|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Применение (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для лечения боли. 2. Способ лечения боли, включающий введение субъекту, страдающему от боли, эффективного количества (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли. 3. Применение (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения боли. 4. Применение по п.1, где боль является воспалительной болью. 5. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является мезилат. 6. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является сульфат или его гидрат. 7. Способ по п.2, где боль является воспалительной болью. 8. Применение по п.3, где боль является воспалительной болью.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Применение (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для лечения боли. 2. Способ лечения боли, включающий введение субъекту, страдающему от боли, эффективного количества (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли. 3. Применение (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения боли. 4. Применение по п.1, где боль является воспалительной болью. 5. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является мезилат. 6. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является сульфат или его гидрат. 7. Способ по п.2, где боль является воспалительной болью. 8. Применение по п.3, где боль является воспалительной болью.
Евразийское 032512 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.06.28
(21) Номер заявки 201792123
(22) Дата подачи заявки 2016.04.22
(51) Int. Cl. A61K31/437 (2006.01) A61P21/00 (2006.01)
(54) ЛЕЧЕНИЕ БОЛИ
(31) 1507048.5 (56) WO-A1-2014199171
(32) 2015.04.24 ^VS^9
(33) GB US-A1-2007066646
(33) GB WO-A1-2015159112
(43) 2018.03.30
(86) PCT/GB2016/051122
(87) WO 2016/170353 2016.10.27
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
БЕНЕВОЛЕНТАЙ КЕМБРИДЖ ЛИМИТЕД (GB)
(72) Изобретатель:
Гонсалес Изабель, Притчард Мартин, Ричардсон Питер (GB)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) В изобретении представлены (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и его соли для применения при лечении боли.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к применению ингибитора SSAO (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата и его солей при лечении боли.
Предпосылки создания изобретения
Активность семикарбазидчувствительной аминоксидазы (SSAO) является ферментативной активностью, выражаемой белком сосудистой адгезии-1 (VAP-1) или медьсодержащей аминоксидазой 3 (АОС3), принадлежащей к семейству ферментов медьсодержащих аминоксидаз (ЕС.1.4.3.6). Поэтому ингибиторы фермента SSAO могут также модулировать биологические функции белка VAP-1.
Активность SSAO обнаружена в различных тканях, включая ткань сосудистых и несосудистых гладких мышц, эндотелий и жировую ткань [Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res., 1984, 17, 223-256; Nakos & Gossrau, Folia Histochem. Cytobiol., 1994, 32, 3-10; Yu et al., Biochem. Pharmacol., 1994, 47, 1055-1059; Castillo et al., Neurochem. Int., 1998, 33, 415-423; Lyles & Pino, J. Neural. Transm. Suppl., 1998, 52, 239-250; Jaakkola et al., Am. J. Pathol., 1999, 155, 1953-1965; Morin et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, 297, 563572; Salmi & Jalkanen, Trends Immunol., 2001, 22, 211-216]. Кроме того, белок SSAO обнаружен в плазме крови, и оказывается, что такая растворимая форма имеет свойства, схожие с формой, связанной с тканью [Yu et al., Biochem. Pharmacol., 1994, 47, 1055-1059; Kurkijarvi et al., J. Immunol., 1998, 161, 15491557].
Точная физиологическая роль этого распространенного фермента пока не определена полностью, но оказывается, что SSAO и продукты ее взаимодействия могут иметь некоторые функции в регуляции и передаче сигнала клеткой. Например, последние исследования предполагают, что SSAO играет роль как в опосредуемом GLUT4 поглощении глюкозы [Enrique-Tarancon et al., J. Biol. Chem., 1998, 273, 80258032; Morin et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, 297, 563-572], так и в дифференцировке адипоцитов [Fontana et al., Biochem. J., 2001, 356, 769-777; Mercier et al., Biochem. J., 2001, 358, 335-342]. Кроме того, показано, что SSAO вовлекается в воспалительные процессы, где она действует как адгезивный белок для лейкоцитов [Salmi & Jalkanen, Trends Immunol., 2001, 22, 211-216; Salmi & Jalkanen, в "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition" K. Ley (Ed.), 2007, p. 237-251], и также может играть роль в развитии и сохранении матрикса соединительной ткани [Langford et al., Cardiovasc. Toxicol., 2002, 2(2), 141-150; Goktiirk et al., Am. J. Pathol., 2003, 163(5), 1921-1928]. Более того, недавно обнаружена связь между SSAO и ангиогенезом [Noda et al., FASEB J., 2008, 22(8), 2928-2935], и на основании этой связи ожидается, что ингибиторы SSAO имеют антиангиогенное действие.
