|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Композиция для отбеливания кожи, содержащая: a) эффективное количество ниацинамида и b) эффективное количество галардина. 2. Композиция для отбеливания кожи по п.1, при этом композиция содержит 0,00001-10 мас.% галардина. 3. Композиция для отбеливания кожи по п.1 или 2, при этом композиция содержит 0,001-10 мас.% ниацинамида. 4. Композиция для отбеливания кожи по любому из пп.1-3, дополнительно содержащая средство для отбеливания кожи. 5. Композиция для отбеливания кожи по любому из пп.1-4 в форме топической композиции. 6. Применение композиции по любому из пп.1-5 для отбеливания кожи. 7. Способ отбеливания кожи у человека, включающий стадию нанесения композиции по любому из пп.1-5 на кожу.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Композиция для отбеливания кожи, содержащая: a) эффективное количество ниацинамида и b) эффективное количество галардина. 2. Композиция для отбеливания кожи по п.1, при этом композиция содержит 0,00001-10 мас.% галардина. 3. Композиция для отбеливания кожи по п.1 или 2, при этом композиция содержит 0,001-10 мас.% ниацинамида. 4. Композиция для отбеливания кожи по любому из пп.1-3, дополнительно содержащая средство для отбеливания кожи. 5. Композиция для отбеливания кожи по любому из пп.1-4 в форме топической композиции. 6. Применение композиции по любому из пп.1-5 для отбеливания кожи. 7. Способ отбеливания кожи у человека, включающий стадию нанесения композиции по любому из пп.1-5 на кожу.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
032574
(13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.06.28
(21) Номер заявки 201791493
(22) Дата подачи заявки 2015.12.08
(51) Int. Cl.
A61K 8/49 (2006.01) A61K 8/67 (2006.01) A61Q19/02 (2006.01)
(54)
КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ОТБЕЛИВАНИЯ КОЖИ, СОДЕРЖАЩАЯ НИАЦИНАМИД И ИЛОМАСТАТ
(31) 14200619.6
(32) 2014.12.30
(33) EP
(43) 2017.11.30
(86) PCT/EP2015/078975
(87) WO 2016/107720 2016.07.07
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ЮНИЛЕВЕР Н.В. (NL)
(72) Изобретатель:
Дутта Майтрейее, Кале Вайдехи Субхаш, Наир Нирмала Сантош (IN)
(74) Представитель:
Воробьева Е.В., Фелицына С.Б. (RU) (56) ЕР-А1-2522331
LIN X. ET AL.: "GM6001, a broad spectrum metalloprotease inhibitor, has multiple efficacies against skin aging", THE JOURNAL OF INVESTIGATIVE DERMATOLOGY, NATURE PUBLISHING GROUP, GB, 1 April 2010 (2010-04-01), XP009141234, ISSN: 0022-202X, Abstract 204
ЕР-A1-2412701
US-A1-2010158842
WO-A2-0219982
(57) Изобретение относится к области композиций для персонального ухода, в частности композиций для отбеливания кожи. Остается желательной композиция, которая объединяет уменьшение адениловой кислоты и уменьшение содержания меланина в меланоцитах. Обнаружено, что ниацинамид в комбинации с ингибитором ММР галардином синергично снижает содержание меланина в меланоцитах. Изобретение также относится к композиции, включающей синергичную комбинацию ниацинамида и галардина для применения при отбеливании кожи. Таким образом, композицию при топическом нанесении в течение соответствующего промежутка времени in vivo можно использовать для отбеливания кожи или уменьшения старческих пятен или веснушек.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение лежит в области композиций для персонального ухода, в частности, композиций для отбеливания кожи.
Предшествующий уровень техники
Большинство людей беспокоит степень пигментации их кожи. Например, люди со старческими пятнами или веснушками могут желать, чтобы такие пигментные пятна были менее заметными. Другие могут желать уменьшения потемнения кожи, вызванного воздействием солнечного света, или осветления их природного цвета кожи. Для того чтобы удовлетворить такие требования, сделано много попыток разработать продукты, которые уменьшают продуцирование пигмента в меланоцитах. Однако вещества, идентифицированные до сих пор, склонны иметь или низкую эффективность или нежелательное побочное действие, такое как, например, токсичность или раздражение кожи. Поэтому сохраняется потребность в новых косметических средствах для отбеливания кожи с улучшенной общей эффективностью.
