EA 028483B1 20171130

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000028483b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы где R представляет собой водород или тритий; F представляет собой фтор или ¹⁸ фтор, или его фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль.

2. Соединения, которые представляют собой 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-b;3',4'-d]пиррол; ³ Н-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-b;3',4'-d]пиррол и [ ¹⁸ F]-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-b;3',4'-d]пиррол.

3. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 для связывания и визуализации агрегатов белка tau, агрегатов бета-амилоида или агрегатов альфа-синуклеина.

4. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 для связывания и визуализации агрегатов белка tau у пациентов с болезнью Альцгеймера.

5. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 в исследованиях, включающих связывание белка tau.

6. Фармацевтическая композиция для связывания и визуализации агрегатов белка tau, содержащая эффективное количество соединения формулы I по любому из пп.1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.

7. Способ визуализации отложений агрегатов белка tau, включающий введение млекопитающему детектируемого количества композиции по п.6; выдержку в течение времени, достаточного для связывания соединения формулы I с отложениями агрегатов белка tau; детекцию соединения, связанного с одним или более отложениями агрегатов белка tau.

8. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 для диагностической визуализации отложений агрегатов белка tau в мозге млекопитающих.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

5. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 в исследованиях, включающих связывание белка tau.

Евразийское 028483 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки 201690515
(22) Дата подачи заявки 2014.10.06
(51) Int. Cl.
C07D 471/04 (2006.01) A61K 31/44 (2006.01) A61P 25/28 (2006.01)
(54) ПРОИЗВОДНЫЕ ДИАЗОКАРБАЗОЛА В КАЧЕСТВЕ ПЭТ-ЛИГАНДОВ БЕЛКА tau
(31) 13187764.9
(32) 2013.10.08
(33) EP
(43) 2016.07.29
(86) PCT/EP2014/071283
(87) WO 2015/052105 2015.04.16
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
Ф. ХОФФМАНН-ЛЯ РОШ АГ (CH)
(72) Изобретатель:
Гобби Лука (CH), Кнуст Хеннер, Кёрнер Маттиас (DE), Мури Дитер
(CH)
(74) Представитель:
Липатова И.И., Хмара М.В., Новоселова С.В., Дощечкина В.В., Осипов К.В., Ильмер Е.Г., Пантелеев А.С. (RU)
(56) WO-A1-2009102498 US-A1-2011182812
где R представляет собой водород или тритий; F представляет собой фтор или 18фтор; или к его фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли. Соединения формулы I включают 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-д]пиррол, 3Н-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-д]пиррол и [18Е]-2-(6-ФТОРПИРИДИН-3-ИЛ)-9Н-ДИПИРИДО[2,3-Ь;3',4'-(Цпиррол. Указанные соединения могут применяться для связывания и визуализации агрегатов белка tau и ассоциированных бета-складчатых агрегатов, включая среди прочих агрегаты бета-амилоида или агрегаты альфа-синуклеина.
где R представляет собой водород или тритий и F представляет собой фтор или 18фтор,
или к его фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли.
Соединения формулы I включают 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-ё]пиррол, 3Н-2-
(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4,-ё]пиррол и [1^]-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-
дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-ё]пиррол.
Соединения с аналогичной общей основной структурой описаны в WO2009/102498 для визуализации in vivo отложений амилоида для диагностики болезни Альцгеймера. Однако там специально не раскрыты трициклические соединения с 3 атомами N.
Было показано, что соединения по настоящему изобретению могут применяться для связывания и визуализации агрегатов белка tau и ассоциированных бета-складчатых агрегатов, включая среди прочих агрегаты бета-амилоида или агрегаты альфа-синуклеина, особенно для применения для связывания и визуализации агрегатов белка tau у пациентов с болезнью Альцгеймера.
