[RU]

1. Способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду, где способ включает нанесение глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату; где значительная часть растений Brassica находится приблизительно на стадии цветения, которая характеризуется наличием по меньшей мере от 10% открытых цветков до 10% на стадии стручков, или после стадии цветения и где значительная часть открытых цветков или стручков не демонстрирует значительного изменения окраски после внесения глифосатного средства обработки; где растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).

2. Способ по п.1, где растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) в комбинации с ферментом, который обеспечивает переносимость гербицида глуфосината.

3. Способ по п.1, где открытые цветки не демонстрируют значительного изменения окраски в течение 5 дней после нанесения глифосатного средства обработки.

4. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки в качестве активного ингредиента содержит 675, 900, 1350, 1800, 2025, 2700 или 3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде однократного применения.

5. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента до 5400 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде одного или нескольких кумулятивных внесений.

6. Способ внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к глифосату, причем способ включает: (а) нанесение одного или нескольких глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где устойчивость к глифосату обусловлена экспрессией фермента глифосат ацетилтрансферазы (GAT) у растений Brassica; (b) получение семян Brassica от растений Brassica, где значительная часть стручков не прекращает развития после обработки глифосатом.

7. Способ предотвращения потери урожая или ухудшения урожая при сборе растений Brassica, где способ включает: (а) применение первого глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии семядольных листьев и растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT); (b) нанесение одного или нескольких дополнительных глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; (c) получение семян Brassica из растений Brassica, где потеря урожая минимизирована вследствие значительного снижения изменения окраски или прекращения развития стручков после одного или нескольких внесений глифосата на поздних стадиях.

8. Способ по п.7, где средний урожай Brassica снижен не более чем на 5% по сравнению со средством для контрольной обработки.

9. Способ борьбы с сорняками в поле, где способ включает: (a) высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу; (b) нанесение глифосатного средства обработки на поле с Brassica, содержащее один или несколько сорняков, где значительная часть растений Brassica находится на поздней стадии развития, выбранной из группы, состоящей из появления соцветий, цветения, развития и созревания семян, и, как следствие, значительное снижение роста сорняков на поле с Brassica.

10. Способ борьбы с заболеваниями в популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле, где способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и глифосатное средство обработки дополнительно содержит средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов; где значительная часть популяции Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, не экспрессирует нечувствительную EPSPS и значительная часть популяции Brassica не демонстрирует значительного хлороза.

11. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят после стадии первого цветка.

12. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии 10% цветков.

13. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии роста канолы от 60 до 80 по шкале BBCH.

14. Способ снижения сорного материала во время уборки урожая семян Brassica популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле, где способ включает: (a) нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и в поле насчитывается один или несколько сорняков, выбранных из группы, состоящей из осота и амаранта, и где популяция Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и популяция Brassica не экспрессирует нечувствительную EPSPS; (b) подавление роста сорняка перед уборкой урожая таким образом, что количество сорного материала снижено во время уборки урожая.

15. Способ контроля сорняков в поздний период в поле с сельскохозяйственной культурой Brassica без оказания отрицательного воздействия на урожай, где способ включает: (a) высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, где растения экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) таким образом, что экспрессия фермента приводит к эффективной переносимости глифосата; (b) нанесение эффективного количества глифосата на растения Brassica, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу; (c) подавление роста сорняков в поле и где урожай сельскохозяйственной культуры Brassica не снижен более чем на 5% по сравнению с контрольными растениями Brassica, не экспрессирующими фермент глифосат ацетилтрансферазу.

16. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-2700 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии 10% цветков.

17. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии 10% цветков.

18. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.

19. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает применение средства для поздней подкормки.

20. Способ по п.15, где глифосат предварительно смешивают со средством для борьбы с заболеваниями, выбранными из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.

21. Способ повышения чистоты семян канолы, где способ включает: (a) высаживание популяции растений канолы с переносимостью глифосата в поле; (b) внесение глифосата в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов, не являющихся канолой, где растения канолы метаболизируют глифосат и не экспрессируют нечувствительную EPSPS и где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; (с) улучшение чистоты семян канолы путем подавления роста видов, не являющихся канолой, за счет позднего внесения глифосата.

22. Способ снижения затрат на уборку урожая Brassica, где способ включает снижение популяции сорняков в поле с растущей Brassica путем нанесения глифосата на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, которые характеризуются по меньшей мере 10% открытых цветков, и уборку урожая сельскохозяйственной культуры Brassica, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).

23. Способ по п.22, где применение глифосата не приводит к значительному хлорозу или некрозу растений Brassica.

24. Способ по п.22, где глифосат инактивируется в растениях Brassica, в том числе в генеративной ткани.

25. Способ борьбы с сорняками в поле Brassica, где способ включает нанесение второго глифосатного средства обработки на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии генеративного роста и где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).

26. Способ по п.25, где фермент глифосат ацетилтрансфераза (GAT) представляет собой GAT-полипептид.

27. Способ по п.25, где растения Brassica, толерантные к глифосату, не экспрессируют нечувствительную EPSPS.

28. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более низкой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.

29. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более высокой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.

30. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает: (a) выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле; (b) нанесение глифосата при норме приблизительно 900 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев; (c) осуществление второго внесения глифосата при норме 900 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.

31. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает: (a) выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле; (b) нанесение глифосата при норме 840 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев; (c) осуществление второго внесения глифосата при норме 840 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.

(57) Реферат / Формула:

1. Способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду, где способ включает нанесение глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату; где значительная часть растений Brassica находится приблизительно на стадии цветения, которая характеризуется наличием по меньшей мере от 10% открытых цветков до 10% на стадии стручков, или после стадии цветения и где значительная часть открытых цветков или стручков не демонстрирует значительного изменения окраски после внесения глифосатного средства обработки; где растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).

2. Способ по п.1, где растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) в комбинации с ферментом, который обеспечивает переносимость гербицида глуфосината.

3. Способ по п.1, где открытые цветки не демонстрируют значительного изменения окраски в течение 5 дней после нанесения глифосатного средства обработки.

4. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки в качестве активного ингредиента содержит 675, 900, 1350, 1800, 2025, 2700 или 3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде однократного применения.

5. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента до 5400 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде одного или нескольких кумулятивных внесений.

6. Способ внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к глифосату, причем способ включает: (а) нанесение одного или нескольких глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где устойчивость к глифосату обусловлена экспрессией фермента глифосат ацетилтрансферазы (GAT) у растений Brassica; (b) получение семян Brassica от растений Brassica, где значительная часть стручков не прекращает развития после обработки глифосатом.

7. Способ предотвращения потери урожая или ухудшения урожая при сборе растений Brassica, где способ включает: (а) применение первого глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии семядольных листьев и растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT); (b) нанесение одного или нескольких дополнительных глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; (c) получение семян Brassica из растений Brassica, где потеря урожая минимизирована вследствие значительного снижения изменения окраски или прекращения развития стручков после одного или нескольких внесений глифосата на поздних стадиях.

8. Способ по п.7, где средний урожай Brassica снижен не более чем на 5% по сравнению со средством для контрольной обработки.

9. Способ борьбы с сорняками в поле, где способ включает: (a) высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу; (b) нанесение глифосатного средства обработки на поле с Brassica, содержащее один или несколько сорняков, где значительная часть растений Brassica находится на поздней стадии развития, выбранной из группы, состоящей из появления соцветий, цветения, развития и созревания семян, и, как следствие, значительное снижение роста сорняков на поле с Brassica.

10. Способ борьбы с заболеваниями в популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле, где способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и глифосатное средство обработки дополнительно содержит средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов; где значительная часть популяции Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, не экспрессирует нечувствительную EPSPS и значительная часть популяции Brassica не демонстрирует значительного хлороза.

11. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят после стадии первого цветка.

12. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии 10% цветков.

13. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии роста канолы от 60 до 80 по шкале BBCH.

14. Способ снижения сорного материала во время уборки урожая семян Brassica популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле, где способ включает: (a) нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и в поле насчитывается один или несколько сорняков, выбранных из группы, состоящей из осота и амаранта, и где популяция Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и популяция Brassica не экспрессирует нечувствительную EPSPS; (b) подавление роста сорняка перед уборкой урожая таким образом, что количество сорного материала снижено во время уборки урожая.

15. Способ контроля сорняков в поздний период в поле с сельскохозяйственной культурой Brassica без оказания отрицательного воздействия на урожай, где способ включает: (a) высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, где растения экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) таким образом, что экспрессия фермента приводит к эффективной переносимости глифосата; (b) нанесение эффективного количества глифосата на растения Brassica, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу; (c) подавление роста сорняков в поле и где урожай сельскохозяйственной культуры Brassica не снижен более чем на 5% по сравнению с контрольными растениями Brassica, не экспрессирующими фермент глифосат ацетилтрансферазу.

16. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-2700 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии 10% цветков.

17. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии 10% цветков.

18. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.

19. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает применение средства для поздней подкормки.

20. Способ по п.15, где глифосат предварительно смешивают со средством для борьбы с заболеваниями, выбранными из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.

21. Способ повышения чистоты семян канолы, где способ включает: (a) высаживание популяции растений канолы с переносимостью глифосата в поле; (b) внесение глифосата в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов, не являющихся канолой, где растения канолы метаболизируют глифосат и не экспрессируют нечувствительную EPSPS и где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; (с) улучшение чистоты семян канолы путем подавления роста видов, не являющихся канолой, за счет позднего внесения глифосата.

22. Способ снижения затрат на уборку урожая Brassica, где способ включает снижение популяции сорняков в поле с растущей Brassica путем нанесения глифосата на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, которые характеризуются по меньшей мере 10% открытых цветков, и уборку урожая сельскохозяйственной культуры Brassica, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).

23. Способ по п.22, где применение глифосата не приводит к значительному хлорозу или некрозу растений Brassica.

24. Способ по п.22, где глифосат инактивируется в растениях Brassica, в том числе в генеративной ткани.

25. Способ борьбы с сорняками в поле Brassica, где способ включает нанесение второго глифосатного средства обработки на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии генеративного роста и где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).

26. Способ по п.25, где фермент глифосат ацетилтрансфераза (GAT) представляет собой GAT-полипептид.

27. Способ по п.25, где растения Brassica, толерантные к глифосату, не экспрессируют нечувствительную EPSPS.

28. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более низкой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.

29. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более высокой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.

30. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает: (a) выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле; (b) нанесение глифосата при норме приблизительно 900 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев; (c) осуществление второго внесения глифосата при норме 900 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.

31. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает: (a) выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле; (b) нанесение глифосата при норме 840 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев; (c) осуществление второго внесения глифосата при норме 840 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.

