|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Применение меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы (QC), выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I)  и соединения формулы (II)  или их стереоизомеров, в качестве визуализирующего средства, где указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы содержит по меньшей мере одну радиоактивную метку и где указанная радиоактивная метка выбрана из группы, включающей 2 Н (D или дейтерий), 3 Н (Т или тритий), 11 С, 14 С, 13 N, 15 N, 15 О, 17 О, 18 О и 18 F. 2. Применение ингибитора по п.1, где указанный ингибитор содержит одну радиоактивную метку. 3. Применение по п.1 или 2, в котором радиоактивная метка выбрана из группы, включающей 11 С и 14 С. 4. Применение по п.3, в котором радиоактивной меткой является 11 С. 5. Применение по любому из пп.1-4, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (I) d  6. Применение по п.3, в котором радиоактивной меткой является 14 С. 7. Применение по любому из пп.1-6, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (I) c  8. Применение по любому из пп.1-6, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (II) с  9. Применение по п.8, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (II) d  10. Применение по любому из пп.1-9, где указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы используется в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения. 11. Меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, выбранный из группы, состоящей из соединения формулы (I) d  соединения формулы (I) с  соединения формулы (II) с  и соединения формулы (II) d  12. Фармацевтическая композиция, содержащая меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, в комбинации с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых инертных наполнителей. 13. Применение фармацевтической композиции по п.12 в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения. 14. Применение по п.10 или 13, где неврологическим нарушением является слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейная британская деменция, семейная датская деменция, нейродегенерация при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона. 15. Способ визуализации и детектирования старческих бляшек и/или нейрофибриллярных пучков в ткани головного мозга, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11. 16. Способ по п.15, где пациенту вводят указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или указанную фармацевтическую композицию по п.12 в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с амилоидными отложениями, меченое соединение детектируют. 17. Способ по п.15, где пациенту вводят указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или указанную фармацевтическую композицию по п.12 в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с тау-белками в нейрофибриллярных пучках, меченое соединение детектируют. 18. Способ по п.15, в котором неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, по отношению к старческим бляшкам. 19. Способ по п.15, в котором неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, по отношению к агрегатам тау-белков. 20. Способ детектирования амилоидных отложений в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11. 21. Способ детектирования амилоидных отложений у пациента in vivo, способ включает введение пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с амилоидным отложением. 22. Способ детектирования тау-белков в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11. 23. Способ детектирования нейрофибриллярных пучков у пациента in vivo, способ включает введение пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с тау-белками. 24. Способ по любому из пп.15-23, в котором детектирование осуществляют путем визуализации с помощью гамма-излучения, магнитно-резонансной визуализации, спектроскопии магнитного резонанса или флуоресцентной спектроскопии. 25. Способ по п.24, в котором методикой детектирования путем визуализации с помощью гамма-излучения является ПЭТ (позитронная эмиссионная томография) или ОФЭКТ (однофотонная эмиссионная компьютерная томография). 26. Набор, предназначенный для диагностики неврологического нарушения, который включает фармацевтическую композицию, определенную в п.12, и инструкции для использования указанного набора в соответствии с методиками, описанными в любом из пп.15-25. 27. Набор по п.26, где неврологическим нарушением является слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейная британская деменция, семейная датская деменция, нейродегенерация при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Применение меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы (QC), выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I) и соединения формулы (II) или их стереоизомеров, в качестве визуализирующего средства, где указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы содержит по меньшей мере одну радиоактивную метку и где указанная радиоактивная метка выбрана из группы, включающей 2 Н (D или дейтерий), 3 Н (Т или тритий), 11 С, 14 С, 13 N, 15 N, 15 О, 17 О, 18 О и 18 F. 2. Применение ингибитора по п.1, где указанный ингибитор содержит одну радиоактивную метку. 3. Применение по п.1 или 2, в котором радиоактивная метка выбрана из группы, включающей 11 С и 14 С. 4. Применение по п.3, в котором радиоактивной меткой является 11 С. 5. Применение по любому из пп.1-4, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (I) d 6. Применение по п.3, в котором радиоактивной меткой является 14 С. 7. Применение по любому из пп.1-6, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (I) c 8. Применение по любому из пп.1-6, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (II) с 9. Применение по п.8, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (II) d 10. Применение по любому из пп.1-9, где указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы используется в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения. 11. Меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, выбранный из группы, состоящей из соединения формулы (I) d соединения формулы (I) с соединения формулы (II) с и соединения формулы (II) d 12. Фармацевтическая композиция, содержащая меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, в комбинации с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых инертных наполнителей. 13. Применение фармацевтической композиции по п.12 в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения. 14. Применение по п.10 или 13, где неврологическим нарушением является слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейная британская деменция, семейная датская деменция, нейродегенерация при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона. 15. Способ визуализации и детектирования старческих бляшек и/или нейрофибриллярных пучков в ткани головного мозга, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11. 16. Способ по п.15, где пациенту вводят указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или указанную фармацевтическую композицию по п.12 в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с амилоидными отложениями, меченое соединение детектируют. 17. Способ по п.15, где пациенту вводят указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или указанную фармацевтическую композицию по п.12 в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с тау-белками в нейрофибриллярных пучках, меченое соединение детектируют. 18. Способ по п.15, в котором неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, по отношению к старческим бляшкам. 19. Способ по п.15, в котором неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, по отношению к агрегатам тау-белков. 20. Способ детектирования амилоидных отложений в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11. 21. Способ детектирования амилоидных отложений у пациента in vivo, способ включает введение пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с амилоидным отложением. 22. Способ детектирования тау-белков в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11. 23. Способ детектирования нейрофибриллярных пучков у пациента in vivo, способ включает введение пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с тау-белками. 24. Способ по любому из пп.15-23, в котором детектирование осуществляют путем визуализации с помощью гамма-излучения, магнитно-резонансной визуализации, спектроскопии магнитного резонанса или флуоресцентной спектроскопии. 25. Способ по п.24, в котором методикой детектирования путем визуализации с помощью гамма-излучения является ПЭТ (позитронная эмиссионная томография) или ОФЭКТ (однофотонная эмиссионная компьютерная томография). 26. Набор, предназначенный для диагностики неврологического нарушения, который включает фармацевтическую композицию, определенную в п.12, и инструкции для использования указанного набора в соответствии с методиками, описанными в любом из пп.15-25. 27. Набор по п.26, где неврологическим нарушением является слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейная британская деменция, семейная датская деменция, нейродегенерация при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
028533 (13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации
и выдачи патента: 2017.11.30
(51) Int. Cl. A61K 51/04 (2006.01) A61K101/00 (2006.01)
(21) Номер заявки:
(22) Дата подачи:
201301334 2012.05.24
(54) МЕЧЕННЫЕ РАДИОАКТИВНЫМИ ИЗОТОПАМИ ИНГИБИТОРЫ ГЛУТАМИНИЛЦИКЛАЗЫ
61/490,654
2011.05.27
(33) US
(43) 2014.05.30
(86) PCT/EP2012/059649
(87) WO 2012/163773 2012.12.06
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ПРОБИОДРУГ АГ (DE)
(72) Изобретатель:
Хайзер Ульрих, Рамсбек Даниель, Демут Ханс-Ульрих (DE)
(74) Представитель:
Веселицкая И.А., Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б., Каксис Р.А., Белоусов Ю.В., Куликов А.В., Кузнецова Е.В. (RU)
(56) US-A1-2011092501 WO-A1-2008055945 WO-A1-2010026212 US-A1-2010040575
MIRKO BUCHHOLZ ET AL.: "Inhibitors for Human Glutaminyl Cyclase by Structure Based Design and Bioisosteric Replacement", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 52, no. 22, 26 November 2009 (2009-11-26), pages 7069-7080, XP55012984, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/jm900969p, figure 1
US-A1-2010028918
HARTLAGE-RUEBSAMEN MAIKE ET AL.: "Glutaminyl cyclase contributes to the formation of focal and diffuse pyroglutamate (pGlu)-A beta deposits in hippocampus via distinct cellular mechanisms", ACTA NEUROPATHOLOGICA, vol. 121, no. 6, June 2011 (2011-06), pages 705-719, XP002678702, cited in the application, published online on 8 February 2011, the whole document
WO-A1-2011110613
(57) В изобретении описано применение меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I)
и соединения формулы (II)
(П),
в качестве визуализирующих средств, предпочтительно, но не исключительно, в качестве визуализирующих средств, предназначенных для выявления неврологических нарушений. В изобретении также описаны фармацевтические композиции, содержащие меченные радиоактивными изотопами ингибиторы, и способы и наборы, предназначенные для выявления неврологических нарушений.
