[RU]

1. Соединение, представленное формулой (I) или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид, где R _b представляет собой Н; R ₁ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₂ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₃ выбран из группы, состоящей из Н и азотзащитной группы; где азотзащитная группа выбрана из группы, состоящей из 9-флуоренилметилоксикарбонила, трет-бутоксикарбонила, карбобензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, ацетила, трифторацетила, бензоила, бензила, п-метоксибензила, п-метоксифенила, 3,4-диметоксибензила, трифенилметила, п-толуолсульфонила, -С(О)-OR ₃₁ и -С(О)R ₃₂ ; где R ₃₁ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₃₂ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₄ и R ₅ , каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C ₁ -C ₆ алкила, X и -C ₁ -C ₆ алкилен-Х, где X выбран из группы, состоящей из: (i) C ₃ -C ₆ циклоалкила; (ii) гетероарила, содержащего от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкила), О и S; и (iii) фенила; или R ₄ и R ₅ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R ₄ и R ₅ ), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C ₁ -C ₆ алкила, гидроксила, C ₁ -C ₆ алкокси и -N(R')R'; R' в каждом случае независимо выбран из Н и C ₁ -C ₆ алкила; R ₆ выбран из группы, состоящей из -ОН и -OC(O)-C ₁ -C ₆ алкила; и R ₇ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н.

3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что R ₂ представляет собой Н.

4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R ₃ представляет собой Н.

5. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R ₃ представляет собой азотзащитную группу.

6. Соединение по п.5, отличающееся тем, что R ₃ имеет формулу -С(О)OR ₃₁ .

7. Соединение по п.6, отличающееся тем, что R ₃₁ представляет собой трет-бутил.

8. Соединение по п.5, отличающееся тем, что R ₃ имеет формулу -C(O)R ₃₂ .

9. Соединение по п.8, отличающееся тем, что R ₃₂ представляет собой -СН ₃ или изопропил.

10. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C ₁ -C ₆ алкила и -C ₁ -C ₆ алкилен-Х.

11. Соединение по п.10, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и -C ₁ -C ₆ алкилен-Х.

12. Соединение по п.11, отличающееся тем, что один из R ₄ и R ₅ представляет собой Н, а другой представляет собой -C ₁ -C ₆ алкилен-Х.

13. Соединение по любому из пп.1 и 10-12, отличающееся тем, что -C ₁ -C ₆ алкилен-Х представляет собой -СН ₂ -Х.

14. Соединение по любому из пп.1 и 10-13, отличающееся тем, что X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, где 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкил), О и S.

15. Соединение по любому из пп.1-11, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

16. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R ₄ и R ₅ ), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C ₁ -C ₆ алкила, гидроксила, C ₁ -C ₆ алкокси и -N(R')R'.

17. Соединение по п.16, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолидинила.

18. Соединение по п.17, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидинильное кольцо.

19. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой Н; a R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо.

20. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой Н; a R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

21. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой Н и один из R ₄ и R ₅ представляет собой Н, а другой представляет собой -СН ₂ -Х, причем X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, при этом 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкил), О и S.

22. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой азотзащитную группу; a R ₁ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо.

23. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой азотзащитную группу; a R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

24. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой азотзащитную группу и один из R ₄ и R ₅ представляет собой Н, а другой представляет собой -СН ₂ -Х, причем X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкил), О и S.

25. Соединение по любому из пп.1-24, отличающееся тем, что R ₆ представляет собой -ОН.

26. Соединение по любому из пп.1-25, отличающееся тем, что R ₇ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил.

27. Соединение по п.26, отличающееся тем, что R ₇ представляет собой -СН ₃ .

28. Соединение по п.1, отличающееся тем, что это соединение выбрано из следующих соединений: или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

29. Фармацевтическая композиция для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, содержащая соединение по любому из пп.1-28 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

30. Применение соединения по любому из пп.1-28 для получения лекарственного средства для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.

31. Соединение, представленное формулой (I) или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид, где R _b представляет собой Н; R ₁ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₂ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₃ выбран из группы, состоящей из Н и азотзащитной группы; где азотзащитная группа выбрана из группы, состоящей из 9-флуоренилметилоксикарбонила, трет-бутоксикарбонила, карбобензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, ацетила, трифторацетила, бензоила, бензила, п-метоксибензила, п-метоксифенила, 3,4-диметоксибензила, трифенилметила, п-толуолсульфонила, -C(O)-OR ₃₁ и -C(O)R ₃₂ ; где R ₃₁ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₃₂ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₄ и R ₅ независимо представляют собой Н или C ₁ -C ₆ алкил, или R ₄ и R ₅ , взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членное гетероциклическое кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C ₁ -C ₆ алкила, -ОН, C ₁ -C ₆ алкокси и -N(R')R', причем R' для каждого случая независимо выбран из Н или C ₁ -C ₆ алкила; R ₆ выбран из группы, состоящей из -ОН и -OC(O)-C ₁ -C ₆ алкила; и R ₇ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил.

32. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н.

33. Соединение по п.31 или 32, отличающееся тем, что R ₂ представляет собой Н.

34. Соединение по любому из пп.31-33, отличающееся тем, что R ₃ представляет собой Н.

35. Соединение по любому из пп.31-34, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

36. Соединение по пп.31-34, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют 4- или 5-членное гетероциклическое кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолидинила.

37. Соединение по любому из пп.31-34, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо.

38. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н; R ₂ представляет собой Н; R ₃ представляет собой Н; a R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо.

39. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н; R ₂ представляет собой Н; R ₃ представляет собой Н и R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

40. Соединение по п.31, отличающееся тем, что это соединение выбрано из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

41. Соединение по п.31, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

42. Соединение по п.41, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль и/или N-оксид.

43. Соединение по п.41, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль и/или N-оксид.

44. Соединение по п.31, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

45. Соединение по п.44, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

46. Фармацевтическая композиция для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, содержащая соединение по любому из пп.31-45 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

47. Применение соединения по любому из пп.31-45 для получения лекарственного средства для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение, представленное формулой (I) или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид, где R _b представляет собой Н; R ₁ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₂ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₃ выбран из группы, состоящей из Н и азотзащитной группы; где азотзащитная группа выбрана из группы, состоящей из 9-флуоренилметилоксикарбонила, трет-бутоксикарбонила, карбобензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, ацетила, трифторацетила, бензоила, бензила, п-метоксибензила, п-метоксифенила, 3,4-диметоксибензила, трифенилметила, п-толуолсульфонила, -С(О)-OR ₃₁ и -С(О)R ₃₂ ; где R ₃₁ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₃₂ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₄ и R ₅ , каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C ₁ -C ₆ алкила, X и -C ₁ -C ₆ алкилен-Х, где X выбран из группы, состоящей из: (i) C ₃ -C ₆ циклоалкила; (ii) гетероарила, содержащего от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкила), О и S; и (iii) фенила; или R ₄ и R ₅ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R ₄ и R ₅ ), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C ₁ -C ₆ алкила, гидроксила, C ₁ -C ₆ алкокси и -N(R')R'; R' в каждом случае независимо выбран из Н и C ₁ -C ₆ алкила; R ₆ выбран из группы, состоящей из -ОН и -OC(O)-C ₁ -C ₆ алкила; и R ₇ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н.

3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что R ₂ представляет собой Н.

4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R ₃ представляет собой Н.

5. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R ₃ представляет собой азотзащитную группу.

6. Соединение по п.5, отличающееся тем, что R ₃ имеет формулу -С(О)OR ₃₁ .

7. Соединение по п.6, отличающееся тем, что R ₃₁ представляет собой трет-бутил.

8. Соединение по п.5, отличающееся тем, что R ₃ имеет формулу -C(O)R ₃₂ .

9. Соединение по п.8, отличающееся тем, что R ₃₂ представляет собой -СН ₃ или изопропил.

10. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C ₁ -C ₆ алкила и -C ₁ -C ₆ алкилен-Х.

11. Соединение по п.10, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и -C ₁ -C ₆ алкилен-Х.

12. Соединение по п.11, отличающееся тем, что один из R ₄ и R ₅ представляет собой Н, а другой представляет собой -C ₁ -C ₆ алкилен-Х.

13. Соединение по любому из пп.1 и 10-12, отличающееся тем, что -C ₁ -C ₆ алкилен-Х представляет собой -СН ₂ -Х.

14. Соединение по любому из пп.1 и 10-13, отличающееся тем, что X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, где 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкил), О и S.

15. Соединение по любому из пп.1-11, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

16. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R ₄ и R ₅ ), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C ₁ -C ₆ алкила, гидроксила, C ₁ -C ₆ алкокси и -N(R')R'.

17. Соединение по п.16, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолидинила.

18. Соединение по п.17, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидинильное кольцо.

19. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой Н; a R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо.

20. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой Н; a R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

21. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой Н и один из R ₄ и R ₅ представляет собой Н, а другой представляет собой -СН ₂ -Х, причем X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, при этом 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкил), О и S.

22. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой азотзащитную группу; a R ₁ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо.

23. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой азотзащитную группу; a R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

24. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₂ представляет собой Н или CH ₃ ; R ₃ представляет собой азотзащитную группу и один из R ₄ и R ₅ представляет собой Н, а другой представляет собой -СН ₂ -Х, причем X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C ₁ -C ₃ алкил), О и S.

25. Соединение по любому из пп.1-24, отличающееся тем, что R ₆ представляет собой -ОН.

26. Соединение по любому из пп.1-25, отличающееся тем, что R ₇ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил.

27. Соединение по п.26, отличающееся тем, что R ₇ представляет собой -СН ₃ .

28. Соединение по п.1, отличающееся тем, что это соединение выбрано из следующих соединений: или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

29. Фармацевтическая композиция для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, содержащая соединение по любому из пп.1-28 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

30. Применение соединения по любому из пп.1-28 для получения лекарственного средства для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.

31. Соединение, представленное формулой (I) или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид, где R _b представляет собой Н; R ₁ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₂ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил; R ₃ выбран из группы, состоящей из Н и азотзащитной группы; где азотзащитная группа выбрана из группы, состоящей из 9-флуоренилметилоксикарбонила, трет-бутоксикарбонила, карбобензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, ацетила, трифторацетила, бензоила, бензила, п-метоксибензила, п-метоксифенила, 3,4-диметоксибензила, трифенилметила, п-толуолсульфонила, -C(O)-OR ₃₁ и -C(O)R ₃₂ ; где R ₃₁ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₃₂ представляет собой C ₁ -C ₆ алкил; R ₄ и R ₅ независимо представляют собой Н или C ₁ -C ₆ алкил, или R ₄ и R ₅ , взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членное гетероциклическое кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C ₁ -C ₆ алкила, -ОН, C ₁ -C ₆ алкокси и -N(R')R', причем R' для каждого случая независимо выбран из Н или C ₁ -C ₆ алкила; R ₆ выбран из группы, состоящей из -ОН и -OC(O)-C ₁ -C ₆ алкила; и R ₇ представляет собой Н или C ₁ -C ₆ алкил.

32. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н.

33. Соединение по п.31 или 32, отличающееся тем, что R ₂ представляет собой Н.

34. Соединение по любому из пп.31-33, отличающееся тем, что R ₃ представляет собой Н.

35. Соединение по любому из пп.31-34, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

36. Соединение по пп.31-34, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют 4- или 5-членное гетероциклическое кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолидинила.

37. Соединение по любому из пп.31-34, отличающееся тем, что R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо.

38. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н; R ₂ представляет собой Н; R ₃ представляет собой Н; a R ₄ и R ₅ , взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо.

39. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R ₁ представляет собой Н; R ₂ представляет собой Н; R ₃ представляет собой Н и R ₄ и R ₅ представляют собой Н.

40. Соединение по п.31, отличающееся тем, что это соединение выбрано из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

41. Соединение по п.31, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

42. Соединение по п.41, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль и/или N-оксид.

43. Соединение по п.41, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль и/или N-оксид.

44. Соединение по п.31, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

45. Соединение по п.44, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.

46. Фармацевтическая композиция для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, содержащая соединение по любому из пп.31-45 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

47. Применение соединения по любому из пп.31-45 для получения лекарственного средства для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.

