Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос :  ea000020856b*\id

больше ...
Термины запроса в документе


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Способ лечения или ослабления патологического состояния волос у подопытного, нуждающегося в этом, включающий введение подопытному эффективного количества композиции, включающей соединение, представленное формулой I в которой X представляет собой (СН 2 ) n , где n равно 1; R 1 выбирают из группы, состоящей из С 1 6 -алкила; R 2 представляет собой водород; R 3 представляет собой водород; R 4 представляет собой водород; R 5 представляет собой метил или этил; или его фармацевтически приемлемые соли или соответствующие N-оксиды и наполнитель.

2. Способ по п.1, в котором патологическое состояние, связанное с волосами, представляет собой депигментацию волос, ограниченный рост волос или короткие волосы, выпадение волос, витилиго или алопецию.

3. Способ по п.2, в котором алопеция выбирается из группы, состоящей из анагенной алопеции, телогеновой алопеции или очаговой алопеции.

4. Способ стимулирования роста волос, включающий введение подопытному, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, содержащей соединение, представленное формулой I в которой X представляет собой (СН 2 ) n , где n равно 1; R 1 выбирают из группы, состоящей из C 1 -C 6 -алкила; R 2 представляет собой водород; R 3 представляет собой водород; R 4 представляет собой водород; R 5 представляет собой метил или этил; или его фармацевтически приемлемые соли или соответствующие N-оксиды и наполнитель.

5. Способ по любому из пп.1-4, в котором композиция вводится местно.

6. Способ по любому из пп.1-5, в котором композиция является фармацевтически или косметически приемлемой.

7. Способ по любому из пп.1-6, в котором композиция дополнительно содержит средство, стимулирующее волосы.

8. Способ по любому из пп.1-7, дополнительно включающий введение средства, стимулирующего волосы.

9. Способ по любому из пп.1-8, в котором R 1 представляет собой метил.

10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором соединение представляет собой N-ацетил-(R)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовую кислоту.


Евразийское 020856 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2015.02.27
(21) Номер заявки 201171063
(22) Дата подачи заявки
2010.02.16
(51) Int. Cl.
A61P17/14 (2006.01) A61K 8/42 (2006.01) A61K31/196 (2006.01) A61Q 7/02 (2006.01)
(54) СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ, СВЯЗАННЫХ С ВОЛОСАМИ
(31) 09425056.0; 61/179,062; 61/287,461
(32) 2009.02.16; 2009.05.18; 2009.12.17
(33) EP; US; US
(43) 2012.01.30
(86) PCT/EP2010/000939
(87) WO 2010/091894 2010.08.19
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ДЖУЛИАНИ ИНТЕРНЭШНЛ ЛИМИТЕД (IE)
(72) Изобретатель:
Барони Серджо, Беллинвия Сальваторе, Вити Франческа (IT)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) WO-A1-0059866 GB-A-767788
DATABASE CHEMCATS [Online]
CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE,
COLUMBUS, OHIO, US; 3 June 2009 (2009-06-03), XP002591674, retrieved from STN, Database accession no. 2058162244, ORDER NUMBER: 20061 - & DATABASE REGISTRY
[Online], CHEMICAL ABSTRACTS SERVICE,
COLUMBUS, OHIO, US; 6 February 2008 (2008-02-06), XP002595814, retrieved from STN, Database accession no. 1001756-73-5 (RN), abstract & "Allichem Catalog" 3 June 2009 (2009-06-03),
ALLICHEM LLC, 8510A CORRIDOR ROAD, SAVAGE, MD, 20763-9504, USA
WO-A2-2007010516
EP-A1-1285908
(57) Изобретение относится к способу лечения или улучшения патологического состояния, связанного с волосами, с использованием композиции, содержащей соединение, представленное формулой I, в которой X представляет собой (СН2)П, в котором n составляет 1; R1 представляет собой C1-С6-алкил; R2 представляет собой водород; R3 представляет собой водород; R4 представляет собой водород; R5 представляет собой метил или этил; или его фармацевтически приемлемые соли или соответствующие N-оксиды и носитель. Изобретение также относится к способу стимулирования роста волос с использованием указанной композиции.
Родственные заявки
Данная заявка претендует на приоритет ЕР09425056.0, заявленной 16 февраля 2009 г.; U.S.S.N. 61/179062, заявленной 18 мая 2009 г., и U.S.S.N. 61/287461, заявленной 17 декабря 2009 г., каждая из которых включена во всей полноте посредством ссылки.
Уровень техники изобретения
Рецепторы, активируемые пролифератором пероксисом (PPAR), являются членами суперсемейства ядерных гормональных рецепторов, которые являются лиганд-активируемыми факторами транскрипции, регулирующими экспрессию генов. Некоторые PPAR играют роль в регулировании клеточной дифференциации, развитии и метаболизме высших организмов.
Было установлено три типа PPAR: а, экспрессируемый в печени, почках, сердце и других тканях и органах, р/Д, экспрессируемый, например, в головном мозге, и у, экспрессируемый в три формы: у1, у2 и у3. PPARy рецепторы были связаны со стимуляцией дифференциации кератиноцитов и выступали в качестве потенциальной цели лекарства при лечении ряда болезненных состояний, включающих кожные заболевания, такие как псориаз и атопический дерматит. Кроме того, экспрессия PPAR была обнаружена в волосяных фолликулах и может участвовать в росте волос.
Выпадение волос является общей проблемой, которая может быть следствием болезни, функционального заболевания или наследственной предрасположенности. В некоторых случаях выпадение волос может локализоваться на теле (например, мужское облысение) или может происходить по всему телу. Алопеция - это медицинский термин, обозначающий отсутствие или выпадение волос, и может возникнуть у подопытных, проходящих лечение от рака или других болезней, которые нуждаются в лечении цитотоксическими препаратами.
Депигментация волос - это также общая проблема и, как правило, она является результатом процесса старения. В какой-то момент в процессе старения стволовые клетки в основании волосяного фолликула, ответственные за выработку меланоцитов (клетки, которые производят и хранят пигмент), производят меньше пигмента до тех пор, пока у волос не наступает дефицит пигмента.
Соответственно требуются эффективные средства, такие как PPAR модуляторы, которые могут быть полезны при лечении таких волосяных нарушений.