Болезнь Альцгеймера (БА) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное заболевание, характеризующееся снижением когнитивных способностей, необратимой потерей памяти, дезориентацией и нарушением речи (Arch. Neurol. 1985, 42(11), 1097-1105). Аутопсия срезов мозга пациентов с БА выявила обильные сенильные бляшки (SPs), состоящие из бета-амилоидных (Ар) пептидов, и присутствие нейрофибриллярных клубков (NFT), образованных из филаментов гиперфосфорилированного белка tau.
tau относится к семейству ассоциированных с микротрубочками белков и экспрессируется главным образом в нейронах, играя в них важную роль в сборке тубулиновых мономеров в микротрубочки для образования нейрональной сети микротрубочек в качестве пути для аксонального транспорта (Brain Res. Rev. 2000, 33(1), 95-130). Tau транслируется с единственного гена, расположенного на 17 хромосоме и его экспрессия в процессе развития контролируется механизмом альтернативного сплайсинга, дающим 6 различных изоформ в мозге взрослого человека, которые могут быть дифференцированы по количеству связывающих доменов. Механизмы, лежащие в основе гиперфосфорилирования, неправильного фолдин-га и агрегирования tau, до сих пор неясны, однако отложение агрегатов tau происходит по стандартному пространственно-временному пути как на внутриклеточных уровнях, так и на уровне топографии мозга.
Недавнее открытие мутаций гена tau, ведущих к лобно-височной деменции (FTD) с паркинсонизмом, связанных с хромосомой 17, усилило доминирующую роль, приписываемую tau в патогенезе ней-родегенеративных расстройств, и подчеркнуло тот факт, что различные наборы изоформ tau, экспресси-руемые в различных нейронных популяциях, могут привести к различным патологиям (Biochim. Biophys. Acta 2005, 1739(2) 240-250). Нейродегенеративные заболевания, характеризующиеся патологическим накоплением белка tau, называются "тауопатиями" (Ann. Rev. Neurosci. 2001, 24, 1121-1159). Помимо БА и FTD другие тауопатии включают прогрессивный супрануклеарный паралич (PSP), слабоумие с преобладающими клубками, болезнь Пика, лобно-височную лобарную дегенерацию (FTLD), синдром Дауна и другие.
Между постепенным вовлечением районов неокортекса и увеличением тяжести деменции была установлена прямая корреляция, предполагая, что патологические агрегаты tau, такие как NFT, являются надежным маркером нейродегенеративного процесса. Степень участия NFT в БА определяется стадиями этапов по Брааку (Acta Neuropathol. 1991, 82, 239-259). Стадии Браака I и II определяются, когда участие NFT приурочено в основном к трансэнторинальным областям мозга, стадии III и IV диагностируются, когда затронуты лимбические регионы, такие как гиппокамп, и стадии V и VI, когда устанавливают обширное участие неокортекса.
В настоящее время обнаружение агрегатов tau возможно только гистологическим анализом материалов биопсии или аутопсии. Визуализация in vivo патологии tau обеспечит новый взгляд на отложения агрегатов tau в головном мозге человека и позволит неинвазивно исследовать степень патологии tau, количественную оценку изменений отложения tau с течением времени, оценку ее взаимосвязи с когнитивными способностями и анализ эффективности анти-tau терапии. Потенциальные лиганды для обнаружения агрегатов tau в живом мозге должны проходить через гематоэнцефалический барьер и обладать высоким сродством и специфичностью к агрегатам tau. Для этого эффективные нейровизаулизирующие радиотрейсеры должны иметь соответствующую липофильность (logD 1-3) и низкую молекулярную массу ( <450), проявлять быстрый клиренс из крови и низкое неспецифическое связывание.
Объектом настоящего изобретения является нахождение средства визуализации, которое позволит
улучшить диагноз посредством выявления потенциальных пациентов с избытком агрегатов tau в головном мозге, которые могут быть склонны к развитию болезни Альцгеймера. Оно также будет полезно для мониторинга прогрессирования заболевания. Когда станет доступным лекарство против агрегатов tau, визуализация клубков tau в головном мозге может обеспечить необходимый инструмент для контроля лечения.
Дополнительным объектом настоящего изобретения является способ визуализации отложений агрегатов tau, содержащий
введение млекопитающему детектируемого количества композиции;
выдержку в течение времени, достаточного для связывания соединения формулы I с отложениями агрегатов белка tau;
детекцию соединения, связанного с одним или более отложениями агрегатов белка tau.
Дополнительным объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая соединения формулы I и фармацевтически приемлемые носители, которая может применяться для идентификации потенциальных пациентов.
Следующие определения общих терминов, используемых в настоящем описании, применяются независимо от того, используются ли указанные термины самостоятельно или в комбинации.
Как здесь используется, термин "низший алкил" обозначает насыщенную, т.е. алифатическую углеводородную группу, включающую линейную или разветвленную углеродную цепочку из 1-7 атомов углерода. Примерами для "алкила" являются метил, этил, н-пропил и изопропил.
