[RU]

1. Соединение формулы I в которой R ¹ и R ² независимо выбирают из водорода, СО ₂ -С ₁ -С ₄ -алкила, C ₁ -C ₆ -алкила, C ₂ -C ₆ -алкенила и C ₂ -C ₆ -алкинила, где алкильный фрагмент указанных групп алкила, алкенила и алкинила может быть линейной или разветвленной цепью или комбинацией линейной и разветвленной цепей, группой -(CH ₂ ) _n -Ph, где n=0-3, группой -(CH ₂ ) _n -пирид-3-ил, где n=1-2, C ₃ -C ₇ -циклоалкил, 3-12-членным гетероциклическим ядром, содержащим до 3 гетероатомов, где гетероатомы независимо выбирают из О, N или S, и каждое гетероциклическое ядро может быть необязательно замещено у одного или более атомов углерода 1-3 заместителями, независимо выбранными из C ₁ -C ₆ -алкокси; R ³ и R ⁴ независимо выбирают из водорода и C ₁ -C ₆ -алкила; R ⁵ и R ⁶ независимо выбирают из водорода и -СО ₂ С ₄ -C ₉ ; A выбирают из ковалентной связи или O; X представляет собой O; B выбирают из ковалентной связи или -CH ₂ -; Y выбирают из OH или OR ⁹ , в которой R ⁹ имеет значение C ₁ -C ₆ -алкил, и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемые соли.

3. Соединение ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила по п.2.

4. Фармацевтически приемлемая соль соединения ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила по п.2.

5. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных кожных заболеваний, включающая антивоспалительно эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных кожных заболеваний, включающая антивоспалительно эффективное количество соединения по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, в котором указанная композиция находится в форме стандартной дозы.

8. Фармацевтическая композиция для лечения псориаза, экземы или себореи, включающая антипсориазно, антиэкземно или антисеборейно эффективное количество соединения по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.

9. Способ лечения воспалительного кожного заболевания у больного, нуждающегося в таком лечении, включающий введение указанному больному количества соединения по п.1, эффективного в лечении указанного заболевания.

10. Способ по п.9, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол) или его фармацевтически приемлемая соль.

11. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является псориаз.

12. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является экзема.

13. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является себорея.

14. Способ по любому из пп.9-12, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол).

15. Применение соединения по любому из пп.1-4 для изготовления лекарственного средства для лечения воспалительного кожного заболевания у больного, нуждающегося в таком лечении.

16. Применение по п.15, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол) или его фармацевтически приемлемая соль.

17. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является псориаз.

18. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является экзема.

19. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является себорея.

20. Применение по любому из пп.15-19, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол).

21. Соединение формулы

22. Соединение формулы в которой R ¹ , R ⁵ и R ⁶ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и -CO ₂ C ₄ H ₉ .

23. Соединение формулы в которой R ¹ , R ⁵ и R ⁶ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и -CO ₂ C ₄ H ₉ .

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы I в которой R ¹ и R ² независимо выбирают из водорода, СО ₂ -С ₁ -С ₄ -алкила, C ₁ -C ₆ -алкила, C ₂ -C ₆ -алкенила и C ₂ -C ₆ -алкинила, где алкильный фрагмент указанных групп алкила, алкенила и алкинила может быть линейной или разветвленной цепью или комбинацией линейной и разветвленной цепей, группой -(CH ₂ ) _n -Ph, где n=0-3, группой -(CH ₂ ) _n -пирид-3-ил, где n=1-2, C ₃ -C ₇ -циклоалкил, 3-12-членным гетероциклическим ядром, содержащим до 3 гетероатомов, где гетероатомы независимо выбирают из О, N или S, и каждое гетероциклическое ядро может быть необязательно замещено у одного или более атомов углерода 1-3 заместителями, независимо выбранными из C ₁ -C ₆ -алкокси; R ³ и R ⁴ независимо выбирают из водорода и C ₁ -C ₆ -алкила; R ⁵ и R ⁶ независимо выбирают из водорода и -СО ₂ С ₄ -C ₉ ; A выбирают из ковалентной связи или O; X представляет собой O; B выбирают из ковалентной связи или -CH ₂ -; Y выбирают из OH или OR ⁹ , в которой R ⁹ имеет значение C ₁ -C ₆ -алкил, и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемые соли.

3. Соединение ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила по п.2.

4. Фармацевтически приемлемая соль соединения ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила по п.2.

5. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных кожных заболеваний, включающая антивоспалительно эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных кожных заболеваний, включающая антивоспалительно эффективное количество соединения по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, в котором указанная композиция находится в форме стандартной дозы.

8. Фармацевтическая композиция для лечения псориаза, экземы или себореи, включающая антипсориазно, антиэкземно или антисеборейно эффективное количество соединения по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.

9. Способ лечения воспалительного кожного заболевания у больного, нуждающегося в таком лечении, включающий введение указанному больному количества соединения по п.1, эффективного в лечении указанного заболевания.

10. Способ по п.9, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол) или его фармацевтически приемлемая соль.

11. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является псориаз.

12. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является экзема.

13. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является себорея.

14. Способ по любому из пп.9-12, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол).

15. Применение соединения по любому из пп.1-4 для изготовления лекарственного средства для лечения воспалительного кожного заболевания у больного, нуждающегося в таком лечении.

16. Применение по п.15, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол) или его фармацевтически приемлемая соль.

17. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является псориаз.

18. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является экзема.

19. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является себорея.

20. Применение по любому из пп.15-19, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол).

21. Соединение формулы

22. Соединение формулы в которой R ¹ , R ⁵ и R ⁶ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и -CO ₂ C ₄ H ₉ .

23. Соединение формулы в которой R ¹ , R ⁵ и R ⁶ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и -CO ₂ C ₄ H ₉ .

