EA 028426B1 20171130 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/028426 Полный текст описания [**] EA201690294 20140919 Регистрационный номер и дата заявки US61/882,769 20130926 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2014/056503 Номер международной заявки (PCT) WO2015/047902 20150402 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа [PDF] eab21711 Номер бюллетеня [**] СОЕДИНЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ tau-ВИЗУАЛИЗИРУЮЩИХ АГЕНТОВ И tau-ВИЗУАЛИЗИРУЮЩИХ СОСТАВОВ Название документа [8] C07D471/04, [8] G01N 33/68, [8] A61K 31/437, [8] A61P 25/28 Индексы МПК [US] Аттардо Джорджио, [US] Листер-Джэймс Джон, [US] Лим Натаниэль Энтони Ко, [US] Сюн Хуй Сведения об авторах [US] ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ Сведения о патентообладателях [US] ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000028426b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы где [анион] - представляет собой подходящий органический сульфонатный или тартратный анионный противоион.

2. Соединение по п.1 формулы где [анион] - представляет собой алкилсульфонат или арилсульфонат.

3. Соединение по п.2, представляющее собой 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфонат, представленный формулой

4. Соединение по п.2, представляющее собой 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий метилсульфонат, представленный формулой

5. Способ получения соединения формулы включающий взаимодействие соединения формулы где [анион] - представляет собой подходящий органический сульфонатный или тартратный анионный противоион, с [ 18 F]фторидом.

6. Способ получения соединения формулы включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий 4-метилбензолсульфоната, представленного формулой с [ 18 F]фторидом.

7. Способ получения соединения формулы включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий-метилсульфоната, представленного формулой с [ 18 F]фторидом.

8. Промежуточное соединение для получения соединения по п.1, где указанное промежуточное соединение представляет собой 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксид, представленный формулой


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы где [анион] - представляет собой подходящий органический сульфонатный или тартратный анионный противоион.

2. Соединение по п.1 формулы где [анион] - представляет собой алкилсульфонат или арилсульфонат.

3. Соединение по п.2, представляющее собой 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфонат, представленный формулой

4. Соединение по п.2, представляющее собой 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий метилсульфонат, представленный формулой

5. Способ получения соединения формулы включающий взаимодействие соединения формулы где [анион] - представляет собой подходящий органический сульфонатный или тартратный анионный противоион, с [ 18 F]фторидом.

6. Способ получения соединения формулы включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий 4-метилбензолсульфоната, представленного формулой с [ 18 F]фторидом.

7. Способ получения соединения формулы включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий-метилсульфоната, представленного формулой с [ 18 F]фторидом.

8. Промежуточное соединение для получения соединения по п.1, где указанное промежуточное соединение представляет собой 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксид, представленный формулой