3Н обозначает атом трития.
F обозначает атом фтора или атом 18фтор.
Термин "уходящая группа" обозначает галоген или сульфонат. Примерами сульфоната являются то-зилат, мезилат, трифлат, нозилат или брозилат.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" или "фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль" охватывает соли с неорганическими и органическими кислотами, такими как соляная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метан-сульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и т.д.
Было установлено, что соединения формулы I или II могут применяться для связывания и визуализации агрегатов tau и связанных b-складчатых агрегатов, включая среди прочих агрегаты бета-амилоида или агрегаты альфа-синуклеина.
Одним воплощением настоящего изобретения являются соединения формулы I, которые представляют собой 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-с1]пиррол, 3Н-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-с1]пиррол и [1^]-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-11]пиррол.
Одним воплощением настоящего изобретения являются дополнительные соединения формулы I, где R представляет собой водород, которое является 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-1]пирролом.
Одним воплощением настоящего изобретения являются дополнительные соединения формулы I, где R представляет собой тритий, например следующее соединение 3Н-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-11]пиррол.
Одним воплощением настоящего изобретения являются дополнительные соединения формулы I, где F представляет собой 18фтор, например [1^]-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ъ;3',4'-1]пиррол.
Положение для R в формуле I, если R представляет собой тритий, наиболее предпочтительно является единственным. Однако тритий также может быть найден в небольших количествах в других положениях молекулы. Обычно только один R представляет собой тритий.
Соединения формул I могут применяться для связывания и визуализации агрегатов белка tau, агрегатов бета-амилоида, агрегатов альфа-синуклеина или агрегатов хантингтина. Предпочтительным применением соединений формулы I является применение для связывания и визуализации агрегатов белка tau у пациентов с болезнью Альцгеймера.
Более того, соединения формулы I могут применяться в исследованиях связывания с белком tau.
Соединения формулы I являются подходящими для диагностической визуализации агрегатов белка tau в мозге млекопитающего.
Настоящее изобретение также применяют для диагностической визуализации отложений агрегатов белка tau в головном мозге млекопитающих.
Соединения формулы I по настоящему изобретению
и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены способом, описанным ниже, которые содержат:
а) связывание соединения формулы 2 (X = CI, Вг)
с подходящими бороновыми кислотами или эфирами бороновых кислот формулы 3
где R' представляет собой водород или низший алкил, с получением соединений формулы I
где R представляет собой водород, и, если необходимо, превращение полученного соединения в фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли или в соединения формулы I, где R представляет собой тритий; или
Ъ) связывание соединений формулы 4
с получением соединений формулы I
где заместитель R представляет собой водород и, если необходимо, превращение полученных соединений в фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли или в соединения формулы I, где R представляет собой тритий;
c) взаимодействие соединения формулы I
где R представляет собой водород с газообразным тритием в присутствии катализатора, например иридий, рутений, родий или палладий содержащего комплекса в подходящем растворителе, например дихлорметане, хлорбензоле, ДМФ, ДМСО или их смеси с получением соединения формулы I
где R представляет собой тритий, и, если необходимо, превращение полученных соединений в фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли; или d) растворение соединения формулы
в диметилсульфоксиде и обработка ультразвуком перед окончанием облучения водным раствором ионов [18] фтора с получением соединения формулы
и, если необходимо, превращение полученных соединений в фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли.
Следующие схемы 1, 2 описывают способы получения соединений формулы I более подробно. Исходными веществами являются известные соединения или те, которые могут быть получены известными способами.
Получение соединений формулы I по настоящему изобретению может проводиться последовательным или конвергентным синтезом. Навыки, необходимые для проведения реакций и очистки полученных продуктов, известны специалистам в данной области. Заместители и индексы, используемые в следующем описании методик, имеют значения, указанные здесь ранее, если не указано иного.
Более конкретно, соединения формулы I могут быть получены способами, приведенными ниже, способами, приведенными в примерах, или аналогичными способами. Подходящие условия реакции для отдельных стадий реакции известны специалисту в данной области. Последовательность реакций не ограничивается той, которая изображена на схемах 1, 2, однако в зависимости от исходных материалов и их реакционной способности последовательности стадий реакции могут быть свободно изменены. Исходные вещества являются либо коммерчески доступными, либо могут быть получены способами, аналогичными способам, приведенным ниже, способами, описанными в ссылках, приведенных в описании или в примерах, или способами, известными в данной области техники.