---

Евразийское 028518 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки 201400786
(22) Дата подачи заявки
2012.12.28
(51) Int. Cl. C07D 473/00 (2006.01) A61K31/52 (2006.01)
(54) КАРБОЦИКЛИЧЕСКИЕ НУКЛЕОЗИДЫ, ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ И КОМПОЗИЦИИ
(31) 61/582,550
(32) 2012.01.03
(33) US
(43) 2014.12.30
(86) PCT/US2012/072103
(87) WO 2013/103601 2013.07.11
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
СЕЛЛСЬЮТИКС КОРПОРЕЙШН
(US)
(72) Изобретатель:
Менон Кришна (US)
(74) Представитель:
Фелицына С.Б. (RU)
(56) EP-A2-0349242
MASON J. ET AL.: "Topical preparations for the treatment of psoriasis: a systematic review", BRITISH JOURNAL OF DERMATOLOGY, OXFORD: WILEY-BLACKWELL, UK, vol. 146, no. 3, 1 March 2002 (2002-03-01), pages 351-364, XP002244836, ISSN: 0007-0963, DOI: 10.1046/ J.1365-2133.2000.04713.X, page 354; figure 1
(57) Предложены соединения формулы I
и фармацевтически приемлемые соли таких соединений. Предложены также способы получения таких соединений, интермедиаты, используемые в получении таких соединений, и применение таких соединений в лечении воспалительных кожных заболеваний.
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к карбоциклическим нуклеозидам и их фармацевтически приемлемым солям, способам получения таких соединений, промежуточным соединениям, используемым при получении таких соединений, фармацевтическим композициям, включающим такие соединения, и применению таких соединений в лечении воспалительных кожных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, псориаз, экзему и себорею.
Вышеупомянутые карбоциклические нуклеозиды и их фармацевтически приемлемые соли, когда назначаются больному, способны продуцировать, прямо или косвенно, противовоспалительные соединения. Такое соединение может быть получено гидролизом или оно может быть метаболитом. Следовательно, эти соединения полезны при лечении псориаза и других воспалительных кожных заболеваний. В настоящее время проявляется большой интерес к обнаружению новых методов лечения вышеуказанных заболеваний.
Предшествующий уровень техники
В одном варианте осуществления данное изобретение относится к соединениям, фармацевтическим композициям и способам лечения псориаза. Псориазом является хроническое, аутоиммунное заболевание, которое проявляется на коже. В псориазе цикл роста клеток кожи ускоряется дефектными иммунными сигналами, но точная причина болезни не известна. Изыскания в этой области предполагают, что увеличенное разрастание и гиперплазия эпидермальных клеток вовлекается в патогенез псориаза [Андерсон и др. Патогенез кожного заболевания (Anderson et al., Pathogenesis of skin disease, 67 (1986))]. Псориаз, как также полагают, является воспалительным кожным заболеванием, в котором нейтрофилы ассоциируются с псориатическими поражениями. Кроме того, более высокие уровни арахидоновой кислоты в псориатических бляшках, чем в нормальных тканях, также известны в литературе. Метаболиты арахидоновой кислоты играют важную роль в псориазе, потому что они являются сосудорасширяющими средствами и хемоаттрактантами для нейтрофилов. Также известно, что в псориатических поражениях значительно возрастает ген РНК, связанный с восприимчивостью к псориазу, вызванному стрессом (PRINS), причем значительно увеличиваются активности 12Я-липоксигеназы и интерлейкина-20 (ИЛ-20). Расширенное разрастание кератиноцитов в псориатических бляшках также зарегистрировано в литературе. Найдено, что в псориатических поражениях уровни циклического аденозинмонофосфата (цАМП) снижаются, что может приводить к пониженной регуляции деления клеток вследствие меньшей активации протеинкиназы. Эти исследования далее предполагают, что псориаз не просто болезнь эпидермиса [Фарбер: Псориаз: болезнь всей кожи. (Farber et al., Psoriasis: a disease of the total skin, J. Am. Acad. Dermal 12, 150 (1985)); Powrie et al., J. Exp. Med., 179, 589 (1994)].
Псориаз является распространенной болезнью, и считается, что приблизительно 3% населения мира страдают от псориаза, включая 2,2% населения одних только Соединенных Штатов Америки. Это является стоящей целью: разработать новые препараты для лечения этой хронической болезни. Большое разнообразие неспецифических лекарственных препаратов, таких как литий, бета-блокаторы, противомалярийные средства, кортикостероиды и нестероидные противовоспалительные средства, были исследованы для контроля псориаза [Abel et al., J. Am. Acad. Dermatol. 15, 1007 (1986)], однако нет никаких специальных лекарственных препаратов на рынке против этой болезни.
Соединения, в настоящее время коммерчески доступные для лечения псориаза, страдают от одного или больше недостатков, включая побочные эффекты, отсутствие достаточной эффективности и неудобный или неэстетический метод введения. Соответственно, поиск эффективных лечений продолжается. Данное изобретение касается новых и эффективных соединений для лечения псориаза и других воспалительных кожных заболеваний.
Животные модели для оценки эффективности молекул препарата для лечения псориаза хорошо установлены [Schon et al., Nature Med. 3, 183-188 (1997); Wrone-Smith et al., J. Clin. Invest., 98, 1878-1887 (1996); Christofidou-Solomidou et al., J. Pathol., 150, 631-639 (1997); Nicoloff et al., J. Invest. Dermatol., 108, 539 (1997); Prens et al., Clin. Dermatol., 13, 115-129 (1995); Caroll et al., Cell, 83, 957-968 (1995); Сандберг и др., Справочник по мышиным мутациям с отклонениями в области кожи и волос (Sundberg et al., Handbook of Mouse Mutations with Skin and Hair Abnormalities, 253-268 (1994)); Boehncke et al., Arch. Dermatol. Res., 286, 325-330 (1994) и Boehncke et al., Nature, 379, 777 (1996)].
Абакавир, (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентенил]-1-метанол, карбоциклический нуклеозид, который обладает кольцом 2,3-дегидроциклопентена, указан в патенте США № 5034394 в качестве ингибитора обратной транскриптазы. Недавно стала известна общая синтетическая стратегия получения этого типа соединений и промежуточных соединений [Crimmins, et al., J. Org. Chem., 61, 4192-4193 (1996) и 65, 8499-8509-4193 (2000)]. Как обсуждено более подробно ниже, в определенном варианте осуществления данное изобретение относится к новым сложным эфирам абака-вира, включая, но не ограничиваясь им, ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентенил]-1-гидроксиметила (также упомянутый здесь как Пруризол (Prurisol)) и его фармацевтически приемлемые соли. Пруризол является пероральным биодоступным соединением для лечения воспалительных кожных заболеваний, таких как псориаз, экзема и себорея.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 показывает выработку ИЛ-20 у мышей под действием Пруризола (при дозах 10 или 2х 10 мг/кг) и МТХ (метотрексатом) (при дозе 7,5 мг/кг).
Фиг. 2 показывает подавление гена РНК, связанного с восприимчивостью к псориазу, индуцированному стрессом (PRTNS), после введения Пруризола (при дозах 10 или 2х 10 мг/кг) и МТХ (7,5 мг/кг).
Фиг. 3 показывает вид кожи после введения Пруризола и МТХ.
Фиг. 4 показывает нормализацию кожи в гистологических параметрах по сравнению с полностью псориатической кожей и МТХ.
Фиг. 5 показывает индукцию активности 12-R липоксигеназы под действием Пруризола и МТХ.
Фиг. 6 показывает вид кожи невооруженным глазом у псориатических животных и у животных, которых лечили Пруризолом.
Фиг. 7 показывает снижение CD4.
Фиг. 8 показывает снижение CD8.
Сущность изобретения
Данное изобретение относится к соединениям формулы I
