[RU]

1. Композиция для лечения злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или для лечения симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции, содержащая: a) экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования воздушных корней, и/или семян, и/или луковиц гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем; b) экстракт растения, относящегося к роду Theobroma, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования плодов гидрофильным или среднеполярным растворителем; и c) экстракт растения, относящегося к роду Passiflora, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования цветков гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем.

2. Композиция по п.1, в которой указанный растворитель a) выбран из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона, смеси вода/кетон, CO ₂ , этилацетата, гексана и их хлорированных форм; и в которой указанный растворитель b) выбран из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона и смеси вода/кетон.

3. Композиция по п.1 или 2, дополнительно содержащая d) экстракт растения, относящегося к роду Crocus, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования цветков гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем.

4. Композиция по п.3, в которой указанный экстракт из а), указанный экстракт из b), указанный экстракт из с) и указанный экстракт из d) представлены в композиции с соотношением, составляющим приблизительно 2,5 ч. указанного экстракта из а), приблизительно 3 ч. указанного экстракта из b), приблизительно 2,5 ч. указанного экстракта из с) и приблизительно 1,5 ч. указанного экстракта из d).

5. Композиция по любому из пп.1-4, где растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao; растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnata.

6. Композиция по п.3 или 4, где растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.

7. Композиция по любому из пп.1-6, при этом композиция дополнительно содержит оливковое масло.

8. Способ лечения злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или лечения симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции, включающий введение композиции по любому из пп.1-7 в дозе, составляющей от приблизительно 18,5 до приблизительно 77,5 мг/кг в день.

9. Способ по п.8, где указанную дозу вводят по меньшей мере в течение двух недель.

10. Способ получения композиции по любому из пп.1-6, включающий стадии: a) экстрагирование воздушных корней, и/или семян, и/или луковиц растения Raphanus гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем; b) экстрагирование плодов растения Theobroma гидрофильным или среднеполярным растворителем; c) экстрагирование цветка растения, относящегося к роду Passiflora, гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем; d) объединение экстракта стадии а) с экстрактами стадий b) и с).

11. Способ по п.10, дополнительно включающий экстрагирование цветка растения, относящегося к роду Crocus, гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем, и объединение полученного экстракта с указанными экстрактами стадий а)-с).

12. Способ по п.10, где растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao; растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnata.

13. Способ по п.11, где растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.

(57) Реферат / Формула:

1. Композиция для лечения злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или для лечения симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции, содержащая: a) экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования воздушных корней, и/или семян, и/или луковиц гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем; b) экстракт растения, относящегося к роду Theobroma, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования плодов гидрофильным или среднеполярным растворителем; и c) экстракт растения, относящегося к роду Passiflora, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования цветков гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем.

2. Композиция по п.1, в которой указанный растворитель a) выбран из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона, смеси вода/кетон, CO ₂ , этилацетата, гексана и их хлорированных форм; и в которой указанный растворитель b) выбран из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона и смеси вода/кетон.

3. Композиция по п.1 или 2, дополнительно содержащая d) экстракт растения, относящегося к роду Crocus, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования цветков гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем.

4. Композиция по п.3, в которой указанный экстракт из а), указанный экстракт из b), указанный экстракт из с) и указанный экстракт из d) представлены в композиции с соотношением, составляющим приблизительно 2,5 ч. указанного экстракта из а), приблизительно 3 ч. указанного экстракта из b), приблизительно 2,5 ч. указанного экстракта из с) и приблизительно 1,5 ч. указанного экстракта из d).

5. Композиция по любому из пп.1-4, где растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao; растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnata.

6. Композиция по п.3 или 4, где растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.

7. Композиция по любому из пп.1-6, при этом композиция дополнительно содержит оливковое масло.

8. Способ лечения злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или лечения симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции, включающий введение композиции по любому из пп.1-7 в дозе, составляющей от приблизительно 18,5 до приблизительно 77,5 мг/кг в день.

9. Способ по п.8, где указанную дозу вводят по меньшей мере в течение двух недель.

10. Способ получения композиции по любому из пп.1-6, включающий стадии: a) экстрагирование воздушных корней, и/или семян, и/или луковиц растения Raphanus гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем; b) экстрагирование плодов растения Theobroma гидрофильным или среднеполярным растворителем; c) экстрагирование цветка растения, относящегося к роду Passiflora, гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем; d) объединение экстракта стадии а) с экстрактами стадий b) и с).

11. Способ по п.10, дополнительно включающий экстрагирование цветка растения, относящегося к роду Crocus, гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем, и объединение полученного экстракта с указанными экстрактами стадий а)-с).

12. Способ по п.10, где растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao; растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnata.

13. Способ по п.11, где растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.