Схема 1
Br) и 2,6-дигалогенированных пиридинбороновых кислот 6 (R' = Н, низший алкил). Среда кросс-сочетания, катализируемого катализаторами на основе переходных металлов с использованием катализа-торных систем, таких как Pd(OAc)2 и PPh3, и основания, такого как, например, триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как ДМФ, дает бипиридины 7. Депротекция и внутримолекулярная циклизация могут быть проведены как одностадийная процедура с использованием основания, такого как, например, карбонат калия, и активатора, такого как, например, 18-crown-6 в подходящем растворителе, таком как ДМФ, и дают 1,6-диазакарбазоловое промежуточное соединение 2. Заключительная трансформация в соединения формулы I может быть выполнена прямой реакцией кросс-сочетания, катализируемой переходными металлами, с использованием подходящих пиридинбороновых кислот 3, катализатора, такого как, например, Pd(dppf)Cl2, и основания, такого как, например, карбонат калия в подходящем растворителе, таком как ДМФ. Альтернативно, 1,6-диазакарбазол 2 сначала конвертируют в защищенные промежуточные соединения 8 через взаимодействие с подходящим реагентом, таким как ди-трет-бутилдикарбонат, в подходящем растворителе, таком как, например, ДМФ, с последующей реакцией кросс-сочетания, катализируемой переходными металлами до промежуточных соединений 9 с использованием подходящих пиридинбороновых кислот 3, катализатора, такого как, например, Pd(dppf)Cl2 и основания, такого как, например, карбонат калия, в растворителе, таком как ДМФ. Последующая депро-текция приводит к соединениям формулы I.
Схема 2
В соответствии со схемой 2 соединение формулы I, где R представляет собой водород, может быть получено посредством обработки соединения формулы 4 (X = Br, Cl, нитро); полученного в соответствии с синтезом соединений формулы I, описанном на схеме 1, подходящим фторирующим реагентом, таким как, например, фторид калия или фторид тетрабутиламмония, в подходящем растворителе, таком как, например, ДМФ или ДМСО.
Соединения формулы I, у которых R представляет собой тритий или F представляет собой 18F
могут быть получены обычными способами, как описано в конкретных примерах. Соединения формулы I не содержат одновременно тритий и 18F. Выделение и очистка соединений.
Выделение и очистка соединений и промежуточных соединений, описанных здесь, может быть осуществлена, если необходимо, с помощью любых подходящих способов разделения или очистки, таких как, например, фильтрация, экстракция, кристаллизация, колоночная хроматография, тонкослойная хроматография, хроматография в толстом слое, препаративная жидкостная хроматография низкого или высокого давления или комбинации этих способов. Конкретные иллюстрации подходящих методик разделения и выделения могут быть найдены по ссылке на способы и примеры, изложенные ниже. Тем не менее, другие эквивалентные процедуры разделения или выделения, конечно, также могут быть использованы. Рацемические смеси хиральных соединений формулы I могут быть разделены с использованием хиральной ВЭЖХ.
Соли соединений формулы I.
Соединения формулы I являются основными и могут быть превращены в соответствующие кислотно-аддитивные соли. Превращение осуществляют путем обработки, по меньшей мере, стехиометриче-ским количеством соответствующей кислоты, такой как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органической кислоты, такой как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоно-вая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и т.п. Как правило, свободное основание растворяют в инертном органическом растворителе, таком как диэтило-вый эфир, этилацетат, хлороформ, этанол или метанол и т.п., и добавляют кислоту в аналогичном растворителе. Температуру поддерживают в пределах от 0 до 50°C. Полученная соль выпадает в осадок самопроизвольно или может быть преципитирована с помощью добавления менее полярного растворителя.
Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы I могут быть превращены в соответст
вующие свободные основания обработкой, по меньшей мере, стехиометрическим эквивалентом подходящего основания, такого как гидроксид натрия или калия, карбонат калия, бикарбонат натрия, аммиак и
т.д.
Соединения были исследованы в соответствии с тестом, приведенным далее. In vitro анализ замещения радиолиганда TAU.
