EA 032082B1 20190430 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2019\PDF/032082 Полный текст описания [**] EA201791456 20160106 Регистрационный номер и дата заявки US62/100,371 20150106 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EP2016/050110 Номер международной заявки (PCT) WO2016/110499 20160714 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа [PDF] eab21904 Номер бюллетеня [**] ПЕПТИДЫ-АНТАГОНИСТЫ CGRP Название документа [8] C07D513/04, [8] C07K 7/64, [8] A61K 38/12, [8] A61P 25/06 Индексы МПК [US] Висневски Казимеж, [US] Цзян Гуанчэн, [US] Рабинович Александр К., [US] Суэирас-Диас Хавьер Х. Сведения об авторах [NL] ФЕРРИНГ Б.В. Сведения о патентообладателях [NL] ФЕРРИНГ Б.В. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000032082b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль: где m равен 1; p равен 0; A представляет собой простую или двойную углерод-углеродную связь; Ar 1 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, оксазолил, пиримидинил, тиазолил, триазолил, пирролил, имидазолил, тиенил, фурил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, нитро, C 1 -C 4 -алкил, C 1 -C 4 -гидроксиалкил, OR a или N(R a R a' ), где каждый R a независимо представляет собой H и каждый R a' независимо представляет собой H; Ar 2 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, оксазолил, тиазолил, пирролил, имидазолил, тиенил, фурил, пиримидинил, триазолил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил, каждый из которых возможно замещен заместителем, представляющим собой галоген, циано, нитро, C 1 -C 4 -алкил, C 1 -C 4 -аминоалкил, C 1 -C 4 -гидроксиалкил, OR b , N(R b R b' ), C(O)-N(R b R b' ) или NH-C(O)-N(R b R b' ), где каждый R b независимо представляет собой H и каждый R b' независимо представляет собой H; Ar 3 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, тиенил, фурил, тиазолил, пирролил, имидазолил, оксазолил, пиримидинил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил; R 1 представляет собой C 1 -C 4 -алкил, C 1 -C 4 -аминоалкил, C 1 -C 4 -гидроксиалкил, OR d или C(O)-N(R d R d' ), где каждый R d независимо представляет собой H и каждый R d' независимо представляет собой H; и R 2 представляет собой -(CH 2 ) n -R, в котором n равен 0, 1, 2 или 3 и R представляет собой N(CH 3 ) 2 , NH(CH(CH 3 ) 2 ), NH-C(O)-CH(NH 2 )-(CH 2 ) 4 -N(CH 3 ) 2 , NH-C(O)-CH 2 -(OCH 2 CH 2 ) 2 -NH 2 , 3-амино-1,2,4-триазол-5-ил, N(CH 2 CH 3 ) 2 или гуанидино, замещенный CH 3 .

2. Соединение по п.1, где Ar 1 представляет собой фенил, пиридинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиримидинил, пирролил или триазолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой F, Cl, NO 2 , CH 3 , CH 2 OH или NH 2 .

3. Соединение по п.1, где Ar 2 представляет собой фенил или пиридинил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой CH 2 NH 2 , C(O)NH 2 , ОН, CN, CH 2 OH, NH 2 или NH-C(O)NH 2 .

4. Соединение по п.1, где Ar представляет собой пиридинил.

5. Соединение по п.1, где R 1 представляет собой OH, C(O)NH 2 или CH 2 NH 2 .

6. Соединение по п.1, где n равен 0, 1 или 2.

7. Соединение по п.1, представляющее собой оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 .

8. Соединение по п.1, представляющее собой пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(Et 2 )-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Et 2 )-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-3Pal-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH 2 NH 2 )-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Aph-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Uph-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(3,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(2-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 или пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 .

9. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью антагониста пептида, связанного с геном кальцитонина (CGRP), содержащая соединение по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.

10. Фармацевтическая композиция по п.9, представляющая собой водный раствор.

11. Фармацевтическая композиция по п.10, где указанный водный раствор представляет собой водный раствор хлорида натрия.

12. Фармацевтическая композиция по п.11, где указанный водный раствор хлорида натрия содержит примерно 0,9 мас.% хлорида натрия.

13. Способ лечения мигрени, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции по п.9.

14. Применение соединения по любому из пп.1-8 для лечения мигрени.

15. Применение соединения по любому из пп.1-8 в изготовлении лекарственного средства для лечения мигрени.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль: где m равен 1; p равен 0; A представляет собой простую или двойную углерод-углеродную связь; Ar 1 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, оксазолил, пиримидинил, тиазолил, триазолил, пирролил, имидазолил, тиенил, фурил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, нитро, C 1 -C 4 -алкил, C 1 -C 4 -гидроксиалкил, OR a или N(R a R a' ), где каждый R a независимо представляет собой H и каждый R a' независимо представляет собой H; Ar 2 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, оксазолил, тиазолил, пирролил, имидазолил, тиенил, фурил, пиримидинил, триазолил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил, каждый из которых возможно замещен заместителем, представляющим собой галоген, циано, нитро, C 1 -C 4 -алкил, C 1 -C 4 -аминоалкил, C 1 -C 4 -гидроксиалкил, OR b , N(R b R b' ), C(O)-N(R b R b' ) или NH-C(O)-N(R b R b' ), где каждый R b независимо представляет собой H и каждый R b' независимо представляет собой H; Ar 3 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, тиенил, фурил, тиазолил, пирролил, имидазолил, оксазолил, пиримидинил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил; R 1 представляет собой C 1 -C 4 -алкил, C 1 -C 4 -аминоалкил, C 1 -C 4 -гидроксиалкил, OR d или C(O)-N(R d R d' ), где каждый R d независимо представляет собой H и каждый R d' независимо представляет собой H; и R 2 представляет собой -(CH 2 ) n -R, в котором n равен 0, 1, 2 или 3 и R представляет собой N(CH 3 ) 2 , NH(CH(CH 3 ) 2 ), NH-C(O)-CH(NH 2 )-(CH 2 ) 4 -N(CH 3 ) 2 , NH-C(O)-CH 2 -(OCH 2 CH 2 ) 2 -NH 2 , 3-амино-1,2,4-триазол-5-ил, N(CH 2 CH 3 ) 2 или гуанидино, замещенный CH 3 .

2. Соединение по п.1, где Ar 1 представляет собой фенил, пиридинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиримидинил, пирролил или триазолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой F, Cl, NO 2 , CH 3 , CH 2 OH или NH 2 .

3. Соединение по п.1, где Ar 2 представляет собой фенил или пиридинил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой CH 2 NH 2 , C(O)NH 2 , ОН, CN, CH 2 OH, NH 2 или NH-C(O)NH 2 .

4. Соединение по п.1, где Ar представляет собой пиридинил.

5. Соединение по п.1, где R 1 представляет собой OH, C(O)NH 2 или CH 2 NH 2 .

6. Соединение по п.1, где n равен 0, 1 или 2.

7. Соединение по п.1, представляющее собой оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 .

8. Соединение по п.1, представляющее собой пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(Et 2 )-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Et 2 )-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-3Pal-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH 2 NH 2 )-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Aph-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Uph-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(3,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(2-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 ; оксазол-2-карбонил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 ; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH 2 или пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH 2 OH)-Cys)-3Pal-NH 2 .

9. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью антагониста пептида, связанного с геном кальцитонина (CGRP), содержащая соединение по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.

10. Фармацевтическая композиция по п.9, представляющая собой водный раствор.

11. Фармацевтическая композиция по п.10, где указанный водный раствор представляет собой водный раствор хлорида натрия.

12. Фармацевтическая композиция по п.11, где указанный водный раствор хлорида натрия содержит примерно 0,9 мас.% хлорида натрия.

13. Способ лечения мигрени, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции по п.9.

14. Применение соединения по любому из пп.1-8 для лечения мигрени.

