[RU]

1. Соединение формулы II-E или его фармацевтически приемлемая соль; где R ₁ представляет собой 3-6-членный гетероциклил, -C _1-10 алкил-(3-6-членный гетероциклил), -(3-6-членный гетероциклил)-C _1-10 алкил, -(3-6-членный гетероциклил)-С _6-10 арил или -(3-6-членный гетероциклил)-C _1-10 гетарил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₀ или R ₁₁ заместителями; R ₂₁ представляет собой -L-C _1-10 гетероалкил, -L-С _6-10 арил, -L-C _1-10 гетарил, -L-C _3-10 циклоалкил или -L-C _1-10 гетероциклил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₂ заместителями; L представляет собой связь; R ₇₂ представляет собой водород; R ₁₀ представляет собой -C _1-10 алкил, -С _2-10 алкенил, -С _2-10 алкинил, -C _1-10 гетероалкил, -С _6-10 арил, -C _1-10 гетарил, -С _3-10 циклоалкил или -C _1-10 гетероциклил, каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₁ заместителями; R ₁₁ и R ₁₂ независимо представляют собой водород, галоген, -C _1-10 алкил, -С _2-10 алкенил, -С _2-10 алкинил, -C _1-10 гетероалкил, -С _6-10 арил, -C _1-10 гетарил, -С _3-10 циклоалкил, -C _1-10 гетероциклил, -ОН, -CF ₃ , -OCF ₃ , -OR ³¹ , -NR ³¹ R ³² , -C(O)R ³¹ , -CO ₂ R ³¹ , -C(=O)NR ³¹ , -NO ₂ , -CN, -S(O) _0-2 R ³¹ , -SO ₂ NR ³¹ R ³² , -NR ³¹ C(=O)R ³² , -NR ³¹ C(=O)OR ³² , NR ³¹ C(=O)NR ³² R ³³ , -NR ³¹ S(O) _0-2 R ³² , -C(=S)OR ³¹ , -C(=O)SR ³¹ , NR ³¹ C(=NR ³² )NR ³² R ³³ , -NR ³¹ C(=NR ³² )OR ³³ , -NR ³¹ C(=NR ³² )SR ³³ , -ОС(=O)OR ³³ , -ОС(=O)NR ³¹ R ³² , -OC(=O)SR ³¹ , -SC(=O)SR ³¹ , -P(O)OR ³¹ OR ³² или SC(=O)NR ³¹ NR ³² ; и каждый из R ³¹ , R ³² и R ³³ независимо представляет собой водород, галоген, -C _1-10 алкил, -С _2-10 алкенил, -С _2-10 алкинил, -C _1-10 гетероалкил, -С _6-10 арил, -C _1-10 гетарил, -С _3-10 циклоалкил или -C _1-10 гетероциклил, или R ³¹ вместе с R ³² образуют гетероциклическое кольцо; где каждый гетероалкил содержит по крайней мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из О, N, P, Si и S; каждый гетарил содержит один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S; каждый гетероциклил содержит один, два или три кольцевых гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, О и S.

2. Соединение по п.1, где R ₂₁ представляет собой -L-C _1-10 гетарил, незамещенный или замещенный одним или несколькими независимыми R ₁₂ заместителями; и где L представляет собой связь.

3. Соединение по п.2, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ включает один или несколько атомов азота.

4. Соединение по п.3, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ выбран из группы, состоящей из пиразолила, пиридинила, пиразинила, пиримидинила, пиридазинила.

5. Соединение по п.4, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ является незамещенным.

6. Соединение по п.4, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ замещен одним, двумя или тремя независимыми R ₁₂ заместителями.

7. Соединение по любому из пп.2-4 или 6, где каждый R ₁₂ заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -C _1-10 алкила, -С _2-10 алкенила, -С _2-10 алкинила, -C _1-10 гетероалкила, -С _6-10 арила, -C _1-10 гетарила, -С _3-10 циклоалкила, -C _1-10 гетероциклила, -ОН, -CF ₃ , -OCF ₃ , -OR ³¹ ; где каждый R ³¹ независимо представляет собой водород или -C _1-10 алкил.

8. Соединение по п.7, где каждый R ₁₂ заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -Me, -Et, -i-Pr, -n-Pr, ОН, -ОМе, -OEt и -OPr.

9. Соединение по любому из пп.1-8, где R ₁ представляет собой каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₀ или R ₁₁ заместителями.

10. Способ ингибирования активности протеинкиназы, присутствующей в клетке, включающий контактирование указанной клетки с эффективным количеством соединения по любому из предшествующих пунктов.

11. Способ по п.10, где протеинкиназа представляет собой ERK.

12. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC ₅₀ значении меньше чем около 1000 нМ.

13. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC ₅₀ значении меньше чем около 100 нМ.

14. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC ₅₀ значении меньше чем около 10 нМ.

15. Способ по п.10, где стадия контактирования имеет место in vitro.

16. Способ по п.10, где стадия контактирования имеет место in vivo.

17. Способ уменьшения тяжести расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по любому из пп.1-9, где расстройство выбрано из группы, состоящей из рака, поражения костей, воспалительного заболевания, иммунного заболевания, заболевания нервной системы, метаболического заболевания, респираторного заболевания и сердечного заболевания.

18. Способ по п.17, где расстройство представляет собой рак, выбранный из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака щитовидной железы, семином, меланомы, рака мочевого пузыря, рака печени, рака почки, миелодиспластического синдрома (MDS), острого миелогенного лейкоза (AML) и колоректального рака.

19. Способ по п.18, где рак представляет собой меланому или колоректальный рак.

20. Способ по п.17, где расстройство опосредовано ERK1 и/или ERK2.

21. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать ERK, включающая эффективное количество соединения по любому из пп.1-9 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

22. Фармацевтическая композиция по п.21, где соединение присутствует в терапевтически эффективном количестве.

23. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована в виде лекарственной формы для перорального введения.

24. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована в виде таблетки или капсулы.

25. Соединение по п.1, выбранное из

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы II-E или его фармацевтически приемлемая соль; где R ₁ представляет собой 3-6-членный гетероциклил, -C _1-10 алкил-(3-6-членный гетероциклил), -(3-6-членный гетероциклил)-C _1-10 алкил, -(3-6-членный гетероциклил)-С _6-10 арил или -(3-6-членный гетероциклил)-C _1-10 гетарил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₀ или R ₁₁ заместителями; R ₂₁ представляет собой -L-C _1-10 гетероалкил, -L-С _6-10 арил, -L-C _1-10 гетарил, -L-C _3-10 циклоалкил или -L-C _1-10 гетероциклил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₂ заместителями; L представляет собой связь; R ₇₂ представляет собой водород; R ₁₀ представляет собой -C _1-10 алкил, -С _2-10 алкенил, -С _2-10 алкинил, -C _1-10 гетероалкил, -С _6-10 арил, -C _1-10 гетарил, -С _3-10 циклоалкил или -C _1-10 гетероциклил, каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₁ заместителями; R ₁₁ и R ₁₂ независимо представляют собой водород, галоген, -C _1-10 алкил, -С _2-10 алкенил, -С _2-10 алкинил, -C _1-10 гетероалкил, -С _6-10 арил, -C _1-10 гетарил, -С _3-10 циклоалкил, -C _1-10 гетероциклил, -ОН, -CF ₃ , -OCF ₃ , -OR ³¹ , -NR ³¹ R ³² , -C(O)R ³¹ , -CO ₂ R ³¹ , -C(=O)NR ³¹ , -NO ₂ , -CN, -S(O) _0-2 R ³¹ , -SO ₂ NR ³¹ R ³² , -NR ³¹ C(=O)R ³² , -NR ³¹ C(=O)OR ³² , NR ³¹ C(=O)NR ³² R ³³ , -NR ³¹ S(O) _0-2 R ³² , -C(=S)OR ³¹ , -C(=O)SR ³¹ , NR ³¹ C(=NR ³² )NR ³² R ³³ , -NR ³¹ C(=NR ³² )OR ³³ , -NR ³¹ C(=NR ³² )SR ³³ , -ОС(=O)OR ³³ , -ОС(=O)NR ³¹ R ³² , -OC(=O)SR ³¹ , -SC(=O)SR ³¹ , -P(O)OR ³¹ OR ³² или SC(=O)NR ³¹ NR ³² ; и каждый из R ³¹ , R ³² и R ³³ независимо представляет собой водород, галоген, -C _1-10 алкил, -С _2-10 алкенил, -С _2-10 алкинил, -C _1-10 гетероалкил, -С _6-10 арил, -C _1-10 гетарил, -С _3-10 циклоалкил или -C _1-10 гетероциклил, или R ³¹ вместе с R ³² образуют гетероциклическое кольцо; где каждый гетероалкил содержит по крайней мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из О, N, P, Si и S; каждый гетарил содержит один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S; каждый гетероциклил содержит один, два или три кольцевых гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, О и S.

2. Соединение по п.1, где R ₂₁ представляет собой -L-C _1-10 гетарил, незамещенный или замещенный одним или несколькими независимыми R ₁₂ заместителями; и где L представляет собой связь.

3. Соединение по п.2, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ включает один или несколько атомов азота.

4. Соединение по п.3, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ выбран из группы, состоящей из пиразолила, пиридинила, пиразинила, пиримидинила, пиридазинила.

5. Соединение по п.4, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ является незамещенным.

6. Соединение по п.4, где C _1-10 гетарил из R ₂₁ замещен одним, двумя или тремя независимыми R ₁₂ заместителями.

7. Соединение по любому из пп.2-4 или 6, где каждый R ₁₂ заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -C _1-10 алкила, -С _2-10 алкенила, -С _2-10 алкинила, -C _1-10 гетероалкила, -С _6-10 арила, -C _1-10 гетарила, -С _3-10 циклоалкила, -C _1-10 гетероциклила, -ОН, -CF ₃ , -OCF ₃ , -OR ³¹ ; где каждый R ³¹ независимо представляет собой водород или -C _1-10 алкил.

8. Соединение по п.7, где каждый R ₁₂ заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -Me, -Et, -i-Pr, -n-Pr, ОН, -ОМе, -OEt и -OPr.

9. Соединение по любому из пп.1-8, где R ₁ представляет собой каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми R ₁₀ или R ₁₁ заместителями.

10. Способ ингибирования активности протеинкиназы, присутствующей в клетке, включающий контактирование указанной клетки с эффективным количеством соединения по любому из предшествующих пунктов.

11. Способ по п.10, где протеинкиназа представляет собой ERK.

12. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC ₅₀ значении меньше чем около 1000 нМ.

13. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC ₅₀ значении меньше чем около 100 нМ.

14. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC ₅₀ значении меньше чем около 10 нМ.

15. Способ по п.10, где стадия контактирования имеет место in vitro.

16. Способ по п.10, где стадия контактирования имеет место in vivo.

17. Способ уменьшения тяжести расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по любому из пп.1-9, где расстройство выбрано из группы, состоящей из рака, поражения костей, воспалительного заболевания, иммунного заболевания, заболевания нервной системы, метаболического заболевания, респираторного заболевания и сердечного заболевания.

18. Способ по п.17, где расстройство представляет собой рак, выбранный из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака щитовидной железы, семином, меланомы, рака мочевого пузыря, рака печени, рака почки, миелодиспластического синдрома (MDS), острого миелогенного лейкоза (AML) и колоректального рака.

19. Способ по п.18, где рак представляет собой меланому или колоректальный рак.

20. Способ по п.17, где расстройство опосредовано ERK1 и/или ERK2.

21. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать ERK, включающая эффективное количество соединения по любому из пп.1-9 и фармацевтически приемлемый эксципиент.

22. Фармацевтическая композиция по п.21, где соединение присутствует в терапевтически эффективном количестве.

23. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована в виде лекарственной формы для перорального введения.

24. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована в виде таблетки или капсулы.

