Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос :  ea000020874b*\id

больше ...
Термины запроса в документе


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат или ротамер; где С 1 выбирают из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила и тиазолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R 1 ; С 2 выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, пиридила и индолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R 2 ; С 3 выбирают из группы, состоящей из C 3-6 алкила, C 3-6 циклоалкила, C 3-6 циклоалкил-С 1-2 алкила, фенила, пиридинила, пиразолила, пиперидинила, пирролидинила, пиперидинилметила и пирролидинилметила, каждый из которых является необязательно замещенным 1-3 заместителями R 3 ; каждый R 1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -R c , -CO 2 R a , -CONR a R b , -C(O)R a , -OC(O)NR a R b , -NR b C(O)R a , -NR b C(O) 2 R c , -NR a C(O)NR a R b , -NR a R b , -OR a и -S(O) 2 NR a R b ; где каждый R a и R b независимо выбирают из водорода, C 1-8 алкила и C 1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S; каждый R c независимо выбирают из группы, состоящей из C 1-8 алкила, C 1-8 галоалкила, C 3-6 циклоалкила и пирролидинила, и где алифатическая и циклическая части R a , R b и R c являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, C 1-8 алкиламиногруппами и диС 1-8 алкиламиногруппами; и необязательно, когда два заместителя R 1 находятся на смежных атомах, они объединяются с образованием конденсированного пяти- или шестичленного карбоциклического кольца; каждый R 2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -R f , -CO 2 R d , -CONR d R e , -C(O)R d , -OC(O)NR d R e , -NR e C(O)R d , -NR e C(O) 2 R f , -NR d C(O)NR d R e , -NR d R e , -OR d и -S(O) 2 NR d R e ; где каждый R d и R e независимо выбирают из водорода, C 1-8 алкила и C 1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатома в кольце, выбранных из N, О или S; каждый R f независимо выбирают из группы, состоящей из C 1-8 алкила, C 1-8 галоалкила, C 3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила и пиразолила, и где алифатическая и циклическая части R d , R e и R f являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, C 1-8 алкиламино и диС 1-8 алкиламиногруппами; каждый R 3 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -R i , -CO 2 R g , -CONR g R h , -C(O)R g , -OC(O)NR g R h , -NR h C(O)R g , -NR h C(O) 2 R i , -NR g C(O)NR g R h , -NR g R h , -OR g , -S(O) 2 NR g R h , -X 4 -R j , -X 4 -NR g R h , -X 4 -CONR g R h , -X 4 -NR h C(O)R g , -NHR j и -NHCH 2 R j , где Х 4 представляет собой C 1-4 алкилен; каждый R g и R h независимо выбирают из водорода, С 1-8 алкила, C 3-6 циклоалкила и C 1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый R i независимо выбирают из группы, состоящей из C 1-8 алкила, C 1-8 галоалкила, C 3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила, пиперидинила, тетрагидрофуранила, пиразолила и пирролила; и каждый R j выбирают из группы, состоящей из C 3-6 циклоалкила, пирролинила, пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила и тетрагидропиранила, и где алифатическая и циклическая части R g , R h , R i и R j являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, метилами, CF 3 , гидрокси, амино, C 1-8 алкиламино и диС 1-8 алкиламиногруппами; и X представляет собой водород или CH 3 .

2. Соединение по п.1, в котором X является водородом.

3. Соединение по п.1, имеющее формулу

4. Соединение по п.1, имеющее формулу

5. Соединение по п.1, имеющее формулу где X 1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR 1 ; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X 2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR 2 ; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.

6. Соединение по п.1, имеющее формулу где X 1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR 1 ; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X 2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR 2 ; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.

7. Соединение по п.1, имеющее формулу где индекс р представляет собой целое число от 0 до 3; X 1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR 1 ; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X 2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR 2 ; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.

8. Соединение по п.1, имеющее формулу

9. Соединение по п.1, имеющее формулу

10. Соединение по п.1, имеющее формулу

11. Соединение по п.1, имеющее формулу

12. Соединение по п.1, имеющее формулу

13. Соединение по п.1, имеющее формулу

14. Соединение по п.1, имеющее формулу где R 3 выбирают из группы, состоящей из -NR g R h , -NHR j и -NHCH 2 R j .

15. Соединение по п.1, имеющее формулу где R 3 выбирают из группы, состоящей из -X 4 -NR g R h , -X 4 -R j и -X 4 -NR h COR g .

16. Соединение по п.1, где каждый R 1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -R c , -NR a R b и -OR a , и где каждый R a и R b независимо выбирают из водорода, С 1-8 алкила и C 1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пирролидинового кольца; каждый R c независимо выбирают из группы, состоящей из C 1-8 алкила, C 1-8 галоалкила и C 3-6 циклоалкила, и где алифатическая и циклическая части R a , R b и R c необязательно являются дополнительно замещенными от одной до трех гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, алкиламиногруппами и диалкиламиногруппами; и необязательно, когда два заместителя R 1 находятся на смежных атомах, объединяются с образованием конденсированного пяти- или шестичленного карбоциклического кольца.

17. Соединение по п.1, где каждый R 2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -R f и -OR d ; где каждый R d независимо выбирают из водорода, C 1-8 алкила и С 1-8 галоалкила; каждый R f независимо выбирают из группы, состоящей из C 1-8 алкила, C 1-8 галоалкила, C 3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила и пиразолила, и где алифатическая и циклическая части R d и R f необязательно являются дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, алкиламино и диалкиламиногруппами.

18. Соединение по п.1, где каждый R 3 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -R i , -CO 2 R g , -CONR g R h , -NR h C(O)R g , -NR h C(O) 2 R i , -NR g R h , -OR g , -X 4 -R j , -X 4 -NR g R h , -X 4 -CONR g R h , -X 4 -NR h C(O)R g , -NHR j и -NHCH 2 R j , где X 4 представляет собой C 1-3 алкилен; каждый R g и R h независимо выбирают из водорода, C 1-8 алкила, C 3-6 циклоалкила и C 1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 1 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый R i независимо выбирают из группы, состоящей из C 1-8 алкила, C 1-8 галоалкила, C 3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила, пиперидинила, тетрагидрофуранила, пиразолила и пирролила; и каждый R j выбирают из группы, состоящей из C 3-6 циклоалкила, пирролинила, пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила и тетрагидропиранила, и где алифатическая и циклическая части R g , R h , R i и R j являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, метилами, CF 3 , гидрокси, амино, алкиламино и диалкиламиногруппами.

19. Соединение по п.17, где С 2 выбирают из группы, состоящей из

20. Соединение по п.16, в котором С 1 выбирают из группы, состоящей из

21. Соединение по п.1, в котором С 3 выбирают из группы, состоящей из

22. Соединение по п.1, в котором С 3 выбирают из группы, состоящей из

23. Соединение по п.1, которое выбирают из группы, включающей или его фармацевтически приемлемая соль.

24. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибиторной активностью в отношении C5aR, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение по п.1.

25. Способ лечения млекопитающего, страдающего от или восприимчивого к болезни или расстройству, характеризующемуся патологической активацией рецептора С5а, включающий введение млекопитающему эффективного количества соединения по п.1.

26. Способ ингибирования клеточного хемотаксиса, опосредованного С5а-рецептором, включающий контактирование лейкоцитов млекопитающего с модулирующим С5а-рецептор количеством соединения по п.1.

27. Способ по п.25, где болезнь или расстройство представляет собой воспалительную болезнь или расстройство.

28. Способ по п.25, где болезнь или расстройство выбирают из группы, состоящей из нейтропении, сепсиса, септического шока,болезни Альцгеймера, рассеянного склероза, инсульта, воспалительной болезни кишечника, хронического легочного обструктивного заболевания, воспаления, связанного с тяжелым ожогом, повреждения легких, остеоартрита, атопического дерматита, хронической крапивницы, ишемически-реперфузионного повреждения, синдрома острой дыхательной недостаточности у взрослых, синдрома системной воспалительной реакции, полиорганной недостаточности, отторжения тканевого трансплантата и сверхострого отторжения трансплантированных органов.

29. Способ по п.25, где болезнь или расстройство представляет собой сердечно-сосудистое или церебрально-васкулярное расстройство.

30. Способ по п.25, где болезнь или расстройство выбирают из группы, состоящей из инфаркта миокарда, тромбоза коронарных артерий, окклюзии сосуда, послеоперационной сосудистой реокклюзии, атеросклероза, травматического повреждения центральной нервной системы и ишемической болезни сердца.

31. Способ по п.25, где болезнь или расстройство представляет собой аутоиммунное расстройство.

32. Способ по п.25, где болезнь или расстройство выбирают из группы, состоящей из ревматоидного артрита, системной красной волчанки, синдрома Гийена-Барре, панкреатита, волчаночного нефрита, волчаночного гломерулонефрита, псориаза, болезни Крона, васкулита, спастического колита, дерматомиозита, бронхиальной астмы, пузырчатки, пемфигоида, склеродермы, тяжелой псевдопаралитической миастении, аутоиммунного гемолитического и тромбоцитопенического состояния, синдрома Гудпасчера, иммуноваскулита.

33. Способ по п.25, где болезнь или расстройство является патологическим осложнением, связанным с группой, состоящей из инсулинозависимого сахарного диабета, волчаночной нефропатии, нефрита Хеймана, мембранозного нефрита, гломерулонефрита, ответной контактной чувствительности и воспаления в результате контакта крови с искусственными поверхностями.

34. Соединение по п.1, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемая соль.

35. Соединение по п.1, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемая соль.

36. Соединение по п.1, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемая соль.