Некоторые исследования на людях показали, что активность SSAO в плазме крови повышается при состояниях, таких как застойная сердечная недостаточность, сахарный диабет, болезнь Альцгеймера и воспаление [Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res., 1984, 17, 223-256; Boomsma et al., Cardiovasc. Res., 1997, 33, 387-391; Ekblom, Pharmacol. Res., 1998, 37, 87-92; Kurkijarvi et al., J. Immunol., 1998, 161, 1549-1557; Boomsma et al., Diabetologia, 1999, 42, 233-237; Meszaros et al., Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 1999, 24, 299-302; Yu et al., Biochim. Biophys. Acta, 2003, 1647(1-2), 193-199; Matyus et al., Curr. Med. Chem., 2004, 11(10), 1285-1298; O'Sullivan et al., Neurotoxicology, 2004, 25(1-2), 303-315; del Mar Hernandez et al., Neurosci. Lett., 2005, 384(1-2), 183-187]. Предполагается, что реакционноспособные альдегиды и перок-сид водорода, выработанные эндогенными аминоксидазами, вносят вклад в развитие сердечнососудистых заболеваний, диабетических осложнений и болезни Альцгеймера [Callingham et al., Prog. Brain Res., 1995, 106, 305-321; Ekblom, Pharmacol. Res., 1998, 37, 87-92; Yu et al., Biochim. Biophys. Acta, 2003, 1647(1-2), 193-199; Jiang et al., Neuropathol Appl Neurobiol., 2008, 34(2), 194-204]. Кроме того, ферментативная активность SSAO вовлекается в процесс экстравазации лейкоцитов в местах воспаления, где, как показано, SSAO в значительной степени экспрессируется на эндотелии сосудов [Salmi et al., Immunity, 2001, 14(3), 265-276; Salmi & Jalkanen, в "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition", K. Ley (Ed.), 2007, p. 237-251]. Соответственно, предполагается, что ингибирование SSAO имеет терапевтическую ценность при предупреждении диабетических осложнений и при воспалительных заболеваниях [Ekblom, Pharmacol. Res., 1998, 37, 87-92; Salmi et al., Immunity, 2001, 14(3), 265-276; Salter-Cid et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315(2), 553-562].
В WO 2007/146188 утверждается, что блокада активности SSAO ингибирует рекрутмент лейкоцитов, ослабляет воспалительную реакцию и ожидается, будет благоприятной при предупреждении и лечении пароксизмов, например, при эпилепсии.
O'Rourke et al. (J. Neural. Transm., 2007; 114(6): 845-9) проверяли потенциальные ингибиторы SSAO при неврологических заболеваниях, причем предварительно показали эффективность ингибирования SSAO на крысиной модели удара. Ингибитор SSAO проверяли на рецидивирующем-ремиттирующем экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (ЕАЕ), мышиная модель которого разделят многие характеристики рассеянного склероза человека. Результаты показывают возможное клиническое благоприятное действие терапии низкомолекулярными веществами против SSAO на такой модели и, следовательно, при лечении рассеянного склероза человека.