15. Применение соединения по любому из пп.1-8 в изготовлении лекарственного средства для лечения мигрени.


Евразийское od 032082 (13) Bl
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2019.04.30
(21) Номер заявки 201791456
(22) Дата подачи заявки 2016.01.06
(51) Int. Cl. C07D 513/04 (2006.01) C07K 7/64 (2006.01) A61K38/12 (2006.01) A61P 25/06 (2006.01)
(54) ПЕПТИДЫ-АНТАГОНИСТЫ CGRP
(31) (32)
62/100,371 2015.01.06
(33) US
(43) 2018.01.31
(86) PCT/EP2016/050110
(87) WO 2016/110499 2016.07.14
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ФЕРРИНГ Б.В. (NL)
(72) Изобретатель:
Висневски Казимеж, Цзян Гуанчэн, Рабинович Александр К., Суэирас-Диас Хавьер Х. (US)
(74) Представитель:
Поликарпов А.В., Соколова М.В., Путинцев А.И., Черкас Д.А., Игнатьев А.В. (RU)
(56) LIANG ZENG YAN ET AL.: "Discovery of potent, cyclic calcitonin gene-related peptide receptor antagonists", JOURNAL OF PEPTIDE SCIENCE, vol. 17, no. 5, 1 May 2011 (2011-05-01), pages 383-386, XP055257307, GB, ISSN: 1075-2617, DOI: 10.1002/psc.1358, cited in the application, the whole document
где m, p, A, Ar1, Ar2, Ar3, R1, R2 и R3 являются такими, как определено в описании изобретения. Соединения формулы (I) могут быть использованы в качестве антагонистов пептида, связанного с геном кальцитонина (CGRP), и могут быть использованы для лечения.
Область техники
Изобретение относится к пептидам-антагонистам CGRP, а также к композициям и способам с их использованием.
Предшествующий уровень техники
Мигрень представляет собой изнуряющее состояние, характеризующееся повторяющимися атаками часто сильной пульсирующей головной боли, обычно вместе с тошнотой и чувствительностью к свету и звуку. Мигрени часто предшествует очаговая неврологическая симптоматика, называемая аурой. Существующий стандарт лечения мигрени заключается в применении лекарственных средств класса трипта-нов. Однако приблизительно 30% пациентов триптаны не приносят облегчения. Кроме того, триптаны противопоказаны страдающим мигренью лицам с высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний (например, диабетом, ожирением и гиперхолестеринемией). Таким образом, остается необходимость в новых терапевтических подходах к лечению мигрени.
Пептид, связанный с геном кальцитонина (CGRP), представляет собой пептид из 37 аминокислот, образуемый в результате альтернативного сплайсинга гена кальцитонина. CGRP вовлечен во многие физиологические и патофизиологические состояния. Было обнаружено, что усеченные пептиды (например, CGRP(8-37) или CGRP(27-37)) могут действовать в качестве антагонистов рецептора CGRP. Эти пептиды оказались полезными в качестве средств для исследований, но такие пептиды не становились объектами клинических исследований. Усилия по разработке лекарственных средств, направленные на непептидные малые молекулы, дали несколько соединений, которые продвинулись до клинических испытаний, такие как олцегепант и телкагепант. Несмотря на очевидную эффективность в лечении мигрени, все эти программы были остановлены в основном из-за гепатотоксичности. Недавно усилия в области разработки лекарственных средств, нацеленные на путь CGRP для мигрени, перефокусировались на моноклональ-ные антитела против CGRP или его рецептора.
Рецептор CGRP представляет собой семиспиральный трансмембранный CLR (кальцитонин-подобный рецептор) в комплексе с RAMP1 (пептид, модулирующий активность рецептора 1). Помимо рецептора CGRP, CGRP в более высоких концентрациях также активирует адреномедуллиновые рецепторы (AM) AM1 и AM2 (CLR+RAMP2 и CLR+RAMP3 соответственно). Полагают, что рецепторы AM влияют на репродукцию; сердечно-сосудистую и почечную функцию; воспаление и другие состояния. Селективный антагонист CGRP-R с пониженной активностью в отношении рецепторов AM мог бы уменьшить риск побочных эффектов вследствие прерывания пути передачи сигнала AM.
Краткое изложение сущности изобретения
В одном из аспектов в изобретении предложено соединение формулы (I) или его соль:
где m равен 0, 1, 2, 3, 4 или 5; p равен 0, 1, 2 или 3;
A представляет собой простую или двойную углерод-углеродную связь;
Ar1 представляет собой арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, нитро, C1-C4-алкил, Q-Q-гидроксиалкил, ORa или N(RaRa), где каждый Ra независимо представляет собой H или ^-^-алкал и каждый Ra независимо представляет собой H или Q-Q-алкил;
Ar2 представляет собой арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, циано, нитро, Q-Q-алкил, Q-Q-аминоалкил, ^^-гидро^^лки, ORb, N(RbRb'), C(O)-N(RbRb') или NH-C(O)-N(RbRb'), где каждый Rb независимо представляет собой H или Q-Q-алкил и каждый Rb независимо представляет собой H или ^-Оралки;
Ar3 представляет собой арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, Q-Q-алкил, Q-Q-гидроксиалкил, ORc или N(RcRc), где каждый Rc независимо представляет собой H или CrQ-алкил и каждый Rc> независимо представляет собой H или Q-Q-алкил;
каждый R1 независимо представляет собой Q-Q-алкил, CrQ-аминоалкил, Q-Q-гидроксиалкил, ORd или C(O)-N(RdRd'), где каждый R независимо представляет собой H или Q-Q-алкил и каждый Rd
независимо представляет собой H или C1-C4-алкил;
R2 представляет собой -(CH2)n-R, в котором n равен 0, 1, 2 или 3 и R представляет собой замещенный или незамещенный гуанидино, аминоацил, C1-C4-алкиламиноацил, OR^ N(ReRe), NH-C(O)-CH(NH2)-(CH2)4-N(ReRe), NH-C(O)-CH2-(OCH2CH2)2-N(ReRe) или 5-членный гетероциклоалкил, возможно замещенный C1-C4-алкилом или N(ReRe), где каждый Re независимо представляет собой H или C1-C4-алкил и каждый Re' независимо представляет собой H или CrQ-алкил; и
каждый R независимо представляет собой галоген, C1-C4-алкил или ORf, в котором каждый Rf независимо представляет собой H или C1-C4-алкил;
при условиях что, когда n равен 0, R не представляет собой амино или гуанидино, и что, когда аминокислотный остаток, связанный с Ar1C(O), представляет собой L-Val, Ar1 не представляет собой незамещенный фенил.
В другом аспекте в данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I), описанное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
В еще одном аспекте в данном изобретении предложен способ лечения мигрени, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции, описанной в данном докуиенте.
Другие признаки, задачи и преимущества будут очевидны из описания и формулы изобретения.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к пептидам-антагонистам CGRP и к их применению для лечения мигрени. В частности, данное изобретение основано на неожиданном обнаружении того, что определенные пептиды являются антагонистами CGRP, которые демонстрируют улучшенную эффективность в отношении рецептора CGRP и могут быть эффективно использованы для лечения мигрени. В определенных воплощениях пептиды-антагонисты CGRP являются более селективными в отношении рецептора CGRP по сравнению с рецептором AM2. В определенных воплощениях пептиды-антагонисты CGRP обладают улучшенной растворимостью. В определенных воплощениях пептиды-антагонисты CGRP обладают улучшенной биодоступностью.
В некоторых воплощениях пептиды-антагонисты CGRP, описанные в данном документе, являются пептидами формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солью
(I).
где m равен 0, 1, 2, 3, 4 или 5; p равен 0, 1, 2 или 3;
A представляет собой простую или двойную углерод-углеродную связь;
Ar1 представляет собой арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген (например, F, Cl, Br или I), нитро, C1-C4-алкил, C1-C4-гидроксиалкил (например, CH2OH), ORa или N(RaRa), где каждый Ra независимо представляет собой H или C1-C4-алкил и каждый Ra' независимо представляет собой H или CrQ-алкил;
