EA 32650B1 20190628

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000032650b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы (Ia) или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где представляет собой связь; кольцевая группа А независимо выбрана из R ¹ независимо выбран из ОН и C _1-4 алкила; R ² независимо выбран из Н и F; R ³ независимо выбран из Н, C _1-4 алкила, C _1-4 галоалкила, CD ₃ , -(CH ₂ ) _n -OR ⁵ , -(CH ₂ ) _n -C(O)OR ⁵ , С _3-6 циклоалкила, необязательно замещенного галогеном, и от 5- до 6-членного гетероарила, содержащего атомы углерода и 1-2 атома азота и необязательно замещенного R ¹ ; при условии, что только одна R ³ группа присутствует на кольце; R ⁴ независимо выбран из Н, F; R ⁵ независимо выбран из Н и C _1-4 алкила; R ⁶ независимо выбран из F, Cl, Br, CN, C(O)CH ₃ , CHF ₂ , CCH ₃ F ₂ , CF ₃ , OCHF ₂ , и R ⁷ независимо выбран из Н и F; R ⁸ представляет собой Cl; R ⁹ независимо выбран из C _1-4 галоалкила и галогена; R ^9' независимо выбран из Н, Cl и CF ₃ ; и n, в каждом случае, представляет собой целое число, выбранное из 1 и 2, причем термин "галоалкил" относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя, тремя или четырьмя атомами галогена.

2. Соединение по п.1, имеющее формулу (IIa) или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из R ¹ представляет собой C _1-3 алкил; R ² независимо выбран из Н и F; R ³ независимо выбран из Н, C _1-3 алкила, C _1-3 галоалкила, -(CH ₂ ) _n -OR ⁵ , -(CH ₂ ) _n -C(O)OR ⁵ и С _3-4 циклоалкила, необязательно замещенного галогеном; R ⁴ независимо выбран из Н и F; R ⁵ независимо выбран из Н и C _1-4 алкила; R ⁶ независимо выбран из F, Cl, Br, CN, CF ₃ , C(O)CH ₃ , CHF ₂ , CCH ₃ F ₂ , OCHF ₂ , и R ⁷ независимо выбран из Н и F; R ⁸ независимо выбран из Cl; R ⁹ представляет собой CHF ₂ ; R ^9' независимо выбран из Н, Cl и CF ₃ ; и n, в каждом случае, представляет собой целое число, выбранное из 1 и 2, причем термин "галоалкил" относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя, тремя или четырьмя атомами галогена.

3. Соединение по п.2 или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где R ¹ независимо выбран из СН ₃ и СН(СН ₃ ) ₂ ; R ² независимо выбран из Н и F; R ³ независимо выбран из Н, СН ₃ , CD ₃ , СН ₂ СН ₃ , -CHF ₂ , -CH ₂ CHF ₂ , -CH ₂ CF ₃ , -СН ₂ СН ₂ ОН, СН ₂ СН ₂ ОС(СН ₃ ) ₃ , -СН ₂ С(О)ОН, циклопропила, необязательно замещенного F, и циклобутила; R ⁶ независимо выбран из F, Cl, Br, CN, CF ₃ , C(O)CH ₃ , CHF ₂ , CCH ₃ F ₂ , CF ₃ , OCHF ₂ , и R ⁷ независимо выбран из Н и F; R ⁸ представляет собой Cl; R ⁹ представляет собой CHF ₂ ; и R ^9' независимо выбран из Н, Cl и CF ₃ .

4. Соединение по п.1, имеющее формулу (IIIa) или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из R ¹ независимо выбран из СН ₃ и CH(CH ₃ ) ₂ ; R ² независимо выбран из Н и F; R ³ независимо выбран из Н, СН ₂ С(=О)ОН, СН ₂ С(=О)ОСН ₂ СН ₃ и R ⁴ независимо выбран из Н и F; R ⁶ независимо выбран из F, Cl, Br, CN, CF ₃ , C(O)CH ₃ , CHF ₂ , CCH ₃ F ₂ , CF ₃ , OCHF ₂ , и R ⁷ независимо выбран из Н и F; R ⁸ независимо выбран из Cl; R ⁹ представляет собой CHF ₂ ; и R ^9' независимо выбран из Н, Cl и CF ₃ .

5. Соединение по п.1 или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где R ³ независимо выбран из Н, СН ₃ , CD ₃ , СН ₂ СН ₃ , -CHF ₂ , -CH ₂ CHF ₂ , -CH ₂ CF ₃ , -СН ₂ СН ₂ ОН, СН ₂ СН ₂ ОС(СН ₃ ) ₃ , -СН ₂ С(О)ОН, СН ₂ С(=О)ОН, СН ₂ С(=О)ОСН ₂ СН ₃ , циклопропила, необязательно замещенного F, циклобутила и R ⁶ независимо выбран из F, Cl, Br, CN, CF ₃ , С(О)СН ₃ , CHF ₂ , CCH ₃ F ₂ , CF ₃ , OCHF ₂ , и R ⁷ независимо выбран из Н и F; R ⁸ представляет собой Cl; R ⁹ представляет собой CHF ₂ ; и R ^9' независимо выбран из Н, Cl, CHF ₂ .

6. Соединение, имеющее формулу (IV) или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из R ¹ независимо выбран из C _1-3 алкила; R ² независимо выбран из Н; R ³ независимо выбран из СН ₃ и CD ₃ ; R ⁴ независимо выбран из Н; R ⁷ представляет собой Н; R ⁸ независимо выбран из Cl; и R ⁹ независимо выбран из CF ₃ .

7. Соединение, имеющее формулу (V) или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из R ¹ независимо выбран из С _1-3 алкила; R ² независимо выбран из Н и F; R ³ независимо выбран из CD ₃ , CHF ₂ и CH ₃ ; R ⁴ независимо выбран из Н; R ⁶ независимо выбран из Cl, CN, CF ₃ , OCHF ₂ и R ⁷ независимо выбран из Н и F; R ⁸ независимо выбран из Cl; R ^9' независимо выбран из CF ₃ .

8. Соединение, выбранное из группы, состоящей из или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль.

9. Фармацевтическая композиция для лечения тромбоэмболического осложнения, содержащая одно или более соединений по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

10. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его стереоизомера, таутомера или фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения тромбоэмболического осложнения.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

Евразийское 032650 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.06.28
(21) Номер заявки 201691561
(22) Дата подачи заявки 2015.01.30
(51) Int. Cl.
C07D 471/18 (2006.01) C07D 487/08 (2006.01) A61K31/439 (2006.01) A61P 9/10 (2006.01)
(54)
МАКРОЦИКЛИЧЕСКИЕ ИНГИБИТОРЫ ФАКТОРА XIA, КОНДЕНСИРОВАННЫЕ С ГЕТЕРОЦИКЛАМИ
(31) 61/933,948
(32) 2014.01.31
(33) US
(43) 2017.01.30
(86) PCT/US2015/013647
(87) WO 2015/116882 2015.08.06
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
БРИСТОЛ-МАЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(72) Изобретатель:
Дилгер Эндрю К., Корте Джеймс Р., Де Лукка Индавати, Фан Тианан, Ян Ву, Ван Юфэн, Паббисетти Кумар Балашаниуга, Эвинг Уильям Р., Чжу Ехэн, Векслер Рут Р., Пинто Дональд Дж. П., Орват Майкл Дж., Смит II
Леон М. (US)
(74) Представитель:
Угрюмов В.М. (RU)
(56) WO-A1-2013022814 WO-A1-2011100401
JAE EUN CHO ET AL.: "Characterization of Binding Mode for Human Coagulation Factor XI (FXI) Inhibitors", BULLETIN OF THE KOREAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 34, no. 4, 2013, pages 1212-1220, XP055178416, ISSN: 0253-2964, DOI: 10.5012/bkcs.2013.34.4.1212 the whole document
table 1
WO-A1-2014022767
или их стереоизомерам, таутомерам или фармацевтически приемлемым солям, где все переменные определены в настоящем описании. Эти соединения представляют собой селективные ингибиторы фактора XIa или двойные ингибиторы FXIa и калликреина плазмы. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и к применению указанных соединений для изготовления лекарственного средства для лечения тромбоэмболического осложнения.
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно 35 U.S.C. § 119(e) по предварительной заявке на патент США № 61/933948, поданной 31 января 2014 года, содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством отсылки.
Область техники
Настоящее изобретение, в общем, относится к новым макроциклическим соединениям и их аналогам, которые являются ингибиторами фактора XIa или двойными ингибиторами фактора XIa и каллик-реина плазмы, композициям, содержащим их, и способам их применения, например для лечения или профилактики тромбоэмболических осложнений или для лечения сосудистой проницаемости сетчатки, связанной с диабетической ретинопатией и диабетическим макулярным отеком.
Уровень техники
Тромбоэмболические осложнения остаются основной причиной смерти в развитых странах, несмотря на наличие антикоагулянтов, таких как варфарин (COUMADIN(r)), гепарин, низкомолекулярные гепарины (LMWH) и синтетические пентасахариды, и антитромбоцитарных средств, таких как аспирин и клопидогрел (PLAVIX(r)). Пероральный антикоагулянт варфарин ингибирует посттрансляционное созревание факторов свертывания VII, IX, X и протромбина и доказал свою эффективность как при венозном, так и при артериальном тромбозе. Однако его использование ограничено из-за его узкого терапевтического диапазона, замедленного появления терапевтического эффекта, многочисленных пищевых и лекарственных взаимодействий и необходимости в наблюдении и коррекции дозы. Таким образом, разработка и совершенствование безопасных и эффективных пероральных антикоагулянтов для профилактики и лечения широкого спектра тромбоэмболических осложнений приобретают все большее значение. Один из подходов к решению заключается в ингибировании образования тромбина путем воздействия на ин-гибирование фактора свертывания крови XIa (FXIa). Фактор XIa представляет собой сериновую протеазу плазмы, принимающую участие в регуляции свертывания крови, которое инициируется in vivo путем связывания тканевого фактора (TF) с фактором VII (FVII) с образованием фактора VIIa (FVIIa). Полученный в результате комплекс TF:FVIIa активирует фактор IX (FIX) и фактор X (FX), что приводит к образованию фактора Ха (FXa). Образовавшийся фактор FXa катализирует преобразование протромбина в небольшие количества тромбина до того, как этот метаболический путь закрывается ингибитором пути тканевого фактора (TFPI). Далее процесс свертывания крови распространяется путем активации по типу обратной связи факторов V, VIII и XI каталитическими количествами тромбина (Gailani D. et al., Arterio-scler. Thromb. Vase. Biol., 27:2507-2513 (2007)). Полученный в результате бурст-очаг тромбина превращает фибриноген в фибрин, который полимеризуется, образуя структурную основу тромба, и активирует тромбоциты, которые являются ключевым клеточным компонентом свертывания (Hoffman M., Blood Reviews, 17:S1-S5 (2003)). Следовательно, фактор XIa играет ключевую роль в распространении этого петлевого усиления и, таким образом, является привлекательной целью для антитромботической терапии.
Альтернативный способ инициирования коагуляции действует, когда кровь подвергается воздействию искусственных поверхностей. Этот процесс также называют контактной активацией. Поверхностная абсорбция фактора XII приводит к конформационному изменению в молекуле фактора XII, способствуя тем самым активации протеолитически активных молекул фактора XII (фактор XIIa и фактор XIIf). Фактор XIIa (или XIIf) имеет ряд белков-мишеней, включая прекалликреин плазмы и фактор XI.
Прекалликреин плазмы является зимогеном трипсиноподобной сериновой протеазы и присутствует в плазме в концентрации от 35 до 50 мкг/мл. Структура гена схожа со структурой фактора XI. В целом, аминокислотная последовательность калликреина плазмы имеет 58% гомологии с фактором XI. Каллик-реин плазмы, как полагают, играет роль в ряде воспалительных заболеваний. Основным ингибитором калликреина плазмы является ингибитор эстеразы серпин С1. Пациенты, которые имеют генетическую недостаточность ингибитора эстеразы С1, страдают от наследственного ангионевротического отека (НАЕ), что приводит к периодическому отеку лица, рук, шеи, желудочно-кишечного тракта и половых органов. Волдыри, образующиеся при острой форме заболевания, содержат высокие уровни калликреина плазмы, который расщепляет кининоген с большой молекулярной массой с выделением брадикинина, что приводит к увеличению проницаемости сосудов. Лечение с помощью ингибитора калликреина плазмы, белка с большой молекулярной массой, как было показано, является эффективным для лечения НАЕ, предотвращая высвобождение брадикинина, который вызывает повышенную проницаемость сосудов (Lehmann, "Ecallantide (DX-88), a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditary angioedema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery", Expert Opin. Biol. Ther., 8:1187-1199 (2008)). Система калликреин плазмы - кинин присутствует в избытке у пациентов с распространенным диабетическим отеком макулы. Недавно было опубликовано, что калликреин плазмы способствует развитию дисфункции сосудов сетчатки у крыс с диабетом (Clermont A. et al., "Plasma kallikrein mediates retinal vascular dysfunction and induces retinal thickening in diabetic rats", Diabetes, 60:1590-1598 (2011)). Кроме того, введение ингибитора ASP-440 калликреина плазмы устраняет как проницаемость сетчатки, так и нарушения кровотока в сосудах сетчатки у крыс с диабетом. Таким образом, ингибитор калликреина плазмы
должен применяться для лечения для уменьшения проницаемости сосудов сетчатки, связанной с диабетической ретинопатией и диабетическим отеком макулы. Другие осложнения диабета, такие как кровоизлияние в мозг, нефропатия, кардиомиопатия и нейропатия, все из которых связаны с калликреином плазмы, можно также рассматривать в качестве мишеней для ингибитора калликреина плазмы.
На сегодняшний день ни одна молекула синтетического ингибитора калликреина плазмы с низкой молекулярной массой не была одобрена для применения в медицинских целях. Ингибиторы калликреина плазмы с высокой молекулярной массой представляют опасность возникновения анафилактических реакций, как уже сообщалось Ecallantide. Таким образом, остается потребность в соединениях, ингиби-рующих калликреин плазмы, которые не вызывают анафилаксии и могут применяться перорально. Кроме того, молекулы известного уровня техники имеют высоко полярную и способную к ионизации гуани-диновую или амидиновую группировку. Хорошо известно, что такие группировки могут служить ограничением в отношении проницаемости кишечника и, следовательно, пероральной доступности.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к новым макроциклическим соединениям, их аналогам, включая их стереоизомеры, таутомеры, фармацевтически приемлемые соли, которые являются полезными в качестве селективных ингибиторов фактора XIa или двойных ингибиторов фактора XIa и калликреина плазмы.
Настоящее изобретение также относится к способам и промежуточным соединениям для получения соединений по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере одно из соединений по настоящему изобретению или их стереоизомеров, таутомеров, фармацевтически приемлемых солей.
Соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения и/или профилактики тромбоэмболических осложнений.
Соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения сосудистой проницаемости сетчатки, связанной с диабетической ретинопатией и диабетическим макулярным отеком.
Соединения по настоящему изобретению могут применяться в терапии.
Соединения по настоящему изобретению могут применяться для производства лекарственного средства для лечения и/или профилактики тромбоэмболического осложнения.
Соединения по настоящему изобретению могут применяться как однокомпонентные, в комбинации с другими соединениями по настоящему изобретению или в комбинации с одним или более, предпочтительно от одного до двух, другим веществом(ами).
Эти и другие отличительные признаки изобретения будут изложены в развернутом виде далее в описании изобретения.
Подробное описание изобретения
или его стереоизомеру, таутомеру, фармацевтически приемлемой соли, где
- представляет собой связь;
кольцевая группа А независимо выбрана из
W 4rY
R1 независимо выбран из ОН и C1-4 алкила; R2 независимо выбран из Н и F;
R3 независимо выбран из Н, С1-4алкила, С1-4галоалкила, CD3, -(CH2)n-OR5, -(CH2)n-C(O)OR5, С3-6 циклоалкила, необязательно замещенного галогеном, и от 5- до 6-членного гетероарила, содержащего атомы углерода и 1-2 атома азота и необязательно замещенного R1; при условии, что только одна R3 группа присутствует на кольце;
R4 независимо выбран из Н, F;
R5 независимо выбран из Н и С1-4 алкила;
R6 независимо выбран из F, CI, Br, CN,C(0)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2, ^ и ^ : R7 независимо выбран из Н и F; R8 представляет собой Cl;
R9 независимо выбран из С1-4 галоалкила и галогена; R9 независимо выбран из Н, Cl и CF3; и
n, в каждом случае, представляет собой целое число, выбранное из 1 и 2,
причем термин "галоалкил" относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя, тремя или четырьмя атомами галогена.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к соединению, выбранному из любого подмножества соединений, приведенных в качестве примера в настоящей заявке.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению, выбранному из
или его стереоизомерам, таутомерам, фармацевтически приемлемым солям. II. Другие варианты осуществления настоящего изобретения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей по меньшей мере одно из соединений по настоящему изобретению или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемую соль.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере одно из соединений по настоящему изобретению или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемую соль.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного из соединений по настоящему изобретению или его стереоизомера, таутомера,
фармацевтически приемлемой соли . В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения по настоящему изобретению.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к применению соединения по настоящему изобретению или его стереоизомера, таутомера, фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения и/или профилактики тромбоэмболического осложнения.
Тромбоэмболическое осложнение включает артериальные сердечно-сосудистые тромбоэмболиче-ские осложнения, венозные сердечно-сосудистые тромбоэмболические осложнения, артериальные це-реброваскулярные тромбоэмболические осложнения и венозные цереброваскулярные тромбоэмболиче-ские осложнения. Примеры тромбоэмболического осложнения включают, но не ограничиваются ими, нестабильную стенокардию, острый коронарный синдром, мерцательную аритмию, первичный инфаркт миокарда, повторный рецидив инфаркта миокарда, ишемическую внезапную смерть, транзиторную ишемическую атаку, инсульт, атеросклероз, окклюзионную болезнь периферических артерий, венозный тромбоз, тромбоз глубоких вен, тромбофлебит, артериальную эмболию, коронарный артериальный тромбоз, церебральный артериальный тромбоз, церебральную эмболию, почечную эмболию, эмболию легочной артерии и тромбоз, возникающий вследствие применения медицинских имплантатов, устройств или процедур, при которых кровь подвергается воздействию со стороны искусственных поверхностей, что вызывает тромбоз.
Заболевание или состояние, с которым связана активность калликреина плазмы, включает, но не ограничивается ими, снижение остроты зрения, диабетическую ретинопатию, диабетический макуляр-ный отек, наследственный ангионевротический отек, диабет, панкреатит, нефропатию, кардиомиопатию, невропатию, воспалительное заболевание кишечника, артрит, воспаление, септический шок, гипотонию, рак, острый респираторный дистресс-синдром взрослых, диссеминированное внутрисосудистое свертывание и операцию в условиях искусственного кровообращения.
Настоящее изобретение может быть воплощено в других конкретных формах, не отступая от его сущности или его существенных признаков. Это изобретение охватывает все комбинации предпочтительных аспектов изобретения, отмеченных в данном документе. Следует понимать, что любые и все варианты осуществления настоящего изобретения могут быть взяты в сочетании с любым другим вариантом или вариантами осуществления для описания дополнительных вариантов осуществления. Также следует понимать, что каждый отдельный элемент в вариантах осуществления является своим собственным независимым вариантом осуществления. Более того, любой элемент в варианте осуществления предназначен для объединения с любыми и всеми другими элементами из любого варианта осуществления для описания дополнительного варианта осуществления.
III. Химия.
Во всем объеме данного описания и прилагаемой формулы изобретения данная химическая формула или наименование будут охватывать все их стерео- и оптические изомеры и рацематы, где такие изомеры существуют. Если не указано иное, все хиральные (энантиомерные и диастереомерные) и рацемические формы включены в объем настоящего изобретения. Многие геометрические изомеры по С=С двойным связям, C=N двойным связям, кольцевым системам и тому подобное могут также присутствовать в этих соединениях, и все такие стабильные изомеры рассматриваются в настоящем изобретении. Цис- и транс- (или Е- и Z-) геометрические изомеры соединений по настоящему изобретению описаны и могут быть выделены в виде смеси изомеров или в виде разделенных изомерных форм. Соединения по настоящему изобретению могут быть выделены в оптически активной или рацемической форме. Оптически активные формы могут быть получены разделением рацемических форм или путем синтеза из оптически активных исходных материалов. Все способы, используемые для получения соединений по настоящему изобретению, и промежуточные соединения, полученные в нем, считаются частью настоящего изобретения. При получении энантиомерных или диастереомерных продуктов они могут быть разделены с помощью обычных методик, например путем хроматографии или фракционной кристаллизации. В зависимости от условий способа конечные продукты по настоящему изобретению получают либо в свободной (нейтральной) форме, либо в форме соли. Как свободная форма, так и соли этих конечных продуктов включены в объем настоящего изобретения. При желании, одна форма соединения может быть преобразована в другую форму. Свободное основание или кислота могут быть превращены в соль; соль может быть превращена в свободное соединение или другую соль, смесь изомерных соединений по настоящему изобретению может быть разделена на индивидуальные изомеры. Соединения по настоящему изобретению, свободная форма и их соли могут существовать в нескольких таутомерных формах, в которых атомы водорода перемещаются в другие части молекул, и, вследствие этого, перегруппировываются химические связи между атомами молекул. Следует понимать, что все таутомерные формы, если они могут существовать, включены в объем настоящего изобретения.
Термин "стереоизомер" относится к изомерам идентичного состава, которые отличаются расположением их атомов в пространстве. Энантиомеры и диастереомеры являются примерами стереоизомеров. Термин "энантиомер" относится к одной паре молекул, которые являются неналагающимся зеркальным отображением друг друга. Термин "диастереомер" относится к стереоизомерам, которые не являются
зеркальным отображением. Термин "рацемат" или "рацемическая смесь" относится к композиции, состоящей из эквимолярных количеств двух энантиомерных соединений, где эта композиция лишена оптической активности.
Символы "R" и "S" представляют собой конфигурацию заместителей вокруг хирального углеродного атома(ов). Изомерные обозначения "R" и "S" используют, как здесь описано, для указания конфигура-ции(ий) атома относительно основной молекулы и предназначены для использования как описано в литературе (Рекомендации IUPAC 1996, Pure and Applied Chemistry, 68:2193-2222 (1996)).
Термин "хиральный" относится к такой структурной характеристике молекулы, которая делает невозможным наложение ее на ее зеркальное отображение. Термин "гомохиральный" относится к уровню энантиомерной чистоты. Термин "оптическая активность" относится к степени, в которой гомохиральная молекула или нерацемическая смесь хиральных молекул вращает плоскость поляризованного света.
В контексте данного документа термин "алкил" или "алкилен" предназначен для включения насыщенных алифатических углеводородных групп как с разветвленной, так и с нормальной цепью, имеющих определенное количество атомов углерода. Например, "C1 до С10 алкил" или "С1-10 алкил" (или алки-лен) предназначен для включения C1, С2, С3, С4, С5, С6, C7, С8, С9 и С10 алкильных групп. В дополнение, например, "C1 до С6 алкил" или "Q-Q алкил" обозначает алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. Алкильная группа может быть незамещенной или замещенной, по меньшей мере, при этом один атом водорода заменяется другой химической группой. Пример алкильных групп включает, но не ограничивается ими, метил (Me), этил (Et), пропил (например, н-пропил и изопропил), бутил (например, н-бутил, изобутил, трет-бутил) и пентил (например, н-пентил, изопентил, неопентил). Когда используется термин "С0 алкил" или "С0 алкилен", он предназначается для обозначения прямой связи. "Алкил" также включает дейтероалкил, такой как CD3.
Термин "алкенил" или "алкенилен" предназначен для включения углеводородных цепей либо нормальной, либо разветвленной конфигурации, имеющих одну или более, предпочтительно от одной до трех углерод-углеродных двойных связей, которые могут встречаться в любой стабильной точке на протяжении цепи. Например, термин "от С2 до С6 алкенил" или "С2-6 алкенил" (или алкенилен) предназначен для включения С2, С3, С4, С5 и С6 алкенильных групп; таких как этенил, пропенил, бутенил, пентенил и гексенил. Термин "алкинил" или "алкинилен" предназначен для включения углеводородных цепей либо нормальной, либо разветвленной конфигурации, имеющих одну или более, предпочтительно от одной до трех углерод-углеродных тройных связей, которые могут встречаться в любой стабильной точке на протяжении цепи. Например, термин "С2 до С6 алкинил" или "С2-6 алкинил" (или алкинилен) предназначен для включения С2, С3, С4, С5 и С6 алкинильных групп, таких как этинил, пропинил, бутинил, пентинил и гексинил. Термин "алкокси" или "алкилокси" относится к -О-алкильной группе. "C1 до С6 алкокси" или "C1-6 алкокси" (или алкилокси) предназначен для включения C1, С2, С3, С4, C5 и С6 алкоксигрупп. Пример алкоксигрупп включает, но не ограничивается ими, метокси, этокси, пропокси (например, н-пропокси и изопропокси) и трет-бутокси. Термин "алкокси" также включает дейтероалкокси, такой как OCD3. Подобным образом, термин "алкилтио" или "тиоалкокси" означает алкильную группу, как определено выше, с указанным числом атомов углерода, соединенных через серный мостик; например метил-S- и этил-
S-.
"Гало" или "галоген" включает фтор, хлор, бром и иод. "Галоалкил" предназначен для включения насыщенных алифатических углеводородных групп либо с нормальной, либо с разветвленной цепью, имеющих определенной число атомов углерода, замещенных 1 или более галогенами. Примеры галоал-кила включают, но не ограничиваются ими, фторметил, дифторметил, трифторметил, трихлорметил, пентафторэтил, пентахлорэтил, 2,2,2-трифторэтил, гептафторпропил и гептахлорпропил. Примеры гало-алкила также включают "фторалкил", который предназначен для включения насыщенных алифатических углеводородных групп либо с нормальной, либо с разветвленной цепью, имеющих определенное число атомов углерода, замещенных 1 или более атомами фтора.
Термин "карбонил", используемый здесь, относится к -С(О)-.
Термин "циано", используемый здесь, относится к -CN.
Термин "циклоалкиламино", используемый здесь, относится к -NHR, где R представляет собой цик-лоалкильную группу.
Термин "галоалкил", используемый здесь, относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя, тремя или четырьмя атомами галогена. Термин "карбонил" относится к С(=О). Термин "карбокси" относится к С(=О)ОН.
Термин "галоалкилкарбонил", используемый здесь, относится к галоалкильной группе, присоединенной к исходному молекулярному фрагменту через карбонильную группу. Термин "гидрокси" или "гидроксил" относится к ОН.
Термин "циклоалкил" относится к циклическим алкильным группам, включающим моно-, би- или полициклические кольцевые системы. "С3 до С7 циклоалкил" или "С3-7 циклоалкил" предназначен для включения С3, С4, C5, С6 и С7 циклоалкильных групп.
Пример циклоалкильных групп включает, но не ограничивается ими, циклопропил, циклобутил,
циклопентил, циклогексил и норборнил. Разветвленные циклоалкильные группы, такие как 1-метилциклопропил и 2-метилциклопропил, включены в определение "циклоалкил".
Используемый здесь термин "карбоцикл" или "карбоциклический остаток" означает любое стабильное 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-членное моноциклическое или бициклическое или 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-или 13-членное бициклическое или трициклическое кольцо, каждое из которых может быть насыщенным, частично ненасыщенным, ненасыщенным или ароматическим. Примеры таких карбоциклов включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклобутенил, циклопентил, циклопенте-нил, циклогексил, циклогептенил, циклогептил, циклогептенил, адамантил, циклооктил, циклооктенил, циклооктадиенил, [3.3.0]бициклооктан, [4.3.0]бициклононан, [4.4.0]бициклодекан (декалин), [2.2.2]бициклооктан, фторенил, фенил, нафтил, инданил, адамантил, антраценил и тетрагидронафтил (тетралин). Как показано выше, кольца с мостиковой связью также включены в определение карбоцикла (например, [2.2.2]бициклооктан).
Предпочтительными карбоциклами, если не указано иное, являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, фенил и инданил. Когда используется термин "карбоцикл", он предназначен для включения термина "арил". Кольцо с мостиковой связью возникает, когда один или более атомов углерода связаны двумя несмежными атомами углерода. Предпочтительные варианты мостиковой связи представляют собой один или два атома углерода. Следует отметить, что мостик всегда преобразует моноциклическое кольцо в трициклическое кольцо. Когда кольцо имеет мостиковую связь, перечисленные заместители для кольца также могут присутствовать в мостиковой связи.
Использованный здесь термин "бициклический карбоцикл" или "бициклическая карбоциклическая группа" означает стабильную 9- или 10-членную карбоциклическую кольцевую систему, которая содержит два конденсированных кольца и состоит из атомов углерода. Из этих двух конденсированных колец одно кольцо представляет собой бензольное кольцо, конденсированное со вторым кольцом; и второе кольцо представляет собой 5- или 6-членное углеродное кольцо, которое является насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным. Бициклическая карбоциклическая группа может присоединяться к его боковой группе через любой атом углерода, что в результате приводит к стабильной структуре. Би-циклическая карбоциклическая группа, описанная в данном документе, может быть замещена любым атомом углерода, если полученное в результате соединение является стабильным. Примеры бицикличе-ской карбоциклической группы представляют собой, но не ограничиваются ими, нафтил, 1,2-дигидронафтил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил и инданил.
"Арил" группы относятся к моноциклическим или полициклическим ароматическим углеводородам, включающим, например, фенил, нафтил и фенантранил. Арильные фрагменты хорошо известны и описаны, например, в Lewis R.J., ed., Hawley's Condensed Chemical Dictionary, 13th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York (1997). "С6 до С10 арил" или "С6-10 арил" относится к фенилу и нафтилу. Если не указано иное, "арил", "С6 до С10 арил", или "С6-10 арил", или "ароматический остаток" может быть незамещен или замещен от 1 до 5 группами, предпочтительно от 1 до 3 группами ОН, ОСН3, Cl, F, Br, I, CN, NO2, NH2, N(CH3)H, N(CH3)2, CF3, OCF3, C(=O)CH3, SCH3, S(=O)CH3, S(=O)2CH3, CH3, CH2CH3, CO2H и CO2CH3.
Термин "бензил", используемый здесь, относится к метильной группе, в которой один из атомов водорода замещен фенильной группой, где указанная фенильная группа необязательно может быть замещена от 1 до 5 группами, предпочтительно от 1 до 3 групп ОН, ОСН3, Cl, F, Br, I, CN, NO2, NH2, N(CH3)H, N(CH3)2, CF3, OCF3, C(=O)CH3, SCH3, S(=O)CH3, S(=O)2CH3, CH3, CH2CH3, CO2H и CO2CH3.
Используемый здесь термин "гетероцикл" или "гетероциклическое кольцо" означает стабильное 3-, 4-, 5-, 6- или 7-членное моноциклическое или бициклическое или 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13- или 14-членное полициклическое гетероциклическое кольцо, которое является насыщенным, частично ненасыщенным или полностью ненасыщенным и которое содержит атомы углерода и 1, 2, 3 или 4 гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, О и S; и включающее любую полициклическую группу, в которой любые определенные выше гетероциклические кольца являются конденсированными с бензольным кольцом. Гетероатомы азот и сера необязательно могут быть окислены (то есть N-Ю и S(O)p, где р имеет значения 0, 1 или 2). Атом азота может быть замещен или незамещен (то есть N или NR, где R представляет собой Н или другой заместитель, если они определены). Гетероциклическое кольцо может быть присоединено к его боковой группе при любом гетероатоме или атоме углерода, что в результате приводит к стабильной структуре. Гетероциклические кольца, описанные здесь, могут быть замещены атомом углерода или азота, если полученное в результате соединение является стабильным. Азот в гетероцикле необязательно может быть кватернизован. Предпочтительно, что когда общее количество атомов S и О в гетероцикле превышает 1, тогда эти гетероатомы не являются смежными по отношению друг к другу. Предпочтительно, чтобы общее количество атомов S и О в гетероцикле не превышало 1. Когда используется термин "гетероцикл", он предназначен для включения гетероарила. Примеры гетероциклов включают, но не ограничиваются ими, акридинил, азетидинил, азоцинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензт-риазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, 4aH-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, циннолинил, декагидрохинолинил, 2H,6H-1,5,2
дитиазинил, дигидрофуро[2,3-Ъ]тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, имидазолопиридинил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изатиноил, изобензофуранил, изохромапил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохи-нолинил, изотиазолил, изотиазолопиридинил, изоксазолил, изоксазолопиридинил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, оксазолопиридинил, оксазолидинилперимидинил, оксиндолил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатиинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидонил, 4-пиперидонил, пиперонил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пи-разолопиридинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазолил, пиридоимидазолил, пиридотиазолил, пи-ридинил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2-пирролидонил, 2H-пирролил, пирролил, хиназо-линил, хинолинил, 4H-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетразолил, тетрагидрофуранил, тет-рагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиазолопиридинил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил, триазинил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,5-триазолил, 1,3,4-триазолил и ксантенил. Также включенными являются конденсированные кольцевые и спиросоединения, содержащие, например, вышеуказанные гетероциклы.
Примеры 5-10-членных гетероциклов включают, но не ограничиваются ими, пиридинил, фуранил, тиенил, пирролил, пиразолил, пиразинил, пиперазинил, пиперидинил, имидазолил, имидазолидинил, ин-долил, тетразолил, изоксазолил, морфолинил, оксазолил, оксадиазолил, оксазолидинил, тетрагидрофура-нил, тиадиазинил, тиадиазолил, тиазолил, триазинил, триазолил, бензимидазолил, 1H-индазолил, бензо-фуранил, бензотиофуранил, бензтетразолил, бензотриазолил, бензизоксазолил, бензоксазолил, оксиндо-лил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензизотиазолил, изатиноил, изохинолинил, октагидроизохиноли-нил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, изоксазолопиридинил, хиназолинил, хинолинил, изотиазолопиридинил, тиазолопиридинил, оксазолопиридинил, имидазолопиридинил и пиразолопири-динил. Примеры 5-6-членных гетероциклов включают, но не ограничиваются ими, пиридинил, фуранил, тиенил, пирролил, пиразолил, пиразинил, пиперазинил, пиперидинил, имидазолил, имидазолидинил, ин-долил, тетразолил, изоксазолил, морфолинил, оксазолил, оксадиазолил, оксазолидинил, тетрагидрофура-нил, тиадиазинил, тиадиазолил, тиазолил, триазинил и триазолил. Также включенными являются конденсированные кольцевые и спиросоединения, содержащие, например, вышеуказанные гетероциклы. Используемый здесь термин "бициклический гетероцикл" или "бициклическая гетероциклическая группа" обозначает стабильную 9- или 10-членную гетероциклическую кольцевую систему, которая содержит два конденсированных кольца и состоит из атомов углерода и 1, 2, 3 или 4 гетероатомов, независимо выбранных из группы, состоящей из N, О и S. Из двух конденсированных колец одно кольцо представляет собой 5- или 6-членное моноциклическое ароматическое кольцо, содержащее 5-членное гетероариль-ное кольцо, 6-членное гетероарильное кольцо или бензокольцо, каждое из которых конденсировано со вторым кольцом. Второе кольцо представляет собой 5-или 6-членное моноциклическое кольцо, которое является насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным и содержит 5-членный гетероцикл, 6-членный гетероцикл или карбоцикл (при условии, что первое кольцо не является бензольным, когда второе кольцо представляет собой карбоцикл).
Бициклическая гетероциклическая группа может быть присоединена к боковой группе с помощью любого гетероатома или атома углерода, что в результате приводит к стабильной структуре. Описанная здесь бициклическая гетероциклическая группа может быть замещена на атоме углерода или азота, если полученное в результате соединение является стабильным. Предпочтительно, что когда общее количество атомов S и О в гетероцикле превышает 1, тогда эти гетероатомы не являются смежными по отношению друг к другу. Предпочтительно, чтобы общее количество атомов S и О в гетероцикле не было более
Примеры бициклической гетероциклической группы представляют собой, но не ограничиваются ими, хинолинил, изохинолинил, фталазинил, хиназолинил, индолил, изоиндолил, индолинил, 1H-индазолил, бензимидазолил, 1,2,3,4-тетрагидрохинолинил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолинил, 5,6,7,8-тетрагидрохинолинил, 2,3-дигидробензофуранил, хроманил, 1,2,3,4-тетрагидрохиноксалинил и 1,2,3,4-тетрагидрохиназолинил. Используемый здесь термин "ароматическая гетероциклическая группа" или "гетероарил" означает стабильные моноциклические и полициклические ароматические углеводороды, которые включают по меньшей мере один гетероатомный кольцевой член, такой как сера, кислород или азот. Гетероарильные группы включают, без ограничения, пиридил, пиримидинил, пиразинил, пиридази-нил, триазинил, фурил, хинолил, изохинолил, тиенил, имидазолил, тиазолил, индолил, пирроил, оксазо-лил, бензофурил, бензотиенил, бензтиазолил, изоксазолил, пиразолил, триазолил, тетразолил, индазолил, 1,2,4-тиадиазолил, изотиазолил, пуринил, карбазолил, бензимидазолил, индолинил, бензодиоксоланил и бензодиоксан. Гетероарильные группы являются замещенными или незамещенными. Атом азота является замещенным или незамещенным (то есть N или NR, где R представляет собой Н или другой заместитель, если это определено). Гетероатомы азот и сера могут необязательно быть окислены (то есть N- O и S(O)p, где р имеет значения 0, 1 или 2).
Мостиковые кольца также являются включенными в определение гетероцикла. Мостиковое кольцо образуется, когда один или более атомов (то есть С, О, N или S) связывают два несмежных атома углерода или азота. Примеры мостиковых колец включают, но не ограничиваются ими, один атом углерода, два атома углерода, один атом азота, два атома азота и группу углерод-азот. Следует отметить, что мостико-вая связь всегда преобразует моноциклическое кольцо в трициклическое кольцо. Когда кольцо соединяется мостиковой связью, заместители, перечисленные для кольца, также могут присутствовать в мости-ковой связи.
Термин "противоион" используется для отображения отрицательно заряженных веществ, таких как хлорид, бромид, гидроксид, ацетат и сульфат.
Когда указанное кольцо используется в кольцевой структуре, это означает, что эта кольцевая структура может быть насыщенной, частично насыщенной или ненасыщенной. Упомянутый здесь термин "замещенный" означает, что по меньшей мере один атом водорода заменен неводородной группой, при условии, что сохраняется нормальная валентность, и что это замещение в результате приводит к стабильному соединению. Когда заместитель представляет собой кето (то есть =O), тогда на атоме замещаются 2 водорода. Кетозаместители не присутствуют в ароматическом фрагменте. Когда указано, что кольцевая система (например, карбоциклическая или гетероциклическая) является замещенной карбонильной группой или двойной связью, предполагается, что эта карбонильная группа или двойная связь является частью (то есть в пределах) этого кольца. Кольцевые двойные связи в контексте данного документа представляют собой двойные связи, которые образуются между двумя соседними атомами кольцевой группы (например, С=С, C=N или N=N).
