конечностей оставляли свободной для перемещения над плоской поверхностью. Другой рукой фиксировали переднюю конечность, которую не контролировали, одна лапа касалась стола. Затем экспериментатор медленно передвигал животное назад или вперед (на 0,9 м за 5 сек). Число упорядоченных шагов подсчитывгиш для правой лапы (33).
Результаты
In vivo анализы проводили с комбинацией лекарственных средств изобретения. Протестированная комбинация лекарственных средств изобретения индуцировала значительное улучшение как в тесте на время инициации или тесте на шагание (таблица 5).
Как проиллюстрировано на фигурах 10 и 11, комбинация лекарственных средств изобретения очень хорошо защищает крыс от вызываемого 60HDA стереотаксического поражения. Примечательно, что лечение комбинацией баклофен-акампросат приводит к почти полному облегчению акинезии в тесте на шагание, зависимым от дозы образом.
REFERENCES
1. de Lau, L.M. and M.M. Breteler, Epidemiology of Parkinson's disease. Lancet Neurol, 2006. 5(6): 525-35.
2. Samii, A., J.G. Nutt, and B.R. Ransom, Parkinson's disease. Lancet, 2004. 363(9423): p. 1783-93.
3. Savitt, J.M., V.L. Dawson, and T.M. Dawson, Diagnosis and treatment of Parkinson disease: molecules to medicine. J Clin Invest, 2006. 116(7): 1744-54.
4. Schapira, A.H. and P. Jenner, Etiology and pathogenesis of Parkinson's disease. Mov Disord, 2011. 26(6): 1049-55.
5. Gao, H.M. and J.S. Hong, Gene-environment interactions: key to unraveling the mystery of Parkinson's disease. Prog Neurobiol, 2011. 94(1): 1-19.
6. Abbott, A., levodopa: the story so far. Nature, 2010. 466(7310): S6-7.
7. Rascol O., Lozano A., Stern M., Poewe W., Milestones in Parkinson's disease therapeutics. Mov Disord, 2011. 26(6): 1072-82.
8. Obeso J.A., Rodriguez-Oroz M.C., Goetz C.G., Marin C, Kordower J.H., Rodriguez M., Hirsch E.C., Farrer M., Schapira A.H., Halliday G., Missing pieces in the Parkinson's disease puzzle. Nat Med, 2010. 16(6): 653-61.
9. Ettmayer, P., Amidon, G. L., Clement, B. & Testa, B. Lessons learned from marketed and investigational prodrugs. J. Med. Chem. 47,2393-2404 (2004).
10. Beaumont, K., Webster, R., Gardner, I. & Dack, K. Design of ester prodrugs to enhance oral absorption of poorly permeable compounds: challenges to the discovery scientist. Curr. Drug Metab. 4,461^185 (2003).
11. Heimbach T, Oh DM, Li LY, Rodriguez-Hornedo N, Garcia G, Fleisher D. Enzyme-mediated precipitation of parent drugs from their phosphate prodrugs. Int. J. Pharm. 261, 81-92 (2003).
12. Yang, C. Y., Dantzig, A. H. & Pidgeon, C. Intestinal peptide transport systems and oral drug availability. Pharm. Res. 16,1331-1343 (1999).
13. Steffansen В., Nielsen C.U., Brodin В., Eriksson A.H., Andersen R., Frokjaer S., Intestinal solute carriers: an overview of trends and strategies for improving oral drug absorption. Eur. J. Pharm. Sci. 21, 3-16 (2004).
14. Stella , Borchardt R, Hageman M, Oliyai R, Maag H, Tilley J, Prodrugs: Challenges and Rewards. Vol. Vol. 1-2. 2007, New York: AAPS Press and Springer.
15. Wermuth, CG. The Practice of Medicinal Chemistry, (tfardbound, 2003). Part VI, Chap 33: Designing prodrugs and bioprecursors.
10.
16. Pezron, I., Mitra A.K., Duwuri S., Tirucherai G.S.., Prodrug strategies in nasal drug delivery. Expert Opin. Ther. Pat., Vol. 12, No. 3 , 331-340 (2002).
17. Stella, V. J. Prodrugs as therapeutics. Expert Opin. Ther. Pat. 14, 277-280 (2004).
18. Stella, V. J. & Nti-Addae, K. W. Prodrug strategies to overcome poor water solubility. Adv. Drug Deliv. Rev. 59,677-694 (2007).
