EA 028382B1 20171130

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000028382b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы (Ia1) или его свободная кислота, свободное основание или фармацевтически приемлемая соль, где R ₁ представляет собой гетероциклил; R ₁ необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R ₃ и необязательно одним дополнительным заместителем R ₄ или R ₁ необязательно замещен одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R ₃ ; R ₂ представляет собой фенил, фуранил, пирролил, 2Н-пирролил, 3H-пирролил, пиразолил, 1Н-пиразолил, имидазолил, 1Н-имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксазолил, 1,3-тиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, индолил, 1Н-индолил, индазолил, 1Н-индазолил, 2Н-индазолил, индолизинил, изоиндолил, бензофуранил, бензотиенил, бензоимидазолил, 1Н-бензоимидазолил, 1,3-бензотиазолил, 1,3-бензоксазолил, пуринил, 9Н-пуринил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,3-диазинил, 1,2-диазинил, 1,2-диазолил, 1,4-диазанафталенил, акридинил, фуро[3,2-b]пиридинил, фуро[3,2-c]пиридинил, фуро[2,3-c]пиридинил, 6Н-тиено[2,3-b]пирролил, тиено[3,2-c]пиридинил, тиено[2,3-d]пиримидинил, 1Н-пирроло [2,3-b]пиридинил, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинил, 1Н-пирроло[3,2-b]пиридинил, пирроло[1,2-а]пиразинил, пирроло[1,2-b]пиридазинил, пиразоло[1,5-а]пиридинил, пиразоло[1,5-а]пиразинил, имидазо[1,2-а]пиридинил, 3H-имидазо[4,5-b]пиридинил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, имидазо[1,2-с]пиримидинил, имидазо [1,2-b]пиридазинил, имидазо[1,2-а]пиразинил, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолил, имидазо[2,1-b][1,3,4]тиадиазолил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинил или [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинил; R ₂ необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R ₆ и необязательно одним дополнительным заместителем R ₇ ; R _a представляет собой водород; R _b представляет собой водород; R _c представляет собой водород; R ₃ , в каждом случае, независимо выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, C _1-8 алкила, галоген-С _1-8 алкила, С _1-8 алкилкарбонила, C _1-8 алкокси, галоген-С _1-8 алкокси, С _1-8 алкокси-С _1-8 алкила, C _1-8 алкоксикарбонила, амино, С _1-8 алкиламино, (C _1-8 алкил) ₂ -амино, амино-C _1-8 алкила, С _1-8 алкиламино-С _1-8 алкила, (C _1-8 алкил) ₂ -амино-С _1-8 алкила, амино-C _1-8 алкиламино, С _1-8 алкиламино-C _1-8 алкиламино, (С _1-8 алкиламино-С _1-8 алкил) ₂ -амино, (C _1-8 алкил) ₂ -амино-С _1-8 алкиламино, [(C _1-8 алкил) ₂ -амино-С _1-8 алкил] ₂ -амино, (С _1-8 алкиламино-C _1-8 алкил)(C _1-8 алкил)амино, [(C _1-8 алкил) ₂ -амино-C _1-8 алкил](C _1-8 алкил)амино, С _1-8 алкокси-С _1-8 алкиламино, (С _1-8 алкокси-С _1-8 алкил) ₂ -амино, (С _1-8 алкокси-С _1-8 алкил)(С _1-8 алкил)амино, C _1-8 алкилкарбониламино, C _1-8 алкоксикарбониламино, гидрокси-C _1-8 алкила, гидрокси-С _1-8 алкокси-С _1-8 алкила, гидрокси-C _1-8 алкиламино, (гидрокси-С _1-8 алкил) ₂ -амино или (гидрокси-C _1-8 алкил)(C _1-8 алкил)амино; R ₄ представляет собой С _3-14 циклоалкил, С _3-14 циклоалкил-С _1-8 алкил, С _3-14 циклоалкиламино, арил-C _1-8 алкил, арил-C _1-8 алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-C _1-8 алкил, гетероциклил или гетероциклил-C _1-8 алкил, где в каждом случае С _3-14 циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R ₅ ; R ₅ в каждом случае независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, C _1-8 алкила, галоген-С _1-8 алкила, C _1-8 алкокси, галоген-C _1-8 алкокси, амино, С _1-8 алкиламино, (C _1-8 алкил) ₂ -амино или C _1-8 алкилтио; R ₆ в каждом случае независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, C _1-8 алкила, С _2-8 алкенила, галоген-C _1-8 алкила, гидрокси-С _1-8 алкила, С _1-8 алкокси, галоген-C _1-8 алкокси, С _1-8 алкокси-С _1-8 алкила, амино, С _1-8 алкиламино, (C _1-8 алкил) ₂ -амино или C _1-8 алкилтио; R ₇ представляет собой С _3-14 циклоалкил, С _3-14 циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил, где в каждом случае гетероциклил выбран из оксиранила, оксетанила, азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролинила, пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, изоксазолинила, изоксазолидинила, изотиазолинила, изотиазолидинила, оксазолинила, оксазолидинила, тиазолинила, тиазолидинила, триазолинила, триазолидинила, оксадиазолинила, оксадиазолидинила, тиадиазолинила, тиадиазолидинила, тетразолинила, тетразолидинила, пиранила, дигидро-2Н-пиранила, тиопиранила, 1,3-диоксанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, 1,4-диазепанила, 1,3-бензодиоксолила, бензо[d][1,3]диоксолила, 1,4-бензодиоксанила, 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинила, 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксинила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1Н)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2Н)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2Н)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-c]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R,8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(2Н)-она, октагидро-2Н-пиридо[1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло [3.2.1]октила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (1S,4S)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила; где в каждом случае арил выбирают из фенила, нафтила, антраценила, флуоренила, азуленила или фенантренила и в каждом случае гетероарил выбирают из 1,3-бензотиазолила, имидазо[1,2-а]пиридинила, тразолила, 1Н-1,2,3-триазолила, фуранила, тиенила, пирролила, 2Н-пирролила, 3H-пирролила, пиразолила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, изоксазолила, изотиазолила, оксазолила, 1,3-тиазолила, оксадиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, тиадиазолила, 1Н-тетразолила, 2Н-тетразолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, триазинила, 1Н-индолила, индазолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, изоиндолила, бензофуранила, бензотиенила, бензотиофенила, бензоимидазолила, 1Н-бензоимидазолила, 1,3-бензоксазолила, 1,3-бензооксазолила, 9Н-пуринила, хинолинила, изохинолинила, хиназолинила, хиноксалинила, 1,3-диазинила, 1,2-диазинила, 1,2-диазолила, 1,4-диазанафталенила, акридинила, фуро[3,2-b]пиридинила, фуро[3,2-c]пиридинила, фуро[2,3-c]пиридинила, 6Н-тиено[2,3-b]пирролила, тиено[3,2-c]пиридинила, тиено[2,3-d]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-b]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, 1Н-пирроло[3,2-b]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-b]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, 3H-имидазо[4,5-b]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-c]пиримидинила, имидазо[1,2-b]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-b] [1,3,4]тиадиазолила, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинила или [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинила.

2. Соединение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, ацетат, трифторацетат или соль трифторуксусной кислоты.

3. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из 6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-[4-(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(4-этоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(4-этоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-этоксифенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(4-этоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метокси-3-метилфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метокси-3-метилфенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-метокси-3-метилфенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метокси-3-метилфенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(6-метоксипиридин-3-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(6-метоксипиридин-3-ил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(6-метоксипиридин-3-ил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 6-(пиперазин-1-ил)-2-[3-(трифторметил)фенил]-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3-(трифторметокси)фенил]-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3-(трифторметокси)фенил]-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метил-1,3-тиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фторфенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[3-(трифторметил)фенил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3,5-дифторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она и 2-(3,5-дифторфенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она, или его фармацевтически приемлемая соль, изотополог или таутомер.

4. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.

5. Фармацевтическая композиция по п.4, применяемая для лечения спинальной мышечной атрофии (SMA).

6. Способ повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемую из гена SMN2, включающий приведение человеческой клетки в контакт с соединением по п.1.

7. Способ увеличения количества белка Smn, включающий приведение человеческой клетки в контакт с соединением по п.1.

8. Способ по п.6 или 7, где указанной человеческой клеткой является человеческая клетка, происходящая от пациента со спинальной мышечной атрофией.

9. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у человека, нуждающегося в этом, включающий введение человеку эффективного количества соединения по п.1.

10. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у человека, нуждающегося в этом, включающий введение человеку фармацевтической композиции по п.4.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

5. Фармацевтическая композиция по п.4, применяемая для лечения спинальной мышечной атрофии (SMA).

(19)
Евразийское
патентное
ведомство
028382
(13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.11.30
(21) Номер заявки 201491766
(22) Дата подачи заявки
2013.03.14
(51) Int. Cl. C07D 311/00 (2006.01) A01N43/16 (2006.01) A61K31/35 (2006.01)
(54) СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СПИНАЛЬНОЙ МЫШЕЧНОЙ АТРОФИИ
(31) (32) (33) (43) (86)
61/614,932
2012.03.23
2015.03.31 PCT/US2013/031232 (87) WO 2013/142236 2013.09.26
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Ян Тяньлэ, Карп Гари Митчелл, Ци Хунянь (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-B2-8093273
US-A1-20110086833 US-A1-20040105849
(57) Изобретение относится к соединениям формулы (Ia1)
где R-ь R2, Ra, Rb и Rc определены в формуле изобретения, к их композициям и к их применению для лечения спинальной мышечной атрофии.
Описанная здесь технология была разработана без финансовой поддержки правительства США.
Перекрестная ссылка
Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США с серийным № 61/614932, поданной 23 марта 2012, содержание которой во всей своей полноте и для всех целей включено в настоящее описание посредством ссылки.
Соглашение о совместно проводимых исследованиях
Раскрываемый здесь предмет изобретения был разработан и заявлен одной или более сторонами соглашения о совместных исследованиях или от лица одной или более сторон данного соглашения, которое вступило в силу на дату подачи, или до подачи, заявки на изобретение;
заявленное изобретение является результатом работы, проводимой в рамках соглашения о совместных исследованиях; и
в данной заявке на выдачу патента на заявленное изобретение указываются имена и фамилии сторон соглашения о совместных исследованиях или вносятся изменение в указанные имена и фамилии сторон данного соглашения.
Введение
Настоящее изобретение относится к соединениям, к композициям, содержащим эти соединения, и к их применению для лечения спинальной мышечной атрофии.
Предшествующий уровень техники
В самых общих чертах, спинальная мышечная атрофия (SMA) представляет собой группу наследуемых и приобретенных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), характеризующихся прогрессирующей потерей мотонейронов спинного мозга и ствола головного мозга, приводящей к слабости и атрофии мышц. Наиболее распространенная форма SMA вызывается мутациями гена выживаемости мотонейронов (SMN) и проявляется тяжелыми поражениями широкого ряда как у детей, так и у взрослых (Crawford and Pardo, Neurobiol. Dis., 1996, 3:97).
SMA у детей представляет собой наиболее тяжелую форму нейродегенеративного расстройства. Симптомами такого расстройства являются мышечная слабость, плохой мышечный тонус, слабый крик, хромота или частые падения, затруднение в сосании или глотании, скапливание секрета в легких или в горле, затруднения в приеме пищи и повышенная восприимчивость к инфекциям дыхательных путей. При этом мышечная слабость проявляется больше в ногах, чем в руках, а функции организма, приобретаемые на последующих этапах развития, такие как поднимание головы или принятие положения сидя, вообще не могут быть достигнуты. Обычно, более ранние проявления симптомов являются признаком более короткой продолжительности жизни. Симптомы заболевания появляются почти сразу после разрушения мотонейронов. Тяжелые формы этого заболевания приводят к летальному исходу, и ни одна из этих форм не поддается лечению известными методами. Течение SMA непосредственно ассоциируется со скоростью разрушения клеток мотонейронов и приводит к слабости в тяжелой форме. Дети с тяжелой формой SMA часто умирают от респираторного заболевания, вызываемого слабостью мышц дыхательных путей. Дети с более легкими формами SMA живут гораздо дольше, хотя и им может потребоваться интенсивная терапия, особенно тем детям, которые страдают более тяжелыми формами расстройств, относящихся к последней группе клинического спектра данного заболевания. Клинический спектр расстройств SMA подразделяется на пять нижеследующих групп:
(a) SMA типа 0 (внутриутробная (in utero) SMA) представляет собой наиболее тяжелую форму заболевания и развивается у ребенка еще до его рождения. Обычно первым симптомом SMA типа 0 является пониженная степень подвижности плода, которая впервые может наблюдаться на сроке беременности от 30 до 36 недель. После родов у этих новорожденных наблюдается слабая подвижность и затруднения в глотании и дыхании.
(b) SMA типа 1 (SMA у детей или болезнь Верднига-Гоффмана), при которой симптомы обычно проявляются через 0-6 месяцев после рождения. SMA этого типа также представляет собой очень тяжелую форму заболевания. Пациенты с такой формой SMA вообще неспособны сидеть, и, если не проводить искусственную вентиляцию легких, то они обычно умирают в первые 2 года жизни.
(c) SMA типа 2 (промежуточная форма SMA) развивается в возрасте 7-18 месяцев. Пациенты с таким заболеванием могут сидеть без поддержки, но неспособны стоять или ходить без посторонней помощи. Прогноз для пациентов этой группы зависит, главным образом, от степени поражения дыхательных путей.
(d) SMA типа 3 (ювенильная SMA или болезнь Кугельберга-Веландера) обычно диагностируется через 18 месяцев после рождения. Пациенты с SMA типа 3 способны ходить самостоятельно на любом этапе течения заболевания, но в юношеском или зрелом возрасте они часто пользуются креслом-каталкой.
(e) SMA типа 4 (SMA у взрослых). Слабость обычно наступает в позднем подростковом возрасте и затрагивает язык, руки или ноги, а затем распространяется и на другие участки организма. SMA у взрослых протекает гораздо медленнее и не влияет или незначительно влияет на ожидаемую продолжительность жизни.
Ген SMN был картирован с помощью анализа на сцепление с комплексной областью в хромосоме
5q. У человека эта область содержит приблизительно 500000 пар оснований (т.п.н.) с инвертированными дупликациями, дающими две почти идентичных копии гена SMN. SMA вызывается инактивирующей мутацией или делецией теломерной копии гена (SMN1) в обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. Однако у всех пациентов сохраняется центромерная копия гена (SMN2), и число копий гена SMN2 у пациентов с SMA обычно обратно пропорционально тяжести заболевания, то есть, у пациентов с менее тяжелой формой SMA имеется большее число копий SMN2. Тем не менее, наличие SMN2 не может полностью компенсировать потерю функции SMN1, что обусловлено альтернативным сплайсингом экзона 7, вызываемым трансляционным сайленсингом мутации С на Т в экзоне 7. В результате этого, в большинстве транскриптов, продуцируемых из SMN2, отсутствует экзон 7 (SMN2A7), и эти транскрипты кодируют усеченный белок Smn, который имеет нарушенную функцию и быстро разлагается.
Очевидно, что белок Smn играет определенную роль в процессинге и метаболизме РНК, имеет хорошо охарактеризованную функцию, заключающуюся в опосредовании сборки комплексов "РНК-белок" конкретного класса, обозначаемых snRNP. Smn может также обладать и другими функциями в мотонейронах, однако его роль в предупреждении селективной дегенерации мотонейронов пока точно не установлена.
В большинстве случаев SMA диагностируют по клиническим симптомам и по отсутствию всех копий экзона 7 в гене SMN1, как было определено с помощью генетического анализа. Однако в приблизительно 5% случаев SMA вызывается мутациями, а не делецией полноразмерного гена SMN1 или какой-либо другой делецией полноразмерного экзона 7 в гене SMN1, при этом некоторые из этих мутаций являются известными, а другие пока еще не определены. В случаях, когда невозможно провести тест на присутствие гена SMN1, или когда последовательность гена SMN1 не обнаруживает какой-либо аномалии, могут быть проведены и другие тесты, такие как электромиография (EMG) или мышечная биопсия.
В настоящее время лечение пациентов с SMA ограничивается поддерживающей терапией, включая искусственную вентиляцию легких, лечебное питание и меры по реабилитации; и пока еще не существует каких-либо известных лекарственных средств, направленных на устранение причины развития заболевания. Современные способы лечения SMA состоят в предупреждении и сдерживании развития побочных эффектов хронической потери мотонейронов. Главной целью лечения SMA типа 1 является предупреждение и сдерживание развития легочных заболеваний на ранней стадии, которые являются основной причиной летального исхода у большинства пациентов с таким заболеванием. Хотя некоторые дети, страдающие SMA, доживают до зрелого возраста, однако ожидаемая продолжительность жизни детей с SMA типа 1 составляет менее 2 лет.
Было получено несколько мышиных моделей SMA. В частности, у модели с SMNAA7 (Le et al., Hum. Mol. Genet., 2005, 14:845) присутствует ген SMN2 и несколько копий кДНК SMN2A7, в результате чего происходит рекапитуляция многих фенотипических признаков SMA типа 1. Модель SMNAA7 может быть использована в исследованиях по экспрессии SMN2, а также для оценки двигательной функции и выживаемости. Мышиная модель с С/С-аллелем (Jackson Laboratory strain No.: 008714) представляет собой модель с менее тяжелой формой SMA, и у этих мышей наблюдаются пониженные уровни полноразмерной мРНК SMN2 (SMN2 FL) и белка Smn. Мышиный фенотип с С/С-аллелем имеет ген SMN2 и гибридный ген mSmn1-SMN2, который подвергается альтернативному сплайсингу, но не ассоциируется с какой-либо заметной слабостью мышц. Мышиная модель с С/С-аллелем используется в исследованиях экспрессии SMN2.