---

(19)
Евразийское
патентное
ведомство
028528 (13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации
и выдачи патента: 2017.11.30
(51) Int. Cl. A01N57/20 (2006.01) A01P13/00 (2006.01)
(21) Номер заявки:
(22) Дата подачи:
201591711 2014.03.11
(54) ВНЕСЕНИЕ ГЛИФОСАТА ДЛЯ БОРЬБЫ С СОРНЯКАМИ У BRASSICA
61/779,347
2013.03.13
(33) US
(43) 2016.02.29
(86) PCT/US2014/022908
(87) WO 2014/159306 2014.10.02
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ПАЙОНИР ХАЙ-БРЕД ИНТЕРНЭШНЛ, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Шарн Дэвид Джордж, Гуэвара Дэвид, Косайелни Чэдвик Брюс, МакКлинчи Скотт, Пател Джаянтилал, Тульзиерам Ломас (CA)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) CLAYTON ET AL.: "Glyphosate Timing and Tillage System Effects on Glyphosate-Resistant Canola (Brassica napus)", WEED TECHNOLOGY, CHAMPAIGN, IL, US, vol. 16,31 January 2002 (2002-01-31), pages 124-130, XP009178638, ISSN: 0890-037X, DOI: 10.1614/0890-037X(2002)016 [0124:GTATSE]2.0.CO;2, the whole document
John Moore: "Weed control strategies for glyphosate tolerant crops", 17 May 2010 (2010-0517), XP055124786, Retrieved from the Internet: URL:http://www. herbiguide .com. au/Downloads/Wee d control strategies for glyphosate tolerant crops.pdf, [retrieved on 2014-06-23], the whole document
Duane R. Berglund ET AL.: "Canola Production A-686 (Revised) Professor Emeritus and Former Extension Agronomist", 1 January 2007 (2007-01-01), XP055124498, Retrieved from the Internet: URL:http://www.ag.ndsu.edU/pubs/plantsci/ crops/a686.pdf, [retrieved on 2014-06-20], page 4, column 2 - page 5, column 1
MARTIN ET AL.: "Critical period of weed
control in spring canola", WEED SCIENCE, WEED SCIENCE SOCIETY OF AMERICA, CHAMPAIGN, IL, US, vol. 49, no. 3, 31 May 2001
(2001-05-31), pages 326-333, XP009178645, ISSN: 0043-1745, DOI: 10.1614/0043-1745(2001)049
[0326:CPOWCI]2.0.CO;2, abstract
(57) В изобретении предусмотрены способы внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду. Более конкретно, глифосатные средства обработки вносят на значительную часть растений Brassica, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии, которая следует после стадии 2-6 листьев, такой как, например, значительная часть растений Brassica, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии от 10% открытых цветков до приблизительно 10% стручков. В изобретении предусмотрены способы, при которых глифосат вносят на поздних стадиях развития Brassica.
Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки США № 61/779347, поданной 13 марта 2013 г., полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.
Область изобретения
Настоящее раскрытие относится к области сельскохозяйственной биотехнологии и, более конкретно, к области трансгенных культурных растений и времени внесения гербицида.
Предпосылки изобретения
Биотехнологию применяли в отношении видов Brassica по многим причинам, в том числе для улучшения разновидностей канолы, повышения урожая, переносимости стрессов, модифицированного потребления масел и других улучшенных признаков, таких как переносимость гербицида. Что касается переносимости гербицида при коммерческом производстве сельскохозяйственной культуры Brassica, желательным является легкое и быстрое устранение нежелательных растений (т.е. "сорняков") из поля с Brassica. Одна такая система обработки предусматривала бы применение культурных растений, которые обладают переносимостью одного или нескольких гербицидов, так что при распылении гербицида на поле с культурными растениями с переносимостью гербицида культурные растения продолжали бы развиваться, тогда как сорняки, не обладающие переносимостью гербицида, погибали или серьезно повреждались.
Были разработаны разновидности канолы с переносимостью гербицида для устойчивости/переносимости определенных гербицидов. Возможность контролировать широкий спектр сорняков в случае канолы с устойчивостью к гербициду привела к быстрому внедрению такой технологии. Минимальная обработка почвы, повышенные урожаи и улучшенный контроль сорняков являются некоторыми примерами преимуществ технологии применения канолы с устойчивостью к гербициду. Однако известно, что реакция канолы на внесения гербицида сильно зависит от системы устойчивости к гербициду, которую применяют на конкретном поле.
Стратегическое планирование времени внесения гербицида для разновидностей канолы с переносимостью гербицида приводит к экономическому эффекту для производителей канолы, поскольку плотность сорняков и биомасса сорняков являются главными ограничениями в производстве канолы. Существует возможность нескольких внесений гербицидов у сельскохозяйственных культур канолы с устойчивостью к гербициду, и стадия сельскохозяйственной культуры является одним из главных показателей для определения подходящего времени внесения гербицида у канолы.
Настоящее раскрытие относится к способам применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду, и, более конкретно, вид Brassica, толерантный к глифосату.
Краткое описание изобретения
В данном документе предусмотрены способы внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду.
Первый аспект отражает способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду. Способ включает нанесение глифосатного средства для обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится приблизительно на стадии цветения, которая характеризуется наличием по меньшей мере от приблизительно 10% открытых цветков до приблизительно 10% на стадии стручков, или после стадии цветения, и где значительная часть открытых цветков или стручков не демонстрирует значительного изменения окраски после внесения глифосатного средства обработки.
В варианте осуществления растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).
В варианте осуществления растения Brassica, толерантные к глифосату, экпрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) в комбинации с ферментом, который обеспечивает переносимость гербицида глуфосината.
В варианте осуществления открытые цветки не демонстрируют значительное изменение окраски в течение 5 дней после внесения глифосатного средства обработки.
В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента приблизительно 675, 900, 1350, 1800, 2025, 2700 или 3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде однократного внесения.
В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента до приблизительно 5400 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде одного или нескольких кумулятивных внесений.
Другой аспект отражает способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к глифосату. Способ включает нанесение одного или нескольких глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где толерантность к глифосату обусловлена экспрессией мета-болизирующего глифосат фермента у растений Brassica; и получение семян Brassica от растений Brassica,
где значительная часть стручков не прекращают развития после внесения глифосатного средства обработки.
Другой аспект отражает способ предотвращения потери урожая или ухудшения урожая при уборке урожая из растений Brassica. Способ включает нанесение первого глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифо-сату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии семядольных листьев, и растения Brassica экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент; внесение одного или нескольких дополнительных глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; и получение семян Brassica от растений Brassica, где потери урожая минимизированы вследствие значительного снижения изменения окраски или прекращения развития стручков после одного или нескольких внесений глифосата на поздних стадиях.
В варианте осуществления растения Brassica экспрессируют глифосат ацетилтрансферазу (GAT).
В варианте осуществления средний урожай Brassica снижен не более чем на 5% по сравнению с контрольным средством обработки.
Другой аспект настоящего раскрытия отражает способ борьбы с сорняками в поле. Способ включает высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу; и нанесение глифосатного средства обработки на поле с Brassica, содержащее один или несколько сорняков, где значительная часть растений Brassica находится на поздней стадии развития, выбранной из группы, состоящей из появления соцветий, цветения, развития и созревания семян, и тем самым значительно снижают рост сорняков на поле с Brassica.
Другой аспект настоящего раскрытия отражает способ борьбы в поле с заболеваниями популяции Brassica, толерантной к глифосату. Способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где глифосатное средство обработки дополнительно содержит средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов; и где значительная часть популяции Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и не экспрессирует нечуствительную 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), и где значительная часть популяции Brassica не демонстрирует значительного хлороза.
В варианте осуществления глифосатное средство обработки наносят после стадии первого цветка.
В варианте осуществления глифосатное средство обработки вносят на стадии приблизительно 10% цветков.
В другом варианте осуществления глифосатное средство обработки наносят на стадии роста канолы от приблизительно 60 до приблизительно 80 по шкале BBCH.
Аспект настоящего раскрытия относится к способу уменьшения количества сорного материала во время уборки урожая семян Brassica популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле. Способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где в поле насчитывается один или несколько сорняков, выбранных из группы, состоящей из осота и амаранта, где популяция Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и популяция Brassica не экспрес-сирует нечувствительную EPSPS; и контроль роста сорняка перед уборкой урожая, так что количество сорного материала снижено во время уборки урожая.
Аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками в позднем периоде в поле с сельскохозяйственной культурой Brassica без оказания отрицательного воздействия на урожай. Способ включает высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, где растения экспресси-руют метаболизирующий глифосат фермент, так что экспрессия фермента приводит к эффективной устойчивости к глифосату; внесение эффективного количества глифосата на растения Brassica, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу; и подавление роста сорняков в поле, и где урожай сельскохозяйственной культуры Brassica не снижается более чем на 5% по сравнению с контрольными растениями Brassica, не экспрессирующими метаболизирующий глифосат фермент.
В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит 1350-2700 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии приблизительно 10% цветков.
В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит 1350-3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га, и значительная часть растений Brassica находится на стадии приблизительно 10% цветков.
В другом варианте осуществления применение глифосата дополнительно включает средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.
В другом варианте осуществления применение глифосата дополнительно включает применение средства для поздней подкормки.
В другом варианте осуществления глифосат предварительно смешивают со средством для борьбы с заболеваниями, выбранным из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.
Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу повышения чистоты семян канолы. Спо
соб включает высаживание популяции растений канолы, толерантных к глифосату, в поле; внесение глифосата в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов, не являющихся кано-лой, где растения канолы метаболизируют глифосат и не экспрессируют нечуствительную EPSPS, и где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; и улучшение чистоты семян канолы при помощи подавления роста видов, не являющихся канолой, путем позднего внесения глифосата.
Другой аспект настоящего раскрытия отражает способ снижения стоимости уборки урожая Brassica. Способ включает снижение популяции сорняков в поле с растущей Brassica путем нанесения глифосата на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, которые характеризуются по меньшей мере 10% открытых цветков, и уборку урожая сельскохозяйственной культуры Brassica, где растения Brassica экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент.
В варианте осуществления внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу или некрозу растений Brassica.
В другом варианте осуществления глифосат инактивируется в растениях Brassica, в том числе в генеративной ткани.
Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками в поле с Brassica. Способ включает нанесение второго глифосатного средства обработки на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии генеративного роста, и где растения Brassica экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент.
В другом варианте осуществления метаболизирующий глифосат фермент представляет собой GAT-полипептид.
В другом варианте осуществления растения Brassica, толерантные к глифосату, не экспрессируют нечувствительную EPSPS.
В другом варианте осуществления второе глифосатное средство обработки применяют в более низкой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.
В другом варианте осуществления второе глифосатное средство обработки вносят в более высокой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.
Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу. Способ включает выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле; внесение глифосата при норме приблизительно 900 г кислотного эквивалента (г к.э.)/га (га) в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев; и проведение второго внесения глифосата при норме приблизительно 900 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии после стадии 6 листьев.
Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica с переносимостью глифосата, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу. Способ включает выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле; внесение глифосата при норме приблизительно 840 г к.э./га в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся от стадии семядольных листьев до стадии 6 листьев; и осуществление второго внесения глифосата при норме приблизительно 840 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии после стадии 6 листьев.
Краткое описание графических материалов
Настоящее раскрытие можно более полно понять из следующего подробного описания и сопутствующих графических материалов, которые образуют часть настоящей заявки.
На фиг. 1 показаны данные по эффективности гербицида из экспериментов по распылению глифо-сата. На чертеже представлены восемь трансгенных линий. Процент некротической реакции сельскохозяйственной культуры показан на оси y, а виды обработок показаны на оси x. Показаны данные для 5 дней после обработки и 10 дней после обработки. "Контроль" представляет собой обработку с помощью традиционных гербицидов для снижения количества сорняков в контрольных участках.
На фиг. 2 показаны данные по эффективности гербицида для восьми трансгенных линий в случае шести различных глифосатных средств обработки. На оси x показан тип средства обработки. На оси у показан процент хлоротического повреждения.
На фиг. 3 показаны данные по эффективности гербицида для восьми трансгенных линий в случае четырех различных глифосатных средств обработки. На оси y показаны процентные доли урожая относительно 2X средства обработки на стадиях 3-5 листьев. На оси х показаны различные типы средств обработки.
На фиг. 4 показаны данные по эффективности гербицида для семи GAT1-элементов при внесении глифосатных средств обработки. На оси x показан номер элемента. На оси y показан урожай (% от 2X обработки).
Подробное описание
Настоящее раскрытие относится к способам применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду. В частности, глифосатные средства обработки наносят на значительную часть растений Brassica, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии, которая следует после стадии 2-6 листьев, такой как, например, значительная часть растений Brassica, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии от 10% открытых цветков до стадии приблизительно 10% стручков.
Настоящее раскрытие теперь будет более подробно описано ниже в данном документе со ссылкой на прилагаемые графические материалы, на которых показаны некоторые, но не все варианты осуществления настоящего раскрытия. В действительности, настоящее раскрытие можно осуществлять во многих различных формах и его не следует рассматривать как ограниченное вариантами осуществления, изложенными в данном документе; скорее, данные варианты осуществления представлены с тем, чтобы данное раскрытие соответствовало требованиям действующего законодательства. Одинаковые числа относятся к одинаковым элементам по всему документу.
Специалисту в данной области, к которой относится настоящее раскрытие, будут понятны множественные модификации и другие варианты осуществления настоящего раскрытия, изложенного в данном документе, при использовании идей, представленных в вышеприведенном описании и сопутствующих графических материалах. Таким образом, следует понимать, что настоящее раскрытие не должно ограничиваться конкретными раскрытыми вариантами осуществления, и подразумевается, что в объем прилагаемой формулы изобретения включены модификации и другие варианты осуществления. Хотя в данном документе используются специальные выражения, они используются только в общем и описательном смысле, а не в целях ограничения.
Единицы, префиксы и символы обозначены в их форме, принятой в Международной системе единиц (СИ). Если не указано иное, нуклеиновые кислоты записаны слева направо в ориентации от 5' к 3'; а аминокислотные последовательности записаны слева направо в ориентации от амино- до карбоксиконца. Числовые диапазоны, перечисляемые в описании, охватывают числа, определяющие диапазон, и включают каждое целое число в определенном диапазоне. Нуклеозиды могут называться в данном документе с помощью их однобуквенных символов, рекомендованных Комиссией по номенклатуре IUPAC-IUBMB. Термины, определяемые далее, более полно определены со ссылкой на настоящее описание в целом. Заголовки разделов, представленные по всему описанию, представлены для удобства, а не для ограничения различных целей и вариантов осуществления настоящего раскрытия.
Раскрытие каждой ссылки, изложенной в данном документе, включено в данный документ посредством ссылки во всей полноте.
Используемые в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если из контекста явно не следует иное. Таким образом, например, ссылка на "растение" включает множество таких растений; ссылка на "клетку" включает одну или несколько клеток и их эквиваленты, известные специалистам в данной области, и так далее.
Используемый в данном документе термин "содержащий" означает "включающий, но без ограничений".
Используемый в данном документе термин "Brassica" означает любое растение Brassica и включает все разновидности растений, которые можно скрещивать с Brassica.
Используемый в данном документе термин "растение" включает растительные клетки, органы растений, протопласты растительных клеток, тканевые культуры растительных клеток, из которых можно регенерировать растения, растительные каллюсы, скопления растительных клеток и растительные клетки, которые являются интактными в растениях или частях растений, таких как зародыши, пыльца, семяпочки, семена, листья, цветки, ветви, плоды, стебли, корни, кончики корней, пыльники и т.п. Полученное зрелое семя может использоваться в качестве пищи, корма, топлива или в других коммерческих или промышленных целях, или с целью выращивания или воспроизводства вида. Потомство, варианты и мутанты регенерированных растений также включены в объем настоящего раскрытия.
Трансгенный "объект" получают при помощи трансформации растительных клеток с помощью ге-терологичной(ых) ДНК-конструкции(й), в том числе кассеты экспрессии нуклеиновой кислоты, которая содержит представляющий интерес трансген, регенерации популяции растений из клеток, каждая из которых содержит вставленный трансген, и отбора конкретного растения, которое характеризуется вставкой в конкретном местоположении в геноме. Объект характеризуют фенотипически по экспрессии трансгена(ов). На генетическом уровне объект представляет собой часть набора генов растения. Термин "объект" также относится к потомству, полученному путем полового ауткросса между трансформантом и другой разновидностью, которая включает гетерологичную ДНК. Даже после повторных возвратных скрещиваний с реккурентным родителем вставленная ДНК и фланкирующая ДНК из трансформированного родителя присутствуют у потомства скрещивания в том же местоположении в хромосоме. Термин "объект" также относится к ДНК из исходного трансформанта, содержащей вставленную ДНК и фланкирующую последовательность, непосредственно прилегающую к вставленной ДНК, которая, как ожидается, передается потомству в результате полового скрещивания одной родительской линии, которая содер
жит вставленную ДНК (например, исходный трансформант и потомство, полученное в результате самоопыления), и родительской линии, которая не содержит вставленную ДНК.
В данном документе тестировали трансгенные объекты, экспрессирующие гены GAT1 и GAT2. GAT1, упомянутый в данном документе, представляет собой GAT-объект Brassica DP-073496-4 (международная патентная PCT заявка № PCT/US2010/058011, включенная посредством ссылки). GAT2, упомянутый в данном документе, представляет собой другую трансгенную линию Brassica, экспрессирующую вариант GAT.
В отличие от растений Brassica, экспрессирующих нечувствительную EPSPS, GAT-экспрессирующие растения Brassica становятся способными переносить гербицид глифосат благодаря действию фермента глифосат ацетилтрансферазы, который инактивирует или обезвреживает глифосат в ходе одной ферментативной стадии. Ферментативное N-ацетилирование глифосата приводит к переносимости глифосата у растений Brassica, раскрытых в данном документе.