Ar2 представляет собой арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, циано, нитро, C1-C4-алкил, C1-C4-аминоалкил (например, CH2NH2), C1-C4-гидроксиалкил, ORb, N(RbRb), C(O)-N(RbRb) или NH-C(O)-N(RbRb), где каждый Rb независимо представляет собой H или C1-C4-алкил и каждый Rb' независимо представляет собой H или C1-C4-алкил;
Ar представляет собой арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, C1-C4-алкил, C1-C4-гидроксиалкил, ORc или N(RcRc), где каждый Rc независимо представляет собой H или C1-C4-алкил и каждый Rc' независимо представляет собой H или C1-C4-алкил;
каждый R1 независимо представляет собой CrQ-алкил, CrQ-аминоалкил, CrQ-гидроксиалкил, ORd или C(O)-N(RdRd), где каждый Rd независимо представляет собой H или C1-C4-алкил и каждый Rd' независимо представляет собой H или CrQ-алкил;
R2 представляет собой -(CH2)n-R, в котором n равен 0, 1, 2 или 3 и R представляет собой замещен
ный или незамещенный гуанидино, аминоацил (т.е. C(O)NH2), C1-C4-алкиламиноацил (например, C(O)NHCH3), ORe, N(ReRe), NH-C(O)-CH(NH2)-(CH2)4-N(ReRe), NH-C(O)-CH2-(OCH2CH2)2-N(ReRe) или 5-членный гетероциклоалкил, возможно замещенный Q-Q-алкилом или группой N(ReRe), где каждый Re независимо представляет собой H или Q-Q-алкил и каждый Re' независимо представляет собой H или Q-Q-алкил; и
каждый R3 независимо представляет собой галоген, Q-Q-алкил или ORf, в котором каждый Rf независимо представляет собой H или Q-Q-алкил;
при условиях что, когда n равен 0, R не представляет собой амино или гуанидино, и что, когда аминокислотный остаток, связанный с Ar1C(O), представляет собой L-Val, Ar1 не представляет собой незамещенный фенил.
Термин "алкил" относится к насыщенной линейной или разветвленной углеводородной группировке, такой как -CH3 или -CH(CH3)2. Термин "циклоалкил" относится к насыщенной циклической углеводородной группировке, такой как циклогексил. Термин "гетероциклоалкил" относится к насыщенной циклической группировке, имеющей по меньшей мере один кольцевой гетероатом (например, N, O или S), такой как 4-тетрагидропиранил. Термин "арил" относится к углеводородной группировке, имеющей одно или более ароматических колец. Примеры арильных группировок включают фенил (Ph), фенилен, нафтил, нафтилен, пиренил, антрил и фенантрил. Термин "гетероарил" относится к группировке, имеющей одно или более ароматических колец, которые содержат по меньшей мере один гетероатом (например, N, O или S). Примеры гетероарильных группировок включают фурил, фурилен, флуоренил, пирро-лил, тиенил, оксазолил, имидазолил, тиазолил, пиридинил, пиримидинил, хиназолинил, хинолил, изохи-нолил и индолил.
В некоторых воплощениях аминокислотный остаток, связанный с Ar1C(O), может представлять собой D-Val.
В некоторых воплощениях Ar1 может представлять собой фенил, пиридинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиримидинил, пирролил или триазолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, такими как F, Cl, NO2, CH3, CH2OH или NH2.
В некоторых воплощениях Ar2 может представлять собой фенил или пиридинил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, такими как CH2NH2, C(O)NH2, OH, CN, CH2OH,
NH2 или NH-C(O)-NH2.
В некоторых воплощениях Ar3 может представлять собой пиридинил.
В некоторых воплощениях R1 может представлять собой OH, C(O)NH2 или CH2NH2. В таких воплощениях m в формуле (I) может быть равен 1.
В некоторых воплощениях n в R2 в формуле (I) может быть равен 0, 1 или 2.
В некоторых воплощениях R может представлять собой N(ReRe), NH-C(O)CH(NH2)-(CH2)4-N(ReRe), NH-C(O)CH2-(OCH2CH2)2-N(ReRe), триазолил, возможно замещенный группой NH2, или гуанидино, возможно замещенный группой CN или CH3, где каждый Re независимо представляет собой H или C1-C3-алкил и каждый Re' независимо представляет собой H или Q-^-алкил. Например, R может представлять
собой NH2, N(CH3)2, N(CH2CH3)2, NH(CH(CH3)2), NH-C(O)CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2, NH-C(O)CH2-
(OCH2CH2)2-NH2, NH-C(O)CH2-(OCH2CH2)2-NH(CH(CH3)2), 3-амино-1,2,4-триазол-5-ил или гуанидино, возможно замещенный группой CN или CH3.
В некоторых воплощениях p в формуле (I) равен 0.
Иллюстративные соединения формулы (I) (т.е. соединения 1-70) включают соединения, перечисленные в табл. 1.
nMKonMHOMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg(CN)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
nMKonMHOMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Atz)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg(Me)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMpMMMflMH-4-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH2NH2)-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH2NH2)-Cys)-3Pal-NH2
TMa3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-Me)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-NH2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
1H-MMMfla3on-5-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Lys(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Dab(Atz)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH2NH2)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Lys(Me2))-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMpMMMflMH-4-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Lys(Me2))-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Me2)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
1H-MMMfla3on-4-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
1H-1,2,4-TpMa3on-5-Kap6oHMn(3-Me)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
1H-nMppon-2-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-N02)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3-CI)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(Atz)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
1H-1,2,4-TpMa3on-5-Kap6oHMn(3-Me)-D-Val-Tyr-c(Cys-Arg-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(2-CH2NH2)-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH2NH2)-Cys)-3Pal-NH2
nMKonMHOMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Tyr-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-3Pal-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Aph-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-
4Uph-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(3,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(2-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2
riMKonMHOMn(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2
nMKonMHOMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
OKca3on-2-Kap6oHMn-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2
Если не указано иное, обозначение аминокислоты в табл. 1 относится к ее L-изомеру. Например, Orn относится к L-орнитину, 3Pal относится к 3-(3-пиридил)-L-аланину, Dhp относится к 3,4-дегидро^-пролину, и Phe(2-Cbm) относится к 3-(2-карбамоил)фенил-L-аланину.
Иллюстративные соединения 1-70 представляют собой соединения формулы (I), где m равен 1, p равен 0, Ar3 представляет собой 3-пиридинил и A, Ar1, Ar2, R1, n и R являются такими, как показано в табл. 2.
пиридин-2-ил
простая
З-аминопиридин-2-ил
фенил
4-ОН
гуанидино
простая
5-имидазолил
фенил
4-ОН
гуанидино
двойная
5-фторпиридин-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
5-фторпиридин-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
1,3-оксазол-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
1,3-оксазол-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
