EA 032155B1 20190430 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2019\PDF/032155 Полный текст описания [**] EA201592155 20140512 Регистрационный номер и дата заявки EP13167722.1 20130514 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EP2014/059676 Номер международной заявки (PCT) WO2014/184151 20141120 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа [PDF] eab21904 Номер бюллетеня [GIF] EAB1\00000032\155BS000#(1888:2203) Основной чертеж [**] УСТРОЙСТВО ДЛЯ ГОРИЗОНТАЛЬНОГО ПРОТОЧНОГО АНАЛИЗА Название документа [8] B01L 3/00, [8] A61B 10/00 Индексы МПК [EE] Нойман Томас Сведения об авторах [EE] ФИБРОТКС ОЮ Сведения о патентообладателях [EE] ФИБРОТКС ОЮ Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000032155b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Вставка (200, 411) для устройства для горизонтального проточного анализа, содержащая мембрану (201), имеющую толщину, ширину и длину, прикрепленную к рамке жесткой опоры (202), причем вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца с поверхности кожи млекопитающего (213), при этом рамка жесткой опоры покрывает периметр мембраны, и при этом мембрана является водопроницаемой со стороны, противоположной поверхности кожи, для крепления к которой мембрана предназначена.

2. Вставка по п.1, в которой мембрана имеет толщину, равную или менее 4 мм, и как ширину, так и длину, превышающие толщину.

3. Вставка по любому из пп.1 и 2, дополнительно содержащая фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления вставки к поверхности кожи млекопитающего (213).

4. Вставка по любому из пп.1-3, в которой вставка является областью (DA) обнаружения устройства для горизонтального проточного анализа, содержащей зону обнаружения (105, 505), содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ.

5. Вставка по любому из пп.1-4, в которой одно или более тестируемых анализируемых веществ выбраны из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.

6. Диагностический набор для определения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности кожи млекопитающего, содержащий: а) отдельную вставку (200, 411) по любому из пп.1-5 для устройства с горизонтальным потоком, причем отдельная вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца, b) устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью размещения отдельной вставки (200, 411), c) фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности кожи млекопитающего (213).

7. Диагностический набор по п.6, в котором устройство для горизонтального протока выполнено с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство (100, 500) с горизонтальным протоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102, 502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).

8. Диагностический набор по пп.6 и 7, в котором мембрана имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширина, так и длина превышают толщину, причем устройство с горизонтальным протоком выполнено имеющим направление (L) горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.

9. Диагностический набор по любому из пп.6-8, в котором фиксирующий элемент (210) содержит расширяющийся слой (212), выполненный с возможностью приложения давления к отдельной вставке (200, 411), тем самым прижимая отдельную вставку (200, 411) к поверхности кожи млекопитающего (213).

10. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является зоной (101) элюции, а не областью (DA) обнаружения.

11. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону (501) элюции и область (DA) обнаружения, и отдельная вставка является областью (DA) обнаружения, а не зоной элюции.

12. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором расширяющийся слой фиксирующего элемента содержит сжатую целлюлозу, при этом расширяющийся слой не сообщается по текучей среде с отдельной вставкой (200, 411).

13. Диагностический набор по любому из пп.6-11, в котором область (DA) обнаружения содержит зону (105, 505) обнаружения, содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одного или более тестируемых анализируемых веществ, и по выбору индикаторную зону (106, 506), содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одной или нескольких индикаторных аффинных молекул.

14. Диагностический набор по любому из пп.6-13, в котором одно или более тестируемых анализируемых веществ выбраны из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.

15. Способ обнаружения наличия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ с использованием набора по любому из пп.6-14, в котором прикрепляют с возможностью открепления к поверхности кожи млекопитающего отдельную вставку (200, 411) для устройства с горизонтальным потоком, причем отдельную вставку выполняют с возможностью получения тестируемого образца; оставляют отдельную вставку (200) на поверхности кожи млекопитающего (213) по меньшей мере на 5 мин; фиксируют отдельную вставку, содержащую тестируемый образец, в устройстве (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненном с возможностью размещения отдельной вставки; проявляют устройство для горизонтального проточного анализа.

16. Способ по п.15, согласно которому отдельную вставку (200, 411) прикрепляют с возможностью открепления к поверхности кожи посредством фиксирующего элемента (210), выполненного с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности кожи млекопитающего (213), при этом фиксирующий элемент содержит расширяющийся слой (212), который активируют между стадиями а) и b) таким образом, создавая усилие, прижимающее отдельную вставку к поверхности кожи.

17. Способ по любому из пп.15 и 16, в котором устройство для горизонтального проточного анализа, используемое в способе, содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является зоной (101) элюции.

18. Способ по любому из пп.15-17, в котором устройство для горизонтального проточного анализа, используемое в способе, содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является областью (DA) обнаружения.

19. Способ по любому из пп.15-18, в котором поверхность кожи млекопитающего представляет собой кожу человека.

20. Способ по любому из пп.15-19, в котором устройство для горизонтального проточного анализа выполняют с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство (100, 500) с горизонтальным потоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102, 502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).

21. Способ по любому из пп.15-20, в котором мембрана устройства для горизонтального проточного анализа, используемого в способе, имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширину, так и длину, превышающие толщину, причем устройство с горизонтальным потоком выполнено имеющим направление (L) горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Вставка (200, 411) для устройства для горизонтального проточного анализа, содержащая мембрану (201), имеющую толщину, ширину и длину, прикрепленную к рамке жесткой опоры (202), причем вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца с поверхности кожи млекопитающего (213), при этом рамка жесткой опоры покрывает периметр мембраны, и при этом мембрана является водопроницаемой со стороны, противоположной поверхности кожи, для крепления к которой мембрана предназначена.

2. Вставка по п.1, в которой мембрана имеет толщину, равную или менее 4 мм, и как ширину, так и длину, превышающие толщину.

3. Вставка по любому из пп.1 и 2, дополнительно содержащая фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления вставки к поверхности кожи млекопитающего (213).

4. Вставка по любому из пп.1-3, в которой вставка является областью (DA) обнаружения устройства для горизонтального проточного анализа, содержащей зону обнаружения (105, 505), содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ.

5. Вставка по любому из пп.1-4, в которой одно или более тестируемых анализируемых веществ выбраны из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.

6. Диагностический набор для определения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности кожи млекопитающего, содержащий: а) отдельную вставку (200, 411) по любому из пп.1-5 для устройства с горизонтальным потоком, причем отдельная вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца, b) устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью размещения отдельной вставки (200, 411), c) фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности кожи млекопитающего (213).

7. Диагностический набор по п.6, в котором устройство для горизонтального протока выполнено с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство (100, 500) с горизонтальным протоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102, 502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).

8. Диагностический набор по пп.6 и 7, в котором мембрана имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширина, так и длина превышают толщину, причем устройство с горизонтальным протоком выполнено имеющим направление (L) горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.

9. Диагностический набор по любому из пп.6-8, в котором фиксирующий элемент (210) содержит расширяющийся слой (212), выполненный с возможностью приложения давления к отдельной вставке (200, 411), тем самым прижимая отдельную вставку (200, 411) к поверхности кожи млекопитающего (213).

10. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является зоной (101) элюции, а не областью (DA) обнаружения.

11. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону (501) элюции и область (DA) обнаружения, и отдельная вставка является областью (DA) обнаружения, а не зоной элюции.

12. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором расширяющийся слой фиксирующего элемента содержит сжатую целлюлозу, при этом расширяющийся слой не сообщается по текучей среде с отдельной вставкой (200, 411).

13. Диагностический набор по любому из пп.6-11, в котором область (DA) обнаружения содержит зону (105, 505) обнаружения, содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одного или более тестируемых анализируемых веществ, и по выбору индикаторную зону (106, 506), содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одной или нескольких индикаторных аффинных молекул.

14. Диагностический набор по любому из пп.6-13, в котором одно или более тестируемых анализируемых веществ выбраны из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.

15. Способ обнаружения наличия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ с использованием набора по любому из пп.6-14, в котором прикрепляют с возможностью открепления к поверхности кожи млекопитающего отдельную вставку (200, 411) для устройства с горизонтальным потоком, причем отдельную вставку выполняют с возможностью получения тестируемого образца; оставляют отдельную вставку (200) на поверхности кожи млекопитающего (213) по меньшей мере на 5 мин; фиксируют отдельную вставку, содержащую тестируемый образец, в устройстве (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненном с возможностью размещения отдельной вставки; проявляют устройство для горизонтального проточного анализа.