---

Евразийское 028508 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки 201591157
(22) Дата подачи заявки
2013.12.20
(51) Int. Cl.
A61K36/88 (2006.01) A61K36/185 (2006.01)
A61K 36/31 (2006.01)
A61P25/32 (2006.01) A61P25/36 (2006.01)
(54) КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ RAPHANUS, THEOBROMA И PASSIFLORA, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОУПОТРЕБЛЕНИЙ ОПИОИДАМИ И АЛКОГОЛЕМ
(31) 12198729.1
(32) 2012.12.20
(33) EP
(43) 2015.11.30
(86) PCT/IB2013/061217
(87) WO 2014/097259 2014.06.26
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
АРАБИАН ДЖЕРМАН МЕДИКАЛ
ПРОДАКТС КО. В.Л.Л. (BH)
(72) Изобретатель:
Кадан Фади (JO)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) DATABASE WPI Week 200032
Thomson Scientific, London, GB; AN 2000-368781 XP002696142, & JP 2000083654 A (LOTTE CO LTD.) 28 March 2000 (2000-03-28) abstract
WO-A1-2008131911
US-A1-2004037792
FR-A1-2885300
US-A1-2010297230
DATABASE WPI Week 201007 Thomson Scientific, London, GB; AN 2010-A28916
XP002696143, & JP 2010001282 A (KINJIRUSHI CO LTD.) 7 January 2010 (2010-01-07) abstract
DATABASE WPI Week 201122 Thomson
Scientific, London, GB; AN 2011-C08698
XP002696144, & WO 2011/025120 A2 (NAM J.H.) 3 March 2011 (2011-03-03) abstract
DATABASE WPI Week 201322 Thomson
Scientific, London, GB; AN 2013-D27323
XP002696145, & CN 102 784 351 A (CHONGQING JI'EN SPECIALTY TEAS TECHNOLOG) 21 November 2012 (2012-11-21) abstract
CN-A-101062328 US-A1-2011280977
DATABASE WPI Week 200066 Thomson Scientific, London, GB; AN 2000-678100
XP002722776, & RU 2151610 C1 (DOKTOR N CO LTD.) 27 June 2000 (2000-06-27) abstract
(57) Представленное изобретение относится к композиции, содержащей: а) экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, воздушных корней, семян и/или луковиц гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем; b) экстракт растения, относящегося к роду Theobroma, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, плодов гидрофильным и/или среднеполярным растворителем, и с) экстракт растения, относящегося к роду Passiflora, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, цветков гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем, ее применению при лечении злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, алкогольной зависимости и/ или злоупотребления алкоголем и/или для применения при лечении симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции и способу ее получения.
Представленное изобретение относится к композиции, содержащей: а) экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, воздушных корней, семян и/или луковиц гидрофильным, среднепо-лярным и/или липофильным растворителем; b) экстракт растения, относящегося к роду Theobroma, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, плодов гидрофильным и/или среднеполярным растворителем, и с) экстракт растения, относящегося к роду Passiflora, при этом указанный экстракт может быть получен или получаеют посредством экстрагирования, по меньшей мере, цветков гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем, к ее применению при лечении злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, алкогольной зависимости и/или злоупотребления алкоголем и/или к применению при лечении симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции и к способу ее получения.
В данном описании цитируется ряд документов, включая патентные заявки и инструкции производителя. Раскрытие данных документов, несмотря на то, что не считается имеющим отношение к патентоспособности данного изобретения, включено в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Более конкретно, все справочные документы включены посредством ссылки в такой же степени, как если бы было специально и индивидуально указано, что посредством ссылки включен каждый отдельный документ.
Злоупотребление алкоголем и опиоидами является сложным заболеванием, характеризующимся интенсивным, а иногда неконтролируемым стремлением к наркотическим веществам последних наряду с компульсивным влечением и использованием наркотического вещества, которое сохраняется даже несмотря на разрушительные последствия. Пристрастие представляет собой заболевание мозга, которое поражает множество рефлекторных путей, включая рефлекторные пути, задействованные в подкреплении и мотивации, обучении и памяти, и подавляющее контроль над поведением. Вследствие того, что злоупотребление и пристрастие к наркотическим веществам имеют такие обширные объемы и разрушают слишком много аспектов жизни индивидуума, лечение не является простым. Современная практика лечения злоупотреблений опиоидами и алкоголем включает в себя лекарственные средства для помощи в подавлении симптомов абстиненции во время детоксификации и для помощи в восстановлении нормальной функции мозга и для предотвращения рецидива и ослаблении пристрастия. В настоящее время лекарственными средствами для лечения опиоидной наркомании являются метадон, бупренорфин и для некоторых индивидов налтрексон. Воздействуя на те же самые мишени в мозге, что и героин и морфин, метадон и бупренорфин подавляют симптомы абстиненции и ослабляют стремление. Налтрексон работает посредством блокирования действия героина или других опиоидов на их рецепторных участках и может использоваться только у пациентов, которые уже прошли дектоксификацию. Из-за проблем, связанных с соблюдением режима терапии, налтрексон не используется также широко, как другие лекарственные средства. Все лекарственные средства помогают пациентам освобождаться от влечения к наркотику и связанного с ним криминального поведения и становятся более открытыми для поведенческой терапии.
FDA были одобрены три лекарственных средства для лечения злоупотребления алкоголем: налтрексон, дисульфирам и дисульфирам. Четвертое, топирамат, демонстрирует обнадёживающие результаты в клиничесчких испытаниях. Налтрексон блокирует опиоидные рецепторы, которые задействованы в подкрепляющем действии при употреблении и при пристрастии к алкоголю. Полагают, что дисульфи-рам уменьшает симптомы затянувшейся абстиненции, такие как бессоница, тревога, беспокойство и дисфория (неприятное или дискомфортное эмоциональное состояние, такое как депрессия, тревога или раздражительность). Дисульфирам препятствует расщеплению алкоголя, приводя к накоплению ацетальде-гида, который, в свою очередь, продуцирует очень неприятную реакцию, которая включает в себя покраснение, тошноту и сердцебиение, если пациент пьет алкоголь. Соблюдение режима терапии может являться проблемой, но среди пациентов, которые высоко мотивированы, дисульфирам может оказаться весьма эффективным.
Техническая проблема, лежащая в основе представленного изобретения, заключалась в идентифицировании альтернативных и/или улучшенных средств и способ лечения злоупотреблений опиоидами и алкоголем и симптомов злоупотреблений опиоидами и алкоголем.
Решение данной технической проблемы достигается посредством предоставления вариантов осуществления, характеризующихся в формуле изобретения.
Соответственно, представленное изобретение в первом варианте осуществления относится к композиции, включающей в себя: а) экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, воздушных корней, семян и/или луковиц гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем; и b) экстракт растения, относящегося к роду Theobroma, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, плодов гидрофильным и/или среднепо-лярным растворителем.
"Экстрагирование", как используется в данном документе, должно обозначать процесс солюбили-зирования соединений, которые содержатся в растительном материале, подлежащем экстрагированию, и последующего высвобождения данных соединения из указанного материала. Высвобожденные соедине
ния могут называться "экстрактом" или образуют основу "экстракта", который может быть получен или получается после последующей обработки, такой как, например, высушивание или добавление эксципи-ентов. Способы экстрагирования растительного сырья хорошо известны в данной области и описаны, например, у Gaedcke, Steinhoff, Herbal Medicinal Products, Medpharm Scientific Publishers, CRC Press 2003, ISBN: 0849310237. Процедуры экстракции могут быть основаны на множестве параметров, таких как, например, масса, размер или растворимость/полярность, в зависимости от намеченных соединений. Экстрагирование в соответствии с изобретением основывается на растворимости. Растворимость описывает способность вещества растворяться в растворителе и является функцией температуры, давления и полярности.
"Растворитель" в соответствии с изобретением представляет собой вещество, которое обладает способностью растворять соединения, которые содержатся в растительном сырье, подлежащие экстрагированию для получения экстракта, который заключен в композиции изобретения. Другими словами, растворитель способен растворять желаемые растительные соединения (также упоминаемые в данном документе в качестве лекарственного вещества, которое образует экстракт) в субстратном растительном сырье и образовывать раствор, содержащий последнее. Указанный растворитель является предпочтительно жидким, но может быть также газообразным, таким как CO2, или твердым, при этом в последнем случае он может быть превращен в жидкое состояние для использования в процессе экстрагирования, как описано в данном документе. Растворители можно классифицировать согласно их полярности от полярных (гидрофильных) до неполярных (липофильных). В целом, полярный растворитель будет лучше растворять полярные соединения, в то время как неполярные растворители будут лучше растворять неполярные соединения. Для классификации растворителей на гидрофильный, среднеполярный или липо-фильный растворители может использоваться диэлектрическая постоянная растворителя, но также для классификации могут использоваться и другие средства, такие как, например, mY-шкала Грюнвальда-Уинстейна или Z-шкала Косовера (Kosower, E.M., "An introduction to Physical Organic Chemistry", Wiley: New York, 1969, p. 293). В соответствии с изобретением липофильный растворитель имеет диэлектриче-скуюя постоянную <5, в то время как среднеполярный растворитель имеет диэлектрическую постоянную, варьирующую от 5 до 20, а гидрофильный растворитель имеет диэлектрическую постоянную > 20.
Гидрофильные растворители в соответствии с изобретением могут представлять собой, например, полярные углеводороды с разветвленной или линейной цепью, полярные и среднеполярные органические соединения, их хлорированные версии, воду или их смеси. Предпочтительно указанные углеводороды имеют каркас C1-C10, такой как, например, спирты C1-C10 (например, n-бутанол, изопропанол, n-пропанол, этанол или метанол) или кислоты (например, муравьиная кислота или уксусная кислота). Полярные огранические соединения выбирают из группы, состоящей из ацетона, диметилформамида (DMF), ацетонитрила (MeCN), диметилсульфоксида (DMSO) или пропиленкарбоната.
Среднеполярные растворители в соответствии с изобретением могут представлять собой, например, среднеполярные огранические соединения такие как, например, этилацетат, дихлорметан или тетрагид-рофуран.
Липофильные растворители в соответствии с изобретением могут представлять собой, например, неполярные разветвленные, ароматические или линейные углеводороды или эфиры (например, диэтило-вый эфир, 1,4-диоксан). Предпочтительно указанные углеводороды имеют каркас C1-C10, такой как, например, хлороформ, толуен (также именуемый толуол), бензол, циклогексан, гексан, циклопентан или пентан.
Независимо от способа экстрагирования (см. ниже), в качестве растворителя-экстрагента растения Raphanus предпочтительно применять липофильный или среднеполярный растворитель, более предпочтительно липофильный растворитель, если не указано иное.
Также предпочтительно, чтобы экстрагирование достигалось посредством перколяции, мацерации, приготовлением отвара или приготовлением настоя с применением растворителей, описанных в данном документе.
Процедура экстрагирования посредством перколяции хорошо известна в данной области и относится к процессу экстрагирования растений посредством применения фильтра для отделения лекарственного вещества, т.е. желаемых растительных соединений, подлежащих экстрагированию, от частей растения, когда растворителем обливают части растения и собирают продукт, содержащий лекарственное вещество. На выход экстракта влияет растворитель (концентрация, полярность и количество), время экстрагирования, экстракционный поток и экстракционное устройство (объем партии, высота). Экстрагирование растений Raphanus, предпочтительно вида Raphanus sativus, или смесей растений Raphanus, содержащих растения вида Raphanus sativus, посредством перколяции предпочтительно выполняют с применением среднеполярнго растворителя, такого как, например, смеси этанол/вода. Экстрагирование растений Therobroma, предпочтительно вида Theobroma cacao или смесей растений Theobroma, содержащих растения вида Theobroma cacao, посредством перколяции предпочтительно выполняют с применением гидрофильного растворителя, такого как, например, 20% раствор ацетона, вода, метанол или смесь вода/метанол.
Мацерация представляет собой процедуру экстрагирования, характеризующуюся замачиванием
субстратного растительного сырья растворителем в течение заданного периода времени, такого как, например, от 12 до 24 ч или двух или более дней с необязательным (периодическим) встряхиванием и отделения жидкого экстракта от экстрагируемого растительного сырья. В данной процедуре соотношение препарата растительного происхождения к растворителю-экстрагенту является значимым фактором для эффективности экстрагирования. Количество экстрагируемого вещества увеличивается с количеством (масса, объем) растворителя-экстрагента вследствие того, что при применении более высоких количеств растворителя-экстрагента условия устойчивого состояния достигаются позже. Вследствие этого, соотношение препарата растительного происхождения и растворителя-экстрагента является параметром, имеющим отношение к качеству экстракта, и должно быть определено, чтобы обеспечить согласованность партии с партией. Экстрагирование растений Raphanus, предпочтительно вида Raphanus sativus, или смесей растений Raphanus, содержащих растения вида Raphanus sativus, посредством мацерации предпочтительно выполняют с применением среднеполярного растворителя, такого как, например, смеси этанол/вода. Экстрагирование растений Therobroma, предпочтительно вида Theobroma cacao, или смеси растений Theobroma, содержащих растения вида Theobroma cacao, посредством мацерации предпочтительно выполняют с применением относительного гидрофильного растворителя, такого как, например, 20% раствор ацетона, чистая вода, метанол или смесь вода/метанол.
Приготовление отвара представляет собой процедуру экстрагирования, характеризующуюся кипячением субстратного растительного сырья с растворителем до температуры кипячения смеси. Процесс экстрагирования в целом занимает относительно длительное время по сравнению с другими способами экстрагирования, в частности способами экстрагирования, описанными в данном документе. После кипячения фильтрат отделяют от использовавшегося растительного сырья. Количество экстрагируемого вещества увеличивается с количеством (массой, объемом). Температура и время экстрагирования являются дополнительными параметрами, которые могут влиять на количество нативного экстракта. Экстрагирование растений Raphanus, предпочтительно вида Raphanus sativus, или смесей растений Raphanus, содержащих растения вида Raphanus sativus, посредством приготовления отвара предпочтительно выполняют с применением среднеполярного растворителя, такого как, например, смеси спирт/вода. Экстрагирование растений Therobroma, предпочтительно вида Theobroma cacao, или смесей растений Theo-broma, содержащих растения вида Theobroma cacao, посредством приготовления отвара предпочтительно выполняют с применением гидрофильного растворителя, такого как, например, вода или смеси спирт/вода или ацетон/вода низких концентраций.
Приготовление настоя представляет собой процедуру экстракции, характеризующуюся применением фиксированного количества (масса/объем) растворителя-экстрагента, пока экстрагируемое вещество полностью не перейдет из растительной основы в растворитель. Вследствие этого, соотношение экстракта лекарственного вещества может варьировать от партии к партии в пределах некоторого диапазона. На это влияют характеристики препарата растительного происхождения (содержание экстрагируемого вещества, потери при высушивании и т.д.). Препараты лекарственного вещества растительного происхождения, изготовленные посредством процедур перколяции, описываются средним количеством (масса/объем) растворителя-экстрагента в определенном диапазоне, например 1:12 (от 1:10 до 1:14). Мерой является либо масса/объем (м/о) растворителя-экстрагента, либо масса/масса (м/м). Экстрагирование растений Raphanus, предпочтительно вида Raphanus sativus, или смесей растений Raphanus, содержащих растения вида Raphanus sativus, посредством приготовления настоя предпочтительно выполняют с применением среднеполярных растворителей, таких как, например, смеси спирт/вода. Экстрагирование растений Therobroma, предпочтительно вида Theobroma cacao, смесей растений Theobroma, содержащих растения вида Theobroma cacao, посредством приготовления настоя предпочтительно выполняют с применением гидрофильного растворителя, такого как, например, вода или смеси спирт/вода низких концентраций или смеси вода/ацетон низких концентраций.
Растительным сырьем, применяемым в качестве субстрата в процессе экстрагирования, предпочтительно является сухое растительное сырье, но также может являться растительное сырье, которое не было обработано или обработано другим путем, поскольку свежее растительное сырье содержит воду, которая может способствовать гидролизу природных соединений и может сделать композицию нестабильной. Дополнительно и как известно в данной области, эффективность экстрагирования является более высокой, если материал растительного субстрата измельчен, мелко нарезан или превращен в порошок, при этом степень последней обработки растительного материала зависит от выбранного способа экстрагирования растительного субстрата.
Raphanus представляет собой род в семействе растений Brassicaceae. В настоящее время и в соответствии с изобретением род включает в себя виды Raphanus caudatus (иногда также рассматриваемые как разновидность R. sativus), Raphanus raphanistrum и Raphanus sativus, включая различные искусственные и природные разновидности, такие как, например, R. saphanistrum ssp. landram, R. raphanistrum ssp. maritimus, "April Cross", "Bunny Tail", "Cherry Belle", "Champion", "Red King", "Sicily Giant", "Snow Belle", "White Icicle", "French Breakfast", "Plum Purple", "Black Spanish", "Black Spanish Round" или "Daikon" (R. sativus var. longipinnatus). В соответствии с изобретением является предпочтительным, чтобы экстрагировались, по меньшей мере, воздушные корни, семена и/или луковицы. Предпочтительно только послед
