EA 028486B1 20171130

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000028486b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (AHAS), кодирующий полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), выбранный из AHASL полипептида, имеющего глутамин- или цистеин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2; причем указанный полинуклеотид представляет собой полинуклеотид растения, которое выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых.

2. Полинуклеотид по п.1, кодирующий полипептид AHASL, выбранный из AHASL полипептида, имеющего глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2.

3. Полинуклеотид по п.1 или 2, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, указанное растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и указанное растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.

4. Выделенный полипептид AHASL, кодируемый полинуклеотидом по любому из пп.1-3.

5. Растение, толерантное к гербицидам, ингибирующим AHAS, и содержащее полинуклеотид по любому из пп.1-3, являющийся трансгенным или мутантным, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых.

6. Растение по п.5, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, указанное растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и указанное растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.

7. Растение, содержащее полинуклеотид по любому из пп.1-3, причем указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.

8. Растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из первого AHASL полипептида, имеющего фенилаланин-, аспарагин-, глицин-, валин-, треонин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего валин-, цистеин-, аспарагиновую кислоту-, глутаминовую кислоту-, аргинин-, треонин-, триптофан- или тирозин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.

9. Растение по п.8, где указанные первый и второй полипептиды выбраны из первого AHASL полипептида, имеющего аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего валин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2.

10. Растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из: a) первого AHASL полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего фенилаланин-, аспаргин-, треонин-, глицин-, валин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и b) первого AHASL полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глутамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.

11. Растение по п.10, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из: a) первого AHASL полипептида, имеющего треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и b) первого AHASL полипептида, имеющего треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего серин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2.

12. Растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид AHASL, второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, и третий полинуклеотид, кодирующий третий полипептид AHASL; или полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, содержащий одну мутацию и полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, содержащий две мутации, где указанные нуклеотидные мутации приводят к аминокислотным заменам в указанных первом, втором и третьем полипептидах AHASL, где указанные первый, второй и третий полипептиды AHASL выбраны из первого, второго и третьего AHASL полипептидов, выбранных из AHASL полипептидов, определенных в любом из пп.1-2 и 8-11; причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.

13. Растение по любому из пп.7-12, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana; растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.

14. Семена, полученные от растения по любому из пп.5-13, содержащие полинуклеотид(ы), кодирующие AHASL, раскрытые в пп.1-3, 9-12.

15. Семена по п.14, обработанные AHAS-ингибирующим гербицидом.

16. Семена по п.15, где гербицид, ингибирующий AHAS, выбран из группы, состоящей из имидазолинонов, сульфонилмочевин, триазол-пиримидинов, пиримидинилоксибензоатов и их смесей.

17. Семена по п.16, где гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.

18. Семена по п.17, где имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и имазапира.

19. Способ борьбы с сорняками в районе произрастания сельскохозяйственных культур, включающий: a) посев в поле семян по п.14 и выращивание из них сельскохозяйственных культур; и b) внесение эффективного количества гербицидной композиции, содержащей имидазолиноновый гербицид, сульфонилмочевинный гербицид или их смеси под сорняки и сельскохозяйственные культуры в поле для борьбы с сорняками.

20. Способ получения трансгенного растения, толерантного к гербицидам, ингибирующим AHAS, включающий следующие стадии: a) трансформация растительных клеток экспрессионным вектором, включающим полинуклеотид по любому из пп.1-3, и b) регенерация из растительной клетки трансгенного растения, экспрессирующего AHASL мутантный полипептид.

21. Способ идентификации или отбора клетки растения, ткани растения, растения или части растения, содержащих полинуклеотид по любому из пп.1-3, включающий: a) предоставление клетки растения, ткани растения, растения или его части; b) приведение в контакт клетки растения, ткани растения, растения или его части по меньшей мере с одним гербицидом, ингибирующим AHAS; и c) определение того, повреждены ли клетка растения, ткань растения, растение или его часть ингибирующим гербицидом, причем, если клетка растения, ткань растения или растение или его часть не повреждены указанным гербицидом или повреждены в меньшей степени, чем соответствующие клетки растения, ткань растения или растение или его часть дикого типа, которые приводили в контакт с гербицидом, ингибирующим AHAS, делается вывод о том, что клетки растения, ткани растения или растения или его часть содержат полинуклеотид по любому из пп.1-3.

22. Способ получения толерантного к гербициду, ингибирующему AHAS, растения, включающий скрещивание первого растения, которое толерантно к гербициду, ингибирующему AHAS, со вторым растением, которое не толерантно к гербициду, ингибирующему AHAS, и отбор растения-потомка, которое устойчиво к указанному гербициду, отличающийся тем, что первое растение является растением по любому из пп.5-13.

23. Способ предотвращения нежелательного вегетативного роста, включающий обработку семян растений по любому из пп.5-13 перед посевом и/или после предварительного проращивания гербицидом, ингибирующим AHAS.

24. Способ по любому из пп.19-21 и 23, в котором гербицид, ингибирующий AHAS, выбран из группы, состоящей из имидазолинононов, сульфонилмочевин, триазолпиримидинов, пиримидинилоксибензоатов и их смесей.

25. Способ по п.24, в котором гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.

26. Способ по п.25, в котором имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и имазапира.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

4. Выделенный полипептид AHASL, кодируемый полинуклеотидом по любому из пп.1-3.

15. Семена по п.14, обработанные AHAS-ингибирующим гербицидом.

17. Семена по п.16, где гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.

18. Семена по п.17, где имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и имазапира.

25. Способ по п.24, в котором гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.

26. Способ по п.25, в котором имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и имазапира.