1,3-оксазол-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
З-амино-1,2,4-триазол-5-ил
двойная
1,3-оксазол-2-ил
3-аминометилфенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
1,3-оксазол-2-ил
фенил
4-OH
NH-C(0)-CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2
простая
пиримидинил
фенил
4-OH
NH-C(0)-CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2
простая
З-фторпиридин-2-ил
фенил
4-OH
NMe2
простая
5-имидазолил
фенил
4-OH
гуанидино
простая
1,2,4-триазол-5-ил
фенил
4-OH
гуанидино
простая
2-пирролил
фенил
4-OH
гуанидино
простая
З-нитропиридин-2-ил
фенил
4-OH
гуанидино
простая
З-хлорпиридин-2-ил
фенил
4-OH
гуанидино
простая
1,3-оксазол-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
З-амино-1,2,4-триазол-5-ил
простая
1,2,4-триазол-5-ил
2-аминометилфенил
4-OH
гуанидино
двойная
2-пиридинил
3-аминометилфенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
2-пиридинил
4-гидроксиметил-фенил
4-OH
NH-iPr
простая
5-фторпиридин-2-ил
4-гидроксиметил-фенил
4-OH
NH2
двойная
1,3-оксазол-2-ил
4-гидроксифенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
двойная
1,3-оксазол-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
двойная
1,3-оксазол-2-ил
4-аминофенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
двойная
1,3-оксазол-2-ил
4-уреидофенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
5-фторпиридин-2-ил
4-гидроксиметил-фенил
4-OH
NH-iPr
простая
3,5-дифтор-пиридин-2-ил
3-пиридинил
4-OH
NH-iPr
двойная
5-фторпиридин-2-ил
3-пиридинил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
простая
1,3-оксазол-2-ил
4-гидроксиметил-фенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
двойная
1,3-оксазол-2-ил
3-карбамоилфенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
двойная
5-фторпиридин-2-ил
2-карбамоилфенил
2-C(0)-NH2
NH-iPr
двойная
1,3-оксазол-2-ил
3-карбамоилфенил
4-ОН
NH-iPr
двойная
5-фторпиридин-2-ил
3-карбамоилфенил
4-ОН
NH-iPr
двойная
2-пиридинил
4-гидроксиметил-фенил
4-ОН
NH-iPr
двойная
1,3-оксазол-2-ил
4-гидроксиметил-фенил
4-ОН
NH-iPr
Соединения формулы (I) могут быть получены способами, известными в данной области техники, или способами, описанными в данной заявке. В примерах 1-5 ниже представлены подробные описания того, как действительно были получены соединения 1-70.
В данном изобретении также предложены фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного (например, двух или более) пептидов-антагонистов CGRP, описанных в данном документе (т.е. соединений формулы (I)), или их фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента, а также по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель (например, адъювант или разбавитель). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли присоединения кислоты, например соли, образованные в результате реакции с галогенводородными кислотами (такими как хлористоводородная кислота или бромистоводородная кислота), минеральными кислотами (такими как серная кислота, фосфорная кислота и азотная кислота) и алифатическими, алициклическими, ароматическими или гетероциклическими сульфоновыми или кар-боновыми кислотами (такими как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, янтарная кислота, гликолевая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, пировино-градная кислота, пара-гидроксибензойная кислота, эмбоновая кислота, метансульфоновая кислота, этан-сульфоновая кислота, гидроксиэтансульфоновая кислота, галогенбензолсульфоновая кислота, трифто-руксусная кислота, трифторметансульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота и нафталинсульфо-новая кислота).
Носитель в фармацевтической композиции должен быть "приемлемым" в том смысле, что он является совместимым с активным ингредиентом композиции (и предпочтительно способен стабилизировать активный ингредиент) и не является вредным для субъекта, подлежащего лечению. Один или более со-любилизирующих агентов могут быть использованы в качестве фармацевтических носителей для доставки активного пептида-антагониста CGRP. Примеры других носителей включают коллоидный диоксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и D &C Yellow # 10 (2-(2-хинолил)-1,3-индандион-дисульфоновой кислоты динатриевая соль).
Фармацевтическая композиция, описанная в данной заявке, возможно может содержать по меньшей мере одну дополнительную добавку, выбранную из разрыхлителя, связующего агента, смазывающего агента, вкусоароматического агента, консерванта, красителя и любой их смеси. Примеры таких и других добавок могут быть найдены в "Handbook of Pharmaceutical Excipients"; Ed. A.H. Kibbe, 3rd Ed., American Pharmaceutical Association, USA и Pharmaceutical Press UK, 2000.
Фармацевтическая композиция, описанная в данном документе, может быть предназначена для парентерального, перорального, местного, назального, ректального, трансбуккального или сублингвально-го введения или для введения через дыхательные пути, например, в форме аэрозоля или взвешенного в воздухе мелкодисперсного порошка. Термин "парентеральный", как использовано в данном описании, относится к подкожной, чрескожной, внутрикожной, внутривенной, внутримышечной, внутрисуставной, внутриартериальной, интрасиновиальной, внутригрудинной, интратекальной, внутриочаговой, внутри-брюшинной, внутриглазной, внутриушной или внутричерепной инъекции, а также любой подходящей инфузионной методике. В некоторых воплощениях композиция может находиться в форме таблеток, капсул, порошков, микрочастиц, гранул, сиропов, суспензий, растворов, назального спрея, чрескожных пластырей или суппозиториев.
В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция, описанная в данном изобретении, может содержать пептид-антагонист CGRP, описанный в данном документе, который растворен в водном растворе. Например, композиция может содержать водный раствор хлорида натрия (например, содержащий 0,9 мас.% хлорида натрия), который служит в качестве разбавителя.
Кроме того, в данном изобретении предложен способ применения пептида-антагониста CGRP, как приведено выше, в лечении мигрени или в изготовлении лекарственного средства для такого лечения. Способ может включать введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацев
тической композиции, описанной в данном документе. "Эффективное количество" относится к количеству фармацевтической композиции, которое требуется для обеспечения терапевтического эффекта у субъекта, которого лечат. Как признано специалистами в данной области, эффективные дозы будут варьироваться в зависимости от типов подлежащих лечению заболеваний, пути введения, использования эксци-пиентов и возможности совместного применения с другим терапевтическим лечением.
Как использовано в данной заявке, термины "лечение", "лечить" и "процесс лечения" относятся к реверсированию течения, облегчению, отсрочке начала или остановке прогрессирования мигрени или одного или более ее симптомов, как описано в данной заявке. В некоторых воплощениях лечение может быть проведено после появления одного или более симптомов. В других воплощениях лечение может быть проведено в отсутствие симптомов. Например, лечение может быть проведено подверженному индивидууму перед началом симптомов (например, в свете истории симптомов и/или в свете генетических и других факторов подверженности). Лечение также может быть продолжено после исчезновения симптомов, например, для предотвращения или отсрочки их повторного появления.