Данный анализ связывания in vitro оценивает аффинность соединений по отношению к нативным агрегатам tau. Соединения инкубируются совместно с хорошо исследованным специфическим к tau ра-диолигандом [3Н]Т808, а эффективность замещения соединениями связывания [3Н]Т808 определяется с помощью авторадиографии in vitro с использованием срезов мозга человека с болезнью Альцгеймера (БА) (см. фиг. В).
Материалы.
Срезы мозга человека с БА получали из Института Banner Sun Health Research Institute (Sun City, AZ, USA). Диагноз патологии БА ставился в соответствии со стандартным критерием NIA-Reagan Institute на основе нейропатологических данных. Радиолиганд [3Н]Т808 синтезировали самостоятельно ([3Н]-2-[4-(2-фторэтил)пиперидин-1-ил]диметил[4,5]имидазо[1,2-а]пиримидин, радиохимическая чистота 99.0%). В качестве референса использовали холодный Т808 (2-[4-(2-фторэтил)пиперидин-1-ил]диметил[4,5]имидазо[1,2-а]пиримидин). Для авторадиографии пластины для визуализации FujiFilm Imaging Plates (BAS-IP TR 2025) выдерживали со срезами и сканировали на ридере FujiFilm IP (BAS-
5000).
Способ.
Десять срезов человеческого мозга с БА микрометровой толщины получали на криостате (Leica CM3050) при -17°С в камере и -15°С температуре объекта. Срезы переносили на предметные стекла His-tobond+ (Marienfeld Laboratory Glasware). После сушки в течение 3 ч при комнатной температуре срезы хранили при -20°С. Срезы инкубировались с радиолигандом (10 нМ) и соответствующим холодным соединением (с различными концентрациями) в 50 мМ Трис буфере, рН 7.4 при комнатной температуре в течение 30 мин. После промывки 3x10 мин при 4°С в 50 мМ Трис буфере, рН 7.4 и 3 быстрых погружений в дистиллированную воду при 4°С срезы высушивали при 4°С в течение 3 ч. Срезы помещали в кассеты FujiFilm Cassette (BAS 2025), выдерживали с пластинами для визуализации в течение пяти дней и после этого сканировали с разрешением 25 мкМ на пиксель.
Анализ данных.
Интенсивность сигнала (плотность - фотостимулированная люминесценция/мм2) в интересующем участке (ROI) авторадиограммы подсчитывалась с помощью программного анализа MCID (версия 7.0, Imaging Research Шс^Специфичность связывания (SB) соединения [3Н]Т808 в отсутствие или в присутствии соединения подсчитывалась посредством вычитания сигнала неспецифического связывания в неокрашенном веществе, таким образом давая SB[3H]T808 только и SB соединения. % замещения различными соединениями подсчитывался следующим образом:
% замещения = 100-(SB соединения/SB[3Н]Т808 только)х10°-
Валидация данных.
В каждом эксперименте использовали холодный Т808 в качестве положительного внутреннего контроля. Совместная инкубация эквимолярных количеств горячего и холодного Т808, как ожидается, снижает специфическое связывание приблизительно на 50%.
Ссылки.
А.К. Szardenings et al., Imaging agents for detecting neurological disorders, US Patent Application US20110182812.
W. Zhang et al., A highly selective and specific PET tracer for imaging of tau pathologies, Journal of Alzheimer's Disease, 31 (2012), 601-612.
Фигура А. Авторадиограмма 3Н-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3,,4'-ё]пиррола, инкубированного со срезом коры мозга человека, полученного от пациента с болезнью Альцгеймера на V стадии по Брааку.
Концентрация радиолиганда составляла 3.2 нМ. Радиолиганд показал точечную окраску агрегатов tau в паттернах послойного распределения.
Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в виде фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты могут вводиться в виде инъекционных растворов.
Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли могут быть обработаны с фармацевтически инертными, неорганическими или органическими носителями для получения фармацевтических препаратов. Подходящими носителями для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза и т.д. Адъюванты, такие как спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.д., могут быть использованы для водных инъекционных растворов водорастворимых солей соединений формулы I, но, как правило, не являются необходимыми. Подходящими носителями для суппозиториев являются, например, природные или гидрогенизированные масла, воски, жиры, полутвердые или жидкие полиолы и т.д.
Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для изменения осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Они также могут содержать и другие терапевтически ценные вещества.
Дозировка может варьироваться в широких пределах и будет, конечно, адаптирована к индивидуальным требованиям в каждом конкретном случае.
Экспериментальный раздел.