Евразийское 028426 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки 201690294
(22) Дата подачи заявки
2014.09.19
(51) Int. Cl.
C07D 471/04 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01) A61K31/437 (2006.01) A61P25/28 (2006.01)
(54) СОЕДИНЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ tau-ВИЗУАЛИЗИРУЮЩИХ АГЕНТОВ И tau-ВИЗУАЛИЗИРУЮЩИХ СОСТАВОВ
(31) 61/882,769
(32) 2013.09.26
(33) US
(43) 2016.06.30
(86) PCT/US2014/056503
(87) WO 2015/047902 2015.04.02 (71)(73) Заявитель и патентовладелец:
ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US)
(72)
Изобретатель:
(74)
Аттардо Джорджио, Листер-Джэймс Джон, Лим Натаниэль Энтони Ко, Сюн Хуй (US)
Представитель:
(56)
Лыу Т.Н., Угрюмов В.М., Дементьев В.Н., Глухарёва А.О., Карпенко О.Ю., Клюкин В.А., Строкова О.В., Христофоров А.А. (RU)
WO-A1-2013017585
Chun-Fang Xia et al.: "[18F]T807, a novel tau positron emission tomography imaging agent for Alzheimer's disease", Alzheimer's & Dementia, vol. 9, no. 6, 16 July 2013 (2013-07-16), pages 666-676, XP002731790, DOI: 10.1016/j.jalz.2012.11.008, Retrieved from the Internet: URL:http://dx.doi.Org/10.1016/j.jalz.2012.11.008 [retrieved on 2014-10-29], cited in the application, page 668, paragraph 2.4.
T.M. Shoup et al.: "A concise radiosynthesis of the tau radiopharmaceutical, [18F]T807", Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, vol. 56, no. 14, 24 July 2013 (2013-07-24), pages 736-740, XP002731791, DOI: 10.1002/jlcr.3098, Retrieved from the
Internet: URL:http://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/ jlcr.3098/pdf [retrieved on 2014-10-29], cited in the application, page 736, abstract; page 737, scheme 1
B.G. Hockley et al.: "(-)-[18F]Flubatine: evaluation in rhesus monkeys and a report of the first fully automated radiosynthesis validated for clinical use", Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuti cals, vol. 56, no. 12 16 July 2013 (2013-07-16), pages 595-599, XP002731792, DOI: 10.1002/jlcr.3069, Retrieved from the Internet: URL:http://onlinelibrary.wiley.com/ doi/10.1002/jlcr.3069/pdf [retrieved on 2014-10-29], page 595, abstract; page 599, scheme 1
David T. Chien et al.: "Early Clinical PET Imaging Results with the Novel PHF-Tau Radioligand [F-18]-T807", JOURNAL OF ALZHEIMER'S DISEASE, IOS PRESS, NL, vol. 34, February 2013 (2013-02), pages 457-468, XP008174041, ISSN: 1387-2877, DOI: 10.3233/ JAD-122059, page 457, abstract; pages 458, 459, paragraph "Radiosynthesis"; page 459, figure 1; pages 467, 468, paragraph "Conclusion"; tables 1, 2
A. Chivate et al.: "Formulation and development of oral dry suspension using taste masked Ornidazole particles prepared using Kollicoat(r) Smartseal 30 D", Drug Vevelopment and Industrial Pharmacy, vol. 39, no. 7 July 2013 (2013-07),
pages 1091-1097, XP002735121, ISSN: 1520-5762,
DOI: 10.3109/03639045.2012.709250, Retrieved from the Internet: URL:http://informahealthcare.com/doi/ abs/10.3109/03639045.2012.709250 [retrieved on 2015-01-28], page 1093, table 3
Z. Ujhelyi et al.: "Assessment of the hemolytic activity and cyctotoxicity of different PEG-based solubilizing agents", Pharmazie, vol. 68, no. 5 May 2013 (2013-05), pages 383-384, XP002735122, ISSN: 0031-7144, DOI: 10.1691/ph.2013.2207, Retrieved from the Internet: URL:http://ingentaconnect.com/content/govi/
pharmaz/2013/00000068/00000005/art00014 [retrieved on 2015-01-28], page 384, table; left-hand column,
"Experimental", point 2
способы получения указанных соединений, способы применения указанных соединений для получения tau-визуализирующих агентов и получение составов tau-визуализирующих агентов.
Настоящее изобретение относится к новым триметиламмониевым соединениям, к способам применения указанных соединений для получения tau-визуализирующего агента [18F]-T807 и к композициям и составам указанных соединений для диагностической визуализации, а также к способам визуализации с применением указанных соединений, композиций и составов.
Болезнь Альцгеймера (AD), основная причина деменции, развивается у 1% населения в возрасте от 65 до 69 лет и достигает 40-50% у людей в возрасте 95 лет и более. Пациенты с AD демонстрируют характерные клинические симптомы, которые включают ухудшение когнитивной функции и дефицит функции памяти. У таких пациентов наличие AD подтверждают по большому количеству сенильных бляшек, находящихся в коре головного мозга при гистопатологическом исследовании при вскрытии. Зрелые сенильные бляшки состоят из внутриклеточных нейрофибриллярных клубков (NFT), образованных из волокон гиперфосфорилированных белков tau, и внеклеточных р-амилоидных белков, образованных в результате ферментативного процессинга белка-предшественника амилоида. Скопления гипер-фосфорилированного tau (PHF-tau), такие как нейрофибриллярные клубки, связаны со степенью ухудшения когнитивной функции у пациентов с болезнью Альцгеймера. [18F]-T807 представляет собой визуализирующий агент для позитронно-эмиссионной томографии (PET), демонстрирующий высокую аффинность и селективность к PHF-tau, а также благоприятные свойства in vivo. ([(18)F]-T807, a novel tau positron emission tomography imaging agent for Alzheimer's disease. Alzheimer's & Dementia (Feb. 2013), 1-11, доступен в режиме онлайн по адресу http://dx.doi.Org/10.1016/j.jalz.2012.ll.008).
[18F]-T807 подходит для обнаружения и/или количественного определения отложений tau у пациентов (Early clinical PET imaging results with the novel PHF-tau radioligand [F-18]-T807, Chien et al., J. Alzheimers Dis. 1 января 2013; 34(2):457-68).
Существует несколько потенциальных преимуществ визуализации tau в головном мозге с помощью [18F]-T807. Визуализация Tau оптимизирует диагностику посредством определения потенциальных пациентов с высоким содержанием tau в головном мозге, которые могут иметь повышенный риск развития AD. Визуализация с помощью [18F]-T807 также станет подходящей для контролирования накопления tau и/или прогрессирования AD, и при появлении анти-tau медикаментозных средств лечения визуализация tau может обеспечить мощный инструмент для мониторинга лечения. Узлы, содержащие tau, сначала появляются в тех областях головного мозга, которые очень тесно связаны с памятью, и патологоанато-мические исследования демонстрируют, что указанные узлы еще сильнее, чем тромбоциты, могут коррелировать с познавательной функцией. Следовательно, востребованы простые неинвазивные способы обнаружения и/или количественного определения отложений tau у пациентов. (См. М. Maruyama et al., "Imaging of tau pathology in a tauopathy mouse model and in Alzheimer patients compared to normal controls", Neuron, 79: 1094-1108, 2013, С. Mathis and W. Klunk, "Imaging Tau Deposits In Vivo: Progress in Viewing More of The Proteophaty Picture", Neuron, 79: 1035-10-37, 2013).