Традиционные композиции для отбеливания кожи основаны на применении средств для отбеливания кожи, которые, как полагают, регулируют дисперсию меланина или ингибируют тирозиназу. Такие средства для отбеливания кожи включают ниацинамид, карбоновые кислоты, подобные азелаиновой кислоте и койевой кислоте, растительные экстракты и гидрохинон и т.д. Ниацинамид, который представляет собой соединение витамина B3, является одним таким широко используемым средством для отбеливания кожи в композициях для топического (местного) применения.
В DE 10133196 (Beiersdorf) раскрываются топические композиции, содержащие никотиновую кислоту или ее предшественников, производные или метаболиты, используемые для улучшения состояния кожи и (1) для лечения или предупреждения сухости кожи, для усиления барьерной функции кожи, для лечения, ухода и профилактики чувствительной кожи и/или для лечения и профилактики симптомов отрицательного изменения в физиологическом гомеостазе нормальной кожи; (2) для лечения или предупреждения воспалительных состояний кожи, атопической экземы, полиморфного фотодерматита, псориаза, витилиго и чувствительной зудящей или разраженной кожи; (3) для лечения или предупреждения анормального перокисления липидов; (4) для лечения или предупреждения анормального метаболизма церамидов, липидов и энергетического метаболизма кожи, анормальной трансэпидермальной потери влаги, уменьшенной гидратации кожи и содержания влаги и содержания натурального увлажняющего фактора; (5) для лечения или предупреждения уменьшенной межклеточной коммуникации, недостаточного внутриклеточного синтеза ДНК, повреждения ДНК, сниженной эндогенной репарации ДНК, активации металлопротеиназ и/или других протеаз или ингибирования соответствующих механизмов репарации ДНК и анормальной посттрансляционной модификации компонентов соединительной ткани; (6) для лечения или предупреждения анормального содержания в коже гиалуроновой кислоты и глюкозами-ногликана; и (7) для лечения или предупреждения перхоти кожи головы, покрытой волосяным покровом, и старения кожи.
Полагают, что ниацинамид снижает эффективную концентрацию циклической адениловой кислоты (циклической 3'-5'-АМР), которая, как полагают, действует как вторичный мессенджер, опосредующий действие различных гормонов, включая меланоцит-стимулирующий гормон, вовлеченный в дисперсии меланина. Циклическая 3'-5'-АМР-фосфодиэстераза является ферментом, который разрушает циклическую 3'-5'-АМР до аденозин-5'-монофосфата. Показано, что активность этого фермента стимулируется ниацинамидом. Таким образом, полагают, что ниацинамид снижает эффективную концентрацию циклической 3'-5'-АМР и, следовательно, дисперсию гранул меланина. Кроме того, показано, что ниацинамид снижает перенос меланосом из меланоцитов в кератиноциты. Однако известно, что ниацинамид мало влияет или не влияет непосредственно на содержание меланина в меланоцитах.
Остается желательной композиция, которая объединяет снижение циклической адениловой кислоты и снижение содержания меланина в меланоцитах.
Обнаружено, что ниацинамид в комбинации с ингибитором ММР галардином синергично снижает содержание меланина в меланоцитах. Таким образом, изобретение относится к композиции, включающей синергичную комбинацию ниацинамида и галардина для применения при отбеливании кожи. Таким образом, композицию при топическом нанесении в течение некоторого времени in vivo можно использовать для отбеливания кожи или для уменьшения старческих пятен или веснушек.
Краткая сущность изобретения
Соответственно, в первом аспекте настоящее изобретение относится к композиции для отбеливания кожи, включающей эффективное количество ниацинамида и эффективное количество галардина.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к применению композиции по изобретению для отбеливания кожи.
