|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли для лечения тройного негативного рака молочной железы, где соединение представляет собой энзалутамид  2. Применение по п.1, где тройной негативный рак молочной железы представляет собой подтип, выбранный из группы, состоящей из базально-подобного типа 1 (BL1), базально-подобного типа 2 (BL2), иммуномодулирующего (IM) типа, мезенхимального (М), подобного мезенхимальному стволовому типу (MSL), и люминального с наличием андрогеновых рецепторов (LAR). 3. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы содержат мутацию BRCA1. 4. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы не экспрессируют на детектируемом уровне андрогеновый рецептор. 5. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы экспрессируют на детектируемом уровне андрогеновый рецептор.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли для лечения тройного негативного рака молочной железы, где соединение представляет собой энзалутамид 2. Применение по п.1, где тройной негативный рак молочной железы представляет собой подтип, выбранный из группы, состоящей из базально-подобного типа 1 (BL1), базально-подобного типа 2 (BL2), иммуномодулирующего (IM) типа, мезенхимального (М), подобного мезенхимальному стволовому типу (MSL), и люминального с наличием андрогеновых рецепторов (LAR). 3. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы содержат мутацию BRCA1. 4. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы не экспрессируют на детектируемом уровне андрогеновый рецептор. 5. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы экспрессируют на детектируемом уровне андрогеновый рецептор.
Евразийское OD 028452 (13) Bl
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 20l7.ll.30
(21) Номер заявки 201400178
(22) Дата подачи заявки
20l2.07.27
(51) Int. Cl. A61K31/4174 (2006.01) A61K31/4166 (2006.0l) A61K31/4439 (2006.0l) A61K31/4178 (2006.0l) A61P 35/00 (2006.01)
(54) ЛЕЧЕНИЕ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
(31) 61/513,361
(32) 2011.07.29
(33) US
(43) 2014.11.28
(86) PCT/US2012/048471
(87) WO 2013/066440 2013.05.10
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
МЕДИВЕЙШН ПРОСТЕЙТ ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.; ТЕ РИДЖЕНТС ОФ ТЕ ЮНИВЕРСИТИ ОФ КОЛОРАДО, Э БОДИ КОРПОРЕЙТ (US)
(72) Изобретатель:
Проттер Эндрю А., Ричер Дженнифер, Кокрейн Дон (US)
(74) Представитель:
Фелицына С.Б. (RU)
(56) US-A1-20070004753 US-A1-20110130296 US-A1-20110003839 WO-A1-2010118354 WO-A1-2011044327 WO-A1-2010099238 US-A1-20120214864 US-A1-20100210665 US-A1-20100172975 US-A1-20110152348 US-A1-20090111864 US-A1-20080139634
для лечения рака молочной железы.
Область техники, к которой принадлежит изобретение
Областью техники является лечение рака молочной железы.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' блокирует DHT-опосредованный рост клеток MCF7. Планки погрешностей представляют стандартную ошибку среднего для 6 лунок в каждой временной точке. См. пример 1.
Фиг. 2. Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' блокирует DHT-опосредованный рост клеток BCK4.
Фиг. 3А-В. Фиг. 3А, диаграмма, демонстрирующая, что RD162' блокирует эстрадиол (Е2)-опосредованный рост клеток MCF7. Планки погрешностей представляют стандартную ошибку среднего для 6 лунок в каждой временной точке. См. пример 3. Фиг. 3В, Вестерн-блоттинг, демонстрирующий экспрессию эстрогенового рецептора альфа, обработанного в течение 48 ч в различных условиях и а-тубулин (контроль загрузки).
Фиг. 4. Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' блокирует Е2-опосредованную положительную регуляцию SDF-1, гена, вовлеченного в Е2-управляемую пролиферацию, прогестеронового рецептора и андрогенового рецептора.
Фиг. 5A-D. Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' ингибирует DHT-опосредованный опухолевый рост in vivo как описано в примере 5. Фиг. 5А, размер опухолей, измеренный штангенциркулем, в зависимости от времени. Фиг. 5В, in vivo люминисцентная визуализация всего организма (IVIS) в зависимости от времени. Фиг. 5С, измерения штангенциркулем размера индивидуальной опухоли в конце исследования. Фиг. 5D, измерения IVIS размера индивидуальной опухоли в конце исследования.
Фиг. 6А-С. Фиг. 6А. Вестерн-блоттинг четырех люминальных (ER+, PR+) и четырех трижды негативных (ER-, PR, Her2-) клеточных линий рака молочной железы по андрогенному рецептору, эстроген-ному рецептору и тубулину (в качестве контроля загрузки). Фиг. 6В, диаграмма, демонстрирующая, что RD162' ингибирует клеточный рост в клеточной линии тройного негативного рака молочной железы ВТ20 и действительно снижает жизнеспособность клеток. Фиг. 6С, диаграмма, демонстрирующая, что RD162' ингибирует клеточный рост в клеточной линии тройного негативного рака молочной железы MDA468 и действительно снижает жизнеспособность клеток.
Фиг. 7А-Е. Фиг. 7А. Диаграмма, демонстрирующая результаты in vitro анализа пролиферации с MTS с использованием клеток MDA-MB-453 (AR+, ER, HER2+, PR-), свидетельствующий о том, что 10 мкМ RD162' ингибирует пролиферацию, индуцированную 10 нМ DHT. Фиг. 7В, Диаграмма, демонстрирующая результаты люциферазного анализа с клетками MDA-kb2, демонстрирующий, что RD162' инги-бирует пролиферацию, индуцированную DHT дозозависимым способом. Фиг. 7С, диаграмма, демонстрирующая соотношение ядерного к общему AR в клетках MDA-kb2, обработанных согласно описанию в примере 7. Фиг. 7D и фиг. 7Е, Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' ингибирует рост опухоли, индуцированный DHT.
Фиг. 8. Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' ингибирует рост клеток тройного негативного рака молочной железы.
Фиг. 9. Диаграмма, демонстрирующая, что RD162' с HERCEPTIN(r) ингибирует рост Her2+ клеток рака молочной железы.
Фиг. 10А. Диаграмма, демонстрирующая еженедельное измерение объема опухоли.
Фиг. 10В. Диаграмма, демонстрирующая массу опухолей в конце эксперимента, описанного в Примере 10.
Фиг. 10С. Репрезентативные срезы опухолей, окрашенные по расщепленной каспазе 3. Фиг. 10В. Изображения окрашивания ядерного AR.
Фиг. 11А. Диаграмма, демонстрирующая средний общий поток всех мышей в каждой их групп обработки.
Фиг. 11В. Диаграмма, демонстрирующая общий люминсцентный поток, показана для всех индивидуальных мышей в день подбора (День -3) и последний день визуализации (День 11).
