Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос :  ea201301245a*\id

больше ...
Термины запроса в документе


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к урологии и предназначено для лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых и разработки новых методов лечения и профилактики этого заболевания у людей. Способ лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита включает проведение антибактериальной терапии экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение трех суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см 3 , отделяют и отмывают клетки костного мозга и отмытые аутологичные мононуклеарные клетки костного мозга в объеме 1 мл физиологического раствора вводят в несколько точек паренхимы яичка. Разработанный способ выделения и введения аутологичных мононуклеарных клеток в паренхиму яичка лабораторных животных с целью изучения и внедрения новых методов лечения инфертильности может быть использован для экспериментального лечения этих заболеваний.


МПК: А 61 В 8/00 А 61 В 17/00 А 61 В 35/74
Способ лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита Жедел орхоэпидидимиттщ эсперименталд! моделдеу тэсШ
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к урологии и предназначено для лечения экспериментальной хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых и разработка новых методов лечения и профилактики этого заболевания у людей.
Острое воспаление яичка и придатка (орхоэпидидимит), является одним из наиболее частых урологических заболеваний. Более 27% мужчин на протяжении жизни переносят эпидидимоорхит. Статистические данные о частоте заболевания свидетельствуют об актуальности его изучения с различных точек зрения: патогенетической, диагностической, лечебной, профилактической.
Переход острого орхоэпидидимита в хронический чреват многими последствиям, среди которых наиболее серьёзны нарушение проходимости придатка яичка, развитие склеротического и дистрофического процессов в яичке, что приводит к нарушению репродуктивной функции этих органов на стороне поражения.
Тактика лечения острого и хронического орхоэпидидимита у пациентов строго дифференцирована, в некоторых случаях при остром
орхоэпидидимите выполняют эпидидимотомию, ведущую к декомпрессии органа и уменьшению остроты воспаления, а также проведение консервативного лечения путем антибиотикотерапии и физиотерапии (Чиненный В. Л. Острый эпидидимит в урологической практике -автореферат на соиск. ученой степени канд. мед наук.- 1991.- Москва.- с. 1015). Недостатком известного способа лечения является то, он предназначен для лечения пациентов.
В доступных патентно-информационных источниках информации прототипа способу лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита не найдено.
Задача изобретения - разработка способа лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита, позволяющего эффективно и доступно провести лечение.
Способ лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита, включает проведение антибактериальной терапии экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение трех суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см ,отделяют и отмывают клетки костного мозга, и отмытые аутологичные мононуклеарные клетки костного мозга в объеме 1 мл физиологичнеского раствора вводят в несколько точек паренхимы яичка.
Способ осуществляют следующим образом.
В качестве объекта исследований используют беспородных кроликов, самцов, весом 3-4 кг, которым ранее осуществляют модель экспериментального хронического орхоэпидидимита путем введения в половые органы экспериментального животного бактериальной культуры.
Введение осуществляют в паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл, в качестве бактериальной культуры используют смешанные культуры стафиллокок+стрептококк в титре 10б микробных тел. Клиническую картину экспериментального хронического орхоэпидидимита у экспериментального животного (кролик) определяют на 30 сутки, при проведении патоморфологических и ультразвуковых исследований экспериментальных животных.
На 30 сутки от начала введения в половые органы экспериментального
животного бактериальной культуры и при постановки диагноза
экспериментального хронического орхоэпидидимита на основе
патоморфологических и ультразвуковых исследований подопытным животным проводят антибактериальную терапию цефазолином в дозе 10 мг/кг, затем выполняют забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см отделяют и отмывают клетки костного мозга, и отмытые аутологичные мононуклеарные клетки костного мозга в объеме 1 мл физиологичнеского раствора вводят в несколько точек паренхимы яичка.
Пример выполнения способа. Использовано животное - кролик самец,
весом 3,5 кг. В паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл, в
качестве бактериальной культуры были введены смешанные культуры
стафиллокок+стрептококк в титре 106 микробных тел. Клиническую картину
экспериментального хронического орхоэпидидимита у данного
экспериментального животного определили на 30 сутки, при проведении ультразвуковых исследований. После этого животному провели антибактериальную терапию цефазолином в дозе 10 мг/кг. Затем выполнели забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см3 , отделили и отмыли клетки костного мозга, и отмытые аутологичные мононуклеарные клетки костного мозга в объеме 1 мл физиологичнеского раствора ввели в несколько точек паренхимы яичка.
Результаты гистоморфологического исследования после трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток в паренхиму яичка лабораторных животных.
В материале ткань (паренхима) яичка с нормальной фиброзной стромой без признаков настоящего или прошлого воспаления или его организации. Сперматогенез выражен отлично во всех извитых канальцах - Фиг. 1.
В материале исследования ткань яичка, нормального гистологического строения. Строма яичка нежно-волокнистая, хорошо васкуляризирована, без признаков воспаления или его организации. Во всех канальцах хорошо
выражен сперматогенез (слегка "запустевшие" канальцы единичны: около 5%) -Фиг. 2.
В исследуемом материале ткань яичка нормального гистологического строения. Строма нежно-волокнистая, без признаков воспаления или его организации. Сперматогенез в извитых канальцах выражен хорошо: признаки "запустения" выражены очень слабо (около 10%) - Фиг.З.
В исследуемом материале нормальная ткань яичка. Признаков воспаления или его организации в строме и в паренхиме не обнаружено. Сперматогенез выражен хорошо ("полупустых канальцев около 5%) Фиг.4.
В материале ткань яичка без признаков бывшего или настоящего воспаления в строме и паренхиме яичка, а так же в прилежащих тканях Сперматогенез отличный - Фиг.5.
В исследуемом материале ткань яичка нормального гистологического строения, без признаков воспаления или его организации в строме и в паренхиме. Сперматогенез отличный: "полупустых" канальцев менее 5 %.Фиг. 6.
Результаты гистоморфологии после трансплантации аутологичных мононукларных клеток в паренхиму яичка показывают, что при этом наблюдается положительный эффект, выражающийся в следующем:
- нормализация фиброзной стромы;
- удовлетворительная/хорошая васкуляризация стромы;
- уменьшение "запустевших" канальцев. Таким образом, статистически доказано, что трансплантация аутологичных мононукларных клеток в паренхиму яичка приводят к уменьшению и исчезновению признаков воспаления и, главным образом, улучшает сперматогенез.
Экспериментальным путем установлены нормальные показатели размеров яичек, показателей скорости кровотока, индекса резистентности и пульсационного индекса у лабораторных кроликов после проведенного лечения.
Разработанный способ выделения и введения аутологичных мононуклеарных клеток в паренхиму яичка лабораторных животных с целью . изучения и внедрения новых методов лечения инфертильности и может быть использования для экспериментального лечения этих заболеваний.
Формула изобретения
Способ лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита, отличающийся тем, что проводят антибактериальную терапию экспериментального животного цефазолином в дозе 10 мг/кг веса в течение трех суток, после чего производят забор костного мозга из крыла подвздошной кости экспериментального животного в объеме 5 см отделяют и отмывают клетки костного мозга, и отмытые аутологичные мононуклеарные клетки костного мозга в объеме 1 мл физиологичнеского раствора вводят в несколько точек паренхимы яичка.
Способ лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита
Окрашен гематоксилин эозином.
Фиг. 3 - Извитые канальцы семенника. Окрашен гематоксилин эозином.
Фиг.4- Извитые канальцы семенника. Окрашен гематоксилин эозином. 10
Фиг. 5 - Извитые канальцы семенника. Окрашен гематоксилин эозином.
Фиг. 6- Извитые канальцы семенника.
Окрашен гематоксилин эозином 11
ОТЧЕТ О ПАТЕНТНОМ
В. 04. 2014 ПОИСКЕ
(статья 15(3) ЕАПК и правило 42
Номер евразийской заявки: 201301245
Датаподачи: 04 ноября 2013 (04.11.2013) |Дата испрашиваемого приоритета: 22 августа 2013 (22.08.2013)
Название изобретения: Способ лечения экспериментального хронического орхоэпидидимита
I I Некоторые пункты формулы не подлежат поиску (см. раздел I дополнительного листа) I I Единство изобретения не соблюдено (см. раздел II дополнительного листа)
Заявитель: АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "НАУЧНЫЙ ЦЕНТР УРОЛОГИИ ИМЕНИ АКАДЕМИКА Б.У. ДЖАРБУСЫНОВА"
А. КЛАССИФИКАЦИЯ ПРЕДМЕТА ИЗОБРЕТЕНИЯ:
А61К 31/545 А61К 35/28 А61К9/08 А61Р15/00 А61Р 31/04
(2006.01) (2006.01) (2006.01) (2006.01) (2006.01)
Согласно Международной патентной классификации (МПК) или национальной классификации и МПК
Б. ОБЛАСТЬ ПОИСКА:
Минимум просмотренной документации (система классификации и индексы МПК)
А61К 9/00, 9/08, 31/00, 31/545, 35/00, 35/28, А61Р 15/00, 31/00, 31/04
Другая проверенная документация в той мере, в какой она включена в область поиска:
В. ДОКУМЕНТЫ, СЧИТАЮЩИЕСЯ РЕЛЕВАНТНЫМИ
Категория*
Ссылки на документы с указанием, где это возможно, релевантных частей
Относится к пункту №
US 2013/0053336 Al (UNIVERSITE PARIS DIDEROT PARIS 7 et al.) 28.02.2013, параграф [0024], формула
PLOMP T.A. et al. Treatment of recurrent chronic bacterial prostatitis by local injection of thiamphenicol into prostate. Urology, June 1980, Vol. XV, No. 6, pp. 542-547, особенно, с. 543, 544, кол.2, с. 546, кол.1
АСКАРОВ М.Б. Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка. Автореферат дисс. доктора мед. наук, М., 2009, 2001с, [он-лайн], [найдено 14.03.2014]. Найдено в Интернет:
, с. 5, 11-12
RU 2074716 С1 (ТОПКА ЭЛЬВИРА ГРИГОРЬЕВНА и др.) 10.03.1997, реферат, формула
последующие документы указаны в продолжении графы В
Особые категории ссылочных документов: А" документ, определяющий общий уровень техники "Е" более ранний документ, но опубликованный на дату
подачи евразийской заявки или после нее О" документ, относящийся к устному раскрытию, экспонированию и т.д.
