EA 32582B1 20190628

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000032582b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящая из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы I, на носителе где R ₁ представляет собой -(C ₁ -C ₆ )SCH ₃ ; R ₂ выбран из Н; R ₃ -R ₆ независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С ₁ -С ₆ алкил, -С ₁ -С ₆ алкил-SCH ₃ , -С ₀ -С ₆ алкил-С ₂ -С ₆ алкенил, -С ₀ -С ₆ алкил-С ₂ -С ₆ алкинил, -C ₁ -C ₆ СООН, -С ₁ -С ₆ алкил-OH, -С ₁ -С ₆ алкил-NH ₂ , -С ₃ -С ₈ циклоалкил, -С ₁ -С ₆ алкиларил, -С ₁ -С ₆ алкилгетероарил, -C ₁ -С ₆ алкил-NC(О)С ₁ -С ₆ алкил, -С ₁ -С ₆ алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH ₃ , -SO ₂ NH ₂ или -О-СН ₂ -О; n составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.

2. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости по п.1, состоящая из множества соединений, по меньшей мере одно из соединений имеет структуру формулы I, на носителе отличающаяся тем, что соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего: (A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; N-(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или (B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобутиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (D) фурфуриламин; N-(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (E) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; N-(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и при этом R ₁ выбран из группы, состоящей из -(C ₁ -C ₆ )SCH ₃ ; R ₂ выбран из Н; R ₃ и R ₅ независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С ₁ -С ₆ алкил, -С ₁ -С ₆ алкил-SCH ₃ , -C ₀ -С ₆ алкил-С ₂ -С ₆ алкенил, -С ₀ -С ₆ алкил-С ₂ -С ₆ алкинил, -C ₁ -C ₆ СООН, -С ₁ -С ₆ алкил-OH, -С ₁ -С ₆ алкил-NH ₂ , -С ₃ -С ₈ циклоалкил, -С ₁ -С ₆ алкиларил, -С ₁ -С ₆ алкилгетероарил, -C ₁ -С ₆ алкил-NC(О)С ₁ -С ₆ алкил, -С ₁ -С ₆ алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH ₃ , -SO ₂ NH ₂ или -О-СН ₂ -О-; R ₄ выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(C ₁ -С ₆ алкил)NR ₇ R ₈ ; R ₆ выбран из группы, состоящей из следующего: Н, 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-ил-n-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2-(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил; n составляет от 3 до 11.

3. Библиотека лигандов по п.2, отличающаяся тем, что носитель выбран из бусины или смолы.

4. Библиотека лигандов по п.3, отличающаяся тем, что указанная бусина или смола содержит полиэтиленгликолевый линкер, содержащий менее 10 мономерных звеньев.

5. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящая из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы X где R ₁ представляет собой -(C ₁ -C ₆ )SCH ₃ ; R ₂ выбран из Н; R ₃ -R ₆ независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: Н, -С ₁ -С ₆ алкил, -С ₁ -С ₆ алкил-SCH ₃ , -С ₀ -С ₆ алкил-С ₂ -С ₆ алкенил, -С ₀ -С ₆ алкил-С ₂ -С ₆ алкинил, -C ₁ -C ₆ СООН, -С ₁ -С ₆ алкил-ОН, -С ₁ -С ₆ алкил-NH ₂ , -С ₃ -С ₈ циклоалкил, -С ₁ -С ₆ алкиларил, -C ₁ -С ₆ алкилгетероарил, -С ₁ -С ₆ алкил-NC(О)С ₁ -С ₆ алкил, -С ₁ -С ₆ алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -ОСН ₃ , -SO ₂ NH ₂ или -О-СН ₂ -О-; n составляет от 3 до 10 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.

6. Библиотека лигандов по п.5, где R ₄ выбран из -n-бутиламина.

7. Библиотека лигандов по п.6, где R ₁ выбран из -CH ₂ CH ₂ SCH ₃ или -CH ₂ SH.

8. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу Ia причем указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы Ia, где: (a) R ₉ представляет собой n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (b) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2,2-диметилэтил(изобутил), R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (c) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (d) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (e) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (f) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изопропил, R ₁₂ представляет собой изопропил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (g) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (h) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (i) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (j) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (k) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (l) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (m) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой фурфурил и R ₁₆ представляет собой фурфурил; (n) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой фурфурил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой фурфурил; (о) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (р) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₃ представляет собой изобутил; (q) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (r) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (s) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (t) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (u) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой изобутил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (v) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (w) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (х) R ₉ представляет собой фурфурил, R ₁₀ представляет собой фурфурил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (у) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (z) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (аа) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (bb) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой изобутил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (cc) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (dd) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (ее) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (ff) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (gg) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (hh) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (ii) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой фурфурил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой фурфурил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (jj) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой изобутил; (kk) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (ll) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (mm) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (nn) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (oo) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой пиперонил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (рр) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (qq) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой фурфурил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (rr) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой изобутил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (ss) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой пиперонил.

9. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где: (a) R ₉ представляет собой n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (b) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2,2-диметилэтил(изобутил), R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (c) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (d) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (e) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (f) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изопропил, R ₁₂ представляет собой изопропил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (g) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (h) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (i) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (j) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (k) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (l) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (m) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой фурфурил и R ₁₆ представляет собой фурфурил; (n) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой фурфурил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой фурфурил; (о) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (р) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой изобутил; (q) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (r) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (s) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (t) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (u) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой изобутил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (v) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (w) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (х) R ₉ представляет собой фурфурил, R ₁₀ представляет собой фурфурил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (y) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (z) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (аа) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (bb) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой изобутил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (cc) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (dd) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (ее) R ₉ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (ff) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (gg) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (hh) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (ii) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой фурфурил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой фурфурил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (jj) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R ₁₆ представляет собой изобутил; (kk) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (ll) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (mm) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (nn) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (оо) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой пиперонил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (рр) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (qq) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой фурфурил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (rr) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой изобутил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (ss) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой пиперонил.

10. Библиотека лигандов по п.8, где указанное по меньшей мере одно соединение формулы II выбрано из групп, содержащих следующие R ₉ -R ₁₆ : (a) R ₉ представляет собой n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (b) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2,2-диметилэтил(изобутил), R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (c) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (d) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (e) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (f) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой изопропил, R ₁₂ представляет собой изопропил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил.

11. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы IIa, где: (a) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (b) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (c) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (d) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой изобутил; (e) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (f) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (j) R ₉ представляет собой фурфурил, R ₁₀ представляет собой фурфурил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (h) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (i) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (j) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (k) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой изобутил; (l) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил.

12. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанное одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где: (m) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой циклогексил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (n) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (о) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой изобутил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил; (р) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой изобутил; (q) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (r) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (s) R ₉ представляет собой фурфурил, R ₁₀ представляет собой фурфурил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (t) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (u) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (v) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой циклогексил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (w) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой изобутил; (х) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил.

13. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R ₉ -R ₁₆ : (a) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (b) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (c) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (d) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-аллил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (e) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (f) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил; (j) R ₉ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (h) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (i) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (j) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (k) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой изобутил; (l) R ₉ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (m) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (n) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.

14. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R ₉ -R ₁₆ : (a) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (b) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₄ представляет собой изобутил, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (c) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (d) R ₉ представляет собой изобутил, R ₁₀ представляет собой циклогексил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-аллил и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (e) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (f) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил; (g) R ₉ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой циклогексил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (h) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (i) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой пиперонил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (j) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (k) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой метилбензил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой изобутил; (l) R ₉ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой пиперонил; (m) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₁ представляет собой изобутил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой циклогексил; (n) R ₉ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.

15. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу где по меньшей мере в одном соединении формулы IIIa R ₉ -R ₁₆ выбраны из: (a) R ₉ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-3N-(2-пирролидинон)пропил, R ₁₁ представляет собой уксусную кислоту, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой бензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-аллил; (b) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₃ представляет собой бензил, R ₁₄ представляет собой пиперонил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (c) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой бензил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (d) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой бензил; (e) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой бензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (f) R ₉ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (g) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (h) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (i) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой бензил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой бензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин.

16. Библиотека лигандов по п.5, где библиотека содержит соединение формулы где в соединении формулы II R ₉ -R ₁₆ выбраны из: (a) R ₉ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-3N-(2-пирролидинон)пропил, R ₁₁ представляет собой уксусную кислоту, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой бензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₅ представляет собой изобутил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-аллил; (b) R ₉ представляет собой циклогексил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₃ представляет собой бензил, R ₁₄ представляет собой пиперонил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил; (c) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой бензил, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (d) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой метилбензил и R ₁₆ представляет собой бензил; (e) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой пиперонил, R ₁₁ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₂ представляет собой циклогексил, R ₁₃ представляет собой бензил, R ₁₄ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (f) R ₉ представляет собой 1-ил-аллил, R ₁₀ представляет собой метилбензил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой пиперонил, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (g) R ₉ представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R ₁₀ представляет собой изобутил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой пиперонил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин; (h) R ₉ представляет собой метилбензил, R ₁₀ представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R ₁₁ представляет собой метилбензил, R ₁₂ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₃ представляет собой метилбензил, R ₁₄ представляет собой метилбензил, R ₁₅ представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R ₁₆ представляет собой метилбензил; (i) R ₉ представляет собой пиперонил, R ₁₀ представляет собой бензил, R ₁₁ представляет собой пиперонил, R ₁₂ представляет собой бензил, R ₁₃ представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R ₁₄ представляет собой бензил, R ₁₅ представляет собой циклогексил и R ₁₆ представляет собой 1-ил-n-бутиламин.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

3. Библиотека лигандов по п.2, отличающаяся тем, что носитель выбран из бусины или смолы.

6. Библиотека лигандов по п.5, где R ₄ выбран из -n-бутиламина.

7. Библиотека лигандов по п.6, где R ₁ выбран из -CH ₂ CH ₂ SCH ₃ или -CH ₂ SH.