В случаях, где присутствуют атомы азота (например, амины) в соединениях по настоящему изобретению, они могут быть превращены в N-оксиды обработкой окисляющим веществом (например, mCPBA и/или пероксидами водорода) для получения других соединений по настоящему изобретению. Таким образом, рассматриваются указанные и заявленные атомы азота, охватывающие как указанный азот, так и его производное N-оксид (N-O).
Когда любая переменная встречается более одного раза в любой составляющей или формуле соединения, ее определение в каждом случае не зависит от ее определения в каждом другом случае. Таким образом, например, если группа, как показано, замещена 0-3 R группами, то указанная группа может быть необязательно замещена до трех R группами, и в каждом случае R независимо выбран из определения для R. Кроме того, комбинации заместителей и/или переменных допустимы, только если такие комбинации приводят к стабильным соединениям.
Когда связь с заместителем показана пересекающей связь, соединяющую два атома в кольце, то такой заместитель может быть связан с любым атомом в кольце. Когда заместитель перечислен без указания атома, к которому такой заместитель присоединен в остальной части соединения данной формулы, то такой заместитель может быть связан через любой атом в таком заместителе. Комбинации заместителей и/или переменных допустимы, только если такие комбинации приводят к стабильным соединениям. Фраза "фармацевтически приемлемый" используется в настоящем документе для обозначения таких соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые в рамках обоснованного медицинского заключения приемлемы для использования в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции и/или других проблем или осложнений, соизмеримых с разумным соотношением польза/риск.
Как используется в настоящем документе, термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к производным раскрытых соединений, где исходное соединение модифицируют путем получения его кислых или основных солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются ими, минеральные или органические кислые соли основных групп, таких как амины; и щелочные или органические соли кислотных групп, таких как карбоновые кислоты. Фармацевтически приемлемые соли включают обычно применяемые нетоксичные соли или четвертичные аммонийные соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных или органических кислот. Например, такие обычно применяемые нетоксичные соли включают соли, получаемые из неорганических кислот, таких как соляная, бромистоводородная, серная, сульфаминовая, фосфорная и азотная; и соли, получаемые из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памоевая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфо-новая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая и изэтионовая.
Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную группу, с помощью общепринятых химических методик. Как правило, такие соли могут быть получены путем реакции свободных кислотных или основных форм этих соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания, или кислоты в воде или органическом растворителе, или их смеси; обычно предпочтительной является неводная среда, такая как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Перечни подходящих солей находятся в Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Company, Easton, PA (1990), раскрытие которых включено в данное описание посредством ссылки.
В дополнение, соединения формулы (I) могут иметь формы пролекарства. Любое соединение, которое будет преобразовано in vivo с получением биологически активного соединения (то есть соединение формулы (I)), представляет собой пролекарство в пределах объема и сущности изобретения. Различные формы пролекарств хорошо известны в данной области. Примеры таких производных пролекарств смотри:
a) Bundgaard H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), и Widder K. et al., eds., Methods in Enzymol-ogy, 112:309-396, Academic Press (1985);
b) Bundgaard H., Chapter 5, "Design and Application of Prodrugs," A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991);
c) Bundgaard H., Adv. DrugDeliv. Rev., 8:1-38 (1992);
d) Bundgaard H. et al., J. Pharm. Sci., 77:285 (1988) и
e) Kakeya N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984).
Соединения, содержащие карбоксигруппу, могут образовывать физиологически гидролизуемые сложные эфиры, которые используются в качестве пролекарств, будучи гидролизуемыми в организме с образованием соединений формулы I в чистом виде. Такие пролекарства предпочтительно вводятся пе-рорально, так как гидролиз во многих случаях происходит преимущественно под воздействием пищеварительных ферментов. Парентеральное введение может быть использовано, когда сложный эфир сам по себе активен или в тех случаях, когда гидролиз происходит в крови. Примеры физиологически гидроли-зуемых сложных эфиров соединений формулы I включают C1-6 алкил, C1-6 алкилбензил, 4-метоксибензил, инданил, фталил, метоксиметил, C1-6 алканоилокси-C1-6 алкил (например, ацетоксиметил, пивалоилокси-метил или пропионилоксиметил), C1-6алкоксикарбонилокси-C1-6алкил (например, метоксикарбонил-оксиметил или этоксикарбонилоксиметил, глицилоксиметил, фенилглицилоксиметил, (5-метил-2-оксо-1,3-диоксолен-4-ил)метил и другие хорошо известные физиологически гидролизуемые сложные эфиры, применяемые, например, в областях, связанных с пенициллином и цефалоспорином. Такие сложные эфиры могут быть получены с помощью общепринятых методик, известных в данной области.
Получение пролекарств хорошо известно в данной области и описано, например, в King F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK (1994); Testa B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzymology, VCHA and Wiley-VCH, Zurich, Switzerland (2003); Wermuth C.G., ed., The Practice of Medicinal Chemistry, Academic Press, San Diego, CA (1999).
Настоящее изобретение предназначено для включения всех изотопов атомов, встречающихся в соединениях по изобретению. Изотопы включают такие атомы, которые имеют одинаковый атомный номер, но различные массовые числа. В качестве общего примера и без ограничений изотопы водорода включают дейтерий и тритий. Дейтерий имеет один протон и один нейтрон в ядре, и его масса в два раза больше массы обычного водорода. Дейтерий может быть представлен символами, такими как "2Н" или "D". Термин "дейтерированный" в данном описании сам по себе или использованный для модификации соединения или группы относится к замещению одного или более атома(ов) водорода, который прикреплен к атому(атомам) углерода, атомом дейтерия. Изотопы углерода включают 13С и 14С.
Соединения по изобретению, меченные изотопами, обычно могут быть получены общепринятыми способами, известными специалистам в данной области, или способами, аналогичными описанным в данном документе, с использованием соответствующего меченного изотопами реагента вместо немеченого реагента, используемого в противном случае. Такие соединения имеют множество потенциальных областей применения, например, в виде стандартов и реагентов в определении способности потенциального фармацевтического соединения связываться с белками-мишенями или рецепторами, или для исследования способности соединений по изобретению связываться с биологическими рецепторами in vivo или in vitro.
Термины "стабильное соединение" и "стабильная структура" предназначены для указания соединения, которое достаточно устойчиво, чтобы выдержать очистку до приемлемой степени чистоты из реакционной смеси и технологию приготовления в эффективное терапевтическое вещество. Предпочтительно, чтобы соединения по настоящему изобретению не содержали N-гало, S(O)2H или S(O)H группу.
Используемые здесь сокращения определяются следующим образом: "1х" однократно, "2х" дважды, "3х" трижды, "°С" для градусов Цельсия, "eq" для эквивалента или эквивалентов, "g" для грамма или граммов, "mg" для миллиграмма или миллиграммов, "L" для литра или литров, "mL" для миллилитра или миллилитров, "|j.L" для микролитра или микролитров, "N" для нормальности, "М" для молярности, "ммоль" для миллимоля или миллимолей, "min" для минуты или минут, "h" для часа или часов, "rt" для комнатной температуры, "RT" для времени удерживания, "RBF" для круглодонной колбы, "atm" для атмосферы, "psi" для фунтов на квадратный дюйм, "conc." для концентрации, "RCM" для метатезиса с закрытием цикла, "sat" или "sat'd" для насыщенности, "SFC" для сверхкритической жидкостной хроматографии, "MW" для молекулярной массы, "mp" для точки плавления, "ее" для энантиомерного избытка, "MS" или "Mass Spec" для масс-спектрометрии, "ESI" для масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением, "HR" для высокого разрешения, "HRMC" для масс-спектрометрии с высоким разрешением,
"LC/MS" для жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией, "HPLC" для жидкостной хроматографии высокого давления, "RP HPLC" для обращенно-фазовой ВЭЖХ, "TLC" или "tic" для тонкослойной хроматографии, "ЯМР" для ядерной магнитно-резонансной спектроскопии, "nOe" для спектроскопии ядерного эффекта Оверхаузера, "1Н" для протона, "8" для дельты, "s" для синглета, "d" для дублета, "t" для триплета, "q" для квартета, "m" для мультиплета, "br" для уширенного, "Гц" для герц и "а", "в", "R", "S", "Е" и "Z" представляют собой стереохимические обозначения, хорошо известные специалисту в данной области техники.
;-Pr
i-Bu
1-Bu
Вое или BOC ВосгО
AcOH или HOAc
AlCb
AffiN
ВВгз
aqueous
BCb
BEMP
реагент BOP
реагент Бургесса Cbz
DCM или CH2CI2 CH3CN или ACN CDCb CHCb
mCPBA или m-CPBA
CS2CO3
Cu(OAc)2
Cy2NMe
Cul
CuS04
DBU
DCE
DEA
Десс-Мартин
DIC или DIPCDI
DIE A, DIPEA или
основание Хунига
DM АР
DME
DMF
DMSO
cDNA
Dppp
DuPhos
EDC
метил
этил
пропил
изопропил
бутил
изобутил
трет-бутш
фенил
бензил
ш/> ев/-бутилоксикарбонил ди-трет-бутш дикарбонат уксусная кислота хлорид алюминия азобисизобутиронитрил трибромид бора водный
трихлорид бора
2-т/?еш-бутилимино-2-диэтиламино-1,3-диметилпергидро-
1,3,2-диазафосфорин
гексафторфосфата бензотриазол-1-
илокситрис(диметиламино)фосфоний
1-метокси-^триэтиламмониосульфонил-метанимидат
карбобе изилоке и
дихлорметан
ацетонитрил
дейтеро-хлороформ
хлороформ
л/еп/а-хлорпербензойная кислота карбонат цезия ацетат меди (II)
М-циклогексил-К-метилциклогексанамин
иодид меди (I)
сульфат меди (II)
1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ен
1,2-дихлорэтан
диэтиламин
1,1,1 -три(ацетокси)-1,1 -дигидро-1 ;2-бензиодоксол-3-( 1 Н)-он
диизопропилкарбодиимид
диизопропилэтиламин
4-диметиламинопиридин 1,2-диметоксиэтан диметилформамид диметилсульфоксид добавочный DNA
(R)-(+)-1,2-бис(дифенилфосфино)пропан
(+)-1,2-бис((28,58)-2,5-диэтилфосфолано)бензол
Лг-(3-диметиламинопропил)-/^'-этилкарбодиимид
ЛЦЗ-диметиламинопропил)-ЛГ-этилкарбодиимид гидрохлорид
этилендиаминтетрауксусная кислота
(+)-1,2-бис((28,58)-2,5-диэтилфосфолано)бензол(1,5-
циклооктадиен)родия (I) трифторметансульфонат
триэтиламин
этилацетат
диэтиловый эфир
этанол
фильтр из микроволокнистого стекла
(1,3-бис(2,4,6-триметилфенил)-2-имидазолидинилиден)дихлор
(фенилметилен)(трициклогексилфосфин)рутений
соляная кислота
0-(7-азабензотриазол-1-ил)-Л'',Л/,К',Ы'-тетраметилуроний гексафторфосфат
4-(2-гидроксиэтил)пипераксин-1-этансульфоновая кислота гексан
1 -гидроксибензотриазол пероксид водорода серная кислота 2-иодоксибензойная кислота
хлорид ИНДИЯ (III) СгОз в водной H2SO4, 2 М карбонат калия двухосновный фосфат калия ацетат калия фосфат калия алюмогидрид ЛИТИЯ замещаемая группа гидроксид лития метанол сульфат магния метансульфоновая кислота хлорид натрия
гидрид натрия
гидрокарбонат натрия
карбонат натрия
гидроксид натрия
сульфит натрия
сульфат натрия
N-бромсукцинимид
N-хлорсукцинимид
аммиак
хлорид аммония гидроксид аммония формиат аммония N-метилморфолин
трифлат или трифторметансульфонат трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0) ацетат палладия (II) палладий на угле
[1,1 -бис(дифенилфосфино)-ферроцен]дихлорпалладий (II)
трифенилфосфин дихлорид
защитная группа
оксихлорид фосфора
изопропанол
полистирол
комнатная температура
2-(триметилсилил)этоксиметил хлорид
оксид кремния
хлорид олова (II)
тетра-н-бутиламмония иодид
те tfipci-5 ут илнитрит
трифторуксусная кислота
тетрагидрофуран
три метилсилилдиазо метан
пропан-фосфоновой кислоты ангидрид
TRIS трис(гидроксимегил)аминомеган pTsOH р-толуолсульфокислота
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены несколькими способами, известными специалистам в области органического синтеза, которые описаны более подробно в разделе VI. IV. Биология.
Помимо того, что свертывание крови имеет существенное значение для регулирования гемостаза организма, оно также вовлекается во многие патологические состояния. При тромбообразовании может сформироваться сгусток крови или тромб, который локально препятствует циркуляции, вызывая местное малокровие и повреждение органа. С другой стороны, в процессе, известном как закупорка сосуда, сгусток может переместиться и затем попасть в периферический сосуд, где он снова вызывает местное малокровие и повреждение органа. Болезни, возникающие в результате патологического образования тромба, в совокупности относятся к тромбоэмболическим осложнениям и включают острый коронарный синдром, нестабильную стенокардию, инфаркт миокарда, тромбоз в полости сердца, ишемический инсульт, тромбоз глубоких вен, окклюзионную болезнь периферических артерий, транзиторную ишемическую атаку и тромбоэмболию легочной артерии. Кроме того, тромбоз происходит на искусственных поверхностях, находящихся в контакте с кровью, включая катетеры, стенты, искусственные клапаны сердца, а также гемодиализные мембраны.
Риску развития тромбоза способствуют некоторые патологические состояния. Например, изменения стенки сосуда, изменения кровотока и изменения в составе сосудистого пространства. Эти факторы риска в совокупности известны как триада Вирхова (Colman R.W. et al., eds., Hemostasis and Thrombosis, Basic Principles and Clinical Practice, Fifth Edition, p. 853, Lippincott Williams & Wilkins (2006)).
Пациентам с риском развития тромбоэмболических осложнений часто назначают антитромботиче-ские средства из-за присутствия одного или нескольких провоцирующих факторов риска из триады Вир-хова, чтобы предотвратить образование окклюзионного тромба (первичная профилактика). Например, в случае ортопедической хирургии (например, при эндопротезировании бедренного и коленного суставов) антитромботическое средство часто вводят перед хирургическим вмешательством. Антитромботическое средство уравновешивает протромботический стимул, вызванный изменениями скорости кровотока в сосудах (застоем), потенциальной хирургической травмой стенки сосуда, а также изменениями в составе крови из-за острофазного ответа, связанного с операцией. Другим примером использования антитромбо-тического средства для первичной профилактики является прием аспирина, ингибитора активации тромбоцитов, пациентами с риском развития тромботического сердечно-сосудистого заболевания. Широко известные факторы риска в этой области включают возраст, мужской пол, гипертонию, сахарный диабет, нарушение липидного обмена и ожирение. Антитромботические средства также показаны для вторичной профилактики после первоначального тромботического эпизода. Например, пациенты с мутациями фактора V (известного также как фактор V Leiden) и дополнительными факторами риска (например, беременность) принимают противосвертывающие средства, чтобы предотвратить повторное появление венозного тромбоза. Другой пример включает вторичную профилактику сердечно-сосудистых осложнений у пациентов с историей острого инфаркта миокарда или острого коронарного синдрома. В клинических условиях может быть использована комбинация аспирина и клопидогрела (или других тиенопиридинов) для предотвращения повторного тромботического осложнения.
Антитромботические средства также показаны для лечения болезненного состояния (то есть остановки его развития) после того, как болезнь уже началась. Например, пациентов, страдающих тромбозом глубоких вен, лечат антикоагулянтами (например, гепарином, варфарином или LMWH (низкомолекулярным гепарином)), чтобы предотвратить дальнейшее развитие венозного окклюзионного заболевания. В динамике эти агенты также вызывают регрессию болезненного состояния из-за того, что баланс между протромботическими факторами и антикоагулянтыми/профибринолитическими путями изменяется в пользу последних. Примеры, касающиеся артериальной сосудистой системы, включают лечение больных с острым инфарктом миокарда или острым коронарным синдромом с применением аспирина и клопи-догрела, предотвращающих дальнейшее развитие закупорки сосудов и в конечном итоге ведущих к регрессии тромботических окклюзий.
Таким образом, антитромботические средства широко используются для первичного и вторичного предупреждения (то есть профилактики или снижения риска) тромбоэмболических осложнений, а также для лечения уже существующего тромботического процесса. Лекарственные средства, ингибирующие коагуляцию крови, или антикоагулянты, являются "основными средствами для профилактики и лечения тромбоэмболических осложнений" (Hirsh J. et al., Blood, 105:453-463 (2005)).
Альтернативный путь инициации свертывания крови может иметь место, когда кровь находится в контакте с искусственными поверхностями (например, во время гемодиализа, при операциях на сердце или сосудах с использованием искусственного кровообращения, при контакте с сосудистыми трансплантатами, при бактериальном сепсисе), с поверхностями клеток, клеточными рецепторами, продуктами клеточного распада, ДНК, РНК и экстрацеллюлярными матриксами. Этот процесс также называется контактной активацией. Поверхностная абсорбция фактора XII приводит к конформационному изменению
молекулы фактора XII, тем самым к облегчению активации молекул до протеолитически активных молекул фактора XII (фактора XIIa и фактора XIIf). Фактор XIIa (или XIIf) имеет ряд белков-мишеней, включая прекалликреин плазмы и фактор XI. Активный калликреин плазмы дополнительно активирует фактор XII, что приводит к увеличению контактной активации. Альтернативно, пролилкарбоксилпептидаза сериновой протеазы может активировать калликреин плазмы, связанный с высокомолекулярным кини-ногеном в мультибелковом комплексе, образованном на поверхности клеток и матриксов (Shariat-Madar et al., Blood, 108:192-199 (2006)). Контактная активация представляет собой опосредованный поверхностью процесс, частично ответственный за регулирование тромбоза и воспаление, и опосредуется, по меньшей мере, частично фибринолитическим, комплементарным, кининоген/кининовым и другими гуморальными и клеточными путями (для рассмотрения, Coleman R. "Contact Activation Pathway", Hemosta-sis and Thrombosis, pp. 103-122, Lippincott Williams & Wilkins (2001); Schmaier A.H. "Contact Activation", Thrombosis and Hemorrhage, pp. 105-128 (1998)). Биологическая значимость системы контактной активации тромбоэмболических осложнений подтверждается фенотипом мышей, дефицитных по фактору XII. Более конкретно, мышей, дефицитных по фактору XII, защищали от тромботической окклюзии сосудов в нескольких моделях тромбоза, а также в моделях инсульта, при этом фенотип мышей, дефицитных по фактору XII, был идентиченым с фенотипом мышей, дефицитных по фактору XI (Renne et al., J. Exp. Med., 202:271-281 (2005); Kleinschmitz et al., J. Exp. Med, 203:513-518 (2006)). To обстоятельство, что фактор XI находится ниже на пути от фактора ХПа в сочетании с идентичным фенотипом XII- и XI-дефицитных мышей, наводит на мысль, что система контактной активации может играть значимую роль в активации фактора XI in vivo. Фактор XI является зимогеном трипсиноподобной сериновой протеазы и присутствует в плазме в относительно низкой концентрации. Протеолитическая активация на внутренней связи R369-I370 продуцирует тяжелую цепь (369 аминокислот) и легкую цепь (238 аминокислот). Последняя содержит типовую трипсиноподобную каталитическую триаду (Н413, D464 и S557). Активация фактора XI тромбином, как полагают, происходит на отрицательно заряженных поверхностях, наиболее вероятно, на поверхности активированных тромбоцитов. Тромбоциты содержат специфические сайты высокой аффинности (0,8 нм) (130-500/тромбоцит) к активированному фактору XI. После активации фактор XIa сохраняет поверхностную связь и распознает фактор IX как свой обычный макромолекуляр-ный субстрат (Galiani D., Trends Cardiovasc. Med., 10:198-204 (2000)).
В дополнение к механизмам активации по петле обратной связи, описанным выше, тромбин активирует ингибитор фибринолиза, активированный тромбином (TAFI), то есть карбоксипептидазу плазмы, которая отщепляет С-концевые лизиновый и аргининовый остатки на фибрине, снижая способность фибрина усиливать активацию плазминогена, зависимую от активации плазминогена тканевого типа (tPA). В присутствии антител к FXIa лизис кровяного сгустка может происходить более быстро независимо от концентрации TAFI в плазме (Bouma B.N. et al., Thromb. Res., 101:329-354 (2001)). Таким образом, ингибиторы фактора XIa, как ожидается, являются антикоагулянтными и профибринолитическими.
Дополнительные доказательства антитромбоэмболических эффектов нацеливания на фактор XI происходят из данных исследования мышей, дефицитных по фактору XI. Было показано, что полный дефицит фактора XI защищал мышей от тромбоза сонной артерии, индуцированного хлоридом железа (FeCl3) (Rosen et al., Thromb. Haemost., 87:774-777 (2002); Wang et al., J. Thromb. Haemost, 3:695-702 (2005)). Кроме того, дефицит фактора XI спасает перинатальный летальный фенотип полной недостаточности белка С (Chan et al., Amer. J. Pathology, 158:469-479 (2001)). Кроме того, перекрестная реактивность бабуинов, функция, блокирующая антитела к человеческому фактору XI, защищают от тромбоза артериально-венозного шунта бабуина (Gruber et al., Blood, 102:953-955 (2003)). Доказательство анти-тромботического эффекта низкомолекулярных ингибиторов фактора XIa также представлено в опубликованной патентной заявке США № 2004/0180855 А1. Взятые вместе, эти исследования позволяют предположить, что нацеливание на фактор XI снизит предрасположенность к тромботическим и тромбоэмбо-лическим осложнениям. Генетические данные показывают, что фактор XI не требуется для нормального гомеостаза, который допускает профиль большей безопасности механизма фактора XI по сравнению с конкурентными антитромботическими механизмами. В противоположность гемофилии А (дефициту фактора VIII) или гемофилии В (дефициту фактора IX) мутации гена фактора XI, вызывающего дефицит фактора XI (гемофилия С), приводят только к легкому до умеренного геморрагическому диатезу, который характеризуется прежде всего послеоперационным или посттравматическим, но редко спонтанным кровотечением. Послеоперационное кровотечение происходит, главным образом, в ткани с высокими концентрациями эндогенной фибринолитической активности (например, в ротовой полости и мочеполовой системе). Преобладающая часть этих фактов была идентифицирована случайно, по предоперационному увеличению времени аРТТ (активированное частичное тромбопластиновое время) (внутренней системы) без какой-либо предшествующей истории кровотечения.
Повышенная безопасность метода антикоагуляционной терапии, в основе которой лежит ингибиро-вание фактора XIa, подтверждается также тем фактом, что "нокаутные" мыши с невыявляемым XI-факторным белком имели вполне нормальное развитие и обычную длительность жизни. При этом не было выявлено никаких свидетельств спонтанного кровотечения. Время аРТТ (внутренняя система) увеличивалось зависимым от генной дозы образом. Интересно, что даже после сильного стимулирования сис
темы свертывания крови (рассечение хвоста) длительность кровотечения не была намного большей, чем у диких и гетерозиготных мышат из одного помета (Gailani D., Frontiers in Bioscience, 6:201-207 (2001); Gailani D. et al., Blood Coagulation and Fibrinolysis, 8:134-144 (1997)). Эти наблюдения, взятые вместе, позволяют предположить, что высокие уровни ингибирования фактора XIa должны легко переноситься пациентами. Это находится в противоречии с нацеленными на гены экспериментами с другими факторами коагуляции, за исключением фактора XII.
Активация in vivo фактора XI может быть определена путем образования комплексов либо с ингибитором С1, либо с альфа-1 антитрипсином. В исследовании с участием 50 пациентов с острым инфарктом миокарда (AMI) около 25% пациентов имели значения выше верхнего нормального диапазона комплексного твердофазного имуноферментного анализа ELISA. Это исследование можно рассматривать как доказательство того, что, по меньшей мере, в субпопуляции пациентов с AMI активация фактора XI вносит вклад в образование тромбина (Minnema М.С. et al., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 20:2489-2493 (2000)). Другое исследование устанавливает положительную корреляцию между степенью коронарного атеросклероза и фактором Х1а в комплексе с альфа-1 антитрипсином (Murakami Т. et al., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 15:1107-1113 (1995)). Еще в одном исследовании уровни фактора XI выше 90-го процентиля у пациентов были связаны с 2,2-кратным увеличением риска возникновения венозного тромбоза (Meijers J.C.M. et al., N. Engl. J. Med, 342:696-701 (2000)).
Также является предпочтительным найти новые соединения, обладающие повышенной активностью в исследованиях тромбообразования in vitro в сравнении с известными ингибиторами серин-протеазы, таких как анализ активированного частичного тромбопластинового времени (аРТТ) или про-тромбинового времени (РТ) (для описания анализов аРТТ и РТ смотри Goodnight S.H. et al. "Screening Tests of Hemostasis", Disorders of Thrombosis and Hemostasis: A Clinical Guide, 2nd Edition, pp. 41-51, McGraw-Hill, New York (2001)).
Также желательным и предпочтительным является найти соединения с предпочтительными и улучшенными характеристиками по сравнению с известными ингибиторами сериновой протеазы в одной или нескольких следующих категориях, которые приведены в качестве примеров и не предназначены для ограничения, таких как (а) фармакокинетические свойства, включая биологическую доступность при пероральном введении препарата, период полувыведения и коэффициент очищения; (b) фармацевтические свойства; (с) требования по дозировке; (d) факторы, снижающие колебания между максимальными и минимальными концентрациями препарата в крови в равновесном состоянии; (е) факторы, увеличивающие концентрацию активного препарата в ферменте; (f) факторы, уменьшающие ответственность за клинические взаимодействия лекарственных средств; (g) факторы, снижающие потенциал неблагоприятных побочных эффектов, включая селективность в сопоставлении с другими биологическими целями и (h) факторы, снижающие производственные затраты или повышающие возможность практической реализации.
Доклинические исследования продемонстрировали значительные антитромботические эффекты ингибиторов низкомолекулярного фактора XIa на модели артериального тромбоза у кролика и крысы в дозах, которые сохраняли гемостаз (Wong P.C et al., Journal of Thrombosis and Thrombolysis, 32(2): 129-137 (Aug. 2011); Schumacher W.A. et al., Eur. J. Pharmacol, 167-174 (2007)). Дополнительно было замечено, что продление аРТТ специфическими ингибиторами XIa in vitro является хорошим прогностическим фактором эффективности в наших моделях тромбоза. Таким образом, аРТТ тест in vitro может быть использован как косвенный показатель эффективности in vivo. Доклинические и клинические исследования с использованием FXI-антисмыслового олигонуклеотида (ASO) показали его эффективность в различных моделях венозного и артериального тромбоза, сравнимую с варфарином или эноксапарином без усиления кровотечения (Bueller et al., DOI: 10.1056/NEJMoal405760 (2014)).
Используемый здесь термин "пациент" охватывает все виды млекопитающих. Используемый здесь термин "лечение" или "терапия" охватывает лечение болезненного состояния у млекопитающего, прежде всего у человека, и включает (а) ингибирование болезненного состояния, то есть остановку его развития; и/или (b) облегчение болезненного состояния, то есть регрессию болезненного состояния.
Используемый здесь термин "профилактика" или "предупреждение" охватывает профилактическое лечение субклинического болезненного состояния у млекопитающего, особенно у человека, направленное на снижение вероятности возникновения клинического болезненного состояния. Пациенты выбираются для превентивной терапии на основе факторов, которые, как известно, увеличивают риск клинического проявления болезни в сравнении с общим населением. "Профилактическую" терапию можно разделить на (а) первичную профилактику и (b) вторичную профилактику. Первичная профилактика определяется как лечение субъекта, у которого еще не проявилось состояние клинического заболевания, в то время как вторичная профилактика определяется как предупреждение вторичного проявления того же самого или подобного состояния клинического заболевания.
Используемое здесь выражение "снижение риска" охватывает терапию, которая снижает частоту развития состояния клинического заболевания. Как таковые, первичная и вторичная профилактические терапии являются примером снижения риска. Выражение "терапевтически эффективное количество" предназначено для включения количества соединения по настоящему изобретению, которое является
эффективным при введении одного соединения или в комбинации для ингибирования фактора XIa и/или калликреина плазмы и/или для предупреждения или лечения расстройств, перечисленных в данном документе. При применении к комбинации этот термин относится к объединенным количествам активных ингредиентов, которые приводят к профилактическому или терапевтическому эффекту, независимо от того, вводятся они в комбинации, последовательно или одновременно.
Термин "тромбоз", используемый здесь, относится к формированию или присутствию тромба (множественных тромбов); тромбообразованию в кровеносном сосуде, которое может вызвать ишемию или инфаркт тканей, питаемых кровеносными сосудами. Термин "эмболия", используемый здесь, относится к внезапной блокировке артерии тромбом или инородным материалом, который был принесен к месту его закрепления током крови.
Термин "тромбоэмболия", используемый здесь, относится к нарушению проходимости кровеносного сосуда тромботическим материалом, принесенным током крови с места его образования, который закупоривает другой сосуд. Термин "тромбоэмболические осложнения" содержит в себе как "тромботиче-ские", так и "эмболические" осложнения (указанные выше).
Термин "тромбоэмболические осложнения", используемый здесь, включает артериальные сердечнососудистые тромбоэмболические осложнения, венозные сердечно-сосудистые или церебрально-васкулярные тромбоэмболические осложнения и тромбоэмболические осложнения в камерах сердца или в периферической части системы кровообращения. Термин "тромбоэмболические осложнения", используемый здесь, также включает в себя конкретные заболевания, выбранные безограничительно из нестабильной стенокардии или других острых коронарных синдромов, фибрилляции предсердий, первичного или повторного рецидива инфаркта миокарда, ишемической внезапной смерти, транзиторной ишемиче-ской атаки, инсульта, атеросклероза, окклюзионной болезни периферических артерий, венозного тромбоза, тромбоза глубоких вен, тромбофлебита, артериальной эмболии, коронарного артериального тромбоза, церебрального артериального тромбоза, церебральной эмболии, почечной эмболии, легочной эмболии и тромбоза, обусловленного медицинскими имплантатами, устройствами или процедурами, где кровь подвергается воздействию искусственных поверхностей, которые способствует тромбообразованию. Медицинские имплантаты или устройства включают, но не ограничиваются ими, искусственные клапаны, постоянные катетеры, стенты, оксигенаторы крови, шунты, устройства сосудистого доступа, желудочковый аппарат вспомогательного кровообращения и искусственные сердца или камеры сердца и сосудистые трансплантаты. Процедуры включают, но не ограничиваются ими, искусственное кровообращение, чре-скожное коронарное вмешательство и гемодиализ. В другом варианте осуществления термин "тромбоэм-болические осложнения" включает в себя острый коронарный синдром, инсульт, тромбоз глубоких вен и легочную эмболию.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения тромбоэм-болических осложнений, где тромбоэмболическое осложнение выбрано из нестабильной стенокардии, острого коронарного синдрома, фибрилляции предсердий, инфаркта миокарда, транзиторной ишемиче-ской атаки, инсульта, атеросклероза, окклюзионной болезни периферических артерий, венозного тромбоза, тромбоза глубоких вен, тромбофлебита, артериальной эмболии, коронарного артериального тромбоза, церебрального артериального тромбоза, церебральной эмболии, почечной эмболии, легочной эмболии и тромбоза, обусловленного медицинскими имплантатами, устройствами или процедурами, в которых кровь подвергается воздействию искусственной поверхности, способствующей тромбозу. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения тромбоэмболического осложнения, где тромбоэмболическое осложнение выбрано из острого коронарного синдрома, инсульта, тромбоза, фибрилляции предсердий и тромбоза, обусловленного медицинскими имплантатами и устройствами.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу первичной профилактики тромбоэмболического осложнения, где тромбоэмболическое осложнение выбрано из нестабильной стенокардии, острого коронарного синдрома, фибрилляции предсердий, инфаркта миокарда, ишеми-ческой внезапной смерти, транзиторной ишемической атаки, инсульта, атеросклероза, окклюзионной болезни периферических артерий, венозного тромбоза, тромбоза глубоких вен, тромбофлебита, артериальной эмболии, коронарного артериального тромбоза, церебрального артериального тромбоза, церебральной эмболии, почечной эмболии, легочной эмболии и тромбоза, обусловленного установкой медицинских имплантатов, устройств или процедур, в ходе которых кровь контактирует с искусственной поверхностью, что способствует тромбообразованию. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу первичной профилактики тромбоэмболического осложнения, где тромбо-эмболическое осложнение выбрано из острого коронарного синдрома, инсульта, венозного тромбоза и тромбоза, обусловленного медицинскими имплантатами и устройствами.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу вторичной профилактики тромбоэмболического осложнения, где тромбоэмболическое осложнение выбрано из нестабильной стенокардии, острого коронарного синдрома, фибрилляции предсердий, повторного рецидива инфаркта миокарда, транзиторной ишемической атаки, инсульта, атеросклероза, окклюзионной болезни периферических артерий, венозного тромбоза, тромбоза глубоких вен, тромбофлебита, артериальной
эмболии, коронарного артериального тромбоза, церебрального артериального тромбоза, церебральной эмболии, почечной эмболия, легочной эмболии и тромбоза, обусловленного медицинскими имплантата-ми, устройствами или процедурами, в которых кровь подвергается воздействию искусственной поверхности, которая способствует тромбообразованию. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу вторичной профилактики тромбоэмболического осложнения, где тромбоэм-болическое осложнение выбрано из острого коронарного синдрома, инсульта, фибрилляции предсердий и венозного тромбоза.
Термин "инсульт", используемый здесь, относится к эмболическому инсульту или к атеротромбо-тическому инсульту, возникающему в результате окклюзионного тромбоза общей сонной артерии, внутренней сонной артерии или внутрицеребральных артерий. Следует отметить, что тромбоз включает закупорку сосудов (например, после шунтирования) и реокклюзию (например, во время или после чре-скожной транслюминальной коронарной ангиопластики). Тромбоэмболические осложнения могут возникнуть в результате условий, включая, но не ограничиваясь ими, атеросклероз, хирургию или хирургические осложнения, продолжительную иммобилизацию, артериальную фибрилляцию, врожденную тромбофилию, рак, диабет, влияние лекарственных средств или гормональных препаратов и осложнения беременности. Тромбоэмболические осложнения часто встречаются у пациентов, страдающих атеросклерозом. Факторы риска развития атеросклероза включают, но не ограничиваются ими, мужской пол, возраст, артериальную гипертонию, нарушения липидного обмена и сахарный диабет. Факторы риска развития атеросклероза являются в то же самое время факторами риска осложнений атеросклероза, то есть тромбоэмболических осложнений. Подобно этому артериальная фибрилляция часто ассоциируется с тромбоэмболическими осложнениями. Факторы риска развития артериальной фибрилляции и последующих тромбоэмболических осложнений включают сердечно-сосудистые заболевания, ревматическую болезнь сердца, неревматическую аномалию митрального клапана, гипертоническое сердечнососудистое заболевание, хроническое заболевание легких и множество других нарушений сердечной деятельности, а также тиреотоксикоз. Сахарный диабет часто связан с атеросклерозом и тромбоэмболи-ческими осложнениями. Факторы риска развития диабета наиболее распространенного 2 типа включают, но не ограничиваются ими, семейный анамнез, ожирение, отсутствие физической активности, расу/этническую принадлежность, нарушенную гликемию натощак или тест на толерантность к глюкозе в прошлом, историю гестационного сахарного диабета или родоразрешение "большой ребенок", гипертен-зию, низкий уровень холестерина ЛПВП и синдром поликистоза яичников.
Факторы риска врожденной тромбофилии включают увеличение функциональных мутаций в факторах свертывания крови или потерю функциональных мутаций в антикоагулянтых или фибринолитиче-ских путях метаболизма.
Тромбоз тесно связан с различными типами опухолей, например с раком поджелудочной железы, раком молочной железы, опухолью мозга, раком легких, раком яичников, раком предстательной железы, злокачественными новообразованиями в желудочно-кишечном тракте и ходжкинскими или неходжкин-скими лимфомами. Последние исследования показывают, что частота рака у пациентов, страдающих тромбозом, отражает частоту конкретного вида рака среди населения в целом (Levitan N. et al., Medicine (Baltimore), 78(5):285-291 (1999); Levine M. et al., N. Engl. J Med, 334(11):677-681 (1996); Blom J.W. et al., JAMA, 293(6):715-722 (2005)). Вследствие этого наиболее распространенными видами рака, связанными с тромбозом у мужчин, являются рак простаты, рак прямой и толстой кишки, рак головного мозга и рак легких, а у женщин это рак молочной железы, рак яичника и рак легких. Наблюдаемая скорость развития венозной тромбоэмболии (VTE) у пациентов, больных раком, является значительной. Различные темпы развития VTE при различных типах опухолей, наиболее вероятно, связаны с выбором контингента больных. Раковые больные с риском развития тромбоза могут обладать любым или всеми из следующих факторов риска: (i) стадия рака (например, наличие метастазов), (ii) наличие центральных венозных катетеров, (iii) хирургия и противораковая терапия, включая химиотерапию, и (iv) гормональные и антиангио-генные лекарственные средства. Таким образом, общей клинической практикой является назначение пациентам, имеющим опухоли на поздней стадии, гепарина или низкомолекулярного гепарина для предупреждения тромбоэмболических осложнений. Ряд препаратов низкомолекулярного гепарина был одобрен FDA для этих показаний.
Существуют три основные клинические ситуации, когда рассматривается возможность профилактики VTE при медицинском обследовании пациента со злокачественным образованием: (i) пациент прикован к постели в течение длительного периода времени; (ii) амбулаторный пациент проходит курс химиотерапии или облучения, и (iii) пациент постоянно живет с центральными венозными катетерами. Не-фракционированный гепарин (UFH) и низкомолекулярный гепарин (LMWH) являются эффективными антитромботическими средствами для больных раком, перенесших операцию (Mismetti P. et al., British Journal of Surgery, 88:913-930 (2001)).
А. Исследования in vitro.