16. Способ по п.15, согласно которому отдельную вставку (200, 411) прикрепляют с возможностью открепления к поверхности кожи посредством фиксирующего элемента (210), выполненного с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности кожи млекопитающего (213), при этом фиксирующий элемент содержит расширяющийся слой (212), который активируют между стадиями а) и b) таким образом, создавая усилие, прижимающее отдельную вставку к поверхности кожи.

17. Способ по любому из пп.15 и 16, в котором устройство для горизонтального проточного анализа, используемое в способе, содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является зоной (101) элюции.

18. Способ по любому из пп.15-17, в котором устройство для горизонтального проточного анализа, используемое в способе, содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является областью (DA) обнаружения.

19. Способ по любому из пп.15-18, в котором поверхность кожи млекопитающего представляет собой кожу человека.

20. Способ по любому из пп.15-19, в котором устройство для горизонтального проточного анализа выполняют с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство (100, 500) с горизонтальным потоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102, 502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).

21. Способ по любому из пп.15-20, в котором мембрана устройства для горизонтального проточного анализа, используемого в способе, имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширину, так и длину, превышающие толщину, причем устройство с горизонтальным потоком выполнено имеющим направление (L) горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.


Евразийское 032155 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.04.30
(21) Номер заявки 201592155
(22) Дата подачи заявки
2014.05.12
(51) Int. Cl. B01L 3/00 (2006.01) A61B10/00 (2006.01)
(54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ГОРИЗОНТАЛЬНОГО ПРОТОЧНОГО АНАЛИЗА
(31) 13167722.1
(32) 2013.05.14
(33) EP
(43) 2016.04.29
(86) PCT/EP2014/059676
(87) WO 2014/184151 2014.11.20
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ФИБРОТКС ОЮ (EE)
(72) Изобретатель:
Нойман Томас (EE)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-A-3552929
US-A1-2004184954 WO-A2-2011008581
(57) В изобретении представлен диагностический набор для обнаружения присутствия или количества одного или более тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности тела млекопитающего, причем диагностический набор содержит отдельную вставку для устройства с горизонтальным потоком (200, 411), содержащую мембрану (201), прикрепленную к жесткой опоре (202), причем отдельная вставка выполняется с возможностью получения тестируемого образца; устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью приема отдельной вставки (200, 411); фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности тела млекопитающего (213); при этом фиксирующий элемент (210) содержит расширяющийся слой (212), выполненный с возможностью приложения давления к отдельной вставке (200, 411), таким образом прижимая отдельную вставку (200, 411) к поверхности тела млекопитающего (213).
Область техники изобретения
Настоящее изобретение относится к диагностическим наборам и способам, опробованным на устройствах для горизонтального проточного анализа для определения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности тела млекопитающего, а также вставкам для устройств горизонтального проточного анализа.
Предшествующий уровень техники
Быстрое развитие геномики, транскриптомики, протеомики и регуломики сделало возможным анализировать молекулярные и клеточные механизмы в крупных масштабах. Одним из важных результатов этих исследований было развитие функциональной геномики и понимание того, что клетки от различных индивидуумов имеют значительные различия в структуре генома, профилях экспрессии генов и белков и регуляторных механизмах, которые управляют специфическими клеточными функциями. Это привело к интересу к обнаружению и/или количественному определению биомаркеров для оценки текущего состояния млекопитающего по присутствию, отсутствию и/или концентрации одного или нескольких биомаркеров.
Также существует потребность в оценке того, насколько эффективными являются терапии на персональном уровне, такие как в областях персонализированной медицины и персонализированного ухода за кожей.
Что касается персонализированной медицины, то существует потребность в устройствах на месте предоставления медицинских услуг, которые являются применимыми при диагностике или прогнозировании нарушения, такого как заболевание кожи, или для предсказания подверженности к заболеванию, наступления или, вероятно, тяжести нарушения, такого как заболевание кожи у индивидуума; или для предсказания восприимчивости индивидуума к терапии; или для предсказания и/или мониторинга рецидива после лечения конкретного нарушения, такого как заболевание кожи.
Что касается персонализированного ухода за кожей, то заявленные эффекты косметических продуктов против морщин и против старения обычно основаны на предположении, что эти продукты имеют сходное воздействие на всех индивидуумов. Однако это не соответствует действительности. Различные люди и различные типы кожи реагируют различным образом на косметические продукты, следовательно, имеется потребность в устройствах на месте предоставления медицинских услуг, которые могут определить эффекты или восприимчивость индивидуума к конкретному типу продукта для ухода за кожей.
Один способ быстрого анализа, который применялся для диагностического тестирования на местах предоставления медицинских услуг, такой как тест на беременность в бытовых условиях, представляет собой способ горизонтального проточного анализа.
Одной из проблем, с которыми сталкиваются при использовании способов горизонтального проточного анализа, является обеспечение образца для тестирования, в частности обеспечение формы образца на коже, и, конкретно, обеспечение образцов, взятых с кожи, воспроизводимым и/или однотипным образом.
В случае тестов на беременность в бытовых условиях образцом в большинстве случаев является
моча.
Патентная заявка США 2005/0175992 на имя Aberl et al. описывает способ быстрой диагностики мишеней в жидкостях организма человека. В частности, способ горизонтального проточного анализа используют там, где образец собирают неинвазивно из глазной жидкости, применяя элемент для взятия мазка.
Элемент для взятия мазка из US 2005/0175992 не вполне подходит для получения анализируемого вещества с поверхности кожи, в частности, когда желательно обеспечить образец воспроизводимым и/или однотипным образом, или, если желательно провести сравнение одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в образце с контрольным образцом, взятом с поверхности кожи в другом месте.
Следовательно, в данной области существует потребность в наборах и способах для получения и проведения анализа анализируемых веществ с поверхности кожи, в частности устройствах в месте предоставления медицинских услуг, которые позволяют проводить быстрое обнаружение. В данной области существует потребность также в способах отбора образцов для устройств в месте предоставления медицинских услуг, которые могут обеспечить образец воспроизводимым и/или однотипным образом в сравнении с предшествующим уровнем техники.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение было создано с учетом предшествующего уровня техники, описанного выше, и целью настоящего изобретения является создание устройства в месте предоставления медицинских услуг, которые, в частности, являются хорошо приспособленными для получения анализируемых веществ, например, с поверхности кожи человека, воспроизводимым и/или однотипным образом в сравнении с предшествующим уровнем техники, или, по меньшей мере, предоставить устройства в месте предоставления медицинских услуг с альтернативными путями получения анализируемого вещества с поверхности кожи.
Чтобы решить проблему, согласно настоящему изобретению создан диагностический набор для оп
ределения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности тела млекопитающего, такой как поверхность кожи млекопитающего, причем диагностический набор содержит отдельную вставку для устройства с горизонтальным потоком, содержащую мембрану, необязательно прикрепленную к жесткой опоре, причем отдельную вставку конфигурируют для получения тестируемого образца; устройство для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью приема отдельной вставки; и фиксирующий элемент, выполненный с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности тела млекопитающего. В некоторых вариантах осуществления мембрана имеет толщину, ширину и длину.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство с горизонтальным потоком выполнено с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство с горизонтальным потоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону элюции и область обнаружения, а также одно или более из подушки конъюгата и впитывающей подушки.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения мембрана имеет толщину, равную 4 мм или менее, и ширину и длину, обе большие, чем толщина, где устройство с горизонтальным потоком конфигурируют, чтобы иметь направление горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фиксирующий элемент содержит расширяющийся слой, конфигурированный для приложения давления к отдельной вставке, посредством этого прижимая отдельную вставку к поверхности тела млекопитающего.