Евразийское ои 020874 (13) В1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента (51) Int. Cl. A01N43/42 (2006.01)
2015.02.27
(21) Номер заявки 201101009
(22) Дата подачи заявки
2009.12.21
(54) АНТАГОНИСТЫ C5aR
(31) 61/139,919
(32) 2008.12.22
(33) US
(43) 2012.01.30
(86) PCT/US2009/068941
(87) WO 2010/075257 2010.07.01
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
КЕМОСЕНТРИКС, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Фан Пинчэнь, Гринман Кевин Ллойд, Лелети Манмохан Редди, Ли Яндун, Пауэрс Джей, Танака Хироко, Ян Цзюй, Цзэн Ибинь (US)
(74) Представитель:
Фелицына С.Б. (RU)
(56) WO-A2-2007051062
GERBER et al., An Activation Switch in the Ligand Binding Pocket of the C5a Receptor, The Journal of Biological Chemistry, vol. 276(5), p. 3394-3400, 02 February 2001, Abstract; p. 3398-3400
(57) Предоставляются соединения, имеющие формулу (I), которые являются модуляторами рецептора С5а. Соединения представляют собой замещенные пиперидины и используются в фармацевтических композициях, способах лечения болезней и расстройств, вовлекающих патологическую активацию рецепторов С5а.
Предшествующий уровень техники
Система комплемента играет центральную роль в выведении (клиренсе) иммунных комплексов и в иммунных ответах на инфекционные агенты, чужеродные антигены, клетки, инфицированные вирусом, и опухолевые клетки. Неадекватная или избыточная активация системы комплемента может приводить к вредным и даже потенциально опасным для жизни последствиям из-за тяжелого воспаления и происходящего в результате этого разрушения ткани. Эти последствия клинически проявляются при различных нарушениях, включая септический шок, миокардиальное, а также кишечное ишемически-реперфузионное повреждение, отторжение трансплантата, органную недостаточность, нефрит, патологическое воспаление и аутоиммунные болезни.
Система комплемента состоит из группы белков, которые в норме присутствуют в сыворотке в неактивном состоянии. Активация системы комплемента включает в основном три различных пути, т.е. классический, альтернативный и лектиновый путь (V. М. Holers, In Clinical Immunology: Principles и Practice, ed. R. R. Rich, Mosby Press; 1996, 363-391). 1) Классический путь представляет собой кальций/магний-зависимый каскад, который в норме активируется при образовании комплексов антиген-антитело. Также он может активироваться антитело-независимым образом при связывании С-реактивного белка, связанного с лигандом, и с помощью многих патогенов, включая грамотрицательные бактерии. 2) Альтернативным путем является магний-зависимый каскад, который активируется при депонировании и активации C3 на определенных чувствительных поверхностях (например, полисахариды клеточной стенки дрожжей и бактерий и некоторые биополимерные материалы). 3) Лектиновый путь предполагает первоначальное связывание лектина, связывающего маннозу, и последующую активацию С2 и С4, которые являются общими для классического пути (Matsushita, M. et al., J. Exp. Med. 176: 14971502 (1992); Suankratay, С et al., J. Immunol. 160: 3006-3013 (1998)).
Активация пути комплемента порождает биологически активные фрагменты белков комплемента, например, C3а, С4а и С5а анафилатоксины и С5Ь-9 атакующий мембрану комплекс (MAC), которые опосредуют воспалительные ответы путем воздействия на хемотаксис лейкоцитов; активацию макрофагов, нейтрофилов, тромбоцитов, тучных клеток и эндотелиальных клеток; и путем увеличения проницаемости сосудов, цитолиза и повреждения ткани.
Комплемент С5а представляет собой один из наиболее сильных провоспалительных медиаторов системы комплемента. (Анафилактический пептид С5а является в 100 раз более сильным, на молярной основе, при вызывании воспалительных ответов, чем C3а.) С5а представляет собой активированную форму С5 (190 kD, молекулярная масса). С5а присутствует в сыворотке человека в количестве приблизительно 80 мкг/мл (Kohler, P. F. et al., J. Immunol. 99: 1211-1216 (1967)). Он состоит из двух полипептидных цепей, а и р, с молекулярной массой приблизительно 115 и 75 kD, соответственно (Tack, В. F. et al., Biochemistry 18: 1490-1497 (1979)). Биосинтезированный как одноцепочечная промолекула С5 ферментатив-но расщепляется до двухцепочечной структуры во время процессинга и секреции. После расщепления две цепи удерживаются вместе с помощью по меньшей мере одной дисульфидной связи, а также некова-лентных взаимодействий (Ooi, Y. M. et al., J. Immunol. 124: 2494-2498 (1980)).
C5 расщепляется на фрагменты С5а и С5Ь во время активации путей комплемента. Конвертазные ферменты, ответственные за активацию С5, представляют собой комплексы из многих субъединиц С4Ь, С2а и C3b для классического пути и из (C3b)2, Bb и Р для альтернативного пути (Goldlust, M. В. et al., J. Immunol. 113: 998-1007 (1974); Schreiber, R. D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 3948-3952 (1978)). C5 активируется при расщеплении в положении 74-75 (Arg-Leu) в а-цепи. После активации из амино-концевой части а-цепи высвобождается пептид С5а, состоящий из 74 аминокислот, весом 11,2 kD. И С5а и C3а являются эффективными стимуляторами нейтрофилов и моноцитов (Schindler, R. et al., Blood 76: 16311638 (1990); Haeffher-Cavaillon, N. et al., J. Immunol. 138: 794-700 (1987); Cavaillon, J. M. et al., Eur. J. Immunol 20: 253-257 (1990)).
В дополнение к его анафилотоксическим свойствам С5а вызывает хемотаксическую миграцию ней-трофилов (Ward, P. A. et al., J. Immunol 102: 93-99 (1969)), эозинофилов (Kay, А. В. et al., Immunol. 24: 969-976 (1973)), базофилов (Lett-Brown, M. A. et al., J. Immunol 117: 246-252 1976)) и моноцитов (Snyder-man, R. et al., Proc. Soc. Exp. Biol Med. 138: 387-390 1971)). И С5а и C5b-9 активируют эндотелиальные клетки к экспрессии молекул адгезии, необходимых для секвестрации активированных лейкоцитов, которые опосредуют воспаление и повреждение тканей (Foreman, K. Е. et al., J. Clin. Invest. 94: 1147-1155 (1994); Foreman, K. Е. et al., Inflammation 20: 1-9 (1996); Rollins, S. A. et al., Transplantation 69: 1959-1967 (2000)). C5a также опосредует воспалительные реакции, вызывая сокращение гладкой мускулатуры, увеличивая проницаемость сосудов, вызывая дегрануляцию базофилов и тучных клеток и вызывая высвобождение лизосомальных протеаз и окислительных свободных радикалов (Gerard, С. et al., Ann. Rev. Immunol. 12: 775-808 (1994)). Более того, С5а модулирует экспрессию гена острой фазы в печени и увеличивает общий иммунный ответ путем увеличения выработки TNF-a, IL-1-р, IL-6, IL-8, простагландинов и лейкотриенов (Lambris, J. D. et al., In: The Human Complement System in Health и Disease, Volanakis, J. E. ed., Marcel Dekker, New York, pp. 83-118).
Полагают, что анафилактические и хемотаксические эффекты С5а опосредуются через его взаимо
действие с рецептором С5а. Человеческий рецептор С5а (C5aR) представляет собой мембрано-связанный рецептор, сопряженный с G-белком, весом 52 kD, который экспрессируется на нейтрофилах, моноцитах, базофилах, эозинофилах, гепатоцитах, гладкомышечных клетках легких, эндотелиальных клетках и гло-мерулярными тканями почек (Van-Epps, D. E. et al., J. Immunol. 132: 2862-2867 (1984); Haviland, D. L. et al., J. Immunol. 154:1861-1869 (1995); Wetsel, R. A., Immunol. Leff. 44: 183-187 (1995); Buchner, R. R. et al., J. Immunol. 155: 308-315 (1995); Chenoweth, D. E. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 3943-3947 (1978); Zwirner, J. et al., Mol. Immunol. 36:877-884 (1999)). Лиганд-связывающий участок C5aR представляет собой комплекс и состоит по меньшей мере из двух физически отдельных доменов связывания. Один связывает С5а амино-конец (аминокислоты 1-20) и дисульфид-связанный центр (аминокислоты 21-61), тогда как второй связывает С5а карбокси-концевой остаток (аминокислоты 62-74) (Wetsel, R. A., Curr. Opin. Immunol. 7: 48-53 (1995)).
С5а играет важную роль в воспалении и повреждении тканей. При искусственном кровообращении и гемодиализе С5а образуется в результате активации альтернативного пути комплемента, когда кровь человека контактирует с искусственной поверхностью аппарата кровообращения или установки для почечного диализа (Howard, R. J. et al., Arch. Surg. 123: 1496-1501 (1988); Kirklin, J. K. et al., J. Cardiovasc. Surg. 86: 845-857 (1983); Craddock, P. R. et al., N. Engl J. Med. 296: 769-774 (1977)). C5a вызывает повышенную проницаемость капилляров и отек, бронхоконстрикцию (сужение просвета бронхов), легочную вазоконстрикцию (сужение сосудов), активацию лейкоцитов и тромбоцитов и инфильтрацию в ткани, в частности в легкие (Czermak, В. J. et al., J. Leukoc. Biol. 64: 40-48 (1998)). Показано, что введение анти-С5а моноклональных антител уменьшает сердечно-легочное кровообращение и вызванную кардиоплеги-ей коронарную эндотелиальную дисфункцию (Tofukuji, M. et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 116: 10601068 (1998)).
C5a также вовлечен в синдром острой дыхательной недостаточности (ARDS), хроническую об-структивную болезнь легких (COPD) и полиорганную недостаточность (MOF) (Hack, С. Е. et al., Am. J. Med. 1989: 86: 20-26; Hammerschmidt DE et al., Lancet 1980; 1: 947-949; Heideman M. et al., J. Trauma 1984; 4: 1038-1043; Marc, M.M., et al., Am. J. Respir. Cell и Mol. Biol., 2004: 31: 216-219). C5a увеличивает выработку моноцитами двух важных провоспалительных цитокинов TNF-а и IL-1. Также было показано, что С5а играет важную роль при развитии повреждения тканей и, в частности, повреждения легких, на модели септического шока у животных (Smedegard G et al. Am. J. Pathol. 1989; 135: 489-497; Markus, S., et al., FASEB Journal (2001), 15: 568-570). На модели сепсиса с использованием крыс, свиней и приматов, не являющихся человеком, анти-С5а антитела, введенные животным до обработки эндотоксином или Е. Coli, приводили к меньшему повреждению тканей, а также пониженной выработке IL-6 (Smedegard, G. et al., Am. J. Pathol. 135: 489-497 (1989); Hopken, U. et al., Eur. J. Immunol. 26: 1103-1109 (1996); Stevens, J. H. et al., J. Clin. Invest. 77: 1812-1816 (1986)). Что еще более важно, было показано, что блокада С5а с помощью анти-С5а поликлональных антител значительно улучшает уровни выживаемости на модели сепсиса с перевязкой/пункцией слепой кишки у крыс (Czermak, B.J. et al., Nat. Med. 5: 788-792 (1999)). Эта модель связана со многими аспектами клинического проявления сепсиса у людей (Parker, S.J. et al., Br. J. Surg. 88: 22-30 (2001)). Было показано, что при такой модели сепсиса анти-С5а антитела ингибируют апоптоз тимоцитов (Guo, R.F. et al., J. Clin. Invest. 106: 1271-1280 (2000)) и предотвращают полиорганную недостаточность (MOF) (Huber-Lang, M. et al., J. Immunol. 166: 1193-1199 (2001)). Также анти-С5а антитела были протективными на модели повреждения легких фактором яда кобры у крыс и при повреждении легких, вызванном иммунным комплексом (Mulligan, M. S. et al., J. Clin. Invest. 98: 503-512 (1996)). Значение С5а при повреждении легких, вызванном иммунным комплексом, позже было подтверждено у мышей (Bozic, С. R. et al., Science 26: 1103-1109 (1996)).
Обнаружено, что С5а является главным медиатором при миокардиальном ишемически-репер-фузионном повреждении. Истощение комплемента уменьшало размер инфаркта миокарда у мышей (Weisman, H. F. et al., Science 249: 146-151 (1990)), а обработка анти-С5а антителами уменьшала повреждение на крысиной модели ишемии-реперфузии на задней конечности (Bless, N. М. et al., Am. J. Physiol. 276: L57-L63 (1999)). Реперфузионное повреждение во время инфаркта миокарда также заметно уменьшалось у свиней, которые были повторно обработаны моноклональным анти-С5а IgG (Amsterdam, Е. A. et al., Am. J. Physiol. 268:H448-H457 (1995)). Рекомбинантный человеческий антагонист C5aR уменьшает размер инфаркта на свиной модели хирургической реваскуляризации (Riley, R. D. et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 120: 350-358 (2000)).
С5а-управляемые нейтрофилы также способствуют многим буллезным болезням (например, бул-лезный пемфигоид (пузырчатка), вульгарная пузырчатка и листовидная пузырчатка). Существуют хронические и повторяющиеся расстройства, клинически характеризующиеся стерильными волдырями, которые появляются в субэпидермальной области кожи и слизистой. В то время как полагают, что в основе отделения эпидермальных базальных кератиноцитов от нижележащей базальной мембраны лежат ауто-антитела к кератиноцитам, расположенным в кожных базальных мембранах, волдыри также характеризуются накоплением нейтрофилов и в верхних слоях кожи, и в полостях волдырей. В экспериментальных моделях уменьшение нейтрофилов или отсутствие комплемента (общего или С5-селективного) может ингибировать образование субэпидермальных волдырей, даже при наличии высоких титров аутоантител.
Уровни комплемента являются повышенными у пациентов с ревматоидным артритом (Jose, P. J. et al., Ann. Rheum. Dis. 49: 747-752 (1990); Grant, E.P. et al., J. of Exp. Med, 196(11): 1461-1471, (2002)), вол-чаночным нефритом (Bao, L. et al., Eur. J. of Immunol, 35(8), 2496-2506, (2005)) и системной красной волчанкой (SLE) (Porcel, J. M. et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 74: 283-288 (1995)). Уровни С5а коррелируют с тяжестью болезненного состояния. Коллаген-индуцированный артрит у мышей и крыс имеет сходство с ревматоидным артритом у человека. Мыши, дефицитные по рецептору С5а, демонстрировали полную защиту от артрита, вызванного инъекцией моноклональных анти-коллаген антител (Banda, N.K. et al., J. of Immunol., 2003, 171: 2109-2115). Следовательно, ингибирование С5а и/или С5а рецептора (C5aR) может быть полезно при лечении этих хронических болезней.
Полагают, что система комплемента является активированной у пациентов с воспалительным заболеванием кишечника (IBD), и предполагают, что она играет роль в патогенезе болезни. Активированные продукты комплемента были обнаружены на поверхности эпителиальных клеток со стороны просвета, а также в мышечной пластинке слизистой оболочки и в подслизистых кровеносных сосудах у пациентов с IBD (Woodruff, Т.М., et al., J. of Immunol, 2003, 171: 5514-5520).
C5aR-экспрессия является активированной на реактивных астроцитах, в микроглие и эндотелиаль-ных клетках в воспаленной центральной нервной системе (Gasque, P. et al., Am. J. Pathol 150: 31-41 (1997)). C5a может быть вовлечен в нейродегенеративные болезни, такие как болезнь Альцгеймера (Mukherjee, P. et al., J. Neuroimmunol 105: 124-130 (2000); OBarr, S. et al., J. Neuroimmunol. (2000) 105: 8794; Farkas, I. et al., J. Immunol. (2003) 170:5764-5771), болезнь Паркинсона, болезнь Пика и передаваемые губчатые энцефалопатии. Активация нейронного C5aR может индуцировать апоптоз (Farkas I. et al. J. Physiol. 1998; 507: 679-687). Следовательно, ингибирование С5а и/или C5aR также должно быть полезно при лечении нейродегенеративных болезней.
Существует некоторое доказательство, что выработка С5а ухудшает воспаление, связанное с атопи-ческим дерматитом (Neuber, K., et al., Immunology 73:83-87, (1991)) и хронической крапивницей (Kaplan, A.P., J. Allergy Clin. Immunol. 114; 465-474 (2004)).
Теперь известно, что псориаз является болезнью, опосредованной Т-клетками (Gottlieb, E. L. et al., Nat. Med. 1: 442-447 (1995)). Однако нейтрофилы и тучные клетки также могут быть связаны с патогенезом этой болезни (Terui, Т. et al., Exp. Dermatol. 9: 1-10; 2000); Werfel, Т. et al., Arch. Dermatol. Res. 289: 83-86 (1997)). Накопление нейтрофилов под роговым слоем наблюдали в сильно воспаленных участках псориазных бляшек, а экстракты из псориазных очагов (чешуек) содержат сильно повышенные уровни С5а и проявляют сильную хемотаксическую активность по отношению к нейтрофилам, эффект, который может быть ингибирован с помощью добавления С5а антител. Т-клетки и нейтрофилы являются С5а-хемопривлекаемыми (Nataf, S. et al., J. Immunol. 162: 4018-4023 (1999); Tsuji, R. F. et al., J. Immunol. 165: 1588-1598 (2000); Cavaillon, J. M. et al., Eur. J. Immunol. 20: 253-257 (1990)). Кроме того, была продемонстрирована экспрессия C5aR в плазмоцитоидных дендритных клетках (pDC), выделенных из очагов кожной красной волчанки, и было показано, что эти клетки проявляют хемотаксическое поведение по отношению к С5а, что указывает на то, что блокада C5aR на pDC может быть эффективной при снижении инфильтрации pDC в воспаленную кожу и при системной красной волчанке (SLE) и при псориазе. Следовательно, С5а может быть важной терапевтической мишенью для лечения псориаза.
Иммунные комплексы (IC), содержащие иммуноглобулин G, вносят вклад в патофизиологию в целом ряде аутоиммунных болезней, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, болезнь Серджена, синдром Гудпасчера и гиперчувствительный пневмонит (Madaio, M. P., Semin. Nephrol. 19: 4856 (1999); Korganow, A. S. et al., Immunity 10: 451-459 (1999); Bolten, W. K., Kidney Int. 50: 1754-1760 (1996); Ando, M. et al., Curr. Opin. Pulm. Med. 3: 391-399 (1997)). Эти болезни являются весьма разнородными и в основном затрагивают один или более из следующих органов: кожу, кровеносные сосуды, суставы, почки, сердце, легкие, нервную систему и печень (включая цирроз и фиброз печени). Классической моделью на животных воспалительного ответа при этих IC болезнях является феномен Артюса, который отличается инфильтрацией полиморфно-ядерных клеток, кровоизлиянием и экссудацией плазмы (проступанием через поры) (Arthus, M, C.R. Soc. Biol. 55: 817-824 (1903)). Недавние исследования показывают, что дефицитные по C5aR мыши являются защищенными от повреждения тканей, вызванного IC (Kohl, J. et al., Mol. Immunol. 36: 893-903 (1999); Baumann, U. et al., J. Immunol. 164: 1065-1070 (2000)). Эти результаты находятся в соответствии с наблюдением, что небольшой пептидный анти-C5aR антагонист ингибирует воспалительный ответ, вызванный отложением IC (Strachan, A. J. et al., J. Immunol. 164: 6560-6565 (2000)). Вместе с его рецептором С5а играет важную роль в патогенезе IC болезней. Ингибиторы С5а и C5aR могут быть полезны при лечении этих болезней.
Описание "родственного" уровня техники
Только недавно непептидные антагонисты рецептора С5а были описаны в литературе (например, Sumichika, H., et al., J. Biol. Chem. (2002), 277, 49403-49407). Непептидный антагонист рецептора С5а был описан как являющийся эффективным для лечения эндотоксического шока у крыс (Stracham, A.J., et al., J. of Immunol. (2000), 164(12): 6560-6565); и для лечения IBD на крысиных моделях (Woodruff, T.M., et al., J. of Immunol., 2003, 171: 5514-5520). Непептидные модуляторы рецептора С5а также описаны в патентной литературе Neurogen Corporation (например, WO 2004/043925, WO 2004/018460, WO
2005/007087, WO 03/082826, WO 03/08828, WO 02/49993, WO 03/084524); Dompe S.P.A. (WO 02/029187);
и Университета Квинсленда (WO 2004/100975).
В литературе существует значительное количество экспериментальных доказательств, которые касаются повышенных уровней С5а при некоторых болезнях и расстройствах, в частности при аутоиммунных и воспалительных болезнях и расстройствах. Таким образом, в данной области сохраняется необходимость в новых небольших органических молекулярных модуляторах, например, агонистах, предпочтительно антагонистах, частичных агонистах рецептора С5а (C5aR), которые пригодны для ингибирования патогенных явлений, например, хемотаксиса, связанного с повышенными уровнями активности анафи-лотоксина. Настоящее изобретение удовлетворяет эту и другие потребности.
Сущность изобретения
В одном аспекте настоящее изобретение предоставляет соединения, имеющие формулу
С2^0 (I);
и их фармацевтически приемлемые соли, гидраты и ротамеры; где
С1 выбирают из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила и тиазолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R1;
С2 выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, пиридила и индолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R2;
С3 выбирают из группы, состоящей из C3-6 алкила, C3-6 циклоалкила, C3-6 циклоалкил-С1-2 алкила, фенила, пиридинила, пиразолила, пиперидинила, пирролидинила, пиперидинилметила и пирролидинил-метила, каждый из которых является необязательно замещенным 1-3 заместителями R3;
каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rc, -CO2Ra, -CONRaRb, -C(O)Ra, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)2Rc, -NRaC(O)NRaRb, -NRaRb, -ORa и -S(O)2NRaRb; где каждый Ra и Rb независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шес-тичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S; каждый Rc независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалки-ла и пирролидинила, и где алифатическая и циклическая части Ra, Rb и Rc являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, C1-8алкиламиногруппами и диС1-8алкиламиногруппами; и необязательно, когда два заместителя R1 находятся на смежных атомах, они объединяются с образованием конденсированного пяти- или шестичлен-ного карбоциклического кольца;