---

Евразийское OD 032649 (13) Bl
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.06.28
(21) Номер заявки 201591401
(22) Дата подачи заявки 2014.01.29
(51) Int. Cl. C07D 487/10 (2006.01) A61K31/40 (2006.01) A61P 25/00 (2006.01)
(54) СПИРОЛАКТАМНЫЕ МОДУЛЯТОРЫ NMDA-РЕЦЕПТОРА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
(31) 61/757,903
(32) 2013.01.29
(33) US
(43) 2018.01.31
(86) PCT/US2014/013619
(87) WO 2014/120783 2014.08.07
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
АПТИНИКС ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Лоу Джон А. III, Кхан М. Амин (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) WO-A1-2010033757
ltd
(57) Описаны соединения формулы I, где все заместители такие, как в формуле изобретения, обладающие повышенной эффективностью модулирования активности NMD А-рецептора. Указанные соединения предусмотрены для применения при лечении патологических состояний, таких как депрессия и родственные расстройства. Описаны также перорально доступные композиции и другие фармацевтически приемлемые формы доставки соединений, включая внутривенные композиции.
Перекрестная ссылка на родственные заявки
В настоящей заявке заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США № 61/757903, поданной 29 января 2013 года, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Уровень техники
]Ч-метил-с1-аспартатный (NMDA) рецептор представляет собой постсинаптический, ионотропный рецептор, который восприимчив, inter alia, к возбуждающим его аминокислотам глутамину и глицину, а также синтетическим аналогам NMDA. NMDA-рецептор контролирует поток двухвалентных и одновалентных ионов в постсинаптическую нервную клетку через рецептор-связанный канал (Foster et al., Nature 1987, 329:395-396; Mayer et al., Trends in Pharmacol. Sci. 1990, 11:254-260). NMDA-рецептор участвует в создании определенной нейронной структуры и конфигурации синаптических связей и может участвовать в синаптических модификациях, зависящих от жизненного опыта. Кроме того, NMDA-рецепторы предположительно участвуют также в долговременной потенциации и расстройствах центральной нервной системы.
NMDA-рецепторы играют важную роль в синаптической пластичности, которая лежит в основе многих высших когнитивных функций, таких как запоминание, сохранение в памяти и обучение, а также в некоторых когнитивных путях и в восприятии боли (Collingridge et al., The NMDA Receptor, Oxford University Press, 1994). Кроме того, некоторые свойства NMDA-рецепторов свидетельствуют о том, что они могут участвовать в обработке информации в головном мозге, что является основной самого сознания.
NMDA-рецепторы привлекают особый интерес, поскольку он участвует в широком ряде расстройств ЦНС. Например, при ишемии головного мозга, вызванной инсультом или травмой, из поврежденных нейронов или нейронов, испытывающих кислородную недостаточность, выделяются избыточные количества возбуждающей глутаминовой кислоты. Этот избыточный глутамат связывается с NMDA-рецепторами, что открывает их управляемые лигандами ионные каналы; в свою очередь приток кальция вызывает высокую концентрацию внутриклеточного кальция, что активирует биохимический каскад, приводящий к разрушению белка и гибели клетки. Это явление, известное как эксайтотоксичность, предположительно отвечает также за неврологическое повреждение, связанное с другими расстройствами, от гипогликемии и остановки сердца до эпилепсии. Кроме того, существуют предварительные отчеты, указывающие на такое же участие в хронической нейродегенерации при болезни Хантингтона, Пар-кинсона и Альцгеймера. Было показано, что активация NMDA-рецептора отвечает за судороги после инсульта и в некоторых моделях эпилепсии было показано, что NMDA-рецептор необходим для возникновения пароксизмов. Было также установлено нейропсихиатрическое участие NMDA-рецептора, поскольку блокирование Ca++ канала NMDA-рецептора с помощью анестезирующего РСР (фенциклидина) животного происхождения вызывает у людей психотическое состояние, схожее с шизофренией (рассмотрено в публикации Johnson K. и Jones S., 1990). Кроме того, NMDA-рецепторы также участвуют в некоторых типах пространственного обучения.
NMDA-рецептор предположительно состоит из нескольких белковых цепей, встроенных в постсинаптическую мембрану. Первые два типа субъединиц, открытых до настоящего времени, образуют крупную внеклеточную область, которая вероятно содержит большинство аллостерических связывающих сайтов, несколько трансмембранных областей, образующих петли и сложенных с образованием поры или канала, который является проницаемым для Ca++, а также карбоксиконцевую область. Открывание и закрывание этого канала регулируется связыванием различных лигандов с доменами (аллостерическими сайтами) белка, находящегося на внеклеточной поверхности. Связывание этих лигандов предположительно влияет на конформационное изменение общей структуры белка, что в конечном итоге отражается на открывании, частичном открывании, частичном закрывании или закрывании канала.
Соединения, воздействующие на NMDA-рецепторы, могут проявлять двойное (агонистиче-ское/антагонистическое) действие на NMDA-рецептор через аллостерические сайты. Эти соединения обычно называют "частичными агонистами". В присутствии лиганда основного сайта частичный агонист заменяет некоторые из лигандов и за счет этого уменьшает поток Ca++ через рецептор. В отсутствие ли-ганда основного сайта или при его пониженной концентрации, частичный агонист действует для увеличения потока Ca++ через рецепторный канал.
В данной области сохраняется необходимость в новых и более специфичных/эффективных соединениях, которые способны связывать глицин-связывающий сайт NMDA-рецепторов и обеспечивать благоприятный фармацевтический эффект. Кроме того, в области медицины сохраняется необходимость в перорально доставляемых формах таких соединений.
Сущность изобретения
В настоящем документе, по меньшей мере в его части, представлены соединения, которые являются модуляторами NMDA, например частичными агонистами NMDA. Например, в настоящем документе описаны соединения, представленные формулой
R R2
и их фармацевтически приемлемые соли, стереоизомеры и N-оксиды, где
Rb выбран из группы, состоящей из Н, галогена, гидроксила, циано и C1-C6 алкила;
R1 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R2 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R3 выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила и азотзащитной группы;
R4 и R5 независимо представляют собой Н или C1-C6 алкил, или R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членное гетероциклическое или гетероариль-ное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, -ОН, C1-C6 алкокси и -N(R')R', где R' для каждого случая независимо выбран из Н или C1-C6 алкила;
R6 выбран из группы, состоящей из -ОН, C1-C6 алкокси, -OC(O)-C1-C6 алкила и -ОС(О)фенила; и
R7 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
или в других вариантах реализации изобретения переменные, представленные в формуле (I), определены следующим образом:
Rb выбран из группы, состоящей из Н, галогена, гидроксила, циано и C1-C6 алкила (например, Н); R1 представляет собой Н или C1-C6 алкил; R2 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R3 выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила и азотзащитной группы;
R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, X и -C1-C6 алкилен-Х, где X выбран из группы, состоящей из:
(i) QrQ циклоалкила;
(ii) гетероарила, содержащего от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S;
(iii) гетероциклила, содержащего от 3 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; и
(iv) фенила;
где каждый C3-C6 циклоалкил и гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R', причем R' в каждом случае независимо выбран из Н и C1-C6 алкила; и каждый гетероарил и фенил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R';
или R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют
гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R4 и R5), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и
-N(R')R'; или
гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероарил содержит не более четырех кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R4 и R5), а каждый дополнительный кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; и причем указанный гетероарил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, ^-С6 алкила, гидроксила, ^-С6 ал-
кокси и -N(R')R';
R6 выбран из группы, состоящей из -ОН, C1-C6 алкокси, -OC(O)-C1-C6 алкила, -ОС(О)фенила и
-N(R')R'; и
R7 представляет собой Н или C1-C6 алкил.
В настоящем документе представлены также фармацевтически приемлемые композиции, содержащие описанное соединение и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Например, такие композиции могут быть пригодными для перорального или внутривенного введения пациенту.
В другом аспекте представлен способ лечения патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из аутизма, тревожного расстройства, депрессии, биполярного расстройства, расстройства дефицита внимания, расстройства гиперактивности с дефицитом внимания (ADHD), шизофрении, пси
хотического расстройства, психотического симптома, социального отчуждения, обсессивно-компульсивного расстройства, фобии, синдрома посттравматического стресса, расстройства поведения, расстройства импульсного контроля, расстройства, связанного со злоупотреблением психоактивными веществами, расстройства сна, расстройства памяти, нарушения способности к обучению, недержания мочи, множественной системной атрофии, прогрессирующего надъядерного паралича, атаксии Фридриха, синдрома Дауна, синдрома ломкой Х-хромосомы, туберозного склероза, оливопонтоцеребеллярной атрофии, церебрального паралича, медикаментозного неврита зрительного нерва, ишемической ретинопатии, диабетической ретинопатии, глаукомы, деменции, деменции на фоне СПИДа, болезни Альцгей-мера, хореи Хантингтона, спастичности, миоклонии, мышечного спазма, синдрома Туретта, эпилепсии, церебральной ишемии, инсульта, опухоли головного мозга, травматического повреждения головного мозга, остановки сердца, миелопатии, повреждения спинного мозга, периферической невропатии, острой невропатической боли и хронической невропатической боли у пациента, нуждающегося в этом. Указанные способы могут включать введение пациенту фармацевтически эффективного количества описанного соединения или его фармацевтически приемлемых солей, стереоизомеров, N-оксидов и гидратов.
В некоторых вариантах реализации изобретения рассматриваемый способ включает лечение депрессии. Например, депрессия может включать одно или более из большого депрессивного расстройства, дистимического расстройства, психотической депрессии, послеродовой депрессии, сезонного аффективного расстройства, биполярного расстройства, расстройства настроения или депрессии, вызванной хроническим медицинским состоянием. В других вариантах реализации изобретения рассматриваемый способ может обеспечивать лечение шизофрении. Указанная шизофрения может быть, например, шизофренией параноидного типа, шизофренией дезорганизованного типа, шизофренией кататонического типа, шизофренией недифференцированного типа, шизофренией остаточного типа, постшизофренической депрессией или простой шизофренией.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 иллюстрирует потенциацию связывания [3Н]MK-801 в присутствии соединения X;
на фиг. 2 проиллюстрированы результаты долговременной потенциации в гиппокампальных срезах с применением соединения X.
Подробное описание изобретения
Описание относится, в целом, к соединениям, которые могут модулировать NMDA, например антагонистам или частичным агонистам NMDA, а также к композициям и/или способам применения описанных соединений.
Определения.
"Лечение" включает любой эффект, например ослабление, уменьшение, модулирование или исключение, который приводит к улучшению патологического состояния, заболевания, расстройства и т. п.
Термин "алкенил", используемый в настоящем документе, относится к ненасыщенному прямому или разветвленному углеводороду, имеющему по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь, такому как прямая или разветвленная группа из 2-6 или 3-4 атомов углерода, упоминаемая в настоящем документе как, например, С2^6 алкенил и С3-С4 алкенил соответственно. Иллюстративные ал-кенильные группы включают, но не ограничиваются ими, винил, аллил, бутенил, пентенил и т.д.
Термин "алкокси", используемый в настоящем документе, относится к прямой или разветвленной алкильной группе, присоединенной к атому кислорода (алкил-О-). Иллюстративные алкоксигруппы включают, но не ограничиваются ими, алкоксигруппы из 1-6 или 2-6 атомов углерода, упоминаемые в настоящем документе как C1-C6 алкокси и C2-C6 алкокси соответственно. Иллюстративные алкокси-группы включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси, изопропокси и т.д.
Термин "алкенилокси", используемый в настоящем документе, относится к прямой или разветвленной алкенильной группе, присоединенной к атому кислорода (алкенил-О). Иллюстративные алкенокси-группы включают, но не ограничиваются ими, группы с алкенильной группой из 3-6 атомов углерода (например, упоминаемый также как C3-C6 алкенилокси). Иллюстративные "алкенокси" группы включают, но не ограничиваются ими, аллилокси, бутенилокси и т. д.
Термин "алкинилокси", используемый в настоящем документе, относится к прямой или разветвленной алкинильной группе, присоединенной к атому кислорода (алкинил-О)). Иллюстративные алкинилок-си-группы включают, но не ограничиваются ими, C3-C6 алкинилокси, например пропинилокси.
Термин "алкил", используемый в настоящем документе, относится к насыщенному прямому или разветвленному углеводороду, такому как прямая или разветвленная группа из 1-6, 1-4 или 1-3 атомов углерода, упоминаемая в настоящем документе как C1-C6 алкил, С1-С4 алкил и C1-C3 алкил, соответственно. Иллюстративные алкильные группы включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, пропил, изопропил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил, 2-метил-1-бутил, 3-метил-1-бутил, 3-метил-2-бутил, 2,2-диметил-1-пропил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 2-метил-2-пентил, 3-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 2,2-диметил-1-бутил, 3,3-диметил-1-бутил, 2-этил-1-бутил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гексил и т.д. Термин "галогеналкил", используемый в настоящем документе, относится к насыщенным прямым или разветвленным алкильным группам, в которых один или более атомов углерода алкильной группы заменены одним или более независимо вы
бранными атомами галогена. Термин "галогеналкил" включает алкильные группы, в которых все атомы водорода алкильной группы заменены независимо выбранными атомами галогена (иногда упоминаемые как " пергалоген" алкильные группы). Иллюстративные галогеналкильные группы включают, но не ограничиваются ими, CH2F, CH2CH2Cl, CF3, CHFCH2Cl.
Термин "алкинил", используемый в настоящем документе, относится к ненасыщенному прямому или разветвленному углеводороду, имеющему по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь, такому как прямая или разветвленная группа из 2-6 или 3-6 атомов углерода, упоминаемая в настоящем документе как С2-C6 алкинил и C3-С6 алкинил соответственно. Иллюстративные алкинильные группы включают, но не ограничиваются ими, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил, метил-пропинил и т.д.
Термин "мостиковый циклоалкил", используемый в настоящем документе, определяют как моноциклическую 4-7-членную циклоалкильную группу, в которой два несмежных атома связаны при помощи группы СН2 или СН2СН2. "Мостиковый циклоалкил" может быть конденсирован с одним или более фенильными, частично ненасыщенными или насыщенными кольцами. Примеры мостиковых карбоцик-лических групп включают, но не ограничиваются ими, бицикло [2.2.1] гептан, бицикло[2.2.2]октан, би-цикло[2.2.2]октен и т.д.
Термин "карбонил", используемый в настоящем документе, относится к радикалу -С(О)-. Термин "циано", используемый в настоящем документе, относится к радикалу -CN. Термин "нитро" относится к радикалу -NO2. Термин "Н" относится к водороду.
Термин "циклоалкокси", используемый в настоящем документе, относится к циклоалкильной группе, присоединенной к атому кислорода (циклоалкил-О-).
Термин "циклоалкил", используемый в настоящем документе, относится к моноциклической насыщенной или частично ненасыщенной углеводородной группе, например из 3-6 или 4-6 атомов углерода, упоминаемой в настоящем документе, например как "C3-6 циклоалкил" или "С4-6 циклоалкил", и полученной из циклоалкана. Иллюстративные циклоалкильные группы включают, но не ограничиваются ими, циклогексан, циклогексен, циклопентан, циклобутан, циклопропан или циклопентан.
Термины "гало" или "галоген", используемые в настоящем документе, относятся к F, Cl, Br или I.
Термин "гетероарил", используемый в настоящем документе, относится к моноциклической ароматической 4-6-членной кольцевой системе, содержащей один или более гетероатомов, например от одного до трех гетероатомов, таких как азот, кислород и сера. Там, где это возможно, указанное гетероарильное кольцо может быть связано с соседним радикалом через атом углерода или азота. Примеры гетероариль-ных колец включают, но не ограничиваются ими, фуран, тиофен, пиррол, тиазол, оксазол, изотиазол, изоксазол, имидазол, пиразол, триазол, пиридин и пиримидин.
Термины "гетероциклил" или "гетероциклическая группа" известны в данной области и относятся к насыщенным или частично ненасыщенным 4-7-членным кольцевым структурам, кольцевые структуры которых содержат от одного до трех гетероатомов, таких как азот, кислород и сера. Гетероцикл может быть конденсирован с одним или более фенильным, частично ненасыщенными или насыщенными кольцами. Примеры гетероциклических групп включают, но не ограничиваются ими, пирролидин, пиперидин, морфолин, тиоморфолин и пиперазин.
Термин "гетероциклилалкокси", используемый в настоящем документе, относится к группе гетеро-циклилалкил-О-.
Термин "гетероциклилоксиалкил" относится к группе гетероциклил-О-алкил-.
Термин "гетероциклокси" относится к группе гетероциклил-О-. Термин "циклоалкилокси" относится к группе циклоалкил-О-.
Термин " гетероарилокси" относится к группе гетероарил-О-.
Термины "гидрокси" и "гидроксил", используемые в настоящем документе, относятся к радикалу
-ОН.
Термин "оксо", используемый в настоящем документе, относится к радикалу =O.
Термин "азотзащитная группа" или "аминозащитная группа" известен в данной области техники и при использовании в настоящем документе относится к химическому фрагменту, который ковалентно связан с атомом азота аминогруппы (первичной или вторичной), и который временно блокирует реакционную способность аминогруппы на стадии синтеза, и который селективно удаляют по завершении стадии синтеза. Азотзащитные группы включают, например, 9-флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc), трет-бутоксикарбонил (Boc), карбобензилоксикарбонил (Cbz), п-метоксибензилоксикарбонил, ацетил, триф-торацетил, бензоил, фталимидо, бензил (Bn), п-метоксибензил, п-метоксифенил, 3,4-диметоксибензил, трифенилметил, бензилиден и п-толуолсульфонил (Ts). В некоторых вариантах реализации изобретения азотзащитная группа может иметь одну из следующих формул: -C(O)OR31 или -C(O)R32, описанных в настоящем документе.
При использовании в настоящем описании термин "частичный агонист NMDA-рецептора", как правило, относится к соединению, которое может связываться с глицин-связывающим сайтом NMDA-рецептора; при низких концентрациях агонист NMDA-рецептора действует, в основном, как агонист, а при высоких концентрациях он действует, в основном, как антагонист. Эти концентрации определяют
экспериментально для всех и каждого "частичного агониста".
" Фармацевтически или фармакологически приемлемые" включает молекулярные вещества и композиции, которые не вызывают побочных, аллергических или других неблагоприятных реакций при введении животному или человеку, в зависимости от конкретного случая. Для введения человеку препараты должны соответствовать стандартам стерильности, пирогенности, общей безопасности и чистоты, обязательным по нормативам Отдела биологических веществ Управления США по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA).
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" или "фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество", используемый в настоящем документе, относится к любому и ко всем растворителям, дисперсионным средам, покрытиям, изотоническим агентам и средствам замедления абсорбции и тому подобным, которые совместимы с фармацевтическим введением. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. Композиции могут также содержать другие активные соединения, обеспечивающие вспомогательные, дополнительные или усиленные терапевтические функции.
Термин "фармацевтическая композиция", используемый в настоящем документе, относится к композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение, описанное в настоящем документе, составленное в композицию с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями.
"Индивидуум", "пациент" или "субъект" используются взаимозаменяемо и включают любых животных, в том числе млекопитающих, предпочтительно мышей, крыс, других грызунов, кроликов, собак, кошек, свиней, крупный рогатый скот, овец, лошадей или приматов, и наиболее предпочтительно людей. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть введены млекопитающему, такому как человек, но могут быть также введены другим млекопитающим, таким как животное, нуждающееся в ветеринарном лечении, например, домашним животным (например, собакам, кошкам и т.п.), сельскохозяйственным животным (например, коровам, овцам, свиньям, лошадям и т.п.) и лабораторным животным (например, крысам, мышам, морским свинкам и т. п.). Млекопитающее, которое лечат в соответствии со способами согласно изобретению, желательно представляет собой млекопитающее, у которого желательно лечение боли или депрессии. "Модулирование" включает антагонизм (например, ингибирование), агонизм, частичный антагонизм и/или частичный агонизм.
В настоящем описании термин "терапевтически эффективное количество" означает количество рассматриваемого соединения, которое вызывает биологический или медицинский ответ ткани, системы, животного или человека, видимый для исследователя, ветеринара, врача или другого клинициста. Соединения согласно настоящему изобретению вводят в терапевтически эффективных количествах для лечения заболевания. Альтернативно, терапевтически эффективное количество соединения представляет собой количество, необходимое для достижения желаемого терапевтического и/или профилактического эффекта, например количество, приводящее к облегчению симптома депрессии.
Термин "фармацевтически приемлемая соль(-и)", используемый в настоящем документе, относится к солям кислотных или основных групп, которые могут присутствовать в соединениях, используемых в композициях согласно настоящему изобретению. Соединения, входящие в состав композиций согласно настоящему изобретению, которые являются основными по своей природе, способны образовывать широкий ряд солей с различными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые могут быть использованы для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот таких основных соединений, представляют собой те, которые образуют нетоксичные соли присоединения кислот, то есть соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, включая, но не ограничиваясь этим, малатные, оксалатные, хлоридные, бромидные, йодидные, нитратные, сульфатные, бисульфатные, фосфатные, гидрофосфатные, изоникотинатные, ацетатные, лактатные, салицилатные, цитратные, тар-тратные, олеатные, таннатные, пантотенатные, битартратные, аскорбатные, сукцинатные, малеатные, гентизинатные, фумаратные, глюконатные, глюкуронатные, сахаратные, формиатные, бензоатные, глу-таматные, метансульфонатные, этансульфонатные, бензолсульфонатные, п-толуолсульфонатные и памо-атные (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоатные)) соли. Соединения, входящие в композиции согласно настоящему изобретению, которые являются кислотными по своей природе, могут образовывать основные соли с различными фармакологически приемлемыми катионами. Примеры таких солей включают соли щелочных металлов или щелочно-земельных металлов и, в частности, соли кальция, магния, натрия, лития, цинка, калия и железа. Соединения, входящие в состав композиций согласно настоящему изобретению, которые содержат основной или кислотный фрагмент, могут также образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами. Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать одновременно кислотные и основные группы; например одну аминогруппу и одну группу карбоновой кислоты. В таком случае это соединение может существовать как соль присоединения кислоты, цвиттер-ион или соль основания.
Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать один или более хиральных центров и/или двойных связей и поэтому могут существовать в виде стереоизомеров, таких как геометрические изомеры, энантиомеры или диастереомеры. Термин "стереоизомеры", используемый в настоящем документе, состоит из всех геометрических изомеров, энантиомеров или диастереомеров. Эти соедине
ния могут быть обозначены символами "R" или "S" в зависимости от конфигурации заместителей вокруг стереогенного атома углерода. Настоящее изобретение охватывает различные стереоизомеры этих соединений и их смеси. Стереоизомеры включают энантиомеры и диастереомеры. Смеси энантиомеров или диастереомеров могут быть обозначены в номенклатуре "(+)", но специалистам в данной области понятно, что структура может неявно обозначать хиральный центр.
Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать один или более хиральных центров и/или двойных связей и поэтому могут существовать в виде геометрических изомеров, энантиоме-ров или диастереомеров. Энантиомеры и диастереомеры могут быть обозначены символами "(+)", "(-)". "R" или "S", в зависимости от конфигурации заместителей вокруг стереогенного атома углерода, но специалистам в данной области понятно, что структура может неявно обозначать хиральный центр. В соединениях согласно настоящему изобретению также могут существовать геометрические изомеры, обусловленные расположением заместителей вокруг двойной углерод-углеродной связи или расположением заместителей вокруг циклоалкильного или гетероциклического кольца. Символ обозначает связь, которая может быть одинарной, двойной или тройной связью, как описано в настоящем документе. Заместители вокруг двойной углерод-углеродной связи обозначают как существующие в "Z" или "Е" конфигурации, при этом термины "Z" и "Е" используют в соответствии с правилами ИЮПАК. Если не указано иное, то структуры, изображающие двойную связь, охватывают оба изомера "Z" и "Е". Альтернативно, заместители вокруг двойной углерод-углеродной связи могут быть упомянуты как "цис" или "транс", при этом "цис" представляет собой заместители по одну сторону двойной связи, а "транс" представляет собой заместители на противоположных сторонах двойной связи. Расположение заместителей относительно карбоциклического кольца также может быть обозначено как "цис" или "транс". Термин "цис" представляет заместители по одну сторону от плоскости кольца, а термин "транс" представляет заместители на противоположных сторонах от плоскости кольца. Смеси соединений, в которых заместители расположены по одну или на противоположных сторонах от плоскости кольца, обозначают как " цис/транс".
Термин "стереоизомеры", используемый в настоящем документе, состоит из всех геометрических изомеров, энантиомеров или диастереомеров. Настоящее изобретение охватывает различные стереоизо-меры этих соединений и их смеси.
Отдельные энантиомеры и диастереомеры соединений согласно настоящему изобретению могут быть получены синтетически из коммерчески доступных исходных материалов, которые содержат асимметричные или стереогенные центры, или получением рацемических смесей с последующим разделением при помощи методов, хорошо известных специалистам в данной области техники. Указанные способы разделения представлены на примере (1) присоединения смеси энантиомеров к хиральному вспомогательному веществу, разделения полученной смеси диастереомеров перекристаллизацией или хроматографией, и отделения оптически чистого продукта от вспомогательного вещества, (2) образования соли с использованием оптически активного разделительного агента, (3) прямого разделения смеси оптических энантиомеров на хиральных жидкостных хроматографических колонках или (4) кинетического разделения с использованием стереоселективных химических или ферментативных реагентов. Рацемические смеси также могут быть разделены на их составляющие энантиомеры при помощи общеизвестных методов, таких как хирально-фазовая газовая хроматография или кристаллизация соединения в хиральном растворителе. Стереоселективные синтезы, химические или ферментативные реакции, в которых один реагент образует неравную смесь стереоизомеров при создании нового стереоцентра или при трансформации уже существующего стереоцентра, хорошо известны в данной области техники. Стереоселектив-ные синтезы охватывают энантио- и диастереоселективные преобразования. Примеры представлены в публикации Carreira и Kvaerno, Classics in Stereoselective Synthesis, Wiley-VCH: Weinheim, 2009.
Соединения, описанные в настоящем документе, могут существовать в сольватированных, а также в несольватированных формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т. п., и подразумевается, что настоящее изобретение включает и сольватированные, и несольватирован-ные формы. В одном из вариантов реализации изобретения соединение является аморфным. В одном из вариантов реализации изобретения соединение представляет собой один полиморф. В другом варианте реализации изобретения соединение представляет собой смесь полиморфов. В другом варианте реализации соединение находится в кристаллической форме.
Настоящее изобретение охватывает также меченные изотопами соединения согласно настоящему изобретению, которые идентичны соединениям, указанным в настоящем документе, за исключением того, что один или более атомов замещены атомами, имеющими атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа, обычно встречающегося в природе. Примеры изотопов, которые могут быть внедрены в соединения согласно настоящему изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как 2Н, 3Н, 13С, 14С, 15N, 18O, 17O, 31P,
32 35 18 36
32P, 35S, 18F и 36Cl соответственно. Например, соединение согласно настоящему изобретению может иметь один или несколько атомов Н, замещенных дейтерием.