Евразийское 028486 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки
201370037
(22) Дата подачи заявки 2008.04.03
(51) Int. Cl. A01H5/00 (2006.01) A01H 5/10 (2006.01) C12N15/82 (2006.01) C12N 9/88 (2006.01)
(54) РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИЛИ МУТАНТНЫЙ ПОЛИНУКЛЕОТИД ДЛЯ ПРИДАНИЯ РАСТЕНИЯМ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ГЕРБИЦИДАМ, ИНГИБИРУЮЩИМ АЦЕТОГИДРОКСИКИСЛОТНУЮ СИНТАЗУ (AHAS), РАСТЕНИЕ, СОДЕРЖАЩЕЕ УКАЗАННЫЙ ПОЛИНУКЛЕОТИД, И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ
РАСТЕНИЙ
(31) 60/910,028
(32) 2007.04.04
(33) US
(43) 2013.07.30
(62) 200901337; 2008.04.03
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
БАСФ ПЛАНТ САЙЕНС ГМБХ (DE)
(72) Изобретатель:
Мэкэлвер Джон А., Зинг Биджай (US)
(74) Представитель:
Беляева Е.Н. (BY)
(56) WO-A-2007005581 US-A1-2006010514 WO-A-03014356 EP-A-1754786 US-A1-2003097692
(57) Изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим мутанты большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHAS), содержащей одну и более мутаций, например двойной или тройной мутации, которые пригодны для получения трансгенного или нетрасгенного растения с повышенным уровнем устойчивости к AHAS-ингибирующим гербицидам. Изобретение также относится к растениям, содержащим мутантные полипептиды большой субъединицы AHAS, a также к способам их получения и применения.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится в целом к способам повышения устойчивости растений к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу.
Предпосылки к созданию изобретения
Ацетогидроксикислотная синтаза (AHAS; ЕС 4.1.3.18, также известная как ацетолактатная синтаза или ALS) является первым ферментом, который катализирует биохимический синтез разветвленных цепей аминокислот валина, лейцина и изолейцина (Singh (1999), "Biosynthesis of valine, leucine and isoleu-cine", in Plant Amino Acids, Singh, B.K., ed., Marcel Dekker Inc. New York, New York, p. 227-247). AHAS является местом приложения действия четырех структурно различных семейств гербицидов, включающих сульфонилмочевины (Tan et al. (2005), Pest Manag. Sci. 61:246-57; Mallory-Smith and Retzinger (2003), Weed Technology 17:620-626; LaRossa and Falco (1984), Trends Biotechnol. 2:158-161), имидазолинононы (Shaner et al. (1984), Plant Physiol. 76:545-546), триазолпиримидины (Subramanian and Gerwick (1989), "Inhibition of acetolactate synthase by triazolopyrimidines", в Biocatalysis in Agricultural Biotechnology, Whita-ker, J.R. and Sonnet, P.E.. eds., ACS Symposium Series, American Chemical Society, Washington, D.C., p. 277288) и пиримидинилоксибензоаты (Subramanian et al. (1990), Plant Physiol. 94: 239-244). Имидазолиноно-новые и сульфонилмочевинные гербициды широко используются в современном сельском хозяйстве благодаря их эффективности при очень низкой дозе внесения и относительной нетоксичности для животных. Ингибируя активность AHAS, эти семейства гербицидов предотвращают дальнейший рост и развитие восприимчивых растений, включая многие виды сорняков. Примерами коммерчески доступных имидазолиноновых гербицидов являются PURSUIT(r) (имазетапир), SCEPTER(r) (имазахин) и ARSENAL(r) (имазапир). Примерами сульфонилмочевинных гербицидов являются хлорсульфурон, метсульфу-рон метил, сульфометурон метил, хлоримурон этил, тифенсульфурон метил, трибенурон метил, бен-сульфурон метил, никосульфурон, этаметилсульфурон метил, римсульфурон, трифлусульфурон метил, триасульфурон, примисульфурон метил, циносульфурон, амидосульфурон, флузасульфурон, имазосуль-фурон, пиразосульфурон этил и галосульфурон.
Благодаря их высокой эффективности и низкой токсичности имидазолинононовые гербициды благоприятны для применения путем опрыскивания наземной части растений в широкий период вегетации. Возможность опрыскивания гербицидом наземной части растений в широкий период вегетации снижает расходы, связанные с приживаемостью и сохранением растений, и уменьшает необходимость предварительной подготовки перед использованием таких химикатов. Опрыскивание наземной части растений желаемых толерантных видов в результате также позволяет достичь максимального потенциального выхода желаемых видов растений вследствие отсутствия конкурентных видов. Однако возможность использования таких методик распыления зависит от наличия устойчивых к имидазолинонону видов желаемых растений в области распыления.
Среди большого разнообразия сельскохозяйственных злаковых культур некоторые виды бобовых, такие как соя, являются природно устойчивыми к имидазолинононовым гербицидам, вследствие их способности к быстрому метаболизму гербицидных соединений (Shaner and Robinson (1985), Weed Sci. 33:469-471). Другие злаковые, такие как кукуруза (Newhouse et al. (1992), Plant Physiol. 100:882-886) и рис (Barrett et al. (1989), Crop Safeners for Herbicides, Academic Press, New York, p. 195-220), являются до некоторой степени чувствительными к имидазолинононовым гербицидам. Различная чувствительность к имидазолинононовым гербицидам зависит от химической природы отдельного гербицида и различного метаболизма соединения из токсичной в нетоксичную форму в каждом растении (Shaner et al. (1984), Plant Physiol. 76:545-546; Brown et al. (1987), Pestic. Biochem. Physiol. 27:24-29). Другие физиологические различия растений, такие как поглощение и передвижение веществ в растении, также играют важную роль в чувствительности (Shaner and Robinson (1985), Weed Sci. 33:469-471).
Устойчивость растений к имдазолинонам, сульфонилмочевинам, триазолопиримидинам и пирими-динилоксибензоатам можно с успехом создать, используя мутагенез семян, микроспор, пыльцы и каллю-са в Zea mays, Arabidopsis thaliana, Brassica napus (например, канола) Glycine max, Nicotiana tabacum, сахарной свекле (Beta vulgaris) и Oryza sativa (Sebastian et al. (1989), Crop Sci. 29:1403-1408; Swanson et al., 1989 Theor. Appl. Genet. 78:525-530; Newhouse et al. (1991), Theor. Appl. Genet. 83:65-70; Sathasivan et al. (1991), Plant Physiol. 97:1044-1050; Mourand et al. (1993), J. Heredity 84:91-96; Wright and Penner (1998), Theor. Appl. Genet. 96:612-620; патент США № 5545822). Во всех случаях единственный частично доминантный ядерный ген обеспечивает устойчивость. Четыре устойчивых к имидазолинонону растения пшеницы были предварительно выделены с последующим мутагенезом семян из Triticum aestivum L. cv. Fidel (Newhouse et al. (1992), Plant Physiol. 100:882-886).
Исследование наследственности подтверждает, что единственный частично доминантный ген обеспечивает устойчивость. На основании изучения аллелей авторы делают вывод, что мутации в четырех идентифицированных линиях были расположены в одном и том же локусе. Один из резистентных генов культурного сорта растения Fidel был обозначен FS-4 (Newhouse et al. (1992), Plant Physiol. 100:882-886).
Компьютерное моделирование трехмерных конформаций комплекса AHAS-ингибитор предсказало различные аминокислоты в предполагаемых местах связывания ингибитора, как в местах, где индуциро
ванные мутации будут вероятно обеспечивать селективную устойчивость к имидазолинононам (Ott et al. (1996), J. Mol. Biol. 263:359-368). Растения табака, полученные с некоторыми из этих рационально обозначенных мутаций в предполагаемых местах связывания фермента AHAS, фактически имели выраженную специфическую устойчивость к единственному классу гербицидов (Ott et al. (1996), J. Mol. Biol.
263:359-368).
Растения, устойчивые к имидазолинононовым гербицидам, также описаны в ряде патентов США № 4761373, 5331107, 5304732, 6211438, 6211439 и 6222100, особенно описывается использование измененного гена AHAS для вызывания устойчивости к гербицидам в растениях, и особенно описываются некоторые устойчивые к имидазолинонону линии кукурузы. В патенте США № 5013659 раскрыты растения, проявляющие устойчивость к гербицидам вследствие мутации по меньшей мере одной аминокислоты в одной или более консервативной области. Описанные мутации кодируют либо перекрестную устойчивость к имидазолинононам и сульфонилмочевинам или специфическую устойчивость к сульфо-нилмочевине, но специфическая устойчивость к имидазолинонону не описана. В патенте США № 5731180 и патенте США № 5767361 обсуждается выделенный ген, имеющий единичное аминокислотное замещение в аминокислотной последовательности AHAS односемядольного растения дикого типа, которое дает в результате специфическую устойчивость к имидазолинонону. Кроме того, растения риса, устойчивые к гербицидам, которые препятствуют AHAS, были получены путем воспроизведения мутации и также выбору культур клеток тканей. См. патенты США № 5545822, 5736629, 5773703, 5773704, 5952553 и 6274796.
В растениях, как и во всех других исследованных организмах, фермент AHAS содержит две субъединицы: большую субъединицу (каталитическая роль) и малую субъединицу (регуляторная роль) (Dug-gleby and Pang (2000), J. Biochem. Mol. Biol. 33:1-36). Большая субъединица AHAS (также обозначенная здесь как AHASL) может быть кодирована с помощью единичного гена, как в случае Arabidopsis, и сахарной свеклы, или с помощью множества членов семейства генов, как в маисе, каноле и хлопке. Специфические единичные нуклеотидные замещения в большой субъединице обеспечивают ферменту степень устойчивости к одному или более классов гербицидов (Chang and Duggleby (1998), Biochem J. 333:765777).
Например, хлебная пшеница, Triticum aestivum L, содержит три гомологичных гена большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы. Каждый из генов проявляет значительную экспрессию, основанную на ответе гербицида и биохимических данных из мутантов в каждом из трех генов (Ascenzi et al. (2003), International Society of Plant Molecular Biologists Congress, Barcelona, Spain, Ref. No. S10-17). Кодирующие последовательности всех трех генов разделяют обширную гомологию на нуклеотидном уровне (WO 03/014357). Секвенированием генов AHASL из различных сортов Triticum aestivum, была найдено, что молекулярной основой толерантности к гербицидам в большинстве IMI-толерантных (имидазо-линонон-толерантных) линий является мутация S653(At)N, характеризующаяся замещением аспарагина на серин в положении эквивалентном аминокислоте 653 в Arabidopsis thaliana (WO 03/01436; WO 03/014357). Эта мутация обусловлена единичным нуклеотидным полиморфизмом (SNP) в последовательности ДНК, кодирующей белок AHASL.
Также известно, что множество генов AHASL встречается в двудольных видах растений. Ранее, Колкман et al. ((2004), Theor. Appl. Genet. 109: 1147-1159) описали идентификацию, клонирование и сек-венирование трех генов AHASL (AHASL1, AHASL2 и AHASL3) из устойчивых к гербицидам и дикого типа генотипов подсолнечника (Helianthus annuus L). Колкман с сотр. сообщали, что устойчивость к гербицидам была обусловлена либо Pro197Leu (использованы номенклатурные положения аминокислот AHASL Arabidopsis) замещением или Ala205Val замещением в белке AHASL1 и что каждое из этих замещений обеспечивает устойчивость и к имидазолинононовым, и к сульфонилмочевинным гербицидам.
Известно, что единичные мутации в большой субъединице AHAS приводят к толерантности или устойчивости к гербицидам (Duggleby et al. (2000), Journal of Biochem and Mol. Bio. 33:1-36; Jander и др. (2003), Plant Physiology 131:139-146). Например, замещение аланина на валин в положении 122 AHASL Arabidopsis (или аланина на треонин в положении, соответствующем положению 100 AHASL дурнишника) определяет устойчивость к имидазолинонону и сульфомочевинам. Замещение метионина на глутами-новую кислоту или изолейцин в положении 124 AHASL Arabidopsis определяет устойчивость к имидазо-линонону и сульфомочевинам. Замещение пролина на серин в положении 197 AHASL Arabidopsis (или пролина на аланин, глутаминовую кислоту, лейцин, глутамин, аргинин, валин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 192 AHASL дрожжей) определяет устойчивость к имидазоли-нононам, сульфомочевинам и триазолопиримидину.
Замещение аргинина на аланин или глутаминовую кислоту в положении 199 AHASL Arabidopsis определяет устойчивость к имидазолинонону. Замещение аланина на валин в положении 205 AHASL Arabidopsis (или аланина на цистеин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, аргинин, треонин, триптофан или тирозин в положении, соответствующем положению 200 AHASL дрожжей) определяет устойчивость к имидазолинононам и сульфомочевинам. Замещение почти любой аминокислоты на тир-тофан в положении 574 AHASL Arabidopsis, соответствующем положению 586 AHASL дрожжей, определяет устойчивость к имидазолинононам, сульфомочевинам, триазолопиримидину и пиримидилокси
бензоатам. Замещение серина на фенилаланин, аспарагин или тронин в положении 653 AHASL Arabidop-sis определяет устойчивость к имидазолинононам и пиримидилоксибензоатам.
В патентах США № 5853973; 5928937 и 6576455 раскрыты основанные на структурном моделировании способы получения вариантов AHAS, которые включают аминокислотные замещения в особых положениях, отличающихся от положений описанных выше. В Mourad et al. (1992), Planta 188; 491-497 показано, что мутантные линии, устойчивые к сульфомочевинам, являются перекрестно устойчивыми к триазолопиримидину, а мутантные линии, устойчивые к имидазолинононам, являются перекрестно устойчивыми к пиримидилоксибензоатам.
В патенте США № 5859348 описан двойной мутант большой субъединицы AHAS сахарной свеклы, имеющий замещение аланина на треонин в положении 113 и замещение пролина на серин в положении 188 аминокислотной последовательности. Растения сахарной свеклы, содержащие двойной мутант белка AHAS, описаны как устойчивые и к имидазолинонону, и к сульфомочевине.
В Mourad et al. (1994), Mol. Gen. Genet. 242:178-184, описан двойной мутант AHAS Arabidopsis обозначенный как csr1-4. Мутант AHAS csr1-4 содержит замещение С на Т в положении 589 нуклеотидной последовательности (соответствующее замещению пролина на серин в положении 197 аминокислотной последовательности AHASL Arabidopsis) и замещение G на А в положении 589 нуклеотидной последовательности (соответствующее замещению серина на треонин в положении 653 аминокислотной последовательности AHASL Arabidopsis).
В Lee et al. (1988), EMBO Journal 7:1241-1248, описан двойной мутант AHAS табака, обозначенный как S4-Hra, который содержит замещение Pro-Ala в положении 196 аминокислотной последовательности (соответствующее замещению в положении 197 аминокислотной последовательности AHASL Arabidop-sis) и замещение Trp-Leu в положении 573 аминокислотной последовательности (соответствующее замещению в положении 574 аминокислотной последовательности AHASL Arabidopsis). Трансгенные линии, содержащие двойные генетические мутации, демонстрируют устойчивость к сульфомочевинному гербициду.
В патенте США № 7119256 описаны двойные мутанты большой субъединицы AHAS риса, имеющие замещение триптофана на лейцин в положении 548 аминокислотной последовательности и замещение серина на изолейцин в положении 627 аминокислотной последовательности. Трансгенные растения риса, экспрессирующие полинуклеотид, кодирующий эти двойные мутанты белка AHAS, демонстрировали повышенную устойчивость к пиримидинкарбокси гербицидам, биспирибак-натрию.
Благодаря их высокой эффективности и низкой токсичности имидазолинононовые гербициды благоприятны для сельскохозяйственного использования. Однако возможность использования имидазоли-нононовых гербицидов в определенных системах производства злаковых зависит от наличия устойчивых к имидазолинонону сортов интересующих злаковых культур. Для получения таких устойчивых к имида-золинонону сортов остается потребность в злаковых культурах, содержащих мутант полипептида AHAS, которые демонстрируют улучшенную устойчивость к имидазолинононам и/или другим AHAS-ингибирующим гербицидам по сравнению со злаковыми культурами с существующими AHAS мутантами.
Несмотря на то что некоторые AHAS мутанты были охарактеризованы, остается потребность в мутантах полипептида AHAS, которые при экспрессии в интересующих злаковых культурах определяют продемонстрированную улучшенную устойчивость к одному или более классам AHAS-ингибирующих гербицидов по сравнению с существующими AHAS мутантами в злаковых культурах.
Сущность изобретения
Изобретение относится к новым мутантам AHAS полипептида, которые проявляют устойчивость к гербициду, в частности к имидазолинононовому гербициду или сульфомочевинному гербициду или их смеси. В предпочтительных формах осуществления устойчивость к гербицидам, определенная мутантами согласно изобретению, улучшается и/или увеличивается относительно полученной с использованием уже известных AHAS мутантов.
Настоящее изобретение относится к способу контролирования роста сорняков в районах произрастания трансгенных и нетрансгенных растений согласно настоящему изобретению. Такие растения имеют повышенную устойчивость к гербицидам по сравнению с растениями дикого типа. Способ включает внесение эффективного количества AHAS-ингибирующего гербицида под сорняки и растения согласно настоящему изобретению.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлена полная последовательность большой субъединицы белка AHAS Arabidopsis (аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 1; и нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 31) с предполагаемой трансляцией, показывающей положения мутаций, обозначенные жирным и подчеркнутым шрифтом. Нумерация ДНК находится слева, нумерация аминокислот находится справа.
На фиг. 2 представлена последовательность большой субъединицы белка AHAS кукурузы (аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 2 и нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 32) с аминокислотами в положениях заявленных мутаций, обозначенными жирным и подчеркнутым шрифтом. Нумерация ДНК находится слева, нумерация аминокислот находится справа.
На фиг. 3 представлена линейная последовательность положений соответствия большой субъединицы белка AHAS (AtAHASL, SEQ ID NO: 1) большой субъединице белка AHAS целого ряда видов, в которых могут быть получены двойные и тройные мутации, с указанием положений замещения, которые соответствуют положениям замещения в
SEQ ID NO: 1: Amaranthus sp. (AsAHASL SEQ ID N0:9),
Brassica napus (BnAHASLIA SEQ ID N0:3, BnAHASLIC SEQ ID N0:10, BnAHASL2A SEQ ID N0:11), Camelina microcarpa (CmAHASLI SEQ ID N0:12, CmAHASL2 SEQ ID N0:13), Solarium tuberosum (StAHASLI SEQ ID N0:16, StAHASL2 SEQ ID N0:17), Oryza sativa (OsAHASL SEQ ID N0:4), Lolium multiflorum (LmAHASL SEQ ID N0:20), Solarium ptychanthum (SpAHASL SEQ ID N0:14), Sorghum bicolor (SbAHASL SEQ ID N0:15), Glycine max (GmAHASL SEQ ID N0:18), Helianthus annuus (HaAHASLI SEQ ID N0:5, HaAHASL2 SEQ ID N0:6, HaAHASL3 SEQ ID N0:7), Triticum aestivum (TaAHASLIA SEQ ID N0:21, TaAHASLIB SEQ ID N0:22, TaAHASLID SEQ ID N0:23), Xanthium sp. (XsAHASL SEQ ID N0:19), Zea mays (ZmAHASLI SEQ ID N0:8, ZmAHASL2 SEQ ID N0:2), Gossypium hirsutum (GhAHASA5 SEQ ID N0:24, GhAHASA19 SEQ ID N0:25), and E.coli (ilvB SEQ ID N0:26, ilvG SEQ ID N0:27, ilvl SEQ ID N0:28). На фиг. 4 представлена карта вектора на основе АЕ, используемого для конструирования АЕ2-АЕ8 мутантов AHASL Arabidopsis в Е.шН с указанием соответствующих положений мутаций в AHASL Arabidopsis.
На фиг. 5 представлена карта вектора основного вектора АР для трансформации растений, используемого для конструирования векторов АР2-АР5, который отличается только мутациями, указанными в табл. 1.
На фиг. 6 представлена карта основного вектора ZE, используемого для изучения AHASL мутантов кукурузы - ZE2, ZE5, ZE6 и ZE7 в E.coli, с указанием соответствующих положений мутаций.
На фиг. 7 представлена карта вектора ZP для трансформации растений, используемого в качестве основного вектора для конструкции векторов ZP2-ZP10.
На фиг. 8 представлена таблица, показывающая соответствия положений аминокислот генов AHASL из разных видов.
На фиг. 9 представлена таблица, показывающая процентное соотношение белков генов AHASL из разных видов. Анализ был проведен с использованием пакета программ Vector NTI (штраф на внесение делеции = 10, штраф на продолжение делеции = 0,05, штраф на разделение делеции = 8, матрица сравнения аминокислот blosum 62MT2).
На фиг. 10 представлены результаты вертикального роста в чашках семян из нескольких линий из Arabidopsis выращенных на среде, содержащей 37,5 микромоль имазетапира. Были исследованы 1) дикий вид экотип Columbia 2; 2) csr1-2 мутант (гомозиготная AtAHASL S653N мутация в генетической копии гена большой субъединицы AHASL); 3) Columbia 2 трансформированный AP1; 4) Columbia 2 трансформированный АР7; и 5) Columbia 2 трансформированный АР2.
На фиг. 11 представлена карта вектора для трансформации растений основного вектора AUP, используемого для конструирования векторов AUP2 и AUP, которые отличаются только мутациями, указанными в табл. 3.
На фиг. 12 представлена карта вектора BAP1 для трансформации растений, который содержит кодирующую последовательность AtAHASL с S653N мутацией.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим AHASL, которые проявляют толерантность к гербицидам, в частности к имидазолиноновым гербицидам и, необязательно, к сульфомочевине, триазолопиримидинсульфоанилидным и /или пиримидилоксибензоатным гербицидам. AHASL мутанты согласно изобретению могут быть использованы для получения трансгенных растений, демонстрирующих уровень устойчивости к гербицидам, достаточный для сравнения с коммерческими уровнями толерантности к гербицидам, которая присутствует только у одного родителя при гибридном скрещивании или в одном геноме полиплоидного растения. Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут быть также использованы в качестве селектируемых маркеров для трансформации сцепленных генов, кодирующих другие признаки, как описано в патенте США № 6025541.
Несмотря на то что белки AHASL различных видов отличаются несколькими аминокислотными остатками в последовательности аминокислот, взаимное расположение остатков для модификации в соответствии с настоящим изобретением показано на фиг. 8. Таким образом, представленные здесь мутации экспрессируются в условиях положений, соответствующих аминокислотным остаткам полипептида AHASL Arabidopsis (SEQ ID NO: 1, фиг. 1, 8), если не указано другое или явствует из контекста. Например, остаток 122 AHASL Arabidopsis соответствует остатку 90 AHASL кукурузы, остатку 104 AHASL 1A Brassica napus, остатку 107 AHASL 1С В. Napus, остатку 96 AHASL О. sativa, остатку 113 AHASL Amaranthus, остатку 26 ilvG Escherichia coli, остатку 117 AHASL Saccharomyces cerevisiae, остатку 113 сахар
ной свеклы, остатку 111 хлопка, остатку 120 AHASL1 Camelina microcarpa, остатку 117 AHASL2 Came-lina microcarpa, остатку 109 AHASL1 Solarium tuberosum, остатку 111 AHASL2 Solarium tuberosum, остатку 92 Lolium multiflorum, остатку 27 Solarium ptychanthum, остатку 93 Sorghum bicolor, остатку 103 Glycine max, остатку 107 AHASL1 Helianthus annuus, остатку 101 AHASL2 Helianthus annuus, остатку 97 AHASL3 Helianthus annuus, остатку 59 Triticum aestivum, и остатку 100 Xanthium sp. Это соответствие хорошо известно специалисту в данной области знаний. Основываясь на этом, соответствующие положения в последовательности большой субъединицы AHAS, не раскрытые здесь детально, могут быть легко определены специалистом в данной области знаний. Особые примеры областей соответствия, относящиеся к настоящему изобретению, представлены на фиг. 3.
Более конкретно настоящее изобретение относится к рекомбинантному или мутантному полинук-леотиду для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (AHAS), кодирующему полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), выбранный из AHASL полипептида, имеющего глутамин- или цистеин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2; причем указанный полинуклеотид представляет собой полинуклеотид растения, которое выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых.
Предпочтительной формой выполнения изобретения является полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, выбранный из AHASL полипептида, имеющего глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2.
Еще одной предпочтительной формой выполнения изобретения является указанный полинуклео-тид, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis tha-liana, указанное растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и указанное растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.
Еще одним предпочтительным объектом изобретения является выделенный полипептид AHASL, кодируемый указанным полинуклеотидом по изобретению.
Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению предоставлены в экспрессионных кассетах для экспрессии в желаемых растениях. Указанная кассета включает регуляторную последовательность, оперативно связанную с последовательностью полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению. Используемый здесь термин "регуляторный элемент" относится к полинуклеотиду, способному регулировать транскрипцию оперативно связанного полинуклеотида. Он включает, но не ограничивается, промоторы, энхансеры, интроны 5' UTRs и 3' UTRs. "Оперативно связанный" обозначает функциональную связь между промотором и второй последовательностью, где последовательность промотора инициирует и определяет транскрипцию последовательности ДНК соответствующей второй последовательности. В общем "оперативно связанный" означает, что связываемые последовательности нуклеиновой кислоты являются последовательными, и, если необходимо, соединить две кодирующие белок области, расположены в одной рамке считывания. Указанная кассета может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген для совместной трансформации в организм. Альтернативно, дополнительный ген или гены могут быть предоставлены во множестве экспрессионных кассет.
Такая экспрессионная кассета предоставлена с множеством сайтов рестрикции для инсерции последовательности полинуклеотида AHASL в область находящуюся под контролем области регулирующей транскрипцию. Указанная экспрессионная кассета может дополнительно содержать селектируемые маркерные гены.
Указанная экспрессионная кассета будет иметь 5'-3' направленную транскрипцию, транскрипционную область и область инициации трансляции (т. е. промотор), последовательность полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению и область, терминирующую транскрипцию и трансляцию (т.е. терминаторную область), которые функционируют в растениях. Промотор может быть естественным, аналогичным, чужеродным или гетерологичным для растения хозяина и/или для последовательности полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению. Так же промотор может быть представлен натуральной последовательностью или альтернативно синтетической последовательностью. Промотор является "чужим" или "гетерологичным" для растительной клетки, если естественный промотор для этого растения не был найден и поэтому он интродуцируется. Промотор является "чужим" или "гетеро-логичным" для последовательности полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению, если не существует естественного или встречающегося в природе промотора способного оперативно связываться с последовательностию полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению. Использованный в настоящем описании термин "химерный ген" включает кодирующую последовательность, оперативно связанную с областью инициации транскрипции, которая является гетерологичной по отношению к кодирующей последовательности.
Таким образом, для экспрессии полинуклеотида AHASL согласно настоящему изобретению можно использовать гетерологичные промоторы и естественные промоторы. Такая конструкция позволяет менять уровень экспрессии AHASL белка в растениях и растительных клетках. Таким образом, фенотип растения или растительной клетки может быть изменен.
Терминаторная область и область инициации траскрипции могут быть естественными и могут быть
оперативно связаны с AHASL последовательностью и могут происходить из растения или из другого источника (т.е. может быть чужой или гетерологичный промотор, интересующая AHASL последовательность, растение хозяин или любая их комбинация). Подходящими терминаторными областями могут являться доступные области из Ti-плазмид у A. tumefaciens, такие как терминаторные области октопин синтазы и нопалин синтазы, Guerineau et al. (1991), Mol. Gen. Genet. 262:141-144; Proudfoot (1991), Cell 64:671-674; Sanfacon et al. (1991), Genes Dev. 5:141-149; Mogen et al. (1990), Plant Cell 2:1261-1272; Mun-roe et al. (1990), Gene 91:151-158; Ballas et al. (1989), Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; и Joshi et al. (1987),
Nucleic Acid Res. 15:9627-9639.
Это дает возможность оптимизировать гены для повышенной экспрессии в трансформированных растениях. Так для улучшенной экспрессии гены могут быть синтезированы, используя подходящие растительные кодоны. Например, Campbell и Gowri (1990), Plant Physiol. 92:1-11 описывают такие хозяин-предпочтительные кодоны, которые широко используются. Методы синтезирования предпочтительных для растений генов хорошо известны в данной области знаний. См. источники US патенты № 5380831 и 5436391; Murray et al. (1989), Nucleic Acids Res. 17:477-498, которые приведены здесь в качестве ссылок.
Известно, что дополнительная модификация последовательности может повысить экспрессию гена в клетке-хозяине. Модификация может включать элиминацию последовательности, кодирующей сигнал псевдо полиаденилирования, сигнальные сайты экзон-интрон сплайсинга, транспозон похожие повторы и другие хорошо известные последовательности, которые могут быть вредны для экспрессии генов. Контент последовательности G-C может быть приведен к среднему уровню экспрессии для данной клетки хозяина, как посчитано в ссылках для экспрессии известных генов в клетке хозяине. Если возможно, последовательность может быть модифицирована для предотвращения образования РНК шпилек.
Нуклеотидные последовательности для усиления экспрессии генов также могут быть использованы в экспрессионных векторах для растений. Такие векторы включают интроны кукурузного гена AdhI, ин-трон I гена (Callis et al. Genes and Development 1:1183-1200, 1987), и лидирующие последовательности, (W-последовательность) из вируса табачной мозаики (TMV), из вируса пятнистого хлороза кукурузы и вируса мозаики люцерны (Gallie et al. Nucleic Acid Res. 15:8693-8711, 1987 и Skuzeski et al. Plant Mol. Biol. 15:65-79, 1990). Было показано, что первый интрон из локуса морщинистости кукурузы повышал экспрессию генов в конструкциях с химерными генами. Патенты США № 5424412 и 5593874 описывают использование специфических интронов в конструкциях экспрессирующих гены. Gallie et al. (Plant Phys-iol. 106:929-939, 1994) также показали тканеспецифичные интроны, полезные для регулирования экспрессии. Для усиления или оптимизации уровня экспрессии гена большой субъединицы AHAS, экспрес-сионные векторы для растений, согласно настоящему изобретению, также могут содержать ДНК последовательность, включающую участок прикрепления к матриксу (MARs). Растительные клетки, трансформированные такой модифицированной экспрессионной системой, могут иметь сверхэкспрессию или конститутивную экспрессию нуклеотидных последовательностей согласно настоящему изобретению.
Экспрессионные кассеты могут дополнительно содержать 5' лидирующие последовательности в структуре экспрессионной кассеты. Такие последовательности могут действовать как энхансер трансляции. Лидирующие последовательности хорошо известны в данной области знаний и включают последовательности пикорновирусов, например, лидирующая последовательность EMCV (5' некодирующая область вируса энцефалокардита) (Elroy-Stein et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6126-6130); лидирующие последовательности поливирусов, например, лидирующая последовательность TEV (вирус гравировки табака) (Gallie et al. (1995), Gene 165(2):233-238), лидирующая последовательность MDMV (вируса карликовости кукурузы) (Virology 154:9-20) и лидирующая последовательность человеческого белка связывающего тяжелые цепи иммуноглобулина (BiP) (Macejak et al. (1991), Nature 353:90-94); не-транслируемая последовательность mRNA поверхностного белка вируса мозаики люцерны (AMV RNA 4) (Jobling et al. (1987), Nature 325:622-625); лидирующая последовательность вируса табачной мозаики (TMV) (Gallie et al. (1989), in Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), p. 237-256); лидирующая последовательность вируса пятнистого хлороза кукурузы (MCMV) (Lommel et al. (1991), Virology 81:382-385). Также смотри, Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84:965-968. Также могут быть использованы другие известные методы для усиления трансляции, например включение интронов и другие.
В получении экспрессионной кассеты могут быть использованы манипуляции с различными ДНК фрагментами, для обеспечения правильной ориентации ДНК последовательности и, соответственно, в подходящих рамках считывания. Таким образом, адапторы или линкеры могут быть присоединены к ДНК последовательностям или другие манипуляции могут быть использованы для обеспечения удобных сайтов рестрикции, удаление лишних ДНК, удаление рестрикционных сайтов и т.п. Для этих целей могут быть использованы in vitro мутагенез, повтор праймеров, рестрикция, отжиг, установка повторов, например транзиция и транспозиция.
Несколько промоторов могут быть использованы для реализации изобретения. Промоторы могут быть выбраны, исходя из желаемого результата. Нуклеиновая кислота может быть соединена с конститутивным, тканеспецифичным или другим промотором для экспрессии в растениях.
Так, в качестве конститутивных векторов могут быть использованы центральный промотор Rsyn7 промотора, описанный в WO 99/43838 и патенте США № 6072050; центральный промотор CaMV 35S
промотора (Odell et al. (1985), Nature 313:810-812); промотор актина у риса (McElroy et al. (1990), Plant Cell 2:163-171); промотор убиквитина (Christensen et al. (1989), Plant Mol. Biol. 12:619-632 и Christensen et al. (1992), Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. (1991), Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten et al. (1984), EMBO J. 3:2723-2730); ALS промотор (патент США № 5659026) и другие. Другие конститутивные промоторы так же описаны, например, в патентах США № 5608149; 5608144; 5604121; 5569597;5466785;5399680;5268463;5608142 и 6177611.
Тканеспецифичные промоторы могут быть использованы для усиления экспрессии AHASL в определенных тканях растений. Список таких тканеспецифичных промоторов включает, но не исчерпывается, лист-специфичными промоторами, корень-специфичными промоторами, семя-специфичными промоторами и стебель-специфичными промоторами. Тканеспецифичные промоторы описаны Yamamoto et al. (1997), Plant J. 12(2):255-265; Kawamata et al. (1997), Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansen et al. (1997), Mol. Gen Genet. 254(3):337-343; Russell et al. (1997), Transgenic Res. 6(2):157-168; Rinehart et al. (1996), Plant Physiol. 112(3):1331-1341; Van Camp et al. (1996), Plant Physiol. 112(2):525-535; Canevascini et al. (1996), Plant Physiol. 112(2):513-524; Yamamoto et al. (1994), Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam (1994), Results Probl. Cell Differ. 20:181-196; Orozco et al. (1993), Plant Mol Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka et al.
(1993) , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586-9590; и Guevara-Garcia et al. (1993), Plant J. 4(3):495-505. Эти промоторы могут быть модифицированы, если необходимо, для слабой экспрессии.
В одной из форм осуществления нуклеиновая кислота может быть нацелена для экспрессии в хло-ропласты. Для этой цели нуклеиновая кислота не вводится напрямую, а экспрессионная кассета дополнительно содержит нацеленную на хлоропласт последовательность, содержащую нуклеиновую последовательность, кодирующую хлоропластный транзитный пептид для направления интересующего генного продукта в хлоропласт. Такие транзитные пептиды хорошо известны в данной области знаний. В отношении хлоропласт-нацеленной последовательности, оперативно-связанный означает, что последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей транзитный пептид (т.е. хлоропласт-нацеленная последовательность) соединен с полинуклеотидом AHASL согласно настоящему изобретению, так что две последовательности соединены смежно и находятся в одной рамке считывания. См., например, в Von Heijne et al. (1991), Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al. (1989), J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993), Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah et al. (1986), Science 233:478-481. В то время как AHASL белки согласно настоящему изобретению включают естественные хлоропласт транзитные пептиды, любой другой хлоропласт транзитный пептид, известный в данной области знаний, может быть соединен с последовательностью аминокислот зрелого AHASL белка согласно настоящему изобретению оперативной связью с хлоропласт-нацеленной последовательностью с 5'-концом нуклеиновой последовательности, кодирующей зрелый AHASL белок согласно настоящему изобретению.
Хлоропласт-нацеленные последовательности хорошо известны в данной области знаний и включают малую субъединицу рибосомальной 1,5-дифосфаткарбоксилазы хлоропластов (Rubisco) (de Castro Silva Filho et al. (1996), Plant Mol. Biol. 30:769-780; Schnell et al. (1991), J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5-енолпирувилшикимат-3-фосфат синтаза (EPSPS) (Archer et al. (1990), J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810); триптофан синтаза (Zhao et al. (1995), J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087); пластоцианин (Lawrence et al. (1997), J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); хоризмат синтаза (Schmidt et al. (1993), J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457) и соединяющий белок образующегося на свету a/b хлорофилла (LHBP) (Lamppa et al. (1988), J. Biol. Chem. 263:14996-14999). Смотри также Von Heijne et al. (1991), Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al. (1989), J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993), Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah et al. (1986), Science 233:478-481.
Методы трансформации хлоропластов хорошо известны в данной области знаний См., например, Svab et al. (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8526-8530; Svab and Maliga (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913-917; Svab and Maliga (1993), EMBO J. 12:601-606. Этот метод основан на использовании генной пушки для передачи ДНК, содержащей селектируемый маркер и нацеливания ДНК в геном пластид через гомологичную рекомбинацию. Также трансформация пластид может быть выполнена с помощью трансактивации молчащего пластидного трансгена путем тканеспецифичной экспрессии действующей в пластидах ядерно-кодируемой РНК полимеразы. Такая система описана в источнике McBride et al.
(1994) , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305.
Нуклеиновая кислота, которую необходимо ввести в хлоропласт, может быть оптимизирована для экспрессии в хлоропластах подсчетом различий в частоте использования кодонов между ядром растения и его органеллами. Для этой цели интересуемые нуклеиновые кислоты могут быть синтезированы используя хлоропласт-специфичные кодоны. См., например, патент США № 5380831, приведенный здесь в качестве ссылки.
Изобретение также относится к способу получения трансгенных растений злаковых культур, содержащих AHASL мутанты, кодируемые нуклеиновой кислотой, где экспрессия этой нуклеиновой кислоты в растении приводит к возникновению устойчивости к гербицидам по сравнению с растениями дикого типа или известными растениями мутантами AHASL, включающему (a) введение в растительную
клетку экспрессионного вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую AHASL мутант, содержащий по меньшей мере две мутации, (b) регенерацию из растительной клетки растения, проявляющего устойчивости к гербицидам. Растительные клетки представляют собой, но не исчерпываются протопласты, репродуктивные клетки, вегетативные клетки. Используемый здесь термин "трансгенный" относится к любому растению, растительной клетке, каллюсу, растительной ткани или части растения, которое содержит весь или часть по меньшей мере одного рекомбинантного полинуклеотида. Во многих случаях, весь или часть рекомбинантного полинуклеотида стабильно интегрируется в хромосому или стабильные экстра хромосомные элементы, что позволяет успешно передаваться из поколения в поколение.
Изобретение также относится к способу идентификации или селекции трансформированных растительных клеток, растительных тканей, растения или его части, которое включает: (a) предоставление растительной клетки, растительной ткани, растения или его части; b) приведение в контакт трансформированной растительной клетки, растительной ткани, растения или его части по меньшей мере с одним AHASL ингибитором или соединением содержащим AHASL ингибитор; c) определение того, повреждены ли клетка растения, ткань растения, растение или его часть ингибирующим гербицидом, причем если клетка растения, ткань растения или растение или его часть не повреждены указанным гербицидом, или повреждены в меньшей степени, чем соответствующие клетки растения, ткань растения или растение или его часть дикого типа, которые приводили в контакт с гербицидом, ингибирующим AHAS, делается вывод о том, что клетки растения, ткани растения или растения или его часть содержат вышеуказанный полинуклеотид.
Изобретение также относится к устойчивым к гербицидам растениям, содержащим один полинук-леотид. Нетрансгенные растения могут быть получены при перекрестном опылении первого растения со вторым растением, предусматривающим, что одно из растений выступает в качестве акцептора пыльцы (может быть как первое, так и втрое растение) и получение семян после перекрестного опыления. Семена и потомки растений, полученные таким образом, могут иметь двойные мутации, затрагивающие одну аллель или две аллели. Первое растение содержит первый полинуклеотид, кодирующий первый единичный мутант полипептида AHASL. Второе растение содержит второй полинуклеотид, кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL. Первый и второй единичные мутанты полипептида AHASL содержат различные единичные замены аминокислот относительно полипептидов дикого типа.