В данном документе демонстрируется эффективность глифосатных средств обработки на поздних генеративных стадиях (например, 10% открытых цветков) при сниженном/минимальном изменении окраски (хлороз) или некрозе, вместе с отсутствием значительного снижения урожая семян Brassica.
Термин "зародышевая плазма" относится к особи, группе особей или клону, представляющим генотип, разновидность, вид, или культуру, или их генетический материал.
Фраза "гибридные растения" относится к растениям, которые получают в результате скрещивания между генетически различными особями.
Повреждение растения можно измерять с применением нескольких параметров, таких как процент некротического повреждения и/или процент хлоротического повреждения.
Процент некротического повреждения описывает визуальную классификацию, основанную на процентной доле растений, которые имеют коричневые или желтеющие пятна, в результате обработки гербицидом, где 100% представляет полностью погибшее растение, а 0% обозначает, что коричневые или желтеющие пятна у обработанных растений отсутствовали.
Процент хлорозного повреждения описывает визуальную классификацию процентной доли растений с желтеющими апикальной меристемой, самыми молодыми листьями или старыми листьями, где 100% обозначает, что вся ткань является желтой, а 0% обозначает отсутствие желтеющей ткани у растений, обработанных гербицидом.
Процентная доля урожая относительно 2X описывает урожай, полученный от GAT-объектов, обработанных соответствующими глифосатными гребицидными средствами обработки, по сравнению с теми же GAT-объектами, подвергнутыми воздействию раствора, содержащего 2X средство глифосатной обработки, на стадии 3-5 листьев, выраженная как процентная доля 2X обработки на стадии 3-5 листьев.
В варианте осуществления глифосат инактивируется ферментом глифосат ацетилтрансферазой врастении Brassica, в том числе в генеративной ткани, такой как открытые цветки и зеленые почки.
Десикация описывает процесс химической обработки растений средством (Reglone(r)), которое будет ускорять высушивание и созревание семян.
Используемый в данном документе термин "пакетированный" включает состояние, при котором несколько признаков присутствуют в одном растении (т.е. оба признака внедрены в ядерный геном, один признак внедрен в ядерный геном и один признак внедрен в геном пластиды, или оба признака внедрены в геном пластиды). В одном неограничивающем примере "пакетированные признаки" предусматривают молекулярный пакет, в котором последовательности физически граничат друг с другом. Используемый в данном документе "признак" относится к фенотипу, обусловленному конкретной последовательностью или группами последовательностей. Котрансформацию генов можно проводить с применением единых векторов для трансформации, содержащих несколько генов, или нескольких векторов, которые несут отдельные гены. Если последовательности пакетированы с помощью генетической трансформации растений, то представляющие интерес последовательности полинуклеотидов можно комбинировать в любое время и в любом порядке. Признаки можно вводить одновременно в протоколе котрансформации с представляющими интерес полинуклеотидами, которые обеспечены с помощью любой комбинации кассет трансформации. Например, если будут вводиться две последовательности, то эти две последовательности могут содержаться в отдельных кассетах для трансформации (транс) или содержаться в одной кассете для трансформации (цис). Экспрессия данных последовательностей может управляться одним промотором или различными промоторами. В определенных случаях может потребоваться введение кассеты для трансформации, которая будет подавлять экспрессию представляющего интерес полинуклеотида. Ее можно комбинировать с любой комбинацией других кассет супрессии или кассет сверхэкспрессии для получения требуемой комбинации признаков в растении. Кроме того, считается, что полинуклеотидные последовательности можно пакетировать в требуемом местоположении в геноме с применением системы для сайт-специфичной рекомбинации; см., например, публикации международных заявок №№ WO 1999/25821, WO 1999/25854, WO 1999/25840, WO 1999/25855 и WO 1999/25853, раскрытия каждой из которых включены в настоящее изобретение с помощью ссылки.
В одном варианте осуществления вид Brassica с переносимостью гербицида может представлять собой GAT1-объект Brassica. Полинуклеотиды, приводящие к получению GAT1-объекта, можно встраи
вать в молекулярный пакет. Молекулярный пакет может содержать по меньшей мере один дополнительный полинуклеотид, который приводит к переносимости второго гербицида. Последовательность может приводить к переносимости глуфосината и может содержать ген pat. Дополнительный полинуклеотид может обеспечивать переносимость гербицидов-ингибиторов ALS. Дополнительный полинуклеотид может обеспечивать переносимость дикамбы или ауксиновых гербицидов.
В других вариантах осуществления вид Brassica, толерантный к гербициду, по настоящему раскрытию может характеризоваться одним или несколькими представляющими интерес признаками, и, в более конкретных вариантах осуществления, в растении можно пакетировать любую комбинацию представляющих интерес полинуклеотидных последовательностей для создания растений с требуемой комбинацией признаков.
Используемый в данном документе "признак" относится к фенотипу, обусловленному конкретной последовательностью или группами последовательностей. Например, полинуклеотиды переносимости гербицида можно пакетировать с любыми другими полинуклеотидами, кодирующими полипептиды с пестицидной и/или инсектицидной активностью, такими как токсичные белки Bacillus thuringiensis (описанные в патентах США №№ 5366892; 5747450; 5737514; 5723756; 5593881; Geiser et al., (1986) Gene 48:109; Lee, et al., (2003) Appl. Environ. Microbiol. 69:4648-4657 (Vip3A); Galitzky, et al., (2001) Acta Crys-tallogr. D. Biol. Crystallogr. 57:1101-1109 (СгуЗВЫ) и Herman, et al., (2004) J. Agric. Food Chem. 52:27262734 (Cry1F)), лектины (Van Damme, et al., (1994) Plant Mol. Biol. 24:825, пентин (описанный в патенте США № 5981722) и т.п. Полученные комбинации также могут включать несколько копий любого представляющего интерес полинуклеотида.
Вид Brassica, толерантный к гербициду, по настоящему раскрытию может содержать пакеты с другими признаками переносимости гербицида для создания трансгенного растения по настоящему раскрытию с дополнительно улучшенными свойствами. Другие полинуклеотиды переносимости гербицида, которые можно было бы применять в таких вариантах осуществления, включают таковые, приводящие к переносимости глифосата с помощью других механизмов действия, таких как, например, ген, который кодирует фермент глифосат-оксидоредуктазу, более подробно описанный в патентах США №№ 5776760 и 5463175. Другие признаки, которые можно было бы комбинировать с объектом по настоящему раскрытию, включают таковые, обусловленные полинуклеотидами, которые придают растению способность вырабатывать более высокий уровень 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (EPSPS), например, как
подробнее описано в патентах США №№ 6248876 В1; 5627061; 5804425; 5633435; 5145783; 4971908; 5312910; 5188642; 4940835; 5866775; 6225114 В1; 6130366; 5310667; 4535060; 4769061; 5633448;
5510471; Re. 36449; RE 37287 Е и 5491288 и публикациях международных заявок №№ WO 97/04103; WO 00/66746; WO 01/66704 и WO 00/66747. Другие признаки, которые можно было бы комбинировать с объектом по настоящему раскрытию, включают таковые, приводящие к переносимости сульфонилмочевины и/или имидазолинона, например, как подробнее описано в патентах США №№ 5605011; 5013659;
5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 и 5378824 и публикации международной заявки № WO 96/33270.
Вид Brassica, толерантный к гербициду, по настоящему раскрытию может содержать пакеты. Поли-нуклеотиды, кодирующие полипептиды, отдельно или пакетированные с одним или несколькими признаками устойчивости к насекомым, можно пакетировать с одним или несколькими дополнительными признаками, влияющими на затраты (например, устойчивость к гербициду, устойчивость к грибам, устойчивость к вирусам, переносимость стрессов, устойчивость к заболеваниям, мужская стерильность, сила стебля и т.п.), или признаками, влияющими на выход (например, повышенный урожай, модифицированные разновидности крахмала, улучшенный профиль масел, сбалансированные аминокислоты, высокое содержание лизина или метионина, повышенная усвояемость, улучшенное качество волокон, устойчивость к засухе и т.п.). Можно получать полный комплекс агротехнических признаков, обеспечивающих улучшенное качество сельскохозяйственной культуры, с возможностью гибкого и экономически эффективного контроля любого числа сельскохозяйственных вредителей.
Трансгены, пригодные для получения трансгенных растений, включают без ограничения следующие.
1. Трансгены, придающие устойчивость к насекомым или заболеванию.
(A) Гены устойчивости растения к заболеваниям. Защитные механизмы растений зачастую активируются посредством специфического взаимодействия между продуктом гена устойчивости к заболеваниям (R) в растении и продуктом соответствующего гена авирулентности (Avr) в патогене. Разновидность растений можно трансформировать с помощью клонированного гена устойчивости для разработки растений, которые устойчивы к специфическим штаммам патогена; см., например, Jones, et al., (1994) Science 266:789 (клонирование гена Cf-9 томата, обеспечивающего устойчивость к Cladosporium fulvum); Martin, et al., (1993) Science 262:1432 (ген Pto томата, обеспечивающий устойчивость к Pseudomonas sy-ringae pv. tomato, кодирует протеинкиназу); Mindrinos, et al., (1994) Cell 78:1089 (ген RSP2 Arabidopsis, обеспечивающий устойчивость к Pseudomonas syringae), McDowell and Woffenden, (2003) Trends Biotech-nol. 21(4):178-83 и Toyoda, et al., (2002) Transgenic Res. 11(6):567-82. Растение, устойчивое к заболеванию, представляет собой растение, которое более устойчиво к патогену в сравнении с растением дикого
типа.
(B) Гены, кодирующие белок Bacillus thuringiensis, его производное или синтетический полипептид, смоделированный на его основе; см., например, Geiser, et al., (1986) Gene 48:109, которые раскрывают клонирование и нуклеотидную последовательность гена дельта-эндотоксина Bt. Более того, молекулы ДНК, кодирующие гены дельта-эндотоксина, можно приобрести в Американской коллекции типовых культур (Роквилл, Мэриленд), например, под номерами доступа АТСС 40098, 67136, 31995 и 31998. Другие неограничивающие примеры трансгенов Bacillus thuringiensis, разработанных при помощи методик генной инженерии, приведены в следующих патентах и заявках на патент и тем самым включены посредством ссылки для этой цели: патенты США №№ 5188960; 5689052; 5880275; 5986177; 6023013,
6060594, 6063597, 6077824, 6620988, 6642030, 6713259, 6893826, 7105332; 7179965, 7208474; 7227056, 7288643, 7323556, 7329736, 7449552, 7468278, 7510878, 7521235, 7544862, 7605304, 7696412, 7629504,
7705216, 7772465, 7790846, 7858849 и WO 1991/14778; WO 1999/31248; WO 2001/12731; WO 1999/24581 и WO 1997/40162, раскрытия каждого из которых включены в данный документ посредством ссылки.
(C) Полинуклеотид, кодирующий специфический для насекомых гормон или феромон, такой как экдистероид и ювенильный гормон, его вариант, миметик на его основе, или его антагонист или агонист; см., например, раскрытие Hammock, et al., (1990) Nature 344:458 экспрессии в бакуловирусе клонированной эстеразы ювенильного гормона, деактиватора ювенильного гормона.
(D) Полинуклеотид, кодирующий специфический для насекомых пептид, который при экспрессии нарушает физиологию насекомого, на которого оказывают воздействие. Например, см. раскрытия Regan, (1994) J. Biol. Chem. 269:9 (экспрессионное клонирование приводит к ДНК, кодирующей рецептор диуретического гормона насекомых); Pratt, et al., (1989) Biochem. Biophys. Res. Comm. 163:1243 (аллостатин, обнаруженный у Diploptera puntata); Chattopadhyay, et al., (2004) Critical Reviews in Microbiology 30(l):33-54; Zjawiony, (2004) J Nat Prod 67 (2):300-310; Carlini and Grossi-de-Sa, (2002) Toxicon 40 (11):1515-1539; Ussuf, et al., (2001) Curr Sci. 80 (7):847-853 и Vasconcelos and Oliveira, (2004) Toxicon 44(4):385-403; см. также патент США № 5266317, Tomalski, et al., в котором раскрываются гены, кодирующие специфические для насекомых токсины.
(E) Полинуклеотид, кодирующий фермент, ответственный за гипернакопление монотерпена, сеск-витерпена, стероида, гидроксамовой кислоты, производного фенилпропаноида или другой небелковой молекулы с инсектицидной активностью.
(F) Полинуклеотид, кодирующий фермент, вовлеченный в модификацию, в том числе посттрансляционную модификацию, биологически активной молекулы; например, гликолитический фермент, проте-олитический фермент, липолитический фермент, нуклеаза, циклаза, трансаминаза, эстераза, гидролаза, фосфатаза, киназа, фосфорилаза, полимераза, эластаза, хитиназа и глюканаза, либо натуральные, либо синтетические; см. PCT заявку WO 1993/02197 от имени Scott, et al., в которой раскрыта нуклеотидная последовательность гена каллазы. Молекулы ДНК, которые содержат последовательности, кодирующие хитиназу, можно получить, например, из АТСС под номерами доступа 39637 и 67152; см. также Kramer, et al., (1993) Insect Biochem. Molec. Biol. 23:691, где показана нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей хитиназу табачного бражника, и Kawalleck, et al., (1993) Plant Molec. Biol. 21:673, где представлена нуклеотидная последовательность гена уби-4-2 полиубиквитина петрушки, и патенты США №№ 6563020; 7145060 и 7087810.
(G) Полинуклеотид, кодирующий молекулу, которая стимулирует сигнальную трансдукцию. Например, см. раскрытие в Botella, et al., (1994) Plant Molec. Biol. 24:757, нуклеотидных последовательностей клонов кДНК кальмодулина маша, и Griess, et al., (1994) Plant Physiol. 104:1467, где представлена нуклеотидная последовательность клона кДНК кальмодулина маиса.
(H) Полинуклеотид, кодирующий пептид с гидрофобным моментом; см. PCT заявку WO 1995/16776 и патент США № 5580852, раскрывающие пептидные производные тахиплезина, которые ингибируют грибные патогены растений, и PCT заявку WO 1995/18855, и патент США № 5607914 (раскрывает синтетические противомикробные пептиды, которые придают устойчивость к заболеваниям).
(I) Полинуклеотид, кодирующий мембранную пермеазу, каналообразователь или блокатор каналов.
Например, см. раскрытие в Jaynes, et al., (1993) Plant Sci. 89:43 гетерологичной экспрессии аналога цек-
ропин-бета литического пептида для придания трансгенным растениям табака устойчивости к Pseudomo-
nas solanacearum.
(J) Ген, кодирующий вирусный инвазивный белок или сложный токсин, полученный из него. Например, накопление белков вирусной оболочки в трансформированных растительных клетках придает устойчивость к вирусной инфекции и/или развитию заболевания, вызванного вирусом, из которого получен ген белка оболочки, а также родственными вирусами; см. Beachy, et al., (1990) Ann. Rev. Phytopathol. 28:451. Устойчивость, опосредованную белком оболочки, придавали трансформированным растениям в отношении вируса мозаики люцерны, вируса мозаики огурца, вируса полосчатости табака, вируса X картофеля, вируса Y картофеля, вируса гравировки табака, вируса погремковости табака и вируса табачной мозаики; там же.
(K) Полинуклеотид, кодирующий белок, останавливающий развитие, вырабатываемый в природе патогеном или паразитом. Так, грибные эндо-альфа-1,4^-полигалактуроназь1 облегчают грибную коло
низацию и высвобождение питательных веществ растения путем солюбилизации гомо-альфа-1,4^-галактуроназы клеточной стенки растения; см. Lamb, et al., (1992) Bio/Technology 10:1436. Клонирование и определение характеристик гена, который кодирует белок, ингибирующий эндополигалактуроназу бобов, описан в Toubart, et al., (1992) Plant J. 2:367.
(L) Полинуклеотид, кодирующий белок, останавливающий развитие, вырабатываемый в природе растением. Например, Logemann, et al., (1992) Bio/Technology 10:305 показали, что трансгенные растения, экспрессирующие ген ячменя, инактивирующий рибосомы, обладали повышенной устойчивостью к грибковым заболеваниям.
(М) Гены, вовлеченные в реакцию системной приобретенной устойчивости (SAR), и/или гены, связанные с патогенезом; Briggs, (1995) Current Biology 5(2), Pieterse and Van Loon, (2004) Curr. Opin. Plant Bio. 7(4):456-64, и Somssich, (2003) Cell 113 (7):815-6.
(N) Противогрибковые гены (Cornelissen and Melchers, (1993) PI. Physiol. 101:709-712, и Parijs, et al., (1991) Planta 183:258-264, и Bushnell, et al., (1998) Can. J. of Plant Path. 20(2): 137-149); также см. публикации заявок на патент США №№ 09/950933; 11/619645; 11/657710; 11/748994; 11/774121 и патенты США №№ 6891085 и 730694 6. Киназы, подобные рецептору LysM, для восприятия фрагментов хитина, как первый этап в защитной реакции растения против грибов-патогенов (US 2012/0110696).
(О) Гены системы детоксикации, такие как кодирующие фумонизин, беауверицин, монилиформин и зеараленон и их структурно родственные производные. Например, см. патенты США №№ 5716820; 5792931; 5798255; 5846812;6083736;6538177;6388171 и 6812380.
(Р) Полинуклеотид, кодирующий цистатин и ингибиторы цистеинпротеиназы; см. патент США №
7205453.
(Q) Гены дефензинов; см. WO 2003/000863 и патенты США №№ 6911577; 6855865; 6777592 и
7238781.
(R) Гены, придающие устойчивость к нематодам; см., например, PCT заявку WO 1996/30517; PCT заявку WO 1993/19181, WO 2003/033651 и Urwin, et al., (1998) Planta 204:472-479, Williamson, (1999) Curr Opin Plant Bio. 2(4):327-31; патенты США №№ 6284948 и 7301069 и гены miR164 (WO 2012/058266).
(S) Гены, которые придают устойчивость к корневой гнили, вызываемой Phytophthora, такие как
Rps 1, Rps 1-a, Rps 1-b, Rps 1-c, Rps 1-d, Rps 1-е, Rps 1-k, Rps 2, Rps 3-a, Rps 3-b, Rps 3-c, Rps 4, Rps 5, Rps
6, Rps 7 и другие гены Rps; см., например, Shoemaker, et al., Phytophthora Root Rot Resistance Gene Mapping in Soybean, Plant Genome IV Conference, San Diego, Calif. (1995).
(T) Гены, которые придают устойчивость к бурой стеблевой гнили, такие как описанные в патенте США № 5689035, включенном посредством ссылки с этой целью.
(U) Гены, которые придают устойчивость к Colletotrichum, такие как описанные в публикации заявки на патент США US 2009/0035765, включенной посредством ссылки с этой целью. Они включают ло-кус Rcg, который можно использовать как конверсию одного локуса.
2. Трансгены, которые придают устойчивость к гербициду.
(A) Полинуклеотид, кодирующий устойчивость к гербициду, который ингибирует конус нарастания или меристему, такой как имидазолинон или сульфонилмочевина. Иллюстративные гены в этой категории кодируют мутантный фермент ALS и AHAS, как описано, например, у Lee, et al., (1988) EMBO J. 7:1241 и Miki, et al., (1990) Theor. Appl. Genet. 80:449 соответственно; см. также патенты США №№ 5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 и 5378824;заявку на патент США с серийным номером 11/683737 и публикацию международной заявки WO 1996/33270.
(B) Полинуклеотид, кодирующий белок для устойчивости к глифосату (устойчивость придают му-тантные гены 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (EPSPS) и aroA соответственно) и другим соединениям с фосфоновыми группами, таким как глуфосинат (гены фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (PAT) и фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (bar) Streptomyces hygroscopicus), и пиридинокси- или фе-ноксипропионовым кислотам и циклогексонам (гены, кодирующие ингибитор АССазы); см., например, патент США № 4940835, Shah, et al., в котором раскрыта нуклеотидная последовательность формы EP-SPS, которая может придавать устойчивость к глифосату. В патенте США № 5627061, Barry, et al., также описаны гены, кодирующие ферменты EPSPS; см. также патенты США №№ 6566587; 6338961; 6248876
В1; 6040497; 5804425; 5633435; 5145783; 4971908; 5312910; 5188642; 5094945, 4940835; 5866775;
6225114 В1; 6130366; 5310667; 4535060; 4769061; 5633448; 5510471; Re. 36449; RE 37287 Е и 5491288 и публикации международных заявок ЕР 1173580; WO 2001/66704; ЕР 1173581 и ЕР 1173582, которые включены в данный документ посредством ссылки для данной цели. Устойчивость к глифосату также придается растениям, которые экспрессируют ген, кодирующий фермент глифосат-оксидоредуктазу, как более подробно описано в патентах США №№ 5776760 и 5463175, которые включены в данный документ посредством ссылки с этой целью. Кроме того, устойчивость к глифосату может придаваться растениям посредством сверхэкспрессии генов, кодирующих глифосат^-ацетилтрансферазу; см., например, патенты США №№ 7462481; 7405074 и публикацию заявки на патент США № US 2008/0234130. Молекулу ДНК, кодирующую мутантный ген aroA, можно получить под номером доступа ATCC 39256, а нук-леотидная последовательность мутантного гена раскрыта в патенте США № 4769061, Comai. В заявке ЕР № 0333033, Kumada, et al. и патенте США № 4975374, Goodman, et al. раскрыты нуклеотидные последо
вательности генов глутаминсинтетазы, придающие устойчивость к гербицидам, таким как L-фосфинотрицин. Нуклеотидная последовательность гена фосфинотрицин-ацетилтрансферазы представлена в заявках ЕР №№ 0242246 и 0242236, Leemans, et al.; De Greef, et al., (1989) Bio/Technology 7:61, где описано получение трансгенных растений, которые экспрессируют химерные гены bar, кодирующие фосфинотрицин-ацетилтрансферазную активность; см. также патенты США №№ 5969213; 5489520; 5550318; 5874265; 5919675; 5561236; 5648477; 5646024; 6177616 В1 и 5879903, которые включены в данный документ посредством ссылки с этой целью. Иллюстративные гены, придающие устойчивость к фе-ноксипропионовым кислотам и циклогексонам, таким как сетоксидим и галоксифоп, представляют собой гены Accl-S1, Accl-S2 и Accl-S3, описанные у Marshall, et al., (1992) Theor. Appl. Genet. 83:435.