каждый R2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rf, -CO2Rd, -CONRdRe, -C(O)Rd, -OC(O)NRdRe, -NReC(O)Rd, -NReC(O)2Rf, -NRdC(O)NRdRe, -NRdRe, -ORd и -S(O)2NRdRe; где каждый Rd и Re независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шес-тичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатома в кольце, выбранных из N, О или S; каждый Rf независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила и пиразолила, и где алифатическая и циклическая части Rd, Re и Rf являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, C1-8алкиламино и диС1-8алкиламиногруппами;
каждый R3 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Ri, -CO2Rg, -CONRgRh, -C(O)Rg, -OC(O)NRgRh, -NRhC(O)Rg, -NRhC(O)2Ri, -NRgC(O)NRgRh, -NRgRh, -ORg, -S(O)2NRgRh, -X4-Rj, -X4-NRgRh, -X4-CONRgRh, -X4-NRhC(O)Rg, -NHRj и -NHCH2Rj, где X4 представляет собой C1-4 алкилен; каждый Rg и Rh независимо выбирают из водорода, C1-8алкила, C3-6 циклоалкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый Ri независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила, пиперидинила, тетрагидрофуранила, пиразолила и пирролила; и каждый Rj выбирают из группы, состоящей из C3-6 циклоалкила, пирролинила, пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила и тетрагидропиранила, и где алифатическая и циклическая части Rg, Rh, Ri и Rj являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, метилами, CF3, гидрокси, амино, C1-8 алки-ламино и диС1-8алкиламиногруппами; и
X представляет собой водород или CH3.
В дополнение к соединениям, представленным в описании, настоящее изобретение дополнительно предоставляет фармацевтические композиции, содержащие одно или более из этих соединений, а также способы применения этих соединений в терапевтических методиках, в первую очередь для лечения болезней, связанных с сигнальной активностью С5а.
В еще одном аспекте настоящее изобретение предоставляет способы диагностирования болезни у индивидуума. В этих способах соединения, предоставленные в описании, вводятся субъекту в меченой форме, с последующей диагностической визуализацией для определения наличия или отсутствия C5aR. В родственном аспекте способ диагностирования болезни осуществляют путем контакта образца ткани или крови с меченым соединением, предоставленным в описании, и определения наличия, отсутствия или количества C5aR в образце.
Краткое описание чертежа
Чертеж показывает структуры и активность конкретных соединений настоящего изобретения. Как правило, соединения были получены способами, в основном описанными ниже, а также способами, предоставленными в примерах.
Осуществление изобретения
I. Сокращения и определения
Термин "алкил", сам по себе или как часть другого заместителя, означает, если не установлено иначе, углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, имеющий обозначенное число атомов углерода (т.е. C1-8 означает от одного до восьми атомов углерода). Примеры алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, т-бутил, изобутил, втор-бутил, н-пентил, н-гексил, н-пентил, н-октил и тому подобное. Термин "алкенил" относится к ненасыщенной алкильной группе, имеющей одну или более двойных связей. Подобным образом, термин "алкинил" относится к ненасыщенной ал-кильной группе, имеющей одну или более тройных связей. Примеры таких ненасыщенных алкильных групп включают винил, 2-пропенил, кротил, 2-изопентенил, 2-(бутадиенил), 2,4-пентадиенил, 3-(1,4-пен-тадиенил), этинил, 1- и 3-пропинил, 3-бутинил и высшие аналоги и изомеры. Термин "циклоалкил" относится к углеводородным кольцам, имеющим указанное число атомов в кольце (например, C3-6 циклоал-кил) и являющимся полностью насыщенными, или имеющим не более чем одну двойную связь между верхушками колец. "Циклоалкил" предназначается для упоминания бициклических и полициклических углеводородных колец, таких как, например, бицикло[2.2.1]гептан, бицикло[2.2.2]октан и т.д. Термин " гетероциклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от одного до пяти гетероато-мов, выбранных из N, О и S, в которой атомы азота и серы являются необязательно окисленными, и атом(ы) азота являются необязательно кватернизованными. Гетероциклоалкил может быть моноциклической, бициклической или полициклической кольцевой системой. Неограничивающие примеры гетеро-циклоалкильных групп включают пирролидин, имидазолидин, пиразолидин, бутиролактам, валеролак-там, имидазолидинон, гидантоин, диоксолан, фталимид, пиперидин, 1,4-диоксан, морфолин, тиоморфо-лин, тиоморфолин-S-оксид, тиоморфолин-S,S-оксид, пиперазин, пиран, пиридон, 3-пирролин, тиопиран, пирон, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, квинуклидин и тому подобное. Гетероциклоалкильная группа может присоединяться к остатку молекулы через углерод в кольце или гетероатом.
Термин "алкилен", сам по себе или как часть другого заместителя, означает двухвалентный радикал, полученный из алкана, примером которых является -СН2СН2СН2СН2-. Обычно, алкильная (или ал-киленовая) группа имеет от 1 до 24 атомов углерода, причем группы, имеющие 10 или меньше атомов углерода, являются предпочтительными в настоящем изобретении. "Низший алкил" или "низший алки-лен" представляет собой алкильную или алкиленовую группу с более короткой цепью, как правило, имеющей четыре или меньше атомов углерода. Подобным образом, "алкенилен" и "алкинилен" относится к ненасыщенным формам "алкилена", имеющим двойную или тройную связь, соответственно.
Термин "гетероалкил", сам по себе или в комбинации с другим термином, означает, если не установлено иначе, устойчивую (насыщенную) прямую или разветвленную цепь, или циклический углеводородный радикал, или их комбинации, состоящую из указанного числа атомов углерода и из от одного до трех гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из О, N, Si и S, и в которой атомы азота и серы необязательно могут быть окисленными, а гетероатом азота может необязательно быть кватернизованным. Гетероатом(ы) О, N и S могут располагаться в любом внутреннем положении гетероалкильной группы. Гетероатом Si может располагаться в любом положении гетероалкильной группы, включая положение, при котором алкильная группа присоединяется к остатку молекулы. Примеры включают -СН2-СН2-О-
СН3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-
CH3, -СН=СН-О-СН3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3, и -CH=CH-N(CH3)-CH3. He более двух гетероатомов могут быть последовательными (следовать друг за другом), например, -CH2-NH-OCH3 и -CH2-O-Si(CH3)3. Подобным образом, термины "гетероалкенил" и "гетероалкинил", сами по себе или в комбинации с другим термином, означают, если не установлено иначе, алкенильную группу или алкинильную группу, соответственно, которая содержит указанное число атомов углерод, и имеющую от одного до трех гетероа-томов, выбранных из группы, состоящей из О, N, Si и S, и в которой атомы азота и серы необязательно могут быть окисленными, а гетероатом азота может необязательно быть кватернизованным. Гетероа-том(ы) О, N и S могут располагаться в любом внутреннем положении гетероалкильной группы.
Термин "гетероалкилен", сам по себе или как часть другого заместителя, означает двухвалентный радикал, насыщенный или ненасыщенный или полиненасыщенный, полученный из гетероалкила, например -CH2-CH2-S-CH2CH2- и -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-, -О-СН2-СН=СН-, -СН2-СН=С(Н)СН2-О-СН2- и
^-CH^feC-. В отношении гетероалкиленовых групп, гетероатомы также могут занимать любой или оба конца цепи (например, алкиленокси, алкилендиокси, алкиленамино, алкилендиаминогруппы и т.п.).
Термины "алкокси", "алкиламино" и "алкилтио" (или тиоалкокси) используются в их обычном значении и относятся к алкильным группам, которые присоединяются к остатку молекулы через атом кислорода, аминогруппу или атом серы, соответственно. Кроме того, в отношении диалкиламиногрупп, алкильные части могут быть одинаковыми или разными и также могут объединяться с образованием 3-7-членного кольца с атомом азота, к которому каждая присоединяется. В соответствии с этим, группа, представленная как -NRaRb, включает пиперидинил, пирролидинил, морфолинил, азетидинил и тому подобное.
Термины "гало" или "галоген", сами по себе или как часть другого заместителя, означают, если не установлено иначе, атом фтора, хлора, брома или иода. Кроме того, такие термины, как "галоалкил", предназначаются для того, чтобы включать моногалоалкил и полигалоалкил. Например, термин "C1-4 галоалкил" предназначается, чтобы включать трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3-бромпро-пил и т.п.
Термин "арил" означает, если не установлено иначе, полиненасыщенную, как правило, ароматическую, углеводородную группу, которая может быть одиночным кольцом или множеством колец (до трех колец), которые объединены вместе или ковалентно связаны. Термин "гетероарил" относится к арильным группам (или кольцам), которые содержат от одного до пяти гетероатомов, выбранных из N, О и S, в которых атомы азота и серы необязательно являются окисленными, а атом(ы) азота необязательно являются кватернизованными. Гетероарильная группа может присоединяться к остатку молекулы через гетероа-том. Неограничивающие примеры арильных групп включают фенил, нафтил и бифенил, в то время как неограничивающие примеры гетероарильных групп включают пиридил, пиридазинил, пиразинил, пири-миндинил, триазинил, хинолинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, бензотриази-нил, пиринил, бензимидазолил, бензопиразолил, бензотриазолил, бензизоксазолил, изобензофурил, изо-индолил, индолизинил, бензотриазинил, тиенопиридинил, тиенопиримидинил, пиразолпиримидинил, имидазопиридины, бензотиаксолил, бензофуранил, бензотиенил, индолил, хинолил, изохинолил, изотиа-золил, пиразолил, индазолил, птеридинил, имидазолил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиадиазолил, пирролил, тиазолил, фурил, тиенил и т.п. Заместителей для каждой из приведенных выше арильных и гетероарильных кольцевых систем выбирают из группы приемлемых заместителей, описанных ниже.
Для краткости, термин "арил" при использовании в комбинации с другими терминами (например, арилокси, арилтиокси, арилалкил) включает и арильные, и гетероарильные кольца, как определено выше. Таким образом, термин "арилалкил" предназначается, чтобы включать те радикалы, в которых арильная группа присоединяется к алкильной группе (например, бензил, фенэтил, пиридилметил и т.п.).
Вышеуказанные термины (например, "алкил", "арил" и "гетероарил") в некоторых вариантах осуществления будут включать и насыщенные, и ненасыщенные формы указанных радикалов. Предпочтительные заместители для каждого типа радикала предоставляются ниже. Для краткости, термины арил и гетероарил будут относиться к замещенным или незамещенным вариантам, как установлено ниже, тогда как термин "алкил" и родственные алифатические радикалы предназначается, чтобы упоминать незамещенный вариант, если не указано, что он является замещенным.
Заместители для алкильных радикалов (включая группы, часто упоминаемые как алкилен, алкенил, алкинил и циклоалкил) могут быть различными группами, выбранными из галогена, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R'", -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R'", -
NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -
NR'S(O)2R", -CN и -NO2 в количестве в пределах от нуля до (2m'+1), где m' представляет собой общее число атомов углерода в таком радикале. R', R" и R'" каждый независимо указывает на водород, незамещенный C1-8 алкил, незамещенный гетероалкил, незамещенный арил, арил, замещенный 1-3 галогенами, незамещенный C1-8 алкил, C1-8 алкоксигруппу или C1-8 тиоалкоксигруппу или незамещенные арил-C1-4 алкильные группы. Когда R' и R" присоединяются к одному и тому же атому азота, они могут объединяться с атомом азота с образованием 3-, 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Например, -NR'R" включает 1-пирролидинил и 4-морфолинил. Термин "ацил" при использовании самого по себе или как части другой группы относится к алкильному радикалу, в котором два заместителя на углероде, который является ближайшим к точке присоединения радикала, заменяются на заместитель =O (например, -С(О)СН3, -
C(O)CH2CH2OR' и т.п.).
Подобным образом, заместители для арильных и гетероарильных групп варьируют и их в основном
выбирают из галогена, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', ,-NR'-C(O)NR"R'", -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-
C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -N3, перфтор^-Оалкоксигруппы и пер-фтор(C1-C4)алкила, в количестве от нуля до общего числа открытых валентностей на ароматической системе колец; и где R', R" и R'" независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила, C3-6 циклоалкила, C2-8 алке-нила, C2-8 алкинила, незамещенного арила и гетероарила, (незамещенного арил)-С1-4 алкила и незаме
щенного арилокси-C1-4алкила. Другие подходящие заместители включают каждый из вышеприведенных арильных заместителей, присоединенный к кольцевому атому при пределе алкилена 1-4 атомов углерода.
Два из заместителей на смежных атомах арильного или гетероарильного кольца могут необязательно быть замещенными заместителем формулы -T-C(O)-(CH2)q-U-, где Т и U независимо представляют собой -NH-, -O-, -СН2- или одинарную связь, и q представляет собой целое число от 0 до 2. Альтернативно, два из заместителей на смежных атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть замещены заместителем формулы -А-(СН2)Г-В-, где А и В представляют собой независимо -СН2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- или одинарную связь, а r представляет собой целое число от 1 до 3. Одна из одинарных связей нового кольца, сформированного таким образом, необязательно может быть заменена на двойную связь. Альтернативно, два из заместителей на смежных атомах арильного или гете-роарильного кольца необязательно могут быть замещены заместителем формулы -(CH2)s-X-(CH2)t, где s и t представляют собой независимо целые числа от 0 до 3, и X представляет собой -О-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- или -S(O)2NR'-. Заместитель R' в -NR'- и -S(O)2NR'- выбирают из водорода или незамещенного C1-6 алкила.
При использовании в описании термин "гетероатом" включает кислород (О), азот (N), серу (S) и кремний (Si).
Термин " ионная жидкость" относится к любой жидкости, которая главным образом содержит ионы. Предпочтительно в настоящем изобретении "ионная жидкость" относится к солям, температура плавления которых является относительно низкой (например, ниже 250°С). Примеры ионных жидкостей включают, но не ограничиваются этим, 1-бутил-3-метил имидазолия тетрафторборат, 1-гексил-3-метилимидазолия тетраф-торборат, 1-октил-3-метилимидазолия тетрафторборат, 1-нонил-3-метилимидазолия тетрафторборат, 1-децил-3-метилимидазолия тетрафторборат, 1-гексил-3-метилимидазолия гексафторфосфат и 1-гексил-3-метилимидазолия бромид и тому подобное.
Термин "фармацевтически приемлемые соли" предназначается для включения солей активных соединений, которые получаются с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных заместителей, находящихся на соединениях, описанных здесь. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно кислотные функциональности, соли присоединения основания можно получить при взаимодействии нейтральных форм таких соединений с достаточным количеством необходимого основания, или беспримесного или в подходящем инертном растворителе. Примеры солей, полученных из фармацевтически приемлемых неорганических оснований, включают соли алюминия, аммония, кальция, медные, железные, железистые соли, соли лития, магния, марганца, марганцова-тистые соли, соли калия, натрия, цинка и т.п. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, включая замещенные амины, циклические амины, природные амины и тому подобные, такие как аргинин, бетаин, кофеин, хо-лин, N,N'-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламинэтанол, 2-диметиламинэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изо-пропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперадин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и тому подобное. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно основные функциональности, соли присоединения кислоты можно получить при взаимодействии нейтральных форм таких соединений с достаточным количеством желательной кислоты, или беспримесной или в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты включают соли, полученные из неорганических кислот, подобных хлористо-водородной, бромисто-водородной, азотной, угольной, мо-ногидрогенугольной, фосфорной, моногидрогенфосфорной, дигидрогенфосфорной, серной, моногидро-генсерной, йодисто-водородной или фосфористой кислот и т.п., а также соли, полученные из относительно нетоксичных органических кислот, подобных уксусной, пропионовой, изомасляной, малоновой, бензойной, янтарной, субериновой, фумаровой, миндальной, фталевой, бензолсульфоновой, р-толуолсульфоновой, лимонной, винной, метансульфоновой и т.п. Также включаются соли аминокислот, такие как аргинат и тому подобное, и соли органических кислот, подобные глюкуроновой или галакту-роновой кислотам и т.п. (см., например, Berge, S.M. et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Отдельные конкретные соединения настоящего изобретения содержат и основные и кислотные функциональности, которые позволяют соединениям превращаться в соли присоединения или кислоты или основания.
Нейтральные формы соединений могут быть восстановлены путем взаимодействия соли с основанием или кислотой и выделения исходного соединения обычным образом. Исходная форма соединения отличается от различных солей по определенным физическим свойствам, таким как растворимость в полярных растворителях, а в остальном соли являются эквивалентными исходной форме соединения в контексте настоящего изобретения.
В дополнение к формам в виде солей, настоящее изобретение предоставляет соединения, которые находятся в форме пролекарства. Пролекарства соединений, описанных здесь, представляют собой соединения, которые легко подвергаются химическим изменениям при физиологических условиях, для
получения соединений настоящего изобретения. Кроме того, пролекарства могут превращаться в соединения настоящего изобретения с помощью химических и биохимических методов в среде ех vivo. Например, пролекарства могут медленно превращаться в соединения настоящего изобретения при размещении в резервуаре трансдермального (чрескожного) пластыря с подходящим ферментом или химическим реактивом.
Определенные соединения настоящего изобретения могут находиться в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидратные формы. В общем, сольватированные формы являются эквивалентными несольватированным формам и включаются в рамки настоящего изобретения. Определенные соединения настоящего изобретения могут находиться в многочисленных кристаллических и аморфных формах. В общем, все физические формы являются равноценными для использования, предполагаемого настоящим изобретением, и включаются в рамки настоящего изобретения.
Определенные соединения настоящего изобретения имеют асимметрические атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; рацематы, диастереомеры, геометрические изомеры, региоизомеры и отдельные изомеры (например, отдельные энантиомеры), все включаются в рамки настоящего изобретения. Соединения настоящего изобретения также могут содержать неприродные (неестественные) доли атомных изотопов одного или более атомов, которые составляют такие соединения. Например, соединения могут быть мечены радиоактивными изотопами, такими как, например, тритий (3Н), йод-125 (125I) или углерод-14 (14С). Все изотопные варианты соединений настоящего изобретения, радиоактивные или нет, включаются в рамки настоящего изобретения.
II. Соединения
В одном аспекте настоящее изобретение предоставляет соединения, имеющие формулу I
С2 (I);
и их фармацевтически приемлемые соли, гидраты и ротамеры; где
С1 выбирают из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила и тиазолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R1;
С2 выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, пиридила и индолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R2;
