Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос :  ea201200343a*\id

больше ...
Термины запроса в документе


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и медицине. Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью. Задача решается за счет того, что фармацевтический состав содержит 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества: калий, магний, железо. Кроме того, в фармацевтическом составе часть изотопов углерода 12 С замещена на изотопы углерода 13 С. Техническими результатами изобретения являются увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, повышение стабильности в течение срока годности.


Евразийское (21) 201200343 (13) A1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2013.09.30
(22) Дата подачи заявки
2012.03.20
(51) Int. Cl.
A61K38/08 (2006.01) A61K31/40 (2006.01) A61P25/00 (2006.01)
(54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЙ,
АНТИАМНЕСТИЧЕСКОЙ, АНТИОКСИДАНТНОЙ, ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ, НЕЙРОМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ, ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ (ВАРИАНТЫ)
(96) 2012000068 (RU) 2012.03.20
(71) Заявитель:
ЧЕЛЯЕВА АНАСТАСИЯ ГЕННАДЬЕВНА; ЛОБКО
ВЛАДИМИР ПАВЛОВИЧ (RU)
(72) Изобретатель:
Челяева Анастасия Геннадьевна, Лобко Владимир Павлович, Тихоненко Олег Олегович (RU)
(74) Представитель:
Тихоненко О.О. (RU)
(57) Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и медицине. Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, ан-тиоксидантной, противогипоксической, противои-шемической активностью. Задача решается за счет того, что фармацевтический состав содержит 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества: калий, магний, железо. Кроме того, в фармацевтическом составе часть изотопов углерода 12С замещена на изотопы углерода 13С. Техническими результатами изобретения являются увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличе- I ния концентрации 2-этил-6-метил-3-гидроксипи-ридина сукцинат и пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, повышение стабильности в течение срока годности.
А 61 К 38/08
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
Область техники, к которой относится изобретение.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и может быть использовано при изготовлении и применении фармацевтических составов с полипептидной последовательностью Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, обладающих нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
Уровень техники.
Важной проблемой современной медицины является создание новых средств, способных эффективно защищать, а также лечить заболевания мозга.
Эффективным направлением исследований в этой области является создание новых средств на базе препаратов Семакс и Мексидол.
Семакс - препарат, который эффективно влияет на процессы, связанные с формированием памяти и обучением, улучшает мнестические функции, улучшает адаптацию организма человека к гипоксии, церебральной ишемии, наркозу и другим повреждающим воздействиям. Другими словами, Семакс улучшает энергетические процессы мозга, повышая его устойчивость к стрессовым повреждениям, гипоксии. Семакс является хорошим ноотропом, нейрометаболическим стимулятором.
В свою очередь, Мексидол обладает механизмом действия, принципиальным отличием которого от механизма действия традиционных нейро-психотропных препаратов является отсутствие у него специфического связывания с известными рецепторами (НИИ Фармакологии РАМН, ТА. Воронина. Мексидол. Основные эффекты, механизм действия, применение (http://www.voed.ru/mexidol.htm). Мексидол является ингибитором свободно-радикальных процессов, перекисного окисления липидов, он активирует супероксиддисмутазу, оказывает влияние на физико-химические свойства мембраны, повышает содержание полярных фракций
липидов (фосфотидилсерина и фосфотидилинозита и др.) в мембране, уменьшает отношение холестерол/ фосфолипиды, уменьшает вязкость липидного слоя и увеличивает текучесть мембраны, активирует энергосинтезирующие функции митохондрий и улучшает энергетический обмен в клетке и, таким образом, защищает аппарат клеток и структуру их мембран.
Вызываемое Мексидолом изменение функциональной активности биологической мембраны приводит к конформационным изменениям белковых макромолекул синаптических мембран, вследствие чего мексидол оказывает модулирующее влияние на активность мембраносвязанных ферментов, ионных каналов и рецепторных комплексов, в частности, бензодиазепиновый, ГАМК, ацетил-холиновый, усиливая их способность к связыванию с лигандами, повышая активность нейромедиаторов и активацию синаптических процессов. Наряду с этим, мексидол обладает выраженным гиполипидемическим действием, уменьшает уровень общего холестерина и липопротеидов низкой плотности и увеличивает липопротеиды высокой плотности.
Таким образом, механизм действия Мексидола определяют прежде всего его антиоксидантные свойства, способность стабилизировать биомембраны клеток, активировать энергосинтезирующие функции митохондрий, модулировать работу рецепторных комплексов и прохождение ионных токов, усиливать связывание эндогенных веществ, улучшать синаптическую передачу и взаимосвязь структур мозга. Благодаря этому механизму действия, мексидол оказывает влияние на ключевые базисные звенья патогенеза различных заболеваний, имеет большой спектр эффектов, чрезвычайно малые побочные проявления и низкую токсичность, обладает способностью потенцировать действие других центральнодействующих веществ, в особенности тех, которые реализуют свое действие как прямые агонисты рецепторов.
В заявке заявлены два варианта фармацевтического состава. Каждый из заявленных фармацевтических составов имеет, в качестве действующих веществ полипептидную последовательность Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
Ниже приведем аналоги, в которых описаны полипептидная последовательность Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
Аналогом каждому варианту фармацевтического состава является фармацевтическая композиция для лечения ишемического инсульта, содержащая полипептидную последовательность Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (Патент на изобретение РФ 2251429, опубликованный 27.07.2004).
Недостатком аналога является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Кроме того, имеется аналог - патент РФ 2156087, опубликованный 20.09.2000. В патенте описана биологически активная добавка (БАД) к пище, включающая калий, марганец, цинк, железо и дополнительно 29 различных веществ. В патенте заявлено, что биологически активная добавка обладает антигипоксическими и антиоксидантными свойствами.
Недостатком аналога является невозможность его применения в лечебных целях.
Известно применение Семакса в качестве нейропротектора (Патент на изобретение РФ 2394816, опубликованный 20.07.2010). В патенте РФ 2394816 в таблице 7 представлено изменение неврологического дефицита у крыс после двусторонней перевязки общих сонных артерий под влиянием препарата Семакс, Мексидол и Амтизол. В патенте делается вывод о том, что Мексидол более предпочтителем, Семакс из-за не достаточной эффективности последнего и невозможности повышения его концентрации в растворе.
Известен аналог (Патент на изобретение РФ 2425670, опубликованный 10.08.2011). В аналоге используют Семакс и холина альфосцерат. Препарат холина альфосцерат повышает эффективность применения Семакса.
Известно применение пептида Семакса формулы Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве антитромботического, антикоагулянтного, фибриндеполимеризационного и фибринолитического средства (Патент РФ2290194, опубликованный 27.12.2006).
Недостатком аналога является его относительно малая эффективность лечебного действия.
Известно применение полипептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве стимулятора памяти (Авторское свидетельство СССР 939440, опубликованное 30.06.1982), который является основой ноотропного средства и фармацевтической композицией ноотропного действия (Патент РФ № 2045958, С 16 А 61 К 38/08, 1994).
Недостатком аналога является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Известна заявка на изобретение 2006146529, опубликованная 20.07.2008. В заявке описана фармацевтическая композиция, обладающая нейротропной, антиамнестической, противогипоксической и противоишемической активностью. Композиция, в качестве активных компонентов, содержит Семакс и Мексидол или их фармацевтически приемлемые соли в терапевтически эффективных количествах. Здесь эффективность Семакса повышается за счет применения Мексидола.
Известен также патент ЕАПВ 008591, опубликованный 29.06.2007. В патенте предложено использовать производные 3-(3,5-диоксо-4,5-дигидро-ЗН-(1,2,4)триазин-2-ил) бензамида в качестве ингибиторов Р2Х7 для лечения различных заболеваний, в том числе ишемию при инсульте или сердечном приступе. В патенте предусмотрено использование изотопов 13С, 15N и др. для внесения изотопных меток в лекарственное средство. По изотопам определяют динамику распространения лекарства в тканях организма.
Другим аналогом вариантам фармацевтического состава является средство, содержащее мексидол и вспомогательные вещества: крахмал картофельный, поливинилпирролидон, магний стеариновокислый, микрокристаллическая целлюлоза, сахар молочный (патент РФ 2145855, опубликованный 26.05.1999). Лекарственное средство предназначено для лечения нарушений функций мозга, в частности, острых и хронических нарушений мозгового кровообращения.
Недостатком аналога является малая стабильность фармацевтического средства в течение срока годности.
Также аналогом всем вариантам фармацевтического состава является стабильный фармацевтический состав для инъекций, содержащий мексидол,
янтарную кислоту, трилон Б и воду для инъекций (Патент РФ 2205640, опубликованный 09.04.2002). Препарат назначают внутривенно и внутримышечно.
Недостатком аналога является малая стабильность фармацевтического состава в течение срока годности.