Сущность изобретения
Данное раскрытие сущности изобретения, как правило, относится к способам лечения, улучшения или существенного предотвращения нарушений, связанных с волосами, или патологических состояний, например предусмотренного в настоящем изобретении способа лечения или улучшения патологического состояния, связанного с волосами, у подопытного, нуждающегося в этом, включающего введение подопытному эффективного количества композиции, содержащей соединение, представленное формулой I
в которой X представляет собой (СН2)П, в котором n составляет 1;
R1 выбирают из группы, состоящей из С1-С6-алкила (например, R1 может быть метилом);
R2 представляет собой водород;
R3 представляет собой водород;
R4 представляет собой водород;
R5 представляет собой метил или этил;
или его фармацевтически приемлемые соли или соответствующие N-оксиды и носитель. Типичным соединением является №ацетил-^)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовая кислота.
Например, в настоящем изобретении предлагаются способы лечения или улучшения патологических состояний, связанных с волосами, такие как депигментация волос, ограниченный рост волос или короткие волосы, выпадение волос, витилиго или алопеция (например, анагеновая алопеция, телогеновая алопеция или очаговая алопеция).
Также предлагается способ стимулирования роста волос, включающий введение подопытному, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции (например, фармацевтически и/или косметически приемлемой композиции), содержащей соединения, описанные в настоящем изобретении, такие как соединения, представленные выше формулой I. Такие композиции могут быть, например, введены местно, причем композиция фармацевтически или косметически приемлема. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения описанная композиция может дополнительно содержать агент, стимулирующий волосы.
Кроме того, предусмотренные в настоящем изобретении композиции включают соединения, представленные формулой I и, например, фармацевтически приемлемый наполнитель.
Также предусмотренное в настоящем изобретении - это соединения, представленные формулой I для использования в терапии и/или для изготовления лекарственного средства для лечения или улучшения потери волос или депигментации волос.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показана стимуляция удлинения волосяного стержня при различных концентрациях N-ацетил Е2;
на фиг. 2 представлена стимуляция пигментации человеческого волосяного фолликула с различными концентрациями N-ацетил Е2 с использованием гистоморфометрии Фонтана-Массон;
на фиг. 3 представлена гистохимия Фонтана-Массон волосяного фолликула с N-ацетил Е2;
на фиг. 4 представлена наблюдаемая Ki67/Tunel (терминальное дезоксиуридиновое мечение концов) иммуногистоморфометрия фолликула с N-ацетил Е2;
на фиг. 5 показана экспрессия K15 в волосяных фолликулах, обработанных соединением А;
на фиг. 6 показано регулирование клеток K19 в волосяных фолликулах, обработанных соединением
на фиг. 7 представлены последствия действия раскрытого соединения на кератиноциты человека;
на фиг. 8 показано ингибирование ФНО-а (фактора некроза опухоли) пероксидом водорода Н2О2 и раскрытым соединением;
на фиг. 9 представлено ингибирование м-РНК экспрессии ИЛ-6 (интерлейкина 6), индуцированной присутствием у-интерферона;
на фиг. 10 показано ингибирование раскрытым соединением активации ядерного фактора к-В (NF- KB);
на фиг. 11 представлено ингибирование раскрытым соединением экспрессии белка интерлейкина-6, индуцированной наличием липополисахарида (ЛПС);
на фиг. 12 показано влияние раскрытого соединения на человеческие себоциты;
на фиг. 13 представлена способность раскрытого соединения к ингибированию себогенеза, индуцированного раздражителем липидного типа;
на фиг. 14 приведены результаты анализа жирных кислот (А) и анализа сквалена (В) ингибирования себогенеза;
на фиг. 15 показана обработка линолевой кислотой и тестостероном с липидогенным раздражителем.
Подробное описание изобретения
Характерные черты и другие детали раскрытия сущности изобретения далее будут описаны более конкретно. Перед дальнейшим описанием настоящего изобретения ниже собраны некоторые термины, используемые в описании изобретения, примеры и прилагаемые формулы изобретения. Эти определения следует рассматривать ввиду оставшейся части раскрытия сущности изобретения и понимать, как понимает квалифицированный специалист в данной области. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же значение, как они обычно понимаются средними специалистами в данной области.
Определения
"Лечение" включает любое действие, например уменьшение, ослабление, модулирование или устранение, что приводит к улучшению патологического состояния, заболевания, нарушения и тому подобному.
Термин "алкил", используемый в настоящем изобретении, относится к насыщенному линейному или разветвленному углеводороду, такому как линейная или разветвленная группа 1-12, 1-10 или 1-6 атомов углерода, упомянутая в настоящем изобретении как С1-С12-алкил, 01-С10-алкил и С1-С6-алкил соответственно. Типичные алкильные группы включают, но не ограничиваются, метил, этил, пропил, изо-пропил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил, 2-метил-1-бутил, 3-метил-1-бутил, 2-метил-3-бутил, 2,2-диметил-1-пропил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 2-метил-2-пентил, 3-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 2,2-диметил-1-бутил, 3,3-диметил-1-бутил, 2-этил-1-бутил, бутил, изобутил, т-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гексил, гептил, октил и т.д. В некоторых вариантах осуществления алкил относится к 01-С6-алкил. В некоторых вариантах осуществления, циклоалкил относится к С3-С6-циклоалкил.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" или "фармацевтически приемлемый наполнитель", используемый в настоящем изобретении, относится к любому или всем растворителям, дисперген-ту, покрытиям, изотоническим и задерживающим поглощение средствам и тому подобное, которые совместимы с фармацевтическим введением. Использование такой среды и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. Композиции могут также содержать другие активные соединения, обеспечивающие вспомогательные, дополнительные или улучшенные терапевтические функции.
Термин "фармацевтическая композиция", используемый в настоящем изобретении, относится к композиции, включающей по крайней мере одно соединение, как описано в настоящем изобретении, образованное вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями.
"Особь", "пациент" или "подопытный" используются как синонимы и включают любое животное, включая млекопитающих, предпочтительно мышей, крыс, других грызунов, кроликов, собак, кошек, свиней, крупного рогатого скота, овец, лошадей или приматов и наиболее предпочтительно человека. Соединения изобретения могут быть введены млекопитающим, таким как человек, но могут быть и другие млекопитающие, такие как животное, нуждающееся в ветеринарном лечении, например домашние животные (например, собаки, кошки и т.п.), животные с фермы (например, коровы, овцы, свиньи, лошади и т.п.) и лабораторные животные (например, крысы, мыши, морские свинки и т.п.). Млекопитающее, которое лечат способами изобретения, это млекопитающее, у которого желательна модуляция PPAR и/или рецепторов эпидермального фактора роста. "Модуляция" включает антагонизм (например, ингиби-рование), агонизм, частичный антагонизм и/или частичный агонизм.