С3 выбирают из группы, состоящей из C3-6 алкила, C3-6 циклоалкила, C3-6 циклоалкил-С1-2 алкила, фенила, пиридинила, пиразолила, пиперидинила, пирролидинила, пиперидинилметила и пирролидинил-метила, каждый из которых является необязательно замещенным 1-3 заместителями R3;
каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rc, -CO2Ra, -CONRaRb, -
C(O)Ra, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)2Rc, -NRaC(O)NRaRb, -NRaRb, -ORa и -S(O)2NRaRb; где каждый Ra и Rb независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шес-тичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S; каждый Rc независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоал-кила и пирролидинила, и где алифатическая и циклическая части Ra, Rb и Rc являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, C1-8 алкиламиногруппами и диС1-8алкиламиногруппами; и необязательно, когда два заместителя R1 находятся на смежных атомах, они объединяются с образованием конденсированного пяти- или шестичлен-ного карбоциклического кольца;
каждый R2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rf, -CO2Rd, -CONRdRe, -C(O)Rd, -OC(O)NRdRe, -NReC(O)Rd, -NReC(O)2Rf, -NRdC(O)NRdRe, -NRdRe, -ORd и -S(O)2NRdRe; где каждый Rd и Re независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шес-тичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатома в кольце, выбранных из N, О или S; каждый Rf независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила и пиразолила, и где алифатическая и циклическая части Rd, Re и Rf являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, C1-8алкиламино и диС1-8алкиламиногруппами;
каждый R3 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Ri, -CO2Rg, -CONRgRh, -C(O)Rg, -OC(O)NRgRh, -NRhC(O)Rg, -NRhC(O)2Ri, -NRgC(O)NRgRh, -NRgRh, -ORg, -S(O)2NRgRh, -X4-Rj, -X4-NRgRh, -X4-CONRgRh, -X4-NRhC(O)Rg, -NHRj и -NHCH2Rj, где X4 представляет собой C1-4 алкилен; каждый Rg и Rh независимо выбирают из водорода, С1-8 алкила, C3-6 циклоалкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила,
пирролидинила, пиперидинила, тетрагидрофуранила, пиразолила и пирролила; и каждый Rj выбирают из
группы, состоящей из C3-6 циклоалкила, пирролинила, пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила
и тетрагидропиранила, и где алифатическая и циклическая части являются необязательно
дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, метилами, CF3, гидрокси, амино, C1-8 алки-ламино и диС1-8алкиламиногруппами; и
X представляет собой водород или CH3.
В формуле I заместитель С1 в одном варианте осуществления выбирают из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила и тиазолила, каждый из которых необязательно является замещенным 1-3 заместителями R1. Предпочтительно каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rc, -NRaRb и -ORa, и где каждый Ra и Rb независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пирролидинового кольца; каждый Rc независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила и C3-6 циклоалкила, и где алифатическая и циклическая части Ra, Rb и Rc являются необязательно дополнительно замещенными от одной до трех гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, алкиламино и диалкиламино группами; и необязательно, когда два заместителя R1 находятся на смежных атомах, они объединяются с образованием конденсированного пяти- или шестичлен-ного карбоциклического кольца. В некоторых вариантах осуществления изобретения С1 выбирают из
СН3 и Н3С
Возвращаясь к формуле I, заместитель С2 в одном варианте осуществления выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, пиридила и индолила, каждый из которых необязательно является замещенным от 1 до 3 R2 заместителями. Предпочтительно каждый R2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -Rf и -ORd; где каждый Rd независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила; каждый Rf независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, гетероциклоалкила и гетероарила, и где алифатическая и циклическая части Rd и Rf являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, алкиламино и диалкиламино группами. В некоторых вариантах осуществления изобретения С2 выбирают из группы, состоящей из
пирролидинила, пиперидинилметила и пирролидинилметила, каждый из которых является необязательно
замещенным от 1 до 3 R3 заместителями. Предпочтительно каждый R3 независимо выбирают из группы,
состоящей из галогена, -Ri, -CO2Rg, -CONRgRh, -NRhC(O)Rg, -NRhC(O)2Ri, -NRgRh, -ORg, -X4-RJ, -X4-
NRgRh, -X4-CONRgRh, -X4-NRhC(O)Rg, -NHRJ и -NHCH2RJ, где X4 представляет собой C1-3 алкилен; каж-
дый Rg и Rh независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила, C3-6 циклоалкила и C1-8 галоалкила, или при
присоединении к тому же самому атому азота они могут объединяться с атомом азота с образованием
пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 1 дополнительных гетероатомов в кольце, выбран-
ных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый Ri независимо
выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, гетероциклоалкила,
арила и гетероарила; и каждый RJ выбирают из группы, состоящей из C3-6 циклоалкила, пирролинила,
пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила и тетрагидропиранила, и где алифатическая и цикли-
ческая части являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех гало-
генами, метилами, CF3, гидрокси, амино, алкиламино и диалкиламиногруппами. В некоторых вариантах
осуществления изобретения С3 выбирают из группы, состоящей из
Возвращаясь к формуле I, X является предпочтительно Н. Подформулы формулы I
В одном варианте осуществления соединения формулы I имеют подформулу Ia
В третьем варианте осуществления изобретения соединения формулы I имеют подформулу 1с
^ <1С)
где X1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR1; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR2; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.
В четвертом варианте осуществления изобретения соединения формулы I имеют подформулу Id
(Id)
где X1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR1; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR2; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.
В пятом варианте осуществления изобретения соединения формулы I имеют подформулу 1е
где индекс р представляет собой целое число от 0 до 3; X1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR1; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR2; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.
В других избранных вариантах осуществления соединения изобретения представляют собой
где заместители R1 и R3 и индекс р имеют значения, предоставленные со ссылкой на формулу I.
В особенно предпочтительной группе вариантов осуществления соединения изобретения представлены формулой (Ie5), где R3 выбирают из группы, состоящей из -NRgRh, -NHRJ- и -NHCH2RJ, и каждый Rg, Rh и RJ имеет значения, предоставленные со ссылкой на формулу I.
В другой особенно предпочтительной группе вариантов осуществления соединения изобретения представлены формулой (Ie5), где R3 выбирают из группы, состоящей из -X4-NRgRh, -X4-RJ и -X4-NRhCORg, и каждый из X4, Rg, Rh и RJ имеет значения, предоставленные со ссылкой на формулу I.
Соединения изобретения, имеющие формулу I, могут находиться в разных диастереоизомерных формах, например, заместители С1 и С2 в подформулах Ia и Ic могут быть в цис-положении относительно друг друга или транс-положении относительно друг друга. При использовании в описании термины "цис" или "транс" используются в их обычном для области химии смысле, т.е. ссылаясь на положение заместителей относительно друг друга по отношению к условной плоскости, например, двойная связь или система колец, такая как кольцевая система декалинового типа или гидрохинолоновая кольцевая система: в цис-изомере заместители находятся на одной и той же стороне условной плоскости, в трансизомере заместители находятся на противоположных сторонах. Кроме того, настоящим изобретением рассматриваются различные конформеры, а также различные ротамеры. Конформеры представляют собой конформационные изомеры, которые могут отличаться поворотами вокруг одной или более а связей. Ротамеры представляют собой конформеры, которые различаются поворотом вокруг только одной а связи.
Получение соединений
Специалистам в данной области техники понятно, что существует ряд доступных способов синтеза молекул, представленных в пунктах формулы изобретения. В общем, подходящие способы для синтеза соединений, представленных в пунктах формулы изобретения, состоят из четырех частей, которые могут быть осуществлены в любом порядке: формирование пиперидинового кольца, формирование двух амид-ных связей и формирование и/или модификация функциональных групп на С1, С2 и С3.
Некоторые способы получения заявленных соединений проиллюстрированы ниже (уравнения 1-6).
Уравнения 1-4 показывают некоторые способы образования пиперидинового кольца. Связывание во 2-положении пиридинового кольца может быть выполнено через связывания, опосредованные переходным металлом, как показано в уравнении 1-2, или путем добавления, катализируемого металлом, орга-нометаллических видов, таких как цинкат или магниевая соль (ур. 3). После связывания во 2-м положении опосредованная переходным металлом гидрогенизация пиридинового кольца дает пиперидиновую кольцевую систему (ур. 1-3). Другой способ приводит к переформированию р-аминокислоты в пипери-диновое кольцо, как описано в уравнении 4. Специалистам в данной области техники понятно, что многие методы синтеза могут давать замещенные пиперидины, включая С-С или C-N циклизацию ациклических предшественников через алкилирование или перестановку с закрытием цикла. Относительная стереохимия может быть установлена различными методами, включая фациальную селективность во время стадии гидрогенизации. Абсолютная стереохимия также может быть установлена различными методами посредством использования хиральных лигандов или хиральных вспомогательных веществ, разделения хиральных диастереоизомеров, использования хиральных исходных материалов или классического разделения. Соединения с 2,3-транс-стереохимией могут иметь относительную стереохимическую конфигурацию во время формирования пиперидина или могут быть получены с помощью эпимеризации 2,3-цис-пиперидина, как показано в уравнении 5.
быть выбран из подходящей группы, например ОН, Cl и F, или из любой группы, способной активировать карбонильную группу для присоединения амина (например, OSu, имидазол и т.д.). Такие соединения можно осуществить, используя неорганические или органические основания, активирующие вещества, такие как HBTU, а также с помощью катализаторов, в частности при помощи катализаторов, известных в данной области техники, которые способствуют формированию амидных связей, таких как DMAP, НОВТ и т.д. Подходящие связующие партнеры включают карбоновую кислоту и пиперидин, фторангид-рид карбоновой кислоты и амин и т.д. Специалистам в данной области техники будет понятно, что существуют другие возможные комбинации, которые в результате также будут давать искомый продукт.
Для получения соединений изобретения используется ряд методов, представленных выше, некоторые из которых описаны в примерах.
Семейство конкретных соединений, представляющих особый интерес и имеющих формулу I, состоит из соединений, их фармацевтически приемлемых солей, гидратов и ротамеров, как показано на чертеже.
III. Фармацевтические композиции
В дополнение к соединениям, предоставленным выше, композиции для модулирования активности С5а у людей и животных будут, как правило, содержать фармацевтический носитель или разбавитель.
Термин "композиция" при использовании в описании предназначается для того, чтобы включать продукт, содержащий установленные ингредиенты в точно определенных количествах, а также любой продукт, который получается, прямо или косвенно, из комбинации установленных ингредиентов в точно определенных количествах. Под "фармацевтически приемлемым" имеется в виду носитель, разбавитель или эксципиент (вспомогательное вещество), который должен быть совместимым с другими ингредиентами композиции и не вредным для его реципиента.
Фармацевтические композиции для введения соединений этого изобретения могут быть удобно представлены в стандартной лекарственной форме и могут быть приготовлены любыми способами, хорошо известными в области фармации и доставки лекарственных средств. Все способы включают этап соединения активного ингредиента с носителем, который представляет собой один или более дополнительных ингредиентов. В общем, фармацевтические композиции получают путем равномерного и тщательного введения активного ингредиента в ассоциацию (связь) с жидким носитель или мелкоизмель-ченным твердым носителем или обоими, и затем, при необходимости, формирования продукта в желательную композицию. В фармацевтическую композицию активное соединение включается в количестве, достаточном для получения желательного действия на процесс или состояние болезни.
Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут находиться в форме, подходящей для перорального применения, такой как, например, таблетки, пастилки, таблетки для рассасывания, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии и само-эмульсификаторы, как описано в патентной заявке США 2002-0012680, твердые или мягкие капсулы, сиропы, эликсиры, растворы, щечные пластыри, гель для рта, жевательная резинка, жевательные таблетки, порошок сухого шипучего напитка и таблетки сухого шипучего напитка. Композиции, предназначенные для перорального применения, можно получить в соответствии с любым способом, известным в данной области техники для производства фармацевтических композиций, причем такие композиции могут содержать одно или более веществ, выбранных из группы, состоящей из подсластителей, вкусовых веществ, красящих веществ, антиоксидантов и консервирующих веществ, для того чтобы обеспечить фармацевтически изысканные и приятные препараты. Таблетки содержат активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми эксципиентами, которые подходят для производства таблеток. Эти эксципиенты могут быть, например, инертными разбавителями, такими как целлюлоза, диоксид кремния, окись алюминия, карбонат кальция, карбонат натрия, глюкоза, маннитол, сорбитол, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующими и дезинтегрирующими веществами, например, кукурузным крахмалом или альгиновой кислотой; связывающими веществами, например, PVP, целлюлозой, PEG, крахмалом, желатином или гуммиарабиком, и смазывающими веществами, например стеара-том магния, стеариновой кислотой или тальком. Таблетки могут быть непокрытыми, или они могут быть покрыты энтеросолюбильной оболочкой или иным образом с помощью известных методов, чтобы отсрочить разрушение и абсорбцию в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода времени. Например, можно использовать материал, дающий задержку высвобождения по времени, такой как глицерил моностеарат или глицерил дистеа-рат. Также таблетки можно покрыть с помощью методов, описанных в патенте США № 4256108; 4166452 и 4265874, для создания осмотических терапевтических таблеток с контролируемых высвобождением.
Составы для перорального применения также могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивается с инертным твердым разбавителем, например,
карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивается с водной или масляной средой, например арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом. Кроме того, эмульсии можно приготовить с неводным смешивающимся ингредиентом, таким как масло, и стабилизировать поверхностно-активными веществами, такими как моноглицериды, ПЭГ-эфиры и т.п.
Водные суспензии содержат активные материалы в смеси с эксципиентами, пригодными для производства водной суспензии. Такие эксципиенты представляют собой суспендирующие вещества, например натрий карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидрокси-пропилметилцеллюлозу, альгинат натрия, поливинил-пирролидон, трагакантовую камедь и гуммиарабик; диспергирующие или увлажняющие вещества могут быть природными фосфатидами, например лецитином, или продуктами конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтиленстеарат, или продуктами конденсации алкиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксице-танол, или продуктами конденсации алкиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гекситола, например, полиоксиэтилен сорбитол моноолеат, или продуктами конденсации алкиле-ноксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гексита, например, поли-оксиэтилен сорбитан моноолеат. Водные суспензии также могут содержать одно или более консервирующих веществ, например этил, или н-пропил, р-гидроксибензоат, одно или более красящих веществ, одно или более ароматизирующих веществ и один или более подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
Масляные суспензии можно получить путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, например арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например, воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Чтобы обеспечить вкусный пероральный препарат, можно добавить подсластители, такие как изложенные выше, и ароматизирующие вещества. Эти композиции можно предохранить путем добавления антиоксидантов, например, аскорбиновой кислоты.
Диспергируемые порошки и гранулы, пригодные для приготовления водных суспензий добавлением воды, предоставляют активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим веществом, суспендирующим веществом и одним или более консервирующими веществами. Подходящие диспергирующие или смачивающие вещества и суспендирующие вещества представлены примерами, уже упомянутыми выше. Также могут присутствовать дополнительные эксципиенты, например подсластители, ароматизирующие и красящие вещества.
Фармацевтические композиции изобретения также могут быть в форме эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может быть растительным маслом, например оливковым маслом или арахисовым маслом, или минеральным маслом, например жидким парафином или их смесями. Подходящие эмульгирующие вещества могут быть природными камедями, например, гуммиарабиком или трагакантовой камедью, природными фосфатидами, например соевые бобы, лецитин и сложные эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, например, сорбитан моноолеат, и продукты конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, например, полиоксиэтилен сорбитан моноолеат. Эмульсии также могут содержать подсластители и красящие вещества.
Сиропы и эликсиры могут быть заключены в состав с подсластителями, например, глицерином, пропиленгликолем, сорбитом или сахарозой. Такие составы также могут содержать успокоительные, консервирующие, ароматизирующие и красящие вещества. Пероральные растворы могут быть приготовлены в комбинации, например, с циклодекстрином, ПЭГ и поверхностно-активными веществами.
Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильных инъецируемых водных или масляных суспензий. Эти суспензии могут быть созданы согласно известному уровню техники с использованием тех подходящих диспергирующих или увлажняющих веществ и суспендирующих веществ, которые были упомянуты выше. Стерильный инъецируемый препарат также может быть стерильным инъецируемым раствором или суспензией в нетоксичном парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например, как раствор в 1,3-бутандоиле. В число приемлемых переносчиков и растворителей, которые можно использовать, входят вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используются стерильные жирные масла. Для этой цели можно использовать любое мягкое жирное масло, включая синтетические моно-или диглицериды. Помимо этого, при приготовлении инъецируемых препаратов находят применение жирные кислоты, например олеиновая кислота.
Соединения настоящего изобретения также могут быть введены в форме суппозиториев для ректального применения лекарственного средства. Эти композиции можно приготовить, смешивая лекарственное средство с подходящим, не вызывающим раздражение эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но становится жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают масло какао и полиэтиленгликоли. Кроме того, соединения могут быть введены посредством глазной доставки с помощью растворов или мазей. Более того, чрескожная доставка предметных соединений может осуществляться с помощью ионофоретических пластырей и т.п. Для местного применения используются
кремы, мази, желе, растворы или суспензии и т.д., содержащие соединения настоящего изобретения. При использовании в описании местное применение также включает использование жидкостей и полосканий для рта.