в которой R1 и R2 независимо выбирают из водорода, СО2-С1-С4-алкила, C1-C6-алкила, C2-C6-алкенила и C^Q-алкинила, в которых алкильный фрагмент указанных групп алкила, алкенила и алкинила может быть линейной или разветвленной цепью или комбинацией линейной и разветвленной цепей, группой -(CH2)n-Ph, где n=0-3, группой -(ОгУл-пирид-3-ил, где n=1-2, C3-C7-циклоалкил, 3-12-членным гетероциклическим ядром, содержащим до 3 гетероатомов, где гетероатомы независимо выбирают из O, N или S и где каждое гетероциклическое ядро может быть необязательно замещено у одного или больше атомов углерода 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-Q-алкокси, и O-Q-Сз-алкил;
R3 и R4 независимо выбирают из водорода и Q-Q-алкила;
R5 и R6 независимо выбирают из водорода и -OO^CpC^
А выбирают из ковалентной связи, О, S, Se, C1-C6-алкила и -(CH2)n-0, где n имеет значение целое число от 0 до 3;
X выбирают из О, S и Se;
В выбирают из ковалентной связи, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, транс-QJ^CH-, цис-CH=CH-, -C=C-, -CHR7-CHR8-, цис- или транс-CR7=CR8-, в которых R7 и R8 независимо выбирают из Q-Q-алкила, C2-C6-алкенила, C2-C6-алкинила и C3-C7-циклоалкила;
Y выбирают из OH, SH, OR9, где R9 имеет значение Q-Q-алкил, C2-C6-алкенил и C^Q-алкинил, C3-C7-циклоалкил и -(CH2)nOH, где n имеет значение целое число от 1 до 6, и NR9R10, в которой R9 и R10 независимо выбирают из C1-C6-алкила и C3-C7-циклоалкила;
и их фармацевтически приемлемые соли.
Следует понимать в вышеупомянутой формуле, что, когда В имеет значение ковалентной связи, Y связан указанной ковалентной связью с углеродом, который связан как с X, так и с А.
Один вариант осуществления данного изобретения относится к ацетату (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентенил]-1-гидроксиметила, Пруризолу и его фармацевтически приемлемым солям.
Один вариант осуществления данного изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения воспалительного кожного заболевания, такого как псориаз, экзема и себорея, включающей соединения формулы I, как определено в любом из вышеупомянутых вариантов осуществления, и фармацевтически эффективный носитель.
Другой вариант осуществления данного изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения воспалительного кожного заболевания, такого как псориаз, экзема и себорея, включающей противовоспалительно эффективное количество соединения формулы I, как определено в любом из вы
шеупомянутых вариантов осуществления, и фармацевтически эффективный носитель. В одном варианте осуществления соединением является ацетат (-)-цис-4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила, Пруризол, или его фармацевтически приемлемая соль.
Другие варианты осуществления данного изобретения относятся к фармацевтической композиции для лечения псориаза, включающей антипсориатически эффективное количество соединения формулы I, как определено в любом из вышеупомянутых вариантов осуществления, и фармацевтически эффективный носитель.
Другой вариант осуществления изобретения относится к методу лечения воспалительного кожного заболевания, такого как псориаз, экзема и себорея, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, противовоспалительно эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. В одном варианте осуществления изобретения воспалительное кожное заболевание выбирают из псориаза, экземы и себореи.
Другой вариант осуществления изобретения относится к способу лечения воспалительного кожного заболевания у пациента, нуждающегося в таком лечении, включающему введение указанному пациенту, количество соединения по п.1, эффективное, чтобы лечить указанное заболевание.
Другой вариант осуществления изобретения относится к способу лечения псориаза, включающему введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, антипсориатически эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.
В других вариантах осуществления изобретения композициями являются местные композиции.
В других вариантах осуществления изобретения композиции находятся в форме стандартной дозы.
Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I включают кислотно-аддитивные и их основно-аддитивные соли (включая дисоли). Соответствующие аддитивные соли с кислотами получают из кислот, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают соли ацетат, аспартат, бензоат, без-илат, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, борат, камзилат, цитрат, эдизилат, эзилат, формиат, фу-марат, глуцептат, глюконат, глюкуронат, гексафторфосфат, дибензоат, хлоргидрат/хлорид, бромгид-рат/бромид, йодгидрат/йодид, изетионат, лактат, малат, малеат, малонат, мезилат, метилсульфат, нафти-лат, 2-напсилат, никотинат, нитрат, оротат, оксалат, пальмитат, памоат, фос-фат/водородфосфат/диводородфосфат, сахарат, стеарат, сукцинат, тартрат, тозилат и трифторацетат. Соответствующие основные соли получают из оснований, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают алюминий, аргинин, бензатин, кальций, холин, диэтиламин, диоламин, глицин, лизин, магний, меглумин, оламин, калий, натрий, трометамин и соли цинка. Для обзора подходящих солей см. "Справочник по фармацевтическим солям: свойства, выбор и использование" (Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, by Stahl и Wermuth (Wiley-VCH, Weinhaim, Germany, 2002).
Фармацевтически приемлемая соль соединения формулы I может быть легко получена смешиванием вместе растворов соединения формулы I и желаемой кислоты или основания соответственно. Соль может выпасть из раствора и может быть собрана фильтрацией или может регенерироваться испарением растворителя. Степень ионизации соли может изменяться от полностью ионизированной до почти неио-низированной.
Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли (в дальнейшем также называемые активными соединениями) могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах. Активные соединения (включая, соединения в форме солей, свободных оснований, свободных кислот и нейтральных соединений) могут образовывать гидраты и другие сольваты.
Термин "сольват" используют здесь, чтобы описать молекулярное комплексное соединение, включающее соединение по изобретению и молекулы одного или больше фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола.
Термин "гидрат" используют, когда указанным растворителем является вода.
Фармацевтически приемлемые сольваты включают гидраты и другие сольваты, в которых растворитель кристаллизации может быть замещен изотопом, например D2O, с^-ацетон, d6-диметилсульфоксид. Активные соединения могут существовать как клатраты или другие комплексные соединения. Обычно сольватированная, гидратированная и другие формы эквивалентны несольватированной, негидратиро-ванной/безводной и другим формам, и соединения, композиции и использование, заявленные здесь, предназначены охватывать эти формы, так же как изомерные, кристаллические и аморфные формы и изотопно меченые соединения, обсужденные ниже, в рамках данного изобретения.
Соединения формулы I, содержащие один или больше асимметричных атомов углерода, могут существовать как два или больше стереоизомера. Когда соединения формулы I содержат группы алкенил или алкенилен или группу циклоалкенил, возможны геометрические цис/транс (или Z/E) изомеры. Когда соединения содержат, например, кето- или оксимную группу или ароматический фрагмент, таутомерная изомерия (таутомеризм) может иметь место. Из этого следует, что единственное соединение может проявлять больше чем один тип изомерии. Соединения формулы I могут также существовать как изомеры, если они образуют аддитивные соли с кислотами или основаниями, в которых противоион является оптически активным, например D-лактат или L-лизин, или рацемические изомеры, например DL-тартрат или DL-аргинин.
Смеси стереоизомеров могут быть разделены обычными методами, известными специалистам в технологии. См., например, "Стереохимия органических соединений" (Stereochmistry of Organic Compounds, E.L. Eliel (Wiley, New York, 1994).
Изомеры цис/транс могут быть разделены обычными методами, известными специалистам в технологии, например хроматографией и дробной кристаллизацией.
