Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос :  ea201200336a*\id

больше ...
Термины запроса в документе


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и медицине. Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью. Задача решается за счет того, что фармацевтический состав содержит пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества: марганец, кальций, цинк. Кроме того, в фармацевтическом составе часть изотопов углерода 12 С замещена на изотопы углерода 13 С. Техническими результатами изобретения являются увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, повышение стабильности в течение срока годности.


(19)
Евразийское
патентное
ведомство
(21) 201200336 (13) A1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2013.09.30
(22) Дата подачи заявки
2012.03.19
(51) Int. Cl.
A61K38/08 (2006.01) A61K33/06 (2006.01) A61K33/24 (2006.01) A61K 51/08 (2006.01) A61P 5/00 (2006.01)
(54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЙ,
АНТИАМНЕСТИЧЕСКОЙ, АНТИОКСИДАНТНОЙ, ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ, НЕЙРОМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ, ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ (ВАРИАНТЫ)
(96) (71)
(72)
(74)
2012000061 (RU) 2012.03.19
Заявитель:
ЧЕЛЯЕВА АНАСТАСИЯ ГЕННАДЬЕВНА; ЛОБКО
ВЛАДИМИР ПАВЛОВИЧ (RU)
Изобретатель:
Челяева Анастасия Геннадьевна, Лобко Владимир Павлович, Тихоненко Олег Олегович (RU)
Представитель: Тихоненко О.О. (RU)
(57) Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и медицине. Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, ан-тиоксидантной, противогипоксической, противо-ишемической активностью. Задача решается за счет того, что фармацевтический состав содержит пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества: марганец, кальций, цинк. Кроме того, в фармацевтическом составе часть изотопов углерода 12С замещена на изотопы углерода 13С. Техническими результатами изобретения являются увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, повышение стабильности в течение срока годности.
А 61 К 38/08
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
Область техники, к которой относится изобретение.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и может быть использовано при изготовлении и применении фармацевтических составов с полипептидной последовательностью Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, обладающих нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
Уровень техники.
Важной проблемой современной медицины является создание новых средств, способных эффективно защищать, а также лечить заболевания мозга.
Эффективным направлением исследований в этой области является создание новых средств на базе препарата семакс. Семакс - препарат, который эффективно влияет на процессы, связанные с формированием памяти и обучением, улучшает мнестические функции, улучшает адаптацию организма человека к гипоксии, церебральной ишемии, наркозу и другим повреждающим воздействиям. Другими словами, семакс улучшает энергетические процессы мозга, повышая его устойчивость к стрессовым повреждениям, гипоксии. Семакс является хорошим ноотропом, нейрометаболическим стимулятором.
В заявке заявлены два барианта фармацевтического состава.
Аналогом каждому варианту фармацевтического состава является фармацевтическая композиция для лечения ишемического инсульта, содержащая полипептидную последовательность Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (Патент на изобретение РФ 2251429, опубликованный 27.07.2004).
Недостатком аналога является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Кроме того, имеется аналог - патент РФ 2156087, опубликованный 20.09.2000. В патенте описана биологически активная добавка (БАД) к пище, включающая
калий, марганец, цинк, железо и дополнительно 29 различных веществ. В патенте заявлено, что биологически активная добавка обладает антигипоксическими и антиоксидантными свойствами.
Недостатком аналога является невозможность его применения в лечебных целях.
Известно применение Семакса в качестве нейропротектора (Патент на изобретение РФ 2394816, опубликованный 20.07.2010). В патенте РФ 2394816 в таблице 7 представлено изменение неврологического дефицита у крыс после двусторонней перевязки общих сонных артерий под влиянием препарата Семакс, Мексидол и Амтизол. В патенте делается вывод о том, что Мексидол более предпочтителем, Семакс из-за не достаточной эффективности последнего и невозможности повышения его концентрации в растворе.
Известен аналог (Патент на изобретение РФ 2425670, опубликованный 10.08.2011). В аналоге используют Семакс и холина альфосцерат. Препарат холина альфосцерат повышает эффективность применения Семакса.
Известно применение пептида Семакса формулы Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве антитромботического, антикоагулянтного, фибриндеполимеризационного и фибринолитического средства (Патент РФ2290194, опубликованный 27.12.2006).
Недостатком аналога является его относительно малая эффективность лечебного действия.
Известно применение полипептидной последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве стимулятора памяти (Авторское свидетельство СССР 939440, опубликованное 30.06.1982), который является основой ноотропного средства и фармацевтической композицией ноотропного действия (Патент РФ № 2045958, С 16 А 61 К 38/08, 1994).
Недостатком аналога является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Известно заявка на изобретение 2006146529, опубликованная 20.07.2008. В заявке описана фармацевтическая композиция, обладающая нейротропной, антиамнестической, противогипоксической и противоишемической активностью. Композиция, в качестве активных компонентов, содержит
Семакс и Мексидол или их фармацевтически приемлемые соли в терапевтически эффективных количествах. Здесь эффективность Семакса повышается за счет применения Мексидола.
Известен также патент ЕАПВ 008591, опубликованный 29.06.2007. В патенте предложено использовать производные 3-(3,5-диоксо-4,5-дигидро-ЗН-(1,2,4)триазин-2-ил) бензамида в качестве ингибиторов Р2Х7 для лечения различных заболеваний, в том числе ишемию при инсульте или сердечном приступе. В патенте предусмотрено использование изотопов 13С, 15N и др. для внесения изотопных меток в лекарственное средство. По изотопам определяют динамику распространения лекарства в тканях организма.
Прототипом двум вариантам изобретения является фармацевтический состав (Семакс. Публикация в сети Интернет:
http://semaks.ru/SEMAX/semax_0l_short.htm), обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
Препарат применяют при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения и связанных с ней заболеваниях, в том числе при инсульте и его последствиях.
Усиление действия препарата осуществляют увеличением его количества (увеличением числа капель в нос или увеличением частоты закапывания). В частности, при инсультах средней тяжести вводится по 2 капли в каждую ноздрю, три раза в день (1% Семакс). А при тяжелом инсульте вводится по четыре капли в каждую ноздрю, пять раз в день.
Исследования показали, что прототип не всегда эффективен при этих патологиях. Другим недостатком прототипа является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Признаки прототипа "фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин
(Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro" совпадают с признаками заявленных вариантов изобретения.
У прототипа фармацевтически приемлемым растворителем является вода (дистиллированная вода). Фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом в фармацевтическом составе является метиловый эфир параоксибензойной кислоты (нипаген).
Нипагин относится к фармакологической группе: Антисептики и дезинфицирующие средства.
Структурная формула полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro):
Недостатками прототипа являются относительно малая скорости наступления лечебного эффекта, не достаточно большой лечебный эффект фармацевтического средства, низкая стабильность фармацевтического состава в течение срока годности.
Сущность изобретения.
Дадим определения терминам.