Пример 1. 2-(6-Фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-с1]пиррол
Стадия 1. трет-Бутил ^[3-(2,6-дихлор-3-пиридил)-4-пиридил]карбамат.
Предварительно нагретую колбу откачали, снова заполнили аргоном несколько раз и заполнили трет-бутил 3-йодопиридин-4-илкарбаматом (4.56 г, 14.2 ммоль), 2,6-дихлорпиридин-3-илбороновой кислотой (5.46 г, 28.4 ммоль), Pd(OAc)2 (320 мг, 1.42 ммоль) и трифенилфосфином (371 мг, 1.41 ммоль) в атмосфере аргона. Триэтиламин (4.32 г, 5.94 мл, 42.7 ммоль) в ДМФ (137 мл) добавили, реакционную смесь нагрели до 100°C и перемешивали в течение 3 ч.
Растворитель эвапорировали практически полностью. Добавили воду и неочищенную продуктовую суспензию экстрагировали этилацетатом дважды. Объединенный органический слой промыли водой (3х), высушили над Na2SO4, отфильтровали и растворитель эвапорировали. Тритурирование неочищенного продукта дихлорметаном дало 1.92 г требуемого продукта. Дихлорметановую фазу эвапорировали и очистили с помощью флеш-хроматографии (с использованием силикагеля и градиента этилаце-тат/гептан) с получением в общем 3.39 г (~90% чистота, 63% выход) трет-бутил ^[3-(2,6-дихлор-3-пиридил)-4-пиридил]карбамата в виде светло-желтого осадка.
MS: m/z =340.1 (М+Н)+.
Стадия 2. 2-Хлор-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол.
Суспензию трет-бутил ^[3-(2,6-дихлор-3-пиридил)-4-пиридил]карбамата (264 мг, 776 мкмоль), карбоната калия (215 мг, 1.55 ммоль) и 18-crown-6 (226 мг, 854 мкмоль) в ДМФ (15.8 мл) нагрели до 100°С и перемешивали в течение 3 ч в атмосфере аргона. Добавили воду и неочищенную продуктовую суспензию экстрагировали этилацетатом дважды. Объединенный органический слой промыли водой (дважды), солевым раствором, высушили над Na2SO4, отфильтровали и растворитель эвапорировали. Тритурирование неочищенного продукта небольшим количеством метанола дало 2-хлор-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол (105 мг, 63% выход) в виде светло-желтого осадка.
MS: m/z = 204.3 (М+Н)+.
Стадия 3. 2-Xлордипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир.
Суспензию гидрида натрия (26.5 мг, 607 мкмоль) в безводном ДМФ (1.5 мл) охладили до 0°С и в атмосфере аргона добавили раствор 2-хлор-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррола (103 мг, 506 мкмоль) в безводном ДМФ (3.0 мл). Перемешивание продолжили при 0°С в течение 10 мин и при КТ в течение 30 мин. После охлаждения до 0°С и добавления ди-трет-бутилдикарбоната (132 мг, 141 мкл) в безводном ДМФ (0.75 мл) перемешивание продолжили при КТ в течение ночи. Добавили воду и реакционную смесь экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенный органический слой промыли водой (дважды) и солевым раствором, высушили над Na2SO4, отфильтровали и эвапорировали. 2-Хлордипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир получили после очистки с помощью флеш-хроматографии (с использованием силикагеля и градиента метанол/дихлорметан) в виде серо-белого осадка (113 мг, 73.5%).
MS: m/z = 304.1 (М+Н)+.
Стадия 4. 2-(6-Фторпиридин-3-ил)дипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир.
Пробирку для микроволновой печи заполнили в атмосфере аргона 2-хлордипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутиловым эфиром (100 мг, 329 мкмоль), 2-фтор-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридином (147 мг, 658 мкмоль), карбонатом калия (137 мг, 988 мкмоль) и 1,1 '-бис-(дифенилфосфино)ферроцен-палладий(П)дихлорид дихлорметановым комплексом (10.8 мг, 13.2 мкмоль), пробирку закрыли, откачали и снова наполнили аргоном. Добавили ДМФ (7 мл), реакционную смесь нагрели до 90°С и перемешивали в течение 17 ч. Реакционную смесь отфильтровали. К фильтрату добавили воду и реакционную смесь экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенный органический слой промыли водой (3х), высушили над Na2SO4, отфильтровали и эвапорировали. Триту-рирование неочищенной продуктовой смеси небольшим количеством метанола дало 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол (m/z = 265.1 (М+Н)+) в виде светло-красного осадка (23 мг с 80% чистотой, 21%). Жидкость эвапорировали и очистили с помощью флеш-хроматографии (с использованием силикагеля и градиента метанол/дихлорметан) с получением 2-(6-фторпиридин-3-ил)дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира в виде серо-белого осадка (12 мг, 10%).