Другими словами, авторы настоящего изобретения в первом аспекте изобретения обнаружили, что разъединение традиционного устройства для горизонтального проточного анализа на отдельную вставку, выполненную с возможностью получения тестируемого образца, например, с поверхности кожи человека, и устройство для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью размещения отдельной вставки, является целесообразным при получении образцов с поверхности тела млекопитающего, такой как поверхность кожи человека, в частности, при комбинации с фиксирующим элементом, который съемно фиксирует отдельную вставку на поверхности, например, кожи.
В предпочтительных вариантах осуществления фиксирующий элемент может оказывать дополнительное давление на отдельную вставку посредством действий расширяющегося слоя, который прижимает отдельную вставку более плотно к коже. При том, что в предшествующем уровне, описанном выше (US 2005/0175992), предполагают, что вихревое движение элемента для взятия мазка является достаточным для получения образца, авторы настоящего изобретения осознали, что альтернативным путем получения образца и во многих случаях превосходящим другие способы отбора образов для получения образцов с поверхности кожи является фиксация на коже отдельной вставки с возможностью последующего снятия и оказание дополнительного давления от расширяющегося слоя.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону элюции и область обнаружения, и отдельная вставка представляет собой зону элюции. Это означает, что отдельная вставка приспособлена для установки в зону элюции или область образца. Соответственно отдельная вставка не является областью обнаружения.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону элюции и область обнаружения, и отдельная вставка представляет собой область обнаружения. Это означает, что отдельная вставка приспособлена для установки в область обнаружения, которая может содержать зону обнаружения, имеющую иммобилизованные одну или несколько аффинных молекул. Соответственно отдельная вставка не является зоной элюции или областью образца. Это является модифицированным путем предоставления горизонтального проточного анализа, в том, что одно или несколько тестируемых анализируемых веществ уже будут связаны с иммобилизованными аффинными молекулами, как только отдельную вставку вкладывают в устройство для горизонтального проточного анализа.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отдельная вставка содержит мембрану, прикрепленную к рамке жесткой опоры.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения рамка жесткой опоры покрывает периметр мембраны.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения расширяющийся слой фиксирующего элемента содержит сжатую целлюлозу, и расширяющийся слой не находится в сообщении по текучей среде с отдельной вставкой.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения область обнаружения содержит зону обнаружения, содержащую одну или несколько аффинных молекул для селективного удерживания одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ и по выбору индикаторную зону, содержащую одну или несколько аффинных молекул для селективного удерживания одной или несколько индикаторных аффинных молекул.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одно или несколько тестируемых анализируемых веществ выбирают из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста,
гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.
В еще одном аспекте настоящего изобретения создана вставка для устройства для горизонтального проточного анализа, содержащая мембрану, прикрепленную к рамке жесткой опоры, отдельную вставку конфигурируют для получения тестируемого образца с поверхности тела млекопитающего.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения мембрана имеет толщину, равную или меньше чем 4 мм, и как ширину, так и длину, превышающие толщину.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения рамка жесткой опоры покрывает периметр мембраны.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вставка дополнительно содержит фиксирующий элемент, выполненный с возможностью съемного прикрепления вставки к поверхности тела млекопитающего.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вставка представляет собой область обнаружения устройства для горизонтального проточного анализа, содержащую зону обнаружения, содержащую одну или несколько аффинных молекул для селективного удерживания одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения мембрана является водопроницаемой со стороны, обращенной от поверхности кожи, для прикрепления к которой выполнена мембрана.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одно или несколько тестируемых анализируемых веществ выбирают из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.
В еще одном аспекте настоящего изобретения создан способ определения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ, причем согласно способу
съемно прикрепляют к поверхности тела млекопитающего отдельную вставку для устройства с горизонтальным потоком, содержащую мембрану, прикрепленную к жесткой опоре, и отдельную вставку, выполненную с возможностью получения тестируемого образца;
оставляют отдельную вставку на поверхности тела млекопитающего по меньшей мере на 5 мин;
фиксируют отдельную вставку, содержащую тестируемый образец, в устройстве для горизонтального проточного анализа, приспособленном для размещения отдельной вставки;
проявляют устройство для горизонтального проточного анализа.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отдельную вставку прикрепляют с возможностью последующего удаления с поверхности тела посредством фиксирующего элемента, выполненного с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности тела млекопитающего, причем фиксирующий элемент содержит расширяющийся слой, который активируют между стадиями а) и b), посредством этого генерируя усилие, прижимающее отдельную вставку к поверхности тела.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону элюции и область обнаружения, и отдельная вставка представляет собой зону элюции.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону элюции и область обнаружения, и отдельная вставка представляет собой область обнаружения.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения поверхность тела млекопитающего представляет собой кожу человека.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство для горизонтального проточного анализа выполнено с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, где устройство с горизонтальным потоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону элюции и область обнаружения, а также одно или более из подушки конъюгата и впитывающей подушки.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения мембрана имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширину, так и длину, превышающие толщину, причем устройство с горизонтальным потоком выполняют имеющим направление горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.
Краткое описание чертежей
Некоторые варианты примеров осуществления изобретения описаны более подробно ниже со ссылкой на сопровождающие чертежи, на которых
фиг. 1 показывает виды в перспективе различных вариантов осуществления настоящего изобретения полоски (100) для горизонтального проточного анализа. На фиг. 1а полоска (100) горизонтального потока показана вместе с подушкой (101) образца, подушкой (102) конъюгата, зоной (105) обнаружения
и индикаторной зоной (106), причем обе зоны иммобилизованы на пористой опоре (107), впитывающей подушкой (104) и материалом подложки (108). "L" показывает направление горизонтального потока, а область "DA" определяет зону обнаружения. Фиг. 1b иллюстрирует полоску горизонтального потока, где подушка (101) образца отсоединена от оставшейся полоски горизонтального потока. Фиг. 1с показывает альтернативный вариант осуществления фиг. 1а, где подушка (101) образца, подушка (102) конъюгата, зона (105) обнаружения и индикаторная зона (106) на пористой опоре (107) и впитывающая подушка (104) примыкают друг к другу или перекрываются и размещены на материале подложки (108). Фиг. 1d иллюстрирует полоску горизонтального потока фиг. 1с, где подушка (101) образца отсоединена от остальной полоски горизонтального потока;
фиг. 2 показывает в варианте осуществления настоящего изобретения различные виды отдельной вставки (200), фиксирующий элемент (210), и фиксирующий элемент, удерживающий отдельную вставку на коже млекопитающего. На фиг. 2а показана отдельная вставка (200) для устройства для горизонтального проточного анализа с мембраной (201), прикрепленной к жесткой опоре (202). Фиг. 2b показывает один вариант осуществления такой же отдельной вставки (200), где показана тыльная сторона мембраны (201), которая осуществляет контакт с поверхностью тела млекопитающего. Фиг. 2с показывает фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления к поверхности тела млекопитающего с помощью расширяющегося слоя (212). Фиг. 2d показывает вариант осуществления, где отдельная вставка съемно прикреплена к поверхности тела млекопитающего (213) посредством фиксирующего элемента (210), и где показана верхняя сторона расширяющегося слоя (212);
