EA 028457B1 20171130 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/028457 Полный текст описания [**] EA201490535 20121012 Регистрационный номер и дата заявки US61/547,198 20111014 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EP2012/070233 Номер международной заявки (PCT) WO2013/053873 20130418 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа [PDF] eab21711 Номер бюллетеня [**] ПИРРОЛОБЕНЗОДИАЗЕПИНЫ Название документа [8] C07D487/04, [8] C07D519/00, [8] A61K 31/5517, [8] A61P 35/00 Индексы МПК [GB] Ховард Филип Уилсон, [GB] Тибергьен Арно, [US] Джеффри Скотт, [US] Бёрк Патрик Сведения об авторах [GB] МЕДИМЬЮН ЛИМИТЕД, [US] СИЭТЛ ДЖЕНЕТИКС, ИНК. Сведения о патентообладателях [GB] МЕДИМЬЮН ЛИМИТЕД, [US] СИЭТЛ ДЖЕНЕТИКС, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000028457b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы I где R 2 имеет формулу II где X представляет собой NHR N , где R N выбран из группы, состоящей из Н и C 1-4 алкила; R C1 , R C2 и R C3 независимо выбраны из Н и метила; R 12 выбран из группы, состоящей из (ia) фенильной или С 5-7 гетероарильной группы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из метилтиофенила, галогена, нитро, циано, C 1-7 алкокси, С 1-7 алкила, С 3-7 гетероциклила, содержащего от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, и необязательно замещенного одной или более C 1-4 алкильными группами, и бис-окси-С 1-3 алкилена; (ib) C 1-5 алифатического алкила; (ic) C 3-6 насыщенного циклоалкила; (id) , где каждый из R 21 , R 22 и R 23 независимо выбран из Н, C 1-3 алкила, С 2-3 алкенила, С 2-3 алкинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в группе R 12 составляет не более 5; (ie) , где один из R 25a и R 25b представляет собой Н и другой выбран из: фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; (if) , где R 24 выбран из Н; C 1-3 алкила; С 2-3 алкенила; С 2-3 алкинила; циклопропила; фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; и каждый R 7 и R 7' представляет собой C 1-4 алкилоксигруппу; и R" представляет собой С 3-7 алкиленовую группу.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R C1 , R C2 и R C3 все представляют собой Н.

3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что X представляет собой NH 2 .

4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R 12 представляет собой фенил.

5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что R 12 содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила и морфолино.

6. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R 12 выбран из (i) метила, этила или пропила; (ii) циклопропила; (iii) группы формулы , где общее количество атомов углерода в группе R 12 составляет не более 4; (iv) группы формулы , и (v) группы формулы , где R 24 выбран из Н, метила, этила, этенила и этинила.

7. Соединение формулы IIA где R 2 , R 7 , R", R 12 , R 7' такие, как определены для соединения формулы I в любом из пп.1-6; и (a) R 10 представляет собой 2,2,2-трихлороэтилкарбонат, и R 11 представляет собой О-третбутилдиметилсилиловый эфир; или (b) R 10 представляет собой [2-(триметилсилил)этокси]метилацеталь, и R 11 представляет собой оксогруппу; и R 10' и R 11' такие же, как R 10 и R 11 .

8. Конъюгат, имеющий формулу III где L представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, обладающего направленным действием на определенные опухолеассоциированные антигены, включая Cripto, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, гликопротеин NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD70, CD79, CD138, PSCA, ПСМА (простатспецифический мембранный антиген) (PSMA), ВСМА, Е-селектин, EphB2, меланотрансферин, Muc16 и TMEFF2, LU представляет собой звено линкера формулы -А 1 -L 1 -, где L 1 представляет собой дипептид структуры -NH-X1-X2-CO-, где группа -Х1-Х2- выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-, и А 1 выбран из где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30; или где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30, где полученная из малеимида группа необязательно заменена на группу -С(=О)СН 2 -; р представляет собой от 1 до 20 и D представляет собой звено лекарственного соединения, представляющее собой соединение следующей формулы IA: где R 7 , R", R 12 и R 7' такие, как определено для соединения формулы I по любому из пп.1-6; R 2 имеет формулу IIB где R C1 , R C2 и R C3 независимо выбраны из Н и метила; X представляет собой , где R N выбран из Н и С 1-4 алкила, и звездочка указывает на место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия указывает на место присоединения к L 1 .

9. Конъюгат по п.8, отличающийся тем, что А 1 представляет собой где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6.

10. Конъюгат по любому из пп.8 или 9, отличающийся тем, что дипептид выбран из группы, состоящей из валин-аланина, валин-цитруллина и фенилаланин-лизина.

11. Применение конъюгата по любому из пп.8-10 для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания.

12. Линкер лекарственного соединения формулы V где G 1 выбран из где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой 0 или 1, m представляет собой от 0 до 30; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой 0 или 1, m представляет собой от 0 до 30; и где малеимидная группа может быть заменена группой -С(=О)СН 2 Х, где X представляет собой Cl, Br или I; L 1 представляет собой дипептид структуры -NH-X1-X2-CO-, где группа-Х1-Х2-выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-; и где D представляет собой звено лекарственного соединения, которое представляет собой соединение формулы IA где R 7 , R", R 12 и R 7' такие, как определено для соединения формулы I по любому из пп.1-6; R 2 имеет формулу IIB где R C1 , R C2 и R C3 независимо выбраны из Н и метила; X представляет собой , где R N выбран из группы, состоящей из Н и C 1-4 алкила, звездочка указывает на место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия указывает на место присоединения к L 1 .


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы I где R 2 имеет формулу II где X представляет собой NHR N , где R N выбран из группы, состоящей из Н и C 1-4 алкила; R C1 , R C2 и R C3 независимо выбраны из Н и метила; R 12 выбран из группы, состоящей из (ia) фенильной или С 5-7 гетероарильной группы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из метилтиофенила, галогена, нитро, циано, C 1-7 алкокси, С 1-7 алкила, С 3-7 гетероциклила, содержащего от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, и необязательно замещенного одной или более C 1-4 алкильными группами, и бис-окси-С 1-3 алкилена; (ib) C 1-5 алифатического алкила; (ic) C 3-6 насыщенного циклоалкила; (id) , где каждый из R 21 , R 22 и R 23 независимо выбран из Н, C 1-3 алкила, С 2-3 алкенила, С 2-3 алкинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в группе R 12 составляет не более 5; (ie) , где один из R 25a и R 25b представляет собой Н и другой выбран из: фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; (if) , где R 24 выбран из Н; C 1-3 алкила; С 2-3 алкенила; С 2-3 алкинила; циклопропила; фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; и каждый R 7 и R 7' представляет собой C 1-4 алкилоксигруппу; и R" представляет собой С 3-7 алкиленовую группу.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R C1 , R C2 и R C3 все представляют собой Н.

3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что X представляет собой NH 2 .

4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R 12 представляет собой фенил.

5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что R 12 содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила и морфолино.

6. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R 12 выбран из (i) метила, этила или пропила; (ii) циклопропила; (iii) группы формулы , где общее количество атомов углерода в группе R 12 составляет не более 4; (iv) группы формулы , и (v) группы формулы , где R 24 выбран из Н, метила, этила, этенила и этинила.

7. Соединение формулы IIA где R 2 , R 7 , R", R 12 , R 7' такие, как определены для соединения формулы I в любом из пп.1-6; и (a) R 10 представляет собой 2,2,2-трихлороэтилкарбонат, и R 11 представляет собой О-третбутилдиметилсилиловый эфир; или (b) R 10 представляет собой [2-(триметилсилил)этокси]метилацеталь, и R 11 представляет собой оксогруппу; и R 10' и R 11' такие же, как R 10 и R 11 .

8. Конъюгат, имеющий формулу III где L представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, обладающего направленным действием на определенные опухолеассоциированные антигены, включая Cripto, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, гликопротеин NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD70, CD79, CD138, PSCA, ПСМА (простатспецифический мембранный антиген) (PSMA), ВСМА, Е-селектин, EphB2, меланотрансферин, Muc16 и TMEFF2, LU представляет собой звено линкера формулы -А 1 -L 1 -, где L 1 представляет собой дипептид структуры -NH-X1-X2-CO-, где группа -Х1-Х2- выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-, и А 1 выбран из где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30; или где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30, где полученная из малеимида группа необязательно заменена на группу -С(=О)СН 2 -; р представляет собой от 1 до 20 и D представляет собой звено лекарственного соединения, представляющее собой соединение следующей формулы IA: где R 7 , R", R 12 и R 7' такие, как определено для соединения формулы I по любому из пп.1-6; R 2 имеет формулу IIB где R C1 , R C2 и R C3 независимо выбраны из Н и метила; X представляет собой , где R N выбран из Н и С 1-4 алкила, и звездочка указывает на место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия указывает на место присоединения к L 1 .

9. Конъюгат по п.8, отличающийся тем, что А 1 представляет собой где звездочка указывает на место присоединения к L 1 , волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6.

10. Конъюгат по любому из пп.8 или 9, отличающийся тем, что дипептид выбран из группы, состоящей из валин-аланина, валин-цитруллина и фенилаланин-лизина.

11. Применение конъюгата по любому из пп.8-10 для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания.

12. Линкер лекарственного соединения формулы V где G 1 выбран из где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой от 0 до 6; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой 0 или 1, m представляет собой от 0 до 30; где звездочка указывает на место присоединения к L 1 и n представляет собой 0 или 1, m представляет собой от 0 до 30; и где малеимидная группа может быть заменена группой -С(=О)СН 2 Х, где X представляет собой Cl, Br или I; L 1 представляет собой дипептид структуры -NH-X1-X2-CO-, где группа-Х1-Х2-выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-; и где D представляет собой звено лекарственного соединения, которое представляет собой соединение формулы IA где R 7 , R", R 12 и R 7' такие, как определено для соединения формулы I по любому из пп.1-6; R 2 имеет формулу IIB где R C1 , R C2 и R C3 независимо выбраны из Н и метила; X представляет собой , где R N выбран из группы, состоящей из Н и C 1-4 алкила, звездочка указывает на место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия указывает на место присоединения к L 1 .