Фиг. 11С. Изображения люминисцентного сигнала в двух группах обработки в день подбора (день -2) и в последний день визуализации (день 11).
Фиг. 11D. Репрезентативные изображения окрашивания BrdU (слева, 400х увеличение) и количественная оценка (справа).
Сущность изобретения
В данном раскрытии описано применение при лечении рака молочной железы диарилгидантоино-вого соединения RD162' (энзалутамида). Соединения, пригодные для лечения рака молочной железы, ингибируют пролиферацию клеток рака молочной железы и/или приводят к смерти клеток рака молочной железы.
1. Соединения диарилгидантоина
Полезные соединения диарилгидантоина, в частности соединение RD162', и их синтез описаны, например, в пат. США 7709517. Соединение RD162' (энзалутамид) представляет собой соединение формулы
2. Соли
В раскрытых способах могут быть использованы соли описанных выше соединений. Если соединение имеет, например, по меньшей мере один основный центр, оно может образовывать кислотно-аддитивную соль. Они образуются, например, с сильными неорганическими кислотами, такими как минеральные кислоты, например, серной кислотой, фосфорной кислотой или галогенводородной кислотой, с сильными органическими карбоновыми кислотами, такими как алканкарбоновые кислоты от 1 до 4 атомов углерода, которые не замещены или замещены, например, галогеном, например, уксусной кислотой, такими как насыщенными или ненасыщенными дикарбоновыми кислотами, например щавелевой, малоновой, янтарной, малеиновой, фумаровой, фталевой или терефталевой кислотами, такими как гид-роксикарбоновые кислоты, например, аскорбиновой, гликолевой, молочной, яблочной, винной или лимонной кислотами, такими как аминокислоты (например, аспарагиновой или глутаминовой кислотами или лизином или аргинином) или бензойной кислотой, или с органическими сульфоновыми кислотами, такими как (С1-С4)-алкил или арилсульфокислоты, которые являются незамещенными или замещенными, например, галогеном, например метил- или п-толуолсульфоновой кислотой. Могут быть также образованы соответствующие кислотно-аддитивные соли, имеющие, при необходимости, дополнительный основный центр. Соединения, имеющие по меньшей мере одну кислотную группу (например, СООН), также могут образовывать соли с основаниями. Подходящими солями с основаниями являются, например, соли металлов, такие как соли щелочных металлов или соли щелочно-земельных металлов, например, соли натрия, калия или магния, или соли с аммиаком или органическим амином, таким как морфо-лин, тиоморфолин, пиперидин, пирролидин, моно, ди- или тринизший алкиламин, например, этил, трет-бутил, диэтил, диизопропил, триэтил, трибутил или диметилпропиламин, или моно, ди- или тригидрок-синизший алкиламин, например моно, ди- или триэтаноламин. Кроме того, могут быть образованы соответствующие внутренние соли. Также включены соли, которые не подходят для фармацевтического применения, но которые могут быть использованы, например, для выделения или очистки свободных соединений или их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых воплощениях соли соединений, которые содержат основную группу, включают моногидрохлорид, гидросульфат, метансульфонат, фосфат или нитрат. В некоторых воплощениях соли соединений, которые содержат кислотную группу включают соли натрия, калия и магния и их фармацевтически приемлемые органические амины.
В некоторых воплощениях соли представляют собой фармацевтически приемлемые (например, нетоксичные, физиологически приемлемые) соли. Фармацевтически приемлемые соли сохраняют, по меньшей мере, некоторые из биологических активностей свободного (несолевого) соединения, которые можно вводить в виде лекарств или фармацевтических препаратов индивидууму. Такие соли, например, включают: (1) кислотно-аддитивные соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., или образованные с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, про-пионовая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, винная кислота и т.п.; (2) соли, образованные, когда кислотный протон, присутствующий в исходном соединении, либо заменен ионом металла, например ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла, или ионом алюминия; либо координируется с органическим основанием. Приемлемые органические основания включают этаноламин, ди-этаноламин, триэтаноламин и т.п. Приемлемые неорганические основания включают гидроксид алюминия, гидроксид кальция, гидроксид калия, карбонат натрия, гидроксид натрия и т.п. Дополнительные примеры фармацевтически приемлемых солей включают те, которые перечислены в Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 1977 Jan; 66(1):1-19. Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены in situ в процессе производства, либо отдельно реакцией очищенного соединения в его свободной кислотной или основной форме с подходящим органическим или неорганическим основанием или кислотой, соответственно, и выделение полученной таким образом соли в течение последующей очистки. Следует понимать, что ссылка на фармацевтически приемлемые соли включают аддитивные формы с растворителем или кристаллические формы, в частности, сольваты или полиморфы. Сольваты содержат либо стехиометрические, либо нестехиометрические количества растворителя и часто образуются во время процесса кристаллизации. Гидраты образуются, когда растворителем является вода или алкоголя-ты образуются, когда растворителем является спирт. Полиморфные модификации включают различные механизмы кристаллической упаковки соединения с одним и тем же химическим составом. Полиморфные модификации обычно имеют различные паттерны дифракции рентгеновских лучей, инфракрасные спектры, температуры плавления, плотность, твердость, форму кристалла, оптические и электрические свойства, стабильность и растворимость. Различные факторы, такие как растворителя перекристаллиза
ции, скорость кристаллизации и температура хранения могут привести к доминированию одной кристаллической формы.
Терапевтические методы
В дополнение к симптомам рака молочной железы, обсуждаемым ниже, и терапевтическим показаниям, описанным в патенте США 7709517; США 2011/0003839, WO 2010/118354, WO 2011/044327 и WO 2010/099238, соединения диарилгидантоина могут быть использованы для лечения заболеваний или состояний связанных с андрогенным рецептором, таких как доброкачественной гиперплазии предстательной железы, выпадение волос и акне. Эти и родственные соединения могут также быть полезными в качестве модуляторов других ядерных рецепторов, таких как глюкокортикоидный рецептор, эстрогеновый рецептор и рецептор, активируемый пролифератором пероксисом, и в качестве терапевтических агентов для заболеваний, при которых ядерные рецепторы играют определенную роль, например, для рака молочной железы, рака яичников, диабета, болезней сердца и заболеваний, связанных с обменом веществ.
"Лечить" или "лечение", при использовании в данном документе, представляет собой подход для получения благотворного или желаемого результата, включая, без ограничения перечисленным, облегчение симптома, уменьшение симптома, а также предотвращение усугубления симптома, связанного с подвергаемым лечению заболеванием. Лечение также включает, без ограничения перечисленным, любое одно или более из числа повышения выживаемости, повышение выживаемости без прогрессирования и уменьшение размера опухоли.