Обычная дозировка пептида-антагониста CGRP, описанного в данной заявке, может варьироваться в пределах широкого диапазона и будет зависеть от различных факторов, таких как индивидуальные потребности каждого пациента и путь введения. Иллюстративные суточные дозировки (например, для подкожного введения) могут составлять по меньшей мере примерно 0,5 мг (например, по меньшей мере примерно 1 мг, по меньшей мере примерно 5 мг, по меньшей мере примерно 10 мг или по меньшей мере примерно 15 мг) и/или максимум примерно 100 мг (например, максимум примерно 75 мг, максимум примерно 50 мг, максимум примерно 20 мг или максимум примерно 15 мг) пептида-антагониста CGRP. Специалист в данной области или лечащий врач может учесть релевантные вариации этого диапазона дозировок и практические наработки в соответствии с рассматриваемой ситуацией.
В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция, описанная в данной заявке, может быть введена один раз в сутки. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция может быть введена более одного раза в сутки (например, дважды в сутки, трижды в сутки или четыре раза в сутки).
Содержание всех публикаций, цитированных в данной заявке (например, патентов, публикаций заявок на патенты и статей), включено в данную заявку посредством ссылки во всей полноте.
Следующие примеры являются иллюстративными и не предназначены ограничивать объем изобретения.
Примеры
Общие способы синтеза.
1. Производные аминокислот.
Производные аминокислот приобретали у коммерческих поставщиков (таких как Aapptec, Chem Impex International, EMD Millipore, PPL, PepTech и Peptides International), за исключением Fmoc-Orn(iPr,Boc)OH. Fmoc-Orn(iPr,Boc)OH получали следующим образом: 50,0 г (105,8 ммоль) Fmoc-Orn(Boc)OH растворяли в 100 мл дихлорметана (DCM). Затем добавляли 100 мл трифторуксусной кислоты (TFA). Реакционную смесь перемешивали с помощью магнитной мешалки в течение 1 ч и растворители выпаривали. Для удаления избытка TFA остаток повторно растворяли в DCM и упаривали несколько раз. Маслянистый остаток растворяли в 400 мл MeOH и 100 мл ацетона с последующим добавлением 30 мл уксусной кислоты. Реакционную смесь интенсивно перемешивали и добавляли 120,0 г (0,57 моль, 5,4 экв.) твердого NaBH(OAc)3 порциями по 10 г до тех пор, пока Fmoc-Orn-OH не был израсходован (примерно 2 ч, что контролировали посредством аналитической HPLC (высокоэффективной жидкостной хроматографии). Затем растворители выпаривали и полученный твердый остаток использовали на следующей стадии без очистки.
Остаток, полученный на предыдущей стадии, растворяли в 100 мл воды и pH раствора доводили до примерно 9,5 твердым Na2CO3. Затем к реакционной смеси, перемешиваемой с помощью магнитной мешалки, добавляли 100 мл t-BuOH. Затем порциями добавляли Boc2O (60,0 г, 275 ммоль, 2,6 экв.) в 100 мл t-BuOH в течение 10 ч. pH реакционной смеси поддерживали при примерно 9,5 путем добавления насыщенного Na2CO3 (водн.). После того как добавили последнюю порцию Boc2O, реакционную смесь перемешивали в течение последующих 9 ч. Реакционную смесь разбавляли 1 л воды и экстрагировали 2^200 мл гексана. Водную фазу подкисляли с использованием 2 М HCl и продукт экстрагировали диэти-ловым эфиром (3^300 мл). Объединенные органические экстракты тщательно промывали 2 М HCl (3x200 мл) и водой и затем сушили над безводным MgSO4. Осушитель отфильтровывали и растворитель выпаривали. Полученный твердый остаток обрабатывали петролейным эфиром, декантировали и сушили в вакууме. Кристаллический продукт растворяли в 200 мл t-BuOH и лиофилизировали. Получили 41,8 г (84 ммоль, выход 79,5%) лиофилизованного производного.
2. Пептидный синтез.
Смолы приобретали у коммерческих поставщиков (например, PCAS BioMatrix Inc. и EMD Millipore). Карбоновые кислоты для введения N-концевой ацильной группы получали от AstaTech, ChemBridge Corp. Frontier Scientific, J &W Pharmalab, Oakwood Products и TCI America. Все дополнительные реагенты, химикаты и растворители приобретали в Sigma-Aldrich и VWR.
Соединения, описанные в данном документе, синтезировали стандартными способами в твердофаз
ной пептидной химии с использованием методологии Fmoc. Сборку пептидов осуществляли либо вручную, либо автоматически с использованием синтезатора пептидов Tribute (Protein Technologies Inc., Tucson, Arizona) или синтезатора пептидов Applied Biosystems 433A, или путем комбинации ручного и автоматизированного синтезов.
Препаративную HPLC осуществляли на системе препаративной жидкостной хроматографии Waters с использованием картриджа PrepPack Delta-Pack C18, 300 А, 15 мкм, 47x300 мм при скорости потока 100 мл/мин и/или колонки Phenomenex Luna C18, 100А, 5 мкм, 30x100 мм при скорости потока 40 мл/мин. Аналитическую обращенно-фазовую HPLC осуществляли на жидкостном хроматографе Agilent Technologies 1200rr Series с использованием колонки Agilent Zorbax C18, 1,8 мкм, 4,6x110 мм при скорости потока 1,5 мл/мин. Конечные анализы соединений осуществляли на хроматографе Agilent Technologies 1200 Series посредством обращенно-фазовой HPLC на колонке Phenomenex Gemini 110 А C18, 3 мкм, 2x150 мм при скорости потока 0,3 мл/мин. Масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре с электрораспылительной ионизацией MAT Finnigan LCQ. Если не указано иное, все реакции осуществляли при комнатной температуре. Следующие ссылки дают дополнительные руководства по общей постановке эксперимента, а также доступности требуемого исходного вещества и реагентов: Kates S.A., Albericio F., Eds., Solid Phase Synthesis: A Practical Guide, Marcel Dekker, New York, Basel, 2000; Greene T.W., Wuts P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley Sons Inc., 2nd Edition, 1991; Stewart J.M., Young J.D., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984; Bisello et al., J. Biol. Chem. 1998, 273, 22498-22505; Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 1963, 85, 2149-2154; и Chang and White P.D., "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach", Oxford University Press, Oxford, 2000.
Следующие защитные группы использовали для защиты боковых функциональных групп данной аминокислоты: Pbf (2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил) для Arg; t-Bu (трет-бутил) для Tyr и Asp; Boc (трет-бутоксикарбонил) для Dab, Orn, Orn(iPr) и Lys и Trt (тритил) для Cys.
Сочетания Fmoc-защищенных аминокислот на синтезаторе Tribute опосредовали с помощью HBTU/NMM в DMF, за исключением производных цистеина, которые подвергали сочетанию с помощью DIC/HOBt в DMF. В ходе синтеза использовали единичные циклы по 30-60 мин с 5-кратным избытком активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Удаление защитной группы Fmoc контролировали с помощью УФ. Осуществляли множество (до 10 раз при необходимости) двухминутных промывок пептидной смолы 20%-ным пиперидином в DMF.
Протоколы циклов, определенные Applied Biosystems, применяли на синтезаторе 433A. Сочетания опосредовали HATU/DIPEA или DIC/HOBt в DMF/NMP. Использовали единичные сочетания по 35-50 мин с 4-кратным избытком активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Удаление защитной группы Fmoc контролировали с помощью УФ и достигали с помощью одной 20-минутной промывки 20%-ным пиперидином/NMP.
DIC/HOBt-опосредованные сочетания в DMF использовали для всех аминокислот в ручном режиме. В ходе синтеза применяли единичные циклы по меньшей мере по 2 ч с использованием вплоть до 3-кратного избытка активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Завершенность сочетаний оценивали с помощью нингидринового теста (Кайзера). Удаление защитной группы Fmoc достигали с помощью одной 30-минутной промывки пептидной смолы 20%-ным пиперидином в DMF.