25. Соединение по п.1, выбранное из

---

Евразийское 032196 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.04.30
(21) Номер заявки 201690708
(22) Дата подачи заявки
2014.10.03
(51) Int. Cl.
A61K31/415 (2006.01) A61K31/495 (2006.01) C07D 471/14 (2006.01)
(54) ИНГИБИТОРЫ ERK И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
(31) 61/886,552; 62/032,446
(32) 2013.10.03; 2014.08.01
(33) US
(43) 2016.12.30
(86) PCT/US2014/059197
(87) WO 2015/051341 2015.04.09
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
КУРА ОНКОЛОДЖИ, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Ли Ляньшэн, Ву Тао, Фэн Цзюнь, Жэнь Пинда, Лю И (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU) (56) US-A-5116843
PubChem CID 70205837 December 1, 2012, pp. 1-9 [online], [retrieved on 2014-11-26] Retrieved from the Internet , page 3, formula
PubChem CID 18347999 December 4, 2007, pp. 1-9 [online], [retrieved on 2014-11-26] Retrieved from the Internet , page 3, formula
EP-A1-2455381
US-B1-6596726
TSURUO, T. et al. Platelet aggregation in the formation of tumor metastasis. Proceedings of the Japan Academy, Series B, Vol. 84, № 6, 2008, pp. 189-198 [online], [retrieved on 2014-11-26] Retrieved from the Internet abstract
US-A1-20080227767
PubChem CID 13481918 February 8, 2007, pp. 1-8 [online], [retrieved on 2014-11-26] Retrieved from the Internet , page 3, formula
US-A-3984556
WO-A2-2012170845
US-A-4042704 US-A1-20100056800
(57) Изобретение обеспечивает химические соединения общей формулы I и их фармацевтические композиции, которые способны модулировать некоторые протеинкиназы, такие как ERK (MAPK). Также обеспечиваются способы применения таких соединений или композиций и способы применения таких композиций для модулирования активностей одной или нескольких из этих киназ, особенно для терапевтических применений, таких как лечение расстройств, таких как рак.
Предпосылки изобретения
ERK киназы представляют собой серин/треонин киназы, которые опосредуют пути внутриклеточной сигнальной трансдукции, вовлеченные в опухолевый рост, прогрессирование и метастазы. ERK вовлечен в Ras/Raf/MEK/ERK путь, который играет центральную роль в регуляции клеточных процессов путем передачи внеклеточных сигналов от лиганд-связанных клеточно-поверхностных рецепторных ти-розинкиназ (RTKs), таких как ErbB (например, EGFR, Her-2 и т.п.), VEGF, PDGF и FGF рецепторные тирозинкиназы. Активация RTK запускает серию фосфорилирующих событий, начиная с активации Ras, с последующим рекрутментом и активацией Raf. Активированный Raf затем фосфорилирует киназу MAP киназы (MEK) 1/2, которая затем фосфорилирует ERK 1/2. Фосфорилирование ERK посредством MEK происходит на Y204 и Т202 для ERK1 и Y185 и Т183 для ERK2 (Ann et al., Methods in Enzymology 2001, 332, 417-431). Фосфорилированная ERK димеризуется и транслоцируется к ядру и аккумулируется в нем (Khokhlatchev et al., Cell. 1998, 93, 605-615). В ядре ERK вовлечена в некоторые важные клеточные функции, включая, но не ограничиваясь этим, внутриядерный транспорт, сигнальную трансдукцию, репарацию ДНК, сборку и транслокацию нуклеосом, мРНК процессинг и трансляцию (Ann et al., Molecular Cell. 2000, 6, 1343-1354). ERK2 фосфорилирует множество регуляторных белков, включая протеинкина-зы Rsk90 и МАРКАР2 ((Bjorbaek et al., 1995, J. Biol. Chem. 270, 18848; Rouse et al., 1994, Cell. 78, 1027), факторы транскрипции, такие как ATF2, Elk-1, c-Fos, c-Myc (Raingeaud et al., 1996, Mol. Cell. Biol. 16, 1247; Chen et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 10952; Oliver et al., 1995, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 210, 162). В целом, обработка клеток факторами роста приводит к активации ERK1 и ERK2, которая в результате приводит к пролиферации и, в некоторых случаях, дифференциации (Lewis et al., Adv. Cancer Res. 1998, 74, 49-139).
На основании большого количества проведенных исследований было показано, что генетические мутации и/или чрезмерная экспрессия протеинкиназ в Ras/Raf/MEK/ERK пути приводят к неконтролируемой клеточной пролиферации и образованию опухоли в пролиферативных заболеваниях, таких как рак. Например, некоторые типы рака содержат мутации, которые приводят к непрерывной активации этого пути из-за непрерывной продукции факторов роста. Другие мутации могут приводить к дефектам в дезактивации активированного GTP-связанного Ras комплекса, также приводя к активации MAP киназ-ного пути. Мутированные онкогенные формы Ras обнаружены в 50% рака толстой кишки и > 90% панкреатического рака, а также многих других типов рак (Kohl et al., Science 1993, 260, 1834-1837). Недавно bRaf мутации были определены в злокачественных меланомах (более чем 60%), раке щитовидной железы (более чем 40%) и колоректальном раке. Эти мутации в bRaf приводят к конститутивно активному Ras/Raf/MEK/ERK киназному каскаду. Исследования образцов первичных опухолей и клеточных линий также показали конститутивную или чрезмерную активацию Ras/Raf/MEK/ERK киназного пути в типах рака поджелудочной железы, толстой кишки, легкого, яичника и почки (Hoshino, R. et al., Oncogene 1999, 18, 813-822). Кроме того, было показано, что ERK2 играет роль в отрицательном контроле роста раковых клеток молочной железы (Frey and Mulder, 1997, Cancer Res. 57, 628), и сообщалось о гиперэкспрессии ERK2 в раке молочной железы человека (Sivaraman et al., 1997, J. Clin. Invest. 99, 1478). Активированная ERK2 также вовлечена в пролиферацию эндотелин-стимулированных клеток гладких мышц дыхательных путей, что предполагает роль этой киназы в астме (Whelchel et al., 1997, Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol.
16, 589).
В свете множества расположенных выше по каскаду (например, Ras, Raf) и ниже по каскаду (например, ATF2, c-Fos, c-Myc) сигнальных белков в Raf/Ras/MEK/ERK пути, которые вовлечены в широкий ряд расстройств, включая, но не ограничиваясь этим, рак, ERK оказалась основной мишенью для разработки лекарственных средств.
Сущность изобретения
Таким образом, существует большая потребность в ингибиторах ERK, фармацевтических композициях, включающих такой ингибитор ERK, применениях таких ингибиторов ERK для лечения и/или диагностики различных заболеваний. Настоящее изобретение направлено на удовлетворение этой потребности и также обеспечивает соответствующие преимущества.
В одном аспекте изобретение обеспечивает соединение формулы I
R72 ,N-N'
или его фармацевтически приемлемую соль; где
R1 представляет собой 3-6-членный гетероциклил, -C1-10алкил-(3-6-членный гетероциклил), -(3-6-членный гетероциклил)-C1-10алкил, -(3-6-членный гетероциклил)-С6-10арил или -(3-6-членный гетероцик-лил)-C1-10гетарил,каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R10 или R11 заместителями;
R21 представляет собой -L-C1-10гетероалкил, -Ь-С3-10арил, -L-C1-10гетарил, ^-С3-10циклоалкил или -L-
C1-10гетероциклил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R12 заместителями;
L представляет собой связь;
R72 представляет собой водород;
R10 представляет собой -^шалюш, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -C1-10гетероалкил, -С3-10арил, -C1-10 гетарил, -С3-10циклоалкил или -C1-10гетероциклил, каждый из которых замещен одним или несколькими независимыми R11 заместителями;
R11 и R12 независимо представляют собой водород, галоген, -^^алкею, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -C1-10гетероалкил, -С3-10арил, -C1-10гетарил, -С3-10циклоалкил, -C1-10гетероциклил, -ОН, -CF3, -OCF3, -OR31, -NR31R32, -C(O)R31, -CO2R31, -C(=O)NR31, -NO2, -CN, -S(O)0-2R31, -SO2NR31R32, -NR31C(=O)R32, -NR31C
(=O)OR32, NR31C(=O)NR32R33, -NR31S(O)0-2R32, -C(=S)OR31, -C(=O)SR31, NR31C(=NR32)NR32R33, -NR31C
(=NR32)OR33, -NR31C(=NR32)SR33, -OC(=O)OR33, -ОС(=O)NR31R32, -OQK^SR31, -SC(=O)SR31, -P(O) OR31OR32 или -SC(=O)NR31NR32; и
каждый из R31, R32 и R33 независимо представляет собой водород, галоген, -^^алкею, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -C1-10гетероалкил, -С3-10арил, -C1-10гетарил, -С3-10циклоалкил или -C1-10гетероциклил, или R31 вместе с R32 образуют гетероциклическое кольцо;
где каждый гетероалкил содержит по крайней мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из О, N, P, Si и S;
где каждый гетарил содержит один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S;
где каждый гетероциклил содержит один, два или три кольцевых гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, О и S.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ ингибирования активности протеинкиназы, присутствующей в клетке, включающий контактирование указанной клетки с эффективным количеством вышеуказанного соединения формулы I.
В ещё одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ уменьшения тяжести расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества вышеуказанного соединения формулы I, где расстройство выбрано из группы, состоящей из рака, поражения костей, воспалительного заболевания, иммунного заболевания, заболевания нервной системы, метаболического заболевания, респираторного заболевания и сердечного заболевания.
В ещё одном другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, обладающую способностью ингибировать ERK, включающую эффективное количество вышеуказанного соединения формулы I и фармацевтически приемлемый эксципиент.
Чертеж представляет биологические данные анализов ингибирования ERK киназы, p90RSK ELISA и клеточной пролиферации для соединений, обеспечиваемых настоящим изобретением, где используются следующие символы: + (больше чем 1000 нМ), ++ (от 250 до 1000 нМ), + + + (от 50 до 250 нМ), + + + + (меньше чем 50 нМ).
Подробное описание изобретения
Термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" относится к такому количеству соединения, описанного в настоящей заявке, которое является достаточным для предполагаемого применения, включая, но не ограничиваясь этим, лечение заболевания, как определено ниже. Терапевтически эффективное количество может варьироваться в зависимости от предполагаемого применения (in vitro или in vivo) или субъекта и болезненного состояния, подлежащего лечению, например массы тела и возраста субъекта, тяжести болезненного состояния, способа введения и т.п., и его легко сможет определить средний специалист в данной области. Термин также относится к дозе, которая будет вызывать определенный ответ в клетках-мишенях, например, уменьшение адгезии тромбоцитов и/или миграции клеток. Конкретная доза будет варьироваться в зависимости от конкретных выбранных соединений, используемой схемы введения лекарственного средства, от того, вводят это средство в комбинации с другими соединениями или нет, срока введения средства, ткани, в которую вводят средство, физической системы доставки, которая осуществляет перенос средства.
В контексте настоящей заявки "лечение", или "лечить", или "временное облегчение", или "уменьшение интенсивности" используюся взаимозаменяемо. Эти термины относятся к подходу для получения благоприятных или желаемых результатов, включая, но не ограничиваясь этим, терапевтическую пользу и/или профилактическую пользу. Под терапевтической пользой подразумевается устранение или облегчение тяжести основного расстройства, подлежащего лечению. Также терапевтическая польза достигается путем устранения или облегчения тяжести одного или нескольких физиологических симптомов, связанных с основным расстройством, так, чтобы у субъекта наблюдалось улучшение, несмотря на то, что субъект все еще может страдать от основного расстройства. Для профилактической пользы композиции можно вводить субъекту, у которого имеется риск развития определенного заболевания, или субъекту, сообщающему об одном или нескольких физиологических симптомах заболевания, даже если диагноз такого заболевания может быть не установлен.
"Терапевтический эффект", как этот термин используется в настоящей заявке, охватывает терапев
тическую пользу и/или профилактическую пользу, как они описаны выше. Профилактический эффект включает отсрочку или устранение возникновения заболевания или состояния, отсрочку или устранение начала развития симптомов заболевания или состояния, замедление, остановку или реверсию прогресси-рования заболевания или состояния или любое из вышеперечисленных.
Термины "совместное введение", "вводимый в комбинации с" и их грамматические эквиваленты в контексте настоящей заявки охватывают введение двух или более средств животному так, чтобы оба средства и/или их метаболиты присутствовали в организме субъекта одновременно. Совместное введение включает одновременное введение в разных композициях, введение в разное время в разных композициях или введение в композиции, в которой присутствуют оба средства.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, образованным из различных органических и неорганических противоионов, хорошо известных в данной области техники, и включают только в качестве примера натрий, калий, кальций, магний, аммоний, тетраалкиламмоний и т. п., когда молекула содержит кислотную функциональную группу; и когда молекула содержит основную функциональную группу - к солям органических или неорганических кислот, таким как гидрохлорид, гидробромид, тартрат, мезилат (метансульфонат), этансульфонат, ацетат, малеат, оксалат, фосфат и т.п. В соединении с более чем одной щелочной группой больше чем одна из щелочных групп может быть преобразована в форму соли, включая, но не ограничиваясь этим, бис- или трис-соль. Альтернативно, соединение, содержащее более чем одну щелочную группу, может образовывать соль только по одной из щелочных групп.
Термины "антагонист" и "ингибитор" используют взаимозаменяемо, они относятся к соединению, обладающему способностью ингибировать биологическую функцию белка-мишени путем ингибирова-ния активности или экспрессии белка-мишени. Соответственно, термины "антагонист" и "ингибиторы" определяются в контексте биологической роли белка-мишени. В то время как предпочтительные антагонисты, описанные в настоящей заявке, специфически взаимодействуют с (например, связываются с) мишенью, соединения, которые ингибируют биологическую активность белка-мишени путем взаимодействия с другими членами пути сигнальной трансдукции, членом которого является белок-мишень, также специально включены в это определение. Предпочтительная биологическая активность, ингибируемая антагонистом, связана с развитием, ростом или распространением опухоли.
Термин "агонист" в контексте настоящей заявки относится к соединению, обладающему способностью инициировать или усиливать биологическую функцию белка-мишени путем усиления активности или экспрессии белка-мишени. Соответственно, термин "агонист" определяется в контексте биологической роли являющегося мишенью полипептида. В то время как предпочтительные агонисты, описанные в настоящей заявке, специфически взаимодействуют с (например, связываются с) мишенью, соединения, которые инициируют или усиливают биологическую активность являющегося мишенью полипептида путем взаимодействия с другими членами пути сигнальной трансдукции, членом которого является полипептид-мишень, также специально включены в это определение.
В контексте настоящей заявки "средство" или "биологически активное средство" относится к биологическому, фармацевтическому или химическому соединению или другому веществу. Неограничивающие примеры включают простую или сложную органическую или неорганическую молекулу, пептид, белок, олигонуклеотид, антитело, производное антитела, фрагмент антитела, производное витамина, углевод, токсин или химиотерапевтическое соединение. Различные соединения могут быть синтезированы, например малые молекулы и олигомеры (например, олигопептиды и олигонуклеотиды), синтетические органические соединения на основании различных структур остова. Кроме того, различные природные источники могут обеспечивать соединения для скрининга, например растительные или животные экстракты и т. п.
Термин "выделенное соединение" или "выделенное средство" относится к биологическому, фармацевтическому или химическому соединению или другому веществу, которое выделяют до чистоты более
чем 90%.
"Сигнальная трансдукция" представляет собой процесс, в ходе которого стимуляторные или инги-биторные сигналы передаются в клетку и внутри клетки, чтобы вызвать внутриклеточный ответ. Модулятор пути сигнальной трансдукции относится к соединению, которое модулирует активность одного или нескольких клеточных белков, связанных с одним и тем же специфическим путем сигнальной транс-дукции. Модулятор может усиливать (агонист) или подавлять (антагонист) активность сигнальной молекулы.
"Противораковое средство", "противоопухолевое средство" или "химиотерапевтическое средство" относится к любому средству, полезному в лечении опухолевого состояния. Один класс противораковых средств включает химиотерапевтические средства. "Химиотерапия" означает введение одного или нескольких химиотерапевтических лекарственных средств и/или других средств страдающему раком пациенту различными способами, включая внутривенный, пероральный, внутримышечный, интраперитоне-альный, интравезикальный, подкожный, чрескожный, буккальный или путем ингаляции или в форме суппозитория.
Термин "клеточная пролиферация" относится к явлению, при котором количество клеток изменяет
ся в результате деления. Этот термин также охватывает клеточный рост, посредством чего клеточная морфология изменяется (например, увеличение в размере) соответственно пролиферативному сигналу.
Термин "селективное ингибирование" или "селективно ингибировать" относится к биологически активному средству и относится к способности средства к преимущественному уменьшению сигнальной активности мишени по сравнению с сигнальной активностью, не относящейся к мишени, через прямое или опосредованное взаимодействие с мишенью.
" Активность ERK1 и/или ERK2" в применении к биологически активному средству относится к способности средства модулировать сигнальную трансдукцию, опосредованную ERK1 и/или ERK2. Например, модуляция ERK1 и/или ERK2 активности подтверждается изменением сигнала, выходящего из
Ras/Raf/MEK/ERK пути.
" Субъект" относится к животному, такому как млекопитающее, например человек. Способы, описанные в настоящей заявке, могут быть полезными как для лечения человека, так и для применения в ветеринарии. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой млекопитающее. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой человека.
"Лучевая терапия" означает воздействие на субъекта, с использованием рутинных способов и композиций, известных практикующему врачу, источников излучения, таких как испускающие сс-частицы радионуклиды (например, радионуклиды актиния и тория), источники излучения с низкой линейной передачей (LET) энергии (т.е. источники Р-излучения), конверсионные электронные источники излучения (например, стронций-89 и самарий-153-EDTMP или высокоэнергетическое излучение, включая, без ограничения, рентгеновское излучение, у-излучение, нейтроны.
Термин "in vivo" относится к событию, которое имеет место в организме субъекта.
Термин "in vitro" относится к событию, которое имеет место вне организма субъекта. Например, in vitro анализ охватывает любой анализ, осуществляемый вне организма субъекта. In vitro анализы охватывают клеточные анализы, в которых используют живые или мертвые клетки. In vitro анализы также охватывают бесклеточный анализ, в котором не используют никакие интактные клетки.
Если не указано иное, присоединения указанных в названии соединения групп имеют место по крайней группе слева. То есть название заместителя начинается со связывающей группы, продолжается любыми связывающими группами, заканчивается концевой группой. Например, "-L-C1-10алкил-С3-10цик-лоалкил" содержит концевую группу, такую как -С3-10циклоалкильная группа, присоединенную к связывающей -^4^^^^^ группе, которая присоединена к элементу L, который, в свою очередь, связан с химическим соединением, несущим этот заместитель.
В контексте настоящей заявки термин "гетероатом" или "кольцевой гетероатом" включает кислород (О), азот (N), серу (S), фосфор (Р) и кремний (Si).
В контексте настоящей заявки термин "алкил" используется для обозначения алкила, содержащего 1-10 атомов углерода, т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов углерода в линейной или разветвленной конфигураци. Во всех вариантах осуществления настоящего изобретения термин "алкил" включает ал-кильные группы как с разветвленной, так и с прямой цепью, или их комбинацию. Алкильные группы являются полностью насыщенными, незамещенными или замещенными и могут включать ди- и многовалентные радикалы, содержащие указанное количество атомов углерода (т.е. C1-10 означает от одного до десяти атомов углерода, и С2-10 означает от двух до десяти атомов углерода). Типичные алкильные группы представляют собой метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, н-гексил, н-гептил, изооктил, нонил, децил и т. п. Алкил является незамещенным или замещенным.
Термин "алкенил" относится к углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, состоящему исключительно из углеродных и водородных атомов, содержащему по меньшей мере одну двойную связь, содержащему от двух до десяти атомов углерода (т.е. -С2-10алкенил). В каждом случае, когда это указывается в настоящей заявке, численный диапазон, такой как "С2-10", относится к каждому целому числу в указанном диапазоне; например "С2-10алкенил" означает, что алкенильная группа может состоять из 2 атомов углерода, 3 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления алкенил включает от двух до восьми атомов углерода (например, -С2-8 алкенил). В других вариантах осуществления алкенил включает от двух до пяти атомов углерода (например, -С2-5алкенил). Алкенил присоединен к остальной части молекулы при помощи простой связи, например этенил (т.е. винил), проп-1-енил (т.е. аллил), бут-1-енил, пент-1-енил, пента-1,4-диенил и т.п. Алкенил является незамещенным или замещенным.
Термин "алкинил" относится к углеводородному радикалу с линейной или разветвленной цепью, состоящему исключительно из углеродных и водородных атомов, содержащему по меньшей мере одну тройную связь, содержащему от двух до десяти атомов углерода (т.е. -С2-10алкинил). В каждом случае, когда это указывается в настоящей заявке, численный диапазон, такой как "С2-10" относится к каждому целому числу в указанном диапазоне; например "С2-10алкинил" означает, что алкинильная группа может состоять из 2 атомов углерода, 3 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления алкинил включает от двух до восьми атомов углерода (например, -С2-8
алкинил). В других вариантах осуществления алкинил содержит от двух до пяти атомов углерода (например, -С2-5алкинил). Алкинил присоединен к остальной части молекулы при помощи простой связи, например этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил и т.п. Алкинил является незамещенным или замещенным.
Термин "гетероалкил" относится к радикалу с линейной или разветвленной цепью, состоящему из по меньшей мере одного атома углерода и по меньшей мере одного гетероатома, выбранного из группы, состоящей из О, N, P, Si и S, где атомы азота, фосфора и серы необязательно могут быть окислены и ге-тероатом азота необязательно может быть кватернизирован.
Гетероатом(гетероатомы) О, N, Р и S и Si могут присутствовать в любом внутреннем положении ге-тероалкильной группы или в положении, по которому алкильная группа присоединяется к остальной части молекулы. Алкильная часть такой группы является незамещенной или замещенной. Примеры
включают, но не ограничиваются этим, -СН2-СН2-О-СН3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3,
-CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-СНз, -СН=СН-О-СН3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3, -CH=CH-N(CH3)-CH3, -О-СН3, -О-СН2-СН3 и -CN. Вплоть до двух или трех гетероатомов могут быть последовательно расположены, например, -CH2-NH-OCH3 и -CH2-O-Si(CH3)3. Аналогичным образом, термин "гетероалкилен" как таковой или как часть другого заместителя означает двухвалентный радикал, образованный из гетероалкила, примеры которого включают, но не ограничиваются этим, -CH2-CH2-S-CH2-СН2- и -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-. Что касается гетероалкиленовых групп, гетероатомы также могут присутствовать на любом или на обоих концах цепи (например, алкиленоксо, алкилендиоксо, ал-киленамино, алкилендиамино и т.п.). Более того, что касается алкиленовых и гетероалкиленовых связывающих групп, направление, в котором пишется формула связывающей группы, не подразумевает никакую ориентацию связывающей группы. Например, формула С(O)OR'- представляет собой как -С(O)OR'-, так и -R'OC(O)-. Как описано выше, гетероалкильные группы в контексте настоящей заявки включают такие группы, которые присоединены к остальной части молекулы через гетероатом, такой как -C(O)R', -C(O)NR', -NR'R'', -OR', -SR' и/или -SO2R'. Где указывается "гетероалкил" с последующим указанием конкретных гетероалкильных групп, таких как -NR'R'' или т.п., должно быть понятно, что термины гете-роалкил и -NR'R'' не являются повторяющимися или взаимоисключающими. Наоборот, конкретные гете-роалкильные группы указываются, чтобы внести ясность. Таким образом, термин "гетероалкил" не следует здесь интерпретировать как исключающий конкретные гетероалкильные группы, такие как -NR'R" или т. п.
Термин "ароматический" или "арил" относится к ароматическому радикалу с 3-16 атомами углерода (например, -С3-16ароматический или -С3-16арил), который содержит по меньшей мере одно кольцо, имеющее сопряженную пи-электронную систему, которое является карбоциклическим (например, фенил, флуоренил, нафтил). В любом месте, где это указано в настоящей заявке, численный диапазон, такой как "С3-10", относится к каждому целому числу в указанном диапазоне; например, "-С3-10арил" означает, что арильная группа может состоять из 3 кольцевых атомов, 4 кольцевых атомов и т. д., вплоть до и включая 10 кольцевых атомов. Термин включает моноциклические или содержащие конденсированные кольца полициклические (т.е. кольца, разделяющие между собой смежные пары кольцевых атомов) группы. Примеры арила включают, но не ограничиваются этим, фенил, 4-хлорфенил, 4-фторфенил, 4-бромфенил, 3-нитрофенил, 2-метоксифенил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-метилфенил, 4-этилфенил, 2-метил-3-метоксифенил, 2,4-дибромфенил, 3,5-дифторфенил, 3,5-диметилфенил, 2,4,6-трихлорфенил, 4-метоксифенил, нафтил, 2-хлорнафтил, 2,4-диметоксинафтил, 4-(трифторметил)нафтил, 2-иод-4-метилнафтил и т. п. Арильная группа является незамещенной или замещенной.
Термин "гетероарил" или альтернативно "гетероароматический", "гетарил", "гетероар" или "гетар" относится к ароматическому радикалу с 1-16 углеродными атомами (например, -С1-16гетероарил) , который, кроме того, включает один или несколько кольцевых гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и который может представлять собой моноциклическую, бициклическую, трициклическую или тетрациклическую кольцевую систему. В любом месте, где это указано в настоящей заявке, численный диапазон, такой как "C1-10", относится к каждому целому числу в указанном диапазоне; например, "-C1-10 гетарил" означает, что гетероарильная группа может состоять из 1 атома углерода, 2 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. "N-содержащая гетероароматическая" или "N-содержащая гетероарильная" группа относится к ароматической группе, в которой по меньшей мере один из атомов каркаса кольца представляет собой атом азота. Полициклическая гетероарильная группа может быть конденсированной или неконденсированной. Гетероатом(гетероатомы) в гетероарильном радикале необязательно является окисленным. Один или несколько атомов азота, если таковые присутствуют, необязательно являются кватернизированными. Гетероарил присоединен к остальной части молекулы через любой атом кольца(колец). Примеры гетероарила включают, но не ограничиваются этим, азепинил, ак-ридинил, бензимидазолил, бензиндолил, 1,3-бензодиоксолил, бензофуранил, бензооксазолил, бен-зоВДтиазолил, бензотиадиазолил, бензо[Ъ][1,4]диоксепинил, бензо[Ъ][1,4]оксазинил, 1,4-бензодиоксанил, бензонафтофуранил, бензоксазолил, бензодиоксолил, бензодиоксинил, бензоксазолил, бензопиранил, бензопиранонил, бензофуранил, бензофуранонил, бензофуразанил, бензотиазолил, бензотиенил (бензо-тиофенил), бензотиено[3,2^]пиримидинил, бензотриазолил, бензо[4,6]имидазо[1,2-а]пиридинил, карба
золил, циннолинил, циклопентаВДпиримидинил, 6,7-дигидро-5Н-циклопента[4,5]тиено[2,3^]пирими-динил, 5,6-дигидробензо[Щхиназолинил, 5,6-дигидробензо[h]циннолинил, 6,7-дигидро-5Н-бензо [6,7]циклогепта[1,2-c]пиридазинил, дибензофуранил, дибензотиофенил, фуранил, фуразанил, фуранонил, фуро[3,2-с]пиридинил, 5,6,7,8,9,10-гексагидроциклоокта[d]пиримидинил, 5,6,7,8,9,10-гексагидроцикло-окта[d]пиридазинил, 5,6,7,8,9,10-гексагидроциклоокта[d]пиридинил, изотиазолил, имидазолил, индазо-лил, индолил, индазолил, изоиндолил, индолинил, изоиндолинил, изохинолил, индолизинил, изоксазо-лил, 5,8-метано-5,6,7,8-тетрагидрохиназолинил, нафтиридинил, 1,6-нафтиридинонил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, оксазолил, оксиранил, 5,6,6а,7,8,9,10,10а-октагидробензо[Щхиназолинил, 1-фенил-1H-пирролил, феназинил, фенотиазинил, феноксазинил, фталазинил, птеридинил, пуринил, пиранил, пирро-лил, пиразолил, пиразоло[3,4-d]пиримидинил, пиридинил, пиридо[3,2-d]пиримидинил, пиридо[3,4-d]пиримидинил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, пирролил, хиназолинил, хиноксалинил, хино-линил, изохинолинил, тетрагидрохинолинил, 5,6,7,8-тетрагидрохиназолинил, 5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3^]пиримидинил, 6,7,8,9-тетрагидро-5Н-циклогепта[4,5]тиено[2,3-d]пиримидинил, 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,5-c]пиридазинил, тиазолил, тиадиазолил, тиапиранил, триазолил, тетразолил, триазинил, тиено[2,3^]пиримидинил, тиено[3,2-d]пиримидинил, тиено[2,3-c] пиридинил, тиофенил (т.е. тиенил). Гетероарильная группа является незамещенной или замещенной.
Термин "циклоалкил" относится к насыщенной или частично ненасыщенной кольцевой структуре с 3-10 атомами углерода (т.е. -С3-10циклоалкил). В любом месте, где это указано в настоящей заявке, численный диапазон, такой как "С3-10", относится к каждому целому числу в указанном диапазоне; например, "-С3-10циклоалкил" означает, что циклоалкильная группа может состоять из 3 атомов углерода, 4 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. Термин включает моноциклические или содержащие конденсированные кольца полициклические (т.е. кольца, которые разделяют между собой смежные пары кольцевых атомов) группы. Циклоалкильная группа является незамещенной или замещенной.
Термин "гетероциклил", "гетциклил" или "гетероциклоалкил" относится к 3-, 4-, 5- или 6-членному насыщенному или частично ненасыщенному кольцу, содержащему один, два или три гетероатома, предпочтительно один или два гетероатома, независимо выбранных из кислорода, азота и серы; или к бицик-лической кольцевой системе, содержащей вплоть до 10 атомов, включая по меньшей мере один гетероа-том, независимо выбранный из кислорода, азота, серы, где кольцо, содержащее гетероатом, является насыщенным. В любом месте, где это указано в настоящей заявке, численный диапазон, такой как "C1-10", относится к каждому целому числу в указанном диапазоне; например, "-C1-10гетероциклил" означает, что гетероциклоалкильная группа может состоять из 1 атома углерода, 2 атомов углерода и т. д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. Примеры гетероциклила включают, но не ограничиваются этим, тетрагид-рофуранил, тетрагидрофурил, пирролидинил, пиперидинил, 4-пиранил, тетрагидропиранил, тиоланил, морфолинил, пиперазинил, диоксоланил, диоксанил, индолинил и хроманил. Гетероциклоалкильная группа является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10алкил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 1-фенилэтил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10алкил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-пиримидинилэтил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10алкил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-циклопропилэтил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10алкил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиперидинилэт-1-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкенил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 1-фенилвинил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкенил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-пиримидинилвинил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкенил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкенильной группе, разветвленной или с пря