Следовательно, необходима также улучшенная технология, совершенствующая возможность визуализации tau у пациентов, для улучшения клинических показателей и расширения эффекта диагностических tau-визуализирующих агентов.
t-Boc версия указанного предшественника, а именно трет-бутил-7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-Ь]индол-5-карбоксилат, изображена ниже:
Способы радиохимического синтеза [18F]-T807 известны в данной области техники. Shoup et al. приводят способ, в котором соединение-предшественник в незащищенной форме или его трет-бутил-7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индол-5-карбоксилат помечают радиоактивным изотопом по реакции с 18F с изократической очисткой методом ВЭЖХ (J. Label Compd. Radiopharm (2013)).
Xia et al. описывают способ, в котором соединение-предшественник представляет собой 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-Ь]индол, представленный ниже:
Н ^/^N02
Xia et al. описывают, что 7-(6-НИТРОПИРИДИН-3-ИЛ)-5Н-ПИРИДО[4,3-Ь]ИНДОЛ помечают радиоактивным изотопом 18F, используя вторую стадию с порошкообразным железом/муравьиной кислотой в отдельной пробирке для восстановления нитрогруппы оставшегося предшественника до соответствующего 2-аминопиридинового производного, что облегчает выделение с помощью ВЭЖХ ([(18)F]-T807, a novel tau positron emission tomography imaging agent for Alzheimer's disease. Alzheimer's & Dementia (Feb. 2013) 1-11, доступен в режиме онлайн по адресу http://dx.doi.Org/10.1016/j.jalz.2012.11.008).
Несмотря на то что указанные способы обеспечивают средство получения [18F]-T807, они имеют технические признаки, которые могут быть улучшены разработкой инновационных синтетических реагентов и способов синтеза [18F]-T807 для применения в клинической визуализации. Улучшенные агенты, способы получения [18F]-T807 и визуализирующие составы с требуемыми радиохимическими и/или радиофармацевтическими свойствами станут подходящими для клинической визуализации tau. Указанная технология обеспечит улучшение обнаружения, диагностики, мониторинга и/или контроля течения AD и других таупатий. Усовершенствованные соединения-предшественники для синтеза [18F]-T807, имеющие преимущественные радиосинтетические свойства, обеспечат улучшенный доступ к [18F]-T807, одновременно исключая проблемы, связанные с известными предшественниками, и, следовательно, обеспечат создание улучшенных средств получения [18F]-T807 и его улучшенных составов.
В настоящем изобретении предложено применение соединений формулы I, Ia или Ib для получения радиофармацевтического агента [18F]-T807 для визуализации tau у людей. В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы получения соединений формулы I, Ia или Ib. В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы получения [18F]-T807 из соединений формулы I, Ia или Ib. Особенно предпочтителен способ получения [18F]-T807 из соединения формулы Ia. В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая [18F]-T807, полученный из соединения формулы I, Ia или Ib, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая [18F]-T807, полученный из соединения формулы I, Ia или Ib, составленный в рецептуру со смесью 10% (об./об.) раствора этанола/90% мас./об. (0,9% водного хлорида натрия), предпочтительно для применения у людей. В настоящем изобретении предложены также способы визуализации tau, включающие введение пациенту обнаруживаемого количества [18F]-T807, полученного из соединения формулы I, Ia или Ib, или его композиции.
В настоящем изобретении предложено соединение формулы I
где [анион]- представляет собой подходящий анионный противоион.
Подходящие анионные противоионы включают ненуклеофильные анионы, такие как органические сульфонаты или тартрат. Органический сульфат предпочтительно представляет собой алкилсульфонат или арилсульфонат.
В настоящем изобретении дополнительно предложено соединение формулы I, где [анион]- представляет собой алкилсульфонат или арилсульфонат. Алкилсульфонаты согласно настоящему изобретению включают С1-С4-алкилсульфонат. Арилсульфонаты согласно настоящему изобретению включают фенилсульфонат, где фенильная группа необязательно замещена один раз С1-С4-алкилом, галогеном или нитрогруппой.
Конкретные значения С1-С4-алкилсульфоната включают метансульфонат (мезилат) и этансульфо-нат. Конкретные значения фенилсульфоната включают бензолсульфонат, 4-метилбензолсульфонат (то-зилат), 4-бромбензолсульфонат и 4-нитробензолсульфонат. Другой подходящий анионный противоион представляет собой трифторметилсульфонат (CF3SO3-).
Предпочтительное соединение согласно настоящему изобретению представляет собой соединение формулы la, где [анион]" представляет собой 4-метилбензолсульфонат:
Предпочтительное соединение согласно настоящему изобретению представляет собой соединение формулы lb, где [анион]" представляет собой метансульфонат:
Соединения формул 1,1а и lb подходят, например, для синтеза соединения формулы II
Соединение формулы II называют также [18F]-T807.
В настоящем изобретении предложено соединение формулы II, полученное из соединения формулы I:
В настоящем изобретении дополнительно предложено соединение формулы II, полученное из соединения формулы Ia или формулы Ib.
В настоящем изобретении предложен способ получения соединения формулы
включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5Н-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфоната, представленного формулой
с источником ^^фторида.
Следующие схемы, способы получения и примеры представлены для лучшего осуществления практического осуществления настоящего изобретения. Подходящие условия реакций для стадий указанных схем, способов получения и примеров общеизвестны в данной области техники, и опытным специалистам понятны соответствующие модификации условий реакций, включая замену растворителей и совместных реагентов.
Общая химическая информация
Соединение формулы II может быть получено из соединения формулы I. Более конкретно, как показано на схеме 1, соединение формулы Ia сначала подвергают реакции с подходящим источником ^^фторида, таким как ^^фторид криптанда 2.2.2-K2CO3, в присутствии основания, такого как карбонат калия. Реакцию обычно проводят в растворителе, таком как ДМСО, ацетонитрил и их смеси. Полученное N-защищенное [18F] промежуточное соединение подвергают реакции с подходящей кислотой, такой как водный раствор хлористо-водородной кислоты, в растворителе, таком как ДМСО и вода, с получением соединения формулы II.