Евразийское 032582 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.06.28
(21) Номер заявки 201391378
(22) Дата подачи заявки
2012.03.22 (51) Int. Cl. C07K17/14 (2006.01)
(54) БИБЛИОТЕКА СЛУЧАЙНЫХ ПЕПТОИДНЫХ ЛИГАНДОВ ДЛЯ СКРИНИНГА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ
(31) 61/467,256; 61/491,717; 61/583,881
(32) 2011.03.24; 2011.05.31; 2012.01.06
(33) US
(43) 2014.09.30
(86) PCT/US2012/030161
(87) WO 2012/129423 2012.09.27
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ОПКО ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи (US)
(72) Изобретатель:
Моола Муралидхар Редди, Шилке Джессика (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-A1-20100303805 US-A1-20090246124 US-A1-20110092384 US-A1-20090246124 US-A1-20070111322
LIU et al. "A Potent Transactivation Domain Mimic with Activity in Living Cells", Journal of the American Chemical Society, 18 May 2005 (18.05.2005), Vol. 127, p. 8254-8255, entire document
US-A1-20070054847
US-A1-20060121489
US-B2-7354584
(57) Изобретение относится к библиотеке случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящей из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы I, на носителе, где R1 представляет собой -(C1-C6)SCH3; R2 выбран из Н и R3-R6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -СгС^лкил-ЖЬ, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -ОСН3, -SO2NH2 или -О-СН2-О; где n составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов. Библиотеку случайных пептоидных лигандов можно применять для скрининга сложных биологических образцов с целью обнаружения связанных с болезнями биомаркеров.
Перекрестные ссылки на родственные заявки
Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительных заявок на патент США 61/467256, 61/491717 и 61/583881, поданных 24 марта 2011 г., 31 мая 2011 г. и 6 января 2012 г. соответственно, каждая из которых полностью включена в настоящую заявку путем ссылки.
Область техники
Настоящее изобретение относится к новой методики скрининга, а также к новым диагностическим и терапевтическим продуктам, получаемым на ее основе. В частности, новые большие библиотеки на основе бусин, содержащие широкий ассортимент небольших молекул, пептидов, пептоидов и/или других олигомеров, применяют для скрининга биологических образцов на ассоциированные с заболеванием биомаркеры. Настоящее изобретение обеспечивает возможность одновременно быстрого и прямого скрининга плазмы, сыворотки или другой биологической жидкости с целью обнаружения ассоциированных с болезнью антител в организме носителя болезни и дополнительно позволяет обнаружить специфичные к антителам молекулы, которые могут служить диагностическими средствами или лекарственными средствами для таких заболеваний. Диагностические наборы, содержащие такие специфичные к антителам молекулы, могут быть изготовлены фактически для любого болезненного состояния, которое включает участие антител или иммуногенного компонента, такого как аутоиммунные заболевания, заболевания центральной нервной системы и рак. Такие наборы могут быть изготовлены фактически из любого носителя при условии, что такой носитель может поддерживать или нести на себе специфичную к антителу молекулу, такую как пептоид или другое связывающее соединение. Аналогичным образом, любой известный метод детекции, включая твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) или другие известные средства детекции, могут быть использованы для детектирования антитела после скрининга, выявляющего потенциальные активные соединения, и/или после диагностического скрининга с использованием таких потенциальных активных соединений в диагностическом анализе. Такие способы также можно использовать для скрининга на другие биомаркеры, включая белки и/или другие биомолекулы на поверхности клеток, с целью отличить клетки, экспрессирующие ассоциированные с заболеванием маркеры от здоровых клеток.
Уровень техники
В заявке на патент США 2007/0003954 раскрыт способ получения профиля белков и антител с использованием микроматриц с низкомолекулярными соединениями. В этой заявке раскрыты лиганды, связывающиеся с лиганд-связывающими молекулами, причем лиганды организованы в виде матриц синтетических молекул, используемых для скрининга на биомаркеры молекулярных отпечатков пальцев. Конкретные матрицы, описанные в этой заявке, включают, например, маикроматрицу пептоидов, содержащую 7680 различных соединений, связанных с матрицей. В этом описании библиотеки на основе бусин используются в качестве исходного средства получения пептоидов, которые затем переносят в микроматрицы, содержащие адресуемые положения, для скрининга биологических жидкостей. Результатом скрининга является уникальный паттерн или "молекулярный отпечаток пальца" для любого конкретного белка в сложной биологической смеси. В заявке на патент США № 2010/0303805, которая полностью включена в настоящее описание путем ссылки, раскрыто несколько пептоидов и диагностические наборы, которые можно применять для скрининга биологических жидкостей на биомаркеры, связанные с заболеваниями центральной нервной системы. Конкретные мономеры, которые согласно этой заявке применяются для формирования матриц, также могут быть использованы в новом способе скрининга согласно настоящему изобретению, при условии увеличения библиотеки до значительно большего количества бусин/пептоидов или бусин/лигандов, например от более чем 100 тысяч до 150 млн.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что значительно более крупные библиотеки на основе бусин (по сравнению со скрининговыми микроматричными системами скрининга на биомаркеры-антитела или системами скрининга на клетки на основе бусин) в соответствующих условиях могут быть непосредственно использованы для скрининга сложных биологических образцов с целью обнаружения связанных с болезнями биомаркеров, а также в качестве значительно более обширного пула лигандов, которые связываются с такими лиганд-связывающими молекулами. Такой значительно более обширный пул включает существенно повышенное число высокоаффинных лигандов, которые служат диагностическими средствами, а также потенциальными терапевтическими средствами. Этот подход также обеспечивает значительно более высокую скорость скрининга для любой данной биологической жидкости, поскольку не исключена необходимость создания микроматриц или аналогичных адресуемых систем на первом этапе. В процессе проведения скрининга могут быть изготовлены микроматрицы или другие носители, включая диагностические матрицы, содержащие активные соединения, обнаруженные при скрининге, которые включены в объем настоящего изобретения.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к композиции или множеству "композиций", содержащим обширную случайную библиотеку лигандов на основе бусин. Библиотека или множество библиотек, которые образуют "композицию", выбраны для скрининга целевых болезни или состояния, и каждая библиотека может применяться для скрининга отдельной болезни или состояния (т.е. болезни или состояния, отличных от тех, для скрининга которых используются другие библиотеки), или одни и те же библиотеки
могут применяться для скрининга нескольких болезней или состояний. Термин "случайная" охватывает библиотеки, которые содержат обширный ассортимент боковых цепей на монозамещенных аминах, которые образуют любой конкретный мономер в олигомерной цепи. Этот ассортимент групп R в исходных материалах - аминах является "случайным", даже если некоторые химические и/или физические свойства какого-либо конкретного мономера, такие как функциональная активность/растворимость, составляют часть желаемого свойства или характеристики целевых олигомеров. Для скрининговых тестов на основе плазмы или скриннинговых тестов на основе сыворотки желательно, чтобы каждый конкретный лиганд, связанный с бусиной, имел характеристики растворимости, облегчающие взаимодействие в растворе с молекулой, связывающей лиганд, такой как антитело. Кроме того, размер олигомера также является свойством, принимаемым во внимание при формировании библиотеки лигандов, способных связываться со связывающим лиганд соединением, если таким соединением-мишенью является, например, антитело или белок. Библиотека лигандов на основе бусин содержит бусины или аналогичные структуры-носители (т.е. полимерные смолы), с которыми (или с линкером такой смолы) связан лиганд, выбранный из группы, состоящей из небольших молекул, пептидов, пептоидов, полисахаридов или любого олиго-мерного соединения, включая нуклеиновые кислоты или модифицированные молекулы нуклеиновых кислот. В предпочтительном варианте реализации библиотека на основе бусин содержит пептоиды. Пеп-тоиды представляют собой олигомеры, содержащие мономерные звенья, в которых от 5 до 15 мономеров связаны с образованием олигомера. Олигомер может содержать дополнительные молекулы, связанные с концом олигомера, для связывания с носителем или с линкером, соединяющего олигомер с носителем. Олигомерные пептоиды получают с использованием, например, гибридной комбинации обычного твердофазного синтеза пептидов с суб-мономерным подходом синтеза и содержат глицин или углерод-замещенные глицин-подобные фрагменты, содержащие монозамещенный амид, причем заместитель на атоме азота в амиде или а-углероде глицина выбран из широкого диапазона молекул в зависимости от монозамещенного амина или а-углерода глицина, применяемого в синтезе. В целом, библиотеки пептоидов могут быть приготовлены, как описано, например, в Kodadek and Reddy, Proceedings of the National Academy of Sciences, Sep. 6, 2005, v. 102, № 36 или как описано в настоящей заявке. Как было указано выше, пул монозамещенных аминов обычно выбирают из разнообразных мономеров. Размер библиотеки может варьировать от приблизительно 200000 до 150 млн бусин, содержащих указанное число различных лигандов на бусину. В альтернативном варианте и в зависимости от размера бусины или носителя каждый носитель или бусина может содержать больше одного лиганда на бусину/носитель, причем ли-ганд(ы) может быть одинаковым или различным лигандом.
Далее бусины/носители, содержащие лиганд(ы), который составляет библиотеку, применяют в способе согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение включает способ скрининга биологической жидкости на ассоциированные с болезнью биомаркеры, включающий этапы скрининга контрольного биологического образца и биологического образца субъекта с заболеванием с использованием по меньшей мере одной библиотеки лигандов на основе бусин и обнаружение ассоциированных с болезнью биомаркеров с использованием такого скрининга. Настоящее изобретение включает способ скрининга сложной биологической жидкости на присутствие ассоциированного с болезнью биомаркера, который включает осуществление контакта указанного образца с множеством содержащих лиганд носителей, причем по меньшей мере один лиганд детектируемо связывается с ассоциированным с болезнью биомаркером. Настоящее изобретение также включает способ скрининга сложного биологического образца на ассоциированные с заболеванием биомаркеры, включающий этапы (1) осуществления контакта библиотеки случайных лигандов с контрольным образцом с идентификацией и удалением неспецифичных "активных соединений" лигандов и (2) осуществления контакта оставшейся библиотеки лигандов с образцом, взятым у больного субъекта, с идентификацией любых лигандов, которые связываются с ассоциированным с болезнью биомаркером в образце, взятом у больного субъекта. В частности, настоящее изобретение включает способ скрининга биологического образца на ассоциированный с болезнью биомаркер, включающий (1) предварительную обработку несущих лиганд бусин (НЛБ, LBB) пригодным растворителем с получением обработанных НЛБ; (2) осуществление контакта обработанных НЛБ с биологическим образцом здорового контроля (ЗК), содержащим связывающие лиганд соединения контрольного образца; (3) осуществление контакта обработанных НЛБ из контрольного образца с панелью Dyna-bead (меченное железом анти-IgG антитело) и удаление активных соединений; (4) промывку оставшейся библиотеки НЛБ и осуществление контакта указанной библиотеки с биологическим образцом ЗК, содержащим какие-либо остатки связывающих соединений контрольного образца, с использованием мечеными квантовыми точками вторичными анти-IgG антителами и удаление активных соединений; (5) промывку оставшейся библиотека НЛБ и осуществление контакта указанной библиотеки с биологическим образцом, взятым у больного пациента; (6) осуществление контакта обработанных НЛБ из образца, взятого у больного пациента, с панелью Dynabead и удаление активных соединений; (7) промывку оставшихся НЛБ и осуществление контакта указанной библиотеки с биологическим образцом, взятым у больного пациента; (8) добавление меченых квантовыми точками анти-IgG антител с промытыми НЛБ и идентификацию соединений, связывающих ассоциированные с болезнью лиганды, связавшихся с лиган
дом на НЛБ и, необязательно, после промывки бусин Dynabead из этапа (6), повторение этапа (8) с использованием активных соединений Dynabead из этапа (6) и идентификацию активных соединений Dy-nabead Qdot. В предпочтительном варианте реализации в приготовлении НЛБ применяют бусины Tentagel (содержащие в своей структуре полиэтиленгликолевые линкеры). Также можно применять альтернативные бусины и/или частицы, содержащие другие и/или необязательные линкеры, а также альтернативные средства детектирования. Бусины могут быть выбраны, например, из бусин Luminex beads. В предпочтительном способе этапы Dynabead не используют, за исключением начальных этапов валидации для подтверждения активных соединений Qdot.
Каждый из или все отдельные активные соединения, полученные на описанном выше этапе или этапах, могут быть далее исследованы, химически идентифицированы и синтезированы в виде идентичного соединения или его модифицированного варианта. В частности, предпочтительное исследование заключается в том, что берут лиганды на НЛБ из этапа (8) и секвенируют конкретный олигомер или ли-ганд, связанный с биомаркером или соединением, связывающим ассоциированный с болезнью лиганд. В предпочтительном варианте реализации лиганд представляет собой пептоид, и этот пептоид секвенируют для идентификации и/или подтверждения и повторной проверки идентичности предполагаемого диагностического зонда, который далее может быть использован в диагностическом наборе или в качестве основы для терапевтического лекарственного средства или кадидатной вакцины в зависимости от конкретной болезни или состояния. В предпочтительном варианте реализации выявленный лиганд секвенируют, идентифицируют и затем повторно синтезируют или синтезируют в более крупном масштабе с использованием метода синтеза на основе бусин или носителей для получения идентифицированно-го/секвенированного лиганда. В этом случае предпочтительный синтетический лиганд включает, например, аминокислоту цистеин в качестве функционального лиганда, который связан со смолой/бусиной или носителем (или с линкером на указанном носителе), и эту аминокислоту можно далее обработать, например, субмономерами, содержащими бромуксусную кислоту и замещенными аминами, содержащими выбранные группы R для лиганда с конкретной последовательностью (пептоид или а-замещенный пеп-тоид). Остаток цистеина или другой аналогичный остаток аминокислоты обеспечивают сульфгидриль-ную группу, которая способна к реакции с электрофильными группами на предметных стеклах или носителях. В другом случае, при формировании исходной библиотеки и на бусинах Tentagel или бусинах или смолах без линкеров в качестве первого мономера используют метионин, что обеспечивает возможность отщепления от бусины или смолы после синтеза пептоидного олигомера. При отщеплении от смолы или бусины метионин образует часть олигомера. Смолы Ринка, с другой стороны, содержат расщепляемые линкеры или линкеры, которые в соответствующих условиях облегчают отщепление молекулы от линкера и смолы без расщепления других амидных связей в олигомере.
Настоящее изобретение также включает диагностический набор, содержащий лиганды (или их модифицированные варианты), идентифицированные с использованием способа скрининга биологических образцов. Эффективность конкретного средства скрининга обеспечивает быструю идентификацию значительного числа фактических активных соединений, которые затем используются в диагностических наборах. Термин "быстрая" в данном случае означает, что предложенный процесс позволяет избежать сложного и ненужного этапа конструирования микрочипа перед необходимым анализом сложной биологической жидкости, что соответственно приводит к значительной экономии времени. Кроме того, предложенный способ позволяет осуществлять скрининг значительного большего числа молекул против сложной биологической жидкости в любое время, не ограничиваясь небольшим числом молекул на микроматрице. В дополнение к выявлению значительного числа активных соединений, обнаруженные ли-ганды включают значительно большее число высокоафинных связывающих соединений, по сравнению с обнаруженными с использованием известной методики скрининга, в которой не осуществляется прямой скрининг или анализ биологической жидкости (жидкостей) с использованием такой технологии на основе бусин или частиц. Такие лиганды могут применяться в мультиплексных платформах скрининга заболеваний, содержащих первый пептоид для скрининга на болезнь или состояние А и по меньшей мере один дополнительный пептоид для скрининга на болезнь или состояние В.
Спектр болезней, которые можно определять в скрининге по присутствию ассоциированных с болезнью антител или биомаркеров в представляющем интерес организме с использованием способа согласно настоящему изобретению, включает практически все болезни на любой стадии развития. Настоящее изобретение можно применять для диагностики и прогрессирования болезни животного и человека. Диагностические наборы, включающие лиганды, обнаруженные и идентифицированные в ходе скрининга, могут включать диагностические наборы на основе бусин для скрининга по месту нахождения больного и/или могут включать более сложные диагностические системы, основанные на более сложных и/или мультиплексных системах носителей, таких как микроматрицы. Кроме того, диагностические тесты с использованием пептоидов, а-замещенных пептоидов или лигандов, выявленных в первоначальном скрининге, могут быть использованы в клинических испытаниях для идентификации или облегчения идентификации групп пациентов и/или прогрессирования заболевания в любой данной популяции или субпопуляции пациентов. Предполагается, что такие данные, полученные в первичном и/или вторичном
или третичном скрининге, описанном здесь, могут ускорять разработку лекарственных средств и адаптированного для подгруппы или конкретного пациента лечения с использованием фармацевтических средств, которые специально предназначены для определенной стадии или нескольких стадий заболевания, включая ранние стадии заболевания. Аналогично, диагностические наборы, полученные из раскрытых здесь лигандов, могут быть использованы для определения прогрессирования ранней стадии заболевания и/или любой стадии прогрессирования заболевания на основании профиля биомаркеров. Такая информация может быть использована для помощи врачу в назначении наиболее подходящего лечения для отдельного пациента или группы пациентов.
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из приведенных ниже подробного описания, примеров и чертежей. Однако следует понимать, что подробное описание и примеры, хотя и указывают предпочтительные варианты реализации изобретения, приведены исключительно для иллюстрации, поскольку для специалиста на основании описания будут очевидны различные изменения и модификации в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
Краткое описание чертежей
Настоящая заявка включает следующие чертежи.
На фиг. 1 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Tentagel) (KN1B), использованной для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэти-ленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений.
На фиг. 2 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Tentagel) (JC3B), которую также использовали для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгейме-ра. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на фиг. В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и га-лоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений. JC3B также использовали для скрининга сыворотки больных раком поджелудочной железы (данные не показаны).
На фиг. 3 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Tentagel) (JC4B), использованной для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэти-ленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на фиг. В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений.
На фиг. 4 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Tentagel) (JC5B), использованной для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэти-ленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений. Мономеры JC5B включали изобу-тиламин, 2-метоксиэтиламин, диаминобутан, фуриламин, циклогексиламин, R-метилбензиламино, пипе-рониламин и 4-(аминоэтил)бензолсульфонамид.
На фиг. 5 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Tentagel) (JC7B), использованной для скрининга образцов сыворотки. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине ме-тионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений.
На фиг. 6 показана схема предложенного согласно настоящему изобретению способа скрининга сложного биологического образца с использованием библиотек пептоидных лигандов на основе бусин.
На фиг. 7 показаны нормальные контроли - активные соединения, полученные с использованием бусин Dynabead (ЗК, NC) после добавления QDot в библиотеку пептоидов (JC3B), приготовленную для
скрининга против образцов сыворотки не больных болезнью Альцгеймера субъектов (нормальные кон-троли) и образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера субъектов. Активные соединения были извлечены, а оставшиеся бусины, связанные с лигандами, использовали для скрининга по заболеванию.
На фиг. 8 показан скрининг на бусинах Tentagel образцов сыворотки крови пациентов с болезнью Альцгеймера после удаления после удаления ЗК. Активные соединения показаны красным, что соответствует вторичному антителу Qdot, связанному с биомаркером (антителом), ассоциированным с болезнью, в сыворотке, которое связано с пептоидом, соединенным полиэтиленгликолевым линкером с бусиной.
На фиг. 9 показан тест на воспроизводимость с применением нормального контрольного образца (NC 030093) после промывки ДСН и добавления Qdot. Стрелка показывает пептоиды, связывавшиеся с NC и выбранные для секвенирования.
На фиг. 10 показан тест на воспроизводимость с применением нормального контрольного образца (NC 050047) после промывки ДСН и добавления Qdot.
На фиг. 11 показан тест на воспроизводимость с применением образца пациента после промывки ДСН и добавления Qdot.
На фиг. 12 показаны пептоидные последовательности предполагаемых выявленных соединений ("активных соединений"), выбранных при скрининге на болезнь Альцгеймера из библиотеки JC3B. С-конец находится на правой стороне листа, а N-конец находится на левой стороне.
На фиг. 13 показаны химические структуры предпочтительных высокоаффинных "активных соединений" (hit), полученных при скрининге болезни Альцгеймера с использованием библиотеки JC3B; показанные в этом примере структуры содержат остаток цистеина и были повторно синтезированы после определения структуры исходного активного соединения при предварительном скрининге. Библиотека JC3B содержала аналогичный пептоид, но содержавший на С-конце остаток метионина, а не остаток ци-стеина.
На фиг. 14 показан эксперимент по конкуренции между высокоаффинным лигандом (ADTGI) в растворе по сравнению с ADTG-1-ADTG-42 на носителе микроматрицы. Указанный эксперимент по конкуренции показывает, что ADTGI в растворе связывался с тем же антителом, которое связывалось с пеп-
тоидами ADTG-1, ADTG14, ADTG24, ADTG25, ADTG3I, ADTG35 и ADTG40 на микроматрице. Аналогичные эксперименты выполнили с каждым из пептоидов с целью поиска четырех наборов пептоидов, связанных с четырьмя различными аутоантителами при болезни Альцгеймера.
На фиг. 15 показаны четыре группы различных пептоидов, связывающихся с различными аутоанти-телами при скрининге болезни Альцгеймера. В верхней части каждой группы на указанном чертеже приведены связывающиеся агенты с более высоким сродством.
На фиг. 16А показаны данные тестирования болезни Альцгеймера (слепое исследование) для пула больных с использованием пептоида P1aag1 (JC3B-1), а на фиг. 16В показаны данные тестирования (слепое исследование) того же пула пациентов с БА с использованием P1aag2 (JC3B-21). Каждый пептоид представлен на микроматрице.
На фиг. 17А показаны данные тестирования болезни Альцгеймера (слепое исследование) для пула больных с использованием пептоида P1aag3 (JC3B-7), на фиг. 17В показаны данные тестирования (слепое исследование) того же пула пациентов с БА с использованием P1aag4 (3C3B-5). Каждый пептоид представлен на микроматрице.
На фиг. 18А показаны данные теста (слепого) на БА для группы пациентов с использованием пеп-тоида P1aag5 (JC3B-R8), а на фиг. 18В показаны данные теста (слепого) для той же группы пациентов с использованием P1aag6 (JC3B-R12). Все пептоиды использовали на микроматрице.
На фиг. 18А показаны данные тестирования болезни Альцгеймера (слепое исследование) для пула больных с использованием пептоида P1aag5 (JC3B-R8), на фиг. 18В показаны данные тестирования (слепое исследование) того же пула пациентов с БА с использованием P1aag6 (JC3B-R 12). Каждый пептоид представлен на микроматрице.
На фиг. 20А показаны данные, полученные с использованием микроматриц для ADP3 в той же группе пациентов для тестов, выполненных с использованием P1aag1-6, на фиг. 20В показано сравнение данных, полученных с использованием P1aag2 и того же набора пациентов. Указанные данные демонстрируют четкую корреляцию между результатами, достигнутыми с ранее выявленным ADP3 и вновь выявленным P1aag2 в одном и той же группе пациентов.
На фиг. 21 показана валидация P1aag5 (предполагаемое активное соединение 5 или JC3B-R8) на бусинах Tentagel при сравнении сыворотки пациентов с БА с пулом сыворотки здоровых контрольных субъектов при концентрации 40 мкг/мл.
На фиг. 22А показаны пептоиды, связывавшиеся при скрининге рака поджелудочной железы с использованием Qdot 655 и библиотеки JC5B. На фиг. 22В и 22С показано подтверждение выявленных соединений ("активных соединений") с использованием Qdot 655 (стрелки указывают на активные соединения).
На фиг. 23 показана валидация пептоидных выявленных соединений ("активных соединений") для скрининга поджелудочной железы и сравнение добавления и детектирования сыворотки при заболевании
с помощью Qdot 655 и добавления нормальной сыворотки.
На фиг. 24 показана валидация активного соединения путем смешивания маркеров БА и PC. Полученные данные показывают, что маркер PC обнаруживали при отсутствии обнаруживаемого антитела на бусинах с пептоидами БА в сыворотке при раке поджелудочной железы (сыворотка 1).
На фиг. 25 показаны последовательности соединений из библиотеки JC3B, подходящих для скрининга рака поджелудочной железы.
На фиг. 26 показаны последовательности соединений из библиотеки JC5B, подходящих для скрининга рака поджелудочной железы.
На фиг. 27А-27С показаны результаты скрининга СКВ (волчанки). А - нормальный контроль, а В и С - сыворотка при СКВ из двух различных групп 1 и 2. Стрелки указывают на активные соединения.
На фиг. 28 показаны активные соединения СКВ из библиотеки KN1B. С-конец находится на правой стороне страницы.
На фиг. 29 показана валидация активных соединений для пептоида KN1B-20. Группу 1 составляют объединенные образцы сыворотки от субъектов с заболеванием с концентрацией приблизительно 0,374 мг/мл (картинка слева) (активные соединения показаны красной окраской бусин). Объединенные сыворотки субъектов без заболевания (картинка в центре) использованы в концентрации приблизительно 0,378 мг/мл, а на дальней правой картинке показан контроль без сыворотки.