"Р" документ, опубликованный до даты подачи евразийской
заявки, но после даты испрашиваемого приоритета "D" документ, приведенный в евразийской заявке
данные о патентах-аналогах указаны в приложении
более поздний документ, опубликованный после даты приоритета и приведенный для понимания изобретения "X" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий новизну или изобретательский уровень, взятый в отдельности
"Y" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий изобретательский уровень в сочетании с другими документами той же категории
" &" документ, являющийся патентом-аналогом
"L" документ, приведенный в ДРУГИХ целях
Дата действительного завершения патентного поиска:
14 марта 2014 (14.03.2014)
Наименование и адрес Международного поискового органа: Федеральный институт промышленной собственности
РФ, 123995,Москва, Г-59, ГСП-5, Бережковская наб., д. 30-1.Факс: (499) 243-3337, телетайп: 114818 ПОДАЧА
Уполномоченное лицо
Телефон № (499) 240-25-91
О.Шанова
SCIENTIFIC ARTICLES
TREATMENT OF RECURRENT CHRONIC BACTERIAL PROSTATITIS BY LOCAL INJECTION OF THIAMPHENICOL INTO PROSTATE
THE О A. PLOMP, PH.D. LUC BAERT, VI.D. ROBERT A. MAES, PH.D.
From the Centre of Human Toxicology, State University of Utrecht, The Netherlands, and the Department of Urology, Kliniek Maria's Voorzienigheid, Kortrijk, Belgium
ABSTRACT - Twenty-nine patients were treated for recurrent chronic bacterial prostatitis by an injection of 2 Gm. thiamphenicol glycinate via the perineal route directly into the prostate. Escherichia coli was identified as the pathogen responsible for this infection in 83 per cent of the cases. Using this medication locally, cure was obtained in 66 per cent of the patients. Thiamphenicol levels in prostatic fluid varied between 1 and 4,000 p^g./ml. and were unrelated to the time after intraprostatic administration. However, in most cases they were high enough to inhibit most strains of gram-negative bacilli responsible for prostatitis. Serum levels were correlated with the time after injection and decreased over twenty-four-hour observation from 25 to 0.3 fig.ltnl. The pH of the prostatic fluid measured in 24 patients varied from 7.1 to 8.7 with a mean value of 7.9 and was markedly higher than the pH value of 6.5 reported for men without inflammatory prostatic disease. The elevated pH of prostatic fluid could explain the failure of short-term trimethoprim/sulfamethoxazole i Uo-trimoxazole) treatment in our patients. The cure rate of the localized thiamphenicol treatment was higher than was reported with short- and long-term trimethoprim/sulfamethoxazole therapy. We concluded that direct injection into the prostate offers a good alternative for treatment of more resistant chronic infections of the prostate.
Chronic bacteria] prostatitis exists as isolated localized infections in glands of the prostate.1 It may involve only a few of many cryptic prostatic glands and varies widely in clinical manifestation. Some patients have only asymptomatic bacteriuria; most patients experience some degree of irritative voiding symptoms, such as frequency and urgency of urination, nycturia, low back pain, perineal or testicular discomfort, pain on ejaculation, and varying degrees of myalgia or arthralgia.1'5 The hallmark of chronic bacterial prostatitis is a relapsing urinary tract infection due to the same pathogen, in most cases a gram-negative col-ifonn organism which resides in the prostatic fluid Clinical experience has shown that a cure is difficult to achieve with most of the currently available antibacterial agents, even after prolonged usage.1"4
Experiments in the dog prostatic fistula model have demonstrated clearly that most of these agents do not diffuse from plasma into the prostatic fluid in sufficient concentrations to eradicate the infecting organism.6"10 The results of several investigations in dog and man have suggested that an antimicrobial drug effective in chronic bacterial prostatitis should have a lipid soluble base with a dissociation constant (pKa) of 7 or greater, showing a low percentage of binding to plasma proteins, and optimal activity against gram-negative bacteria at the prostatic pjj 6.7,10-12 gucn an antibacterial agent will diffuse readily into the prostatic fluid and even may reach a level several times higher than the
corresponding plasma level in case the prostatic fluid is acid relative to plasma (ion-trapping phenomenon").
Based on these theoretical characteristics as well as on experimental and clinical findings, a variety of antibacterial agents such as the combination of trimethoprim and sulfamethoxazole,10'K!,1J the semisynthetic tetracyclines. minocycline15 and doxycycline;1"'17 the cephalosporin antibiotic, vcefazolin;1B''9 the macro! ide antibiotics, erythromycin and rosamiein;20 the aminoglycosides, streptomycin and kanamy-cin;1" and the chloramphenicol analogue, thiamphenicol,21 have been presented during the last decade as drugs which may be effective in curing infections of the prostate gland. Of these agents the combination of trimethoprim/sulfamethoxazole is currently the first-choice drug in the treatment of patients with chronic bacterial prostatitis. 1,3"5Л2 However, clinical experience revealed that using trimethoprim/sulfamethoxazole or one of the other antimicrobial agents, a permanent cure of prostatic infection was achieved only partly.ьз.-i.12.21.22
Up to now for those patients who did not respond to antimicrobial therapy, the only alternative for cure of this disease was total or transurethral prostatectomy.''* Although total prostatectomy offers a permanent cure, it often results in sexual impotence and high risk of urinary incontinence which render this solution unsatisfactory for the patient. Transurethral prostatectomy can be curative but only if all infected foci are removed successfully during surgery. Clinical experience has shown that only about one third of the patients are actually cured l.iу this form of treatment.14
For these reasons it is obvious that a new mode of medical therapy which may be curative fur patients with recurrent chronic bacterial prostatitis is important. In 1938 Ritter and Lippovv23 reported the use of intraprostatic injection of the antiseptic electrargol (a colloidal solution containing 0.04 per cent silver) by transurethral route as an alternative method for the treatment of this infection. Recently a new procedure based on this old technique was introduced by Baert et a/.24'2i* to treat recurrent chronic bacterial prostatitis. In patients with persistent infection of the prostate after twenty da\s of therapy with trimethoprim/sulfamethoxazole, under rectal control they locally injected amikacin, cefazolin, or gentamicin in combination with cefazolin directly into the peripheral prostate via the perineal route.
In the present study the results of localized treatment with thiamphenicol according to this procedure are reported. Also data on the concentration of thiamphenicol in prostatic fluid and serum and on the pH of prostatic fluid are given. In this study thiamphenicol was chosen because of its broad-spectrum antibacterial activity resembling that of chloramphenicol, its basic character (pKa± 7.2), its low percentage of protein binding (10-20 per cent), its lipid solubility, its excellent diffusibility into body tissues, and its low incidence of serious side effects.M
Material and Methods
Twenty-nine patients with urine and prostatic fluid cultures positive for the same pathogen before and after treatment with 2 tablets of trimethoprim/sulfamethoxazole (Co-trimoxazole) twice a day for twenty days, were selected for injection of thiamphenicol directly into the prostate. The age of the patients varied from twenty-seven to seventy-four years (mean age, 52.5). All patients had a history of recurrent urinary tract infection, in 8 cases accompanied by orchiepididymitis. They all had been treated repeatedly with various antimicrobial agents without success.
The technique used for collecting the urine and expressed prostatic secretion specimens and fin localizing the urinary tract and prostate infections has been described bv Meares and Stamey.2'3 This method is based on quantitative bacterial counts of 3 separate voided urine specimens and 1 expressed prostatic' secretion specimen, respectively. In our investigation, however, the second voided urine specimen (VB2). collected before the expressed prostatic secretion specimen, was replaced by a urine specimen obtained by suprapubic puncture.31 The patients were advised to abstain from sexual intercourse for at least three days before the examination. Two to 3 drops of prostatic fluid were collected and put immediately on dip slides by the physician during prostate massage. This procedure prevents possible contamination of the prostatic fluid specimens and guarantees that all bacteria cultured are pathogenic no matter their number.
Urine specimens were stored in plastic containers, at 4° C. and cultured within four hours. Semiquantitative cultures were performed by surface colony counts on the dip slide culture base after twenty-four hours of incubation at 37° С Bacterial identification was done by standard methods in subcultures.