Срок годности - период, в течение которого фармацевтический состав сохраняет свои свойства в мере, обеспечивающей его использование по назначению.
Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической,
антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
Задача решается за счет того, что фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержит полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 10 3 - 80 • 10 3;
кальций - 0.001 - 2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9.
Также задача решается за счет того, что фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержит полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 • 10 3 - 80 10 3;
кальций - 0.001 - 2.56;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк- 0.065-66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит
13 13
изотопы углерода С, и отношение количества изотопов углерода С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75.
Фармацевтический состав выполнен в виде раствора, например, назальных капель (для применения интраназально). Фармацевтический состав имеет значение рН от 4 до 7.
Кинематическая вязкость фармацевтического состава, выполненного в виде раствора, от 1.01 до 1.23 мм /с. Кинематическую вязкость фармацевтического состава определяют с помощью капиллярного вязкозиметра.
В фармацевтическом составе кроме действующего вещества (полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин или его фармацевтически приемлемой соли) и минеральных веществ могут использовать фармацевтически приемлемый растворитель. Кроме растворителя, в фармацевтическом составе могут использовать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
В качестве фармацевтически приемлемого растворителя может быть использована вода (дистиллированная вода), а также другой растворитель.
В качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества может быть использован метиловый эфир параоксибензойной кислоты (например, от 0.01 до 80 г/л) или другое вещество.
Другими словами, основой фармацевтического состава являются действующее вещество полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и минеральные вещества в фармацевтически приемлемом растворителе, в частности, в воде.
В фармацевтическом составе действующее вещество (полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин) и минеральные вещества выбирают из вышеуказанных диапазонов, а растворитель - остальное.
Техническими результатами изобретения являются:
- увеличение скорости наступления лечебного эффекта (уменьшение времени наступления лечебного эффекта) при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы
и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- повышение стабильности фармацевтического состава с полипептидом метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) в течение срока годности.
В настоящее время, увеличение скорости наступления лечебного эффекта при введении лекарственных средств в организм обеспечивают:
- дозировкой средства и временем его воздействия;
- введением в раствор вспомогательного ингредиента - ускорителя скорости воздействия (частный случай регулятора скорости воздействия).
Приведем примеры.
Известен раствор (заявка РФ N 94015245, опубликованная 27.12.1995) в котором в качестве регулятора скорости воздействия используют 5-10% раствор гиалуроновой кислоты.
Известен кардиостимулирующий препарат (патент РФ N 2068697, опубликованный 10.11.1996), содержащий яд зеленой жабы, хлорбутанодигидрат, хлористый натрий и воду. Для повышения скорости наступления кардиостимулирующего эффекта (при сохранении продолжительности действия), обеспечиваемого указанным ядом, в препарат вводят до 95% этилового спирта. Спирт за счет осмотических явлений вызывает болевые ощущения и местную негативную реакцию, что и ускоряет действие препарата.
Известны биологически активные добавки, которые при их введении совместно с действующим началом повышают фармакологическую активность лечебных препаратов за счет оптимизации скорости усвоения действующего начала. Так в противоопухолевое средство (Авторское свидетельство СССР
1683190, опубликованное 20.04.1995) дополнительно вводят поливинилпирролидон и сорбиновую кислоту. Эти компоненты повышают противоопухолевую активность действующего начала.
В изобретении достигается увеличение скорости наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации действующего вещества в фармацевтическом средстве, за счет введение в состав фармацевтического средства минеральных веществ.
Ниже приведем общие сведения о минеральных веществах.
Минеральные вещества подразделяют на макро- и микроэлементы.
К макроэлементам относятся кальций, фосфор, магний, калий, натрий, хлор и
сера.
Микроэлементов: железо, медь, марганец, цинк, кобальт, йод, фтор, хром, молибден, ванадий, никель, стронций, кремний, селен признаны необходимыми для жизнедеятельности человека и животных.
Макроэлементы регулируют водно-солевой обмен, поддерживают осмотическое давление в клетках и межклеточных жидкостях, что необходимо для передвижения между ними питательных и лекарственных веществ. Процессы кроветворения происходят с участием железа, меди, марганца, кальция и других минеральных веществ (элементов). Минеральные вещества (микроэлементы) активируют действие ферментов, гормонов, участвуют во всех видах обмена веществ.
Минеральные вещества (Fe, Си, Zn и другие) в растворе (в частности, в фармацевтическом составе) находятся в составе фармацевтически приемлемых солей, например, сукцинатов, хлоридов, карбонатов или сульфатов, а также в составе различных фармацевтически приемлемых комплексных соединений.
Минеральные вещества, соли металлов оказывают противомикробный эффект, инактивируя ферменты, необходимые для жизнедеятельности микроорганизмов. Инактивация ферментов происходит путем взаимодействия ионов металлов с сульфгидрильными группами ферментов.
На слизистые оболочки металлы оказывают выраженное местное действие. При рассматриваемых в заявке концентрациях минеральных веществ, местное действие этих веществ может быть вяжущим или раздражающим.
Механизм местного действия металлов обусловлен их способностью реагировать с белками тканей. В результате такого взаимодействия белки свертываются и образуют с ионами металлов альбуминаты. При этом, если происходит частичное свертывание белков только в самых поверхностных слоях тканей, наблюдается вяжущий или раздражающий эффект, имеющий обратимый характер.
Проведенные исследования показали, что минеральные вещества, входящие в состав препарата, усиливают их лечебный эффект. Обеспечивается это, в основном, за счет явно выраженного раздражающего эффекта на ткани организма, а также путем воздействия на ферментативную систему организма.
Для всех вариантов, рассматриваемых в изобретении фармацевтических составов рациональные диапазоны значений содержания минеральных веществ, следующие:
кальций- 0.001 -2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9.
Данные диапазоны частично пересекаются с диапазонами значений минеральных веществ в БАД (см. патент РФ 2156087). Новизна изобретения обеспечивается за счет использования в фармацевтическом составе полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
При разработке изобретения установлено, что увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в фармацевтическом составе, повышение стабильности фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в течение срока годности, обеспечивается введением в фармацевтический состав определенных минералов (определенной комбинации минералов) в строго определенном для каждого минерала количестве. В результате проведенных исследований для каждого минерала установлен весовой диапазон в фармацевтическом составе. Использование меньшего, чем указано в диапазоне, количества минерального вещества не приводит к достижению технических
результатов. Использование большего, чем указано в диапазоне, количества минерального вещества не только не приводит к достижению технических результатов, но ухудшает лечебный эффект от действия пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Установлено, что с повышением концентрации минеральных веществ в фармацевтическом составе (выше заявленных диапазонов) они подавляют действие пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, лечебный эффект от препарата исчезает.
Дополнительное увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в фармацевтическом составе, повышение стабильности фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в течение срока годности обеспечивается частичным замещением в фармацевтическом
12 13
составе изотопов углерода С на изотопы углерода С. Перечень фигур чертежей.