Соединение формулы I может быть получено из соединения формулы II. Более конкретно, соединение III подвергают реакции с активатором, таким как п-толуолсульфоновый ангидрид (тозиковый ангидрид) или трифторуксусный ангидрид, и триметиламином в растворителе, таком как метиленхлорид, с получением соединения формулы Ia, где [анион]- представляет собой 4-метилбензолсульфонат или, в альтернативном варианте, трифторацеатат. Использование пиридина, триазола, триалкил-или гетероари-ламинов приводит к получению пиридиния, триазолия, триалкиламмония или гетероциклических аммониевых соединений, соответственно. Соединение формулы III может быть получено из соединения формулы IV. Более конкретно, соединение формулы IV подвергают реакции с бис-(пинаколато)дибором в присутствии катализатора на основе переходного металла, такого как аддукт дихлор-1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроценпалладия(П) с дихлорметаном в диоксане. Полученный промежуточный сложный пинаколовый эфир подвергают реакции с 3-бромпиридин-1-оксидом в присутствии катализатора, такого как тетракистрифенилфосфинпалладий(И), и основания, такого как водный карбонат натрия, с получением соединения формулы III. Реакцию обычно проводят в растворителе, таком как метиленхло-
рид.
Схема 1
1) бис(пинаколато)дибор
катализатор
Кроме того, опытным специалистам понятно, что в некоторых случаях порядок введения фрагментов не критичен. Конкретный порядок стадий, необходимых для получения соединений формулы I, зависит от конкретного синтезируемого соединения, исходного соединения и относительной подвижности замещенных фрагментов, что понятно опытным химикам. Опытным специалистам понятно, что не все заместители совместимы со всеми условиями реакций. Указанные соединения могут быть защищены или модифицированы в удобной точке синтеза по способам, хорошо известным в данной области техники. Промежуточные соединения и конечные продукты согласно настоящему изобретению могут быть при необходимости дополнительно очищены с помощью общепринятых технологий, таких как перекристаллизация или хроматография на твердых подложках, таких как силикагель или оксид алюминия.
Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно получены в виде радиофармацевтических композиций, которые вводят различными способами. Предпочтительно указанные композиции предназначены для внутривенного введения. Указанные фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, et al., ред., 19-е изд., Mack Publishing Co., 1995).
Предпочтительные составы согласно настоящему изобретению представляют собой составы [18F]-T807, полученного из соединений формулы I, и особенно предпочтительны составы [18F]-T807, полученного из соединения формулы Ia. Особенно предпочтителен [18F]-T807, полученный из соединения формулы Ia в соответствии со способами, описанными на схеме 1. Особенно предпочтителен [18F]-T807,
полученный из соединения формулы Ia в соответствии со способами, описанными в примерах 1 и 2. Предпочтительный состав [18F]-T807 получают из соединения формулы I и объединяют со смесью 10% (об./об.) этанола/90% мас./об. (0,9% водного хлорида натрия). Особенно предпочтительный состав [18F]-T807 получают из соединения формулы Ia и объединяют со смесью 10% (об./об.) этанола/90% мас./об. (0,9% водного хлорида натрия). Предпочтительный состав [18F]-T807 получают из соединения формулы I и объединяют со смесью 10% (об./об.) этанола/90% (21 мМ фосфат натрия). Предпочтительный состав [18F]-T807 получают из соединения формулы Ia и объединяют со смесью 10% (об./об.) этанола/90% (21 мМ фосфат натрия). Другой вариант реализации настоящего изобретения представляет собой состав [18F]-T807, полученного из соединения формулы Ia и составленного в рецептуру со смесью 9% (об./об.) этанола, 1% (мас./об.) Kolliphor HS 15 и 90% (об./об.) (0,9% водного хлорида натрия). Особенно предпочтителен [18F]-T807, полученный из соединения формулы Ia в соответствии со способами, описанными на схеме 1, и составленный в рецептуру со смесью 10% (об./об.) этанола/90% мас./об. (0,9% водного хлорида натрия). Особенно предпочтителен [18F]-T807, полученный из соединения формулы Ia в соответствии со способами, описанными в примерах 1 и 2, и объединенный со смесью 10% (об./об.) этанола/90% мас./об. (0,9% водного хлорида натрия).
Было обнаружено, что новые триметиламмониевые соединения согласно настоящему изобретению неожиданно и вопреки ожиданиям являются преимущественными для применения в качестве синтетических предшественников для радиохимического синтеза [18F]-T807 для применения для визуализации, включая клиническую визуализацию у людей. Предпочтительное соединение, соединение формулы Ia, обладает сочетанием особенно подходящих свойств в качестве предшественника для синтеза [18F]-T807, включая растворимость, реакционную способность, более короткое время реакции, возможность разделения и выход реакции. Указанное неожиданно преимущественное сочетание улучшенных свойств обеспечивает эффективный и действенный клинический способ радиохимического синтеза [18F]-T807, который облегчает визуализацию нагрузки tau на организм пациентов. Растворимость соединения-предшественника обеспечивает возможность выхода указанного соединения в раствор для эффективного протекания реакции с образованием [18F]-T807. В отличие от 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-^индола, соединение формулы Ia легко растворимо в ДМСО и, следовательно, не требует обработки ультразвуком или нагревания для перехода соединения в раствор, как это было необходимо в известных способах с применением предшественника 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола.
Синтез [18F]-T807 из 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола по способу без применения железа также имеет недостаток, который заключается в том, что оставшийся непрореагировавший 7-(6-НИТРОПИРИДИН-3-ИЛ)-5Н-ПИРИДО[4,3-Ь]ИНДОЛ выпадает в осадок во время водной обработки реакционной смеси. Указанный осадок может приводить к блокированию течения жидкости и, в конечном итоге, может приводить к невозможности получения продукта. Напротив, улучшенная растворимость соединения формулы Ia обеспечивает снижение и/или исключение риска производственного сбоя, обусловленного образованием осадка. Производственные сбои представляют собой известную проблему в клинической практике радиохимического синтеза и могут ограничивать количество партий, получаемых каждый день, и, следовательно, ограничивать количество пациентов, для которых может быть проведена визуализация за определенный период времени. Таким образом, производственные сбои могут существенно влиять на стоимость, доступность и возможность визуализации пациента.