ние части растений применяют в качестве субстратного растительного сырья для экстрагирования или, в случае дополнительного применения частей растений Raphanus, как можно больше частей последнего растения применяют в качестве субстратного растительного сырья для экстрагирования. Предпочтительно в случае применения дополнительных частей растений процентное отношение воздушных корней, семян и/или луковиц в субстратном растительном сырье составляет до или более чем (для каждого значения) 50, 60, 70, 80%, более предпочтительно 85 и 90% и наиболее предпочтительно более чем 95% субстратного растительного сырья, применяемого для экстрагирования. Собственно, также предусматривается, что можно экстрагировать дополнительные части растения, даже целое растение. Предпочтительно растения Raphanus, используемые для получения субстратного растительного сырья, имеют возраст приблизительно от 6 до 8 месяцев и/или собраны между апрелем и маем.
Theobroma является родом растений семейства Malvaceae (также называемого Sterculiaceae). В настоящее время и в соответствии с изобретением род содержит следующие виды: Theobroma angustifoli-um, Theobroma bicolor, Theobroma cacao, Theobroma canumanense, Theobroma grandiflorum, Theobroma mammosum, Theobroma microcarpum, Theobroma obovatum, Theobroma simiarium, Theobroma speciosum, Theobroma stipulatu, Theobroma subincanum, Theobroma sylvestre, Theobroma bernoulli, Theobroma gileri, Theobroma glaucum, Theobroma hylaeum, Theobroma sinuosum, Theobroma velutinum. Также в соответствии с изобретением включены искусственные и природные разновидности.
В соответствии с изобретением является предпочтительным, чтобы экстрагировали, по меньшей мере, плоды. Плоды включают, например, семена. Предпочтительно только плоды применяют в качестве субстратного растительного сырья для экстрагирования либо в случае применения дополнительных частей растений Theobroma, применяют как можно больше плодов в качестве субстратного растительного сырья для экстрагирования. Предпочтительно в случае применения дополнительных частей растений процентная доля плодов в субстратном растительном сырье составляет до или более чем (для каждого значения) 50, 60, 70, 80%, более предпочтительно 85 и 90% и наиболее предпочтительно более чем 95% субстратного растительного сырья, применяемого для экстрагирования. Собственно также предусматривается, что можно экстрагировать дополнительные части растения, такие как, например, листья, кору, и опять даже целое растение за исключением корней. Предпочтительно растения Theobroma, используемые для получения субстратного растительного сырья, находятся в возрасте приблизительно от 10 до 20 лет, растут в регионе влажных тропических лесов, таком как западная Африка или центральная Америка, и/или собраны между апрелем и маем.
Также предусматривается, что части растений двух или более других видов рода, определенных в данном документе, применяют в качестве субстратного растительного сырья для экстрагирования. Предпочтительно и в случае Raphanus в качестве субстратного растительного сырья применяют виды Rapha-nus sativus или смеси растений Raphanus, содержащие растения вида Raphanus sativus; в случае Theo-broma в качестве субстратного растительного сырья применяют виды Theobroma cacao или смеси растений Theobroma, содержащие растения вида Theobroma cacao.
Как указано выше, экстракт, содержащий растворитель и растворенные растительные соединения, может быть в целом, а также в соответствии с изобретением обработан дополнительно, например, с целью очищения и концентрирования экстрагируемого соединения. Концентрирование экстрагируемых соединений может достигаться, например, посредством минимизирования количества растворителя (растворителей), например, за счет предоставления растворителю возможности испаряться, посредством осаждения или других способов, как описано, например, у Gaedcke, Steinhoff, Herbal Medicinal Products, Medpharm Scientific Publishers, CRC Press 2003, ISBN: 0849310237. Очистка может быть достигнута, например, посредством способов фильтрации, которые преимущественно, но не обязательно, используются перед минизацией количества растворителя. Кроме того, являясь способом концентрирования экстракта, осаждение также можно использовать в качестве средства очистки экстракта, в котором осадком может быть либо желаемое растительное соединение(соединения), либо или нежелательные примеси, которые оба приводят к концентрированию и очищению части экстракта, содержащей желаемое соедине-ние(соединения). Предпочтительно раствор, содержащий желаемые растительное соединение (соединения) и растворитель (растворители), фильтруют и в последующем фильтрат испаряют в вакууме до высушивания. С применением стандартных процедур может быть осуществлен выбор параметров (выбор растворителя и т.д.) процесса экстрагирования для того, чтобы стали возможны указанная фильтрация и указанное испарение растворителя.
Таким образом, предпочтительно и в родовых терминах экстракты в соответствии с изобретением получаются или получают посредством экстрагирования субстратного растительного сырья (которое является предпочтительно высушенным) одним или более растворителей, как определено в данном документе, за которым следует стадия последующей фильтрации перед тем, как отфильтрованный раствор высушивают для получения сухого экстракта.
В целях стандартизации сухой экстракт можно дополнительно модифицировать в зависимости от предполагаемого использования, например, посредством добавления эксципиентов, таких как, например, мальтодекстрин и/или диоксид кремния.
В случае экстракта растения, относящегося к роду Raphanus, экстракт предпочтительно стандарти
зируют до содержания от 1 до 5% общего количества флавоноидов, такого как от 1,1 до 4,9%, от 1,2 до 4,8%, от 1,25 до 4,75%, от 1,5 до 4,5%, от 1,75 до 4,25%, более предпочтительно от 2 до 3% или от 2,25 до 2,75% общего количества флавоноидов. Например, указанный экстракт может быть стандартизирован до содержания 1, 1,25, 1,5, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,5%, или более предпочтительно 2, 3%, или наиболее предпочтительно 2,5% общего количества флавоноидов. В случае экстракта растения, относящегося к роду Theo-broma, экстракт предпочтительно стандартизируют до содержания от 3 до 20% общего количества про-цианидинов, такого как от 4 до 19%, от 5 до 18%, от 6 до 17% или 16%, более предпочтительно от 6 до 14% или от 15% и наиболее предпочтительно от 7 до 12% или 13%, от 8 до 10% или 11% общего количества процианидинов. Например, указанный экстракт может быть стандартизируют до содержания 3, 4, 5, 14, 15, 16, 17, 18%, более предпочтительно 6, 7, 11 или 12% и наиболее предпочтительно 8, 9 или 10% общего количества процианидинов. Квалифицированный специалист занимает позицию стандартизации экстрактов до значений, указанных выше, с использованием средств, известных в данной области и описанных в данном документе, например, посредством добавления эксципиентов и/или приспосабливания субстратного растительного сырья.
Было показано, что комбинация экстрактов, как определено в данном документе, была хорошо переносимой в исследованиях in vivo без наблюдаемых побочных явлений.
Представленное изобретение основывается на неожиданных данных, что указанную комбинацию экстрактов можно использовать в качестве фармацевтической композиции для борьбы со злоупотреблением опиоидами и алкоголем и симптомами злоупотребления опиоидами и алкоголем. Конкретно, авторы изобретения провели множество исследований с композициями изобретения на животных моделях, пригодных для оценки различных действий злоупотребления опиоидами и алкоголем. Посредством оценки поведения крыс на модели внутривенного самостоятельного введения в результате введения композиции согласно изобретению было продемонстрировано, что самостоятельное введение морфина и героина было значительно уменьшено (см. пример 1). Это подтверждает, что композиция изобретения является способной эффективно уменьшать усиливающее действие, что показывает, что указанные композиции являются полезными в борьбе со злоупотреблением опиоидами. Дополнительно также была представлена производительность двигательного поведения, которая является научно признанной моделью для анализа действий данного лекарственного вещества в отношении появления тремора рук, эффективности памяти, времени реакции, зрительной координации движений рук, точности, равновесия, визуального поиска, срабатывания навыков, распознавания, бега, циклических периодов и общей производительности (см. пример 2). У больных людей была продемонстрирована эффективность лечения злоупотребления алкоголем, так как могли значительно уменьшаться симптомы, связанные со злоупотреблением алкоголем (см. пример 4). Взятые вместе, данные результаты показали, что композиция по изобретению является пригодной для уменьшения побуждения введения в организм алкоголя или опиоидов и для минизации симптомов, сопровождающих алкогольную или опиоидную абстиненцию. Ни одно растение не было описано в данном контексте ранее.
Знания о растениях Raphanus и Theobroma и их потенциальное значение в медицинском сценарии сведены в следующее. В отношении компонентов известно, что растения Theobroma содержат таннины и флавоноиды, подобные процианидинам, в высокой концентрации, а также другие фенольные соединения, подобные флавоноидам. Было показано, что флавоноидные антиоксиданты в Theobroma cacao снижают уровни холестерина посредством препятствования накоплению холестерина в кровеносных сосудах. Дополнительно считается, что антиоксиданты поддерживают функцию сердца. Исследования показали, кровеносные сосуды более релаксированы с помощью антиоксидантов, эффективно снижающих кровяное давление, а также улучшающих кровообращение (Ding et al., Nutr Metab (Lond), 3:2 (2006); (Khawaja et al., Curr Atheroscler Rep., 13:447-452 (2011)).
Theobroma cacao также содержит аргинин, аминокислоту, которая помогает в построении мышц, а также способствует более быстрому восстановлению после физической нагрузки. Преимущества аргинина в данном процессе делают возможным более быстрое восстановление. Аргинин именуется как "аф-родизиатический" ингредиент, придающий чувство расслабления и уменьшающий стресс. Theobroma cacao, а также другие виды Theobroma содержат различные дополнительные соединения, которые обладают действием на настроение, такого как, например, ингибиторы МАО (ингибиторы фермента моно-аминооксидазы), анандамид, тирамин, серотонин, фенилэтиламин (PEA). Предполагается, что данные вещества улучшающие настроение, придают ощущение энергичности и счастья и мотивацию в личностном улучшении, так и упражнения и потеря массы. Производные ксантина, такие как кофеин и теобромин, также обнаружены в Theobroma cacao. Они предоставляют энергию, которая является более постоянной, чем временная встряска, которая может оставить человека нервозным. Кофеин и теобромин дополнительно обеспечивают ясность и сконцентрированность на протяжении всего дня. В дополнение мощные вещества, подавляющие аппетит, успокаивают сильное пристрастие, которое делает пребывание на диете трудным. Известно, что шоколад повышает уровни нейротрансмиттеров, таких как фенилэтила-мин, серотонин и анандамид, в мозге. Сообщалось также, что дисбаланс между различными нейротранс-миттерами, включая серотонин, имеется у больных с CFS (синдром хронической усталости). Действие какао у больных с синдромом хронической усталости до сегодняшнего дня не исследовалось. Имеется
гипотеза, что шоколад, посредством модулирующих нейротрансмиттеров, может уменьшать тяжесть симптомов CFS (di Tomaso et al., Nature, 382, 677-678 (1996)). Взаимосвязь между шоколадом и настроением является весьма сложной, сочетая психофармакологические компоненты, питательные и органо-лептические свойства пищи. Индивидуальные и ситуационные различия в употреблении шоколада могут также оказывать влияние на настроение, а смешанные результаты в предыдущем исследовании показывают, что направленность связи остается неясной (Macht M. and Mueller J., J. Nerv Ment Dis., 195(12): 1024-6 (2007)). Также считают, что Theobroma cacao является одним из лучших пищевых источников магния.
Было показано, что употребление какао способно снижать титры специфических IgG2a, IgG2b и IgG2c. Более того, употребление какао при CIA (коллаген-индцуцированном артрите) у крыс уменьшает продуцирование ROS (активных форм кислорода), высвобождение TNFa и NO (оксида азота) из перито-неальных макрофагов и уменьшает соотношение Th:цитотоксические Т-клетки в ILN (паховых лимфатических узлах). Диета, обогащенная флавоноидами какао, у крыс LOU с CIA не оказывала действие на опухоль задних лап, но была способна модулировать специфический гуморальный иммунный ответ (Ramos-Romero S., et al., Br J. Nutr, 107 (3):378-87 (2012).
Подавляющее действие РСЕ (экстракта какао, обогащенного полифенолами) на острый UC (язвенный колит), индуцированный DSS у мышей, ослаблялось посредством перорального введения РСЕ, полученного из какао. Данное действие наблюдается главным образом вследствие ингибирования факторов транскрипции STAT1 и STAT3 в клетках тонкой кишки, также задействованного ингибирования NF-KP (Andujar et al., Oxidative Medicine и Cellular Longevity, Vol. 2012: 1-23 (2012)). Также LCC какао-массы (колоночная жидкостная хроматография) показала, что она обладает анти-ВИЧ-активностью (Sakagami H. et al., In Vivo, 25(2):229-36 (2011)).
В данной области известно, что корни и листья растений Raphanus содержат алкалоиды, белки, полисахариды, флавоноиды, гликозиды и фенольные соединения. Имеется гипотеза, что биологическая активность овощей из семейства крестоцветных обусловлена метаболитами класса фитохимических соединений, называемых глюкозинолаты. Химические свойства данных метаболитов, включая изотиоциа-наты, определяют биологическую активность данных соединений и таким образом их действие на здоровье человека (Gutierrez R.M. и Perez R.L., ScientificWorldJournal, 4: 811-837 (2004)). Идентификация полифенолов методом ЖХВД в листьях R. sativus показала присутствие катехина, протокатеховой кислоты, сиреневой кислоты, ванилиновой кислоты, феруловой кислоты, синаповой кислоты, о-кумаровой кислоты, мирицетина и кверцетина в листьях и стебле (Beevi et al., Plant Foods Hum Nutr., 65(1):8-17 (2010); Beevi et al., Nat Prod Res., 26(6):557-63 (2012)).
Среди различных растворителей-экстрагентов метанольный экстракт листьев и стебля показал мощную восстановительную способность, значительно ингибирующую перекисное окисление линолевой кислоты, и продемонстрировал хелатообразующую активность металлов. Дополнительно они эффективно поглощали свободные радикалы с IC50 (полумаксимальной ингибирующей концентрацией), составляющей 31 и 42 мкг/мл для радикала DPPH, 23 и 52 мкг/мл для супероксидного радикала, 67 и 197 мкг/мл для перекиси водорода и 56 и 62 мкг/мл для оксида азота соответственно. Листья продемонстрировали наиболее мощную антиоксидантную активность и активность захвата радикалов по сравнению со стеблем, что можно объяснить высоким содержанием полифенолов. Листья и стебель R. sativus, зачастую недоиспользуемые части данного растения, таким образом, обладают значительным количеством полифенолов.
Была исследована эффективность различных частей R. Sativus, таких как корень, стебель и листья, экстрагируемых с растворителями различной полярности (Beevi et al., Plant Foods Hum Nutr., 65(3):200-9 (2010)). Был исследован молекулярный механизм, ведущий к остановке роста и смерти апоптотических клеток в клеточных линиях рака человека. R. sativus продемонстрировал значительное хемопревентивное подавляющее рост действие в гексановом экстракте. Рафазатин, выделенный из R. sativus, но не являющийся продуктом распада, активировал антиоксидантный ответный элемент (ARE) в стабильно трансфи-цированных репортерной линии клеток. Мыши, употреблявшие пищу, состоящую из 20%-сублимированныхредек, в течение 2 недель, имели значительно более выраженную экспрессию в печени цитохрома Р450 (CYP) 1А1, 1А2, хинон-редуктазы, микросомальной эпоксидгидролазы и глутатион-S-трансферазы а2, чем мыши, употреблявшие соответствующую по питательности контрольную диету (Scholl et al., J. Food Sci., 76(3):C504-11 (2011)).
Водный экстракт коры R. sativus исследовали на его антиуролитогенное и мочегонное действие (Vargas et al., Journal of Ethnopharmacology 68, pp. 335-338 (1999)). У животных, которые получали водный экстракт, после лечения наблюдалось значительное уменьшение массы конкрементов по сравнению с контрольными группами. Данный экстракт продемонстрировал увеличение объема мочи за 24 ч по сравнению с контролем.
Было дополнительно исследовано противодиабетическое действие R. sativus и оно показало, что уровни глюкозы крови могут быть снижены (Shukla et al., Pharm Biol., 49(1):32-7 (2011)).
Неожиданной находкой является способность экстрактов Raphanus модулировать концентрацию
дофамина в мозге. В научном мире постулировано, что все подкрепляющие действия злоупотребления многими лекарственными веществами до некоторой степени опосредованы мезолимбическими дофами-нергическими проводящими путями, берущими начало в вентральной области покрышки и иннерви-рующими центр удовольствия. Хотя и через разные механизмы, опиоиды, возбуждающие средства, этанол и никотин - все увеличивают уровни внеклеточного дофамина в центре удовольствия. Не ограничиваясь конкретной научной теорией относительно действия композиций изобретения, можно было бы, с одной стороны, показать, что в соответствии с продемонстрированным действием против привыкания указанных композиций изобретения высвобождение дофамина в центре удовольствия могло бы уменьшаться (даже в пределах первых 2 ч после введения; данные не показаны). С другой стороны, как становится очевидным из примера 5 ниже, также может быть продемонстрировано, что экстракт Raphanus приводит к увеличению дофамина в течение 30 мин после введения. Также повышение уровней дофамина является благотворным в лечении наркоманов, как определено в данном документе ниже, например, при лечении аспекта депрессии, ассоциированной с опиоидным/алкогольным пристрастием и/или опио-идной/алкогольной абстиненцией. Таким образом, модулирование концентрации дофамина в мозге является благотворным в лечении пристрастия к наркотикам и при лечении симптомов абстиненции, как определено в данном документе ниже.
Как выделено в данном документе выше, перспективные в настоящее время виды лечения злоупотребления наркотическими веществами нацелены на злоупотребление конкретными наркотическими веществами или классами наркотических веществ. Однако композиции изобретения являются эффективными при лечении множественных форм злоупотребления наркотическими веществами, т.е. злоупотреблений опиоидами и алкоголем, а также при лечении симптомов опиоидной и алкогольной абстиненции. Более того, есть основания полагать, что композиции изобретения действуют на некоторые рецепторы, такие как опиоидные рецепторы, совместно демонстрируя синегретический эффект. Они также уменьшают главным образом все или, по меньшей мере, основные симптомы опиоидной и/или алкогольной абстиненции и обладают седативным и антидепрессивным действием, тогда как побочные эффекты были слабыми.