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к применению меченных радиоактивными изотопами ингибиторов глута-минилциклазы (QC) в качестве визуализирующих средств, предпочтительно, но не исключительно, в качестве применяющихся в медицине визуализирующих средств, предназначенных для выявления неврологических нарушений. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные меченные радиоактивными изотопами ингибиторы, и к способам и наборам, предназначенным для выявления неврологических нарушений.
Уровень техники
Глутаминилциклаза (QC, ЕС 2.3.2.5) катализирует внутримолекулярную циклизацию N-концевых остатков глутамина с образованием пироглутаминовой кислоты (pGlu*) с выделением аммиака. QC впервые была выделена Мессером (Messer) из латекса тропического растения Carica papaya в 1963 г. (Messer, M. 1963 Nature 4874, 1299). Спустя 24 года соответствующая ферментативная активность была обнаружена в гипофизе животных (Busby W.H.J. et al. 1987, J. Biol. Chem. 262, 8532-8536; Fischer W.H. and Spiess J. 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 3628-3632). В случае QC млекопитающих превращение Gin в pGlu с помощью QC смогли обнаружить для предшественников соединений TRH (тиреолиберин) и GnRH (гонадолиберин) (Busby W.H.J. et al. 1987, J. Biol. Chem. 262, 8532-8536; Fischer W.H. and Spiess J. 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 3628-3632). Кроме того, в предварительных экспериментах по выявлению локализации QC обнаружена ее совместная локализация с предполагаемыми продуктами катализа в бычьем гипофизе, что дополнительно подтверждает предположение о ее функции в синтезе пептидных гормонов (Bockers Т.М. et al. 1995 J. Neuroendocrinol. 7, 445-453). В противоположность этому физиологическая функция QC растений остается менее понятной. Предполагается, что фермент, выделенный из Cpapaya, играет роль в защите растений от патогенных микроорганизмов (El Moussaoui A. et al. 2001, Cell Mol. Life Sci. 58, 556-570). Недавно на основании сравнительного анализа последовательностей были идентифицированы предполагаемые QC, выделенные из других растений (Dahl S.W. et al. 2000, Protein Expr Purif 20, 27-36). Однако физиологическая функция этих ферментов все еще остается неясной.
Известные выделенные из растений и животных QC обладают строгой специфичностью по отношению к L-глутамину, находящемуся в N-концевом положении субстратов, и установлено, что их кинетические характеристики описываются уравнением Михаэлиса-Ментена (Pohl Т. et al. 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 10059-10063; Consalvo A.P. et al. 1988, Anal. Biochem. 175, 131-138; Gololobov M.Y. et al. 1996, Biol. Chem. Hoppe Seyler 377, 395-398). Однако сравнение первичной структуры QC, выделенной из Cpapaya, и высококонсервативных QC, выделенных из млекопитающих, не выявило никакой гомологии последовательностей (Dahl S.W. et al. 2000, Protein Expr. Purif. 20, 27-36). В то время как QC растений, вероятно, относятся к новому семейству ферментов (Dahl S.W. et al. 2000, Protein. Expr. Purif 20, 2736), установлено, что QC млекопитающих и бактериальные аминопептидазы обладают выраженной гомологией последовательностей (Bateman R.C et al. 2001, Biochemistry 40, 11246-11250), что позволяет сделать заключение о различном эволюционном происхождении QC, выделенных из растений и животных.
Недавно показано, что рекомбинантная QC человека, а также активность QC, полученной из экстрактов, выделенных из головного мозга, катализирует циклизацию N-концевого глутаминила, а также глутамата. Наиболее примечательными являются данные о том, что для катализируемого циклазой превращения Glu1 предпочтительным является значение pH, равное примерно 6,0, тогда как для превращения Gln1 в производные pGlu оптимальным является значение pH, равное примерно 8,0. Поскольку образование пептидов, родственных pGlu-Ap, можно подавлять путем ингибирования рекомбинантной QC человека и активности QC экстрактов, выделенных из гипофиза свиньи, фермент QC является мишенью для разработки лекарственного средства, предназначенного для лечения болезни Альцгеймера.
Болезнь Альцгеймера (БА) представляет собой самую распространенную форму слабоумия и является неизлечимым, дегенеративным и терминальным заболеванием. В 2006 г. во всем мире от него страдало 26,6 миллиона человек. Предполагается, что к 2050 г. во всем мире болезнью Альцгеймера будет страдать 1 из 85 человек. Обычно болезнь Альцгеймера диагностируют клинически на основании истории болезни пациента, а также историй болезней родственников и клинических наблюдений, основанных на наличии характерных неврологических и нейропсихологических симптомов и отсутствии альтернативных патологических состояний. Степень проявления заболевания дополнительно можно определить с помощью оценки умственной деятельности, включая тестирование памяти.
Совсем недавно визуализация стала важной методикой диагностики болезни Альцгеймера. Например, нейровизуализацию с помощью однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ) и позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ), если они доступны в качестве средств диагностики, можно использовать для подтверждения диагноза болезни Альцгеймера в сочетании с оценкой, включающей исследование психического состояния. Если индивидуум уже страдает слабоумием, то по сравнению с обычными подходами, в которых используют исследование психического состояния и анализ истории болезни, ОФЭКТ, возможно, является лучшей методикой, с помощью которой можно отличить болезнь Альцгеймера от других возможных случаев.
Новая методика, известная как PiB ПЭТ, разработана для прямой и четкой визуализации Р-амилоидных отложений in vivo с использованием индикатора, который селективно связывается с отложениями Ар. При использовании соединения PiB в методике ПЭТ проводят сканирование С с помощью ПЭТ. Результаты недавних исследований показали, что с помощью PiB-ПЭТ с точностью, равной 86%, можно предсказать, у каких людей, страдающих слабым нарушением познавательной способности, в течение 2 лет разовьется болезнь Альцгеймера, и с точностью, равной 92%, исключить вероятность развития болезни Альцгеймера.
Недавно получено сходное радиоактивное фармацевтическое соединение, использующееся для сканирования с помощью ПЭТ, называющееся (Е^-^-^-^-^-^-^^фторэтокси^токси^токс^пиридин-3-ил)винил)-№метилбензоламином (также известный, как 18F AV-45, флорбетапир-фтор-18 или флорбе-тапир), которое содержит обладающий большим периодом полураспада радиоактивный изотоп фтор-18, и оно испытано в качестве возможного средства диагностики у пациентов болезни Альцгеймера. Флор-бетапир, также как и PiB, связывается с Р-амилоидом, но благодаря содержанию фтор-18 обладает периодом полураспада, равным 110 мин, в отличие от PiB, которые обладают периодом полураспада, равным 20 мин. Также установлено, более значительный срок службы приводит к более значительной степени накопления индикатора в головном мозге страдающих БА (болезнь Альцгеймера) пациентов, в особенности в областях, для которых известно, что они связаны с бета-амилоидными отложениями.
Поэтому необходимы дополнительные визуализирующие средства, с помощью которых можно диагностировать неврологические нарушения, такие как болезнь Альцгеймера.
Описание чертежей
На фиг. 1 приведены итоговые изображения, полученные с помощью ПЭТ (0-60 мин) после введения соединения (I) двум крысам;
на фиг. 2 - зависимость радиоактивности от времени в головном мозге двух крыс (выраженная в процентах доля введенной дозы в пересчете на 1 г головного мозга) после введения соединения (I).
Подробное описание изобретения
Первым объектом настоящего изобретения является меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы (QC), предназначенный для применения в качестве визуализирующего средства.
В настоящем изобретении указание на "меченный радиоактивным изотопом" означает указание на соединение, в котором один или большее количество атомов заменены или замещены атомами, обладающими атомной массой или массовым числом, отличающимися от атомной массы или массового числа, обычно обнаруживающихся в природе. Одним неограничивающим исключением является 19F, который обеспечивает обнаружение молекулы, содержащей этот элемент без обогащения до количества, превышающего обнаруживающееся в природ. Поэтому соединения, содержащие заместитель 19F, также могут называться "меченные" и т.п. Термин "меченный радиоактивным изотопом" можно использовать взаимозаменяемым образом с терминами "изотопно-меченный", "меченный", "группа-изотопный индикатор" "изотопный маркер", "изотопная метка", "обнаруживаемый изотоп" или "радиолиганд".