Нокаутированные для SSAO животные фенотипично явно нормальные, но проявляют заметное ослабление воспалительных реакций, вызванных в ответ на различные воспалительные раздражители [Sto
len et al., Immunity, 2005, 22(1), 105-115]. Кроме того, показано с использованием антител и/или небольших молекул, что противодействие ее функции у животных дикого типа на многих животных моделях болезни человека (например, вызванного каррагинаном воспаления конечностей, вызванного оксазооло-ном колита, вызванного липополисахаридом воспаления легких, вызванного коллагеном артрита, вызванного эндотоксином увеита) является защитным при снижении инфильтрации лейкоцитов, уменьшении тяжести фенотипа заболевания и снижении уровней воспалительных цитокинов и хемокинов [Kirton et al., Eur. J. Immunol., 2005, 35(11), 3119-3130; Salter-Cid et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 315(2), 553562; McDonald et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2007, 42, 229-243; Salmi & Jalkanen, в "Adhesion Molecules: Functions and Inhibition", K. Ley (Ed.), 2007, p. 237-251; Noda et al., FASEB J., 2008 22(4), 1094-1103; Noda et al., FASEB J., 2008, 22(8), 2928-2935]. Оказывается, что такая противовоспалительная защита предоставляется в широком ряду моделей воспаления у всех независимо от причинных механизмов, а не ограничивается одним определенным заболеванием или моделью заболевания. Это позволяет предположить, что SSAO может являться ключевой центральной точкой для регуляции воспалительной реакции, и следовательно вероятно, что ингибиторы SSAO будут эффективными противовоспалительными лекарственными средствами при широком ряде заболеваний человека. VAP-1 также вовлечен в развитие и поддержание фиброзных заболеваний, включая болезни печени и легких. Weston and Adams (J. Neural. Transm., 2011, 118(7), 1055-64) суммировали экспериментальные данные о вовлечении VAP-1 в фиброз печени, и Weston et al. (EASL Poster, 2010) сообщают, что блокада VAP-1 ускоряет рассасывание фиброза, вызванного четыреххлористым углеродом. Кроме того, VAP-1 вовлекается в воспаление легких (например, см. Singh et al., 2003, Virchows Arch., 442: 491-495), что предполагает, что блокаторы VAP-1 могут ослаблять воспаление легких и таким образом благоприятны для лечения мусковисцидоза путем лечения как профиброзного, так и провоспалительного аспектов заболевания.
SSAO (VAP-1) апрегулируется при раке желудка и идентифицирована в сосудистой сети опухоли меланомы, гепатомы и опухолях головы и шеи человека (Yoong KF, McNab G., Hubscher SG, Adams DH (1998), J. Immunol., 160, 3978-88; Irjala H., Salmi M., Alanen K., Grenman R., Jalkanen S (2001), Immunol., 166, 6937-6943; Forster-Horvath C., Dome B., Paku S. et al. (2004), Melanoma Res., 14, 135-40). В одном сообщении (Marttila-Ichihara F., Castermans K., Auvinen K., Oude Egbrink MG, Jalkanen S., Griffioen AW, Salmi M. (2010), J. Immunol., 184, 3164-3173) показано, что у мышей с ферментативно неактивным VAP-1 меланомы растут медленнее, и у них уменьшенные число и диаметр кровеносных сосудов опухоли. Уменьшенный рост таких опухолей также отражается в меньшей (на 60-70%) инфильтрации миелоидных супрессорных клеток. Обнадеживает, что дефицит VAP-1 не влияет на образование сосудов или лимфо-сосудов в нормальной ткани.
В силу указанных выше доводов ожидается, что ингибирование SSAO будет снижать уровни продуктов провоспалительных ферментов (альдегидов, пероксида водорода и аммиака), и причем в то же время уменьшается адгезивная способность иммунных клеток и соответственно их активация и конечная экстравазация. Заболевания, при которых ожидается, что такая активность является терапевтически благоприятной, включают все заболевания, где иммунные клетки играют заметную роль в инициации, поддержании или рассасывании патологии таких воспалительных заболеваний и иммунных/аутоиммунных заболеваний. Примеры таких заболеваний включают рассеянный склероз, артрит и васкулит.
В WO 2010/031789 (включенной в настоящее описание в качестве ссылки) раскрывается перспективный класс соединений ингибиторов SSAO, причем особенно перспективным является соединение примера 16, которое представляет собой свободное основание (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и имеет следующую структуру:
Боль является неприятным состоянием, которое может нанести вред качеству жизни индивидуума. Существует неудовлетворенная потребность в новых средствах для лечения боли.