На фиг. 1 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с УФ-детектором (210нм). Сорбент С18.
На фиг.2 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 4.096 мин.
На фиг.З представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 4.664 мин.
На фиг.4 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 5.282 мин.
На фиг.5 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 12.163 мин.
На фиг.6 представлена хроматограмма (левая часть) заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с УФ-детектором (220нм).
На фиг.7 представлена хроматограмма (правая часть) заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с УФ-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 5.274.
На фиг.8 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 5.274.
На фиг.9 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 6.366.
На фиг. 10 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 7.263.
На фиг. 11 представлена хроматограмма (левая часть) заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 14.648.
На фиг. 12 представлена хроматограмма (правая часть) заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 14.648.
На фиг. 13 представлен MSMS спектр (левая часть) молекулярного иона со значением Z = 153.5.
На фиг. 14 представлен MSMS спектр (правая часть) молекулярного иона со значением Z = 153.5.
На фиг. 15 представлен масс-спектр высокого разрешения фармацевтического состава.
На фиг. 16 представлена схема кавитационного реактора для изотопного обогащения различных смесей.
На фиг. 17 представлено поперечное сечение кавитационного реактора.
На фиг. 18 представлена схема установки по изотопному обогащению.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Изобретение иллюстрируется представленными ниже примерами.
Пример 1 - способ введения минеральных веществ в воду.
Пример 2 - способ получения фармацевтических составов и проверка на стабильность.
Пример 3 - испытания на общую токсичность.
Примеры 4-8 иллюстрируют эффективность заявленных фармацевтических составов обладающих нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью. Исследования проведены с использованием материалов, опубликованных в источниках /1 - 5/. В заявке, для наглядности, представлены сравнения действия заявленных фармацевтических составов с действием препарата Семакс на моделях, которые использовались для исследования эффективности препарата Мексидол. Концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro выбирались таким образом, чтобы результаты можно было сравнить с результатами применения препарата 2-этил-6-метил-З-гидроксипиридина сукцинат.
Пример 1. Введение минеральных веществ в раствор (в воду) осуществляли по методике /6/. Существуют и другие способы введения минеральных веществ в раствор. Растворы готовили из чистых металлов при использовании фармацевтически приемлемых растворителей, обеспечивающих устойчивость растворов при хранении.
Для проведения углубленных исследований, при разработке заявки на изобретение, концентрации металлов в растворах обеспечивались в следующих диапазонах, мг/л:
кальций- 0.001 -2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9.
Кроме того, были проведены исследования на сверхбольшое содержание минеральных веществ в составах. Об этих исследованиях будет написано ниже.
Контроль концентраций металлов в растворах осуществляли атомно-абсорбционным методом определения содержания натрия, калия, кальция, магния, железа, марганца, меди, цинка, свинца, кадмия, кобольта, никеля, хрома. П. 1.3.2.1 источника 161.
Кроме того, исследовались и другие фармацевтические составы, содержащие пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с минеральными веществами: железо, калий медь, кобальт, хром, натрий и молибден. Для исследований, концентрации этих металлов в растворах обеспечивались в следующих диапазонах, мг/л:
медь- 0.0003 -0.56;
кобальт- 0.0003 -0.67;
хром- 0.0012- 1.89;
молибден- 0.0006- 1.89; калий - 0.001 - 17.5; железо- 0.007-24.5; натрий- 0.019 - 350.
Пример 2. Для примера, опишем получение одного фармацевтического состава с марганцем, цинком и кальцием определенной концентрации.
В реактор с мешалкой, наливают 8 л воды для инъекций. После чего в реактор загружают пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 1 Or, заливают раствор с марганцем (общее содержание марганца 0. 23 мг), заливают раствор с кальцием (общее содержание кальция 0. 02 мг), заливают раствор с цинком (общее содержание цинка 6.6 мг), при постоянном перемешивании. Затем доводят рН раствора до значения 4,5. Полученный раствор доводят до объема 10 л водой для инъекций и пропускают через фильтр.
Контроль показал качественное выполнение фармацевтического состава.
Аналогичным образом были получены и проконтролированы другие заявленные фармацевтические составы с минеральными веществами и пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
Проведены лабораторные исследования заявленных фармацевтических составов. В заявке на фиг. 1-15 проиллюстрированы исследования только одного фармацевтического состава:
пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 1г/л (Капли назальные, 0,1%);
минеральные вещества, мг/л:
кальций- 0.001 -2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9.
На фиг. 1-12 представлены хроматограммы исследованного образца фармацевтического состава с минеральными веществами.
На фиг. 13 и 14 представлены MSMS спектры фармацевтического состава. А на фиг. 15 представлен масс-спектр высокого разрешения фармацевтического состава.
Остальные заявленные и описанные в заявке фармацевтические составы также подвергались лабораторным исследованиям. Хроматограммы образцов фармацевтических составов с другим составом минеральных веществ аналогичны (различия малы и на графиках соизмеримы с толщенной линии).
Кроме того, исследованы электрические характеристики фармацевтических составов. Установлено, что действующее вещество и минеральные вещества присутствуют в фармацевтическом составе в количествах, обеспечивающих
при температуре 253 - 773К, частоте электрического или электромагнитного поля в диапазоне от 50 Гц до 100Гц, значение действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости в диапазоне от 5 до 80. Диэлектрическая проницаемость фармацевтического состава характеризует его способность к накоплению электрических зарядов.
Установлено, величина действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости может изменяться путем изменения концентрации (содержания) пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ. Целесообразно, для повышения фармацевтического действия обеспечивать значение действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости в диапазоне от 5 до 80. Если её значение будут ниже или выше, то эффективность действия фармацевтического состава может уменьшаться. Поэтому в исследованиях показатель "действительная составляющая относительной диэлектрической проницаемости" являлся контрольным, своего рода критерием применимости фармацевтического состава.
Пример 3. Испытания на общую токсичность проводили путем внутрибрюшинного введения фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Ргои минеральных веществ крысам.
Для проведения исследований концентрации минеральных веществ в растворах выбраны, мг/л:
калий - 30.000;
магний -
80.000;
железо -
30.000;
цинк -
80.000.
марганец -
10.000;
медь -
1.000;
кобальт -
1.000;
хром -
2.000;
молибден -
2.000;
кальций -
3.500;
натрий -
390.0.
LD50 составляет величину до 1000 мг/кг при внутрибрюшинном введении.
При внутримышечном введении LD50 составляет величину до 3000 мг/кг, что позволяет отнести заявляемые составы к нетоксичным веществам.
При длительном применении фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ у крыс не выявило изменений со стороны органов и тканей организма (были несущественные).
Пример 4. Антиоксидантную активность фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и содержащих изотопы 13С, сравнивали с антиоксидантной активностью препарата семакс хемилюминесцентным методом 111.
В фармацевтических составах содержание пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.15г/л. Препарат Семакс также содержал пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.15г/л. Препарат Семакс 0.1% был разбавлен водой 1:6.7 до необходимой концентрации действующего вещества в воде (порядковые номера фармацевтических составов 49 - 56). Результаты сравнения приведены в таблице 13.