В предпочтительном варианте осуществления композиции изобретения указанный растворитель а) выбирают из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона, смеси вода/кетон, CO2, этил-ацетата, гексана и их хлорированных форм; и/или при этом указанный растворитель b) выбирают из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона и смеси вода/кетон.
Спирты, которые можно использовать согласно данному предпочтительному варианту осуществления, предпочтительно являются выбранными из группы, состоящей из метанола, этанола, бутанола, про-панола, изопропанола, пропиленгликоля, глицерина и их комбинаций. Предпочтительно метанол или этанол используют в качестве растворителя либо отдельно, либо в комбинации, например 30% метанола и 70% этанола. Каждый из спиртов, в частности вышеуказанная группа спиртов, можно также использовать в смеси с водой в качестве растворителя, т.е. растворитель представляет собой смесь вода/спирт. Предпочтительно процентное отношение спирта к соответствующей смеси составляет от 25 до 95%, как, например, от 30 до 90%, от 40 до 80%, от 50 до 70%, 30, 50 или 70%, тогда как также предусматриваются более высокие и низкие процентные отношения спирта, такие как 10, 15, 20% 80 или 90%. Предпочтительно в качестве растворителя используют смесь этанол/вода от 30 до 90%, от 40 до 80%, от 50 до 70%, 30, 50 или 70% этанол или смесь метанол/вода от 30 до 90%, от 40 до 80%, от 50 до 70%, 30, 50 или 70% метанола.
Кетоны, которые можно использовать в соответствии с изобретением, предпочтительно являются выбранными из группы, состоящей из ацетона и бутанона (также известного как метилэтилкетон). Предпочтительно ацетон используют в качестве растворителя. Каждый из кетонов, в частности вышеуказанная группа кетонов, могут также использоваться в смеси с водой в качестве растворителя, т.е. растворитель представляет собой смесь вода/кетон. Предпочтительно процентное отношение кетона к соответствующей смеси составляет от 25 до 95%, как, например, от 30 до 90%, от 40 до 80%, от 50 до 70%, от 30, 50 или 70%, в то время как также предусматриваются более высокие и более низкие процентные соотношения кетона, такие как 10, 15, 20, 80 или 90%. Например, растения Theobroma можно экстрагировать с помощью смеси кетон/вода с 10 или 20% кетона. Предпочтительно используют смесь ацетон/вода от 30 до 90%, от 40 до 80%, от 50 до 70%, 30, 50 или 70% ацетона.
Этилацетат в соответствии с определением, данным в данном документе выше, представляет собой среднеполярный растворитель (также указанный в данной области как полярный апротонный растворитель). Предпочтительно этилацетат используют при температуре, составляющей от 40 до 60°С, более предпочтительно в комбинации с низким давлением.
Гексан в соответствии с определением, данным в данном документе выше, представляет собой неполярный растворитель. Предпочтительно гексан используют при температуре между 40 и 60°С, более предпочтительно в комбинации с низким давлением.
CO2 в соответствии с определением, данным в настоящем документе выше, представляет собой неполярный растворитель, и в текучем состоянии, в котором он находится при или выше своей критической температуре и при критическом давлении, также известен в данной области как суперкритический
CO2 (также именуемый scCO2). Стандартными условиями температуры и давления для CO2-экстрагирования является температура, составляющая от 30 до 50°С при давлении от 300 до 400 бар и очень малые количества жидких растворителей (см., например, Не et al., Int J. Mol Sci. 13(10):13065-78
(2012)).
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению указанный экстракт из а) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4-7,5:1 и указанный экстракт из b) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1 представлены в композиции в соотношении, составляющем приблизительно от 1,5 до приблизительно 6,5 частей указанного экстракта из а) и приблизительно от 3,5 до приблизительно 7,5 частей указанного экстракта из
b).
"Соотношение лекарственное средство-экстракт" (также сокращенное как DER) представляет собой параметр, хорошо известный в данной области, и относится к соотношению между количеством субстратного растительного сырья (содержащего желаемые растительные соединения, подлежащие экстрагированию), применяемого в производстве растительного экстракта, и количеством полученного высушенного растительного экстракта, в котором высушенный растительный экстракт не смешан с дополнительными веществами, такими как, например, эксципиенты и т.д., но относится к экстракту эндогенных растительных соединений (см., например, "Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy" by Michael Heinrich, Joanne Barnes, Simon Gibbons, Elizabeth M. Williamson), Elsevier Science, First edition, 2004, ISBN:-10: 0443071322, Chapter 9, p. 144-159). Количество, написанное перед знаком деления, представляет собой относительное количество субстратного растительного сырья, тогда как количество, написанное после знака деления, представляет собой относительное количество полученного высушенного растительного экстракта. Специалист, квалифицированный в данной области, занимает позицию регулировки различных параметров процесса экстрагирования, таких как, например, растворитель, температура, способ экстрагирования, чтобы достигнуть соотношений лекарственное средство-экстракт, которые точно указаны в данном документе, для каждого растительного экстракта, применяя свои общедоступные знания или стандартные эксперименты (см., например, также "Fundamentals of Pharmacognosy and Phytother-apy", как указано выше). Например, экстракт Raphanus, например экстракт Raphanus sativus, с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4-7,5:1, может быть получен или можно получить посредством применения среднеполярного и/или липофильного растворителя (такого как 50% смесь вода/этанол), и/или посредством применения мацерации в качестве способа экстрагирования. Без ограничения экстракт Theobroma, например экстракт Theobroma cacao, с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1, может быть получен или можно получить посредством применения гидрофильного и/или среднеполярного растворителя (такого как, например, 10 или 20% смесь этанол/вода, или 10 или 20% смесь ацетон/вода, или 40-60% смесь этанол/вода, или 40-60% ацетон/вода), и/или посредством применения мацерации в качестве способа экстрагирования, необязательно применяя температуру ниже 40°С, например, в случае этанола в качестве растворителя.
Термин "приблизительно", как используется в данном документе в отношении числовых значений, в частности в контексте соотношений различных экстрактов друг к другу, которые содержатся в композициях по изобретению, обозначает ссылку на среднее отклонение, составляющее максимально ±10%, предпочтительно ±5%, например ±2,5%, ±1,25% или ±0,625%. В то же время, указание также относится к указанным числовым значениям, например указанным значениям соотношений, без термина "приблизительно", т.е. указание также относится непосредственно к указанным значениям соотношений per se, не беря в расчет среднее отклонение.
В контексте относительного количества экстрактов а) и b) друг к другу, т.е. соотношения, в котором они представлены в композиции, термин "части" обозначает либо масса/масса (сокращенно как м/м) или объем/объем (сокращенно о/о).
Более предпочтительные соотношения экстракта а) и экстракта b) (написанные в формате а)^)) выбраны из группы, состоящей из 2-6:4-7 (т.е. 2-6 частей экстракта а) : 4-7 частей экстракта b)), 3-5:4-6. Даже более предпочтительным является соотношение 4-5:1.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению композиция дополнительно содержит с) экстракт растения, относящегося к роду Passiflora, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, цветков гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем; и/или d) экстракт растения, относящегося к роду Crocus, при этом указанный экстракт может быть получен или получают посредством экстрагирования, по меньшей мере, цветков гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем.
Passiflora представляет собой род в семействе Passifloraceae. Указанный род содержит более чем 500 видов. Также в соответствии с изобретением включены искусственные (садоводческие гибриды) и природные разновидности. В соответствии с изобретением является предпочтительным, чтобы экстрагируемым являлся, по меньшей мере, цветок. Предпочтительно для экстрагирования в качестве субстратного растительного сырья используют только последнюю часть растения или в случае применения до
полнительных частей растения для экстрагирования в качестве субстратного растительного сырья используют как можно больше последней части растения. Предпочтительно в случае применения дополнительных частей растения процентное отношение цветков в субстратном растительном сырье составляет до или более чем (для каждого значения) 50, 60, 70, 80%, более предпочтительно 85 и 90% и наиболее предпочтительно более чем 95% субстратного растительного сырья, применяемого для экстрагирования. Собственно также предусматривается, что можно экстрагировать дополнительные части растения, даже целое растение. Предпочтительно части растения, в частности цветки, должны быть собраны предпочтительно, по меньшей мере, у трехлетних экземпляров весной после образования бутонов растениями Pas-siflora. Также предпочтительным является, чтобы растения Passiflora, культивируемые в Бразилии, были собраны предпочтительно на почве, которая хорошо дренируется.
Далее приведена суть современных знаний о компонентах и свойствах растений рода Passiflora. Было обнаружено, что много видов содержат р-карболины гармала алкалоиды, которые являются ингибиторами МАО с антидепрессивными свойствами. Цветки и плоды содержат только следы данных химических веществ, но листья и корни часто являются более сильнодействующими и применяются для потенцирования действия наркотиков, действующих на психику человека. Наиболее распространенными из данных алкалоидов является гарман (1-метил-9Н-b-карболин), но также были идентифицированы гарма-лин (4,9-дигидро-7-метокси-1-метил-3H-пиридо[3,4-b]индол), гармалол (1-метил-2,3,4,9-тетра-ГИДРОПИРИДО[3,4-Ь]ИНДОЛ-7-ОН), гармин ^-метокси-Ьметил^Н-пиридоРД-ЭДиндол) и гармол. В Passi-flora было обнаружено много флавоноидов и их гликозидов, включая апигенин, бензофлавон гомоориен-тин, 7-изоориентин, изошафтозид, изовитексин (или сапонаретин), кемпферол, люценин, лютеолин, n-ориентин, пассифлорин (названный именем рода), кверцетин, рутин, сапонарин, шафтозид, виценин и витексин. Maypop, Blue Passion Цветок (P. caerulea) и, возможно, другие содержат кризин, флавон с подтвержденными анксиолитическими и противовоспалительными, предполагаемым ароматаза-ингибирующим свойствами. Также документально подтверждено наличие, по меньшей мере, у некоторых видов Passiflora, углеводорода нонакозана и антоцианидина пеларгонидин-3-дигликозид в большом количестве. В отношении огранических кислот род богат муравьиной, масляной, линолевой, линолено-вой, яблочной, миристиновой, олеиновой и пальмитиновой кислотами, а также фенольными соединениями и аминокислотой а-аланин. Сложные эфиры, такие как этилбутират, этилкапроат, n-гексилбутират и n-гексилкапроат, придают плодам их аромат и аппетитный запах. Наиболее важными сахарами, содержащимися главным образом в плодах, являются D-фруктоза, D-глюкоза и раффиноза. Было обнаружено, что из ферментов виды Passiflora богаты каталазой, пектинметилэстеразой и фенолазой.
Было показано, что различные компоненты растений Passiflora имеют различное терапевтически полезное действие, как изложено далее. Свежие или высушенные цветки различных видов Passiflora используют для приготовления чая, который применяют для лечения бессоницы, истерического невроза и эпилепсии, а также оценен за свои анальгетические свойства. Р. edulis (страстоцвет съедобный) и некоторые другие виды используют в Центральной и Южной Америке с аналогичными целями. После высушивания листья можно также курить. Было научно исследовано медицинское применение очень немногих видов Passiflora. В начальных испытаниях для лечения генерализированного тревожного расстройства провели экстрагирование мейпопа, а также оксазепама, но с меньшим количеством кратковременных побочных эффектов. Было рекомендовано предпринять последующие долгосрочные исследования (Ak-hondzadeh et al., Journal of Clinical Pharmacy and Therapeutics, vol. 26, issue 5, p. 363-367, (2001)). Passiflora incarnata внесена в список фармакопей Великобритании, Соединенных Штатов, Индии, Франции, Германии, Швейцарии и других (Dhawan et al., J. Ethnopharmacol.; 78(2-3):165-70 (2001)). Активные ингредиенты, ответственные за потенциальный фармацевтический эффект, не были достоверно определены (Carlini ЕА, Plants and the central nervous system. Pharmacology, Biochemistry and Behavior. 2003;75:501-512). Большинство имеющихся данных предлагают флавоноиды в качестве активных ингредиентов (Speroni and Minghetti, Planta Med.;54(6):488-91 (1988); Dhawan et al., J. Ethnopharmacol.; 78(2-3):165-70 (2001); Dhawan et al., J. Pharm Pharmaceut Sci., 6(2):215-222 (2003)).
Исследования на животных моделях продемонстрировали эффективность экстрактов Passiflora и фракций флавоноидов против эпилептических припадков, индуцированных пентилентетразолом (PTZ), (Speroni and Minghetti, Planta Med.; 54(6):488-91 (1988); Speroni and Billi, Phytotherapy Research, 10:S92-S94 (1996); Nassiri-Asl et al., BMC Complement Altern Med., 8;7:26 (2007); Nassiri-Asl et al., Progess in Neu-ro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry, 32:989-993 (2008)). В 3 клинических испытаниях экстракты Passiflora продемонстрировали анксиолитическое действие. Одно из испытаний сравнило Passi-flora с плацебо (Movafegh et al., Anesth Analg., 106(6): 1728-32 (2008)), и два других продемонстрировали, что Passiflora обладает анксиолитическим действием, аналогичным бензодиазепинам (Mori et al., Rinsho Hyoka [Clinical evaluation for drugs], 21(3):383-440(1993); Akhondzadeh et al., J. Clin Pharm Ther., 26(5):363-7(2001)). В дополнение экстракт Passiflora продемонстрировал седативное действие в 2 клинических испытаниях (Akhondzadeh et al., J. Clin Pharm Ther., 26(5):369-73 (2001); Movafegh et al., Anesth Analg., 106(6): 1728-32(2008)). Результаты исследования (Singh et al., Journal of Ethnopharmacology, Volume 139, issue 1, p. 273-279 (2012)) заключили, что гидроэтаноловый экстракт Passiflora incarnate подав
ляет PTZ-индуцированные эпилептические припадки и улучшает связанную с ними постиктальную депрессию, которая, как было обнаружено, становится хуже при стандартным противоэпилептическом лекарственном веществе диазепаме. Пероральное предоперационное применение Passiflora incarnata подавляет нарастание тревоги перед спинальной анестезией без изменений результатов тестирования психомоторной функции, уровня седации или гемодинамики. Активные алкалоиды в страстоцвете - гармин и гарман - влияют на уровни GABA, нейротрансмиттера, на которые воздействуют бензодиазепиновые лекарственные средства, такие как Валиум и Ксанакс. Недавно стало очевидно значение страстоцвета при лечении опиатной абстиненции. Согласно Национальному институту здоровья использование страстоцвета наряду с Клонидином при опиатной абстиненции приводит к лучшему ослаблению симптомов, чем при использовании одного лишь Клонидина. Необходимы дополнительные исследования, но в соответствии с представленным изобретением считается, что, помимо прочих, расслабляющие свойства страстоцвета можно применять для облегчения симптомов опиоидной и алкогольной абстиненции.
Crocus представляет собой род в семействе Iridaceae, подсемействе Crocoideae. Существуют различные виды, которые хорошо известны квалифицированному специалисту. Данные виды можно классифицировать по Mathew (Brian Mathew, Crocus: Revision рода Crocus, Timber Press, 1983. ISBN 0917304-23-3) в i) секцию Crocus, включающую в себя серии Verni, Baytopi, Scardici, Versicolores, Longi-flori, Kotschyani, Crocus; и в ii) секцию Nudiscapus, включающую в себя серии Reticulati, Biflori, Speciosi, Orientales, Flavi, Aleppici, Carpetani, Intertexti и Laevigatae. В соответствии с изобретением является предпочтительным, чтобы экстрагировали, по меньшей мере, цветок. Предпочтительно для экстрагирования в качестве субстратного растительного сырья используют только последнюю часть растения или в случае применения дополнительных частей растения, для экстрагирования в качестве субстратного растительного сырья используют как можно больше последней части растения. Предпочтительно в случае применения дополнительных частей растения процентное отношение цветков в субстратном растительном сырье составляет до или более чем (для каждого значения) 50, 60, 70, 80%, более предпочтительно 85 и 90% и наиболее предпочтительно более чем 95% субстратного растительного сырья, применяемого для экстрагирования. Собственно также предусматривается, что можно экстрагировать дополнительные части растения, даже целое растение. Предпочтительно части растения, в частности цветки, должны быть собраны от растений, культивированных в Греции, Испании и Иране и в странах, в которых годовая сумма осадков составляет в среднем 400-1000 мм. Оптимальными являются обильные весенние дожди и более сухое лето. Посадку производят предпочтительно в июне, уборка в силу необходимости является быстрой: после цветения на рассвете цветки быстро увядают, когда проходит день. Все растения цветут в пределах периода в одну или две недели.