фиг. 3 показывает один вариант осуществления в соответствии с настоящим изобретением. На фиг. 3 а устройство (300) для горизонтального проточного анализа с корпусом (310) показано вместе с отдельной вставкой (200) и покрытием (312) подушки образца в открытом положении, показывающим порт (313) для образца, обеспечивающий добавление жидкости для проявления устройства с горизонтальным потоком, и окно (311) реакции, обеспечивающее визуальное обнаружение реакций в зоне обнаружения и индикаторной зоне. Фиг. 3b показывает вид поперечного сечения варианта осуществления настоящего изобретения, где корпус (310) устройства для горизонтального проточного анализа содержит отдельную вставку (200) в местоположении подушки (101) образца с покрытием (312) подушки образца в закрытом положении, показывающим порт (313) для образца. Отдельная вставка находится в сообщении по текучей среде с пористой опорой (309), которая находится в сообщении по текучей среде с подушкой (302) конъюгата, снова в сообщении по текучей среде с пористой мембраной (307), которая имеет иммобилизованные зону обнаружения и индикаторную зону (105, 106, не показаны) и впитывающую подушку (304). Окончательно, окно (311) реакции обеспечивает визуальный осмотр области обнаружения ("DA");
фиг. 4 показывает вариант осуществления в соответствии с настоящим изобретением. На фиг. 4а устройство (400) для горизонтального проточного анализа с корпусом (410) показано вместе с отдельной вставкой (411) и портом (413) для образца, обеспечивающим добавление жидкости для проявления устройства с горизонтальным потоком. Фиг. 4b показывает вид поперечного сечения устройства (400) для горизонтального проточного анализа в соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения, где корпус (410) устройства для горизонтального проточного анализа содержит отдельную вставку (411), вставляемую в положении области обнаружения ("DA"). Показаны подушка (401) образца, порт (413) для образца и впитывающая подушка (404), и как только отдельная вставка (411) полностью вставлена, она будет обеспечивать соединение по текучей среде подушки образца с впитывающей подушкой (404) через отдельную вставку (411). Фиг. 4с показывает устройство (400) для горизонтального проточного анализа, где отдельная вставка является полностью вставленной. Показаны зона (405) обнаружения и индикаторная зона (406). Фиг. 4d показывает вид поперечного сечения устройства (400) для горизонтального проточного анализа в соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения, где отдельная вставка (411) является полностью установленной, и, где подушка (401) образца, отдельная вставка (411) с зоной (405) обнаружения и индикаторной зоной (406) находятся в сообщении по текучей среде с впитывающей подушкой (404);
фиг. 5 показывает виды в перспективе различных вариантов осуществления настоящего изобретения, полоски (500) для горизонтального проточного анализа. На фиг. 5а полоска (500) горизонтального потока показана вместе с подушкой (501) образца, подушкой (502) конъюгата, зоной (505) обнаружения и индикаторной зоной (506), причем обе зоны иммобилизованы на пористой опоре (507), впитывающей подушкой (504) и, по выбору, материалом подложки (508). "L" показывает направление горизонтального потока, а область "DA" определяет область обнаружения. Фиг. 5b иллюстрирует полоску горизонтального потока, где зона (505) обнаружения и индикаторная зона (506), иммобилизованные на пористой опоре (507), отсоединены от оставшейся полоски горизонтального потока;
фиг. 6 показывает чувствительность устройства для горизонтального проточного анализа в соответствии с примером 1, где на фиг. 6а были проанализированы различные концентрации анализируемых веществ, добавленных непосредственно на подушки образца. Контроли (слева) и анализируемые вещества (справа) показывают, что уровень визуального обнаружения при обнаружении IL-8 равен приблизительно 1 нг/мл, и что уровень визуального обнаружения hBD-1 равен приблизительно 0,25 нг/мл. Фиг. 6b показывает, что с использованием подушки образца, помещаемой на коже, IL-8 и hBD-1 могут быть об
наружены на поверхности кожи;
фиг. 7 показывает чувствительность устройства для горизонтального проточного анализа в соответствии с примером 2, где на фиг. 7а проанализированы различные концентрации анализируемых веществ, добавленных непосредственно в область (DA) обнаружения. Контроли (справа) и анализируемые вещества (слева) показывают, что уровень визуального обнаружения при обнаружении IL-8 равен приблизительно 1 нг/мл, и что уровень визуального обнаружения hBD-1 равен приблизительно 0,25 нг/мл. Фиг. 7b показывает, что с использованием области (DA) обнаружения в качестве "области отбора образцов" анализируемые вещества hBD-1 и IL-8 могут быть обнаружены на поверхности кожи.
Рядовой специалист в данной области сможет понять, принимая во внимание эффект данного раскрытия, что некоторые признаки, показанные на фиг. 1-5, не обязательно изображены в масштабе. Размеры и характеристики некоторых признаков на чертежах могут быть укрупнены, искажены или изменены относительно других признаков на фигурах, чтобы способствовать лучшему пониманию иллюстративных примеров, раскрытых в данном документе.
Рядовой специалист в данной области сможет дополнительно понять, что отдельные признаки чертежей могут быть взаимозаменяемыми, чтобы получить дополнительные варианты осуществления.
Подробное описание изобретения
При описании вариантов осуществления изобретения для полной ясности будет использоваться специальная терминология. Однако подразумевается, что изобретение не ограничивается специальными терминами, выбранными таким образом, и понимают, что каждый особый термин включает все технические эквиваленты, которые используют аналогичным образом для достижения аналогичной цели.
Аналитические тесты на опоре горизонтального проточного анализа могут использоваться в устройствах на месте предоставления медицинских услуг для обнаружения присутствия или отсутствия одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце. Считывание данных может проводиться визуально, т.е. присутствие или отсутствие одного или нескольких окрашенных тестовых линий, также именуемых тестовыми полосками, в зоне (105) обнаружения, и подтверждение/проверка корректности теста могут выполняться по присутствию и/или отсутствию одной или нескольких окрашенных индикаторных линий/полосок в индикаторной зоне (106). Тест может быть качественным (на присутствие или отсутствие), а также количественным, и обнаружению/количественному определению может содействовать оборудование для считывания данных, или может проводиться чисто визуальное обнаружение посредством глаз пользователя устройства для горизонтального проточного анализа. По желанию, считывающее устройство, такое как оптическое считывающее устройство, может применяться в некоторых вариантах осуществления для измерения интенсивности зондов.
Действительная конфигурация и структура оптического считывающего устройства могут обычно варьироваться в зависимости от зондов, которые подлежат измерению. Например, методы оптического обнаружения, которые могут использоваться, включают, но не ограничены перечисленными, люминесценцию (например, флуоресценцию, фосфоресценцию и т.д.), поглощение (например, флуоресцентное или нефлуоресцентное), дифракцию и т.д. Качественное, количественное или полуколичественное определение присутствия или концентрации анализируемого вещества может достигаться в соответствии с настоящим изобретением. Например, количество анализируемого вещества может быть количественно или полуколичественно определяться посредством использования интенсивностей сигналов, производимых зондами для обнаружения, связанными в зоне (105) обнаружения и индикаторной зоне (106).
Аналитические тесты с горизонтальным протоком могут быть основаны на капиллярном русле (таком как пористая бумага или спекаемый полимер), или в большинстве случаев они могут быть основаны на ряде из капиллярных русел, находящихся в сообщении по текучей среде друг с другом. Капиллярные русла обладают способностью перемещать текучую среду под действием капиллярных сил. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство для горизонтального проточного анализа выполняют таким, чтобы образовать капиллярное русло.
Первый элемент, подушка (101) для образца, действует как губка и удерживает тестируемый образец. Как только он впитывается, тестируемый образец, содержащий одно или несколько тестируемых анализируемых веществ, будет мигрировать к подушке (102) конъюгата, которая содержит одну или несколько индикаторных аффинных молекул, таких как аффинные молекулы, меченных зондом для обнаружения, разработанным для связывания с одним или несколькими из тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце. Тестируемый образец и одну или несколько аффинных молекул смешивают, и одна или несколько аффинных молекул, имеющих сродство к одному или нескольким тестируемым анализируемым веществам в тестируемом образце, будут связываться друг с другом, в то же время, мигрируя далее к области (DA) обнаружения, которая может содержать зону (105) обнаружения, и может содержать индикаторную зону (106), которые обе имеют одну или несколько полосок, где был иммобилизован еще один набор одной или нескольких аффинных молекул. К тому времени, когда тестируемый образец, смешанный с аффинными молекулами из подушки конъюгата, достигает области (DA) обнаружения, одно или несколько анализируемых веществ в тестируемом образце будут связаны с аффинными молекулами из подушки конъюгата. Данный комплекс будет, в свою очередь, связан аффинными молекулами на полоске (полосках) в зоне (105) обнаружения. Через некоторое время, когда все больше и