В третьем аспекте изобретение относится к способу отбеливания кожи человека, включающему стадию нанесения композиции по изобретению на кожу.
Эти и другие аспекты, особенности и преимущества станут очевидны для специалистов в данной области техники при прочтении следующего далее подробного описания и прилагаемой формулы изобретения. Во избежание сомнений любая особенность одного аспекта изобретения может быть использована в любом другом аспекте изобретения. Подразумевается, что слово "содержащий" обозначает "вклю
чающий", но необязательно "состоящий из" или "составленный из". Иными словами, перечисленные стадии или опции необязательно являются исчерпывающими. Отмечается, что примеры, приведенные в описании ниже, предназначены для пояснения изобретения и не предназначены для ограничения изобретения такими примерами как таковыми. Подобным образом, все проценты являются процентами мас./мас., если не указано иное. За исключением рабочих примеров и примеров для сравнения или где ясно указано иное, все числа в настоящем описании, указывающие количества материала или условия реакции, физические свойства материалов и/или применение, следует понимать как модифицированные словом "примерно". Числовые интервалы, выраженные в формате "от х до у" понимаются как включающие х и у. Когда для конкретной особенности описываются несколько предпочтительных интервалов в формате "от х до у", следует иметь в виду, что также рассматриваются все интервалы, объединяющие различные конечные точки.
Подробное описание изобретения
Первый аспект изобретения относится к композиции для отбеливания кожи, причем композиция включает ниацинамид и галардин.
Ниацинамид
Ниацинамид, также известный как никотинамид и как пиридин-3-карбоксамид, представляет собой активную растворимую в воде форму витамина B3. Он необходим для коферментов NADH и NADPH и, следовательно, для более 200 ферментативных реакций в организме, включая образование АТФ.
Композиция по настоящему изобретению включает эффективное количество ниацинамида, типично в концентрации 0,001-10 мас.%, предпочтительно по меньшей мере 0,01 мас.%, предпочтительнее по меньшей мере 0,1 мас.%, еще предпочтительнее по меньшей мере 1 мас.%, даже предпочтительнее по меньшей мере 2 мас.%, еще предпочтительнее по меньшей мере 3 мас.% или даже по меньшей мере 4 мас.% от композиции; но предпочтительно не более 9 мас.%, предпочтительнее не более 8 мас.%, еще предпочтительнее не более 6 мас.% или даже не более 5 мас.% от композиции.
Галардин
Галардин, также известный как GM6001 или иломастат, является ингибитором широкого спектра матриксных металлопротеиназ, имеющим следующую структуру:
Галардин является членом класса гироксамовых кислот обратимо действующих ингибиторов мат-риксных металлопротеиназ. Анионное состояние группы гидроксамовой кислоты образует бидентатный комплекс с цинком в активном участке.
Матриксные металлопротеиназы (ММР) известны из-за их роли в ремоделировании матрикса и секретируются из различных клеток, включая клетки кожи, такие как меланоциты, кератиноциты и фиб-робласты. Галардин является синтетическим ингибитором широкого спектра матриксных металлопро-теиназ (ММР), с сильной активностью против ММР-1, 2, 3, 7, 8, 9, 12, 14, 26. Как сообщалось впервые в 1990-х, он имеет коллагеноподобную боковую цепь для облегчения связывания с активным сайтом ММР и структуру гидроксамата (R-CO-NH-OH, где R представляет собой органический остаток), которая образует хелат с ионом цинка, локализованным в каталитическом домене ММР. Сообщается о модуляции ММР путем предотвращения конверсии про-ММР в их активные формы.
Принимая во внимание, что меланин представляет собой группу пигментов, образовавшихся путем окисления аминокислоты тирозина с последующей полимеризацией, является неожиданным, что галар-дин также играет роль в снижении содержания меланина в меланоцитах вместе с ниацинамидом. Кроме того, также оказывается, что галардин не оказывает влияния на ингибирование тирозиназы, которая является оксидазой для тирозина и представляет собой содержащий медь белок, но не металлопротеиназы, как показано в настоящем описании ниже в примерах.