(C) Полинуклеотид, кодирующий белок, обеспечивающий устойчивость к гербициду, который ин-гибирует фотосинтез, такому как триазин (гены psbA и gs+) и бензонитрил (ген нитрилазы). Przibilla, et al., (1991) Plant Cell 3:169 описывают трансформацию Chlamydomonas с помощью плазмид, кодирующих мутантные гены psbA. Нуклеотидные последовательности генов нитрилазы раскрыты в патенте США № 4810648, Stalker, и молекулы ДНК, содержащие эти гены, доступны под номерами доступа ATCC 53435, 67441 и 67442. Клонирование и экспрессия ДНК, кодирующей глутатион^-трансферазу, описаны у Hayes, et al., (1992) Biochem. J. 285:173.
(D) Полинуклеотид, кодирующий белок, обеспечивающий устойчивость к синтазе ацетогидрокси-кислот, которая, как было обнаружено, делает растения, которые экспрессируют этот фермент, устойчивыми к нескольким типам гербицидов, был введен в ряд растений (см., например, Hattori, et al., (1995) Mol Gen Genet. 24 6:419). Другие гены, которые придают устойчивость к гербицидам, включают ген, кодирующий химерный белок цитохрома Р4507А1 крысы и NADPH-цитохром Р450-оксидоредуктазы дрожжей (Shiota, et al., (1994) Plant Physiol 106:17), гены, кодирующие глутатионредуктазу и супероксид-дисмутазу (Aono, et al., (1995) Plant Cell Physiol 36:1687), и гены, кодирующие различные фосфотрансфе-разы (Datta, et al., (1992) Plant Mol Biol 20:619).
(E) Полинуклеотид, кодирующий устойчивость к гербициду, целенаправленно воздействующему на протопорфириноген-оксидазу (protox), которая необходима для выработки хлорофилла. Фермент protox служит в качестве мишени для ряда гербицидных соединений. Эти гербициды также ингибируют рост всех присутствующих различных видов растений, вызывая их полное разрушение. Разработка растений, характеризующихся измененной protox-активностью, которые устойчивы к этим гербицидам, описана в патентах США №№ 6288306 В1; 6282837 В1 и 5767373 и публикации международной заявки WO 2001/12825.
(F) Ген aad-1 (изначально из Sphingobium herbicidovorans) кодирует белок арилоксиалканоат-диоксигеназу (AAD-1). Признак приводит к переносимости гербицидов на основе 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и арилоксифеноксипропионата (обычно называемых "фоп"-гербициды, таких как квизалофоп). Ген aad-1, как таковой, обеспечивающий переносимость гербицида у растений, впервые был раскрыт в WO 2005/107437 (см. также US 2009/0093366). Ген aad-12, полученный от Delftia acidovorans, который кодирует белок арилоксиалканоат-диоксигеназу (AAD-12), приводящий к переносимости гербицидов на основе 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и пиридилоксиацетата посредством инактивации некоторых гербицидов с арилоксиалканоатным фрагментом, в том числе фенокси-ауксина (например, 2,4-D, MCPA), а также видов пиридилокси-ауксина (например, флуроксипир, триклопир).
(G) Полинуклеотид, кодирующий устойчивую к гербициду дикамба-монооксигеназу, раскрытый в публикации заявки на патент США 2003/0135879, для придания переносимости дикамбы.
(H) Полинуклеотидная молекула, кодирующая бромоксинилнитрилазу (Bxn), раскрытая в патенте США № 4810648, для придания переносимости бромоксинила.
(I) Полинуклеотидная молекула, кодирующая фитоен (crtl), описанный у Misawa, et al., (1993) Plant
J. 4:833-840 и у Misawa, et al., (1994) Plant J. 6:481-489, для переносимости норфлуразона.
3. Трансгены, придающие измененные характеристики зернам или вносящие в них вклад. (А) Измененные жирные кислоты, например, посредством следующего.
(1) Подавления стеароил-АСР для повышения содержания стеариновой кислоты в растении; см. Knultzon, et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:2624 и WO 1999/64579 (Гены для изменения липид-ных профилей в кукурузе ("Genes to Alter Lipid Profiles in Corn")).
(2) Повышения содержания олеиновой кислоты посредством модификации гена FAD-2 и/или снижения содержания линоленовой кислоты посредством модификации гена FAD-3 (см. патенты США №№ 6063947; 6323392; 6372965 и WO 1993/11245).
(3) Изменения содержания конъюгированных линоленовой или линолевой кислоты, например, как в WO 2001/12800.
(4) Изменения LEC1, AGP, Dek1, Superall, mil ps, различных генов Ipa, таких как Ipa1, Ipa3, hpt или hggt. Например, см. WO 2002/42424, WO 1998/22604, WO 2003/011015, WO 2002/057439, WO
2003/011015, патенты США №№ 6423886, 6197561, 6825397 и публикации заявки на патент США №№
US 2003/0079247, US 2003/0204870 и Rivera-Madrid, et al., (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. 92:5620-5624.
(5) Генов, кодирующих дельта-8-десатуразу для получения длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (патент США № 8058571), дельта-9 десатуразу для снижения содержания насыщенных
(5)
жиров (патент США № 8063269), Лб-десатуразу примулы для улучшения профилей омега-3-жирных кислот.
(6) Выделенных нуклеиновых кислот и белков, ассоциированных с регуляцией метаболизма липи-дов и сахаров, в частности белка липидного метаболизма (LMP), применяемых в способах получения трансгенных растений и модуляции уровней запасных веществ семени, в том числе липидов, жирных кислот, видов крахмала или запасных белков семени, и их применения в способах модуляции размера семени, количества семян, веса семян, длины корней и размера листьев растений (ЕР 2404499).
(7) Изменения экспрессии белка, индуцируемого сахарами 2 (HSI2), с высоким уровнем экспрессии в растении для повышения или снижения экспрессии HSI2 в растении. Повышение экспрессии HSI2 повышает содержание масла, тогда как понижение экспрессии HSI2 снижает восприимчивость к абсцизо-вой кислоте и/или повышает устойчивость к засухе (публикация заявки на патент США № 2012/0066794).
(B) Измененное содержание фосфора, например, посредством следующего.
(1) Введения гена, кодирующего фитазу, при этом будет улучшаться распад фитата, что приводит к большему количеству свободного фосфата в трансформированном растении. Например, см. Van Hart-ingsveldt, et al., (1993) Gene 127:87 относительно раскрытия нуклеотидной последовательности гена фи-тазы Aspergillus niger.
(2) Модуляции гена, который снижает содержание фитата. У маиса это, например, можно осуществлять при помощи клонирования, а затем повторного введения ДНК, ассоциированной с одним или несколькими аллелями, такими как аллели LPA, обнаруженные у мутантов маиса, характеризующихся низкими уровнями фитиновой кислоты, как, например, в WO 2005/113778, и/или посредством изменения активности инозитолкиназы, как в WO 2002/059324, публикации заявки на патент США № 2003/0009011, WO 2003/027243, публикации заявки на патент США № 2003/0079247, WO 1999/05298, патенте США № 6197561, патенте США № 6291224, патенте США № 6391348, WO 2002/059324, публикации заявки на патент США № 2003/0079247, WO 1998/45448, WO 1999/55882, WO 2001/04147.
(C) Измененные углеводы, на которые воздействовали, например, посредством изменения гена, кодирующего фермент, который воздействует на паттерн ветвления крахмала, или гена, изменяющего тио-редоксин, такого как NTR и/или TRX (см. патент США № 6531648, который включен посредством ссылки с этой целью), и/или нокаута гамма-зеина или использования мутанта, такого как cs27, или TUSC27, или en27 (см. патент США № 6858778 и публикацию заявки на патент США № 2005/0160488, публикацию заявки на патент США № 2005/0204418, которые включены посредством ссылки с этой целью); см. Shiroza, et al., (1988) J. Bacteriol. 170:810 (нуклеотидная последовательность мутантного гена фруктозил-трансферазы Streptococcus), Steinmetz, et al., (1985) Mol. Gen. Genet. 200:220 (нуклеотидная последовательность гена левансахаразы Bacillus subtilis), Pen, et al., (1992) Bio/Technology 10:292 (получение трансгенных растений, которые экспрессируют альфа-амилазу Bacillus licheniformis), Elliot, et al., (1993) Plant Molec. Biol. 21:515 (нуклеотидные последовательности генов инвертазы томата), Sogaard, et al., (1993) J. Biol. Chem. 268:22480 (сайт-направленный мутагенез гена альфа-амилазы ячменя), и Fisher, et al., (1993) Plant Physiol. 102:1045 (фермент ветвления крахмала эндосперма маиса II), WO 1999/10498 (улучшенная усвояемость и/или экстракция крахмала благодаря модификации UDP-D-ксилоза-4-эпимеразы, Fragile 1 и 2, Ref1, HCHL, C4H), патент США № 6232529 (способ получения семян с высоким содержанием масла путем модификации уровней крахмала (AGP) ). Гены модификации жирных кислот, упомянутые в данном документе, также можно применять для воздействия на содержание и/или состав крахмала благодаря взаимосвязи путей метаболизма крахмала и масла.
(D) Измененное содержание или состав антиоксидантов, как, например, изменение токоферола или токотриенолов. Например, см. патент США № 6787683, публикацию заявки на патент США № 2004/0034886 и WO 2000/68393, предусматривающие манипуляцию с уровнями антиоксидантов, и WO 2003/082899, благодаря изменению гомогентизатгеранил-геранилтрансферазы (hggt).
(E) Измененные незаменимые аминокислоты семян. Например, см. патент США № 6127600 (способ повышения накопления незаменимых аминокислот в семенах), патент США № 6080913 (бинарные способы повышения накопления незаменимых аминокислот в семенах), патент США № 5990389 (высокое содержание лизина), WO 1999/40209 (изменение аминокислотного состава семян), WO 1999/29882 (способы для изменения содержания аминокислот в белках), патент США № 5850016 (изменение аминокислотного состава семян), WO 1998/20133 (белки с повышенными уровнями незаменимых аминокислот), патент США № 5885802 (высокое содержание метионина), патент США № 5885801 (высокое содержание треонина), патент США № 6664445 (растительные ферменты биосинтеза аминокислот), патент США № 6459019 (повышенное содержание лизина и треонина), патент США № 6441274 (бета-субъединица растительной триптофансинтазы), патент США № 6346403 (ферменты метаболизма метионина), патент США № 5939599 (высокое содержание серы), патент США № 5912414 (повышенное содержание метио-нина), WO 1998/56935 (растительные ферменты биосинтеза аминокислот), WO 1998/45458 (сконструированный белок семени, имеющий более высокую процентную долю незаменимых аминокислот), WO 1998/42831 (повышенное содержание лизина), патент США № 5633436 (повышение содержания серосодержащих аминокислот), патент США № 5559223 (синтетические запасные белки с определенной струк
(C)
турой, содержащие программируемые уровни незаменимых аминокислот для улучшения питательной ценности растений), WO 1996/01905 (повышенное содержание треонина), WO 1995/15392 (повышенное содержание лизина), публикацию заявки на патент США № 2003/0163838, публикацию заявки на патент
США № 2003/0150014, публикацию заявки на патент США № 2004/0068767, патент США № 6803498, WO 2001/79516.
4. Гены, создающие сайт для сайт-специфической интеграции ДНК.
Подразумевается введение сайтов FRT, которые можно применять в системе FLP/FRT, и/или сайтов Lox, которые можно применять в системе Cre/Loxp. Например, см. Lyznik, et al., (2003) Plant Cell Rep 21:925-932 и WO 1999/25821, которые включены в данный документ посредством ссылки. Другие системы, которые можно применять, включают рекомбиназу Gin из фага Mu (Maeser, et al., (1991) Vicki Chandler, The Maize Handbook ch. 118 (Springer-Verlag 1994), рекомбиназу Pin из E. coli (Enomoto, et al., 1983) и систему R/RS из плазмиды pSRi (Araki, et al., 1992).
5. Гены, воздействующие на устойчивость к абиотическому стрессу.
В том числе без ограничений цветения, развития початка и семени, улучшения эффективности использования азота, измененной реактивности в отношении азота, устойчивости к засухе или ее переносимости, устойчивости к действию тепла или его переносимости, устойчивости к холоду или его переносимости, а также устойчивости к солям или их переносимости и повышенного урожая при стрессе.
(A) Например, см. WO 2000/73475, где эффективность использования воды изменена благодаря изменению малата; патенты США №№ 5892009, 5965705, 5929305, 5891859, 6417428, 6664446, 6706866,
6717034, 6801104, WO 2000/060089, WO 2001/026459, WO 2001/035725, WO 2001/034726, WO
2001/035727, WO 2001/036444, WO 2001/036597, WO 2001/036598, WO 2002/015675, WO 2002/017430, WO 2002/077185, WO 2002/079403, WO 2003/013227, WO 2003/013228, WO 2003/014327, WO
2004/031349, WO 2004/076638, WO 199809521.
(B) WO 199938977, описывающая гены, в том числе гены CBF, и факторы транскрипции, эффективные при ослаблении негативных эффектов замораживания, высокого содержания солей и засухи на растения, а также приводящие к другим положительным эффектам в отношении фенотипа растения.
(C) Публикация заявки на патент США № 2004/0148654 и WO 2001/36596, где в растениях изменяется содержание абсцизовой кислоты, что приводит к улучшенному фенотипу растения, такому как повышенный урожай и/или повышенная переносимость абиотического стресса.
(D) WO 2000/006341, WO 2004/090143, патенты США №№ 7531723 и 6992237, где экспрессия ци-токинина модифицируется, что приводит к растениям с повышенной переносимостью стрессов, как, например, переносимостью засухи и/или повышенным урожаем; также см. WO 2002/02776, WO 2003/052063, JP 2002/281975, патент США № 6084153, WO 2001/64898, патент США № 6177275 и патент США № 6107547 (улучшение использования азота и измененная реактивность в отношении азота).
(E) Что касается изменения содержания этилена, см. публикацию заявки на патент США № 2004/0128719, публикацию заявки на патент США № 2003/0166197 и WO 2000/32761.
(F) Что касается растительных факторов транскрипции или транскрипционных регуляторов, связанных с реакцией на абиотический стресс, см., например, публикацию заявки на патент США №
2004/0098764 или публикацию заявки на патент США № 2004/0078852.
(G) Гены, которые повышают экспрессию вакуолярной пирофосфатазы, такие как AVP1 (патент США № 8058515), для повышения урожая; нуклеиновая кислота, кодирующая полипептиды HSFA4 или HSFA5 (фактор теплового шока класса А4 или А5), полипептид белка транспортера олигопептидов (ОРТ4-подобный); пластохрон-2-подобный полипептид (PLA2-подобный) или Wuschel-родственный го-меобокс 1-подобный полипептид (WOXl-подобный) (публикация заявки на патент США № US 2011/0283420).
(H) Подавление полинуклеотидов, кодирующих белки поли-(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) для модуляции запрограммированной клеточной смерти (патент США № 8058510), для повышения мощности.
(I) Полинуклеотид, кодирующий полипептиды DTP21, для обеспечения устойчивости к засухе
(публикация заявки на патент США № US 2011/02 77181).
(J) Нуклеотидные последовательности, кодирующие белки АСС синтазы 3 (ACS3) для модуляции развития, модуляции реакции на стресс и модуляции переносимости стрессов (публикация заявки на патент США № US 2010/0287669).
(K) Полинуклеотиды, которые кодируют белки, которые приводят к фенотипу переносимости засухи (DTP), для обеспечения устойчивости к засухе (WO 2012/058528).
Другие гены и факторы транскрипции, которые воздействуют на рост и агротехнические признаки растений, такие как урожайность, цветение, рост растения и/или структура растения, можно вводить или интрогрессировать в растения, см., например, WO 1997/49811 (LHY), WO 1998/56918 (ESD4), WO 1997/10339 и патент США № 6573430 (TFL), патент США № 6713663 (FT), WO 1996/14414 (CON), WO 1996/38560, WO 2001/21822 (VRN1), WO 2000/44918 (VRN2), WO 1999/49064 (GI), WO 2000/46358 (FR1), WO 1997/29123, патент США № 6794560, патент США № 6307126 (GAI), WO 1999/09174 (D8 и Rht), и WO 2004/076638, и WO 2004/031349 (факторы транскрипции).
6. Гены, приводящие к повышению урожая.
(A) Трансгенное культурное растение, трансформированное при помощи нуклеиновой кислоты, кодирующей 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминаза-подобный полипептид (ACCDP), где экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты в культурном растении приводит к повышенному росту корней, и/или повышению урожая, и/или повышенной переносимости стрессов под влиянием факторов среды у растения, по сравнению с разновидностью дикого типа растения (патент США № 8097769).
(B) Сверхэкспрессия гена белков "цинковых пальцев" маиса (Zm-ZFP1) с применением промотора, активного преимущественно в семенах, как было показано, усиливает рост растения, увеличивает количество зерен и общий вес зерен на растение (публикация заявки на патент США № 2012/0079623).
(C) Конститутивная сверхэкспрессия белка с доменом границ латеральных органов (LOB) (Zm-LOBDP1) маиса, как было показано, увеличивает количество зерен и общий вес зерен на растение (публикация заявки на патент США № 2012/0079622).
(D) Улучшение признаков, связанных с урожаем, у растений посредством модуляции экспрессии у растения нуклеиновой кислоты, кодирующей VIM1 (вариант с метилированием 1)-подобный полипептид или 'уТ^-подобный (GDP-L-галактоза-фосфорилаза) полипептид, или полипептид DUF1685, или ARF6-подобный (восприимчивый к ауксину фактор) полипептид (WO 2012/038893).
(E) Модуляция экспрессии в растении нуклеиновой кислоты, кодирующей Ste20-подобный полипептид или его гомолог, позволяет растениям производить повышенный урожай относительно контрольных растений (ЕР 2431472).
Специалист в данной области техники знаком с протоколами для имитации условий засухи и для оценки выносливости к засухе у растений, которые были подвергнуты имитированным или естественным условиям засухи. Например, можно имитировать условия засухи путем обеспечения растений меньшим количеством воды, чем обычно требуется, или не обеспечивать их водой в течение некоторого периода времени, и можно оценивать засухоустойчивость путем поиска различий, связанных с физиологическим и/или физическим состоянием, в том числе (но без ограничений) мощностью, ростом, размером или длиной корней, или, в частности, цветом листьев или размером площади листьев. Другие методики оценивания засухоустойчивости включают измерение флуоресценции хлорофилла, показателей интенсивности фотосинтеза и показателей интенсивности газообмена.
Эксперимент со стрессом, вызванным засухой, может предусматривать хронический стресс (т.е. медленное высыхание) и/или может предусматривать два острых стресса (т.е. неожиданное удаление воды), разделенных днем или двумя днями восстановления.
Признаки переносимости гербицида.
В вид Brassica по настоящему изобретению можно пакетировать, например, гидроксифенилпиру-ватдиоксигеназами, которые представляют собой ферменты, которые катализируют реакцию, в которой пара-гидроксифенилпируват (НРР) превращается в гомогентизат. Молекулы, которые ингибируют этот фермент и которые связываются с ферментом для ингибирования превращения НРР в гомогентизат, являются пригодными в качестве гербицидов. Признаки, приводящие к переносимости таких гербицидов у растений, описаны в патентах США №№ 6245968 В1; 6268549 и 6069115 и публикации международной заявки № WO 99/23886. Другие примеры подходящих признаков переносимости гербицида, которые можно было бы пакетировать у объекта по настоящему раскрытию, включают полинуклеотиды, кодирующие арилоксиалканоатдиоксигеназу (которая, как сообщается, приводит к переносимости 2,4-D и других феноксиауксиновых гербицидов, а также арилоксифеноксипропианатных гербицидов, как описано, например, в публикации международной заявки WO 05/107437), и полинуклеотиды, обеспечивающие переносимость дикамбы, как описано, например, в Herman, et al., (2005) J. Biol. Chem. 280:24759-24767.
Другие примеры признаков переносимости гербицида, которые можно было бы пакетировать, включают признаки, которые придают полинуклеотиды, кодирующие экзогенную фосфинотрицин-
ацетилтрансферазу, как описано в патентах США №№ 5969213; 5489520; 5550318; 5874265; 5919675;
5561236; 5648477; 5646024; 6177616 и 5879903. Растения, содержащие экзогенную фосфинотрицин-ацетилтрансферазу, могут проявлять повышенную переносимость глуфосинатных гербицидов, которые ингибируют фермент глутаминсинтазу. Другие примеры признаков переносимости гербицида, которые можно было бы комбинировать у объекта, раскрытого в данном документе, включают признаки, которые придают полинуклеотиды, приводящие к измененной активности протопорфириноген-оксидазы (protox), как описано в патентах США №№ 6288306 В1; 6282837 В1 и 5767373, и в публикации международной заявки WO 01/12825. Растения, содержащие такие полинуклеотиды, могут проявлять повышенную переносимость любого из ряда гербицидов, которые целенаправленно воздействуют на фермент protox (также называемые "ингибиторы protox").
Признаки переносимости ингибитора ALS можно пакетировать у растений, раскрытых в данном документе. Используемый в данном документе "полипептид переносимости ингибиторов ALS" предусматривает любой полипептид, который при экспрессии в растении придает переносимость по меньшей мере одному ингибитору ALS. Известно множество ингибиторов ALS, и они включают, например, гербицид на основе сульфонилмочевины, имидазолинона, триазолопиримидинов, пиримидинилок-си(тио)бензоатов и/или сульфониламинокарбонилтриазолинона. Дополнительные ингибиторы ALS из
вестны и раскрыты в других разделах данного документа. В данной области техники известно, что мутации ALS делятся на различные классы в отношении переносимости сульфонилмочевин, имидазолино-нов, триазолопиримидинов и пиримидинил(тио)бензоатов, в том числе мутации со следующими характеристиками: (1) широкая переносимость всех четырех этих групп; (2) переносимость имидазолинонов и пиримидинил(тио)бензоатов; (3) переносимость сульфонилмочевин и триазолопиримидинов и (4) переносимость сульфонилмочевин и имидазолинонов.
