EA 028392B1 20171130 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/028392 Полный текст описания [**] EA201300162 20080813 Регистрационный номер и дата заявки US60/955,448 20070813 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок EAB1 Код вида документа [PDF] eab21711 Номер бюллетеня [**] КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ КОНТРОЛЯ НЕМАТОД Название документа [8] C07D413/04, [8] C07D413/14, [8] A01N 43/76, [8] A01P 5/00 Индексы МПК [US] Уилльямс Дерик Дж., [US] Диммик Мэтт У., [US] Хаакенсон Уилльям П., мл., [US] Видеман Эл, [US] Шортт Барри Дж., [GB] Чизрайт Тим, [US] Кроуфорд Майкл Дж. Сведения об авторах [US] МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ ЛЛС Сведения о патентообладателях [US] МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ ЛЛС Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000028392b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение, имеющее формулу (VI), формулу (VII), или его соль где А представляет собой необязательно замещенный фенил, где указанные заместители выбраны из группы, состоящей из OCF 3 , галогена, C 1 -C 6 галогеналкила, C 1 -C 6 алкила и C 1 -C 6 алкокси; и С представляет собой тиенил или фуранил, каждый из которых может быть необязательно независимо замещенным одним или несколькими заместителями СН 3 .

2. Соединение по п.1, где С представляет собой необязательно замещенный тиенил.

3. Соединение по п.1, где С представляет собой необязательно замещенный фуранил.

4. Соединение по п.1, имеющее формулу VIa, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, CH 3 , F, Cl, Br и CF 3 ; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 выбран из группы, состоящей из водорода, CH 3 , CF 3 , F, Cl, Br, OCH 3 и OCF 3 ; R 7 выбран из группы, состоящей из водорода и СН 3 ; R 8 и R 9 представляют собой водород и Е представляет собой O или S.

5. Соединение по п.1, имеющее формулу VIb, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и CH 3 ; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 представляет собой Cl; R 8 представляет собой водород; R 6 и R 9 представляют собой водород и Е представляет собой O.

6. Соединение по п.1, имеющее формулу VIIa, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 представляет собой CH 3 ; R 7 и R 8 представляют собой водород; R 9 представляет собой водород и Е представляет собой O.

7. Соединение по п.1, имеющее формулу VIIb, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 представляет собой СН 3 ; R 8 представляет собой водород; R 6 и R 9 представляют собой водород и Е представляет собой O.

8. Соединение по п.4, где Е представляет собой O.

9. Соединение по п.4, где Е представляет собой S.

10. Соединение, выбранное из группы, состоящей из 3-(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-бром-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-бром-2-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-хлорфенил)-5-(тиен-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-хлор-2-фторфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола и 5-(2-хлор-4-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола.

11. Способ контроля растительных паразитарных нематод, включающий введение в растение, семя или почву композиции, включающей эффективное количество соединения по любому из пп.1-10.

12. Способ по п.11, где композиция включает поверхностно-активное вещество.

13. Способ по п.11 или 12, где композиция включает один или несколько инсектицидов, фунгицидов, гербицидов или других пестицидов.

14. Способ по любому из пп.11-13, где композиция включает сорастворитель.

15. Способ по п.13, где инсектицид, фунгицид, гербицид или пестицид выбраны из группы, состоящей из авермектина, ивермектина, милбемицина, имидаклоприда, алдикарба, оксамила, фенамифоса, фостиазата, метам-натрия, этридиазола, пентахлорнитробензола (ПХНБ), флутоланила, металаксила, мефоноксама, фосетил-алюминия, силтиофама, флудиоксонила, миклобутанила, азоксистробина, хлороталонила, пропиконазола, тебуконазола, пираклостробина, трифлоксисульфурона, глифосата и галосульфурона.

16. Способ по любому из пп.11-15, где растительные паразитарные нематоды выбирают из Pratylenchus spp, Heterodera spp, Globodera spp, Meloidogyne spp, Rotylenchulus spp, Hoplolaimus spp, Belonolaimus spp, Longidorus spp, Paratrichodorus spp, Ditylenchus spp, Xiphinema spp, Helicotylenchus spp, Radopholus spp, Hirschmanniella spp, Tylenchorhynchus spp и Trichodorus spp.

17. Способ по любому из пп.11-16, где композицию наносят на семена.

18. Семя, имеющее покрытие, содержащее соединение по любому из пп.1-10.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение, имеющее формулу (VI), формулу (VII), или его соль где А представляет собой необязательно замещенный фенил, где указанные заместители выбраны из группы, состоящей из OCF 3 , галогена, C 1 -C 6 галогеналкила, C 1 -C 6 алкила и C 1 -C 6 алкокси; и С представляет собой тиенил или фуранил, каждый из которых может быть необязательно независимо замещенным одним или несколькими заместителями СН 3 .

2. Соединение по п.1, где С представляет собой необязательно замещенный тиенил.

3. Соединение по п.1, где С представляет собой необязательно замещенный фуранил.

4. Соединение по п.1, имеющее формулу VIa, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, CH 3 , F, Cl, Br и CF 3 ; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 выбран из группы, состоящей из водорода, CH 3 , CF 3 , F, Cl, Br, OCH 3 и OCF 3 ; R 7 выбран из группы, состоящей из водорода и СН 3 ; R 8 и R 9 представляют собой водород и Е представляет собой O или S.

5. Соединение по п.1, имеющее формулу VIb, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и CH 3 ; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 представляет собой Cl; R 8 представляет собой водород; R 6 и R 9 представляют собой водород и Е представляет собой O.

6. Соединение по п.1, имеющее формулу VIIa, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 представляет собой CH 3 ; R 7 и R 8 представляют собой водород; R 9 представляет собой водород и Е представляет собой O.

7. Соединение по п.1, имеющее формулу VIIb, или его соль где R 1 и R 5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl; R 2 и R 4 представляют собой водород; R 3 представляет собой СН 3 ; R 8 представляет собой водород; R 6 и R 9 представляют собой водород и Е представляет собой O.

8. Соединение по п.4, где Е представляет собой O.

9. Соединение по п.4, где Е представляет собой S.

10. Соединение, выбранное из группы, состоящей из 3-(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-бром-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-бром-2-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-хлорфенил)-5-(тиен-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола; 3-(4-хлор-2-фторфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола и 5-(2-хлор-4-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола.

11. Способ контроля растительных паразитарных нематод, включающий введение в растение, семя или почву композиции, включающей эффективное количество соединения по любому из пп.1-10.

12. Способ по п.11, где композиция включает поверхностно-активное вещество.

13. Способ по п.11 или 12, где композиция включает один или несколько инсектицидов, фунгицидов, гербицидов или других пестицидов.

14. Способ по любому из пп.11-13, где композиция включает сорастворитель.

15. Способ по п.13, где инсектицид, фунгицид, гербицид или пестицид выбраны из группы, состоящей из авермектина, ивермектина, милбемицина, имидаклоприда, алдикарба, оксамила, фенамифоса, фостиазата, метам-натрия, этридиазола, пентахлорнитробензола (ПХНБ), флутоланила, металаксила, мефоноксама, фосетил-алюминия, силтиофама, флудиоксонила, миклобутанила, азоксистробина, хлороталонила, пропиконазола, тебуконазола, пираклостробина, трифлоксисульфурона, глифосата и галосульфурона.

16. Способ по любому из пп.11-15, где растительные паразитарные нематоды выбирают из Pratylenchus spp, Heterodera spp, Globodera spp, Meloidogyne spp, Rotylenchulus spp, Hoplolaimus spp, Belonolaimus spp, Longidorus spp, Paratrichodorus spp, Ditylenchus spp, Xiphinema spp, Helicotylenchus spp, Radopholus spp, Hirschmanniella spp, Tylenchorhynchus spp и Trichodorus spp.

17. Способ по любому из пп.11-16, где композицию наносят на семена.

18. Семя, имеющее покрытие, содержащее соединение по любому из пп.1-10.