I'KOUICY |U\t I9H0 • VOLUME XV. N'l'MBIiH 6
543
'A 20-ml. physiologic saline solution, containing 2.0 Gm. thiamphenicol glycinate (Ur-famycine) and 20 mg. lignocaine hydrochloride (2 ml. Xylocaine [1%]) was injected using a long fine needle via the perineal route directly into the prostate lobes. This procedure was performed under rectal control and without general anesthesia. During the procedure the needle was moved several times to obtain maximum distribution of the antibiotic in the prostate gland. Urine and prostatic fluid or ejaculate specimen were examined for infection at one and six months after treatment. If infection persisted after one month, localized treatment was repeated. Negative urine and prostatic fluid cultures at one and six months after treatment, respectively, indicated cure of the bacterial prostatitis.
From 33 patients, samples of serum and prostatic: fluid were collected simultaneously between two and twenty-four hours after local injection of the antibiotic. In 8 cases serum and prostatic fluid samples were obtained also after the second (n = 6) or the third (n = 2) local injection into the prostate. The prostatic fluid specimens were obtained by prostatic massage and were stored at - 20° C, together with the serum specimens, until time of assay.
To pie vent urine contamination of the prostatic fluid, patients were not allowed to urinate tor at least two hours prior to the prostatic massage Thiamphenicol assays were performed using a modified 63Ni electron-capture gas chromatographic method as described by Plomp. Maes, and Thiery.32 These modifications included the use of a different silylating reagent (Tri-Sil) and slightly different gas chromatographic conditions.21 The quantitation of thiamphenicol was performed by referring to a standard curve constructed from values of known amounts of thiamphenicol (0.1-2 fig.) added to thiarnphenicol-free samples of serum and prostatic fluid. All unknown serum (100-500 fi\.) and prostatic fluid (50-100 samples were assayed in triplicate. In those cases in which the assayed serum and prostatic fluid concentrations were outside the range of the calibration curve, an aliquot volume of the final pyridine solution32 was diluted after addition of internal standard solution and silylating reagent with p\ ridinc to 1 ml.
The prostatic fluid pH was measured in 24 of the prostatic fluid samples, used for the thiamphenicol assay. The pH measurement was done using a Radiometer pH meter with a micro-electrode at a constant temperature of 37° C.
Results
The organisms isolated from prostatic fluid and urine specimens of 29 patients after twenty days of treatment with trimethoprim/sulfamethoxazole (80 mg. + 400 mg.) showed the following: Escherichia coli was the most common organism (24 patients); E. coli associated with Klebsiella pneumoniae (1); Klebsiella (2); Paracoli (1); and Streptococcus faecalis (1). The other antibacterial drugs that had been used previously in these patients for the treatment of bacterial prostatitis and/or the associated recurrent urinary tract infection are listed in Table I. For recurrent urinary tract infection most patients received a course of penicillin or nitrofurantoin. Furthermore, 4 patients were not cured after oral treatment with thiamphenicol, and 8 patients did not respond to direct injections into the prostate of 4 Gm. cefazolin alone or in combination with 240 nig. of gentamicin,
The results of the localized thiamphenicol therapy in bacterial prostatitis are summarized in Table II. Nineteen of 29 patients showed negative cultures at one and six months after treatment. Of these patients, 11 were cured after one injection; among them 1 was resistant to oral thiamphenicol therapy, 5 required 2 injections, and 3 obtained sterile cultures after 3 injections. Ten of 29 patients, including 3 cases resistant to oral thiamphenicol treatment, were not cured one to two months after localized therapy. The organism recovered in all patients was similar to that identified at entry. Of these resistant cases, 5 had persistent infection even after 2 injections.
The thiamphenicol concentrations in serum and prostatic fluid at various times after injection of 2 Gm. thiamphenicol glycinate directly
TABLK I. Previous antibacterials used (all failures) in 24 patients
Drug No. of Patients
Ampicillin 10
Nitrofurantoin 9
Gentamicin 6
i Cefazolin* 8
Cefazolin* + gentamicin* 4
Thiamphenicol 4
Amoxicillin 3
Hydroxymethylnitrorurantoin 3
Doxycycline 2
Tetracycline 1
Penicillin 1
•Direct injections into the prostate.
FIGURE 1. (A) Serum and ' B) prostatic fluid c()ru:entrations of thiamphenicol on logarithmic scale versus time after injection of 2 Gm, thiam-phenicul glycinate into prostate.
N..
<
timt (hours)
12 16 20
into the prostate are shown in Figure 1. The serum (n = 40) and prostatic fluid (n = 38) concentration data were obtained from the 29 studied cases and 4 additional cases with symptomatic prostatitis. The relationship of thiamphenicol serum concentration (c) versus time (t) can be expressed by the exponential function С = 25.4083 е'0'1914 < (Fig. 1A).
The elimination half-life (tW) of thiamphenicol in serum after intraprostatic injection was 3.6 hours, and during the twenty-four hours of observation the mean thiamphenicol serum concentration decreased from 25 to 0.3 /otg./ml. No relationship exists between the thiamphenicol prostatic fluid concentration and the time after uitiaprostatic injection (Fig. IB). Large variations in the prostatic fluid concentration were found at any time during the twenty-four hours ot observation, with thiamphenicol concentrations ranging from 1 to 4,000 /ixg./ml. However, irrespective of the time of administration, it can be concluded that effective thiamphenicol levels for most strains of E. coli (MIC 12.5100 /xg./rnl.) are reached in the prostatic fluid of most patients. The pH values of the prostatic fluid, obtained from 24 patients with bacterial prostatitis, ranged from 7.1 to 8.7 with a mean ± S.D. of 7.9 ± 0.4. In 15 of these cases the pH value was between 7 and 8, and in 9 cases higher than 8.
Com merit
A cure of chronic bacterial prostatitis is difficult to achieve with most antibacterial agents because most of these compounds do not diffuse from plasma via prostatic epithelium into the prostatic fluid where the bacteria reside. M Of the antibacterial drugs which are able to penetrate the prostate and kill the persistent bacteria, trimethoprim is the current agent of choice in the treatment of chronic bacterial prostatitis.'•3,4,r> "12 However, clinical studies have shown that after treatment with 2 tablets of trimethoprim/sulfamethoxazole twice a day for two to four weeks only 15 to 33 per cent of the patients were cured permanently of their prostatic infection, and after treatment with the same dosage for twelve weeks a cure of 32 to 50 per cent was obtained.|,а,4л2'22,24
TABLE II. Results of "local" thiamphenicol therapy in bacterial prostatitis
Organisms
No. of Patients
Neg.
Culture*
Relapse t
Recurrent Organism
E. coli 24
E. coli/Klebsiella 1
Klebsiella 2
Paracoli 1
Streptococcus 1
16 1 2 0 0
E. coli
Paracoli Streptococcus
•Negative urine and prostatic Huid culture at one and six months after last treatment.
t Positive urine and prostatic Huid culture between one and two months after last treatment.
UROLOGY
JUNE 1980
VOLUME XV. NUMBER 6
545
• Up to the present time in those patients not responding to the aforementioned therapy, a cure could have been obtained by oral or parenteral treatment with other possibly effective agents such as minocycline, doxycycline, cefazolin, streptomycin, kanamycin, and thiamphenicol'2 !Г' 17,21 or by removal of the infected foci by transurethral resection.'"4 We present a new alternative medical treatment of chronic bacterial prostatitis involving direct injections of thiamphenicol into the prostate. This therapy proved to be effective in controlling prostatic infections in 19 .(66 per cent) of 29 patients (Table II).
To evaluate the cure rate the patients were divided into two groups according to medication used previously. Group 1, 17 patients, had been treated previously with urinary tract disinfectants nitrofurantoin or ampicillin and a standard t h re c-wee к therapy of trimethoprim/ sulfamethoxazole. Group 2, 12 patients, had received besides the aforementioned treatment local injections of cefazolin alone or in combination with gentamicirrr*arra7or intramuscular injection of gentamicin, or an oral course of thiamphenicol or doxycycline (Table I).
In these 2 groups the cure rates were 71 and 5fs per cent, respectively, and they indicate that localized treatment with thiamphenicol is about as effective in the uncomplicated as in the more resistant cases of chronic bacterial prostatitis. Compared to the reported cure rates after shortage! long-term therapy with trimethoprim/ sulfamethoxazole,1 ¦3,4.12.22.24 our cure rate may
be considered to be favorable. Further, the cure rate after local injection of thiamphenicol was comparable to that obtained in 10 patients with chronic bacterial prostatitis after oral treatment i500 mg. of thiamphenicol, 3 times a day for six weeks).21 It should be noted that in the latter case, first, a smaller number of patients had been treated, and second the patients received onK trimethoprim/sulfamethoxazole before the thiamphenicol therapy was initiated and therefore should be regarded as uncomplicated cases.
Concerning the organisms causing bacterial prostatitis, our study clearly indicates that gram-negative organisms are responsible primarily for this infection. In 83 per cent of our cases the infection was due to various strains of E. coii and to Klebsiella, Paracoli, S. faecalis, and a mixed infection of E. coli/Klebsiella in the remaining 17 per cent. These findings are in agreement with the results reported by Meares and Stanley,2 implicating E. coli as the most common pathogen in chronic bacterial prostatitis. In our study prostatic fluid levels indicate that no relationship exists between the thiamphenicol concentration in prostatic fluid and the time after injection into the prostate.
The high variations in prostatic fluid concentrations at any time may be explained by the fact that in each case of chronic bacterial prostatitis different degrees of inflammation of the prostatic tissue are likely to be encountered, resulting in variable diffusion into the prostatic fluid. Also in each patient complete application of the antibiotic only in prostatic tissue is not always feasible, consequently resulting in lower attainable levels in prostatic fluid. The minimum inhibitory concentration (MIC) of thiamphenicol for most strains of E. coli ranges between 12.5 and 100 /u.g./ml.3u Comparing these MR] values to the observed prostatic fluid levels (Fig. IB), it may be concluded that after local injection effective levels are reached in most cases.