1. Формы рака молочной железы
Соединения могут быть использованы для лечения различных форм рака молочной железы, вне зависимости от того, экспрессирует ли или нет рак молочной железы андрогенные рецепторы или эстро-генные рецепторы. Раки молочной железы, которые поддаются лечению, включают, без ограничения перечисленным, базально-подобный рак молочной железы, BRCA1-ассоциированный рак молочной железы, медуллярный рак молочной железы, метапластический рак молочной железы, рак молочной железы специфического гистологического типа, тройной негативный рак молочной железы и рак молочной железы устойчивый к гормональной терапии.
В некоторых воплощениях, пациенты, подлежащие лечению, находятся в постменопаузе. В других воплощениях пациенты, подлежащие лечению, находятся в пременопаузе. В других воплощениях пациенты, подлежащие лечению, находятся в перименопаузе. В некоторых воплощениях пациенты, подлежащие лечению, являются мужчинами.
В некоторых воплощениях рак молочной железы являются ER + (т.е. 1% или более тестируемых клеток экспрессирует ER, обнаруживаемый иммуноцитохимией). В некоторых воплощениях рак молочной железы содержат клетки, которые демонстрируют эстрадиолопосредованный рост. В некоторых воплощениях пациенты, подлежащие лечению, не имеют обнаруживаемых уровней циркулирующего эст-радиола. В некоторых воплощениях пациенты, подлежащие лечению, имеют уровни циркулирующего эстрадиола выше 10 пмоль/л. В некоторых воплощениях пациенты, подлежащие лечению, имеют уровни циркулирующего эстрадиола менее 10 пмоль/л. В некоторых воплощениях уровни эстрадиола измеряются методикой двойных антител, описанной в Cummings et al., JAMA 287, 216-20, 2002.
i. Тройной негативный рак молочной железы
В предпочтительных воплощениях рак молочной железы представляет собой тройной негативный рак молочной железы, включая, без ограничения перечисленным, такие подтипы тройного негативного рака молочной железы, как базальный-подобный 1 типа (BL1), базальный-подобный 2 типа (BL2), имму-номодулирующий (IM), мезенхимальный (М), подобный мезенхимальному стволовому типу (MSL), и люминальный с наличием андрогеновых рецепторов (LAR) подтипы. "Тройной негативный рак молочной железы", при использовании в данном документе характеризуется отсутствием рецептора эстрогена (ER), рецептора прогестерона (PR), a также отсутствием избыточной экспрессии или амплификации Her2neu. Опухоль является отрицательной по экспрессии ER или PR, если менее 1% протестированных клеток являются положительными по ER или PR, согласно измерению иммуногистохимией, и если ген Her2 не экспрессируется (например, не обнаруживается амплификация с помощью FISH). Тройной негативный рак молочной железы клинически характеризуется как более агрессивный и менее чувствительный к стандартной терапии и связан с более плохим общим прогнозом для пациента. Это диагноз чаще ставится у молодых женщин и у женщин с мутацией BRCA1.
В некоторых воплощениях тройной негативный рак молочной железы является AR +, т.е. он включает клетки, которые экспрессируют андрогеновые рецепторы, обнаруживаемые с помощью иммуноги-стохимии, связывания лиганда, или другими способами, известными в данной области. В других воплощениях тройной негативный рак молочной железы является AR-.
ii. ER+ рак молочной железы, устойчивый к эндокринной терапии
Приблизительно 75% случаев рака молочной железы экспрессируют рецептор эстрогена (ER) и являются кандидатами на эндокринную терапию. Избирательный модулятор ER тамоксифен является наиболее часто назначаемой гормональной терапией, однако около 30 процентов опухолей, которые сохраняют рецептор эстрогена (ER), не реагируют на эстроген/ER направленные методы лечения, такие как тамоксифен или ингибиторы ароматазы (AI) и почти у всех пациентов с метастатическим заболеванием
развивается устойчивость. У таких пациентов соединение может обеспечить терапевтическое воздействие.
В некоторых воплощениях рак молочной железы является ER+, т.е. он содержит детектируемые уровни рецептора эстрогена, измеренные, как описано выше, но является устойчивым к эндокринной терапии. "Эндокринная терапия", используемая в данном документе, включает введение одного или нескольких ингибиторов ароматазы (например, анастрозол, экземестан, летрозол) и/или введения одного или нескольких модуляторов рецептора эстрогена (например, тамоксифен, ралоксифен, фулвестрант). "Устойчивый к эндокринной терапии", используемый в данном документе, означает, что опухоли (первичные или метастазы) не реагируют на одну или несколько из числа указанных выше процедур уменьшением, а остаются такого же размера или увеличивается в размере, или что рецидивируют в ответ на такое лечение в любое период жизни пациента.
В некоторых воплощениях рак молочной железы является ER + / AR +. В некоторых воплощениях рак молочной железы является ER + / AR-. В некоторых воплощениях рак молочной железы содержит клетки, которые являются положительными по рецептору прогестерона (+ PR), что определяется с помощью иммуногистохимии или анализов связывания лигандов или любым другим способами обнаружения. В некоторых воплощениях рак молочной железы не содержит детектируемых клеток с рецепторами прогестерона; например, рак молочной железы является отрицательным по рецептору прогестерона (PR). В некоторых воплощениях рак молочной железы содержит клетки, которые являются положительными по HER2 (HER2 +), что определяется по наблюдаемой генной амплификации Her2 после гибридизации in situ. В некоторых воплощениях рак молочной железы не содержит детектируемых клеток с амплификацией или экспрессией или сверхэкспрессией Her2; например, рак молочной железы является отрицательным по Her2 (HER2-). Рецепторы прогестерона и HER2 могут присутствовать на одной и той же или на различных популяций клеток, которые могут быть одинаковыми или различными в качестве популяций клеток, экспрессирующих ER и/или Ar.
В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR +, ER + и HER2+. В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR +,
ER + и PR +. В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR +, ER +, HER2+ и PR +. В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR, ER + и HER2+. В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR, ER + и PR +. В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR, ER +, HER2+ и PR+. В некоторых воплощениях рак молочной железы идентифицируется как AR +, ER, HER2+, PR-.
2. Фармацевтические композиции
Соединения могут быть приготовлены в виде любого типа фармацевтической композиции, известного в данной области, включая, без ограничения перечисленным, таблетки, пастилки, пилюли, капсулы, сиропы, эликсиры, растворы для инъекций и т.п.
Фармацевтическая композиция, как правило, включает фармацевтически или фармакологически приемлемый наполнитель или носитель. При использовании в данном документе, "фармацевтически приемлемый" или "фармакологически приемлемый" подразумевают материал, который не является биологически или иным образом нежелательным, например, материал может быть включен в фармацевтическую композицию, вводимую пациенту, если он вызывает никаких значительных нежелательных биологических эффектов или не взаимодействует вредным образом с любым из других компонентов композиции, в которой он содержится. В некоторых воплощениях фармацевтически приемлемые носители или наполнители соответствуют требуемым стандартам токсикологической и производственного тестирования и/или включены в Руководство неактивных ингредиентов, подготовленное Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США.