Некоторые описанные соединения с изотопной меткой (например, соединения, меченные 3Н и 14С) применимы в анализах распределения соединения и/или субстрата в ткани. Изотопы трития (т.е. 3Н) и
углерода- 14 (т.е. 14С), являются наиболее предпочтительными, благодаря простоте получения и обнаружения. Кроме того, замена на более тяжелые изотопы, такие как дейтерий (т.е. 2Н), может давать определенное терапевтическое преимущество из-за более высокой метаболической устойчивости (например, увеличенного периода полувыведения in vivo или снижения необходимых дозировок), и поэтому может быть предпочтительна в некоторых условиях. Соединения согласно настоящему изобретению с изотопной меткой могут быть получены, в основном, при помощи таких же способов, как описаны, например, в
примерах, представленных в настоящем документе, путем замены реагента без изотопной метки на реа-
гент с изотопной меткой.
Термин "пролекарство" относится к соединениям, которые преобразуются in vivo с образованием описанного соединения или фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата этого соединения. Такое преобразование может происходить по различным механизмам (таким как эстеразный, амидазный, фосфатазный, окислительный или восстановительный метаболизм) в различных местах (таких как в кишечной полости или при прохождении через кишечник, кровь или печень). Пролекарства хорошо известны в данной области техники (например, см. Rautio, Kumpulainen, et al., Nature Reviews Drug Discovery 2008, 7, 255). Например, если соединение согласно настоящему изобретению или фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват этого соединения содержит функциональную группу карбоновой кислоты, то пролекарство может содержать сложный эфир, полученный замещением атома водорода кислотной группы такой группой как (C1-С8)алкил, (С2-С12)алканоилоксиметил, 1-(алканоилокси)этил, имеющий от 4 до 9 атомов углерода, 1-метил-1-(алканоилокси)этил, имеющий от 5 до 10 атомов углерода, алкоксикарбонилоксиметил, имеющий от 3 до 6 атомов углерода, 1-(алкоксикарбонилокси)этил, имеющий от 4 до 7 атомов углерода, 1-метил-1-(алкоксикарбонилокси)этил, имеющий от 5 до 8 атомов углерода, ^(алкоксикарбонил)аминометил, имеющий от 3 до 9 атомов углерода, 1-^-(алкокси-карбонил)амино)этил, имеющий от 4 до 10 атомов углерода, 3-фталидил, 4-кротонолактонил, гамма-бутиролактон-4-ил, ди-^^(СгС2)алкиламино(С2-С3)алкил (такой как (3-диметиламиноэтил), карбамоил-(С1-C2)алкил, ^№ди(СгС2)алкилкарбамоил-(СгС2)алкил и пиперидино-, пирролидино- или морфоли-но(С2-С3)алкил.
Точно так же, если соединение согласно настоящему изобретению содержит спиртовую функцио-
нальную группу, то пролекарство может быть получено замещением атома водорода спиртовой группы
такой группой как (С1-С6)алканоилоксиметил, 1-((С1-С6)алканоилокси)этил, 1-метил-1-((С1-С6)алк-аноилокси)этил, (С1-С6)алкоксикарбонилоксиметил, ^(СгС6)алкоксикарбониламинометил, сукциноил, (С1-С6)алканоил, а-амино(С1-С4)алканоил, арилацил и о-аминоацил или а-аминоацил-ос-аминоацил, где каждая о-аминоацильная группа независимо выбрана из природных L-аминокислот, Р(О)(ОН)2, -Р(О)(О(С1-С6)алкил)2 или гликозила (радикала, полученного при отщеплении гидроксильной группы гемиацетальной формы углевода).
Если соединение согласно изобретению содержит аминную функциональную группу, то пролекарство может быть получено, например, образованием амида или карбамата, N-ацилоксиалкильного производного, (оксодиоксоленил)метилового производного, N-основания Манниха, имина или енамина. Кроме того, вторичный амин может быть метаболически расщеплен с образованием биоактивного первичного амина, или третичный амин может быть метаболически расщеплен с образованием биоактивного первичного или вторичного амина. Примеры представлены в публикации Simplicio et al., Molecules 2008, 13, 519 и содержащихся в ней ссылках.
Соединения.
Описанные соединения включают соединения, представленные формулой
и их фармацевтически приемлемые соли, стереоизомеры и N-оксиды, где
Rb выбран из группы, состоящей из Н, галогена, гидроксила, циано и C1-C6 алкила;
R1 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R2 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R3 выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила и азотзащитной группы;
R4 и R5 независимо представляют собой Н или C1-C6 алкил, или R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членное гетероциклическое или гетероариль-ное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, -ОН, C1-C6 алкокси и -N(R')R', где R' для каждого случая независимо выбран из Н или C1-C6 алкила;
R6 выбран из группы, состоящей из -ОН, C1-C6 алкокси, -OC(O)-C1-C6 алкила и -ОС(О)фенила; и
R7 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
или в других вариантах реализации изобретения переменные, представленные в формуле (I), определены следующим образом:
Rb выбран из группы, состоящей из Н, галогена, гидроксила, циано и C1-C6 алкила (например, Н); R1 представляет собой Н или C1-C6 алкил; R2 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R3 выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила и азотзащитной группы;
R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, X и -C1-C6 алкилен-Х, где X выбран из группы, состоящей из:
(i) C3-C6 циклоалкила;
(ii) гетероарила, содержащего от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S;
(iii) гетероциклила, содержащего от 3 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; и
(iv) фенила;
где каждый C3-C6 циклоалкил и гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R', где R' в каждом случае независимо выбран из H и C1-C6 алкила; и каждый гетероарил и фенил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R';
или R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют
гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R4 и R5), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и
-N(R')R'; или
гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероарил содержит не более четырех кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R4 и R5), а каждый дополнительный кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкила), О и S; и причем указанный гетероарил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 ал-
кокси и -N(R')R';
R6 выбран из группы, состоящей из -ОН, C1-C6 алкокси, -OC(O)-C1-C6 алкила, -ОС(О)фенила и
-N(R')R'; и
R7 представляет собой Н или C1-C6 алкил.
В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой Н. В других вариантах реализации R1 представляет собой C1-C6 алкил, например, СН3. В некоторых вариантах реализации изобретения R2 представляет собой Н. В других вариантах реализации R2 представляет собой C1-C6 алкил, например, СН3. В некоторых вариантах реализации изобретения R3 представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации изобретения R3 представляет собой азотзащитную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения R3 имеет формулу -C(O)OR31, где R31 выбран из группы, состоящей из C1-C6 ал-кила; C1-C6 галогеналкила; C2-C6 алкенила; C2-C6 алкинила; С3-С10 циклоалкила, при этом С3-С10 цикло-алкил необязательно замещен 1-3 независимо вабранными C1-C3 алкилами; -СН2-С3-С10 циклоалкила, при этом С3-С10 циклоалкил необязательно замещен 1-3 независимо выбранными C1-C3 алкилами; -СН2-фенила, где фенил необязательно замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из C1-C3 алкила, C1-C3 галогеналкила, C1-C3 алкокси, C1-C3 галогеналкокси, нитро, галогена, SO2Me, циано и -ОС(О)СН3; и -СН2-пиридила. В некоторых вариантах реализации изобретения R31 представляет собой C1-C6 алкил (например, трет-бутил). В других вариантах реализации R3 имеет формулу -C(O)R32, где R32 выбран из группы, состоящей из: Н; C1-C6 алкила; C1-C6 галогеналкила; фенила, где фенил необязательно замещен 1-2 заместителями, независимо выбранными из C1-C3 алкила; С1-С3 галогеналкила; С1-С3 алкокси; С1-С3 галогеналкокси; нитро; галогена; SO2Me, циано; и -ОС(О)СН3; и пиридила. В некоторых вариантах реализации изобретения R32 представляет собой C1-C6 алкил (например, -СН3 или изопропил). В некоторых вариантах реализации изобретения R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, X и -C1-C6 алкилен-Х. В некоторых вариантах реализации R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и C1-C6 алкила. В других вариантах реализации R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и -C1-C6 алкилен-Х. В некоторых вариантах реализации R4 и R5 представляют собой Н. В других вариантах реализации один из R4 и R5 представляет собой Н, а другой представляет собой -C1-C6 алкилен-Х. В некоторых из таких вариантов реализации соединения могут иметь одну или обе (например, обе) следующие особенности: (i) -C1-C6 алкилен-Х представляет собой -СН2-Х; и (ii) X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, где 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; причем каждый необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R'.
В других вариантах реализации изобретения R4 и R5, взятые вместе, образуют гетероциклическое
или гетероарильное кольцо, как описано ранее и в любом месте настоящего документа. В некоторых вариантах реализации R4 и R5, взятые вместе, образуют гетероциклическое кольцо, например, кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолидинила. В конкретном варианте реализации R4 и R5, взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо. В некоторых вариантах реализации R4 и R5, взятые вместе, образуют гетероарильное кольцо, например, кольцо, выбранное из группы, состоящей из имидазолила, пиразолила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, пиридинила, диазинила, оксази-нила и тиазинила.
В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой Н; R2 представляет собой Н; R3 представляет собой Н; a R4 и R5, взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо. В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой Н; R2 представляет собой Н; R3 представляет собой Н; a R4 и R5 представлют собой Н. В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой Н или СН3; R2 представляет собой Н или СН3; R3 представляет собой Н; a R4 и R5, взятые вместе, образуют пирролидиниль-ное кольцо. В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой Н или СН3; R2 представляет собой Н или СН3; R3 представляет собой Н; a R4 и R5 представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой Н или СН3; R2 представляет собой Н или СН3; R3 представляет собой Н; а один из R4 и R5 представляет собой Н, а другой представляет собой -СН2-Х, где X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, где 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; каждый необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6 ал-кила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R'. В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой Н или СН3; R2 представляет собой Н или СН3; R3 представляет собой азотзащитную группу (например, -C(O)OR31 или -C(O)R32); a R4 и R5, взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо. В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой Н или СН3; R2 представляет собой Н или СН3; R3 представляет собой азотзащитную группу (например, -C(O)OR31 или -C(O)R32); a R4 и R5 представляют собой Н. В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой Н или СН3; R2 представляет собой Н или СН3; R3 представляет собой азотзащитную группу (например, -C(O)OR31 или -C(O)R32); и один из R4 и R5 представляет собой Н, а другой представляет собой -СН2-Х, где X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, где 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S; каждый необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R'.
В некоторых вариантах реализации изобретения (включая любые варианты реализации, описанные выше) R6 выбран из группы, состоящей из -ОН, C1-C6 алкокси, -OC(O)-C1-C6 алкила и -ОС(О)фенила. В некоторых вариантах реализации (включая любые варианты реализации, описанные выше) R6 представляет собой -ОН. В других вариантах реализации (включая любые варианты реализации, описанные выше) R6 представляет собой -NH2. В некоторых вариантах реализации изобретения (включая любые предыдущие варианты реализации, описанные выше) R7 представляет собой C1-C6 алкил, например CH3. В некоторых вариантах реализации изобретения (включая любые предыдущие варианты реализации, описанные выше) R6 представляет собой -ОН или -NH2, a R7 представляет собой C1-C6 алкил, например, СН3. В некоторых вариантах реализации изобретения (включая любые предыдущие варианты реализации, описанные выше) Rb представляет собой Н.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение выбрано из соединений, представленных в табл. 1 и/или в примерах. В некоторых вариантах реализации описанное соединение включает соединение, имеющее формулу:
о о ^\ Л VNH2 ^ Л VNH2 1-V q
о о / ипи о ^он
Соединения по данному изобретению и их композиции могут иметь множество хиральных центров. Каждый хиральный центр может быть независимо R, S или смесью R и S. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения хиральный центр может иметь соотношение R.S от около 100:0 до около 50:50, от около 100:0 до около 75:25, от около 100:0 до около 85:15, от около 100:0 до около 90:10, от около 100:0 до около 95:5, от около 100:0 до около 98:2, от около 100:0 до около 99:1, от около 0:100 до 50:50, от около 0:100 до около 25:75, от около 0:100 до около 15:85, от около 0:100 до около 10:90, от около 0:100 до около 5:95, от около 0:100 до около 2:98, от около 0:100 до около 1:99, от около 75:25 до 25:75 и около 50:50. Композиции описанных соединений, содержащие более высокие соотношения одного или более изомеров (т.е. R и/или S), могут обладать улучшенными терапевтическими характеристиками по сравнению с рацемическими композициями описанных соединений или смесей соединений. В некоторых случаях химические формулы содержат идентификатор "-(R)-" или "-(S)-", который дополнительно присоединен сплошной или пунктирной линией. Указанный идентификатор предназначен для
обозначения метинового атома углерода (СН), который присоединен к трем другим заместителям и имеет либо указанную R, либо S конфигурацию (см., например, табл. 1).
Описанные соединения могут обеспечивать эффективное открывание катионного канала NMDA-рецептора, например могут связываться или ассоциироваться с глутаматным сайтом NMDA-рецептора, способствуя открыванию катионного канала.
Описанные соединения могут быть использованы для регулирования (включения или выключения) NMDA-рецептора за счет их агонистического действия. Соединения, описанные в настоящем документе, могут быть частичными агонистами глицинового сайта NMDA-рецептора. Частичный агонист при использовании в данном контексте следует понимать как обозначение того, что при низких концентрациях указанный аналог действует в качестве агониста, а при высоких концентрациях указанный аналог действует в качестве антагониста. Связывание глицина не ингибируется глутаматом или конкурентными ингибиторами глутамата, а также он не связывается с тем же сайтом, что и глутамат на NMDA-рецепторе. На NMDA-рецепторе находится второй и отдельный сайт связывания глицина. Таким образом, управляемый лигандом ионный канал NMDA-рецептора регулируется по меньшей мере двумя этими отдельными аллостерическими сайтами. Описанные соединения могут быть способны связываться или ассоциироваться с глицин-связывающим сайтом NMDA-рецептора. В некоторых вариантах реализации изобретения описанные соединения могут обладать эффективностью, которая в 10 раз или более превышает активность существующих частичных агонистов глицинового сайта NMDA-рецептора.
Описанные соединения могут демонстрировать высокий терапевтический индекс. Терапевтический индекс при использовании в настоящем документе относится к соотношению дозы, которая вызывает токсичность в 50% популяции (т.е. TD50), к минимальной эффективной дозе для 50% указанной популяции (т.е. ED50). Следовательно, терапевтический индекс = (TD50):(ED50). В некоторых вариантах реализации изобретения описанное соединение может иметь терапевтический индекс по меньшей мере около 10:1, по меньшей мере около 50:1, по меньшей мере около 100:1, по меньшей мере около 200:1, по меньшей мере около 500:1 или по меньшей мере около 1000:1.
Композиции.
В других аспектах представлены препараты и композиции, содержащие описанные соединения и необязательно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В некоторых вариантах реализации изобретения рассматриваемая композиция содержит рацемическую смесь одного или более из описанных соединений. Рассматриваемые композиции могут быть приготовлены в любой из многочисленных форм для применения. В качестве примера, а не ограничения, указанные соединения могут быть приготовлены в композиции, пригодной для перорального введения, подкожной инъекции или для других способов введения активного агента животному, известных в области фармацевтики.
Количество описанного соединения в композиции, описанной в настоящем документе, может варьироваться в зависимости от таких факторов как тяжесть заболевания, возраст, пол и вес индивидуума. Режимы дозирования могут быть подобраны для обеспечения оптимального терапевтического ответа. Например, может быть введен однократный болюс, могут быть введены несколько дробных доз в течение определенного времени, или доза может пропорционально уменьшаться или увеличиваться, в соответствии с требованиями терапевтической ситуации. Особенно целесообразно составлять парентеральные композиции в единичной дозированной форме для простоты введения и равномерности дозирования. Единичная дозированная форма, при использовании в настоящем документе, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве однократных доз для млекопитающих субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит определенное количество активного соединения, рассчитанное для обеспечения заданного терапевтического эффекта, в сочетании с заданным фармацевтическим носителем.
Характеристики единичных лекарственных форм согласно настоящему изобретению продиктованы и напрямую зависят от (а) уникальных характеристик выбранного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который требуется достичь, а также от (b) ограничений, существующих в области составления композиций, таких как активный агент для лечения сенситивности у пациентов. Терапевтические композиции, как правило, должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Композиция может быть составлена в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, пригодной для высокой концентрации лекарства. Носителем может быть растворитель или дисперсионная среда, содержащая, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль, и т.д.) и их подходящие смеси. Необходимая текучесть может поддерживаться, например, за счет использования покрытий, таких как лецитин, путем сохранения нужного размера частиц в случае дисперсий, а также при помощи поверхностно-активных веществ. Во многих случаях предпочтительно включать в композицию изотонические агенты, например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит или сорбит, или как хлорид натрия. Пролонгированное поглощение инъецируемых композиций может быть осуществлено за счет включения в композицию агента, замедляющего абсорбцию, например моностеаратных солей и желатина.
Соединения могут быть введены в форме композиции с временным высвобождением, например, в композиции, которая содержит полимер с замедленным высвобождением. Соединения могут быть при
готовлены с носителями, которые защищают соединение от быстрого высвобождения, как в композиции с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут быть использованы биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилаце-тат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры, полимолочная кислота и сополимеры полимолочной и полигликолевой кислот (PLG). Многие способы получения таких композиций хорошо известны специалистам в данной области.
Стерильные инъецируемые растворы могут быть получены введением необходимого количества соединения в подходящий растворитель, при необходимости, с одним компонентом или комбинацией компонентов, перечисленных выше, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают введением активного соединения в стерильный жидкий носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций, предпочтительные способы приготовления представляют собой вакуумную сушку и лиофильную сушку, в результате которых из предварительно стерильно отфильтрованного раствора получают порошок активного компонента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент.
В соответствии с альтернативным аспектом настоящего изобретения соединение может быть составлено в композицию с одним или более дополнительными соединениями, которые улучшают растворимость указанного соединения.
Способы.
Представлены способы лечения патологического состояния у пациента, нуждающегося в этом, путем введения терапевтически эффективной дозы соединения, описанного в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения патологическое состояние может быть умственным состоянием. Например, можно лечить умственное заболевание. В другом аспекте можно лечить патологическое состояние нервной системы. Например, можно лечить патологическое состояние, которое поражает центральную нервную систему, периферическую нервную систему и/или глаза. В некоторых вариантах реализации изобретения можно лечить нейродегенеративные заболевания.
В некоторых вариантах реализации изобретения способы включают введение соединения для лечения пациентов, страдающих от аутизма, тревожного расстройства, депрессии, биполярного расстройства, расстройства дефицита внимания, расстройство гиперактивности с дефицитом внимания (ADHD), шизофрении, психотического расстройства, психотического симптома, социального отчуждения, обсессив-но-компульсивного расстройства (OCD), фобии, синдрома посттравматического стресса, расстройства поведения, расстройства импульсного контроля, расстройства, связанного со злоупотреблением психоактивными веществами (например, абстинентного симптома, опиатной зависимости, никотиновой зависимости и алкогольной зависимости), расстройства сна, расстройства памяти (например, дефицита, потери или сниженной способности к запоминанию), нарушения способности к обучению, недержания мочи, множественной системной атрофии, прогрессирующего надъядерного паралича, атаксии Фридриха, синдрома Дауна, синдрома ломкой Х-хромосомы, туберозного склероза, оливопонтоцеребеллярной атрофии, церебрального паралича, медикаментозного неврита зрительного нерва, ишемической ретинопатии, диабетической ретинопатии, глаукомы, деменции, деменции на фоне СПИДа, болезни Альцгеймера, хореи Хантингтона, спастичности, миоклонии, мышечного спазма, синдрома Туретта, эпилепсии, церебральной ишемии, инсульта, опухоли головного мозга, травматического повреждения головного мозга, остановки сердца, миелопатии, повреждения спинного мозга, периферической невропатии, острой невропатической боли и хронической невропатической боли.
В некоторых вариантах реализации изобретения рассмотрены способы лечения расстройства памяти, связанного со старением, шизофренией, нестандартными нарушениями способности к обучению, конвульсиями, судорогами после инсульта, ишемией головного мозга, гипогликемией, остановкой сердца, эпилепсией, мигренью, деменцией на фоне СПИДа, хореей Хантингтона, болезнью Паркинсона, ранней стадией болезни Альцгеймера и болезнью Альцгеймера.
В некоторых вариантах реализации изобретения представлены способы лечения шизофрении. Например, с помощью способов и композиций, рассмотренных в настоящем документе, можно лечить шизофрению параноидального типа, шизофрению дезорганизованного типа (т.е. гебефреническую шизофрению), шизофрению кататонического типа, шизофрению недифференцированного типа, шизофрению остаточного типа, пост-шизофреническую депрессию и простую шизофрению. С помощью композиций, рассмотренных в настоящем документе, можно лечить также психотические расстройства, такие как ши-зоаффективные расстройства, бредовые расстройства, кратковременные психотические расстройства, индуцированные психотические расстройства и психотические расстройствами с бредом или галлюцинациями.
Параноидная шизофрения может характеризоваться наличием бреда или слуховых галлюцинаций при отсутствии психического расстройства, дезорганизованного поведения или аффективной тупости. Бред может быть бредом преследования и/или претенциозным бредом, но помимо этого могут также присутствовать другие темы, такие как ревнивость, религиозность или соматизация. Шизофрения дезорганизованного типа может характеризоваться при одновременном наличии психического расстройства и
уплощенного аффекта. Шизофрения кататонического типа может характеризоваться в случае, если пациент может быть почти неподвижным или проявлять возбужденное, бесцельное движение. Симптомы могут включать кататонический ступор и восковую гибкость. Шизофрения недифференцированного типа может характеризоваться при наличии психотических симптомов, но при несоответствии критериям параноидального, гебефренического или кататонического типа. Шизофрения остаточного типа может характеризоваться при наличии лишь положительных симптомов низкой интенсивности. Постшизофреническая депрессия может характеризоваться при возникновении депрессивного эпизода вследствие шизофренической болезни, при этом могут присутствовать некоторые слабые шизофренические симптомы. Простая шизофрения может характеризоваться постепенным и прогрессирующим развитием явных негативных симптомов в отсутствие истории психотических эпизодов.
В некоторых вариантах реализации изобретения представлены способы лечения психотических симптомов, которые могут присутствовать при других психических расстройствах, включая, но не ограничиваясь ими, биполярное расстройство, пограничное расстройство личности, наркотическая интоксикацию и наркотический психоз. В другом варианте реализации изобретения представлены способы лечения бреда (например, "не причудливого"), который может иметь место, например, при бредовом расстройстве. Также представлены способы лечения социального отчуждения в состояниях, включающих, но не ограничиваясь ими, социальное тревожное расстройство, личностное расстройство избегания и шизотипическое расстройство личности.
В некоторых вариантах реализации изобретения представлены способы лечения невропатической боли. Невропатическая боль может быть острой или хронической. В некоторых случаях невропатическая боль может быть связана с патологическим состоянием, таким как герпес, ВИЧ, травматическое повреждение нерва, инсульт, постишемия, фибромиалгия, рефлекторная симпатическая дистрофия, комплексный регионарный болевой синдром, повреждение спинного мозга, ишиас, фантомная боль в ампутированных конечностях, диабетическая невропатия и невропатическая боль, вызванная противораковой химиотерапией. Предусмотрены также способы усиления облегчения боли и обеспечения аналгезии пациента.
Дополнительно предусмотренные способы включают способ лечения аутизма и/или расстройства аутического спектра у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту эффективного количества соединения. В одном из вариантов реализации изобретения предусмотрен способ облегчения симптомов аутизма у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту эффективного количества описанного соединения. Например, соединение при введении может обеспечивать снижение частоты возникновения одного или более симптомов аутизма, таких как избегание визуального контакта, безрезультатность социализации, дефицит внимания, плохое настроение, гиперактивность, патологическое восприятие звуков, неправильная речь, прерывание сна и персеверация. Такое снижение частоты возникновения может быть измерено относительно частоты возникновения у индивидуума, не прошедшего лечение, или у индивидуумов, не прошедших лечение.
В настоящем документе представлен также способ модулирования экспрессии гена-мишени аутизма в клетке, включающий приведение в контакт клетки с эффективным количеством соединения, описанного в настоящем документе. Экспрессия гена аутизма может быть выбрана, например из АВАТ, АРОЕ, CHRNA4, GABRA5, GFAP, GRIN2A, PDYN и PENK. В другом варианте реализации изобретения представлен способ модулирования синаптической пластичности у пациента, страдающего от расстройства, связанного с синаптической пластичностью, включающий введение пациенту эффективного количества соединения.
В другом варианте реализации изобретения представлен способ лечения болезни Альцгеймера или, например, лечения потери памяти, которое, например, сопровождает раннюю стадию болезни Альцгей-мера, у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение соединения. В настоящем документе описан также способ in-vitro или in-vivo (например, в клетке) модулирования амилоидного белка Альцгеймера (например, бета-амилоидного пептида, например, изоформы А|31-42), включающий приведение в контакт указанного белка с эффективным количеством соединения. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения соединение может блокировать способность такого амилоидного белка подавлять долговременную потенциацию в гиппокампальных срезах, а также апоптическую гибель нейронных клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения описанное соединение может обеспечивать ней-ропротекторные свойства для пациента с болезнью Альцгеймера, нуждающегося в этом, например, может обеспечивать терапевтический эффект на гибель нейронных клеток, связанную с поздней стадии болезни Альцгеймера. В дополнительном варианте реализации изобретения представлен способ лечения депрессии, включающий введение соединения, описанного в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения лечение может облегчать депрессию или симптом депрессии, не влияя на поведение или двигательную координацию и не вызывая или не ускоряя судорожную активность. Иллюстративные депрессивные состояния, которые, как ожидается, можно лечить в соответствии с данным аспектом настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, большое депрессивное расстройство, дистимическое расстройство, психотическую депрессию, послеродовую депрессию, предменструальный синдром, предменструальное дисфорическое расстройство, сезонное аффективное расстрой
ство (SAD), биполярное расстройство (или маниакально-депрессивное расстройство), расстройство настроения и депрессии, вызванные хроническими медицинскими состояниями, такими как рак или хроническая боль, химиотерапия, хронический стресс и посттравматические стрессовые расстройства. Кроме того, пациенты, страдающие от любой формы депрессии, зачастую испытывают тревогу. Различные симптомы, связанные с тревогой, включают, среди прочих, страх, панику, учащенное сердцебиение, затруднение дыхания, усталость, тошноту и головные боли. Тревога или любые ее симптомы можно лечить путем введения соединения, описанного в настоящем документе.