Евразийское 028392 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки 201300162
(22) Дата подачи заявки 2008.08.13
(51) Int. Cl.
C07D 413/04 (2006.01) C07D 413/14 (2006.01) A01N43/76 (2006.01) A01P 5/00 (2006.01)
(54) КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ КОНТРОЛЯ НЕМАТОД
(31) 60/955,448
(32) 2007.08.13
(33) US
(43) 2013.06.28
(62) 201070279; 2008.08.13
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ ЛЛС (US)
(72) Изобретатель:
Уилльямс Дерик Дж., Диммик Мэтт У., Хаакенсон Уилльям П., мл., Видеман Эл, Шортт Барри Дж. (US), Чизрайт Тим (GB), Кроуфорд Майкл
Дж. (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-A1-20020013326 US-A-5912243 US-A-5633271
(57) В настоящем изобретении представлены композиции и способы контроля нематод, например нематод, которые инфицируют растения или животных. Указанные соединения включают тиадиазолы формулы (VI) и (VII)
Уровень техники
Нематоды (термин происходит от греческого слова, означающего "нить") представляют собой активные, гибкие организмы удлиненной формы, которые живут на влажных поверхностях или в жидких средах, включая тонкие слои воды внутри почвы и влажные ткани внутри других организмов. Несмотря на то, что было идентифицировано лишь 20000 видов нематод, установлено, что фактически существует от 40000 до 10 млн их видов. В результате эволюции появилось много видов нематод, которые являются благополучно существующими паразитами растений и животных и ответственны за значительные экономические потери в сельском хозяйстве и потери в поголовье крупного рогатого скота, а также за распространенность некоторых болезней и смертность у людей (Whitehead (1998) Plant Nematode Control. CAB International, New York).
Нематодные паразиты растений могут заражать все части растений, включая корни, развивающиеся бутоны цветов, листья и стебли. Паразиты растений на основании особенности их питания подразделяются на основные классы мигрирующих эктопаразитов, мигрирующих эндопаразов и прикрепленных эндопаразитов. Прикрепленные эндопаразиты, которые включают яванские галловые нематоды (Meloi-dogyne) и цистообразующие нематоды (Globodera и Heterodera), инициируют сайты питания и создают долгосрочные инфекции внутри корней, которые зачастую причиняют значительный ущерб зерновым культурам (Whitehead, supra). Исходя из того, что ежегодно потери всех основных зерновых культур составляют в среднем 12%, подсчитано, что затраты на борьбу с паразитарными нематодами в промышленном садоводстве и сельскохозяйственном производстве во всем мире составляют более 78 миллиардов долларов в год. Например, подсчитано, что ежегодно во всем мире нематоды вызывают потери сои приблизительно на 3,2 миллиарда долларов (Barker et al. (1994) Plant and Soil Nematodes: Societal Impact and Focus for the Future. The Committee on National Needs and Priorities in Nematology. Cooperative State Research Service, US Department of Agriculture and Society of Nematologists). Некоторые факторы вызывают необходимость безотлагательного осуществления безопасного и эффективного контроля нематод. Постоянный прирост населения, голод и ухудшение качества окружающей среды вызываеют более заинтересованное отношение к устойчивому развитию сельского хозяйства, и новые правительственные постановления могут препятствовать использованию или строго ограничивать использование многих доступных сельскохозяйственных противоглистных средств.
Существует очень небольшой перечень химических соединений, доступных для эффективного контроля нематод (Becker (1999) Agricultural Research Magazine 47 (3):22-24; Патент США № 6048714). Обычно химические нематоциды являются высокотоксичными соединениями, которые, как известно, наносят значительный ущерб окружающей среде, и все более значительно ограничиваются их количества и те области, где они могут применяться. Например, применение почвенного фумиганта метилброми-да, который эффективно использовался для снижения заражения нематодами ряда культур специального назначения, ограничивается Монреальским Протоколом ООН как вещества, разрушающего озоновый слой, и постепенно сокращается в США и во всем мире (Carter (2001) California Agriculture, 55(3):2). Ожидается, что производство земляники и других продуктов сельскохозяйственного производства, поступающих на рынок, подвергнется значительному воздействию, если не будет разработана соответствующая замена метилбромиду. Аналогично, применение нематоцидов с широким спектром действия, таких как Telone (различные преараты 1,3-дихлорпропена), в значительной степени ограничивается вследствие их токсикологических характеристик (Carter (2001) California Agriculture, 55(3):12-18). Пестициды на основе фосфорорганических соединений и карбаматов являются другим важным классом нема-тоцидов, подвергающихся регуляционному тестированию, и применение некоторых из этих соединений в настоящее время постепенно сокращается (например, фенамифоса, тербуфоса, кадусафоса).
На сегодняшний день был достигнут незначительный успех в изыскании безопасных эффективных замен традиционным токсичным, но эффективным нематоцидам. Последним примером недостаточной эффективности множества более новых соединений, способных заменить фосфорорганические соединения и карбаматы, является исследование альтернатив фенамифосу для контроля растительных паразитарных нематод в бермудской траве. В этих опытах ни одна из экспериментальных обработок не привела к снижению плотностей популяций паразитарных нематод растений или не способствовала равным образом росту воспроизводства дерна при зрительной оценке или росту корней дерновых трав. (Crow (2005) Journal of Neonatology, 37(4):477-482). Следовательно, существует острая потребность в разработке экологически безопасных, эффективных способов контроля паразитарных нематод растений.
Известно, что некоторые виды растений являются высокоризистентными по отношению к нематодам. Среди них наиболее описанными видами являются бархатцы (Tagetes spp.), кроталяция (Crotalaria spectabilis), хризантема (Chrysanthemum spp.), касторовые бобы (Ricinus communis), мелия азердарах или мелия индийская (Azardiracta indica), некоторые представители семейства Asteraceae (семейство Compo-sitae) (Hackney & Dickerson. (1975) J. Nematol. 7(1):84-90). В случае Asteraceae было показано, что сильная нематоцидная активность корней объясняется действием фотодинамического соединения альфа-тертиенила. Касторовые бобы запахивают в качестве зеленого органического удобрения до посадки семян культур. Однако значительным недостатком применения касторового растения является то, что его семена содержат токсичные соединения (такие как рицин), которые могут убить человека, домашних
животных и домашний скот, а также являются высоко аллергенными. Тем не менее, в большинстве случаев активное(ые) соединение(я), проявляющие нематоцидную активность в отношении нематод растений, не были выявлены, и все еще трудно получить коммерчески успешные препараты из этих резистентных растений или придать резистентность сельскохозяйственным культурам, важным с экономической точки зрения, таким как соя или хлопчатник.
Генетическая резистентность к некоторым нематодам встречается в некоторых коммерческих культурах (например, в сое), но число таких культур, их желательные агрономические признаки и резистентность ограничены. Кроме того, получение коммерческих видов с резистентностью к нематодам традиционной селекцией растений на основе генетической рекомбинации через половое скрещивание является медленным процессом и зачастую дополнительно затруднено отсутствием подходящей зародышевой плазмы.
Химический способ контроля паразитарных нематод растений остается важным для многих зерновых культур, у которых отсутствует адекватная природная резистентность или резистентность трансгенного происхождения. На отраслевых рынках экономические потери вследствие заражения паразитарными нематодами особенно высоки в производстве земляники, бананов и других высокоценных овощей и фруктов. На огромных посевных площадях важных сельскохозяйственных культур самые значительные повреждения от нематод наблюдаются в сое и хлопке. Однако страдает от значительного заражения паразитирующими нематодами и множество других культур, в том числе картофель, перец, лук, цитрусовые, кофе, сахарный тростник, тепличные декоративные растения и дернообразующие травы полей для гольфа.
Нематоциды, предназначенные для применения в современном сельском хозяйстве, должны обладать высокой эффективностью, широким спектром активности в отношении нематод различных видов, а также не должны быть токсичными по отношению к нецелевым организмам.
Нематодные паразиты позвоночных (например, человека, домашнего скота и домашних животных) включают круглые глисты пищеварительного тракта, анкилостомы, острицы, хлыстовики и филярии. Они могут передаваться различными путями, включая загрязнение воды, проникновение через кожу, укус насекомых или проглатывание загрязненной пищи.
У домашних животных контроль нематод или "дегельминтизация" имеет большое значение для экономической эффективности работы животноводов и является неотъемлемой частью ветеринарного ухода за любимыми домашними животными. Паразитарные нематоды вызывают смертность животных (например, нематоды собак и кошек, обитающие в сердце или в токе крови) и распространение болезней в результате ингибирования паразитами у инфицированного животного способности поглощать питательные вещества. Недостаток питательных веществ, вызванный паразитами, приводит к заболеванию и ведет к задержке роста у домашнего скота и любимых домашних животных. Например, в стадах крупного рогатого и молочного скота единственное невылеченное заражение коричневым желудочным червем может неизменно снижать способность животного превращать пищу в мышечную массу или молоко.
Потребность в новых противоглистных средствах и вакцинах для контроля паразитарных нематод животных обусловлена двумя факторами. Во-первых, некоторые из более широко распространенных видов паразитарных нематод крупного рогатого скота вырабатывают резистентность к противоглистным лекарственным средствам, доступным в настоящее время, а это означает, что данные лекарственные средства теряют свою эффективность. Развитие такой резистентности не является неожиданным, поскольку доступными являются несколько эффективных противоглистных лекарственных средств, и большинство из них постоянно применяется. Некоторые виды паразитов выработали резистентность к большинству противоглистных лекарственных средств (Geents et al. (1997) Parasitology Today 13:149-151; Prichard (1994) Veterinary Parasitology 54: 259-268). Тот факт, что многие из противоглистных лекарственных средств обладают сходными механизмами действия, усложняет существо дела, поскольку потеря чувствительности паразита к одному лекарственному средству зачастую сопровождается и побочной резистентностью - то есть резистентностью к другим лекарственным средствам того же класса (Sangster & Gill (1999) Parasitology Today 15 (4): 141-146). Во-вторых, имеются некоторые проблемы с токсичностью основных соединений, доступных в настоящее время.
Заражения паразитарными нематодными червями приводят к значительной смертности и заболеваемости также у людей, особенно в тропических регионах Африки, Азии и Америки. Всемирной Организацией Здравоохранения было подсчитано, что инфицированы 2,9 млрд людей, и в некоторых регионах 85% населения являются носителями гельминтов. Несмотря на то, что смертность является редкой относительно количества инфицированных, заболеваемость значительна и конкурирует с диабетом и раком легких в соответствии с показателем "годы жизни, утраченные вследствие нетрудоспособности" (disability adjusted life year - DALY).