19. Higuchi, Т.; Stella, V. eds. Prodrugs As Novel Drug Delivery Systems. ACS Symposium Series. American Chemical Society: Washington, DC (1975). 31.
20. Roche, E. B. Design of Biopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs. American Pharmaceutical Association: Washington, DC (1977).
21. Lai R., Sukbuntherng J., Tai E. H., Upadhyay S., Yao F., Warren M. S., Luo W., Bu L., Nguyen S., Zamora J., Peng G., Dias Т., Bao Y., Ludwikow M., Phan Т., Scheuerman R. A., Yan H., Gao M., Wu Q. Q., Annamalai Т., Raillard S. P., Koller K., Gallop M. A., Cundy К. C, Arbaclofen placarbil, a novel R-baclofen prodrug: improved absorption, distribution, metabolism, and elimination properties compared with R-baclofen. J Pharmacol Exp Ther, 2009. 330(3): 911-21.
22. Feng Xu, Ge Peng, Thu Phan, Usha Dilip, Jian Lu Chen, Tania Chernov-Rogan, Xuexiang Zhang, Kent Grindstaff, Thamil Annamalai, Kerry Koller., Mark A. Gallop, David J. Wustrow, Discovery of a novel potent GABAB receptor agonist; Bioorg Med Chem Lett. 2011 Nov 1; 21(21): 6582-5.
23. Andrew R. Leach,Valerie J. Gillet. An Introduction to Chemoinformatics. Springer
2007.
24. S. Asad Rahman, M. Bashton, G. L. Holliday, R. Schrader and J. M. Thornton: Small Molecule Subgraph Detector (SMSD) Toolkit, Journal of Chemiinformatics 2009, 1:12.
25. Stahl H., Wermuth C. G. (Eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use. Wiley-VCH; 2 edition (March 29,2011).
26. Hanafi R, Mosad S, Abouzid K, Niess R, Spahn-Langguth H Baclofen ester and carbamate prodrug candidates: a simultaneous chromatographic assay, resolution optimized with DryLab.. J Pharm Biomed Anal. 2011 Nov 1; 56(3): 569-76.
27. Neugebauer G, Besenfelder E, von Mollendorff E. Pharmacokinetics and metabolism oftorasemide in man. Arzneimittelforschung. 1988 Jan; 38(1A): 164-6.
28. Kahle PJ, Waak J, Gasser T. DJ-1 and prevention of oxidative stress in Parkinson's disease and other age-related disorders. Free Radic Biol Med. 2009 Nov 15; 47(10): 1354-61.
29. Lee DW, Rajagopalan S, Siddiq A, Gwiazda R, Yang L, Beal MF, Ratan RR, Andersen JK. Inhibition of prolyl hydroxylase protects against l-methyl-4-phenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridine-induced neurotoxicity: model for the potential involvement of the hypoxia
24.
inducible factor pathway in Parkinson disease. J Biol Chem. 2009 Oct 16; 284(42): 29065-76.
30. Singer CA, Figueroa-Masot XA, Batchelor RH, and Dorsa DMMitogen-activated protein kinase pathway mediates estrogen neuroprotection after glutamate toxicity in primary cortical neurons. J. Neuroscience, 1999.19(7):2455-2463.
31. Schinelli S, Zuddas A, Kopin IJ, Barker JL, di Porzio U. l-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine metabolism and l-methyl-4-phenylpyridinium uptake in dissociated cell cultures from the embryonic mesencephalon. JNeurochem. 1988 Jun; 50(6): 1900-7.
32. Jouve L, Salin P, Melon C, Kerkerian-Le Goff L. Deep brain stimulation of the center median-parafascicular complex of the thalamus has efficient anti-parkinsonian action associated with widespread cellular responses in the basal ganglia network in a rat model of Parkinson's disease. J Neurosci. 2010 Jul 21; 30(29): 9919-28.
33. Olsson M, Nikkhah G, Bentlage C, Bjorklund A. Forelimb akinesia in the rat Parkinson model: differential effects of dopamine agonists and nigral transplants as assessed by a new stepping test. J Neurosci. 1995 May; 15(5 Pt 2): 3863-75.