больше текучей среды пройдет зону обнаружения, зонды для обнаружения накапливаются, и полоска изменяет цвет. Зонды для обнаружения могут, например, являться частицами золота или латексными частицами, конъюгированными с аффинными молекулами, для получения аффинных молекул, меченных зондами для обнаружения. Область (DA) обнаружения может также содержать индикаторную зону (106), которая может функционировать в качестве контроля для верификации того, что горизонтальный проточный анализ был проведен должным образом. Такая индикаторная зона (106) может также содержать одну или несколько полосок с иммобилизованными аффинными молекулами, которые связываются только с аффинными молекулами, меченными зондами для обнаружения из подушки конъюгата, в то время как аффинные молекулы в зоне (105) обнаружения связываются с комплексом между анализируемыми веществом (веществами) и индикаторными аффинными молекулами, такими как аффинные молекулы, меченные зондами для обнаружения из подушки конъюгата. После прохождения области (DA) обнаружения текучая среда поступает во впитывающую подушку (104), которая обычно принимает текучую среду, которая мигрировала через целое капиллярное русло (101, 102, DA, 104 - также представлены 107). Впитывающая подушка может способствовать инициации капиллярного действия и потоку текучей среды из подушки (101) образца, подушки (102) конъюгата через область (DA) обнаружения.
Полоска для горизонтального проточного анализа может по выбору содержать защитный слой (108) и/или корпус (310, 410), который является непроницаемым для жидкости, так что текучая среда, протекающая через полоску для горизонтального проточного анализа, не просачивается через защитный слой (108). Примеры подходящих материалов для опоры включают стекло; полимерные материалы, такие как полистирол, полипропилен, сложный полиэфир, полибутадиен, поливинилхлорид, полиамид, поликарбонат, эпоксиды, метакрилаты и полимеламин, но не ограничены ими.
Зона (105) обнаружения может быть расположена по потоку до или после индикаторной зоны (106). Линии или полоски в зоне обнаружения или индикаторной зоне могут располагаться в направлении, которое, по существу, является перпендикулярным потоку тестируемого образца. В некоторых вариантах осуществления линии могут иметь направление, которое, по существу, является параллельным потоку тестируемого образца. Линии или полоски в зоне (105) обнаружения или индикаторной зоне (106) не обязательно являются линиями или полосками и могут также иметь другие формы, такие как, например, точки или узоры.
В одном аспекте настоящего изобретения предоставлен диагностический набор для определения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности тела млекопитающего, причем диагностический набор содержит отдельную вставку (200, 411) для устройства с горизонтальным потоком, содержащую мембрану (201), которая может быть прикреплена к жесткой опоре (202), отдельная вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца; устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью размещения отдельной вставки (200, 411); и фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности тела млекопитающего (213).
В целом, настоящее изобретение направлено на диагностический набор, который предоставляет интегрированную систему для обнаружения присутствия или отсутствия одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, в пределах широкого интервала возможных концентраций одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ. В некоторых вариантах осуществления количество одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ также обнаруживают при количественном анализе. В диагностическом наборе используют устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа и отдельную вставку (200, 411) и один или несколько аналитических реагентов для обнаружения одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце. Аналитические реагенты включают аффинные молекулы, меченные зондами для обнаружения, которые способны производить сигнал обнаружения, представляющий присутствие или количество одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце. Один путь количественной оценки одного или нескольких из тестируемых анализируемых веществ заключается в получении подходящих стандартных кривых с использованием известных концентраций одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одно или несколько тестируемых анализируемых веществ выбирают из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на поверхности тела млекопитающего, такой как кожа млекопитающего. Специфичные тестируемые анализируемые вещества могут включать одно или несколько, выбранных из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.
Настоящее изобретение подходит для обнаружения любой молекулы, которая присутствует на коже млекопитающего, которая может представлять хемокины, интерлейкины, факторы роста, гормоны или ферменты. Аналогично, настоящее изобретение также является подходящим для обнаружения лекарственных средств, а также их метаболитов, в случаях, когда они экскретируются на коже млекопитающего. Это обнаружение лекарственных средств охватывает как лекарственные средства, взятые для медицинских и/или косметических целей, а также лекарственные средства, взятые для оздоровительных целей.
Тестируемый образец отбирают с поверхности тела млекопитающего, используя отдельную вставку для устройства с горизонтальным потоком. Отдельная вставка содержит мембрану (201), которая может быть прикреплена к жесткой опоре (202).
Жесткая опора (202) может применяться для стабилизации мембраны (201) таким образом, чтобы она не сгибалась или складывалась, и может применяться для упрощения манипуляций с отдельной вставкой, позволяя ей входить, или встать на свое место в устройстве (300) для горизонтального проточного анализа, таким образом, как, например, посредством завинчивания на место. В некоторых вариантах осуществления жесткая опора покрывает периметр мембраны, таким образом, как, например, показано на фиг. 2.
Мембрана выполнена возможностью получения тестируемого образца, что означает, что мембрана должна быть способной к поглощению тестируемого образца, и подходящим может быть любой материал, способный к этому действию. Материалы, используемые для мембраны, могут включать, но не ограничены перечисленными, природные, синтетические или природного происхождения материалы, которые синтетически модифицируют, такие как полисахариды (например, целлюлозные материалы, такие как бумага и производные целлюлозы, такие как ацетат целлюлозы и нитроцеллюлоза), полиэфирсуль-фон, полиэтилен, найлон, поливинилиденфторид (PVDF), сложный полиэфир, полипропилен, хлопок или ткань. В некоторых вариантах осуществления мембрана является неадгезивной, что будет минимизировать количество клеток кожи, переносимых на мембрану. Материалы, применяемые для жесткой опоры, могут включать, но не ограничены перечисленными, пластические материалы, композиты, металлы или металлические сплавы.
Мембрана может быть листовидной. Мембрана может иметь толщину, равную или меньше чем 4 мм (такую как меньше чем 4, 3, 2, 1 мм), и как ширину, так и длину, превышающие толщину. В некоторых вариантах осуществления как ширина, так и длина мембраны являются большими (например, в 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50 раз больше или до 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50 раз больше), чем толщина. В некоторых вариантах осуществления мембрана представляет собой предмет четырехугольной формы, такой как прямоугольник, и в некоторых вариантах осуществления мембрана является круглой. Если мембрана имеет неправильную форму, т.е. отличную от квадрата или прямоугольника, тогда ширина, длина и толщина относятся к максимальным значениям для такой неправильной формы. Например, шириной круга будет являться диаметр. Примерами значений ширины и длины могут быть 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40 мм, такие как, например, в интервале значений ширины и длины от 5-30 мм.
Тестируемый образец берут с поверхности тела млекопитающего, и он содержит один или несколько тестируемых анализируемых веществ. Тестируемый образец получают посредством диффузии образца с поверхности тела млекопитающего к мембране. Отбору образцов может способствовать увлажнение мембраны фиксированным объемом текучей среды, либо в то время, как ее прикрепляют к участку отбора образцов на поверхности тела, или перед тем, как ее прикрепляют к участку отбора образцов на поверхности тела.
В некоторых вариантах осуществления мембрана является водопроницаемой со стороны, противоположной поверхности кожи, для прикрепления к которой выполняется мембрана. Данное может сделать возможным увлажнение мембраны фиксированным объемом текучей среды во время ее прикрепления, а также может обеспечить добавление жидкости для проявления устройства с горизонтальным потоком, когда, например, мембрана функционирует в качестве части зоны элюции, как показано на фиг. 3, т.е. это делает возможным увлажнение мембраны со стороны, противоположной поверхности кожи, для прикрепления к которой мембрану создают.
В предпочтительных вариантах осуществления поверхностью тела является кожа, такая как кожа тела человека, и в предпочтительных вариантах осуществления млекопитающее представляет собой тело человека.