Выбранные потомки растений демонстрируют неожиданно высокий уровень устойчивости к AHASL-ингибирующим гербицидам, например к имидазолиноновым или сульфомочевинным гербицидам, это произошло, предположительно, из-за комбинации двух единичных мутантов полипептида AHASL в одном растении. Потомки растений демонстрируют синергетический эффект в отношении устойчивости к гербицидам, по сравнению с которым уровень устойчивости у потомков растений, содержащих первый и второй мутант от родительских растений, больше чем устойчивость растений, содержащих две копии первого полинуклеотида или две копии второго полинуклеотида.
Если первое и втрое растения являются гомозиготными по первому и второму полинуклеотиду, соответственно, каждый из полученных потомков будет содержать одну копию каждого полинуклеотида первого и второго, и один из селекционных этапов может быть исключен. Если по меньшей мере одно первое или второе растение является гетерозиготным, может быть выбрано потомство растения, содержащее оба полинуклеотида, например, анализируя ДНК у потомков растений для определения содержат ли растения потомки оба первый и второй полинуклеотид или тестируя потомки растений по повышению устойчивости к гербицидам. Потомки растений, которые содержат оба первый и второй полинук-леотид, проявляют больший уровень устойчивости к гербицидам чем, растения, содержащие две копии первого или две копии второго полинуклеотида.
Настоящее изобретение также относится к растениям, толерантным к гербицидам, ингибирующим AHAS, и содержащее вышеуказанный полинуклеотид, являющийся трансгенным или мутантным, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых.
В одной предпочтительной форме выполнения изобретения указанное растение выбрано из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, указанное растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и указанное растение, выбранное из членов семейства злаковых, представлен собой кукурузу.
Еще одним объектом изобретения является растение, содержащее указанный полинуклеотид и имеющее толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
Далее, объектом изобретения является растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и второй поли-нуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из первого AHASL полипептида, имеющего фенилаланин-, аспарагин-, глицин-, валин-, треонин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего валин-, цистеин-, аспарагино-вую кислоту-, глутаминовую кислоту-, аргинин-, треонин-, триптофан- или тирозин-замещение в поло
жении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему
AHAS.
В одной предпочтительной форме выполнения изобретения в растении указанные первый и второй полипептиды выбраны из первого AHASL полипептида, имеющего аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего валин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1
или положению 173 SEQ ID NO: 2.
Далее, объектом изобретения является растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и второй поли-нуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из:
a) первого AHASL полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего фенилаланин-, аспаргин-, треонин-, глицин-, валин-или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и
b) первого AHASL полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глу-тамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
В одной предпочтительной форме выполнения изобретения в указанном растении, указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из:
a) первого AHASL полипептида, имеющего треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2 и второго AHASL полипептида, имеющего аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и
b) первого AHASL полипептида, имеющего треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего серин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2.
Объектом изобретения является также растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид AHASL, второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, и третий полинуклеотид, кодирующий третий полипептид AHASL; или полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, содержащий одну мутацию и полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, содержащий две мутации, где указанные нуклеотидные мутации приводят к аминокислотным мутациям, соответствующим аминокислотным мутациям в указанных первом, втором и третьем полипептидах AHASL, где указанные первый, второй и третий полипептиды AHASL выбраны из первого, второго, и третьего AHASL полипептидов, из AHASL полипептидов, определенных выше, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
Предпочтительной формой выполнения настоящего изобретения является растение, выбранное из членов семейства Brassica, и представляет собой Arabidosis thaliana; растение, выбранное из членов семейства бобовых и представляющее собой соевый боб, и растение, выбранное из членов семейства злаковых и представляющее собой кукурузу.
Альтернативно растения, содержащие один или несколько полинуклеотидов, кодирующих единичный мутант полипептида AHASL, могут быть получены трансформацией растений двумя или несколькими такими полинуклеотидами или трансформацией первого растения первым полинуклеотидом кодирующим первый единичный мутант полипептида AHASL и перекрестное опыление первого растения со вторым растением, содержащим второй полинуклеотид кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL. Второе растения содержит второй полинуклеотид кодирующий второй единичный мутант полипептида AHASL, который является эндогенным или интродуцирован при трансформации. Первый и второй единичные мутанты полипептида AHASL содержат различные аминокислотные замены относительно (которые отличают их от) полипептидов AHASL дикого типа. Если необходимо семена или потомство растений могут содержать оба первый и второй полинуклеотид, как они описаны выше.
К гербицид-толерантным или гербицид-устойчивым растениям, как определено здесь, относятся растения, которые толерантны или устойчивы хотя бы к одному гербициду, уровень которого в норме уничтожает растение или ингибирует рост у растения дикого типа. Согласно настоящему изобретению,
термины "гербицид-толерантный" или "гербицид-устойчивый" взаимозаменяемы и имеют одинаковое значение и одинаковую область определения. Таким же образом, термины "имидазолин-устойчивый" и "мидазолин-устойчивость" взаимозаменяемы и чтобы быть одинаковыми по значению и по области определения с терминами "гербицид-толерантный" и "гербицид-толерантность" соответственно.
Настоящее изобретение относится к растениям, имеющим повышенный уровень устойчивости или толерантности хотя бы к одному гербициду, в частности к имидазолинону или сульфомочевине. Предпочтительное количество или концентрация гербицида означает "эффективное количество" или "эффективная концентрация". "Эффективное количество" и "эффективная концентрация" означает такое количество и концентрацию соответственно, которое необходимо для уничтожения или ингибирования роста растений подобного дикого типа, растительной ткани, растительной клетки или клетки хозяина, но это количество не уничтожает и не ингибирует существенно рост гербицид-устойчивых растений, растительных тканей, клеток растений и клеток хозяев согласно настоящему изобретению. Типично, эффективное количество гербицида означает такое количество, которое обычно используется в сельском хозяйстве для уничтожения интересуемых сорняков. Такое количество хорошо известно из обычного опыта в данной области.
"Растение подобное дикому типу, растительная ткань, растительная клетка или клетка-хозяин" означает растение, растительную ткань, растительную клетку или клетку-хозяин, соответственно, которые не имеют признаков гербицид-устойчивости и/или особый (отдельный) полинуклеотид согласно изобретению, описанному здесь. Использование термина "дикий тип" (не) предназначено, чтобы подразумевать, что растение, растительная ткань, растительная клетка или клетка-хозяин или другая клетка-хозяин не имеют рекомбинантной ДНК в своем геноме и/или не обладают гербицид-устойчивыми признаками, которые отличаются от тех, которые описаны здесь.
Как определено здесь, если, понятно, что не определено иное, термин "растение" означает растение в любой стадии развития, так же как и любая часть или части растения, которые могут быть присоединены или отдельны от целого неповрежденного растения. Такие части растения включают но не ограничиваются, органами, тканями и клетками растений. Примеры определенных частей растения включают стебель, лист, корень, соцветие, цветок, отдельный цветок в соцветии, плод, плодоножка, цветоножка, тычинка, пыльник, рыльце, пестик, завязь, лепесток, чашелистик, плодолистик, кончик корня, корневой чехлик, волосок корня, волосок листа, волосок семени (бороздка зерна), пыльцевое зерно, микроспора, семядоля, гипокотель (подсемядольное колено), эпикотель (надсемядольное колено), ксилема, флоэма, паренхима, эндосперм, клетка-спутник, замыкающая клетка, и любые другие известные органы, ткани, и клетки растения.
Растения согласно настоящему изобретению включают как нетрансгенные, так и трансгенные растения. Под "нетрансгенным растением" подразумевают растения, не имеющие рекомбинантную ДНК в своем геноме. Под "трансгенным растением" подразумевают растение, содержащее рекомбинантную ДНК в своем геноме. Такие трансгенные растения могут быть получены введением рекомбинантной ДНК в геном растения. Если такая рекомбинантная ДНК встроена в геном трансгенного растения, то потомство растения также может содержать рекомбинантную ДНК. Потомство трансгенного растения, которое содержит по меньшей мере часть рекомбинантной ДНК хотя бы от одного трансгенного растения-предка, тоже будет трансгенным растением.
В отельных формах осуществления настоящее изобретение касается гербицид-устойчивых растений, которые получены при мутационной селекции. Такие растения содержат полинуклеотид, кодирующий единичный мутант полипептида большой субъединицы AHASL и являются толерантными к одному или нескольким AHASL-ингибирующим гербицидам. Такие методы могут включать, например, экспозицию растений или семян растений в присутствии мутагена, в частности химического мутагена, такого как, например, этилметанезилфонат (EMS), и селекцию растений, которые имеют усиленную толерантность хотя бы к одному AHASL-ингибирующему гербициду, в частности к имидазолиноновому гербициду или сульфомочевине. Тем не менее, настоящее изобретение не ограничивается гербицид-толерантными растениями, которые получены методом мутагенеза, включающего химический мутагенез EMS. Любой метод мутагенеза, известный в данной области знаний, может быть использован для получения гербицид-толерантных растений согласно настоящему изобретению. Такие методы мутагенеза могут включать, например, использование одного любого или более следующих мутагенов: радиационное излучение, такое как X-лучи, гамма-лучи (кобальт 60 или цезий 137), нейтроны (продукты ядерного распада урана 235 в атомном реакторе), Р-излучение (испускаемое радиоизотопами фосфора 32 и углерода 14) и ультрафиолетовое излучение (в диапазоне 2500-2900 нм), и химические мутагены, такие как аналоги нуклеотидных оснований (5-бромурацил), похожие соединения (8-этоксикофеин), антибиотики (стептонигрин), алкилирующие агенты (сернистый иприт, нитроиприт, этиленамины, сульфаты, сульфо-наты, сульфоны и лактоны), азиды, гидроксиламин, азотистая кислота или акридины. Гербицид-устойчивые растения также могут быть получены, используя методы тканевых культур для селекции растительных клеток, содержащих гербицид-устойчивые мутации, и затем из этих клеток регенерируют гербицид-устойчивые растения. См., например, патенты США № 5773702 и 5859348, которые приведены здесь в качестве ссылок. Более детально стадии мутационного скрещивания можно найти в "Principals of
Cultivar Development", Fehr, 1993, Macmillan Publishing Company, которые также приведены здесь в качестве ссылок.
Настоящее изобретение предлагает усиление толерантности или устойчивые растения по меньшей
мере к одному гербициду, который ингибирует активность фермента AHASL. Предпочтительно такими
гербицидами являются пиримидинилоксибензоатные гербициды, сульфониламино-
карбонилтриазолиновые гербициды или их смеси. Более предпочтительно, такими гербицидами являют-
ся имидазолиноновые гербициды, сульфонилмочевина или их смеси. В настоящем изобретении имидазо-
линоновые гербициды включают, но не ограничиваются PURSUIT(r) (имазетапир), CADRE(r) (имазапик),
RAPTOR(r) (имазамокс), SCEPTER(r) (имазакуин), ASSERT(r) (имазетабенц), ARSENAL(r) (имазапир),
производные любого из вышеперечисленных гербицида и смеси двух или более вышеперечисленных
гербицидов, например, имазапир-имазамокс (ODYSSEY(r)). Более предпочтительно имидазолиноновые
гербициды могут быть выбраны из, но не ограничиваются, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-
имидазолинон-2-ил)никотиновая кислота, [2-(4-изопропил)-4][(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-3-
куинолинокарбоксиловая] кислота, [5-этил-2-(4-изопропил)-(4-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-
ил)никотиновая] кислота, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-5-
(метоксиметил)никотиновая кислота, (2-(4-изопропил)-4-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-5-
метилникониновая кислота и смесь метил[6-(4-изо1гоопил)-4-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)]-гп-
толуата и метил[2-(4-изопропил-4-метил)]-5-(оксо-2-имидазолинон-2-ил)-p-толуата. Использование 5-
этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)никотиновой кислоты и [2-(4-изопропил-4-
метил-5-оксо-2-имидазолинон-2)-ил]-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты является предпочтитель-
ным. Использование [2-(4-изопропил)-4]-(метил-5-оксо-2-имидазолинон-2-ил)-5-
(метоксиметил)никотиновой кислоты является более предпочтительным.
В целях настоящего изобретения, гербициды группы сульфонилмочевины включают, но не ограничиваются, хлорсульфурон, метсульфурон метил, сульфометурон метил, хлоримурон этил, трифенсилфу-рон метил, трибенурон метил, бензилфирон метил, никосульфурон, этаметсульфурон метил, римсульфу-рон, трифлусульфурон метил, триасульфурон, примисульфурон метил, циносульфурон, амидосульфурон, флузасульфурон, имазосульфурон, пиразольфурон этил, халосульфурон, азимсульфурон, циклосульфу-рон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфурон метил, форамсульфурон, йодосульфурон, ок-сасульфурон, мезосульфурон, просульфурон, сульфосульфурон, трифлоксисульфурон, тритосульфурон, производное любого из вышеперечисленных гербицидов и смеси двух или более вышеперечисленных гербицидов. Триазолпиримидиновые гербициды включают, но не ограничиваются, хлорансулам, дихло-сулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам и пеноксисулам. Пиримидинилоксибензоатные (или кар-боксипиримидиниловые) гербициды согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются, биспирибак, пиритиобак, пиримиобак, пирибензомикс и пирифталид. Сульфониламино-карбонилтриазолиновые гербициды включают, но не ограничиваются, флукарбазон и пропоксикарбазон.
Является признанным, что пиримидинилоксибензоатные гербициды тесно связаны с пиримидинил-тиобензоатными гербицидами и сгруппированы под общим последним названием Американским обществом по изучению сорняков (Weed Science Society of America). Соответственно, гербициды согласно настоящему изобретению далее включают пиримидинилтиобензоатные гербициды, включая, но не ограничиваясь, пиримидинилоксибензоатные гербициды, описанные выше.
Настоящее изобретение предоставляет экспрессионные кассеты для экспрессии полинуклеотида согласно изобретению в растении, растительной ткани, растительной клетке или другой клетке-хозяине. Указанные экспрессионные кассеты содержит промотор способный экспрессироваться в растении, растительной ткани, растительной клетке или другой интересующей клетке-хозяине, оперативно связанный с полинуклеотидом согласно изобретению, который содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую либо полноразмерный (т. е. включающий хлоропластный транзитный пептид) либо простой AHASL белок (т.е. не включающий хлоропластный транзитный пептид). Если экспрессия желательна в пластидах или хлоропластах растений или растительных клетках, то экспрессионная кассета может также содержать оперативно связанную хлоропласт-нацеленную последовательность, которая кодирует хлоропластный транзитный белок.
Указанные экспрессионные кассеты согласно изобретению могут быть использованы в способах усиления толерантности к гербицидам у растений или у клетки-хозяина. Способ включает трансформацию растительной или клетки-хозяина экспрессионной кассетой согласно изобретению, где указанная экспрессионная кассета содержит промотор, который способен экспрессироваться в растительной или другой интересующей клетке-хозяине, и промотор оперативно связанный с полинуклеотидом согласно изобретению, содержащему нуклеотидную последовательность, кодирующую имидазолинон-устойчивый белок AHASL согласно изобретению.
Использованный здесь термин "полинуклеотидная конструкция" не предназначен, чтобы ограничивать настоящее изобретение до полинуклеотидной последовательности, содержащей ДНК. Так для специалиста в данной области знаний будет очевидно, что полинуклеотидная конструкция, в частности по-линуклеотиды или олигонуклеотиды, включают рибонуклеотиды и комбинации рибонуклеотидов и де
зоксирибонуклеотиды, которые также могут быть использованы в описанных здесь способах. Таким образом, полинуклеотидные конструкции согласно изобретению включают все полинуклеотидные конструкции, которые могут быть использованы в способах согласно настоящему изобретению для трансформации растений, включают, но не ограничиваются теми, которые содержат дезоксирибонуклеотиды, ри-бонуклеотиды и их комбинации. Такие дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды включают как природные молекулы, так и синтетические аналоги. Полинуклеотидные конструкции согласно настоящему изобретению включают все формы полинуклеотидных конструкций, которые, включают, но не ограничиваются одноцепочечной формой, двуцепочечной формой, шпиличные структуры, петлевые и прямые структуры и подобные. Кроме того, для специалиста в данной области знаний понятно, что каждая описанная здесь нуклеотидная последовательность также включает комплиментарную последовательность, являющуюся копией этой последовательности.
Например, предпочтительно консервативные замещения аминокислот могут быть выполнены в одном или более прогнозируемом положении, предпочтительно среди несущественных аминокислот. "Несущественная" аминокислота означает аминокислоту, которая может быть изменена в диком типе последовательности белка AHASL (например, последовательность SEQ ID NO: 1) без потери биологической активности, тогда как "существенная" аминокислота является необходимой для биологической активности. " Консервативные замещения аминокислот" являются теми замещениями, в которых остаток аминокислоты замещен остатком аминокислоты в похожем положении в цепи. Группы аминокислотных остатков, имеющих похожие положения в цепи, хорошо известны в данной области знаний. Эти группы включают аминокислоты основной стороны цепи (например, лизин, аргинин, гистидин), кислой стороны (например, аспартановая кислота, глутаминовая кислота), незаряженные, полярные стороны цепи (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), неполярные стороны цепи (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвленные участки цепи (например, треинин, валин, изолейцин) и ароматические участки цепи (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Такие замещения не были сделаны для консервативных аминокислотных остатков или для остатков находящихся в пределах консервативных мотивов.
Признано, что молекулы полинуклеотидов и полипептидов согласно изобретению включают молекулы полинуклеотидов и полипептидов, имеющих нуклеотидную или аминокислотную последовательность, которая достаточно идентична двойной или тройной нуклеотидной последовательности, которая представлена на фиг. 1 и 2, или аминокислотной последовательности, представленной на фиг. 1 и 2. Термин " достаточно идентична" использован здесь для обозначения первой аминокислотной или нуклеотид-ной последовательности, которая содержит полное (достаточное) или минимальное число идентичных или эквивалентных (например, в похожей области цепи) аминокислот или нуклеотидов и второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности такой, что первая и вторая аминокислотная или нук-леотидная последовательности имеют общую структурную область и/или общую выполняемую функцию. Например, аминокислотная или нуклеотидная последовательность, которая содержит общий структурный домен, имеющий по крайней мере 80% идентичности, предпочтительно 85% идентичности, более предпочтительно 90, 95, или 98% идентичности, определена здесь как достаточно идентичная.
Для определения процента идентичности между двумя аминокислотными или двумя нуклеотидны-ми последовательностям последовательности выравнивают по длине для оптимизации условий сравнения. Процент идентичности между двумя последовательностями является функцией числа идентичных положений разделенных между последовательностями (например, процент идентичности - число идентичных положений/общее число положений (например, перекрывание положений)х100). В одном из вариантов осуществления две последовательности имеют одинаковую длину. Процентная идентичность между двумя последовательностями может быть определена при помощи методик, подобных описанным ниже, с промежутками или без них. В определении процента идентичности подсчитывается количество точных совпадений.
Для определения процента идентичности между двумя последовательностями может быть использован математический алгоритм. Предпочтительным, но не ограничивающим, примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей, является алгоритм Karlin и Alt-schul (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264, модифицированный Karlin и Altschul (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Такой алгоритм введен в программы NBLAST и XBLAST ученым Altschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215:403. BLAST нуклеотидный поиск может быть осуществлен с помощью программы NBLAST, показание (сопоставление) - 100, размерность - 12, для получения нуклеотидной последовательности гомологичной полинуклеотидной молекуле согласно изобретению. BLAST протеиновый поиск может быть выполнен с помощью программы XBLAST, показание - 50, размерность - 3, для получения аминокислотной последовательности гомологичной молекуле белка согласно изобретению. Для получения последовательности содержащей разрывы для целей сравнения может быть использована программа Gapped BLAST, которая описана в Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389. Альтернативно, может быть использована программа PSI-Blast для выполнения повторного поиска, который обнаруживает отдаленные соотношения между молекулами. Смотри, Altschul et al. (1997), как указано выше. При выполнении программ BLAST, Gapped BLAST и PSI-Blast параметры, по умолчанию соответст
вующие этим программам (XBLAST и NBLAST), могут быть использованы. См. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Существуют другие предпочтительные, не ограничивающие примеры, математических программ, используемых для сравнительного анализа последовательностей от Myers и Miller (1988), CABIOS 4:11-17. Такие алгоритмы включены в программу ALIGN (версия 2.0), которая является частью пакета программного обеспечения GCG выравнивания последовательностей. При использовании программы ALIGN для сравнения аминокислотной последовательности может использоваться таблица РАМ120 массы остатков, штраф по длине 12, штраф на удлинение гена 4. Сравнение может быть выполнено и визуально.
Если не заявлено иначе, значения идентичности последовательности относятся к значению, полученному с использованием полноразмерной последовательности изобретения и многократного сравнения с использованием программы Clustal W (Nucleic Acid Research, 22(22):4673-4680, 1994), используя программу AlignX пакета Vector NTI адаптированную версию 9 (Invitrogen, 1600 Faraday Ave., Carlsbad, CA 92008), используя стандартные параметры или любую другую аналогичную программу. Под термином "аналогичная программа" понимается любая сравнительная программа, для любых двух рассматриваемых последовательностей, которая производит выравнивание последовательностей, обеспечивающее сравнение последовательностей, имеющих идентичный нуклеотид или остатки аминокислоты и определение процента идентичности в сравнении с соответствующим выравниванием, произведенным AlignX в Векторе пакета программ Версия 9 Набора NTI.
Как раскрыто здесь, полинуклеотид согласно изобретению используется для повышения толерантности к гербицидам у растений, которое содержит в своем геноме ген, кодирующий гербицид-устойчивый AHASL белок. Такой ген может быть эндогенным или трансгенным. Дополнительно, в определенном осуществлении, полинуклеотид согласно настоящему изобретению может быть соединен в любой комбинации с интересующими полинуклеотидными последовательностями для цели создания растения с желательным фенотипом.
Например, полинуклеотид согласно настоящему изобретению может быть соединен с любым другим полинуклеотидом, кодирующим полипептид, имеющий пестицидную и/или инсектицидную активность, такие как, например, токсический белок Bacillus thuringiensis (описанный в патентах US 5366892; 5747450; 5737514; 5723756; 5593881 и Geiser et al. (1986), Gene 48:109). Полученные комбинации могут также включать множественные копии любого интересующего полинуклеотида.
В то же время полинуклеотид согласно настоящему изобретению может найти применение в качестве селективного маркера для трансформированных растений, экспрессионные векторы могут включать другие селективные маркеры генов для селекции трансформированных клеток. Селективные маркерные гены, включая таковые в настоящем изобретении, используются для селекции трансформированных клеток или тканей. Маркерные гены включают, но не ограничиваются, гены, кодирующие устойчивость к антибиотикам, такие как, кодирующие неомицин фосфотрансферазу II (NEO) и гидромицин фос-фотрансферазу (НРТ), также как гены, отвечающие за устойчивость к гербицидам, таким как глифосинат аммония, бромоксилин, имидазолиноны, и 2,4-дихлорофеноксиацетат (2,4-D). См. Yarranton (1992) Curr. Opin. Biotech. 3:506-511; Christopherson et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:6314-6318; Yao et al. (1992) Cell 71:63-72; Reznikoff (1992) Mol. Microbiol. 6:2419-2422; Barkley et al. (1980) in The Operon, pp. 177-220; Hu et al. (1987) Cell 48:555-566; Brown et al. (1987) Cell 49:603-612; Figge et al. (1988) Cell 52:713-722; Deuschle et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Aci. USA 86:5400-5404; Fuerst et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:25492553; Deuschle et al. (1990) Science 248:480-483; Gossen (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Reines et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:1917-1921; Labow et al.
(1990) Mol. Cell. Biol. 10:3343-3356; Zambretti et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3952-3956; Baim et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:5072-5076; Wyborski et al.
(1991) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman (1989) Topics Mol. Struc. Biol. 10:143-162; Degenkolb et al. (1991) Antimicrob. Agents Chemother. 35:1591-1595; Kleinschnidt et al. (1988) Biochemistry 27:1094-1104; Bonin (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551; Oliva et al.
(1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka et al. (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78 ( Springer-Verlag, Berlin); Gill et al. (1988) Nature 334:721-724,
приведенные здесь в качестве ссылок.
Вышеупомянутый список выбираемых маркерных генов не предназначен, чтобы ограничить объем притязаний. Любой выбираемый маркерный ген может использоваться в настоящем изобретении.
В изобретении используются растительные экспрессионные вектора, содержащие промотор, который управляет экспрессией генов в растении и оперативно связан с выделенной молекулой полинуклео-тида. Выделенная молекула полинуклеотида включает нуклеотидную последовательность, которая коди
рует AHASL белки или функциональный фрагмент или их вариант. Указанный растительный экспресси-онный вектор не зависит от специфического промотора, лишь бы только этот промотор был способен к управлению экспрессии генов в клетке растения. Предпочтительными векторами являются конститутивные промоторы и тканеспецифичные промоторы.
Трансформационные векторы могут быть использованы для получения растений, трансформированных интересующими генами. Трансформационные векторы будут содержать селективные маркерные гены согласно изобретению и интересующие гены, которые будут введены и типично экспрессироваться в трансформированном растении. Такие селективные маркерные гены включают полинуклеотид согласно изобретению, кодирующий двойной или тройной мутант полипептида AHASL, где полинуклеотид оперативно связан с промотором, управляющим экспрессией генов в растительной клетке. Для использования в растении или растительной клетке трансформационный вектор содержит селективные маркерные гены, содержащие полинуклеотид согласно изобретению, который кодирует двойной или тройной мутант полипептида AHASL, оперативно связанный с промотором, управляющим экспрессией генов в растительной клетке.
Интересующие гены согласно изобретению могут быть изменены в зависимости от желаемого результата. Например, различные изменения в фенотипе могут включать различные интересующие изменения, включая изменение состава жирных кислот в растении, изменение содержания аминокислоты в растении, изменение механизмов защиты от насекомых и/или патогенов растения и подобные.
Эти результаты могут быть достигнуты, обеспечивая экспрессию гетерологичных продуктов или увеличивая экспрессию эндогенных продуктов растения. Альтернативно, результаты могут быть достигнуты, обеспечивая сокращение экспрессии одного или более эндогенных продуктов, особенно ферментов или кофакторов растения. Эти изменения приводят к изменению в фенотипе трансформированного растения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения интересующие гены включают гены устойчивости к насекомым, например, такие как токсический белок Bacillus thuringiensis (патенты США № 5366892; 5747450; 5736514; 5723756; 5593881; и Geiser et al. (1986), Gene 48:109).
Полипептиды согласно изобретению могут быть выделены, например, из растения подсолнечника и могут использоваться в комбинации.
Полинуклеотид согласно изобретению может быть использован для увеличения устойчивости гербицид-толерантных растений. Изобретение далее относится к гербицид-толерантным растениям, которые содержат два или более полинуклеотида, кодирующего единичный мутант AHASL полипептида. Поли-нуклеотиды, кодирующие гербицид толерантные AHASL белки и гербицид-толерантные растения, содержащие эндогенный ген, который кодирует гербицид-толерантный белок AHASL, относятся к настоящему изобретению и те, которые известны в данной области знаний. См., например, патенты США № 5013659, 5731180, 5767361, 5545822, 5736629, 5773703, 5773704, 5952553 и 6274796; которые приведены здесь в качестве ссылок. Способы увеличения устойчивости гербицид-толерантных растений включают трансформацию гербицид-толерантного растения хотя бы одной полинуклеотидной конструкцией, содержащей промотор, управляющий экспрессией генов в растительных клетках, оперативно связанный с полинуклеотидом согласно изобретению.
Многочисленные векторы трансформации растения и методы трансформации растения являются общеизвестными, См., например, G- et а/- С1986) Plant Physiol.,
81:301-305; Fry, J., et al. (1987) Plant Cell Rep. 6:321-325; Block, M. (1988) Theor. Appl Genet.76:767-774; Hinchee, et al. (1990) Stadler. Genet. Symp.203212.203-212; Cousins, et al. (1991) Aust. J. Plant Physiol. 18:481-494; Chee, P. P. and Slightom, J. L. (1992) Gene. 118:255-260; Christou, et al. (1992) Trends. Biotechnol. 10:239-246; D'Halluin, et al.
(1992) Bio/Technol. 10:309-314; Dhir, et al. (1992) Plant Physiol. 99:81-88; Casas et al.
(1993) Proc. Nat. Acad Sci. USA 90:11212-11216; Christou, P. (1993) In Vitro Cell. Dev. Biol.-Plant; 29P:119-124; Davies, et al. (1993) Plant Cell Rep. 12:180-183; Dong, J. A. and Mchughen, A. (1993) Plant Sci. 91:139-148; Franklin, С. I. and Trieu, T. N. (1993) Plant. Physiol. 102:167; Golovkin, et al. (1993) Plant Sci. 90:41-52; Guo Chin Sci. Bull. 38:20722078; Asano, et al. (1994) Plant Cell Rep. 13; Ayeres N. M. and Park, W. D. (1994) Crit. Rev. Plant. Sci. 13:219-239; Barcelo, et al. (1994) Plant. J. 5:583-592; Becker, et al. (1994) Plant. J. 5:299-307; Borkowska et al. (1994) Acta. Physiol Plant. 16:225-230; Christou, P. (1994) Agro. Food. Ind. Hi Tech. 5: 17-27; Eapen et al. (1994) Plant Cell Rep. 13:582-586; Hartman, et al. (1994) Bio-Technology 12: 919923; Ritala, et al. (1994) Plant. Mol. Biol. 24:317-325; и Wan, Y. С. и Lemaux, P. G. (1994) Plant Physiol. 104:3748.
Способы согласно изобретению подразумевают введение полинуклеотидной конструкции в растение. Под "введением" подразумевается предоставление растению конструкции полинуклеотида в таком виде, что конструкция получает доступ к внутреннему пространству клетки растения.
Способы согласно изобретению не зависят от конкретных методов введения полинуклеотидной
конструкции в растение, они просто должны обеспечивать доступ полинуклеотидной конструкции к внутреннему пространству хотя бы одной клетки растения.
Такие способы введения полинуклеотидной конструкции в растения хорошо известны в данной области знаний, но не ограничиваются, методами стабильной трансформации, методы нестабильной трансформации и вирус-опосредованные методы.
"Стабильная трансформация" подразумевает, что полинуклеотидная конструкция вводится в растение и интегрируется в геном растения и способна передаваться из поколения в поколение. "Нестабильная трансформация" подразумевает, что полинуклеотидная конструкция вводится в растение и не интегрируется в геном растения.
Для трансформации растения или растительной клетки нуклеотидные последовательности согласно изобретению вводятся, используя стандартные методики, в любой вектор, известный в данной области знаний, который подходит для экспрессии нуклеотидных последовательностей в растении или растительной клетке. Выбор вектора зависит от предпочитаемой методики трансформации и желаемого вида растения, которое должно быть трансформировано. В одном из осуществлений изобретение относится к нуклеотидной последовательности AHASL, оперативно связанной с растительным промотором, который вызывает увеличение экспрессии генов растительной клетке, и к конструкции, которая затем вводится в растение, которое чувствительно к имидазолиноновым гербицидам или сульфомочевине и к регенерации трансформированного растения.
Трансформированные растения устойчивы к такому уровню имидазолинонового гербицида и суль-фомочевине, который уничтожил бы или значительно повредил бы нетрансформированное растение.
Этот метод может быть применен к любым видам растения, однако, полезнее всего это будет для хлебных злаков.
Методики конструирования растительных экспрессионных кассет и введения чужеродных нуклеиновых кислот в растения являются общеизвестными в данной области знаний и были предварительно описаны.
Например, чужеродная ДНК может быть введена в растение, используя векторы на основе плазмид, индуцирующих опухоли (Ti плазмиды). Методика трансформации с использованием Agrobacterium также хорошо известна в данной области знаний. Штаммы Agrobacterium (например, Agrobacterium tumefa-ciens или Agrobacterium rhizogenes) содержат (Ti или Ri плазмиды) и Т-ДНК элементы, которые перемещаются в растение после его инфицирования штаммом Agrobacterium. Т-ДНК (трансферная ДНК) интегрируется в геном растительной клетки. Т-ДНК может локализоваться в Ri- или Ti-плазмиде или отдельно входит в состав так называемого бинарного вектора. Методы Agrobacterium опосредованной трансформации описаны, например, в Horsch R.B. et al. (1985), Science 225:1229f. Agrobacterium опосредованная трансформации может быть использована как у двудольных, так и у однодольных растений. Трансформация растений с использованием Agrobacteria описана в White F.F., Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; Vol. 1, Engineering and Utilization, edited by S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, p. 15-38; Jenes В et al. (1993), Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, edited by S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, p. 128-143; Potrykus (1991), Annu Rev Plant Physiol Plant Molec Biol. 42:205- 225. Другие методы, используемые для вставки чужеродной ДНК, включают PEG-опосредованную трансформацию протопластов, электропорацию, микроинъекции ДНК в клетку, биолистику или бомбардировку микрочастицами для прямого внедрения ДНК.
Такие методы хорошо известны в данной области знаний (US 5405765 автора
Vasil et al.; Bilang et al. (1991) Gene 100: 247-250; Scheid et al. (1991) Mol. Gen. Genet,
228: 104-112; Guerche et al. (1987) Plant Science 52: 111-116; Neuhause et al. (1987) Theor. Appl Genet. 75: 30-36; Klein et al. (1987) Nature 327: 70-73; Howell et al. (1980) Science 208:1265; Horsch et al. (1985) Science 227: 1229-1231; DeBlock et al. (1989) Plant Physiology 91: 694-701; Methods for Plant Molecular Biology (Weissbach and Weissbach, eds.) Academic Press, Inc. (1988) и Methods in Plant Molecular Biology (Schuler and Zielinski, eds.) Academic Press, Inc. (1989). Метод трансформации зависит от вида растительной клетки, которая должна быть трансформирована, стабильности используемого вектора, уровня экспрессии генного продукта и других параметров.
Другие методы введения нуклеотидной последовательности в растительную клетку и последующее встраивание в геном растения включают микроинъекции ДНК в клетку Crossway et al. (1986), Biotech-niques 4:320-334, электропорацию, как описано у
Riggs et al. (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:5602-5606, Agrobacterium-опосредованная трансформация описана у Townsend et al. US 5563055, Zhao et al. US 5981840, прямое введение генов как описано у Paszkowski et al. (1984) EMBO J. 3:2717-2722, бомбардировка микрочастицами как описано например у Sanford et al. US 4945050; Tomes et al. US 5879918; Tomes et al. US 5886244; Bidney et al. US 5932782; Tomes et al. (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment," in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg and Phillips (Springer-Verlag, Berlin); McCabe et al. (1988) Biotechnology 6:923926); и Led трансформация (WO 00/28058). Также смотри Weissinger et al. (1988) Ann. Rev. Genet. 22:421-477; Sanford et al. (1987) Particulate Science and Technology 5:27-37 (лук); Christou et al. (1988) Plant Physiol. 87:671-674 (соя); McCabe et al. (1988) Bio/Technology 6:923-926 (соя); Finer and McMullen (1991) In Vitro Cell Dev. Biol. 27P:175-182 (соя); Singh et al. (1998) Theor. Appl. Genet. 96:319-324 (соя); Datta et al. (1990) Biotechnology 8:736-740 (рис); Klein et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4305-4309 (кукуруза); Klein et al. (1988) Biotechnology 6:559-563 (кукуруза); Tomes, US 5240855; Buising et al. US 5322783 и 5324646; Tomes et al. (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment," in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg (Springer-Verlag, Berlin) (кукуруза); Klein et al. (1988) Plant Physiol. 91:440-444 (кукуруза); Fromm et al. (1990) Biotechnology 8:833-839 (кукуруза); Hooykaas-Van Slogteren et al. (1984) Nature (London) 311:763-764; Bowen et al. US 5736369 (злаки); Bytebier et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5345-5349 (лилийные); De Wet et al. (1985) in The Experimental Manipulation of Ovule Tissues, ed. Chapman et al. (Longman, New York), pp. 197-209 (пыльца); Kaeppler et al. (1990) Plant
Cell Reports 9:415-418 и Kaeppler et al. (1992) Theor. Appl. Genet. 84:560-566 (трансформация клеток посредством прокалывания при встряхивани их в суспензии
микроигл); D'Halluin et al. (1992) Plant Cell 4:1495-1505 (electroporation); Li et al. (1993)
Plant Cell Reports 12:250-255 и Christou and Ford (1995) Annals of Botany 75:407-413
(rice); Osjoda et al. (1996) Nature Biotechnology 14:745-750 (трансформация кукурузы с использованием Agrobacterium tumefaciens); которые здесь указаны в виде ссылок.
Полинуклеотид согласно изобретению может быть введен в растение при контактировании с вирусом или вирусной нуклеиновой кислотой.
В общих чертах эти методы включают соединение полинуклеотидной конструкции согласно изобретению с вирусной ДНК или РНК молекулой. Является очевидным что, AHASL белок, использованный в настоящем изобретении, первоначально может быть синтезирован как часть вирусного полибелка, который затем процессируется при протеолизе in vivo или in vitro до получения желаемого рекомбинант-ного белка. Далее, является очевидным, что промотор, использованный в настоящем изобретении, также охватывает промоторы, используемые для транскрипции вирусной полимеразой. Методы введения по-линуклеотидной конструкции в растение и экспрессирования белка, кодируемого ей, включают вирусные ДНК или РНК молекулы, хорошо известны в данной области знаний. См., например, патенты США № 5889191, 5889190, 5866785, 5589367 и 5316931, приведенные здесь в качестве ссылок.
