EA 32644B1 20190628 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2019\PDF/032644 Полный текст описания EA201790445 20151007 Регистрационный номер и дата заявки US62/062,086 20141009 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2015/054533 Номер международной заявки (PCT) WO2016/057698 20160414 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа [PDF] eab21906 Номер бюллетеня [**] ПРОИЗВОДНЫЕ ИНДОЛИНОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Название документа [8] C07D401/10, [8] A61K 31/404, [8] A61K 31/4155, [8] A61K 31/4439, [8] C07D403/10, [8] C07D209/34, [8] A61P 35/00 Индексы МПК [US] Вернье Жан-Мишель Сведения об авторах [US] ОНКТЕРНАЛ ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Сведения о патентообладателях [US] ОНКТЕРНАЛ ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000032644b*\id
больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение, или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, имеющее структуру формулы (I) где R 1 и R 4 представляют собой Cl; R 2 и R 3 представляют собой Н; А выбран из группы, состоящей из Н и С 1-6 алкила; D выбран из группы, состоящей из -OH и -O(С 1-6 алкила); R 5 и R 6 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, F и С 1-6 алкила; или R 5 и R 6 , взятые вместе, образуют C 3-8 циклоалкильное кольцо; R 12 независимо выбран из группы, состоящей из C 3-8 циклоалкила и где R 7 , R 8 , R 10 и R 11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, гидрокси, галогена, CN, С 1-6 алкила, -OC 1-6 алкила, 5-6-членного гетероарила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO 2 H, -CO 2 (С 1-6 алкила), -CONH 2 , -SO 2 (С 1-6 алкила), -SO 2 NH 2 , -SO 2 NH(С 1-6 алкила), -SO 2 N(С 1-6 алкила) 2 , C 3-8 моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -N(С 1-6 алкила) 2 или -O(С 1-6 алкила), и C 3-8 гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О; и R 9 выбран из группы, состоящей из CN, 5-6 членного гетероарила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO 2 H, -CO 2 (С 1-6 алкила), -SO 2 (С 1-6 алкила), -SO 2 NH 2 , -SO 2 NH(С 1-6 алкила), -SO 2 N(С 1-6 алкила) 2 , C 3-8 моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -N(С 1-6 алкила) 2 или -O(С 1-6 алкила) и C 3-8 гетероциклоалкила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О.

2. Соединение по п.1, в котором R 9 выбран из группы, состоящей из азиридинила, азетидинила, пирролидинила и морфолинолила.

3. Соединение по п.1, в котором R 9 представляет собой циклопропил.

4. Соединение по п.1, имеющее структуру формулы (Ia) или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, где R 1 и R 4 представляют собой Cl; R 2 и R 3 представляют собой Н; R 7 , R 8 , R 10 и R 11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и галогена; R 9 независимо выбран из группы, состоящей из C 3-8 моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -N(С 1-6 алкила) 2 или -O(С 1-6 алкила), и C 3-8 гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О.

5. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из: или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из: или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение по п.1, имеющее структуру или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение по п.1, имеющее структуру или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Применение соединения по любому из пп.1-8 для ингибирования пролиферации клетки, где клетка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS или содержит слитый ген ETS.

10. Применение п.9, где ген ETS или слитый ген ETS выбран из группы, состоящей из FLI1, ERG, ETV1 и ETV4.

11. Применение соединения по любому из пп.1-8 для уничтожения или ингибирования роста неопластической клетки.

12. Применение по пп.9-11, в котором клетка представляет собой раковую клетку, причем рак выбран из группы, состоящей из саркомы Юинга, рака предстательной железы, глиобластомы, острого миелоидного лейкоза, рака молочной железы, рака головы, рака шеи, меланомы, немелкоклеточного рака легких, рака яичников и рака матки.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение, или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, имеющее структуру формулы (I) где R 1 и R 4 представляют собой Cl; R 2 и R 3 представляют собой Н; А выбран из группы, состоящей из Н и С 1-6 алкила; D выбран из группы, состоящей из -OH и -O(С 1-6 алкила); R 5 и R 6 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, F и С 1-6 алкила; или R 5 и R 6 , взятые вместе, образуют C 3-8 циклоалкильное кольцо; R 12 независимо выбран из группы, состоящей из C 3-8 циклоалкила и где R 7 , R 8 , R 10 и R 11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, гидрокси, галогена, CN, С 1-6 алкила, -OC 1-6 алкила, 5-6-членного гетероарила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO 2 H, -CO 2 (С 1-6 алкила), -CONH 2 , -SO 2 (С 1-6 алкила), -SO 2 NH 2 , -SO 2 NH(С 1-6 алкила), -SO 2 N(С 1-6 алкила) 2 , C 3-8 моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -N(С 1-6 алкила) 2 или -O(С 1-6 алкила), и C 3-8 гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О; и R 9 выбран из группы, состоящей из CN, 5-6 членного гетероарила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO 2 H, -CO 2 (С 1-6 алкила), -SO 2 (С 1-6 алкила), -SO 2 NH 2 , -SO 2 NH(С 1-6 алкила), -SO 2 N(С 1-6 алкила) 2 , C 3-8 моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -N(С 1-6 алкила) 2 или -O(С 1-6 алкила) и C 3-8 гетероциклоалкила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О.

2. Соединение по п.1, в котором R 9 выбран из группы, состоящей из азиридинила, азетидинила, пирролидинила и морфолинолила.

3. Соединение по п.1, в котором R 9 представляет собой циклопропил.

4. Соединение по п.1, имеющее структуру формулы (Ia) или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, где R 1 и R 4 представляют собой Cl; R 2 и R 3 представляют собой Н; R 7 , R 8 , R 10 и R 11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и галогена; R 9 независимо выбран из группы, состоящей из C 3-8 моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -N(С 1-6 алкила) 2 или -O(С 1-6 алкила), и C 3-8 гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О.

5. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из: или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из: или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение по п.1, имеющее структуру или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение по п.1, имеющее структуру или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Применение соединения по любому из пп.1-8 для ингибирования пролиферации клетки, где клетка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS или содержит слитый ген ETS.

10. Применение п.9, где ген ETS или слитый ген ETS выбран из группы, состоящей из FLI1, ERG, ETV1 и ETV4.

11. Применение соединения по любому из пп.1-8 для уничтожения или ингибирования роста неопластической клетки.

12. Применение по пп.9-11, в котором клетка представляет собой раковую клетку, причем рак выбран из группы, состоящей из саркомы Юинга, рака предстательной железы, глиобластомы, острого миелоидного лейкоза, рака молочной железы, рака головы, рака шеи, меланомы, немелкоклеточного рака легких, рака яичников и рака матки.