На фиг. 30 показано связывание/детектирование одного из пептодидов СКВ (волчанки) с планшетами для твердофазного ИФА (ELISA) с использованием двух различных способов связывания при различных концентрациях пептоида с использованием флуоресцентной метки.
На фиг. 31 показан конкурентный анализ с иммобилизованным на планшете KN1B-20-биотин-флюоресцеина и свободным KN1B-20-биотином в растворе в различных концентрациях. Сигнал снижается по мере увеличения концентрации свободного KN1B-20-биотина, начиная с эквимолярных концентраций свободного и связанного веществ.
На фиг. 32 показан планшет для твердофазного ИФА, содержащий пептоид в различных концентрациях, изображение четко демонстрирует разницу между сывороткой больного субъекта (БА) (Р столбец 1) и сывороткой здорового контроля (ряд 3) [1:200 с удвоением в каждой лунке: 1:400, 1:800, 1:1600, 1:3200, 1:6400, 1:12800]. Стрелки указывают на разведение 1:800 в 1X буфере TBST. Концентрация пеп-тоида в лунке составляет 10 мМ. На фиг. 32 также показана валидация платформы на бусинах Tentagel по различению между сывороткой больного субъекта и контрольной сывороткой.
На фиг. 33 показан планшет для твердофазного ИФА (ELISA) с 10 мМ ADP3 и различными разбавлениями сыворотки субъекта с БА против контрольной сыворотки. Стрелка указывает на разбавление
1:800.
На фиг. 34 показан планшет для твердофазного ИФА (ELISA) с 10 мМ SLE-KN1B-20 и различными разбавлениями сыворотки субъекта с БА против контрольной сыворотки. Стрелка указывает на разбавление 1:800.
На фиг. 35 показан график ИФА-анализа (ELISA) сыворотки БА с использованием 10 мМ ADP3, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка БА при 0,394 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 0,386 мг/мл).
На фиг. 36 показан график ИФА-анализа (ELISA) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ KN1B-20, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ при 0,375 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 0,396 мг/мл).
На фиг. 37 показан график ИФА-анализа (ELISA) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ KN1B-20, при, приготовленного в ДМСО, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ при 0,367 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 0,322 мг/мл).
На фиг. 38 показана валидация платформы FACS для бусин Tentagel.
Фиг. 39 иллюстрирует степень разделение между бусинами, содержащими ацетильную группу, и бусинами, содержащими 2,5-динитрофенильную группу (DNP), при различных концентрациях сыворотки (от 100 до 1,000 мкг/мл) и в ответ на обработку вторичным антителом с анти-DNP меткой. Разделение по средней интенсивности флюоресценции (MFI) было максимальным при разбавлении сыворотки выше 1000 мкг/мл.
Фиг. 40 демонстрирует, что существует прямая конкуренция между этаноламин-DNP и связыванием DNP (на планшете) с анти-DNP антителом в концентрации 1000 мкг/мл сыворотки.
На фиг. 41 показано, что ADP3 связывал антитело к антителу из объединенных сывороток здорового контроля и объединенных сывороток БА. Эти данные демонстрируют хорошее разделение при концентрациях сывороток в диапазоне от 20 до 140 мкг/мл с использованием двух различных вторичных
антител (антитела козы к AT человека с Dylight 649, антитела козы к AT человека с Alexa 647).
На фиг. 42 показано, что ADP3 связывал аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с БА после вычитания фоновых значений в различных диапазонах концентрации сыворотки. Имеет место значительная степень разделения в большинстве диапазонов концентраций от меньше чем 20 до 120 мкг/мл или выше.
На фиг. 43 и 44 приведены структуры повторно синтезированных пептоидных лигандов - выявленных соединений ("активных соединений") при СКВ (волчанка).
На фиг. 45 показано получение ADP3 на 10-мкм бусинах Tentagel и последующее расщепление с помощью CNBr вместе с масс-спектрометрическим считыванием показанного лактона.
На фиг. 46 показано связанное с ADP3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера в различных концентрациях. Бусины предварительно блокировали в течение 3 ч с использованием 1X TBST, а затем осуществляли детектирование с использованием вторичного антитела козы к AT человека с Alexa 647.
На фиг. 47 показано связанное с ADP3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера при различных концентрациях сыворотки, а также показаны значения DNP.
На фиг. 48 и 49 - связанное с ADP3 аутоантитело из сывороток здоровых контролей в сравнении с сыворотками субъектов с БА с использованием условий предварительного блокирования, таких как ли-зат Е. coli и лизин.
На фиг. 50 показана базовая схема приготовления и различения пептоидов, которые используются в микроматрицах в сравнении с пептоидами, которые размещали на планшетах для ИФА (ELISA). Схема получения отдельных пептоидов: отдельные бусины раздельно помещают в лунки микротитрационных планшетов и отщепляют пептоиды от бусин с получением концентрированного исходного раствора. Следует отметить, что в каждой лунке теперь находится единственный вид пептоида. Затем несколько тасыч пептоидов наносят на предметные стекла их химически модифицированного стекла таким образом, что они ковалентно связываются с поверхностью. Из одной синтетической библиотеки можно получить несколько тысяч стекол с высокой степенью воспроизводимости. ИФА получают аналогичным образом, за тем исключением, что на поверхности нет цепи ПЭГ, но плотность пептоидов на планшете для ИФА может отличаться от их плотности на микроматрицах.
На фиг. 51 показаны эксперименты ИФА, которые позволяют четко отличить сыворотку здорового контроля от сыворотки больного пациента при разбавлении сыворотки 1:800 с использованием перокси-дазы хрена (HRP), связанной со вторичным антителом, для детектирования комплекса, ассоциированного с болезнью антитела с пептоидом. Добавляют бесцветный субстрат, который меняет цвет (на синий) после реакции со связанным ферментом HRP.
На фиг. 52 показаны данные по титрованию, сравнивающие различные БА-пептоиды с помощью твердофазного ИФА при различных разведениях сыворотки пациентов (А) по сравнению с нормальной сывороткой (В). В нормальной сыворотке отсутствуют интенсивные сигналы, и имеет место четкое различие интенсивности всех БА-пептоидов по мере увеличения концентрации от 1:12800 до 1:200.
На фиг. 53 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против пептоида ADP3 для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (Jacksonville, США). UND = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 54 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА (график представляет собой среднее значение результатов для 9 пептоидов) согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (Jacksonville, США). UND = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 55 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (Jacksonville, США). UND = неопреде
ленный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным. Эти данные также демонстрируют действие для других деменций в случае, когда в исследовании также участвовали маркированные образцы от пациентов с умеренными когнитивными нарушениями (MCI)/депрессией, и также маркированные образцы пациентов с деменцией с тельцами Леви. Эти данные демонстрируют, что по меньшей мере у трех пациентов с MCI в образцах плазмы были определены антитела, связываемые селективными в отношении БА петоидами согласно настоящему изобретению, в количествах выше 1.
На фиг. 56A-D представлены данные от подгруппы образцов от тех пациентов, у которых были несовпадения в результатах диагностических тестов на основе пептоидов Opko Health с использованием множества пептоидов БА и клиническим диагнозом после предоставления этой информации в демаскированном виде. На фиг. 56А показаны данные для пептоида ADP3 и других в случае пациентов с клиническим диагнозом, у которых, однако, результаты, полученные с пептоидом P1aag4 (Opko), были ниже 1,0 (UND в единственной точке; положительное титрование БА). Все другие пептоиды Opko были положительны по БА (т.е. выше 1.0). На фиг. 56В показано, что все пептоиды Opko были положительны в отношении ассоциированных с болезнью антител у пациентов, которые в данный момент имели диагноз "здоров" (деменция отсутствует), что указывает на предболезнь А. Фиг. 56С демонстрирует, что не один из пептоидов БА Opko не показал интенсивность выше 1 при каком-либо значении разбавления у пациента в клинически диагностированной БА, что указывает на то, что этот пациент страдает какой-то другой формой деменции. Фиг. 56D демонстрирует, что у пациента с положительным клиническим диагнозом БА несколько пептоидов БА Opko не дали положительных результатов по антителам, ассоциированным с болезнью, но два пептоида (P1aag6 и P1aag4) дали положительные результаты, т.е. UND в отдельной точке и UND даже после титрования.
На фиг. 57 приведена кластерная диаграмма, полученная по предыдущим образцам БА с использованием микроматрицы с нанесенным ADP3. Существует явная корреляция между образцами больных по сравнению со здоровым контролем в данных, полученных с использованием микроматрицы, и данных, полученных с использованием платформа ИФА. На фиг. 57 также показано, что пептоид ADP3 селективен в отношении антител, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, но не для болезни Паркинсона и волчанки (СКВ).
На фиг. 58 приведены обобщенные результаты иммунноферментного анализа (ELISA), в котором исследовали всего 106 образцов сыворотки.
На фиг. 59 приведены химические структуры P1aag7-9.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение представляет значительный шаг вперед в области диагностики и создания лекарственных средств. В частности, авторы настоящего изобретения создали способ скрининга, который затмевает более ранние подходы к скринингу сложных биологических образцов. В частности, существует потребность в улучшенных способах поиска лекарственных ассоциированных с заболеваниями биомаркеров и в создании наборов, содержащих высокоаффинные лиганды к таким биомаркерам. Настоящее изобретение относится к способу скрининга таких биомаркеров и диагностики заболевания или прогрессирования заболевания с применением лигандов для детектирования таких биомаркеров.
Настоящее изобретение включает композиции, содержащие библиотеки на основе бусин, причем указанные библиотеки содержат соединения, выбранные из пептоидов, пептидов, олигомеров, низкомолекулярных соединений и любых молекул природного происхождения или полученных синтетическим путем, которые могут быть размещены на системе носителей, такой как бусины или маленькие частицы. Затем эту "библиотеку" подвергают предварительной обработке и контакту в соответствующих условиях, и после контакта с образцом плазмы или сыворотки для удаления неселективных лигандов приводят в контакт со сложной биологической жидкостью, такой как плазма или сыворотка, которую "скриниру-ют" на присутствие или отсутствие связанных с заболеванием биомаркеров, таких как антитела или белки, такие как белки клеточной поверхности. Образцы крови или образцы другой биологической жидкости берут у пациентов, которые могут страдать или не страдать конкретным заболеванием, и результаты скрининга сравнивают с результатами, полученными в популяции здоровых пациентов или контрольных пациентов с заболеванием.
Начальный скрининг дает значительное число высокоаффинных лигандов для любого конкретного ассоциированного с заболеванием биомаркера, такого как антитело. Далее настоящее изобретение включает способ получения высокоаффинных лигандов, которые можно применять либо в средствах для диагностики такого болезненного состояния и/или в качестве самостоятельных лигандов, т.е. в качестве терапевтических вакцин или лекарственных средств, которые могут направленно действовать в конкретной области организма или ткани организма. Такие лекарственные средства могут быть связаны с другими соединениями, такими как химиотерапевтические средства или другие агенты, что позволяет вызывать локальный иммунный ответ для удаления и/или разрушения аутоантител.
Болезнь Альцгеймера (БА) является прогрессирующим и смертельным заболеванием мозга, которым страдают 2,5 млн американцев. БА уничтожает клетки мозга, вызывая проблемы с памятью, мышле
нием и поведением. Со временем происходит ухудшение симптомов и в конце концов больной умирает. На сегодняшний день она является шестой по распространенности причиной смерти в США и самой частой формой деменции; на БА приходится 50-70% всех случаев деменции. К сожалению, хотя существуют средства лечения симптомов, средства для излечивания БА не существует.
Диагностика болезни Альцгеймера представляет собой эмпирический процесс, включающий несколько типов анализов, выполнение которых может занимать от нескольких дней до недель. Эти анализы включают сбор подробной медицинской истории и физический осмотр. Кроме того, стандартные лабораторные анализы, включая анализ крови, мочи и спинно-мозговой жидкости, направлены в основном на исключение других заболеваний. Также проводят неврологическое и психологическое тестирование с использованием многочисленных инструментов для оценки памяти, способности к решению задач, внимания, визуально-моторной координации и абстрактного мышления. Наконец, рекомендуется проведение томографии мозга для исключения опухолей и тромбов в мозгу как возможных причин проявления симптомов. И в итоге, на сегодняшний день не существует единого теста, который позволяет точно диагностировать болезнь Альцгеймера, категорический диагноз болезни Альцгеймера может быть поставлен только по результатам посмертного исследования мозга.
Болезнь Паркинсона (БП) является другим дегенеративным заболеванием головного мозга (центральной нервной системы), который часто приводит к нарушению двигательных навыков, речи и других функций. Она влияет на движение (двигательный синдром), но другие часто встречающиеся симптомы включают расстройства настроения, поведения, мышления и эмоций (не-двигательные симптомы). Симптомы у индивидуальных пациентов могут сильно различаться, прогрессирование заболевания также очень индивидуально. Симптомы БП обусловлены потерей (идиопатической или вторичной, в результате отравления или травмы) пигментированных допамин-секретирующих (допаминергических) клеток в области компактного вещества и substantia nigra (беквально "черного вещества"). Эти нейроны имеют проекцию в полосатом теле, и их потеря приводит к изменениям активности нейронных цепей в базальных ганглиях, которые управляют движением, по существу, ингибируя прямой путь и возбуждая непрямой путь.
Диагностика БП связана с аналогичными, хотя и несколько отличающимися сложностями. При проведении неврологического исследования для оценки возможных двигательных нарушений у пациента врач должен изучить историю болезни и провести физический осмотр. Кроме того, проводят неврологические исследования для тщательной оценки нервной системы, включая наблюдение за разными аспектами движения пациента, координацией и равновесием. Лабораторный анализ крови пациентов с типичными симптомами болезни Паркинсона лишь в редких случаях обнаруживает какие-либо аномалии. Электроэнцефалограммы (ЭЭГ) регистрируют некоторые аспекты электрической активности мозга, но они не позволяют эффективно установит БП. Процедуры магнитно-резонансной и компьютерной томографии мозга дают исключительные и показательные анатомические изображения мозга, но мозг пациентов с БП выглядит нормальным даже при такой детализации, поскольку изменения, ассоциированные с БП, являются микроскопическими и не выявляются при этих видах томографии. В отсутствие категорических диагностических тестов для получения конкретных ответов врачу приходится ставить диагноз БП на основании суждений.
Таким образом, существует потребность в диагностических процедурах для обоих указанных заболеваний, а также для других неврологических заболеваний, которая была бы (i) точной и объективной, (ii) простой и воспроизводимой и (iii) применимой и для ранних, и для поздних стадий.
В соответствии с настоящим изобретением предложены композиции, включающие пептоид(ы), связывающие антитела, являющиеся показателем нейродегенеративного заболевания, и способы детектирования антител в образце, содержащем антитела, включающие осуществление контакта антителосодер-жащего образца с носителем, к которому присоединен пептоид. Библиотеки лигандов могут включать соединения формулы I, где группы R на аминной боковой цепи или при альфа-атоме углерода независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода; алкила; аллила; метила; этила; n-пропила; изопро-пила; n-бутила; изобутила; n-бутиламина; фтор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; ари-ла; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазолила; оксазолила; пиперонила; пиразолила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пиринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензтриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; ^)-метил-бензила; C0-6 алкиларила; C0-6 алкилгетероарила; C0-6 алкила, замещенного группой, выбранной из ОН, SH, галогена, OR15, COOR15, NR15 (где R15 выбрана из группы, состоящей из Н или C1-6 алкил или C1-6 алкинила) или R16 (где R16 выбрана из группы, состоящей из Н или C1-6 алкинила); OC1-6 алкила; C2-6 алкенила; C2-6 алкинила; C2-6 алкенила и C2-6 алкинила, включая одну или более химических групп, описанных в табл. 1 и 2 предварительной патентной заявки США 61/467256, полностью включенной в настоящий документ посредством ссылки.
Предпочтительные библиотеки лигандов согласно настоящему изобретению для целей скрининга болезни Альцгеймера включают случайную библиотеку случайных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящей из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений
где R1 представляет собой -(C1-C6)SCH3; R2 выбран из Н;
R3-R6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6COOH, -С1-С6алкил-ОН, -С^С^лкил-М!^ -C3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH3, -SO2NH2 или -О-СН2-О;
n составляет 3-11 и
указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
Другие библиотеки пептоидов, пригодные для скрининга болезни Альцгеймера, включают библиотеки, содержащие случайную библиотеку случайных лигандов для скрининга биологической жидкости по п.1, состоящую из множества соединений, по меньшей мере одно из соединений имеет структуру формулы I, на носителе
отличающиеся тем, что соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; N-^-амино-пропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензи-ламин; изобутиламин;4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или
(B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобу-тиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензи-ламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(D) фурфуриламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; №(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-амино-этил)бензолсульфонамид; или
(E) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин, циклогексиламин, 3,4-диметоксифениламин, бензиламин, ^(2-аминоэтил)ацетамид, ^(3-аминопропил)-2-пирролидрн, 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и
при этом R1 выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)SCH3; R2 выбран из Н;
R3 и R5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -СгС^лкил-NH^ -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(O)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH3, -SO2NH2 или -О-СН2-О-;
R4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(С1-С6алкил)NR7R8;
R6 выбран из группы, состоящей из следующего: 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-ил-n-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2-(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
n составляет от 3 до 11.
В более предпочтительном варианте реализации такие библиотеки и соединения выбраны из следующего.
Соединение формулы 1а
где указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы Ia, где:
(a) R9 представляет собой n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет
собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представ-
ляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогек-
сил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2,2-
диметилэтил(изобутил), R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой метилбензил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(d) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой ме-тилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой цикло-гексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изопропил, R12 представляет собой изопропил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(h) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой цикло-гексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(i) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет
собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин,
R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16
представляет собой циклогексил;
(j) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой фурфурил и R16 представляет собой фурфурил;
(n) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой фурфурил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой фурфурил;
(о) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2
метоксиэтил и R16 представляет собой метилбензил;
(р) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R13 представляет собой изобутил;
(q) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(r) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(s) R9 представляет собой ^ил^-бутилами^ R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метил-бензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой пиперонил;
(t) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(u) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(v) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой пиперонил;
(w) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой циклогексил;
(х) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой пи-перонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(у) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(z) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой ме-тилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(аа) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(bb) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(cc) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(dd) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой циклогексил;
(ее) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представ
ляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(ff) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(gg) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой
1- ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(hh) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(ii) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой фурфурил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(jjj) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой изобутил;
(kk) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(ll) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(mm) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4(бензолсульфоиамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогек-сил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(nn) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(oo) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой пиперонил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(рр) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-
2- метоксиэтил;
(qq) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой фурфурил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(rr) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(ss) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой пи-перонил.
В более предпочтительном варианте реализации и для скрининга связанных с болезнью биомаркеров у пациентов, болеющих БА или у которых подозревают болезнь Альцгеймера, с применением наборов и/или средств и/или устройств для диагностики предпочтительны следующие соединения.
причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из соединения формулы II, где:
(a) R9 представляет собой n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет
собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представ-
ляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогек-
сил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2,2-
диметилэтил(изобутил), R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой метилбензил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(d) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изопропил, R12 представляет собой изопропил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1 -ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(h) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(i) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет
собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин,
R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16
представляет собой циклогексил;
(j) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой фурфурил и R16 представляет собой фурфурил;
(n) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет со
бой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой фурфурил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой фурфурил;
(о) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой метилбензил;
(р) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(q) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(r) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(s) R9 представляет собой ^ил^-бутилами^ R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метил-бензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой пиперонил;
(t) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(u) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(v) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой пиперонил;
(w) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой циклогексил;
(х) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой пи-перонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(y) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(z) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой ме-тилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(аа) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(bb) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(cc) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 пред
ставляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(dd) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой циклогексил;
(ее) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(ff) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(gg) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой
1- ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(hh) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(ii) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой фурфурил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(jj) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой изобутил;
(kk) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(ll) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(mm) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогек-сил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(nn) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(oo) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой пиперонил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(pp) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-
2- метоксиэтил;
(qq) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой фурфурил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(rr) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(ss) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин,