Можно использовать различные полипептиды переносимости ингибиторов ALS. Полинуклеотиды переносимости ингибиторов ALS содержат по меньшей мере одну нуклеотидную мутацию, приводящую к замене одной аминокислоты в полипептиде ALS. Изменение происходит в одном из семи фактически консервативных участков ацетолактатсинтазы; см., например, Hattori et al. (1995) Molecular Genetics and Genomes 246:419-425; Lee et al. (1998) EMBO Journal 7:1241-1248; Mazur et al. (1989) Ann. Rev. Plant Phys. 40:441-470 и патент США № 5605011, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Полипептид переносимости ингибитора ALS может кодироваться, например, локусами SuRA или SuRB ALS. В конкретных вариантах осуществления полипептид переносимости ингибиторов ALS включает мутант ALS C3, мутант ALS HRA, мутант S4 или мутант S4/HRA или любую их комбинацию. Известны различные мутации ALS, придающие переносимость различных гербицидов и групп (и/или подгрупп) гербицидов; см., например, Tranel and Wright (2002) Weed Science 50:700-712; см. также патенты США №№ 5605011, 5378824, 5141870, 5013659, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте; см. также SEQ ID NO:65, содержащую последовательность HRA сои; SEQ ID NO:66, содержащую последовательность HRA маиса; и SEQ ID NO:67, содержащую последовательность HRA Arabidopsis; и SEQ ID NO:86, содержащую последовательность HRA, используемую у хлопчатника. Мутация HRA в ALS особенно применима. Мутация приводит к выработке полипептида ацетолактатсинтазы, который является устойчивым по меньшей мере к одному химическому типу ингибиторов ALS по сравнению с белком дикого типа. Например, растение, экспресси-рующее полипептид, устойчивый к ингибитору ALS, может обладать устойчивостью к дозе гербицида на основе сульфонилмочевины, имидазолинона, триазолопиримидинов, пиримидинилокси(тио)бензоатов и/или сульфониламинокарбонилтриазолинона, которая по меньшей мере в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 70, 80, 100, 125, 150, 200, 500 или 1000 раз выше, чем доза гербицида, которая вызвала бы повреждение у соответствующего контрольного растения. Полипептид, устойчивый к ингибитору ALS, содержит ряд мутаций. Дополнительно, растения с полипептидом ингибитором ALS можно получать благодаря отбору естественных мутаций, которые придают переносимость глифосата.
Полипептид, устойчивый к ингибитору ALS, может обеспечить толерантность гербицидов на основе сульфонилмочевины и имидазолинона. Гербициды на основе сульфонилмочевины и имидазолинона подавляют рост высших растений путем блокирования ацетолактатсинтазы (ALS), также известной как синтаза ацетогидроксикислот (AHAS). Например, растения, содержащие конкретные мутации в ALS (например, мутации S4 и/или HRA), обладают переносимостью гербицидов на основе сульфонилмочевины. Получение растений, толерантных к сульфонилмочевине и толерантных к имидазолинону, описано более
полно в патентах США №№ 5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107;
5928937 и 5378824; и в публикации международной заявки № WO 96/33270, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте во всех отношениях. Полипептид, устойчивый к ингибитору ALS, может представлять собой ацетолактатсинтазу, толерантную к сульфонамиду (иначе известную как синтаза ацетогидроксикислот с переносимостью сульфонамида), или ацетолактатсинтазу, толерантную к имидазолинону (иначе известную как синтаза ацетогидроксикислот с переносимостью имидазолинона).
Растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT), который можно комбинировать или пакетировать с ферментом EPSPS.
Другими примерами признаков толерантности к гербициду, которые можно было бы комбинировать в виде Brassica, раскрытом в данном документе, включают признаки, придающие устойчивость к по меньшей мере одному гербициду у растения, такого как, например, растение Brassica или мелколепестник. Сорняки, толерантные к гербициду, известны в данной области техники как растения, которые варьируют в своей переносимости конкретных гербицидов; см., например, Green and Williams, (2004) "Correlation of Corn (Zea mays) Inbred Response to Nicosulfuron and Mesotrione", постер, представленный на ежегодной встрече WSSA в Канзас-сити, Миссури, 9-12 февраля 2004 г.; Green, (1998) Weed Technology 12:474-477; Green and Ulrich, (1993) Weed Science 41:508-516. Признак(и), ответственный(е) за такие виды переносимости, можно комбинировать с помощью скрещивания или путем других способов с объектом, раскрытым в данном документе, с получением растения по настоящему раскрытию, а также способов его применения.
Вид Brassica, раскрытый в данном документе, может характеризоваться по меньшей мере одним признаком, который приводит к образованию ряда требуемых комбинаций признаков, в том числе без ограничения признаков, требуемых для кормов животных, как, например, высокое содержание масла (например, патент США № 6232529); сбалансированное содержание аминокислот (например, хордотио-нины (патенты США №№ 5990389; 5885801; 5885802 и 5703409; патент США № 5850016); высокое со
держание лизина в ячмене (Williamson, et al., (1987) Eur. J. Biochem. 165:99-106 и WO 98/20122) и богатые метионином белки (Pedersen, et al., (1986) J. Biol. Chem. 261:6279; Kirihara, et al., (1988) Gene 71:359, и Musumura, et al., (1989) Plant Mol. Biol. 12:123)); повышенная усвояемость (например, модифицированные запасные белки (заявка на патент США с серийным номером 10/053410, поданная 7 ноября 2001 г.) и тиоредоксины (заявка на патент США с серийным номером 10/005429, поданная 3 декабря 2001 г.)), раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки. Требуемые комбинации признаков также включают LLNC (низкое содержание линоленовой кислоты; см., например, Dyer, et al., (2002) Appl. Microbiol. Biotechnol. 59:224-230) и OLCH (высокое содержание олеиновой кислоты; см., например, Fernandez-Moya, et al., (2005) J. Agric. Food Chem. 53:5326-5330).
Вид Brassica, раскрытый в данном документе, может дополнительно характеризоваться другими требуемыми признаками, такими как, например, гены детоксикации фумонизина (патент США № 5792931), гены авирулентности и устойчивости к заболеваниям (Jones, et al., (1994) Science 266:789; Martin, et al., (1993) Science 262:1432; Mindrinos, et al., (1994) Cell 78:1089), и признаками, требуемыми для обработки или получения продуктов, таких как модифицированные масла (например, гены десатуразы жирных кислот (патент США № 5952544; WO 94/11516)); модифицированные разновидности крахмала (например, ADPG пирофосфорилазы (AGP-азы), крахмал-синтазы (SS), крахмал-ветвящие ферменты (SBE), и крахмал-деветвящие ферменты (SDBE)), и полимеры или биопластики (например, патент США № 5602321; бета-кетотиолаза, полигидроксибутиратсинтаза и ацетоацетил-СоА редуктаза (Schubert, et al., (1988) J. Bacteriol. 170:5837-5847), облегчающие экспрессию полигидроксиалканоатов (РНА)), раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки. Также можно комбинировать поли-нуклеотиды переносимости гербицида с полинуклеотидами, обеспечивающими агротехнические признаки, такие как мужская стерильность (например, см. патент США № 5583210), прочность стебля, время цветения, или признаки, связанные с техникой трансформации, такие как регуляция клеточного цикла или целенаправленное воздействие на гены (например, WO 99/61619; WO 00/17364; WO 99/25821), раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.
Эти пакетированные комбинации можно создавать любым способом, в том числе без ограничения скрещиванием растений с помощью любой традиционной методики или генетической трансформации. Если последовательности пакетированы с помощью генетической трансформации растений, то представляющие интерес полинуклеотидные последовательности можно комбинировать в любое время и в любом порядке. Признаки можно вводить одновременно в протоколе котрансформации с представляющими интерес полинуклеотидами, представленными любой комбинацией кассет трансформации. Например, если будут вводиться две последовательности, то эти две последовательности могут содержаться в отдельных кассетах для трансформации (транс) или содержаться в одной кассете для трансформации (цис). Экспрессия данных последовательностей может управляться одним промотором или различными промоторами. В определенных случаях может потребоваться введение кассеты для трансформации, которая будет подавлять экспрессию представляющего интерес полинуклеотида. Ее можно комбинировать с любой комбинацией других кассет супрессии или кассет сверхэкспрессии для получения требуемой комбинации признаков в растении. Кроме того, считается, что полинуклеотидные последовательности можно пакетировать в требуемом местоположении в геноме с применением системы для сайт-специфичной рекомбинации; см., например, WO99/25821, WO99/25854, WO99/25840, WO99/25855 и WO99/25853, все из которых включены в данный документ посредством ссылки.
Следует понимать, что используемый в данном документе термин "трансгенный" включает любую клетку, клеточную линию, каллюс, ткань, часть растения или растение, генотип которого был изменен в результате присутствия гетерологичной нуклеиновой кислоты, в том числе такие трансгенные объекты, которые исходно изменены таким образом, а также такие трансгенные объекты, которые созданы путем половых скрещиваний или бесполого размножения из исходного трансгенного объекта. Используемый в данном документе термин "трансгенный" не охватывает изменение генома (хромосомное или внехромо-сомное) с помощью традиционных способов селекции растений или встречающихся в природе событий, таких как случайное перекрестное опыление, инфекция, вызванная нерекомбинантным вирусом, трансформация нерекомбинантными бактериями, нерекомбинантная транспозиция или спонтанная мутация.
"Трансформация" относится к переносу фрагмента нуклеиновой кислоты в геном организма-хозяина, что приводит к генетически стабильному наследованию. Организмы-хозяева, содержащие трансформированные фрагменты нуклеиновой кислоты, называются "трансгенными" организмами. Примеры способов трансформации растений включают трансформацию, опосредованную Agrobacterium (De Blaere, et al., (1987) Meth. Enzymol. 143:277), и техники трансформации с ускорением частиц или "генной пушкой" (Klein, et al., (1987) Nature (London) 327:70-73; патент США № 4945050, включенные в данный документ посредством ссылки). Дополнительные способы трансформации раскрыты ниже.
Настоящее раскрытие предусматривает способы контроля сорняков в площадке возделывания, предотвращения развития или появления устойчивых к гербициду сорняков в площадке возделывания, производства сельскохозяйственной культуры и повышения безопасности сельскохозяйственной культуры. Термин "контроль" и его производные, например как в "контроль сорняков", относится к одному или нескольким из подавления роста, прорастания, размножения и/или пролиферации сорняка, и/или унич
тожения, удаления, разрушения или иного уменьшения встречаемости и/или активности сорняка.
Используемая в данном документе "площадка возделывания" предусматривает любую область, в которой требуется выращивать растение. Такие площадки возделывания включают без ограничений поле, на котором возделывают растение (такое как нива, залежь, сад, управляемый лес, поле для возделывания фруктов и овощей и т.д.), теплица, вегетационная камера и т.д.
Если не указано иное, например, в конкретном эксперименте "контроль", или "контрольное растение", или "контрольная растительная клетка" обеспечивает точку отсчета для измерения изменений в фенотипе испытуемого растения или растительной клетки и может быть любым подходящим растением или растительной клеткой. Контрольное растение или растительная клетка могут представлять собой, например, (а) растение или растительную клетку дикого типа, т.е. с тем же генотипом, что и исходный материал для генетического изменения, которое приводит к испытуемому растению или клетке; (b) растение или растительную клетку с тем же генотипом, что и исходный материал, но которое было трансформировано нулевой конструкцией (т.е. конструкцией, которая не оказывает известного влияния на представляющий интерес признак, такой как конструкция, содержащая маркерный ген); (с) растение или растительную клетку, представляющие собой нетрансформированный сегрегант из числа потомства исследуемого растения или растительной клетки; (d) растение или растительную клетку, являющиеся генетически идентичными исследуемому растению или части растения, но которых не подвергают такой же обработке (например, обработке гербицидом), как исследуемое растение или растительную клетку; (е) само по себе исследуемое растение или растительную клетку в условиях, при которых представляющий интерес ген не экспрессируется; или (f) само по себе исследуемое растение или растительную клетку в условиях, при которых они не подвергаются конкретной обработке, как, например, гербицидом или комбинацией гербицидов и/или другими химическими веществами. В некоторых случаях подходящее контрольное растение или контрольная растительная клетка могут характеризоваться генотипом, отличным от исследуемого растения или растительной клетки, но могут иметь общие характеристики переносимости гербицида с исходным материалом для генетического (генетических) изменения(й), которое(ые) при-водит(ят) к образованию исследуемого растения или клетки (см., например, Green, (1998) Weed Technology 12:474-477; Green and Ulrich, (1993) Weed Science 41:508-516. В других вариантах осуществления в качестве контроля может применяться нуль-сегрегант, поскольку они являются генетически идентичными с DP-073496-4 за исключением трансгенной ДНК-вставки.
Классификация гербицидов (т.е. группировка гербицидов по классам и подклассам) хорошо известна в области техники и включает классификации от HRAC (Комитет по предупреждению резистентности к действию гербицидов) и WSSA (Американское научное общество по борьбе с сорняками) (см. также, Retzinger and Mallory-Smith, (1997) Weed Technology 11:384-393). Сокращенную версию классификации от HRAC (с примечаниями, касающимися соответствующей группе по WSSA) можно найти в таблице 1 публикации международной PCT заявки № PCT/US2010/058011 (включенной в данный документ посредством ссылки).
Гербициды можно классифицировать по их механизму действия и/или участку приложения действия и также можно классифицировать по времени, в которое они вносятся (например, довсходовые или послевсходовые), по способу внесения (например, некорневое внесение или почвенное внесение) или по тому, каким образом они доставляются или воздействуют на растение. Например, тифенсульфурон-метил и трибенурон-метил вносят на листья сельскохозяйственной культуры и они, в основном, там ме-таболизируются, тогда как римсульфурон и хлоримурон-этил, в основном, доставляются как через корни, так и через листья растения. "Механизм действия" в целом относится к метаболическому или физиологическому процессу в растении, который гербицид подавляет или по-иному нарушает, тогда как "участок приложения действия" в целом относится к физическому местоположению или биохимическому сайту в растении, на которые действует гербицид или с которыми он непосредственно взаимодействует. Гербициды можно классифицировать различными способами, в том числе по механизму действия и/или участку приложения действия.
Зачастую ген устойчивости гербицида, который приводит к толерантности к конкретному гербициду или другому химическому веществу у растения, экспрессирующего его, будет также приводить к толерантности к другим гербицидам или химическим веществам того же класса или подкласса, изложенным в сокращенной версии системы классификации от HRAC (см. табл. 1; международная патентная PCT заявка № PCT/US2010/058011, включенная в данный документ посредством ссылки).
В определенных способах глифосат, отдельно или в комбинации с другим представляющим интерес гербицидом, можно вносить на растения Brassica или их площадку возделывания. Неограничивающие примеры глифосатных составов изложены в табл. 1.
Другие подходящие гербициды и химические вещества для сельского хозяйства известны в данной области техники, такие как, например, описанные в WO 2005/041654. Другие гербициды также включают биогербициды, такие как Alternaria destruens Simmons, Colletotrichum gloeosporiod.es (Penz.) Penz. and Sacc, Drechsiera monoceras (MTB-951), Myrothecium verrucaria (Albertini & Schweinitz) Ditmar: Fries, Phy-tophthora palmivora (Butl.) Butl. и Puccinia thlaspeos Schub. Комбинации различных гербицидов могут приводить к эффекту большему, чем аддитивный (т.е. синергическому), в отношении сорняков и/или эффекту, меньшему, чем аддитивный (т.е. эффекту антидота), в отношении сельскохозяйственных культур или других требуемых растений. В определенных случаях комбинации глифосата с другими гербицидами, имеющими подобный спектр контроля, но отличающийся механизм действия, будут особо предпочтительными для предотвращения развития устойчивых сорняков.
Способы дополнительно включают нанесение на сельскохозяйственную культуру и сорняки в поле достаточного количества по меньшей мере одного гербицида, который могут переносить семена и растения сельскохозяйственной культуры, такого как, например, глифосат, ингибитор гидроксифенилпируват-диоксигеназы (например, мезотрион или сулькотрион), ингибитор фитоен-десатуразы (например, диф-луфеникан), ингибитор синтеза пигмента, сульфонамид, имидазолинон, биалафос, фосфинотрицин, аза-фендик, бутаяенацил, сульфосат, глуфосинат, триазолопиримидин, пиримидинилокси(тио)бензоат или сулониламинокарбонилтриазолинон, ингибитор ацетил-Со-А- карбоксилазы, такой как квизалафоп-Р-этил, синтетический ауксин, такой как квинклорак, KIH-485 или ингибитор protox для контроля сорняков без нанесения существенного вреда культурным растениям.
В целом эффективное количество гербицида, вносимого на поле, является достаточным для селективного контроля сорняков без значительного воздействия на сельскохозяйственную культуру. Исполь
зуемый в данном документе "сорняк" относится к растению, которое является нежелательным на конкретном участке. Напротив, используемое в данном документе "культурное растение" относится к растению, которое является желательным на конкретном участке, такому как, например, растение Brassica. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления сорняк представляет собой растение, не являющееся культурным растением, или вид, не являющийся культурным видом. Сорняки можно классифицировать на две основные группы: однодольные растения и двудольные растения.
Многие виды растений можно контролировать (т.е. уничтожать или повреждать) при помощи гербицидов, описанных в данном документе. Соответственно способы по настоящему изобретению пригодны в борьбе с этими видами растений, где они являются нежелательными (т.е. где они представляют собой сорняки). Эти виды растений включают культурные растения, а также виды, обычно считаемые сорняками, в том числе без ограничения виды, такие как лисохвост мышехвостниковидный (Alopecurus my-osuroides), щетинник гигантский (Setaria faberi), росичка кроваво-красная (Digitaria sanguinalis), суринам-ская трава (Brachiaria decumbens), овес дикий (Avena fatua), дурнишник пенсильванский (Xanthium pen-sylvanicum), марь белая (Chenopodium album), ипомея (Ipomoea coccinea), амарант (Amaranthus spp.), канатник Теофраста (Abutilion theophrasti), ежовник обыкновенный (Echinochloa crus-galli), бермудская трава (Cynodon dactylon), костер кровельный (Bromus tectorum), элевсина индийская (Eleusine indica), щетинник зеленый (Setaria viridis), плевел многоцветковый (Lolium multiflorum), джонсонова трава (Sorghum halepense), канареечник (Phalaris minor), метлица обыкновенная (Apera spica-venti), шерстяк мохнатый (Erichloa villosa), сыть съедобная (Cyperus esculentus), звездчатка средняя (Stellaria media), амброзия полыннолистная (Ambrosia artemisiifolia), Kochia scoparia, мелколепестник канадский (Conyza canadensis), плевел жесткий (Lolium rigidum), элевсина индийская (Eleucine indica), мелколепестник ворсистый (Conyza bonariensis), подорожник ланцетолистный (Plantago lanceolata), коммелина бенгальская (Commelina benghalensis), вьюнок полевой (Convolvulus arvensis), сыть круглая (Cyperus rotundus), бру-нишия (Brunnichia ovata), сесбания рослая (Sesbania exaltata), сенна туполистная (Senna obtusifolia), подсолнечник реснитчатый (Helianthus ciliaris) и пробосцидея луизианская (Proboscidea louisianica). В других вариантах осуществления сорняк включает плевел с устойчивостью к гербициду, например плевел с устойчивостью к глифосату, плевел с устойчивостью к параквату, плевел с устойчивостью к ингибитору ACC-азы и плевел с устойчивостью к неселективному гербициду. В некоторых вариантах осуществления нежелательные растения находятся в непосредственной близости от культурных растений.
В некоторых вариантах осуществления растение Brassica по настоящему раскрытию незначительно повреждается при обработке глифосатом, вносимым на такое растение в дозе, эквивалентной норме по меньшей мере 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 150, 170, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1800, 2000, 2400, 3000, 3600, 4000, 4500, 5000, 5400 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента, и коммерческого продукта, или гербицидного состава на акр или на гектар, в то время как соответствующее контрольное растение значительно повреждается под действием той же обработки.
В варианте осуществления Brassica с переносимостью глифосата находится на стадии роста, которая следует после стадии 6 листьев. В варианте осуществления Brassica с переносимостью глифосата находится на стадии роста первого цветка (BBCH 60). В варианте осуществления Brassica с переносимостью глифосата находится на стадии роста 10% открытых цветков (BBCH 61). В варианте осуществления Brassica с переносимостью глифосата находится на стадии роста 10% открытых цветков (BBCH 71). В варианте осуществления внесение глифосата осуществляют приблизительно за 7-10 дней перед уборкой урожая.
Эффективное количество гербицида ингибитора ALS включает по меньшей мере приблизительно
0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000,