Кроме того, имеется аналог - патент РФ 2156087, опубликованный 20.09.2000. В патенте описана биологически активная добавка к пище, включающая калий (4-380мг/л), магний (1-510мг/л), железо (1-2100мг/л), цинк (1-1240мг/л), мексидол (1-200мг/л) и дополнительно 29 различных веществ. В патенте заявлено, что биологически активная добавка обладает антигипоксическими и антиоксидантными свойствами.
Недостатком аналога является невозможность его применения в качестве состава для инъекций. Другим недостатком является малое содержание мексидола в литре. Примерно на три порядка меньше, чем требуется для инъекционного раствора.
Прототипом двум вариантам изобретения является фармацевтический состав (Заявка на изобретение РФ 2006146529/15, опубликованная 20.07.2008), обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, а также полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
Задачей прототипа было расширение арсенала лекарственных средств, обладающих выраженной нейропротекторной активностью, в сочетании с антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
Исследования показали, что прототип не всегда эффективен при этих патологиях. Другим недостатком прототипа является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Признаки прототипа "Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-
фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro)" совпадают с признаками заявленных вариантов изобретения.
У прототипа фармацевтически приемлемым растворителем является вода (дистиллированная вода или вода для инъекций). Фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом в фармацевтическом составе является ацетат аммония.
Структурная формула полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro):
Формула 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат может быть представлена в следующем виде:
Связь N+ - Н - это ковалентная связь.
Вышеуказанный препарат содержит катион 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина (2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиний) и фармацевтически приемлемый анион, а именно С4Н604. Ионная связь между катионом и анионом это связь между, отрицательно и положительно заряженными частицами в препарате.
В качестве аниона может быть использован не только сукцинат, но и другое вещество, в частности, хлорид. Поэтому более широкая формулировка, признаков, описывающих 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиний может быть следующей:
"Фармацевтический состав, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния и фармацевтически приемлемый анион".
Недостатками прототипа являются относительно малая скорости наступления лечебного эффекта, не достаточно большой лечебный эффект фармацевтического средства, низкая стабильность фармацевтического состава в течение срока годности.
Сущность изобретения.
Дадим определения терминам.
Срок годности - период, в течение которого фармацевтический состав сохраняет свои свойства в мере, обеспечивающей его использование по назначению.
Нейропротекторная активность фармацевтического состава (препарата) -купирование и ограничения повреждений ткани мозга, развивающегося вследствие остро возникающей ишемии (гипоксии).
Лекарство активизирует метаболические процессы в головном мозге, защищает нервные клетки от атак свободных радикалов и токсинов, а также от других вредных воздействий.
Антиамнестическая активность препарата - противодействие амнезии.
Амнезия - общая или частичная неспособность вспомнить недавние или отдаленные события.
Антиоксидантная активность препарата - способность замедлять окисление органических соединений.
Противогипоксическая активность препарата - улучшает утилизацию циркулирующего в организме кислорода и повышает устойчивость организма к гипоксии (кислородной недостаточности). Гипоксия представляет собой состояние кислородного голодания вследствие нарушений внешнего и внутреннего (тканевого, клеточного) дыхания.
Нейрометаболическая активность - стимулирует синтез и утилизацию кислорода и глюкозы, увеличивает синтез АТФ в условиях ишемии и гипоксии более чем на порядок.
Противоишемическая активность препарата - предотвращает местное малокровие, чаще обусловленное сосудистым фактором (сужением или полной обтурацией просвета артерии), приводящее к временной дисфункции или стойкому повреждению ткани или органа.
Ишемия- местное малокровие, чаще обусловленное сосудистым фактором (сужением или полной обтурацией просвета артерии), приводящее к временной дисфункции или стойкому повреждению ткани или органа. Последствия ишемии зависят от степени и скорости снижения параметров кровотока, продолжительности ишемии, чувствительности тканей к гипоксии, общего состояния организма. Самыми чувствительными к ишемии являются органы центральной нервной системы и миокард.
Ишемия имеет ряд существенных отличий от гипоксии.
Ишемия характеризуется относительной или абсолютной недостаточностью кровоснабжения, что проявляется не только локальной тканевой гипоксией, но и иными нарушениями метаболизма вследствие недостаточного поступления питательных веществ.
Ишемия - динамический, и, как правило, потенциально обратимый процесс. Вероятность ишемического некроза (инфаркта) ткани непосредственно зависит от длительности и степени снижения локального кровотока.
Миокард - мышечный слой сердца, составляющий главную его массу. Построен из особой поперечнополосатой мышечной ткани, представляющей собой плотное соединение мышечных клеток. Функциональная особенность миокарда - ритмические автоматические сокращения, чередующиеся с расслаблениями, совершаются непрерывно в течение всей жизни организма.
Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
Задача решается за счет того, что фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержит 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 ' 10 3 - 300 10 3;
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо- 0.007-345.
Также задача решается за счет того, что фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержит 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 - 300 10 ;
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин-0.1 -30;
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо - 0.007 - 345,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы углерода 13С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75.
Действующими веществами в фармацевтическом растворе являются препарат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
Фармацевтический состав выполнен в виде раствора, например, в виде раствора для инъекций. Фармацевтический состав имеет значение рН от 4 до 7.
Кинематическая вязкость фармацевтического состава, выполненного в виде раствора, от 1.01 до 1.23 мм /с. Кинематическую вязкость фармацевтического состава определяют с помощью капиллярного вязкозиметра.
Также фармацевтический состав может быть выполнен в виде назальных капель или раствора для приема внутрь (в частности, сиропа, БАД).
В фармацевтическом составе кроме действующих веществ: полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (или его фармацевтически приемлемой соли), препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат (или его фармацевтически приемлемой соли) и минеральных веществ могут использовать фармацевтически приемлемый растворитель. Кроме растворителя, в фармацевтическом составе могут использовать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
В качестве фармацевтически приемлемого растворителя может быть использована вода (дистиллированная вода), а также другой растворитель.
В качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества может быть использован ацетат аммония, натрия дисульфат (натрия метабисульфат) или другое фармацевтически приемлемое вещество.
Другими словами, основой фармацевтического состава являются действующие вещества препарат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и минеральные вещества в фармацевтически приемлемом растворителе, в частности, в воде.
В фармацевтическом составе действующие вещества и минеральные вещества выбирают из вышеуказанных диапазонов, а растворитель - остальное до литра.
Техническими результатами изобретения являются:
- увеличение скорости наступления лечебного эффекта (уменьшение времени наступления лечебного эффекта) при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и препарата 2-этил-6-метил-З-гидроксипиридина сукцинат при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- повышение стабильности фармацевтического состава с полипептидом метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и препаратом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат в течение срока годности.
Нижняя граница диапазона содержания в фармацевтическом составе полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин и нижняя граница содержания в фармацевтическом составе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат могут быть использованы для лечения детей и беременных, а также в составе БАД.
Верхняя граница диапазона содержания в фармацевтическом составе полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин и верхняя граница содержания в фармацевтическом составе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат могут быть использованы для лечения взрослых людей при тяжелом инсульте.
Фармацевтические составы с верхними границами диапазонов полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин и препарата 2-этил-6-метил-З-гидроксипиридина сукцинат являются концентрированными
составами и могут разбавляться фармацевтически приемлемым растворителем. Концентрированное выполнение фармацевтических составов удобно при транспортировке и хранении.
В настоящее время, увеличение скорости наступления лечебного эффекта при введении лекарственных средств в организм обеспечивают:
- дозировкой средства и временем его воздействия;
- введением в раствор вспомогательного ингредиента - ускорителя скорости воздействия (частный случай регулятора скорости воздействия).
Приведем примеры.
Известен раствор (заявка РФ N 94015245, опубликованная 27.12.1995) в котором в качестве регулятора скорости воздействия используют 5-10% раствор гиалуроновой кислоты.
Известен кардиостимулирующий препарат (патент РФ N 2068697, опубликованный 10.11.1996), содержащий яд зеленой жабы, хлорбутанодигидрат, хлористый натрий и воду. Для повышения скорости наступления кардиостимулирующего эффекта (при сохранении продолжительности действия), обеспечиваемого указанным ядом, в препарат вводят до 95% этилового спирта. Спирт за счет осмотических явлений вызывает болевые ощущения и местную негативную реакцию, что и ускоряет действие препарата.
Известны биологически активные добавки, которые при их введении совместно с действующим началом повышают фармакологическую активность лечебных препаратов за счет оптимизации скорости усвоения действующего начала. Так в противоопухолевое средство (Авторское свидетельство СССР 1683190, опубликованное 20.04.1995) дополнительно вводят поливинилпирролидон и сорбиновую кислоту. Эти компоненты повышают противоопухолевую активность действующего начала.
В изобретении достигается увеличение скорости наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации действующих вещества в фармацевтическом средстве, за счет введение в состав фармацевтического средства минеральных веществ.
Ниже приведем общие сведения о минеральных веществах.