R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой пи-перонил.
В более предпочтительном варианте реализации в качестве лигандов для скрининга и/или обнаружения болезни Альцгеймера выбирают следующие соединения.
Соединение, где указанное по меньшей мере одно соединение формулы II выбрано из групп, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет
собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представ-
ляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогек-
сил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2,2-
диметилэтил(изобутил), R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой метилбензил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(d) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой ме-тилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой цикло-гексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изопропил, R12 представляет собой изопропил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил.
Аутоиммунные заболевания.
Настоящее изобретение также предусматривает идентификацию молекул, которые могут связываться с аутоиммунными Т-клетками и/или антителами при различных аутоиммунных заболеваниях и состояниях. На примере индуцированного экспериментального аутоиммунного энцефалита, животной модели PC, настоящее изобретение должно быть применимо в контексте различных аутоиммунных заболеваний, которые обсуждаются ниже. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение включает, но не ограничивается, такими заболеваниями, как острый рассеянный энцефаломиелит Бало, болезнь Бехчета, буллезная пузырчатка (ADEM), острый некротический геморрагический лейкоэнцефалит, болезнь Аддисона, агаммаглобулинемия, аллергическая астма, аллергический ринит, гнездная алопеция, амилоидоз, анкилозирующий спондилит, анти-вВМ/анти-ТВМ нефрит, антифосфолипидный синдром (АФС), аутоиммунная апластическая анемия, аутоиммунная вегетативная дистония, аутоиммунный гепатит, аутоиммунная гиперлипидемия, аутоиммунный иммунодефицит, аутоиммунная болезнь внутреннего уха (AIED), аутоиммунный миокардит, аутоиммунный панкреатит, аутоиммунная ретинопатия, аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура (АТП), аутоиммунная болезнь щитовидной железы, аксональ-ные и нейрональные нейропатии, болезнь Бало, болезнь Бехчета, буллезная пузырчатка, кардиомиопатия, болезнь Каслмена, целиакия (не тропическая), болезнь Шагаса, синдром хронической усталости, хроническая демиелинизирующая воспалительная полинейропатия (CIDP), хронический рецидивирующий мультифокальный остеомиелит (CRMO), синдром Чарг-Штраусса, рубцовый пемфигоид/добро-качественная пузырчатка слизистой оболочки, болезнь Крона, синдром Когана, холодная болезнь агглютининов, врожденная блокада сердца, миокардит Коксаки, CREST-синдром, эссенциальная смешанная криоглобулинемия, демиелинизирующая невропатия, дерматомиозит, болезнь Девика (нейромиелит зрительного нерва), дискоидная волчанка, синдром Дресслера, эндометриоз, эозинофильный фасциит, узловатая эритема, экспериментальный аллергический энцефаломиелит, синдром Ивана, фибромиалгия, фиб-розирующий альвеолит, гартериит гигантских клеток (височный артериит), гломерулонефрит, синдром Гудпасчера, болезнь Граве, синдром Гийена-Барре, энцефалит Хашимото, тириодит Хашимото, гемолитическая анемия, пурпура Геноха-Шенлейна, гестационный герпес, синдром дефицита антител, идиопа-тическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), IgA-зависимая нефропатия, иммунорегуляторные липо-протеины, миозит с тельцами включения, инсулин-зависимый диабет (тип 1), интерстициальный цистит, ювенильный артрит, ювенильный диабет, синдром Кавасаки, синдром Ламберта-Итона, лейкоцитокла-стический васкулит, красный плоский лишай, лишай склероатрофический, деревянистый конъюнктивит, линейный IgA зависимый дерматоз (ЛАД), волчанка (СКВ), болезнь Лайма, болезнь Меньера, микроско
пический полиангиит, смешанное заболевание соединительной ткани (MCTD), язва Морена, болезнь Мухи-Габерманна, рассеянный склероз, миастения, миозит, нарколепсия, нейромиелит зрительного нерва (болезнь Девика), нейтропения, глазной рубцовый пемфигоид, неврит зрительного нерва, палиндром-ный ревматизм, PANDAS (детские аутоиммунные невропсихиатрические нарушения, ассоциированные со стрептококком), паранеопластическая мозжечковая дегенерация, пароксизмальная ночная гемоглоби-нурия (ПНГ), синдром Перри-Ромберга, Персонейджа-Тернера синдром, pars plantis (периферический увеит), пузырчатка, периферическая невропатия, перивенозной энцефаломиелит, злокачественная анемия, POEMS-синдром, узелковый полиартериит, аутоиммунные полигландулярные синдромы I, II и III типа, ревматическая полимиалгия, полимиозит, постинфарктный синдром, постперикардиотомический синдром, прогестероновый дерматит, первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холан-гит, псориаз, псориатический артрит, идиопатический легочный фиброз, гангренозная пиодермия, чистая красноклеточная аплазия, феномен Рейно, рефлекторная симпатическая дистрофия, синдром Рейтера, рецидивирующий полихондрит, синдром беспокойных ног, забрюшинный фиброз, ревматическая лихорадка, ревматоидный артрит, саркоидоз, синдром Шмидта, склерит, склеродермия, синдром Шегрена, аутоиммунитет к сперме и тестикулярной ткани, синдром скованного человека, подострый бактериальный эндокардит (ПБЭ), симпатическая офтальмия, артериит Такаясу, височный артери-ит/гигантоклеточный артериит, тромбоцитопеническая пурпура (ТЦП), синдром Толоса-Ханта, поперечный миелит, язвенный колит, недифференцированное заболевание соединительной ткани (НЗСТ), увеит, васкулит, везикулобуллезный дерматоз, витилиго или гранулематоз Вегенера, или хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз, дилатационная кардиомиопатия, миокардит, аутоиммунный полиэндокринный синдром I типа(APS-I), кистозный фиброз, васкулиты, приобретенный гипопаратире-оз, ишемическая болезнь сердца, пузырчатка эксфолиативная, обыкновенная пузырчатка, энцефалит Расмуссена, аутоиммунный гастрит, гипогликемический инсулиновый синдром (болезнь Хирата), резистентность к инсулину типа В, акантоз, системная красная волчанка (СКВ), злокачественная анемия, резистентный к лечению артрит Лайма, полинейропатии, демиелинизирующие заболевания, атопический дерматит, аутоиммунный гипотиреоз, витилиго, офтальмопатия, ассоциированная с заболеванием щитовидной железы, аутоиммунная целиакия, дефицит АКТГ, дерматомиозит, синдром Шегрена, системный склероз, прогрессирующий системный склероз, кольцевидная склеродермия, первичный антифосфоли-пидный синдром, хроническая идиопатическая крапивница, синдромы соединительной ткани, некротический и серповидный гломерулонефрит (НСГ), системный васкулит, синдром Рейно, хронические заболевания печени, висцеральный лейшманиоз, аутоиммунный дефицит C1, мембранный пролиферативный гломерулонефрит (MPGN), замедленное свертывание крови, иммунодефицит, атеросклероз, нефропатия, паранеопластическая пузырчатка, паранеоплатический синдром мышечной скованности, паранеопласти-ческий энцефаломиелит, подострая автономная нейропатия, ассоциированная с раком ретинопатия, па-ранеопластическая опсоклонус-миоклонус-атаксия, синдром нижних мотонейронов и миастенический синдром Ламберта-Итона.
Библиотеки пептоидов согласно настоящему изобретению для целей скрининга антител, ассоциированных с волчанкой, включают библиотеку (библиотеки), указанную выше, и дополнительно включают случайную библиотеку лигандов для скрининга сложных биологических жидкостей, содержащую соединение I, на носителе
где R1 представляет собой -(Q-C^SCH^ R2 выбран из Н;
R3-R6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 COOH, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-NH2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(O)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH3, -SO2NH2 или -О-СН2-О;
n составляет 3-11 и
указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
где соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-
аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метил-
бензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или
(B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобу-тиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензи-ламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(D) фурфуриламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; ^(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(E) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и
при этом R1 выбран из группы, состоящей из -(С1-C6)SCH3; R2 выбран из Н;
R3 и R5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 COOH, -С1-С6алкил-ОН, -СгС6алкил-№12, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(O)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH3, -SO2NH2 или -О-СН2-О-;
R4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(С1-С6алкил)NR7R8;
R6 выбран из группы, состоящей из следующего: 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-ил-n-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2-(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
n составляет от 3 до 11.
Предпочтительные варианты реализации для целей первичного скрининга включают соединение
формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(b) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(c) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(d) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4(бензолсульфоиамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-аллил,
(a)
R14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-аллил и R16 представляет собой
пиперонил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой
пиперонил;
(i) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(j) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пипе-ронил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой
пиперонил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой циклогексил;
(n) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
Предпочтительные варианты реализации для наборов и/или других способов диагностики включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(b) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(c) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет
(a)
собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(d) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-аллил и R16 представляет собой пиперонил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой ^ил^-бутилами^ R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(i) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой
пиперонил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представ-
ляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представ-
ляет собой метилбензил;
(j) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пипе-ронил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой ^ил^-бутилами^ R13 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой циклогексил;
(n) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
Рак.
Настоящее изобретение также можно применять для идентификации и/или исследования присутствия или отсутствия биомаркеров, связанных с раком или предраковыми состояниями. Эти виды рака выбраны из группы, включающей, например, следующие: острый лимфобластный лейкоз, острый миелоб-ластный лейкоз, рак коры надпочечников, СПИД-ассоциированные злокачественные опухоли, СПИД-ассоциированная лимфома, анальный рак, рак аппендикса, астроцитома, опухоли головного мозга или мозжечка у детей, базальноклеточная карцинома, рак желчного протока, внепеченочный, рак мочевого пузыря, рак кости, остеосаркома/злокачественная фиброзная гистиоцитома, глиомы ствола мозга, опухоли мозга, опухоли головного мозга, астроцитома мозжечка, опухоль головного мозга, астроцитома мозга/злокачественная глиома, опухоль головного мозга, эпендимома, опухоль головного мозга, медуллоб-ластома, опухоль головного мозга, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, опухоль головного мозга, глиомы зрительного пути и гипоталамуса, рак молочной железы, бронхиальная аденома / карциноиды, лимфома Беркитта, карциноидная опухоль, карциноидная опухоль у детей, желудочно-кишечного тракта, рак с неизвестной первичной локализацией, лимфома ЦНС, первичная, астро-цитома мозжечка у детей, астроцитома головного мозга/злокачественная глиома у детей, рак шейки матки, рак у детей, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, хронические миелопролифера
тивные заболевания, рак толстой кишки, кожная Т-клеточная лимфома, десмопластическая мелкокруг-локлеточная опухоль эндометрия, эпендимома, рак пищевода, саркома Юинга в семействе серком Юин-га, опухоли экстракраниальных зародышевых клеток у детей, опухоль экстрагонадных зародышевых клеток, внепеченочный рак желчных протоков, рак глаза, внутриглазная меланомы, рак глаз, ретинобла-стому, рак желчного пузыря, рак желудка, карциноидная опухоль желудочно-кишечного тракта, стро-мальная опухоль желудочно-кишечного тракта (GIST, СОЖКТ), опухоль зародышевых клеток: экстракраниальная, экстрагонадная или яичника, гестационная трофобластическая опухоль, глиома ствола головного мозга, глиомы, астроцитома головного мозга у детей, глиома, глиома зрительного пути и гипоталамуса, у детей, карциноид желудка, лейкоз волосатых клеток, рак головы и шеи, рак сердца, гепато-целлюлярный рак (печени), лимфома Ходжкина, рак подглоточника, глиома зрительного пути и гипоталамуса, у детей, внутриглазная меланома, крацинома островковых клеток (эндокринной поджелудочной железы), саркома Капоши, рак почки (почечноклеточный рак), рак гортани, лейкемии, лейкоз, острый лимфобластический лейкоз (также называемый острым лимфоцитарным лейкозом), лейкоз, острый мие-лоидный лейкоз (также называемый острым миелогенным лейкозом), лейкоз, хронический лимфобла-стический лейкоз (также называемый хроническим лимфоцитарным лейкозом), лейкоз, хронический ми-елоидный лейкоз (также называемый хроническим миелогенным лейкозом), лейкоз волосатых клеток, рак губы и ротовой полости, рак печени (первичный), рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточная лимфома, лимфома, связанная с СПИД, лимфома Беркитта, лимфома кожная Т-клеточная, лимфома Ходжкина, лимфомы не-ходжкинские (старая классификация для всех лимфом, кроме лимфо-мы Ходжкина), лимфома, первичная ЦНС, Муркуса-Уиттла, смертельная болезнь, макроглобулинемия, Вальденстрема, злокачественная фиброзная гистиоцитома кости/остеосаркома, медуллобластома, у детей, меланома, меланома, внутриглазная (глаза), карцинома клеток Меркеля, мезотелиома, у взрослых злокачественная, мехотелиома, у детей, метастазирующий плоскоклеточный рак неидентифицируемого происхождения, рак рта, синдром множественных эндокринных новообразований, у детей, множественная миелома/неоплазия плазматических клеток, грибковый микоз, миелодиспластический синдром, Мие-лодиспластические / миелопролиферативными заболевания, миелогенный лейкоз, хронический, миело-идный лейкоз, острый миелолейкоз у взрослых, острая, множественная миелома у детей, множественные (рак костного мозга), миелопролиферативные заболевания, хронический рак полости носа и придаточных пазух, рак носоглотки, нейробластома, неходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легкого, рак ротовой полости, рак ротоглотки, остеосаркома/злокачественная фиброзная гистиоцитома кости, рак яичников, эпителиальный рак яичников (поверхностная эпителиально-стромальная опухоль), опухоли зародышевых клеток яичников, опухоли яичников с низким злокачественным потенциалом, рак поджелудочной железы, рак островковых клеток поджелудочной железы, рак придаточных пазух носа и полости носа, рак паращитовидных желез, рак полового члена, рак глотки, феохромоцитома, астроцитома гипофиза, герминома гипофиза и супратенториальная примитивная нейроэктодермальная пинеобластома у детей, аденома гипофиза, плазменная клеточная неоплазия/множественная миелома, плевролегочная бластома, первичная лимфома центральной нервной системы, рак простаты, рак прямой кишки, почечно-клеточный рак (рак почки), рак почечной лоханки и мочеточника, переходные опухоли, ретинобластома, рабдомиосаркома у детей, рак слюнных желез, опухоли семейства сарком Юинга, саркомы Капоши, саркома мягких тканей, саркома матки, синдром Сезари, рак кожи (не меланома), рак кожи (меланома), кожный рак клеток Меркеля, мелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак кишечника, саркомы мягких тканей, плоскоклеточный рак - см. рак кожи (не меланомы), плоскоклеточный рак шеи неясного происхождения, метастатический, рак желудка, супратенториальная примитивная нейроэктодермальная опухоль у детей, Т-клеточная лимфома, кожная - см. грибовидный микоз и синдром Сезари, рак яичек, рак горла, тимомы у детей, тимома и карцинома тимуса, рак гипофиза, рак гипофиза у детей, переходные клеточные опухоли почечной лоханки и мочеточника, трофобластическая опухоль, гестационная опухоль неизвестной первичной локализации у взрослых, опухоль с неизвестной первичной локализацией, рак, у детей, уретры и почечной лоханки, рак переходных клеток, рак уретры, рак матки, саркома эндометрия, матки, рак влагалища, глиома зрительного пути и гипоталамуса у детей, рак вульвы, макрогло-булинемия Вальденстрема, опухоль Вильмса (рак почки) у детей.
где R1 представляет собой -(С^С^СН^ R2 выбран из Н;
Библиотеки пептоидов согласно настоящему изобретению для целей скрининга на рак поджелудочной железы в дополнение к библиотекам, описанным выше, включают случайную библиотеку лигандов для скрининга сложных биологических жидкостей, включающую соединение формулы I, на носителе
и R3-R6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С^^алкил^СЦз, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-КИ2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-МС(0)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-
циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве
заместителя -ОН, С1, F, Br, -ОСН3, -S02NH2 или -0-СИ2-0; n составляет 3-11 и
указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различаю-
щихся лигандов.
Другие библиотеки пептоидов, пригодные для скрининга на рак, включают библиотеки, содержащие случайную библиотеку лигандов для скрининга сложной биологической жидкости, содержащей соединение формулы I, на носителе
где соединения получают способом, который включает применение участвующих:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-
аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метил-
бензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или
(B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобу-тиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензи-ламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(D) фурфуриламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; №(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(E) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и
при этом R1 выбран из группы, состоящей из -(С^С^СН^ R2 выбран из Н;
R3 и R5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -Сг^алкил^СН^ -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -Сг^алкил-МН^ -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-
циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве
заместителя -ОН, С1, F, Br, -0СН3, -S02NH2 или -О-СН2-О-;
R4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(С1-С6алкил)NR7R8;
R6 выбран из группы, состоящей из следующего: 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-ил-n-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2-(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
n составляет от 3 до 11.
Предпочтительные варианты реализации для целей предварительного скрининга включают пептои-ды, содержащие соединение формулы
причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы IIa, где:
(a) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(b) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой
(a)
изобутил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(d) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой изобутил;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой ме-тилбензил;
(f) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(g) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(i) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой
метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14
представляет собой изобутил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-
бутиламин;
(j) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Предпочтительные варианты реализации для целей скрининга рака поджелудочной железы в наборах включают соединение формулы
причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где:
(a) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(b) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(d) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой изобутил;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет
собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой метилбензил;
(f) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(g) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(i) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой
метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14
представляет собой изобутил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-
бутиламин;
(j) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Другие альтернативные варианты реализации для целей предварительного скрининга для обнаружения аутоантител рака поджелудочной железы включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащей следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(b) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой Ьшт-бутиламин;
(c) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(d) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-аллил и R16 представляет собой пиперонил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой метилбен
(a)
зил, R14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и R16 представляет собой 1 -ил-2-гидроксиэтил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой
пиперонил;
(i) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(j) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пипе-ронил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой
пиперонил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой циклогексил;
(n) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Предпочтительные варианты реализации для целей наборов и диагностики включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(b) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(c) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(d) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-аллил и R16 представляет собой
пиперонил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой пи-нил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4
бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(i) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой
пиперонил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представ-
ляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представ-
ляет собой метилбензил;
(j) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой циклогексил;
(n) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Настоящее изобретение также можно применять для скрининга на присутствие биомаркеров, ассоциированных с любыми другими заболеваниями и состояниями. Такие заболевания и состояния включают указанные выше неврологические заболевания, аутоиммунные заболевания и онкологическое заболевания (рак), а также любые другие заболевания и состояния, для которых существует биомаркер, например антитело, или другой характеристический белок или биомолекула, ассоциированные с данным заболеванием или прогрессированием заболевания. Эти заболевания включают, в частности, воспалительные заболевания, инфекционные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и метаболические заболевания. Конкретные инфекционные заболевания включают СПИД, сибирскую язву, бруцеллез, мягкий шанкр, хламидийную инфекцию, холеру, кокцидиоидомикоз, криптоспоридиоз, циклоспорию, дифтерию, эрлихиоз, арбовирусный энцефалит, энтерогеморрагическую Escherichia coli (E. coli), лямблиоз, гонорею, инфекцию Haemophilus influenzae, болезнь Хансена (лепре), хантавирусный легочный синдром, гемолитический уремический синдром, гепатит А, гепатит В, гепатит С, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), легионеллез, листериоз, болезнь Лайма, малярию, корь, менингококковую инфекцию, инфекционный паротит, коклюш, чуму, паралитический полиомиелит, пситтакоз (орнитозе), Ку-лихорадку, бешенство, пятнистую лихорадку Скалистых гор, краснуху, синдром врожденной краснухи, сальмонел-лез, тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС), шигеллез, оспу, стрептококковые заболевания (инвазивные стрептококки группы А), стрептококковый синдром токсического шока (STSS), Streptococcus pneumoniae, сифилис, столбняк, синдром токсического шока, трихинеллез, туберкулез, туляремию, брюшной тиф, ванкомицин-промежуточный/устойчивый Staphylococcus aureus, ветряную оспу, желтую лихорадку, болезнь Крейтцфельда-Якоба (vCJD), лихорадку денге, геморрагическую лихорадку Эбола, эхинококкоз (альвеолярный эхинококкоз), инфекцию вирусом Хендра, оспу обезьян, грипп H5N1 (птичий грипп), лихорадку Ласса, геморрагическую лихорадку Марбург, вирус Нипах, лихорадку о'ньонг-ньонг, лихорадку долины Рифт, венесуэльской конской энцефалит и вирус Западного Нила.
Обширные библиотеки лигандов согласно настоящему изобретению можно применять непосредственно при анализе биологической жидкости в соответствующих экспериментальных условиях для выявления биомаркеров, без необходимости использовать меньшее количество опорных элементов (например, примерно 100000 или менее) или переноса таких пептоидов или лигандов на микроматрицу до скрининга биологической жидкости. Кроме того, библиотеки лигандов также можно применять для скрининга рецепторов клеток, которые имеют непосредственное отношение к определенному маркеру поверхности клеток. Настоящее изобретение, в отличие от ранее известных способов, допускает включение большего количества бусин/смол и, таким образом, более крупных библиотек при скрининге агентов, связывающихся с лигандом или скрининге клеточных рецепторов для непосредственного скрининга биологических образцов сложного состава (сложных биологических образцов). Соответственно настоящее изобретение включает также способ мониторинга прогрессирования заболевания, включающий этапы скрининга биологического образца, взятого у пациента, в момент времени 1 с последующим скринингом биологического образца, взятого у пациента, в момент времени 2 или в любой более поздний момент времени и/или мониторинг присутствия или отсутствия ассоциированного с заболевания биомаркера у указанного пациента с использованием набора, устройства или прибора, содержащего по меньшей мере один лиганд, выявленный согласно способу быстрого скрининга, предложенному в настоящему изобретении.
Лиганды.
Как было описано ранее для микроматричных систем, практически любая молекула может использоваться для создания случайной библиотеки на основе смолы или бусин. Эти "молекулы" или "соединения" могут включать природные продукты или созданные человеком соединения, или синтетические молекулы. Источником таких молекул могут быть биологические системы, а также источники небиологического происхождения. Предпочтительные лиганды для целей начального скрининга с использованием больших библиотек и в условиях согласно настоящему изобретению получают, частично, из субмономеров, которые выбирают из любых известных галидов уксусной кислоты или замещенных галидов уксусной кислоты. Например, в табл. 1 приведен ряд групп R в составе монозамещенных аминов, которые могут быть выбраны для этой цели.
H2N^
H2N^
H2N^
H2N
CH3
H2N^