По мере появления все большей информации о генетической основе и патофизиологии SMA было исследовано несколько стратегий лечения, но ни одна из них не дала заметного успеха при клиническом применении.
Замена гена SMN1 с использованием вирусного вектора для доставки и замена клеток с использованием дифференцированных стволовых SMN1+/+-клеток продемонстрировали эффективность таких замен у животных с моделями SMA. До применения этих методов в медицине необходимо провести дополнительные исследования для оценки безопасности иммунного ответа, и уже после этого можно начать лечение человека на неонатальной стадии.
Коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 в культивированных клетках была также достигнута с использованием синтетических нуклеиновых кислот в качестве терапевтических средств, а именно: (i) антисмысловых олигонуклеотидов, которые направлены на элементы последовательности в пре-мРНК SMN2 и переключают реакцию сплайсинга на продуцирование полноразмерной мРНК SMN2 (Passini et al., Sci. Transl. Med., 2011, 3:72ra 18; и, Hua et al., Nature, 2011, 478:123), и (ii) молекул транс-сплайсинга РНК, которые в процессе сплайсинга вместо мутантного фрагмента обеспечивают продуцирование полностью функциональной последовательности РНК и генерируют полноразмерную мРНК SMN1 (Coady and Lorson, J. Neurosci., 2010, 30: 126).
Другие подходы, применяемые в исследованиях, включают поиск лекарственных средств, способствующих повышению уровней Smn, усилению остаточной функции Smn или компенсации потери Smn. Было показано, что аминогликозиды способствуют повышению уровня экспрессии стабилизированного
белка Smn, продуцируемого из мРНК SMN2A7, благодаря стимуляции трансляционного считывания аберрантного стоп-кодона, но они плохо проникают в центральную нервную систему и являются токсичными при их введении в повторных дозах. Было показано, что химиотерапевтические средства, такие как акларубицин, увеличивают уровнень белка Smn в клеточной культуре, однако профиль токсичности этих лекарственных средств не позволяет осуществлять длительное применение таких средств для пациентов с SMA. Существует несколько лекарственных средств, проходящих клинические испытания на возможность их применения для лечения SMA, и этими лекарственными средствами являются активаторы транскрипции, такие как ингибиторы гистон-деацетилазы ("HDAC") (например, бутираты, вальпроевая кислота и гидроксимочевина) и стабилизаторы мРНК (ингибитор декэппирования мРНК RG3039 от Repli-gen), которые, как предполагается, увеличивают количество полной РНК, транскрибированной из гена SMN2. Однако применение ингибиторов HDAC или стабилизаторов мРНК не направлено на устранение причины развития SMA и может приводить к глобальному повышению уровня транскрипции и экспрессии гена, в связи с чем могут возникать проблемы, связанные с безопасностью при лечении человека.
В альтернативном способе для проведения исследования были выбраны нейропротективные агенты, такие как олероксим. Целью таких стратегий является не увеличение уровня продуцирования функционального Smn, необходимого для лечения SMA, а проведение исследования по защите Smn-дефицитных мотонейронов от нейродегенерации.
Система, сконструированная для идентификации соединений, повышающих уровень включения эк-зона 7 SMN в РНК, транскрибируемую из гена SMN2, и некоторые идентифицированные таким образом соединения бензооксазола и бензоизоксазола описаны в Международной заявке PCT/US2009/003238, поданной 27 мая 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2009/151546 и публикация заявки на патент США № US2011/0086833). Система, сконструированная для идентификации соединений, продуцирующих стабилизированный белок Smn из мРНК SMN2A7 и некоторые идентифицированные таким образом соединения изоиндолинона, описаны в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация завки № WO2010/019236 и публикация заявки на патент США US2011/0172284). Каждый из вышеупомянутых документов во всей своей полноте и во всех целях включен в настоящее описание посредством ссылки.
Все другие цитируемые здесь документы во всей своей полноте включены в настоящую заявку посредством ссылки.
Несмотря на прогресс в понимании генетической основы и патофизиологии SMA, необходимость в идентификации соединений, влияющих на течение спинальной мышечной атрофии, то есть, одного из наиболее тяжелых неврологических заболеваний у детей, остается актуальной.
Описание сущности изобретения
В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)
или их формам, где w1, w2, w3, w4, w5 и w6 определены в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение формулы (I) или его форму и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его форме или к их фармацевтической композиции для лечения спинальной мышечной атрофии
(SMA).
SMA вызывается делецией или мутацией гена SMN1, которые приводят к селективной дегенерации Smn-дефицитных мотонейронов. Хотя у человека сохраняется несколько копий гена SMN2, однако небольшое количество функционального белка Smn, экспрессируемого из SMN2, не может полностью компенсировать потерю белка Smn, который экспрессируется из гена SMN1. Получение соединений и их композиций, а также их применение, описанные в настоящей заявке, основаны, в частности, на обнаружении заявителями того факта, что соединение формулы (I) повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемую из минигена SMN2. Этот миниген репродуцирует реакцию альтернативного сплайсинга экзона 7 SMN2, что приводит к удалению экзона 7 в большинстве транскриптов SMN2. Таким образом, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. Заявителями также было обнаружено, что соединение формулы (I) повышает уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN1. Таким образом, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена
SMN1.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) или к их формам, которые могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) или к их формам, которые могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) или к их формам, которые могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 SMN1 и SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и SMN2, соответственно.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для лечения SMA. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение указанному индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. Соединение формулы (I) или его форма, предпочтительно вводят индивидууму в виде фармацевтической композиции. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения SMA, где указанное соединение повышает уровень включения эк-зона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, авторы лишь отмечают, что соединения формулы (I) повышают уровень включения экзона
7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, и повышают уровни белка Smn, продуцируемого из гена SMN2, а поэтому они могут быть использованы для лечения SMA у человека, нуждающегося в этом.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к праймерам и/или зондам, описанным ниже в разделе "Биологические примеры" (например, к праймерам SMN, таким как SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и/или к зондам SMN, таким как SEQ ID NO: 3 или 10) и к применению этих праймеров и/или зондов. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклеотидной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13.
8 другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклео-тидной последовательности, состоящей по существу из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклеотид-ной последовательности, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13.
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или гена SMN2 и не включает экзон 7 SMN1 и/или SMN2, может быть использовано в качестве биомаркера для выявления SMA, описанной в настоящем документе. В других вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или гена SMN2 и включает экзон 7 SMN1 и/или SMN2, может быть использовано в качестве биомаркера для лечения пациента с использованием описанного здесь соединения. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или гена SMN2 и включает экзон 7 SMN1 и/или SMN2, а также количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или гена SMN2 и не включает экзон 7 SMN1 и/или SMN2, могут быть использованы в качестве биомаркеров для лечения пациента с использованием описанного здесь соединения. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с SMA.
В соответствии с этими вариантами осуществления изобретения праймер(-ы) SMN и/или зонд SMN, описанные ниже, могут быть использованы в анализах, таких как PCR (например, qPCR), амплификация по типу "катящегося кольца" и RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), проводимых для оценки и/или определения количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или гена SMN2 и включает или не включает экзон 7 SMN1 и/или SMN2.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологические примеры"), проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемой из
гена SMN2.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологиче
ские примеры"), проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, транскрибируемой из
гена SMN1.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологические примеры"), проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, транскрибируемой из гена SMN1 и/или SMN2.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 7, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Но-зерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологические примеры"), проводимом для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2 и включает экзон 7 SMN2, в образце, взятом у пациента. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с SMA.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 7, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Но-зерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологические примеры"), проводимом для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и включает экзон 7 SMN1, в образце, взятом у пациента. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с SMA.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 7, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Но-зерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологические примеры"), проводимом для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или SMN2 и включает экзон 7 SMN1 и/или SMN2, в образце, взятом у пациента. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с SMA.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, праймеры SMN, такие как SEQ ID NO: 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 9 или 12, и/или зонды SMN, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе "Биологические примеры"), проводимом для мониторинга ответа пациента на соединение (например, соединение формулы (I) или его форму). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с SMA.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанный способ включает
(a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2010/019236) или публикации заявки на патент США US2011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, SEQ ID NO: 1 и/или 2) вместе с соответствующими компонентами, например, для RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR в конечной точке, qPCR или амплификации по типу "катящегося кольца"; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена
(a)
SMN2; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемой из гена SMN2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанный способ включает (а) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2010/019236) или публикации заявки на патент США US2011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, SEQ ID NO: 1 и/или 2) вместе с соответствующими компонентами, например, для RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR в конечной точке, qPCR или амплификации по типу "катящегося кольца"; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, транскрибируемой из гена SMN1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанный способ включает
(a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2010/019236) или публикации заявки на патент США US2011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь зондом (например, SEQ ID NO: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификации по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемой из гена SMN2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1, где указанный способ включает
(a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN1, описанного в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2010/019236) или публикации заявки на патент США US2011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь зондом (например, SEQ ID NO: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификации по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1 в отсутст
(a)
вие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемой из гена SMN2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанный способ включает
(a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2010/019236) или публикации заявки на патент США US2011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, SEQ ID NO: 1 или 2) и/или зондом (например, SEQ ID NO: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификации по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN2, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемой из гена SMN2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1, где указанный способ включает
(a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена SMN1, в Международной заявке PCT/US2009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № WO2010/019236) или публикации заявки на патент США US2011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I) ), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, SEQ ID NO: 1 или 2) и/или описанным здесь зондом (например, SEQ ID NO: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификации по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 SMN1, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к наборам, содержащим праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе "Биологические примеры" (например, к праймерам SMN, таким как SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и/или к зондам SMN, таким как SEQ ID NO: 3 или 10), и к применению таких наборов.
Краткое описание графического материала
На фиг. 1, упомянутой в биологическом примере 1, схематически представлена конструкция мини-гена SMN2-A, которая продуцирует два альтернативно сплайсированных транскрипта мРНК: полноразмерной мРНК, содержащей экзон 7, и мРНК A7, не содержащей экзона 7. Нуклеотид аденин, встроенный в экзон 7 SMN2-A за нуклеотидным остатком 48, обозначен буквой "А". Альтернативно, нуклеотид может быть также выбран из цитозина или тимина. В результате инсерции одного нуклеотида (A, C или T) за нуклеотидным остатком 48, полноразмерная мРНК не содержит стоп-кодона в открытой рамке считывания SMN, тогда как мРНК A7 имеет стоп-кодон в экзоне 8, который обозначен словом "Stop".
На фиг. 2, упомянутой в биологическом примере 1, представлена последовательность ДНК миниге-на, происходящего от конструкции минигена SMN2-A SEQ ID NO: 21 (фиг. 2а). Как показано на фиг. 2b, могут присутствовать нижеследующие подпоследовательности:
1-70: 5'UTR (вырожденный);
71-79: экзон 6: старт-кодон и BamHI-сайт (atgggatcc);
80-190: экзон 6; 191-5959: интрон 6;
5960-6014: экзон 7 со встроенным нуклеотидом аденином "А" (положение 6008);
6015-6458: интрон 7;
6459-6481: часть экзона 8;
6482-8l46: BamHI-сайт (последовательность у 5'-конца), последовательность, кодирующая люцефе-разу и начинающаяся с кодона 2 (без кодона инициации), NotI-сайт (последовательность у 3'-конца), стоп-кодон ТАА; и
8147-8266: 3'UTR (врожденный).
Для конструирования варианта минигена SMN1, шестой нуклеотид экзона 7 (тиминовый остаток) конструкции минигена SMN2-A был заменен цитозином с помощью сайт-направленного мутагенеза. Таким образом, по аналогии с конструкцией минигена SMN2-A, конструкция минигена SMN1 имеет один адениновый остаток, встроенный за нуклеотидным остатком 48 экзона 7. Конструкция минигена SMN1 обозначена SMN1-A. Аналогичным образом, нуклеотид, встроенный в конструкцию минигена SMN1 за нуклеотидным остатком 48 экзона 7, может быть также альтернативно выбран из цитозина и тимина.
На фиг. 3, упомянутой в биологическом примере 2, продемонстрирована коррекция альтернативного сплайсинга минигена SMN2 в клетках, обработанных повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 3 a) и соединения 38 (фиг. 3b) в течение 24 ч. Уровни полноразмерной мРНК минигена SMN2 количественно оценивали с помощью количественной PCR с обратной транскриптазой (RT-qPCR). Уровень полноразмерной мРНК минигена SMN2 в образцах, обработанных соединением, нормализовали по уровню в образцах, обработанных носителем, и строили график зависимости от концентрации соединений.
На фиг. 4, упомянутой в биологическом примере 3, продемонстрирована коррекция альтернативного сплайсинга SMN2 в фибробластах пациента с SMA типа 1, обработанных повышенными концентрациями соединения 38 в течение 24 ч. Уровни полноразмерной мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Д7 количественно оценивали с помощью RT-qPCR. Уровни полноразмерной мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Д7 в образцах, обработанных соединением, нормализовали по уровню в образцах, обработанных носителем, и строили график зависимости от концентрации соединений.
На фиг. 5, упомянутой в биологическом примере 4, продемонстрирована коррекция альтернативного сплайсинга минигена SMN2 в фибробластах пациента с SMA типа 1, обработанных повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 5а) и соединения 38 (фиг. 5b) в течение 24 ч. Полноразмерную мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Д7 амплифицировали с помощью PCR в конечной точке с обратной транс-криптазой (RT-PCR), и PCR-продукты разделяли с помощью электрофореза в агарозном геле. Верхние и нижние полосы соответствуют полноразмерной мРНК SMN2 и мРНК SMN2 Д7, соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, присутствующей в образце.
На фиг. 6, упомянутой в биологическом примере 7, проиллюстрировано дозозависимое повышение уровней экспрессии белка Smn в фибробластах пациента с SMA типа 1, обработанных в течение 48 ч соединением 17 (фиг. 6a) и соединением 38 (фиг. 6b).
На фиг. 7, упомянутой в биологическом примере 7, проиллюстрировано увеличение числа ядерных пятен (гемов) в фибробластах пациента с SMA типа 1, обработанных соединением 38 в течение 48 ч. Пятна были подсчитаны на флуоресцентном микроскопе. Число пятен в образцах, обработанных соединением, нормализовали по числу пятен в образцах, обработанных носителем, и строили график зависимости от концентрации соединений.
На фиг. 8, упомянутой в биологическом примере 7, проиллюстрировано дозозависимое повышение уровня полноразмерной мРНК минигена SMN1 и дозозависимое снижение уровня мРНК Д7 минигена SMN1 в клетках НЕК293Н человека, обработанных в течение 7 ч соединением 17 (фиг. 8а) и соединением 38 (фиг. 8b). Полноразмерную мРНК минигена SMN1 и мРНК Д7 амплифицировали с помощью RT-PCR, и полученные PCR-продукты разделяли с помощью электрофореза в агарозном геле. Верхние и нижние полосы соответствуют полноразмерной мРНК минигена SMN1 и мРНК Д7, соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, присутствующей в образце.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)
или их формам, где
w1 представляет собой C-Rb или N;
w2 и w3 представляют собой C-R1, C-R2, C-Ra или N; w4 представляет собой C-Ra или N; w5 представляет собой C-R1, C-R2, C-Rc или N; w6 представляет собой C-R1, C-R2 или C-Ra;
где один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R1, a другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что:
если w3 представляет собой C-R1, то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-R1, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-R1, то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; или
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; и
где один, два или три из w1, w2, w3, w4 и w5 могут необязательно представлять собой N;
R1 представляет собой С1-8алкил, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алки-ламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, амино-C1-8алкил, С1-8 алкиламино-С1-8алкил, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, C1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-C1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8ал-киламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алки-ламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](C1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (C1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, С1 -8алкокси-C1 -8алкиламино -C1 -8алкокси, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино -С1-8 алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)(C1 -8алкил)амино-С1 -8алкокси, амино-С2-8алкенил, С1 -8алкиламино-С2-8 алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил, амино-С2-8алкинил, C1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидро-кси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкила-мино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8 алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидро-кси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, [(гидрокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино -С1 -8алкил] (С1 -8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1 -8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклила-мино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8ал-кил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8 алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8 алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероари-ламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-C1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(C1-8алкил) амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино -C1 -8алкил;
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R4; или
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R3;
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино;
где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R6 и необязательно одним дополнительным заместителем R7; Ra, в каждом случае, независимо выбран из водорода, галогена или ^^алтала; Rb представляет собой водород, галоген, C^^ram или ^^люкси; Rc представляет собой водород, галоген или ^^алюш;
R3, в каждом случае независимо, выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-Q^ алкила, C1-8алкилкарбонила, C1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбо-нила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8ал-кил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8 алкил)2-амино, (С1-8алкил)2-амино-C1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (C1-8алкила-мино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](C1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8алкил-амино, (С1-8алкокси-C1-8алкил)2-амино, (C1-8алкокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, C1-8алкилкарбонил
амино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8 алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино;
R4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8 алкил, арил-C1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8 алкил; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R5;
R5, в каждом случае независимо, выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, C1-8алкила, галоген-C1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино или C1-8 алкил-тио;
R6, в каждом случае независимо, выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, ^^алтаии, С2-8алке-нила, галоген-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, C1-8алкокси-С1-8алкила, амино, C1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио; и
R7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил.
Варианты осуществления изобретения
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w1 представляет собой C-Rb.