2000, 3000, 4000, 5000 или более граммов или унций (1 унция= 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. В других вариантах осуществления эффективное количество ингибитора ALS включает по меньшей мере приблизительно 0,1-50, приблизительно 25-75, приблизительно 50-100, приблизительно 100-110, приблизительно 110-120, приблизительно 120-130, приблизительно 130-140, приблизительно 140-150, приблизительно 150-200, приблизительно 200-500, приблизительно 500-600, приблизительно 600-800, приблизительно 800-1000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. Множество ингибиторов ALS можно вносить на этих уровнях.
Эффективное количество сульфонилмочевины включает по меньшей мере 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 5000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. В других вариантах осуществления эффективное количество сульфонилмочевины включает по меньшей мере приблизительно 0,1-50, приблизительно 2575, приблизительно 50-100, приблизительно 100-110, приблизительно 110-120, приблизительно 120-130, приблизительно 130-140, приблизительно 140-150, приблизительно 150-160, приблизительно 160-170, приблизительно 170-180, приблизительно 190-200, приблизительно 200-250, приблизительно 250-300, приблизительно 300-350, приблизительно 350-400, приблизительно 400-450, приблизительно 450-500, приблизительно 500-550, приблизительно 550-600, приблизительно 600-650, приблизительно 650-700, приблизительно 700-800, приблизительно 800-900, приблизительно 900-1000, приблизительно 1000-2000
или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. Множество сульфо-нилмочевин можно вносить на этих уровнях.
Эффективное количество сульфониламинокарбонилтриазолинонов, триазолопиримидинов, пири-мидинилокси(тио)бензоатов и имидазолинонов может включать по меньшей мере приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000,
1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000,
2500, 3500, 4000, 4500, 5000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. В других вариантах осуществления эффективное количество сульфониламинокарбонилтриазоли-нов, триазолопиримидинов, пиримидинилокси(тио)бензоатов или имидазолинонов включает по меньшей мере приблизительно 0,1-50, приблизительно 25-75, приблизительно 50-100, приблизительно 100-110, приблизительно 110-120, приблизительно 120-130, приблизительно 130-140, приблизительно 140-150, приблизительно 150-160, приблизительно 160-170, приблизительно 170-180, приблизительно 190-200, приблизительно 200-250, приблизительно 250-300, приблизительно 300-350, приблизительно 350-400, приблизительно 400-450, приблизительно 450-500, приблизительно 500-550, приблизительно 550-600, приблизительно 600-650, приблизительно 650-700, приблизительно 700-800, приблизительно 800-900, приблизительно 900-1000, приблизительно 1000-2000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар.
Дополнительные диапазоны эффективных количеств гербицидов можно найти, например, в различных публикациях университетских служб внедрения достижений; см., например, Bernards, et al., (2006) Guide for Weed Management in Nebraska (www.ianrpubs.url.edu/sendlt/ec130); Regher, et al., (2005) Chemical Weed Control for Fields Crops, Pastures, Rangeland, and Noncropland, Kansas State University Agricultural Extension Station and Corporate Extension Service; Zollinger, et al., (2006) North Dakota Weed Control Guide, North Dakota Extension Service and the Iowa State University Extension на www.weeds.iastate.edu, каждый из который включен в данный документ посредством ссылки.
В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия глифосат вносят на площадку возделывания и/или по меньшей мере на одно растение на площадке возделывания из расчета норм 8-32 унции кислотного эквивалента на акр, или из расчета норм от 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 до 30 унций кислотного эквивалента на акр на нижнем пределе диапазона внесения и от 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 до 32 унций кислотного эквивалента на акр на верхнем пределе диапазона внесения (1 унция = 29,57 мл). В других вариантах осуществления глифосат вносят по меньшей мере из расчета 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или более унций активного ингредиента на гектар (1 унция = 29,57 мл). В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия гербицид на основе сульфонилмочевины вносят на поле и/или по меньшей мере на одно растение в поле из расчета норм от 0,04 до 1,0 унции активного ингредиента на акр или из расчета норм от 0,1, 0,2, 0,4, 0,6 до 0,8 унции активного ингредиента на акр на нижнем пределе диапазона внесения и от 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 до 1,0 унции активного ингредиента на акр на верхнем пределе диапазона внесения (1 унция = 29,57 мл). В некоторых вариантах осуществления, как описано в данном документе, глифосатное средство обработки при необходимости можно вносить на поздней стадии развития канолы для контроля сорняков.
Как известно в данной области техники, гербициды на основе глифосата, как класс, содержат один активный ингредиент, однако активный ингредиент присутствует в виде одного из ряда различных солей и/или составов. Однако гербициды, которые, как известно, ингибируют ALS, варьируют по своему активному ингредиенту, а также их химическим составам. Специалист в данной области знаком с определением количества активного ингредиента и/или кислотного эквивалента, присутствующего в конкретном объеме, и/или веса гербицидного препарата.
Используют гербицид ингибитор ALS. Нормы, при каких гербицид ингибитор ALS вносят на сельскохозяйственную культуру, часть сельскохозяйственной культуры, семя или площадку возделывания, могут представлять собой любые из норм, раскрытых в данном документе. В конкретных вариантах осуществления норма для гербицида ингибитора ALS составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 5000 г а.и./га, от приблизительно 0,5 до приблизительно 300 г а.и./га или от приблизительно 1 до приблизительно 150 г а.и./га.
В целом конкретный гербицид вносят на конкретное поле (и любые растения, растущие на нем) не больше 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 раз в год или не больше 1, 2, 3, 4 или 5 раз за вегетационный период.
Под "обработанный комбинацией" или "внесением комбинации" гербицидов на сельскохозяйственную культуру, площадку возделывания или поле подразумевается, что конкретное поле, сельскохозяйственная культура или сорняк обрабатывают каждым из гербицидов и/или химических веществ, для которых указано, что они являются частью комбинации, чтобы достигнуть требуемого эффекта, т.е. чтобы сорняки подвергались селективному контролю, в то же время сельскохозяйственная культура повреждалась незначительно. В некоторых вариантах осуществления сорняки, которые являются восприимчивыми к каждому из гербицидов, проявляют повреждение в результате обработки каждым из гербицидов, который является аддитивным или синергическим. Внесение каждого гербицида и/или химического вещества может происходить одновременно или внесения могут происходить в разное время при условии, что требуемый эффект достигается. Кроме того, внесение может происходить до высаживания сельско
хозяйственной культуры.
"Аддитивная гербицидная композиция" характеризуется гербицидной активностью, которая приблизительно равна наблюдаемым активностям индивидуальных компонентов. "Синергическая гербицид-ная комбинация" обладает более высокой гербицидной активностью, чем можно было ожидать, исходя из наблюдаемых активностей индивидуальных компонентов при использовании по отдельности. Соответственно раскрытый в данном документе объект изобретения предусматривает синергическую герби-цидную комбинацию, где степень контроля сорняков смеси превышает сумму контролей индивидуальных гербицидов. В некоторых вариантах осуществления степень контроля сорняков смеси превышает сумму контролей индивидуальных гербицидов на статистически значимую величину, в том числе, например, от приблизительно 1 до 5%, от приблизительно 5 до приблизительно 10%, от приблизительно 10 до приблизительно 20%, от приблизительно 20 до приблизительно 30%, от приблизительно 30 до 40%, от приблизительно 40 до приблизительно 50%, от приблизительно 50 до приблизительно 60%, от приблизительно 60 до приблизительно 70%, от приблизительно 70 до приблизительно 80%, от приблизительно 80 до приблизительно 90%, от приблизительно 90 до приблизительно 100%, от приблизительно 100 до 120% или больше. Кроме того, "синергически эффективное количество" гербицида относится к количеству одного гербицида, необходимому для вызывания синергического эффекта у другого гербицида, присутствующего в гербицидной композиции. Таким образом, термин "синергист" и его производные относятся к веществу, которое усиливает активность активного ингредиента (а.и.), т.е. вещества в составе, за счет которого получают биологический эффект, например, гербицида.
Для контроля нежелательных растений глифосат можно вносить до появления всходов, после появления всходов или до и после появления всходов на нежелательные растения или культурные растения, и/или гербицид ингибитор ALS (т.е. гербицид на основе сульфонилмочевины) вносят до появления всходов, после появления всходов или до и после появления всходов на нежелательные растения или культурные растения. В других вариантах осуществления глифосат и/или гербицид ингибитор ALS (т.е. гербицид на основе сульфонилмочевины) вносят вместе или вносят по отдельности. В еще одних вариантах осуществления синергическую гербицидную композицию вносят, например, на стадии (b), выше, по меньшей мере один раз перед высаживанием представляющей(их) интерес сельскохозяйственной(ых) культуры (культур), например, на стадии (а), выше.
Сорняки, которые может быть трудно контролировать с помощью только глифосата в полях, где выращивают сельскохозяйственную культуру (такую как, например, сельскохозяйственная культура Brassica), включают без ограничения следующие: мелколепестник канадский (например, Conyza canaden-sis); плевел жесткий (например, Lolium rigidum); элевсина индийская (например, Eleusine indica); плевел многоцветковый (например, Lolium multiflorum); мелколепестник ворсистый (например, Conyza bonarien-sis); подорожник ланцетолистный (например, Plantago lanceolata); амброзия полыннолистная (например, Ambrosia artemisifolia); ипомея (например, Ipomoea spp.); амарант (например, Amaranthus spp.); вьюнок полевой (например, Convolvulus arvensis); сыть съедобная (например, Cyperus esculentus); common марь белая (например, Chenopodium album); горец вьюнковый (например, Polygonium convolvulus); канатник Теофраста (например, Abutilon theophrasti); кохия (например, Kochia scoparia) и коммелина (например, Commelina spp.). На участках, где обнаруживаются такие сорняки, растения Brassica с переносимостью другого гербицида являются особенно пригодными, поскольку обеспечивают возможность обработки поля (и, следовательно, любой сельскохозяйственной культуры, выращиваемой в поле) комбинациями гербицидов, которые будут вызывать неприемлемое повреждение культурных растений, которые не содержат обоих этих полинуклеотидов. Растения по настоящему раскрытию с преносимостью глифосата и других гербицидов, таких как, например, гербициды на основе сульфонилмочевины, имидахолинона, триазолопиримидина, пиримидинил(тио)бензоата и/или сульфониламинокарбонилтриазолинона, в дополнение характеризующиеся переносимостью по меньшей мере одного другого гербицида с другим механизмом действия или участком приложения действия, являются особенно пригодными в ситуациях, если сорняки характеризуются переносимостью по меньшей мере двух из тех же гербицидов, переносимостью которых характеризуются растения. Таким образом, растения по настоящему раскрытию создают возможность улучшенного контроля сорняков, которые характеризуются переносимостью нескольких гербицидов.
Другие широкоприменяемые средства обработки для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие разновидности сельскохозяйственных культур (в том числе, например, растения Brassica), включают гербицид тифенсульфурон-метил на основе сульфонилмочевины (коммерчески доступен как Harmony GT(r)). Однако одним недостатком тифенсульфурон-метила является то, что высокие нормы внесения, требуемые для стабильного контроля сорняков, часто вызывают повреждения сельскохозяйственной культуры, растущей в том же поле. Растения Brassica, характеризующиеся дополнительной переносимостью (в дополнение к глифосату), можно обрабатывать комбинацией глифосата и тифенсульфурон-метила, которые имеют преимущество, связанное с применением гербицидов с различными механизмами действия. Таким образом, сорняки, которые характеризуются переносимостью каждого гербицида по отдельности, контролируют комбинацией двух гербицидов, и улучшенные GAT1-растения Brassica не будут значительно повреждаться в результате обработки.
Другими гербицидами, которые применяют для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие разновидности сельскохозяйственных культур (в том числе, например, растения Brassica), являются гербицид на основе триазолопиримидина клорансулам-метил (коммерчески доступен как FirstRate(r)) и гербицид на основе имидазолинона имазаквин (коммерчески доступен как Scep-tor(r)). Когда эти гербициды применяют по отдельности, они могут обеспечивать только минимальный контроль сорняков. Однако коммерческие разновидности сельскохозяйственных культур можно обрабатывать, например, комбинацией глифосата (например, Roundup(r) (изопропиламинная соль глифосата)), имазапира (в настоящее время коммерчески доступен как Arsenal(r)), хлоримурон-этила (в настоящее время коммерчески доступен как Classic(r)), квизалофоп-Р-этила (в настоящее время коммерчески доступен как Assure II(r)) и фомесафена (в настоящее время коммерчески доступен как Flexstar(r)). Эта комбинация имеет преимущество, связанное с применением гербицидов с различными механизмами действия. Таким образом, сорняки, характеризующиеся переносимостью только одного или нескольких из этих гербицидов, контролируются комбинацией из пяти гербицидов. Эта комбинация обеспечивает очень широкий спектр защиты от типа сорняков с переносимостью гербицида, которые, как можно ожидать, будут появляться и распространяться при современной практике контроля сорняков.
Поля, содержащие растения Brassica с переносимостью, обусловленной метаболизированием гли-фосата, с переносимостью дополнительного гербицида также можно обрабатывать, например, комбинацией гербицидов, включающей глифосат, римсульфурон и дикамба или мезотрион. Эта комбинация может быть особенно пригодной при контроле сорняков, у которых развилась некоторая переносимость гербицидов, которые ингибируют ALS. Другая комбинация гербицидов, которая может быть особенно пригодной для контроля сорняков, включает глифосат и по меньшей мере один из следующих: метсуль-фурон-метил (коммерчески доступен как Ally(r)), имазапир (коммерчески доступен как Arsenal(r)), имазе-тапир, имазаквин и сульфентразон. Понятно, что любую из комбинаций, обсуждаемых выше или где-либо в данном документе, также можно применять для обработки участков в комбинации с любым другим гербицидом или веществом для применения в сельском хозяйстве.
Некоторые широко применяемые средства обработки для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие сельскохозяйственные культуры (в том числе, например, Brassica), включают глифосат (в настоящее время коммерчески доступен как Roundup(r)), римсульфурон (в настоящее время коммерчески доступен как Resolve(r) или Matrix(r)), дикамбу (коммерчески доступна как Clarity(r)), атразин и мезотрион (коммерчески доступен как Callisto(r)). Эти гербициды иногда применяют по отдельности из-за слабой переносимости сельскохозяйственной культурой нескольких гербицидов. К сожалению, при применении по отдельности каждый из этих гербицидов имеет значительные недостатки. В частности, частота встречаемости сорняков, которые характеризуются переносимостью индивидуальных гербицидов, продолжает возрастать, что делает глифосат менее эффективным, чем требуется в некоторых ситуациях. Римсульфурон обеспечивает лучший контроль сорняков при высоких дозах, которые могут вызвать повреждения у сельскохозяйственной культуры, а альтернативы, такие как дикамба, зачастую являются более дорогими, чем другие широко применяемые гербициды.
Некоторые широко применяемые средства обработки для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие сельскохозяйственные культуры, включают глифосат (в настоящее время коммерчески доступен как Roundup(r)), хлоримурон-этил, трибенурон-метил, римсульфурон (в настоящее время коммерчески доступен как Resolve(r) или Matrix(r)), имазетапир, имазапир и имазаквин. К сожалению, при применении по отдельности каждый из этих гербицидов имеет значительные недостатки. В частности, частота встречаемости сорняков, которые характеризуются переносимостью индивидуальных гербицидов, продолжает возрастать, что делает каждый индивидуальный гербицид менее эффективным, чем требуется в некоторых ситуациях. Однако растения Brassica, которые характеризуются переносимостью глифосата благодаря экспрессии метаболизирующего глифосат фермента, такого как GAT, в комбинации с дополнительным признаком переносимости гербицида, можно обрабатывать комбинацией гербицидов, которые вызвали бы неприемлемое повреждение стандартной разновидности растения, в том числе комбинациями гербицидов, которые включают по меньшей мере один из упомянутых выше.
Различные комбинации гербицидов, фунгицидов и/или инсектицидов можно вносить с глифосатом вплоть до стадии уборки урожая канолы или по меньшей мере до стадии 10% цветков. Они включают, без ограничений, гербициды Lontrel(r) (активный ингредиент клопиралид), клетодим (в настоящее время коммерчески доступен как Select(r), Centurion(r)), Equinox(r) (тепралоксидим), Muster(r) (этаметсульфурон-метил) и Poast Ultra(r) (сетоксидим). Эти фунгициды включают без ограничений Lance(r) (боксалид), Pro-line(r) (протиоконазол), Vertisan(tm), Headline(r), Astound(r), Ti^/пропиконазол, Quadris(r)/азоксистробин, ипродионы (в настоящее время коммерчески доступны как Rovral(r)), Quash(r), Serenade(r) Max(tm) (Bacillus subtilis) и Acapela(tm). Эти инсектициды включают без ограничений Lorsban(r), Decis(r), лямбда-цигалотрин (в настоящее время коммерчески доступен как Matador(r)), диметоат (в настоящее время коммерчески доступен как Lagon(r) или Cygon(r)), циперметрин (Ripcord(r)), малатион, Monitor(r), перметрин (Pounce(r)),
Sevin(r) XLR Plus, Coragen(r) и Benevia(r).
Гербицид можно составлять и вносить на представляющий интерес участок, такой как, например, поле или площадка возделывания, любым подходящим способом. Гербицид можно вносить на поле в любой форме, такой как, например, раствор для распыления, или в виде твердого порошка или гранул. В конкретных вариантах осуществления гербицид или комбинация гербицидов, которые используются в способах, предусматривает баковую смесь или премикс. Гербицид также можно составлять, например, в виде "гомогенной смеси гранул", полученной с применением технологии приготовления смесей (см., например, патент США № 6022552 под названием "Однородные смеси пестицидных гранул" (Uniform Mixtures of Pesticide Granules)). Технология приготовления смесей из патента США № 6022552 позволяет производить нерасслаивающуюся смесь (т.е. "гомогеннную смесь гранул") составленных химических веществ для защиты сельскохозяйственной культуры в форме сухих гранул, которая делает возможной доставку индивидуальных смесей, разработанных для решения специальных проблем. Гомогенную смесь гранул можно транспортировать, обрабатывать, дополнительно разделять и вносить таким же способом, что и традиционные премикс-продукты, в которых несколько активных ингредиентов составлены в одной грануле.
Любой гербицидный состав, вносимый на GAT1-растение Brassica, можно готовить в виде композиции для получения "баковой смеси". В таких вариантах осуществления каждый ингредиент или комбинацию ингредиентов можно хранить отдельно друг от друга. Затем ингредиенты можно смешивать друг с другом перед внесением. Как правило, такое смешивание происходит незадолго перед внесением. При процессе приготовления баковой смеси каждый ингредиент перед смешиванием, как правило, находится в воде или подходящем органическом растворителе. Дополнительные рекомендации касательно технологии составления см. в Woods, "The Formulator's Toolbox--Product Forms for Modern Agriculture" Pesticide Chemistry and Bioscience, The Food-Environment Challenge, Brooks and Roberts, Eds., Proceedings of the 9th International Congress on Pesticide Chemistry, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, 1999, p. 120-133; см. также патент США № 3235361, от столбца 6, строки 16 до столбца 7, строки 19, и примеры 10-41; патент США № 3309192, от столбца 5, строки 43 до столбца 7, строки 62, и примеры 8, 12, 15, 39, 41, 52, 53, 58, 132, 138-140, 162-164, 166, 167 и 169-182; патент США № 2891855, от столбца 3, строки 66 до столбца 5, строки 17, и примеры 1-4; Klingman, Weed Control as a Science, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1961, p. 81-96, и Hance, et al., Weed Control Handbook, 8th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1989, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки в своей полноте.
Способы по настоящему раскрытию дополнительно создают возможность для разработки герби-цидных комбинаций для применения с растениями Brassica. В таких способах оцениваются условия окружающей среды на площадке возделывания. Условия окружающей среды, которые можно оценивать, включают без ограничений проблемы загрязнения грунтовых и поверхностных вод, предполагаемое применение сельскохозяйственной культуры, переносимость, присущую сельскохозяйственной культуре, остаточные содержания в почве, сорняки, присутствующие на площадке возделывания, механический состав почвы, pH почвы, количество органического вещества в почве, оборудование для внесения и приемы механической обработки почвы. После оценки условий окружающей среды эффективное количество комбинации гербицидов можно вносить на сельскохозяйственную культуру, часть сельскохозяйственной культуры, семя сельскохозяйственной культуры или площадку возделывания.