Предпочтительные мономеры и/или субмономеры для целей скрининга БА, скрининга рака поджелудочной железы и скрининга волчанки (предварительного и/или диагностического) выбраны из группы, состоящей из цистеина, глицина, метионина, аллиламина, этаноламина, изобутиламина, диаминобутана, метилбензиламина (рацемического или энантиомерного), пиперониламина, циклогексиламина, 3,4-диметоксифенетиламина, бензиламина, М-(2-аминоэтил)ацетамида, М-(3-аминопропил)-2-пирролидино-на, 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамида или фурфуриламина.
В качестве субмономеров также используют галогениды уксусной кислоты и/или галогениды замещенной группой R уксусной кислоты, где R выбрана из любой боковой цепи аминокислоты или из любой другой группы, включая указанные группы при монозамещенных аминах. В качестве альтернативы можно осуществлять взаимодействие комбинации любого амина и любого галогенида уксусной кислоты с образованием мономера, который затем подвергают взаимодействию с другим реакционноспособным мономером в растущей цепи пептоида с образованием олигомера согласно настоящему изобретению. Комбинаторные библиотеки пептоидов могут быть приготовлены следующим образом. Пептоиды, содержащие мономерный цистеин или метионин, присоединенный к носителю или линкеру на носителе или смоле или бусине, можно получить путем первоначального добавления блокированной аминокислоты к носителю или линкеру на носителе. После добавления указанной аминокислоты (или любой желательной аминокислоты, способной служить функциональной группой или использоваться для других целей в составе олигомера или диагностического средства, содержащего указанный олигомер) можно внести оставшиеся мономеры с использованием стандартных реактивов для пептидной химии или с использованием субмономеров бромуксусной кислоты (или а-замещенной бромуксусной кислоты или аналогичного реагента) и монозамещенного амина, причем указанный амин замещен R-группой. R-группа может быть выбрана из любого известного замещенного пептоида, в том числе пептоидов, описанных, например, в патентных публикациях США №№ 2010/0303805 или 2010/0303835 и/или в различных публикациях Zuckermann и Kodadek, полностью включенных в настоящий документ посредством ссылок. Предпочтительными аминами являются амины, выбранные из библиотек, упомянутых в настоящем документе, причем определенные мономерные амины добавляют в каждую библиотеку для создания библиотек, содержащих 1-250 млн бусин или частиц смолы. Предпочтительный размер
библиотеки колеблется от 1 до 50 млн бусин или частиц смолы, содержащих указанное разнообразие соединений.
Процесс изготовления каждого пептоида обычно включает (1) изготовление аминокислотного реагента на носителе (включая необязательный линкер на носителе), (2) взаимодействие аминокислоты на носителе с ацилгалогенидом, например бромуксусной кислотой либо хлоруксусной кислотой, с образованием галогенированного производного, (3) взаимодействие указанного галогенированного производного с монозамещенным амином с образованием амида и (4) повторение этапов (2) и (3) с образованием пептоида. В составе крупных библиотек обычно получают метионинсодержащие пептоиды. Цистеинсо-держащие пептоиды, как правило, получают при необходимости синтеза высокоаффинных пептоидов в больших количествах после первоначального скрининга крупных библиотек на основе бусин или частиц смолы. Если для первоначального скрининга сложной биологический жидкости, например сыворотки, используют обширные библиотеки на основе бусин, то необходимость или потребность в длинном поли-этиленгликолевом линкере, который, как правило, необходим для скрининга с помощью микроматриц, отсутствует. Полиэтиленгликолевый линкер может присутствовать на бусине или частице смолы при условии, что он является коротким линкером, содержащим менее приблизительно 10 мономерных звеньев. В диагностических наборах, включающих бусины или бусины Tentagel размером менее приблизительно 50 мкм (например, 10 мкм), можно использовать как короткие линкеры ПЭГ (например, содержащие 2-10 мономеров ПЭГ), так и более длинные олигомеры ПЭГ.
При выполнении каждого этапа в процессе изготовления олигомера применяют растворители, например ДМФ или ацетонитрил или дихлорметан. Трифторуксусную кислоту применяют для целей отщепления, а пиперидин или другое подходящее основание применяют в качестве основания в реакции между бромпроизводным и амином. При получении аминокислотного реагента применяют различные блокирующие группы. В предпочтительном варианте реализации диаминобутан применяют в качестве первого аминного субмономера в цепи, примыкающего к остатку цистеина на С-конце пептоида. На первом этапе указанного процесса выбранные бусины или частицы смолы (в количествах граммов или миллиграммов) подвергают набуханию в подходящем растворителе, например ДМФ. Если бусины "блокированы" блокирующей группой при реакционноспособном амине на указанной бусине, для деблокирования бусины неоднократно добавляют щелочной раствор, например пиперидин, с последующей промывкой ДМФ. После деблокирования бусин или при первоначальном использовании таких бусин, как бусины Tentagel, их можно подвергать взаимодействию с подходящей аминокислотой, например цистеином или метионином (блокированной Fmoc или другой подходящей блокирующей группой при атоме азота, блокированной Trt (трифенилметилом), при атоме серы и в молярных количествах, достаточных для взаимодействия с каждой бусиной) в подходящем растворителе, например ДМФ. HBTU (гексафторфосфат тет-раметилурония (связующий реагент) и 4-метилморфолин (основание) вместе с блокированной аминокислотой добавляют к раствору бусин в химическом стакане (или пробирке или колбе) и встряхивают при комнатной температуре с образованием Fmoc/Trt-блокированной аминокислоты на частицах смолы (или на линкере на частицах смолы). Затем бусины несколько раз промывают в растворителе, например ДМФ. Затем Fmoc-группу деблокируют с помощью подходящего реагента, обеспечивая реакцию амина в составе аминокислоты с другим реагентом, например, другой блокированной аминокислотой или субмономером, например бромуксусной кислотой, и активирующим агентом, например DIG (3-изопропилкарбодиимидом) в подходящем растворителе при нагревании (СВЧ при перемешивании). Затем полученные бусины промывают несколько раз, а затем обрабатывают желательным мономерным амином (в некотором молярном избытке) в подходящем растворителе при нагревании. Полученные бусины промывают несколько раз, а затем повторно обрабатывают бромуксусной кислотой и выбранным амином, получая олигомер и библиотеку олигомеров. Пептоиды можно отщепить от бусин с помощью трифторуксусной кислоты. Альтернативный или другой подходящий процесс получения пептоидов, включающих предпочтительный вариант реализации, например пептоидов, содержащих цистеин, примыкающий к мономеру, содержащему 1-ил-п-бутиламин, включает получение пептоида, содержащего две аминокислоты на С-конце, посредством процесса, дополнительно включающего добавление любого из мономеров, изготовленных в субмономерном процессе, причем вторая аминокислота представляет собой лизин. Указанное дополнительно включает выбор любого мономера или субмономера с целью изготовления а-замещенных субмономеров бромуксусной кислоты, причем заместители при атоме углерода могут быть выбраны из типичных боковых цепей аминокислот с образованием, после реакции с реагентами, а-замещенных пептоидов, причем R-группа находится при одном или обоих атомах углерода пептоидной цепи или при атоме азота цепи пептоида.
Комбинаторные библиотеки низкомолекулярных соединений можно получить коммерческим путем или изготовить с помощью способов, известных в данной области техники; см., например, Bichler et al. 1995; Cho et al., 1999; LePiae et al., 2002; Ostergaard and Holm, 1997; Yang et al., 1999. Кроме того, источниками таких молекул и библиотек являются патент США № 6344334 и публикациях Gallop et al. (1994), Gordon et al. (1994); Thompson and Eilman (1996).
Комбинаторные библиотеки пептидов можно получить коммерческим путем или изготовить с по
мощью способов, известных в данной области техники; см., например, Stewart and Young (1984); Tarn et al. (1983); MerrifteM (1986) и Barany and Merritleld (1979), каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки.
Комбинаторные библиотеки нуклеиновых кислот, включая РНК или ДНК, можно получить коммерческим путем или изготовить с помощью способов, известных в данной области техники. Комбинаторные библиотеки олигосахаридов можно получить коммерческим путем или изготовить с помощью способов, известных в данной области техники.
В каждом случае "лиганды" или случайные лиганды можно добавлять к смоле или бусинам носителя, формируя библиотеки для скрининга, которые можно применять в условиях, описанных в данном описании, для скрининга биомаркеров в сложной биологической жидкости. Предпочтительными лиган-дами являются пептоидные лиганды.
В дополнение к изготовлению и/или применению таких библиотек может быть необходима или желательна оценка характеристик, очистка и/или синтез или повторный синтез любого из таких лигандов. Такие способы известны в данной области техники и включают весь спектр способов очистки, например ВЭЖХ, с помощью хроматографических средств, или способы очистки с помощью химических средств; способы оценки характеристик, например масс-спектрометрию или ЯМР, или комбинации любых из этих способов. Дополнительное описание таких способов приведено, например, в патентной публикации США 2007/0003954, включенной в настоящий документ посредством ссылки. В таких случаях любой из таких очищенных лигандов можно называть соединением или практически очищенным соединением.
В методике начального скрининга согласно настоящему изобретению бусины и/или частицы смолы применяют в качестве носителей, содержащих олигомер, функционально присоединенный к указанному носителю. В диагностических наборах или других наборах, содержащих "активные соединения" или "предполагаемые активные соединения", полученные в таком начальном скрининге, системы носителей могут быть расширены до практически любой системы носителей, включая микроматрицы или любую другую известную диагностическую платформу. В указанных случаях необходимо обеспечить, чтобы такие наборы или другие системы носителей, содержащие указанные предполагаемые активные соединения, также содержали или были приспособлены к детектору или способу, обеспечивающему обнаружение лигандов, включающему связывающие лиганд молекулы, присоединенные к таким лигандам. Предпочтительные способы детектирования включают, например, твердофазный ИФА или другие способы, включающие применение меченых вторичных антител.
Носители могут быть изготовлены из любого подходящего материала. Материалы, применяемые для изготовления таких носителей, могут включать, например, стекло, пластик, керамические или полимерные смолы или бусины. Носители также могут включать такие материалы, как никель, латунь, сталь или другие металлы или смеси металлов. Носители также можно кондиционировать, присоединяя к ним линкеры и/или другие средства для связывания с или присоединения к или взаимодействия с лигандом или активной группой в составе лиганда. Такие группы также описаны в патентной публикации США № 2007/0003954. В настоящем изобретении количество частиц смолы или бусин, содержащих отдельные лиганды, связанные с ними или с линкером, а затем с указанным носителем, колеблется от более 100000 до приблизительно 150 млн. Предпочтительное количество, применяемое в способах начального скрининга согласно настоящему изобретению, составляет от 1 до 2 млн лигандов/частиц смолы.
Смолы Tentagel(r) являются наиболее предпочтительными для методологии крупномасштабного скрининга лигандов согласно настоящему изобретению. Эти смолы являются привитыми сополимерами, состоящими из слабосшитой полистирольной матрицы, на которую привит полиэтиленгликоль (ПЭГ или FOB). Смолы Tentagel доступны для приобретения (Rapp Polymere GmbH). Поскольку ПЭГ являются полимером-"хамелеоном" с гидрофобными и гидрофильными свойствами, привитый сополимер демонстрирует модифицированные химические свойства. По данным производителя, в принципе существуют два способа внедрения ПЭГ на модифицированную полистирольную матрицу. Простейшая процедура иммобилизации представляет собой присоединение ПЭГ через одну из его концевых гидроксильных групп к хлорметилированному полистиролу в соответствии с классической методологией синтеза простых эфиров или применение других бифункциональных ПЭГ для присоединения к твердому носителю. Производитель обнаружил, что посредством последовательного присоединения ПЭГ непосредственно к матриксу путем анионной привитой сополимеризации на функционализированном сшитом полистироле иммобилизовали цепи ПЭГ с молекулярной массой до 20 кДа. Оказалось, что привитые сополимеры с цепями ПЭГ приблизительно 2000-3000 Да оптимальны по отношению к кинетической скорости, подвижности, набуханию и емкости смолы. Поскольку ни одна методика полимеризации не обеспечивает получения монодисперсного ПЭГ, содержащего более 10 этиленоксидных единиц, теоретически не существует способа внедрения монодисперсных цепей ПЭГ, содержащих более 10 этиленоксидных единиц, в смолу, или получения монодисперсного ПЭГ путем прямой полимеризации на полистирольном каркасе (монодисперсность определяется как ПЭГ без распределения по молекулярной массе). Указанные привитые сополимеры стабильны при давлении и могут применяться в периодических процессах, а также в условиях непрерывного потока. Указанный сополимер содержит приблизительно 50-70% ПЭГ (мас./мас.). Свойства указанных полимеров в значительной степени определяются свойствами ПЭГ и
преобладают над свойствами полистирольной матрицы.
Устройство химической библиотеки или пептидной библиотеки по принципу "одна бусина - одно соединение" важна для знания количества бусин, доступных при определенном количестве смолы, а также емкости одиночной бусины. В табл. 2 приведены некоторые размеры частиц и их сопоставление с соответствующей емкостью одиночной бусины. Расчеты основаны на типичной загрузке бусин Tentagel, которая находится в диапазоне 0,25-0,3 ммоль/г. Для аналитического исследования характеристик и сек-венирования на бусине должно быть по меньшей мере 5 пмоль пептида, связанного со смолой. С целью оценки оптимального количества смолы для библиотеки, которое можно обработать экономически, следует учитывать размер бусин и емкость бусин. По отношению к однородности процесса диффузии и кинетической скорости, а также для анализа и количественной оценки одиночной бусины, все бусины, использованные авторами, демонстрировали очень узкое распределение по размеру.
Таблица 3
смола
размер [мкм]
бусин/г
емкость/бусину
TentaGel NH2
750 мкм
4.62 х 103
65 нмоль
TentaGel NH2
500 мкм I
1,5 хЮ4
19нмоль
TentaGel NH2
300 мкм 1
6,4 х 104
I 4 нмоль
TentaGel NH2
200 мкм
2,15 х 105
1,3 нмоль
TentaGel NH2
130 мкм |
8,87 х 105
i 280 - 330 пмоль
TentaGel NH2
90 мкм i
2,86 х 106
1 80- 100 пмоль
TentaGel M NH2
35 мкм ]
4,55 х 107
! 5,5 пмоль
TentaGel M NH2
20 МКМ !
2,.4х 108
1,0 пмоль
TentaGelMNH2
10 мкм
1,95 х 109
0,13 пмоль
Корреляция размера частиц, количества бусин на 1 г смолы и емкости одиночной бусины. Расчет емкости одиночной бусины основан на емкости 0,25-0,3 ммоль/г смолы.
Существует несколько типов смол Tentagel, демонстрирующих заданные свойства в зависимости от их применения.
Смолы Tentagel S.
Полиэтиленгликолевый спейсер присоединен к полистирольной цепи через алкильную связь. Указанная связь устойчива к действию кислот или оснований. Указанный тип смолы представляет собой смолу стандартного типа, применяемую при синтезе пептидов, твердофазном органическом синтезе или комбинаторной химии. Смолы Tentagel PAP.
ПЭГ присоединен к полистирольному каркасу через бензильную эфирную связь. Указанная бен-зильная эфирная связь чувствительна к агрессивным кислотам, например 100% ТФУК или смесям ТФУК/FMSBr.
Указанные специально разработанные смолы применяют для процедур иммунизации или для синтеза ПЭГ-модифицированных производных (продуктов, присоединенных через ПЭГ); при воздействии агрессивных кислот ПЭГ-спейсер отщепляется вместе с синтезированным соединением от твердого носителя с получением ПЭГ-модифицированных растворимых соединений в условиях твердофазного синтеза (например, ПЭГ-модифицированных пептидов). Смолы Tentagel N.
Полиэтиленгликолевый спейсер присоединен к полистирольному каркасу через бензильную слож-ноэфирную связь. Указанные специально разработанные смолы применяют в химии олигонуклеотидов для синтеза олигонуклеотидов в небольших и крупных масштабах. По сравнению со стеклом с регулируемой плотностью емкость увеличивается в 10 раз.
Поскольку смолы Tentagel являются сополимерами, состоящими из полистирола и полиэтиленгли-коля, следует принимать во внимание химические и физико-химические свойства обоих исходных полимеров.
ПЭГ сам по себе является гигроскопичным полимером. Как известно из литературы, сложные эфи-ры ПЭГ не очень стабильны и легко гидролизуются. В зависимости от условий хранения и времени хранения, ПЭГ сам по себе можно окислить по полиэфирной цепи с образованием пероксидов или сложных эфиров. Затем обработка кислотой или основанием гидролизует образовавшиеся сложные эфиры ПЭГ, что приводит к небольшой "утечке ПЭГ". Указанную утечку можно зарегистрировать с помощью МС или ЯМР как ПЭГ и примеси в конечном продукте. Эти химические свойства присутствуют у всех ПЭГ и полимеров на основе ПЭГ.
032582
Таблица 4
TentaGel S : TentaGel R:
"S" означает стандартную смолу, пригодную для широкого спектра вариантов применения, используемую в периодических и проточных системах.
Специально разработанная смола для синтеза в исследовательских целях. Смола демонстрирует повышенный объем при набухании, но менее устойчива к давлению. Хорошо подходит для синтеза крупных пептидов и проблемного синтеза.
TentaGel HL: TentaGel MB:
Этот вариант TentaGel с высокой загрузкой объединяет существенно повышенную емкость с достоинствами смол TentaGel
Макробусины TentaGel выделяются необычно большим диаметром и
высокой емкостью частиц, основанной на технологии TentaGel, и предназначены для синтеза на одиночной бусине и анализа одиночных бусин.
TentaGel N :
Смола этого типа предназначена для автоматического крупномасштабного синтеза олигонуклеотидов.
TentaGel J :
Смола этого типа разработана для полимерных иммуноконъюгатов.
TentaGel M :
Микросферическая форма частиц этой смолы TentaGel размером 10, 20, 30 мкм и ее монодисперсность обеспечивает применение в автоматических сортировщиках, для создания очень крупных библиотек, высокоскоростного синтеза и т.д.
TentaGel В :
Бифункциональные смолы TentaGel, в которых реакционноспособные сайты на внешней поверхности бусин перпендикулярны реакционноспособным сайтам во внутреннем объеме бусин, а также гибридные смолы для последовательного отщепления.
В дополнение к бусинам Tentagel, для получения библиотек типа "один лиганд на бусину" можно применять другие смолы и/или частицы. Например, можно применять слабосшитые полистирольные смолы или полиамидные смолы. Группа, соединяющая носитель с бусиной смолы, может представлять собой неотъемлемую часть твердофазного синтеза. Линкер представляет собой специализированную блокирующую группу, в том смысле, что большую часть времени линкер связывает функциональную группу только для того, чтобы она появилась в конце синтеза. Линкер не должен быть подвержен действию реагентов, применяемых для модификации или удлинения присоединенного соединения. И, наконец, этап отщепления должен протекать быстро и с хорошим выходом. Лучший линкер должен обеспечивать присоединение и отщепление с количественным выходом
В некоторых аспектах носитель может представлять собой бусину, планшет, тест-полоску, фильтр, мембрану, стержень или лунку. Обнаружение может включать РИА, ФИА, твердофазный ИФА, вестерн-блоттинг, проточную цитометрию, FRET или поверхностный плазмонный резонанс. Линкеры на основе карбоновых кислот.
Первая линкерная группа, использованная для синтеза пептидов, носит имя родоначальника твердофазного синтеза. Смола Меррифильда представляет собой сшитый полистирол, модифицированный хлорметильной группой. Карбонильная группа присоединена путем нуклеофильного замещения хлорида карбоксилатом цезия в ДМФ. Расщепление для регенерации карбоновой кислоты обычно осуществляют с помощью фтористого водорода.
Второй класс линкеров, применяемых для карбоновой кислоты, представляет собой линкер Ванга. Указанный линкер обычно присоединяют к сшитому полистиролу, Tentagel и полиакриламиду, получая смолу Ванга, разработанную для синтеза пептидных карбоновых кислот с использованием стратегии Fmoc-блокирования, и в связи с принципом использования активированного бензилового спирта продукт - карбоновую кислоту можно отщеплять с помощью ТФУК. Разработана более кислотолабиль-ная форма смолы Ванга. Смола SASRIN обладает структурой, аналогичной линкеру Ванга, но с добавлением метоксигруппы для стабилизации иона карбония, образующегося при кислотном отщеплении.
Карбоксамидные линкеры.
Линкер Ринка обычно предпочтителен для получения первичного карбоксамида при твердофазном синтезе; в настоящем изобретении этот линкер применяют при производстве или повторном синтезе выявленных соединений ("активных соединений") или предполагаемых выявленных соединений ("активных соединений"), полученных при первичном скрининге согласно изобретению. В таких случаях цисте-ин является первым мономером, взаимодействующим с линкером Ринка, а затем процесс включает либо добавление следующего мономера для получения олигомера, либо последующего субмономерного реактива для получения олигомера. Повышенная чувствительность линкера Ринка к кислоте является следствием двух дополнительных электронодонорных метоксигрупп. При получении первичного карбоксамида исходный материал присоединяют к линкеру в виде карбоновой кислоты и после синтеза отщепляют от смолы с помощью ТФА.
После применения смолы Ринка для получения карбоксамида следует ТФУК-катализируемое отщепление.
Спиртовые линкеры.
Гидроксильный линкер на основе тетрагидропиранильной (ТНР) блокирующей группы разработан Thompson and Ellmann. Все виды спиртов легко присоединяются к дигидропирану, и полученная ТНР-блокирующая группа устойчива к действию сильного основания, но легко расщепляется кислотой. Этот линкер присоединяют к смоле Меррифильда. Тритильная группа является хорошей кислотолабильной блокирующей группой для большого количества гетероатомов. Тритильную группу использовали для присоединения спиртов при синтезе библиотеки р-меркаптокетонов.
Карбаматные и аминные линкеры.
Карбаматный линкер использовали для синтеза комбинаторной библиотеки из 576 полиаминов, изготовленной при поиске ингибиторов трипаносомных паразитарных инфекций. Исследовали два линкера. Один из них был основан на гидроксиметилбензойной кислоте 1, а к другому была добавлена элек-тронодонорная группа 2. Последний линкер обеспечивал отщепление с помощью ТФУК, в то время как первый мог расщепляться в агрессивной кислой среде.
о о
Очень полезный линкер разработан недавно для получения третичного амина (третичные амины часто используют в молекулах лекарств). Первичные и вторичные амины внедряют в линкер путем реакции Майкла. Амин можно алкилировать, получая ион четвертичного аммония, связанный со смолой. В умеренно щелочных условиях происходит элиминирование Хоффманна с получением третичных аминов высокой чистоты.
Бесследовые линкеры.
В некоторых случаях исходные материалы загружают на смолу в одной из форм, например в виде карбоновой кислоты, а отщепляют в другой форме, например карбоксамида. Это в особенности приемлемо, если для соединения-мишени требуется функция высвобождения. (Пептиды неизменно содержат карбоновую кислоту или карбоксамид.) В то же время рост интереса к комбинаторным библиотекам низкомолекулярных соединений, не являющихся пептидами, выявил необходимость в линкерах нового типа. Указанные линкеры проявляют неспецифические функции после расщепления. Бесследные линкеры называются так потому, что анализ конечного соединения не обнаруживает следа присоединения к твердой фазе.
Образцы.
Как обсуждалось ранее, биологические жидкости сложного состава, подготовленные для анализа в процессе согласно настоящему изобретению, включают или могут включать множество потенциальных биомаркеров, включая маркеры, экспрессирующиеся на клетках (неадгезивных клетках, в том числе Т-клетках или других иммунных эффекторных клетках), микроорганизмы, белки, пептиды, липиды, полисахариды, низкомолекулярные соединения, органические молекулы, неорганические молекулы, биологические молекулы, и в том числе любые обнаруживаемые или регистрируемые молекулы в такой среде
сложного состава. В предпочтительном варианте реализации такие маркеры представляют собой антитела и, в частности, являются антителами, генерируемыми в результате заболевания или состояния. В предпочтительном варианте реализации источником таких маркеров являются физиологические жидкости, например сыворотка, плазма, слюна или другие жидкости или образцы, полученные от пациента или животного или организма. Каждый образец или ткань или биологический образец или образец, происходящий из окружающей среды, или полученный образец кондиционируют или обрабатывают или разбавляют, или иным способом подготавливают для начального скрининга либо любого последующего скрининга указанного образца с применением предполагаемых выявленных соединений ("активных соединений") или лигандов, обладающих сродством к таким биомаркерам. Образцы разбавляют в соответствии со способами, приведенными здесь, с целью обеспечить или допустить достаточное различие между фоновыми уровнями или шумом и сигналами, ассоциированными со связыванием лиганда с связывающей лиганд молекулой.
Время и/или условия, необходимые для воздействия лигандов/носителей на такие образцы, зависят от конкретного образца и других факторов. Предпочтительные условия для процесса согласно настоящему изобретению дополнительно описаны в данном документе. Почти во всех случаях после воздействия биологической жидкости на крупную библиотеку лигандов и/или лиганды или наборы, полученные из такой библиотеки, применяют этапы промывки или элюирования и другие средства кондиционирования. Применяют водные растворы, в том числе буферные растворы, например HEPES-буфер, Iris-буфер или физиологический раствор с фосфатным буфером. Системы носителя также можно обработать энер-гопоглощающими материалами для облегчения десорбции или ионизации "комплекса" с поверхности носителя. Кроме того, применяют химические средства для отсоединения или удаления комплексов "лиганд - связывающая лиганд молекула" с носителя.
Способы детектирования комплексов "лиганд - связывающая лиганд молекула" на носителе включают фотометрические и нефотометрические способы. Такие способы включают обеспечение того, что указанный процесс включает способ для детектирования и измерения поглощения, флуоресценции, показателя преломления, поляризации или светорассеяния. Сюда относятся прямые и/или косвенные средства для измерения таких параметров. Способы, использующие флуоресценцию, включают применение флуоресцентных маркеров в иммунологических способах, например твердофазном ИФА или сэндвич-анализе. Способы, использующие показатель преломления, включают поверхностный плазмонный резонанс (SPR), способы использования дифракционных решеток (например, сенсоры с однородным решеточным выводом, оптические сенсоры с опросом по длине волны (WIOS) и дифракционные решетки с линейно меняющимся периодом), резонансное зеркало и интерферометрические методики. Способы, использующие поляризацию, включают эллипсометрию. Кроме того, можно использовать способы на основе светорассеяния. Другие средства для мечения и/или разделения и/или детектирования могут также включать магнитные средства. Можно применять магнитно-резонансную томографию, ионную спектрометрию в газовой фазе, МРТ.