Эффективность соединений по настоящему изобретению в качестве ингибиторов факторов свертывания крови XIa, VIIa, IXa, Xa, XIIa, калликреина плазмы или тромбина может быть определена с использованием соответствующей очищенной сериновой протеазы и подходящего синтетического субстра
та. Скорость гидролиза хромогенного или флюорогенного субстрата соответствующей сериновой про-теазы измеряли как в отсутствие, так и в присутствии соединений по настоящему изобретению. Гидролиз субстрата приводил к выделению pNA (паранитроанилина), который контролировали методом спектро-фотометрии, измеряя возрастание поглощения при 405 нм, или к выделению АМС (амино-метилкумарина), который контролировали методом спектрофлюорометрии, измеряя увеличение эмиссии при 460 нм с возбуждением при 380 нм. Уменьшение скорости поглощения или изменения флуоресценции в присутствии ингибитора служит признаком ингибирования действия ферментов. Такие способы известны специалистам в данной области. Результаты этого анализа выражали в виде константы ингиби-рования Ki.
Определения фактора XIa выполняли в 50 мМ растворе буфера HEPES при рН 7.4, содержащем 145 мМ NaCl, 5 мМ KCl и 0.1% PEG 8000 (полиэтиленгликоль; JT Baker или Fisher Scientific). Определения проводили с использованием очищенного фактора XIa человека при конечной концентрации 25-200 пМ (Haematologic Technologies) и синтетического субстрата S-2366 (пиро Glu-Pro-Arg-pNA; Chromogenix или AnaSpec) при концентрации 0.0002-0.001 М.
Определения фактора VIIa выполняли в 0.005 М растворе хлорида кальция, 0.15 М хлорида натрия, 0.05 М буфера HEPES, содержащем 0.1% PEG 8000, при рН 7.5. Определения проводили с использованием очищенного человеческого фактора VIIa (Haematologic Technologies) или рекомбинантного человеческого фактора VIIa (Novo Nordisk) при конечной концентрации испытания 0.5-10 нМ, рекомбинантного растворимого тканевого фактора при концентрации 10-40 нМ и синтетического субстрата H-D-Ile-Pro-Arg-pNA (S-2288; Chromogenix или ВМРМ-2; AnaSpec) при концентрации 0.001-0.0075 М.
Определения фактора IXa выполняли в 0.005 М растворе хлорида кальция, 0.1 М хлорида натрия, 0,0000001 М рефлюдана (Berlex), 0.05 М TRIS основания и 0.5% PEG 8000 при рН 7.4. Рефлюдан добавляли для ингибирования небольших количеств тромбина в коммерческих препаратах человеческого фактора IXa. Определения выполняли с использованием очищенного человеческого фактора IXa (Haema-tologic Technologies) при конечной концентрации испытания 20-100 нМ и синтетического субстрата PCIXA2100-B (CenterChem) или Pefafluor IXa 3688 (H-D-Leu-Ph'Gly-Arg-AMC; CenterChem) при концентрации 0.0004-0.0005 М.
Определения фактора Ха выполняли в 0.1 М растворе натрий-фосфатного буфера при рН 7.5, содержащем 0.2 М хлорида натрия и 0.5% PEG 8000. Определения выполняли с использованием очищенного человеческого фактора Ха (Haematologic Technologies) при конечной концентрации анализа 1501000 пМ и синтетического субстрата S-2222 (Bz-Ile-Glu (gamma-OMe, 50%)-Gly-Arg-pNA; Chromogenix) при концентрации 0.0002-0.00035 М. Определения фактора XIIa выполняли в 0.05 М растворе буфера HEPES при рН 7.4, содержащем 0.145 М NaCl, 0.05 М KC1 и 0.1% PEG 8000. Определения выполняли с использованием очищенного человеческого фактора XIIa при конечной концентрации 4 нМ (American Diagnostica) и синтетического субстрата SPECTROZYME(r) #312 (H-D-CHT-Gly-L-Arg-pNA.2AcOH; American Diagnostica) при концентрации 0.00015 М. Определения калликреина плазмы выполняли в 0.1 М растворе натрий-фосфатного буфера при рН 7.5, содержащем 0.1-0.2 М хлорида натрия и 0.5% PEG 8000. Определения выполняли с использованием очищенного человеческого калликреина (Enzyme Research Laboratories) при конечной концентрации анализа 200 пМ и синтетического субстрата S-2302 (H-(D)-Pro-Phe-Arg-pNA; Chromogenix) при концентрации 0.00008-0.0004 М. Определения тромбина выполняли в 0.1 М растворе натрий-фосфатного буфера при рН 7.5, содержащем 0.2 М хлорида натрия и 0.5% PEG 8000. Определения выполняли с использованием очищенного человеческого альфа-тромбина (Hae-matologic Technologies или Enzyme Research Laboratories) при конечной концентрации 200-250 пМ и синтетического субстрата S-2366 (пиро-Glu-Pro-Arg-pNA; Chromogenix или AnaSpec) при концентрации 0.0002-0.0004 М.
Константу Михаэлиса Km для гидролиза субстрата каждой протеазой определяли при 25°С или при 37°С в отсутствие ингибитора. Значения Ki определяли, оставляя протеазу прореагировать с субстратом в присутствии ингибитора. Реакции оставляли протекать в течение периода времени 20-180 мин (в зависимости от протеазы), и определяли скорости (скорость абсорбции или изменения флуоресценции в зависимости от времени). Для расчета значений Ki были использованы следующие соотношения:
(Vmax-S)/(Km+S);
(vo-vs)/vs=I/(Ki(1+S/Km)) для конкурентного ингибитора с одним сайтом связывания; или Vs/Vo=А+((В-А)/1+((IC5o/(I)n))); и Ki=IC50/(1+S/Km) для конкурентного ингибитора, где
vo представляет собой скорость регулирования при отсутствии ингибитора; vs представляет собой скорость в присутствии ингибитора; Vmax представляет собой максимальную скорость реакции; I представляет собой концентрацию ингибитора;
А представляет собой минимальную остаточную активность (обычно фиксированную на нуле); В представляет собой максимальную остаточную активность (обычно фиксированную на 1.0);
n представляет собой коэффициент Хилла, меру количества и кооперативности потенциальных сайтов связывания ингибитора;
IC50 представляет собой концентрацию ингибитора, который обеспечивает 50% ингибирования при условиях анализа;
Ki представляет собой константу диссоциации фермент: ингибиторный комплекс;
S представляет собой концентрацию субстрата; и
Km представляет собой константу Михаэлиса для субстрата.
Селективность соединения может быть оценена с помощью отношения значения Ki для данной про-теазы к значению Ki для интересующей протеазы (то есть селективность FXIa в сравнении с протеазой P=Ki для протеазы P/Ki для FXIa). Соединения с отношением селективности > 20 считаются селективными.
Эффективность соединений по настоящему изобретению как ингибиторов коагуляции может быть определена с использованием стандартного или модифицированного анализа коагулирующей активности. Увеличение времени свертывания крови в присутствии ингибитора является показателем антикоагуляции. Относительное время свертывания представляет собой время свертывания в присутствии ингибитора, деленное на время свертывания в отсутствие ингибитора. Результаты этого анализа могут быть выражены как IC1.5x или IC2x, то есть концентрация ингибитора, необходимая для увеличения времени свертывания в 1.5 раза или 2 раза соответственно, относительно времени свертывания при отсутствии ингибитора.
IC1.5x или IC2x находятся путем линейной интерполяции кривой зависимости относительного времени свертывания от концентрации ингибитора с использованием концентрации ингибитора, которая охватывает IC1.5x или IC2x.
Значения времени свертывания определяются с использованием цитратной нормальной человеческой плазмы, а также плазмы, полученной от ряда лабораторных видов животных (например, крысы или кролика). Соединение разбавляется в плазме, начиная от исходного раствора 10 мМ DMSO. Конечная концентрация DMSO составляет менее 2%. Анализы свертывания плазмы проводили в автоматизированном коагулографе (Sysmex, Dade-Behring, Illinois). Аналогичным образом, время свертывания может быть определено на основании анализов лабораторных видов животных или людей, которым вводили соединения по изобретению.
Активированное частичное тромбопластиновое время (аРТТ) определяется с использованием AC-TIN(r) (Dade-Behring, Illinois), следуя указаниям в листовке-вкладыше в упаковке. Плазму (0.05 мл) нагревали до 37°С в течение 1 мин. К плазме добавляли ACTIN(r) (0.05 мл) и инкубировали в течение дополнительных от 2 до 5 мин. К реакционной смеси добавляли хлорид кальция (25 мМ, 0.05 мл), чтобы инициировать свертывание. Время свертывания представляет собой время в секундах от момента добавления хлорида кальция до момента определения сгустка.
Протромбиновое время (РТ) определяется с использованием тромбопластина (Thromboplastin С Plus или Innovin, Dade-Behring, Illinois), следуя указаниям в листовке-вкладыше в упаковке. Плазму (0.05 мл) нагревали до 37°С в течение 1 мин. К плазме добавляли тромбопластин (0.1 мл), чтобы инициировать свертывание. Время свертывания представляет собой время в секундах от момента добавления тромбо-пластина до момента определения сгустка.
Определения химотрипсина проводили в 50 мМ буфере HEPES при рН 7.4, содержащем 145 мМ NaCl, 5 мМ KCl и 0.1% PEG 8000 (полиэтиленгликоль; JT Baker или Fisher Scientific). Определения были сделаны с использованием очищенного человеческого химотрипсина при конечной концентрации 0.2-2 нМ (Calbiochem) и синтетического субстрата S-2586 (Methoxy-Succinyl-Arg-Pro-Tyr-pNA; Chromogenix) при концентрации 0.0005-0.005 М.
Определения трипсина проводили в 0.1 М растворе натрий-фосфатного буфера при рН 7.5, содержащем 0.2 М хлорида натрия и 0.5% PEG 8000. Определения были сделаны с использованием очищенного человеческого трипсина (Sigma) при конечной концентрации анализа 0.1-1 нМ и синтетического субстрата S-2222 (Bz-Ile-Glu (gamma-OMe, 50%)-Gly-Arg-pNA; Chromogenix) при концентрации 0.00050.005 M.
Пояснительные примеры, представленные ниже, были исследованы с помощью анализа, связанного с фактором XIa, описанного выше, и были обнаружены имеющие ингибирующую фактор XIa активность. Наблюдался диапазон ингибиторной активности фактора XIa (значения Ki) в пределах <10 мкМ (10000 нМ).
Пояснительные примеры, представленные ниже, были исследованы с помощью анализа, связанного с калликреином плазмы, описанного выше, с некоторыми примерами, имеющими ингибиторную активность в отношении и фактора XIa, и калликреина плазмы. Для этих примеров, ингибиторная активность которых в отношении калликреина плазмы наблюдалась как значения Ki <10 мкМ (10000 нМ), ингиби-торная активность сообщается. Соединения по настоящему изобретению проявляют неожиданную инги-биторную активность в отношении FXIa по сравнению с соединениями формулы (X) в WO 2014/022767 А1, где кольцо В представляет собой пиразол, присоединенный через его атомы углерода к макроциклу.
и значением Ki фактора XIa 1317 нМ (табл. 1, с. 89). Для сравнения, значения Ki фактора XIa соединений по настоящему изобретению, как показано в конце каждого примера, меньше чем 20 нМ. Эти данные показывают, что соединения по настоящему изобретению, в данном описании, например соединения формул (I), (II), (III), (Ia), (IIa), (IIIa), (IV) и (V), являются удивительно эффективными для ингиби-рования фактора XIa.
В. Анализы in vivo.
Эффективность соединений по настоящему изобретению в качестве антитромботических средств можно определить, используя соответствующие модели тромбоза in vivo, включая модели электрически индуцированного тромбоза сонной артерии in vivo и модели тромбоза артериовенозного шунта кролика in vivo.
a. Модель электрически индуцированного тромбоза сонной артерии (ECAT) in vivo.
В этом исследовании может быть использована модель ECAT кролика, описанная Wong et al. (J. Pharmacol. Exp. Ther., 295:212-218 (2000)). Самцов новозеландских белых кроликов анестезировали с помощью кетамина (50 мг/кг+50 мг/кг/ч IM (внутримышечно)) и ксилазина (10 мг/кг+10 мг/кг/ч IM). Эти анестетики добавлялись по мере необходимости. Электромагнитный зонд для измерения кровотока помещается на сегменте изолированной сонной артерии, чтобы контролировать циркуляцию крови. Тестируемые вещества или носитель вводятся (внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно или перорально) до или после инициации тромбоза. Лекарственная терапия до инициации тромбоза используется для того, чтобы смоделировать способность тестируемых агентов предупредить и снизить риск образования тромбов, тогда как дозирование после инициации используется для того, чтобы смоделировать возможность лечения существующего тромботического осложнения. Образование тромба индуцируется электрической стимуляцией сонной артерии в течение 3 мин при силе тока 4 мА с использованием внешнего биполярного электрода из нержавеющей стали. Кровоток в сонной артерии непрерывно измеряется в течение 90-минутного периода, чтобы контролировать индуцированную тромбом окклюзию. Общий кровоток в сонной артерии в течение 90 мин рассчитывается по правилу трапеции. Средний кровоток в сонной артерии в течение 90 мин затем определяется путем преобразования общего кровотока в сонной артерии в течение 90 мин в процентах от общего контрольного кровотока сонной артерии, который был бы получен, если бы контрольный кровоток поддерживался непрерывно в течение 90 мин. ED50 (доза, которая увеличила средний кровоток в сонной артерии в течение 90 мин до 50% от контрольного) соединений оцениваются по программе нелинейной регрессии методом наименьших квадратов, используя уравнение Хилла для сигмоидной Emax (DeltaGraph; SPSS Inc., Chicago, IL).
b. Модель тромбоза артериовенозного (AV) шунта у кролика in vivo.
В этом исследовании может быть использована модель AV шунта у кролика, описанная Wong et al. (Wong P.C. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 292:351-357 (2000)). Самцов новозеландских белых кроликов анестезировали с использованием кетамина (50 мг/кг+50 мг/кг/ч IM) и ксилазина (10 мг/кг+10 мг/кг ч IM). Эти анестетики добавляли по мере необходимости. Бедренную артерию, яремную вену и бедренную вену изолировали и вводили катетер. Заполненное физиологическим раствором AV шунтирующее устройство подсоединяли между бедренным артериальным и бедренным венозным катетерами. AV шунтирующее устройство состояло из внешней части трубки Tygon (длина=8 см, внутренний диаметр=7.9 мм) и внутренней части трубки (длина=2.5 см; внутренний диаметр=4.8 мм). AV-шунт также содержал шелковую нить 2-0 длиной 8 см (Ethicon, Somerville, NJ). Кровь текла из бедренной артерии через AV-шунт в бедренную вену. Взаимодействие текущей крови с шелковой нитью индуцировало образование значительного тромба. Через 40 мин шунт отсоединяли, и шелковую нить, покрытую тромбами, взвешивали. Тестируемые агенты или носитель вводили (внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно или перорально) до открытия AV-шунта. Процент ингибирования образования тромбов определяли для каждой экспериментальной группы. Значения ID50 (доза, которая вызывает 50%-ное ингибирование образования тромбов) оцениваются по программе нелинейной регрессии методом наименьших квадратов, используя уравнение Хилла для сигмоидной Emax (DeltaGraph; SPSS Inc., Chicago, IL). Противовоспалительное действие этих соединений может быть продемонстрировано в исследовании экстравазации с красителем Evans Blue с использованием мышей, дефицитных по ингибитору С1-эстеразы. В этой модели мышам вводили соединение по настоящему изобретению, краситель Evans Blue вводили через хвостовую вену, и экстра-вазацию голубого красителя определяли с помощью спектрофотометрии тканевых экстрактов.
Способность соединений по настоящему изобретению снижать или предотвращать синдром сис
темной воспалительной реакции, например, как это наблюдалось во время процедур с использованием искусственного кровообращения, может быть протестирована in vitro в перфузионных системах или в хирургических операциях с использованием искусственного кровообращения на более крупных млекопитающих, в том числе собаках и бабуинах. Выбор показателей для оценки преимущества соединений по настоящему изобретению включает, например, снижение потери тромбоцитов, снижение комплексов тромбоцит/лейкоцит, снижение уровней эластазы нейтрофилов в плазме, снижение активации факторов комплемента и снижение активации и/или ограничение контактной активации белков (калликреина плазмы, фактора XII, фактора XI, высокомолекулярного кининогена, ингибиторов С1-эстеразы).
Соединения по настоящему изобретению также могут быть использованы в качестве ингибиторов других сериновых протеаз, в особенности человеческого тромбина, человеческого плазменного каллик-реина и человеческого плазмина. Благодаря своему ингибирующему действию эти соединения показаны для применения в профилактике или лечении физиологических реакций, в том числе свертывания крови, фибринолиза, регуляции кровяного давления и воспаления и заживления ран, катализируемых указанным выше классом ферментов. В частности, соединения полезны в качестве лекарственных средств для лечения заболеваний, связанных с повышенной тромбиновой активностью вышеупомянутых сериновых протеаз, таких как инфаркт миокарда, и в качестве реагентов, используемых в качестве антикоагулянтов при получении плазмы из крови для диагностических и других коммерческих целей.
V. Фармацевтические композиции, лекарственные формы и комбинации.
Соединения по настоящему изобретению могут быть введены перорально в виде таких лекарственных форм, как таблетки, капсулы (каждая из которых включает лекарственную форму с замедленным высвобождением или определенным по времени высвобождением), пилюли, порошки, гранулы, эликсиры, настойки, суспензии, сиропы и эмульсии. Они также могут быть введены внутривенно (в виде бо-люсного или капельного введения), внутрибрюшинно, подкожно или внутримышечно, всех используемых лекарственных форм, хорошо известных обычному специалисту в области фармацевтики. Они могут быть введены в чистом виде, но обычно вводятся с фармацевтическим носителем, выбранным в зависимости от способа введения и стандартной фармацевтической практики.
Термин "фармацевтическая композиция" означает композицию, содержащую соединение по изобретению в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным фармацевтически приемлемым носителем. "Фармацевтически приемлемый носитель" относится к средам, обычно принятым в данной области для доставки биологически активных веществ животным, в частности млекопитающим, включающим, например, адъювант, вспомогательное вещество или носитель, таким как разбавители, консерванты, наполнители, агенты, регулирующие текучесть, вещества для улучшения распадаемости таблеток, смачивающие агенты, эмульгирующие агенты, суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые агенты, ароматизирующие агенты, антибактериальные агенты, противогрибковые агенты, смазывающие агенты и диспергирующие агенты, в зависимости от особенности способа введения и лекарственных форм. Фармацевтически приемлемые носители имеют состав в соответствии с рядом факторов в пределах компетенции специалистов в данной области техники. Они включают, без ограничения, тип и природу активного вещества, входящего в состав рецептуры; субъекта, которому композиция, содержащая это вещество, должна быть введена; предполагаемый способ введения композиции и целевое показание к применению. Фармацевтически приемлемые носители включают как водные, так и неводные жидкие среды, а также разнообразные твердые и полутвердые лекарственные формы. Такие носители могут включать несколько различных ингредиентов и добавок в дополнение к активному агенту, причем такие дополнительные ингредиенты включаются в композицию по множеству причин, например для стабилизации активного агента, связующих и других агентов, хорошо известных специалистам в данной области. Описания подходящих фармацевтически приемлемых носителей и факторов, участвующих в их выборе, можно найти в различных доступных источниках, таких как, например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (1990).
Режим дозирования для соединений по настоящему изобретению будет, конечно, варьироваться в зависимости от известных факторов, таких как фармакодинамические характеристики конкретного агента и его вида и способа введения; от вида, возраста, пола, состояния здоровья, характера заболевания и массы тела реципиента; от природы и степени симптомов; от вида сопутствующего лечения; частоты лечебных процедур; способа введения лекарственного средства, функции почек и печени пациента и от желаемого эффекта. Врач или ветеринар может определить и прописать эффективное количество лекарственного средства, необходимого для предотвращения, противодействия или остановки прогрессирова-ния тромбоэмболического осложнения. В качестве общего руководства суточная пероральная доза каждого активного ингредиента, используемого для достижения указанных эффектов, будет варьироваться в диапазоне от около 0.001 до около 1000 мг/кг массы тела, предпочтительно от около 0.01 до около 100 мг/кг массы тела в сутки и наиболее предпочтительно от около 0.1 до около 20 мг/кг/сутки. При внутривенном введении наиболее предпочтительные дозы будут находиться в диапазоне от около 0.001 до около 10 мг/кг/мин в течение инфузии с постоянной скоростью. Соединения по настоящему изобретению могут быть введены в виде одноразовой суточной дозы или общая суточная доза может быть введена в виде разделенных доз два, три или четыре раза в сутки.
Соединения по настоящему изобретению также могут быть введены парентерально (например, внутривенно, внутриартериально, внутримышечно или подкожно). При внутривенном или внутриарте-риальном введении дозирование может осуществляться непрерывно или с перерывами. Кроме того, лекарственная форма может быть разработана для внутримышечного и подкожного введения, которое обеспечивает постепенное высвобождение активного фармацевтического ингредиента. В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция представляет собой твердый препарат, например высушенную распылением композицию, которая может быть использована сама по себе, или куда врач или пациент добавляет растворители и/или разбавители перед применением.
Соединения по настоящему изобретению могут вводиться в интраназальной форме путем местного применения с подходящими интраназальными носителями или трансдермально с использованием транс-дермальных пластырей. При введении в форме трансдермальной системы доставки введение дозы будет, конечно, происходить непрерывно в течение всего времени приема в отличие от прерывистого приема лекарственного средства. Соединения обычно вводятся в смеси с подходящими фармацевтическими разбавителями, вспомогательными веществами или носителями (собирательно упоминаются здесь как фармацевтические носители), выбранными в соответствии с предполагаемой формой введения, например пероральные таблетки, капсулы, эликсиры и сиропы, и в соответствии с обычной фармацевтической практикой.
Например, для перорального введения в виде таблетки или капсулы активный лекарственный компонент может быть объединен с пероральным нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как лактоза, крахмал, сахароза, глюкоза, метилцеллюлоза, стеарат магния, дикальций-фосфат, сульфат кальция, маннит, сорбит и тому подобное; для перорального введения в жидкой форме пероральные лекарственные компоненты могут быть объединены с любым пероральным нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и тому подобное. Более того, когда желательно или необходимо, подходящие связующие вещества, смазывающие вещества, разрыхляющие средства и окрашивающие вещества также могут быть включены в смесь. Подходящие связующие вещества включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, кукурузные подсластители, натуральные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, трагакант или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и тому подобное. Смазывающие вещества, используемые в этих лекарственных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и тому подобное. Разрыхлители включают, без ограничения, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и тому подобное.
Соединения по настоящему изобретению также можно вводить в форме липосомальных систем доставки, таких как маленькие моноламеллярные везикулы, большие моноламеллярные везикулы и муль-тиламеллярные везикулы. Липосомы могут быть сформированы из различных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.
Соединения по настоящему изобретению также могут быть объединены с растворимыми полимерами, такими как носители лекарственных средств направленного действия. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигид-роксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксид-полилизин, замещенный остатками пальмитоила. Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут быть объединены с соединениями, относящимися к классу биоразлагаемых полимеров, используемых для достижения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например с полимолочной кислотой, полигликолевой кислотой, сополимерами полимолочной и полигликолевой кислот, полиэпсилонкапролактоном, полигидроксимасляной кислотой, сложными полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианоацилатами и сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей. Твердые дисперсии также называют дисперсиями в твердом состоянии. В некоторых вариантах осуществления любое соединение, описанное здесь, приготовлено в виде высушенной распылением дисперсии (SDD). SDD представляет собой однофазную аморфную молекулярную дисперсию лекарственного средства в полимерной матрице. Это твердый раствор, полученный растворением лекарственного средства и полимера в растворителе (например, ацетоне, метаноле или тому подобном) и распылительной сушкой раствора. Растворитель быстро испаряется из капель, что быстро отверждает смесь полимера и лекарственного средства, удерживая лекарственное средство в аморфной форме в виде аморфной молекулярной дисперсии.
Лекарственные формы (фармацевтические композиции), пригодные для введения, могут содержать от около 1 до около 1000 мг активного ингредиента на дозированную единицу. В этих фармацевтических композициях активный ингредиент обычно присутствует в количестве около 0.1-95 мас.% из расчета на общую массу композиции.
Желатиновые капсулы могут содержать активный ингредиент и порошкообразные носители, такие как лактоза, крахмал, производные целлюлозы, стеарат магния, стеариновая кислота и тому подобное. Подобные разбавители могут быть использованы при получении прессованных таблеток. Как таблетки, так и капсулы могут быть изготовлены как продукты с замедленным высвобождением, чтобы обеспечить непрерывное высвобождение лекарственного средства в течение периода до нескольких часов. Прессо
ванные таблетки могут быть покрыты сахаром или пленкой, чтобы замаскировать неприятный вкус и защитить таблетку от влияния атмосферы, или энтеросолюбильным покрытием для избирательного разрушения таблетки в желудочно-кишечном тракте.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения могут содержать краситель и вкусовой агент для создания положительного отношения к ним пациентов. В общем, вода, подходящее масло, солевой раствор, водный раствор декстрозы (глюкозы) и соответствующие растворы сахаров и гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоли, являются подходящими носителями для парентеральных растворов. Растворы для парентерального введения предпочтительно содержат водорастворимую соль активного ингредиента, подходящие стабилизирующие вещества и, если необходимо, буферные вещества. Противоокислительные вещества, такие как бисульфит натрия, сульфит натрия или аскорбиновая кислота, либо по отдельности, либо в сочетании являются подходящими стабилизирующими агентами. Используют также лимонную кислоту и ее соли и натриевую соль EDTA. Кроме того, парентеральные растворы могут содержать консерванты, такие как бензалкония хлорид, метил- или пропилпара-бен и хлорбутанол.
Подходящие фармацевтические носители описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, стандартном справочнике в этой области.
Когда соединения по настоящему изобретению объединяются с другими противокоагулирующими средствами, например, суточная доза может составлять от около 0.1 до около 100 мг соединения по настоящему изобретению и от около 0.1 до около 100 мг на килограмм массы тела пациента. Для таблети-рованной лекарственной формы соединения по настоящему изобретению обычно могут присутствовать в количестве от около 5 до около 300 мг на дозированную единицу, и второе противокоагулирующее средство будет присутствовать в количестве от около 1 до около 500 мг на дозированную единицу.
Когда соединения по настоящему изобретению вводятся в комбинации с антитромботическим средством, в качестве общего руководства обычно суточная доза может составлять от около 0.01 до около 300 мг соединения по настоящему изобретению и от около 50 до около 150 мг антитромботического средства, предпочтительно от около 0.1 до около 4 мг соединения по настоящему изобретению и от около 1 до около 3 мг антитромботических средств на килограмм массы тела пациента.
Когда соединения по настоящему изобретению вводятся в комбинации с тромболитическим средством, обычно суточная доза может составлять от около 0.1 до около 100 мг соединения по настоящему изобретению на килограмм массы тела пациента, и в случае тромболитических средств обычная дозировка тромболитического средства, когда оно вводится одно, может быть уменьшена на около 50-80%, если оно вводится с соединением по настоящему изобретению. В частности, когда предусматривается единичная дозированная лекарственная форма, существует потенциальная возможность химического взаимодействия объединенных активных ингредиентов. По этой причине, когда соединение по настоящему изобретению и второй терапевтическое вещество объединены в одной единичной дозированной лекарственной форме, они представлены таким образом, что хотя активные ингредиенты объединены в одной дозированной единице, физический контакт между активными ингредиентами минимизирован (то есть снижен). Например, один активный ингредиент может быть покрыт энтеросолюбильной оболочкой. С помощью энтеросолюбильного покрытия одного из активных ингредиентов можно не только свести к минимуму контакт между объединенными активными ингредиентами, но также можно контролировать высвобождение одного из этих компонентов в желудочно-кишечном тракте таким образом, что один из этих компонентов не высвобождается в желудке, а высвобождается в кишечнике. Один из активных ингредиентов может также быть покрыт материалом, который влияет на замедленное высвобождение во всем желудочно-кишечном тракте, и также служит для минимизации физического контакта между объединенными активными ингредиентами. Кроме того, компонент с замедленным высвобождением может быть дополнительно покрыт энтеросолюбильной оболочкой таким образом, что высвобождение этого компонента происходит только в кишечнике. Еще один подход может предусматривать разработку объединенной композиции, в которой один компонент покрыт полимером для замедленного и/или кишечного высвобождения, а другой компонент также покрыт полимером, таким как гидроксипропилметилцеллю-лоза (НРМС) с низким коэффициентом вязкости, или другими подходящими материалами, известными в данной области техники, с целью дополнительного разделения активных компонентов. Полимерное покрытие служит для образования дополнительного барьера, препятствующего взаимодействию с другим компонентом.
Эти, а также другие способы минимизации контакта между компонентами объединенных продуктов по настоящему изобретению, независимо от того, вводятся они в виде одной лекарственной формы или вводятся в виде отдельных форм, но в одно и то же время и тем же самым способом, будут очевидны специалистам в данной области, когда те будут вооружены настоящим изобретением.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, кроме того, содержащей дополнительное терапевтическое(ие) средство(а), выбранное из веществ, открывающих калиевые каналы, блокаторов калиевых каналов, блокаторов кальциевых каналов, ингибиторов натрий-водородных обменников, противоаритмических средств, противоатеросклеротических средств, антикоагулянтов, противотромботических средств, протромболитических средств, антагонистов
фибриногена, диуретиков, гипотензивных средств, ингибиторов АТФазы, антагонистов минералокорти-коидных рецепторов, ингибиторов фосфодиэстеразы, противодиабетических средств, противовоспалительных средств, антиоксидантов, модуляторов ангиогенеза, антиостеопоретических препаратов, заместительных гормональных препаратов, модуляторов рецепторов гормона, оральных контрацептивов, средств против ожирения, антидепрессантов, успокаивающих средств, антипсихотических средств, анти-пролиферативных средств, противоопухолевых средств, противоязвенных средств и средств против гаст-роэзофагеальной рефлюксной болезни, препаратов гормона роста и/или стимуляторов секреции гормона роста, миметиков щитовидной железы, противоинфекционных средств, противовирусных средств, антибактериальных средств, противогрибковых средств, холестерин/гиполипидемических средств и препаратов липидного профиля и средств, имитирующих ишемическое прекондиционирование и/или постише-мическое нарушение сократительной функции миокарда или их комбинации. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, также содержащей дополнительное терапевтическое(ие) средство(а), выбранное из антиаритмического средства, антигипертен-зивного средства, противокоагулирующего средства, антитромботического средства, ингибитора тромбина, тромболитического средства, фибринолитического средства, блокатора кальциевых каналов, бло-катора калиевых каналов, холестерин/гиполипидемических средств или их комбинации. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей также дополнительное терапевтическое(ие) средство(а), выбранное из варфарина, нефракционированно-го гепарина, низкомолекулярного гепарина, синтетического пентасахарида, гирудина, аргатробана, аспирина, ибупрофена, напроксена, сулиндака, индометацина, мефенамата, дипиридамола, дроксикама, дик-лофенака, сульфинпиразона, пироксикама, тиклопидина, клопидогрела, тирофибана, эптифибатида, аб-циксимаба, мелагатрана, ксимелагатрана, дисульфатогирудина, тканевого активатора плазминогена, модифицированного тканевого активатора плазминогена, анистреплазы, урокиназы и стрептокиназы или их комбинации. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, в которой дополнительное терапевтическое средство представляет собой противогиперто-ническое средство, выбранное из АСЕ ингибиторов, антагонистов АТ-1 рецепторов, антагонистов бета-адренергических рецепторов, антагонистов ЕТА рецепторов, антагонистов рецепторов двойного действия в отношении рецепторов ЕТА/АТ-1, ингибиторов ренина (алискирена) и ингибиторов вазопептидазы, антиаритмического средства, выбранного из ингибиторов IKur, антикоагулирующего средства, выбранного из ингибиторов тромбина, активаторов антитромбина-III, активаторов гепаринового кофактора II, других ингибиторов фактора XIa, других ингибиторов калликреина, антагонистов ингибитора активаторов плазминогена (PAI-1), ингибиторов активированного тромбином ингибитора (TAFI) фибринолиза, ингибиторов фактора VIIa, ингибиторов фактора IXa и ингибиторов фактора Ха, или антитромботического средства, выбранного из GPIIb/IIIa блокаторов, GP Ib/IX блокаторов, антагонистов активированных про-теазами рецепторов 1 (PAR-1), антагонистов активированных протеазами рецепторов 4 (PAR-4), антагонистов рецептора ЕР3 простагландина Е2, антагонистов рецепторов коллагена, ингибиторов фосфодиэ-стеразы-III, антагонистов рецепторов P2Y1, антагонистов рецепторов P2Y12, антагонистов рецепторов тромбоксана, ингибиторов циклооксигеназы-1 и аспирина или их комбинации.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, в которой дополнительное терапевтическое(ие) средство(а) представляет собой антитромботическое средство или их комбинацию.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, в которой дополнительное терапевтическое средство представляет собой антитромботическое средство клопидогрел.
Соединения по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Под "вводить в комбинации" или "комбинированное лечение" подразумевается, что соединение по настоящему изобретению и одно или несколько дополнительных терапевтических средств вводятся совместно млекопитающему, которое подвергается лечению. При введении в комбинации каждый компонент может быть введен в то же самое время или последовательно в любом порядке в различные моменты времени. Таким образом, каждый компонент может быть введен отдельно, но достаточно близко по времени, с тем, чтобы обеспечить желаемый терапевтический эффект.
Соединения, которые могут быть введены в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, антикоагулянты, антитромбиновые средства, антитромботи-ческие средства, фибринолитические средства, гиполипидемические средства, антигипертензивные средства и антиишемические средства.
Другие антикоагулирующие средства (или ингибиторы коагуляции), которые могут быть использованы в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, включают варфарин, гепарин (либо нефракционированный гепарин, либо любой коммерчески доступный низкомолекулярный гепарин, например LOVENOX(r)), синтетический пентасахарид, ингибиторы тромбина прямого действия, включая гирудин и аргатробан, а также другие ингибиторы фактора VIIa, ингибиторы фактора IXa, ингибиторы
фактора Ха (например, ARIXTRA(r), апиксабан, ривароксабан, LY-517717, DU-176b, DX-9065a, и те, которые описаны в WO 98/57951, WO 03/026652, WO 01/047919 и WO 00/076970), ингибиторы фактора XIa и ингибиторы активированного TAFI и PAI-1, известные в данной области.
Термин "антитромботические средства" (или ингибиторы тромбоцитов), как он использован здесь, обозначает средства, которые ингибируют функцию тромбоцитов, например, путем ингибирования агрегации, адгезии или секреции содержимого гранул тромбоцитов. Такие средства включают, но не ограничиваются ими, различные известные нестероидные противовоспалительные препараты (NSAIDs) (НПВП), такие как ацетаминофен, аспирин, кодеин, диклофенак, дроксикам, фентанил, ибупрофен, ин-дометацин, кеторолак, мефенамат, морфин, напроксен, фенацетин, пироксикам, суфентанил, сульфинпи-разон, сулиндак и их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства. Из НПВП предпочтительными являются аспирин (ацетилсалициловая кислота или ASA) и пироксикам. Другие подходящие ингибиторы тромбоцитов включают антагонистов гликопротеинов IIb/IIIa (например, тирофибан, эптифиба-тид, абциксимаб, интегрилин), антагонистов рецепторов тромбоксана-А2 (например, ифетробан), ингибиторов тромбоксан-А-синтетазы, ингибиторов фосфодиэстеразы-III (PDE-III) (например, дипиридамол, цилостазол) и ингибиторов PDE-V (таких как силденафил), антагонистов активируемых протеазами рецепторов 1 (PAR-1) (например, Е-5555, SCH-530348, SCH-203099, SCH-529153 и SCH-205831) и их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства.
Другими примерами подходящих антитромбоцитарных средств для применения в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, с аспирином или без аспирина, являются антагонисты рецепторов ADP (аденозиндифосфата), предпочтительно антагонисты пуринергических рецепторов P2Y1 и P2Y12, при этом P2Y12 является даже более предпочтительным. Предпочтительные антагонисты рецептора P2Y12 включают клопидогрел, тиклопидин, прасугрел, тикагрелор и кангрелор и их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства. Тиклопидин и клопидогрел также являются предпочтительными соединениями, так как они, как известно, оказывают более мягкое действие, чем аспирин, на желудочно-кишечный тракт при использовании. Клопидогрел является даже более предпочтительным средством.
Предпочтительным примером является тройная комбинация соединения по настоящему изобретению, аспирина и другого антитромботического средства. Предпочтительно антитромботическим средством является клопидогрел или прасугрел, более предпочтительно клопидогрел.
Термин "ингибиторы тромбина" (или антитромбиновые средства), как он использован здесь, обозначает ингибиторы сериновой протеазы тромбина. При ингибировании тромбина нарушаются различные опосредованные тромбином процессы, такие как опосредованная тромбином активация тромбоцитов (то есть, например, агрегация тромбоцитов и/или секреция тромбоцитами содержимого гранул в том числе серотонина) и/или образование фибрина. Ряд ингибиторов тромбина известен специалистам в данной области, и эти ингибиторы рассматриваются для использования в комбинации с соединениями по настоящему изобретению. Такие ингибиторы включают, но не ограничиваются ими, производные боро-аргинина, боропептиды, гепарины, гирудин, аргатробан, дабигатран, AZD-0837, а также те, которые описаны в WO 98/37075 и WO 02/044145, и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства. Производные бороаргинина и боропептиды включают N-ацетил и пептидные производные бороновой кислоты, такие как производные С-концевых а-аминобороновых кислот лизина, орнитина, аргинина, гомоаргини-на и соответствующие их изотиоурониевые аналоги. Термин "гирудин", как он использован здесь, включает в себя подходящие производные или аналоги гирудина, которые упоминаются здесь как гирулоги, такие как дисульфатогирудин.
Термины "тромболитические (или фибринолитические) средства (или тромболитики, или фибрино-литики)", как они использованы здесь, обозначают средства, которые лизируют сгустки крови (тромбы). Такие средства включают тканевой активатор плазминогена (ТРА, природный или рекомбинантный) и его модифицированные формы, анистреплазу, урокиназу, стрептокиназу, тенектеплазу (TNK), ланоте-плазу (nPA), ингибиторы фактора VIIa, ингибиторы тромбина, ингибиторы факторов IXa, Ха и XIa, ингибиторы PAI-I (т.е. инактиваторы ингибиторов тканевого активатора плазминогена), ингибиторы активированного TAFI, ингибиторы альфа-2-антиплазмина и анизоилированный активатор комплекса стреп-токиназы и плазминогена, в том числе их фармацевтически приемлемые соли или пролекарства. Термин "анистреплаза", как используется здесь, относится к анизоилированному активатору комплекса стрепто-киназы и плазминогена, как описано, например, в европейской патентной заявке № 028489, описание которой включено сюда посредством ссылки. Термин "урокиназа", как он использован здесь, предназначен для обозначения как двух-, так и одноцепочечной урокиназы, последняя также упоминается здесь как проурокиназа.