Трансформированные клетки могут быть выращены в растения в соответствии с обычными методиками. См., например, McCormick et al. (1986), Plant Cell Reports 5:81-84. Эти растения могут быть выращены и также опылены тем же трансформированным видом или другим видом, и полученный гибрид будет иметь конститутивную экспрессию желаемого признака в фенотипе. Два или больше поколения могут быть выращены, чтобы гарантировать, что экспрессия желательного признака фенотипично устойчиво поддерживается и унаследовано и затем семена собираются, чтобы гарантировать, что экспрессия желательного фенотипичного признака было достигнуто. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает трансформированное семя, (так называемое "трансгенное семя"), имеющее полинуклеотидную конструкцию согласно изобретению, например, экспрессионная кассета стабильно встроенный в его геном.
Настоящее изобретение может быть использовано для трансформации любого вида растения, включая, но не ограничиваясь, однодольные и двудольные растения. Например, растения интересующих видов включают, но не ограничиваются, кукурузу (Zea mays), виды семейства Brassica (такие как В. napus, В. rapa, B. juncea), особенно те виды Brassica, которые используют для получения масло из семян, люцерну (Medicago sativa), рис (Oryza sativa), рожь (Secale cereale), сорго (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare), просо (т.е. пеннисетум сизый (Pennisetum glaucum), просо обыкновенное (Panicum miliaceum), просо итальянское (Setaria italica), просо пальчатое (Eleusine coracana)), подсолнечник (Helianthus
annuus), сафлор (Carthamus tinctorius), пшеницу (Triticum aestivum, T. Turgidum ssp. durum), сою (Glycine max), табак (Nicotiana tabacum), картофель (Solanum tuberosum), земляной орех (Arachis hypogaea), хлопок (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), топинамбур (Ipomoea batatus), маниоку (Manihot escu-lenta), кофе (Coffea spp.), кокос (Cocos nucifera), ананас (Ananas comosus), цитрусовые растения (Citrus spp.), какао (Theobroma cacao), чай (Camellia sinensis), banana (Musa spp.), авокадо (Persea americana), инжир (Ficus casica), гуава (Psidium guajava), манго (Mangifera indica), оливу (Olea europaea), папайю (Carica papaya), орех кешью (Anacardium occidental), макадамию (Macadamia integrifolia), миндаль (Prunus amyg-dalus), сахарную свеклу (Beta vulgaris), сахарный тростник (Saccharum spp.), овес, ячмень, овощи, декоративные растения и хвойные. Предпочтительно растения настоящего изобретения относятся к сельскохозяйственным растениям (например, подсолнечник, Brassica sp., хлопок, сахарная свекла, соя, земляной орех, люцеран, сафлор, табак, злаковые, рис, пшеница, рожь, ячмень, тритикале, сорго, просо и так далее).
Растения согласно изобретению являются гербицид-устойчивыми и таким образом могут найти свое применение в способах борьбы с сорняками, которые включают внесение гербицидов. Далее настоящее изобретение относится к способу борьбы с сорняками на территории выращивания устойчивого к гербициду растения.
Способ включает внесение эффективного количества гербицида под сорняки и под устойчивое к гербициду растение, где растение имеет повышенную устойчивость хотя бы к одному гербициду, инги-бирующему активность AHAS, в частности к имидазолиноновому гербициду или сульфомочевине, по сравнению с растением дикого типа. В таком способе борьбы с сорняками гербицид-устойчивым растением является растение согласно изобретению, предпочтительно злаковые растения, включая, но не ограничиваясь, подсолнечник, люцерна, Brassica sp., соя, хлопок, сафлор, земляной орех, табак, томат, картофель, пшеница, рис, кукуруза, сорго, овес, ячмень, просо и сорго.
Предоставляя растения с повышенной устойчивостью к гербицидам, особенно к имидазолиноновым гербицидам и сульфомочевине, широкое разнообразие осуществлений может использоваться для того, чтобы защитить растения от сорняков, увеличить рост растения и уменьшить конкуренцию за питательные вещества.
Гербицид может использоваться отдельно для довсходовой, послевсходовой, предпосевной и посевной борьбы с сорняками на территории роста описанных здесь растений, или гербицид может содержать другие добавки.
Гербицид также может быть использован при обработке семян. Добавки, которые используются в составе смесей имидазолиноновых или сульфонилмочевинных гербицидов, включают другие гербициды, поверхностно-активные вещества, адъюванты, лиофилизирующие агенты, адгезивные агенты, стабилизирующие агенты и подобные. Состав гербицида может быть выполнен в сухой или влажной форме, которая включает, но не ограничивается, сыпучий порошок, концентрат в виде эмульсии или жидкий концентрат. Гербицид и составы гербицида могут быть применены в соответствии с обычными методами, например распылением, орошением, ирригацией, опылением или подобным методами.
Настоящее изобретение относится к нетрансгенным и трансгенным растениям и семенам с увеличенной устойчивостью по крайней мере к одному гербициду, особенно к гербициду, ингибирующему AHAS, предпочтительно к имидазолиноновым и сульфонилмочевинным гербицидам, наиболее предпочтительно к имидазолиноновым гербицидам.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения растения и семена согласно изобретению демонстрируют более высокий уровень устойчивости к гербицидам по сравнению с подобными растениями, которые содержат только один единственный мутант полипептида AHASL.
Такие растения и семена согласно изобретению могут найти использование в улучшенных способах борьбы с сорняками, которые предусматривают внесение гербицида под сорняки и под устойчивые к гербициду растения в эффективном количестве, которое включает более высокую концентрацию гербицида, или уровень чем тот который может использоваться к подобным растениям, которые включают только один единственный мутант полипептида AHASL. Соответственно, такие улучшенные способы предоставляют способ борьбы с сорняками превосходящий по сравнению с существующими методами, включающим растения, имеющие только один единственный мутант полипептида AHASL и применение более низкой концентрации или уровня гербицида.
Настоящее изобретение также относится к растениям, семенам, которые трансформированы по крайней мере одной молекулой полинуклеотида экспрессионной кассетой или вектором трансформации согласно изобретению. Такие трансформированные растения и семена имеют увеличенную толерантность или устойчивость по крайней мере к одному гербициду, к такому уровню гербицида, который уничтожает или предотвращает рост нетрансформированного растения. Предпочтительно трансформированными растениями и семенами согласно изобретению являются Arabidopsis thaliana и злаковые культуры.
Настоящее изобретение относится, таким образом, к семенам, полученным от вышеуказанных растений, содержащим полинуклеотид(ы), кодирующие AHASL.
Предпочтительным объектом изобретения являются семена, обработанные AHAS-ингибирующим
гербицидом.
В предпочтительной форме выполнения изобретения гербицид, ингибирующий AHAS, выбран из группы, состоящей из имидазолинонов, сульфонилмочевин, триазол-пиримидинов, пиримидинилокси-бензоатов и их смесей.
В более предпочтительной форме выполнения изобретения гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.
В еще более предпочтительной форме выполнения изобретения имидазолинон выбран из имазета-пира, имазапика, имазамокса и имазапира.
Настоящее изобретение относится к способам, которые включают использование по крайней мере одного гербицида, ингибирующего активность AHAS, выбранного из группы, состоящей из имидазоли-ноновых гербицидов, сульфонилмочевины, триазолопиримидиновых гербицидов, пиримидинилоксибен-зоатных гербицидов, сульфониламино-карбонилтриазолиновых гербицидов и их смеси. В этих способах гербицид, ингибирующий AHAS, может быть применен любым методом, известным в данной области знаний, включая, но не ограничиваясь, обработку семян, обработку почвы, обработку листьев.
Перед применением AHAS-ингибирующий гербицид может быть преобразован в общепринятые препаративные формы, например, растворы, эмульсии, суспензии, дусты, порошки, пасты и гранулы. Форма использования зависит от особой намеченной цели, и в каждом случае, должна гарантировать тонкое и равномерное распределение состава согласно изобретению.
Препаративные формы готовят по стандартным методикам (См., например, патент США 3060084, ЕР-А 707445 (для жидких концентратов), Browning, "Agglomeration", Chemical Engineering, Dec. 4, 1967, 147-48, Perry's Chemical Engineer's Handbook, 4th Ed., McGraw-Hill, New York, 1963, pages 8-57 и также WO 91/13546, US 4172714, US 4144050, US 3920442, US 5180587, US 5232701, US 5208030, GB 2095558, US 3299566, Klingman, Weed Control as a Science, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1961, Hance et al., Weed Control Handbook, 8th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1989 and Mollet, H., Grubemann, A., Formulation technology, Wiley VCH Verlag GmbH, Weinheim (Germany), 2001, 2. D. A. Knowles, Chemistry and Technology of Agrochemical Formulations, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, 1998 (ISBN 07514-0443-8), например смешивая активный состав со вспомогательными веществами, подходящими для приготовления агрохимикатов, такими как растворитель и/или носители, если необходимо эмульгаторы, сурфактанты и диспергаторы, консерванты, агенты антивспенивания, агенты предотвращающие замерзание, формы для обработки семян могут также необязательно содержать красители и/или связывающие вещества и/или гелеобразующие агенты.
Примерами подходящих растворителей могут быть вода, ароматические растворители (например, продукты Solvesso, ксилол), парафины, (например, минеральные нефтяные фракции, спирты (например, метанол, бутанол, пентанол, бензиловый спирт), кетоны (например, циклогексанон, гамма-бутирлактон), пирролидоны (NMP, NOP), ацетаты (гликоль диацетат), гликоли, диметиламиды жирных кислот и эфиры жирных кислот. В принципе, растворяющиеся смеси могут также использоваться.
Примерами подходящих носителей могут быть почвенные естественные полезные ископаемые (например, каолины, глины, тальк, мел) и синтетические минералы (например, высоко диспергированный кварц, силикаты).
Подходящими эмульгаторами являются неионогенные и анионные эмульгаторы (например, эфиры полиоксиэтиловый эфир жирного спирта, алкилсульфонаты и арилсульфонаты).
Примерами диспергаторов могут быть жидкие отходы лигнинового сульфита и метилцеллюлоза.
Подходящей поверхностно-активной добавкой являются щелочной металл, щёлочноземельный металл, аммонийные соли лигносульфоновой кислоты, нафталинсульфоновая кислота, феносульфоновая кислота, дибутилнафталинсульфоновая кислота, алкиларилсульфонаты, алкилированные сульфаты, ал-килсульфонаты, сульфаты жирных спиртов, жирные кислоты и сульфатные эфиры жирных двухатомных спиртов, кроме того конденсаты сульфонированного нафталина и производные нафталина с формальдегидом, конденсаты нафталина или нафталинсульфоновой кислоты с фенолом и формальдегидом, эфир полиоксиэтиленоктилфенола, этоксилированный изооктифенол, октифенол, нонифенол, алкилфенольные эфиры многоатомных спиртов, трибутилфениловые эфиры многоатомных спиртов, тристеарилфенило-вые эфиры многоатомных спиртов, алкилариловые полиэфиры спиртов, спирты и конденсаты этиленок-сида жирных спиртов, этоксилированное касторовое масло, эфиры полиоксиэтиленалкилов, этоксилиро-ванные полиоксипропилены, лауриловый эфир ацеталя, эфиры сорбитола, жидкие отходы лигносульфита и метилцеллюлоза.
Вещества, которые являются подходящими для подготовки непосредственно распыляемых растворов, эмульсий, паст или нефтяных дисперсий, это минеральные нефтяные фракции со средней-высокой температурой кипения, типа керосина или дизельного топлива, кроме того масла битума и масла растительного или животного происхождения, алифатических, циклических и ароматических углеводородов, например толуол, ксилол, парафин, тетрагидронафталин, алкилированные нафталины или их производные, метанол, этанол, пропанол, бутанол, циклогексанол, циклогексанон, изофорон, высокополярные растворители, например сульфоксид этана, N-метилпирролидон или вода.
Агенты предотвращающие замерзание, типа глицерина, этиленового спирта, пропиленгликоля и
бактерициды, могут быть также добавлены к препаративной форме.
Подходящими противовспенивающими агентами являются, например, противовспенивающие агенты на основе силикона или стеарат магния.
Подходящими консервантами являются, например, дихлорфенол и бензилалкохолгемиформальде-
гид.
Препаративные формы для обработки семян могут дополнительно содержать связующие вещества и оптические красители.
Связующие вещества могут быть добавлены для улучшения адгезии активного вещества на семенах после обработки.
Подходящими связующими веществами могут быть блок-сополимеры EO/PO сурфактантов, но также и поливиниловый спирт, поливинилпирролидоны, полиакрилаты, полиметакрилаты, полибутены, полиизобутилены, пенопласт, полиэтиленамины, полиэтиленимимны (Lupasol(r), Polymin(r)), многоатомные эфиры, полиуретаны, поливинилацетат, тилоза и сополимеры из этих полимеров.
При необходимости красители также могут быть включены в препаративную форму. Подходящими красителями или пигментами для препаративной формы для обработки семян являются родамин В, C.I. пигмент красный 112, C.I. растворимый красный 1, пигмент голубой 15:4, пигмент голубой 15:3, пигмент голубой 15:2, пигмент голубой 15:1, пигмент голубой 80, пигмент желтый 1, пигмент желтый 13, пигмент 112, пигмент красный 48:2, пигмент красный 48:1, пигмент красный 57:1, пигмент красный 53:1, пигмент оранжевый 43, пигмент оранжевый 34, пигмент оранжевый 5, пигмент зеленый 36, пигмент зеленый 7, пигмент белый 6, пигмент коричневый 25, основной фиолетовый 10, основной фиолетовый 49, кислотный красный 51, кислотный красный 52, кислотный красный 14, кислотный голубой 9, кислотный желтый 23, основный красный 10, основный красный 108.
Примером подходящего гелеобразующего агента является карраген (Satiagel(r)).
Порошки, вещества для распыления, и дусты могут быть получены смешиванием или параллельным размолом биологически активных веществ с твердым носителем.
Гранулы, например, гранулы с покрытием, пропитанные гранулы и гомогенезированные гранулы могут быть получены при соединении биологически активного вещества с твердым носителем.
Примерами твердых носителей являются земельные минералы, такие как силикагели, силикаты, тальк, каолин, аттаклей, известняк, извести, мел, известковая глина, глины, доломит, диатомовый грунт, сульфат кальция, сульфат магния, окись магния, основные синтетические материалы, удобрения, такие как, например, сульфат аммония, фосфат аммония, нитрат аммония, мочевина и продукты растительного происхождения, такие как злаковые продукты, продукты из коры дерева, мелкие опилки, продукты из ореховой скорлупы, порошки целлюлозы и других твердых носителей.
В общем, препаративные формы включают от 0,01 до 95 мас.%, предпочтительно от 0,1 до 90 мас.%, гербицида, ингибирующего AHAS. В этом случае, AHAS-ингибирующие гербициды используются в чистом виде от 90 до 100 мас.%, предпочтительно от 95 до 100 мас.% (согласно спектру ЯМР). Для обработки семян соответствующие формы могут быть разбавлены в 2-10 раз до концентрации готовой к использованию, которая составляет 0,01-60 мас.%, предпочтительно 0,1-40 мас.%.
AHAS-ингибирующий гербицид может использоваться как таковой в виде их препаративных форм или форм использования, полученных из них, например, в форме раствора для распыления, порошка, суспензии или дисперсии, эмульсии, масляной дисперсии, пасты, дустов, веществ для разбрасывания или гранул, посредством разбрызгивания, распыления, опыливания, распространения или полива. Используемые формы зависят от намеченных целей; и предназначены, чтобы гарантировать в каждом случае оптимальное распределение AHAS-ингибирующего гербицида согласно изобретению.
Водные формы могут быть получены из концентрированных эмульсий, паст, или смачиваемых порошков (разбрызгиваемые порошки, масляная дисперсия), при добавлении воды. Чтобы получить эмульсии, пасты или маслянную дисперсию, вещества смешивают с маслом или растворителем, вещества могут быть гомогенизированы в воде посредством увлажнителя, агента придающего липкость, диспергато-ра или эмульгатора.
Тем не менее, также возможно готовить концентраты, состоящие из биологически активного вещества, увлажнителя, агента придающего липкость, диспергатора или эмульгатора и, если необходимо, растворителя или масла, и такие концентраты являются подходящими для растворения в воде.
Концентрации активных компонентов в готовых к использованию препаративных формах могут быть различны в пределах относительно широких диапазонов. Но, в общем, они составляют от 0,0001 до 10 мас.%, предпочтительно от 0,01 до 1 мас.%.
AHAS-ингибирующий гербицид может также успешно использоваться в форме "крайне низкий объем" (ULV), это является возможным для применения формы, включающей более чем 95 мас.% активного состава, или даже применять активный состав без добавок.
Ниже представлены следующие примеры препаративных форм.
1. Продукты для растворения в воде для лиственной обработки. Для обработки семян такие продукты могут применяться как в растворенном, так и в нерастворенном виде.
A) Растворимые в воде концентраты (SL, LS).
10 мас. ч. гербицида, ингибирующего AHAS, смешивают с 90 частями воды или растворимого в воде растворителя. Альтернативно, могут добавляться увлажнители или другие вспомогательные средства. Гербицид, ингибирующий AHAS, растворяется в воде, в соответствии с чем получается форма с 10% (по массе) AHAS-ингибирующего гербицида.
B) Диспергируемые концентраты (DC).
20 мас. ч. гербицида, ингибирующего AHAS, растворяют в 70 мас.ч. циклогексанона с дополнением 10 мас. ч. диспергатора, например поливинилпирролидона. Растворение в воде дает дисперсию, в соответствии с чем получается форма AHAS ингибирующего гербицида с 20% (мас./мас.).
C) Эмульгируемые концентраты (ЕС).
15 мас.ч. гербицида, ингибирующего AHAS, растворяют в 7 мас.ч. ксилола с дополнением кальция додецилбензосульфоната и этоксилата касторового масла (в каждом случае 5 мас.ч.). Растворение с водой дает эмульсию, в соответствии с чем получена форма с 15% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида.
D) Эмульсии (EW, EO, ES).
25 мас.ч. гербицида, ингибирующего AHAS, растворяют в 35 мас.ч. ксилола с дополнением кальция додецилбензосульфоната и этоксилата касторового масла (в каждом случае 5 мас.ч.). Эта смесь перемешивается с 30 мас.ч. воды посредством механизма эмульгатора (например, Ultraturrax) и превращается в гомогенную эмульсию. Растворение с водой дает эмульсию, посредством чего получается форма с 25% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида.
E) Суспензии (SC, OD, FS).
В грануляторе смешивают 20 мас. ч. ингибирующего AHAS гербицида и 10 мас.ч. диспергаторов, увлажнителей и 70 мас. ч. воды или органического растворителя, чтобы получить суспензию гербицида, ингибирующего AHAS. Растворение с водой дает устойчивую суспензию гербицида, ингибирующего AHAS, в соответствии с чем получается форма с 20% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида.
F) Гранулы, диспергируемые в воде, и гранулы, растворимые в воде (WG, SG).
50 мас.ч. гербицида, ингибирующего AHAS, мелко размалывают с дополнением 50 мас.ч. дисперга-торов и увлажнителей и получают гранулы, диспергируемые в воде, или гранулы, растворимые в воде посредством технических приборов (например, экструдора, колонны с распылительным орашением, вихревым распылением). Растворение с водой дает устойчивую дисперсию или раствор гербицида, ингиби-рующего AHAS, в соответствии с чем получается форма с 50% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида.
G) Порошки диспергируемые в воде и порошки растворимые в воде (WP, SP, SS, WS).
75 мас.ч. гербицида, ингибирующего AHAS, мелко размалывают в роторе с дополнением 25 мас.ч. диспергаторов, увлажнителей и силикагеля. Растворение с водой дает устойчивую дисперсию или раствор гербицида, ингибирующего AHAS, посредством чего получается форма с 75% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида.
H) Гелевые формы (GF).
В грануляторе размельчают 20 мас.ч. гербицида, ингибирующего AHAS, с добавлением 10 мас.ч. диспергаторов, 1 части гелеобразующего увлажняющего агента и 70 мас. ч. воды или органического растворителя, чтобы получить суспензию гербицида, ингибирующего AHAS. Растворение с водой дает устойчивую суспензию гербицида, ингибирующего AHAS, посредством чего получается форма с 20% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида. Эта форма геля является подходящей для обработки семян.
2. Продукты, используемые для обработки листьев в неразведенном виде. В целях обработки семян такие продукты могут быть применены в растворенном виде.
A) Распыляемые порошки (DP, DS).
5 мас.ч. гербицида, ингибирующего AHAS, мелко измельчали и смешивали с 95 мас.ч. мелко измельченного каолина. Получается распыляемый продукт, имеющий 5% (мас./мас.) AHAS ингибирующе-го гербицида.
B) Гранулы (GR, FG, GG, MG).
Половину по массе гербицида, ингибирующего AHAS, размалывают и смешивают с 95,5 мас.ч. носителя, посредством чего получена форма с 0,5% (мас./мас.) AHAS ингибирующего гербицида. Обычные методы - экструзия, сушка распылением, грануляция в псевдоожиженном слое. Так получают гранулы, которые будут использованы для обработки листьев.
Обычные препаративные формы для обработки семян включают, например, текучие концентраты FS, растворы LS, порошки для сухой обработки DS, вододиспергируемые порошки для шламовой обработки WS, растворимые в воде порошки SS и эмульсия ES и ЕС и гель образующие агенты.
Эти формы могут быть применены для обработки семян в растворенном виде или нерастворенном. Внесение выполняют перед посевом или непосредственно на семена.
В предпочтительном варианте осуществления форма FS используется для обработки семян. Обычно, форма ФС может включать 1-800 г/л активного компонента, 1-200 г/л сурфактантов, 0-200 г/л агента, препятствующего замерзанию, 0-400 г/л связующего вещества, 0-200 г/л пигмента и до 1 л растворителя,
предпочтительно воды.
Для обработки семян семена растений, устойчивых к гербициду, согласно настоящему изобретению обрабатывают гербицидами, предпочтительно гербицидами, выбранными из группы, включающей AHAS-ингибирующие гербициды, таких как амидосульфурон, азимсульфурон, бензилсульфурон, хлори-мурон, хлорсульфурон, циносульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон, этоксисульфурон, флаза-сульфурон, флупирсульфурон, фомасульфурон, галосульфурон, имазосульфурон, йодосульфурон, мезо-зульфурон, метсульфурон, никосульфурон, оксасульфурон, примисульфурон, просульфурон, пиразо-сульфурон, римсульфурон, сульфометурон, сульфосульфурон, тифенсульфурон, триасульфурон, трибе-нурон, трифлоксисульфурон, трифлусульфурон, тритосульфурон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазапир, имазакуин, имазктапир, хлорансулам, диклосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам, пе-ноксулам, биспирибак, пириминобак, пропоксикарбазон, флукарбазон, пирибезоксим, пирифталид, пи-ритиобак и их смеси или формы, включающие гербицид, ингибирующий AHAS.
Термин "обработка семян" включает все подходящие методы обработки семян, известные в данной области знаний, такие как протравливание семян, покрытие семени, сухое протравливание семян, пропитывание семян и гранулирование семян. Таким образом, объектом изобретения является способ предотвращения нежелательного вегетативного роста, включающий обработку семян растений перед посевом и/или после предварительного проращивания гербицидом, ингибирующим AHAS. В предпочтительном выполнении указанного способа гербицид, ингибирующий AHAS выбран из группы, состоящей из ими-дазолинононов, сульфонилмочевин, триазолпиримидинов, пиримидинилоксибензоатов и их смесей. В еще одном предпочтительном выполнении указанного способа гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон. В более предпочтительном выполнении указанного способа имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и имазапира.
В настоящем изобретении используется способ обработки почвы внесением, в частности рядовой сеялкой: гранулированной формы, содержащей гербицид, ингибирующий AHAS, такие как состав/форма, например гранулированная форма, с необязательно одним или более твердым или жидким, с точки зрения сельского хозяйства приемлемые носителем и/или необязательно с одним или более с точки зрения сельского хозяйства приемлемыми сурфактантами. Этот способ может успешно использоваться, например, в грядах хлебных злаков, кукурузы, хлопка и подсолнечника.
Настоящее изобретение также включает семена, покрытые или содержащие форму для обработки семян, включающую по крайней мере один гербицид, ингибирующий AHAS, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, азимсульфурон, бензилсульфурон, хлоримурон, хлорсульфурон, цино-сульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфурон, фомасульфурон, галосульфурон, имазосульфурон, йодосульфурон, мезозульфурон, метсульфурон, нико-сульфурон, оксасульфурон, примисульфурон, просульфурон, пиразосульфурон, римсульфурон, сульфо-метурон, сульфосульфурон, тифенсульфурон, триасульфурон, трибенурон, трифлоксисульфурон, триф-лусульфурон, тритосульфурон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазапир, имазакуин, имазктапир, хлорансулам, диклосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам, пеноксулам, биспирибак, пиримино-бак, пропоксикарбазон, флукарбазон, пирибезоксим, пирифталид, пиритиобак.
Термин "семя" охватывает семена и зачатки растения (пропагулы) всех видов, включает, но не ограничивается истинными семенами, частями семян, корневые побеги, клубнелуковица, луковицами, плодами, клубнями, зернами, отводки, отростки, и подобные и означает в предпочтительном осуществлении истинные семена.
Термин "покрытый и/или содержащий" означает, что активный компонент находится на большей части поверхности промежуточного продукта во время внесения, хотя большая или меньшая часть компонента может проникнуть в промежуточный продукт, в зависимости от метода внесения. Когда упомянутый промежуточный продукт установлен (внесен), он может абсорбировать активный компонент.
Обработка семян гербицидом, ингибирующим AHAS, или формой, содержащей гербицид, ингиби-рующий AHAS, проводится разбрызгиванием или распылением на семена перед посевом растений или перед прорастанием растений.
При обработке семян, соответствующие формы используются в эффективном количестве гербицида, ингибирующего AHAS, или формы, содержащие гербициды, ингибирующие AHAS.
Таким образом, используемые нормы составляют от 0,1 г до 10 кг гербицида, ингибирующего AHAS (или смеси гербицида, ингибирующего AHAS, или формы), на 100 кг семян, предпочтительно от 1 г до 5 кг на 100 кг семян, в особенности от 1 г до 2,5 кг на 100 кг семян. Для определенных злаковых культур, таких как салат, норма может быть выше.
Настоящее изобретение относится к способу борьбы с нежелательной растительностью или борьбе с сорняками, включающему обработку семян устойчивых к гербицидам растений согласно настоящему изобретению перед посевом и/или после предварительного проращивания AHAS- ингибирующим гербицидом.
Способ может дополнительно включать посев семян, например, в почву в поле или в поддерживающую рост среду в оранжерее.
Способ может найти специфическое использование в борьбе с нежелательной растительностью или
борьбе с сорняками в непосредственной близости от семян.
Борьба с нежелательной растительностью является, как известно, уничтожением сорняков и/или замедлением или ингибированием нормального роста сорняков. Сорняки, в самом широком смысле, означают все те растения, которые растут в местоположениях, где они являются нежелательными.
Сорняки существующего изобретения включают, например, двудольные и однодольные сорняки. Двудольные сорняки включают, но не ограничиваются, сорняками родов: горчица, клоповник, подмаренник, звездчатка, ромашка, пупавка, галинзога, марь, крапива, крестовник, амарантус, портулак, дурнишник, вьюнковых, ипомея, гречиха, сесбания, амброзия, бодяк, чертополох, паслен, жерушник, ротала, линдерния, яснотка, вероника, канатник, эмекс, дурман, виола, пикульник, мак, василек, клевер, лютик и одуванчик.
Однодольные сорняки включают, но не ограничиваются, сорняками родов: ежовник, щетинник, просо, росичка, тимофеевка, мятлик, овсяница, элевзина, ветвянка, плевел, костер, овес, папирус, сорго, пырей, свинорой, монохория, фимбристилис, стрелолист, ситняг, камыш, паспалум, бородач, сфеноклея, дактилоктемиум, полевица, лисохвост и метлица.
Кроме того, сорняками согласно настоящему изобретению могут являться, например, хлебные злаки, которые растут в нежелательном месте. Например, самосевные растения кукурузы, которые находятся в зоне, которая преобладающе включает растения сои, можно считать сорняком, растение кукурузы если оно является нежелательным в зоне роста растений сои.
Под используемым здесь словом "включает" или вариациями, такими как "включают" или "включающий", следует понимать заключает в себе добавления определенных элементов, целых чисел или этапов, или группы элементов, целых чисел или этапов, но не исключение любого другого элемента, целого числа или этапа или группы элементов, целых чисел или этапов.
Следующие примеры приведены с целью иллюстрации, но не с целью ограничения.
Любые изменения в иллюстрируемых методах, которые происходят в данной области знаний, предназначены, чтобы находиться в пределах области существующего изобретения.
Пример 1. Векторы, содержащие мутантные гены AHASL Arabidopsis.
Полноразмерный фрагмент XbaI Arabidopsis thaliana геномной ДНК, который содержит весь большой ген субъединицы AHAS с некоторой дополнительной ДНК, включая участки XbaI на 5' и 3' концах, встроена в последовательность(ти) SEQ ID NO: 34 (AtAHASL). Основания 2484-4496 из SEQ ID NO: 34 охватывают последовательность Arabidopsis thaliana, кодирующую большую субъединицу AHAS, имеющую серин в положении 653 (аллельный мутант треонина), и включают стоп-кодон, показанный на
SEQ ID NO: 30.
Меньший геномный фрагмент большой субъединицы AHAS Arabidopsis thaliana, имеющий серин в положении 653 (аллельный мутант треонина), показанный на SEQ ID NO: 33, охватывает основания 2484-5717 SEQ ID NO: 34, включая кодирующую последовательность и 3' конец, вплоть до 3' конца участка XbaI, с первыми двумя основаниями участка NcoI, находящегося в старт кодоне AtAHASL, дан для разъяснения.
Фрагмент ДНК SEQ ID NO: 33, кодирующий полноразмерную последовательность AHASL Arabi-dopsis с единичной мутацией S653N и 3' нетранслируемую область, были клонированы в плазмиду KK233-2, чтобы получить вектор, определяемый как АЕ1 для экспрессии и тестирования в E.coli (pKK233-2, бактериальный экспрессионный вектор, Pharmacia, GenBank Accession No. X70478).
Векторы АЕ2 посредством АЕ9 были получены из АЕ1 мутагенезом и стандартными методиками клонирования. Фиг. 4 показывает карту вектора на основании АЕ1, с обозначенными положениями мутаций.
Вектор AP1 (фиг. 5) является вектором трансформации растения, который включает геномный фрагмент ДНК Arabidopsis thaliana, которая включает ген AtAHASL с единичной мутацией S653N (последовательность SEQ ID NO:34).
Фрагмент ДНК, показанный на SEQ ID NO: 34, был клонирован в вектор AP1 в обратной ориентации. Векторы АР2-АР7 были получены из AP1 и АЕ плазмид, используя стандартные методики клонирования, и отличаются только мутациями, как указано в табл. 1. Для удобства клонирования различные фрагменты использовались, чтобы получить АР6 и АР7, по сравнению с АР2-АР5. Таким образом, векторы АР6 и АР7 являются на 47 пар оснований короче, чем векторы AP1-АР5. Это различие находится в основной последовательности плазмиды и не затрагивает геномный фрагмент Arabidopsis thaliana.
Дикий тип гена большой субъединицы AHAS Arabidopsis thaliana был амплифицирован в мутагенных условиях, используя комплект Genemorph II для случайного мутагенеза (Stratagene, La Jolla, Калифорния), что привело к появлению беспорядочно мутированных амплифицированных фрагментов ДНК этого гена. ДНК этих мутантов была затем снова клонирована в вектор АЕ7, заменив дикий тип гена большой субъединицы A. thaliana (между уникальными сайтами Sacll и Agel в векторе АЕ7) для получения мутантных форм. Этой ДНК был трансформирован штамм E.coli TOP10 и селектирован на агаризо-ванной среде LB таким образом, чтобы иметь большое количество отдельных трансформантов, каждый из которых имеет независимый мутагенезированный ген AHAS. Эти колонии были собраны и плазмид-ная ДНК была выделена для первичного анализа последовательности. Этой ДНК был трансформирован
штамм E.coli не имеющий AHAS и снова селектирован на агаризованной среде LB с карбенициклином. На этой стадии колонии, имеющие плазмиду, были реплицированы, используя бархат на минимальную среду, не содержащую разветвленных аминокислот и содержащую 30 микромоль имазетапира. Те колонии, которые выросли на этих селективных средах, имели функционирующий мутант гена AHAS A. thaliana, который был также имидазолинон устойчивым.
Последовательность ДНК гена большой субъединицы AHAS A. thaliana была определена для каждой позитивной колонии. Последовательность ДНК гена большой субъединицы AHAS A. thaliana не обеспечивающая рост на селективной среде не определялась. Поскольку соответствие функции гена AHAS и устойчивости к имидазолинону были известны в библиотеке, то репликанты, имеющие те же мутации, были обнаружены при помощи анализа последовательности ДНК. Только один клон каждого из них был отобран для тестирования устойчивости к увеличению концентрации имидазолинона и включен в табл. 1.
* Список векторов для экспрессии AtAHASL2 в E.coli (AE плазмиды) и плазмид для трансформации растений (AP плазмиды). Мутации в каждом векторе указаны в отношении SEQ ID NO: 1.
** Простая система одинарных, двойных или тройных плюсов +, ++, или +++ для соответствующего увеличения размера колонии, была использована для визуальной оценки устойчивости функции Arabidopsis AHAS у AHAS минус E.coli, содержащих АЕ плазмиды и не дающих рост в присутствии имазетапира - ингибитора AHAS. Знак "-" означает, что рост не наблюдался, и это значит, что мутация вызвала инактивацию белка или не было никакой заметной устойчивости к выбранному количеству имазетапира. IN означает инактивированный белок, в то время NT означает отсутствие устойчивости к имидазолинону. NA означает, данные не представлены (не тестировались). t Не проверенный по сравнению с мутантом S653N, факт устойчивости определен при скрининге по протоколу.
@ Для трансгенных растений, включающих вектор AP1, концентрация имазетарира 18, 75 мкМ была самой высокой, при которой наблюдался хороший рост растения в микропланшетах. Эта концентрация была использована как основа для определения X-fold улучшения по отношению к AP1.
Пример 2. Векторы, содержащие мутантные гены AHASL Zea mays.
Ген AHASL2 Zea mays (SEQ ID NO: 29) был клонирован в бактериальный экспрессирующий вектор pTrcHis A (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA), соединен с векторным tag сайтом и сайтом начала трансляции, начиная от основания 160 SEQ ID NO: 29. Методы мутагенеза и субклонирования были использованы для создания векторов ZE2, ZE6, и используя ZE1 в качестве основного вектора.
Метод субклонирования был использован для получения вектора ZE3 из ZE1, который является плазмидой TrcHis А, содержащей ген AHASL2 кукурузы, соединенный с сайтом tag и сайтом начала трансляции, начиная от основания 121 SEQ ID NO: 29. Так как никакое функциональное отличие не было обнаружено в E.coli между ZE1 или ZE3, стандартные методы мутагенеза и субклонирования были использованы для получения вектора ZE4 посредством вектора ZE22, используя вектор ZE3 в качестве основного вектора.
Вектор для трансформации растений с экспрессионной кассетой, содержащей кукурузный убикви-тиновый промотор в комбинации с полинуклеотидом, кодирующим кукурузный AHASL2 S653N мутант, был получен, используя стандартные методы, и был определен с помощью ZP1 (фиг. 7). Чтобы получить векторы для трансформации растений для экспрессии других мутантов AHASL, использовались стан
дартные методы клонирования, для замены полинуклеотидных сегментов ZP1 на полинуклеотидные фрагменты векторов ZE, кодирующих мутации.
Векторы ZE23 посредством ZE38 были получены, как указано ниже.
Вектор ZE3 был подвержен сайт направленному мутагенезу используя набор для многонаправленного мутагенеза QuikChange(r) Kit (Stratagene, La Jolla, California) следуя "Общим Руководящим принципам для того, чтобы Создать Спроектированный Клон Мутанта(tm) Коллекции" приложению протокола.
Мутагенный полинуклеотид, который произвел бы все возможные кодоны в критических сайтах большой субъединицы AHAS кукурузы, использовался в различных комбинациях, чтобы получить коллекцию мутантов с замещениями в остатках А90, М92, Р165, R167, S621, и G622. Плазмиды коллекционных мутантов были трансформированы в дефицитный по AHAS штамм E.coli, который был высеян на минимальную агаризованную среду LB, содержащую 100 г/л карбенициллина.
Полученные колонии были собраны в микропланшеты с минеральной средой М9, имеющей концентрацию 1х (как для изотонического буфера) и затем реплицированы на минимальную агаризованную среду, не содержащую разветвленных аминокислот и содержащую 150 микромоль имазетапира.
Колонии, выращенные на этой селективной среде, имели функционирующий мутант кукурузного ген a AHAS, который был также имидазолинон устойчив.
Последовательность ДНК гена большой субъединицы AHAS кукурузы была определена для каждой положительной колонии. Последовательность ДНК гена большой субъединицы AHAS кукурузы для не дающих рост колоний на селективной среде не проводилась.
* Список экспрессирующих векторов для ZmAHASL2 в E.coli (ZE плазмиды) плазмид для трансформации растений (ZP плазмиды). Мутации в каждом векторе определяли относительно SEQ ID NO: 2. ** Простая система одинарных, двойных или тройных плюсов +, ++, или +++ для соответствующего увеличения размера колонии, была использована для визуальной оценки устойчивости функции Arabi-dopsis AHAS у AHAS минус E.coli, содержащих АЕ плазмиды и не дающих рост в присутствии имазетапира - ингибитора AHAS. Знак "-" означает, что рост не наблюдался, и это значит, что мутация вызвала инактивацию белка или не было никакой заметной устойчивости к выбранному количеству имазетапира. IN означает инактивиро-ванный белок, в то время NT означает отсутствие устойчивости к имидазолинону. NA означает, данные не представлены (не тестировались).
t Не проверенный по сравнению с мутантом S653N факт устойчивости определен при скрининге по протоколу.
@ Показатель общего числа устойчивых трансгенных растений кукурузы, результат основан на комбинации результатов тестов, проводимых в оранжерее и на многократных полевых участках в течение более чем несколько сельскохозяйственных сезонов. Система бальной оценки устойчивости для растений кукурузы была такая же, как
описана выше для устойчивых штаммов E.coli. Заметьте, что все конструкции ZP со знаком +++ имели устойчивость к более чем трем тысячам граммам имазамокса на гектар, которая является самой высокой проверенной распыляемой нормой. Пример 3. Сравнительный анализ E.coli.
Штамм E.coli JMC1 (генотип [ilvB1201 ilvHI2202 rbs-221 ara thi delta(pro-lac) recA56 srlC300::Tn10], DE(hsdR)::Cat) имел выключенный по всем копиям ilvG нативный ген AHASL E.coli.
Этот штамм мог расти на минимальной среде с недостатком лейцина, изолейцина и валина, только если ген AHASL был дополнен внешним геном AHASL (см. Singh, et al. (1992), Plant Physiol. 99, 812-816; Smith, et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 4179-4183). Этот штамм E.coli был использован в сравнительном анализе для скрининга активности фермента AHASL и устойчивости к гербициду, кодируемой векторами АЕ и ZE в отсутствии или присутствии имидазолинонового гербицида Pursuit(r) (имазета-пир, Корпорация BASF, Парк Florham, Нью-Джерси).
Пример 4. Биохимическая характеристика.
Основанный на росте во время дополнительного тестирования или простых тестов, определенные серии векторов ZE были использованы для биохимического исследований ингибирования фермента AHAS в свежих лизатах E.coli.
Для тестирования культура LB (2-4 мл), содержащая 50 мг/мл карбенициллина (LB-carb), была ино-кулирована единственной колонией JMC1, трансформированной вектором ZE, и инкубировалась при температуре 37°C в течение ночи при встряхивании.
На следующее утро 0,5-1,0 мл ночной культуры были использованы для инокуляции 20 мл культуры LB-carb, которая инкубировалась при температуре 37°C при встряхивании до оптической плотности культуры (OD) приблизительно 0,6-0,8 OD единиц при 600 нм.
Изо1гоопил-1-тио-Р^-галактопиранозид (IPTG) был добавлен до концентрации 0,1 мМ и культура инкубировалась при встряхивании в течение 1-1,5 ч.
Культура центрифугировалась для отделения клеток и супернатант сливался.
Клетки в буфере для исследования AHAS (как указано Singh et al. (1988), Anal. Biochem. 171:173179) лизировали добавлением 10 мг/мл лизозима и быстро разрушали ультразвуком.
Нерастворимая фракция была собрана центрифугированием и супернатант использовался для исследования активности AHAS. Каждая концентрация ингибитора имазетапира была использована для исследования активности, активность сравнивалась с неингибированным контролем того же самого мутанта ZE. Эти результаты измерения представлены как "процент от контроля".
Пример 5. Трансформация растений.
Вектором АР было трансформировано растение A. thaliana экотип Col-2.
Семена первого поколения трансформантов были собраны для трансформации в чашках Петри с добавлением 100 нМ Pursuit(r) в качестве селектирующего агента.