Анализ полученных данных, как правило, включает количественную оценку сигнала, обусловленного обнаруженным биомаркером, по сравнению с контролем или эталоном. Указанные данные можно анализировать с помощью любого подходящего средства. Для сбора и анализа данных можно применять компьютеры и компьютерные программы. Бусины и/или другие носители можно кодировать с помощью компьютера в целях идентификации. Анализ данных включает анализ интенсивности сигнала в условиях данного анализа или способа детектирования. Лиганды, связывающие лиганд молекулы или эталонные молекулы и/или молекулы для вторичного детектирования можно метить радиоактивной меткой или обнаруживаемой молекулой. Специалист в данной области техники может оценить различия и/или отличие между образцами биологической жидкости, содержащими биомаркеры, ассоциированные с заболеванием, и контрольными образцами или образцами от здорового пациента, которые не содержат таких маркеров. Специалист в данной области техники также может определить в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, наличие ложноположительных или других выявленных соединений ("активных соединений"), которые являются или могут обнаруживаться в контрольных образцах для учета и/или удаления таких "активных соединений", и специалист в данной области техники может в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, продолжить процесс определения или поиска биомаркеров, ассоциированных с заболеванием, в образцах от пациентов с указанным заболеванием или состоянием. "Детектирование" таких выявленных соединений ("активных соединений") во всех случаях осуществляют с помощью средства для определения связывания лиганд-связывающей молекулы, например биомаркера, ассоциированного с заболеванием, или другого маркера, с лигандами в библиотеке лигандов, например, описанной в настоящем документе.
Биомаркеры, ассоциированные с заболеваниями и/или состояниями, приведенными в настоящем документе, варьируют в зависимости от конкретной стадии заболевания и/или состояния конкретного пациента или животного или другого исследуемого организма. В большинстве случаев ожидается, что лиганды, являющиеся предполагаемыми активными соединениями и соединениями, приведенными здесь, имитируют природный антиген, в первую очередь инициирующий иммунный ответ и/или образование антител или иммунных клеток. Настоящее изобретение и процесс скрининга, приведенные в на
стоящем документе, не требуют знания конкретного антигена или антитела, генерируемых в ответ на антиген. В то же время лиганды могут быть полезны сами по себе в качестве вакцин или лекарств-кандидатов в дополнение к применению при скрининге и в диагностических способах, приведенных в настоящем документе. Таким образом, настоящее изобретение включает соединения и фармацевтические композиции.
Скрининг пептоидов.
Для скрининга пептоидной комбинаторной библиотеки "одна бусина - одно соединение" (ОВОС) получают от десятков тысяч до миллионов бусин, несущих пептоиды, а затем смешивают их с биологическим образцом сложного состава. Начальный биологический образец сложного состава предпочтительно является контрольным образцом, а последующий биологический образец сложного состава, обработанный библиотекой лигандов после "удаления" из нее контрольных "активных соединений", затем обрабатывают и/или подвергают скринингу с биологическим образцом сложного состава больного. Затем обнаруживают, идентифицируют и выделяют и/или оценивают характеристики лигандов/бусин, взаимодействующих по меньшей мере с одним биомаркером, ассоциированным с заболеванием. В предпочтительном варианте реализации применяют протокол скрининга Tentagel, включающий (1) получение бусин, (2) скрининг сложной биологический жидкости и (3) обнаружение выявленных соединений ("активных соединений").
Скрининг пептидов.
Для скрининга пептидной комбинаторной библиотеки "одна бусина - одно соединение" (ОВОС) получают от десятков тысяч до миллионов бусин, несущих пептиды, а затем смешивают их с биологическим образцом сложного состава согласно процессам, описанным в настоящем документе. Затем идентифицируют и выделяют бусины, взаимодействующие с биомаркером, ассоциированным с заболеванием, для определения структуры соединения. Например, можно выполнить скрининг с помощью ОВОС-библиотеки пептидов с использованием стрептавидина (SA) в качестве белка-зонда, меченного красным флуоресцентным красителем, и с применением оборудования для проточной сортировки COPAS BIO-BEAD для отделения флуоресцентных бусин от нефлуоресцентных; см. Manmi et al., J. Comb. Chein., 2009, 11 (1), p. 146-150. Красные красители, которые можно применять, представляют собой АТТО 590 и Texas Red. После инкубирования библиотеки с конъюгатом SA-красный флуоресцентный краситель получают положительные бусины, обусловленные взаимодействием пептид-SA. Бусины анализируют вре-мяпролетной масс-спектрометрией с ионизацией лазерной десорбцией и использованием матрицы (MALDI-TOF MS). Таким образом, пептидные библиотеки можно использовать аналогично описанному в настоящем документе способу с применением пептоидов, причем первоначальный контроль образцов биологической жидкости используют для удаления лигандов/бусин выявленных соединений ("активных соединений") из исходной библиотеки соединений, а затем используют оставшиеся члены библиотеки для скрининга любых "активных соединений" в образце сложной биологический жидкости, взятой у больного. Указанные активные соединения являются предполагаемыми выявленными соединениями, дальнейшую обработку которых осуществляют с применением любых диагностических наборов.
Аналогичным образом, любой лиганд можно подвергать скринингу с применением бусин или носителей и процессов, описанных в настоящем документе. Указанные лиганды включают, в дополнение к пептоидам или пептидам, нуклеиновые кислоты, олигомеры, полисахариды, низкомолекулярные соединения и/или любую их комбинацию, которую можно встроить в библиотеки и использовать для скрининга сложной биологический жидкости в условиях, приведенных в настоящем документе.
Наборы и средства диагностики.
Любое из соединений или композиций, описанных здесь, можно в дальнейшем применять в диагностических наборах в клинических или лабораторных условиях. Указанные наборы могут варьироваться от простых диагностических анализов, осуществляемых на месте, до сложных и многоканальных инструментов или зондов. Системы носителей и "упаковка", окружающая внутреннюю часть системы носи-тель/лиганд, могут быть выбраны из современных коммерческих наборов, предназначенных для включения предполагаемых выявленных соединений ("активных соединений") и/или повторно синтезированных выявленных соединений ("активных соединений"), установленных на таких подходящих платформах, либо их можно применять в диагностических наборах новой конструкции. Комплекты, как правило, снабжены всеми подходящими реагентами и инструкциями по применению наборов для скрининга и/или диагностики конкретного заболевания или состояния согласно назначению набора. Любой такой набор или способ включает по меньшей мере одно предполагаемое активное соединение или лиганд, идентифицированный в соответствии со способом скрининга, приведенным в настоящем документе. Указанный лиганд или множество лигандов можно выбрать из того же лиганда или смеси лигандов, которые включают соединения согласно настоящему изобретению. Указанные лиганды можно выбрать на основании их сродства к биомаркеру, ассоциированному с одним конкретным болезненным состоянием или группой или категорией заболеваний или состояний. Предпочтительными лигандами являются пептоидные лиганды. Наборы также могут содержать инструкции для врачей, диагностирующих конкретное заболевание или состояние, и специфические этикетки для определенного набора и болезненного состояния. Таким образом, настоящее изобретение включает комбинацию комплекта, включающего все необходи
мые компоненты, например предполагаемые пептоиды или лиганды, обнаруженные при начальном скрининге с использованием любой из библиотек, описанных в настоящем документе и/или известных в соответствии с конкретными способами, приведенными здесь, и инструкций и этикеток. Кроме того, предполагается, что конкретные процессы, способы и материалы, описанные в настоящем документе, можно применять в клинических и лабораторных условиях под наблюдением квалифицированного оператора. Наборы и/или инструменты или оборудование включают лиганды, например пептоиды, специфические для антител и/или клеток, ассоциированных с заболеванием. "Набор" может включать полный диагностический набор и/или набор для скрининга, либо "набор" может включать компоненты или субкомпоненты, содержащие или включающие диагностические пептоиды, антитела, обнаруженные и охарактеризованные посредством таких пептоидов, или нативные антигены, обнаруженные и очищенные и/или охарактеризованные в результате взаимодействия с аутоантителом. Такие антитела и очищенные антигены составляют часть настоящего изобретения. Способы диагностики.
Библиотеки лигандов согласно настоящему изобретению применяют для поиска и определения ли-гандов, связывающихся с биомаркерами, ассоциированными с заболеванием. Такие лиганды затем используют в наборах и/или способах, в целом описанных выше, для оценки, скрининга или диагностики болезненных состояний. Указанные диагностические способы обычно включают скрининг и поиск биомаркеров, ассоциированных с заболеванием, которые включают антитела и/или другие биологические маркеры. Как указано выше, эти антитела можно дополнительно идентифицировать и исследовать с использованием лигандов согласно настоящему изобретению на подходящих колонках для выделения или удаления таких антител из образцов крови. Указанные антитела можно, в свою очередь, использовать в качестве зондов для детектирования нативного антигена, связанного с таким антителом. Таким образом, настоящее изобретение включает как антитела, так и очищенные антигены, связанные с такими антителами, и обнаруженные, выделенные и охарактеризованные с применением способов согласно настоящему изобретению.
Наборы и/или другие средства для скрининга и/или диагностики болезненных состояний следует, в первую очередь, оценивать по образцам, взятым у пациентов. Указанные образцы, взятые у пациента, могут происходить от нормальных контрольных образцов или образцов от пациента, где указанный пациент болен или у которого подозревают указанное заболевание или состояние. У пациента могут быть другие симптомы, связанные с заболеванием, кроме "присутствия" биомаркера, ассоциированного с заболеванием. Пациент может находиться на ранней стадии заболевания, может вообще не страдать заболеванием или состоянием, или может находиться на поздней стадии конкретного заболевания. В любом клиническом контексте и в рамках соответствующих руководств контрольные образцы, образцы от пациента и клинические образцы можно представить в соответствии со слепым принципом, а затем оценить с помощью соединений согласно настоящему изобретению. Данные, полученные в результате скрининга, можно анализировать после раскрытия с целью поиска статистически значимых результатов или корреляций с известными или базовыми данными о любом конкретном пациенте или группе пациентов. Настоящее изобретение включает способ скрининга на присутствие заболевания или состояния, включающий в себя (1) скрининг биологического образца от пациента с применением по меньшей мере одного соединения согласно настоящему изобретению: (2) скрининг контрольного биологического образца при тех же условиях с применением по меньшей мере одного соединения, и (3) сравнение контрольных данных здорового субъекта с данными для пациента с целью определения наличия или отсутствия биомаркера, ассоциированного с заболеванием. Группу пациентов и образцов от пациентов, которые больны или у которых подозревают заболевание X, можно подвергнуть скринингу с применением набора или диагностического зонда, содержащего по меньшей мере одно соединение согласно настоящему изобретению, а данные, полученные по каждому пациенту, можно использовать в зависимости от конкретного случая с целью подтверждения или валидации болезненного состояния или отсутствия такового. Такие данные, полученные согласно настоящему изобретению, можно использовать в сочетании с полной известной информацией о конкретном пациенте с целью оценки состояния пациента, а также обеспечения указаний для врача, назначающего лечение. "Информацию", полученную в результате любого такого скрининга, можно использовать при клинических испытаниях для оценки отдельных пациентов, получающих медикаментозное лечение. Таким образом, настоящее изобретение включает способ оценки хода клинических испытаний, включающий применение скрининга, выполненного в соответствии со способами, описанными в настоящем документе. В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу скрининга или диагностики раннего болезненного состояния, включающему использование скрининга или соединения, приведенного в настоящем документе, для детектирования биомаркера, ассоциированного с заболеванием. Настоящее изобретение особенно полезно в контексте раннего вмешательства в ход заболевания, причем обнаружение таких биомаркеров, как ожидается, станет возможным задолго до агрессивного прогрессирования заболевания. В еще одном контексте ожидается, что раннее вмешательство в ход сердечно-сосудистого заболевания и/или метаболического заболевания, а также неврологического заболевания спасет жизни и предотвратит или сможет использоваться для предотвращения дальнейшего развития таких заболеваний без раннего медицинского вмешательства
или лечения.
Настоящее изобретение также включает способы повышения разрешения или эффективности различий между контрольным или стандартным раствором и биологической жидкостью сложного состава, содержащей биомаркер, ассоциированный с заболеванием. Например, способы включают в себя предварительную подготовку или предобработку или предварительное блокирование системы/сыворотки буферами и/или кондиционирующими агентами, например лизатом Е. coli и/или лизином.
В еще одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способ лечения субъекта, предположительно страдающего от заболевания, включающий (a) обеспечение контакта образца, содержащего антитело, от указанного субъекта с одним или более носителями, присоединяющими к нему пеп-тоид, включающий пептоид формул, приведенных в настоящем документе, (b) обнаружение антител, связанных с указанными пептоидами, и (c) формирование решения по лечению на основании результатов шага (b). Способ может дополнительно включать получение указанного образца от субъекта. Способ может также дополнительно включать постановку диагноза заболевания для субъекта, от которого получен указанный образец, если уровень антитела, связывающегося с пептоидом, больше, чем уровень антитела, наблюдаемый для контрольных здоровых пациентов. Способ может также дополнительно включать формирование решения по лечению для указанного субъекта. Образец можно приводить в контакт более чем с одним пептоидом формул, приведенных в настоящем документе. Образец можно приводить в контакт с многоканальной платформой для целей диагностики множественных болезненных состояний. Носитель может представлять собой бусину, планшет, тест-полоску, фильтр, мембрану, стержень или лунку. Образец может представлять собой кровь, сыворотку, слюну или ЦСЖ. Обнаружение может включать РИА, ФИА, твердофазный ИФА, вестерн-блоттинг, проточную цитометрию, FRET или поверхностный плазмонный резонанс.
Еще один вариант реализации направлен на композицию антител, выделенных из биологической жидкости, являющихся показателем заболевания; в некоторых вариантах реализации указанные антитела выделены путем контакта образца, содержащего такие антитела, с пептоидной композицией, специфически связывающейся с антителами, являющимися показателем заболевания или ассоциированными с заболеванием. Антитела можно удалить, выделить или очистить от других компонентов, не являющихся антителами, и не-D специфических компонентов. Затем антитела можно промыть и/или отделить от агентов, захватывающих пептоиды.
В некоторых вариантах реализации матрицу с пептоидами, изготовленную из пептоидов, обнаруженных с применением способа, описанного здесь, гибридизуют с биологическим образцом, включающим добавку бактериального лизата, например лизата Е. coli. Биологический образец включает контрольный образец и образец, содержащий маркер расстройства центральной нервной системы. Например, стекла микроматриц покрывают камерой для гибридизации и уравновешивают 1XTBST (50 мМ Трис, рН 8,0; 150 мМ NaCl, 0,1% Твин-20) в течение приблизительно 15 мин. Затем стекла блокируют бактериальным лизатом при концентрации, по меньшей мере, не превышающей или приблизительно равной 0,5, 1, 1,5, 2 мг/мл лизата. Лизат удаляют, а предметные стекла инкубируют приблизительно с 1 мл биологического образца (содержащим приблизительную концентрацию белка 5, 10, 15, 20 или 25 дг/мл, включая все диапазоны и значения между ними) в бактериальном лизате при осторожном встряхивании. Затем микроматрицы промывают 1XTBST и гибридизуют с меченым антителом против IgG (например, при разведении 1:400). Затем стекла промывают соответствующим буфером. Стекла высушивают с использованием центрифуги (например, 5-мин центрифугирование при 1500 об/мин) и сканируют на сканере микроматриц, например, с использованием 635-нм лазера при 100% мощности и усилении трубки фотоумножителя 600 или 650. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу снижения фонового шума антисывороток в диагностическом тесте, включающему обработку контрольного образца плазмы и образца от больного лизатом E.coli и обеспечение контакта указанных образцов с матрицей пептоидов или лигандов. Считается, что этот процесс можно использовать для обработки носителя любой матрицы, используемой для детектирования и различения антител в сыворотках в контексте сравнения контрольного образца и образца от больного.
Предполагается, что любой способ или композицию, описанные в настоящем документе, можно осуществить по отношению к любому другому способу или композиции, описанным в настоящем документе.
Использование форм единственного числа в сочетании с термином "включающий" в формуле изобретения и/или описании может означать "один", но также согласуется со значением "один или более", "по меньшей мере один" и "один или более одного".
Предполагается, что любые варианты реализации, рассмотренные в данном описании, можно осуществить по отношению к любому способу или композиции согласно настоящему изобретению, и наоборот. Кроме того, композиции и наборы согласно настоящему изобретению можно применять для осуществления способов согласно настоящему изобретению.
В данной заявке термин "приблизительно" используется для указания того, что значение включает изменения, обусловленные внутренней ошибкой устройства, способа, используемого для определения указанного значения, или изменчивость, существующую среди подопытных субъектов.
Вакцины и лекарственные средства
Понятно, что любое из предполагаемых выявленных соединений ("активных соединений") или пеп-тоидов, обнаруженных в ходе процесса, приведенного в настоящем документе, также может являться терапевтическим лекарственным средством или вакциной-кандидатом. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу для детектирования лекарств-кандидатов или вакцин, включающему использование скрининга в соответствии со способами, описанными в настоящем документе.
Пример 1. Получение библиотеки.
Протокол синтеза пептоидов (цистеин-пептоидов или метионин-пептоидов).
В следующем примере продемонстрировано получение библиотек пептоидов согласно настоящему изобретению. Материалы, используемые в примере, включали химические колбы или стаканы, пластиковые пробирки, 10-15 3-мл шприцов с иглами. Латексные перчатки, 10-15 15-мл полипропиленовых пробирок и микропипетки с наконечниками, устойчивыми к действию растворителей (1000 мкл), стеклянные пипетки и бусины из смолы. Использованные химические вещества и/или реагенты включали ^^диметилформамид, бромуксусную кислоту (ВМА), безводный диметилформамид, пиперидин, аце-тонитрил, 3-диизопропилкарбодиимид (DIC), трифторуксусную кислоту, 5(6)-карбоксифлуоресцеин, дихлорметан (ДХМ) и 4-метилморфолин (NMM). При изготовлении каждой библиотеки также применяли различные амины, а также HBTU (гексафторфосфат тетраметилурония) и триэтилсилан.
Получение пептоидов.
Концентрацию каждого амина, используемого в процессе, вычисляли с использованием следующей формулы: V-FW/d/1000x2Mx5 мл. Процедура.
Этап 1. Набухание бусин смолы.
250 мг бусин смолы помещали в чистую сухую реакционную колбу, добавляли к бусинам 5 мл водного ДМФ и оставляли набухать в течение 1 ч или менее. Затем бусины несколько раз (2 или 3 раза) промывали ДМФ в вакууме.
Этап 2.
Этапы (b)-(d) пропускали с использованием "неблокированных бусин" (например, Tema-Gel).
20% раствор пиперидина (основание) с использованием безводного ДМФ в качестве растворителя использовали в следующем процессе.
Следующий способ, включающий этапы (b)-(d), осуществляли 2 раза с использованием "защищенных бусин".
(b) К защищенным бусинам добавляли 2,5 мл 20% раствора пиперидина.
(c) После добавления пиперидина реакционную колбу помещали на качалку/инкубатор в течение 20 мин при 200 об/мин и 25°C.
(d) Реакционную колбу промывали 8-10 раз 5 мл водного ДМФ.
Кроме того, получали следующие растворы:
1) 468 мг Fmoc-Cys(Trt)-OH в безводном ДМФ (объем 2 мл) (раствор А),
2) 161,6 мг NMM в 2 мл безводного ДМФ,
3) 303,2 мг HBTU добавляли во флакон с NMM (раствор В). Добавление HBTU/HMM и Fmoc-Cys.
1 мл раствора А и раствора 8 добавляли к бусинам - (HBTU/NMM) и Fmoc-Cys (Trt)-OH) и встряхивали в течение 1 ч.
Бусины промывали в ДМФ 5-10 раз.
К бусинам добавляли оставшийся 1 мл раствора растворов А и В, встряхивали в течение 1 ч и затем снова промывали в ДМФ 5-10 раз.
Кроме того, получали следующие растворы: 20% пиперидин (в безводном ДМФ),
2 М бромуксусную кислоту, 50% D1C/А. ДМФ,
2 М раствор каждого амина.
Следующие этапы (а)-(с) выполняли 2 раза, добавляли 2,5 мл 20% раствора пиперидина; (b) реакционную колбу встряхивали при 200 об/мин и 25°C, а затем (с) промывали бусины ДМФ от 8 до 10 раз. Получали 10 мл раствора 2 М бромуксусной кислоты. Также получали 10 мл раствора 50% 3,2 DIC/безводного ДМФ (об./об.).
Для каждого амина и каждой библиотеки получали 2 М растворы аминов. Для синтеза пептоида каждый раз при добавлении амина к цепи пептоида использовали 1 мл 2 М рабочего раствора. Этап 3.
1 мл бромуксусной кислоты добавляли в реакционный сосуд.
(b) затем добавляли 1 мл 50% раствора DIC/ДМФ и полученный раствор подвергали (с) действию СВЧ в течение 15 с при 10% мощности.
Этап (с) проводили два раза, вращая колбу из стороны в сторону между этапами СВЧ-обработки.
После каждого этапа СВЧ-обработки выпадал белый осадок. Затем бусины промывали ДМФ 8-10
раз.
Этап 4.
1 мл первого амина в последовательности добавляли в реакционную колбу, содержащую бронированный интермедиат предыдущего этапа, и встряхивали сосуд для равномерного распределения амина по бусинам. Затем инициировали реакцию с помощью 2-кратной обработки СВЧ в течение 15 с при 10% мощности. Затем прореагировавшие бусины промывали водным ДМФ 8-10 раз.
Этапы 3 и 4 повторяли до добавления всех аминов, получая целевые пептоиды.
Этап 5.
Затем промывали бусины дихлорметаном (ДХМ) 3 раза и позволяли им высохнуть. Этап 6.
Затем отщепляли пептоиды от бусин с помощью 95% раствора ТФУК (5 мл). Затем отделяли пептоиды от бусин, промытых растворителем (CH3CN и вода) для удаления остаточных пептоидов. Для удаления остаточной ТФУК использовали газообразный аргон. Затем пептоиды при необходимости лиофи-лизировали, исследовали и очищали.
Вышеуказанные условия реакции можно изменить в соответствии с необходимостью в зависимости от необходимых количеств конкретной композиции бусин.
На фиг. 1-5 в целом продемонстрировано получение библиотеки согласно настоящему изобретению для заболевания, например диагностики БА, диагностики рака поджелудочной железы и волчанки. В целом, бусины, несущие аминогруппу, присоединяют к аминокислотному остатку путем осуществления ряда этапов, применяя стандартные реагенты в области химии пептидов, взаимодействующие с активированной карбонильной группой, несущей галогенидную группу, которая затем взаимодействовала с мономерным амином, несущим группу R. Этапы цикла 2 и 3 повторяли, как показано на фиг., получая обширные библиотеки пептоидов, содержащие от 1 до 2 млн различных лигандов. Библиотека для начального скрининга, полученная на смоле или бусинах Tentagel, обычно содержала аминокислоту метио-нин в качестве первого мономера в цепи. Автор настоящего изобретения использовал такую аминокислоту для облегчения отщепления от бусин или смолы в отсутствие расщепляемого линкера. Для получения цистеинсодержащих пептоидов с линкерами, не нуждающихся или не требующих использования метионина в качестве первой аминокислоты, использовали смолу Ринка. Цистеинсодержащие пептоиды обычно повторно синтезировали после детектирования предполагаемых выявленных соединений (активных соединений) начальном скрининге. Сульфогруппа цистеина обеспечивала реакцию пептоидной цепи, например, с другой реакционноспособной группой на носителе диагностической платформы. Повторно синтезированные пептоиды также содержали 1-ил-n-бутиламиногруппу в качестве первой боковой цепи после амина аминокислоты. Считается, что эта группа необходима для экспонирования пептоида и солюбилизации пептоида в водных растворах.
Пример 2. Общая методика скрининга.
160-мкм бусины Tentagel с присоединенными выбранными пептоидами оставляли набухать в течение ночи в ДМФ. Затем бусины десять раз промывали водой Millipore в реакционном сосуде при энергичном встряхивании. Каждый раз добавляли свежую воду Millipore, а при 10-й промывке бусины оставляли на ночь при встряхивании (150-200 об/мин). На следующий день бусины аналогичным образом промывали 1X TBST и оставляли при встряхивании (150-200 об/мин) по меньшей мере на 3 ч.
Затем бусины равномерно распределяли по 15-мл коническим пробиркам из расчета приблизительно 0,5 г на пробирку в 1X TBST. TBST удаляли и в каждую пробирку добавляли 4 мл разбавленной нормальной сыворотки человека. Рабочую сыворотку в 1X TBST распределяли нано-раскапыванием, получая желательную концентрацию 20 мкг/мл. Пробирки, содержащие сыворотку и бусины, затем оставляли перемешиваться на ночь при 4°С в темноте. Затем сыворотку удаляли из пробирок пипеткой и заменяли 4 мл 1X TBST. Затем пробирки медленно переворачивали для повторного суспендирования бусин, а затем оставляли осаждаться. TBST дважды удаляли и вновь добавляли, т.е. в общей сложности осуществляли три промывки с использованием TBST.
Затем получали раствор вторичного антитела путем изготовления раствора 5 мкл антитела козы против IgG человека Qdot 655 в 1 мл 1X TBST. После удаления последнего добавленного TBST от бусин добавляли 4 мл раствора Qdot и оставляли бусины перемешиваться на 2 ч при 4°С в темноте. Затем бусинам позволяли осесть и удаляли раствор Qdot. Затем бусины трижды промывали 4 мл 1X TBST. Затем бусины переносили в чистую чашку Петри и рассматривали под УФ-микроскопом с фильтром DAP I. Удаляли все бусины, окрашенные красным.
После завершения первого скрининга бусины вновь переносили в 15-мл конические пробирки и перемешивали при 4°С по меньшей мере в течение 4 ч, до добавления следующего образца сыворотки. Затем к бусинам добавляли сыворотку от больных аналогично добавлению нормальной сыворотки, за исключением того, что сыворотку разбавляли StartingBlock PBS, а не 1X TBST. Однако исходный рабочий раствор разбавляли 1X TBST для получения необходимой концентрации с помощью нанокапельницы. Добавление сыворотки и вторичного антитела осуществляли аналогично тому, как это делали для нор
мальной сыворотки.
После удаления "активных соединений", характерных для заболевания, их объединяли в 1,5-мл пробирке Эппендорфа и нагревали при 95°С в течение 25-30 мин в 1% ДСН. Затем ДСН удаляли из пробирки и заменяли водой Millipore. Затем бусины перемешивали в течение 15 мин при 4°С. Затем воду заменяли свежей водой и перемешивали бусины в течение еще 15 мин. Затем воду удаляли, заменяли 50/50 раствором ацетонитрил/вода и оставляли перемешиваться в течение еще 15 мин. Затем бусины распределяли по отдельным лункам 96-луночного планшета и оставляли сушиться.