Сущность изобретения
После широких исследований обнаружено, что (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-^^Д-тетрагидро^Н-имидазо^^-^пиридин^-карбоксилат неожиданно эффективен при лечении боли.
Краткое описание чертежей Фигура показывает действие (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо^^-^пиридин^-карбоксилата на модели термической гиперальгезии (боли), вызванной CFA.
Определения
Термин "боль", используемый в настоящем описании, включает воспалительную боль. В одном воплощении боль является воспалительной болью.
"Лечение" при использовании в настоящем описании включает профилактику названного расстройства или состояния или облегчение или устранение расстройства как только оно установлено.
Термин "эффективное количество" относится к количеству соединения, которое дает терапевтический эффект субъекту, которого лечат. Терапевтический эффект может быть объективным (т.е. который можно измерить с помощью некоторого теста или маркера) или субъективным (т.е. субъект показывает или ощущает действие).
"Фармацевтически приемлемый" означает применимость при получении фармацевтической композиции, которая вообще безопасна, нетоксична и ни биологически, ни как-то иначе не является нежелательной, и включает применимость для применения в ветеринарии, а также фармацевтическое применение человеком.
Если не указано иное, термин "(3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо^^-^пиридин^-карбоксилат", используемый в связи с кристаллической формой соли, описанной в настоящем описании, включает смесь энантиомеров (3S,4S) и (3R,4R). В одном воплощении (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат и его соли имеют абсолютную чистоту > 95%, предпочтительно > 99%, предпочтительнее > 99,5%. В одном воплощении (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат обозначает (3S,4S) энантиомер, имеющий энантиомерную чистоту > 95%, предпочтительно > 99%, предпочтительнее > 99,5%. В одном воплощении ^)-тетрагидрофуран-3-ил-^)-4-изопропил-^^^-тетграгидро^Н-имидазо^^-^пиридин^-карбоксилат имеет диастереоизомерную чистоту > 95%, предпочтительно > 99%, предпочтительнее > 99,5%.
Подробное описание изобретения (3S)-Тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат можно использовать как таковой или в форме его фармацевтически приемлемой соли. Соли включают фармацевтически приемлемые соли, например соли присоединения кислот, образованные с неорганическими или органическими кислотами, такие как гидрохлориды, гидробромиды, п-толуолсульфонаты, фосфаты, сульфаты, перхлораты, ацетаты, трифторацетаты, пропионаты, цитраты, малонаты, сукцинаты, лактаты, оксалаты, тартраты и бензоаты. Для общего представления о солях см. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim,
Germany, 2002).
Соли также могут быть образованы с основаниями. Такие соли включают соли, полученные с неорганическими или органическими основаниями, например соли щелочноземельных металлов, такие как магниевые и кальциевые соли, и соли органических аминов, такие как соли морфолина, пиперидина, диметиламина или диэтиламина. Особой солью является мезилат. Другой солью является сульфат, который существует в виде гидрата. В одном воплощении гидрат представляет собой сульфат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата.1,5Н2О.
Типичная дозировка составляет 2-20 мг/кг, вводимая один или несколько раз в день или непрерывной инфузией. Типичная общая суточная дозировка для человека составляет 1-2000 мг/сутки, предпочтительно от 200 до 2000 мг/сутки, предпочтительнее от 500 до 2000 мг/сутки.
(3S)-Тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат можно вводить в различных лекарственных формах. Так, его можно вводить перорально, например, в виде таблетки, капсулы, пастилки, лепешки, водной или масляной суспензии, диспергируемого порошка или гранулы. Лекарственное средство предпочтительно вводят пероральным путем. Однако следует иметь в виду, что конкретный уровень дозы для определенного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая возраст, массу тела, состояние здоровья, пол, питание пациента, время введения, комбинацию лекарственных средств и тяжесть определенного состояния, от которого лечат.