По завершении пептидного синтеза пептидные смолы промывали DCM и сушили в вакууме. Смолы обрабатывали TFA, содержащей различные количества H2O (вплоть до 10%) и диизопропилсилана (TIS; вплоть до 4%) в течение 2 ч для удаления защитных групп боковой цепи с параллельным отщеплением пептида от смолы. Пептиды фильтровали, осаждали диэтиловым эфиром и декантировали. Для получения пептидов с дисульфидными мостиками осадок растворяли в чистом TFA или AcOH и затем раствор вливали в 10%-ный ацетонитрил в воде. В некоторых случаях для солюбилизации субстрата добавляли дополнительное количество ацетонитрила. Линейный пептид окисляли 0,1М I2 в MeOH или AcOH. Раствор окислителя добавляли по каплям до сохранения желтой окраски. Избыток йода снижали с помощью аскорбиновой кислоты. Затем pH доводили до примерно 4 концентрированным аммиаком. Полученный раствор загружали непосредственно на препаративную колонку HPLC и элюировали градиентом компонента B, показанного в табл. 3 ниже.
Каждый неочищенный пептид очищали буфером T, показанным в табл. 3. Фракции с чистотой, превышающей 90%, определенные посредством обращенно-фазовой аналитической HPLC, объединяли и повторно загружали в колонку и элюировали буфером T с получением трифторацетатных солей. В некоторых случаях осуществляли дополнительную очистку буфером C, показанным в табл. 3. Для получения гидрохлоридных солей фракции из опытов с буфером T или C повторно загружали в колонку и колонку промывали 3-5 объемами 0,1 М хлорида натрия в 1 мМ HCl. Конечный продукт элюировали буфером H, показанным в табл. 3. Фракции объединяли и лиофилизировали. Как было обнаружено, полученные таким образом соединения, как правило, имели по меньшей мере примерно 90%-ную чистоту.
Синтезы некоторых иллюстративных соединений формулы (I), описанных в данном документе, представлены ниже.
Пример 1. Синтез соединения 30.
Сборку пептида осуществляли вручную, начиная с 3,0 г (1,95 ммоль) амидной MBHA смолы Ринка, защищенной Fmoc (EMD Millipore, номер по каталогу 855003, 0,65 ммоль/г). Использовали DIC/HOBt-опосредованные сочетания в DMF. В ходе синтеза использовали единичные циклы по меньшей мере по 2 ч с использованием вплоть до 3-кратного избытка активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Завершенность сочетаний оценивали с помощью нингидринового теста. Удаление защитной группы Fmoc достигали путем одной 30-минутной промывки пептидной смолы 20%-ным пиперидином в DMF. Следующие производные аминокислот использовали для сборки связанного со смолой пептида: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)OH, Fmoc-Cys(Trt)OH, Fmoc-Phe(2-Cbm)OH и Fmoc-D-Val-OH. После сборки 1-11 фрагмента пептида смолу блокировали оксазол-2-карбоновой кислотой/DIC/HOBt (4 экв.), тщательно промывали DCM и сушили в вакууме. Неочищенный линейный пептид отщепляли от смолы с помощью 50 мл TFA/H2O/TIS 96:2:2 (об./об./об.) в течение 2 ч. После выпаривания растворителя неочищенный пептид осаждали диэтиловым эфиром и декантировали. Осадок растворяли в 1 л 1%-ной водной TFA и окисляли 0,1 М I2/MeOH. Раствор окислителя добавляли по каплям до сохранения желтой окраски. Избыток йода сокращали, используя твердую аскорбиновую кислоту. Затем pH доводили до примерно 4 концентрированным аммиаком. Полученный раствор загружали непосредственно в препаративную колонку HPLC и очищали буфером T. Фракции с чистотой более 90%, определенной посредством обращенно-фазовой аналитической HPLC, объединяли и повторно загружали в колонку. Колонку уравновешивали с использованием 1 мМ HCl, промывали 3 об. 0,1 мМ NaCl в 1 мМ HCl и соединение элюировали буфером H с получением гидрохлоридной соли. Фракции объединяли и лиофилизировали. Получили 1009,8 мг (0,63 ммоль, общий выход 32,3% в расчете на содержание пептида 89,6%) белого порошка пептида (соединение 30).
Чистоту продукта определили посредством аналитической HPLC как 90,7%. Найденные и вычисленные данные MS (а именно, M+H) представлены в табл. 4.
Пример 2. Синтез соединения 40.
Твердофазный синтез этого пептида осуществляли на пептидном синтезаторе Tribute с использованием Fmoc-стратегии. Исходная смола представляла собой 0,23 г (0,15 ммоль) амидной MBHA смолы Ринка (EMD Millipore, номер по каталогу 855003, 100-200 меш, 0,65 ммоль/г). DIC/HOBt опосредованные сочетания в DMF использовали для всех аминокислот, за исключением N-концевой оксазол-2-карбоновой кислоты, которая требовала способа сочетания HBTU/NMM. В ходе синтеза использовали единичные циклы по 2 ч с 3-кратным избытком активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Защитную группу Fmoc удаляли путем обработки 20%-ным пиперидином в DMF, 1x5 мин и 1x25 мин. Следующие производные аминокислот использовали последовательно для сборки связанного со смолой пептида: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)OH, Fmoc-Cys(Trt)OH, Fmoc-Phe(2-Cbm)OH и Fmoc-D-Val-OH. N-концевую ацильную группу вводили путем обработки связанного со смолой пептидного фрагмента (1-11) предварительно активированной смесью оксазол-2-карбоновой кислоты (0,5 ммоль), HBTU (0,5 ммоль) и DIEA (1,0 ммоль) в DMF в течение 4 ч. Конечную собранную пептидную смолу промывали DCM и сушили в вакууме. Неочищенный линейный пептид отщепляли от смолы с помощью 25 мл TFA/H2O/TIS (94:3:3, об./об./об.) в течение 2,5 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и неочищенный пептид осаждали диэтиловым эфиром. Осадок собирали путем фильтрации и затем растворяли в 400 мл 0,1% TFA в 5% ACN и окисляли с помощью 0,1М I2/AcOH. Раствор йода добавляли по каплям до сохранения желтой окраски. Избыток йода сокращали, используя насыщенный раствор аскорбиновой кислоты в воде. Полученный раствор загружали непосредственно на препаративную колонку HPLC и очищали буфером T. Фракции с чистотой более 90%, определенной посредством обращенно-фазовой аналитической HPLC, объединяли и сушили сублимацией на лиофилизаторе. Получили 80,2 мг (45,0 мкмоль, общий выход 30% в расчете на оцененное содержание пептида 80%) белого порошка пептида (соединение 40).
Чистоту продукта определили посредством аналитической HPLC как 96,8%. Найденные и вычисленные данные MS (а именно, M+H) приведены в табл. 4 ниже. Пример 3. Синтез соединения 62.
Сборку пептида осуществляли вручную, начиная с 3,0 г (1,77 ммоль) амидной MBHA смолы Ринка (Novabiochem, номер по каталогу 8.55003, 0,59 ммоль/г), с использованием высокотемпературного SPPS (твердофазного пептидного синтеза) (75°C, водяная баня Lauda E100, реакционный сосуд 50 мл для SPPS, оснащенный рубашкой). В ходе синтеза использовали единичные циклы по меньшей мере по 15 мин с использованием вплоть до 4-кратного избытка предварительно активированных Fmoc-защищенных аминокислот (HOBt, DIC, в ходе синтеза не использовали предварительную активацию для Fmoc-Orn(iPr,Boc)-OH). Защитную группу Fmoc удаляли с помощью 2x5-минутной промывки пептидной смолы 25%-ным пиперидином в DMF. Следующие производные аминокислот использовали для сборки пептида, связанного со смолой: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)OH, Fmoc-Phe-OH,
Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)OH, Fmoc-Cys(Trt)OH