Примеры паразитарных нематод человека включают кривоголовки, филярии и острицы. Кривого-ловки (1,3 миллиарда инфекций) являются основной причиной анемии у миллионов детей, что приводит к задержке роста и ухудшению умственного развития. Филярии проникают в лимфатическую систему, вызывая перманентное распухание и деформирование конечностей (слоновость), и в глаза, вызывая африканскую речную слепоту. Аскариды Ascaris lumbricoides, обитающие в толстой кишке, инфицируют
более одного миллиарда людей во всем мире и вызывают нарушение питания или обструктивную болезнь кишечника. В развитых странах острицы являются распространенными гельминтами и зачастую передаются через детей в детских дошкольных учреждениях.
Даже при бессимптомных паразитарных инфекциях нематоды все еще могут лишать организм хозяин полезных питательных веществ и повышать способность других организмов производить вторичные инфекции. В некоторых случаях инфекции могут вызывать ослабляющие здоровье заболевания и могут приводить к анемии, диареи, обезвоживанию организма, потере аппетита или смерти.
Несмотря на некоторые успехи при получении доступных лекарственных средств в здравоохранении и почти устранение одной тропической нематоды (ришты), большинство нематодных инфекций остаются неразрешимыми проблемами. Например, лечение акилостомидоза противоглистными лекарственными средствами не обеспечило адекватного контроля в регионах с высокой заболеваемостью, поскольку после лечения происходит быстрое повторное заражение. Фактически в течение последних 50 лет, в то время как интенсивность зараженности в Соединенных Штатах, Европе и Японии падает, общее число заражений равтес вместе с ростом населения мира. Крупномасштабные инициативы региональных правительств, Всемирная Организация Здравоохранения, благотворительные организации и фармацевтические компании в настоящее время предпринимают попытки взять под контроль инфекции нематод доступными на сегодняшний день средствами, включая три программы контроля Onchocerciasis (речная слепота) в Африке и Америке с использованием ивермектина и направленного контроля; Международное общество борьбы с лимфатическим филяриатозом с использованием DEC, албендазола и ивермекти-на; очень успешную Программу уничтожения ришты. До разработки безопасных и эффективных вакцин для профилактики заражения нематодами противогельминтные лекарственные средства будут продолжать использоваться для контроля и лечения нематодных паразитарных инфекций у людей и домашних животных.
В данной области техники были описаны некоторые инсектицидные оксазолы (Патент США № 4791124) и триазолы (Патент США № 4908357), а также нематоцидные пиразолы (Патент США № 6310049). Настоящее изобретение относится к другим новым оксазолам, оксадиазолам и тиадиазолам с неожиданно высокой нематоцидной активностью, сравнимой с эффективностью стандартных коммерческих препаратов. Коммерческий уровень нематоцидной эффективности оксазолы, оксадиазолы и тиадиа-золы ранее не проявляли. Важно, что эти соединения проявляют активность широкого спектра в отношении нематод и безопасны для нецелевых организмов.
В Патенте США № 4791124 впервые описаны некоторые оксазолы и триазолы, обладающие нема-тоцидной активностью в отношении Meloidogyne incognita (корневой галловой нематоды) в концентрации 10 частей на миллион. Однако соединения не были титрованы до более низких доз, и, как можно видеть из табл. 1D настоящего описания, некоторые аналоги триазола, которые проявили высокую эффективность при 8 м.д., по эффективности не сопоставимы с коммерческими стандартами и не обладают подходящей нематоцидной активностью при 1 м.д.
В Патенте США № 6310049 описываются некоторые нематоцидные пиразолы с активностью в отношении яванской галловой нематоды. Было показано, что несколько пиразоловых соединений обладает активностью при 100 м.д. в испытании in vitro и небольшая подгруппа соединений проявляет активность при 50 м.д. в почве в тепличном испытании. Одно соединение заявлено как обладающее активностью при 20 м.д. в теплице и единственное соединение как обладающее активностью при 5 м.д. Непонятно, обладает ли какое либо из этих соединений эффективностью, сравнимой с коммерческими стандартами, т.е. при 1 м.д. Как можно видеть из табл. 1D в настоящем описании, нематоцидная активность для 3-(фуран-2-ил)-5-фенил-Ш-пиразола представлена при 8 м.д., а не при 1 м.д., в то время как множество оксазолов и оксадиазолов обладают нематоцидной активностью, сравнимой с коммерческими стандартами при 1 м.д.
Некоторые производные оксадиазола, содержащие замещенные фурановые или теофеновые циклы, а не незамещенные фурановые или тиофеновые циклы, описаны как соединения, индуцирующие апоптоз и применимые в качестве химиотерапевтических лекарственных средств при некоторых видах рака (Zhang et al., 2005 J. Med. Chem. 48(16):5215-23). Несмотря на некоторое внешнее химическое сходство, нематоцидные аналоги согласно настоящему изобретению не стимулируют апоптоз в клетках млекопитающих и обладают одинакой эффективностью в отношении нематоды С. elegans дикого типа и мутантов ced-3 или ced-4 С. elegans, неполных в апоптозе. Следовательно, указанные аналоги структурно и функционально отличаются от оксадиазолов, вызывающих апоптоз, которые описаны в Патенте США № 7041685 (Cai et al.).
Сущность изобретения
В настоящем изобретении раскрыты композиции и способы контроля нематод, которые инфицируют растения или части растений. Нематоды, которые паразитируют на животных, также можно контролировать с использованием способов и соединений, раскрытых в настоящем изобретении.
В настоящем изобретении описаны нематоцидные композиции, включающие эффективное количество соединения или смеси соединений любой из формул, представленных в описании, например, соединений, представленных ниже.
где
А представляет собой необязательно замещенный фенил, где заместители выбраны из группы, включающей галоген, C1-C6 галогеналкил, C1-C6 алкил;
С представляет собой тиенил или фуранил, каждый из которых может быть необязательно независимо замещенным одним или несколькими заместителями, CH3.
В различных вариантах осуществления соединения С представляет собой тиенил; С представляет собой фуранил;
В настоящем изобретении раскрыты соединения, имеющие формулу Via, или их соли,
где
R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, F, Cl, Br и CF3; R2 и R4 выбраны из водорода;
R3 выбран из водорода, СН3, CF3, F, Cl, Br, OCF3 и OCH3; R7 выбран из водорода и CH3; R8 и R9 выбран из водорода; и Е представляет собой O или S.
В различных вариантах осуществления соединения формулы VIa R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, F и Cl;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, фтора и Cl, и R3 представляет собой Cl; R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, фтора и Cl, и R3 представляет собой Br; R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, фтора и Cl, R3 представляет собой Cl и Е представляет собой О;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, фтора и Cl, R3 представляет собой Br, и Е представляет собой О;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и CH3, R3 представляет собой Cl, E представляет собой О и R6, R8 и R9 выбраны из водорода и фтора;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и CH3, и R3 представляет собой Br, E представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и фтора, R3 представляет собой Cl, E представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и фтора, R3 представляет собой Br, Е представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и хлора, R3 представляет собой Cl, Е представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и CH3, R3 представляет собой Cl, R2 и R4 оба представляют собой водород, Е представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и CH3, R2 и R4 оба представляют собой водород, R3 представляют собой Br, E представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и фтора, R2 и R4 представляют собой водород, R3 представляет собой Cl, E представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и фтора, R2 и R4 оба представляют собой водород, R3 представляет собой Br, Е представляет собой О, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода;
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и хлора, R2 и R4 оба представляют собой водород, R3 представляет собой Cl, E представляет собой O, и R7, R8 и R9 выбраны из водорода.
В настоящем изобретении раскрыты соединения, имеющие формулу VIb, или их соли
где
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и CH3;
R2 и R4 выбраны из водорода;
R3 выбран из Cl;
R8 выбран из водорода;
R6 и R9 выбраны из водорода и
E представляет собой O.
В различных вариантах осуществления соединения формулы VIb R1 и R5 независимо выбраны из водорода и CH3, R3 представляет собой Cl, R2 и R4 оба представляют собой водород, Е представляет собой O, и R6, R8 и R9 выбраны из водорода;
В настоящем изобретении раскрыты соединения, имеющие формулу (VII), или их соли
где
А представляет собой необязательно замещенный фенил, где заместители выбраны из группы, включающей галоген, C1-C6 галогеналкил, C1-C6 алкил;
С представляет собой тиенил или фуранил, каждый из которых может быть необязательно независимо замещенным одним или несколькими заместителями, CH3.
В различных вариантах осуществления соединения C представляет собой тиенил; C представляет собой фуранил.
В настоящем изобретении раскрыто соединение, имеющее формулу Vila или его соль
где
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и Cl;
R2 и R4 выбраны из водорода;
R3 выбран из CH3;
R7 и R8 выбраны из водорода;
R9 выбран из водорода;
E представляет собой O.
В различных вариантах осуществления изобретения соединения формулы VIIa R1 и R5 независимо выбраны из водорода и Cl.
В настоящем изобретении раскрыто соединение, имеющее формулу Vllb, или его соль
где
R1 и R5 независимо выбраны из водорода и Cl;
R2 и R4 выбраны из водорода;
R3 выбран из CH3;
R5 выбран из водорода;
R6 и R9 выбраны из водорода;
E представляет собой O.
В различных вариантах осуществления соединения формулы VIIa R1 и R5 независимо выбраны из водорода; R1 и R5 независимо выбраны из Cl.
Изобретение также относится к способу контроля нежелательных нематод, указанный способ включает введение млекопитающим, птицам или введение в их пищу, в растения, семена или почву композиции, включающей эффективное количество соединения любой из формул VI, VIa, VIb, VII, VIIa и VIIb без дополнительных ограничений.
Изобретение также относится к способу контроля нежелательных нематод, указанный способ включает введение млекопитающим, птицам или введение в их корм, в растения, семена или почву композиции, включающей эффективное количество соединения любой из формул VI, VIa, VIb, VII, VIIa и VIIb с дополнительными ограничениями.
Изобретение относится к нематоцидной композиции, включающей соединение любой из формул VI, VIa, VIb, VII, VIIa и VIIb без дополнительных ограничений в концентрации, достаточной для снижения жизнеспособности паразитарной нематоды.
Изобретение также относится к нематоцидной композиции, включающей соединение любой из формул VI, VIa, VIb, VII, VIIa и VIIb с дополнительными ограничениями в концентрации, достаточной для снижения жизнеспособности паразитарной нематоды.