Data on the prostatic fluid level after intravenous (IV) administration of 2 Gm. thiamphenicol glycinate are not available. However, a mean ejaculate thiamphenicol concentration of 2.3 /xg./ml. at two hours after a single oral administration of 500 mg. of the drug and a mean prostatic tissue level of 32 /Ltg./Gm. at forty-five minutes and of 6 /xg./Gm. at two hours, respectively, after injection of 1 Gm. were reported previously.21,33 From these data a prostatic fluid concentration of about 10-20 /u,g./ml. at two hours after IV injection of 2 Gm. of the antibiotic can be expected, which in most cases is considerably lower than the levels obtained after local injection of the same dose (Fig. IB).
After intraprostatie injection of 2 Gm. of thiamphenicol glycinate the mean serum level decreased from 17 /u.g./ml. at two hours to 0.3 /Lig./ml. at twenty-four hours (Fig. 1A). Intravenous administration of the same dose to adults with normal renal function resulted in comparable serum values at the same times. On these grounds it may be suggested that after injection into the prostate a rapid diffusion from prostatic tissue to blood takes place.25 In our cases of chronic bacterial prostatitis a mean pH of 7.9 of the prostate fluid was observed. This value was in agreement with the mean pH of 7.7 and 8,1 in patients with chronic bacterial prostatitis reported by Blacklock and Beavis11 and Pfau and Sacks,12 respectively. Comparing these mean pH values with the prostatic fluid pH of 6.5 found in dogs and normal men, it may be concluded that the presence of infection and
inflammation of the prostate causes a significant elevation of the prostatic fluid pH and in turn a high alkaline pH may serve as an indication of a prostatic- infection.6,7
In addition the elevated prostatic fluid pH ma\ be used to explain failure of short-term trimethoprim/sulfamethoxazole treatment to cure chronic bacterial prostatitis. By elevation oi the prostatic pH as observed in our patients, the previous pH gradient between the plasma and the prostatic fluid is abolished or even may be reversed. In such a case a lipid soluble base with a pka of 7.4, like trimethoprim, no longer will be able to concentrate adequately in the prostate lion-trapping phenomenon") and even may reach a higher concentration in the plasma. Consequently no cure will be obtained since the attained trimethoprim levels then will be insufficient tor the eradication of gram-negative bacteria in the prostatic fluid.
Finally, in our opinion, the new localized thiamphenicol treatment has several advantages over the currently most used long-term trimethoprim/sulfamethoxazole treatment: direct presence of highly active antibiotic concentration at the site of infection, minimal incidence of side-effects, no limitation of concentration in prostatic fluid of high alkaline pH, and no possible inactivation of the antibiotic by metabolism in the body. The pain and discomfort experienced by the patients during direct injection into the prostate were minimal and were comparable to that observed after intramuscular injection.
The data of the current study have demonstrated that thiamphenicol enters the prostatic fluid in therapeutic levels after direct injections into the prostate and is curative in 66 per cent of the cases of resistant chronic bacterial prostatitis. Therefore we recommend this as treatment of choice for chronic bacterial prostatitis, especially for the more resistant cases. The effectiveness of local thiamphenicol injections in cases that are resistant to oral therapy with the druti is questionable, and in these cases local treatment with other antibiotics is advisable,
3521 GE Utrecht, The Netherlands (DR. PLOMP)
UKSOWLEDCMENT. The technical expertise of Mrs. W <' \ an I litniarsch.
References
I Uracil GV\ Prostatitis man s hidden injection. Urol, Clin. North \m 2: 499 : 1975). j Mr.irrs KM jr am! Stamo\ ТА The diagnosis and management of bacterial prostatitis, Br. J. Urol, 44: 175 (1972).
3. Meares EM Jr: Prostatitis, a review, Urol. Clin. North Am.
2; 3 (1975)
4. IOKM: Prostatitis, diagnosis and treatment, Drugs 15: 472
0978),
5. Berkow R; The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 13th ed.. Railway. N.J . Merck Co.. Inc.. 1977, p, 719.
6. Stamey ТА, Meares EM Jr, and Winninghajn DC: Chronic bacteria] prostatitis and the diffusion of drugs into prostatic Huid, J, Urol. 103: 187 (1970)
7 Winningham DC. and Stamey ТА: Diffusion of antibiotics from plasma into prostatic fluid. Nature 219: 139 |1968).
8. IDKM: Diffusion of sulfonamides from plasma into prostatic fluid, J. Urol. 104: 559 (1970).
9. Hessl JM, and Stamey ТА: The passage of tetracyclines across epithelial membranes with special reference to prostatic epithelium, ibid. 106: 253 (1971).
10. Reeves DS, and Chilchick M. Secretion of the antibacterial
substance trimethoprim in the prostatic Huid of dogs, Br J. Urol.
42: 66 il970).
11 Black-lock Nj, and Be avis, JR The response of prostatic Hind pH in inflammation, ibid. 46: 537 ,1974).
12 Pfau A, and Sacks T: Chronic bacterial prostatitis new therapeutic aspects, ibid. 48: 245 [1976).
13. Oosterlinck W. Defoort R, and Renders C: The concentration of sulphamethoxazole and trimethoprim in human prostate-gland, ibid. 47: 301 (1975).
14. Dabhoiwala NF, Bye A, and Clardige M: A study of concentrations of trimethoprim-sulphamethoxazole in the human prostate gland, ibid. 48: 77 (1976).
15. Hensle TW, Prout GR, and Griffin D. Minocycline diffusion into benign prostatic hyperplasia, J. Urol. 118: 609 (1977).
16 Fabrc J. et al: La cinetique des tetracyclines chez 1'hommc, Schweiz. mod. Wschr. 101: 625 (19711.
17. Games HA: Doxycycline levels in serum and prostatic tissue in man. Urology 1: 205 (1973).
18. Litvak AS. et al: Cefazolin and cephalexin levels in prostatic tissue and sera, ibid 7: 497 (1976)
19 Suzuki К el al- Diffusion of antibacterial drugs into human prostatic fluids. Proceedings of the 10th International Congress of Chemotherapy. Zurich, 1978. p. 412.
20. Bauinueller A, Hoyme U, and Madsen PO: Rosamicin, a new dnig for the treatment ot bacterial prostatitis. Antimicrob. Agents Chemother. 12: 240 (1977).
21. Plomp TA, Mattelaer JJ. and Maes RAA The concentration ot thiamphenicol in ejaculate and prostatic tissue, J Antimicrob, Chemotherap. 4: 65 (1978).
22 Paulson DE. and Dcvcre White R: Trimethoprim-sulfamethoxazole and minocycline hydrochloride in the treatment of culture-proved bacterial prostatitis, j. Urol. 120: 184 (1978).
23 Hitter SJ, and Lippow C: Pathological and bacteriological processes present in prostatitis and tissue reaction lo therapy. ibul. 39: HI (1938)
24 Baert L Soep H and Pyck J Chnmische bacteriele Prostatitis, Tschr geneesk. 16: 794 (1975).
25 IDEM. Chronic bacterial prostatitis, Ann. Urol 10: 39 (1976).
26. Baert L Bacterial prostatitis treated b\ local antibiotics, let-
ter to the editoc Urology 8: 644 (.1976).
27 IDKM Bacterial prostatitis and its present treatment. Arm Urol 11: 275 11977)
28. IDLM: Direct antibiotic injection clears most prostatitis. Family Prat. News 7,- 57 1.1977/.
29. IDEM: A reappraisal of treatment in chronic bacterial prostatitis, letter to the editor, J. Urol., in press.
30. Farrari V: Thiamphenicol, experimental and clinical basis of a new antibiotic, Zambon S.p.A., Milan, 1968.
31. Baert L: Urine ;uialysis, estimation of residue and cystography using the suprapubic approach, Ann. Urol. 7: 83 (1973),
32. Plump ТА, Maes RAA, and Thiery M: A rapid-gas chromatographic determination of thiamphenicol in plasma and amniotic fluid, J, Chroinatogr, 121: 243 (1976),
33. Plomp ТА, Schalkhauser KM, and Maes RAA: Concentration uf thiamphenicol in the human prostate and testis, Chemotherapy 25: 254 1979)
28.
28.
HHOU'CY J (INK 1980 VOLUME XV. NUMBER b
547
4!>
оисч диссертации
Способы оплаты
ЬССП.'МТмые
тпсоертации
диссертации jl!13 i ода доступны для заказа
i.aO/'.iv.OKa чо1 кони 1лась до'.сар | ациями .'о:.: года
В библиотеку поступили диссертации 2011 года
> Гт; I !ОНиаЯ
библиоека диссертаций VI ic-po b Oooylo г
Ьисдрен индекс паучиои
Научная электронная библиотека ¦ Медицинские науки Трансплантология и искусственные органы
Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв
желудка
* t с ^ es> е* s
Мег."о защиты диссертации! Код специальности ВАК: Специальность: ТРЛН сп л а
Количество страниц: со-
Оглавление диссертации
доктор медицинских vк Лгкопов, Мана
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ, ПРИНЯТЫХ В ТЕКСТЕ. ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. БОЛЕЗНЬ ЖЕЛУДКА И
ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ .• КАК ДИЗРЕГУЛЯЦИОННАЯ
ПАТОЛОГИЯ ОРГАНИЗМА (обзор литературы).