Обычно энантиомерно чистые соединения по данному изобретению могут быть получены и могут быть выделены согласно процессам, известным в технологии, таким как, например, хиральный синтез из соответствующего оптически чистого предшественника и расщепление рацемата (или рацемата соли или производного). Например, рацемат (или рацемический предшественник) может быть разделен, используя хиральную жидкостную хроматографию высокого давления (ЖХВД). Альтернативно, рацемат (или рацемический предшественник) может реагировать с соответствующим оптически активным соединением, например спиртом, или, в случае когда соединение формулы I содержит кислотный или основный фрагмент, с кислотой или основанием, такими как, винная кислота или 1-фенилэтиламин. Конечная смесь диастереомеров может быть разделена хроматографией или дробной кристаллизацией или обеими, и один или оба из диастереоизомеров могут быть преобразованы в соответствующий чистый энантиомер (энантиомеры) средствами, известными специалистам.
Хиральные соединения по данному изобретению (и их хиральные предшественники) могут быть получены в энантиомерно обогащенной форме, используя хроматографию, обычно ЖХВД, на смоле с асимметричной неподвижной фазой и с подвижной фазой, состоящей из углеводорода, обычно гептана или гексана, содержащей от 0 до 50% изопропанола, обычно от 2 до 20% и от 0 до 5% алкиламина, обычно 0.1% диэтиламина. Концентрация элюата из адсорбента представляет обогащенную смесь.
В твердом состоянии соединения по данному изобретению могут существовать в кристаллической или аморфной форме.
Данное изобретение включает все фармацевтически приемлемые изотопно меченые соединения формулы I, заявленные здесь, в которых один или больше атомов замещают атомами, имеющими тот же самый атомный номер, но массу атома или массовое число, отличающиеся от массы атома или массового числа, обычно находимых в природе.
Примеры изотопов, пригодных для включения в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, такие как 2Н и 3Н, углерода, такие как 11С, 13С и 14С, хлора, такие как 36ClI, фтора, такие как 18F, йода, такие как 123I и 125I, азота, такие как 13N и 15N, кислорода, такие как 150, 170 и 180, фосфора, такие как 32Р, и серы, такие как 35S. Определенные изотопно меченые соединения формулы I, например, соединения, которые включают радиоактивный изотоп, полезны в лекарственном препарате и/или в изучениях распространения ткани субстрата. Радиоактивный изотоп трития, т.е. 3Н, и углерода-14, т.е. 14С, особенно полезны для этой цели ввиду их легкого включения и легкости обнаружения. Замена более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, т.е. 2Н, может предоставить определенные терапевтические преимущества, следующие из большей метаболической стабильности, например увеличенный в естественных условиях период полураспада, или требования пониженной дозировки, и, следовательно, может быть предпочтительна при некоторых обстоятельствах. Замена на изотопы, испускающими позитрон, такие как 11С, 18F, 5О и 13N, может быть полезной в изучении позитронно-эмиссионной топографией (ПЭТ), чтобы исследовать заполнение рецептора субстрата.
Изотопно меченые соединения формулы I обычно могут быть получены обычными методами, известными специалистам в технологии, или процессами, аналогичными описанным в сопутствующих примерах, используя соответствующий изотопно меченый реактив вместо немеченого реактива, ранее используемого.
Данное изобретение также относится к способу получения соединения формулы I, в которой R1 и R2 имеют значение водород и группа циклопропил соответственно, как определено выше для формулы I, реакцией соединения 4 (показано на схеме II ниже) с (трет-бутилдиметилсилилокси)ацетилхлоридом, с последующей кислотной обработкой и, при желании, с получением свободного основания или аддици-онных солей с различными кислотами. В одном варианте осуществления изобретения растворитель выбирают из триэтиламина или диизопропилэтиламина или N-метилморфолина.
В одном варианте осуществления изобретения аддитивные соли с бромисто-водородной кислотой получают замещением бромсодержащего исходного материала в процессах, описанных выше. Мезилат-ные соли получают замещением мезилатного исходного материала в процессах, описанных выше. Ди-соль по данному изобретению может быть аналогично получена при использовании соли в качестве исходного материала. Можно получить такую соль, если свободное основание имеет два основных центра.
Один вариант осуществления данного изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения псориаза, экземы и себореи и других воспалительных кожных заболеваний, включающих ацетат (-)-цис-4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила (Пруризол).
Химическая структура Пруризола показана ниже (см. формулу 9). Он является чрезвычайно перо-рально биодоступным (%F=83%) соединением и метаболизируется, прежде всего, посредством алко-гольдегидрогеназы или глюкуронилтрансферазы. Он также способен к пересечению гематоэнцефаличе-ского барьера. Он устойчив и хранится при температуре окружающей среды защищенным от света. Как
обсуждается ниже, ацетат (-)-цис-4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила (Пруризол) продемонстрировал значительную активность против псориаза на животных моделях.
Осуществление изобретения
Следующие схемы реакции поясняют получение Пруризола.
Схема I
Схема I показывает получение трет-бутилдиметилсилилоксиацетилхлорида. Гликолевая кислота в реакции с TBDMS-Cl (трет-бутилдиметилсилилоксихлорид) в присутствии имидазола дает О-трет-бутилдиметилсилилоксиуксусную кислоту, которая в реакции с хлорангидридом щавелевой кислоты дает желаемую производное хлорангидрида кислоты.
Схема II
9 Пруризол
Схема II показывает синтез Пруризола. Исходный материал Абакавир (Abacavir) (4) может быть легко получен литературным методом [Crimmins, et al., J. Org. Chem., 61, 4192-4193 (1996) и 65, 84998509-4193 (2000)], который при обработке TBDMS-Cl, как описано выше, дает О-трет-бутилдиметилсилилокси производное (5). Соединение 5 при реакции с ди(трет-бутилкарбонатом) дает соединение (6) с хорошим выходом, которое после обработки тетрабутиламмонийфторидом обеспечивает желаемое ключевое промежуточное соединение 7. Это соединение в реакции с соединением 3 дает защищенный сложный эфир 8, который после удаления защиты кислотой дает соединение 9 (Пру-ризол).
Любой из средних специалистов в данной области знает, как выбрать условия из обсужденных выше или внести изменения для того, чтобы получить другие определенные соединения формулы I, которые представляют интерес, включая соединения, в которых R1 и R2 отличны от водорода, и соединения, в которых R2 отличен от группы циклопропил.
Данное изобретение также включает способ ингибирования псориаза, который является хронической аутоиммунной болезнью, появляющейся на коже. Способ включает контактирование клеток кожи с
соединением формулы I в достаточном количестве, чтобы замедлять цикл роста. Обычно соединения формулы I полезны в лечении воспалительных заболеваний кожи, включая экзему, склеродерматит и себорею. Соединения, описанные здесь, могут образовать активный ингредиент фармацевтической композиции и обычно вводятся в смеси с соответствующими инертными эксципиентами или носителями, соответственно выбранными являются пероральные таблетки или капсулы. Композиции дозировки, такие как таблетки, капсулы, пилюли, свечи и порошки, зависят от намеченного пути введения, который может быть любым приемлемым путем. Эти пути введения включают пероральный, местный, трансдер-мальный, подкожный и носовой. Один или больше из этих путей может использоваться на одном пациенте. Соединения по изобретению предпочтительно могут использоваться в качестве пероральной формы дозировки для введения и могут быть комбинированы с нетоксичными фармацевтически приемлемыми неактивными носителями, такими как вода, глицерин, этанол и т.д. Инертные эксципиенты, которые обычно используются в качестве связующих компонентов, средств распада и пигментов, могут также быть включены в смесь для перорального приема.