Далее предоставлен обзор современных знаний о компонентах и свойствах растений рода Crocus: ввиду широкого диапазона их медицинского применения, известного на сегодня, хорошо известную специю шафран (см., например, Negbi, M. (editor), Saffron: Crocus sativus L, CRC Press (1999), ISBN: 987-905702-394-1), произведенную из Crocus sativus, подвергли интенсивным фитохимическим и биохимическим исследованиям и выделили множество биологически активных ингредиентов. Шафран содержит более чем 150 летучих и придающих аромат соединений. Отличительными компонентами шафрана являются кроцин (ответственный за цвет), пикрокроцин (ответственный за горький вкус), и сафраналь (ответственный за запах и аромат). Он также содержит много нелетучих активных компонентов, многие из которых представляют собой каротиноиды, включая зеаксантин, ликопин и различные а- и р-каротины. Летучие вещества с очень сильным запахом соответстствуют более чем 34 компонентам, которые представляют собой главным образом терпены, терпеновые спирты и их сложные эфиры. Нелетучие соединения содержат 14 кроцинов, которые ответственны за красный или красновато-коричневый цвет рылец вместе с каротинами, кроцетином, пикрокроцином (гликозидного прекурсора сафраналя), горькое вещество и сафраналь, основной органолептический компонент рылец. Однако золотой желто-оранжевый цвет главным образом обусловлен а-кроцином. Данный кроцин представляет собой сложный эфир транс-кроцетина и ди-(Р^-гентиобиозили). Систематическое (ИЮПАК) название: 8,8-диапо-8,8-каротиновая кислота. Это означает, что кроцин, лежащий в основе аромата шафрана, представляет собой сложный эфир дигентиобиозы каротиноида кроцетина. Сами кроцины представляют собой серию гидрофильных каротиноидов, которые являются либо моногликозил-, либо дигликозилполиеновыми сложными эфирами кроцетина. Кроцетин представляет собой конъюгированную полиендикарбоновую кислоту, которая является гидрофобной и, таким образом, жирорастворимой. Когда кроцетин этерифицируют двумя водорастворимыми гентиобиозами (которые представляют собой сахара), получается продукт, который сам является водорастворимым. Полученный в результате а-кроцин представляет собой каро-тиноидный пигмент, который может составлять более чем 10% сухой массы шафрана.
В данной области было показано, что С. sativus обладает антидепрессивным действием, двумя активными ингредиентами-антидепрессантами являются кроцин и сафраналь. Как показали предварительные фитохимические результаты, можно предположить, что антиноцицептивное и противовоспалительное действие экстрактов лепестков может быть обусловлено содержанием в них флавоноидов, таннинов и антоцианинов. Другие исследования продемонстрировали, что присутствуют различные флавоноиды,
например, рутин, кверцетин, лютеолин, гесперидин и биофлавоноиды (Srivastava et al., Pharmacogn Rev.,
4(8):200-8 (2010)).
Fatehi и другие (J. Ethnopharmacology, 84:199-203 (2003)) исследовал действие экстракта лепестков С. sativus на кровяное давление у крыс под анестезией и также на ответную реакцию выделенных семя-выносящего протока крысы и подвздошной кишки морской свинки, индуцированную стимулированием электрическим полем (EFS). Водный и этаноловый экстракты лепестков С. sativus уменьшали кровяное давление дозозависимым образом.
В одном из исследований, противосудорожная активность компонентов рылец С. sativus, сафраналя и кроцина, была оценена у мышей с применением пентилентетразол(PTZ)-индуцированных судорог у мышей. Сафраналь (0,15 и 0,35 мл/кг массы тела, интраперитонеально) уменьшал продолжительность эпилептических приступов, задерживала начало тонических судорог и защищал мышей от смерти. Кро-цин (22 мг/кг, интраперитонеально) не показал противосудорожной активности.
Было показано, что этаноловый экстракт С. sativus и сафраналь уменьшают величину кашля (Hosse-
inzadeh et al., Fitoterapia, 77:446-8 (2006)).
Другие исследование показывают, что лечение кроцинами С. sativus L. Индуцирует у крыс действие, подобное анксиолитическому (Pitsikas et al., Phytomedicine, 15:1135-9 (2008)).
Для исследования механизма (механизмов) вызывающего релаксацию действия С. sativus, стимулирующее действие водно-этаноловых экстрактов данного растения и одного из его компонентов, сафрана-ля, исследовали на р-адренорецепторах в трахеальных стволах морских свинок. Результаты показали относительно мощное стимулирующее действие экстракта С. sativus на р2-адренорецепторы, которое частично развивается благодаря его компоненту, сафраналю. Также в данной области было предположено возможное подавляющее действие растений на гистаминовые (H1) рецепторы (Nemati et al., Phy-
tomedicine, 15:1038-45 (2008)).
Эффективность лепестков С. sativus была оценена при лечении депрессии от легкой до умеренной степени тяжести в 6-недельном двойном слепом, плацебо-контролируемом и рандомизированном исследовании. Результаты данного исследования показывают эффективность лепестков С. sativus в лечении депрессии от лёгкой до умеренной степени тяжести. В дополнительной предварительной работе шафран сравнивали с лекарственным веществом флуоксетином; было обнаружено, что при лечении депрессии шафран действовал так же, как и лекарственное вещество (Moshiri et al., Phytomedicine, 13:607-11 (2006)).
В другом исследовании экстракт шафрана и два его основных ингредиента, кроцин и кроцетин, улучшали память и навыки обучения при этанол-индуцированных нарушениях поведения при обучении у мышей и крыс. В данной области выдвинута гипотеза, что пероральное введение шафрана является полезным при лечении нейродегенеративных нарушений и нарушений, связанных с памятью. Таким образом, в данной области было постулировано, что применение данных веществ является полезным в фармакологическом снижении когнитивного дефицита (Sigiura et al., Phytother Res., 9: 100-4 (1995)).
Дополнительное исследование показало, что аналоги кроцина, выделенные из шафрана, значительно повышали кровоток в сетчатке и сосудистой оболочке глаза, а также улучшало восстановление функции сетчатки, и их можно было бы использовать для лечения ишемической ретинопатии и/или возрастной макулярной дегенерации (Xuan B., J. Ocul Pharmacol Ther, 15:143-52 (1999)).
Другое исследование (Ghoshooni et al., Pak J. Biol Sci., 14(20):939-44 (2011)) проводили на этаноло-вом экстракте шафрана и его компоненте, сафранале. Данное исследование представляло собой изучение приобретения и выражения морфининдуцированного предпочтения места введения психоактивного вещества (СРР) на самцах мышей Swiss Webster (20-25 г). Для оценки подкрепляющих свойств морфина применяли несмещенный метод оценки предпочтения места введения психоактивного вещества. Экстракт шафрана и сафраналь вводили интраперитонеально (i.p.) во время (приобретение) или после индукции (выражение) СРР морфина. В пилотном исследовании экстракт и сафраналь раздельно вводили животным для оценки, имеют ли они какие-либо подкрепляющие свойства. Подкожное (п/к) введение морфина (4 и 8 мг кг (-1)) и экстракта (50 мг кг (-1); интраперитонеально) индуцировало СРР. Экстракт (10, 50 и 100 мг кг (-1); интраперитонеально) уменьшал приобретение и выражение СРР морфина. Такие же результаты получили при использовании сафраналя (1, 5 и 10 мг кг (-1), интраперитонеально). Можно заключить, что как этаноловый экстракт шафрана, так и сафраналь могут подавлять приобретение и выражение морфининдуцированного СРР у мышей.
Как становится очевидным из вышесказанного, и не связывая себя конкретной теорией, считается, что в частности антидепрессивное, расслабляющее и потенциальное действие растений Crocus, связанное с СРР, является благотворным при применении в качестве части композиции в соответствии с изобретением, содержащей экстракт Raphanus и Theobroma и, необязательно, Passiflora.
Если не указано иное, определения, комбинации и конкретные примеры растворителей, описанные в данном документе выше, также употребляют с соответствующими поправками к данному предпочтительному варианту осуществления по отношению к экстрагированию Passiflora и Crocus. Следовательно, указанный растворитель из с) и d) предпочтительно выбирают из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона, смеси вода/кетон, CO2, этилацетата, гексана и их хлорированных форм. Более
предпочтительным в качестве растворителя является использование этанола для экстрагирования Passi-flora и любого водного растворителя, описанного в данном документе выше, такого как смесь вода/этанол, для экстрагирования Crocus. Также предпочтительным является, чтобы экстрагирование проводили посредством перколяции или мацерации.
В случае экстракта растения, относящегося к роду Passiflora, экстракт предпочтительно стандартизируют до содержания от 1 до 5% общего количества флавоноидов с применением витексина в качестве индикатора, например, от 1,1 до 4,9%, от 1,2 до 4,8%, от 1,25 до 4,75%, от 1,5 до 4,5%, от 1,75 до 4,25%, более предпочтительно от 1,5 до 3% или от 1,5 до 2,5% общего количества флавоноидов. Например, указанный экстракт может быть стандартизирован до содержания 1, 1,25, 1,5, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,5% или более предпочтительно 1,75, 2,5 или наиболее предпочтительно 2% общего количества флавоноидов.
В случае экстракта растения, относящегося к роду Crocus, экстракт предпочтительно стандартизируют до содержания от 1 до 5% сафраналя, такого как от 1,1 до 4,9%, от 1,2 до 4,8%, от 1,25 до 4,75%, от 1,5 до 4,5%, от 1,75 до 4,25%, более предпочтительно от 1,5 до 3% или от 1,5 до 2,5% сафраналя. Например, указанный экстракт может быть стандартизирован до содержания 1, 1,25, 1,5, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,5% или более предпочтительно 1,75, 2,5% или наиболее предпочтительно 2% сафраналя.
В более предпочтительном варианте осуществления композиции изобретения указанный экстракт из а) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4-7,5:1, указанный экстракт из b) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1, и указанный экстракт из с) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 5-7:1, представлены в композиции в соотношении, составляющем приблизительно от 0,5 до приблизительно 5 частей указанного экстракта из а), приблизительно от 2,75 до приблизительно 4 частей указанного экстракта из b) и приблизительно от 2,5 до приблизительно 5,5 части указанного экстракта из с).
В дополнительном более предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению указанный экстракт из а) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4-7,5:1, указанный экстракт из b) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1, и указанный экстракт из d) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 0,5-5:1 представлены в композиции в соотношении, составляющем приблизительно от 1 до приблизительно 4 частей указанного экстракта из а), приблизительно от 3 до приблизительно 4 частей указанного экстракта из b) и приблизительно от 1 до приблизительно 3,5 части указанного экстракта из d).
В дополнительном, более предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению, указанный экстракт из а) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4-7,5:1, указанный экстракт из b) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1, указанный экстракт из с) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 5-7:1, и указанный экстракт из d) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 0,5-5:1, представлены в композиции в соотношении, составляющем приблизительно от 0,5 до приблизительно 4 частей указанного экстракта из а), приблизительно от 2,5 до приблизительно 3 частей указанного экстракта из b), от приблизительно 2,5 до приблизительно 5,25 частей указанного экстракта из с) и приблизительно от 0,5 до приблизительно 3,75 частей указанного экстракта из d).
В еще более предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению указанный экстракт из а), указанный экстракт из b), указанный экстракт из с) и указанный экстракт из d) представлены в композиции в соотношении, составляющем приблизительно 2,5 части указанного экстракта из а), приблизительно 3 частей указанного экстракта из b), приблизительно 2,5 части указанного экстракта из с) и приблизительно 1,5 части указанного экстракта из d).
Как становится очевидным из раздела примеров, соответствующая композиция продемонстрировала особенно высокую эффективность.
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению композиция дополнительно содержит оливковое масло.
Добавление оливкового масла к композиции является предпочтительным вследствие того, что оно является хорошим носителем, и это способствует растворимости экстрактов. Оливковое масло представляет собой жир, полученный из маслины, и различные способы его получения являются хорошо известными в данной области на протяжении столетий (см., например, Olive oil production on bronze age Crete: nurtitional properies, processing mehtods and хранения life of Minoan olive oil. Riley, F.R.: Oxford Journal of Archaeology, Volume 21, Issue 1, pages 63-75, February 2002). В соответствии с изобретением, оливковое масло первого отжима является предпочтительнее, чем жмыховое масло, т.е. химически экстрагируемое оливковое масло. Также предпочтительным является оливковое масло, экстрагируемое на холоде, т.е. экстрагируемое предпочтительно при температурах, не превышающих 27°С. Предпочтительно множество маслин, применяемых для производства оливкового масла, относятся к Olea europea, который убирают в предпочтительно средиземноморской стране.
Соотношение добавленного оливкового масла к общему объему экстрактов а), b), или а), b) и с), и/или d) в композиции, полученной в результате добавления оливкового масла, составляет, предпочтительно, 1 часть оливкового масла к 4 частям экстрактов по массе.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения композиция изобретения
представляет собой фармацевтическую композицию.
Термин "фармацевтическая композиция", как используется в данном документе, относится к композиции для введения пациенту, предпочтительно пациенту человеку. Как таковая, фармацевтическая композиция изобретения либо состоит из растительных экстрактов и необязательно оливкового масла, как определено в данном документе выше, или она содержит дополнительные агенты, такие как, например, фармацевтически приемлемые носитель, эксципиент, разбавитель и/или дополнительный фармацевтически активный агент. Примеры пригодных фармацевтических носителей, эксципиентов и/или разбавителей являются хорошо известными в данной области и включают в себя фосфатно-буферные солевые растворы, воду, эмульсии, такие как эмульсии масло/вода, различные типы увлажняющих агентов, стерильные растворы и т.д. Композиции, содержащие данные носители, могут быть получены в виде готовой формы посредством хорошо известных общепринятых способов. Данные фармацевтические композиции можно вводить больному в приемлемой дозе, например дозах, изложенных в данном документе ниже.
Композиция может быть в твердой или предпочтительно в жидкой форме и может быть в том числе в форме (а) порошка(порошков), (а) таблетки(таблеток), (а) капсулы(капсул) или (а) раствор(растворов). Благодаря легкости изготовления и введения, более предпочтительная лекарственная форма представляет собой мягкую желатиновую капсулу, содержащую композиции по изобретению, предпочтительно композицию по изобретению, содержащую оливковое масло.
Введение пригодных композиций может осуществляться посредством различных путей, предпочтительно посредством непарентеральных способов, таких как предпочтительно посредством перорального введения. Схема приема лекарства может быть определена лечащим врачом и клиническими факторами. Как хорошо известно в области медицины, дозировки для какого бы ни было пациента зависят от многих факторов, включая размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное соединение, подлежащее ведению, пол, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарственные вещества, вводимые в настоящее время. Композицию можно вводить в дозировке между 1 мг и 100 мг/кг массы тела в день также в зависимости от выбранной эффективности растительных экстрактов в композиции изобретения; однако предусмотрены дозы ниже или выше данного иллюстративного диапазона, особенно учитывая вышеуказанные факторы и выбранное разведение фармацевтически активного вещества, т.е. растительных экстрактов композиций по изобретению. Прогресс можно контролировать посредством периодической оценки.
Препараты для перорального введения включают в себя, например, (стерильные) водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгли-коль, полиэтиленгликоль, растительные масла и огранические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают в себя воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевую и буферную среды. Среды содержат раствор хлористого натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или фиксированные масла. Данные среды содержат текучие и питательные наполнители, электролитные наполнители (например, наполнители, основанные на декстрозе Ринге-ра) и т.п. Также могут присутствовать консерванты и другие вспомогательные вещества, такие как, например, противомикробные агенты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы и т.п. Также предусматривается, что указанная фармацевтическая композиция содержит дополнительные фармацевтически активные агенты, известные в данной области, эффективные в лечении патологических состояний, указанных в данном документе, например лечении патологических состояний или заболеваний, связанных с ними. Общепринятые эксципиенты включают в себя связывающие агенты, наполнители, люб-риканты и увлажняющие агенты. Предпочтительно композиции по изобретению вводят перорально, принимая форму мягкой желатиновой капсулы, пригодной для растворения в тонкой кишке (и высвобождения композиций изобретения). В данной области известно, что данная форма введения делает возможным быстрое всасывание принятых внутрь соединений. В данном случае является предпочтительным, чтобы композиция с добавленным оливковым маслом, описанная в данном документе выше, используется с дополнительными агентами или без них, как определено в данном документе. Однако также предусматривается добавление другого растительного масла или дополнительного растительного масла, такого как, например, масло семян льна или масло семян черного тмина.
В другом варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция по изобретению предназначена для применения при лечении злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или для применения при лечении симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции.
Злоупотребление алкоголем и алкогольная зависимость представляют собой патологические состояния, хорошо известные в данной области, описывают повторное использование алкогольных напитков, несмотря на негативные последствия. Существуют различные системы классификации, согласно которым можно диагностировать, что человек страдает алкогольной зависимостью и злоупотреблением алкоголем. В соответствии с изобретением все указанные системы классификации можно использовать для постановки диагноза пациента, подходящего для лечения, как описано в данном документе. Конкретно, может использоваться классификация согласно Диагностико-статистическому руководству по психическим расстройствам (DSM) или Всемирной организации здравоохранения. Согласно современ