Евразийское 032644 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.06.28
(21) Номер заявки 201790445
(22) Дата подачи заявки
2015.10.07
(51) Int. Cl.
C07D 401/10 (2006.01) A61K31/404 (2006.01) A61K31/4155 (2006.01) A61K31/4439 (2006.01) C07D 403/10 (2006.01) C07D 209/34 (2006.01) A61P35/00 (2006.01)
(54) ПРОИЗВОДНЫЕ ИНДОЛИНОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
(31) 62/062,086
(32) 2014.10.09
(33) US
(43) 2017.09.29
(86) PCT/US2015/054533
(87) WO 2016/057698 2016.04.14
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ОНКТЕРНАЛ ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Вернье Жан-Мишель (US)
(74) Представитель:
Нилова М.И. (RU)
(56) NAGLE, AMRITA A. ET AL.: "3-(2-
Oxoethylidene)indolin-2-one Derivatives Activate Nrf2 and Inhibit NF-kappa. B: Potenti al Candidates for Chemoprevention", CHEM. MED. CHEM, vol. 9, no. 8, 2014, pages 1763-1774, XP002751371, DOI: 10.1002/ CMDC.201402038, compounds B1-B18
YU, JIN-SHENG ET AL.: "Highly efficient "on water" catalyst-free nucleophilic addition reactions using difluoroenoxysilanes: Dramatic fluorine effects", ANGEWANDTE CHEMIE, INTERNATIONAL EDITION, vol. 53, no. 36, 2014, pages 9512-9516, XP002751372, DOI: 10.1002/ANIE.201404432, compounds 6a-6f
ZHONG, FANGRUI ET AL.: "Molecular sieve mediated decarboxylative Mannich and aldol reactions of beta-ketoacids" , TETRAHEDRON LETTERS, vol. 54, no. 32, 2013, pages 4333-4336, XP002751373, DOI: 10.1016/ J.TETLET.2013.06.030, compounds 1,6-14
LU, YU ET AL.: "Synthesis of planar chiral[2.2]paracyclophane-based aminothioureas and their application in asymmetric aldol reactions of ketones with isatins", TETRAHEDRON: ASYMMETRY, vol. 24, no. 18, 2013, pages 1082-1088, XP002751374, DOI: 10.1016/ J.TETASY.2013.07.023, compounds 9-12
SAIDALIMU, IBRAHIM ET AL.: "Highly enantioselective construction of 3-hydroxy oxindoles through a decarboxylative aldol addition of trifluoromethyl.alpha.-fluorinated gem-diols to N-benzyl
isatins", ANGEWANDTE CHEMIE, INTERNATIONAL
EDITION , vol. 52, no. 21, 2013, pages 5566-5570, XP002751375, DOI: 10.1002/ANIE.201301443, Scheme 2, 1st compound; table 2: compounds 3aj, 3ak
LIU, YUN-LIN ET AL.: "Organocatalytic asymmetric synthesis of 3-difluoroalkyl 3hydroxyoxindoles", CHEMICAL COMMUNICATIONS
CAMBRIDGE, vol. 48, 2012, pages 1919-1921, XP002751376, DOI: 10.1039/C2CC17140F, compounds 4,
8a-8g, 8j-8p
' RICHTER, LARS ET AL.: "Diazepam-bound GABAA receptor models identify new benzodiazepine
binding-siteligands", NATURE CHEMICAL BIOLOGY,
vol. 8, no. 5, 2012, pages 455-464, XP002751377, DOI: 10.1038/NCHEMBIO.917, table 2; compounds 15, 15f, 15g
BYLER, KENDALL G. ET AL.: " Identification of benzoylisoquinolines as potential anti-Chagas agents", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 20, no. 8, 2012, pages 2587-2594, XP002751378, DOI: 10.1016/J. BMC.2012.02.046, table 3; compound CHEMBL259139
ALLU, SURESH ET AL.: "Enantioselective organocatalytic aldol reaction of unactivated ketones with isatins", TETRAHEDRON LETTERS, vol. 52, no. 32, 2011, pages 4080-4083, XP002751379, DOI: 10.1016/ J.TETLET.2011.05.013, compounds 4a-4j, 4o
KLOECK, CORNELIUS ET AL.: "Acylideneoxoindoles: A new class of reversible inhibitors
of human transglutaminase 2", BIOORGANIC &
MEDIClNAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 21, no. 9, 2011, pages 2692-2696, XP002751380, DOI: 10.1016/ J.BMCL.2010.12.037, intermediate (b--> c) for compounds
20-25
GUO, QUNSHENG ET AL.: "Quinidine thiourea-catalyzed aldol reaction of unactivated ketones: highly enantioselective synthesis of 3-alkyl-3-hydroxyindolin-2-
ones", ANGEWANDTE CHEMIE, INTERNATIONAL
EDITION , vol. 49, no. 49, 2010, pages 9460-9464, XP002751381, DOI: 10.1002/ANIE.201004161, table 2; compounds 12.7-12.12, 12r
BECERRA, DIANA ET AL.: "Hydrogen-bonding patterns in 3-alkyl-3-hydroxyindolin-2-ones", ACTA
CRYSTALLOGRAPHICA, SECTION C: CRYSTAL
STRUCTURE COMMUNICATIONS, vol. 66, no. 2, 2010, pages o79-o86, XP002751382, DOI: 10.1107/ S0108270110001058, compounds (I)-(VI)
ERKIZAN, HAYRIYE V. ET AL.: "A small molecule blocking oncogenic protein EWS-FLI1 interaction with RNA helicase A inhibits growth of Ewing's sarcoma", NATURE MEDICINE, vol. 15, no. 7, 2009, pages 750-757, XP002751383, DOI: 10.1038/NM.1983, figure 3;
compounds NSC635473, YK-4-279
CHEN, WEN-BING ET AL.: "Catalyst-free aldol condensation of ketones and isatins under mild reaction conditions in DMF with molecular sieves 4.ANG. as additive", GREEN CHEMISTRY, vol. 11, no. 9, 2009, pages 1465-1476, XP002751384, DOI: 10.1039/B906684E, compounds 3a-3k, 3q-3z, 3a1
SEGURA-CABRERA, ALDO ET AL.: "Structure-based prediction of Mycobacterium tuberculosis shikimate kinase inhibitors by high-throughput virtual screening", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 18, no. 11, 2008, pages 3152-3157, XP002751385, DOI: 10.1016/J.BMCL.2008.05.003. Chem. Abs. RNs 404842-60-0, 442567-97-7
MACAEV, F.Z. ET AL.: "Synthesis and structure of new oxoindoles", CHEMISTRY OF HETEROCYCLIC COMPOUNDS, vol. 43, no. 3, 2007, pages 298-305, XP002751386, DOI: 10.1007/ S10593-007-0045-6, compounds 8-15, 18
LOPEZ-ALVARADO, PILAR ET AL.:
"New diastereoselective synthesis of 3-alkylidene-1-
methyloxindoles", SYNTHESIS, vol. 1, 2002, pages 104-110, XP002751387, DOI: 10.1055/S-2002-19299,
compounds 2-15
EL-GENDY, ADEL A. ET AL.: "Synthesis
and antimicrobial activity of some new 2-indolinone derived oximes and spiro-isoxazolines", ARCHIVES OF
PHARMACAL RESEARCH, vol. 23, no. 4, 2000, pages
310-314, XP002751388, DOI: 10.1007/BF02975439, table I ; compounds 9-20
GRIGG, RONALD ET AL.: "Silver
acetate catalyzed cycloadditions of isocyanoacetates", TETRAHEDRON, vol. 55, no. 7, 1999, pages 2025-2044, XP002751389, DOI: 10.1016/50040-4020(98)01216-2,
Chem. Abs. Rn 222420-93-1
JOSHI, KRISHNA C. ET AL.: "Studies in spiroheterocycles. Part XXVIII. Investigation of the reaction of 3-(aroylmethylene)indolin-2-ones with thiosemicarbazide and synthesis of spiro[3H-indole-3,4'(3'H)-pyrimidin]-2(1H)-ones", HETEROCYCLES, vol. 31, no.
3, 1990, pages 473-477, XP008178197, ISSN: 0385-5414,
compound IIia
JOSHI, KRISHNA C. ET AL.: "Investigation
of the reaction of 1,3-dihydro-3-(2-phenyl-2-oxoethylidene)indol-2(H)-ones with 3-amino-1-phenyl-2-
pyrazolin-5-one", INDIAN JOURNAL OF CHEMISTRY, SECTION B: ORGANIC CHEMISTRY INCLUDING MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 29B, no. 10, 1990, pages 933-936, XP008178196, intermediates to prepare compounds I
JOSHI, KRISHNA C. ET AL.: "Synthesis and
antibacterial activity of some novel fluorine containing spiro[3H-indole-3,3'-[3H]-pyrazol]-2(1H)-one derivatives",
JOURNAL OF THE INDIAN CHEMICAL SOCIETY, vol.
67, no. 9, 1990, pages 753-756, XP008178194, compounds
(1)
JOSHI, K.C. ET AL.: "Studies in spiro
heterocycles. Part 4: investigation of the reactions of fluorinated 3-aroylmethyleneindol-2-ones with hydrazine and phenylhydrazine and synthesis of spiro[indole-3,3-pyrazol]-2-ones", PHARMAZIE, vol. 40, no. 1, 1985, pages 21-22, XP008178195, compounds 3
BAYOUMY B.E. ET AL: "Studies on
Spiroheterocyclic Nitrogen Compounds. Part 1: Synthesis of Some New Spiro Pyrazolines, Isoxazolines and Pyrimidinethiones Containing Benzanilide Moiety",
JOURNAL OF THE INDIAN CHEMICAL SOCIETY, THE INDIAN CHEMICAL SOCIETY, CALCUTTA; IN,
vol. LXI, 1 June 1984 (1984-06-01), pages 520-522, XP008175382, ISSN: 0019-4522, compounds 2a-d
PAJOUHESH, HOSSEIN ET AL.: "Potential
anticonvulsants. VI: Condensation of isatins with cyclohexanone and other cyclic ketones", JOURNAL
OF PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 72, no. 3,
1983, pages 318-321, XP002751390, DOI: 10.1002/JPS. 2600720330, compounds of table IV
POPP, F.D. ET AL.: "Synthesis of 3-
hydroxy-3-phenacyloxindole analogs", JOURNAL OF
PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 68, no. 4,
1979, pages 519-520, XP002751391, DOI: 10.1002/ JPS.2600680437, table I; compounds 1, 2, 4, 5, 7-13
KOBAYASHI, GORO ET AL.: "Studies on
Indole derivatives. I. Synthesis of 3-phenyl-9H-pyridazino-[3,4-b]indole derivatives", CHEMICAL &
PHARMACEUTICAL BULLETIN, vol. 12, no. 10, 1964, pages 1120-1135, XP002751392, DOI: 10.1248/
CPB.12.1129, compounds of table I
PIETRA, SILVIO ET AL.: "The stereochemistry of
propiophenone addition to isatin", GAZZETTA CHIMICA
ITALIANA, vol. 92, no. XII, 1962, pages 1422-1431, XP008178198, compounds IA, IB and compounds of scheme I
LUTZ R.E. ET AL.: "ACID-CATALYZED
REARRANGEMENTS OF THE .GAMMA.-
(METHYLANILINE)LACTONE OF CIS-.BETA.-(P-
BROMOBENZOYL)-.BETA.-METHYLACRYLIC ACID,
AND OF TRANS-.BETA.-(P-
BROMOBENZOYL)ACRYLIC METHYLANILIDE, TO OXINDOLES", THE JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 25, 1 February 1960 (1960-02-01), pages 193-196, XP002393294, ISSN: 0022-3263, DOI: 10.1021/
J001072A010, compounds V(a), V(b)
CN-A-103435606
WO-A1-2013155341 WO-A2-2012078519 WO-A1-2010083505 WO-A2-2006113864
или их стереоизомеры или фармацевтически приемлемые соли, где A, D, R1, R2, R3, R4, R5, R6 и R12 имеют значения, определенные в настоящем документе. Указанные соединения представляют собой производные индолинона, которые действуют как ингибиторы фактора транскрипции EWS-FLI1. Также предложено применение указанных соединений для ингибирования пролиферации клетки, где клетка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS или содержит слитый ген ETS.
Родственные заявки
Заявка на данное изобретение испрашивает приоритет согласно предварительной заявке США № 62/062086, поданной 9 октября 2014 г., имеющей название "Производные индолинона и их применение" , которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
Уровень техники
Область.
Предложены соединения - производные индолинона, которые действуют как ингибиторы фактора транскрипции EWS-FLI1. Также предложены фармацевтические композиции, содержащие такие производные индолинона, способы синтеза производных индолинона, способы лечения с применением производных индолинона и способы анализа для идентификации ингибиторов онкобелка EWS-FLI.
Описание.
Фактор транскрипции EWS-FLI, присутствующий в большом количестве различных опухолей семейства саркомы Юинга (ОССЮ), был описан более десяти лет назад. Прогресс в лечении саркомы Юинга, второй по распространенности опухоли костей у детей и подростков, привел к улучшению выживаемости пациентов с локализованными опухолями. Но положение пациентов с метастазами остается плохим, и лечение связано с краткосрочными и долгосрочными токсическими эффектами. Семейство опухолей саркомы Юинга характеризуется хромосомной транслокацией, в результате которой образуется EWS-FLI1, слитый онкогенный фактор транскрипции, непрерывная экспрессия которого считается критическим фактором для выживания клеток ОССЮ (Balamuth, N.J., Womer, R.B., Lancet Oncology, 11, 184192 (2010)).
Исследования in vitro и in vivo продемонстрировали, что ингибирование связывания онкобелка EWS-FLI1 с РНК-геликазой A (RHA) приводит к снижению пролиферации линий клеток ОССЮ и снижению объема опухоли. EWS-FLI1 не обладает ферментативной активностью, но белок-белковое взаимодействие между РНК-геликазой A (RHA) и EWS-FLI1 модулирует онкогенез и соответственно необходимо для поддержания роста опухоли (Hyariye N. Erkizan et al., Nature Medicine, 15(7):750-756 (2009)). Принцип разрушения ключевых белковых взаимодействий может найти применение в лечении заболеваний, включая саркомы с аналогичными транслокациями и лейкозы с транслокациями MLL ((Helman L.J., Meltzer P. Mechanisms of sarcoma development. Nat. Rev. Cancer, 2003; 3(9):685-94) и Pui C.H. et al., N. Engl. J. Med. 2004; 350(15):1535-48). Кроме того, белки с нарушенной структурой могут быть отличными мишенями терапии благодаря присущим им биохимическим свойствам (Cheng Y., LeGall T., Oldfield C.J., et al., Trends Biotechnol. 2006; 24(10):435-42).
Краткое описание
Несмотря на годы исследований антисмысловых и миРНК, нацеленных на EWS-FLI1, in vitro и на ксенографтах, ни одно из исследованных средств на настоящий момент не нашло применения в лечении людей из-за ненадлежащих свойств доставки и стабильности. Соответственно, существует потребность в улучшенных терапевтических средствах для лечения таких нарушений как опухоли семейства ОССЮ.
FLI-1 принадлежит к семейству факторов транскрипции ETS, которые в норме активны в ходе развития эмбриона, но не после рождения. Существует 29 членов этого семейства факторов транскрипции, четыре из которых, FLI-1, ETV1, ETV4 и ERG, связывают с различными видами рака.
Терапевтические соединения, нацеленные на ингибирование связывания онкогенных белков слияния FLI1, ETV1, ETV4 или ERG или самих факторов транскрипции, найдут применение в лечение раковых заболеваний, включая семейство опухолей саркомы Юинга, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, глиобластому, немелкоклеточный рак легких и несколько других видов рака.
Предпочтительные варианты реализации удовлетворяют эти потребности, а также обеспечивают другие преимущества.
где R1 и R4 представляют собой Cl;
R2 и R3 представляют собой Н;
А выбран из группы, состоящей из Н и С1-6алкила;
D выбран из группы, состоящей из -OH и ^(С^алкила);
R5 и R6 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, F и С1-6алкила; или
R5 и R6, взятые вместе, образуют C3-8циклоалкильное кольцо;
Некоторые варианты реализации, раскрытые в настоящем документе, относятся к соединению формулы (I), включая такие формы, как стереоизомеры и фармацевтически приемлемые соли таких соединений:
R12 независимо выбран из группы, состоящей из С3 8циклоалкила и
где R7, R8, R10 и R11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, гидрокси, галогена, CN, С1-6алкила, -OC^^^m^ 5-6-членного гетероарила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO2H, -ГО2(С1-6алкила), -CONH2, -SO2(С1-6алкила), -SO2NH2, -SO2NH(С1-6алкила), -SO2N(С1-6алкила)2, C3-8моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -^С1-6алкила)2 или ^(С^алкила), и C3-8гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О;
R9 выбран из группы, состоящей из CN, 5-6-членного гетероарила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO2H, -CO2(С1-6алкила), -SO2(С1-6алкила), -SO2NH2, -SO2NH(С1-6алкила), -SO2N(С1-6алкила)2, C3-8моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -^С1-6алкила)2 или ^(С^алкила), и C3-8гетероциклоалкила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О.
Некоторые варианты реализации, раскрытые в настоящем документе, относятся к применению одного или более соединений формулы (I), включая такие его формы, как стереоизомеры или фармацевтически приемлемая соль, для ингибирования пролиферации клетки, где клетка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS или содержит слитый ген ETS.
Эти и другие варианты реализации ниже описаны более подробно.
Подробное описание
Нижеследующее описание и примеры в подробностях иллюстрируют один из предпочтительных вариантов реализации настоящего изобретения. Специалисту в данной области будет понятно, что существуют многочисленные варианты и модификации этого изобретения, входящие в его объем. Соответственно, описание одного из предпочтительных вариантов реализации не следует воспринимать как ограничение объема настоящего изобретения.
Хромосомные транслокации, приводящие к образованию онкогенных факторов транскрипции, являются отличительной чертой ряда различных опухолей, включая многие саркомы. Опухоли семейства саркомы Юинга (ОССЮ) характеризуются транслокацией t(11; 22)(q24; q12), в результате которой образуется критический участок 1 саркомы Юинга и слитый фактор транскрипции с участком вирусной интеграции саркомы Френда 1 (EWS-FLI1), отвечающий за высокозлокачественный фенотип этой опухоли. Непрерывная экспрессия EWS-FLI1 считается критическим фактором для выживания клеток ОССЮ. Благодаря тому, что EWS-FLI1 специфичен для злокачественных клеток, он представляет собой привлекательную мишень лечения саркомы Юинга. Кроме того, экспериментальные данные указывают на то, что экспрессия EWS/FLI необходима для опухолевых клеток саркомы Юинга. In vitro направленное воздействие на EWS-FLI1 антисмысловыми олигодезоксинуклеотидами и РНК интерференции (РНКи) подавляет жизнеспособность, рост и онкогенную трансформацию клеток саркомы Юинга, что подкрепляет мысль о том, что ослабление EWS-FLI1 может быть возможным подходом к лечению. Терапевтические агенты согласно предпочтительным вариантам настоящего изобретения имеют широкий спектр применения для более обширной группы опухолей и полезны в качестве терапевтических средств для лечения других злокачественных состояний, связанных с факторами транскрипции, таких как саркомы и лейкозы, устойчивые к химиотерапии, и плохо поддающиеся лечению опухоли, такие как саркома Юинга.
Определения
В случае отсутствия другого определения все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют значение, обычно подразумеваемое средними специалистами в данной области. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, цитируемые в данном документе, включены в него полностью посредством ссылки, если не указано иное. В случае, если для какого-либо термина в настоящем документе приведено несколько определений, в отсутствие других указаний большую силу имеют определения, приведенные в настоящем разделе.
В настоящем тексте любая группа(ы) "R", такая(ие) как, без ограничения, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 и R12, представляют заместители, которые могут быть присоединены к указанному атому. Группа R может быть замещенной (содержащей заместители) или незамещенной. Если две группы "R" описаны как "взятые вместе", эти группы R и атомы, к которым они присоединены, могут образовывать циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероарил или гетероцикл. Например, без ограничения, если указано, что Ra и Rb в группе NRaRb "взяты вместе", это означает, что они ковалентно связаны друг с другом с образованием кольца:
Дополнительно, если две группы "R" описаны как "взятые вместе" с атомом (атомами), к которым
они присоединены, с образованием кольца, в качестве альтернативы указанные группы R могут быть не ограничены переменными или заместителями, определенными ранее.