Евразийское <") 028457 <13) В1
патентное
ведомство
<12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
<45) Дата публикации и выдачи патента
2017.11.30 <21) Номер заявки
201490535 <22) Дата подачи заявки
2012.10.12
<51) Int. Cl. C07D 487/04 (2006.01) C07D 519/00 (2006.01) A61K31/5517 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)
<54) ПИРРОЛОБЕНЗОДИАЗЕПИНЫ
<31) 61/547,198 <32) 2011.10.14 <33) US
<43) 2014.09.30
<8б) PCT/EP2012/070233
<87) WO 2013/053873 2013.04.18
<71) <73) Заявитель и патентовладелец:
МЕДИМЬЮН ЛИМИТЕД (GB);
СИЭТЛ ДЖЕНЕТИКС, ИНК. (US)
<72) Изобретатель:
Ховард Филип Уилсон, Тибергьен Арно (GB), Джеффри Скотт, Бёрк Патрик (US)
<74) Представитель:
Нилова М.И. (RU)
<56) WO-A1-2010043880
где X представляет собой NHRN, где RN; RC1, RC2 и RC3 такие, как определено в описании; R12 выбран из группы, состоящей из (ia) фенильной или С5-7 гетероарильной группы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из метилтиофенила, галогена, нитро, циано, C1-7 алкокси, С1-7 алкила, С3-7 гетероциклила, содержащего от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, и необязательно замещенного одной или более C1-4 алкильными группами, и бис-окси-
R22
где
Сьз алкилена; (ib) Ci_5 алифатического алкила; (ic) С3.6 насыщенного циклоалкила; (id) r21
R21, R22 и R23 такие, как определено в описании; (ie) R25a, где R25a и R25b такие, как определено в
описании; и (if) r24 , где R24, R7, R7 и R" такие, как определено в описании.
Настоящее изобретение относится к пирролобензодиазепинам (PBD), в частности к димерам пирро-лобензодиазепина, содержащим одно мономерное звено, содержащее С2-С3 двойную связь и арильную группу в положении С2, и второе мономерное звено, содержащее С2-С3 двойную связь и замещенную пропиленовую группу в положении С2, и к их включению в конъюгаты направленного действия.
Уровень техники
Некоторые пирролобензодиазепины (PBD) способны распознавать и связываться со специфическими последовательностями ДНК; предпочтительной последовательностью является PuGPu. Первый противоопухолевый антибиотик на основе PBD, антрамицин, был открыт в 1965 г. (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc, 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc, 87, 5791-5793 (1965)). После этого сообщалось о ряде природных PBD, и были разработаны многочисленные способы синтеза их различных аналогов (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E., Chem. Rev. 2011, 111 (4), 2815-2864). Представители данного семейства включают эббимицин (abbeymycin) (Ho-chlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), чикамицин (chicamycin) (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (патент Японии 58-180487; Thurston, et al., Chem. Brit, 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tempahedron, 48, 751-758 (1992)), мазетрамицин (mazethramycin) (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), неотрамицины А и В (neothramycin) (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), по-ротрамицин (porothramycin) (Tsunakawa, et al.), J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), протракарцин (pro-thracarcin) (Shimizu, et al., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley и Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), сибаномицин (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), сибиромицин (sibiromycin) (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc, 110, 2992-2993 (1988)) и томамицин (tomamycin) (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). PBD имеют следующую общую структуру:
[ В
11 а У
О 3
Они различаются числом, типом и положением заместителей как в ароматических кольцах А, так и пиррольных кольцах С, а также степенью насыщения кольца С. В кольце В присутствуют имин (N=C), карбиноламин (NH-CH(OH)) или метиловый эфир карбиноламина (NH-CH(OMe)) в положении N10-C11, которое представляет собой электрофильный центр, ответственный за алкилирование ДНК. Все известные природные продукты имеют ^-конфигурацию хирального центра С11а, что обеспечивает правозак-рученную форму, если смотреть от кольца С в направлении кольца А. Такая форма придает им подходящую трехмерную конфигурацию для изоспиральности с малой бороздкой В-формы ДНК, что приводит к плотному соединению в месте связывания (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley и Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Их способность образовывать аддукты в малой бороздке позволяет указанным соединениям влиять на процессинг ДНК, а следовательно, и применять их в качестве противоопухолевых агентов.
Ранее было обнаружено, что биологическую активность указанных молекул можно усиливать путем объединения двух звеньев PBD посредством их С8/С'-гидроксильных функциональных групп через гибкий алкиленовый линкер (Bose, D.S., et al., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D.E., et al., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)). Полагают, что димеры PBD вызывают селективные повреждения последовательностей ДНК, такие как поперечные сшивки палиндромных участков 5'-Pu-GATC-Py-3' цепей ДНК (Smellie, M., et al., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, С, et al., Biochemistry, 44, 41354147), что считается основной причиной, определяющей их биологическую активность. Одним из примеров димера PBD, SG2000 (SJG-136)
недавно вошел в фазу II клинических испытаний в области онкологии (Gregson, S., et al., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C., et al., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley, J.A., et al., Cancer
Research, 64, 6693-6699 (2004)).
Совсем недавно авторы настоящего изобретения обнаружили в WO 2005/085251 димерные соединения PBD, содержащие С2 арильные заместители, такие как SG2202 (ZC-207)
Было показано, что указанные соединения являются очень подходящими цитотоксическими агентами (Howard, P.W., et al., Bioorg. Med. Chem. (2009), 19 (22), 6463-6466, doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.012).
Благодаря особенности действия указанных высокоактивных соединений при поперечной сшивке ДНК указанные молекулы были получены в симметричной форме. Это обеспечивалось прямым синтезом за счет либо получения фрагментов PBD, уже содержащих линкерную группу димера, либо путем взаимодействия синтезированных фрагментов PBD с линкерной группой димера.
В WO 2010/043880 описаны несимметричные димерные соединения PBD, содержащие арильные группы в положении С2 каждого мономера, где одна из трех указанных арильных групп содержит заместитель, способный обеспечить якорь для связывания указанного соединения и другого фрагмента. В находящейся одновременно на рассмотрении международной заявке PCT/US 2011/032664, поданной 15 апреля 2011 г, опубликованной как WO 2011/130613, описано включение указанных соединений димера PBD в конъюгаты направленного действия. В находящейся одновременно на рассмотрении международной заявке PCT/US 2011/032668, поданной 15 апреля 2011 г, опубликованной как WO 2011/130616, описано несимметричное димерное соединение PBD, содержащее арильную группу в положении С2 одного из мономеров, содержащих заместитель, способный обеспечить якорь для связывания указанного соединения и другого фрагмента, и другой мономер, содержащий неароматическую группу в положении С2. Также описано включение указанных соединений к конъюгаты направленного действия.
Описание изобретения
Авторы настоящего изобретения разработали дополнительные несимметричные димерные соединения PBD для включения в конъюгаты направленного действия, устраняющие потребность в арильной группе, содержащей якорь. Указанная группа С2, содержащая заместитель, способный обеспечить якорь для связывания указанного соединения и другого фрагмента, в настоящем изобретении представляет собой пропиленовую группу. Указанные соединения можно легко синтезировать, и они обладают преимуществами при применении, в частности, в биологических свойствах и при синтезе конъюгатов, а также биологических свойствах указанных конъюгатов.
Настоящее изобретение включает соединение, имеющее формулу I
о о
где R2 имеет формулу II
где X представляет собой NHRN, где RN выбран из группы, состоящей из Н, и C1-4 алкила; RC1, RC2 и RC3 независимо выбраны из Н и метила; R12 выбран из группы, состоящей из
(ia) фенильной или С5-7 гетероарильной группы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов в кольце, вы-
бранных из N, О и S, необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из груп-
пы, состоящей из метилтиофенила, галогена, нитро, циано, C1-7 алкокси, С1-7 алкила, С3-7 гетероциклила,
содержащего от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, и необязательно замещенного од-
ной или более ^^алкильными группами, и бис-окси-С1-3 алкилена;
(ib) C1-5 алифатического алкила;
(ic) С3_6 насыщенного циклоалкила;
(id) r21 , где каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, d_3 алкила, С2.3 алкенила, С2.3 ал
кинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в группе R12 составляет не более 5;
(ie) ^ "R"°, где один из R25a и R25b представляет собой Н и другой выбран из: фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; и
(if) r24, где R24 выбран из Н; d-з алкила; d-з алкенила; d-з алкинила; циклопропила; фенила,
где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; и каждый R7 и R7 представляет собой C1-4 алкилоксигруппу; и R" представляет собой С3-7 алкиле-новую группу.
Согласно второму аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения по первому аспекту изобретения для получения лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания. Согласно второму аспекту также предложено соединение по первому аспекту изобретения для применения для лечения пролиферативного заболевания.
Специалисты в данной области техники могут легко определить, подходит ли исследуемый кандидат конъюгата для лечения пролиферативного состояния для любого конкретного типа клеток. Например, исследования, которые можно без труда применять для определения активности, обеспечиваемой конкретным соединением, описаны ниже в примерах.
Согласно третьему аспекту изобретение включает соединение формулы ПА
где X представляет собой NHRN, где RN выбран из группы, состоящей из Н, и C1-4 алкила; R , R и R независимо выбраны из Н и метила; R12 выбран из группы, состоящей из
(ia) C5-10 фенильной или С5-7 гетероарильной группы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов в кольце,
выбранных из N, О и S, необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из
группы, состоящей из метилтиофенила, галогена, нитро, циано, C1-7 алкокси, C1-7 алкила, С3-7 гетероцик-
лила, содержащего от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, и необязательно замещенно-
го одной или более C1-4 алкильными группами, и бис-окси-С1-3 алкилена;
(ib) C1-5 алифатического алкила;
(ic) d_6 насыщенного циклоалкила;
(id) r21 , где каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, d-з алкила, d-з алкенила, d-з алкинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в R12 группе составляет не более 5;
(ie) "^"V58 ^ где один из R25a и R25b представляет собой Н и другой выбран из фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила; и
(if) r24 , где R24 выбран из Н; d-з алкила; d-з алкенила; d-з алкинила; циклопропила; фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофе-нила; и каждый R7 и R7 представляет собой C1-4 алкилоксигруппу; и R" представляет собой С3-7 алкиле-новую группу;
(a) R10 представляет собой 2,2,2-трихлороэтилкарбонат, и R11 представляет собой О-
третбутилдиметилсилиловый эфир; или
(b) R10 представляет собой [2-(триметилсилил)этокси]метилацеталь, и R11 представляет собой оксо-
группу; и R10 и R11 представляют собой такие же группы, как R10 и R11.
Согласно четвертому аспекту настоящее изобретение включает способ получения соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата из соединения формулы II или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата путем снятия защиты иминной связи.
Несимметричные димеры PBD согласно настоящему изобретению получают при помощи способов,
отличающихся от применявшихся ранее для получения симметричных димеров PBD. В частности, авторами настоящего изобретения разработан способ, заключающийся в добавлении каждого заместителя С2 в ядро симметричного димера PBD на разных стадиях способа. Соответственно, согласно пятому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения соединения по первому и третьему аспекту изобретения, включающий по меньшей мере одну стадию способа, описанную ниже.
Согласно шестому аспекту настоящее изобретение относится к конъюгатам, содержащим димеры PBD, связанные с нацеливающим агентом, где указанный димер PBD представляет собой димер PBD формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата (см. выше).
Согласно некоторым вариантам реализации конъюгаты имеют следующую формулу III:
L-(LU-D)P (III)
или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, где L представляет собой звено лиганда (т.е. нацеливающий агент), LU представляет собой звено линкера, a D представляет собой звено лекарственного соединения, представляющее собой димер PBD (см. ниже). Индекс р представляет собой целое число от 1 до 20. Соответственно, конъюгаты содержат звено лиганда, ковалентно связанное по меньшей мере с одним звеном лекарственного соединения при помощи звена линкера. Звено лиганда, более подробно описанное ниже, представляет собой нацеливающий агент, который связывается с фрагментом-мишенью. Звено лиганда может, например, специфично связываться с компонентом клетки (агент, связывающийся с клеткой) или с другими целевыми молекулами-мишенями. Соответственно, в настоящем изобретении также предложены способы лечения, например, различных типов рака и аутоиммунных заболеваний. Указанные способы включают применение конъюгатов, где звено лиганда представляет собой нацеливающий агент, который специфично связывается с молекулой-мишенью, звено лиганда может представлять собой, например, белок, полипептид или пептид, такой как антитело, антигенсвязывающий фрагмент антитела или другой связывающий агент, такой как гибридный белок Fc.
В конъюгатах согласно настоящему изобретению димер PBD D представляет собой димер формулы I или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, за исключением того, что X представляет со-
"*-N(RN)|- t-jN /- тт п
бои > , где к выбран из группы, состоящей из Н и С1.4 алкила, и где звездочка означает место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия или + означает место присоединения к звену линкера.
Содержание лекарственного соединения обозначается р, значение количества молекул лекарственного соединения на звено лиганда (например, антитела). Содержание лекарственного соединения может варьироваться от 1 до 20 звеньев лекарственного соединения (D) на звено лиганда (например, Ab или mAb). Для композиций р представляет собой среднее содержание лекарственного соединения в конъюга-тах в композиции, и р составляет от 1 до 20.
Согласно некоторым вариантам реализации р составляет от примерно 1 до примерно 8 звеньев лекарственного соединения на звено лиганда. Согласно некоторым вариантам реализации р представляет собой 1. Согласно некоторым вариантам реализации р представляет собой 2. Согласно некоторым вариантам реализации р составляет от примерно 2 до примерно 8 звеньев лекарственного соединения на звено лиганда. Согласно некоторым вариантам реализации р составляет от примерно 2 до примерно 6, от 2 до примерно 5 или от 2 до примерно 4 звеньев лекарственного соединения на звено лиганда. Согласно некоторым вариантам реализации р составляет примерно 2, примерно 4, примерно 6 или примерно 8 звеньев лекарственного соединения на звено лиганда.
Среднее количество звеньев лекарственного соединения на звено лиганда в препаратах после реакции конъюгации может быть охарактеризовано с помощью традиционных средств, например масс-спектроскопии, анализа ИФА и ВЭЖХ. Может быть также определено количественное распределение конъюгатов через р. В некоторых случаях отделение, очистку и характеризацию гомогенных конъюгатов, в которых р имеет конкретное значение, от конъюгатов с другим содержанием лекарственного соединения можно выполнить с помощью средств, таких как обращенно-фазовая ВЭЖХ или электрофорез.
В седьмом аспекте аспекте настоящее изобретение относится к соединениям линкер-лекарственное соединение (т.е. лекарственные соединения-линкеры), содержащим димеры PBD (см. выше), связанные со звеном линкера. Указанные лекарственные соединения-линкеры можно использовать в качестве промежуточных веществ для синтеза конъюгатов, содержащих димеры PBD, связанные с нацеливающим агентом.
Указанные лекарственные соединения-линкеры могут иметь следующую формулу V:
LU-D (V)
его фармацевтически приемлемую соль или сольват, где LU является звеном линкера и D является звеном лекарственного соединения, представляющее собой димер PBD.
В указанных лекарственных соединениях-линкерах согласно настоящему изобретению димер PBD D представляет собой димер формулы I или его фармацевтически приемлемую соль или сольват за исключением того, что X представляет собой ' ' ^ , где RN выбран из группы, состоящей из Н и С1.4 алки-ла, и где звездочка означает место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волни
стая линия или q означает место присоединения к звену линкера.
Определения
Фармацевтически приемлемые катионы.
Примеры фармацевтически приемлемых одновалентных и двухвалентных катионов описаны в публикации Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977), содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Фармацевтически приемлемый катион может быть неорганическим или органическим.
Примеры фармацевтически приемлемых одновалентных неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Na+ и K+. Примеры фармацевтически приемлемых двухвалентных неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, катионы щелоч-но-земельных металлов, такие как Са2+ и Mg2+. Примеры фармацевтически приемлемых органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (т.е. NH4+) и замещенные ионы аммония (например, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бути-ламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также из аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является N(Qi3)4+.
Заместители.
В настоящем описании выражение "возможно замещенный" относится к исходной группе, которая может быть незамещенной или замещенной.
Если не указано иное, в настоящем описании термин "замещенный" относится к исходной группе, которая содержит один или более заместителей. В настоящем описании термин "заместитель" используется в традиционном значении и относится к химическому фрагменту, который ковалентно присоединен или, если это возможно, конденсирован с исходной группой. Хорошо известен широкий ряд заместителей, и способы их получения и введения в разнообразные исходные группы также хорошо известны.
Примеры заместителей более подробно описаны ниже.
C1-12 алкил: в настоящем описании термин "С1-12алкил" относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома углерода в углеводороде, содержащем от 1 до 12 атомов углерода, который может быть алифатическим или алициклическим и который может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). В настоящем описании термин "С1-4 алкил" относится к одновалентному фрагменту, полученному путем удаления атома водорода от атома углерода углеводородного соединения, имеющего от 1 до 4 атомов углерода, которое может быть алифатическим или алициклическим, и которое может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). Таким образом, термин "алкил" включает подклассы алкенил, алкинил, циклоалкил и т.д., описанные ниже.
Примеры насыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (C1), этил (С2), пропил (С3), бутил (С4), пентил (C5), гексил (С6) и гептил (С7).
Примеры насыщенных линейных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (C1), этил (С2), н-пропил (С3), н-бутил (С4), н-пентил (амил) (C5), н-гексил (С6) и н-гептил (С7).
Примеры насыщенных разветвленных алкильных групп включают изопропил (С3), изобутил (С4), втор-бутил (С4), трет-бутил (С4), изопентил (C5) и неопентил (C5).
С2-12 алкенил: в настоящем описании термин "С2-12 алкенил" относится к алкильной группе, содержащей одну или более двойных углерод-углеродных связей.
Примеры ненасыщенных алкенильных групп включают, но не ограничиваются ими, этенил (винил, -СН=СН2), 1-пропенил (-СН=СН-СН3), 2-пропенил (аллил, -СН-СН=СН2), изопропенил (1-метилвинил, -С(СН3)=СН2), бутенил (С4), пентенил (C5) и гексенил (С6).
С2-12 алкинил: в настоящем описании термин "С2-12 алкинил" относится к алкильной группе, содержащей одну или более тройных углерод-углеродных связей.
Примеры ненасыщенных алкинильных групп включают, но не ограничиваются ими, этинил (-С=СН) и 2-пропинил (пропаргил, -СН2-С=СН).
С3-12 циклоалкил: в настоящем описании термин "С3-12 циклоалкил" относится к алкильной группе, которая также является циклической группой; то есть представляет собой одновалентный фрагмент, полученный в результате удаления атома водорода из атома алициклического кольца циклического углеводородного соединения (карбоциклического соединения), содержащий от 3 до 7 атомов углерода, включая от 3 до 7 атомов в кольце.
Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
насыщенных моноциклических углеводородных соединений:
циклопропана (С3), циклобутана (С4), циклопентана (C5), циклогексана (С6), циклогептана (С7), ме-тилциклопропана (С4), диметилциклопропана (C5), метилциклобутана (C5), диметилциклобутана (С6), метилциклопентана (С6), диметилциклопентана (С7) и метилциклогексана (С7);
ненасыщенных моноциклических углеводородных соединений:
циклопропена (С3), циклобутена (С4), циклопентена (C5), циклогексена (С6), метилциклопропена
(С4), диметилциклопропена (C5), метилциклобутена (C5), диметилциклобутена (С6), метилциклопентена (С6), диметилциклопентена (С7) и метилциклогексена (С7); и
насыщенных полициклических углеводородных соединений:
норкарана (С7), норпинана (С7), норборнана (С7).
С3-20 гетероциклил: в настоящем описании термин "С3-20 гетероциклил" относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода из атома кольца гетероциклического соединения, при этом фрагмент содержит от 3 до 20 атомов в кольце, из которых от 1 до 10 атомов представляют собой гетероатомы кольца. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 3 до 7 атомов, среди которых от 1 до 4 представляют собой гетероатомы кольца.
В указанном контексте префиксы (например, С3-20, С3-7, C5-6 и т.д.) обозначают количество атомов в кольце или диапазон количества атомов в кольце, включая атомы углерода и гетероатомы. Например, в настоящем описании термин "C5-6 гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.
Примеры моноциклических гетероциклильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
N1: азиридина (С3), азетидина (С4), пирролидина (тетрагидропиррола) (C5), пирролина (например, 3-пирролина, 2,5-дигидропиррола) (C5), 2Н-пиррола или 3Н-пиррола (изопиррола, изоазола) (C5), пиперидина (С6), дигидропиридина (С6), тетрагидропиридина (С6), азепина (С7);
O1: оксирана (С3), оксетана (С4), оксолана (тетрагидрофурана) (C5), оксола (дигидрофурана) (C5), оксана (тетрагидропирана) (С6), дигидропирана (С6), пирана (С6), оксепина (С7);
S1: тиирана (С3), тиетана (С4), тиолана (тетрагидротиофена) (C5), тиана (тетрагидротиопирана) (С6), тиепана (С7);
О2: диоксолана (C5), диоксана (С6) и диоксепана (С7); О3: триоксана (С6);
N2: имидазолидина (C5), пиразолидина (диазолидина) (C5), имидазолина (C5), пиразолина (дигидро-пиразола) (C5), пиперазина (С6);
N1O1: тетрагидрооксазола (C5), дигидрооксазола (C5), тетрагидроизоксазола (C5), дигидроизоксазола (C5), морфолина (С6), тетрагидрооксазина (С6), дигидрооксазина (С6), оксазина (С6);
N1S1: тиазолина (C5), тиазолидина (C5), тиоморфолина (С6);
N2O1: оксадиазина (С6);
O1S1: оксатиола (C5) и оксатиана (тиоксана) (С6); N1O1S1: оксатиазина (С6).
Примеры замещенных моноциклических гетероциклильных групп включают группы, полученные из сахаридов в циклической форме, например из фураноз (C5), таких как арабинофураноза, ликсофурано-за, рибофураноза и ксилофураноза, и пираноз (С6), таких как аллопираноза, альтропираноза, глюкопира-ноза, маннопираноза, гулопираноза, идопираноза, галактопираноза и талопираноза.
С5-20 арил: в настоящем описании термин "С5-20 арил" относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, который содержит от 3 до 20 атомов в кольце. В настоящем описании термин "C5-7 арил" относится к одновалентному фрагменту, полученному путем удаления атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, который содержит 5 до 7 атомов в кольце, и термин "C5-10 арил", используемый в настоящем документе, относится к одновалентному фрагменту, полученному путем удаления атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, который содержит 5 до 10 атомов в кольце. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 5 до 7 атомов в кольце.
В указанном контексте префиксы (например, С3-20, C5-7, C5-6, С5-10 и т.д.) обозначают количество атомов в кольце или диапазон количества атомов в кольце, включая атомы углерода и гетероатомы. Например, в настоящем описании термин "C5-6 арил" относится к арильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.
Все атомы в кольце могут представлять собой атомы углерода, как в случае "карбоарильных групп".