В данном описании изобретения термин "терапевтически эффективное количество" означает количество раскрытого соединения, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ ткани, системы, животного или человека, которого добивается исследователь, ветеринар, медицинский врач или другой клинический врач. Соединения изобретения вводятся в терапевтически эффективных количествах для лечения заболевания. Кроме того, терапевтически эффективное количество соединения - это количество, необходимое для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического эффекта, например количество, которое приведет к предотвращению или усилению проявления симптомов, связанных с болезнью, относящейся к PPAR и/или рецепторам EGF эпидермального фактора роста.
Термин "фармацевтически приемлемая соль (соли)", используемая в настоящем изобретении, относится к солям кислотных или основных групп, которые могут присутствовать в соединениях, используемых в настоящих композициях. Соединения, включенные в настоящие композиции, которые имеют основную природу, способны образовывать самые разнообразные соли с различными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые могут быть использованы для получения фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей таких основных соединений, представляют собой кислоты, которые образуют нетоксичные кислотно-аддитивные соли, т.е. соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, в том числе, но не ограничиваясь ими, соли: малат, оксалат, хлорид, бромид, йодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, ацетат, лактат, салицилат, цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюко-нат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, зтансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Входящие в настоящие композиции соединения, содержащие аминогруппу, в дополнение к вышеуказанным кислотам могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами. Входящие в настоящие композиции соединения, имеющие кислотную природу, способны к образованию основных солей с различными фармакологически приемлемыми катионами. Примеры таких солей включают соли щелочных металлов или щелочно-земельных металлов и, в частности, соли кальция, магния, натрия, лития, цинка, калия и железа.
Раскрытые соединения могут содержать один или несколько хиральных центров и/или двойных связей и, следовательно, существуют в виде стереоизомеров, таких как геометрические изомеры, энан-тиомеры или диастереомеры. Термин "стереоизомеры" при использовании в настоящем изобретении включает все геометрические изомеры, энантиомеры или диастереомеры. Эти соединения могут быть определены символами "R" или "S" в зависимости от конфигурации заместителей вокруг стереогенного атома углерода. Настоящее изобретение охватывает различные стереоизомеры этих соединений и их смесей. Стереоизомеры включают энантиомеры и диастереомеры. Смеси энантиомеров или диастерео-меров могут быть обозначены "(±)" в номенклатуре, но специалистам в данной области будет понятно, что структура может обозначать хиральный центр в неявном виде.
Индивидуальные стереоизомеры соединений настоящего изобретения могут быть получены синтетическим путем из коммерчески доступных исходных материалов, которые содержат асимметричные или стереогенные центры, или при подготовке рацемических смесей с последующими способами разделения, хорошо известными специалистам в данной области. Эти способы разделения характерны (1) прикреплением смеси энантиомеров к хиральному вспомогательному элементу, отделением полученной смеси диастереомеров перекристаллизацией или хроматографией и освобождением оптически чистого продукта от вспомогательного элемента, (2) образованием соли с использованием оптически активного разделяющего агента или (3) прямым разделением смеси оптических энантиомеров на хиральных хрома-тографических колонках. Стереоизомерные смеси также могут быть разделены на стереоизомерные компоненты хорошо известными способами, такими как газовая хроматография с хиральной фазой, высокоэффективная жидкостная хроматография с хиральной фазой, кристаллизация соединений в виде хираль-ного солевого комплекса или кристаллизация соединения в хиральном растворителе. Стереоизомеры могут также быть получены из стереомерно чистых промежуточных соединений, реагентов и катализаторов путем хорошо известных способов асимметрического синтеза.
Геометрические изомеры могут присутствовать и в соединениях настоящего изобретения. Символ обозначает связь, которая может быть простой, двойной или тройной связью, как описано в настоящем изобретении. Настоящее изобретение включает различные геометрические изомеры и их смеси, полученные в результате группировки заместителей вокруг углерод-углеродной двойной связи или группировки заместителей вокруг карбоциклического кольца. Заместители вокруг углерод-углеродной двойной связи обозначаются как Z- или Е-конфигурация, в которой термины Z и Е используются в соответствии со стандартами ИЮПАК. Если не указано иное, описанные структуры с двойными связями охватывают как Е-, так и Z-изомеры.
Заместители вокруг углерод-углеродной двойной связи также могут быть отнесены к "цис" или "транс", где "цис" означает, что заместители находятся по одну сторону от двойной связи, а "транс" означает, что заместители находятся на противоположных сторонах от двойной связи. Расположение заместителей вокруг карбоциклического кольца обозначают как "цис" или "транс". Термин "цис" обозначает, что заместители находятся по одну сторону от плоскости кольца, а термин "транс" означает, что заместители располагаются по разные стороны от плоскости кольца. Смеси соединений, в которых заместители расположены как по одной, так и по разным сторонам от плоскости кольца, обозначаются "цис/транс".
Соединения, раскрытые в настоящем изобретении, могут существовать в сольватированных и не-сольватированных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п., и предполагают, что изобретение охватывают как сольватированные, так и несольватированные формы. В одном из вариантов осуществления соединение является аморфным. В одном из вариантов осуществления соединение полиморфно. В другом варианте осуществления соединение находится в кристаллической форме.
Термин "пролекарство" относится к соединениям, которые трансформируются in vivo (в естественных условиях), для получения раскрытого соединения или фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата соединения. Трансформация может происходить при помощи различных механизмов, например путем гидролиза в крови. Например, если соединение изобретения или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват соединения содержит функциональную группу карбоновой кислоты, пролекарство может состоять из сложного эфира, образованного заменой атома водорода кислотной группы на группу, такую как (С1-С8)алкил, (С2-С12)алканоилоксиметил, 1-(алканоилокси)этил, имеющие от 4 до 9 атомов углерода, 1-метил-1-(алканоилокси)этил, имеющий от 5 до 10 атомов углерода, алкокси-карбонилоксиметил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, 1-(алкоксикарбонилокси)этил, имеющий от 4 до 7 атомов углерода, 1-метил-1-(алкоксикарбонилокси)этил, имеющий от 5 до 8 атомов углерода, N-(алкоксикарбонил)аминометил, имеющий от 3 до 9 атомов углерода, 1-(№(ажоксикарбонил)амино)этил, имеющий от 4 до 10 атомов углерода, 3-фталидил, 4-кротонолактонил, у-бутиролактон-4-ил, ди-^^^-02)алкиламино(С2-С3)алкил (такой как р-диметиламиноэтил), карбамоил-(01-С2)алкил, N,N^(Q-С2)алкилкарбамоил-(C1-C2)алкил и пиперидино-, пирролидино- или морфолино-(С2-С3)алкил.