мой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-циклопропилвинил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкенил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиперидинилэтен-1-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкинил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 1-фенилэтинил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкинил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-пиримидинилэтинил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкинил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-циклопропилэтинил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С2-10алкинил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиперидэтин-1-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10гетероалкил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероалкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 1-фенилэтоксиэтил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероалкил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей гетероалкиль-ной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере 1 гетероатом, такой как, например, 2-пиримидинилэтоксиэтил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10гетероалкил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероалкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 2-циклопропилэтоксиэтил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероалкил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероалкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероа-том, такой как, например, 4-пиперидинилэтоксиэт-1-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10алкокси-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающему кислородному атому, который также соединен с алкильной группой, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 1-феноксиэтил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10алкокси-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающему кислородному атому, который также соединен с алкильной группой, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-пиримидоксиэтил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10алкокси-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающему кислородному атому, который также соединен с алкильной группой, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-циклопропоксиэтил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-C1-10алкокси-C1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающему кислородному атому, который также соединен с алкильной группой, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиперидоксиэт-1-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10арил-C1-10алкил" относится к алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей арильной группе, которая со
держит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-этилфенил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10арил-С2-10алкенил" относится к алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-этенилфенил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10арил-С2-10алкинил" относится к алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-этинилфенил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10арил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиримидинилфен-4-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10арил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-циклопропилфенил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10арил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиперидинилфен-4-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетарил-С1-10алкил" относится к алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-этилпиримидин-2-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетарил-С2-10алкенил" относится к алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-этенилпиримидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетарил-С2-10алкинил" относится к алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-этинилпиримидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетарил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-фенилпиримидин-2-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетарил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-циклопропилпиримидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетарил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей гета-рильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-пиперидинилпиримидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10циклоалкил-С1-10алкил" относится к алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-этилциклопентил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10циклоалкил-С2-10алкенил" относится к алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-этенилциклопентил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10циклоалкил-С2-10алкинил" относится к алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей циклоалкиль-ной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-этинилциклопентил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10циклоалкил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 2-фенилциклопентил и т. п. Любая часть такой группы является
незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10циклоалкил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей циклоалкиль-ной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиримидинилциклопент-2-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С3-10циклоалкил-С1-10гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, такой как, например, 4-пиперидинилциклопент-2-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероциклил-С1-10алкил" относится к алкильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-этилпиперидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероциклил-С2-10алкенил" относится к алкенильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероцик-лильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-этенилпиперидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероциклил-С2-10алкинил" относится к алкинильной группе, разветвленной или с прямой цепью и содержащей от 2 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероцик-лильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-этинилпиперидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероциклил-С3-10арил" относится к арильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-фенилпиперидин-2-ил и т. п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероциклил-С1-10гетарил" относится к гетарильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, присоединенной к связывающей гетероцик-лильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-пиримидинилпиперидин-2-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "-С1-10гетероциклил-С3-10циклоалкил" относится к циклоалкильной группе, которая содержит от 3 до 10 атомов углерода, присоединенной к связывающей гетероциклильной группе, которая содержит от 1 до 10 атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, такой как, например, 4-циклопропилпиперидин-2-ил и т.п. Любая часть такой группы является незамещенной или замещенной.
Термин "гало" или "галоген" относится к фтору, хлору, брому или иоду.
Термин "галогеналкил" относится к алкильной группе, замещенной одной или несколькими группами галогенов, например хлорметил, 2-бромэтил, 3-иодпропил, трифторметил, перфторпропил, 8-хлорнонил и т.п. Галогеналкильная группа может быть дополнительно замещенной или не быть дополнительно замещенной.
Термин "амин" или "амино" относится к -NR'R''-группе, где каждый R' независимо представляет собой водород, -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, -С1-10галогеналкил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-10 гетероарил, -С1-10алкил-С1-10гетарил, -С3-10циклоалкил, -С1-10алкил-С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил или -С1-10алкил-С1-10гетероциклил, если в описании изобретения конкретно не указано иное. Когда оба R' и R'' из -NR'R'' группы не являются водородом, R' и R'' могут быть объединены с атомом азота с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Например, подразумевается, что -NR'R'' включает, но не должен ограничиваться этим, 1-пирролидинил и 4-морфолинил. Если в описании изобретения конкретно не указано иное, аминогруппа необязательно замещена одним или несколькими заместителями, которые независимо представляют собой -С1-10алкил, -C1-10гетероалкил, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -С1-10гетероалкил, -С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-10гетарил, -С1-10алкил-С1-10ге-
тарил, галоген, -ОН, -CN, -CF3, -OCF3, -NO2, -SiMe3, -OR', -SR', -OC(O)-R', -N(R')2, -C(O)R',
-C(O)OR', -OС(O)N(R')2, -C(O)N(R')2, -N(R1)С(O)OR', -N(R')С(O)R', -N(R')C(O)N(R')2, -N(R')C(NR')N(R')2,
-N(R')S(O)tR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tOR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tN(R')2 (где t
имеет значение 1 или 2) или PO3(R')2, где каждый R' независимо представляет собой водород, -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, галогеналкил, -С1-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-10гетероарил, -С1-10алкил-С1-10гета-рил, -С3-10циклоалкил, -С1-10алкил-С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил или -С1-10алкил-С1-10 гетероциклил.
Термин "амид" или "амидо" относится к химической группе с формулой -C(O)N(R')2 или -NHC(O)R', где R' выбран из группы, состоящей из водорода, -С1-10алкила, -С1-10гетероалкила, галоген-алкила, -С3-10арила, -С1-10алкил-С3-10арила, -С1-10гетарила (связанного через кольцевой углерод), -С1-10ал-кил-С1-10гетарила, -С3-10циклоалкила, -С1-10алкил-С3-10циклоалкила, -С1-10гетероциклила (связанного через
кольцевой углерод) или -С1-10алкил-С1-10 гетероциклила. В некоторых вариантах осуществления амид представляет собой C1-C4 радикал, который включает амидкарбонил с таким же общим количеством атомов углерода в радикале. R'2 из -N(R')2 амида необязательно может быть взят вместе с азотом, к которому он присоединен, с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Если в описании изобретения конкретно не указано иное, амидогруппа необязательно замещена независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке для алкила, циклоалкила, арила, гетероарила или гете-роциклила. Амид может представлять собой молекулу аминокислоты или пептида, присоединенную к соединению формулы II или III, с образованием, таким образом, пролекарства. Любая аминовая, гидро-кси или карбоксильная боковая цепь на соединениях, описанных в настоящей заявке, может быть амиди-рована. Процедуры и конкретные группы для получения таких амидов известны специалистам в данной области техники, и их легко можно найти в справочниках, таких как Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.sup.rd Ed., John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1999, который включен в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.
Термин "ацил" или "карбонил" относится к структуре -^=O)-R, в которой R представляет собой водород, -С1-10алкил, -C1-10гетероалкил, галогеналкил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, С1-10гетарил (связанный через кольцевой углерод), -С1-10алкил-С1-10гетарил, -С3-10циклоалкил, -C1-10алкил-С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил (связанный через кольцевой углерод) или -С1-10 алкил-С1-10гетероциклил. Если в описании изобретения конкретно не указано иное, R группа ацильной части необязательно замещена одним или несколькими заместителями, которые независимо представляют собой -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил, -С3-10арил, -С1-10 алкил-С3-10арил, -С1-10
гетарил, -С1-10алкил-С1-10гетарил, галоген, -OH, -CN, - CF3, -OCF3, -NO2, -SiMe3, -OR', -SR', -OC(O)-R',
-N(R')2, -C(O)R', -C(O)OR', -OС(O)N(R')2, -C(O)N(R')2, -N(R')C(O)OR', -N(R')C(O)R', -N(R')С(O)N(R')2, -N(R')С(NR')N(R')2, -N(R')S(O)tR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tOR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tN(R')2 (где t имеет значение 1 или 2) или PO3(R')2, где каждый R' независимо представляет собой водород, -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, галогеналкил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-10гетероарил, -С1-10алкил-С1-10гетарил, С3-10циклоалкил, -С1-10алкил-С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил или -С1-10ал-кил-С1-10гетероциклил.
Термин "карбоксил" или "карбокси" относится к структуре -^=O)-OR, в которой R представляет собой водород, -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, галогеналкил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-10гета-рил (связанный через кольцевой углерод), -С1-10алкил-С1-10 гетарил, -С3-10циклоалкил, -С1-10алкил-С3-10 циклоалкил, -С1-10гетероциклил (связанный через кольцевой углерод) или -С1-10алкил-С1-10гетероциклил. Если в описании изобретения конкретно не указано иное, R группа карбоксильной части необязательно замещена одним или несколькими заместителями, которые независимо представляют собой -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил, -С3-10арил, -С1-10ал-кил-С3-10арил, -С1-10гетарил, -С1-10алкил-С1-10 гетарил, галоген, -ОН, -CN, - CF3, -OCF3, -NO2, -SiMe3, -OR', -SR', -OC(O)-R', -N(R')2, -C(O)R', -C(O)OR', -ОС (O)N(R')2, -C(O)N(R')2, -N(R')QO)OR', -N(R')С(O)R', -N(R')С(O)N(R')2, N(R')С(NR')N(R')2, -N(R')S(O)tR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tOR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tN(R')2 (где t имеет значение 1 или 2) или PO3(R')2, где каждый R' независимо представляет собой водород, -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, галогеналкил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10 арил, -С1-10гетероарил, -С1-10алкил-С1-10гетарил, -С3-10циклоалкил, -С1-10алкил-С3-10циклоалкил, -С1-10гете-роциклил или -С1-10алкил-С1-10гетероциклил.
Термин " оксо" относится к кислородному атому, который соединен двойной связью с атомом углерода. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что "оксо" требует второй связи от атома, к которому оксо присоединен. Соответственно, совершенно очевидно, что оксо не может быть замещен на арильном или гетероарильном кольце, если только он не образует часть ароматической системы в виде таутомера.
Указываемые в настоящей заявке 0-2 в контексте -S(O)(0-2)- представляют собой целые числа, имеющие значения 0, 1 и 2.
Термин "сульфонамидил" или "сульфонамидо" относится к структуре -S (=O)2-NR'R', где каждый R' выбран независимо из группы, состоящей из водорода, -С1-10алкила, -С3-10циклоалкила, -С3-10арила, -С1-10 гетероарила (связанного через кольцевой углерод) и -С1-10-С1-10гетероциклила (связанного через кольцевой углерод). R' группы в -NR'R' части -S(=O)2-NR'R' радикала могут быть взяты вместе с азотом, к которому такая группа присоединена, с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Если в описании изобретения конкретно не указано иное, R' группа в сульфонамидо части необязательно замещена одним или несколькими заместителями, которые независимо представляют собой -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, -С2-10 алкенил, -С2-10алкинил, -С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-
10гетарил, -С1-10алкил-С1-10гетарил, галоген, -ОН, -CN, -CF3, -OCF3, -NO2, -SiMe3, -OR', -SR', -OC(O)-R',
-N(R')2, -C(O)R', -C(O)OR', -ОС (O)N(R')2, -C(O)N(R')2, -N(R')С(O)OR', -N(R')QO)R', -N(R')C(O)N(R')2,
-N(R')C(NR')N(R')2, -N(R')S(O)tR' (где t имеет значение 1 или 2), -S(O)tOR' (где t имеет значение 1 или 2),
-S(O)tN(R')2 (где t имеет значение 1 или 2) или PO3(R')2, где каждый R' независимо представляет собой водород, -С1-10алкил, -С1-10гетероалкил, галогеналкил, -С3-10арил, -С1-10алкил-С3-10арил, -С1-10гетероарил, -С1-10алкил-С1-10гетарил, -С3-10циклоалкил, -С1-10алкил-С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил или -С1-10ал
кил-С1-10гетероциклил.
Соединения, которые описаны, могут содержать один или несколько асимметричных центров, и, таким образом, могут быть образованы диастереомеры и оптические изомеры. Настоящее изобретение включает все такие возможные диастереомеры, а также их рацемические смеси, их, по существу, чистые выделенные энантиомеры, все возможные геометрические изомеры и их фармацевтически приемлемые соли. Кроме того, включены также смеси стереоизомеров, а также выделенные конкретные стереоизоме-ры. В процессе осуществления процедур синтеза для получения таких соединений или при использовании процедур рацемизации или эпимеризации, известных специалистам в данной области, продукты таких процедур могут представлять собой смесь стереоизомеров.
Настоящее изобретение включает все возможные ротамеры и конформационно ограниченные состояния соединения по настоящему изобретению.
А. Общие формулы и подробное описание.
Обеспечивается соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, или пролекарство, где соединение имеет формулу I
или его фармацевтически приемлемая соль;
где R1 представляет собой 3-6-членный гетероциклил, -С1-10алкил-(3-6-членный гетероциклил), -(3-6-членный гетероциклил)-С1-10алкил, -(3-6-членный гетероциклил)-С6-10арил или -(3-6-членный гетеро-циклил)-С1-10гетарил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R10 или R11 заместителями;
R21 представляет собой -Ь-С1-10гетероалкил, -L-С3-10арил, -L-С1-10гетарил, ^-С3-10циклоалкил или -L-С1-10гетероциклил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R12 заместителями; L представляет собой связь; R72 представляет собой водород;
R10 представляет собой -С1-10алкил, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -С1-10гетероалкил, -С3-10арил, -С1-10 гетарил, -С3-10циклоалкил, или -С1-10гетероциклил, каждый из которых замещен одним или несколькими независимыми Rn заместителями;
R11 и R12 независимо представляют собой водород, галоген, -С1-10алкил, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -С1-10гетероалкил, -С3-10арил, -С1-10гетарил, -С3-10циклоалкил, -С1-10гетероциклил, -ОН, -CF3, -OCF3, -OR31,
-NR31R32, -C(O)R31, -CO2R31, -C(=O)NR31, -NO2, -CN, -S(O)0-2R31, -SO2NR31R32, -NR31C(=O)R32, -NR31C(=O)OR32, NR31C(=O)NR32R33, -NR31S(O)0-2R32, -C(=S)OR31, -C(=O)SR31, NR31C(=NR32)NR32R33,
-NR31C(=NR32)OR33, -NR31C(=NR32)SR33, OC(=O)OR33, -OC(=O)NR31R32, -OС(=O)SR31, -SC(=O)SR31, -P(O)OR31OR32 или -SC(=O)NR31NR32; и
каждый из R31, R32 и R33 независимо представляет собой водород, галоген, -С1-10алкил, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -С1-10гетероалкил, -С3-10арил, -С1-10гетарил, -С3-10циклоалкил или -С1-10гетероциклил, или R31 вместе с R32 образуют гетероциклическое кольцо;
где каждый гетероалкил содержит по крайней мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из О, N, P, Si и S;
каждый гетарил содержит один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S;
каждый гетероциклил содержит один, два или три кольцевых гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, О и S.
В предпочтительном варианте обеспечиваются соединения, где R21 представляет собой -Ь-С1-10ге-тарил, незамещенный или замещенный одним или несколькими независимыми R12 заместителями; и где L представляет собой связь. При этом наиболее предпочтительно, когда С1-10гетарил из R21 включает один или несколько атомов азота. Ещё более предпочтительно, когда С1-10гетарил из R21 выбран из группы, состоящей из пиразолила, пиридинила, пиразинила, пиримидинила, пиридазинила.
В одном из предпочтительных вариантов С1-10гетарил из R21 является незамещенным, а в другом предпочтительном варианте С1-10 гетарил в R21 замещен одним, двумя или тремя независимыми заместителями, R12 заместителями.
В предпочтительном варианте обеспечиваются соединения, в которых каждый R12 заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -С1-10алкила, -С2-10алкенила, -С2-10алкинила, -С1-10гетероалкила, -С3-10арила, -С1-10гетарила, -С3-10циклоалкила, -С1-10гетероциклила, -ОН, -CF3, -OCF3, -OR31; где каждый R31 независимо представляет собой водород или -С1-10алкил.
При этом наиболее предпочтительно, когда каждый R12 заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -Me, -Et, -i-Pr, -n-Pr, ОН, -ОМе, -OEt, и -OPr.
В одном из предпочтительных вариантов предлагается соединение формулы I, где R1 представляет
собой
или
каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми R10 или R11 заместителями.
В наиболее предпочтительном варианте обеспечивается соединение формулы I, выбранное из
н н
6 "О
;fxV(c)
vOX
TO)
Ntco
TOX
""ОТ*
TO>
В. Схемы реакций.
Соединения, раскрытые в настоящей заявке, можно получить путями, описанными ниже. Используемые вещества либо являются коммерчески доступными, либо получены способами синтеза, хорошо известными в данной области техники. Эти схемы не ограничиваются соединениями, которые перечислены, или какими-либо конкретными заместителями, используемыми для иллюстративных целей. Нумерация необязательно соответствует используемой в формуле изобретенияя или других таблицах.
В некоторых вариантах осуществления соединения синтезируют путем связывания R21 группы на N-защищенном индазоле А-3 через реакцию сочетания (например, реакцию Сузуки) с получением соединения формулы А-4. Промежуточное соединение А-4 обрабатывают N-бромсукцинимидным (NBS) реагентом для введения бромидной группы в аллильное положение, как в А-5, и затем подвергают взаимодействию с аминогруппой для введения R1 группы и получения соединения формулы А-6. Восстановление нитрогруппы с использованием цинкового катализатора в кислотных условиях дает бис-аминогетероароматическое соединение А-7, которое затем конденсируют с карбонилдиимидазолом (CDI), с получением трициклического соединения формулы А-8. Удаление защитных групп в кислотных условиях дает соединение А-9.
Схема А
вдан),
н ... (tm) Л UN. R"
ji^y-NO, NBS. КОН ^ NfYY''02 TrtCI'NaH ,. "CZCC"0' F'IC''""'Pf> 'K;C':'i, "ЙСС"0'
VJl^. DMF.K/ _Г^^ тн*,о"е*кт g^"*^ дииюан;вода,ю"е R^4s^
Tit H
toe
R21 R21
В других вариантах осуществления R21 группу связывают на N-защищенном индазоле В-5 через первую реакцию сочетания (например, реакцию Сузуки) с получением соединения формулы В-6. Ви-нильную группу затем вводят в В-6 через вторую реакцию сочетания (например, реакцию Стилле), как в В-7, затем обрабатывают тетроксидом осмия и периодатом натрия с получением альдегида В-8. Промежуточное соединение В-8 затем подвергают взаимодействию с аминогруппой для введения R1 группы, с последующим восстановлением при помощи борогидрида натрия, с получением соединения формулы В-8. Защитные группы удаляют в кислотных условиях с получением бис-аминоиндазола В-10, который подвергают конденсации с карбонилдиимидазолом (CDI), с получением трициклического соединения формулы В-11.
Схема В
ы ~ ai -"у
¦OCX
Tit (tm)
И^"°г , ЛГУ10* ^J^U /Tr"*
кон Г^^ег
II "\ м вгони "V м , *ь , в -"^ "\ н
TEA / Bf D/lf^HHA^I 1^_ОЛ
в-s в-е в-7
OiOj. "аЮ4
^"if^T л" оарэтным младильни(tm) N,.]l _J ? вн на М\^Д^1
"i-"^-^^-. ° ,,иЛи "_ г""-""^ кипячение; _м 1
J, J 2|мавм,, кт НМ ", оВратымяогодильником" HN R'
кипячение с ' "
обратным холодильником ^
В-11
И еще в некоторых вариантах осуществления винильную группу можно ввести в N-защищенный индазол С-1 через первую реакцию сочетания (например, реакцию Стилле), как в С-2, который затем обрабатывают тетроксидом осмия и периодатом натрия, с получением альдегида С-3. Промежуточное соединение С-3 подвергают взаимодействию с аминогруппой для введения R1 группы, как в С-4. Восстановление нитрогруппы с использованием цинкового катализатора в кислотных условиях дает бис-аминогетероароматическое соединение С-5, которое затем подвергают конденсации с карбонилдиимида-золом (CDI), с получением трициклического соединения формулы С-6. Соединение С-6 подвергают процедуре удаления защиты в кислотных условиях и обрабатывают N-иодсукцинимидом (NIS) с получением иодиндазола С-7. После введения тритильных защитных групп в щелочных условиях, как в С-8, R21 группу вводят через вторую реакцию сочетания (например, реакцию Стилле) с получением N-защищенного трициклического соединения С-9. Удаление защитных групп в кислотных условиях обеспечивает соединения формулы С-11.
^° NlЈ,KOH H YY Y ТТЮ.И*_ Y^r f. К J J i
Н н Tit н BfOHfe Tit П
N _,
В некоторых вариантах осуществления N-защищенный индазол А-3 подвергают бромированию с использованием NBS с получением дибромида D-1, который затем подвергают взаимодействию с аминогруппой для введения R1 группы с получением промежуточного соединения D-2. Восстановление нитро-группы с использованием цинкового катализатора в кислотных условиях дает бис-аминогетеро-ароматическое соединение D-3, которое затем подвергают конденсации с карбонилдиимидазолом (CDI), с получением трициклического соединения формулы D-4. R21 группу вводят через реакцию сочетания (например, реакцию Сузуки) с получением N-защищенного трициклического соединения D-5. Удаление защитных групп в кислотных условиях обеспечивает соединения формулы D-6.
Схема D
,HYY HBSTAIBM N. YT " RNHS N. YT H - - "Л! T И
А-3 D-1 D-2
N R1 Аеон/2-Ргонгво',с Ri
Br Br
D-3
~-N R1 дИОкеан/веда,8о"с ^p^--N R1 DCM, кт yK^^" R.
СИ, Et3N DCM, кт
В других вариантах осуществления промежуточное соединение В-4 подвергают взаимодействию с ацилхлоридом с образованием амида Е-1. R21 группу вводят через первую реакцию сочетания (например, реакцию Сузуки) с получением промежуточного соединения Е-2. Винильная группа может быть введена через вторую реакцию сочетания (например, реакцию Стилле), как в Е-3, с последующей обработкой тетроксидом осмия и периодатом натрия, с получением альдегида Е-4. Трициклическое соединение Е-5 получают через внутримолекулярную альдольную конденсацию в щелочных условиях. Удаление защитных групп в кислотных условиях дает соединения формулы Е-6.
Схема Е
Trt О Tit ы
i/-^f4Br TEA V^-Авг0 Pd(dppOCI! КаРОа р?" ВГ
Альтернативно, промежуточное соединение В-8 можно подвергнуть деацетилированию с образованием анилина F-1. Обработка F-1 ацилхлоридом в присутствим TEA дает соответствующий амид Е-4. Трициклическое соединение Е-5 получают через внутримолекулярную альдольную конденсацию в щелочных условиях. Удаление защитных групп в кислотных условиях дает соединения формулы Е-6.
Схема F
Trt
N..
R21
TFA
R21
E-5
E-6
В некоторых вариантах осуществления дибром соединение G-1 можно обработать ацетатом калия в DMF с образованием ацетата G-2. Нитрогруппу можно восстановить в присутствии тиосульфата натрия, и последующий гидролиз сложного эфира с использованием гидроксида лития может обеспечить ами-носпирт G-4. Окисление бензилового спирта до альдегида дает G-5. Ацилирование при помощи ацилхло-рида может привести к образованию соответствующего амида G-6. Трициклическое соединение G-7 может быть образовано через внутримолекулярную альдольную конденсацию. R21 группа может быть введена через сочетание с арилбромидом G-7 (например, сочетание по методу Сузуки). Удаление защитных групп в кислотных условиях дает соединения формулы G-9.
Схема G
мо2
ДсОК, DMF
Trt
"\ н " и "
R?1
В некоторых вариантах осуществления бициклическое соединение Н-1 можно обработать при помощи NBS и AIBN с получением соответствующего бромида Н-2. Обработка амином может привести к образованию соответствующего бензамина Н-3. Последующее восстановление нитроарена дает анилин Н-4. Трициклическое соединение образуется в результате добавления CDI. R21 группа может быть введена через реакцию сочетания с бороновой кислотой (например, сочетание по методу Сузуки). Удаление защитной группы путем гидрирования и обработки при помощи Boc-ангидрида может дать Вос-защищенный амин Н-7. Удаление Boc-группы в кислотных условиях и восстановительное аминирование при помощи альдегида может привести к образованию замещенного амина Н-9.
Схема Н
^NOl ^.Aiaw,ccu (tm)HYY°- - -ЬЗО Z'"°" IVt"B
/ Bi Trt Trt
в, вое
Trt
-¦*Ш> -¦ -tax*
В некоторых вариантах осуществления бромид Н-2 подвергают реакции сочетания с амином с образованием соответствующего бензиламина I-1. Обработка этил 2-хлорацетатом в присутствии основания может дать соединение I-2. Восстановление нитрогруппы арила при помощи Zn в уксусной кислоте приводит к трициклическому соединению I-3. R21 группа может быть введена через реакцию сочетания с бороновой кислотой (например, сочетание по методу Сузуки) с получением продукта I-4. Удаление защитной группы в кислотных условиях может дать продукт I-5.
Схема I
H ^^.N02 TEA
"^у^ HaOH, DMF OE, *
Trt HHK1 Trt, CI-v^O Trt,
N" 1 A в, T0°C
! M .NO. I
Br Br H-2 1-1
R*1
(HOfeB
Trt HO Tft H ,0
Zn, AcOH/i-РЮН N^j.N-f Pd(dppf)CI;, KjCO, N^-^-N-^ TFA/DCM
в/ R1 9С№ R^1 R1
В некоторых вариантах осуществления арилолефин С-2 можно подвергнуть гидроборированию с образованием линейного спирта J-1. Окисление спирта до J-2 может дать карбоновую кислоту. Кислоту можно подвергнуть взаимодействию с амином с образованием амида J-3, с введением, таким образом, R1 группы через реакцию образования амидной связи. Восстановление амида с использованием борана может обеспечить амин J-4, и последующее восстановление нитрогруппы при помощи цинка в уксусной кислоте может обеспечить анилин J-5. Трициклическое соединение J-6 может быть образовано через добавление CDI. Удаление защиты в кислотных условиях и последующее иодирование приводит к арилио-диду J-8. Защита Boc-группой дает промежуточное соединение J-9, которое можно подвергнуть реакции сочетания (т.е. реакции Сузуки) для введения R21 группы. Удаление Boc-группы дает продукт J-10.
Схема J
C-Z J-1 J-2
В некоторых вариантах осуществления арилбромид В-1 подвергают реакции сочетания с амином с образованием K-2. Восстановление нитрогруппы арила дает анилин K-3. Трициклическое соединение K-4 получают путем добавления трифосгена. Защитную группу удаляют в кислотных условиях с образованием соединения K-5, которое подвергают иодированию при помощи NIS, с получением арилиодида K-6. Защита соединения Boc-группой дает соединение K-7. Подвергая K-7 реакции сочетания, можно ввести R21 группу (т.е. сочетание по методу Сузуки) с получением соединения K-8.
Схема K
Pd^dbab xantphot
tec
NH2
Trt, н
TEA -^ч, K-4 R'
NRL DMF
I R1 K-6
B|OH|j
R21 KfCOj
H H
Rl1 R < К-8
В некоторых вариантах осуществления альдегид G-5 подвергают олефинированию (т. е. HWE реакция) с получением сложного эфира L-1. Обработка основанием, таким как DBU, обеспечивает трицикли-ческое соединение L-2. R21 группа может быть введена через реакцию сочетания с бороновой кислотой (например, сочетание по методу Сузуки) с образованием соединения L-3. Селективное бромирование дает соединение L-4, которое можно подвергнуть реакции сочетания с образованием соединения L-5. Восстановление олефина и удаление бензильной группы дает соединение L-6. Удаление защиты в кислотных условиях и последующее восстановительное аминирование может обеспечить соединение L-8.
Схема L
N.. II
В некоторых вариантах осуществления альдегид М-1 окисляют до кислоты М-2 при помощи реагента Джонса. Отщепление ацетатной группы осуществляют в кислотных условиях с образованием соединения М-3. Взаимодействие с амином (т.е. реакция образования амидной связи) используют для введения R1 группы с образованием, таким образом, соединения М-4. Трициклическое соединение М-5 получают путем добавления CDI.
Схема М
"л л
С НО реагент Джонса
со^н
"Л I
NH,
CO;H
М-1
HATU, DEA
,rJH2 Н
GDI, DIE А
Г f
В других вариантах осуществления соединение N-1 подвергают бромированию при помощи NIS селективно с образованием N-1. Взаимодействие с винилбороновой кислотой или эфиром бороновой кислоты можно использовать для получения N-3 и введения R10 группы. Гидроборирование и окисление
олефина может дать спирт N-4. Удаление защитной группы в кислотных условиях дает соединение N-5.
Схема N
N-1
NBS
N-2
1)BH,
R21 L,
TFA
N¦4
В некоторых вариантах осуществления соединение O-1 можно подвергнуть селективному сочетанию по азоту пиразола с образованием соединения O-2. Удаление трет-бутильных групп в кислотных условиях может привести к образованию соединения O-3.
Схема О
Y' n1
O-l
,p-o
В некоторых вариантах осуществления соединение структуры Р-1 может быть окислено до Р-2, например, в присутствии перманганата калия.
Схема Р
КМпО,
vCOC
R21 о Р-2
Некоторые иллюстративные R1 группы, которые можно ввести, следуя любой из схем А-Р, включают, но не ограничиваются этим
Дополнительные иллюстративные R1 группы, которые можно ввести, следуя любой из схем А-Р, включают, но не ограничиваются этим
Некоторые иллюстративные R21 и/или R22 группы, которые можно ввести, следуя любой из схем АР, включают, но не ограничиваются этим
Некоторые иллюстративные соединения, которые можно синтезировать в соответствии с любой из схем А-Р, включают, но не ограничиваются этим, соединения, представленные в табл. 1 (см. примеры). С. Способы применения композиций, раскрытых в настоящей заявке.