Примерами холестерин/липидпонижающих средств и средств липидного профиля, подходящих для применения в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, являются ингибиторы HMG-CoA редуктазы (например, правастатин, ловастатин, симвастатин, флувастатин, аторвастатин, розуваста-тин и другие статины), модуляторы активности рецепторов липопротеина низкой плотность (LDL) (например, НОЕ-402, ингибиторы PCSK9), секвестранты желчных кислот (например, холестирамин и коле-стипол), никотиновая кислота или ее производные (например, NIASPAN(r)), модуляторы GPR109B (ре
цептор никотиновой кислоты), производные фенофибриновой кислоты (например, гемфиброзил, кло-фибрат, фенофибрат и бензафибрат) и другие модуляторы альфа рецепторов (PPAR), активируемых про-лифератором пероксисом, модуляторы PPAR-дельта (например, GW-501516), модуляторы PPAR-гамма (например, росиглитазон), соединения, обладающие многофункциональностью при модуляции активности различных комбинаций PPAR-альфа, PPAR-гамма и PPAR-дельта, пробукол или его производные (например, AGI-1067), ингибиторы абсорбции холестерина и/или ингибиторы белка-транспортера Най-мана-Пика типа С1 (например, эзетимиб), ингибиторы транспортерных белков эфиров холестерина (например, СР-529414), ингибиторы сквален-синтазы и/или ингибиторы сквален-эпоксидазы или их смеси, ацилкоэнзим А: ингибиторы холестерил ацилтрансферазы (ACAT) 1, ингибиторы АСАТ2, двойные ингибиторы АСАТ1/2, ингибиторы транспорта желчной кислоты в подвздошной кишке (или ингибиторы натрийзависимого транспорта желчной кислоты в подвздошной кишке), ингибиторы микросомального белка-переносчика триглицеридов, модуляторы X-рецепторов печени LXR альфа, модуляторы LXR бета, двойные модуляторы LXR альфа/бета, модуляторы FXR, омега-3 жирные кислоты (например, 3-PUFA), растительные станолы и/или сложные эфиры жирных кислот и растительных станолов (например, сложный эфир ситостанола, используемый в маргарине BENECOL(r)), ингибиторы эндотелиальной липазы и функциональные миметики HDL, которые активируют обратный транспорт холестерина (например, apoAI производные или apoAI пептидомиметики).
Соединения по настоящему изобретению также могут быть объединены с ингибиторами растворимой гуанилатциклазы, ингибиторами химазы, ингибиторами ROMK, ингибиторами АСЕ, ингибиторами ATII, ингибиторами ATR, ингибиторами NEP и другими соединениями для лечения сердечной недостаточности.
Соединения по настоящему изобретению также используются в качестве стандартных или рефе-ренсных соединений, например как стандарт качества или контроля, в тестах или анализах, включающих ингибирование тромбина, факторов VIIa, IXa, Xa, XIa и/или калликреина плазмы. Такие соединения могут быть представлены в коммерческом наборе, например, для использования в фармацевтических изысканиях, включающих тромбин, факторы VIIa, IXa, Xa, XIa и/или калликреин плазмы. Например, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы в качестве референсных в сравнительном анализе, чтобы сравнить их известную активность с соединением с неизвестной активностью. Это позволит экспериментатору убедиться, что анализ выполнен должным образом и обеспечит основу для сравнения, особенно если испытуемое соединение представляло собой производное от референсного соединения. При разработке новых анализов или протоколов соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для проверки их эффективности.
Соединения по настоящему изобретению также могут быть использованы в диагностических анализах, включающих тромбин, факторы VIIa, IXa, Xa, XIa и/или калликреин плазмы. Например, присутствие тромбина, факторов VIIa, IXa, Xa XIa и/или калликреина плазмы в неизвестном образце может быть определено путем добавления соответствующего хромогенного субстрата, например S2366 для фактора XIa, к серии растворов, содержащих тестируемый образец, и необязательно одно из соединений по настоящему изобретению. Если наблюдалось образование pNA в растворах, содержащих тестируемый образец, но не в присутствии соединения по настоящему изобретению, то можно сделать заключение, что присутствовал фактор XIa.
Сильнодействующие и селективные соединения по настоящему изобретению, имеющие значения Ki меньше или равные 0,001 мкМ против целевой протеазы и больше или равные 0,1 мкМ против других протеаз, также можно использовать в диагностических анализах, включающих количественную оценку тромбина, факторов VIIa, IXa, Xa, XIa и/или калликреина плазмы в образцах сыворотки. Например, количество фактора XIa в образцах сыворотки может быть определено путем тщательного титриметриче-ского анализа протеазной активности в присутствии соответствующего хромогенного субстрата S2366 с сильнодействующим ингибитором фактора XIa по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также охватывает готовое изделие. Термин "готовое изделие", используемый здесь, предназначен для включения, но не ограничивается этим, наборов и упаковок. Готовое изделие по настоящему изобретению содержит (а) первый контейнер, (b) фармацевтическую композицию, расположенную внутри первого контейнера, где композиция содержит: первое терапевтическое средство, содержащее соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль; и (с) листок-вкладыш в упаковке, указывающий, что фармацевтическая композиция может быть использована для лечения тромбоэмболи-ческого и/или воспалительного заболевания (как определено ранее). В другом варианте осуществления изобретения листок-вкладыш в упаковке указывает, что фармацевтическая композиция может быть использована в комбинации (как определено выше) со вторым терапевтическим средством для лечения тромбоэмболического и/или воспалительного заболевания. Готовое изделие может дополнительно содержать (d) второй контейнер, где компоненты (а) и (b) расположены во втором контейнере, и компонент (с) находится внутри или вне второго контейнера. Выражение "расположенный в первом и во втором контейнерах" означает, что соответствующий контейнер содержит предмет в пределах его границ. Первый контейнер представляет собой емкость, используемую для хранения фармацевтической композиции. Этот контейнер может быть использован для изготовления, хранения, перевозки и/или индивидуаль
ной/массовой продажи. Первый контейнер предназначен для содержания бутылки, банки, флакона, колбы, шприца, пробирки (например, для приготовления крема) или любой другой емкости, используемой для приготовления, содержания, хранения или распространения фармацевтического продукта.
Второй контейнер используется для хранения первого контейнера и необязательно листка-вкладыша в упаковке. Примеры второго контейнера включают, но не ограничиваются ими, коробки (например, из картона или пластика), ящики, короба, пакеты (например, бумажные и пластиковые пакеты), сумки и мешки. Листок-вкладыш в упаковке может быть физически прикреплен к наружной поверхности первого контейнера с помощью ленты, клея, скобки или другим способом крепления или он может остаться внутри второго контейнера без каких-либо физических средств крепления к первому контейнеру. В качестве альтернативы листок-вкладыш в упаковке помещается на внешней стороне второго контейнера. Если он расположен на внешней стороне второго контейнера предпочтительно, чтобы листок-вкладыш в упаковке был физически прикреплен с помощью ленты, клея, скобы или другого способа крепления. В качестве альтернативы он может быть рядом или находиться на внешней поверхности второго контейнера без физического прикрепления.
Листок-вкладыш в упаковке представляет собой этикетку, ярлык, маркер и т.д., которая содержит информацию, относящуюся к фармацевтической композиции, расположенной внутри первого контейнера. Содержание информации, как правило, определяется регулирующим органом, определяющим область, в которой готовое изделие должно быть продано (например, управление США по надзору в сфере пищевых продуктов и лекарственных средств). Предпочтительно листок-вкладыш в упаковке конкретно излагает показания, для которых фармацевтическая композиция была одобрена. Листок-вкладыш может быть изготовлен из любого материала, на котором человек может прочитать информацию, содержащуюся в нем или на нем. Предпочтительно листок-вкладыш в упаковке представляет собой пригодный для печатания материал (например, бумагу, пластик, картон, фольгу, клейкую бумагу или пластик и т.д.), на котором формируют нужную информацию (например, печатают или наносят).
Другие признаки изобретения станут очевидными в ходе следующих описаний примерных вариантов осуществления, которые даны для иллюстрации изобретения и не предназначены для его ограничения. Следующие соединения в примерах были получены, выделены и охарактеризованы с помощью описанных здесь способов.
VI. Общий синтез, включая схемы.
Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с помощью множества способов, доступных специалистам в области органической химии (Maffrand J.P. et al., Heterocycles, 16(1):35-37 (1981)). Общие схемы синтеза для получения соединений по настоящему изобретению описаны ниже. Эти схемы являются иллюстративными и не предназначены для ограничения возможных методик, которые специалисты в данной области могут использовать для получения соединений, описанных здесь. Различные способы получения соединений по настоящему изобретению будут очевидны таким специалистам в данной области. Кроме того, различные стадии синтеза могут быть выполнены в альтернативной последовательности для получения целевого соединения или соединений.
Примеры соединений по настоящему изобретению, полученные с помощью методик, описанных в общих схемах, приведены в разделе "Промежуточные соединения и примеры", изложенном ниже. Получение гомохиральных примеров может быть выполнено с помощью методик, известных специалисту в данной области. Например, гомохиральные соединения могут быть получены путем разделения рацемических продуктов с помощью хиральной фазовой препаративной ВЭЖХ. В качестве альтернативы соединения в примерах могут быть получены способами, известными для получения энантиомерно обогащенных продуктов. Эти способы включают, но не ограничиваются ими, включение хиральных вспомогательных функциональных групп в рацемические промежуточные соединения, которые служат для управления диастереоселективностью преобразований, с получением энантиообогащенных продуктов при расщеплении хирального вспомогательного вещества.
Соединения по настоящему изобретению могут быть получены несколькими способами, известными специалисту в области органического синтеза. Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием методик, описанных ниже, совместно со способами синтеза, известными в области синтетической органической химии, или их вариантами, как ясно специалистам в данной области. Предпочтительные способы включают, но не ограничиваются ими, способы, которые описаны ниже. Реакции проводят в растворителе или смеси растворителей, соответствующих применяемым реагентам и материалам и подходящих для осуществляемых преобразований. Специалистам в области органического синтеза будет понятно, что функциональные группы, присутствующие в молекуле, должны соответствовать предполагаемым преобразованиям. В некоторых случаях потребуется изменить порядок стадий синтеза или выбрать одну схему конкретного процесса по отношению к другой с тем, чтобы получить целевое соединение по изобретению.
Также является общепризнанным, что еще одним важным фактором при планировании любого пути синтеза в этой области является рациональный выбор защитной группы, используемой для защиты реакционноспособных функциональных групп, присутствующих в соединениях, описанных в настоящем изобретении. Авторитетным источником, описывающим множество альтернатив для квалифицированно
го практикующего специалиста, является Greene et al. (Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, Wiley-Interscience (2006)).
Типичные соединения по настоящему изобретению, где кольцо А представляет собой 6-членный гетероцикл (пример - пиридин), могут быть получены из промежуточных соединений 1h, синтез которых описан в схеме 1. Конденсацией альдегида 1а, полученного в соответствии с модифицированной методикой, описанной Negi (Synthesis, 991 (1996)), с ^)-2-метил1фопан-2-сульфинамидом в присутствии безводного сульфата меди или карбоната цезия в растворителе, таком как DCM, получают сульфинимин 1b (Ellman J., J. Org. Chem., 64:1278 (1999)). Используя модифицированную методику, описанную Kuduk (Tetrahedron Letters, 45:6641 (2004)), соответствующим образом замещенные реагенты Гриньяра, например аллилмагний бромид, могут быть добавлены к сульфинимину 1b с получением сульфинамида 1с в виде смеси диастереомеров, которые могут быть разделены на различных стадиях последовательности. Диастереоселективность для присоединения аллилмагния бромида к сульфинимину 1b может быть улучшена путем применения хлорида индия (III) в соответствии с модифицированной методикой Xu (Xu M.-H., Organic Letters, 10(6): 1259 (2008)). Взаимопревращение защитной группы может быть осуществлено в две стадии с получением Id. Этот хлорпиридин может быть связан с 4-нитропиразолами при нагревании с солью Pd II, такой как Pd(OAc)2, в присутствии фосфинового лиганда и основания, такого как карбонат калия, в растворителе, таком как DMF или DMA, в микроволновом реакторе, как описано Sa-mes (Goikhman R. et al., J. Am. Chem. Soc, 131:3042 (2009)). Восстановлением цинк/НОАс нитропиразола с последующим амидированием с соответствующим образом замещенной карбоновой кислотой получают 1f. Макроциклизация затем осуществляется путем метатезиса с закрытием кольца с использованием рутениевого катализатора Граббса второго поколения с выходом 1g. Гидрированием полученного оле-фина и отщеплением защитной группы получают амин 1h. Соединения формул 1h могут быть преобразованы в соединения по настоящему изобретению в соответствии со схемами 2 и 3.
Схема 1
Типичные соединения по настоящему изобретению могут быть получены, как показано на схеме 2. Начиная с альдегида 2а добавлением винилового реактива Гриньяра (с выходом аллилового спирта 2b) с последующим окислением получают винилкетоны 2с. Присоединением по Михаэлю аминов из схемы 1 с последующим ацилированием 2d получают соединения 2е, которые в результате циклизации с основанием приводят к дигидропиридону 2f.
Соединения по настоящему изобретению, содержащие альтернативное региохимическое замещение пиразола, могут быть синтезированы, как показано на схеме 3. Когда R является подходящей защитной группой (пример - триметилсилилэтоксиметил), удаление защитной группы из 3а-3Ь может проходить с последующим алкилированием алкилгалогенидом в основных условиях или в результате реакции с бо-роновой кислотой в присутствии солей Cu(II), таких как Cu(OAc)2. В большинстве случаев алкилирова-ние протекает с получением только продукта, показанного на 3с. В некоторых случаях продукты такого типа, как показано на схеме 2, образуются в качестве минорного компонента.
Схема 3
Типичные соединения пиридазинона по настоящему изобретению могут быть получены, как показано на схеме 4. Используя модифицированную методику, описанную Vidal (Chem. Eur. J., 3(10): 1691 (1997)), амин 1h может быть подвергнут взаимодействию с оксазиридином 4а с получением Вос-защищенного производного гидразина. Снятием защиты с помощью либо TFA в дихлорметане, либо 4М HCl в диоксане получают гидразин 4b. Конденсацией гидразина 4b и соответствующим образом замещенного гидроксифуранона 4с в метаноле при повышенных температурах получают пиридазинон 4d. Подходящим образом замещенные производные гидроксифуранона 4с могут быть получены в две стадии из стирола 4f в соответствии с модифицированной методикой, описанной van Niel (J. Med. Chem., 48:6004 (2005)). Стирол 4f может быть окислен тетраацетатом свинца в TFA с получением соответствующего производного ацетальдегида, последующая конденсация с глиоксиловой кислотой в присутствии морфолина и соляной кислоты при повышенных температурах обеспечит 4с.
Промежуточные соединения для получения соединений по настоящему изобретению, в которых R2 представляет собой -F, могут быть получены в соответствии со схемой 5. Олефин 1g может быть подвергнут гидрофторированию с выходом до четырех изомерных алкилфторидов. После разделения изомеров удаление защитной группы амина осуществляют путем воздействия или TFA, или HCl, как ранее показано на схеме 1. Промежуточное соединение 5а может быть получено для соединений по настоящему изобретению в соответствии с методикой, описанной на схеме 2.
1fl 5а 5Ь
Соединения по настоящему изобретению с пиридоном, присоединенным к макроциклу (6а), могут быть синтезированы путем окисления соединений 2f в различных окислительных условиях, таких как CuI в DMSO или кумилгидропероксид/катализатор Перлмана, как показано на схеме 6.
Схема 6
Me Me
В качестве альтернативы соединения по настоящему изобретению (6а) с пиридоном, присоединенным к макроциклу, могут быть синтезированы, как показано на схеме 7. Обработкой 1-этоксипроп-1-ена малонилдихлоридом с последующей остановкой реакции этанолом получают соединение 7а, которое может быть гидролизовано до 7b с помощью KOH/EtOH. 7b может быть подвергнуто воздействию концентрированной H2SO4 при высокой температуре с получением 7с, которое может вступать в реакцию с 1h с получением 7d. 7d может быть преобразовано в свой трифлат 7е, и в результате реакции сочетания Сузуки с различными бороновыми кислотами могут быть получены соединения 6а по настоящему изобретению.
Схема 7
7е R8 6а
Промежуточное соединение 1. Получение 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она
В 100-мл круглодонную колбу, содержащую 1 М винилмагния бромид в THF (24 мл, 24,0 ммоль), в атмосфере Ar при 0°С добавляли 3-хлор-2,6-дифторбензальдегид (3,2 г, 18,13 ммоль) в THF (10 мл) по каплям. Реакцию перемешивали в течение 1 ч и быстро охлаждали 1н. HCl до рН 2. Смесь экстрагировали Et2O (3х). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с выходом 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-ола (3 71 г, 100%) в виде бледно-желтого масла. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.34 (ddd, J=8.9, 8.1, 5.8 Гц, 1H), 6.90 (td, J=9.2, 1.7 Гц, 1H), 6.23 (dddt, J=17.2, 10.4, 5.8, 1.2 Гц, 1H), 5.60 (dd, J=7.6, 6.7 Гц, 1H), 5.40-5.31 (m, 1H), 5.28 (dt, J=10.2, 1.2 Гц, 1H), 2.38 (dt, J=8.3, 1.9 Гц, 1Н).
1В. Получение 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она.
К раствору 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-ола (3.7 г, 18.08 ммоль) в ацетоне (90 мл) при 0°С добавляли реагент Джонса (8.77 мл, 23.51 ммоль) по каплям. Сразу после окончания добавления реагента Джонса реакцию быстро охлаждали iPrOH. Смесь концентрировали. Остаток суспендировали в воде и экстрагировали DCM (3х). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с выходом 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она в виде желтого масла (3.45 г, 94%), которое затвердевало в холодильнике. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.48 (ddd, J=9.0, 8.0, 5.5 Гц, 1H), 7.056.91 (m, 1H), 6.70 (ddt, J=17.5, 10.5, 1.1 Гц, 1H), 6.29-6.11 (m, 2H).
Промежуточное соединение 2. Получение 1-(3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-
она
1-(3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным использованному для получения промежуточного соединения 1, путем замены 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида на 3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)бензальдегид. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.64 (ddd, J=8.0, 7.4, 0.8 Гц, 1H), 7.50 (dd, J=8.5, 0.6 Гц, 1H), 6.69 (dd, J=17.6, 10.7 Гц, 1H), 6.27 (d, J=10.7 Гц, 1H), 6.01 (dd, J=17.7, 0.7 Гц, 1H).
Промежуточное соединение 3. Получение 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-
ЗА. Получение 5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида
она
Виалу с септой и обжимной крышкой заполняли 5-хлор-2-фторбензальдегидом (1.0 г, 6.31 ммоль), Ш-1,2,3-триазолом (3.0 г, 43.4 ммоль) и Cs2CO3 (2.260 г, 6.94 ммоль). Густой раствор нагревали при 90°С в течение 1 ч. Очисткой с помощью хроматографии на силикагеле получали смесь целевого продукта и непрореагировавшего триазольного исходного материала. Сразу после добавления ~5-10 мл воды продукт осаждался. Фильтрованием и высушиванием под вакуумом получали 5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегид в виде белого твердого вещества (0.52 г, 40%). MS(ESI) m/z: 208.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 9.85 (s, 1H), 8.09 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.97 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.94 (d, J=0.8 Гц, 1H), 7.73 (dd, J=8.4, 2.3 Гц, 1H), 7.49 (d, J=8.3 Гц, 1Н).
3В. Получение 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-Гона.
1-(5-Хлор-2-(1Н-1,2,3 -триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным использованному для получения промежуточного соединения 1, применяя 5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегид. MS(ESI) m/z: 234.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.82-7.78 (m, 2Н), 7.66-7.59 (m, 2Н), 7.56-7.51 (m, 1H), 6.25 (dd, J=17.6, 10.7 Гц, 1H), 5.93 (dd, J=17.3, 0.6 Гц, 1H), 5.82 (dd, J=10.7, 0.6 Гц,
1Н).
Промежуточное соединение 4. Получение Г(5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-Гил)фенил)проп-2-ен-1-она
4А. Получение 2-азидо-5-хлорбензальдегида.
Раствор 5-хлор-2-фторбензальдегида (1.38 г, 8.70 ммоль) и NaN3 (0.58 г, 8.92 ммоль) в DMF (4 мл) перемешивали при 55°С в течение 8 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли Et2O и водой, затем подкисляли 1н. HCl до рН 4. Органический слой промывали водой (3х) с
последующим солевым раствором (3х), затем высушивали над MgSO4 и фильтровали. Органические слои затем концентрировали с выходом 1.47 г 2-азидо-5-хлорбензальдегида (93%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3-d) 5 10.30 (s, 1H), 7.86 (d, J=2.6 Гц, 1H), 7.58 (dd, J=8.7, 2.5 Гц, 1H), 7.24 (d, J=8.6 Гц, 1Н).
4В. Получение 5-хлор-2-(4-(трибутилстаннил)-1Н-1,2,3-триазол-1 -ил)бензальдегида.
Раствор 2-азидо-5-хлорбензальдегида (386 мг, 2.126 ммоль) и трибутилстаннилацетилена (0.646 мл, 2.126 ммоль) в толуоле (5 мл) нагревали при 100°С в течение 5 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Через 5 ч реакционную смесь концентрировали и сразу очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 495 мг 5-хлор-2-(4-(трибутилстаннил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида (43%) в виде бледно-желтого масла. MS(ESI) m/z: 498.1 (М+Н)+.
4С. Получение 5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида.
К раствору 5-хлор-2-(4-(трибутилстаннил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида (459 мг, 0.924 ммоль) в ACN (5 мл) добавляли NCS (185 мг, 1.386 ммоль), и реакцию затем нагревали при 60°С в течение 15 ч. Через 15 ч реакционную смесь концентрировали и сразу очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 117 мг 5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида (52%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 242.0 (М+Н, пик изотопа хлора)+.
4D. Получение 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она.
1-(5-Хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3 -триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным использованному для получения промежуточного соединения 1, путем замены 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида на 5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегид. MS(ESI) m/z: 268.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.71-7.66 (m, 1H), 7.62-7.52 (m, 2H), 7.44 (d, J=8.4 Гц, 1H), 6.29 (dd, J=17.6, 10.6 Гц, 1H), 5.98-5.79 (m, 2Н).
Промежуточное соединение 5. Получение диэтил(2-хлор-2-оксоэтил)фосфоната
EtO-P COCI
OEt
К раствору 2-(диэтоксифосфорил)уксусной кислоты (0.1 мл, 0.622 ммоль) в CH2Cl2 (1 мл) добавляли 2М (CO)2Cl2 в DCM (0.6 мл, 1.24 ммоль) с последующим добавлением капли DMF. Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч и концентрировали под вакуумом с выходом диэтил(2-хлор-2-оксоэтил)фосфоната в виде желтого масла. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 4.24 (dq, J=8.4, 7.1 Гц, 4Н), 3.55-3.47 (d, J=21.46 Гц, 2Н), 1.42-1.38 (t, J=7.4 Гц, 6Н).
Промежуточное соединение 6. Получение (11)-2-метилбут-3-еновой кислоты
6А. Получение (Я)-4-бензил-3 -((Я)-2-метилбут-3 -еноил)оксазолидин-2-она.
К раствору 2-метилбут-3-еновой кислоты (5.59 г, 55.9 ммоль) и NMM (6.14 мл, 55.9 ммоль) в THF (62 мл) при 0°С добавляли пивалоилхлорид (6.87 мл, 55.9 ммоль) по каплям. Реакционную смесь охлаждали до -78°С и перемешивали в течение ~2 ч. В отдельной колбе к раствору (Я)-4-бензилоксазолидин-2-она (8.25 г, 46.6 ммоль) в THF (126 мл) при -78°С добавляли 2.5 М nBuLi в гексане (20.49 мл, 51.2 ммоль) по каплям. Через 35 мин эту реакционную смесь переносили с помощью канюли к первой реакции. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 2 ч, затем холодную баню удаляли, и реакцию быстро охлаждали насыщенным NH4Cl. Реакцию разбавляли водой и экстрагировали EtOAc (3х). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением желтого масла (15 г). Очисткой с помощью хроматографии на силикагеле получали (Я)-4-бензил-3-((Я)-2-метилбут-3-еноил)оксазолидин-2-он (6.59 г, 55%) в виде бесцветного масла. MS(ESI) m/z: 282.1 (M+Na)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.36-7.19 (m, 5H), 6.03-5.93 (m, 1H), 5.23-5.10 (m, 2Н), 4.69-4.63 (m, 1H), 4.51-4.43 (m, 1H), 4.23-4.15 (m, 2H), 3.29 (dd, J=13.5, 3.3 Гц, 1H), 2.79 (dd, J=13.5, 9.6 Гц, 1H), 1.35 (d, J=6.9 Гц, 3Н) ppm. Другой диастереомер (11)-4-бензил-3-(^)-2-метилбут-3-еноил)оксазолидин-2-он (4.6 г, 38%) также получали в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z:
260.1 (М+Н)+.
6В. Получение (Я)-2-метилбут-3-еновой кислоты.
К прозрачному бесцветному раствору (Я)-4-бензил-3-((Я)-2-метилбут-3-еноил)оксазолидин-2-она (6.05 г, 23.33 ммоль) в THF (146 мл) при 0°С добавляли CHCl3 (3х). Водный слой подкисляли концентрированной HCl до рН~3, и затем его экстрагировали EtOAc (3х). Слои EtOAc объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением (R)-2-метилбут-3-еновой кислоты (2.15 г, 92%) в виде бесцветного масла. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 10.84 (br. s., 1H), 5.94 (ddd, J=17.4, 10.1, 7.4 Гц, 1H), 5.22-5.13 (m, 2H), 3.23-3.15(m, 1H), 1.31 (d, J=7.2 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 7. Получение 1-циклопропил-4-нитро-1Н-пиразола
DCE (66 мл) добавляли к 4-нитро-1Н-пиразолу (1.5 г, 13.3 ммоль), циклопропилбороновой кислоте (2.28 г, 26.5 ммоль), 2,2'-бипиридину (2.1 г, 13.3 ммоль) и Na2CO3 (2.81 г, 26.5 ммоль) в 250-мл кругло-донной колбе. Смесь продували Ar (3х). Добавляли Cu(OAc)2 (2.41 г, 13.3 ммоль) с последующим продуванием Ar. Реакцию затем нагревали в атмосфере Ar в течение 6 ч. Сразу после завершения реакции смесь фильтровали через CELITE(r) и концентрировали. Очисткой с помощью хроматографии на силика-геле получали 1-циклопропил-4-нитро-1Н-пиразол (0.965 г, 47.5%) в виде белого твердого вещества.
Промежуточное соединение 8. Получение 1-этил-4-нитро-1Н-пиразола
1-Этил-4-нитро-Ш-пиразол получали способом, аналогичным использованному для получения 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола, описанного в примере 1D, путем замены EtI на MeI.
Промежуточное соединение 9. Получение 1-(2,2-дифторэтил)-4-нитро-1Н-пиразола
1-(2,2-Дифторэтил)-4-нитро-1H-пиразол получали способом, аналогичным использованному для получения 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола, описанного в примере 1D, путем замены 2,2-дифторэтилтрифторметансульфоната на MeI. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.24 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 6.345.97 (m, 1H), 4.52 (td, J=13.5, 4.1 Гц, 2Н).
Промежуточное соединение 10. Получение 4-нитро-1-(2,2,2-трифторэтил)-1Н-пиразола
4-Нитро-1-(2,2,2-трифторэтил)-1Н-пиразол получали способом, аналогичным использованному для получения 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола, описанного в примере 1D, путем замены 1,1,1-трифтор-3-иодпропана на MeI. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.30 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 4.77 (q, J=8.1 Гц, 2Н).
Промежуточное соединение 11. Получение 4-нитро-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пиразола
4-Нитро-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-Ш-пиразол получали способом, аналогичным использованному для получения 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола, описанного в примере 1D, путем замены SEM-Cl на MeI. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.30 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.63 (dd, J=8.9, 7.8 Гц, 3Н), 0.98-0.90 (m, 3Н), 0.02-0.02 (m, 10Н).
Промежуточное соединение 12. Получение 1-(6-бром-3-хлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она
1-(6-Бром-3-хлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным способу получения промежуточного соединения 1, путем замены 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида на 6-бром-3-хлор-2-фторбензальдегид. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.33-7.41 (m, 2H), 6.64 (dd, J=17.6, 10.2 Гц, 1H), 6.25 (d, J=10.7 Гц, 1H), 6.07 (d, J=17.6 Гц, 1Н).
Промежуточное соединение 13 получали из 2-бром-5-хлорбензальдегида с использованием способов, описанных для синтеза промежуточного соединения 1, из 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида с выхо-
Промежуточное соединение 13. Получение 1-(2-бром-5-хлорфенил)проп-2-ен-1-она
Cs2CO3 (14.41 г, 44.2 ммоль) суспендировали в растворе 4-нитро-Ш-пиразола (5.00 г, 44.2 ммоль) и DMF (40 мл). После нагрева до 120°С в течение 5 мин добавляли твердый 2-хлор-2,2-дифторацетат натрия (13.48 г, 88 ммоль) 10 равными порциями на протяжении 20 мин. Реакция завершилась после 10 мин дополнительного нагревания. Смесь добавляли в делительную воронку, содержащую 100 мл воды, и экстрагировали Et2O (2x50 мл). Объединенные органические слои концентрировали. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гексаны/EtOAc, получали 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразол (6.99 г, 42.9 ммоль, выход 97%) в виде прозрачного бесцветного масла. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.39-7.05 (t, J=60 Гц, 1H).
Промежуточное соединение 15. Получение 1-(2,2-дифторциклопропил)-4-нитро-1Н-пиразола
15 А. Получение 4-нитро-1-винил-Ш-пиразола.
4-Нитро-Ш-пиразол (1 г, 8.84 ммоль) и ВТЕАС (0.20 г, 0.884 ммоль) добавляли в виалу, содержащую DCE (5 мл) и 50%-ный водный NaOH (3.5 г, 44.2 ммоль). Реакцию нагревали до 80°С в течение 6 ч. Реакцию фильтровали, фильтрат концентрировали досуха под вакуумом, и остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой (градиент гексаны-EtOAc). 4-Нитро-1-винил-Ш-пиразол (0.87 г, выход 71%) выделяли в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.31 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.02 (dd, J=15.6, 8.8 Гц, 1H), 5.80 (dd, J=15.5, 1.9 Гц, 1H), 5.17 (dd, J=8.8, 2.0 Гц, 1Н).
15В. Получение 1-(2,2-дифторцикло1гоопил)-4-нитро-Ш-пиразола.
Триметилсилил 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)ацетат (0.57 мл, 2.88 ммоль) медленно капали (на протяжении 20 мин) в смесь 4-нитро-1-винил-Ш-пиразола (0.2 г, 1.44 ммоль) и NaF (6 мг, 0.144 ммоль) в метилбензоате (1 мл), и этот раствор нагревали до 105°С. Сразу после окончания добавления реакция была завершена. Смесь охлаждали до комнатной температуры и сразу подвергали хроматографии с нормальной фазой (градиент гексаны-EtOAc) с выходом 1-(2,2-дифторциклопропил)-4-нитро-Ш-пиразола (0.084 г, выход 30.9%) в виде желтого кристаллического твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.26 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 4.18 (dddd, J=10.4, 8.4, 6.2, 2.3 Гц, 1H), 2.40-2.10 (m, 2H).
Промежуточное соединение 16. Получение 1-(3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-
она
16А. Получение 3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторбензальдегида.
К раствору 1-хлор-4-(дифторметокси)-2-фторбензола (400 мг, 2.04 ммоль) в THF (8 мл) при -78°С добавляли LDA в THF/гептане/этилбензоле (1.4 мл, 2.4 ммоль) по каплям. После перемешивания при этой же температуре в течение 20 мин добавляли DMF (0.2 мл, 2.44 ммоль) одной порцией, и перемешивание продолжали при этой же температуре в течение 10 мин. Добавляли НОАс (0.47 мл, 8.14 ммоль) с последующим добавлением воды (30 мл). Водный слой затем экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои высушивали над MgSO4 и концентрировали под вакуумом. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторбензальдегида (120 мг, 21%) в виде прозрачного бесцветного масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 10.35 (d, J=0.9 Гц, 1H), 7.63 (dd, J=8.9, 8.0 Гц, 1H), 7.07 (dd, J=8.9, 1.2 Гц, 1H), 6.87-6.39 (t, J=7.2 Гц, 1Н).
16В. Получение 1 -(3 -хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она.
1-(3-Хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он получали из 3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторбензальдегида с использованием способов, описанных для синтеза промежуточного соединения 1, из 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида с выходом 3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторбензальдегида (0.04 г, выход 67%) в виде прозрачного бесцветного масла. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 7.48 (dd, J=8.9, 8.1 Гц, 1H), 7.08-7.01 (m, 1H), 6.69-6.63 (m, 1H), 6.63-6.30 (t, J=73 Гц, 1H), 6.18 (d, J=10.5 Гц, 1H), 6.10 (d, J=17.6
Гц, 1Н).
13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола на 4-нитро-1-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1H-пиразол, промежуточное соединение 11.
17В. Получение 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1 (18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3 -триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3-{[2-(триметилсилил)этокси]метил}-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он сразу обрабатывали HCl с выходом 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-она. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.69-8.64 (m, 1H), 8.36-8.32 (m, 1H), 7.94-7.90 (m, 2H), 7.82-7.77 (m, 2H), 7.65 (s, 2H), 7.62-7.58 (m, 1H), 5.87-5.82 (m, 1H), 5.56-5.50 (m, 1H), 3.44-3.39 (m, 2H), 2.69-2.60 (m, 1H), 2.30-2.11 (m, 3H), 2.10-1.93 (m, 2H), 1.74-1.65 (m, 1H), 1.42-1.28 (m, 2H), 1.20-1.14 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 543.6 (M+H)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=4.71 мин, чистота > 99.5%.
Промежуточное соединение 18. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали аналогично получению 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она, промежуточное соединение 17, путем замены 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-он с выходом (0.5 мг, 11%). MS(ESI) m/z: 512.1 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.68-8.59 (m, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.78-7.70 (m, 1H), 7.59-7.50 (m, 2H), 7.18-7.05 (m, 1H), 6.19-6.09 (m, 1H), 5.75-5.61 (m, 1H), 3.83-3.73 (m, 1H), 3.73-3.56 (m, 2H), 2.82-2.59 (m, 3Н), 2.26-2.14 (m, 1H), 2.132.03 (m, 1H), 2.03-1.93 (m, 1H), 1.76-1.63 (m, 1H), 1.45-1.26 (m, 2Н), 1.25-1.18 (m, 2Н), 1.14 (d, J=6.9 Гц, 5Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод А): RT=5.67 мин, чистота=100%.
Промежуточное соединение 19. Получение (9R,13S)-13-амино-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
19А. Получение 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразола.
Cs2CO3 (14.41 г, 44.2 ммоль) суспендировали в растворе 4-нитро-Ш-пиразола (5.00 г, 44.2 ммоль) и DMF (40 мл). После нагрева до 120°С в течение 5 мин добавляли твердый 2-хлор-2,2-дифторацетат натрия (13.48 г, 88 ммоль) 10 равными порциями на протяжении 20 мин. Реакции была завершена после 10 мин дополнительного нагревания. Смесь добавляли в делительную воронку, содержащую 100 мл воды, и экстрагировали Et2O (2x 50 мл). Объединенные органические слои концентрировали. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гексаны/EtOAc, получали 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразол (6.99 г, 42.9 ммоль, выход 97%) в виде прозрачного бесцветного масла. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.39-7.05 (t, J=60 Гц, 1Н).
19В. Получение ^)-трет-бутил (1-(4-(1-(дифторметил)-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1 -ил)карбамата.
В промытую N2 500-мл круглодонную колбу добавляли ^)-трет-бутил (1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат, полученный как описано в примере 1С, (10 г, 35.4 ммоль), 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразол, промежуточное соединение 14, (6.34 г, 38.9 ммоль) и диоксан (100 мл). Раствор барботиро-вали N2 в течение 5 мин и добавляли Pd(OAc)2 (0.40 г, 1.7 ммоль), ди(адамантан-1-ил)(бутил)фосфин (1.27 г, 3.5 ммоль), K2CO3 (14.7 г, 106 ммоль) и PvOH (1.08 г, 10.61 ммоль). Реакционную смесь барботи-ровали N2 в течение 5 мин. Затем ее нагревали до 100°С в течение 3 ч. Добавляли воду (200 мл). Реакционную смесь затем экстрагировали EtOAc (2x 200 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (200 мл), солевым раствором (200 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гекса-ны/EtOAc, получали ^)-трет-бутил (1-(4-(1-(дифторметил)-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (12.91 г, 31.5 ммоль, выход 89%) в виде слегка желтого масла. MS(ESI) m/z: 410.4 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.80 (dd, J=5.1, 0.7 Гц, 1H), 8.36 (s, 1Н), 7.34 (s, 1H), 7.31 (dd, J=5.1, 1.5 Гц, 1H), 7.27-6.91 (t, J=58 Гц, 1H), 5.79-5.63 (m, 1H), 5.16-5.03 (m, 2H), 4.92 (d, J=5.9 Гц, 1H), 2.67 (t, J=6.4 Гц, 2H), 1.46 (br. s., 9H).
19C. Получение ^)-трет-бутил (1-(4-(4-амино-1-(дифторметил)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-
3- ен-1 -ил)карбамата.
В 100-мл 3-горлую круглодонную колбу добавляли раствор ^)-трет-бутил (1-(4-(1-(дифторметил)-
4- нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (0.78 г, 1.90 ммоль) в МеОН (12 мл) и раствор NH4Cl (1.02 г, 19 ммоль) в воде (3 мл). К раствору добавляли Fe (0.53 г, 9.49 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 65°С в течение 3 ч. Добавляли воду (50 мл). После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали через слой CELITE(r) и прополаскивали МеОН (200 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток разделяли между EtOAc (100 мл) и водой (100 мл). Органическую фазу отделяли, промывали водой (100 мл), солевым раствором (100 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом DCM/MeOH, получали ^)-трет-бутил (1-(4-(4-амино-1-(дифторметил)-Ш-пиразол-
5- ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (0.585 г, 1.54 ммоль, выход 81%) в виде масла. MS(ESI) m/z: 380.1 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.70 (dd, J=5.0, 0.7 Гц, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.32 (dd, J=5.1, 1.5 Гц, 1H), 7.28-6.97 (t, J=58 Гц, 1H), 5.80-5.66 (m, 1H), 5.65-5.53 (m, 1H), 5.13-5.03 (m, 2Н), 4.87 (br. s., 1Н), 3.22 (br. s., 2H), 2.65 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 1.52-1.37 (m, 9H).