Фармацевтическая композиция, содержащая активный ингредиент, может находиться в любой подходящей форме, например, водных или неводных растворов или суспензий, диспергируемых порошков или гранул, трансдермальных или трансмукозальных пэтчей, кремов, мазей или эмульсий.
Фармацевтическая композиция может находиться в форме стерильного водного или неводного (например, масляного) раствора или суспензии для инъекции. Стерильный препарат для инъекции также может находиться в виде стерильного раствора или суспензии для инъекции в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, в 1,3-бутандиоле. К числу приемлемых сред и растворителей, которые можно использовать, относятся вода, забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспензионной среды традиционно используют нелетучие масла. Для такой цели можно использовать любое смешанное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, при получении инъекции находят применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота. Суспензии можно получить согласно способам, известным в технике, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов.
Водные суспензии содержат активный ингредиент в смеси с эксципиентами, подходящими для изготовления водных суспензий. Такими эксципиентами являются суспендирующие агенты, например натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, по-ливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь; диспергирующие или смачивающие
агенты, такие как встречающийся в природе фосфатид, например лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтиленстеарат, или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, например полиоксиэтилена с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гекси-та, например моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Водные суспензии также могут содержать один или несколько консервантов, например этил- или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько корригентов и один или несколько подслащивающих агентов, таких как сахароза или сахарин.
Неводные (т.е. масляные) суспензии можно получить суспендированием активного ингредиента в растительном масле, например, арахисовом масле, оливковом масле, сезамовом масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например, пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Такие композиции можно сохранять, добавляя антиоксидант, такой как аскорбиновая кислота.
Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для получения водной суспензии путем добавления воды, предоставляют активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты известны.
Активный агент также можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения лекарственного средства. Такие композиции можно получить, смешивая лекарственное средство с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при обычных температурах, но жидким при ректальной температуре, и поэтому будет плавиться в прямой кишке, высвобождая лекарственное средство. Такими материалами являются масло какао и полиэтиленгликоли.
Для топической доставки можно использовать трансдермальные и трансмукозальные пэтчи, кремы, мази, желе, растворы или суспензии. Для сублингвальной доставки можно использовать композиции быстрорастворимых таблеток, а также ряд представленных выше композиций. В случае перорального введения лекарственное средство можно вводить в таблетках, капсулах или жидкостях.
Следующее далее исследование предоставляет данные, на которых основано настоящее изобретение.
(3S)-Тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат исследовали (фигура 1) на модели тепловой анальгезии, вызванной CFA, которая является признанной моделью воспалительной боли. Обнаружено, что ^)-тетрагидрофуран-3-ил-^)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат эффективен в зависимости от дозы и сравним по эффективности с золотым стандартом эталонным индометацином. Подробнее далее.
Оценка соли мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо^^ч^пиридин^-карбоксилата по гиперчувствительности у крысы, вызванной CFA (полный адъювант Фрейнда).
Оценку антигиперальгизивных свойств соли мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата проводят через измерение весовой нагрузки на конечности после гиперчувствительности, вызванной CFA. У наивных крыс их масса тела распределяется равномерно на обе задние лапы. Однако, когда инъецированная (левая) задняя лапа является болезненной, масса перераспределяется так, что на пораженную лапу приходится меньший вес (уменьшение весовой нагрузки на поврежденную лапу). Весовую нагрузку на каждую заднюю конечность измеряют с использованием прибора для теста инвадилизации у крыс (Linton Instruments, UK). Крыс помещают в прибор для теста инвадилизации задними лапами на отдельные сенсоры, и регистрируют среднее усилие, прилагаемое обеими задними конечностями, в течение 4 секунд. Инъекция CFA также вызывает отек, который можно оценить по объему лапы; объем измеряют с использованием пле-тизмометра. Заднюю лапу крысы помещают в цилиндр, содержащий раствор, и объем вытесненной жидкости определяет объем лапы.