Примеры карбоарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из бензола (т.е. фенил) (С6), нафталина (С10), азулена (С10), антрацена (С14), фенантрена (С14), нафтацена (С10) и пирена (С10).
Примеры арильных групп, которые содержат конденсированные кольца, по меньшей мере одно из которых представляет собой ароматическое кольцо, включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из индана (например, 2,3-дигидро-1Н-индена) (С9), индена (С9), изоиндена (С9), тетралина (1,2,3,4-тетрагидронафталина (С10), аценафтена (С12), флуорена (С10), феналена (С10), ацефенантрена (C15) и ацеантрена (С10).
Альтернативно, атомы кольца могут включать один или более гетероатомов, как в случае "гетероа-рильных групп". Примеры моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
N1: пиррола (азола) (C5), пиридина (азина) (С6);
O1: фурана (оксола) (C5);
S1: тиофена (тиола) (C5);
N1O1: оксазола (C5), изоксазола (C5), изоксазина (С6);
N2O1: оксадиазола (фуразана) (C5);
N3O1: оксатриазола (C5);
N1S1: тиазола (C5), изотиазола (C5);
N2: имидазола (1,3-диазола) (C5), пиразола (1,2-диазола) (C5), пиридазина (1,2-диазина) (С6), пиримидина (1,3-диазина) (С6) (например, цитозина, тимина, урацила), пиразина (1,4-диазина) (С6); N3: триазола (C5), триазина (С6) и N4: тетразола (C5).
Примеры гетероарильных групп, содержащих конденсированные кольца, включают, но не ограничиваются ими,
С9 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из бензофурана (O1), изобензофурана (O1), индола (N1), изоиндола (N1), индолизина (N1), индолина (N1), изоиндолина (N1), пурина (N4) (например, аденина, гуанина), бензимидазола (N2), индазола (N2), бензоксазола (N1O1), бензизоксазола (N1O1), бензодиоксола (О2), бензофуразана (N2O1), бензотриазола (N3), бензотиофурана (S1), бензотиазола (N1S1), бензотиадиазола (N2S);
С10 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из хромена (O1), изохромена (O1), хро-мана (O1), изохромана (O1), бензодиоксана (О2), хинолина (N1), изохинолина (N1), хинолизина (N1), бен-зоксазина (N1O1), бензодиазина (N2), пиридопиридина (N2), хиноксалина (N2), хиназолина (N2), цинноли-на (N2), фталазина (N2), нафтиридина (N2), птеридина (N4);
С11 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из бензодиазепина (N2);
C13 (содержащие 3 конденсированных кольца), полученные из карбазола (N1), дибензофурана (O1), дибензотиофена (S1), карболина (N2), перимидина (N2), пиридоиндола (N2); и
С14 (содержащие 3 конденсированных кольца), полученные из акридина (N1), ксантена (O1), тиок-сантена (S1), оксантрена (О2), феноксатиина (O1S1), феназина (N2), феноксазина (N1O1), фенотиазина (N1S1), тиантрена (S2), фенантридина (N1), фенантролина (N2), феназина (N2).
Приведенные выше группы, по отдельности или как часть другого заместителя, могут быть замещены одной или более группами, выбранными из таких же групп и дополнительных заместителей, перечисленных ниже.
Галогены: -F, -Cl, -Br и -I.
Гидрокси: -ОН.
Простой эфир: -OR, где R представляет собой заместитель простого эфира, например C1-7 алкиль-ную группу (которую также называют С1-7 алкоксигруппой, как описано ниже), С3-20 гетероциклильную группу (которую также называют С3-20 гетероциклилоксигруппой) или C5-20 арильную группу (которую также называют С5-20 арилоксигруппой), предпочтительно С1-7 алкильную группу.
Алкокси: -OR, где R представляет собой алкильную группу, например С1-7 алкильную группу. Примеры С1-7 алкоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОМе (метокси), -OEt (этокси), -О(nPr) (н-пропокси), -O(iPr) (изопропокси), -O(nBu) (н-бутокси), -O(sBu) (втор-бутокси), -O(iBu) (изобутокси) и -O(tBu) (трет-бутокси).
Ацеталь: -CH(OR1)(OR2), где R1 и R2 независимо представляют собой заместители ацеталя, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу, или в случае "циклической" ацетальной группы R1 и R2, взятые совместно с двумя атомами кислорода, к которым они присоединены, и атомами углерода, к которым они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Примеры ацетальных групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(ОМе)2, -CH(OEt)2 и -CH(OMe)(OEt).
Гемиацеталь: -CH(OH)(OR1), где R1 представляет собой заместитель гемиацеталя, например C1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры гемиацетальных групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(ОН)(ОМе) и -CH(OH)(OEt).
Кеталь: -CR(OR1)(OR2), где R1 и R2 такие же, как определены для ацеталей, и R представляет собой заместитель кеталя, отличный от водорода, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры кеталей включают,
но не ограничиваются ими, -С(Ме)(ОМе)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2 и
-C(Et)(OMe)(OEt).
Гемикеталь: -CR(OH)(OR1), где R1 такой же, как определен для гемиацеталей, и R представляет собой заместитель гемикеталя, отличный от водорода, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры гемике-талей включают, но не ограничиваются ими, -С(Ме)(ОН)(ОМе), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt) и -C(Et)(OH)(OEt).
Оксогруппа (кето-, -он): =O.
Тион (тиокетон): =S.
Имино (иминная группа): =NR, где R представляет собой заместитель имина, например водород,
C1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры иминов включают, но не ограничиваются ими, =NH, =NMe, =NEt и =NPh.
Формил (карбальдегид, карбоксальдегид): -С(=О)Н.
Ацил (кето-): -C(=O)R где R представляет собой заместитель ацила, например С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкилацилом или С1-7 алканоилом), С3-20 гетероциклильную группу (которую также называют С3-20 гетероциклилацилом) или C5-20 арильную группу (которую также называют C5-20 арилацилом), предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры ацильных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)СН3 (ацетил), -С(=О)СН2СН3 (пропионил), -С(=О)С(СН3)3 (т-бутирил) и -C(=O)Ph (бензоил, фенон).
Карбокси (карбоновая кислота): -С(=О)ОН.
Тиокарбокси (тиокарбоновая кислота): -C(=S)SH.
Тиолокарбокси (тиолокарбоновая кислота): -C(=O)SH.
Тионокарбокси (тионокарбоновая кислота): -C(=S)OH.
Имидокислота: -C(=NH)OH.
Гидроксамовая кислота: -C(=NOH)OH.
Сложный эфир (карбоксилат, сложный эфир карбоновой кислоты, оксикарбонил): -C(=O)OR где R представляет собой заместитель сложноэфирной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)ОСН3, -С(=О)ОСН2СН3, -С(=О)ОС(СН3)3 и -C(=O)OPh.
Ацилокси ("обращенный" сложный эфир): -OC(=O)R, где R представляет собой заместитель аци-локси, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры ацилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОС(=О)СН3 (ацетокси), -ОС(=О)СН2СН3, -ОС(=О)С(СН3)3, -OC(=O)Ph и -OC(=O)CH2Ph.
Оксикарбонилокси: -OC(=O)OR, где R представляет собой заместитель сложноэфирной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОС(=О)ОСН3, -ОС(=О)ОСН2СН2, -ОС(=О)ОС(СН3)3 и -OC(=O)OPh.
Амино: -NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, например водород, С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкиламино или ди-С1-7 алкиламино), С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу, или в случае "циклической" аминогруппы R1 и R2 совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Аминогруппы могут быть первичными (-NH2), вторичными (-NHR1) или третичными (-NHR1R2), а также в случае катионной формы, могут быть четвертичными (-+NR1R2R3). Примеры аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2 и -NHPh. Примеры циклических аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, азиридино, азетидино, пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино и тиоморфолино.
Амидная группа (карбамоил, карбамил, аминокарбонил, карбоксамид): -C(=O)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры амидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 и -C(=O)N(CH2CH3)2, a также амидогруппы, в которых R1 и R2 совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую структуру, как, например, в случае пиперидинокарбонила, морфолинокарбонила, тиоморфолинокарбонила и пиперазинокарбонила.
Тиоамид (тиокарбамил): -C(=S)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры амидных групп включают, но не ограничиваются ими, -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2 и -C(=S)NHCH2CH3.
Ациламидо (ациламино): -NR1C(=O)R2, где R1 представляет собой заместитель амидной группы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу, и R2 представляет собой заместитель ацильной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры ациламидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3 и -NHC(=O)Ph. R1 и R2, взятые вместе, могут образовывать циклическую структуру, например, как в сукцинимидиле, малеимидиле и фталимидиле
Аминокарбонилокси: -OC(=O)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры аминокарбонилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2 и -OC(=O)NEt2.
Уреидогруппа: -N(R1)CONR2R3, где R2 и R3 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп, a R1 представляет собой заместитель уреидогруппы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры уреидогрупп включают, но не ограничиваются
ими, -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe,
-NMeCONHEt, -NMeCONMe2 n-NMeCONEt2. Гуанидин: -NH-C(=NH)NH2.
Тетразолил: пятичленное ароматическое кольцо, содержащее четыре атома азота и один атом углерода,
Иминогруппа: =NR, где R представляет собой заместитель иминогруппы, например водород, C1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу. Примеры иминогрупп включают, но не ограничиваются ими, =NH, =NMe и =NEt.
Амидин (амидино): -C(=NR)NR2, где каждый R представляет собой заместитель амидиногруппы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С6-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу. Примеры амидиногрупп включают, но не ограничиваются ими, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2 и -C(=NMe)NMe2.
Нитро: -NO2.
Нитрозо: -NO.
Азидо: -N3.
Циано (нитрил, карбонитрил): -CN. Изоциано: -NC. Цианато: -OCN. Изоцианато: -NCO. Тиоциано (тиоцианато): -SCN. Изотиоциано (изотиоцианато): -NCS. Сульфгидрил (тиол, меркапто): -SH.
Простой тиоэфир (сульфид): -SR, где R представляет собой заместитель простого тиоэфира, например С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкилтиогруппой), С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры С1-7 алкилтиог-рупп включают, но не ограничиваются ими, -SCH3 и -SCH2CH3.
Дисульфид: -SS-R, где R представляет собой заместитель дисульфида, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкилдисульфидом). Примеры C1-7 алкилдисульфидных групп включают, но не ограничиваются ими, -SSCH3 и -SSCH2CH3.
Сульфин (сульфинил, сульфоксид): -S(=O)R, где R представляет собой заместитель сульфиногруп-пы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфиновых групп включают, но не ограничиваются ими,
-S(=O)CH3 и -S(=O)CH2CH3.
Сульфон (сульфонил): -S(=O)2R, где R представляет собой заместитель сульфоновой группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу, включая, например, фторированную или перфторированную С1-7 алкильную группу. Примеры сульфоновых групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)2CH3 (метан-сульфонил, мезил), -S(=O)2CF3 (трифлил), -S(=O)2CH2CH3 (эзил), -S(=O)2C4F9 (нонафлил), -S(=O)2CH2CF3 (трезил), -S(=O)2CH2CH2NH2 (таурил), -S(=O)2Ph (фенилсульфонил, безил), 4-метилфенилсульфонил (то-зил), 4-хлорфенилсульфонил (хлозил), 4-бромфенилсульфонил (брозил), 4-нитрофенил (нозил), 2-нафталинсульфонат (напсил) и 5-диметиламинонафталин-1-илсульфонат (дансил).
Сернистая кислота (сульфино): -S(=O)OH, -SO2H.
Сульфокислота (сульфо): -S(=O)2OH, -SO3H.
Сульфинат (сложный эфир сернистой кислоты): -S(=O)OR; где R представляет собой заместитель сульфинатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинатных групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)OCH3 (метоксисульфинил; метилсульфинат) и -S(=O)OCH2CH3 (этоксисуль-финил; этилсульфинат).
Сульфонат (сложный эфир сульфокислоты): -S(=O)2OR, где R представляет собой заместитель
сульфонатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонатных групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)2OCH3 (метоксисульфонил; метилсульфонат) и -S(=O)2OCH2CH3 (этокси-сульфонил; этилсульфонат).
Сульфинилокси: -OS(=O)R, где R представляет собой заместитель сульфинилоксигруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OS(=O)CH3 и -OS(=O)CH2CH3.
Сульфонилокси: -OS(=O)2R, где R представляет собой заместитель сульфонилоксигруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OS(=O)2CH3 (мезилат) и -OS(=O)2CH2QH (эзилат).
Сульфат: -OS(=O)2OR; где R представляет собой заместитель сульфатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфатных групп включают, но не ограничиваются ими, -OS(=O)2OCH3 и -SO(=O)2OCH2CH3.
Сульфамил (сульфамоил; амид сернистой кислоты; сульфинамид): -S(=O)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры сульфа-мильных групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2 и -S(=O)NHPh.
Сульфонамидо (сульфинамоил, амид сульфокислоты, сульфонамид): -S(=O)2NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры сульфонамидных групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=ObN(CH2CH3)2 и -S(=O)2NHPh.
Сульфамино: -NR1S(=O)2OH, где R1 представляет собой заместитель аминогруппы, определенный для аминогрупп. Примеры сульфаминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NHS(=O)2OH и -N(CH3)S(=O)2OH.
Сульфонамино: -NR1S(=O)2R, где R1 представляет собой заместитель аминогруппы, определенный для аминогрупп, и R представляет собой заместитель сульфонаминогруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонаминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NHS(=O)2CH3 и -N(CH3)S(=O)2C6H5.
Сульфинамино: -NR1S(=O)R, где R1 представляет собой заместитель аминогруппы, определенный для аминогрупп, и R представляет собой заместитель сульфинаминогруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинаминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NHS(=O)CH3 и -N(CH3)S(=O)C6H5.
Фосфино (фосфин): -PR2, где R представляет собой заместитель фосфиногруппы, например -Н, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или C5-20 арильную группу. Примеры фосфиновых групп включают, но не ограничиваются ими, -РН2, -Р(СН3)2, -Р(СН2СН3)2, -P(t-Bu)2 и -P(Ph)2.
Фосфо: -Р(=О)2.
Фосфинил (фосфиноксид): -P(=O)R2, где R представляет собой заместитель фосфинила, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или C5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу или C5-20 арильную группу. Примеры фосфинильных групп включают, но не ограничиваются ими, -Р(=О)(СН3)2, -Р(=О)(СН2СН3)2, -P(=O)(t-Bu)2 и -P(=O)(Ph)2.
Фосфоновая кислота (фосфоно): -Р(=О)(ОН)2.
Фосфонат (сложный эфир фосфоновой кислоты): -P(=O)(OR)2, где R представляет собой заместитель фосфонатной группы, например -Н, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфонатных групп включают, но не ограничиваются ими, -Р(=О)(ОСН3)2, -Р(=О)(ОСН2СН3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2 и -P(=O)(OPh)2.
Фосфорная кислота (фосфоноокси): -ОР(=О)(ОН)2.
Фосфат (сложный эфир фосфоноокси): -OP(=O)(OR)2, где R представляет собой заместитель фосфатной группы, например -Н, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфатных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОР(=О)(ОСН3)2, -ОР(=О)(ОСН2СН3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2 и -OP(=O)(OPh)2.
Фосфористая кислота: -ОР(ОН)2.
Фосфит: -OP(OR)2, где R представляет собой заместитель фосфитной группы, например -Н, C1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфитных групп включают, но не ограничива
ются ими, -ОР(ОСН3)2, -ОР(ОСН2СН3)2, -OP(O-t-Bu)2 и -OP(OPh)2.
Фосфорамидит: -OP(OR1)-NR22, где R1 и R2 представляют собой заместители фосфорамидитной группы, например -Н, (возможно замещенную) С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфорамидитных групп включают, но не ограничиваются ими, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 и -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Фосфорамидат: -OP(=O)(OR1)-NR22, где R1 и R2 представляют собой заместители фосфорамидатной группы, например -Н, (возможно замещенную) С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно -Н, С1-7 алкильную группу или С5-20 арильную группу. Примеры фосфорамидатных групп включают, но не ограничиваются ими, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 и -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Алкилен.
С3-12 алкилен: в настоящем описании термин "С3-12 алкилен" относится к бидентатному фрагменту,
полученному в результате удаления двух атомов водорода, обоих от одного атома углерода или по одному от каждого из двух разных атомов углерода, в углеводороде, содержащем от 3 до 12 атомов углерода
(если не указано иное), который может быть алифатическим или алициклическим и который может быть насыщенным, частично ненасыщенным или полностью ненасыщенным. Таким образом, термин "алкилен" включает такие подклассы, как алкенилен, алкинилен, циклоалкилен и т.д., описанные ниже.
Примеры линейных насыщенных С3-12 алкиленовых групп включают, но не ограничиваются ими, -(СН2)П-, где n представляет собой целое число от 3 до 12, например -СН2СН2СН2-(пропилен),
-СН2СН2СН2СН2- (бутилен), -СН2СН2СН2СН2СН2- (пентилен) и -СН2СН2СН2СН-2СН2СН2СН2- (гепти-
лен).
Примеры разветвленных насыщенных С3-12 алкиленовых групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(СН3)СН2-, -СН(СН3)СН2СН2-, -СЩСЩС^С^С^-, -С^СЩСЩС^-, -СН2СН(СН3)СН2СН2-, -СН(СН2СН3)-, -СН(СН2СН3)СН2- и -СН2СН(СН2СН3)СН2-.
Примеры линейных частично ненасыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 алкениленовых и алки-ниленовых групп) включают, но не ограничиваются ими, -СН=СН-СН2-, -СН2-СН=СН2-, -СН=СН-СН2-
СН2-, -СН=СН-СН2-СН2-СН2-, -СН=СН-СН =СН-, -СН=СН-СН=СН-СН2-, -СН=СН-СН=СН-СН2-СН2-,
-СН=СН-СН2-СН=СН-, -СН=СН-СН2-СН2-СН=СН- и -СН2-С=С-СН2-.
Примеры разветвленных частично ненасыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 алкениленовых и алкиниленовых групп) включают, но не ограничиваются ими, -С(СН3)=СН-, -С(СН3)=СН-СН2-, -СН=СН-СН(СН3)- и -С=С-СН(СН3)-.
Примеры алициклических насыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются ими, циклопентилен (например, циклопент-1,3-илен) и циклогексилен (например, циклогекс-1,4-илен).
Примеры алициклических частично ненасыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются ими, циклопентенилен (например, 4-циклопентен-1,3-илен), циклогек-сенилен (например, 2-циклогексен-1,4-илен; 3-циклогексен-1,2-илен; 2,5-циклогексэдиен-1,4-илен).
Защитные группы атома кислорода: термин "защитные группы атома кислорода" относится к фрагменту, который защищает гидроксигруппу, и такие группы хорошо известны в данной области техники. Большое число подходящих групп описано в Greene, T.W. и Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999 на стр. 23-100, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Классы групп, представляющие наибольший интерес, включают простые силильные эфирные группы (например, триметилсилильную группу (TMS), трет-бутилдиметилсилильную группу (TBDMS)), замещенные простые метиловые эфирные группы (например, тетрагидропиранильную группу (ТНР)) и сложноэфирные группы (например, ацетатную).
Карбаматные защитные группы атома азота: термин "карбаматные защитные группы атома азота" относится к фрагменту, который защищает атом азота иминной связи, и такие группы хорошо известны в данной области техники. Указанные группы имеют следующую структуру:
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в Greene, T.W. и Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на стр. 503-549, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в Greene, T.W. и Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на стр.
Гемиаминальные защитные группы атома азота: термин "гемиаминальные защитные группы атома азота" относится к группе, имеющей следующую структуру:
633-647, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Конъюгаты.
В настоящем изобретении предложены конъюгаты, содержащие димер PBD, связанный со звеном лиганда через звено линкера. Согласно одному из вариантов реализации звено линкера включает удлиняющее звено (А), специфичное звено (L1) и звено-спейсер (L2). Звено линкера связано одним концом со звеном лиганда (L) и другим концом с димерным соединением PBD (D).
Согласно одному аспекту такой конъюгат представлен ниже формулой Ша
L- (A1a-L1s-L2y-D)p (Ша)
или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, где
L представляет собой звено лиганда;
-A1a-L1s-L2y- представляет собой звено линкера (LU), где
-А1- представляет собой удлиняющее звено,
а представляет собой 1 или 2,
-L1- представляет собой специфичное звено,
s представляет собой целое число в диапазоне от 0 до 12,
-L2- представляет собой звено-спейсер,
у представляет собой 0, 1 или 2;
-D представляет собой димер PBD;
р представляет собой от 1 до 20.
Согласно другому аспекту такой конъюгат представлен ниже формулой IIIb
L-(A1a-L2y-D)p Также его можно представить в виде
L-(A1a-L2y(-L1s)-D)p (1Mb) или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, где L представляет собой звено лиганда; -A1a-L1s(L2y)- представляет собой звено линкера (LU), где
-А1- представляет собой удлиняющее звено, связанное с удлиняющим звеном (L2), а представляет собой 1 или 2,
-L1- представляет собой специфичное звено, связанное с удлиняющим звеном (L2),
s представляет собой целое число в диапазоне от 0 до 12,
-L2- представляет собой звено-спейсер,
у представляет собой 0, 1 или 2;
-D представляет собой димер PBD и
р представляет собой от 1 до 20.
Предпочтительные варианты реализации изобретения Представленные ниже предпочтительные варианты реализации можно применять для всех аспектов настоящего изобретения, как описано выше, или они могут относиться к одному аспекту. Предпочтительные варианты реализации можно объединять в любых комбинациях.
Согласно одному из вариантов реализации указанный конъюгат имеет формулу
L- (A1a-L1s-L2y-D)P, L- (AVLS1-D)p, L- (A1-L1-D)p
или
L- (A1-D)p
или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, где L, A1, a, L1, s, L2, D, у и р такие, как описано выше.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда (L) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже приведена формула соединения в качестве примера
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L1 и связывающийся с клетками агент, L2 представляет собой звено-спейсер, которое представляет собой ковалентную связь, саморасщепляющуюся группу или -ОС(=О) образует саморасщепляющуюся группу, при этом L2 является необязательным.
совместно с
-ОС(=О)- может рассматриваться как часть L1 или L2, при необходимости.
Согласно другому варианту реализации заено лиганда (L) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже представлена формула соединения в качестве примера
СВА-А1а-1Л-1_2У-*,
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L1 и связывающийся с клетками агент, L2 представляет собой звено-спейсер, которое представляет собой ковалентную связь или саморасщепляющуюся группу, а представляет собой 1 или 2, s представляет собой 0, 1 или 2 и у представляет собой 0, 1 или 2.
Согласно вариантам реализации, проиллюстрированным выше, L1 может представлять собой способное к расщеплению специфичное звено и может называться "триггер", который при расщеплении активирует саморасщепляющуюся группу (или саморасщепляющиеся группы) в L2, в случае если саморас-щепляющаяся(иеся) группа(ы) присутствует(ют). Когда специфичное звено L1 расщепляется или линкер (т.е. ковалентная связь) между L1 и L2 расщепляется, то саморасщепляющаяся группа высвобождает звено лекарственного соединения (D).
Согласно другому варианту реализации звено лиганда (L) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже приведена формула соединения в качестве примера
1Л I
СВА-А1а- L2y-*
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, связанное с L2, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L2 и связывающийся с клетками агент, L2 представляет собой саморасщепляющуюся группу, а представляет собой 1 или 2, s представляет собой 1 или 2 и у представляет собой 1 или 2.
Согласно различным вариантам реализации, описанным в настоящем документе, природа L1 и L2 может изменяться в широких пределах. Указанные группы выбирают с учетом их характеристик, которые могут частично определяться условиями в том месте, в которое доставляется конъюгат. Если специфичное звено L1 способно к расщеплению, то структуру и/или последовательность L1 выбирают таким образом, чтобы оно расщеплялось под действием ферментов, присутствующих в целевом участке (например, в клетке-мишени). Также можно применять звенья L1, которые способны расщепляться в результате изменений рН (например, фрагменты, лабильные к действию кислоты или основания), температуры или под действием облучения (например, фотолабильные фрагменты).
Звенья L1, способные расщепляться в восстановительных или окислительных условиях, также можно использовать в указанных конъюгатах.
Согласно некоторым вариантам реализации L1 может содержать одну аминокислоту или непрерывную последовательность аминокислот. Последовательность аминокислот может представлять собой субстрат-мишень для фермента.
Согласно одному из вариантов реализации L1 способен расщепляться под действием ферментов. Согласно одному из вариантов реализации фермент представляет собой эстеразу или пептидазу. Например, L1 может расщепляться лизосомной протеазой, такой как катепсин.