В случае необходимости фармацевтическая композиция, подлежащая введению, может также содержать незначительное количество нетоксичных веществ, таких как буферные средства, эмульгаторы, ацетат натрия и т.д. Режим дозировки используемых соединений будет зависеть от вида, пола, веса, возраста, заболеваний больного, пути введения и серьезности состояния, подлежащего лечению. Квалифицированный врач может легко определять и предписывать эффективную дозировку препарата, чтобы лечить заболевание.
В зависимости от болезни и состояния больного термин "лечение", как используется здесь, может включать одно или больше терапевтическое, паллиативное и профилактическое лечение. Точная дозировка вводимого каждого активного соединения изменяется в зависимости от многих факторов, включая, но не ограничиваясь ими, тип больного и тип болезненного состояния, подлежащего лечению, возраст пациента и путь(и) введения.
Для введения больным полная ежедневная доза активных соединений, как ожидают, находится в интервале от 1 до 100 мг на 1 кг массы тела в зависимости от пути введения. Например, пероральный прием может требовать полной ежедневной дозы от 10 до 100 мг на 1 кг массы тела. Полная ежедневная доза может быть введена за одну дозу или раздельными дозами. Для среднего человеческого субъекта, имеющего вес приблизительно 70 кг, дозировка составила бы приблизительно от 70 до 7000 мг при перо-ральном приеме. Терапевт легко будет в состоянии определить дозы для субъектов, вес которых попадает вне этого интервала, таких как дети и пожилые люди. Ветеринар легко будет в состоянии определить дозы для других млекопитающих.
В одном варианте осуществления изобретение включает назначение перорального приема посредством желатиновых капсул или суспензии, включающей 10 мг активного соединения на 1 кг массы тела. Для вышеупомянутого терапевтического использования вводимая дозировка будет, конечно, изменяться в зависимости от используемого соединения, пути введения, желаемого лечения и выявленного нарушения. Полная ежедневная доза может быть введена за одну дозу или раздельными дозами. Данное изобретение также охватывает композиции пролонгированного выделения.
Фармацевтическая композиция может, например, быть в форме, подходящей для перорального приема, такой как таблетка, капсула, пилюля, порошок, состав для пролонгированного выделения, раствор, суспензия или эмульсия, для местного применения, такие как мазь или крем, или для ректального введения, такой как свечи. Фармацевтическая композиция может быть в форме стандартной дозы, пригодной для разового введения точных дозировок. Фармацевтическая композиция будет включать обычный фармацевтический носитель или эксципиент и активное соединение. Кроме того, она может включать другие лекарственные или фармацевтические средства, носители, присадки и т.д.
Соответствующие фармацевтические носители включают инертные растворители или наполнители, воду и различные органические растворители. Фармацевтические композиции могут, при желании, содержать дополнительные ингредиенты, такие как вкусовые добавки, связующие компоненты, эксципиен-ты и т.д. Таким образом, для перорального введения таблетки, содержащие различные эксципиенты, такие как лимонная кислота, могут использоваться вместе с различным средствами распада, такими как крахмал, альгиновая кислота и определенные сложные силикаты, и со связующими веществами, такими как сахароза, желатин и акация. Дополнительно, замасливатели, такие как стеарат магния, натрия лау-рилсульфат и тальк, часто полезны для получения таблеток. Твердые композиции подобного типа могут также использоваться в мягких и твердых наполненных желатиновых капсулах. Полезные компоненты этих композиций включают лактозу или молочный сахар и высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Когда водные суспензии или эликсиры желательны для перорального введения, активное соединение может быть комбинировано с различными подслащивающими или вкусовыми средствами, пигментами или красителями и, при желании, с эмульгаторами или суспендирующими средствами, вместе с растворителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин или их комбинации.
Способы получения различных фармацевтических композиций с определенным количеством активного соединение известны или будут очевидны специалистам в этой области техники. Для примеров см. Справочник Ремингтона по фармацевтическим наукам (Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack
Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975)).
Интервалы дозировки, сформулированные здесь, являются типичными только и не предназначены ограничивать объем или практику заявленной композиции. Например, дозы могут быть приспособлены к фармакокинетическим или фармакодинамическим параметрам, которые могут включать клинические эффекты, такие как токсические эффекты, и/или лабораторные значения. Таким образом, данное изобретение охватывает подъем дозы внутри больного, как определено специалистом. Определение соответствующих дозировок и режимов введения химиотерапевтические средства известно в соответствующей области техники и, как понимают, будет охвачено специалистом, однажды снабженным сведениями, раскрытыми здесь.
Псориаз является аутоиммунным заболеванием. Системное введение лекарственного препарата является предпочтительным путем введения препарата. Эта аутоиммунная болезнь вызывает поражение кожи, вызывающее зуд. Так как это может вызвать дегенерацию ткани, местное применение препарата может включать мягчитель. При системном введении уровень лекарственного препарата в ткани является решающим фактором, поэтому препарат может быть введен дважды или трижды в день.
Фармацевтическая композиция по изобретению может быть получена, упакована или продана насыпью как стандартная доза или как несколько стандартных доз. Как используется здесь, "стандартная доза" является дискретным количеством фармацевтической композиции, включающей предопределенное количество активного соединения. Количество активного соединения обычно равно дозировке активного соединения, которое было бы введено субъекту, или удобной доле такой дозировки, такой как, например, половина или одна треть такой дозировки.
Относительное количество активного соединения, фармацевтически приемлемого носителя и любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции по изобретению изменяется в зависимости от идентичности, размера и состояния больного при лечении и далее - в зависимости от пути, которым композиция должна быть введена. Например, композиция может включить от 0,1 до 100 вес.% активного ингредиента.
Так как соединение по данному изобретению может быть введено как перорально, так и местно (например, как крем или мазь), введенная доза будет изменяться в зависимости от пути введения. В одном варианте осуществления пероральную композицию вводят в дозировке 5 мг/кг/день как разовая доза или 10 мг/кг/день как разовая доза или раздельными дозами, такие концентрации могут быть введены дважды в сутки, три раза в сутки или четыре раза в сутки согласно серьезности состояния. В одном варианте осуществления, если соединение по данному изобретению вводят как крем, предложенный процент соединения составляет 10 вес.% крема, и это приводит к дозе приблизительно 10 мг/100 г крема, нанесенного свободно. В одном варианте осуществления безрецептурный продукт (ОТС) будет содержать процент соединения по данному изобретению в концентрации 2 вес.% крема, и это будет приводить к дозе приблизительно 2 мг/100 мг крема, нанесенного свободно.