Аналогичным образом, если соединение изобретения содержит спиртовую функциональную группу, пролекарство может быть образовано замещением атома водорода спиртовой группы на группу, такую как (^-С^алканоилоксиметил, 1-((C1-С6)алканоилокси)этил, 1-метил-1-((C1-C6)алканоилокси)этил (C1 -С6)алкоксикарбонилоксиметил, N-(C1 -C6)алкоксикарбониламинометил, сукциноил, (C1 -^алканои:, а-амино (C1-C4)алканоил, арилацил и а-аминоацил, или а-аминоацил-а-аминоацил, где каждую а-аминоацильную группу независимо выбирают из природных L-аминокислот, Р(О)(ОН)2, -Р(О)(O(C1-C6)алкил)2 или гликозила (радикал, полученный в результате удаления гидроксильной группы полуацетальной формы углеводов).
Если соединение изобретения включает функциональную аминогруппу, пролекарство может быть образовано замещением атома водорода в аминогруппе на группу, такую как R-карбонил, RO-карбонил, NRR1-карбонил, где R и R', каждый независимо, представляют собой (Q-QO^COUI, (С3-С7)циклоалкил, бензил или R-карбонил представляет собой природный а-аминоацил или природный а-аминоацил-природный а-аминоацил, -C(OH)C(O)OY1, в котором Y1 представляет собой Н, (Q-ООалкил или бензил, -C(OY2)Y3, в котором Y2 представляет собой (^-О^алссю и Y3 представляет собой (Q-Оалкил, карбок-си(С1-С6)алкил, амино (C1-C4)алкил или моно-N- или ди-N,N-(С1-С6)алкиламиноалкил, -C(Y4)Y5, в котором Y4 представляет собой Н или метил и Y5 представляет собой моно-N- или ди-N,N-(C1-C6)алкиламино, морфолино, пиперидин-1-ил или пирролидин-1-ил.
Соединения
Раскрытие сущности изобретения обеспечивают, по крайней мере частично, соединения, представленные формулой I, как показано ниже. Кроме того, предусмотренное в настоящем изобретении - это композиции, которые включают соединения, представленные формулой I, и, например, фармацевтически или косметически приемлемый носитель или наполнитель
^ У
*' R, I
в которой X представляет собой (СН2)П, в котором n составляет 1;
R1 выбирают из группы, состоящей из С1-С6-алкила (например, R1 может быть метилом);
R2 представляет собой водород;
R3 представляет собой водород;
R4 представляет собой водород;
R5 представляет собой метил или этил;
или их фармацевтически приемлемые соли или их N-оксиды.
В другом варианте осуществления -NR2-COR1 может быть в мета-положении по отношению к X, как показано в формуле III
САД.
В другом варианте осуществления -NR2-COR1 может быть в пара-положении по отношению к X, как показано в формуле IV
Предполагаемое соединение и фармацевтические композиции, включающие, по меньшей мере, соединение, могут быть выбраны из группы, состоящей из №ацетил-^)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовой кислоты (соединение А), №ацетил-(8)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипро-пионовой кислоты (соединение В), рацемических №ацетил-(8)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипро-пионовой кислоты (соединение АВ);
или фармацевтически приемлемых солей или их N-оксидов.
Настоящее раскрытие сущности изобретения также обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие соединения, как описано в настоящем изобретении, образованные совместно с одним или несколькими фармацевтически или косметически приемлемыми носителями. Эти препараты включают препараты, пригодные для перорального, ректального, местного, буккального и парентерального (например, подкожного, внутримышечного, внутрикожного или внутривенного) введения или для местного
применения, например, в качестве косметического средства. Хотя выбор наиболее подходящей формы введения в каждом конкретном случае будет зависеть от степени и тяжести состояния лечащегося и от характера конкретного используемого соединения.
Терапевтическое применение Раскрытие сущности изобретения далее предусматривает в некоторых вариантах осуществления способы модуляции активности одного или нескольких PPAR и/или рецепторов эпидермального фактора роста, включающие воздействие на вышеупомянутый рецептор соединением изобретения. Например, предусмотренное в настоящем изобретении представляет собой способы лечения болезней, связанных с экспрессией или активностью одного или нескольких PPAR и/или рецепторов эпидермального фактора роста у пациента, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения изобретения.
Раскрытие сущности изобретения направлено, по крайней мере частично, на лечение или ослабление волосяных нарушений с помощью, например раскрытого соединения. Например, в настоящем изобретении обеспечиваются способы стимулирования роста волос, в которых пациенту, нуждающемуся в этом, вводят раскрытое соединение (или, например, композицию, которая включает раскрытое соединение), например, местно.
В некоторых вариантах осуществления обеспечивается способ лечения или ослабления потери волос или депигментации волос у пациента, страдающего этим (или предвидящим это), нежелающего потерю волос или нежелающего депигментацию, включающий введение эффективного количества композиции, содержащей раскрытое соединение. Предполагаемые способы включают способы, которые замедляют образование седых волос или существенно ослабляют выпадение волос по сравнению с, например, выпадением волос или депигментацией, не предусмотренных при лечении. Также в настоящем изобретении рассматриваются способы лечения витилиго, очаговой алопеции, андрогенной алопеции и/или телогенового выделения.
Например, у пациентов с акне может увеличиться непрерывное образование кожного сала, а применение ингибитора образования кожного сала, такого как раскрытого в настоящем изобретении, может быть полезным при лечении акне, себореи или алопеции. В другом примере хроническое воспаление волосяных фолликулов (кератиноцитов) может быть признаком, например, андрогенной алопеции. Ингибитор такого воспаления, такой как раскрытый в настоящем изобретении, может быть полезен, например, при лечении выпадения волос.