Получали раствор 20-30 мг бромистого цианогена, 500 мкл ацетонитрила, 400 мкл ледяной уксусной кислоты и 100 мкл воды Millipore. 20 мкл указанного раствора добавляли в каждую лунку, содержавшую бусины с выявленными соединениями. Планшет закрывали и оставляли на 16 ч при встряхивании (100 об/мин). Затем снимали крышку и выпаривали раствор для отщепления из лунок. Затем соеди-нения-"активные соединения" по каплям переносили на планшет для МС секвенирования с помощью анализатора 4800 MALDI/TOF/FOF.
На фиг. 6 приведена общая схема методики скрининга, описанная в настоящем документе.
Пример 3. Скрининг болезни Альцгеймера.
Скрининг на магнитных бусинах Tentagel.
500 мг 160-микронных бусин Tentagel (библиотека JC3B) добавляли в 15-мл коническую пробирку. В пробирку добавляли 5 мл ДМФ и оставляли бусины набухать в течение ночи. Затем ДМФ удаляли из пробирки с использованием пипетки и заменяли на 5 мл 1X TBST. Пробирки переворачивали, чтобы перемешать, а потом позволяли постоять дном вниз и удаляли 1X TBST. Еще пять раз добавляли по 5 мл 1X TBST и удаляли.
Образцы нормальной по БА сыворотки готовили путем добавления 4 мл блокирующего раствора ФБР в пробирку с последующим добавлением 7 мкл каждого из четырех отдельных образцов АБ в ту же пробирку. Сыворотку добавляли к промытым бусинам и оставляли бусины и сыворотку перемешиваться в течение ночи при 4°С в темноте. На следующее утро бусины снимали с устройства для перемешивания и позволяли осесть, а затем удаляли сыворотку из пробирки. В пробирку добавляли 4 мл 1X TBST и переворачивали пробирку для перемешивания. Затем TBST удаляли из пробирки пипеткой, заменяли на 4 мл свежего 1X TBST и снова удаляли.
Затем получали раствор бусин DYNA, добавляя 50 мкл перемешанных бусин DYNA с антителами козы против IgG человека в 4 мл 1X TBST. Затем указанную смесь добавляли к промытым бусинам. Затем бусины оставляли перемешиваться на 2 ч при 4°С в темноте.
Скрининг бусин DYNA выполняли без промывки бусин. Пробирку помещали в магнитный держатель и заполняли до краев 1X TBST. Магнит и пробирку медленно взбалтывали в течение 2 мин и позволяли бусинам осесть в магнитный держатель. TBST и свободные бусины, осевшие на дно, тщательно удаляли, не касаясь бусин с выявленными соединениями, прикрепленных к боковым стенкам за счет магнита, и заменяли свежим 1X TBST. Указанный процесс повторяли два-три раза, пока не становились видны бусины, присоединенные к боковым стенкам пробирки. Затем бусины с лигандами-" активными соединениями" объединяли в одной пробирке.
Оставшиеся бусины, не содержавшие выявленных соединений ("активных соединений"), распределяли по 1,5-мл пробиркам, переворачивали и подвергали быстрому импульсному центрифугированию. Супернатант удаляли и заменяли свежим 1X TBST. Указанный процесс повторяли 6-8 раз, пока видимые бусины DYNA не исчезали из раствора бусин/TBST. Бусины с выявленными соединениями промывали аналогичным образом
Бусины вновь объединяли в 15-мл пробирке, добавляли к бусинам нормальную сыворотку аналогично предыдущему описанию и оставляли оседать в течение ночи при 4°С в темноте. Кроме того, 3 мл каждого из четырех нормальных образцов добавляли к 1 мл StartingBlock PBS и полученный раствор добавляли к бусинам DYNA и бусинам с "выявленными соединениями" в пробирке. На следующий день бусины промывали аналогично промывке для нормальной сыворотки.
20 мкл антитела козы против IgG человека, конъюгированного с квантовой точкой 655, разбавляли в 4 мл 1X TBST (20 мкл Qdot в 1 мл 1X TBST на пробирку с "выявленными соединениями") и добавляли к бусинам. Раствор перемешивали в течение 2 ч при 4°С в темноте. Пробирки, содержавшие и не содержавшие выявленных соединений ("активных соединений"), четырежды промывали 1X TBST и выполняли скрининг ярко-красных бусин под УФ-микроскопом. Остальные бусины перемешивали в 4 мл 1X TBST в течение 1 ч и добавляли образец сыворотки больного или после обработки лекарственным средством аналогично образцу нормальной сыворотки. Магнитный скрининг и добавление Qdot выполняли аналогично описанному выше. Затем активные соединения секвенировали на масс-спектрометре MALDI-TOF/TOF.
На фиг. 7 показаны объединенные нормальные контрольные образцы сыворотки, которые в течение ночи инкубировали с бусинами из библиотеки пептоидов (JC3B). Осуществляли первичный скрининг с вторичными антителами на бусинах DYNA с использованием антителами козы к IgG, меченых бусинами DYNA, чтобы удалить неспецифические активные соединения. Эти неспецифические активные соедине
ния затем повторно подтверждали с использованием другого вторичного антитела. В этом случае антитело козы к IgG человека, меченое Quantum Dot 655 (Invitrogen), детектировали с использованием УФ-микроскопа с фильтром DAPI. Активные соединения, на которые указывали окрашенные красным бусины, затем снова подтверждали, синие бусины указывают на бусины, которые не были подтверждены. Процент бусин, прошедших подтверждение, был постоянно низким, поэтому скрининг с бусинами DYNA в итоге прекратили.
На фиг. 8 показана библиотека пептоидов, которую инкубировали с сывороткой пациентов с БА. Затем библиотеку инкубировали с вторичным детектирующим антителом (антитела козы к IgG человека, меченые квантовой точкой Quantum dot 655 (Invitrogen). Бусины с активными соединениями детектировали при помощи УФ-микроскопа с фильтром DAPI, и бусины, окрашенные красным, отбирали как активные соединения для дальнейшего секвенирования для дальнейшего исследования.
Фиг. 9-11 демонстрируют, что после удаления активных соединений болезни из библиотеки пеп-тоидов, осуществляли промывку 1% SDS, чтобы отсоединить активные соединения от всех оставшихся антител. Затем бусины инкубировали с отдельными образцами сыворотки субъекта с заболеванием, а затем антитело козы к IgG человека с Quantum dot 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, пройдут ли активные соединения повторное подтверждение с отдельными образцами. Активные соединения, прошедшие повторное подтверждение, были выбраны для секвенирования.
На фиг. 12 показаны последовательности всех "активных соединений", выбранных при скрининге на болезнь Альцгеймера из библиотеки JC3B.
На фиг. 13 показаны химические структуры предпочтительных высокоаффинных выявленных соединений ("активных соединений"), полученных в скрининге болезни Альцгеймера.
На фиг. 14 показан конкурентный анализ с использованием пептоида ADTG1, который сравнивали с пептоидами ADTG1-42 на микроматрице. Эти данные демонстрируют, что пептоиды ADTG1, 14, 24, 25, 31, 35 и 40 связываются с одним антителом. Проводили одинаковые эксперименты для каждого из пептоидов на матрице, этот процесс позволил установить, что пептоиды связываются с семью различными аутоантителами к антигенам болезни Альцгеймера.
На фиг. 15 показаны последовательности 41 из этих пептоидов, которые расположены, начиная сверху, от более активных к менее активным, и которые разделены на четыре различные группы на основании результатов конкурентного анализа, в котором было обнаружено, что лиганды связываются с четырьмя различными антителами - биомаркерами БА. ADP1-3 были изначально выявлены в микроматричном скрининге (данные не показаны, но они были ранее описаны в патентной публикации США № 2010/0303805). Было обнаружено, что они связываются с двумя различными биомаркерами БА. Было обнаружено, что ADP1 ADP3 связываются с одним антителом, в то время как ADP2 связывался с другим антителом. Новые лиганды, обнаруженные с применением новой методики скрининга согласно настоящему изобретению (все другие лиганды на фиг. 15 и показанные на фиг. 13), также образуют группы, связывающиеся с различными антителами. Были обнаружены два новых биомаркера-антитетела и несколько новых лигандов, связывающихся с одним из антител, включающих антитело, с которым связываются ADP1 и ADP3, и антитело, с которым связываются ADP2.
Результаты анализа БА.
Данные микроматричного анализа с единственным измерением.
Микроматрицы изготовили, как описано в патентной публикации США № 2010/0303805, включенной в настоящий документ посредством ссылки. Стекла микроматриц накрывали камерой для гибридизации и уравновешивали 1X TBST (50 мМ Iris, pH 8,0, 150 мМ NaCl, 0,1% Твин-20) в течение 15 мин. Затем стекла блокировали 1 мл блокирующего буфера в течение 1 ч при 4°C. Блокирующий буфер удаляли и инкубировали стекла с 1 мл сыворотки (20 мг/мл) в течение 16 ч при 4°C и аккуратном встряхивании. В альтернативном способе стекла блокировали 1 мл лизата Е. coli (1,5 мг/мл) в течение 1 ч при 4°C. Лизат Е. coli удаляли и инкубировали стекла с 1 мл сыворотки (15 мг/мл) в лизате Е. coli (1,5 мг/мл) в течение 18 ч при 4°C и аккуратном встряхивании. Затем микроматрицы трижды промывали 1X TBST и гибридизовали с антителом против IgG, меченным Alexa-647 (5 мг/мл), в течение 2 ч на орбитальном шейкере при 4°C. Камеры кассеты снимали со стекол микроматриц и промывали 1X TBST (3x15 мин), а затем 0,1X TBST (1x10). Затем стекла высушивали на центрифуге (5 мин при 1500 об/мин) и сканировали на сканере для микроматриц (Gene Pix Autoloader 4200), используя 635-нм лазер при 100% мощности и усиление трубки фотоумножителя 600 или 650. Все отсканированные изображения анализировали с помощью программного обеспечения Gene Fix Pro 6.0 и Genespring.
Новые пептоиды или лиганды, выстроенные на микроматрицах и протестированные с взятыми у пациентов образцами в соответствии со способом, описанным выше, в слепом исследовании.
На фиг. 16-20 приведены результаты этих скрининговых тестов. Образцы сыворотки брали из группы, включающей 34 пациентов. Результатом для каждого образца было наличие или отсутствие интенсивности, как показано на фиг. 16-18. Два из новых пептоидов (P1aag4 и P1aag2) сравнивали с известными пептоидами ADP3 и ADP2 в той же группе пациентов. Эти результаты демонстрируют прямую кор
реляцию между новыми пептоидами и ставшими известными ранее пептоидами, которые валидировали в немаскированном исследовании, которое подтвердило прямую корреляцию между присутствием ассоциированного с БА антителом и клиническими симптомами заболевания.
На фиг. 16А показаны данные для группы образцов плазмы (20 мкг/мл) от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом P1aag1 на микроматрице. На фиг. 16В показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом P1aag2 на микроматрице.
На фиг. 17А показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом P1aag3 на микроматрице. На фиг. 17В показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом P4aag1 на микроматрице.
На фиг. 18А показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом P1aag5 на микроматрице. На фиг. 18В показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом P1aag6 на микроматрице.
Каждый из этих пептоидов показан также на фиг. 13. P1aag1 - это JC3B-1; P1aag2 - это JC3B-21; P1aag3 - это JC3B-7; P1aag4 - это JC3B-5; P1aag5 - это JC3B-R8 и P1aag6^TO JC3B-R12.
На фиг. 19А показаны данные микроматричного теста ADP2. На фиг. 19В показаны данные микроматричного теста P1aag4 с использованием сыворотки пациента из той же группы пациентов. Имеет место по меньшей мере 90% корреляция между набором данных для ADP2 слева и набором данных для P1aag4 справа.
На фиг. 20А показаны данные, полученные с использованием микроматриц для ADP3. На фиг. 20В показаны данные, полученные с использованием микроматриц для P1aag2 с использованием сыворотки пациента из той же группы пациентов. Имеет место по меньшей мере 90% корреляция между набором данных для ADP3 слева и набором данных для P1aag2 справа.
На фиг. 21 показана валидация применения пептоида (JC3B-R8) в скрининге болезни Альцгеймера на основе бусин. Использовали бусины диаметром 140 мкм и сыворотку в концентрации 40 мкг/мл. Имело место четкое различие между бусинами с заболеванием и без заболевания (нормальный контроль).
На фиг. 50 показана простая схема приготовления и различения пептоидов, которые используются в микроматрицах в сравнении с пептоидами, которые размещали на планшетах для ИФА (ELISA). Схема получения отдельных пептоидов: отдельные бусины раздельно помещают в лунки микротитрационных планшетов и отщепляют пептоиды от бусин с получением концентрированного исходного раствора. Следует отметить, что в каждой лунке теперь расходится единственный вид пептоида. Затем несколько тысяч пептоидов наносят на предметные стекла их химически модифицированного стекла таким образом, что они ковалентно связываются с поверхностью. Из одной синтетической библиотеки можно получить несколько тысяч стекол с высокой степенью воспроизводимости. ИФА получают аналогичным образом за тем исключением, что на поверхности нет цепи ПЭГ, но плотность пептоидов на планшете для ИФА может отличаться от их плотности на микроматрицах.
На фиг. 51 показаны эксперименты ИФА, которые позволяют четко отличить сыворотку здорового контроля от сыворотки больного пациента при разбавлении сыворотки 1:800 с использованием перокси-дазы хрена (HRP), связанной со вторичным антителом, для детектирования комплекса ассоциированного с болезнью антитела с пептоидом. Добавляют бесцветный субстрат, который меняет цвет (на синий) после реакции со связанным ферментом HRP.
На фиг. 52 показаны данные по титрованию, сравнивающие различные БА-пептоиды с помощью твердофазного ИФА при различных разведениях сыворотки пациентов (А) по сравнению с нормальной сывороткой (В). В нормальной сыворотке отсутствуют интенсивные сигналы, и имеет место четкое различие интенсивности всех БА-пептоидов по мере увеличения концентрации от 1:12800 до 1:200.
На фиг. 53 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против пептоида ADP3 для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (Jacksonville, США). UND = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 54 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА (график представляет собой среднее значение результатов для 9 пептоидов) согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (Jacksonville, США). UND = неопределенный. График получа
ли с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 55 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (Jacksonville, США). UND = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным. Эти данные также демонстрируют действие для других деменций в случае, когда в исследовании также участвовали маркированные образцы от пациентов с умеренными когнитивными нарушениями (MCI)/депрессией, и также маркированные образцы пациентов с деменцией с тельцами Леви. Эти данные демонстрируют, что по меньшей мере у трех пациентов с MCI в образцах плазмы были определены антитела, связываемые селективными в отношении БА петоидами согласно настоящему изобретению, в количествах выше 1.
На фиг. 56A-D представлены данные от подгруппы образцов от тех пациентов, у которых были несовпадения в результатах диагностических тестов на основе пептоидов Opko Health с использованием множества пептоидов БА и клиническим диагнозом после предоставления этой информации в демаскированном виде. На фиг. 56А показаны данные для пептоида ADP3 и других в случае пациентов с клиническим диагнозом, у которых, однако, результаты, полученные с пептоидом P1aag4 (Opko), были ниже 1,0 (UND в единственной точке; положительное титрование БА). Все другие пептоиды Opko были положительны по БА (т.е. выше 1.0). На фиг. 56В показано, что все пептоиды Opko были положительны в отношении ассоциированных с болезнью антител у пациентов, которые в данный момент имели диагноз "здоров" (деменция отсутствует), что указывает на предболезнь А. Фиг. 56С демонстрирует, что не один из пептоидов БА Opko не показал интенсивность выше 1 при каком-либо значении разбавления у пациента в клинически диагностированной БА, что указывает на то, что этот пациент страдает какой-то другой формой деменции. Фиг. 56D демонстрирует, что у пациента с положительным клиническим диагнозом БА несколько пептоидов БА Opko не дали положительных результатов по антителам, ассоциированным с болезнью, но два пептоида (P1aag6 и P1aag4) дали положительные результаты, т.е. UND в отдельной точке и UND даже после титрования.
На фиг. 57 приведена кластерная диаграмма, полученная по предыдущим образцам БА с использованием микроматрицы с нанесенным ADP3. Существует явная корреляция между образцами больных по сравнению со здоровым контролем в данных, полученных с использованием микроматрицы, и данных, полученных с использованием платформа ИФА. На фиг. 57 также показано, что пептоид ADP3 селективен в отношении антител, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, но не для болезни Паркинсона и волчанки (СКВ).
На фиг. 58 приведены обобщенные результаты иммунно-ферментного анализа (ELISA), в котором исследовали всего 106 образцов сыворотки. Согласно этим данным 9 образцов нельзя определить (4 с клиническим диагнозом АБ, 5 здоровых) по одной точке данных. По результатам исследования 3 кривых титрования из этих 9 соответствовали клиническим данным. Для 6 результат был неясным (расхождение результатов по различным пептоидам).
На фиг. 59 приведены химические структуры P1aag7-9.
Данные, представленные на описанных выше чертежах для диагностического метода Opko для детектирования антител, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, подтверждают, что раскрытые и описанные здесь способы представляют собой эффективные инструменты для подтверждения и/или предсказания начала болезни Альцгеймера и/или подтверждения того, что неврологическое расстройство является каким-либо другим неврологическим нарушением, таким как мягкое когнитивное нарушение. Эти данные явно согласуются с поданными ранее патентными заявками, в которых заявлены некоторые пеп-тоиды и способы детектирования антител, ассоциированных с заболеваниями. Здесь совершенные новые пептоиды, обнаруженные посредством нового и более быстрого способа скрининга, валидировали с использованием множества платформ, включая микроматрицы и твердофазный ИФА, сопоставляя с клиническими результатами для пациентов с различными стадиями симптомов болезни Альцгеймера, после демаскирования полученные результаты в значительной степени коррелировали с фактическими клиническими данными.
Пример 4. Скрининг рака поджелудочной железы.
Получали библиотеки пептоидов для проведения скрининга сыворотки пациентов с раком поджелудочной железы. Синтезировали две библиотеки (JC3B и JC5B). В этих скринингах против биомаркеров рака поджелудочной железы выявили в общей сложности 26 активных соединений. Библиотека JC3B содержала амины, выбранные из диаминобутана; R-метилбензиламина; изобутиламина; циклогексила-мина; пиперониламина; 4-(аминоэтил)бензолсульфонамида; фурфуриламина и 2-метоксиэтиламина.
Библиотека JC5B состояла из аминов, выбранных из изобутиламина; 2-метоксиэтиламина; диаминобута-на; фурфуриламина; циклогексиламина; R-метилбензиламина; пиперониламина и 4-(аминоэтил)бензолсульфонамида. Для скрининга использовали пулы из 6 образцов каждой сыворотки субъекта с заболеванием и контрольной 6 сыворотки. Условия для JC3B: использовали 5 мкл каждого образца сыворотки субъекта с заболеванием в 4 мл блокирующего буфера ФБР и использовали 5 мкл каждого образца нормальной сыворотки в 4 мл 1X TBST. Условия для JC5B: использовали 10 мг/мл сыворотки больного в 4 мл блокирующего буфера ФБР и использовали 150 мг/мл контрольной сыворотки в 4 мл 1X TBST. Скрининг на бусинах DYNA: в 1 мл 1X TBST добавляли 50 мкл бусин DYNA с антителом козы к IgG человека. Проводили скрининг на бусинах DYNA для удаления неспецифических активных соединений. Скрининг с Quantum: в 1X TBST добавляли 10 мкл/мд антитела козы к IgG человека с Quantum Dot 655; осуществляли скрининг с использованием УФ-микроскопа, чтобы удалить активные соединения. Валидация активных соединений: JC3B: в 1 мл 1X TBST добавляли 2 мкл каждого контрольного образца РПЖ для скрининга активных соединений; удаляли красные (неспецифические) бусины; добавляли 2 мкл каждого образца от больного РПЖ в 1 мл блокирующего буфера для скрининга активных соединений; удаляли считанные бусины (фактические активные соединения) и расщепляли для секвениро-вания. Эту процедуру осуществляли как с активными соединениями, выявленными с использованием бусин DYNA, так и с активными соединениями Q dot. 12 активных соединений были подтверждены. JC5B: Добавляли 50 мг/мл объединенных образцов субъектов с заболеванием в 1 мл блокирующего буфера для скрининга активных соединений; добавляли 15 мг/мл объединенных контрольных образцов в 1X TBST для скрининга активных соединений; удаляли красные бусины (фактические активные соединения) и отщепляли для секвенирования. Эту процедуру осуществляли как с активными соединениями, выявленными с использованием бусин DYNA, так и с активными соединениями Q dot. Было подтверждено 14 активных соединений.
На фиг. 22 (картинка слева): библиотеку пептоидов инкубировали с сывороткой пациентов с раком поджелудочной железы. Затем библиотеку инкубировали с вторичным детектирующим антителом (антитело козы к IgG человека, меченное Quantum dot 655 (Invitrogen). Бусины с активными соединениями детектировали с использованием УФ-микроскопа с фильтром DAPI и бусины, которые имели красную окраску, отбирали как активные соединения для секвенирования и последующего исследования.
На фиг. 22 (картинка справа): после выделения активных соединений для рака поджелудочной железы из библиотеки пептоидов осуществляли промывку 1% SDS для отделения активных соединений от оставшихся антител. Затем бусины инкубировали с отдельными образцами сывороток пациентов с раком поджелудочной железы, а затем с антителом козы к IgG человека с Quantum Got 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, будут ли активные соединения подтверждены в анализе с отдельными образцами. Для секвенирования отбирали стабильно подтверждаемые активные соединения.
На фиг. 23 (слева): картины валидации активных соединений демонстрируют эффективность скрининга Tentagel. После выделения активных соединений для рака поджелудочной железы из библиотеки пептоидов осуществляли промывку 1% SDS для отделения активных соединений от оставшихся антител. Затем бусины инкубировали с отдельными образцами сывороток пациентов с раком поджелудочной железы, а затем с антителом козы к IgG человека с Quantum Got 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, будут ли активные соединения подтверждены в анализе с отдельными образцами. Для секвенирования отбирали стабильно подтверждаемые активные соединения.
На фиг. 23 (справа): осуществляли еще одну промывку бусин с активными соединениями SDS (до-децилсульфатом натрия), затем бусины инкубировали с контрольной сывороткой и с антителом козы к IgG человека, меченым Quantum Got 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, будут ли активные соединения подтверждены в анализе с отдельными образцами. Для секвенирования отбирали стабильно подтверждаемые активные соединения.
На фиг. 24 показана валидация активных соединений в скрининге рака поджелудочной железы путем смешивания. Эти данные демонстрируют, что маркеры специфичны в отношении определенного заболевания (РПЖ против БА).
На фиг. 25 показаны лиганды рака поджелудочной железы (возможные активные соединения) из библиотеки JC3B.
На фиг. 26 показаны лиганды рака поджелудочной железы (возможные активные соединения) из библиотеки JC5B.
Пример 5. Скрининг волчанки.
На фиг. 27 показаны активные соединения СКВ в скрининге библиотеки СКВ против нормального контроля. Использовали библиотеку KN1B и обнаружили ее пригодность для этого конкретного скрининга. Для скрининга волчанки использовали тот же самый протокол, который описан выше для скрининга рака поджелудочной железы и для скрининга БА, за исключением используемой библиотеки и образцов сыворотки.
На фиг. 28 показаны возможные активные соединения СКВ.
На фиг. 29 показана валидация активных соединений. Диагностические наборы и методы.
На фиг. 30 показано связывание одного из пептоидов СКВ (волчанки) с планшетами для твердофазного ИФА с использование двух различных методов связывания. В первом случае биотин использовали в качестве "молекулы", которая "связывается" с планшетом для ИФА, обработанным стрептавидином (не-ковалентное связывание). Пептоид содержал флюоресцентную метку. Во втором случае цистеин в составе пептоида ковалентно связывается с планшетом для ИФА, обработанным малеимидом. В обоих случаях результаты показывают, что в миллимолярных концентрациях выше 3 мМ наблюдается значительный флюоресцентный сигнал.
На фиг. 31 показан конкурентный анализ с иммобилизованным на планшете KN1B-20-биотин-флюоресцеином и свободным ^1^-20-6^x^1^(tm) в растворе в различных концентрациях. Сигнал снижается по мере увеличения концентрации свободного KN1B-20-биотина, начиная с эквимолярных концентраций свободного и связанного веществ.
На фиг. 32 показан планшет для ИФА (ELISA), содержащий 10 мМ пептоида, явно видны различия между сывороткой субъекта с заболеванием (столбец 1) (БА) и сывороткой нормального (столбец 3) при различных разбавлениях сыворотки [двукратные разведения 1:200 до 1:400, 1:800, 1:1,600, 1:3,200, 1:6,400, 1:12800]. Концентрация пептоида БА ADP3 в лунках с пептоидом составляет 10 мМ. Аналогичным образом, на фиг. 32 показано четкое различие между сывороткой субъекта с заболеванием и образцами нормального контроля для платформы с Tentagel при концентрации 40 мг/мл разбавленной сыворотки на бусинах размером 140 мкм.
На фиг. 33 показан планшет для твердофазного ИФА (ELISA), содержащий пептоид в различных концентрациях, четко видны различия между сывороткой субъекта с заболеванием (БА) и сывороткой здорового контроля в различных концентрациях [от 1:200 до 1: 12,800]. Стрелки указывают на результаты для 10 мМ ADP3 при разбавлении сыворотки 1:800.
На фиг. 34 показан планшет для ИФА (ELISA), содержащий 10 мМ пептоида, четко видны различия между сывороткой субъекта с заболеванием (СКВ) и сывороткой здорового контроля в различных концентрациях [1:200-1:12,800]. Эти данные демонстрируют четкое различение сыворотки больного и контрольной сыворотки с использованием SLE-KN1B-20 (10 мМ). Во всех способах скрининга можно также использовать плазму при условии, что будет учитываться присутствие белков.
На фиг. 35 показан график ИФА-анализа (ELISA) сыворотки БА с использованием 10 мМ ADP3, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10,000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка БА 0,394 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 386 мг/мл).
На фиг. 36 показан график ИФА-анализа (ELISA) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ KN1B-20, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10,000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ 0,375 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 396 мг/мл).
На фиг. 37 показан график ИФА-анализа (ELISA) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ KN1B-20, приготовленного в ДМСО, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10,000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ 367 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 322 мг/мл).
На фиг. 38 показана валидация платформы FACS для бусин Tentagel.
Фиг. 39 иллюстрирует степень разделения между бусинами, содержащими ацетильную группу, и бусинами, содержащими 2,5-динитрофенильную группу (DNP), при различных концентрациях сыворотки (от 100 до 1,000 мкг/мл) и в ответ на обработку вторичным антителом с анти-DNP меткой. Разделение по средней интенсивности флюоресценции (MFI) было максимальным при разбавлении сыворотки выше 1,000 мкг/мл.
Фиг. 40 демонстрирует, что существует прямая конкуренция между этаноламин-DNP и связыванием DNP (на планшете) с анти-DNP антителом в концентрации 1000 мкг/мл сыворотки.
На фиг. 41 показано, что ADP3 связывал антитело к антителу из объединенных сывороток здорового контроля и объединенных сывороток БА. Эти данные демонстрируют хорошее разделение при концентрациях сывороток в диапазоне от 20 до 140 мкг/мл с использованием двух различных вторичных антител (антитела козы к AT человека с Dylight 649 антитела козы к AT человека с Alexa 647).