19D. Получение трет-бутил ((S)-1-(4-(1-(дифторметил)-4-((R)-2-метилбут-3-енамидо)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата.
В промытую N2 3-горлую 250-мл круглодонную колбу добавляли раствор ^)-трет-бутил (1-(4-(4-амино-1-(дифторметил)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (5 г, 13.18 ммоль) и EtOAc (50 мл). Раствор охлаждали до -10°С и добавляли ^)-2-метилбут-3-еновую кислоту, промежуточное соединение 6 (1.72 г, 17.13 ммоль), пиридин (4.26 мл, 52.7 ммоль) и Т3Р(r) (23.54 мл, 39.5 ммоль). Охлаждающую баню удаляли, и раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивали на протяжении 20 ч. Добавляли воду (30 мл) и EtOAc (30 мл), и смесь перемешивали в течение 30 мин. Органическую фазу отделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (30 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гексаны/EtOAc, получали трет-бутил (^)-1-(4-(1-(дифторметил)-4-(^)-2-метилбут-3-енамидо)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (5.69 г, 12.33 ммоль, выход 94%). MS(ESI) m/z: 462.2 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.75 (dd, J=5.0, 0.6 Гц, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.32 (t, J=59 Гц, 1H), 7.28 (br. s., 1H), 7.20 (s, 1H), 5.97-5.85 (m, 1H), 5.78-5.65 (m, 1H), 5.56-5.44 (m, 1H), 5.28-5.19
(m, 2H), 5.12 (d, J=2.0 Гц, 2Н), 4.91-4.82 (m, 1H), 3.20-3.11 (m, 1H), 2.72-2.62 (m, 2H), 1.48-1.43 (s, 9H), 1.33 (d, J=6.8 Гц, 3Н).
19Е. Получение трет-бутил N-[(9R,10E,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата.
В промытую N2 2 л 3-горлую круглодонную колбу добавляли раствор трет-бутил ((S)-1-(4-(1-(дифторметил)-4-((R)-2-метилбут-3-енамидо)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (3 г, 6.50 ммоль) в EtOAc (1300 мл). Раствор барботировали Ar в течение 15 мин. Добавляли катализатор Граббса второго поколения (1.38 г, 1.63 ммоль) одной порцией. Реакционную смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 24 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли, и остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом DCM/MeOH, с выходом трет-бутил N-[(9R,10E,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (2.13 г, 4.91 ммоль, выход 76%) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 434.4 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.71 (d, J=5.1 Гц, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.44-7.40 (m, 1H), 7.36 (br. s., 1H), 7.27 (t, J=58 Гц, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.49-6.39 (m, 1H), 5.78 (s, 1H), 4.80 (br. s., 2H), 3.18-3.08 (m, 1H), 3.08-2.98 (m, 1H), 2.06-1.93 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.19 (d, J=6.6 Гц, 3Н).
19F. Получение трет-бутил N-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатри-цикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата.
Pd на угле (0.60 г, 0.570 ммоль) добавляли в 250 мл колбу Парра для гидрирования, содержащую раствор трет-бутил N-[(9R,10E,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло-[12.3.1.02,6] октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (2.46 г, 5.68 ммоль) в EtOH (100 мл). Колбу продували N2, повышали давление до 55 psi H2 и оставляли перемешиваться в течение 18 ч. Реакцию фильтровали через CELITE(r) и концентрировали с выходом трет-бутил N-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (2.17 г, выход 88%) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 436.3 [М+Н]+. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 5 9.32 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.0 Гц, 1H), 7.96 (t, J=58 Гц, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.32 (d, J=4.8 Гц, 1H), 7.22 (d, J=7.3 Гц, 1H), 4.66 (d, J=8.3 Гц, 1H), 2.62 (br. s., 1H), 1.88 (d, J=12.8 Гц, 1H), 1.77-1.59 (m, 2H), 1.42-1.28 (m, 9H), 1.15 (d, J=18.2 Гц, 2Н), 0.83 (d, J=7.0 Гц, 3Н).
19G. Получение (9R, 13S)-13 -амино-3 -(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицик-
ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
4н. HCl в диоксане (3.88 мл, 15.5 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил N-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (2.25 г, 5.2 ммоль) в МеОН (10 мл). Реакцию оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакцию охлаждали на ледяной бане, и добавляли 7н. NH3 в МеОН (13.3 мл, 93.0 ммоль). Через 5 мин реакцию разбавляли CH2Cl2 (80 мл), и образовавшееся твердое вещество отфильтровывали. Фильтрат концентрировали с выходом (9R,13S)-13-амино-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (1.3 г, 3.88 ммоль, выход 75%). MS(ESI) m/z: 336.3 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 5 9.33 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.0 Гц, 1H), 7.94 (t, J=58 Гц, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.32 (d, J=5.0 Гц, 1H), 4.01 (dd, J=10.2, 5.1 Гц, 1H), 2.63-2.53 (m, 1H), 1.90-1.69 (m, 2H), 1.53-1.36 (m, 2H), 1.16-1.00 (m, 1H), 0.85 (d, J=7.0 Гц, 3Н).
Пример 1. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-онтрифторацетата
IA. Получение (S,Е)-N-((4-хлорпиридин-2-ил)метилен)-2-метилпропан-2-сульфинамида.
К раствору S-(-)-трет-бутил-сульфинамида (0.856 г, 7.06 ммоль) в DCM (14.13 мл) добавляли последовательно CuSO4 (2.481 г, 15.54 ммоль) и 4-хлорпиколинальдегид (1.0 г, 7.06 ммоль). Белую суспензию перемешивали при комнатной температуре. Через 3 ч коричневую суспензию фильтровали через CELITE(r), элюируя DCM, с получением прозрачного коричневого фильтрата. Концентрированием получали коричневое масло массой 1.85 г. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой получали 1.31 г (S,Е)-N-((4-хлорпиридин-2-ил)метилен)-2-метилпропан-2-сульфинамида в виде прозрачного
желтого масла. MS(ESI) m/z: 245.0 (М+Н)+.
IB. Получение (S)-N-((S)-1 -(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3 -енил)-2-метилпропан-2-сульфинамида.
К охлажденной (0-5°С) смеси InCl3 (13.56 г, 61.3 ммоль) в THF (170 мл) добавляли по каплям на протяжении 30 мин раствор 1 М аллилмагния бромид в Et2O (62 мл, 61.3 ммоль). Реакцию оставляли на
греваться до комнатной температуры. Через 1 ч при комнатной температуре добавляли раствор (SJi)-N-((4-хлорпиридин-2-ил)метилен)-2-метилпропан-2-сульфинамида (10 г, 40.9 ммоль) в EtOH (170 мл). Через 2-3 ч реакцию концентрировали под вакуумом при 50-55°С. Сырое вещество разделяли между EtOAc (200 мл) и водой (50 мл), и слои разделяли. Водный слой экстрагировали EtOAc (2x50 мл). Органические слои объединяли и промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением ^)^-(^)-1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-енил)-2-метилпропан-2-сульфинамида (13.5 г, 106%) в виде желтого масла. MS(ESI) m/z: 287.2 (М+Н)+.
IC. Получение ^)-трет-бутил1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-енилкарбамата.
(S)-N-((S)-1-(4-Хлорпиридин-2-ил)бут-3-енил)-2-метилпропан-2-сульфинамид (75 г, 261 ммоль) растворяли в МеОН (1500 мл). Добавляли водную 6н. HCl (750 мл, 4.5 моль). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 2-3 ч и затем концентрировали. Остаток разбавляли водой (2 л), промывали EtOAc (500 мл). Водный слой подщелачивали насыщенным NaHCO3, экстрагировали в EtOAc (3x1 л). Объединенные органические слои промывали водой (1 л) и солевым раствором (1 л), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом при 50-55°С с получением сырого продукта (43 г, 90%). MS(ESI) m/z: 183.2 (М+Н)+. Сырой продукт (42 г, 230 ммоль) растворяли в DCM (420 мл), и добавляли Et3N (32.1 мл, 230 ммоль) с последующим добавлением по каплям ВОС2О (53.4 мл, 230 ммоль). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 2-3 ч. Реакцию разбавляли избытком DCM (1 л), промывали водой (500 мл) и солевым раствором (500 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением ^)-трет-бутил 1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-енилкарбамата (61 г, 86%) в виде бледно-желтого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 283.2 (М+Н)+.
ID. Получение 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола.
К раствору 4-нитро-Ш-пиразола (2.5 г, 22.11 ммоль) в THF (50 мл) добавляли NaH (0.973 г, 24.32 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. К этой суспензии затем добавляли MeI (1.382 мл, 22.11 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь затем разбавляли EtOAc и промывали солевым раствором. Органический слой концентрировали с последующей очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола в виде белого твердого вещества (1.9 г, 80%). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 ppm 8.12 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 3.97 (s, 3Н).
IE. Получение ^)-трет-бутил (1-(4-(1-метил-4-нитро-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-
ил)карбамата.
В виалу под давлением добавляли ^)-трет-бутил 1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-енилкарбамат (3.0 г, 10.61 ммоль), 1-метил-4-нитро-Ш-пиразол (1.348 г, 10.61 ммоль), ди(адамант-1-ил)(бутил)фосфин (1.141 г, 3.18 ммоль), пивалевую кислоту (0.369 мл, 3.18 ммоль) и K2CO3 (4.40 г, 31.8 ммоль). К реакционной смеси затем добавляли DMF (21 мл), и виалу продували Ar (3x). К этой смеси затем добавляли Pd(OAc)2 (0.476 г, 2.122 ммоль). Виалу герметично закрывали и нагревали на масляной бане при 120°С на протяжении ночи. Реакционную смесь фильтровали и разделяли между водным 10% LiCl (15 мл) и EtOAc (30 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x 20 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (15 мл) и высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 1.2 г ^)-трет-бутил (1-(4-(1-метил-4-нитро-Ш-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (29%) в виде коричневого масла. MS(ESI)
m/z: 374.4 (М+Н)+.
IF. Получение ^)-трет-бутил( 1 -(4-(4-шино-1-метил-Ш-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3 -ен-1 -
ил)карбамата.
Раствор ^)-трет-бутил( 1 -(4-( 1 -метил-4-нитро-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3 -ен-1-
ил)карбамата (1.2 г, 3.21 ммоль) в МеОН (10 мл) и АсОН (1 мл) нагревали на масляной бане до 60°С. К полученному выше прозрачному раствору затем медленно добавляли Zn (0.420 г, 6.43 ммоль) и оставляли перемешиваться при этой же температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь затем фильтровали через CELITE(r) и концентрировали с выходом сырого продукта. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 0.88 г ^)-трет-бутил(1-(4-(4-амино-1-метил-Ш-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (76%) в виде бледно-коричневого масла. MS(ESI)
m/z: 344.4 (М+Н)+.
IG. Получение трет-бутил(^)-1-(4-( 1 -метил-4-(^)-2-метилбут-3 -енамидо)-Ш-пиразол-5 -
ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата.
К раствору ^)-2-метилбут-3-еновой кислоты, промежуточное соединение 6 (385 мг, 3.84 ммоль), (S)-трет-бутил(1-(4-(4-амино-1-метил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (880 мг, 2.56 ммоль) и пиридина (0.620 мл, 7.69 ммоль) в EtOAc (40 мл) при -10°С в атмосфере Ar добавляли Т3Р(r) (50 мас.% в EtOAc) (3.05 мл, 5.12 ммоль) по каплям. Реакционную смесь перемешивали при -10°С, затем оставляли постепенно нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь затем оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь затем разбавляли EtOAc с последующим промыванием водным насыщенным NaHCO3 и солевым раствором. Органические
слои объединяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 0.6 г трет-бутил(^)-1-(4-(1-метил-4-((R)-2-метилбут-3-енамидо)-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (52%) в виде желтого масла. MS(ESI) m/z: 426.5 (М+Н)+.
IH. Получение трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-
ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата.
Раствор трет-бутил((S)-1-(4-(1-метил-4-((R)-2-метилбут-3-енамидо)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (600 мг, 1.410 ммоль) в DCE (18 мл) продували барботированием Ar через реакционную смесь. Затем добавляли катализатор Граббса второго поколения (480 мг, 0.564 ммоль). Реакционную смесь продували Ar и снова откачивали (3 x ). Реакционную смесь затем нагревали при 120°С в виале для микроволн в течение 30 мин. Реакционную смесь затем концентрировали, и сырой остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом 118 мг трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (20%) в виде коричневого масла. MS(ESI) m/z: 398.5 (М+Н)+.
II. Получение трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]ок-
тадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата.
К дегазированному раствору трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (118 мг, 0.297 ммоль) в EtOH (12 мл) добавляли Pd на угле (31.6 мг, 0.030 ммоль), и реакционную смесь затем перемешивали в атмосфере Н2 при 55 psi в течение 5 ч. Реакционную смесь затем фильтровали через CELITE(r) и концентрировали с выходом трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (92 мг, 72%) в виде коричневого масла.
MS(ESI) m/z: 400.4 (М+Н)+.
1J. Получение (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
К раствору трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (92 мг, 0.230 ммоль) в МеОН (3 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (3 мл, 12.00 ммоль), и реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 1.5 ч. Реакционную смесь затем концентрировали под вакуумом с выходом 86 мг (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она в виде желтого твердого
вещества. MS(ESI) m/z: 300.4 (М+Н)+.
1K. Получение (9R,13S)-13-({3-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-3-оксопропил}амино)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
К раствору (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (34 мг, 0.091 ммоль) и 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она (21.34 мг, 0.091 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли DIEA (16 мкл, 0.092 ммоль). Реакцию затем перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. По окончании 15 мин сырую реакционную смесь использовали на следующей стадии. MS(ESI) m/z: 533.4 (М+Н)+.
1L. Получение [({3-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-3-оксопропил}[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамоил)ме-тил]фосфоната.
К сырой реакционной смеси (9R,13S)-13-({3-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-3-оксопропил}амино)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (49 мг, 0.092 ммоль) при 0°С добавляли диэтил(2-хлор-2-оксоэтил)фосфонат (276 мкл, 0.276 ммоль), и реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь затем быстро охлаждали 0.2 мл H2O с последующей очисткой с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Целевые фракции затем концентрировали с использованием BIOTAGE(r) V10 с получением 43 мг [({3-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-3-оксопропил}[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-13-ил]карбамоил)метил]фосфоната в виде прозрачного масла. MS(ESI) m/z: 711.4
(М+Н)+.
1М. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-
тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата.
К раствору [({3-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-3-оксопропил}[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамоил)метил]-фосфоната (43 мг, 0.060 ммоль) в МеОН (1.5 мл) при 0°С добавляли NaOMe (52.3 мг, 0.242 ммоль). Ледяную баню удаляли, и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную смесь затем быстро охлаждали 1н. HCl (0.05 мл) и концентрировали с получением сырого продукта. Сырой продукт затем очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением 21 мг (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9
диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата в виде бледно-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) 5 8.76 (d, J=6.4 Гц, 1H), 8.27 (d, J=0.9 Гц, 1H), 7.85 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.81-7.77 (m, 2Н), 7.62-7.48 (m, 4Н), 5.77 (s, 1H), 5.39 (dd, J=12.5, 3.7 Гц, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.42 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.57-2.45 (m, 1H), 2.23-2.06 (m, 3Н), 1.95-1.82 (m, 2H), 1.61-1.48 (m, 1H), 1.34-1.24 (m, 1H), 1.13 (d, J=6.8 Гц, 2Н), 1.07-1.02 (m, 3Н). MS(ESI) m/z: 557.4 (M+H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=5.82 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=1.8 нМ, для калликреина плазмы Ki=24 нМ.
Пример 2. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7Д5-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замещения 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 1. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.84-7.73 (m, 2H), 7.59-7.48 (m, 2H), 7.10 (td, J=9.2, 2.0 Гц, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.5, 3.7 Гц, 1H), 4.09 (s, 3Н), 3.70 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.79-2.68 (m, 2Н), 2.65-2.53 (m, 1H), 2.33 - 2.19 (m, 1H), 2.07-1.90 (m, 2Н), 1.69-1.56 (m, 1H), 1.21 (br. s., 2H), 1.10 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 526.4 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод А): RT=6.97 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=10 нМ, для калликреина плазмы Ki=30 нМ.
Пример 3. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),-4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 4. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.77 (d, J=5.3 Гц, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.71-7.57 (m, 4H), 7.54 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.55 (dd, J=12.8, 3.7 Гц, 1H), 4.09 (s, 3Н), 3.60-3.49 (m, 2Н), 2.60 (d, J=5.7 Гц, 1H), 2.26 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.18 (d, J=11.2 Гц, 1H), 2.04-1.84 (m, 2H), 1.68-1.52 (m, 1H), 1.45-1.31 (m, 2Н), 1.20 (d, J=6.6 Гц, 2Н), 1.13-1.08 (m, 3Н). MS(ESI) m/z: 591.3 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.69 мин, чистота > 95%; для фактора XIa K=0.12 нМ, для калликреина плазмы Ki=6 нМ.
4А. Получение (9R, 13S)-3 -(дифторметил)-13 -(4-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
Пример 4. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-ил}бензонитрила
К раствору (9R,13S)-13-амино-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (0.060 г, 0.178 ммоль), промежуточное соединение 19, 4-гидрокси-2Н-пиран-2-она, в виале добавляли nBuOH (0.8 мл) и воду (0.2 мл). Сосуд закрывали и нагревали при 110°С в течение 15 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с получением (9R,13S)-3-(дифторметил)-13-(4-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (0.0055 г, 7.2%) в виде желтого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 430.0
(М+Н).
4В. Получение 1-[(9R, 13S)-3 -(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-
ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16 -пентаен-13 -ил] -2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-ил трифторметан-сульфоната
В виалу, содержащую (9R,13S)-3-(дифторметил)-13-(4-гидрокси-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (5.5 мг, 0.013 ммоль), 1,1,1-трифтор-М-фенил-М-((трифторметил)сульфонил)метансульфонамид (5.49 мг, 0.015 ммоль), добавляли Et3N (5.36 мкл, 0.038 ммоль) в DMF (0.3 мл). Через 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с получением 1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-ил трифторметансульфоната (1.8 мг, выход 25.03%) в виде желтого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 562.08 (М+Н).
4С. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16 -пентаен-13-ил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-ил}бензонитрил трифторацетата.
К раствору в диоксане (0.15 мл) 1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16 -пентаен-13-ил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-ил трифторметан-сульфоната (1.8 мг, 3.21 мкмоль), (5-хлор-2-цианофенил)бороновой кислоты (0.698 мг, 3.85 мкмоль) добавляли водный 2М Na2CO3 (3.21 мкл, 6.41 мкмоль). Раствор продували Ar и добавляли Pd(PPh3)4 (0.370 мг, 0.321 мкмоль). Реакцию продували Ar в течение нескольких минут, затем закрывали и нагревали при 100°С в течение 3 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-4-ил}бензонитрил трифторацетата (1.62 мг, 2.370 мкмоль, выход 73.9%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 549.4 (М+Н). 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 5 8.74 (d, J=5.0 Гц, 1H), 8.36 (d, J=6.9 Гц, 1H), 7.87 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.79-7.72 (m, 1H), 7.71 (d, J=1.9 Гц, 1H), 7.687.64 (m, 2H), 7.52 (d, J=4.1 Гц, 1H), 6.73 (d, J=1.9 Гц, 1H), 6.64 (dd, J=7.3, 2.1 Гц, 1H), 6.19 (dd, J=13.1, 4.3 Гц, 1H), 2.76-2.67 (m, 1H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.13-1.98 (m, 2H), 1.70-1.57 (m, 1H), 1.55-1.41 (m, 1H), 1.381.29 (m, 1H), 1.02 (d, J=6.9 Гц, 3Н), 0.70 (br. s., 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.66 мин, чистота > 99%; для фактора XIa Ki=3.2 нМ, для калликреина плазмы Ki=19 нМ.
13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-цикло-пропил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола, при-
Пример 5. Получение 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропи-ридин-1-ил}-3-циклопропил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
мер 1D, на 1-циклопропил-4-нитро-1Н-пиразол, промежуточное соединение 7. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.75 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.33 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.92 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.89-7.85 (m, 1H), 7.70-7.63 (m, 3H), 7.59 (dd, J=8.1, 0.7 Гц, 1H), 7.49 (s, 1H), 5.84 (t, J=1.2 Гц, 1H), 5.56-5.48 (m, 1H), 3.98-3.88 (m, 1H), 3.64-3.55 (m, 1H), 3.55-3.46 (m, 1H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.27-2.11 (m, 3Н), 2.03-1.94 (m, 1H), 1.93-1.82 (m, 1H), 1.67-1.53 (m, 1H), 1.39-1.28 (m, 1H), 1.28-1.18 (m, 1H), 1.16-1.03 (m, 8Н). MS(ESI) m/z: 583.5 (М+Н)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.11 мин, чистота=98%; для фактора XIa Ki=1.4 нМ, для каллик-реина плазмы Ki=52 нМ.
Пример 6. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замещения 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 2. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) 5 8.74 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.72 (dd, J=5.6, 1.2 Гц, 1H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.56-7.51 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 5.47 (dd, J=12.5, 3.7 Гц, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.65 (br. s., 2H), 2.55-2.44 (m, 2H), 2.25-2.12 (m, 1H), 1.98-1.84 (m, 2H), 1.60-1.48 (m, 1H), 1.13 (br. s., 2H), 1.02 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 576.1 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.27 мин, чисто-та=97%; для фактора XIa Ki=1.7 нМ, для калликреина плазмы Ki=7 нМ.
Пример 7. Получение 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидро-пиридин-1-ил}-3-этил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-
8-она
13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-этил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола на 1-этил-4-нитро-Ш-пиразол, промежуточное соединение 8. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.35 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.92 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.73 (dd, J=5.5, 1.5 Гц, 1H), 7.69-7.63 (m, 2H), 7.62-7.55 (m, 2H), 5.84 (s, 1H), 5.48 (dd, J=12.5, 3.7 Гц, 1H), 4.42 (q, J=7.0 Гц, 2Н), 3.51 (dd, J=7.9, 6.2 Гц, 2Н), 2.66-2.51 (m, 1H), 2.30-2.10 (m, 3Н), 2.02-1.83 (m, 2H), 1.68-1.54 (m, 1H), 1.52 (t, J=7.3 Гц, 3Н), 1.17 (br. s., 2H), 1.10 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 571.2 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=9.150 мин, чистота=97%; для фактора XIa Ki=1.3 нМ, для калликреина плазмы Ki=41 нМ.
Пример 8. Получение 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2,2-дифторэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -(2,2-дифторэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола на 1-(2,2-дифторэтил)-4-нитро-Ш-пиразол, промежуточное соединение 9. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.82 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.33 (d, J=0.9 Гц, 1H), 7.91 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (dd, J=5.5,
1.3 Гц, 1H), 7.68-7.63 (m, 3Н), 7.61-7.56 (m, 1H), 6.48-6.15 (m, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.49 (dd, J=12.5, 4.0 Гц,
1H), 4.85-4.72 (m, 2H), 3.59-3.45 (m, 2H), 2.64-2.52 (m, 1H), 2.26-2.12 (m, 3H), 1.99-1.84 (m, 2H), 1.59 (td,
J=13.8, 8.3 Гц, 1H), 1.43-1.31 (m, 1H), 1.23-1.14 (m, 1H), 1.09 (d, J=7.0 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 607.2 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.521 мин, чистота=97%; для фактора XIa Ki=11 нМ, для каллик-реина плазмы Ki=90 нМ.
Пример 9. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-4-(2-гидроксипиридин-4-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-8-она
9А. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-4-(2-метоксипиридин-4-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-
8-она.
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (0.045 г, 0.088 ммоль), (1R,2R)-Ш,№-диметилциклогексан-1,2-диамин (0.013 г, 0.088 ммоль), 4-иод-2-метоксипиридин (0.041 г, 0.176 ммоль), CuI (3.4 мг, 0.018 ммоль), Cs2CO3 (0.057 г, 0.176 ммоль) и DMF (2 мл) добавляли в виалу для микроволн. Смесь затем дегазировали и снова заполняли Ar (3х). После того как виалу герметично закрывали реакцию затем нагревали до 125°С в течение 30 мин в микроволнах. Смесь очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии с выходом (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил] -4-(2-метоксипиридин-4-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.026] -октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-8-она(5.9 мг, 11%). MS(ESI) m/z: 619 А (М+Н). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 8.83 (s, 1H), 8.68 (d, J=4.9 Гц, 1H), 8.29 (d, J=5.8 Гц, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.68 (d, J=5.8 Гц, 1H), 7.59 (d, J=4.9 Гц, 2Н), 7.34 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.74-5.62 (m, 1H), 3.93 (s, 4H), 2.77-2.61 (m, 3Н), 2.20-1.98 (m, 2H), 1.83-1.71 (m, 1H), 1.64-1.50 (m, 1H), 1.42-1.27 (m, 1H), 0.98 (d, J=6.7 Гц, 3Н), 0.850.65 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод С): RT=1.64 мин, чистота=100%.
9В. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-4-(2-гидроксипиридин-4-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-4-(2-метоксипи-ридин-4-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-8-он (30 мг, 0.048 ммоль) растворяли в THF (2 мл) и добавляли концентрированную HCl (500 мкл, 6.00 ммоль). Раствор нагревали до 70°С в течение 8 ч. Реакцию затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали досуха под вакуумом. Остаток очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии с выходом (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-4-(2-гидрокси-пиридин-4-ил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026] октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-8-она (12 мг, 32%). MS(ESI) m/z: 605.4 (М+Н). 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.80-8.71 (m, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.098.03 (m, 1H), 8.01-7.95 (m, 1H), 7.69-7.62 (m, 1H), 7.61-7.52 (m, 1H), 7.17-7.08 (m, 2H), 7.05-6.99 (m, 1H), 6.18-6.12 (m, 1H), 5.68-5.60 (m, 1H), 3.79-3.65 (m, 2H), 2.89-2.79 (m, 1H), 2.79-2.67 (m, 2H), 2.33-2.21 (m, 1H), 2.19-2.05 (m, 2H), 1.83-1.69 (m, 1H), 1.50-1.29 (m, 3Н), 1.19 (d, J=6.9 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.22 мин, чистота=96%, для фактора XIa Ki=14 нМ, для калликреина плазмы Ki=14 нМ.
Пример 10. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-этил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-этил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 1, и путем замены 1-метил-4-нитро-1Н-пиразола на 1-этил-4-нитро-1Н-пиразол, промежуточное соединение 8. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.84 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.76 (dd, J=5.7, 1.5 Гц, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (td, J=8.7,
5.5 Гц, 1H), 7.12 (td, J=9.2, 1.8 Гц, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.5, 4.0 Гц, 1H), 4.43 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 3.74 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.85-2.69 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.38-2.20 (m, 1H), 2.10-1.88 (m, 2H), 1.71-1.58 (m, 1H), 1.53 (t, J=7.3 Гц, 3Н), 1.22 (br. s., 2Н), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 540.2 (М+Н)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод А): RT=11.04 мин, чистота=97%, для фактора XIa Ki=14 нМ, для калликреина плазмы
Ki=50 нМ.
11 А. Получение 3-{2-[(трет-бутилдиметилсилил)окси]этил}-13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
Пример 11. Получение 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2-гидроксиэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
DMF (0.7 мл) добавляли в виалу, содержащую 4-нитро-1-(2,2,2-трифторэтил)-Ш-пиразол, 4-нитро-1-(2,2,2-трифторэтил)-Ш-пиразол, промежуточное соединение 10 (0.02 г, 0.037 ммоль), Cs2CO3 (0.024 г, 0.074 ммоль) и (2-бромэтокси)(трет-бутил)диметилсилан (0.026 г, 0.110 ммоль). Суспензию нагревали до 75°С в течение 25 мин, затем концентрировали при комнатной температуре. Сырой продукт использовали на следующей стадии.
11В. Получение 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -(2-гидроксиэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
К 3-{2-[(трет-бутилдиметилсилил)окси]этил}-13-{4-[5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-ону добавляли МеОН (0.7 мл) и концентрированную HCl (0.05 мл, 0.60 ммоль), и реакцию перемешивали в течение 10 мин. Сырой продукт очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с выходом 13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2-гидроксиэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она в виде белого твердого вещества (6 мг, 8.22 мкмоль, выход 22.2%). 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.76-8.70 (m, 1H), 8.34-8.30 (m, 1H), 7.93-7.88 (m, 1H), 7.84-7.78 (m, 1H), 7.687.62 (m, 3H), 7.60 (s, 3H), 5.89-5.81 (m, 1H), 5.59-5.50 (m, 1H), 4.44-4.38 (m, 2H), 4.05-3.97 (m, 3H), 3.513.45 (m, 2H), 2.61-2.51 (m, 1H), 2.23-2.09 (m, 3H), 1.99-1.81 (m, 2H), 1.65-1.53 (m, 1H), 1.39-1.28 (m, 2H), 1.19-1.12 (m, 2H), 1.12-1.08 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 587.5 (M+H)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=5.33 мин, чистота=96%; для фактора XIa Ki=5.5 нМ, для калликреина плазмы Ki=140 нМ.
12А. Получение 2-(13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропи-ридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-4-
ил)ацетата
Пример 12. Получение 2-(13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-4-ил)уксусной кислоты
2-(13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-4-ил)ацетат получали в соответствии со способами, описанными в примере 11, путем замены (2-бромэтокси)(трет-бутил)диметилсилана на этил 2-бромацетат. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.69-8.62 (m, 1H), 8.37-8.34 (m, 1H), 8.31-8.26 (m, 1H), 8.03-7.98 (m, 1H), 7.96-7.91 (m, 1H), 7.89-7.84 (m, 1H), 7.70-7.64 (m, 2H), 7.63-7.58 (m, 1H), 5.89-5.82 (m, 1H), 5.48-5.38 (m, 1H), 5.17-5.13 (m, 2H), 4.34-4.23 (m, 2H), 2.92-2.83 (m, 1H), 2.412.28 (m, 1H), 2.25-2.16 (m, 2H), 2.03-1.87 (m,2H), 1.76-1.64 (m, 1H), 1.61-1.49 (m, 1H), 1.32 (s, 4H), 1.261.20 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 629.4 (M+H)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=5.33 мин, чистота=96%.
12В. Получение 2-(13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропи-ридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-4-ил)уксусной кислоты.
К раствору 2-(13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3Л.02'6]октадека-1(18),2,5Д4Д6-пентаен-4-ил)ацетата (16 мг, 0.025 ммоль) в THF (1 мл) добавляли LiOH (0.216 мл, 0.432 ммоль), и реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Через 1 ч реакционную смесь концентрировали, и остаток очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением 9.5 мг 2-(13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]-октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-4-ил)уксусной кислоты (50%) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.71 (d, J=6.2 Гц, 1H), 8.34 (d, J=1.1 Гц, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.09 (dd, J=5.9, 1.5 Гц, 1H), 7.92 (d, J=1.1 Гц, 1H), 7.90-7.89 (m, 1H), 7.69-7.56 (m, 3Н), 5.82 (s, 1H), 5.42 (dd, J=11.2, 3.3 Гц, 1H), 5.11 (d, J=0.9 Гц, 2Н), 3.49-3.39 (m, 1H), 3.42-3.40 (m, 1H), 2.67-2.54 (m, 1H), 2.34-1.94 (m, 5H), 1.79-1.64 (m, 1H), 1.63-1.49 (m, 1H), 1.31 (d, J=7.0 Гц, 1H), 1.19 (d, J=7.0 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 601.4 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=4.99 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=14 нМ, для калликреина плазмы Ki=480 нМ.
Пример 13. Получение (9S,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-онатрифторацетата, изомер А
13А. Получение трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата.
В 250-мл круглодонной колбе Fe2(C2O4)3-6H2O (449 мг, 0.928 ммоль) в воде (20 мл) перемешивали
на бане с теплой водой до растворения до прозрачного желтого раствора. Добавляли SELECTFLUOR(r)
(329 мг, 0.928 ммоль) с последующим добавлением трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-
3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (123 мг,
0.309 ммоль), полученного как в примере 1, в ACN (20 мл) с последующим добавлением NaBH4 (94 мг,
2.476 ммоль) порциями и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь
быстро охлаждали 28-30%-ным водным NH4OH (10 мл), экстрагировали 10% МеОН в DCM (200 мл, 3х).
Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтрова-
ли и концентрировали. Очисткой с помощью обращенно-фазовой хроматографии с последующей ней-
трализацией получали трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-
тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамат (35.4 мг, 27%) в виде
белого твердого вещества и в виде смеси стерео- и региодиастереомеров. MS(ESI) m/z: 418.1 (М+Н).
13В1 и 13В2. Получение трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетрааза-трицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата, изомер А (13В1), и трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02•6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата, изомер В (13В2).
трет-Бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамат (35.4 мг), смесь диастереомеров, анализировали путем разделения с помощью хиральной SFC. Колонка: Lux 5 мкм Cellulose-4, 21x250 мм, 5 мкм. Подвижная фаза:
15% МеОН-0.1% DEA/85% CO2, скорость потока 45 мл/мин, 150 бар, 40°С. Фракцию 1-го пика 20 мг 13В1 получали в виде белого твердого вещества, который обозначали как единственный изомер А; и фракцию 1-го пика концентрировали с получением 10 мг 13В2 в виде белого твердого вещества, который обозначали как единственный изомер В.
13С. Получение (9S,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата, изомер А.
(9S,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат, изомер А (0.0150 г, 61%), получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она и трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02•6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата. MS(ESI) m/z: 609.1 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.72 (d, J=5.3 Гц, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.57-7.50 (m, 2H), 7.47-7.44 (m, 2H), 5.78 (s, 1H), 5.67 (dd, J=12.7, 5.4 Гц, 1H), 5.27-5.09 (m, 1H), 4.22-4.14 (m, 1H), 4.01 (s, 3Н), 3.70 (ddd, J=12.5, 9.7, 5.1 Гц, 1H), 3.12-3.01 (m, 1H), 2.43-2.32 (m, 1H), 2.31-2.21 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.71-1.55 (m, 1H), 0.93 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 0.62-0.40 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.16 мин, чистота > 99%; для фактора XIa Ki=0.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=6 нМ.
Пример 14. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (25 мг, 53%) получали таким же образом, как пример 1, путем использования 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразола, промежуточное соединение 14, и -(3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 2. MS(ESI) m/z: 612.3 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN) 5 8.87-8.73 (m, 1H), 7.82-7.36 (m, 7H), 5.93 (s, 1H), 5.66-5.52 (m, 1H), 4.23-4.03 (m, 1H), 3.97-3.83 (m, 1H), 3.82-3.66 (m, 1H), 2.73-2.46 (m, 3Н), 2.34-2.17 (m, 1H), 1.66-1.48 (m, 2Н), 1.38-1.18 (m, 3Н), 1.01 (d, J=6.8 Гц, 4Н), 0.85-0.71 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=9.88 мин, чистота=94%; для фактора XIa Ki=1 нМ, для калликреина плазмы Ki=110 нМ.
Пример 15. Получение (9S,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-онатрифторацетата, изомер В
(9S,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат, изомер В (0.0081 г, 62%), получали в соответствии со способами, описанными в примере 13, путем замены трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата на трет-бутил N-[(9S,13S)-10-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамат, изомер В, полученный как промежуточное соединение 13В2. MS(ESI) m/z: 609.1 (М+Н). 1H ЯМР (500 МГц, метанол-d.,) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.72 (dd, J=5.5, 1.4 Гц, 1H), 7.65-7.61 (m, 2H), 7.597.57 (m, 2H), 7.56-7.54 (m, 2H), 5.84 (d, J=1.4 Гц, 1H), 5.67 (dd, J=12.9, 2.8 Гц, 1H), 4.50-4.30 (m, 1H), 4.06 (s, 3Н), 3.47-3.36 (m, 1H), 3.20-3.05 (m, 1H), 2.82-2.53 (m, 2H), 2.33-1.86 (m, 4H), 1.22(d, J=6.6 Гц, 3Н) Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.29 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=19 нМ, для каллик-реина плазмы Ki=450 нМ.
Пример 16. Получение 2-[(9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-
Раствор (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2-гидроксиэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата (0.025 г, 0.040 ммоль), полученный как описано в примере 35, в ацетоне (2 мл) охлаждали до 0°С. К этой охлажденной смеси затем добавляли 2.86 молярный раствор реагента Джонса (0.028 мл, 0.080 ммоль), и полученную в результате реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры на протяжении 2 ч. Реакционную смесь затем быстро охлаждали 0.5 мл IPA и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением 2-[(9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-2(6),4,14,16-пентаен-3-ил]уксусной кислоты трифторацетата (4.5 мг, 5.70 мкмоль, выход 14%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.74-8.65 (m, 1H), 8.47-8.44 (m, 1H), 7.68-7.47 (m, 6H), 5.82 (s, 1H), 5.54 (dd, J=12.8, 3.7 Гц, 1H), 5.20-5.06 (m, 2H), 4.21-4.07 (m, 1H), 3.61-3.43 (m, 2H), 2.622.49 (m, 2H), 2.30-2.05 (m, 3Н), 1.99-1.77 (m, 2H), 1.66-1.50 (m, 1H), 1.43-1.16 (m, 3Н). MS(ESI) m/z: 635.4 [М+Н]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.74 мин, чистота > 95.0%; Ki=0.19 нМ для фактора XIa, Ki=17 нМ для калликреина плазмы.
Пример 17. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
17А. Получение 1-(2Н3)метил-4-нитро-Ш-пиразола.
DIAD (5.59 мл, 28.7 ммоль) добавляли к раствору 4-нитро-Ш-пиразола (2.5 г, 22.11 ммоль), CD3OD (0.898 мл, 22.11 ммоль) и Ph3P (связанный смолой) (8.84 г, 26.5 ммоль) в THF (40 мл) и перемешивали на протяжении ночи. Реакцию быстро охлаждали водой, экстрагировали EtOAc, промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом DCM/MeOH, с получением 1-(2Н3)метил-4-нитро-Ш-пиразола (1.92 г, 14.76 ммоль, выход 66.7%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 131.0 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.13 (d, J=0.4 Гц, 1H), 8.05 (s, 1H).
17В. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[1-(2Н3)метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1 -ил] карбамата.