После того как тестируемый образец перенесен на мембрану, отдельную вставку затем устанавливают в устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью размещения отдельной вставки (200, 411).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство с горизонтальным потоком выполнено с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, где устройство (100, 500) с горизонтальным потоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102, 502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения устройство с горизонтальным потоком выполняют имеющим направление горизонтального потока (L), по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны. Фраза "по существу, вдоль плоскости" охватывает как примыкание, а также перекрывание, такое как частичное перекрывание мембраны, с другими элементами устройства с горизонтальным потоком (см., например, фиг. 1, где элементы (101, 102, 107, 104) устройства с горизонтальным потоком являются изображенными как примыкающие; см., например, фиг. 3b, где отдельная вставка (200) частично перекрывается с пористой опорой (309), подушкой (302) конъюгата,
пористой мембраной (307) и впитывающей подушкой (304). В случае, если пористая опора (309) полностью перекрывается с отдельной вставкой (200), направление горизонтального потока (L) от подушки образца к области (DA) обнаружения будет все еще ориентировано, по существу, в направлении плоскости, создаваемой шириной и длиной мембраны, в противоположность перпендикуляру к данной плоскости.
Существует много возможностей для стыковки отдельной вставки с устройством с горизонтальным потоком, и в предпочтительных вариантах осуществления мембранную часть вставки подготавливают таким образом, что она будет входить в то же самое место устройства для горизонтального проточного анализа, таким образом увеличивая воспроизводимость. Одним путем многократного помещения мембранной части вставки в то же самое положение является прикрепление мембраны к жесткой опоре.
Когда желательно получение тестируемого образца воспроизводимым и однотипным образом с конкретного участка на поверхности тела, вставку прикрепляют с возможностью последующего удаления к поверхности тела, предпочтительно с использованием фиксирующего элемента (210). Посредством съемного прикрепления вставки к поверхности тела становится возможным взять образец с конкретной области, определяемой размером мембраны вставки, в течение конкретного периода времени. Это является преимущественным, когда желательно сравнить уровни конкретных тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом, например, с поврежденной области кожи, с конкретными тестируемыми анализируемыми веществами в тестируемом образце, взятом, например, со здоровой или неповрежденной области кожи воспроизводимым образом, где образец берут с области кожи одинакового размера в течение одинаковой продолжительности времени. Съемное прикрепление вставки предоставляет преимущества по сравнению с взятием мазка с области с использованием элемента мазка, так как взятие мазка проводят с менее точно определенной области и невоспроизводимо, когда имеет место вариация от образца к образцу, что означает, что становится трудным получить тестируемый образец, например, с неповрежденной кожи, используя взятие мазка с таким же размером образца, как у тестируемого образца, полученного взятием мазка с поврежденной области кожи. Следовательно, съемное прикрепление исключает взятие мазка.
Одним примером поврежденной кожи может быть воспаленная кожа, и одним примером неповрежденной кожи может быть невоспаленная кожа, например поврежденная псориатическая кожа и неповрежденная псориатическая кожа.
В некоторых вариантах осуществления фиксирующий элемент представляет собой полоску клейкого вещества.
Когда желательно улучшить воспроизводимость и однотипность при получении тестируемого образца, фиксирующий элемент (210) может содержать расширяющийся слой (212), выполненный с возможностью приложения давления к отдельной вставке (200, 411), таким образом прижимая отдельную вставку (200, 411) к поверхности тела млекопитающего (213). Одним путем выполнения расширяющегося слоя, чтобы оказывать давление на отдельную вставку, является помещение его между отдельной вставкой и фиксирующим элементом. Расширяющийся слой (212) представляет собой слой, который может расширяться, таким образом, чтобы оказывать давление на мембрану (201) отдельной вставки (200, 411). Примерами расширяющегося слоя являются надувной материал, такой как надувной мешок, устройство пружинного типа или способный к набуханию материал. В некоторых вариантах осуществления материал представляет собой сжатую целлюлозу, которая будет набухать при контакте с жидкостью, такой как водный раствор, таким образом, оказывая давление на мембрану (201), которая будет плотно прижиматься к коже млекопитающего. Можно видеть из таблицы в примере 3, что среднеквадра-тическое отклонение при получении образца с поверхности кожи с использованием отдельной вставки с расширяющимся слоем улучшается по сравнению с неиспользованием расширяющегося слоя. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения расширяющийся слой не находится в сообщении по текучей среде с отдельной вставкой (200, 411), так как может существовать некоторый риск переноса части тестируемого образца на расширяющийся слой, если расширяющийся слой изготовлен из, например, сжатой целлюлозы, находящейся в сообщении по текучей среде с мембраной. В некотором варианте осуществления существует инертный защитный слой между расширяющимся слоем и мембраной, который не даст возможности тестируемому образцу диффундировать в расширяющийся слой.
Соответственно в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предоставлена вставка (200, 411) для устройства для горизонтального проточного анализа, содержащая мембрану (201), прикрепленную к рамке жесткой опоры (202), причем отдельную вставку выполняют с возможностью получения тестируемого образца с поверхности тела млекопитающего (213), и в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вставку, дополнительно содержащую фиксирующий элемент (210), выполняют с возможностью съемного прикрепления вставки к поверхности тела млекопитающего
(213).
Уже описанные варианты осуществления были описаны со ссылкой на вариант осуществления настоящего изобретения устройства для горизонтального проточного анализа, содержащего зону (101) элюции, и область (DA) обнаружения, где отдельная вставка представляет собой зону (101) элюции. Это означает, что отдельная вставка приспособлена для установки в зону элюции или область образца.
Однако настоящее изобретение также охватывает варианты осуществления устройства для горизонтального проточного анализа, содержащего зону (501) элюции и область (DA) обнаружения, где отдельная вставка представляет собой область (DA) обнаружения. Это означает, что отдельная вставка приспособлена для установки в зону обнаружения, которая может содержать зону (505) обнаружения, имеющую иммобилизованные одну или несколько аффинных молекул. Данный вариант является модифицированным путем обеспечения горизонтального проточного анализа, в том, что одно или несколько тестируемых анализируемых веществ будут уже связанными с иммобилизованными аффинными молекулами, после того, как отдельную вставку помещают в устройство для горизонтального проточного анализа.
В данном варианте осуществления, где отдельная вставка представляет собой область (DA) обнаружения, устройство для горизонтального проточного анализа будет функционировать слегка отличным образом, в том, что одно или несколько тестируемых анализируемых веществ уже будут связанными с аффинными молекулами, иммобилизованными в зоне (405) обнаружения, когда тестируемый образец получают с поверхности тела млекопитающего. Проявление горизонтального проточного анализа посредством добавления текучей среды на подушку (401) образца будет затем транспортировать аффинные молекулы, меченные зондами для обнаружения, из подушки конъюгата над областью (DA) обнаружения, и они будут связываться с одной или несколькими тестируемыми анализируемыми веществами, уже связанными с аффинными молекулами, иммобилизованными в зоне обнаружения, таким образом обнаруживая присутствие или количество одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения область (DA) обнаружения содержит зону (105, 505) обнаружения, содержащую одну или несколько аффинных молекул для селективного удерживания одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ, и, по выбору, индикаторную зону (106, 506), содержащую одну или несколько аффинных молекул для селективного удерживания одной или нескольких индикаторных аффинных молекул, таких как аффинные молекулы, меченные зондами для обнаружения, из подушки конъюгата.
Аффинные молекулы представляют собой молекулы, которые в основном связываются с одним или несколькими анализируемыми веществами, таким образом селективно удерживая такие анализируемые вещества, представляющие интерес. Аффинные молекулы в общем случае представляют собой молекулы, которые имеют более высокое сродство к конкретному анализируемому веществу или классу анализируемых веществ, чем другие анализируемые вещества. Наиболее характерными примерами таких молекул являются антитела (поликлональные и/или моноклональные и их фрагменты), аптамеры и рецепторы, а также другие сконструированные белковые матрицы, известные как AdNectin, Affibody, Anticalin, Knottin, DARPin и Kunitz, а также органические и/или полимерные матрицы.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предоставлен способ обнаружения наличия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ, причем согласно способу