1.1.Ведущая роль дисбаланса в развитии и
> о .:!?11ПцН;.| язв гастродуоденальной зоны.
1.1.1 .Нарушения и клеточного звена иммунной
системы при ¦ 'поражениях слизистой оболочки
гастродуоденальной зоны
1.1.2. Ци т( .-к -мнов! .и:- механизмы в иммунопатогенезе
гастродуоденальных • .
1.1.3. Роль оо. .¦• в регуляции тканевого гомеостаза и
.:...!> ,. язвенной оолезни.
1.2.Значение с v-.-.. v, ., механизмов в патогенезе язвенной
12 1^ 1 реакции и ульцерозный процесс.
1.2.2. Связь аутоиммунных реакций с нарушениями
v.: ом:с v п 'Ч:с! в слизистой оболочке желудка. 1.3 Регуляторные пептиды в комплексном лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.
ч > 1 1 ч-
< ' о
Имплантация ИОЛ при первичной хирургической обработке проникающего ранения глазного яблока
Комбинированная анестезия с применением клофелина при абдоминальном родоразрешении у рожениц с гестозом
Научное
обоснование
мероприятий по
совершенствованию
управления
клинико-
экспертной
деятельностью
муниципальной
системы
здравооранения
(на примере
амбулаторно-
поликлинических
учреждений
города Хабарове
Выбор способа желчеотведения при раке органов гепатопанкреатоудена зоны,
ослажненном механической желтухой
Прогностическая значимость клинических и электрофизиологиче" показателей в течение ишемической болезни сердца
нр: \\ \ v\\ .elissci'Ccit.сС)т/сс> п1сnt/trЈinsplcintcitsiv^-cicitolоiсhпуkh-l-c 1 ctoR-l*costiro^o-n'ioz.Lici-... 14.03.2014
цитируемое(tm) ок.-. i о и дно еимцпи
Ар* и и новоеiей
1 АВозможности применения ;сд:-';ж костного мозга для
лечения • незаживающих, трудно рубцующихся язв
- ¦ и двенадцатиперстной кишки.
1.4.1. Факторы регуляции, выделяемые клетками •-..".: д мозга для индукции восстановительных процессов в
'Ч5":йкн.:ь:> органах.
1.4.2. Мульг и-до oil-: Hive мезенхимальные стромальные клетки костного мозгз - как биорезерв тканевой регенерации. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Общая характеристика экспериментального и
• .¦•: .'-.> , - -.-о материала.
2.2. Технология получения и ведения культур клеток костного
мозга.
2.2.1. Технология получения, культивирования и подготовки для гранопоантодои мононуклеарной фракции клеток костного мозга.
2.2.2. Технология получения, культивирования и подготовки для трансплантации ¦ .д. • идо н.-итчых мезенхимальных стромальных клеток костного мозга.
2.3. Технология моделирования длительно с '.')'* одд.дс -> ,-
аутоиммунной язвы желудка у крыс.
2.3.1. Подготовка животных к материала и
приготовление водно-солевого для моделирования
длительно незаживающих аутоиммунных язв желудка;
Подготовка животных к моделированию ilr'-i" и
анестезиологическое обеспечение.
2.3.2. Техника моделирования длительно незаживающей
. . •¦!•.; . ЯЗВЫ ЖелуДКЭ.
2.4. Техника трансплантации клеток в зону язвы желудка.
2.5. Методы исследования.
2.5.1. Методы культуральных исследований.
2.5.2. Методы идентификации клеток после трансплантации в зону язвенного дефекта.
2.6. Морфологические, биохимические и инструментальные
методы исследования состояния зоны язвенного дефекта.
2.6.1. Оценка регенерации язв.
2.6.2. Оценка апоптоза д -- - мддпдндд < клеток в слизистой оболочке желудка.
2.6.3. Оценка системы " ^• •гд-и !! - циклические
нуклеотиды" в с-:: . д оболочке желудка.
2.6.4. Оценка состояния ¦. -д ¦••> <¦¦¦¦;> <, ч.торного русла слизистой
оболочки желудка.
2.6.5. Электронно-микроскопическая оценка структурно-
функциональных особенностей в слизистой
оболочке желудка больных с язвенной и животных с
длительно ' аутоиммунными язвами желудка.
2.7. Исследования иммунного ( ) статуса
организма.
2.7.1. ддчг.-!..- д ¦: ¦ ¦¦ изучение слизистой оболочки желудка.
2.7.2. Оценка ддддддрх '-сд,1д..!...!дHTTP://www.eapatis.com/getdocument.asp?Document=//eapatis2012/Data/EATXT/,дгд состояния органов иммунной системы.
2.7.3. Исследование цитокинового статуса в сыворотке- крови.
2.8. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. ПРЕКУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА -КАК СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ И г У/ дТДДДт'дд АКТИВНОСТИ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ
Особенности
клинического
течения и
эффективность
лечения больных
туберкулезом
органов дыхания
с первичной
лекарственной
устойчивостью
возбудителя
Тактика
хирургической
коррекции редких
аномалий
магистральных
сосудов и
коронарных
артерий в
сочетании с
врожденными
пороками
Структурно-функциональные изменения эритроцитов у больных ИБС с поздними осложнениями сахарного диабета и их коррекция эссенциальными фосфолипидами
Оценка
эффективности
хирургического
метода локальной
химической
деструкции
доброкачественных
узловых
образований
щитовидной
железы
Ультразвуковые критерии диагностики и оценки лечения хирургических заболеваний пахово-мошоночной области у детей.
М13ЕНХИМ А ЛЬНЫХ ' -oiAilbHb'-, КЛЕТОК АУТОЛОГИЧНОГО KUC Tl ЮГО МОЗГА.
3 ! Фенотипическая характеристика мультипотентных
стромальных клеток костного мозга крысы
(определение однородности культуры ММСК),
предназначенных для : ¦ •¦ ¦> ,¦-,.,. ......... лечения язвенной
болезн и.
3/. Культивирование как способ восстановления функциональной активности клеток ?уч'.пг-о ,-оното костного мозга у животных с длительно незаживающими - ню язвами.
ГЛАВА 4. МЕСТНЫЕ И СИСТЕМНЫЕ г: -1 О;? 'НЕТИЧГ. м-'Е НАРУШЕНИЯ В ОРГАНИЗМЕ ПРИ ФРМИРОВАНИИ ДЛИТЕЛЬНО
АУТОИММУННЫХ ЯЗВ ЖЕЛУДКА.
4.1 •: о> аутоиммунной язвы желудка.
4.Z. эпителиоцитов в слизистой оболочке желудка как
индикспор . течения аутоиммунных язв желудка.
4. -.. Нарушения микроциркуляции при моделировании
о vтоиммунных язв желудка.
4 4 системы "простагландины - циклические
нуклеогиды" при <
4 3. . ¦-.-..¦Phin дисбаланс как фактор развития и
хроьизации язвенной болезни.
4 о. . о.¦ состояние органов иммуногенеза в
процессе развития длительно незаживающей аутоиммунной
язвы желудка.
17. с эффект лимфоцитов в слизистой
ооолочке желудка при длительно незаживающей !> ¦тоиммунной желудка.
0 3 Аутоиммунные факторы в патогенезе длительно |-н-:мживающих экспериментальных язв желудка. ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ КУЛЬТИВИРОВАННЫХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА НА ЗАЖИВНЕИИЕ ДЛИТЕЛЬНО НЕЗАЖИВАЮЩИХ АУТОИММУННЫХ ЯЗВ ЖЕЛУДКА. 3.1. Влияние ММСК и МНК аутологичного КМ на динамику язв и морфологическое состояние слизистой сеч "точки желудка.
5. ; Влияние ММСК КМ на активность апоптоза :-;стзс- о? ;.
в слизистой оболочке желудка в динамике ••-.,c..,.;.,v.
3. 3 Влияние ММСК КМ на систему "простагландины -
циклические нуклеотиды" в регуляции процессов регенерации
и ¦• /к :ои в слизистой оболочке желудка.
ГЛАВА б. ВЛИЯНИЕ ММСК И МНК КМ НА КОРРЕКЦИИ > ИММУННОГО ДИСБАЛАНСА ПРИ ДЛИТЕЛЬНО НЕЗАЖИВАЮЩИХ АУТОИММУННЫХ ЖЕЛУДКА.
с 1. Морфофункциональное состояние животных при
цлио-льно незаживающих аутоиммунных язвах желудка и грат плантации ММСК КМ
<.> ,/ Морфофункциональное состояние ., е.. животных при длительно незаживающих аутоиммунных язвах желудка при трансплантации ММСК КМ
ОТ ¦¦:¦¦ <..;'' цитокинового дисбаланса при длительно незаживающих аутоиммунных язвах желудка и трансплантации ММСК КМ.
6.4 Морфофункциональное состояние тимуса животных при длительно незаживающих язвах желудка и трансплантации
МНК км.
3.5 Морфофункциональное состояние селезенки животных при длительно незаживающих язвах желудка и трансплантации МНК КМ.