В некоторых случаях нематоцидная композиция дополнительно включает водное поверхностно-активное вещество. Примеры поверхностно-активных веществ, которые могут использоваться, включают Span 20, Span 40, Span 80, Span 85, Tween 20, Tween 40, Tween 80, Tween 85, Triton X 100, Makon 10, Ige-pal CO 630, Brij 35, Brij 97, Tergitol TMN 6, Dowfax 3B2, Physan и Toximul ТА 15. В некоторых случаях нематоцидная композиция дополнительно включает добавку, повышающую проницаемость (например, циклодекстрин). В некоторых случаях нематоцидная композиция дополнительно включает сораствори-тель. Примеры сорастворителей, которые могут использоваться, включают этиллактат, смеси метилсой-ат/этиллактат (например, Steposol), используемые в качестве сорастворителей, изопропанол, ацетон, 1,2-пропандиол, н-алкилпирролидоны (например, серия препаратов Agsolex), масло нафтеновой основы (например, aromatic 200) или минеральное масло (например, керосин). В некоторый случаях нематоцидная композиция дополнительно включает другой пестицид (например, нематоцид, инсектицид или фунгицид), такой как авермектин (например, ивермектин), милбемицин, имидаклоприд, алдикарб, оксамил, фенамифос, фостиазат, метам-натрий, этридиазол, пентахлорнитробензол (ПХНБ), флутоланил, металак-сил, мефоноксам и фосетил-алюминий. Фунгициды, которые могут применяться, включают, но без ограничения, силтиофам, флудиоксонил, миклобутанил, азоксистробин, хлороталонил, пропиконазол, тебу-коназол и пираклостробин. Композиция также может включать гербициды (например, трифлоксисуль-фурон, глифосат, галосульфурон) и другие химические соединения для контроля болезней растений (например, хитозан).
Раскрыта также нематоцидная композиция, включающая аналоги тиадиазола или смеси аналогов, выбранных из группы, включающей 3-(4-хлорфенил)-5-(тиофен-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 5-(4-хлор-2-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-бром-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-хлор-2-фторфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиади-азол, 3-(4-бром-2-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол.
В различных вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно включает водное поверхностно-активное вещество. Примеры поверхностно-активных веществ, которые могут использоваться, включают Span 20, Span 40, Span 80, Span 85, Tween 20, Tween 40, Tween 80, Tween 85, Triton X 100, Makon 10, Igepal CO 630, Brij 35, Brij 97, Tergitol TMN 6, Dowfax 3B2, Physan и Toximul ТА 15. В некоторых случаях нематоцидная композиция включает также добавку, повышающую проницаемость (например, циклодекстрин). В некоторых случая нематоцидная композиция включает сорастворитель. Примеры сорастворителей, которые могут использоваться, включают этиллактат, смеси метилсой-ат/этиллактат (например, Steposol), используемые в качестве сорастворителей, изопропанол, ацетон, 1,2-пропандиол, н-алкилпирролидоны (например, серия препаратов Agsolex), масло нафтеновой основы (например, aromatic 200) или минеральное масло (например, керосин). В некоторый случаях нематоцидная композиция дополнительно включает другой пестицид (например, нематоцид, инсектицид или фунгицид), такой как авермектин (например, ивермектин), милбемицин, имидаклоприд, алдикарб, оксамил, фенамифос, фостиазат, метам-натрий, этридиазол, пентахлорнитробензол (ПХНБ), флутоланил, металак-сил, мефоноксам и фосетил-алюминий. Фунгициды, которые могут применяться, включают, но без ограничения, силтиофам, флудиоксонил, миклобутанил, азоксистробин, хлороталонил, пропиконазол, тебу-коназол и пираклостробин. Композиция также может включать гербициды (например, трифлоксисуль-фурон, глифосат, галосульфурон) и другие химические соединения для контроля болезней растений (например, хитозан).
Настоящее изобретение относится также к способу контроля нежелательной паразитарной нематоды (например, нематод, отличных от С. elegans), указанный способ включает введение позвоночным, в растения, семена или почву нематоцидной композиции, включающей соединение любой из формул, описанных в изобретении, в любой из нематоцидных композиций, описанных в настоящем изобретении.
В некоторых случаях нематода заражает растения, и нематоцидная композиция наносится на почву или на растения. В некоторых случаях нематоцидная композиция наносится на почву перед посадкой. В некоторых случаях нематоцидная композиция наносится на почву после посадки. В некоторых случаях нематоцидная композиция наносится на почву с использованием капельной системы. В некоторых случаях нематоцидная композиция наносится в почву с использованием системы пропитывания раствором (насыщения раствором). В некоторых случаях нематоцидная композиция наносится на корни растений или листву растений (например, листья, стебли). В некоторых случаях нематоцидная композиция запахивается в почву или вносится в борозду. В некоторых случаях нематоцидная композиция наносится на семена. В некоторых случаях нематодный паразит заражает позвоночное. В некоторых случаях немато-цидная композиция вводится позвоночному, которое не является человеком. В некоторых случаях нема
тоцидная композиция вводится человеку. В некоторых случаях нематоцидная композиция изготавливается в форме препарата для смачивания для введения животному, которое не является человеком. В некоторых случаях нематоцидная композиция изготавливается в форме лекарственного препарата для пе-рорального введения. В некоторых случаях нематоцидная композиция изготавливается в форме лекарственного препарата для введения инъекцией. В некоторых случаях нематоцидная композиция изготавливается в форме препарата для местного применения, такого как смачивания, или для применения в накладках (бирках) или ошейниках.
Настоящее изобретение относится к способу лечения расстройства (например, инфекции), вызванного паразитарной нематодой (например, М. incognita, H. glycines, В. longicaudatus, H. contortus, A. suum, В. malayi), у субъекта, например, в организме-хозяине растения, животного или человека. Способ включает введение субъекту эффективного количества соединения формулы VI, VIa, VIb, VII, VIIa или VIIb. Соединение может доставляться несколькими способами, включая предпосадочный, послепосадочный, или в виде пищевой добавки, пропиткой, внешнего нанесения, в виде пилюли или инъекцией.
В соответствии с еще одним аспектом предоставлены способы ингибирования паразитарной нематоды (например, М. incognita, H. glycines, В. longicaudatus, H. contortus, A. suum, В. malayi). Такие способы могут включать контактирование нематоды (на любой стадии развития) с соединением, например,
соединением формулы IV, IVa, IVb, V, Va, Vb, VI, VIa, VIb, VII, VIIa или VIIb.
В соответствии с еще одним аспектом предоставлены способы снижения жизнеспособности или плодовитости, замедления роста или развития или ингибирования инвазионной способности нематоды с использованием соединения, например, соединения формулы VI, VIa, VIb, VII, VIIa или VIIb. Такие способы могут включать контактирование нематоды с конкретным соединением, например, соединением формулы VI, VIa, VIb, VII, VIIa или VIIb; (с) снижения жизнеспособности или инвазионной способности нематодного паразита.
Изобретение также относится к способу снижения жизнеспособности, роста или плодовитости паразитарной нематоды, указанный способ включает воздействие на нематоду соединением формулы VI, VIa, VIb, VII, VIIa или VIIb, а также способ защиты растения от нематодной инфекции, указанный способ включает нанесение на растение, почву или на семена растения соединения формулы VI, VIa, VIb,
VII, VIIa или VIIb.
Изобретение также относится к способу защиты позвоночного (например, птицы или млекопитающего) от нематодной инфекции, указанный способ включает введение позвоночному соединения формулы VI, VIa, VIb, VII, VIIa или VIIb. Птица может представлять собой домашнюю птицу (например, цыпленка, индейку, утку или гуся). Млекопитающее может представлять собой одомашненное животное, например, домашнее животное (например, кошку, собаку, коня или кролика) или домашний скот (например, корову, овцу, свинью, козу, альпаку или ламу), или может представлять собой человека.
Изобретение также относится к способам контроля нематодных паразитов введением соединения, описанного в изобретении. Способы включают введения применения на позвоночных, растениях, семенах или почве нематоцидной композиции, включающей:
(а) эффективное количество соединения или смеси соединения любой из формул, описанных в настоящем изобретении, например, одной из следующих формул:
VIb
где
R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, F, Cl, Br, CF3;
R2 и R4 выбраны из водорода;
R3 выбран из водорода, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3;
R8 выбран из водорода;
R6 и R9 выбраны из водорода;
E представляет собой O или S.
В некоторых случаях R1 и R5 оба не являются H.
Композиции также могут включать водное поверхностно-активное вещество. Примеры поверхностно-активных веществ, которые могут использоваться, включают Span 20, Span 40, Span 80, Span 85, Tween 20, Tween 40, Tween 80, Tween 85, Triton X 100, Makon 10, Igepal CO 630, Brij 35, Brij 97, Tergitol TMN 6, Dowfax 3B2, Physan и Toximul ТА 15. В некоторых случаях нематоцидная композиция дополнительно включает добавку, повышающую проницаемость (например, циклодекстрин). В некоторых случаях нематоцидная композиция включает сорастворитель. Примеры сорастворителей, которые могут использоваться, включают этиллактат, смеси метилсойат/этиллактат (например, Steposol), используемые в качестве сорастворителей, изопропанол, ацетон, 1,2-пропандиол, н-алкилпирролидоны (например, серия препаратов Agsolex), масло нафтеновой основы (например, aromatic 200) или минеральное масло (например, керосин). В некоторый случаях нематоцидная композиция дополнительно включает другой пестицид (например, нематоцид, инсектицид или фунгицид), такой как авермектин (например, ивермектин), милбемицин, имидаклоприд, алдикарб, оксамил, фенамифос, фостиазат, метам-натрий, этридиазол, пен-тахлорнитробензол (ПХНБ), флутоланил, металаксил, мефоноксам и фосетил-алюминий. Фунгициды, которые могут применяться, включают, но без ограничения, силтиофам, флудиоксонил, миклобутанил, азоксистробин, хлороталонил, пропиконазол, тебуконазол и пираклостробин. Композиция также может включать гербициды (например, трифлоксисульфурон, глифосат, галосульфурон) и другие химические соединения для контроля болезней растений (например, хитозан).
Отличительным признаком настоящего изобретения является способ контроля нежелательных нематод, включающий введение в организм позвоночных, в растения, семена или почву нематоцидной композиции, включающей эффективное количество соединения, выбранного из группы, включающей 3-(4-хлорфенил)-5-(тиофен-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 5-(4-хлор-2-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-бром-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-хлор-2-фторфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол, 3-(4-бром-2-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол.