В одном варианте осуществления ингибитор глутаминилциклазы (QC) содержит одну меченую радиоактивным изотопом группу.
Неограничивающие примеры подходящих групп-радиоактивных меток включают Н (D или дейтерий), Н (Т или тритий), 11C, 13C, 14C, 15N, 15N, 15O, 17O, 18O, 18F, 35S, 36Cl, 82Br, 75Br, 76Br, 77Br, 123I, 124I, 125I и 131I. Следует понимать, что изотопно-меченное соединение должно быть обогащено обнаруживаемым изотопом в степени, равной или превышающей степень, которая обеспечивает детектирование по методике, подходящей для конкретного случая применения, например в части молекул обнаруживаемых соединений, меченных с помощью С, атом углерода, содержащийся в меченной группе меченного соединения может быть заменен на С или другие изотопы углерода. То, какой радиоактивный изотоп включают в меченные радиоактивными изотопами соединения, зависит от конкретного случая применения этого меченного радиоактивным изотопом соединения. Например, для введения метки в бляшки или рецептор in vitro и в исследованиях конкуренции наиболее подходящими обычно являются соединения, в которые включены 3Н, 14С или I. Для методик визуализации in vivo наиболее подходящими обычно являются 11C, 13C, 18F, 19F, 120I, 123I, 131I, 75Br или 76Br. В одном варианте осуществления радиоактивной меткой является 11С. В альтернативном варианте осуществления радиоактивной меткой является 14С. В еще одном альтернативном варианте осуществления радиоактивной меткой является 13С.
В одном варианте осуществления ингибитором глутаминилциклазы (QC) является соединение формулы (I) (1 -(1 Н-бензо[ <1]имидазол-5-ил)-5-(4-пропоксифенил)имидазолидин-2-он):
Соединение формулы (I) описано как соединение примера 12 в WO 2010/026212 A1(Probiodrug AG). В одном варианте осуществления меченным радиоактивным изотопом соединением является соединение формулы (1)°
В одном варианте осуществления меченным радиоактивным изотопом соединением является соединение формулы (I)d
В одном варианте осуществления ингибитором глутаминилциклазы (QC) является соединение формулы (II) (1-(1Н-бензо[с1]имидазол-6-ил)-5-(2,3-Дифторфенил)-3-метокси-4-метил-Ш-пиррол-2(5Н)-он)
(II).
Соединение формулы (II) описано как соединение примера 8 в WO 2011/110613A1(Probiodrug AG). В одном варианте осуществления меченным радиоактивным изотопом соединением является соединение формулы (П)°
В другом варианте осуществления меченным радиоактивным изотопом соединением является соединение формулы (II)d
Введение радиоактивных меток в ингибиторы глутаминилциклазы (QC) можно провести в соответствии с известными методиками введения меток. Например, в WO 2010/111303 описан способ введения в соединения метки, изотопа фтор-18.
В одном варианте осуществления ингибитор, определенный в настоящем изобретении, используется в медицине в качестве визуализирующего средства. В другом варианте осуществления ингибитор, определенный в настоящем изобретении, используется в медицине в качестве визуализирующего средства, предназначенного для выявления неврологического нарушения.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая меченное радиоактивным изотопом соединение, определенное в настоящем изобретении, или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или полиморфную форму, включая все их таутомеры и стерео-изомеры, в комбинации с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых инертных наполнителей.
Фармацевтически приемлемые соли.
Ввиду близкого родства между свободными соединениями и соединениями в форме их солей или сольватов любое указание на соединение в этом контексте следует понимать и как указание на соответствующую соль, сольват или полиморфную форму, если при данных обстоятельствах это является возможным и подходящим.
Солями и сольватами ингибиторов глутаминилциклазы (QC) и их физиологически приемлемыми содержащими функциональные группы производными, которые являются подходящими для применения в медицине, являются такие, в которых противоион или включенный растворитель является фармацевтически приемлемым. Однако соли и сольваты, содержащие не являющиеся фармацевтически приемлемыми противоионы или включенные растворители, входят в объем настоящего изобретения, например, для использования в качестве промежуточных продуктов для получения других соединений и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов.
Подходящие соли, предлагаемые в настоящем изобретении, включают соли, образованные с органическими и неорганическими кислотами или основаниями. Фармацевтически приемлемые соли присоединения с кислотами включают соли, образованные с хлористоводородной, бромистоводородной, серной, азотной, лимонной, винной, фосфорной, молочной, пировиноградной, уксусной, трифторуксусной, трифенилуксусной, сульфаминовой, сульфаниловой, янтарной, щавелевой, фумаровой, малеиновой, яблочной, миндальной, глутаминовой, аспарагиновой, щавелево-уксусной, метансульфоновой, этансуль-фоновой, арилсульфоновой (например, п-толуолсульфоновой, бензолсульфоновой, нафталинсульфоно-вой или нафталиндисульфоновой), салициловой, глутаровой, глюконовой, трикарбаллиловой, коричной, замещенной коричной (например, замещенной фенилом, метилом, метоксигруппой или галогеном коричной кислотой, включая 4-метил- и 4-метоксикоричную кислоту), аскорбиновой, олеиновой, нафтой-ной, гидроксинафтойной (например, 1- или 3-гидрокси-2-нафтойной), нафталинакриловой (например, нафталин-2-акриловой), бензойной, 4-метоксибензойной, 2- или 4-гидроксибензойной, 4-хлорбензойной, 4-фенилбензойной, бензолакриловой (например, 1,4-бензолдиакриловой), изэтионовой кислотой, хлорной, пропионовой, гликолевой, гидроксиэтансульфоновой, памоевой, циклогексансульфаминовой, салициловой, сахариновой и трифторуксусной кислотой. Фармацевтически приемлемые соли с основаниями включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, и соли с органическими основаниями, такими как дихлоргексиламин и ^метил^-глюкамин.
Подразумевается, что все фармацевтически приемлемые соли присоединения с кислотами соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, входят в объем настоящего изобретения. Полиморфные кристаллические формы.
Кроме того, некоторые из кристаллических форм соединений могут существовать в полиморфных формах, и подразумевается, что они включены в объем настоящего изобретения. Кроме того, некоторые из соединений могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или с обычными органическими растворителями, и подразумевается, что такие сольваты также входят в объем настоящего изобретения. Со
единения, включая их соли, также можно получить в форме их гидратов или с включением других растворителей, использовавшихся для их кристаллизации.
Фармацевтически приемлемые инертные наполнители.
Так, в случае жидких пероральных препаратов, таких как, например, суспензии, эликсиры и растворы, подходящие носители и добавки, предпочтительно могут включать воду, гликоли, масла, спирты, вкусовые агенты, консерванты, окрашиваюшие агенты и т.п.; в случае твердых пероральных препаратов, таких как, например, порошки, капсулы, желатиновые капсулы и таблетки, подходящие носители и добавки включают крахмалы, сахара, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связующие, разрыхляющие агенты и т.п.
Носители, которые можно добавить к смеси, включают необходимые и инертные фармацевтические наполнители, включая, но не ограничиваясь только ими, подходящие связующие, суспендирующие агенты, смазывающие вещества, ароматизаторы, подсластители, консерванты, покрытия, разрыхляющие агенты, красители и окрашивающие агенты.
Растворимые полимеры, использующиеся в качестве носителей лекарственного средства, могут включать поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигид-роксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксид-полилизин, замещенный пальмитоильным остатком. Кроме того, соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно объединить с соединениями, относящимися к классу биологически разлагающихся полимеров, использующимися для обеспечения регулируемого высвобождения лекарственного средства, например, с полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, сложными полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианоакрилатами и со сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.
Подходящие связующие включают, без наложения ограничений, крахмал, желатин, натуральные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, подсластители, полученные из кукурузы, натуральные и синтетические камеди, такие как камедь акации, трагакантовая камедь, или олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п.
Разрыхлители включают, без наложения ограничений, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, определенная в настоящем изобретении, предназначенная для применения в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения.
Неограничивающие примеры соответствующих неврологических нарушений включают слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейную британскую деменцию, семейную датскую деменцию, нейродегенерацию при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона. В одном предпочтительном варианте осуществления неврологическим нарушением является болезнь Альцгеймера.
В одном варианте осуществления ингибитор или композиция, предлагаемая в настоящем изобретении, применяется для детектирования амилоидных пептидов.