Коррекция цитокинового дисбаланса при длительно незаживающих аутоиммунных язвах желудка и ртзг сплантации МНК КМ
ГЛАВА 7. ВЛИЯНИЕ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА НА НЕОАНГИОГЕНЕЗА И ВОССТАНОВЛЕНИЕ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНОГО РУСЛА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ
ЖГЛУДКА
/Л. Динамика показателей микроциркуляции и зноиогене^ в слизистой оболочке желудка при длительно незаживающих аутоиммунных язвах желудка и трансплантации ММСК КМ. / 2. Динамика показателей микроциркуляции и ангиогенеза в 0'1п-;иотой оболочке желудка при длительно незаживающих ц> тоиммунных язвах желудка и трансплантации МНК КМ.
Введение диссертации (часть автореферата)
В последние 10-15 лет в связи с развитием клеточных
технологии и пробудившимся в мире интересом к
["-•генерационным возможностям cococ .-о клеток костного
Мозес появилась возможность их легитимного применения у
сольных с тяжелой - .> - лее о cv. патологией. Клеточные
биотехнологии стали использовать для лечения > : или
лронической сердечной недостаточности [Шумаков В.И и др.,
з из. ,ло04; Assmus В. et al., 2002], ряда гнойно-септических и
заболеваний [Витязев Г.А., 1993; Шумаков В.И
и ,-зр. 1995, 1998; -. ¦ е- ;е,- ... Н.А и др., 2006], острой и
хронической : с о..- ;,i недостаточности разного генеза
[Parelclcadan В. et al., 2007], длительно незаживающих язв,
ран и [Колосов Н.Г и др., 2000, ' М.Ф., 2007;
Badoivas Б. et al., 2003] и др.
Для • с трансплантации используют
;снммол ическую или сромопыток- фракции клеток
ау нелогичного костного (КМ), которые содержат
стволовые и клетки [Kusmartsev S. et al., 1998;
"lerrazas L. et al., 2001; Caplan A. et al., 1997]. Эффективность
•ото. клеток KM обусловлена иммунорегуляторной
активностью, выделяемых ими о - о е . ... пептидов
| lerrazas L. et al., 2001]. Эффективность е> от vP фракции
клеток КМ, обусловлена не только тем, что эти клетки
широкий спектр цитокинов и ростстимулирующих
рако[)ов, но и тем, что являясь предшественниками
мезенхимальных стромальных клеток
(ММСК), они способны активно ¦¦ в культуре,
дифференцироваться в . > клетки других
фенотипов и непосредственно участвовать в процессах - с- регенерации поврежденных тканей [Потапов И.В и др., 2005; Amado L. et al., 2005; Parelclcadan В. et ас, 7007; Caplan A. et al., 2008]. Кроме того, известно, что КМ могут участвовать в регуляции диф.'ре Т-клеток, вызывают супрессию пролиферации
клеток (цитотоксических Т-лимфоцитов, натуральных ), а также, ограничивают дифференцировку дендритных клеток [ Fa На ri no F. et al., 2002; Aggarwal S.,
2005], способствуя ингибированию системной
- реакции. Именно благодаря регуляторным
аффектам пептидов, продуцируемых клетками КМ, оказалось
оправданным их применение при лечении многих ¦ : • > "> ""
заболеваний, сопровождающихся угнетением репаративных
процессов, > дизрегуляцией и развитием вторичного
[Шумаков В.И и др., 2004; л. лоз М.Ф., -"о . Parekkadan В. et al., 2007].
К таким заболеваниям относится и (.о.-л-о.) болезнь (ЯБ) желудка и З:-.от:' ле-ерст ной кишки (ДГЖ), поиск путей повышения эффективности лечения которой является по -прежнему актуальной задачей современной лодиоиоо,, ибо ЯБ .полется одним из самых распространенных и социально значимых хронических рецидивируй-д.о-ы заболеваний желудочно-кишечного тракта по срокам временной и стойкой ¦¦• ¦¦¦ < о [Ивашкин В.Т., 2004., Васильченков А.В., ЛНл'о ¦ . . М.П и др., 2009].
При ЯБ л с", с и ДПК имеет место местный ¦¦счмунмь.п
дисоаланс, в результате чего начинает реализовываться
паоченное действие Helicobacter pylon (Hp), которые часто (до
80-90 > о) "ы со, инфицируют слизистую желудка и ДПК
[Мансуров Х.Х., 2005; Васильченков А.В., 2006; Borody Т., 2002], но в условиях иммунодефицита предопределяют течение заболевания [Логинов А,С, 1998; Я.С, 2000].
Пораженная зело в области язвенного дефекта настолько
изменяет индивидуальную биологическую принадлежность,
чю приобретает свойства -ггуз-т.зен: [Чернин В.В., 2000], а
о ,оюьиях иммунодефицита становится фактором активизации
л аутоиммунных процессов, отягощающих
юление заболевания и развитие з-ы злл : .¦, [Кириченко Б.В.,
1990]. Дизрегуляция иммунной системы поддерживает
деструктивно-воспалительные изменения в зоне чзвепно'О
дефекта и ингибирует пролиферативно-репаративную фазу
лл1: о процесса, что связано с нарушением не
'слько синтеза структурных белков, но и синтеза молекул
взаимодействия (пептиды) [Потапова В.Б.,
ооОлР В этой связи, для улучшения результатов лечения через
устранение • \ '•- с; - иммунной системы при ЯБ стали
использовать пептиды , доставляемые в организм
больного путем > подключения донорской
евиной селезенки ( com ) или в виде нативных пептидов из
| ползнки свиньи ( ) [Васильченков А.В., 2006], и
клеток КМ ( ) [Михайлова Л.П., 1998]. Однако
¦ 4 о подключение донорской селезенки свиньи
:;;,гзано с организационными трудностями заготовки
материала, а также с о л л¦, - ио. ч .лото
проблемами и опасностью переноса трудно отооо-чпооло
инфекций у животных. Применение нативных пептидов
(Спленопид, Миелопид) ограничивается их ксенногенным
происхождением, а таюке необходимостью курсового
осеменения , производство которых имеет
сл раниченные масштабы и пока не может обеспечить
пел ребности всех больных. Кроме того, все еще присутствует опасность переноса трудно диагностируемых по :л с.,00.
Для клеточной л с лс ЯБ желудка и ДПК использовали
:.чл1.' фетальных клеток печени, селезенки и
[С.трункин Д.Н. и др. 2000J. Однако применение клеток остается нелегитимным в связи с нерешенностью этических и юридических проблем "о:л'> оло и использования этого материала.
Выше изложенные ограничения побудили нас для с ¦ устойчивого заживления хронических язв желудка через оегуляцию местных и системных л;- л- механизмов Р nip пивного морфогенеза -использовать регенерационные ж г м in стволовых клеток, и прежде всего, ММСК КМ, из-• м +.юхти их легитимного и лес применения.
Однако, приступая к этим исследованиям, мы не обнаружили работ, касающихся применения клеток
аутологичного коии.го мозга для лечения длительно
язв желудка. Кроме того, мы не только не
обнаружили сведений о влиянии клеток костного мозга на
1..' с о. ол от о показателей ;тлзл."лг . (цитокинового) статуса
онанизма и на связь иммунного (лелз:. олзе-л;'") дисбаланса с
';оо'гсянием регенераторных I процессов в ¦ ¦> ¦¦¦;."¦ оболочке
желудка, но и не обнаружили адекватной модели аутоиммунных длительно незаживающих язвлжелудка для изучения этих вопросов.
Оюутствие в литературе выше указанных сведений и важность учета их для разработки эффективной терапии дмигельно незаживающих язв желудка позволили нам сформулировать цель и задачи настоящего исследования. Цель
Рыучигь и обосновать целесообразность ые-:-. в
.ллзиоую оболочку желудка мультипотентных
..¦¦> .!¦ о стромальных клеток и мононуклеарной фракции клеток аутологичного костного мозга для тле'юз нения устойчивой регенерации длительно незаживающих язв желудка Задачи исследования:
1. Создать модель длительно не> йжиь.> ч:ндзл аутоиммунной язвы желудка, изучить лгл-о <нопз> 'лтт ; е..з> ;..-! механизмы !зазвития язвенной болезни и выбрать наиболее ос| ормз I ивные показатели для контроля эффективности клепочной терапии длительно незаживающих язв желудка.
Отработать технологию выделения клеток из то, юлогичного костного мозга, идентифицировать в культуре получение мультипотентных мезенхимальных от.cit.siN> к.зе ок (ММСК) и показать целесообразность их лре/\варительного культивирования у больных животных для всозлоиовления функциональной и активности этих клеток.
Изучить особенности процессов регенерации длительно незаживающих аутоиммунных язв желудк.ч (,. no-) при трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных и • .. .о клеток (МНК) ау юло1 ичного костного мозга.
4. Показать на моделях ДНЯЖ взаимосвязь активизации • - процессов в язве желудка с присутствием в
ней ¦..';"о н:у клеток.
:. Изучить влияние ММСК костного мозга на состояние
¦ оHTTP://www.eapatis.com/getdocument.asp?Document=//eapatis2012/Data/EATXT/or.о'зоио русла, содержание биологически
активных веществ (> ¦ п2) и циклических нуклеотидов, а также
но эпителиоцитов в слизистой оболочки желудка при
ДНЯЖ и клеточной терапии.
Установить влияние клеток аутологичного костного
м'.нл о на . - л . иммунного (цитокинового) статуса и
восстановление ' ' л. очно* компартментов
злил -нов иммуногенеза (тимуса и селезенки) у животных с дли1ельно от ...¦! и • ¦;•/ чцолл аутоиммунными язвами при о со! о мной терапии.