Соединения данного изобретения также могут быть объединены с носителем, который представляет собой подходящий полимер в качестве нацеливаемого носителя лекарственных средств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, сополимеры пирана, полигидрокси-пропил-метакриламид-фенол, полигидроксиэтил-аспартамид-фенол или полиэтиленоксид-полилизин, замещенный остатками пальмитоила. Кроме того, соединения изобретения могут быть соединены с носителем, который представляет класс биодеградируемых полимеров, пригодных для достижения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например, полимолочная кислота, полигликолиевая кислота, сополимеры полимолочной и полигликолиевой кислот, полиэпсилон-капролактон, полигидроксимасляная кислота, полиортоэфиры, полиацетали, полигидропираны, полицианакрилаты и поперечно-связанные или ам-фипатические блок-сополимеры гидрогелей. Полимеры и полупроницаемые полимерные матрицы могут быть сформованы в профилированные изделия, такие как клапаны, стенты, трубки, протезы и тому подобное. В одном варианте осуществления изобретения соединения изобретения соединяются с полимером или полупроницаемой полимерной матрицей, которая сформована как стент или стент-графт устройство.
IV. Способы лечения болезней и расстройств, модулируемых С5а
Соединения изобретения могут быть использованы как агонисты, (предпочтительно) антагонисты, частичные агонисты, обратные агонисты рецепторов С5а в различных случаях и in vitro и in vivo. В одном варианте осуществления соединения изобретения представляют собой антагонист C5aR, который можно использовать для того, чтобы ингибировать связывание лиганда рецептора С5а (например, С5а) с рецептором С5а in vitro или in vivo. В общем, такие способы содержат стадию контактирования рецептора С5а с достаточным количеством одного или более модуляторов рецептора С5а, как предусмотрено здесь, в присутствии лиганда рецептора С5а в водном растворе и при условиях, в других случаях подходящих для связывания лиганда с рецептором С5а. Рецептор С5а может присутствовать в суспензии (например, в изолированной мембране или клеточном препарате), в культивированной или изолированной клетке или в ткани или органе.
Предпочтительно количество модулятора рецептора С5а, контактирующего с рецептором, должно быть достаточным, чтобы ингибировать связывание С5а с рецептором С5а in vitro, что измеряется, например, путем анализа связывания радиолиганда, анализа мобилизации кальция или анализа хемотаксиса, как описано здесь.
В одном варианте осуществления изобретения С5а-модуляторы изобретения используют, чтобы модулировать, предпочтительно ингибировать, активность, связанную с трансдукцией сигнала, рецептора С5а, например, путем контактирования одного или более соединения(й) изобретения с рецептором С5а (или in vitro или in vivo) при условиях, подходящих для связывания модулятора(ов) с рецептором. Рецептор может присутствовать в растворе или суспензии, в культивируемом или изолированном клеточном препарате или в организме пациента. Любое изменение активности, связанной с трансдукцией сигнала, можно оценить путем обнаружения влияния на мобилизацию ионов кальция или путем определения влияния на клеточный хемотаксис, опосредованный С5а рецептором. В общем, эффективное количество модулятора(ов) С5а представляет собой количество, достаточное для того, чтобы модулировать С5а-рецепторную активность, связанную с трансдукцией сигнала, в рамках метода анализа мобилизации кальция in vitro, или клеточный хемотаксис, опосредованный рецептором С5а, в рамках метода анализа миграции.
Когда соединения изобретения используются, чтобы ингибировать опосредованный рецептором С5а клеточный хемотаксис, предпочтительно хемотаксис лейкоцитов (например, нейтрофилов), при анализе хемотаксиса in vitro, такие способы включают контактирование лейкоцитов (в частности, лейкоцитов приматов, особенно лейкоцитов человека) с одним или более соединениями изобретения. Предпочтительно концентрация является достаточной, чтобы ингибировать хемотаксис лейкоцитов при анализе хемотаксиса in vitro, так что уровни хемотаксиса, наблюдаемые в контрольной пробе, являются значительно более высокими, как описано выше, чем уровни, наблюдаемые в пробе, к которой было добавлено соединение изобретения.
В другом варианте осуществления соединения настоящего изобретения дополнительно могут использоваться для лечения пациентов, страдающих от состояний, которые реагируют на изменение (модулирование) рецептора С5а. При использовании в описании термин "лечение" включает и болезнь-модифицирующее лечение и симптоматическое лечение, любое из которых может быть профилактическим (т.е. до начала симптомов, для того, чтобы предотвратить, отсрочить или уменьшить тяжесть симптомов) или терапевтическим (т.е. после начала симптомов, для того, чтобы уменьшить тяжесть и/или продолжительность симптомов). При использовании в описании считается, что состояние "реагирует на модулирование рецептора С5а", если модулирование активности рецептора С5а приводит к снижению неадекватной активности рецептора С5а. При использовании в описании термин "пациенты" включает
приматов (в частности, людей), домашних животных (таких как собаки, кошки, лошади и т.п.) и сельскохозяйственных животных (таких как крупный рогатый скот, свиньи, овцы и т.п.), при использовании дозировок, как описано здесь.
Состояния, которые можно лечить, модулируя С5а
Аутоиммунные болезни - например, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, синдром Гийена-Барре, панкреатит, волчаночный нефрит, волчаночный гломерулонефрит, псориаз, болезнь Крона, васкулит, спастический колит, дерматомиозит, рассеянный склероз, бронхиальная астма, пузырчатка, пемфигоид, склеродерма, тяжелая псевдопаралитическая миастения, аутоиммунное гемолитическое и тромбоцитопеническое состояния, синдром Гудпасчера (и связанный с ним гломерулонефрит и легочное кровотечение), иммуноваскулит, отторжение тканевого трансплантата, сверхострое отторжение трансплантированных органов и т.д.
Воспалительные нарушения и родственные состояния - например, нейтропения, сепсис, септический шок, болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, инсульт, воспалительная болезнь кишечника (IBD), воспаление, связанное с тяжелым ожогом, повреждение легких, ишемически-реперфузионное повреждение, остеоартрит, а также синдром острой дыхательной недостаточности у взрослых (ARDS), хроническое легочное обструктивное заболевание (COPD), синдром системной воспалительной реакции (SIRS), атопический дерматит, псориаз, хроническая крапивница и полиорганная недостаточность (MODS). Также включаются патологические осложнения, связанные с инсулинозависимым сахарным диабетом (включая диабетическую ретинопатию), волчаночную нефропатию, нефрит Хеймана, мембранозный нефрит и другие формы гломерулонефрита, ответная контактная чувствительность и воспаление в результате контакта крови с искусственными поверхностями, что может вызвать активацию комплемента, как происходит, например, во время искусственного кровообращения (например, во время гемодиализа или в аппарате искусственного кровообращения, например, в связи с сосудистой хирургией, такой как аортокоронарное шунтирование или замена сердечного клапана), или в связи с контактом с другим искусственным сосудом или поверхностями контейнера (например, вспомогательная желудочковая система, устройство "искусственное сердце", трубки для переливания крови, контейнеры для консервации крови, плазмоферез, тромбоцитоферез и т.д.). Также включаются болезни, связанные с ишемически-реперфузионным повреждением, такие как те, которые являются результатом трансплантации, включая трансплантацию цельных органов, и такие синдромы, как ишемическое реперфузионное повреждение, ишемический колит и сердечная ишемия. Соединения текущего изобретения также могут быть пригодны для лечения возрастной дегенерации желтого пятна (Hageman et al., P.N.A.S. 102: 7227-7232, 2005).
Сердечно-сосудистые и церебрально-васкулярные нарушения - например, инфаркт миокарда, тромбоз коронарных артерий, окклюзия сосуда, послеоперационная сосудистая реокклюзия, атеросклероз, травматическое повреждение центральной нервной системы и ишемическая болезнь сердца. В одном варианте осуществления эффективное количество соединения изобретения может быть введено пациенту, подверженному риску инфаркта миокарда или тромбоза (т.е. пациенту, который имеет один или более признанных факторов риска инфаркта миокарда или тромбоза, таких как, но не ограничиваясь этим, ожирение, курение, высокое давление крови, гиперхолестеринемия, предшествующая или наследственная история инфаркта миокарда или тромбоза) для того, чтобы снизить риск инфаркта миокарда или тромбоза.
Воспалительные болезни сосудов - васкулиты - характеризуются воспалением кровеносных сосудов. Инфильтрация лейкоцитов приводит к разрушению стенок сосудов, и как полагают, путь комплемента играет основную роль в инициации миграции лейкоцитов, а также получаемом в результате повреждении, которое обнаруживается на месте воспаления (Vasculitis, Second Edition, Edited by Ball и Bridges, Oxford University Press, p. 47-53, 2008). Соединения, предоставленные в настоящем изобретении, можно использовать для лечения лейкокластического васкулита, гранулематоза Вегенера, микроскопической ангиопатии, синдрома Черджа-Стросса, пурпуры Шенлейна-Геноха, нодозного (узелкового) артериита, быстропрогрессирующего гломерулонефрита (RPGN), криоглобулинемии, гигантоклеточного артериита (GCA), болезни Бехчета и артериита Такаясу (TAK).
ВИЧ инфекция и СПИД - модуляторы рецептора С5а, предоставленные в описании, могут использоваться, чтобы ингибировать ВИЧ-инфекции, задерживать развитие СПИДа или уменьшать тяжесть симптомов ВИЧ-инфекции и СПИДа.
Нейродегенеративные расстройства и родственные болезни - в дополнительных аспектах антагонисты С5а, предоставленные в описании, можно использовать для лечения болезни Альцгеймера, рассеянного склероза и ухудшения когнитивной функции, связанного с операцией в условиях искусственного кровообращения и связанных с этим процедур.
В одном варианте осуществления изобретения соединения изобретения можно использовать для лечения болезней, выбранных из группы, состоящей из сепсиса (и родственных расстройств), COPD, ревматоидного артрита, волчаночного нефрита и рассеянного склероза.
Способы лечения, предоставленные в описании, включают, в основном, введение пациенту эффективного количества одного или более соединений, предоставленных здесь. Подходящие пациенты включают пациентов, страдающих от или чувствительных к (т.е. профилактическое лечение) расстройству
или болезни, установленной здесь. Типичные пациенты, как описано здесь, включают млекопитающих, в частности приматов, особенно людей. Другие подходящие пациенты включают домашних животных, таких как собаки, кошки, лошади и т.п., или сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, свиньи, овцы и т.п.
В общем, способы лечения, предоставленные в описании, включают введение пациенту эффективного количества соединений, предоставленных здесь. В предпочтительном варианте осуществления со-единение(я) изобретения предпочтительно вводят пациенту (например, человеку) перорально или местно. Эффективное количество может быть количеством, достаточным для модулирования активности рецептора С5а, и/или количеством, достаточным для снижения или облегчения симптомов, демонстрируемых пациентом. Предпочтительно введенное количество является достаточным, чтобы получить концентрацию соединения в плазме (или его активного метаболита, если соединение является пролекарством), достаточно высокую, чтобы обнаружимо ингибировать хемотаксис лейкоцитов (например, нейтрофилов) in vitro. Режимы лечения могут изменяться в зависимости от использованного соединения и конкретного состояния, которое нужно лечить; для лечения большинства расстройств предпочтительной является частота введения 4 раза в день или меньше. В общем, режим дозирования 2 раза в день является более предпочтительным, причем дозирование один раз в день является особенно предпочтительным. Однако следует понимать, что конкретный уровень дозирования и лечебный режим для любого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая активность определенного использованного соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, путь введения, скорость выведения, лекарственную комбинацию (т.е. когда другие препараты также вводятся пациенту) и тяжесть конкретной болезни, подвергающейся лечению, а также от мнения лечащего врача. В общем, предпочтительным является применение минимальной дозы, достаточной, чтобы обеспечить эффективное лечение. Как правило, можно проконтролировать терапевтическую эффективность у пациентов, используя медицинские или ветеринарные критерии, соответствующие состоянию, которое лечат или предотвращают.
Уровни дозирования порядка примерно от 0,1 до 140 мг на килограмм веса тела в день используются при лечении или предотвращении состояний, имеющих отношение к патогенной активности С5а (примерно от 0,5 мг до 7 г на пациента-человека в день). Данное количество активного ингредиента, которое можно объединить с материалами-носителями для изготовления отдельной лекарственной формы, будет изменяться в зависимости от "хозяина", которого лечат, и конкретного способа введения. Стандартная лекарственная форма, как правило, будет содержать примерно от 1 до 500 мг активного ингредиента. Для соединений, которые вводятся перорально, чрескожно, внутривенно или подкожно, предпочтительным является введение соответствующего количества соединения для достижения в сыворотке концентрации 5 нг (нанограмм)/мл-10 мкг (микрограмм)/мл сыворотки, более предпочтительным является введение соответствующего количества соединения для достижения концентрации в сыворотке 20 нг-1 мкг/мл сыворотки, наиболее предпочтительным является введение соответствующего количества соединения для достижения концентрации в сыворотке 50-200 нг/мл. При прямой инъекции в синовиальную оболочку (для лечения артрита) должно быть введено соответствующее количество соединения для достижения приблизительно 1 микромолярной местной концентрации.
Частота дозирования также может изменяться в зависимости от применяемого соединения и конкретной болезни, которую лечат. Однако, для лечения большинства расстройств режим дозирования 4 раза в день, 3 раза в день или менее является предпочтительным, причем режим дозирования 1 раз в день или 2 раза в день является особенно предпочтительным. Однако следует понимать, что конкретный уровень дозирования для любого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая активность определенного использованного соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, путь введения, скорость выведения, лекарственную комбинацию (т.е. когда другие препараты также вводятся пациенту) и тяжесть конкретной болезни, подвергающейся лечению, а также от мнения лечащего врача.
В другом аспекте изобретения соединения изобретения могут быть использованы в ряде нефармацевтических in vitro и in vivo применений. Например, соединения изобретения можно пометить и использовать как зонды для обнаружения и установления локализации рецептора С5а (клеточные препараты или образцы срезов тканей). Соединения изобретения также можно использовать как положительные контроли при исследованиях активности рецептора С5а, т.е. в качестве стандартов для установления способности веществ-кандидатов связываться с рецептором С5а, или в качестве радиоактивных индикаторов для визуализации с помощью позитронно-эмиссионной томографии (PET) или однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (SPECT). Такие методы можно использовать для того, что охарактеризовать рецепторы С5а у живых субъектов. Например, модулятор рецептора С5а можно пометить с помощью любого из целого ряда хорошо известных методов (например, мечение радиоактивным изотопом, таким как тритий) и инкубировать с образцом в течение соответствующего времени инкубации (например, определенного с помощью первого анализа зависимости связывания от времени). После инкубации несвязанное соединение удаляют (например, отмывкой), а связанное соединение определяют, используя любой метод, подходящий для работы с меткой (например, радиоавтографию или сцинтилля
ционный метод подсчета меченых радиоактивными изотопами соединений; для обнаружения люминесцентных и флуоресцентных групп можно использовать спектроскопические методы). В качестве контроля можно взять, обработанные аналогичным образом, эквивалентные образцы, содержащие меченое соединение и большее (например, в 10 раз больше) количество немеченого соединения. Большее, чем в контроле, количество определяемой метки, оставшееся в испытываемом образце, указывает на наличие рецептора С5а в образце.
Обнаружение, включая рецепторную радиоавтографию (рецепторное картирование) рецептора С5а в культивируемых клетках или образцах ткани, можно осуществить, как описано (Kuhar в разделах 8.1.18.1.9 Current Protocols in Pharmacology (1998) John Wiley & Sons, New York).
Соединения, предоставленные в описании, также можно использовать в целом ряде хорошо известных методов разделения клеток. Например, модуляторы могут быть связаны с внутренней поверхностью чашки для культуры тканей или другой подложкой для использования в качестве аффинных лигандов для иммобилизации и таким образом отделения С5а рецепторов (например, отделения рецептор-экспрессирующих клеток) in vitro. В одном предпочтительном применении модулятор, связанный с флуоресцентным маркером, например, флуоресцеином, контактирует с клетками, которые затем анализируют (или отделяют) с помощью метода флуоресцентной сортировки клеток (FACS).
На чертеже представлена структура и активность репрезентативных соединений, описанных здесь. Активность предоставляется в следующем виде для анализа связывания, как описано здесь: +, 500 нМ <Ю5о < 2000 нМ; ++, 50 нМ <Ю50 <500 нМ; +++, 5 нМ <Ю50 <50 нМ; и ++++, IC50 <5 нМ.
V. Примеры
Следующие примеры предлагаются для иллюстрации, но не для ограничения заявленного изобретения.
Реактивы и растворители, использованные ниже, можно получить из коммерческих источников, таких как Aldrich Chemical Co. (Милуоки, Висконсин, США). ^-ЯМР-спектры регистрировали на ЯМР-спектрометре Varian Mercury 400 МГц. Значимые пики предоставлены относительно TMS и представлены в следующем порядке: мультиплетность (s, синглет; d, дублет; t, триплет; q, квартет; m, мультиплет) и число протонов. Результаты масс-спектрометрии сообщаются как отношение массы к заряду, за которым следует относительная распространенность каждого иона (в скобках). В примерах отдельное значение m/е сообщается для М+Н (или, как отмечается, М-Н) иона, содержащего самые распространенные атомные изотопы. Изотопные диаграммы соответствовали ожидаемой формуле во всех случаях. Масс-спектроскопию с ионизацией электрораспылением (ESI) проводили на масс-спектрометре с электрораспылением Hewlett-Packard MSD, используя HP1100 ВЭЖХ для подачи проб. Обычно аналит растворяли в метаноле при 0,1 мг/мл и 1 мкл вливали в растворитель для подачи в масс-спектрометр, который проводил сканирование от 100 до 1500 Да. Все соединения можно проанализировать в положительном ESI методе, используя ацетонитрил/вода с 1% муравьиной кислотой в качестве растворителя для подачи. Соединения, предоставленные ниже, также можно проанализировать отрицательным ESI методом, используя 2 мМ NH4OAC в системе доставки ацетонитрил /вода.
В примерах и на протяжении всего описания изобретения используются следующие сокращения:
EtOH: этанол
EtONa: этилат натрия
ТГФ: тетрагидрофуран
ТСХ: тонкослойная хроматография
МеОН: метанол
Соединения в рамках этого изобретения можно синтезировать, как описано ниже, используя целый ряд реакций, известных квалифицированным специалистам. Специалисту в данной области понятно, что можно использовать альтернативные методы для синтеза целевых соединений этого изобретения и что подходы, описанные в главной части этого документа, не являются исчерпывающими, но обеспечивают широко применимые и практические пути представляющим интерес соединениям.
Некоторые молекулы, заявленные в этом патенте, могут находиться в разных энантиомерных и диа-стереомерных формах, и все подобные варианты этих соединений являются заявленными.
Подробное описание экспериментальных методов, использованных для синтеза ключевых соединений в этом тексте, приводит к молекулам, которые описываются с помощью физических данных, отождествляющих их, а также структурными изображениями, связанными с ними.