Также сравнивали Семакс, содержащий пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro -0.15г/лс фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода |3С равным 0.5% и 75% от всего углерода в фармацевтическом составе (порядковые номера фармацевтических составов 57 - 72). Результаты сравнения приведены в таблице 13.
Установлено, что по антиоксидантной активности (АОА) фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ в основном превосходили Семакс на величину до 17%.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 49, 57 и 65 не превосходили Семакс.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 55 и 56 по АОА практически не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 54.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 63 и 64 по АОА не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 62.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 71 и 72 по АОА не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 70. У составов 71 и 72 наблюдалось некоторое снижение АОА.
Следовательно, фармацевтические составы с порядковыми номерами 55 и 56, 63 и 64, 71 и 72 применять в качестве антиоксидантного средства экономически не целесообразно (затратно).
Исследования на антиоксидантную активность фармацевтических составов также проведены по методике /8/. Результаты, в основном, аналогичны вышеприведенным.
Пример 5. Противогипоксическую и нейрометаболическую активность фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro,
минеральных веществ и содержащих изотопы углерода С, сравнивали с активностью препарата Семакс.
Сравнения выполнены на белых нелинейных мышах (самцах) массой 25 - 27 г по острой гипоксии 19, 10/.
Острую гипоксию (нормобарическую гипоксическую гипоксию) моделировали путем помещения мышей в термокамеру объемом 250 см3.
В опытах регистрировали продолжительность жизни животных после прекращения доступа воздуха в термокамеру. Животные помещались в термокамеру поодиночке.
Семакс вводили однократно внутрибрюшинно за 30, 60 и 90 минут до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в термокамеру.
Время от момента введения препарата до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в таблицах обозначено Тв в минутах.
Каждый из фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro Gly-Pro и минеральных веществ, вводили однократно внутрибрюшинно также за 30, 60 и 90 минут до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в термокамеру.
После помещения мышей в термокамеру, по мере потребления кислорода концентрация его в воздухе и в организме мышей снижалась, а количество углекислого газа возрастало. В результате у животных развивалась острая гипоксическая гипоксия. Продолжительность жизни (до остановки дыхания) регистрировали с помощью секундомера и по ее увеличению судили об эффективности испытанных препаратов.
Результаты сравнения противогипоксической и нейрометаболической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода 13С, с противогипоксической активностью препарата Семакс приведены в таблицах 14-17
На модели острой нормобарической гипоксической гипоксии (в термокамере) установлено, что большая часть фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ увеличивала продолжительность жизни мышей в среднем более чем на 5% по сравнению с разбавленным 1:6.7 Семаксом.
Установлено увеличение скорости наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства. Это хорошо видно в таблице 17. Заявленные препараты увеличивают скорость наступления лечебного эффекта, что сближает значения продолжительности жизни при Тв = ЗОмин и Тв =60мин и 90 мин.
Достигнуто увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации и количества пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
Сравнения также проведены на моделях: острой гипобарической гипоксии в вытяжной барокамере с имитацией подъема животных со скоростью 50 м/с до высоты 11000 м; острой гемической гипоксии и острой гистотоксической гипоксии.
Результаты этих сравнений аналогичны, результатам, полученным на модели острой нормобарической гипоксической гипоксии.
Кроме того, были проведены исследования по повышению концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до величины 80г/л. Наблюдалось повышение эффективности действия по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Однако повышение не превышало 3-5%. Повышение концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro более 80г/л, в частности, до 240 г/л приводило к снижению эффективности по сравнению с лучшими фармацевтическими составами.
Пример 6. Нейропротекторное действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и содержащих
изотопы углерода С сравнивали с нейропротекторным действием препарата Семакс.
При сравнении концентрация пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.038 г/л. Семакс разбавляли водой 1:26.
Сравнительные исследования выполнены на белых нелинейных крысах-самцах массой 230-250 г, у которых моделировали ишемический инсульт и геморрагический инсульт.
Ишемический инсульт у крыс воспроизводили двусторонней перевязкой общих сонных артерий. Подопытным животным вводили внутри брюшинно Семакс и заявленные фармацевтические составы с порядковыми номерами от 25 по 48. Характеристики этих фармацевтических составов приведены в таблицах 4-6.
Животных после операции наблюдали в течение 2 недель с учетом выживаемости крыс. Неврологический дефицит у животных определяли каждый час в течение первых 24 ч, а затем 1 раз в сутки. Тяжесть состояния определяли по сумме соответствующих баллов.
Результаты исследования нейропротекторного действия препаратов представлены в таблице 18. Анализ результатов, приведенных в таблице показал, что у крыс, получивших внутрибрюшинно Семакс, неврологический дефицит был максимально выражен (5.3±0,1 балла) через 3, 4 и 5 сутки после двусторонней перевязки общих сонных артерий. Количество крыс в опыте - 12. Из них погибло 2 животных (16.67%о).
В опытах было установлено, что составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С в дозах 0.07 мг в сутки на крысу оказывает выраженное нейропротекторное действие, в целом превосходя по выраженности действия в отношении неврологического дефицита Семакса.
Было проведено 24 опыта с крысами, получившими внутрибрюшинно фармацевтический состав на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С. Количество крыс в каждом опыте -12. В опытах погибало 10-15% животных.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 25, 33 и 41 по нейропротекторному действию не превосходят Семакс (Смотри таблицу 18). Нейропротекторные действия остальных составов превосходят нейропротекторное действие Семакса.
Наиболее выраженое нейропротекторное действие у фармацевтических составов с порядковыми номерами 26 - 32, 34-40, 42-48.
Однако следует учесть следующее. Фармацевтические составы 31, 32 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 30. Поэтому эти составы использовать не целесообразно. Фармацевтические составы 39, 40 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 38. Поэтому эти составы использовать не целесообразно. Фармацевтические составы 47, 48 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 46. Поэтому эти составы использовать не целесообразно.
Геморрагический инсульт (ГИ) у крыс воспроизводили моделированием локального кровоизлияния в головном мозге (создание ГИ с ишемией мозга) проводили по методике /11/. В соответствие с методикой проводили трепанацию черепа крысы и деструкцию мозговой ткани в области внутренней капсулы с последующим введением в место повреждения крови этой же крысы (0,03 мл крови). Таким образом, достигали инсульт в области внутренней капсулы практически без повреждений соседних тканей мозга.
Фармацевтический состав на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода |3С вводили животным внутрибрюшинно в дозе 0.07мг в сутки на крысу. Семакс вводили животным внутрибрюшинно в дозе 0.07мг в сутки на крысу. Схема введения была
следующей: первую инъекцию осуществляли через 2 ч после операции, потом 3 инъекции через 4 ч. Затем фармацевтический состав на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, а также Семакс вводили ежедневно один раз в сутки в течение 14 суток.