Минеральные вещества подразделяют на макро- и микроэлементы.
К макроэлементам относятся кальций, фосфор, магний, калий, натрий, хлор и
сера.
Микроэлементов: железо, медь, марганец, цинк, кобальт, йод, фтор, хром, молибден, ванадий, никель, стронций, кремний, селен признаны необходимыми для жизнедеятельности человека и животных.
Макроэлементы регулируют водно-солевой обмен, поддерживают осмотическое давление в клетках и межклеточных жидкостях, что необходимо для передвижения между ними питательных и лекарственных веществ. Процессы кроветворения происходят с участием железа, меди, марганца, кальция и других минеральных веществ (элементов). Минеральные вещества (микроэлементы) активируют действие ферментов, гормонов, участвуют во всех видах обмена веществ.
Минеральные вещества (Fe, Си, Zn и другие) в растворе (в частности, в фармацевтическом составе) находятся в составе фармацевтически приемлемых солей, например, сукцинатов, хлоридов, карбонатов или сульфатов, а также в составе различных фармацевтически приемлемых комплексных соединений.
Минеральные вещества, соли металлов оказывают противомикробный эффект, инактивируя ферменты, необходимые для жизнедеятельности микроорганизмов. Инактивация ферментов происходит путем взаимодействия ионов металлов с сульфгидрильными группами ферментов.
На слизистые оболочки металлы оказывают выраженное местное действие. При рассматриваемых в заявке концентрациях минеральных веществ, местное действие этих веществ может быть вяжущим или раздражающим.
Механизм местного действия металлов обусловлен их способностью реагировать с белками тканей. В результате такого взаимодействия белки свертываются и образуют с ионами металлов альбуминаты. При этом если происходит частичное свертывание белков только в самых поверхностных слоях тканей, наблюдается вяжущий или раздражающий эффект, имеющий обратимый характер.
Проведенные исследования показали, что минеральные вещества, входящие в состав препаратов, усиливают их лечебный эффект. Обеспечивается это, в
основном, за счет явно выраженного раздражающего эффекта на ткани организма, а также путем воздействия на ферментативную систему организма.
Для всех вариантов, рассматриваемых в изобретении фармацевтических составов рациональные диапазоны значений содержания минеральных веществ, следующие:
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо- 0.007-345.
Данные диапазоны частично пересекаются с диапазонами значений минеральных веществ в БАД (см. патент РФ 2156087). Новизна изобретения обеспечивается за счет использования в фармацевтическом составе полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
При разработке изобретения установлено, что увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат в фармацевтическом составе, повышение стабильности фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат в течение срока годности, обеспечивается введением в фармацевтический состав определенных минералов (определенной комбинации минералов) в строго определенном для каждого минерала количестве. В результате проведенных исследований для каждого минерала установлен весовой диапазон в фармацевтическом составе. Использование меньшего, чем указано в диапазоне, количества минерального вещества не приводит к достижению технических результатов. Использование большего, чем указано в диапазоне, количества минерального вещества не только не приводит к достижению технических результатов, но ухудшает лечебный эффект от действия пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат. Установлено, что с повышением концентрации минеральных веществ в фармацевтическом составе (выше заявленных диапазонов) они подавляют действие препарата 2-этил-6-метил-3
гидроксипиридина сукцинат и пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, лечебный эффект от препарата исчезает.
Дополнительное увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат в фармацевтическом составе, повышение стабильности фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препаратом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат в течение срока годности обеспечивается частичным замещением в фармацевтическом составе изотопов углерода 12С на изотопы углерода 13С.
Перечень фигур чертежей.
На фиг. 1 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с УФ-детектором (210нм). Сорбент С18.
На фиг.2 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 4.096 мин.
На фиг.З представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 4.664 мин.
На фиг.4 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 5.282 мин.
На фиг.5 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 12.163 мин.
На фиг. 6 представлена хроматограмма (левая часть) фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на колонке с хиральным сорбентом и с УФ-детектором (220нм).
На фиг. 7 представлена хроматограмма (правая часть) фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на колонке с хиральным сорбентом и с УФ-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 5.274.
На фиг. 8 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 5.274.
На фиг.9 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 6.366.
На фиг. 10 представлена хроматограмма фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 7.263.
На фиг. 11 представлена хроматограмма (левая часть) фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 14.648.
На фиг. 12 представлена хроматограмма (правая часть) фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 14.648.
На фиг. 13 представлен MSMS спектр пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (левая часть) молекулярного иона со значением Z = 153.5.
На фиг. 14 представлен MSMS спектр пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (правая часть) молекулярного иона со значением Z = 153.5.
На фиг. 15 представлен масс-спектр высокого разрешения фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
На фиг. 16 представлена хроматограмма образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 17 - 20 представлены хроматограммы образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 21-23 представлены хроматограммы образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат на хиральной колонке.
На фиг. 24 представлена хроматограмма образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат. На фиг. 25 представлен MSMS иона 438.7.
На фиг. 26 представлен MSMS иона 138.
На фиг. 27 представлено определение массовой доли компонентов образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 28 представлен 'Н-ЯМР-спектр образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат в D20.
На фиг. 29 представлен 1 Н-ЯМР-спектр образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат в DMSO.
На фиг. 30 - 32 представлены С-ЯМР-спектры образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат с подавлением и без подавления.
На фиг. 33 представлен 1 Н-ЯМР-спектр образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 34 и 35 представлены масс-спектры высокого разрешения смеси производных фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 36 представлена схема кавитационного реактора для изотопного обогащения различных смесей.
На фиг. 37 представлено поперечное сечение кавитационного реактора.
На фиг. 38 представлена схема установки по изотопному обогащению.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Изобретение иллюстрируется представленными ниже примерами.
Пример 1 - способ введения минеральных веществ в воду.
Пример 2 - способ получения фармацевтических составов и проверка на стабильность.
Пример 3 - испытания на общую токсичность.
Примеры 4-8 иллюстрируют эффективность заявленных фармацевтических составов обладающих нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью. Исследования проведены с использованием материалов, опубликованных в источниках /1 - 5/. В заявке, для наглядности, представлены сравнения действия заявленных фармацевтических составов с действием препарата Мексидол.
Концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат выбирались таким образом, чтобы результаты можно было сравнить с результатами применения только препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
Пример 1. Введение минеральных веществ в раствор (в воду) осуществляли по методике /6/. Существуют и другие способы введения минеральных веществ в раствор. Растворы готовили из чистых металлов при использовании фармацевтически приемлемых растворителей, обеспечивающих устойчивость растворов при хранении.
Для проведения углубленных исследований, при разработке заявки на изобретение, концентрации металлов в растворах обеспечивались в следующих диапазонах, мг/л:
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо- 0.007-345.
Кроме того, были проведены исследования на сверхбольшое содержание минеральных веществ в составах. Об этих исследованиях будет написано ниже.
Контроль концентраций металлов в растворах осуществляли атомно-абсорбционным методом определения содержания натрия, калия, кальция, магния, железа, марганца, меди, цинка, свинца, кадмия, кобольта, никеля, хрома. П. 1.3.2.1 источника /6/.
Также исследовались и другие фармацевтические составы, содержащие пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат с минеральными веществами, мг/л:
медь
0.0003
-0.5;
марганец -
0.001
-7.5;
цинк -
0.065
-72.8;
кобальт -
0.0003
-0.75;
хром -
0.0006
- 1.57;
молибден -
0.0006
- 1.59;
кальций -
0.001
-5.8;
натрий -
0.019
- 1600.
Пример 2. Для примера, опишем получение одного фармацевтического состава с калием, магнием, железом определенной концентрации.
В реактор с мешалкой (объемом 5 л) наливают 4 л воды для инъекций. После чего в реактор загружают пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.1мг и заливают раствор с калием (общее содержание калия 8.15 мг), заливают раствор с железом (общее содержание железа 49.4 мг), заливают раствор с магнием (общее содержание магния 1.4 мг) при постоянном перемешивании.
В другой реактор с мешалкой (объемом 5 л) наливают 4 л воды для инъекций. После чего в эту реактор загружают препарат 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 10000мг и заливают раствор с калием (общее содержание калия 8.15 мг), заливают раствор с железом (общее содержание железа 49.4 мг), заливают раствор с магнием (общее содержание магния 1.4 мг) при постоянном перемешивании.
После чего полученные растворы сливают в реактор с мешалкой (объемом 12 л), доводят рН раствора до значения 4,5. Полученный раствор доводят до объема 10 л водой для инъекций и пропускают через фильтр. При необходимости, с целью повышения или понижения концентрации действующих веществ, фармацевтический состав могут подвергать лиофилизации. При необходимости уменьшить концентрацию пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-З- гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ, например, в два раза, в полученный раствор добавляли 10 л воды. Смешение раствора с водой осуществляли в реакторе с мешалкой объемом более 22 л. Таким образом, были получены все составы, указанные в таблицах 1-24.