В другом варианте соединения формулы (I) w1 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-R1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-R2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-R1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-R2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w4 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w4 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w5 представляет собой C-R1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w5 представляет собой C-R2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w5 представляет собой C-Rc.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w5 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w6 представляет собой C-R1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w6 представляет собой C-R2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w6 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-R1, и w5 представляет собой C-R2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-R2, и w5 представляет собой C-R1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, w3 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, w3 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-R1, и w6 представляет собой C-R2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-R2, и w6 представляет собой C-R1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2; w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
соединения формулы (I) w1 и w2 представляют собой N. соединения формулы (I) w1 и w3 представляют собой N. соединения формулы (I) w1 и w4 представляют собой N. соединения формулы (I) w1 и w5 представляют собой N. соединения формулы (I) w2 и w4 представляют собой N. соединения формулы (I) w2 и w5 представляют собой N. соединения формулы (I) w3 и w4 представляют собой N. соединения формулы (I) w4 и w5 представляют собой N. соединения формулы (I) w1, w2 и w4 представляют собой N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1; w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) wi, w2 и w5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) wi, w3 и w4 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) wi, w4 и w5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) w2, w4 и w5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Ri представляет собой С1-8алкил, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино, амино -Ci -8алкил, С1 -8алкиламино -С1 -8алкил, (С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкил, Ci -8алкокси-С1 -8алкиламино -С1 -8алкил, (С1 -8алкокси-С1 ^алкшлЬ-амино-Q -8алкил, (С1 -8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкил-амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил] (C1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, С1-8 алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8ал-кил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, C1-8алкиламино-С2-8алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил, амино-С2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гид-рокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8 ал-кил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гид-рокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8 ал-кил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8 алки-ламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](С1-8алкил)амино, [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8ал-кил)амино -Ci -8алкил] (Ci -8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1 -8алкил, гетероциклил-С1 -8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-C^ алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8ал-кил)амино-C1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14цикло-алкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алки-ламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (ге-тероарил-C1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8 алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Ri представляет собой амино, (^-8ал-кил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкил, C1-8алкила-мино-С1-8алкил, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-C1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8ал-киламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил-амино, [(C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](C1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (C1-8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино-C1-8алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, C1-8алкиламино-С2-8алкенил, (C1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил, амино-C2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8 ал-кил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-Cb 8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1 -8алкил, (гидрокси-С1 -8алкил)(С1-8алкил)амино-С1 -8алкил, гидрокси-C1 -8алкиламино-С1 -8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-Q-8алкиламино-С1 -8алкиламино, (гидрокси-С1 -8алкиламино-С1 -8алкил)2-амино, (гидрокси-С1 -8 алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, [(гидро-кси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-C1-8алкил](С1-8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гете-роциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8 алкил, гетероциклил-C1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-C1-8алкил)(С1-8 алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гете-роциклил-C1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8 алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероарил-С1-8алки-ламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкил
амино-C1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-C1-8алкил;
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой C^^ram, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8 алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, амино-C1-8алкил, С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкил)2-амино-С1-8 алкил, C1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-C1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкила-мино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](C1-8 алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, С1-8ал-кокси-С1-8алкиламино-С1 -8алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8ал-кил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, амино-C2-8алкенил, C1-8алкиламино-C2-8алкенил, (C1-8алкил)2-амино-C2-8алкенил, амино-C2-8алкинил, С1-8алкиламино-C2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-C2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гид-рокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8 ал-кил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гид-рокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8 ал-кил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8 алки-ламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино или [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8ал-кил)амино -С1 -8алкил] (C1 -8алкил)амино.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-C1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетеро-циклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-C1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-C1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гете-роарил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-C1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетеро-циклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклил-карбонил или гетероциклилкарбонилокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил, необязательно замещенный заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой С3-14циклоалкил, необязательно замещенный заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой арил-С1-8алкила-мино, необязательно замещенный заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил, гете-роарил-C1-8алкил, гетероарил-C1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-C1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-C1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероа-рил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и
R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил, необязательно замещенный заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил,
выбранный из азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,4-диазепанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидропирроло[3,4-b] пиррол-(1Н)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-^пиррол-^Щ-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пир-рол-(2Н)-ила, гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-с]пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R,8aS)-гексагидро-пирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1H)-ила, (8aR)-гексагидро-пирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1H)-ила, (8aR)-октагидро-пирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (Ж,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,48)-2,5-диазабицикло[2.2.1]геп-тила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октил, (Ж^)-3,8-диазабицикло[3.2Л]ок-тила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро [3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил, выбранный из азетидин-1-ила, тетрагидрофуран-3-ила, пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, пиперидин-4-ила, пиперазин-1-ила, 1,4-диазепан-1-ила, 1,2,5,6-тетрагидропиридин-5-ила, 1,2,3,6-тетрагидро-пиридин-4-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-1(2H)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-1(2Н)-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-5(1H)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b] пиррол-5(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-с]пир-рол-2(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридин-5-ила, октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ила, (4aR,7aR)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ила, (4aS,7aS)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-6(2Н)-она, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (7aR, 8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1H)-ила, (8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1H)-ила, (8aR)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1H)-ила, (8aS)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1H)-ила, (8aR)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 3 -азаби-цикло[3.1.0]гекс-3-ила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ила, 8-азаби-цикло[3.2.1]окт-2-ен-3-ила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен-3-ила, 9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ила, (18,48)-2,5-диазабицикло [2.2.1]гепт-2-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]окт-2-ила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]окт-3-ила, (Ж,58)-3,8-диаза-бицикло[3.2.1]окт-3-ила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нон-4-ила, азаспиро[3.3]гепт-2-ила, 2,6-диазаспиро [3.3]гепт-2-ила, 2,7-диазаспиро[3.5]нон-7-ила, 5,8-диазаспиро[3.5]нон-8-ила, 2,7-диазаспиро[4.4]нон-2-ила или 6,9-диазаспиро[4.5]дек-9-ила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой замещенный ге-тероциклил, выбранный из 4-метил-1,4-диазепан-1-ила, (3aS,6aS)-1-метилгексагидропирроло[3,4-b] пир-рол-5(1Н)-ила, (3aS,6aS)-5-метилгексагидропирроло[3,4-b]пиррол-1(2H)-ила, (3aR,6aR)-1-метилгекса-гидропирроло[3,4-b]пиррол-5(1H)-ила, (3aR,6aS)-5-метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1H)-ила, (3aR,6aS)-5-(2-гидроксиэтил)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3aR,6aS)-5-(пропан-2-ил)гекса-гидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3aR,6aS)-5-этилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1H)-ила, (4aR,7aR)-1 -метилоктагидро-6Н-пирроло [3,4-b]пиридин-6-ила, (4aR,7aR)-1 -этилоктагидро-6Н-пирроло [3,4-b]пиридин-6-ила, (4aR,7aR))-1-(2-гидроксиэтил)октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ила, (4aS, 7aS)-1-метилоктагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ила, (4aS,7aS)-1-(2-гидроксиэтил)октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридин-6-ила, (7R,8aS)-7-гидроксигексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1H)-ила, (8aS)-8a-метилоктагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8aR)-8а-метилоктагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (1R,5S,6S)-6-(диметиламино)-3-азабицикло[3.1.0]гекс-3-ила, (1R,5S)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1] окт-3-ила, 9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (3-экзо)-9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (1R,5S)-9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (18,48)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ила или (1S,4S)-5-этил-2, 5 -диазабицикло [2.2.1]гепт-2 -ила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-С1-8алкил, где гетероциклил выбран из морфолинила, пиперидинила, пиперазинила, имидазолила или пирролидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-Cb 8алкил, выбранный из морфолин-4-ил-метила, морфолин-4-ил-этила, морфолин-4-ил-пропила, пипери-дин-1-ил-метила, пиперазин-1-ил-метила, пиперазин-1-ил-этила, пиперазин-1-ил-пропила, пиперазин-1-ил-бутила, имидазол-1-ил-метила, имидазол-1-ил-этила, имидазол-1-ил-пропила, имидазол-1-ил-бутила, пирролидин-1-ил-метила, пирролидин-1-ил-этила, пирролидин-1-ил-пропила или пирролидин-1-ил-бутила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-С1-8алкокси, где гетероциклил выбран из пирролидинила, пиперидинила или морфолинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-Cb 8алкокси, выбранный из пирролидин-2-ил-метокси, пирролидин-2-ил-этокси, пирролидин-1-ил-метокси, пирролидин-1-ил-этокси, пиперидин-1-ил-метокси, пиперидин-1-ил-этокси, морфолин-4-ил-метокси или морфолин-4-ил-этокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и
R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероцикли-ламино, где гетероциклил выбран из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, 9-азабицикло [3.3.1]нонила или (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклила-мино, выбранный из азетидин-3-ил-амино, пирролидин-3-ил-амино, пиперидин-4-ил-амино, 9-азабици-кло[3.3.1]нон-3-ил-амино, (Ж^)-9-азабицикло[3.3Л]нон-3-ил-амино, 9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ил-амино, (3-экзо)-9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ил-амино или (1R,5S)-9-метил-9-азабицикло [3.3.1]нон-3-ил-амино; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и
R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой (гетероцик-лил) (C1-8алкил)амино, где гетероциклил выбран из пирролидинила или пиперидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой (гетероциклил) (C1-8алкил)амино, выбранный из (пирролидин-3-ил)(метил)амино или (пиперидин-4-ил)(метил)амино;
где в каждом случае гетероциклил необязательно замещензаместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероцикли-ламино-С1-8алкил, где гетероциклил выбран из тетрагидрофуранила; и где в каждом случае гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклила-мино-С1-8алкил, выбранный из 3-(тетрагидрофуран-3-ил-амино)пропила; где в каждом случае гетероцик-лил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, где гетероциклил выбран из тетрагидрофуранила, тиенила или пиридинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, выбранный из 3-[(тетрагидрофуран-2-илметил)амино]пропила, 3-[(тиенил-3-илметил)амино]пропила, 3-[(пиридин-2-илметил)амино]пропила или 3-[(пиридин-4-илметил)амино] пропила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероцикли-локси, где гетероциклил выбран из пирролидинила или пиперидинила; и где, в каждом случае, гетеро-циклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероциклилок-си, выбранный из пирролидин-3-илокси или пиперидин-4-илокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероцик-лилкарбонил, где гетероциклил выбран из пиперазинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-карбонил, выбранный из пиперазин-1-ил-карбонила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероцик-лилкарбонилокси, где гетероциклил выбран из пиперазинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероциклил-карбонилокси, выбранный из пиперазин-1-ил-карбонилокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой С3-14циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогексенила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой С3-8циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогексенила или циклогеп-тила; где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой арил-С1
8алкиламино-С1-8алкил, где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, выбранный из 3-(бензиламино)пропила; где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил, где гетероарил выбран из пиридинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил, выбранный из пиридин-4-ила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R3 и
R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил-Cb 8алкил, где гетероарил выбран из 1Н-имидазолила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил-Q^ алкил выбранный из 1Н-имидазол-1-ил-метила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой (гетероарил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, где гетероарил выбран из пиридинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой (гетероарил-Q^ алкил)(C1-8алкил)амино, выбранный из (пиридин-3-илметил)(метил)амино; где, в каждом случае, гете-роарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, где гетероарил выбран из тиенила или пиридинила; и где, в каждом случае, гете-роарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил-С1-8 алкиламино-С1-8алкил, выбранный из тиен-3-ил-метиламинопропила, пиридин-2-ил-метиламинопропила, пиридин-3-ил-метиламинопропила или пиридин-4-ил-метиламинопропила; где, в каждом случае, гете-роарил необязательно замещен заместителями R3 и R4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 выбран из циано, галогена, гидро-кси, оксо, С1-8алкила, галоген-C1-8алкила, C1-8алкилкарбонила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, С1-8 ал-кокси-С1-8алкила, C1-8алкоксикарбонила, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-C1-8алкила, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, C1-8алкиламино-С1-8 алкиламино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, C1-8алкокси-С1-8алкиламино, С1-8алкилкарбониламино, C1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила-мино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R3 выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, C1-8алкила, галоген-С1-8алкила, C1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, C1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8 алкила, C1-8алкиламино-С1-8алкиламино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидро-кси-С1-8алкила, гидрокси-C1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой С1-8алкил, выбранный из метила, этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой C1-8алкил, выбранный из этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой галоген-С1-8 алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэ-тила, галогенэтила, тригалогенпропила, дигалогенпропила или галогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой галоген-С1-8ал-кил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэти-ла, тригалогенпропила или дигалогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой гидрокси-Q^ алкил, выбранный из гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, дигидроксипропила, гидрокси-бутила или дигидроксибутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой гидрокси-C1-8ал-кил, выбранный из гидроксиметила, дигидроксипропила, гидроксибутила или дигидроксибутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой C1-8алкокси, выбранный из метокси, этокси, пропокси или изопропокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой галоген-Q^
алкокси, выбранный из тригалогенметокси, дигалогенметокси, галогенметокси, тригалогенэтокси, дига-логенэтокси, галогенэтокси, тригалогенпропокси, дигалогенпропокси или галогенпропокси; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R3 представляет собой C1-8алкокси-карбониламино, выбранный из метоксикарбониламино, этоксикарбониламино, пропоксикарбониламино, изопропоксикарбониламино, трет-бутоксикарбониламино.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой С3-14цикло-алкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями R5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой С3-8циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями R5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой С3-14цикло-алкил-С1-8алкил, где С3-14циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогекси-ла или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями R5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой С3-8циклоалкил-С1-8алкил, где С3-8циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями R5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой С3-14цикло-алкиламино, где С3-14циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями R5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой С3-8циклоалкил-амино, где С3-8циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или цик-логептила; и где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями R5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой арил-С1-8 ал-кил, арил-С1-8алкоксикарбонил или арилсульфонилокси-С1-8алкил, где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой арил-С1-8алкил или арил-C1-8алкоксикарбонил, где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R4 представлет собой гетероциклил, выбранный из оксетанила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,3-диоксанила или морфоли-нила, где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R4 представлет собой гетероциклил, выбранный из оксетан-3-ила, пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, пиперазин-1-ила, 1,3-диоксан-5-ила или морфолин-4-ила, где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой гетероциклил-C1-8алкил, где в каждом случае, гетероциклил выбран из пирролидинила или пиперидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R4 представляет собой гетероциклил-Cb 8алкил, выбранный из пирролидин-1-ил-С1-8алкила или пиперидин-1-ил-С1-8алкила, где в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителям.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R5 выбран из галогена, гидрокси, ци-ано, нитро, галоген-C1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, амино, C1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R5 представляет собой гидрокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R5 представляет собой C1-8алкил, выбранный из метила, этила, пропила, изопропила, н-бутила или трет-бутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R5 представляет собой C1-8алкил, выбранный из этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R5 представляет собой галоген-C^ 8алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэ-тила, галогенэтила, тригалогенпропила, дигалогенпропила или галогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R5 представляет собой C1-8алкокси, выбранный из метокси, этокси, пропокси или изопропокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R5 представляет собой галоген-С1-8алкокси выбранный из тригалогенметокси, дигалогенметокси, галогенметокси, тригалогенэтокси, дига-логенэтокси, галогенэтокси, тригалогенпропокси, дигалогенпропокси или галогенпропокси; где, галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой арил, выбранный из фенила, необязательно замещенного заместителями R6 и R7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой ариламино,