Согласно одному из вариантов реализации L2 присутствует и совместно с -С(=О)О- образует саморасщепляющуюся группу или саморасщепляющиеся группы. Согласно некоторым вариантам реализации -С(=О)О- также представляет собой саморасщепляющуюся группу.
Согласно одному из вариантов реализации, где L1 способен расщепляться под действием фермента, и L2 присутствует, фермент расщепляет связь между L1 и L2, в результате чего саморасщепляющая-ся(иеся) группа(ы) высвобождает(ют) звено лекарственного соединения.
L1 и L2, в случае если присутствуют, могут быть связаны с помощью связывающей группы, выбранной из
-C(=0)NH-, -С(=0)0-, -NHC(=0)-, -ОС(=0)-, -ОС(=0)0-, -NHC(=0)0-, -OC(=0)NH-, -NHC(=0)NH и -О- (гликозидная связь).
Аминогруппа в L1, которая связана с L2, может представлять собой N-конец аминокислоты или может быть получена из аминогруппы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты
лизин.
Карбоксильная группа в L1, которая связана с L2, может представлять собой С-конец аминокислоты или может быть получена из карбоксильной группы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты глутаминовая кислота.
Гидроксигруппа в L1, которая связана с L2, может быть получена из гидроксигруппы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты серин.
Согласно одному из вариантов реализации -С(=0)0- и L2 вместе образуют группу
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к L1, Y представляет собой -N(H)-, -О-, -C(=O)N(H)- или -С(=О)О- и n представляет собой от 0 до 3. Фениленовое кольцо возможно замещено одним, двумя или тремя заместителями, описанными в настоящем документе.
Согласно одному из вариантов реализации Y представляет собой NH.
Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 0 или 1. Предпочтительно n представляет собой 0.
Если Y представляет собой NH, n представляет собой 0, то саморасщепляющуюся группу можно назвать п-аминобензилкарбонильным линкером (РАВС).
Саморасщепляющаяся группа обеспечивает высвобождение звена лекарственного соединения (т.е. несимметричного PBD), если активируется удаленный участок линкера, при этом разложение происходит согласно представленному ниже уравнению (при п=0)
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, L* представляет собой активированную форму остатка линкера, высвобожденное звено лекарственного соединения не показано. Указанные группы обладают преимуществом, заключающимся в отделении места активации от лекарственного соединения.
Согласно другому варианту реализации -С(=0)0- и L2 вместе образуют группу, выбранную из
где звездочка, волнистая линия, Y и n такие, как определено выше. Каждое фениленовое кольцо возможно замещено одним, двумя или тремя заместителями, описанными в настоящем документе. Согласно одному из вариантов реализации фениленовое кольцо, содержащее заместитель Y, является возможно замещенным, и фениленовое кольцо, не содержащее заместитель Y, является незамещенным.
Согласно другому варианту реализации -С(=0)0- и L2 вместе образуют группу, выбранную из
где звездочка, волнистая линия, Y и n такие, как определено выше, Е представляет собой О, S или NR, D представляет собой N, СН или CR, a F представляет собой N, СН или CR.
Согласно одному из вариантов реализации D представляет собой N. Согласно одному из вариантов
реализации D представляет собой СН. Согласно одному из вариантов реализации Е представляет собой О или S. Согласно одному из вариантов реализации F представляет собой СН.
Согласно предпочтительному варианту реализации ковалентная связь между L1 и L2 представляет собой связь, лабильную к действию катепсина (например, способную к расщеплению).
Согласно одному из вариантов реализации L1 включает дипептид. Аминокислоты в дипептиде могут представлять собой любую комбинацию природных аминокислот и неприродных аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации дипептид содержит природные аминокислоты. Если линкер представляет собой линкер, лабильный к действию катепсина, то дипептид представляет собой участок расщепления, опосредованного катепсином. Дипептид, таким образом, является участком распознавания для катепсина.
Согласно одному из вариантов реализации группа -Xi-X2- в дипептиде, -NH-Xi-X2-CO-, выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -lle-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-;
где Cit представляет собой цитруллин. В указанном дипептиде -NH- представляет собой аминогруппу в X1, а СО представляет собой карбонильную группу в Х2.
Предпочтительно группа -ХГХ2- в дипептиде, -NH-XrX2-CO-, выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-и -Val-Cit-.
Более предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -NH-X1-X2-CO-, представляет собой -Phe-Lys-, Val-Cit или -Val-Ala-.
Другие требуемые комбинации аминокислот в дипептиде включают -Gly-Gly-, -Pro-Pro- и -Val-Glu-.
Можно применять другие комбинации аминокислот в дипептиде, включая комбинации, описанные в публикации Dubowchik et al., содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Согласно одному из вариантов реализации боковая цепь аминокислоты является химически защищенной, если это необходимо. Защитная группа боковой цепи может представлять собой группу, описанную ниже. Последовательности защищенных аминокислот способны расщепляться под действием ферментов. Например, последовательность аминокислот в дипептиде, содержащем остаток Lys с Вос-защищенной боковой цепью, способна расщепляться под действием катепсина.
Защитные группы боковых цепей аминокислот хорошо известны в данной области техники и описаны в каталоге Novabiochem (Novabiochem Catalog). Дополнительные способы введения защитных групп представлены в Protective groups in Organic Synthesis, Greene and Wuts.
Ниже приведены возможные защитные группы боковых цепей аминокислот, имеющих реакционно-способные функциональные группы в боковых цепях Arg: Z, Mtr, Tos; Asn: Trt, Xan; Asp: Bzl, t-Bu;
Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt; Glu: Bzl, t-Bu; Gin: Trt, Xan; His: Boc, Dnp, Tos, Trt; Lys: Boc, Z-CI, Fmoc, Z; Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS; Thr: Bz; Trp: Boc; Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
Согласно одному из вариантов реализации -Х2- опосредованно связан со звеном лекарственного соединения. Согласно указанному варианту реализации звено-спейсер L2 присутствует.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид применяют в комбинации с саморасщепляю-щейся(имися) группой(ами) (звено-спейсер). Саморасщепляющаяся(иеся) группа(ы) может быть соединена с -Х2-.
Если саморасщепляющаяся группа присутствует, то -Х2- связан непосредственно с саморасщепляющейся группой. Согласно одному из вариантов реализации -Х2- связан с группой Y саморасщепляющейся группы. Предпочтительно группа -Х2-СО- связана с Y, где Y представляет собой NH.
Согласно одному из вариантов реализации -Х1- связан непосредственно с А1. Предпочтительно группа -NH-X1- (N-конец X1) связана с А1. А1 может содержать функциональную группу -СО- и, тем самым, образовывать амидную связь с -Х1-.
Согласно одному из вариантов реализации L1 и L2, взятые совместно с -ОС(=О)-, содержат группу -Х1-Х2-РАВС-. Группа РАВС связана непосредственно со звеном лекарственного соединения. В одном из примеров саморасщепляющаяся группа и дипептид вместе образуют группу -Phe-Lys-PABC-, которая показана ниже
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения и волнистая линия означает место присоединения к остальной части L1 или место присоединения к А1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к А1.
где звездочка и волнистая линия такие, как определено выше.
Согласно другому варианту реализации L1 и L2 совместно с -ОС(=0)-, представляют собой
Альтернативно саморасщепляющаяся группа и дипептид вместе образуют группу -Val-Ala-РАВС-, которая показана ниже
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к A1, Y представляет собой ковалентную связь или функциональную группу и Е представляет собой группу, которая способна к расщеплению, и, тем самым, активировать саморасщепляющуюся группу.
Е выбирают таким образом, чтобы группа была способной к расщеплению, например, под действием света или фермента. Е может представлять собой -NO2 или глюкуроновую кислоту (например, (3-глюкуроновую кислоту). Первая из указанных групп может быть чувствительна к действию нитроредук-тазы, а последняя к действию ( -глюкуронидазы.
Группа Y может представлять собой ковалентную связь.
Группа Y может представлять собой функциональную группу, выбранную из
или
где звездочка означает место присоединения в звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к A, Y представляет собой ковалентную связь или функциональную группу и Е представляет собой глюкуроновую кислоту (например, в-глюкуроновую кислоту). Y предпочтительно представляет собой функциональную группу, выбранную из -NH-.
Согласно некоторым вариантам реализации взятые вместе, представляют собой
или
где звездочка означает место присоединения к остатку L или звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к A1, Y представляет собой ковалентную связь или функциональную группу и Е представляет собой глюкуроновую кислоту (например, в-глюкуроновую кислоту). Y предпочтительно представляет собой функциональную группу, выбранную из -NH-, -СН2-,
-О- и -S-.
Согласно некоторым дополнительным вариантам реализации Y представляет собой функциональную группу, предложенную выше, где функциональная группа связана с аминокислотой, и аминокислота связана с удлиняющим звеном А1. Согласно некоторым вариантам реализации аминокислота представляет собой в-аланин. Согласно указанному варианту реализации аминокислоту можно рассматривать в качестве эквивалента удлиняющего звена.
Специфичное звено L1 и лиганд опосредованно связаны через удлиняющее звено. L1 и А1 могут
быть связаны посредством связывающей группы, выбранной из
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8. Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда и А1 связаны посредством тиольного остатка лиганда и малеимидной группы в А1.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда и А1 связаны посредством
где звездочка означает место присоединения к остатку A1, L1, L2 или D, а волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда. Согласно указанному варианту реализации атом S, как правило, получен от звена лиганда.
Согласно каждому из вариантов реализации, предложенных выше, можно применять альтернативную функциональную группу вместо группы, полученной из малеимида, показанной ниже
где волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, как указано выше, и звездочка означает связь с остатком группы А1 или с L1, L2 или D.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу
где волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и звездочка означает связь с остатком группы А или с L , L или D.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу, которая возможно взятая совместно со звеном лиганда (например, связывающегося с клетками агента) выбрана из
-C(=0)NH-,
-C(=0)0-,
-NHC(=0)-,
-OC(=0)-,
-OC(=0)0-,
-NHC(=0)0-,
-OC(=0)NH-,
-NHC(=0)NH-,
-NHC(=0)NH,
-C(=0)NHC(=0)-,
-S-,
-S-S-,
-CH2C(=0)-, -C(=0)CH2-, = N-NH- и -NH-N=.
из которых -С(=О)СН2- может быть предпочтительной, особенно когда указанная карбонильная группа связана с -NH-.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу, которая возможно взятая совместно с лигандом выбрана из
где волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда или связь с остатком группы А1, звездочка означает другое место присоединения к звену лиганда или связь с остатком группы А1.
Другие группы, подходящие для связывания L1 со связывающимся с клетками агентом, описаны в WO 2005/082023.
Согласно одному из вариантов реализации удлиняющее звено А1 присутствует, специфичное звено L1 присутствует, и звено-спейсер L2 отсутствует. Таким образом, L1 и звено лекарственного соединения напрямую соединены посредством связи, что эквивалентно тому, что согласно указанному варианту реализации L2 представляет собой связь.
могут быть связаны при помощи связывающей группы, выбранной из -C(=0)N <
-С(=0)0-,
-NHC(=0)-,
-ОС(=0)-,
-ОС(=0)0-,
-NHC(=0)0-,
-OC(=0)N < и
-NHC(=0)N <
где N < или О- являются частью D.
Согласно одному из вариантов реализации L1 и D предпочтительно соединены при помощи связи, выбранной из -C(=0)N < и -NHC(=0)-.
Согласно одному из вариантов реализации L1 содержит дипептид, и один из концов дипептида связан с D. Как описано выше, аминокислоты, входящие в состав дипептида, могут представлять собой любую комбинацию природных аминокислот и неприродных аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации дипептид содержит природные аминокислоты. Если линкер представляет собой линкер, лабильный к действию катепсина, то дипептид представляет собой участок расщепления, опосредованного катепсином. Дипептид, таким образом, является участком распознавания для катепсина.
Согласно одному из вариантов реализации группа -Х!-Х2- в дипептиде, -NH-X!-X2-CO-, выбрана из
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-,
где Cit представляет собой цитруллин. В указанном дипептиде -NH- представляет собой аминогруппу в Xb а СО представляет собой карбонильную группу в Х2.
Предпочтительно группа -ХГХ2- в дипептиде, -NH-XrX2-CO-, выбрана из
Более предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -NH-X1-X2-CO-, представляет собой -Phe-Lys-или -Val-Ala-.
Другие важные комбинации аминокислот в дипептиде включают
Можно применять другие комбинации аминокислот в дипептиде, включая описанные выше. Согласно одному из вариантов реализации L*-D представляет собой
/ - NH-XrX2-CO-N < *
где -NH-X1-X2-CO представляет собой дипептид, N < является частью звена лекарственного соединения, звездочка означает места присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия означает место присоединения к остатку L1 или место присоединения к А1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к А1.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид представляет собой валин-аланин, а L1-D представляет собой
где звездочки, -N < и волнистая линия такие, как определено выше.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид представляет собой фенилаланин-лизин, D представляет собой
L1-
где звездочки, -N < и волнистая линия такие, как определено выше.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид представляет собой валин-цитруллин.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой
L J m
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 7, предпочтительно от 3 до 7, более предпочтительно 3 или 7.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой
Q ^\ г 1 " . 1
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
n m
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, S представляет собой серосодержащую группу звена лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части звена лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-!,1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, S представляет собой серосодержащую группу звена лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части звена лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-!,1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, S представляет собой серосодержащую группу звена лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части звена лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 7, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-!,1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-!,1 представляют собой
Q ^\ г 1 " I 1
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-!,1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации удлиняющее звено представляет собой ацетамидное звено, имеющее формулу
/-CH2-CO-N-*
где звездочка означает место присоединения к остатку удлиняющего звена, L1 или D, а волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда. Линкер-лекарственное соединение.
Согласно другим вариантам реализации предложены лекарственные соединения, связанные с линкером, для конъюгации с лигандом. Согласно одному из вариантов реализации лекарственные соединения, связанные с линкером, предназначены для соединения со связывающимся с клетками агентом.
Согласно одному из вариантов реализации лекарственное соединение, связанное с линкером, имеет формулу
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, G1 представляет собой удлиняющее звено (А1) для образования связи со звеном лиганда, L1 представляет собой специфичное звено, L (звено-спейсер) представляет собой ковалентную связь или совместно с -ОС(=О)- образует саморасщепляющуюся(иеся) группу(ы).
Согласно другому варианту реализации лекарственное соединение, связанное с линкером, имеет формулу
G1-L1-L2- *,
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, G1 представляет собой удлиняющее звено (А1) для образования связи со звеном лиганда, L1 представляет собой специфичное звено, L2 (звено-спейсер) представляет собой ковалентную связь или саморасщепляющую-ся(иеся) группу(ы).
L1 и L2 являются такими, как определено выше. Выражение "связывание с А1" можно рассматривать в данном случае как связывание с G1.
Согласно одному из вариантов реализации, когда L1 содержит аминокислоту, боковая цепь этой аминокислоты может быть защищена. Можно использовать любые подходящие защитные группы. Согласно одному из вариантов реализации защитные группы боковой цепи способны удаляться совместно с другими защитными группами, присутствующими в соединении. Согласно другим вариантам реализации защитные группы могут быть расположены ортогонально по отношению к другим защитным группам, присутствующим в молекуле.
Подходящие защитные группы боковых цепей аминокислот включают группы, описанные в каталоге Novabiochem 2006/2007 (Novabiochem Catalog 2006/2007). Защитные группы для линкера, лабильного к действию катепсина, также описаны в источнике Dubowchik et al.
Согласно конкретным вариантам реализации группа L1 включает остаток аминокислоты Lys. Боко
вая цепь этой аминокислоты может быть защищена при помощи Boc- или Alloc-защитных групп. Вос-защитная группа является более предпочтительной.
Функциональная группа G1 образует связывающую группу в результате взаимодействия со звеном лиганда (например, со связывающимся с клетками агентом).
Согласно одному из вариантов реализации функциональная группа G1 представляет собой или содержит аминокислоту, карбоновую кислоту, гидроксигруппу, тиольную или малеимидную группу для взаимодействия с соответствующей группой звена лиганда. Согласно предпочтительному варианту реализации G1 содержит малеимидную группу.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой алкилмалеимидную группу. Указанная группа подходит для взаимодействия с тиольными группами, в частности с тиольными группами цистеина, присутствующими в связывающемся с клетками агенте, например присутствующими в антителе.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
О Г О
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 2, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8. Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 2, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1 и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8.
где звездочка означает связь с остатком группы G.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу
где звездочка означает связь с остатком группы G.
Согласно одному из вариантов реализации малеимидная группа замещена на группу, выбранную из
В каждом из указанных выше вариантов реализации можно использовать альтернативную функциональную группу вместо малеимидной группы, показанной ниже
из которых -С(=О)СН2Х может быть предпочтительной, особенно когда указанная карбонильная группа связана с -NH-.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой -NH2, -NHMe, -COOH, -ОН или -SH.
Согласно одному из вариантов реализации, когда L1 присутствует, G1 представляет собой -NH2 или -NHMe. Каждая из групп может представлять собой N-конец последовательности аминокислот в L1.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, G1 представляет собой -NH2, и L1 представляет собой последовательность аминокислот -Х1-Х2-, как определено выше.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой СООН. Эта группа может представлять собой С-конец последовательности аминокислот в L1.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой ОН. Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой SH.
Группа G1 способна превращаться из одной функциональной группы в другую. Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой -NH2. Указанная группа способна превращаться в другую группу G1, содержащую малеимидную группу. Например, группу -NH2 можно подвергать взаимодействию с кислотами или активированной кислотой (например, с N-сукцинимидными формами кислот) тех групп G1, содержащих малеимидную группу, показанных выше.
Группу G1, таким образом, можно превращать в функциональную группу, которая больше подходит
для взаимодействия со звеном лиганда.
Как отмечалось выше, согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, a G1 представляет собой -NH2, -NHMe, -COOH, -ОН или -SH. В дополнительном варианте реализации указанные группы предложены в химически защищенной форме. Химически защищенная форма, таким образом, является предшественником линкера, который содержит функциональную группу.
Согласно одному из вариантов реализации G1 представляет собой -NH2 в химически защищенной форме. Указанная группа может быть защищена карбаматной защитной группой. Карбаматная защитная группа может быть выбрана из группы, состоящей из: Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Cbz и PNZ.
Предпочтительно, если G1 представляет собой -NH2, то она защищена Alloc- или Fmoc-группой. Согласно одному из вариантов реализации, если G1 представляет собой -NH2, то она защищена Fmoc-группой.
Согласно одному из вариантов реализации защитная группа является такой же, как и карбаматная защитная группа блокирующей (кэппирующей) группы.
Согласно одному из вариантов реализации защитная группа отличается от карбаматной защитной группы блокирующей группы. Согласно указанному варианту реализации предпочтительно, чтобы защитная группа была способна удаляться в условиях, при которых не происходит удаление карбаматной защитной группы блокирующей группы.
Химическую защитную группу можно удалять для получения функциональной группы, связывающейся со звеном лиганда. Указанная функциональная группа затем необязательно может быть превращена в другую функциональную группу, описанную выше.
Согласно одному из вариантов реализации активная группа представляет собой амин. Указанный амин предпочтительно представляет собой N-терминальный амин, входящий в состав пептида, а также может представлять собой N-терминальный амин, входящий в состав предпочтительных дипептидов согласно настоящему изобретению.
Активную группу можно подвергать взаимодействию с образованием функциональной группы, предназначенной для образования связи со звеном лиганда.
Согласно другим вариантам реализации линкер представляет собой предшественник линкера, содержащего активную группу. Согласно указанному варианту реализации линкер содержит активную группу, которая защищена с помощью защитной группы. Защитную группу можно удалить для получения линкера, содержащего активную группу.
Если активная группа представляет собой амин, то защитная группа может представлять собой защитную группу аминогруппы, например, описанную в источнике Green и Wuts.
Защитная группа предпочтительно расположена ортогонально по отношению к другим защитным группам, присутствующим в звене линкера.
Согласно одному из вариантов реализации защитная группа расположена ортогонально к блокирующей группе. Таким образом, защитная группа активной группы способна удаляться с сохранением блокирующей группы. Согласно другим вариантам реализации защитная группа и блокирующая группа способна удаляться в тех же условиях, что и, например, условия для удаления блокирующей группы. Согласно одному из вариантов реализации звено линкера представляет собой
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, и волнистая линия означает место присоединения к остатку звена линкера, если он присутствует, или место присоединения к G1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к G1.
Согласно одному из вариантов реализации звено линкера представляет собой
где звездочка и волнистая линия являются такими, как определено выше.
Другие функциональные группы, подходящие для применения для образования связи между L1 и связывающимся с клетками агентом, описаны в WO 2005/082023. Звено лиганда.
Звено лиганда может быть любым и включает белок, полипептид, пептид и непептидный агент, ко
торый специфично связывается с молекулой-мишенью. Согласно некоторым вариантам реализации звено лиганда может представлять собой белок, полипептид или пептид. Согласно некоторым вариантам реализации звено лиганда может представлять собой циклический полипептид. Указанные звенья лиган-дов могут включать антитела или фрагмент антитела, который содержит по меньшей мере один участок связывания с молекулой-мишенью, лимфокины, гормоны, факторы роста или любые другие связывающиеся с клетками молекулы или вещества, которые могут специфично связываться с мишенью. В настоящем документе звено лиганда также называют "связывающим агентом" или "нацеливающим агентом".