и Fmoc-D-Val-OH. После сборки фрагмента пептида 1-11 смолу блокировали 3,5-дифторпиколиновой кислотой/HATU/DIPEA (4 экв.), тщательно промывали MeOH и сушили в вакууме. Неочищенный линейный пептид отщепляли от смолы с помощью 75 мл TFA/H2O/TIS 96:2:2 (об./об./об.) в течение 2 ч. После выпаривания растворителя неочищенный пептид осаждали диэтиловым эфиром и декантировали. Осадок растворяли в 1 л 10%-ного MeCN в 0,5%-ной водной TFA и окисляли с помощью 0,05М I2/AcOH. Раствор окислителя добавляли по каплям до сохранения желтой окраски. Избыток йода сокращали, используя 1М аскорбиновую кислоту. Полученный раствор загружали непосредственно в препаративную колонку HPLC и очищали с помощью модифицированного буфера T (компонент A: 0,01% TFA, компонент B: 95% ацетонитрила в 0,01% TFA). Фракции с чистотой более 95%, определенной посредством обращенно-фазовой аналитической HPLC, объединяли и загружали в колонку. Колонку уравновешивали с помощью 1 мМ HCl, промывали 3 об. 0,1 мМ NaCl в 1 мМ HCl и затем соединение элюировали буфером H с получением гидрохлоридной соли. Фракции объединяли и лиофилизировали. Получили 583 мг (0,63 ммоль, общий выход 20% в расчете на содержание пептида 87,3% и чистоту 98,8%) белого порошка пептида (соединение 62).
Чистоту продукта определили посредством аналитической HPLC как 98,8%. Наблюдаемые и вычисленные данные MS (а именно, M+H) представлены в табл. 4 ниже. Пример 4. Синтез соединения 65.
Сборку соединения осуществляли на твердой фазе путем комбинации ручного и автоматического синтеза. Сначала вручную синтезировали C-концевой трипептид, начиная с 7,3 г (3,5 ммоль) амидной смолы Ринка, защищенной Fmoc, Chem Matrix (Biotage, номер по каталогу 7-600-1310-25, 0,48 ммоль/г). HATU/DIPEA-опосредованные сочетания в DMF использовали для 3Pal и Phe(3-Cbm), и DIC/HOBt-опосредованное сочетание в DMF использовали для Cys. В ходе синтеза использовали единичные циклы по меньшей мере по 2 ч с использованием вплоть до 3-кратного избытка активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Завершенность сочетаний оценивали с помощью нингидринового теста. Удаление защитной группы Fmoc достигали использованием 30%-ного пиперидина в DMF с использованием двух промывок по 5 и 25 мин соответственно. Следующие производные аминокислот использовали для сборки пептидов, связанных со смолой: Fmoc-3Pal-OH, Fmoc-Cys(Trt)OH и Fmoc-Phe(3-Cbm)OH. Синтез продолжали на синтезаторе 433A с одной восьмой частью (0,44 ммоль) смолы. Использовали HA-TU/DIPEA или DIC/HOBt (для Cys) опосредованные сочетания в NMP/DMF. В ходе синтеза использовали единичные циклы по меньшей мере по 30 мин с использованием вплоть до 5-кратного избытка активированных Fmoc-защищенных аминокислот. Удаление защитной группы Fmoc достигали с помощью одной 30-минутной промывки пептидной смолы 20%-ным пиперидином в NMP. Следующие аминокислотные производные использовали для завершения сборки пептида, связанного со смолой:
Fmoc-Dhp-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(tBu)OH, Fmoc-Orn(iPr,Boc)OH, Fmoc-Cys(Trt)OH,
Fmoc-Phe(2-Cbm)OH и Fmoc-D-Val-OH. После сборки пептидного фрагмента 1-11 смолу блокировали вручную оксазол-2-карбоновой кислотой/HATU/DIPEA (4 экв.), тщательно промывали DCM и сушили в вакууме. Неочищенный линейный пептид отщепляли от смолы с помощью 50 мл TFA/H2O/TIS 90:8:2 (об./об./об.) в течение 2 ч. Растворитель выпаривали и неочищенный пептид осаждали с помощью MTBA, центрифугировали и декантировали. Осадок растворяли в 15 мл AcOH и вливали в 250 мл 10% (об./об.) водного ацетонитрила и окисляли 0,1М I2/MeOH. Раствор окислителя добавляли по каплям до сохранения желтой окраски. Избыток йода сокращали, используя твердую аскорбиновую кислоту. Затем pH доводили до примерно 4 концентрированным аммиаком. Полученный раствор загружали непосредственно в препаративную колонку HPLC и очищали буфером T (см. таблицу выше). Фракции с чистотой более 90%, определенной посредством обращенно-фазовой аналитической HPLC, объединяли и лиофи-лизировали. Получили 116,2 мг (0,06 ммоль, общий выход 14,1% в расчете на содержание пептида 78,5%) белого порошка пептида (соединение 65).
Чистоту продукта определили посредством аналитической HPLC как 98,3%. Наблюдаемые и вычисленные данные MS (а именно, M+H) представлены в табл. 4.
Пример 5. Синтез соединений 1-29, 31-39, 41-61, 63, 64 и 66-70.
Соединения 1-29, 31-39, 41-61, 63, 64 и 66-70 синтезировали с использованием способов, описанных в примерах 1-4.
Наблюдаемые и вычисленные данные MS (а именно, M+H) соединений 1-70 сведены в табл. 4.
Таблица 4
№ соединения
Вычисленный М+Н
Наблюдаемый М+Н
1425,6
1425,6
1426,6
1426,6
1408,6
1408,6
1423,6
1423,5
1454,6
1454,6
1398,5
1398,5
1371,5
1371,5
1408,6
1408,8
1394,6
1394,7
1628,7
1628,9
1398,6
1398,8
1384,6
1384,7
1571,7
1571,8
1426,6
1426,7
1452,6
1452,7
1409,6
1409,7
1426,6
1426,7
1426,6
1426,7
1436,6
1436,7
1454,6
1454,6
1450,6
1450,6
1452,6
1452,7
1452,6
1452,7
1422,6
1422,7
1396,6
1396,7
1433,6
1433,7
1448,6
1488,7
1422,6
1422,8
1414,6
1414,7
1425,6
1425,7
1463,6
1463,8
1480,6
1480,7
1414,5
1414,7
1422,6
1422,7
1444,6
1444,7
1423,6
1423,6
1397,6
1397,7
1452,6
1452,6
1454,6
1454,6
1426,6
1426,5
1440,6
1440,6
1452,6
1452,5
1452,6
1452,6
1512,7
1512,7
1523,7
1523,8
1412,6
1412,7
1397,6
1397,6
1412,6
1412,7
1396,6
1396,6
1453,6
1453,6
1442,6
1442,6
1466,6
1466,6
1441,6
1441,8
1462,6
1462,7
1438,6
1438,8
1414,6
1414,9
1439,6
1439,8
1424,6
1424,7
1438,6
1438,9
1481,6
1481,7
1456,6
1456,7
1444,6
1444,7
1481,6
1481,6
1455,6
1455,6
1466,6
1466,7
1494,6
1494,7
1439,6
1439,6
1467,6
1467,7
1436,6
1436,7
1426,6
1426,5
Пример 6. Антагонистическая активность в отношении рецептора CGRP, измеренная в анализе cAMP.
Агонисты рецептора CGRP увеличивают количество внутриклеточного циклического аденозинмо-нофосфата (cAMP). Антагонисты рецептора CGRP могут уменьшать этот агонистический эффект. Активность антагониста рецептора оценивали путем измерения количества циклического аденозинмоно-фосфата (cAMP) с использованием клеточной линии, стабильно экспрессирующей рецептор hCGRP (GeneBLAzer(r) CALCRL:RAMP1-CRE-bla Freestyle(tm) 293F, Invitrogen). Клетки, экспрессирующие рецептор hCGRP, поддерживали в DMEM с высоким содержанием глюкозы с GlutaMAX(tm), содержащей 10% (об./об.) FBS, 0,1 мМ NEAA, 25 мМ HEPES, 5 мкг/мл бластицидина, 100 мкг/мл гигромицина и 400 мкг/мл генетицина при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2. Для измерения cAMP клетки промывали один раз 5 мл 1x PBS, среду поддержания клеток заменяли буфером соединений ((CB): DMEM, содержащая 0,1% BSA и 0,5 мМ IBMX) и колбы инкубировали в течение 1 ч при 37°C в увлажненной атмосфере с 5% CO2. Клетки удаляли из колб с культурами с использованием неферментативного буфера для диссоциации клеток и собирали в CB. Реакцию осуществляли в белых 384-луночных планшетах небольшого объема (Greiner) при плотности 10000 клеток/лунка. Клетки подвергали воздействию различных концентраций соединений-антагонистов в течение 30 мин в присутствии фиксированной концентрации агониста (человеческого a-CGRP). Уровни cAMP измеряли с использованием основанного на HTRF (гомогенная флуоресценция с временным разрешением) конкурентного иммуноанализа на cAMP (cAMP Dynamic 2 Kit, Cisbio) согласно инструкциям производителя. Вычисляли соотношение разрешенных во времени показаний флуоресценции (RFU) при 665 и 615 нм для осуществления нелинейного регрессионного анализа и использовали четырехпараметрическую модель концентрация-ответ с одиночным сайтом связывания
(MIN+((MAX-MIN)/(1+((EC50/x)AHill)))),
генерируя кривую концентрация-ответ. Указанные параметры включают эффективность антагониста IC50 (концентрация, вызывающая полумаксимальное ингибирование агонистического ответа соединениями-антагонистами) и эффективность (%MPE: процент максимально возможного эффекта).