В настоящем тексте "алкил" относится к прямой или разветвленной углеводородной цепи, которая содержит полностью насыщенную (без двойных или тройных связей) углеводородную группу. Алкиль-ная группа может содержать от 1 до 20 атомов углерода (во всех случаях, когда в настоящем описании встречается численный диапазон, такой как "от 1 до 20", он относится к каждому целому числу в данном диапазоне, например "от 1 до 20 атомов углерода" означает, что алкильная группа может состоять из 1 атома углерода, 2 атомов углерода, 3 атомов углерода и т.д. до 20 атомов углерода включительно, хотя настоящее определение также охватывает случай применения термина "алкил" без упоминания числового диапазона). Алкильная группа также может представлять собой алкил среднего размера, содержащий от 1 до 10 атомов углерода. Алкильная группа может также представлять собой низший алкил, содержащий от 1 до 6 атомов углерода. Алкильная группа соединений может быть обозначена как "С1-6алкил" или с использованием аналогичных обозначений. Исключительно в качестве примера "С1-6алкил" указывает, что алкильная цепь содержит только от одного до шести атомов углерода, т.е. алкильная цепь выбрана из метила, этила, пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, сек-бутила и трет-бутила, пентила (линейного и разветвленного) и гексила (линейного и разветвленного). Типичные алкильные группы включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, третичный бутил, пентил (линейный и разветвленный) и гексил (линейный и разветвленный), но ни в коем случае не ограничиваются ими. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной.
В настоящем тексте "циклоалкил" относится к полностью насыщенной (без двойных или тройных связей) моно- или полициклической системе колец. В случае, когда система состоит из двух или больше колец, кольца могут быть соединены друг с другом путем конденсации. Циклоалкильные группы могут содержать от 3 до 10 атомов в кольце(ах) или от 3 до 8 атомов в кольце(ах). Циклоалкильная группа может быть незамещенной или замещенной. Типичные циклоалкильные группы включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.
В настоящем тексте "арил" относится к карбоциклической (все углероды) моноциклической или полициклической ароматической системе колец (включая конденсированные системы колец, в которых два карбоциклических кольца имеют общую химическую связь) с системой полностью делокализован-ных пи-электронов, охватывающей все кольца. Число атомов углерода в арильной группе может варьировать. Например, арильная группа может представлять собой ^парильную группу, Оз^оарильную группу или Q-арильную группу. Примеры арильных групп включают бензол, нафталин и азулен, но не ограничиваются ими. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной.
В настоящем тексте "гетероарил" относится к моноциклической или полициклической ароматической системе колец (системе колец с системой полностью делокализованных пи-электронов), которые содержат (или содержит) один или больше гетероатомов (например, от 1 до 5 гетероатомов), т.е. элементов, отличных от углерода, включая азот, кислород и серу, но не ограничиваясь ими. Число атомов в кольце(ах) гетероарильной группы может варьировать. Например, гетероарильная группа может содержать от 4 до 14 атомов в кольце(ах), от 5 до 10 атомов в кольце(ах) или от 5 до 6 атомов в кольце(ах). Кроме того, термин "гетероарил" включает конденсированные системы колец, в которых два кольца, такие как меньшей мере одно арильное кольцо и по меньшей мере одно гетероарильное кольцо, или по меньшей мере два гетероарильных кольца имеют по меньшей мере одну общую химическую связь. Примеры гетероарильных колец включают, но не ограничиваются ими, фуран, фуразан, тиофен, бензотиофен, фталазин, пиррол, оксазол, бензоксазол, 1,2,3-оксадиазол, 1,2,4-оксадиазол, тиазол, 1,2,3-тиадиазол, 1,2,4-тиадиазол, бензотиазол, имидазол, бензимидазол, индол, индазол, пиразол, бензо-пиразол, изоксазол, бензоизоксазол, изотиазол, триазол, бензотриазол, тиадиазол, тетразол, пиридин, пиридазин, пиримидин, пиразин, пурин, птеридин, хинолинил, изохинолин, хиназолин, хиноксалин, циннолин и триазин. Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной.
В настоящем тексте гетероциклоалкил относится к моноциклической, бициклической и трицикли-ческой системе колец содержащей три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять и до 18 членов, которая включает вместе с атомами углерода от 1 до 5 гетероатомов. Гетероцикл может дополнительно содержать одну или больше ненасыщенных связей, расположенных таким образом, что не образуется делокализованная система пи-электронов, охватывающая всю систему. Гетероатом или гетероатомы представляет собой элементы, отличные от углерода, включая, без ограничения, кислород, серу и азот. Гетероцикл может дополнительно содержать одну или больше карбонильных или тиокарбонильных функциональных групп, и, таким образом, это определение включает оксосистемы и тиосистемы, такие как лактамы, лактоны, циклические имиды, циклические тиоимиды и циклические карбаматы. В случае присутствия в составе более двух колец они могут быть соединены друг с другом с образованием конденсированной системы. Дополнительно, любые атомы азота в составе циклоалкила могут быть кватер-низированы. Гетероциклоалкильные группы могут быть незамещенными или замещенными. Примеры таких гетероциклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, 1,3-диоксин, 1,3-диоксан, 1,4-диоксан, 1,2-диоксолан, 1,3-диоксолан, 1,4-диоксолан, 1,3-оксатиан, 1,4-оксатиин, 1,3-оксатиолан, 1,3-дитиол, 1,3-дитиолан, 1,4-оксатиан, тетрагидро-1,4-тиазин, 2Н-1,2-оксазин, малеимид, сукцинимид,
барбитуровую кислоту, тиобарбитуровую кислоту, диоксопиперазин, гидантоин, дигидроурацил, триок-сан, гексагидро-1,3,5-триазин, имидазолин, имидазолидин, изоксазолин, изоксазолидин, оксазолин, окса-золидин, оксазолидинон, тиазолин, тиазолидин, морфолин, оксиран, пиперидин N-оксид, пиперидин, пиперазин, пирролидин, пирролидон, пирролидион, 4-пиперидон, пиразолин, пиразолин, 2-оксопирролидин, тетрагидропиран, 4Н-пиран, тетрагидротиопиран, тиаморфолин, тиаморфолин суль-фоксид, тиаморфолинсульфон и из бензоконденсированные аналоги (например, бензимидазолидинон, тетрагидрохинолинил и 3,4-метилендиоксифенил).
Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к соли соединения, которая не вызывает значительного раздражения в организме, в который ее вводят, и не разрушают биологическую активность и свойства соединения. В некоторых вариантах реализации соль представляет собой соль присоединения соединения с кислотой. Фармацевтические соли могут быть получены путем осуществления реакции соединения с неорганическими кислотами, такими как галогенводородные кислоты (например, хлороводородная кислота или бромоводородная кислота), серная кислота, азотная кислота и фосфорная кислота. Фармацевтические соли также могут быть получены путем осуществления соединения с органической кислотой, такой как органическая кислота или ароматические карбоновые или сульфоновые кислоты, например муравьиная, уксусная, янтарная, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, никотиновая, метансульфоновая, этансульфоновая, п-толуолсульфоновая, салициловая или нафта-линсульфоновая кислота. Сульфоновые соли также могут быть получены путем осуществления реакции соединения с основанием с образованием соли, такой как аммонийная соль, соль щелочного металла, такая как соль натрия или калия, соль щелочноземельного металла, такая как соль кальция или магния, соль органического основания, такого как дициклогексиламин, ^метил^-глюкамин, трис-(гидроксиметил)метиламин, С1-7алкиламин, циклогексиламин, триэтаноламин, этилендиамин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин и лизин.
Понятно, что в любом соединении, описанном в настоящем документе, которое содержит один или более хиральных центров, если абсолютная стехиометрия не показана в явном виде, каждый центр независимо может иметь R-конфигурацию или S-конфигурацию или их комбинацию. Соответственно, соединения, описанные в настоящем документе, могут быть энантиомерно чистыми, энантиомерно обогащенными, могут представлять собой рацемическую смесь, могут быть диастереомерно чистыми, диасте-реомерно обогащенными или могут представлять собой смесь стереоизомеров. Кроме того, понятно, что в любом соединении, описанном в настоящем документе, которое содержит одну или более двойных связей, обусловливающих существование геометрических изомеров, которые могут быть определены как Е или Z, каждая двойная связь независимо может представлять собой Е или Z или их смесь.
Понятно, что в тех случаях, когда соединения, раскрытые в настоящем документе, имеют незаполненные валентности, эти валентности могут быть заполнены атомами водорода или его изотопами, например водородом 1 (протием) и водородом 2 (дейтерием).
Понятно, что соединения, описанные в настоящем документе, могут быть мечены изотопами. Замена изотопами, такими как дейтерий, может обеспечивать терапевтические преимущества, обусловливаемые повышенной метаболической стабильностью, такие как, например, более продолжительное время полужизни in vivo или более низкие необходимые дозировки. Каждый химический элемент, присутствующий в структуре соединения, может включать любой изотоп указанного элемента. Например, в структуре соединения может быть в явном виде показан атом водорода или его присутствие может подразумеваться. В любом положении соединения, где может присутствовать атом водорода, этот атом водорода может представлять собой любой изотоп водорода, включая водород-1 (протий) и водород-2 (дейтерий), но не ограничиваясь ими. Соответственно, в настоящем описании указание на соединение включает все возможные изотопные формы, если это не противоречит явным образом контексту.
Понятно, что способы и комбинации, описанные в настоящем документе, включают кристаллические формы (также известные как полиморфы, которые включают различные варианты кристаллической упаковки соединений с одинаковым элементным составом), аморфные фазы, соли, сольваты и гидраты. В некоторых вариантах реализации соединения, описанные в настоящем документе, существуют в формах сольватов с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол или т.п. В других вариантах реализации соединения, описанные в настоящем документе, существуют в несольватирован-ной форме. Сольваты могут содержать стехиометрические или нестехиометрические количества растворителя и могут образовываться в ходе кристаллизации с такими фармацевтически приемлемыми растворителями, как вода, этанол и т.п. Гидраты образуются в тех случаях, когда растворителем является вода, а в тех случаях, когда растворителем является спирт, образуются алкоголяты. Дополнительно соединения, предложенные в настоящем документе, могут существовать в несольватированных и сольватиро-ванных формах. В целом сольватированные формы считаются эквивалентными несольватированным формам для целей соединений и способов, предложенных в настоящем документе.
В тех случаях, когда приведен диапазон значений, понятно, что объем такого варианта реализации включает верхний и нижний пределы, а также все промежуточные значения между верхним и нижним пределами.
Соединения
В первом аспекте предложено соединение формулы (I)
или его стереоизомер, фармацевтически приемлемая соль или сольват, где Rb R2, R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, Cl, -CN и -CF3; А выбран из группы, состоящей из Н и С1-6алкила; D выбран из группы, состоящей из -OH и -0(С1-6алкила); R5 и R6 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, F и С1-6алкила; или R5 и R6, взятые вместе, образуют замещенное или незамещенное циклоалкильное кольцо; R12 независимо выбран из группы, состоящей из С3.8циклоалкила и
где R7, R8, R9, R10 и R11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, галогена, CN, CF3, С1-6алкила, арила, гетероарила, -О(арила), -О(гетероарила), -CO2H, -CO2(С1-6алкила), -М^02(С1-6алкила), -NHSO2(арила), -NHCONH(С1-6алкила), -NHCON(С1-6алкила)2, -N(С1-6алкил)CONH2, ^(С1-6алкил)Ш№[(С1-6алкила), -N(С1-6алкил)CON(С1-6алкила)2, -SO2(С1-6алкила), -SO2NH2, -SO2NH(С1-6алкила), ^0^(С1-6алкила)2, C3-8циклоалкила и C3-8гетероциклоалкила.
В одном из вариантов реализации первого аспекта R1, R2, R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl.
В одном из вариантов реализации первого аспекта R5 и R6, взятые вместе, образуют замещенное или незамещенное циклоалкильное кольцо.
В одном из вариантов реализации первого аспекта А представляет собой Н. В одном из вариантов реализации первого аспекта D представляет собой OH.
В одном из вариантов реализации первого аспекта А представляет собой Н и D представляет собой
OH.
В одном из вариантов реализации первого аспекта R9 выбран из группы, состоящей из азиридинила, азетидинила, пирролидинила и морфолинила.
В одном из вариантов реализации первого аспекта R9 выбран из группы, состоящей из изопропила и циклопропила.
В одном из вариантов реализации первого аспекта предложено соединение формулы (Ia)
(la)
или его стереоизомер, фармацевтически приемлемая соль или сольват, где R1, R2, R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и Cl; R7, R8, R10 и R11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и галогена; R9 независимо выбран из группы, состоящей из C3-8циклоалкила и C3-8гетероциклоалкила. В одном из вариантов реализации первого аспекта R1 и R4 представляют собой Cl и R2 и R3 представляют собой Н.
или их стереоизомеров, фармацевтически приемлемых солей, сложных эфиров или сольватов.
Во втором аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно любому варианту реализации первого аспекта или любому варианту его реализации и фармацевтически приемлемый носитель.
В третьем аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно любому варианту реализации первого аспекта или любому варианту его реализации и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
В четвертом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно любому варианту реализации первого аспекта или любому варианту его реализации и по меньшей мере один дополнительный фармацевтически активный агент.
В четвертом аспекте предложен способ лечения рака, включающий введение эффективного количества соединения согласно первому аспекту или любому варианту его реализации нуждающемуся в этом субъекту.
В одном из вариантов реализации пятого аспекта субъект представляет собой млекопитающее.
В одном из вариантов реализации пятого аспекта субъект представляет собой человека.
В одном из вариантов реализации пятого аспекта рак выбран из группы, состоящей из саркомы Юинга, рака предстательной железы, глиобластомы, острого миелоидного лейкоза, рака молочной железы, рака головы и шеи, меланомы, немелкоклеточного рака легких, рака яичников и рака матки.
В шестом аспекте предложен способ уничтожения или ингибирования роста неопластической клетки, включающий осуществление контакта клетки с эффективным количеством соединения согласно первому аспекту или любому варианту реализации первого аспекта.
В одном из вариантов реализации шестого аспекта клетка представляет собой клетку млекопитающего.
В одном из вариантов реализации шестого аспекта клетка представляет собой клетку человека.
В одном из вариантов реализации шестого аспекта клетка находится в условиях in vitro.
В одном из вариантов реализации шестого аспекта клетка находится в условиях in vivo.
В одном из вариантов реализации шестого аспекта клетка представляет собой раковую клетку, причем рак выбран из группы, состоящей из саркомы Юинга, рака предстательной железы, глиобластомы, острого миелоидного лейкоза, рака молочной железы, рака головы и шеи, меланомы, немелкоклеточного рака легких, рака яичников и рака матки.
В седьмом аспекте предложен способ ингибирования пролиферации клетки, где клетка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS или содержит слитый ген ETS, включающий осуществление контакта клетки с эффективным количеством соединения согласно первому аспекту или любому варианту реализации первого аспекта.
В одном из вариантов реализации седьмого аспекта ген ETS или слитый ген ETS выбран из группы, состоящей из FLI1, ERG, ETV1 и ETV4.
В одном из вариантов реализации седьмого аспекта клетка представляет собой клетку млекопитающего.
В одном из вариантов реализации седьмого аспекта клетка представляет собой клетку человека.
В одном из вариантов реализации седьмого аспекта клетка находится в условиях in vitro.
В одном из вариантов реализации седьмого аспекта клетка находится в условиях in vivo.
В одном из вариантов реализации седьмого аспекта клетка представляет собой раковую клетку, причем рак выбран из группы, состоящей из саркомы Юинга, рака предстательной железы, глиобласто-мы, острой миелоидной лейкемии, рака молочной железы, рака головы и шеи, меланомы, немелкокле-точного рака легких, рака яичников и рака матки.
(II) (III) (I)
Соединения формулы (I), описанные в настоящем документе, могут быть получены различными способами. Общие пути синтеза соединений формулы (I) показаны и описаны в настоящем тексте. Пути, показанные и описанные в настоящем документе, являются чисто иллюстративными, они не предназначены для какого-либо ограничения объема изобретения и не должны рассматриваться в качестве ограничений объема изобретения. Специалисты смогут модифицировать раскрытые процедуры синтеза и разработать альтернативные пути на основании настоящего описания; все такие модификации и альтернативные пути входят в объем формулы изобретения.
В зависимости от присутствующих заместителей низкомолекулярные ингибиторы могут существовать в форме фармацевтически приемлемой соли. Термин "фармацевтически приемлемая соль" в настоящем документе представляет собой широкий термин и должен трактоваться в соответствии со своим обычным и привычным для специалиста значении (и не ограничивается каким-либо особенным или специальным значением) и относится, без ограничения, к солям, полученным из фармацевтически приемлемых, нетоксичных кислот или оснований. Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают соли металлов, например соли алюминия, цинка, соли щелочных металлов, такие как соли лития, натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, органические соли, например соли лизина, ^№-дибензилэтилендиамина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглюмина (N-метилглюкамина), прокаина и трис; соли свободных кислот и оснований, неорганические соли, например сульфат, гидрохлорид и гидробромид, и другие соли, которые в настоящее время широко применяются в фармацевтике и приведены в источниках, хорошо известных в данной области, таких, как, например, справочник "Merck Index". Для получения соли фармацевтического агента, применяемого в настоящем документе, может быть выбран любой подходящий компонент при условии, что он нетоксичен и не оказывает существенного влияния на желаемую активность.