В настоящем документе представлены также способы лечения патологического состояния у пациентов, не восприимчивых к лечению, например, у пациентов, страдающих от умственного патологического состояния или патологического состояния центральной нервной системы, которые не отвечают и/или не отвечали на эффективные курсы по меньшей мере одного, по меньшей мере двух других соединений или терапий. Например, в настоящем документе представлен способ лечения депрессии при лечении невосприимчивого пациента, включающий а) необязательную идентификацию пациента как невосприимчивого к лечению и b) введение указанному субъекту эффективной дозы соединения.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение, описанное в настоящем документе, может быть использовано для неотложной помощи пациенту. Например, соединение может быть введено пациенту для лечения конкретного эпизода (например, тяжелого эпизода) патологического состояния, предусмотренного в настоящем документе.
В документе предусмотрены также комплексные терапии, содержащие соединение в комбинации с одним или более другими активными агентами. Например, соединение может быть комбинировано с одним или более антидепрессантами, такими как трициклические антидепрессанты, MAO-I, SSRI, а также с двойными и тройными ингибиторами захвата и/или анксиолитическими лекарствами. Иллюстративные лекарства, которые могут быть использованы в комбинации с соединением, включают анафра-нил, адапин, авентил, элавил, норпрамин, памелор, пертофран, синекван, сурмонтил, тофранил, вивактил, парнат, нардил, марплан, целекса, лексапро, лувокс, паксил, прозак, золофт, велбутрин, эффексор, реме-рон, симбалта, дезирел (тразодон) и лудиомил. В другом примере соединение может быть комбинировано с антипсихотическим лекарственным препаратом. Не ограничивающие примеры антипсихотических препаратов включают бутирофеноны, фенотиазины, тиоксантены, клозапин, оланзапин, рисперидон, кве-тиапин, зипразидон, амисульприд, азенапин, палиперидон, илоперидон, зотепин, сертиндол, луразидон и арипипразол. Следует понимать, что комбинации соединения и одного или более из вышеперечисленных терапевтических препаратов могут быть использованы для лечения любого подходящего состояния, и они не ограничены применением в качестве антидепрессантов или антипсихотических агентов.
Примеры
Следующие примеры представлены лишь для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения границ объема изобретения.
Ниже в табл. 1 изображены некоторые иллюстративные соединения настоящего изобретения, а также представлены физиохимические характеристики соединений.
2S-21
СНз ?нз
нД',м°цо
341,4027
-0,243061
113,17
2S-24
395,4931
0,610089
90,39
2S-27
Н3С-\ /Ч/"~"~1 )"N X \
сЧ ixy
395,4931
0,610089
90,39
2S-30
409,5197
1,02666
90,39
2S-8
Н3С О
383,4824
0,808343
99,18
2S-9
СН3
ноЧТ^'Л СНз Q
395,4931
0,789186
99,18
2S-FNL-10
CH3
СНз Г\
417,4986
1,28851
99,18
2S-FNL-11
\NH
ноЧ HN~\
СНз Г\
317,3828
0,005320 27
81,67
2S-FNL-12
СНз
ноЧ, HN"~"\
СНз Г\
359,4195
-0,384737
89,95
2S-FNL-13
НзСч^сН3
ноЧ HN~"~V_
СНз ГЛ
387,4727
0,858785
89,95
2S-FNL-14
СНз
оЧСНз
409,4369
-0,960294
138,1
2S-FNL-15
СНз
оЧ"СНз
4r> t
409,4369
-1,65688
138,1
2S-FNL-16
423,3444
-2,94007
120,59
2S-FNL-17
СНз
361,3956
-1,88186
115,73
2S-FNL-18
СНз
419,4748
-0,35934
124,96
2S-FNL-19
СНз
433,3823
-1,6029
107,45
2S-FNL-2
СНз
HSCH^H3
327,3761
-0,659636
113,17
2S-FNL-20
389,4488
-0,696233
115,73
2S-FNL-21
H.N^''"^?
213,2337
-2,3594
95,66
2S-FNL-22, 2S-16
НЗСН^НЗ
313,3495
-1,07621
113,17
2S-FNL-23
405,4482
-0,769835
124,96
2S-FNL-24
305,3324
-2,01339
107,45
2S-FNL-25
375,4222
-1,10673
115,73
2S-FNL-26
281,3507
-1,08968
72,88
2S-FNL-27
HOI нзС j~j
HN^)
359,848
-0,648554
78,95
2S-FNL-28
NH2 СНз
241,2869
-1,52625
95,66
2S-FNL-29
нЧОз
433,5013
0,051154
124,96
2S-FNL-3
NH2
227,2603
-1,94283
95,66
2S-FNL-30
333,3855
-1,1924
107,45
2S-FNL-31
403,4754
-0,285738
115,73
2S-FNL-32
<\P CH3
295,3773
-0,673104
72,88
2S-FNL-33
СНз
341,4027
-0,243061
113,17
2S-FNL-34
NH2
241,2869
-1,52625
95,66
2S-FNL-35
H°^H3^CHS
295,3773
-0,673104
72,88
2S-FNL-36
NH2 СНз НзС^^СНз
355,4293
0,173514
113,17
2S-FNL-37
NH2 СНз НзС^/н^СНз
255,3134
-1,10968
95,66
2S-FNL-38
0 СНз НО-^^Й^СНз
309,4039
-0,256529
72,88
2S-FNL-4
СНз
:4o^CHs
н3с
297,3501
-1,08936
103,94
2S-FNL-5
NH2
н3с N'
426,4689
-0,121843
134,65
2S-FNL-6
СНз
326,3913
-0,766518
118,96
2S-FNL-7
NH2
262,736
-2,04971
101,45
2S-FNL-8
О")
397,3899
-0,47485
81,67
2S-FNL-9
f3 HO-(^N--\
НО^О СНз Q
409,4006
-0,494007
81,67
Пример 1. Синтез соединения X.
Схема 1
Стадия-3
вом-а
ГЛ/Р Стадия. 1 Стадия-2 Г"^-^
^ ОН SOCI, ВОН* ^pjbCH, (Вос)20*кМ ОСНз LIHMDS,
ОВп ОН
О О о О О
НО У~ ОН Стадия-А НО "^ОН Стадия-В ВпО V- ОН _Стадия-С_ВпО У-ОВп Стадия-D BnO V- ОВп
/Лн2 (В0С^° MJHBOC NaH'BnBf / VjHBoc К.СОЗВПВГ /"ЛНВОС MeOKHCI MN н, HCI
ИП/11 А В С ПС-D
Синтез (28,3К)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-гидроксибутановой кислоты (А).
К перемешиваемому раствору L-треонина (исходный материал 1) (100 г, 0,84 моль) в 1,4-диоксане (500 мл) и воде (800 мл) добавили Na2CO3 (178 г, 1,67 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь охладили до 0°C, по каплям добавили Вос-ангидрид (219,6 г, 1,007 моль) и продолжали перемешивание в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением и нейтрализовали полученный остаток при помощи 1н. HCl (рН~4). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл). Отделенные органические экстракты промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения А (160 г, 87%).
^-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-dj): 8 6,30 (д, 1H), 4,07-4,01 (м, 1H), 3,90 (д, 1H), 1,99 (с, 1H), 1,42 (с,
9Н), 1,09 (д, 3H).
ЖХМС (m/z): 218,1 [М+-1].
Синтез (2S,3R)-3-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)бутановой кислоты.
К перемешиваемому раствору соединения А (100 г, 0,45 моль) в ДМФА (600 мл) по частям добавили 60% NaH (36,5 г, 0,91 моль) при -20°C в атмосфере N2 и перемешивали в течение 2 ч. По каплям добавили бензилбромид (66,8 мл, 0,55 моль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь погасили ледяной водой и промыли диэтиловым эфиром (2 х 250 мл). Отделенный водный слой подкислили при помощи 1 н. HCl и экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл). Объединенные органические слои высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения В (100 г, 71%).
Синтез (2S,3R)-бензил-3-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)бутаноата (C).
К перемешиваемому раствору соединения В (100 г, 0,32 моль) в ДМФА (400 мл) добавили K2CO3 (111,6 г, 0,81 моль) в атмосфере N2 и перемешивали в течение 30 мин. По каплям добавили бензилбро-мид (47,4 мл, 0,38 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Реакционную смесь погасили ледяной водой и экстрагировали диэтиловым эфиром (2 х 250 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силика-геле, элюируя 5% EtOAc в н-гексане, с получением соединения С (80 г, 62%).
^-ЯМР: (400 МГц, ДМСОч16): 8 7,41-7,25 (м, 10H), 5,09 (с, 2Н), 4,55-4,50 (м, 1H), 4,34-4,30 (м, 1H), 2,09 (с, 3H), 1,42 (с, 9Н), 1,15 (д, 3H).
Синтез (2S,3R)-бензил-2-амино-3-(бензилокси)бутаноата (промежуточное соединение D).
К перемешиваемому раствору соединения С (80 г, 0,20 моль) в метаноле (100 мл) добавили мета-нольный раствор HCl (70 мл) в атмосфере N2 и перемешивали в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал промыли н-гексаном и высушили под пониженным давлением с получением промежуточного соединения D (45 г, 75%) в виде соли HCl.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-с16): 8 7,35-7,30 (м, 10H), 5,25 (к, 2Н), 4,58-4,52 (м, 3H), 4,37 (д, 1H), 4,27 (ш с, 1И), 4,15-4,10 (м, 1И), 1,30 (д, 3И). ЖХМС (m/z): 300,2 [М++1]. Синтез ^)-метилпирролидин-2-карбоксилата (2).
К перемешиваемому раствору L-пролина 1 (100 г, 0,87 моль) в метаноле (800 мл) медленно, по каплям добавили тионилхлорид (76,9 мл, 1,04 моль) при 0°C. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток промыли н-гексаном с получением соединения 2 (143,9 г, соль HCl).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 3,89 (с, 3H), 3,68-3,62 (м, 2Н), 3,59-3,47 (м, 2Н), 2,49-2,37 (м, 1H), 2,27-2,05 (м, 3И).
ЖХМС (m/z): 166 [М++1].
Синтез ^)-1-трет-бутил-2-метилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (3).
К перемешиваемому раствору соединения 2 (35 г, 0,22 моль) в CH2Cl2 (175 мл) добавили Et3N (90 мл, 0,65 моль), затем Вос-ангидрид (56,9 мл, 0,26 моль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Органический слой промыли водой, насыщенным солевым раствором, высушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 3 (41 г, 95%).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 4,25-4,21 (м, 1И), 3,75 (с, 3И), 3,57-3,26 (м, 2Н), 2,29-2,10 (м, 1И), 1,99-1,75 (м, 3И), 1,45 (с, 9Н).
ЖХМС (m/z): 130 [(М++1)-Вос].
Синтез 1-трет-бутил-2-метил-2-((бензилокси)метил)пирролидин-1,2-дикарбоксилата (4).
К перемешиваемому раствору соединения 3 (100 г, 0,43 моль) в ТГФ (800 мл) добавили LiHMDS (873 мл, 0,87 моль) при -78°C и перемешивали в течение 1 ч. По каплям добавили ВОМ-хлорид (93,2 мл, 0,65 моль) при -78°C и перемешивали в течение 2 ч при -20°C. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакцию погасили водным раствором NH4Cl и экстрагировали EtOAc. Отделенный органический слой промыли водой, высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 4 (180 г, неочищенное). Полученный материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС (m/z): 250 [(М++1)-Вос].
Синтез 2-((бензилокси)метил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (5).
К перемешиваемому раствору соединения 4 (100 г, 0,28 моль) в метаноле (200 мл) добавили 2н. раствор NaOH (300 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворитель выпарили из реакционной смеси под пониженным давлением и разбавили EtOAc (100 мл). Водный слой подкислили раствором лимонной кислоты и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 250 мл). Отделенный органический слой промыли водой, высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 5 (60 г, 63%). 1И-ЯМР:
(400 МГц, CDCl3): 8 7,37-7,32 (м, 5Н), 4,61 (с, 2Н), 4,05-3,88 (м, 2Н), 3,65-3,42 (м, 2Н), 2,54-2,46 (м, 2Н),
1,95 (ш с, 2Н), 1,57 (с, 9Н).
ЖХМС (m/z): 334 [М+-1].
Синтез 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (6).
К перемешиваемому раствору соединения 5 (10 г, 29,81 ммоль) в метаноле (300 мл) добавили 10% Pd/C с влажностью 50% (5 г) при комнатной температуре и перемешивали в течение 24 ч в атмосфере И2 (баллонное давление). После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 6 (6 г, 82%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 12,55 (ш м, 1И), 3,99 (д, 1И), 3,88 (д, 1И), 7,65-7,60 (м, 1И), 3,513,45 (м, 1И), 3,39-3,34 (м, 1И), 2,32-2,14 (м, 1И), 1,98-1,69 (м, 3И), 1,39 (с, 9Н).
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиме-тил)пирролидин-1-карбоксилата (7).
К перемешиваемому раствору соединения 6 (3 г, 12,2 ммоль) в CH2Cl (100 мл) добавили промежуточное соединение D (5,8 г, 14,6 ммоль), EDCI-HCl (2,8 г, 14,6 ммоль), затем HOBt (1,99 г, 14,6 ммоль) и DIPEA (4,8 г, 36,7 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения 7 (1,6 г, 25%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 8,25-8,12 (м, 1И), 7,31-7,27 (м, 10И), 5,85 (т, 1И), 5,14 (с, 2Н), 4,544,49 (м, 2Н), 4,31 (дд, 1И), 4,15-4,07 (м, 1И), 3,91-3,50 (м, 1И), 3,52-3,37 (м, 1И), 3,31-3,27 (м, 2Н), 2,35-
2,07 (м, 1И), 1,95-1,90 (м, 1И), 1,73-1,52 (м, 2Н), 1,39-1,27 (м, 9Н), 1,19-1,12 (м, 3И). Масса (ИЭР): m/z 527,4 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]ок-тан-5-карбоксилата (8).
К перемешиваемому раствору соединения 7 (1,4 г, 2,65 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавили трифенил-фосфин (1,1 г, 3,98 ммоль) и DTAD (1,2 г, 3,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения 8-F1 (0,6 г) и 8-F2 (0,55 г).
Синтез (2S,3R)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гидроксибу-тановой кислоты (9).
К перемешиваемому раствору соединения 8-F1 и 8-F2 (0,6 г) в метаноле (50 мл) добавили 10% Pd/C (120 мг) при комнатной температуре и перемешивали в течение 6 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой цели-та и промыли этот слой метанолом. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного материала, который растерли с диэтиловым эфиром с получением соединения 9 (0,3 г, 82%) в виде грязновато-белого твердого вещества. 1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-16): 8 12,95 (ш с, 1И), 4,97 (ш с, 1И), 4,24-4,20 (м, 1И), 4,14-4,07 (м, 1И), 3,84 (д, 1И), 3,53 (т, 1И), 3,41-3,35 (м, 1И), 3,27-3,22 (м, 1И), 2,14-2,08 (м, 2Н), 1,84-1,80 (м, 2Н), 1,42 (с, 9Н), 1,24 (д, 3И).
ЖХМС (m/z): 329,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]ок-тан-5-карбоксилата (10).
К перемешиваемому раствору соединения 9 (5 г, 15,2 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) добавили хлорид аммония (2 г, 38,1 ммоль), EDCI-HCl (3,5 г, 18,2 ммоль), затем HOBt (5,9 г, 45,7 ммоль) и DIPEA (5,9 г, 45,7 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал растерли с Et2O (50 мл) и н-пентаном (50 мл) с получением соединения 10 (2,5 г, 51%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 7,51 (ш с, 1И), 7,19 (ш с, 1И), 4,64 (д, 1И), 4,07-3,95 (м, 2Н), 3,78 (м, 1И), 3,62-3,35 (м, 2Н), 3,27-3,25 (м, 1И), 2,18-2,05 (м, 2Н), 1,86-1,74 (м, 2Н), 1,41 (с, 9Н), 1,12 (д, 3И).
ЖХМС (m/z): 328,2 [М++1].
Синтез (2S,3R)-3-гидрокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутанамида (соединение X).
К перемешиваемому раствору соединения 10 (2,2 г, 6,70 ммоль) в CH2Cl2 (25 мл) добавили ТФК (7,6 г, 67 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением соединения X (2 г, 87%) в виде соли ТФК.
1И-ЯМР: (400 МГц, D2O): 8 4,33-4,29 (м, 2Н), 4,09 (д, 1И), 3,95 (д, 1И), 3,57-3,48 (м, 2Н), 2,51-2,46 (м, 2Н), 2,25-2,19 (м, 2Н), 1,31 (д, 3И).
ЖХМС (m/z): 455 [2М++1].
Пример 2. Синтез соединения Z.
Синтез (2S,3R)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-гидроксибутановой кислоты (А).
К перемешиваемому раствору (2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутановой кислоты (исходный материал 2) (30 г, 0,25 моль) в ТГФ (150 мл) и воде (150 мл) добавили NaHCO3 (65 г, 0,75 моль), затем Вос-ангидрид (66 мл, 0,302 моль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 х 150 мл). Водный слой подкислили при помощи 2н. HCl, а затем экстрагировали 10% Ме-Отделенные органические экстракты высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под вакуумом с получением соединения А (30 г, 63%). 1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 5,92-5,70 (м, 2Н), 5,55 (д, 1И), 4,42 (ш с, 1И), 4,29 (д, 1И), 1,47 (с, 9Н), 1,25 (д, 3И).
ЖХМС (m/z): 218 [М+-1].
Синтез трет-бутил-((2S,3R)-3-гидрокси-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)карбамата (В).
К перемешиваемому раствору соединения А (13 г, 59,36 ммоль) в ДМФА (65 мл) добавили EDCI-HCl (12,5 г, 65,2 ммоль), затем HOBt (8,8 г, 65,2 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 5 мин к реакционной смеси добавили DIPEA (30,6 мл, 0,17 моль), затем пирролидин (4,6 г, 65,2 ммоль) и продолжали перемешивание еще 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промыли водой и экстрагировали EtOAc (2 х 100 мл). Органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией с получением соединения В (5 г, 31%). 1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 5,51 (ш с, 1И), 4,32 (д, 1И), 4,15-4,10 (м, 1И), 3,77-3,74 (м, 1И), 3,55-3,46 (м, 3И), 1,99-1,94 (м, 2Н), 1,91-1,85 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н), 1,26 (т, 1И), 1,29 (д, 3И).
Синтез (2R,3S)-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-оксо-4-(пирролидин-1-ил)бутан-2-илацетата
(D).
К перемешиваемому раствору соединения В (4 г, 14,7 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл) добавили Et3N (5,1 мл, 36,7 ммоль), затем уксусный ангидрид (1,7 г, 17,6 ммоль) и каталитическое количество DMAP при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой и отделили органический слой. Органический слой промыли водой, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения С. К нему добавили ^-диоксан/ИО (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и промыли остаток Et2O (2х15 мл) с получением соединения D (3,5 г, 97%) в виде соли HCl.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-ds) (ротамеры): 8 8,49 (ш с, 3И), 8,15 (ш с, 1И), 5,14-5,10 (м, 1И), 4,264,22 (м, 1И), 3,97-3,95 (м, 1И), 3,59 (с, 2Н), 2,09 (с, 3И), 1,98 (с, 2Н), 1,87-1,80 (м, 2Н), 1,26 (д, 3И).
ЖХМС (m/z): 215,1 [М++1].
Синтез метилпирролидин-2-карбоксилата (1).
К перемешиваемому раствору пирролидин-2-карбоновой кислоты (исходный материал 1) (100 г, 0,87 моль) в метаноле (800 мл) медленно, по каплям добавили тионилхлорид (76,9 мл, 1,04 моль) 0°C. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток промыли н-гексаном и отогнали растворитель с получением соединения 1 (143,9 г, соль HCl).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3) (ротамеры): 8 3,89 (с, 3И), 3,68-3,62 (м, 2Н), 3,59-3,47 (м, 2Н), 2,49-2,37 (м, 1И), 2,27-2,05 (м, 3И).
ЖХМС (m/z): 166 [М++1].
Синтез 1-трет-бутил-2-метилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2).
К перемешиваемому раствору соединения 1 (35 г, 0,22 моль) в CH2Cl2 (175 мл) добавили Et3N (90 мл, 0.65 моль), затем Вос-ангидрид (56,9 мл, 0,26 моль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Органический слой промыли водой, насыщенным солевым раствором, высушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30% EtOAc в гексане, с получением соединения 2 (41 г, 95%).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3) (ротамеры): 8 4,25-4,21 (м, 1И), 3,75 (с, 3И), 3,57-3,26 (м, 2Н), 2,29-2,10 (м, 1И), 1,99-1,75 (м, 3И), 1,45 (с, 9Н).
ЖХМС (m/z): 130 [(М++1)-Вос].
Синтез 1-трет-бутил-2-метил-2-(|бензилокси)метил)пирролидин-1,2-дикарбоксилата (3).
К перемешиваемому раствору соединения 2 (100 г, 0,43 моль) в ТГФ (800 мл) добавили LiHMDS (873 мл, 0,87 моль) при -78°C и перемешивали в течение 1 ч. По каплям добавили ВОМ-хлорид (93,2 мл, 0,65 моль) -78°C и перемешивали в течение 2 ч при -20°C. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакцию погасили NH4Cl при 0°C. Отделенный органический слой промыли водой, высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 3 (180 г, неочищенное). Полученный материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
ЖХМС (m/z): 250 [(М++1)-Вос].
Синтез 2-((бензилокси)метил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (4).
К перемешиваемому раствору соединения 3 (100 г, 0,28 моль) в метаноле (200 мл) добавили 2н. раствор NaOH (300 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) выпарили растворитель из реакционной смеси под вакуумом и разбавили смесь EtOAc (100 мл). Водный слой подкислили раствором лимонной кислоты и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 250 мл). Отделенный органический слой промыли водой, высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 4 (60 г, 63%). 1И-ЯМР: (400
МГц, CDCl3) (ротамеры): 8 7,37-7,32 (м, 5Н), 4,61 (с, 2Н), 4,05-3,88 (м, 2Н), 3,65-3,42 (м, 2Н), 2,54-2,46 (м,
2Н), 1,95 (ш с, 2Н), 1,57 (с, 9Н). ЖХМС (m/z): 334 [М+-1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3-ацетокси-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)карбамоил)-2-((бензилокси)метил)пирролидин-1-карбоксилата (5).
К перемешиваемому раствору соединения D (1 г, 2,90 ммоль) в ДМФА (8 мл) добавили EDCI-HCl (0,63 г, 3,28 ммоль), затем HOBt (0,44 г, 3,28 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 5 мин к реакционной смеси добавили DIPEA (1,3 мл, 7,46 ммоль), затем соединение 4 (0,74 г, 3,58 ммоль) и продолжали перемешивание еще 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промыли водой и экстрагировали EtOAc (2 х 500 мл). Органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией с получением соединения 5 (0,6 г, 38%).
ЖХМС (m/z): 532 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3-ацетокси-1-оксо-1-(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)карбамоил)-2-(ги-дроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата (6).
К перемешиваемому раствору соединения 5 (4,5 г, 8,40 ммоль) в МеОН (40 мл) добавили влажний 10% Pd/C (1,5 г) в инертной атмосфере и перемешивали в течение 4 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 6 (3,0 г, 81%). ЖХМС (m/z): 442,5 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-ацетокси-1 -оксо-1 -(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диаза-спиро [3.4]октан-5-карбоксилата (7).
К перемешиваемому раствору соединения 6 (3 г, 6,70 ммоль) в ТГФ (25 мл) добавили трифенил-фосфин (2 г, 7,40 ммоль), затем DTAD (2,5 г, 10,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 10% МеОН/QH^Cb, с получением соединения 7 (1,2 г с ТРРО,
43%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 5,25-5,19 (м, 1И), 4,65 (д, 1И), 3,61-3,57 (м, 3И), 3,47-3,42 (м, 2Н), 3,41-3,25 (м, 4Н), 2,05 (с, 4Н), 1,95-1,71 (м, 7Н), 1,42 (с, 10И).
ЖХМС (m/z): 424,4 [М++1.]
Синтез (2R,3S)-4-оксо-3-(1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-4-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил ацетата (8).
Перемешиваемый раствор соединения 7 (0,4 г, 0,94 ммоль) в ^-диоксане/ИО (5 мл) охладили до 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал промыли н-пентаном, затем EtOAc с получением соединения 8 (0,22 г, 65%).
1И-ЯМР: (400 МГц, D2O): 8 4,62 (д, 1И), 4,41-4,29 (м, 2Н), 4,24 (д, 1И), 3,89-3,77 (м, 3И), 3,54-3,49 (м, 3И), 2,57-2,52 (м, 1И), 2,49 (с, 3И), 2,42-2,00 (м, 8Н), 1,30 (д, 3И).
ЖХМС (m/z): 324,3 [М++1]. Чистота по СВЭЖХ: 99,37%.
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1 -оксо-1 -(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диаза-спиро[3.4]октан-5-карбоксилата (9).
Раствор соединения 7 (0,15 г, 0,41 ммоль) в водном NH3 (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили CH2Cl2 (75 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 9 (0,1 г, 76%).
ЖХМС (m/z): 382 [М++1].
Синтез 2-((2S,3R)-3-гидрокси-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)-2,5-диазаспиро[3.4]октан-1-она (соединение Z).
К перемешиваемому раствору соединения 9 (0,2 г, 0,63 ммоль) в CH2Cl2 (2 мл) добавили ТФК (0,3 мл) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, а остаток разбавили водой и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 25 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под вакуумом с получением соединения Z (0,2 г, 80%) в виде соли ТФК.
1И-ЯМР: (400 МГц, D2O): 8 4,64 (т, 1И), 4,25-4,21 (м, 1И), 4,09 (д, 1И), 3,99-3,87 (м, 1И), 3,70 (т, 2Н), 3,55-3,47 (м, 5Н), 2,52-2,34 (м, 2Н), 2,25-2,22 (м, 2Н), 2,08-1,98 (м, 5Н), 1,25 (т, 3И).
ЖХМС (m/z): 282,4 [М++1].
Схема 2S-I-1
но °VOH СТАДИЯ1 но VOH СТА*ия2 впо VOH Стадия3 BnO VoBn
NH2 (Вос)20 / NHBoc NaH.BnBr / NHBoc K2C03BnBr / NHBoc
2S-A 2S-B 2S-C
Стадия 4 ВпО V.ОВп
эфир.НС! / NH2. HCl
2S-D
Синтез (2S,3R)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-гидроксибутановой кислоты (2S-A).
К перемешиваемому раствору L-треонина (50 г, 420 моль) в ТГФ/воде (500 мл/500 мл) добавили NaHCO3 (111 г, 1,05 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь охладили до 0°C и по каплям добавили Вос-ангидрид (137 мл, 630 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, а полученный остаток разбавили водой (100 мл) и подкислили при помощи 1н. HCl (рН~3). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (1 х 200 мл), высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-A (80 г, 87%) в виде густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 12,5 (ш с, 1И), 6,30 (д, J = 8,5 Гц, 1И), 4,50 (ш с, 1И), 4,05-4,02 (м, 1И), 3,88-3,86 (м, 1И), 1,39 (с, 9Н), 1,08 (д, J = 6,0 Гц, 3И); ЖХМС m/z: 218,1 [М+-1].
Синтез (2S,3R)-3-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)бутановой кислоты (2S-B).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-A (40 г, 182 ммоль) в ДМФА (400 мл) по частям добавили 60% NaH (18,2 г, 758 ммоль) при -20°C в атмосфере N2 и перемешивали в течение 2 ч. По каплям добавили бензилбромид (66,8 мл, 0,55 моль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь погасили ледяной водой и промыли диэтиловым эфиром (2 х 250 мл). Отделенный водный слой подкислили раствором лимонной кислоты (100 мл) и экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл). Объединенные органические слои высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-B (45 г, 80%) в виде густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 12,64 (ш с, 1И), 7,34-7,25 (м, 5Н), 6,46 (д, J = 8,5 Гц, 1И), 4,53 (д, J = 11,5 Гц, 1И), 4,39 (д, J = 12,0 Гц, 1И), 4,00-3,98 (м, 2Н), 1,39 (с, 9Н), 1,15 (д, J = 6,0 Гц, 3И).
Синтез (2S,3R)бензил-3-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)бутаноата (2S-C).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-B (45 г, 146 ммоль) в ДМФА (400 мл) добавили K2CO3 (40 г, 292 ммоль) в атмосфере N2 и перемешивали в течение 30 мин. По каплям добавили бензилбромид (21 мл, 175 ммоль) при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную
смесь погасили ледяной водой и экстрагировали диэтиловым эфиром (2 х 250 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-C (48 г, 82%) в виде густого сиропообразного вещества. 1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-ё6): 8 7,37-7,18 (м, 10И), 6,81 (д, J = 9,0 Гц, 1И), 5,08 (с, 2Н), 4,49 (д, J = 12,0 Гц, 1И), 4,32 (д, J = 12,0 Гц, 1И), 4,25-4,22 (м, 1И), 4,01-3,98 (м, 1И), 1,38 (с, 9Н), 1,15 (д, J = 6,0 Гц, 3И). Масса (ИЭР): m/z 399,4 [М++1].
Синтез (2S,3R)бензил-2-амино-3-(бензилокси)бутаноата (2S-D).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-C (48 г, 120 ммоль) в диэтиловом эфире (50 мл) добавили диэтиловый эфир, насыщенный HCl (350 мл), при 0°С и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал растерли с диэтиловым эфиром/н-пентаном (50 мл/50 мл) и высушили под пониженным давлением с получением соединения 2S-D (28 г, 77%) в виде полутвердого вещества (соль HCl).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-ё6): 8 8,59 (с, 2Н), 7,50-7,25 (м, 10И), 5,23 (д, J = 12,5 Гц, 1И), 5,16 (д, J = 12,5 Гц, 1И), 4,54 (д, J = 12,0 Гц, 1И), 4,36 (д, J = 12,0 Гц, 1И), 4,12-4,09 (м, 1И), 4,09-3,99 (м, 1И), 1,29 (д, J = 6,5 Гц, 3И). Масса (ИЭР): m/z 299,4 [М++1].
Схема 2S-I-2
Стадия 1
.HCI
Стадия 2
(В0С)2О
| \ / ^ Стадия 3
ОВп
Стадия 4
NaOH
2S-L
Синтез метилпирролидин-2-карбоксилата (2S-E).
К перемешиваемому раствору L-пролина (50 г, 434 ммоль) в метаноле добавили тионилхлорид (37,5 мл, 521 ммоль) при 0°C и нагревали до 70°C в течение 16 ч. Реакционную смесь довели до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом с получением соединения 2S-E (70 г, 99%) в виде густого сиропообразного вещества (гидрохлоридная соль).
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-ё6): 8 4,15-4,13 (м, 1И), 3,65 (с, 3И), 3,35-3,30 (м, 2Н), 2,23-2,15 (м, 1И), 1,86-1,78 (м, 3И), 1,41 (с, 9Н);
ЖХМС m/z: 129 [М++1].
Синтез 1-трет-бутил-2-метилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-F).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-E (70 г, 422 ммоль) в CH2Cl2 (700 мл) добавили Et3N (183 мл, 1,26 моль) при 0°C и перемешивали в течение 10 мин. Затем добавили Вос-ангидрид (184 мл, 845 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (200 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 200 мл). Объединенный органический слой промыли лимонной кислотой (1 х 150 мл), насыщенным солевым раствором (1 х 200 мл). Органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 50% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-F (80 г, 83%) в виде густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-ё6): 8 4,15-4,13 (м, 1И), 3,65 (с, 3И), 3,35-3,30 (м, 2Н), 2,23-2,15 (м, 1И), 1,86-1,78 (м, 3И), 1,41 (с, 9Н);
ЖХМС m/z: 229 [(М++1)-Вос].
Синтез 1-трет-бутил-2-метил-2-((бензилокси)метил)пирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-G).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-F (25 г, 109 ммоль) в ТГФ (250 мл) добавили LiHMDS (240 мл, 240 ммоль) при -20°C и перемешивали в течение 2 ч. По каплям добавили ВОМ-хлорид (23 мл, 163 ммоль) при -30°C и перемешивали в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакцию погасили водным раствором NH4Cl (100 мл) и экстрагировали EtOAc (2 х 200 мл). Объединенный органический слой промыли водой (2 х 150 мл), затем насыщенным солевым раствором (2 х 100 мл).
Органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 10% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-G (30 г, 79%) в виде густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-с16): 8 7,36-7,22 (м, 5Н), 4,59-4,48 (м, 2Н), 4,02-3,88 (м, 1И), 3,63 (с, 3И), 3,49-3,35 (м, 2Н), 3,34-3,30 (м, 1И), 2,31-2,23 (м, 1И), 2,04-1,89 (м, 2Н), 1,82-1,78 (м, 1Н);
ЖХМС m/z: 349,4 [(М++1)-Вос].
Синтез 2-((бензилокси)метил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2S-H).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-G (30 г, 86 ммоль) в метаноле (70 мл) добавили раствор NaOH (6,88 г в 70 мл Н2О) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 70°C в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) выпарили растворитель из реакционной смеси под пониженным давлением и разбавили смесь EtOAc (2 х 200 мл). Отделенный водный слой подкислили раствором лимонной кислоты (рН~3) и экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл). Объединенный органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного материала, который растерли с н-гексаном с получением соединения 2S-H (25 г, 86,8%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-116): 8 12,35 (ш с, 1И), 7,37-7,29 (м, 5Н), 4,56-4,48 (м, 2Н), 4,06-4,00 (м, 1И), 3,92-3,89 (м, 1И), 3,66-3,45 (м, 1И), 3,37-3,28 (м, 1И), 2,31-2,20 (м, 1И), 2,05-1,97 (м, 1И), 1,87-1,75 (м, 2Н), 1,38 (с, 9Н); ЖХМС m/z: 335,3 [М++1].
Синтез 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2S-I).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-H (25 г, 74 ммоль) в метаноле (150 мл) добавили 10% Pd/C с влажностью 50% (7 г) при комнатной температуре и перемешивали в течение 10 ч в атмосфере Н2. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой цели-та и промыли этот слой метанолом (100 мл). Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-I (15 г, 82,8%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 4,66 (ш с, 1И), 3,96-3,83 (м, 1И), 3,63-3,59 (м, 1И), 3,49-3,41 (м, 1И), 3,34-3,25 (м, 1И), 2,30-2,17 (м, 1И), 1,95-1,72 (м, 3И), 1,38 (с, 9Н).