В одном варианте осуществления ингибитор или композиция, предлагаемая в настоящем изобретении, применяется для детектирования тау-белков в нейрофибриллярных пучках.
Детектирование таких амилоидных пептидов применимо для детектирования и количественного определения содержания амилоидных отложений и/или нейрофибриллярных пучков при заболеваниях, включая, но не ограничиваясь только ими, средиземноморскую лихорадку, синдром Маки-Веллса, идио-патическую миелому, амилоидную полиневропатию, амилоидную кардиомиопатию, системный старческий амилоидоз, амилоидную полиневропатию, наследственное кровоизлияние в головной мозг с ами-лоидозом, синдром Дауна, почесуху, болезнь Крейцфельдта-Якоба, куру, синдром Герстмана-Штраусслера-Шейнкера, медуллярную карциному щитовидной железы, изолированный амилоидоз предсердий, [бета]2-микроглобулиновый амилоидоз у пациентов, подвергающихся гемодиализу, миозит с включенными тельцами, Р2-амилоидные отложения при мышечной слабости, хроническую травматическую энцефалопатию (ХТЭ) и диабет типа II при инсулиноме островков Лангерганса.
Меченные радиоактивным изотопом соединения, предлагаемые в изобретении, можно вводить любыми путями, известными специалисту в данной области техники. Например, введение может быть локальным или системным и его можно выполнять перорально, парентерально, путем ингаляции спрея, местно, ректально, ингаляционно, назально, трансбуккально, вагинально или с помощью имплантированного резервуара. Термин "парентеральный" при использовании в изобретении включает методики подкожной, внутривенной, внутриартериальной, внутримышечной, внутрибрюшинной, внутриоболочеч-ной, внутрижелудочковой, надчревной, внутричерепной и внутрикостной инъекции или вливания.
Доза может находиться в диапазоне от примерно 0,001 мкг/кг/сутки до примерно 10000 мг/кг/сутки. В одном варианте осуществления доза составляет от примерно 0,001 мкг/кг/сутки до примерно 10 г/кг/сутки. В другом варианте осуществления доза составляет от примерно 0,01 мкг/кг/сутки до примерно 1,0 г/кг/сутки. В еще одном варианте осуществления доза составляет от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг/сутки.
Точный режим введения и дозы могут меняться в зависимости от многих факторов, включая воз
раст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету пациента; выбор конкретных методик является стандартной процедурой для любого специалиста с общей подготовкой в данной области техники.
Режим может включать предварительное лечение и/или совместное введение с дополнительными соединениями, такими как, например, терапевтическое средство (средства).
Другим объектом настоящего изобретения является способ визуализации и детектирования старческих бляшек и/или нейрофибриллярных пучков в ткани головного мозга, способ включает введение в ткань ингибитора, определенного в настоящем изобретении, предназначенного для выявления неврологических нарушений.
В одном варианте осуществления неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства ингибитора, определенного в настоящем изобретении, по отношению к старческим бляшкам.
В одном варианте осуществления неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства ингибитора, определенного в настоящем изобретении, по отношению к агрегатам тау-белков.
Другим объектом настоящего изобретения является способ детектирования амилоидных отложений в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань ингибитора, определенного в настоящем изобретении, предназначенного для детектирования амилоидного отложения.
Другим объектом настоящего изобретения является способ детектирования амилоидных отложений у пациента in vivo, способ включает введение пациенту ингибитора, определенного в настоящем изобретении, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с амилоидным отложением.
Другим объектом настоящего изобретения является способ детектирования тау-белков в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань ингибитора, определенного в настоящем изобретении, предназначенного для детектирования нейрофибриллярных пучков.
Другим объектом настоящего изобретения является способ детектирования нейрофибриллярных пучков у пациента in vivo, способ включает введение пациенту ингибитора, определенного в настоящем изобретении, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с тау-белками.
В одном варианте осуществления способ относится к детектированию старческих бляшек и нейро-фибриллярных пучков, характерных для неврологического заболевания.
В одном варианте осуществления детектирование осуществляют путем визуализации с помощью гамма-излучения, магнитно-резонансной визуализации, спектроскопии магнитного резонанса или флуоресцентной спектроскопии.
В одном варианте осуществления методикой детектирования путем визуализации с помощью гамма-излучения является ПЭТ или ОФЭКТ. Позитронная эмиссионная томография (ПЭТ) является точной и сложной методикой, в которой используются изотопы, производящиеся на циклотроне. Испускающий позитроны радиоактивный изотоп вводят обычно путем инъекции, и он накапливается в ткани-мишени. При его распаде происходит испускание позитрона, который быстро соединяется с соседним электроном, что приводит к одновременному испусканию двух поддающихся регистрации гамма-лучей в противоположных направлениях. Их детектируют в камере ПЭТ и получают чрезвычайно точную информацию об их происхождении. Наиболее важную клиническую роль ПЭТ играет в онкологии, при использовании в качестве индикатора фтор-18, поскольку показано, что это является наиболее точной неинвазивной методикой детектирования и оценки большинства типов рака. Ее также используют для визуализации сердца и головного мозга.
Ряд использующихся в медицине методик диагностики, включая ПЭТ и ОФЭКТ, в которых используют меченные радиоактивными изотопами соединения, хорошо известны в данной области техники. ПЭТ и ОФЭКТ являются чрезвычайно чувствительными методиками, в которых требуются небольшие количества меченных радиоактивными изотопами соединений, называющихся индикаторами. Меченные радиоактивными изотопами соединения перемещаются, накапливаются и подвергаются превращению in vivo точно таким же образом, как и соответствующие не обладающие радиоактивностью соединения. В индикаторы, или зонды, можно ввести радиоактивный изотоп, пригодный для визуализации с помощью ПЭТ, такой как 11С, 13N, 15О, 18F, 64Cu и 124I, или радиоактивный изотоп, пригодный для визуализации с помощью ОФЭКТ, такой как 99Тс, 77Br, 61Cu, 153Gd, 123I, 125I, 131I и 32Р.
Изображения, полученные с помощью ПЭТ, создаются на основе распределения в ткани пациента индикаторов, предназначенных для молекулярной визуализации, содержащих изотопы, испускающие позитроны. Методика ПЭТ обеспечивает возможность детектирования нарушения функций в исследуемых тканях или органах на клеточном уровне. ПЭТ используют в клинической онкологии, например, для визуализации опухолей и метастазов, ее используют для диагноза некоторых заболеваний головного мозга, а также для картирования головного мозга и функции сердца. Аналогичным образом, ОФЭКТ можно использовать в дополнение к любому исследованию, проводимому путем визуализации с помощью гамма-излучения, когда может оказаться полезным точное трехмерное изображение, например, для визуализации опухоли, инфекции (лейкоцитов), щитовидной железы или костей.
Специалисту в данной области техники известны различные пути детектирования меченых соединений с целью визуализации. Например, для детектирования меченных радиоактивными изотопами соединений можно использовать позитронную эмиссионную томографию (ПЭТ) или однофотонную эмиссионную компьютерную томографию (ОФЭКТ). То, какую метку включают в соединение, может зависеть от необходимой методики детектирования. Специалисту в данной области техники известно детектирование испускающих позитроны атомов, таких как F, с помощью ПЭТ. Настоящее изобретение также относится к конкретным соединениям, описанным в настоящем изобретении, в которых атом F заменен нерадиоактивным атомом фтора. Специалисту в данной области техники известно детектирование испускающих позитроны атомов, таких как 123I или 99Тс, с помощью ОФЭКТ.
Меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, предлагаемый в настоящем изобретении, обычно должен обладать радиоактивностью и концентрацией радиоактивного вещества, достаточной для обеспечения достоверного диагноза. При визуализации амилоидных отложений и ней-рофибриллярных пучков также можно провести количественную оценку так, что можно определить количество амилоидных отложений и нейрофибриллярных пучков.
Одним из основных предварительных условий использования визуализирующего средства для исследования головного мозга in vivo является его способность проходить через неповрежденный гемато-энцефалический барьер после внутривенной болюсной инъекции. На первой стадии способа визуализации, предлагаемого в настоящем изобретении, в ткань или пациенту вводят меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, предлагаемый в настоящем изобретении, в обнаруживаемом количестве. Соединение обычно является компонентом фармацевтической композиции, и его вводят в ткань или пациенту по методикам, известным специалистам в данной области техники.