Соединения согласно предпочтительному варианту реализации могут включать изомеры, рацематы, оптические изомеры, энантиомеры, диастереомеры, таутомеры и цис/транс-конформеры. Все такие изомерные формы включены в предпочтительные варианты реализации, включая их смеси. Как обсуждалось выше, соединения согласно предпочтительным вариантам реализации могут содержать хиральные центры, например они могут содержать асимметричные атомы углерода и могут существовать в форме энантиомеров или диастереоизомеров и их смесей, например рацематов. Асимметричные атом или атомы углерода могут существовать в (R)- или ^-конфигурации или могут существовать в виде смеси (R)- и (S)- форм. Ниже приведены изомерные формы соединений формулы (I)
Соединения могут быть представлены в аморфной форме или в кристаллических формах. Кристаллические формы соединений согласно предпочтительным вариантам реализации могут существовать в виде полиморфов, которые включены в предпочтительные варианты реализации. Дополнительно некоторые из соединений согласно предпочтительным вариантам реализации могут также образовывать сольваты с водой или другими органическими растворителями. Такие сольваты также включены в объем предпочтительных вариантов реализации.
Некоторые фармацевтические композиции.
Обычно предпочтительно вводить ингибиторы согласно предпочтительным вариантам реализации в лекарственной форме для внутривенного или подкожного применения, но также предусмотрены другие пути введения. Предусмотренные пути введения включают парентеральное, внутривенное и подкожное,
но не ограничиваются перечисленными. Ингибиторы согласно предпочтительным вариантам реализации могут быть изготовлены в форме жидких препаратов, например, для перорального введения. Подходящие формы включают суспензии, сиропы, эликсиры и т.п. Особенно предпочтительные дозированные лекарственные формы для перорального применения включают таблетки и капсулы. Особенно предпочтительны дозированные лекарственные формы, предназначенные для введения один раз в день, но в некоторых вариантах реализации может быть желательно адаптировать их для введения два или более раз в день.
В предпочтительном варианте фармацевтические композиции согласно предпочтительным вариантам реализации изотоничны крови или другой физиологической жидкости реципиента. Изотонические композиции можно получить с использованием тартрата натрия, пропиленгликоля или других органических или неорганических растворяемых веществ. Особенно предпочтителен хлорид натрия. Можно применять буферные вещества, такие как уксусная кислота и ее соли, лимонная кислота и ее соли, борная кислота и ее соли и фосфорная кислота и ее соли. Основы для парентерального введения включают раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, Рингер-лактат или нелетучие масла. Основы для внутривенного введения включают вещества для восполнения жидкости и питательных веществ, вещества для восполнения электролитов (например, основанные на декстрозе Рингера) и т.п.
Вязкость фармацевтических композиций можно поддерживать на выбранном уровне при помощи фармацевтически приемлемого загустителя. Метилцеллюлоза предпочтительна, поскольку ее легко приобрести по невысоким ценами и с ней легко работать. Другие подходящие загустители включают, например, ксантановую камедь, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбомер и т.п. Предпочтительная концентрация загустителя будет зависеть от выбранного загустителя. В предпочтительном варианте применяют количество, обеспечивающее выбранную вязкость. Вязкие композиции обычно готовят из растворов путем добавления таких загустителей.
Могут применяться фармацевтически приемлемые консерванты для увеличения срока хранения фармацевтических композиций. Подходящим может быть бензиловый спирт, но также можно применять различные консерванты, включая, например, парабены, тимеросал, хлорбутанол или бензалкония хлорид. Подходящая концентрация консерванта обычно составляет от приблизительно 0,02 до приблизительно 2% от общей массы композиции, хотя могут быть желательны более высокие или более низкие количества в зависимости от выбранного агента. Может быть желательно применять восстанавливающее агенты, описанные выше, для поддержания хорошего срока хранения препарата.
Ингибиторы согласно предпочтительным вариантам реализации можно смешивать с подходящим носителем, разбавителем или вспомогательными веществами, такими как вода, физиологический раствор, глюкоза и т.п., и они могут содержать вспомогательные средства, такие как смачивающие агенты, эмульгаторы, буферные вещества, регулирующие рН, желирующие добавки или добавки, повышающие вязкость, консерванты, пищевкусовые вещества, красители и. т.п., в зависимости от желаемых пути введения и препарата. См., например, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Lippincott Williams & Wilkins; 20-e изд. (1 июня 2003 г) и "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Pub. Co.; 18- и 19-е изд. (декабрь 1985 г. и июнь 1990 г. соответственно). Такие препараты могут включать комплексообразо-ватели, ионы металлов, полимерные соединения, такие как полиуксусная кислота, полигликолевая кислота, гидрогели, декстран и т.п., липосомы, микроэмульсии, мицеллы, однослойные и многослойные везикулы, тени эритроцитов или сферобласты. Подходящие липиды для липосом включают, но не ограничиваются ими, моноглицериды, диглицериды, сульфатиды, лизолецитин, фосфолипиды, сапонин, желчные кислоты и т.п. Присутствие таких дополнительных компонентов может влиять на физическое состояние, растворимость, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость выведения in vivo, и соответственно их выбирают с учетом предполагаемого применения таким образом, чтобы характеристики носителя соответствовали выбранному пути введения.
Для перорального введения фармацевтические композиции могут быть выполнены в форме таблетки, водной или масляной суспензии, диспергируемых порошков или гранул, эмульсии, твердой или мягкой капсулы, сиропа или эликсира. Композиции, предназначенные для перорального применения, могут быть получены в соответствии с любым способом изготовления фармацевтических композиций, и они могут содержать один или больше из следующих агентов: подсластители, вкусоароматические вещества, красители и консерванты. Водные суспензии могут содержать активный ингредиент в смеси со вспомогательными веществами, подходящими для изготовления водной суспензии.
Препараты для перорального применения также могут быть выполнены в форме твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент(ы) смешаны с твердым инертны разбавителем, таким как карбонат кальция, фосфат кальция или каолин, или мягких желатиновых капсул. В мягких капсулах ингибиторы могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как водная или масляная среды, такая как арахисовое масло, оливковое масло, жирные масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Также можно применять стабилизаторы и микросферы, представленные в форме для перорального применения. Капсулы могут включать жесткие капсулы, выполненные из желатина, а также мягкие, запечатанные капсулы, выполненные из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбит. Жесткие капсулы могут содержать активный ингредиент в смеси с наполнителями, такими
как лактоза, связующими, такими как крахмалы, и/или смазывающими веществами, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, стабилизаторами.
Таблетки могут быть без покрытия, или на них может быть нанесено покрытие любыми известными способами, чтобы замедлить распадение таблеток и всасывание в желудочно-кишечном тракте, что обеспечивает устойчивое действие в течение более продолжительного периода времени. Например, можно применять замедляющие материалы, такие как глиценилмоностеарат. В случае введения в твердой форме, такой как форма таблетки, такая твердая форма обычно содержит от приблизительно 0,001 или меньше до приблизительно 50 мас.% или больше активного ингредиента(ов), предпочтительно от приблизительно 0,005, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или от 1 до приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 или 45 мас.%.
Таблетки могут содержать активные ингредиенты в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, включая инертные материалы. Например, таблетка может быть получена путем прессования или формовки, необязательно, с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в подходящем устройстве активных ингредиентов в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанных со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, поверхностно-активными веществом или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в подходящем устройстве смеси ингибитора в форме порошка, смоченного инертным жидким разбавителем.
В предпочтительном варианте каждая таблетка или капсула содержит от приблизительно 1 мг или меньше до приблизительно 1,000 мг или больше ингибитора согласно предпочтительным вариантам реализации, более предпочтительно от приблизительно от 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг до приблизительно 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800 или 900 мг. В наиболее предпочтительном варианте таблетки или капсулы представлены в диапазоне дозировок, позволяющем делить дозы для введения. Легко можно подобрать подходящую для пациента дозировку и число доз, вводимых в течение дня. В некоторых вариантах реализации предпочтительно включать два или больше терапевтических агента, которые необходимо ввести, в одну таблетку или другую лекарственную форму (например, при комбинированной терапии), но в других вариантах реализации может быть предпочтительно применять терапевтические агенты в раздельных лекарственных формах.
Подходящие инертные материалы включают разбавители, такие как углеводороды, маннитол, лактоза, безводная лактоза, целлюлоза, сахароза, модифицированные декстраны, крахмал и т.п., или неорганические соли, такие как трифосфат кальция, фосфат кальция, фосфат натрия, карбонат кальция, карбонат натрия, карбонат магния и хлорид натрия. В препарат могут быть включены дезинтегрирующие агенты или гранулирующие агенты, например крахмалы, такие как кукурузный крахмал, альгиновая кислота, натрия крахмал гликолят, амберлит, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, ультрамилопектин, альги-нат натрия, желатин, кожура апельсина, карбоксиметилцеллюлоза в форме кислоты, природная губка и бентонит, нерастворимые катионообменные смолы, порошковые камеди, такие как агар, камедь карайи или трагакантовая камедь, или альгиновая кислота или ее соли.
Для получения твердых таблеток могут применяться связующие. Связующие включают материалы из природных продуктов, таких как акация, трагакант, крахмал и желатин, метилцеллюлоза, этилцеллю-лоза, карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза и т.п.
В препараты в форме таблеток можно включать смазывающие вещества, такие как стеаровая кислота или ее магниевые или кальциевые соли, политетрафторэтилен, жидкий парафин, растительные масла и воски, лаурилсульфат натрия, лаурилсульфат магния, полиэтиленгликоль, крахмал, тальк, пирогенный диоксид кремния, гидратированный алюмосиликат и т.п.
Можно применять поверхностно-активные вещества, например анионные поверхностно-активные вещества, такие как лаурилсульфат натрия, натрий-диоктилсукцинат и натрий-диоктилсульфонат, кати-онные, такие как бензалкония хлорид или бензетония хлорид, или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиоксиэтилен, гидрогенированное касторовое масло, глицерина моностеарат, поли-сорбаты, сложные эфиры сахарозы с жирными кислотами, метилцеллюлоза или карбоксиметил целлюлоза.
Можно применять препараты с контролируемым высвобождением, в которых амифостин или его аналог(и) содержатся в инертной матрице, которая обеспечивает высвобождение по механизму диффузии или вымывания. В препарат также можно включать медленно разрушающиеся матрицы. Другие системы доставки могут включать системы с запланированным высвобождением, отложенным высвобождением или непрерывным высвобождением.
Могут применяться покрытия, например материалы, не относящиеся к распадающимся в кишечнике, такие как метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, метилгидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, прови-дон и полиэтиленгликоли, или материалы, растворяющиеся в кишечнике, такие как сложные эфиры фта-левой кислоты. Для идентификации или характеристики различных комбинаций или доз ингибитора могут применяться красители или пигменты.
В случае перорального введения в жидкой форме к активному ингредиенту (ингредиентам) можно добавлять жидкий носитель, такой как вода, петролеум, масла животного и растительного происхождения, такие как арахисовое масло, минеральное масло, соевое масло или кунжутное масло, или синтетические масла. Подходящими жидкими носителями также могут быть физиологический раствор, раствор декстрозы или другого сахара или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленг-ликоль. Фармацевтические композиции также могут быть представлены в форме эмульсии типа масло в воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое или арахисовое масло, минеральное масло, такое как жидкий парафин, или их смесь. Подходящие эмульгаторы включают природные камеди, такие как гуммиарабик и трагакантовая камедь, природные фосфатиды, такие как соевый лецитин, сложные эфиры или частично сложные эфиры, полученные из жирных кислот, и ангидриды гекситолов, такие как сорбитан моноолеат, и продукты конденсации этих частично сложных эфи-ров с этиленоксидом, такие как полиоксиэтилен сорбитан моноолеат. Эмульсии могут также содержать подсластители и вкусоароматические вещества.
Также можно применять доставку в легкие. Соединение доставляется в легкие при вдыхании и проходит через эпителиальную выстилку легких в кровоток. Можно применять многочисленные механические устройства, предназначенные для доставки терапевтических продуктов в легкие, включая небулай-зеры, дозирующие ингаляторы и порошковые ингаляторы, но не ограничиваясь перечисленными устройствами; все такие устройства знакомы специалистам в данной области. Эти устройства работают с препаратами, подходящими для доставки из устройства. Обычно каждый препарат специально адаптирован для применяемого типа устройства и может включать применение подходящего материала-вытеснителя в дополнение к разбавителям, адъювантам и/или носителям, применяющимся в лечении.
Соединение и/или другие необязательные активные ингредиенты в предпочтительном случае готовят для доставки в легкие в форме частиц с размером от 0,1 или меньше до 10 мкМ или больше, более предпочтительно от приблизительно 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9 мкМ до приблизительно 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0 или 9,5 мкм. Фармацевтически приемлемые носители для доставки ингибитора в легкие включают углеводороды, такие как трегалоза, маннитол, ксилит, сахароза, лактоза и сорбит. Другие ингредиенты для применения в составе могут включать DPPC (дипальмитоилфосфатидилхолин), DOPE (диолеоилфосфатидилэтаноламин), DSPC (дистеароилфосфа-тидилхолин) и DOPC (диолеоилфосфатидилхолин). Могут применяться природные или синтетические поверхностно-активные вещества, включая полиэтиленгликоль и декстраны, такие как циклодекстран. Также могут применяться соли желчных кислот и другие родственные вспомогательные вещества, а также целлюлоза производные целлюлозы и аминокислоты. Также можно применять липосомы, микрокапсулы, микросферы, комплексы включения и другие типы носителей.
Фармацевтические препараты, подходящие для применения в комбинации с небулайзером, струйным или ультразвуковым, обычно содержат ингибитор, растворенный или суспендированный в воде при концентрации ингибитора от примерно 0,01 или меньше до 100 мг или больше на 1 мл раствора, предпочтительно от приблизительно от 0,1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мг до приблизительно 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90 мг на 1 мл раствора. Препарат может также включать буфер и простой сахар (например, для стабилизации белка и регуляции осмотического давления). Препарат для небулайзера может также содержать поверхностно-активное вещество для снижения или предотвращения агрегации ингибитора при контакте с поверхностью, вызванного атомизацией раствора при образовании аэрозоля.
Препараты для применения с дозирующим ингалятором обычно содержат мелкодисперсный порошок, содержащий активные ингредиенты, суспендированные в вытеснителе с добавкой поверхностно-активного вещества. Вытеснитель может содержать обычные вытеснители, такие как хлорфторуглероды, гидрохлорфторуглероды и углеводороды. Предпочтительные вытеснители включают трихлорфторметан, дихлордифторметан, дихлортетрафторэтанол, 1,1,1,2-тетрафторэтан и их комбинации. Подходящие поверхностно-активные вещества включают сорбитан триолеат, соевый лецитин и олеиновую кислоту.
Препараты для доставки при помощи порошкового ингалятора обычно включают мелкодисперсный сухой порошок, содержащий ингибитор и, необязательно, содержащий объемообразующее вещество, такое как лактоза, сорбит, сахароза, маннитол, трегалоза или ксилит в количестве, которое обеспечивает распыление порошка из устройства, обычно от приблизительно 1 или меньше до 99 мас.% или больше от массы состава, предпочтительно от приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 мас.% до приблизительно 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90 мас.% массы состава.
Если соединение согласно предпочтительным вариантам реализации вводят путем внутривенной, парентеральной инъекции или другого вида инъекции, оно в предпочтительном варианте представлено в форме апирогенного пригодного для парентерального введения раствора или масляной суспензии. Суспензии могут быть получены в соответствии со способами, известными в данной области, с применением подходящих диспергирующих или смачивающих веществ и суспендирующих веществ. Получение приемлемых водных растворов с подходящими рН, изотоничностью, стабильностью и т.п. относится к уровню техники. Предпочтительная композиция для инъекции в предпочтительном варианте содержит изотоническую основу, такую как 1,3-бутандиол, вода, изотонический раствор хлорида натрия, раствор Рин