В течение 14 суток после операции оценивали координацию движений на вращающемся стержне в течение 2 минут и способность препаратов повышать выживаемость животных (см. таблицу 19).
Установлено, что фармацевтические составы с порядковыми номерами 25, 33 и 41 по координации движения на вращающемся стержне практически не превосходят Семакс. Нейропротекторные действия остальных составов превосходят нейропротекторное действие Семакса.
Координация движения крыс заметно повышается при применении составов с порядковыми номерами 26 - 32 (см. характеристики составов в таблице 4), 34-40 (см. характеристики составов в таблице 5), 42-48 (см. характеристики составов в таблице 6). Однако следует учесть следующее.
Фармацевтические составы 31, 32 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 30. Одинаковость значений отмечены значками "-//-". Поэтому эти составы использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы 39, 40 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 38. Одинаковость значений отмечены значками "-//-". Поэтому эти составы использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы 47, 48 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 46. Одинаковость значений отмечены значками "-//-". Поэтому эти составы использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С повышают (по сравнению с Семаксом) выживаемость крыс после операций.
Как и в примере 5, были проведены исследования по повышению концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до величины 80г/л и выше. Наблюдалось повышение эффективности действия составов с концентрацией до 80г/л по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (См. таблицу 18). Повышение также
не превышало 3-5%. Повышение концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до 240 г/л приводило к снижению эффективности по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами.
О не допустимости чрезмерного повышения содержание препарата Семакс указывалось в патенте РФ 2394816 (см. таблицу 7 в описании патента РФ 2394816).
Пример 7. Антиамнестическое действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, сравнивали с антиамнистическим действием препарата Семакс.
Сравнения выполнены на белых нелинейных мышах (самцах) массой 25 - 27 г.
Влияние фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, и препарата Семакс на амнезию (процессы обучения и памяти) у мышей исследовали, используя условную реакцию пассивного избегания электрокожного раздражения. Мышей подвергали воздействию электросудорожного шока (ток 30 мА в течение 0.3-0.5с к ушным раковинам) сразу после обучения условной реакции пассивного избегания (модель амнезии, вызванной электросудорожным шоком) /10, 12/.
Влияние фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода |3С, и препарата Семакс на амнезию также оценивали на модели скополаминовой амнезии после обучения условной реакции пассивного избегания /10/.
Препараты вводили однократно внутрибрюшинно за 30, 60 и 90 минут до обучения мышей. Сохранность условной реакции пассивного избегания проверяли через 24 ч после амнезирующего воздействия.
На модели амнезии, вызванной электросудорожным шоком, было обнаружено, что у мышей фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода |3С, а также препарат Семакс активно предупреждают развитие амнезии условной реакции пассивного избегания (см. таблицу 20). Число мышей, обучившихся условной реакции пассивного избегания, составляло от 50 до 60%. Причем верхние значения диапазона обеспечивают практически все фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, а также составы,
содержащие изотопы углерода С. Нижнее значение диапазона обеспечивает Семакс.
Анализ таблица 20 показывает, что фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С увеличивают скорость наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства. Также наблюдается увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации фармацевтического средства.
Вышеперечисленные эффекты могут быть достигнуты и за счет применения Семакса путем увеличения дозы Семакса или его концентрации в дозе. В опытах (см. таблицу 20) количество Семакса было увеличено с 0.07 мг до 0.3 мг на мышь.
На модели скополаминовой амнезии было обнаружено, что у мышей фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также препарат Семакс также предупреждают развитие амнезии условной реакции пассивного избегания (см. таблицу 21).
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода |3С увеличивают скорость наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства. Также наблюдается увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации фармацевтического средства.
Увеличение скорости наступления лечебного эффекта и увеличение лечебного эффекта за счет использования Семакса может быть достигнуто путем увеличения его количества в иньекции.
Пример 8. Противоишемическое действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С, сравнивали с противоишемическим действием препарата Семакс. Результаты сравнения представлены в таблице 22.
Исследования проведены на белых нелинейных мышах (самцы) массой 35 -
37г.
Ишемию головного мозга воспроизводили путем перевязки обеих общих сонных артерий. Животных после операции наблюдали в течение 7 дней.
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, и препарат Семакс вводили внутрибрюшинно в течение 7 дней. В первый день препараты вводились дважды: сразу после опирации и через 3 часа после операции. Во второй, третий, и т.д. до седьмого дня препараты вводились один раз в сутки.
После двусторонней перевязки общих сонных артерий (и не использовании вышеуказанных препаратов) более 90% мышей погибали в течение наблюдаемых дней.
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также препарат Семакс существенно увеличивали выживаемость мышей в период наблюдения. При этом концентрация пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro составляла 0.0035г/л. В экспериментах препарат семакс разводили водой в соотношении 1:286.
Увеличение концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в составах до 80г/л приводило к дальнейшему повышению выживаемости мышей до 99%.
Из таблицы 22 видно, что выживаемость мышей при использовании большинства фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С выше, чем выживаемость мышей при использовании разбавленного водой препарата Семакс.
Фармацевтические составы №1, №9 и №17 по действию аналогичны действию Семакса. С увеличением количества минеральных веществ в составах их действие усиливается.
Фармацевтические составы №7, №8 по своему действию не превосходят действие состава №6. Фармацевтические составы №15, №16 по своему действию не превосходят действие состава №14. Фармацевтические составы №23 и №24 по своему действию не превосходят действие состава №22. Поэтому производить и применять их не целесообразно.
Таким образом, описано применение и подтверждены технические результаты состава №1, содержащего, мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) - 0.01 10 3 - 80 10 3;
кальций- 0.001 -2.56;
марганец- 0.006-7.5; цинк- 0.065-66.9.
Также, описано применение и подтверждены технические результаты состава №2 содержащего, мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) - 0.0Г 10 3 - 80 10 3 ;
кальций- 0.001 -2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9,
1 ^
и при этом фармацевтический состав содержит изотопы углерода С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75 ( от 0.5% до 75%)
Проведены также исследования составов содержащих:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
калий - 0.01 - 17.5;
натрий-0.019-350;
железо-0.007-24.5;
цинк-0.065 -66.9;
магний-0.0001 -7.0;
хром-0.0012- 1.89;
марганец -0.006-7.5;
кальций - 0.001 - 2.56;
медь - 0.0003 - 0.56;
кобальт - 0.0003 - 0.67;
молибден-0.0006-1.89.
Проведены также исследования составов содержащих: полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), минеральные вещества и изотопы углерода |3С (от 0.5 до 75%) при следующем соотношении компонентов в мг/л: калий - 0.01 - 17.5;
натрий-0.019-350; железо-0.007-24.5; цинк-0.065-66.9; магний-0.0001 -7.0; хром-0.0012- 1.89; марганец -0.006-7.5; кальций - 0.001 - 2.56; медь - 0.0003 - 0.56; кобальт-0.0003 -0.67; молибден-0.0006-1.89.