В некоторых вариантах осуществления указанного способа композиция дополнительно включает водное поверхностно-активное вещество. Примеры поверхностно-активных веществ, которые могут использоваться, включают Span 20, Span 40, Span 80, Span 85, Tween 20, Tween 40, Tween 80, Tween 85, Triton X 100, Makon 10, Igepal CO 630, Brij 35, Brij 97, Tergitol TMN 6, Dowfax 3B2, Physan и Toximul ТА 15. В некоторых случаях нематоцидная композиция дополнительно включает добавку, повышающую проницаемость (например, циклодекстрин). В некоторых случая нематоцидная композиция включает сорастворитель. Примеры сорастворителей, которые могут использоваться, включают этиллактат, смеси метилсойат/этиллактат (например, Steposol), используемые в качестве сорастворителей, изопропанол, ацетон, 1,2-пропандиол, н-алкилпирролидоны (например, серия препаратов Agsolex), масло нафтеновой основы (например, aromatic 200) или минеральное масло (например, керосин). В некоторый случаях не-матоцидная композиция дополнительно включает другой пестицид (например, нематоцид, инсектицид или фунгицид), такой как авермектин (например, ивермектин), милбемицин, имидаклоприд, алдикарб, оксамил, фенамифос, фостиазат, метам-натрий, этридиазол, пентахлорнитробензол (ПХНБ), флутоланил, металаксил, мефоноксам и фосетил-алюминий. Фунгициды, которые могут применяться, включают, но без ограничения, силтиофам, флудиоксонил, миклобутанил, азоксистробин, хлорсталонил, пропиконазол, тебуконазол и пираклостробин. Композиция также может включать гербициды (например, трифлокси-сульфурон, глифосат, галосульфурон) и другие химические соединения для контроля болезней (например, хитозан); нематода заражает растения, и нематоцидная композиция наносится на почву или на растения; нематоцидная композиция наносится на почву перед посадкой; нематоцидная композиция наносится на почву после посадки; нематоцидная композиция наносится на почву с использованием капельной системы; нематоцидная композиция наносится в почву с использованием системы пропитывания раствором (насыщения раствором); нематоцидная композиция наносится на корни растений; пестицид-ная композиция наносится на семена; нематоцидная композиция наносится на листву растений; нематода инфицирует позвоночное; нематоцидная композиция вводится птице или млекопитающему, которое не является человеком; нематоцидная композиция вводится человеку; нематоцидная композиция изготавливается в форме препарата для капельного введения животному, которое не является человеком; немато-цидная композиция изготавливается в форме лекарственного препарата для перорального введения; не-матоцидная композиция изготавливается в форме лекарственного препарата, который может вводиться инъекцией.
Способы, описанные в настоящем изобретении, особенно ценны для контроля нематод, воздействующих на корни целевых растений сельскохозяйственных культур, декоративных культур и дерновых злаков. Целевыми сельскохозяйственными культурами могут быть, например, соя, хлопчатник, кукуруза, табак, пшеница, земляника, томаты, бананы, сахарный тростник, сахарная свекла, картофель или цитрус.
Настоящее изобретение относится также к нематоцидному корму для позвоночного, которое не является человеком, включающему:
(a) корм и
(b) нематоцидную композицию, включая нематоцидную композицию, описанную в настоящем изобретении.
В некоторых случаях корм выбран из группы, включающей сою, пшеницу, кукурузу, сорго, просо, люцерну, клевер и рожь.
Изобретение также относится к кормам, которые дополнены одним или несколькими соединениями, описанными в настоящем изобретении.
Нематоцидный корм для позвоночного, которое не является человеком, может включать:
(a) корм для животного;
(b) эффективное количество нематоцидного соединения или смесей соединений любой из формул, представленных в описании, например одной из формул, представленных ниже
(a)
(a)
(a)
где
R1 и R5 независимо выбраны из водорода, CH3, F, Cl, Br, CF3;
R2 и R4 выбраны из водорода;
R3 выбран из водорода, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3;
R8 выбран из водорода;
R6 и R9 выбраны из водорода;
E представляет собой O или S.
В некоторых случаях оба R1 и R5 не являются H.
Корм может быть выбран из группы, включающей сою, пшеницу, кукурузу, сорго, просо, люцерну, клевер и рожь.
Термин средство с "антигельминтной или противоглистной активностью", когда используется в настоящем описании, относится к средству, которое при тестировании обладает измеримой способностью поражать нематоды, вызывает снижение фертильности или стерильности нематоды таким образом, что приводит к менее жизнеспособному потомству или к отсутствию потомства, ставит под угрозу способность нематоды заражать организм-хозяин или репродуцировать в организме-хозяине или препятствует росту или развитию нематоды. Средство может также проявлять репеллентные свойства в отношении нематод. При испытании средство объединяется с нематодами, например, в лунке микротитровального планшета, в жидкой или твердой среде или в почве, содержащей указанное средство. На указанную среду помещаются нематоды определенных стадий развития. Количественно определяют время выживания, жизнеспособность потоства и/или перемещение нематод. Средство с "антигельминтной или противоглистной активностью" может, например, снижать время выживания взрослых нематод относительно необработанных взрослых особей аналогичной стадии развития, например примерно на 20, 40, 60, 80% или более. Альтернативно, средство с "антигельминтной или противоглистной активностью" может вызывать у нематод прекращение воспроизводства, регенерации и/или продуцирования жизнеспособного потомства, например примерно на 20, 40, 60, 80% или более. Эффект может проявляться сразу или на последующих поколениях.
Термин "галоген" относится к любому радикалу фтора, хлора, брома или йода.
Термин "алкил", когда используется в настоящем описании сам по себе или как часть другой группы, относится к радикалам с прямой и разветвленной цепью, содержащим до десяти атомов углерода. Типичные C1-10 группы включают метильную, этильную, пропильную, изопропильную, бутильную, втор-бутильную, трет-бутильную, 3-пентильную, гексильную и октильную группы, которые могут быть необязательно замещенными.
Термин "алкоксигруппы" относится к группам, которые содержат атом кислорода, замещенный одной из C1-10 алкильных групп, указанных выше, которые могут быть необязательно замещенными.
Примеры галогеналкильных групп включают C1-10 алкильные группы, замещенные одним или несколькими заместителями, выбранными из атомов фтора, хлора, брома или йода, например фторметиль-ную, дифторметильную, трифторметильную, пентафторэтильную, 1,1-дифторэтильную, хлорметильную, хлорфторметильную и трихлорметильную группы.
Добавка, повышающая проницаемость, обычно представляет собой добавку, которая способствует действию активных соединений согласно изобретению.
Сорастворитель (т.е. скрытый растворитель или непрямой растворитель) представляет собой добавку, которая становится эффективным растворителем в присутствии активного растворителя и может улучшить свойства первичного (активного) растворителя.
Композиция может быть получена в концентрированной форме, которая включает небольшое количество воды или не содержит воды. Композиция может разбавляться водой или некоторым другим растворителем перед применением для обработки растений, семян, почвы или позвоночных.
Подробное описание одного или нескольких вариантов осуществления изобретения представлено в прилагающихся чертежах и описании, представленном ниже. Другие отличительные признаки, предметы и преимущества изобретения будут понятны из описания и рисунков, а также из формулы изобретения.
Описания чертежей
Фиг. 1: Галлообразование на корнях растений без химической обработки (осеннее испытание).
Фиг. 2: Типичное галлообразование у растений, обработанных коммерческим нематоцидом оксами-лом в дозе 2 кг/га (осеннее испытание).
Фиг. 3: Галлообразование, наблюдаемое у растений без химической обработки (летнее испытание).
Фиг. 4: Типичное галлообразование, наблюдаемое у растений, обработанных соединением 5938 в дозе 4 кг/га (летнее испытание).
Подробное описание
Далее описаны соединения, некоторые из которых являются аналогами оксазола, оксадиазола и тиадиазола и обладают широким спектром нематоцидной активностью.
Соединения, обладающие нематоцидной активностью, можно наносить на растения экзогенно, например опрыскиванием. Данные соединения также могут применяться в качестве покрытия семян. Соединения могут наноситься на растения или вноситься в окружающую среду растений, которые нуждаются в контроле нематод, или вводиться животным или в корм животных, которые нуждаются в контроле паразитарных нематод. Композиции могут применяться, например, способом пропитывания или капельным способом. При капельном применении соединения могут наноситься непосредственно на основания растений или на почву, находящуюся в непосредственной близости от растений. Соединение может применяться через имеющие место системы капельного орошения. Эта методика особенно применима для хлопчатника, земляники, томатов, картофеля, овощей и декоративных растений. Альтернативно, может использоваться применение системы пропитки (насыщения раствором нематоцида), когда достаточное количество нематоцидной композиции применяется таким образом, что она дренирует в корневую область растений. Методика дренирования может использоваться для различных культур и дерновых трав. Методика дренирования может использоваться для обработки животных. Предпочтительно нематоцидные композиции вводятся перорально для способствования активности в отношении внутренних паразитарных нематод. Нематоцидные композиции в некоторых случаях могут также вводиться в организм животного-хозяина инъекцией или способами местного применения.
Концентрация нематоцидной композиции должна быть достаточной для контроля паразита без значительной фитотоксичности для целевого растения или избыточной токсичности для животного-хозяина. Соединения, описанные в настоящем изобретении, обладают хорошим "терапевтическим окном".
Заявителями было неожиданно установлено, что некоторые аналоги оксазола, оксадиазола и тиа-диазола (например, 3-(2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол) обладают нематоцидной эффективностью, сравнимой с активностью стандартных фосфорорганических и карбаматных нематоцидных препаратов, и проявляют превосходную селективность в отношении нематод растений и животных. Таким образом, данные аналоги предоставят соединения, применимые для контроля паразитарных нематод.
Нематоцидные средства, описанные в настоящем изобретении, могут применяться в сочетании с другими пестицидными средствами. Второй пестицид может, например, применяться одновременно или последовательно. Такие пестициды могут включать, например, авермектины, используемые для животных.
Упомянутые выше нематоцидные композиции могут применяться для лечения болезней или инфекций, вызванных, например (но без ограничения), нематодами следующих родов
Anguina, Ditylenchus,
Tylenchorhynchus, Pratylenchus, Radopholus, Hirschmanniella,
Nacobbus, Hoplolaimus, Scutellonema, Rotylenchus,
Helicotylenchus, Rotylenchulus, Belonolaimus, Heterodera,
другие гетеродериды, Meloidogyne, Criconemoides,
Hemicycliophora, Paratylenchus, Tylenchulus, Aphelenchoides,
Bursaphelenchus, Rhadinaphelenchus, Longidorus, Xiphinema,
Trichodorus и Paratrichodorus, Dirofiliaria, Onchocerca,
Brugia, Acanthocheilonema, Aelurostrongylus, Anchlostoma,
Angiostrongylus, Ascaris, Bunostomum, Capillaria, Chabertia,
Cooperia, Crenosoma, Dictyocaulus, Dioctophyme, Dipetalonema,
Dracunculus, Enterobius, Filaroides, Haemonchus,
Lagochilascaris, Loa, Manseonella, Muellerius, Necator,
Nematodirus, Oesophagostomum, Ostertagia, Parafilaria ,
Parascaris, Physaloptera, Protostrongylus, Setaria, Spirocerca,
Stephanogilaria, Strongyloides, Strongylus, Thelazia,
Toxascaris, Toxocara, Trichinella, Trichostrongylus, Trichuris, Uncinaria и Wuchereria. Особенно предпочтительными являются нематоды включающие Dirofilaria, Onchocerca, Brugia, Acanthocheilonema, Dipetalonema, Loa, Mansonella, Parafilaria, Setaria, Stephanofilaria и Wucheria, Pratylenchus, Heterodera, Meloidogyne, Paratylehus. Еще более предпочтительными видами нематод являются Ancylostoma caninum, Haemonchus contortus, Trjchinella spiralis, Trichurs muris, Dirofilaria immitis, Dirofilaria tenuis, Dirofilaria repens, Dirofilari ursi,