Специалистам в данной области также известно, что в органической химии во время стандартных процедур выделения часто используются кислоты и основания. Иногда во время экспериментальных процедур, описанных в рамках этого патента, получают соли исходных соединений, если они обладают необходимой собственной кислотностью или основностью.
a) Pd(PPh3)4 (3,0 г; 2,6 ммоль) добавили к раствору 2-хлор-3-карбоксиэтилпиридина (25 г; 134,7 ммоль), фенилбороновой кислоты (21,04 г; 172,6 ммоль) и K2CO3 (55,1 г; 399 ммоль) в 1,4-диоксане (200 мл) и воде (200 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 2 ч. Затем раствор охладили до комнатной температуры, и диоксан удалили при пониженном давлении. Полученный водный слой экстрагировали с этилацетатом, а объединенные органические слои высушивали (Na2SO4), фильтровали через целит и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 10-100% EtOAc/гексаны) с получением производного 2-фенилпиридина с выходом 91% (27,98 г). LC-MS Rt (время удерживания): 2,45 мин; MS: (ES) m/z 228 (М+Н+).
b) PtO2 (800 мг; 3,52 ммоль) добавили к раствору этилового эфира 2-фенил-никотиновой кислоты (20 г; 88 ммоль, полученного на стадии а) выше) в EtOH (60 мл) и концентрированной HCl (15 мл). Реакционную смесь гидрогенезировали с помощью шейкера Парра при 40-45 пси в течение 1 ч. Затем реакционную смесь профильтровали через целит, промыли EtOH, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Осадок разбавили CH2Cl2 и промыли насыщенным NaHCO3. Очистка с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 0-20% МеОН/GrbCb) дала искомый продукт с выходом 85% (17,4 г). LC-MS Rt (время удерживания): 1,73 мин, MS: (ES) m/z 234 (М+Н+).
c) Оксалил хлорид (3,2 мл; 30,75 ммоль) добавили к раствору 2-фтор-6-метилбензойной кислоты (3,79 г; 24,6 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл) в реакционную колбу при комнатной температуре, а затем добавили каталитическое количество ДМФА. Реакцию проводили при перемешивании в течение 2 ч при комнатной температуре. Растворитель и избыток оксалил хлорида удалили под вакуумом и осадок высушили в условиях высокого вакуума в течение 20 мин. Полученный хлорангидрид растворили в безводном CH2Cl2 (20 мл) и охладили до 0°С, а затем добавили пиперидин, полученный на стадии b) (5,56 г; 20,5 ммоль) и Et3N (8,6 мл; 61,5 ммоль). Затем дали смеси нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь развели CH2Cl2 и добавили воду. Слои разделили, причем водный слой экстрагировали CH2Cl2. Объединенные органические слои высушили (MgSO4) и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 10-35% EtOAc/гексаны) с получением 7,47 г искомого соединения, выход 99%. LC-MS Rt (время удерживания): 2,50 и 2,58 мин (два ротамера), MS: (ES) m/z 370 (М+Н+).
d) Раствор алюмогидрида лития (2,0 М в ТГФ; 8,2 мл; 16,4 ммоль) добавили к раствору эфира от стадии с) (2,98 г; 8,06 ммоль) в ТГФ (100 мл) при 0°С. Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч, за это время реакция завершалась. Добавили по каплям 15% водный NaOH (625 мкл) для погашения реакции, а затем H2O (625 мкл). К мутной коллоидной смеси добавили дополнительную воду (1,85 мл) и перемешивали смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем смесь фильтровали через целитовую пробку, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Очистка с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 33-67% EtOAc/гексаны) давала 2,46 г искомого продукта (выход 93%). LC-MS: Rt (время удерживания): 1,90 и 2,09 мин (два ротамера), MS: (ES) m/z 328 (М+Н+).
e) Раствор спирта из стадии d) (1,42 г; 4,33 ммоль) в уксусной кислоте (65 мл) добавили к кашице CrO3 (2,61 г; 26,1 ммоль) в H2O (16 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции (90 мин). Затем смесь фильтровали через целитовую пробку, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Очистка с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 3-10% CH2Cl2:МеОН, а затем 50-67% EtOAc/гексаны) давала 1,03 г искомого продукта (выход 70%). LC-MS: Rt (время удерживания): 1,88 и 2,12 мин (два ротамера), MS: (ES) m/z 342
(М+Н+).
f) 3-Трифторметиланилин (16,2 мг; 0,1 ммоль; 1,0 экв.) добавили к раствору кислоты, полученной выше (34,2 мг; 0,1 ммоль), и триэтиламина (6 экв.) в CH2Cl2 (1 мл). Затем медленно добавили T3P (95,5
f)
мг; 0,15 ммоль) и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Реакционную смесь разбавили CH2Cl2 (1 мл), промыли 1 N водной HCl, а затем насыщенным водным NaHCO3. Органический слой отделили, высушили над безводным Mg2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Очистка с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 5-40% EtOAc/гексаны) дала 35 мг (выход 73%) продукта в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 1.22-2.45 (m, 8Н), 2.93-3.32 (m, 3Н), 6.77-7.82 (m, 12Н), 9.10 (s, 0.38Н), 9.30 (s, 0.62Н). LC-MS: Rt (время удерживания) = 2,88 мин, MS: (ES) m/z 485 (М+Н+).
Пример 2
a) 2-Хлорникотиноил хлорид (1,05 экв.), растворенный в безводном дихлорметане (0,5 М), добавляли к раствору 3-трет-бутиланилина (1 экв.) и 2 М водного K2CO3 (2,2 экв.) в безводном дихлорметане (0,5 М) при 0°С в течение 30 мин, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение дополнительных 1,5 ч. Слои разделили, при этом водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промыли рассолом, высушили (Mg2SO4), профильтровали и концентрировали с получением искомого амида в виде пенообразного твердого вещества, которое было использовано "как есть" в следующей стадии без дальнейшей очистки. MS: (ES) m/z 289,1 (М+Н+).
b) Pd(PPh3)4 (2-5 мол.%) добавили к раствору вышеуказанного пиридинамида (1 eq), фенилбороно-вой кислоты (1,4 экв) и 2 М водного K2CO3 (2,4 экв) в толуоле (0,7 М), и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение ночи (~12 ч). После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали через целит, а целитовую пробку промыли EtOAc. Фильтрат развели водой и экстрагировали EtOAc, высушили (Mg2SO4), профильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью автоматизированной флэш-хроматографии (SiO2, 10% до 100% градиент EtOAc-гексаны) и высушили под вакуумом с получением 2-фенил-3-карбоксиамидпиридина с выходом 60-75%, MS: (ES) m/z 331,2 (М+Н+).
c) PtO2 (10 мол.%) добавили к раствору производного 2-фенилпиридина, полученного выше (1 экв), в EtOH и концентрированной HCl (избыток, в отношении 4:1), и реакционную смесь гидрогенезировали, используя шейкер Парра при 40-45 пси в течение 1,5 ч. Смесь профильтровали через целит, промыли EtOH, а фильтрат концентрировали. Осадок разбавили CH2Cl2 и промыли насыщенным водным NaHCO3. Затем осадок очистили с помощью автоматизированной флэш-хроматографии (SiO2, 1% до 30% градиент QH^Cb-МеОН) и высушили под вакуумом с получением титульного соединения с выходом ~85% в виде пенообразного твердого вещества. MS: (ES) m/z 337,2 (М+Н+).
d) 5-Хлор-3-метилпиколиновую кислоту (30 мг; 0,16 ммоль) и ^(3-трет-бутилфенил)-2-фенилпи-перидин-3-карбоксамид (50 мг; 0,15 ммоль, полученный на стадии с) выше) растворили в безводном ДМФА (1 мл). Добавили ^^диизопропилэтиламин (0,15 мл) при комнатной температуре, а затем HCTU (67 мг; 0,16 ммоль). После перемешивания 2 ч при температуре окружающей среды определили завершение реакции с помощью LC-MS и ТСХ. Реакционную смесь развели EtOAc (50 мл) и промыли 1 N HCl (20 мл), насыщенным NaHCO3 (30 мл) и рассолом (30 мл), а полученный раствор концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью препаративной ВЭЖХ (20 95% градиент MeCN-H2O с 0,1% ТФУК) и чистые фракции лиофилизировали с получением титульного соединения (50 мг, выход 67%). ВЭЖХ время удерживания = 2,88 мин. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.42 (d, 1H, J= 0.8 Гц), 7.97 (br, 1Н), 7.59 (d, 1Н, J= 0.8 Гц), 7.56 (d, 1Н, J= 7.6 Гц), 7.34 (m, 3Н), 7.20 (m, 3Н), 7.10 (d, 1H, J= 7.6 Гц), 6.61 (две серии br, 1Н), 3.12 (две серии m, 2Н), 2.94 (три серии m, 1Н), 2.36 (s, 3Н), 2.20 (две серии br, 2Н), 1.74 (br комплекс, 2Н), 1.29 (s, 9Н). MS: (ES) m/z 490,2 (М+H+X
a)
e) К смеси №(3-трет-бутилфенил)-2-хлорникотинамида (570,2 мг; 2 ммоль), 3-фторфенилбороновой кислоты (401,2 мг; 2,8 ммоль), 3 мл толуола и 1 мл 2 N карбоната калия в воде добавили тетракис(трифе-нилфосфин)палладий(0) (234,5 мг; 0,2 ммоль). Затем смесь нагревали при 90°C в течение 3 ч в атмосфере азота, перед тем как она была охлаждена до комнатной температуры. Затем реакционную смесь разбавили 30 мл воды и 150 мл EtOAc. Органический слой отделили, промыли рассолом и высушили (Na2SO4). Органический растворитель удалили при пониженном давлении и осадок очистили с помощью колонки с силикагелем (40% EtOAc в гексане) с получением №(3-трет-бутилфенил)-2-(3-фторфенил)никотинамида (691,4 мг, 99%). MS: (ES) m/z 394,5 (М+Н+).
f) Смесь №(3-трет-бутилфенил)-2-(3-фторфенил)никотинамида (501,2 мг; 1,4 ммоль), двуокиси платины (51,9 мг; 0,21 ммоль) и концентрированной HCl (400 мкл; 5,2 ммоль) в 5 мл этанола энергично перемешивали в атмосфере азота в течение ночи. Смесь профильтровали и твердые вещества промыли 25 мл метанола три раза. Объединенный раствор высушили при пониженном давлении. К осадку добавили 30 мл насыщенного бикарбоната натрия и 150 мл EtOAc. Органический слой отделили и высушили над сульфатом натрия. Выпаривание растворителя дало сырой (3-трет-бутилфенил)амид 2-(3-фторфенил) пиперидин-3-карбоновой кислоты в виде бурого твердого вещества, которое было взято непосредственно в следующую стадию. MS: (ES) m/z 355,7 (М+Н+).
g) К раствору (3-трет-бутилфенил)амида 2-(3-фторфенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (полученного выше, 177, 3 мг; 0,5 ммоль) в 2 мл дихлорметана добавили Et3N (100 мкл, избыток) и 2-метилбензоил хлорид (92,3 мг; 0,6 ммоль) при комнатной температуре. Затем полученный раствор перемешивали при этой температуре до завершения реакции (10 мин). Затем реакционную смесь загрузили в силикагелевую колонку и очистили с помощью ISCO (30% EtOAc в гексане) с получением конечного продукта (3-трет-бутилфенил)амида 2-(3-фторфенил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (151,2 мг, выход 64%). 1H ЯМР (400 МГЦ, CDCL,, смесь ротомеров) 5 7.91 (s, 0.6Н), 7.85 (s, 0.4Н), 7.18-7.46 (m, 9Н), 7.11 (m, 1Н), 6.95 (m, 1Н), 6.67 (d, J = 1.2 Гц, 1Н), 3.36 (d, J= 1.6 Гц, 0.4Н), 3.26 (d, J= 1.6 Гц, 1Н), 3.05 (m, 1Н), 2.89 (t, J= 1.2 Гц, 1Н), 2.45 (s, 1Н), 2.02-2.40 (m, 4Н), 1.70-1.84 (m, 3Н), 1.44-1.64 (s, 1Н), 1.32 (s, 6Н), 1.25 (s, 1Н). MS: (ES) m/z 473,2 (М+Н+).
Пример 4
Синтез (3-трет-бутилфенил)амида цис-1-(2-метилбензоил)-2-(2,2-диметилпропил)пиперидин-3-кар-боновой кислоты
дихлорметаном, а потом промыли насыщенным бикарбонатом натрия и водой. Слой дихлорметана высушили над безводным сульфатом магния, профильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью флэш-хроматографии с получением 2-бром-^(3-трет-бутилфенил)никотинамида с выходом 59% (950 мг). Rt: 2,44 мин (20-100-5 метод). MS: (ES) m/z 333, 335 (М+Н+).
b) 2,2-Диметилпропилмагний хлорид (1 М-диэтилэфир; 4,8 мл; 4,8 ммоль) добавили к суспензии цианида меди (215 мг; 2,40 ммоль) в ТГФ (6 мл) при -78°C. После перемешивания при той же самой температуре в течение 1 ч 2-бром^-(3-трет-бутилфенил)никотинамид (200 мг; 0,601 ммоль) был добавлен весь сразу в виде твердого вещества. Реакционную смесь постепенно нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавили насыщенный раствор хлорида аммония и этилацетата, реакционную смесь профильтровали через целит и сполоснули этилацетатом. Слои разделили и продукт еще раз экстрагировали с этилацетатом. Объединенные органические слои промыли рассолом и высушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя при пониженном давлении сырой материал очистили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием градиента 2050% этилацетата в гексанах с выходом N-(3-трет-бутилфенил)-2-(2,2-диметилпропил)никотинамида (168 мг; 0,517 ммоль, 86%). Rf = 0.45 (толуол:этилацетат = 2:1).
c) N-(3-трет-Бутилфенил)-2-(2,2-диметилпропил)никотинамид (168 мг; 0,517 ммоль) растворили в этаноле (5 мл). Добавили оксид платины (11,6 мг; 0,0511 ммоль), а затем концентрированную соляную кислоту (250 мкл). Реакционную смесь гидрогенезировали, используя шейкер Парра, в течение 1,5 ч при 45 пси. Анализ реакционной смеси показал неполную конверсию, и цикл был повторен еще раз. Оксид платины отфильтровали, а растворители удалили при пониженном давлении. Сырое вещество нейтрализовали с помощью насыщенного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом. Затем органический слой промыли рассолом и высушили над безводным сульфатом магния. Удаление растворителя при пониженном давлении давало сырой (3-трет-бутилфенил)амид 2,3-цис-2-(2,2-диметил-пропил)пиперидин-3 карбоновой кислоты (153 мг), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.
d) К раствору (3-трет-бутилфенил)амида 2,3-цис-2-(2,2-диметилпропил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (84,8 мг; 0,257 ммоль) в пиридине (415 мкл; 5,13 ммоль) при комнатной температуре добавили 2-метилбензоил хлорид (81,6 мг; 0,528 ммоль) в хлороформе (415 мкл). Для усиления реакции добавили каталитическое количество (не взвешенное) диметиламинопиридина, а смесь перемешивали в течение трех дней. Затем к реакционной смеси добавили этилацетат и воду, и продукт экстрагировали с этилаце-татом три раза. Объединенные органические слои высушили над безводным сульфатом магния. После удаления растворителя при пониженном давлении сырое вещество очистили с помощью силикагель-хроматографии, используя 10-20% этилацетат в гексанах с получением (3-трет-бутилфенил)амида 2,3-цис-2-(2,2-диметилпропил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (47,0 мг; 0,105 ммоль, 41%). Rf = 0,6 (гексаны:этилацетат = 2:1). Rt = 3,16 мин, 3,26 мин (соединение существует в виде смеси нескольких конформеров 20-100-5 метод). 1H ЯМР (CDCl3) 5 9.68 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.28 (s, 1H)), 6.97-7.79 (m, 8Н), 5.48 (br,1H), 5.39 (dd, J= 4, 10 Гц, 1Н), 5.33 (dd, J= 6, 6 Гц, 1Н), 3.38 (ddd, J= 4, 14, 14 Гц, 2Н), 3.25 (dd, J = 13, 13 Гц, 2Н), 2.66 (dd, J= 4, 8.4 Гц, 1Н), 2.63 (ddd, J= 2.8, 2.8, 8 Гц, 1Н), 2.50 (s, 9Н), 2.40 (s, 9Н), 2.25 (s, 9Н), 2.13 (s, 9Н), 1.79-1.99 (m, 2Н), 1.23-1.56 (m, 2Н), 1.32 (s, 9Н), 1.07 (s, 9Н), 1.06 (s, 9Н), 0.97 (s, 9Н), 0.95 (s, 9Н). MS: (ES) m/z 449 (М+Н+).
Пример 5
Синтез (3-трет-бутилфенил)амида цис-2-циклопентил-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой
кислоты
а) Циклопентилцинк бромид (0,5 М; 6,5 мл; 3,26 ммоль) добавили к перемешиваемому при комнатной температуре раствору сложного метилового эфира 2-хлорникотиновой кислоты (400 мг; 2,33 ммоль), CuI (19 мг; 0,1 ммоль) и Pd(dppf)Cl2 (42 мг; 0,06 ммоль) в безводном диметилацетамиде (1,7 мл) под азотом. Реакционную смесь нагревали до 70°C в течение 3,5 ч, охладили до комнатной температуры, профильтровали через целит, а фильтрационный осадок промыли этилацетатом. Фильтрат промыли водой, рассолом, высушили (Mg2SO4), профильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок
очистили с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 10-100% EtOAc/гексаны) с получением искомого соединения с выходом 83% (400 мг). LC-MS Rt (время удерживания): 1,87 мин; MS: (ES) m/z 206 (М+Н+).
b) н-BuLi (1,47 мл; 3,68 ммоль) добавили к 3-трет-бутиланилину (580 мг; 3,89 ммоль) при -78°C в безводном ТГФ (2 мл) под азотом и перемешивали раствор при 0°C в течение 10 мин. Реакционную смесь вторично охладили до -78°C и к ней добавили сложный метиловый эфир 2-циклопентил-никотиновой кислоты (400 мг; 1,94 ммоль), растворенный в безводном ТГФ (2 мл). Реакционной смеси давали достичь 0°C в течение 2 ч, тушили насыщенным водным NH4Cl и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои высушивали (Mg2SO4), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью флэш-хроматографии (SiO2, 10-100% EtOAc/гексаны) с получением чистого соединения с выходом 91% (572 мг). LC-MS Rt (время удерживания): 2,61 мин; MS: (ES) m/z 323 (М+Н+).
c) К раствору №(3-трет-бутилфенил)-2-циклопентилникотинамида (570 мг; 1,77 ммоль) в этаноле (10 мл), содержащему концентрированную HCl (1 мл), добавили оксид платины (40 мг; 0,17 ммоль) и раствор гидрогенезировали, используя шейкер Парра при 40 пси в течение 1,5 ч. Реакционную смесь профильтровали через целит, фильтрационный осадок промыли этанолом. Фильтрат концентрировали, а осадок высушили в условиях высокого вакуума в течение 2 ч с получением количественного выхода искомого пиперидина в виде HCl соли. LC-MS Rt (время удерживания): 1,97 мин; MS: (ES) m/z 329 (М+Н+).
d) К раствору (3-трет-бутил-фенил)амида цис-2-циклопентилпиперидин-3-карбоновой кислоты, полученному выше (123 мг; 0,34 ммоль), в безводном CH2Cl2 (1 мл), содержащем Et3N (142 мкл; 1,02 ммоль), добавили 2-метилбензоил хлорид (53 мг; 0,34 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь разбавили этилацетатом (20 мл), промыли 1 N водной HCl, водой и рассолом. Органический слой высушили (Mg2SO4), профильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очистили с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (2095% градиент CH3CN-H2O) и высушили (лиофилизатор) с получением титульного соединения с выходом 65% (109 мг). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 1.22-1.48 (m, 11Н), 1.56-1.80 (m, 5Н), 1.84-2.06 (m, 4Н), 2.102.23 (m, 1Н), 2.30 (s, 1.6Н), 2.39 (s, 1.4Н), 2.41-2.50 (m, 1H), 2.71-2.76 (m, 1H), 3.02-3.09 (m, 1H), 3.25-3.39 (m, 1H), 5.11 (bs, 1Н), 7.05-7.30 (m, 6Н), 7.47-7.55 (m, 2Н), 8.32 (bs, 1H). LC-MS Rt (время удерживания): 3,16 мин; MS: (ES) m/z 447 (М+Н)+. LC-MS метод: Agilent Zorbax SB-C18, 2.1x50 мм, 5ц, 35°C, 1 мл/мин скорость потока, 2,5 мин градиент 20% до 100% В с промывкой 1,0 мин при 100% В; А= 0,1% муравьиная кислота/5% ацетонитрил/94,9 вода, В = 0,1% муравьиная кислота/5% вода/94,9 ацетонитрил.
Пример 6
Синтез (3-хлор-4-метилфенил)амида (2R,3S)-2-(4-циклопентиламинофенил)-1-(2-метилбензоил)пи-перидин-3-карбоновой кислоты
b) Этиловый эфир цис-2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты был синтезирован аналогично, как проиллюстрировано в примере 1.
с:1) Этиловый эфир цис-2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (61 г; 174,8 ммоль) и ди-р-толуол^-винную кислоту (62 г; 174,8 ммоль) растворили в EtOH (500 мл). Чистый раствор концентрировали и выкачали до сухости. Затем полученную белую соль растворили в 250 мл этил ацетата с получением прозрачного раствора. К этому раствору медленно добавили 500 мл ТВМЕ. Полученный раствор оставили при комнатной температуре (ненарушенным) в течение 3 дней. За это время образовалось множество белых кристаллов. Затем их профильтровали и промыли 100 мл ТВМЕ, чтобы получить белое твердое вещество (60 г).
Вышеупомянутую соль вновь растворили в этаноле, концентрировали и выкачали до сухости. Полученную соль растворили в 500 мл ТГФ, а затем добавили ТВМЕ (500 мл). Полученный раствор остави
ли при комнатной температуре (ненарушенным) в течение 2,5 дней. Полученные белые кристаллы профильтровали с получением 20,5 г (обогащение 64:1) соли.
с:2) К перемешиваемой при 0°C суспензии соли (16,7 г) в CH2Cl2 (150 мл) добавили насыщенный водный раствор NaHCO3 (100 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 мин. Слои разделили и водный слой экстрагировали с CH2Cl2 (50 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным водным NaHCO3 (2x100 мл), высушили и концентрировали с получением этилового эфира (2R,3S)-2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты с выходом 90% и ~с 97% ее.
d) К раствору (0°C) этилового эфира (2R,3S)-2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)пиперидин-3-карбоновой кислоты, полученного выше (600 мг; 1,72 ммоль) в безводном CH2Cl2 (5 мл), содержащем Et3N (480 мкл; 3,44 ммоль), добавили 2-метилбензоил хлорид (266 мг;1,72 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь развели CH2Cl2 (20 мл), промыли 1 N водной HCl, водой и рассолом. Органический слой высушили (Mg2SO4), профильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением этилового эфира (2R,3S)-2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты с количественным выходом и сырой продукт использовали "как есть" в следующей стадии.
e) 4N HCl в 1,4-диоксане (5 мл; 20 ммоль) медленно добавили к раствору (0°C) вышеупомянутого сырого продукта этилового эфира (2R,3S)-2-(4-трет-бутоксикарбониламинофенил)-1-(2-метилбензоил) пиперидин-3-карбоновой кислоты (840 мг; 1,72 ммоль) в безводном CH2Cl2 (4 мл). После добавления HCl давали реакционной смеси достичь комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Смесь разбавили CH2Cl2 (30 мл), охладили до 0°C и нейтрализовали насыщенным водным NaHCO3 с получением этилового эфира (2R,3S)-2-(4-аминофенил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (612 мг) с выходом 97% за две стадии.