ному изданию (DSM-IV) критерии для алкогольной зависимости содержат привыкание; симптомы абстиненции или клинически распознанный алкогольный абстинентный синдром; использование более крупных количеств или в течение более длительных периодов, чем предполагалось; устойчивое желание или безуспешные попытки свести к минимуму употребление алкоголя; время, затраченное на получение алкоголя или восстановление от действия употребления алкоголя; социальные, профессиональные и развлекательные занятия, оставленные или сокращенные вследствие употребление алкоголя; и использование продолжено, несмотря на знания о вреде, обусловленным алкоголем (физическом или физиологическом). За период, составляющий 12 месяцев, должны манифестироваться по меньшей мере три критерия. Например, так называемый тест на выявление нарушений, связанных с употреблением алкоголя (AUDIT; см. Babor et al., AUDIT, The Alcohol Use Disorders Identification Test, Guidelines for Use in Primary Care, Second Edition, World Health Organization, Department of Mental Health and Substance Dependence) может использоваться в качестве скринингового инструмента для выявления потенциального злоупотребления алкоголем (). Тестом, более конкретно направленный на диагностику алкогольной зависимости, является Анкета тяжести алкогольной зависимости (SAD-Q). Алкогольную зависимость дифференцируют от злоупотребления алкоголем посредством наличия симптомов, таких как привыкание и абстиненция. Злоупотребление алкоголем может привести к алкогольной зависимости. В настоящее время, и по следующему выпуску DSM (DSM-V) предполагается, что злоупотребление алкоголем и алкогольная зависимость сочетаются в одном едином расстройстве, т.е. расстройстве употребления алкоголя (AUD), которое может включать разделенную по степеням клиническую степень тяжести от умеренной до тяжелой, объясняющую различия между злоупотреблением алкоголем и зависимостью. В соответствии с указанной классификацией, изобретение также относится к лечению заболевания, включая заболевания злоупотребление алкоголем и алкогольную зависимость, как изложено выше.
Злоупотребление опиоидами и опиоидная зависимость представляют собой патологические состояния, одинаково хорошо известные в данной области. Опять же, в DSM-IV были определены критерии зависимости от психоактивных веществ и злоупотребления алкоголем или наркотиками. После проведения тщательного обследования пациента должен быть установлен формальный диагноз либо опиоидной зависимости, либо злоупотребления. Диагноз зависимости от психоактивных веществ или злоупотребления ими, согласно современной диагностической программе DSM-IV, основывается на кластерах поведенческих и физиологических действий, возникающих в пределах конкретных временных рамок. Диагноз зависимости всегда обладает приоритетом по сравнению с диагнозом злоупотребления, например диагноз злоупотребления устанавливают, только если критерии DSM-IV для зависимости никогда не встречались.
Зависимость определяют как возникновение по меньшей мере трех из следующих критериев в пределах периода, составляющего 12 месяцев: привыкание (значительное повышение количества; значительное уменьшение действия); характерные симптомы абстиненции; вещество, употребляемое для ослабления абстиненции; вещество, употребляемое в более крупных количествах и в течение более длительного периода, чем предполагалось; устойчивое желание или повторные безуспешные попытки освободиться; много времени/активности для получения, применения, восстановления; оставленные или сокращенные важные социальные, профессиональные и развлекательные занятия; и продолжение использования, несмотря на знания о неблагоприятных последствиях (например, невыполнение ролевых обязанностей, использование при физической опасности).
Злоупотребление определяют как появление по меньшей мере одного их следующих критериев в пределах периода, составляющего 12 месяцев (критерии никогда не должны иметь совпадающие критерии для зависимости от психоактивных веществ для класса обсуждаемых веществ): повторное использование, приводящее к невыполнению главных ролевых обязанностей на работе, дома или в школе; повторное использование при физически опасных ситуациях; повторяющиеся правовые проблемы, связанные с веществом; и продолжающееся использование, несмотря на постоянные или повторяющиеся социальные или межличностные проблемы, вызванные или усугубленные веществом.
При применении критериев DSM-IV врач-клиницист должен установить, связана ли зависимость от психоактивных веществ с психологической зависимостью (т.е. имеется доказательство привыкания или абстиненции) или без психологической зависимости (т.е. нет доказательства привыкания или абстиненции). В дополнение, пациентов можно различным образом классифицировать в виде заявленной в настоящее время схемы злоупотребления или зависимости или в виде в ремиссии. Больных в ремиссии можно разделить на четыре подтипа - полная, ранняя частичная, длительная и длительная частичная - на основании того, встречались ли какие-либо из критериев злоупотребления или зависимости в течение каких-то временных рамок. Категорию ремиссии также можно использовать для пациентов, получающих терапию агонистами (например, метадоновую поддержку), или для пациентов, живущих в контролируемой среде без наркотиков.
Термин "опиоид" известен в данной области по отношению к психоактивному химическому выделению, например связыванию с опиоидными рецепторами, и используется соответственно в отношении к изобретению. Данные психоактивные химические вещества не ограничены природными алкалоидами, которые обнаружены, например, в смоле опиумного мака, которые называются "опиаты". Другими сло
вами, химические вещества, попадающие под термин "опиоид", включают в себя химические вещества, попадающие под термин "опиат". Опиоиды можно, например, классифицировать на i) природные опиаты (такие как, например, морфин, кодеин, тебаин, орипавин или сальвинорин A), ii) сложные эфиры морфи-новых опиатов (таких как, например, диацетилморфин (героин), никоморфин, дипропаноилморфин, де-зоморфин, ацетилпропионилморфин, дибензоилморфин или диацетилдигидроморфин); iii) полусинтетические опиоиды, созданные либо из природных опиатов, либо сложных эфиров морфина (такие как, например, гидроморфон, гидрокодон, оксикодон, оксиморфон, этилморфин или бупренорфин); iv) синтетические опиоиды (такие как, например, фентанил, петидин, леворфанол, метадон, трамадол или декстро-пропоксифен); и v) эндогенные опиоиды (такие как, например, эндорфины, энкефалины, динорфины, морфин и эндоморфины). Как таковой, термин "опиоид" может быть заменен любым из вышеуказанных веществ или классов веществ, подходящих под указанный термин. Соответственно, теперь можно успешно лечить поведение со злоупотреблением, с привлечением вышеуказанных веществ или классов веществ и симптомов, возникающих во время абстиненции последних у пациента.
В соответствии с изобретением "лечение симптомов" алкогольной и/или опиоидной абстиненции подразумевает указание на уменьшение интенсивности или снижение, предпочтительно устранение симптомов, связанных с алкогольной и/или опиоидной абстиненцией. Так как большинство указанных симптомов как таковых можно классифицировать как медицинское патологическое состояние или заболевание, в отношении симптомов используют термин "лечение". Как таковое, изобретение также относится к фармацевтической композиции изобретения для применения при лечении опиоидной и/или алкогольной абстиненции.
Симптомы алкогольной абстиненции являются известными в данной области и инициируются в результате уменьшения или прекращения употребления алкоголя после продолжительных периодов чрезмерного приема алкоголя. Абстинентный синдром возникает большей частью благодаря центральной нервной системе, находящейся в сверхвозбужденном состоянии (гипервозбудимость ЦНС; (Saitz et al., JAMA., 272(7):519-23 (1994)). Тяжесть алкогольного абстинентного синдрома может варьировать от умеренных симптомов, таких как умеренных нарушения сна и умеренная тревога, до очень тяжелой и жиз-неугрожающей, включая делирий, в частности зрительные галлюцинации в тяжелых случаях, и судороги (которые могут привести к смерти). Данные симптомы характерно возникают сразу после пробуждения вследствие падения концентрации алкоголя в крови во время сна. Тяжесть алкогольной абстиненции зависит от различных факторов, включая возраст, генетику и, наиболее важно, интенсивность потребления алкоголя и продолжительность времени, в течение которого индивидуум употреблял алкоголь и количество предыдущих детоксификаций. Симптомы включают в себя, например, волнение, алкогольный галлюциноз, потерю аппетита, тревогу, панические атаки, кататонию, спутанность, алкогольный делирий, деперсонализацию, депрессию, дереализацию, профузное потоотделение, понос, эйфорию, страх, желудочно-кишечное расстройство, головную боль, гипертензию, гипертермию, бессоницу, раздражительность, мигрень, тошноту и рвоту, сердцебиение, психоз, синдром рикошета фазы быстрого сна, беспокойство, эпилептические припадки и смерть, потоотделение, тахикардию, тремор и/или слабость. Данные симптомы нарастают, когда пациент, страдающий состоянием алкогольной зависимости, воздерживается от употребления алкоголя.
Симптомы опиоидной абстиненции являются известными в данной области (см., например, Dansou et al., Rev Prat., 62(6):837-41 (2012)). Физические симптомы включают в себя, например, тремор, спазмы, костную и мышечную боль, озноб, потоотделение, приапизм, тахикардию, зуд, синдром беспокойных ног, гриппоподобные симптомы, ринит, зевоту, чихание, рвоту, понос, слабость и/или акатизию; тогда как психологические симптомы могут содержать, например, дисфорию, беспокойство, тягу, тревогу, панические атаки, паранойю, бессоницу, головокружение, тошноту и/или депрессию.
Данные симптомы нарастают, когда пациент, страдающий состоянием опиоидной зависимости, воздерживается от введения самому себе или самой себе опиоидов.
В предпочтительном варианте осуществления композиции для применения изобретения указанная композиция подлежит введению в дозе, составляющей от приблизительно 18,5 до приблизительно 77,5 мг/кг в день.
Было показано, что подлежащая введению доза, как определено в данном варианте осуществления, в частности, в связи с предпочтительными вариантами осуществления композиции изобретения, т.е. с вариантами, предоставляющим особые соотношения экстрактов, приводит к желаемому лечебному действию способом, особенно подходящим как для врача-клинициста, так и пациента. Собственно также предусматриваются дозировки, составляющие приблизительно от 20 до 75 мг/кг в день, такие как от 25 до 70, от 30 до 70, от 35 до 70, от 40 до 65, от 45 до 60 или от 50 до 60 мг/кг в день. Более предпочтительными являются дозы, составляющие приблизительно (для каждого значения) 50, 55, 60 или 65 мг/кг в день и наиболее предпочтительно 50 мг/кг в день.
Как указано в данном документе выше, доза лекарственного вещества в целом регулируется лечащим врачом в зависимости от множества факторов. В связи с этим и в зависимости, например, от выбранной концентрации экстрактов композиции в момент введения может быть введено большее количество композиции изобретения, превышающее вышеуказанный диапазон, составляющий 77,5 мг/кг в день,
более чем на 2,5 мг, например (для каждого значения) более чем на 5, 7,5, 10, 15, 20, 25 мг или более чем на 50 мг. В качестве руководства для дозирования, общая суточная доза не должна превышать 60 мг композиции со средним соотношением экстрактов лекарственных веществ, составляющим 5:1, приблизительно с 20% неактивных вспомогательных веществ.
В соответствии с изобретением композиции по изобретению, содержащие указанный экстракт из а) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4-7,5:1, указанный экстракт из b) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1, указанный экстракт из с) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 5-7:1, и указанный экстракт из d) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 0,5-5:1, будучи представленными в композиции с соотношением, составляющим от приблизительно 0,5 до приблизительно 4, предпочтительно приблизительно 2,5 части указанного экстракта из а), от приблизительно 2,5 до приблизительно 3, предпочтительно приблизительно 3 частей указанного экстракта из b), от приблизительно 2,5 до приблизительно 5,25, предпочтительно приблизительно 2,5 части указанного экстракта из с) и от приблизительно 0,5 до приблизительно 3,75 частей указанного экстракта из d), вводили в дозе, составляющей от 20 до 70, более предпочтительно от 20 до 60, даже более предпочтительно от 20 до 40 и наиболее предпочтительно от 25 до 30 мг/кг в день. Также предусматриваются дозы, составляющие от 10 до 20 мг/кг в день, от 10 до 15 мг/кг в день и от 15 до 20 мг/кг в день.
Например, 600 мг (300 мг экстракта Raphanus (предпочтительно с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3:1), 180 мг экстракта Theobroma (предпочтительно с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 5:1), 60 мг экстракта Passiflora (предпочтительно с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 5:1) и 60 мг экстракта Crocus (предпочтительно с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 4:1)) предпочтительной композиции по изобретению можно вводить три раза в день, предпочтительно после еды, отдельно или в комбинации с любым из вспомогательных веществ, описанных в данном документе. Предпочтительно ежедневное введение дозы последней продолжается в течение 4-6 недель.
В более предпочтительном варианте осуществления композиции для применения изобретения, указанную дозу необходимо вводить по меньшей мере в течение двух недель.
Было показано, что период лечения, как определено в данном варианте осуществления, в частности в связи с предпочтительными вариантами осуществления композиции по изобретению, т.е. с вариантами, предоставляющими конкретные соотношения экстрактов, приводит к желаемым результатам лечения способом, особенно подходящим как для врача-клинициста, так и для пациента. Однако также предусматриваются периоды лечения, составляющие по меньшей мере (для каждого значения) 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 дней или по меньшей мере 17 дней, 3 недели, 4 недели или по меньшей мере 5 недель или более. Как можно представить и как указано в данном документе выше, период лечения, а также доза лекарственного вещества в общем регулируются лечащим врачом в зависимости от множества факторов. В связи с этим и в зависимости, например, от выбранной концентрации экстрактов в композиции при введении для достижения желаемого результата лечения может быть целесообразна и эффективна стратегия более длительного периода лечения, например при применении низких концентрации экстрактов. Также периоды лечения могут варьировать на основании установленного уровня зависимости или злоупотребления алкоголем и/или опиоидами: в целом, чем меньше указанный установленный уровень, тем меньше период введения. В большинстве случаев злоупотребления или зависимости от опиоидов и/или алкоголя введение композиций, как определено в данном документе выше, в частности в дозировках, указанных выше, в течение по меньшей мере от двух до четырех недель является достаточным для лечения. Предпочтительно злоупотребление или зависимость от алкоголя лечат посредством введения композиции изобретения в течение по меньшей мере приблизительно 20 дней, более предпочтительно по меньшей мере 25, например 30 дней.
В соответствии с изобретением и предпочтительно в связи с композициями по изобретению, содержащими указанный экстракт из а) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 47,5:1, указанный экстракт из b) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 3-8:1, указанный экстракт из с) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 5-7:1, и указанный экстракт из d) с соотношением лекарственное средство-экстракт, составляющим 0,5-5:1, представленные в композиции с соотношением, составляющим от приблизительно 0,5 до приблизительно 4, предпочтительно приблизительно 2,5 части указанного экстракта из а), от приблизительно 2,5 до приблизительно 3, предпочтительно приблизительно 3 частей указанного экстракта из b), от приблизительно 2,5 до приблизительно 5,25, предпочтительно приблизительно 2,5 части указанного экстракта из с) и от приблизительно 0,5 до приблизительно 3,75 частей указанного экстракта из d), и вводимые в дозе, составляющей от 20 до 70, более предпочтительно от 20 до 60, даже более предпочтительно от 20 до 40 и наиболее предпочтительно от 25 до 30 мг/кг в день, указанное введение поддерживают в течение по меньшей мере (для каждого значения) 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 дней или по меньшей мере 17 дней, 3 недели, 4 недели или по меньшей мере 5 недель.
В другом варианте осуществления изобретение относится к способу получения композиции, содержащей экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, и экстракт растения, относящегося к роду The
obroma, включающее стадии: а) экстрагирования, по меньшей мере, воздушных корней, семян и/или луковиц растения Raphanus гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем; b) экстрагирования, по меньшей мере, плодов растения Theobroma гидрофильным и/или среднеполярным растворителем и с) объединения экстракта стадии а) с экстрактом стадии b) с получением посредством этого указанной композиции, содержащей экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, и экстракт растения, относящегося к роду Theobroma.
Определения, комбинации и конкретные параметры для экстрагирования, указанные в данном документе выше, также применяются с соответствующими поправками к данному варианту осуществления и его предпочтительным модификациям, указанным в данном документе ниже.
В предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению способ содержит дополнительно стадии из d) экстрагирования, по меньшей мере, цветка растения, относящегося к роду Passiflora, гидрофильным, среднеполярным и/или липофильным растворителем; и/или е) экстрагирования, по меньшей мере, цветка растения, относящегося к роду Crocus, гидрофильным, среднеполярным и/или ли-пофильным растворителем, перед стадией с), причем в этом случае экстракт стадии d) и/или экстракт стадии е) объединяется/объединяются с указанными экстрактами стадии а) и стадии b) или после стадии с), причем в этом случае экстракт стадии d) и/или экстракт стадии е) объединяется/объединяются на дополнительной стадии f) с композицией стадии с), с получением посредством этого композиции, содержащей экстракт растения рода Raphanus, экстракт растения рода Theobroma, экстракт растения рода Pas-siflora и/или экстракт растения рода Crocus.
Как указано в данном документе выше, в дополнительном предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению, композиции для применения изобретения или способа по изобретению растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; и/или растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao.
Единственные экстракты, а также их комбинации, такие как комбинации, образующие композицию изобретения, как описано в данном документе выше, предпочтительно хранят в герметичных контейнерах и защищают от солнечного света, либо посредством хранения в темных местах, либо в контейнерах, которые препятствуют попаданию света в указанные контейнеры, предпочтительно при температурах от 4 до 8°С. Предпочтительно контейнеры являются непроницаемыми для воздуха и не содержат кислород. Комбинирование экстрактов предпочтительно проводят в высушенном состоянии каждого экстракта. Как ожидается, минимальный срок годности составляет 2 года для текучих (например, спиртовых) экстрактов и по меньшей мере 3 года для сухих экстрактов.