Контроль показал качественное выполнение фармацевтического состава.
Проведены лабораторные исследования заявленных фармацевтических составов.
В заявке на фиг. 1-35 проиллюстрированы исследования отдельно раствора с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат (фиг. 1-15) и с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (фиг. 16-35) перед их смешением в реакторе объемом 12 л.
На фиг. 1-12 представлены хроматограммы исследованного образца фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральными веществами.
На фиг. 13 и 14 представлены MSMS спектры фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
А на фиг. 15 представлен масс-спектр высокого разрешения фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
На фиг. 16-24 представлены хроматограммы образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 25 и 26 представлены MSMS иона 438.7 и иона 138.
На фиг. 27 представлено определение массовой доли компонентов образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат.
На фиг. 28 - 33 представлены 'Н-ЯМР и |3С-ЯМР-спектры образца фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат в D20.
На фиг. 34 и 35 представлены масс-спектры высокого разрешения смеси производных фармацевтического состава с препаратом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
Остальные заявленные и описанные в заявке фармацевтические составы также подвергались лабораторным исследованиям. Хроматограммы образцов фармацевтических составов с другим составом минеральных веществ аналогичны (различия малы и на графиках соизмеримы с толщенной линии).
Кроме того, исследованы электрические характеристики фармацевтических составов с препаратом 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Установлено, что действующие вещества и минеральные вещества присутствуют в фармацевтическом составе в количествах, обеспечивающих при температуре 253 - 773К, частоте электрического или электромагнитного поля в диапазоне от 50 Гц до 100Гц, значение действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости в диапазоне от 5 до 80. Диэлектрическая проницаемость фармацевтического состава характеризует его способность к накоплению электрических зарядов.
Установлено, что величина действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости может изменяться путем изменения концентрации (содержания) пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ. Целесообразно, для повышения фармацевтического действия обеспечивать значение действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости в диапазоне от 5 до 80. Если её значение будут ниже или выше, то эффективность действия фармацевтического состава может уменьшаться. Поэтому в исследованиях показатель "действительная составляющая относительной диэлектрической проницаемости" являлся контрольным, своего рода критерием применимости фармацевтического состава.
Пример 3. Испытания на общую токсичность проводили путем внутрибрюшинного введения фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ крысам.
Для проведения исследований концентрации компонентов в растворах выбраны, мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат-300 ' 10 3;
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 30;
калий- 275.0;
магний- 105.0;
железо - 556.0;
цинк- 126.0;
марганец- 25.5;
медь- 5.7;
кобальт- 2.35;
хром- 5.3;
молибден- 5.3;
кальций- 15.3;
натрий- 1890.0.
LD50 составляет величину до 1000 мг/кг при внутрибрюшинном введении.
При внутримышечном введении LD50 составляет величину до 3000 мг/кг, что позволяет отнести заявляемые составы к нетоксичным веществам.
При длительном применении фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ у крыс не выявило изменений со стороны органов и тканей организма (были несущественные).
Пример 4. Антиоксидантную активность фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат ,минеральных веществ и содержащих изотопы 13С, сравнивали с антиоксидантной активностью препарата Мексидол хемилюминесцентным методом 111.
В фармацевтических составах содержание пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.5мг/л, содержание препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 50 ООО мг/л. Препарат Мексидол содержал пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 50 000г/л. Порядковые номера фармацевтических составов 49 - 56 (см. таблицу 7).
Также сравнивали действие препарата Мексидол, с фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% и 75% от всего углерода в фармацевтическом составе (см. таблицу 8 и 9).
Результаты сравнения фармацевтических составов с препаратом Мексидол приведены в таблице 25.
Установлено, что по антиоксидантной активности (АОА) фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ в основном превосходили Мексидол на величину до 24 %.
Также установлено, что по антиоксидантной активности фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С до 75% от всего углерода в фармацевтическом составе в основном превосходили Мексидол на величину до 29 %.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 49, 57 и 65 не превосходили Мексидол.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 55 и 56 по АО А практически не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 54.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 63 и 64 по АОА не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 62.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 71 и 72 по АОА не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 70. У составов 71 и 72 наблюдалось некоторое снижение АОА.
Следовательно, фармацевтические составы с порядковыми номерами 55 и 56, 63 и 64, 71 и 72 применять в качестве антиоксидантного средства экономически не целесообразно (затратно). Кроме того, по АОА составы с порядковыми номерами 56, 64 и 72 несколько уступали Мексидолу. Исследовали также АОА фармацевтических составов с порядковыми номерами 169 - 192.
Установлено, что по антиоксидантной активности эти фармацевтические составы в основном превосходили Мексидол на величину до 5 %.
Исследования на антиоксидантную активность фармацевтических составов также проведены по методике /8/. Результаты аналогичны вышеприведенным.
Пример 5. Противогипоксическую и нейрометаболическую активность фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода 13С, сравнивали с активностью препарата Мексидол.
Сравнения выполнены на белых нелинейных мышах (самцах) массой 25 - 27 г по острой гипоксии /9, 10/.
Острую гипоксию (нормобарическую гипоксическую гипоксию) моделировали путем помещения мышей в термокамеру объемом 250 см .
В опытах регистрировали продолжительность жизни животных после прекращения доступа воздуха в термокамеру. Животные помещались в термокамеру поодиночке.
Мексидол вводили однократно внутрибрюшинно за 30, 60 и 90 минут до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в термокамеру.
Время от момента введения препарата до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в таблицах обозначено Тв в минутах.
Каждый из фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ, вводили однократно внутрибрюшинно также за 30, 60 и 90 минут до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в термокамеру.
После помещения мышей в термокамеру, по мере потребления кислорода концентрация его в воздухе и в организме мышей снижалась, а количество углекислого газа возрастало. В результате у животных развивалась острая гипоксическая гипоксия. Продолжительность жизни (до остановки дыхания) регистрировали с помощью секундомера и по ее увеличению судили об эффективности испытанных препаратов.
Результаты сравнения противогипоксической и нейрометаболической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода |3С, с противогипоксической активностью препарата Мексидол приведены в таблицах 26-29.
На модели острой нормобарической гипоксической гипоксии (в термокамере) установлено, что большая часть фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ увеличивала продолжительность жизни мышей на величину до 16% по сравнению с Мексидолом.
Установлено увеличение скорости наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства. Это хорошо видно в таблице 29. Заявленные препараты увеличивают скорость наступления лечебного эффекта, что сближает значения продолжительности жизни при Тв = ЗОмин и Тв =60мин и 90 мин.
Достигнуто увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации и количества пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
Сравнения также проведены на моделях: острой гипобарической гипоксии в вытяжной барокамере с имитацией подъема животных со скоростью 50 м/с до
высоты 11000 м; острой гемической гипоксии и острой гистотоксической гипоксии.
Результаты этих сравнений аналогичны, результатам, полученным на модели острой нормобарической гипоксической гипоксии.
Кроме того, были проведены исследования по повышению концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до величины ЗОмг/л и препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат до величины ЗООг/л. Наблюдалось повышение эффективности действия по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат. Однако повышение эффективности не превышало 3-5%. Повышение концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro более ЗОмг/л, в частности, до 100мг/л не приводило к повышению эффективности по сравнению с лучшими фармацевтическими составами.
Также эффективность действия Мексидола соравнивали с эффективностью действия фармацевтических составов №№ 1-48. Установлено, что составы №№ 1 - 24 превосходят действие Мексидола примерно на 3%. Составы 25 - 48 по своему действию превосходят действие Мексидола не более чем на 5%.
Пример 6. Нейропротекторное действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода 13С сравнивали с нейропротекторным действием препарата Мексидол.
При сравнении содержание препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 10 г/л, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.1мг/л, Мексидол - 10 г/л (разбавлен водой 1:5).
Сравнительные исследования выполнены на белых нелинейных крысах-самцах массой 250-270 г, у которых моделировали ишемический инсульт и геморрагический инсульт.
Ишемический инсульт у крыс воспроизводили двусторонней перевязкой общих сонных артерий. Подопытным животным вводили внутрибрюшинно Мексидол и заявленные фармацевтические составы с порядковыми номерами от 25
по 48. Характеристики этих фармацевтических составов приведены в таблицах 4 -6.
Животных после операции наблюдали в течение 2 недель с учетом выживаемости крыс. Неврологический дефицит у животных определяли каждый час в течение первых 24 ч, а затем 1 раз в сутки. Тяжесть состояния определяли по сумме соответствующих баллов.
Результаты исследования нейропротекторного действия препаратов представлены в таблице 30. Анализ результатов, приведенных в таблице показал, что у крыс, получивших внутрибрюшинно Мексидол, неврологический дефицит был максимально выражен (5.3±0,1 балла) через 3, 4 и 5 сутки после двусторонней перевязки общих сонных артерий. Количество крыс в опыте - 12. Из них погибло 2 животных (16.67%).