Настоящее изобретение обеспечивает способ ингибирования активности протеинкиназы, присутствующей в клетке, включающий контактирование указанной клетки с эффективным количеством соединения формулы I. Предпочтительно протеинкиназа представляет собой ERK и соединение ингибирует ERK при IC50 значении меньше чем около 1000 нМ, предпочтительно меньше чем около 100 нМ и наиболее предпочтительно меньше чем около 10 нМ.
В одном из вариантов предложенного способа стадия контактирования имеет место in vitro, а в другом варианте стадия контактирования имеет место in vivo.
Ингибирование активности киназы можно определить и продемонстрировать многими различными способами, известными в данной области техники. Неограничивающие примеры включают: (а) имму-ноблоттинг и иммунопреципитацию с использованием антител, таких как антифосфотирозиновые, анти-фосфосериновые или антифосфотреониновые антитела, которые распознают фосфорилированные белки; (b) использование антител, которые специфически распознают конкретную фосфорилированную форму киназного субстрата (например, антифосфо ERK); (с) анализы клеточной пролиферации, такие как, но не ограничиваясь этим, анализы поглощения тритированного тимидина, поглощения BrdU (5'-бром-2'-дезоксиуридин) (набор, поставляемый на рынок компанией Calibochem), поглощения MTS (набор, поставляемый на рынок компанией Promega), поглощения МТТ (набор, поставляемый на рынок компанией Cayman Chemical), поглощения CyQUANT(r) красителя (поставляемого на рынок компанией Invitrogen).
Селективное ингибирование PI3Kcc также можно определить на основании уровней экспрессии PI3Kcc генов, сигнальных генов, регулирующих последующие звенья ее сигнальных каскадов (например, при помощи RT-PCR), или уровней экспрессии белков (например, методами иммуноцитохимии, иммуно-гистохимии, вестерн-блоттинга) по сравнению с другими PB-киназами или протеинкиназами.
Наборы и коммерчески доступные анализы можно использовать для определения одного или нескольких из вышеуказанных.
В некоторых вариантах осуществления практическое применение такого способа включает стадию контактирования, осуществляемую in vitro. В других вариантах осуществления стадия контактирования осуществляется in vivo.
Любое из соединений, представленных выше, может показывать биологическую активность в анализе ингибирования ERK в пределах примерно от 0,5 нМ до 25 мкМ (IC50).
Соединения по настоящему изобретению могут специфически связываться с ERK (MAPK) киназой или протеинкиназой, выбранной из группы, включающей Ras, Raf, JNK, ErbB-1 (EGFR), Her2 (ErbB-2), Her3 (ErbB-3), Her4 (ErbB-4), MAP2K1 (MEK1), MAP2K2 (MEK2), MAP2K3 (MEK3), MAP2K4 (MEK4), MAP2K5 (MEK5), MAP2K6 (MEK6), MAP2K7 (MEK7), CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK8, CDK9, CDK11 и любые другие протеинкиназы, перечисленные в прилагаемых таблицах и фигурах, также любые их функциональные мутанты.
В некоторых вариантах осуществления IC50 соединения по настоящему изобретению для ERK1 и/или ERK2 составляет меньше чем около 1 мкМ, меньше чем около 100 нМ, меньше чем около 50 нМ, меньше чем около 10 нМ, меньше чем 1 нМ или даже меньше чем около 0,5 нМ. В некоторых вариантах осуществления IC50 соединения по настоящему изобретению для ERK составляет меньше чем около 1 мкМ, меньше чем около 100 нМ, меньше чем около 50 нМ, меньше чем около 10 нМ, меньше чем 1 нМ или даже меньше чем около 0,5 нМ. В некоторых других вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению демонстрируют двойную специфичность связывания и способны ингибировать ERK киназу (например, ERK-1 киназу, ERK-2 киназу и т. д.), а также протеинкиназу (например, Ras, Raf, Her-2, MEK1 и т.д.) с IC50 значением меньше чем около 1 мкМ, меньше чем около 100 нМ, меньше чем около 50 нМ, меньше чем около 10 нМ, меньше чем 1 нМ или даже меньше чем около 0,5 нМ. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению могут обладать способностью ингибирования киназ, вовлеченных в Ras-Raf-MEK-ERK
путь, включая, например, Ras, Raf, JNK, ErbB-1 (EGFR), Her2 (ErbB-2), Her3 (ErbB-3), Her4 (ErbB-4),
MAP2K1 (MEK1), MAP2K2 (MEK2), MAP2K3 (MEK3), MAP2K4 (MEK4), MAP2K5 (MEK5), MAP2K6 (MEK6), MAP2K7 (MEK7), CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK8, CDK9, CDK11 и их функциональные мутанты. В некоторых вариантах осуществления киназа представляет собой Ras, Raf, JNK, ErbB-1 (EGFR), Her2 (ErbB-2), MAP2K1 (MEK1), CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6 или любые другие киназы, перечисленные в таблицах ниже.
Еще в одном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению включая, но не ограничиваясь этим, соединения, представленные в табл. 1, селективно ингибируют ERK1 и/или ERK2 активность по сравнению с одной или несколькими протеинкиназами, включая, но не ограничиваясь этим, серин/треонин киназу, такую как DNA-PK и mTor. Такое селективное ингибирование может быть подтверждено, например, IC50 значением соединения по настоящему изобретению, которое может представлять 1/2, 1/3, 1/4, 1/5, 1/7, 1/10, 1/20, 1/25, 1/50, 1/100, 1/200, 1/300, 1/400, 1/500, 1/1000, 1/2000 или меньше по сравнению с контрольной протеинкиназой. В некоторых случаях соединения по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, соединения, представленные в табл. 1, не обладают существенной перекрестной реактивностью по меньшей мере с около 100, 200, 300 или более протеинкиназа-ми, отличными от ERK1 или ERK2. Отсутствие существенной перекрестной реактивности с другими не-ERK протеинкиназами может быть подтверждено, например, по меньшей мере, сохранением 50, 60, 70, 80, 90% или более киназной активности, когда соединение по настоящему изобретению применяют для протеинкиназы при концентрации 1, 5, 10 мкМ или выше.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению селективно ингибируют активность как ERK1, так и ERK2 при значении IC50 около 100, 50, 10, 5 нМ, 100 пМ, 10 пМ или даже 1 пМ или меньше, как определено в in vitro киназном анализе.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению конкурируют с АТФ за связывание с АТФ-связывающим сайтом на ERK1 и/или ERK2. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению связываются с ERK1 и/или ERK2 на сайте, отличном от АТФ-связывающего сайта.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению способны ингибировать и/или иначе модулировать клеточную сигнальную трансдукцию через одну или несколько протеинкиназ или киназ липидов, раскрытых в настоящей заявке. Например, одно или несколько соединений по настоящему изобретению способны ингибировать или модулировать продукт пути сигнальной трансдукции. Продукт сигнальной трансдукции рассматриваемого пути можно измерить по уровню фосфорилирования, дефосфорилирования, фрагментации, восстановления, окисления сигнальной молекулы в представляющем интерес пути. В еще одном специальном варианте осуществления продукт пути может представлять собой клеточный или фенотипический продукт (например, моду-ляция/ингибирование клеточной пролиферации, клеточной гибели, апоптоза, аутофагии, фагоцитоза, развития клеточного цикла, метастазов, клеточной инвазии, ангиогенеза, васкуляризации, убихитиниро-вания, трансляции, транскрипции, транспорта белков, митохондриальной функции, функции Гольджи, эндоплазматической ретикулярной функции и т. д.). В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению способны в качестве примера вызывать апоптоз, вызы
вать остановку клеточного цикла, ингибирование клеточной пролиферации, ингибирование роста опухоли, ингибирование ангиогенеза, ингибирование васкуляризации, ингибирование метастазов и/или инги-бирование клеточной инвазии.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению вызывает апоптоз указанной клетки или остановку клеточного цикла. Клеточный цикл может быть остановлен соединениями по настоящему изобретению в G0/G1 фазе, S фазе и/или G2/M фазе.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, соединения, перечисленные выше, способны ингибировать клеточную пролиферацию. Например, в некоторых случаях одно или несколько соединений по настоящему изобретению, перечисленных выше, могут ингибировать пролиферацию опухолевых клеток или опухолевых клеточных линий с разнообразным генетическим составом. В некоторых случаях соединения по настоящему изобретению могут ингибировать РС3 клеточную пролиферацию in vitro или в in vivo модели, такой как мышиная модель ксенотрансплантата. В некоторых случаях пролиферация in vitro культивированных РС3 клеток может ингибироваться при значении IC50 меньше чем 100, 75, 50, 25, 15, 10, 5, 3, 2, 1, 0,5, 0,1 нМ или меньше одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению, перечисленными выше.
В некоторых вариантах осуществления пролиферацию первичных опухолей, выделенных у субъектов (например, раковых пациентов), можно ингибировать при помощи соединения по настоящему изобретению, как показано в in vitro анализах или in vivo моделях (например, с использованием опухолевых клеток субъектов для получения модели ксенотрансплантата). В некоторых случаях пролиферация первичной опухолевой клеточной линии может ингибироваться при IC50 меньше чем 100, 75, 50, 25, 15, 10, 5, 3, 2, 1, 0,5, 0,1 нМ или даже меньше одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению, перечисленными в табл. 1. В некоторых случаях среднее значение IC50 соединения по настоящему изобретению для ингибирования панели 10, 20, 30, 40, 50, 100 или больше первичных опухолевых клеток может быть около 200, 100, 75, 50, 25, 15, 10, 5, 3, 2, 1, 0,5, 0,1 нМ или даже меньше. Опухолевые клетки, которые можно ингибировать соединениями по настоящему изобретению, включают но не ограничиваются этим, панкреатические, ренальные (почки), костные, назофарингеальные, гастральные, желудочные, яичников, ротовой полости, молочной железы, крови, предстательной железы, прямой кишки, толстой кишки, колоректальные, глиальные, нервные, легкочные, кожные клетки.
В некоторых вариантах осуществления, соединения по настоящему изобретению являются эффективными для блокирования сигналов клеточной пролиферации в клетках. В некоторых случаях, передачу сигнала клеточной пролиферации можно ингибировать при помощи одного или нескольких соединений по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, соединения, представленные в табл. 1, как показывает Вестерн-блот анализ фосфорилирования белков, таких как FOXO1 (фосфорилирование по T24/3a T32), GSK3P (фосфорилирование по S9), PRAS40 (фосфорилирование по Т246) или фосфори-лирования MAPK. В некоторых случаях соединения по настоящему изобретению могут ингибировать фосфорилирование сигнальных белков и подавлять пролиферацию клеток, содержащих такие сигнальные белки, но являющихся резистентными к существующим химиотерапевтическим средствам, включая, но не ограничиваясь этим, рапамицин, гливек, дазатиниб, алкилирующие средства, антиметаболиты, ан-трациклины, растительные алкалоиды, ингибиторы топоизомеразы и другие противоопухолевые средства, раскрытые в настоящей заявке.
В некоторых вариантах осуществления одно или несколько соединений по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, соединения, перечисленные выше, могут вызывать остановку клеточного цикла. В некоторых случаях клетки, обработанные одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, соединения, перечисленные выше, могут иметь остановку или задержку прохождения через одну или несколько стадий клеточного цикла, таких как G0/G1, S или G2/M. Например, клетки, обработанные одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению могут иметь остановку или задержку прохождения через G0/G1 стадию клеточного цикла. В некоторых случаях около 35, 40, 50, 55, 60, 65, 70% или больше клеток, обработанных одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению, могут находиться в G0/G1 стадии клеточного цикла. В некоторых случаях клетки, демонстрирующие остановку клеточного цикла в G0/G1 стадии клеточного цикла в ответ на обработку соединениями по настоящему изобретению, представляют собой опухолевые клетки или быстроделящиеся клетки. В некоторых случаях соединения по настоящему изобретению вызывают остановку G0/G1, сопоставимую или в большей степени по сравнению с доксоруби-цином.
В некоторых вариантах осуществления передачу сигнала в клетке в опухолевых клетках, ксе-нотрансплантированных самкам бестимусных мышей, можно ингибировать при помощи одного или нескольких соединений по настоящему изобретению, таких как соединения, перечисленные выше. В некоторых случаях передачу сигнала в клетке можно ингибировать при помощи одного или нескольких соединений по настоящему изобретению, как показывает вестерн-блот анализ детекции фосфорилирования ERK киназы(киназ), экстрагированной из гомогенизированных опухолей. В некоторых случаях ингиби-рование фосфорилирования может быть сопоставимым или больше, чем обеспечиваемое известными
ингибиторами киназ, которые также ингибируют одну или несколько изоформ ERK в испытываемых условиях.
В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь этим, соединения, перечисленные выше, вызывают уменьшение объема опухоли в опухолях, ксенотрансплантированных самкам бестимусных мышей. Например, обработка одним или несколькими соединениями по настоящему изобретению в результате приводит к уменьшению роста или объема опухоли, вызванной приживлением трансплантата А375 (мутант B-Raf V600E), LOX (мутант B-Raf V600E) и 0)ю-205(мутант B-Raf V600E), PANC-1 (мутант K-Ras G12D), MiaPaca-2 (мутант K-Ras G12C), НСТ116 (мутант K-Ras G13D), Н441 (мутант K-Ras G12V), Н23 (мутант K-Ras G12C), MDA-MB-231 (мутант K-Ras G13D) ) и LS1034 (мутант N-Ras) опухолевых клеток у бестимусных мышей. Соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально, подкожно или внутривенно или любыми другими способами введения соединения, представленными в настоящей заявке. В некоторых случаях соединения вводят один раз в неделю, через день, один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день или больше. В некоторых случаях вводят 0,01, 0,05, 0,1, 0,2, 0,4, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 7,5, 10, 100 мг/кг соединения или больше за один раз. В некоторых случаях существенное уменьшение объема опухоли можно наблюдать через 5, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после приживления опухолевого трансплантата.
D. Способы лечения.
Изобретение также обеспечивает способы использования соединений или фармацевтических композиций по настоящему изобретению для лечения болезненных состояний, включая, но не ограничиваясь этим, состояния, связанные с нарушением функции ERK1, ERK2, Ras, Raf и/или MEK киназы.
Настоящее изобретение обеспечивает способ уменьшения тяжести расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы I, где расстройство выбрано из группы, состоящей из рака, поражения костей, воспалительного заболевания, иммунного заболевания, заболевания нервной системы, метаболического заболевания, респираторного заболевания и сердечного заболевания.
Предпочтительно расстройство представляет собой рак, выбранный из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака щитовидной железы, семином, меланомы, рака мочевого пузыря, рака печени, рака почки, миелодиспластиче-ского синдрома (MDS), острого миелогенного лейкоза (AML) и колоректального рака.
В предпочтительном варианте рак представляет собой меланому или колоректальный рак.
В другом предпочтительном варианте расстройство опосредовано ERK1 и/или ERK2.
E. Фармацевтические композиции и наборы.
Изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, обладающую способностью ингибиро-вать ERK, включающую эффективное количество соединения формулы I и фармацевтически приемлемый эксципиент. Предпочтительно соединение присутствует в терапевтически эффективном количестве.
В одном из вариантов фармацевтическая композиция сформулирована в виде лекарственной формы для перорального введения, в другом варианте фармацевтическая композиция сформулирована в виде таблетки или капсулы.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению обычно формулируют так, чтобы обеспечить терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира, пролекарства, соль-вата, гидрата или производного. Где это требуется, фармацевтические композиции содержат фармацевтически приемлемую соль и/или ее координационный комплекс, один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей, включая инертные твердые разбавители и наполнители, разбавители, включающие стерильный водный раствор и различные органические растворители, усилители проницаемости, солюбилизирующие вещества и адъюванты.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими средствами, которые также обычно вводят в форме фармацевтических композиций. Где это требуется, одно или несколько соединений по настоящему изобретению и другое средство(средства) можно смешать в виде одного препарата, или оба компонента можно сформулировать в отдельные препараты для использования их в комбинации отдельно или одновременно.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или нескольких соединений, содержащихся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, составляет меньше чем 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,09,
0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,009, 0,008, 0,007, 0,006, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001,
0,0009, 0,0008, 0,0007, 0,0006, 0,0005, 0,0004, 0,0003, 0,0002или 0,0001% мас./мас., мас./об. или об./об.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или нескольких соединений, содержащихся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, составляет больше чем 90, 80,
70, 60, 50, 40, 30, 20, 19,75, 19,50, 19,25, 19, 18,75, 18,50, 18,25 18, 17,75, 17,50, 17,25 17, 16,75, 16,50, 16,25, 16, 15,75, 15,50, 15,25, 15, 14,75, 14,50, 14,25, 14, 13,75, 13,50, 13,25, 13, 12,75, 12,50, 12,25, 12, 11,75, 11,50, 11,25, 11, 10,75, 10,50, 10,25, 10, 9,75, 9,50, 9,25, 9, 8,75, 8,50, 8,25, 8, 7,75, 7,50, 7,25, 7, 6,75, 6,50, 6,25, 6, 5,75, 5,50, 5,25, 5, 4,75, 4,50, 4,25, 4, 3,75, 3,50, 3,25, 3, 2,75, 2,50, 2,25, 2, 1,75, 1,50, 1,25, 1,
0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,009, 0,008, 0,007, 0,006, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0009, 0,0008, 0,0007, 0,0006, 0,0005, 0,0004, 0,0003, 0,0002 или 0,0001% мас./мас., мас./об. или об./об.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или нескольких соединений, содержащихся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, находится в пределах от приблизительно 0,0001 до приблизительно 50%, от приблизительно 0,001 до приблизительно 40%, от приблизительно 0,01 до приблизительно 30%, от приблизительно 0,02 до приблизительно 29%, от приблизительно 0,03 до приблизительно 28%, от приблизительно 0,04 до приблизительно 27%, от приблизительно 0,05 до приблизительно 26%, от приблизительно 0,06 до приблизительно 25%, от приблизительно 0,07 до приблизительно 24%, от приблизительно 0,08 до приблизительно 23%, от приблизительно 0,09 до приблизительно 22%, от приблизительно 0,1 до приблизительно 21%, от приблизительно 0,2 до приблизительно 20%, от приблизительно 0,3 до приблизительно 19%, от приблизительно 0,4 до приблизительно 18%, от приблизительно 0,5 до приблизительно 17%, от приблизительно 0,6 до приблизительно 16%, от приблизительно 0,7 до приблизительно 15%, от приблизительно 0,8 до приблизительно 14%, от приблизительно 0,9 до приблизительно 12%, от приблизительно 1 до приблизительно 10% мас./мас., мас./об. или об./об.
В некоторых вариантах осуществления концентрация одного или нескольких соединений, содержащихся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, находится в пределах от приблизительно 0,001 до приблизительно 10%, от приблизительно 0,01 до приблизительно 5%, от приблизительно 0,02 до приблизительно 4,5%, от приблизительно 0,03 до приблизительно 4%, от приблизительно 0,04 до приблизительно 3,5%, от приблизительно 0,05 до приблизительно 3%, от приблизительно 0,06 до приблизительно 2,5%, от приблизительно 0,07 до приблизительно 2%, от приблизительно 0,08 до приблизительно 1,5%, от приблизительно 0,09 до приблизительно 1%, от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,9% мас./мас., мас./об. или об./об.
В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких соединений, содержащихся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, равно или меньше чем 10, 9,5, 9,0,
8,5, 8,0, 7,5, 7,0, 6,5, 6,0, 5,5, 5,0, 4,5, 4,0, 3,5, 3,0, 2,5, 2,0, 1,5, 1,0, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,65, 0,6, 0,55, 0,5, 0,45, 0,4, 0,35, 0,3, 0,25, 0,2, 0,15, 0,1, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,009, 0,008, 0,007, 0,006, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0009, 0,0008, 0,0007, 0,0006, 0,0005, 0,0004, 0,0003, 0,0002 или 0,0001 г.
В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких соединений, содержащихся в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, больше чем 0,0001, 0,0002, 0,0003,
0,0004, 0,0005, 0,0006, 0,0007, 0,0008, 0,0009, 0,001, 0,0015, 0,002, 0,0025, 0,003, 0,0035, 0,004, 0,0045, 0,005, 0,0055, 0,006, 0,0065, 0,007, 0,0075, 0,008, 0,0085, 0,009, 0,0095, 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,15, 0,2, 0,25, 0,3, 0,35, 0,4,
0,45, 0,5, 0,55, 0,6, 0,65, 0,7, 0,75, 0,8, 0,85, 0,9, 0,95, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10 г.
В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких соединений по настоящему изобретению находится в пределах 0,0001-10 г, 0,0005-9 г, 0,001-8 г, 0,005-7 г, 0,01-6 г, 0,05-5 г, 0,1-4 г, 0,5-4 г или 1-3 г.
Соединения в соответствии с изобретением являются эффективными в широком диапазоне доз. Например, для лечения взрослого человека дозы от 0,01 до 1000 мг в день, от 0,1 до 500 мг, от 0,5 до 100 мг, от 1 до 50 мг в день, от 2 до 40 мг в день, от 3 до 30 мг в день, от 4 до 20 мг в день, от 5 до 10 мг в день являются примерами доз, которые можно использовать. Точная доза будет зависеть от пути введения, формы, в которой вводят соединение, субъекта, подлежащего лечению, массы тела субъекта, подлежащего лечению, предпочтения и опыта лечащего врача.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению типично содержит активный ингредиент (например, соединение) по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и/или координационный комплекс, один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей, включая, но не ограничиваясь этим, инертные твердые разбавители и наполнители, разбавители, стерильный водный раствор и различные органические растворители, усилители проницаемости, солюбилизирующие вещества и адъюванты.
Ниже описаны неограничивающие иллюстративные фармацевтические композиции и способы получения таких композиций.
В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для перорального введения, содержащую соединение по настоящему изобретению и фармацевтический эксципиент, подходящий для перорального введения.
В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает твердую фармацевтическую композицию для перорального введения, содержащую: (i) эффективное количество соединения по настоящему изобретению; необязательно (ii) эффективное количество второго средства и (iii) фармацевтический эксципиент, подходящий для перорального введения. В некоторых вариантах осуществления композиция дополнительно содержит (iv) эффективное количество третьего средства.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может представлять собой жидкую фармацевтическую композицию, подходящую для перорального приема.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных лекарственных форм, таких как капсулы, саше или таблетки, или в виде жидкостей или аэрозольных спреев, при этом каждая такая форма содержит предварительно определенное количество активного ингредиента в виде порошка или гранул, раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле. Такие лекарственные формы можно получить любым из способов приготовления лекарственных средств, при этом все способы включают стадию приведения активного ингредиента в ассоциацию с носителем, который составляет один или несколько обязательных ингредиентов. Как правило, композиции получают путем однородного и тесного смешивания активного ингредиента с жидкими носителями или тонко-измельченными твердыми носителями, или и теми, и другими, затем, если необходимо, формования продукта в желаемую форму. Например, таблетку можно получить путем прессования или формования, необязательно с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки можно получить путем прессования в подходящей машине активного ингредиента в свободнотекучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного с эксципиентом, таким как, но не ограничиваясь этим, связующее, смазывающее вещество, инертный разбавитель и/или поверхностно-активное или диспергирующее вещество. Формованные таблетки можно получить путем формования в подходящей машине смеси порошкообразного соединения, смоченного инертным жидким разбавителем.
Настоящее изобретение, кроме того, охватывает безводные фармацевтические композиции и лекарственные формы, включающие активный ингредиент, поскольку вода может способствовать разложению некоторых соединений. Например, в фармацевтике можно добавлять воду (например, 5%) в качестве средства для имитации длительного хранения для определения характеристик, таких как срок хранения или стабильность композиций в течение времени. Безводные фармацевтические композиции и лекарственные формы по настоящему изобретению можно получить с использованием безводных или содержащих низкие количества влаги ингредиентов и в безводных условиях или условиях низкой влажности. Фармацевтические композиции и лекарственные формы по настоящему изобретению, которые содержат лактозу, можно сделать безводными, если ожидается существенный контакт с сыростью и/или влажностью в процессе изготовления, упаковки и/или хранения. Безводную фармацевтическую композицию можно получить и хранить так, чтобы поддерживать ее безводную природу. Соответственно, безводные композиции можно упаковывать с использованием материалов, которые известны как предотвращающие воздействие воды, так, чтобы они были включены в подходящие фармакологические наборы. Примеры подходящей упаковки включают, но не ограничиваются этим, герметичные упаковки из фольги, пластика или т. п., однодозовые контейнеры, блистерные упаковки и контурные упаковки.
Активный ингредиент можно объединить в тесной смеси с фармацевтическим носителем в соответствии с традиционными способами составления фармацевтических композиций. Носитель может принимать самые различные формы в зависимости от формы препарата, которая необходима для введения. Для получения композиций для пероральной лекарственной формы можно использовать любую обычную фармацевтическую среду в качестве носителя, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты, отдушки, консерванты, красители и т. п., в случае пероральных жидких препаратов (таких как суспензии, растворы и эликсиры) или аэрозолей; или носители, такие как крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие вещества, смазывающие вещества, связующие и разрыхлители можно использовать в случае пероральных твердых препаратов, в некоторых вариантах осуществления без использования лактозы. Например, подходящие носители включают порошки, капсулы и таблетки в случае твердых пероральных препаратов. Если желательно, таблетки могут иметь покрытие, нанесенное стандартными водными или неводными методами.
Связующие, подходящие для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, включают, но не ограничиваются этим, кукурузный крахмал, картофельный крахмал или другие крахмалы, желатин, природные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, альгинат натрия, альгиновая кислота, другие альгинаты, порошкообразные трагакант, гуаровую камедь, целлюлозу и ее производные (например, этилцеллюлозу, ацетат целлюлозы, кальциевую соль карбоксиметилцеллюлозы, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы), поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, предварительно желатинизированный крахмал, гидроксипропилметилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу и смеси таких веществ.
Примеры подходящих наполнителей для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, раскрытых в настоящей заявке, включают, но не ограничиваются этим, тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, декстраты, каолин, маннит, кремневую кислоту, сорбит, крахмал, предварительно желатини-зированный крахмал и смеси таких веществ.
Разрыхлители можно использовать в композициях по настоящему изобретению для получения таблеток, которые разрушаются под действием водной среды. Слишком много разрыхлителя может привести к получению таблеток, которые могут разрушаться в флаконе. Слишком малое количество может
быть недостаточным для разрушения таблетки и, таким образом, может изменять скорость и степень высвобождения активного ингредиента(ингредиентов) из лекарственной формы. Таким образом, достаточное количество разрыхлителя, которое не является ни слишком малым, ни слишком большим для негативного влияния на высвобождение активного ингредиента(ингредиентов), можно использовать для получения лекарственных форм соединений, раскрытых в настоящей заявке. Количество используемого разрыхлителя может варьироваться в зависимости от типа композиции и способа введения, и его легко сможет определить средний специалист в данной области. От около 0,5 до около 15 мас.% разрыхлителя или от около 1 до около 5 мас.% разрыхлителя можно использовать в фармацевтической композиции. Разрыхлители, которые можно использовать для получения фармацевтических композиций и лекарственных форм по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, агар-агар, альгиновую кислоту, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, натрий-кроскармелозу, кросповидон, полакрилин калия, натрийкрахмалгликолят, картофельный или тапиоковый крахмал, предварительно желатинизированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгины, другие целлюлозы, камеди или смеси таких веществ.
Смазывающие вещества, которые можно использовать для получения фармацевтических композиций и лекарственных форм по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, светлое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, по-лиэтиленгликоль, другие гликоли, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизиро-ванное растительное масло (например, арахисовое масло, масло семян хлопчатника, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло, соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллау-рат, агар или смеси таких веществ. Дополнительные смазывающие вещества включают, например, сило-идный силикагель, коагулированный аэрозоль синтетического кремнезема или смеси таких веществ. Добавление смазывающего вещества является необязательным, и его количество составляет меньше чем примерно 1 мас.% от массы фармацевтической композиции.
Когда для перорального введения желательны водные суспензии и/или эликсиры, активный ингредиент в них может быть объединен с различными подсластителями или отдушками, окрашивающими веществами или красителями и, если это желательно, эмульгаторами и/или суспендирующими веществами вместе с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин, и различными комбинациями таких веществ.
Таблетки могут быть без покрытия или могут иметь покрытие, нанесенное известными методами, для замедления разложения и абсорбции в желудочно-кишечном тракте и обеспечения, таким образом, замедленного действия в течение более длительного периода времени. Например, можно использовать обеспечивающее временную задержку вещество, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Композиции для перорального применения также могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водой или с масляной средой, например с арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.
Поверхностно-активные вещества, которые можно использовать для получения фармацевтических композиций и лекарственных форм по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, гидрофильные поверхностно-активные вещества, липофильные поверхностно-активные вещества и смеси таких веществ. Таким образом, можно использовать смесь гидрофильных поверхностно-активных веществ, можно использовать смесь липофильных поверхностно-активных веществ или можно использовать смесь по меньшей мере одного гидрофильного поверхностно-активного вещества и по меньшей мере одного липофильного поверхностно-активного вещества.
Подходящее гидрофильное поверхностно-активное вещество, как правило, может иметь значение ГЛБ по меньшей мере 10, тогда как подходящие липофильные поверхностно-активные вещества, как правило, могут иметь значение ГЛБ, равное или меньше чем около 10. Эмпирический параметр, используемый для характеристики относительной гидрофильности и гидрофобности неионных амфифильных соединений, представляет собой гидрофильно-липофильный баланс ("ГЛБ" значение). Поверхностно-активные вещества с более низкими значениями ГЛБ являются более липофильными или гидрофобными и имеют более высокую растворимость в маслах, тогда как поверхностно-активные вещества с более высокими значениями ГЛБ являются более гидрофильными и имеют более высокую растворимость в водных растворах.