В альтернативном варианте осуществления пациенту вводят меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, предлагаемый в настоящем изобретении, в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с амилоидными отложениями и/или тау-белками, меченое соединение детектируют с помощью неинвазивной методики. В другом варианте осуществления настоящего изобретения пациенту вводят меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, предлагаемый в настоящем изобретении, соединению предоставляют время, достаточное для связывания с амилоидными отложениями, и затем у пациента берут образец ткани и содержащееся в ткани меченное радиоактивным изотопом соединение детектируют вдали от пациента. В другом варианте осуществления настоящего изобретения у пациента берут образец ткани и в образец ткани вводят меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, предлагаемый в настоящем изобретении. Через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с амилоидными отложениями и/или тау-белками, соединение детектируют.
Обнаруживаемое количество означает количество меченого соединения, необходимое для его детектирования с помощью выбранной методики детектирования. Специалисты в данной области техники могут легко определить количество меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилцикла-зы, предлагаемого в настоящем изобретении, которое необходимо ввести пациенту для обеспечения детектирования. Например, пациенту можно вводить меченное радиоактивным изотопом соединение с увеличением его количества до обеспечения детектирования соединения с помощью выбранной методики детектирования. Для обеспечения детектирования соединений в соединения вводят метку.
Необходимый промежуток времени можно легко определить путем введения пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, предлагаемого в настоящем изобретении, в обнаруживаемом количестве и последующего детектирования меченного радиоактивным изотопом соединения чрез различные промежутки времени после введения.
Другим объектом настоящего изобретения является набор, предназначенный для диагностирования неврологического нарушения, который включает фармацевтическую композицию, определенную в настоящем изобретении, и инструкции для использования указанного набора в соответствии с методиками, описанными в настоящем изобретении.
Примеры
Пример 1. Получение [бензимидазол-2-14С]содержащего соединения формулы (I)b (соединение формулы (I)c).
Me3SiCN, АсОН
комнатная температура
К 5-амино[2-14С]бензимидазолгидрохлориду (1,30 г, 6,27 ммоль, 375 мКи) добавляли воду (10 мл),
Промежуточный продукт 1
затем 2 М раствор гидроксида натрия (6,3 мл, 12,60 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли уксусную кислоту (6,2 мл) и взвесь перемешивали при комнатной температуре. Затем в течение 15 мин по каплям добавляли 4-пропоксибензальдегид (935 мг, 5,69 ммоль). Также в течение 15 мин по каплям добавляли триметилсилилцианид (846 мг, 8,52 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере при комнатной температуре азота в течение 3 ч.
Реакционную смесь при перемешивании по каплям добавляли к охлажденному льдом 28% раствору гидроксида аммония (15 мл). Продукт экстрагировали этилацетатом (3x20 мл) и экстракты объединяли. После сушки над сульфатом натрия взвесь фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью флэш-хроматографии и искомые фракции объединяли. Растворитель удаляли при пониженном давлении и оставшееся твердое вещество сушили в вакууме до постоянной массы и получали искомое соединение (1,67 г, 5,22 ммоль, 312 мКи).
Промежуточный продукт 2
К промежуточному продукту 1 (267 мг, 0,84 ммоль, 50,0 мКи) в атмосфере азота добавляли взвесь 10% палладия на угле, выпускающегося фирмой Degussa, type E101 R/W (51 мг), в уксусной кислоте (3 мл). Смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 18 ч.
Катализатор удаляли фильтрованием через слой целита, затем промывали уксусной кислотой (10 мл). Фильтрат выпаривали досуха при пониженном давлении и к остатку добавляли толуол (20 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении и получали искомое соединение (0,75 ммоль, эквивалентно 45 мКи).
[Бензимидазол-2-14С]содержащее соединение формулы (1)а
К промежуточному продукту 2 (0,75 ммоль, 45 мКи) добавляли тетрагидрофуран (ТГФ, 2,8 мл), триэтиламин (ТЭА, 227 мг, 2,25 ммоль) и 1,1-карбонилдиимидазол (КДИ, 146 мг, 0,90 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 2 ч.
После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду (15 мл) и продукт экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Экстракты объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл), затем сушили над сульфатом натрия. Взвесь фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении.
Продукт очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой. Искомые фракции объединяли и органический растворитель удаляли при пониженном давлении. К оставшейся водной фазе добавляли насыщенный раствор хлорида натрия (15 мл) и продукт экстрагировали этилацетатом (2x15 мл). Экстракты объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Это давало искомое соединение (0,098 ммоль, эквивалентно 5,9 мКи).
[Бензимидазол-2-14С]содержащее соединение формулы (I)a (0,098 ммоль, эквивалентно 5,9 мКи) растворяли в смеси н-гептан:этанол:метанол:диэтиламин (500:250:250:5; 5 мл) и изомеры разделяли с помощью хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием колонки Pirkle
[Бензимидазол-2-14С]содержащее соединение формулы (1)ъ
Whelk.
Искомые фракции объединяли и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в смеси ацетонитрил:вода (33:66; 5 мл), затем лиофилизировали и получали твердое вещество, которое сушили в высоком вакууме до постоянной массы. Это давало искомое соединение (14,0 мг, 0,0415 ммоль, 2,49 мКи).
Технические характеристики.
Удельная радиоактивность.
Определенная с помощью
Масс-спектрометрии 61 мКи/ммоль 2,26 ГБк/ммоль
Гравиметрического анализа 178 мкКи/мг 6,59 МБк/мг
Эквивалентно 60 мКи/ммоль 2,22 ГБк/ммоль
Молекулярная масса (при этой удельной радиоактивности): 338,3.
Колонка: Температура: Растворитель А: Растворитель В:
Радиохимическая чистота по данным ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография): 99,9%.
Phenomenex Luna С 18(2) 150x4,6 мм
температура окружающей среды
0,05% трифторуксусной кислоты в воде
0,05% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле
Градиентный режим:
Время (мин) С
%В С
Скорость потока: 1,0 мл/мин
УФ-детектирование: 254 нм Химическая чистота по данным ВЭЖХ: 99,0%.
Колонка: Phenomenex Luna С 18(2) 150x4,6 мм
Температура: температура окружающей среды
Растворитель А: Растворитель В: Градиентный режим:
Скорость потока: УФ-детектирование:
0,05% трифторуксусной кислоты в воде 0,05% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле Время(мин) 0 15 20 21 30 100 100 0 0
1,0 мл/мин 254 нм
Хиральная чистота по данным ВЭЖХ: > 99,9%.
Колонка: Regis Pirkle Whelk 02 (R,R) 250x4,6 мм 10 мкм
Температура: температура окружающей среды
Растворитель: н-гептан:этанол:метанол:диэтиламин (50:25:25:0,5)
Градиентный режим: в изократическом режиме в течение 30 мин Скорость потока: 1,0 мл/мин
Пример 2.
Получение [бензимидазол-2-1 ^содержащего соединения формулы (1)° (соединение формулы (I)d)
r11
C]C02
1) LiEtjBH/ТГФ
2} НгО
О 2 н. ВОДН. р-р HCI
140°С,10 мин
(i)°
В реактор, содержащий 100 мкл ТГФ и 50 мкл LiEt3BH, при -20°C подавали [nQCO2. После проведения реакции в течение 40 с проводили гидролиз путем добавления 500 мкл H2O. В качестве продукта реакции получали ["dHCOOH.
Затем добавляли (8)-1-(3,4-диаминофенил)-5-(4-пропоксифенил)имидазолидин-2-он (1 мг в 300 мкл 2н. водного раствора HCl). После проведения реакции при 140°C в течение 10 мин реакционную смесь охлаждали и продукт очищали с помощью ВЭЖХ.
Колонка: колонка для ВЭЖХ Chromolith Performance RP-18 с монолитным наполнителем, содержащим блокированные концевые группы, 100-4,6 мм (MERCK).
Растворитель: 16% ацетонитрила в H2O (0,1% ТФК (трифторуксусная кислота)).
Скорость потока: 6 мл/мин.
RT (время удерживания): (8)-1-(3,4-диаминофенил)-5-(4-пропоксифенил)имидазолидин-2-он: 3-7 мин; соединение (I)d: 8-9,5 мин.
Фракцию, содержащую продукт, соединение (I)d, собирали в 100 мл H2O и для проведения дополнительной очистки загружали в колонку SepPak tc18. Колонку SepPak tc18 промывали с помощью 10 мл Н2О. Затем соединение (I)d элюировали с помощью 3 мл этанола. Затем продукт сушили в атмосфере аргона при 96°C.