Соединения изобретения могут быть введены подопытным (животным и/или людям), нуждающимся в таком лечении в дозировках, которые обеспечат оптимальную фармацевтическую эффективность. Следует иметь в виду, что дозировки, необходимые для использования в любом конкретном применении, будут варьироваться от подопытного к подопытному и не только в зависимости от определенного соединения или выбранной композиции, но и от маршрута введения, природы патологического состояния подопытного, подлежащего лечению, возраста и патологического состояния пациента, сопутствующего медикаментозного лечения или специальных диет, назначенных затем пациенту, и от других факторов, которые будут понятны специалистам в данной области, учитывая, в конечном счете, соответствующую дозировку, назначенную по усмотрению лечащего врача. Для лечения клинических патологических состояний заболеваний, упомянутых выше, соединение данного изобретения можно вводить перорально, местно, парентерально, путем ингаляции спрея или ректально в дозированной лекарственной форме, содержащей обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и транспортные средства. Термин парентерально, используемый в настоящем изобретении, включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные, интрастернальную инъекцию или методику вливания.
Как правило, терапевтически эффективное количество активного компонента будет находиться в интервале от около 0,1 до примерно 100 мг/кг, в некоторых случаях от около 1 до примерно 100 мг/кг, в некоторых случаях от около 1 до 10 мг/кг. Введенное количество будет зависеть от таких переменных, как тип и степень заболевания или указания лечиться, общее состояние здоровья конкретного пациента, относительная биологическая эффективность соединений, лекарственная форма соединений, наличие и виды наполнителей в лекарственной форме и маршруты введения. Начальная введенная доза может быть увеличена до пределов свыше верхнего уровня для того, чтобы быстро достичь желаемого уровня в крови или в ткани, или начальная доза может быть меньше, чем оптимальная, а суточная доза может быть постепенно увеличена в течение курса лечения в зависимости от конкретной ситуации. Человеческая доза может быть оптимизирована, например, при обычном изучении увеличения дозы на фазе I, предназначенной для работы от 0,5 до 20 мг/кг. Частота дозирования может варьироваться в зависимости от факторов, таких как способ введения, количества дозы и болезненного состояния пациента, подлежащего лечению. Типичные частоты дозирования составляют один раз в день, раз в неделю и раз в две недели.
Предполагаемая лекарственная форма или композиция содержат раскрытые соединения и, как правило, могут также включать фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.
В некоторых вариантах осуществления предполагаемые композиции могут также включать другие агенты, например вещества, стимулирующие волосы, такие как ProcapilTM, латанопрост, миноксидил, финастерид, дутастерид и/или спиронолактон. Кроме того, предполагаемое в настоящем изобретении
это раскрытые способы, которые могут в некоторых вариантах осуществления далее включать введение одного или нескольких агентов, стимулирующих волосы, таких как описанные выше.
Предполагаемые композиции можно вводить различными способами в зависимости от их использования по назначению, как это хорошо известно специалистам в данной области. Например, если композиции настоящего изобретения должны быть введены перорально, они могут быть образованы в виде таблеток, капсул, гранул, порошков или сиропов. Кроме того, лекарственные формы настоящего изобретения могут быть введены парентерально в виде инъекций (внутривенно, внутримышечно или подкожно), препаратов капельного вливания или в виде клизм или свечей. При нанесении на глазную слизистую оболочку композиции настоящего изобретения могут быть получены в виде глазных капель или мази для глаз. Данные лекарственные формы могут быть получены обычными средствами и, при желании, композиции могут быть смешаны с любой обычной добавкой, такой как наполнитель, связывающее вещество, разрыхлитель, смазывающее вещество, корригирующее вещество, солюбилизирующий агент, суспензионное вспомогательное средство, эмульгирующее вещество или покрывающее средство.
В лекарственных формах данного изобретения могут присутствовать в качестве образующих средств увлажняющие вещества, эмульгирующие вещества и смазывающие вещества, такие как лаурил-сульфат натрия и стеарат магния, а также красители, разделительные средства, покрывающие средства, подсластители, вкусовые и ароматизирующие средства, консерванты и антиоксиданты.
Заявленные композиции могут быть пригодны для перорального, назального, местного (в том числе буккального и сублингвального), ректального, вагинального, аэрозольного и/или парентерального введения. Композиции могут быть удобно представлены в виде стандартной лекарственной формы и могут быть получены любыми способами, хорошо известными специалистам в области фармацевтики. Количество композиции, которое может быть связано с материалом носителя для производства одной дозы, варьируется в зависимости от подопытного, подлежащего лечению, и конкретного способа введения.
Способы приготовления этих лекарственных форм включают стадию совмещения композиции настоящего изобретения с носителем и, возможно, одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. В общем, лекарственные формы готовятся одинаково и тщательно, совмещая агенты с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями либо с обоими, а затем, при необходимости, формируя изделие.
Композиции, пригодные для перорального введения, могут быть в форме капсулы, пилюли, таблетки, пастилки (с использованием ароматизированной основы, как правило, сахарозы и акации или трагаканта), порошков, гранул или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле, или в виде эликсира или сиропа, или в виде пастилки (с использованием инертного основания, такого как желатин и глицерин, или сахароза и акация), каждая из которых содержит заданное количество заявленной композиции в качестве активного ингредиента. Композиции настоящего изобретения могут быть также введены в виде болюса, электуария или пасты.
В твердых лекарственных формах для перорального введения (капсулы, таблетки, пилюли, таблетки, покрытые оболочкой, драже, порошки, гранулы и т.п.) заявленную композицию смешивают с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, такими как цитрат натрия или дикаль-цийфосфат и/или с любым из следующих: (1) наполнителями или разбавителями, такими как крахмал, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремниевая кислота, (2) связывающими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и/или акация, (3) увлажнителями, такими как глицерин; (4) разрыхлителями, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; (5) замедлителями схватывания раствора, такими как парафин; (6) ускорителями впитывания, такими как соединения четвертичного аммония; (7) увлажняющими агентами, такими как, например, ацетиловый спирт и моностеарат глицерина; (8) абсорбентами, такими как каолиновая и бентонитовая глина; (9) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, магния стеарат, твердые поли-этиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смесями; и (10) красителями. В случае использования капсул, таблеток и пилюль композиции могут также содержать буферные вещества. Твердые композиции подобного типа могут быть также использованы в качестве наполнителей в мягких и твердых капсулах, заполненных желатином, используя такие наполнители, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и т.п.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к заявленной композиции жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в искусстве, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этиловый карбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил бензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, масло зародышей пшеницы, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидро-фуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот сорбитана, циклодекстринов и их смесей.