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению, как также указано выше, композиции для применения изобретения или способа изобретения растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnate; и/или растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.
Растения видов Raphanus sativus, Theobroma cacao, Passiflora incarnata и Crocus sativus являются особенно предпочтительными растениями, из которых можно получить экстракты, образующие композицию по изобретению и экстракты которых используют в композициях, приведенных в примерах в данном документе ниже.
Что касается вариантов осуществления, охарактеризованных в данном описании, в частности в формуле изобретения, предполагется, что каждый вариант осуществления, указанный в зависимом пункте формулы изобретения, объединен с каждым вариантом осуществления каждого пункта формулы изобретения (независимого или зависимого), от которого зависит указанный зависимый пункт формулы изобретения. Например, в случае перечисления в независимом п.1 формулы изобретения 3 альтернатив А, В и С, перечисления в зависимом п.2 формулы изобретения 3 альтернатив D, Е и F, и перечисления в п.3 формулы изобретения, зависящем от пп.1 и 2, 3 альтернатив G, Н и I, должно быть понятно, что в описании однозначно раскрыты варианты осуществления, соответствующие комбинациям А, D, G; A, D,
H; A, D, I; A, E, G; A, E, H; A, E, I; A, F, G; А, F, H; A, F, I; В, D, G; В, D, Н; В, D, I; В, Е, G; В, Е, Н; В, E, I; В, F, G; В, F, Н; В, F, I; С, D, G; С, D, Н; С, D, I; С, E, G; С, Е, Н; С, Е, I; С, F, G; С, F, Н; С, F, I, за исключением случаев, когда конкретно указано иное.
Аналогичным образом, а также в тех случаях, когда в независимых и/или зависимых пунктах не перечисляются альтернативы, должно быть понятно, что если зависимые пункты снова ссылаются на множество предшествующих пунктов, тогда считается, что однозначно раскрыта любая комбинация охватываемых объектов изобретения. Например, в случае независимого п.1, зависимого п.2, снова ссылающегося на п.1, и зависимого п.3, снова ссылающегося на оба пп.2 и 1, следует, что ясно и однозначно раскрыта комбинация объектов изобретения пп.3 и 1, как и комбинация объектов изобретения пп.3, 2 и 1. В случае, если представлен дополнительный зависимый п.4, который ссылается на любой из пп. с 1 по 3, следует, что ясно и однозначно раскрыта комбинация объектов изобретения пп.4 и 1, пп.4, 2 и 1, пп.4, 3 и 1, а также пп.4, 3, 2 и 1.
Умозаключения выше применимы с соответствующими поправками ко всем присоединенным пунктам формулы изобретения. Фигуры демонстрируют:
Фиг. 1 - дозозависимый эффект вводимой перорально композиции экстрактов при интраперитоне-альном введении морфина или героина для восстановления двигательного поведения у крыс. Каждый элемент данных представляет среднее (+ стандартное отклонение) пяти крыс; * существенные различия между базовым уровнем и каждой обработкой р <0,001; t существенное различие между применяемой дозой и меньшей дозой (р <0,001);
фиг. 2 - % зависимость уменьшения морфина или героина после перорального введения композиции экстрактов. Каждый элемент данных представляет среднее (+ стандартное отклонение) пяти крыс; * существенные различия между базовым уровнем и каждой обработкой р <0,001; t существенное различие между применяемой дозой и меньшей дозой (р <0,001);
фиг. 3 - показатель HIC для мышей, подвергаемых воздействию этанола в течение 72 ч. Мышей обрабатывали на 1 и 4 ч различными дозами экстракта или среды и через некоторое время регистрировали показатели HIC в течение 64 ч. Показатели HIC были значительно меньше (р <0,001) в группах обработки экстрактом 40 или 60 мг/кг в течение первых 12 ч;
фиг.4 - после длительного воздействия этанола у мышей регистрировали активность с краткими эпизодами веретен (BSE). Мыши, обработанные 40 и 60 мг/кг композиции экстрактов, имеют значительно меньше BSE от 2 до 72 ч после этаноловой абстиненции, чем мыши, обработанные средой. Активность BSE для мышей, обработанных 40 или 60 мг/кг композицией экстракта, была значительно меньше (р <0,001), чем для мышей, обработанных средой.
Примеры, иллюстрирующие изобретение
Пример 1. Модель самостоятельного введения.
1.1. Материал и методы.
1.1.1. Композиция экстрактов.
Композицию экстрактов, применяемую в примере 1 и во всех других примерах, получали следующим образом.
2,5 ч. экстракта Raphanus sativus, при этом указанный экстракт получали с помощью экстрагирования следующим образом:
добавляя 500 мл 30% смеси метанол/вода к 90 г высушенного порошкового редиса в стеклянном стакане,
нагревая раствор до 40-50°С в течение 30 мин,
фильтруя раствор и выпаривая фильтрат в вакууме до высушивания,
лиофилизируя высушенный остаток в течение 24 ч (полученное в результате количество нативного экстракта составляло 36,3 г сухого экстракта),
добавляя 40% эксципиентов (37 ч. мальтодекстрина и 3 ч. диоксида кремния) в целях стандартизации для того, чтобы стандартизировать экстракт с содержанием по меньшей мере 1,5% общего количества флавоноидов.
3 ч. экстракта Theobroma cocoa, при этом указанный экстракт получали с помощью экстрагирования следующим образом:
добавляя 1 л очищенной воды к 200 г высушенных порошковых плодов cacao в стеклянном стакане,
нагревая раствор между 70 и 80°С в течение 45 мин,
фильтруя раствор и выпаривая фильтрат до объема, равного 100 мл,
замораживая и лиофилизируя в течение 24 ч,
добавляя эксципиенты для стандартизации экстракта до содержания мин, концентрации проциани-динов.
2,5 ч. экстракта Passiflora incarnata, при этом указанный экстракт получали с помощью экстрагирования следующим образом:
добавляя 750 мл метанола к 175 г высушенного порошкового страстоцвета в стеклянном стакане, нагревая раствор между 40 и 50°С в течение 30 мин, фильтруя раствор и выпаривая досуха, лиофилизируя остаток в течение 24 ч,
добавляя эксципиенты для стандартизации экстракта до содержания мин, концентрации флавонои-
дов.
1,5 ч. экстракта Crocus sativus, при этом указанный экстракт получали с помощью экстрагирования следующим образом:
добавляя 300 мл этанола к 10 г высушенных порошковых цветков шафрана в стеклянном стакане, нагревая раствор между 30-45°С в течение 30 мин, фильтруя раствор и выпаривая досуха, лиофилизируя остаток в течение 24 ч,
добавляя эксципиенты для стандартизации экстракта до содержания мин, концентрации сафраналя, высушенные экстракты перемешивали в смеси воды и оливкового масла.
1.1.2. Устройство внутривенного самостоятельного введения.
Реакции на каждый из двух рычагов (установленных через 15 см на передней стенке каждой опе
рантной тестовой клетки) регистрировали на IBM-совместимом компьютере с Med Associates interface. Система внутривенного самостоятельного введения состояла из полиэтиленовых силиконовых канюль, выполненных согласно конструкции Weeks (1972) (Weeks J.R. Long-term intravenous infusion. In: Myers RD, editor. Methods in Psychobiology. Vol. 2. Academic Press; New York: 1972. pp. 155-168), шлеек и шарниров Instech и инфузионных насосов Harvard Apparatus. Формирование реакции нажатия на рычаг первоначально осуществляли с помощью тренировки крыс при нажатии на рычаг для воды. Затем канюли имплантировали в наружную яремную вену согласно методикам, описанным Weeks (1972) (см. выше). Тестирование самостоятельного введения начали с 16 ч ночной сессии с последующими дневными 1 ч сессиями, 6 дней в неделю. Реакция нажатия на рычаг давала вливание 10 мл раствора лекарственного вещества (0,01 мг сульфата морфина) приблизительно за 0,2 с или вливание 50 мл раствора лекарственного вещества.
1.1.3. Методика "крестообразный лабиринт".
Устройство было изготовлено из черного плексигласа и состояло из двух дорожек, которые пересекались в центре под прямыми углами. Каждый рукав лабиринта имел размер 40х 10 см (длина на ширину). Два рукава, которые располагались друг напротив друга, имели стенки, которые имели размер 40 см в высоту (закрытые рукава), тогда как другие два рукава не имели стенок (закрытые рукава). Лабиринт был поднят на 52 см над полом. Он находился в темной комнате для того, чтобы освещались только открытые рукава, каждое своей собственной 40 Вт лампой накаливания. Животных помещали в центре лабиринта, а количество входов в рукав каждого типа учитывали (при этом вход определяют все четыре лапы в рукаве) как время, проведенное в рукаве каждого типа. Тест завершали через 5 мин после того, как животное помещали в центре. Рассчитывали следующие показатели: общее количество заходов в рукав, заходы в открытый и закрытый рукава, время в открытом и закрытом рукавах и процентная доля общего количества времени, проведенного в открытом рукаве.
Изменения общего количества заходов в рукав отражают общий индекс активности, тогда как изменения процентного показателя составляют индекс тревоги. Повышенный процент времени в открытом рукаве отражает анксиолитическое состояние, в то время как пониженный процент времени в открытом рукаве отражает анксиогенное состояние. Передвижения животных регистрировали посредством применения потолочной видеокамеры и кассетного видеомагнитофона. В последующем их подсчитывал "слепой" наблюдатель.
1.1.4. Микродиализное исследование.
Под анестезией пентобарбиталом (50 мг/кг интраперитонеально) крысам стереотаксически имплантировали направляющую канюлю для микродиализа (СМА: 8309010; Acton, MA) в центр удовольствия и двусторонние направляющие инъектора на 0,5 мм над интерпедункулярным ядром (Paxinos and Watson, 1986, The rat brain in stereotaxic coordinates, Ed 2. (Academic Press, London)). У животных контролировали правильное восстановление, но все остальное оставили нетронутым в течение 4 дней после операции. После полудня перед микродиализным экспериментом in vivo крыс помещали в кубическую микродиализную камеру со свободным доступом к пище и воде. Крыс ненадолго анестезировали бревиталом (45 мг/кг интраперитонеально), и через направляющие канюли вводили диализные зонды. Искусственную цереброспинальную жидкость, содержащую 146 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 1,2 мМ CaCl2 и 1,0 мМ MgCl2 непрерывно доставляли с помощью шприцевого насоса Harvard со скоростью потока, равного 1 мл/мин. На следующий день начинали сбор перфузатов. Двадцатиминутные фракции собирали в пробирки, содержащие 2,0 мл 1,1 М раствора хлорной кислоты (содержащего 50 мг/л EDTA и 50 мг/л метабисульфита натрия). Через 2 ч после базовых сборов 18-МС (10 мг) или среду местно вводили в интерпедункулярное ядро, и крысы получали дозу морфина (5 мг/кг интраперитонеально) или солевой раствор. Затем в течение 3 ч продолжали сбор образцов диализатов. По завершении эксперимента крыс умерщвляли с помощью передозировки пентобарбитала. Каждый мозг извлекали, замораживали и нарезали тонкими слоями в криостате. Идентифицировали следы, оставленные зондами, и определяли их точное положение посредством ссылки на атлас Paxinos и Watson (1986) (The rat brain in stereotaxic coordinates, Ed 2. (Academic Press, London)).
Образцы диализатов анализировали на дофамин, дигидроксифенилуксусную кислоту (DOPAC) и гомованилиновую кислоту (HVA) посредством жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД) с электрохимическим детектором. Система ЖХВД состояла из пробоотборника ESA, системы доставки растворителя ESA, колонки С18. Подвижную фазу, состоящую из 0,075 ммоль дигидрофосфата натрия, моногидрата, 0,0017 ммоль октансульфокислоты и 25 ммоль EDTA в 10% ацетонитриле для ЖХВД, довели до рН 3,0 с помощью фосфорной кислоты. Скорость потока установили на 0,53 мл/мин.
1.1.5. Микроинъекционное исследование.
Под анестезией этаниналом натрия (50 мг/кг) крысам стереотаксически имплантировали двусторонние измерительные направляющие инъектора (Plastics One, Roanoke, VA, USA) на 0,5 мм выше ин-терпедункулярного ядра (Paxinos and Watson, 1986, см. выше). В направляющие инъектора ввинчивали обтюраторы. Направляющие инъектора прикрепляли к черепу с применением винтов из нержавеющей стали и краниопластического цемента. Крыс возвращали в отдельные клетки и обеспечивали пищей и водой без ограничения. Клетки содержали на нагревающем коврике в течение ночи, а на следующий
день крыс возвращали в помещение колонии. Крысам обеспечивали возможность восстановления по меньшей мере 4-5 дней после операции перед использованием в микроинъекционных исследованиях. Композицию (или среду) морфина и экстракта вводили локально в интерпедункулярное ядро с применением инфузионного насоса (Harvard Apparatus); все подобные обработки вводили в объеме 1 мл во время 1 мин инфузии для предотвращения заброса через направляющую канюлю; инъекционную канюлю удерживали на месте в течение дополнительной минуты после проведения обработки. 1.2. Результаты.
Композиция экстрактов уменьшала самостоятельное введение злоупотребляемого морфина; при 40 мг/кг данное действие в целом длилось в течение 18-64 ч. По всей видимости, смесь экстрактов (40 мг/кг) производила сдвиг вниз, без всякого смещения влево или вправо, по всей кривой зависимости от разовой дозы инфузии самостоятельно вводимого лекарственного вещества, показывая, что была снижена подкрепляющая эффективность (т.е. морфин и другие злоупотребляемые вещества, например никотин, были менее подкрепляющими в присутствии композиции экстрактов). Также следует отметить, что смесь экстрактов обладает потенциалом уменьшения самостоятельного введения. Смесь экстрактов продемонстрировала очень хорошую активность на опиоидных рецепторах.
Пример 2. Исследование двигательного поведения.
2.1. Материал и способы.
В эксперименте использовали крыс, весящих 250 г ±10%. Каждая группа состояла из 5 животных.
Тест вращающегося стержня представляет собой тест, используемый в данном документе для оценки двигательной координации у крыс после индуцирования зависимости от морфина или героина. Реакция крыс вырабатывается после введения 0,04 мг/кг морфина, 0,04 мг/кг героина после инфузии 10 мл раствора лекарственного вещества (0,01 мг морфина сульфата) приблизительно за 0,2 с или инфузии 50 мл раствора лекарственного вещества (0,015 мг героина сульфата) в той же концентрации.
Для оценки действия экспериментального лечения, провели эксперименты, когда базовый уровень норм введения стабилизировали в пределах 10% колебания от одного дня до следующих 5 дней. Потребовалось 20 дней тестирования, чтобы показать зависимость и согласованную двигательную производительность с применением теста производительности вращающимся стержнем. Дозы морфина или героина вводили крысам интраперитонеально ежедневно с целью сбалансировать поведение. После перораль-ного введения экстракта, дозы морфина или героина регулировали с целью сбалансировать двигательную координацию, аналогичную "нормальному" состоянию.
Измерения производительности двигательного поведения проводили с применением коммерчески разработанного и сконструированного ускоряющегося вращающегося стержня (Rotamex). Двигательную координацию количественно определяли, как способность животного оставаться на месте на ускоряющемся вращающемся стержне. Перед дозированием лекарственного вещества, крыс постепенно тренировали оставаться на стержне посредством предоставления им шести-восьми 3-минутных тренировочных периодов в день. Крыс тренировали с увеличивающейся скоростью стержня, составляющей 3, 6, 9, 12 и 15 об/мин в течение периодов, равных 3 мин. Чтобы стимулировать животных оставаться на стержне на полу устройства обеспечивали электрический шок (2 мА, переменный ток). Время падения животного автоматически регистрировали за счет выявления с помощью фотоэлемента. Отдельное животное считалось тренированным, когда достигался критерий двух последовательных испытаний при 15 об/мин, когда оно оставалось на стержне в течение полной 3-минутной сессии. В данных экспериментах использовали только тех крыс, которые соответствовали данному критерию после 2 дней тренировок. Все тестирование проводили по меньшей мере через 2 ч после заключительного тренировочного испытания. Лекарственные вещества давали посредством интраперитонеальной инъекции за 30 мин перед сеансом тестирования. Животных помещали на стержень в то время, как он вращался при 10 об/мин. При размещении скорость вращения стержня увеличивали до нормы 8,3 об/мин. Общая возможная продолжительность сеанса тестирования составляла 3 мин. Для каждого животного регистрировали время падения и обороты в минуту в момент падения.
Все данные представляли, как среднее ± стандартное отклонение (SS) либо в виде мг/кг либо в %, и оценивали посредством применения однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом (тестом Тьюки) (95% достоверность) для множественных сравнений (SPSS version 17).
Значение Р меньше чем 0,05 ( <0,05) считается статистически значимым.
2.2. Результаты и заключения.
Повышение доз введения композиции экстрактов значительно уменьшало (р <0,001) дозы морфина и героина с целью стабилизировать двигательную координацию крыс согласно тесту производительности вращающегося стержня (фиг. 1). Данное последнее воздействие было дозозависимым, а процентное значение уменьшения морфина или героина значительно уменьшалось при более высоких дозах (фиг. 2). Значения 50% уменьшения зависимости составляли 9,8 и 12,5 мг/кг для героина и морфина соответственно (фиг. 2). Результаты показывают, что экстракт уменьшал зависимость от морфина и героина зависимым от дозы образом, но не показывая превосходства какого-либо из используемых опиоидных наркотиков.
Пример 3. Гипервозбудимость ЦНС, связанная с алкогольной абстиненцией на мышиной модели зависимости от этанола.
3.1. Материалы и способы. Животные.
В данных экспериментах использовали взрослых самцов мышей (в возрасте 80-90 дней). В начале экспериментов мыши весили 25-30 г. Подготовка и введение экстракта.
Композицию экстрактов растворяли в солевом растворе и солевой раствор отдельно применяли в качестве среды. Композицию экстрактов вводили перорально. Воздействие этанолом и измерение.