Как правило, считают, что гидрофильные поверхностно-активные вещества представляют собой такие соединения, которые имеют значение ГЛБ больше чем около 10, а также анионные, катионные или цвиттерионные соединения, для которых ГЛБ шкала в большинстве случаев неприменима. Аналогичным образом, липофильные (т.е. гидрофобные) поверхностно-активные вещества представляют собой соединения, имеющие значение ГЛБ, равное или меньше чем около 10. Однако ГЛБ значение поверхностно-активного вещества просто является грубо ориентировочным, обычно используемым, чтобы обеспечить возможность формулирования промышленных, фармацевтических и косметических эмульсий.
Гидрофильные поверхностно-активные вещества могут быть либо ионными либо неионными. Под
ходящие ионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются этим, алкиламмо-ниевые соли; соли фузидовой кислоты; жирнокислотные производные аминокислот, олигопептидов и полипептидов; глицеридные производные аминокислот, олигопептидов и полипептидов; лецитины и гидрогенизированные лецитины; лизолецитины и гидрогенизированные лизолецитины; фосфолипиды и их производные; лизофосфолипиды и их производные; соли сложных эфиров жирных кислот и карнити-на; соли алкилсульфатов; соли жирных кислот; докузат натрия; ациллактилаты; моно- и диацетилиро-ванные моно- и диглицеридные эфиры винной кислоты; сукцинилированные моно- и диглицериды; моно- и диглицеридные эфиры лимонной кислоты и смеси таких веществ.
В описанной выше группе ионные поверхностно-активные вещества включают в качестве примера лецитины, лизолецитин, фосфолипиды, лизофосфолипиды и их производные; соли сложных эфиров жирных кислот и карнитина; соли алкилсульфатов; соли жирных кислот; докузат натрия; ациллактилаты; моно- и диацетилированные моно- и диглицеридные эфиры винной кислоты; сукцинилированные моно-и диглицериды; моно- и диглицеридные эфиры лимонной кислоты и смеси таких веществ.
Ионные поверхностно-активные вещества могут представлять собой ионизированные формы лецитина, лизолецитина, фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилглицерина, фосфатидовой кислоты, фосфатидилсерина, лизофосфатидилхолина, лизофосфатидилэтаноламина, лизофосфатидилг-лицерина, лизофосфатидовой кислоты, лизофосфатидилсерина, ПЭГ-фосфатидилэтаноламина, ПВП-фосфатидилэтаноламина, жирнокислотных эфиров молочной кислоты, стеароил-2-лактилата, стеароил-лактилата, сукцинилированных моноглицеридов, моно/диацетилированных моно/диглицеридных эфиров винной кислоты, моно/диглицеридных эфиров лимонной кислоты, холилсаркозина, капроата, каприлата, капрата, лаурата, миристата, пальмитата, олеата, рицинолеата, линолеата, линолената, стеарата, лаурил-сульфата, тетрадецилсульфата, докузата, лауроилкарнитинов, пальмитоилкарнитинов, миристоилкарни-тинов и их соли и смеси.
Гидрофильные неионные поверхностно-активные вещества могут включать, но не ограничиваются этим, алкилглюкозиды; алкилмальтозиды; алкилтиоглюкозиды; лаурилмакроголглицериды; алкиловые эфиры полиоксиалкилена, такие как алкиловые эфиры полиэтиленгликоля; полиоксиалкиленалкилфено-лы, такие как полиэтиленгликоль алкилфенолы; полиоксиалкиленовые эфиры жирных кислот и алкил-фенолов, такие как моноэфиры жирных кислот и полиэтиленгликоля и диэфиры жирных кислот и поли-этиленгликоля; полиэтиленгликолевые эфиры глицерина и жирных кислот; сложные полиглицериновые эфиры жирных кислот; полиоксиалкиленовые эфиры сорбитана и жирных кислот, такие как полиэти-ленгликолевые эфиры сорбитана и жирных кислот; гидрофильные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из глицеридов, растительных масел, гидрогенизи-рованных растительных масел, жирных кислот и стеролов; полиоксиэтиленстеролы, их производные и аналоги; полиоксиэтилированные витамины и их производные; полиоксиэтилен-полиоксипропиленовые блок-сополимеры; и смеси таких веществ; полиэтиленгликолевые эфиры сорбитана и жирных кислот и гидрофильные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из триглицеридов, растительных масел и гидрогенизированных растительных масел. Полиол может представлять собой глицерин, этиленгликоль, полиэтиленгликоль, сорбит, пропиленгликоль, пентаэрит-рит или сахарид.
Другие гидрофильные-неионные поверхностно-активные вещества включают, без ограничения, ПЭГ-10 лаурат, ПЭГ-12 лаурат, ПЭГ-20 лаурат, ПЭГ-32 лаурат, ПЭГ-32 дилаурат, ПЭГ-12 олеат, ПЭГ-15 олеат, ПЭГ-20 олеат, ПЭГ-20 диолеат, ПЭГ-32 олеат, ПЭГ-200 олеат, ПЭГ-400 олеат, ПЭГ-15 стеарат, ПЭГ-32 дистеарат, ПЭГ-40 стеарат, ПЭГ-100 стеарат, ПЭГ-20 дилаурат, ПЭГ-25 глицерилтриолеат, ПЭГ-32 диолеат, ПЭГ-20 глицериллаурат, ПЭГ-30 глицериллаурат, ПЭГ-20 глицерилстеарат, ПЭГ-20 глице-рилолеат, ПЭГ-30 глицерилолеат, ПЭГ-30 глицериллаурат, ПЭГ-40 глицериллаурат, ПЭГ-40 масло из ядер кокосового ореха, ПЭГ-50 гидрогенизированное касторовое масло, ПЭГ-40 касторовое масло, ПЭГ-35 касторовое масло, ПЭГ-60 касторовое масло, ПЭГ-40 гидрогенизированное касторовое масло, ПЭГ-60 гидрогенизированное касторовое масло, ПЭГ-60 кукурузное масло, ПЭГ-6 капрат/каприлат глицериды, ПЭГ-8 капрат/каприлат глицериды, полиглицерил-10 лаурат, ПЭГ-30 холестерин, ПЭГ-25 фитостерол, ПЭГ-30 соевый стерол, ПЭГ-20 триолеат, ПЭГ-40 сорбитанолеат, ПЭГ-80 сорбитанлаурат, полисорбат 20, полисорбат 80, ПОЭ-9 лауриловый эфир, ПОЭ-23 лауриловый эфир, ПОЭ-10 олеиловый эфир, ПОЭ-20 олеиловый эфир, ПОЭ-20 стеариловый эфир, токоферил ПЭГ-100 сукцинат, ПЭГ-24 холестерин, по-лиглицерил-10 олеат, Tween 40, Tween 60, моностеарат сахарозы, монолаурат сахарозы, монопальмитат сахарозы, ряд ПЭГ 10-100 нонилфенолов, ряд ПЭГ 15-100 октилфенолов и полоксамеры.
Подходящие липофильные поверхностно-активные вещества включают только в качестве примера жирные спирты; сложные эфиры жирных кислот и глицерина; ацетилированные сложные эфиры жирных кислот и глицерина; сложные эфиры жирных кислот низших спиртов; сложные эфиры пропиленгликоля и жирных кислот; сложные эфиры сорбитана и жирных кислот; полиэтиленгликолевые сложные эфиры жирных кислот и сорбитана; стеролы и производные стеролов; полиоксиэтилированные стеролы и производные стеролов; алкиловый эфиры полиэтиленгликоля; сложные эфиры сахаров; эфиры сахаров; моно- и диглицеридные производные молочной кислоты; гидрофобные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из глицеридов, растительных масем, гидро
генизированных растительных масел, жирных кислот и стеролов; маслорастворимые витамины/производные витаминов; и смеси таких веществ. В этой группе предпочтительные липофильные поверхностно-активные вещества включают сложные эфиры жирных кислот и глицерина, сложные эфиры пропиленгликоля и жирных кислот и смеси таких веществ или представляют собой гидрофобные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из растительных масел, гидрогенизированных растительных масел и триглицеридов.
В одном варианте осуществления композиция может включать солюбилизирующее вещество для обеспечения хорошей солюбилизации и/или растворения соединения по настоящему изобретению и для минимизации преципитации соединения по настоящему изобретению. Это может быть особенно важным для композиций, предназначенных для неперорального применения, например композиций для инъекций. Солюбилизирующее вещество также может быть добавлено для повышения растворимости гидрофильного лекарственного средства и/или других компонентов, таких как поверхностно-активные вещества, или для поддержания композиции в виде стабильного или гомогенного раствора или дисперсии.
Примеры подходящих солюбилизирующих веществ включают, но не ограничиваются этим, следующие: спирты и полиолы, такие как этанол, изопропанол, бутанол, бензиловый спирт, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутандиолы и их изомеры, глицерин, пентаэритрит, сорбит, маннит, транскутол, диме-тилизосорбид, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, поливиниловый спирт, гидроксипропилме-тилцеллюлоза и другие производные целлюлозы, циклодекстрины и производные циклодекстринов; эфиры полиэтиленгликолей со средней молекулярной массой от около 200 до около 6000, такие как тет-рагидрофурфуриловый спирт ПЭГ эфир (гликофурол) или метокси ПЭГ; амиды и другие азотсодержащие соединения, такие как 2-пирролидон, 2-пиперидон, 8-капролактам, N-алкилпирролидон, N-гидроксиалкилпирролидон, N-алкилпиперидон, N-алкилкапролактам, диметилацетамид и поливинил-пирролидон; сложные эфиры, такие как этилпропионат, трибутилцитрат, ацетилтриэтилцитрат, ацетил-трибутилцитрат, триэтилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, этилбутират, триацетин, пропиленгликоль моноацетат, пропиленгликоль диацетат, е-капролактон и его изомеры, 8-валеролактон и его изомеры, Р-бутиролактон и его изомеры; другие солюбилизирующие вещества, известные в данной области техники, такие как диметилацетамид, диметилизосорбид, N-метилпирролидоны, монооктаноин, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля и вода.
Смеси солюбилизирующих веществ также можно использовать. Примеры включают, но не ограничиваясь этим, триацетин, триэтилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, диметилацетамид, N-метилпирролидон, N-гидроксиэтилпирролидон, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюло-зу, гидроксипропилциклодекстрины, этанол, полиэтиленгликоль 200-100, гликофурол, транскутол, про-пиленгликоль и диметилизосорбид. Особенно предпочтительные солюбилизирующие вещества включают сорбит, глицерин, триацетин, этиловый спирт, ПЭГ-400, гликофурол и пропиленгликоль.
Количество солюбилизирующего вещества, которое может быть включно, конкретно не ограничивается. Количество данного конкретного солюбилизирующего вещества может ограничиваться биоприемлемым количеством, которое легко сможет определить специалист в данной области. В некоторых обстоятельствах, может быть полезным включение количеств солюбилизирующих веществ намного больше, чем биоприемлемые количества, например, для достижения максимальной концентрации лекарственного средства, при этом избыток солюбилизирующего вещества удаляют до поставки композици субъекту с использованием традиционных процедур, таких как дистилляция или выпаривание. Таким образом, если таковое присутствует, солюбилизирующее вещество может присутствовать в количестве 10, 25, 50, 100 или вплоть до около 200 мас.% в расчете на общую массу лекарственного средства и других эксципиентов. Если желательно, можно использовать также очень малые количества солюбилизи-рующего вещества, такие как 5, 2, 1 или даже меньше. Типично, солюбилизирующее вещество может присутствовать в количестве от около 1 до около 100%, более типично от около 5 до около 25 мас.%.
Композиция также может включать одну или несколько фармацевтически приемлемых добавок и эксципиентов. Такие добавки и эксципиенты включают, без ограничения, агенты для уменьшения вязкости, противовспенивающие добавки, буферные вещества, полимеры, антиоксиданты, консерванты, хела-тообразующие вещества, модуляторы вязкости, агенты тоничности, отдушки, красители, ароматизаторы, вещества, делающие композицию непрозрачной, суспендирующие вещества, связующие, наполнители, пластификаторы, смазывающие вещества и смеси таких веществ.
Кроме того, кислота или основание могут быть включены в композицию для облегчения переработки, для повышения стабильности или для других целей. Примеры фармацевтически приемлемых оснований включают аминокислоты, сложные эфиры аминокислот, гидроксид аммония, гидроксид калия, гид-роксид натрия, гидрокарбонат натрия, гидроксид алюминия, карбонат кальция, гидроксид магния, алюмосиликат магния, синтетический силикат алюминия, синтетический гидрокальцит, алюминия-магния-гидроокись, диизопропилэтиламин, этаноламин, этилендиамин, триэтаноламин, триэтиламин, триизо-пропаноламин, триметиламин, трис(гидроксиметил)аминометан (TRIS) и т. п. Также подходящими являются основания, которые представляют собой соли фармацевтически приемлемой кислоты, такой как уксусная кислота, акриловая кислота, адипиновая кислота, альгиновая кислота, алкансульфоновая кислота, аминокислоты, аскорбиновая кислота, бензойная кислота, борная кислота, масляная кислота, угольная
кислота, лимонная кислота, жирные кислоты, муравьиная кислота, фумаровая кислота, глюконовая кислота, гидрохиносульфоновая кислота, изоаскорбиновая кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, щавелевая кислота, парабромфенилсульфоновая кислота, пропионовая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, дубильная кислота, винная кислота, тиогликолевая кислота, толуолсульфоновая кислота, мочевая кислота и т.п. Соли полипротоновых кислот, такие как фосфат натрия, динатрий гидрофосфат и дигидрофосфат натрия, также можно использовать. Когда основание представляет собой соль, катион может быть любым удобным и фармацевтически приемлемым катионом, таким как аммоний, щелочные металлы, щелочно-земельные металлы и т. п. Пример может включать, но не ограничивается этим, натрий, калий, литий, магний, кальций и аммоний.
Подходящие кислоты представляют собой фармацевтически приемлемые органические или неорганические кислоты. Примеры подходящих неорганических кислот включают хлористо-водородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, иодисто-водородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, борную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Примеры подходящих органических кислот включают уксусную кислоту, акриловую кислоту, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, алкансульфоновые кислоты, аминокислоты, аскорбиновую кислоту, бензойную кислоту, борную кислоту, масляную кислоту, угольную кислоту, лимонную кислоту, жирные кислоты, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, глю-коновую кислоту, гидрохиносульфоновую кислоту, изоаскорбиновую кислоту, молочную кислоту, ма-леиновую кислоту, метансульфоновую кислоту, щавелевую кислоту, парабромфенилсульфоновую кислоту, пропионовую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, дубильную кислоту, винную кислоту, тиогликолевую кислоту,толуолсульфоновую кислоту, мочевую кислоту и т.п.
В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для инъекций, содержащую соединение по настоящему изобретению и фармацевтический эксципиент, подходящей для инъекции. Компоненты и количества веществ в композициях такие, как описано выше.
Формы, в которые могут быть включены новые композиции по настоящему изобретению, для введения путем инъекции включают водные или масляные суспензии или эмульсии с использованием кунжутного масла, кукурузного масла, масла семян хлопчатника или арахисового масла, а также эликсиров, маннита, декстрозы или стерильного водного раствора и подобных фармацевтических носителей.
Водные растворы в физиологическом солевом растворе также традиционно используют для инъекций. Этанол, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и т.п. (и подходящие смеси таких веществ), производные циклодекстринов и растительные масла также можно использовать. Подходящую текучесть можно поддерживать, например, с использованием покрытия, такого как лецитин, для поддержания нужного размера частиц в случае дисперсии и с использованием поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечивать с использованием различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т.п.
Стерильные растворы для инъекций получают путем включения соединения по настоящему изобретению в необходимом количестве в подходящий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, в соответствии с требованиями, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают путем включения различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных растворов для инъекций, некоторые подходящие способы получения включают вакуумную сушку и сушку с замораживанием с получением порошка, включающего активный ингредиент плюс любой дополнительный желаемый ингредиент, из содержащего их раствора, полученного ранее путем стерилизации фильтрованием.
В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию для чрескожной доставки, содержащую соединение по настоящему изобретению и фармацевтический эксципиент, подходящий для чрескожной доставки.
Композиции по настоящему изобретению могут быть сформулированы в препараты в твердой, полутвердой или жидкой форме, подходящие для локального или местного введения, например, гели, водорастворимые желе, кремы, лосьоны, суспензии, пены, порошки, взвеси, мази, растворы, масла, пасты, суппозитории, спреи, эмульсии, физиологические солевые растворы, растворы на основе диметилсуль-фоксида (DMSO). Как правило, носители с более высокой плотностью способны обеспечивать область пролонгированного воздействия активных ингредиентов. В отличие от этого, композиция раствора может обеспечить более быстрое воздействие активного ингредиента на выбранную область.
Фармацевтические композиции также могут включать подходящие носители или эксципиенты в твердой или гелевой фазе, которые представляют собой соединения, обеспечивающие лучшую пенетра-цию или способствующие доставке терапевтических молекул через барьер рогового слоя кожи. Существует множество таких усиливающих пенетрацию молекул, известных специалистам в области составления композиций для местного применения. Примеры таких носителей и эксципиентов включают, но не ограничиваются этим, увлажнители (например, мочевина), гликоли (например, пропиленгликоль), спир
ты (например, этанол), жирные кислоты (например, олеиновая кислота), поверхностно-активные вещества (например, изопропилмиристат и лаурилсульфат натрия), пирролидоны, глицеринмонолаурат, суль-фоксиды, терпены (например, ментол), амины, амиды, алканы, алканолы, воду, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы, желатин и полимеры, такие как поли-этиленгликоли.
Еще одна иллюстративная лекарственная для использования в способах по настоящему изобретению предполагает использование устройств для чрескожной доставки ("пластыри"). Такие чрескожные пластыри можно использовать для обеспечения непрерывной или прерывистой инфузии соединения по настоящему изобретению в контролируемых количествах либо с использованием, либо без другого средства.
Конструкция и применение чрескожных пластырей для доставки фармацевтических средств хорошо известны в данной области техники. См., например, патенты США №№ 5023252, 4992445 и 5001139. Такие пластыри могут быть сконструированы для непрерывной, импульсной или по мере необходимости доставки фармацевтических средств.
Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты, которые описаны выше. Предпочтительно композиции вводят пероральным или интраназальным путем для местного или системного эффекта. Композиции в предпочтительно фармацевтически приемлемых растворителях можно распылять с использованием инертных газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства, или распыляющее устройство может быть присоединено к дыхательной маске или к дыхательносу устройству с прерывистым положительным давлением. Композиции в виде растворов, суспензий или порошков можно вводить, предпочтительно перорально или назально, из устройств, которые доставляют лекарственный препарат подходящим образом.
Фармацевтические композиции также можно получить из композиций, описанных в настоящей заявке, и одного или нескольких фармацевтически приемлемых эксципиентов, подходящих для сублин-гвального, буккального, ректального, внутрикостного, внутриглазного, интраназального, эпидурального или интраспинального введения. Способы получения таких фармацевтических композиций хорошо известны в данной области. См., например, Anderson, Philip О.; Knoben, James E.; Troutman, William G, eds., Handbook of Clinical Drug Data, Tenth Edition, McGraw-Hill, 2002; Pratt and Taylor, eds., Principles of Drug Action, Third Edition, Churchill Livingston, New York, 1990; Katzung, ed., Basic and Clinical Pharmacology, Ninth Edition, McGraw Hill, 20037ybg; Goodman and Gilman, eds., The Pharmacological Basis of Therapeutics, Tenth Edition, McGraw Hill, 2001; Remingtons Pharmaceutical Sciences, 20th Ed., Lippincott Williams & Wilkins., 2000; Martindale, The Extra Pharmacopoeia, Thirty-Second Edition (The Pharmaceutical Press, London, 1999); которые все включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей их полноте.
Введение соединений или фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно осуществлять любым способом, который обеспечивает доставку соединений к месту действия. Эти способы включают пероральные пути, интрадуоденальные пути, парентеральную инъекцию (включая внутривенную, интраартериальную, подкожную, внутримышечную, интраваскулярную, интраперитонеальную или инфузию), местный путь (например, чрескожное введение), ректальное введение, местную доставку при помощи катетера или стента или путем ингаляции. Соединения также можно вводить интраадипозаль-ным или интратекальным путем.
Количество вводимого соединения будет зависеть от субъекта, подлежащего лечению, тяжести расстройства или состояния, скорости введения, характера соединения и мнения лечащего вреча, прописывающего такое лечение. Однако эффективная доза находится в пределах от около 0,001 до около 100 мг на 1 кг массы тела в день, предпочтительно примерно от 1 до около 35 мг/кг/день в виде одной или дробных доз. Для человека с массой тела 70 кг это будет составлять примерно от 0,05 до 7 г/день, предпочтительно от около 0,05 до около 2,5 г/день. В некоторых случаях уровни доз меньше нижнего предела указанного диапазона могут быть более чем достаточными, тогда как в других случаях можно использовать еще более высокие дозы, не вызывая при этом каких-либо вредных побочных эффектов, например разделяя такие более высокие дозы на несколько небольших доз для введения в течение суток.
В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению вводят в виде разовой дозы. Типично, такое введение осуществляют путем инъекции, например внутривенной инъекции, для быстрого введения средства. Однако можно использовать другие пути, известные из уровня техники или описанные в настоящей заявке, которые являются подходящими. Разовую дозу соединения по настоящему изобретению также можно использовать для лечения острого состояния.
В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению вводят в виде нескольких доз. Введение можно осуществлять примерно один раз, два раза, три раза, четыре раза, пять раз, шесть раз или больше чем шесть раз в день. Введение можно осуществлять примерно один раз в месяц, один раз в две недели, один раз в неделю или через день. В другом варианте осуществления соединение по настоящему изобретению и другое средство вводят вместе примерно от одного раза в день до примерно 6 раз в день. В другом варианте осуществления введение соединения по настоящему изобрете
нию и другого средства продолжают в течение меньше чем примерно 7 дней. Еще в одном варианте осуществления введение осуществляют в течение больше чем примерно 6, 10, 14, 28 дней, два месяца, шесть месяцев или один год. В некоторых случаях непрерывное введение осуществляют и поддерживают так долго, как это необходимо.
Введение соединений по настоящему изобретению может продолжаться так долго, как это необходимо. В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению вводят в течение больше чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14 или 28 дней. В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению вводят в течение меньше чем 28, 14, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 дня. В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению вводят в течение длительного времени непрерывно, например, для лечения хронических эффектов.
Эффективное количество соединения по настоящему изобретению можно вводить в виде разовой или нескольких доз любым из принятых путей введения средств, имеющих подобные применения, включая ректальный, буккальный, трансназальный и чрескожный пути, при помощи интраартериальной инъекции, внутривенно, интраперитонеально, парентерально, внутримышечно, подкожно, перорально, местно или путем ингаляции.
Доставку композиций по настоящему изобретению также можно осуществлять через импрегниро-ванное или имеющее покрытие устройство, такое как стент, например, или введенный в артерию цилиндрический полимер. Такой способ введения, например, может способствовать предотвращению или уменьшению рестеноза после процедур, таких как баллонная ангиопластика. Не связывая это с теорией, соединения по настоящему изобретению могут замедлять или ингибировать миграцию и пролиферацию клеток гладких мышц в стенке артерий, способствующие рестенозу. Соединение по настоящему изобретению можно вводить, например, путем местной доставки из каркаса стента, из стент-графта, из трансплантатов или из покрытия или оболочки стента. В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению смешивают с матрицей. Такая матрица может представлять собой полимерную матрицу и может служить для связывания соединения со стентом. Полимерные матрицы, подходящие для такого применения, включают, например, сложные полиэфиры или сложные сополиэфиры на основе лактонов, такие как полилактид, поликапролактонгликолид, сложные полиортоэфиры, полиангидриды, полиаминокислоты, полисахариды, полифосфазены, поли (простой эфир-сложный эфир) сополимеры (например, PEO-PLLA); полидиметилсилоксан, поли(этилен-винилацетат), акрилатные полимеры или сополимеры (например, полигидроксиэтилметилметакрилат, поливинилпирролидинон), фторированные полимеры, такие как политетрафторэтилен, и сложные эфиры целлюлозы. Подходящие матрицы могут быть неразлагаемыми или могут разлагаться со временем, высвобождая соединение или соединения. Соединения по настоящему изобретению можно наносить на поверхность стента различными способами, такими как нанесение покрытия методом погружения/центрифугирования, нанесение покрытия распылением, нанесение покрытия путем окунания и/или нанесения покрытия при помощи щеточного устройства. Соединения можно наносить в растворителе, и растворителю можно дать возможность испариться, с образованием, таким образом, слоя соединения на стенте. Альтернативно, соединение может находиться в самом стенте или трансплантате, например в микроканалах или микропорах. После имплантации соединение диффундирует из стента для контактирования со стенкой артерии. Такие стенты можно получить путем погружения стента, изготовленного таким образом, чтобы он имел такие микропоры или микроканалы, в раствор соединения по настоящему изобретению в подходящем растворителе, с последующим выпариваним растворителя. Избыток лекарственного средства на поверхности стента можно удалить при помощи дополнительной быстрой промывки растворителем. В некоторых других вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению могут быть ковалентно связаны со стентом или имплантатом. Можно использовать ковалентно связывающий агент, который разлагается in vivo, приводя к высвобождению соединения по настоящему изобретению. Любую биолабильную связь можно использовать для таких целей, такую как сложноэфирная, амидная или ангидридная связь. Соединения по настоящему изобретению, кроме того, можно вводить интраваскулярно из баллона, используемого в процессе ангиопластики. Экстраваскулярное введение соединений через перикард или через периартери-альное нанесение композиций по настоящему изобретению также можно осуществлять для уменьшения рестеноза.
Различные устройства для стентов, которые можно использовать, как описано выше, раскрыты, например, в следующих ссылочных документах, которые все включены в настоящую заявку посредством ссылки на патенты США №№ 5451233; 5040548; 5061273; 5496346; 5292331; 5674278; 3657744; 4739762; 5195984; 5292331;5674278;5879382;6344053.
Соединения по настоящему изобретению можно вводить дозированно. Из уровня техники известно, что из-за межсубъектной вариабельности фармакокинетики соединения необходима индивидуализация режима введения для оптимальной терапии. Режим введения для соединения по настоящему изобретению можно определить путем рутинного экспериментирования в свете настоящего раскрытия.
Когда соединение по настоящему изобретению вводят в композиции, которая включает одно или несколько средств, и входящее в композицию средство имеет более короткий период полужизни, чем у соединения по настоящему изобретению, стандартные дозы такого средства и соединения по настоящему
изобретению можно скорректировать соответствующим образом.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может, например, быть в форме, подходящей для перорального введения, в виде таблетки, капсулы, пилюли, порошка, композиций замедленного высвобождения, раствора, суспензии, для парентеральной инъекции в виде стерильного раствора, суспензии или эмульсии, для местного введения в виде мази или крема или для ректального введения в виде суппозитория. Фармацевтическая композиция может быть представлена в стандартных лекарст-веннах формах, подходящих для разового введения точно определенных доз. Фармацевтическая композиция будет включать традиционный фармацевтический носитель или эксципиент и соединение в соответствии с изобретением в качестве активного ингредиента. Кроме того, она может включать другие медицинские или фармацевтические средства, носители, адъюванты и т.д.
Иллюстративные формы для парентерального введения включают растворы или суспензии активного соединения в стерильных водных растворах, например водных растворах пропиленгликоля или декстрозы. Такие лекарственные формы могут быть подходящим образом забуферены, если желательно.
Примеры
В следующих далее примерах молекулы с одним хиральным центром, если не указано иное, существуют в виде рацемической смеси. Те молекулы, которые имеют два или больше хиральных центров, если не указано иное, существуют в виде рацемической смеси диастереомеров. Отдельные энантиоме-ры/диастереомеры можно получить способами, известными специалистам в данной области.
Пример 1. Синтез соединения (6-бензил-3-(пиридин-4-ил)-1,5,6,8-тетрагидро-7Н-пиразоло-[4,3-g]-хиназолин-7-он)
3-Бром-5-метил-6-нитро-1Н-индазол (ЕХ 1-2).
К перемешиваемому раствору 5-метил-6-нитро-1 Н-индазола (1,77 г, 10 ммоль) в 20 мл безводного DMF при комнатной температуре добавляли NBS (2,14 г, 12 ммоль) с последующим добавлением KOH (1,12 г, 20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой и насыщенным водным раствором NH4Cl. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (3,1 г) в виде коричневого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
3-Бром-5-метил-6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол (ЕХ 1-3).
К перемешиваемому раствору 3-бром-5-метил-6-нитро-1Н-индазола (2,43 г, 9,5 ммоль) в 30 мл безводного THF при 0°С добавляли NaH (60% в минеральном масле, 0,76 г, 19 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 мин. Добавляли TrtCl (3,97 г, 14,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Растворитель удаляли. Остаток растворяли в этилацетате и промывали насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на системе Biotage (25 г картридж, 0-30% этилацетат в гексан) с получением желаемого продукта (4,5 г, 95% выход) в виде желтого твердого вещества.
5-Метил-6-нитро-3-(пиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол (ЕХ 1-4).
К раствору 3-бром-5-метил-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (2,0 г, 4,0 ммоль) и пиридин-4-илбороновой кислоты (736 мг, 6,0 ммоль) в 30 мл 4:1 смеси диоксана и воды при комнатной температуре добавляли PdCl2 (dppf) (32 7 мг, 0,40 ммоль) и K2CO3 (1,10 г, 8,0 ммоль). Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацетатом. Смесь фильтровали через слой целита и фильтрат промывали насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали
и концентрировали. Остаток очищали на системе Biotage (25 г картридж, 10-80% этилацетата в гексане) с получением желаемого продукта (1,12 г, 56% выход). ESI-MS m/z: 497 [M+H]+.
N-Бензил-! -(6-нитро-3 -(пиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метенамин (ЕХ 1-6).
К раствору 5-метил-6-нитро-3-(пиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазола (222 мг, 0,45 ммоль) и NBS (239 мг, 1,35 ммоль) в 10 мл CCl4 при комнатной температуре добавляли AIBN (22 мг, 0,30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 2 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и затем добавляли бензиламин (1,64 мл, 15 ммоль). Полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 3 ч. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацетатом, промывали насыщенным водным раствором NH4Cl и насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (58 мг, 21% выход). ESI-MS m/z: 602