где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой ариламино, выбранный из фениламино; где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой ариламино-карбонил, где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой ариламинокарбо-нил, выбранный из фениламинокарбонила; где в каждом случае арил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R2 представлет собой гетероциклил, выбранный из 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, 1,3-бензодиоксолила или 2,3-дигидро-1,4-бензодиокси-нила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представлет собой гетероциклил, выбранный из 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила, 1,3-бензодиоксол-5-ила или 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-
6- ила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой гетероарил, выбранный из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, 1,3-тиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензотиазолила, 1,3-бензо-ксазолила, 9Н-пуринила, фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, тиено [3,2-с]пиридинила, тиено[2,3-d]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пири-динила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-Ь]пиридазинила, пиразо-ло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пирими-динила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо [2,1-Ь][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5-Ь]пиридинила или хинокса-линила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой гетероарил, выбранный из тиен-2-ила, тиен-3-ила, 1Н-пиразол-3-ила, 1Н-пиразол-4-ила, 1Н-пиразол-5-ила, 1Н-имидазол-1-ила, 1Н-имидазол-4-ила, 1,3-тиазол-2-ила, 1,2,4-оксадиазол-3-ила, 1,3,4-оксадиазол-2-ила, пиридин-2-ила, пиридин-3-ила, пиридин-4-ила, пиримидин-4-ила, 1Н-индол-3-ила, 1Н-индол-4-ила, 1Н-индол-5-ила, 1Н-индол-6-ила, 1Н-индазол-5-ила, 2Н-индазол-5-ила, индолизин-2-ила, бензофуран-2-ила, бензофуран-5-ила, бензотиен-2-ила, бензотиен-3-ила, 1Н-бензимидазол-2-ила, 1Н-бензимидазол-6-ила, 1,3-бензоксазол-2-ила, 1,3-бензоксазол-5-ила, 1,3-бензоксазол-6-ила, 1,3-бензотиазол-2-ила, 1,3-бензо-тиазол-5-ила, 1,3-бензотиазол-6-ила, 9Н-пурин-8-ила, фуро[3,2-Ь]пиридин-2-ила, фуро[3,2-с]пиридин-2-ила, фуро[2,3-с]пиридин-2-ила, тиено[3,2-с]пиридин-2-ила, тиено[2,3-d]пиримидин-6-ила, 1Н-пирроло [2,3-Ь]пиридин-3-ила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридин-4-ила, пирроло[1,2-а]пиримидин-7-ила, пирроло[1,2-а] пиразин-7-ила, пирроло[1,2-Ь]пиридазин-2-ила, пиразоло[1,5-а]пиридин-2-ила, пиразоло[1,5-а]пиразин-2-ила, имидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, имидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, имидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, ими-дазо[1,2-а]пиримидин-6-ила, имидазо[1,2-с]пиримидин-2-ила, имидазо[1,2-Ь]пиридазин-2-ила, имида-зо[1,2-а]пиразин-2-ила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазол-6-ила, [1,3]окса-золо[4,5-Ь]пиридин-2-ила или хиноксалин-2-ила; где в каждом случае гетероарил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой замещенный ге-тероарил, выбранный из 4-метилтиен-2-ила, 1-метил-1Н-пиразол-3-ила, 4-метил-1Н-пиразол-3-ила, 1-фенил-1Н-пиразол-3-ила, 1-фенил-1Н-имидазол-4-ила, 2-метил-1-(пиридин-2-ил)-1Н-имидазол-4-ила, 4-метил-1,3-тиазол-2-ила, 4-(трифторметил)-1,3-тиазол-2-ила, 4-фенил-1,3-тиазол-2-ила, 5-фенил-1,2,4-оксадиазол-3-ила, 3-фторпиридин-4-ила,6-фторпиридин-2-ила, 2-хлорпиридин-4-ила, 4-хлорпиридин-3-ила, 5-хлорпиридин-2-ила, 6-метилпиридин-3-ила, 2-(трифторметил)пиридин-3-ила, 4-(трифторметил) пиридин-2-ила, 6-(трифторметил)пиридин-2-ила, 2-метоксипиридин-4-ила, 4-метоксипиридин-3-ила,6-метоксипиридин-2-ила, 2-этоксипиридин-3-ила,6-этоксипиридин-2-ила,6-(пропан-2-илокси)пиридин-2-ила,6-(диметиламино)пиридин-3-ила,6-(метилсульфанил)пиридин-2-ила,6-(циклобутилокси)пиридин-2-ила,6-(пирролидин-1-ил)пиридин-2-ила, 2-метилпиримидин-4-ила, 2-(пропан-2-ил)пиримидин-4-ила, 2-циклопропилпиримидин-4-ила, 1-метил-1Н-индол-3-ила, 2-метил-2Н-индазол-5-ила, 2-метил-1-бензофуран-5-ила, 1-метил-1Н-бензимидазол-2-ила, 4-метил-1Н-бензимидазол-2-ила 5-фтор-1Н-бензи-мидазол-2-ила, 4-фтор-1,3-бензоксазол-2-ила, 5-фтор-1,3-бензоксазол-2-ила, 4-хлор-1,3-бензоксазол-2-ила, 4-иод-1,3-бензоксазол-2-ила, 2-метил-1,3-бензоксазол-6-ила, 4-метил-1,3-бензоксазол-2-ила, 4-(трифторметил)-1,3-бензоксазол-2-ила, 7-(трифторметил)-1,3-бензоксазол-2-ила, 2-метил-1,3-бензоти-азол-2-ила, 2-метил-1,3-бензотиазол-5-ила, 2-метил-1,3-бензотиазол-6-ила, 4-хлор-1,3-бензотиазол-2-ила,
7- хлор-1,3-бензотиазол-2-ила, 4-(трифторметил)-1,3-бензотиазол-2-ила, 5-метилфуро[3,2-Ь]пиридин-2-ила, 4,6-диметилфуро[3,2-с]пиридин-2-ила, 5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2-ила, 4,6-диметилтиено[3,2-с]пиридин-2-ила, 2,4-диметилтиено[2,3-d]пиримидин-6-ила, 1-метилпирроло[1,2-а]пиразин-7-ила, 3-метилпирроло[ 1,2-а]пиразин-7-ила, 1,3-диметилпирроло[ 1,2-а]пиразин-7-ила, 2-метилпирроло[ 1,2-Ь]пи
ридазин-2-ила, 4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ила, 5-метилпиразоло[1,5-а]пиридин-2-ила, 4,6-диметилпиразоло [ 1,5-а]пиразин-2-ила, 2-хлоримидазо [2,1 -b] [ 1,3]тиазол-6-ила, 2-метилимидазо [2,1-b] [1,3]тиазол-6-ила, 3-метилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, 2-этилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, 2-метилимидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазол-6-ила,6-цианоимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила (также называемого 2-имидазо [ 1,2-а]пиридин-6-карбонитрилом), 6-фторимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ила, 8-фторимидазо [1,2-а] пиридин-2 -ила, 6, 8 -дифторимидазо [1,2-а] пиридин-2-ила, 7 -(трифторметил) имидазо [1,2-а] пиридин-2 -ила, 8-(трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 6-хлоримидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 7-хлоримидазо [1,2-а]пиридин-2-ила, 8-хлоримидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-бромимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 2-метилимидазо [1,2-а] пиридин-2 -ила, 5 -метилимидазо [1,2-а] пиридин-2 -ила,6 -метилимидазо [1,2-а] пиридин-2 -ила, 7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 7-этилимидазо[1,2-а] пиридин-2-ила, 8-этилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 6,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-этил-6-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ила, 7-метоксиимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ила, 8-метоксиимидазо [ 1,2-а] пиридин-2-ила,6-фтор-8-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ила, 8-фтор-6-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ила, 8-хлор-6-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 6-метил-8-нитроимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-циклопропилимидазо[ 1,2-а]пиридин-2-ила, 2-метилимидазо[ 1,2-а]пиридин-6-ила, 2-этилимидазо[1,2-а] пиридин-6-ила, 2,3-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 2-(трифторметил)имидазо [ 1,2-а]пиридин-6-ила, 8-хлор-2-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-6-ила, 8-фтор-2-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-6-ила, 6-фторимидазо [ 1,2-а]пиримидин-2-ила, 6-хлоримидазо [ 1,2-а]пири-мидин-2-ила, 6-метилимидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, 7-метилимидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, 2-метилимидазо [ 1,2-а]пиримидин-6-ила, 6-метилимидазо[ 1,2-а]пиридазин-2-ила, 2-метил-3-(1,2,3,6-тетрагидро-пиридин-4-ил)имидазо[ 1,2-а]пиридазин-6-ила,6-метилимидазо[ 1,2-а]пиразин-2-ила, 8-метилимидазо[1,2-а] пиразин-2 -ила, 6, 8 -диметилимидазо [1,2-а] пиразин-2 -ила, 6 -хлор-8 -метилимидазо [1,2-а] пиразин-2 -ила, 6 -метил-8-(трифторметил)имидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 8-(метилсульфанил)имидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 2-метилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, 3-метилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила или 2-метилимидазо [2,1-b] [1,3,4]тиадиазол-6-ила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой гетероарил, выбранный из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, 1,3-тиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолил, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензотиазолила, 1,3-бензо-ксазолила, 9Н-пуринила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R6 и
R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой гетероарил, выбранный из фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, тиено[3,2-с]пири-динила, тиено[2,3ч1]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, пир-роло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-а]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пири-динила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имида-зо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиа-золила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5-Ь]пиридинила или хиноксалинила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой гетероарила-мино, где гетероарил выбран из пиридинила или пиримидинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R2 представляет собой гетероариламино, выбранный из пиридин-2-иламино, пиридин-3-иламино или пиримидин-2-иламино; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями R6 и R7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 выбран из галогена, гидрокси, ци-ано, нитро, C1-8алкила, галоген-C1-8алкила, гидрокси-C1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, С1-8 алкокси-С1-8алкила, (C1-8алкил)2-амино или ^^килти); где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой C1-8алкил, выбранный из метила, этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой C1-8алкил, выбранный из этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой С2-8алкенил, выбранный из этенила, аллила или бута-1,3-диенила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой С2-8алкенил, выбранный из этенила или аллила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой галоген-Q^ алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэ-тила, галогенэтила, тригалогенпропила, дигалогенпропила или галогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой гидрокси-С1-8
алкил, выбранный из гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, дигидроксипропила, гидрокси-бутила или дигидроксибутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой гидрокси-С1-8ал-кил, выбранный из гидроксиметила, дигидроксипропила, гидроксибутила или дигидроксибутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой C1-8алкокси, выбранный из метокси, этокси, пропокси или изопропокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R6 представляет собой галоген-Q^ алкокси, выбранный из тригалогенметокси, дигалогенметокси, галогенметокси, тригалогенэтокси, дига-логенэтокси, галогенэтокси, тригалогенпропокси, дигалогенпропокси или галогенпропокси; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой С3-14цикло-алкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил; где С3-14циклоалкил выбран из цикло-пропила или циклобутокси; арил выбран из фенила; гетероциклил выбран из оксетанила, пирролидинила или 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, и где гетероарил выбран из тиенила или пиридинила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой С3-14циклоалкил или С3-14циклоалкилокси, где, в каждом случае, С3-14циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой С3-8циклоалкил или С3-8циклоалкилокси, где, в каждом случае, С3-8циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой арил, выбранный из фенила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R7 представлет собой гетероциклил, выбранный из оксетанила, пирролидинила или 1,2,3,6-тетрагидропиридинила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой гетероциклил, выбранный из оксетан-3-ила, пирролидин-1-ила или 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой гетероарил, выбранный из тиенила или пиридинила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой гетероарил, выбранный из пиридинила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой гетероарил, выбранный из тиен-2-ила или пиридин-2-ила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R7 представляет собой гетероарил, выбранный из пиридин-2-ила. В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетеро-циклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-C1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-C1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклиларбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-C1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и R4; и
где гетероциклил выбран из азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пи-перазинила, 1,4-диазепанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидро-пирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aR)-гекса-гидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ил, (3а8,6а8)-гексагидро-пирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло [3,4-с] пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6a8)-гексагидро-пирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-b] пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4a8,7a8)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b] пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R,8a8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8a8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8a8)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-октагидропирроло[ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[ 1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0] гексила, (Ж,58)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1R,58)-8-азабицикло[3.2.1] ок-тила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нони-ла, (Ж,58)-9-азабицикло[3.3Л]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,48)-2,5-диазабицикло [2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,58)-3,8-диазабицикло [3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро
[4.5]децила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I):
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино;
где арил представляет собой фенил;
где гетероциклил выбран из 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, 1,3-бензодиоксолила или 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинила;
где гетероарил выбран из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазоллила, 1,3-тиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазо-лила, 2Н-индазолила, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензо-тиазолила, 1,3-бензоксазолила, 9Н-пуринила, фуро[3,2-b]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, тиено[3,2-с]пиридинила, тиено[2,3ч1]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-b]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-b]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазоП^-^пиридазинила, имидазо[1,2-
a] пиразинила, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-b][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5-
b] пиридинила или хиноксалинила; и где в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероциклил, ге-тероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-C1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетеро-циклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-C1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гете-роарил-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино-C1 -8алкил;
где гетероциклил выбран из азетидинила,тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пи-перазинила, 1,4-диазепанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидро-пирролоР^-^пиррол-^Щ-ила, (3a8,6a8)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, (3aR,6aR)-гекса-гидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ила, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, (3aR,6aS)-гексагидро-пирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6a8)-гексагидро-пирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-b] пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4a8,7a8)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b] пиридинила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R, 8a8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1H)-ила, (8a8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1H)-ила, (8aR)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8a8)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-октагидропирроло[ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[ 1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0] гексила, (Ж,58)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (Ж,58)-8-азабицикло[3.2Л]ок-тила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1R,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нони-ла, (1R,58)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,48)-2,5-диазабицикло [2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1R,58)-3,8-диазабицикло [3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро [4.5]децила; и где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино;
где гетероциклил выбран из 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила, 1,3-бензодиоксол-5-ила или 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ила;
где, гетероарил выбран из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, 1,3-тиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензотиазолила, 1,3-бензоксазолила, 9Н-пуринила, фуро[3,2-b]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фу-ро[2,3-с]пиридинила, тиено[3,2-с]пиридинила, тиено[2,3ч1]пиримидинила, 1Н-ПИРРОЛО[2,3-Ь]ПИРИДИНИ-ла, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-b]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазоП^-^пиридазинила, имидазо[1,2-а] пиразинила, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-b][1,3,4]тиадиазолила, П^оксазоло^^-^пири-динила или хиноксалинила; и где, в каждом случае, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены
заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой ^^алки, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8 алкокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, амино-C1-8алкил, С1-8алкиламино-С1-8алкил, (C1-8алкил)2-амино-С1-8 алкил, C1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-C1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкила-мино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](C1-8 алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, С1-8 алко-кси-С1-8алкиламино-С1 -8алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, (С1-8алкокси-С1 ^алкил)^ -8 алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, C1-8алкиламино-С2-8алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алке-нил, амино-C2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкил-амино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8 алкил)амино, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-C1-8алкиламино-С1-8алкил-амино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гид-рокси-Q -8алкиламино-С1-8алкил)(C1 -8алкил)амино, (гидрокси-С1 -8алкил)(C1 -8алкил)амино-С1 -8алкил-амино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](C1-8алкил)амино или [(гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил) амино-С1-8алкил](C1-8алкил)амино; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероциклил, ге-тероциклил-C1-8алкил, гетероциклил-C1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-C1-8алкиламино, (гетероциклил-C1-8алкил)2-амино, (гетеро-циклил-C1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1 -8алкиламино, (гетероарил-C1 -8алкил)2-амино, (гетероарил-С1 -8алкил)(С1-8 алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гете-роарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероциклил, ге-тероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероцикл^^^^кшими^), (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетеро-циклил-C1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклил-карбонил или гетероциклилкарбонилокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представлет собой гетероциклил, необязательно замещенный заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой С3-14циклоалкил, необязательно замещенный заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой арил-C1-8алкила-мино, (арил-C1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (арил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, арил
необязательно замещен заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой арил-Ci^ алкил-амино, необязательно замещенный заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил, гете-роарил-C1-8алкил, гетероарил-C1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-C1-8алкиламино, (гетероарил-C1-8 алкил)2-амино, (гетероарил-C1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероа-рил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями R3 и
R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями R6 и R7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) R1 представляет собой гетероарил, необязательно замещенный заместителями R3 и R4; и
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-
роариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещен заместите-
лями R6 и R7.