Семена второго поколения трансформантов от приблизительно двадцати независимых трансформированных линий были высеяны в чашки с агаризованной средой с нарастающей концентрацией Pursuit(r) для оценки повышения устойчивости по сравнению с AP1. Векторы, обеспечивающие свободный рост рассады при самых высоких концентрациях Pursuit(r), были оценены визуально. Результаты экспериментов по трансформации растения Arabidopsis представлены в табл. 1.
Семена от нескольких линий растения Arabidopsis были протестированы, используя тест вертикал-ного роста.
Чашка со стандартной полутвердой средой Murashige и Skoog, содержащей 37,5 микромоль Pursuit (имазетапир), была залита с несколькими семенами в 0,1% агарозе.
Чашка располагалась вертикально, так что корни росли вдоль поверхности агара.
Использовались семена: 1) дикого пита экотип Columbia 2; 2) мутанта csr1-2 (гомозигота мутации AtAHASL S653N в геномной копии гена большой субъединицы AHAS; 3) Columbia 2 трансформированный AP1; 4) Columbia 2 рансформированный АР7; 5) Columbia 2 расформированный АР2. Следует отметить, что номер 2 и 3 примерно эквивалентны в отношении вероятной устойчивости, поскольку растение AP1 было трансформировано клоном геномного фрагмента XbaI csr1-2 (SEQ ID NO: 34). При этой концентрации имазетапира рассада дикого типа была не в состоянии прорасти, единственные растения мутанта (csr1-2 и AP1 трансформанты) только проросли. Мутанты АР7 и АР2 продемонстрировали хороший устойчивый рост, хотя растения АР7, кажется, имело ослабленный рост корня. Следует отметить, что все линии проросли и росли хорошо на средах без имазетапира. Результаты исследований вертикального роста представлены на фиг. 10.
Конструкции ZP были введены в незрелые эмбрионы кукурузу, используя Agrobacterium-опосредованную трансформацию.
Трансформированные клетки были отобраны на селективной среде с 0,75 мкМ Pursuit(r) в течение 34 недель. Трансгенные саженцы были регенерированы в растения на регенерирующей среде с добавлением 0,75 мкМ Pursuit(r). Трансформированные саженцы были укоренены в присутствии 0,5 мкМ Pur
suit(r). Трансформированные растения были подвергнуты TaqMan исследованию на присутствие трансгена прежде, чем были пересажены в питательный субстрат и выросли в оранжерее. Результаты трансформации растений кукурузы представлены в табл. 2.
Растения кукурузы, трансформированные конструкциями ZP, опылялись различными дозами има-замокса, в нескольких участках поля и местоположениях в оранжерее. Относительные оценки целых растений, содержащих конструкции ZP, представлены в табл. 2.
Пример 6. Экспрессия мутантных генов AtAHASL в сое.
Вектор для экспрессии генов AtAHASL был трансформирован в растение сои.
Векторы AUP2 и AUP3 были получены клонированием продукта полимеразной ценной реакции, используя убиквиноновый промотор петрушки, который был амплифицирован для встраивания рестрик-ционных Asp718 и NcoI, переварен и лигирован по тем же сайтам АР2 и AP3, используя стандартные методики клонирования (см. фиг. 11 и 12). AUP2 кодирует белок AtAHASL с мутациями А122Т и S653N, и AUP3 кодирует белок AtAHASL с мутациями А122Т и S653N. Вектор BAP1 был получен клонированием целого промотора, кодирующей последовательности и 3'-нетранслируемой области последовательности AP1 согласно стандартной программе трансформации двудольных растений, содержащей селектируемую маркерную генную экспрессионную кассету BAR по стандартной методике клонирования с использованием тупых концов. Конструкции АР2, AUP2, и AUP3 были введены в пазушные клетки меристемы сои в первичные почки проростков эксплантов, используя Agrobacterium-опосредованную трансформацию.
После инокулирования и совместного культивирования с Agrobacteria, экспланты были перенесены на индуцирующую среду без селекции в течение одной недели. Экспланты затем выращивали на индуцирующей среде, содержащей 5 мкМ имазепира (Arsenal) в течение 3 недель, чтобы отобрать трансформированные клетки.
Экспланты, имеющие бугорки или зачатки ростков в первичном узле, выращивались на среде индуцирующей элонгацию, содержащую 3 мкМ имазапира до тех пор, пока зачатки ростков не удлинялись или пока эксплант не погибал.
Трансгенные растения были укоренены, пересажены в питательную среду, подвержены TaqMan анализу на присутствие трансгена и затем выращивались до взрослого состояния в теплице.
Конструкция BAP1 использовалась для трансформации растений сои по той же методике, за исключением того, что в качестве селективного агента использовался BASTA.
Трансформированные растения сои были протестированы на устойчивость к гербициду как в теплицах, так и на полях.
Для исследований в поле был использован имазапир в дозе 300 г аи/га по схеме V3. Для исследований в теплице был использован имазапир по схеме V2. Результаты этих исследований представлены в табл. 3.
* BAP1 (рис 12) был преобразован используя ген BAR для селекции, поскольку имазапир в качестве селекционного маркера для сои, имеющей только одну мутацию S653N не был оптимизирован. ** Некоторая погрешность по сравнению с AUP2. Пример 7. Отбор трансформантов.
Полинуклеотиды, полученные согласно изобретению, могут использоваться в качестве селектируемых маркеров для трансформированных растений. Полинуклеотиды, полученные согласно изобретению, могут использоваться в качестве селектируемых маркеров для идентификации и/или отбора трансформированных растений, которые могут содержать дополнительный интересующий ген. Растения или клетки растения, трансформированные векторами, содержащими множественные мутантные формы генов большой субъединицы AHAS, могут быть отобраны из нетрансформированных растений или клеток, выращивая их на минимальных средах, таких как MS, которые включают ингибиторы AHAS или AHAS, ингибирующие гербициды, такие как имидазолиноны. Трансформированные растения или ткани будут в
состоянии продолжить рост в присутствии этих ингибиторов, в то время как нетрансформированные растения или ткани погибнут.
В случае трансформированных тканей, так как нетрансформированные ткани могут получать не-разветвленные аминокислоты от трансформированных тканей, то активно растущие ткани удаляются от медленно растущих или умирающих тканей и повторно переносятся на селективные среды.
Целые растения также могут быть отобраны при выращивании семян, при ожидании прорастания или при росте рассады, распыляя ингибиторы AHAS или AHAS, ингибирующие гербициды, такие как имидазолиноны. Трансформированные растения выживут, в то время как нетрансформированные погибнут.
Пример 8. Полевые испытания с трансформированной кукурузой.
Полевые испытания проводились, для того чтобы оценить, имеют ли растения кукурузы, трансформированные одним из векторов, включающих AHASL двойные и тройные мутанты, какие-нибудь грубые физиологические или репродуктивные аффекты с внесением и без внесения имазамокса.
Материалы и методы.
Источник материалов.
Генетически модифицированные организмы были получены трансформацией линии зерна J553. Семена гибрида F1 на основании 8 векторных конструкций были получены, используя линию TR5753 в качестве отцовской (мужской) особи в инбридинге.
Векторные конструкции представлены в табл. 4. Семена для испытания были получены в изолированном блоке для скрещиваний (опылений) на острове Кауаи, Гавайи. В США в течение сезонов 20062007 г. Средние образцы каждого полученного гибрида F1 были проанализированы на наличие правильной векторной конструкции и на отсутствие случайного присутствия других AHASL конструкций.
Нетрансформированные коммерческие гибриды были куплены у Средне-Западной компании зерна США и проанализированы, чтобы подтвердить отсутствие любого случайного присутствия других AHASL конструкций.
Методика испытания.
Проектом испытания был опытный участок в рандомизированной полной блочной конструкции, главный участок обрабатывался гербицидом и вспомогательный участок использовался для выведения гибридов F1. Обработка гербицидами включала: 1) отсутствие обработки (контроль) и 2) внесение има-замокса в дозе 150 г аи/га. Выведенные гибриды включали 29 случаев наличия 8 векторных конструкций и 4 нетрансформированных коммерческих гибрида (3395IR от Pioneer Hi-Bred International, Inc, Johnston, IA, USA; и 8342GLS/IT, 8546IT, и 8590IT от Garst Seed Co., Inc., Slater, IA. USA). Размер участка составлял 2 ряда; ширина ряда 2,5 фута; длина ряда 20 футов. Каждая обработка повторялась четыре раза. Испытание было проведено в трех областях. Областями были: Ames, IA, USA; Estherville, IA, USA; и York, NE, USA. Все испытания проводились в течение мая 2007 года.
Местные условия.
В области Ames, IA использовался севооборот, что, возможно, оказало некоторое влияние на однородность появления и раннего проростания, поскольку значительное количество остаточного зерна присутствовало при посадке. Никакие другие влияния на урожай из-за погоды, болезни или насекомых не были отмечены. На участке Айовы был проливной дождь, который сопровождался порывами ветра до 70 миль/ч, и 16 июля были ветры примерно 40 миль/ч. Полегание посевов наблюдалось в целом на каждом участке. Никакие другие влияния на урожай из-за болезни или насекомых не были отмечены. На участке Йорк, Небраски количество осадков в мае было выше среднего уровня, в июле и августе никакие основные насекомые или проблемы болезни не были отмечены.
Результаты и обсуждение.
Результаты исследований были собраны с трех областей и привели к результату, что одна векторная конструкции вызвала существенное уменьшение урожая (p <0,05), сравнивая урожай с внесением или без внесения гербицида имазамокса (табл. 5). Одна векторная конструкция вызвала существенное увеличение урожая при внесении имазамокса. Другие агрономические характеристики были также собраны в трех областях испытаний, но никакие существенные различия не были обнаружены при наличии вектор
ной конструкции, в отсутствии обработки или при обработке имазамоксом, если рассматривать такие характеристики, как рост растения, рост початка, полегание посевов и полегание растений (данные, не показанные).
Цель испытания состояла в том, чтобы определить, повлияло ли внесение гербицида имазамокса на векторную конструкцию так, чтобы оптимизировать получение улучшенной устойчивости к гербициду имазамоксу, что в свою очередь приведет к повышению устойчивости, или очевидно, физиологическим или репродуктивным эффектам первичного урожая.
Только у одной векторной конструкции (конструкция 1, единичный мутант, P197L) было отмечено существенное (p <0,05) отрицательное влияние на урожай зерна при внесении имазамокса.
Остальные семь векторных конструкций не показало неблагоприятных физиологических или репродуктивных эффектов как в присутствии, так и в отсутствии гербицида имазамокса. Результаты этих полевых испытаний демонстрируют превосходный агрономический потенциал растений кукурузы, трансформированных вектором, содержащим двойной или тройной мутант AHASL.
Все публикации и патентные заявки, указанные в описании, показывают уровень техники, к которому это изобретение принадлежит. Все публикации и патентные заявки включены здесь с помощью ссылки в том же объеме, если каждая индивидуальная публикация или патентная заявка были специально и индивидуально указаны, как включенные с помощью ссылки.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Мэкэлвер, Джон Зинг, Биджай
<120> Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (AHAS), растение, содержащее указанный полинуклеотид,и способы получения и применения растений
<130> 038867/341792
<160> 34
<150> US 60/910,028 <151> 2007-04-04
<170> PatentIn version 3.4
<210> 1
<211> 670
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Arabidopsis
thaliana
(AtAHASL) <400> 1
Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ile Ser Phe
1 5 10 15
Ser Thr Lys Pro Ser Pro Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser
20 25 30
Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Ser
35 40 45
Ser Arg Arg Arg Gly Ile Lys Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ile Ser Ala
50 55 60
Val Leu Asn Thr Thr Thr Asn Val Thr Thr Thr Pro Ser Pro Thr Lys
65 70 75 80
Pro Thr Lys Pro Glu Thr Phe Ile Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro
85 90 95
Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val
100 105 110
Glu Thr Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln
115 120 125
Ala Leu Thr Arg Ser Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu
130 135 140
Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys
145 150 155 160
Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val
165 170 175
Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile
180 185 190
Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu
195 200 205
Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu
210 215 220
Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Ile Glu Glu Ala Phe Phe
225 230 235 240
Leu Ala Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys
245 250 255
Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ala Met Arg
260 265 270
Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His
275 280 285
Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu
290 295 300
Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Asp Glu Leu Gly Arg Phe
305 310 315 320
Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly
325 330 335
Ser Tyr Pro Cys Asp Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His
340 345 350
Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu
355 360 365
Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala
370 375 380
Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu
385 390 395 400
Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys
405 410 415
Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu
420 425 430
Leu Lys Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Asn Glu Leu Asn Val Gln Lys
435 440 445
Gln Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro
450 455 460
Gln Tyr Ala Ile Lys Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile
465 470 475 480
Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr
485 490 495
Asn Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Gly Gly Leu Gly Ala
500 505 510
Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro
515 520 525
Asp Ala Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn
530 535 540
Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Val
545 550 555 560
Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp
565 570 575
Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Phe Leu Gly Asp Pro Ala
580 585 590
Gln Glu Asp Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Leu Phe Ala Ala Ala Cys
595 600 605
Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Ala Asp Leu Arg Glu Ala
610 615 620
Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile
625 630 635 640
Cys Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr
645 650 655
Phe Asn Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Ile Lys Tyr
660 665 670
<210> 2
<211> 638
<212> PRT
<213> Zea mays
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица номер два ацетогидроксикислотной синтазы Кукурузы
(ZmAHASL2) <400> 2
Met Ala Thr Ala Ala Ala Ala Ser Thr Ala Leu Thr Gly Ala Thr Thr
1 5 10 15
Ala Ala Pro Lys Ala Arg Arg Arg Ala His Leu Leu Ala Thr Arg Arg
20 25 30
Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Ala Ser Pro Ala Met Pro
35 40 45
Met Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Thr Asp Pro
50 55 60
Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ser Leu Glu Arg Cys Gly Val
65 70 75 80
Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln
85 90 95
Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu
100 105 110
Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg
115 120 125
Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val
130 135 140
Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile
145 150 155 160
Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu
165 170 175
Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu
180 185 190
Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe
195 200 205
Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys
210 215 220
Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Lys Pro Met Ser
225 230 235 240
Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Leu
245 250 255
Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu
260 265 270
Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg Phe
275 280 285
Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly
290 295 300
Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His
305 310 315 320
Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu
325 330 335
Ala Leu Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala
340 345 350
Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Val Asp Ile Asp Pro Ala Glu
355 360 365
Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys
370 375 380
Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Ala Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys
385 390 395 400
Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp Asn Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys
405 410 415
Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Ser Asn Glu Glu Ile Gln Pro
420 425 430
Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile
435 440 445
Ile Gly Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr
450 455 460
Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala
465 470 475 480
Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro
485 490 495
Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn
500 505 510
Val Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val
515 520 525
Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp
530 535 540
Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu
545 550 555 560
Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly Phe
565 570 575
Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Asn Glu Val Arg Ala Ala
580 585 590
Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile
595 600 605
Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala
610 615 620
Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr
625 630 635
<210> 3 <211> 652 <212> PRT
<213> Brassica napus
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица номер один ацетогидроксикислотной синтазы A генома Brassica napus (BnAHASL1A)
<400> 3
Met Ala Ala Ala Thr Ser Ser Ser Pro Ile Ser Leu Thr Ala Lys Pro
1 5 10 15
Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser
20 25 30
Leu Thr Pro Gln Lys Pro Ser Ser Arg Leu His Arg Pro Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Ala Val Leu Asn Ser Pro Val Asn Val Ala Pro Glu Lys Thr Asp
50 55 60
Lys Ile Lys Thr Phe Ile Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Glu Pro Arg Lys
65 70 75 80
Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Glu Thr
85 90 95
Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu
100 105 110
Thr Arg Ser Ser Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly
115 120 125
Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys Pro Gly
130 135 140
Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly
165 170 175
Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro
180 185 190
Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met
195 200 205
Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala
210 215 220
Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys Asp Ile
225 230 235 240
Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Asp Gln Pro Met Arg Leu Pro
245 250 255
Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Gln Pro Pro Glu Val Ser Gln Leu Gly
260 265 270
Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val
275 280 285
Gly Gly Gly Ser Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu
290 295 300
Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ser Tyr
305 310 315 320
Pro Cys Asn Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr
325 330 335
Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe
340 345 350
Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala
355 360 365
Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly
370 375 380
Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala
385 390 395 400
Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu Leu Lys
405 410 415
Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Ser Glu Gln Lys Gln Lys
420 425 430
Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr
435 440 445
Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Gln Gly Lys Ala Ile Ile Ser
450 455 460
Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr
465 470 475 480
Arg Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly
485 490 495
Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ala
500 505 510
Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln
515 520 525
Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu
530 535 540
Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe
545 550 555 560
Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro Ala Arg Glu
565 570 575
Asn Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Gly Ala Cys Gly Ile
580 585 590
Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln
595 600 605
Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro
610 615 620
His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Lys
625 630 635 640
Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 645 650
<210> 4
<211> 644
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы риса (OsAHASL)
<400> 4
Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ser Ala Ala Ala
1 5 10 15
Thr Ala Lys Thr Gly Arg Lys Asn His Gln Arg His His Val Leu Pro
20 25 30
Ala Arg Gly Arg Val Gly Ala Ala Ala Val Arg Cys Ser Ala Val Ser
35 40 45
Pro Val Thr Pro Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro
50 55 60
Trp Gly Pro Ala Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala
65 70 75 80
Leu Glu Arg Cys Gly Val Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala
85 90 95
Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn
100 105 110
His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr
115 120 125
Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro
130 135 140
Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser
145 150 155 160
Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly
165 170 175
Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile
180 185 190
Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val
195 200 205
Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val
210 215 220
Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val
225 230 235 240
Trp Asp Thr Ser Met Asn Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys
245 250 255
Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu
260 265 270
Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly
275 280 285
Asp Glu Leu Arg Trp Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr
290 295 300
Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu
305 310 315 320
Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp
325 330 335
Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val
340 345 350
Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile
355 360 365
Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser
370 375 380
Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu
385 390 395 400
Gln Gln Ser Thr Thr Lys Thr Ser Ser Asp Phe Ser Ala Trp His Asn
405 410 415
Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe
420 425 430
Gly Glu Glu Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu
435 440 445
Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met
450 455 460
Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser
465 470 475 480
Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly
485 490 495
Ala Ser Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp
500 505 510
Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu
515 520 525
Asn Leu Pro Val Lys Val Met Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met
530 535 540
Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr
545 550 555 560
Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Cys Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val
565 570 575
Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys
580 585 590
Ser Glu Val Arg Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro
595 600 605
Tyr Leu Leu Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met
610 615 620
Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly
625 630 635 640
Arg Thr Val Tyr
<210> 5
<211> 655
<212> PRT
<213> Helianthus annuus
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы подсолнечника номер
1(HaAHASL1)
<400> 5
Met Ala Ala Pro Pro Asn Pro Ser Ile Ser Phe Lys Pro Pro Ser Pro
1 5 10 15
Ala Ala Ala Leu Pro Pro Arg Ser Ala Phe Leu Pro Arg Phe Ala Leu
20 25 30
Pro Ile Thr Ser Thr Thr Gln Lys Arg His Arg Leu His Ile Ser Asn
35 40 45
Val Leu Ser Asp Ser Lys Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Gln
50 55 60
Arg Pro Leu Pro Val Gln Pro Phe Val Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Gln
65 70 75 80
Pro Arg Lys Gly Ala Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly
85 90 95
Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His
100 105 110
Gln Ala Leu Thr Arg Ser Ser Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His
115 120 125
Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly
130 135 140
Leu Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu
145 150 155 160
Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala
165 170 175
Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln
180 185 190
Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr
195 200 205
Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe
210 215 220
Tyr Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro
225 230 235 240
Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Val Pro Lys Trp Asp Glu Pro Met
245 250 255
Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser Arg Met Pro Lys Pro Gln Tyr Asp Gly
260 265 270
His Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Val Gly Glu Ala Lys Arg Pro Val
275 280 285
Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Asp Asp Glu Leu Arg Arg
290 295 300
Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu
305 310 315 320
Gly Ala Tyr Pro Ala Ser Ser Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met
325 330 335
His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ser Asp Leu Leu
340 345 350
Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu
355 360 365
Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala
370 375 380
Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Gly Asp Ile
385 390 395 400
Lys Val Ala Leu Gln Gly Leu Asn Lys Ile Leu Glu Glu Lys Asn Ser
405 410 415
Val Thr Asn Leu Asp Phe Ser Thr Trp Arg Lys Glu Leu Asp Glu Gln
420 425 430
Lys Met Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro
435 440 445
Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Gly Gly Asn Ala
450 455 460
Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe
465 470 475 480
Tyr Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly
485 490 495
Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg
500 505 510
Pro Asp Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Met Met
515 520 525
Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys
530 535 540
Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu
545 550 555 560
Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro
565 570 575
Ser Lys Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn Met Val Lys Phe Ala Glu Ala
580 585 590
Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Gln Lys Ala Asp Leu Arg Ala
595 600 605
Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val
610 615 620
Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly
625 630 635 640
Gly Phe Ser Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr
645 650 655
<210> 6
<211> 646
<212> PRT
<213> Helianthus annuus
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы подсолнечника номер 2(HaAHASL2)
<400> 6
Met Ala Ala Ile His Pro Pro His Pro Ser Ile Thr Ala Lys Pro Pro
1 5 10 15
Pro Ser Ser Ala Ala Ala Val Ala Leu Pro Pro His Phe Ala Phe Ser
20 25 30
Ile Thr Ser Thr Ser His Lys Arg His Arg Leu His Ile Ser Asn Val
35 40 45
Leu Ser Asp Ser Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ile His Pro Pro
50 55 60
Pro Phe Val Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys Gly Ala Asp
65 70 75 80
Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala
85 90 95
Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser
100 105 110
Asn Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe
115 120 125
Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Val Pro Gly Val Cys Ile
130 135 140
Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp
145 150 155 160
Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro
165 170 175
Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu
180 185 190
Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu
195 200 205
Asp Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe Tyr Leu Ala Ser Ser Gly
210 215 220
Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln
225 230 235 240
Leu Val Val Pro Lys Trp Asp Glu Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Leu
245 250 255
Ser Arg Met Pro Lys Pro Gln Tyr Asp Gly His Leu Glu Gln Ile Val
260 265 270
Arg Leu Val Gly Glu Ala Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly
275 280 285
Cys Leu Asn Ser Asp Asp Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly
290 295 300
Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr Pro Ala Ser
305 310 315 320
Ser Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala
325 330 335
Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg
340 345 350
Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala
355 360 365
Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys
370 375 380
Gln Pro His Val Ser Ile Cys Gly Asp Ile Lys Val Ala Leu Gln Gly
385 390 395 400
Leu Asn Lys Ile Leu Glu Glu Lys Asn Ser Leu Asp Phe Ser Asn Trp
405 410 415
Arg Lys Glu Leu Asp Glu Gln Lys Val Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys
420 425 430
Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile His Val Leu Asp
435 440 445
Glu Leu Thr Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His
450 455 460
Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Gln Trp
465 470 475 480
Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala
485 490 495
Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val Asp Ile Asp
500 505 510
Gly Asp Gly Ser Phe Met Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg
515 520 525
Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu
530 535 540
Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala
545 550 555 560
His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Lys Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn
565 570 575
Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr
580 585 590
Arg Lys Gly Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro
595 600 605
Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu
610 615 620
Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly Gly Phe Ser Asp Val Ile Thr Glu Gly
625 630 635 640
Asp Gly Arg Met Lys Tyr 645
<210> 7
<211> 646
<212> PRT
<213> Helianthus annuus
<220>
<221> misc_feature
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы подсолнечника номер
3(HaAHASL3) <400> 7
Met Ala Val Pro Leu Thr Phe Ile Ser Gly Lys Pro Pro Phe Ser Ala
1 5 10 15
Thr Pro Ser Gln Leu Thr Thr Asn Leu Ser Leu Pro Leu Thr Leu Leu
20 25 30
Pro Ile Ile Pro Ser Lys Thr His Val Ser Lys His Leu Ile Ile Thr
35 40 45
Asn Ala Ile Ala Lys His Ser His Ser His Lys Ala Phe Val Val Ser
50 55 60
Arg Phe Gly Pro Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ser Asp Val Leu Val Glu
65 70 75 80
Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asn Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly
85 90 95
Ala Thr Leu Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Thr Ile Ile Arg
100 105 110
Asn Ile Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly
115 120 125
Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Leu Thr Gly Val Cys Ile Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp
145 150 155 160
Ser Val Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Asn Met Ile
165 170 175
Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Ser Arg Ser
180 185 190
Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asn Val Gln Asp Ile Pro Arg
195 200 205
Ile Val His Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro
210 215 220
Val Leu Ile Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Val Pro
225 230 235 240
Asn Trp Asp Glu Gln Gln Gln Pro Met Arg Leu Asp Gly Tyr Ile Ser
245 250 255
Arg Leu Pro Lys Pro Pro Asn Glu Thr His Leu Arg Gln Ile Val Arg
260 265 270
Phe Ile Lys Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys
275 280 285
Met Asn Ser Ser Asp Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile
290 295 300
Pro Val Ala Asn Thr Leu Met Gly Leu Gly Thr Tyr Pro Gly Ser His
305 310 315 320
Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn
325 330 335
Tyr Ala Ile Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe
340 345 350
Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys
355 360 365
Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln
370 375 380
Pro His Phe Ser Ile Cys Gly Asp Ile Lys Ala Ala Leu Gln Gly Leu
385 390 395 400
Asn Lys Ile Leu Glu Arg Gly Glu Asp Leu Asp Phe Asp Phe Ser Pro
405 410 415
Trp Lys Glu Glu Val Met Asn Gln Lys Ala Ser Asn Pro Leu Ser Tyr
420 425 430
Lys Thr Phe Gly Asp Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu
435 440 445
Asn Glu Val Thr Gly Gly Asn Ala Ile Ile Thr Thr Gly Val Gly Gln
450 455 460
His Gln Met Trp Ser Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Asn Arg Pro Arg Gln
465 470 475 480
Trp Leu Thr Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala
485 490 495
Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val Asp Ile
500 505 510
Asp Gly Asp Gly Ser Phe Met Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile
515 520 525
Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Met Met Val Leu Asn Asn Gln His
530 535 540
Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg
545 550 555 560
Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Thr Asn Glu Ser Gly Ile Phe Pro
565 570 575
Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg Val
580 585 590
Thr Lys Lys Gly Asp Val Arg Thr Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr
595 600 605
Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val
610 615 620
Leu Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly Gly Phe Asn Asp Ile Ile Thr Asp
625 630 635 640
Gly Asp Gly Arg Thr Gln 645
<210> 8
<211> 638
<212> PRT
<213> Zea mays
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы кукурузы номер 1(ZmAHASL1)
<400> 8
Met Ala Thr Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala Leu Thr Gly Ala Thr Thr
1 5 10 15
Ala Thr Pro Lys Ser Arg Arg Arg Ala His His Leu Ala Thr Arg Arg
20 25 30
Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Leu Ser Arg Ala Thr Pro
35 40 45
Thr Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Asn Glu Pro
50 55 60
Arg Lys Gly Ser Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Val
65 70 75 80
Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln
85 90 95
Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe Arg His Glu
100 105 110
Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Ala Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Arg
115 120 125
Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val
130 135 140
Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile
145 150 155 160
Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu
165 170 175
Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu
180 185 190
Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu Ala Phe Phe
195 200 205
Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys
210 215 220
Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Ala Trp Asp Thr Pro Met Ser
225 230 235 240
Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr Glu Phe
245 250 255
Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Val Leu
260 265 270
Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Cys Arg Phe
275 280 285
Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly
290 295 300
Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met His
305 310 315 320
Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu
325 330 335
Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu Ala
340 345 350
Phe Ala Gly Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala Glu
355 360 365
Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val Lys
370 375 380
Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Thr Leu Leu Glu Gly Ser Thr Ser Lys
385 390 395 400
Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp His Asp Glu Leu Asp Gln Gln Lys
405 410 415
Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Ile Phe Asn Glu Glu Ile Gln Pro
420 425 430
Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala Ile
435 440 445
Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr
450 455 460
Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala
465 470 475 480
Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro
485 490 495
Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn
500 505 510
Ile Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys Val
515 520 525
Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp
530 535 540
Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Phe Leu Gly Asn Pro Glu
545 550 555 560
Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Ala Ile Ala Lys Gly Phe
565 570 575
Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val His Ala Ala
580 585 590
Ile Lys Lys Met Leu Glu Ala Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile Ile
595 600 605
Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala
610 615 620
Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr
625 630 635
<210> 9
<211> 665
<212> PRT
<213> Amaranthus sp.
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Amaranthus (AsA-
HASL) <400> 9
Met Val Thr Leu Asn His Ile Ser Ser Phe Thr Lys Pro Asn Lys Thr
1 5 10 15
Tyr Leu Gln Ser Ser Ile Tyr Ala Ile Pro Phe Ser Asn Ser Leu Lys
20 25 30
Pro Thr Ser Ser Ser Ser Ile Leu Ala Ala Leu Phe Lys Ser His His
35 40 45
Leu Leu Leu Gln Ser Pro Lys Pro Lys Pro Pro Ser Ala Thr Ile Thr
50 55 60
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Asp Asp Lys Pro Ser Ser Phe Val Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Pro Glu Glu Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu
85 90 95
Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly
100 105 110
Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg
115 120 125
Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Gln Gly
130 135 140
Tyr Ala Arg Ala Thr Gly Arg Val Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly
145 150 155 160
Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Phe Ala Asp Ala Leu Leu Asp
165 170 175
Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile
180 185 190
Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser
195 200 205
Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg
210 215 220
Ile Val Lys Glu Ala Phe Phe Leu Ala Asn Ser Gly Arg Pro Gly Pro
225 230 235 240
Val Leu Ile Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Val Pro
245 250 255
Asn Trp Glu Gln Pro Ile Lys Leu Gly Gly Tyr Leu Ser Arg Leu Pro
260 265 270
Lys Pro Thr Phe Ser Ala Asn Glu Glu Gly Leu Leu Asp Gln Ile Val
275 280 285
Arg Leu Val Gly Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Thr Gly Gly Gly
290 295 300
Cys Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Arg Lys Phe Val Glu Leu Thr Gly
305 310 315 320
Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Cys Thr
325 330 335
Asp Asp Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala
340 345 350
Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg
355 360 365
Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala
370 375 380
Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys
385 390 395 400
Gln Pro His Val Ser Ile Cys Gly Glu Ile Lys Val Ala Leu Gln Gly
405 410 415
Leu Asn Lys Ile Leu Glu Ser Arg Lys Gly Lys Leu Lys Leu Asp Phe
420 425 430
Ser Asn Trp Arg Glu Glu Leu Asn Glu Gln Lys Lys Lys Phe Pro Leu
435 440 445
Ser Phe Lys Ser Phe Gly Asp Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln
450 455 460
Val Leu Asp Glu Leu Thr Leu Gly Asp Ala Ile Val Ser Thr Gly Val
465 470 475 480
Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Arg Asn Pro
485 490 495
Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu
500 505 510
Pro Ala Cys Tyr Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val
515 520 525
Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala
530 535 540
Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Met Leu Leu Asn Asn
545 550 555 560
Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala
565 570 575
Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Asn Ser Ser Glu Ile
580 585 590
Phe Pro Asp Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala
595 600 605
Arg Val Thr Lys Val Ser Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Thr Met Leu
610 615 620
Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu
625 630 635 640
His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Ala Ala Phe Lys Asp Thr Ile
645 650 655
Thr Glu Gly Asp Gly Arg Arg Ala Tyr 660 665
<210> 10
<211> 655
<212> PRT
<213> Brassica napus
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица С генома ацетогидроксикислотной синтазы Brassica napus номер 1 (BnAHASL1C)
<400> 10
Met Ala Ala Ala Thr Ser Ser Ser Pro Ile Ser Leu Thr Ala Lys Pro
1 5 10 15
Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser
20 25 30
Leu Thr Pro Gln Lys Asp Ser Ser Arg Leu His Arg Pro Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Ala Val Leu Asn Ser Pro Val Asn Val Ala Pro Pro Ser Pro Glu
50 55 60
Lys Thr Asp Lys Asn Lys Thr Phe Val Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Glu
65 70 75 80
Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly
85 90 95
Val Glu Thr Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His
100 105 110
Gln Ala Leu Thr Arg Ser Ser Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His
115 120 125
Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly
130 135 140
Lys Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu
145 150 155 160
Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala
165 170 175
Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln
180 185 190
Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr
195 200 205
Leu Val Met Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val Gln Glu Ala Phe
210 215 220
Phe Leu Ala Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro
225 230 235 240
Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Asp Gln Pro Met
245 250 255
Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Gln Pro Pro Glu Val Ser
260 265 270
Gln Leu Gly Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val
275 280 285
Leu Tyr Val Gly Gly Gly Ser Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg
290 295 300
Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu
305 310 315 320
Gly Ser Tyr Pro Cys Asn Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met
325 330 335
His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu
340 345 350
Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu
355 360 365
Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala
370 375 380
Glu Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val
385 390 395 400
Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu
405 410 415
Glu Leu Lys Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Ser Glu Gln
420 425 430
Lys Gln Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro
435 440 445
Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Ile Leu Asp Glu Leu Thr Glu Gly Lys Ala
450 455 460
Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe
465 470 475 480
Tyr Lys Tyr Arg Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly
485 490 495
Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn
500 505 510
Pro Asp Ala Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met
515 520 525
Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys
530 535 540
Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu
545 550 555 560
Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro
565 570 575
Ala Arg Glu Asn Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Gly Ala
580 585 590
Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Glu
595 600 605
Ala Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val
610 615 620
Ile Cys Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly
625 630 635 640
Thr Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr
645 650 655
<210> 11 <211> 637 <212> PRT
<213> Brassica napus
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица С генома ацетогидроксикислотной синтазы Brassica napus номер 2 (BnAHASL2A)
<400> 11
Met Ala Ser Phe Ser Phe Phe Gly Thr Ile Pro Ser Ser Pro Thr Lys
1 5 10 15
Ala Ser Val Phe Ser Leu Pro Val Ser Val Thr Thr Leu Pro Ser Phe
20 25 30
Pro Arg Arg Arg Ala Thr Arg Val Ser Val Ser Ala Asn Ser Lys Lys
35 40 45
Asp Gln Asp Arg Thr Ala Ser Arg Arg Glu Asn Pro Ser Thr Phe Ser
50 55 60
Ser Lys Tyr Ala Pro Asn Val Pro Arg Ser Gly Ala Asp Ile Leu Val
65 70 75 80
Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Asp Val Val Phe Ala Tyr Pro Gly
85 90 95
Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Thr Ile
100 105 110
Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Ile Phe Ala Ala Glu
115 120 125
Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser
130 135 140
Gly Pro Gly Ala Met Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Phe
145 150 155 160
Asp Ser Val Pro Leu Ile Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met
165 170 175
Ile Gly Thr Met Ala Phe Gln Glu Thr Pro Val Val Glu Val Thr Arg
180 185 190
Thr Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met Glu Val Asp Asp Ile Pro
195 200 205
Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe Phe Leu Ala Thr Ser Val Arg Pro Gly
210 215 220
Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Val Gln Gln Gln Phe Ala Ile
225 230 235 240
Pro Asn Trp Glu Gln Pro Met Arg Leu Pro Leu Tyr Met Ser Thr Met
245 250 255
Pro Lys Pro Pro Lys Val Ser His Leu Glu Gln Ile Leu Arg Leu Val
260 265 270
Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn
275 280 285
Ser Ser Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val
290 295 300
Ala Ser Thr Phe Met Gly Leu Gly Ser Tyr Pro Cys Asp Asp Glu Glu
305 310 315 320
Phe Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr
325 330 335
Ala Val Glu Tyr Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp
340 345 350
Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile
355 360 365
Val His Ile Asp Ile Asp Ser Thr Glu Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro
370 375 380
His Val Ser Val Cys Cys Asp Val Gln Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn
385 390 395 400
Glu Val Leu Glu Asn Arg Arg Asp Val Leu Asp Phe Gly Glu Trp Arg
405 410 415
Cys Glu Leu Asn Glu Gln Arg Leu Lys Phe Pro Leu Arg Tyr Lys Thr
420 425 430
Phe Gly Glu Glu Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Leu Leu Asp Glu
435 440 445
Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile Ile Thr Thr Gly Val Gly Gln His Gln
450 455 460
Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Arg Phe Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu
465 470 475 480
Ser Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Met
485 490 495
Gly Ala Ala Ile Ala Asn Pro Gly Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly
500 505 510
Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val
515 520 525
Glu Asn Leu Pro Val Lys Val Leu Leu Ile Asn Asn Gln His Leu Gly
530 535 540
Met Val Leu Gln Trp Glu Asp His Phe Tyr Ala Ala Asn Arg Ala Asp
545 550 555 560
Ser Phe Leu Gly Asp Pro Ala Asn Pro Glu Ala Val Phe Pro Asp Met
565 570 575
Leu Leu Phe Ala Ala Ser Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Arg
580 585 590
Arg Glu Asp Leu Arg Glu Ala Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly
595 600 605
Pro Phe Leu Leu Asp Val Val Cys Pro His Gln Asp His Val Leu Pro
610 615 620
Leu Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Lys Asp Ile Ile Val
625 630 635
<210> 12
<211> 668
<212> PRT
<213> Camelina microcarpa
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Camelina micro-carpa номер 1 (CmAHASL1)
<400> 12
Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ile Pro Phe Ser Thr
1 5 10 15
Lys His Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Thr Leu
20 25 30
Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Arg Arg
35 40 45
Arg Gly Ile Lys Ser Thr Ala Leu Ser Ile Ser Ala Val Leu Asn Thr
50 55 60
Thr Thr Asn Val Ser Thr Thr Thr Pro Gln Ser Lys Pro Thr Lys Pro
65 70 75 80
Glu Lys Lys Lys Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys
85 90 95
Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Glu Thr
100 105 110
Ala Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu
115 120 125
Thr Arg Ser Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly
130 135 140
Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Thr Gly Lys Pro Gly
145 150 155 160
Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly
165 170 175
Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly
180 185 190
Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro
195 200 205
Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met
210 215 220
Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Val Glu Glu Ala Phe Phe Leu Ala
225 230 235 240
Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys Asp Ile
245 250 255
Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ser Met Arg Leu Pro
260 265 270
Gly Tyr Met Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His Leu Glu
275 280 285
Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val
290 295 300
Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu
305 310 315 320
Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr
325 330 335
Pro Cys Asp Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr
340 345 350
Val Tyr Ala Asn Tyr Ser Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe
355 360 365
Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala
370 375 380
Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly
385 390 395 400
Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala
405 410 415
Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu Leu Lys
420 425 430
Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Asn Glu Gln Lys Gln Lys
435 440 445
Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr
450 455 460
Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Arg Ala Ile Ile Ser
465 470 475 480
Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr
485 490 495
Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly
500 505 510
Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ser
515 520 525
Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln
530 535 540
Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Ile
545 550 555 560
Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe
565 570 575
Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ala Glu Glu
580 585 590
Asp Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Ser Ala Cys Gly Ile
595 600 605
Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Ile Ala Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln
610 615 620
Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro
625 630 635 640
His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Asn
645 650 655
Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 660 665
<210> 13 <211> 665
<212> PRT
<213> Camelina microcarpa
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Camelina micro-carpa номер 2 (CmAHASL2)
<400> 13
Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ile Pro Phe Ser Thr
1 5 10 15
Lys Pro Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser Arg Phe Thr Leu
20 25 30
Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Arg Arg Arg Gly Ile
35 40 45
Lys Ser Thr Ser Leu Ser Ile Ser Ala Val Leu Asn Thr Thr Thr Asn
50 55 60
Val Ser Thr Thr Thr Pro Pro Ser Lys Pro Thr Lys Pro Glu Lys Lys
65 70 75 80
Lys Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys Gly Ala Asp
85 90 95
Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Glu Thr Val Phe Ala
100 105 110
Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser
115 120 125
Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe
130 135 140
Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Thr Gly Lys Pro Gly Ile Cys Ile
145 150 155 160
Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp
165 170 175
Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro
180 185 190
Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu
195 200 205
Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu
210 215 220
Asp Ile Pro Arg Ile Val Glu Glu Ala Phe Phe Leu Ala Thr Ser Gly
225 230 235 240
Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln
245 250 255
Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ser Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met
260 265 270
Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His Leu Glu Gln Ile Val
275 280 285
Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly
290 295 300
Cys Leu Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly
305 310 315 320
Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr Pro Cys Asp
325 330 335
Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala
340 345 350
Asn Tyr Ser Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg
355 360 365
Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala
370 375 380
Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys
385 390 395 400
Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly
405 410 415
Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Gly Glu Glu Leu Lys Leu Asp Phe
420 425 430
Gly Val Trp Arg Ser Glu Leu Asn Glu Gln Lys Gln Lys Phe Pro Leu
435 440 445
Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln
450 455 460
Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val
465 470 475 480
Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro
485 490 495
Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu
500 505 510
Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ala Val Val Val
515 520 525
Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala
530 535 540
Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Ile Leu Asn Asn
545 550 555 560
Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala
565 570 575
Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ala Thr Glu Asp Glu Ile
580 585 590
Phe Pro Asn Met Leu Gln Phe Ala Ser Ala Cys Gly Ile Pro Ser Ala
595 600 605
Arg Val Thr Lys Lys Ala Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln Lys Met Leu
610 615 620
Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro His Gln Glu
625 630 635 640
His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asp Val Ile
645 650 655
Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 660 665
<210> 14
<211> 567
<212> PRT
<213> Solanum ptychanthum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Solanum ptychan-thum
(SpAHASL) <400> 14
Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly
1 5 10 15
Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Thr Ser Met Glu Ile His
20 25 30
Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His
35 40 45
Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Thr Gly
50 55 60
Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu
65 70 75 80
Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Ile Val Ala
85 90 95
Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln
100 105 110
Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr
115 120 125
Leu Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe
130 135 140
Phe Leu Ala Lys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro
145 150 155 160
Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Ile Pro Asn Trp Asp Gln Pro Met
165 170 175
Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Lys Leu Pro Asn Glu Met
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val
195 200 205
Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Gln Ser Ser Glu Glu Leu Arg Arg
210 215 220
Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu
225 230 235 240
Gly Ala Phe Pro Thr Gly Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met
245 250 255
His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Ser Ser Asp Leu Leu
260 265 270
Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu
275 280 285
Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala
290 295 300
Glu Ile Gly Lys Asn Lys Leu Pro His Ala Ser Ile Cys Ala Asp Ile
305 310 315 320
Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu Gly Lys Glu Gly
325 330 335
Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu Leu Asn Glu Gln
340 345 350
Lys Val Lys Tyr Pro Leu Asn Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro
355 360 365
Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly Asn Ala
370 375 380
Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe
385 390 395 400
Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly
405 410 415
Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Met Gly Ala Ala Val Gly Arg
420 425 430
Pro Gly Glu Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Met Met
435 440 445
Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn Leu Pro Val Lys
450 455 460
Ile Met Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu
465 470 475 480
Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro
485 490 495
Ala Asn Glu Glu Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala
500 505 510
Cys Gly Val Pro Ala Ala Arg Val Thr His Arg Asp Glu Leu Arg Ala
515 520 525
Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val
530 535 540
Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly
545 550 555 560
Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr 565
<210> 15
<211> 641
<212> PRT
<213> Sorghum bicolor
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Sorghum bicolor
(SbAHASL) <400> 15
Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ala Gly Ala Thr
1 5 10 15
Thr Ala Ala Pro Lys Ala Arg Arg Arg Ala His Leu Leu Ala Ala Arg
20 25 30
Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr
35 40 45
Leu Thr Val Thr Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro
50 55 60
Thr Asp Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg
65 70 75 80
Cys Gly Val Arg Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu
85 90 95
Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Ala Asn His Leu Phe
100 105 110
Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Phe Ala Arg Ser
115 120 125
Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr
130 135 140
Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met
145 150 155 160
Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala
165 170 175
Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His
180 185 190
Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Gln Glu
195 200 205
Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp
210 215 220
Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Thr
225 230 235 240
Pro Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala
245 250 255
Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg
260 265 270
Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu
275 280 285
Arg Arg Phe Val Glu Met Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met
290 295 300
Gly Leu Gly Asn Phe Pro Gly Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu
305 310 315 320
Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp
325 330 335
Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys
Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp
355 360 365
Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala
370 375 380
Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Ala Leu Leu Glu Gly Ser
385 390 395 400
Thr Ser Lys Lys Ser Phe Asp Phe Gly Ser Trp Gln Ala Glu Leu Asp
405 410 415
Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Asp Asp Glu
420 425 430
Ile Gln Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly
435 440 445
Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala
450 455 460
Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ala Gly
465 470 475 480
Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val
485 490 495
Ala Asn Pro Gly Ile Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe
500 505 510
Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Met Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro
515 520 525
Val Lys Val Phe Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln
530 535 540
Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly
545 550 555 560
Asn Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala
565 570 575
Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val
580 585 590
His Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu
595 600 605
Asp Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser
610 615 620
Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val
625 630 635 640
Tyr
<210> 16
<211> 657
<212> PRT
<213> Solanum tuberosum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы картофеля номер 1
(StAHASL1) <400> 16
Met Ala Ala Ala Ser Pro Ser Pro Cys Phe Ser Lys Asn Leu Pro Pro
1 5 10 15
Ser Ser Ser Lys Ser Ser Ile Leu Leu Pro Lys Ser Thr Phe Thr Phe
20 25 30
His Asn His Pro Lys Lys Thr Ser Pro Leu His Leu Thr His Thr Gln
35 40 45
His His Ser Arg Phe Thr Val Ser Asn Val Ile Leu Ser Thr Thr Thr
50 55 60
His Asn Asp Val Ser Glu Pro Glu Ile Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro
65 70 75 80
Asp Glu Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg
85 90 95
Glu Gly Val Lys Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu
100 105 110
Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg Asn Val Leu Pro
115 120 125
Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala
130 135 140
Thr Gly Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr
145 150 155 160
Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Ile
165 170 175
Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala
180 185 190
Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His
195 200 205
Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Val Arg Glu
210 215 220
Ala Phe Phe Leu Ala Lys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp
225 230 235 240
Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Pro Leu Val Ile Pro Asn Trp Asp Gln
245 250 255
Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Lys Leu Pro Asn
260 265 270
Glu Met Leu Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys
275 280 285
Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Thr Gln Ser Ser Glu Glu Leu
290 295 300
Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met
305 310 315 320
Gly Leu Gly Ala Phe Pro Val Gly Asp Glu Leu Ser Leu Gln Met Leu
325 330 335
Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Ser Ser Asp
340 345 350
Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys
355 360 365
Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp
370 375 380
Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala
385 390 395 400
Asp Ile Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu Gly Lys
405 410 415
Glu Gly Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu Leu Thr
420 425 430
Glu Gln Lys Val Lys Tyr Pro Leu Asn Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Ala
435 440 445
Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly
450 455 460
Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala
465 470 475 480
Gln Tyr Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly
485 490 495
Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val
500 505 510
Gly Arg Pro Gly Glu Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn Leu Pro
530 535 540
Val Lys Ile Met Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln
545 550 555 560
Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly
565 570 575
Asp Pro Ala Asn Glu Glu Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala
580 585 590
Glu Ala Cys Gly Val Pro Ala Ala Arg Val Ser His Arg Asp Asp Leu
595 600 605
Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu
610 615 620
Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser
625 630 635 640
Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Arg Ser
645 650 655
Tyr
<210> 17
<211> 659
<212> PRT
<213> Solanum tuberosum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы картофеля номер 2
(StAHASL2)
<220>
<221> misc_feature <222> (406)..(406)
<223> Xaa может быть любая встречающаяся в природе аминокислота
<400> 17
Met Ala Ala Ala Ala Ser Pro Ser Pro Cys Phe Ser Lys Thr Leu Pro
1 5 10 15
Pro Ser Ser Ser Lys Ser Ser Thr Ile Leu Pro Arg Ser Thr Phe Pro
20 25 30
Phe His Asn His Pro Gln Lys Ala Ser Pro Leu His Leu Thr His Thr
35 40 45
His His His Arg Arg Gly Phe Ala Val Ser Asn Val Val Ile Ser Thr
50 55 60
Thr Thr His Asn Asp Val Ser Glu Pro Glu Thr Phe Val Ser Arg Phe
65 70 75 80
Ala Pro Asp Glu Pro Arg Lys Gly Cys Asp Val Leu Val Glu Ala Leu
85 90 95
Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser
100 105 110
Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Asn Ile Ile Arg Asn Val
115 120 125
Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala
130 135 140
Arg Ala Thr Gly Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile
165 170 175
Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr
180 185 190
Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr
195 200 205
Lys His Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Val
210 215 220
Arg Glu Ala Phe Phe Leu Ala Lys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu
225 230 235 240
Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Val Ile Pro Asn Trp
245 250 255
Asp Gln Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Leu Pro Lys Leu
260 265 270
Pro Asn Glu Met Leu Leu Glu Gln Ile Ile Arg Leu Ile Ser Glu Ser
275 280 285
Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Gln Ser Ser Glu
290 295 300
Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Ser Val Ala Ser Thr
305 310 315 320
Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Thr Gly Asp Glu Leu Ser Leu Gln
325 330 335
Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Gly
340 345 350
Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr
355 360 365
Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp
370 375 380
Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile
385 390 395 400
Cys Ala Asp Ile Lys Xaa Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu
405 410 415
Gly Lys Glu Gly Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu
420 425 430
Leu Thr Glu Gln Lys Val Lys Tyr Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly
435 440 445
Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr
450 455 460
Asn Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp
465 470 475 480
Ala Ala Gln Tyr Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser
485 490 495
Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala
500 505 510
Ala Val Gly Arg Pro Gly Glu Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly
515 520 525
Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn
530 535 540
Leu Pro Val Lys Ile Met Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val
545 550 555 560
Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr
565 570 575
Leu Gly Asp Pro Ala Asn Glu Glu Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys
580 585 590
Phe Ala Glu Ala Cys Gly Val Pro Ala Ala Arg Val Ser His Arg Asp
595 600 605
Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr
610 615 620
Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile
625 630 635 640
Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg
645 650 655
Arg Ser Tyr
<210> 18
<211> 651
<212> PRT
<213> Glycine max
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы соевых бобов
(GmAHASL) <400> 18
Met Ala Ala Thr Ala Ser Arg Thr Thr Arg Phe Ser Ser Ser Ser Ser
1 5 10 15
His Pro Thr Phe Pro Lys Arg Ile Thr Arg Ser Thr Leu Pro Leu Ser
20 25 30
His Gln Thr Leu Thr Lys Pro Asn His Ala Leu Lys Ile Lys Cys Ser
35 40 45
Ile Ser Lys Pro Pro Thr Ala Ala Pro Phe Thr Lys Glu Ala Pro Thr
50 55 60
Thr Glu Pro Phe Val Ser Arg Phe Ala Ser Gly Glu Pro Arg Lys Gly
65 70 75 80
Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val Thr Thr Val
85 90 95
Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr
100 105 110
Arg Ser Ala Ala Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly
115 120 125
Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Leu Pro Gly Val
130 135 140
Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu
145 150 155 160
Ala Asp Ala Leu Met Asp Ser Val Pro Val Val Ala Ile Thr Gly Gln
165 170 175
Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile
Val Glu Val Ser Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Ile Leu Asp
195 200 205
Val Asp Asp Ile Pro Arg Val Val Ala Glu Ala Phe Phe Val Ala Thr
210 215 220
Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Ile Pro Lys Asp Val Gln
225 230 235 240
Gln Gln Leu Ala Val Pro Asn Trp Asp Glu Pro Val Asn Leu Pro Gly
245 250 255
Tyr Leu Ala Arg Leu Pro Arg Pro Pro Ala Glu Ala Gln Leu Glu His
260 265 270
Ile Val Arg Leu Ile Met Glu Ala Gln Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Leu Asn Ser Ser Ala Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu
290 295 300
Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Thr Phe Pro
305 310 315 320
Ile Gly Asp Glu Tyr Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr Val
325 330 335
Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Asn Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly
340 345 350
Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser
355 360 365
Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys
370 375 380
Asn Lys Gln Ala His Val Ser Val Cys Ala Asp Leu Lys Leu Ala Leu
385 390 395 400
Lys Gly Ile Asn Met Ile Leu Glu Glu Lys Gly Val Glu Gly Lys Phe
405 410 415
Asp Leu Gly Gly Trp Arg Glu Glu Ile Asn Val Gln Lys His Lys Phe
420 425 430
Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Gln Asp Ala Ile Ser Pro Gln His Ala
435 440 445
Ile Glu Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly Asp Ala Ile Val Ser Thr
450 455 460
Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys
465 470 475 480
Arg Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe
485 490 495
Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Asn Pro Gly Ala Val
500 505 510
Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu
515 520 525
Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu
530 535 540
Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr
545 550 555 560
Lys Ser Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro Ser Ser Glu Ser
565 570 575
Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Asp Ala Cys Gly Ile Pro
580 585 590
Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Ala Ala Ile Gln Arg
595 600 605
Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His
610 615 620
Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Asn Gly Ser Phe Lys Asp
625 630 635 640
Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Thr Arg Tyr 645 650
<210> 19
<211> 648
<212> PRT
<213> Xanthium sp.
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы дурнишника (XsA-
HASL) <400> 19
Met Ala Ala Ile Pro His Thr Asn Pro Ser Ile Thr Thr Lys Pro Pro
1 5 10 15
Ser Ser Pro Pro Arg Pro Thr Phe Leu Ala Arg Phe Thr Phe Pro Ile
20 25 30
Thr Ser Thr Ser His Lys Arg His Arg Leu His Ile Ser Asn Val Leu
35 40 45
Ser Asp Ser Lys Pro Thr Ile Thr His Ser Pro Leu Pro Thr Glu Ser
50 55 60
Phe Ile Ser Arg Tyr Ala Pro Asp Gln Pro Arg Lys Gly Ala Asp Val
65 70 75 80
Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr
85 90 95
Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Thr
100 105 110
Thr Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala
115 120 125
Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Leu Pro Gly Val Cys Ile Ala
130 135 140
Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala
145 150 155 160
Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg
165 170 175
Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val
180 185 190
Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp
195 200 205
Ile Pro Arg Ile Val Arg Glu Ala Phe Tyr Leu Ala Ser Ser Gly Arg
210 215 220
Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu
225 230 235 240
Val Val Pro Lys Trp Asp Glu Pro Ile Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser
245 250 255
Arg Leu Pro Lys Thr Glu Asn Asn Gly Gln Leu Glu His Ile Val Arg
260 265 270
Leu Val Ser Glu Ala Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys
275 280 285
Leu Asn Ser Gly Asp Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile
290 295 300
Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Tyr Pro Ala Ser Ser
305 310 315 320
Asp Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn
325 330 335
Tyr Ala Val Asp Lys Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe
340 345 350
Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys
355 360 365
Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln
370 375 380
Pro His Val Ser Ile Cys Gly Asp Ile Lys Val Ala Leu Gln Gly Leu
385 390 395 400
Asn Lys Ile Leu Glu Val Lys Asn Ser Val Thr Asn Leu Asp Phe Ser
405 410 415
Asn Trp Arg Lys Glu Leu Asp Glu Gln Lys Val Lys Tyr Pro Leu Ser
420 425 430
Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val
435 440 445
Leu Asp Glu Leu Thr Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly
450 455 460
Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Asn Lys Pro Arg
465 470 475 480
Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro
485 490 495
Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Ala Arg Pro Asp Ala Val Val Val Asp
500 505 510
Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Ser Val Gln Glu Leu Ala Thr
515 520 525
Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln
530 535 540
His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn
545 550 555 560
Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Lys Glu Ser Glu Ile Phe
565 570 575
Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Asp Ile Pro Ala Ala Arg
580 585 590
Val Thr Arg Lys Ala Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp
595 600 605
Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His
610 615 620
Val Leu Pro Met Ile Pro Ala Gly Gly Gly Phe Met Asp Val Ile Thr
625 630 635 640
Glu Gly Asp Gly Arg Met Lys Tyr 645
<210> 20
<211> 640
<212> PRT
<213> Lolium multiflorum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы плевела (LmAHASL)
<400> 20
Met Ala Thr Ala Thr Ser Thr Ala Val Ala Phe Ser Gly Ala Thr Ala
1 5 10 15
Thr Leu Pro Lys Pro Arg Thr Leu Pro Arg His Leu Leu Pro Ser Ser
20 25 30
Arg Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Val Ser Pro Ser
35 40 45
Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser
50 55 60
Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys
65 70 75 80
Gly Ile Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile
85 90 95
His Gln Ala Leu Thr Ser Ser Pro Leu Ile Thr Asn His Leu Phe Arg
100 105 110
His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser
115 120 125
Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn
130 135 140
Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val
145 150 155 160
Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe
165 170 175
Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn
180 185 190
Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala
195 200 205
Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile
210 215 220
Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Ala Pro
225 230 235 240
Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr
245 250 255
Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Glu Arg Arg Pro
260 265 270
Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly Glu Asp Val Arg
275 280 285
Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly
290 295 300
Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly
305 310 315 320
Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu
325 330 335
Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile
340 345 350
Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro
355 360 365
Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp
370 375 380
Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Val Leu Thr Gly Ser Lys
385 390 395 400
Cys Asp Lys Ser Phe Asp Phe Ala Ser Trp His Asp Glu Leu Glu Gln
405 410 415
Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile
420 425 430
Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu
435 440 445
Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln
450 455 460
Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Val Leu Ser Ser Ala Gly Leu
465 470 475 480
Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Thr Ala Val Ala
485 490 495
Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu
500 505 510
Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val
515 520 525
Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp
530 535 540
Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn
545 550 555 560
Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys
565 570 575
Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Arg Ser Glu Val Arg
580 585 590
Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp
595 600 605
Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly
610 615 620
Gly Ala Phe Lys Asp Ile Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Ile Ser Tyr
625 630 635 640
<210> 21
<211> 607
<212> PRT
<213> Triticum aestivum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы А генома пшеницы (TaAHASL1A), частичная
<400> 21
Leu Pro Ala Arg Val Val Arg Cys Cys Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu
20 25 30
Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly
35 40 45
Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His
50 55 60
Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His
65 70 75 80
Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly
85 90 95
Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu
100 105 110
Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala
115 120 125
Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln
130 135 140
Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr
145 150 155 160
Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe
165 170 175
Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro
180 185 190
Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Ile Trp Asp Thr Pro Met
195 200 205
Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu
210 215 220
Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile
225 230 235 240
Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg
245 250 255
Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu
260 265 270
Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met
275 280 285
His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu
290 295 300
Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu
305 310 315 320
Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala
325 330 335
Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val
340 345 350
Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala
355 360 365
Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln
370 375 380
Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro
385 390 395 400
Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala
405 410 415
Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr
420 425 430
Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly
435 440 445
Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn
450 455 460
Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met
465 470 475 480
Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys
485 490 495
Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu
500 505 510
Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro
515 520 525
Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly
530 535 540
Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala
545 550 555 560
Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile
565 570 575
Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly
580 585 590
Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Thr Ser Tyr
595 600 605
<210> 22
<211> 607
<212> PRT
<213> Triticum aestivum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы В генома пшеницы (TaAHASL1B), частичная
<400> 22
Leu Pro Ala Arg Ile Val Arg Cys Cys Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu
20 25 30
Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly
35 40 45
Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His
50 55 60
Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His
65 70 75 80
Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly
85 90 95
Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu
100 105 110
Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala
115 120 125
Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln
130 135 140
Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr
145 150 155 160
Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe
165 170 175
Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro
180 185 190
Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Thr Pro Met
195 200 205
Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu
210 215 220
Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile
225 230 235 240
Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg
245 250 255
Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu
260 265 270
Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met
275 280 285
His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu
290 295 300
Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu
305 310 315 320
Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala
325 330 335
Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val
340 345 350
Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala
355 360 365
Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln
370 375 380
Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro
385 390 395 400
Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala
405 410 415
Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr
420 425 430
Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly
435 440 445
Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn
450 455 460
Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met
465 470 475 480
Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys
485 490 495
Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu
500 505 510
Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro
515 520 525
Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly
530 535 540
Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala
545 550 555 560
Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile
565 570 575
Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly
580 585 590
Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Thr Ser Tyr
595 600 605
<210> 23
<211> 607
<212> PRT
<213> Triticum aestivum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы D генома пшеницы
(TaAHASL1D), частичная
<400> 23
Leu Pro Ala Arg Ile Val Arg Cys Cys Ala Ala Ser Pro Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ser Ala Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser Glu