Настоящее изобретение выдвигает на первый план роль галардина в синергичной модуляции содержания меланина в первичных меланоцитах человека путем объединения с ниацинамидом.
Композиция по настоящему изобретению включает эффективное количество галардина, типично в концентрации 0,00001-10 мас.%, предпочтительно по меньшей мере 0,0001 мас.%, предпочтительнее по меньшей мере 0,001 мас.%, еще предпочтительнее по меньшей мере 0,01 мас.%, даже предпочтительнее по меньшей мере 0,1 мас.%, еще предпочтительнее по меньшей мере 0,5 мас.% или даже по меньшей мере 1 мас.% от композиции; но предпочтительно не более 8 мас.%, предпочтительнее не более 5 мас.%, еще предпочтительнее не более 4 мас.%, даже предпочтительнее не более 3 мас.%, еще предпочтительнее не более 2 мас.% и даже не более 1,5 мас.% от композиции.
Другие ингредиенты
Композиция по настоящему изобретению может также включать косметически приемлемую среду,
которая может действовать как разбавители, диспергаторы и/или носители для средств для отбеливания кожи, используемых в композиции, например, для облегчения их распределения, когда композицию наносят на кожу. Косметически приемлемая среда, подходящая для применения в настоящем изобретении, может быть водной, безводной или представлять собой эмульсию; причем наиболее предпочтительны водная среда или эмульсия, в особенности, эмульсия вода-в-масле или масло-в-воде. Вода, когда она присутствует, типично составляет баланс композиции. Предпочтительно вода присутствует в концентрации 5-99 мас.%, предпочтительнее от 20 до 80 мас.%, еще предпочтительнее от 40 до 80 мас.% от композиции.
Кроме воды в качестве носителей в композициях по настоящему изобретению также могут служить органические растворители.
Смягчающие вещества также можно использовать в качестве косметически приемлемых носителей в композиции по настоящему изобретению. Смягчающие вещества обычно находятся в форме силиконовых масел и синтетических сложных эфиров. Силиконовое масло может быть летучим и нелетучим. Летучие силиконовые масла предпочтительно выбирают из циклических или линейных полидиметилсилок-санов, содержащих от 3 до 9, предпочтительно, от 4 до 5 атомов кремния. Нелетучие силиконовые масла, применимые в качестве смягчающего материала, включают полиалкилсилоксаны, полиалкиларилсилок-саны и сополимеры простых полиэфирсилоксанов. По существу нелетучие полиалкилсилоксаны, применимые в настоящем изобретении, включают, например, полидиметилсилоксаны.
Сложноэфирными смягчающими веществами, которые можно использовать, являются перечисленные далее.
a) Алкенил- или алкил- сложные эфиры жирных кислот с 10-20 атомами углерода. Их примеры включают изоарахидилнеопентаноат, изононилизонаноноат, олеилмиристат, олеилстеарат и олеилолеат.
b) Сложные эфиры простых эфиров, такие как сложные эфиры жирных кислот этоксилированных жирных спиртов.
c) Сложные эфиры многоатомных спиртов. Моно- и диэфиры (сложные) жирных кислот и этиленг-ликоля, моно- и диэфиры (сложные) жирных кислот и диэтиленгликоля, моно- и диэфиры (сложные) жирных кислот и полиэтиленгликоля (200-6000), моно- и диэфиры (сложные) жирных кислот и пропи-ленгликоля, моноолеат пропиленгликоля 2000, моностеарат пропиленгликоля 2000, этоксилированный моностеарат пропиленгликоля, глицериловые моно- и диэфиры (сложные) жирных кислот, сложные эфиры полиглицеридов и жирных кислот, этоксилированный глицерилмоностеарат, моностеарат 1,3-бутиленгликоля, дистеарат 1,3-бутиленгликоля, полиоксиэтиленполиольный сложные эфир жирной кислоты, сорбитановые сложные эфиры жирных кислот и полиоксиэтиленсорбитановые сложные эфиры жирных кислот являются удовлетворительными сложными эфирами многоатомных спиртов.
d) Сложные эфиры восков, таких как пчелиный воск, спермацет, миристилмиристат, стеарилстеарат и арахидилбегенат.
e) Сложные эфиры стеролов, примерами которых являются эфиры жирных кислот и холестерина.