На мышей хронически воздействовали паром этанола в плексигласовых ингаляционных камерах (60x36x60 см3). Кратко, этанол (95%) испаряли посредством прохождения воздуха через аэратор, погруженный в этанол. Пар этанола смешивали со свежим воздухом и доставляли в камеры со скоростью 10 л/мин, которая поддерживала концентрацию этанола в камере в диапазоне 10-13 мг/л воздуха. Перед поступлением в этаноловые камеры инициировали интоксикацию посредством введения этанола (1,6 г/кг; 8% м/о; внутрибрюшинно), а концентрацию этанола в крови (ВЕС) стабилизировали посредством введения ингибитора алкогольдегидрогеназы пиразола (1 ммоль/кг). Мыши, содержавшиеся в контрольной (воздушной) камере, получали инъекции солевого раствора и пиразола. Условия содержания в ингаляционных камерах были идентичны условиям в помещении колонии. Тотчас после извлечения мышей из ингаляционных камер собирали образцы крови для определения ВЕС. Концентрацию этанола в камере определяли ежедневно посредством сбора образцов воздуха (2 мл) газонепроницаемым шприцом через порт в стенке камеры. Затем образцы переносили в пробирки Venoject(tm) для последующего анализа с применением методики количественного ферментного спектрофотомертического анализа. Концентрацию этанола в камерах выражали в мг/л воздуха. Образцы крови собирали из ретроорбитального синуса гепаринизированной капиллярной трубкой. Образцы центрифугировали на протяжении фазы разделения и 5 мкл плазмы инъецировали в Analox Instrument analyzer (Lunenburg, MA). ВЕС (в мг/дл) регистрировали посредством измерения потребления кислорода, генерируемого за счет окисления этанола до ацеталь-дегида и перекиси водорода этанолоксидазой.
Индуцированная манипулированием судорога (HIC).
Мышей случайным образом распределяли по условиям обработки этанолом, а затем разделили на несколько групп (контрольную и зависящие от концентрации группы). На мышей непрерывно в течение 72 ч воздействовали паром этанола в ингаляционных камерах. При извлечении из ингаляционных камер собирали образцы крови для определения концентрации этанола в крови (ВЕС). На 1 и 4 ч после этано-ловой абстиненции мыши получали пероральное введение композиции экстрактов (0, 20, 40 или 60 мг/кг). Судорогу, индуцированную последующей алкогольной абстиненцией, регистрировали как реакцию в виде индуцированной манипулированием судороги (HIC). Было доказано, что реакция HIC представляет собой чувствительный и надежный показатель гипервозбудимости ЦНС, связанной с этаноло-вой абстиненцией.
Электроэнцефалографическая активность.
Для оценки электрографических измерений этаноловой абстиненции использовали отдельные группы мышей. Мышам стереотаксически имплантировали постоянные вживляемые электроды, как опи-санно ранее. Кратко, монополярные полимикроэлектроды (120 мм) из нержавеющей стали имплантировали в гиппокамп (АР: -1,65 мм; L: 1,5 мм; V: -2,25 мм), миндалевидное тело (АР: -0,7 мм; L: -2,25 мм; V: -5,25 мм) и зрительную кору (АР: -3,0 мм; L: -2,0 мм), наряду с винтом из нержавеющей стали в область носа (АР: +4,0 мм; L: +0,5 мм) для применения в качестве контрольного электрода. Координаты даны относительно темени. Электроды соединяли с четырехконтактной вилкой MicroTech и фиксировали на черепе с применением зубного акрилового светоотверждаемого полимерного композита. Через три-пять дней после операции регистрировали базовую электроэнцефалографическую (ЭЭГ) активность в результате свободного передвижения мышей каждые 2 ч в течение 8-часового периода. На следующий день мышей помещали в ингаляционные камеры, где они получали 72-часовое непрерывное воздействие паров этанола. В 1 и 4 ч после этаноловой абстиненции мыши получали перорально композицию экстрактов (0, 40 или 60 мг/кг). Данные ЭЭГ собирали во время абстиненции с дополнительными образцами, регистрируемыми на 24, 32, 48 и 72 ч после абстиненции. Сессии регистрации проводили в электроэкра-нированных камерах, при этом кабели электродов соединяли с усилителями Grass. Данные спонтанной ЭЭГ отцифровывали посредством аналогово-цифрового преобразователя CED и серии электрографической активности высокого напряжения, известные как краткими эпизодами веретен (BSE), идентифицировали с помощью компютерной программы (Spike2). Кратко, автоматический анализ приводил к идентификации и классификации всплесков активности ЭЭГ с частотой между 7 и 9 Гц и продолжительностью по меньшей мере 1 с. Данные представлены в виде процентного значения активности BSE (т.е. кумулятивной продолжительности всех событий BSE относительно полной продолжительности каждого сеанса регистрации).
Данные анализа.
Данные были представлены в виде баллов HIC или активности BSE, и данные между группами анализировали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим постериорным тестом. Значимым считался Р <0,05.
Результаты.
Композицию экстрактов вводили на 1 и 4 ч после этаноловой абстиненция. Экстракт в дозах 40 и 60 мг/кг значительно уменьшал (Р <0,001) баллы HIC по сравнению со средой. Который обрабатывали мышей (фиг. 3). Данное уменьшение наблюдали во время первых 12 ч после абстиненции. Доза экстракта 20 мг/кг показывала картину снижения баллов HIC; однако это было не значительно. Более того, отсутствовали различия в баллах HIC между группами, обрабатываемыми 40 и 60 мг/кг (фиг. 3). Аналогичным образом, композиция экстрактов при 40 или 60 мг/кг значительно уменьшала активность BSE зависимым от времени образом (фиг. 4). Максимальное уменьшение активности BSE наблюдалось в течение первых 36 ч после алкогольной абстиненции. Однако спустя 36 ч активность BSE в группе, обработанной средой, начинала падать. В итоге, обработка композицией экстрактов повторных абстиненции была эффективной для остановки развития чувствительности к абстиненции, наблюдаемой у мышей, обработанных средой.
Пример 4. Лечение алкогольной зависимости у пациентов с депрессивным расстройством.
Композиция экстрактов обладает факторами ингибиторов обратного захвата серотонина. Таким образом, сравнивали алкогользависимых пациентов с сопутствующим большим депрессивным расстройством.
4.1. Способы.
В муниципальной алкогольной клинике четверым алкогользависимым пациентам с сопутствующим большим депрессивным расстройством давали композицию экстрактов (40 мг/кг) в малом пилотном исследовании. Во время 6-недельного периода исследования пациенты продолжали получать свою стандартную терапию в клинике. Абстиненция происходила не обязательно, но стимулировалась. Визиты пациентам наносились еженедельно в тчение первых двух недель, а затем на 4 и на 6 неделях. Показателями результатов были тест на выявление нарушений, связанных с употреблением алкоголя (AUDIT), шкала обсессивного компульсивного влечения к алкоголю (OCDS) и ежедневное употребление алкоголя.
4.2. Участники исследования.
Три мужчины и одна женщина в возрасте от 31 до 47 лет, добровольно стремящиеся к амбулаторному лечению алкогольных проблем в двух иорданских муниципальных алкогольных клиниках. Пациенты с сильной степенью пьянства в анамнезе (в серднем четыре или более употреблений алкогольных напитков ежедневно для мужчин и три или более употреблений алкогольных напитков ежедневно для женщин) в течение по меньшей мере пяти лет и с серьезной депрессией, определяемой с помощью шкалы оценки депрессий Бека II (BDI-II> 16), и которые были заинтересованы в добровольном участии в исследовании, были рекомендованы их лечащим врачом к скринингу врачом, проводящим исследование. Врач, проводящий исследование, опрашивал пациентов (психиатр LM) по плану. Время после последней предшествующей детоксификации в стационаре должно было составлять по меньшей мере четыре недели. В дополнение подходящие пациенты в настоящее время должны были пребывать в депрессивном эпизоде, продолжающемся в течение более двух недель. Критерии исключения включали в себя зависимость от применения других веществ, выявляемых посредством анализа мочи (амфетамин, бензодиазе-пины, кокаин, тетрагидроканнабинол и опиаты), шизофрению или другие психотические расстройства и биполярное расстройство I и II, острый риск суицида, беременность или грудное вскармливание, тяжелая нелеченная соматическая патология или серьезное нарушение работы печени и психическая недееспособность. Допускались другие лекарственные средства, предписанные лечащими врачами участников, за исключением других антидепрессантов. Все пациенты были иорданцами. Средняя продолжительность представленного депрессивного периода составляла 22 месяца. От всех пациентов, участвующих в исследовании, получали информированное согласие.
4.3. Дизайн исследования.
Первоначально скринировали четырех пациентов. Для подтверждения диагнозов MDD и алкогольной зависимости проводили скрининговое интервью (SCID). Пациенты заполняли опросники, включая шкалу обсессивного компульсивного влечения к алкоголю (OCDS; Anton RF: Obsessive compulsive aspects of craving: development of Obsessive Compulsive Drinking Scale, Addiction 2000, 95: (211-217)) и тест на выявление нарушений, связанных с употреблением алкоголя (AUDIT; Saunders JB et al., 1993, Development of the alcohol Use disorders identifiation test (AUDIT): WHO collaborative project on early detection of persons with harmful alcohol consumtion II, Addition 1993, 88(6): 791-804), AUDIT-QF (Aalto M et al., 2006, Alcohol Clin Exp. Res., Effectiveness of structuted questionnaires for screening heavy drinking in middle aged women, 30(11): 1884-1888), и AUDIT-3 (Gual et al., 2002, Alcohol (37(6):591-596, Audit-3 и Audit-4: Effectiveness of two short forms of the alcohol) использовали для подробного анализа потребления спиртных напитков. Регистрацию теста на выявление нарушений, связанных с употреблением алкоголя, употреблением в течение 6-недельного периода лечения проводили при ежедневном персональном употреблении алкогольных напитков в течение всех дней.
Подходящие пациенты перорально получали композицию экстрактов 40 мг/день. Пациентов инструктировали принимать лекарство исследования по утрам. Пациентам позволялось звонить врачу, проводящему исследование, в любое время. Если пациент не появлялся в запланированное посещение, предлагалось новое посещение врача.
В течение 6-недельного периода лечения пациенты возвращались в место исследования на 2,4±2 неделях и 6±2 неделях для сбора данных и для проверки и раздачи лекарств. В каждое посещение из дневника приема лекарств регистрировали ежедневное употребление алкогольных напитков и прием лекарства исследования с предыдущего посещения. Прием лекарства исследования контролировали посредством подсчета пилюль из возвратной используемой бутылки. Результаты регистрировали в конкретные недели: OCDS (0,2,4 и 6 недели); AUDIT (0, 2 и 6 недели). Клинические лабораторные тесты (MCV, AST, ALT, CDT, и GGT) брали в начале исследования и повторяли на 2, 4 и 6, неделях для обеспечения надежности приема лекарств. Анализы крови и дыхания на алкоголь не выполняли, но если пациент явно находился в интоксикации, предлагалось новое посещение врача.
Статистический анализ.
Статистический анализ всех первичных и вторичных результатов проводили с помощью независимого источника.
4.4. Результаты.
Базовый AUDIT и анамнез употребления алкоголя аналогичны в баллах AUDIT со снижением от базового уровня, с 27,6±6,3 до 12,47±7,9 в группе композиции экстрактов (40 мг/кг). Общее снижение было весьма значительным (р <0,0001).
Значительно снизилось употребление алкоголя, измеряемое по показателям AUDIT QF (количество-частота): композиция экстрактов (40 мг/кг) с 6,1±1,4 до 3,7±2,3 и с 6,0±1,5 до 4,1+2,1 (р <0,0001). Зависимость эффекта лечения от времени была незначительной. Количество дней тяжелого употребления алкогольных напитков, измеряемых по показателю AUDIT-3, также значительно уменьшилось: для смеси экстрактов 40 мг/кг с 2,7±0,9 до 1,6±1,1 и с 3,0±0,8 до 2,2±1,1 (р> 0,0001). Зависимость эффекта лечения от времени была незначительной.
4.5. Суть результатов.
Значительно снизилось употребление алкоголя, измеряемое по показателям AUDIT QF (количество-частота) у тех людей, которым давали композицию экстрактов.
Пример 5. Экстракт Raphanus повышает концентрации дофамина в мозге у крыс. Материалы и методы.
2.1. Экспериментальные животные.
На всем протяжении исследования использовали самцов крыс Wistar (250-300 г. Amman-Иордания) (8 крыс для каждого эксперимента). Животных помещали в группы по 4/клетку со световым циклом 12/12 (свет включали в 07.00 утра), с пищей без ограничения и доступной водой. Животных случайным образом распределяли в различные группы эксперимента. Все эксперименты проводили в соответствии со стандартными этическими руководствами и утверждали в местном университетском комитете по этике медицинского комитета по использованию и уходу за животными, 81/021, 10 июля 2011 года (Petra University, Amman, Иордания)).
2.2. Лекарственные вещества.
Флуоксетин гидрохлорид [N-метил-3-[(4-трифторметил)фенокси]-3-фенилпропиламин гидрохлорид] и дезипрамин гидрохлорид [10-11-дигидро^-метил-5Н-дибенз^)[Ъ,^азепин-5-пропанамин гидрохлорид] (TOCRIS Bioscience, UK) растворяли в стерильном солевом растворе и вводили интраперитоне-ально в концентрации, равной 1 мл/кг; экстракт получали непосредственно перед использованием. Контрольным группам вводили солевой раствор.
2.3. Растительное сырье.
Используемый экстракт Raphanus sativus получали в Иордании. Для получения экстракта 100 г высушенных и измельченных рылец экстрагировали с 1000 мл дистилированной водой посредством мацерации. Экстракт сушили при 35-40°С, и результатом экстрагирования было 23 мг лиофилизированного порошка на 100 мг сушеных рылец. Экстракт растворяли в нормальном солевом растворе и немедленно вводили животным.
2.4. Подготовка мозга.
Через тридцать минут после инъекции лекарственного вещества и/или экстракта животных умерщвляли в CO2 коробе, обезглавливали с помощью гильотины, и специалист извлекал их мозг менее чем за минуту. Мозг гомогенизировали в пробирке Фалькона, содержащей 10 мл прохладного (0°С) стерильного солевого раствора, и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин при 4°С. Супернатант использовали для последующего выявления нейротрансмиттеров с помощью ИФА. На основании предыдущих исследований было выбрано интервальное время, равное 30 мин; данное время считалось достаточным для действия экстракта.
2.5. Статистический анализ.
Данные представлены в виде среднего ± стандартная ошибка среднего (SEM) концентрации ней-
ротрансмиттеров. Однофакторный дисперсионный анализ (one-way ANOVA). 3. Результаты.
3.1. Воздействие экстракта Raphanus на концентрацию серотонина в мозге.
Исследовали воздействие различных доз экстракта Raphanus (2, 8, 32, 64, 128 и 256 мг/кг, интрапе-ритонеально) на серотонин мозга. Животные получали либо солевой раствор (1 мл/кг, интраперитоне-ально), либо флуоксетином (10 мг/кг, интраперитонеально), дезипрамин (50 мг/кг, интраперитонеально), экстракт Raphanus (различные концентрации) и умерщвлялись 30 мин спустя. Однофакторный дисперсионный анализ показал, что флуоксетин может значительно повышать уровни серотонина в мозге, но ни дезипрамин, ни экстракт Raphanus не может повышать уровни серотонина в мозге.
3.2. Воздействие экстракта Raphanus на концентрацию дофамина в мозге.
Результаты авторов изобретения показали, что как флуоксетин (10 мг/кг, интраперитонеально) и де-зипрамин (50 мг/кг, интраперитонеально) могут повышать концентрацию дофамина в мозге.
Интересно, что экстракт Raphanus может повышать концентрацию дофамина в мозге зависимым от дозы образом, при этом доза экстракта, равная 256 мг/кг, интраперитонеально является наиболее сильнодействующей в данном исследовании.
3.3. Воздействие экстракта Raphanus на концентрацию глутамата в мозге.
В последней части экспериментов исследовали воздействие экстракта Raphanus на концентрацию глутамата в мозге. Результаты показали, что имелись колебания уровня глутамата в мозге в зависимости от доз экстракта. Экстракт значительно повышал концентрацию глутамата в мозге, например, при применении дозы, равной 264 мг/кг, интраперитонеально.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция для лечения злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или для лечения симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции, содержащая:
a) экстракт растения, относящегося к роду Raphanus, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования воздушных корней, и/или семян, и/или луковиц гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем;
b) экстракт растения, относящегося к роду Theobroma, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования плодов гидрофильным или среднеполярным растворителем; и
c) экстракт растения, относящегося к роду Passiflora, при этом указанный экстракт получен посредством экстрагирования цветков гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем.
2. Композиция по п.1, в которой указанный растворитель
a) выбран из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона, смеси вода/кетон, CO2, этилацетата, гексана и их хлорированных форм; и в которой указанный растворитель
b) выбран из группы, состоящей из воды, спирта, смеси вода/спирт, кетона и смеси вода/кетон.
3. Композиция по п.1 или 2, дополнительно содержащая
d) экстракт растения, относящегося к роду Crocus, при этом указанный экстракт получен посредст-
вом экстрагирования цветков гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем.
4. Композиция по п.3, в которой указанный экстракт из а), указанный экстракт из b), указанный экстракт из с) и указанный экстракт из d) представлены в композиции с соотношением, составляющим приблизительно 2,5 ч. указанного экстракта из а), приблизительно 3 ч. указанного экстракта из b), приблизительно 2,5 ч. указанного экстракта из с) и приблизительно 1,5 ч. указанного экстракта из d).
5. Композиция по любому из пп.1-4, где растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao; растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnata.
6. Композиция по п.3 или 4, где растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.
7. Композиция по любому из пп.1-6, при этом композиция дополнительно содержит оливковое масло.
8. Способ лечения злоупотребления опиоидами, опиоидной зависимости, злоупотребления алкоголем и/или алкогольной зависимости и/или лечения симптомов опиоидной и/или алкогольной абстиненции, включающий введение композиции по любому из пп.1-7 в дозе, составляющей от приблизительно 18,5 до приблизительно 77,5 мг/кг в день.
9. Способ по п.8, где указанную дозу вводят по меньшей мере в течение двух недель.
10. Способ получения композиции по любому из пп.1-6, включающий стадии:
a) экстрагирование воздушных корней, и/или семян, и/или луковиц растения Raphanus гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем;
b) экстрагирование плодов растения Theobroma гидрофильным или среднеполярным растворителем;
c) экстрагирование цветка растения, относящегося к роду Passiflora, гидрофильным, среднеполяр
ным или липофильным растворителем;
d) объединение экстракта стадии а) с экстрактами стадий b) и с).
11. Способ по п.10, дополнительно включающий экстрагирование цветка растения, относящегося к роду Crocus, гидрофильным, среднеполярным или липофильным растворителем, и объединение полученного экстракта с указанными экстрактами стадий а)-с).
12. Способ по п.10, где растением, относящимся к роду Raphanus, является растение Raphanus sativus; растением, относящимся к роду Theobroma, является растение Theobroma cacao; растением, относящимся к роду Passiflora, является растение Passiflora incarnata.
13. Способ по п.11, где растением, относящимся к роду Crocus, является растение Crocus sativus.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028508
- 1 -
(19)
028508
- 1 -
(19)
028508
- 1 -
(19)
028508
- 4 -
(19)
028508
- 26 -