Термин "наполнитель", используемый в данном документе, означает инертное или неактивное вещество, которое может использоваться в производстве лекарственных средств или фармацевтических средств, таких как таблетки, содержащих соединение в качестве активного ингредиента. Термин "наполнитель" может охватывать различные вещества, включая, помимо прочего, любое вещество, используемое в качестве связующего, разрыхлителя, покрытия, добавки для прессования/инкапсуляции, крема или лосьона, смазочного вещества, растворов для парентерального введения, материалов для жевательных таблеток, подсластителей или ароматических веществ, суспендирующего/гелеобразующего агента или агента для влажного гранулирования. Связующие включают, например, карбомеры, повидон, ксантано-вую камедь и т.п.; покрытия включают, например, фталат ацетата целлюлозы, этилцеллюлозу, геллано-вую камедь, мальтодекстрин, энтеросолюбильные покрытия и т.п.; добавки для прессования/инкапсуляции включают, например, карбонат кальция, декстрозу, фруктозу dc (dc = "прямо прессуемый"), мёд dc, лактозу (безводную или моногидрат; необязательно в комбинации с аспартамом, целлюлозой или микрокристаллической целлюлозой), крахмал dc, сахарозу и т.п.; разрыхлители включают, например, натриевую соль кроскармеллозы, геллановую камедь, натриевую соль гликолята крахмала и т.п.; кремы или лосьоны, включают, например, мальтодекстрин, каррагенаны и т.п.; смазывающие вещества включают, например, стеарат магния, стеариновую кислоту, стеарилфумарат натрия и т.п.; материалы для жевательных таблеток включают, например, декстрозу, фруктозу dc, лактозу (моногидрат, необязательно в
комбинации с аспартамом или целлюлозой) и т.п.; суспендирующие/гелеобразующие агенты включают, например, каррагенан, натриевую соль гликолята крахмала, ксантановую камедь и т.п.; подсластители включают, например, аспартам, декстрозу, фруктозу dc, сорбит, сахарозу dc и т.п., а агенты для влажного гранулирования включают, например, карбонат кальция, мальтодекстрин, микрокристаллическую целлюлозу и т.п.
Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и т.п. могут также содержать следующее: связующие, такие как трагакантовая камедь, аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин; наполнители, такие как дикальция фосфат; разрыхитель, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и т.п.; смазывающее вещество, такое как стеарат магния; и подсластитель, такой как сахароза, фруктоза, лактоза или аспартам или вкусовая добавка, такая как мята перечная, масло грушанки или вишневый ароматизатор. Когда стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, она может содержать, в дополнение к материалам указанного выше типа, жидкий носитель, такой как растительное масло или полиэтиленгликоль. Различные другие материалы могут присутствовать в качестве покрытий или для модификации физической формы твердой стандартной лекарственной формы. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты желатином, воском, шеллаком или сахаром и т.п. Сироп или эликсир может содержать активное соединение, сахарозу или фруктозу в качестве подсластителя, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, например вишневый или апельсиновый. Конечно, любой материал, используемый для получения любой лекарственной формы, должны быть фармацевтически приемлемым и по существу нетоксичным в используемых количествах. Кроме того, соединение диарилгидантоина может быть включено в препараты и устройства с замедленным высвобождением. Например, соединение может быть включено в капсулы с замедленным высвобождением, таблетки с замедленным высвобождением, и пилюли с замедленным высвобождением.
Фармацевтические лекарственные формы, пригодные для инъекции или инфузии, могут включать стерильные водные растворы или дисперсии или стерильные порошки, содержащие соединение, которое приспособлено для приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций или инфузий, необязательно, инкапсулированных в липосомы. Конечная лекарственная форма, как правило, является стерильной, жидкой и стабильной в условиях изготовления и хранения. Жидкий носитель или наполнитель может представлять собой растворитель или жидкую дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкие полиэтиленгликоли и т.п.), растительные масла, нетоксичные сложные эфиры глицерина и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем образования липосом, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсий или путем использования поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеро-сала и т.п. Во многих случаях изотонические агенты включают, например, сахара, буферы или хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может быть осуществлено с использованием в композициях агентов, задерживающих абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные инъекционные растворы готовят путем введения соединения в требуемом количестве в соответствующий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, как требуется, с последующей стерилизацией фильтрацией. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов, способы получения включают методы вакуумной и лиофильной сушки, которые дают порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желательный ингредиент, присутствующий в предварительно стерильно профильтрованных растворах.
Полезные твердые носители включают тонкоизмельченные твердые вещества, такие как тальк, глина, микрокристаллическая целлюлоза, кремнезем, глинозем и т.п. Другие твердые носители включают нетоксичные полимерные наночастицы или микрочастицы. Полезные жидкие носители включают воду, спирты или гликоли или смеси вода/спирт гликоль, в которых соединение может быть растворен или диспергирован на эффективных уровнях, при необходимости с помощью нетоксичных поверхностно-активных веществ. Могут быть добавлены адъюванты, такие как отдушки и дополнительные противо-микробные агенты, при оптимизации свойств для заданного применения. Полученные жидкие композиции могут быть применены с абсорбирующих аппликаторов, используемых для пропитки бинтов и других перевязочных материалов, или распыляться на пораженный участок с помощью распылителей насосного типа или аэрозольных.
Загустители, такие как синтетические полимеры, жирные кислоты, соли жирных кислот и сложные эфиры, жирные спирты, модифицированные целлюлозы или модифицированные минеральные материалы также могут быть использованы с жидкими носителями для формирования легконамазывающихся паст, гелей, мазей, мыла и т.п., для применения непосредственно на коже пользователя.
Примеры полезных дерматологических композиций, которые могут использоваться для доставки соединения на кожу, известны в данной области, например, см. Jacquet et al. (US Pat. № 4608392), Geria (US Pat. № 4992478), Smith et al. (US Pat. № 4559157) и Wortzman (US Pat. № 4820508).
В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция представляет собой единичную лекарственную форму. При использовании в данном документе "единичная дозированная форма" является физически дискретной единицей, содержащей заданное количество активного вещества.
3. Дозы
При использовании в данном документе, термин "эффективное количество" предназначен для обозначения такого количества соединения, которое в сочетании с его параметрами эффективности и токсичности, а также на основе знаний практикующего специалиста, должно быть эффективным в данной терапевтической форме. Как известно в данной области, эффективное количество может быть в одной или нескольких дозах, т.е. для достижения желаемого конечного результата могут быть необходимы разовая доза или многократные дозы. Эффективное количество можно рассматривать в контексте введение одного или более терапевтических агентов, и один агент может считаться данным в эффективном количестве, если, в сочетании с одним или несколькими другими агентами, достигается желательный или благотворный результат. Подходящие дозы любого из совместно вводимых соединений необязательно могут быть снижены за счет комбинированного действия (например, аддитивных или синергетических эффектов) соединений.