Термины "специфично связывается" и "специфичное связывание" относятся к связыванию антитела или другого белка, полипептида или пептида с целевой молекулой (например, с антигеном). Как правило, антитело или другая молекула связывается с аффинностью, составляющей по меньшей мере примерно 1х107 М-1, при этом аффинность связывания с целевой молекулой по меньшей мере в два раза выше аффинности связывания с другими молекулами (например, БСА, казеина), отличными от целевой молекулы или родственной ей молекулы.
Примеры звеньев лигандов включают агенты, описанные для применения в документе WO 2007/085930, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Согласно некоторым вариантам реализации звено лиганда представляет собой связывающийся с клетками агент, который связывается с внеклеточной мишенью на поверхности клетки. Указанный связывающийся с клетками агент может представлять собой белок, полипептид, пептид или непептидный агент. Согласно некоторым вариантам реализации связывающийся с клетками агент может представлять собой белок, полипептид или пептид. Согласно некоторым вариантам реализации связывающийся с клетками агент может представлять собой циклический полипептид. Связывающийся с клетками агент также может представлять собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела. Таким образом, согласно одному из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC).
Согласно одному из вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, полностью человеческое антитело или одноцепочечное антитело. Один из вариантов реализации антитела представляет собой фрагмент одного из представленных антител, имеющих биологическую активность. Примеры указанных фрагментов включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv.
Антитело может представлять собой диатело, доменное антитело (DAB) или одноцепочечное антитело.
Согласно одному из вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело.
Антитела для применения в настоящем изобретении включают антитела, описанные в документе WO 2005/082023, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Особенно предпочтительными являются антитела к опухолеассоциированным антигенам. Примеры указанных антигенов, известных в данной области техники, включают, но не ограничиваются ими, опухолеассоцииро-ванные антигены, представленные в WO 2005/082023. См., например, стр. 41-55.
Согласно некоторым вариантам реализации указанные конъюгаты предназначены для направленного действия на опухолевые клетки через антигены, расположенные на поверхности клетки. Антигены могут представлять собой антигены, расположенные на поверхности клетки, которые сверхэкспрессиру-ются или экспрессируются с отклонениями по времени или атипичными клетками. Предпочтительно антиген-мишень экспрессируется только пролиферирующими клетками (предпочтительно опухолевыми клетками); тем не менее, это явление редко наблюдают на практике. В результате, антигены-мишени, как правило, выбирают на основании дифференциальной экспрессии между пролиферирующими и здоровыми тканями.
Были разработаны антитела для направленного действия на определенные опухолеассоциирован-ные антигены, включая Cripto, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, гликопротеин NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD70, CD79, CD138, PSCA, ПСМА (простатспецифический мембранный антиген) (PSMA), ВСМА, Е-селектин, EphB2, меланотрансферин (Melanotransferin), Muc16 и TMEFF2.
Звено лиганда связано с линкером. Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано с А, входящим в состав звена линкера, если А присутствует.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством простой тиоэфирной связи.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством дисульфидной связи.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством амидной связи.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством сложноэфирной связи.
Согласно одному из вариантов реализации связывание звена лиганда и звена линкера осуществляется посредством связывания тиольной группы остатка цистеина в звене лиганда и малеимидной группы
в звене линкера.
Остатки цистеина в звене лиганда могут быть доступны для взаимодействия с функциональными группами звена линкера для образования связи. Согласно другим вариантам реализации, например, когда звено лиганда представляет собой антитело, тиольные группы антитела могут участвовать в образовании межцепочечных дисульфидных связей. Указанные межцепочечные связи можно превращать в свободные тиольные группы, например, путем обработки антитела DTT до взаимодействия с функциональной группой звена линкера.
Согласно некоторым вариантам реализации остаток цистеина вводят в тяжелую или легкую цепь антитела. Положения ввода цистеина в результате реакции замещения в тяжелых или легких цепях антитела включают положения, описанные в публикации заявки US 2007/0092940 и публикации международной заявки WO 2008070593, содержание которых включено в настоящее описание.
Способы лечения.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в способе терапии. Также предложен способ лечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количество соединения формулы I. Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество, достаточное для достижения благоприятного действия для пациента. Указанное благоприятное действие может представлять собой, по меньшей мере, облегчение по меньшей мере одного симптома. Фактическое количество вводимого соединения, а также скорость и длительность введения будут зависеть от характера и степени тяжести состояния, подвергаемого лечению. Назначения для лечения, например выбор дозировки, входят в компетенцию врачей общей практики и других лечащих врачей.
Соединение можно вводить индивидуально или в комбинации с другими способами лечения, например, одновременно или последовательно, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению. Примеры способов лечения и терапий включают, но не ограничиваются ими, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например, лекарственные средства, оперативное вмешательство и лучевую терапию.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению и для применения согласно настоящему изобретению могут включать в дополнение к активному ингредиенту, т.е. к соединению формулы I, фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель, буфер, стабилизатор или другие вещества, хорошо известные специалистам в данной области техники. Указанные вещества должны быть нетоксичными и не должны снижать эффективность активного ингредиента. Конкретная природа носителя или другого вещества будет зависеть от способа введения, который может быть пероральным или представлять собой инъекцию, например кожную, подкожную или внутривенную.
Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в форме таблеток, капсул, порошка или в жидкой форме. Таблетка может содержать твердый носитель или вспомогательное средство. Жидкие фармацевтические композиции, как правило, содержат жидкий носитель, такой как вода, минеральные, животные или растительные масла, минеральные или синтетические масла. В такую композицию может быть включен физиологический солевой раствор, раствор декстрозы или раствор другого сахарида или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Капсула может включать твердый носитель, такой как желатин.
В случае внутривенной, кожной или подкожной инъекции или инъекции в место поражения, активный ингредиент должен находиться в форме водного раствора, подходящего для парентерального введения, который является апирогенным и имеет подходящие рН, изотоничность и стабильность. Специалисты в данной области техники смогут приготовить подходящие растворы с применением, например, изотонических разбавителей, таких как хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, лакти-рованный раствор Рингера для инъекций. Консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки можно вводить при необходимости.
Соединения и конъюгаты можно применять для лечения пролиферативного заболевания и аутоиммунного заболевания. Термин "пролиферативное заболевание" относится к нежелательной или неконтролируемой клеточной пролиферации с избыточным содержанием клеток в организме или атипичных клеток, что представляет собой нежелательный процесс, например неопластический или гиперпластический рост in vitro или in vivo.
Примеры пролиферативных состояний включают, но не ограничиваются ими, доброкачественную, предопухолевую и злокачественную пролиферацию клеток, включая, но не ограничиваясь ими, неоплазмы и опухоли (например, гистиоцитому, глиому, астроцитому, остеому), раковые заболевания (например, рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, рак толстой кишки, карциному молочной железы, карциному яичников, рак простаты, рак яичек, рак печени, рак почек, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак мозга, саркому, остеосаркому, саркому Капоши, меланому), лейкозы, псориаз, заболевания костей, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей) и атеросклероз. Другие раковые заболевания, представляющие интерес, включают, но не ограничиваются ими, гематологические злокачественные опухоли, такие как лейкозы и лимфомы, например неходжкинскую лимфому и ее подтипы, такие как ДКВКЛ (диффузная крупнокле
точная В-клеточная лимфома), лимфому маргинальной зоны, мантийной зоны и фолликулярную лимфо-му, лимфому Ходжкина, ОМЛ (острый миелобластный лейкоз) и другие раковые заболевания В- или Т-клеток.
Примеры аутоиммунных заболеваний включают следующие: ревматоидный артрит, аутоиммунные демиелинизирующие нарушения (например, рассеянный склероз, аллергический энцефаломиелит), псо-риатический артрит, эндокринную офтальмопатию, увеоретинит, системную красную волчанку, тяжелую миастению, болезнь Грейвса, гломерулонефрит, аутоиммунные нарушения печени, воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона), анафилаксию, аллергические реакции, синдром Шегрена, сахарный диабет I типа, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, фибромиалгию, полимиозит, дерматомиозит, множественную эндокринную недостаточность, синдром Шмидта, аутоиммунный увеит, болезнь Аддисона, адреналит, тироидит, тироидит Хашимото, аутоиммунный тироидит, пер-нициозную анемию, атрофию желудка, хронический гепатит, волчаночный гепатит, атеросклероз, подо-струю кожную красную волчанку, гипопаратиреоз, синдром Дресслера, аутоиммунную тромбоцитопе-нию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, гемолитическую анемию, вульгарную пузырчатку, пузырчатку, герпетиформный дерматит, алопецию Ареата, пемфигоид, склеродермию, прогрессирующий системный склероз, CREST-синдром (кальциноз, синдром Рейно, нарушение моторики пищевода, склеродактилия и телеангиэктазия), мужское и женское аутоиммунное бесплодие, анкилозирующий спондилит, язвенный колит, смешанное заболевание соединительной ткани, нодозный полиартериит, системный некротизирующий васкулит, атопический дерматит, атопический ринит, синдром Гудпасчера, болезнь Шагаса, саркоидоз, ревматическую лихорадку, астму, привычный выкидыш, антифосфолипид-ный синдром, "легкое фермера", мультиформную эритему, посткардиотомный синдром, синдром Ку-шинга, аутоиммунный хронический активный гепатит, "легкое птицевода", токсический эпидермальный некролиз, синдром Альпорта, альеволит, аллергический альвеолит, фиброзный альвеолит, интерстици-альное заболевание легких, нодозную эритему, гангренозную пиодермию, трансфузионную реакцию, артериит Такаясу, ревматоидную полимиалгию, темпоральный артериит, шистосомоз, гигантоклеточный артериит, аскариаз, аспергиллез, синдром Самптера, экзему, лимфоматоидный гранулематоз, болезнь Бехчета, синдром Каплана, болезнь Кавасаки, лихорадку денге, энцефаломиелит, эндокардит, фиброз эндомиокарда, эндофтальмит, стойкую возвышающуюся эритему, псориаз, эритробластоз плода, эози-нофильный фасциит, синдром Шульмана, синдром Фелти, филариаз, циклит, хронический циклит, гетерохромный циклит, циклит Фукса, нефропатию IgA, пурпуру Геноха-Шенлейна, реакцию "трансплантат против хозяина", отторжение трансплантата, кардиомиопатию, синдром Итона-Ламберта, рецидивирующий полихондрит, криоглобулинемию, макроглобулинемию Вальденстрема, синдром Эванса и аутоиммунную гонадную недостаточность.
Согласно некоторым вариантам реализации аутоиммунное заболевание представляет собой нарушение, связанное с В-лимфоцитами (например, системную красную волчанку, синдром Гудпасчера, ревматоидный артрит и диабет I типа), Th1-лимфоцитами (например, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз, синдром Шегрена, тироидит Хашимото, болезнь Грейвса, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, туберкулез или заболевание "трансплантат против хозяина") или Th2-лимфоцитами (например, атопический дерматит, системную красную волчанку, атопическую астму, ри-ноконъюнктивит, аллергический ринит, синдром Оменна, системный склероз или хроническое заболевание "трансплантат против хозяина"). В целом, нарушения, связанные с дендритными клетками, включают нарушения, связанные с Th1-лимфоцитами и Th2-лимфоцитами. Согласно некоторым вариантам реализации аутоиммунное нарушение представляет собой нарушение иммунной системы, опосредованное Т-клетками.
Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 10 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 5 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 5 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 5 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 4 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 3 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 3 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 2 мг/кг на дозу.
Другие формы.
Если не указано иное, предложенные выше заместители включают хорошо известные ионные формы, соли, сольваты и защищенные формы указанных заместителей. Например, ссылка на карбоновую кислоту (-СООН) также включает анионную (карбоксилатную) форму (-СОО-), соль или сольват кислоты, а также традиционные защищенные формы. Аналогично, ссылка на аминогруппу включает протони-рованную форму (-N+HR1R2), соль или сольват аминогруппы, например гидрохлоридную соль, а также
традиционные защищенные формы аминогруппы. Аналогично, ссылка на гидроксильную группу также включает анионную форму (-О-), соль или сольват указанной группы, а также традиционные защищенные формы. Соли.
Могут быть удобными или желательными получение, очистка и/или обращение с соответствующей солью активного соединения (конъюгата), например фармацевтически приемлемой солью. Примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Например, если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая может быть анионной (например, -СООН может представлять собой -СОО-), в данном случае возможно образование соли с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Na+ и K+, катионы щелочно-земельных металлов, такие как Са2+ и Mg2+, и другие катионы, такие как Al3+. Примеры подходящих органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (NH4) и замещенные ионы аммония (например, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутила-мина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холи-на, меглумина и трометамина, а также из аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является ^СН3)4 .
Если соединение является катионным или содержит функциональную группу, которая может быть катионной (например, -NH2 может представлять собой -NH3), тогда возможно образование соли с подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих неорганических кислот: хлороводородной, бромоводородной, йодоводородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой.
Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих органических кислот: 2-ацетилоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспараги-новой, бензойной, камфорсульфокислоты, коричной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этанди-сульфокислоты, этансульфокислоты, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, глико-левой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изетионовой, молочной, лактобионовой, ла-уриновой, малеиновой, яблочной, метансульфокислоты, муциновой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфокислоты, пропионовой, виноградной, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, винной, толуолсульфокислоты и валериановой. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.
Сольваты.
Могут быть удобными или желательными получение, очистка и/или обращение с соответствующим сольватом активного соединения. Термин " сольват" используют в настоящем изобретении в общепринятом значении для обозначения комплекса растворенного вещества (например, активного соединения, соли активного соединения) и растворителя. Если растворитель представляет собой воду, то сольват обычно называют гидратом, например моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.
Карбиноламины.
Изобретение включает соединения, в которых присоединение растворителя проходит по иминной связи фрагмента PBD, что показано ниже, где растворитель представляет собой воду или спирт (RAOH, где RA представляет собой С 1.4 алкил)
Указанные формы можно назвать карбиноламинной и простой эфирной карбиноламинной формой PBD. Равновесие в указанных реакциях зависит от условий, в которых находятся соединения, а также от природы самого фрагмента.
Указанные конкретные соединения можно выделить в твердом виде, например, путем лиофилиза-
ции.
Изомеры.
Конкретные соединения могут существовать в одной или более конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, атропоизмерных, стереоизомерных, таутомер-ных, конформационных или аномерных формах, включая, но не ограничиваясь ими, цис- и транс-формы; Е- и Z-формы; с-, t- и r-формы; эндо- и экзо-формы; R-, S- и мезо-формы; D- и L-формы; d- и l-формы; (+) и (-)-формы; кето-, -енольные и -енолятные формы; син- и антиформы; синклинальные и антиклинальные формы; а- и Р-формы; аксиальные и экваториальные формы; конформации "ванна", "кресло", "твист", "конверт" и "полукресло"; а также их комбинации, которые далее в целом называют "изомера
ми" (или "изомерными формами").
Необходимо отметить, что за исключением описанного ниже для таутомерных форм из термина "изомеры", используемого в настоящем документе, специально исключены структурные (или конституционные) изомеры (т.е. изомеры, имеющие различные связи между атомами, а не только различное положение атомов в пространстве). Например, ссылку на метоксигруппу -ОСН3 не следует рассматривать как ссылку на ее структурный изомер, гидроксиметильную группу -СН2ОН. Аналогично, ссылку на орто-хлорфенил не следует рассматривать как ссылку на его структурный изомер, метахлорфенил. Тем не менее, ссылка на класс структур вполне может включать структурные изомерные формы, входящие указанный класс (например, С1-7 алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и параметоксифенил).
Указанное выше исключение не относится к таутомерным формам, например кето-, -енольным и -енолятным формам, как, например, в случае следующих таутомерных пар: кето/енол (показано ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол, N-нитрозо/ гидроксиазо и нитро/ацинитро
V ,Я \ /> н н+ \ р-с-с ^ с=с = с=с I \ / \ н+ / \
Кето енол енолят
Следует отметить, что в термин "изомер" специально включены соединения с замещением одного или более атомов изотопами. Например, Н может представлять собой любой изотоп, включая 1Н, 2Н(D) и
3 12 13 14
3Н(Т); С может представлять собой любой изотоп, включая 12С, 13С и 14С; О может представлять собой
любой изотоп, включая и т.п.
Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение включает все указанные изомерные формы, включая (полностью или частично) рацемические и другие смеси. Способы получения (например, асимметрический синтез) и разделения (например, фракционная кристаллизация и хроматографические методы) указанных изомерных форм или известны из уровня техники, или легкодоступны за счет известной адаптации известным образом способов, описанных в настоящем документе, или известных способов.
Общие способы синтеза
Синтез соединений PBD широко представлен в следующих источниках, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки:
a) WO 00/12508 (стр.14-30);
b) WO 2005/023814 (стр.3-10);
c) WO 2004/043963 (стр.28-29) и
d) WO 2005/085251 (стр.30-39). Способ синтеза.
Конъюгаты согласно настоящему изобретению, где R10 и R11 образуют двойную азот-углеродную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, можно синтезировать из соединения формулы 2
PrOtN 9'
Формула 2
где R2, R6, R7, R9, R6, R7, R9, R12, X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы I, ProtN представляет собой защитную группу атома азота для проведения синтеза, и Prot° представляет собой защищенную кислородсодержащую группу для проведения синтеза или оксогруппу, путем снятия защиты иминной связи при помощи стандартных методов.
Получаемое соединение может быть в карбиноламинной форме или простой эфирной карбинола-минной форме в зависимости от используемых растворителей. Например, если ProtN представляет собой Troc, a Prot° представляет собой защитную группу атома кислорода для проведения синтеза, то снятие защиты проводят с применением пары Cd/Pb с получением соединения формулы (I). Если ProtN представляет собой SEM или аналогичную группу и Prot° представляет собой оксогруппу, тогда оксогруппу можно удалить путем восстановления, которое приводит к образованию промежуточного защищенного карбиноламина, который затем можно обработать для удаления SEM-защитной группы, с последующим удалением воды. Восстановление соединения формулы 2 можно проводить, например, при помощи тет-раборгидрида лития, в то же время подходящим способом удаления SEM-защитной группы является обработка силикагелем.
Соединения формулы 2 можно синтезировать из соединения формулы 3а
Формула За
TfO
где R2, R6, R7, R9, R6, R7, R9, X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания с металлорганическим производным, содержащим R12, например с борорганическим производным. Борорганическое производное может представлять собой боронат или бороновую кислоту. Соединения формулы 2 можно синтезировать из соединения формулы ЗЬ
Формула 3b
OTf
где R12, R6, R7, R9, R6, R7, R9, X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания с металлорганическим производным, содержащим R2 или его предшественником, например с борорганическим производным. Борорганическое производное может представлять собой бо-ронат или бороновую кислоту.
Соединения формул За и ЗЬ можно синтезировать из соединения формулы 4
ProtN п о I Prot
V__^ Формула 4
TfO ^ \\ 16- 16 // ^ OTf
о R R о
где R2, R6, R7, R9, R6, R7, R9, X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания примерно с одним эквивалентом (например, от 0,9 или 1 до 1,1 или 1,2) металлоргани-ческого производного, например борорганического производного, содержащего R2 или R12.
Сочетание, описанное выше, как правило, проводят в присутствии палладиевого катализатора, например, Pd(PPh3)4, Pd(OCOCH3)2, PdCl2 или Pd2(dba)3. Реакцию сочетания можно проводить в обычных условиях, но также можно проводить в условиях микроволнового излучения.
Две стадии реакции сочетания, как правило, проводят последовательно. Их можно проводить с проведением или без проведения очистки между двумя стадиями. Если очистку не проводят, то две стадии можно проводить в одном реакционном сосуде. Проведение очистки обычно требуется после второй стадии реакции сочетания. Очистку соединения от нежелательных побочных продуктов можно проводить путем колоночной хроматографии или ион-обменного разделения.
Синтез соединений формулы 4, где Prot° представляет собой оксогруппу, a ProtN представляет собой SEM, подробно описан в документе WO 00/12508, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. В частности, в настоящем описании приведена ссылка на схему 7 на стр. 24, где предложенное выше соединение обозначено как промежуточное вещество Р. Этот способ синтеза также описан в WO 2004/043963.
Синтез соединений формулы 4, где Prot° представляет собой защищенную кислородсодержащую группу, описан в документе WO 2005/085251, в котором описан синтез, включенный в настоящее описание посредством ссылки.
Соединения формулы I, где R10 и R10 представляют собой Н, и R11 и R11 представляют собой SOzM, можно синтезировать из соединений формулы I, где R10 и R11 образуют двойную азот-углеродную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, путем присоединения подходящей би-сульфитной соли или сульфинатной соли и последующей стадии соответствующей очистки. Дополнительные способы описаны в документе GB 2053894, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Защитные группы атома азота для синтеза.
Защитные группы азота для проведения синтеза хорошо известны в данной области техники. В настоящем изобретении особенно важны карбаматные защитные группы азота и гемиаминальные защитные группы азота.
Карбаматные защитные группы азота имеют следующую структуру:
R'1- CL /О
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в Greene, T.W. и Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, стр. 503-549, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Особенно предпочтительные защитные группы включают Troc, Teoc, Fmoc, BOC, Doc, Hoc, ТсВОС, 1-Adoc и 2-Adoc.
Другими возможными группами являются нитробензилоксикарбонил (например, 4-нитробензилоксикарбонил) и 2-(фенилсульфонил)этоксикарбонил.
Защитные группы, которые можно удалить с помощью палладиевого катализа, например, Alloc, не являются предпочтительными.
Гемиаминальные защитные группы азота имеют следующую структуру:
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в качестве защитных групп амидной группы в Greene, T.W. and Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на стр. 633-647, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Группы, описанные в настоящем документе, можно применять для соединений для применения согласно настоящему изобретению. Указанные группы включают, но не ограничиваются ими, SEM, MOM, MTM, MEM, BOM, нитро- или метоксизамещенный ВОМ и Q3CCH2OCH2-.
Защищенные группы кислорода для проведения синтеза.
Защищенные группы кислорода для проведения синтеза хорошо известны в данной области техники. Большое число подходящих защитных групп кислорода описано в Greene, T.W. и Wuts, G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на стр. 23-200, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Особенно важные классы таких групп включают простые силильные эфиры, простые метиловые эфиры, простые алкильные эфиры, простые бензиловые эфиры, сложные эфиры, ацетаты, бензоаты, карбонаты и сульфонаты.
Предпочтительные защитные группы атома кислорода включают ацетаты, TBS и ТНР.
Синтез конъюгатов лекарственного вещества.
Конъюгаты могут быть получены так, как описано ранее. Линкеры, содержащие малеимидильную группу (А), пептидную группу (L1) и саморасщепляющуюся группу (L2) могут быть получены, как описано в патенте США № 6214345, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Линкеры, содержащие малеимидильную группу (А) и пептидную группу (L1) могут быть получены, как описано в публикации WO 2009/0117531, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Другие линкеры могут быть получены согласно ссылками, приведенным в настоящем документе, или методам, известным специалисту в данной области техники.
Лекарственные соединения, связанные с линкером, могут быть получены согласно способам, известным в данной области техники. Связывание заместителей X на основе аминов (звено лекарственного соединения димера PDB) с активными группами звеньев линкера можно осуществить согласно способам, в целом, описанным в патентах США № 6214345 и 7498298; и WO 2009-0117531, или а также известны специалисту в данной области техники.
Антитела могут быть конъюгированы с лекарственными соединениями, связанными с линкером, как описано в Doronina et al., Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784). Вкратце, антитела (4-5 мг/мл) в PBS, содержащем 50 нМ бората натрия, при рН 7,4 восстанавливают гидрохлоридом трис(карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) при 37°С. Протекание реакции, в результате которой восстанавливаются межцепочечные дисульфиды, контролируют путем взаимодействия с 5,5'-дитиобис(2-нитробензойной кислотой) и оставляют до достижения требуемого уровня тиолов/mAb. Затем восстановленное антитело охлаждают до 0°С и алкилируют 1,5 экв. малеимидного лекарственного соединения, связанного с линкером, на тиол антитела. Через 1 ч реакцию гасят путем добавления 5 экв. N-ацетилцистеина. Гашеное лекарственное соединение, связанное с линкером, удаляют с помощью фильтрации в геле через колонку PD-10. Затем ADC стерильно фильтровали через 0,22 мкм шприцевой фильтр. Концентрация белка может быть определена с помощью спектрального анализа при 280 нм и 329 нм соответственно, с поправкой на поглощение лекарственного соединения при 280 нм. Эксклюзионную хроматографию можно использовать для определения чрезмерной агрегации антител, и RP-HPLC (обра-щенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография) можно использовать для определения содержания оставшегося NAC-гашеного лекарственного соединения, связанного с линкером.
Антитела с введенными остатками цистеина можно конъюгировать с соединениями "линкер-лекарственное соединение", как описано в международной публикации на патент WO 2008/070593, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки. Антитела, содержащие введенный остаток цистеина в основной цепи, полностью восстанавливают путем добавления 10 экв. ТСЕР и 1 мМ ЭДТА и доводя рН до 7,4 с помощью 1М Трис буфера (рН 9,0). После 1 ч инкубации при 37°С реак
ционную смесь охлаждают до 22°С и добавляют 30 экв. дегидроаскорбиновой кислоты для селективного повторного окисления исходных дисульфидов, сохраняя введенный цистеин в восстановленном состоянии. рН доводят до 6,5 с помощью 1М Трис буфера (рН 3,7) и реакцию оставляют протекать в течение 1 ч при 22°С. Затем рН раствора опять повышают до 7,4 путем добавления 1 М Трис буфера (рН 9,0). 3,5 экв. линкера лекарственного соединения PBD в ДМСО помещают в подходящий контейнер для разбавления пропиленгликолем до добавления к реакционной смеси. Для сохранения растворимости линкера лекарственного соединения PBD само антитело сначала разбавляют пропиленгликолем до конечной концентрации 33% (например, если раствор антитела имел реакционный объем 60 мл, добавляют 30 мл про-пиленгликоля). Такой же объем пропиленгликоля (30 мл в данном примере) добавляют к линкеру лекарственного соединения PBD в качестве разбавителя. После перемешивания раствор линкера лекарственного соединения PBD в пропиленгликоле добавляют к раствору антитела для проведения конъюгации; конечная концентрация пропиленгликоля составляла 50%. Реакцию оставляют протекать в течение 30 мин и затем гасят путем добавления 5 экв. N-ацетилцистеина. ADC очищают с помощью ультрафильтрации через 30 kD мембрану. (Следует отметить, что концентрацию пропиленгликоля, используемого в реакции, можно уменьшить для любого конкретного PBD, поскольку он только решает проблему сохранения растворимости линкера лекарственного соединения в водной среде).
Для соединений линкер-лекарственное соединение на основе галогенацетамида конъюгацию можно проводить в целом следующим образом. К раствору восстановленных и повторно окисленных антител (содержащих введенные цистеины в основную цепь) в 10 мМ Трис (рН 7,4), 50 мМ NaCl и 2 мМ DTPA добавляют 0,5 об. пропиленгликоля. 10 мМ раствор соединения линкер-лекарственное соединение на основе галогенацетамида в диметилацетамиде получают непосредственно перед конъюгацией. Эквивалентное количество пропиленгликоля, добавленного к раствору антитела, добавляют к 6-кратному молярному избытку соединения линкер-лекарственное соединение. Разбавленный раствор линкер-лекарственное соединение добавляют к раствору антитела и рН доводят до 8-8,5 с использованием 1М Трис (рН 9). Реакцию конъюгации проводят в течение 45 мин при 37°С. Конъюгацию контролируют по восстановлению и денатурированию обращено-фазовой PLRP-S хроматографии, избыток соединения линкер-лекарственное соединение удаляют с помощью смолы Quadrasil MP и буфер заменяют на 10 мМ Трис (рН 7,4), 50 мМ NaCl и 5% пропиленгликоля с использованиема колонки для обессоливания PD-10. Примеры схем синтеза линкеров лекарственного соединения
Следующие схемы являются иллюстративными способами синтеза линкеров лекарственного соединения - димер PBD показан с конкретными заместителями и димерными связями, однако они могут варьироваться с рамках объема настоящего изобретения.
S4 R, = R2 = R3 = H '
Промежуточное вещество глюкоронидного линкера S1 (ссылка: Jeffrey et al., Bioconjugate
Схема А
Chemistry, 2006, 17, 831-840) можно обработать дифосгеном в дихлорметане при -78°С с получением хлорформиата глюкоронида, который затем подвергают взаимодействию с димером PBD S2, растворенным в CH2Cl2, путем добавления по каплям. Нагревание реакционной смеси до 0°С в течение 2 ч с последующей экстракцией приводит к получению соединения S3. Обработка раствора S3 в соответствующей смеси растворителей МеОН, тетрагидрофурана и воды (охлажденной до 0°С) моногидратом гидро-ксида лития в течение 4 ч с последующим взаимодействием с ледяной уксусной кислотой приводит к получению соединения S4. Добавление сложного эфира малеимидокапроила и NHS к раствору S4 в ДМФА с последующим добавлением диизопропилэтиламина и перемешиваем при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2 ч приводит к получению требуемого линкера лекарственного соединения S5.
Схема В
Малеимидный линкер S6, который может быть синтезирован путем взаимодействия малеимидока-проил^-гидроксисукцинимида и H-Val-Ala-OH, может быть связан с типичными соединениями, S2 в присутствии EEDQ в безводном дихлорметане.
J (ii) сложный эсЬир малеимидокапроила и NHS. DIPEA
S11: R1 = МС '
Линкер S8 может быть связан с типичными соединениями, S2, в присутствии EEDQ в 5% метано-ле/_дихлорметане. Снятие защиты S9 можно проводить с использованием Ph3P, пирролидина и тетракис палладия в безводном дихлорметане. S10 можно преобразовать в требуемые продукты путем добавления сложного эфира малеимидокапроила и NHS в присутствии DIPEA в ДМФА.
Дополнительные предпочтительные варианты реализации.
Предложенные ниже предпочтительные варианты реализации можно применять ко всем аспектам
изобретения, описанным выше, или они могут относиться к одному аспекту. Предпочтительные варианты реализации можно объединять в любой комбинации.
Согласно некоторым вариантам реализации R6, R7, R9, R10, R11 и Y' предпочтительно являются такими же, как R6, R7, R9, R10, R11 и Y соответственно.
Линкер в димере.
Y и Y' предпочтительно представляют собой О.
R" предпочтительно представляет собой С3-7 алкиленовую группу, не содержащую заместителей. Более предпочтительно R" представляет собой С3, C5 или С7 алкилен. Более предпочтительно R" представляет собой С3 или C5 алкилен.
R6 - R9.
предпочтительно представляет собой Н.
R6 предпочтительно выбран из Н, ОН, OR, SH, NH2, нитрогруппы и галогена, более предпочтительно из Н или галогена и более предпочтительно представляет собой Н.
R7 предпочтительно выбран из Н, ОН, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' и галогена, более предпочтительно независимо выбран из Н, ОН и OR, где R предпочтительно выбран из необязательно замещенных С1-7 алкильной, С3-10 гетероциклильной и C5-10 арильной групп. Более предпочтительно R может представлять собой C1-4 алкильную группу, которая может быть замещенной или незамещенной. Заместитель, представляющий интерес, представляет собой C5-6 арильную группу (например, фенил). Особенно предпочтительными заместителями в положении 7 являются ОМе и OCH2Ph. Другие важные заместители представляют собой диметиламино (т.е. -NMe2); -(OC2H4)qOMe, где q составляет от 0 до 2; азотсодержащие С6 гетероциклилы, в том числе морфолино, пиперидинил и N-метилпиперазинил.
Указанные предпочтительные варианты реализации относятся к R9, R6 и R7 соответственно.
R2.
R , R и R независимо выбраны из Н и незамещенного С1-2 алкила. Согласно некоторым вариантам реализации R , R и R , все, представляют собой Н. Согласно другим вариантам реализации R , все, представляют собой метил. Согласно некоторым вариантам реализации R , R и R независимо выбраны из Н и метила.
X выбран из группы, состоящей из ОН, SH, С02Н, СОН, N=C=0, NHNH2, CONHNH2,
-^ \н "-|/ \JH
, NHRN, где RN выбран из группы, состоящей из Н и C1-4 алкила. X может предпочтительно представлять собой ОН, SH, CO2H, -N=C=O или NHRN и может предпочтительно представлять собой ОН, SH, CO2H, -N=C=O или NH2. Особенно предпочтительные группы включают: ОН, SH и NH2, где NH2 является наиболее предпочтительной.
R1122.
R12 выбран из
(a) С6-10 арильной группы, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из группы, содержащей галоген, нитро, циано, простой эфир, С1-7 алкил, С3-7 гетероциклил и бис-окси-С1-3 алкилен;
(b) C1-5 насыщенного алифатического алкила;
(c) С3.6 насыщенного циклоалкила;
R22
(d) r21 , где каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из H, Ci_3 насыщенного алкила, С2.3 ал-
кенила, С2-3 алкинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в группе R12 составляет не
более 5;
(е) r25° , где один из R25a и R25b представляет собой H и другой выбран из фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси, пиридила и тиофенила; и
R24 24
(f) , где R выбран из H; Ci_3 насыщенного алкила; С2.3 алкенила; С2.3 алкинила; циклопро-
пила; фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена метила, метокси; пири-дила и тиофенила.
Когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, он может представлять собой С5-7 арильную группу. С5-7 арильная группа может представлять собой фенильную группу или С5-7 гетероарильную группу, например фуранил, тиофенил и пиридил. Согласно некоторым вариантам реализации R12 предпочтительно представляет собой фенил.
Согласно другим вариантам реализации R12 предпочтительно представляет собой тиофенил, например тиофен-2-ил и тиофен-3-ил.
Когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, он может представлять собой С8-10 арил, например хинолинильную или изохинолинильную группу. Хинолинильная или изохинолинильная группа может быть связана с ядром PBD через любой доступный атом кольца. Например, хинолинил может
представлять собой хинолин-2-ил, хинолин-3-ил, хинолин-4-ил, хинолин-5-ил, хинолин-6-ил, хинолин-7-ил и хинолин-8-ил. Среди указанных групп хинолин-3-ил и хинолин-6-ил могут быть предпочтительными. Изохинолинил может представлять собой изохинолин-1-ил, изохинолин-3-ил, изохинолин-4-ил, изо-хинолин-5-ил, изохинолин-6-ил, изохинолин-7-ил и изохинолин-8-ил. Среди указанных групп изохино-лин-3-ил и изохинолин-6-ил могут быть предпочтительными.
Когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, он может содержать любое число замещающих групп. Предпочтительно он содержит от 1 до 3 замещающих групп, при этом 1 и 2 являются более предпочтительными, замещенные одним заместителем, являются наиболее предпочтительными. Заместители могут находиться в любом положении.
Когда R12 представляет собой С5-7 арильную группу, то единственный заместитель предпочтительно расположен у атома кольца, который не расположен рядом со связью с остатком соединения, т.е. предпочтительно находится в р- или у-положении относительно связи с остатком соединения. Таким образом, если С5-7 арильная группа представляет собой фенил, то заместитель предпочтительно находится в мета-или пара-положениях, более предпочтительно в пара-положении.
Когда R12 представляет собой С8-10 арильную группу, например хинолинил или изохинолинил, он может содержать любое число заместителей в любом положении хинолинового или изохинолинового колец. Согласно некоторым вариантам реализации он содержит один, два или три заместителя, которые могут быть расположены в проксимальном или дистальном кольце или на обоих кольцах (если содержит более одного заместителя).
R12 заместители, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу.
Если заместитель на R12, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой галоген, то предпочтительно он представляет собой F или Cl, более предпочтительно F.
Если заместитель на R12, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой простую эфирную группу, то согласно некоторым вариантам реализации он может представлять собой алкоксигруппу, например С1-7 алкоксигруппу (например, метокси, этокси), или согласно некоторым вариантам реализации он может представлять собой С5-7 арилоксигруппу (например, фенокси, пиридилок-си, фуранилокси). Алкоксигруппа может быть сама дополнительно замещена, например, аминогруппой (например, диметиламино).
Если заместитель на R12, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой С1-7 алкил, то он предпочтительно может представлять собой C1-4 алкильную группу (например, метил, этил, пропил, бутил).
Если заместитель на R12, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой С3-7 гетероциклил, согласно некоторым вариантам реализации он может представлять собой С6 азотсодержащую гетероциклильную группу, например морфолино, тиоморфолино, пиперидинил, пиперазинил. Указанные группы могут быть связаны с остальной частью фрагмента PBD через атом азота. Указанные группы могут быть дополнительно замещены, например, C1-4 алкильными группами. Если С6 азотсодержащая гетероциклильная группа представляет собой пиперазинил, то указанный дополнительный заместитель может быть расположен на втором атоме азота в кольце.
Если заместитель на R12, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой бис-окси-С1-3 алкилен, то предпочтительно он представляет собой бис-оксиметилен или бис-оксиэтилен.
Особенно предпочтительные заместители, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, включают метокси, этокси, фтор, хлор, циано, бис-оксиметилен, метилпиперазинил, морфолино и метил-тиофенил. Другим особенно предпочтительным заместителем в R12 является диметиламинопропилокси.
Особенно предпочтительные замещенные группы R12, когда R12 представляет собой C5-10 арильную группу, включают, но не ограничиваются ими, 4-метоксифенил, 3-метоксифенил, 4-метилфенил, 4-этоксифенил, 3-этоксифенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил, 3,4-бис-оксиметиленфенил, 4-метилтиофенил, 4-цианофенил, 4-феноксифенил, хинолин-3-ил и хинолин-6-ил, изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил, 2-тиенил, 2-фуранил, метоксинафтил и нафтил. Другой возможной замещенной группой R12 является 4-нитрофенил.
Когда R12 представляет собой C1-5 насыщенный алифатический алкил, он может представлять собой метил, этил, пропил, бутил или пентил. Согласно некоторым вариантам реализации, он может представлять собой метил, этил или пропил (н-пентил или изопропил). Согласно указанным вариантам реализации он может представлять собой метил. Согласно другим вариантам реализации он может представлять собой бутил или пентил, которые могут быть линейными или разветвленными.
Когда R12 представляет собой С3-6 насыщенный циклоалкил, он может представлять собой цикло-пропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил. Согласно некоторым вариантам реализации, он может представлять циклопропил.
Когда R12 представляет собой r2' , каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, Ci_3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в группе R12 составляет не более 5. Согласно некоторым вариантам реализации общее количество атомов
углерода в группе R12 составляет не более 4 или не более 3.
21 22 23
Согласно некоторым вариантам реализации один из R , R и R представляет собой Н, и две другие группы выбраны из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила.
Согласно другим вариантам реализации два из R21, R22 и R23 представляют собой Н, и другая группа выбрана из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила.
Согласно некоторым вариантам реализации группы, которые не представляют собой Н, выбраны из метила и этила. Согласно некоторым указанным вариантам реализации указанные группы, которые не представляют собой Н, представляют собой метил.
Согласно некоторым вариантам реализации R21 представляет собой Н. Согласно некоторым вариантам реализации R22 представляет собой Н. Согласно некоторым вариантам реализации R23 представляет собой Н. Согласно некоторым вариантам реализации R21 и R22 представляют собой Н.
Согласно некоторым вариантам реализации R21 и R23 представляют собой Н. Согласно некоторым вариантам реализации R22 и R23 представляют собой Н.
Группой R12, представляющая собой особый интерес, является
Когда R12 представляет собой р25а, один из R25a и R25b представляет собой Н и другой выбран из: фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила. Согласно некоторым вариантам реализации группа, которая не представляет собой Н, представляет собой необязательно замещенный фенил. Если необязательный заместитель фенила представляет собой галоген, он предпочтительно представляет собой фтор. Согласно некоторым вариантам реализации указанная фенильная группа незамещена.
Когда R12 представляет собой r24, R24 выбран из Н; Ci_3 насыщенного алкила; С2.3 алкенила; С2.3 алкинила; циклопропила; фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена метила, метокси; пиридила и тиофенила. Если необязательный заместитель фенила представляет собой галоген, он предпочтительно представляет собой фтор. Согласно некоторым вариантам реализации указанная фенильная группа незамещена.
Согласно некоторым вариантам реализации R24 выбран из Н, метила, этила, этенила и этинила. Согласно некоторым вариантам реализации R24 выбран из Н и метила.
M и z.
Предпочтительно М и М' представляют собой одновалентные фармацевтически приемлемые катионы, более предпочтительно Na+.
z предпочтительно представляет собой 3.
Особенно предпочтительными соединениями согласно настоящему изобретению являются соединения формулы Ia
где n представляет собой 1 или 3; R1a представляет собой метил или фенил; R12a выбран из
Дополнительные группы для R12a могут представлять собой
(g)
OAs
(h)
3й аспект.
Предпочтительные варианты, указанные выше для первого аспекта, можно применять по отношению к соединениям данного аспекта в соответствующих случаях.
Когда R10 представляет собой карбаматную защитную группу азота, он может предпочтительно представлять собой Теос, Fmoc и Troc и более предпочтительно представлять собой Troc.
Когда R11 представляет собой O-Prot°, где Prot° представляет собой защитную группу кислорода, Prot° может предпочтительно представлять собой TBS или ТНР, более предпочтительно представлять собой TBS.
Когда R10 представляет собой гемиаминальную защитную группу азота, он может предпочтительно представлять собой MOM, BOM или SEM, более предпочтительно представлять собой SEM.
~N(R
Предпочтительные варианты для соединения формулы I применимы в соответствующих случаях к D в шестом аспекте изобретения. Например, в шестом аспекте димер PBD представляет собой любое соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, описанные в настоящем документе, где
г *-NHR1
заменен
где волнистая
*-V VIH *-\ *-(^нн *-f~
\-/ заменен > -/ , > -/ заменен
линия означает место присоединения к звену линкера.
Соответственно, конъюгаты согласно изобретению включают конъюгаты, имеющие следующую
формулу (IV):
L~(LU-D)p (IV)
или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, где L представляет собой звено лиганда (т.е. нацеливающий агент), представляет собой звено линкера и димер PBD D. D представляет собой любое из соединений формулы I или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, описанные в настоящем документе, где
*-NHRN
-N(RNH
заменен
где волнистая ли-
-f заменен N-' , N-f заменен ния означает место присоединения к звену линкера.
(a) Конъюгаты согласно изобретению включают, например, конъюгаты формулы
СВА-А1-1_1-*
где звездочка означает место присоединения к димеру PBD (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, расщепляемое под действием фермента, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L1 и связывающийся с клетками агент.
(b) Конъюгаты согласно изобретению включают, например, конъюгаты формулы
СВА-А1-1_1-*
где звездочка означает место присоединения к димеру PBD (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L1 и связывающийся с клетками агент, и L1 представляет собой специфичное звено, расщепляемое под действием катепсина, L1 представляет собой дипептид, L1 представляет собой дипептид, расщепляемый под действием катепсина, или L1 представляет собой дипептид, выбранный из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys- и -Val-Cit-.
Предпочтительные конъюгаты согласно изобретению включают любые из описанных в (а) и (b), где А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения СВА и n представляет собой от 0 до 6 (предпочтительно n представляет собой 5).
Примеры
Общие методы проведения экспериментов для примера 1.
Оптическое вращение измеряли на поляриметре ADP 220 (Bellingham Stanley Ltd.), концентрации (с) представлены в виде г/100 мл. Температуру плавления измеряли при помощи цифрового измерителя температуры плавления (Electrothermal). ИК-спектры записывали на ИК-спектрометре Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT. Спектры 1Н и 13С ЯМР получали при 300 К на ЯМР-спектрометре Bruker Advance при 400 и 100 МГц соответственно. Химические сдвиги представлены относительно TMS (8 = 0,0 ppm), сигналы обозначены как s (синглет), d (дублет), t (триплет), dt (двойной триплет), dd (дублет дублетов), ddd (двойной дублет дублетов) или m (мультиплет), константы спин-спинового взаимодействия даны в герцах (Гц). Данные масс-спектрометрического анализа (МС) получали на оборудования Waters Micromass ZQ, соединенного с ВЭЖХ хроматографом Waters 2695 и детектором Waters 2996 PDA. Использовались следующие параметры системы Waters Micromass ZQ: капилляр (кВ) 3,38; конус (В) 35; экстрактор (В) 3,0; температура источника (°С) 100; температура десольватации (°С) 200; скорость потока подвижной фазы (л/ч) 50; расход десольватированного потока (л/ч) 250. Масс-спектрометрию высокого разрешения (HRMS) проводили в системе Waters Micromass QTOF Global в положительном W-режиме с использованием наконечников из боросиликатного стекла с металлическим покрытием для введения образцов в прибор. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на алюминиевых пластинах с силикагелем (Merck 60, F254), а для флэш-хроматографии использовали силикагель (Merck 60, 230-400 меш ASTM). За исключением HOBt (NovaBiochem) и реагентов на твердой подложке (Argonaut) все остальные химические реактивы и растворители приобретали в Sigma-Aldrich и их применяли в поставляемом виде без дополнительной очистки. Безводные растворители получали путем перегонки в атмосфере сухого азота в присутствии соответствующего осушителя и хранили над молекулярными ситами 4 А или над натриевой проволокой. Петролейный эфир представляет собой фракцию, кипящую при 40-60°С.