5- ((Бензиламино)метил)-3-(пиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-6-амин (ЕХ 1-7).
К раствору N-бензил-1-(6-нитро-3-(пиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метанамина (60 мг, 0,10 ммоль) в 3 мл 1:5 смеси AcOH/2-PrOH при комнатной температуре добавляли Zn пыль (130 мг, 2,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (36 мг, 63% выход). ESI-MS m/z: 572 [M+НГ.
6- Бензил-3 -(пиридин-4-ил)-1-тритил-1,5,6,8-тетрагидро-7Н-пиразоло-[4,3-g] -хиназолин-7-он (ЕХ 18).
К раствору 5-((бензиламино)метил)-3-(пиридин-4-ил)-1-тритил-1 Н-индазол-6-амина (24 мг, 0,04 ммоль) в 3 мл DCM добавляли Et3N (42 мкл, 0,24 ммоль) с последующим добавлением CDI (65 мг, 0,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь концентрировали в вакууме и остаток использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ESI-MS m/z: 598
6-Бензил-3-(пиридин-4-ил)-1,5,6,8-тетрагидро-7Н-пиразоло-[4,3-g]-хиназолин-7-он (1).
К раствору 6-бензил-3 -(пиридин-4-ил)-1 -тритил-1,5,6,8-тетрагидро-7Н-пиразоло [4,3^]хиназолин-7-она (неочищенный продукт, полученный на предыдущей стадии) в 4 мл DCM добавляли 1 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Растворитель удаляли и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (8 мг, 56% выход, 2 стадии).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,25 (шир., 1Н), 9,62 (с, 1Н), 8,63(дд, J=1,4, 4,6 Гц, 1Н), 7,92-7,95 (м, 3Н), 7,29-7,37 (м, 5Н), 6,98 (с, 1Н), 4,60 (с, 2Н), 4,45 (с, 2Н). ESI-MS m/z: 356,0 [М+Н]+.
Пример 2. Синтез соединения (^)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-(1-фенилэтил)-5,6-дигидро-1Н-пиразоло-[4,3-g]-хиназолин-7(8Н)-он)
выливали в воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (200 мл х3). Объединенные органические слои промывали при помощи Н2О (200 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (4,2 г, 79% выход) в виде желтого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
5-Бром-3-иод-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол (ЕХ 2-3). К перемешиваемой смеси 5-бром-3-иод-6-нитро-1 Н-индазола (1 г, 2,7 ммоль) в THF (10 мл) при комнатной температуре добавляли NaH (162 мг, 4,08 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин в атмосфере азота. К этой смеси добавляли Trt-Cl (912 мг, 3,27 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в воду (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (80 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (5-20% этилацетата/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (1,6 г, 96% выход) в виде желтого твердого вещества.
5-Бром-3-иод-1-тритил-1Н-индазол-6-амин (ЕХ 2-4).
К перемешиваемой смеси 5-бром-3-иод-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (1,15 г, 1,89 ммоль) в НОАс/Н2О (16 мл/ 4 мл) при 60°С добавляли Fe порошок (530 мг, 9,46 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 6 ч, затем давали охладиться до комнатной температуры. Реакционную смесь фильтровали через силикагель и промывали этилацетатом (100 мл). Объединенный фильтрат экстрагировали этилацетатом (80 мл х3). Объединенный органический слой промывали при помощи Н2О (80 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (750 мг, 69% выход) в виде желтого твердого вещества. Полученный неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
№(5-Бром-3-иод-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамид (ЕХ 2-5).
К перемешиваемой смеси 5-бром-3-иод-1-тритил-1 Н-индазол-6-амина (346 мг, 0,6 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°С добавляли Et3N (91 мг, 0,9 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, затем добавляли по каплям раствор ацетилхлорида (61 мг, 0,78 ммоль) в DCM (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали при помощи DCM (50 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (50 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (350 мг, 95% выход) в виде желтого твердого вещества. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
N-(5-Бром-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамид (ЕХ 2-6).
К смеси ^(5-бром-3-иод-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамида (173 мг, 0,278 ммоль) и 2-метилпиридин-4-илбороновой кислоты (42 мг, 0,306 ммоль) в 1,4-диоксане/H2O (8 мл/2 мл) добавляли последовательно PdCl2dppf (31 мг, 0,042 ммоль) и K^O^^^ (222 мг, 0,834 ммоль). Полученную смесь дегазировали и снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 85°С в течение 4 ч. Смеси давали охладиться до комнатной температуры. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (60 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (60 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (10-40% этилацетата/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (46 мг, 35% выход) в виде белого твердого вещества.
N-(3 -(2-Метилпиридин-4-ил)-1-тритил-5-винил-1Н-индазол-6-ил)ацетамид (ЕХ 2-7).
К смеси N-(5-бром-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамида (46 мг, 0,0785 ммоль) и Pd(PPh3)4 (18 мг, 0,016 ммоль) в толуоле (6 мл) добавляли трибутил(винил)олово (30 мг, 0,094 ммоль). Полученную смесь дегазировали и снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 115°С в течение 4 ч. Реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры, выливали в воду (20 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (60 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (60 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (20-50% этилаце-тата/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (30 мг, 90% выход) в виде белого твердого вещества.
№(5-Формил-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1 -тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамид (ЕХ 2-8).
К перемешиваемой смеси N-(3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-5-винил-1Н-индазол-6-ил)ацет-амида (28 мг, 0,0524 ммоль) в THF (4 мл) и Н2О (1 мл) при 0°С добавляли тетроксид осмия (5 мг) и полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. К этой смеси добавляли периодат натрия (56 мг, 0,262 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливали в воду (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (50 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (30-60%
этилацетата/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (20 мг, 80% выход) в виде белого твердого вещества.
(R)-N-(3 -(2-Метилпиридин-4-ил)-5-((1 -фенилэтиламино)метил)-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацет-
амид (ЕХ 2-9).
Смесь N-(5-формил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамида (84 мг, 0,157 ммоль) и ^)-1-фенилэтанамина (21 мг, 0,172 ммоль) в EtOH перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 ч. Смеси давали охладиться до комнатной температуры и затем добавляли NaBH4 (12 мг, 0,31 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч, выливали в воду (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (40 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (40 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (80 мг, 65% выход) в виде белого твердого вещества. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
(R)-3-(2-Метилпиридин-4-ил)-5-((1-фенилэтиламино)метил)-1Н-индазол-6-амин (ЕХ 2-10).
Смесь (R)-N-(3-(2-метилпиридин-4-ил)-5-((1-фенилэтиламино)метил)-1-тритил-1Н-индазол-6-ил) ацетамида (40 мг, 0,062 ммоль) в 6н. HCl (5 мл) перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 5 ч. Смеси давали охладиться до 0°С, добавляли K2CO3 для доведения рН до 9. Смесь экстрагировали этилацетатом (40 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (40 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (30 мг, 85% выход) в виде белого твердого вещества. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
(R)-3-(2-Метилпиридин-4-ил)-6-(1-фенилэтил)-5,6-дигидро-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-он
(2).
К смеси (R)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-5-((1-фенилэтиламино)метил)-1Н-индазол-6-амина (30 мг, 0,084 ммоль) в THF (5 мл) добавляли CDI (21 мг, 0,12 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 70°С в течение 5 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в воду (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (30 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-10% MeOH/DCM) с получением желаемого продукта (10 мг, 31% выход) в виде белого твердого вещества.
1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) 8: 13,25 (с, 1Н), 9,57 (с, 1Н), 8,48(д, J=5,4 Гц, 1Н), 7,95 (с, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,73 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 7,38 (м, 4Н), 7,28 (м, 1Н), 6,97 (с, 1Н), 5,76 (м, 1Н), 4,56 (д, J=4,7 Гц, 1Н), 4,01 (д, J=4,9^, 1H), 2,54 (с, 3Н), 1,57 (д, J=7,2 Гц, 3Н). ESI-MS m/z: 384,3 [М+Н]+.
Пример 3. Синтез 6-(4-фторбензил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-она.
N-((3-Бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)(4-фторфенил)метанамин.
К раствору 3-бром-5-метил-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (500 мг, 1,0 ммоль) и NBS (268 мг, 1,5 ммоль) в 10 мл CCl4 при комнатной температуре добавляли AIBN (98 мг, 0,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры и твердое вещество удаляли фильтрованием. Добавляли (4-фторфенил)метанамин (500 мг, 4,0 ммоль) и 1 мл DMF. Полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацетатом, промывали насыщенным водным раствором NH4Cl и насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 15% эти-лацетата в петролейном эфире) с получением желаемого продукта (280 мг, 45% выход). ESI-MS m/z: 621.
5- ((4-Фторбензиламино)метил)-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-6-амин.
К раствору N-((3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)(4-фторфенил)метанамина (280 мг, 0,45 ммоль) в 6 мл 1:5 смеси AcOH/2-PrOH добавляли Zn пыль (587 мг, 9,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (230 мг). ESI-MS m/z: 591.
6- (4-Фторбензил)-3 -бром-5,6-дигидро-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хиназолин-7(8Н)-он.
К раствору 5-((4-фторбензиламино)метил)-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-6-амина (230 мг, 0,39 ммоль) в 6 мл DCM добавляли Et3N (433 мг, 4,3 ммоль) с последующим добавлением CDI (316 мг, 1,95 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали при помощи 40% этил-ацетата в петролейном эфире) с получением желаемого продукта (180 мг, 75% выход от 2 стадий). ESI-
MS m/z: 611.
6-(4-Фторбензил)-5,6-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хиназолин-
7(8Н)-он.
К раствору 6-(4-фторбензил)-3-бром-5,6-дигидро-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хиназолин-7(8Н)-она (135 мг, 0,22 ммоль) и пиридин-4-илбороновой кислоты (60 мг, 0,44 ммоль) в 11 мл 10:1 смеси диоксана и воды при комнатной температуре добавляли PdCl2(dppf) (16 мг, 0,02 ммоль) и K2CO3 (91 мг, 0,66 ммоль). Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на си-ликагеле (элюировали при помощи 40% этилацетата в петролейном эфире) с получением желаемого продукта (22 мг, 16% выход). ESI-MS m/z: 630.
6-(4-Фторбензил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-он.
К раствору 6-(4-фторбензил)-5,6-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3-g] хиназолин-7(8Н)-она (22 мг, 0,03 ммоль) в 3 мл DCM добавляли 3 мл TFA и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли и добавляли NH3.MeOH для доведения рН> 8,0. Полученную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 7% МеОН в DCM) с получением желаемого продукта (3 мг, 22% выход).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,21 (шир., 1Н), 9,62 (с, 1Н), 8,50 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 7,96 (с, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,74 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 7,41 (дд, J=5,6, 8,0 Гц, 2Н), 7,22 (т, J=8,8 Гц, 2Н), 6,97 (с, 1Н), 4,58 (с,
2Н), 4,45 (с, 2Н), 2,55 (с, 3Н). ESI-MS m/z: 388.
Пример 4. Синтез 5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-((тиазол-4-ил)метил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-она.
2-((3-Бром-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)изоиндолин-1,3-дион.
К раствору 3-бром-5-метил-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (4,0 г, 8,0 ммоль) и NBS (2,14 мг, 12,0 ммоль) в 40 мл CCl4 при комнатной температуре добавляли AIBN (787 мг, 4,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры и твердое вещество удаляли фильтрованием. Растворитель удаляли в условиях вакуума и добавляли н-калий фта-лимид (4,44 г, 24 ммоль) и 40 мл DMF. Полученную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацетатом, промывали водой и насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 15% этилацетата в петролейном эфире) с получением желаемого продукта (2,3 г, 45% выход). ESI-MS m/z: 645.
(3 -Бром-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метанамин.
К раствору 2-((3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)изоиндолин-1,3-диона (300 мг, 0,47 ммоль) в метаноле (6 мл) добавляли гидрат гидразина (233 мг, 4,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и твердое вещество удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 50% этилацетата в петролейном эфире) с получением желаемого продукта (140 мг, 58% выход). ESI-MS m/z: 515.
N-((3-Бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)(тиазол-4-ил)метанамин.
К смеси (3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метанамина (380 мг, 0,74 ммоль) и тиазол-4-карбальдегида (84 мг, 0,74 ммоль) добавляли 3 капли уксусной кислоты и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляли цианоборогидрид натрия (93 мг, 1,48 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюи-ровали при помощи 25% этилацетата в дихлорметане) с получением желаемого продукта (177 мг, 32%
выход). ESI-MS m/z: 612.
5-(((Тиазол-4-ил)метиламино)метил)-3-бром-1-тритил-1 Н-индазол-6-амин.
К раствору N-((3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)(тиазол-4-ил)метанамина (177 мг, 0,29 ммоль) в 12 мл 1:5 смеси AcOH/2-PrOH добавляли Zn пыль (378 мг, 5,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в эти-лацетате, затем промывали водой. Органическую фазу собирали, промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого неочищенного продукта в виде желтого твердого вещества (158 мг). ESI-MS m/z: 582.
5-(((Тиазол-4-ил)метиламино)метил)-3-бром-1-тритил-1 Н-индазол-6-амин.
К раствору 5-(((тиазол-4-ил)метиламино)метил)-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-6-амина (158 мг, 0,27 ммоль) в 8 мл DCM добавляли Et3N (303 мг, 43,0 ммоль) с последующим добавлением CDI (221 мг, 1,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали при помощи 4% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (65 мг, 39% выход от 2 стадий). ESI-MS m/z: 606.
5,6-Дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-((тиазол-4-ил)метил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-
7(8Н)-он.
К раствору 5-(((тиазол-4-ил)метиламино)метил)-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-6-амина (65 мг, 0,11 ммоль) и пиридин-4-илбороновой кислоты (29 мг, 0,21 ммоль) в 11 мл 10:1 смеси диоксана и воды при комнатной температуре добавляли PdCl2(dppf) (23 мг, 0,03 ммоль) и K2CO3 (45 мг, 0,33 ммоль). Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюи-ровали при помощи 2,5% дихлорметана в метаноле) с получением желаемого продукта (38 мг, 57% выход). ESI-MS m/z: 630.
5,6-Дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-((тиазол-4-ил)метил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-
он.
К раствору 5,6-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-6-((тиазол-4-ил)метил)-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3 -g]хиназолин-7(8Н)-она (38 мг, 0,06 ммоль) в 3 мл DCM добавляли 3 мл TFA и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли и добавляли NH3-MeOH для доведения рН> 8,0. Полученную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 7% МеОН в DCM) с получением желаемого продукта (15 мг, 64% выход).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,24 (шир., 1Н), 9,60 (с, 1Н), 9,10 (д, J=1,6 Гц, 1Н), 8,51(д, J= 5,6 Гц, 1Н), 7,99 (с, 1Н), 7,82 (с, 1Н), 7,76(с, 1Н), 7,57(с, 1Н), 6,69 (с, 1Н), 4,72 (с, 2Н), 4,60 (с, 2Н), 2,56 (с,
3Н). ESI-MS m/z:376.
Пример 5. 5,6-Дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-6-((R)-1-((тиофен-2-ил)метил)пиперидин-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3-д]хиназолин-7(8Н)-он.
3-Бром-5-(бромметил)-6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол.
Смесь 3-бром-5-метил-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (2 г, 4 ммоль), NBS (1 г, 5,6 ммоль) и AIBN (400 мг, 2,4 ммоль) в 40 мл CCl4 перемешивали при 80°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (2,5 г) в виде коричневого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
^)-трет-Бутил 3-((3-бром-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метиламино)пиперидин-1 -карбок-силат.
Смесь 3-бром-5-(бромметил)-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (2,5 г, 4,3 ммоль) и ^)-трет-бутил 3-аминопиперидин-1-карбоксилата (2,5 г, 12,9 ммоль) в 30 мл THF перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (020% ЕА в РЕ) с получением желаемого продукта (860 мг, 47,8% выход) в виде оранжевого масла.
^)-трет-Бутил 3-((6-амино-3 -бром-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метиламино)пиперидин-1-карбок-силат.
Смесь 3-((3-бром-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метиламино)пиперидин-1-карбоксилата (860 мг, 1,23 ммоль) в 10 мл 4:1 смеси НОАс и IPA при 60°С перемешивали в течение 1 ч. К этой смеси добавляли Zn (1,6 г, 24,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 1 ч. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацетатом. Смесь фильтровали через слой целита и фильтрат промывали насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и остаток концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (668 мг, 81% выход). ESI-MS
m/z:668.
^)-трет-Бутил 3-(3 -бром-7,8-дигидро-7-оксо-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хиназолин-6(5Н)-ил)пи-перидин-1-карбоксилат.
Смесь ^)-трет -бутил 3-((6-амино-3 -бром-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метиламино)пиперидин-1-карбоксилата (668 мг, 1 ммоль), CDI (890 мг, 5,5 ммоль) и Et3N (1,1 г, 11 ммоль) в 10 мл DCM перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацета-том, промывали насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с диоксидом кремния (0-30% ЕА в РЕ) с получением желаемого продукта (400 мг, 58% выход) в виде желтого твердого вещества. ESI-
MS m/z: 692.
^)-трет-Бутил 3-(7,8-дигидро-3 -(2-метоксипиримидин-5-ил)-7-оксо-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-6(5Н)-ил)пиперидин-1-карбоксилат.
Смесь ^)-трет-бутил 3-(3-бром-7,8-дигидро-7-оксо-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-6(5Н)-ил)пиперидин-1-карбоксилата (400 мг, 0,56 ммоль), 2-метоксипиримидин-5-ил-5-бороновой кислоты (250 мг, 1,65 ммоль), Pd(dppf)Cl2 (81 мг, 0,1 ммоль) и K2CO3 (138 мг, 1 ммоль) в 18 мл 1:5 H^/диоксан перемешивали при 100°С в течение 16 ч. Растворитель удаляли и остаток поглощали этилацетатом, промывали насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем (0-50% ЕА в РЕ) с получением желаемого продукта (270 мг, 75% выход) в виде светло-желтого твердого вещества.ESI-MS m/z: 722.
5,6-Дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-6-((R)-пиперидин-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-
7(8Н)-он.
Смесь ^)-трет-бутил 3-(7,8-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-7-оксо-1-тритил-1Н-пиразоло
[4,3^]хиназолин-6(5Н)-ил)пиперидин-1-карбоксилата (270 мг, 0,37 ммоль) и 3 мл TFA и 7 мл DCM. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (0-20% МеОН в DCM) с получением желаемого продукта (130 мг, 92,8% выход) в виде белого твердого вещества. ESI-MS m/z: 380.
5,6-Дигидро-3 -(2-метоксипиримидин-5-ил)-6-((R)-1-((тиофен-2-ил)метил)пиперидин-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-7(8Н)-он.
Смесь 5,6-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-6-((R)-пиперидин-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хина-золин-7(8Н)-она (130 мг, 0,34 ммоль) и тиофен-2-карбальдегида (307 мг, 2,74 ммоль) в 70 мл 8:1 смеси НОАс и МеОН перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли NaBH3CN(55 мг, 0,86 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (0-10% МеОН в DCM) с получением желаемого продукта (110 мг, 67,5% выход) в виде светло-желтого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,05 (с, 1Н), 9,45 (с, 1Н), 9,14 (с, 2Н), 7,94 (с, 1Н), 7,42-7,41 (м, 1Н), 6,96-6,91 (м, 3Н), 4,5494,37 (м, 2Н), 4,30-4,23 (м, 1Н), 4,00 (с, 3Н), 3,72-3,71 (м, 2Н), 2,86-2,27 (м, 2Н), 2,19-2,14 (м, 1Н), 1,91-1,87 (м, 1Н), 1,75-1,50 (м, 4Н). ESI-MS m/z: 476.
Пример 6. Синтез 3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-(1-фенилэтил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8H)-она.
6-Амино-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-5-карбальдегид.
К перемешиваемому раствору №(5-формил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-Ш-индазол-6-ил)ацетамида (16,0 г, 28 ммоль) в 200 мл безводного МеОН при 0°С добавляли по каплям SOCl2 (12 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли. Остаток разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (15 г) в виде коричневого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
№(5-Формил-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1 -тритил-1Н-индазол-6-ил)-3-фенилбутанамид.
К перемешиваемому раствору 6-амино-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-5-карбаль-дегида (1,5 г, 3,1 ммоль) в 20 мл безводного DCM при 0°С добавляли TEA (1,5 г, 13,7 ммоль) с последующим медленным добавлением 3-фенилбутаноилхлорида (1,6 г, 9,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 4 ч. Растворитель удаляли, остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи DCM/MeOH=25:1) с получением желаемого продукта (2,0 г, 95% выход) в виде желтого твердого вещества.
3-(2-Метилпиридин-4-ил)-6-(1-фенилэтил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-он.
Условие 1. К раствору ^(5-формил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-Ш-индазол-6-ил)-3-фенилбутанамида (2,0 г, 3,1 ммоль) в 60 мл THF при комнатной температуре добавляли KOH (700 мг, 12,5 ммоль) и 1 мл EtOH. Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи ЕА/РЕ=1:2) с получением желаемого продукта (50 мг, 3% выход). ESI-MS m/z: 623.
Условие 2. К раствору №(5-формил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-Ш-индазол-6-ил)-3-фенилбутанамида (7,0 г, 10,9 ммоль) в 200 мл МеОН добавляли MeONa (5,5 г, 100 ммоль). Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи ЕА/РЕ=1:2) с получением желаемого продукта (1,3 г, 18% выход). ESI-MS m/z: 623.
3-(2-Метилпиридин-4-ил)-6-(1 -фенилэтил)-1Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7(8Н)-он.
К раствору 3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-( 1-фенилэтил)-1-тритил-Ш-пиразоло ^^^^июлин^^^-она (1,3 г, 2,0 ммоль) в 4 мл DCM добавляли 4 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли и остаток гасили при помощи 7М NH3.MeOH. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи DCM/MeOH=20:1) с получением желаемого продукта (500 мг, 66% выход).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,44 (шир., 1Н), 11,67 (с, 1Н), 8,62 (с, 1Н), 8,56 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 8,01 (с, 1Н), 7,93 (с, 1Н), 7,86 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 7,38 (с, 1Н), 7,15-7,35 (м, 5Н), 4,38 (кв., J=7,2 Гц, 1H), 2,61 (с, 3Н), 1,56 (кв., J =7,2 Гц, 3Н). ESI-MS m/z: 381.
Пример 7. Синтез 3-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)-6-(1-фенилэтил)-1H-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-она.
(3 -Бром-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метилацетат.
К перемешиваемому раствору 3-бром-5-(бромметил)-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (500 мг, 1 ммоль, неочищенный) в 10 мл безводного DMF добавляли AcOK (700 мг, 7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь распределяли между ЕА и Н2О. Органический слой концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на
силикагеле (элюировали при помощи ЕА/РЕ=1:6) с получением желаемого продукта (250 мг, 50% выход) в виде желтого твердого вещества.
(6-Амино-3-бром-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)метилацетат.
К перемешиваемому раствору (3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метилацетата (500 мг, 1 ммоль) в 10 мл EtOH добавляли Na2S2O4 (1,7 г, 10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 10 ч. Растворитель удаляли и остаток распределяли между ЕА и Н2О. Органический слой концентрировали в вакууме с получением продукта (350 мг, 70% выход) в виде желтого твердого вещества без дополнительной очистки.
(6-Амино-3-бром-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)метанол.
К раствору (6-амино-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метилацетата (350 мг, 0,65 ммоль) в смеси THF/EtOH/H2O (6,0 мл, 1:1:1) при комнатной температуре добавляли LiOH (109 мг, 2,61 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 8 ч. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи ЕА/РЕ=1:3) с получением продукта (130 мг, 50% выход) в виде желтого твердого вещества.
6-Амино-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-5-карбальдегид.
К перемешиваемому раствору (6-амино-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метанола (130 мг, 0,27 ммоль) в 10 мл DCM добавляли MnO2(480 мг, 5,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме с получением продукта (100 мг, 70% выход) в виде желтого твердого вещества без дополнительной очистки.
3-Бром-6-( 1-фенилэтил)-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7(8Н)-он.
К раствору №(3-бром-5-формил-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)-3-фенилбутанамида (2,0 г, 3,2 ммоль) в 40 мл МеОН добавляли MeONa (1,73 г, 32 ммоль). Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюиро-вали при помощи ЕА/РЕ=1:5) с получением желаемого продукта (300 мг, 15% выход). Выделяли некоторое количество исходного вещества (около 1,0 г). ESI-MS m/z: 612.
3-(6-(4-Метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -ил)-6-(1-фенилэтил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хинолин-
7(8Н)-он.
Смесь 3-бром-6-(1-фенилэтил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-она (200 мг, 0,33 ммоль), K2CO3 (100 мг, 0,72 ммоль) и 1-метилпиперазина (0,5 мл) в 2 мл DMSO перемешивали при 100°С в герметично закрытой пробирке в течение 10 ч. Остаток очищали колоночной хроматографией на сили-кагеле (элюировали при помощи ЕА/РЕ=1:2) с получением желаемого продукта (70 мг, 30% выход). ESI-
MS m/z: 707.
3-(6-(4-Метилпиперазин-1 -ил)пиридин-3 -ил)-6-(1-фенилэтил)-1Н-пиразоло [4,3-g]хинолин-7(8Н)-он.
К раствору 3 -(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)-6-(1-фенилэтил)-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хинолин-7(8Н)-она (70 мг, 0,1 ммоль) в 2 мл DCM добавляли 2 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли и остаток гасили при помощи 7М NH3.MeOH. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи DCM/MeOH=20:1) с получением желаемого продукта (10 мг, 66% выход).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,02 (шир., 1Н), 11,59 (шир., 1Н), 8,82 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 8,47 (с, 1Н), 8,56 (дд, J=8,8, 2,0 Гц, 1Н), 7,99 (с, 1Н), 7,29 (м, 5Н), 7,18 (м, 1Н), 6,98 (д, J=8,8 Гц, 1Н), 4,37 (кв., J=7,2 Гц, 1H) , 3,60 (м, 4Н), 2,51 (м, 3Н), 2,46 (м, 4Н), 1,54 (д, J=7,2 Гц, 3Н). ESI-MS m/z: 465.
Пример 8. Синтез 6-(4-трет-бутил-1-(2,2,2-трифторэтил)пирролидин-3-ил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-7(8Н)-она.
3,3-Диметил-1-нитробутан-2-ол.
К смеси пивалальдегида (10 г, 116 ммоль) и нитрометана (7,1 мг, 116 ммоль) в 150 мл метанола на ледяной бане медленно добавляли водный раствор гидроксида натрия (4,88 г, 122 ммоль, 88 мл Н2О) и температуре давали повыситься медленно до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 1 ч. Растворитель удаляли, остаток растворяли в воде и этилацетате. Смесь промывали раствором карбоната натрия. Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта в виде желтого масла (14 г, 82% выход). ESI-
MS m/z: 148.
(Е)-3,3-Диметил-1-нитробут-1 -ен.
К раствору 3,3-диметил-1-нитробутан-2-ола (4,0 г, 27 ммоль) в 20 мл дихлорметана при 0°С медленно добавляли трифторуксусный ангидрид (3,5 г, 16,5 ммоль), с последующим добавлением триэтила-мина и температуре давали медленно повыситься до комнатной температуры. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой силикагеля и промывали дихлорметаном. Фильтрат концентрировали (без нагревания) в вакууме с получением желтого масла. Это масло поглощали в 20% раствор бензина в эфире, фильтровали через слой силикагеля и промывали 20% петролейным эфиром. Фильтрат концентрировали (без нагревания) в вакууме с получением
продукта в виде желтого масла (3 г неочищенного продукта). ESI-MS m/z: 130.
3- трет-Бутил-1-бензил-4-нитропирролидин.
К смеси (Е)-3,3-диметил-1-нитробут-1-ена (3,5 г, 27 ммоль) и TFA (307 мг, 2,7 ммоль) в 300 мл ди-хлорметана медленно добавляли №(метоксиметил)-№((триметилсилил)метил)(фенил)метанамин (7,7 г, 32 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение уикенда. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 22,5% этилацетата в петролейном эфире) с получением желаемого продукта в виде желтого масла (2,3 г, 32% выход). ESI-MS m/z: 263.
4- трет-Бутил-1-бензилпирролидин-3-амин.
К смеси 3-трет-бутил-1-бензил-4-нитропирролидина (1,2 г, 4,6 ммоль) в 20 мл метанола при 0°С добавляли Ni Ренея (1 г) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме с получением продукта в виде желтого масла (2,3 г, 32% выход). ESI-MS m/z: 233.
4- трет-Бутил-1-бензил-№((3 -бром-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)пирролидин-3 -амин синтезировали в соответствии с общей схемой D.
5- ((4-трет-Бутил-1-бензилпирролидин-3-иламино)метил)-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-6-амин синтезировали в соответствии с общей схемой D.
6- (4-трет-Бутил-1-бензилпирролидин-3 -ил)-3 -бром-5,6-дигидро-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хина-золин-7(8Н)-он синтезировали в соответствии с общей схемой D.
6-(4-трет-Бутил-1-бензилпирролидин-3 -ил)-5,6-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-он синтезировали в соответствии с общей схемой D.
трет-Бутил 3-трет-бутил-4-(7,8-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-7-оксо-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хиназолин-6(5Н)-ил)пирролидин-1-карбоксилат.
Смесь 6-(4-трет-бутил-1 -бензилпирролидин-3-ил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-7(8Н)-она (200 мг, 0,27 ммоль), (Вос)^ (190 мг, 0,81 ммоль) и 10% Pd(OH)2/C (50 мг) в 20 мл этилацетата перемешивали в атмосфере Н2 при комнатной температуре в течение ночи. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 50% этилацетата в петро-лейном эфире) с получением желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (60 мг, 30% выход).
ESI-MS m/z: 747.
6-(4-трет-Бутилпирролидин-3-ил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хиназолин-7(8Н)-он.
Раствор трет-бутил 3-трет-бутил-4-(7,8-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-7-оксо-1 -тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-6(5Н)-ил)пирролидин-1-карбоксилата (60 мг, 0,08 ммоль) в АсОН/МеОН (1:4, 6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. К этой смеси добавляли NH3-MeOH для доведения рН до > 8,0. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 8% NH3-MeOH в дихлорметане) с получением желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (30 мг, 58% выход). ESI-MS m/z: 647.
6-(4-трет-Бутил-1 -(2,2,2-трифторэтил)пирролидин-3 -ил)-5,6-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хиназолин-7(8Н)-он.
К раствору 6-(4-трет-бутилпирролидин-3-ил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-7(8Н)-она (30 мг, 0,05 ммоль) в DMF добавляли 2,2,2-трифтор-этилтрифторметансульфонат (22 мг, 0,09 ммоль) с последующим добавлением №этил-№изопро-пилпропан-2-амина (24 мг, 0,18 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь распределяли между водой и этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюировали при помощи 5% метанола в дихлорме-тане) с получением желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (30 мг, 89% выход). ESI-MS
m/z: 729.
6-(4-трет-Бутил-1-(2,2,2-трифторэтил)пирролидин-3-ил)-5,6-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-7(8Н)-он синтезировали в соответствии с общей схемой D (10 мг, 50% выход).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,22 (шир., 1Н), 9,47 (с, 1Н), 8,54 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 7,79(д, J=5,2 Гц, 1Н), 6,96 (с, 1Н), 4,91 (м, 2Н), 4,65 (д, J=12,3 МГц, 1Н), 4,51 (д, J=12,3 Гц, 1Н), 3,34 (м, 1Н), 3,20 (м, 1Н), 3,02 (м, 1Н), 2,91 (м, 1Н), 2,73 (м, 1Н), 2,58 (с, 3Н), 0,85 (с, 9Н). ESI-MS