Конечный раствор радиоактивного индикатора получали путем растворения соединения (I)d в 100 мкл этанола при добавлении NaCl (конечная концентрация этанола не более 10%). Удельная радиоактивность: 35,7 ГБк/мкмоль.
Стабильность конечного раствора радиоактивного индикатора через 1,5 ч при комнатной температуре: > 98% (n=6).
Технические характеристики. Аналитическая ВЭЖХ.
ВЭЖХ: Agilent HP 1200 DAD, включая автоматический пробоотборник и детектор Raytest RA (BGO
cell).
Колонка: колонка для ВЭЖХ Chromolith Performance RP-18 с монолитным наполнителем, содержащим блокированные концевые группы, 100-4,6 мм (MERCK).
Растворитель: А: 0,1% ТФК в Н2О.
В: Ацетонитрил. Скорость потока: 1 мл/мин. Градиентный режим:
0-10 мин: 15-20% В 10-24 мин: 20-50% В 24-26 мин: 50-95% В
26- 27 мин: 95% В
27- 28 мин: 15% В
28- 30 мин: 15% В Установление равновесия: 8 мин: 15% В (до инжектирования). УФ-детектирование: 225 нм.
Аналитическая ВЭЖХ - хиральная методика.
ВЭЖХ: Agilent HP 1100 DAD, включая детектор Raytest RA (ПЭТ).
Колонка: Chiralcel OD-H (ODH0CE-PA130) 4,6x250 мм + 4,5x10 мм, включая форколонку. Растворитель: смесь н-гексан/этанол состава 80/20. Скорость потока: 1 мл/мин. УФ-детектирование: 225 нм. Пример 3.
Получение 1-(1Н-бензимидазол-5-ил)-5-(4-пропоксифенил-[13С6]-имидазолидин-2-она (соединение формулы (I)e).
Промежуточный продукт 1. Пропоксибензол-[13С6]
он о
NaOH.flMCO,
^"С йод пропан iac"^ ^1ас
Фенол-[13С6] (1,20 г, 12,0 ммоль) растворяли в ДМСО (диметилсульфоксид, 12 мл). Добавляли тон-коизмельченный гидроксид натрия (1,9 г, 48 ммоль) и энергично перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем в течение 3 мин по каплям добавляли йодпропан (4,08 г, 24,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Для обработки небольшого количества смеси отбирали образец и его анализировали с помощью ГХ-МС (газовая хроматография-масс-спектрометрия). Нали
чие одного пика при 6,3 мин (m/z 142) указывало на завершение реакции, и реакционную смесь обрабатывали путем ее добавления к охлажденной воде (100 мл). Смесь, реакция в которой остановлена, экстрагировали гексанами (4x25 мл), экстракты объединяли и последовательно промывали разбавленным раствором гидроксида натрия и рассолом. Органический экстракт сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме и получали сиропообразный продукт (1,4 г, 9,9 ммоль, 82%). Реакцию повторяли аналогичным образом с использованием 1,6 г фенол-[13С6] (16 ммоль) и получали 1,50 г (10,6 ммоль, 66%) продукта, который объединяли с полученным выше препаратом. Объединенное искомое соединение использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. Промежуточный продукт 2. 1-Бром-4-пропоксибензол-[13Сб]
13i ацетонитрил, 131
К промежуточному продукту 1 (2,76 г, 19,4 ммоль), растворенному в ацетонитриле (15 мл), добавляли нитрат аммония (0,15 г, 1,9 ммоль, 0,1 экв., чистота соответствовала требованиям ACS (Американское химическое общество)) и перемешивали в течение 10 мин. Добавляли N-бромсукцинимид (3,42 г, 19,2 ммоль, 0,99 экв., перекристаллизованный из воды) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Данные анализа с помощью ГХ-МС подтверждали израсходование исходного вещества и указывали на наличие пика нового содержащего бром продукта при 10,8 мин (m/z 220+222). Реакцию останавливали с помощью 50 мл этилацетата и 50 мл гексанов. После экстракции водного раствора дополнительным количеством смеси этилацетат-гексаны (1:1, 4x25 мл) объединенные органические слои промывали водой, затем рассолом, затем сушили над сульфатом натрия. Фильтрование и выпаривание растворителя давали искомое соединение (4,2 г, 19 ммоль, 98%), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточный продукт 3. 4-Пропоксибензальдегид-[13Сб]
n-BuLi, ТГФ, -78°С ДМФ
К промежуточному продукту 2 (4,0 г, 18 ммоль) в сухом ТГФ (16 мл) в инертной атмосфере при -78°C в течение 5 мин добавляли раствор н-бутиллития (2,5М в гексанах, 10,9 мл, 27,1 ммоль, 1,5 экв.). Эту холодную смесь перемешивали в течение еще 75 мин. Затем медленно добавляли раствор сухого ДМФ ^^-диметилформамид, 2,6 г, 36 ммоль, 2 экв.) в сухом ТГФ (16 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч, при этом охлаждающая баня нагревалась до 0°C. Данные анализа с помощью ГХ-МС указывали на завершение реакции и наличие пика продукта при 11,5 мин (m/z 170). Реакцию останавливали холодной разбавленной лимонной кислотой и смесь экстрагировали смесью метил-трет-бутиловый эфир-гексан (1:1, 4x25 мл). Объединенные экстракты промывали водой (2x25 мл), затем рассолом (25 мл) и сушили над сульфатом натрия. Фильтрование и выпаривание растворителя давали 3,5 г неочищенного продукта. Этот неочищенный продукт очищали на диоксиде кремния с использованием смеси этилацетат-гексаны (7,5:92,5) и получали 2,83 г искомого соединения (16,6 ммоль, 92%).
Промежуточный продукт 4. [(1Н-Бензимидазол-5-иламино)]-(4-пропоксифенил-[13Сб])ацетонитрил
-. ^ Т р т >
j 5-аминобензимидазол, ^v^^^^^N
триметилсилилцианид, N
° уксусная кислота
Промежуточный продукт 3 (2,0 г, 11,8 ммоль) добавляли к раствору 5-аминобензимидазола (1,73 г, 13,0 ммоль, 1,1 экв.) в уксусной кислоте (14 мл) и перемешивали в течение 15 мин. В течение 15 мин по каплям добавляли триметилсилилцианид (2,3 мл, 1,8 г, 18 ммоль) и полученный темный реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. За протеканием реакции следили с помощью ТСХ (тонкослойная хроматография) (метанол-хлороформ, 10:90) и МС. Реакцию останавливали путем добавления смеси к холодному 25% раствору гидроксид аммония (35 мл). Полученный твердый продукт оставляли в реакторе и растворяли в этилацетате и водную смесь дополнительно экстрагировали этилацетатом (3x25 мл). Объединенные органические растворы промывали водой (2x25 мл), затем рассолом (25 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Промежуточный продукт 5. К1-(1Н-Бензимидазол-5-ил)-1-(4-пропоксифенил-[13Сб])этан-1,2-диамин
"L А. Ж
Pd-C, Н2
Н N
уксусная кислота г
Неочищенный промежуточный продукт 4 растворяли в уксусной кислоте (40 мл) и гидрировали с использованием Pd на угле (10%, 0,8 г) при давлении водорода, равном 40 фунт-сила/дюйм2, в течение 24 ч. Фильтрование через целит и выпаривание растворителя давали 10 г сиропообразного продукта. Данные ТСХ (метанол-хлороформ 10:90, Rf=0) и MC(+) (m/z 317) указывали на завершение реакции. Неочищенный продукт очищали на колонке с диоксидом кремния с использованием смеси метанол-дихлорметан-триэтиламин (2 л, 10:90:0,1), затем с использованием смеси метанол-дихлорметан-триэтиламин (1,2 л, 20:80:0,1) и получали 2,9 г искомого соединения (9,2 ммоль, 78%), за 2 стадии.