В опытах было установлено, что составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С в дозах 20 мг в сутки на крысу оказывает выраженное нейропротекторное действие, в целом превосходя по выраженности действия в отношении неврологического дефицита Мексидола.
Было проведено 24 опыта с крысами, получившими внутрибрюшинно фармацевтический состав на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С. Количество крыс в каждом опыте - 12. В опытах погибало 10-15% животных.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 25, 33 и 41, а также 31, 32, 39, 40, 47, 48 по нейропротекторному действию не превосходят Мексидол (Смотри таблицу 30). Нейропротекторные действия остальных составов превосходят нейропротекторное действие Мексидола.
Наиболее выраженое нейропротекторное действие у фармацевтических составов с порядковыми номерами 29, 30, 37, 38, 45, 46.
Однако следует учесть следующее. Фармацевтический состав 30 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 29. Поэтому состав 30 использовать не целесообразно.
Фармацевтический состав 38 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 39. Поэтому состав 38 использовать не целесообразно.
Фармацевтический состав 46 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 45. Поэтому состав 46 использовать не целесообразно.
Геморрагический инсульт (ГИ) у крыс воспроизводили моделированием локального кровоизлияния в головном мозге (создание ГИ с ишемией мозга) проводили по методике /11/. В соответствие с методикой проводили трепанацию черепа крысы и деструкцию мозговой ткани в области внутренней капсулы с последующим введением в место повреждения крови этой же крысы (0,03 мл крови). Таким образом, достигали инсульт в области внутренней капсулы практически без повреждений соседних тканей мозга.
Фармацевтический состав на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С вводили животным внутрибрюшинно в дозе 20мг в сутки на крысу. Мексидол вводили животным внутрибрюшинно также в дозе 20мг в сутки на крысу. Схема введения была следующей: первую инъекцию осуществляли через 2 ч после операции, потом 3 инъекции через 4 ч. Затем фармацевтический состав на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, а также Мексидол вводили ежедневно один раз в сутки в течение 14 суток.
В течение 14 суток после операции оценивали координацию движений на вращающемся стержне в течение 2 минут и способность препаратов повышать выживаемость животных (см. таблицу 31).
Установлено, что фармацевтические составы с порядковыми номерами 25, 33 и 41, 31, 32, 39, 40, 47, 48 по координации движения на вращающемся стержне практически не превосходят Мексидол. Нейропротекторные действия остальных составов превосходят нейропротекторное действие препарата Мексидол.
Координация движения крыс заметно повышается при применении составов с порядковыми номерами 28 - 30 (см. характеристики составов в таблице 4), 36-48 (см. характеристики составов в таблице 5), 44-46 (см. характеристики составов в таблице 6). Однако следует учесть следующее.
Фармацевтический состав 30 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 29. Поэтому состав 30 использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтический состав 38 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 37. Поэтому состав 38 использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтический состав 46 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 45. Поэтому состав 46 использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С повышают (по сравнению с Мексидолом) выживаемость крыс после операций.
Кроме того, были проведены исследования по повышению концентрации препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат до ЗООг/л и выше, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до величины ЗОмг/л и выше. Наблюдалось повышение эффективности действия составов с повышенными концентрациями по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (См. таблицу 30). Эффективность действия повышалась на 3-5%. Дальнейшее повышение концентрации препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro приводило к снижению эффективности по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами.
Также эффективность действия Мексидола соравнивали с эффективностью действия фармацевтических составов №№ 1 - 48, 169 - 192. Установлено, что составы №№ 1 -24, 169 - 192 превосходят действие Мексидола примерно на 3%. Составы 25 - 48 по своему действию превосходят действие Мексидола не более чем на 5%.
Пример 7. Антиамнестическое действие фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-
Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С, сравнивали с антиамнистическим действием препарата Мексидол.
Сравнения выполнены на белых нелинейных мышах (самцах) массой 25 - 27 г.
Влияние фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, и препарата Мексидол на амнезию (процессы обучения и памяти) у мышей исследовали, используя условную реакцию пассивного избегания электрокожного раздражения. Мышей подвергали воздействию электросудорожного шока (ток 30 мА в течение 0.3-0.5с к ушным раковинам) сразу после обучения условной реакции пассивного избегания (модель амнезии, вызванной электросудорожным шоком) /10, 12/.
Влияние фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, и препарата Мексидол на амнезию также оценивали на модели скополаминовой амнезии после обучения условной реакции пассивного избегания /10/.
Препараты вводили однократно внутрибрюшинно за 30, 60 и 90 минут до обучения мышей. Сохранность условной реакции пассивного избегания проверяли через 24 ч после амнезирующего воздействия.
На модели амнезии, вызванной электросудорожным шоком, было обнаружено, что у мышей фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также препарат Мексидол активно предупреждают развитие амнезии условной реакции пассивного избегания (см. таблицу 32).
Анализ таблица 32 показывает, что фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С увеличивают скорость наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации действующих веществ в фармацевтическом средстве.
Вышеперечисленные эффекты могут быть достигнуты и за счет применения Мексидола путем увеличения дозы Мексидола или его концентрации в дозе. В опытах (см. таблицу 32) количество Мексидола было увеличено с 20 мг до 40 мг на мышь.
На модели скополаминовой амнезии было обнаружено, что у мышей фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С, а также препарат Мексидол также предупреждают развитие амнезии условной реакции пассивного избегания (см. таблицу 33).
Фармацевтические составы на базе пептида препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С увеличивают скорость наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства.
Увеличение скорости наступления лечебного эффекта и увеличение лечебного эффекта за счет использования Мексидола может быть достигнуто путем увеличения его количества в иньекции.
Пример 8. Противоишемическое действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов
углерода С, сравнивали с противоишемическим действием препарата Мексидол. Результаты сравнения представлены в таблицах 34 и 35.
Исследования проведены на белых нелинейных мышах (самцы) массой 35 -
37г.
Ишемию головного мозга воспроизводили путем перевязки обеих общих сонных артерий. Животных после операции наблюдали в течение 7 дней. Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, и препарат Мексидол вводили внутрибрюшинно в течение 7 дней. В первый день препараты вводились дважды: сразу после операции и через 3 часа после операции. Во второй, третий, и т.д. до седьмого дня препараты вводились один раз в сутки.
После двусторонней перевязки общих сонных артерий (и не использовании вышеуказанных препаратов) более 90% мышей погибали в течение наблюдаемых дней.
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также препарат Мексидол существенно увеличивали выживаемость мышей в период наблюдения. При этом концентрация пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro составляла от 0.1 до ЗОмг/л. Концентрация препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат составляла 1г/л и 300 г/л. Из таблиц 34 и 35 видно, что выживаемость мышей при использовании большинства фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С выше, чем выживаемость мышей при использовании препарата Мексидол.
Установлено, что с увеличением количества минеральных веществ в составах их действие усиливается.
Таким образом, описано применение и подтверждены технические результаты первого (по нумерации формулы изобретения) состава, содержащего, мг/л:
3 3
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 - 300 10 ; полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0; магний- 0.0001 -70.3; железо- 0.007-345.
Также, описано применение и подтверждены технические результаты второго (по нумерации формулы изобретения) состава,содержащего, мг/л:
3 3
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 - 300 10 ; полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0; магний- 0.0001 -70.3; железо - 0.007 - 345,
и при этом фармацевтический состав содержит изотопы углерода С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75 (от 0.5% до 75%) Проведены также исследования составов содержащих: полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), препарат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
калий -
0.001 -
158.0;
магний -
0.0001 -
-70.3;
железо -
0.007-
345;
медь -
0.0003
-0.5;
марганец -
0.001
-7.5
цинк-
0.065
-72.8
кобальт
0.0003
-0.75;
хром -
0.0006
- 1.57;
молибден -
0.0006
- 1.59;
кальций
0.001
-5.8;
натрий -
0.019
- 1600.
Проведены также исследования составов содержащих: полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), препарат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, минеральные вещества и изотопы углерода 13С (от 0.5 до 75%) при следующем соотношении компонентов в мг/л:
калий -
0.001 -
158.0;
магний -
0.0001 -
-70.3;
железо -
0.007 -
345;
медь -
0.0003
-0.5;
марганец -
0.001
-7.5
цинк-
0.065
-72.8
кобальт -
0.0003
-0.75;
хром
0.0006
- 1.57;
молибден- 0.0006- 1.59; кальций- 0.001 -5.8; натрий- 0.019 - 1600.
Состав минеральных веществ в выше описанных фармацевтических составах был ограничен перечнем минеральных веществ (макроэлементов и микроэлементов) в "Руководстве по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, - 240с". В Руководстве описан метод введения минеральных веществ в раствор, а также методы точного контроля количества минеральных веществ в растворах.