В большую виалу для микроволн добавляли ^)-трет-бутил(1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (2.61 г, 9.22 ммоль), 1-(2Н3)метил-4-нитро-Ш-пиразол (1.0 г, 7.69 ммоль), ди(адамантан-1-ил)(бутил)фосфин (0.413 г, 1.15 ммоль), K2CO3 (3.19 г, 23.06 ммоль), пивалевую кислоту (0.268 мл, 2.306 ммоль) и DMF (15.37 мл). Реакцию продували Ar в течение 10 мин, затем добавляли Pd(OAc)2 (0.173 г, 0.769 ммоль), виалу герметично закрывали, и смесь перемешивали при 115°С на протяжении ночи. Реакцию затем разделяли между EtOAc и H2O. Водный слой экстрагировали EtOAc (2х). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гекса-ны/EtOAc, с получением трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[1-(2Н3)метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1-ил]карбамата (1.49 г, 3.96 ммоль, выход 51.5%) в виде пены цвета лаванды. MS(ESI) m/z: 377.0 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.77 (d, J=4.8 Гц, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.23 (dd, J=5.1, 1.5 Гц, 1H), 5.78-5.65 (m, 1H), 5.55 (d, J=6.8 Гц, 1H), 5.14-5.03 (m, 2H), 4.89 (d, J=6.8 Гц, 1H), 2.66 (t, 1=6.6Гц, 2Н), 1.44 (s,9H).
17С. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[4-амино-1-(2Н3)метил-1H-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1-ил]карбамата.
трет-Бутил N-[(1S)-1-{4-[1 -(2Н3)метил-4-нитро-1Н-пиразол-5 -ил]пиридин-2-ил}бут-3 -ен-1 -
ил]карбамат (1.45 г, 3.85 ммоль) растворяли в ацетоне (15 мл)/воде (3 мл), охлаждали до 0°С и добавляли NH4Cl (1.030 г, 19.26 ммоль) и Zn (2.52 г, 38.5 ммоль), и реакцию оставляли нагреваться до комнатной
температуры. Через 1 ч реакцию фильтровали, и фильтрат разделяли между водой (30 мл) и EtOAc (50 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2х 50 мл). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом DCM/MeOH, с получением трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[4-амино-1-(2Н3)метил-1Н-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1-ил]карбамата (0.62 г, 46.5%). MS(ESI) m/z: 347.2 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.67 (dd, J=5.1, 0.7 Гц, 1H), 7.26-7.23 (m, 2H), 7.21 (dd, J=5.1, 1.5 Гц, 1H), 5.79-5.66 (m, 1H), 5.58 (d, J=7.3 Гц, 1H), 5.11-5.05 (m, 2Н), 4.86 (q, J=6.6 Гц, 1H), 2.64 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 1.44 (s,9H).
17D. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[1-(2Н3)метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1Н-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1-ил] карбамата.
(R)-2-Метилбут-3-еновую кислоту (233 мг, 2.327 ммоль), трет-бутил №[(^)-1-{4-[4-амино-1-(2Н3)метил-1Н-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1-ил]карбамат (620 мг, 1.79 ммоль), пиридин (0.433 мл, 5.37 ммоль) в EtOAc (17.900 мл) охлаждали до -10°С в атмосфере Ar с последующим добавлением по каплям Т3Р(r) (50 мас.%, в EtOAc) (2.131 мл, 3.58 ммоль), и затем реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры. Через 3.5 ч реакционную смесь разбавляли EtOAc, промывали 1.5М K2HPO4 с последующим солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гексаны/EtOAc, с получением трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[1-(2Н3)метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3-ен-1-ил]карбамата (529 мг, 1.234 ммоль, выход 69.0%) в виде желтой
пены. MS(ESI) m/z: 429.2 (М+Н)+.
17Е. Получение трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата.
Пять больших виал для микроволн заполняли в равных количествах следующим: трет-бутил N-[(1S)-1-{4-[1 -(2Н3)метил-4-[(2R)-2-метилбут-3 -енамидо] -1Н-пиразол-5-ил]пиридин-2-ил}бут-3 -ен-1 -ил]карбамат (0.51 г, 1.190 ммоль) в дегазированном DCE (90 мл) облучали при 120°С в течение 30 мин в присутствии катализатора Граббса второго поколения (0.404 г, 0.476 ммоль). Реакции объединяли, концентрировали, и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гексаны/EtOAc, с получением трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (0.124 г, 26.0%) в виде коричневого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 401.2 (М+Н)+. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.66 (d, J=5.1 Гц, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.19 (d, J=4.8 Гц, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.37 (d, J=7.5 Гц, 1H), 5.68 (t, J=11.2 Гц, 1H), 4.82-4.63 (m, 2H), 3.12-2.93 (m, 2H), 1.93 (q, J=11.1 Гц, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.15 (d, J=5.9 Гц, 3Н).
17F. Получение трет-бутил N-[(9R,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата.
PtO2 (6.80 мг, 0.030 ммоль) добавляли к перемешанному раствору трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (0.120 г, 0.300 ммоль) в EtOH (10 мл). Суспензию выдерживали в атмосфере H2 (55 psi) в течение 1 ч. Катализатор отфильтровывали через пробку CELITE(r), и фильтрат концентрировали. Продукт (0.104 г, 86%) переносили в следующую реакцию как есть без дополнительной очистки. MS(ESI)
m/z: 403.2 (М+Н)+.
17G. Получение (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]ок-тадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
4М HCl в диоксане (1.6 мл) добавляли к перемешанному раствору трет-бутил N-[(9R,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (0.100 г, 0.248 ммоль) в МеОН (3 мл). После перемешивания на протяжении ночи реакционную смесь концентрировали досуха и помещали в высокий вакуум. Соль соляной кислоты превращали в свободное основание путем растворения в МеОН, пропуская через картридж со связанным со смолой NaHCO3 (StratoSpheres SPE; загрузка 500 мг, 0.90 ммоль), и фильтрат концентрировали. Материал переносили как есть далее в следующую реакцию. MS(ESI) m/z: 303.4 (М+Н)+.
17Н. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил} -3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15 -тетраазатрицикло [12.3.1.02,6] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-онатрифторацетата.
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (14 мг, выход 33%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования (9R, 13S)-13 -амино-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.026]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она и 1-(5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 4. MS(ESI) m/z: 594.1 (М+Н)+. 1H ЯМР: (500 МГц, метанол-d.,) 5 8.78 (br. s., 1H), 8.48 (s, 1H), 7.73-7.52 (m, 7H), 5.85 (s, 1H), 5.60-5.55 (m, 1H), 3.58-3.51 (m, 2H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.25 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.00-1.86 (m, 3Н), 1.61 (dd, J=13.3, 5.9 Гц, 1H), 1.23-1.19 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.9 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=5.94 мин, чистота=92%; Ki=0.15 нМ для фак
тора XIa, Ki=10 нМ для калликреина плазмы.
Пример 18. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6), 4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-
(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло-[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он триф-
торацетат (17.6 мг, 39%) получали способами, аналогичными описанным в примере 1, путем использова-
ния (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она, полученного, как описано для примера 17G и 1-(3-хлор-2-фтор-6-
(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 2. MS(ESI) m/z: 579.1 (М+Н)+. 1Н
ЯМР: (500 МГц, CD3OD) 5 8.78 (br. s., 1H), 8.48 (s, 1H), 7.73-7.52 (m, 7H), 5.85 (s, 1H), 5.60-5.55 (m, 1H),
3.58-3.51 (m, 2H), 2.61-2.56 (m, 1H), 2.25 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.00-1.86 (m, 3Н), 1.61 (dd,
J=13.3, 5.9 Гц, 1H), 1.23-1.19 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.9 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.26
мин, чистота=95%; для фактора XIa Ki=2.8 нМ, для калликреина плазмы Ki=30 нМ.
Пример 19. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R, 13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетрааза-трицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16 -пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил} бензонитрила
19А. Получение (9R,13S)-13-[4-(2-бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-[4-(2-Бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (35 мг, 47%) получали таким же образом, как пример 1, путем использования 1-(6-бром-3-хлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она и 1-(дифторметил)-4-нитро-1H-пиразола. MS(ESI) m/z: 604.2 (М+Н) и 606.2 (М+2+Н).
19В. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}бензо-нитрила.
4-Хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}бензонитрил получали из (9R,13S)-13-[4-(2-бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она аналогично способам, описанным в примере 1, с выходом 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(дифторметил)-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.02,6] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13 -ил] -6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропири-дин-4-ил}бензонитрила (9 мг, 26%). MS(ESI) m/z: 551.3 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.85-7.71 (m, 4H), 7.71-7.36 (m, 4H), 6.20 (s, 1H), 5.53 (dd, J=12.7, 4.3 Гц, 1H), 3.95-3.83 (m, 1H), 3.82-3.72 (m, 1H), 2.81 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.56 (td, J=7.2, 3.1 Гц, 1H), 2.28 (dd, J=6.4, 3.5 Гц, 1H), 1.951.85 (m, 2Н), 1.65-1.51 (m, 1H), 1.41-1.21 (m, 2H), 1.06-0.98 (m, 3Н), 0.96-0.74 (m, 2H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.24 мин, чистота=96%; для фактора XIa Ki=1.4 нМ, для калликреина плазмы Ki=10 нМ.
(9S,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-
Пример 20. Получение (9S,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-8-она
10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он триф-торацетат (0.0144 г, 66%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 13, путем замены 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 2. MS(ESI) m/z: 594.2 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.76 (d, J=5.3 Гц, 1H), 7.73-7.66 (m, 1H), 7.60 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.55-7.44 (m, 3Н), 5.93 (s, 1H), 5.79 (dd, J=12.7, 5.4 Гц, 1H), 5.33-5.14 (m, 1H), 4.49-4.38 (m, 1H), 4.03 (s, 3Н), 3.97-3.87 (m, 1H), 3.15-3.05 (m, 1H), 2.90-2.49 (m, 2H), 2.30-2.19 (m, 1H), 2.13-2.00 (m, 1H), 1.77-1.59 (m, 1H), 0.96 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 0.67-0.45 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.39 мин, чистота > 98%; для фактора XIa Ki=1.4 нМ, для калликреина плазмы Ki=40 нМ.
Пример 21. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил} -3 -(дифторметил)-9 -метил-3,4,7,15 -тетраазатрицикло [12.3.1.02,6] октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (28 мг, 79%) получали таким же образом, как пример 1, путем использования 1-(дифторметил)-4-нитро-1H-пиразола, промежуточное соединение 14, и 1-(3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 16. MS(ESI) m/z: 610.3 (М+Н). 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.85-8.74 (m, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.65-7.51 (m, 2H), 7.16-7.09 (m, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.69-5.60 (m, 1H), 3.93-3.81 (m, 1H), 3.80-3.69 (m, 1H), 2.75-2.57 (m, 3Н), 2.33-2.16 (m, 1H), 2.06-1.87 (m, 2H), 1.721.53 (m, 1H), 1.41-1.19 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.9 Гц, 3Н), 0.95-0.83 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=9.60 мин, чистота=99%; для фактора XIa Ki=0.69 нМ, для калликреина плазмы Ki=40 нМ.
Пример 22. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3 -(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-
8-она
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-(дифторме-тил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (22 мг, 54%) получали таким же образом, как пример 1, путем использования 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразола, промежуточное соединение 14, и 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 1. MS(ESI) m/z: 562.3 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN) 5 8.78 (d, J=5.3 Гц, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.53 (s, 2H), 7.15-7.01 (m, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.67-5.55 (m, 1H), 3.93-3.80 (m, 1H), 3.80-3.66 (m, 1H), 2.67 (s, 2H), 2.62-2.47 (m, 2H), 2.30-2.17 (m, 1H), 1.66-1.47 (m, 1H), 1.41-1.16 (m, 2H), 1.02 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 0.91-0.69 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод А): RT=9.03 мин, чистота=98%; для фактора XIa Ki=8 нМ, для калликреина плазмы Ki=50 нМ.
Пример 23. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (21 мг, 0.025 ммоль, выход 31%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2
фторфенил]проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 16. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.79 (dd, J=5.6, 1.4 Гц, 1H), 7.57-7.48 (m, 2H), 7.13-7.05 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.53 (dd, J=12.5, 3.7 Гц, 1H), 4.08 (s, 3Н), 3.67 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.76-2.50 (m, 3Н), 2.342.18 (m, 1H), 2.08-1.88 (m, 2H), 1.69-1.53 (m, 1H), 1.21 (br. s., 2H), 1.09 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 574.3 [М+Н]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.63 мин, чистота > 95.0%; для фактора XIa Ki=0.92 нМ, для калликреина плазмы Ki=7 нМ.
Пример 24. Получение (9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7Д5-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (0.016 г, выход 61%) получали способом, аналогичным описанному в примере 2, путем замены 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3,6-дихлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он (0.032 г, 0.039 ммоль), полученный, как описано в примере 31A. MS(ESI) m/z: 542.2 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) d 8.79 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.71 (dd, J=5.4, 1.7 Гц, 1H), 7.54-7.47 (m, 2H), 7.34 (dd, J=8.7, 1.7 Гц, 1H), 5.98 (t, J=1.3 Гц, 1H), 5.58 (dd, J=12.5, 4.0 Гц, 1H), 4.08 (s, 3Н), 3.74 (t, J=7.0 Гц, 2Н), 2.73-2.53 (m, 3Н), 2.312.19 (m, 1H), 2.04-1.91 (m, 2H), 1.67-1.55 (m, 1H), 1.28-1.14 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.36 мин, 99.5% чистота; для фактора XIa Ki=2.7 нМ, для калликреина плазмы
Ki=6 нМ.
25А. Получение 2-изопропилбут-З-еновой кислоты
Пример 25. Получение (9S,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
В высушенную на пламени круглодонную колбу добавляли 2М DIA в THF (3.64 мл, 25.6 ммоль) и THF (58.1 мл). Реакцию охлаждали до -78°С и добавляли 1.6 М nBuLi в гексанах (15.97 мл, 25.6 ммоль). Реакцию перемешивали при -78°С в течение 30 мин и добавляли бут-3-еновую кислоту (0.990 мл, 11.62 ммоль), и реакцию перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Затем добавляли iPrI (1.739 мл, 17.42 ммоль) при -78°С, и реакцию медленно нагревали до комнатной температуры на протяжении 2 ч и затем перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакцию быстро охлаждали насыщенным водным NH4Cl (15 мл), и затем рН раствора доводили до <4, применяя 1н. HCl. Реакцию экстрагировали EtOAc (3x30 мл). Объединенный слой EtOAc промывали солевым раствором (40 мл) и высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием системы ISCO (градиент 0-50% EtOAc/гексан) с получением 2-изопропилбут-3-еновой кислоты (800 мг, 6.24 ммоль, выход 53.7%) в виде прозрачной жидкости. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 5.98-5.65 (m, 1H), 5.335.05 (m, 2H), 2.73 (t, J=8.8 Гц, 1H), 2.08-1.95 (m, 1H), 1.09-0.74 (m, 6H).
В круглодонную колбу добавляли ^)-трет-бутил (1-(4-(4-амино-1-метил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат, полученный как описано в примере 1F (765 мг, 2.228 ммоль), EtOAc (20
25В. Получение трет-бутил ((1S-[1-(4-{1-метил-4-[2-(пропан-2-ил)бут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил}пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил]карбамата
мл), 2-изопропилбут-3-еновую кислоту (286 мг, 2.228 ммоль) и пиридин (0.540 мл, 6.68 ммоль). Раствор охлаждали на бане рассол/лед и добавляли 50% Т3Р(r) (1.989 мл, 3.34 ммоль). Реакцию перемешивали при 0°С в течение 10 мин и затем при комнатной температуре в течение 60 мин. Реакцию разбавляли EtOAc (30 мл) и промывали насыщенным NaHCO3 (20 мл), водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием системы ISCO (градиент 0-100% EtOAc/гексан) с получением трет-бутил ((1S)-1-(4-(4-(2-изопропилбут-3-енамидо)-1-метил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (850 мг, 1.874 ммоль, выход 84%) как диастереомерную смесь в виде желтого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 454.2 (М+Н)+.
25С1 и 25С2. Получение трет-бутил N-[(9S,10Е,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата и трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4, 10,14,16-гексаен-13 -ил]карбамата
В виалу для микроволн добавляли трет-бутил ((1,5)-1-(4-(4-(2-изопропилбут-3-енамидо)-1-метил-Ш-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (250 мг, 0.551 ммоль) и DCE (15 мл). Реакцию продували Ar в течение 1 мин, затем добавляли катализатор Граббса второго поколения (187 мг, 0.220 ммоль). Реакцию герметично закрывали и нагревали в микроволнах при 120°С в течение 60 мин. Реакцию затем концентрировали, и остаток очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением трет-бутил N-[(9S,10E,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16 -гексаен-13-ил]карбамата трифторацетата, 25С1, (50 мг, 0.093 ммоль, выход 16.8%), (ESI) m/z: 426.2 (М+Н)+, который имел более короткое время удерживания, и трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата трифторацетата 25С2, (50 мг, 0.093 ммоль, выход 16.8%), MS(ESI) m/z: 426.2 (М+Н)+ который имел более длинное время удерживания.
25D. Получение трет-бутил N-[(9S,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата
В 3-горлую круглодонную колбу добавляли трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамат триф-торацетат (25С2) (15 мг, 0.028 ммоль), EtOH (3 мл) и PtO2 (3.16 мг, 0.014 ммоль). Реакцию перемешивали в атмосфере H2 (баллонное давление) в течение 1 ч. Реакцию фильтровали через CELITE(r), и фильтрат концентрировали с получением трет-бутил N-[(9S,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (10 мг, 0.023 ммоль, выход 84%) в виде коричневого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 618.2 (М+Н)+.
25Е. Получение (9S,13S)-13-амино-3-метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицик-
ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
В круглодонную колбу добавляли трет-бутил N-[(9S,13S)-3-метил-8-оксо-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамат (20 мг, 0.047 ммоль), диоксан (3 мл), 4н. HCl в диоксане (0.142 мл, 4.68 ммоль) и МеОН (0.5 мл). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Реакцию концентрировали, и остаток очищали с помощью об-ращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением (9S,13S)-13-амино-3-метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она гидрохлорида.
Продукт добавляли на картридж Agilent StratoSpheres SPE PL-НСО3 МР Resin. Гравитационным фильтрованием, элюируя МеОН, получали прозрачный слегка коричневый фильтрат. Концентрированием получали (9S,13S)-13-амино-3-метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (1.5 мг, 3.43 мкмоль, выход 7.34%) в виде бежевого твердого вещества.
MS(ESI) m/z: 328.2 (М+Н)+.
25F. Получение (9S,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9S,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 4, и (9R,13S)-13-амино-3-метил-9-(пропан-2-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.79 (d, J=5.3 Гц, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.74 (dd, J=5.4, 1.2 Гц, 1H), 7.68-7.57 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.50 (dd, J=12.5, 3.5 Гц, 1H), 4.10 (s, 3H), 3.55-3.40 (m, 2H), 2.30-2.13 (m, 3H), 2.10-1.90 (m, 3H), 1.79 (dt, J=9.2, 6.6 Гц, 1H), 1.61 (d, J=6.6 Гц, 1H), 1.35 (d, J=3.1 Гц, 1H), 1.19-1.09 (m, 1H), 0.99 (dd, J=6.6, 4.2 Гц, 6Н). MS(ESI) m/z: 619.2 (M+H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.67 мин, чистота=98%; для фактора XIa Ki=0.47 нМ, для калликреина плазмы Ki=16 нМ.
26 А. Получение 3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторбензальдегида
Пример 26. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
К раствору 1-хлор-4-(дифторметил)-2-фторбензола (373 мг, 2.066 ммоль) в THF (6 мл) при -78°С добавляли LDA в THF/гептане/этилбензоле (1.240 мл, 2.479 ммоль) по каплям. Раствор потемнел. После перемешивания при этой же температуре в течение 20 мин добавляли DMF (0.191 мл, 2.479 ммоль) и перемешивали при этой же температуре в течение 10 мин. Добавляли АсОН (0.473 мл, 8.26 ммоль) с последующим добавлением воды (30 мл). Реакцию экстрагировали EtOAc (30 мл). Слой EtOAc промывали водой (15 мл) и солевым раствором (15 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием системы ISCO (градиент 0-30% EtOAc/гексан) с получением 3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторбензальдегида (400 мг, 1.918 ммоль, выход 93%) в виде светло-желтой жидкости. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 10.48 (s, 1H), 7.80-7.72 (m, 1H), 7.62 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.56-7.27 (t, 1H).
26B. Получение 1 -(3 -хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1 -она
CF2H о
1-(3-Хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным использованному для получения промежуточного соединения 1, путем замены 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида на 3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторбензальдегид. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.64-7.55 (m, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Гц, 1H), 6.95-6.57 (m, 2H), 6.24-6.05 (m, 2H).
26С. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-
тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замещения 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) 5 8.81 (d, J=5.3 Гц, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.72 (dd, J=5.3, 1.5 Гц, 1H), 7.68 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.57-7.49 (m, 2H), 7.03-6.70 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.61 (dd, J=12.7, 3.9 Гц, 1H), 4.10 (s, 3H), 3.75 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.72-2.54 (m, 3Н), 2.32-2.19 (m, 1H), 2.08-1.92 (m, 2Н), 1.64 (dd, J=14.5, 8.8 Гц, 1H), 1.23 (br. s., 2Н), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 558.1 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.13 мин, чисто-та=98%; для фактора XIa Ki=0.48 нМ, для калликреина плазмы Ki=5 нМ.
Пример 27. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата
В герметичную пробирку, содержащую (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, полученный как описано в примере 23 (21 мг, 0.037 ммоль), CuI (6.97 мг, 0.037 ммоль) в DMSO (1 мл) добавляли 3-иодпиридин (15.00 мг, 0.073 ммоль) и Cs2CO3 (47.7 мг, 0.146 ммоль). Реакционную смесь продували Ar (3x), затем перемешивали при 95°С на протяжении ночи. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата (1.4 мг, 1.898 мкмоль, выход 5.19%) в виде прозрачной пленки. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.75 (d, J=5.1 Гц, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.67-7.59 (m, 1H), 7.56-7.52 (m, 2H), 7.50 (dd, J=8.4, 2.2 Гц, 1H), 7.19 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.096.68 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.48 (d, J=7.7 Гц, 1H), 6.18 (dd, J=12.9, 4.3 Гц, 1H), 4.08 (s, 3Н), 2.79-2.66 (m, 1H), 2.39-2.28 (m, 1H), 2.18-2.01 (m, 2H), 1.71-1.60 (m, 1H), 1.47 (br. s., 1H), 1.06 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 0.83 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 572.2 (M+H)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=11.21 мин, чистота=93%; для фактора XIa Ki=4.9 нМ, для калликреина плазмы Ki=40 нМ.
Пример 28. Получение (9S,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-он трифторацетата
Реакционную виалу, содержащую (9S,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат, полученный как описано в примере 20, (0.010 г, 0.014 ммоль), 3-иодпиридин (0.020 г, 0.098 ммоль), CuI (0.008 г, 0.042 ммоль), Cs2CO3 (0.023 г, 0.071 ммоль) в DMSO (2 мл) закрывали и нагревали при 100°С в течение 16 ч. После этого реакцию охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали. Очисткой с помощью обра-щенно-фазовой хроматографии получали (9S,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил}-10-фтор-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (0.0012 г, 11%) в виде бежевого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 592.4 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.81 (d, J=5.1 Гц, 1H), 8.66 (br. s., 1H), 7.85-7.77 (m, 1H), 7.70 (d, J=8.8 Гц, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.50 (dd, J=5.1, 1.5 Гц, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.51 (d, J=7.3 Гц, 1H), 5.49-5.29 (m, 1H), 4.07 (s, 3Н), 3.25-3.13 (m, 1H), 2.44-2.19 (m, 2H), 1.91-1.70 (m, 1H), 1.43-1.28 (m, 1H), 1.02 (d, J=7.0 Гц, 3Н), 0.76-0.52 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.26 мин, чистота > 92%; для фактора XIa Ki=3 нМ, для калликреина плазмы Ki=25 нМ.
Пример 29. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (18 мг, 43%) получали способами, аналогичными описанным в примере 1, путем использования (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-2(6),4,14,16-пентаен-8-она, полученного как описано в примере 17G, и 1-(3-хлор-6-(дифторметил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она, полученного как описано в примере 26. MS(ESI) m/z: 561.2 (М+Н)+. 1Н ЯМР
(400 МГц, CD3OD) 5 8.82 (br. s., 1H), 7.76 (br. s., 1H), 7.71-7.66 (m, 2H), 7.56-7.52 (m, 2H), 7.04-6.82 (m, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.63 (d, J=10.3 Гц, 1H), 3.76 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.69-2.59 (m, 3Н), 2.29-2.22 (m, 1H), 2.031.97 (m, 2H), 1.69-1.61 (m, 1H), 1.24 (d, J=4.2 Гц, 1H), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.93 мин, чистота=95%; для фактора XIa Ki=0.6 нМ, для калликреина плазмы Ki=6 нМ.
Пример 30. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2H3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он три-фторацетат (2.1 мг, 18%) получали способами, аналогичными описанным в примере 1, путем использования (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),-2(6),4,14,16-пентаен-8-она, полученного как описано для примера 17G, и 1-(3-хлор-6-(дифторметокси)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 16. MS(ESI) m/z: 577.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) d 7.61-7.54 (m, 2H), 7.15 (d, J=9.1 Гц, 1H), 7.10-6.78 (m, 2H), 6.06 (s, 1H), 5.71 (br. s., 1H), 3.85-3.73 (m, 2H), 2.71-2.60 (m, 3Н), 2.27-2.21 (m, 1H), 2.04-1.95 (m, 2H), 1.65 (td, J=13.5, 8.3 Гц, 1H), 1.28 (d, J=9.9 Гц, 1H), 1.22-1.15 (m, 1H), 1.16-1.07 (m, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=9.98 мин, чистота=95%; для фактора XIa Ki=1 нМ, для калликреина плазмы Ki=7 нМ.
Пример 31. Получение (9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3 -(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
31А. Получение 1-(3,6-дихлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-она.
1-(3,6-Дихлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным описанному для получения 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 1, путем замены 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида на 3,6-дихлор-2-фторбензальдегид. MS(ESI) m/z: 219.0 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.42 (t, J=8.1 Гц, 1H), 7.20 (dd, J=8.7, 1.4 Гц, 1H), 6.63 (dd, J=17.6, 10.6 Гц, 1H), 6.23 (d, J=10.3 Гц, 1H), 6.06 (d, J=17.6 Гц, 1Н).
31В. Получение (9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-онатрифторацетата.
(9R, 13 S)-13-[4-(3,6-Дихлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил] -3 -(дифтор-метил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (0.014 г, выход 81%) получали способом, аналогичным описанному в примере 22, путем замены 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3,6-дихлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он (8.94 мг, 0.041 ммоль). MS(ESI) m/z: 578.1 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.79 (d, J=5.1 Гц, 1H), 7.83-7.67 (m, 3Н), 7.61 (d, J=4.8 Гц, 1H), 7.55-7.46 (m, 1H), 7.34 (dd, J=8.7, 1.7 Гц, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.62 (dd, J=12.7, 3.9 Гц, 1H), 3.933.73 (m, 2H), 2.73-2.54 (m, 3Н), 2.30-2.18 (m, 1H), 2.01-1.87 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 1H), 1.30-1.18 (m, 1H), 1.10-0.94 (m, 4H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.75 мин, чистота=100%; для фактора XIa Ki=1.9 нМ, для калликреина плазмы Ki=11 нМ.
Пример 32. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетрааза-трицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}бензонитрила
4-Хлор-2-{1-[(9R,13S)-3-(2Н3)метил-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}бензонитрил трифторацетат (2.1 мг, 18%) получали способами, аналогичными описанным в примере 1, путем использования (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она, полученный как описано в примере 17G, и 2-акрилоил-4-хлорбензонитрила, полученного как описано в примере 19. MS(ESI) m/z: 518 (М+Н)+. 1Н ЯМР: (400 МГц, CD3OD) 5 8.80 (br. s., 1H), 7.84 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.71-7.66 (m, 2H), 7.62 (dd, J=8.3, 2.1 Гц, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.63 (dd, J=12.4, 3.2 Гц, 1H), 3.84-3.74 (m, 2H), 2.89-2.82 (m, 2H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.32-2.21 (m, 1H), 2.06-1.96 (m, 2Н), 1.69-1.60 (m, 1H), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.22 мин, чистота=98%; для фактора XIa Ki=2.4 нМ, для калликреина плазмы Ki=4 нМ.
Пример 33. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
33А. Получение 1-хлор-4-(1,1-дифторэтил)-2-фторбензола.
В пробирку добавляли 1-(4-хлор-3-фторфенил)этанон (1 г, 5.79 ммоль), CH2Cl2 (10 мл) и DAST (2.297 мл, 17.38 ммоль). Реакционный сосуд затем герметично закрывали и перемешивали при 45°С в течение 8 ч. Реакцию осторожно быстро охлаждали холодным насыщенным водным NaHCO3 на протяжении 30 мин, пока не было достигнуто значение рН> 7. Органический слой отделяли, промывали водой (10 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием системы ISCO (градиент 0-10% EtOAc/гексан) с получением 1-хлор-4-(1,1-дифторэтил)-2-фторбензола (30 мг, 0.154 ммоль, выход 2.66%) в виде светло-коричневой жидкости. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.497.42 (m, 1H), 7.32-7.27 (m, 1H), 7.25-7.20 (m, 1H), 1.90 (t, J=18.2 Гц, 3Н).
33В. Получение 3-хлор-6-(1Д-дифторэтил)-2-фторбензальдегида
К раствору 1-хлор-4-(1,1-дифторэтил)-2-фторбензола (110 мг, 0.565 ммоль) в THF (2 мл) при -78°С добавляли LDA в THF/гептане/этилбензоле (0.339 мл, 0.678 ммоль) по каплям. Раствор потемнел. После перемешивания при этой же температуре в течение 20 мин добавляли DMF (0.052 мл, 0.678 ммоль), и затем реакцию перемешивали при этой же температуре в течение 10 мин. Добавляли АсОН (0.129 мл, 2.261 ммоль) с последующим добавлением воды (30 мл). Реакцию экстрагировали EtOAc (30 мл). Слой EtOAc промывали водой (15 мл) и солевым раствором (15 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием системы ISCO (0-30% EtOAc/гексан) с получением 3-хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторбензальдегида (100 мг, 0.449 ммоль, выход 79%) в виде светло-желтой жидкости. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 10.45 (s, 1H), 7.63 (t, J=7.7 Гц, 1H), 7.45-7.31 (m, 1H), 2.082.00 (m, 3Н).
3 3 С. Получение 1 -(3 -хлор-6-( 1,1 -дифторэтил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1 -она
1-(3-Хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он получали способом, аналогичным использованному для получения промежуточного соединения 1, путем замены 3-хлор-2,6-дифторбензальдегида на 3-хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторбензальдегид. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.52 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.29 (dd, J=8.4, 0.7 Гц, 1H), 6.64 (dd, J=17.6, 10.6 Гц, 1H), 6.22-6.16 (m, 1H), 6.03-5.94 (m, 1H), 1.91 (t, J=18.5 Гц, 3Н).
33D. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагид-ропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1 (18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторфенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1
ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-6-(1,1-дифторэтил)-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) 8.81 (d, J=5.3 Гц, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.71 (br. s., 1H), 7.65-7.58 (m, 1H), 7.57-7.52 (m, 1H), 7.45 (d, J=8.6 Гц, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.61 (d, J=9.5 Гц, 1H), 4.10 (s, 3Н), 3.79-3.67 (m, 2H), 2.71-2.58 (m, 3Н), 2.25 (br. s., 1H), 2.06-1.87 (m, 5H), 1.71-1.56 (m, 1H), 1.22 (br. s., 2H), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 572.2 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=10.48 мин, чистота=96%; для фактора XIa Ki=5.7 нМ, для калликреина плазмы Ki=50 нМ.
Пример 34. Получение (9R,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
34А. Получение 1-(2-(трет-бутокси)этил)-4-нитро-Ш-пиразола.
DIAD (8.60 мл, 44.2 ммоль) добавляли к раствору 4-нитро-Ш-пиразола (5 г, 44.2 ммоль), 2-(трет-бутокси)этанола (5.23 г, 44.2 ммоль) и PPh3 (11.60 г, 44.2 ммоль) в THF (40 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь затем быстро охлаждали водой и очищали с помощью хроматографии на силикагеле с выходом 1-(2-(трет-бутокси)этил)-4-нитро-Ш-пиразола (10.45 г, 44.1 ммоль, выход 95%). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.24 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 4.26 (t, J=5.1 Гц, 2Н), 3.763.63 (m, 2H), 1.10 (s, 9H).
34В. Получение ^)-бензил( 1 -(4-( 1 -(2-(трет-бутокси)этил)-4-нитро-Ш-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3 -ен-1 -ил)карбамата.
В продутую N2 виалу под давлением добавляли ^)-бензил(1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (3.0 г, 9.47 ммоль), полученный как ^)-трет-бутил(1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат, описанный в примере 1С, путем замены Вос2О на Cbz-Cl, и 1-(2-(трет-бутокси)этил)-4-нитро-Ш-пиразол (1.34 г, 6.31 ммоль), ди(адамант-1-ил)(бутил)фосфин (0.679 г, 1.894 ммоль), PvOH (0.193 мл, 1.894 ммоль) и K2CO3 (2.62 г, 18.94 ммоль). К реакционной смеси затем добавляли DMF (18 мл), и виалу продували N2 в течение 5 мин. К этой смеси затем добавляли Pd(OAc)2 (0.283 г, 1.263 ммоль). Реакционную смесь снова быстро продували N2. Виалу герметично закрывали и нагревали на масляной бане при 120°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разделяли между 10% водным LiCl (15 мл) и EtOAc (30 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x20 мл), и объединенные органические слои промывали солевым раствором (15 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом (S)-бензил(1-(4-(1-(2-(трет-бутокси)этил)-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (2.2 г, 4.23 ммоль, выход 67%) в виде коричневого масла. MS(ESI) m/z: 494.2
(М+Н)+.
34С. Получение (S)-бензил(1-(4-(4-амино-1-(2-(трет-бутокси)этил)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3 -ен-1 -ил)карбамата.
Раствор ^)-бензил( 1 -(4-( 1 -(2-(трет-бутокси)этил)-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (0.95 г, 1.925 ммоль) в МеОН (10 мл) и АсОН (1.0 мл) нагревали на масляной бане до 40°С. К полученному выше прозрачному раствору затем медленно добавляли Zn (0.252 г, 3.85 ммоль, 3 порции (50:25:25%)) и оставляли перемешиваться при этой же температуре в течение 5 мин. Реакционную смесь контролировали с помощью LCMS, и когда реакция завершилась, к охлажденной реакционной смеси затем добавляли 1.0 г K2CO3 (1 г на 1 мл АсОН) и 1.0 мл воды и затем перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь затем фильтровали через пробку CELITE(r) и концентрировали под вакуумом с выходом сырого продукта. Сырой продукт разделяли между EtOAc (40 мл) и насыщенным водным Na-HCO3 (20 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с выходом ^)-бензил(1-(4-(4-амино-1-(2-(трет-бутокси)этил)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (0.49 г, 1.004 ммоль, выход 52%) в виде бледно-коричневого масла. MS(ESI) m/z: 464.5 (М+Н)+.
34D. Получение бензил((S)-1-(4-(1-(2-(трет-бутокси)этил)-4-((R)-2-метилбут-3-енамидо)-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата.
В продутую N2 3-горлую 250 мл круглодонную колбу добавляли ^)-бензил(1-(4-(4-амино-1-(2-(трет-бутокси)этил)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (0.49 г, 1.057 ммоль) и EtOAc (15 мл). Раствор охлаждали до -10°С и добавляли ^)-2-метилбут-3-еновую кислоту, полученную как в промежуточном соединении 6 (106 мг, 1.057 ммоль), пиридин (0.171 мл, 2.114 ммоль) и Т3Р(r) (0.944 мл, 1.586 ммоль). Охлаждающую баню удаляли, и раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивали на протяжении 20 ч. Добавляли воду (20 мл) и EtOAc (20 мл), и смесь перемешивали в течение 30 мин. Органическую фазу отделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл).
Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (15 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом гексаны/EtOAc, получали бензил (^)-1-(4-(1-(2-(трет-бутокси)этил)-4-(^)-2-метилбут-3-енамидо)-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат (0.35 г, 0.609 ммоль, выход
58%). MS(ESI) m/z: 546.6 [М+Н]+.
34Е. Получение бензил N-[(9R,10E,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата.
В продутую N2 250 мл 3-горлую круглодонную колбу добавляли раствор бензил ((-S)-1-(4-(1-(2-(трет-бутокси)этил) -4-((R) -2 -метилбут-3 -енамидо)-1H-пиразол-5 -ил)пиридин-2 -ил)бут-3 -ен-1 -ил)карба-мата (350 мг, 0.641 ммоль) в DCE (18 мл). Раствор барботировали Ar в течение 15 мин. Добавляли катализатор Граббса второго поколения (218 мг, 0.257 ммоль) одной порцией. Реакционную смесь нагревали в микроволнах до 120°С в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли, и остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, элюируя градиентом DCM/MeOH, с выходом бензил N-[(9R,10E,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (140 мг, 0.243 ммоль, выход 38%) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 518.5 [М+Н]+.
34F. Получение (9R,13S)-13-амино-3-[2-(трет-бутокси)этил]-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
Pd на угле (0.033 г, 0.031 ммоль) добавляли в 250 мл колбу Парра для гидрирования, содержащую раствор бензил N-[(9R,10E,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-9-метил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (160 мг, 0.309 ммоль) в EtOH (10 мл). Колбу продували N2 и помещали под давление Н2 55 psi и оставляли перемешиваться в течение 4 ч. Реакцию фильтровали через слой CELITE(r) и концентрировали с выходом (9R,13S)-13-амино-3-[2-(трет-бутокси)этил]-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (81 мг, 0.210 ммоль, выход 68%) в виде рыжевато-коричневого твердого вещества. MS(ESI)m/z: 386.5
[М+Н]+.
34G. Получение (9R,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-онатрифторацетата.
(9R,13,S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-он трифторацетат получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-(5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 4, с выходом (9R,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-онатрифтор-ацетата (48 мг, 0.058 ммоль, выход 27%). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.49-8.44 (m, 1H), 8.23 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.68-7.53 (m, 4H), 5.86-5.79 (m, 1H), 5.48 (dd, J=12.8, 3.5 Гц, 1H), 4.51-4.33 (m, 2Н), 3.94-3.78 (m, 2H), 3.53-3.34 (m, 2H), 2.58-2.46 (m, 1H), 2.26-2.14 (m, 3H), 2.02-1.83 (m, 2H), 1.66-1.51 (m, 1H), 1.30 (br. s., 1H), 1.10 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 1.08-1.03 (m, 9H). MS(ESI) m/z: 677.5 [M+H]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.93 мин, чистота > 95.0%; для фактора XIa Ki= 1. 1 нМ, для калликреина плазмы Ki=50 нМ.