Выход продукта представляет собой другой важный аспект клинического процесса радиохимического синтеза для получения [18F]-T807. Способ с применением соединения формулы Ia обеспечивает получение клинически подходящего выхода продукта. Напротив, бром- или хлорзамещенные предшественники имеют очень низкий скорректированный выход ( <5%), поскольку бром- и хлорзаместители с трудом поддаются вытеснению в обычных условиях нуклеофильного ароматического фторирования без добавления носителя. В то время как данный аспект сам по себе является существенным и важным, указанное свойство, обнаруженное в комбинации с другими преимущественными свойствами соединения формулы Ia, обеспечивает неожиданное улучшение клинических процессов радиохимического синтеза для получения [18F]-T807.
Кроме того, на выход продукта может негативно влиять сложность разрушения оставшегося непро-реагировавшего 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола.
Например, в процессе, в котором для получения [18F]-T807 использовали 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-ПИРИДО[4,3-Ь]ИНДОЛ и использовали железо, скорректированные выходы, полученные на двух разных производственных площадках, составили 42, 48 и 25% в Калвер-Сити и 8, 6 и 19% в Норт-Уэльсе. Для сравнения, способ компании Siemens без применения железа обеспечивает получение скорректированных выходов 71, 45, 70, 55 и 54%. Полученные результаты указывают на то, что при разрушении 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола может происходить сопутствующее разрушение [18F]-T807, что приводит к противоречивости выходов и более низким скорректированным выходам. Напротив, при использовании соединения формулы Ia необходимо лишь удалить Boc-защитную группу в более мягких химических условиях и отделить положительно заряженное соединение формулы Ia, не содержащее Boc-защиты, от [18F]-T807, что обеспечивает стабильно более высокие скорректированные выходы продукта на уровне 45-55%.
Возможность эффективной и действенной очистки продукта [18F]-T807 представляет собой третий важный атрибут клинического процесса радиохимического синтеза для получения [18F]-T807, и на данный аспект может влиять предшественник, используемый в процессе. В способе получения [18F]-T807 с применением 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола необходимо разрушение оставшегося непрореагировавшего 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола для облегчения хроматографи-ческой очистки продукта [18F]-T807. Это обусловлено тем, что 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-Ь]ИНДОЛ и [18F]-T807 имеют сходные хроматографические свойства, что приводит к проблематичности их разделения. В способе компании Siemens с использованием 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-^индола без применения железа, в котором после реакции сохраняется высокое содержание 7-(6-нитропиридин-3-ил)-5Н-пиридо[4,3-b]индола, состав подвижной фазы для ВЭЖХ ограничен необходимостью меньшего содержания органического растворителя для обеспечения возможности разделения. Такой относительный недостаток органического растворителя приводит к элюированию [18F]-T807 из разделительной колонки за время, составляющее примерно 27 мин. Указанное относительно продолжительное время является недостатком для фармацевтических препаратов, меченных короткоживущим радионуклидом, таких как [18F]-T807. Напротив, предложенный способ с применением соединения формулы Ia обеспечивает возможность элюирования [18F]-T807 за 8 мин с небольшим содержанием совместно элюирующихся примесей или без них. Кроме того, значительная разница хроматографических свойств [18F]-T807 и побочного продукта, образованного при использовании соединения-предшественника формулы Ia, также способствует применению картриджной очистки, в отличие от более длительных и трудоемких процессов ВЭЖХ. Таким образом, применение соединения формулы Ia может обеспечивать также упрощение производственного процесса. Указанные различия могут обеспечивать существенно более короткое время получения и увеличение производственных возможностей клинического радиохимического синтеза, что может иметь существенное позитивное влияние на стоимость, доступность и возможность визуализации пациента.
Таким образом, предложенный способ с применением соединения формулы Ia, 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфоната, имеет неожиданные и важные практические преимущества для обеспечения безотказности и производственной возможности клинического радиохимического синтеза визуализирующих доз [18F]-T807. Большее количество партий, полученных в результате улучшения производственных возможностей и безотказности, может иметь существенное позитивное влияние на визуализацию tau у пациентов.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Пик ВЭЖХ, соответствующий профилю 7-[18F]фтор-5Н-пиридо[4,3-b]индола, [18F]-T807.
На верхней диаграмме для меченого [18F]-T807 (гамма-детектор ВЭЖХ) изображена радиохромато-грамма 7-(6-[18F]фтор-3-пиридил)-5H-пиридо[4,3-b]индола, [18F]-T807. На нижней диаграмме для меченого [18F]-T807 (УФ-детектор ВЭЖХ) изображена ультрафиолетовая хроматограмма 7-(6-[^]фтор-3-пиридил)-5H-пиридо [4,3-b] индола, [18F]-T807.
Фиг. 2. Внедрение метки [18F]-T807 в tau в срезах (10 мкм) ткани лобных долей головного мозга tau-положительных пациентов с AD после вскрытия, примерно 20 мкКи [18F]-T807 на одно предметное стекло.
В области серого вещества (GM) наблюдают сильный радиоавтографический сигнал [18F]-T807, и наличие tau в указанных областях подтверждают иммунным окрашиванием tau. Неспецифический или фоновый сигнал [18F]-T807 показан в области белого вещества (WM), и он является низким. На специфичность радиоавтографического сигнала в отношении связывания с нативными агрегатами tau указывает блокирующий эффект 1 мкМ холодного Т807.
Примеры и способы получения
Все реакции проводили в атмосфере азота, если не указано иное. Продукты очищали с помощью автоматической системы флэш-хроматографии Teledyne Isco(r). Реагенты, растворители и поставщики известны опытным химикам.