Смягчающие вещества могут присутствовать в композиции в количестве где-то от 0,1 до 50 мас.%,
предпочтительно от 1 до 20 мас.% от композиции.
В композицию по настоящему изобретению в качестве косметически приемлемых носителей также можно включать жирные кислоты, имеющие от 10 до 30 атомов углерода. Показательными примерами таких жирных кислот являются пеларгоновая, лауриновая, миристиновая, пальмитиновая, стеариновая, изостеариновая, гидроксистеариновая, олеиновая, линолевая, рицинолеиновая, арахиновая, бегеновая, эруковая кислоты и их смеси.
Влагоудерживающие вещества типа многоатомных спиртов также можно использовать в качестве косметически приемлемых носителей в композиции по настоящему изобретению. Влагоудерживающее вещество содействует повышению эффективности смягчающего вещества, уменьшает шероховатость, стимулирует удаление отслоившихся чешуек и улучшает восприятие кожи на ощупь. Типичные многоатомные спирты включают глицерин, полиалкиленгликоли и предпочтительнее алкиленполиолы и их производные, включая пропиленгликоль, дипропиленгликоль, полипропиленгликоль, полиэтиленгликоль и их производные, сорбит, гидроксипропилсорбит, гексиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, 1,2,6-гексантриол, этоксилированный глицерин, пропоксилированный глицерин и их смеси. Для наилучших результатов влагоудерживающее вещество предпочтительно представляет собой пропиленгликоль или гиалуронат натрия. Концентрация влагоудерживающего вещества в композиции может колебаться где-то от 0,5 до 30 мас.%, предпочтительно между 1 и 15 мас.% от композиции.
Так же как часть косметически приемлемого носителя композиций по настоящему изобретению можно использовать загуститель. Типичные загустители включают сшитые акрилаты (например, карбо-пол 982), гидрофобномодифицированные акрилаты (например, карбопол 1382), производные целлюлозы и природные камеди. К числу применимых производных целлюлозы относятся натрийкарбоксиметил-целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, этил-целлюлоза и гидроксиметилцеллюлоза. Природные камеди, подходящие для настоящего изобретения, включают гуаровую, ксантановую камедь, камедь склероция, каррагенановую камедь, пектин и комбинации таких камедей. Концентрация загустителя в композиции может колебаться от 0,0001 до 5 мас.%,
обычно от 0,001 до 1 мас.%, оптимально от 0,01 до 0,5 мас.%.
Все вместе вода, растворители, силиконы, сложные эфиры, жирные кислоты, влагоудерживающие вещества и/или загустители будут составлять косметически приемлемый носитель в количествах от 1 до 99,9 мас.%, предпочтительно от 80 до 99 мас.% композиции.
В композиции по настоящему изобретению также могут присутствовать поверхностно-активные вещества. Общая концентрация поверхностно-активного вещества будет колебаться от 0,1 до 40 мас.%, предпочтительно от 1 до 20 мас.%, оптимально от 1 до 5 мас.% от композиции. Поверхностно-активное вещество может быть выбрано из группы, включающей анионогенные, неионогенные, катионогенные и амфотерные вещества. Особенно предпочтительными неионогенными поверхностно-активными веществами являются вещества из гидрофобных С10-С20 жирного спирта или кислоты, конденсированных с 2100 молями этиленоксида или пропиленоксида на моль гидрофобного вещества; C^Qo-алкилфенолов, конденсированных с 2-20 моль алкиленоксида; моно- и диэфиры (сложные) жирных кислот и этиленгли-коля; моноглицерид жирной кислоты; моно- и диэфиры сорбитана и С8-С20-жирных кислот; блоксополи-меры (этиленоксид/пропиленоксид) и полиоксиэтиленсорбитан, а также их комбинации. Алкилполигли-козиды и жирные амиды сахаридов (например, метилглюконамиды) также являются подходящими неио-ногенными поверхностно-активными веществами.