20 25 30
Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly
35 40 45
Ile Val Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser Met Glu Ile His
50 55 60
Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn His Leu Phe Arg His
65 70 75 80
Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly
85 90 95
Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu
100 105 110
Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val Ala
115 120 125
Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln
130 135 140
Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr
145 150 155 160
Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala Phe
165 170 175
Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro
180 185 190
Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Thr Pro Met
195 200 205
Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ser Thr Glu
210 215 220
Ser Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Ser Arg Arg Pro Ile
225 230 235 240
Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ala Ala Ser Gly Glu Glu Leu Arg Arg
245 250 255
Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu
260 265 270
Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly Met
275 280 285
His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu
290 295 300
Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile Glu
305 310 315 320
Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro Ala
325 330 335
Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Val
340 345 350
Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Asp Leu Leu Asn Gly Ser Lys Ala
355 360 365
Gln Gln Gly Leu Asp Phe Gly Pro Trp His Lys Glu Leu Asp Gln Gln
370 375 380
Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro
385 390 395 400
Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu Ala
405 410 415
Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr
420 425 430
Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly
435 440 445
Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Asn
450 455 460
Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met
465 470 475 480
Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val Lys
485 490 495
Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu
500 505 510
Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro
515 520 525
Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys Gly
530 535 540
Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Thr Ala
545 550 555 560
Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Ile
565 570 575
Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly
580 585 590
Ala Phe Lys Asp Met Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Thr Ser Tyr
595 600 605
<210> 24 <211> 659 <212> PRT
<213> Gossypium hirsutuia
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы хлопка (GHAHASA5)
<400> 24
Met Ala Ala Ala Thr Ala Asn Ser Ala Leu Pro Lys Leu Ser Thr Leu
1 5 10 15
Thr Ser Ser Phe Lys Ser Ser Ile Pro Ile Ser Lys Ser Ser Leu Pro
20 25 30
Phe Ser Thr Thr Pro Gln Lys Pro Thr Pro Tyr Arg Ser Phe Asp Val
35 40 45
Ser Cys Ser Leu Ser His Ala Ser Ser Asn Pro Arg Ser Ala Ala Thr
50 55 60
Ser Val Thr Pro Lys Asn Ala Pro Pro His Asp Phe Ile Ser Arg Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu
85 90 95
Val Arg Glu Gly Val Lys Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser
100 105 110
Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Lys Ile Ile Arg Asn Val
115 120 125
Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala
130 135 140
Arg Ser Ser Gly Ile Pro Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Ile
165 170 175
Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr
180 185 190
Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr
195 200 205
Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val
210 215 220
Ser Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu
225 230 235 240
Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Val Pro Lys Trp
245 250 255
Asn His Ser Leu Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser Arg Leu Pro Lys Ala
260 265 270
Pro Gly Glu Ala His Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Val Ser Glu Ser
275 280 285
Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Glu
290 295 300
Glu Leu Lys Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr
305 310 315 320
Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ile Ser Asp Asp Leu Ser Leu Gln
325 330 335
Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys
340 345 350
Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr
355 360 365
Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp
370 375 380
Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Val
385 390 395 400
Cys Ser Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Ile Asn Lys Ile Leu Glu
405 410 415
Thr Lys Val Ala Lys Leu Asn Leu Asp Tyr Ser Glu Trp Arg Gln Glu
420 425 430
Leu Asn Glu Gln Lys Leu Lys Phe Pro Leu Ser Tyr Lys Thr Phe Gly
435 440 445
Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr
450 455 460
Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp
465 470 475 480
Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser
485 490 495
Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala
500 505 510
Ala Val Ala Asn Pro Glu Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly
515 520 525
Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn
530 535 540
Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val
545 550 555 560
Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr
565 570 575
Leu Gly Asp Pro Ser Asn Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys
580 585 590
Phe Ala Glu Ala Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu
595 600 605
Asp Leu Lys Ala Ala Met Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr
610 615 620
Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile
625 630 635 640
Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg
645 650 655
Thr Gln Tyr
<210> 25
<211> 659
<212> PRT
<213> Gossypium hirsutum
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы хлопка
(GHAHASA19) <400> 25
Met Ala Ala Ala Thr Ser Asn Ser Ala Leu Pro Lys Leu Ser Thr Leu
1 5 10 15
Thr Ser Ser Phe Lys Ser Ser Ile Pro Ile Ser Lys Ser Ser Leu Pro
20 25 30
Phe Ser Thr Thr Pro Gln Lys Pro Thr Pro Tyr Arg Ser Phe Asp Val
35 40 45
Ser Cys Ser Leu Ser His Ala Ser Ser Asn Pro Arg Asn Pro Ala Ala
50 55 60
Ser Val Thr Gln Lys Thr Ala Pro Pro His Tyr Phe Ile Ser Arg Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu
85 90 95
Glu Arg Glu Gly Val Lys Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Gly Ala Ser
100 105 110
Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Lys Ile Ile Arg Asn Val
115 120 125
Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala
130 135 140
Arg Ser Ser Gly Ile Ser Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Arg Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala Met Leu Asp Ser Ile
165 170 175
Pro Leu Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr
180 185 190
Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr
195 200 205
Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Asp Asp Ile Pro Arg Ile Val
210 215 220
Ser Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu
225 230 235 240
Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Val Pro Lys Trp
245 250 255
Asn His Ser Leu Arg Leu Pro Gly Tyr Leu Ser Arg Leu Pro Lys Ala
260 265 270
Pro Ala Glu Ala His Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Val Ser Glu Ser
275 280 285
Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Glu
290 295 300
Glu Leu Lys Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr
305 310 315 320
Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ile Ser Asp Glu Leu Ser Leu Gln
325 330 335
Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys
340 345 350
Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr
355 360 365
Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp
370 375 380
Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Met Ser Val
385 390 395 400
Cys Ser Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Ile Asn Lys Ile Leu Glu
405 410 415
Thr Thr Gly Ala Lys Leu Asn Leu Asp Tyr Ser Glu Trp Arg Gln Glu
420 425 430
Leu Asn Glu Gln Lys Leu Lys Phe Pro Leu Ser Tyr Lys Thr Phe Gly
435 440 445
Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr
450 455 460
Gly Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp
465 470 475 480
Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser
485 490 495
Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala
500 505 510
Ala Val Ala Asn Pro Glu Ala Val Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly
515 520 525
Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn
530 535 540
Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val
545 550 555 560
Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr
565 570 575
Leu Gly Asp Pro Ser Asn Glu Ser Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys
580 585 590
Phe Ala Glu Ala Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Glu
595 600 605
Asp Leu Lys Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr
610 615 620
Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile
625 630 635 640
Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg
645 650 655
Thr Gln Tyr
<210> 26
<211> 562
<212> PRT
<213> Escherichia coli
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица I ацетогидроксикислотной синтазы E. coli (IlvB)
<400> 26
Met Ala Ser Ser Gly Thr Thr Ser Thr Arg Lys Arg Phe Thr Gly Ala
1 5 10 15
Glu Phe Ile Val His Phe Leu Glu Gln Gln Gly Ile Lys Ile Val Thr
20 25 30
Gly Ile Pro Gly Gly Ser Ile Leu Pro Val Tyr Asp Ala Leu Ser Gln
35 40 45
Ser Thr Gln Ile Arg His Ile Leu Ala Arg His Glu Gln Gly Ala Gly
50 55 60
Phe Ile Ala Gln Gly Met Ala Arg Thr Asp Gly Lys Pro Ala Val Cys
65 70 75 80
Met Ala Cys Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Thr Ala Ile Ala
85 90 95
Asp Ala Arg Leu Asp Ser Ile Pro Leu Ile Cys Ile Thr Gly Gln Val
100 105 110
Pro Ala Ser Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Val Asp Thr Tyr
115 120 125
Gly Ile Ser Ile Pro Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Arg His Ile
130 135 140
Glu Glu Leu Pro Gln Val Met Ser Asp Ala Phe Arg Ile Ala Gln Ser
145 150 155 160
Gly Arg Pro Gly Pro Val Trp Ile Asp Ile Pro Lys Asp Val Gln Thr
165 170 175
Ala Val Phe Glu Ile Glu Thr Gln Pro Ala Met Ala Glu Lys Ala Ala
180 185 190
Ala Pro Ala Phe Ser Glu Glu Ser Ile Arg Asp Ala Ala Ala Met Ile
195 200 205
Asn Ala Ala Lys Arg Pro Val Leu Tyr Leu Gly Gly Gly Val Ile Asn
210 215 220
Ala Pro Ala Arg Val Arg Glu Leu Ala Glu Lys Ala Gln Leu Pro Thr
225 230 235 240
Thr Met Thr Leu Met Ala Leu Gly Met Leu Pro Lys Ala His Pro Leu
245 250 255
Ser Leu Gly Met Leu Gly Met His Gly Val Arg Ser Thr Asn Tyr Ile
260 265 270
Leu Gln Glu Ala Asp Leu Leu Ile Val Leu Gly Ala Arg Phe Asp Asp
275 280 285
Arg Ala Ile Gly Lys Thr Glu Gln Phe Cys Pro Asn Ala Lys Ile Ile
290 295 300
His Val Asp Ile Asp Arg Ala Glu Leu Gly Lys Ile Lys Gln Pro His
305 310 315 320
Val Ala Ile Gln Ala Asp Val Asp Asp Val Leu Ala Gln Leu Ile Pro
325 330 335
Leu Val Glu Ala Gln Pro Arg Ala Glu Trp His Gln Leu Val Ala Asp
340 345 350
Leu Gln Arg Glu Phe Pro Cys Pro Ile Pro Lys Ala Cys Asp Pro Leu
355 360 365
Ser His Tyr Gly Leu Ile Asn Ala Val Ala Ala Cys Val Asp Asp Asn
370 375 380
Ala Ile Ile Thr Thr Asp Val Gly Gln His Gln Met Trp Thr Ala Gln
385 390 395 400
Ala Tyr Pro Leu Asn Arg Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu
405 410 415
Gly Thr Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Leu Ala
420 425 430
Asn Pro Asp Arg Lys Val Leu Cys Phe Ser Gly Asp Gly Ser Leu Met
435 440 445
Met Asn Ile Gln Glu Met Ala Thr Ala Ser Glu Asn Gln Leu Asp Val
450 455 460
Lys Ile Ile Leu Met Asn Asn Glu Ala Leu Gly Leu Val His Gln Gln
465 470 475 480
Gln Ser Leu Phe Tyr Glu Gln Gly Val Phe Ala Ala Thr Tyr Pro Gly
485 490 495
Lys Ile Asn Phe Met Gln Ile Ala Ala Gly Phe Gly Leu Glu Thr Cys
500 505 510
Asp Leu Asn Asn Glu Ala Asp Pro Gln Ala Ser Leu Gln Glu Ile Ile
515 520 525
Asn Arg Pro Gly Pro Ala Leu Ile His Val Arg Ile Asp Ala Glu Glu
530 535 540
Lys Val Tyr Pro Met Val Pro Pro Gly Ala Ala Asn Thr Glu Met Val
545 550 555 560
Gly Glu
<210> 27
<211> 548
<212> PRT
<213> Escherichia coli
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица II ацетогидроксикислотной синтазы E. coli (IlvG)
<400> 27
Met Asn Gly Ala Gln Trp Val Val His Ala Leu Arg Ala Gln Gly Val
1 5 10 15
Asn Thr Val Phe Gly Tyr Pro Gly Gly Ala Ile Met Pro Val Tyr Asp
20 25 30
Ala Leu Tyr Asp Gly Gly Val Glu His Leu Leu Cys Arg His Glu Gln
35 40 45
Gly Ala Ala Met Ala Ala Ile Gly Tyr Ala Arg Ala Thr Gly Lys Thr
50 55 60
Gly Val Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Ile Thr
65 70 75 80
Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Val Val Ala Ile Thr
85 90 95
Gly Gln Val Ser Ala Pro Phe Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Val
100 105 110
Asp Val Leu Gly Leu Ser Leu Ala Cys Thr Lys His Ser Phe Leu Val
115 120 125
Gln Ser Leu Glu Glu Leu Pro Arg Ile Met Ala Glu Ala Phe Asp Val
130 135 140
Ala Cys Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp
145 150 155 160
Ile Gln Leu Ala Ser Gly Asp Leu Glu Pro Trp Phe Thr Thr Val Glu
165 170 175
Asn Glu Val Thr Phe Pro His Ala Glu Val Glu Gln Ala Arg Gln Met
180 185 190
Leu Ala Lys Ala Gln Lys Pro Met Leu Tyr Val Gly Gly Gly Val Gly
195 200 205
Met Ala Gln Ala Val Pro Ala Leu Arg Glu Phe Leu Ala Ala Thr Lys
210 215 220
Met Pro Ala Thr Cys Thr Leu Lys Gly Leu Gly Ala Val Glu Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Pro Tyr Tyr Leu Gly Met Leu Gly Met His Gly Thr Lys Ala Ala
245 250 255
Asn Phe Ala Val Gln Glu Cys Asp Leu Leu Ile Ala Val Gly Ala Arg
260 265 270
Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Asn Thr Phe Ala Pro His Ala
275 280 285
Ser Val Ile His Met Asp Ile Asp Pro Ala Glu Met Asn Lys Leu Arg
290 295 300
Gln Ala His Val Ala Leu Gln Gly Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala
305 310 315 320
Leu Gln Gln Pro Leu Asn Gln Tyr Asp Trp Gln Gln His Cys Ala Gln
325 330 335
Leu Arg Asp Glu His Ser Trp Arg Tyr Asp His Pro Gly Asp Ala Ile
340 345 350
Tyr Ala Pro Leu Leu Leu Lys Gln Leu Ser Asp Arg Lys Pro Ala Asp
355 360 365
Cys Val Val Thr Thr Asp Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln
370 375 380
His Ile Ala His Thr Arg Pro Glu Asn Phe Ile Thr Ser Ser Gly Leu
385 390 395 400
Gly Thr Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Val Gly Ala Gln Val Ala
405 410 415
Arg Pro Asn Asp Thr Val Val Cys Ile Ser Gly Asp Gly Ser Phe Met
420 425 430
Met Asn Val Gln Glu Leu Gly Thr Val Lys Arg Lys Gln Leu Pro Leu
435 440 445
Lys Ile Val Leu Leu Asp Asn Gln Arg Leu Gly Met Val Arg Gln Trp
450 455 460
Gln Gln Leu Phe Phe Gln Glu Arg Tyr Ser Glu Thr Thr Leu Thr Asp
465 470 475 480
Asn Pro Asp Phe Leu Met Leu Ala Ser Ala Phe Gly Ile His Gly Gln
485 490 495
His Ile Thr Arg Lys Asp Gln Val Glu Ala Ala Leu Asp Thr Met Leu
500 505 510
Asn Ser Asp Gly Pro Tyr Leu Leu His Val Ser Ile Asp Glu Leu Glu
515 520 525
Asn Val Trp Pro Leu Val Pro Pro Gly Ala Ser Asn Ser Glu Met Leu
530 535 540
Glu Lys Leu Ser
545
<210> 28
<211> 574
<212> PRT
<213> Escherichia coli
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Большая субъединица III ацетогидроксикислотной синтазы E. coli
(IlvI) <400> 28
Met Glu Met Leu Ser Gly Ala Glu Met Val Val Arg Ser Leu Ile Asp
1 5 10 15
Gln Gly Val Lys Gln Val Phe Gly Tyr Pro Gly Gly Ala Val Leu Asp
20 25 30
Ile Tyr Asp Ala Leu His Thr Val Gly Gly Ile Asp His Val Leu Val
35 40 45
Arg His Glu Gln Ala Ala Val His Met Ala Asp Gly Leu Ala Arg Ala
50 55 60
Thr Gly Glu Val Gly Val Val Leu Val Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr
65 70 75 80
Asn Ala Ile Thr Gly Ile Ala Thr Ala Tyr Met Asp Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Val Val Leu Ser Gly Gln Val Ala Thr Ser Leu Ile Gly Tyr Asp Ala
100 105 110
Phe Gln Glu Cys Asp Met Val Gly Ile Ser Arg Pro Val Val Lys His
115 120 125
Ser Phe Leu Val Lys Gln Thr Glu Asp Ile Pro Gln Val Leu Lys Lys
130 135 140
Ala Phe Trp Leu Ala Ala Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Val Val Asp
145 150 155 160
Leu Pro Lys Asp Ile Leu Asn Pro Ala Asn Lys Leu Pro Tyr Val Trp
165 170 175
Pro Glu Ser Val Ser Met Arg Ser Tyr Asn Pro Thr Thr Thr Gly His
180 185 190
Lys Gly Gln Ile Lys Arg Ala Leu Gln Thr Leu Val Ala Ala Lys Lys
195 200 205
Pro Val Val Tyr Val Gly Gly Gly Ala Ile Thr Ala Gly Cys His Gln
210 215 220
Gln Leu Lys Glu Thr Val Glu Ala Leu Asn Leu Pro Val Val Cys Ser
225 230 235 240
Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ala Thr His Arg Gln Ala Leu Gly
245 250 255
Met Leu Gly Met His Gly Thr Tyr Glu Ala Asn Met Thr Met His Asn
260 265 270
Ala Asp Val Ile Phe Ala Val Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Thr Thr
275 280 285
Asn Asn Leu Ala Lys Tyr Cys Pro Asn Ala Thr Val Leu His Ile Asp
290 295 300
Ile Asp Pro Thr Ser Ile Ser Lys Thr Val Thr Ala Asp Ile Pro Ile
305 310 315 320
Val Gly Asp Ala Arg Gln Val Leu Glu Gln Met Leu Glu Leu Leu Ser
325 330 335
Gln Glu Ser Ala His Gln Pro Leu Asp Glu Ile Arg Asp Trp Trp Gln
340 345 350
Gln Ile Glu Gln Trp Arg Ala Arg Gln Cys Leu Lys Tyr Asp Thr His
355 360 365
Ser Glu Lys Ile Lys Pro Gln Ala Val Ile Glu Thr Leu Trp Arg Leu
370 375 380
Thr Lys Gly Asp Ala Tyr Val Thr Ser Asp Val Gly Gln His Gln Met
385 390 395 400
Phe Ala Ala Leu Tyr Tyr Pro Phe Asp Lys Pro Arg Arg Trp Ile Asn
405 410 415
Ser Gly Gly Leu Gly Thr Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Leu Gly
420 425 430
Val Lys Met Ala Leu Pro Glu Glu Thr Val Val Cys Val Thr Gly Asp
435 440 445
Gly Ser Ile Gln Met Asn Ile Gln Glu Leu Ser Thr Ala Leu Gln Tyr
450 455 460
Glu Leu Pro Val Leu Val Val Asn Leu Asn Asn Arg Tyr Leu Gly Met
465 470 475 480
Val Lys Gln Trp Gln Asp Met Ile Tyr Ser Gly Arg His Ser Gln Ser
485 490 495
Tyr Met Gln Ser Leu Pro Asp Phe Val Arg Leu Ala Glu Ala Tyr Gly
500 505 510
His Val Gly Ile Gln Ile Ser His Pro His Glu Leu Glu Ser Lys Leu
515 520 525
Ser Glu Ala Leu Glu Gln Val Arg Asn Asn Arg Leu Val Phe Val Asp
530 535 540
Val Thr Val Asp Gly Ser Glu His Val Tyr Pro Met Gln Ile Arg Gly
545 550 555 560
Gly Gly Met Asp Glu Met Trp Leu Ser Lys Thr Glu Arg Thr 565 570
<210> 29
<211> 1917
<212> DNA
<213> Zea mays
<220>
<221> misc_feature
<223> Кодирующая последовательность большой субъединицы 2 ацетогидроксикислотной синтазы (ZmAHASL2) кукурузы, аллель S621N.
ctgcgtcttg tctggtgagg atgggcctcg ggcacggtgt cggtttgatg cacgttgata gcagatgtta aagagctttg cttgggtata gagctgacga gcacagtact atgggatttg gttgacatcg attgagaacc cagtgggagg aatgaaagtg gtccgtgtga gggccgtacc aatggtgggg ttggtgaatc agttgcgacg gcaacttccc atgcaaatta atcgtgtgac ttgatccggc agcttgcttt actttggctc aaacatctaa aaggcgaggc acacttacaa gtttgccggc atggagatgg tcccggtgaa acaggttcta agatatatcc caaagaagaa tcttggatat ctttcaagga ccggcgccct ctttgtggag cagcgacgac tgcagtggat agggaagatt tgagattggc gcagggcatg atggaacgat tgaggagatc catcatcggc gcggccaagg tgctgctggt tagctttctc ggtctttgtg taaggccaac agatttcgtg cgaagtccgc aatcgtccca tatgatcctg gttctttatg ctgactggaa ccactgtctc aaggccgatc gaggcttttg aagaacaagc aatgctcttc gagttggatc cagccacaat acaggtgttg cagtggttgt gcttctgtgg atgaacgttc ctaaacaacc agagcgcaca acgatcgcca gcagcgataa caccaggagc gatggtgatg ttggcggtgg tcccggtcac tgcgcatgct tgttgcttgc caagcagggc agccacatgt ttgaaggaag agcagaagag atgctattca ggcagcacca cttcagctgg ccaacccagg aggagctagc agcacctggg catacttggg aagggttcaa agaagatgct atgtgttgcc gcaggactgt ctgcgcagca aactactctt aggtatgcat acttggtgtg taagattgtg gtccatctgt cacatcaaag ggaattcccc ggttcttgat gatgtgggcg tcttggggct tgttactgtt tatgatccga gatggtggtg aaacccagag cattccagcg cgagactcca tatgatccct gtactga
840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1917
<210> 30
<211> 2013
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<220>
<221> misc_feature
<223> Кодирующая последовательность большой субъединицы ацетогидроксикис-лотной синтазы Arabidopsis (AtAHASL),S653N мутантный аллель.
<400> 30
atggcggcgg caacaacaac aacaacaaca tcttcttcga tctccttctc caccaaacca 60
tctccttcct cctccaaatc accattacca atctccagat tctccctccc attctcccta 120
aaccccaaca aatcatcctc ctcctcccgc cgccgcggta tcaaatccag ctctccctcc 180
tccatctccg ccgtgctcaa cacaaccacc aatgtcacaa ccactccctc tccaaccaaa 240
cctaccaaac ccgaaacatt catctcccga ttcgctccag atcaaccccg caaaggcgct 300
gatatcctcg tcgaagcttt agaacgtcaa ggcgtagaaa ccgtattcgc ttaccctgga 360
ggtgcatcaa tggagattca ccaagcctta acccgctctt cctcaatccg taacgtcctt 420
cctcgtcacg aacaaggagg tgtattcgca gcagaaggat acgctcgatc ctcaggtaaa 480
ccaggtatct gtatagccac ttcaggtccc ggagctacaa atctcgttag cggattagcc 540
gatgcgttgt tagatagtgt tcctcttgta gcaatcacag gacaagtccc tcgtcgtatg 600
attggtacag atgcgtttca agagactccg attgttgagg taacgcgttc gattacgaag 660
cataactatc ttgtgatgga tgttgaagat atccctagga ttattgagga agctttcttt 720
ttagctactt ctggtagacc tggacctgtt ttggttgatg ttcctaaaga tattcaacaa 780
cagcttgcga ttcctaattg ggaacaggct atgagattac ctggttatat gtctaggatg 840
cctaaacctc cggaagattc tcatttggag cagattgtta ggttgatttc tgagtctaag 900
aagcctgtgt tgtatgttgg tggtggttgt ttgaattcta gcgatgaatt gggtaggttt 960
gttgagctta cggggatccc tgttgcgagt acgttgatgg ggctgggatc ttatccttgt 1020
gatgatgagt tgtcgttaca tatgcttgga atgcatggga ctgtgtatgc aaattacgct 1080
gtggagcata gtgatttgtt gttggcgttt ggggtaaggt ttgatgatcg tgtcacgggt 1140
aagcttgagg cttttgctag tagggctaag attgttcata ttgatattga ctcggctgag 1200
attgggaaga ataagactcc tcatgtgtct gtgtgtggtg atgttaagct ggctttgcaa 1260
gggatgaata aggttcttga gaaccgagcg gaggagctta agcttgattt tggagtttgg 1320
aggaatgagt tgaacgtaca gaaacagaag tttccgttga gctttaagac gtttggggaa 1380
gctattcctc cacagtatgc gattaaggtc cttgatgagt tgactgatgg aaaagccata 1440
ataagtactg gtgtcgggca acatcaaatg tgggcggcgc agttctacaa ttacaagaaa 1500
ccaaggcagt ggctatcatc aggaggcctt ggagctatgg gatttggact tcctgctgcg 1560
attggagcgt ctgttgctaa ccctgatgcg atagttgtgg atattgacgg agatggaagc 1620
tttataatga atgtgcaaga gctagccact attcgtgtag agaatcttcc agtgaaggta 1680
cttttattaa acaaccagca tcttggcatg gttatgcaat gggaagatcg gttctacaaa 1740
gctaaccgag ctcacacatt tctcggggat ccggctcagg aggacgagat attcccgaac 1800
atgttgctgt ttgcagcagc ttgcgggatt ccagcggcga gggtgacaaa gaaagcagat 1860
ctccgagaag ctattcagac aatgctggat acaccaggac cttacctgtt ggatgtgatt 1920
tgtccgcacc aagaacatgt gttgccgatg atcccgaatg gtggcacttt caacgatgtc 1980
ataacggaag gagatggccg gattaaatac tga 2013
<210> 31 <211> 2013 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<220>
<221> misc_feature
<223> Кодирующая последовательность большой субъединицы ацетогидроксикис-лотной синтазы Arabidopsis (AtAHASL), аллель дикого типа.
<400> 31
atggcggcgg caacaacaac aacaacaaca tcttcttcga tctccttctc caccaaacca 60
tctccttcct cctccaaatc accattacca atctccagat tctccctccc attctcccta 120
aaccccaaca aatcatcctc ctcctcccgc cgccgcggta tcaaatccag ctctccctcc 180
tccatctccg ccgtgctcaa cacaaccacc aatgtcacaa ccactccctc tccaaccaaa 240
cctaccaaac ccgaaacatt catctcccga ttcgctccag atcaaccccg caaaggcgct 300
gatatcctcg tcgaagcttt agaacgtcaa ggcgtagaaa ccgtattcgc ttaccctgga 360
ggtgcatcaa tggagattca ccaagcctta acccgctctt cctcaatccg taacgtcctt 420
cctcgtcacg aacaaggagg tgtattcgca gcagaaggat acgctcgatc ctcaggtaaa 480
ccaggtatct gtatagccac ttcaggtccc ggagctacaa atctcgttag cggattagcc 540
gatgcgttgt tagatagtgt tcctcttgta gcaatcacag gacaagtccc tcgtcgtatg 600
attggtacag atgcgtttca agagactccg attgttgagg taacgcgttc gattacgaag 660
cataactatc ttgtgatgga tgttgaagat atccctagga ttattgagga agctttcttt 720
ttagctactt ctggtagacc tggacctgtt ttggttgatg ttcctaaaga tattcaacaa 780
cagcttgcga ttcctaattg ggaacaggct atgagattac ctggttatat gtctaggatg 840
cctaaacctc cggaagattc tcatttggag cagattgtta ggttgatttc tgagtctaag 900
aagcctgtgt tgtatgttgg tggtggttgt ttgaattcta gcgatgaatt gggtaggttt 960
gttgagctta cggggatccc tgttgcgagt acgttgatgg ggctgggatc ttatccttgt 1020
gatgatgagt tgtcgttaca tatgcttgga atgcatggga ctgtgtatgc aaattacgct 1080
gtggagcata gtgatttgtt gttggcgttt ggggtaaggt ttgatgatcg tgtcacgggt 1140
aagcttgagg cttttgctag tagggctaag attgttcata ttgatattga ctcggctgag 1200
attgggaaga ataagactcc tcatgtgtct gtgtgtggtg atgttaagct ggctttgcaa 1260
gggatgaata aggttcttga gaaccgagcg gaggagctta agcttgattt tggagtttgg 1320
aggaatgagt tgaacgtaca gaaacagaag tttccgttga gctttaagac gtttggggaa 1380
gctattcctc cacagtatgc gattaaggtc cttgatgagt tgactgatgg aaaagccata 1440
ataagtactg gtgtcgggca acatcaaatg tgggcggcgc agttctacaa ttacaagaaa 1500
ccaaggcagt ggctatcatc aggaggcctt ggagctatgg gatttggact tcctgctgcg 1560
attggagcgt ctgttgctaa ccctgatgcg atagttgtgg atattgacgg agatggaagc 1620
tttataatga atgtgcaaga gctagccact attcgtgtag agaatcttcc agtgaaggta 1680
cttttattaa acaaccagca tcttggcatg gttatgcaat gggaagatcg gttctacaaa 1740
gctaaccgag ctcacacatt tctcggggat ccggctcagg aggacgagat attcccgaac 1800
atgttgctgt ttgcagcagc ttgcgggatt ccagcggcga gggtgacaaa gaaagcagat 1860
ctccgagaag ctattcagac aatgctggat acaccaggac cttacctgtt ggatgtgatt 1920
tgtccgcacc aagaacatgt gttgccgatg atcccgagtg gtggcacttt caacgatgtc 1980
ataacggaag gagatggccg gattaaatac tga 2013
<210> 32
<211> 1917
<212> DNA
<213> Zea mays
<220>
<221> misc_feature
<223> Кодирующая последовательность большой субъединицы 2 ацетогидрокси-кислотной синтазы кукурузы (ZmAHASL2), аллель дикого типа.
<400> 32
atggccaccg ccgccgccgc gtctaccgcg ctcactggcg ccactaccgc tgcgcccaag 60
gcgaggcgcc gggcgcacct cctggccacc cgccgcgccc tcgccgcgcc catcaggtgc 120
tcagcggcgt cacccgccat gccgatggct cccccggcca ccccgctccg gccgtggggc 180
cccaccgatc cccgcaaggg cgccgacatc ctcgtcgagt ccctcgagcg ctgcggcgtc 240
cgcgacgtct tcgcctaccc cggcggcgcg tccatggaga tccaccaggc actcacccgc 300
tcccccgtca tcgccaacca cctcttccgc cacgagcaag gggaggcctt tgcggcctcc 360
ggctacgcgc gctcctcggg ccgcgtcggc gtctgcatcg ccacctccgg ccccggcgcc 420
accaaccttg tctccgcgct cgccgacgcg ctgctcgatt ccgtccccat ggtcgccatc 480
acgggacagg tgccgcgacg catgattggc accgacgcct tccaggagac gcccatcgtc 540
gaggtcaccc gctccatcac caagcacaac tacctggtcc tcgacgtcga cgacatcccc 600
cgcgtcgtgc aggaggcttt cttcctcgcc tcctctggtc gaccggggcc ggtgcttgtc 660
gacatcccca aggacatcca gcagcagatg gcggtgcctg tctgggacaa gcccatgagt 720
ctgcctgggt acattgcgcg ccttcccaag ccccctgcga ctgagttgct tgagcaggtg 780
ctgcgtcttg ttggtgaatc ccggcgccct gttctttatg ttggcggtgg ctgcgcagca 840
tctggtgagg agttgcgacg ctttgtggag ctgactggaa tcccggtcac aactactctt 900
atgggcctcg gcaacttccc cagcgacgac ccactgtctc tgcgcatgct aggtatgcat 960
ggcacggtgt atgcaaatta tgcagtggat aaggccgatc tgttgcttgc acttggtgtg 1020
cggtttgatg atcgtgtgac agggaagatt gaggcttttg caagcagggc taagattgtg 1080
cacgttgata ttgatccggc tgagattggc aagaacaagc agccacatgt gtccatctgt 1140
gcagatgtta agcttgcttt gcagggcatg aatgctcttc ttgaaggaag cacatcaaag 1200
aagagctttg actttggctc atggaacgat gagttggatc agcagaagag ggaattcccc 1260
cttgggtata aaacatctaa tgaggagatc cagccacaat atgctattca ggttcttgat 1320
gagctgacga aaggcgaggc catcatcggc acaggtgttg ggcagcacca gatgtgggcg 1380
gcacagtact acacttacaa gcggccaagg cagtggttgt cttcagctgg tcttggggct 1440
atgggatttg gtttgccggc tgctgctggt gcttctgtgg ccaacccagg tgttactgtt 1500
gttgacatcg atggagatgg tagctttctc atgaacgttc aggagctagc tatgatccga 1560
attgagaacc tcccggtgaa ggtctttgtg ctaaacaacc agcacctggg gatggtggtg 1620
cagtgggagg acaggttcta taaggccaac agagcgcaca catacttggg aaacccagag 1680
aatgaaagtg agatatatcc agatttcgtg acgatcgcca aagggttcaa cattccagcg 1740
gtccgtgtga caaagaagaa cgaagtccgc gcagcgataa agaagatgct cgagactcca 1800
gggccgtacc tcttggatat aatcgtccca caccaggagc atgtgttgcc tatgatccct 1860
agtggtgggg ctttcaagga tatgatcctg gatggtgatg gcaggactgt gtactga 1917
<210> 33
<211> 3234
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<220>
<221> misc_feature
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Arabidopsis
(AtAHASL)
геномный фрагмент, S653N аллель.
<400> 33
atggcggcgg caacaacaac aacaacaaca tcttcttcga tctccttctc caccaaacca 60
tctccttcct cctccaaatc accattacca atctccagat tctccctccc attctcccta 120
aaccccaaca aatcatcctc ctcctcccgc cgccgcggta tcaaatccag ctctccctcc 180
tccatctccg ccgtgctcaa cacaaccacc aatgtcacaa ccactccctc tccaaccaaa 240
cctaccaaac ccgaaacatt catctcccga ttcgctccag atcaaccccg caaaggcgct 300
gatatcctcg tcgaagcttt agaacgtcaa ggcgtagaaa ccgtattcgc ttaccctgga 360
ggtgcatcaa tggagattca ccaagcctta acccgctctt cctcaatccg taacgtcctt 420
cctcgtcacg aacaaggagg tgtattcgca gcagaaggat acgctcgatc ctcaggtaaa 480
ccaggtatct gtatagccac ttcaggtccc ggagctacaa atctcgttag cggattagcc 540
gatgcgttgt tagatagtgt tcctcttgta gcaatcacag gacaagtccc tcgtcgtatg 600
attggtacag atgcgtttca agagactccg attgttgagg taacgcgttc gattacgaag 660
cataactatc ttgtgatgga tgttgaagat atccctagga ttattgagga agctttcttt 720
ttagctactt ctggtagacc tggacctgtt ttggttgatg ttcctaaaga tattcaacaa 780
cagcttgcga ttcctaattg ggaacaggct atgagattac ctggttatat gtctaggatg 840
cctaaacctc cggaagattc tcatttggag cagattgtta ggttgatttc tgagtctaag 900
aagcctgtgt tgtatgttgg tggtggttgt ttgaattcta gcgatgaatt gggtaggttt 960
gttgagctta cggggatccc tgttgcgagt acgttgatgg ggctgggatc ttatccttgt 1020
gatgatgagt tgtcgttaca tatgcttgga atgcatggga ctgtgtatgc aaattacgct 1080
gtggagcata gtgatttgtt gttggcgttt ggggtaaggt ttgatgatcg tgtcacgggt 1140
aagcttgagg cttttgctag tagggctaag attgttcata ttgatattga ctcggctgag 1200
attgggaaga ataagactcc tcatgtgtct gtgtgtggtg atgttaagct ggctttgcaa 1260
gggatgaata aggttcttga gaaccgagcg gaggagctta agcttgattt tggagtttgg 1320
aggaatgagt tgaacgtaca gaaacagaag tttccgttga gctttaagac gtttggggaa 1380
gctattcctc cacagtatgc gattaaggtc cttgatgagt tgactgatgg aaaagccata 1440
ataagtactg gtgtcgggca acatcaaatg tgggcggcgc agttctacaa ttacaagaaa 1500
ccaaggcagt ggctatcatc aggaggcctt ggagctatgg gatttggact tcctgctgcg 1560
attggagcgt ctgttgctaa ccctgatgcg atagttgtgg atattgacgg agatggaagc 1620
tttataatga atgtgcaaga gctagccact attcgtgtag agaatcttcc agtgaaggta 1680
cttttattaa acaaccagca tcttggcatg gttatgcaat gggaagatcg gttctacaaa 1740
gctaaccgag ctcacacatt tctcggggat ccggctcagg aggacgagat attcccgaac 1800
atgttgctgt ttgcagcagc ttgcgggatt ccagcggcga gggtgacaaa gaaagcagat 1860
ctccgagaag ctattcagac aatgctggat acaccaggac cttacctgtt ggatgtgatt 1920
tgtccgcacc aagaacatgt gttgccgatg atcccgaatg gtggcacttt caacgatgtc 1980
ataacggaag gagatggccg gattaaatac tgagagatga aaccggtgat tatcagaacc 2040
ttttatggtc tttgtatgca tatggtaaaa aaacttagtt tgcaatttcc tgtttgtttt 2100
ggtaatttga gtttctttta gttgttgatc tgcctgcttt ttggtttacg tcagactact 2160
actgctgttg ttgtttggtt tcctttcttt cattttataa ataaataatc cggttcggtt 2220
tactccttgt gactggctca gtttggttat tgcgaaatgc gaatggtaaa ttgagtaatt 2280
gaaattcgtt attagggttc taagctgttt taacagtcac tgggttaata tctctcgaat 2340
cttgcatgga aaatgctctt accattggtt tttaattgaa atgtgctcat atgggccgtg 2400
gtttccaaat taaataaaac tacgatgtca tcgagaagta aaatcaactg tgtccacatt 2460
atcagttttg tgtatacgat gaaatagggt aattcaaaat ctagcttgat atgccttttg 2520
gttcatttta accttctgta aacatttttt cagattttga acaagtaaat ccaaaaaaaa 2580
aaaaaaaaaa tctcaactca acactaaatt attttaatgt ataaaagatg cttaaaacat 2640
ttggcttaaa agaaagaagc taaaaacata gagaactctt gtaaattgaa gtatgaaaat 2700
atactgaatt gggtattata tgaatttttc tgatttagga ttcacatgat ccaaaaagga 2760
aatccagaag cactaatcag acattggaag taggaatatt tcaaaaagtt tttttttttt 2820
aagtaagtga caaaagcttt taaaaaatag aaaagaaact agtattaaag ttgtaaattt 2880
aataaacaaa agaaattttt tatatttttt catttctttt tccagcatga ggttatgatg 2940
gcaggatgtg gatttcattt ttttcctttt gatagccttt taattgatct attataattg 3000
acgaaaaaat attagttaat tatagatata ttttaggtag tattagcaat ttacacttcc 3060
aaaagactat gtaagttgta aatatgatgc gttgatctct tcatcattca atggttagtc 3120
aaaaaaataa aagcttaact agtaaactaa agtagtcaaa aattgtactt tagtttaaaa 3180
tattacatga ataatccaaa acgacattta tgtgaaacaa aaacaatatc taga 3234
<210> 34
<211> 5717
<212> ДНК
<213> Arabidopsis thaliana
<220>
<221> misc_feature
<223> Большая субъединица ацетогидроксикислотной синтазы Arabidopsis
(AtAHASL)
геномный фрагмент, S653N аллель.
<400> 34
tctagattat gtatttccaa ctttcattaa caatataatc gcatataaat gaaaaatcgt 60
ttccaggata atattttgat gaaatctcat attattgttc gtactcggat tgatgttgaa 120
ggcttgaagc gcttcaaatt atagaccaga ttatttaagt ttttcttttg tttactccat 180
atcaatttga tccattatac tacctaagaa aatttaggta acatagaatt atttattgtt 240
atagtaaaaa aaaggaaaac cacaaaaata atctactttt acgtatatac tattttcatg 300
acataagtaa ttaagttgta caactttttt ttaatgaaaa gagagagtaa atttatcatg 360
ttcatgtgta gttacctcgt gaataaccga cggttatata gacgcctaac atgaattgtt 420
cagttgaaga cagttcaaaa catgtgtttc actctaaaat cctcaacaaa aaaaaagtgt 480
taaaatttgt aaacctcttt caagcaaaaa aagaaaaagt gttagaatcc caagattctt 540
tcataatccg gaatcttggc tgaaaacgta taaaagagat tgacgtagta acaaggagtc 600
ttggtatgct tccatgcttt ttatcctttt ttgtcatgga accatgattt ggttaccatt 660
tattatgtaa ccgaaatttt cattgtaata atgaatattt aaatttttag caaaaaaaaa 720
caaaaaaaaa caaggagtct tgtcttcgtt ctcaaatttc agagctcttg cacttttcaa 780
gagttttact ttgatgagtg agacatttgt ctttttagtg tttattttct aaacttaaaa 840
tagtagcatc aacatcactc aattataatt cttaagatgt tgtagaaaaa tattttatag 900
atggaaagta atcgatatta agacaaataa gaaaccaaac cggactttgt gttcagaccg 960
aatcaaatct gaattggaga aattatggtg gaggcgaaag tcaacggaac taaagtataa 1020
aaccaaatgt caaaaataaa acccaatttt catccttaaa cgaacctgct gaaaccctaa 1080
tttcgattac caattccgat ctaaaaagaa gtcatggaag ccattgattc cgcaatcgat 1140
cctctcagag atttcgctaa gagcagtgtt cgtctcgtcc agcgctgtca caaacccgat 1200
cgcaagggta acgccttttc tcaaaaaaat ctcatttccg atttttgatc tgtagattag 1260
ggttttctga aattttgata tcatttgtaa ttgaattggt tatcagaatt cacgaaagta 1320
gctgtgcgta cggcgattgg atttgtggtg atgggattcg ttggattctt cgtgaagctc 1380
gttttcatcc caatcaacaa catcatcgtt ggatcttctt agtgtagtac tttctttacg 1440
aggtaattga tctcgcatta tatatctaca ttttggttat gttacttgac atatagtcat 1500
tgattcaata gttctgttaa ttcctttaaa gatcattttg actagaccac attcttggtt 1560
cattcctcaa taatttgtaa tcatattggt ggatatagaa gtagattggt tatagatcag 1620
atagtggaag actttaggat gaatttcagc tagttttttt ttttggctta ttgtctcaaa 1680
agattagtgc tttgctgtct ccattgcttc tgctatcgac acgcttctgt ctccttgtat 1740
ctttattata tctattcgtc ccatgagttt tgtttgttct gtattcgttc gctctggtgt 1800
catggatgga gtctctgttc catgtttctg taatgcatgt tgggttgttt catgcaagaa 1860
atgctgagat aaacactcat ttgtgaaagt ttctaaactc tgaatcgcgc tacaggcaat 1920
gctccgagga gtaggaggag aagaacgaac caaacgacat tatcagccct ttgaggaagc 1980
tcttagtttt gttattgttt ttgtagccaa attctccatt cttattccat tttcacttat 2040
ctcttgttcc ttatagacct tataagtttt ttattcatgt atacaaatta tattgtcatc 2100
aagaagtatc tttaaaatct aaatctcaaa tcaccaggac tatgtttttg tccaattcgt 2160
ggaaccaact tgcagcttgt atccattctc ttaaccaata aaaaaagaaa gaaagatcaa 2220
tttgataaat ttctcagcca caaattctac atttaggttt tagcatatcg aaggctcaat 2280
cacaaataca atagatagac tagagattcc agcgtcacgt gagttttatc tataaataaa 2340
ggaccaaaaa tcaaatcccg agggcatttt cgtaatccaa cataaaaccc ttaaacttca 2400
agtctcattt ttaaacaaat catgttcaca agtctcttct tcttctctgt ttctctatct 2460
cttgctcatc tttctcctga accatggcgg cggcaacaac aacaacaaca acatcttctt 2520
cgatctcctt ctccaccaaa ccatctcctt cctcctccaa atcaccatta ccaatctcca 2580
gattctccct cccattctcc ctaaacccca acaaatcatc ctcctcctcc cgccgccgcg 2640
gtatcaaatc cagctctccc tcctccatct ccgccgtgct caacacaacc accaatgtca 2700
caaccactcc ctctccaacc aaacctacca aacccgaaac attcatctcc cgattcgctc 2760
cagatcaacc ccgcaaaggc gctgatatcc tcgtcgaagc tttagaacgt caaggcgtag 2820
aaaccgtatt cgcttaccct ggaggtgcat caatggagat tcaccaagcc ttaacccgct 2880
cttcctcaat ccgtaacgtc cttcctcgtc acgaacaagg aggtgtattc gcagcagaag 2940
gatacgctcg atcctcaggt aaaccaggta tctgtatagc cacttcaggt cccggagcta 3000
caaatctcgt tagcggatta gccgatgcgt tgttagatag tgttcctctt gtagcaatca 3060
caggacaagt ccctcgtcgt atgattggta cagatgcgtt tcaagagact ccgattgttg 3120
aggtaacgcg ttcgattacg aagcataact atcttgtgat ggatgttgaa gatatcccta 3180
ggattattga ggaagctttc tttttagcta cttctggtag acctggacct gttttggttg 3240
atgttcctaa agatattcaa caacagcttg cgattcctaa ttgggaacag gctatgagat 3300
tacctggtta tatgtctagg atgcctaaac ctccggaaga ttctcatttg gagcagattg 3360
ttaggttgat ttctgagtct aagaagcctg tgttgtatgt tggtggtggt tgtttgaatt 3420
ctagcgatga attgggtagg tttgttgagc ttacggggat ccctgttgcg agtacgttga 3480
tggggctggg atcttatcct tgtgatgatg agttgtcgtt acatatgctt ggaatgcatg 3540
ggactgtgta tgcaaattac gctgtggagc atagtgattt gttgttggcg tttggggtaa 3600
ggtttgatga tcgtgtcacg ggtaagcttg aggcttttgc tagtagggct aagattgttc 3660
atattgatat tgactcggct gagattggga agaataagac tcctcatgtg tctgtgtgtg 3720
gtgatgttaa gctggctttg caagggatga ataaggttct tgagaaccga gcggaggagc 3780
ttaagcttga ttttggagtt tggaggaatg agttgaacgt acagaaacag aagtttccgt 3840
tgagctttaa gacgtttggg gaagctattc ctccacagta tgcgattaag gtccttgatg 3900
agttgactga tggaaaagcc ataataagta ctggtgtcgg gcaacatcaa atgtgggcgg 3960
cgcagttcta caattacaag aaaccaaggc agtggctatc atcaggaggc cttggagcta 4020
tgggatttgg acttcctgct gcgattggag cgtctgttgc taaccctgat gcgatagttg 4080
tggatattga cggagatgga agctttataa tgaatgtgca agagctagcc actattcgtg 4140
tagagaatct tccagtgaag gtacttttat taaacaacca gcatcttggc atggttatgc 4200
aatgggaaga tcggttctac aaagctaacc gagctcacac atttctcggg gatccggctc 4260
aggaggacga gatattcccg aacatgttgc tgtttgcagc agcttgcggg attccagcgg 4320
cgagggtgac aaagaaagca gatctccgag aagctattca gacaatgctg gatacaccag 4380
gaccttacct gttggatgtg atttgtccgc accaagaaca tgtgttgccg atgatcccga 4440
atggtggcac tttcaacgat gtcataacgg aaggagatgg ccggattaaa tactgagaga 4500
tgaaaccggt gattatcaga accttttatg gtctttgtat gcatatggta aaaaaactta 4560
gtttgcaatt tcctgtttgt tttggtaatt tgagtttctt ttagttgttg atctgcctgc 4620
tttttggttt acgtcagact actactgctg ttgttgtttg gtttcctttc tttcatttta 4680
taaataaata atccggttcg gtttactcct tgtgactggc tcagtttggt tattgcgaaa 4740
tgcgaatggt aaattgagta attgaaattc gttattaggg ttctaagctg ttttaacagt 4800
cactgggtta atatctctcg aatcttgcat ggaaaatgct cttaccattg gtttttaatt 4860
gaaatgtgct catatgggcc gtggtttcca aattaaataa aactacgatg tcatcgagaa 4920
gtaaaatcaa ctgtgtccac attatcagtt ttgtgtatac gatgaaatag ggtaattcaa 4980
aatctagctt gatatgcctt ttggttcatt ttaaccttct gtaaacattt tttcagattt 5040
tgaacaagta aatccaaaaa aaaaaaaaaa aaatctcaac tcaacactaa attattttaa 5100
tgtataaaag atgcttaaaa catttggctt aaaagaaaga agctaaaaac atagagaact 5160
cttgtaaatt gaagtatgaa aatatactga attgggtatt atatgaattt ttctgattta 5220
ggattcacat gatccaaaaa ggaaatccag aagcactaat cagacattgg aagtaggaat 5280
atttcaaaaa gttttttttt tttaagtaag tgacaaaagc ttttaaaaaa tagaaaagaa 5340
actagtatta aagttgtaaa tttaataaac aaaagaaatt ttttatattt tttcatttct 5400
ttttccagca tgaggttatg atggcaggat gtggatttca tttttttcct tttgatagcc 5460
ttttaattga tctattataa ttgacgaaaa aatattagtt aattatagat atattttagg 5520
tagtattagc aatttacact tccaaaagac tatgtaagtt gtaaatatga tgcgttgatc 5580
tcttcatcat tcaatggtta gtcaaaaaaa taaaagctta actagtaaac taaagtagtc 5640
aaaaattgta ctttagttta aaatattaca tgaataatcc aaaacgacat ttatgtgaaa 5700
caaaaacaat atctaga 5717
100
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Рекомбинантный или мутантный полинуклеотид для придания растениям толерантности к гербицидам, ингибирующим ацетогидроксикислотную синтазу (AHAS), кодирующий полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), выбранный из AHASL полипептида, имеющего глутамин- или цистеин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2; причем указанный полинуклеотид представляет собой полинуклеотид растения, которое выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых.
2. Полинуклеотид по п.1, кодирующий полипептид AHASL, выбранный из AHASL полипептида, имеющего глутамин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2.
3. Полинуклеотид по п.1 или 2, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, указанное растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и указанное растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.
4. Выделенный полипептид AHASL, кодируемый полинуклеотидом по любому из пп.1-3.
5. Растение, толерантное к гербицидам, ингибирующим AHAS, и содержащее полинуклеотид по любому из пп.1-3, являющийся трансгенным или мутантным, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых.
6. Растение по п.5, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana, указанное растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и указанное растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.
7. Растение, содержащее полинуклеотид по любому из пп.1-3, причем указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
8. Растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из первого AHASL полипептида, имеющего фенилаланин-, аспарагин-, глицин-, валин-, треонин- или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего валин-, цистеин-, аспарагиновую кислоту-, глутаминовую кислоту, аргинин-, треонин-, триптофан- или тирозин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2, причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
9. Растение по п.8, где указанные первый и второй полипептиды выбраны из первого AHASL полипептида, имеющего аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего валин-замещение в положении, соответствующем положению 205 SEQ ID NO: 1 или положению 173 SEQ ID NO: 2.
10. Растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из:
a) первого AHASL полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего фенилаланин-, аспаргин-, треонин-, глицин-, валин-или триптофан-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и
b) первого AHASL полипептида, имеющего валин-, треонин-, глутамин-, цистеин- или метионин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего серин-, аланин-, глутаминовую кислоту-, лейцин-, глу-тамин-, аргинин-, валин-, триптофан-, тирозин- или изолейцин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению 165 SEQ ID NO: 2,
причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
11. Растение по п.10, где указанные первый и второй полипептиды AHASL выбраны из:
a) первого AHASL полипептида, имеющего треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имею
щего аспарагин-замещение в положении, соответствующем положению 653 SEQ ID NO: 1 или положению 621 SEQ ID NO: 2; и