Один из вариантов осуществления изобретения включает соединение формулы (I), где указанное соединение выбрано из соединений формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (IX), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX):
или их форм.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (II) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (II) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, и w3 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (II) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (II) w3 представляет собой C-R2, w6 пред
ставляет собой C-R1, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (III) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w4 представляет собой C-Ra или N, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (III) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, w4 представляет собой C-Ra или N, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IV) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, w4 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IV) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, w4 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (V) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, w3 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (V) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, w3 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (V) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (V) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb w2 представляет собой C-Ra или N, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VI) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VII) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w4 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (VII) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, w4 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VIII) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w4 представляет собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (VIII) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, и w4 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IX) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IX) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IX) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IX) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (X) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, и w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (X) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, и w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XI) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-R или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XI) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb w1 представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XII) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w4 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XII) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, w4 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIII) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XIII) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-Ra, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIV) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XIV) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, w2 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XV) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, и w5 представляет собой C-Rc.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XV) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb и w5 представляет собой C-Rc.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVI) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, и w4 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XVI) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, и w4 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVII) w2 представляет собой C-R1, w5 представляет собой C-R2, и w6 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XVII) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-R1, и w6 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVIII) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, и w2 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XVIII) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, и w2 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIX) w3 представляет собой C-R1, w6 представляет собой C-R2, и w1 представляет собой C-Rb.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XIX) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, и w1 представляет собой C-Rb.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (III)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (IV)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (V)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (VI)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (VII)
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (II)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (VIII)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (IX):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (X):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XI):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XII):
или его форма
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XIII):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XIV):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XV):
или его форма.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XVII):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XVIII):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XIX):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I), формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX) является соединение, выбранное из соединений формулы (Ia), формулы (IIa), формулы (IIIa), формулы (IVa), формулы (Va), формулы (VIa), формулы (VIIa), формулы (VIIIa), формулы (Xa), формулы (XIa), формулы (XIIa), формулы (ХШа), формулы (XIVa), формулы (XVa), формулы (XVte), формулы (XVIIa), формулы (XVIIIa) или формулы (XIXa), соответственно:
или его форма.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Ia) один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-Ri, а другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что
если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-Ri, то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Ri, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IIa) один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-Ri, а другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что
если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-Ri, то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; или
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Ri, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IVa) один из w2 и w5 представляет собой C-Ri а другой представляет собой C-R2 при условии, что если w2 представляет собой C-Ri, то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Ri.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Va) один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-Ri, а другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что
если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-Ri, то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; или
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Ri, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VIIIa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Xa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIIIa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIVa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6
представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIXa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (II) является соединение формулы (Па):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (III) является соединение формулы (Ша):
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (1а):
или его форма.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (V) является соединение формулы (Va):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VI) является соединение формулы (Via):
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IV) является соединение формулы (IVa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VII) является соединение формулы
(VIIa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIII) является соединение формулы (Villa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (X) является соединение формулы (Ха):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XI) является соединение формулы (Х1а):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XII) является соединение формулы (ХПа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIII) является соединение формулы (ХШа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIV) является соединение формулы (XlVa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XV) является соединение формулы (XVa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVI) является соединение формулы (XVIa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVII) является соединение формулы (XVIIa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIII) является соединение формулы (XVIIIa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIX) является соединение формулы (XlXa):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ia) является соединение формулы (Iai), формулы (1а2), формулы (1аЗ) или формулы (1а4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IIa) является соединение формулы (Hal), формулы (Па2), формулы (ПаЗ) или формулы (Па4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IIIa) является соединение формулы (Ша1) или формулы (Ша2):
Rb Rb
.О. Я2 /L .О. .R1
Ra О Ra О
(Illal) или (IIIa2)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IVa) является соединение формулы (IVal) или формулы (IVа2):
Rb Rb
IT R2 |^ If R1
Ra О Ra О
(IVal) или (IVa2)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Va) является соединение формулы (Val), формулы (Va2), формулы Va3) или формулы (Va4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIa) является соединение формулы (Vial) или формулы (VIa2):
Ra О
(Vial) или
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIIa) является соединение формулы (VIIal) или формулы (VIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIIIa) является соединение формулы (Villa 1) или формулы (VIIIa2):
III т
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (IXal), формулы (IXa2), формулы (IXa3) или формулы (IXa4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Xa) является соединение формулы (Xal) или формулы (Ха2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIa) является соединение формулы (XIal) или формулы (XIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIIa) является соединение формулы (XI-Ial) или формулы (XIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIIIa) является соединение формулы (XIIIal) или формулы (XIIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIVa) является соединение формулы (XIVal) или формулы (XIVa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVa) является соединение формулы (XVal) или формулы (XVa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIa) является соединение формулы (XVIal) или формулы (XVIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIa) является соединение формулы (XVIIal) или формулы (XVIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIIa) является соединение формулы (XVIIIal) или формулы (XVIIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIXa) является соединение формулы (XIXal) или формулы (XIXa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ia) является соединение формулы (Ia2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ia) является соединение формулы (Ia3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ia) является соединение формулы (Ia4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения (IIa) является соединение формулы (IIal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Па) является соединение формулы (Па2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IIa) является соединение формулы (IIa3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения (Па) является соединение формулы (Па4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IIIa) является соединение формулы (IIIal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IIIa) является соединение формулы (IIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IVa) является соединение формулы (IVal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IVa) является соединение формулы (IVa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Va) является соединение формулы (Val):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Va) является соединение формулы (Va2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Va) является соединение формулы (Va3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Va) является соединение формулы (Va4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIa) является соединение формулы (Vial):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIa) является соединение формулы (VIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIIa) является соединение формулы (Vllal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIIa) является соединение формулы (VIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIIIa) является соединение формулы (VHIal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIIIa) является соединение формулы (VIIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (IXal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (IXa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (IXa3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (IXa4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Xa) является соединение формулы (Xal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Xa) является соединение формулы (Ха2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIa) является соединение формулы (XIal):
или его форма.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIIa) является соединение формулы (XI-
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIa) является соединение формулы (Х1а2):
Ial):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIIa) является соединение формулы (ХПа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIIIa) является соединение формулы (ХШа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIIIa) является соединение формулы (ХШа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIVa) является соединение формулы (XlVal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIVa) является соединение формулы (XIVa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVa) является соединение формулы (XVal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVa) является соединение формулы (XVa2):
или его форма
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIa) является соединение формулы (XVIal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIa) является соединение формулы (XVIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIa) является соединение формулы (XVIIal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIa) является соединение формулы (XVIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIIa) является соединение формулы (XVIIIal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIIa) является соединение формулы (XVIIIa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIXa) является соединение формулы (XlXal):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIXa) является соединение формулы (XIXa2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение, выбранное из группы, состоящей из соединении:
или его форма.
Терминология
Химические термины, употребляемые выше и во всем описании изобретения, если это не оговорено особо, имеют общепринятые значения, известные специалисту в данной области, и определены ниже.
Используемый здесь термин мС1-8алкилм обычно означает насыщенные углеводородные радикалы, имеющие от одного до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации, включая, но не ограничиваясь ими, метил, этил, н-пропил (также называемый пропилом или пропанилом), изопропил, н-бутил (также называемый бутилом или бутанилом), изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил (также называемый пентилом или пентанилом), н-гексил (также называемый гексилом или гекса-нилом), н-гептил (также называемый гептилом или гептанилом), н-октил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С1-8алкил включает, но не ограничивается ими, С1-6алкил, С1-4алкил и т.п. СЬ-8алкильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "С2-8алкенил" обычно означает частично ненасыщенные углеводородные радикалы, имеющие от двух до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации и одну или более углерод-углеродных двойных связей, включая, но не ограничиваясь ими, этенил (также называемый винилом), аллил, пропенил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С2-8алкенил включает, но не ограничивается ими, С2-6алкенил, С2-4алкенил и т.п. С2-8алкенильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "С2-8алкинил" обычно означает частично ненасыщенные углеводородные радикалы, имеющие от двух до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации и одну или более углерод-углеродных тройных связей, включая, но не ограничиваясь ими, этинил, пропинил, бутинил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С2-8алкинил включает, но не ограничивается ими, С2-6алкинил, С2-4алкинил и т.п. С2-8алкинильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин мС1-8алкоксим обычно означает насыщенные углеводородные радикалы, имеющие от одного до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации формулы -0-С1-8алкил, включая, но не ограничиваясь ими, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, н-гексокси т.п. В некоторых вариантах
осуществления изобретения С^алкокси включает, но не ограничивается ими, С^алкокси, Сь4алкокси т.п. С^алкокси-радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "С^мциклоалкил" обычно означает насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или полициклический углеводородный радикал, включая, но не ограничиваясь ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил, цикло-гептил, циклооктил, lH-инданил, инденил, тетрагидронафталенил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С^мциклоалкил включает, но не ограничивается ими, С3-8циклоалкил, С5-8цик-лоалкил, С3-10циклоалкил и т.п. С^^циклоалкильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "арил" обычно означает радикал, имеющий моноциклическую, бицик-лическую или полициклическую ароматическую углеродную структуру, включая, но не ограничиваясь ими, фенил, нафтил, антраценил, флуоренил, азуленил, фенантренил и т.п. Арильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "гетероарил" обычно означает радикал, имеющий моноциклическую, бициклическую или полициклическую ароматическую углеродную структуру, в которой один или более углеродных кольцевых членов, если они обладают структурной стабильностью, замещены одним или более гетероатомами, такими как атом O, S или N, включая, но не ограничиваясь ими, фуранил (также называемый фурилом), тиенил (также называемый тиофенилом), пирролил, 2Н-пирролил, 3Н-пирролил, пиразолил, lH-пиразолил, имидазолил, lH-имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксазолил, l,3-тиазолил, триазолил (такой как Ш-!,2,3-триазолил и т.п.), оксадиазолил (такой как !,2,4-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил и т.п.), тиадиазолил, тетразолил (такой как lH-тетразолил, 2Н-тетразолил и т.п.), пи-ридинил (также называемый пиридилом), пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, индолил, lH-индолил, индазолил, lH-индазолил, 2Н-индазолил, индолизинил, изоиндолил, бензофуранил, бензо-тиенил (также называемый бензотиофенилом), бензоимидазолил, lH-бензоимидазолил, ^-бензо-тиазолил, !,3-бензоксазолил (также называемый 1,3-бензооксазолилом), пуринил, 9^^^^^ хиноли-нил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,3-диазинил, 1,2-диазинил, 1,2-диазолил, 1,4-диаза-нафталенил, акридинил, фуро[3,2-Ь]пиридинил, фуро[3,2-с]пиридинил, фуро[2,3-с]пиридинил, 6H-тиено [2,3-Ь]пирролил, тиено[3,2-с]пиридинил, тиено[2,3-d]пиримидинил, 1H-пирроло[2,3-b]пиридинил, lH-пирроло[2,3-с]пиридинил, 1H-пирроло[3,2-b]пиридинил, пирроло[1,2-а]пиразинил, ПИРРОЛО[1,2-Ь] пири-дазинил, пиразоло[1,5-а]пиридинил, пиразоло[1,5-а]пиразинил, имидазо[1,2-а]пиридинил, 3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридинил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, имидазо[1,2-с]пиримидинил, имидазо^Д-^пи-ридазинил, имидазо[1,2-а]пиразинил, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолил, имидазо[2,1-b][1,3,4]тиадиазолил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинил, [!,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинил и т.п.
Гетероарильный радикал необязательно замещен на кольцевых членах у атома углерода или азота описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "гетероциклил" обычно означает радикал, имеющий насыщенную или частично ненасыщенную моноциклическую, бициклическую или полициклическую углеродную кольцевую структуру, в которой один или более углеродных кольцевых членов, если они обладают структурной стабильностью, замещены одним или более гетероатомами, такими как атом O, S или N, включая, но не ограничиваясь ими, оксиранил, оксетанил, азетидинил, тетрагидрофуранил, пирролинил, пирролидинил, пиразолинил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, изоксазолинил, изоксазолининил, изотиа-золинил, изотиазолидинил, оксазолинил, оксазолидинил, тиазолинил, тиазолидинил, триазолинил, триа-золидинил, оксадиазолинил, оксадиазолидинил, тиадиазолинил, тиадиазолидинил, тетразолинил, тетра-золидинил, пиранил, дигидро-2H-пиранил, тиопиранил, !,3-диоксанил, 1,2,5,6-тетрагидропиридинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, 1,4-диазепанил, 1,3-бензодиоксолил (также называемый бензо^Щ^диоксолилом), 1,4-бензодиоксанил, 2,3-ДИГИДРО-1,4-бензодиоксинил (также называемый 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксинилом), гексагидропирроло[3,4-b] пиррол-(1H)-ил, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1H)-ил, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b] пиррол-(1H)-ил, гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ил, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-io, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2H)-ил, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1H)-ил, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1H)-ил, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1H)-ил, октагидро-5H-пирроло[3,2-с]пиридинил, октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинил, (4aR,7aR)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинил, (4aS,7aS)-октагидро-6H-пирроло[3,4-b]пиридинил, гексагидропирроло [ !,2-а]пиразин-(Ш)-ил, (7R,8aS)-гексагидропирроло [ l ,2-а]пиразин-(1H)-ил, (8aS)-гексагидропирроло [1,2-а]пиразин-(1H)-ил, (8aR)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1H)-ил, (8aS)-октагидропирроло[1,2-а] пиразин-(1H)-ил, (8aR)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1H)-ил, гексагидропирроло [ l ^^mq^mi-^H)-он, октагидро-2H-пиридо [ l ,2-а]пиразинил, 3 -азабицикло [3. l .0]гексил, (lR,5S)-3 -азабицикло [3. l .0]гексил, 8-азабицикло[3.2. 1]ОКТИЛ, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октил, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енил, (lR,5S)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енил, 9-азабицикло[3.3.1]нонил, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонил, 2,5-диазаби-цикло[2.2Л]гептил, (1S,4S)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептил, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октил, 3,8-диазаби
цикло[3.2Л]октил, (Ж,58)-3,8-диазабицикло[3.2Л]октил, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонил, азаспиро[3.3] гептил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептил, 2,7-диазаспиро[3.5]нонил, 5,8-диазаспиро[3.5]нонил, 2,7-диазаспиро [4.4]нонил, 6,9-диазаспиро[4.5]децил и т.п.
Гетероциклильный радикал необязательно замещен на кольцевых членах у атома углерода или азота описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "С^алкокси-С^алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-0-Q^ алкил.
Используемый здесь термин "С1-8алкокси-С1-8алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^ал-кил-О-С -8алкил.
Используемый здесь термин "(С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино" означает радикал формулы: -N(Q-8 алкил-О-С1 -8алкил)2".
Используемый здесь термин "С^алкокси-С^алкиламино-С^алкокси" означает радикал формужг О-СЬ ^алкил-NH-Q -8алкил-О-С1 -8алкил.
Используемый здесь термин "(С^ажокси-С^алкил^-амино-С^алкокси" означает радикал формулы: -О-С^ажил-^С^алкил-О-С^алкилЬ.
Используемый здесь термин "(С1-8алкокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкокси" означает радикал формулы: -О-С^алкил-^С^алкилХС^алкил-О-С^алкил).
Используемый здесь термин "С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -С -8алкил-NH-С1 -8алкил-О-С -8алкил.
Используемый здесь термин "(С^ажокси-С^алкил^-амино-С^ажил" означает радикал формужг -С ^алкил-^С -8алкил-0-С1 -8алкил)2.
Используемый здесь термин "(С1-8алкокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-^С^алкилХС^алкил-О-С^алкил).
Используемый здесь термин "C1-8алкоксикарбонил" означает радикал формулы: -С^-О-С^алкил.
Используемый здесь термин "С^алкоксикарбонил-С^алкенил" означает радикал формулы: СЬ8ал-кенил-С(О)-О-C1 -8алкил.
Используемый здесь термин "С^алкоксикарбониламино" означает радикал формулы: -№Н-С(О)-О-C1-8алкил.
Используемый здесь термин "С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^алкил. Используемый здесь термин "(С1-8алкил)2-амино" означает радикал формулы: -^С^ажил)^ Используемый здесь термин "С^алкиламино-С^аженил" означает радикал формулы: -С2-8алке-нил-NH-С1-8алкил.
Используемый здесь термин "(С^алкилЬ-амино-С^алкенил" означает радикал формужг -С2-8алке-нил-N(С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин "С^алкиламино-С^алкокси" означает радикал формулы: -О-СЬ8ал-кил-МЛ-С^алкил.
Используемый здесь термин "(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси" означает радикал формулы: -О-СЬ8ал-кил-N(С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин "С^алкиламино-С^алкил" означает радикал формулы: -С^ажил-NH-С1-8алкил.
Используемый здесь термин "(С^алкил^-амино-С^алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-N(С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин "С^ажиламино-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-Q-8 алкил-NH-С1 -8алкил.
Используемый здесь термин "(С^ажил^-амино-С^алкиламино" означает радикал формужг -NH-С -8алкил-N(С1 -8алкил)2.
Используемый здесь термин "(С^алкиламино-С^алкил^-амино" означает радикал формулы: -N(С1-8алкил-NH-С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин "[(С^ажил^-амино-С^ажил^-амино" означает радикал формужг -N[С1-8алкил-N(С1-8алкил)2]2.
Используемый здесь термин "(С^алкил^ино-С^ажилКС^алкиОамино" означает радикал формулы: -N(C1-8алкил)(C1-8алкил-NH-С1-8алкил).
Используемый здесь термин "[(С^ажил^-амино-С^ажилКС^алкиОамино" означает радикал формулы: -N(Q -8алкил) [СЬ -8алкил-N(С1 -8алкил)2].
Используемый здесь термин "С^алкиламино-С^ажинил" означает радикал формулы: -С2-8алки-нил-NH-С1-8алкил.
Используемый здесь термин "(С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил" означает радикал формулы: -С2-8ал-кинил-N(С1 -8алкил)2.
Используемый здесь термин "C1-8алкилкарбонил" означает радикал формулы: -С^-С^алкил. Используемый здесь термин "С^алкилкарбониламино" означает радикал формулы: -NH-C^-Q^ алкил.
Используемый здесь термин "С^алкилтио" означает радикал формулы: -S-C1-8алкил.
Используемый здесь термин "амино-С2-8алкенил" означает радикал формулы: -С^алкенил-NH^ Используемый здесь термин "амино-С^алкокси" означает радикал формулы: -О-С^алкил-NH^ Используемый здесь термин "амино-С^алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-NH^ Используемый здесь термин "амино-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С1-8алкил-
NH2.
Используемый здесь термин "(амино-С^ажил^-амино" означает радикал формулы: -N(С1-8алкил-
NH2)2.
Используемый здесь термин "(амино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино" означает радикал формулы:
-N(Q -8алкил)(С1 -8алкил-NH2).
Используемый здесь термин "амино-С2-8алкинил" означает радикал формулы: -С^алкинил-NH^ Используемый здесь термин "арил-С^алкоксикарбонил" означает радикал формулы: -С(О)-0-С1-8
алкиларил.
Используемый здесь термин "арил-С^алкил" означает радикал формужг -C1-8алкиларил. Используемый здесь термин "арил-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^алкиларил. Используемый здесь термин "(арил-С^алкил^-амино" означает радикал формулы: -N(Cl- алкилар-
ил)2.
Используемый здесь термин "(арил-С^алкилХС^ажщОамино" означает радикал формужг -N(Cl-8 алкилХС -8алкиларил).
Используемый здесь термин "арил-С^алкиламино-С^алкил" означает радикал формулы: -С1-8 ал-кил-NH-С1-8алкиларил.
Используемый здесь термин "(арил-С^алкил^-амино-С^алкил" означает радикал формужг -Cl-8 алкил-N(С1 -8алкиларил)2.
Используемый здесь термин "(арил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -С^ажил-^С^алкилХС^алкиларил).
Используемый здесь термин "ариламино" означает радикал формужг -NH-арил.
Используемый здесь термин "ариламинокарбонил" означает радикал формулы: -С(О)-NH-арил.
Используемый здесь термин "арилсульфонилокси-С^алкил" означает радикал формужг -СЬ8ал-кил-О-802-арил.
Используемый здесь термин "бензоксикарбонил" означает радикал формулы: -С(О)-О-СH2-фенил. Используемый здесь термин "С^нциклоажил-С^ажил" означает радикал формулы: -С^алкил-С^ 14циклоалкил.
Используемый здесь термин "С^мциклоалкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^мцикло-алкил.
Используемый здесь термин "С^мциклоалкилокси" означает радикал формужг -0-С3-14циклоалкил.