Спектры 1Н и 13С ЯМР записывали на спектрометре Broker HD Avance III 400 в CDCl3 (Cambridge Isotope Laboratories, кат. № DLM-7-100, пропущенном через щелочной оксид алюминия непосредственно перед применением) или ДМСОч16, (Cambridge Isotope Laboratories, кат. № DLM-10-25). Данные масс-спектрометрии высокого разрешения (МСВР) получали на масс-спектрометре Waters QTof, используя режим сканирования с положительной электрораспылительной ионизацией. Элементарный анализ проводили в компании Galbraith Laboratories (GLI) (Galbraith Inc., 2323 Sycamore Drive, Ноксвилл, штат Теннесси, 37921) по способу GLI ME-12, а анализ палладия проводили по способу GLI МЕ-70 (оптико-эмиссионная спектроскопия индуктивно связанной плазмы на ОЭС анализаторе 5300 ICP или его эквиваленте), записывая результаты в м.д. (см.: Galbraith Inc., 2323 Sycamore Drive, Ноксвилл, штат Теннесси,
37921).
Названия соединений согласно настоящему изобретению созданы с помощью программы Symyx версии 3.2.NET с функциональной возможностью создания названий по ИЮПАК.
Сокращения имеют общее и обычное применение, известное специалистам в данной области техники, и некоторые сокращения, использованные в настоящем документе, имеют следующие значения: Boc или BOC - трет-бутилкарбонил; (Вос)2О - ди-трет-бутилкарбонат; шс - широкий синглет; д - дублет;
DAD - диодно-матричный детектор;
дд - дублет дублетов;
DMAP - диметиламинопиридин;
ДМСОЧ16 - гексадейтеродиметилсульфоксид;
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;
МСВР - масс-спектрометрия высокого разрешения;
ЖХМС - жидкостная хромато-масс-спектрометрия;
ЯМР - ядерный магнитный резонанс;
м.д. - миллионные доли;
QTof - квадрупольное время пролета;
с - синглет;
т - триплет;
ТГФ - тетрагидрофуран;
СВЭЖХ - сверхэффективная жидкостная хроматография;
GE - компания General Electric;
Ki - константа ингибирования;
ПЭТ - позитронно-эмиссионная томография;
Т1/2 - период полувыведения;
%ID/г - процент введенной дозы на 1 г ткани;
USP - фармакопея США;
об./об. - соотношение объема к объему;
WFI - вода для инъекций.
Способ получения 1. Синтез трет-бутил-7-бром-5Н-пиридо[4,3-Ь]индол-5-карбоксилата, (IV).
В круглодонную колбу загружали 7-бром-5H-пиридо[4,3-b]индол (15,00 г, 60,7 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (19,87 г, 91,1 ммоль, 1,5 экв.) и диметиламинопиридин (0,204 г, 1,8 ммоль, 0,03 экв.). Добавляли тетрагидрофуран (550 мл) и перемешивали полученный коричневый раствор при комнатной температуре. Завершение реакции определяли по ЖХМС через 4 ч. Реакционную смесь концентрировали до коричневого твердого вещества. Твердое вещество повторно суспендировали примерно в 500 мл гексанов (при перемешивании), выделяли фильтрованием, промывали гексанами, а затем высушивали под высоким вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде темно-коричневого твердого вещества (18,03 г, 86%). Полученный материал использовали на следующей стадии без очистки.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО^): 5 9,37 (д, J=1,2 Гц, 1H), 8,59 (д, Jo=6,0 Гц, 1H), 8,36 (д, J=1,2 Гц, 1H), 8,19 (дд, J=8,4 Гц, J=0,4 Гц, 1H), 7,99 (дд, Jo=6,0 Гц, Jm=1,2 Гц, 1H), 7,59 (дд, Jo=8,4 Гц, Jm=1,6 Гц, 1H), 1,66 (с, 9Н).
13С ЯМР (100,6 МГц, CDCl3): 5 150,06, 147,46, 143,37, 142,47, 139,07, 127,07, 122,51, 122,71, 121,27, 120,92, 119,67, 110,97, 85,67, 28,24.
МСВР: Рассчитано для C16H15N2O2Br (M+H)+ 347,0395, найдено 347,0400, погрешность = 1,4 м.д.
Суспензию трет-бутил-7-бром-5H-пиридо[4,3-b]индол-5-карбоксилата (IV) (20,41 г, 58,8 ммоль, 1,0 экв.), бис-(пинаколато)дибора (22,53 г, 88,7 ммоль, 1,5 экв.) и ацетата калия (19,55 г, 199,2 ммоль, 3,4 экв.) в диоксане (590 мл) продували азотом в течение 15 мин и обрабатывали аддуктом дихлор-1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроценпалладия (II) с дихлорметаном (4,82 г, 5,91 ммоль, 0,1 экв.).
Способ получения 2. Синтез 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксида, (III).
Смесь продували азотом еще 10 мин и перемешивали реакционную смесь при 80°C в течение ночи. Через
17.5 ч данные ЖХМС указывали на завершение реакции с получением сложного пинаколового эфира (трет-бутил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-5-карбоксилата), составляющего 90% реакционной смеси (по УФ). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Смесь продували азотом в течение 15 мин и добавляли 3-бромпиридин-1-оксид (15,76 г,
90.5 ммоль, 1,5 экв.), карбонат натрия (156 мл 2 М раствора в дистиллированной воде, 312 ммоль, 5,3 экв.) и тетракис-трифенилфосфинпалладий(И) (3,40 г, 2,9 ммоль, 5 мол.%). Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 7,5 ч, охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь концентрировали до темно-коричневого/черного остатка, который суспендировали в 90:10 растворе метиленхлорида:метанола (500 мл) и обрабатывали ультразвуком, а затем отфильтровывали. Соли промывали чередующимися порциями метиленхлорида (2x250 мл) и метанола (2x250 мл), концентрировали и предварительно абсорбировали на примерно 65 г силикагеля. Полученный материал разделяли и очищали на двух силикагелевых флэш-колонках по 330 г, используя градиент от 100:0 (удержание в течение 2 мин) до 95:5 метиленхлорида:метанола за 10 мин (удержание в течение 8 мин), затем сразу повышая до 90:10 метиленхлорида:метанола (удержание в течение 25 мин). Полученный материал концентрировали и высушивали под высоким вакуумом с получением серо-черного твердого вещества (9,01 г, 31%). Полученный материал растворяли в 90:10 смеси метиленхлорида:метанола (400 мл) и перемешивали со смолой Quadrasil-MP (26,05 г, 26,05-39,08 ммоль тиола, 1-1,5 экв.) в течение ночи. Смесь отфильтровывали и промывали смолу 90:10 смесью метиленхлорида:метанола (4x200 мл). Фильтраты концентрировали, повторно растворяли в 90:10 смеси метиленхлорида:метанола (400 мл) и перемешивали со свежей смолой (6,48 г, 6,48-9,72 ммоль тиола, 0,26-0,39 экв.) в течение ночи. Смесь отфильтровывали и промывали смолу 90:10 смесью метиленхлорида:метанола (3x125 мл). Фильтраты концентрировали и высушивали с получением бежевого твердого вещества. Твердое вещество растворяли в теплом этаноле (800 мл, примерно 75°C), а затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры в течение ночи. Полученную смесь дополнительно охлаждали до 4°C. Через 7 ч твердое вещество выделяли фильтрацией, промывали холодным этанолом и высушивали под высоким вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (6,29 г). Таким же образом выделяли вторую партию кристаллов (0,714), получая в общем 7,00 г (выход 78%).