В дополнение к активному соединению фармацевтическая композиция по изобретению может далее включать одно или больше дополнительных терапевтически эффективных соединений, как обсуждено выше.
Как используется здесь, "парентеральное введение" фармацевтической композиции включает любой путь введения, характеризуемый физическим нарушением ткани субъекта, и введение фармацевтической композиции через разрыв в ткани. Парентеральное введение, таким образом, включает, но не ограничивается ими, введение фармацевтической композиции инъекцией композиции, нанесением композиции через хирургический надрез, нанесением композиции через тканепроницающую нехирургическую рану и т.д. Таким образом, активные соединения можно вводить прямо в кровоток, в мышцу или во внутренний орган. Соответствующие средства для парентерального введения включают внутривенную, внутриартериальную, внутрибрюшинную, интратекальную, внутрижелудочковую, внутриуретральную, интрастернальную, внутричерепную, внутримышечную и подкожную и почечную диалитическую методики инфузии. Соответствующие устройства для такого парентерального введения включают игольчатые (включая микроигольчатый) инжекторы, безыгольчатые инжекторы и приборы инфузии.
Парентеральными составами являются обычно водные растворы, которые могут содержать эксци-пиенты, такие как соли, углеводы и средства буферизации (предпочтительно до pH от 3 до 9), но для некоторых применений они могут быть более соответственно составлены как стерильный неводный раствор или как сухая форма, которая будет использоваться вместе с соответствующим носителем, таким как стерильная вода без пирогенов.
Получение парентеральных составов в стерильных условиях, например лиофилизацией, может легко быть достигнуто, используя стандартные фармацевтические методики, известные специалистам в данной области техники.
Составы фармацевтической композиции, пригодные для парентерального введения, включают активный ингредиент, комбинированный с фармацевтически приемлемым носителем, таким как стерильная вода или стерильный изотонический солевой раствор. Такие составы могут быть получены, упакованы или проданы в форме, пригодной для введения болюсов или для непрерывного введения. Инъецируемые составы могут быть получены, упакованы или проданы в стандартной дозированной форме, напри
мер в ампулах или в многодозных емкостях, содержащих консервирующее средство. Составы для парентерального введения включают, но не ограничиваются ими, суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных транспортных средствах, пастах и имплантируемых составах пролонгированного выделения или биоразлагаемых микроорганизмами, как обсуждено ниже. Такие составы могут, далее, включать один или больше дополнительных ингредиентов, включая, но не ограничиваясь ими, суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие средства. В одном варианте осуществления состав для парентерального введения активного ингредиента обеспечивают в сухой (т.е. порошок или гранулы) форме для восстановления соответствующим растворителем (например, стерильной беспирогенной водой) до парентерального введения восстановленной композиции.
Фармацевтические композиции могут быть получены, упакованы или проданы в форме стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии или раствора. Эта суспензия или раствор могут быть составлены по известной технологии, и могут включать, в дополнение к активному ингредиенту, дополнительные ингредиенты, такие как диспергирующие средства, смачивающие вещества или суспендирующие средства, описанные здесь. Такие стерильные инъецируемые составы могут быть получены, используя нетоксичный, парентерально приемлемый разбавитель или растворитель, такой как вода или 1,3-бутандиол, например. Другие приемлемые разбавители и растворители включают, но не ограничиваются ими, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия и нелетучие масла, такие как синтетические моно- или диглицериды. Другие парентерально-вводимые составы, которые полезны, включают составы, которые включают активный ингредиент в микрокристаллической форме, в липосомных препаратах, или как компонент биоразлагаемой микроорганизмами полимерной системы. Композиции для пролонгированного выделения или имплантации могут включать фармацевтически приемлемые полимерные или гидрофобные материалы, такие как эмульсия, ионообменная смола, умеренно растворимый полимер, или умеренно растворимая соль.
Общие методы.
Следующие неограничивающие примеры поясняют получение новых соединений и их использование в лечении воспалительных кожных заболеваний. 1Н ЯМР спектры были получены на спектрофотометре Varian 300 МГц, и величины химического сдвига приведены в частях на миллион (ppm, 5) ниже по полю от тетраметилсилана, используя условные сокращения для обозначения главных пиков: например, s (с), синглет; d (д), дублет; t (т), триплет; q (кв), квартет; m (м), мультиплет; br, уширенный. Анализ тонкослойной хроматографией (ТСХ) был выполнен на пластинах ТСХ, покрытых силикагелем 60F254 [Е Merck]. Все промежуточные соединения и конечные соединения характеризовались данными 1H ЯМР и масс-спектрометрии-жидкостной хроматографии (МС-ЖХ спектральными данными). Чистоту проверяли жидкостной хроматографией высокого давления (ЖХВД, HPLC), и полная синтетическая стратегия получения ацетата (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентенил]-1-гидроксиметила (Пруризола) показана на фиг. 2. Масс-спектры (m/z) были зарегистрированы на масс-спектрометре Agilent модели 1100, используя ионизацию электрораспылением (ESI) или химическую ионизацию при атмосферном давлении (APCI). Следующие сокращения использовались для общих растворителей: CDCl3 - дейтерохлороформ; d6-ДМС0 - дейтеродиметилсульфоксид; CD3OD - дейтеромета-нол.
Примеры
Пример 1
A. Синтез (трет-бутилдиметилсилилокси)ацетилхлорида.
1. К перемешиваемому раствору гидроксиуксусной кислоты (1,0 г, 13,16 ммоль) и
трет-бутилдиметилсилилхлорида (4,32 г, 28,80 ммоль) в диметилформамиде (ДМФ) (10 мл) добавляли
имидазол (3,73 г, 54,91 ммоль) и образующуюся реакционную смесь перемешивали под азотом 18 ч. За-
тем смесь выливали в воду (100 мл) и соединение извлекали гексаном (3х25 мл). Объединенный слой
гексана промывали насыщенным раствором NaHCO3 и сушили над MgSO4. Органический слой при ис-
парении дал 2,94 г (73%) твердого тела белого цвета.
2. К раствору трет-бутилдиметилсилилового эфира (трет-бутилдиметилсилилокси)уксусной кисло-
ты (2,01 г, 6,61 ммоль) в дихлорметане (10 мл), содержащем 4 капли ДМФ, медленно добавляли раствор
оксалилхлорида (1,05 г, 8,26 ммоль) под азотом в течение 40 мин. Образующуюся реакционную смесь
перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Образующаяся реакционная смесь при испаре-
нии дает 1,37 г желтого остатка с почти количественным выходом, который использовался как таковой в
следующей стадии.
B. (-)-цис-[4-[2-Амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил-2-циклопентен-1-(трет-
бутилдиметилсилилокси)метиловыйэфир.
Смесь абакавира (6,0 г, 20,98 ммоль), трет-бутилдиметилсилилхлорида (3,78 г, 25,20 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (DMAP) (0,13 г, 1,05 ммоль) в дихлорметане (100 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем дополнительное количество трет-бутилдиметилсилилхлорида (0,63 г, 4,2 ммоль) размешивали и реакцию продолжали в течение 1,5 ч. Затем насыщенный раствор NaHCO3 (100 мл) добавляли и слои разделяли. Органический слой промывали солевым раствором
(100 мл) и сушили над MgSO4. Дихлорметан удаляли при пониженном давлении и остаток очищали на системе CombiFlash(tm) с колонкой RediSep(tm) с силикагелем в качестве твердого носителя, используя смесь гексан/этилацетат (100,5:0,95) в качестве элюента, чтобы получить 5,55 г (66,15%) желаемого продукта, который использовался как таковой для следующей стадии.