Масса (ИЭР): m/z 245 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиме-тил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-J).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-I (18 г, 73,4 ммоль) в CH2Cl2 (180 мл) добавили DIPEA (40 мл, 220 ммоль), 2S-D (21,9 г, 73,4 ммоль), HATU (41,8 г, 110 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (50 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-J (20 г, 52%) в виде бледно-желтого густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 8,25-8,12 (м, 1И), 7,31-7,27 (м, 10И), 5,85 (т, J = 4,8 Гц, 1И), 5,14 (с, 2Н), 4,54-4,49 (м, 2Н), 4,31-4,20 (м, 1И), 4,15-4,07 (м, 1И), 3,91-3,50 (м, 1И), 3,52-3,37 (м, 1И), 3,31-3,27 (м, 2Н), 2,35-2,07 (м, 1И), 1,95-1,90 (м, 1И), 1,73-1,52 (м, 2Н), 1,39 (с, 9Н), 1,19 (д, J = 6,4 Гц, 3И). Масса
(ИЭР): m/z 527,4 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]ок-тан-5-карбоксилата (2S-K).
К перемешиваемому раствору трифенилфосфина (24,7 г, 94 ммоль) в ТГФ (100 мл) добавили DIAD (15,3 г, 75 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 30 мин. Медленно добавили соединение 2S-J (20 г, 37,9 ммоль) в ТГФ (10 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 25% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-K (17 г, 88%) в виде бледно-желтого густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 7,33-7,26 (м, 5Н), 7,23-7,18 (м, 5Н), 5,10 (с, 2Н), 4,80-4,73 (м, 2Н), 4,60 (с, 2Н), 4,31 (с, 2Н), 4,05-4,00 (м, 2Н), 1,80-1,68 (м, 4Н), 1,39 (с, 9Н), 1,18 (д, J = 6,0 Гц, 3И). Масса
(ИЭР): m/z 509,4 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гидроксибута-новой кислоты (2S-L).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-K (7 г, 13,7 ммоль) в метаноле (100 мл) добавили 10% Pd/C (4 г) при комнатной температуре и перемешивали в течение 6 ч в атмосфере Н2. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом (50 мл).
Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного материала, который растерли с н-пентаном (50 мл) с получением соединения 2S-L (4 г, 88%) в виде бело
го твердого вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-df,): 8 12,80 (ш с, 1И), 4,78-4,73 (м, 1И), 4,21-4,19 (м, 1И), 4,09 (с, 2Н), 3,55-3,46 (м, 2Н), 2,09-2,05 (м, 2Н), 1,80 (д, J = 7,0 Гц, 1И), 1,38 (с, 9Н), 1,35-1,28 (м, 2Н), 1,17 (д, J = 6,5 Гц, 3И). ЖХМС m/z: 329,6 [М++1].
Схема 2S-I-3
О Стадия 1 О Стадия 2 О Стадия 3
H2N^ Д. *" BocHN. X *" BocHN. X.IU "
1 ОН (Вос)20 ОН NH4CI ^ NH2 ДМФА.DMA
2S-M EDCI 2S-N
BocHN 1 ^ / СтаДНя4 , И СТЭДИЯ5> и м !Р"
"N N s^X^rf (tm)"nV". ТФК. H2N
I NH2OH.HCI Boc' ^ ° ТФК/ДХМ
2S-0 2S-P 2S-Q
Синтез 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)уксусной кислоты (2S-M).
К перемешиваемому раствору глицина (15 г, 200 ммоль) в 1,4-диоксане/воде (150 мл/75 мл) добавили Na2CO3 (53 г, 500 ммоль). Затем медленно добавили Вос-ангидрид (109 мл, 500 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный остаток подкислили (рН~4) раствором лимонной кислоты и экстрагировали водный слой EtOAc (2 х 150 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (2 х 100 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под вакуумом с получением соединения 2S-M (30 г, 85,7%) в виде белого твердого вещества. Полученный материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-df,): 8 12,41 (ш с, 1И), 7,04 (т, J = 5,5 Гц, 1И), 3,57 (д, J = 5,5 Гц, 2Н), 1,37
(с, 9Н).
Синтез трет-бутил(2-амино-2-оксоэтил)карбамата (2S-N).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-M (10 г, 57,14 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) добавили HOBt (15,43 г, 114 ммоль), EDCI-HCl (21,8 г, 114 ммоль), затем NH4Cl (4,54 г, 85,71 ммоль) и DIPEA (30,7 мл, 171 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь промыли водой (2 х 100 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного материала, который очистили колоночной хроматографией на силикаге-ле, элюируя 2% МеОН/CH^b. Затем соединение растерли с эфиром (25 мл) и отфильтровали выпавшее в осадок твердое вещество с получением соединения 2S-N (2 г, 20%) в виде белого твердого вещества. 1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 7,52 (ш с, 1И), 7,17 (ш с, 1И), 3,46 (д, J = 6,5 Гц, 2Н), 1,38 (с, 9Н).
Синтез (E)-трет-бутил-2-(((диметиламино)метилен)амино)-2-оксоэтил)карбамата (2S-O).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-N (7 г, 40,22 ммоль) в ТГФ (70 мл) добавили DMF-DMA (10,7 мл, 80,44 ммоль) при комнатной температуре и нагревали до 80°C в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-O (9 г, неочищенное) в виде коричневого сиропообразного вещества.
Полученный неочищенный материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 6,72 (ш с, 1И), 4,35 (с, 1И), 3,64 (д, J = 5,5 Гц, 2Н), 3,09 (с, 1И), 1,42
(с, 9Н).
Масса (ИЭР): m/z 230,2 [М++1].
Синтез трет-бутил((1,2,4-оксадиазол-5-ил)метил)карбамата (2S-P).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-O (9 г (неочищенное), 39,30 ммоль) в этаноле (80 мл) добавили гидроксиламина гидрохлорид (5,45 г, 78,60 ммоль) в атмосфере N2. Реакционную смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворитель выпарили под пониженным давлением, а неочищенный остаток разбавили водой (75 мл). Водный слой экстрагировали ДХМ (3 х 100 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (1 х 100 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали растворитель под пониженным давлением с получением неочищенного материала, который очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 25% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-P (4 г, 51%).
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 8,90 (с, 1И), 7,64 (с, 1И), 4,44 (с, 2Н), 1,39 (с, 9Н). ЖХМС m/z: 198,4 [ММ].
Синтез (1,2,4-оксадиазол-5-ил)метанамина (2S-Q).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-P (1,1 г, 5,52 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавляли триф-торуксусную кислоту (2,1 мл, 27,63 ммоль) при 0°C в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток растерли с эфиром (20 мл) с получением соединения 2S-Q (850 мг, 72,6%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-do): 8 9,13 (с, 1И), 8,90 (ш с, 2Н), 4,56 (с, 2Н); ЖХМС (ИЭР): 100,4 [М++1].
Схема 2S-I-4
О Стадия-1 О Стадия-2 О Стадия-3
CIH.H2N. Л-,/ " BocHN.il/ " ВОСНМ-^АМИМИ "
^ ° (Вос)20 ^ 0 NH2NH2.H20 ^ NHNH2 CH(OEt)3
2S-R 2S-S
N'N Стадия1-4
BOCHN ^JLj "
^ U EtOAc.HCI
2S-T
2S-U
Синтез метил(трет-бутоксикарбонил)глицината (2S-R).
К перемешиваемому раствору гидрохлорида метилового эфира глицина (50 г, 400 ммоль) в 1,4-диоксане/воде (300 мл/200 мл) добавили Na2CO3 (84,8 г, 800 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную смесь охладили до 0°C и по каплям добавили Вос-ангидрид (104 мл, 480 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, а полученный остаток разбавили водой (100 мл) и экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (1 х 200 мл) и высушили органический слой над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-R (64 г, 84%) в виде густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-do): 8 7,19 (т, J = 5,5 Гц, 1И), 3,67 (д, J = 6,0 Гц, 2Н), 3,62 (с, 3И), 1,38 (с,
9Н).
ЖХМС m/z: 190,2 [М++1].
Синтез трет-бутил(2-гидразинил-2-оксоэтил)карбамата (2S-S).
К раствору соединения 2S-R (20 г, 105 ммоль) в EtOH (100 мл) добавили гидразин-гидрат (15,8 г, 315 ммоль) при комнатной температуре, а затем перемешивали при 100°C в течение 6 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) этанол выпарили под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал растерли с н-пентаном/диэтиловым эфиром (20 мл/20 мл) с получением соединения 2S-S в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-do): 8 8,91 (с, 1И), 6,88 (т, J = 5,5 Гц, 1И), 4,16 (с, 2Н), 3,47 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 1,37 (с, 9Н); ЖХМС m/z: 190,2 [М++1].
Синтез трет-бутил((1,3,4-оксадиазол-2-ил)метил)карбамата (2S-T).
К раствору соединения 2S-S (14 г, 74 ммоль) в триэтилортоформиате (140 мл) добавили p-TSA (каталитическое количество, 140 мг) при комнатной температуре, а затем перемешивали при 80 °C в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) триэтилортоформиат выпарили под пониженным давлением. Неочищенный остаток очистили колоночной хроматографией, элюируя 20% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-T (6,1 г, 41,5%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-do): 8 10,74 (с, 1И), 7,45 (с, 1И), 4,03 (с, 2Н), 1,47 (с, 9Н).
ЖХМС m/z: 200,2 [М++1].
Синтез (1,3,4-оксадиазол-2-ил)метанамина (2S-U).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-T (5 г, 25 ммоль) в EtOAc (10 мл) добавили EtOAc, насыщенный HCl (60 мл), при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал растерли с диэтиловым эфиром/н-пентаном (25 мл/25 мл) и высушили под пониженным давлением с получением соединения 2S-U (3 г, 88,7%) в виде грязновато-белого твердого вещества (соль HCl).
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-do): 8 9,55 (ш с, 2Н), 7,99 (с, 1И), 3,90 (с, 2Н).
ЖХМС m/z: 100 [М++1].
Схема 2S-I-7
0v л 0 0
но VOH стадияА но VOH стадия В ВП0 VOH
NH2 (Вос)20 NHBoc NaH.BnBr NHBoc
2S-Z 2S-AA
О " гч 0
Стадия С Вп0 ^ОВп Стадия D BnO VOBn
K2C03BnBr NHBoc ЭФИР-НС| NH2. HCl
2S-AB 2S-AC
Синтез (S)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3-гидроксипропановой кислоты (2S-Z).
К перемешиваемому раствору L-серина (76 г, 723 ммоль) в 1,4 диоксанеЛ-^O (350 мл/300 мл) добавили NaOH (61 г, 1,51 моль), Вос-ангидрид (190 мл, 868 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь подкислили при помощи 2н. HCl (рН~4) и экстрагировали EtOAc (5х500 мл). Объединенные органические экстракты высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-Z (100 г, 67,5%) в виде желтого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCb): 8 6,54 (ш с, 1И), 5,77 (ш с, 1И), 4,35-4,04 (м, 1И), 3,87-3,84 (м, 2Н), 1,45
(с, 9Н).
Синтез (S)-3-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропановой кислоты (2S-AA).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-Z (50 г, 245 ммоль) в ДМФА (650 мл) добавили NaH (60%) (23 г, 563 ммоль) при -15°C и перемешивали в течение 2 ч. Медленно добавили бензилбромид (32,8 мл, 269 ммоль). Реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь вылили в ледяную воду (200 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (2 х 250 мл). Водный слой подкислили лимонной кислотой (рН~4) и экстрагировали EtOAc (2 х 500 мл). Объединенные органические слои промыли водой (3 х 250 мл). Органические экстракты высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AA (54 г, 75%) в виде коричневого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCb): 8 7,32-7,26 (м, 5Н), 5,43 (д, J = 7,6 Гц, 1И), 4,70-4,46 (м, 1И), 4,45 (с, 2Н), 4,13-3,91 (м, 1И), 3,73-3,70 (м, 1И), 1,44 (с, 9Н).
Синтез (S)-бензил-3-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноата ^S-АВ).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AA (36 г, 122 ммоль) в ДМФА (250 мл) добавили Na2CO3 (20 г, 183 ммоль) при 0°C и медленно добавили бензилбромид (18 мл, 146 ммоль). Реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь вылили в ледяную воду (200 мл) и экстрагировали диэтило-вым эфиром (2 х 250 мл). Объединенные органические слои промыли водой (3 х 250 мл).
Органические экстракты высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AB (42 г, 91%) в виде коричневого сиропообразного вещества, которое непосредственно использовали на следующей стадии без какой-либо очистки.
Синтез ^)-бензил-2-амино-3-(бензилокси)пропаноата гидрохлорида (2S-AC).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AB (10 г, 25,9 ммоль) в эфире, насыщенном HCl (50 мл), добавили при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Полученный осадок отфильтровали и растерли с диэтиловым эфиром (2 х 100 мл). Отфильтрованное вещество высушили под вакуумом с получением соединения 2S-AC (5 г, 60%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 8,66 (с, 2Н), 7,38-7,27 (м, 10И), 5,29-5,22 (м, 2Н), 4,57-4,44 (м, 3И), 3,91-3,81 (м, 2Н).
Схема 2S-I-8
он он о о
rVnH^ти C> vK-A0BnOCN- < °ВПстадия3. rYV. <он
N Д 2S-AC.HATU Ч I Г П DIAD,PPh3 Y ^ОВп Pd-C/H2 N \ ^ОН
Вос° Воси ^ОВп Вос0 вое О
2S-I 2S-AD 2S-AE 2дд(-
Синтез трет-бутил-2-(((S)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-AD).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-I (5 г, 20,4 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавили DIPEA (10,7 мл, 61,2 ммоль), 2S-AC (5,8 г, 20,4 ммоль), HATU (11,6 г, 30,6 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Объединенный органический слой
промыли лимонной кислотой (1 х 100 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 100 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элю-ируя 50% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-AD (8 г, 76,5%) в виде желтого густого сиропообразного вещества. 1И-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 8 7,33-7,24 (м, 10И), 5,23-5,11 (м, 2Н), 4,72-4,66 (м, 2Н), 4,50-4,44 (м, 1И), 4,18-3,91 (м, 2Н), 3,75-3,70 (м, 2Н), 3,65-3,40 (м, 2Н), 2,34-2,03 (м, 2Н), 1,81-1,78 (м, 2Н), 1,41 (с, 9Н); Масса (ИЭР): m/z 512,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((S)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-AE).
К перемешиваемому раствору трифенилфосфина (640 мг, 2,44 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавили DIAD (392 мг, 1,94 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 15 мин, затем медленно добавили соединение 2S-AD (500 мг, 0,97 ммоль) в ТГФ (5 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-AE (450 мг, 93%) в виде желтой жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 8 7,34-7,27 (м, 10И), 5,25-5,14 (м, 2Н), 4,78-4,73 (м, 1И), 4,70-4,42 (м, 2Н), 4,04-3,98 (м, 1И), 3,93-3,78 (м, 1И), 3,89-3,78 (м, 1И), 3,76-3,68 (м, 1И), 3,45-3,35 (м, 2Н), 2,20-2,09 (м, 2Н), 1,90-1,78 (м, 2Н), 1,46 (с, 9Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 495,5 [М++1].
Синтез 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2S-AF).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AE (500 мг, 1,01 ммоль) в метаноле (25 мл) добавили 10% Pd/C влажностью 50% (250 мг) при комнатной температуре и перемешивали в течение 24 ч в атмосфере Н2. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом (20 мл). Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AF (400 мг, неочищенное) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 8 4,92-4,87 (м, 1И), 4,28-4,07 (м, 3И), 3,63-3,60 (м, 1И), 3,55-3,40 (м, 2Н), 2,30-2,25 (м, 2Н), 1,95-1,87 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н). ЖХМС: 315,3 [М+1].
Схема 2S-I-9
H2N. J Стадия 1 И2^.М Стадия 2 HN J? Стадия 3 HN," Стадия 4 H2N У
--4 Стадия 1 n2IN. if Стадия 2 HN Jf Стадия 3 HN V Стадия 4 H2N л-
OMe
он soc|2 Ън см S)H TBDPS ^0TBDps Pd^ VTBDPS
2S-AG 2S-AH 2S-AI 2S'M
Синтез ^)-метил-2-амино-3-гидроксипропаноата (2S-AG).
К перемешиваемому раствору L-серина (40 г, 0,38 моль) в метаноле (300 мл) по каплям добавили добавили SOCl2 (33,6 мл, 0,45 моль) при 0°C и перемешивали в течение 1 ч. Полученную реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 24 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь нагрели до комнатной температуры, и концентрировали под вакуумом, и декантировали с н-гексаном (2 х 200 мл) с получением соединения 2S-AG (59,18 г, неочищенное).
1И-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): 8 8,62 (с, 3И), 4,08 (д, J = 3,2 Гц, 1И), 3,83 (д, J = 3,6 Гц, 2Н), 3,78 (с,
3И).
ЖХМС, m/z: 120,2 [M+-1].
Синтез ^)-метил-2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-гидроксипропаноата (2S-AH).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AG (40 г, 0,33 моль) в 1,4-диоксане (300 мл) и воде (100 мл) добавили Na2CO3 (71,18 г, 0,67 моль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь охладили до 0°C, по каплям добавили бензилхлорформиат (68,5 г, 0,40 моль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 8 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили EtOAc (200 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 х 200 мл). Отделенные органические экстракты промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-AH (53 г, 62%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 7,49 (д, J = 8 Гц, 1И), 7,37-7,29 (м, 5Н), 5,04 (с, 2 Н), 4,93 (т, J = 6 Гц, 1И), 4,18-4,13 (м, 1И), 3,78 (с, 3И), 3,67-3,56 (м, 2Н).
Синтез (S)-метил-2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-((трет-бутилдифенилсилил)окси)пропаноата
(2S-AI).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AH (20 г, 79,20 ммоль) в ДХМ (700 мл) добавили имидазол (16 г, 237,6 мммоль) при 0°C, затем TBDPS (25,9 г, 95,04 ммоль) в атмосфере N2 и перемеши-
вали при комнатной температуре в течение 8 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали водный слой ДХМ (2 х 200 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-AI (25 г, 64%).
1И-ЯМР: (500 МГц, CDCl3): 8 7,23-7,68 (м, 1И), 7,58 (д, J = 7 Гц, 3И), 7,44-7,37 (м, 9Н), 7,34 (д, J = 7,5 Гц, 2Н), 5,65 (д, J = 9 Гц, 1И), 5,12 (д, J = 2, 2Н), 4,45 (д, J = 9 Гц, 1И), 4,10-4,07 (м, 1И), 3,91-3,88 (м, 1И), 3,74 (с, 3И), 1,04 (с, 9Н); ЖХМС (m/z): 492,1 [М+-1]
Синтез ^)-метил-2-амино-3-((трет-бутилдифенилсилил)окси)пропаноата (2S-AJ). К перемешиваемому раствору соединения 2S-AI (25 г, 51,12 ммоль) в этаноле (250 мл) добавили 10% Pd/C с влажностью 50% (15 г) при комнатной температуре и перемешивали в течение 8 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой этанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AJ (18 г, 97%) в виде желтой жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 7,66-7,61 (м, 4Н), 7,43-7,36 (м, 6Н), 4,00-3,97 (м, 2Н), 3,74 (с, 3И), 3,64 (т, J = 4 Гц, 1И), 2,65 (с, 2Н), 1,04 (с, 9Н).
ЖХМС m/z: 358 [М+-1].
Схема 2S-I-10
N' У°Н 2S-D.EDCI "V IT "Г ^ОВп 0|Щ pphs \\ V"OBn Pd.C/H2
вое' ё lp ;,,0Bn 1 - 1
2S-AN 2S-AO 2S-AP 2S-AQ
Синтез этилпирролидин-2-карбоксилата гидрохлорида (2S-AK).
К перемешиваемому раствору L-пролина (110 г, 956,5 ммоль) в этаноле добавили тионилхлорид (141 мл, 1911,3 ммоль) и кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. Реакционную смесь довели до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом с получением соединения 2S-AK в виде гидрохлоридной соли (170 г, 99%).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 4,15-4,10 (м, 2Н), 3,68-3,62 (м, 2Н), 3,59-3,47 (м, 2Н), 2,49-2,37 (м, 1И), 2,27-2,05 (м, 3И), 1,18 (т, J = 3,6 Гц, 3И).
ЖХМС, m/z: 143 [М++1].
Синтез 1-трет-бутил-2-этилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-AL).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AK (70 г, 0,391 моль) в CH2Cl2 (700 мл) добавили Et3N (170,7 мл, 1,22 моль), затем Вос-ангидрид (133 г, 0,61 моль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 200 мл). Органический слой промыли водой (1 х 150 мл), насыщенным солевым раствором (1 х 200 мл), высушили над Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AL (90 г, 90%) в виде густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 4,15-4,10 (м, 2Н), 4,09-4,02 (м, 1И), 3,36-3,29 (м, 2Н), 2,25-2,13 (м, 1И), 1,87-1,76 (м, 3И), 1,40 (с, 9Н), 1,18 (т, J = 3,6 Гц, 3И). ЖХМС, m/z: 144 [(М++1)-ВОС]. ВЭЖХ: 96,11%.
Синтез 1-трет-бутил-2-этил-2-(1-гидроксиэтил)пирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S- АМ).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AL (5 г, 20,5 ммоль) в ТГФ (50 мл) добавили LiHMDS (20,3 мл, 20,5 ммоль) при -20°C и перемешивали в течение 1 ч. По каплям добавили ацетальдегид (1,2 мл, 20,5 ммоль) при -20°C и перемешивали в течение 1 ч при -20°C. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакцию погасили водным раствором NH4Cl и экстрагировали EtOAc (1 х 50 мл). Отделенный органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 10% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-AM (1,8 г, 30%) в виде бледно-желтого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 5,10 (д, J = 8,5 Гц, 1И), 4,54-4,36 (м, 2Н), 4,05-3,99 (м, 2Н), 3,603,49 (м, 1И), 1,97-1,74 (м, 4Н), 1,40 (с, 9Н), 1,18, 1,15 (дд, J = 7,5 Гц, 6,5 Гц, 3И), 0,96 (д, J=9,5 Гц, 3И).
ЖХМС, m/z: 188 [(М++1)-Вос].
Синтез 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-(1-гидроксиэтил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2S-AN).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AM (10 г, 34,8 ммоль) в метаноле (30 мл) добавили NaOH (2,7 г, 69,6 ммоль), Н2О/ТГФ (30 мл/30 мл)) при 0°C. Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 5 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворитель выпарили под пониженным давлением. Водный слой подкислили раствором лимонной кислоты и экстрагировали EtOAc (2 х 100 мл). Отделенный органический слой промыли водой (1 х 50 мл), высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 2S-AN (4,8 г, 53,3%) в виде коричневого вязкого вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 4,60-4,54 (м, 1И), 3,98 (д, J = 10,0 Гц, 1И), 3,90-3,77 (м, 2Н), 3,443,34 (м, 1И), 2,01-1,68 (м, 4Н), 1,40 (с, 9Н), 1,26 (д, J = 10,0 Гц, 3И); ЖХМС, m/z: 258 (М+-1).
ВЭЖХ (чистота): 91,7%.
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-13-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(1 -гидроксиэ-тил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-AO).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AN (2,0 г, 7,72 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавили DI-PEA (4,2 мл, 22,4 ммоль), EDCI-HCl (2,2 г, 11,5 ммоль), затем HOBt (1,5 г, 11,5 ммоль), соединение D (2,8 г, 8,35 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (30 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 50 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (2 х 50 мл), высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 25% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-AO (1,5 г, 36%) в виде бесцветной жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 8,47 (т, J = 8,8 Гц, 1И), 7,31-7,19 (м, 10И), 5,73-5,58 (м, 1И), 5,18 (с, 2Н), 4,64 (с, 2Н), 4,60-4,49 (м, 1И), 4,29 (д, J = 12,0 Гц, 1И), 4,15-4,12 (м, 1И), 3,59-3,59 (м, 1И), 3,24-3,13 (м, 1И), 1,71-1,60 (м, 2Н), 1,43-1,38 (м, 2Н), 1,35 (с, 9Н), 1,18 (д, J = 6,0 Гц, 3И), 1,04 (д, J = 6,4 Гц, 3И).
Масса (ИЭР): m/z 540 [М--1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)-1-метил-3-оксо-2,5-диазаспи-ро [3.4] октан-5 -карбоксилата (2S-AP).
К перемешиваемому раствору трифенилфосфина (1,45 г, 5,53 ммоль) в ТГФ (30 мл) добавили DIAD (1,12 г, 5,53 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 30 мин. Медленно добавили соединение 2S-AO (1,5 г, 2,77 ммоль) в ТГФ (10 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-AP (800 мг, 57%) в виде бледно-желтого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 7,33-7,18 (м, 10И), 5,07 (с, 2Н), 4,61 (с, 2Н), 4,38-4,31 (м, 1И), 3,773,75 (м, 1И), 3,28-3,24 (м, 1И), 2,67-2,66 (м, 1И), 2,22-2,12 (м, 1И), 1,98-1,92 (м, 3И), 1,72-1,60 (м, 1И), 1,40 (с, 9Н), 1,18 (д, J = 5,6 Гц, 3И), 1,13 (д, J = 6,4 Гц, 3И). Масса (ИЭР): m/z 523 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-1-метил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гид-роксибутановой кислоты (2S-AQ).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AP (900 мг) в метаноле (30 мл) добавили 10% Pd/C (300 мг) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли метанолом (10 мл). Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AQ (480 мг, 82%) в виде желтого густого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 12,80 (ш с, 1И), 5,11-4,96 (м, 1И), 4,83-4,04 (м, 3И), 3,40-3,35 (м, 1И), 2,11 (с, 3И), 2,10-2,03 (м, 2Н), 1,46 (с, 9Н), 1,43-1,39 (м, 6Н).
ЖХМС: 342 [М--1].
Синтез этил-5-оксопирролидин-2-карбоксилата (2S-AR).
К перемешиваемому раствору 5-оксопирролидин-2-карбоновой кислоты (10 г, 77,4 ммоль) в этаноле (100 мл) добавили тионилхлорид (6,7 мл, 92,9 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворители удалили из реакционной смеси под вакуумом. Остаток разбавили EtOAc (50 мл) и перемешивали над K2CO3. Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения 2S-AR (9 г, 74%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 7,98 (ш с, 1И), 4,16 (т, 3И), 2,37-2,30 (м, 1И), 2,15 (к, 2Н), 2,03-1,97
(м, 1И), 1,22 (т, 3И).
ЖХМС, m/z: 157,9 [М++1].
Синтез 1-трет-бутил-2-этил-5-оксопирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-AS).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AR (9 г, 57,3 ммоль) в CH2Cl2 (90 мл) добавили DMAP (7,0 г, 57,3 ммоль), затем Et3N (15,9 мл, 114,6 ммоль) и Вос-ангидрид (36,7 мл, 171,9 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавили CH2Cl2 (50 мл) и промыли 1н. водным раствором HCl, затем насыщенным солевым раствором. Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией, элюируя 50% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-AS (12 г, 82%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 4,61 (дд, 1И), 4,19 (к, 2Н), 2,46-2,40 (м, 2Н), 2,37-2,25 (м, 1И), 1,911,85 (м, 1И), 1,42 (с, 9Н), 1,22 (т, 3И).
Синтез этил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5-оксогексаноата (2S-AT).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AS (12 г, 46,6 ммоль) в ТГФ (120 мл) в инертной атмосфере добавили MeMgBr (3М в эфире) (20,2 мл, 60,6 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь погасили водным раствором NH4Cl и экстрагировали водный слой EtOAc (2 х 200 мл). Объединенные органические экстракты высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-AT (10 г, 79%).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 5,14 (ш с, 1И), 4,23 (к, 2Н), 2,62-2,47 (м, 2Н), 2,17 (с, 4Н), 1,91-1,82 (м, 1И), 1,45 (с, 10И), 1,26 (т, 3И).
Синтез этил-5-метилпирролидин-2-карбоксилата (2S-AU и 2S-AV).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AT (10 г, 36,7 ммоль) в CH2Cl2 (100 мл) добавили ТФК (14,89 мл, 194,6 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-AU. Полученный материал растворили в этаноле (100 мл) и добавили 10% Pd/C (влажность 50%, 3 г) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2 (баллонное давление) в течение 16 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и концентрировали фильтрат под пониенным давлением с получением соединения 2S-AV (15 г, неочищенное). Полученный материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС, m/z: 158,1 [М++1].
Синтез 1-трет-бутил-2-этил-5-метилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-AW) К перемешиваемому
раствору соединения 2S-AV (30 г, 191 ммоль) в CH2Cl2 (150 мл) добавили DMAP (23,3 г, 191 ммоль), затем Et3N (79,8 мл, 573 ммоль) и Вос-ангидрид (104 мл, 477 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавили CH2Cl2 (50 мл) и промыли водой (2 х 150 мл), затем насыщенным солевым раствором. Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией, элюируя 6% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-AW (30 г, 61,22%) в виде бледно-желтой жидкости.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-dfO: 8 4,13-3,86 (м, 4Н), 2,15 (д, J = 3,5 Гц, 1И), 1,99-1,82 (м, 2Н), 1,52 (т, J = 4,5 Гц, 1И), 1,38 (с, 9Н), 1,24 (т, J = 5,5 Гц, 3И), 1,16 (д, J = 6,5 Гц, 3И).
ЖХМС, m/z: 258 [(М++1).
Синтез 1-трет-бутил-2-этил-2-((бензилокси)метил)-5-метилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-
AX).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AW (8,0 г, 31,12 ммоль) в ТГФ (70 мл) добавили LiHMDS (59 мл, 41,72 ммоль) при -78°C и перемешивали в течение 2 ч. По каплям добавили ВОМ-хлорид (6,56 мл, 41,72 ммоль) добавили и перемешивали в течение 2 ч при -30°C. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакцию погасили водным раствором NH4Cl (20 мл) и экстрагировали ДХМ (30 мл). Отделенный органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного материала, который очистили колоночной хроматографией, элюируя 10% EtOAc в гекса-не, с получением соединения 2S-AX (11 г, 94,2%) в виде бледно-желтой жидкости.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-16): 8 7,33-7,25 (м, 5Н), 4,38 (д, J = 10,5 Гц, 2Н), 4,08-3,98 (м, 1И), 3,88 (д, J = 9,5 Гц, 2Н), 2,20-2,08 (м, 2Н), 1,38 (с, 9Н), 1,37-1,29 (м, 4Н), 1,19 (т, J = 7,5 Гц, 3И), 1,14-1,10 (м,
3И).
ЖХМС, m/z: 378 (М++1).
Синтез 2-((бензилокси)метил)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-2-карбоновой кислоты (2S-AY).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AX (11 г, 29,17 ммоль) в Qr^OH/ТГФ (22 мл/20 мл) добавили 2н. раствор NaOH (33 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 65 °C в течение 8 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворитель выпарили из реакционной смеси под пониженным давлением и разбавили EtOAc (50 мл). Водный слой подкислили раствором лимонной кислоты и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Отделенный органический слой промыли водой (1 х 50 мл), высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 2S-AY (8 г, 80%).
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-16): 8 12,58 (с, 1И), 7,34-7,28 (м, 5Н), 4,54-4,47 (м, 2Н), 4,05-3,87 (м, 2Н), 3,70-3,62 (м, 1И), 2,28-2,08 (м, 3И), 1,46-1,37 (м, 1И), 1,28 (с, 9Н).
ЖХМС, m/z: 350 [М++1].
Синтез 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-(гидроксиметил)-5-метилпирролидин-2-карбоновой кислоты (2S-AZ).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AY (8 г, 1,45 ммоль) в метаноле (40 мл) добавили 10%Pd/C (4 г) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере И2 (баллонное давление) при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном с получением соединения 2S-AZ (4,5 г, 75,2%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-16): 8 12,37 (ш с, 1И), 4,61 (ш с, 1И), 3,95-3,85 (м, 3И), 2,18-2,06 (м, 3И), 1,44-1,41 (м, 1И), 1,38 (с, 9Н), 1,09 (д, J = 6,0 Гц, 3И).
ЖХМС (ИЭР): m/z 260 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиме-тил)-5-метилпирролидин-1-карбоксилата (2S-BA).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AZ (3 г, 11,58 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (6 мл, 34,7 ммоль), промежуточное соединение D (5 г, 13,8 ммоль), затем EDCI (2,7 г, 13,8 ммоль), НОВТ (1,9 г, 13,8 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO3 (1 х 50 мл), 2н. раствором HCl (30 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 40 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией с получением соединения 2S-BA (2 г, 32,5%) в виде бледно-желтой жидкости.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-16): 8 7,30-7,17 (м, 10И), 5,16-5,10 (м, 2Н), 4,50 (т, J = 5,2 Гц, 2Н), 4,28 (т, J = 12,0 Гц, 1И), 4,13-4,07 (м, 1И), 3,95 (с, 2Н), 2,10-1,85 (м, 4Н), 1,40-1,35 (м, 1И), 1,30 (с, 9Н), 1,18, 1,16
(дд, J = 6,4 Гц, 6Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 440,3 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)-6-метил-1 -оксо-2,5-диазаспи