Используемый здесь термин "гало" или "галоген" обычно означает радикал с атомом галогена, включая фтор, хлор, бром и иод.
Используемый здесь термин "галоген-С^алкокси" означает радикал формулы: -О-С^алкилгалоген, где -C1-8алкил частично или полностью замещен одним или более атомами галогена, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "галоген-С^алкил" означает радикал формулы: С^алкилгалоген, где С^алкил частично или полностью замещен одним или более атомами галогена, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "галоген-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^ал-килгалоген.
Используемый здесь термин "(галоген-С^ажилХС^алкщОамино" означает радикал формулы: -N(Cl ^алкилХС -8алкилгалоген).
Используемый здесь термин "(галоген-С^ажил^-амино" означает радикал формулы: -^С^алк-илгалоген)2.
Используемый здесь термин "гетероарил-С^алкокси" означает радикал формулы: -О-С^алкил-гетероарил.
Используемый здесь термин "гетероарил-C1-8алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-гетероарил.
Используемый здесь термин "гетероарил-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^ал-килгетероарил.
Используемый здесь термин "(гетероарил-С^алкил^-амино" означает радикал формужг -N(C1-8ал-килгетероарил)2.
Используемый здесь термин "(гетероарил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино" означает радикал формулы: -N(Q -8алкил)(C1 -8алкилгетероарил).
Используемый здесь термин "гетероарил-С^алкиламино-С^алкил" означает радикал формулы: -С1-8алкил-NH-С1-8алкилгетероарил.
Используемый здесь термин "(гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -C1-8алкил-N(С1-8алкилгетероарил)2.
Используемый здесь термин "(гетероарил-С^алкилХС^ажщОамино-С^алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-^С^алкилХС^алкилгетероарил).
Используемый здесь термин "гетероариламино" означает радикал формулы: -NH-гетероарил.
Используемый здесь термин "гетероциклил-С^алкокси" означает радикал формулы: -0-С^алкил-гетероциклил.
Используемый здесь термин "гетероциклил-С^алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-гетероциклил.
Используемый здесь термин "гетероциклил-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-Cl-8 алкилгетероциклил.
Используемый здесь термин "(гетероциклил-С^алкил^-амино" означает радикал формулы: -N(Cl-8 алкилгетероциклил)2.
Используемый здесь термин "(гетероциклил-С^ажилХС^алкщОамино" означает радикал формулы: -N(Q -8алкил)(C1 -8алкилгетероциклил).
Используемый здесь термин "гетероциклил-С^ажиламино-С^алкил" означает радикал формулы: -С1-8алкил-NH-С1-8алкилгетероциклил.
Используемый здесь термин "(гетероциклил-С^алкил^-амино-С^алкил" означает радикал формулы: -С^ажил-^С^алкилгетероциюлилЬ.
Используемый здесь термин "(гетероциклил-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -С^алкил-^С^алкилХС^алкижетероциклил).
Используемый здесь термин "гетероциклиламино" означает радикал формулы: -NH-гетероциклил.
Используемый здесь термин "(гетероциклилХС^алкщОамино" означает радикал формулы: -N(Q-8 алкил)(гетероциклил).
Используемый здесь термин "гетероциклиламино-С^алкил" означает радикал формулы: -Сь8алкил-NH-гетероциклил.
Используемый здесь термин "гетероциклилкарбонил" означает радикал формулы: -С(О)-гетероциклил.
Используемый здесь термин "гетероциклилкарбонилокси" означает радикал формулы: -0-С(О)-гетероциклил.
Используемый здесь термин "гетероциклилокси" означает радикал формулы: -О-гетероциклил. Используемый здесь термин "гидрокси" означает радикал формулы: -0H.
Используемый здесь термин "гидрокси-С^алкокси-С^алкил" означает радикал формулы: -СЬ8ал-кил-О-С1-8алкил-0H.
Используемый здесь термин "гидрокси-С^алкил" означает радикал формулы: ^^^№0^ где С^алкил частично или полностью замещен одним или более атомами гидрокси-радикалами, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин "гидрокси-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С^алкил-
0H.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкил)2-амино" означает радикал формулы: -^С^ал-кил-0H)2.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С^алкилХС^алкщОамино" означает радикал формулы: -N(Q -8алкил)(С1 -8алкил-0H).
Используемый здесь термин "гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -С1-8 алкил-NH-С1 -8алкил-0H.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил" означает радикал формулы:
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил" означает радикал формулы: -C1-8алкил-N(С1-8алкил)(С1-8алкил-0H).
Используемый здесь термин "гидрокси-С^алкиламино-С^алкокси" означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-NH-С1-8алкил-0H.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси" означает радикал формулы: -0-Q -8алкил-N(С1 -8алкил-0H)2.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкокси" означает радикал формулы: -0-С1-8алкил-N(С1-8алкил)(С1-8алкил-0H).
Используемый здесь термин "гидрокси-С^алкиламино-С^алкиламино" означает радикал формулы: -NH-С1-8алкил-NH-С1-8алкил-0H.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С^алкил^ино-С^ажилЬ-амино" означает радикал формулы: -N(С1-8алкил-NH-С1-8алкил-0H)2.
Используемый здесь термин "(гидрокси-С^алкил^-амино-С^алкиламино" означает радикал формулы: -№[-^^^№N(^^^№0^^
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино" означает радикал формулы: -N(C1-8алкил)(С1-8алкил-NH-С1-8алкил-0H).
Используемый здесь термин "[(гидрокси-С^ажилЬ-амино-С^ажилКС^алкщОамино" означает
радикал формулы: -N(C1-8алкил)[С1-8алкил-N(С1-8алкил-0H)2].
Используемый здесь термин "(гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкиламино" означает радикал формулы: -NH-C1-8алкил-N(С1-8алкил, С1-8алкил-0H).
Используемый здесь термин "[(гидрокси-С1-8алкил)(C1-8алкил)амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино" означает радикал формулы: -N(С1-8алкил)[С1-8алкил-N(С1-8алкил)(С1-8алкил-0H)].
Используемый здесь термин "заместитель" означает замещающие атомы или группы в соответствующих положениях на атомах центральной молекулы, которые присоединены к атому в указанном положении, вместо одного или более атомов водорода, при условии, что валентность присоединенного атома не будет превышать допустимую валентность или общую валентность, и такое замещение будет приводить к образованию стабильного соединения. В соответствии с этим, комбинации заместителей и/или замещающих групп или атомов допустимы только в том случае, если в результате таких комбинаций образуются стабильные соединения. Следует также отметить, что любой углерод, а также гетероа-том с уровнем валентности, который является ненасыщенным, как описано или указано в настоящей заявке, очевидно должен иметь число атомов водорода, достаточное для насыщения описанной или указанной валентности.
В целях настоящего описания, если одна или более групп-заместителей для соединения формулы (I) включает функциональные группы, введенные в соединение формулы (I), то каждая функциональная группа, находящаяся в любом положении описанного соединения, может быть независимо выбрана, и если это необходимо, независимо и/или необязательно замещена.
Используемый здесь термин "независимо выбранный" или "каждый выбран" относится к функциональным группам в различных заместителях, которые могут быть присоединены более чем один раз на структуре центральной молекулы, где характер замещения в каждом случае не зависит от характера замещения в любом другом случае. Кроме того, использование общего заместителя на центральной структуре описанного здесь соединения предусматривает замену общего заместителя молекулами-заместителями, принадлежащими к конкретному роду, например, арил может быть независимо замещен фенилом или нафталенилом (также называемый нафтилом) и т.п., и полученное в результате соединение входит в объем описанных здесь соединений.
Используемый здесь термин "в каждом случае", если он употребляется в выражении "...арил, арил-С^алкил, гетероциклил и гетероциклил-С^алкил, где в каждом случае, арил и гетероциклил необязательно замещены одним или двумя заместителями...", означает необязательное и независимое замещение на каждом из арильных и гетероциклильных кольцах и на арильных и гетероциклильных частях арил-С^ алкила и гетероциклил-С^алкила.
Используемый здесь термин "необязательно замещенный" означает, что определенные молекулы, группы, радикалы или фрагменты заместителя входят в объем данного рода и могут быть независимо выбраны, если это необходимо, для замещения одного или более атомов водорода на указанном атоме, присоединенном к центральной молекуле.
Используемые здесь термины "стабильное соединение" или "стабильная структура" означают соединение, которое является достаточно устойчивым при его выделении с нужной степенью чистоты из реакционной смеси и ее препаратов с получением эффективного терапевтического средства.
Приведенные здесь названия соединений были присвоены с использованием компьютерной программы ACD Labs Index Name, разработанной ACD Labs, и/или компьютерной программы ChemDraw Ultra, разработанной CambridgeSoft(r). Если название описанного здесь соединения не соответствует указанной структуре, то в качестве руководства для определения соединения следует принимать во внимание структуру, а не название соединения. Hоменклатура определенных здесь радикалов-заместителей может несколько отличаться от химического названия соединения, от которого они происходят; специалисту в данной области понятно, что при определении радикала-заместителя подразумевается, что он должен быть указан в химическом названии.
Термин "SMN", если это не оговорено особо, означает ген ДНК или PHK SMNl человека и/или ген ДНК или PHK SMN2 человека. В конкретном варианте осуществления изобретения термин "SMNl" означает ген ДНК или PHK SMNl человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения термин "SMN2" означает ген ДЖ или РЖ SMN2 человека.
Последовательности нуклеиновой кислоты для генов SMNl и SMN2 человека известны в данной области. Последовательности нуклеиновой кислоты SMNl человека можно найти, например, в GenBank под номерами доступа DQ894095, NM 000344, NM 022874 и ВС062723. Последовательности нуклеиновой кислоты SMN2 человека можно найти, например, в NM 022875, NM 022876, NM 022877, NM 0l74ll, DQ894734 (Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen), Carlsbad, Calif), BC000908, BC070242, CR595484, CR598529, CR609539, U2l9l4 и ВС015308.
Ген SMNl может присутствовать на прямой цепи человеческой хромосомы 5 в области, простирающейся от приблизительно нуклеотида 70220768 до приблизительно нуклеотида 70249769. Приблизительные положения экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 SMNl на человеческой хромосоме 5 представляют собой:
положения 7024l893-70242003 экзона 6;
положения 70242004-70247767 интрона 6; положения 70247768-7024782l экзона 7; положения 70247822-70248265 интрона 7 и положения 70248266-70248839 экзона 8.
Ген SMN2 может присутствовать на прямой цепи человеческой хромосомы 5 в области, простирающейся от приблизительно 69345350 нуклеотида до приблизительно 69374349 нуклеотида.
Приблизительные положения экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 гена SMN2 на человеческой хромосоме 5 представляют собой:
положения 693664 68-69366578 экзона 6;
положения 69366579-69372347 интрона 6;
положения 69372348-6937240l экзона 7;
положения 69372402-69372845 интрона 7 и
положения 69372846-693734l9 экзона 8.
В конкретных вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности, определенные выше для экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 SMNl, используются в описанных здесь конструкциях нуклеиновой кислоты минигена SMNl. В других вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 SMN2, представленные в приведенных ниже примерах, используются в описанных здесь конструкциях нуклеиновой кислоты минигена SMN2.
Термины "Smn" или "белок Smn", если это не оговорено особо, означают человеческой белок Smn, содержащий аминокислотные остатки, кодируемые экзонами l-7 гена SMNl и/или гена SMN2. В конкретных вариантах осуществления изобретения белок Smn является стабильным и функциональным in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам в данной области. В другом конкретном варианте осуществления изобретения белок Smn представляет собой полноразмерный белок, кодируемый геном SMNl и/или геном SMN2 человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения белок Smn имеет аминокислотную последовательность, находящуюся в GenBank под номером доступа NP 000335, AAC50473.l, AAA66242.l или NP_059l07.
Используемый здесь термин "повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мPHK, которая транскрибируется из гена SMN2" и аналогичные термины относятся, если это не оговорено особо, к включению полноразмерной, интактной, неусеченной последовательности экзона 7 SMN2 в зрелую мPHK, которая транскрибируется из гена SMN2 (то есть, такое включение приводит к продуцированию полноразмерной мPHK SMN2) in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам в данной области, так, чтобы это приводило к повышению уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMN2 in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам в данной области; или к повышению уровня экспрессии стабильного и функционального белка Smn, продуцируемого из гена SMN2 in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии слитого белка, кодируемого минигеном in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии белка Smn, продуцируемого из гена SMN2 у индивидуума (например, у животного с моделью SMA или у человека или пациента с SMA), нуждающегося в этом.
Используемый здесь термин "повышает уровень включения экзона 7 SMNl в мPHK, которая транскрибируется из гена SMNl" и аналогичные термины относятся, если это не оговорено особо, к включению полноразмерной, интактной, неусеченной последовательности экзона 7 SMNl в зрелую мPHK, которая транскрибируется из гена SMNl (то есть, такое включение приводит к продуцированию полноразмерной мPHK SMNl) in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам, так, чтобы это приводило к повышению уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMNl in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии стабильного и функционального белка Smn, продуцируемого из гена SMNl in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии гибридного белка, кодируемого минигеном in vitro и/или in vivo, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии белка Smn, продуцируемого из гена SMNl у индивидуума (например, у животного с моделью SMA или у человека или пациента с SMA), нуждающегося в этом.
Термин "существенное изменение", используемый здесь по отношению к количеству мPHK, означает, что данное изменение количества мPHK не является ститистически значимым, например, величина р меньше величины, выбранной из 0,l, 0,05, 0,0l, 0,005, 0,00l, 0,0005, 0,000l, 0,00005 или 0,0000l.
Используемые здесь термины "индивидуум" и "пациент" являются взаимозаменяемыми и означают животное или любой живой организм, которые обладают сенсорной и локомоторной произвольной активностью и которым для поддержания жизни требуется кислород и органическая пища. Их неограничивающими примерами являются человек, лошадь, свинья, корова, крыса, мышь, собака и кошка. В некоторых вариантах осуществления изобретения индивидуумом является млекопитающее или теплокровное позвоночное животное. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанный индивидуум не является человеком. В конкретных вариантах осуществления изобретения таким индивидуумом является
человек. В одном из конкретных вариантов осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек с SMA.
Используемый здесь термин "пожилой человек" означает человека в возрасте 65 лет или старше. Используемый здесь термин "взрослый человек" означает человека в возрасте l8 лет или старше. Используемый здесь термин "ребенок" означает человека в возрасте от l года до l8 лет. Используемый здесь термин "младенец" означает новорожденного до l года. Используемый здесь термин "ребенок раннего возраста" означает человека в возрасте от l года до 3
лет.