Самцов наивных крыс Sprague Dawly акклиматизируют при доступе к корму и воде ad libitum. Вырабатывают привычку к прибору для теста инвадилизации. Перед вызыванием повреждения снимают показания исходной весовой нагрузки и объема лап. Воспалительную гиперчувствительность вызывают интраплантарной инъекцией CFA (100 мкл 1 мг/мл раствора) в левую заднюю лапу. Измерения весовой нагрузки и объема лапы перед обработкой для оценки гиперчувствительности проводят через 23 ч после CFA. Затем животных классифицируют и рандомизируют согласно окну CFA в плане на латинском квадрате. Дают соль мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо^^ч^пиридин^-карбоксилата по 150, 200 и 500 мг/кг, р.о. (дозируют в воде по 2 мл/кг, рН ~5-6), дополнительно среду и индометацин группе для сравнения, n=9-10 на группу. Весовую нагрузку оценивают во всех группах через 1, 2 и 4 ч после введения соединения. Объем лапы оценивают через 4 ч после введения соединения. Данные анализируют, сравнивая группы обработки с контрольной группой в каждый момент времени.
Показания весовой нагрузки (г) снимают как для правой, так и левой задних лап, и вычисляют раз
личие. Данные выражают в виде % обращения чувствительности к боли (показание после дозы - показание перед дозой)/(исходное показание - показание перед дозой)х100, где разницу различие исходной весовой нагрузки - различие исходной нагрузки перед дозой определяют как обратную окну CFA. Статистический анализ проводят с помощью ANOVA повторных измерений и затем теста плановых сравнений с использованием InVivoStat (invivostat.co.uk) (p <0,05 считают значимым).
Соль мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата при 150 мг/кг не показывает значимого обращения гиперчувствительности в любой момент времени, 250 мг/кг показывают значимое обращение в момент 4 ч, однако 500 мг/кг являются эффективными во все моменты времени с максимальным эффектом, видимым через 4 ч после дозы. Не отмечается действия соли мезилата (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата на объем лапы.
Синтез.
Используют следующие аббревиатуры:
водный,
DCM
дихлорметан,
DIPEA
диизопропилэтиламин,
энантиомерный избыток,
ES+
электрораспыление,
EtOAc
этилацетат,
час
час(ы),
ВЭЖХ
высокоэффективная жидкостная хроматография,
МСВР
масс-спектрометрия высокого разрешения,
ЖХМС
жидкостная хроматография/масс-спектрометрия,
молярный,
МеОН
метанол,
[MH+]
протонированный молекулярный ион,
мин
минуты,
обращенная фаза,
масс-спектрометрия,
время удерживания,
насыщ.
насыщенный,
ТГФ
тетрагидрофуран,
ТФК
трифторуксусная кислота.
Экспериментальные методы.
Все реагенты технической чистоты и используются как получены без дополнительной очистки, если не указано иное. Во всех случаях используют растворители химически чистые.
Аналитическую ЖХМС выполняют на масс-спектрометре Waters ZQ, соединенным с системой ВЭЖХ Agilent 1100. Аналитическую ВЭЖХ выполняют на системе Agilent 1100. Масс-спектры высокого разрешения (МСВР) получают на Agilent MSD-TOF, соединенном с системой ВЭЖХ Agilent 1100. Во время анализов калибровку проверяют с помощью двух масс и при необходимости автоматически корректируют. Спектры получают положительной ионизацией электрораспылением. Полученный диапазон массы составляет m/z 100-1100. Используют детекцию по профилю пиков масс-спектра. Флэш-хроматографию выполняют или на системе CombiFlash Companion, снабженной колонками с диоксидом кремния RediSep, или на системе Flash Master Personal, снабженной гигатрубками (gigatubes) с диоксидом кремния Strata SI-1. ВЭЖХ с обращенной фазой выполняют на системе Gilson (насос Gilson 322 с насосом Gilson 321 для уравновешивания и автоматическим пробоотборником Gilson 215), снабженной колонками Phenomenex Synergi Hydro RP, 150х10 мм, YMC ODS-A 100/150х20 мм или Chirobiotic T 250x10 мм. Колоночную хроматографию с обращенной фазой выполняют на системе Reverse Gilson (насос Gilson 321 и сборник фракций Gilson FC204), снабженной колонками с диоксидом кремния Merck LiChroprep(r) RP-18 (40-63 мкм). Соединения называют автоматически с использованием ACD 6.0. Все соединения сушат в вакууме в течение ночи.