ро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-BB).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BA (1,0 г, 1,85 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавили трифе-нилфосфин (0,935 г, 4,62 ммоль) и DIAD (0,75 г, 3,70 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-BB (0,8 г, 51%) в виде желтой жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 7,30-7,17 (м, 10И), 5,17 (с, 2Н), 4,79, 4,76 (дд, J = 6,0 Гц, 2Н), 4,73 (с, 2Н), 4,31-4,18 (м, 2Н), 3,84 (т, J = 6,8 Гц, 2Н), 2,12 (т, J = 6,8 Гц, 1И), 1,98-1,91 (м, 2Н), 1,39 (с, 9Н), 1,32, 1,25 (дд, J = 6,0 Гц, 6,4 Гц, 3И), 1,18, 1,09 (дд, J=6,0 Гц, 6,4 Гц, 3И).
ЖХМС (ИЭР): m/z 523,3 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-6-метил-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гид-роксибутановой кислоты (2S-BC).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BB (1 г, 1,91 ммоль) в метаноле (20 мл) добавили 10%Pd/C (400 мг) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2 (баллонное давление) при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-BC (0,80 г, неочищенное) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 12,75 (ш с, 1И), 4,80-4,73 (м, 3И), 4,20-4,05 (м, 2Н), 3,40, 3,36 (дд, J=6,8 Гц, 1И), 2,21-2,13 (м, 1И), 2,06-1,99 (м, 2Н), 1,53 (т, J=6,0 Гц, 1И), 1,40 (с, 9Н), 1,11, 1,10 (дд, J=4,8
Гц, 5,2 Гц, 6Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 343,3 [М++1].
Схема 2S-I-12
Синтез 1-трет-бутил-2-этил-2-(1-гидроксиэтил)-5-метилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2S-BD).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AW (20 г, 77,8 ммоль) в ТГФ (200 мл) по каплям добавили LiHMDS (84 мл, 155 ммоль) -20°C и перемешивали в течение 30 мин. По каплям добавили аце-тальдегид (8,77 мл, 155 ммоль) добавили и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакцию погасили водным раствором NH4Cl (100 мл) и экстрагировали ДХМ (2 х 150 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (1 х 150 мл). Отделенный органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного материала, который очистили колоночной хроматографией, элюируя 30% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-BD (16 г, 23,1%) в виде бесцветного сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 7,33-7,25 (м, 5Н),4,38 (д, J = 10,5 Гц, 2Н), 4,08-3,98 (м, 1И), 3,88 (д, J = 9,5 Гц, 2Н), 2,20-2,08 (м, 2Н), 1,38 (с, 9Н), 1,37-1,29 (м, 4Н), 1,19 (т, J = 7,5 Гц, 3И), 1,14-1,10 (м, 3И).
ЖХМС m/z: 378 (М++1).
Синтез 1-(трет-бутоксикарбонил)-2-(1-гидроксиэтил)-5-метилпирролидин-2-карбоновой кислоты
(2S-BE).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BD (15 г, 49 ммоль) в EtOH/ТГФ (10 мл/20 мл) добавили NaOH (3,98 г, 99 ммоль) в воде (10 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 90°C в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворитель выпарили из реакционной смеси под пониженным давлением и подкислили смесь лимонной кислотой (рН~4).
Водный слой экстрагировали ДХМ (2 х 200 мл) и промыли объединенный органический слой насыщенным солевым раствором (1 х 150 мл). Отделенный органический слой высушили над Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 40% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-BE (8,2 г, 60,7%) в виде коричневого сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 12,15 (ш с, 2Н), 4,54-4,50 (м, 1И), 4,03-4,02 (м, 1И), 2,17-1,77 (м,
3И), 1,41 (с, 9Н), 1,39-1,09 (м, 3И), 0,99-0,94 (м, 3И). ЖХМС m/z: 272,4 [ММ].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)- 1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(1 -гидроксиэт-ил)-5-метилпирролидин-1-карбоксилата (2S-BF).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BE (8 г, 29,3 ммоль) в ДХМ (100 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (15,12 мл, 87 ммоль), 2S-D (12,13 г, 40,6 ммоль), затем HATU (16,5 г, 43,5 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (1 х 75 мл), насыщенным солевым раствором (1 х 100 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 40% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-BF (11 г, 68,4%) в виде бледно-желтой жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСОМ6): 8 7,31-7,19 (м, 10И), 5,14-5,06 (м, 2Н), 4,59-4,48 (м, 3И), 4,31-4,26 (м, 1И), 4,05-4,00 (м, 2Н), 1,98-1,89 (м, 2Н), 1,41 (с, 9Н), 1,39-1,35 (м, 3И), 1,28-1,17 (м, 6Н), 1,16-1,00 (м, 3И).
ЖХМС (ИЭР): 555,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксобутан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диаза-спиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-BG).
К перемешиваемому раствору трифенилфосфина (3,5 г, 13,5 ммоль) в ТГФ (10 мл) по частям добавили DIAD (2,72 г, 13,5 ммоль) и перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре. Медленно добавили соединение 2S-BF (3 г, 5,4 ммоль) в ТГФ (10 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 3 ч. После расходования исходного материала (по ЖХМС) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силика-геле, элюируя 20% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-BG (2,5 г, 86,5%) в виде желтой жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 7,39-7,18 (м, 10И), 5,19-5,10 (м, 2Н), 4,78-4,49 (м, 3И), 4,34-4,25 (м, 2Н), 3,85-3,76 (м, 1И), 2,10-1,69 (м, 4Н), 1,40 (с,9Н), 1,35-1,26 (м, 3И), 1,18-1,12 (м, 6Н).
Синтез (2S,3R)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гидроксибутановой кислоты (2S-BH).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BG (2 г, 3,72 ммоль) в метаноле (20 мл) добавили 10% сухой Pd/C (200 мг) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2 при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом (10 мл). Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-BH (1,8 г, 60,4%) в виде желтого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 12,72 (ш с, 1И), 5,11-4,97 (м, 1И), 4,30-4,15 (м,2Н), 3,91-3,76 (м, 2Н), 2,18-1,90 (м, 3И), 1,40 (с, 9Н), 1,37-1,29 (м, 1И), 1,26-1,22 (м, 3И), 1,21-1,10 (м, 6Н). ЖХМС (ИЭР): 357,5 [М++1].
Схема 2S-I-13
Вое Вое Восп О
HN 9 СтадиИ HN 9 Стадия2 HN Р Стадия3 CIHH2N. "
ОН Г Н-к ~ J N^. *"
пирролидин -/ \ (CHoCO)-jO I \ диоксан.НС! / >
ОН ОНЧ/ ОАсЧУ ОАсЧ/
2S-A 2S-BI 2S-BJ 2S-BK
Синтез трет-бутил-((2S,3R)-3-гидрокси-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)карбамата (2S-BI).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-A (13 г, 59,36 ммоль) в ДМФА (65 мл) добавили EDCI-HCl (12,5 г, 65,2 ммоль), затем HOBt (8,8 г, 65,2 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 5 мин к реакционной смеси добавили DIPEA (30,6 мл, 0,17 моль), затем пирролидин (4,6 г, 65,2 ммоль) и продолжали перемешивание еще 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промыли водой и экстрагировали EtOAc (2 х 100 мл). Органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией с получением соединения 2S-BI (5 г, 31%).
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 5,51 (ш с, 1И), 4,32 (д, 1И), 4,15-4,10 (м, 1И), 3,77-3,74 (м, 1И), 3,553,46 (м, 3И), 1,99-1,94 (м, 2Н), 1,91-1,85 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н), 1,26 (т, 1И), 1,29 (д, 3И).
Синтез (2R,3S)-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-оксо-4-(пирролидин-1-ил)бутан-2-илацетата
(2S-BJ и 2S-BK).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BI (4 г, 14,7 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл) добавили Et3N (5,1 мл, 36,7 ммоль), затем уксусный ангидрид (1,7 г, 17,6 ммоль) и каталитическое количество DMAP при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой и отделили органический слой. Органический слой промыли водой, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под по
ниженным давлением. Полученный неочищенный остаток очистили колоночной хроматографией на си-ликагеле с получением соединения 2S-BJ. Добавили 1,4-диоксан/HCl (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и промыли полученный материал Et2O (2х15 мл) с получением соединения 2S-BK (3,5 г, 97%) в виде соли HCl.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-do) (ротамеры): 8 8,49 (ш с, 3И), 8,15 (ш с, 1И), 5,14-5,10 (м, 1И), 4,264,22 (м, 1И), 3,97-3,95 (м, 1И), 3,59 (с, 2Н), 2,09 (с, 3И), 1,98 (с, 2Н), 1,87-1,80 (м, 2Н), 1,26 (д, 3И). ЖХМС (ИЭР): 215,1 [М++1].
Схема 2S-I-14
Вое Вое О
HN 9 Стадия 1 HN 9 Стадия 2 H2N-^
гън -- " ^ГЛ
\ EDCI I \ эфир.НС! / )
ОВп ОВп4-/ ОВп^^
2S-B 2S-BL 2S-BM
Синтез трет-бутил-((2S,3R)-3-(бензилокси)-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)карбамата (2S-
BL).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-B (8 г, 25,8 ммоль) в ДХМ (80 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (11 мл, 87,4 ммоль), пирролидин (2,5 мл, 35,4 ммоль), затем EDCI (7,39 г, 38,7 ммоль), НОВТ (5,2 г, 38,7 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO3 (1 х 25 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 30 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 1% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-BL (8 г, 86%) в виде белого твердого вещества. 1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-df,): 8 7,34-7,24 (м, 5Н), 6,57 (д, J = 4,0 Гц, 1И), 4,53, 4,44 (дд, J = 12,0 Гц, 12,0 Гц, 2Н), 4,32-4,28 (м, 1И), 3,74 (т, J = 6,0 Гц, 1И), 3,58-3,53 (м, 1И), 3,423,38 (м, 1И), 3,28-3,24 (м, 2Н), 1,82-1,70 (м, 4Н), 1,37 (с, 9Н), 1,11 (д, J = 6,4 Гц, 3И). Масса (ИЭР): m/z
363,4 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-амино-3-(бензилокси)-1-(пирролидин-1-ил)бутан-1-она (2S-BM).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BL (6 г, 16,52 ммоль) в эфире, насыщенном HCl (30 мл), добавили при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с пентаном (15 мл) с получением соединения 2S-BM (4 г, 93%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 8,25 (с, 2Н), 7,36-7,29 (м, 5Н), 4,58, 4,48 (дд, J = 12,0, 11,5 Гц, 2Н), 4,12 (т, J = 4,5 Гц, 1И), 3,87 (т, J = 5,5 Гц, 1И), 3,60-3,57 (м, 1И), 3,37-3,33 (м, 3И), 1,78-1,70 (м, 4Н), 1,22 (д, J = 6,5 Гц, 3И). Масса (ИЭР): 263,3 [М++1].
Схема 2S-1
Синтез трет-бутил-2-((бензилокси)метил)-2-(((2S,3R)-3-гидрокси-1 -метокси-1 -оксобутан-2-ил)кар-бамоил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-1).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-H (2,0 г, 5,97 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DI-PEA (2,6 мл, 14,92 ммоль), затем HATU (2,26 г, 5,94 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 10 мин. К реакционной смеси добавили раствор метил-2-амино-3-гидроксибутаноата гидрохлорида (1 г, 5,97 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) при 0°C. Полученную реакционную смесь оставили нагреваться до комнатной температуры и продолжали перемешивание еще 3 ч. Летучие вещества выпарили под пониженным давлением. Полученный остаток разбавили водой (25 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 75 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Неочищен
ное вещество очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-1 (1,8 г, 67%) в виде жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 7,38-7,31 (м, 5Н), 5,16 (ш с, 1И), 4,54 (с, 2Н), 4,28-4,26 (м, 1И), 4,17-4,12 (м, 1И), 3,84-3,82 (м, 1И), 3,62 (с, 3И), 3,54-3,51 (м, 1И), 2,32-2,27 (м, 4Н), 1,84-1,78 (м, 2Н), 1,42 (с, 9Н), 1,06 (д, 3И).
ЖХМС m/z: 451,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3-ацетокси-1-метокси-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-((бензилок-си)метил)пирролидин-1 -карбоксилата (2S-2).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-1 (1,0 г, 2,22 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) по каплям добавили Et3N (0,34 мл, 2,44 ммоль) при 0°C в инертной атмосфере. Добавили Ас2О (0,27 мл, 2,64 ммоль), затем DMAP (50 мг, 0,40 ммоль) при 0°C и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 2 ч. Реакционную смесь разбавили водой и экстрагировали водный слой CH2Cl2 (2 х 25 мл). Объединенные органические экстракты высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-2 (0,8 г, 73%) в виде жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 7,41-7,34 (м, 5Н), 5,26-5,24 (м, 1И), 4,54 (с, 2Н), 4,06-3,97 (м, 1И), 3,78-3,72 (м, 1И), 3,62 (с, 3И), 3,52-3,49 (м, 1И), 2,68 (с, 6Н), 2,34-2,31 (м, 1И), 1,87 (с, 3И), 1,78-1,74 (м, 2Н), 1,42 (с, 6Н), 1,14 (д, 3И). Масса m/z: 493,8 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3-ацетокси-1-метокси-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиме-тил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-3).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-2 (0,8 г, 1,62 ммоль) в EtOAc (15 мл) добавили 10% Pd-C (0,15 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли EtOAc. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Неочищенное соединение очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-3 (0,5 г, 77%) в виде жидкости. 1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 8,16 (ш с, 1И), 5,78-5,74 (м, 1И), 5,23 (д, J = 9,5 Гц, 1И), 4,64-4,58 (м, 1И), 4,03-3,98 (м, 1И), 3,61 (с, 3И), 3,52 (д, J = 10,0 Гц, 1И), 3,43 (д, J = 6,5 Гц, 1И), 2,29-2,27 (м, 1И), 1,961,94 (м, 4Н), 1,74-1,68 (м, 2Н), 1,38-1,30 (м, 9Н), 1,14 (д, J = 6,5 Гц, 3И).
ЖХМС m/z: 403,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-ацетокси-1-метокси-1-оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспи-ро [3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-1).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-3 (0,35 г, 0,87 ммоль) в ТГФ (15 мл) добавили PPh3 (274 мг, 1,04 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 30 мин в инертной атмосфере. Затем реакционную смесь охладили до 0°C, к реакционной смеси добавили DTAD (0,22 г, 0,95 ммоль), и оставили нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание еще 20 ч. Смесь погасили насыщенным раствором лимонной кислоты, и промыли насыщенным раствором NaCl, и экстрагировали EtOAc (2 х 20 мл). Объединенный органический экстракт высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40% EtOAc в гексане, с получением NRX-1076 (2S-FNL-1) (160 мг, 48%) в виде жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 5,21-5,18 (м, 1И), 4,57 (д, 1И), 3,82 (д, 1И), 3,64 (д, 3И), 3,42 (д, 2Н), 3,24-3,21 (м, 1И), 2,14-2,11 (м, 2Н), 1,97 (с, 3И), 1,84-1,78 (м, 2Н), 1,37 (с, 9Н), 1,18 (д, 3И).
Масса m/z: 383,1 [М-1].
Схема 2S-2
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]ок-тан-5-карбоксилата (2S-FNL-2).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (500 мг, 1,52 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили DI-PEA (0,8 мл, 4,57 ммоль), EDCI HCl (350 мг, 1,82 ммоль), затем HOBt (280 мг, 1,82 ммоль), NH4Cl (161 мг, 3,04 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования
исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 30 мл). Объединенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (2 х 30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элю-ируя 2% МеОН/ДХМ, с получением соединения (2S-FNL-2) (200 мг, 40%) в виде бесцветной жидкости.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 7,53 (с, 2Н), 4,59 (с, 1И), 4,02 (с, 1И), 3,77-3,70 (м, 2Н), 3,62-3,53 (м, 2Н), 3,46-3,33 (м, 1И), 2,17-2,03 (м, 2Н), 1,88-1,71 (м, 2Н), 1,38 (с, 9Н), 1,18 (д, J=6,5 Гц, 3И).
Масса (ИЭР): 328,3 [М++1].
Синтез (2S,3R)-3-гидрокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутанамида (2S-FNL-3).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-2) (200 мг, 0,61 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили ТФК (0,5 мл, 6,1 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном/диэтиловым эфиром (5 мл/5 мл) с получением соединения (2S-FNL-3) (100 мг) в виде белого твердого вещества (соль ТФК).
1И-ЯМР: (400 МГц, D2O): 8 4,33-4,29 (м, 2Н), 4,09 (д, 1И), 3,95 (д, 1И), 3,57-3,48 (м, 2Н), 2,51-2,46 (м, 2Н), 2,25-2,19 (м, 2Н), 1,31 (д, 3И).
ЖХМС, m/z: 455 [2М++1].
Синтез (2S,3R)-3-гидрокси-2-(5-изобутирил-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутанамида (2S-
FNL-4).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-3) (500 мг (неочищенное), 2,20 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили TEA (1 мл, 7,70 ммоль), затем исходный материал 3 (256 мг, 2,42 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 30 мл). Объединенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (2х30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-4) (100 мг, 15,2%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, D2O): 8 4,54-4,52 (м, 1И), 4,41-4,37 (м, 1И), 4,27 (д, J = 3,6 Гц, 1И), 4,04 (т, J = 6,5 Гц, 1И), 3,85-3,72 (м, 1И), 3,71-3,66 (м, 1И), 2,92-2,87 (м, 1И), 2,38-2,27 (м, 2Н), 2,12-2,05 (м, 2Н), 1,30 (д, J = 6,5 Гц, 3И), 1,14 (д, J = 6,5 Гц, 6Н); Масса (ИЭР): 298,3 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(3-(1-бензил-5-метил-1Н-1,2,3-триазол-4-карбонил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]ок-тан-2-ил)-3-гидроксибутанамида (2S-FNL-5).
К перемешиваемому раствору 2S-X2 (200 мг, 0,92 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл), ДМФА (0,1 мл) добавили оксалилхлорид (0,16 мл, 1,84 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Летучие вещества выпарили под пониженным давлением в атмосфере N2 с получением хлорангидрида кислоты (300 мг, неочищенный). К перемешиваемому раствору хлорангид-рида кислоты (300 мг, неочищенный) в ДХМ (5 мл) добавили (2S-FNL-3) (220 мг, 0,92 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0,53 мл, 2,76 ммоль) при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 20 мл). Объединенные органические экстракты промыли насыщенным солевым раствором (2 х 10 мл) и высушили над безводным Na2SO4, концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного продукта, который очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 3% МеОН/CH^b, с получением соединения (2S-FNL-5) (200 мг, 48,6%) в виде бледно-коричневого твердого вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСОч^): 8 7,77 (с, 2Н), 7,38-7,31 (м, 3И), 7,18 (д, J = 7,5 Гц, 2Н), 5,65 (с, 2Н), 4,89 (д, J = 5,5 Гц, 1И), 4,76 (д, J = 4,0 Гц, 1И), 4,07-3,91 (м, 4Н), 3,62-3,48 (м, 1И), 2,39 (с, 3И), 2,26-2,12 (м, 2Н), 1,98-1,91 (м, 2Н), 1,13 (д, J = 6,5 Гц, 3И).
ЖХМС m/z: 427,6 [М++1]. ВЭЖХ: 95,5% (оба энантиомера).
Схема 2S-2
бамоил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-4).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-H (50 г, 0,15 моль) в CH2Cl2 (500 мл) добавили метил-2-амино-3-гидроксибутаноат (23,8 г, 0,18 моль), EDCI-HCl (34,2 г, 0,18 моль), затем HOBt (24,1 г, 0,18 моль) и DIPEA (57,8 г, 0,45 моль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (250 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 250 мл). Отделенные органические слои промыли водой, насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 50% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-4 (53 г, 78,9%) в виде светло-зеленой жидкости.
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3-ацетокси-1-метокси-1-оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-((бензилок-си)метил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-5).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-4 (15 г, 33,3 ммоль) в CH2Cl2 (150 мл) добавили DI-PEA (6,4 г, 49,9 ммоль), затем уксусный ангидрид (4 г, 39,9 ммоль) и DMAP (408 мг, 3,33 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 100 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-5 (16 г, неочищенное) в виде светло-коричневой жидкости.
1И-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 8 7,35 (д, 5Н), 5,47-5,44 (м, 1И), 4,80 (дд, 1И), 4,64-4,61 (м, 2Н), 4,154,11 (м, 1И), 3,86-3,83 (м, 1И), 3,75 (с, 4Н), 3,54-3,50 (м, 2Н), 2,42-3,38 (м, 1И), 1,91-1,85 (м, 5Н), 1,45-1,41 (м, 10И), 1,27 (д, 2Н); ЖХМС (ИЭР): 492 [М+].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3 -ацетокси-1 -метокси-1 -оксобутан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиме-тил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-6).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-5 (16 г, 32,5 ммоль) в метаноле (100 мл) и EtOAc (100 мл) добавили 10% Pd на древесном угле (3 г) при комнатной температуре и перемешивали в течение 4 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-6 (10 г, неочищенное) в виде коричневого густого сиропообразного вещества. Полученный материал непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Синтез (2)-трет-бутил-2-(1-метокси-1-оксобут-2-ен-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-кар-боксилата (2S-7).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-6 (10 г, 24,8 ммоль) в ТГФ (50 мл) добавили трифе-нилфосфин (13 г, 49,7 ммоль) и DTAD (11,15 г, 37,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-7 (2 г,
24,8%).
Синтез трет-бутил-2-( 1,3-диамино-1-оксобутан-2-ил)- 1-оксо-2,5-диазаспиро [3.4]октан-5-карбокси-
лата (2S-FNL-6).
Раствор соединения 2S-7 (2 г, 6,16 ммоль) в метанольном растворе NH3 (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал промыли Et2O (25 мл) и н-пентаном (25 мл) с получением (2S-FNL-6) (0,35 г, 16,6%) в виде белого твердого вещества. 1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-16): 8 7,70 (ш с, 1И), 7,07 (с, 1И), 3,85 (д, 1И), 3,73 (д, 1И), 3,42-3,38 (м, 2Н), 3,29-3,25 (м, 1И), 3,12-3,07 (м, 1И), 2,09 (т, 2Н), 1,95 (ш с, 1И), 1,84-1,81 (м, 2Н), 1,93 (с, 9Н), 1,12 (д, 1И),
0,99 (д, 2Н).
ЖХМС (ИЭР) m/z: 327,3 [М++1].
Синтез 3-амино-2-(1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутанамида (2S-FNL-7).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-6) (0,25 г, 0,76 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили эфир.ИО (5 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 4 ч. Добавили 1,4-диоксан-ИCl (5 мл) и продолжали перемешивание в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) растворитель удалили из реакционной смеси под пониженным давлением, а полученный неочищенный материал промыли ACN (25 мл) И Et2O (25 мл) с получением (2S-FNL-7) (0,11 г, 63,5%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, D2O): 8 4,69-4,55 (м, 1И), 4,12-3,86 (м, 3И), 3,62-3,51 (м, 2Н), 2,56-2,23 (м, 2Н), 2,25-2,21 (м, 2Н), 1,52-1,43 (м, 3И), ЖХМС (ИЭР) m/z: 227,2 [М++1]; СВЭЖХ (чистота): 97,96%.
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1 -(изобутиламино)- 1-оксобутан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диаза-спиро [3.4] октан-5 -карбоксилата (2S-8).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (300 мг, 0,91 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DI-PEA (354 мг, 2,74 ммоль), EDCIHCl (210 мг, 1,09 ммоль), затем HOBt (165 мг, 1,09 ммоль), изобутила-мин (80 мг, 1,09 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 30 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (2 х 30 мл), высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ с получением соединения 2S-8 (250 мг, 71,5%) в виде белого твердого вещества.
1И-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 8 8,02 (т, J = 5,2 Гц, 1И), 4,37 (с, 2Н), 4,04 (т, J = 5,6 Гц, 1И), 4,00 (д, J = 5,6 Гц, 1И), 3,77-3,72 (м, 1И), 3,61 (д, J = 6,0 Гц, 1И), 3,44-3,38 (м, 1И), 2,98-2,84 (м, 3И), 2,19-2,08 (м, 3И), 1,84-1,79 (м, 1И), 1,42 (с, 9Н), 1,39 (д, J = 5,5 Гц, 3И), 0,84 (д, J=6,4 Гц, 6И). Масса (ИЭР): m/z 384,4 [М++1].
Синтез (2S,3R)-3-гидрокси-N-изобутил-2-(1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутанамида (2S-
FNL-8).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-8 (250 мг, 0,65 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили ТФК (0,6 мл, 6,52 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном/диэтиловым эфиром (3х5 мл) с получением (2S-FNL-8) (125 мг, 67,9%) в виде белого твердого вещества (соль ТФК).
1И-ЯМР: (500 МГц, D2O): 8 4,26 (с, 2Н), 4,09 (т, J = 8,0 Гц, 1И), 3,95 (т, J = 7,5 Гц, 1И), 3,56-3,51 (м, 2Н), 3,14-3,06 (м, 2Н), 2,50-2,43 (м, 2Н), 2,25-2,21 (м, 2Н), 1,85-1,82 (м, 1И), 1,30 (д, J = 5,5 Гц, 3И), 0,96 (д, J = 7,0 Гц, 6Н). Масса (ИЭР): m/z 284,3 [М++1].
Схема 2S-4
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1 -((циклобутилметил)амино)-3-гидрокси-1 -оксобутан-2-ил)- 1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-9).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (500 мг, 1,52 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DI-PEA (0,8 мл, 4,57 ммоль), EDCI HCl (350 мг, 1,82 ммоль), затем HOBt (280 мг, 1,82 ммоль), циклобути-ламин (155 мг, 1,82 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и промыли отделенный органический слой лимонной кислотой (2 х 20 мл), насыщенным солевым раствором (2 х 20 мл). Объединенные органические слои высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 80% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-9 (250 мг, 41,5%) в виде бесцветного сиропообразного вещества.
1И-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 8 8,20 (т, J=11,5 Гц, 1И), 4,53 (с, 2Н), 4,03 (т, J = 7,5 Гц, 1И), 3,88 (т, J = 8,5 Гц, 2Н), 3,41-3,33 (м, 2Н), 3,32-3,24 (м, 2Н), 2,41-2,33 (м, 3И), 2,32-2,27 (м, 2Н), 2,24-2,17 (м, 2Н), 2,10-1,90 (м, 2Н), 1,68 (т, J = 8,5 Гц, 2Н), 1,40 (с, 9Н), 1,18 (д, J =6,4 Гц, 3И).
Масса (ИЭР): m/z 396,4 [М++1].
Синтез (2S,3R)-N-(циклобутилметил)-3-гидрокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутана-
мида (2S-FNL-9).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-9 (250 мг, 0,63 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили ТФК (0,5 мл, 5,06 ммоль) при 0 °C и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с диэтиловым эфиром (5 мл) с получением (2S-FNL-9) (90 мг, 48,3%) в виде гигроскопичного белого твердого вещества (соль ТФК).
1И-ЯМР: (500 МГц, D2O): 8 4,23 (с, 2Н), 4,08 (т, J = 7,0 Гц, 1И), 3,94 (т, J = 8,5 Гц, 1И), 3,56-3,51 (м,
Синтез TpeT-6yTRn-2-((2S,3R)- 1-(бензиламино)-3 -гидрокси-1 -оксобутан-2-ил)- 1-оксо-2,5-диазаспи-ро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-10).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (1 г, 3,04 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) добавили DIPEA (1,6 мл, 9,14 ммоль), EDCI-HCl (700 мг, 3,66 ммоль), затем НОВТ (560 мг, 3,66 ммоль), бензиламин (325 мг, 3,04 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 30 мл). Объединенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (2 X 30 мл), и органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-10) (800 мг, 63,5%) в виде белого твердого вещества.
^-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 7,38-7,20 (м, 5Н), 4,62-4,60 (м, 1H), 4,49-4,43 (м, 2Н), 4,33-4,25 (м,
IH) , 4,04 (д, J = 5,6 Гц, 1H), 3,96-3,92 (м, 1H), 3,51-3,45 (м, 1H), 3,43-3,31 (м, 1H), 2,31-2,21 (м, 2Н), 1,98-
1,86 (м, 2Н), 1,39 (с, 9Н), 1,24-1,22 (м, 3H). Масса (ИЭР): m/z 418,4 [М++1].
ВЭЖХ: 91,8% (оба изомера).
Синтез (2S,3R)-N-бeнзил-3-гидpокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)бyтанамида (2S-FNL-
II) .
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-10) (700 мг, 1,67 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили ТФК (1,9 мл, 16,7 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном/диэтиловым эфиром (5 мл/5 мл) с получением (2S-FNL-11) (400 мг, 75,6%) в виде белого твердого вещества (соль ТФК).
^-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 7,45-7,34 (м, 5Н), 4,45 (с, 2Н), 4,29-4,21 (м, 2Н), 4,06-3,85 (м, 2Н), 3,523,47 (м, 2Н), 2,45-2,35 (м, 2Н), 2,22-2,16 (м, 2Н), 1,24-1,20 (м, 3H).
Масса (ИЭР): m/z 318,4 [М++1]; ВЭЖХ: 89,1% (оба изомера).
Синтез (2S,3R)-2-(5-ацeтил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-бeнзил-3-гидpоксибyтанамида (2S-FNL-12).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-11) (240 мг, 0,75 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили TEA (0,31 мл, 2,25 ммоль) при комнатной температуре. Затем медленно добавили ацетилхлорид (0,1 мл, 0,9 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (5 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 20 мл). Объединенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (1 X 20 мл), насыщенным солевым раствором (1 X 20 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-12) (90 мг, 33,4%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
^-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 7,32-7,20 (м, 5Н), 4,58-4,55 (м, 1H), 4,52-4,42 (м, 2Н), 4,36-4,22 (м, 1H), 4,08-3,93 (м, 1H), 3,70-3,65 (м, 2Н), 3,64-3,53 (м, 2Н), 2,32-2,22 (м, 2Н), 2,20 (с, 3H), 2,04-1,95 (м, 2Н), 1,22-1,20 (м, 3H). Масса (ИЭР): m/z 360,3 [М++1].
ВЭЖХ: 97,5% (оба изомера).
Синтез (2S,3R)-N-бeнзил-3-гидpокси-2-(5-изобyтиpил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)бyтана-мида (NRX-2563) (2S-FNL-13).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-11) (244 мг, 0,76 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили TEA (0,37 мл, 2,66 ммоль) при 0°C. Затем добавили промежуточное соединение F (89 мг, 0,84 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 20 мл). Объединенный органический слой
промыли раствором лимонной кислоты (2 X 30 мл) и органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 60% EtOAc в н-гексане, с получением (2S-FNL-13) (150 мг, 51%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 7,35-7,20 (м, 5Н), 4,82-4,49 (м, 1H), 4,46-4,31 (м, 1H), 4,29-4,03 (м, 1Н), 3,90-3,70 (м, 2Н), 3,69-3,57 (м, 2Н), 3,46-3,31 (м, 1Н), 2,77-2,73 (м, 1Н), 2,28-2,21 (м, 2Н), 2,06-1,97 (м, 2Н), 1,22 (д, J = 6,8 Гц, 3Н), 1,08-0,98 (м, 6Н).
Масса (ИЭР): m/z 388,4 [М++1].
ВЭЖХ: 95,2% (оба изомера).
Схема 2S-6
Стадия 1 2S-Q, HATU
2S-L
Синтез тpeт-бyтил-2-((2S,3R)-1 -(((1,2,4-оксадиазол-5-ил)метил)амино)-3-гидрокси-1 -оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-14).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (600 мг, 1,82 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавили DI-PEA (708 мг, 5,48 ммоль), 2S-Q (290 мг, 1,82 ммоль), HATU (761 мг, 2,00 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (50 мл) и EtOAc (100 мл). Органический слой промыли водой (2 X 50 мл), затем насыщенным солевым раствором (2 X 30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ. Полученное твердое вещество растерли с эфиром/н-пентаном (5 мл/5 мл) с получением (2S-FNL-14) (100 мг, 13,5%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,61 (с, 1Н), 4,85 (с, 2Н), 4,78-4,63 (м, 1Н), 4,59-4,55 (м, 1Н), 4,30-4,25 (м, 1Н), 3,52-3,46 (м, 2Н), 3,43-3,29 (м, 1Н), 2,31-2,23 (м, 2Н), 1,96-1,88 (м, 2Н), 1,45 (с, 9Н), 1,26-1,20 (м,
3H).
Масса (ИЭР): m/z 410,4 [М++1]. ВЭЖХ: 98,14% (оба изомера).
Схема 2S-7
,-N
2S-FNL-16
Синтез тpeт-бyтил-2-((2S,3R)-1 -(((1,3,4-оксадиазол-2-ил)метил)амино)-3-гидрокси-1 -оксобутан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-15).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (1 г, 3,04 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавили DIPEA (1,58 мл, 9,12 ммоль), реагент ВОР (2,01 г, 4,56 ммоль), затем 2S-U (496 мг, 3,64 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали EtOAc (2 X 30 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (2 X 50 мл) и органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 80% EtOAc в не-гексане, затем препаративной ВЭЖХ с получением (2S-FNL-15) (67 мг, 5,4%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^6): 5 10,92 (с, 1Н), 7,83 (с, 1Н), 4,97-4,88 (м, 2Н), 4,07 (д, J = 7,2 Гц, 2Н), 3,83-3,65 (м, 2Н), 3,57-3,40 (м, 1Н), 3,38-3,25 (м, 2Н), 2,15-2,01 (м, 2Н), 1,83-1,80 (м, 2Н), 1,40 (с, 9Н), 1,22