MS: m/z = 365.2 (М+Н)+.
Стадия 5. 2-(6-Фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол.
Светло-желтый раствор 2-(6-фторпиридин-3-ил)дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира (22 мг, 60.4 мкмоль) и трифторуксусной кислоты (33.3 мкл, 432 мкмоль) в ди-хлорметане (0.5 мл) перемешивали при КТ в течение ночи. После охлаждения до 0°С добавили триэти-ламин (70 мкл, 503 мкмоль) и все летучие компоненты удалили. Неочищенное вещество очистили с помощью препаративной ВЭЖХ (с использованием колонки Gemini C18 и воды с 0.1% триэтила-мин/ацетонитрил градиентом) с получением 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррола в виде серо-белого осадка (14 мг, 88%).
MS: m/z = 265.1 (М+Н)+.
Пример 2. 3Н-2-(6-Фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-с1]пиррол
В 2-мл колбе для тритирования 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол (2.0 мг, 7.6 мкмоль; пример 1) и катализатор Крэбтри (9.14 мг, 11.4 мкмоль) растворили в дихлорметане (0.8 мл) и ДМФ (0.2 мл). Колбу присоединили к трубопроводу для трития (RC-TRITEC) и дегазировали с помощью заморозки-прокачки-оттаивания. Ввели газообразный тритий и светло-оранжевый раствор энергично перемешивали в течение 4 ч в атмосфере трития при давлении 450 мбар. Раствор охладили с помощью жидкого азота и избыток тритиевого газа в реакционном сосуде снова абсорбировали на урановой ловушке для неиспользованного трития. Растворитель удалили лиофилизированием и нестабильный тритий удалили лиофилизацией со смесью 9:1 этанола и воды (3х1 мл) и толуола (2х1 мл). Оставшееся коричневатое масло растворили в этаноле (1.5 мл) и поместили на катионный обменник SCX-2. Оставшийся катализатор элюировали МеОН (10 мл) и отбросили, продукт элюировали с помощью NH3 в МеОН (3.5н.,
10 мл), собрали отдельно и сконцентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очистили с помощью препаративной ВЭЖХ (XBridge Prep, 5 мкм, 10x250 мм) с использованием ацетонит-рила, воды и буфера рН 7 в качестве элюента. Получили 37 МБк (1 мКи) соединения, указанного в заголовке, с радиохимической чистотой 99% и специфической активностью 936 ГБк/ммоль (25.3 Ки/ммоль), по данным МС спектроскопии. Соединение хранили в виде раствор рН 7 буфер/ДМСО.
MS: m/z = 265.1 [М+Н]+, 267.1 [M(3H1)+H]+, 269.1 [М(3Н2)+Н]+.
а) 2-(6-Нитропиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-(1]пиррол
Пример 3. [18Р]-2-(6-Фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-(1]пиррол
В 50-мл колбе (откаченной и заполненной аргоном) объединили 2-хлордипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррол-9-карбоновой кислоты трет-бутиловый эфир (285 мг, 938 мкмоль), 2-нитропиридин-5-бороновой кислоты пинаколовый эфир (469 мг, 1.88 ммоль), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен-палладий(П)дихлорид дихлорметановый комплекс (34.5 мг, 42.2 мкмоль) и K2CO3 (389 мг, 2.81 ммоль). Добавили ДМФ (24 мл) и колбу закрыли, эвапорировали и продули Ar. Реакционную смесь нагрели до 90°С и перемешивали в течение 18 ч. Фильтрация через целит и затем через небольшой слой силикагеля (нейтральный, 60А, 32-63 меш) сопровождалась последующей промывкой достаточным количеством ДМФ и эвапорацией досуха. Коричневый осадок растворили в ДМФ (20 мл) и добавили ДМСО до получения практически прозрачного раствора. После фильтрации растворители эвапорировали практически досуха. Очистка посредством препаративной ВЭЖХ дала соединение, указанное в заголовке (37 мг, 13%), в виде желтого осадка.