гера, раствор декстрозы, раствор декстрозы и хлорида натрия, раствор Рингера с лактатом или другие основы, известные в данной области. Дополнительно, в соответствии с обычной практикой можно применять стерильные нелетучие масла в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели может применяться смесь нелетучих масел, включающая синтетические моноглицериды и диглицериды. Дополнительно, для получения препаратов для инъекций можно также применять жирные кислоты, такие как олеиновая кислота. Фармацевтические композиции также могут содержать стабилизаторы, консерванты, буферы, антиоксиданты или другие добавки, известные специалистам в данной области.
Продолжительность инъекции можно корректировать в зависимости от различных факторов, инъекция включает от однократной инъекции, выполняемой в течение нескольких секунд или меньше, до непрерывного внутривенного введения в течение 0,5, 0,1, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 ч или больше.
Для соединений согласно предпочтительным вариантам реализации можно дополнительно применять вспомогательные компоненты, обычно присутствующие в фармацевтических композициях, причем их применяют так, как это принято в данной области, и в количествах, обычно применяемых в данной области. Соответственно, например, композиции могут содержать дополнительные подходящие фармацевтически активные материалы для комбинированной терапии (такие как дополнительные противомик-робные средства, противозудные средства, вяжущие средства, обезболивающие местного действия, противовоспалительные средства, восстанавливающие средства, химиотерапевтические средства и т.п) или могут содержать материалы, полезные для создания различных лекарственных форм с определенными физическими свойствами согласно предпочтительным вариантам реализации, такие как вспомогательные вещества, красители, загустители, стабилизаторы, консерванты или антиоксиданты. Противораковые средства, которые можно применять в комбинации с соединениями согласно предпочтительным вариантам реализации, включают, но не ограничиваются ими, алкалоиды барвинка, такие как винбластин и винкристин; антрациклины, такие как доксорубицин, даунорубицин, эпирубицин; антрацены, такие как бизантрен и митоксантрон; эпиподофиллотоксины, такие как этопозид и тенипозид, и другие противораковые лекарственные средства, такие как актиномицин D, митомицин С, митрамицин, метотрексат, доце-таксель, этопозид (VP-16), паклитаксел, доцетаксель и адриамицин); и иммуносупрессорные средства (например, циклоспорин А, такролимус). В некоторых вариантах реализации соединения композиции и способы, предложенные в настоящем тексте, могут применяться в комбинации с ингибиторами гистон-деацетилазы (HDAC), ингибиторами киназы aurora, деметилирующими агентами (такими как 5-азацитидин), иммунотерапией с применением клеток-природных киллеров, антителами к рецептору инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR), антителами к антигену Юинга, иммуносупрессорными лекарственными средствами и гидроксимочесвиной. Примеры ингибиторов гистондеацетилазы включают вориностат, ромидепсин, панобиностат, вальпроевую кислоту, белиностат, моцетиностат, гивиностат и трихостатин А. Примеры ингибиторов киназы aurora включают ZM447439, гесперадин и VX-680. Примеры деметилирующих агентов включают 5-азацитидин, 5-азадезоксицитидин и прокаин. Примеры им-муносупрессорных лекарственных средств включают 6-меркаптопурин и азатиоприн.
Некоторые наборы.
Соединения согласно предпочтительным вариантам введения для обеспечения ими лечащего врача или другого медицинского персонала могут быть представлены в форме набора. Набор представляет собой упаковку, в которой содержится контейнер, содержащий соединения в подходящей фармацевтической композиции и инструкции по введению этой фармацевтической композиции субъекту. Набор также может необязательно содержать один или больше дополнительных терапевтических агентов, например, химиотерапевтических средств, применяемых на данный момент для лечения описанных в настоящем документе сарком. Например, предложен набор, содержащий одну или больше композиций, содержащих соединения согласно предпочтительным вариантам реализации в комбинации с одним или большим количеством дополнительных химотерапевтических средств, или отдельные фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно предпочтительным вариантам реализации и дополнительные терапевтические средства. Набор также может содержать раздельные дозы соединения согласно предпочтительным вариантам реализации для серийного или последовательного введения. Набор может необязательно содержать один или больше диагностических средств и инструкции по применению. Набор может содержать подходящие устройства для доставки, например шприцы и т.п., вместе с инструкциями по введению ингибитора (ингибиторов) и любого другого терапевтического агента. Набор может необязательно содержать инструкции по хранению, восстановлению (если нужно) и введению любого или всех входящих в него терапевтических агентов. Наборы могут включать множество контейнеров, соответствующих числу введений субъекту.
Способы применения.
Некоторые раскрытые в данном документе варианты реализации относятся к способам лечения опухолей семейства саркомы Юинга (ОССЮ). В ОССЮ присутствует уникальный слитый белок EWS-FLI1. ОССЮ поражают пациентов в возрасте от 3 до 40 лет, причем большинство случаев приходится на 10-20 лет. Несмотря на то что неизвестно, из какого типа эмбриональных клеток образуются ОССЮ, опухоль часто растет вблизи кости, но может иметь форму массы мягкой ткани. Более чем у 40%
пациентов с локализованными опухолями развивается рецидивирующее заболевание, и большинство этих пациентов умирает от ОССЮ, а 75-80% пациентов с метастатическими ОССЮ умирают в течение 5 лет, несмотря на высокодозовое химиотерапевтическое лечение (Grier H.E., Krailo M.D., Tarbell N.J., et al., Addition of ifosfamide and etoposide to standard chemotherapy for Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor of bone. N. Engl. J. Med. 2003; 348(8):694-701). Эти показатели выживаемости не улучшились за последние 20 лет, даже после повышения применяемых доз химиотерапевтических средств. Для улучшения выживаемости и снижения осложнений терапии, для лечения пациентов с ОС-СЮ могут применяться новые стратегии направленного (таргетного) лечения в соответствии с предпочтительными вариантами реализации.
ОССЮ характеризуются присутствующей в 95% опухолей транслокацией центральных экзонов гена EWS (от "саркомы Юинга"), расположенного в 22 хромосоме, к центральным экзонам гена семейства ets: либо FLI1 (вставка лейкоза Френда), расположенного на 11 хромосоме, t(11;22), либо ERG, расположенного на 21 хромосоме, t(21;22). Слитый транскрипт EWS-FLI1 кодирует белок массой 55 кДа (элек-трофоретическая подвижность приблизительно 68 кДа) с двумя основными доменами. Домен EWS представляет собой эффективный активатор транскрипции, а домен FLI1 содержит высококонсервативный ДНК-связывающий домен ets (May W.A., Lessnick S.L., Braun B.S. et al., The Ewing's sarcoma EWS/FLI-1 fusion gene encodes a more potent transcriptional activator and is more powerful transforming gene than FLI-1. Mol. Cell Biol. 1993; 13(12):7393-8); образующийся в результате слитый белок EWS-FLI1 действует как абберантный фактор транскрипции. Для трансформации белком EWS-FLI1 мышиных фибробластов необходимо, чтобы оба функциональных домена EWS и FLI1 были интактными (May W.A., Gishizky Jr., Lessnick S.L., et al., Ewing sarcoma 11; 22 translocation produces a chimeric transcription factor that requires the DNA-binding domain encoded by FLI1 for transformation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993; 90(12):5752-6).
EWS-FLI1 представляет собой значимую терапевтическую мишень, поскольку он экспрессируется только в опухолевых клетках, и необходим для поддержания роста клеточных линий ОССЮ. Снижение уровней экспрессии EWS-FLI1 с использованием либо антисмысловых олигодезоксирнуклеотидов (ОДН, ODN) (Toretsky J.A., Connell Y., Neckers L., Bhat N.K. Inhibition of EWS-FLI-1 fusion protein with antisense oligodeoxynucleotides. J. Neurooncol. 1997; 31(1-2):9-16; Tanaka K., Iwakuma T., Harimaya K., Sato H., Iwamoto Y. EWS-Fli1 antisense oligodeoxynucleotide inhibits proliferation of human Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor cells. J. Clin. Invest. 1997; 99(2):239-47), либо малых интерферирующих РНК (миРНК, siRNA) (Ouchida M., Ohno T., Fujimura Y., Rao V.N., Reddy E.S. Loss of tumorigenicity of Ewing's sarcoma cells expressing antisense RNA to EWS-fusion transcripts. Oncogene, 1995; 11(6):1049-54; Maksimenko A., Malvy C., Lambert G., et al., Oligonucleotides targeted against a junction oncogene are made efficient by nanotechnologies. Pharm Res, 2003; 20(10):1565-7; Kovar H., Aryee D.N., Jug G., et al., EWS/FLI-1 antagonists induce growth inhibition of Ewing tumor cells in vitro. Cell Growth Differ, 1996; 7(4):429-37) приводит к снижению пролиферации в линиях клеток ОССЮ и регрессии опухоли у бести-мусных мышей. Недавние успехи нанотехнологий привели к улучшению доставки и контролируемого высвобождения миРНК, но современные технологии не обеспечивают возможности снижения уровней EWS-FLI1 с использованием миРНК или ОДН (Maksimenko A., Malvy С., Lambert G., et al., Oligonucleotides targeted against a junction oncogene are made efficient by nanotechnologies. Pharm Res, 2003; 20(10):1565-7; Lambert G., Bertrand J.R., Fattal E., et al., EWS FLI-1 antisense nanocapsules inhibits Ewing sarcoma-related tumor in mice. Biochem. Biophys. Res. Commun, 2000; 279(2):401-6). В одном из интересных подходов к разработке нацеленного воздействия на EWS-FLI1 применяли сравнительную экспрессию между EWS-FLI1, экспрессию которого понижали при помощи миРНК, и библиотекой низкомолекулярных соединений, результатом чего стали клинические испытания цитозин-арабинозида (Ara-C) (Stegmaier K., Wong J.S., Ross K.N., et al. Signature-based small molecule screening identifies cytosine arabinoside as an EWS/FLI modulator in Ewing sarcoma. PLoS medicine, 2007 ;4(4):e122). Этот способ, которым идентифицировали Ara-С, также показал, что доксорубицин и пуромицин могут снижать уровни EWS-FLI1.
Доксорубицин используется в настоящее время в качестве стандартного терапевтического средства для пациентов с ОССЮ, но, несмотря на это, выживаемость очень далека от приемлемой (Grier H.E., Krailo M.D., Tarbell N.J., et al., Addition of ifosfamide and etoposide to standard chemotherapy for Ewing's sarcoma and primitive neuroectodermal tumor of bone. N. Engl. J. Med. 2003; 348(8):694-701). Применение цитозин-арабинозида у пациентов с ОССЮ в настоящее время проходит оценку в рамках II стадии клинических испытаний. Хотя и есть надежда, что эта ситуация представляет необходимый клинический прорыв, она безусловно демонстрирует важность низкомолекулярных соединений, мишенью которых является EWS-FLI1. В предпочтительных вариантах реализации предложены низкомолекулярные ингибиторы белок-белковых взаимодействий (SMPPII), которые нарушают связывание EWS-FLI1 с его важнейшими белковыми партнерами, и благодаря этому обеспечивают специфичность в отношении опухоли и более точное нацеливание на EWS-FLI1.
EWS-FLI1 представляет собой важную терапевтическую мишень, поскольку он экспрессируется только в опухолевых клетках; но возможность нацеленно воздействовать на этот опухолеспецифичный
онкоген ранее не приводила к успеху. Одной из проблем на пути разработки низкомолекулярных соединений является то, что у EWS-FLI1 нет известных ферментативных доменов, в то время как считается, что ферментативные домены имеют важнейшее значение для нацеленных терапевтических средств. Кроме того, EWS-FLI1 является неупорядоченным белком, что указывает на то, что он не имеет жесткой структуры, которую можно было бы использовать для разработки лекарственного средства на основании структуры (Uren A., Tcherkasskaya О., Toretsky J.A. Recombinant EWS-FLI1 oncoprotein activates transcription. Biochemistry, 2004; 43(42):13579-89). На самом деле неупорядоченная природа EWS-FLI1 имеет критическое значение для регуляции его транскрипции (Ng K.P., Potikyan G., Savene R.O., Denny C.T., Uversky V.N., Lee K.A. Multiple aromatic side chains within a disordered структура are critical for transcription and transforming activity of EWS family oncoproteins. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2007; 104(2):479-84). Неупорядоченные белки считаются более привлекательными мишенями для низкомолекулярных ингибиторов белок-белковых взаимодействий, в частности, из-за их нерегулярных биохимических свойств (Cheng Y., LeGall T., Oldfield C.J., et al., Rational drug design via intrinsically disordered protein. Trends Biotechnol. 2006; 24(10):435-42).
EWS-FLI1 связывает РНК-геликазу A in vitro и in vivo. Считается, что белок-белковые взаимодействия EWS-FLI1 могут вносить какой-то вклад в его онкогенный потенциал; соответственно, необходимы новые белки, которые бы напрямую взаимодействовали с EWS-FLI1 и модулировали его функцию. Рекомбинантный EWS-FLI1, обладающий транскрипционной активностью (Uren A., Tcherkasskaya О., Toretsky J.A. Recombinant EWS-FLI1 oncoprotein activates transcription. Biochemistry, 2004; 43(42):13579-89), применяли в качестве мишени для скрининга коммерческой библиотеки пептидов на основе фагового дисплея. Путем секвенирования фагов определили 28 новых пептидов, которые по-разному связываются с EWS-FLI1. Поиск белков, гомологичных этим пептидам, в базе данных Национального Центра Биотехнологии выявил пептид, гомологичный аминокислотам 823-832 человеческой РНК-геликазы A, (RHA, номер доступа в базе данных gene bank A47363) (Toretsky J.A., Erkizan V., Levenson A., et al., Oncoprotein EWS-FLI1 activity is enhanced by RNA helicase A. Cancer Res. 2006; 66(11):5574-81).
Хотя EWS-FLI1 весьма специфичен для клеток ОССЮ, EWS и RHA экспрессируются повсеместно. Участок между EWS-FLI1 и RHA является мишенью молекулярных терапевтических средств, которые могут обладать специфичностью, поскольку EWS-FLI1 экспрессируется только в опухолях и точки взаимодействия с RHA могут быть уникальными. В настоящем документе предложены терапевтические агенты, а именно, низкомолекулярные ингибиторы белок-белковых взаимодействий, ингибирующие функцию EWS-FLI1.
Большинство сарком с гибридным белком, образовавшимся в результате транслокации, включая ОССЮ, связано с плохим прогнозом. Хромосомная транслокация t(11; 22), приводящая к образованию уникального и имеющего критическое значение слитого белка EWS-FLI1, представляет собой прекрасную мишень в раковой опухоли. Аналогичные варианты транслокаций есть и у многих других сарком (табл. 2 из Helman L.J., Meltzer P. Mechanisms of sarcoma development. Nat. Rev. Cancer, 2003; 3(9):685-94).
Транслокации EWS-FLI1 были обнаружены в солидных псевдопапиллярных неоплазиях поджелудочной железы (Maitra A., et al., Detection of t(11; 22)(q24; q12) translocation and EWS-FLI-1 fusion transcript in a case of solid pseudopapillary tumor of the pancreas. Pediatr. Dev. Pathol. 2000; 3:603-605), но роль EWS-FLI1 во всех солидных папиллярных неоплазиях еще предстоит выяснить (Katharina Tiemann et al., Solid pseudopapillary neoplasms of the pancreas are associated with FLI-1 expression, but not with EWS/FLI-1 translocation).
Гомологи EWS или FLI1 являются партнерами при транслокациях, которые возникают в большом количестве различных сарком и лейкозов. EWS, или его гомолог TLS или FUS, участвует в хромосомных транслокациях прозрачноклеточной саркомы, миксоидной липосаркомы, десмопластической мелкокруг-локлеточной опухоли, хондросаркомы и острого миелоидного лейкоза. FLI1 принадлежит к семейству генов ets. Транслокация гомолога FLI1, называемого ERG, присутствует приблизительно в 10% случаев саркомы Юинга и в 20% случаев острого миелоидного лейкоза. Это указывает на то, что EWS-FLI1 может служить модельной системой, которая может оказывать влияние на семейство заболеваний (связанных через партнеров по транслокации), поражающих большое количество пациентов (Uren A., Tcherkasskaya О., Toretsky J.A. Recombinant EWS-FLI1 oncoprotein activates transcription. Biochemistry 43(42) 13579-89(2004)).
Транслокация ERG также имеет место при раке предстательной железы; в этом случае слитый белок TMPRSS2:ERG указывает на отдельный молекулярный подтип, который может определять риск про-грессирования заболевания (F. Demichelis et al., TMPRSS2:ERG gene fusion associated with lethal cancer in a watchful waiting cohort. Oncogene, (2007), 26, 4596-4599). Другие заболевания, при которых могут наблюдаться транслокации членов семейства EWS или FLI1, включают рак предстательной железы, глиоб-ластому, острый миелоидный лейкоз, рак молочной железы, рак головы и шеи, меланому, немелкокле-точный рак легких, рак яичников и рак матки (Janknecht, Ralf; Shin, Sook, Oh, Sangphil, ETV1, 4 and 5: An Oncogenic Subfamily of ETS Transcription Fectors. Biochim. Biophys. Acta, 1826 (1), 1-12 (2012)).
Соответственно, терапевтические агенты согласно предпочтительным вариантам реализации обладают потенциалом для применения во многих других опухолях. Более того, некоторые из наиболее трудных лейкозов характеризуются слитыми белками, образованными в результате транслокаций, затрагивающих ген лейкозов смешанного происхождения (MLL, 11q23), и наша работа может дать подход для лечения групп раковых заболеваний, очень плохо поддающихся лечению (Pui C.H., Chessels J.M., Camitta В. et al., Clinical heterogeneity in childhood acute lymphoblastic leukemia with 11q23 rearrangements. Leukemia, 2003; 17(4):700-6). Соответственно, варианты реализации включают раковые заболевания, при которых имеют место транслокации. Слитые гены, образованные в результате транслокаций, перечислены в табл. 1.
Таблица 1
саркома Юинга
Транслокация
гены
Тип слитого гена
t(11;22)(q24;q12)
EWSR1-FLI1
Фактор транскрипции
t(21;22)(q22;q12)
EWSR1-ERG
Фактор транскрипции
t(7;22)(p22;q12)
EWSR1-ETV1
Фактор транскрипции
t(17;22)(q21;q12)
EWSR1-ETV4
Фактор транскрипции
t(2;22)(q33;q12)
EWSR1-FEV
Фактор транскрипции