C. (-)-цис-4-[2-N-(бис-Бутоксикарбонил)амино-6-(N-бутоксикарбонил,N-циклопро-пиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-О-(трет-бутилдиметилсилилокси)метиловый эфир.
Смесь TBDMS производного (5,55 г, 13,88 ммоль), ди(трет-бутилкарбонат) (10,59 г, 48,58 ммоль) и DMAP (0,17 г, 1,388 ммоль) в ацетонитриле (170 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Затем добавляли дополнительное количество ди(трет-бутилкарбоната) (4,54 г, 20,83 ммоль) и DMAP (0,17 г, 1,388 ммоль) и образующуюся реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Затем растворитель удаляли и остаток растворяли в дихлорметане (100 мл). Органический слой промывали насыщенным NaHCO3 (100 мл) и затем насыщенным раствором соли (100 мл), затем сушили над MgSO4. Органический слой затем испаряли и образующийся остаток очищали, используя систему CombiFlash(tm) с колонкой RediSep(tm) с силикагелем в качестве твердого носителя, используя смесь гексан/этилацетат (от 100:00 до 70:30) в качестве элюента, чтобы получить 4,40 г (45,30%) продукта.
D. (-)-цис-4-[2-N-(бис-Бутоксикарбонил)амино-6-(N-бутоксикарбонил,N-циклопропил)амино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-метанол.
К ледяному перемешиваемому раствору О-(трет-бутилдиметилсилилокси)^^^-трибутоксикарбонилабакавира (4,40 г, 6,29 ммоль) в тетрагидрофуране (100 мл) добавляли раствор тет-рабутиламмонийфторида (TBAF) в тетрагидрофуране (4,5 мл, 9,43 ммоль). Образующейся реакционной смеси позволили нагреваться до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение 1 ч. Растворитель затем испаряли и остаток суспендировали в этилацетате (100 мл) и промывали 1н. NaHSO4 (100 мл), затем насыщенным NaHCO3 (100 мл) и затем насыщенным раствором соли (100 мл), затем сушили над MgSO4. Органический слой затем испаряли и образующийся остаток очищали, используя систему CombiFlash(tm) с колонкой RediSep(tm) с силикагелем в качестве твердого носителя, используя смесь гексан/этилацетат (от 100:00 до 00:100) в качестве элюента, чтобы получить 3,51 г (95,38%) продукта.
E. (-)-цис-4-[2-N-(бис-Бутоксикарбонил)амино-6-(N-бутоксикарбонил,N-циклопропил)амино-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-(О-трет-бутилдиметил-силилокси)метила ацетат.
К перемешиваемому ледяному раствору титульного соединения стадии D выше (1,02 г, 1,74 ммоль) и триэтиламина (ТЭА) (5 мл) в дихлорметане (100 мл) добавляли по каплям трет-бутилдиметилсилилоксиацетилхлорид (0,36 г, 1,73 ммоль). Образующуюся реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 (100 мл). Слой дихлорметана отделяли, промывали насыщенным раствором соли и сушили над MgSO4. Органический слой затем испаряли и образующийся остаток очищали, используя систему CombiFlash(tm) с колонкой RediSep(tm) с си-ликагелем в качестве твердого носителя, используя смесь гексан/этилацетат (от 100:00 до 60:40) в качестве элюента, чтобы получить 0,38 г (28,78%) продукта.
F. (-)-цис-4-(2-Амино-6-циклопропиламино-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила аце-
тат (Пруризол).
К перемешиваемому ледяному раствору О-(трет-бутилдиметилсилилокси)ацетилокси^^^-трибутоксикарбонилабакавира (0,38 г, 0,50 ммоль) в дихлорметане (30 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (ТФК) (12 мл) и смеси позволяли нагреваться до комнатной температуры в течение 1 ч. Затем растворитель удаляли и ацетонитрил (30 мл) добавляли, затем добавляли 40% ТФК в воде (4,5 мл). Образующуюся реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем ацетонит-рил упаривали при пониженном давлении и дихлорметан (30 мл) и добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Органический слой отделяли, сушили над MgSO4 и упаривали до сухого состояния. Образующийся остаток очищали на системе CombiFlash(tm) с колонкой RediSep(tm) с силикагелем в качестве твердого носителя, используя смесь дихлорметан/метанол (от 100:00 до 94:6) в качестве элюента, чтобы получить 0,132 г (75,43%) конечного продукта.
1Н ЯМР (ДМСО-dfe свободное основание): 5 0.45-0.76 (4Н, м, CH2), 1.58 (1H, м, CH), 2.65 (1Н, м, CH), 2.92-3.18 (2Н, м, CH2), 3.98 (2Н, дд, CH2), 4.13 (2Н, д, CH2), 5.30 (1Н, т, CH), 5.39 (1Н, м, CH), 5.80 (2Н, шс, NH2), 5.93 (1Н, дт, CH), 6.06 (1H, дт, CH), 7.27 (1H, д, NH), 7.78 (1Н, с, Ar-H);
масса (C16H20N6O3, 344.37) найдено (m+1) 345.1.
Пример 2.
Эффективность Пруризола in vivo в животных моделях. Псориатическая ткань и мыши.
Чтобы исследовать эффективность ацетата (-)-цис-4-(2-амино-6-циклопропиламино-9Н-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-гидроксиметила в мышах, мыши ТКИН (тяжелая комбинированная иммунодефи-цитная недостаточность), самцы и самки, (24-28 г), возраст 6-8 недель, были закуплены в Лаборатории Чарльз Ривер (Уилмингтон, Массачусетс). Животные содержались в стандартных клетках для грызунов с вершинами-изоляторами при 18-26°C и относительной влажности 30-70% и циклом 12 ч света-12 ч тем
ноты. Мышам давали еду грызунов и воду без ограничения. Животных акклиматизировали в течение одной недели, и каждое животное наблюдалось, по меньшей мере, ежедневно по поводу любой ненормальности или развития инфекционного заболевания. Соответствующие животные были отобраны для назначенного изучения.
Любые животные, которых рассматривают как неприемлемые для использования в этом изучении, были заменены животными подобного возраста и веса от того же самого продавца. Человеческие псориа-тические ткани покупали от National Disease Research Interchange, Philadelphia, PA.
Общее облучение (TBI).
Мышей подвергают общему облучению, чтобы мягко подавить иммунную систему при 120 рад на животное в гамма-облучателе клеток. Мыши были идентифицированы перфорированием ушка. Имплантация псориатической ткани.
Спустя 24 ч после общего облучения кусочек 5x5 мм человеческой псориатической ткани пересаживали на кожу мыши под кетамин/ксилазиновой анестезией. Ткани соединяли, используя кожный цемент. Все животные пережили анестезию и хирургию в течение эксперимента. Полное слияние тканей достигали на 27 день. Во время обработок мыши ежедневно наблюдались на предмет появления любого неблагоприятного воздействия. Массы тела мышей были взяты до обработки и через день во время последующей обработки. Если животное стало нездоровым, любая обработка этого животного откладывалась. Если не было никакого улучшения, животное умерщвляли. Животное, демонстрирующее больше чем 15% потери веса, считали нездоровым. Любое животное, которое показывало потерю веса больше чем 20%, умерщвляли. Любые животные, показывающие устойчивое изъязвление кожи по месту, умерщвлялись. Измерение размера площади пересадки у мыши проводили до обработки и через день во время и после обработки. Один и тот же ученый был ответственен за проведение измерений в течение изучения.
Как только место трансплантата из группы носителей достигало клинически невыносимого состояния для животного, все животные группы умерщвлялись удушьем газом CO2. После умерщвления места трансплантата удаляли и анализировали.
Протоколы эффективности in vivo (в естественных условиях).
Группы из 5 самцов мыши и 5 самок мыши, несущих псориатические ткани, лечили либо ацетатом (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентенил]-1-гидроксиметила (Пруризол), либо метотрексатом МТХсогласно протоколу ниже. Другая группа мышей оставалась без лечения, чтобы служить контрольной группой.
Данные представлены как средний объем в течение долгого времени. Эффективность лечения анализировали тремя способами. Во-первых, индивидуальные псориатические объемы ткани сравнивали в единый момент времени. Во-вторых, число дней определяют для каждой ткани, чтобы достичь определенной точки конечного размера, т.е. анализируют время до конечной точки (ВКТ). Если данные нормально распределяются, то двусторонний статистический анализ при p=0,05, использующий критерий суммы рангов Манн-Уитни-Уилкоксона, использовали, чтобы определить существенные различия между группами. В-третьих, псориатический рост вычисляют как разность между средним ВКТ для группы с лечением и средним ВКТ контрольной группы, выраженный как процент от контрольной группы.