Ascaris suum, Toxocara canis, Toxocara cati, Strongyloides ratti, Parastrongyloides trichosuri, Heterodera glycines, Globodera pallida, Meloidogyne javanica, Meloidogyne incognita и Meloidogyne arenaria, Radopholus similis, Longidorus elongatus, Meloidogyne hapla и Pratylenchus penetrans. Таким образом, представленные далее примеры должны рассматриваться только как иллюстративные, а не ограничивающие область изобретения. Все публикации, приведенные в настоящем описании, введены в описании во всей полноте в виде ссылок.
Примеры
Пример 1. Исследование нематоцидной активности нескольких соединений в отношении М. incognita при испытании в теплице небольшого размера. Общее описание:
Испытываемое соединение растворяют в ацетоновом растворе и добавляют в воду. Пророщенные семена огурца помещают в пробирку с сухим песком и сразу после этого добавляют раствор химического соединения в воде. Спустя 24 ч в пробирку добавляют яйца Meloidogyne incognita и через 10-12 дней обследуют корни растения для количественной оценки нематодного галообразования.
Методика:
Семена огурца проращивают в течение 3 дней во влажных бумажных полотенцах. Подходящая рассада должна иметь ростки длиной от 3 до 4 см и начинающие формироваться боковые корни. Исходные растворы химических соединений приготавливают в смеси ацетона и Triton X100 (412 мг в 500 мл), конечная концентрация соединения составляет 5 мг/мл. После этого исходный раствор химического соединения вносят в смесь 10 мл деионизированной воды и 10 мл Triton X100 и тщательно смешивают. Испытание каждого соединения проводят трижды. В каждую пробирку добавляют десять мл сухого песка. На данном этапе визуально определяют растворимость химического соединения и записывают либо в м.д. (осадки в виде крупных частиц), либо определяют как мутность (осадки в виде мелкодисперсных частиц).
Рассаду высаживают, переворачивая пробирку и располагая проросток таким образом, чтобы семядоли находились точно над песком и затем снова переворачивают, чтобы закрыть первичные корешки песком. В каждую пробирку добавляют 3,3 мл смеси вода/химическое соединение и пробирки помещают на штативы под источники флуорисцентного излучения. Через два дня после посадки пробирки иноку- 11
лируют 500 яцами червя М. Incognita, добавляя их в каждую пробирку в 50 мкл деионизированной или ключевой воды. Затем пробирки выдерживают под источниками флуорисцентного света при комнатной температуре и смачивают 1 мл деионизированной воды по необходимости, обычно дважды в течение испытания. Сбор растений огурца проводят через 10-12 дней после инокулирования, смывая песок с корней. Определение размера корневых галлов и визуальное определение фитотоксичности проводят с использованием следующих шкал: Шкала количественной оценки размера галлов (галл: % массы корневых галлов): 0 = 0-5%; 1 = 6-20%; 2 = 21-50% и 3 = 51-100%. Затем вычисляют среднее значение размера корневых галлов трех опытов: зеленая - 0,33 (галлы отсутствуют); желтая = 0,67-1,33 (умеренное галлообразование); оранжевая = 1,67-2,33 (среднее галлообразование); красная = 2,67-3,00 (значительное галлообразование). Устанавливают также шкалу визуально выявляемой фитотоксичности (vis. tox.; визуальное снижение массы корней по сравнению с контролем): rs1 = умеренное замедление развития корней; rs2 = среднее замедление развития корней; rs3 = значительное замедление развития корней.
Некоторые фенил-2-фурантиадиазолы обладают нематоцидной эффективностью, эквивалентной эффективности коммерческого карбаматного нематоцида оксамила и эффективности коммерческого фосфорорганического нематоцида фенамифоса. Оксамил и фенамифос являются высокотоксичными соединениями, классифицированными как соединения с токсичностью Класса I в соответствии с классификацией Агентства по защите окружающей среды США. Заслуживает внимания и тот факт, что некоторые производные, содержащие множество заместителей, обладают, главным образом, нематоцидной активностью.
Пример 2. Общие методики тепличных испытаний. Посадка и выращивание сои.
Семена сои высаживают в 100% песок в пластиковые горшки площадью два квадратный дюйма (0,0013 м2). Химическую обработку выполняют в начале формирования первого трехлистника, то есть примерно через 10-12 дней после посадки. По меньшей мере, через четыре часа после применения химической обработки вносят яйца соевой нематоды (soybean cyst nematode - SCN) и через 28 дней после инокуляции опытные растения собирают.
Посадка и выращивание огурцов.
Семена огурца высаживают в смесь почвы и песка в пластиковые горшки площадью два квадратных дюйма (0,0013 м2). Когда семядоли полностью раскрываются и как только начинает формироваться первый лист, обычно через 7 дней после посадки, на 7 день проводят химическую обработку. Спустя неделю относительно 0 дня проводят химическую обработку. Обработку каждого растения проводят отдельно. В это время растения находятся на стадии развития 1-2 листьев. По меньшей мере через 4 ч после химической обработки горшки инокулируют яйцами яванской галловой нематоды (root knot nematode - RKN). Оценку галлообразо-вания растений проводят через 14 дней после инокуляции яйцами нематоды.
Химический препарат и применение
Доза в один миллиграмм химического соединения на четыре горшка равна дозе в один килограмм химического соединения на гектар. В стандартном опыте каждое испытание проводят четыре раза. Для доз свыше 2 мг/га заданное количество химического соединения взвешивают в пузырьке объемом 30 мл (например: доза 8 кг/га = 8 мг химического соединения в пузырьке объемом 30 мл). Химическое соединение растворяют в 2 мл подходящего растворителя, обычно ацетона. Для доз менее 2 кг/га 2 миллиграмма химического соединения взвешивают в пузырьке и растворяют в 2 мл растворителя. Затем подходящее количество химического концентрата с помощью пипетки переносят в отдельный пузырек объемом 30 мл и добавляют подходящее количество растворителя для получения объема 2 мл (например, 0,5
кг/га = 0,5 мл концентрата + 1,5 мл растворителя). Затем объем каждого концентрата доводят до 20 миллилитров с использованием 0,05% раствора поверхностно-активного соединения Triton X 100.
Применение химической обработки нематод Горшки, подлежащие обработке, увлажняют, но не насыщают водой. В каждый из четырех горшков на поверхность грунта пипеткой переносят пять миллилитров раствора подходящего химического соединения, избегая контакта раствора с основанием растения. Сразу после внесения химического соединения, используя сопло мелкокапельного распыления, поверхность грунта в горшке увлажняют достаточно для насыщенного смачивания поверхности горшка химическим соединением. Обработку химическим соединением проводят утром.
Яйца нематоды, SCN или RKN, добавляют в дистиллированную воду для получения концентрации 1000 яиц нематоды на литр воды. По меньшей мере через 4 ч после химической обработки яйца вносят в обработанные горшки, а также в необработанные горшки с растениями. Для этого на поверхности грунта горшка делают воронку глубиной примерно 1 см. В полученную воронку с помощью пипетки вносят один миллилитр суспензии яиц нематоды. Сразу после этого воронку осторожно закапывают. Полив опытных растений после этого ограничивают только водой, которая необходима для предотвращения увядания растения в течение 24 ч. После 24-часового ограничения полива в продолжение опыта проводят нормальное подпочвенное орошение.
Таблица 2А. Тепличные испытания на растениях сои в отношении SCN с использованием
песчаной почвы
Название
Аналог
кг*
кг*
0.5 кг*
0.25 кг*
0.1 кг*
5938
89d
60d
5939
88d
64d
Фенамифос
98а 98ь 94е
26d
*Доза в кг/га. Данные представлены в процентах контроля (т.е. снижения галлообразо-вания) по сравнению с необработанными растениями. Данные, помеченные одинаковыми буквами, получены в одном и том же испытании.
Некоторые тиадиазолы являются высокоэффективными нематоцидами в биоактивной почве с эф-фективностями, сравнимыми с эффективностью фенамифоса, и резистентны к биотическому и абиотическому разложению в пределах по меньшей мере одной недели.
Оксазолы, оксадиазолы и тиадиазолы согласно настоящему изобретению обладают высокой нема-тоцидной эффективностью в отношении соевой нематоды, сравнимой с эффективностью фенамифоса, демонстрируя, что соединения данного химического класса обладают широким спектром нематоцидной активности.
Пример 4. Методики определения биологической активности в отношении С. elegans.
Нематоцидную активность различных соединений в отношении С. elegans определяют с использованием контактных испытаний в лунках. Тесты проводят как описано ниже. Испытываемые соединения солюбилизируют в ДМСО с концентрацией 10 мг/мл для получения исходных растворов в Triton 100X. Растворы последовательного разбавления получают разбавлением исходного раствора ДМСО. Для каждой лунки опыта: в лунку микропланшета вносят 4 мкл раствора соответствующего разбавления.
400 мкл аликвоту исходного бактериального раствора (в М9 буфере с ампициллином и нистатином) добавляют в каждую лунку экспериментального микропланшета. В лунки добавляют нематоды, экспериментальный микропланшет помещают на роторный шейкер и выдерживают при 20°C. Обследование и подсчет нематод проводят через 4, 24, 48 и 72 ч.
В данном опыте используют L1 и L4 нематоды. L1 нематоды получают размещением яиц на планшете без бактериального питающего слоя. Яйца выдерживают в условиях выведения и останавливают их развитие на L1 стадии. Полученную популяцию L1 стадии развития используют в экспериментах в качестве исходной биомассы. Для получения исходной биомассы нематод L4 стадии развития небольшое количество нематод отбирают из планшета с переросшей и истощенной биомассой и помещают на планшет с бактериальным питающим слоем. В этом эксперименте в каждую лунку добавляют 25 мкл аликвоту нематод.
Таблица 4. Нематоцидная активность аналогов оксадиазола и оксазола в отношении С. Elegans в
*EC50 соединений приведены в миллионных долях после воздействия в течение одного дня, двух дней или трех дней на нематоды L1 или L4 стадий развития. Данные для L4 в круглых скобках относятся к воздействию на второе поколение личинок. ND: испытание не проводилось.
Свободноживущая нематода С. elegans значительно отличается генетически от тиленхоидных (ty-lenchid) паразитов, таких как соевая нематода и корневая галловая нематода. Поэтому нематоцидная активность этих оксазолов, оксадиазолов и тиадиазолов в отношении L1 личинок и L4 личинок С. elegans дополнительно подтверждает, что соединения данного химического класса проявляют активность широкого спектра действия в отношении нематод различных видов и стадий развития.
Пример 5. Определение острой токсичности в опыте на мышах.
Определение острой токсичности при пероральном введении проводят на мышах в соответствии с методом P203.UDP, согласно указаниям Eurofins/Product Safety Laboratories (Dayton, New Jersey). Получают группу CD-I/Swiss белых мышей и размещают в подвешенных клетках с твердой основой. Мышей кормят обычным кормом для грызунов и снабжают отфильтрованной водопроводной водой "по желанию". После акклиматизации в лабораторных условиях группу животных выдерживают без корма, удаляя его из клеток. После периода голодания отбирают трех самок, исходя из их жизнеспособности и начальной массы тела. Индивидуальные дозы соединений рассчитывают на основе массы тела.
Испытываемое соединение приготавливают в виде 1% (50 мг/кг) или 5% (500 мг/кг) (мас./мас.) смеси в 0,5% (мас./мас.) растворе карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ) в дистиллированной воде. Для получения гомогенной смеси используют гомогенизатор ткани. Каждой из трех здоровых мышей вводят дозу 50 или 500 мг/кг пероральным интубированием, используя иглу для зондового питания с шариком на конце, присоединенную к шприцу. После введения животных возвращают в клетки и сразу после дозировки корм заменяют.