30.
Таблица соответствия пунктов (и признаков) уточненной формулы изобретения
первоначальным материалам заявки
Уточненный пункт
Первоначальный пункт
Первоначальное описание
Стр. 8, абзац 2
Стр. 8, абзац 2
Стр. 21, абзац 2 снизу
Стр. 21, абзац 2 снизу
Стр. 27, абзац 2, абзац 3 снизу, последний абзац
5, 8
Стр. 26, абзац 3
Стр.27, абзац 2,3
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция для применения при лечении паркинсонизма, включающая, по меньшей мере, два соединения, которые выбирают из акампросата, баклофена, цинакалцета, мексилетина, сульфизоксазола и торасемида, или их соли, пролекарства, производного любой химической чистоты или композиции с замедленным высвобождением.
2. Композиция для применения по п. 1, включающая, по меньшей мере, одну из следующих комбинаций лекарственных средств:
баклофен и акампросат, баклофен и цинакалцет, мексилетин и цинакалцет, торасемид и баклофен, торасемид и сульфизоксазол, баклофен и цинакалцет и мексилетин, цинакалцет и акампросат и мексилетин, баклофен и акампросат и цинакалцет, баклофен и акампросат и торасемид, баклофен и акампросат и мексилетин, или торасемид и баклофен и цинакалцет.
3. Композиция по п. 1 или 2, для применения при лечении болезни Паркинсона.
4. Композиция для применения по п. 3, дополнительно включающая леводопу, или ее соль, пролекарство, производное любой чистоты, или композицию с замедленным высвобождением.
5. Композиция для применения по любому из предыдущих п.п., которая дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
6. Композиция для применения по любому из предыдущих п.п., в которой соединения составляют или вводят совместно, раздельно или последовательно.
7. Композиция для применения по любому из предыдущих п.п., в которой указанную композицию вводят субъекту многократно.
8. Композиция для применения по любому из предыдущих п.п., в которой указанную композиция вводят перорально.
9. Композиция для применения по любому из п.п. 1-7, в которой акампросат, если присутствует, вводят в дозе менее чем 50 мг в день, более предпочтительно, менее
3.
чем 10 мг в день.
10. Композиция для применения по любому из п.п. 1-8, в которой баклофен, если присутствует, вводят в дозе менее чем 30 мг в день.
11. Композиция по любому из п.п. 1-10, для применения при защите дофаминергических нейронов из нигростриарной системы от дегенерации.
12. Композиция по любому из п.п. 1-10, дня применения при лечении брадикинезии или акинезии.
13. Способ лечения паркинсонизма у нуждающегося в этом субъекта, представляющего собой млекопитающее, способ, включающий одновременное, раздельное или последовательное введение указанному субъекту эффективного количества композиции по любому из предыдущих пунктов.
14. Способ по п. 13, в котором нуждающегося в этом указанного субъекта также лечат с помощью глубокой стимуляции субталамического ядра или globus pallidus interna в головом мозге.
15. Композиция или способ по любому из предыдущих пунктов, для применения в профилактическом лечении нуждающегося в этом субъекта и субъекта под угрозой паркинсонизма.
10.
МАЦ10
Контроль Цинакалцет Мексилетин Цинакалцет
+ Мексилетин
Фиг. 1
Контроль Сульфизоксазол Торасемид Сульфизоксазол
+ Торасемид
Фиг. 2
Контроль Сульфизоксазол Торасемид Сульфизоксазол рилузол
+ Торасемид
Фиг. 5
о ¦!
Контроль Цинакалцет Мексилетин Цинакалцет рилузол
+ Мексилетин
СМЕСЬ: БАКЛОФЕН + ТОРАСЕМИД
** *
* * * * # # # * *
СМЕСЬ: БАКЛОФЕН + АКАМПРОСАТ
^ov Оо^ <р л> # o &s? 1/6
2/6
Фиг. 4
1/6
2/6
Фиг. 4
1/6
2/6
Фиг. 4
3/6
2/6
Фиг. 4
4/6
4/6
Фиг. 8
Фиг. 8
5/6
5/6
6/6
6/6
Фиг. 11
Фиг. 11
6/6
6/6
Фиг. 11
Фиг. 11
6/6
6/6
Фиг. 11
Фиг. 11