При ряде нарушений имеет место гиперэкспрессия гена ETS или гибридного гена ETS, т.е. генная транслокация, затрагивающая ген ETS. Примеры таких генов ETS включают FLI1, ERG, ETV1 и ETV4. Примеры слитых генов включают EWS-FLI, TMPRSS2-ERG. В табл. 1А приведены несколько типов рака, при которых имеет место гиперэкспрессия и/или перестройка одного или более членов семейства
ETS.
Показания.
Некоторые соединения, композиции и способы, описанные в настоящем документе, можно применять для лечения ряда нарушений, таких как опухоль или опухолевые клетки, содержащие слитый ген, образованный в результате транслокации, такой как гены, перечисленные в табл. 1, саркома Юинга, рак предстательной железы, глиобластома, острый миелоидный лейкоз, рак молочной железы, рак головы и шеи, меланома, немелкоклеточный рак легких, рак яичников и рак матки. Некоторые варианты реализации способов, представленных в настоящем документе, включают способ ингибирования пролиферации клетки. В некоторых вариантах реализации клетка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS. В некоторых вариантах реализации гипреэкспрессируемый ген ETS может включать FLI1, ERG, ETV1 или ETV4. В некоторых вариантах реализации клетка содержит слитый ген ETS. В некоторых вариантах реализации слитый ген ETS может включать ген ETS, такой как FLI1, ERG, ETV1 и ETV4.
(II) (III) (I)
Соединения формулы (I) получали в соответствии со схемами синтеза, представленными в настоящем документе. Кетон формулы (II) (4,0 экв.) конденсировали с производным изатином формулы (III) (1,0 экв.) в присутствии диэтиламина (10 капель) в метаноле (5 мл) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали с использованием флэш-хроматографии с использованием смеси дихлорметан/метанол в качестве элюента, в результате чего получали чистый продукт. Осуществляли дополнительную очистку путем перекристаллизации с метанолом. Заместители на кетоне и его производном с изатином выбирали таким образом, чтобы получить соединения формулы (I), описанные ниже как примеры 1-23. ЯМР-спектры для соединений из примеров 1-26, полученных таким образом, снимали для 1Н (400 МГц) с использованием спектрометра Varian-400. Химические сдвиги даны в ppm в сторону слабого поля от тетраметилсилана, используемого в качестве внутреннего стандарта, а константы связывания (J-значения) даны в Герцах (Гц).
Хиральное разделение осуществляли путем растворения изомерных смесей в смеси в мета-нол/метиленхлорид (4/1) или чистом метаноле, а разделение осуществляли методом сверхкритической жидкостной хроматографии (СЖХ) с использованием колонки Chiralpak IA (250x4,6 мм; размер частиц 5 мкм) и элюирования с применением смеси метанол/CO2 (50/50). Растворитель удаляли под вакуумом, в результате чего получали чистые энантиомеры.
В этих схемах кетон (4,0 экв.) и каталитическое количество диэтиламина (10 капель) добавляют к раствору замещенного изатина (1,0 экв.) в метаноле (5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре до полного исчезновения исходного материала (замещенного изатина). Полученный раствор концентрируют и вводят в систему для флэш-хроматографии, используя для элюирования гексан/этилацетат, в результате чего получают чистый продукт при количественном выходе. Дополнительную очистку осуществляли путем перекристаллизации с использованием смеси гексан/этилацетат.
Пример соединения, синтезированного по описанной выше схеме, включает 4,7-дихлор-3-гидрокси-3-[2-(4-метоксифенил-2-оксоэтил)]-1,3-дигидроиндол-2-он: белое твердое вещество; температура плавления 149-151°C; 1Н-ЯМР (ДМСО, 400 МГц) 5 10,93 (s, 1H), 7,86 (d, 2H, J=9,2 Гц), 7,26 (d, 1H, J=8,8 Гц), 6,98 (d, 2H, J=8,8 Гц), 6,86 (d, 1H, J=8,4 Гц), 6,39 (s, 1H), 4,31 (d, 1H, J=18,0 Гц), 3,80 (s, 3H), 3,61 (d, 1H, J=18,0 Гц).
В таких вариантах реализации можно осуществить конденсацию подходящего ацетофенона и 4,7-дихлоризатина в присутствии каталитического количества диэтиламина с получением целевого соединения с количественным выходом.
Ниже приведен пример синтеза:
4,7-Дихлоризотин (30,05 г, 139,1 ммоль, 1,0 экв., Alfa Aesar лот № 10173559) и MeOH (450 мл, 15 об.) помещали в 2-л трехгорлую круглодонную колбу, оборудованную азотопроводом, верхней механической мешалкой и температурным зондом. Добавляли диэтиламин (3,25 г, 0,32 экв., Sigma-Aldrich, лот № SHBD5313V) в течение 3 мин (суспензия становилась темно-красной). Наблюдалось очень небольшое повышение температуры (с 17,5 до 18,8°C). Затем через пластиковую воронку добавляли 1-[4-(диметиламино)фенил]этанон 2 (44,3 г, 1,95 экв., ArkPharm, лот № 0000197-130717000) и споласкивали воронку метанолом (MeOH) (75 мл, 2,5 об.). Наблюдали снижение температуры реакции до 15,1°C. После перемешивания в течение нескольких минут получали темно-красный раствор с небольшим количеством нерастворенных частиц. Раствор перемешивали при температуре окружающей среды и периодически брали образцы для контроля хода процесса (IPC) методом ЖХВД. После протекания реакции в течение 23 ч при помощи шприца добавляли еще диэтиламин (1,42 г, 0,14 экв.) и продолжали перемешивание при температуре окружающей среды. Через 40,5 ч образовывалась светлая суспензия. Порциями добавляли твердое вещество 2 (54,1 г, 2,38 экв., ArkPharm, лот № 0000197-130717000 и 3,2 г, 0,14 экв., TCl лот № GK01-BRAH) с получением в сумме 4,47 экв. ацетофенона 2. После протекания реакции в течение 88 ч контроль процесса методом ЖХВД показал меньше 1% AUC изатина 1, присутствующего в реакционной смеси. Образовался тяжелый осадок. Через 4,5 дней реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении (водяная ванна <40°C), затем в высоком вакууме, в результате чего получали приблизительно 84 г твердой смеси, лот № BIO-W-22-11. Твердое вещество растворяли в смеси дихлормета-на (385 мл) и MeOH (140 мл) и адсорбировали на 100 г силикагеля. Растворитель удаляли при пониженном давлении и сухую смесь продукт/силикагель загружали на колонку, содержащую силикагель (1 кг, предварительно заполнена гептанами) для очистки методом флэш-хроматографии.
Элюирование начинали 10% этилацетатом в гептанах и доводили градиент до 100% этилацетата, меняли элюент на 10% метанол в этилацетате. Собирали фракции объемом от 500 мл до 2 л. Фракции, содержащие продукт, в которых началось осаждение продукта, объединяли и концентрировали до объема приблизительно 1 л. Полученный осадок отфильтровывали, ресуспендировали в смеси EtOAc/MeOH (соотношение 75:25, 200 мл), фильтровали и промывали метанолом (MeOH), в результате чего получали первую порцию соединения. Первый фильтрат концентрировали до небольшого объема и добавляли MeOH для осаждения второй порции соединения. Фильтраты, полученные из обеих порций, объединяли, концентрировали до небольшого значения, разбавляли в 25 мл MeOH, полученное твердое вещество фильтровали, в результате чего получали третью порцию соединения. Все три порции сушили в высоком вакууме при температуре окружающей среды в течение дня и при 40°C в течение четырех дней. Общий объединенный вес составлял 40,03 г, что соответствовало 76% выходу соединения (без поправки на чистоту или содержание растворителя). Твердое вещество было беловатым (с оттенками от очень бледно-желтого до персикового).
Другой пример синтеза включает:
4,7-Дихлоризотин (4,26 г, 19,7 ммоль, 1 экв., Alfa Aesar, лот № 10173559) и MeOH (70 мл, 16,4 об.) помещали в 250 мл трехгорлую круглодонную колбу, оборудованную азотопроводом, верхней механической мешалкой и температурным датчиком. Добавляли диэтиламин (0,43 г, 0,30 экв., Sigma-Aldrich, лот № SHBD5313V) в течение 1 мин при помощи шприца (суспензия становилась темно-красной). Порциями через пластиковую воронку добавляли 1-[4-(метиламино)фенил]этанон 3 (11,4 г, 3,9 экв., Sigma-Aldrich, лот № 01129HHV) в течение 15 мин. Воронку споласкивали метанолом (MeOH) (2x15 мл, 7,0 об.). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды (приблизительно 18-20°C) и периодически брали образцы для контроля хода процесса (IPC) методом ЖХВД. Через 40 ч реакции к реакционной смеси при помощи шприца добавляли дополнительное количество диэтиламина (0,16 г, 0,11 экв.) и продолжали перемешивание при температуре окружающей среды. Через 64 ч образовывалась светлая суспензия. В реакционную смесь при помощи шприца добавляли еще диэтиламин (0,13 г, 0,09 экв.) и продолжали перемешивание при температуре окружающей среды. Через 92 ч протекания реакции анализа процесса методом ЖХВД показал 2,1% AUC изатина 1, присутствующего в реакционной смеси. В реакционную смесь при помощи шприца добавляли еще диэтиламин (0,07 г, 0,05 экв.) до получения в целом 0,55 экв. основания и продолжали перемешивание при температуре окружающей среды на протяжении выходных. Через сложности семь дней (общее время) реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении (водяная ванна <40°C) твердый остаток растворяли в смеси дихлорметана (450 мл) и MeOH (50 мл) при 30°C и адсорбировали на 20 г силикагеля. Очистку осуществляли в системе
Combiflash Companion TM XL с 220 г с одноразовой колонкой RediSep с 220 г силикагеля (№ по каталогу 69-2203-422). Остатки исходного материала 3 элюировали дихлорметаном (приблизительно 20 объемов колонки, а продукт TK-202 элюировали 10% метанолом в дихлорметане. Фракции, содержащие продукт, в которых уже началось осаждение продукта, объединяли в две разные партии и частично концентрировали при пониженном давлении. Полученные суспензии фильтровали и промывали твердые остатки на фильтре метанолом (MeOH), в результате чего получали две фракции, которые сушили в высоком вакууме при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем при 50°C в течение 24 ч, в результате чего получали партию № BIO-W-30-17 и партию № BIO-W-30-18. Фильтрат, полученный после обеих процедур кристаллизации, второй раз очищали методом хроматографии (на 40 г колонке RediSep Gold, № в каталоге 69-2203-347) с использованием для элюирования градиента от дихлорметана до 5% метанола в дихлорметане. Фракции, содержащие продукт (степень очистки выше 99%, по значению площади под кривой после ЖХВД), объединяли и давали продукту осесть в течение 2 ч. Твердое вещество отфильтровывали, промывали метанолом и сушили в высоком вакууме в течение 24 ч при 50°C, в результате чего получали партию № BIOW-30-19. Второй набор фракций, содержащих продукт, со степенью чистоты примерно 95% (по значению площади под кривой после ЖХВД) объединяли, твердое вещество отфильтровывали, перерастворяли в дихлорметане и добавляли 20% метанол для осаждения в течение ночи. Осажденный TK-202 фильтровали и промывали метанолом, затем сушили в высоком вакууме в течение 24 ч при 50°C, в результате чего получали партию № BIO-W-30-16. Общая объединенная масса 5,99 г соответствует 83% выходу соединения. Твердое вещество было беловатым (с оттенками от очень бледно-персикового до светло-коричневого).
Пример 1. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-(метилсульфонил)фенил)-2-оксоэтил)индолин-2-он: беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 3,28 (s, 3H), 3,81 (d, 1H, J=16 Гц), 4,42 (d, 1H, J=16 Гц), 6,53 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J=8 Гц), 7,32 (d, 1H, J=8 Гц), 8,05 (d, 2H, J=8 Гц), 8,17 (d, 2H, J=8 Гц), 11,04 (s, 1H).
Пример 2. 3-(2-(4-(Азиридин-1-ил)фенил)-2-оксоэтил)-4,7-дихлор-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество
К 4,7-дихлориндолин-2,3-диону (А) (300 мг, 1,39 ммоль) в 15 мл метанола добавляли 1-(4-(азиридин-1-ил)фенил)этанон (В) (0,9 г, 5,5 ммоль) и 10 капель диэтиламина (2). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 24 ч. Растворитель удаляли, а остаток очищали флэш-хроматографией (0-5% метанол/CH2Cl2), в результате чего получали беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 2,16 (s, 4H), 3,64 (d, 1H, J=16 Гц), 4,32 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,41 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J=8 Гц), 7,05 (d, 2H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,80 (d, 2H, J=8 Гц), 10,95 (s, 1H).
Пример 3. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-изопропилфенил)-2-оксоэтил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 1,21 (d, 6H, J=4 Гц), 2,95 (m, 1H), 3,69 (d, 1H, J=16 Гц), 4,39 (d, 1H, J=16 Гц), 6,45 (s, 1H), 6,90 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,29 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,38 (d, 2Н, J=8 Гц), 7,85 (d, 2Н, J=8 Гц), 10,98 (s, 1Н).
Пример 4. 4,7-Дихлор-3-(1-(4-(диметиламино)фенил)-1-оксопропан-2-ил)-3-гидроксииндолин-2-он.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 1,48 (d, 3H, J=8 Гц), 3,00 (s, 6H), 4,78 (m, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,66 (d, 2H, J=8 Гц), 6,76 (d, 1H, J=8 Гц), 7,17 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,69 (d, 2H, J=8 Гц), 10,74 (s, 1H).
Пример 7. 4,7-Дихлор-3-(2-(4-циклопропилфенил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество
А В
К 4,7-дихлориндолин-2,3-диону (А) (300 мг, 1,39 ммоль) в 15 мл метанола добавляли 1-(4-циклопропилфенил)этанон (В) (0,9 г, 5,5 ммоль) и 10 капель диэтиламина (2). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 24 ч. Растворитель удаляли, а остаток очищали флэш-хроматографией (0-5% метанол/CH2Cl2), в результате чего получали беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 0,76 (m, 2Н), 1,06 (m, 2Н), 2,0(m, 1Н), 3,65 (d, 1Н, J=16 Гц), 4,35 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,43 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J=8 Гц), 7,19 (d, 2H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,79 (d, 2H, J=8 Гц), 10,97 (s, 1H).
Пример 8. 3-(2-(4-(1Н-Пиразол-1-ил)фенил)-2-оксоэтил)-4,7-дихлор-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 3,72 (d, 1Н, J=16 Гц), 4,41 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,47 (s, 1H), 6,62(d, 1H, J=4 Гц), 6,90 (d, 1H, J=8 Гц), 7,31 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,84, (d, 1Н, J=4 Гц), 7,99 (d, 2H, J=8 Гц), 8,06 (d, 2H, J=8 Гц), 8,66 (d, 1H, J=4 Гц), 10,98 (s, 1H).
Пример 10. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(4-(пирролидин-1-ил)фенил)этил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество
А В
К 4,7-дихлориндолин-2,3-диону (А) (12,5 г, 0,06 моль) в 800 мл метанола добавляли 1-(4-(пирролидин-1-ил)фенил)этанон (В) (45 г, 0,24моль) и 0,5 мл диэтиламина (2). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч. Растворитель удаляли, а остаток очищали флэш-хроматографией (0-5% метанол/CH^bJ, в результате чего получали 13,5 г коричневого твердого вещества. Его снова очищали флэш-хроматографией с применением смеси этилацетат/гексан, в результате чего получали 11,5 г беловатого твердого вещества. Повторение реакции в том же масштабе давало еще 11,5 г продукта. Две партии продукта объединяли и перекристаллизовывали из метанола, в результате чего получали 20,5 г в виде беловатого твердого вещества.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 1,96 (m, 4Н), 3,30 (m, 4Н), 3,65 (d, 1H, J=16 Гц), 4,29 (d, 1H, J=16 Гц), 6,34 (s, 1H), 6,53 (d, 2H, J=8 Гц), 6,88(d, 1H, J=8 Гц), 7,28 (d, 1H, J=8 Гц), 7,72 (d, 2Н, J=8 Гц), 10,97(s, 1H).
Хиральное разделение проводили в следующих условиях.
В способе подготовки применяли следующее: колонка RegisCell L: 250 мм, ИС: 50 мм, размер частиц: 5 мкм; подвижная фаза: метанол/CO^ соотношение: 35/65, длина волны для детектирования: 254 нм, скорость потока: 325 г/мин, скорость потока сорастворителя 113,75 мл/мин. Растворяли 19,72 г в 1000 мл метанола для получения концентрации 0,020 г/мл. Вводимый объем составлял 25,00 мл, что соответствовало общему количеству 0,500 г/введение. Выход составил (+): 9,73 г при оптическом вращении +247 при 20°C и (-): 9,26 г.
Пример 11. 4-(2-(4,7-Дихлор-3-гидрокси-2-оксоиндолин-3-ил)ацетил)бензолсульфонамид беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 3,78 (d, 1H, J=16 Гц), 4,41 (d, 1H, J=16 Гц), 6,51 (s, 1H), 6,90 (d, 1H, J=8 Гц), 7,31 (d, 1H, J=8 Гц), 7,56 (s, 2H), 7,91 (d, 2H, J=8 Гц), 8,11 (d, 2H, J=8 Гц), 10,98 (s, 1H).
Пример 12. 4,7-Дихлор-3-(2-(3-фтор-4-(пирролидин-1-ил)фенил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 1,91 (m, 4Н), 3,46 (m, 4Н), 3,57 (d, 1Н, J=16 Гц), 4,27 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,36 (s, 1Н), 6,71 (t, 1Н, J=4 Гц, J=8 Гц), 7,29 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,46 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,61 (d, 1H, J=4 Гц), 7,64 (d, 1Н, J=8 Гц), 11,01 (s, 1Н).
Пример 13. 3-(2-(4-(Азетидин-1-ил)фенил)-2-оксоэтил)-4,7-дихлор-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество
К 4,7-дихлориндолин-2,3-диону (А) (300 мг, 1,39 ммоль) в 15 мл метанола добавляли 1-(4-(азетидин-1-ил)фенил)этан-1-он (В) (972 мг, 5,5 ммоль) и несколько капель диэтиламина (2). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч. Растворитель удаляли, а остаток очищали флэш-хроматографией (0-5% метанол/CT^CbJ, в результате чего получали беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-d^ 400 МГц) 5 2,32 (m, 2H), 3,51 (d, 1H, J=16 Гц), 3,95 (m, 4Н), 4,30 (d, 1H, J=16 Гц), 6,35 (s, 1H), 6,36 (d, 2H, J=8 Гц), 6,87 (d, 1H, J=8 Гц), 7,28 (d, 1H, J=8 Гц), 7,73 (d, 2H, J=8 Гц), 10,89 (s, 1H).
Пример 14. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-метоксициклогексил)-2-оксоэтил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) 5 1,24 (m, 4H), 1,92 (m, 2Н), 2,08 (m, 2Н), 2,32 (m, 1Н), 3,06 (m, 1Н), 3,26 (s, 3H), 3,33 (d, 1H, J=16 Гц), 3,69 (s, 1Н), 3,70 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,91 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,20 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,61 (s, 1Н).
Пример 15. 4,7-Дихлор-3 -гидрокси-3-(2-(4-метоксибицикло[2,2,2]октан-1 -ил)-2-оксоэтил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) 5 1,59 (m, 12Н), 3,16 (s, 3H), 3,22 (d, 1H, J=16 Гц), 3,58 (s, 1H), 4,14 (d, 1H,
J=16 Гц), 6,90 (d, 1H, J=8 Гц), 7,23 (d, 1H, J=8 Гц), 7,67 (s, 1H).
Пример 16. 4,7-Дихлор-3-(2-(4-(диметиламино)бицикло[2,2,2]октан-1-ил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он), беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfc 400 МГц) 5 1,59 (m, 12Н), 2,5 (s, 3H), 3,18 (d, 1Н, J=16 Гц), 3,85 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,31 (s, 1Н), 6,90 (d, 1H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 10,95 (s, 1H).
Пример 17. 4,7-Дихлор-3-(2-(4-циклопропил-3-фторфенил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество
А В