Суспензии в дополнение к заявленной композиции могут содержать суспендирующие вещества, как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, сложные эфиры полиоксиэтиленового сорбита и сорбитана, целлюлозу микрокристаллическую, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант и их смеси.
Лекарственные формы для трансдермального или местного введения заявленной композиции включают порошки, аэрозоли, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и ингаляторы. Активный компонент может быть смешан в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с какими-либо консервантами, буферными растворами или распыляющими веществами, которые могут потребоваться.
Мази, пасты, кремы и гели могут содержать в дополнение к заявленной композиции наполнители, такие как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевая кислота, тальк и оксид цинка или их смеси.
Порошки и аэрозоли могут содержать в дополнение к заявленной композиции наполнители, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и полиамидный порошок или смеси этих веществ. Спрей может дополнительно содержать обычные распыляющие вещества, такие как хлорфторуглеводороды и летучие незамещенные углеводороды, такие как бутан и пропан.
Композиции и соединения настоящего изобретения можно, альтернативно, вводить аэрозолем. Это достигается путем приготовления водного аэрозоля, липосомального препарата или твердых частиц, содержащих соединение. Может быть использована неводная (например, фторированное распыляющее средство) суспензия. Также могут быть использованы ультразвуковые распылители, поскольку они минимизируют подверженность агента к сдвигу, который может привести к разрушению соединений, содержащихся в заявленной композиции.
Как правило, водный аэрозоль получают путем образования водного раствора или суспензии заявленной композиции вместе с обычными фармацевтически приемлемыми носителями и стабилизаторами. Носители и стабилизаторы меняются в зависимости от требований конкретной заявленной композиции, но, как правило, включают неионогенные поверхностно-активные вещества (твины, плюроники или по-лиэтиленгликоль), нетоксичные белки, такие как сывороточный альбумин, сложные эфиры сорбитана, олеиновая кислота, лецитин, аминокислоты, такие как глицин, буферные растворы, соли, сахара или сахарные спирты. Аэрозоли, как правило, готовят из изотонических растворов.
Фармацевтические композиции данного изобретения, пригодные для парентерального введения, включают заявленную композицию с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми стерильными изотоническими водными или неводными растворами, коллоидными растворами, суспензиями или эмульсиями, или стерильными порошками, которые могут быть восстановлены в стерильные инъекционные растворы или коллоидные растворы непосредственно перед использованием, которые могут содержать антиоксиданты, буферные растворы, бактериостатические агенты, растворенные вещества, которые доводят лекарственную форму до изотонического состояния с кровью предполагаемого получателя, или суспендирующих, или загущающих средств.
Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях изобретения, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропи-ленгликоль, полиэтиленгликоль и тому подобное) и подходящие смеси из них, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные органические сложные эфиры, такие как этилолеат и цикло-декстрины. Должная текучесть может быть обеспечена, например, использованием покрывающих материалов, таких как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае коллоидных растворов, а также за счет использования поверхностно-активных веществ. Эффективность лечения заявленными композициями может быть определена квалифицированными специалистами.
При раскрытии сущности изобретения, в котором композиции описываются как имеющие, включающие или содержащие специфические компоненты, предполагается, что композиции также состоят в основном из или состоят из перечисленных компонентов. Подобным образом, когда способы описываются как имеющие, включающие или содержащие конкретные стадии, эти способы также состоят в основном из или состоят из перечисленных стадий обработки. Если не указано иное, порядок стадий или порядок для выполнения определенных действий несущественен до тех пор, пока изобретение остается в рабочем состоянии. Более того, если не указано иное, две или несколько стадий или действий может проводиться одновременно.
Примеры
Соединения, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть подготовлены несколькими способами, хорошо известными специалистам в области органического синтеза. Более конкретно, соединения изобретения могут быть получены с использованием реакций и методик, раскрытых в настоящем изобретении. При раскрытии синтетических способов, описанных ниже, следует понимать, что все предлагаемые условия реакции, в том числе выбор растворителя, атмосфера реакции, температура реакции, длительность эксперимента и процедура обработки, могут быть стандартными условиями для этой реакции, если не указано иное. Специалистам в области органического синтеза понятно, что функциональные
группы, имеющиеся на различных частях молекулы, должны быть совместимы с реагентами и предлагаемыми реакциями. Заместители, не совместимые с условиями реакции, будут очевидны для специалиста в данной области, поэтому указаны альтернативные способы. Исходными материалами для примеров являются или коммерчески доступные, или легко получаемые стандартными способами из известных веществ материалы.
Пример 1. Получение N-ацетил-(R)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовой кислоты (N-ацетил Е2); соединение А.
К (Я)-(-)-3-(4-аминофенил)-2-метоксипропионовой кислоте (40 г) в 0,5-л стеклянный реактор добавляют этилацетат (80 г) и ангидрид уксусной кислоты (62,8 г). Смесь перемешивают при 90°С в течение 1 ч. После охлаждения растворитель удаляют вакуумной перегонкой до маслянистого остатка. К этому остатку добавляют воду (120 г) и этилацетат (120 г). После перемешивания в течение 10 мин при температуре 35°С слои разделяют и удаляют водный слой. Слой органического растворителя удаляют вакуумной дистилляцией. Затем добавляют ацетон (120 г) и нагревают полученную смесь до полного растворения. Раствор охлаждают до 0°С, а осажденный продукт собирают фильтрацией. Твердое вещество промывают ацетоном (20 г) и сушат при температуре 65°С, получая 26 г указанного в заголовке соединения.
Пример 2. In vitro испытание органной культуры волосяного фолликула.
Для модельного испытания микропрепарированных орган-культурных фолликул волос используют Филпотт систему. Волосяные фолликулы и кожные штампы разделяют на 4 группы (3 волосяных фоли-кула на лунку), инкубированные с испытуемым веществом "соединение А" при различных концентрациях в течение 6 дней. В нулевой день проводят измерения микропрепарирования длины волос. На 1-й день среда изменяется, и добавляют соединение А (с измерением длины волос). На 3-й день среда изменяется, и добавляют соединение А (с измерением длины волос). На 6-й день измеряют длину волос и делают заключение. На фиг. 1 показано, что соединение А стимулирует удлинение волосяного стержня при низкой дозе соединения А.