f) Na(OAC)3BH (495 мг; 2,33 ммоль) добавили к раствору этилового эфира (2R,3S)-2-(4-аминофенил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (612 мг; 1,67 ммоль), циклопентанона (140 мг; 1,67 ммоль) и уксусной кислоты (100 мг; 1,67 ммоль) в безводном дихлорэтане при комнатной температуре, реакционную смесь нагревали до 50°C за 4 ч и перемешивали в течение 48 ч. Затем смесь разбавили CH2Cl2 (30 мл), промыли насыщенным водным раствором NaHCO3, высушили и концентрировали под вакуумом. Осадок очистили с помощью ISCO флэш-колонки с использованием этилацетата и гексанов в качестве мобильной фазы (40 г колонка, 0-40% градиент) с получением этилового эфира (2R,3S)-2-(4-циклопентиламинофенил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты (450 мг).
г) Me3Al (290 мкл; 0,57 ммоль, 2М в толуоле) добавили к раствору 3-хлор-4-метилфениламина (65 мг; 0,46 ммоль) в безводном дихлорэтане (1 мл) при комнатной температуре. Перемешивали в течение 20 мин, затем к нему добавили этиловый эфир (2R,3S)-2-(4-циклопентиламинофенил)-1-(2-метилбензоил) пиперидин-3-карбоновой кислоты (100 мг; 0,23 ммоль), растворенный в безводном дихлорэтане (1 мл). Затем реакционную смесь нагревали до 85°C в течение 3 ч, охладили до комнатной температуры, разбавили CH2Cl2 (20 мл), промыли насыщенным водным раствором NaHCO3. Водный слой экстрагировали с CH2Cl2 (20 мл), а объединенный органический слой высушили (Mg2SO4) и концентрировали. Осадок очистили с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (20-95% градиент CH3CN-H2O с 0,1% ТФУК как добавка), фракции, содержащие продукт, объединили вместе и концентрировали. Осадок развели с CH2Cl2 (30 мл), промыли насыщенным водным раствором NaHCO3. Слой CH2Cl2 высушили (Mg2SO4) и концентрировали с получением чистого (3-хлор-4-метилфенил)амида (2R,3S)-2-(4-mnuro-пентиламинофенил)-1-(2-метилбензоил)пиперидин-3-карбоновой кислоты с выходом 50%.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.4 (bs, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.37-7.05 (m, 9H), 6.55-6.52 (m, 2H), 3.77-
3.70(m, 1H), 3.30-3.16 (m, 1H), 3.04-2.91 (m, 2H), 2.43-1.94 (m, 8H), 1.71-1.46 (m, 11H).
Пример 7
Следующие соединения являются репрезентативными соединениями, полученными и установленными с помощью методов, подобных методам, представленным в примерах. Характеристики соединений предоставлены ниже.
Биологическая оценка этих и других соединений, полученных, как описано здесь, показана на чер-
теже.
1H ЯМР (400 МГц, TFA-d) 5 7.91 (d, J= 8.6 Гц, 1Н), 7.84 (d, J= 8.6 Гц, 1Н), 7.58-6.82 (m, 8Н), 6.75 (t, J= 8.6 Гц, 1Н), 4.10-4.00 (m, 1Н), 3.60-3.47 (m, 1H), 3.45-3.41 (m, 1Н), 3.33-3.25 (m, 1Н), 2.44-2.22 (m, 7Н), 2.04-1.92 (m, 4Н), 1.82-1.69 (m, 7Н).
(4-Метил-3-трифторметилфенил)амид (2R,3S)-2-(4-циклопентиламинофенил)-1-(2-фтор-6-метилбе-нзоил)пиперидин-3 -карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 9.41 (bs, 0.5H), 9.03 (bs, 0.5H), 7.55 (s, 1H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.31-7.27 (m, 2H), 7.18-7.04 (m, 2H), 6.83-6.74 (m, 3H), 3.76-3.64 (m, 1H), 3.22-2.90 (m, 5H), 2.39 (s, 3H), 2.32-2.20 (m, 1H), 2.16-2.04 (m, 1H), 2.0-1.86 (m, 2H) 1.80-1.72 (m, 3H), 1.56 (bs, 5H).
(3-Хлор-4-метилфенил)амид (2R,3S)-2-(4-циклопентиламинофенил)-1-(2-фтор-6-метилбензоил)пи-перидин-3-карбоновой кислоты
1H ЯМР (DMSO-d6) 5 10.22 (s, 1H), 7.67 (dd, J= 1.8 Гц, J = 11.0 Гц, 1H), 7.04-7.33 (m, 9H), 6.30 (dd, J= 5.8 Гц, J= 9.4 Гц, 1H), 5.52 (br, 1H), 3.56-3.64 (m, 1H), 3.00-3.17 (m, 2H), 2.90-2.98 (m, 1H), 2.23(2.24) (s, 3H), 1.97(2.33) (s, 3H), 1.32-2.22 (m, 12H).
(4-Метил-3-трифторметилфенил)амид (2R,3S)-1-(4-хлорбензоил)-2-(4-циклопентиламинофенил)пи-перидин-3-карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.79 (bs, 1Н), 7.62 (s, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.37-7.30 (m, 5H), 7.13 (d, J= 8.4 Гц, 1H), 6.52-6.50 (m, 3H), 3.75-3.69 (m, 1H), 3.44 (bs, 1H), 3.09-2.97 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.37-2.30 (m, 1H), 2.13-2.08 (m, 1H), 2.10-1.93 (m, 2H), 1.80-1.59 (m, 7H), 1.48-1.42 (m, 2H).
(3-трет-Бутилфенил)амид (2R,3S)-2-(4-циклогексиламинофенил)-1-(2-фтор-6-метилбензоил)пипери-дин-3-карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.24 (m, 1H), 7.40-6.85 (m, 8H), 6.65-6.40 (m, 3H), 3.57 (s, 1H), 3.30-2.90 (m, 4H), 2.50-1.85 (m, 9H), 1.80-1.50 (m, 5H), 1.40-1.00 (m, 13H).
(4-Метил-3-пирролидин-1-ил-фенил)амид (2R,3S)-2-(4-циклопентиламинофенил)-1-(2-фтор-6-ме-тилбензоил)пиперидин-3 -карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.98 (m, 1H), 7.40-7.18 (m, 3H), 7.10-6.80 (m, 4H), 6.64-6.40 (m, 3H), 3.80-3.50 (m, 2H), 3.30-2.90 (m, 6H), 2.50-2.10 (m, 7H), 2.10-1.80 (m, 8H), 1.80-1.20 (m, 9H).
(3-Хлор-4-метилфенил)амид (2R,3S)-2-[4-(циклопентилокси)фенил]-1-(2-фтор-6-метилбензоил)пи-перидин-3 -карбо но вой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.68 (bs, 0.6H), 8.58 (bs, 0.4H), 7.59-7.40 (m, 3H), 7.29-6.90 (m, 4H), 6.80 (m, 2H), 6.65 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 3.30-2.92 (m, 3H), 2.44 (s, 1H), 2.42-2.30 (m, 1H), 2.30 (s, 1H), 2.29 (s, 2H), 2.20 (s, 2H), 2.19-2.12 (m, 1H), 2.08-1.92 (m, 2H), 1.90-1.72 (m, 7H) 1.60 (m, 2H).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.25 (bs, 0.4H), 8.16 (bs, 0.6H), 7.44-7.20 (m, 6H), 7.06-6.84 (m, 2H), 6.596.50 (m, 2H), 3.75 (m, 1H), 3.66 (bs, 1H), 3.26-2.92 (m, 3H), 2.43 (s, 1H), 2.42-2.30 (m, 1H), 2.30 (s, 1H), 2.29 (s, 2H), 2.20 (s, 2H), 2.19-2.12 (m, 1H), 2.08-1.92 (m, 2H), 1.80-1.58 (m,7H) 1.45 (m, 2H).
(3-трет-Бутилфенил)амид (2R,3S)-2-(4-циклобутиламинофенил)-1-(2-фтор-6-метилбензоил)пипери-дин-3 -карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.20 (s, 0.6Н), 8.39 (s, 0.4Н), 7.44-6.88 (m, 10Н), 6.25 (dd, J=12 Гц, J=6 Гц, 1Н), 6.45 (t, J=8.4 Гц, 1Н), 3.87 (m, 1H), 3.26-2.95 (m, 3H), 2.46-2.05 (m, 8Н), 1.86-1.61 (m, 5Н), 1.341.11 (m, 9Н).
(3-Морфолин-4-ил-фенил)амид (2R,3S)-1-(2-фтор-6-метилбензоил)-2-[4-(тетрагидропиран-4-илами-но)фенил] пиперидин-3 -карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.61 (s,1H), 7.34-6.92 (m, 10Н), 6.78-6.65 (m, 1H), 6.62-6.53 (m, 1H), 3.98-3.85 (m, 4H), 3.83-3.70 (m, 1H), 3.55-3.30 (m, 3H), 3.27-2.98 (m, 4H), 2.42-1.92 (m, 8H), 1.81-1.45 (m, 7H).
(3-трет-Бутилфенил)амид (2R,3S)-1-(2-фтор-6-метилбензоил)-2-[4-((R)-2-трифторметилпирролидин-1 -илметил)фенил] пиперидин-3 -карбоновой кислоты
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.01 (bs, 0.5H), 7.96 (bs, 0.5H), 7.55-7.37 (m, 3H), 7.30-7.19 (m, 6H), 7.137.06 (m, 1H), 7.01-6.90 (m, 1H), 6.85-6.64 (m, 1H), 4.15-4.11 (m, 1H), 3.58-3.54 (m, 1H), 3.30-3.20 (m, 2H), 3.17-2.80 (m, 2H), 2.45-2.17 (m, 4H), 2.00-1.94 (m, 2H), 1.86-1.60 (m, 8H), 1.31-1.26 (m, 7H).
Пример 8
Материалы и методы А. Клетки
1. Клетки, экспрессирующие рецептор С5а
a) Клетки U937
Клетки U937 представляют собой клеточную линию моноцитов, которые экспрессируют C5aR, и являются доступными от АТСС (VA). Эти клетки культивировали в виде суспензии в среде RPMI-1640 с добавлением 2 мМ L-глутамина, 1,5 г/л бикарбоната натрия, 4,5 г/л глюкозы, 10 мМ HEPES, 1 mM пиру-вата натрия и 10% FBS. Клетки выращивали в атмосфере 5% CO2/95% воздух при 100% влажности и при 37°C и пересевали дважды в неделю при разведении 1:6 (клетки культивировали при плотности в пределах от 1x10 до 2x10 клеток/мл) и собирали при 1x10 клеток/мл. Перед исследованием клетки обрабатывали в течение ночи 0,5 мМ циклическим аденозинмонофосфатом АМФ (Sigma, ОН) и промывали один раз перед использованием. Клетки U937, обработанные цАМФ, можно использовать в связывании лиганда C5aR и функциональных анализах.
b) Изолированные нейтрофилы человека
По желанию для исследования активности соединения можно использовать нейтрофилы человека или мыши. Нейтрофилы можно выделить из свежей крови человека при помощи разделения в градиенте плотности и центрифугирования. Коротко, цельную кровь инкубируют с равными частями 3% декстрана и дают возможность разделиться в течение 45 мин. После разделения верхний слой наслаивают сверху 15 мл фиколла (15 мл фиколла на каждые 30 мл суспензии крови) и центрифугируют в течение 30 мин
при 400x g без торможения. Затем извлекают осадок со дна пробирки и ресуспендируют в лизирующем буфере PharmLyse RBC (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния), после чего образец вновь центрифугируют в течение 10 мин при 400xg с торможением. Оставшийся клеточный осадок, который состоит из выделенных нейтрофилов, ресуспендируют соответствующим образом.
B. Исследования
1. Ингибирование связывания лиганда C5aR
Клетки U937, экспрессирующие C5aR, обработанные цАМФ, центрифугировали и ресуспендирова-ли в буфере (20 мМ HEPES рН 7,1; 140 мМ NaCl, 1 мМ CaCl2, 5 мМ MgCl2 и 0,1% альбумин бычьей сыворотки) до концентрации 3x106 клеток/мл. Анализ связывания проводили, как указано ниже. 0,1 мл Клеток поместили в чашки, содержащие 5 мкл соединения, давая окончательную концентрацию каждого соединения ~2-10 мкМ для скрининга (или часть дозозависимого ответа для определения IC50 соединения). Затем добавили 0,1 мл 125I меченого С5а (полученного от компании Perkin Elmer Life Sciences, Бостон, Массачусетс), разведенного в буфере до окончательной концентрации ~50 пМ, давая ~30000 cpm на лунку, чашки запечатали и инкубировали приблизительно 3 ч при 4°C на шейкере с платформой. Реакции были аспирированы на стеклянных фильтрах GF/B, предварительно замоченных в 0,3% растворе полиэтиленимина (PEI) на вакуумном коллекторе клеток (Packard Instruments; Мериден, Коннектикут). К каждой лунке добавили сцинтилляционную жидкость (40 мкл; Microscint 20, Packard Instruments), чашки запечатали и измеряли радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика Topcount (Packard Instruments). Для вычисления процента общего ингибирования для соединения использовали контрольные лунки, содержащие или только растворитель (для общего счета), или избыток С5а (1 мкг/мл, для неспецифического связывания). Для подсчета значений IC50 использовали компьютерную программу Prism от GraphPad, Inc. (Сан-Диего, Калифорния). IC50 значения представляют собой концентрации, необходимые для уменьшения на 50% связывания меченого изотопом С5а с рецептором. (Дополнительные описания лигандного связывания и другие функциональные исследования см. в Dairaghi, et al., J. Biol. Chem. 274: 21569-21574 (1999), Penfold, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96: 9839-9844 (1999), и Dairaghi, et al., J.
Biol. Chem. 272: 28206-28209 (1997).)
2. Мобилизация кальция
При необходимости соединения можно дополнительно исследовать на способность ингибировать поток кальция в клетках. Чтобы определить высвобождение внутриклеточных запасов кальция, клетки (например, Ш37-клетки, стимулированные цАМФ или нейтрофилы) инкубируют с 3 мкМ красителя IN-DO-1AM (Molecular Probes; Юджин, Орегон) в клеточной среде в течение 45 мин при комнатной температуре и промывают раствором фосфатного буфера (PBS). После "загрузки" INDO-1AM клетки ресус-пендируют в flux-буфере (сбалансированный солевой раствор Хенкса (HBSS) и 1% FBS). Мобилизацию кальция измеряют с помощью спектрофотометра Photon Technology International (Photon Technology International; Нью-Джерси) с возбуждением при 350 нм и двойной одновременной регистрацией эмиссии флуоресценции при 400 и 490 нм. Относительные внутриклеточные уровни кальция выражаются как отношение эмиссии 400/490 нм. Эксперименты проводятся при 37°C при постоянном перемешивании в кюветах, содержащих каждая 10 клеток в 2 мл flux-буфера. Можно использовать лиганды цитокинов в пределах от 1 до 100 нМ. Отношение эмиссии откладывают на графике относительно времени (обычно 23 мин). Соединения, кандидаты в блокирующие лиганды (до 10 мкМ), добавляют через 10 с, потом цито-кины через 60 с (т.е. С5а; R &D Systems; Миннеаполис, Миннесота) и контрольный хемокин (т.е. SDF-1a; R &D Systems; Миннеаполис, Миннесота) через 150 с.
3. Исследование хемотаксиса
При необходимости соединения можно дополнительно исследовать на способность ингибировать хемотаксис в клетках. Исследование хемотаксиса проводится с использованием 5-мкм пористого поликарбоната, фильтров, покрытых поливинилпирролидоном в 96-луночных камерах для хемотаксиса (Neu-roprobe; Гейтерсберг, Мэриленд) с использованием буфера для хемотаксиса (сбалансированный солевой раствор Хенкса (HBSS) и 1% FBS). Чтобы оценить опосредованное соединением ингибирование C5aR-опосредованной миграции, используются лиганды C5aR (т.е. С5а, R &D Systems; Миннеаполис, Миннесота). Другие хемокины (т.е. SDF-1a; R &D Systems; Миннеаполис, Миннесота) использовали как специфические контроли. Нижнюю камеру "нагружают" 29 мкл хемокина (т.е. 0,03 нМ С5а) и переменными количествами соединения; верхняя камера содержит 100000 U937 клеток или нейтрофилов в 20 мкл. Камеры инкубируют 1,5 ч при 37°C, и количество клеток в нижней камере определяют или прямым подсчетом клеток в пяти полях при большом увеличении на лунку, или методом CyQuant (Molecular Probes), методом флуоресцентного окрашивания, который определяет содержание нуклеиновой кислоты, и с помощью микроскопического исследования.
C. Установление ингибиторов C5aR 1. Анализ
Чтобы оценить небольшие органические молекулы, которые препятствуют связыванию лиганда с рецептором С5а, было проведено исследование, которое определило связывание радиоактивного лиганда (т.е. С5а) с клетками, экспрессирующими C5aR на клеточной поверхности (например, клетки U937, сти
мулированные цАМФ, или изолированные нейтрофилы человека). В отношении соединений, которые ингибировали связывание, конкурентное или нет, наблюдался меньший радиоактивный счет по сравнению с неингибированными контролями.
К каждой лунке планшета добавили равное количество клеток. Затем клетки инкубировали с меченым радиоактивным изотопом С5а. Несвязанный лиганд удалили промывкой клеток, а количество связанного лиганда определили путем подсчета радиоактивности. Клетки, которые инкубировали без какого-либо органического соединения, давали общий счет; неспецифическое связывание определяли, инкубируя клетки с немеченым лигандом и меченым лигандом. Процент ингибирования определяли с помо-шью уравнения
2. Кривые зависимости от дозы
Чтобы определить аффинность соединений-кандидатов к C5aR, а также подтвердить их способность ингибировать связывание лиганда, ингибиторная активность была проверена в пределах концентраций соединений от 1 x10-10 до 1 x10-4 М. Количество соединения в исследовании варьировало, тогда как количество клеток и концентрация лиганда были постоянными.
D. Модели эффективности In Vivo
Представляющие интерес соединения можно оценить по потенциальной эффективности при лечении состояний, опосредованных С5а, путем определения эффективности соединения на животной модели. В дополнение к моделям, описанным ниже, другие подходящие модели на животных для изучения представляющего интерес соединения можно найти в работе (Mizuno, M. et al., Expert Opin. Investig. Drugs (2005), 14(7), 807-821), которая полностью включена в описание путем отсылки.
1. Модели лейкопении, индуцированной С5а
a) Лейкопения, индуцированная С5а, на мышиной модели с внесением человеческого C5aR (модель knock-in)
Для исследования эффективности соединений текущего изобретения на моделях животных с помощью обычных методов были созданы рекомбинантные мыши, у которых генетическая последовательность, кодирующая мышиный C5aR, замещена последовательностью, кодирующей человеческий C5aR, чтобы сделать hC5aR-KI мышь. У этой мыши введение hC5a приводит к повышению экспрессии молекул адгезии на стенках кровеносных сосудов, которые связывают лейкоциты крови, изолируя их из кровотока. Животным вводят 20 мкг/кг hC5a, и через 1 мин подсчитывают лейкоциты в периферической крови с помощью стандартных методов. Предварительная обработка мышей разными дозами настоящих соединений может почти полностью блокировать лейкопению, индуцированную hC5a.
b) Лейкопения, индуцированная С5а, на модели обезьяны циномолгус (яванская макака)
Чтобы изучить эффективность соединений текущего изобретения на модели приматов, не являющихся человеком, лейкопению, индуцированную С5а, исследовали на модели циномолгуса. На этой модели введение Ы^^а приводит к повышению экспрессии молекул адгезии на стенках кровеносных сосудов, которые связывают лейкоциты крови, в результате изолируя их из кровотока. Животным вводится 10 мкг/кг hC5a, и через 1 мин проводят количественное определение лейкоцитов в периферической крови.
Мышиная модель васкулита, индуцированного ANCA
В 0 день мышам hC5aR-KI внутривенно вводили 50 мг/кг очищенных антител к миелопероксидазе (Xiao et al., J. Clin. Invest. 110: 955-963 (2002)). Кроме того, мышам давали ежедневно перорально дозы соединений изобретения или носителя в течение семи дней, затем мышей забивали и брали почки на гистологическое исследование. Изучение срезов почек может показать значительно уменьшенное количество и тяжесть серповидных и некротических повреждений в клубочках по сравнению с животными, обработанными носителем.
2. Мышиная модель хороидальной неоваскуляризации
Для изучения эффективности соединений настоящего изобретения при лечении возрастной дистрофии желтого пятна (AMD) базальную пластинку в глазах мышей hC5aR-KI разрушали путем лазерной коагуляции (Nozika et al., PNAS 103: 2328-2333 (2006)). Мышей лечили или носителем, или ежедневной пероральной или соответствующей внутри-витреальной (внутрь стекловидного тела) дозой соединения изобретения в течение от одной до двух недель. Восстановление повреждения, вызванного лазером, и неоваскуляризацию оценивали с помощью гистологии и ангиографии.
3. Модель ревматоидного артрита
a) Модель деструктивного воспаления сустава на кроликах
Чтобы исследовать действие соединений-кандидатов на ингибирование воспалительного ответа кроликов на внутрисуставную инъекцию липополисахаридного (LPS) компонента бактериальной мембраны, использовали модель деструктивного воспаления сустава на кроликах. Эта исследовательская
% ингибирование = (1 - [(образца срт) - (неспецифическое срт)]/[(общее срт) (неспецифическое срт)]) х 100.
модель имитирует деструктивное воспаление сустава, наблюдаемое при артрите. Внутрисуставное введение LPS вызывает острый воспалительный ответ, характеризующийся высвобождением цитокинов и хемокинов, многие из которых выявлены в суставах при ревматоидном артрите. В синовиальной жидкости и в синовиальной оболочке наблюдается заметное увеличение числа лейкоцитов в ответ на увеличение этих хемотаксических медиаторов. Селективные антагонисты рецепторов хемокинов показали эффективность на этой модели (см. Podolin et al., J. Immunol. 169(11): 6435-6444 (2002)).
Исследование LPS на кроликах проводили в основном, как описано в Podolin, et al. ibid., самкам новозеландских кроликов (приблизительно 2 кг) вводили внутрисуставным способом в одно колено LPS (10 нг) только вместе с носителем (фосфатно-буферный раствор с 1% DMSO) или с добавлением соединения-кандидата (доза 1 = 50 мкМ или доза 2 = 100 мкМ) в общем объеме 1,0 мл. Через 16 ч после инъекции LPS проводили лаваж колена и подсчитывали клетки. Благоприятные эффекты лечения определяли путем гистологической оценки синовиального воспаления. Для гистологической оценки подсчитывали очки воспаления: 1 - минимальное, 2 - слабое, 3 - умеренное, 4 - умеренно-выраженное.
b) Оценка соединения на крысиной модели артрита, индуцированного коллагеном
Было проведено 17-дневное исследование развития артрита, индуцированного коллагеном II типа, чтобы оценить эффекты соединения-кандидата на артрит, при котором наблюдается клиническое опухание голеностопного сустава. Коллагеновый артрит у крыс является экспериментальной моделью полиартрита, которая широко используется для предклинического тестирования многочисленных средств против артрита (см. Trentham, et al., J. Exp. Med 146(3): 857-868 (1977), Bendele, et al., Toxicologic Pathol. 27: 134-142 (1999), Bendele, et al., Arthritis Rheum. 42: 498-506 (1999)). Отличительными чертами этой модели являются гарантированное начало и развитие сильного, легко измеримого многосуставного воспаления, заметного разрушения хряща в связи с формированием паннуса, резорбция кости от слабой до умеренной и разрастание околохрящевой кости.