Гербицид, вносимый на растения Brassica по настоящему раскрытию, служит для предотвращения начала роста восприимчивых сорняков и/или служит для нанесения повреждений у сорняков, произрастающих на представляющем интерес участке. В некоторых вариантах осуществления гербицид или гер-бицидная смесь оказывают такие эффекты на сорняки, поражающие сельскохозяйственные культуры, которые затем высаживают в представляющем интерес участке (т.е. поле или площадке возделывания). В способах по настоящему раскрытию внесение комбинации гербицидов не должно происходить в одно и то же время. При условии, что в поле, на котором посажена сельскохозяйственная культура, содержатся обнаруживаемые количества первого гербицида, и второй гербицид вносят в какой-то момент в течение периода, в котором сельскохозяйственная культура находится на площадке возделывания, считается, что сельскохозяйственная культура была обработана смесью гербицидов по настоящему раскрытию. Таким образом, способы по настоящему раскрытию охватывают внесение гербицидов, которые являются "довсходовыми", "послевсходовыми", "с предпосевной заделкой" и/или которые предусматривают обработку семян перед высаживанием.
"Довсходовый" относится к гербициду, который вносят на представляющий интерес участок (например, поле или площадку возделывания) перед тем, как растение явно появится над поверхностью почвы. "Послевсходовый" относится к гербициду, который вносят на участок после того, как растение явно появится над поверхностью почвы. В некоторых случаях термины "довсходовый" и "послевсходо-вый" используются в отношении сорняка на представляющем интерес участке, и в некоторых случаях эти термины используются в отношении культурного растения на представляющем интерес участке. При использовании в отношении сорняка, эти термины можно применять только для конкретного типа сорняка или вида сорняка, который присутствует или, как полагают, присутствует на представляющем интерес участке. Несмотря на то что любой гербицид можно вносить в довсходовом и/или послевсходовом
средстве обработки, некоторые гербициды, как известно, являются более эффективными в контроле сорняка или сорняков при внесении либо до появления всходов, либо после появления всходов. Например, римсульфурон характеризуется как довсходовой, так и послевсходовой активностью, тогда как другие гербициды характеризуются преимущественно довсходовой (метолахлор) или послевсходовой (глифо-сат) активностью. Эти свойства конкретных гербицидов известны из уровня техники и их легко определит специалист в данной области. Кроме того, специалист в данной области с легкостью сможет выбрать подходящие гербициды и время внесения для применения с трансгенными растениями по настоящему раскрытию и/или на участках, на которых трансгенные растения по настоящему раскрытию планируют посадить. "Предпосевная заделка" предусматривает заделку соединений в почву перед высаживанием.
Таким образом, в настоящем раскрытии предусмотрены улучшенные способы выращивания сельскохозяйственной культуры и/или контроля сорняков. В настоящем раскрытии также предусмотрены способы выращивания сельскохозяйственной культуры и/или контроля сорняков, при этом они представляют собой способы "без обработки почвы" или с "неглубокой обработки почвы" (также называемые "минимальная обработка почвы"). В таких способах почву не возделывают или возделывают менее часто во время цикла выращивания по сравнению с традиционными способами; эти способы могут экономить средства, которые в ином случае затрачивались бы из-за дополнительного возделывания, включая трудозатраты и затраты на топливо.
Способы по настоящему раскрытию охватывают применение одновременных и/или последовательных внесений нескольких классов гербицидов. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему раскрытию предусматривают обработку растения по настоящему раскрытию, и/или представляющего интерес участка (например, поля или площадки возделывания), и/или сорняка только одним гербицидом или другим химическим веществом, таким как, например, гербицид глифосат.
Время, в которое гербицид вносят на представляющий интерес участок (и любые растения на нем), может быть важным для оптимизации контроля сорняков. Время, в которое гербицид вносят, может определяться с учетом размера растений, и/или стадии роста, и/или развития растений в представляющем интерес участке, например культурных растений или сорняков, растущих на участке. Стадии роста и/или развития растений известны из уровня техники. Таким образом, например, время, в которое гербицид или другое химическое вещество вносят в представляющий интерес участок, на котором растения выращиваются, может представлять собой время, в которое некоторые или все растения в конкретном участке достигли, по меньшей мере, конкретного размера, и/или стадии роста, и/или развития, или время, в которое некоторые или все растения в конкретном участке еще не достигли конкретного размера, и/или стадии роста, и/или развития.
Различные химические вещества, такие как гербициды, характеризуются различными "остаточными" эффектами, т.е. различными количествами времени, в течение которых обработка химическим средством или гербицидом продолжает оказывать эффект на растения, растущие на обработанном участке. Такие эффекты могут быть желательными или нежелательными, в зависимости от требуемого будущего предназначения обработанного участка (например, поля или площадки возделывания). Таким образом, схема чередования сельскохозяйственных культур может быть выбрана, исходя из остаточных эффектов обработок, которые будут применяться для каждой сельскохозяйственной культуры, и их эффектов в отношении сельскохозяйственной культуры, которая будет выращиваться на том же участке впоследствии. Специалисту в данной области знакомы методики, которые можно применять для оценки остаточного эффекта гербицида; например, в целом глифосат характеризуется очень небольшой остаточной активностью в почве или ее отсутствием, тогда как гербициды, которые действую с ингибированием ALS, варьируют по их уровням остаточной активности. Остаточные активности разнообразных гербицидов известны из уровня техники и, что также известно, варьируют в зависимости от разнообразных факторов окружающей среды, таких как, например, уровни почвенной влаги, температура, pH и состав почвы (структура и органическое вещество).
Более того, трансгенные растения по настоящему раскрытию могут обеспечивать улучшенную переносимость обработки дополнительными химическими веществами, обычно используемыми в отношении сельскохозяйственных культур в сочетании с гербицидными средствами обработки, такими как антидоты, вспомогательные вещества, такие как сульфонат аммония и маслянистый концентрат для сельскохозяйственных культур, и т.п. Термин "антидот" относится к веществу, которое при добавлении к гербицидному составу устраняет или снижает фитотоксические эффекты гербицида на определенные сельскохозяйственные культуры. Специалист в данной области техники будет понимать, что выбор антидота зависит, частично, от представляющего интерес культурного растения и конкретного гербицида или комбинации гербицидов, входящих в состав синергической гербицидной композиции. Иллюстративные антидоты, подходящие для применения с раскрытой в данном документе гербицидной композицией, включают без ограничений раскрытые в патентах США №№ 4808208; 5502025; 6124240 и публикациях заявок на патент США №№ 2006/0148647; 2006/0030485; 2005/0233904; 2005/0049145; 2004/0224849; 2004/0224848; 2004/0224844; 2004/0157737; 2004/0018940; 2003/0171220; 2003/0130120; 2003/0078167, раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки в своей полноте. Способы по настоящему раскрытию могут предусматривать применение гербицидов в комбинации с антидотами гер
бицидов, такими как беноксакор, BCS (1-бром-4-[(хлорметил)сульфонил]бензол), клоквинтосет-мексил, циометринил, дихлормид, 2-(дихлорметил)-2-метил-1,3-диоксолан (MG 191), фенхлоразол-этил, фенкло-рим, флуразол, флуксофеним, фурилазол, изоксадифен-этил, мефенпир-диэтил, метоксифенон ((4-метокси-3-метилфенил)(3-метилфенил)-метанон), нафталиновый ангидрид (1,8-нафталиновый ангидрид) и оксабетринил для повышения безопасности сельскохозяйственной культуры. Эффективные в качестве антидота количества антидотов гербицидов можно вносить одновременно с соединениями по настоящему раскрытию или применять в качестве средств обработки семян. Следовательно, аспект настоящего раскрытия относится к применению смеси, содержащей глифосат, по меньшей мере один другой гербицид и эффективное в качестве антидота количество антидота гербицида.
Используемым в данном документе "вспомогательным веществом" является любой материал, добавленный в раствор или состав для распыления для модифицирования действия химического вещества для сельского хозяйства или физических свойств раствора для распыления; см., например, Green and Foy, (2003) "Adjuvants: Tools for Enhancing Herbicide Performance", в Weed Biology and Management, ed. Inderjit (Kluwer Academic Publishers, The Netherlands). Вспомогательные вещества можно классифицировать или подразделять на активаторы, подкисляющие средства, буферы, добавки, адгезивы, противофлокулирую-щие средства, противовспениватели, пеноудаляющие средства, антифризы, аттрактанты, основные смеси, хелатирующие средства, очистители, окрашивающие средства или красители, средства для сочетаемости, сорастворители, связывающие средства, масляные концентраты для сельскохозяйственных культур, средства для отложения, детергенты, диспергирующие средства, средства для контроля уноса капель воздухом, эмульгаторы, средства для снижения испарения, разбавители, удобрения, пенные маркеры, компоненты составов, инертные вещества, увлажняющие средства, метилированные масла из семян, концентрированные СОС, полимеры, модифицированные растительные масла, средство для проникновения, репелленты, концентраты нефтяного масла, консерванты, средства устойчивости к осадкам, удерживающие добавки, солюбилизаторы, поверхностно-активные вещества, средства для распределения, клеящие средства, адгезивные средства, синергисты, загустители, средства содействия перераспределению, средства для защиты от УФ, растительные масла, средства обработки воды и смачивающие средства.
В дополнение, растения Brassica с переносимостью по настоящему раскрытию можно обрабатывать смесью гербицидов, а также одним или несколькими другими инсектицидами, фунгицидами, немтоци-дами, бактерицидами, акарицидами, регуляторами роста, хемостерилянтами, химическими сигнальными веществами, репеллентами, аттрактантами, феромонами, стимуляторами питания или другими биологически активными соединениями или энтомопатогенными бактериями, вирусами или грибами с образованием многокомпонентной смеси, обеспечивающий даже более широкий спектр сельскохозяйственной защиты. Примеры таких сельскохозяйственных защитных средств, которые можно применять в способах по настоящему раскрытию, включают: инсектициды, такие как абамектин, ацефат, ацетамиприд, ами-дофлумет (S-1955), авермектин, азадирахтин, азинфос-метил, бифентрин, бифеназат, бупрофезин, карбо-фуран, картап, хлорфенапир, хлорфлуазурон, хлорпирифос, хлорпирифос-метил, кромафенозид, клотиа-нидин, цифлуметофен, цифлутрин, бета-цифлутрин, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, циперметрин, ци-ромазин, дельтаметрин, диафентиурон, диазинон, диелдрин, дифлубензурон, димефлутрин, диметоат, динотефуран, диофенолан, эмамектин, эндосульфан, эсфенвалерат, этипрол, фенотиокарб, феноксикарб, фенпропатрин, фенвалерат, фипронил, флоникамид, флубендиамид, флуцитринат, тау-флювалинат, флу-фенерим (UR-50701), флуфеноксурон, фонофос, галофенозид, гексафлумурон, гидраметилнон, имидак-лоприд, индоксакарб, изофенфос, люфенурон, малатион, метафлумизон, метальдегид, метамидофос, ме-тидатион, метомил, метопрен, метоксихлор, метофлутрин, монокротофос, метоксифенозид, нитенпирам, нитиазин, новалурон, новифлумурон (XDE-007), оксамил, паратион, паратион-метил, перметрин, форат, фозалон, фосме, фосфамидон, пиримикарб, профенофос, профлутрин, пиметрозин, пирафлупрол, пирет-рин, пиридалил, пирипрол, пирипроксифен, ротенон, рианодин, спиносад, спиродиклофен, спиромезифен (BSN 2060), спиротетрамат, сульпрофос, тебуфенозид, тефлубензурон, тефлутрин, тербуфос, тетрахлор-винфос, тиаклоприд, тиаметоксам, тиодикарб, тиосултап-натрий, тралометрин, триазамат, трихлорфон и трифлумурон; фунгициды, такие как ацибензолар, альдиморф, амисулбром, азаконазол, азоксистробин, беналаксил, беномил, бентиаваликарб, бентиаваликарб-изопропил, биномиал, бифенил, битертанол, бла-стицидин-S, бордосская смесь (трехосновный сульфат меди), боксалид/никобифен, бромуконазол, бупи-римат, бутиобат, карбоксин, карпропамид, каптафол, каптан, карбендазим, хлоронеб, хлороталонил, хло-золинат, клотримазол, хлорокись меди, соли меди, такие как сульфат меди и гидроксид меди, циазофа-мид, цифлунамид, цимоксанил, ципроконазол, ципродинил, дихлофлуанид, диклоцимет, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, дифеноконазол, диметоморф, димоксистробин, диниконазол, диниконазол-М, динокап, дискостробин, дитианон, додеморф, додин, эконазол, этаконазол, эдифенфос, эпоксиконазол, этабоксам, этиримол, этридиазол, фамоксадон, фенамидон, фенаримол, фенбуконазол, фенкарамид, фен-фурам, фенгексамид, феноксанил, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропиморф, ацетат фентина, гидро-ксид фентина, фербам, ферфуразоат, феримзон, флуазинам, флудиоксонил, флуметовер, флуопиколид, флуоксастробин, флуквинконазол, флуквинконазол, флузилазол, флусульфамид, флутоланил, флутриа-фол, фолпет, фосетил-алюминий, фуберидазол, фуралаксил, фураметпир, гексаконазол, гимексазол, гуа
затин, имазалил, имибенконазол, иминоктадин, иодокарб, ипконазол, ипробенфос, ипродион, ипровали-карб, изоконазол, изопротиолан, касугамицин, крезоксим-метил, манкозеб, мандипропамид, манеб, ма-панипирин, мефеноксам, мепронил, металаксил, метконазол, метасульфокарб, метирам, метоминостро-бин/феноминостробин, мепанипирим, метрафенон, миконазол, миклобутанил, нео-азозин (метанарсонат трехвалентного железа), нуаримол, октилинон, офурас, орисастробин, оксадиксил, оксолиновая кислота, окспоконазол, оксикарбоксин, паклобутразол, пенконазол, пенцикурон, пентиопирад, перфуразоат, фос-фоновая кислота, фталид, пикобензамид, пикоксистробин, полиоксин, пробеназол, прохлораз, процими-дон, пропамокарб, пропамокарб-гидрохлорид, пропиконазол, пропинеб, проквиназид, протиоконазол, пираклостробин, приазофос, пирифенокс, пириметанил, пирифенокс, пиролнитрин, пироквилон, квинко-назол, квиноксифен, квинтозен, силтиофам, симеконазол, спироксамин, стрептомицин, сера, тебукона-зол, техразен, теклофталам, текназен, тетраконазол, тиабендазол, тифлузамид, тиофанат, тиофанат-метил, тирам, тиадинил, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триаримол, триа-зоксид, тридеморф, триморфамид, трициклазол, трифлоксистробин, трифорин, тритиконазол, уникона-зол, валидамицин, винклозолин, цинеб, цирам и зоксамид; нематоциды, такие как альдикарб, оксамил и фенамифос; бактерициды, такие как стрептомицин; акарициды, такие как амитраз, хинометионат, хлоро-бензилат, цихексатин, дикофол, диенохлор, этоксазол, феназаквин, фенбутатин оксид, фенпропатрин, фенпироксимат, гекситиазокс, пропаргит, пиридабен и тебуфенпирад, и биологические средства, в том числе энтомопатогенные бактерии, такие как Bacillus thuringiensis subsp. Aizawai, Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki, и инкапсулированные дельта-эндотоксины Bacillus thuringiensis (например, Cellcap, MPV, MPVII); энтомопатогенные грибы, такие как гриб, вызывающий зеленую мускардину; и энтомопатоген-ные вирусы, в том числе бакуловирус, вирус ядерного полиэдроза (NPV), такой как HzNPV, AfNPV; и вирус гранулеза (GV), такой как CpGV. Весовые соотношения этих разнообразных объектов смешивания с прочими композициями (например, гербицидами), применяемыми в способах по настоящему раскрытию, как правило, составляют от 100:1 до 1:100 или от 30:1 до 1:30, от 10:1 до 1:10 или от 4:1 до 1:4.
Таким образом, в способах по настоящему раскрытию используют гербицид или гербицидную комбинацию, и они могут дополнительно предусматривать применение инсектицидов, и/или фунгицидов, и/или других химических веществ для сельского хозяйства, таких как удобрения. Применение таких комбинированных средств обработки по настоящему раскрытию может расширять спектр активности против дополнительных видов сорняков и подавлять пролиферацию любых устойчивых биотипов.
Способы по настоящему раскрытию могут дополнительно предусматривать применение регуляторов роста растений, таких как авиглицин, №(фенилметил)-1Н-пурин-6-амин, этефон, эпохолеон, гиббе-реллиновая кислота, гиббереллин А4 и А7, белок-гарпин, мепикват-хлорид, прогексадион кальция, про-гидрожасмон, нитрофенолят натрия и тринексапак-метил, и организмов, модифицирующих рост растений, таких как штамм ВР01 Bacillus cereus.
Способы, описанные в данном документе, также обеспечивают средства для минимизации неблагоприятных агротехнических последствий, являющихся результатом позднего развития сорняков. Контроль сорняков, которые растут во время поздних стадий развития канолы, может приводить к меньшему количеству соломы, меньшему количеству биологического вещества и усовершенствованным сельскохозяйственным работам по уборке урожая, что, в конечном итоге, приводит к положительным агротехническим последствиям для растениевода. Заболевания, которые могут усиливаться вследствие роста сорняков в поле во время поздних стадий роста канолы, включают без ограничений черную ножку, фузари-озный вилт и склеротиниоз. С помощью контроля роста сорняков на поздних стадиях развития канолы заболевания канолы можно контролировать лучше. Следовательно, внесение глифосатного средства обработки на поздней стадии развития канолы может обеспечивать средства для лучшего контроля заболеваний канолы.
Стадии роста канолы.
Шкалу стадий роста, называемую десятичная система BBCH, можно применять для классификации различных стадий роста канолы (Meier, U ed), Growth Stages of mono-and dicotyledonous plants, 2. Edition (2001) (Federal Biological Research Centre for Agriculture and Forestry, Berlin and Braunschweig; Lancashire, P.D., H. Bleiholder, P. Langeluddecke, R.T. Van Den Boom, E. Weber und A. Witzen-Berger, An uniformdeci-mal code for growth stages of crops and weeds. Ann. appl. Biol. 119, 561-601). Шкала BBCH для канолы описывает девять основных стадий роста для канолы и соответствующие коды и описания. Шкала поделена на основные стадии роста: прорастание, развитие листьев, образование боковых побегов, удлинение стебля, появление соцветий, цветение, развитие плодов, созревание и увядание и дополнительно подразделяется на подгруппы. Стадии роста по BBCH изложены в табл. 2.
2=явно удлиненное междоузлие n развивается между листом n и листом n+1.
Варианты осуществления настоящего раскрытия дополнительно определены в следующих примерах. Следует понимать, что эти примеры представлены только с целью иллюстрации. Из вышеприведенного описания и данных примеров специалист в данной области может установить необходимые характеристики настоящего раскрытия и без отступления от его сути и объема может выполнить различные изменения и модификации вариантов осуществления настоящего раскрытия для адаптации его к различным способам применения и условиям. Таким образом, различные модификации вариантов осуществления настоящего раскрытия в дополнение к представленным и описанным в данном документе будут очевидны для специалистов в данной области из вышеизложенного описания. Такие модификации так же, как предполагается, находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Экспериментальная часть
Пример 1. Испытания эффективности гербицида в отношении GAT-объектов для определения урожая.
Полевые испытания разрабатывали как схему с расщепленными делянками, при этом глифосатные средства обработки служили основным фактором, а элементы как субделянки. Схему с расщепленными делянками применяли потому, что в каждом местоположении оценивали более одного внесения глифо-сатного средства обработки, при этом в индивидуальную делянку вносили различное средство обработки. В схеме с расщепленными делянками рандомизировали уровни основного фактора делянки (внесения глифосатного средства обработки) и факторы субделянки (элементы индивидуальных объектов) в пределах главных делянок.
Применяли следующие обработки глифосатом, как подробно описано ниже, на различных стадиях роста. В этих тестах 1X внесение глифосатного средства обработки составляло 675 г к.э./га, 2X внесение глифосатного средства обработки составляло 1350 г к.э./га, 3X внесение глифосатного средства обработки составляло 2025 г к.э./га и 4X внесение глифосатного средства обработки составляло 2700 г к.э./га в виде активного ингредиента глифосата. Все средства обработки вносили с применением механического опрыскивателя. Например, в обработке 1, ниже, "2X семядольные листья" описывает обработку из расче
та 1350 г к.э./га глифосата на стадии роста семядольных листьев. Различные средства обработки тестировали на протяжении двухлетнего периода, и они описаны ниже. Средства обработки, протестированные в год 1:
1) 2X семядольные листья,
2) 2X стадия 3-5 листьев,
3) 2X семядольные листья + 2X стадия 3-5 листьев,
4) 2X семядольные листья + 2X выбрасывание цветоноса BBCH55,
5) 4X семядольные листья,
6) 4X стадия 3-5 листьев.
Средства обработки, протестированные в год 2:
1) 1X семядольные листья + 1X стадия 3-5 листьев,
2) 2X семядольные листья + 2X стадия 3-5 листьев,
3) 1X семядольные листья + 1X зеленая почка BBCH51,
4) 2X семядольные листья + 2X зеленая почка BBCH51,
5) 1X семядольные листья + 1X 10% цветков BBCH61,
6) 2X семядольные листья + 2X 10 % цветков BBCH61.