На фиг. 42 показано, что ADP3 связывал аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с БА после вычитания фоновых значений в различных диапазонах концентрации сыворотки. Имеет место значительная степень разделения в большинстве диапазонов концентраций от меньше чем 20 до 120 мкг/мл или выше.
На фиг. 43 и 44 приведены структуры повторно синтезированных пептоидных лигандов - выявленных соединений ("активных соединений") при СКВ (волчанка).
На фиг. 45 показано получение ADP3 на 10-мкм бусинах Tentagel и последующее расщепление с помощью CNBr вместе с масс-спектрометрическим считыванием показанного лактона.
На фиг. 46 показано связанное с ADP3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера в различных концентрациях. Бусины предварительно блокировали в течение 3 ч с использованием 1X TBST, а затем осуществляли детектирование с использованием вторичного антитела козы к AT человека с Alexa 647.
На фиг. 47 показано связанное с ADP3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера при различных концентрациях сыворотки, а также показаны значения DNP.
На фиг. 48 и 49 - связанное с ADP3 аутоантитело из сывороток здоровых контролей в сравнении с сыворотками субъектов с БА с использованием условий предварительного блокирования, таких как ли-зат Е. coli и лизин.
Протокол твердофазного ИФА (ELISA).
96-луночные малеимид-активированные планшеты получили из Thermo Scientific, трижды промывали с использованием 400 мкл/лунку буфера для промывки (0,1 М фосфата натрия, 0,15 М хлорида натрия, 0,05% Твин-20, рН 7,2) с помощью устройства для промывки планшетов от Beckman Coulter. Исследуемый пептоид разбавляли до 10 мМ в PBS-буфере для связывания (0,1 М фосфата натрия, 0,15 М хлорида натрия, 10 мМ ЭДТА, рН 7,2) и 200 мкл раствора пептоида добавляли в соответствующие лунки. Затем планшет оставляли для инкубирования в темноте на 2 ч при комнатной температуре и встряхивании (500 об/мин). Затем раствор пептоида удаляли из лунок с помощью устройства для промывки планшетов и вновь трижды промывали 400 мкл/лунку буфера для промывки. L-цистеин HCl:H2O (Thermo Scientific) разбавляли буфером для связывания до 10 мкг/мл и добавляли по 200 мкл на лунку. Затем планшет инкубировали в течение 1 ч в темноте при комнатной температуре и встряхивании при 500 об/мин и трижды промывали. 200 мкл блокирующего буфера StartingBlock(tm) (PBS) (Thermo Scientific) добавляли в лунки и инкубировали планшет в течение 1 ч при 4°C в темноте при встряхивании (500 об/мин). Планшет трижды промывали с помощью устройства для промывки планшетов и получали образцы сыворотки путем серийного разведения в буфере для связывания, начиная от 1:200. Концентрации 1:200 рабочих образцов получали путем нанораскапывания (Thermo Scientific), обеспечивая их сходство. Каждый разбавленный образец встряхивали на вортексе до получения следующего разведения. 200 мкл соответствующего разведения сыворотки (больных и здоровых субъектов), а также буфер для связывания без сыворотки в качестве контроля добавляли в лунки планшета. Сыворотку оставляли для инкубирования в течение 2 ч при комнатной температуре в темноте при встряхивании (500 об/мин). Планшет повторно промывали и добавляли в соответствующие лунки 200 мкл 1:30000 разведения антитела козы, меченного ПХ, против IgG человека (Millipore) в буфере для связывания и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин при встряхивании (500 об/мин) в темноте. Планшет трижды промывали, в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора ТМБ (3,3',5,5'-тетраметилбензидина) и оставляли для развития окраски на 30 мин на лабораторном столе в темноте. Для остановки реакции добавляли 100 мкл 2 М стоп-раствора серной кислоты и считывали поглощение в лунках при 450 нм с помощью планшетного считывающего устройства.
Таким образом, в каждом конкретном случае и в отношении каждого варианта лечения с помощью лекарственного средства можно применять процесс согласно настоящему изобретению для быстрого детектирования биомаркеров, ассоциированных с вызванной лекарственным средством реакцией (например, неблагоприятной реакцией, устойчивостью к лекарству и эффективности терапевтической дозы), и лигандов, связывающихся с такими маркерами. Указанный крупный пул лигандов затем можно использовать в различных диагностических или терапевтических целях. Диагностические платформы включают микроматрицы, средства на основе бусин и системы для твердофазного ИФА. Условия, использованные выше, составляют важный аспект изобретения. Указанные условия включают диапазоны разбавления сыворотки, а также концентрацию конкретного пептоида на бусине или в лунке, и способы детектирования. Количество бусин, содержащих пептоид, может варьироваться в зависимости от конкретного диагностического набора или набора для скрининга. Указанные количества также могут варьировать в зависимости от применения бусин/лигандов согласно протоколу начального скрининга и способу, приведенному в настоящем документе, и/или их применения в составе диагностического набора, основанного на обнаружении высокоаффинного лиганда.
Специалист в данной области техники поймет, что в вышеописанные варианты реализации можно внести изменения без отхода от расширенной сущности изобретения. Таким образом, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается описанными конкретными вариантами реализации; подразумевается, что оно охватывает модификации, входящие в объем изобретения, определенный прилагаемой формулой изобретения.
где R1 представляет собой -(C1-C6)SCH3; R2 выбран из Н;
R3-R6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 СООН, -С1-С6алкил-OH, -СгС6алкил-М12, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -C1-С6алкил-NC(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH3, -SO2NH2 или -О-СН2-О;
n составляет 3-11 и
указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
2. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости по п.1, состоящая из множества соединений, по меньшей мере одно из соединений имеет структуру формулы I, на носителе
отличающаяся тем, что соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; ^(3-амино-пропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензи-ламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или
(B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобу-тиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензи-ламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или
(D) фурфуриламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; ^(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-амино-этил)бензолсульфонамид; или
(E) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3-аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и
при этом R1 выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)SCH3; R2 выбран из Н;
R3 и R5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -C0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 СООН, -С1-С6алкил-OH, -С1-С6алкил-NH2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -C1-С6алкил-NC(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -OCH3, -SO2NH2 или -О-СН2-О-;
R4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(C1-С6алкил)NR7R8;
R6 выбран из группы, состоящей из следующего: Н, 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-ил-n-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2-(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
n составляет от 3 до 11.
3. Библиотека лигандов по п.2, отличающаяся тем, что носитель выбран из бусины или смолы.
4. Библиотека лигандов по п.3, отличающаяся тем, что указанная бусина или смола содержит поли-этиленгликолевый линкер, содержащий менее 10 мономерных звеньев.
5. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящая
где R1 представляет собой -(C1-C6)SCH3; R2 выбран из Н;
R3-R6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: Н, -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-SCH3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -C1-C6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-> Щ2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -C1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-NC(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкил-циклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -ОСН3, -SO2NH2 или -О-СН2-О-;
n составляет от 3 до 10 и
указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
6. Библиотека лигандов по п.5, где R4 выбран из -n-бутиламина.
7. Библиотека лигандов по п.6, где R1 выбран из -CH2CH2SCH3 или -CH2SH.
8. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу
причем указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы Ia, где:
(a) R9 представляет собой n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет
собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представ-
ляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогек-
сил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2,2-
диметилэтил(изобутил), R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой метилбензил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(d) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изопропил, R12 представляет собой изопропил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(h) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(c)
(i) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой Ьил-^бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(j) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой Ьил-^бутиламин, R15 представляет собой фурфурил и R16 представляет собой фурфурил;
(n) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой фурфурил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой фурфурил;
(о) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой метилбензил;
(р) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R13 представляет собой изобутил;
(q) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(r) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(s) R9 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой пиперонил;
(t) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(u) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(v) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой пиперонил;
(w) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой циклогексил;
(х) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой
1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(у) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(z) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(аа) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(bb) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(cc) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(dd) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой циклогексил;
(ее) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(ff) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(gg) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(hh) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(ii) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой фурфурил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(jj) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой изобутил;
(kk) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(ll) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(mm) R9 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(nn) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(oo) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой пиперонил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(рр) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(qq) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой фурфурил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(rr) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(ss) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой пи-
перонил.
причем указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где:
(a) R9 представляет собой n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет
собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представ-
ляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогек-
сил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2,2-
диметилэтил(изобутил), R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой метилбензил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(d) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изопропил, R12 представляет собой изопропил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(h) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 пред-
ставляет собой метилбензил, Ri2 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Ri3 представляет собой циклогексил, Ri4 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(i) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(j) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой Ьил-^бутиламин, R15 представляет собой фурфурил и R16 представляет собой фурфурил;
(n) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой фурфурил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой фурфурил;
(о) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой метилбензил;
(р) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(q) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(r) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(s) R9 представляет собой Ьил-^бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой пиперонил;
(t) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(u) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(v) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой пиперонил;
(w) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2
метоксиэтил и R16 представляет собой циклогексил;
(х) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(y) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(z) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой Ьил-^бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(аа) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(bb) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(cc) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1-ил-^бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(dd) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой циклогексил;
(ее) R9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(ff) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой циклогексил;
(gg) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(hh) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(ii) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой фурфурил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(jjj) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и R16 представляет собой изобутил;
(kk) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(ll) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(mm) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(nn) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(оо) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой пиперонил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(рр) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой ^ил^-бутилами^ R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(qq) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой фурфурил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(rr) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой изобутил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(ss) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой пиперонил.
10. Библиотека лигандов по п.8, где указанное по меньшей мере одно соединение формулы II выбрано из групп, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет
собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представ-
ляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет
собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-
бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогек-
сил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2,2-диметилэтил(изобутил),
R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой метилбензил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой циклогексил;
(d) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой изопропил, R12 представляет собой изопропил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил.
11. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу
11.
(a) R9 представляет собой ^ил^-бутилами^ R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(b) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой ^ил^-бутилами^
(c) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(d) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой изобутил;
(e) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой ме-тилбензил;
(f) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(j) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил,
R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-
бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16
представляет собой метилбензил;
(i) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой
метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14
представляет собой изобутил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-
бутиламин;
(j) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобу-
тил;
(l) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-
метоксиэтил.
12. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет форму-
причем указанное одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где: (m) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой циклогексил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(n) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13
представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(о) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой изобутил, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(р) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой изобутил;
(q) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой ме-тилбензил;
(r) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(s) R9 представляет собой фурфурил, R10 представляет собой фурфурил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой метилбензил;
(t) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(u) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(v) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой циклогексил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(w) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобу-
тил;
(х) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1 -ил-2-метоксиэтил.
13. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет форму-
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой Ьшт-бутиламин;
(b) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(c) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой Ьшт-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П
(a)
бутиламин;
(d) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой 1-ил-аллил и R16 представляет собой пиперонил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой пи-перонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой Ьшт-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой 1-ил-^бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(j) R9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой
метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 пред-
ставляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой
пиперонил;
(i) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой
пиперонил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1 -ил^-бутилами^ R14 представ-
ляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представ-
ляет собой метилбензил;
(j) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пипе-ронил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пипе-ронил;
(m) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой циклогексил;
(n) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
14. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие R9-R16:
(a) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой Ьшт-бутиламин;
(b) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой изобутил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П
(a)
бутиламин;
(c) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(d) R9 представляет собой изобутил, R10 представляет собой циклогексил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-аллил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-аллил и R16 представляет собой пиперонил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой пи-перонил, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой циклогексил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пиперонил;
(i) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой
пиперонил, R12 представляет собой пиперонил, R13 представляет собой 1 -ил-n-бутиламин, R14 представ-
ляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представ-
ляет собой метилбензил;
(j) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой пиперонил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин;
(k) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой метилбензил, R13 представляет собой пипе-ронил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой изобутил;
(l) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой пипе-ронил;
(m) R9 представляет собой Ьшт-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой изобутил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R15 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин и R16 представляет собой циклогексил;
(n) R9 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, R13 представляет собой 1-ИЛ-П-бутиламин, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
где по меньшей мере в одном соединении формулы IIIa R9-R16 выбраны из:
(a) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой 1-ил-3К-(2-пирролидинон)пропил, R11 представляет собой уксусную кислоту, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой бензил, R14 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R15 представляет собой изобутил и
15. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу
R16 представляет собой 1-ил-аллил;
(b) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R13 представляет собой бензил, R14 представляет собой пиперонил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1 -ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой бензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(d) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R11 представляет собой Ьшт-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой бензил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой бензил, R14 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой Ьшт-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой Ьшт-бутиламин;
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1 -ил^-бутилами^
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(i) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой бензил, R11 представляет собой пипе-
ронил, R12 представляет собой бензил, R13 представляет собой Ьшт-бутиламин, R14 представляет собой
бензил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин.
16. Библиотека лигандов по п.5, где библиотека содержит соединение формулы
где в соединении формулы II R9-R16 выбраны из:
(a) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой 1-ил-31Ч-(2-пирролидинон)пропил, R11 представляет собой уксусную кислоту, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой бензил, R14 представляет собой ^ил^-бутилами^ R15 представляет собой изобутил и R16 представляет собой 1-ил-аллил;
(b) R9 представляет собой циклогексил, R10 представляет собой Ьшт-бутиламин, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R13 представляет собой бензил, R14 представляет собой пиперонил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(c) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-аллил, R11 представляет собой Ьшт-бутиламин, R12 представляет собой бензил, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(d) R9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R10 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R13 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой метилбензил и R16 представляет собой бензил;
(e) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой пиперонил, R11 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R12 представляет собой циклогексил, R13 представляет собой бензил, R14 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R15 представляет собой 1-ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(f) R9 представляет собой 1-ил-аллил, R10 представляет собой метилбензил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой Ьшт-бутиламин, R13 представляет собой пиперонил, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин;
(a)
(g) R9 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, R10 представляет собой изобутил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой бензил, R15 представляет собой пиперонил и R16 представляет собой 1 -ил-n-бутиламин;
(h) R9 представляет собой метилбензил, R10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, R11 представляет собой метилбензил, R12 представляет собой 1-ил-n-бутиламин, R13 представляет собой метилбензил, R14 представляет собой метилбензил, R15 представляет собой 1 -ил-n-бутиламин и R16 представляет собой метилбензил;
(i) R9 представляет собой пиперонил, R10 представляет собой бензил, R11 представляет собой пипе-
ронил, R12 представляет собой бензил, R13 представляет собой Ьшт-бутиламин, R14 представляет собой
бензил, R15 представляет собой циклогексил и R16 представляет собой 1-ил-n-бутиламин.
o-NH2+Ho^-a^xH^1^Lr
Структурная схема скрининга с применением TentaGel
Обеспечивают набухание гранул в
DMF, промывают TBST, оставляют
набухать на один час
I Добавляют NC-сыворотку в 1 X I |TBST, перемешивать в течение ночи|
I Выполняют скрининг I
Тест воспроизводимости (образцы от больных после промывки ДСН и добавления Qdot)
Фиг. 11
Фиг. 16А
ТЕСТ БА Р1аад4 MayolOO :
Мауо97
Мауо94 : -
Мауо91 :[
Мауо88
Мауо85 :
Мауо82 :
Мауо79 :¦
Мауо76 :
Мауо73 > --
Мауо70 :
Мауо67
Мауо64 ;;-
МЭУ061 '. ттттнтжтжтжтжт.
Мауо58 1'^^^^^^
Мауо55 :
Мауо52 :
Мауо49 :
Мауо46 '. >
Мауо43 :¦
Мауо40 :
Мауо37
Мауо34 ;
Мауо31 - Мауо28 : Мауо25 Г
Мауо22 : • -
Мауо19 --- Мауо1б :¦ Мауо13 : MayolO :J
Мауо7 ; ^ш^ш^
мэуо4 : >
Mayol $яшг , , , , ,
О 20 40 60 80
Интенсивность(Х103}
Фиг. 17В
Фиг. 19В
Фиг. 20В
А. Нормальная В. Сыворотка при СКВ - С. Сыворотка при СКВ
контрольная сыворотка Группа 1 Группа 2
Скрининг библиотеки при СКВ
10000
5000
0 1 I .* , , , ^
0 200 400 600 800 100
[Сыворотка] (мкг/мл)
о ю2 ю3 ю4 ю5
Этаноламин-ДНФ конкурирует за связывание ДНФ с антителом против ДНФ
О 500 1000 1500 2000 2500 3000
[Свободный этаноламин-ДНФ] (мкг/мл)
л-0
"ОЦ о 0> у о ОЦ.--- о^о но
/ °(У 7 ° Y 7 °
NH2 NH2 KN1B-20 NH2
NH2 г~0 /-Q
О о ^\ о'^Х o^t)^ О н о
/ °сУ °(У ° & 0 / 0 Чн
н2 KN1B-22 NH2
Фиг. 44
Сводная информация по твердофазному ИФА Общее количество исследованных образцов плазмы = 106
Клинич. диагноз Диагноз авт. изобр-я Различия
49 пациентов с БА 42 7 (14%)
57 здор. субъектов 47 10(17%)
Фиг. 59В
Фиг. 58
Фиг. 59С
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032582
032582
- 1 -
- 1 -
(19)
032582
032582
- 1 -
- 1 -
(19)
032582
032582
- 2 -
- 1 -
(19)
032582
032582
- 8 -
- 9 -
032582
032582
- 19 -
032582
032582
- 22 -
- 22 -
032582
032582
- 25 -
032582
032582
- 28 -
- 28 -
032582
032582
- 29 -
- 29 -
032582
- 43 -
- 42 -
032582
032582
- 45 -
- 45 -
032582
032582
- 46 -
- 46 -
032582
- 49 -
- 50 -
032582
032582
- 52 -
- 52 -
032582
032582
- 68 -
032582
032582
- 71 -
- 71 -
032582
032582
032582
032582
- 75 -
- 75 -
032582
032582
- 76 -
032582
032582
- 79 -
- 79 -
032582
032582
- 88 -
- 88 -
032582
032582
- 90 -
- 90 -
032582
032582
- 93 -
- 93 -
032582
032582
- 94 -
- 94 -