m/z: 487.
Пример 9. Синтез 6-(3-хлорбензил)-6,7-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-[1,4]диазепино[6,5-^индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она.
3-Бром-5-(бромметил)-6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол.
К перемешиваемому раствору 3-бром-5-метил-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (5,0 г, 10 ммоль) в 150 мл CCl4 добавляли NBS (2,7 г, 15 ммоль) и AIBN (1,0 г, 6,0 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток использовали на сле
дующей стадии без дополнительной очистки.
N-((3-Бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)(3-хлорфенил)метанамин.
Смесь 3-бром-5-(бромметил)-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (4,0 г, 8 ммоль), (3-хлорфенил)метанамина (7,0 г, 50 ммоль) и TEA (5,0 г, 50 ммоль) в 150 мл CC14 перемешивали при 70°С в течение 3 ч. Смесь промывали водой и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с сили-кагелем (0-2% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (1,6 г, 25% выход) в виде желтого твердого вещества. ESI-MS m/z: 639.
Этил 2-(N-(3-хлорбензил)-N-((3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)амино)ацетат.
Смесь N-((3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)(3-хлорфенил)метанамина (1,6 г, 2,5 ммоль) и NaOH (150 мг, 3,7 6 ммоль) в 10 мл DMF перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. К смеси добавляли этил 2-бромацетат (630 мг, 3,76 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Смесь охлаждали, выливали в воду и экстрагировали при помощи ЕА (100 мл х3). Органический слой концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (0-1% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (1,2 г, 67% выход). ESI-MS m/z:725.
6-(3-Хлорбензил)-3-бром-6,7-дигидро-1-тритил-[1,4]диазепино[6,5-1]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-он.
К раствору этил 2-(N-(3-хлорбензил)-N-((3-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)метил)амино) ацетата (1,1 г, 1,52 ммоль) в AcOH/i-PrOH (20 мл/4 мл) при 60°С добавляли Zn (2,0 г, 30,3 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 5 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли при помощи ЕА и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Органический слой концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (0-2% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (910 мг, 93% выход). ESI-MS m/z: 649.
6-(3 -Хлорбензил)-6,7-дигидро-3 -(2-метоксипиримидин-5-ил)-1-тритил-[1,4] диазепино [6,5-^индазол-8(1Н,5Н,9Н)-он.
Смесь 6-(3-хлорбензил)-3-бром-6,7-дигидро-1-тритил-[1,4]диазепино[6,5-1]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (400 мг, 0,62 ммоль), 2-метоксипиримидин-5-ил-5-бороновой кислоты (240 мг, 1,54 ммоль), Pd(dppf)C12 и K2CO3 в диоксане/H2O (15 мл/1,5 мл) перемешивали при 90°С в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (0-1% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (320 мг, 76% выход). ESI-MS m/z: 677.
6-(3-Хлорбензил)-6,7-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-[1,4]диазепино[6,5-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-он.
К раствору 6-(3-хлорбензил)-6,7-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-1-тритил-[1,4]диазе-пино[6,5-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (100 мг, 0,147 ммоль) в 3 мл DCM добавляли TFA (6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали в вакууме, разбавляли при помощи NH3 в метаноле. Смесь концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силика-гелем (0-10% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (25 мг, 39% выход).
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,34 (с, 1Н), 10,25 (с, 1Н), 9,21 (м, 2Н), 8,09 (с, 1Н), 7,34-7,41 (м, 4Н), 7,23 (с, 1Н), 4,00 (с, 3Н), 3,83 (с, 2Н), 3,75 (с, 2Н), 3,12 (с, 2Н). ESI-MS m/z: 435.
Пример 10. Синтез 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-[1,3]диазепино[5,4-Аиндазол-8 (1Н,5Н,9Н)-она.
5- Бром-6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол.
К перемешиваемому раствору 5-бром-6-нитро-1 Н-индазола (5 г, 20,7 ммоль) в 60 мл безводного THF при 0°С добавляли NaH (60% в минеральном масле, 1,16 г, 29 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при этой же температуре в течение 30 мин. К смеси добавляли TrtCl (6,92 г, 24,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Растворитель удаляли. Остаток растворяли в этилацетате и промывали насыщенным солевым раствором. Органический раствор сушили над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с сили-кагелем с получением желаемого продукта (9 г, 90% выход) в виде желтого твердого вещества.
6- Нитро-1-тритил-5-винил-1 Н-индазол.
К смеси 5-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (9 г, 18,6 ммоль) и Pd(pph3)4 (2,15 г, 1,86 ммоль) в толуоле (60 мл) добавляли трибутил(винил)олово (7 г, 22,32 ммоль). Полученную смесь дегазировали и снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 115°С в течение 4 ч. Смеси давали охладиться до комнатной температуры. Раствор выливали в воду (100 мл) и экстрагировали при помощи ЕА (300 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикаге-ле с получением желаемого продукта 6-нитро-1-тритил-5-винил-1 Н-индазола (6,8 г, 85% выход) в виде белого твердого вещества.
2-(6-Нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)этанол.
К перемешиваемому раствору 6-нитро-1-тритил-5-винил-1 Н-индазола (6,8 г, 15,77 ммоль) в 60 мл безводного THF при 0°С медленно добавляли BH3-THF (1н. раствор, 47,33 мл, 47,33 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. К этой смеси медленно добавляли NaOH (3н. раствор, 15,77 мл, 47,33 ммоль) и Н2О2 (4,94 г, 47,33 ммоль, 30%) и полученную смесь пере- 44
мешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Раствор выливали в воду (100 мл) и экстрагировали при помощи ЕА (100 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на силикагеле с получением желаемого продукта 2-(6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)этанола (3,9 г, 55% выход). 2-(6-Нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)уксусная кислота.
Смесь H5IO6 (4,94 г, 21,69 ммоль ) и CrO3 (43 мг, 0,43 ммоль) в 50 мл CH3CN:H2O (99,25%:0,75%) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. К этой смеси медленно добавляли 2-(6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)этанол (3,9 г, 8,67 ммоль) в 50 мл CH3CN:H2O (99,25%:0,75%) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Раствор выливали в воду (100 мл) и экстрагировали при помощи ЕА (100 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на силикагеле с получением желаемого продукта 2-(6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)уксусной кислоты (3,2 г, 80% выход).
N-(4-Фторбензил)-2-(6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)ацетамид.
К перемешиваемому раствору 2-(6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)уксусной кислоты (3,2 г, 6,91 ммоль) в 40 мл безводного DMF добавляли (4-фторфенил)метанамин (1,04 г, 8,29 ммоль), EDC.HCl (2,64 г, 13,82 ммоль), HOBt (1,86 г, 13,82 ммоль) и TEA (2,79 г, 27,64 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Раствор выливали в воду (100 мл) и экстрагировали при помощи ЕА (100 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4, концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем с получением желаемого продукта N-(4-фторбензил)-2-(6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)ацетамида (3,15 г,
80% выход).
№(4-Фторбензил)-2-(6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)этанамин.
К перемешиваемому раствору N-(4-фторбензил)-2-(6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)ацетамида (3,15 г, 5,53 ммоль) в 30 мл безводного THF при 0°С медленно добавляли BH3-THF (1н. раствор, 16,6 мл, 16,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 5 ч. Раствор выливали в воду (80 мл) и экстрагировали при помощи ЕА (100 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем с получением желаемого продукта N-(4-фторбензил)-2-(6-нитро-1-тритил-1 Н-индазол-5-ил)этанамина (2,31 г, 75% выход).
5-(2-(4-Фторбензиламино)этил)-1-тритил-1 Н-индазол-6-амин.
К перемешиваемому раствору №(4-фторбензил)-2-(6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)этанамина (2,31 г, 4,15 ммоль) в 40 мл 1:5 смеси AcOH/2-PrOH при 60°С добавляли С Zn пыль (5,4 г, 83,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество удаляли фильтрованием и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток выливали в раствор NaHCO3 (80 мл) и экстрагировали при помощи ЕА (100 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Собирали желтое твердое вещество, представляющее собой 5-(2-(4-фторбензиламино)этил)-1-тритил-1 Н-индазол-6-амин (1,96 г, 90% выход), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
7-(4-Фторбензил)-6,7-дигидро-1-тритил-[1,3]диазепино[5,4-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-он.
К раствору 5-(2-(4-фторбензиламино)этил)-1-тритил-1 Н-индазол-6-амина (1,96 г, 4,56 ммоль) в 20 мл DCM добавляли Et3N (5 г, 50 ммоль) и CDI (4 г, 25,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Раствор выливали в воду (40 мл) и экстрагировали при помощи DCM (60 мл) три раза. Органический слой промывали насыщенным солевым раствором два раза, сушили над Na2SO4, концентрировали в вакууме. Остаток очищали на силикагеле с получением желаемого продукта 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-1-тритил-[1,3]диазепино[5,4-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (1,51 г, 60% выход).
7-(4-Фторбензил)-6,7-дигидро-[1,3]диазепино[5,4-f]индазол-8-(1Н,5Н,9Н)-он.
К раствору 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-1-тритил-[1,3]диазепино[5,4-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (1,51 г, 2,73 ммоль) в 10 мл DCM добавляли 5 мл TFA. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Растворитель удаляли и остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-[1,3]диазепино[5,4-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (677 мг, 80% выход).
7-(4-Фторбензил)-6,7-дигидро-3-иод-[1,3]-диазепино-[5,4-f]-индазол-8(1Н,5Н,9Н)-он.
К перемешиваемой смеси 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-[1,3]-диазепино-[5,4-f]-индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (677 мг, 2,18 ммоль) в DMF (10 мл) при комнатной температуре добавляли KOH (366 мг, 6,54 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. К реакционной смеси добавляли NIS (540 мг, 2,4 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (60 мл х3). Объединенный органический слой промывали при помощи Н2О (200 мл х3), сушили над без
водным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением желаемого продукта (713 мг, 75% выход) в виде желтого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.
трет-Бутил-7-(4-фторбензил)-6,7,8,9-тетрагидро-3-иод-8-оксо-[1,3]-диазепино[5,4-f]индазол-1(5Н)-карбоксилат.
К перемешиваемой смеси 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-3-иод-[1,3]-диазепино[5,4-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (713 мг, 1,68ммоль) в THF (10 мл) при комнатной температуре добавляли (Вос)2О (403 мг, 1,85 ммоль), DMAP (31 мг, 0,25 ммоль), TEA (339 мг, 3,36 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (60 мл х3). Объединенный органический слой промывали при помощи Н2О (200 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем с получением желаемого продукта трет-бутил 7-(4-фторбензил)-6,7,8,9-тетрагидро-3-иод-8-оксо-[1,3]-диазепино[5,4-f]индазол-1(5Н)-карбоксилата (720 мг, 80% выход).
7-(4-Фторбензил)-6,7-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-[1,3]-диазепино[5,4-1^индазол-8(1Н,5Н,9Н)-он.
К смеси трет-бутил 7-(4-фторбензил)-6,7,8,9-тетрагидро-3-иод-8-оксо-[1,3]-диазепино[5,4-f]индазол-1(5Н)-карбоксилата (720 мг, 1,34 ммоль) и 2-метоксипиримидин-5-ил-5-бороновой кислоты (616 мг, 4 ммоль) в 1,4-диоксане/H2O (8 мл/2 мл) последовательно добавляли PdC12(dppf) (292 мг, 0,4 ммоль) и K2CO3 (553 мг, 4 ммоль). Полученную смесь дегазировали и снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 85°С в течение 4 ч. Смеси давали охладиться до комнатной температуры. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (60 мл х3). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (60 мл х3), сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле с получением желаемого продукта 7-(4-фторбензил)-6,7-дигидро-3-(2-метоксипиримидин-5-ил)-[1,3]-диазепино[5,4-f]индазол-8(1Н,5Н,9Н)-она (392 мг, 70% выход) в виде белого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,12 (с, 1Н), 9,15 (с, 2Н), 9,06 (с, 1Н), 7,86 (с, 1Н), 7,36 (м, 2Н), 7,27 (с, 1Н), 7,17 (м, 2Н), 4,54 (с, 2Н), 3,99 (с, 3Н), 3,42 (м, 2Н), 3,08(м, 2Н).
Пример 11. Синтез 5-бензил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-имидазо[4,5-f]индазол-6-(1Н,5Н,7Н)-она. №Бензил-6-нитро-1 -тритил-1Н-индазол-5-амин.
Раствор 5-бром-6-нитро-1-тритил-1Н-индазола (4 г, 8,23 ммоль), фенилметанамина (1,32 г, 12,39 ммоль), Pd2(dba)3 (760 мг, 0,823 ммоль), Xantphos (480 мг, 1,24 ммоль), Cs2CO3 (8 г, 24,49 ммоль) в диок-сане (30 мл) перемешивали при 110°С в атмосфере азота в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали досуха. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силика-геле (0-5% этилацетат/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (2,16 г, 51% выход) в виде красного твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 8,08 (с, 1Н), 7,70 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 7,23-7,42 (м, 14Н), 7,14-7,18 (м, 7Н), 7,04(с, 1Н), 4,51 (д, J=6,0 Гц, 2Н).
^-Бензил-1-тритил-1Н-индазол-5,6-диамин.
К раствору №бензил-6-нитро-1-тритил-1Н-индазол-5-амина и никеля Ренея (1 г) в THF (20 мл) и МеОН (10 мл) при 0°С добавляли по каплям N2H4-H2O (10 мл). Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали при этой температуре в течение 1 ч. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме с получением продукта (2 г, 97% выход) в виде серого твердого вещества, которое использовали непосредственно на следующей стадии.
1-Бензил-5-тритилимидазо[4,5-1Г1индол-2(Ш,3Н,5Н)-он.
К раствору ^-бензил-1-тритил-1Н-индазол-5,6-диамина (2 г, 4,17 ммоль), TEA (1,2 мл, 4,17 ммоль) в DCM (20 мл) при 0°С медленно добавляли трифосген (1,19 г, 4,17 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере N2 в течение 1 ч. Смесь распределяли между водой и DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали досуха. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (0-30% этилацетат/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (720 мг, 34% выход).
5-Бензилимидазо[4,5-1]индазол-6(1Н,5Н,7Н)-он.
Смесь 5-бензил-1-тритилимидазо[4,5-1]индазол-6(1Н,5Н,7Н)-она (720 мг, 1,42 ммоль) в TFA перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали досуха. Добавляли NH3/MeOH (7н. раствор) и смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH/DCM) с получением желаемого продукта (358 мг, 95% выход) в виде белого твердого вещества.
5-Бензил-3-иодимидазо[4,5-1]индазол-6(1Н,5Н,7Н)-он.
К раствору 5-бензилимидазо[4,5-1]индазол-6(1Н, 5Н,7Н)-она (620 мг, 2,35 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли KOH (657 мг, 11,74 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. К смеси добавляли NIS (684 мг, 3,05 ммоль) и затем смесь перемешивали при комнатной
температуре в течение ночи. Смесь распределяли между водой и этилацетатом. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали досуха. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH/DCM) с получением желаемого продукта (358 мг, 75% выход) в виде белого твердого вещества.
трет-Бутил 5-бензил-3-иод-6-оксо-6,7-дигидроимидазо[4,5-1]индазол-1(5Н)-карбоксилат.
Смесь 5-бензил-3-иодимидазо[4,5-1]индазол-6(1Н,5Н,7Н)-она (690 мг, 1,77 ммоль), DMAP (108 мг, 0,88 ммоль), TEA (0,5 мл, 3,54 ммоль) в THF (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. К этой смеси добавляли ВОС2О (1,16 г, 5,3 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали досуха и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле(0-20% этилацетат/петролейный эфир) с получением желаемого продукта (516 мг, 59% выход) в виде желтого твердого вещества.
5- Бензил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-имидазо[4,5-1]индазол-6(1Н,5Н,7Н)-он.
Смесь трет-бутил 5-бензил-3-иод-6-оксо-6,7-дигидроимидазо[4,5-1]индазол-1(5Н)-карбоксилата (250 мг, 0,51 ммоль), 2-метилпиридин-4-илбороновой кислоты (209 мг, 1,53 ммоль), K2CO3 (209 мг, 1,53 ммоль), Pd(dppf)C12 (112 мг, 0,15 ммоль) в Н2О (3 мл) и диоксане (12 мл) перемешивали при 100°С в атмосфере азота в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (0-10% MeOH/DCM) с получением желаемого продукта (43 мг, 24% выход) в виде коричневого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8: 13,24 (с, 1Н), 11,08 (с, 1Н), 8,52 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 7,75 (м, 2Н), 7,63 (с, 1Н), 7,36 (м, 4Н), 7,26 (м, 1Н), 7,09 (с, 1Н), 5,16 (с, 2Н), 2,57 (с, 3Н). ESI-MS m/z: 356,1.
Пример 12. Синтез 6-(1-бензилпиперидин-3-ил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-пиразоло-[4,3-g]-хинолин-7(8Н)-она.
Этил 4-(6-амино-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)бут-3-еноат.
К раствору триэтилфосфоноацетата (1,06 г, 4,73 ммоль) в THF (20 мл) при 0°С добавляли NaH (145 мг, 4,73 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 30 мин. К этой смеси медленно добавляли 6-амино-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-5-карбальдегид (1,9 г, 3,94 ммоль) в THF (10 мл) и затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь распределяли между водой и ЕА. Органический слой концентрировали досуха. Остаток очищали на колонке с силикагелем (0-1,5% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (1,9 г, 88% выход). ESI-MS m/z: 553.
3-Бром-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3 -g] хинолин-7(8Н)-он.
Смесь этил 4-(6-амино-3-бром-1-тритил-1Н-индазол-5-ил)бут-3-еноата (1,7 г, 3,08 ммоль) и DBU (9,35 г, 61,54 ммоль) в NMP (170 мл) перемешивали при 160°С в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток распределяли между водой и ЕА. Органический слой концентрировали в вакууме и остаток очищали на колонке с силикагелем (0-3% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (1,0 г, 64% выход). ESI-MS m/z: 506.
3-(2-Метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7(8Н)-он.
Смесь 3-бром-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3^]хинолин-7(8Н)-она (1,1 г, 2,17 ммоль), 2-метилпиридин-4-ил-4-бороновой кислоты (743 мг, 5,43 ммоль), Pd(dppf)C12 (480 мг, 0,65 ммоль) и K2CO3 (900 мг, 6,52 ммоль) в диоксанеЛ-l^O (50 мл/5 мл) перемешивали при 90°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали на колонке с силикагелем (0-2% метанола в дихлорметане) с получением желаемого продукта (700 мг, 64% выход). ESI-MS m/z: 519.
6- Бром-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7(8Н)-он.
Смесь 3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-она (700 мг, 1,35 ммоль) и NBS (1,44 г, 8,10 ммоль) в DMF (15 мл) перемешивали при 55°С в течение ночи. Смесь выливали в воду и экстрагировали при помощи ЕА. Органический слой концентрировали досуха. Остаток очищали на колонке с силикагелем (DCM/MeOH=200/1-75/1) с получением желаемого продукта (450 мг,
56% выход). ESI-MS m/z: 597.
6-(1 -Бензил-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 -ил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хинолин-7(8Н)-он.
Смесь 6-бром-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-она (170 мг, 0,28 ммоль), 1-бензил-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-ил-3-бороновой кислоты (300 мг, 1,38 ммоль), Pd(dppf) C12 (52 мг, 0,07 ммоль) и K2CO3 (120 мг, 0,85 ммоль) в диоксанеЛ-^O (12 мл/3 мл) перемешивали при 90°С в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали на колонке с силикагелем (DCM/MeOH=200/1-50/1) с получением желаемого продукта (170 мг, 87% выход). ESI-MS
m/z: 690.
трет-Бутил 3-(7,8-дигидро-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-7-оксо-1 -тритил-1Н-пиразоло [4,3-g]хинолин-6-ил)пиперидин-1-карбоксилат.
Смесь 6-(1-бензил- 1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-ил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1 -тритил-1Н-пиразо-ло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-она (200 мг, 0,29 ммоль), Pd^)^ (300 мг) и (Вос)2О (160 мг, 0,73 ммоль) в EtOAc (15 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение ночи. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем (DCM/MeOH=200/1-50/1) с получе
нием желаемого продукта (80 мг, 40% выход). ESI-MS m/z: 702.
3-(2-Метилпиридин-4-ил)-6-(пиперидин-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-он.
К раствору трет-бутил 3-(7,8-дигидро-3-(2-метилпиридин-4-ил)-7-оксо-1-тритил-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-6-ил)пиперидин-1-карбоксилата (75 мг, 0,107 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (3 мл) и Et3SiH (3 капли). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме и остаток разбавляли при помощи NH3 (в метаноле). Смесь концентрировали в вакууме и остаток (38 мг, 100% выход) использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ESI-MS
m/z: 360.
6-(1-Бензилпиперидин-3 -ил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7(8Н)-он.
Смесь 3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-(пиперидин-3-ил)-1Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7(8Н)-она (38 мг, 0,2 ммоль), бензальдегида (120 мг, 2,1 ммоль) и АсОН (50 мг, 0,83 ммоль) в 10 мл МеОН перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. К этой смеси добавляли цианоборогидрид натрия (50 мг, 0,79 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали на колонке с силикагелем (DCM/MeOH=100/1-10/1) с получением желаемого продукта (20 мг, 43% выход).
1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 8: 8,70 (м, 2Н), 8,44 (с, 1Н), 8,39 (д, J=6,4 Гц, 1Н), 8,11 (с, 1Н), 7,53 (с, 1Н), 3,77-3,62 (м, 2Н), 3,15 (м, 1Н), 2,96 (с, 3Н), 2,85 (с, 3Н), 2,21-1,95 (м, 6Н). ESI-MS m/z: 450.
Пример 13. Синтез 6-(3-хлорбензил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1,8-дигидро-5Н-пиразоло[4,3-g]-хиназолин-5,7(6Н)-диона.
6-Ацетамидо-3 -(2-метилпиридин-4-ил)-1 -тритил-1Н-индазол-5-карбоновая кислота.
К перемешиваемому раствору №(5-формил-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1Н-индазол-6-ил)ацетамида (220 мг, 0,40 ммоль) в 40 мл ацетона при комнатной температуре добавляли 20 мл реагента Джонса. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли и остаток подвергали очистке колоночной флэш-хроматографией с получением желаемого продукта
(68 мг, 30%).
6-Амино-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-индазол-5-карбоновая кислота.
К перемешиваемому раствору 6-ацетамидо-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1 Н-индазол-5-карбоновой кислоты (268 мг, 0,50 ммоль) в 10 мл диоксана при комнатной температуре добавляли 10 мл 6н. раствор HC1. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 2 ч. Растворитель удаляли. Остаток разбавляли в DCM и промывали NaHCO3 и водой. Органический слой сушили и концентрировали в вакууме с получением 102 мг неочищенного продукта. Этот продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
6-Амино-N-(3-хлорбензил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-индазол-5-карбоксамид.
К перемешиваемому раствору неочищенной 6-амино-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-индазол-5-карбоновой кислоты с предыдущей стадии (14 мг, 0,05 ммоль) и (3-хлорфенил)метанамина (18 мкл, 0,15 ммоль) в 2 мл безводного DMF добавляли HATU (29 мг, 0,075 ммоль) с последующим добавлением DIEA (45 мкл, 0,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой два раза. Органический слой сушили и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле с получением желаемого продукта (11 мг, 54%) в виде желтого порошка.
6-(3-Хлорбензил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1,8-дигидро-5Н-пиразоло [4,3^]хиназолин-5,7(6Н)-
дион.
К раствору 6-амино-N-(3-хлорбензил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1Н-индазол-5-карбоксамида (5 мг, 0,013 ммоль) в 3 мл DCM добавляли Et3N (14 мкл, 0,078 ммоль) с последующим добавлением CDI (21 мг, 0,128 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток подвергали очистке при помощи препаративной ВЭЖХ и препаративной ТСХ с получением желаемого продукта (2,8 мг, 53% выход).
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 8: 13,62 (с, 1Н), 10,56 (с, 1Н), 8,75 (с, 1Н), 8,594 (д, J=5,5 Гц, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 7,78 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 7,41 (с, 1Н), 7,28-7,36 (м, 3Н), 7,13 (с, 1Н), 5,12 (с, 2Н), 2,59 (с, 3Н). ESI-MS
m/z: 417,1.
Пример 14. Синтез 6-(2-гидрокси-1-фенилэтил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1,8-дигидро-7Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7-она.
6-Бром-3 -(2-метилпиридин-4-ил)- 1-тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7-он.
К раствору 3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7-она (14 мг, 0,025 ммоль) в 3,0 мл DMF при комнатной температуре добавляли NBS (22 мг, 0,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом, промывали водой и сушили над Na2SO4. Высушенный раствор концентрировали и остаток подвергали колоночной хроматографии с получением желаемого продукта (12 мг, 75%).
3-(2-Метилпиридин-4-ил)-6-(1 -фенилвинил)-1 -тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло [4,3^]хинолин-7-
он.
К раствору 6-бром-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло[4,3^]хинолин-7
она (120 мг, 0,20 ммоль) и (1-фенилвинил)бороновой кислоты (89 мг, 0,60 ммоль) в 3,0 мл 4:1 смеси ди-оксан/вода при комнатной температуре добавляли PdC12(dppf) (33 мг, 0,04 ммоль) и K2CO3 (83 мг, 0,60 ммоль). Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли азотом. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. Твердое вещество отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток подвергали очистке колоночной флэш-хроматографией с получением желаемого продукта (72 мг, 58% выход).
6-(2-Гидрокси-1-фенилэтил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло [4,3-g] хинолин-7-он.
Перемешиваемый раствор 3-(2-метилпиридин-4-ил)-6-(1-фенилвинил)-1-тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло[4,3^]хинолин-7-она (96,8 мг, 0,16 ммоль) в 5 мл безводного THF охлаждали до 0°С на бане с ледяной водой, добавляли по каплям большое избыточное количество комплекса боран-диметилсульфид (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем добавляли 5 мл деионизиро-ванной воды. К реакционной смеси добавляли 5 мл 3М NaOH, с последующим добавлением по каплям 10 мл H2O2 раствора, полученную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Реакционную смесь экстрагировали 3 раза при помощи DCM. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде коричневого твердого вещества. Неочищенное соединение использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
6-(2-Гидрокси-1-фенилэтил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1,8-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7-
он.
К раствору неочищенного 6-(2-гидрокси-1-фенилэтил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1-тритил-1,8-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-g]хинолин-7-она с предыдущей стадии в 10 мл DCM добавляли 1 мл TFA и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь промывали насыщенным NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (10% МеОН в DCM) с получением желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (32 мг, 55% выход).
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 8: 13,42 (с, 1Н), 11,65 (с, 1Н), 8,60 (с, 1Н), 8,56 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 7,93 (с, 1Н), 7,86 (д, J=5,5 Гц, 1Н), 7,37 (с, 1Н), 7,33 (д, J=7,0 Гц, 2Н), 7,29 (т, J=7,0 Гц, 2Н), 7,19 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 4,84 (т, J=5,5 Гц, 1Н), 4,34 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 4,00 (м, 1Н), 3,90 (м, 1Н), 2,60 (с, 3Н). ESI-MS
m/z: 397,2.
Пример 15. Синтез (6-бензил-3-(2,6-диметилпиридин-4-ил)-7-оксо-5,6,7,8-тетрагидро-1Н-пиразоло [4,3 -g] хиназолин-1-ил)метила.
(6-Бензил-3-(2,6-диметилпиридин-4-ил)-7-оксо-5,6,7,8-тетрагидро-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-1-ил)метил ди-трет-бутилфосфат.
К перемешиваемому раствору 6-бензил-3-(2,6-диметилпиридин-4-ил)-1,5,6,8-тетрагидро-7Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-7-она (76 мг, 0,20 ммоль) в 5,0 мл безводного DMA при комнатной температуре добавляли Cs2CO3 (196 мг, 0,60 ммоль) с последующим добавлением ди-трет-бутил(хлорме-тил)фосфата (78 мг, 0,30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический раствор отделяли и сушили. Растворитель удаляли и остаток подвергали очистке колоночной флэш-хроматографией с получением желаемого продукта (50 мг, 41% выход).
(6-Бензил-3-(2,6-диметилпиридин-4-ил)-7-оксо-5,6,7,8-тетрагидро-1Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-1-ил)метил дигидрофосфат.
Раствор (6-бензил-3-(2,6-диметилпиридин-4-ил)-7-оксо-5,6,7,8-тетрагидро-1Н-пиразоло[4,3-g]хина-золин-1-ил)метил ди-трет-бутилфосфата (80 мг, 0,132 ммоль) в 4,0 мл 1:3 смеси АсОН/Н2О перемешивали при 50°С в течение 12 ч.
Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток подвергали очистке при помощи препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (38 мг, 58%).
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 8: 10,21 (с, 1Н), 8,23 (шир., 1Н), 7,90 (с, 1Н), 7,60 (с, 2Н), 7,28-7,41 (м,
5Н), 5,91 (с, 2Н), 4,62 (с, 2Н), 4,44 (с, 2Н). ESI-MS m/z: 493,1.
Пример 16. Синтез 6-(3-хлор-4-фторбензил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1,8-дигидро-5Н-пиразоло[4,3-g]хиназолин-5,7(6Н)-диона.
К перемешиваемому раствору 6-(3-хлор-4-фторбензил)-3-(2-метилпиридин-4-ил)-1,5,6,8-тетрагидро-7Н-пиразоло[4,3^]хиназолин-7-она (8 мг, 0,02 ммоль) в 2 мл DMSO при комнатной температуре добавляли KMnO4 (63 мг, 0,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Твердое вещество отфильтровывали и полученный DMSO раствор подвергали очистке при помощи препаративной ВЭЖХ с получением желаемого продукта (2,5 мг 30%).
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 8: 13,71 (шир., 1Н), 11,60 (шир., 1Н), 8,74 (с, 1Н), 8,59 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 7,83 (с, 1Н), 7,78 (д, J=5,5 Гц, 1Н), 7,58 (дд, J=2,0, 7,0 Гц, 1Н), 7,36-7,39 (м, 2Н), 7,28 (с, 1Н), 5,10 (с,
2Н), 2,54 (с, 3Н). ESI-MS m/z: 435,1.
Пример 17. Анализы ингибирования ERK.
Ингибирование ERK активности соединениями, раскрытыми в настоящей заявке, определяли с использованием набора для киназного анализа Z'-LYTE (Life Technologies) с Ser/Thr 3 пептидным субстратом (Life Technologies) в соответствии с инструкциями изготовителя. Анализ осуществляли с концентрацией ERK2 фермента (Life Technologies) 0,47 нг/мкл при 100 мкМ АТФ (приблизительно АТФ Km для ERK2). Значения IC50 для соединений определяли с использованием 3-кратных серийных разведений в двух повторах. Соединения сначала разбавляли с получением 1:3 разведений в 100% DMSO при 100Х желаемой концентрации, затем снова разбавляли (1:25) в 20 мМ HEPES буфере (Invitrogen) для получения 4Х растворов перед добавлением к раствору фермента. Конечная DMSO концентрация в анализе составляла 1%. Конечный объем реакции составлял 20 мкл/лунка в 384-луночных планшетах. Киназные реакции осуществляли в течение 1 ч с последующим развитием реакции (1 ч) в 20 мкл/лунка в формате 384-луночных планшетов. Одно или несколько соединений, раскрытых в настоящей заявке, показали значение IC50 меньше чем 10 нМ при испытании в этом анализе (см. чертеж).
Таблица 1
In vitro Erk2 IC50 данные для выбранных соединений по настоящему изобретению Используются следующие символы: + (больше чем 1000 нМ), ++ (от 250 до 1000 нМ), +++ (от 50 до 250 нМ),
+ + + + (меньше чем 50 нМ)
Химическая Структура
Erk2
IC50 (HM)
Рассчитанная молекулярная
масса
Найденная
масса
(М+1)
Н Н
k j
++++
355,4
356,1
++++
383,5
384,3
H H
++++
389,8
390,1
^XXK
++++
403,9
404,4
+++
401,4
402,2
+++
366,4
367,2
++++
405,4
406,2
jXXfXxl
++++
421, 9
422,2
++++
400,4
401 ,4
++++
399,4
400,3
++++
405,4
406,3
NY^"Y° XXCFS
+++
437,4
438,2
н н
5QXOC
++++
405,4
406,3
\XXIXJ
++++
403,9
402,5
н н
0 0
N - v
+++
435,8
436,1
H H
O,.
++++
417,9
418,2
н н
"л I J I - J
+++
413,4
414,2
H H
д. u.F
++++
401,4
4 02,2
н H
0 o>
++++
355,4
356,2
Н Н
N J Т
+++
369,4
370,2
н н
+++
384,4
385,2
^. т
4 1
++++
380,4
381,2
н н
N ^ ,N. ,-Q ,CN
++++
408,5
409,2
|ДДТ^ЛЛС| Q °
н--\
+++
417,1
418,1
н н
391,7