Животных обследуют для определения смертности, явных признаков токсичности и изменений в поведении в течение первых нескольких часов после дозировки и, по меньшей мере, раз в сутки в течение до 14 дней. Массы тела записывают до начала эксперимента и на 7 и 14 дни или сразу после гибели
животного.
Получают результаты для следующих соединений:
В дозе 500 мг/кг все животные выживают, увеличивают массу тела и выглядят активными и здоровыми. Явных признаков токсичности, неблагоприятных фармакологических эффектов или абнормально-го поведения не наблюдается.
Полученные результаты показывают, что пероральная токсичность соединения 5960 составляет более 500 мг/кг. Для сравнения, пероральные LD50 для альдикарба, оксамила и фенамифоса в опыте на мышах равны 300 мкг/кг, 2,3 мг/кг и 22,7 мг/кг соответственно.
Следовательно, хотя производные тиадиазола согласно настоящему изобретению обладают широким спектром нематоцидной активности, эти соединения, тем не менее, показали значительно лучшую безопасность по сравнению с коммерческими стандартными фосфорорганическими и карбаматными соединениями, а также по сравнению с абамектином (пероральная LD50 для мыши 13,6 мг/кг), который является активным ингредиентом препарата для нематоцидной обработки семян Avicta(tm).
Пример 6. Методики расширенных тепличных испытаний.
Тест предпосевной обработки (pre-plant incorporated rest -PPI).
PPI тест изучает влияние предпосевного введения соединений в почву и сохранение качества в течение более длительного периода для моделирования полевых методов введения нематоцидов в борозду. При PPI испытании соединения применяют в почве большего объема и с сушкой, которая может приводить к более тяжелому связыванию почвы. Соединения также выдерживают в почве в течение более длинных периодов времени, что может приводить к более интенсивному биотическому и абиотическому разложению, дополнительно снижающему активность.
Химически обработанную почву (смесь почвы и песка) во все дни обработки (например, 7 день, 14 день, 21 день) вносят в соответствующие горшки. В этот же 7 день обработки в горшки засевают семена. Неделей позже вносят яйца и через 14 дней после введения яиц оценивают результаты. 14 день обработки являются 7 днем после первой посадки. 14 день после посадки и 7 день после инокуляции являются одним и тем же днем. Одной неделей позже в 14 день обработки почву инокулируют яйцами. Результаты оценивают через 14 дней после инокуляции. 21 день обработки являются 14 днем после первой посадки. 14 день инокуляции и 21 день посадки являются одним и тем же днем.
Одной неделей позже в 21 день растения инокулируют яйцами. 7 день обработки является днем сбора растений, как и 21 день инокуляции. На четырнадцатые дни после инокуляции собирают 21 дневные растения.
жуляцш
Исходный раствор для каждого соединения приготавливают, используя 4 мг соединения в 4 мл ацетона. Почва представляет собой смесь, полученная внесением 80 мл полевой почвы и 320 мл песка в пластиковый пакет и тщательным перемешиванием. Препарат для обработки получают добавлением 2,13 мл (доза 8 кг/га), 1,06 мл (доза 4 кг/га) или 0,53 мл (доза 2 кг/га) в пузырек и доведением общего объема до 10 мл добавлением 0,05% Triton Х100. Затем обрабатывают почву добавлением всего объема 10 мл к 400 мг смеси в пакете. Обработанную почву тщательно перемешивают в герметично закрытом пакете для равномерного распределения соединения. Приблизительно 95 мл используют для заполнения каждого горшка площадью два квадратных дюйма (0,013 м2) доверха, почву немного уплотняют и разравнивают. Для каждого соединения и для контрольных обработок подготавливают таким образом 4 горшка. Все горшки увлажняют до влажного состояния, таким образом, чтобы вода не вытекала через отверстие в дне горшка.
PPI испытание моделирует введение соединений в дозах 8, 4 и 2 кг/га на глубину 15 см в полевых условиях и эквивалентно дозам 2, 1 и 0,5 кг/га при применении дренирования в стандартном тепличном испытании на растениях огурца с применением горшка площадью 2 квадратных дюйма (0,0013 м2).
Данные, обозначенные одинаковыми буквами, получены в одном и том же испытании.
Пример 8. Летние полевые испытания соединений на нематоцидную активность при их предпосадочном введении (PPI) соединений контроля Meloidogyne incognita на растениях тыквы.
На опытных делянках выкапывают лунки диаметром 33 см и глубиной 41 см в глинистой почве и заполняют смесью 80% песка и 20% пылевато-глинистой почвы. Техническое соединение для каждой обработки растворяют в 50 мл ацетона, содержащих 250 мкл поверхностно-активного препарата Triton X-100. Полученный раствор добавляют к 450 мл воды и выливают в смесь песок/почва объемом 95 л, помещенной в ротационный барабанный смеситель. При продолжающемся вращении барабанного смесителя к смеси добавляют 66 г рубленных корневых галлов томатов и тщательно смешивают для равномерного распределения их в смеси. Обработанной почвы достаточно для наполнения верхних 15 см каждой из 6 делянок, которые являются повторными для каждой обработки, моделируя таким образом PPI обработку. После этого делянки слегка увлажняют и в делянку вводят на глубину 5 см в 5 точек смеси яиц и личинок М. incognita (100k яиц/личинок в 10 мл на делянку). Через 4 дня после обработки почвы сажают растения тыквы (cv. Liberator III) "возраста" трех недель с полностью сформированным 1 настоящим листом, одно на делянку.
0-3 энерг. 16 DAP
0-3 энерг. 21 DAP
Масса корней
(г) 31DAP
Масса надземных
частей Фунт(кг)
3 ЮАР
Общая масса плода фунт(кг)
Галлообра -зования 31DAP
Питающий корень
1 3=средн.) 31 DAP
5938 4 кг
2,5
2,7
24, 1
1,60 (0,726)
1, 22 (0,553)
2,7
5960 4 кг
3,0
3,0
32,6
1,58 (0,717
1,61 (0,730)
3,3
Фостиазат 2 кг
3,0
3,0
26,4
2,01 (0,912)
1,25 (0,567)
2,3
Оксамил А кг
2, 7
2,5
37,0
1, 16 (0,526)
1,09 (0,494)
3,0
Контроль
1,5
1,2
23,4
0,30 (0,136)
0,38 (0,172)
2,7
Инокулят из измельченных галлов, объединенных с яйцами/молодыми особями, обеспечивает высокую численность нематод и быстрое развитие симптомов. PPI применение DC5938 обеспечивает отличный контроль в дозе 4 кг/га. DC5960 также обеспечивает значительный контроль в дозе 4 кг/га.
Пример 9. Тест обработки семян для контроля яванской галловой нематоды на растениях огурца и соевой нематоды на растениях сои.
Для получения заданной концентрации химическое соединение растворяют в 500 мкл ацетона и добавляют один грамм семян огурца (RKN тест) или семян сои (SCN тест) (например, 20 мг активного ингредиента в 500 мкл ацетона плюс 1 г семян). Растворы, содержащие семена, тщательно перемешивают до тех пор, пока все семена не будут покрыты раствором химического соединения. После этого ацетону дают возможность испариться в процессе сушки семян на воздухе. Семена сажают в горшки площадью 2 кв. дюйма (0,0013 м2), содержащие песчаную почву, и через три для после посадки семян горшки инокулируют Veloidogyne incognita (RKN) (1000 яиц/горшок) или Heterodera glycines (SCN) (1000 яиц/горшок). Галлообразование на корнях растений оценивают через 14 дней после инокуляции яйцами для RKN или через 28 дней после инокуляции яйцами для SCN.
*Данные показывают процент снижения образования пузырьков относительно контрольной обработки. Дозы представлены в мг а.и./г семян. Данные, помеченные одинаковыми буквами, получены в
одном испытании.
Аналоги оксадиазола, тиадиазола и оксазола представляют собой нематоциды широкого спектра действия, проявляющие активность при обработке семян при применении способом опрыскивания, а также при почвенном применении до посадки растений.
Пример 10. Соединения заявленных структур не индуцируют маркер апоптоза в клетках млекопитающих и не уничтожают нематоды вызовом апоптоза.
Предыдущие исследования показали, что индуцирование проапоптической каспас-3-протеазы через расщепление специфических флуорогенных субстратов является надежным методом количественного измерения индукции апоптоза, и некоторые хлор-и бром-замещенные тиофен- и фураноксадиазолы были идентифицированы после высокопроизводительного скрининга каспас-3 индуцирования в клетках млекопитающих (Zhang H.Z., Kasibhatla S., Kuemmerle J.; Kemnitzer W., Ollis-Mason. K., Qiu L, Crogan-Grundy do, Tseng В., Drewe J., Cai S.X. Discovery и structure-activity relationship of 3-aryl-5-aryl-1,2,4-oxadiazoles as a new series of apoptosis inducers и potential anticancer agents. J. Med. Chem. 2005 48(16): 5215-23).
Для оценки того, способны ли соединения согласно изобретению указанных классов индуцировать апоптоз, количественно определяют каспас-3-активность после выдерживания соединения в гепатоме крысы, производимой H4IIE клетками, с использованием каспас-субстрата (DEVD, Asp-Glu-Val-Asp), меченного флуоресцентной молекулой 7-амино-4-метилкумарина (АМС). Каспас-3 расщепляет тетра-пептид между D и АМС, высвобождая таким образом флуорогенный зеленый АМС. После выдерживания экспериментального образца с клетками в 96-луночных микропланшетах среду аспирируют из планшетов и в каждую лунку добавляют PBS. Микропланшеты хранят при -80°C для лизирования клеток и до следующего анализа. В день анализа микропланшеты удаляют из морозильной камеры и оттаивают. В каждую ячейку добавляют каспас-буфер с флуоресцентным субстратом и микропланшеты инкубируют при комнатной температуре в течение часа. Количественное измерение высвобожденного АМС проводят с помощью спектрофлюориметра при длине волны возбуждения 360 нм и длине волны излучения 460 нм. Полученные величины представляют в относительных единицах флуоресценции (relative fluorescent unit - RFU). В отличие от паклитаксела, камптотецина и стауроспорина, которые, как сообщалось, способны индуцировать апоптоз в различных клеточных линиях в дозах 1 мкМ или ниже, для DC5915 и DC5938 в концентрациях до 300 мкМ в данной системе индуцирования каспас-3 не наблюдалось.
Для подтверждения того, что указанные соединения воздействуют на нематоды не посредством индуцирования апоптоза, мутанты Caenorhabditis elegans с нарушенным апоптическим путем метаболизма, ced-3(n717) и ced-4(N1162) мутанты (Ellis НМ, Horvitz HR. Genetic control of programmed cell death in the nematode C. elegans. 1986 Cell 44:817-829), оценивают на восприимчивость к 10 мкг/мл DC5823 на NGM агаровых планшетах. Никакого фенотипического различия в восприимчивости линией С. elegances дикого типа (N2 Bristol) и ced-3 и ced-4 мутантами не наблюдалось, включая время смертности.
Эти данные указывают, что заявленные структуры не воздействуют на апоптоз в любых клетках млекопитающих или нематодах.
Пример 11. Описание синтеза соединений формул с VI по VII.
Соединения формулы с VI по VII согласно настоящему изобретению могут быть получены с использованием способов, известных специалисту данной области техники.
В частности, соединения формул VIa и VIb согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со схемой 6. Синтез начинается с взаимодействия подходящего бензамида 1 с хлор-карбонилсульфенилхлоридом для получения оксатиазолона 2. На следующей стадии промежуточный оксатиазолин 2 подвергается взаимодействию с подходящим фуран- или тиофеннитрилом в толуоле в условиях микроволнового облучения с получением целевого 3,5-дизамещенного производного 1,2,4-тиадиазола 3.
В частности, соединения формул VIIa и VIIb согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии со схемой 7. Подходящий фуран- или тиофенкарбоксамид 1 подвергается взаимодействию с хлоркарбонилсульфенилхлоридом с получением промежуточного оксатиазолона. Затем окса-тиазолиновый промежуточный продукт 2 подвергается взаимодействию с подходящим бензонитрилом в толуоле в условиях микроволнового облучения с получением целевого 3,5-дизамещенного производного 1,2,4-тиадиазола 4.
Схема 7: Схема синтеза соединений формул Vila и VIIb.