Пригодные дозы соединений можно определить путем сравнения их in vitro активности и/или in vivo активности на животных моделях. Методы экстраполяции эффективных доз мышей и других животных на человека, известны в данной области техники, см., например, US Pat. № 4938949. Например, концентрация соединения в жидкой композиции, например лосьона, может составлять от около 0,1-25 мас.% или около 0,5-10 мас.%. Концентрация в полутвердой или твердой композиции, такой как гель или порошок, может составлять около 0,1-5 мас.% или 0,5-2,5 мас.%.
Количество соединения, требуемой для использования в лечении, будет изменяться не только в связи с конкретной выбранной солью, но также в связи с путем введения, природой состояния, подлежащего лечению, возраста и состояния пациента и будет в конечном счете находиться на усмотрении лечащего или клинического врача.
Эффективные дозы и способы введения соединений являются обычными. Точное количество (эффективная доза) агента будет варьировать от объекта к объекту в зависимости, например, от вида, возраста, массы и общее или клинического состояния объекта, тяжести или механизма любого расстройства, подлежащего лечению, от используемого конкретного агента или носителя, способа и схемы введения и т.п. Терапевтически эффективная доза может быть определена эмпирически обычными способами, известными специалистам в данной области техники. См., например, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman and Gilman, eds., Macmillan Publishing Co., New York. Например, эффективная доза может быть оценена первоначально либо в анализах на клеточных культурах, либо на подходящих животных моделях. Животная модель также может использоваться для определения соответствующих диапазонов концентраций и путей введения. Такая информация может быть использована для определения подходящих доз и способов их введения человеку. Терапевтическая доза может быть выбрана по аналогии с дозами сравнимых терапевтических агентов.
Конкретный способ введения и режима дозирования будет выбран лечащим врачом, с учетом сведений о случае (например, объект, заболевание, стадия заболевания, и является ли лечение профилактическим). Лечение может включать ежедневную или мультиежедневные дозы соединения(ий) в течение определенного периода от нескольких дней до месяцев или даже лет.
В целом, однако подходящая доза будет в диапазоне от около 0,001 до около 100 мг/кг, например, от около 0,01 до около 100 мг/кг массы тела в день, например, выше примерно 0,1 мг на килограмм, или в диапазоне от около 1 до около 10 мг на килограмм веса тела реципиента в день. Например, подходящая доза может составлять около 1, 10 или 50 мг/кг массы тела в день.
Соединение удобно вводить в единичной дозированной форме, например, содержащей от 0,05 до 10000 мг, от 0,5 до 10000 мг, от 5 до 1000 мг или около 100 мг активного ингредиента на единичную дозированную форму.
Соединение может быть введено для достижения пиковой концентрации в плазме, например, от примерно 0,5 до примерно 75 мкМ, от приблизительно 1 до 50 мкм, примерно от 2 до 30 мкМ, или примерно 5 до примерно 25 мкм. Типичные искомые концентрации в плазме включают, по меньшей мере, или не более чем 0,25, 0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 или 200 мкМ. Например, уровни в плазме могут составлять приблизительно от 1 до 100 микромолярные или от примерно 10 до примерно 25 микромолярные. Это может быть достигнуто, например, путем внутривенной инъекции от 0,05 до 5% раствором соединения диарилгидантоина или гидантоина, необязательно в физиологическом растворе, или при перораль-ном введении в виде болюса, содержащего примерно 1-100 мг соединения диарилгидантоина или гидан-тоина. Искомые уровни в крови можно поддерживать непрерывной инфузией, чтобы обеспечить около 0,00005-5 мг на кг массы тела в час, например, по меньшей мере или не более чем 0,00005, 0,0005, 0,005, 0,05, 0,5 или 5 мг/кг/ч. Кроме того, такие уровни могут быть получены путем периодических инфузий, содержащих около 0,0002-20 мг на кг массы тела, например, по меньшей мере, или не более чем 0,0002, 0,002, 0,02, 0,2, 2, 20 или 50 мг соединения на килограмм веса тела.
Соединение может быть удобно представлено в виде единичной дозы или в виде разделенных доз,
вводимых через соответствующие интервалы, например, в виде двух, трех, четырех или более субдоз в день. Сами субдозы могут быть разделены, например, на несколько дискретных свободно разнесенных введений; например, несколько вдохов из инсуффлятора.
4. Способы введения
Соединение может быть введено с использованием фармацевтических композиций, содержащих терапевтически эффективное количество соединения и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, в различных формах, приспособленных для выбранного способа введения, например, перо-рально, назально, внутрибрюшинно или парентерально, путем внутривенного, внутримышечного, местного или подкожного путей, или путем инъекции в ткани.
Соединение может вводиться системно, например, перорально, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, таким как инертный разбавитель или усваиваемым съедобным носителем, или путем ингаляции или инсуффляции. Оно может быть заключено в твердую или мягкую желатиновые капсулы, может быть спрессовано в таблетки, или может быть включено непосредственно в пищевые продукты диеты пациента. Для перорального терапевтического введения соединения могут быть объединены с одним или несколькими эксципиентами и могут быть использованы в виде проглатываемой таблетки, таблетки для медленного растворения в щёчном кармане, пастилки, капсулы, эликсира, суспензии, сиропа, облатки и т.п. Соединение может быть объединено с мелким инертным порошкообразным носителем, и вдыхаться объектом или инсуфлироваться. В некоторых воплощениях такие композиции и препараты содержат по меньшей мере 0,1% соединения диарилгидантоина или гидантоина. Процент композиций и препаратов может, конечно, быть изменен и может составлять от примерно 2% до примерно 60% от массы данной единичной дозированной формы. Количество соединения диарилгидантоина или гидан-тоина в таких терапевтически полезных композициях таково, что будет получен эффективный уровень дозирования.
Соединение можно также вводить внутривенно или интраперитонеально путем инфузии или инъекции. Растворы соединения могут быть приготовлены в воде, необязательно в смеси с нетоксичным поверхностно-активного веществом. Дисперсии могут быть также получены в глицерине, жидких полиэти-ленгликолях, триацетине и в их смесях и в маслах. При обычных условиях хранения и использования эти препараты могут содержать консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
5. Комбинированная терапия
В некоторых воплощениях используются комбинации одного или нескольких соединений. "Комбинация" соединений включает в себя одно или несколько соединений, вводимых фактически одновременно, независимо от того находятся ли они в одной и той же фармацевтической композиции или вводятся последовательно. Соединения могут быть, но не обязательно должны, химически подобны (например, два соединения диарилгидантоина; соединение диарилгидантоина и диарилтиогидантоина и т.д.).