К 4,7-дихлориндолин-2,3-диону (А) (261 мг, 1,21 ммоль) в 15 мл метанола добавляли 1-(4-циклопропил-3-фторфенил)этанон (В) (280 мг, 1,57 ммоль) и 10 капель диэтиламина (2). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 24 ч. Растворитель удаляли, а остаток очищали флэш-хроматографией (0-5% метанол/CH2Cl2), в результате чего получали беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-df,, 400 МГц) 5 0,83 (m, 2H), 1,08 (m, 2Н), 2,11 (m, 1H), 3,68 (d, 1Н, J=16 Гц), 4,34 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,43 (s, 1H), 6,90 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,11 (m, 1Н), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,60 (d, 1H, J=8 Гц), 7,68
(d, 1H, J=8 Гц), 10,96 (s, 1H).
Хиральное разделение осуществляли способом, по существу, аналогичным способу, описанному выше. Скрининг методом ЖХ осуществляли с использованием следующего: колонка: AD-H, 250x4,6 мм, 5 мкм, гексан/этанол (65/35), 1,5 мл/мин, вводимый объем: 10,0 мкл, давление: 102,9 бар. Пик 1: время удерживания: 5,40 мин, ширина: 0,171 мин, площадь: 4502,21, % площади: 50,08. Пик 2: время удерживания: 7,23 мин, ширина: 0,239 мин, площадь: 4488,43, % площади: 49,92.
Пример 18. 4,7-Дихлор-3-(2-(4-циклопропил-2-фторфенил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество
А В
К 4,7-дихлориндолин-2,3-диону (А) (261 мг, 1,21 ммоль) в 15 мл метанола добавляли 1-(4-циклопропил-2-фторфенил)этанон (В) (280 мг, 1,57 ммоль) и 10 капель диэтиламина (2). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 24 ч. Растворитель удаляли, а остаток очищали флэш-хроматографией (0-5% метанол/CH2Cl2), в результате чего получали беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-df,, 400 МГц) 5 0,82 (m, 2H), 1,07 (m, 2Н), 2,01 (m, 1H), 3,66 (d, 1H, J=16 Гц), 4,26 (d, 1H, J=16 Гц), 6,44 (s, 1H), 6,91 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,01 (m, 2Н), 7,31 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,57 (m, 1Н), 10,96 (s,
1H).
Хиральное разделение осуществляли способом, по существу, аналогичным способу, описанному выше. Скрининг методом ЖХ осуществляли с использованием следующего: колонка: RegisCell, 250x4,6 мм, 5 мкм, гексан/IPA (80/20), 1,5 мл/мин, вводимый объем: 2,0 мкл, давление: 51,5 бар.
Пик 1: время удерживания: 5,16 мин, ширина: 0,238 мин, площадь: 3716,20, % площади: 49,78.
Пик 2: время удерживания: 6,49 мин, ширина: 0,324 мин, площадь: 3749,55, % площади: 50,22.
Пример 19. 4-Хлор-7-фтор-3-гидрокси-3-(2-(4-метоксифенил)-2-оксоэтил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-df,, 400 МГц) 5 3,63 (d, 1H, J=16 Гц), 3,84 (s, 3H), 4,36 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,38 (s, 1H), 6,88(d, 1H, J=8 Гц), 7,02 (d, 2Н, J=8 Гц), 7,16 (m, 1H), 7,89 (d, 2H, J=8 Гц), 11,01 (s, 1H).
Пример 20. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-морфолинофенил)-2-оксоэтил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfe 400 МГц) 5 3,28 (m, 4H), 3,53 (d, 1H, J=16 Гц), 3,71 (m, 4H), 4,33 (d, 1H, J=16 Гц), 6,37 (s, 1H), 6,87 (d, 1H, J=8 Гц), 6,97 (d, 2H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,77 (d, 2H, J=8 Гц), 10,95 (s, 1H).
Пример 21. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(пиридин-4-ил)этил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfe 400 МГц) 5 3,78 (d, 1H, J=16 Гц), 4,39 (d, 1H, J=16 Гц), 6,53 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J=8 Гц), 7,32 (d, 1H, J=8 Гц), 7,79 (d, 2H, J=4 Гц), 8,80 (d, 2Н, J=4 Гц), 11,03 (s, 1Н).
Пример 22. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(пиридин-3-ил)этил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfo 400 МГц) 5 3,78 (d, 1H, J=16 Гц), 4,39 (d, 1Н, J=16 Гц), 6,50 (s, 1Н), 6,90 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,30 (d, 1Н, J=8 Гц), 7,57 (m, 1Н), 8,28 (d, 1H, J=4 Гц), 8,80 (d, 1H, J=4 Гц), 9,09 (s, 1H), 11,03 (s,
1H).
Пример 23. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(пиридин-2-ил)этил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfo 400 МГц) 5 3,78 (d, 1H, J=16 Гц), 4,68 (d, 1H, J=16 Гц), 6,50 (s, 1H), 6,90 (d, 1H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,70 (d, 1H, J=4 Гц), 7,81 (d, 1H, J=4 Гц), 7,98 (m, 1H), 8,76 (s, 1H), 11,01 (s,
1H).
Пример 24. 4-(2-(4,7-Дихлор-3-гидрокси-2-оксоиндолин-3-ил)ацетил)бензамид, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfe 400 МГц) 5 3,74 (d, 1H, J=16 Гц), 4,42 (d, 1H, J=16 Гц), 6,49 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J=8 Гц), 7,31 (d, 1H, J=8 Гц), 7,57 (s, 1H), 7,95 (d, 2H, J=8 Гц), 7,97 (d, 2H, J=8 Гц), 8,10 (s, 1H), 11,01 (s,
1H).
Пример 25. 4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-гидроксифенил)-2-оксоэтил)индолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfe 400 МГц) 5 3,60 (d, 1H, J=16 Гц), 4,30 (d, 1H, J=16 Гц), 6,39 (s, 1H), 6,82 (d, 2H, J=8 Гц), 6,90 (d, 1H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,80 (d, 2H, J=8 Гц), 10,45 (s, 1H), 10,93 (s, 1H).
Пример 26. 4,7-Дихлор-3-(2-(3,4-дифторфенил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он, беловатое твердое вещество.
1Н-ЯМР (ДМСО-dfo 400 МГц) 5 3,70 (d, 1H, J=16 Гц), 4,37 (d, 1H, J=16 Гц), 6,48 (s, 1H), 6,91 (d, 1H, J=8 Гц), 7,30 (d, 1H, J=8 Гц), 7,56 (m, 1Н), 7,96 (m, 1Н), 8,01 (m, 1Н), 11,01 (s, 1H). Биологическая активность соединений согласно настоящему изобретению. Были определены значения активности некоторых соединений, приведенных в табл. 2.
Соединение (оптическое вращение)
Структура
Название
1 (+/-)
ОСН3
?' HO
Тн Cl
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-[2-(4-метоксифенил-2-оксоэтил)]-1,3-дигидроиндол-2-он
2(-)
ОСНз
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-[2-(4-метоксифенил-2-оксоэтил)]-1,3-дигидроиндол-2-он
3(+)
ОСН3
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-[2-(4-метоксифенил-2-оксоэтил)]-1,3-дигидроиндол-2-он
4 (+/-)
Учз0
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-
(метилсульфонил)фенил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
5(-)
^.NHCH3
ci но)
т^й °
4,7-д ихл о р- 3- гид рокси-3- [2- [4-
(метиламино)фенил]-2-оксоэтил]-
1Н-индол-2-он
6(+)
~^/NHCH3
ci НО J
4,7-д ихл о р- 3- гид рокси-3- [2- [4-
(метиламино)фенил]-2-оксоэтил]-
1Н-индол-2-он
7 (+/-)
.^.NHCHs
ci нсГ) Тн
4,7-д ихл о р- 3- гид рокси-3- [2- [4-
(метиламино)фенил]-2-оксоэтил]-
1Н-индол-2-он
8 (+/-)
9' но ^-4
3-(2-(4-(азиридин-1-ил)фенил)-2-
оксоэтил)-4,7-дихлор-3-
гидроксииндолин-2-он
9 (+/-)
9' но --4
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-
изопропилфенил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
10(+)
\|-~
91 но --4 f4vo° Тн
4,7-дихлор-3-(1-(4-(диметиламино)фенил)-1-оксопропан-2-ил)-3-гидроксииндолин-2-он
11 (-)
91 но
4,7-дихлор-3-(1-(4-(диметиламино)фенил)-1-оксопропан-2-ил)-3-гидроксииндолин-2-он
12(+/-)
\|-"
Cl HO --4 Cl
4,7-дихлор-3-(1-(4-(диметиламино)фенил)-1-оксопропан-2-ил)-3-гидроксииндолин-2-он
13(+)
9' но --4
лр(о°
4,7-дихлор-3-(2-(4-
циклопропилфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
14(-)
9' но ^-4
лр( °
VSt °
4,7-дихлор-3-(2-(4-
циклопропилфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
15(+/-)
9' HO ^-4
yTVo°
4,7-дихлор-3-(2-(4-
циклопропилфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
16(+/-)
ci Hn -4
V^K °
3-(2-(4-(1Н-пиразол-1-ил)фенил)-2-
оксоэтил)-4,7-дихлор-3-
гидроксииндолин-2-он
17(+)
4,7-Дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-
(4-(пирролидин-1-
ил)фенил)этил)индолин-2-он
18(-)
ci Hn -4 Тн
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-
(4-(пирролидин-1-
ил)фенил)этил)индолин-2-он
19(+/-)
9' но --4 T н
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-
(4-(пирролидин-1-
ил)фенил)этил)индолин-2-он
20 (+/-)
Cl но) T н
4-(2-(4,7-дихлор-3-гидрокси-2-оксоиндолин-3-
ил)ацетил)бензолсульфонамид
21 (+/-)
9' но /^-L
4,7-дихлор-3-(2-(3-фтор-4-
(пирролидин-1-ил)фенил)-2-
оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он
22 (+/-)
91 но --4 T н
3-(2-(4-(Азетидин-1-ил)фенил)-2-
оксоэтил)-4,7-дихлор-3-
гидроксииндолин-2-он
23 (+/-)
91 HO --4 T н
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-
метоксициклогексил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
24 (+/-)
CL HO)
T н
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-
метоксибицикло[2,2,2]октан-1-ил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
25 (+/-)
CL HO) T н
4,7-дихлор-3-(2-(4-(диметиламино)бицикло[2,2,2]октан-1 -ил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он
26 (+/-)
91 но ^-4 ffTVo° Тн
4,7-дихпор-3-(2-(4-циклопропил-3-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
27 (+/-)
91 но --4
ГтСо
Тн ci Н
4,7-д ихл о р-3-(2-(4-ци кл о п ро п и л-2-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
27 (-)
91 но ^-4
лрС0°
4,7-д ихл о р-3-(2-(4-ци кл о п ро п и л-2-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
27 (+)
91 но --4
yYVo
4,7-дихлор-3-(2-(4-циклопропил-2-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
28 (+/-)
9' но --4
ГтСо°
4-хлор-7-фтор-3-гидрокси-3-(2-(4-
метоксифенил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
29 (+/-)
С| но ) Т^н °
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-
морфолинофенил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
30 (+/-)
С| но) Тн
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(пиридин-4-ил)этил)индолин-2-он
31 (+/-)
С| нсГ) Тн
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(пиридин-3-ил)этил)индолин-2-он
32 (+/-)
91 нем Тн
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-оксо-2-(пиридин-2-ил)этил)индолин-2-он
33 (+/-)
CONH2
01 но) Тн^0
4-(2-(4,7-дихлор-3-гидрокси-2-оксоиндолин-3-ил)ацетил)бензамид
_ <эн
34 (+/-)
91 но J Т~н °
4,7-дихлор-3-гидрокси-3-(2-(4-
гидроксифенил)-2-
оксоэтил)индолин-2-он
35 (+/-)
91 но)
4,7-дихлор-3-(2-(3,4-дифторфенил)-2-оксоэтил)-3-гидроксииндолин-2-он
36 (-)
91 но ^-4 ffTVo° Тн
4,7-д ихл о р- 3- (2-(4- ци кл о п ро п и л-3-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
37 (+)
Тн ci н
4,7-дихлор-3-(2-(4-циклопропил-3-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
38 (-)
91 но ^-4 Тн
4,7-дихлор-3-(2-(4-циклопропил-2-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
39 (+)
4,7-дихлор-3-(2-(4-циклопропил-2-
фторфенил)-2-оксоэтил)-3-
гидроксииндолин-2-он
Активности соединений согласно настоящему изобретению.
Анализ, основанный на модифицированной соли тетразолия, в котором использовался набор CCK-8 (Sigma-Aldrich; Сент-Луис, МО, США), применяли для измерения ингибирования роста клеток опухоли человека. Опухолевые клетки (5000-7500 клеток/лунку) добавляли в 96-луночные планшеты и давали им прикрепиться в течение 4-5 ч. Готовили серийные разбавления соединений и добавляли с трипликатах в концентрации от 0,02 до 5 мкМ. В качестве контроля, содержащего основу, в анализ включали ДМСО. Клетки инкубировали в присутствии соединения в течение 3 дней. После инкубации в каждую лунку добавляли реагент CCK-8 и инкубировали в течение 2-4 ч. Количество жизнеспособных клеток определяли методом спектрофотометрии на длине волны 450 нм. Процент жизнеспособности в каждом образце рассчитывали по значениям А450 следующим образом: % жизнеспособности = (А450 нм образ-ца/А450 нм клетка, стимулированная ДМСО х 100). IC50 определяли как концентрацию, которая дает 50% подавление жизнеспособности клеток. Значения активности конкретных соединений, выраженные в форме IC50, определяли с использованием клеток (линия клеток саркомы Юинга). Результаты собраны в табл. 3. Значения активности конкретных соединений, выраженные в форме IC50, определяли с использованием линий клеток, перечисленных в табл. 4.
Соединен ие
1С5
Соединен ие
ICs
Соединен ие
ICs
Соединен ие
ICs
Соединен ие
ICs
А обозначает ICso > 5 мкМ; В обозначает ICso < 5 мкМ; и С обозначает "не определено".
Ниже приведены значения 1С50 для некоторых соединений:
(Соединение 1: SKES: С А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С PANC1: С.
Соединение 2: SKES: В; А4573: В; ТС71: В; LNCap: В; РСЗ: A; MDA-MB-231: В; MCF7: А; ВхРСЗ: В и PANC1: А.
Соединение 3: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 4: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 5: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 6: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С. Соединение 7: SKES: С; А4573: С;
ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С. Соединение 8: SKES: В; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 9: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 10: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 11: SKES: В; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 12: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 13: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 14: SKES: В; А4573: В; ТС71: В; LNCap: В; РСЗ: A; MDA-MB-231: В; MCF7: А; ВхРСЗ: В; и PANC1: A. i
Соединение 15: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 16: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 17: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7 С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 18: SKES: В; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; V1CF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С. Соединение 19: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 20: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 21: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 22: SKES: В; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 23: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С. Соединение 24: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: Соединение 24: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 25: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 26: SKES: В; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 27: SKES: В; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 28: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 29: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 30: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 31: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 32: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 33: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 34: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 35: SKES: А; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 36: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ:
Соединение 37: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231:
MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 38: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
Соединение 39: SKES: С; А4573: С; ТС71: С; LNCap: С; РСЗ: С; MDA-MB-231: С; MCF7: С; ВхРСЗ: С; и PANC1: С.
А обозначает ICso > 5 мкМ; В обозначает ICso < 5 мкМ и С обозначает "не определено".
В исследовании на ксенографте клетки опухоли А4573 имплантировали мышам. Мышам давали несколько соединений (перорально, дважды в день). Измеряли средний объем опухоли А4573 в разные моменты времени. В сравнении с контролем, включающим введение основы, соединение 14 продемонстрировало 57% подавление роста опухоли (TGI) в количестве 100 мг/кг/день, дважды в день, соединение 2 не продемонстрировало ингибирования роста опухоли (TGI) в количества 200 мг/кг/день, дважды в день. В аналогичном исследовании с ксенографтами на крысах соединение 2 продемонстрировало 87 % TGI, а соединение 14 продемонстрировало 53 % TGI, в обоих случаях в сравнении с контролем, включающим введение основы.
Метаболическая активность некоторых соединений.
Метаболическая активность некоторых соединений оценивали на микросомах печени с использованием системы регенерации НАДФН и стандартных протоколов. Вкратце, соединения инкубировали с выделенными микросомами печени человека, крысы, собаки или мыши. Реакции в 96-луночных планшетах запускали путем добавления системы регенерации НАДФН (в-никотинамидадениндинуклеотидфосфат адениндинуклеотидфосфа, изолимонная кислота и изолимон-ная дегидрогеназа). Реакции гасили холодным акрилонитрилом через 5, 10, 20, 30 и 60 мин, встряхивали и центрифугировали на 4000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочные жидкости, содержащие определяемые соединения, исследовали с использованием ЖХ/МС/МС: для ЖХ: Shimadzu LC 20-AD, MC: API4000, автоматический дозатор: СТС PAL; используемые колонки включали CHIRALPAK AS-RH 150x4,6 мм, 5 мкм, № компонента: ASRHCD-KK008, и Асе 5 Phenyl, 50x2,1 мм, № компонента АСЕ-125-0502. Анализ данных: T1/2 и CL (клиренс) рассчитывали с использованием уравнений кинетики первого порядка: Ct=C0*e-kt; Ct = (1/2)*С0; t1/2 = In2/k = 0,693/k; CL = Vd*k и Vd = 2 мл/мг. Результаты собраны в табл. 5-8, в которых R2 представляет собой коэффициент корреляции линейной регрессии для определения константы скорости; T1/2 представляет собой время полужизни; БКФ обозначает отсутствие кофактора.
Микросома печени человека
Соединение
Tl/2
(мин)
Остальное(Т = 60 мин)
Остальное(БКФ = 60 мин)
0,9771
20,2
12,7%
112,1%
0,7345
> 145
77,1%
112,6%
0,9869
23,0
17,8%
99,4%
0,9268
103,4
68,5%
105,1%
0,9901
27,7
22,8%
104,5%
0,9659
85,6
62,8%
103,4%
0,9972
23,8
17,9%
104,0%
0,9910
79,7
60,4%
100,0%
0,9970
18,7
11,2%
99,5%
Тестостерон
0,9928
18,9
10,9%
88,1%
Диклофенак
0,9855
7,3
0,3%
77,8%
Пропафенон
0,9315
6,8
0,2%
92,5%
Масса печени: 22 г/кг, относительная масса печени для человека
Таблица 6
микросома печени крысы
Соединение
Tl/2
(мин)
Остальное(Т = 60 мин)
Остальное(БКФ = 60 мин)
0,9991
3,8
2,3%
92,7%
0,9989
7,1
2,7%
92,6%
0,9995
1,3
0,0%
88,5%
0,9885
3,6
0,2%
97,0%
0,9971
2,8
0,1%
97,6%
0,9968
3,5
0,3%
95,4%
0,9943
2,6
0,2%
97,8%
0,9849
3,0
0,2%
90,5%
0,9137
2,9
0,2%
94,7%
Тестостерон
1,0000
1,0
0,0%
87,3%
Диклофенак
0,9985
13,3
4,1%
94,1%
Пропафенон
0,9926
2,0
0,0%
89,2%
Масса печени: 40 г/кг, относительная масса печени для крысы
Таблица 7
микросома печени мыши
Соединение
Tl/2
(мин)
Остальное(Т = 60 мин)
Остальное(БКФ = 60 мин)
0,9919
16,2
7,7%
90,2%
0,9902
7,4
0,4%
97,5%
0,9820
9,6
1,6%
88,4%
0,9780
26,6
19,6%
85,6%
0,9474
23,1
19,7%
102,0%
0,9871
20,7
12,8%
88,6%
0,9904
11,9
3,0%
89,6%
0,9917
15,4
6,4%
89,7%
0,9968
6,8
0,0%
93,0%
Тестостерон
0,9992
3,3
0,0%
83,6%
Диклофенак
0,9887
39,2
32,6%
88,1%
Пропафенон
0,9891
2,0
0,0%
91,7%
Масса печени: 88 г/кг, относительная масса печени для крысы
микросома печени собаки
Соединение
Tl/2
(мин)
Остальное(Т = 60 мин)
Остальное(БКФ = 60 мин)
0,9911
30,3
24,6%
100,6%
0,9977
21,3
14,0%
100,1%
0,9932
24,1
18,7%
92,9%
0,9935
8,4
0,7%
98,4%
0,9932
40,8
36,2%
97,1%
0,9855
9,1
1,0%
94,1%
0,9908
35,0
29,9%
93,1%
0,9857
2,4
0,1%
96,3%
0,9961
33,5
28,3%
97,6%
Тестостерон
0,9900
19,8
12,5%
91,0%
Диклофенак
0,7395
> 145
75,5%
89,6%
Пропафенон
0,9765
5,2
0,1%
89,6%