Соединение 1 синтезировали, как описано в WO 2010/043880 (соединение 17), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Общие условия ЖХ/МС: ВЭЖХ (Waters Alliance 2695) проводили с применением подвижных фаз: воды (А) (муравьиная кислота 0,1%) и ацетонитрила (В) (муравьиная кислота 0,1%). Градиент: начальный состав 5% В, через 1,0 мин, затем 5% В до 95% В в течение 3 мин. Состав подвижной фазы сохраняли в течение 0,5 мин на уровне 95% В, а затем возвращали к уровню 5% В за 0,3 мин. Общее время градиентного анализа составляет 5 мин. Скорость потока: 3,0 мл/мин, 400 мкл вводили при помощи тройника с нулевым мертвым объемом в масс-спектрометр. Диапазон длин волн детектирования: 220-400 нм. Режим: диодная матрица (535 сканов). Колонка: Phenomenex(r) Onyx Monolithic C18 50x4,60 мм.
Синтез боронатного эфира
(a) 2,2,2-Трихлоэтиловый эфир метил-проп-2-инилкарбаминовой кислоты (I2).
Раствор Troc хлорформиата (10,2 мл, 75,8 ммоль, 1,05 экв.) в ДХМ (100 мл) добавляли по каплям к раствору N-метилпропаргиламина (5 г, 72,3 ммоль, 1 экв.) и TEA (12,08 мл, 0,86 ммоль, 1,2 экв.) в ДХМ (150 мл) при -78°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Раствор промывали водой (200 мл), 0,1N водным раствором лимонной кислоты (200 мл), насыщенным водным NaHCO3 (100 мл) и солевым раствором (50 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом магния и выпаривали в вакууме с получением с требуемого продукта в виде бесцветного масла (15,5 г, 93%). Не определялся с помощью ЖХ/МС.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCb) 8 4,69 (s, 2H), 4,09 (d, 2H, J = 2,4 Гц), 3,01-2,97 (m, 3Н), 2,20 (t, 1H, J = 2,4
Гц).
(b) 2,2,2-Трихлорэтиловый эфир метил-[(Е)-3-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)аллил] карбаминовой кислоты (I3).
Чистый комплекс BH3.SMe2 (1,7 мл, 16,8 ммоль, 1,3 экв.) добавляли по каплям к раствору альфа (-)пинена (5,4 мл, 33,6 ммоль, 2,6 экв.) в сухом ТГФ (5 мл) при 0°С в атмосфере аргона. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи и наблюдали белый осадок. Раствор метилпропаргила-мина (3 г, 13 ммоль, 1 экв.), защищенного Troc, в сухом ТГФ (5 мл) добавляли к реакционной смеси при 0°С и реакцию оставляли протекать в течение ночи при комнатной температуре. Чистый ацетальдегид (22 мл, 387 ммоль, 30 экв.) затем добавляли при 0°С и смесь перемешивали в течение 5 ч. Летучие вещества удаляли в вакууме. Добавляли эфир (20 мл) с последующим добавлением пинакола (2,4 г, 20,1 ммоль, 1,2 экв.). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Смесь брали в пентане (20 мл), промывали водой (2x10 мл), затем сушили над сульфатом магния. Летучие вещества удаляли с помощью ротационного испарения и остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (градиент: от 0/100 до 10/90 этилацетат/гексан об./об.). Очищенные фракции визуализи
ровали перманганатом калия и получали 2,25 г (46%) очищенного боронатного эфира. Не определялся с помощью ЖХ/МС.
1Н ЯМР (400МГц, CDCl3) 8 6,44 (dt, 1Н, J = 18,0 Гц, J = 4,9Гц,), 5,48 (dd, 1H, J= 18,0 Гц, J = 1,3 Гц), 4,66 (d, 2H, J = 6,3 Гц), 3,95 (dd, 2H, J = 4,9 Гц, J = 1,7 Гц), 2,89 (d, 2H, J = 8,5 Гц), 1,20 (s, 12H). Пример 1
(a) Соединение 2.
Соединение 1 (соединение 17 в WO 2010/0043880) растворяли в сухом ТГФ (25 мл) и охлаждали при -78°С (700 мг, 0,65 ммоль, 1 экв.). Раствор супергидрида в ТГФ (1М, 1,95 мл, 1,95 ммоль, 3 экв.) вводили медленно в перемешиваемую реакционную смесь. Завершение реакции наблюдали через 30 мин. Реакцию гасили водой (10 мл) и остаток экстрагировали ДХМ (100 мл). Органические вещества промывали водой (100 мл), затем солевым раствором (50 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом магния и летучие вещества удаляли с помощью ротационного испарения с последующим глубоким вакуумом. Остаток обрабатывали ДХМ (50 мл), этанолом (140 мл), водой (70 мл) и силикагелем (100 г). Вязкую смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 3 дней. Смесь фильтровали медленно через воронку Бюхнера и остаток силикагеля промывали 90/10 хлороформ/метанол об./об. (500 мл). Органическую фазу промывали водой (300 мл), солевым раствором (100 мл), сушили (сульфат магния), фильтровали и выпаривали в вакууме с получением неочищенного материала, которое очищали с помощью флеш-хроматографии (градиент метанол/хлороформ, от 0/100 до 2,5/97,5 об./об.) с получением 150 мг (29%) относительно нестабильного монотрифлата PBD (2), которое непосредственно на следующей стадии.
(b) Соединение 3.
Твердый Pd(PPh3)4 (6,6 мг, 5,7 мкмоль) добавляли к перемешиваемому раствору монотрифлата PBD (2)(150 мг, 0,19 ммоль) и боронатного эфира, защищенного Troc (I3) (114 мг, 0,31 ммоль), в толуоле (8 мл), EtOH (4 мл) и Na2CO3 (65 мг, 0,61 ммоль), в Н2О (4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере азота в течение 20 ч, по истечению которых реакцию считали завершенной согласно показаниям ЖХ/МС и ТСХ (EtOAc). Растворитель удаляли с помощью ротационного испарения при пониженном давлении в вакууме и полученный остаток разделяли между EtOAc (30 мл) и Н2О (60 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (2x30 мл) и объединенные органические слои промывали Н2О (30 мл), солевым раствором (40 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта (3). Неочищенный продукт очищали с помощью флеш-хроматографии (градиент метанол / хлороформ, от 0,5/100 до 2,5/97,5, об./об.) с получением 60 мг (35,5 %). ЖХ/МС кт 3,28 мин m/z (879,97) М+Н.
(c) Соединение 4.
Тонкоизмельчённую свежеприготовленную пару Cd/Pb (150 mg) добавляли к раствору PBD димера, защищенного Troc (3)(55 мг, 0,070 ммоль) в ТГФ /1N водного ацетата аммония (1,5 мл /1,5 мл). Реакционную смесь интенсивно перемешивали и завершение наблюдали через 1 ч. Смесь фильтровали через целит и фильтрат, брали в 15 % МеОН в хлороформе (об./об., 3 x 20 мл) и 1N водным раствором карбоната натрия (50 мл). Органические вещества промывали солевым раствором (20 мл), сушили над сульфатом натрияе и летучие вещества удаляли в вакууме. Неочищенный материал очищали с помощью препаративной ЖХ/МС с получением соединения 4. ЖХ/МС кт 2,43 мин m/z (704,4) М+Н.
Общие методы проведения экспериментов для следующих примеров
Данные ЖХМС получали с использованием серий ЖХ/МС Agilent 1200 с квадрупольной масс-спектрометрией Agilent 6110, с ионизацией электроспреем. Подвижная фаза А - 0,1% уксусной кислоты в воде. Подвижная фаза В - 0,1% в ацетонитриле. Скорость потока 1,00 мл/мин. Градиент от 5% В повышают до 95% В в течение 3 минут, сохраняют на уровне 95% В в течение 1 минуты и затем возвращают до 5% В в течение 6 секунд, общее время хроматографирования составляет 5 минут. Колонка: Phenome-nex Gemini-NX 3 мкм С18, 30 x 2,00 мм. Хроматограммы основаны на УФ обнаружении при 254 нм. Масс-спектры получали с использованием МС в положительном режиме. Значения химического сдвига протонного ЯМР измеряли по шкале дельта прт 400 МГц с использованием Bruker AV400, Использовали следующие сокращения: s, синглет; d, деплет; t, триплет; q, квартет; m, мультиплет; br, широкий. Константы взаимодействия представлены в Гц. Если не указано иное, колоночную хроматографию (посредством флеш процедуры) проводили на Merck Kieselgel silica (Art. 9385). Данные по масс-спектроскопии (МС) получали с использованием инструмента Waters Micromass LCT, связанного с модулем разделения Waters 2795 HPLC. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на алюминиевых пластинах с силикагелем (Merck 60, F254). Все остальные химические реактивы и растворители приобретали в Sigma-Aldrich или Fisher Scientific и их применяли в поставляемом виде без дополнительной очистки.
Оптическое вращение измеряли на поляриметре ADP 220 (Bellingham Stanley Ltd.), концентрации (с) представлены в виде г/100 мл. Температуры плавления измеряли при помощи цифрового измерителя температуры плавления (Electrothermal). ИК-спектры записывали на ИК спектрометре Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT. Спектры 1Н и 13С ЯМР получали при 300 K на ЯМР спектрометре Bruker Advance при 400 и 100 МГц, соответственно. Химические сдвиги представлены относительно TMS (8 = 0,0 ppm), сигналы обозначены как s (синглет), d (дублет), t (триплет), dt (двойной триплет), dd (дублет дублетов), ddd (двойной дублет дублетов) или m (мультиплет), константы спин-спинового взаимодействия даны в герцах (Гц). Данные масс-спектроскопии (МС) получали на оборудования Waters Micromass ZQ, соединенного с ВЭЖХ хроматографом Waters 2695 и Waters 2996 PDA. Использовались следующие параметры системы Waters Micromass ZQ: капилляр (кВ) 3,38; конус (В) 35; экстрактор (В) 3,0; температура источника (°С) 100; температура десольватации (°С) 200; скорость потока подвижной фазы (л/ч) 50; расход десольватированного потока (л/ч) 250. Масс-спектроскопию высокого разрешения (HRMS) проводили в Waters Micromass QTOF Global в положительном W-режиме с использованием наконечников из бороси-ликатного стекла с металлическим покрытием для введения образцов в прибор. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на алюминиевых пластинах с силикагелем (Merck 60, F254), а для флэш-хроматографии использовали силикагель (Merck 60, 230-400 меш ASTM). За исключением HOBt (No-vaBiochem) и реагентов на твердой подложке (Argonaut) все остальные химические реактивы и растворители приобретали в Sigma-Aldrich, и их применяли в поставляемом виде без дополнительной очистки. Безводные растворители получали путем перегонки в атмосфере сухого азота в присутствии соответствующего осушителя и хранили над молекулярными ситами 4 А или над натриевой проволокой. Петро-лейный эфир представляет собой фракцию, кипящую при 40-60°С.
Общие условия ЖХ/МС: ВЭЖХ (Waters Alliance 2695) проводили с применением следующих подвижных фаз: воды (А) (муравьиная кислота 0,1%) и ацетонитрила (В) (муравьиная кислота 0,1%). Градиент: начальный состав 5% В, 1,0 мин, затем 5% В-95% В, 3 мин. Состав подвижной фазы сохраняли в течение 0,5 мин на уровне 95% В, а затем возвращали к уровню 5% В за 0,3 мин. Общее время градиентного анализа составляет 5 мин. Скорость потока: 3,0 мл/мин, 400 мкл вводили при помощи тройника с нулевым мертвым объемом в масс-спектрометр. Диапазон длин волн детектирования: 220-400 нм. Режим: диодная матрица (535 сканов). Колонка: Phenomenex(r) Onyx Monolithic C18 50x4,60 мм.
Синтез основных промежуточных веществ
(i) 1,1'-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис(11aS)-7-метокси-2-[[(трифторметил)сульфонил]окси]-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1,10,11,11а-тетрагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4] -бензодиазепин-5,11 -дион] (7).
Соединение 5 синтезировали, как описано в WO 2010/043880 (соединение 6а), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
(a) 1,1 '-[[(Пропан-1,3-диил)диокси]бис[( 11 aS)-11 -сульфо-7-метокси-2-оксо-10-((2-(триметилсилил)
этокси)метил) 1,2,3,10,11,11 а-гексагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4]бензодиазепин-5, 11 -дион] ] (6).
Диол 5 (25,60 г, 29,9 ммоль, 1,0 экв.), NaOAc (6,90 г, 84,1 ммоль, 2,8 экв.) и TEMPO (0,188 г, 1,2 ммоль, 0,04 экв.) растворяли в ДХМ (326 мл) в атмосфере азота. Смесь охлаждали до -8°С и порциями добавляли ТССА (9,70 г, 41,7 ммоль, 1,4 экв.) в течение 20 мин, в ходе чего раствор становился темно-коричневым и светлел по ходу протекания реакции. Через 30 мин добавляли холодный ДХМ (200 мл) и смесь фильтровали через целит и затем промывали раствором гидрокарбоната натрия/тиосульфата натрия (1:1 об./об.; 200 мл x 2). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением бис-кетона 6 в виде губчатого желто/оранжевого вещества (5 г, 100%). ЖХ/МС (3,173 мин (ES+)). m/z: 854,20 [М]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,32 (s, 2H), 7,25 (s, 2H), 5,50 (d, 2H, J = 10,1 Гц), 4,75 (d, 2H, J=10,1 Гц), 4,60 (dd, 2H, J = 9,9, 3,1 Гц), 4,31-4,18 (m, 6Н), 3,89-3,84 (m, 8Н), 3,78-3,62 (m, 4Н), 3,55 (dd, 2H, J = 19,3, 3,0 Гц), 2,76 (dd, 2Н, J = 18,6, 10,2 Гц), 2,42 (р, 2Н, J = 5,8 Гц), 0,98-0,91 (m, 4Н), 0,00 (s, 18H).
(b) [(Пропан-1,3 -диил)диокси] бис( 11 aS)-7-метокси-2-[ [(трифторметил)сульфонил] окси] -10-((2-
(триметилсилил)этокси)метил)-1,10,11,11 а-тетрагидро-5Н-пирроло [2,1-с][1,4]-бензодиазепин-5, 11 -дион]
(7).
Безводный 2,6-лутидин (1,984 г, 17,864 ммоль, 6,22 экв.) вводили одной порцией в интенсивно перемешиваемый раствор бис-кетона 6 (2,45 г, 2,977 ммоль, 1,0 экв.) в сухом ДХМ (90 мл) при -45°С (сухой лед/ацетонитрил) в атмосфере азота. Безводный трифликовый ангидрид (5,04 г, 17,86 ммоль, 6,0 экв.), взятый из только что открытой ампулы быстро вводили по каплям, поддерживая температуру не выше -40°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при -45°С в течение 1 ч, по окончании которого ТСХ (50/50 об./об. н-гексан/EtOAc) и ЖХМС показали завершение реакции исходного материала. Холодную реакционную смесь немедленно разбавляли ДХМ (100 мл) и, энергично встряхивая, промывали водой (1x50 мл), 5% раствором лимонной кислоты (1x100 мл), насыщенным NaHCO3 (100 мл), солевым раствором (50 мл) и сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель, элюирование градиентом 90:10 н-гексан/EtOAc об./об. до 60:40 н-гексан/EtOAc об./об.) с получением бис-енолтрифлата 7 в виде желтой пены (2,097 г, 63%). ЖХ/МС (3,916 мин (ES+)). m/z: 1117,24 [М]+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,33 (s, 2H), 7,26 (s, 2H), 7,14 (t, 2H, J= 2,0 Гц), 5,51 (d, 2H, J= 10,1 Гц), 4,76 (d, 2H, J= 10,1 Гц), 4,62 (dd, 2H, J= 11,0, 3,6 Гц), 4,32-4,23 (m, 4H), 3,94-3,90 (m, 8Н), 3,81-3,64 (m, 4Н), 3,16 (ddd, 2Н, J = 16,4, 11,1, 2,3 Гц), 2,43 (р, 2Н, J = 5,9 Гц), 1,23-0,92 (m, 4H), 0,02 (s, 18H).
(ii) (Е)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)аллилкарбамат (10)
(a) (9Н-флуорен-9-ил)метил проп-2-инилкарбамат (9).
Раствор Fmoc chloride (25,00 г, 96,64 ммоль, 1,05 экв.) в ДХМ (150 мл) добавляли по каплям к раствору пропаргиламина 8 (5,89 мл, 92,04 ммоль, 1,0 экв.) и триэтиламина (15,4 мл, 110,4 ммоль, 1,2 экв.) в ДХМ (200 мл) при -78°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре и через 16 ч раствор промывали водой (300 мл), 0,1N водным раствором лимонной кислоты (300 мл), насыщенным водным NaHCO3 (300 мл) и солевым раствором (200 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением аморфного белого порошка. В результате обработки ультразвуком в холодном гексане (200 мл) с последующей
фильтрацией получали продукт в виде белого твердого вещества (24,316 г, 95%). ЖХ/МС (2,758 мин (ES+)). m/z: 300,0 [M+Na]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,74 (d, 2H, J = 7,6 Гц), 7,57 (d, 2H, J = 7,4 Гц), 7,41 - 7,37 (m, 2H), 7,30 (dt, 2H, J = 7,5, 1,2 Гц), 4,93 (br s, 1Н), 4,41 (d, 2Н, J = 6,9 Гц), 4,21 (t, 1Н, J = 6,4 Гц), 3,99 (d, 2Н, J = 3,3 Гц), 2,24 (t, 1Н, J = 2,5 ГЦ).
(b) (Е)-(9Н-флуорен-9-ил)метил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)аллилкарбамат
(10).
Чистый комплекс ВН3.SMe2 (9,35 мл, 92,47 ммоль, 1,3 экв.) добавляли по каплям к раствору альфа (-)пинена (25,20 г, 19,72 ммоль, 2,6 экв.) в сухом ТГФ (40 мл) при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи и наблюдали белый осадок. Раствор Fmoc пропаргила-мина 9 (19,72 г, 71,13 ммоль, 1,0 экв.) в сухом ТГФ (40 мл) добавляли к реакционной смеси при 0°С и реакцию оставляли протекать в течение ночи при комнатной температуре, что приводило к растворению белого осадка и образованию суспензии светлого соломенного цвета. Затем добавляли чистый ацетальде-гид (121,32 мл, 2,134 моль, 30,0 экв.) при 0°С и смесь перемешивали в течение 5 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Добавляли диэтиловый эфир (125 мл) с последующим добавлением пинакола (10,08 г, 85,36 ммоль, 1,2 экв.). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Смесь брали в ДХМ (125 мл), промывали водой (2x75 мл), затем сушили над сульфатом магния. Летучие вещества удаляли путем концентрирования при пониженном давлении и остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (от 0/100 до 60/40 этилацетат/гексан об./об.). Фракции продукта объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного масла, которое брали в небольшом количестве ДЧМ, охлаждали до -78°С и добавляли гексан до образования белого осадка. Суспензию оставляли перемешиваться в течение 5 мин и фильтровали с получением продукта в виде белого твердого вещества (14,09 г, 49%). ЖХ/МС (min (ES+)). m/z: [М]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,76 (d, 2H, J= 7,6 Гц), 7,59 (d, 2H, J= 7,4 Гц), 7,40 (t, 2H, J= 7,4 Гц), 7,32 (t, 2H, J= 7,4 Гц), 6,59 (dt, 1H, J= 18,0, 4,7 Гц), 5,60 (d, 2H, J= 18,0 Гц), 4,90-4,83 (m, 1H), 4,40 (d, 2H, J= 7,1 Гц), 4,22 (t, 1H, J= 7,1 Гц), 3,92 (t, 1H, J= 4,7 Гц), 1,27 (s, 12H).
(iii) (S)-2-((S)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-метилбутанамидо)пропановая кислота (HO-Ala-Val-Fmoc) (12)
H-Val-Ala-OH 11 (1,0g, 5,313 ммоль, 1,0 экв.) и Na2CO3 (1,42 г, 13,282 ммоль, 2,5 экв.) солюбилизи-ровали в дистиллированной Н2О (40 мл) и смесь охлаждали до 0°С до добавления диоксана (40 мл). Происходило частичное осаждение соли аминокислоты. Раствор Fmoc-Cl (1,44 г, 5,579 ммоль, 1,05 экв.), растворенный в диоксане (40 мл), добавляли по каплям при интенсивном перемешивании в течение 10 мин. Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч до удаления ледяной бани и перемешивание продолжали в течение 16 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, и твердое вещество оставалось растворенным в воде (450 мл). рН доводили до 2 с помощью 1N HCl (25 мл) и водный слой последовательно экстрагировали EtOAc (3x250 мл). Объединенные органические вещества промывали солевым раствором (100 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением чистого HO-Ala-Val-Fmoc 12 в виде белого твердого вещества (2,06 г, 94%). ЖХ/МС (2,758 мин (ES+)), m/z: 411,0 [М+Н]+.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО^) 8 12,47 (br s, 1Н), 8,20 (d, 1Н, J = 6,7 Гц), 7,89 (d, 2H, J = 7,5 Гц), 7,75 (t, 2H, J = 6,8 Гц), 7,43 - 7,38 (m, 3Н), 7,34-7,30 (m, 2Н), 4,31 -4,16(m, 4Н), 3,88 (dd, 1Н, J= 8,8, 7,2 Гц), 1,98 (m, 1Н), 1,26 (d, 3Н, J = 7,3 Гц), 0,89 (d, 3Н, J = 6,8 Гц), 0,86 (d, 3Н, J = 6,8 Гц).
Пример 2
rxf*
(a) (S)-8-(3-((S)-2-((Е)-3-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)проп-1-енил)-7-метокси-5,11-
диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11 а-тетрагидро-1 Н-бензо[е]пирроло[1,2-а] [ 1,4]диа-
зепин-8-илокси)пропокси)-7-метокси-5,11 -диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-
тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-илтрифторметансульфонат (13).
Суспензию боронового эфира 10 (2,19 г, 5,61 ммоль, 0,95 экв.) в толуоле (6 мл) добавляли по каплям в течение 1 ч к перемешиваемому раствору бис-енолтрифлата 7 (6,6 г, 5,91 ммоль, 1,0 экв.), тетра-кис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,273 г, 0,236 ммоль, 0,04 экв.), карбонат натрия (2,00 г, 18,91 ммоль, 3,2 экв.) в метаноле (28 мл), толуоле (56 мл) и воде (34 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи, затем концентрировали досуха и остаток брали в EtOAc (200 мл) и промывали водой (2x150 мл), солевым раствором (150 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагелем, от 80:20 гексан/EtOAc об./об. до 10:90 гексан/EtOAc затем чистым EtOAc) с получением извлеченного 7, продукта и бис-замещенной примеси. 2,49 г (37%) 13 в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС (3,930 мин (ES+)), m/z: 1247,39 [М+Н]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,78 (d, 2H, J=7,6 Гц), 7,60 (d, 2Н, J=7,4 Гц), 7,41 (t, 2Н, J=7,6 Гц), 7,367,31 (m, 1Н), 7,14 (m, 1Н), 6,96 (m, 1Н), 6,36 (d, 1Н, J= 14,4 Гц), 5,69-5,59 (m, 1Н), 5,51 (dd, 2Н, J = 10,1, 3,0 Гц), 4,87-4,81 (m, 1Н), 4,75 (dd, 2H, J = 10,1, 7,9 Гц), 4,61 (dd, 1H, J = 10,9, 3,6 Гц), 4,54 (dd, 2H, J = 10,6, 3,3 Гц), 4,43 (d, 2Н, J=6,6 Гц), 4,31-4,20 (m, 6Н), 3,95-3,87 (m, 9Н), 3,81-3,63 (m, 6Н), 3,15 (ddd, 1H, J=16,2, 10,9, 2,3 Гц), 2,93-2,83 (m, 1Н), 2,43 (hep, 1Н, J=5,8 Гц), 1,00-0,92 (m, 4Н), 0,01 (s, 18Н). 2,06 г (33%) 7. ЖХ/МС (3,916 мин (ES+)). 0,770 г бис-замещенной примеси в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС (3,977 мин (ES+)). m/z: 1376,52 [М+Н]+.
(b) Соединения 14а-е.
(i) (9Н-флуорен-9-ил)метил-(Е)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-метил-5,11-диоксо-10-((2
(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллилкарбамат (14а).
Трифениларсин (0,010 г, 0,0321 ммоль, 0,8 экв.) добавляли к смеси трифлата 13 (0,050 г, 0,0401 ммоль, 1,0 экв.), метилбороновой кислоты (0,012 г, 0,20 ммоль, 5,0 экв.), оксида серебра (0,074 г, 0,321 ммоль, 8,0 экв.) и трехосновного фосфата калия (0,102 г, 0,481 ммоль, 12,0 экв.) в сухом диоксане (2 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь продували азотом и добавляли хлорид бис(бензонитрил) палла-дия(11) (0,003 г, 0,00802 ммоль, 0,2 экв.). Реакционную смесь еще раз продували азотом до нагревания до 70°С в течение 1 ч. Условия реакции повторяли для 0,200 г трифлата 13 и объединенные реакционные смеси фильтровали через подложку из целит(r) с промыванием этилацетатом. Неочищенный материал концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флеш-хроматографии с получением продукта в виде светло-желтого твердого вещества (0,010 г, 56%). ЖХ/МС (3,823 мин (ES+)), m/z: 1112,92 [М+Н]+.
(ii) (9Н-Флуорен-9-ил)метил-(Е)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-5,11-диоксо-2-((Е)-проп-1-
енил)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диа-
зепин-8-илокси)пропокси)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-
бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллилкарбамат (14с).
Транс-1-пропен-1-илбороновую кислоту(0,103 г, 1,20 ммоль, 3,0 экв.), триэтиламин (0,220 мл, 1,60 ммоль, 4,0 экв.) и монотрифлат 13 (0,500 г, 0,401 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в смеси этанола (10 мл), толуола (20 мл) и воды (3 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь дегазировали в атмосфере азота в течение 5 мин и добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,018 г, 0,016 ммоль, 0,04 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 50 мин, затем концентрировали досуха при пониженном давлении и неочищенное твердое вещество очищали с помощью флеш-хроматографии (силика-гель, 50:50 ацетат/гексан об./об., затем 66:33 этилацетат/гексан об./об.) с получением продукта светло-желтого твердого вещества.(0,35 г, 77%). ЖХ/МС (3,910 мин (ES+)), m/z: 1137,86 [М+Н]+.
(iii) (9Н-Флуорен-9-ил)метил-(Е)-3-((S)-8-(3-((S)-2-(бензо[d][1,3]диоксол-5-ил)-7-метокси-5,11-
диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диа-
зепин-8-илокси)пропокси)-7-метокси-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-
тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил) аллилкарбамат (14d).
3,4-(Метилендиокси)фенилбороновую кислота (0,027 г, 0,160 ммоль, 2,0 экв.), триэтиламин (0,065 г, 0,064 ммоль, 8,0 экв.) и монотрифлат 13 (0,100 г, 0,080 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в смеси этанола (1 мл), толуола (2 мл) и воды (0,4 мл) в атмосфере азота. Реакционный сосуд вакуумировали и продували азотом три раза до добавления тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,006 г, 0,005 ммоль, 0,06 экв.). Затем колбу вакуумировали и продували азотом три раза и нагревали в условия микроволнового излучения при 80°С в течение 8 мин. Указанную реакцию повторяли дважды в 0,100 г масштабе и один раз в 0,130 г масштабе. Неочищенные реакционные смеси объединяли, разбавляли ДХМ (10 мл) и промывали Н2О (10 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель, от 30/70 до 20/80 об./об. гек-сан/этилацетат) с получением продукта в виде светло-желтого твердого вещества (0,199 г, 62%). ЖХ/МС (3,887 мин (ES+)), m/z: 1217,57 [M+H]+.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,77 (d, 2H, J= 7,4 Гц), 7,60 (d, 2Н, J = 7,5 Гц), 7,43-7,29 (m, 7Н), 6,976,94 (m, 2Н), 6,88 (dd, 2H, J = 7,8, 1,7 Гц), 6,78 (d, 2H, J= 8,1 Гц), 6,35 (d, 1Н, J= 15,7 Гц), 5,97 (s, 2Н), 5,695,59 (m, 1Н), 5,50 (dd, 2H, J= 10,1, 2,7 Гц), 4,84 (m, 1Н), 4,75 (dd, 2H, J = 10,1, 5,8 Гц), 4,61-4,52 (m, 3Н), 4,44 (d, 1H, J = 6,9 Гц), 4,32-4,20 (m, 6Н), 3,94-3,87 (m, 9Н), 3,81-3,64 (m, 6Н), 3,15 (ddd, 1H, J = 16,2, 10,6, 1,9 Гц), 2,88 (m, 1Н), 2,43 (m, 1Н), 0,99-0,95 (m, 4Н), 0,01 (s, 18H).
(iv) (9Н-Флуорен-9-ил)метил-(Е)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-
ил)фенил)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пир-
роло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-
5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллилкарбамат (14е).
Монотрифлат 13 (0,100 г, 0,0802 ммоль, 1,0 экв.), (4-метилпиперазин-1-ил)фенилбороновую кислоту, сложный эфир пинакола (0,023 г, 0,0762, 0,95 экв.) и триэтиламин (0,051 мл, 0,369 ммоль, 4,6 экв.) солюбилизировали в смеси толуол/этанол/Н2О [6:3:1] (4 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь продували азотом в течение 5 мин и добавляли палладий-тетракистрифенилфосфин (0,9 мг, 0,000802 ммоль, 0,01 экв.). Затем реакционную смесь подвергали воздействию микроволнового излучения при 80°С в течение 5 мин. Указанную выше реакцию повторяли 3 раза в 0,100 г масштабе. Объединенные реакционные смеси концентрировали при пониженном давлении и твердый остаток разделяли между Н2О (180 мл) и этилацетатом (180 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x180 мл) до промывания объединенных органических веществ солевым раствором (180 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученную неочищенную смесь очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель, от 40:1 об./об. ДХМ/МеОН до 20:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением требуемого продукта в виде желтого твердого вещества (0,220 г, 54%). ЖХ/МС (2,833 мин (ES+)), m/z:
1272,53 [М+Н]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,77 (d, 2Н, J = 7,5 Гц), 7,60 (d, 2Н, J = 7,3 Гц), 7,43-7,39 (m, 3Н), 7,357,30 (m, 6Н), 6,95 (m, 1Н), 6,90-6,87 (m, 1H), 6,34 (d, 1H, J = 15,7 Гц), 5,67-5,57 (m, 1H), 5,50 (dd, 2H, J = 10,1, 3,3 Гц), 4,86 (m, 1H), 4,75 (dd, 2H, J = 10,1, 5,6 Гц), 4,54 (m, 2H), 4,44 (d, 2H, J =6,8 Гц), 4,31-4,21 (m, 6Н), 3,96-3,87 (m, 9Н), 3,81-3,73 (m, 3Н), 3,71-3,62 (m, 3Н), 3,31-3,20 (m, 5Н), 3,10 (m, 1Н), 2,87 (m, 1Н), 2,58 (m, 4Н), 2,43 (m, 2Н), 2,36 (s, 3Н), 0,97 (m, 4Н), 0,01 (s, 18H).
(c) Соединения 15а-е.
(i) (9Н-Флуорен-9-ил)метил-(Е)-3-((S)-8-(3-((S)-2-(бензо[6][1,3]диоксол-5-ил)-7-метокси-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-1-метокси-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллилкарбамат (15d).
SEM дилактам 14d (0,223 г, 0,183 ммоль, 1,0 экв.) солюбилизировали в ТГФ (10 мл) и охлаждали до -78°С в атмосфере азота. Раствор супергидрида (0,373 мл, 0,373 ммоль, 2,04 экв.), добавляли по каплям в течение 5 мин. Через 20 мин аликвоту промывали водой для анализа ЖХМС и ТСХ и через 30 мин добавляли воду (30 мл) и удаляли ледяную баню. Органический слой экстрагировали EtOAc (2x30 мл) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (30 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в МеОН (12 мл), ДХМ (6 мл) и воде (2 мл) и достаточном количестве силикагеля для образования густой перемешиваемой суспензии, которую оставляли на 5 дней. Суспензию фильтровали и промывали ДХМ/МеОН 9:1 (~200 мл) до завершения элюирования продукта. Органический слой промывали солевым раствором (2x 70 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагелем, от 100/0 до 90/10 об./об. CHCl3/ МеОН) с получением продукта в виде желтого твердого вещества (0,133 г, 79%). ЖХ/МС (2,916 мин (ES+)), m/z: 926,33
[М+Н]+.
(ii) (9Н-Флуорен-9-ил)метил-(Е)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5-оксо-
5,11а-дигидро-1 Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллилкарбамат (15е).
SEM дилактам 14е (0,250 г, 0,196 ммоль, 1,0 экв.) солюбилизировали в ТГФ (13 мл) и охлаждали до -78°С в атмосфере азота. Раствор супергидрида (0,40 мл, 0,401 ммоль, 2,04 экв.) добавляли по каплям в течение 5 мин. Через 20 мин аликвоту промывали водой для анализ ЖХМС и ТСХ. Через 30 мин добавляли воду (30 мл) и удаляли ледяную баню. Органический слой экстрагировали EtOAc (2x40 мл) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (40 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в МеОН (13 мл), ДХМ (7 мл) и водой (1,7 мл) и достаточном количестве силикагеля для образования густой перемешиваемой суспензии. Через 5 дней суспензию фильтровали через воронку Бюхнера и промывали ДХМ/МеОН 9:1 (~200 мл) до завершения элюирования продукта. Органический слой промывали солевым раствором (2 x 70 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. В результате очистки с помощью флеш-хроматографии (силикагель, от CHCl3 100 до 96:4 об./об. CHC^/МеОН) получали продукт в виде светло-желтого твердого вещества (0,090 г, 47%). ЖХ/МС (2,112 мин (ES+)), m/z: 981,0 [М+Н]+.
(d) Соединения 16а-е.
(i) (S)-2-((Е)-3-аминопроп-1-енил)-8-(3-((S)-2-(бензо[d][1,3]диоксол-5-ил)-7-метокси-5-оксо-5,11а-
дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-7-метокси-1H-бензо[е]пирро-
ло [ 1,2-а] [1,4]диазепин-5(11аН)-он (16d).
Пиперидин (6 капель, избыток) добавляли к перемешиваемой смеси Fmoc-аллиламина 15d (0,030 г, 0,0306 ммоль, 1,0 экв.) в безводном ДМФА (0,30 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 20 мин ЖХМС реакционной смеси показала завершение реакции, и реакционную смесь разбавляли ДХМ (30 мл) и промывали водой (3x30 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал растворяли в хлороформе и полученный осадок собирали с помощью фильтрации с получением продукта в виде оранжевого твердого вещества (0,003 г, 13%). ЖХ/МС (1,802 мин (ES+)), m/z: 704,1 [М+Н]+.
(ii) (S)-2-((E)-3-аминопроп-1-енил)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-
ил)фенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-1Н-
бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-5(11аН)-он (16е).
Пиперидин (4 капель, избыток) добавляли к перемешиваемой смеси Fmoc-аллиламина 15е (0,02 г, 0,0204 ммоль, 1,0 экв.) в безводном ДМФА (0,25 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 мин реакционную смесь разбавляли ДХМ (30 мл) и промывали водой (3x30 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал растворяли в хлороформе и полученный осадок собирали с помощью фильтрации с получением продукта в виде оранжевого твердого вещества (0,001 г, 7%). ЖХ/МС (1,495 мин (ES+)), m/z: 379,5 1/2
[М+2Н]+.
1-Йод-2-оксо-6,9,12,15-тетраокса-3-азаоктадекан-18- овая кислота (I5).
Раствор йодуксусного ангидрида (0,250 г, 0,706 ммоль, 1,1 экв.) в сухом ДХМ (1 мл) добавляли к амино-РЕО(4)-кислоте 14 (0,170 г, 0,642 ммоль, 1,0 экв.) в ДХМ (1 мл). Смесь перемешивали в темноте при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь промывали 0,1М HCl, водой, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель, от 3% МеОН и 0,1% муравьиной кислоты в хлороформе до 10% МеОН и 0,1% муравьиной кислоты в хлороформе) с получением продукта в виде оранжевого масла (0,118 г, 42%). ЖХ/МС (1,623 мин (ES+)), m/z: 433,.98 [М+Н]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 8,069 (s, 1H), 7,22 (brs, 1H), 3,79 (t, 2H, J= 5,8 Гц), 3,74 (s, 2H), 3,72 -3,58 (m, 14H), 3,50-3,46 (m, 2H), 2,62 (t, 2H, J=5,8 Гц).
Пример 3
(а) Соединения 17а-е.
(i) (S)-2-((E)-3-аминопроп-1-енил)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-метил-5,11-диоксо-10-((2-
(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин
5,11(10Н,11аН)-дион (17а).
Пиперидин (0,133 мл, 1,35 ммоль, 12 экв.) добавляли к перемешиваемому раствору Fmoc-амина 14а (0,125 г, 0,112 ммоль, 1,0 экв.) в ДМФА (1,8 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин ЖХМС анализ показал израсходование исходного вещества, и реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл) и промывали водой (3x200 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали досуха с получением неочищенного продукта, который не подвергали дополнительной очистке (0,100 г, предположительно 100% выход). Указанный материал использовали без дальнейшей характеризации.
(ii) (S)-2-((Е)-3-аминопроп-1-енил)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-5,11-диоксо-2-((Е)-проп-1-енил)-
10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-
илокси)пропокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-
5,11(10Н,11аН)-дион (17с).
Пиперидин (0,40 мл, 4,0 ммоль, 12 экв.) добавляли к перемешиваемому раствору Fmoc-амина 14с (0,380 г, 0,334 ммоль, 1,0 экв.) в ДМФА (5,0 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин ЖХМС анализ показал израсходование исходного вещества и реакционную смесь разбавляли ДХМ (300 мл) и промывали водой (3x300 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали досуха при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который не подвергали дополнительной очистке (0,306 г, предположительно 100% выход). ЖХ/МС (2,533 мин (ES+)), m/z: 916,3 [М+Н]+.
(iii) (S)-2-((E)-3-аминопроп-1-енил)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-
ил)фенил)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирро-
ло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-бензо[е]пирро-
ло[1,2-а][1,4]диазепин-5,11 (10Н, 11аН)-дион (17е).
Пиперидин (0,40 мл, 4,0 ммоль, 14,2 экв.) добавляли к перемешиваемому раствору Fmoc-амина 14е (0,358 г, 0,282 ммоль, 1,0 экв.) в ДМФА (5,0 мл). Прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (300 мл) и промывали водой (3 x 300 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который не подвергали дополнительной очистке (0,296 г, предположительно 100% выход). ЖХ/МС (2,049 мин (ES+)), m/z: 1051,2 [М+Н]+.
(b) Соединения 18а-е.
(i) (9H-Флуорен-9-ил)метил-(R)-1-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-метил-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диа-зепин-8-илокси)пропокси)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо [е]пирроло [1,2-а][ 1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1 -оксопропан-2-иламино)-3 -метил-1 -оксобутан-2-илкарбамат (18а).
Гидрохлорид 1-этил-3-(3'-диметиламинопропил)карбодиимида (0,018 г, 0,095 ммоль, 1,0 экв.) добавляли к раствору аллиламина 17а (предположительно 100% выход, 0,100 г, 0,095 ммоль, 1,0 экв.) и HO-Ala-Val-Fmoc 12 (0,036 г, 0,095 ммоль, 1,0 экв.) в сухом дихлорметане (6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 120 мин при комнатной температуре после разбавления реакционной смеси дихлор-метаном (10 мл) и последовательно промывали водой (10 мл) и солевым раствором (10 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и избыток дихлорметана удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель; от 100:1 об./об. ДХМ/МеОН до 40:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением продукта в виде желтого твердого вещества (0,050 г, 35%). ЖХ/МС (3,677 мин (ES+)), m/z: 1281,42 [М+Н]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,76 (d, 2H, J = 7,7 Гц), 7,58 (m, 2H), 7,40 (t, 2H, J = 7,6 Гц), 7,34 (d, 2H,
J=5,7 Гц), 7,31 (m, 3Н), 7,25 (m, 2Н), 6,93 (s, 1Н), 6,68 (m, 1Н), 6,34 (m, 3Н), 5,58 (m, 1Н), 5,49 (m, 2Н), 4,71 (m, 2Н), 4,45 (m, 5Н), 4,27 (m, 4Н), 4,22 (t, 1Н, J=7,0 Гц), 3,97 (m, 2Н), 3,89 (m, 7Н), 3,75 (m, 2Н), 3,65 (m, 3Н), 3,44 (m, 1Н), 2,77 (m, 2Н), 2,43 (m, 2Н), 2,14 (m, 1Н), 1,83 (d, 3Н, J= 1,0 Гц), 1,40 (d, 3Н, J=6,9 Гц), 0,99-0,91 (m, 10Н), 0,01 (s, 9H), 0,00 (s, 9H).
(ii) (9H-Флуорен-9-ил)метил-(S)-1-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-5,11-диоксо-2-((Е)-проп-1-енил)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-иламино)-3-метил-1-оксобутан-2-илкарбамат (18с).
Гидрохлорид 1-этил-3-(3'-диметиламинопропил)карбодиимида (0,0641 г, 0,334 ммоль, 1,0 экв.) добавляли к раствору аллиламина 17с (предположительно 100% выход, 0,306 г, 0,334 ммоль, 1,0 экв.) и HO-Ala-Val-Fmoc 12 (0,1367 г, 0,334 ммоль, 1,0 экв.) в сухом дихлорметане (18 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 95 мин при комнатной температуре после разбавления реакционной смеси ди-хлорметаном (30 мл) и промывали последовательно водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и избыток дихлорметана удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель; от 100:1 об./об.
ДХМ/МеОН до 40:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением продукта в виде желтого твердого вещества (0,220 г, 50%). ЖХ/МС (3,804 мин (ES+)), m/z: 1307,37 [М+Н]+.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7,76 (d, 2H, J = 7,6 Гц), 7,57 (m, 2H), 7,39 (t, 2H, J = 7,6 Гц), 7,34 (d, 2H,
J=3,2 Гц), 7,31 (m, 3Н), 7,26 (m, 1Н), 6,93 (s, 1Н), 6,85 (m, 1Н), 6,36 (m, 2Н), 6,24 (d, 1H, J = 14,7 Гц), 5,68 (m, 1Н), 5,58 (m, 1Н), 5,49 (m, 2Н), 4,72 (m, 2Н), 4,83 (m, 4Н), 4,39 (m, 1Н), 4,27 (m, 4Н), 4,22 (t, 1Н, J= 6,9 Гц), 3,98 (m, 3Н), 3,89 (m, 8Н), 3,75 (m, 2Н), 3,65 (m, 4Н), 2,85 (m, 2Н), 2,43 (m, 2Н), 2,14 (m, 1Н), 1,82 (dd, 3Н, J=5,8, 0,8 Гц), 1,40 (d, 3Н, J=6,9 Гц), 0,99-0,92 (m, 10Н), 0,01 (s, 9H), 0,00 (s, 9H).
(iii) (9H-Флуорен-9-ил)метил-(S)-1-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метил-пиперазин-1-ил)фенил)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси) метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-иламино)-3-метил-1-оксобутан-2-илкарбамат (18е).
Гидрохлорид 1-этил-3-(3'-диметиламинопропил)карбодиимида (0,0541 г, 0,282 ммоль, 1,0 экв.) добавляли к раствору аллиламина 17е (предположительно 100% выход, 0,296 г, 0,282 ммоль, 1,0 экв.) и HO-Ala-Val-Fmoc 12 (0,116 г, 0,282 ммоль, 1,0 экв.) в сухом дихлорметане (18 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 80 мин при комнатной температуре после разбавления реакционной смеси дихлор-метаном (30 мл) и последовательно промывали водой (30 мл) и солевым раствором (30 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и избыток дихлорметана удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель; от 40:1 об./об. ДХМ/МеОН до 20:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением продукта в виде желтого твердого вещества (0,245 г, 60%). ЖХ/МС (2,706 мин (ES+)), m/z:721,5 1/2[M+2H]+.
(с) Соединения 19а-е.
(i) (9H-Флуорен-9-ил)метил-(S)-1-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-5-оксо-2-((Е)-
проп-1-енил)-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5-оксо-5,11а-
дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-иламино)-3-метил-1-
оксобутан-2-илкарбамат (19с) SEM Fmoc-амин 18с (0,212 г, 0,162 ммоль, 1,0 экв.) солюбилизировали в
ТГФ (9,2 мл) и охлаждали до -78°С в атмосфере азота. Раствор супергидрида (0,330 мл, 0,330 ммоль, 2,04
экв.) добавляли по каплям в течение 4 мин. Через 45 мин аликвоту разбавляли водой и МеОН для
ЖХМС. После перемешивания в течение дополнительных 10 мин реакционную смесь разбавляли водой
(27 мл) и удаляли ледяную баню. Органический слой экстрагировали EtOAc (2x27 мл) и объединенные
органические экстракты промывали солевым раствором (27 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и кон-
центрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в МеОН (11,05 мл), ДХМ
(5,53 мл) и воде (1,85 мл) и достаточном количестве силикагеля добавляли с образованием густой сус-
пензии, которую оставляли перемешиваться в течение 5 дней. Суспензию фильтровали и промывали
ДХМ/МеОН 9:1 (~200 мл) до завершения элюирования продукта. Органический слой промывали соле-
вым раствором (2x 70 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давле-
нии. Полученный остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель; от 40:1 об./об.
ДХМ/МеОН до 20:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением продукта в виде желтого твердого вещества
(0,060 г, 36%). ЖХ/МС (2,802 мин (ES+)), m/z: 1016,15 [М+Н]+.
(ii) (9Н-ЦФлуорен-9-ил)метил-(R)-1-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метил-
пиперазин-1-ил)фенил)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропок-
си)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-
иламино)-3-метил-1-оксобутан-2-илкарбамат (19е).
SEM Fmoc-амин 18е (0,245 г, 0,170 ммоль, 1,0 экв.) солюбилизировали в ТГФ (10,6 мл) и охлаждали до -78°С в атмосфере азота. Раствор супергидрида (0,347 мл, 0,347 ммоль, 2,04 экв.) добавляли по каплям в течение 4 мин. Через 45 мин аликвоту разбавляли водой и МеОН для ЖХМС После перемешивания в течение дополнительных 10 мин реакционную смесь разбавляли водой (35 мл) и удаляли ледяную баню. Органический слой экстрагировали EtOAc (2x35 мл) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (35 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал растворяли в МеОН (12,8 мл), ДХМ (6,4 мл) и воде (2,15 мл) и достаточном количестве силикагеля добавляли с образованием густой суспензии, которую оставляли перемешиваться в течение 5 дней. Суспензию фильтровали и промывали ДХМ/МеОН 9:1 (~200 мл) до завершения элюирования продукта. Органический слой промывали солевым раствором (2x100 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (силикагель; от 40:1 об./об. ДХМ/МеОН до 20:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением продукта (0,100 г, 51%). ЖХ/МС (2,117 мин (ES+)), m/z: 575,7 1/2[М+2Н]+.
(а) Соединения 20а-е.
(i) (S)-2-амино-N-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-5-оксо-2-((E)-npon-1-енил)-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо [е]пирроло [1,2-а][ 1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-ил)-3 -метилбутанамид (20с).
Пиперидин (0,04 мл, 4,1 ммоль, 13,7 экв.) добавляли к перемешиваемой смеси Fmoc-амина 19с
(0,030 г, 0,0295 ммоль, 1 экв.) в безводном ДМФА (0,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 20 мин ЖХМС показала завершение реакции и реакционную смесь разбавляли ДХМ (75 мл) и промывали водой (3x75 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали досуха при пониженном давлении. В результате соиспарения с н-гексанами получали продукт в виде коричневого масла, и материал не подвергался дополнительной очистке (0,023 г, предположительно 100%). ЖХ/МС (1,868 мин (ES+)), m/z: 794,2 [М+Н]+.
(ii) (S)-2-амино-N-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил)-5-оксо-5, 11 а-дигидро-1 Н-бензо[е]пирроло [1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5-оксо-5,11 а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а] [ 1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-ил)-3-метилбутанамид (20е).
Пиперидин (0,058 мл, 0,590 ммоль, 12,0 экв.) добавляли к перемешиваемой смеси Fmoc-амина 19е (0,050 г, 0,0492 ммоль, 1,0 экв.) в безводном ДМФА (0,8 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 20 мин ЖХМС показала завершение реакции и реакционную смесь разбавляли ДХМ (30 мл) и промывали водой (3x30 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали досуха при пониженном давлении. В результате соиспарения с н-гексанами получали продукт в виде коричневого масла, и материал не подвергался дополнительной очистке (0,040 г, предположительно 100%). ЖХ/МС (1,533 мин (ES+)), m/z: 928,2 [М+Н]+.
(а) Соединения 21а-е.
(i) 1-(2-Йодацетамидо)-N-((S)-1-((S)-1-((E)-3-((S)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-5-оксо-2-((Е)-проп-1-енил)-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-8-илокси)пропокси)-5-оксо-5,11а-дигидро-1Н-бензо[е]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)аллиламино)-1-оксопропан-2-иламино)-3-метил-1-оксобутан-2 -ил)-3,6,9,12 -тетраоксапентадекан-15 -амид (21с).
2-Этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (0,007 г, 0,0290 ммоль, 1,0 экв.) добавляли к раствору амина 20с (предположительно 100%, 0,023 г, 0,0290 ммоль, 1,0 экв.) и 1-йод-2-оксо-6,9,12,15-тетраокса-3-азаоктадекан-18-овой кислоты (I5) (0,0126 г, 0,0290 ммоль, 1,0 экв.) в сухом дихлорметане (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч, затем разбавляли ДХМ (6 мл) и промывали водой (2x10 мл). Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток флеш-хроматографии (силикагель; от 40:1 об./об. ДХМ/МеОН до 5:1 об./об. ДХМ/МеОН) с получением продукта в виде бледно-желтого масла (0,0043 г, 29%). ЖХ/МС (2,380 мин (ES+)), m/z: 605,0 1/2[М+2Н]+.
Пример 4. Определение цитотоксичности In Vitro.
Клетки помещали в 150 мкл среды для выращивания на лунку в 96-луночные планшеты с черными стенками и прозрачным дном (Costar, Corning) и оставляли осаждаться в течение 1 ч в биологической камере до помещения в инкубатор при 37°С, 5% СО2. На следующий день получали 4x концентрацию образцов лекарственного средства и затем титровали 10-кратными последовательными разбавлениями с получением 8-точечной кривой зависимости дозы и добавляли в количестве 50 мкл на лунку в дуплика-тах. Затем клетки инкубировали в течение 48 ч при 37°С, 5% СО2. Цитотоксичность измеряли путем инкубирования со 100 мкл раствора Cell Titer Glo (Promega) в течение 1 ч и затем люминесценцию измеряли на планшет-ридере Fusion HT (Perkin Elmer). Данные обрабатывали с помощью Excel (Microsoft) и GraphPad (Prism) с получением кривых "доза-ответ" и получали значения 1С50 и собирали данные.
ICso (нМ)
786-0
Caki-1
L428
MCF-7
0,2
0,0002
0,06
0,8
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы I
где имеет формулу II
где X представляет собой NHRN, где RN выбран из группы, состоящей из Н и C1-4 алкила; RC1, RC2 и RC3 независимо выбраны из Н и метила; R12 выбран из группы, состоящей из
(ia) фенильной или С5-7 гетероарильной группы, содержащей от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, необязательно замещенных одним или более заместителями, выбранными из груп
пы, состоящей из метилтиофенила, галогена, нитро, циано, C1-7 алкокси, С1-7 алкила, С3-7 гетероциклила, содержащего от 1 до 4 гетероатомов в кольце, выбранных из N, О и S, и необязательно замещенного одной или более C1-4 алкильными группами, и бис-окси-С1-3 алкилена;
(ib) C1-5 алифатического алкила;
(ic) С3_б насыщенного циклоалкила;
121 21 22 23
(id) * , где каждый из R , R и R независимо выбран из Н, d_3 алкила, С2.3 алкенила, С2.3 алкинила и циклопропила, где общее количество атомов углерода в группе R12 составляет не более 5;
R2r
(ie) \^"^R25a5 Где один из R25a и R25b представляет собой Н и другой выбран из: фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофенила;
(if) r24, где R24 выбран из Н; Ci_3 алкила; С2.3 алкенила; С2.3 алкинила; циклопропила; фенила, где фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила и тиофе-нила; и каждый R7 и R7 представляет собой C1-4 алкилоксигруппу; и R" представляет собой С3-7 алкиле-новую группу.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R , R и R все представляют собой Н.
3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что X представляет собой NH2.
4. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R12 представляет собой фенил.
5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что R12 содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила и морфоли-
но.
6. Соединение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что R12 выбран из
(i) метила, этила или пропила;
(ii) циклопропила;
(iii) группы формулы
где общее количество атомов углерода в группе R12 составляет не более 4; (iv) группы формулы
где R2, R7, R", R12, R7 такие, как определены для соединения формулы I в любом из пп.1-6; и
(a) R10 представляет собой 2,2,2-трихлороэтилкарбонат, и R11 представляет собой О-
третбутилдиметилсилиловый эфир; или
(b) R10 представляет собой [2-(триметилсилил)этокси]метилацеталь, и R11 представляет собой оксо-
группу;
и R10' и R11' такие же, как R10 и R11. 8. Конъюгат, имеющий формулу III
L-(LU-D)P (III)
где L представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, обладающего направленным действием на определенные опухолеассоциированные антигены, включая Cripto, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, гликопротеин NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD70, CD79,
CD138, PSCA, ПСМА (простатспецифический мембранный антиген) (PSMA), ВСМА, Е-селектин, EphB2, меланотрансферин, Muc16 и TMEFF2,
LU представляет собой звено линкера формулы -А1-Ь1-, где L1 представляет собой дипептид структуры -NH-X1-X2-CO-, где группа -Х1-Х2- выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-1 -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-,
и А1 выбран из
где звездочка указывает на место присоединения к L1, волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и п представляет собой от 0 до 6;
где звездочка указывает на место присоединения к L1, волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и п представляет собой от 0 до 6;
где звездочка указывает на место присоединения к L1, волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда, п представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30; или
о Г о
КэгЧ
где звездочка указывает на место присоединения к L1, волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1 и m представляет собой от 0 до 30, где полученная из малеимида группа необязательно заменена на группу -С(=О)СН2-; р представляет собой от 1 до 20 и
D представляет собой звено лекарственного соединения, представляющее собой соединение следующей формулы IA:
где R7, R", R12 и R7 такие, как определено для соединения формулы I по любому из пп. 1-6; R2 имеет формулу IIB
где RC1, RC2 и RC3 независимо выбраны из Н и метила;
*-N(RN)-s-
X представляет собой -3 , где R выбран из Н и Сi_4алкила, и звездочка указывает на место
присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия указывает на место присоединения к L1.
9. Конъюгат по п.8, отличающийся тем, что А1 представляет собой
где звездочка указывает на место присоединения к L1, волнистая линия указывает на место присоединения к звену лиганда и n представляет собой от 0 до 6.
10. Конъюгат по любому из пп.8 или 9, отличающийся тем, что дипептид выбран из группы, состоящей из валин-аланина, валин-цитруллина и фенилаланин-лизина.
11. Применение конъюгата по любому из пп.8-10 для лечения пролиферативного заболевания или аутоиммунного заболевания.
12. Линкер лекарственного соединения формулы V
11.
где
G1 выбран
G1-L1-D (V)
bp*-
где звездочка указывает на место присоединения к L1 и и представляет собой от 0 до 6;
где звездочка указывает на место присоединения к
L1 и n представляет собой от 0 до 6;
где звездочка указывает на место присоединения к L1 и n представляет собой 0 или 1, m представляет собой от 0 до 30;
где звездочка указывает на место присоединения к L1 и n представляет собой 0 или 1, m представляет собой от 0 до 30;
и где малеимидная группа может быть заменена группой -С(=О)СН2Х, где X представляет собой Cl, Br или I;
L1 представляет собой дипептид структуры -NH-X1-X2-CO-, где группа-Х1-Х2-выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-;
и где D представляет собой звено лекарственного соединения, которое представляет собой соединение формулы IA
бран из группы, состоящей из Н и C1-4 алкила, звездочка указывает на место присоединения к остатку звена лекарственного соединения и волнистая линия указывает на место присоединения к L1.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 1 -
028457
- 2 -
028457
- 1 -
028457
- 3 -
028457
- 2 -
028457
- 4 -
028457
- 17 -
028457
- 17 -
028457
- 26 -
028457
- 26 -
028457
- 40 -
028457
- 40 -
028457
- 53 -
028457
- 53 -
028457
- 55 -
028457
- 55 -
028457
- 55 -
028457
- 55 -