Данные аналитической ВЭЖХ и ЖХМС получают с помощью
системы А: Phenomenex Synergi Hydro RP (C18, 30x4,6 мм, 4 мкм), градиент 5-100% CH3CN (+0,085% ТФК) в воде (+0,1% TFA), 1,5 мл/мин, со временем градиента 1,75 мин, 200 нм, 30°C; или
системы B: Phenomenex Synergi Hydro RP (C18, 150x4,6 мм, 4 мкм), градиент 5-100% CH3CN (+0,085% ТФК) в воде (+0,1% TFA), 1,5 мл/мин со временем градиента 7 мин, 200 нм, 30°C.
Данные хиральной ВЭЖХ получают с помощью
системы C: Chirobiotic V полярно-ионного типа (150x4,6 мм), 70% MeOH в 10 мМ водн. аммоний-формиатном буфере, 1,0 мл/мин в течение 10 мин, 200 нм, 30°C.
Гидрохлорид гистамина (61,9 г, 336 ммоль) растворяют в растворе NaOH (33,6 г. 841 ммоль) в воде (125 мл) и МеОН (500 мл), и добавляют изобутиральдегид (61,4 мл, 672 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником при 80°С в течение 24 ч, охлаждают до комнатной температуры, рН доводят до 7 1 М водн. раствором HCl (250 мл) и растворители удаляют в вакууме. Остаток растворяют в теплом МеОН (300 мл), оставляют на 1 ч, фильтруют и растворители удаляют в вакууме. Остаток перемешивают в МеОН (50 мл) и ацетоне (400 мл) в течение 2 час и охлаждают до 4°С в течение 2 ч. Полученное выпавшее в осадок вещество промывают ацетоном (100 мл) и получают гидрохлорид 4-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-c]пиридина (33,0 г, 48,7%) в виде белого твердого вещества.
Аналитическая ЖХМС: чистота > 90% (система А, RT=0,51 мин), ES+: 166,4 [MH]+. Промежуточное соединение 2.
4-Нитрофенил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат
Промежуточное соединение 1 (2,78 г, 8,28 ммоль, чистота 60%) и DIPEA (5,27 мл, 30,3 ммоль) растворяют в DCM (100 мл). Реакционную смесь охлаждают до 0°С и добавляют 4-нитрофенилхлорформиат (4,07 г, 20,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь промывают насыщ. водн. раствором NaHCO3 (5x100 мл), сушат (MgSO4), растворители удаляют в вакууме и получают 4-нитрофенил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро^Н-имидазо^^-^пиридин^-карбоксилат (5,28 г, неочищенный) в виде желтой смолы.
Аналитическая ВЭЖХ: чистота 41% (система В, RT=4,70 мин). Аналитическая ЖХМС: чистота 86% (система А, RT=1,70 мин), ES+: 331,0 [MH]+.
(3S)-Тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат
NaH (0,40 г, 10,0 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле) суспендируют в безводном ТГФ (20 мл), охлаждают до 0°С и добавляют ^)-3-гидрокситетрагидрофуран (0,88 г, 0,68 мл, 10,0 ммоль). Суспензию перемешивают при 0°С в течение 30 мин, затем добавляют к раствору промежуточного соединения 2 (3,30 г, 10,0 ммоль, чистота 70%) в ТГФ (60 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре. Добавляют еще две дополнительные порции NaH и (S)-3-гидрокситетрагидрофурана в ТГФ через 5 и 29 ч соответственно. Через 2 суток реакцию гасят водой (10 мл) и растворители удаляют в вакууме. Остаток растворяют в EtOAc (100 мл), промывают 1 М водн. раствором Na2CO3 (4x100 мл), сушат (MgSO4) и растворители удаляют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией (нормальная фаза, 20 г Strata Si-1, гигатрубка с диоксидом кремния, DCM (200 мл), затем 2, 4 и 5% МеОН в DCM (каждый раз 200 мл)) и ВЭЖХ с обращенной фазой (YMC ODS-A 100x20 мм, 5 мкм, 25 мл/мин, градиент 30-60% (в течение 7 мин), затем 100% (3 мин) MeOH в смеси 10% MeOH/вода), и получают ^)-тетрагидрофуран-3-ил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-^пиридин-5-карбоксилат (34,8 мг, 1,1%) в виде белого твердого вещества.