В некоторых воплощениях одно или несколько соединений комбинируется с другими терапиями, такими как внутренняя или внешняя лучевая терапия, хирургия, химиотерапия, и в том числе:
1) антрациклины, такие как доксорубицин (например, ADRJAMYCIN(r), DOXIL(r)), в том числе ли-посомальный доксорубицин, эпирубицин (например, ELLENCE(r)) и даунорубицин (например, CERU-
BIDINE(r), DAUNOXOME(r));
2) таксаны, такие как доцетаксел (например, TAXOTERE(r)) паклитаксел (например, TAXOL(r), ABRAXANE(r)), и белоксвязанный паклитаксел (например, ABRAXANE(r));
3) модуляторы эстрогенового рецептора, такие как тамоксифен (например, NOLVADEX(r),
SOLTAMOX(r), ISTUBAL(r), VALODEX(r));
4) циклофосфамид (например, CYTOXAN(r)):
5) капецитабин (например, XELODA(r))
6) 5-фторурацил или 5 ФУ (например, ADRUCIL(r));
7) винорелбин (например, NAVELBINE(r));
8) гемцитабин (например, GEMZAR(r));
9) трастузумаб (например, HERCEPTIN(r));
10) карбоплатин (например, PARAPLATIN(r));
11) эрибулин (например, HALAVEN(r));
12) иксабепилон (например, IXEMPRA(r));
13) метотрексат (например, AMETHOPTERIN(r), MEXATE(r), FOLEX(r));
14) мутамицин (например, MITOMYCIN(r));
15) митоксантрон (например, Novantrone(r));
16) тиотепа (например, THIOPLEX(r));
17) винкристин (например, Oncovin(r), Vincasar PES(r), VINCREX(r));
18) ингибиторы ароматазы, такие как анастрозол (например, ARIMIDEX), экземестан (AROMASIN) и летрозол (FEMARA);
19) ралоксифен (например, EVISTA(r));
10)
20) торемифен (например, FARESTON(r));
21) фульвестрант (например, FASLODEX(r));
22) лапатиниб (например, TYKERB(r)), а также
23) метформин.
Одно или несколько соединений также могут быть использованы в сочетании с комбинациями химических методов лечения, таких как:
1) доксорубицин и доцетаксел (например, "AT", ADRIAMYCIN(r) и TAXOTERE(r));
2) доксорубицин и циклофосфамид, с или без паклитаксел или доцетаксел (например, "AC ± T",
ADRIAMYCIN(r) и CYTOXAN(r), с или без TAXOL(r) или TAXOTERE(r));
3) циклофосфамид, метотрексат и фторурацил (например, "CMF" CYTOXAN(r), метотрексат и фто-рурацил);
4) циклофосфамид, эпирубицин и фторурацил (например, "CEF", CYTOXAN(r), ELLENCE(r) и фто-рурацил);
5) фторурацил, доксорубицин, циклофосфамид (например, "FAC", фторурацил, ADRIAMYCIN(r) и CYTOXAN(r) или "CAF", CYTOXAN(r), ADRIAMYCIN(r) и фторурацил);
6) доцетаксел, доксорубицин и циклофосфамид (например, "ТАС", TAXOTERE(r), ADRIAMYCIN(r)
и CYTOXAN(r)) и
7) гемцитабин, эпирубицин и паклитаксел (например, "GET", GEMZAR(r), ELLENCE(r) и TAXOL(r)).
Другие терапевтические агенты, которые могут быть объединены с соединениями, описанными в
данном документе, включают:
1) ингибиторы PI3K/mTOR, такие как эверолимус (например, Afinitor(r)); темсиролимус (например, Torisel(r)); рапамицин (сиролимус; например, RAPAMMUNE(r)), а также радафоролимус;
2) ингибиторы EGFR, такие как трастузумаб; трастузумаб энтанзин (TDM1); пертузумаб (например, PERJECTA(tm)-1; гефинитиб (например, IRESSA(r)), нератиниб (HK1-272); афатиниб; эрлотиниб (например,
TARCERA(r));
3) ингибиторы ангиогенеза, такие как бевацизумаб (например, AVASTIN(r)); рамуцирумаб; сунити-ниб (например, SUTENT(r)); пазопаниб (например, VOTRIENT(r)); сорафениб (например, Нексавар(r)); вандетаниб (например, CAPRELSA(r)), а также цедираниб (например, RECENTIN(r));
4) цитотоксические, такие как винфлунин (например, JAVLOR(r)); трабектедин (например, Yonde-lis(r)) и NKTR-102 (PEG-IRINOTECAN(r));
5) вакцин, таких как NeuVax(tm) (E75 пептид, полученный из HER2 в сочетании с иммуноадъюван-том гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (GM-CSF);
6) ингибиторы киназы BCR-ABL, такие как иматиниб (например, GLEEVEC(r)) и дазатиниб (например, SPRYCEL(r));
7) агенты, направленно воздействующие на кости, такие как деносумаб (например, PROLIA(r),
XGEVA(r)); и золедроновая кислота (например, ZOMETA(r), RECLAST(r));
8) аналоги GnRH, такие как гозерелин (например, Zoladex(r)); леупролид (например, LUPRON(r)); дегареликс (например, FIRMAGON(r)); нафарелин (например, SYNAREL(r));
9) антрациклины, такие как идарубицин (например, IDAMYCIN(r)); инпариб; гефинитиб (например, IRESSA(r)); цетуксимаб (например, ERBITUX(r)); иринотекан (ERBITUX(r)); мегестролацетат (например,
MEGACE(r));
10) ингибиторы PARP, такие как олапариб; велипариб; MK4827;
11) ингибиторы Akt, такие как гексадецилфосфохолин (например, MILTEFOSINE(r)), и
12) ингибиторы HER3, такие как U3-1287.
Ничто в настоящем описании не следует рассматривать как ограничивающее объем настоящего изобретения. Все представленные примеры являются репрезентативными и неограничивающими. Вышеописанные воплощения могут быть модифицированы или изменены, как понятно специалистам в данной области техники в свете вышеизложенного описания. Поэтому следует понимать, что в пределах объема формулы изобретения и ее эквивалентов, описанные воплощения можно осуществлять на практике иначе, чем конкретно описано.