Масса печени: 32г/кг, относительная масса печени для собаки
Метаболическая стабильность некоторых соединений.
Параметры полужизни и клиренса для некоторых соединений оценивали на микросомах печени человека и человеческих гепатоцитах. Для запуска реакций соединения инкубировали в присутствии мик-росом печени человека (или человеческих гепатоцитов) в инкубаторе с 95% влажностью при 5% CO2. В определенные моменты времени (0, 5, 15, 30, 60, 90 мин) реакции останавливали, откручивали и центрифугировали. Надосадочные жидкости хранили замороженными до проведения анализа методом ЖХ/МС/МС. Результаты для микросом печени человека и гепатоцитов человека приведены в табл. 9 и 10 соответственно.
Соединение
% ост.
время полужизни (мин)
СЦер (МЛ/МИН/КГ)*
226
8,7
> 240
<8,7
Соединение
% ост.
время полужизни (мин)
СЦер (МЛ/МИН/КГ)*
100
> 240
<8,7
*печеночный клиренс при скорости потока = 20 мл/мин/кг
В другом исследовании изучали метаболизм соединений согласно настоящему изобретению в гем-птоцитах различных видов. Гепатоциты обрабатывали соединением и определяли время полужизни соединения. Результаты приведены в табл. 11.
Таблица 11
Время полужизни соединений (мин)
Соединение
7-этоксикумарин
7-гидроксикумарин
Мышь
30,9
60,0
62,79
37,86
15,82
Крыса
14,2
18,8
27,41
38,24
12,41
Собака
16,7
30,6
20,26
9,14
9,38
Человек
45,5
63,6
75,87
45,29
20,78
Некоторые соединения исследовали на микросомах печени человека (HLM) и человеческих гепато-цитах, и определяли их метаболиты. Вкратце, метаболическую стабильность исследовали при одной концентрации исследуемого аналита (например, 1 мкМ) в двух повторах. Оценивали уменьшение количества исследуемого аналита с течением времени в микросомах печени человека (0,5 мг/мл) с НАДФН и без него в моменты времени 0, 5, 10, 20, 30 и 45 мин и в гепатоцитах (0,5x106 клеток/мл) в моменты времени 0, 15, 30, 60, 120 и 240 мин. В анализ включали положительный контроль (диклофенак) и отрицательный контроль (обработанные кипячением микросомы печени человека или инактивированные нагреванием гепатоциты). Диклофенак проверяли в те же моменты инкубации, что и исследуемый аналит, а измерения для отрицательного контроля проводили в моменты времени 0 и 45 мин в микросомах печени человека и в моменты 0 и 240 мин в гепатоцитах. Инкубируемые смеси сохраняли и использовали для идентификации метаболита методом ЖХ/МС/МС. Отношение площадей пиков исходного анали-та/внутреннего стандарта преобразовывали в долю оставшегося лекарственного средства, принимая значения отношения площадей пиков в момент времени 0 за 100%. Наклон линейной регрессии логарифм зависимости процентной доли оставшегося соединения от времени (-k) определяли методом линейной регрессии. По профилям отдельных значений логарифма оставшейся доли от времени определяли время полужизни и собственный клиренс. Проводили исследование исходного исследуемого аналита методами UHPLC-HRMS (хроматография сверхвысокого давления/масс-спектрометрия высокого разрешения) и UHPLC-MC/MC (хроматография сверхвысокого давления/масс-спектрометрия-масс-спектроскопия), чтобы проверить возможные общие ионные фрагменты. Отобранные образцы микросом, из аликвот, взятых в моменты времени 0, 10, 20 и 45 мин, и аликвот инкубируемых смесей гепатоцитов, взятых в моменты времени 0, 60, 120 и 240 мин, использовали для первичной идентификации метаболитов. Данные по метаболитам приведены на основании площадей пиков их масс-спектрограмм. Табл.12-14 содержат результаты для соединений: 1 12 и 7 соответственно.
Описание
[М+Н] (m/z)
Время
удерживания (мин)
Структура
Микросомы
печени
человека
Человечески е гепатоциты
Исходное соединение
366,029
2,52
Деметилирование + присоединение глюкуронида
528,048
1,97
glucuronide = глюкуронид
н/о
Окисление
382,024
2,24
Тн Cl
н/о
Деметилирование
352,014
2,27
Тн Cl
о: определено, н/о: не определено
Описание
[М+Н] (m/z)
Время удерживай ия (мин)
Структура
Микросо мы
печени человека
Человеческ ие
гепатоциты
Исходное соединение
379,06
2,55
Деметилировани е + Окисление
381,04 06
2,13
н/о
Дидеметилирова ние
351,03 05
2,25
NH2
Окисление
395,05 52
2,28
н/о
о: определено, н/о: не определено
Описание
[М+Н] (m/z)
Время удерживай ия (мин)
Структура
Микросом ы печени человека
Человеч еские гепатоци ты
Исходное соединение
365,04 58
2,40
\|Н
Окисление
381,04 02
2,21
н/о
Деметилированн ое соединение
351,03 01
2,25
NH2
о: определено, н/о: не определено
Фармакокинетика некоторых соединений
Для нескольких соединений определяли некоторые фармакокинетические параметры in vivo при внутривенном и пероральном применении. Вкратце, готовили препарат соединения и вводили путем внутривенного болюса, непрерывной внутривенной инфузии или перорально. В течение 24 ч несколько раз брали кровь и перерабатывали в плазму. Исходное соединение в плазме исследовали с использованием ЖХ/МС/МА. Некоторые параметры для некоторых соединений получали в дупликатах. В табл. 15 приведены результаты для соединения 14 в исследовании с непрерывной инфузией на крысах или собаках, в табл. 16 приведены результаты исследований на мышах BALB/c или крысах Спраг-Даули.
Доза
(мг/кг/день)
Т1/2 (ч)
квывед (1/4)
(МЛ/КГ)
(МЛ/Ч/КГ)
MRT24- (ч) -
среднее
время
удерживания
CSS(3-24H)
(нг/мл)
мкМ
24#
0,824
0,846
3457
2922
1,11
344
0,91
96#
1,00
0,703
4231
2976
1,73
1376
3,7
10Л
1,9
0,4
5643
2016
2,5
210
0,56
25л
1,7
0,4
5663
2238
2,2
466
1,24
#: крыса; л: собака
ничений. Раскрытие не ограничивается раскрытыми вариантами реализации. Специалист в данной области может увидеть возможные изменения раскрытых вариантов реализации при осуществлении заявленных решений, на основании изучения чертежей, описания и прилагаемой формулы изобретения.
Все цитируемые в настоящем документе источники полностью включены в настоящий источник посредством ссылки. Если публикации и патенты или заявки на патент, включенные в описание посредством ссылки, противоречат информации, содержащейся в описании, подразумевается, что настоящее описание имеет большее значение, чем любой такой противоречащий материал, и/или имеет приоритет по отношению к нему.
При отсутствии другого определения, все термины (включая технические и научные термины) следует понимать в соответствии с их обычным и привычным для среднего специалиста значением, они не ограничиваются каким-либо конкретным или специальным значением, если такое ограничение не выражено в явном виде в настоящем документе. Следует учесть, что применение конкретной терминологии при описании определенных признаков или аспектов раскрытых объектов не следует понимать в том смысле, что определение этой терминологии в данном документе меняется и ограничивается включением каких-либо конкретных характеристик признаков или аспектов раскрытого объекта, с которым связана эта терминология.
В тех случаях, когда приводится диапазон значений, подразумевается, что варианты реализации охватывают верхний и нижний пределы, а также все промежуточные значения между верхним и нижним пределами.
Термины и выражения, применяемые в этом описании, и их варианты, особенно в прилагаемой формуле изобретения, если явным образом не выражено иное, следует понимать как открытые, в противоположность ограничивающим. В качестве примеров вышесказанного термин "включающий" следует понимать в смысле "включающий, без ограничения", "включающий, но не но не ограничивающийся перечисленным" и т.п., термин "содержащий" в настоящем документе синонимичен терминам "включающий", "содержащий" или "характеризующийся чем-либо", и является инклюзивным или открытым и не исключает дополнительных, не указанных элементов или этапов способа; термин "имеющий" (содержащий) следует интерпретировать как "имеющий по меньшей мере"; термин "включает" следует интерпретировать как "включает, но не ограничивается"; термин "пример" используется, чтобы привести примеры вариантов обсуждаемого объекта, а не их исчерпывающего или ограничивающего списка; такие прилагательные, как "известный", "обычный", "стандартный" и термины, имеющие аналогичное значение, не следует воспринимать как ограничивающие описываемый объект определенным периодом времени или сводящие его к объекту, доступному в определенный момент времени; их следует понимать как включающие известные, обычные или стандартные технологии, которые могут быть доступны или известны в настоящее время или в любой момент в будущем; а применение таких терминов, как "предпочтительно", "предпочтительный", "желательный" или "желаемый", а также слов, имеющих близкое значение, не следует понимать в том смысле, что они подразумевают, что некоторые признаки являются необходимыми, существенными или хотя бы важными для структуры или функции настоящего изобретения, они предназначены просто для того, чтобы обозначить альтернативные или дополнительные признаки, которые могут применяться или не применяться в конкретном варианте реализации настоящего изобретения. Аналогично, группу объектов, связанных союзом "и", не следует понимать в том смысле, что в этой группе обязательно должны присутствовать все и каждый из этих объектов, а, напротив, следует читать как "и/или", если прямо не указано обратное. Аналогично, группу объектов, связанных союзом "или", не следует понимать как предполагающую обязательное взаимоисключение в пределах группы, а, напротив, следует читать как "и/или", если прямо не указано обратное.
Что касается применения в настоящем документе, по существу, любых терминов во множественном и/или единственном числе, специалисты в данной области смогут преобразовать множественное число в единственное и/или единственное в множественное в соответствии с контекстом и/или применением. В настоящем документе для обеспечения ясности могут быть в явном виде приведены различные комбинации единственного и множественного чисел. Употребление термина в единственном числе без уточняющих модификаторов не исключает множественное число. Сам по себе тот факт, что различные количественные значения приведены в разных зависимых пунктах, не означает, что нельзя применить комбинацию этих численных значений для достижения некоторого преимущества. Никакую ссылку в формуле изобретения не следует рассматривать как ограничивающую объем.
Специалисты в данной области поймут, что, если предполагается какое-либо конкретное число указываемых в формуле объектов (т.е. их описаний), это будет в явном виде указано в формуле изобретения, а отсутствие такого указания означает отсутствие намерения ограничения конкретным числом. Например, для облегчения понимания в следующей ниже формуле изобретения могут применяться вводные выражения "по меньшей мере один" и "один или больше", предшествующие описанию какого-либо объекта в формуле. Однако применение таких выражений не следует понимать в том смысле, что, если объект указан/описан в формуле в единственном числе (что соответствует использованию неопределенного артикля "а" или "an" в исходном тексте на английском языке), это ограничивает конкретный пункт формулы, в который объект введен таким образом, вариантами реализации, содержащими только один такой
объект, даже в тех случаях, когда один и тот же пункт содержит вводные выражения "один или больше" или "по меньшей мере один", и термины в единственном числе без уточняющих модификаторов (что соответствует использованию неопределенного артикля "а" или "an" в исходном тексте на английском языке) (например, термин в единственном числе ("а" и/или "an") обычно следует понимать в смысле "по меньшей мере один" или "один или больше"); то же самое справедливо для случая, когда объекты вводятся с уточняющими модификаторами (например, "этот", что соответствует использованию определенного артикля в исходном тексте). Дополнительно, даже в тех случаях, когда действительно в явном виде указано конкретное число каких-либо объектов, упоминающихся в формуле, специалисты в данной области поймут, что такое описание обычно следует понимать в смысле "по меньшей мере указанное число" (например, указание просто на "два объекта" без каких-либо других модификаторов обычно означает по меньшей мере два объекта или два или больше объектов). Кроме того, в тех случаях, когда применяется формулировка, аналогичная формулировке "по меньшей мере один из А, В и С и т.д.", в целом такая конструкция имеет значение, которое этой формулировке придал бы специалист в данной области (например, "система, содержащая по меньшей мере один из А, В и С" включает, но не ограничивается системами, которые содержат только А, только В, только С, А и В совместно, А и С совместно, В и С совместно, и/или А, В и С совместно, и т.д). В тех случаях, когда применяется формулировка, аналогичная формулировке "по меньшей мере один из А, В или С и т.д.", в целом такая конструкция имеет значение, которое этой формулировке придал бы специалист в данной области (например, "система, содержащая по меньшей мере один из А, В или С" включает, но не ограничивается системами, которые содержат только А, только В, только С, А и В совместно, А и С совместно, В и С совместно и/или А, В и С совместно и т.д.). Также специалисты в данной области поймут, что практически любое дизъюнктивное слово и/или фразу, относящуюся к двум или большему числу альтернативных признаков, будь то в описании, формуле изобретения или на чертежах, следует понимать как охватывающие возможность включения одного из терминов, любого из терминов или обоих терминов. Например, фразу "А или В" следует понимать как включающую возможности "А", или "В", или "А и В".
Все числа, выражающие количества ингредиентов, условия реакций и т.д., использующиеся в описании, следует во всех случаях понимать как включающие модификатор "примерно". Соответственно, если не указано иное, числовые параметры, приведенные в настоящем документе, представляют собой приблизительные значения, которые могут варьировать в зависимости от свойств, которые желательно получить. По меньшей мере, но не в качестве попытки применения доктрины эквивалентов к объему любого пункта формулы в любой заявке с приоритетом, заявленным по заявке на данное изобретение, каждый числовой параметр следует рассматривать с учетом количества значащих разрядов и обычных подходов к округлению.
Кроме того, несмотря на то, что в описании выше приведены некоторые подробности в качестве иллюстраций и примеров, которые имеют целью обеспечение ясности и понимания, специалистам в данной области понятно, что можно осуществить некоторые изменения и модификации. Соответственно, описание и примеры не следует воспринимать в том смысле, что объем настоящего изобретения ограничивается конкретными вариантами реализации и примерами, описанными в настоящем документе, но нужно понимать, что они охватывают все модификации и альтернативы, соответствующие истинному объему и сущности изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, имеющее структуру формулы (I)
где R1 и R4 представляют собой Cl;
R2 и R3 представляют собой Н;
А выбран из группы, состоящей из Н и С1-6алкила;
D выбран из группы, состоящей из -OH и ^(С^алкила);
R5 и R6 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, F и С1-6алкила; или
R5 и R6, взятые вместе, образуют Cз-8циклоалкильное кольцо;
R12 независимо выбран из группы, состоящей из Cз-8циклоалкила и
где R7, R8, R10 и R11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, гидрокси, галогена, CN, С1-6алкила, -OC^^^um, 5-6-членного гетероарила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO2H, -т2(С1-6алкила), -CONH2, -SO2(Сl-6алкила), -SO2NH2, -SO2NH(Сl-6алкила), -SO2N(С1-6алкила)2, Cз-8моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -^С1-6алкила)2 или ^(С^алкила), и Cз-8гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О; и
R9 выбран из группы, состоящей из CN, 5-6 членного гетероарила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О, -CO2H, -CO^^^M^m), -SO^b^^um), -SO2NH2, -SO2NH(С1-6алкила), -SO^N^b^^um)^ Cз-8моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -^С1-6алкила)2 или -O(С1-6алкила) и C3-8гетероциклоалкила, имеющего один или два гетероатома, независимо выбранных из N и О.
2. Соединение по п.1, в котором R9 выбран из группы, состоящей из азиридинила, азетидинила, пирролидинила и морфолинолила.
3. Соединение по п.1, в котором R9 представляет собой циклопропил.
4. Соединение по п.1, имеющее структуру формулы (1а)
*1 (1а)
или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, где R1 и R4 представляют собой Cl; R2 и R3 представляют собой Н;
R7, R8, R10 и R11 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и галогена;
R9 независимо выбран из группы, состоящей из ^^моно- или бициклоалкила, незамещенного или замещенного -^С1-6алкила)2 или -O(С1-6алкила), и C3-8гетероциклоалкила, имеющего 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из N и О.
5. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из:
или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль. 6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из:
9. Применение соединения по любому из пп.1-8 для ингибирования пролиферации клетки, где клет-
ка характеризуется гиперэкспрессией гена ETS или содержит слитый ген ETS.
10. Применение п.9, где ген ETS или слитый ген ETS выбран из группы, состоящей из FLI1, ERG, ETV1 и ETV4.
11. Применение соединения по любому из пп.1-8 для уничтожения или ингибирования роста неопластической клетки.
12. Применение по пп.9-11, в котором клетка представляет собой раковую клетку, причем рак выбран из группы, состоящей из саркомы Юинга, рака предстательной железы, глиобластомы, острого миелоидного лейкоза, рака молочной железы, рака головы, рака шеи, меланомы, немелкоклеточного рака легких, рака яичников и рака матки.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
(19)
(19)
(19)
032644
032644
- 4 -
- 1 -
032644
032644
- 2 -
- 5 -
032644
032644
- 8 -
- 9 -
032644
032644
- 8 -
032644
032644
- 8 -
032644
032644
- 10 -
032644
032644
- 11 -
- 11 -
032644
032644
Таблица 2
- 24 -
- 25 -
032644
032644
Таблица 2
- 24 -
- 25 -
032644
032644
- 27 -
- 27 -
032644
Таблица 3
032644
- 34 -
- 33 -
032644
Таблица 3
032644
- 34 -
- 33 -
032644
032644
Таблица 5
- 36 -
- 37 -
032644
032644
Таблица 5
- 36 -
- 37 -
032644
Таблица 8
032644
Таблица 8
- 39 -
- 39 -
032644
Таблица 10
032644
Таблица 10
- 40 -
- 40 -
032644
Таблица 12
032644
Таблица 12
- 41 -
- 41 -
032644
Таблица 13
032644
Таблица 13
- 42 -
- 42 -
032644
Таблица 14
032644
Таблица 14
- 43 -
- 43 -
032644
Таблица 15
032644
Таблица 15
- 44 -
- 44 -
032644
032644
- 45 -
- 45 -
032644
032644
- 49 -
- 49 -
032644
032644
- 50 -
- 50 -