MS m/z: 292.2 [М+Н]+.
b) [18Р]-2-(6-Фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-(1]пиррол
Предшественник (0.7+0.3 мг) растворили в 400 мкл диметилсульфоксида и подвергли облучению ультразвуком перед окончанием облучения (ЕОВ). При ЕОВ водный раствор ионов [18Б]фтора, полученный бомбардировкой протонами воды, обогащенной [18O], улавливали на ионообменной колонке. Ионообменную колонку элюировали 150 мкл стокового раствора Krytpofix 2.2.2/карбонат калия (48 мг Krypto-fix 2.2.2 и 10 мг карбоната калия, растворенного в 600 мкл 1:1 ацетонитрил:вода) в реакционную пробирку с последующими 250 мкл ацетонитрила. Фтористый раствор эвапорировали досуха при 110°С под потоком азота и дополнительно высушили азеотропно посредством двух добавлений ацетонитрила (250 мкл каждое). Реакционную пробирку дистанционно перенесли в микроволновый резонатор (Resonance Instruments) и охладили сжатым воздухом в течение 2 мин. Добавили предшественник и затем облучали микроволновым излучением при 50 Вт в течение 240 с, после чего раствор погасили 1 мл воды.
Реакционный раствор разбавили 3 мл триэтиламинового (TEA) буфера (рН 7.2), затем ввели в колонку для полупрепаративной ВЭЖХ (XBridge C18, 10 мкм, 10x150 мм) с элюцией 15:85 метанол:буфер TEA (рН 7.2) при 15 мл/мин.
Сток ВЭЖХ контролировали при 254 нм и с помощью радиоактивного детектора на линии. Наблюдали полупрепаративную хроматограмму, пик [18Р]-продукта собрали в 50 мл воды и реформулировали с помощью модуля SPE. Раствор продукта элюировали через картридж Waters C-18 SepPak Plus, промыли 10 мл воды Milli-Q, затем элюировали 1 мл абсолютного этанола с последующими 10 мл нормального физраствора в пробирку для конечного продукта через 0.22 мкм стерилизующий фильтр Millipore FG.
Аликвоты удалили из конечной бутыли для анализа контроля качества. Провели аналитическую ВЭЖХ (XBridge C18, 3.5 мкм, 4.6x100 мм) с элюцией 40:60 метанол:буфер TEA (рН 7.2) при 2 мл/мин с контролем при 350 нм для определения радиохимической и химической чистоты, специфической активности и химической идентичности.
57-минутный радиосинтез [18F]-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-d]пиррола дал среднее конечного продукта 330.5 мКи, 26.1% (n=2) выход без коррекции распада. Конечный продукт обладал средней специфической радиоактивностью 24,684 мКи/мкмоль и радиохимической чистотой 99%.
где R представляет собой водород или тритий; F представляет собой фтор или 18фтор,
или его фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль.
2. Соединения, которые представляют собой 2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'-
d]пиррол; 3Н-2-(6-фторпиридин-3-ил)-9Н-дипиридо[2,3-Ь;3,,4,-d]пиррол и [1^]-2-(6-фторпиридин-3-ил)-
9Н-дипиридо[2,3-Ь;3',4'^]пиррол.
3. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 для связывания и визуализации агрегатов белка tau, агрегатов бета-амилоида или агрегатов альфа-синуклеина.
4. Применение соединения по любому из пп. 1 или 2 для связывания и визуализации агрегатов белка tau у пациентов с болезнью Альцгеймера.
5. Применение соединения по любому из пп.1 или 2 в исследованиях, включающих связывание белка tau.
6. Фармацевтическая композиция для связывания и визуализации агрегатов белка tau, содержащая эффективное количество соединения формулы I по любому из пп.1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.
7. Способ визуализации отложений агрегатов белка tau, включающий
введение млекопитающему детектируемого количества композиции по п.6;
выдержку в течение времени, достаточного для связывания соединения формулы I с отложениями агрегатов белка tau;
детекцию соединения, связанного с одним или более отложениями агрегатов белка tau.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
8. Применение соединения по любому из пп. 1 или 2 для диагностической визуализации отложений
агрегатов белка tau в мозге млекопитающих.
028483
- 1 -
(19)
028483
- 1 -
(19)
028483
- 1 -
(19)
028483
- 4 -
(19)