Результаты.
Изменения веса.
Пруризол вводили перорально (ПО) мышам, наряду с местным применением с 8-часовыми интервалами на произведенной области. Потеря веса вследствие введения соединения была в приемлемых пределах. 5 мг/кг вводили в дни от 11 до 35, и 20 мг/кг точно по плану местно, не приводили к потерям веса, что предполагает, что Пруризол нетоксичен. В псориазе антиапоптический белок G1P3 сверхэкс-прессируется, что регулируется некодирующей РНК. Ген РНК, связанный с восприимчивостью к псориазу, индуцированному стрессом (PRINS), исследовали в трансплантатах контрольных животных и лечили их (экспрессия в псориатических бляшках будет в 10 раз более высокой), и результаты этих изучений показаны ниже.
Субъект
PRINS
Контроль
Пруризол
МТХ
Пруризол х 2
Результаты этого изучения демонстрируют, что Пруризол снижает PRINS значительно по сравнению с метотрексатом (МТХ). ИЛ-20 также измеряли, используя методику твердофазного иммунофер-ментного анализа (ELISA), и данные также показаны ниже.
Контроль
178
Пруризол
МТХ
127
Пруризол х 2
Результаты выше указывают, что Пруризол и метотрексат снижают концентрацию ИЛ-20 в ткани в 3 и в 1,4 раза соответственно. В целом, эти результаты предполагают, что Пруризол более эффективен, чем метотрексат, в контроле псориаза. Вышеупомянутые результаты также показаны на фиг. 1-3.
Поражения или область кожи, когда ксенотрансплантат имплантировали, иссекали стерильным образом. Под микротомом слайды 0,5 мкм толщины были приготовлены и расположены на стекле. Образцы для испытания обработали при повышающемся процентном содержании спирта, до 100%, каждый раз выдерживая при определенном процентном содержании спирта в течение 2 ч. Образцы затем высушивали и окрашивали гематоксилином и Эозином. Слайды изучали под микроскопом LEICA(tm) при увеличении 20x. Слайды градуировали от 1 до 10, причем балл 1 обозначает нормальную ткань, а балл 10 обозначает ткань, очень серьезно пораженную псориазом. Результаты показаны на фиг. 4.
кДНК 12R липоксигеназы обнаруживают полимеразной цепной реакцией (ПЦР) в псориатическом тесте, и как мРНК с 2.5 тысяч гетероциклических оснований назерн- анализом кератиноцитов. Идентификация этого фермента расширяет известное распространение 12R липоксигеназ на людей и представляет дополнительную цель для потенциальных терапевтических вмешательств в псориаз, и результаты, когда животным вводили дозы в 10 мг/кг, поясняются на фиг. 5.
Фиг. 5 показывает индукцию активности 12R липоксигеназы Пруризолом и МТХ. Животным с тяжелой комбинированной иммунной недостаточностью (ТКИН, SCID) давали полное облучение тела и имплантировали человеческую псориатическую ткань. Всех животных лечили либо средством Пруризол, 10 мг, один раз в сутки, либо BID и МТХ. После лечения животные выздоравливали от псориаза так, как показывает изображение на фиг. 6.
Данные, показанные на фиг. 7 и 8 для CD4 и CD8 соответственно, были получены сортировкой флуоресцентно-активированных клеток (СФАК, FACS). Термины CD4 и CD8 обозначают серьезность ингибирования толерантности животными. Низкий уровень CD4 и CD8 указывает, что животные получают ослабленный иммунитет, если уровень понижается ниже 70% первоначальных уровней, то лечение должно быть остановлено. CD4 и CD8 являются элементами суперсемьи иммуноглобулина. CD4 и CD8 (кластер дифференцировки 4 или 8) являются гликопротеинами, выраженными на поверхности клеток T-хелперов, моноцитов, макрофагов и дендритных клеток.
Хотя изобретение было описано выше в отношении раскрытых вариантов осуществления, специалисты в данной области легко оценят определенные детализированные эксперименты только иллюстрациями изобретения. Нужно понимать, что различные изменения могут быть сделаны, не отступая от сущности изобретения. Соответственно, изобретение ограничивается только следующими пунктами формулы изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
в которой R1 и R2 независимо выбирают из водорода, СО2-С1-С4-алкила, CpQ-алкила, ^-^-ал^нила и C2-C6-алкинила, где алкильный фрагмент указанных групп алкила, алкенила и алкинила
1. Соединение формулы I
может быть линейной или разветвленной цепью или комбинацией линейной и разветвленной цепей, группой -(CH2)n-Ph, где n=0-3, группой -(CH2)n-пирид-3-ил, где n=1-2, Q-Q-циклоалкил, 3-12-членным гетероциклическим ядром, содержащим до 3 гетероатомов, где гетероатомы независимо выбирают из О, N или S, и каждое гетероциклическое ядро может быть необязательно замещено у одного или более атомов углерода 1-3 заместителями, независимо выбранными из Q-Q-алкокси;
R3 и R4 независимо выбирают из водорода и Q-Q-алкила;
R5 и R6 независимо выбирают из водорода и -002Q-C9;
A выбирают из ковалентной связи или O;
X представляет собой O;
B выбирают из ковалентной связи или -CH2-;
Y выбирают из OH или OR9, в которой R9 имеет значение CrQ-алкил, и его фармацевтически приемлемые соли. 2. Соединение, имеющее формулу
или его фармацевтически приемлемые соли.
3. Соединение ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила по п.2.
4. Фармацевтически приемлемая соль соединения ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-гидроксиметила по п.2.
5. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных кожных заболеваний, включающая антивоспалительно эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
6. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных кожных заболеваний, включающая антивоспалительно эффективное количество соединения по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель.
7. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, в котором указанная композиция находится в форме стандартной дозы.
8. Фармацевтическая композиция для лечения псориаза, экземы или себореи, включающая антипсо-риазно, антиэкземно или антисеборейно эффективное количество соединения по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.
9. Способ лечения воспалительного кожного заболевания у больного, нуждающегося в таком лечении, включающий введение указанному больному количества соединения по п.1, эффективного в лечении указанного заболевания.
10. Способ по п.9, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол) или его фармацевтически приемлемая соль.
11. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является псориаз.
12. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является экзема.
13. Способ по п.9, в котором указанным воспалительным заболеванием является себорея.
14. Способ по любому из пп.9-12, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол).
15. Применение соединения по любому из пп.1-4 для изготовления лекарственного средства для лечения воспалительного кожного заболевания у больного, нуждающегося в таком лечении.
16. Применение по п.15, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол) или его фармацевтически приемлемая соль.
17. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является псориаз.
18. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является экзема.
19. Применение по п.15, в котором указанным воспалительным заболеванием является себорея.
20. Применение по любому из пп.15-19, в котором указанным соединением является ацетат (-)-цис-[4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен]-1-гидроксиметила (Пруризол).
21. Соединение формулы
10.
22. Соединение формулы
МТХ Пруризол xl Пруризол х2
Фиг. 5
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028518
- 1 -
(19)
028518
- 1 -
(19)
028518
- 1 -
(19)
028518
- 1 -
(19)
028518
- 1 -
(19)
028518
- 4 -
028518
- 13 -
028518
- 13 -
028518
- 14 -