Формы соединений
Используемые здесь термины "соединение формулы (Ia)", "соединение формулы (Ial)", "соединение формулы (Ia2)", "соединение формулы (Ia3)", "соединение формулы (Ia4)", "соединение формулы (II)", "соединение формулы (IIa)", "соединение формулы (IIal)", "соединение формулы (IIa2)", "соединение формулы (IIa3)", "соединение формулы (IIa4)", "соединение формулы (III)", "соединение формулы (IIIa)", "соединение формулы (IIIal)", "соединение формулы (IIIa2)", "соединение формулы (IV)", "соединение формулы (IVa)", "соединение формулы (IVal)", "соединение формулы (IVa2)", "соединение формулы (V)", "соединение формулы (Va)", "соединение формулы (Val)", "соединение формулы (Va2)", "соединение формулы (Va3)", "соединение формулы (Va4)", "соединение формулы (VI)", "соединение формулы (VIa)", "соединение формулы (VIal)", "соединение формулы (VIa2)", "соединение формулы (VII)", "соединение формулы (VIIa)", "соединение формулы (VIIal)", "соединение формулы (VIIa2)", "соединение формулы (VIII)", "соединение формулы (VIIIa)", "соединение формулы (VIIIal)", "соединение формулы (VIIIa2)", "соединение формулы (IX)", "соединение формулы (IXa)", "соединение формулы (IXal)", "соединение формулы (IXa2)", "соединение формулы (IXa3)", "соединение формулы (IXa4)", "соединение формулы (X)", "соединение формулы (Xa)", "соединение формулы (Xal)", "соединение формулы (Ха2)", "соединение формулы (XI)", "соединение формулы (XIa)", "соединение формулы (XIal)", "соединение формулы (XIa2)", "соединение формулы (XII)", "соединение формулы (XIIa)", "соединение формулы (XIIal)", "соединение формулы (XIIa2)", "соединение формулы (XIII)", "соединение формулы (XIIIa)", "соединение формулы (XIIIal)", "соединение формулы (XIIIa2)", "соединение формулы (XIV)", "соединение формулы (XIVa)", "соединение формулы (XIVal)", "соединение формулы (XIVa2)", "соединение формулы (XV)", "соединение формулы (XVa)", "соединение формулы (XVal)", "соединение формулы (XVa2)", "соединение формулы (XVI)", "соединение формулы (XVIa)", "соединение формулы (XVIal)", "соединение формулы (XVIa2)", "соединение формулы (XVII)", "соединение формулы (XVIIa)", "соединение формулы (XVIIal)", "соединение формулы (XVIIa2)", "соединение формулы (XVIII)", "соединение формулы (XVIIIa)", "соединение формулы (XVIIIal)", "соединение формулы (XVIIIa2)", "соединение формулы (XIX), "соединение формулы (XIXа)", "соединение формулы (XIXal)" и "соединение формулы (XIXa2)" означают, что каждое из этих соединений принадлежит к подроду соединения формулы (I) или его формы.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, для того, чтобы не повторять слова "различные подроды соединения формулы (I), термин "соединение формулы (I) или его форма" имеет инклюзивное значение и означает соединение формулы (Ia) или его форму, соединение формулы (Ial) или его форму, соединение формулы (Ia2) или его форму, соединение формулы (Ia3) или его форму, соединение формулы (Ia4) или его форму, соединение формулы (II) или его форму, соединение формулы (IIa) или его форму, соединение формулы (IIal) или его форму, соединение формулы (IIa2) или его форму, соединение формулы (IIa3) или его форму, соединение формулы (IIa4) или его форму, соединение формулы (III) или его форму, соединение формулы (IIIa) или его форму, соединение формулы (IIIal) или его форму, соединение формулы (IIIa2) или его форму, соединение формулы (IV) или его форму, соединение формулы (IVa) или его форму, соединение формулы (IVal) или его форму, соединение формулы (IVa2) или его форму, соединение формулы (V) или его форму, соединение формулы (Va) или его форму, соединение формулы (Val) или его форму, соединение формулы (Va2) или его форму, соединение формулы (Va3) или его форму, соединение формулы (Va4) или его форму, соединение формулы (VI) или его форму, соединение формулы (VIa) или его форму, соединение формулы (VIal) или его форму, соединение формулы (VIa2) или его форму, соединение формулы (VII) или его форму, соединение формулы (VIIa) или его форму, соединение формулы (VIIal) или его форму, соединение формулы (VIIa2) или его форму, соединение формулы (VIII) или его форму, соединение формулы (VIIIa) или его форму, соединение формулы (VIIIal) или его форму, соединение формулы (VIIIa2) или его форму, соединение формулы (IX) или его форму, соединение формулы (IXa) или его форму, соединение формулы (IXal) или его форму, соединение формулы (IXa2) или его форму, соединение формулы (IXa3) или его форму, соединение формулы (IXa4) или его форму, соединение формулы (X) или его форму, соединение формулы (Xa) или его форму, соединение формулы (Xal) или его форму, соединение формулы (Ха2) или его форму, соединение формулы (XI) или его форму, соединение формулы (XIa) или его форму, соединение формулы (XIal) или его форму, соединение формулы (XIa2) или его форму, соединение формулы (XII) или его форму, соединение формулы (XIIa) или его форму, соединение формулы (XIIal) или его форму, соединение формулы (XIIa2) или его форму, соединение формулы (XIII) или его форму, соединение формулы
(XIIIa) или его форму, соединение формулы (XIIIal) или его форму, соединение формулы (XIIIa2) или его форму, соединение формулы (XIV) или его форму, соединение формулы (XIVa) или его форму, соединение формулы (XIVal) или его форму, соединение формулы (XIVa2) или его форму, соединение формулы (XV) или его форму, соединение формулы (XVa) или его форму, соединение формулы (XVal) или его форму, соединение формулы (XVa2) или его форму, соединение формулы (XVI) или его форму, соединение формулы (XVIa) или его форму, соединение формулы (XVIal) или его форму, соединение формулы (XVIa2) или его форму, соединение формулы (XVII) или его форму, соединение формулы (XVIIa) или его форму, соединение формулы (XVIIal) или его форму, соединение формулы (XVIIa2) или его форму, соединение формулы (XVIII) или его форму, соединение формулы (XVIIIa) или его форму, соединение формулы (XVIIIal) или его форму, соединение формулы (XVIIIa2) или его форму, соединение формулы (XIX) или его форму, соединение формулы (XIXa) или его форму, соединение формулы (XIXal) или его форму или соединение формулы (XIXa2) или его форму, используемые либо отдельно, либо в сочетании друг с другом.
Таким образом, подразумевается, что варианты осуществления "соединения формулы (I)" и ссылки на "соединения формулы (I)" включают соединения формулы (Ia), формулы (Ial), формулы (Ia2), формулы (Ia3), формулы (Ia4), формулы (II), формулы (IIa), формулы (IIal), формулы (IIa2), формулы (IIa3), формулы (IIa4), формулы (III), формулы (IIIa), формулы (IIIal), формулы (IIIa2), формулы (IV), формулы (IVa), формулы (IVal), формулы (IVa2), формулы (V), формулы (Va), формулы (Val), формулы (Va2), формулы (Va3), формулы (Va4), формулы (VI), формулы (VIa), формулы (VIal), формулы (VIa2), формулы (VII), формулы (VIIa), формулы (VIIal), формулы (VIIa2), формулы (VIII), формулы (VIIIa), формулы (VIIIal), формулы (VIIIa2), формулы (IX), формулы (IXa), формулы (IXal), формулы (IXa2), формулы (IXa3), формулы (IXa4), формулы (X), формулы (Xa), формулы (Xal), формулы (Ха2), формулы (XI), формулы (XIa), формулы (XIal), формулы (XIa2), формулы (XII), формулы (XIIa), формулы (XIIal), формулы (XIIa2), формулы (XIII), формулы (XIIIa), формулы (XIIIal), формулы (XIIIa2), формулы (XIV), формулы (XIVa), формулы (XIVal), формулы (XIVa2), формулы (XV), формулы (XVa), формулы (XVal), формулы (XVa2), формулы (XVI), формулы (XVIa), формулы (XVIal), формулы (XVIa2), формулы (XVII), формулы (XVIIa), формулы (XVIIal), формулы (XVIIa2), формулы (XVIII), формулы (XVIIIa), формулы (XVIIIal), формулы (XVIIIa2), формулы (XIX), формулы (XIXa), формулы (XIXal) и формулы
(XIXa2).
Используемый здесь термин "форма" означает соединение формулы (I), выбранное из его свободной кислоты, свободного основания, соли, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диасте-реомера или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения форма соединения формулы (I) выбрана из его соли, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или тауто-мера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения форма соединения формулы (I) выбрана из его свободной кислоты, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереоме-ра или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения форма соединения формулы (I) выбрана из его свободного основания, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастере-омера или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его свободная кислота, свободное основание или соль.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его изотополог.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его стереоизомер, рацемат, энантиомер или диастереомер.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его таутомер.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является фармацевтически приемлемая форма.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма были выделены для применения.
Используемый здесь термин "выделенный" относится к физическому состоянию соединения формулы (I) или его формы после выделения и/или очистки (например, из реакционной смеси или из природного источника) методом синтеза или комбинированным методом синтеза, включающим описанные здесь способы выделения или очистки, или методами, хорошо известными специалистам (например, с помощью хроматографии, перекристаллизациии и т.п.), до достижения чистоты, достаточной для харак-теризации соединения стандартными аналитическими методами, описанными в настоящей заявке или хорошо известными специалистам.
Используемый здесь термин "защищенный" означает, что функциональная группа на соединении формулы (I) имеет форму, модифицированную в целях предотвращения нежелательных побочных реак
ций в защищенном положении при осуществлении реакции взаимодействия указанного соединения. Подходящие защитные группы известны специалистам, а также описаны в стандартных руководствах, таких как, например, T. W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis (l99l), Wiley, New York.
В настоящем изобретении также рассматриваются пролекарства соединения формулы (I) или его формы.
Используемый здесь термин "пролекарство" означает, что функциональная группа на соединении формулы (I) присутствует в форме (например, действующей как активный или неактивный предшественник лекарственного средства), которая может быть превращена in vivo в активное или более активное соединение формулы (I) или в другую его форму. Такое превращение может происходить согласно различным механизмам (например, под действием химических метаболических и/или неметаболических процессов), таким как, например, гидролиз и/или метаболизм в крови, печени и/или в других органах и тканях. Обсуждение применения пролекарств приводится в руководстве V.J. Stella, et. al., "Biotechnology: Pharmaceutical Aspects, Prodrugs: Challenges and Rewards" American Association of Pharmaceutical Scientists and Springer Press, 2007.
В одном из примеров, если соединение формулы (I) или его форма содержат функциональную группу карбоновой кислоты, то пролекарство может включать сложный эфир, образованный посредством замещения атома водорода кислотной группы функциональной группой, такой как алкил и т.п. В другом примере, если соединение формулы (I) или его форма содержат спиртовую функциональную группу, то пролекарство может быть образовано посредством замещения атома водорода спиртовой группы функциональной группой, такой как алкил или замещенный карбонил и т.п. В другом примере, если соединение формулы (I) или его форма содержат функциональную аминогруппу, то пролекарство может быть образовано посредством замещения одного или более атомов водорода амина функциональной группой, такой как алкил или замещенный карбонил. В другом примере, если соединение формулы (I) или его форма содержат водородный заместитель, то пролекарство может быть образовано посредством замещения одного или более атомов водорода алкильным заместителем.
Фармацевтически приемлемыми пролекарствами соединений формулы (I) или их форм являются соединения, замещенные, если это необходимо, одной или более группами, такими как сложные эфиры карбоновой кислоты, сложные эфиры сульфоновой кислоты, сложные эфиры аминокислоты, сложные эфиры фосфоновой кислоты, сложные эфиры моно-, ди- или трифосфорной кислоты или алкильные заместители. В соответствии с приведенным здесь описанием, для специалиста в данной области очевидно, что один или более таких заместителей могут быть использованы для получения соединения (I) или его формы, которые могут быть применены в качестве пролекарства.
Соединения формулы (I) могут образовывать соли, которые входят в объем настоящего изобретения. При ссылке на соединение формулы (I) предусматривается, что такое соединение может присутствовать в виде соли, если это не оговорено особо. Используемый здесь термин "соль(-и)" означает соли кислоты, образованные неорганическими и/или органическими кислотами, а также соли основания, образованные неорганическими и/или органическими основаниями. Кроме того, если соединение формулы (I) содержит основную группу, такую как, но не ограничиваясь ими, пиридин или имидазол, и кислотную группу, такую как, но не ограничиваясь ими, карбоновая кислота, то могут образовываться цвиттер-ионы ("внутренние соли"), которые входят в используемый здесь термин "соль(-и)".
Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемая соль(-и)" означает соли описанных здесь соединений, которые являются безопасными и эффективными (то есть, нетоксичными, физиологически приемлемыми) для введения млекопитающим и обладают биологической активностью, хотя могут быть также использованы и другие соли. Соли соединений формулы (I) могут быть образованы, например, посредством реакции соединения формулы (I) с соответствующим количеством кислоты или основания, таким как эквивалентное или стехиометрическое количество, в среде, в которой данная соль осаждается, или в водной среде, с последующей лиофилизацией.
Фармацевтически приемлемые соли включают одну или более солей кислотных или основных групп, присутствующих в описанных здесь соединениях. Вариантами осуществления кислотно-аддитивных солей являются, но не ограничиваются ими, ацетат, диацетат, фосфат кислоты, аскорбат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, хлорид, цитрат, камфорат, камфор-сульфонат, этансульфонат, формиат, фумарат, гентизинат, глюконат, глюкуронат, глутамат, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, тригидрохлорид, гидроиодид, изоникотинат, лактат, малеат, метан-сульфонат, нафталинсульфонат, нитрат, оксалат, памоат, пантотенат, фосфат, пропионат, сахарат, сали-цилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат (также известный как тозилат), трифтор-ацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п. Один или более вариантов осуществления кислотно-аддитивных солей включают хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, тригидрохлорид, ацетат, диацетат, трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п. Более конкретные варианты осуществления включают хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, трифторацетат, соль трифторук-сусной кислоты и т.п.
Кроме того, кислоты, которые обычно рассматриваются как подходящие для образования фармацевтически приемлемых солей из основных фармацевтических соединений, обсуждаются, например, в
публикациях P. Stahl et al., Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (l977) 66(l) l-l9; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (l986) 33, 20l-2l7; Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (l996), Academic Press, New York; и The Orange Book (см., например, web-сайт Food & Drug Administration, Washington, D.C.). Эти обсуждения вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
Подходящими солями оснований являются, но не ограничиваются ими, соли алюминия, аммония, кальция, лития, магния, калия, натрия, цинка и диэтаноламина. Некоторые описанные здесь соединения могут также образовывать фармацевтически приемлемые соли с органическими основаниями (например, органическими аминами), такими как, но не ограничиваясь ими, дициклогексиламины, трет-бутиламины и т.п., и с различными аминокислотами, такими как, но не ограничиваясь ими, аргинин, лизин и т.п. Группы, содержащие азотистые основания, могут быть кватернизированы такими агентами, как низшие алкилгалогениды (например, метил-, этил- и бутилхлориды, бромиды и иодиды), диалкилсульфаты (например, диметил-, диэтил-и дибутилсульфаты), длинноцепочечные галогениды (например, децил-, лау-рил- и стеарилхлориды, бромиды и иодиды), аралкилгалогениды (например, бензил- и фенетилбромиды) и т.п.
При этом подразумевается, что все эти соли кислот и оснований, входящие в объем настоящего изобретения, являются фармацевтически приемлемыми солями и эквивалентны свободным формам соответствующих соединений, используемых в описанных здесь целях.
Соединения формулы I и их различные формы могут также присутствовать в таутомерной форме. Все такие таутомерные формы рассматриваются здесь как часть настоящего описания.
Соединения формулы (I) могут содержать асимметрические или хиральные центры, и поэтому они могут существовать в различных стереоизомерных формах. Настоящее изобретение включает все сте-реоизомерные формы соединений формулы (I), а также их смеси, включая рацемические смеси.
Описанные здесь соединения формулы (I) могут включать один или более хиральных центров и могут существовать в виде рацемических смесей (R/S) или в виде по существу чистых энантиомеров и диа-стереомеров. Эти соединения могут также существовать в виде, по существу, чистых (R)- или (S)-энантиомеров (если присутствует один хиральный центр). В одном из вариантов осуществления изобретения описанные здесь соединения формулы (I) представляют собой ^)-изомеры и могут существовать в виде энантиомерно чистых композиций, содержащих, по существу, только ^)-изомер. В другом варианте осуществления изобретения описанные здесь соединения формулы (I) представляют собой (R)-изомеры и могут существовать в виде энантиомерно чистых композиций, содержащих, по существу, только ^)-изомер. Как известно специалистам в данной области, если присутствует более чем один хи-ральный центр, то описанные здесь соединения формулы (I) могут также включать части, описанные здесь как (R,R)-, (R,S)-, (S,R)- или ^^)-изомеры, определенные в соответствии с рекомендациями по номенклатуре IUPAC.
Используемый здесь термин "по существу чистый" относится к соединениям, состоящим, по существу, из одного изомера, который присутствует в количестве, превышающем или равном 90%, в количестве, превышающем или равном 92%, в количестве, превышающем или равном 95%, в количестве, превышающем или равном 98%, в количестве, превышающем или равном 99%, или в количестве, равном l00%.
В одном из аспектов изобретения соединение формулы (I) представляет собой по существу чистый ^)-энантиомер, который присутствует в количестве, превышающем или равном 90%, в количестве, превышающем или равном 92%, в количестве, превышающем или равном 95%, в количестве, превышающем или равном 98%, в количестве, превышающем или равном 99%, или в количестве, равном l00%.
В одном из аспектов изобретения соединение формулы (I) представляет собой по существу чистый ^)-энантиомер, который присутствует в количестве, превышающем или равном 90%, в количестве, превышающем или равном 92%, в количестве, превышающем или равном 95%, в количестве, превышающем или равном 98%, в количестве, превышающем или равном 99%, или в количестве, равном l00%.
Используемый здесь термин "рацемат" означает любую смесь изомерных форм, которые не являются "энантиомерно чистыми", включая такие смеси, как, но не ограничиваясь ими, смеси в отношении приблизительно 50/50, приблизительно 60/40, приблизительно 70/30, приблизительно 80/20, приблизительно 85/l5 или приблизительно 90/l0.
Кроме того, настоящее изобретение включает все геометрические изомеры и изомеры положений. Так, например, если соединение формулы (I) включает двойную связь или конденсированное кольцо, то такие цис- и транс-формы, а также их смеси входят в объем настоящего изобретения.
Диастереомерные смеси могут быть разделены на отдельные диастереомеры, исходя из их физико-химических различий, методами, хорошо известными специалистам, такими как, например, хроматография и/или фракционированная кристаллизация.
Энантиомеры могут быть разделены на хиральной ВЭЖХ-колонке или другими известными хрома-тографическими методами.
Энантиомеры могут быть также разделены путем превращения энантиомерной смеси в диастерео-мерную смесь посредством реакции взаимодействия с соответствующим оптически активным соедине
нием (например, с хиральным вспомогательными веществом, таким как хиральный спирт или хлоран-гидрид Мошера), с последующим разделением диастереомеров и превращением (например, гидролизом) отдельных диастереомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Кроме того, некоторые соединения формулы (I) могут представлять собой атропизомеры (например, замещенные биарилы) и рассматриваются как часть настоящего изобретения.
Все стереоизомерные формы (например, геометрические изомеры, оптические изомеры, изомеры положений и т.п.) соединений согласно изобретению (включая соли, сольваты, сложные эфиры, проле-карства и производные пролекарств), которые могут образовываться благодаря асимметрическим атомам углерода на различных заместителях, включая энантиомерные формы (которые могут существовать даже в отсутствие асимметрических атомов углерода), ротамерные формы, атропизомеры, диастереомерные формы и региоизомерные формы, входят в объем настоящего изобретения. Так, например, если соединение формулы (I) включает двойную связь или конденсированное кольцо, то такие цис- и транс-формы, а также их смеси, входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, например, в настоящее изобретение также входят все кето-енольные и имино-енаминовые таутомерные формы соединений. Отдельные стереоизомеры описанных здесь соединений формулы (I) могут, например, по существу не содержать других изомеров, либо они могут присутствовать в рацемической смеси, как описано выше.
При употреблении терминов "соль", "пролекарство" и "производное пролекарства" подразумевается, что эти термины в равной степени относятся к солям, пролекарствам и производным пролекарств всех рассматриваемых изотопологов, стереоизомеров, рацематов или таутомеров соединений согласно изобретению.