Пример 35. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2-гидроксиэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
К раствору (9R,13S)-3-[2-(трет-бутокси)этил]-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата (32 мг, 0.047 ммоль) в DCM добавляли TFA (2 мл), и реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь затем концентрировали под вакуумом и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с выходом (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2-гидрокси-этил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата (28.4 мг, 0.037 ммоль, выход 78%). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.77 (d, J=5.3 Гц, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.89 (dd, J=5.3, 1.3 Гц, 1H), 7.70-7.58 (m, 6Н), 5.86 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.8, 3.5 Гц, 1H), 4.47-4.40 (m,
2H), 4.07-3.98 (m, 3H), 3.52 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.65-2.52 (m, 1H), 2.49-2.36 (m, 1H), 2.34-2.11 (m, 2H), 2.011.82 (m, 2H), 1.69-1.52 (m, 1H), 1.18 (br. s., 1H), 1.12 (d, J=7.0 Гц, 3H). MS(ESI) m/z: 621.5 [M+H]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.42 мин, чистота > 95.0%; для фактора XIa Ki=0.82 нМ, для калликреина плазмы Ki=32 нМ.
Пример 36. Получение (9R,13S)-13-[4-(6-бром-3-хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидро-пиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(6-Бром-3 -хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замещения 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(6-бром-3-хлор-2-фторфенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 12. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) d 8.72 (d, J=5.1 Гц, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.52-7.37 (m, 4H), 5.93 (s, 1H), 5.65 (dd, J=12.7, 3.9 Гц, 1H), 4.04 (s, 3Н), 3.91-3.69 (m, 2H), 2.65-2.53 (m, 3Н), 2.27-2.13 (m, 1H), 2.04-1.80 (m, 2Н), 1.66-1.51 (m, 1H), 1.37-1.17 (m, 1H), 1.05 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 1.02-0.93 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 586.0 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.46 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=1.7 нМ, для калликреина плазмы Ki=5 нМ.
Пример 37. Получение (9R,13S)-13-[4-(2-бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7Д5-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(2-Бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (0.085 г, выход 20%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1М, путем замены 1-(5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(2-бром-5-хлорфенил)проп-2-ен-1-он (0.15 г, 0.611 ммоль), промежуточное соединение 13. MS(ESI) m/z: 570.4 (М+2+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.79 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.75 (dd, J=5.5, 1.5 Гц, 1H), 7.63 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.34 (d, J=2.6 Гц, 1H), 7.30 (dd, J=8.5, 2.5 Гц, 1H), 5.91 (t, J=1.2 Гц, 1H), 5.56 (dd, J=12.7, 3.9 Гц, 1H), 4.08 (s, 3Н), 3.72 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.73 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.62-2.53 (m, 1H), 2.31-2.20 (m, 1H), 2.04-1.91 (m, 2H), 1.67-1.56 (m, 1H), 1.271.16 (m, 2H), 1.10 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.44 мин, 96.5% чистота; для фактора XIa Ki=4.7 нМ, для калликреина плазмы Ki=16 нМ.
Пример 38. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[1-(дифторметил)-1Н-пиразол-4-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14Д6-пентаен-8-она
В герметичную пробирку добавляли (9R,13S)-13-[4-(2-бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (0.02 г, 0.029 ммоль), полученный как описано в примере 37, 1-(дифторметил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (7.86 мг, 0.032 ммоль), 3М водный K3PO4 (0.039 мл, 0.117 ммоль) и THF (1 мл). Ar барботировали через реакционную смесь в течение нескольких минут и добавляли (DtBPF)PdCl2 (0.95 мг, 1.464 мкмоль). Реакцию герметично закрывали и нагревали при 90°С. Через 18 ч реакцию охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Очисткой с помощью обращенно-фазовой хроматографии получали (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[1-(дифторметил)-1Н-пиразол-4-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15
тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (6.5 мг, выход 30%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 606.5 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.77 (br. s., 1H), 8.22 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.78-7.66 (m, 2Н), 7.52 (s, 1H), 7.50 (t, J=59.6 Гц, 1H), 7.45-7.43 (m, 2Н), 7.35 (t, J=1.2 Гц, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.54 (d, J=9.4 Гц, 1H), 4.07 (s, 3Н), 3.49 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 2.60-2.52 (m, 1H), 2.37 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.22-2.13 (m, 1H), 1.99-1.88 (m, 2H), 1.63-1.54 (m, 1H), 1.23-1.14 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.9 Гц, 3Н). 19F ЯМР (376МГц, CD3OD) 5 -77.60 (s), -96.03 (s). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.39 мин, 98.5% чистота; для фактора XIa Ki=1.8 нМ, для калликреина плазмы Ki=120 нМ.
Пример 39. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}-3-фторбензонитрила
4-Хлор-2-{1-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02•6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}-3-фторбензонитрил получали в соответствии со способами, описанными в примере 19, путем замещения (9R,13S)-13-[4-(2-бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]-октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она на (9R,13S)-13-[4-(6-бром-3-хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, пример 36. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.80 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.75-7.63 (m, 3Н), 7.54 (s, 1H), 6.19 (t, J=1.2 Гц, 1H), 5.59 (dd, J=12.5, 4.0 Гц, 1H), 4.09 (s, 3Н), 3.81-3.71 (m, 2H), 2.842.69 (m, 2H), 2.63-2.52 (m, 1H), 2.31-2.18 (m, 1H), 2.05-1.91 (m, 2H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.21 (d, J=4.2 Гц, 2Н), 1.09 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 533.1 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.62 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki= 1. 1 нМ, для калликреина плазмы Ki=120 нМ.
Пример 40. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
40А. Получение 5 -хлор-2-(4-(трифторметил)-Ш-1,2,3-триазол-1 -ил)бензальдегида.
Газообразный 3,3,3-трифторпроп-1-ин осторожно барботировали в течение 3 мин через суспензию 2-азидо-5-хлорбензальдегида (160 мг, 0.881 ммоль) и Cu2O (14 мг, 0.098 ммоль) в CH3CN (6 мл). Реакционный сосуд закрывали, и реакцию перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакцию разбавляли EtOAc и промывали насыщенным NH4Cl и солевым раствором. Органический слой высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением 5-хлор-2-(4-(трифторметил)-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида (241 мг, выход 99%) в виде бежевого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 276.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 9.88 (s, 1H), 8.26 (d, J=0.9 Гц, 1H), 8.10 (d, J=2.4 Гц, 1H), 7.78 (dd, J=8.4, 2.4 Гц, 1H), 7.52 (d, J=8.4 Гц, 1Н).
40В. Получение 1 -(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1 -ил)фенил)проп-2-ен-1-ола.
К раствору 5-хлор-2-(4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)бензальдегида (241 мг, 0.874 ммоль) и THF (10 мл) при 0°С добавляли по каплям 1.6 М винилмагния хлорид в THF (1.137 мл, 1.137 ммоль). Реакцию перемешивали при 0°С в течение 30 мин и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакцию затем быстро охлаждали 1н. HCl. Реакционную смесь распределяли между EtOAc и водой, и слои разделяли. Органический слой промывали солевым раствором, концентрировали и очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с получением 1-(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-ола (224 мг, выход 84%) в виде желтого масла. MS(ESI) m/z: 304.4 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.18 (d, J=0.7 Гц, 1H), 7.72 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.47 (dd, J=8.4, 2.4 Гц, 1H), 7.32 (d, J=8.4 Гц, 1H), 5.87 (ddd, J=17.3, 10.3, 5.4 Гц, 1H), 5.20 (dt, J=6.0, 1.2 Гц, 1H), 5.18-5.14 (m, 1H), 5.11 (d, J=4.0 Гц, 1H), 2.82 (br. s., 1Н).
40C. Получение 1 -(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-Ш-1,2,3-триазол-1 -ил)фенил)проп-2-ен-1-она.
К раствору 1-(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она (124 мг, 0.408 ммоль) в ацетоне (5 мл) при 0°С добавляли по каплям реагент Джонса (0.16 мл, 0.408 ммоль) до тех
пор, пока сохранялся коричневый цвет. Реакционную смесь быстро охлаждали IPA, разбавляли EtOAc и подщелачивали насыщенным NaHCO3 до рН 8. Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (2х). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, концентрировали и затем очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с получением 1-(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она (112 мг, выход 91%) в виде желтого масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.11 (s, 1H), 7.71-7.66 (m, 1H), 7.65 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.54 (d, J=8.4 Гц, 1H), 6.41 (dd, J=17.5, 10.7 Гц, 1H), 6.10-5.91 (m, 2H). MS(ESI) m/z: 302.3 (M+H)+.
40D. Получение (9R,13S)-13-(4-{5 -хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-она трифторацетата.
(9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетат (14 мг, выход 36%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-он. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.93 (d, J=0.7 Гц, 1H), 8.72 (br. s., 1H), 7.69-7.55 (m, 5H), 7.50 (s, 1H), 5.80 (s, 1H), 5.52 (d, J=11.9 Гц, 1H), 4.05 (s, 3Н), 3.56-3.42 (m, 2H), 2.60-2.48 (m, 1H), 2.24 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.13 (m, 1H), 2.03-1.78 (m, 2Н), 1.62-1.51 (m, 1H), 1.18 (т., 1H), 1.07 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 625.1 (М+Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.44 мин, чистота=97%; для фактора XIa Ki=0.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=6 нМ.
Пример 41. Получение (9R,13S)-13-(4-{3-хлор-6-[1-(дифторметил)-1Н-пиразол-4-ил]-2-фторфенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13,S)-13-(4-{3-Хлор-6-[1-(дифторметил)-1Н-пиразол-4-ил]-2-фторфенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (9.5 мг, выход 38%) получали в соответствии со способом, описанным в примере 38, путем замены (9R,13S)-13-[4-(2-бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата на (9R,13S)-13-[4-(6-бром-3-хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (0.02 г, 0.034 ммоль), полученный как описано в примере 36. MS(ESI) m/z: 624.5 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.73 (d, J=5.1 Гц, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56-7.52 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.49 (t, J=59.0 Гц, 1H), 7.30 (dd, J=8.4, 1.3 Гц, 1H), 5.96 (s, 1H), 5.59 (dd, J=12.8, 3.7 Гц, 1H), 4.05 (s, 3Н), 3.64-3.49 (m, 2Н), 2.62-2.51 (m, 1H), 2.42 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 2.22-2.11 (m, 1H), 2.01-1.83 (m, 2H), 1.64-1.53 (m, 1H), 1.271.03 (m, 5H). 19F ЯМР (376МГц, CD3OD) 5 -77.45 (s), -96.21 (s), -117.57 (s). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.47 мин, чистота=100%, для фактора XIa Ki=1 нМ, для калликреина плазмы Ki=34 нМ.
Пример 42. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]-октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагид-ропиридин-1-ил)-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (21 мг, выход 41%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования 1-(5-хлор-2-(4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она, полученного как описано в примере 40С, и (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она, полученного как описано в примере 18. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD-d4) 5 8.94 (d, J=0.7 Гц, 1H), 8.77 (br. s., 1H), 7.75 (br. s., 2H), 7.69-7.59 (m, 4H), 7.52 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.47 (d, J=10.3 Гц, 1H), 3.50 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.55 (ddd, J=9.3, 6.5, 3.3 Гц, 1H), 2.27 (t, J=6.7 Гц, 2H), 2.22-2.11 (m, 1H), 1.99-1.83 (m, 2H), 1.64-1.52 (m, 1H), 1.17 (br. s., 2H), 1.08 (d,
43А. Получение (S)-N-[(1Е)-(6-хлорпиридин-2-ил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида.
К раствору ^)-2-метилпропан-2-сульфинамида (1.712 г, 14.13 ммоль) в DCM (61.4 мл) добавляли последовательно Cs2CO3 (6.91 г, 21.19 ммоль) и 6-хлорпиколинальдегид (2.0 г, 14.13 ммоль). Полученную в результате белую суспензию перемешивали при комнатной температуре. Через 17 ч реакцию останавливали и фильтровали. Фильтрат разбавляли EtOAc (100 мл) и промывали солевым раствором (50 млх 3). Органический слой высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением (S)-N-[(1E)-(6-хлорпиридин-2-ил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида (3.58 г, 104%) в виде желтого масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.65 (s, 1H), 7.99-7.94 (m, 1H), 7.79 (t, J=7.7 Гц, 1H), 7.45 (dd, J=7.9, 0.7 Гц, 1H), 1.28 (s, 10Н).
43В. Получение (S)-N-[( 1 S)-1-(6-хлорпиридин-2-ил)бут-3 -ен-1 -ил] -2-метилпропан-2-сульфинамида,
43С. Получение (S)-N-[(1R)-1-(6-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил]-2-метилпропан-2-сульфинамида.
К смеси (S)-N-[(1Е)-(6-хлорпиридин-2-ил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида (1.73 г, 7.07 ммоль) и In (0.92 г, 10.60 ммоль) в THF (17.7 мл) медленно добавляли 3-бромпроп-1-ен (0.92 г, 10.60 ммоль). Реакцию нагревали при 60°С на протяжении ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через CELITE(r), и фильтрат концентрировали. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, используя гексаны и EtOAc, с получением в соотношении 5.6:1 (S)-N-[(1S)-1-(6-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил]-2-метилпропан-2-сульфинамида: (S)-N-[(1R)-1 -(6-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1 -ил]-2-метилпропан-2-сульфинамида (2.42 г, 58%) в виде главного продукта и в виде коричневого полутвердого вещества. MS(ESI) m/z: 287.4
(М+Н)+.
43D. Получение (S)-2-метил-N-[(1R)-1-[6-(1-метил-4-нитро-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]пропан-2-сульфинамида (диастереомер А), и
43Е. Получение (S)-2-метил-N-[(1S)-1-[6-(1-метил-4-нитро-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]пропан-2-сульфинамида (диастереомер В).
В продутую N2 виалу под давлением добавляли в соотношении 5.6:1 ^)-№[(^)-1-(6-хлорпиридин-2-ил)бут-3 -ен-1 -ил] -2-метилпропан-2-сульфинамид:(S)-N-[(1R)-1-(6-хлорпиридин-2-ил)бут-3 -ен-1 -ил] -2-метилпропан-2-сульфинамид (2.18 г, 7.60 ммоль), 1-метил-4-нитро-Ш-пиразол (0.966 г, 7.60 ммоль), полученный как описано в примере 1D, ди(адамант-1-ил)(бутил)фосфин (0.954 г, 2.66 ммоль), PvOH (0.300 мл, 2.58 ммоль), K2CO3 (3.62 г, 26.2 ммоль), Pd(OAc)2 (0.341 г, 1.52 ммоль) и DMF (15.2 мл). Виалу продували Ar. Виалу герметично закрывали и нагревали на масляной бане при 120°С на протяжении ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разделяли между водой и EtOAc, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали EtOAc (3х), и органические слои объединяли и концентрировали. Сырой продукт очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с последующей вторичной очисткой с помощью обращенно-фазовой хроматографии с получением ^)-2-метил-^[(Ж)-1-[6-(1-метил-4-нитро-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]пропан-2-сульфинамида (диастереомер А) (0.275 г, 13%), MS(ESI) m/z: 274.4 (M+H)+, и (S)-2-метил-N-[(1S)-1-[6-(1-метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]пропан-2-сульфинамида (диастереомер В) (1.2 г, 57%), MS(ESI) m/z: 214.4 (М+Н)+.
43F. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-[6-(1-метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]карбамата.
(1S)-1-(6-(1-Метил-4-нитро-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-амин (диастереомер В) (1.2 г, 3.18 ммоль) растворяли в МеОН (5 мл) и диоксане (25 мл). Добавляли 4н. HCl в диоксане (4.8 мл, 19.1 ммоль). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали. Остаток совместно выпаривали с толуолом, растворяли в DCM (40 мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли TEA (4.43 мл, 31.8 ммоль) с последующим добавлением ВОС2О (0.738 мл, 3.18 ммоль). Реакцию перемешивали при 0°С в течение 15 мин, и затем реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 2 ч реакцию разбавляли DCM, промывали насыщенным NaHCO3, солевым раствором и концентрировали. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой получали трет-бутил №[(^)-1-[6-(1-метил-4
нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]карбамат (393 мг, выход 33%) в виде оранжевого масла. MS(ESI) m/z: 374.5 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.19 (s, 1H), 7.84 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.55 (d, J=7.7 Гц, 1H), 7.38 (d, J=7.7 Гц, 1H), 5.77-5.58 (m, 1H), 5.40 (br. s., 1H), 5.13-5.01 (m, 2H), 4.92 (d, J=6.8 Гц, 1H), 3.86 (s, 3Н), 2.71-2.51 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
43G. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-[6-(4-амино-1-метил-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил] карбамата.
К раствору трет-бутил N-[(1S)-1-[6-(1-метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]карбамата (393 мг, 1.05 ммоль) в МеОН (6.4 мл) добавляли АсОН (0.64 мл). Реакционную колбу помещали на предварительно нагретую баню при 45°С, затем добавляли порциями порошкообразный Zn (206 мг, 3.16 ммоль). Через 1 ч добавляли дополнительный Zn (198 мг). Сразу после завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, разделяли между DCM и насыщенным NaHCO3, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали DCM (2х ). Органические слои объединяли и промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением трет-бутил N-[(1S)-1-[6-(4-амино-1-метил-1H-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]карбамата (343 мг, выход 95%) в виде желтой пены. MS(ESI) m/z: 344.5 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.74 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.39 (dd, J=7.8, 0.8 Гц, 1H), 7.25-7.18 (m, 1H), 7.14 (d, J=7.7 Гц, 1H), 5.70 (ddt, J=17.1, 10.2, 7.0 Гц, 1H), 5.46 (d, J=6.8 Гц, 1H), 5.13-4.99 (m, 2H), 4.89 (d, J=6.8 Гц, 1H), 4.01 (s, 3Н), 2.71-2.53 (m, 2H), 1.49-1.30 (m,
9H).
43Н. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-(6-{1-метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил}пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил]карбамата.
К трет-бутил N-[(1S)-1-[6-(4-амино-1-метил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин-2-ил]бут-3-ен-1-ил]карбама-ту (343 мг, 0.999 ммоль) в EtOAc (3.33 мл) добавляли раствор да-2-метилбут-3-еновой кислоты (0.150 г,
I. 498 ммоль), промежуточное соединение 6, в EtOAc (1 мл). Смесь охлаждали до 0°С и добавляли пири-
дин (0.24 мл, 3.0 ммоль) с последующим добавлением раствора 50% Т3Р(r) в EtOAc (1.19 мл, 1.50 ммоль).
Через 2 ч реакцию разделяли между насыщенным NaHCO3 и EtOAc, и слои разделяли. Водный слой экс-
трагировали EtOAc (2х ). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором и затем концен-
трировали. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой получали трет-бутил N-[(1S)-1-(6-
{1-метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил}пиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил]карбамат (360 мг,
85%) в виде желтого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 426.5 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 9.35 (br.
s., 1H), 8.30 (s, 1H), 7.82 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.40 (d, J=7.9 Гц, 1H), 7.32-7.19 (m, 1H), 6.01 (ddd, J=17.4, 10.0,
7.6 Гц, 1H), 5.78-5.57 (m, 1H), 5.35-5.04 (m, 5Н), 4.91 (br. s., 1H), 4.06 (s, 3Н), 3.26-3.06 (m, 1H), 2.81-2.54
(m, 2H), 1.54-1.30 (m, 12H).
43I. Получение трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата.
Раствор трет-бутил N-[(1S)-1-(6-{1-метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил}пири-дин-2-ил)бут-3-ен-1-ил]карбамата (140 мг, 0.329 ммоль) в EtOAc (25 мл) продували Ar в течение 20 мин. Добавляли катализатор Граббса второго поколения (0.112 г, 0.132 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 80°С на протяжении ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Проводили очистку с помощью хроматографии с нормальной фазой и затем с помощью об-ращенно-фазовой хроматографии. Фракции, содержащие целевой продукт, подщелачивали (рН~8) насыщенным NaHCO3 и затем концентрировали. Остаток разделяли между водой и EtOAc, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали DCM (3х) и EtOAc (3х). Органические слои объединяли и промывали солевым раствором, высушивали MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02•6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (96 мг, выход 66%). MS(ESI) m/z: 398.2 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5
II. 12 (br. s., 1H), 8.08 (s, 1H), 7.84 (t, J=7.9 Гц, 1H), 7.39 (dd, J=7.9, 0.7 Гц, 1H), 7.32-7.24 (m, 1H), 5.98-5.83
(m, 1H), 5.55 (dd, J=15.7, 7.4 Гц, 1H), 5.41 (d, J=6.6 Гц, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.10-4.03 (m, 3Н), 3.15 (quin,
J=7.3 Гц, 1H), 2.84-2.56 (m, 2H), 1.51-1.32 (m, 12H).
43J. Получение трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло-[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата, и
43K. Получение трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6] октадека-2(6),4-диеп-13-ил]карбамата.
Раствор трет-бутил N-[(9R,10E,13,S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]ок-тадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (0.096 г, 0.024 ммоль) в EtOH (4 мл) гидрировали при 20 psi H2 в присутствии PtO2 (20 мг) в течение 20 ч. Смесь фильтровали, промывая МеОН и EtOAc. Фильтрат концентрировали и затем очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии с получением с последующей нейтрализацией фракций и экстракцией, трет-бутил-N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-2(6),4-диеп-13-ил]карбамата (20 мг, выход 20.4%), MS(ESI) m/z: 406.2 (М+Н)+; и трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (68 мг, выход 70.5%),
MS(ESI) m/z: 400.2 (М+Н)+.
43L. Получение (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
К раствору трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]ок-тадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (0.035 г, 0.088 ммоль) в DCM (0.5 мл) добавляли TFA (0.2 мл, 2.60 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали досуха и выпаривали совместно с CH3CN. Остаток нейтрализовали путем растворения в МеОН, пропуская через картридж NaHCO3 (StratoSpheres SPE; загрузка 500 мг, 0.90 ммоль) и концентрируя фильтрат с получением (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (15 мг, выход 57%) в виде прозрачного стекла, которое использовали без дополнительной
очистки. MS(ESI) m/z: 300.5 (М+Н)+.
43М. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (7 мг, выход 32%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования 1-(5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она, полученного как описано в промежуточном соединении 4, и (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,18-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она. MS(ESI) m/z: 591.2 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.43 (s, 1Н), 7.95 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.66-7.60 (m, 3Н), 7.58-7.53 (m, 2H), 7.34 (d, J=7.7 Гц, 1H), 5.83 (s, 1H), 5.68 (dd, J=11.1, 1.9 Гц, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.93 (ddd, J=13.1, 7.8, 5.5 Гц, 1Н), 2.65-2.52 (m, 1H), 2.51-2.39 (m, 1H), 2.19-2.09 (m, 1H), 2.02-1.91 (m, 1H), 1.83-1.64 (m, 3H), 1.60-1.49 (m, 1H), 1.32-1.19 (m, 1H), 1.16 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.46 мин, чистота=99.6%; для фактора XIa Ki=4.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=110 нМ.
Пример 44. Получение (9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7Д5-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
В герметичную пробирку, содержащую (9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он), полученный как описано в примере 24, и CuI (0.368 мг, 1.935 мкмоль) в DMSO (1 мл), добавляли 3-иодпиридин (7.93 мг, 0.039 ммоль) и Cs2CO3 (0.025 г, 0.077 ммоль). Реакционную смесь продували Ar (3х), затем нагревали до 80°С. Через 44 ч реакцию охлаждали до комнатной температуры. Очисткой с помощью обращенно-фазовой хроматографии получали (9R,13S)-13-[4-(3,6-дихлор-2-фторфенил)-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (1.91 мг, выход 15%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 540.1 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.74 (d, J=5.1 Гц, 1H), 8.23 (d, J=7.0 Гц, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.59-7.50 (m, 3Н), 7.39 (dd, J=8.8, 1.5 Гц, 1H), 6.55 (d, J=2.0 Гц, 1H), 6.42 (dd, J=7.0, 1.5 Гц, 1Н), 6.17 (dd, J=12.8, 4.2 Гц, 1H), 4.06 (s, 3Н), 2.74-2.64 (m, 1Н), 2.38-2.26 (m, 1Н), 2.15-1.99 (m, 2H), 1.701.58 (m, 1Н), 1.52-1.39 (m, 1Н), 1.03 (d, J=7.0 Гц, 3Н), 0.89-0.72 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.43 мин, чистота=97.9%; для фактора XIa Ki=2.2 нМ, для калликреина плазмы Ki=5.7 нМ.
Пример 45. Получение (9R,13S)-13-[4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-этил-9-метил-ЗД,7Д5-тетраазатрщикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-[4-(3-Хлор-2,6-дифторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3-этил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования 1-(3-хлор-2,6-дифторфенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 1, и 1-этил-4-нитро-Ш-пиразола, промежуточное соединение 8. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.84 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.76 (dd, J=5.7, 1.5 Гц, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (td, J=8.7, 5.5 Гц, 1H), 7.12 (td, J=9.2, 1.8 Гц, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.5, 4.0 Гц, 1H), 4.43 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 3.74
(t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.85-2.69 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.38-2.20 (m, 1H), 2.10-1.88 (m, 2H), 1.71-1.58 (m, 1H), 1.53 (t, J=7.3 Гц, 3Н), 1.22 (br. s., 2H), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 540.2 (М+Н)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=11.04 мин, чистота=97%; для фактора XIa Ki=13 нМ, для калликреина плазмы
Ki=54 нМ.
Пример 46. Получение (9R,13S)-13-[4-(6-ацетил-3-хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидро-пиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-
она
Смесь (9R, 13 S)-13-[4-(6-бром-3 -хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил] -3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (18 мг, 0.031 ммоль), трибутил(1-этоксивинил)станнана (20.72 мкл, 0.061 ммоль) и Pd(PPh3)2Cl2 (2.153 мг, 3.07 мкмоль) в толуоле (767 мкл) дегазировали и нагревали при 110°С на протяжении ночи. Растворитель удаляли, и добавляли 2 мл 1:1 смеси 1н. HCl и THF. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0.5 ч и концентрировали. Сырой продукт затем очищали с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением (9R,13S)-13-[4-(6-ацетил-3 -хлор-2-фторфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата (9.6 мг, 46%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 9.24 (s, 1H), 8.74 (d, J=5.2 Гц, 1H), 7.85-7.73 (m, 2H), 7.59-7.44 (m, 3H), 7.27-7.00 (m, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.60 (d, J=8.9 Гц, 1H), 4.02 (s, 3Н), 3.88 (br. s., 1H), 3.70 (d, J=5.5 Гц, 1H), 3.51-3.38 (m, 5H), 2.17-1.93 (m, 2H), 1.69 (br. s., 1H), 1.48 (br. s., 1H), 1.28-1.10 (m, 1H), 0.93 (d, J=6.7 Гц, 3Н), 0.66 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 550.4 (M+H). Аналитическая ВЭЖХ (метод С): RT=1.40 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=3.5 нМ, для калликреина плазмы Ki=46 нМ.
Пример 47. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-4-(пиримидин-5-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5Д4Д6-пентаен-8-она
47А. Получение (9R,13,S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидро-пиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата.
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (262 мг, 0.387 ммоль, выход 65%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замещения 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2-фтор-6-(трифтор-метил)фенил)проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 2. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 9.25 (s, 1H), 8.59 (d, J=4.3 Гц, 1H), 7.91-7.79 (m, 2H), 7.74-7.65 (m, 2H), 7.44 (d, J=4.9 Гц, 1H), 7.26-6.96 (m, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.65 (d, J=8.9 Гц, 1H), 3.91-3.81 (m, 1H), 3.60 (br. s., 1H), 2.65 (br. s., 2H), 2.20-1.97 (m, 2H), 1.76 (br. s., 1H), 1.51 (br. s., 1H), 1.31 (br. s., 1H), 0.95 (d, J=7.0 Гц, 3H), 0.81 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 562.3 [M+H]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод В): RT=1.72 мин, чистота =100.0%.
47В. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-
тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-4-(пиримидин-5-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16 -пентае н-8-она трифторацетата.
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-4-(пиримидин-5-ил)-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2,5,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (7.5 мг, 9.85 мкмоль, выход 18%) получали в соответствии со способами, описанными в примере 11, путем замены (2-бромэтокси)(трет-бутил)диметилсилана на 5-иодпиримидин. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 9.58 (s, 1H), 9.39 (s, 2H), 9.19 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.68 (d, J=4.9 Гц, 1H), 7.85 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.60 (d, J=4.3 Гц, 1H), 7.26-6.97 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.71 (d, J=8.8 Гц, 1H), 3.97 (br. s., 1H), 3.67 (br. s., 1H), 3.44, 3.36 (m, 1H), 2.73 (br. s., 1H), 2.19 (br. s., 1H), 2.06 (br. s., 1H), 1.76 (br. s., 1H), 1.56 (br. s., 1H), 1.34 (br. s., 1H), 0.97 (d, J=6.7 Гц, 3H), 0.69 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 640.1 [M+H]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод В): RT=1.84 мин, чистота=99.0%; для фактора XIa
48А. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-[3-(1-метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)фенил]бут-3-ен-1-ил]карбамата.
К трет-бутил N-[(1S)-1-(3-бромфенил)бут-3-ен-1-ил]карбамату (2 г, 6.13 ммоль), 1-метил-4-нитро-1H-пиразолу (0.779 г, 6.13 ммоль), ди(адамантан-1-ил)(бутил)фосфину (0.659 г, 1.839 ммоль), пивалевой кислоте (0.213 мл, 1.839 ммоль), K2CO3 (2.54 г, 18.39 ммоль) добавляли DMF (9 мл). Смесь дегазировали Ar в течение 10 мин. Добавляли Pd(OAc)2 (0.275 г, 1.226 ммоль), и реакцию нагревали на масляной бане при 120°С в течение 15 ч. Реакцию разделяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл), раствор фильтровали через бумагу, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали EtOAc (2х 50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, используя гексаны и EtOAc в качестве элюентов, с получением ^)-трет-бутил (1-(3-(1-метил-4-нитро-Ш-пиразол-5-ил)фенил)бут-3-ен-1-ил)карбамата (1.186 г, 3.18 ммоль, выход 51.9%) в виде желтого масла. MS(ESI) m/z: 371.1 (М-Н)+.
48В. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-[3-(4-амино-1-метил-1H-пиразол-5-ил)фенил]бут-3-ен-1-ил]карбамата.
К трет-бутил N-[(1S)-1-[3-(1-метил-4-нитро-1H-пиразол-5-ил)фенил]бут-3-ен-1-ил]карбамату (0.097 г, 0.260 ммоль) в ацетоне (5 мл)/воде (1 мл), охлажденному до 0°С, добавляли NH4Cl (0.070 г, 1.302 ммоль) и Zn (0.170 г, 2.60 ммоль). Ледяную баню удаляли. Через 3 ч реакцию фильтровали, и фильтрат разделяли между водой (10 мл) и EtOAc (30 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2х20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, применяя DCM и 0-10% МеОН в качестве элюентов, с получением трет-бутил №[(^)-1-[3-(4-шино-1-метил-Ш-пиразол-5-ил)фенил]бут-3-ен-1-ил]карбамата (76.6 мг, 86%). MS(ESI) m/z: 343.2 (М+Н)+.
48С. Получение трет-бутил N-[(1S)-1-(3-{1-метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил} фенил)бут-3 -ен-1 -ил] карбамата.
К трет-бутил N-[(1S)-1-[3-(4-амино-1-метил-1H-пиразол-5-ил)фенил]бут-3-ен-1-ил]карбамату (0.076 г, 0.222 ммоль) в EtOAc (0.58 мл) добавляли ^)-2-метилбут-3-еновую кислоту (0.027 г, 0.266 ммоль), промежуточное соединение 6, в 0.3 мл EtOAc. Смесь охлаждали до 0°С и добавляли основание Хунига (0.116 мл, 0.666 ммоль) с последующим добавлением раствора 50% Т3Р(r) в EtOAc (0.264 мл, 0.444 ммоль). Через 3 ч реакционную смесь распределяли между насыщенным NaHCO3 (5 мл) и EtOAc (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2х 10 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (5 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, применяя гексаны и EtOAc в качестве элюентов, с получением (69 мг, 73%) трет-бутил N-[(1S)-1-(3-{1-метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил}фенил)бут-3-ен-1-ил]карбамата в виде желтого масла. MS(ESI) m/z: 425.2 (М+Н)+. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 8.04 (s, 1H), 7.52-7.45 (m, 1H), 7.37 (d, J=7.9 Гц, 1H), 7.26-7.18 (m, 2H), 7.05 (br. s., 1H), 5.96-5.85 (m, 1H), 5.69 (ddt, J=17.0, 10.1, 7.0 Гц, 1H), 5.21-5.09 (m, 4Н), 4.95 (br. s., 1H), 4.77 (br. s., 1H), 3.76 (s, 3H), 3.07 (quin, J=7.2 Гц, 1H), 2.61-2.48 (m, 2H), 1.45-1.38 (m, 9H), 1.30 (d, J=7.0 Гц, 3Н).
48D. Получение трет-бутил N-[(9RД0ЕД3S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3Л.02'6] октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата.
Раствор трет-бутил N-[(1S)-1-(3-{1-метил-4-[(2R)-2-метилбут-3-енамидо]-1H-пиразол-5-ил}фенил)бут-3-ен-1-ил]карбамата (0.069 г, 0.163 ммоль) в дегазированном DCE (10 мл) нагревали до 120°С в течение 30 мин в микроволнах в присутствии катализатора Граббса второго поколения (0.055 г, 0.065 ммоль). Реакционную смесь сразу дважды очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, применяя гексаны и EtOAc в качестве элюентов, с получением целевого трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (33 мг, 51.2%) в виде темного твердого вещества. MS(ESI) m/z: 397.1 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 7.61-7.52 (m, 1H), 7.46-7.40 (m, 1H), 7.33-7.25 (m, 1H), 7.20 (d, J=7.5 Гц, 1H), 6.93 (br. s., 1H), 6.83 (s, 1H), 5.63 (ddd, J=15.1, 9.4, 5.6 Гц, 1H), 5.18 (br. s., 1H), 4.89 (dd, J=15.2, 8.8 Гц, 1H), 4.69 (br. s., 1H), 3.93-3.86 (m, 3H), 3.09-2.99 (m, 1H), 2.69-2.58 (m, 1H), 2.17-2.08 (m, 1H), 1.53-1.32 (m,9H), 1.18 (d,
J=6.8 Гц, 3Н).
48E. Получение трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата.
Раствор трет-бутил N-[(9R,10Е,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (0.089 г, 0.224 ммоль) в EtOH (5 мл) гидрировали в атмосфере H2 при 55 psi в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали через маленькую пробку CELITE(r) и прополаскивали EtOH/MeOH/DCM с получением трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (89 мг, 99%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 399.4 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц CDCl3) 5 7.53-7.43 (m, 2H), 7.43-7.36 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 4.90 (br. s., 1H), 4.68 (br. s., 1H), 3.98 (s, 3Н), 2.44 (br. s., 1H), 1.93 (d, J=7.7 Гц, 1H), 1.85-1.63 (m, 2H), 1.42 (br. s., 9H), 1.28-1.19 (m, 2H), 1.07 (d,J=6.8 Гц, 3Н), 0.96 (br. s., 1H).
48F. Получение (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она гидрохлорида
С трет-бутил N-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (88 мг, 0.221 ммоль) снимали защиту с помощью 4н. HCl в диоксане (3 мл) в течение 5 ч. Реакцию концентрировали с получением (70 мг, 95%) (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она гидрохлорида в виде темного твердого вещества. MS(ESI) m/z: 299.08 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 7.81 (s, 1H), 7.77-7.70 (m, 1H), 7.70-7.58 (m, 3H), 4.46 (dd, J=12.0, 4.5 Гц, 1H), 4.19-4.07 (m, 3H), 3.45-3.26 (m, 1H), 2.752.59 (m, 1H), 2.21-2.09 (m, 1H), 1.99-1.86 (m, 2H), 1.58 (td, J=14.3, 8.3 Гц, 1H), 1.29-1.17 (m, 1H), 1.03 (d, J=6.9 Гц, 3H), 0.94-0.82 (m, 1H).
48G. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (23 мг, 86%), белое твердое вещество, получали таким же образом, как пример 1, путем использования 1-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]проп-2-ен-1-она и 13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она. MS(ESI) m/z: 590.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.33 (s, 1Н), 7.58-7.51 (m, 2H), 7.51-7.35 (m, 6H), 7.25 (d, J=7.7 Гц, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.46 (dd, J=12.8, 3.1 Гц, 1H), 3.97-3.85 (m, 3H), 2.94-2.81 (m, 1H), 2.36-2.25 (m, 1H), 2.13-1.98 (m, 2H), 1.98-1.86 (m, 1H), 1.79-1.63 (m, 2H), 1.57-1.40 (m, 2H), 1.05 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 0.93 (t, J=12.7 Гц, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (Метод A): RT=8.52 мин, чистота =97%; для фактора XIa Ki=0.13 нМ, для калликреина плазмы
Ki=5.5 нМ.
Пример 49. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (10.3 мг, 59.1%), белое твердое вещество, получали таким же образом, как пример 48, используя 1-[5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]проп-2-ен-1-он и 13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он. MS(ESI) m/z: 575.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 7.787.69 (m, 1H), 7.65-7.58 (m, 3Н), 7.56-7.51 (m, 2Н), 7.46 (d, J=7.7 Гц, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.68 (dd, J=13.0, 3.1 Гц, 1H), 4.04 (s, 3Н), 3.60-3.47 (m, 1H), 3.23-3.14 (m, 1H), 2.66-2.39 (m, 3Н), 2.33-2.20 (m, 1H), 1.98-1.89 (m, 1H), 1.89-1.81 (m, 1H), 1.73-1.66 (m, 1H), 1.66-1.56 (m, 1H), 1.19 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 1.09 (t, J=12.8 Гц, 1Н). Аналитическая ВЭЖХ (Метод A): RT=9.56 мин, чистота =95%; для фактора XIa Ki=3.2 нМ, для кал-ликреина плазмы Ki=69 нМ.