Затем из объединенных партий 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксида удаляли палладий. Несколько партий 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксида объединяли (21,57 г, 59,7 ммоль) и растворяли в 90:10 смеси метиленхлори-да:метанола (990 мл). Золотисто-коричневый раствор обрабатывали смолой Quadrasil-MP (56,0 г, 56,0-84,0 ммоль тиола, 0,9-1,4 экв.) в течение ночи. Смесь отфильтровывали и промывали смолу 90:10 смесью метиленхлорида:метанола (3x200 мл). Фильтраты концентрировали и высушивали с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества кремового цвета (20,82 г, выход 97%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 5 9,31 (д, J=0,8 Гц, 1H), 8,67 (д, J=5,6 Гц, 1H), 8,64 (д, J=1,2 Гц, 1H), 8,59 (тд, Jm=1,6 Гц, Jp=0,4 Гц, 1H), 8,23 (ддд, Jo=6,4 Гц, Jm=1,6 Гц, Jm=1,2 Гц, 1H), 8,17 (дд, Jo=8,0 Гц, Jp=0,4 Гц, 1H), 8,10 (дд, Jo=5,6 Гц, Jm=1,2 Гц, 1H), 7,60 (дд, Jo=8,0 Гц, Jm=1,6 Гц, 1H), 7,58 (ддд, Jo=6,4 Гц, Jm=1,6 Гц, Jp=0,8 Гц, 1H), 7,38 (ддд, Jo=8,0 Гц, Jm=6,4 Гц, Jp=0,4 Гц, 1H), 1,79 (с, 9Н).
13С ЯМР (100,6 МГц, CDCl3): 5 150,23, 147,74, 143,83, 142,90, 140,60, 139,13, 137,94, 137,77, 135,00, 125,88, 124,61, 124,47, 122,66, 121,25, 120,82, 115,11, 111,03, 85,68, 28,31.
МСВР: рассчитано для C21H19N3O3 (М+Н)+ 362,1505, найдено 362,1515, погрешность = 2,8 м.д.
Пример 1. Синтез 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфоната, (1а).
К перемешанному раствору 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксида (6,10 г, 16,9 ммоль, 1,0 экв.) в метиленхлориде (435 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляли п-толуолсульфоновый ангидрид (12,50 г, 38,3 ммоль, 2,0 экв.). Оранжево-коричневая реакционная смесь становилась однородной, и ее перемешивали в течение 30 мин. Медленно добавляли 1,0 М раствор триметиламина в тетрагидрофуране (335 мл, 335 ммоль, 20,0 экв.) (примечание: небольшой экзотермический эффект). Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин, а затем обрабатывали дополнительным количеством п-толуолсульфонового ангидрида (5,49 г, 16,9 ммоль, 1,0 экв.), добавленного одной порцией. Через 30 мин добавляли третью порцию п-толуолсульфонового ангидрида (5,49 г, 16,9 ммоль, 1,0 экв.). Еще через 30 мин добавляли последнюю порцию п-толуолсульфонового ангидрида (5,49 г, 16,9 ммоль, 1,0 экв.) и перемешивали смесь/раствор в течение 30 мин. В это время
данные ЖХМС указывали на полное расходование исходного материала (m/z=306, M-tBu). Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением до светло-желтого твердого вещества. Твердое вещество суспендировали в метиленхлориде (500 мл) и дважды экстрагировали водой (300 мл, 200 мл). Водные слои объединяли и экстрагировали метиленхлоридом (2x 200 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали до светло-коричневого/оранжевого твердого вещества. Твердое вещество растворяли в метиленхлориде (75 мл) и по каплям добавляли к быстро перемешиваемому диэтиловому эфиру (600 мл). Полученное твердое вещество выделяли фильтрацией и промывали диэтиловым эфиром. Процесс повторного суспендирования повторяли еще 1-3 раза, сколько необходимо для удаления дополнительных примесей, обусловленных тозилом. При необходимости материал дополнительно очищали на силикагелевой колонке массой 40 г (2-4 г соединения), используя градиент от 100:0 (удержание в течение 3 мин) до 90:10 метиленхлори-да:метанола за 3 мин с удержанием в течение 3 мин, с последующим повышением до 80:20 метиленхло-рида:метанола за 3 мин и удержанием в течение 20 мин. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли, концентрировали, повторно растворяли в метиленхлориде, отфильтровывали для удаления остаточного силикагеля, а затем концентрировали. После высушивания под высоким вакуумом получали соединение 1а в виде бежевого твердого вещества (6,73 г, 69%).
Очистка 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфоната.
Несколько партий 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-
триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфоната объединяли (11,25 г) и растворяли в метиленхло-риде (500 мл). Мутную оранжевую смесь высушивали над Na2SO4 и отфильтровывали через Celite(r). Осадок на фильтре промывали метиленхлоридом (100 мл). Полученный оранжевый раствор по каплям добавляли к быстро перемешиваемому диэтиловому эфиру (2 л). Выпавшее в осадок твердое вещество выделяли фильтрацией и промывали диэтиловым эфиром (1 л). После высушивания под высоким вакуумом получали титульное соединение в виде бежевого твердого вещества (10,75 г, выход 96%).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 5 9,31 (дд, J <0,5 Гц (2), 1Н), 8,77 (дд, J=2,4, 0,6 Гц, 1Н), 8,67 (дд, J=5,9, <0,5 Гц, 1Н), 8,63 (дд, J=1,6, 0,5 Гц, 1Н), 8,51 (дд, J=8,7, 0,6 Гц, 1Н), 8,16 (дд, J=8,1, 0,5 Гц, 1Н), 8,13 (дд, J=8,7, 2,4 Гц, 1Н), 8,11 (дд, J=5,9, <0,5 Гц, 1Н), 7,80 (пара-дублет, J=8,1 Гц, 2Н), 7,58 (дд, J=8,1, 1,6 Гц, 1Н), 7,13 (пара-дублет, J=8,1 Uw, 2H), 3,94 (с, 9Н), 2,28 (с, 3H), 1,78 (с, 9Н).
13С ЯМР (100,6 МГц, CDCl3): 5 156,0, 150,2, 147,6, 146,6, 144,0, 143,9, 142,8, 139,6, 139,3 (2), 139,2, 135,2, 128,7, 126,0, 124,3, 123,1, 121,3, 120,9, 116,0, 115,3, 111,1, 85,7, 55,4, 28,3, 21,2.
МСВР: Рассчитано для C24H27N4O2 (исходный ион, М+Н)+ 403,2134, найдено 403,2129, погрешность = -1,2 м.д.
Элементарный анализ (способ GLI МЕ-12): рассчитано С 64,79 Н 5,96 N 9,75, найдено С 63,88/63,44 Н 6,05/5,90 N 9,34/9,24.
Анализ Pd (способ GLI ME-70): 4,6 м.д. (Galbraith Inc., 2323 Sycamore Drive, Ноксвилл, штат Теннесси, 37921).
Пример 2. Радиохимический синтез 7-(6-[18Р]фтор-3-пиридил)-5Н-пиридо[4,3-Ь]индола, [18F]-T807.
Титульное соединение получали при помощи автоматического устройства для радиохимического синтеза, такого как автоматическое устройство для радиохимического синтеза GE TRACERlab FXF-N. Типичный выход с поправкой на радиоактивный распад составлял 45-55% активного ^^фторида, остающегося на карбонатном картридже Sep-Pak(r) Light Accell(tm) Plus (QMA) (46 мг сорбента на один картридж, размер частиц 40 мкм) при элюировании в реакционный сосуд с использованием 0,8 мл водного раствора криптанда 2.2.2-K2CO3 [криптанд 2.2.2 (7 мг) и карбоната калия (0,75 мг) в WFI (вода для инъекций, 0,4 мл) и ацетонитриле (0,4 мл)]. Элюированное активное соединение высушивали нагреванием при 70°C в токе азота под вакуумом в течение 4,5 мин. Затем температуру повышали до 100°C и выдерживали еще 1 мин. Ток азота отключали и высушивали активное соединение под вакуумом в течение 4 мин с получением безводного [^фторида криптанда 2.2.2-K2CO3.