Осуществление изобретения
Пример 1
RD162' блокирует DHT-опосредованную пролиферацию в клетках MCF7
Клетки MCF7 являются широко используемыми клетками люминального рака молочной железы, которые экспрессируют высокие уровни ER и некоторое количество AR. MCF7 клетки высевали в среду без фенолового красного, содержащую очищенную на активированном угле сыворотку. На следующий день клетки обрабатывали только носителем (этанол, EtOH), 10 нМ дигидротестостероном (ДГТ), 10 мкМ RD162' (RD162'), или комбинацией DHT + RD162'. Анализ пролиферации in vitro с использованием соли тетразолия МТТ проводили в различные моменты времени. Значения нормализовали к считанным
данным необработанного планшета через 24 ч для того, чтобы учесть различия в плотности клеток. Результаты показаны на фиг. 1. Эти эксперименты показали, что RD162' блокирует DHT-опосредованный рост клеток MCF7. Пример 2
RD162' блокирует DHT-опосредованный рост клеток BCK4
Клетки BCK4 рака молочной железы, которые экспрессируют больше AR, чем ER и более эффективно реагируют на андрогены, чем в эстрогены. Пролиферацию клеток BCK4 анализировали, как описано выше, в присутствии DHT и в присутствии RD162' и DHT. Результаты показаны на фиг. 2. Эти эксперименты показали, что RD162' блокирует DHT-опосредованный рост клеток BCK4.
Пример 3
RD162' блокирует эстрадиолопосредованный рост клеток MCF7
Клетки MCF7 высевали в среду без фенолового красного, содержащую очищенную на активированном угле сыворотку. На следующий день клетки обрабатывали только носителем (EtOH), 10 нМ эст-радиола (Е2), 10 мкМ RD162', или комбинации Е2 и RD162'. Анализ с МТТ проводили в различные моменты времени. Значения нормализовали к считанным данным необработанного планшета через 24 ч после посева для того, чтобы учесть различия в плотности клеток. Результаты показаны на фиг. 3. Этот эксперимент демонстрирует, что RD162' блокирует эстрадиолопосредованный рост клеток MCF7.
Пример 4
RD162' блокирует Е2-опосредованную регуляцию SDF-1 и экспрессию гена рецептора прогестерона Экспрессия SDF-1, гена, вовлеченного в эстроген-опосредованную пролиферацию, и гена рецептора прогестерона (известного эстрогенрегулируемого гена и маркера ERa-активности, анализировали в присутствии или в отсутствии эстрадиола (Е2). RD162' блокирует Е2-опосредованную активацию этих E2/ER регулируемых генов, указывая на то, что RD162' модулирует активность ERa, как показано на фиг. 4.
Пример 5
В In vivo исследованиях продемонстрировано, что RD162' подавляет DHT-опосредованный рост клеток MCF7, выращенных в молочных железах мышей nod-scid.
Клетки MCF7 (1 х 106 клеток), сконструированные для экспрессии люциферазы, смешивали с 100 мкл Matrigel и вводили в жировую ткань молочной железы 6-8-недельных овариэктомированных мышей NOD/SCID. В мышь были имплантированы по две опухоли, по одной с каждой стороны. Мыши имели гранулу DHT, имплантированную подкожно в момент инъекции опухолевых клеток. Опухолевую нагрузку измеряли либо штангенциркулем, либо люминисцентным имиджингом всего тела in vivo (IVIS). На 22 день мышей подбирали на основе опухолевой нагрузки, измеренной IVIS, и разделяли на две группы. Одна группа получала контрольный корм, а другая получала корм, содержащий 50 мг/кг RD162'. Результаты показаны на фиг. 5A-D. Фиг. 5А-В изображают рост опухоли с течением времени, фиг. 5C-D демонстрируют размер индивидуальный опухоли в конце исследования.
Пример 6
RD162' блокирует пролиферацию клеток тройного негативного рака молочной железы.
Вестерн-блоттинг из четырех люминальных (ER +, PR +) и четыре тройных негативных (ER, PR, HER2-) клеточных линий рака молочной железы по андрогенному рецептору, рецептору эстрогена и ту-булину (в качестве контроля нагрузки) (фиг. 6А). Три из тройных негативных клеточных линий имеют сильную экспрессию AR.
Клетки MDA468 и ВТ20 высевали среду без фенолового красного, содержащую очищенную на активированном угле сыворотку. На следующий день клетки обрабатывали только носителем (EtOH), 10 нМ дигидротестостероном (DHT), 10 мкМ RD162' или комбинацией DHT и RD162'. Анализ МТТ проводили в различные моменты времени. Значения нормализовали к считанным данным необработанного планшета через 24 ч для того, чтобы учесть различия в плотности клеток. Результаты показаны на фиг. 6В-С. Этот эксперимент показывает, что RD162' блокирует рост клеток тройного негативного рака молочной железы.
Пример 7
RD162' ингибирует DHT-индуцированную пролиферацию клеток апокринного рака молочной железы (Ar +, ER, HER2 +, PR-) и ингибирует in vivo рост этих клеток в модели ксенотрансплантата в молочных железах мышей NOD SCID.
Эффект RD162' на DHT-индуцированной пролиферации клеток апокринного рака молочной железы оценивали на клетках MDA-MB-453, которые являются AR +, ER, HER2 + и PR, с помощью колориметрического in vitro анализа пролиферации с использованием соли тетразолия MTS ("MTS-анализ") и лю-циферазного анализа. Результаты анализа MTS показаны на фиг. 7А. Эти результаты демонстрируют, что 10 мкМ RD162' ингибирует пролиферацию, индуцированную 10 нМ DHT.
Люциферазный анализ, проведенный на клетках MDA-KB2, которые были получены из клеток MDA-MB-453, и содержат андроген-зависимый люциферазный репортер, продемонстрировал, что RD162' ингибирует пролиферацию, индуцированную DHT, в зависимости от дозы. Результаты показаны
на фиг 7В. Столбики ошибок отражают SEM независимых экспериментов, а * означает Р <0,05, ** означает Р <0,01, *** означает Р <0,001 (ANOVA с поправкой Бонферрони для множественных сравнений).
Иммуноцитохимические анализы проводили на клетках MDA-KB2 с использованием антитела к AR. Клетки обрабатывали в течение 3 ч носителем (Vh), 1 нМ DHT, 10 мкМ RD162' или 10 мкМ RD162' и DHT. Диаграмма, приведенная на фиг. 7С показывает соотношение количества ядерного к общему AR для всех измеренных клеток. Результаты показывают, что RD162' ингибирует ядерную транслокацию AR, индуцированную DHT.
In vivo рост клеток апокринного рака молочной железы изучали в ксенотрансплантатной модели в молочных железах мышей NOD SCID. Клетки MDA-MB-453 (6 х 106) вводили в жировую ткань 4-й паховой молочной железы самок мышей NOD-SCID-IL2Rgc-/-. Гранулу DHT с 60-дневным высвобождением имплантировали подкожно в 3 группы мышей в момент инъекции клеток. Размер опухоли измеряли с помощью штангенциркуля, а как только опухоли достигали 100 мм3, мыши начинали получать через желудочный зонд 10 мг/кг/сут RD162', 25 мг/кг/сут RD162' или носитель.