Пример 50. Получение (9S,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10,16-дифтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
50А. Получение N-[(9S,13S)-10,16-дифтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]ок-тадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата Fe2(C2O4)3-6H2O (2.16 г, 4.46 ммоль) добавляли в круглодонную колбу, содержащую H2O (30 мл). Суспензию нагревали на водяной бане (50°С) для растворения. Через 3 ч прозрачный желтый раствор охлаждали до 0°С и продували аргоном Ar. Через 20 мин добавляли SELECTFLUOR(r) (1.58 г, 4.46 ммоль) в ACN (5 мл) с последующим добавлением по каплям трет-бутил N-[(9R,10E,13S)-16-фтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18), 2(6),4,10,14,16-гексаен-13-ил]карбамата (0.370 г, 0.893 ммоль) в ACN (10 мл). Через 5 мин добавляли NaBH4 (0.270 г, 7.14 ммоль) двумя отдельными порциями на протяжении 5 мин. Через 15 мин реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 1 ч реакционную смесь быстро охлаждали водным 28-30% NH4OH (15 мл). Через 30 мин реакционную смесь фильтровали, твердые вещества промывали EtOAc, органические вещества промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением сырой смеси изомеров. Это вещество подвергали хираль-ной очистке с помощью CHIRALPAK(r) 1С, 21x250 мм, 5 мкм, применяя 10% EtOH/90% СО2 при 45 мл/мин, 150 Бар, 40°С. Элюируемый первым изомер идентифицировали как трет-бутил N-[(9S,13S)-10,16-дифтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамат (99.5% ее; 68 мг, 17.50%) и элюируемый вторым изомер как трет-бутил N-[(9R,13S)-11,16-дифтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамат (99.5% ее; 32 мг, 8.3%). 435 (М+Н)+.
50В. Получение (9S,13s)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10,16-дифтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата ^,Ш)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-10,16-дифтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16 -пентаен-8-он трифторацетат (10 мг, 6%) получали аналогичными способами, описанными в примере 1, путем использования Вос-незащищенного трет-бутил N-[(9R,13S)-11,16-дифтор-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02•6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]карбамата (раньше элюируемый изомер) и 1-(5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она, полученного как описано для промежуточного соединения 4. Главный диа-стереомер выделяли с помощью хиральной очистки, используя CHIRALPAK(r) IC, 21 x 250 мм, 5 мкм, применяя 15% МеОН / 85% СО2 при 45 мл/мин, 150 Бар, 40°С, и последующей обращено-фазовой хроматографии (PHENOMENEX(r) Luna Axia С18, 5 мкм, колонка 30x100 мм, 10-минутный градиент; растворитель А: 20% МеОН-80% H2O-0.1% TFA; растворитель В: 90% МеОН-10% Н2О-0.1% TFA). MS(ESI) m/z: 626 (М+Н)+. 1Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d6) 5 9.40 (s, 1H), 8.62-8.56 (m, 1H), 8.12 (d, J=7.5 Гц, 1H), 7.75-7.67 (m, 3Н), 7.41-7.32 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.88 (d, J=9.9 Гц, 1H), 6.30-6.23 (m, 1H), 5.97-5.82 (m, 2H), 5.43-5.24 (m, 1H), 3.93-3.88 (m, 3Н), 3.00 (ddd, J=10.8, 6.9, 4.1 Гц, 1H), 2.34-2.23 (m, 1H), 1.89-1.78 (m, 1H), 1.65-1.49 (m, 1H), 1.25-1.10 (m, 1H), 0.81 (d, J=7.0 Гц, 3Н), 0.66-0.44 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод X): RT=6.25 мин, чистота =100%; для фактора XIa Ki=0.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=8 нМ.
51А. Получение (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-Амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-
Пример 51. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил}-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7-триазатрицикло [12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (0.28 г, 98%), серое твердое вещество, получали таким же образом, как и (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, описанный в примере 48F, путем замены 1-(2Н3)метил-4-нитро-Ш-пиразола на 1-метил-4-нитро-Ш-
пиразол. MS(ESI) m/z: 302.5 (М+Н)+.
51В. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-
тетрагидропиридин-1 -ил} -3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7-триазатрицикло [12.3.1.026]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-
1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октад ека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (3 мг, 56.7%) получали таким же образом, как и (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-
(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7-три-
азатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, описанный в примере 48, путем замены
(9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02•6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-
пентаен-8-она на (9R, 13S)-13 -амино-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло [12.3.1.026]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он. MS(ESI) m/z: 593.5 (M+H)+. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.49-8.44 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.69-7.64 (m, 2H), 7.60-7.56 (m, 2H), 7.56-7.49 (m, 3H), 7.38 (d, J=7.7 Гц, 1H), 5.92-5.82 (m, 1H), 5.59 (dd, J=12.7, 3.0 Гц, 1H), 3.07-2.94 (m, 1H), 2.51-2.38 (m, 1H), 2.25-2.11 (m, 2H), 2.12-2.00 (m, 1H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.72-1.53 (m, 2H), 1.41-1.32 (m, 1H), 1.18 (d, J=6.8 Гц, 3H), 1.10-1.00 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.17 мин, чистота =90%; для фактора XIa Ki=0.18 нМ, для калликреина плазмы Ki=5 нМ.
Пример 52. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2,2-дифторэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -(2,2-дифторэтил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем использования 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она, промежуточное соединение 4, и 1-(2,2-дифторэтил)-4-нитро-Ш-пиразола, промежуточное соединение 9. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN) 5 8.81 (d, J=5.3 Гц, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.71-7.63 (m, 4H), 7.62-7.55 (m, 1H), 6.50-6.15 (m, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.52 (dd, J=12.7, 4.1 Гц, 1H), 4.83-4.71 (m, 2H), 3.63-3.49 (m, 2H), 2.64-2.53 (m, 1H), 2.32-2.13 (m, 3Н), 1.991.84 (m, 2H), 1.66-1.52 (m, 1H), 1.41-1.29 (m, 1H), 1.24-1.14 (m, 1H), 1.09 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 641.1 (М+Н)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=11.43 мин, чистота =95%; для фактора XIa Ki=0.76 нМ, для калликреина плазмы Ki=22 нМ.
Пример 53. Получение (9R)-13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил} -3 -(дифторметил)-9 -метил-3,4,7,15 -тетраазатрицикло [12.3.1.02,6] октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (6 мг, 9%) в виде белого твердого вещества получали аналогично получению примера 1 путем замены 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола на 1-(дифторметил)-4-нитро-1H-пиразол. MS(ESI) m/z: 593.2 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.93-8.64 (m, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.77 (s, 2Н), 7.72-7.50 (m, 6H), 5.83 (s, 1H), 5.67-5.49 (m, 1H), 4.34-4.08 (m, 1H), 3.75-3.62 (m, 1H), 3.60-3.48 (m, 1H), 2.67-2.54 (m, 1H), 2.272.09 (m, 3Н), 1.96 (s, 2H), 1.90-1.76 (m, 1H), 1.67-1.52 (m, 1H), 1.50-1.29 (m, 1H), 1.28-1.15 (m, 1H), 1.06 (d, J=7.0 Гц, 3Н), 1.01-0.86 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.19 мин, чистота =100%; для фактора XIa Ki=0.87 нМ, для калликреина плазмы Ki=37 нМ.
Пример 54. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1 -ил} -3 -циклобутил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
В сухую круглодонную колбу добавляли 4-нитро-1Н-пиразол (2 г, 17.69 ммоль) и DMF (40 мл). Реакцию охлаждали до 0°С, и к реакционной смеси добавляли NaH (1.415 г, 35.4 ммоль) с последующим добавлением бромциклобутана (3.58 г, 26.5 ммоль). Реакцию медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. ВЭЖХ показала еще наличие большей части исходного материала. Затем еще добавляли одно эквивалентное количество NaH и бром-циклобутана, и реакцию перемешивали при 65°С в течение дополнительных 4 ч. Реакцию осторожно быстро охлаждали водой (5 мл), и реакционную смесь затем разделяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x20 мл). Объединенный слой EtOAc промывали водой (2x40 мл) и солевым раствором (40 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием системы ISCO (градиент 0-50% EtOAc/гексан) с получением 1-циклобутил-4-нитро-Ш-пиразола (640 мг, 3.83 ммоль, выход 21.65%) в виде прозрачного масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 88.16 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 4.78 (quin, J=8.3 Гц, 1H), 2.65-2.39 (m, 4H), 2.04-1.79 (m, 2H). MS(ESI) m/z: 167.1 (М+Н)+.
54В. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-
тетрагидропиридин-1 -ил} -3 -циклобутил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-циклобутил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали в соответствии со способами, описанными в примере 1, путем замены 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола на 1-циклобутил-4-нитро-Ш-пиразол. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.59 (d, J=5.1 Гц, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.58-7.43 (m, 4H), 7.39 (s, 1H), 7.29-7.17 (m, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.44 (dd, J=12.5, 3.7 Гц, 1H), 4.99 (t, J=8.3 Гц, 1H), 3.45 (br. s., 1H), 3.42-3.30 (m, 1H), 2.74-2.57 (m, 2Н), 2.51-2.41 (m, 1H), 2.35 (dd, J=7.7, 5.7 Гц, 2Н), 2.07-1.93 (m, 3Н), 1.87-1.75 (m, 3Н), 1.73-1.61 (m, 1H), 1.52-1.39 (m, 1H), 1.25-1.17 (m, 2H), 1.07 (d, J=5.3 Гц, 1H), 0.94 (d, J=6.8 Гц, 3Н). MS(ESI) m/z: 597.1 (М+Н)+. Аналитическая ВЭЖХ (метод В): RT=.87 мин, чистота=96%; для фактора XIa Ki=7.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=150 нМ.
Пример 55. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -(дифторметил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (45 мг, 66%). получали таким же образом, как пример 1, путем замены 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола на 1-(дифторметил)-4-нитро-Ш-пиразол и заменой 1-(5-хлор-2-(1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(5-хлор-2-(4-хлор-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-он. MS(ESI) m/z: 627.3 (М+Н). 1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.77 (d, J=5.2 Гц, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73-7.62 (m, 4H), 7.62-7.55 (m, 2H), 5.88-5.78 (m, 1H), 5.63-5.50 (m, 1H), 3.76-3.64 (m, 1H), 3.63-3.51 (m, 1H), 2.672.53 (m, 1H), 2.27 (d, J=6.1 Гц, 2Н), 2.24-2.11 (m, 1H), 2.02-1.91 (m, 1H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.65-1.53 (m, 1H), 1.40-1.29 (m, 1H), 1.28-1.18 (m, 1H), 1.07 (d, J=6.9 Гц, 3Н), 1.03-0.86 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.36 мин, чистота=98.8%; для фактора XIa Ki=0.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=6 нМ.
Пример 56. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-(2,2-дифторциклопропил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.-1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3 -(2,2-дифторциклопропил)-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-он (26 мг, 49%) получали таким же образом, как пример 1, путем использования 1-(2,2-дифторциклопропил)-4-нитро-1H-пиразола, промежуточное соединение 15, и 1-(5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она. MS(ESI) m/z: 653.3 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN) 5 8.79 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.80 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.77-7.68 (m, 1H), 7.67-7.60 (m, 2H), 7.58-7.52 (m, 2H), 5.87 (d, J=9.7 Гц, 1H), 5.40-5.24 (m, 1H), 4.63-4.43 (m, 1H), 3.72-3.42 (m, 2H), 2.64-2.50 (m, 1H), 2.44-2.07 (m, 5H), 1.31 (br. s., 3Н), 1.01 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.10 мин, чисто-та=99%; для фактора XIa Ki=0.36 нМ, для калликреина плазмы Ki=30 нМ.
Пример 57. Получение 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}бензо-нитрила
(9R,13S)-13-[4-(2-Бром-5-хлорфенил)-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат, полученный как пример 37 (0.0094 г, 0.012 ммоль), Zn(CN)2 (0.0007 г, 5.90 мкмоль), Pd(P(t-Bu)3)2 (0.0012 г, 2.36 мкмоль) в DMF (0.5 мл) продували Ar, герметично закрывали и нагревали при 80°С в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и концентрировали. Очисткой с помощью обращенно-фазовой хроматографии получали 4-хлор-2-{1-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропири-дин-4-ил}бензонитрил трифторацетат (0.0015 г, 17%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 515.3 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.79 (d, J=5.1 Гц, 1H), 7.88-7.81 (m, 1H), 7.75-7.59 (m, 4Н), 7.55 (s, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.65 (dd, J=12.4, 3.4 Гц, 1H), 4.12-4.08 (m, 3Н), 3.88-3.70 (m, 2Н), 2.85 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.67-2.56 (m, 1H), 2.32-2.17 (m, 1H), 2.09-1.90 (m, 2H), 1.71-1.58 (m, 1H), 1.40-1.21 (m, 2H), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=6.41 мин, чистота > 95%; для фактора XIa Ki=4.0 нМ, для калликреина плазмы Ki=14 нМ.
Пример 58. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
<^^°
" /С1 " J HhU
У II Т "т fl
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (140 мг, 0.174 ммоль, выход 73%) получали таким же способом, как описано в примере 10, путем замены 1-[5-хлор-2-(Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]проп-2-ен-1-она на 1-[5-хлор-2-(4-хлор-Ш-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]проп-2-ен-1-он, промежуточное соединение 4. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 9.31 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.60 (d, J=5.2 Гц, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.78-7.63 (m, 5H), 7.56 (d, J=4.6 Гц, 1H), 7.276.99 (m, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.48 (d, J=11.3 Гц, 1H), 3.54 (br. s., 1H), 3.38 (br. s., 1H), 2.61 (br. s., 1H), 1.72 (br. s., 1H), 1.51 (d, J=6.4 Гц, 1H), 1.24 (br. s., 1H), 0.96 (d, J=6.7 Гц, 3Н), 0.88 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 577.1 [M+H]+. Аналитическая ВЭЖХ (метод В): RT=1.431 мин, чистота=96.0%; для фактора XIa Ki=2.4 нМ, для калликреина плазмы Ki=46 нМ.
Пример 59. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-16-фтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
59А. Получение (R)-N-[(1Е)-(3-бром-5-фторфенил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида.
К 3-бром-5-фторбензальдегиду (25 г, 123 моль), растворенному в DCM (200 мл), добавляли (R)-2-метилпропан-2-сульфинамид (14.96 г, 123 моль) и Cs2CO3 (40.2 г, 123 моль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. После этого реакционную смесь фильтровали и концентрировали с получением желтого масла. Это желтое масло очищали, используя 120 г колонку с силикагелем ISCO, элюируя гексанами и EtOAc, с получением ^)^-[(1Е)-(3-бром-5-фторфенил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида (35 г, 93%) в виде желтого масла. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 8.58-8.55 (m, 1H), 8.05-7.98 (m, 1H), 7.84-7.76 (m, 2H), 1.20 (s, 9H). LCMS m/z: 306.1
(М+Н).
59В. Получение (R)-N-[( 1S)-1 -(3 -бром-5-фторфенил)бут-3 -ен-1-ил] -2-метилпропан-2-сульфинамида.
N-[(1Е)-(3-Бром-5-фторфенил)метилиден]-2,2-диметилпропанамид (35 г, 114 моль) растворяли в THF (500 мл) в большой 3-горлой круглодонной колбе и продували Ar. Раствор охлаждали до 0°С и добавляли In (18.4 г, 160 моль) с последующим добавлением по каплям аллилбромида (15.2 г, 126 моль). Реакцию перемешивали при 0°С в течение 2 ч, затем ледяную баню удаляли, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакцию быстро охлаждали водой (2 л), и гелеобразное вещество фильтровали через CELITE(r). Фильтрат концентрировали под вакуумом до маслянистой массы. Сырое вещество растворяли в воде (2 л), и органические вещества экстрагировали EtOAc (4x 200 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением масла. Маслянистую жидкость очищали на колонке с силикагелем ISCO и элюировали DCM/MeOH с получением (R)-N-[(1S)-1-(3-бром-5-фторфенил)бут-3-ен-1-ил]-2-метилпропан-2-сульфинамида (34.9 г, выход 88%) в виде полутвердого вещества. LCMS m/z 348.2 (М+Н). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 7.44-7.38 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 5.79-5.65 (m, 1H), 5.46-5.42 (m, 1H), 5.04-4.98 (m, 2H), 4.41-4.34 (m, 1H), 2.69-2.59 (m, 1H), 2.49-2.43 (m, 1H), 1.09 (s, 9H).
59C. Получение трет-бутил М-[(18)-1-(3-бром-5-фторфенил)бут-3-ен-1-ил]карбамата
К охлажденному до 0°С раствору да-№[(^)-1-(3-бром-5-фторфенил)бут-3-ен-1-ил]-2-метилпропан-2-сульфинамида (21.9 г, 100 моль), растворенного в МеОН (100 мл), добавляли концентрированную HCl (50 мл) по каплям и затем перемешивали при 0°С в течение 48 ч. После этого реакционную смесь концентрировали с получением белого твердого вещества. Остаток растворяли в воде (1000 мл), и органические слои экстрагировали EtOAc (2x 200 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали до коричневого масла (11.5 г). Водный слой подщелачивали 1н. NaOH, и органические слои экстрагировали EtOAc (2x300 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали до коричневого масла (18 г). Объединенные порции масла растворяли в DCM (500 мл), к смеси добавляли Вос2О (22 г) с последующим добавлением TEA (15 мл), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и очищали на 330 г колонке с силикагелем Isco, элюируя гексанами и EtOAc, с получением белого твердого вещества. Это белое твердое вещество растирали с гексанами, и осадок собирали фильтрованием с получением трет-бутил-N-[(1S)-1-(3-бром-5-фторфенил)бут-3-ен-1-ил]карбамата (29.5 г, выход 87%).
59D. Получение (9R,13S)-13-амино-16-фтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1 (18),2(6),4Д4Д6-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-Амино-16-фтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1-(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-он (19 мг, 92%), темное твердое вещество, получали таким же образом, как и (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, описанный в примере 48, путем замены трет-бутил^-[(^)-1-(3-бром-5-фторфенил)бут-3-ен-1-ил]карбамата на трет-бутил^-[(^)-1-(3-бромфенил)бут-3-ен-1-ил]карбамат. MS(ESI) m/z: 317.4 (М+Н)+.
59Е. Получение (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-16-фтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-{4-[5-Хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-16-фтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (32 мг, 63.5%), белое твердое вещество, получали таким же образом, как и (9R,13S)-13-{4-[5-хлор-2-(4-хлор-1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, отсанный в примере 48, путем замены (9R,13S)-13-амино-16-фтор-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1-(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она на (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7-триазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он. MS(ESI) m/z: 608.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.46 (s, 1H), 7.69-7.63 (m, 2H), 7.62-7.57 (m, 1H), 7.53-7.48 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.32 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.13 (d, J=9.5 Гц, 1H), 5.87-5.84 (m, 1H), 5.55 (dd, J=12.5, 3.1 Гц, 1H), 4.03 (s, 3Н), 3.07-3.00 (m, 1H), 2.47-2.40 (m, 1H), 2.26-2.06 (m, 3Н), 1.881.79 (m, 2H), 1.68-1.55 (m, 2H), 1.17 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 1.09-1.00 (m, 1Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.82 мин, чистота=95%; для фактора XIa Ki=0.1 нМ, для калликреина плазмы Ki=4 нМ.
Пример 60. Получение (9R,13S)-13-{4-[3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-циклопропил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она
(9R,13S)-13-{4-[3-Хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил}-3-циклопропил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (30 мг, 39%). получали таким же образом, как пример 1, путем замены 1-метил-4-нитро-Ш-пиразола на 1-1циклопротл-4-нитро-Ш-пиразол и путем замены 1-(5-хлор-2-(1H-1,2,3-триазол-1-ил)фенил)проп-2-ен-1-она на 1-(3-хлор-2-фтор-6-(трифторметил)фенил)проп-2-ен-1-он. MS(ESI) m/z: 602.4 (М+Н). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN) 5 8.79 (d, J=5.7 Гц, 1H), 7.91 (br. s., 1H), 7.81 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.69 (d, J=7.3 Гц, 1H), 7.64-7.58 (m, 1H), 7.43 (s, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.54-5.41 (m, 1H), 3.90-3.68 (m, 5H), 2.79-2.48 (m, 3Н), 2.382.21 (m, 1H), 1.66-1.50 (m, 1H), 1.30 (br. s., 2H), 1.22-1.08 (m, 4H), 1.04 (d, J=6.8 Гц, 3Н). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.19 мин, чистота=92%; для фактора XIa Ki=7.2 нМ, для калликреина плазмы Ki=22 нМ.
Пример 61. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3 -триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02,6]октадека-1 (18 ),2 (6 ),4,14,16-пентаен-8-онатрифторацетата
61 А. Получение 1-(4-хлор-2-этенилфенил)-4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазола.
К охлажденной (-20°С) суспензии метилтрифенилфосфония бромида (1.540 г, 4.31 ммоль) в Et2O (12 мл) добавляли по каплям раствор 2.5М nBuLi в гексане (1.58 мл, 3.95 ммоль). Полученную в результате желтую суспензию оставляли нагреваться до 0°С и перемешивали в течение 2 ч. Затем добавляли по каплям раствор 5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]бензальдегида (0.99 г, 3.59 ммоль), полученного как описано в примере 40А, в Et2O (5 мл) с получением коричневой суспензии. Суспензию перемешивали при 0°С в течение 30 мин, и затем реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 17 ч реакцию охлаждали до 0°С, и затем добавляли насыщенный NH4CL Реакцию нагревали до комнатной температуры, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали Et2O. Органические слои объединяли и промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением черной пены. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой получали 1-(4-хлор-2-этенилфенил)-4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол (0.357 г, выход 36%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 274.0 (М+Н)+ и 276.0 (М+2+Н)+.
61В. Получение 4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-5-гидрокси-2,5-дигидро фуран-2 -она.
К охлажденному (-5°С) прозрачному бесцветному раствору Pb(OAc)4 (0.567 г, 1.28 ммоль) в TFA (1.3 мл) добавляли по каплям прозрачный бес1цветньгй раствор 1-(4-хлор-2-этенилфенил)-4
(трифторметил)-Ш-1,2,3-триазола (0.350 г, 1.28 ммоль) в DCM (1.3 мл). В процессе добавления температура реакции не поднималась выше 2°С. После добавления полученный в результате прозрачный бледно-желтый раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 2 ч реакцию охлаждали до -5°С, и добавляли по каплям дополнительный Pb(OAc)4 (0.283 г) в TFA (0.65 мл). Реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 2 ч добавляли по каплям воду (10 мл) с получением красно-коричневой суспензию. Суспензию фильтровали через CELITE(r), элюируя DCM. Двухфазный фильтрат разделяли, и водный слой экстрагировали DCM. Органические слои объединяли и концентрировали с получением желтого масла. Масло растворяли в DCM и промывали водой, солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением 2-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}ацетальдегида (0.370 г) в виде бледно-желтой пены. Это вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. MS(ESI) m/z: 290.3 (М+Н)+ и 292.3 (М+2+Н)+. К раствору морфолина (0.12 мл, 1.34 ммоль) в диоксане (1.7 мл) добавляли 6М HCl (0.22 мл, 1.30 ммоль) с последующим добавлением глиоксиловой кислоты моногидрата (0.112 г, 1.21 ммоль). Далее добавляли раствор 2-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}ацетальдегида (0.370 г, 1.28 ммоль) в диоксане (1.7 мл). Реакционную смесь нагревали до кипения с обратным холодильником. Через 5 ч реакцию останавливали и охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду и EtOAc, и слои разделяли. Водный слой экстрагировали EtOAc (1 x ). Органические слои объединяли и промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением золотисто-коричневой пены. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой получали 4-(3-хлор-2,6-дифторфенил)-5-гидрокси-2,5-дигидрофуран-2-он (0.112 г, выход 28%) в виде бледно-желтой пены. MS(ESI) m/z: 346.2 (M+Щ+и 348.3 (М+2+Н)+.
61С. Получение N'-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил](трет-бутокси)карбогидразида.
К охлажденной (0°С) пурпурной суспензии (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетрааза-трицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (0.083 г, 0.277 ммоль), полученного как описано в примере 1, в DCM (1.848 мл) добавляли по каплям прозрачный бесцветный раствор трет-бутил 3-(4-цианофенил)-1,2-оксазиридин-2-карбоксилата (0.068 г, 0.277 ммоль) в DCM (1 мл). После добавления реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 5.5 ч реакцию останавливали и концентрировали. Очисткой с помощью хроматографии с нормальной фазой получали N'-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил](трет-бутокси)карбогидразид (0.0310 г, выход 27%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 415.5
(М+Н)+.
61D. Получение (9R,13S)-13-гидразинил-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]окта-дека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она бис-гидрохлорида.
Суспензию N'-[(9R,13S)-3,9-диметил-8-оксо-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-13-ил](трет-бутокси)карбогидразида (0.0310 г, 0.075 ммоль) в 4М HCl в диок-сане (0.94 мл, 3.74 ммоль) перемешивали при комнатной температуре. МеОН (0.2 мл) добавляли с получением прозрачного ярко-желтого раствора. Через 1 ч реакцию концентрировали с получением желтого остатка. Остаток растворяли в МеОН и концентрировали. Эту процедуру повторяли еще два раза с получением (9R,13S)-13-гидразинил-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-8-она бис-гидрохлорида (0.029 г, выход 100%) в виде желтого твердого вещества. Это вещество использовали без дополнительной очистки. MS(ESI) m/z: 315.5 (М+Н)+.
61Е. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-она трифторацетата.
Слегка мутный желтый раствор (9R,13S)-13-гидразинил-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она бис-гидрохлорида (0.029 г, 0.075 ммоль) и 4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-5-гидрокси-2,5-дигидрофуран-2-она (0.026 г, 0.075 ммоль) в МеОН (0.75 мл) нагревали при 150°С в микроволнах в течение 30 мин. Сразу после охлаждения до комнатной температуры к реакционной смеси добавляли DMF (0.75 мл). Очисткой с помощью обращенно-фазовой хроматографии получали (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1-ил)-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицик-ло[12.3.1.02,6]октадека-1(18),2(6),4,14,16 -пентаен-8-он трифторацетат (0.0021 г, выход 3.7%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 624.4 (М+Н)+ и 626.4 (М+2+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.85 (d, J=0.6 Гц, 1H), 8.62 (d, J=5.2 Гц, 1H), 7.81 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.79-7.76 (m, 2H), 7.74-7.70 (m, 1H), 7.58-7.54 (m, 2Н), 7.51 (s, 1H), 6.82 (d, J=2.5 Гц, 1H), 6.00 (dd, J=12.1, 4.1 Гц, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.63-2.55 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 1H), 1.63-1.55 (m, 1H), 1.36-1.26 (m, 1H), 1.11-1.03 (m, 4H). 19F ЯМР (471МГц, CD3OD) 5 -62.65 (s), -77.57 (s). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.42 мин, чистота=99.5%, для фактора XIa Ki=0.51 нМ, для калликреина плазмы Ki=66 нМ.
Пример 62. (9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-2-оксо-1,2-дигидропиридин-1-ил)-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),
4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат
К суспензии (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она (30 мг, 0.048 ммоль), полученного как описано в примере 42, в DMF (0.5 мл) добавляли K2CO3 (66.0 мг, 0.478 ммоль), катализатор Перлмана (6.71 мг, 0.048 ммоль) и трет-бутилгидропероксид (70% в воде, 0.066 мл, 0.478 ммоль). Через 67 ч реакцию останавливали добавлением 3 капель 10% Na2S2O3. Реакцию очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии с получением (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-2-оксо-1,2-дигидропи-ридин-1-ил)-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата (0.0030 г, выход 8.4%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 626.4 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.72 (d, J=0.9 Гц, 1H), 8.67 (d, J=5.1 Гц, 1H), 8.01 (d, J=7.0 Гц, 1H), 7.75-7.66 (m, 4H), 7.52-7.48 (m, 2H), 6.38 (d, J=2.0 Гц, 1H), 6.10-6.01 (m, 2H), 2.67 (td, J=7.0, 3.2 Гц, 1H), 2.27-2.15 (m, 1H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.93 (tt, J=11.6, 5.9 Гц, 1H), 1.66-1.53 (m, 1H), 1.47-1.34 (m, 1H), 1.02 (d, J=7.0 Гц, 3Н), 0.77 (m, 1H). Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.28 мин, чистота=99.7%, для фактора XIa Ki=0.10 нМ, для калликреина плазмы Ki=6 нМ.
Пример 63. (9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1-ил)-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат
63А. Получение (9R,13S)-13-гидразинил-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она бис-гидрохлорида.
(9R,13S)-13-Гидразинил-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он бис-гидрохлорид (0.088 г, 43% за две стадии, желтое твердое вещество) получали в соответствии со способами, описанными в примерах 61С и 61D, путем замены (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она на (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-он. MS(ESI) m/z: 318.5 (М+Н)+.
63В. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3 -триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1 -ил)-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло [12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она трифторацетата.
(9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропи-ридазин-1-ил)-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он трифторацетат (0.0034 г, выход 4.4%) получали, как описано в примере 61Е, путем замены (9R,13S)-13-гидразинил-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она бис-гидрохлорида на (9R,13S)-13-гидразинил-3-(2H3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он бис-гидрохлорид. MS(ESI) m/z: 621А (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CD3OD) 5 8.86 (d, J=0.8 Гц, 1H), 8.64 (d, J=5.2 Гц, 1H), 7.82-7.80 (m, 2H), 7.77 (dd, J=8.5, 2.5 Гц, 1H), 7.72 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.60-7.58 (m, 1H), 7.57 (d, J=2.2 Гц, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.83 (d, J=2.2 Гц, 1H), 6.01 (dd, J=12.4, 4.1 Гц, 1H), 2.63-2.55 (m, 1H), 2.48-2.38 (m, 1H), 2.11-2.01 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 1H), 1.64-1.55 (m, 1H), 1.36-1.26 (m, 1H), 1.13-1.02 (m, 4H). 19F ЯМР (471МГц, CD3OD) 5 -62.46, -77.66. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=7.39 мин, чистота=99.7%, для фактора XIa Ki=0.52 нМ, для калликреина плазмы Ki=77 нМ.
Пример 64. (9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1-ил)-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),-4,14,16-пентаен-8-он
64А. Получение (R)-N-[(1Е)-(2-бромпиридин-4-ил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида.
К перемешанной суспензии ^)-2-метилпропан-2-сульфинамида (13.03 г, 108 ммоль) и Cs2CO3 (52.5 г, 161 ммоль) в DCM (400 мл) добавляли 2-бромпиридин-4-карбальдегид (20 г, 108 ммоль) на протяжении 10 мин. Реакционную смесь затем перемешивали в течение 18.5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали, и остаток разбавляли EtOAc (50 мл) и промывали солевым раствором (3x20 мл). Органический слой высушивали над MgSO4 и фильтровали, и затем фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, применяя гексаны и EtOAc в качестве элюентов, с получением (R)-N-[(1Е)-(2-бромпиридин-4-ил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида (27.2 г, 87%) в виде белого твердого вещества. MS(ESI) m/z: 289-291.0 (М+Н)+.
64В. Получение (R)-N-[( 1S)-1 -(2-бромпиридин-4-ил)бут-3 -ен-1-ил] -2-метилпропан-2-сульфонамида.
К раствору (R)-N-[(1Е)-(2-бромпиридин-4-ил)метилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида (0.73 г, 2.52 ммоль) и индия (0.435 г, 3.79 ммоль) в THF (6 мл) медленно добавляли 3-бромпроп-1-ен (0.458 г, 3.79 ммоль), и полученный в результате раствор нагревали при 60°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали, фильтровали через CELITE(r), и фильтрат концентрировали. К остатку добавляли EtOAc (100 мл) и 5% NaHCO3 (водн.) (1000 мл), и немедленно образовывалась эмульсия. Суспензию фильтровали через бумагу. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, применяя гексаны и EtOAc в качестве элюентов, с получением ^)-№[(^)-1-(2-бромпиридин-4-ил)бут-3-ен-1-ил]-2-метилпропан-2-сульфонамида (0.62 г, 74%) в виде желтой жидкости. MS(ESI) m/z: 331-333.0 (М+Н)+.
64С. Получение трет-бутил №[(^)-1-(2-бромпиридин-4-ил)бут-3-ен-1-ил]карбамата.
К раствору (R)-N-[(1S)-1-(2-бромпиридин-4-ил)бут-3-ен-1-ил]-2-метилпропан-2-сульфинамида (1.38 г, 4.17 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли 4н. HCl в диоксане (5.21 мл, 20.83 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1.5 ч при комнатной температуре, затем концентрировали. К полученному в результате остатку добавляли ACN (10 мл), TEA (5.81 мл, 41.7 ммоль) и Вос2О (1.818 г, 8.33 ммоль). Через 18 ч реакционную смесь концентрировали, и остаток переносили в EtOAc, промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой, применяя гексаны и EtOAc в качестве элюентов, с получением трет-бутил ^[(^)-1-(2-бромпиридин-4-ил)бут-3-ен-1-ил]карбамата (0.80 г, 58.7%) в виде бледно-желтого масла. MS(ESI) m/z: 324-326.1 (М+Н)+.
64D. Получение (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]ок-тадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-Амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он получали таким же образом, как и (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он, как описано в примерах 17В-17в, путем замены ^)-трет-бутил(1-(4-хлорпиридин-2-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамата на (S)-трет-бутил(1-(2-бромпиридин-4-ил)бут-3-ен-1-ил)карбамат. MS(ESI) m/z: 303.3 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.70 (d, J=5.3 Гц, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.50-7.42 (m, 2H), 4.14-4.05 (m, 1H), 2.72 (td, J=6.7, 3.5 Гц, 1H), 2.06-1.94 (m, 2H), 1.65-1.50 (m, 2H), 1.41-1.26 (m, 1H), 1.02 (d, J=6.8 Гц, 3Н), 0.70-0.53 (m, 1H).
64Е. Получение (9R,13S)-13-гидразинил-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6] октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она бис-гидрохлорида.
(9R, 13S)-13 -Гидразинил-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло [12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он бис-гидрохлорид (0.067 г, 35% за две стадии, желтое твердое вещество) получали в соответствии со способами, описанными в примерах 61С и 61D, путем замены (9R,13S)-13-амино-3,9-диметил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она на (9R,13S)-13-амино-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,-14,16-пентаен-8-он. MS(ESI) m/z: 318.5 (М+Н)+.
64F. Получение (9R,13S)-13-(4-{5-хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-1 -ил)-3 -(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло [12.3.1.026]октадека-
1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-она.
(9R,13S)-13-(4-{5-Хлор-2-[4-(трифторметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил]фенил}-6-оксо-1,6-дигидро-пиридазин-1-ил)-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он (2.7 мг, 2.7%) получали таким же образом, как и пример 6IE, путем замены (9R,13S)-13-гидразинил-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,15-тетраазатрицикло[12.3.1.02'6]октадека-1(18),2(6),4,14,16
пентаен-8-она бис-гидрохлорида, описанного в примере 61D, на (9R,13S)-13-гидразинил-3-(2Н3)метил-9-метил-3,4,7,17-тетраазатрицикло[ 12.3.1.026]октадека-1(18),2(6),4,14,16-пентаен-8-он бис-гидрохлорид. MS(ESI) m/z: 627,4 (М+Н)+. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.90 (d, J=0.7 Гц, 1H), 8.70-8.64 (m, 1H), 7.917.75 (m, 4H), 7.64-7.58 (m, 1H), 7.53-7.48 (m, 1H), 7.21 (dd, J=5.3, 1.5 Гц, 1H), 6.90 (d, J=2.4 Гц, 1H), 6.10 (dd, J=12.1, 4.2 Гц, 1H), 2.67 (dt, J=6.9, 3.6 Гц, 1H), 2.57-2.45 (m, 1H), 2.09-1.97 (m, 2H), 1.64 (dd, J=14.1, 5.7 Гц, 1H), 1.42-1.32 (m, 1H), 1.25-1.19 (m, 1H), 1.10 (d, J=7.0 Гц, 3Н), содержит минорный диастереомер. Аналитическая ВЭЖХ (метод A): RT=8.32 мин, чистота=95%, для фактора XIa Ki=0.71 нМ, для каллик-реина плазмы Ki=52.6 нМ.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы (Ia)
или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где
- представляет собой связь;
кольцевая группа А независимо выбрана из
^V, N^;"
R1 независимо выбран из ОН и C1-4алкила; R2 независимо выбран из Н и F;
R3 независимо выбран из Н, C^^raum, C1-4галоалкила, CD3, -(CH2)n-OR5, -(CH2)n-C(O)OR5, С3-6циклоалкила, необязательно замещенного галогеном, и от 5- до 6-членного гетероарила, содержащего атомы углерода и 1-2 атома азота и необязательно замещенного R1; при условии, что только одна R3 группа присутствует на кольце;
R4 независимо выбран из Н, F;
R5 независимо выбран из Н и С1_4алкила;
R4 R3 N-N N-(
R6 независимо выбран из F, Cl, Br, CN, C(0)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2, X и X R7 независимо выбран из Н и F;
представляет собой Cl; R9 независимо выбран из C1-4галоалкила и галогена; R9' независимо выбран из Н, Cl и CF3; и
n, в каждом случае, представляет собой целое число, выбранное из 1 и 2,
причем термин "галоалкил" относится к алкильной группе, замещенной одним, двумя, тремя или четырьмя атомами галогена.
2. Соединение по п.1, имеющее формулу (Па)
или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из
KrV1
R1 представляет собой ^^алюш; R2 независимо выбран из Н и F;
представляет собой Cl;
представляет собой CHF2; и R9' независимо выбран из Н, Cl, CHF2. 6. Соединение, имеющее формулу (IV)
или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из
R1 независимо выбран из C1-3алкила; R2 независимо выбран из Н; R3 независимо выбран из СН3 и CD3; R4 независимо выбран из Н;
представляет собой Н; R8 независимо выбран из Cl; и R9 независимо выбран из CF3. 7. Соединение, имеющее формулу (V)
или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль, где кольцевая группа А независимо выбрана из
R1 независимо выбран из С1-3алкила; R2 независимо выбран из Н и F; R3 независимо выбран из CD3, CHF2 и CH3; R4 независимо выбран из Н;
R6 независимо выбран из Cl, CN, CF3, OCHF2 и ^ R7 независимо выбран из Н и F; R8 независимо выбран из Cl; R9' независимо выбран из CF3.
8. Соединение, выбранное из группы, состоящей из
или его стереоизомер, таутомер, фармацевтически приемлемая соль.
9. Фармацевтическая композиция для лечения тромбоэмболического осложнения, содержащая одно
или более соединений по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
10. Применение соединения по любому из пп.1-8 или его стереоизомера, таутомера или фармацев-
тически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения тромбоэмболического
осложнения.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032650
032650
- 1 -
- 1 -
(19)
032650
032650
- 1 -
- 1 -
(19)
032650
032650
- 1 -
- 1 -
(19)
032650
032650
- 1 -
- 1 -
(19)
032650
032650
- 4 -
- 5 -
032650
032650
032650
032650
- 8 -
- 9 -
032650
032650
- 13 -
- 13 -
032650
032650
- 14 -
- 14 -
032650
032650
- 15 -
- 15 -
032650
032650
- 53 -
032650
032650
- 58 -
- 58 -
032650
032650
- 79 -
- 79 -
032650
032650
- 80 -
- 80 -
032650
032650
- 81 -
- 81 -
032650
032650
- 82 -
- 82 -
032650
032650
- 86 -
- 86 -