1-(1H-Бензимидазол-5-ил)-5-ил)-5-(4-пропоксифенил-[13С6]имидазолидин-2-он (соединение формулы (1)е)
(1Г
К раствору триэтиламина (1,28 г, 12,6 ммоль, 4 экв.) и 1,1'-карбонилдиимидазола (КДИ, 0,77 г, 4,7 ммоль, 1,5 экв., предварительно перекристаллизованного из сухого ТГФ) в сухом ТГФ (15 мл) в течение 5 мин добавляли неразбавленный промежуточный продукт 5 (1,00 г, 3,16 ммоль). Полученную смесь нагревали в инертной атмосфере при 73°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали, добавляли к воде (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (4x25 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2x25 мл) и рассолом (25 мл) и сушили над сульфатом натрия. После фильтрования и выпаривания растворителя получали сиропообразное вещество (0,7 г), которое очищали на диоксиде кремния с использованием смеси метанол-дихлорметан (20:80). Эта очистка давала 0,245 г искомого соединения (ТСХ: метанол-хлороформ (20:80), Rf=0,55, перемещение одновременно с эталонным стандартом; МС(+) m/z 344/345) и получали еще 0,070 г смеси, содержащей искомое соединение.
Реакцию повторяли с использованием еще 1,7 г промежуточного продукта 5 (5,4 ммоль), изменение методики заключалось в использовании только 1,2 экв. КДИ (6,5 ммоль). Этот второй препарат очищали на диоксиде кремния в градиентном режиме с использованием смеси метанол-дихлорметан (от 7:93 до 20:80) и получали 0,376 г желтовато-коричневого искомого соединения. Также как и в предыдущей реакции, получали смесь (0,301 г), содержащую искомый продукт. На каждой стадии очистки фракции, содержащие обладающее более высокой чистотой искомое соединение, идентифицировали с помощью ВЭЖХ (Eclipse XDB-C18, 4,6x150 мм, 3,5 мкм, А = вода-ацетонитрил-трифторуксусная кислота (90:10:0,1), В = вода-ацетонитрил-трифторуксусная кислота (10:90:0,1), 0-100% В за 20 мин, rt=9,2 мин). На этой стадии очистки чистота объединенного продукта составляла примерно 90%. Конечную очистку искомого соединения проводили на колонке Amberchrom CG161m (4x30 см) с использованием элюиро-вания в ступенчатом градиентном режиме смесью вода-ацетонитрил (85:15, 75:25, 67:33). И в этом случае фракции, содержащие чистый продукт, идентифицировали с помощью ОФ-ВЭЖХ (ОФ = обращенная фаза). Объединенные фракции лиофилизировали в течение ночи. Затем твердый продукт повторно растворяли в смеси метанол-дихлорметан (5:95) и промывали разбавленным вдвое насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом, при этом все водные промывочные растворы подвергали тщательной обратной экстракции. Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель выпаривали путем азеотропной перегонки с гептаном и получали 0,317 г искомого соединения (0,93 ммоль).
Технические характеристики.
Чистота по данным ВЭЖХ.
Методика: Waters Acquity с детектором ELS
Phenomenex Polar RP 4,6x150x4 мкм
А: Н20
В: МеОН
Время (мин) %А %В
0 95 5
5 5 95
9 5 95
Скорость потока: 0,6 мл/мин
Результат: > 99%
RT: 6,43 мин
Содержание изотопа по данным масс-спектрометрии. Методика: Agilent MSD 1100.
Условия: режим ионизации: ЭР (электрораспыление)-ИАД (ионизация при атмосферном давлении). Положительная полярность.
6 мМ формиата аммония в смеси метанол:вода состава 7:3.
Результат: пик молекулярного иона при значении массы, равном 343, находится в соответствии с ожидаемым включением метки и методикой ионизации в масс-спектрометрии.
Примечания: полное содержание изотопа в соединении (!)е составляет > 99% М+6. Пример 4.
Получение 1-(1Н-бенз[d]имидазол-5-ил)-5-(4-гидроксифенил-[13С6]имидазолидин-2-она (соедине-
ние формулы (I))
К раствору соединения примера 3 (0,200 г, 0,58 ммоль) в сухом дихлорметане в инертной атмосфере при -20°C по каплям добавляли трибромид бора (0,17 мл, 0,44 г, 1,8 ммоль). Затем использовали охлаждающую баню из воды со льдом (0°C) и холодную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. С использованием бани с водой, обладающей комнатной температурой, реакционную смесь перемешивали в течение еще 1 ч. Реакцию останавливали путем медленного добавления воды (18 мл). Органический
слой отделяли и повторно экстрагировали дополнительным количеством воды. Все прозрачные бесцветные водные слои (pH ~ 3) объединяли, охлаждали до 5°C и подщелачивали путем добавления 1н. раствора гидроксида натрия. Водную фазу охлаждали льдом в течение 1 ч и центрифугировали и получали белый осадок, который промывали холодной водой, сушили над драйеритом в течение ночи и получали 0,138 г соединения, нуждающегося в дополнительной очистки. Использовали колонку Amberchrom CG161m (2x30 см) и градиентный режим с использованием смеси вода-ацетонитрил (от 10:90 до 50:50). Фракции анализировали с помощью ОФ-ВЭЖХ и объединяли и получали 2 порции искомого соединения
(0,038 г и 0,063 г).
Технические характеристики.
Чистота по данным ВЭЖХ
Методика: Zorbax Bonus RP 4,6x150x5 мкм
А: Н20
В: МеОН
Время (мин) %А %В
0 90 10
5 90 10
10 5 95
20 5 95
Скорость потока: 1,0 мл/мин; УФ: 254 нм
Результат: 97,4%
RT: 9,88 мин и 9,5 мин для 2 порций
Содержание изотопа по данным масс-спектрометрии. Методика: Agilent MSD 1100. Условия: режим ионизации: ЭР-ИАД. Положительная полярность.
6 мМ формиата аммония в смеси метанол:вода состава 7:3.
Результат: пик молекулярного иона при значении массы, равном 301, находится в соответствии с ожидаемым включением метки и методикой ионизации в масс-спектрометрии.
Примечания: полное содержание изотопа в соединении (I)f составляет > 99% М+6. Пример 5.
Получение [бензимидазол-2-14С]содержащих соединений формул (II)a и (II)b (соединения формул (II)c и (II)d)/
Промежуточный продукт 1
К суспензии 5-амино[2-14С]бензимидазол•2HCl (поставщик - фирма IOI; Catalogue No. CC-544) (52,2 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,87 ммоль) в метаноле (2 мл) добавляли карбонат калия (468 мг, 3,388 ммоль) и триэтиламин (236 мкл, 1,694 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч, фильтровали и выпаривали в роторном испарителе и получали коричневое твердое вещество. Это коричневое твердое вещество растворяли в метаноле (1 мл) и перемешивали при 0°C. К этому раствору добавляли 2,3-дифторбензальдегид (119 мг, 0,837 ммоль). Раствору давали нагреваться до комнатной температуры и его перемешивали в течение 2 ч. Растворитель удаляли путем выпаривания в роторном испарителе и получали масло (52 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,867 ммоль).
Промежуточный продукт 2
Промежуточный продукт 1 (52 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,867 ммоль) растворяли в 1,2-диметоксиэтане (5 мл). К этому раствору добавляли диэтилоксалопропионат (183 мкл, 0,969 ммоль) и раствор кипятили с обратным холодильником при 95°C в течение 72 ч.
Продукт очищали с помощью ВЭЖХ на колонке Gemini C18 при элюировании в градиентном режиме смесью 20 мМ гидроксид аммония:метанол, затем выпаривали в роторном испарителе и получали твердое вещество (21,2 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,353 ммоль).
Промежуточный продукт 3
НС1
Промежуточный продукт 2 (21,2 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,353 ммоль) растворяли в концентрированной хлористоводородной кислоте (6 мл) и кипятили с обратным холодильником при 110°C в течение 16 ч.
Твердое вещество отфильтровывали, суспендировали в воде (10 мл) и подщелачивали насыщенным раствором бикарбоната натрия до pH 8,1. Перемешивание продолжали в течение 30 мин, затем смесь фильтровали и выпаривали в роторном испарителе и получали твердое вещество (16,2 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,27 ммоль).
Рацемическое [бензимидазол-2-14С]содержащее соединение формулы (П)а (соединение формулы
(П)с)
TMS-CH2N2 ДИПЭ
(ИТ
При перемешивании к раствору промежуточного продукта 3 (16,2 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,27 ммоль) в метаноле (4 мл) добавляли диизопропилэтиламин (ДИПЭА, 53 мкм, 0,303 ммоль), затем (триметилси-лил)диазометан (2М раствор в эфире, 275 мкл, 0,55 ммоль). Через 15 мин добавляли еще одну аликвоту (триметилсилил)диазометана (275 мкл, 0,55 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 1 ч. Растворители удаляли путем выпаривания в роторном испарителе и получали твердое вещество. Затем твердое вещество очищали с помощью ВЭЖХ на колонке Gemini C18 при элюировании в градиентном режиме смесью 20 мМ гидроксид аммония:метанол, затем выпаривали в роторном испарителе и получали твердое вещество.