Предпочтительные анионогенные поверхностно-активные вещества включают мыло, простые ал-килэфирсульфаты и сульфонаты, алкилсульфаты и сульфонаты, алкилбензолсульфонаты, алкил- и диал-килсульфосукцинаты, Q-C^-ацилизетионаты, простые Q-C^-алкилэфирфосфаты и их комбинации.
Солнцезащитные фильтры включают такие материалы, которые обычно используют для блокирования ультрафиолетового излучения. Характерными соединениями являются производные РАВА, цин-намат и салицилат. Например, можно использовать авобензофенон (парсол 1789(r)), октилметоксицинна-мат и 2-гидрокси-4-метоксибензофенон (также известный как оксибензон). Октилметоксициннамат и 2-гидрокси-4-метоксибензофенон коммерчески доступны под товарными знаками Парсол МСХ и бензофе-нон-3, соответственно. Точное количество солнцезащитного фильтра, используемого в композиции, может изменяться в зависимости от степени желательной защиты от УФ-излучения. Также можно использовать добавки, которые отражают или рассеивают солнечные лучи. Такие добавки включают оксиды, подобные оксиду цинка и диоксиду титана.
Композиции по настоящему изобретению могут включать широкий ряд других необязательных компонентов. В CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition, 1992, которая полностью включена в настоящее описание посредством ссылки, описывается широкое разнообразие не имеющих ограничения косметических и фармацевтических ингредиентов, обычно используемых в индустрии товаров для ухода за кожей, которые подходят для использования в композициях по настоящему изобретению. Примеры включают антиоксиданты, связующие вещества, биологические добавки, буферирующие вещества, красители, полимеры, вяжущие вещества, отдушку, замутняющие компоненты, кондиционеры, средства для отшелушивания, регуляторы рН, консерванты, натуральные экстракты, эфирные масла, вещества для улучшения ощущения кожи (skin sensates), успокаивающие средства для кожи и лечебные средства для кожи.
При изготовлении композиции по настоящему изобретению нужные ингредиенты смешивают в любом порядке и обычно при температуре от примерно 70 до примерно 80°С и при атмосферном давлении.
Упаковкой для композиции по настоящему изобретению может быть полоска, пузырек, туба, шариковая упаковка, аппликатор, аэрозольное устройство с пропеллентом, емкость под давлением или баночка с крышкой.
Во втором аспекте изобретение относится к способу отбеливания кожи у человека, включающему стадию нанесения композиции по изобретению на кожу.
Теперь изобретение будет поясняться с помощью приведенных далее не являющихся ограничением примеров.
Примеры
Пример 1. Исследования in vitro действия ниацинамида и галардина на ингибирование меланина
Материалы
(i) Первичные меланоциты крайней плоти новорожденного, среда 254 и добавка-2 для выращивания
меланоцитов человека (Life Technologies)
(ii) Галардин (R)-N4-гидрокси-N1-[(S)-2-(1H-индол-3-ил)-1-метилкарбамоилэтил]-2-изобутил-
сукцинамид (Sigma Aldrich)
(iii) Никотинамид (Sigma Aldrich)
(iv) Гексилрезорцин (Sigma Aldrich)
(v) Кальцеин-АМ - ацетоксиметиловый сложный эфир кальцеина (Sigma Aldrich)
(vi) ДМСО - диметилсульфоксид (Sigma Aldrich)
(vii) Гидроксид натрия (Merck Specialities Pvt. Ltd.)