В вышеперечисленных вариантах составов приведены диапазоны весовых значений (в мг/л) компонентов составов, которые по сравнению с прототипом (Мексидол) дают эффект (по техническим результатам) более чем на 3-5%.
Для практической реализации заявленных в изобретении составов, дополнительно к указанным в них минеральным веществам могут быть добавлен любой или добавлены любые из нижеприведенных (за исключением уже указанных в составе минеральных веществ), мг/л:
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо- 0.007-345;
медь- 0.0003 -0.5;
марганец- 0.001 -7.5
цинк- 0.065 - 72.8
кобальт- 0.0003 -0.75;
хром- 0.0006- 1.57;
молибден- 0.0006- 1.59;
кальций- 0.001 -5.8;
натрий- 0.019 - 1600.
Например, первый состав может быть выполнен следующим образом: Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6
метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 3 - 300 10 3;
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо- 0.007-345;
молибден- 0.0006- 1.59.
Или может быть выполнен следующим образом:
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 3 - 300 10 3;
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо- 0.007-345;
кобальт- 0.0003 -0.75;
молибден- 0.0006- 1.59.
В настоящее время в Мире изотопы углерода |3С широко применяются в биохимии и медицине для диагностики. В заявке представлены результаты собственных исследований по влиянию изотопов углерода С на стабильность и эффективность действия лекарственных составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат.
Установлено, что повышение стабильности заявленного фармацевтического состава в течение срока годности может быть достигнуто за счет замены (от 0.5% до 75%) изотопов углерода С на изотопы углерода С. Установлено, что изотопы углерода 13С в молекулах пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и молекулах 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат замедляют происходящие в молекулах химические реакции, формируют более прочные ковалентные связи, чем изотопы углерода 12С.
Изотопы углерода С повышают сопротивляемость молекул к окислительному воздействию радикалов.
Изотопы углерода С не токсичны. Проведенные эксперименты показывают, что кормление мышей и крыс пищей, обогащенной на 75% углеродом 13С, не приводит к побочным эффектам и ухудшению их здоровья.
В процессе экспериментальной проверки, заявленных фармацевтических составов, обогащенных изотопами углерода С установлено, что эти составы обладают повышенной стабильностью, они не токсичны и, кроме того, обладают повышенной нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью по сравнению с фармацевтическим составом, в котором отсутствуют изотопы углерода С.
Способы производства стабильного высокообогащенного нерадиоактивного изотопа углерода-13 широко применяются в российской и мировой промышленности. Хорошо отработаны способы получения изотопа углерода-13 методом газовой диффузии через пористые перегородки, диффузии в потоке пара, термодиффузии, а также методом дистилляции, изотопного обмена, центрифугирования, электролиза, генной инженерии и др. Краткая характеристика этих методов приведена в источнике /13/.
В Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова отрабатывают современные нанотехнологии получения и включения атомов стабильных изотопов углерода С в молекулы различной структуры. В академии получают молекулы изотопномеченных соединений с различными уровнями изотопного обогащения - от долей процентов до ста процентов изотопов в веществе. Работы ведутся в интересах медицинской
диагностики. В источнике /14/ приведено 165 ссылок на иностранные источники информации по изотопному обогащению различных веществ.
В свою очередь, авторы активно участвовал в работах по изотопному обогащению углеводородов, а также реагентов для получения различных лекарственных препаратов. Обогащение реагентов изотопами углерода С (замещение изотопов углерода 12С на изотопы углерода ЬС) осуществляли в кавитационном реакторе конструкции профессора Кормилицына В.И. (Московский Энергетический Институт - технический университет).
Реактор был изготовлен по методике, приведенной в источнике /15/. Скорость течения в реакторе, по длине канала, изменялась от 10м/с до 50м/с.
На фиг.36 представлена схема кавитационного реактора для изотопного обогащения различных смесей, в частности, углеводородных реагентов для получения пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, обогащенных изотопами углерода 13С. Реактор расположен в установке, которая содержит насос 6НК-6х1, обеспечивающий максимальный расход 90 м3/час, напор 125 м при мощности электродвигателя 75кВт, частоте оборотов ротора электродвигателя и колеса насоса 2950 об/мин. Дополнительно установка содержит емкости для реагентов и измерительные приборы.
Обогащение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат изотопами углерода 13С осуществляют аналогично.
Схема установка представлена на фиг.38.
Кавитационный реактор 1 (см. фиг.36) выполнен в виде плоского сопла Лаваля с телами кавитации 2-9 в канале 10.
На фиг.37 представлено поперечное сечение кавитационного реактора. Канал реактора в области тел кавитации разделяется на несколько каналов. Например, тела кавитации 5 и 6 разделяют канал на более мелкие каналы 13, 14 и 15. Снаружи канал ограничивают стенки 16 и 17, а также две крышки 11 и 12.
На фиг. 16 стрелками 18 показано направление движения реагента на входе в реактор, стрелкой 19 показано направление движения реагента на выходе из реактора.
В стенке 16 выполнены каналы 24 и 25 для подачи в зоны кавитации двуокиси углерода и азота.
Установка работает следующим образом. Углеводородный реагент из емкости 28 с помощью насоса 26 прокачивается через реактор 27 и поступает обратно в емкость 28. Падение давления на реакторе контролируется манометрами 29 и 30. Температура реагента контролируется по термометру 31. Подогрев реагента в емкости осуществляют нагревателем 32.
При работе реактора углеводородный реагент движется по каналу кавитатора в направлении 18. При обтекании тел кавитации поток разделяется на несколько потоков. За телами кавитации возникают области кавитации. В частности, за телами (если смотреть по направлению движения реагента) кавитации 2, 3 и 4 располагаются зоны кавитации 20, 21, 22 и 23. При входе в область кавитации реагент "закипает", возникают кавитационные пузырьки, при выходе из области кавитации кавитационные пузырьки схлопываются. При этом, в области (в месте) схлопывания кавитационного пузырька наблюдается повышение давления до нескольких тысяч атмосфер и повышение температуры до тысячи и более градусов Цельсия. Через каналы 24 и 25 в поток подается двуокись углерода таким образом, чтобы газ попал в зоны кавитации.
Парогазовая смесь, полученная в реакторе совместно с жидким реагентом поступает в емкость 28. Далее парогазовая смесь по трубопроводу 33 поступает в сепаратор с пористой перегородкой, где парогазовые смеси с 13С и ,2С разделяются.
В экспериментах реактор работал от нескольких часов до нескольких суток. Установлена прямая зависимость степени обогащения парогазовой смеси и реагента изотопом 13С от времени работы кавитационного реактора.
Контроль количества изотопов углерода 13С осуществлялся масс-спектроскопией высокого разрешения.
В результате экспериментов было достигнуто обогащение реагента изотопом углерода 13С до 75%.
Таким образом, были получены фармацевтические составы, содержащие пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с содержанием изотопа углерода С от 0.5% до 75% от всего углерода в фармацевтическом составе.
Обогащение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат изотопами углерода 13С осуществляют аналогично.
Кроме того, проведены работы по обогащению реагентов для получения различных лекарственных препаратов изотопами 15N.
Замещение изотопов азота 14N на изотопы азота l5N осуществляли в вышеописанном кавитационном реакторе. При работе реактора реагент движется по каналу кавитатора в направлении 18. При обтекании тел кавитации поток разделяется на несколько потоков. За телами кавитации возникают области кавитации. При входе в область кавитации реагент "закипает", возникают кавитационные пузырьки, при выходе из области кавитации кавитационные пузырьки схлопываются. В эксперимента через каналы 24 и 25 в поток подавали подогретый до 100 - 150°С азот таким образом, чтобы газ попал в зоны кавитации.
Парогазовая смесь, полученная в реакторе совместно с реагентом поступает в емкость 28. Далее парогазовая смесь по трубопроводу 33 поступает в сепаратор с пористой перегородкой, где парогазовые смеси с 14N и l5N разделяются.
В результате экспериментов было достигнуто обогащение реагента изотопом азота 15N до 13.75%. Значение показателя "п" принимало значения от 0.01% до 13.75%.
Показатель "п" определяли по формуле n = n15NT00% / (n14N+n15N),
где n15N - количество изотопов азота с относительной атомной массой 15.0037;
n14N - количество изотопов азота с относительной атомной массой
14,0067.
Таким образом, были получены следующие фармацевтические составы, обладающие нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
А. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro),
отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 3 - 300 ' 10 3;
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0;
магний- 0.0001 -70.3;
железо - 0.007 - 345,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы азота 15N , и отношение количества изотопов азота 15N к общему количеству азота в фармацевтическом составе составляет величину от 0.0001 до 0.1375.