/ Установить предпочтительность использования . овироб.:д л !|-"л мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток или мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга в качестве наиболее
¦флективного средства гл. *;¦:¦¦¦¦•¦,!¦ о-ч . ¦ терапии у больных с
дли сльно незаживающими • ¦""¦, язвами желудка и
лв...- .цдцатиперст ной
Научная новизна. В настоящей работе, выполнявшейся в рамках программы "мкмсчнае технологии - медицине" по заданию "л лл л: (регистрационный номер - 01.2.00 305442) впервые представлены гштогенетзлеч з.,з обоснованные результаты применения прекультивированных клеток аутологичного костного мозга для эффективного лечения длительно незаживающих аутоиммунных язв желудка.
Зоовые разработана модель длительно исхаживающей язвы желудка, позволяющая изучить •и г-..и. .патологические механизмы развития хронической с .-, в слизистой оболочке желудка и влияние на них клеточной
3 |3,Л! 0111.
Впервые в эксперименте для ускоренного зозооолл'оз • п.,иммунных ДНЯЖ применены культуры мультипотентных л.. зенхимальных стромальных и мононуклеарных клеток ау юлогичного костного мозга и выявлена предпочтительность (более высокая эффективность) ММСК.
Показано, что при использовании клеток аутологичного
кон гиого мозга при лечении ДНЯЖ необходимо проводить
с "рдваоительное культивирование этих клеток для
восстановления их биорегуляторной активности;
ингирированной -конским заболеванием. Установлен
оптимальный срок культивирования ММСК костного мозга (9-
П- .) при котором восстанавливается до нормы
о-.оо лл баланс и пролиферативная активность клеток. С
помощью рекомбинантного аденовирусного вектора
(содержащего LacZ ген E.coli), внедренного в клетки
. ММСК) на этапе культивирования, доказано,
чю ускорение темпа регенерации ДНЯЖ после трансплантации клепок костного мозга связано с присутствием и функционированием (продукция факторов роста, оонпоз) их в юне язвенного дефекта (в сроках не менее 30 суток).
yv гановлено, что аутологичные .-. сен
ММСК КМ, трансплантированные в зону язвенного дефекта
¦ ¦ к ряюг процессы регенерации ДНЯЖ (сокращение сроков и
деструктивно-воспалительной фазы и
1", щвшации пролиферативно-регенераторной фазы язвенного
процесса) и это происходит за счет усиления :оп иогепепа и
/ау г.ниния микроциркуляции, активизации регенерационных
процессов (восстановление регуляции в системе
: -,дл- - циклические нуклеотиды") и
иегиОирование активности опо по со
ММСК и мм- костного мозга устраняют иммунный
(циIокиновый) дисбаланс в организме и восстанавливают
е оле . компартменты органов иммуногенеза
(тмус и о::п . .... )^ дисфункция которых развивается при
хронической длительно незаживающей аутоиммунной • ¦¦
желудка и становится фактором ее р ¦ : течения. На
к •.> ..цч"гком и экспериментальном ¦ материале
ИММуИОГИСТОХИМИЧеСКИ И ЭЛеКТрОННО - :ЛЛ;ЛЛ'.-'Л' е к.
подтвержден цитотоксический эффект лимфоцитов ' ( 1.)8 л :CD 16ч-) в отношении тросе ,:-.- .¦. собственной пластинки слизистой оболочки желудка и установлено снижение активности молекулярного o.iio"e-oo (FOXP3), что подтверждает важное Пл еллЛ'Сл о-ео¦: ~. значение глубокой иммунной дизрегуляции в организме при развитии ДНЯЖ.
Рлактическая значимость работьо Разработана модель .,, •¦.;иммунной длительно незаживающей язвы желудка у крыс, на которой могут быть изучены иммунопатологические ,31 ,,амизмы развития хронических язв желудка, типичных для о человека. Разработанная модель может быть использована для ¦ л!медикаментозных препаратов, ото; одных для лечения язв желудка, а также для разработки оптимальных режимов применения клеточной терапии.
Остановлена необходимость и оптимальные сроки е'Ч < , пьтивирования клеток костного мозга при • '••.,*> "•• -с •• е;.пленении для эффективного лечения ДНЯЖ. Показано, что лез-, ..• костный мозг после предварительной лодллговки может служить источником оптимального для эффективной клеточной терапии ДНЯЖ, так кок клетки костного мозга, особенно ММСК, продуцируюет широкий спектр разнообразных биорегуляторных пептидов и факторов роста и способны возместить дефицит их ,. о1 , .опорных функций в организме у больных с длительно незаживающими аутоиммунными я лол- : .
Показана необходимость включения в комплексную язвенной болезни иммунокорректоров, так как докатано, что в -.а ¦-о со ..оДНЯЖ иммунопатологические : ау i оиммунные) механизмы занимают ведущую роль.
Положения, выносимые на защиту. Предварительное
культивирование клеток костного мозга in vitro - важный этап
подготовки клеток при проведении клеточной терапии
хронической длительно незаживающей аутоиммунной язвы
.-со :.дка, так как устраняет дм-лто: , л . влияние на них
хронического ooivoim процесса и восстановливает
. оорсгуляторную активность.
in vitro и трансплантированные в оболочку желудка аутологичные ММСК или МНК КМ, ускоряют процессы регенерации ДНЯЖ за счет быстрой смены
JissLMval.coiu'eontenL^ 14.03.2014
фаз язвенного процесса: сокращения сроков и выраженности десголктивно-воспалительной фазы и активизации пролиферативно-регенераторной фазы язвенного процесса, что обусловлено длительным (30 суток - срок исследования) функционированием их в зоне язвенного дефекта.
-'I,: л -' ллолл'' клетки костного мозга (ММСК и
МНК) способствуют эффективной регенерации ДНЯЖ путем
,*.ллелия процессов ангиогенеза и ¦¦ . ..л .л-.. !--л.зл. в
слизистой оболочке желудка, регуляции иммунного
(цитокинового) ¦ с .-.злел;! в организме, местной регуляции
системы "простагландины - циклические нуклеотиды" и
апотоза ле. но; он
Внедрение резулыатов работы. Разработанная модель
эк: периментальной язвы желудка с ;¦ з -ол оооо"
компонентом и водно солевой для ее моделирования
внедрены и используются в научно -исследовательской
работе: лаборатории физиологии ГУ ЦНИИ
. асз роон I ерологии Департамента с - ¦ . г. Москвьр
в лаборатории воспаления ГУ НИИ
морфологии человека пололо, г.Москва; в лаборатории клеточных технологий ГУН Центр биомедицинских технологий РАМН г.Москва. Результаты экспериментальной работы используются в лекционном курсе на кафедре т-с - - и искусственных органов ММА им. И.М. , а также приняты за основу при разработке медицинских клеточных технологий для лечения пациентов с ЯБ в ГУ - о им. С.П.Боткина Департамента здравоохранения г. Москвы.
Апробация диссертации. Апробация работы состоялась 7 октября 2008 года на межлабораторной конференции в фгу НИИ трансплантологии и искусственных органов Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи.
Основные положения работы доложены и обсуждены: на
Международной конференции "Новые технологии в
трансплантации фетальных клеток и их
¦ о" (Казахстан, г. Астана, ноябрь 2005г.); на 7съезде Научного общества - 'Ллтоо > со. оо России (г. Москва, март 2007(0); на Научной конференции "Клеточные технологии в и ортопедии" (г.
Москва, апрель 2007); на Ежегодной Всероссийской и
международной научной конференции ". гоо-ювыл клетки и
перспектива их использования в здравоозоооонио" (г. Москва,
май 2007); на 8 съезде Научного общества гастроэнтерологов
России (г.Москва, март 2008); на 15 Национальном Конгрессе
<• о е.. ооз" (г.Москва, апрель 2008); на Ежегодной
Всероссийской и международной научной конференции
" (г.Москва, май 2008); на Всероссийской
ли еле-конференции "Аутологичные стволовые и
прогениторные клетки: экспериментальные и о оюоноо'о
достижения" (г.Москва, июнь 2008); на Всероссийской
конференции с международным участием "Инновационные
технологии в трансплантации органов, -тнео и клеток",
посвященной 25-летию Самарского банка тканей и 45-летию
СамГМУ (г.Самара, июнь 2008); на 4 Всероссийском
съезде .о ¦-.потов памяти академика В.И.Шумакова (г.
Москва, 9-10 ноября 2008); на 9 съезде Научного общества гастроэнтерологов России (г. Москва, 2-5 марта 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 35 работ, в юм числе 10 работ в центральной печати и 2 главы в MOHOI рафии. По теме диссертации получены решения о выдаче патента на 2 изобретения: № 2007128128 от 11.11.2008г.
Способ моделирования аутоим'-л,. а гастрита; №
,'007128125/14 (030614) от 09.02.2009г. Способ моделирования аутоиммунной язвы желудка.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 251 странице компьютерного текста. Состоит из введения, 8 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка лсл ированной литературы (492 источника, из них 277 -отечественных и 215 - зарубежных). Работа иллюстрирована •о: рисунком и 17 таблицами.
:,с,.,лс!онйе диссертаций
выводы
1 • прекультивированных аутологичных
к к костного - мононуклеарных клеток и
¦ ":- мезенхимальных стромальных клеток в зону ¦ дефекта является эффективным методом лечения незаживающих аутоиммунных язв желудка, так как ускоряет процесс зос <да1л:о:л--оолс,пот- регенерации в зоне язвенного дефекта и горро:-иоу^г иммунопатологические изменения в организме, ликвидируя тем самым условия для их
ОсЗнЛтКООВеНИЯ.