(д, J = 6,4 Гц, 3H). +
Масса (ИЭР): m/z 410,4 [М++1]; ВЭЖХ: 90,6%.
Синтез (2S,3R)-N-((1,3,4-оксадиазол-2-ил)мeтил)-3-гидpокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)бутанамида (2S-FNL-16).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-15) (70 мг, 0,71 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили ТФК (195 мг, 1,71 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном/диэтиловым эфиром (5 мл/5 мл) с получением соединения (2S-FNL-16) (60 мг, 84,5%) в виде грязновато-белого твердого вещества (соль
ТФК).
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 7,83 (с, 1Н), 5,20-5,10 (м, 1Н), 4,80 (с, 1Н), 4,39-4,30 (м, 2Н), 4,13-4,04 (м, 2Н), 3,53-3,48 (м, 2Н), 2,44-2,41 (м, 2Н), 2,21-2,16 (м, 2Н), 1,31 (д, J = 6,4 Гц, 3Н). Масса (ИЭР): m/z 310,1 [М++1]. ВЭЖХ: 90,99%.
Схема 2S-8
Синтез бeнзил(2S,3R)-3-(бeнзилокси)-2-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)бyтаноата (8).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-K (800 мг, 1,57 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавили ТФК (1,2 мл) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-10 (500 мг, 78%) в виде грязновато-белого твердого вещества (соль HCl), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
1Н-ЯМР: (500 МГц, D2O): 5 7,48 (м, 5Н), 7,24-7,21 (м, 5Н), 5,29 (с, 2Н), 4,96 (с, 2Н), 4,80-4,62 (м, 1Н), 4,29-4,18 (м, 2Н), 4,01-3,89 (м, 1Н), 3,52-3,46 (м, 2Н), 2,43-2,38 (м, 2Н), 2,24-2,14 (м, 2Н), 1,35-1,28
(м, 3H).
ЖХМС: 408 [М++1].
Синтез бeнзил(2S,3R)-2-(5-ацeтил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-3-(бeнзилокси)бyтаноата (2S-11).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-10 (500 мг, 1,22 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили TEA (0,46 мл, 3,36 ммоль), затем ацетилхлорид (0,1 мл, 1,47 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-11 (300 мг, 54,5%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 7,36-7,29 (м, 5Н), 7,26-7,16 (м, 5Н), 5,13 (с, 2Н), 4,59 (с, 2Н), 4,32-4,29 (м, 2Н), 4,16-4,13 (м, 1Н), 3,65-3,61 (м, 1Н), 3,60-3,46 (м, 2Н), 2,21-2,09 (м, 2Н), 2,02 (с, 3Н), 2,01-1,91 (м, 2Н), 1,21 (д, J = 6,4 Гц, 3Н); ЖХМС: 451,3 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(5-ацeтил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-3-гидpоксибyтановой кислоты
(2S-12).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-11 (1 г, 2,22 ммоль) в метаноле (30 мл) добавили 10% Pd/C (500 мг) при комнатной температуре и перемешивали в течение 24 ч в атмосфере Н2. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом (20 мл). Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-12 (500 мг, 83,3%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 4,35-4,30 (м, 1Н), 4,29-4,17 (м, 1Н), 4,09-4,04 (м, 1Н), 3,76-3,67 (м, 1Н), 3,59-3,48 (м, 1Н), 3,34-3,31 (м, 1Н), 2,29-2,24 (м, 2Н), 2,15 (с, 3Н), 2,04-1,96 (м, 2Н), 1,28 (д, J=6,4 Гц, 3Н).
ЖХМС m/z: 270,4 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(5-ацeтил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-3-гидpокси-N-(пиpимидин-2-ил-метил)бутанамида (2S-FNL-17).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-12 (700 мг, 2,59 ммоль) в ДХМ (15 мл) добавили DI-PEA (1,35 мл, 7,77 ммоль), 2S-Y (410 мг, 2,84 ммоль), EDCI (593 мг, 3,1 ммоль), затем НОВТ (474 мг, 3,1 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (40 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 3% МеОН/ДХМ с получением (2S-FNL-17) (100 мг, 10,7%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 8,78 (д, J = 5,2 Гц, 2Н), 7,49 (т, J = 5,2 Гц, 1Н), 4,79 (с, 2Н), 4,55-4,47 (м, 1Н), 4,40-4,37 (м, 2Н), 3,79-3,56 (м, 3Н), 2,37-2,26 (м, 2Н), 2,14-2,03 (м, 2Н), 2,01 (с, 3Н), 1,28 (д, J=6,4 Гц,
3Н); Масса (ИЭР): m/z 362,4 [М++1]. ВЭЖХ: 92,3% (оба изомера).
Схема 2S-9
о о
V,он т*к N Y V"OH
2S-Y EDCI /N \\ /¦¦'^п м- ТФК п || /'¦'*-
Вое О / ТфК О 7
2S-L 2S-FNL-18 2S-FNL-19
2S-FNL-20
Стадия 3 I A'N'"( W\
У"ОН N^7
изобутирил- п_/ *Д / хлорид
Синтез тpeт-бyтил-2-((2S,3R)-3-гидpокси-1-оксо-1-((пиpимидин-2-илмeтил)амино)бyтан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-18).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-L (1 г, 3,04 ммоль) в CH2Cl2 (30 мл) добавили DIPEA (1,63 мл, 9,14 ммоль), EDCI-HQ (696 мг, 3,64 ммоль), затем НОВТ (558 мг, 3,64 ммоль), 2S-Y (241 мг, 3,34 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (30 мл). Органический слой промыли раствором лимонной кислоты (2 X 30 мл), затем насыщенным солевым раствором (2 X 25 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элю-ируя 5% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-18) (800 мг, 63%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,72 (т, J = 4,8 Гц, 2Н), 7,36 (т, J = 4,8 Гц, 1Н), 4,81-4,76 (м, 1Н), 4,624,49 (м, 1Н), 4,34-4,29 (м, 1Н), 4,18-4,03 (м, 2Н), 3,56 (д, J = 5,6 Гц, 2Н), 3,52-3,46 (м, 1Н), 2,30-2,25 (м, 2Н), 1,97-1,88 (м, 2Н), 1,46 (с, 9Н), 1,31-1,28 (м, 3Н). Масса (ИЭР): m/z 420,4 [М++1].
ВЭЖХ: 99,6% (оба изомера).
Синтез (2S,3R)-3-гидpокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-(пиpимидин-2-илмeтил)бy-
танамида (2S-FNL-19).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-18) (280 мг, 0,66 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили ТФК (0,3 мл, 4,0 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном/диэтиловым эфиром (5 мл/5 мл) с получением (2S-FNL-19) (95 мг, 44,6%) в виде белого твердого вещества (соль ТФК).
1Н-ЯМР: (500 МГц, D2O): 5 8,81 (д, J = 4,5 Гц, 2Н), 7,53 (т, J = 5,0 Гц, 1Н), 4,80-4,65 (м, 2Н), 4,46 (д, J = 6,0 Гц, 1Н), 4,36-4,31 (м, 2Н), 4,10 (д, J = 7,5 Гц, 1Н), 3,95 (т, J = 8,0 Гц, 1Н), 3,58-3,49 (м, 1Н), 2,512,40 (м, 2Н), 2,26-2,17 (м, 2Н), 1,34 (д, J = 6,0 Гц, 3Н); Масса (ИЭР): m/z 320,3 [М++1].
Синтез (2S,3R)-3-гидpокси-2-(5-изобyтиpил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-(пиpимидин-2-илметил)бутанамида (2S-FNL-20).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-19) (300 мг, 0,94 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили TEA (0,4 мл, 2,82 ммоль), затем исходный материал 4 (120 мг, 1,12 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 20 мл). Объединенный органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-20) (100 мг, 27,3%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,73 (т, J = 5,2 Гц, 2Н), 7,36 (т, J = 4,8 Гц, 1Н), 4,83-4,55 (м, 1Н), 4,514,29 (м, 3Н), 4,21-4,02 (м, 1Н), 3,75-3,69 (м, 1Н), 3,64-3,60 (м, 1Н), 3,31-3,30 (м, 1Н), 2,79-2,72 (м, 1Н), 2,28-2,25 (м, 2Н), 2,08-1,97 (м, 2Н), 1,31 (д, J = 6,4 Гц, 3Н), 1,07-1,02 (м, 6Н).
Масса (ИЭР): m/z 390,4 [М++1]. ВЭЖХ: 97,75%.
2S-15 2S-16 2S-FNL-21
трет-Бутил-2-(((8)-3-((трет-бутилдифенилсилил)окси)- 1-метокси-1 -оксопропан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-13).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-I (11 г, 44,89 ммоль) в CH2Cl2 (110 мл) добавили соединение 2S-AJ (16,07 г, 44,89 ммоль), HATU (20,4 г, 53,68 ммоль), затем DIPEA (17,37 г, 0,13 моль) при комнатной температуре и перемешивали в течение 10 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 100 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения 2S-13 (16 г, 61%) в виде желтой жидкости.
1Н-ЯМР: (500 МГц, CDQ3): 5 7,58-7,37 (м, 10Н), 4,67 (с, 1Н), 4,12-4,08 (м, 2Н), 3,93(с, 1Н), 3,75 (с, 3Н), 3,72-3,64 (м, 2Н), 2,8 (с, 1Н), 2,35 (с, 1Н), 2,04 (с, 1Н), 1,98-1,82 (м, 3Н), 1,25 (с, 9Н), 1,03 (с, 9Н); Масса (ИЭР): m/z 583,5 [М+-1].
Синтез тpeт-бyтил-2-((S)-3-((тpeт-бyтилдифeнилсилил)окси)- 1-метокси-1 -оксопропан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диазаспиро [3.4 ] октан-5 -карбоксилата (2S-14).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-13 (1,6 г, 2,73 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавили трифе-нилфосфин (0,994 г, 4,10 ммоль) и DTAD (0,788 г, 3,00 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой и экстрагировали EtOAc (2 X 30 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле с получением соединения 2S-14 (0,8 г, 51%) в виде желтого вязкого соединения.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CDCl3): 5 7,63-7,58 (м, 4Н), 7,45-7,30 (м, 6Н), 4,1 (с, 3Н), 3,80-3,67 (м, 4Н), 3,563,44 (м, 3Н), 2,04-1,95 (м, 4Н), 1,59 (с, 9Н), 1,04 (с, 9Н). Масса (ИЭР): m/z 567,4 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(^)- 1-амино-3-((трет-бутилдифенилсилил)окси)- 1-оксопропан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-15).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-14 (6 г) в метаноле (50 мл) добавили метанольный раствор аммиака (50 мл) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением и очистили неочищенный остаток колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 40% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-15 (1 г, 17%) в виде бледно-желтого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CDQ3): 5 8,27 (с, 1Н), 7,67-7,63 (м, 4Н), 7,45-7,36 (м, 7Н), 5,37 (с, 1Н), 4,56-4,54 (м, 1Н), 3,82 (д, J = 5,2 Гц, 1Н), 3,44 (т, J = 7,6 Гц, 2Н ), 3,35 (д, J = 5,2 Гц, 1Н), 3,21 (с, 1Н), 2,09-2,06 (м, 2Н), 2,03 (д, J = 4,8 Гц, 2Н), 1,44 (с, 9Н), 1,08 (с, 9Н).
ЖХМС (M/Z) m/z: 214 [М++1].
Синтез тpeт-бyтил-2-((S)-1-амино-3-гидpокси-1-оксопpопан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-16).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-15 (1 г, 1,81 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавили TBAF (0,943 г, 3,62 ммоль) при 0°C и медленно нагрели реакционную смесь до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (5 мл) и экстрагировали EtOAc (2X15 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 3% МеОН:ДХМ, с получением 2S-16 (0,13 г, 23%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,53 (т, J = 6,8 Гц, 1Н), 4,03 (д, J = 4,8, 1Н), 3,96-3,91 (м, 2Н), 3,85 (т, J = 5,8 Гц, 1Н), 3,82 (с, 2Н), 2,30 (т, J = 4 Гц, 2Н), 2,15-1,82 (м, 2Н), 1,49 (с, 9Н).
ЖХМС (M/Z) m/z: 314,2 [М++1].
Синтез (2S)-3-гидpокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)пpопанамида (2S-FNL-21).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-16 (0,13 г, 0,415 ммоль) в CH2Cl2 (3 мл) добавили
ТФК (1 мл) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением (2S-FNL-21) (100 мг, неочищенное) в виде соли
ТФК.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,58 (т, J = 5,8 Гц, 1Н), 4,09-4,03 (м, 3Н), 3,92 (д, J = 7,2 Гц, 1Н), 3,573,52 (м, 2Н), 2,55-2,41 (м, 2Н), 2,28-2,19 (м, 2Н); ЖХМС (M/Z) m/z: 214 [М++1].
Схема 2S-11
Вое О NH4CI EDCI lj 04
2S-AF 2S-FNL-22
Синтез трет-бутил-2-(^)-амино-3-гидрокси-1 -оксопропан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-22).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AF (250 мг, 0,79 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавили DI-PEA (0,5 мл, 2,38 ммоль), EDCI (181 мг, 0,94 ммоль), НОВТ (127 мг, 0,94 ммоль), затем NH4Cl (84,5 мг, 1,58 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл) и промыли лимонной кислотой (1 X 30 мл), затем насыщенным солевым раствором (1X30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-22) (150 мг, 60,7%) в виде желтого густого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 4,13-4,07 (м, 2Н), 3,96-3,88 (м, 1Н), 3,87-3,77 (м, 1Н), 3,63-3,47 (м, 2Н), 3,44-3,30 (м, 1Н), 2,31-2,26 (м, 2Н), 1,97-1,88 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 314,3 [М++1]; ВЭЖХ: 98,38%.
Схема 2S-12
,У0И Гх> °\~NH> Nс^ г^,Уш^
N 1^ VOH 2S-Y, EDCI 1 Y ^OH N) тфк ^\f\ ^OH N *
2S-AF
BocO Boc° H О
2S-FNL-23
2S-FNL-24
Стадия 3
изобутирил-хлорид
-NH-
Ni1 ¦ < y-bi
2S-FNL-25
Синтез трет-бутил-2-(^)-3-гидрокси-1 -оксо-1 -((пиримидин-2-илметил)амино)пропан-2-ил)-1 -оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-23).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AF (1,3 г, 4,14 ммоль) в ДХМ (25 мл) добавили DIPEA (2,15 мл, 12,42 ммоль), НОВТ (760 мг, 4,96 ммоль), EDCI (1 г, 4,96 ммоль), затем 2S-Y (715 мг, 4,96 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (50 мл). Органический слой промыли лимонной кислотой (1 X 30 мл), затем раствором бикарбоната (1 X 30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-23) (800 мг, 50%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,75-8,71 (м, 2Н), 7,37-7,34 (м, 1Н), 4,66-4,49 (м, 2Н), 4,27-4,24 (м, 1Н), 4,19-4,14 (м, 1Н), 4,03-3,99 (м, 1Н), 3,97-3,92 (м, 1Н), 3,66-3,54 (м, 1Н), 3,49-3,45 (м, 1Н), 3,40-3,36 (м, 1Н), 2,32-2,27 (м, 2Н), 1,97-1,88 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н); Масса (ИЭР): m/z 406,4 [М++1].
ВЭЖХ: 97,1%.
Синтез (2S)-3-гидpокси-2-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-(пиpимидин-2-илмeтил)пpопа-
намида (2S-FNL-24).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-23) (350 мг, 0,86 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили ТФК (985 мг, 0,86 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь довели до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом с получением (2S-FNL-24) (250 мг, 95,4%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 8,84 (д, J = 5,2 Гц, 2Н), 7,55 (т, J = 4,8 Гц, 1Н), 4,90-4,67 (м, 3Н), 4,104,06 (м, 3Н), 3,94-3,92 (м, 1Н), 3,57-3,51 (м, 2Н), 2,54-2,43 (м, 2Н), 2,28-2,19 (м, 2Н).
ЖХМС: m/z 306,4 [М++1].
ВЭЖХ: 90,07%.
Синтез (2S)-3-гидpокси-2-(5-изобyтиpил-1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-(пиpимидин-2
илметил)пропанамида (2S-FNL-25).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-24) (500 мг, 1,63 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили TEA (0,7 мл, 4,91 ммоль) при 0°C. Затем медленно добавили промежуточное соединение F (207 мг, 1,95 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Органический слой промыли лимонной кислотой (1 X 30 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 X 30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-25) (100 мг, 16,3%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,73 (т, J = 4,8 Гц, 2Н), 7,37 (д, J = 5,2 Гц, 1Н), 4,56-4,51 (м, 2Н), 4,324,29 (м, 1Н), 4,17-4,12 (м, 1Н), 4,05-3,98 (м, 2Н), 3,74-3,68 (м, 1Н), 3,63-3,58 (м, 1Н), 3,57-3,51 (м, 1Н), 2,77-2,69 (м, 1Н), 2,31-2,26 (м, 2Н), 2,08-1,95 (м, 2Н), 1,05-0,98 (м, 6Н).
ЖХМС: m/z 376,4 [М++1].
ВЭЖХ: 89,6% (оба изомера).
Схема 2S-13
Синтез тpeт-бyтил-2-(((2S,3R)-3-ацeтокси-1-оксо-1-(пиppолидин-1-ил)бyтан-2-ил)каpбамоил)-2-((бензилокси)метил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-17) К перемешиваемому раствору соединения 2S-BK (1 г, 2,90 ммоль) в ДМФА (8 мл) добавили EDCI HCl (0,63 г, 3,28 ммоль), затем HOBt (0,44 г, 3,28 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 5 мин к реакционной смеси добавили DIPEA (1,3 мл, 7,46 ммоль), затем соединение 2S-H (0,74 г, 3,58 ммоль) и продолжали перемешивание еще 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промыли водой и экстрагировали EtOAc (2 X 500 мл). Органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией с получением соединения 2S-17 (0,6 г, 38%).
1Н-ЯМР: (400 МГц, CDCI3) (ротамеры): 5 7,34 (с, 5Н), 5,37-5,34 (м, 1Н), 4,84-4,80 (м, 1Н), 4,72-4,65 (м, 2Н), 4,09-4,02 (м, 1Н), 3,91-3,87 (м, 1Н), 3,65-3,61 (м, 3Н), 3,52-3,46 (м, 3Н), 2.41 (ш с, 1Н), 2,22-2,15 (м, 1Н), 1,98 (д, 5Н), 1,87-1,84 (м, 4Н), 1,50-1,42 (м, 9Н).
ЖХМС m/z: 532 [М++1].
Синтез тpeт-бyтил-2-(((2S,3R)-3-ацeтокси-1-оксо-1-(пиppолидин-1-ил)бyтан-2-ил)каpбамоил)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-18).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-17 (4,5 г, 8,40 ммоль) в МеОН (40 мл) добавили влажный 10% Pd/C (1,5 г) в инертной атмосфере и перемешивали в течение 4 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-18 (3,0 г, 81%).
ЖХМС m/z: 442,5 [М++1].
Синтез тpeт-бyтил-2-((2S,3R)-3-ацeтокси-1-оксо-1-(пиppолидин-1-ил)бyтан-2-ил)-1-оксо-2,5-диаза-спиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-19).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-18 (3 г, 6,70 ммоль) в ТГФ (25 мл) добавили трифе-нилфосфин (2 г, 7,40 ммоль), затем DTAD (2,5 г, 10,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 10% МеОН/CH^b, с получением соединения 2S-19 (1,2 г с
ТРРО, 43%).
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-с^): 5 5,25-5,19 (м, 1Н), 4,65 (д, 1Н), 3,61-3,57 (м, 3Н), 3,47-3,42 (м, 2Н), 3,41-3,25 (м, 4Н), 2,05 (с, 4Н), 1,95-1,71 (м, 7Н), 1,42 (с, 10Н).
ЖХМС m/z: 424,4 [М++1].
Синтез тpeт-бyтил-2-((2S,3R)-3-гидpокси-1-оксо-1-(пиppолидин-1-ил)бyтан-2-ил)-1-оксо-2,5-диаза-спиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-20).
Раствор соединения 2S-19 (0,15 г, 0,41 ммоль) в водном NH3 (2 мл) перемешивали при комнатной
температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили CH2Cl2 (75 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-20 (0,1 г, 76%). ЖХМС m/z: 382 [М++1].
Синтез 2-((2S,3R)-3-гидpокси-1-оксо-1-(пиppолидин-1-ил)бyтан-2-ил)-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-1-
она (2S-FNL-26).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-20 (0,2 г, 0,63 ммоль) в CH2Cl2 (2 мл) добавили ТФК (0,3 мл) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный остаток разбавили водой и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 25 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под вакуумом с получением (2S-FNL-26) (0,2 г, 80%) в виде соли ТФК.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,64 (т, 1Н), 4,25-4,21 (м, 1Н), 4,09 (д, 1Н), 3,99-3,87 (м, 1Н), 3,70 (т, 2Н), 3,55-3,47 (м, 5Н), 2,52-2,34 (м, 2Н), 2,25-2,22 (м, 2Н), 2,08-1,98 (м, 5Н), 1,25 (т, 3Н).
ЖХМС (ИЭР) m/z: 282,4 [М++1].
Синтез (2R,3S)-4-оксо-3-(1-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-4-(пиppолидин-1-ил)бyтан-2-илацe-
тата (2S-FNL-27).
Перемешиваемый раствор соединения 2S-19 (0,4 г, 0,94 ммоль) в 1,4-диоксанеЛ-Ю (5 мл) охладили до 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал промыли н-пентаном, затем EtOAc с получением (2S-FNL-27) (0,22 г, 65%).
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,62 (д, 1Н), 4,41-4,29 (м, 2Н), 4,24 (д, 1Н), 3,89-3,77 (м, 3Н), 3,54-3,49 (м, 3Н), 2,57-2,52 (м, 1Н), 2,49 (с, 3Н), 2,42-2,00 (м, 8Н), 1,30 (д, 3Н).
ЖХМС m/z: 324,3 [М++1]. Чистота по ВЭЖХ: 99,37%.
Схема 2S-14
Синтез тpeт-бyтил-2-((2S,3R)-1-амино-3-гидpокси-1-оксобyтан-2-ил)-6-мeтил-1-оксо-2,5-диазаспи-ро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-21).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AQ (480 мг, 1,40 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) добавили DIPEA (543 мг, 4,20 ммоль), EDCI HCl (382 мг, 2,0 ммоль), затем HOBt (280 мг, 2,0 ммоль), NH4Cl (111 мг, 2,0 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 30 мл). Объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (2 X 50 мл), высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-21 (150 мг, 31%) в виде бесцветного густого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-с16): 5 5,00-4,88 (м, 1Н), 4,05-3,94 (м, 4Н), 3,37 (т, J = 10,5 Гц, 2Н), 2,101,93 (м, 4Н), 1,45 (с, 9Н), 1,39-1,27 (м, 1Н), 1,24-1,16 (м, 6Н).
Масса (ИЭР): m/z 364,3 [M++Na].
Синтез (2S,3R)-3-гидpокси-2-(1-мeтил-3-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)бyтанамида (2S-FNL-
28).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-21 (150 мг, 0,43 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл) добавили ТФК (0,4 мл, 4,39 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с диэтиловым эфиром/н-пентаном (5 мл/5 мл) с получением (2S-FNL-28) (100 мг, 65,7%) в виде вязкого вещества (соль ТФК). ВЭЖХ (чистота): 99,7%.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,50-4,46 (м, 3Н), 3,63-3,49 (м, 2Н), 2,56-2,49 (м, 2Н), 2,35-2,29 (м, 2Н),
1,57 (д, J = 6,8 Гц, 3Н), 1,36 (д, J = 6,0 Гц, 3Н); Масса (ИЭР): m/z 483,1 [2М++1].
Синтез тpeт-бyтил-2-((2R,3S)-3-гидpокси-1-оксо-1-((пиpимидин-2-илмeтил)амино)бyтан-2-ил)-1-метил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-29).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AQ (500 мг, 1,46 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) добавили DIPEA (0,76 мл, 4,38 ммоль), EDCI HCl (334 мг, 1,75 ммоль), HOBt (334 мг, 1,75 ммоль), затем 2S-Y (252 мг, 1,75 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 X 30 мл). Объединенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (20 мл), NaHCO3 (1 X 30 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 X 50 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-29) (200 мг, 31,6%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,74-8,70 (м, 2Н), 7,37-7,32 (м, 1Н), 4,72-4,43 (м, 3Н), 4,24-4,14 (м, 1Н), 4,10-3,88 (м, 2Н), 3,52-3,36 (м, 2Н), 2,22-2,19 (м, 2Н), 2,01-1,94 (м, 1Н), 1,88-1,79 (м, 1Н), 1,45-1,41 (м, 3Н), 1,40 (с, 9Н), 1,29-1,26 (м, 3Н). Масса (ИЭР): 434,5 [М++1]. ВЭЖХ: 92,8%.
Синтез (2S,3R)-3-гидpокси-2-(1-мeтил-3-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-(пиpимидин-2-ил-метил)бутанамида (2S-FNL-30).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-29) (250 мг, 0,57 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавили ТФК (0,44 мл) в атмосфере N2 и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал растерли с диэтиловым эфиром/н-пентаном (5 мл/5 мл) и высушили под пониженным давлением с получением (2S-FNL-30) (180 мг, 94,7%) в виде полутвердого вещества (соль ТФК).
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 8,82 (д, J = 2,0 Гц, 2Н), 7,53 (т, J = 4,8 Гц, 1Н), 4,67-4,62 (м, 2Н), 4,444,40 (м, 1Н), 4,34-4,32 (м, 2Н), 3,61-3,56 (м, 2Н), 2,51-2,20 (м, 4Н), 1,55-1,46 (м, 3Н), 1,32-1,29 (м, 3Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 333,3. ВЭЖХ: 90,7%.
Синтез (2S,3R)-3-гидpокси-2-(5-изобyтиpил-1-мeтил-3-оксо-2,5-диазаспиpо[3.4]октан-2-ил)-N-(пи-римидин-2-илметил)бутанамида (2S-FNL-31).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-30) (150 мг, 0,45 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили TEA (0,18 мл, 1,35 ммоль), затем изобутирилхлорид (57 мг, 0,54 ммоль) при 0°C в атмосфере N2 и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (5 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2X10 мл). Объединенный органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-31) (85 мг, 47%) в виде полутвердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 8,73 (д, J = 4,8 Гц, 2Н), 7,36 (т, J = 4,8 Гц, 1Н), 4,83-4,54 (м, 3Н), 4,354,32 (м, 1Н), 4,22-4,11 (м, 1Н), 3,93-3,88 (м, 1Н), 3,76-3,71 (м, 1Н), 3,67-3,60 (м, 2Н), 2,81-2,76 (м, 1Н), 2,21-2,07 (м, 3Н), 1,96-1,91 (м, 1Н), 1,29-1,26 (м, 6Н), 1,05-1,02 (м, 6Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 404,4. ВЭЖХ: 93,57%.
Синтез трет-бутил-2-(((28,3Я)-3-(бензилокси)- 1-оксо-1 -(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)карбамоил)-2-(1 -гидроксиэтил)пирролидин-1-карбоксилата (2S-22).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AN (2,5 г, 9,65 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавили соединение 2S-BM (2,7 г, 10,6 ммоль), EDCI-HCl (2,7 г, 14,4 ммоль), затем HOBt (1,9 г, 14,4 ммоль) и DI-PEA (5,3 мл, 28,9 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (30 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (2 х 50 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-22 (3,5 г, 73%) в виде бесцветной жидкости.
^-ЯМР: (500 МГц, ДМСО^): 5 8,11 (д, J = 9,0 Гц, 1H), 7,82 (д, J = 8,5 Гц, 1H), 7,33-7,26 (м, 5Н), 6,56 (с, 1H), 4,68-4,63 (м, 1H), 4,56 (с, 2Н), 3,80-3,74 (м, 1H), 3,55-3,33 (м, 5Н), 1,76-1,66 (м, 7Н), 1,40 (с, 9Н), 1,37-1,24 (м, 2Н), 1,08-0,97 (м, 6Н). Масса (ПЭР): m/z 504 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-(бензилокси)-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-метил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-23).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-22 (3,5 г, 6,95 ммоль) в ТГФ (50 мл) добавили трифе-нилфосфин (3,6 г, 13,9 ммоль) и DTAD (3,2 г, 13,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-23 (1,0 г, 30%) в виде бледно-желтой жидкости.
^-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-dj): 5 7,63-7,54 (м, 1H), 7,41-7,24 (м, 4Н), 4,60-4,37 (м, 3H), 3,98 (д, J = 10,0 Гц, 1H), 3,91 (д, J = 7,0 Гц, 1H), 3,77 (д, J = 7,0 Гц, 2Н), 3,44-3,34 (м, 4Н), 2,01-1,91 (м, 2Н), 1,85-1,68
(м, 6Н), 1,40 (с, 9Н), 1,20-1,11 (м, 6Н).
Масса (ИЭР): m/z 486,6 [М++1].
Синтез (2S,3R)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гидроксибу-тановой кислоты (2S-24).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-23 (1 г) в метаноле (30 мл) добавили 10% Pd/C (400 мг) при комнатной температуре и перемешивали в течение 12 ч в атмосфере Н2 (баллонное давление). После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой цели-та и промыли этот слой метанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 2S-24 (230 мг, 28%) в виде белого твердого вещества.
^-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-dj): 5 4,79 (ш с, 1H), 4,34 (ш с, 1H), 4,27 (д, J = 8,5 Гц, 1H), 4,03-3,95 (м, 1H), 3,78 (д, J = 6,5 Гц, 1H), 3,67-3,63 (м, 1H), 3,53-3,49 (м, 2Н), 3,39 (т, J = 9,0 Гц, 2Н), 2,04-1,67 (м, 8Н), 1,36 (с, 9Н), 1,26 (д, J = 6,0 Гц, 3H), 1,08, 1,06 (дд, J = 6,5 Гц, 3H).
ЖХМС: 396,4 [М++1].
Синтез 2-((2S,3R)-3-гидрокси-1 -оксо-1-(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)-3-метил-2,5-диазаспи-
ро[3.4]октан-1-она (2S-FNL-32).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-24 (230 мг, 0,58 ммоль) в CH2Cl2 (2 мл) добавили ТФК (0,44 мл, 5,82 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением материала, который растерли с пентаном и диэтиловым эфиром (5 мл/5 мл) с получением (2S-FNL-32) (210 мг, 92%) в виде вязкого вещества (соль ТФК).
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,27 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,07-4,03 (м, 1H), 4,01-3,97 (м, 1H), 3,52-3,48 (м, 1Н), 3,39-3,35 (м, 2Н), 3,32-3,20 (м, 3Н), 2,16 (т, J = 7,6 Гц, 2Н), 2,06-1,96 (м, 2Н), 1,89-1,80 (м, 2Н), 1,781,74 (м, 2Н), 1,43 (д, J = 6,4 Гц, 3H), 1,06 (д, J = 6,0 Гц, 3H).
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-6-метил-1-оксо-2,5-диазаспи-ро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-33).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BC (1,5 г, 4,38 ммоль) в ДХМ (25 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (2,35 мл, 13,14 ммоль), NH4Cl (310 мг, 8,76 ммоль), затем EDCI (1 г, 5,25 ммоль), НОВТ (793 мг, 5,25 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (1х30 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 5% МеОН/ДХМ, с получением соединения (2S-FNL-33) (600 мг, 41%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 4,24-4,17 (м, 1Н), 4,03-3,99 (м, 3Н), 3,67-3,46 (м, 1Н), 2,401,99 (м, 3Н), 1,68-1,62 (м, 1Н), 1,46 (с, 9Н), 1,24-1,18 (м, 6Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 342,5 [М++1].
Синтез (2S,3R)-3-гидрокси-2-(6-метил-1-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)бутанамида (2S-FNL-
34).
К перемешиваемому раствору соединения (2S-FNL-33) (200 мг, 0,58 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавили трифторуксусную кислоту (0,5 мл) при 0°C в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного материала, который растерли с н-пентаном (10 мл) с получением (2S-FNL-34) (100 мг, 71%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,35-4,27 (м, 2Н), 4,08-3,93 (м, 3Н), 2,58-2,52 (м, 1Н), 2,48-2,44 (м, 2Н), 1,92-1,86 (м, 1Н), 1,51, 1,48 (дд, J = 6,8 Гц, 6,4 Гц, 3Н), 1,31, 1,28 (дд, J = 6,0 Гц, 6,4 Гц, 3Н).
ЖХМС (ИЭР): 241,3 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-(((2S,3R)-3-(бензилокси)-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)карбамоил)-2-(гидроксиметил)-5-метилпирролидин-1-карбоксилат (2S-25).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AZ (1,1 г, 4,28 ммоль) в ДХМ (20 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (2,2 мл, 12,8 ммоль), 2S-BM (1,2 г, 4,78 ммоль), затем EDCI (2,45 г, 12,8 ммоль), НОВТ (1,7 г, 12,8 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO3 (1 х 25 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 30 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 5% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-25 (1,2 г, 57%) в виде густого белого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 5 7,93 (т, J = 7,6 Гц, 1Н), 7,71-7,26 (м, 5Н), 5,30 (ш с, 1Н), 4,65-4,61 (м, 1Н), 4,57 (с, 2Н), 3,93-3,85 (м, 2Н), 3,57-3,34 (м, 2Н), 3,17-3,09 (м, 2Н), 2,07-1,94 (м, 2Н), 1,77-1,73 (м, 4Н), 1,36-1,28 (м, 10Н), 1,20 (с, 9Н); ЖХМС: m/z 504,7 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-(бензилокси)-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)-6-метил-1-ок-со-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-26).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-25 (0,6 г, 1,19 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавили трифе-нилфосфин (0,46 г, 1,78 ммоль) и DTAD (0,4 г, 1,78 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную
смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (1 х 30 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 2% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-26 (0,2 г, 35%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-ё6): 5 7,63-7,26 (м, 5Н), 4,52 (с, 2Н), 3,91-3,77 (м, 3Н), 3,56-3,36 (м, 4Н), 2,35-2,11 (м, 4Н), 1,94-1,68 (м, 6Н), 1,39 (с, 9Н), 1,13, 1,09 (дд, J = 6,0 Гц, 5,5 Гц, 3Н), 1,04 (д, J=6,5 Гц,
3H).
ЖХМС: m/z 486,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-(бензилокси)- 1-оксо-1 -(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)-6-метил-1 -ок-со-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-27) К перемешиваемому раствору соединения 2S-26 (1,5 г, 3,09 ммоль) в метаноле (20 мл) добавили 10% Pd/C (200 мг) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2 (баллонное давление) при комнатной температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом. Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией с получением соединения 2S-27 (0,9 г, 90,9%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, CDCl3): 5 4,11 (д, J = 7,0 Гц, 1Н), 3,96-3,90 (м, 1Н), 3,73 (с, 2Н), 3,49 (д, J = 13,0 Гц, 2Н), 3,40-3,34 (м, 2Н), 2,50-2,28 (м, 4Н), 2,17-1,82 (м, 6Н), 1,53 (с, 9Н), 1,52-1,41 (м, 3Н), 1,36-1,18 (м,
3H).
ЖХМС: 396,5 [М++1].
Синтез 2-((2S,3R)-3-гидрокси-1 -оксо-1-(пирролидин-1 -ил)бутан-2-ил)-6-метил-2,5-диазаспи-
ро[3.4]октан-1-она (2S-FNL-35).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-27 (0,18 г, 0,45 ммоль) в метаноле (10 мл) добавили ТФК (3 мл) в атмосфере N2 при 0°C. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое растерли с н-пентаном (10 мл) с получением (2S-FNL-35) (0,1 г, 74,6%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-ё6): 5 9,99 (ш с, 1Н), 9,57 (ш с, 1Н), 4,32 (д, J = 7,6 Гц, 1Н), 3,93 (т, J = 6,0 Гц, 1Н), 3,81-3,75 (м, 3Н), 3,51-3,46 (м, 2Н), 3,30 (т, J = 6,8 Гц, 2Н), 2,29-2,20 (м, 3Н), 1,93-1,75 (м, 4Н), 1,68-1,63 (м, 1Н), 1,34 (д, J = 6,8 Гц, 3Н), 1,13 (д, J = 6,4 Гц, 3Н). Масса (ИЭР): m/z 296,3 [М++1].