съемно прикрепляют к поверхности тела млекопитающего отдельную вставку (200, 411) для устройства с горизонтальным потоком, содержащую мембрану (201), прикрепленную к жесткой опоре (202), причем отдельную вставку выполняют с возможностью получения тестируемого образца;
оставляют мембрану отдельной вставки (200) на поверхности тела млекопитающего (213) по меньшей мере на 5 мин или в течение периода времени, заканчивающегося, когда получено достаточное количество тестируемого образца;
фиксируют отдельную вставку, содержащую тестируемый образец в устройстве (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненном с возможностью размещения отдельной вставки;
проявляют устройство для горизонтального проточного анализа.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отдельную вставку (200, 411) съемно прикрепляют к поверхности тела посредством фиксирующего элемента (210), выполненного с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности тела млекопитающего (213), причем фиксирующий элемент содержит расширяющийся слой (212), который активируется между стадиями а) и b), таким образом создавая усилие, прижимающее отдельную вставку к поверхности тела.
Мембранный слой отдельной вставки будет прикреплен к коже в течение периода отбора образцов, который заканчивается, когда получено достаточное количество тестируемого образца. В некоторых случаях будет достаточным иметь мембранный слой, прикрепленный к коже, по меньшей мере, на 1 мин, например по меньшей мере 5 мин, по меньшей мере 10 мин, по меньшей мере 15 мин, по меньшей мере 20 мин, по меньшей мере 30 мин, по меньшей мере 40 мин, по меньшей мере 50 мин, по меньшей мере 60 мин, например до 5 мин, до 10 мин, до 15 мин, до 20 мин, до 30 мин, до 40 мин, до 50 мин, до 60 мин, например до 24 ч. Желательно выдерживать как можно более короткое время отбора образцов, так как это обеспечивает более быстрое обнаружение. Предусмотрено, что настоящий способ отбора образцов должен быть достаточно чувствительным, чтобы обеспечить время отбора образцов, где мембрану прикрепляют к коже или она находится в сообщении с возможностью переноса текучей среды с кожей, между 1 и 30 мин, в частности между 15 и 30 мин.
При описании вариантов осуществления настоящего изобретения комбинации и перестановки всех возможных вариантов осуществления не были описаны явным образом. Тем не менее, простой факт того,
что некоторые меры изложены во взаимно различных зависимых пунктах формулы изобретения или описаны в различных вариантах осуществления, не означает, что комбинация этих мер не может использоваться преимущественно. Настоящее изобретение предусматривает все возможные комбинации и перестановки описанных вариантов осуществления.
Авторы изобретения подразумевают, что термины "содержащий", "содержат" и "содержит" в данном документе являются необязательно заменяемыми на термины "состоящие из", "состоят из" и "состоит из" соответственно в каждом случае.
Примеры
Пример 1. Обнаружение IL-8 и hBD-1 с использованием устройства в соответствии с фиг. 3.
Данный пример показывает, что отдельная вставка подушки (200) образца, отделенная от устройства (300) для горизонтального проточного анализа, может применяться при горизонтальном проточном анализе (фиг. 3) для обнаружения IL-8 и hBD-1 с человеческой кожи.
Материалы.
Захватывающие антитела:
100 мкг/мл в lxPBS: Кроличьи против-Человеческого BD-1, и Козьи против-Человеческого CXCL8/IL-8
Идентифицирующие антитела:
Конъюгированные с 40 нм коллоидным золотом при 10мкг/мл: Кроличьи против-Человеческого BD-1, и Мышиные против-Человеческого CXCL8/IL-8
Антигены:
Различные уровни 0-50 нг/мл в подвижном буфере
Рекомбинантный человеческий BD-1, и Рекомбинантный человеческий CXCL8/IL-8
Подвижный буфер:
25 мМ Трис, 1% Триполифиосфата пентанатрия, 0,1% Азида натрия, 0,1% Тритона Х-405, 2 мМ ЭДТК, 0,5% Казеина натрия, рН 8,0
Аналитическая мембрана (3 07) :
Sartorius CN140, с захватывающими антителами, блокированными блокирующим
буфером: 10 мМ Фосфата натрия, 0,1% Сахарозы, 0,1% БСА, 0,2% ПВП-40, рН 7,2
Впитывающая подушка (304, 104) :
Millipore С095
Подушка (302, 102) конъюгата:
Millipore G041, Блокирующий буфер: 10 мМ Бората, 3% БСА, 1% ПВП-40, 0,25% Тритон Х-100, рН 8,0
Подушка (200) образца (подушка для сбора):
Millipore G041
Калибровка чувствительности теста.
Анализируемые вещества IL-8 и hBD1 разбавляли в подвижном буфере до концентраций 0,25, 1 и 25 нг/мл и применяли для определения чувствительности для данного конкретного набора (фиг. 6а). Для тестирования анализируемые вещества добавляли на подушку образца (50 мкл) после сборки кассеты для анализа и добавления 100 мкл подвижного буфера.
Полоски горизонтального потока фиг. 6а показывают, что уровень визуального обнаружения IL-8 равен приблизительно 1 нг/мл, и что уровень визуального обнаружения hBD-1 равен приблизительно 0,25 нг/мл.
Для анализа IL-8 и hBD-1 с кожи подушку (200) образца смачивали 25 мкл воды milliQ и помещали в контакт с областью повреждения кожи с контактным дерматитом в течение 15 мин, вставляли в кассету (310) для горизонтального проточного анализа и проявляли посредством добавления 100 мкл подвижного буфера.
Полоска горизонтального потока показана на фиг. 6b где можно видеть, что IL-8 и hBD-1 (справа) могут быть обнаружены из образца, полученного с поверхности кожи. Показаны контроли (слева).
Пример 2. Обнаружение IL-8 и hBD-1 с использованием устройства в соответствии с фиг. 4.
Данный пример показывает, что отдельная вставка области (411, 507) обнаружения, отделенная от устройства (400) для горизонтального проточного анализа, может применяться при горизонтальном проточном анализе для обнаружения IL-8 и hBD-1 с человеческой кожи.
Материалы.
Захватывающие антитела:
100 мкг/мл in lxPBS: Кроличьи против-Человеческого BD-1, и Козьи против-Человеческого CXCL8/IL-8
Идентифицирующие антитела:
Конъюгированные с 40 нм Коллоидным золотом при 10 мкг/мл: Кроличьи против-Человеческого BD-1, и Мышиные против-Человеческого CXCL8/IL-8
Антигены:
Различные уровни 0-50 нг/мл в подвижном буфере
Рекомбинантный человеческий BD-1, и Рекомбинантный человеческий CXCL8/IL-8
Подвижный буфер:
25 мМ Трис, 1% Триполифиосфата пентанатрия, 0,1% Азида натрия, 0,1% Тритона Х-405, 2 мМ ЭДТК, 0,5% Казеина натрия, рН 8,0
Аналитическая мембрана (411, 507) :
Sartorius CN140, с захватывающими антителами, блокированными блокирующим
буфером: 10 мМ Фосфата натрия, 0,1% Сахарозы, 0,1% БСА, 0,2% ПВП-40, рН 7,2
Впитывающая подушка (404, 504) :
Millipore С095
Подушка (502) конъюгата:
Millipore G041, Блокирующий буфер: 10 мМ Бората, 3% БСА, 1% ПВП-40, 0,25% Тритона Х-100, рН 8, 0
Подушка (401, 501) образца (зона элюции):
Millipore G041
Калибровка чувствительности теста.
Анализируемые вещества IL-8 и hBD1 разбавляли в подвижном буфере до концентраций 0,25, 1 и 25 нг/мл и применяли для определения чувствительности для данного конкретного набора (фиг. 7а). Для тестирования анализируемые вещества добавляли на мембрану зоны обнаружения (50 мкл) после сборки кассеты для анализа и добавления 100 мкл подвижного буфера.
Полоски горизонтального потока фиг. 7а показывают, что уровень визуального обнаружения IL-8 равен приблизительно 1 нг/мл, и что уровень визуального обнаружения hBD-1 равен приблизительно 0,25 нг/мл.
Для анализа IL-8 и hBD-1 с кожи область (411, 507) обнаружения смачивали 25 мкл воды milliQ и помещали в контакт с областью повреждения кожи с контактным дерматитом в течение 15 мин, вставляли в кассету (410) для горизонтального проточного анализа и проявляли посредством добавления 100 мкл подвижного буфера.
Полоска горизонтального потока показана на фиг. 7b, где можно видеть, что IL-8 и hBD-1 (слева) могут быть обнаружены из образца, полученного с поверхности кожи. Показаны контроли (справа). Пример 3. Пример, показывающий эффект расширяющегося слоя (212).
Тестировали эффект расширяющегося слоя на стадии отбора образцов. Можно видеть, что стабильные и надежные результаты анализа кожи получают с использованием конфигурации подушки образца для устройства с горизонтальным потоком (фиг. 1, 2 и 3) для обнаружения IL-8 и hBD-1 с человеческой кожи.
Материалы.
Захватывающие антитела:
100мкг/мл в lxPBS: Кроличьи против-Человеческого BD-1, и Козьи против-Человеческого CXCL8/IL-8
Идентифицирующие антитела:
Конъюгированные с 4 0 нм Коллоидным золотом при 10мкг/мл: Кроличьи против-Человеческого BD-1, и Мышиные против-Человеческого CXCL8/IL-8
Антигены:
Различные уровни 0-50 нг/мл в подвижном буфере
Рекомбинантный человеческий BD-1 и Рекомбинантный человеческий CXCL8/IL-8
Подвижный буфер:
25 мМ Трис, 1% Триполифиосфата пентанатрия, 0,1% Азида натрия, 0,1% Тритона Х-405, 2 мМ ЭДТК, 0,5% Казеина натрия, рН 8,0
Аналитическая мембрана (3 07) :
Sartorius CN140, с захватывающими антителами, блокированными блокирующим
буфером: 10 мМ Фосфата натрия, 0,1% Сахарозы, 0,1% БСА, 0,2% ПВП-40, рН 7,2
Впитывающая подушка (304, 104) :
Millipore С095
Подушка (302, 102) конъюгата:
Millipore G041, Блокирующий буфер: 10 мМ Бората, 3% БСА, 1% ПВП-40, 0,25% Тритон Х-100, рН 8,0
Подушка (201) образца (подушка для сбора):
Millipore G041
Считывающее устройство для
полоски горизонтального
потока:
Считывающее устройство ESE, ID: ESLF34-МВ-4501, SN: Р0082 (Qiagen)
Р а сшир яющий с я слой/мембрана (212)