Состав минеральных веществ в выше описанных фармацевтических составах был ограничен перечнем минеральных веществ (макроэлементов и микроэлементов) в "Руководстве по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, - 240с". В Руководстве описан метод введения минеральных веществ в раствор, а также методы точного контроля количества минеральных веществ в растворах.
В вышеперечисленных вариантах составов приведены диапазоны весовых значений (в мг/л) компонентов составов, которые по сравнению с прототипом (Семаксом) дают эффект (по техническим результатам) более чем на 3-5%.
Для практической реализации составов №1 и №2, дополнительно к указанным в них минеральным веществам могут быть добавлен любой или добавлены любые из нижеприведенных (за исключением уже указанных в составе минеральных веществ), мг/л:
калий - 0.01 - 17.5;
натрий-0.019-350;
железо-0.007-24.5;
цинк-0.065-66.9;
магний-0.0001 -7.0;
хром-0.0012- 1.89;
марганец -0.006-7.5;
кальций - 0.001 - 2.56;
медь - 0.0003 - 0.56; кобальт-0.0003 -0.67; молибден-0.0006-1.89.
Например, первый состав может быть выполнен следующим образом:
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 ' 10 3 - 80 10 3 ;
кальций- 0.001 -2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9;
молибден-0.0006-1.89.
Или может быть выполнен следующим образом:
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 • 10 3 - 80' 10 3 ;
кальций - 0.001 - 2.56;
марганец- 0.006-7.5;
цинк- 0.065-66.9;
молибден-0.0006-1.89;
кобальт - 0.0003 - 0.67.
В настоящее время в Мире изотопы углерода С широко применяются в биохимии и медицине для диагностики. В заявке представлены результаты
собственных исследований по влиянию изотопов углерода 13С на стабильность и эффективность действия лекарственных составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
Установлено, что повышение стабильности заявленного фармацевтического состава в течение срока годности может быть достигнуто за счет замены (от 0.5% до 75%) изотопов углерода |2С на изотопы углерода 13С. Установлено, что изотопы углерода С в молекулах пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro замедляют происходящие в молекулах химические реакции, формируют более прочные ковалентные связи, чем изотопы углерода С.
Изотопы углерода 13С повышают сопротивляемость молекул к окислительному воздействию радикалов.
Изотопы углерода 13С не токсичны. Проведенные эксперименты показывают, что кормление мышей и крыс пищей, обогащенной на 75% углеродом 13С, не приводит к побочным эффектам и ухудшению их здоровья.
В процессе экспериментальной проверки заявленных фармацевтических составов, обогащенных изотопами углерода 13С установлено, что эти составы обладают повышенной стабильностью, они не токсичны и, кроме того, обладают повышенной нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью по сравнению с фармацевтическим составом, в котором отсутствуют изотопы углерода С.
Способы производства стабильного высокообогащенного нерадиоактивного изотопа углерода-13 широко применяются в российской и мировой промышленности. Хорошо отработаны способы получения изотопа углерода-13 методом газовой диффузии через пористые перегородки, диффузии в потоке пара, термодиффузии, а также методом дистилляции, изотопного обмена, центрифугирования, электролиза, генной инженерии и др. Краткая характеристика этих методов приведена в источнике /13/.
В Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова отрабатывают современные нанотехнологии получения и включения атомов стабильных изотопов углерода 13С в молекулы различной структуры. В академии получают молекулы изотопномеченных соединений с различными уровнями изотопного обогащения - от долей процентов до ста
процентов изотопов в веществе. Работы ведутся в интересах медицинской диагностики. В источнике /14/ приведено 165 ссылок на иностранные источники информации по изотопному обогащению различных веществ.
В свою очередь, авторы активно участвовал в работах по изотопному обогащению углеводородов, а также реагентов для получения различных лекарственных препаратов. Обогащение реагентов изотопами углерода 13С (замещение изотопов углерода С на изотопы углерода С) осуществляли в кавитационном реакторе конструкции профессора Кормилицына В.И. (Московский Энергетический Институт - технический университет).
Реактор был изготовлен по методике, приведенной в источнике /15/. Скорость течения в реакторе, по длине канала, изменялась от 10м/с до 50м/с.
На фиг. 16 представлена схема кавитационного реактора для изотопного обогащения различных смесей, в частности, углеводородных реагентов для получения пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, обогащенного изотопами
углерода С. Реактор расположен в установке, которая содержит насос 6НК-6х1, обеспечивающий максимальный расход 90 м3/час, напор 125 м при мощности электродвигателя 7 5 кВт, частоте оборотов ротора электродвигателя и колеса насоса 2950 об/мин. Дополнительно установка содержит емкости для реагентов и измерительные приборы.
Схема установка представлена на фиг. 18.
Кавитационный реактор 1 (см. фиг. 16) выполнен в виде плоского сопла Лаваля с телами кавитации 2-9 в канале 10.
На фиг. 17 представлено поперечное сечение кавитационного реактора. Канал реактора в области тел кавитации разделяется на несколько каналов. Например, тела кавитации 5 и 6 разделяют канал на более мелкие каналы 13, 14 и 15. Снаружи канал ограничивают стенки 16 и 17, а также две крышки 11 и 12.
На фиг. 16 стрелками 18 показано направление движения реагента на входе в реактор, стрелкой 19 показано направление движения реагента на выходе из реактора.
В стенке 16 выполнены каналы 24 и 25 для подачи в зоны кавитации двуокиси углерода и азота.
Установка работает следующим образом. Углеводородный реагент из емкости 28 с помощью насоса 26 прокачивается через реактор 27 и поступает обратно в емкость 28. Падение давления на реакторе контролируется манометрами 29 и 30. Температура реагента контролируется по термометру 31. Подогрев реагента в емкости осуществляют нагревателем 32.
При работе реактора углеводородный реагент движется по каналу кавитатора в направлении 18. При обтекании тел кавитации поток разделяется на несколько потоков. За телами кавитации возникают области кавитации. В частности, за телами (если смотреть по направлению движения реагента) кавитации 2, 3 и 4 располагаются зоны кавитации 20, 21, 22 и 23. При входе в область кавитации реагент "закипает", возникают кавитационные пузырьки, при выходе из области кавитации кавитационные пузырьки схлопываются. При этом, в области (в месте) схлопывания кавитационного пузырька наблюдается повышение давления до нескольких тысяч атмосфер и повышение температуры до тысячи градусов Цельсия. Через каналы 24 и 25 в поток подается двуокись углерода таким образом, чтобы газ попал в зоны кавитации.
Парогазовая смесь, полученная в реакторе совместно с жидким реагентом поступает в емкость 28. Далее парогазовая смесь по трубопроводу 33 поступает в сепаратор с пористой перегородкой, где парогазовые смеси с 13С и |2С разделяются.
В экспериментах реактор работал от нескольких часов до нескольких суток. Установлена прямая зависимость степени обогащения парогазовой смеси и реагента изотопом 13С от времени работы кавитационного реактора.