Б. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
3 3
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 ' 10 - 300 10 ; полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0; магний- 0.0001 -70.3; железо - 0.007 - 345,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит
13 13
изотопы углерода С, и отношение количества изотопов углерода С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75;
и, кроме того, фармацевтический состав содержит изотопы азота 15N , и отношение количества изотопов азота l5N к общему количеству азота в фармацевтическом составе составляет величину от 0.0001 до 0.1375.
Таким образом, при реализации заявленных фармацевтических составов обеспечивается:
- увеличение скорости наступления лечебного эффекта (уменьшение времени наступления лечебного эффекта) при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и препарата 2-этил-6-метил-З-гидроксипиридина сукцинат при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- повышение стабильности фармацевтического состава с полипептидом метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и препаратом 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат в течение срока годности.
-
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 1 граммом препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.1 миллиграммом пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
и минеральных веществ
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 10 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.1 миллиграммом пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Таблица 5
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 10 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.1 миллиграммом пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Таблица 6
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные
Порядковый номер фармацевтического состава с 10
вещества
граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.1 миллиграммом пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных
веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 50 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.5 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
и минеральных веществ
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 3 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 3 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Таблица 12
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 3 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 10 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
105
106
107
108
109
111
112
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода |3С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
и минеральных веществ
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 30 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
121
122
123
124
125
126
127
128
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 30 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
137
138
139
140
141
142
143
144
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 300 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.1 миллиграммом пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro в литре
153
154
155
156
157
158
159
160
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
и минеральных веществ
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в
фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 0.4 граммом препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и 0.1 миллиграммом пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
185
186
187
188
189
190
191
192
Калий, мг/л
0.0001
0.001
0.1
1.63
158.0
275.0
530.0
880.0
Магний, мг/л
0.00001
0.0001
0.001
0.28
70.3
105.0
200.0
330.0
Железо, мг/л
0.0007
0.007
0.01
9.88
345.0
556.0
1270.0
1780.0
Результаты проверки противогипоксической активности препарата Мексидол, доза^ 100мг (одна ампула с содержанием препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 50г/л)
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ. Доза 100 мг. Средняя продолжительность жизни, мин
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro минеральных веществ и изотопов углерода |3С. Доза препарата 100 мг. Средняя продолжительность жизни, мин
Время Тв, мин
Порядковый номер фармацевтического состава с 50 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и с 0.5 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
33.6
36.5
37.6
38.3
38.9
38.9
33.6
33.1
37.4
37.8
38.6
39.3
43.3
43.3
37.5
37.0
38.0
39.5
41.6
42.5
43.8
43.8
38.1
38.0
гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro минеральных веществ и изотопов углерода 13С. Доза препарата 100 мг. Средняя продолжительность жизни, мин
Время Тв, мин
Порядковый номер фармацевтического состава с 50 граммами препарата 2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат и с 0.5 миллиграммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
33.6
36.5
37.9
38.8
41.9
41.9
33.6
33.1
37.4
37.8
38.6
39.5
43.7
43.7
37.5
37.0
38.0
39.5
41.6
42.7
44.1
44.1
38.1
38.0
Фармацевтические составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ
Фарм. состав №25
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
5.0
Фарм. состав №26
4.7
4.7
4.7
4.7
4.7
4.6
4.5
4.4
4.4
4.3
Фарм. состав №27
4.5
4.5
4.6
4.6
4.6
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
Фарм. состав №28
4.3
4.4
4.6
4.6
4.6
4.5
4.4
4.4
4.4
4.4
Фарм. состав №29
4.2
4.3
4.4
4.5
4.5
4.5
4.4
4.3
4.3
4.3
Фарм. состав №30
4.2
4.3
4.4
4.5
4.5
4.5
4.4
4.3
4.3
4.3
Фарм. состав №31
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
5.0
Фарм. состав №32
5.1
5.1
5.2
5.4
5.4
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
Фарм. состав №33
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
5.0
Фарм. состав №34
4.7
4.7
4.7
4.7
4.7
4.6
4.5
4.4
4.4
4.3
Фарм. состав №35
4.5
4.5
4.6
4.6
4.6
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
Фарм. состав №36
4.3
4.4
4.6
4.6
4.6
4.5
4.4
4.4
4.4
4.4
Фарм. состав №37
4.2
4.2
4.3
4.4
4.5
4.5
4.4
4.3
4.3
4.3
Фарм. состав №38
4.2
4.2
4.3
4.4
4.5
4.5
4.4
4.3
4.3
4.3
Фарм. состав №39
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
5.0
Фарм. состав №40
5.1
5.2
5.2
5.4
5.4
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
Фарм. состав №41
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
5.0
Фарм. состав №42
4.6
4.6
4.6
4.6
4.6
4.6
4.5
4.4
4.4
4.3
Фарм. состав №43
4.5
4.5
4.5
4.5
4.6
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
Фарм. состав №44
4.3
4.3
4.4
4.5
4.5
4.5
4.4
4.4
4.4
4.4
Фарм. состав №45
4.2
4.2
4.3
4.4
4.4
4.4
4.4
4.3
4.3
4.3
Фарм. состав №46
4.2
4.2
4.3
4.4
4.4
4.4
4.4
4.3
4.3
4.3
Фарм. состав №47
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
5.0
Фарм. состав №48
5.1
5.2
5.2
5.4
5.4
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
Результаты проверки нейропротекторного действия (на модели геморрагического инсульта) фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ с изотопами углерода 13С, и нейропротекторного действия препарата мексидол. Количество крыс, не удержавшихся на вращающемся стержне в течение
Таблица 32
Результаты проверки влияния фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также Мексидола на амнезию у
мышей, вызванную электросудорожным шоком. Число мышей с амнезией условной реакции пассивного избегания через 24 часа после амнезирующего воздействия, % (значения округлены до целого числа)
Препарат, порядковый номер фармацевтического состава, доза 20мг на мышь
Препарат вводили однократно внутрибрюшинно за 15, 30, 60, 90 и 120 минут до обучения мышей
120
Мексидол
Мексидол, 20 мг
23* (21м)
(20 )
17 (15**)
15 (13 )
(13 )
Фармацевтические составов на базе пептида Met-Glu-His-препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и ми
Phe-Pro-Gl неральных
у-Рго, . веществ
Фарм. состав №25
Фарм. состав №26
Фарм. состав №27
Фарм. состав №28
Фарм. состав №29
разбавлен водой 1 : 50)
Фармацевтические составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат и минеральных веществ
Фармацевтический состав № 1
Фармацевтический состав №2
Фармацевтический состав №3
Фармацевтический состав №4
Фармацевтический состав №5
Фармацевтический состав №6
Фармацевтический состав №7
Фармацевтический состав №8
Фармацевтический состав №9
Фармацевтический состав №10
Фармацевтический состав №11
Фармацевтический состав №12
Фармацевтический состав №13
Фармацевтический состав №14
Фармацевтический состав №15
Фармацевтический состав №16
Фармацевтический состав №17
Фармацевтический состав №18
Фармацевтический состав №19
Фармацевтический состав №20
Фармацевтический состав №21
Фармацевтический состав №22
Фармацевтический состав №23
Фармацевтический состав №24
Фармацевтический состав №165
Фармацевтический состав №166
Фармацевтический состав №167
Фармацевтический состав №168
Фармацевтический состав №89
Фармацевтический состав №90
Фармацевтический состав №91
Фармацевтический состав №92
Фармацевтический состав №93
Фармацевтический состав №94
Фармацевтический состав №95
Фармацевтический состав №96
Фармацевтический состав №97
Фармацевтический состав №98
Фармацевтический состав №99
Фармацевтический состав №100
Фармацевтический состав №101
Фармацевтический состав №102
Фармацевтический состав №103
Фармацевтический состав №104
100
Фармацевтический состав №105
Фармацевтический состав №106
Фармацевтический состав №107
Фармацевтический состав №108
Фармацевтический состав №109
Фармацевтический состав №110
Фармацевтический состав №111
100
Фармацевтический состав №112
100
Фармацевтический состав №113
Фармацевтический состав №114
Фармацевтический состав №115
Фармацевтический состав №116
Фармацевтический состав №117
Фармацевтический состав №118
Фармацевтический состав №119
100
Фармацевтический состав №120
100
Фармацевтический состав №121
Фармацевтический состав №122
Фармацевтический состав №123
Фармацевтический состав №124
Фармацевтический состав №125
Фармацевтический состав №126
100
Фармацевтический состав №127
100
Фармацевтический состав №128
100
Фармацевтический состав №137
Фармацевтический состав №138
Фармацевтический состав №139
Фармацевтический состав №140
Фармацевтический состав №141
100
Фармацевтический состав №142
100
Фармацевтический состав №143
100
Фармацевтический состав №144
100
Литература
1. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ //Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Фисенко В.П. - М., 2000. - С. 153-158.
2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.Д. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: пер. с англ./Под. ред. Батуева А.С. - М.: Высш. шк., 1991.- 399 с.
3. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции // Биофизика. -1992. - Т.37, вып.6. - С.1041-1047.
4. Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. - М., 2004. - 21 с.
5. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001.
6. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, - 240с.
7. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции // Биофизика. -1992. - Т.37, вып.6. - С.1041-1047.
8. В.Х.Хавинсон, В.Г.Морозов, В.Н.Анисимов. Влияние эпиталамина на свободнорадикальные процессы у человека и животных. Успехи геронтологии, 1999г., выпуск 3 .
9. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств. Под редакцией Л.Д.Лукьяновой. - М., 1990.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых
фармакологических веществ. Под редакцией Р.У.Хабриева. - М.: Минздрав РФ,
2005.
11. McGraw СР., Pashayan A.G., Wendel O.T. Cerebral infarction in the Mongolian gerbil exacerbated by phenoxybenzaminetreatment // Stroke. - 1976 - Vol.7, No 5. -P.485-488.
12. Cumin R., Bandle E.F., Gamzu E., Haefely W.E. Effect of the novel compound antiracetam (Ro 13-5057) upon impared learning and memory in rodents // Psychopharmacol. - 1982. - Vol.78. - P.104-111.
13. Разделение изотопов. Физическая энциклопедия. http://dic.academic.ru/dic.nsf/enc_physics/1071/ИЗОТОПОВ .
14. Нанотехнология и включение атомов дейтерия 2Н, углерода 13С, азота 15N, и кислорода 180 в молекулы аминокислот и белков.
http://samlib.rU/o/oleg_wm/cdocumentsandsettingsolegmosinmoidokumentynanotehnol ogiiaiwkliuchenieatomowdeiteriia2hrtf.shtml
15. Р.Ф.Ганиев, В.И.Кормилицын, Л.И.Украинский. Волновая технология приготовления альтернативных видов топлив и эффективность их сжигания.-М.:Научно-издательский центр "Регулярная и хаотическая динамика", 2008.-116 с.
15.
Формула изобретения
1. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 3 - 300 10 3; полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0; магний- 0.0001 -70.3; железо- 0.007-345.
2. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
2-этил-6-метил-3- гидроксипиридина сукцинат - 0.4 10 3 - 300 10 3; полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин - 0.1 - 30;
калий- 0.001 - 158.0; магний- 0.0001 -70.3; железо - 0.007 - 345,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы углерода 13С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75.
3. Фармацевтический состав по любому из пп.1-2, отличающийся тем, что значение рН составляет величину от 4 до 7.
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
VWD1 A, Wavelength=210 nm (RA\C 1 (1).D)
rnAU
3500
3000 -
2500 -
2000
1500 -
1000
500
CD О
Ю Time[min] 15
Фиг.1
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
\ Overlaid Д Stacked Д List j
Interns.:
xio5;
2.0 1.5 1.0 0.5
0.04 415.9
352. S
_J
+MS,3.8-4.2min "(138-150)
200
400
1800
m/z
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Chromatogram - CI (1).D: TIC +AII MS
Intens. x107
4-1
3 2
-i-i-i- 15
-1 1 1 1 r -i-
35 Time [min]
\ Overlaid f\ Stacked ^ List /
¦ИННВ
IS, 4.6-5.2min 8(164-183)
Фиг.З
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Intens.
0.8' 0.60.40.20.0-1 138.3
414.9 ¦
353.1
+MS, 7.0min Й246
200
400
1800
m/z
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
VWD1 A, Wavelength=220 nm (ВALAEV\C 1 (5) HIRO.D)
mAU
CD л CO r-k-1
7.5
Фиг.6
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
VWD1 A, Wavelength=220 nm (BALAE\AC1 (5) HIRO.D)
mAU
400
300 -i
200
100-
0-H
~~Г~
17.5
min
Фиг.7
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Chromatogram - С1 (5) HIRO.D; TIC +AII MS
Intens. хЮ7
Time [min]
\ Overlaid Д Stacked Д List /
¦ME3J
Intens. x104 6
20-
Ў НИ
200
415.9
400
600
800 m/z
Фиг.8
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Фиг.10
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Chromatogram - С1 (5) HIRO.D: TIC +AII MS Ц]
Intens.. x1Q7;
-v..
-i- т
I г 1
18 Time [min]
\ Overlaid
Intens.: X104:
3\ 21 0
4rfSJ4.2-15.5min 8(607-668]
1400
1600
1800
m/z
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
' * * ' Ч ' <
Intens х104
+MS2(153.5)J2.1min "419
1.0
0 8-
0.6
0.4-
0.2-
0.04
81.0
7Л.
f t i ¦ i i i г i i i
70 80 90
94.9
m/z
Фиг.13
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
• i •
+MS2(153.5)Л 2.1 min Й41Э
110
120
150 m/z
Фиг.14
6 ¦
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
шг.ешо|
"Ж.1Ю58
407.6 407.8 408.0 408,2 409,4 408.6 408.8
Фиг.15
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
mAU
600 -
f А
А14
ч--р 2
Фиг.16
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Intens.-x106:
137.9
+MS, 3.4-4.3min tt(122-154)
I 5 НИ
200 400
800 1000 1200 1400 1600 1800 т/г
Фиг.18
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Intens. х105' 1.00.50.0-
Но'
604.4
+MS,6.7min "238
200 400 GOO 800 1000 1200 1400 1600 1800 m/г
Фиг.19
Chromatogram - Ml (200)-3.D: TIC +AII MS
Intens.. x10?
0.80.6 0.4 0.24
~8 ' 10 ' 12 ' 14 ' lҐ ' Time'tmin]
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
mAU -
400350 -¦ 300 ¦ 250200 I 150100 -500 -"
^И11ВИЙ1Ш11
i - <
i i
6 3 10
Фиг.21
Chromatogram -
Mi (100) HIRO.D: TIC +AII MS
Intens. x107j 0.8-
0.6-
0.4-
0.2-
-'¦¦- Г ..-.Г.. i. i i . ._ . .
0.0^
i ¦ V4" i i i*(tm)V" '
2 4 6
8 10
12 14 16 Time[min]
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Intens.;
+MS, 5.6-6.5min "(225-258)
4000:
432.6 1
2000: 0J
159.0 11.
200
400 600
800 1000
1200 1400 1600 1800 m/г
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Фиг.23
mAU
Q C)
800-
eoo
400-
200
4 10
Фиг.24
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Intens. хЮ7'
1.00.80.6 0.4 0.2 0.0
-г-
18 Time[min]
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Intens.
327.1
393.1
282.3
310.4
357. Б
¦JLjtli.4. *
410.1
350 400 Фиг.25
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0-1
t О 0 2
12 18 Timefmin]
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Intens. 400
300
200
100'
123.0
0 > i iii) i 100 200
300 Фиг.26
400
500
0.84
35 А 30 25 20 15 -10 -5
0.0
0,2
0.4
0,6
0.8
1.0 1,2
Time, min
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
ER-M1, ЗВДСЕ-Ш), С13{Н1}
N г*
¦ * S4 г*
Ф со г* * ¦ i ." as со ш
"чин*
г-и
111nil > "чг""рич 1Ч."тч;т | > 1i ¦ i'Tti 401111.111 f 1114 i < i "4 > "ч Щ
) 170 16Q 15G 140 130 120 110 40 30 20 10 Щ
Фиг.30
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
1 ¦•• 1-'-1-I-" LS0.0 149.5
I II j V -г
149.0
ERrMl, DMSO-$6, С13
14.0 133
13*0 Фиг.31
1Й .-'11
l &,f
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
1 D0.-3
sis -Ё ml
i-qi
BS-j 55-=
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
R-2277D1 24
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
100 -,
133.09419 R-2 25504 z=1
95-Е 90-Е 85 -Ё
so-E
75-Ё 70-= 65-Ё 60-Ё 55-Ё 50-= 45i 40-Ё 35-Е 304 25-Ё 20-=
15-
10~
13 9.0878 1 R=213304 z=?
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
А-А
11 16 6 5 17
(19)
(19)
(19)
Таблица 1
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 1
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 3
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 3
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 7
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 7
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 9
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 9
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 11
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 11
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 13
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 13
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 15
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 15
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 17
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 17
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 19
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 19
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
Таблица 21
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 21
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 23
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 23
Фармацевтические составы на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 27
Таблица 27
Таблица 29
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 29
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе препарата 2-этил-6-метил-3-
Таблица 31
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.2
Фиг.4
Фиг.4
Фиг.4
Фиг.4
Фиг.4
Фиг.12
Фиг.12
Фиг.12
Фиг.12
Фиг.22
Фиг.22
Фиг.22
Фиг.22
Фиг.22
Фиг.22
Фиг.22
Фиг.22
300
300
300
300
300
300
300
300
Фиг.32
Фиг.32
Фиг.32
Фиг.32
Фиг.32
Фиг.32
Фиг.32
Фиг.35
Фиг.35
Фиг.35
Фиг.35
Фиг.35
Фиг.35