Аналитическая ВЭЖХ: чистота 100% (система В, RT=3,63 мин). Аналитическая ЖХМС: чистота 100% (система В, RT=4,01 мин), ES+: 280,1 [MH]+.
(3S)-Тетрагидрофуран-3-ил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат (39,91 мг) растворяют в 10 мМ аммонийформиатном буфере и МеОН (2 мл, 1:1) и дважды очищают хиральной ВЭЖХ с обращенной фазой (Chirobiotic T, 250x10 мм, 3 мл/мин, изократное элюи-рование 70% МеОН в 10 мМ аммонийформиатном буфере (40 мин), рН 7,4), получают отдельный диа-стереоизомер (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-^пиридин-5-карбоксилат (6,90 мг, ее 99%).
Аналитическая ВЭЖХ: чистота 100% (система В, RT=3,63 мин); хиральная ВЭЖХ: чистота 99,5% (система С, RT=2,22 мин); аналитическая ЖХМС: чистота 100% (система В, RT=3,90 мин), ES+: 280,1 [MH]+; МСВР вычислено для C14H21N3O3 279,1583, найдено 279,1571.
Соль метансульфоновой кислоты (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата (пример 1).
Свободное основание (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо^^-^пиридин^-карбоксилат (460 мг, 1,65 ммоль) растворяют в EtOAc (10 мл) при комнатной температуре и получают прозрачный бесцветный раствор. Добавляют по частям метансульфоновую кислоту (107 мкл) при слабом нагревании. Раствор охлаждают до комнатной температуры в течение ночи. Полученные кристаллы собирают фильтрацией, промывают EtOAc (2x10 мл) и сушат в течение ночи при 40°С в вакууме. Соль мезилат (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилата получают с выходом 99% (615 мг) в виде белого кристаллического твердого вещества. ВЭЖХ: время удерживания 2,27 мин, чистота 99,5%. Температура плавления 189°C. ЖХМС: время удерживания 4,19 мин, ES+ 280,0 [MH]+, чистота 100%. Хиральная ВЭЖХ: время удерживания 3,70 мин, de > 99,5%.
1H ЯМР (400 МГц, CDCb): 8н 8,72 (1H, м, NHCHNH+), 5,29 (1H, м, OCH), 5,05 (0,5H, д, J=8,4 Гц, CCHN), 4,89 (0,5H, д, J=7,6 Гц, CCHN), 4,59 (0,5H, м, NCHACHB), 4,39 (0,5H, м, NCHACHB), 3,97-3,85 (4H, м, CH2OCH2), 3,20 (1H, м, NCHACHB), 2,89 (3H, с, CH3SO3-), 2,89-2,72 (2H, м, CCH2CH2N), 2,23-2,07 (3H, м, CH(CH3)2, OCH2CH2), 1,16 (3H, д, J=6,4 Гц, CH3) и 1,06-0,96 (3H, м, CH3).
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-
с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для лечения бо-
ли.
2. Способ лечения боли, включающий введение субъекту, страдающему от боли, эффективного ко-
личества (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-
карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли.
3. Применение (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-
с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для получения
лекарственного средства для лечения боли.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
4. Применение по п.1, где боль является воспалительной болью.
5. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является мезилат.
6. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является сульфат или его гидрат.
7. Способ по п.2, где боль является воспалительной болью.
8. Применение по п.3, где боль является воспалительной болью.
032512
- 1 -
(19)
032512
- 1 -
(19)
032512
- 1 -
(19)
032512
- 9 -
(19)
|