Схема 2S-19:
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диаза-спиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-36).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BH (1,8 г, 5,05 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавили DI-PEA (2,62 мл, 15,15 ммоль), EDCI (1,92 г, 10,1 ммоль), HOBt (1,36 г, 10,1 ммоль), затем NH4Cl (803 мг, 15,15 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (30 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (1 х 50 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 50 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 4% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-36) (468 мг, 26%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-ё6): 5 7,25 (с, 2Н), 4,92-4,48 (м, 1Н), 4,34-4,01(м, 1Н), 3,97-3,72 (м, 3Н), 2,32-1,88 (м, 3Н), 1,58-1,51 (м, 1Н), 1,41(с, 9Н), 1,36-1,20 (м, 6Н), 1,16-1,07 (м, 3Н).
ЖХМС (ИЭР): 356,4 [М++1]; ВЭЖХ: 99,19%.
Синтез (2S,3R)-2-(1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гидроксибутанамида (2S-
FNL-37).
К перемешиваемому раствору (2S-FNL-36) (200 мг, 0,56 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили ТФК (0,45 мл, 5,63 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал растерли с диэтиловым эфиром/н-пентаном (50 мл/50 мл) и высушили под пониженным давлением с получением (2S-FNL-37) (140 мг, 98%) в виде гигроскопичного белого твердого вещества (соль ТФК).
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,42-4,36 (м, 1Н), 4,34-4,28 (м, 1Н), 4,27-4,15 (м, 1Н), 4,07-4,01 (м, 1Н), 2,57-2,49 (м, 1Н), 2,46-2,36 (м, 2Н), 2,01-1,90 (м, 1Н), 1,56-1,50 (м, 6Н), 1,32-1,29 (м, 3Н). ЖХМС (ИЭР): 256,4 [М++1]; ВЭЖХ (ИДСР): 93,86%.
Синтез трет-бутил2-(((2S,3R)-3-(бензилокси)-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)карбамоил)-2-(1-гидроксиэтил)-5-метилпирролидин-1-карбоксилата (2S-28).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BE (2 г, 7,32 ммоль) в ДМФА (20 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (6,7 мл, 36,5 ммоль), 2S-BM (2,6 г, 8,7 ммоль), затем HATU (3,3 г, 8,7 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (100 мл) и EtOAc (200 мл). Отделенный органический слой промыли раствором бикарбоната натрия (2 х 75 мл), раствором лимонной кислоты (2 х 50 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 50 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 40% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-28 (1 г, 27%) в виде бледно-желтой жидкости.
ЖХМС (ИЭР): 518 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-(бензилокси)-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-29).
К перемешиваемому раствору трифенилфосфина (1,5 г, 5,7 ммоль) в ТГФ (10 мл) по частям добавили DIAD (976 мг, 4,8 ммоль) и перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре. Медленно добавили соединение 2S-28 (1 г, 1,93 ммоль) в ТГФ (10 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ЖХМС) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией на сили-кагеле, элюируя 30% EtOAc в гексане, с получением соединения 2S-29 (500 мг, 63%) в виде желтой жидкости.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CDCb): 5 7,69-7,66 (м, 1Н), 7,48-7,43 (м, 1Н), 7,32-7,29 (м, 3Н), 4,68 (с, 2Н), 4,46-4,40 (м, 1Н), 4,26-4,05 (м, 2Н), 3,97-3,91 (м,0,5н), 3,87-3,81 (м, 0,5Н), 3,58-3,53 (м, 1Н), 3,40-3,32 (м, 2Н), 2,16-2,11 (м, 1Н), 2,04-1,90 (м, 2Н), 1,80-1,71 (м, 2Н), 1,41 (с, 9Н), 1,32-1,21 (м, 10Н), 1,17-1,15 (м,
3H).
ЖХМС (ИЭР): 500 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-30).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-29 (200 мг, 0,40 ммоль) в метаноле (5 мл) добавили 10% Pd/C (50 мг) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2 при комнатной температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой метанолом (10 мл). Полученный фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 1% МеОН/ДХМ, с получением соединения 2S-30 (100 г, 61%) в виде желтого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^): 5 4,93 (д, J = 5,6 Гц, 1Н), 4,26 (д, J = 9,2 Гц, 0,5 Н), 4,17 (д, J = 7,2 Гц, 0,5 Н), 4,02-3,99 (м, 1Н), 3,91-3,66 (м, 3Н), 3,33-3,30 (м, 1Н), 3,55-3,50 (м, 1Н), 3,19-3,16 (м, 1Н), 2,69 (с, 1Н), 2,13-2,03 (м, 1Н), 1,99-1,87 (м, 3Н), 1,81-1,75 (м, 2Н), 1,56-1,50 (м, 1Н), 1,39 (с, 9Н), 1,19 (д, J = 5,6 Гц, 3Н), 1,13 (д, J = 6,4 Гц, 6Н).
ЖХМС: 410,5 [М++1].
Синтез 2-((2S,3R)-3-гидрокси-1-оксо-1-(пирролидин-1-ил)бутан-2-ил)-3,6-диметил-2,5-диазаспи-ро[3.4]октан-1-она (2S-FNL-38).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-30 (300 мг, 0,73 ммоль) в ДХМ (20 мл) добавили ТФК (418 мг, 3,66 ммоль) при 0°C в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь выпарили под пониженным давлением с получением неочищенного материала, который очистили методом препаративной ВЭЖХ с получением (2S-FNL-38) (140 мг, 46%) в виде густого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,53-4,46 (м, 1Н), 4,34-4,22 (м, 2Н), 4,03 (д, J = 6,4 Гц, 1Н), 3,68 (с, 2Н), 3,52-3,41 (м,2Н), 2,44-2,37 (м, 3Н), 2,03-1,94 (м, 5Н), 1,56 (д, J = 6,4 Гц, 6Н), 1,27 (д, J=6,0 Гц, 3Н).
ЖХМС (ИЭР): 310 [М++1].
Схема 2S-I-15
HV I v
он Гхд1 Гх> " < ОВп стадия3-
N If 2S-AC, EDCI ^""N jf ''fOBn DIAD, pph3 /~~N if ^OBn Pd-C/H2
> ° ° ° ^OBn Boo' О
2S-BE 2S-BN 2S-BO 2S-BP
Синтез трет-бутил-2-(((S)-1,3-бис(бензилокси)- 1-оксопропан-2-ил)карбамоил)-2-(1-гидроксиэтил)-5-метилпирролидин-1-карбоксилата (2S-BN).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BE (3 г, 10,98 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (5,73 мл, 32,96 ммоль), 2S-AC (3,75 г, 13,17 ммоль), затем HATU (5 г, 13,17 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Отделенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 20% EtOAc в н-гексане, с получением соединения 2S-BN (2,9 г, 49%) в виде коричневого густого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, ДМСО- <16): 5 8,50 (м, 1Н), 7,33-7,27 (м, 10Н), 5,68-5,60 (м, 1Н), 5,22-5,09 (м, 2Н), 4,72-4,43 (м, 3Н), 3,89-3,63 (м, 3Н), 2,28-1,78 (м, 3Н), 1,45-1,42 (м, 1Н), 1,36 (с, 9Н), 1,26-1,04 (м, 6Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 541,6 [М++1].
Синтез трет-бутил-2-((S)-1,3-бис(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспи-ро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-BO).
К перемешиваемому раствору трифенилфосфина (3,51 г, 13,42 ммоль) в сухом ТГФ (30 мл) по частям добавили DIAD (2,21 г, 10,74 ммоль) и перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. К полученному раствору с осадком медленно добавили 2S-BN (2,9 г, 5,37 ммоль) в сухом ТГФ (15 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Неочищенный материал растерли с 30% диэтиловым эфиром в н-пентане. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией на силикаге-ле, элюируя 30% EtOAc в гексане, с получением 2S-BO (2,5 г, 89,2%) в виде коричневого густого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, ДМСО- <16): 5 7,38-7,25 (м, 10Н), 5,22-5,15 (м, 2Н), 4,80-4,73 (м, 2Н), 4,56-4,43 (м, 2Н), 3,92-3,60 (м, 3Н), 1,89-1,83 (м, 3Н), 1,50-1,44 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,22-1,18 (с, 3Н), 1,16-1,13 (м, 3Н); ЖХМС (ИЭР): m/z 523,6 [М++1].
Синтез (2S)-2-(5-(трет-бутоксикарбонил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-2-ил)-3-гид-роксипропановой кислоты (2S-BP).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BO (2,5 г, 4,78 ммоль) в метаноле (50 мл) добавили 10% P 1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО- <16): 5 4,78-4,75 (м, 1Н), 4,24-4,18 (м, 1Н), 3,86-3,81 (м, 1Н), 3,80-3,72 (м, 2Н), 3,64-3,59 (м, 1Н), 2,15-1,93 (м, 3Н), 1,55-1,50 (м, 1Н), 1,39 (с, 9Н), 1,24-1,10 (м, 6Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 343,3 [М++1].
Схема 2S-21
N ^-ОН изопропиламин N jf ^-ОН
Вое О , HATU ВосО
2S-AF 2S-FNL-39
Синтез трет-бутил-2-((S)-3-гидрокси-1-(изопропиламино)-1-оксопропан-2-ил)-1-оксо-2,5-диазаспи-ро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-39).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-AF (200 мг, 0,63 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DIPEA (0,32 мл, 1,90 ммоль), изопропиламин (0,08 мл, 0,94 ммоль), HATU (287 мг, 0,75 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой промыли лимонной кислотой (1 х 20 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 20 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный
неочищенный материал очистили препаративной ВЭЖХ с получением (2S-FNL-39) (150 мг, 67,2%) в виде белого твердого вещества. 1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО-df,): 5 7,76 (д, J = 8,4 Гц, 1Н), 5,01-4,91 (м, 1Н), 4,70 (т, J = 6,0 Гц, 1Н), 4,14-4,07 (м, 1Н), 3,99-3,80 (м, 2Н), 3,78-3,61 (м, 2Н), 3,58-3,35 (м, 2Н), 2,202,05 (м, 2Н), 1,85-1,77 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н), 1,10-1,00 (м, 6Н). Масса (ИЭР): m/z 356,6 [М++1] ВЭЖХ:
99,27%.
Схема 2S-22
Стадия 1
'0Н ЕОС1,бензиламин
2S-BH 2S-FNL-40
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1-(бензиламино)-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-40).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BH (250 мг, 0,70 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DIPEA (0,36 мл, 2,11 ммоль), EDCI (161 мг, 0,84 ммоль), HOBt (129 мг, 0,84 ммоль), затем бензиламин (82 мг, 0,77 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 5% Ме-ОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-40) (55 мг, 16%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, ДМСО^6): 5 7,31-7,20 (м, 5Н), 4,92-4,87 (м, 1Н), 4,64-4,55 (м, 1Н), 4,46-4,37 (м, 2Н), 4,22-4,10 (м, 1Н), 4,02-3,90 (м, 2Н), 2,39-1,95 (м, 3Н), 1,70-1,60 (м, 1Н), 1,37 (с, 9Н), 1,30-1,22 (м, 9Н);
ЖХМС (ИЭР): m/z 446,56 [М++1]. ВЭЖХ: 89,54%.
Схема 2S-23
VOH
Вое
2S-BH 2S-FNL-41
/ Стадия 1
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1-((4-фторбензил)амино)-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-41).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BH (500 мг, 1,40 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DIPEA (0,73 мл, 4,21 ммоль), EDCI (321 мг, 1,68 ммоль), HOBt (257 мг, 1,68 ммоль), затем 4-фторбензиламин (175 мг, 1,40 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (15 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (1 х 25 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 25 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 5% МеОН/ДХМ, затем препаративной ВЭЖХ с получением (2S-FNL-41) (150 мг, 23,07%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 7,34-7,30 (м, 2Н), 7,02-6,98 (м, 2Н), 4,65-4,59 (м, 1Н), 4,55-4,36 (м, 2Н), 4,34-4,20 (м, 1Н), 4,12-3,99 (м, 2Н), 2,39-2,31 (м, 1Н), 2,19-2,01 (м, 2Н), 1,71-1,62 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,29-1,13 (м, 9Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 464,5 [М++1]; ВЭЖХ: 96,32%.
Схема 2S-24
2S-BH 2S-FNL-42
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1-((4-метоксибензил)амино)-1-оксобутан-2-ил)-1,6-диме-тил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-42).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BH (250 мг, 0,70 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DIPEA (0,36 мл, 2,11 ммоль), EDCI (161 мг, 0,84 ммоль), HOBt (129 мг, 0,84 ммоль), затем 4-метоксибензиламин (106 мг, 0,77 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (1 х 20 мл), затем насыщенным солевым раствором (1 х 25 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали
под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 5% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-42) (60 мг, 17,9%) в виде грязновато-белого твердого вещества. 1Н-ЯМР: (400 МГц, CD3OD): 5 7,24 (д, J = 1,6 Гц, 2Н), 6,85 (д, J = 1,6 Гц, 2Н), 4,64-4,58 (м, 1Н), 4,39-4,28 (м, 1Н), 4,21-4,08 (м, 2Н), 4,06-3,99 (м, 1Н), 3,98-3,88 (м, 1Н), 3,83 (с, 3Н), 2,39-2,28 (м, 1Н), 2,22-2,13 (м, 1Н), 2,09-1,97 (м, 1Н), 1,71-1,61 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,31-1,22 (м, 9Н). ЖХМС (ИЭР): m/z 476,6 [М++1]; ВЭЖХ: 90,29%.
Схема 2S-25
Стадия 1
2S-BH 2S-FNL-43
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1 -(изопропиламино)- 1-оксобутан-2-ил)- 1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-43).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BH (500 мг, 1,40 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DIPEA (0,73 мл, 4,21 ммоль), изопропиламин (100 мг, 1,68 ммоль), HATU (798 мг, 2,1 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (15 мл), затем насыщенным солевым раствором (15 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 2% МеОН/ДХМ, затем препаративной ВЭЖХ с получением (2S-FNL-43) (100 мг, 18%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (400 МГц, D2O): 5 4,42-3,89 (м, 5Н), 2,38-2,04 (м, 3Н), 1,77-1,72 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,361,17 (м, 15Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 398,5 [М++1]; ВЭЖХ: 93,36%.
Схема 2S-26
Стадия 1
2S-BH 2S-FNL-44
Синтез трет-бутил-2-((2S,3R)-1 -(трет-бутиламино)-3-гидрокси-1 -оксобутан-2-ил)- 1,6-диметил-3-ок-со-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-44).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BH (500 мг, 1,40 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавили DIPEA (0,62 мл, 3,51 ммоль), трет-бутиламин (125 мг, 1,68 ммоль), HATU (798 мг, 2,1 ммоль) при 0°C и перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (10 мл). Отделенный органический слой промыли раствором лимонной кислоты (15 мл), затем насыщенным солевым раствором (15 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 2% МеОН/ДХМ, затем препаративной ВЭЖХ с получением (2S-FNL-44) (100 мг, 17,3%) в виде белого твердого вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, CD3OD): 5 4,53-4,50 (м, 1Н), 4,08-3,99 (м, 2Н), 3,82-3,79 (м, 1Н), 2,38-2,34 (м, 1Н), 2,20-2,17 (м, 2Н), 2,09-2,01 (м, 1Н), 1,71-1,67 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н), 1,38 (с, 9Н), 1,33-1,21 (м, 9Н).
ЖХМС (ИЭР): m/z 412,5 [М++1]; ВЭЖХ: 93,91%.
Схема 2S-27
2S-BP 2S-FNL-45
Синтез трет-бутил-2-(^)- 1-((4-фторбензил)амино)-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)- 1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-45).
К перемешиваемому раствору соединения 2S-BP (200 мг, 0,58 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавили N,N-диизопропилэтиламин (0,3 мл, 1,75 ммоль), EDCI (133 мг, 0,69 ммоль), НОВТ (93 мг, 0,69 ммоль), затем 4-фторбензиламин (79,7 мг, 0,63 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Отделенный органический слой промыли лимонной кислотой (20 мл), затем насыщенным солевым раствором (30 мл). Отделенный органический слой высушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной
хроматографией, элюируя 3% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-45) (46 мг, 17,7%) в виде густого сиропообразного вещества.
1Н-ЯМР: (500 МГц, ДМСО-с1б): 5 8,63-8,59 (м, 1H), 7,30-7,26 (м, 2Н), 7,15-7,07 (м, 2Н), 5,07-5,00 (м, 1Н), 4,31-4,21 (м, 3H), 3,89-3,62 (м, 4Н), 2,13-1,84 (м, 3H), 1,58-1,52 (м, 1H), 1,36 (с, 9Н), 1,32-1,20 (м, 3H), 1,18-1,13 (м, 3H).
ЖХМС (ИЭР): m/z 450,5 [М++1].
ВЭЖХ: 93%.
Синтез трет-бутил-2-(^)- 1-((4-фторбензил)амино)-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)- 1,6-диметил-3-оксо-2,5-диазаспиро[3.4]октан-5-карбоксилата (2S-FNL-46) К перемешиваемому раствору соединения 2S-BP (500 мг, 1,46 ммоль) в ДХМ (15 мл) добавили ^^диизопропилэтиламин (0,76 мл, 4,38 ммоль), циклобутиламин (124 мг, 1,75 ммоль), затем HATU (665 мг, 1,75 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После расходования исходного материала (по ТСХ) реакционную смесь разбавили водой (20 мл). Отделенный органический слой промыли лимонной кислотой (20 мл), затем насыщенным солевым раствором (30 мл). Органический слой высушили над безводным Na2SO4, отфильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного соединения, которое очистили колоночной хроматографией, элюируя 3% МеОН/ДХМ, с получением (2S-FNL-46) (110 мг, 19%) в виде грязновато-белого твердого вещества.
^-ЯМР: (400 МГц, ДМСО- (ИЭР): m/z 396,5 [М++1].
ВЭЖХ: 96,6%. 3
Пример 3. Анализ связывания [3Н] MK-801. Способы.
Анализы выполняли так, как описано в публикации Moskal et al. (Moskal J.R., Kuo A.G., Weiss C., Wood P.L., O'Connor Hanson A., Kelso S., Harris R.B., Disterhoft J.F., 2005. GLYX-13: a monoclonal antibody-derived peptide that acts as an N-метил-D-aspartate receptor modulator. Neuropharmacology. 49, 107787). Усиление связывания [3H]MK-801 (5 нМ; 22,5 Ки/ммоль) с хорошо промытыми кортикальными мембранами (200 мкг) крыс измеряли в неравновесных условиях (15 мин при 25°C) в присутствии увеличивающихся концентраций исследуемых соединений и 50 мкМ глутамата. Нулевые уровни определяли в отсутствие какого-либо глицинового лиганда и в присутствии 30 мкМ 5,7-дихлоркинуреновой кислоты (5,7-DCKA). Максимальное стимулирование измеряли в присутствии 1 мМ глицина, и во всех образцах содержался 50 мкМ глутамат. Облегчение связывания [3ff|MK-801 под действием исследуемых соединений рассчитывали при помощи трехпараметрического уравнения зависимости ответа от log агониста (Graph pad Prism, США), и для исследуемого соединения рассчитали эффективность (ЕС50, выраженную в пМ) и максимальную активность (% максимального стимулирования).
Результаты.
Как показано в табл. 2 и на фиг. 1, рЕС50 и максимальная активность соединения X составляют -7,4
и 38%.
Пример 4. Долговременная потенциация в гиппокампальных срезах. Способы.
Анализ выполнили так, как описано в публикации Zhang et al. (Zhang X.L., Sullivan J. A., Moskal J.R., Stanton P.K., 2008. A NMDA receptor glycine site partial agonist, GLYX-13, simultaneously enhances ДВП and reduces LTD at Schaffer collateral-CA1 synapses in hippocampus. Neuropharmacology. 55, 1238-50). Крыс Спрага-Доули (возрастом 12-18 дней; Taconic Farms) глубоко анестезировали изофлураном и обезглавили. Быстро вынули головной мозг крыс, погрузили в ледяную искусственную цереброспинальную жидкость (ACSF, 2-4°C), которая содержала (в мМ): 124 NaCl, 4 KCl, 2 MgSO4, 2 CaCb, 1,25 NaH^PO4, 26 NaHCO3, 10 глюкозы; с рН 7,4, непрерывно насыщали газом 95% 02/5% СО2). Выполнили гемисекцию головного мозга крыс, отрезали лобные доли, а отдельные полусферы наклеили с помощью цианоакри-латного клея на пластину, погруженную в ледяную ACSF, непрерывно насыщаемую газом 95% 02/5% СО2 при разрезании. Коронарные срезы (толщиной 400 мкм) отрезали с помощью Vibratome (Leica VT1200S), и перенесли в интерфейсную портативную камеру для инкубации при комнатной температуре в течение не менее одного часа, затем перенесли в интерфейсную записывающую камеру Haas, непрерывно обрызгиваемую при 3 мл/мин оксигенированной ACSF при 32 ± 0,5°C. Измерительные электроды с низким сопротивлением были выполнены из тонкостенного боросиликатного стекла (1-2 МОм после наполнения ACSF), их вставили в апикальную дендритную область конечного поля коллатералей Шаф-фера в stratum radiatum региона СА1 для записи полевых возбуждающих постсинаптических потенциалов (пВПСП). Биполярный стимулирующий электрод из нержавеющей стали (FHC Со.) поместили в колла-терально-комиссуральные волокна Шаффера в stratum radiatum CA3, а интенсивность стимула постоянным током отрегулировали для инициации приблизительно полумаксимальных пВПСП, каждый по 30 с (50-100 пА; продолжительность 100 мкс). Угол наклона пВПСП измерили до и после инициации ДВП линейной интерполяцией из 20-80% от максимально отрицательного отклонения, и подтвердили, что углы наклона стабильны в пределах ±10% по меньшей мере в течение 15 мин до начала эксперимента. Введение исследуемого соединения (1 мкМ) в кювету выполняли за 30 мин до применения испытания стимулом коллатераля Шаффера для достижения ДВП. ДВП индуцировали стимуляцией аксонов колла-тералей Шаффера четырьмя испытаниями высокочастотными тета-импульсными стимулами по 10 х 100 Гц/5 пакетов импульсов в каждом, которые выполняли с интервалами между импульсами 200 мс. Продолжительность каждого испытания составляла 2 с, и испытания выполняли с интервалом 15 с. Сигналы записывали с помощью амплификатора Multiclamp 700B и оцифровывали на приборе Digidata 1322 (Ax-on Instruments, США). Данные анализировали с помощью программы pClamp (версия 9, Axon Instruments) на IBM-совместимом персональном компьютере.
Результаты.
Как проиллюстрировано на фиг. 2, соединение X, испытанное в концентрации 1 мкМ, увеличивает долговременную потенциацию после высокочастотной стимуляции спровоцированных коллатералями Шаффера ВПСТ NMDA крыс, записанную в пирамидальных нейронах СА1.
Эквиваленты.
Специалисты в данной области понимают или могут установить с помощью не более чем стандартных экспериментов множество эквивалентов конкретных вариантов реализации настоящего изобретения, описанных в настоящем документе. Подразумевается, что такие эквиваленты входят в рамки следующей формулы изобретения.
Включение посредством ссылки.
Полное содержание всех патентов, опубликованных патентных заявок, веб-сайтов и других ссылок, цитируемых в настоящем документе, явным образом включено в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, представленное формулой (I)
Rb R2 R?
R3 ° о R5 (I)
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид, где
Rb представляет собой Н;
R1 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R2 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R3 выбран из группы, состоящей из Н и азотзащитной группы;
где азотзащитная группа выбрана из группы, состоящей из 9-флуоренилметилоксикарбонила, трет-бутоксикарбонила, карбобензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, ацетила, трифторацети-ла, бензоила, бензила, п-метоксибензила, п-метоксифенила, 3,4-диметоксибензила, трифенилметила, п-толуолсульфонила, -С(О)-(Ж31 и -С(О^32; где
R31 представляет собой C1-C6 алкил;
R32 представляет собой C1-C6 алкил;
R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, X и -C1-C6 алкилен-Х, где X выбран из группы, состоящей из:
(i) C3-C6 циклоалкила;
(ii) гетероарила, содержащего от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкила), О и S; и
(iii) фенила;
или R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют
гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R4 и R5), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R';
R' в каждом случае независимо выбран из Н и C1-C6 алкила;
Re выбран из группы, состоящей из -ОН и -OC(O)-C1-C6 алкила; и
R7 представляет собой Н или C1-C6 алкил.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н.
3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что R2 представляет собой Н.
4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R3 представляет собой Н.
5. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R3 представляет собой азотзащитную
группу.
6. Соединение по п.5, отличающееся тем, что R3 имеет формулу -OX^OR^.
7. Соединение по п.6, отличающееся тем, что R31 представляет собой трет-бутил.
8. Соединение по п.5, отличающееся тем, что R3 имеет формулу -C(O)R32.
9. Соединение по п.8, отличающееся тем, что R32 представляет собой -СН3 или изопропил.
10. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила и -C1-C6 алкилен-Х.
11. Соединение по п.10, отличающееся тем, что R4 и R5, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и -C1-C6 алкилен-Х.
12. Соединение по п.11, отличающееся тем, что один из R4 и R5 представляет собой Н, а другой представляет собой -C1-C6 алкилен-Х.
13. Соединение по любому из пп.1 и 10-12, отличающееся тем, что -C1-C6 алкилен-Х представляет
собой -СН2-Х.
14. Соединение по любому из пп.1 и 10-13, отличающееся тем, что X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, где 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S.
15. Соединение по любому из пп.1-11, отличающееся тем, что R4 и R5 представляют собой Н.
16. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что R4 и R5 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклил, содержащий от 4 до 6 кольцевых атомов; причем указанный гетероциклил содержит не более двух кольцевых гетероатомов (включая атом азота, присоединенный к R4 и R5), а второй кольцевой гетероатом, при его наличии, независимо выбран из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкила), О и S; и причем указанный гетероциклил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, оксо, C1-C6 алкила, гидроксила, C1-C6 алкокси и -N(R')R'.
17. Соединение по п.16, отличающееся тем, что R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолиди-нила.
18. Соединение по п.17, отличающееся тем, что R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидинильное кольцо.
19. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н или CH3; R2 представляет собой Н или CH3; R3 представляет собой Н; a R4 и R5, взятые вместе, образуют пирролидинильное кольцо.
20. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н или CH3; R2 представляет собой Н или CH3; R3 представляет собой Н; a R4 и R5 представляют собой Н.
21. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н или CH3; R2 представляет собой Н или CH3; R3 представляет собой Н и один из R4 и R5 представляет собой Н, а другой представляет собой -СН2-Х, причем X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, при этом 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S.
22. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н или CH3; R2 представляет собой Н или CH3; R3 представляет собой азотзащитную группу; a R1 и R5, взятые вместе, образуют пир-ролидинильное кольцо.
23. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н или CH3; R2 представляет собой Н или CH3; R3 представляет собой азотзащитную группу; a R4 и R5 представляют собой Н.
24. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н или CH3; R2 представляет собой Н или CH3; R3 представляет собой азотзащитную группу и один из R4 и R5 представляет собой Н, а другой представляет собой -СН2-Х, причем X представляет собой фенил или гетероарил, содержащий от 5 до 6 кольцевых атомов, причем 1, 2 или 3 кольцевых атома независимо выбраны из группы, состоящей из N, NH, N(C1-C3 алкил), О и S.
25. Соединение по любому из пп.1-24, отличающееся тем, что R6 представляет собой -ОН.
26. Соединение по любому из пп.1-25, отличающееся тем, что R7 представляет собой C1-C6 алкил.
27. Соединение по п.26, отличающееся тем, что R7 представляет собой -СН3.
28. Соединение по п.1, отличающееся тем, что это соединение выбрано из следующих соединений:
14.
14.
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.
29. Фармацевтическая композиция для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, содержащая соединение по любому из пп.1-28 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
30. Применение соединения по любому из пп.1-28 для получения лекарственного средства для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.
31. Соединение, представленное формулой (I)
Rb R2 Ry
R3 ° о R5 (I)
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид, где
Rb представляет собой Н;
R1 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R2 представляет собой Н или C1-C6 алкил;
R3 выбран из группы, состоящей из Н и азотзащитной группы;
где азотзащитная группа выбрана из группы, состоящей из 9-флуоренилметилоксикарбонила, трет-бутоксикарбонила, карбобензилоксикарбонила, п-метоксибензилоксикарбонила, ацетила, трифторацети-ла, бензоила, бензила, п-метоксибензила, п-метоксифенила, 3,4-диметоксибензила, трифенилметила, п-толуолсульфонила, -C(O)-OR31 и -C(O)R32; где
R31 представляет собой C1-C6 алкил;
R32 представляет собой C1-C6 алкил;
R4 и R5 независимо представляют собой Н или C1-C6 алкил, или R4 и R5, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членное гетероциклическое кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, ци-ано, оксо, C1-C6 алкила, -ОН, C1-C6 алкокси и -N(R')R', причем R' для каждого случая независимо выбран из Н или C1-C6 алкила;
R6 выбран из группы, состоящей из -ОН и -OC(O)-C1-C6 алкила; и
R7 представляет собой Н или C1-C6 алкил.
32. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н.
33. Соединение по п.31 или 32, отличающееся тем, что R2 представляет собой Н.
34. Соединение по любому из пп.31-33, отличающееся тем, что R3 представляет собой Н.
35. Соединение по любому из пп.31-34, отличающееся тем, что R4 и R5 представляют собой Н.
36. Соединение по пп.31-34, отличающееся тем, что R4 и R5, взятые вместе, образуют 4- или 5-членное гетероциклическое кольцо, выбранное из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиразолидинила, изоксазолидинила, имидазолидинила, оксазолидинила, тиазолидинила и изотиазолиди-нила.
37. Соединение по любому из пп.31-34, отличающееся тем, что R и R5, взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо.
38. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н; R2 представляет собой Н; R3 представляет собой Н; a R4 и R5, взятые вместе, образуют пирролидиновое кольцо.
39. Соединение по п.31, отличающееся тем, что R1 представляет собой Н; R2 представляет собой Н; R3 представляет собой Н и R4 и R5 представляют собой Н.
40. Соединение по п.31, отличающееся тем, что это соединение выбрано из группы, состоящей из
о о ^\ Л VNH2 ^ Л VNH2 I-v о
ОН. 9р^о
М О Н О I и ° /^ОН
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.
41. Соединение по п.31, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.
42. Соединение по п.41, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемая соль и/или N-оксид. 43. Соединение по п.41, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемая соль и/или N-оксид. 44. Соединение по п.31, где соединение представляет собой
VNH2
N (
-N |f VOH 1 о
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид. 45. Соединение по п.44, где соединение представляет собой
СНз НО" Л
О о
СНз
н3с
или его фармацевтически приемлемая соль, стереоизомер и/или N-оксид.
46. Фармацевтическая композиция для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, содержащая соединение по любому из пп.31-45 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
47. Применение соединения по любому из пп.31-45 для получения лекарственного средства для лечения депрессии, болезни Альцгеймера, расстройства дефицита внимания, шизофрении или тревожного расстройства у пациента, нуждающегося в этом.
46.
л s s
100908070605040 30 20 10 0
-15 -14 -13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 Log концентрации (М)
Фиг. 1
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032649
- 1 -
032649
- 1 -
032649
- 1 -
032649
- 1 -
032649
- 9 -
032649
- 14 -
032649
- 22 -
032649
- 22 -
032649
- 22 -
032649
- 28 -
032649
- 28 -
032649
- 30 -
032649
- 30 -
032649
- 47 -
032649
- 47 -
032649
- 49 -
032649
- 49 -
032649
- 51 -
032649
- 51 -
032649
- 59 -
032649
- 59 -
032649
- 66 -
032649
- 67 -
032649
- 69 -
032649
- 69 -
032649
- 69 -
032649
- 69 -
032649
- 69 -
032649
- 69 -
032649
- 70 -