1 3
Контроль количества изотопов углерода С осуществлялся масс-спектроскопией высокого разрешения.
В результате экспериментов было достигнуто обогащение реагента изотопом углерода 13С до 75%.
Таким образом, были получены фармацевтические составы, содержащие пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с содержанием изотопа углерода С от 0.5% до 75% от всего углерода в фармацевтическом составе.
Кроме того, проведены работы по обогащению реагентов для получения различных лекарственных препаратов изотопами l5N.
Замещение изотопов азота l4N на изотопы азота 15N осуществляли в вышеописанном кавитационном реакторе. При работе реактора реагент движется по каналу кавитатора в направлении 18. При обтекании тел кавитации поток разделяется на несколько потоков. За телами кавитации возникают области кавитации. При входе в область кавитации реагент "закипает", возникают кавитационные пузырьки, при выходе из области кавитации кавитационные пузырьки схлопываются. В эксперимента через каналы 24 и 25 в поток подавали азот таким образом, чтобы газ попал в зоны кавитации.
Парогазовая смесь, полученная в реакторе совместно с реагентом поступает в емкость 28. Далее парогазовая смесь по трубопроводу 33 поступает в сепаратор с пористой перегородкой, где парогазовые смеси с l4N и 15N разделяются.
В результате экспериментов было достигнуто обогащение реагента изотопом азота 15N до 13.75%. Значение показателя "п" принимало значения от 0.01% до 13.75%.
Показатель "п" определяли по формуле n = n15NT00% / (n14N+nl5N),
где n15N - количество изотопов азота с относительной атомной массой 15.0037;
n14N - количество изотопов азота с относительной атомной массой
14,0067.
Таким образом были получены следующие фармацевтические составы, обладающие нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
А. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 ¦ 10 3 - 80 10 3 ;
кальций- 0.001 -2.56;
марганец - 0.006 - 7.5; цинк- 0.065-66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы азота 15N , и отношение количества изотопов азота 15N к общему количеству азота в фармацевтическом составе составляет величину от 0.0001 до 0.1375.
Б. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 10 3 - 80 10 3;
кальций- 0.001 -2.56;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк- 0.065-66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит
13 13
изотопы углерода С, и отношение количества изотопов углерода С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75;
и кроме того фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы азота 15N , и отношение количества изотопов азота l5N к общему количеству азота в фармацевтическом составе составляет величину от 0.0001 до 0.1375.
Таким образом, при реализации заявленных фармацевтических составов обеспечивается:
- увеличение скорости наступления лечебного эффекта (уменьшение времени наступления лечебного эффекта) при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы
и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- повышение стабильности фармацевтического состава с полипептидом метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) в течение срока годности.
Также установлено, что заявленные фармацевтические составы являются эффективными стимуляторами памяти. Обеспечивают восстановление интеллектуально-мнестических функций нервной системы и улучшают общее состояние больного.
Заявленные фармацевтические составы могут применяться для лечения невритов зрительного нерва.
Кроме того, заявленные фармацевтические составы могут применяться, как антитромботические и антикоагулянтные средства.
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro,
минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% от всего углерода в фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 0.01 грамма пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Кальций, мг/л
0.0001
0.001
0.01
0.02
2.56
189.0
290.0
530.0
Марганец,мг/л
0.0006
0.006
0.01
0.023
7.5
39.0
130.0
335.0
Цинк, мг/л
0.0605
0.065
0.1
0.66
66.9
876.0
1250.0
2350.0
Таблица 3
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 0.01 грамма пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Кальций, мг/л
0.0001
0.001
0.01
0.02
2.56
189.0
290.0
530.0
Марганец,мг/л
0.0006
0.006
0.01
0.023
7.5
39.0
130.0
335.0
Цинк, мг/л
0.0605
0.065
0.1
0.66
66.9
876.0
1250.0
2350.0
Таблица 11
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro,
1 3
минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% от всего углерода в фармацевтическом составе
Минеральные вещества
Порядковый номер фармацевтического состава с 80 граммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Кальций, мг/л
0.0001
0.001
0.01
0.02
2.56
189.0
290.0
530.0
Марганец, мг/л
0.0006
0.006
0.01
0.023
7.5
39.0
130.0
335.0
Цинк, мг/л
0.0605
0.065
0.1
0.66
66.9
876.0
1250.0
2350.0
3.44
3.46
3.46
3.73
3.81
4.04
4.17
4.18
3.47
3.43
3.46
3.74
3.82
4.05
4.19
4.18
3.45
3.43
Результаты проверки противогипоксической активности препарата Семакс, доза*} 0.5 мг
Время Тв,
Порядковый номер фармацевтического состава с 0.15 граммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Время Тв,
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С. Доза препарата 0.3 мг. Средняя продолжительность жизни, мин Порядковый номер фармацевтического состава с 0.15 граммами
мин
33.4
35.8
36.3
36.5
36.7
36.7
33.4
33.2
37.3
38.1
38.1
38.5
38.7
38.7
37.2
37.1
38.0
38.6
39.1
39.1
39.2
39.2
37.8
37.7
Время Тв,
Порядковый номер фармацевтического состава с 0.15 граммами пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
стержне в течение 2 минут (количество выживших крыс)
Препарат, порядковый номер фармацевтического состава, доза 0.07мг в сутки на крысу
Время после операции, сутки
сут.
2 сут.
сут.
10 сут.
14 сут.
Семакс
Семакс, 0.07 мг
* **
5 (9 )
4(8)
3(8)
1(7)
0(6)
Фармацевтические составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и
минеральных веществ
Фарм. состав №25
5(9)
4(8)
3(8)
1(7)
0(6)
Фарм. состав №26
4(10)
3(9)
2(8)
1(8)
0(8)
Фармацевтический состав №10
Фармацевтический состав №11
Фармацевтический состав № 12
Фармацевтический состав №13
Фармацевтический состав № 14
Фармацевтический состав № 15
Фармацевтический состав №16
Фармацевтический состав № 17
Фармацевтический состав № 18
Фармацевтический состав №19
Фармацевтический состав №20
Фармацевтический состав №21
Фармацевтический состав №22
Фармацевтический состав №23
Фармацевтический состав №24
Фармацевтический состав №89
Фармацевтический состав №90
Фармацевтический состав №91
Фармацевтический состав №92
Фармацевтический состав №93
Фармацевтический состав №94
Фармацевтический состав №95
Фармацевтический состав №96
Литература
1. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ //Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Фисенко В.П. - М., 2000. - С. 153-158.
2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.Д. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: пер. с англ./Под. ред. Батуева А.С. - М.: Высш. шк., 1991. - 399 с.
3. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции // Биофизика. -1992. - Т.37, вып.6. - С.1041-1047.
4. Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение. - М., 2004. - 21 с.
5. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001.
6. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, - 240с.
7. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции // Биофизика. -1992. - Т.37, вып.6. - С.1041-1047.
8. В.Х.Хавинсон, В.Г.Морозов, В.Н.Анисимов. Влияние эпиталамина на свободнорадикальные процессы у человека и животных. Успехи геронтологии, 1999г., выпуск 3 .
9. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств. Под редакцией Л.Д.Лукьяновой. - М., 1990.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых
фармакологических веществ. Под редакцией Р.У.Хабриева. - М.: Минздрав РФ,
2005.
11. McGraw СР., Pashayan A.G., Wendel О.Т. Cerebral infarction in the Mongolian gerbil exacerbated by phenoxybenzaminetreatment // Stroke. - 1976 - Vol.7, No5.-P.485-488.
12. Cumin R., Bandle E.F., Gamzu E., Haefely W.E. Effect of the novel compound antiracetam (Ro 13-5057) upon impared learning and memory in rodents // Psychopharmacol. - 1982. - Vol.78. - P.l04-111.
13. Разделение изотопов. Физическая энциклопедия. http://dic.academic.ru/dic.nsf/enc_physics/1071/ИЗОТОПОВ .
14. Нанотехнология и включение атомов дейтерия 2Н, углерода 13С, азота 15N, и кислорода 180 в молекулы аминокислот и белков.
http://samlib.rU/o/oleg_w_m/cdocumentsandsettingsolegmosinmoidokumentynanotehnol ogijaiwkljuchenieatomowdejteriia2hrtf.shtml
15. Р.Ф.Ганиев, В.И.Кормилицын, Л.И.Украинский. Волновая технология приготовления альтернативных видов топлив и эффективность их сжигания.-М.:Научно-издательский центр "Регулярная и хаотическая динамика", 2008.-116 с.
15.
Формула изобретения
1. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 • 10 3 - 80 10 3; кальций - 0.001 - 2.56; марганец- 0.006-7.5; цинк- 0.065-66.9.
2. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин -0.01 10 3 - 80 10 3 ; кальций- 0.001 -2.56; марганец- 0.006-7.5; цинк- 0.065 -66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит
13 13
изотопы углерода С, и отношение количества изотопов углерода С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75.
3. Фармацевтический состав по любому из пп.1-2, отличающийся тем, что значение рН составляет величину от 4 до 7.
3.
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
VWD1 A, Wave!ength=210 nm (RA\C1 (1).D)
mAU
CO CD
3500 -
3000
2500 ~
2000
1500
1000-
500-!
- 4
CD О
¦4*
Фиг.1
10 Time[min] 15
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Intens.. x105 2.0'
1.51.00.50.07 I o|
200
415.9
352.8
L .
400 Фиг.2
m/z
+MS,3.S-4.2mintt(138-150)
1800
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Chromatogram - CI (1).D: TIC + All MS
-I 1 r-
-I 1 r-
35 Time [min]
\Overlaid /^Stacked Д List /
1S, 4.6-5.2min "[164-183]
1800
m/z
Фиг.З
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
\ Overlaid Д Stacked Д List /
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Time [min]
\ Overlaid Д Stacked \ List /
: 153.1
352.Э42Э.З
¦' ¦
1..
200
400
600
m/z
Фиг.5
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
VWD,1 A. WaveJ*ngths220 nm (BAI_AEV\C 1 (5) HIRO.D)
mAU
CD CD
400
300
200-
100
¦> f- r--*-rr-г
-r-r~ ' Г"
7.5
Фиг.6
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
~ VWD1" ATwave I е n glh=220 n m (BALAEV\Cl"(^
400
300 Ч
17.5
Фиг.7
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Chromatogram - О (5) HIRO.D: TIC +AII MS
Intens. хЮ?
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
¦при
Intens. x106
32 10
200
407.8
400
600
¦№41
+MS,6.1-6.9min "(251-301)
814.4 800
m/z
Фиг.9
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
1 ¦ t
4 6
¦ i ¦
8 Time[min]
\ Overlaid ^ Stacked Д List /
Intens. н xlO5-
5.0
+MS,7.3min "319
10:
0.5: 0.0:
474.4
^_ . . .i. .
866.4 . 11
200
400 ' 600
800 m/z
Фиг.Ю
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
1 1 1 1
2 4
-i 1 1 1 1
6 8 Time [min]
\ Overlaid Д Stacked Д List /
". < - , > .
Intens.: x104:
153.3
+MS,14.2-15.5min "(607-668)
. bl .
391.5
200 400
600 800 т/г
Фиг.11
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Chromatogram - С1 (5) HIRO.D: TIC + All MS
-i 1 1 1 1 ¦
16 18 Time [min]
\ Overlaid
Intens.: x10+:
+MSJ4.2-15.5min tt(G07-668)
2'-
1400
1600 1800 m/z
Фиг.12
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
Intens. х104
+MS2(153.5L12.1min "419
1.0-
0.8
0.6-
0.4
0.2
81.0 Э4.Э
0.0
! <> 70 80 90 m/z
Фиг.13
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
i i i i i i i
+MS2(153.5), 12.1 min "419
110
120
150 m/z
Фиг.14
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
406.1839
407.6 407.8 408,0 408.2 408.4 408.6 408.8 nvz
Фиг.15
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью
(варианты)
А-А
11 16 6 5 17
Категория*
Ссылки на документы с указанием, где это возможно, релевантных частей
Относится к пункту №
Y А
RU 2440132 С2 (ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "СИНТЕЗ ПЕПТИДОВ") 20.01.2012, реферат
RU 2156087 С1 (ТОВАРИЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТС ТВЕННОСТЬЮ ФИРМА "ЭЛЕК ТРОННАЯ МЕДИЦИНА") 20.09.2000, реферат, формула
ЕА 008591 В1 (ПФАЙЗЕР ПРОДАКТС ИНК.) 29.06.2007. реферат, с. 18
RU 2286168 С1 (ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК (ИМГ РАН) 27.10.2006
1- 3
2- 3
1-3
* Особые категории ссылочных документов: "А" документ, определяющий общий уровень техники "Н" более ранний документ, но опубликованный на дату
подачи евразийской заявки или после нее "О" документ, относящийся к устному раскрытию, экспонированию и т.д.
"Р" документ, опубликованный до даты подачи евразийской
заявки, но после даты испрашиваемого приоритета "D" документ, приведенный в евразийской заявке
последующие документы указаны в продолжении графы В Д данные о патентах-аналогах указаны в приложении
"Т" более поздний документ, опубликованный после даты приоритета и приведенный для понимания изобретения "X" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету поиска, порочащий новизну или изобретательский уровень, взятый в отдельноеги
"Y" документ, имеющий наиболее близкое отношение к предмету
поиска, порочащий изобретательский уровень в сочетании с
другими документами той же категории
" &" документ, являющийся патентом-аналогом
"L" документ, приведенный в других целях
Таблица 2
Таблица 14
Таблица 14
Таблица 14
Таблица 14
Таблица 16
Таблица 16