391
н н
++++
433,9
434,1
++++
363,4
384,2
0. '
+++
417 ,9
418,4
н н
374 ,0
375,2
н н
++++
387 ,4
388,2
н н
++++
410,8
411,1
н н
+++
362 ,4
363,2
Н Н
-:rxY. .
++++
376,5
377,3
+++
362,4
363,2
++++
417,9
418,1
437 ,9
438,1
++++
438,8
439,1
доххх
++++
437 ,9
438,1
••IJ.XXJ й
394 ,4
395,2
длхо:
+++
424,8
425,1
++++
437,9
438,2
+++
370,8
371,1
jxxx.
++++
323,3
325,2
++++
363,4
364,2
++++
381,4
382,2
+++
350,4
351,2
++++
376,4
377,1
"Г/
++++
396,8
397,1
н н
N, I Г
N--\
++++
363,4
364,2
Й^,Я о
++++
417,9
418,1
н н
++++
392,5
393,2
н и
N 1 "Y f
++++
337,4
338,2
н н
++++
363,5
364,2
Н н
Ыч II 1
++++
337,4
338,2
++++
394 ,4
395,2
<хххл>
++++
376,4
377,2
н н
vuxuC!
++++
389,8
390,1
oaYn
++++
403,9
404,1
н н
"ДД XX JL
++++
429,9
430,1
уХХДХ1С|
++++
378,8
379,1
HN '
++++
405,8
406,1
+++
416,5
417,3
++++
452,6
453,3
N _ N 0 -N ~'
++++
394,5
395,3
p\Xxo сы
++++
403,5
409,2
N N
++++
390,8
391,1
u HO
415,5
416,2
++++
420,9
421, 1
+++
416,5
417,2
++++
452,6
453,3
++++
434,9
435, 1
++++
404,4
405, 1
412,5
413,2
ДХХ/а,,
+++
433,9
434 ,1
дххха,
++++
419,9
420,1
f±CXJF
++++
403,4
404,1
4N Дч
++++
417,9
418,1
++++
397,9
398,1
++++
417,4
418,1
|Хх
++++
418,4
419,1
393,4
394,2
447 ,5
448,3
++++
322,4
32 3,2
++++
380,4
381,2
fco: a"
++++
433,9
434,1
++++
434 ,9
435,1
м "4 N ,0 F
ал/ v
++++
421,4
422,1
++++
422,4
423,1
°Х>
++++
4 66,9
467
рхо.
++++
4 04,9
405,1
+++
389,8
390,1
0ОХЛ,
++++
421,4
422,1
H;N
++++
4 05,8
406,1
jxXa,
+++
413,9
414 ,1
N--NR. N
++++
434 ,9
435,1
tox
N '/
+++
310,3
311,1
374,4
375,1
NX^X0
X^N-Q
434,9
435,1
> xsX9'F
++++
422,4
423,1
100
н и
ХХж X,ACN
+ + + +
425,4
426,1
101
н н
дъ-хсо
N, Ч Г О
++++
487,5
483,2
102
Н Н
+ + + +
505,5
506,2
103
н н
++++
517,6
518,2
104
н н
ХХггз
++++
469,5
470,2
105
н н 8.^^н 0
' т г---. 0
+ + + +
409,4
410,2
106
н н
Д н
N. /'
395,4
396,2
107
ы НО
Х, _
у-н W
+ +
448,9
449,1
108
+ + +
403,9
404,1
109
и НО
324 ,3
325,2
110
+ +++
388,4
389,2
111
+ +++
404,9
405,1
112
Н-^Д^Д N ^-.^ NH2
++++
353,4
354,2
113
+ + +
339,4
340,2
114
++++
392,4
393,1
115
++++
404, 9
405,1
116
hi-N F
++ +
487,5
488,2
117
•"!/ra"
++++
420,9
421,1
118
N <; * -ой
++++
450,9
451,1
119
++++
454,4
455,1
120
;p;X'-x
++++
439,5
440,1
121
ACi;!Vr;::i
++++
457,5
458,2
122
,?X;A
N N
++++
475,5
476,2
123
++++
390,8
391,1
124
VI::61CLC,
++++
424,4
425,1
125
к '/
++++
411,4
412,2
126
++++
487,5
488,2
127
N-N
++++
392,4
393,1
128
'N-N
++++
381,4
382,1
129
XX0-
N v-N
+++
431,9
432,1
130
voX
+++
418,4
419,1
131
X rrx
H \
+++
4 67,6
468,2
132
¦Sn'C. - •
й "'л
++++
471,5
472,2
133
++++
456,5
457,2
134
++++
505,0
505,2
135
i°4 га
++ +
4 60,6
461,2
136
+++
446,6
447,3
137
+++
430,5
431,3
138
+++
444 ,6
445,2
139
++++
457,5
458,2
140
X^X'X^
++++
473,6
474,2
141
l^xx
++ +
458,6
459,3
142
^ххохэ
++++
470,6
471,3
143
++++
488,5
489,2
144
++++
500, 6
501,2
145
++++
466, 6
467,2
146
++++
438,5
439,2
147
+++
474,5
475,5
148
++++
454,6
455,2
149
++++
412,5
413,2
150
++++
483, 6
484 ,2
151
^x°rxxx
++++
470,5
471,2
152
++++
501,0
501,2
153
++++
452,6
453,2
154
++++
466,6
467,2
155
jxXX/
++++
430,5
431,3
156
++++
487,0
487,2
157
+++
466,6
467,2
158
++++
487,0
487,1
159
0, u ^
++++
487,0
487,2
160
+++
386,5
387,2
161
++++
521,5
522,2
162
++++
486,5
487
163
++++
488,5
489,2
164
++++
501,0
501,2
165
++++
459,6
460,3
166
++++
454 ,5
455,5
167
+++
484 ,6
485,2
168
+++ +
467,6
468,5
169
+++ +
432,6
433,2
170
++++
467,6
468,2
171
+++
453,5
454,2
172
++++
466,5
467,2
173
++++
4 64 ,9
4 65,1
174
++++
473,0
473,2
175
++++
430,5
431,2
176
++++
446,9
447,2
177
N ~J
++++
466,6
467,2
178
++++
458,5
459,2
179
+++
484,6
485,2
180
+++
501,0
501,2
181
+++
414 ,9
415,1
182
+++
430,5
431,3
183
+++
467,6
468,2
184
N* J I Г
N \
++++
470,5
471,2
185
н н
++++
488,5
489,2
186
н н n
+++
499,6
500,3
187
|Xxx)
++++
488,5
489,2
188
н н
^cxXX°
++++
483,6
484 ,2
189
н к
vXXT
+++
402,5
403,2
190
++++
488,5
489,2
191
н н
++++
424,5
425,2
192
+++
438,5
439,2
193
++++
444,5
445,2
194
+++
444, 6
445,5
195
+++
487, 6
488,3
196
++++
488,5
489,2
197
++++
398,4
399,2
198
388,5
389,1
199
+++¦!¦
457,5
458,2
200
Xxrx)
++++
488,5
489,4
201
480,6
481,5
202
524,5
525,5
203
++++
460,6
461,5
204
H . И n
++++
361,4
362,3
205
++++
347,4
348,3
206
430,5
431,4
207
X У
+++
418,5
419,4
208
+++
466,6
467,5
209
++++
446,5
447,4
210
+++
416,5
211
++++
377,4
378,2
212
u Н
++++
361,4
362,2
213
++++
375,2
376,3
214
++++
430,4
431,1
215
+++
430,5
431,3
216
++++
458,5
459,3
217
H H
yURTJy
r\ CI
++++
403,9
404,2
218
++++
437,4
438,2
219
++++
391,5
392,3
220
н н
Q k'°
++++
391,5
392,7
221
н н
?YVNY° Л
"jXXJLyO
++++
382,4
383,2
222
МЛ F3C
(Рацемат)
+++
506,5
507,3
223
(Рацемат)
++++
424,5
425,3
224
++++
397,4
398,2
225
419,4
420,1
226
435,9
436,1
227
389,5
390,1
228
++++
404,5
405,1
229
¦toioo
383,4
384,2
230
H H
431,9
4 32,1
231
M* J JL ILL
(N>
++++
474,9
475,1
232
H H
++++
466,5
467,2
233
++++
451,4
452,2
234
н н
++++
390,5
391,1
235
н н
+++
392,8
393,1
236
+++
4 62,6
461,4 (M-l)
237
++++
444 ,5
445,2
23В
+++
453,5
454,2
239
++++
361,4
362,2
240
++++
437,4
438,2
241
(Рацемат)
++++
438,5
439,2
242
x) N) NA F3C
(Рацемат)
+++
520,5
521,3
243
++++
333,4
334,2
244
++++
458,5
459,3
245
++++
472,6
473,2
246
++++
390,5
391,1
247
++++
404 ,5
405,3
248
(Рацемат)
++++
452 ,6
453,3
249
+++
458,9
459,2
250
ДхХтЛ
++++
391,5
392,2
251
++++
472,6
472,3 (М-1)
252
++++
458 ,6
459,2
253
++++
347,4
348,2
254
++++
458,6
459,2
255
++++
362,4
363,1
256
++++
376,5
377,2
257
+++
443,5
444 ,2
258
++++
333,4
334 ,1
259
н н
N-N
++++
419,4
420,1
260
> XXTJCC
- N
486,0
486,2
261
++++
441,5
442,2
262
н н
++++
391,5
392,2
263
488,5
489,2
264
н н
++++
488,5
489,3
265
н н
+++
419,4
420,1
266
н н
+++ +
372,5
373,2
267
н "
л хм
++++
444,5
445,1
268
н н
+++
390,5
391,3
269
о.. ¦
++++
378,4
379,2
270
н н
ДХ^ХХ)
+++ +
468,6
469,2
271
ХУт° 1
+++ +
504,5
505,2
272
н н
XN о
++++
468,6
469,2
273
++++
504,5
505,2
274
++++
430,4
431,1
275
ХХ"""о
++++
452,6
453,2
276
N tf
++++
447,4
448,2
277
++++
446,4
447,1
278
(Рацемат)
++++
452,6
453,2
279
Cx V-
Ч (Рэцемат)
++++
466,6
467,2
280
н н
N ^ F 0
++++
505,5
506,2
261
++++
477,5
478,2
282
и н
N,Tl J Г CF,
++++
431,4
432,2
283
н и
+++
347,4
348,2
284
++++
488,5
489,2
285
н н
++++
441,5
442,2
286
u H /
++++
418,5
419,2
287
^Xxjf
+++
398,4
399,1
288
++++
398,4
399,2
289
++++
344,4
345,2
290
476,6
477,2
291
++++
476,6
477,3
292
++++
453,5
454 ,3
293
++++
489,5
490,3
294
++++
375,5
376,2
295
++++
475,6
476,2
296
+++
466,6
467,3
297
чл V
++++
466,6
467,2
298
PPn>
++++
447,6
448,2
299
рсбр
++++
430,4
431,2
300
ЧЛ ^CF=
(Рацемат)
++++
524,5
525,2
301
++++
438,5
439,2
302
н н
N,1 Г
(Рацемат)
++++
444,5
445,2
303
N Г 1
VASJЈ*J^N" ml J NA, CF*
506,5
507,2
304
н н
N^WN о x=/;
Л\ N
++++
506,5
507,2
305
Й-^Й 0q
(Рацемат)
+++
470,5
471 ,2
306
(Рацемат)
++++
470,5
471,2
307
+++
452,6
453,2
308
++++
452,6
453,2
309
+++
444,5
445,2
310
++++
444,5
445,2
311
(Рацемат)
+++
524,5
525,2
312
+++
416,4
417 ,2
313
NN | [J ^ Д
++++
466,6
4 67,3
314
++++
373,5
374 ,2
315
4N-Y
++++
447,5
370,1
316
++++
464,6
465,3
317
N^Y^N^O YY
N I| [ II
VAX\XYA4/ XN4> 1
+++
369,4
370,2
N^W"^O YY
318
++++
464,6
465,3
319
Рацемическая
> ^TY>
смесь \
+++
470,5
471,2
320
+++
505,5
506,3
321
Рацемическая смесь
++++
512,6
513,3
322
Рацемическая
смесь х
+++
472,5
473,3
323
++++
367,4
368,2
Н _ й л _
324
у О
451,5
452,3
325
451,5
452,3
326
N 1 Г 1 V
366,4
367,2
327
Рацемическая
н н
N II Г ;
4 J N
смесь 4
404,5
405,3
328
Н н
N 1 Г 1
++++
396,4
397,2
32 9
Рацемическая смесь
486,5
487,4
330
Н н
ыч I I Г I 0
++++
366,4
367,2
331
Рацемическая
Н Н
ГХ N
^ J ) NA с с7
смесь N гз°
++++
498,4
499,3
332
н н
++++
449,5
450,4
333
н н
++++
369,4
370,2
334
Н Н
N !} H2N
++++
382,4
383,2
335
Н Н
(tm)хссо & "
++++
380,4
381,2
336
н н
++++
485,5
486,2
338
Н н
HN 1
++++
388,5
389,2
339
Н Н / ^\
Ал ^ср"
++++
520,5
521,4
340
н н /ГЛ
Д Х
++++
493,5
494,4
341
++++
492,5
493,3
342
++++
492,5
493,3
343
+++
380,4
381,2
344
++++
381,4
382,1
345
++++
374,4
375,2
346
х!€
++++
522,5
523,3
347
N^w" О ^
++++
396,4
397,1
348
V ^F3
++++
523,5
524,4
349
N-^W*V° О N^-N V_CF3
++++
507,5
508,3
350
N ^CF3
+ +
495,5
496,3
351
/X N Vtf ^CF, H2N
++++
508,5
509,2
352
++++
4 95,5
496,2
353
++++
454,5
455,3
354
cfX
Рацемическая смесь
++++
454,5
455,3
355
Рацемическая смесь X
++++
455,5
456,3
356
Рацемическая смесь N~\
++++
477, 6
478,3
357
N> AAXAJ
HN 1
++++
388,5
389,2
358
+++
387,5
388,2
359
Рацемическая смесь
+++
508,6
509,3
360
N4 д T T
+++
463,6
464,3
361
+++
514,5
515,3
362
Рацемическая
смесь F
++++
488,5
489,2
363
++++
466,6
467,3
364
АХ"тЗ У"
++++
466,5
467,3
365
nД- ОТ)
+++
469,5
470,3
366
Рацемическая смесь
++++
463,5
464 ,2
367
н н
X от
+++
465,5
466,3
368
X от
+++
468,6
469,3
369
н н
504,5
505,4
370
Р'То
"Л-
++++
465,5
466,4
371
н н
NX J Г X.J
+++
382,5
383,2
372
н н
++++
369,4
370,2
373
XVo
+++
449,5
450,3
374
++++
522,5
523,3
375
+++
522,5
523,3
376
Рацемическая смесь
О v__/0H
++++
468,6
469,3
377
++++
397,5
398,3
378
+++
455,2
456,2
379
Рацемическая смесь
++++
502,2
503,2
380
466,3
467,3
381
Par
450,2
451,3
382
ны \
. N
429,3
430,2
383
Рт РАг о ' 'X'
488,2
489,3
384
(Sjl \ > F
488,2
489,3
385
502,2
503,3
386
502,2
503,3
387
N И 0 A Nv
' ! 4NA
CF3
Рацемическая смесь
520,2
521,2
388
H H f )
Рацемическая смесь
464,6
465,3
389
Я .. N .of'/
Рацемическая смесь
478,6
479,3
Пример 18. Иммуно-ферментный анализ (ELISA) фосфо-р90 RSK с использованием А375 (Braf V600E) клеток.
В день 1 А375 клетки (клеточная линия меланомы с Braf V600E мутацией) выращивали до около 80% конфлюентности, трипсинизировали, высевали при 50000 клеток на лунку в 100 мкл полной питательной среды (10% FBS в DMEM) в 96-луночный планшет. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение ночи перед обработкой. При подготовке для анализа ELISA планшет с предварительно нанесенным козлиным антимышиным антителом (Thermo Scientific) обрабатывали мышиным античеловеческим RSK1 антителом (моноклональное, Invitrogen) при 1:800 разведении (150 нг/лунка) в PBS, планшет помещали на устройство для встряхивания планшетов при 4°С в течение ночи. В день 3 соединения сначала разбавляли с получением 1:3 разведений в 100% DMSO при 250Х желаемой концентрации, затем снова разбавляли (1:50) в 10% DMEM питательной среде. Разбавленные соединения добавляли в содержащий клетки планшет (25 мкл для 5Х разведения) и клетки обрабатывали соединениями
(0,4% DMSO в 10% FBS DMEM) в течение 2 ч при 37°С в атмосфере 5% СО2. В лунки с контрольными
клетками добавляли только носитель (0,4% DMSO в 10% FBS DMEM). Каждую концентрацию соединений испытывали в двух повторах. Через 2 ч после обработки соединением супернатант удаляли из содержащего клетки планшета, клетки лизировали в 100 мкл/лунка клеточного лизисного буфера (Cell Signaling Technologies), содержащего ингибиторы фосфатазы и протеазы (Cell Signaling Technologies), на устройстве для встряхивания планшетов при 4°С в течение 20 мин. ELISA планшет промывали четыре раза промывочным буфером ELISA (Thermo Scientific) перед добавлением 100 мкл клеточного лизата. Лизат инкубировали на ELISA планшете при осторожном встряхивании при комнатной температуре в течение 2 ч. Содержимое лунок удаляли и ELISA планшет промывали четыре раза промывочным буфером, инкубировали с 100 мкл/лунка антифосфо-RSK! (Thr359/Ser363) кроличьего моноклонального антитела (Millipore) при разведении 1:1000 в StartingBlock буфере (Thermo Scientific) на устройстве для встряхивания планшетов при комнатной температуре в течение 1 ч. Содержимое лунок удаляли и ELISA планшет промывали четыре раза промывочным буфером, инкубировали с 100 мкл/лунка козлиного антикроличьего HRP (Thermo Scientific) при разведении 1:3000 в StartingBlock буфере (Thermo Scientific) на устройстве для встряхивания планшетов при комнатной температуре в течение 1 ч. Содержимое лунок удаляли и ELISA планшет промывали четыре раза промывочным буфером, затем инкубировали с 100 мкл/лунка раствора ТМВ субстрата (Thermo Scientific) на устройстве для встряхивания планшетов при комнатной температуре в течение 20 мин. В завершение 100 мкл ТМВ стоп-раствора (Thermo Scientific) добавляли в каждую лунку и поглощение измеряли при 450 нм на планшет-ридере Tecan. Одно или несколько соединений, раскрытых в настоящей заявке, продемонстрировали ЕС50 меньше чем 50 нМ при испытании в этом анализе (см. чертеж).
Пример 19. Анализ пролиферации опухолевой клеточной линии.
Способность одного или нескольких соединений по настоящему изобретению ингибировать пролиферацию опухолевой клеточной линии определяли в соответствии со стандартными процедурами, известными в данной области техники. Например, осуществляли in vitro анализ клеточной пролиферации для измерения метаболической активности живых клеток. Опухолевые клеточные линии А375, WM-266-4 или клетки НСТ116 (АТСС) выращивали до около 80% конфлюентности, трипсинизировали и высевали при 1500 клеток/лунка в объеме 100 на лунку в полной питательной среде (10% FBS в DMEM или
10% FBS в RPMI) в 96-луночный планшет.
Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 ч для обеспечения их адгезии к планшетам. Соединения сначала разбавляли с получением 1:3 разведений в 100% DMSO при 250Х желаемой концентрации, затем снова разбавляли (1:50) в 10% DMEM питательной среде. Разбавленные соединения добавляли в содержащий клетки планшет (25 мкл для 5Х разведения) и клетки обрабатывали соединениями (0,4% DMSO в 10% FBS DMEM) в течение 2 ч при 37°С в атмосфере 5% СО2. В лунки с контрольными клетками добавляли только носитель (0,4% DMSO в 10% FBS DMEM или в 10% FBS RPMI). Каждую концентрацию соединений испытывали в двух повторах. Через 96 ч после обработки соединением добавляли CellTiter Glo реагент (Promega) при 1:5 разведении в каждую лунку содержащего клетки планшета и содержащий клетки планшет помещали в условия комнатной температуры на 30 мин. Люминесценцию лунок определяли с использованием планшет-ридера Tecan. Одно или несколько соединений, раскрытых в настоящей заявке, при испытании в этом анализе продемонстрировали IC50 меньше чем 80 нМ в А375 клетках, IC50 меньше чем 50 нМ в НСТ1116 клетках и IC50 меньше чем 110 нМ в Н358 клетках (см. чертеж).
Таблица 2
238,
239,
240,
241,
242,
243,
244,
245,
246,
248,
249,
250,
251,
252,
253,
254,
258,
259,
261,
262,
264,
266,
267,
269,
270,
271,
272,
273,
274,
275,
276,
277,
278,
279,
280,
281,
284,
285,
286,
288,
290,
291,
292,
293,
294,
295,
297,
298,
299,
300,
301,
302,
304,
305,
306,
308,
311,
312,
316,
318,
320,
321,
323,
324,
325,
326,
328,
330,
332,
333,
334,
336,
338,
339,
340,
341,
342,
344,
345,
346,
347,
348,
349,
352,
353,
354,
356,
357,
361,
362,
364,
366,
370,
372,
380,
384,
386
А375 (V599E)
3, 4,
22,
6, 7,
5, 9
, 15
IV,
клеточная
63,
64, 68
77,
10,
11,
12,
19,
20,
24,
пролиферация
84,
101,
102,
13,
14,
16,
27,
32,
33,
IC50 (нМ)
103,
104,
134,
18,
21,
23,
34,
39,
47,
143,
144,
146,
26,
30,
31,
49,
201,
202,
148,
149,
151,
35,
36,
37,
257,
317,
366
153,
154,
156,
41,
92,
99,
158,
162,
165,
120
123,
132,
181,
184,
185,
136
138 ,
139
187,
190,
196,
140,
141,
197,
212,
213,
147
161,
163,
214,
225,
237,
174
178,
179,
239,
240,
241,
180
193,
199,
243,
244,
245,
200
204,
205,
248,
251,
252,
211
216,
221,
254,
264,
267,
222
224,
226,
269,
270,
271,
227
228,
229,
272,
273,
275,
231
234,
242,
278,
279,
280,
301
308,
311,
281,
284,
285,
320
321,
323,
288,
291,
292,
328
330,
331,
293,
304,
305,
306,
316,
318,
324,
325,
326,
332,
333,
338,
339,
357,
362,
364
Н358 (Kras,
1, 35, 63,
64,
30,
31,
36,
26,
27,
32,
G12C)
84,
101,
102,
37,
39,
41,
33,
34,
47,
клеточная
103,
143,
144,
68,
77,
99,
49,
136,
138,
пролиферация
146,
147,
165,
120
123,
132,
201,
202,
204
IC50 (нМ)
174,
181,
196,
134
139,
140,
197,
214
141
161,
163,
178
179,
180,
190
193,
199,
200
205,
221,
222
ИМ-266-4
1, 3, 4, 7, 8,
5, 6, 9,
15, 17, 19,
(V599D)
10, 11, 12, 22
13,
14, 16,
20, 23, 24
клеточная
18,
пролиферация
IC50 (нМ)
Пример 20. Анализ стабильности с использованием микросом.
Стабильность одного или нескольких соединений по настоящему изобретению определяли в соответствии со стандартными процедурами, известными в данной области техники. Например, стабильность одного или нескольких соединений по настоящему изобретению устанавливали при помощи in vitro анализа. В частности, осуществляли in vitro анализ стабильности с использованием микросом, который измеряет стабильность одного или нескольких соединений по настоящему изобретению при взаимодействии с мышиными, крысинами или человеческими микросомами из печени. Реакцию микросом с соединениями осуществляли в 1,5 мл пробирке Эппендорфа. Каждая пробирка содержала 0,1 мкл 10,0 мг/мл NADPH; 75 мкл 20,0 мг/мл микросом печени мыши, крысы или человека; 0,4 мкл 0,2 М фосфатного буфера, 425 мкл ddH2O. Пробирка с отрицательным контролем (без NADPH) содержала 75 мкл 20,0 мг/мл микросом печени мыши, крысы или человека; 0,4 мкл 0,2 М фосфатного буфера и 525 мкл ddH2O. Реакцию начинали путем добавления 1,0 мкл 10,0 мМ испытываемого соединения. Реакционные пробирки инкубировали при 37°С. 100 мкл образца собирали в новую пробирку Эппендорфа, содержащую 300 мкл холодного метанола, через 0, 5, 10, 15, 30 и 60 мин реакции. Образцы центрифугировали при 15000 об/мин для удаления белка. Супернатант после центрифугирования образца переносили в новую пробирку. Концентрацию стабильного соединения после реакции с микросомами в супернатанте измеряли при помощи жидкостой хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ-МС).
Стабильность в микросомах одного или нескольких соединений по настоящему изобретению, определенная в этих условиях, представленная как Т1/2 (мин), была в пределах, требуемых для клинических исследований.
Пример 21. Анализ стабильности в плазме.
Стабильность одного или нескольких соединений по настоящему изобретению в плазме определяли в соответствии со стандартными процедурами, известными в данной области техники. См., например, Rapid Commun. Mass Spectrom., 10: 1019-1026. Следующая процедура представляет собой ВЭЖХ-МС/МС анализ с использованием человеческой плазмы; другие виды, включая обезьяну, собаку, крысу и мышь, также можно использовать. Замороженную гепаринизированную человеческую плазму оттаивали на бане с холодной водой и центрифугировали в течение 10 мин при 2000 об/мин при 4°С перед использованием. Соединение по настоящему изобретению добавляли из 400 мкМ исходного раствора к аликво-те предварительно отогретой плазмы для получения конечного объема для анализа 400 мкл (или 800 мкл для определения времени полужизни), содержащего 5 мкМ испытываемого соединения и 0,5% DMSO. Реакции инкубировали при встряхивании в течение 0 мин и 60 мин при 37°С или в течение 0, 15, 30, 45 и 60 мин при 37°С для определения времени полужизни. Реакции останавливали путем переноса 50 мкл инкубационной смеси в 200 мкл охлажденного льдом ацетонитрила и смешивали путем встряхивании в течение 5 мин. Образцы центрифугировали при 6000xg в течение 15 мин при 4°С и 120 мкл супернатанта забирали в чистые пробирки. Образцы затем упаривали досуха и подвергали анализу ВЭЖХ-МС/МС.
Где это требуется, одно или несколько контрольных или эталонных соединений (5 мкМ) испытывали одновременно с испытываемыми соединениями: одно соединение, пропоксикаин, с низкой стабильностью в плазме и другое соединение, пропантелин, со средней стабильностью в плазме.
Образцы восстанавливали в смеси ацетонитрил/метанол/вода (1/1/2, об/об/об) и анализировали методом (ОФ)ВЭЖХ-МС/МС с использованием контроля селективных реакций (SRM). ВЭЖХ условия включали бинарный ЖХ насос с автоматическим пробоотборником, смешанный режим, колонку С12, 2x20 мм и программу градиента. Площади пиков, соответствующие аналитам, регистрировали при помощи ВЭЖХ-МС/МС. Количество исходного соединения, остающееся через 60 мин, относительно количества, остающегося на время ноль, выраженное в виде процента, представляли как стабильность в плазме. В случае определения времени полужизни время полужизни определяли из угла наклона исходного линейного диапазона логарифмической кривой оставшегося соединения (%) против времени, предполагая кинетику первого порядка.
Пример 22. Анализ химической стабильности.
Химическую стабильность одного или нескольких соединений по настоящему изобретению определяли в соответствии со стандартными процедурами, известными в данной области техники. Далее подробно описана иллюстративная процедура для определения химической стабильности соединения по настоящему изобретению. Стандартный буфер, используемый для анализа химической стабильности, представлял собой фосфатно-буферный солевой раствор (PBS) при рН 7,4; можно использовать другие подходящие буферы. Соединение по настоящему изобретению добавляли из 100 мкМ исходного раствора к аликвоте PBS (в двух повторах) для получения конечного анализируемого объема 400 мкл, содержащего 5 мкМ испытываемого соединения и 1% DMSO (для определения времени полужизни получали
общий объем образца 700 мкл). Реакции инкубировали при встряхивании в течение 0 мин и 24 ч при 37° С; для определения времени полужизни образцы инкубировали в течение 0, 2, 4, 6, 24 ч. Реакции останавливали путем немедленного добавления 100 мкл инкубационной смеси к 100 мкл ацетонитрила и интенсивного перемешивания в течение 5 мин. Образцы затем хранили при -20°С до анализа ВЭЖХ-МС/МС. Где это требуется, контрольное соединение или эталонное соединение, такое как хлорамбуцил (5 мкМ), испытывали одновременно с соединением по настоящему изобретению, представляющим интерес, поскольку такое соединение в основном гидролизуется в течение 24 ч. Образцы анализировали методом (ОФ)ВЭЖХ-МС/МС с использованием контроля селективных реакций (SRM). ВЭЖХ условия включали бинарный ЖХ насос с автоматическим пробоотборником, смешанный режим, колонку С12, 2x20 мм и программу градиента. Площади пиков, соответствующие аналитам, регистрировали при помощи ВЭЖХ-МС/МС. Количество исходного соединения, оставшееся через 24 ч, относительно количества, остающегося на время ноль, выраженное в виде процента, представляли как химическую стабильность. В случае определения времени полужизни время полужизни определяли из угла наклона исходного линейного диапазона логарифмической кривой оставшегося соединения (%) против времени, предполагая кинетику первого порядка.
Пример 23. Фармакокинетический анализ с использованием грызунов.
Для исследования фармакокинетики соединений по настоящему изобретению соединения растворяли в подходящем носителе (например, 5% 1-метил-2-пирролидинона, 85% полиэтиленгликоля 400, 10% Solutor) и вводили перорально группе 4-10-недельных мышей с 12-часовыми интервалами ежедневно. Всех животных умерщвляли в СО2 через 2 ч после конечного введения соединения. Кровь собирали сразу же и хранили на льду для отделения плазмы. Плазму выделяли путем центрифугирования при 5000 об/мин в течение 10 мин. Собранную плазму замораживали для определения фармакокинетических свойств.
Альтернативно, осуществляли неотложное введение соединений (например, один раз) и через некоторое время (например, около 0, 30 с, 1 мин, 5, 10, 20, 30 мин, 1 ч, 2, 3, 5, 8, 10, 12 ч, 1 день, 2 дня и т.д.), кровь собирали и анализировали, как описано ниже.
Результаты, как ожидается, демонстрируют фармакокинетические параметры, такие как абсорбция, дистрибуция, метаболизм, экскреция, токсичность, для соединений по настоящему изобретению.
Пример 24. Ингибирование роста опухоли in vivo.
Клеточные линии: человеческие раковые клеточные линии с А375 (мутант B-Raf V600E), LOX (мутант B-Raf V600E) и Colo-205(мутант B-Raf V600E), PANC-1 (мутант K-Ras G12D), MiaPaca-2 (мутант K-Ras G12C), НСТ116 (мутант K-Ras G13D), Н441 (мутант K-Ras G12V), H23 (мутант K-Ras G12C), MDA-MB-231 (мутант K-Ras G13D) и LS1034 (мутант N-Ras) получали от АТСС. Клетки поддерживали в клеточной культуре в среде, рекомендованной АТСС, при 37°С в 5% СО2/воздух. Клетки собирали в экспоненциальной фазе роста.
Животные: 5-7-недельных самок balb/c бестимусных, CB17.SCID (тяжелый комбинированный иммунодефицит) или SCID/c врожденным отсутствием естественных клеток-киллеров мышей получали от Charles River Laboratories. Животные содержались в клетках одноразового использования и индивидуально проветриваемых, находящихся в SPF помещениях или изолированных помещениях, в стерильных непатогенных условиях. Животным давали стандартный корм в виде стерилизованных сухих гранул, и они имели свободный доступ к стерильной воде. Все исследования были одобрены Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных Explora Biolabs, где осуществляют исследования, и исследования осуществляли в соответствии с требованиями Комитета по содержанию и использованию лабораторных животных Wellspring Biosciences и в соответствии с инструкциями по содержанию и использованию лабораторных животных (1996).
Модель ксенотрансплантата опухоли: мышам возраста 7-9-недель подкожно вводили прививку (2-5x106 клеток в PBS или смеси PBS:Matrigel) в правый бок. Массу тела животных измеряли 3 раза/неделя до начала лечения, с этого времени массу тела измеряли ежедневно перед введением средства. Размеры опухолей измеряли 2-3 раза/неделя с использованием циркуля. Объем опухоли рассчитывали с использованием формулы I (LxW2)/2, где L представляет собой длину опухоли и W представляет собой ширину опухоли соответственно. Типично, введение начинают, когда средний размер составляет 100 мм3. Мышей рандомизированно распределяли по группам испытания (^9-10/группа). Соединения формулировали в PBS, ПЭГ300 (полиэтиленгликоль) или СМС/Н2О (карбоксиметилцеллюлоза) и вводили животным в соответствии с массой тела (5 мкл/мг) перорально ежедневно один или два раза в день. Животных умерщвляли, когда опухоли в контрольной группе введения носителя достигали объема 2000 мм3. Для люци-фераза-трансфицированных моделей опухоли, жизнеспособность опухоли контролировали 2-3 раза/неделя с использованием Xenogen IVIS(r) 200.
Данные и статистический анализ: ингибирование роста опухоли (TGI) рассчитывали как [1-(Т-Т0)/(С-С0)]/100, где Т и Т0 представляют собой средние объемы опухоли для группы обработки в конкретный день эксперимента и в первый день обработки, соответственно, для экспериментальных групп; С и С0 представляют собой средние объемы опухоли для контрольной группы.
Данные выражали как среднее значение ± SEM (стандартная ошибка среднего). Статистическую значимость в средних значениях определяли при помощи ANOVA (дисперсионный анализ) с использованием апостериорного критерия множественных сравнений Даннетта (GraphPad Prism(r)) или критерия Тьюки (SPSS 16.0). Р-значение <0,05 считается статистически значимым.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы П-Е
(II-E)
или его фармацевтически приемлемая соль;
где R1 представляет собой 3-6-членный гетероциклил, -C1-10алкил-(3-6-членный гетероциклил), -(3-6-членный гетероциклил)-C1-10алкил, -(3-6-членный гетероциклил)-С6-10арил или -(3-6-членный гетеро-циклил)-C1-10гетарил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R10 или R11 заместителями;
R21 представляет собой -L-C1-10гетероалкил, -Ь-С6-10арил, -L-C1-10гетарил, -L-C3-10циклоалкил или -L-C1-10гетероциклил, каждый из которых является незамещенным или замещен одним или несколькими независимыми R12 заместителями;
L представляет собой связь;
R72 представляет собой водород;
R10 представляет собой -Q^^raui, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -C1-10гетероалкил, -С6-10арил, -C1-10 гетарил, -С3-10циклоалкил или -C1-10гетероциклил, каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми R11 заместителями;
R11 и R12 независимо представляют собой водород, галоген, -^^алкею, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -C1-10гетероалкил, -С6-10арил, ^м^тарил, -С3-10циклоалкил, -C1-10гетероциклил, -ОН, -CF3, -OCF3, -OR31,
-NR31R32, -C(O)R31, -CO2R31, -C(=O)NR31, -NO2, -CN, -S(O)0-2R31, -SO2NR31R32, -NR31C(=O)R32, -NR31C(=O)OR32, NR31C(=O)NR32R33, -NR31S(O)0-2R32, -C(=S)OR31, -C(=O)SR31, NR31C(=NR32)NR32R33,
-NR31C(=NR32)OR33, -NR31C(=NR32)SR33, -ОС(=O)OR33, -ОС(Ю)№13^32, -OC(=O)SR31, -SC(=O)SR31, -P(O)OR31OR32 или SC(=O)NR31NR32; и
31 32 33
каждый из R , R и R независимо представляет собой водород, галоген, -^^алкею, -С2-10алкенил, -С2-10алкинил, -C1-10гетероалкил, -С6-10арил, -C1-10гетарил, -С3-10циклоалкил или -C1-10гетероциклил, или R31 вместе с R32 образуют гетероциклическое кольцо;
где каждый гетероалкил содержит по крайней мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из О, N, P, Si и S;
каждый гетарил содержит один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S;
каждый гетероциклил содержит один, два или три кольцевых гетероатома, выбранных из группы, состоящей из N, О и S.
2. Соединение по п.1, где R21 представляет собой -L-C1-10гетарил, незамещенный или замещенный одним или несколькими независимыми R12 заместителями; и где L представляет собой связь.
3. Соединение по п.2, где ^^^тарит из R21 включает один или несколько атомов азота.
4. Соединение по п.3, где ^^^тарит из R21 выбран из группы, состоящей из пиразолила, пириди-нила, пиразинила, пиримидинила, пиридазинила.
5. Соединение по п.4, где ^^^тарит из R21 является незамещенным.
6. Соединение по п.4, где ^^^тарит из R21 замещен одним, двумя или тремя независимыми R12 заместителями.
7. Соединение по любому из пп.2-4 или 6, где каждый R12 заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -C1-10алкила, -С2-10алкенила, -С2-10алкинила, -C1-10гетероалкила, -С6-10арила, -C1-10гета-рила, -С3-10циклоалкила, -C1-10гетероциклила, -ОН, -CF3, -OCF3, -OR31; где каждый R31 независимо представляет собой водород или -^^алкею.
8. Соединение по п.7, где каждый R12 заместитель независимо выбран из группы, состоящей из -Me,
-Et, -i-Pr, -n-Pr, ОН, -ОМе, -OEt и -OPr.
9. Соединение по любому из пп.1-8, где R1 представляет собой
, или ,
каждый из которых незамещен или замещен одним или несколькими независимыми Ri0 или Rn заместителями.
10. Способ ингибирования активности протеинкиназы, присутствующей в клетке, включающий контактирование указанной клетки с эффективным количеством соединения по любому из предшествующих пунктов.
11. Способ по п.10, где протеинкиназа представляет собой ERK.
12. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC50 значении меньше чем около 1000 нМ.
13. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC50 значении меньше чем около 100 нМ.
14. Способ по п.10, где соединение ингибирует ERK при IC50 значении меньше чем около 10 нМ.
15. Способ по п.10, где стадия контактирования имеет место in vitro.
16. Способ по п.10, где стадия контактирования имеет место in vivo.
17. Способ уменьшения тяжести расстройства, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по любому из пп.1-9, где расстройство выбрано из группы, состоящей из рака, поражения костей, воспалительного заболевания, иммунного заболевания, заболевания нервной системы, метаболического заболевания, респираторного заболевания и сердечного заболевания.
18. Способ по п.17, где расстройство представляет собой рак, выбранный из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака щитовидной железы, семином, меланомы, рака мочевого пузыря, рака печени, рака почки, миелодиспла-стического синдрома (MDS), острого миелогенного лейкоза (AML) и колоректального рака.
19. Способ по п.18, где рак представляет собой меланому или колоректальный рак.
20. Способ по п.17, где расстройство опосредовано ERK1 и/или ERK2.
21. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать ERK, включающая эффективное количество соединения по любому из пп.1-9 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
22. Фармацевтическая композиция по п.21, где соединение присутствует в терапевтически эффективном количестве.
23. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована в виде лекарственной формы для перорального введения.
24. Фармацевтическая композиция по п.21, где указанная композиция сформулирована в виде таблетки или капсулы.
25. Соединение по п.1, выбранное из
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032196
032196
- 1 -
- 1 -
(19)
032196
032196
- 1 -
- 1 -
(19)
032196
032196
- 1 -
- 1 -
(19)
032196
032196
- 4 -
- 3 -
(19)
032196
032196
- 12 -
- 12 -
032196
032196
- 12 -
- 12 -
032196
032196
- 12 -
- 12 -
032196
032196
- 12 -
- 12 -
032196
032196
- 13 -
- 13 -
032196
032196
- 15 -
- 15 -
032196
032196
- 16 -
- 16 -
032196
032196
- 16 -
- 16 -
032196
032196
- 16 -
- 16 -
032196
032196
- 16 -
- 16 -
032196
032196
- 17 -
- 17 -
032196
032196
- 17 -
- 17 -
032196
032196
- 18 -
- 18 -
032196
032196
- 18 -
- 18 -
032196
032196
- 18 -
- 18 -
032196
032196
- 18 -
- 18 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 20 -
- 20 -
032196
032196
- 21 -
- 21 -
032196
032196
- 21 -
- 21 -
032196
032196
- 21 -
- 21 -
032196
032196
- 21 -
- 21 -
032196
032196
- 43 -
032196
032196
- 46 -
- 46 -
032196
032196
- 51 -
- 51 -
032196
032196
- 78 -
- 78 -
032196
032196
- 80 -
- 80 -
032196
032196
- 81 -
- 81 -
032196
032196
- 85 -
- 85 -