Пример получения соединения формулы VIa: (2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол:
Смесь 2,4-дихлорбензамида (25 г, 131,5 ммоль) и хлоркарбонилсульфенилхлорида (19 г, 14 5 ммоль) в толуоле (150 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч (образование газообразной HCl контролируют с помощью pH-бумаги). После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрируют в вакууме, получая целевое оксатиазолоновое соединение в виде твердого, не совсем белого вещества (32,4 г, 99%), которое используют в следующей стадии без дополнительной очистки. В ампуле объемом 20 мл смесь оксатиазолона 8а (2 г, 8 ммоль) и 2-фуронитрила (10 г, 107 ммоль) нагревают в микроволновой печи при 190°C в течение 20 мин. Реакцию проводят 10 раз и объединенную смесь отгоняют (Kugerrohr) при 100°C/20 мбар для удаления избытка 2-фуронитрила (выделенный 2-фуронитрил используют снова). Смесь дополнительно отгоняют при 150°C/10 мбар для удаления побочного нитрила 10 (твердого вещество желтого цвета, 6,5 г, 47%). Остаток после отгонки (приблизительно 10 г) переносят в дихлорметан (50 мл), фильтруют и фильтрат концентрируют, получая твердое вещество коричневого цвета (8 г). Перекристаллизация с растворением в теплом MeOH (50 мл) и добавлением воды (10 мл) приводит к получению чистого (2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола в виде твердого вещества коричневого цвета (4,7 г, 20% выход).
Химическая формула: C12H6Cl2N2OS; М.м.: 297,16; ВЭЖХ-ЭСМС: tR = 6,5; m/z: 296,96; 298,95 (М+1); ВЭЖХ чистота > 99% (221 нм), > 99% (263 нм), > 99,0 % (306 нм);
^-ЯМР (300 МГц, CDCl3): 7,90 (дд, J=8,4, 1H), 7,57-7,58 (м, 1H), 7,29 (дд, J=8,4, 1,8) 7,48 (д, J=1,8, 1H), 7,15-7,20 (м, 1Н), 6,55-6,59 (M, 1H).
Пример получения соединения формулы Via. 3-(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол.
Смесь 4-хлор-2-метилбензойной кислоты (50 г, 0,29 моль), дихлорметана (200 мл) и 0,5 мл ДМФА при перемешивании магнитной мешалкой охлаждают на ледяной бане. Охлажденную смесь соединяют с ловушкой абсорбции газа. К смеси по каплям в течение 1 ч добавляют оксалилхлорид (44,5 г, 0,35 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, в процессе чего все твердое вещество растворяется. Раствор концентрируют в вакууме и отгоняют с дихлорметаном для удаления избытка оксалилхлорида. Остаток переносят в ТГФ (200 мл) и перемешивают механической мешалкой с охлаждением на бане с ледяной водой. К смеси в течение 15 мин добавляют водный 25% раствор аммиака (100 мл), что приводит к образованию осадка. ТГФ удаляют на роторном испарителе и добавляют воду (100 мл). Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Твердый продукт собирают фильтрацией и сушат в вакууме, получая 2-метил-4-хлорбензамид (43,7 г, выход 89%), который используют в следующей стадии без дополнительной очистки.
Смесь 2-метил-4-хлорбензамида (31,35 г, 185 ммоль), толуола (400 мл) и хлоркарбонилсульфенил-хлорида (25 г, 190 ммоль) при механическом перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрируют в вакууме, получая продукт в форме твердого вещества желтого цвета (40 г, 95%). H-ЯМР показывает, что данная смесь состоит из целевого оксатиазолонового соединения, нитрильного побочного продукта и исходного амида в соотношении 85:10:5. Полученную смесь используют в следующей стадии без дополнительной очистки.
Сырое производное оксатиазолона (2,0 г, 8,8 ммоль) и 2-фуронитрил (16 г, 170 ммоль) смешивают и нагревают в течение 20 мин при 190°C в микроволновой печи. Десять порций объединяют и смесь отго
няют (Kugelrohr) при 100°C/30 мбар для удаления избытка 2-фуронитрила (который снова используют в следующих реакциях в микроволновой печи). Остаток дополнительно перегоняют при 150°C/20 мбар для удаления нитрильного побочного продукта. Остаток 5,5 г объединяют с остатком других десяти реакций в микроволновой печи (4,5 г) и очищают колоночной хроматографией. Полученные 4,5 г (85% чистоты ВЭЖХ) перекристаллизовывают из MeOH (50 мл), получая чистый 3-(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (3,6 г, выход 7,5%).
Химическая формула: C13H9ClN2OS; М.м.: 278,7; ВЭЖХ-ЭСМС: tR = 6,36 мин. и m/z 277,0 (М+1); ВЭЖХ чистота: > 95% (220 нм) 95% (270 нм).
^-ЯМР (300 МГц, CDCl3): 8,06, (дд, J=7,8, 1H), 7,62-7,63 (м, 1Н), 7,22-7,31 (м, 3H), 6,61-6,63 (м, 1Н), 2,66 (с, 3H).
Пример получения соединения формулы VIa: 3-(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол.
Смесь 4-хлорбензамида (20,23 г, 130 ммоль), толуола (150 мл) и хлоркарбонилсульфенилхлорида (19 г, 145 ммоль) при механическом перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрируют в вакууме, получая твердую пену желтого цвета (27,65 г, 100%). Н-ЯМР показывает, что продукт представляет собой почти чистое окса-тиазолоновое соединение, которое используют в следующей стадии без дополнительной очистки. Окса-тиазолоновое производное (1,71 г, 8 ммоль) и 2-фуронитрил (15 г, 160 ммоль) смешивают и нагревают в течение 20 мин при 190°C в микроволновой печи. Десять порций объединяют и полученную массу перегоняют (Kugelrohr) при 100°C/30 мбар для удаления избытка 2-фуронитрила (который снова используют в следующих реакциях в микроволновой печи). Остаток дополнительно перегоняют при 150°C/20 мбар для удаления нитрильного побочного продукта. Остаток (5 г) перекристаллизовывают из MeOH, получая 3,5 г твердого продукта. Продукт объединяют с остатком других 5 реакций в микроволновой печи (2,6 г) и очищают колоночной хроматографией. Полученный продукт (4,4 г, 90% чистота ВЭЖХ) перекристал-лизовывают из смеси гептан/EtOAc (7/1, 50 мл), получая чистый 3-(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол в виде твердого вещества светло-коричневого цвета (3,35 г, выход 10%).
Химическая формула: C12H7ClN2OS; молекулярная масса: 262,71; ВЭЖХ-ЭСМС: tR = 6,06 мин.; m/z:
263,00, 264,99 (М+1).
1Н-ЯМР (300 МГц, CDCl3) : 8,24-8,33 (м, 2Н), 7,63-7,65 (м, 1Н), 7,42-7,50 (м, 2Н), 7,23-7,28 (м, 1Н), 6,62-64 (м, 1Н).
Пример получения соединения формулы VIIa: 5-(2-хлор-4-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол:
Смесь 2-фуроиламида (полученного из 2-фуроилхлорида и водного гидроксида аммония, 1,13 г, 10 ммоль) и хлоркарбонилсульфенилхлорида (2,0 г, 15 моль) в толуоле (20 мл) при перемешивании магнитной мешалкой кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрируют, получая 1,7 г целевого оксатиазолона в виде твердого вещества желтого цвета (почти с количественным выходом), который используют в следующей стадии без дополнительной очистки.
Смесь оксатиазолонового соединения (170 мг, 1 ммоль) и 4-хлор-2-метилбензонитрила (3,03 г, 20 ммоль) нагревают в микроволновой печи при 190°C в течение 20 мин. Реакцию повторяют и полученные смеси объединяют. Избыток нитрильного побочного продукта (фуронитрил) удаляют в вакууме (120°C, 0,3 мбар). Полученный твердый продукт коричневого цвета (100 мг) переносят в теплый MeOH (10 мл) и декантируют от нерастворимого материала (предположительно серы). MeOH раствор оставляют при комнатной температуры на ночь. Выпавший твердый осадок собирают и сушат, получая 5-(2-хлор-4-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазол в виде твердого вещества коричневого цвета (40 мг, 7%). ЯМР подтверждает структуру.
Химическая формула: C13H9ClN2OS; М.м.: 278,7; ВЭЖХ-ЭСМС: tR = 6,36 мин. и m/z 277,01 (М+1); ВЭЖХ чистота: 93,5 (216 нм), 91% (324 нм);
^-ЯМР (300 МГц, CDCl3): 7,87 (дд, J=8,1, 1H), 7,51-7,60 (м, 1Н), 7,24-7,32 (м, 2Н), 7,15-7,20 (м, 1Н), 6,50-6,56 (м, 1Н), 2,58 (с, 3H).
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение, имеющее формулу (VI), формулу (VII), или его соль
где
А представляет собой необязательно замещенный фенил, где указанные заместители выбраны из группы, состоящей из OCF3, галогена, Ci-C6 галогеналкила, Ci-C6 алкила и Ci-C6 алкокси; и
С представляет собой тиенил или фуранил, каждый из которых может быть необязательно независимо замещенным одним или несколькими заместителями СН3.
2. Соединение по п.1, где С представляет собой необязательно замещенный тиенил.
3. Соединение по п.1, где С представляет собой необязательно замещенный фуранил.
4. Соединение по п.1, имеющее формулу Via, или его соль
где
R1 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, CH3, F, Cl, Br и CF3; R2 и R4 представляют собой водород;
R3 выбран из группы, состоящей из водорода, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCH3 и OCF3; R7 выбран из группы, состоящей из водорода и СН3; Rg и R9 представляют собой водород и Е представляет собой O или S.
5. Соединение по п.1, имеющее формулу VIb, или его соль
где
R1 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и CH3;
R2 и R4 представляют собой водород;
R3 представляет собой Cl;
R8 представляет собой водород;
R6 и R9 представляют собой водород и
Е представляет собой O.
6. Соединение по п.1, имеющее формулу Vila, или его соль
где
R1 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl;
R2 и R4 представляют собой водород;
R3 представляет собой CH3;
R7 и R8 представляют собой водород;
где
R1 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода и Cl;
R2 и R4 представляют собой водород;
R3 представляет собой СН3;
R8 представляет собой водород;
R6 и R9 представляют собой водород и
Е представляет собой O.
8. Соединение по п.4, где Е представляет собой O.
9. Соединение по п.4, где Е представляет собой S.
10. Соединение, выбранное из группы, состоящей из
3 -(4-хлор-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола;
3 -(2,4-дихлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола;
3 -(4-бром-2-метилфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола;
3 -(4-бром-2-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола;
3 -(4-хлорфенил)-5-(тиен-2-ил)-1,2,4-тиадиазола;
3 -(4-хлорфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола;
3 -(4-хлор-2-фторфенил)-5-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола и
5-(2-хлор-4-метилфенил)-3-(фуран-2-ил)-1,2,4-тиадиазола.
11. Способ контроля растительных паразитарных нематод, включающий введение в растение, семя или почву композиции, включающей эффективное количество соединения по любому из пп.1-10.
12. Способ по п.11, где композиция включает поверхностно-активное вещество.
13. Способ по п.11 или 12, где композиция включает один или несколько инсектицидов, фунгицидов, гербицидов или других пестицидов.
14. Способ по любому из пп.11-13, где композиция включает сорастворитель.
15. Способ по п.13, где инсектицид, фунгицид, гербицид или пестицид выбраны из группы, состоящей из авермектина, ивермектина, милбемицина, имидаклоприда, алдикарба, оксамила, фенамифоса, фостиазата, метам-натрия, этридиазола, пентахлорнитробензола (ПХНБ), флутоланила, металаксила, ме-фоноксама, фосетил-алюминия, силтиофама, флудиоксонила, миклобутанила, азоксистробина, хлорота-лонила, пропиконазола, тебуконазола, пираклостробина, трифлоксисульфурона, глифосата и галосуль-фурона.
16. Способ по любому из пп.11-15, где растительные паразитарные нематоды выбирают из Pratylenchus spp, Heterodera spp, Globodera spp, Meloidogyne spp, Rotylenchulus spp, Hoplolaimus spp, Belonolaimus spp, Longidorus spp, Paratrichodorus spp, Ditylenchus spp, Xiphinema spp, Helicotylenchus spp, Radopholus spp, Hirschmanniella spp, Tylenchorhynchus spp и Trichodorus spp.
17. Способ по любому из пп. 11-16, где композицию наносят на семена.
18. Семя, имеющее покрытие, содержащее соединение по любому из пп.1-10.
11.
11.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028392
028392
- 1 -
- 1 -
(19)
028392
028392
- 1 -
- 1 -
(19)
028392
028392
- 1 -
- 1 -
(19)
028392
028392
- 4 -
- 3 -
(19)
028392
028392
- 7 -
- 7 -
028392
028392
- 7 -
- 7 -
028392
028392
- 10 -
028392
028392
- 13 -
- 13 -
028392
028392
- 23 -
- 23 -