(viii) HEPES - (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновая кислота, №(2-гидрокси-
этил)пиперазин-№-(2-этансульфоновая кислота) (Sigma Aldrich)
(ix) NaCl - хлорид натрия (Fisher Scientific)
(x) NP40 - нонидет Р 40 (USB Corporation)
(xi) PMSF - фенилметансульфонил фторид (Sigma Aldrich)
(xii) Коктейль ингибиторов протеаз (Sigma Aldrich)
(xiii) L-Тирозин (Sigma Aldrich)
Методы
(i) Культуры клеток
Первичные меланоциты крайней плоти новорожденного приобретают у Life Technologies, США. Клетки выращивают в среде 254 с добавлением добавки-2 для выращивания меланоцитов человека и сохраняют при 37°С в увлажненном инкубаторе в атмосфере с 5% CO2. Сохранение и субкультивирование клеток осуществляют по инструкциям изготовителя. Клетки пассажей 3-6 были использованы для экспериментов.
(ii) Добавление активных компонентов
Клетки высевают при плотности 5х104/лунка в 24-луночные планшеты в средах для выращивания меланоцитов (MGM) и инкубируют в течение 24 ч при 37°С/5% CO2. Активные компоненты добавляют к клеткам вместе с релевантными контролями. Через 72 ч после обработки активными компонентами определяют жизнеспособность клеток с использованием метода с кальцеином с последующим измерением содержания клеточного меланина (описано в разделах ниже).
(iii) Анализ клеток на жизнеспособность
Коротко, использованную среду удаляют, и клетки промывают один раз 0,2 мл 1х раствора PBS-Ca-Mg. В каждую лунку добавляют свежеприготовленный раствор 1 мкМ кальцеина-АМ в буфере с PBS. Планшеты инкубируют в течение 30 мин при 37°С в инкубаторе с CO2. Затем измеряют флуоресценцию кальцеина (возбуждение при 450 нм и испускание при 520 нм) с помощью планшет-ридера TECAN M1000.
(iv) Анализ содержания меланина
После измерений с кальцеином культуры промывают PBS (1х) и лизируют в течение 1 ч при 60°С в шейкерном инкубаторе с использованием смеси NaOH/ДМСО. Содержание меланина измеряют с помощью планшет-ридера Тесап (фильтр 405 нм), корректируют на число клеток и представляют в виде % ингибирования.
(v) Анализ in vitro активности человеческой тирозиназы
Приведенная выше таблица (табл. I) подчеркивает синергичное снижение содержания меланина в меланоцитах, полученное при комбинировании галардина с ниацинамидом. Данные в табл. I показывают, что галардин сам по себе или не дает снижения (при 1 мкМ) или дает небольшое снижение (при 10
Лизат первичных меланоцитов человека используют в качестве источника фермента тирозиназы. Лизат меланоцитов человека и испытываемые активные компоненты (в различных концентрациях) инкубируют вместе в течение 15 мин перед добавлением смеси тирозин/субстрат DOPA. Затем аналитический планшет инкубируют при 37°С в течение -14-16 ч. Измеряют оптическую плотность при 405 нм и вычисляют % ингибирования.
мкМ) содержания меланина в первичных меланоцитах человека. Однако, когда галардин и ниацинамид соединяют вместе в различных соотношениях, получают синергичное снижение содержания меланина при конкретных испытываемых концентрациях каждого активного компонента.
Таблица II также поясняет, что такое снижение содержания меланина не происходит через прямую модуляцию активности фермента тирозиназы. Схожие результаты также видны с ниацинамидом.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция для отбеливания кожи, содержащая:
a) эффективное количество ниацинамида и
b) эффективное количество галардина.
2. Композиция для отбеливания кожи по п.1, при этом композиция содержит 0,00001-10 мас.% га-лардина.
3. Композиция для отбеливания кожи по п.1 или 2, при этом композиция содержит 0,001-10 мас.% ниацинамида.
4. Композиция для отбеливания кожи по любому из пп.1-3, дополнительно содержащая средство для отбеливания кожи.
5. Композиция для отбеливания кожи по любому из пп.1-4 в форме топической композиции.
6. Применение композиции по любому из пп.1-5 для отбеливания кожи.
7. Способ отбеливания кожи у человека, включающий стадию нанесения композиции по любому из пп.1-5 на кожу.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032574
- 1 -
032574
- 1 -
032574
- 1 -
032574
- 1 -
032574
- 9 -
|