Самок крыс (приблизительно 0,2 кг) обезболивали изофлураном и вводили неполный адьювант Фрейнда, содержащий 2 мг/мл бычьего коллагена II типа, в основание хвоста и в два места на спине в день 0 и день 6 этого 17-дневного исследования. Соединение-кандидат давали ежедневно подкожно с 0 дня до 17 дня в эффективной дозе. Проводили измерения штангенциркулем диаметра голеностопного сустава, при этом уменьшение опухания сустава принимается как мера эффективности.
4. Модель сепсиса на крысах
Для изучения действия представляющих интерес соединений на ингибирование генерализованного воспалительного ответа, то есть связанного с болезнью, подобной сепсису, использовали крысиную модель сепсиса с перевязкой и пункцией слепой кишки (CLP). Исследование CLP на крысах проводили, в основном, как описано в Fujimura N, et al. (American Journal Respiratory Critical Care Medicine 2000; 161: 440-446). Коротко, белых крыс Wistar обоего пола весом 200-250 г не кормили 20 ч перед экспериментами. Животных содержали при нормальном 12-часовом цикле день/ночь и кормили стандартным крысиным кормом вплоть до 12 ч перед экспериментом. Затем животных разделили на четыре группы; (i) две группы с имитацией операции и (ii) две CLP группы. Каждая из этих двух групп (т.е. (i) и (ii)) разбивается на контрольную группу с носителем и группу с исследуемым соединением. Сепсис индуцируют методом CLP. Под краткосрочной анестезией делается срединная лапаротомия с использованием минимального рассечения, и слепую кишку перевязывают непосредственно ниже илеоцекального клапана шелковой нитью 3-0, так что сохраняется кишечная непрерывность. Противобрыжеечную поверхность слепой кишки прокалывают иглой 18 размера в двух местах на расстоянии 1 см, и слепую кишку осторожно сжимают до тех пор, пока фекальная масса не выдавится. Затем кишечник возвращают в живот и разрез зашивают. В конце операции всех крыс приводят в сознание с помощью подкожного введения физраствора 3 мл/100 г веса тела. После операции крыс лишают пищи, но дают свободный доступ к воде в течение следующих 16 ч, до тех пор, когда их забивают. В группах с имитацией операции проводят лапа-ротомию и манипуляции со слепой кишкой, но ее не прокалывают и не перевязывают. Полезные эффекты лечения измеряются с помощью гистопатологического счета тканей и органов, а также измерения нескольких ключевых показателей функции печени, функции почек и перекисного окисления липидов. Для проверки функции печени измеряют аспартаттрансаминазу (AST) и аланинтрансаминазу (ALT). Для оценки функции почек исследуют концентрации азота мочевины крови и креатинина. Также исследуют уровни провоспалительных цитокинов в сыворотке, таких как TNF-альфа и IL-Шета, с помощью метода
ELISA.
5. Модель волчаночного нефрита на мышах SLE
Для изучения влияния представляющих интерес соединений на системную красную волчанку (SLE) использовали SLE модель на мышах MRL/lpr. Штамм MRL/Mp-Tmfrsf6lpr/lpr (MRL/lpr) является обычно используемой мышиной моделью человеческого. Для проверки эффективности соединений на этой модели самцов мышей MRL/lpr поровну разделили между контролем и группами с антагонистами C5aR в 13-недельном возрасте. Затем в течение следующих 6 недель животному вводят соединение или носитель с помощью осмотического насоса, чтобы сохранить покрытие (coverage) и свести к минимуму эффект стресса на животных. Образцы сыворотки и мочи собирают два раза в неделю на протяжении шести недель от начала и развития болезни. У меньшей части из этих мышей развивается гломерулосклероз,
приводящий к смерти животного от почечной недостаточности. Последующий падеж является одним из измеряемых критериев почечной недостаточности, а успешное лечение обычно приводит к задержке начала внезапной смерти среди животных в тестовых группах. Кроме того, наличие и величину почечной недостаточности также можно постоянно контролировать путем измерения азота мочевины крови (BUN) и альбуминурии. Также собирают ткани и органы в течение 19 недель и подвергают гистопатологиче-скому и иммуногистохимическому исследованию и подсчитывают очки на основе повреждения тканей и клеточной инфильтрации.
6. Модель COPD на крысах
Воспаление дыхательных путей, вызванное дымом, на моделях грызунов можно использовать для оценки эффективности соединений при хронической обструктивной болезни легких (COPD). Селективные антагонисты хемокинов показали эффективность на этой модели (см. Stevenson, et al., Am. J. Physiol Lung Cell Mol Physiol. 288 L514-L522, (2005)). Острую крысиную модель COPD осуществляли, как описано Stevenson et al. Представляющее интерес соединение вводится или системно перорально, или внутривенным дозированием (IV); или местно с распыляемым соединением. Самцов крыс Sprague-Dawley (350-400 г) помещают в камеры из оргстекла и подвергают воздействию сигаретного дыма, засасываемого насосом (50 мл каждые 30 с вместе со свежим воздухом). Крыс подвергают воздействию в течение общего периода 32 мин. Крыс забивают в пределах 7 дней после начала воздействия. Какие-либо полезные эффекты лечения оцениваются по уменьшению воспалительного клеточного инфильтрата, снижению уровней хемокинов и цитокинов.
В хронической модели мышей или крыс ежедневно подвергают воздействию табачного дыма до 12 месяцев. Соединение вводится системно один раз в день перорально; или возможно местно путем распыления соединения. В дополнение к воспалению, наблюдаемому в острой модели (Stevensen et al.), животные также могут демонстрировать другие виды патологии, подобные тем, которые наблюдаются у людей с COPD, такие как эмфизема (как показано увеличенным средним значением линейных секущих), а также изменение химического состава легких (см. Martorana et al., Am. J. Respir. Crit CareMed. 172(7): 84853).
7. Модель рассеянного склероза на мыши ЕАЕ
Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ) представляет собой модель рассеянного склероза человека. Варианты этой модели опубликованы и хорошо известны в данной области. В типичном протоколе для этой ЕАЕ-модели используют мышей C57BL/6 (Charles River Laboratories). Мышей иммунизируют 200 мкг миелинового гликопротеина олигодендроцитов (MOG) 35-55 (Peptide International), эмульгированном в полном адьюванте Фрейнда (CFA), содержащем 4 мг/мл Mycobacterium tuberculosis (Sigma-Aldrich), подкожно (s.c.) в день 0. Кроме того, на день 0 и день 2 животным давали 200 нг коклюшного токсина (Calbiochem) внутривенно (i.v.) Клиническая оценка основывается на шкале 0-5: 0, нет признаков болезни; 1, вялый (безвольный) хвост; 2, слабость задних конечностей; 3, паралич задних конечностей; 4, слабость или паралич передних конечностей; 5, атональное состояние. Дозирование представляющих интерес соединений, которые следует оценить, может быть начато на день 0 (профилактическое) или день 7 (терапевтическое, когда присутствует гистологическое доказательство болезни, но немногие животные имеют клинические признаки), и дозы дают один раз или более в день в концентрациях, соответствующих их активности и фармакокинетическим свойствам, например, 100 мг/кг подкожно. Эффективность соединений можно оценить путем сравнения тяжести болезни (максимальное значение клинического счета в присутствии соединения по сравнению с носителем), или путем измерения снижения количества макрофагов (F4/80 положит.), выделенных из спинного мозга. Мононуклеар-ные клетки спинного мозга можно выделить с помощью ступенчатого градиента Перколла. Клетки можно окрасить, используя крысиные анти-мышь F4/80-PE или крысиные IgG2b-PE (Caltag Laboratories), и определить количественно с помощью FACS-анализа с использованием 10 мкл Polybeads на образец (Polysciences).
8. Модель трансплантации почки на мыши
Модели трансплантации могут осуществляться на мышах, например, модель аллогенной трансплантации почки от мышей C57BL/6 мышам BALB/c описана (Faikah Gueler et al., JASN Express, Aug 27th, 2008). Кратко, мышей обезболивали и левую донорскую почку, присоединенную к манжете аорты, почечную вену с малой кавальной манжетой и мочеточники удаляли "блоком". После левой нефрэкто-мии реципиента сосудистые манжеты соединили анастомозом с брюшной аортой и полой веной реципиента, соответственно, ниже уровня естественных сосудов почки. Мочеточник соединили анастомозом с мочевым пузырем. Время холодовой ишемии составляет 60 мин, а время тепловой ишемии составляет 30 мин. Правую "родную" почку можно удалить во время трансплантации аллографта или на 4 день после трансплантации во время долгосрочного исследования выживаемости. Для подтверждения отторжения контролируется общее физическое состояние мыши. Обработка животных соединением может начинаться до хирургического вмешательства или непосредственно после трансплантации, например, путем подкожной инъекции один раз в день. Проводится исследование функции почек и выживаемости мышей. Уровни креатинина в сыворотке измеряют с помощью автоматизированного метода (Beckman Analyzer,
Krefeld, Германия).
9. Модель ишемии/реперфузии на мыши
Мышиная модель ишемически-реперфизионного повреждения может быть осуществлена, как описано (Xiufen Zheng et al., Am. J. Pathol, vol. 173:4, Oct, 2008). Коротко, мышей CD1 возраста 6-8 недель обезболивали и помещали на греющую плиту для поддержания тепла во время хирургического вмешательства. После разреза брюшной стенки почечные ножки резко рассекают и на левую почечную ножку помещают микрососудистый зажим на 25-30 мин. После ишемии зажимы удаляют вместе с правой почкой, разрезы зашивают и дают возможность животному восстановиться. Образцы крови собирают для анализа на креатинин сыворотки и BUN-исследование в качестве показателя здоровья почки. Альтернативно контролируют выживаемость животных в течение времени. Соединения можно было вводить животным до и/или после хирургической операции, при этом эффекты на креатинин сыворотки, BUN или выживаемость животных использовали в качестве индикаторов эффективности соединения.
10. Мышиная модель роста опухоли
Мышам C57BL/6 в возрасте 6-16 недель вводили подкожно клетки 1x105 ТС-1 (АТСС, VA) в правый или левый бок. Начиная примерно с 2 недель после инъекции клеток, опухоли измеряют с помощью штангенциркуля каждые 2-4 дня, до тех пор, пока размер опухоли не достиг необходимого размера, тогда мышей забивали. Во время забоя животных подвергали полному вскрытию, извлекая селезенку и опухоль. Иссеченные опухоли измеряли и взвешивали. Соединения могли быть введены до и/или после инъекций опухоли, причем задержку или ингибирование роста опухоли использовали для оценки эффективности соединения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение, имеющее формулу
или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат или ротамер; где
С1 выбирают из группы, состоящей из фенила, пиридила, индолила и тиазолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R1;
С2 выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, пиридила и индолила, каждый из которых является необязательно замещенным от 1 до 3 заместителями R2;
С3 выбирают из группы, состоящей из C3-6 алкила, C3-6 циклоалкила, C3-6 циклоалкил-С1-2 алкила, фенила, пиридинила, пиразолила, пиперидинила, пирролидинила, пиперидинилметила и пирролидинил-метила, каждый из которых является необязательно замещенным 1-3 заместителями R3;
каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rc, -CO2Ra, -CONRaRb, -C(O)Ra, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)2Rc, -NRaC(O)NRaRb, -NRaRb, -ORa и -S(O)2NRaRb; где каждый Ra и Rb независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шес-тичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S; каждый Rc независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоал-кила и пирролидинила, и где алифатическая и циклическая части Ra, Rb и Rc являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, C1-8алкиламиногруппами и диС1-8алкиламиногруппами; и необязательно, когда два заместителя R1 находятся на смежных атомах, они объединяются с образованием конденсированного пяти- или шестичлен-ного карбоциклического кольца;
каждый R2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rf, -CO2Rd, -CONRdRe, -C(O)Rd, -OC(O)NRdRe, -NReC(O)Rd, -NReC(O)2Rf, -NRdC(O)NRdRe, -NRdRe, -ORd и -S(O)2NRdRe; где каждый Rd и Re независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шес-тичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатома в кольце, выбранных из N, О или S; каждый Rf независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила и пиразолила, и где алифатическая и циклическая части Rd, Re и Rf являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, C1-8алкиламино и диС1-8алкиламиногруппами;
каждый R3 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Ri, -CO2Rg, -CONRgRh, -C(O)Rg, -OC(O)NRgRh, -NRhC(O)Rg, -NRhC(O)2Ri, -NRgC(O)NRgRh, -NRgRh, -ORg, -S(O)2NRgRh, -X4-Rj, -X4-NRgRh, -X4-CONRgRh, -X4-NRhC(O)Rg, -NHRj и -NHCH2Rj, где Х4 представляет собой C1-4 алкилен; каждый Rg и Rh независимо выбирают из водорода, С1-8 алкила, C3-6 циклоалкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образовани
ем пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 2 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из Ci-8 алкила, Ci-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила, пиперидинила, тетрагидрофуранила, пиразолила и пирролила; и каждый RJ выбирают из группы, состоящей из C3-6 циклоалкила, пирролинила, пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила и тетрагидропиранила, и где алифатическая и циклическая части Rg, Rh, R1 и RJ являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, метилами, CF3, гидрокси, амино, C1-8 алки-ламино и диС1-8алкиламиногруппами; и
X представляет собой водород или CH3.
2. Соединение по п.1, в котором X является водородом.
3. Соединение по п.1, имеющее формулу
5. Соединение по п.1, имеющее формулу
где X1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR1; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR2; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.
6. Соединение по п.1, имеющее формулу
где X1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR1; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR2; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.
7. Соединение по п.1, имеющее формулу
где индекс р представляет собой целое число от 0 до 3; X1 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR1; индекс n представляет собой целое число от 0 до 2; X2 выбирают из группы, состоящей из N, СН и CR2; и индекс m представляет собой целое число от 0 до 2.
9. Соединение по п.1, имеющее формулу
8. Соединение по п.1, имеющее формулу
14. Соединение по п.1, имеющее формулу
A-QC
О""й
СН3 N
где R3 выбирают из группы, состоящей из -NRgRh, -NHRJ и -NHCH2RJ. 15. Соединение по п.1, имеющее формулу
где R3 выбирают из группы, состоящей из -X4-NRgRh, -X4-RJ и -X4-NRhCORg.
16. Соединение по п.1, где каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -Rc, -NRaRb и -ORa, и где каждый Ra и Rb независимо выбирают из водорода, С1-8 алкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пирролидинового кольца; каждый Rc независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила и C3-6 циклоалкила, и где алифатическая и циклическая части Ra, Rb и Rc необязательно являются дополнительно замещенными от одной до трех гидроксигруппами, метилами, аминогруппами, алкиламиногруппами и диалкиламиногруппами; и необязательно, когда два заместителя R1 находятся на смежных атомах, объединяются с образованием конденсированного пяти- или шести-членного карбоциклического кольца.
17. Соединение по п.1, где каждый R2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -Rf и -ORd; где каждый Rd независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила и С1-8 галоалкила; каждый Rf независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила и пиразолила, и где алифатическая и циклическая части Rd и Rf необязательно являются
16.
дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, гидроксигруппами, метилами, амино, алки-ламино и диалкиламиногруппами.
21. Соединение по п.1, в котором С3 выбирают из группы, состоящей из
18. Соединение по п.1, где каждый R3 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -R1, -CO2Rg, -CONRgRh, -NRhC(O)Rg, -NRhC(O)2Ri, -NRgRh, -ORg, -X4-RJ, -X4-NRgRh, -X4-CONRgRh, -X4-NRhC(O)Rg, -NHRJ и -NHCH2RJ, где X4 представляет собой C1-3 алкилен; каждый Rg и Rh независимо выбирают из водорода, C1-8 алкила, C3-6 циклоалкила и C1-8 галоалкила, или при присоединении к тому же самому атому азота они могут быть объединены с атомом азота с образованием пяти- или шестичленного кольца, имеющего от 0 до 1 дополнительных гетероатомов в кольце, выбранных из N, О или S, и необязательно замещенного одной или двумя оксогруппами; каждый R1 независимо выбирают из группы, состоящей из C1-8 алкила, C1-8 галоалкила, C3-6 циклоалкила, морфолинила, пирролидинила, пиперидинила, тетрагидрофуранила, пиразолила и пирролила; и каждый RJ выбирают из группы, состоящей из C3-6 цик-лоалкила, пирролинила, пиперидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила и тетрагидропиранила, и где алифатическая и циклическая части Rg, Rh, R1 и RJ являются необязательно дополнительно замещенными от одного до трех галогенами, метилами, CF3, гидрокси, амино, алкиламино и диалкиламиногруппами.
19. Соединение по п. 17, где С2 выбирают из группы, состоящей из
18.
23. Соединение по п.1, которое выбирают из группы, включающей
или его фармацевтически приемлемая соль.
24. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибиторной активностью в отношении C5aR, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение по п.1.
25. Способ лечения млекопитающего, страдающего от или восприимчивого к болезни или расстройству, характеризующемуся патологической активацией рецептора С5а, включающий введение млекопитающему эффективного количества соединения по п.1.
26. Способ ингибирования клеточного хемотаксиса, опосредованного С5а-рецептором, включающий контактирование лейкоцитов млекопитающего с модулирующим С5а-рецептор количеством соединения по п.1.
27. Способ по п.25, где болезнь или расстройство представляет собой воспалительную болезнь или расстройство.
28. Способ по п.25, где болезнь или расстройство выбирают из группы, состоящей из нейтропении, сепсиса, септического шока, болезни Альцгеймера, рассеянного склероза, инсульта, воспалительной болезни кишечника, хронического легочного обструктивного заболевания, воспаления, связанного с тяжелым ожогом, повреждения легких, остеоартрита, атопического дерматита, хронической крапивницы, ишемически-реперфузионного повреждения, синдрома острой дыхательной недостаточности у взрослых, синдрома системной воспалительной реакции, полиорганной недостаточности, отторжения тканевого трансплантата и сверхострого отторжения трансплантированных органов.
29. Способ по п.25, где болезнь или расстройство представляет собой сердечно-сосудистое или це-ребрально-васкулярное расстройство.
30. Способ по п.25, где болезнь или расстройство выбирают из группы, состоящей из инфаркта миокарда, тромбоза коронарных артерий, окклюзии сосуда, послеоперационной сосудистой реокклюзии, атеросклероза, травматического повреждения центральной нервной системы и ишемической болезни
или его фармацевтически приемлемая соль. 35. Соединение по п.1, имеющее формулу
или его фармацевтически приемлемая соль. 36. Соединение по п.1, имеющее формулу
или его фармацевтически приемлемая соль.
сердца.
31. Способ по п.25, где болезнь или расстройство представляет собой аутоиммунное расстройство.
32. Способ по п.25, где болезнь или расстройство выбирают из группы, состоящей из ревматоидного артрита, системной красной волчанки, синдрома Гийена-Барре, панкреатита, волчаночного нефрита, волчаночного гломерулонефрита, псориаза, болезни Крона, васкулита, спастического колита, дермато-миозита, бронхиальной астмы, пузырчатки, пемфигоида, склеродермы, тяжелой псевдопаралитической миастении, аутоиммунного гемолитического и тромбоцитопенического состояния, синдрома Гудпасчера, иммуноваскулита.
33. Способ по п.25, где болезнь или расстройство является патологическим осложнением, связанным с группой, состоящей из инсулинозависимого сахарного диабета, волчаночной нефропатии, нефрита Хеймана, мембранозного нефрита, гломерулонефрита, ответной контактной чувствительности и воспаления в результате контакта крови с искусственными поверхностями.
34. Соединение по п.1, имеющее формулу
31.
31.
31.
31.
31.
31.
31.
31.
31.
31.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
020874
020874
- 1 -
- 1 -
020874
020874
- 1 -
- 1 -
020874
020874
- 1 -
- 1 -
020874
020874
- 1 -
- 1 -
020874
020874
- 4 -
- 3 -
020874
020874
- 10 -
020874
020874
- 13 -
- 13 -
020874
020874
- 35 -
- 35 -
020874
020874
- 36 -
- 36 -
020874
020874
- 43 -
- 43 -
020874
020874
- 44 -
- 44 -