b) первого AHASL полипептида, имеющего треонин-замещение в положении, соответствующем положению 122 SEQ ID NO: 1 или положению 90 SEQ ID NO: 2, и второго AHASL полипептида, имеющего серин-замещение в положении, соответствующем положению 197 SEQ ID NO: 1 или положению
165 SEQ ID NO: 2.
12. Растение, содержащее первый полинуклеотид, кодирующий первый полипептид AHASL, второй полинуклеотид, кодирующий второй полипептид AHASL, и третий полинуклеотид, кодирующий третий полипептид AHASL; или полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, содержащий одну мутацию и полинуклеотид, кодирующий полипептид AHASL, содержащий две мутации, где указанные нуклео-тидные мутации приводят к аминокислотным заменам в указанных первом, втором и третьем полипептидах AHASL, где указанные первый, второй и третий полипептиды AHASL выбраны из первого, второго и третьего AHASL полипептидов, выбранных из AHASL полипептидов, определенных в любом из пп.1-2 и 8-11; причем указанное растение выбрано из группы, состоящей из членов семейства Brassica, членов семейства бобовых и членов семейства злаковых, и указанное растение имеет толерантность к гербициду, ингибирующему AHAS.
13. Растение по любому из пп.7-12, где указанное растение, выбранное из членов семейства Brassica, представляет собой Arabidosis thaliana; растение, выбранное из членов семейства бобовых, представляет собой соевый боб и растение, выбранное из членов семейства злаковых, представляет собой кукурузу.
14. Семена, полученные от растения по любому из пп.5-13, содержащие полинуклеотид(ы), кодирующие AHASL, раскрытые в пп.1-3, 9-12.
15. Семена по п.14, обработанные AHAS-ингибирующим гербицидом.
16. Семена по п.15, где гербицид, ингибирующий AHAS, выбран из группы, состоящей из имидазо-линонов, сульфонилмочевин, триазол-пиримидинов, пиримидинилоксибензоатов и их смесей.
17. Семена по п.16, где гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.
18. Семена по п.17, где имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и имазапира.
19. Способ борьбы с сорняками в районе произрастания сельскохозяйственных культур, включающий:
a) посев в поле семян по п.14 и выращивание из них сельскохозяйственных культур; и
b) внесение эффективного количества гербицидной композиции, содержащей имидазолиноновый гербицид, сульфонилмочевинный гербицид или их смеси под сорняки и сельскохозяйственные культуры в поле для борьбы с сорняками.
20. Способ получения трансгенного растения, толерантного к гербицидам, ингибирующим AHAS, включающий следующие стадии:
a) трансформация растительных клеток экспрессионным вектором, включающим полинуклеотид по любому из пп.1-3, и
b) регенерация из растительной клетки трансгенного растения, экспрессирующего AHASL мутант-ный полипептид.
21. Способ идентификации или отбора клетки растения, ткани растения, растения или части растения, содержащих полинуклеотид по любому из пп.1-3, включающий:
a) предоставление клетки растения, ткани растения, растения или его части;
b) приведение в контакт клетки растения, ткани растения, растения или его части по меньшей мере с одним гербицидом, ингибирующим AHAS; и
c) определение того, повреждены ли клетка растения, ткань растения, растение или его часть инги-бирующим гербицидом, причем, если клетка растения, ткань растения или растение или его часть не повреждены указанным гербицидом или повреждены в меньшей степени, чем соответствующие клетки растения, ткань растения или растение или его часть дикого типа, которые приводили в контакт с гербицидом, ингибирующим AHAS, делается вывод о том, что клетки растения, ткани растения или растения или его часть содержат полинуклеотид по любому из пп.1-3.
22. Способ получения толерантного к гербициду, ингибирующему AHAS, растения, включающий скрещивание первого растения, которое толерантно к гербициду, ингибирующему AHAS, со вторым растением, которое не толерантно к гербициду, ингибирующему AHAS, и отбор растения-потомка, которое устойчиво к указанному гербициду, отличающийся тем, что первое растение является растением по любому из пп.5-13.
23. Способ предотвращения нежелательного вегетативного роста, включающий обработку семян растений по любому из пп.5-13 перед посевом и/или после предварительного проращивания гербицидом, ингибирующим AHAS.
24. Способ по любому из пп.19-21 и 23, в котором гербицид, ингибирующий AHAS, выбран из группы, состоящей из имидазолинононов, сульфонилмочевин, триазолпиримидинов, пиримидинилокси-бензоатов и их смесей.
25. Способ по п.24, в котором гербицидом, ингибирующим AHAS, является имидазолинон.
22.
26. Способ по п.25, в котором имидазолинон выбран из имазетапира, имазапика, имазамокса и има-запира.
Полноразмерная трансляционная последовательность AHASL из арабидопсис и соответствующая ей первичная аминокислотная последовательность, нумерация ДНК находится слева, нумерация аминокислот находится справа
MetAlaAlaAlaTh rThrThrThrThrTh rSerSerSerlleSe rPheSerThrLysPr oSerProSerSerS er 25 1 ATGGCGGCGGCAAC AACAACAACAACAAC ATCTTCTTCGATCTC С ГГСТССАССАААСС ATCTCCTTCCTCCTC С
byeSerProLeuPr oIleSerArgPheSe rLeuProPheSerLe uAsnProAsnLysSe rSerSerSerSerAr g 50 7 6 AAATCACCATTACC AATCTCCAGATTCTC CCTCCCA'fTCTCCCT AAACCCCAACAAATC ATCCTCCTCCTCCC GC
ArgArgGlylleLy sSerSerSerProSe rSerlleSerAlaVa lbeuAsnThrThrTh rAsnValThrThrTh r 75 151 CGCCGCGGTATCAA ATCCAGCTCTCCCTC CTCCATCTCCGCCGT GCTCAACACAACCAC CAATGTCACAACCAC T
FroserProThrby BProThrbyaProGluThrPhelleserAr gPheAlaProAspGlnProArgLysGlyAla loo
2 2 G CCCTCTCCAACCAA ACCTACCAAACCCGA AACATTCATCTCCCG ATTCGCTCCAGATC AACCCCGCAAAGGCG CT
K83 Q9 5
AsplleLeuValGl uAlaLeuGluArgGl nGlyValGluThrVa lPheAlaTyrProGl yGlyAJ."8erM"tGlu 125 301 GATATCCTCGTCGA AGCTTTAGAACGTCA AGGCCTAGAAACCGT ATTCGCTTACCCTGQ AGGTGCATCAATGGAG
A122 M124
IleHisGlnAlaLe uThrArgSerSerSe гIIеАгдАвпУа! LeuProArgHisGluG InGlyGlyValPheA la 150 376 ATTCACCAAGCCT TAACCCGCTCTTCCT CAATCCGTAAC GTCCTTCCTCGTCACGAAC AAGGAGGTGTATTCG CA
V139
AlaGluGlyTyrAl aArgSefSerGlyLy sProGlylleCysIl eAlaThrSerGlyPr oGlyAlaThrAsnLe u 175 4 51 GCAG AAGG ATACGC TCGATCCTCAGGTAA ACCAGGTATCTGTA TAGCCACTTCAGGTC CCGGAGCTACAAATC TC
valSerGlyLeuAl aAspAlaLeuLeuAe pSerValProLeuVa lAlalleThrGlyGl nva 1 ProArgArgMet 200 526 GTTAGCGGATTAGC CGATGCGTTGTTAGA TAGTGTTCCTCTTGT AGCAATCACAGGACA AGTCCCTCGTCGTATG
Р1Э7 R159
HeGlyrhrAspA laPheQlnGluThrProIleValGluValThrArgSerileThrlj ysHieAsnTyrLeuval 225 601 ATTGCVr ACAG AT GCGTTTCAAGAGACTC CGATTGTTGAGGTAA CGCGTTCGATTACGA AGCATAACTATCTTG TG
MetAepValGluAs pIleProAcgllell eGluGluAlaPhePheLeuAlaThrSerGl yArgProGlyProVa 1 250
6 76 ATGGATGTTGAAGA TATCCCTAGGATTAT TGAGGAAGCTTTCTT TTTAGCTACTTCTGG TAGACCTGGACCTGT T
beuValAspVal ProLysAsplleGlnQ InGlnLeuAlalleP roAsnTrpOluOln AlaMetArgbeuProG ly 275
7 51 TTGGTTGAT GTTCCTAAAGATATTCAAC AACAGCTTGCGATTC CTAATTGGGAA CAGGCTATGAGATTACCTG GT
V254 Q269
TyrMetSerArgMe bProLyaProProQl uAspSerHisLeuGl uGlnlleValArgLe ulleSerGluSerLys 300
8 26 TATATGTCTAGG ATGCCTAAACCTCCGGA AGATTCTCATTTGGA GCAGATTGTTAGGT TGATTTCTGAGTCTA AG
M277
LyeProValLeuTy rValGlyGlyGlyCy sLeuAsnSerSerA spGluLeuGlyArgP heValGluLeuThrG ly 325 901 AAGCCTGTGTTGTA TGTTGGTGGTGGTTG TTTGAATTCTAGC GATGAATTGGGTAGGT TTGTTGAGCTTACGG GG
D3 15
IleProValAlaSe rThrLeuMetGlyLe uGlySerTyrProCy sAspAepGluLeuSe rbeuHiaMatLeuGl у 350 976 ATCCCTGTTGCGAG TACGTTGATGGGGCT GGGATCTTATCCTTG TGATGATGAGTTGTC QTTACATATGCTTGG A
MetHisGlyThrVa lTyrAlaAsnTyrAl aValGluHisSerAa pLeuLeuLeuAlaPh eGlyValArgPheAsp 375 1051 ATGCATGGGACTGT GTATGCAAATTACGC TGTGGAGCATAGTGA TTTGTTGTTGGCGTT TGGGGTAAGGTTT GAT
D37 5
AapArgValThrGl yLyaLeuGluAlaPh eAlaSerArgAlaLy sIleValHisIleAs pIleAspSarAIaOl u 400 1126 GATCGTGTCACGGG TAAGCTTGAGGCTTT TGCTAGTAGGGCTAA GATTGTTCATATTGA TATTGACTCGGCTGAG
S398
IleGlyLysAsnLy sThrProHisValSe rValCyeGlyAapVa lbya Leu Ala LeuG InGlyMetAsnLysV al 425 1201 ATTGGGAAGAATA AGACTCCTCATGTGT CTGTGTGTGGTGATG TTAAGCTGGCTTTGC AAGGGATGAATAAGG TT
K416
Фиг. 1
Laug 1 uAsnArgAlaGluGlubeuLyaLeuAapPheGlyValTrpArgAmGluLeuAanVa lqi nLyaGInLye 450
1276 CTTGAGAACCGA GCGGAGGAGCTTAAGC TTGATTTTGG A GTTTGGAGGATITGAGTTGAACGTACAGAAACAGA AG
L426 A43 0 V439 N442 N44 5
PheProLeuSerPh eLyaThrPheGlyGl uAlalleProProGl nTyrAlallaLyaVa lLeuAapGluLeuTti r 475 1351 TTTCCGTTGAGCTT TAAGACGTTTGGGG AAGCTATTCCTCCAC AOTATGCGATTAAGG TCCTTGATGAGTTGACT
AspGlyLysAlall elleSerThrGlyVa lGlyGlnHisGlnMe tTrpAlaAlaGlnPh eTyrAsnTyrLysLy в 500 1426 GATGGAAAAGCCAT AATAAGTACTGGTGT CGGGCAACATCAAAT GTGGGCGGCGCAGTT CTACAATTACAAGAA A
ProArgGlnTrpLe userSerGlyGlyLeuGlyAlaMetGlyP heGlyLeuProAlaA lalleGlyftlaSerVal 525 1501 CCAAGGCAGTGGCT ATCATCAGGAGGCCT TGGAGCTATGGGATT TGGACTTCCTGCTGC GATTGGAQCGTCTGT T
AlaAsnProAspAl alleValvalAapll eAapGlyAapGlySe rPhelleMetAsnVa lGlnGluLeuAlaTh r 550 1576 GCTAACCCTGATGC GATAGTTGTGG ATA TTGACGGAGATGGAA GCTTTATAATGAATG TGCAAGAGCTAGCCA CT
IleArgvalGluAs nLeuProValbysVa lLeuLeuLeuAenAs nGlnHieLeuGlyMe tValMetGlnTrpGlu 575 1651 ATTCGTGTAGAGAA TCTTCCAGTGAAGGT ACTTTTATTAAACAA CCAGCATCTTCGCAT GGTTATGCAATGGG AA
W574
AspArqPheTyrLyaAlaAanArgAlaH isThrPheLeuGlyA spProAlaGlnQluA apQluIlePheProA an 600
1726 GATCGGTTCTACAAAGCTAACCGAGCTC ACACATTTCTCGGGG ATCCGGCTCAGGAGC ACGAGATATTCCCGA AC
K58 0 D59 5
MetLeuLeuPheAl aAlaAlaCyeGlyll eProAlaAlaArgVa IThrLysLysAlaAs pLeuArgGluAlall e 625 1801 ATGTTG CTGTTTGC AGCAGCTTGCGGGAT TCCAGCGGCGAGGGT GACAAAGAAAGCAGA TCTCCGAGAAGCTAT T
GlnThrMetbeuAs pThrProGlyProTy rLeubeuAspValll eCyeProHisGlnGl uHisValLeuProMe t 650 1876 CAGACAATGCTGGA TACACCAGGACCTTA CCTGTTGGATGTGAT TTGTCCGCACCAAGA ACATGTGTTGCCGAT G
11 eProSarGly G lyThr PheAsn AspV allleThrGluGlyA spGlyArglleLyeT yr*** 670 1951 ATCCCGAGTGGTGGCACTTrCAACGATG TCATAACGGAAGGAG ATGGCCGGATTAAAT ACTGA S653/G654
Фиг. 1 (продолжение)
Полноразмерная трансляционная последовательность AHASL из кукурузы и соответствующая ей первичная аминокислотная последовательность, нумерация ДНК находится слева, нумерация аминокислот
находится справа
Me tAlaThrAlaAlaAl aAlaSerThrAlaLe uThrGlyAlaThr'rh rAlaAlaProLysAl aArgArgArgAla. 25 1 ATGGCCACCGCCGCCGC CGCGTCTACCGCGCT CACTGGCGCCACTAC CGC1GCGCCCAAGGC GAGGCGCCGGGCG
Hi sLeuLeuAlaThrAr gArgAlaLeuAlaAl aProIleArgCysSe rAlaAlaSerProAl aMetProMeCAla 50
76 CACCTCCTGGCCACCCG CCGCGCCCTCGCCGC GCCCATCAGGTGCTC AGCGGCGTCACCCGC CATGCCOATGGCT
ProProAlaThr Probe uArgProTrpGlyPr oThrAapProArgLyaGlyAlaAaplIeLe uValGluSerLeu 75 151 CCCCCGGCCACCCCGCT CCGGCCGTGGGGCCC CACCGATCCCCGCAA GGGCGCCG ACATCCT CGTCGAGTCCCTC P51 D63
GluArgCyeGlyValArgAapValPheAlaTy rProGlyGlyAl"SexMiatGluIleHisGlnAlaLouThrArg 100 226 GAGCGCTGCGCCGTCCG CGACOTCTTCGCCTA CCCCGGCGGCGCGTC CATGGAQATCCACCA GGCACTCACCCGC
A90 M92
SerProVallleAlaAs nBiabeuPheArgHi sGluGlnGlyGluAl aPbeAlaAlaSerOl yTyrAlaArgSer 1 25 301 TC CCCCGTCATCGCCAA CCACCTCTTCCGCCA CGAGCAAGGGGAGGC CTTTGCGGCCTCCGG CTACGCGCGCTCC H107
SerGlyArgValGlyVa ICyalleAlaThrSe rGlyProGlyAlaTh rAsnLeuValSerAl abeuAlaAspAla 150 376 TCGGGCCGCGTCGGCGT CTGCATCGCCACCTC CGGCCCCGQCGCCAC CAACCTTGTCTCCGC GCTCGCCGACGCG
LeuLeuAspServalPr oMetvalAlaileTh rGlyGlnValProArgArgMetlleGlyThrAepAlaPheGln 1 75 4 51 CTGCTCGATTCCGTCCC CATGGTCGCCATCAC GGGACAGGTGCCGCG ACGCATGATTGGCAC CGACGCCTTCCAG
P165 R167 A173
Gl uThrProIleValGl uValThrArgSerli eThrLysHlsAsnTy rbeuValLauAspva lAspAspllePro 2 00 526 GAGACGCCCATCGTCGA GGTCACCCGCTCCAT CACCAAGCACAACTA CCTGGTCCTCGACGT CGACGACATCCCC
ArgvalValGlnGluAl aPhePheLeuAlaSe rSerGlyArgProGl yProValLeuValAs pileProLysAsp 2 25 6 01 CG CGTCGTGCAGGAGGC TTTCTTCCTCGCCTC CTCTGGTCQACCGGG GCCGGTGCTTGTCGA CATCCCCAAGGAC
1222
IleGlnGlnGlrtMetAl aValProValTrpAapLyaProMet3erLeuProGlyTyrIl"AlaArgLeuProby8 2 SO G 7 6 ATCCAGCAGCAGATGGC QGTGCCTGTCTGGGA CAAGCCCATGAGTCTGCCTQGGTACATTGCGCGCCTTCCCAAG
X237 1245
proProAlaThrGluLeuLeuQluGlnValLe uArgLeuValGlyGl uSerArgArgProVa lLeuTyrValGly 2 75 751 CC CCCTGCGACTGAGTT GCTTGAGCAGGTGCT GCGTCTTGTTGGTGA ATCCCG6CGCCCTGT TCTTTATGTTGGC
Gl yClyCyaAlaAlaSe rGlyGluGluLeuArgArgPheValGlul*\iThrGlyIleProVa IThrThrThrLeu 3 00 826 GGTGGCTGCGCAGCATCTGGTGAGGAGTTOCGACGCTTTOTGGAGCT GACTGGAATCCCGGT CACAACTACTCTT
E283
MetGlyLeuGlyAsnPh eProSerAspAspFr oLeuSerLeuArgMe tLeuGlyHetHiaGl yThrValTyrAla 3 25 901 AT GGGCCTCGGCAACTT CCCCAGCGACGACCC ACTGTCTCTGCGCAT GCTAGGTATGCATGG CACQGTGTAT3CA
AsnTyrAlaValAspLys AlaAspLeuLeuLeu AlaLeuGlyValArg PheAapAapArgVa IThrGlyLyslle 3 50
976 AATTATGCAOTGGATAA GGCCGATCTGTTGCT TGCACTTGGTGTGCG GTTTGATGATCGTGTG ACAGGGAAGATT
D343
Gl uAlaPheAlaSerArgAlaLysIleValHi eValAsplleAepProAlaGluIleGlyLy eAenLysGlnPro 3 75 1051 GAGGCTTTTGCAAGCAG GGCTAAGATTGTGCA CGTTGATATTGAT CCGGCTGAGATTGQCAA GAACAAGCAGCCA
P36 Б
HiaValSerlleCysAl aAapValLyaLeuAlal)"uGlnGly> latAenAlabe\iIi <> uGluGly8erThrSerLya 400 1126 CATGTGTCCATCTGTGC AGATGTTAAGCTTGCTTTGCAGGGCATGAAT GCTCTTCTTGAAGGAAGCACATCAAAG
X384 ЬЗЭ4 ТЗЭ8
LysSerPheAspPheGl y8"rTrpAanA"pGluLeuA"pGlnGlnLyeArgGluPheProLe uGlyTyrLyaThr 4 25
1201 AAGAGCTTTGACTTTGG CW^TGGAACOATGAGTTGOATCAGCAGAAGAGGGAATTCCCCCT TGGGTATAAAACA
S407 D410 D413
Фиг. 2
SerAsnGluGluIleGl nProGlnTyrAlall eGlnValLeuAspGl uLeuThrLysGlyGl uAlallelleGly 4 SO 1276 TCTAATGAGGAG ATCCAGCCACAATAT OCTATTCAGGTTCTT GATGAGCTGACGAAA OGCGAGGCCATCATC QGC
ThrGlyValGlyGlnHi sGlnMetTrpAlaAl aGlnTyrTyrThrTyrbyeArgProArgGl nTrpLeuSerSer 4 75
13 51 AC AGGTGTTGGGCAGCA CCAGATGTGGG CGG С ACAGTACTACACTTA CAAGCGQCCAAGGCA GTGGTTOTCTTCA
AlaGlyLeuGlyAlaMe tGlyPheGlyLeuPr oAlaAlaAlaGlyAl aSerValAlaAenPr oGlyValThrval 5 00
14 26 GCTGGTCTTGGGGCTAT GGGATTTGGTTTGCC GGCTGCTGCTGGTGC TTCTGTGGCCAACCC AGGTGTTACTGTT
valAsplleAspGlyAe pGlySerPhel-euMe tAsnValGlnGlube uAlaMetlleArgll eGluAsnbeuPro 5 25 1501 GTTGACATCGATGGAGA TGGTAGCTTTCTCAT GAACGTTCAGQAGCT AGCTATGATCCGAAT TGAGAACCTCCCG
va lLysValPheValLe uAenAsnGlnHisbe uGlyMetValValGl nTrpGluAapArgPheTyrbyiAlaAan 5 50 1576 GTGAAGGTCTTTGTGCTAAACAACCAGCACCTGGGGATGGTGGTGCAGTQGGAGGACAGGTTCTATAA3GCCAAC
W542 K54 3
ArgAlaHieThrTyrLeuGlyAenProGluAenGluflerGluIleTyrProAepPheValThrlleAlaLyeGly 575 1651 AG AGCGCACACATACTT GGGAAACCCAGAGAA TGAAAGTGAGATATA TCCAGATTTCGTGAC GATCGC CAAAGGG
S563
PheAsnlleProAlaVa lArgValThrLyeLy sAanGluValArgAl aAlalleLysLysMe tLauGluThrPto 6 00 1726 TTCAACATTCCAGCGGT CCGTGTGACAAAGAA GAACGAAGTCCGCGC AGCGATAAAGAAGAT GCTCGAGACTCCA
Gl yProTyrLeuLeuAe pllelleValProHi eGlnGluHieValLeu ProMetГДеРгоЗ*rOlySlyAlaPhe 6 25 1801 GG GCCGTACCTCTTGGA TATAATCGTCCCACA CCAGG AG CATGTGTT GCCTATGATCCCTAG TGOTGGGGCTTTC
S62 1/G622
Ly sAspMet 11 eLeuAs pGlyAspGlyArgTh rValTyr * * * 1876 AAGGATATGATCCTGGA TGGTGATGGCAGGAC TGTGTACTGA
Фиг. 2 (продолжение)
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL 21-TaAHASLlA 2 2-TaAHASLlВ 23-TaAHASLlD
2 4-GHAHASA5 2 5-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
MAA ATTTTTTSSS ISFSTKPSPS SSKSPLPISR FSLPFSLNPN
M ATAAAASTAL TGATTAAP KARRRAHLL
MAAATSSSP ISLTAKPS.. .SKSPLPISR FSLPFSLTPQ
MA TTAAAAAAAL SAAATAKTG RKNHQRHHVL
MA APPNPSISFK PPSPAMLP. ..PRSAFLPR FALPITSTTQ
MAAI HPPHPSITAK PPPSSAAA VALPPH FAFSITSTSH
M AVPLTFISGK PPFSATPS QLTTN LSLPLTLLPI
M ATAATAAAAL TGATTATP KSRRRAHHL
MVTLNHISSF TKPNKTYLQS SIYAIPFS NSLXPT SSSSILAALF
MAAATSSSP ISLTAKPS.. .SKSPLPISR FSLPFSLTPQ
MASF SFFGTIPS SPTKASV FSLPVSVTTL
M AAATTTSSSS IPFSTKHS.. SSKSPLPISR FTLPFSLNPN
M AAATTTSSSS IPFSTKPS.. SSKSPLPISR FTLPFSLNPN
..MA TTAAAAAAAL AGATTAAP KARRRAHLL
.MAA ASPSPCFSKN LPPSSSKS SILLPK STFTFHNHPK
MAAA ASPSPCFSKT LPPSSSKS STILPR STFPFHHHPQ
.... ..MAATASRT TRFSSSSS.. HPTFPKRITR STLPLSHQTL
MAAI PHTNPSITTK PPSSPPRP TFLAR FTFPITSTSH
...M ATATSTAVAF SGATATLP KPRTLPRHLL
MAAATANSAL PKLSTLTS. . SFKSSIPISK SSLPFSTTPQ MAAATSNSAL PKLSTLTS.. SFKSSIPISK SSLPFSTTPQ
1-AtAHASL 2-2mAHASL2 3-BnAHASLlA
4- 05AHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3 0-ZmAHASLl
9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CtnAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
2 5-GHAHASAl9
26- llvB
27- IlvG
28- IlvI
AAR RAL AAPIRC. . . .
KTSP LHLTHT QHHSR.FTVS
KASP LHLTHT HHHRRGFAVS
TKPN HALKI KCSIS..
KRHR LHISNV LSDSK.,
PSSR RAL AAPIRC.
LP ARWRC.
LP ARIVRC.
LP ARIVRC.
KPTP YRSFDV SCSLSHASSN
KPTP YRSFDV SCSLSHASSN
.SAAPPATLT NVILSTTTHN NWISTTTHN KPPTAAPFTK
PTITH
..SAVSPSP .CAASPAAT .CAASPAAT •CAASPAAT PRSAATSVTP PRNPAASVl'Q
VTflPPATPLR OVSEPEIFVS DVS ? PETFVS BAP Г TEPFVS SPIPTESFIS SPA PPATALR SAR P PATALR SAfl P PATALR
SAPP PATALR КШ! P PHDFIS KTAJPPHYFIS
MASSG
Фиг. 3
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- 08AHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZraAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GKAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
RFAPlgtRKG PWGP1D ?RKG RYAPIE ?RKG PWGP? Б ?RKG RYAPt Q ?RKG RYAPIQ?RKG RFGPIE ?RKG PWGP* E ?RKG RFSPE E ?RKG RYAPIБ ?RKG KYAP* V ?RSG RFAPEQ?RKG RFAPqQ ?RKG , ?RKG
PMGP1D ?RKG RFAPE E ?RKG RFAPD.E ?RKG > RKG
?RKG
RFASCБ RYAPIQ PWGPS Б ?RKG PWGPЈ E ?RKG
?RKG ?RKG
PWGPЈ E PWGPЈE RYADI E|?RKG RYADIE ?RKG TTSTqKRFTG .MNG 4LSG
Ь. E
122 124
ADILVEALER ADILVESLER ADILVEALER ADILVEALER ADVLVEALER ADVLVEALER SDVLVEALER SDILVEALER CDVLVEALER ADILVEALER ADILVEALER ADILVEALER ADILVEALER CDVLVEALER ADILVEALER CDVLVEALER CDVLVEALER ADILVEALER ADVLVEALER ADILVEALER ADILVEALER ADILVEALER ADILVEALER ADILVEALVR ADILVEALER AEFIVHFLEQ AQWVVHALRA AEMVVRSLID
139 QGVETVFAYP CGVRDVFAYP QGVETVFAYP CGVSDVFAYP EGVTDVFAYP EGVTDVFAYP EGVTNVFAYP CGVRDVFAYP EGVTDVFAYP QGVETVFAYP QGVDWFAYP QGVETAFAYP QGVETVFAYP EGVTDVFAYP CGVRDVFAYP EGVKDVFAYP EGVTDVFAYP QGVTTVFAYP EGVTDVFAYP CGISDVFAYP CGIVDVFAYP CGIVDVFAYP CGIVDVFAYP EGVKDVFAYP EGVKDVFAYP QGIKIVTGIP QGVNTVFGYP QGVKQVFGYP
GC A i H SIHQA GCfiiMJIHQA GCASMSIHQA GCA-M3IHQA GC A: M 3IHQA GC Й ¦ M 31 HQ A GCRIL SIHQA GCR:M3IHQA GCA:MSIHQA GC R:N3IHQA
GC R: M 3IHQA GC R: H 3IHQA GC|AHN|SIHQA
SIHQA 3IHQA SIHQA SIHQA SIHQA GdAttl &IHQA
GCR-M3IHQA GCA:M5IHQA GCR;M5IHQA GC A: M SIHQA
GC ft: M 3IHQA GCRiMSIHQA GCSIL ?VYDA GC AIM PVYDA GC A11 3IYDA
LTRSSSIRti V LTRSPVIAS H LTRSSTIRli V LTRSPVTTf H LTRSSTIRf V LTRSNTIRb V LTRSTIIRttI LTRSPVIAPH LTRSNIIR* V LTRSSTIRf V LTRSNTIR* V LTRSSSIRK V LTRSSSIRH 4 LTRSNIIRIS V LTRSPVIAf И LTRSNIIRS У LTRSNIIR* V LTRSAAIR* V LTRSTTIRJ V LTSSPLIT* H LTRSPVIT* tt LTRSPVm H LTRSPVIT* H LTRSKIIR* V LTRSKIIR* V LSQSTQIRFI LYDGG.VEFb LHTVGGIDb V
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZraAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB '23-TaAHASLlD
24-GHAHASAS 25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
LPRHEQGGVF LFRHEQGEAF LPRHEQGGVF LFRHEQGEAF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LFRHEQGEAF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LPRHEQGGIF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LFRHEQGEAF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LFRHEQGEAF LFRHEQGEAF LFRHEQGEAF LFRHEQGEAF LPRHEQGGVF LPRHEQGGVF LARHEQGAGF LCRHEQGAAM LVRHEQAAVH
AAEGYARSSG AASGYARSSG AAEGYARSSG AASGYARASG AAEGYARASG AAEGYARASG AAEGYARASG AASAYARSSG AAQGYARATG AAEGYARSSG AAEGYARSSG AAEGYARSTG AAEGYARSTG AAEGYARATG AASGFARSSG AAEGYARATG AAEGYARATG AAEGYARSSG AAEGYARASG AASGYARASG AASGYARASG AASGYARASG AASGYARASG AAEGYARSSG AAEGYARSSG IAQGMARTDG AAIGYARATG MADGLARATG
KPGICIATSG RVGVCIATSG KPGICIATSG RVGVCVATSG LPGVCIATSG VPGVCIATSG LTGVCISTSG RVGVCIATSG RVGVCIATSG KPGICIATSG KPGICIATSG KPGICIATSG KPGICIATSG FPGVCIATSG RVGVCVATSG FPGVCIATSG FPGVCIATSG LPGVCIATSG LPGVCIATSG RVGVCVATSG RVGVCVATSG RVGVCVATSG RVGVCVATSG IPGVCIATSG ISGVCIATSG KPAVCMACSG KTGVCIATSG EVGWLVTSG
PGATNLVSGL PGATNLVSAL PGATNLVSGL PGATNLVSAL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSAL PGATNLVSGF PGATNLVSGL PGAMNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSAL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSGL PGATNLVSAL PGATNLVSAL PGATNLVSAL PGATNLVSAL PGATNLVSGL PGRTNLVSGL PGATNLVTAI PGATNLITGL PGATNAITGI
ADALLDSVPL ADALLDSVPM ADAMLDSVPL ADALLDSVPM ADALLDSVPM ADALLDSVPM ADALLDSVPI ADALLDSVPM ADALLDSVPL ADAMLDSVPL ADALFDSVPL ADALLDSVPL ADALLDSVPL ADALLDSIPI ADALLDSVPM ADALLDSIPI ADALLDSIPI ADALMDSVPV ADALLDSVPM ADALLDSIPM ADALLDSIPM ADALLDSIPM ADALLDSIPM ADAMLDSIPL ADAMLDSIPL ADARLDSIPL ADALLDSIPV ATAYMDSIPL
1-AtAHASL 2-ZraAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
197 VAITGQVjT VAITGQVt VAITGQVJ VAITGQVj VAITGQV VAITGQM VAITGQVj VAITGQM VAITGQM VAITGQV] IAITGQV1 VAITGQVj VAITGQVj VAITGQVj VAITGQV VAITGQVj VAITGQM VAITGQV VAITGQV VAITGQV VAITGQVi VAITGQV VAITGQVj VAITGQV VAITGQV ICITGQV VAITGQV WLSGQV
199 205 MIGTI HIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI MIGTI FIGT LIGY
Г0ЕТ PQET ?QET ?QET ?QET ?QET ?QET TQE7 •"QET ¦"QET Г0ЕТ iXiET PQET ?QET ?QET rQET
?QBT ?QET fQET ?QET •X3ET ?QET ftjET PQET FQEV FQEV FQEC
PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVSRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PWEVTRTIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVSRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT PIVEVTRSIT DTYGISIPIT DVLGLSLACT DMVGISRPW
KHNYLVMDVE KHNYLVLDVD KHNYLVMDVD KHNYLVLDVE KHNYLVLDVE KHNYLVLDVE KHNYLVLNVQ KHNYLVLDVD KHNYLVLDVE KHNYLVMDVD KHNYLVMEVD KHNYLVMDVE KHNYLVMDVE KHNYLVMDVE KHNYLVLDVD KHNYLVMDVE KHNYLVMDVE KHNYLILDVD KHNYLVLDVE KHNYLVLDVE KHNYLVLDVE KHNYLVLDVE KHNYLVLDVE KHNYLVLDVD KHNYLVLDVD KHNYLVRHIE KHSFLVQSLE KHSFLVKQTE
DIPRIIEEAF DIPRWQEAF DIPRIVQEAF DIPRVIQEAF DIPRIVREAF DIPRIVREAF DIPRIVHEAF DIPRWQEAF DIPRIVREAF DIPRIVQEAF DIPRIVREAF DIPRIVEEAF DIPRIVEEAF DIPRIVREAF DIPRWQEAF DIPRWREAF DIPRWREAF DIPRVVAEAF DIPRIVREAF DIPRVIQEAF DIPRVIQEAF DIPRVIQEAF DIPRVIQEAF DIPRIVSEAF DIPRIVSBAF ELPQVMSDAF ELPRIHAEAF DIPQVLKKAF
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3 B-ZmAHASLl
9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
254
FLATSGRPGP VLvdj &KDIQ QQLAIPNWE. FLASSGRPGP VLVII?KDIQ QQMAVPVWD. FLATSGRPGP VLVIV?KDIQ QQLAIPNWD. FLASSGRPGP VLVII?KDIQ QQMAVPVWD. YLASSGRPGP VLIEVPKDIQ QQLWPKWD. YLASSGRPGP VLICV?KDIQ QQLWPKWD. FLASSGRPGP VLICI?KDIQ QQLVVPNWDE FLASSGRPGP VLVII?KDIQ QQMAVPAWD. FLANSGRPGP VLICIPKDIQ QQLWPNWE. FLATSGRPGP VLVIVPKDIQ QQLAIPNWD. FLATSVRPGP VLIIVPKDVQ QQFAIPNWE. FLATSGRPGP VLVIVPKDIQ QQLAIPNWE. FLATSGRPGP VLVCV?KDIQ QQLAIPNWE. FLAKSGRPGP VLIEV?KDIQ QQLVIPNWD. FLASSGRPGP VLVtI?KDIQ QQMAVPVWD. FLAKSGRPGP VLIIVPKDIQ QPLVIPNWD. FLAKSGRPGP VLICV?KDIQ QQLVIPNWD. FVATSGRPGP VLIII?KDVQ QQLAVPNWD. YLASSGRPGP VLIIV?KDIQ QQLWPKWD. FLASSGRPGP VLVCI?KDIQ QQMAVPVWD. FLASSGRPGP VLVII?KDIQ QQMAVPIWD. FLASSGRPGP VLVII?KDIQ QQMAXPVWD. FLASSGRPGP VLVII?KDIQ QQMAVPVWD. FLASSGRPGP VLIIV?KDIQ QQLAVPKWN. FLASSGRPGP VLIIV PKDIQ QQLAVPKWN. RIAQSGRPGP VWIEIPKDVQ TAVFEIETQ. DVACSGRPGP VLVIIJKDIQ LASGDLEPWF WLAASGRPGP VWEjlJ?KDIL NPANKLPYV.
Qt Q PMRLDGY ..Г ?MSLPGY ..Q?IKLGGY
Q?MRLPLY .Q 3MRLPGY .Q 3MRLPGY Q ?MRLPGY Г ?MSLPGY Q?MRLPGY Q?HRLPGY E ?VNLPGY .E ?IRLPGY .ft ?MSLPGY T PMSLPGY TPHSLPGY Г ?MSLPGY .H 3LRLPGY jHpLRLPGY . .РАМ
.BPES
I3RLPKPPN. I \RLPKPPA. L 3RLPKPTFS
M3TMPKPPK. M3RMPKPPE. M3RMPKPPE. H 3RLPKLPN. IWLPKPPA. M3RLPKLPN. M 3RLPKLPN. LUILPRPPA. L3RLPKTEN. I\RLPKPPA. IVRLPKPPS. I UlLPKPPS. IVRLPKPPS. L 3RLPKAPG. L 3RLPKAPA. A JKAAAPAFS
V SNEVTFPHA
V 3MRSYNPTT
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
15-SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI ...DSHLEQI ...TELLEQV ...VSQLGQI ...TELLEQV ...DGHLEQI ...DGHLEQI .,.ETHLRQI .,.TEFLEQV ANEEGLLDQI ...VSQLGQI ...VSHLEQI ...DSHLEQI ...DSHLEQI ...EMLLEQI ...TELLEQV ...EMLLEQI ...EMLLEQI ...EAQLEHI ...NGQLEHI ...TELLEQV ...TESLEQV ...TESLEQV ...TESLEQV ...EAHLEQI .,.EAHLEQI ...EESIRDA
EVEQA
TGHKGQIKRA
TLMGLGSYPC TLMGLGNFPS TLMGLGSYPC TLMGLGNFPS TLMGLGAYPA TLMGLGAYPA TLMGLGTYPG TLMGLGNFPS TLMGLGAFPC TLMGLGSYPC TFMGLGSYPC TLMGLGAYPC TLMGLGAYPC
1 jUrJUXiUrnE tT 1
TLMGLGNFPG TLMGLGAFPV TLMGLGAFPT TLMGLGTFPI TLMGLGAYPA TLMGLGNFPS TLMGLGNFPS TLMGLGNFPS TLMGLGNFPS TLMGLGAFPI TLMGLGAFPI TLMALGMLPK TLKGLGAVEA SLMGLGAFPA
VRLISESKKP LRLVGESRRP VRLISESKRP LRLVGESRRP VRLVGEAKRP VRLVGEAKRP VRFIKESKRP LRLVGESRRP VRLVGESKRP VRLISESKRP LRLVSBSKRP VRLISESKKP VRLISESKKP VRLISESKKP LRLVGESRRP VRLISESKKP IRLISESKKP VRLIMEAQKP VRLVSEAKRP LRLVGEERRP LRLVGESRRP LRLVGESRRP LRLVGESRRP VRLVSESKKP VRLVSESKKP AAMINAAKRP RQMLAKAQKP LQTLVAAKKP
D.DELSLHML D.DPLSLRML N.DELSLQML D.DPLSLRML S.SDLSLHML S.SDLSLHML S.HDLSLHML D.DPLSLRML T.DDLSLQML N.DELSLQML DDEEFSLQML D.DELSLHML D.DELSLHML G.DELSLQML D.DPLSLRML G.DELSLQML G.DELSLQML G.DEYSLQML S.SDLSLHML D.DPLSLRML D.DPLSLRML D.DPLSLRML D.DPLSLRML S.DDLSLQML S.DELSLQML A.HPLSLGML D.YPYYLGML T.HRQALGML
VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGS.. ILYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYTGGGC.. VLYVGGGS.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGS.. VLYVGGGC.. ILYVGGGC.. ILYVGGGC.. ILYVGGGC.. ILYVGGGC.. VLYVGGGC.. VLYVGGGC. . VLYLGGGV.. MLYVGGGVGM WYVGGGAIT
GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGTVYANY GMHGVRSTNY GMHGTKAANF GMHGTYEANM
315 LNSS ЭJLGRF AASG E 5LRRF LNSSE 5LGRF SASC D SLRWF LNSID 5LRRF LNSID SLRRF MNSS D iLGRF AASC E 5LCRF LNSЈВ 5LRKF LNSS Б iLGRF LNSS Б JLRRF LNSS В 5LGRF LNSS E SLGRF SQSЈ Б 5LRRF AASC E JLRRF TQSЈ E SLRRF LQSS E 5LRRF LNSS ft SLRRF LNSGD SLRRF SASC В 3VRRF AASCБ JLRRF AASC E 5LRRF AASC ESLRRF LNSSE SLKRF LNSS Б 5LKRF INAI ft WREL AQAV P iLREF AGCHfiPLKET
AVEHSDLLLA AVDKADLLLA AVEHSDLLLA AVDKADLLLA AVDKSDLLLA AVDKSDLLLA AIDKSDLLLA AVDKADLLLA AVDKADLLLA AVEHSDLLLA AVEYSDLLLA SVEHSDLLLA SVEHSDLLLA AVDSSDLLLA AVDKADLLLA AVDSSDLLLA AVDGSDLLLA AVDNSDLLLA AVDKSDLLLA AVDKADLLLA AVDKADLLLA AVDKADLLLA AVDKADLLLA AVDKSDLLLA AVDKSDLLLA ILQEADLLIV AVQECDLLIA TMHNADVIFA
VELTGIPVAS VELTGIPVTT VELTGIPVAS VELTGIPVTT VELTGIPVAS VELTGIPVAS VELTGIPVAN VELTGIPVTT VELTGIPVAS VELTGIPVAS VELTGIPVAS VELTGIPVAS VELTGIPVAS VELTGIPVAS VEMTGIPVTT VELTGIPVAS VELTGISVAS VELTGIPVAS VELTGIPVAS VELTGIPVTT VELTGIPVTT VELTGIPVTT VELTGIPVTT VELTGIPVAS VELTGIPVAS AEKAQLPTTM LAATKMPATC VEALNLPWC
3RVT JRVT 3RVT 3RVT 3RVT 3RVT
> RVT 5RVT FGVREjD 3RVT FGVRE D > RVT FGVRE D > RVT FGVRE DJRVT FGVRE D5RVT FGVRE D 3RVT FGVRE D JRVT FGVRE D JRVT FGVRED3RVT LGARED3RAI VGARE D DRVT VGVRE D 3RTT
375 FGVRHpbRVT LGVRE D 3RVT FGVRE D 3RVT FGVRE D3RVT FGVRE D3RVT FGVRE D JRVT FGVRE D FGVRE D FGVRE D FGVRED FGVRE D FGVRE D FGVRE D JRVT FGVRED 3RVT FGVRED FGVRED
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
2 5-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
GKLEAFASRA GKIEAFASRA GKLEAFASRA GKIEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKIEAFASRA GKIEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKIEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKIEAFASRS GKIEAFASRS GKIEAFASRS GKIEAFASRS GKLEAFASRA GKLEAFASRA GKTEQFCPNA GKLNTFAPHA NNLAKYCPNA
398 KIVHIDItjsk KIVHVDItP* KIVHIDII S i KIVHIDIIP i KIVHIDIIPi KIVHIDII P i KIVHIDIIPi KIVHIDII Pi KIVHIDII S V KIVHIDIISi KIVHIDIIS Г KIVHIDIISI KIVHIDII Si KIVHIDII S * KIVHIDIIPi KIVHIDIISi KIVHIDII S i KIVHIDIIS V KIVHIDIIS i KIVHIDIIPi KIVHIDIIP i KIVHIDIIP V KIVHIDIIPi KIVHIDIISi KIVHIDIISi KIIHVDIt Ri SVIHMDIt Pi TVLHIDIIPP
EIGKNKTPHV EIGKNKQPHV EIGKNKTPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHF EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKTPHV EIGKNKTPHV EIGKNKTPHV EIGKNKTPHV EIGKNKLPHA EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQAHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHV EIGKNKQPHM ELGKIKQPHV EMNKLRQAHV SISKTVTADI
SICGD1
SVCGDV SVCGDV KtAL
SICGD1К /AL SICGDlК iAL SICADV К jAL SICGE3 К/AL SVCGDV К jAL SVCCDVQ jAL К jAL jAL jAL
SICADV К SICADV SICADV SVCSDV К
SICAD1К SICADV К jAL SICAD3K jAL SICAD1К jAL
К jAL KpAL AL
SVCSDVjKtAL AIQADV D JVL ALQGDIN VLL
5EK ЗЕК RG GS ESR NR 3NR 3NR SNR 3GK 3GS IGK :GK ЗЕК
3VK
LPGS
42 & QGMNKMLENR
QGLNKIL QGLNKI QGMNTIL QGLNKIL QGMNKVL QGMNEVL QGMNKVL QGMNKVL QGLNS3 L QGMNAIL QGLNS1L QGLNS1 KGINM1L QGLNKIL QGLNAV
*GS 3TK TT AQ LNQY
QGLNAIL ҐGS QGLNAIL 4GS
QGLNDIL QGINK1L QGINKIjL AQLI PALQQEjL
IЈQE
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
1 л __o"~".n unci д. ¦" upniinuii
15-SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
A 3ELKLDFG. T3KKSFDFG. a 5ELKLDFG.
fKTSSDFS. NpVTNLDFS. ..SLDFS. DLDFDFS. T|SKKSFDFG.
KLKLDFS. AfeELKLDFG. R|. . DVLDFG. ELKLDFG. 3ELKLDFG.
PKKSFDFG. KLKLDFS. KLKLDFS. GpEGKFDLG. NpVTNLDFS.
DKSFDFA.
KAQQGLDFG.
КiQQGLDFG.
КIQQGLDFG.
V iKLNLDYS.
3 iKLNLDYS.
P* A.
VHQPLDEIR
К SID
3QK
31N
V" S V"S
SK ASIDJQK
QK !QK
AKSQ ?1T ft il Q 31 G JI E 33 N1/QK NJf KPlfc S"
K3IDJQK E SV M iQK ^DpijD JQK SQK SQK QR QK Ш
:QK
Pil P"
DfelJEpQK РЩК 3ID2QK К ?1 D 2QK Kpi|D2QK 3QK 3QK EWriQlliMAJLQ DKCHCA2LR D Iti Q 31E 2WR
QKFPLSFKTF REFPLGYKTS QKFPLSFKTF REFPLGYKTF MKFPLSFKTF VKFPLSFKTF ASNPLSYKTF REFPLGYKIF KKFPLSFKSF QKFPLSFKTF LKFPLRYKTF QKFPLSFKTF QKFPLSFKTF
\;b'Vt> T ucvnic*
REFPLGYKTF VKYPLNYKTF VKYPLSFKTF HKFPLGYKTF VKYPLSFKTF REFPLGYKTF REFPLGFKTF REFPLGFKTF REFPLGFKTF LKFPLSYKTF LKFPLSYKTF REFPCPIPKA DEHSWRYDHP ARQCLKYDTH
GEAIPPQYAI NEEIQPQYAI GEAIPPQYAI GEEIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI GDAIPPQYAI NEEIQPQYAI GDAIPPQYAI GEAIPPQYAI GEEIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI
r*m n т onnvn T
DDEIQPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI QDAISPQHAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI GEAIPPQYAI CDPLSHYGLI GDAIYAPLLL SEKIKPQAVI
KVLDELTDGK QVLDELTKGE QVLDELTQGK QVLDELTKGE QVLDELTGGN HVLDELTGGN QVLNEVTGGN QVLDELTKGE QVLDELTLGD QILDELTEGK QLLDELTDGK QVLDELTDGR QVLDELTDGK
nut rVDT ФМГМ
QVLDELTKGE QVLDELTNGN QVLDELTNGN EVLDELTNGD QVLDELTGGN QVLDELTKGE QVLDELTKGE QVLDELTKGE QVLDELTKGE QVLDELTGGN QVLDELTGGN NAVAACVDDN KQLSDRKPAD ETLWRLTKGD
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- 03AHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AaAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB 2 3-TaAHASL1D
24-GHAHASA5 2 5-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
AIISTGVGQH AIIGTGVGQH AIISTGVGQH AIIATGVGQH AIISTGVGQH AIISTGVGQH AIITTGVGQH AIIATGVGQH AIVSTGVGQH AIISTGVGQH AIITTGVGQH AIISTGVGQH AIISTGVGQH AIISTGVGQH AIIATGVGQH AIISTGVGQH AIISTGVGQH AIVSTGVGQH AIISTGVGQH AIIATGVGQH AIIATGVGQH AIIATGVGQH AIIATGVGQH AIISTGVGQH AIISTGVGQH AIITTDVGQH CWTTDVGQH AYVTSDVGQH
QMWAAQFYNY QMWAAQYYTY QMWAAQFYKY QMWAAQYYTY QMWAAQFYKY QMWAAQFYKY QMWSAQFYKY QMWAAQYYTY QMWAAQFYKY QMWAAQFYKY QMWAAQFYRF QMWAAQFYKY QMWAAQFYKY QMWAAQFYKY QMWAAQYYTY QMWAAQYYKY QMWAAQYYKY QMWAAQFYKY QMWAAQFYKY QMWAAQYYTY QMWAAQYYTY QMWAAQYYTY QMWAAQYYTY QMWAAQFYKY QMWAAQFYKY QMWTAQAYPL QMKAAQHIAH QMFAALYYPF
KKPRQWLSSG KRPRQWLSSA RKPRQWLSSS KRPRQWLSSA NKPRQWLTSG NKPRQWLTSG NRPRQWLTSA KRPRQWLSSA RNPRQWLTSG RKPRQWLSSS KKPRQWLSSG KKPRQWLSSA KKPRQWLSSA KKPRQWLTSG KRPRQWLSSA KKPRQWLTSG KKPRQWLTSG KRPRQWLTSG NKPRQWLTSG KRPRQVLSSA KRPRQWLSSS KRPRQWLSSS KRPRQWLSSS KKPRQWLTSG KKPRQWLTSG NRPRQWLTSG TRPENFITSS DKPRRWINSG
GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGAMGFGLP GLGTMGFGLP GLGTMGFGLP GLGTMGFGLP
AAIGASVANP AAAGASVANP AAIGASVANP AAAGASVANP AAIGAAVARP AAIGAAVARP AAIGAAVARP AAAGAAVANP ACYGAAVARP AAIGASVANP AAMGAAIANP AAIGASVANP AAIGASVANP AAMGAAVGRP AAAGAAVANP AAIGAAVGRP AAIGAAVGRP AAIGAAVANP AAIGAAVARP AAAGTAVANP AAAGAAVANP AAAGAAVANP AAAGAAVANP AAIGAAVANP AAIGAAVANP AAIGAALANP AAVGAQVARP AALGVKMALP
1-AtAHASL 2-ZraAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OaAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
DAIWDIDGD GVTVVDIDGD DAIWDIDGD GVTWDIDGD DAWVDIDGD DAWVDIDGD DAWVDIDGD GVTWDIDGD DAWVDIDGD DAIWDIDGD GAWVDIDGD DSIVVDtDGD DAWVDIDGD GEIWDIDGD GITWDIDGD GEIWDIDGD GEIWDIDGD GAWVDIDGD DAWVDIDGD GVTWDIDGD GVTVVDIDGD GVTWDIDGD GVTWDIDGD EAWVDIDGD EAWVDIDGD DRKVLCFSGD NDTWCISGD EETWCVTGD
GSFIMNVQEL GSFLMNVQEL GSFIMNVQEL GSFLMNIQEL GSFMMNVQEL GSFMMNVQEL GSFMMNVQEL GSFLMNIQEL GSFIMNVQEL GSFIMNVQEL GSFIMNIQEL GSFIMNVQEL GSFIMNVQEL GSFMMNVQEL GSFLMNIQEL GSFIMNVQEL GSFIMNVQEL GSFIMNVQEL GSFIMSVQEL GSFLMNIQEL GSFLMNIQEL GSFLMNIQEL GSFLMNIQEL GSFIMNVQEL GSFIMNVQEL GSLMMNIQEM GSFMMNVQEL GSIQMNIQEL
ATIRVENLPV AMIRIENLPV ATIRVENLPV ALIRIENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV AMIRIENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV AMIRIENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ALIRIENLPV ALIRIENLPV ALIRIENLPV ALIRIENLPV ATIRVENLPV ATIRVENLPV ATASENQLDV GTVKRKQLPL STALQYELPV
KVLLLNNQHL KVFVLNNQHL KILLLNNQHL KVMVLNNQHL KILLLNNQHL KILLLNNQHL KMMVLNNQHL KVFVLNNQHL KIMLLNNQHL KILLLNNQHL KVLLINNQHL KILILNNQHL KILILNNQHL KIMLLNNQHL KVFVLNNQHL KIMLLNNQHL KIMLLNNQHL KILLLNNQHL KILLLNNQHL KVMILNNQHL KVMILNNQHL KVMILNNQHL KVMILNNQHL KILLLNNQHL KILLLNNQHL KIILMNNEAL KIVLLDNQRL LWNLNNRYL
SDRF DRF SDRF
574 GMVMC g SDRF GMWC Й SDRF GMVMC W SDRF GMWC W SDRF GMWC W SDRF GMWC WJ3DRF GMWCW GMWC W GMWC L
5DHF
GMVMC W SDRF
GMVLC W
SDRF SDRF SDRF SDRF SDRF
GMVMC W SDRF
GMVMC W GMWCW GMWCW GMWCW GMWCW
SDRF SDRF DRF SDRF SDRF
GMWC W SDRF
GMWC L GMWCW GMWCW GMWCW GMWCW
2QLF
GMWC W SDRF GMWC W SDRF GLVHC Q 3SLF
GMVRC W
GMVKCjWPDMI
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- ОзAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB
23- TaAHASLlD 24-GHAHASA5
2 5-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
580 vEh.NRAHTF К К V.NRAHTY 1 К i.NRAHTY YКNRAHTY
V Кi.NRAHTY К Кi.NRAHTY \K\. NRAHTY \ К V.NRAHTF У К NRAHTY №. NRAHTY 1 Ai.NRADSF iКi.NRAHTY
К\.NRAHTY \ К V. NRAHTY 1К i. NRAHTY \ К \. NRAHTY SKi.NRAHTY KK5.NRAHTY К К i.NRAHTY YKA.NRAHTY У К\.NRAHTY К К\. NRAHTY HКi.NRAHTY У К\.NRAHTY
V К\.NRAHTY К RJGVFAATY E Q SRYSETTL US 5.RHSQSY
SI !I SI 31 31
D5I ESI SI I 31 31 31
595 LGDPAQE LGNPENE S LGDPARE N LGNPECE S LGNPSKES LGNPSKES LGNPTNIS LGNPENE S 31 LGNPSNЈ S SI LGDPARE N SI LGDPANIE VV LGNPAEI DPI LGNPATE LGDPANI LGNPENE S LGDPANE E LGDPANI E LGDPSSE S LGNPSKES LGNPENES &I LGNPENE S LGNPENEX LGNPENE S LGDPSNE S LGDPSNEJS PG. . TDN, HQS,
FPNMLLFAAA YPDFVTIAKG FPNHLQFAGA YPDFVTIAKG FPNMVKFAEA FPNHLKFAEA FPNHLKFAEA YPDFVAIAKG FPDMLKFAEA FPNHLQFAGA FPDHLLFAAS FPNMLQFASA FPNMLQFASA FPNHLKFAEA YPDFVTIAKG FPNHLKFAEA FPNMLKFAEA FPNMLKFADA FPNHLKFAEA YPDFVTIAKG YPDFVTIAKG YPDFVTIAKG YPDFVTIAKG FPNHLKFAEA FPNMLKFAEA KINFMQIAAG .PDFLMLASA LPDFVRLAEA
CGIPAARVTK FNIPAVRVTK CGIPAARVTK FNIPAVRVTK COIPAARVTQ CDIPAARVTR CDIPAARVTK FNIPAVRVTK CDIPAARVTK CGIPAARVTK CGIPAARVTR CGIPAARVTK CGIPSARVTK CGVPAARVTH FNIPAVRVTK CGVPAARVSH CGVPAARVSH CGIPAARVTK CDIPAARVTR FNVPAVRVTK FNVPAVRVTK FNVPAVRVTK FNVPAVRVTK CGIPAARVTK CGIPAARVTK FGLETCDLNN FGIHGQHITR YGHVGIQISH
KADLREAIQT KNEVRAAIKK KEELREA1QT KSBVRAAIKK KADLRAAIQK KGDLRAAIQK KGDVRTAIQK KSEVHAAIKK VSDLRAAIQT KBELREAIQT REDLREAIQT IAELREAIQK KAELREAIQK RDELRAAIQK KSEVHAAIKK RDDLRAAIQK RDDLRAAIQK KEELRAAIQR KADLRAAIQK RSEVRAAIKK KSEVTAAIKK KSEVTAAIKK KSEVTAAIKK KEDLKAAMQK KEDLKAAIQK EADPQASLQE KDQVEAALDT PHELESKLSE
1-AtAHASL 2-ZmAHASL2 3-BnAHASLlA
4- OsAHASL
5- HaAHASLl
6- HaAHASL2
7- HaAHASL3
8- ZmAHASLl 9-AsAHASL
10- BnAHASLlC
11- BnAHASL2A
12- CmAHASLl
13- CmAHASL2
14- SpAHASL
15- SbAHASL
16- StAHASLl
17- StAHASL2
18- GmAHASL
19- XsAHASL
20- LmAHASL
21- TaAHASLlA
22- TaAHASLlB 2 3-TaAHASLlD
24-GHAHASA5 25-GHAHASA19
26- IlvB
27- IlvG
28- IlvI
MLDTPGP... MLETPGP... MLDTPGP... MLETPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLEAPGP... MLDTPGP.. . MLDTPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLETPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLDTPGP... MLETPGP... MLETPGP... MLETPGP... MLETPGP... MLDTPGP. . . MLDTPGP... IINRPGP... MLNSDGP... ALEQVRNNRL
YLLDVICPHQ YLLDIIVPHQ YLLDVICPHQ YLLDIIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDIIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVICPHQ FLLDWCPHQ YLLDVICPHQ YLLDVICPHQ YLLDVIVPHQ YLLDIIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDIIVPHQ YLLDIIVPHQ YLLDIIVPHQ YLLDIIVPHQ YLLDVIVPHQ YLLDVIVPHQ ALIHVRIDAE YLLHVSIDEL VFVDVTVDGS
EHVLPMIES EHVLPMI IS EHVLPMIE a EHVLPMIE я EHVLPMIIЦ EHVLPMI E s| EHVLPMII a EHVLPMIIS EHVLPMIE S DHVLPLIIS EHVLPMIIS EHVLPMIE S EHVLPMIES EHVLPMIIS EHVLPMIES EHVLPMIIS EHVLPMIIS EHVLPMI I P. EHVLPMIES EHVLPMIES EHVLPMIES EHVLPMIIS EHVLPMIES EHVLPMIES EKVYPMVII ENVWPLVEE EHVYPMQ1f
GAFKDMILDG GTFKDVITEG GAFKDMILDG
i GGFSDVITEG GGFSDVITEG GGFNDIITDG GAFKDMILDG
IAAFKDTITEG GTFKDVITEG GTFKDIIV.. GTFNDVITEG GTFNDVITEG GAFKDVIT. .
IGAFKDMILDG GAFKDVITEG GAFKDVITEG
IGSFKDVITEG GGFMDVITEG
[GAFKDIIMEG
i GAFKDMIMEG GAFKDMIMEG GAFKDMIMEG GAFKDVITEG GAFKDVITEG AANTEMVGE. ASNSEMLEKL GGMDEMWLSK
DGRIKY DGRTVY DGRTKY DGRTVY DGRTKY DGRMKY DGRTQ. DGRTVY DGRRAY DGRTKY
DGRTKY DGRTKY
DGRTVY DGRRSY DGRRSY DGRTRY DGRMKY DGRISY DGRTSY DGRTSY DGRTSY DGRTQY DGRTQY
TERT..
Фиг. 3 (продолжение)
М277 Q269
АР основной вектор Т-ДНК
Карта нового основного вектор ZP Т-ДНК 5417 пар оснований
Фиг. 8
Фиг. 7
AtAHASL
Л 205
V2M
Q269
Ш77
D315
D375
S30S
ZmAHASL2
A173
1222
K237
1246
D343
P3G6
BnAHASLIA
Л187
V236
Q2S1
М2Й9
К 297
D357
а* во
Os AHASL
Л179
1228
T243
1251
D2BS
Da49
P372
HaAHASH
A1BO
V239
E254
LZbZ
ПЯОП
D3SQ
P383
HaAHASL2
A IB 4
К24Й
L256
U294
D354
P377
HaAHASLS
Л180
L229
Q247
12ft 5
D293
D3G3
P37G
ZmAHASLI
Л17Е)
1222
T237
Т24Й
E2B3
D343
РУ66
As AHASL
1245
L2G8
E310
D370
BnAHASLlC
А1Э0
V239
Q2S4
M262
E30D
mtso
ИЗ 83
BnAHASL2A
Л181
V230
Q245
M253
Ш52
Й375
CmAHASLI
Л203
V252
Q2G7
M275
R313
D373
S390
CmAHASL2
АЙ0О
V2d &
Q2G4
M272
E310
D37U
S393
Sp AHASL Partial
Л1Ш
V169
Q174
M1B2
E220
Ш80
S3G3
SbAHASL
A17G
1225
T240
1248
K28S
D34G
рэеэ
SIAHASL1
V2J1
Q26G
Ш64
E3U2
D362
SIAHASL2
V243
Q25B
MZGti
Ш6 4
Я 387
GmAHASL
Л180
1235
L258
Л296
S37W
XsAHASL
А18У
vaaa
K247
L2J55
D293
Ш53
S37G
LmAHASL
Л17Б
1224
A239
1247
Е2Й5
P3G8
TaAHASLIA Partial
A14E
1101
T20S
1214
EC252
D312
РЗЗ &
TaAHASLlB Partial
A142
[191
T206
1214
Е25И
D312
F335
TaAHASLID Partial
A142
1191
T20S
1214
E2G2
P312
Р335
GHAHASA5
A194
V243
H2G8
1,266
E304
D364
S367
GHAHASA1S
A194
V243
H25S
L26G
E304
ЯЗД7
live
A121
1170
A18S
A227
D2S7
КЗ 10
IlvG
A10B
I1 &7
V17G
P214
D274
Р2Э7
Alia
U61
VlSO
Q2Z4
D2S4
Н307
Фиг. 8 (продолжение)
AtAHASL
K416
Л430
V439
N442
N445
WG7-1
ZmAHASL2
1Ш4
L394
T39S
S407
D410
D413
W542
BrtAHASLIA
КЗОЙ
L408
А412
V4E1
S424
S427
W55G
OsAHASL
КЗУ0
L400
Т404
А413
N416
D4I9
W648
HaAHASLl
K101
L411
N415
Т424
К427
D430
W55S
HaAHASL2
КЗЭ5
L405
N409
N415
К418
15421
WB50
HaAHASLS
КУ94
\ли
1С40Й
P41S
Е41Э
М422
W551
ZmAHASLI
K384
I ЛЯ 4
Т39Я
S.407
D4L0
D413
W542
AsAHASL
Kill
L.421
?АЧЬ
N4-34
Е437
N440
W5G9
BnAHASLlC
K401
L411
А41Б
V424
S427
S430
BnAHA5L2A
Q393
L403
1Ш7
Е4И
С417
N420
W549
CmAHASLI
K414
L424
А42.8
V437
S440
N443
W &72
CrnAHASL2
K411
L421
G425
V434
S437
N440
W5G9
SpAHASL Partial
K321
L331
К335
Л344
Q347
N350
W479
3b AHASL
КЗ 87
L3S7
Т401
S410
Л413
D41G
W545
StAHASLI
K403
L413
JS417
А426
Q429
Т432
WGG1
StAHASL2
K405
L415
Е419
Л42Й
Q.431
Т434
W5S3
GmAHASL
КЗЭ7
Ы[> 7
G411
G420
Е423
N423
Wri &ft
Xs AHASL
КЗЭ4
L404
N408
N417
К420
D423
W &62
LmAHASL
КЗЙЙ
L396
К4О0
S409
D41U
"В415
Wf> 44
TaAHASLIA Partial
КЗ S3
L3G3
K3G7
T37G
КЗ 79
Б382
W511
Та A HASH В Partial
KJ &3
L363
К367
Т376
К 379
D332
W511
T &AHASUD Partial
КЗ &З
!,3G3
КЗЙ7
Т376
К370
D3S2
W5H
GHAHASA5
K4U5
L415
V419
Е4ЙЯ
Q431
N434
W5 &3
GHAMASA19
K4UG
L415
G419
ГС428
N434
W563
llvB
Щ2Я
V338
Р342
Е349
Q348
A3G]
IlvG
N315
L3M
Y328
Ш49
ф32
А332
W464
llvi
L335
S33D
К 34 5
Q3fi2
Е355
W484
Фиг. 8 (продолжение)
AJAHASL
КЙ80
DЈ> &5
CS54
ZmAHASL2
К54Б
S &63
SS2I
GS22
BnAHASUA
K562
N577
SG35
Gb3 &
OsAHASL
K554
S569
S627
GS2 &
HaAHASLl
K5S5
S580
лезя
CJG3S
HaAHASL2
K556
S571
A620
G63D
HaAHASUJ
K557
S672
A6JU
Cieai
ZmAHASLI
K5"
Й621
G622
AsAHASL
K57S
S5 &0
SG48
G649
BnAHASLlC
K56 &
N580
S638
с;бзе
BnAHASL2A
A55G
E570
B628
0023
CmAHASLI
KD7S
D &y*
StiS)
G652
CmAHASL2
K57ft
DGDO
SG48
G649
SpAHASL Partial
K.435
E500
Й558
G559
SbAHASL
ЙПЙ6
Й624
GG25
1-6
StAHASLI
K567
EGB2
S640
Ci <341
SLAHASL2
K5G9
E584
S642
GG42
GmAHASL
K561
SG7fi
RG34
N &35
XsAHASL
$57,1
Л631
GG32
LmAHASL
K5G0
S5B &
SfcЈ3
G632
TaAHASLIA Partial
K517
НйЭО
G591
TaAHASLIB Partial
KG17
S590
GG91
T3AHASLID Partial
K517
S5S0
G59I
GHAHASA5
К5Ш
S№4
S642
GC43
GHAHASA19
K669
S584
SG4Z
G643
E48G
G553
IlvG
Q470
P53S
G537
llul
5490
R559
GG60
Фиг. 9
Фиг. 8 (продолжение)
1 - дикого типа
2 - csrl-2
3 - API
4 - АР7
5 - АР2
С использованием 37,5 uM имазетапира
М277
Основной вектор ATJP Т-ДНК
Фиг. 11
Левый край
5' транслирующая область*
Правый край
Фиг. 12
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028486
028486
- 1 -
- 1 -
(19)
028486
028486
- 1 -
- 1 -
(19)
028486
028486
- 1 -
- 1 -
(19)
028486
028486
- 1 -
- 1 -
(19)
028486
028486
- 4 -
- 3 -
(19)
028486
028486
¦ 29 ¦
- 28 -
028486
028486
¦ 29 ¦
- 30 -
028486
028486
- 31 -
- 31 -
028486
028486
- 32 -
- 32 -
028486
028486
- 33 -
- 33 -
028486
028486
- 35 -
- 35 -
028486
028486
- 36 -
- 36 -
028486
028486
- 37 -
- 37 -
028486
028486
- 38 -
- 38 -
028486
028486
- 40 -
- 40 -
028486
028486
- 41 -
- 41 -
028486
028486
- 43 -
- 43 -
028486
028486
- 44 -
- 44 -
028486
028486
- 46 -
- 46 -
028486
028486
- 47 -
- 47 -
028486
028486
- 49 -
- 49 -
028486
028486
- 50 -
- 50 -
028486
028486
- 51 -
- 51 -
028486
028486
- 52 -
- 52 -
028486
028486
- 54 -
- 54 -
028486
028486
- 55 -
- 55 -
028486
028486
- 57 -
- 57 -
028486
028486
- 58 -
- 58 -
028486
028486
- 60 -
- 60 -
028486
028486
- 61 -
- 61 -
028486
028486
- 63 -
- 63 -
028486
028486
- 64 -
- 64 -
028486
028486
- 66 -
- 66 -
028486
028486
- 67 -
- 67 -
028486
028486
- 68 -
- 68 -
028486
028486
340 345 350
- 69 -
- 70 -
028486
028486
340 345 350
- 71 -
- 70 -
028486
028486
- 72 -
- 72 -
028486
028486
- 74 -
- 74 -
028486
028486
- 75 -
- 75 -
028486
028486
- 77 -
- 77 -
028486
180 185 190
028486
180 185 190
- 78 -
- 78 -
028486
028486
- 79 -
<220>
- 79 -
<220>
028486
028486
- 80 -
- 80 -
028486
028486
- 81 -
- 81 -
028486
028486
- 82 -
- 82 -
028486
028486
- 83 -
- 83 -
028486
028486
- 85 -
- 85 -
028486
028486
- 86 -
- 86 -
028486
028486
- 88 -
- 88 -
028486
028486
- 89 -
- 89 -
028486
028486
- 90 -
- 90 -
028486
028486
- 91 -
- 91 -
028486
028486
- 93 -
- 93 -
028486
028486
- 94 -
- 94 -
028486
028486
- 99 -
- 99 -
028486
028486
- 100 -
- 100 -
028486
028486
- 101 -
- 101 -
028486
028486
- 102 -
- 102 -
028486
028486
107 ¦
- 106 -
028486
028486
- 109 -
- 109 -
028486
028486
111
- 110 -
028486
028486
- 113 -
- 113 -
028486
028486
- 124 -
- 124 -
028486
028486
Фиг. 3 (продолжение)
- 125 -
Фиг. 3 (продолжение)
- 125 -
028486
028486
- 130 -
- 130 -
028486
028486
- 131 -
- 131 -
028486
028486
- 132 -
- 132 -
028486
Пос. ID видовой AHAS остатки AHAS
028486
Пос. ID видовой AHAS остатки AHAS
- 133 -
- 133 -
028486
Пос. ID видовой AHAS остатки AHAS
028486
Пос. ID видовой AHAS остатки AHAS
- 135 -
- 135 -
028486
028486
- 136 -
- 136 -
028486
028486
- 136 -
- 136 -
028486
028486
- 136 -
- 136 -
028486
028486
- 136 -
- 136 -