Для уменьшения роста сорняков на контрольных делянках по мере необходимости применяли традиционные гербициды или механическую прополку сорняков. В контрольные делянки глифосат не носили и применяли их как контроль/основу, с которой сравнивали другие внесения глифосатного средства обработки. Контрольные делянки могли содержать один или несколько сорняков, присутствующих во время вегетационного периода. Контроль основан на традиционных гербицидах, которые зарегистрированы для применения у всех разновидностей канолы.
Делянки считали высохшими, когда 60-70% семян поменяли цвет с зеленого на черный. Уборку комбайном проводили через 5-14 дней после десикации в зависимости от погодных условий. На каждой делянке урожай убирали по отдельности. Влажность и вес регистрировали непосредственно на комбайне. Урожай определяли для GAT1-объекта.
В тесте использовали различные местоположения. Испытания оценивали по 10 местоположениям и в год 1, и в год 2. Местоположения включали несколько участков в зонах с коротким, средним и длинным вегетационным периодом по обоим годам.
Объект, который тестировали, представлял собой объект DP-73496-4 (GAT1) канолы (международная патентная PCT заявка № PCT/US2010/058011, включенная посредством ссылки).
Пример 2. Испытания эффективности гербицида в отношении GAT-объектов для определения хлороза.
Полевые испытания разрабатывали как схему с расщепленными делянками, при этом глифосатные средства обработки служили основным фактором, а элементы как субделянки. Элементы рандомизиро-вали в пределах фактора расщепления, и расщепление рандомизировали в пределах повторности.
Применяли следующие обработки глифосатом, как подробно описано ниже, на различных стадиях роста. В этих тестах 1X внесение глифосатного средства обработки составляло 675 г к.э./га, 2X внесение глифосатного средства обработки составляло 1350 г к.э./га, 3X внесение глифосатного средства обработки составляло 2025 г к.э./га, и 4X внесение глифосатного средства обработки составляло 2700 г к.э./га. Все средства обработки вносили с применением механического опрыскивателя. Например, в обработке 1, ниже, "2X семядольные листья" описывает обработку из расчета 1350 г к.э./га глифосата на стадии роста семядольных листьев. Различные средства обработки тестировали на протяжении двухлетнего периода, и они описаны ниже.
Средства обработки, протестированные в год 2:
1) 2X семядольные листья,
2) 2X стадия 3-5 листьев,
3) 2X семядольные листья + 2X стадия 3-5 листьев,
4) 2X семядольные листья + 2X выбрасывание цветоноса BBCH55,
5) 4X семядольные листья,
6) 4X стадия 3-5 листьев.
Средства обработки, протестированные в год 2:
1) 1X семядольные листья + 1X стадия 3-5 листьев,
2) 2X семядольные листья + 2X стадия 3-5 листьев,
3) 1X семядольные листья + 1X зеленая почка BBCH51,
4) 2X семядольные листья + 2X зеленая почка BBCH51,
5) 1X семядольные листья + 1X 10% цветков BBCH61,
6) 2X семядольные листья + 2X 10 % цветков BBCH61. Контрольные обработки применяли в качестве сравнений (см. пример 1).
Объект, который тестировали, представлял собой объект трансформации DP-73496-4 (GAT1) канолы.
Определяли процент хлороза. Визуальную классификацию хлороза на растениях проводили во вре
мя указанного периода (т.е. 3-5 дней) после внесения распылением. Пожелтение апикальной меристемы, самых молодых листьев или старых листьев указывало на хлоротическое повреждение, индуцированное гербицидом. 100%= вся ткань желтая, 0% = нет признаков желтеющей ткани.
Показатели хлороза были следующими.
Гербицидное повреждение - хлороз (hincl):
3-5 дней (HINCL5) описывает визуальную классификацию хлороза через 5 дней после обработки, 7-10 дней (HINCL10) описывает визуальную классификацию хлороза через 10 дней после обработки,
14-21 дней (HINCL21) описывает визуальную классификацию хлороза через 21 день после обработки,
21-30 дней (HINCL30) описывает визуальную классификацию хлороза через 30 дней после обработки.
Значения от 0 до 100%.
Пример 3. Испытания эффективности гербицида в отношении GAT-объектов для определения некроза.
Полевые испытания разрабатывали как схему с расщепленными делянками, при этом глифосатные средства обработки служили основным фактором, а элементы как субделянки. Элементы рандомизиро-вали в пределах фактора расщепления, и расщепление рандомизировали в пределах повторности.
Применяли следующие обработки глифосатом, как подробно описано ниже, на различных стадиях роста. В этих тестах 1X внесение глифосатного средства обработки составляло 675 г к.э./га, 2X внесение глифосатного средства обработки составляло 1350 г к.э./га, 3X внесение глифосатного средства обработки составляло 2025 г к.э./га, и 4X внесение глифосатного средства обработки составляло 2700 г к.э./га. Все средства обработки вносили с применением механического опрыскивателя. Например, в обработке 1, ниже, "2X семядольные листья" описывает обработку из расчета 1350 г к.э./га глифосата на стадии роста семядольных листьев. Различные средства обработки тестировали на протяжении двухлетнего периода, и они описаны ниже.
Средства обработки, протестированные в год 2:
1) 2X семядольные листья,
2) 2X стадия 3-5 листьев,
3) 2X семядольные листья + 2X стадия 3-5 листьев,
4) 2X семядольные листья + 2X выбрасывание цветоноса BBCH55,
5) 4X семядольные листья,
6) 4X стадия 3-5 листьев.
Средства обработки, протестированные в год 2:
1) 1X семядольные листья + 1X стадия 3-5 листьев,
2) 2X семядольные листья + 2X стадия 3-5 листьев,
3) 1X семядольные листья + 1X зеленая почка BBCH51,
4) 2X семядольные листья + 2X зеленая почка BBCH51,
5) 1X семядольные листья + 1X 10% цветков BBCH61,
6) 2X семядольные листья + 2X 10 % цветков BBCH61.
Обработки традиционными химическими веществами применяли в качестве одного из контролей (см. пример 1).
Процентную долю некроза определяли следующим образом. Визуальную классификацию мертвой ткани на растениях проводили во время указанного периода (т.е. 3-5 дней) после внесения распылением. Коричневые или желтеющие пятна представляют собой ранние признаки разрушения. Сухая коричневая ткань представляет собой далеко зашедшее разрушение. 100% = полностью погибшее растение, 0% = нет признаков погибшей ткани.
Показатели некроза были следующими.
Реакция сельскохозяйственной культуры на гербицид - некроз (hinne):
3-5 дней (HINNE5) описывает визуальную классификацию некроза через 5 дней после обработки гербицидом,
7-10 дней (HINNE10) описывает визуальную классификацию некроза через 10 дней после обработки гербицидом,
14-21 дней (HINNE21) описывает визуальную классификацию некроза через 21 день после обработки гербицидом,
21-30 дней (HINNE30) описывает визуальную классификацию некроза через 30 дней после обработки гербицидом.
Значения от 0 до 100%.
Объект, который тестировали, представлял собой объект трансформации DP-73496-4 (GAT1) канолы.
Пример 4. Внесение глифосата на поздних стадиях на GAT-объекты.
Внесения глифосата на поздних стадиях представляют собой внесения глифосата на более поздних стадиях роста, чем указано на этикетке глифосата. Одной из целей оценки реакции сельскохозяйственной культуры GAT1-канолы после указанной на текущей этикетке глифосата стадии роста было протестировать, значительно ли влияет на урожай реакция какой-либо сельскохозяйственной культуры, наблюдаемая в отношении обработок гербицидом, по сравнению с контрольной обработкой. В год 1 расширенное окно внесения глифосата составляли 2X семядольные листья + 2X выбрасывание цветоноса BBCH55; 2X обработка во время стадии семядольных листьев и дополнительная 2X обработка во время стадии роста растения, когда отдельные цветочные почки (главное соцветие) различимы, но остаются закрытыми. В год 2 расширенное окно обработок включало 1X семядольные листья, 1X зеленая почка BBCH51; 2X семядольные листья, 2X зеленая почка BBCH51; 1X семядольные листья, 1X 10% цветков BBCH61 и 2X семядольные листья, 2X 10% цветков BBCH61.
Пример 5. Сравнение GAT 1 с контрольными обработками и контрольными вариантами.
Реакция сельскохозяйственной культуры была подобной для 3 гибридных генетических фонов в год 1 в случае расширенного окна обработок 2X семядольные листья и 2X выбрасывание цветоноса BBCH55. Все три гибрида, оцениваемые в одном местоположении, демонстрировали 1% хлороза. Один гибридный генетический фон характеризовался 3% хлороза во втором местоположении, и реакция сельскохозяйственной культуры на эту обработку в виде позднего внесения в оставшихся восьми местоположениях отсутствовала. Полное восстановление этого незначительного временного хлороза наблюдали через 10 дней после внесения глифосата, и не было значительных отличий в урожае по сравнению с контрольной обработкой. Четыре GAT-экспрессирующих генетических фона канолы, оцениваемые с помощью расширенного окна внесения глифосатных средств обработки в год 2, не характеризовались какой-либо реакцией сельскохозяйственной культуры. Обработки, включавшие расщепленные внесения 1X семядольные листья и 1X BBCH51 (стадия зеленой почки); 1X семядольные листья и 1X BBCH61 (стадия 10% цветков) для четырех генетических фонов, не привели к снижению урожая по сравнению с контрольной обработкой. Кроме того, другие две обработки в виде позднего расщепленного внесения 2X глифосата (1350 г к.э./га), проводимые на тех же стадиях роста, не привели к снижению урожая по сравнению с контрольной обработкой. В сравнении с контролями, GAT1 не демонстрировали снижения урожая при X обработке.
Пример 6. Сравнение GAT 2 с контрольными обработками и контрольными вариантами.
GAT2-объекты подвергали испытаниям эффективности гербицида вместе с GAT1 в качестве диагонального контроля в 9 различных местоположениях. Испытания эффективности гербицида состояли из 6 обработок, которые включали: контроль без глифосата, 2Х, 4Х или 8Х глифосат, применяемый на стадии 3-5 листьев (1Х=675 г к.э./га), 2Х, применяемый во время стадии 3-5 листьев и во время стадии зеленой почки (+2X зеленая почка), и 2Х, применяемый во время стадии 3-5 листьев и во время 10% цветения (+2X 10% цветение). Индуцированное гербицидом некрозное и хлорозное повреждение регистрировали на стадиях листьев через 5, 10, 21 и 30 DAT (дней после обработки). После 10 DAT не наблюдали никакого повреждения, и наблюдали минимальное индуцированное гербицидом некротическое повреждение даже при нормах распыления 8Х (фиг. 1). Незначительное хлоротическое повреждение наблюдали у обоих протестированных GAT1- и GAT2-объектов даже при нормах распыления 8Х, и как во время стадии зеленой почки, так и во время стадии 10% цветения (фиг. 2). Урожай, полученный при различных обработках, выражали как процент от 2X обработки на стадии 3-5 листьев. Воздействие 2Х внесения глифосата на стадии 3-5 листьев и во время стадии зеленой почки или 10% цветения приводило к отсутствию ощутимых отличий в урожае по сравнению с соответствующей 2X обработкой у обоих GAT1 и GAT2 (фиг. 3). Внесение 4Х глифосата на стадии 3-5 листьев приводило к 6-8% снижению урожая по сравнению с 2X обработкой, и при норме 8Х урожай снижался на 10-12% у обработанных объектов по сравнению с 2X обработкой (фиг. 3).
Пример 7. Внесение глифосата на поздних стадиях на GAT-элементы.
GAT1-элементы подвергали испытаниям эффективности гербицида, которые включали 2X внесение глифосатного средства обработки, применяемое на стадии 3-5 листьев (1Х=900 г к.э./га), и 2Х, применяемое во время стадии 3-5 листьев и во время стадии первого цветка (BBCH60). Урожай, полученный при различных обработках, выражали как процент от 2X обработки на стадии 3-5 листьев. Воздействие 2X внесения глифосата на стадии 3-5 листьев и во время стадии первого цветка приводило к отсутствию ощутимых отличий в урожае по сравнению с соответствующей 2X обработкой у всех GAT1-элементов (фиг. 4). Также в ответ на обработку не наблюдали значительного некроза/хлороза, вызванных обработкой гербицидом, и значительного прекращения развития стручков или бледных цветков.
Пример 8. Внесение глифосата после стадии 10% цветения.
Расширенное окно обработок может включать 4Х внесения глифосата при 20% открытых цветков на главной кисти (BBCH62) и 2X внесения глифосата при 30% открытых цветков на главной кисти (ВВСН63). Эти обработки могут позволять растениеводам осуществлять эффективный контроль живучих сорняков для контроля сорняков при помощи более высоких норм внесения глифосата и расширенного контроля сорняков на стадиях роста раннего цветения. Внесение глифосата на этих стадиях может
приводить к превосходному контролю сорняков и, следовательно, более высокому урожаю после созревания, что, таким образом, приводит к экономическим выгодам для производителей канолы.
Все публикации и заявки на патенты, упомянутые в описании, ориентированы на уровень специалиста в области техники, к которой принадлежит настоящее раскрытие. Все публикации и заявки на патент включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или заявка на патент конкретно и отдельно была включена посредством ссылки.
Хотя в целях ясности понимания вышеприведенное раскрытие было довольно подробно описано посредством иллюстрации и примера, очевидно, что на практике можно осуществлять определенные изменения и модификации в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду, где способ включает
нанесение глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату;
где значительная часть растений Brassica находится приблизительно на стадии цветения, которая характеризуется наличием по меньшей мере от 10% открытых цветков до 10% на стадии стручков, или после стадии цветения и где значительная часть открытых цветков или стручков не демонстрирует значительного изменения окраски после внесения глифосатного средства обработки;
где растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансфе-разу (GAT).
2. Способ по п.1, где растения Brassica, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) в комбинации с ферментом, который обеспечивает переносимость гербицида глуфосината.
3. Способ по п.1, где открытые цветки не демонстрируют значительного изменения окраски в течение 5 дней после нанесения глифосатного средства обработки.
4. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки в качестве активного ингредиента содержит 675, 900, 1350, 1800, 2025, 2700 или 3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде однократного применения.
5. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента до 5400 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде одного или нескольких кумулятивных внесений.
6. Способ внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к глифосату, причем способ включает:
(a) нанесение одного или нескольких глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где устойчивость к глифосату обусловлена экспрессией фермента глифосат ацетилтрансферазы (GAT) у растений Brassica;
(b) получение семян Brassica от растений Brassica, где значительная часть стручков не прекращает развития после обработки глифосатом.
7. Способ предотвращения потери урожая или ухудшения урожая при сборе растений Brassica, где способ включает:
(a) применение первого глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии семядольных листьев и растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT);
(b) нанесение одного или нескольких дополнительных глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев;
(c) получение семян Brassica из растений Brassica, где потеря урожая минимизирована вследствие значительного снижения изменения окраски или прекращения развития стручков после одного или нескольких внесений глифосата на поздних стадиях.
8. Способ по п.7, где средний урожай Brassica снижен не более чем на 5% по сравнению со средством для контрольной обработки.
9. Способ борьбы с сорняками в поле, где способ включает:
(a) высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, в поле, где растения Bras-sica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу;
(b) нанесение глифосатного средства обработки на поле с Brassica, содержащее один или несколько сорняков, где значительная часть растений Brassica находится на поздней стадии развития, выбранной из группы, состоящей из появления соцветий, цветения, развития и созревания семян, и, как следствие, значительное снижение роста сорняков на поле с Brassica.
10. Способ борьбы с заболеваниями в популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле, где
способ включает
нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и глифосатное средство обработки дополнительно содержит средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов;
где значительная часть популяции Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, не экспрессирует нечувствительную EPSPS и значительная часть популяции Brassica не демонстрирует значительного хлороза.
11. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят после стадии первого цветка.
12. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии 10% цветков.
13. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии роста канолы от 60 до 80 по шкале BBCH.
14. Способ снижения сорного материала во время уборки урожая семян Brassica популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле, где способ включает:
(a) нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Brassica в поле, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и в поле насчитывается один или несколько сорняков, выбранных из группы, состоящей из осота и амаранта, и где популяция Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и популяция Brassica не экспрессирует нечувствительную
EPSPS;
(b) подавление роста сорняка перед уборкой урожая таким образом, что количество сорного материала снижено во время уборки урожая.
15. Способ контроля сорняков в поздний период в поле с сельскохозяйственной культурой Brassica без оказания отрицательного воздействия на урожай, где способ включает:
(a) высаживание популяции растений Brassica, толерантных к глифосату, где растения экспресси-руют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT) таким образом, что экспрессия фермента приводит к эффективной переносимости глифосата;
(b) нанесение эффективного количества глифосата на растения Brassica, где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу;
(c) подавление роста сорняков в поле и где урожай сельскохозяйственной культуры Brassica не снижен более чем на 5% по сравнению с контрольными растениями Brassica, не экспрессирующими фермент глифосат ацетилтрансферазу.
16. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-2700 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии 10% цветков.
17. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Brassica находится на стадии 10% цветков.
18. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.
19. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает применение средства для поздней подкормки.
20. Способ по п.15, где глифосат предварительно смешивают со средством для борьбы с заболеваниями, выбранными из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.
21. Способ повышения чистоты семян канолы, где способ включает:
(a) высаживание популяции растений канолы с переносимостью глифосата в поле;
(b) внесение глифосата в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов, не являющихся канолой, где растения канолы метаболизируют глифосат и не экспрессируют нечувствительную EPSPS и где значительная часть растений Brassica находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев;
(c) улучшение чистоты семян канолы путем подавления роста видов, не являющихся канолой, за счет позднего внесения глифосата.
22. Способ снижения затрат на уборку урожая Brassica, где способ включает снижение популяции сорняков в поле с растущей Brassica путем нанесения глифосата на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, которые характеризуются по меньшей мере 10% открытых цветков, и уборку урожая сельскохозяйственной культуры Brassica, где растения Brassica экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).
23. Способ по п.22, где применение глифосата не приводит к значительному хлорозу или некрозу растений Brassica.
24. Способ по п.22, где глифосат инактивируется в растениях Brassica, в том числе в генеративной ткани.
25. Способ борьбы с сорняками в поле Brassica, где способ включает нанесение второго глифосат-ного средства обработки на популяцию растений Brassica, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Brassica находится на стадии генеративного роста и где растения Brassica экспрессируют
22.
фермент глифосат ацетилтрансферазу (GAT).
26. Способ по п.25, где фермент глифосат ацетилтрансфераза (GAT) представляет собой GAT-полипептид.
27. Способ по п.25, где растения Brassica, толерантные к глифосату, не экспрессируют нечувствительную EPSPS.
28. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более низкой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.
29. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более высокой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.
30. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает:
(a) выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле;
(b) нанесение глифосата при норме приблизительно 900 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев;
(c) осуществление второго внесения глифосата при норме 900 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.
31. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Brassica, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Brassica экспрессирует фермент гли-фосат ацетилтрансферазу, где способ включает:
(a) выращивание популяции Brassica, толерантной к глифосату, в поле;
(b) нанесение глифосата при норме 840 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Brassica находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев;
(c) осуществление второго внесения глифосата при норме 840 г к.э./га, где растения Brassica находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028528
- 1 -
028528
- 1 -
028528
- 1 -
028528
- 1 -
028528
- 1 -
028528
- 1 -
028528
- 4 -
028528
- 25 -
028528
- 26 -
028528
- 33 -