Разработанная модель длительно пезо *и баю шеи
аутоиммунной язвы желудка у крыс является адекватной
экспериментальной моделью для изучения
• л. механизмов развития язвенной болезни и для оценки эффективности лечения длительно -. 'с,!!Л; , язв методами клеточной трансплантации, так как воспроизводит основные местные до. с изменения возникающие в зоне язвенного дефекта у больных.
Культивирование мультипотентных л ;,.лл,, л.,> <ы -.
ср.'омальных клеток аутологичного костного мозга также как кутиливирование ¦¦. "чилтейооа клеток является важным
jidiiuM подготовки этих клеток к л . . -. ..о:.' в зону
язвенного дефекта, так как позволяют восстановить их
оуоп-чпсо и биорегуляторную активность от
ингибирующего влияния хронически!.- стресса, а также
увеличить сое зчоую массу, необходимую для проведения
терапии. Технология выделения ММСК является
адекватной, так как выявление 1 типа в 100% этих
клеток свидетельствует о • природе этих клеток
и однородности клеточной культуры.
4 > о,¦ , :..жированные мононуклеарные и
му до ипотентные мезенхимальные . -\ > •• клетки
аутологичного костного мозга ускоряют процессы регенерации ¦ ' за счет быстрой смены фаз язвенного процесса: сокращения сроков и выпаже!лл ¦ деструктивно
воспалительной фазы и активизации азоонзал-о> еш-е'. регенераторной фазы язвенного процесса. Процессы регенерации ДНЯЖ при трансплантации ММСК протекают в более быстром темпе, чем при трансплантации МИ'Л КМ.
О Клетки мозга при трансплантации в зону
л-венного дефекта реализуют свою - ,.рана,
.наивность не краткосрочно, а за счет их длительного
;р.он.ционирования (не менее 30 ), что подтверждается
выявлением в зоне язвенного дефекта флуоресцирующих ММСК, использованных от трансгенных доноров с геном ОРР, или ММСК, предварительно меченых геном Ьас2 Е.соН.
о. ММСК и МНК КМ обеспечивают
более качественную и быструю регенерацию ¦¦ол- желудка за снег стимуляции нес) л о -л-о ..•".; и восстановления ю.Г'о циркуляторного русла, улучшения процессов - ¦• регуляции в системе "простагландины -циклические нуклеотиды", следствием чего становится ингибирование процессов усиленного ого-ша эпителиоцитов о .ли.лютой оболочке "с ЛЛал.
мононуклеарные и мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки ау члоа ,¦ костного мола трансплантированные в зону язвенного дефекта, уараняют ¦ оожнлсо дисбаланс: снижается уровень провоспалительных (1Ыр и ТИР а) и повышается уровень ологоол!: ныз (1Ь-10 иТОБр) цитокинов.
8. Культивированные моионукпеар- ь-е и мультипотентные
мезенхимальные стромальные клетки аутологичного костного
мозга восстанавливают мюеразч-н^тиоозоеолло компартменты
..ретов иммуногенеза у животных с длительно
- аутоиммунными язвами: в тимусе отмечается
расширение ¦ слоя и субкортикальной зоньр в
- увеличивается доля лимфоидных фолликулов и
¦ лимфатических муфт. Появление в
селезенке • зл.ллоор. после проведения клеточной терапии может рассматриваться как феномен перестройки системы в ответ на активизацию ее о > • -шли клетками костного мозга.
о Наиболее информативными показателями
эффективности клеточной > тозс длительно незаживающей
/![:¦. зхелудка и . ш кишки может стать
¦тр.ечогипический контроль активированных
' • - клеток (цитотоксических лимфоцитов: о Ьо | , ело 16+) и молекулярного '¦¦> с. ро регуляторных клеток (( 04з С025 + ) -БОХРЗ в зоне язвенного дефекта.
10. Повышение уровня противовоспалительных .д, <п•> ..'.нов в сыворотке крови животных, коррелирующее со снижением активности апоптоза в динамике после трансплантации ММСК и МНК КМ может служить показателем качественной
оегенерацни ¦ <: ,..ланяю1оИ факторы а,-'.' .... . а , ¦ дестру кти вн о-я лтенното процесса.
1.1. Прекультивированные ММСК и МНК КМ аутологичного кеелного мозга целесообразно использовать для а о о о -.: о н к л лз лечения хронических, длительно незаживающих, трудно рео.пулоон-езол гастродуоденальных язв.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. При моделировании длительно незаживающей
- язвы желудка подопытным животным (крысам)
необходимо вводить подкожно 3-кратно, с интервалом в 7-10
дней слизистой оболочки желудка в дозе до 1,5-1,8
0,д,| к д/'кг.
2. Для точного определения (с погрешностью до 0,01 см2)
г пощади язвенного дефекта необходимо производить
фол атрофирование язвенного дефекта на фоне линейки и
производить расчеты с использованием компьютерной
программы "Видео Тест-Мастер 5,0 ("о/, <¦ ¦ ; ", СПб)".
J. С целью восстановления ¦ п: о ...ион и
Функциональной активности клеток о е> . -. КМ (ММСК и МНК) перед з -о ¦¦niniOH: 'однкн следует их культивировать in va.ro: МНК - 4-5 дней, а ММСК - 9-12 суток для устранения ингиОирующего влияния стресса на клетки.
4 При культивировании клеток площадь монослоя ММСК т.- ,.,.,мна превышать 80-85%, так как превышение этих значений может стать фактором ингибирования
- активности клеток в культуре.
5 Целесообразно исследовать возможности применения
трлоло очных клеток костного мозга (ММСК и МНК) для
, - - длительно незаживающих и . о язв,
причем предпочтение следует отдавать ММСК, которые
являются предшественниками фибрози-о -еп;,' дефицит
которых имеет место в зоне язвенного дефекта, стимулируют
региональные - еевые клетки в слизистой оболочке желудка
и продуцируют оно: .¦ '¦ /о з торные пептидьр регулирующие
ее.опои и общий ¦¦ гомеостаз.
Целесообразно эффективность клеточной терапии при длтелоно незаживающих о-пап оценивать эндоскопически доя контроля в епоооз- из зоны язвенного дефекта динамики снижения цие и-,о <;отческое; эффекта лимфоцитов в слизистой оболочке желудка и повышения п-.плз .... молекулярного маркера регуляторных клеток - .. > чг ., отражающего степень нарушения иммунопатологических сдвигов в организме. 7. К л , терапия должна проводиться трансэндоскопически путем зоны елденн-.ло дефекта, что создает условия для более .'длительного функционирования мезенхимальных клеток в зоне язвенного дефекта, так как эти клетки попадают в условия адекватного с : о ---..оззооо
1 игерагуры диссертационного
' Г.Г. Медицинская морфометрия. Мл п5 л:шоп> пл -
i034. -786 С.
о Р.Т., Склянская О.А., Мягкова Л.П. и др.
пп; процессы при язвенной болезни в зависимости
от еоюояния - . системы. Мат. 4-го Всесоюзного Съезда
'.сщотп,- 1990.- Т. 1,- С. 109-110.
hup: \\ \\л\ .dissercat.com/content/transplanlatsiya-autologichnykh-kletok-kostnog 14.03.2014
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
542
UROLOGY / JUNE 1980 / VOLUME XV, NUMBER 6
511
UROLOGY ' JUNE 1980 ' VOLUME XV, NUMBER 6
511
UROLOGY ' JUNE 1980 ' VOLUME XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
UROLOGY ' JUNK 1980 ' VOLUME .XV, NUMBER 6
Page 1 of 39
Page 1 of 39
Page 2 of 39
Page 2 of 39
hup. www.disseixatxom/c()ntent/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
hup. www.disseixatxom/c()ntent/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 3 of 39
Page 3 of 39
hup: \\\\ w .Jissercat.com/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
hup: \\\\ w .Jissercat.com/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 4 of 39
Page 4 of 39
пир w w u .clisscMxat.cxim/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
пир w w u .clisscMxat.cxim/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 5 of 39
Page 5 of 39
hup л w \ w\ .dissercat.com/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
hup л w \ w\ .dissercat.com/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 6 of 39
Page 6 of 39
14.03.2014
\\\v v\.di ssercal.com/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-
14.03.2014
\\\v v\.di ssercal.com/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-
Page 7 of 39
Page 7 of 39
imp: :\\\\\\.dissercai.eonvt4> ntent/transplanlatsiya4Hitologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
imp: :\\\\\\.dissercai.eonvt4> ntent/transplanlatsiya4Hitologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 8 of 39
Page 8 of 39
Page 9 of 39
Page 9 of 39
Ujv \\\\\\.clisseixat.coni/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Ujv \\\\\\.clisseixat.coni/content/transplantatsiya-autologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 10 of 39
Page 10 of 39
v w д w Jissercat.com 'content/lransplanlalsi\ a-autologichn\ kh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
v w д w Jissercat.com 'content/lransplanlalsi\ a-autologichn\ kh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 1 1 of ЗУ
Page 1 1 of ЗУ
и;л; w w w olissercal.eom/content/transplanlatsiN a-aulologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
и;л; w w w olissercal.eom/content/transplanlatsiN a-aulologichnykh-kletok-kostnogo-mozga-... 14.03.2014
Page 12 of 34
Page 12 of 34