Использование гистоморфометрии Фонтана-Массон/окрашивания меланина при изготовлении срезов из замороженных клеток. На фиг. 2 показана стимуляция соединением А пигментации человеческого волосяного фолликула. На фиг. 3 представлена гистохимия Фонтана-Массон волосяного фолликула при использовании соединения А.
Также проводят Ki-67/Tunel окрашивание волосяных фолликул с помощью флуоресцентного окрашивания. Фиг. 4 показывает Ki67/Tunel иммуногистоморфометрию фолликула и указывает на то, что высокие дозы соединения А стимулируют как пролиферацию, так и апоптоз кератиноцитов человеческой матрицы волос.
При низких дозах соединения А существует значительное повышение экспрессии K15 в слабой волосяной фолликуле, в то время как обработанная кожа не показывает никакой измеримой экспрессии (см. фиг. 5). Фиг. 6 свидетельствует о значительном повышении экспрессии клеток K19 в слабой волосяной фолликуле при низкой концентрации, в то время как концентрация, увеличенная в 10 раз, показывает падение регуляции (фиг. 6). Кожа не показывает никакой измеримой экспрессии.
Пример 3. Кератиноциты.
Чтобы оценить возможное токсическое или цитостатическое действие веществ при исследовании, проводят спектрофотометрическое испытание (МТТ). Человеческие первичные кератиноциты, выделенные из биопсии кожи, высевают в лунки 24-луночного планшета в подходящей среде с добавлением антибиотиков, кальция и специфических факторов роста. При слиянии около 70% на клетки воздействуют соединением А при различных концентрациях (0,1-1-2 мМ) в течение 24 и 48 ч в подходящей среде с добавлением антибиотиков, кальция, но без факторов роста. Это условие культивирования создают для всех последующих экспериментов. В конце обработки делают тест МТТ. Результаты показаны на фиг. 7. Соединение А при всех использованных концентрациях не показало никакого действия на клеточную жизнеспособность.
Пример 4. ФНО-а.
Анализ ингибирования соединения А мРНК индукции противоспалительного цитокина ФНО-а пе-роксидом водорода Н2О2 проводят в реальном масштабе времени ПЦР-РВ. Кератиноциты высевают в чашки 6 см/0. При слиянии 80% клетки обрабатывают перекисью водорода Н2О2 (300 мкМ) в присутствии соединения А при трех концентрациях (0,1-0,1-0,5 мМ) в течение 6 ч. В конце обработки клетки ли-зируют в буфере для лизиса, изолируют и подвергают последующей ретротранскрипции РНК. Соединение А, как оказывается, способно подавлять экспрессию мРНК ФНО-а, индуцированную пероксидом водорода Н2О2 при двух высоких дозах (0,1 мМ; 0,5 мМ). Более высокая доза демонстрирует полное ин-гибирование противоспалительных цитокинов с эффектом, сходным с троглитазоном (Тг) (фиг. 8).
Пример 5. Ингибирование мРНК экспрессии ИЛ-6, индуцированной наличием у-интерферона.
Анализ ингибирования соединением А мРНК индукции противоспалительного цитокина ИЛ-6 у-нтерфероном проводят в реальном масштабе времени ПЦР-РВ. Кератиноциты высевают в чашки 6 см/0.
При слиянии 80% клетки обрабатывают у-итерфероном (30 нг/мл) в присутствии соединения А при
трех концентрациях (0,01-0,1-0,5 мМ) в течение 6 ч. В конце обработки клетки лизируют в буфере для лизиса, изолируют и подвергают последующей ретротранскрипции РНК. Результаты (как показано на фиг. 9) показывают способность соединения А ингибировать экспрессию цитокина, индуцированную наличием у-интерферона, который, как оказалось, не зависит от дозы.
Пример 6. Ингибирующая способность активации ядерного фактора к-В (NF-KB), индуцированная наличием пероксида водорода Н2О2.
Оценку ингибирования соединением А активации ядерного фактора к-В (NF-KB), индуцированной наличием пероксида водорода Н2О2, делают с помощью анализа в цитофлюориметрии.
Кератиноциты высевают в лунки 12-луночного планшета. При слиянии 80% клетки обрабатывают пероксидом водорода Н2О2 (300 мкМ) в присутствии соединения А при трех концентрациях (0,01-0,1-0,5 мМ) в течение 1 ч. В конце обработки клетки помещают в параформальдегид, пермеабилизируют в метаноле и затем инкубируют в присутствии специфического антитела субъединицы р65. Соединение А показывает ингибирующее влияние на активацию и последующую транслокацию NF-KB в зависимости от дозы (фиг. 10).
Пример 7. Ингибирование экспрессии белка ИЛ-6, индуцированной наличием липополисахарида
(ЛПС).
Анализ ингибирования соединением А индукции белка ИЛ-6 ЛПС (липополисахаридом) делают с комплектом ELISA (иммуноферментный анализ). Кератиноциты высевают в лунки 24-луночного планшета. При слиянии 80% клетки обрабатывают ЛПС (10 мкг/мл) в присутствии соединения А при трех концентрациях (0,01-0,1-0,5 мМ) в течение 24 ч. В конце обработки супернатант декантируют, центрифугируют для удаления любого клеточного детрита и выдерживают при -80°С до времени проведения анализа. Количество ИЛ-6, присутствующего в супернатанте, приводят к норме концентрации белка самого образца. Результаты (фиг. 11) показывают способность соединения А ингибировать в зависимости от дозы экспрессии белка воспалительных цитокинов на стадии изучения.
Пример 8. Человеческие себоциты.
Чтобы оценить возможное токсическое или цитостатическое действие веществ при исследовании, проводят спектрофотометрическое испытание (МТТ). Себоциты высевают в лунки 24-луночного планшета в подходящей среде с добавлением антибиотиков, кальция и ЭФР (эпидермальный фактор роста). При слиянии около 70% на клетки воздействуют соединением А при различных концентрациях (0,1-0,51-2 мм) в течение 24 и 48 ч. В конце обработки делают тест МТТ. Соединение А при всех использованных концентрациях не показало никакого действия на клеточную жизнеспособность (фиг. 12).
Пример 9. Оценка способности соединения к ингибированию себогенеза, индуцированного раздражителями липидного типа (линолевая кислота, тестостерон).