Результаты показаны на фиг. 7D и 7Е. Результаты показывают, что RD162' в любой дозе ингибирует рост опухоли, индуцированной DHT (фиг. 7D). Опухоли были взвешены при вскрытии и обе дозы RD162' значительно ингибируют DHT-индуцированный рост опухоли (фиг. 7Е). Планки погрешностей отражают SEM и * означает Р <0,05, *** означает Р <0,001 (Манн-Уитни).
Пример 8
RD162' подавляет рост клеток тройного негативного рака молочной железы
HS578T, клеточную линию TNBC, высевали в DMEM/F12 без фенолового красного, содержащей 5% DCC в течение 2 дней перед обработкой контролем-носителем, RD162' (10 мкМ), DHT (10 нМ) и RD162' + DHT в течение 9 дней. Жизнеспособные клетки анализировали с помощью анализа MTS. Результаты показаны на фиг. 8. Средние значения трех параллельных точек данных показаны со стандартным отклонением. *** Р <0,001 (двусторонний критерий Стьюдента). Следует отметить, что обработка DHT не ускоряет рост клеток HS578T.
Пример 9
RD162' вместе с Герцептином подавляет рост Her2 + клеток рака молочной железы SKBR3, Her2+ клеточную линию клеток рака молочной железы, выращивали в DMEM +1% FBS, в присутствии контроля-носителя. 10 мкМ RD162', 20 мкг/мл герцептина и RD162' + Герцептин соответственно, в течение 8 дней, прежде чем анализировали в отношении жизнеспособных клеток с помощью анализа MTS. Результаты показаны на фиг. 9. Средние значения трех параллельных точек данных показаны со стандартным отклонением. *р <0,05 и ***р <0,001 (двусторонний критерий Стьюдента).
Пример 10
RD162' ингибирует андроген-стимулированный рост опухолей MDA-MB-453
MDA-MB-453 клетки инъецировали ортотопически в молочную железу самок мышей NOD-SCID-IL2Rgc-/-. Три группы имели имплантированную п.к. гранулу DHT и одна группа не имела гранулы (носитель). После того как опухоли достигали 100 мм3, мышам вводили либо RD162' (10 мг/кг), либо носитель (Группы Носителя и DHT) с помощью ежедневного желудочного зонда. Когда опухоли достигали 400 мм3, другая группа получала через желудочный зонд более высокую дозу RD162' (25 мг/кг). Результаты показаны на фиг. ЮА-D.
Объем опухоли измеряли еженедельно с помощью штангенциркуля. Планки погрешностей представляют SEM. * означает Р <0,05, ** означает Р <0,01 для DHT против DHT + RD162' (10 мг/кг), сумма рангов Вилкоксона (фиг. 10А). Не было обнаружено никаких существенных различий в любой момент времени для DHT против DHT + RD162' (25 мг/кг). Опухоли вырезали и взвешивали в конце эксперимента (фиг. 10В). Опухолевые срезы, окрашенные по расщепленной каспазе 3, оценивали количественно, и репрезентативные изображения показаны ниже (200-кратное увеличение). Для массы опухолей и окрашивания расщепленной каспазы 3, * означает р <0,05, ** означает Р <0,01, *** означает Р <0,001, ANOVA с поправкой Бонферрони для множественных сравнений (фиг. 10С). Окрашивание ядерного AR оценивали количественно и ниже показаны репрезентативные изображения (400-кратное увеличение). * означает Р <0,05, *** означает Р <0,001, критерий Крускала-Уоллиса с поправкой Данна для множественных сравнений (фиг. 10D).
Пример 11
RD162' является таким же эффективным, как тамоксифен, при ингибировании роста эстроген-стимулированной опухоли.
Клетки MCF7-TGL, стабильно экспрессирующие люциферазу, были имплантированы ортотопиче-ски в молочные железы овариэктомированных самок голых мышей. Все мыши имели имплантированные п.к. гранулы Е2 и получали либо контрольный корм (Е2), контрольный корм плюс гранула тамоксифена, имплантированая SQ (Е2 + ТАМ), либо корм, содержащий 50 мг/кг RD162' (Е2 + RD162'). Начало обработки обозначено стрелкой. Опухолевую нагрузку измеряли с помощью люминесценции всего тела. Результаты показаны на фиг. 11A-D. Показан средний общий поток всех мышей в каждой из групп обработки. Мышей подбирали на день -3 и начали обработку в день 0. * означает Р <0,05, ANOVA с поправкой Бонферрони для множественных сравнений (фиг. 11А). Общий люминесцентный поток показан для
всех отдельных мышей в день подбора (день -3) и в последний день получения изображений (день 11). * означает Р <0,05, ANOVA с поправкой Бонферрони для множественных сравнений (фиг. 11В). Показаны изображения люминесцентного сигнала в обеих группах обработки на день подбора (-2 день) и в последний день получения изображений (день 11) показано (фиг. 11С). Мышам вводили BrdU за 2 ч перед умерщвлением. Иммуногистохимию по BrdU проводили на срезах опухоли и оценивали количественно, показаны репрезентативное изображение окрашивания BrdU (слева, 400-кратное увеличение) и количественный анализ (справа). ** означает Р <0,01 для Е2 против Е2 + тамоксифен, *** означает Р <0,001 для Е2 против Е2 + RD162', ANOVA с поправкой Бонферрони для множественных сравнений (фиг. 11D).
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли для лечения тройного негативного рака молочной железы, где соединение представляет собой энзалутамид
2. Применение по п.1, где тройной негативный рак молочной железы представляет собой подтип, выбранный из группы, состоящей из базально-подобного типа 1 (BL1), базально-подобного типа 2 (BL2), иммуномодулирующего (IM) типа, мезенхимального (М), подобного мезенхимальному стволовому типу (MSL), и люминального с наличием андрогеновых рецепторов (LAR).
3. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы содержат мутацию BRCA1.
4. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы не экспрессируют на детектируемом уровне андрогеновый рецептор.
5. Применение по п.1, где клетки тройного негативного рака молочной железы экспрессируют на детектируемом уровне андрогеновый рецептор.
2.
2.
2.
2.
2.
Носитель
DHT
^ DKT+RD162'( Ю МГ/КГ) OhT+RD162'(25 МГ/КГ)
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028452
- 1 -
028452
- 1 -
028452
- 1 -
028452
- 1 -
028452
- 1 -
028452
- 1 -
028452
- 1 -
028452
- 4 -
028452
- 12 -
028452
- 14 -
028452
- 15 -
028452
- 16 -
|