1/4'' сжатая целлюлозная губка, Industrial Commercial Supply
Сравнение результатов анализа, полученных с использованием подушки образца с расширяющимся слоем и без него, показывает что расширяющийся слой улучшает воспроизводимость и качество результатов анализа, что очевидно из приведенной ниже табл. 1.
Таблица показывает эффект расширяющегося слоя на уровень обнаружения и вариацию результатов анализа кожи. Каждую из подушек образца с расширяющимся материалом и без него (в подушках образца без расширяющегося материала, расширяющийся материал заменяли на нерасширяющийся материал), имеющую два различных типа захватывающих антител, IL-8 и hBD-1, смачивали водой mQ (150 мкл) после закрепления, с возможностью последующего удаления, на 4 индивидуумах, причем каждый индивидуум был проанализирован с использованием 3 пластырей. Подушки образца подвергали воздействию в течение 15 мин на области кожи с контактным дерматитом после идентичной обработки. Уровень анализируемых веществ количественно определяли с использованием стандартных кривых и считывающего устройства для полосок горизонтального потока. Рассчитывали среднюю концентрацию, среднеквадратическое отклонение и среднеквадратическое отклонение в %.
Подушка образца с расширяющимся материалом
Среднее значение концентрации IL-8 (нг/мл) из 3 подушек образца
Среднеквадратическое отклонение в %
Субъект № 1
3,5+0,2
5, 7%
Субъект № 2
8,6±0,5
5, 8%
Субъект № 3
13,0±0,8
б, 1%
Субъект № 4
7,7±0,5
б, 4%
Среднее значение концентрации hBD-1 (нг/мл) из 3 подушек образца
Субъект № 1
12,5±0,3
2,4%
Субъект № 2
15,0±0,5
3,3%
Субъект № 3
9,8±0,4
4,1%
Субъект № 4
17,5±0,6
3,4%
Подушка образца без
расширяющегося материала
Среднее значение концентрации IL-8 (нг/мл) из 3 подушек образца
Среднеквадратическое отклонение в %
Субъект № 1
2,4±0,9
37, 5%
Субъект № 2
3, 6+1,4
38,9%
Субъект № 3
9,б±5,1
53, 1%
Субъект № 4
3,1±1,8
58, 1%
Среднее значение концентрации hBD-1 (нг/мл) из 3 подушек образца
Субъект № 1
6,9±0,9
13, 0%
Субъект № 2
3,7±1,9
51, 4%
Субъект № 3
4,1±1,б
39, 0%
Субъект № 4
11,3±5,8
51, 3%
Из табличных данных можно видеть, что устройства с расширяющимся слоем в подушке образца приводили к существенно более высокому значения анализируемых веществ и приводили к значительно более низкому среднеквадратическому отклонению и среднеквадратическому отклонению в % по сравнению с подушками образца без расширяющегося материала.
Данная более высокая чувствительность и более низкая вариация данных анализа от устройств с расширяющимся слоем относится к плотному и однотипному контакту материала подушки образца с кожей вследствие постоянного давления, создаваемого расширяющимся слоем.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Вставка (200, 411) для устройства для горизонтального проточного анализа, содержащая мембрану (201), имеющую толщину, ширину и длину, прикрепленную к рамке жесткой опоры (202), причем вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца с поверхности кожи млекопитающего (213), при этом рамка жесткой опоры покрывает периметр мембраны, и при этом мембрана является водопроницаемой со стороны, противоположной поверхности кожи, для крепления к которой мембрана предназначена.
2. Вставка по п.1, в которой мембрана имеет толщину, равную или менее 4 мм, и как ширину, так и длину, превышающие толщину.
3. Вставка по любому из пп.1 и 2, дополнительно содержащая фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления вставки к поверхности кожи млекопитающего (213).
4. Вставка по любому из пп.1-3, в которой вставка является областью (DA) обнаружения устройства для горизонтального проточного анализа, содержащей зону обнаружения (105, 505), содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ.
5. Вставка по любому из пп.1-4, в которой одно или более тестируемых анализируемых веществ выбраны из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.
6. Диагностический набор для определения присутствия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ в тестируемом образце, взятом с поверхности кожи млекопитающего, содержащий:
a) отдельную вставку (200, 411) по любому из пп.1-5 для устройства с горизонтальным потоком, причем отдельная вставка выполнена с возможностью получения тестируемого образца,
b) устройство (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненное с возможностью
размещения отдельной вставки (200, 411),
c) фиксирующий элемент (210), выполненный с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности кожи млекопитающего (213).
7. Диагностический набор по п.6, в котором устройство для горизонтального протока выполнено с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство (100, 500) с горизонтальным протоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102, 502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).
8. Диагностический набор по пп.6 и 7, в котором мембрана имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширина, так и длина превышают толщину, причем устройство с горизонтальным протоком выполнено имеющим направление (L) горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.
9. Диагностический набор по любому из пп.6-8, в котором фиксирующий элемент (210) содержит расширяющийся слой (212), выполненный с возможностью приложения давления к отдельной вставке (200, 411), тем самым прижимая отдельную вставку (200, 411) к поверхности кожи млекопитающего
(213).
10. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является зоной (101) элюции, а не областью (DA) обнаружения.
11. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором устройство для горизонтального проточного анализа содержит зону (501) элюции и область (DA) обнаружения, и отдельная вставка является областью (DA) обнаружения, а не зоной элюции.
12. Диагностический набор по любому из пп.6-9, в котором расширяющийся слой фиксирующего элемента содержит сжатую целлюлозу, при этом расширяющийся слой не сообщается по текучей среде с отдельной вставкой (200, 411).
13. Диагностический набор по любому из пп.6-11, в котором область (DA) обнаружения содержит зону (105, 505) обнаружения, содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одного или более тестируемых анализируемых веществ, и по выбору индикаторную зону (106, 506), содержащую одну или более аффинных молекул для селективного удерживания одной или нескольких индикаторных аффинных молекул.
14. Диагностический набор по любому из пп.6-13, в котором одно или более тестируемых анализируемых веществ выбраны из списка, состоящего из хемокинов, интерлейкинов, факторов роста, гормонов, ферментов и других молекул, присутствующих на коже млекопитающего, таких как выбранные из списка, состоящего из IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Траппин2/Элафина, hBD-1, hBD-2, VEGF и TSLP.
15. Способ обнаружения наличия или количества одного или нескольких тестируемых анализируемых веществ с использованием набора по любому из пп.6-14, в котором
прикрепляют с возможностью открепления к поверхности кожи млекопитающего отдельную вставку (200, 411) для устройства с горизонтальным потоком, причем отдельную вставку выполняют с возможностью получения тестируемого образца;
оставляют отдельную вставку (200) на поверхности кожи млекопитающего (213) по меньшей мере на 5 мин;
фиксируют отдельную вставку, содержащую тестируемый образец, в устройстве (300, 400) для горизонтального проточного анализа, выполненном с возможностью размещения отдельной вставки; проявляют устройство для горизонтального проточного анализа.
16. Способ по п.15, согласно которому отдельную вставку (200, 411) прикрепляют с возможностью открепления к поверхности кожи посредством фиксирующего элемента (210), выполненного с возможностью съемного прикрепления отдельной вставки к поверхности кожи млекопитающего (213), при этом фиксирующий элемент содержит расширяющийся слой (212), который активируют между стадиями а) и b) таким образом, создавая усилие, прижимающее отдельную вставку к поверхности кожи.
17. Способ по любому из пп.15 и 16, в котором устройство для горизонтального проточного анализа, используемое в способе, содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является зоной (101) элюции.
18. Способ по любому из пп.15-17, в котором устройство для горизонтального проточного анализа, используемое в способе, содержит зону (101) элюции и область (DA) обнаружения и отдельная вставка является областью (DA) обнаружения.
19. Способ по любому из пп.15-18, в котором поверхность кожи млекопитающего представляет собой кожу человека.
20. Способ по любому из пп.15-19, в котором устройство для горизонтального проточного анализа выполняют с возможностью образования капиллярного русла, когда оно состыковано с отдельной вставкой, причем устройство (100, 500) с горизонтальным потоком, состыкованное с отдельной вставкой, содержит зону (101, 501) элюции и область (DA) обнаружения, а также одно или более из подушки (102,
16.
502) конъюгата и впитывающей подушки (104, 504).
21. Способ по любому из пп.15-20, в котором мембрана устройства для горизонтального проточного анализа, используемого в способе, имеет толщину, равную 4 мм или менее, и как ширину, так и длину, превышающие толщину, причем устройство с горизонтальным потоком выполнено имеющим направление (L) горизонтального потока, по существу, вдоль плоскости, образованной шириной и длиной мембраны.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032155
- 1 -
(19)
032155
- 1 -
(19)
032155
- 1 -
(19)
032155
- 4 -
032155
- 16 -