Анализ ингибирования (соединением А) себогенеза, индуцированного обработкой линолевой кислотой (ЛК) и тестостероном (ТСТ), оценивают спектрофлуориметрией с использованием нильского красного в качестве селективного маркера внутриклеточных липидов (анализ нильским красным). Себо-циты высевают в лунки 24-луночного планшета. На следующий день их лишают сыворотки (2%) и после 24 ч их раздражают в течение следующих 24 ч ЛК (10-4 М), ТСТ (20 нМ) в присутствии или в отсутствие А (1 мМ). В конце обработки себоциты окрашивают нильским красным. Количественный анализ делают при помощи спектрофлуориметрии, которая дает возможность провести различие между нейтральными липидами и полярными липидами на основе различных длин волн возбуждения и эмиссии. Полученные данные показывают, что обработка ЛК способна индуцировать синтез липидов и что комбинированная обработка ЛК+ТСТ еще больше увеличивает этот эффект. Наличие соединения А, как оказалось, способно снижать действие липидогенного раздражителя (фиг. 13).
Пример 10. Оценка способности к ингибированию себогенеза, индуцированного раздражителями липидного типа (линолевая кислота, тестостерон): оценка жирных кислот и сквалена.
Для того чтобы оценить более подробно ингибирование себогенеза соединением А, индуцированного ЛК и ТСТ, проводят анализы на липидном экстракте себоцитов с использованием газовой хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ГХ-МС). Себоциты обрабатывают по схеме, описанной для анализа нильским красным. В конце обработки клетки удаляют и затем с помощью органических растворителей проводят экстракцию липидов. Одну часть экстракта используют для анализа на состав жирных кислот, в то время как другую часть используют для определения количества сквалена, липидной характеристики кожного сала. Анализ жирных кислот показал, что действие липидогенного раздражителя, индуцированного обработкой ЛК и ЛК+ТСТ, уменьшается при наличии А (фиг. 14А). Эти результаты подтверждаются анализом сквалена (фиг. 14В).
Пример 11. Оценка способности к ингибированию себогенеза, индуцированного раздражителями липидного типа (линолевая кислота, тестостерон).
Анализ ингибирования соединением А себогенеза, индуцированного обработкой линолевой кислотой (ЛК) и тестостероном (ТСТ), оценивают спектрофлуориметрией с использованием нильского красного в качестве селективного маркера внутриклеточных липидов (анализ нильским красным). Себоциты высевают в лунки 24-луночного планшета. На следующий день их лишают сыворотки (2%) и после 24 ч
их раздражают в течение следующих 24 ч ЛК (10-4 М), ТСТ (20 нМ) в присутствии или в отсутствие соединения А (1 мМ). В конце обработки себоциты окрашивают нильским красным. Количественный анализ делают при помощи спектрофлуориметрии, которая дает возможность провести различие между нейтральными липидами и полярными липидами на основе различных длин волн возбуждения и эмиссии. Полученные данные (фиг. 15) показывают, что обработка ЛК способна индуцировать синтез липидов и что комбинированная обработка ЛК+ТСТ еще больше увеличивает этот эффект. Наличие А, как оказалось, способно снижать действие липидогенного раздражителя. Никаких различий не наблюдается в отношении времени обработки А.
Ссылочные материалы
Все публикации и патенты, упомянутые в настоящем изобретении, в том числе перечисленные ниже, включены тем самым в качестве ссылки во всей их полноте, таким образом, чтобы каждая индивидуальная публикация или патент были специально и индивидуально включены в качестве ссылки. В случае конфликтной ситуации настоящее изобретение, включающее любые определения в настоящем изобретении, будет регулировать это.
Эквиваленты
Поскольку конкретные варианты осуществления заявленного изобретения были обсуждены, вышеупомянутое описание изобретения носит иллюстративный, а не ограничительный характер. Многие изменения изобретения станут очевидными для квалифицированных специалистов в данной области после рассмотрения данного описания изобретения. Полный объем изобретения должен определяться ссылкой на формулу изобретения вместе с их полным спектром эквивалентов, а также описанием изобретения наряду с такими изменениями.
Если не указано иное, все числа, выражающие количества ингредиентов, условия реакции и т.д., используемые в описании и в формуле изобретения, следует понимать как изменяемые во всех случаях термином "приблизительно". Соответственно, если не указано обратное, числовые параметры, изложенные в этом описании изобретения и приложенной формуле изобретения, являются приближениями, которые могут варьироваться в зависимости от требуемых свойств, которые стремится получить настоящее изобретение.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ лечения или ослабления патологического состояния волос у подопытного, нуждающегося в этом, включающий введение подопытному эффективного количества композиции, включающей соединение, представленное формулой I
в которой X представляет собой (СН2)П, где n равно 1;
R1 выбирают из группы, состоящей из С1 -С6-алкила;
R2 представляет собой водород;
R3 представляет собой водород;
R4 представляет собой водород;
R5 представляет собой метил или этил;
или его фармацевтически приемлемые соли или соответствующие N-оксиды и наполнитель.
2. Способ по п.1, в котором патологическое состояние, связанное с волосами, представляет собой депигментацию волос, ограниченный рост волос или короткие волосы, выпадение волос, витилиго или алопецию.
3. Способ по п.2, в котором алопеция выбирается из группы, состоящей из анагенной алопеции, те-логеновой алопеции или очаговой алопеции.
4. Способ стимулирования роста волос, включающий введение подопытному, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, содержащей соединение, представленное формулой I
2.
в которой X представляет собой (СН2)П, где n равно 1;
R1 выбирают из группы, состоящей из С1-С6-алкила;
R2 представляет собой водород;
R3 представляет собой водород;
R4 представляет собой водород;
R5 представляет собой метил или этил;
или его фармацевтически приемлемые соли или соответствующие N-оксиды и наполнитель.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором композиция вводится местно.
6. Способ по любому из пп.1-5, в котором композиция является фармацевтически или косметически приемлемой.
7. Способ по любому из пп.1-6, в котором композиция дополнительно содержит средство, стимулирующее волосы.
8. Способ по любому из пп.1-7, дополнительно включающий введение средства, стимулирующего волосы.
9. Способ по любому из пп.1-8, в котором R1 представляет собой метил.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором соединение представляет собой N-
ацетил-^)-(-)-3 -(4-аминофенил)-2-метоксипропионовую кислоту.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
020856
- 1 -
(19)
020856
- 1 -
(19)
020856
- 4 -
(19)
020856
- 13 -