Соединения 1-70 и три референсных пептидных соединения тестировали в вышеописанном анализе. Указанные три референсных пептидных соединения представляют собой:
(1) Bz(4-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Agp-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2 ("Референсное соединение 1'', т.е. соединение 36 в Yan et al., J. Pept. Sci. 2011, 17, 383-386);
(2) Bz-D-Val-Tyr-c(Cys-Dpr-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2 ("Референсное соединение 2", соединение 33 в Yan et al., J. Pept. Sci. 2011, 17, 383-386) и
(3) H-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-
Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2 ("Референсное соединение 3", антагонист человеческого a-
CGRP(8-37)-NH2).
Результаты сведены в табл. 5.
Как показано в табл. 5, соединения 1-70 в целом демонстрировали повышенную эффективность по сравнению с референсными соединениями 1-3.
Пример 7. Антагонистическая активность в отношении рецептора AM2, измеренная в анализе
cAMP.
Антагонистическую активность в отношении адреномедуллинового рецептора AM2 определяли с использованием метода, описанного в примере 6 выше, со следующими модификациями. Вместо клеток GeneBLAzer(r) CALCRL:RAMP1-CRE-bla Freestyle(tm) 293F использовали клетки GeneBLAzer(r) CALCRL:RAMP3-CRE-bla Freestyle(tm) 293F для тестирования активности рецепторов hAM2. Агонистом вместо a-CGRP являлся человеческий адреномедуллин.
В этом анализе тестировали соединения 1-70 и три референсных пептидных соединения, описанных в примере 6. Результаты сведены в табл. 5 ниже. В табл. 5 соотношение селективности для hCGRP относительно hAM2 рассчитано в виде hCGRP-R IC50/hAM2-R IC50.
Как показано в табл. 5, большинство соединений 1-70 демонстрировало повышенную селективность для рецептора hCGRP относительно рецептора hAM2 по сравнению с референсными соединениями 1-3.
0,13
100
275
101
2125
0,09
100
980
10884
0,13
100
1020
8075
0,14
100
1225
9068
0,04
100
180
101
4693
0,17
100
114
100
668
0,18
100
198
1082
0,15
100
184
1189
0,16
100
232
1460
0,07
100
402
5610
0,19
100
461
0,18
100
8,1
0,14
100
100
0,15
100
770
5203
0,11
100
901
8130
0,17
100
150
898
0,18
100
137
100
746
0,17
100
100
328
0,12
100
624
5225
0,18
100
476
2588
0,17
100
467
2770
0,12
100
444
100
3759
0,10
100
100
934
0,14
100
100
592
0,10
101
848
0,12
101
1246
10594
0,06
101
318
100
5492
0,08
101
100
1027
0,09
101
103
1094
0,06
101
100
300
0,13
100
100
497
0,15
100
107
100
727
Референсное соединение 1
0,20
100
210
Референсное соединение 2
0,52
100
200
100
387
Референсное соединение 3
4,1
100
101
Другие воплощения находятся в объеме прилагаемой формулы изобретения.
где m равен 1; p равен 0;
A представляет собой простую или двойную углерод-углеродную связь;
Ar1 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, оксазолил, пиримидинил, тиазолил, триазолил, пирролил, имидазолил, тиенил, фурил, хиназолинил, хинолил, изохино-лил или индолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой галоген, нитро, C1-C4-алкил, C1-C4-гидроксиалкил, ORa или N(RaRa> ), где каждый Ra независимо представляет собой H и каждый Ra независимо представляет собой H;
Ar2 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, оксазолил, тиазо-лил, пирролил, имидазолил, тиенил, фурил, пиримидинил, триазолил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или индолил, каждый из которых возможно замещен заместителем, представляющим собой галоген, ци-ано, нитро, C1-C4-алкил, C1-C4-аминоалкил, C1-C4-гидроксиалкил, ORb, N(RbRb), C(O)-N(RbRb) или NH-C(O)-N(RbRb'), где каждый Rb независимо представляет собой H и каждый Rb> независимо представляет собой H;
Ar3 представляет собой арил, представляющий собой фенил, нафтил, пиренил, антрил, фенантрил или флуоренил, или 5- или 6-членный гетероарил, представляющий собой пиридинил, тиенил, фурил, тиазолил, пирролил, имидазолил, оксазолил, пиримидинил, хиназолинил, хинолил, изохинолил или ин-долил;
R1 представляет собой C1-C4-алкил, C1-C4-аминоалкил, C1-C4-гидроксиалкил, ORd или C(O)-N(RdRd), где каждый Rd независимо представляет собой H и каждый независимо представляет собой H; и
R2 представляет собой -(CH2)n-R, в котором n равен 0, 1, 2 или 3 и R представляет собой N(CH3)2,
NH(CH(CH3)2), NH-C(O)-CH(NH2)-(CH2)4-N(CH3)2, NH-C(O)-CH2-(OCH2CH2)2-NH2, 3-амино-1,2,4-
триазол-5-ил, N(CH2CH3)2 или гуанидино, замещенный CH3.
2. Соединение по п.1, где Ar1 представляет собой фенил, пиридинил, оксазолил, тиазолил, имидазо-лил, пиримидинил, пирролил или триазолил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой F, Cl, NO2, CH3, CH2OH или
NH2.
3. Соединение по п.1, где Ar2 представляет собой фенил или пиридинил, каждый из которых возможно замещен одним или более заместителями, где каждый заместитель независимо представляет собой CH2NH2, C(O)NH2, ОН, CN, CH2OH, NH2 или NH-C(O)NH2.
4. Соединение по п.1, где Ar представляет собой пиридинил.
5. Соединение по п.1, где R1 представляет собой OH, C(O)NH2 или CH2NH2.
6. Соединение по п.1, где n равен 0, 1 или 2.
7. Соединение по п.1, представляющее собой оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-
Orn(iPr)Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2.
8. Соединение по п.1, представляющее собой
пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(Et2)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Dab(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(Et2)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-3Pal-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2;
оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-3Pal-Cys)-3Pal-NH2; оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-CH2NH2)-Cys)-3Pal-
NH2;
оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Aph-Cys)-3Pal-NH2;
оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-4Uph-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил(з,5-F2)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe-Cys)-3Pal-NH2;
пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2;
оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Pro-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-
NH2;
оксазол-2-карбонил-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; пиколиноил(5-F)-D-Val-Phe(2-Cbm)-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(2-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; оксазол-2-карбонил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2; пиколиноил(5-F)-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(3-Cbm)-Cys)-3Pal-NH2 или пиколиноил-D-Val-Tyr-c(Cys-Orn(iPr)-Asp-Val-Gly-Dhp-Phe(4-CH2OH)-Cys)-3Pal-NH2.
9. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью антагониста пептида, связанного с ге-
ном кальцитонина (CGRP), содержащая соединение по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемле-
мый носитель.
10. Фармацевтическая композиция по п.9, представляющая собой водный раствор.
11. Фармацевтическая композиция по п.10, где указанный водный раствор представляет собой водный раствор хлорида натрия.
12. Фармацевтическая композиция по п.11, где указанный водный раствор хлорида натрия содержит примерно 0,9 мас.% хлорида натрия.
13. Способ лечения мигрени, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции по п.9.
14. Применение соединения по любому из пп.1-8 для лечения мигрени.
15. Применение соединения по любому из пп.1-8 в изготовлении лекарственного средства для лечения мигрени.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
032082
- 1 -
032082
- 1 -
032082
- 1 -
032082
- 1 -
032082
- 4 -
032082
- 4 -
032082
- 7 -
032082
- 8 -
032082
- 10 -
032082
- 18 -
032082
- 20 -