(II)d)
Чистый изомер [бензимидазол-2-14С]содержащего соединения формулы (II)b (соединение формулы
(П)а
Рацемическое соединение (II)c очищали с помощью ВЭЖХ на колонке Chirobiotic TAG при элюи-ровании смесью 40 мМ ацетат аммония:метанол (4:6). Чистый изомер соединения (II)c сушили вымораживанием в течение ночи и получали белое твердое вещество (1,94 мКи, 60 мКи/ммоль, 0,032 моль).
Технические характеристики.
Удельная радиоактивность.
Определенная с помощью:
60 мКи/ммоль
Масс-спектрометрии: 60 мКи/ммоль 2,22 ГБк/ммоль
Молекулярная масса (при этой удельной радиоактивности): 357,3. Радиохимическая чистота по данным ВЭЖХ.
Колонка: Zorbax Bonus RP 3,5 мкм (150x4,6 мм)
Растворитель А: Растворитель В: Градиентный режим:
/0В
Температура: 25°С
Скорость потока: 1,0 мл/мин
Детектирование: гомогенный радиохимический детектор, ДДМ
(детектор с диодной матрицей), при 225 нм Результат: 98,1% Хиральная чистота по данным ВЭЖХ.
Колонка: Chirobiotic Tag 5 мкм (250x4,6 мм)
Растворитель А: 40 мМ аммонийацетатный буфер рН 4,0
Растворитель В: метанол
Градиентный режим: 60% В в изократическом режиме в течение 20 мин Температура: 20°С
Скорость потока: 1 мл/мин
Детектирование: гомогенный радиохимический детектор, ДДМ, при 220
Результат: 98,8% Биологические примеры.
Предварительное исследование на мелких животных с помощью ПЭТ с использованием крыс. Двум самкам крыс Sprague-Dawley вводили соединение (I)d.
Крыса 1: 109,5 МБк соединения (I)d, растворенного в 500 мкл смеси 0,9% NaCl/EtOH (9/1, об./об.), вводили внутривенно в хвостовую вену. Удельная радиоактивность меченого соединения (I)d составляла 23,7 ГБк/мкмоль. Конечная доза соединения (I)d, введенная крысе 1, составляла 0,009 мг/кг.
Крыса 2: 29,5 МБк соединения (I)d и 0,57 мг не содержащего метку соединения (I)d вводили внутривенно в хвостовую вену. Конечная доза соединения (I)d, введенная крысе 2, составляла 3,8 мг/кг. Сканирование с помощью ПЭТ.
С помощью динамической ПЭТ проводили сканирование областей головы у крыс 1 и 2 в течение 60 мин. В конце сканирования с помощью ПЭТ из ретроорбитальных областей брали пробы плазмы крови. Итоговые изображения, полученные с помощью ПЭТ, приведены на фиг. 1.
Пробы плазмы объемом 1,5 мл тщательно перемешивали с 3,0 мл ацетонитрила. После центрифугирования надосадочную жидкость выпаривали в атмосфере аргона при 100°C. Высушенный остаток растворяли в 2 мл смеси CH3CN/0,1% раствор ТФК (9/1) и к нему добавляли 20 мкл не содержащего метку соединения (I)d (2,3 мг/кг) и определяли радиоактивность с помощью ВЭЖХ.
Колонка: колонка для ВЭЖХ Chromolith Performance RP-18 с монолитным наполнителем, содержащим блокированные концевые группы, 100-4,6 мм (MERCK).
Растворитель: 13% ацетонитрила в Н20 (0,1% ТФК)
Скорость потока: 5 мл/мин
УФ-детектирование: 225 нм На фиг. 2 приведена зависимость радиоактивности от времени. Концентрации радиоактивного вещества в головном мозге крыс (полная радиоактивность) в плазме после сканирования с помощью ПЭТ составляли 0,27% ВД (введенная доза)/г для крысы 1 и 0,19% ВД/г для крысы 2.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы (QC), выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I)
(П).
и соединения формулы (II)
или их стереоизомеров,
в качестве визуализирующего средства, где указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы содержит по меньшей мере одну радиоактивную метку и где указанная радиоактивная метка выбрана из группы, включающей 2Н (D или дейтерий), 3Н (Т или тритий), 11С, 14С, 13N, 15N, 15О, 17О, 18О и 18F.
2. Применение ингибитора по п.1, где указанный ингибитор содержит одну радиоактивную метку.
3. Применение по п.1 или 2, в котором радиоактивная метка выбрана из группы, включающей 11С и
4. Применение по п.3, в котором радиоактивной меткой является 11С.
5. Применение по любому из пп.1-4, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глута-минилциклазы является соединение формулы (I)d
2.
6. Применение по п.3, в котором радиоактивной меткой является 14С.
7. Применение по любому из пп.1-6, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (1)с
8. Применение по любому из пп.1-6, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (П)с
9. Применение по п.8, где меченным радиоактивным изотопом ингибитором глутаминилциклазы является соединение формулы (II)d
10. Применение по любому из пп.1-9, где указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы используется в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения.
11. Меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы, выбранный из группы, состоящей из соединения формулы (I)d
10.
12. Фармацевтическая композиция, содержащая меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, в комбинации с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых инертных наполнителей.
13. Применение фармацевтической композиции по п.12 в качестве визуализирующего средства для выявления неврологического нарушения.
14. Применение по п.10 или 13, где неврологическим нарушением является слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейная британская деменция, семейная датская де-менция, нейродегенерация при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона.
15. Способ визуализации и детектирования старческих бляшек и/или нейрофибриллярных пучков в ткани головного мозга, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11.
16. Способ по п.15, где пациенту вводят указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или указанную фармацевтическую композицию по п.12 в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с амилоидными отложениями, меченое соединение детектируют.
17. Способ по п.15, где пациенту вводят указанный меченный радиоактивным изотопом ингибитор глутаминилциклазы по п.11 или указанную фармацевтическую композицию по п.12 в обнаруживаемом количестве и через промежуток времени, достаточный для связывания соединения с тау-белками в ней-рофибриллярных пучках, меченое соединение детектируют.
12.
18. Способ по п.15, в котором неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, по отношению к старческим бляшкам.
19. Способ по п.15, в котором неврологическое заболевание выявляют с помощью определения сродства меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, по отношению к агрегатам тау-белков.
20. Способ детектирования амилоидных отложений в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11.
21. Способ детектирования амилоидных отложений у пациента in vivo, способ включает введение пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с амилоидным отложением.
22. Способ детектирования тау-белков в ткани головного мозга ex vivo или in vitro, способ включает введение в ткань меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в
п.11.
23. Способ детектирования нейрофибриллярных пучков у пациента in vivo, способ включает введение пациенту меченного радиоактивным изотопом ингибитора глутаминилциклазы, определенного в п.11, в эффективном количестве и определение у пациента степени связывания соединения с тау-белками.
24. Способ по любому из пп.15-23, в котором детектирование осуществляют путем визуализации с помощью гамма-излучения, магнитно-резонансной визуализации, спектроскопии магнитного резонанса или флуоресцентной спектроскопии.
25. Способ по п.24, в котором методикой детектирования путем визуализации с помощью гамма-излучения является ПЭТ (позитронная эмиссионная томография) или ОФЭКТ (однофотонная эмиссионная компьютерная томография).
26. Набор, предназначенный для диагностики неврологического нарушения, который включает фармацевтическую композицию, определенную в п.12, и инструкции для использования указанного набора в соответствии с методиками, описанными в любом из пп.15-25.
27. Набор по п.26, где неврологическим нарушением является слабое нарушение познавательной способности, болезнь Альцгеймера, семейная британская деменция, семейная датская деменция, нейро-дегенерация при синдроме Дауна и болезнь Гентингтона.
23.
О 10 20 30 40 50 80
Время (мин)
Фиг. 2
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028533
- 1 -
028533
- 1 -
028533
- 1 -
028533
- 1 -
028533
- 1 -
028533
- 1 -
028533
- 4 -
028533
- 9 -
028533
- 9 -
028533
- 9 -
028533
- 9 -
028533
- 9 -
028533
- 15 -
028533
- 15 -
028533
- 15 -
028533
- 15 -
028533
- 16 -
028533
- 16 -
028533
- 21 -
|