В реакционный сосуд добавляли раствор 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-^^^триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфоната [1,5 мг в безводном ДМСО (2 мл)] и выдерживали полученную смесь при 110°C в течение 5 мин, затем проводили снятие защиты с помощью 1 мл 3н. раствора HCl (водн.) при 100°C в течение 5 мин. После охлаждения до 50°C неочищенное титульное соединение нейтрализовали с помощью 7 мл 0,5 М раствора NaOH (водн.) (3,5 мл 1н. раствора NaOH (водн.) и 3,5 мл воды для инъекций, WFI). Полученную смесь пропускали через обращенно-фазовый картридж Oasis(r) HLB Light (30 мг сорбента на один картридж, размер частиц 30 мкм). Удержанное неочищенное титульное соединение промывали WFI (5 мл), затем элюировали из картриджа Oasis HLB Light ацетонитрилом (1,5 мл). Неочищенный материал разбавляли WFI (3 мл), затем наносили на полупрепаративную колонку С-18 для обращенно-фазовой ВЭЖХ (Agilent ZORBAX Eclipse
XDB-C18, 9,4x250 мм, скорость потока = 4 мл/мин.) для очистки (время удержания ~8 мин), используя изократическое элюирование с 40% ацетонитрилом в 10 мМ растворе ацетата аммония в воде.
ВЭЖХ фракцию, содержащую титульное соединение, собирали и разбавляли 30 мл WFI. Затем разбавленный раствор пропускали через обращенно-фазовый картридж Sep-Pak Light C18 (130 мг сорбента на один картридж, размер частиц 55-105 мкм) и промывали удержанное титульное соединение 5 мл WFI. [18F]-T807 элюировали из картриджа Sep-Pak C18 Plus Light абсолютным спиртом, USP (1 мл), затем 0,9% раствором хлорида натрия для инъекций, USP (2 мл), в 0,9% раствор хлорида натрия для инъекций, USP (7 мл). Раствор лекарственного вещества переносили в пробирку для нерасфасованного продукта (BPV) через стерилизующий фильтр с размером пор 0,22 мкм (Millex GVPVDF, Millipore SLGV013SL).
В методе ВЭЖХ анализа использовали изократическое элюирование подвижной фазой 25:75% об./об. ацетонитрила:воды с 0,1% ТФК на колонке С18 для обращенно-фазовой ВЭЖХ при скорости потока 1,0 мл/мин. Систему оснащали двумя детекторами, радиометрическим детектором и УФ-детектором, установленным на 270 нм. Вводили пробы растворов стандартного образца и образца лекарственного продукта. Пики УФ-хроматограмм и радиохроматограмм интегрировали и использовали данные для расчета радиохимической чистоты и удельной радиоактивности, а также для подтверждения радиохимической идентичности. Идентичность титульного соединения подтверждали сопоставлением УФ и радиохроматографического времени удержания при ВЭЖХ, полученного для соединения с меткой 18F и нерадиоактивного стандартного образца 7-(6-фтор-3-пиридил)-5H-пиридо[4,3-b]индола. См. фиг. 1.
Пример 3 Пленочная радиоавтография срезов ткани головного мозга, пораженного AD.
Пленочную радиоавтографию срезов ткани головного мозга, пораженного AD, выполняли в соответствии с ранее опубликованными способами (см. Zhang, W., et al. F-18 stilbenes as PET imaging agents for detecting beta-amyloid plaques in the brain. Journal of Medicinal Chemistry, 48:5980-5988, 2005, Zhang, W., et al. F-18 stilbenes as PET imaging agents for amyloid plaque imaging. Nucl. Med Biol. 2007, 34(1):89-97). Срезы головного мозга, полученные после вскрытия людей с диагнозом AD (лобная доля, 10 мкм), покрывали 0,5 мл [18F]-T807 (в смеси 2,5:2,5:95 = ДМСО:этанол:1Х-фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), примерно 20 мкКи [18F]-T807 на одно предметное стекло) и инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре. Затем проводили последовательные циклы промывания: 2 мин 1X PBS, 2 мин 30% этанола/1Х PBS, 2 мин 70% этанола/1Х PBS и 2 мин 1X PBS для удаления несвязанной метки. После высушивания в вытяжном шкафу срезы укладывали на радиочувствительную кассету Fuji-Film и оставляли на ночь. Происходила запись сигнала радиоавтографии на радиочувствительной пленке, который считывали/визуализировали при помощи биовизуализирующей системы FujiFilm FLA-7000. Радиоавтографическую визуализацию tau наблюдали в сером веществе ткани головного мозга, пораженного AD, после вскрытия.
На фиг. 2 изображено внедрение метки [18F]-T807 в tau в срезах (10 мкм) ткани лобной доли головного мозга tau-положительных пациентов с AD после вскрытия, примерно 20 мкКи [18F]-T807 на одно предметное стекло. В области серого вещества (GM) наблюдали сильный радиоавтографический сигнал [18F]-T807, и наличие tau в указанных областях подтверждали иммунным окрашиванием tau. Неспецифический или фоновый сигнал [18F]-T807 показан в области белого вещества (WM), и он является низким. На специфичность радиоавтографического сигнала в отношении связывания с нативными агрегатами tau указывает блокирующий эффект 1 мкМ холодного Т807.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы
где [анион]- представляет собой подходящий органический сульфонатный или тартратный анионный противоион.
2. Соединение по п.1 формулы
где [анион]- представляет собой алкилсульфонат или арилсульфонат.
3. Соединение по п.2, представляющее собой 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-М,М,М-триметилпиридин-2-аминия 4-метилбензолсульфонат, представленный формулой
5. Способ получения соединения формулы
включающий взаимодействие соединения формулы
4. Соединение по п.2, представляющее собой 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-М,М,М-триметилпиридин-2-аминий метилсульфонат, представленный формулой
где [анион]- представляет собой подходящий органический сульфонатный или тартратный анионный противоион, с [^фторидом.
6. Способ получения соединения формулы
включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий 4-метилбензолсульфоната, представленного формулой
с [^фторидом.
7. Способ получения соединения формулы
включающий взаимодействие 5-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)-N,N,N-триметилпиридин-2-аминий-метилсульфоната, представленного формулой
с [^фторидом.
8. Промежуточное соединение для получения соединения по п.1, где указанное промежуточное соединение представляет собой 3-(5-(трет-бутоксикарбонил)-5H-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-1-оксид, представленный формулой
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028426
- 1 -
(19)
028426
- 1 -
(19)
028426
- 2 -
(19)
028426
- 4 -
028426
- 4 -
028426
- 4 -
028426
- 12 -
028426
- 12 -