Термин "изотополог" означает обогащенные изотопами соединения, которые идентичны описанным здесь соединениям, но в которых один или более атомов замещены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличающиеся от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе. Примерами изотопов, которые могут быть включены в описанные здесь соединения, являются изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как Н2, Н3, С13, С14, Nl5, О18, О17, Р31, Р32, S35, Fl8, Cl35 и Cl36, соответственно, каждый из которых также входит в объем настоящего изобретения.
Некоторые описанные здесь соединения, обогащенные изотопами (например, соединения, меченные Н3 и С14), могут быть использованы в анализах на распределение соединения и/или субстрата в ткани. Изотопы, меченные тритием (то есть, Н3) и углеродом-14 (то есть, С14), являются особенно предпочтительными с точки зрения простоты их получения и детектирования. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (то есть, обогащение дейтерием), может давать некоторые терапевтические преимущества, обусловленные более высокой метаболической стабильностью (например, более продолжительным временем полужизни in vivo или возможностью введения более низких доз терапевтического средства), и поэтому в некоторых случаях они могут быть более предпочтительными. Обычно обогащенные изотопами соединения формулы (I) могут быть получены известными специалистам в данной области методами путем замены соответствующего реагента, не обогащенного изотопами, на соответствующий реагент, обогащенный изотопами.
Если соединения обогащены дейтерием, то отношение дейтерий/водород на дейтерированных атомах молекулы значительно превышает природное отношение дейтерий/водород.
Описанный здесь вариант осуществления изобретения может включать изотопологическую форму соединения формулы (I), где в изотопологе один или более атомов водорода замещены на одном или более членах соединения формулы (I) одним или более атомами дейтерия.
Описанный здесь вариант осуществления изобретения может включать соединение формулы (I) и его формы, где у атома углерода могут присутствовать от 1 до 3 атомов водорода, необязательно замещенных дейтерием.
Описанные здесь одно или более соединений могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах вместе с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п., и эти сольватированные и несольватированные формы входят в объем настоящего изобретения.
Используемый здесь термин "сольват" означает описанное здесь соединение, физически ассоциированное с одной или более молекулами растворителя. Такая физическая ассоциация включает различные степени ионного и ковалентного связывания, включая связывание с водородом. В некоторых случаях сольват может присутствовать в изолированной форме, например, если одна или более молекул растворителя включены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. Используемый здесь термин "сольват" включает сольваты как в жидкой фазе, так и изолированные сольваты. Неограничивающими примерами подходящих сольватов являются этаноляты, метаноляты и и т.п.
Одно или более описанных здесь соединений могут быть необязательно превращены в сольват. Обычно, сольваты получают известными способами. Типичный неограничивающий способ включает растворение соединения в нужном количестве соответствующего растворителя (органического растворителя или воды или их смеси) при температуре выше температуры окружающей среды, и охлаждение раствора со скоростью, достаточной для образования кристаллов, которые затем выделяют стандартными
методами. Аналитические методы, такие как, например, инфракрасная спектроскопия, позволяют выявить присутствие растворителя (или воды) в кристаллах в качестве сольвата (или гидрата).
Используемый здесь термин "гидрат" означает сольват, в котором молекулой растворителя является
вода.
Полиморфные кристаллические и аморфные формы соединений формулы (I) и солей, сольватов, сложных эфиров и пролекарств соединений формулы (I) также входят в объем описанных здесь соединений.
Применение соединений
Соединения формулы (I) или их формы, повышающие уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, описаны в настоящей заявке. Было показано, что такие соединения формулы (I) или их формы повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено с помощью описанных здесь анализов (см. ниже раздел "Биологические примеры"). В соответствии с этим, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы в качестве стимуляторов включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из
гена SMN2.
Соединения формулы (I) или их формы, повышающие уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1, описаны в настоящей заявке. Такие соединения формулы (I) или их формы могут повышать уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1, как было определено с помощью анализа минигена SMN1. В соответствии с этим, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы в качестве стимуляторов включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1.
В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способам модуляции включения эк-зона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую из гена SMN2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формами. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам модуляции включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую из гена SMN2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формами, которые модулируют экспрессию мини-гена SMN2, описанного в настоящей заявке или в публикации Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в "Биологическом примере 1". Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формами in vitro и/или in vivo, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента, где SMA вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене SMN1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. В другом варианте осуществления изобретения человеческой клеткой является клетка человека, происходящая от пациента с SMA. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческая клетка происходит от клеточной линии, такой как GM03813, GM00232, GM09677 и/или GM23240 (доступные от Coriell Institute). В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формами, которые повышают уровень экспрессии минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в "Биологическом примере 1". Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой in vitro и/или in vivo, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуще
ствления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента, где SMA вызвана инактиви-рующими мутациями или делециями в гене SMN1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. В другом варианте осуществления изобретения человеческой клеткой является клетка человека, происходящая от пациента с SMA. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческая клетка происходит от клеточной линии, такой как GM03813, GM00232, GM09677 и/или GM23240 (доступные от института Coriell Institute). В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения эк-зона 7 SMN1 в РНК, транскрибируемую из гена SMN1, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 SMN1 в РНК, транскрибируемую из гена SMN1, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 SMN1 в РНК, транскрибируемую из гена SMN1, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой, которые модулируют экспрессию мини-гена SMN1, описанного в публикации Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой in vitro и/или in vivo, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 SMN1 и SMN2 в РНК, транскрибируемую из генов SMN1 и SMN2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой in vitro и/или in vivo, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу модуляции включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую из гена SMN2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу модуляции включения экзона 7 SMN2 в РНК, транскрибируемую из гена SMN2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы, которые модулируют экспрессию минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в "Биологическом примере 1". В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы, которые стимулируют повышение уровня экспрессии минигена SMN2, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена
в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в "Биологическом примере 1". В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN1 в РНК, транскрибируемую из гена SMN1, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN1 в РНК, транскрибируемую из гена SMN1, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы, которые модулируют экспрессию минигена SMN1, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN1 и SMN2 в РНК, транскрибируемую из генов SMN1 и SMN2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Smn, где указанный способ включает приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Smn, где указанный способ включает приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Smn, где указанный способ включает приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой in vitro и/или in vivo, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с SMA или присутствует у этого пациента, где SMA вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене SMN1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. В другом варианте осуществления изобретения человеческой клеткой является клетка человека, происходящая от пациента с SMA. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческая клетка происходит от клеточной линии, такой как GM03813, GM00232, GM09677 и/или GM23240 (доступные от Coriell Institute). В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Smn, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Smn, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, например, как было определено с помощью клеточного или бесклеточного анализа, описанного ниже в разделе "Биологические примеры". В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Smn, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью SMA соединения формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2, например, как было определено с помощью клеточного или бесклеточного анализа.
В одном из вариантов осуществления изобретения соединение формулы (I) повышает уровень экспрессии минигена, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления
изобретения соединение формулы (I) повышает уровень экспрессии минигена, описанного в Примерах Международной публикации заявки WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) повышает уровень экспрессии минигена, описанного ниже в биологическом примере 1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, и тем самым повышает уровень экспрессии белка Smn у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см. ниже раздел "Биологические примеры"). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или SMN2. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 и/или SMN2, и тем самым повышает уровень экспрессии белка Smn у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения эк-зона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, у человека, нуждающегося в этом, где указанные способы включают введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см. ниже раздел "Биологические примеры"). В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см. ниже раздел "Биологические примеры"). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным человеком является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным человеком является пациент с SMA, где SMA вызвана инактиви-рующими мутациями или делециями в гене SMN1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения эк-зона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1 у человека, нуждающегося в этом, где указанные способы включают введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1, как было определено в анализе, описанном в Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 SMN1 и SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и SMN2 у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN1 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN1, как было определено в анализе(-ах), описанном в Международной публикации заявки
WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA, где SMA вызвана инактиви-рующими мутациями или делециями в гене SMN1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня экспрессии белка Smn у человека, нуждающегося в этом, где указанные способы включают введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня экспрессии белка Smn у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня экспрессии белка Smn у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2. В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже раздел "Биологические примеры") или в анализе, описанном в Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки.
В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA, где SMA вызвана инактивирующими мутациями или делециями в теломерной копии гена SMN1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMN1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень экспрессии белка Smn у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже раздел "Биологические примеры"). В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже "Биологические примеры") или в анализе, описанном в Международной публикации заявки WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения спинальной мышечной атрофии (SMA), включающим введение индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому индивидууму фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. В конкретном варианте осуществления настоящее
изобретение относится к способу лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому индивидууму фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому индивидууму фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципи-ент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже "Биологические примеры"). В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже "Биологические примеры") или в анализе, описанном в Международной публикации заявки WO 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства для лечения SMA у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже "Биологические примеры"). В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже "Биологические примеры") или в анализе, описанном в Международной публикации заявки WO2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В одном из вариантов осуществления описанного здесь применения или способа, соединения формулы (I) или их формы используют в комбинации с одним или более дополнительными агентами. Со-единение(-я) формулы (I) или его форма могут быть введены индивидууму или приведены в контакт с клеткой до, во время или после введения индивидууму дополнительного агента(-ов) или приведения указанной клетки в контакт с таким агентом(-ами). Соединение(-я) формулы (I) или его форма и дополнительный агент(-ы), взятые в виде одной композиции или различных композиций, могут быть введены индивидууму или приведены в контакт с клеткой. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с геном-заместителем SMN1 (с использованием, например, вирусных векторов для доставки). В других конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с клеткой-заместителем с использованием дифференцированных стволовых SMN1 и/или SM^^-MK^D^ В других конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с клеткой-заместителем с использованием дифференцированных стволовых SMN1 -клеток. В других конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с клеткой-заместителем с использованием дифференцированных стволовых SM^^-METO^ В другом конкретном варианте осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с акларубицином. В другом конкретном варианте осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с активатором транскрипции, таким как ингибитор гистон-деацетилазы ("HDAC") (например, бутираты, вальпроевая кислота и гидроксимочевина), и стабилизаторами мРНК (например, с ингибитором декэппи-рования мРНК RG3039 от Repligen).
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (I) или их форм в комбинации с поддерживающей терапией, включая искусственную вентиляцию легких, лечебное питание или меры по реабилитации.
В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) дает терапевтический и/или благоприятный эффект. В конкретном варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) дает один, два или более следующих эффектов:
(i) снижение или ослабление тяжести SMA;
(ii) замедление начала развития SMA;
(iii) ингибирование прогрессирования SMA;
(iv) снижение необходимости госпитализации индивидуума;
(v) снижение времени пребывания индивидуума в стационаре;
(vi) увеличение продолжительности жизни индивидуума;
(vii) повышение качества жизни индивидуума;
(viii) снижение числа симптомов, ассоциированных с SMA;
(ix) снижение или ослабление тяжести симптома(-ов), ассоциированного с SMA;
(x) уменьшение продолжительности симптома(-ов), ассоциированного с SMA;
(xi) предупреждение рецидивов симптомов, ассоциированных с SMA;
(xii) ингибирование развития или возникновения симптома SMA; и/или
(xiii) ингибирование прогрессирования симптома, ассоциированного с SMA.
Симптомами SMA являются мышечная слабость; плохой мышечный тонус; слабый крик; слабый кашель; хромота или частые падения; затруднение в сосании или проглатывании; затруднение дыхания; скапливание секрета в легких или в горле; сжатые кулаки при потности рук; подергивание/вибрация языка; частое поворачивание головы на одну сторону даже в положении лежа; слабость, которая является более выраженной в ногах, чем в руках; часто принимаемое положение ног, напоминающее "лягушачьи лапки"; затруднение приема пищи; повышенная восприимчивость к инфекциям дыхательных путей; слабость кишечника/мочевого пузыря; снижение массы тела; неспособность сидеть без поддержки; неспособность ходить; неспособность к какому-либо передвижению; а также гипотония; арефлексия и множественные врожденные контрактуры (артрогрипоз), ассоциированные с уменьшением числа клеток переднего рога.
В конкретном варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) дает один, два или более эффектов, таких как: (i) уменьшение потери мышечной силы; (ii) повышение мышечной силы; (iii) снижение мышечной атрофии; (iv) уменьшение потери двигательной функции; (v) увеличение числа мотонейронов; (vii) уменьшение потери мотонейронов; (viii) защита SMN-дефицитных мотонейронов от разрушения; (ix) повышение двигательной функции; (х) улучшение работы легких; и/или (xi) снижение степени нарушения работы легких.
В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу или ребенку раннего возраста способность сидеть или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность стоять без посторонней помощи или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность ходить без посторонней помощи или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность бежать без посторонней помощи или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность свободно дышать или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность свободно переворачиваться во время сна или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение SMA с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность свободно глотать или сохранить эту способность.
В некоторых вариантах осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, SMN-праймеры, такие как SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и SMN-зонды, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Но-зерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ, проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение формулы (I) или его форма повышать уровень включения экзона 7 SMN1 и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMN1 и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, SMN-праймеры, такие как
SEQ ID NO: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или 12, и SMN-зонды, такие как SEQ ID NO: 3 или 10), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, амплификация по типу "катящегося кольца", Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ, или в анализе, проводимом с использованием фармацевтического или аналитического набора, описанных ниже, для мониторинга ответов у пациента на соединение формулы (I) или его форму.
В одном из вариантов осуществления изобретения соединение формулы (I)
или его форму используют, как описано в настоящей заявке, где
wl представляет собой C-R или N;
w2 и w3 представляют собой C-Rl, C-R2, C-Ra или N;
w4 представляет собой C-R или N;
w5 представляет собой C-Rl, C-R2, C-Rc или N;
w6 представляет собой C-Rl, C-R2 или C-R;
где один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-Rl, a другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что
если w3 представляет собой C-Rl, то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-R или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rl, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-Rl, то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; или
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; и,
где один, два или три из wl, w2, w3, w4 и w5 могут необязательно представлять собой N;
Rl представляет собой C1-8алкил, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алки-ламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, амино-C1-8алкил, С1-8 алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, C1-8алкокси-C1-8алкиламино-C1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8ал-киламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (C1-8алкил)2-амино-C1-8алки-ламино, [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (C1-8алкил)2-амино-C1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8 алкокси, (C1-8алкокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкокси, амино-C2-8алкенил, С^алкиламино-C^ алкенил, (C1-8алкил)2-амино-C2-8алкенил, амино-C2-8алкинил, C1-8алкиламино-C2-8алкинил, (C1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-C1-8алкил)(C1-8ал-кил)амино, гидрокси-C1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8 алкил)2-амино, (гидрокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8 алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-C1-8 алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-C1-8алкиламино-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкиламино, [(гидрокси-C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино, [(гидро-кси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гете-роциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(C1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8 алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-C1-8алкил)(C1-8 алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гете-роциклил-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероцик-лилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-C1-8алкил)(C1-8 алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, ге-тероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-C1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гете-роарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8ал-кил)(C1-8алкил)амино-C1-8алкил;
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены
одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R4; или
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены
одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R3;
R2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гете-роариламино;
где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R6 и необязательно одним дополнительным заместителем R7; Ra, в каждом случае независимо, выбран из водорода, галогена или С1-8алкила; Rb представляет собой водород, галоген, C1-8алкил или C^^ram^; Rc представляет собой водород, галоген или C1-8алкил;
R3, в каждом случае, независимо выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, C1-8алкила, галоген-Ci^ алкила, C1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, C1-8алкокси-карбонила, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (C1-8алкил)2-амино-C1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил]2-амино, (C1-8алкил-амино-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8алки-ламино, (C1-8алкокси-C1-8алкил)2-амино, (C1-8алкокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, C1-8алкилкарбонил-амино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил а, гидрокси-С1-8 алкил амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино;
R4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8 алкил, арил-C1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8 алкил; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R5;
R5, в каждом случае, независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, C1-8алкила, галоген-C1-8алкила, C1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкил-тио;
R6, в каждом случае, независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, С2-8алке-нила, галоген-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, C1-8алкокси-C1-8алкила, амино, C1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио; и
R7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил. Один из вариантов осуществления изобретения относится к применению соединения формулы (I), где указанное соединение выбрано из соединений формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (IX), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX):
или его формы.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (II) w2 представляет собой C-Rl, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (II) w2 представляет собой C- 61 -
R2, w5 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-Ra, и w3 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (II) w3 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-R2, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (II) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rl, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (III) w3 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-R2, w4 представляет собой C-Ra или N, wl представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (III) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rl, w4 представляет собой C-Ra или N, wl представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IV) w2 представляет собой C-Rl, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, w4 представляет собой C-Ra или N, и wl представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IV) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-Ra, w4 представляет собой C-Ra или N, и wl представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (V) w2 представляет собой C-Rl, w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, w3 представляет собой C-Ra или N, и wl представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (V) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-Ra, w3 представляет собой C-Ra или N, и wl представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (V) w3 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, wl представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (V) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rl, w2 представляет собой C-Ra или N, wl представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VI) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и wl представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (VI) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rl, w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N, и wl представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VII) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, w4 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (VII) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rl, w4 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIII) w2 представляет собой C-Rb w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w4 представляет собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (VIII) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-Ra, и w4 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) w2 представляет собой C-Rb w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IX) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IX) w3 представляет собой C-Rl, w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IX) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rl, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (X) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, и w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (X) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb и w2 и w4 независимо представляют собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XI) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, wb представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XI) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb wb представляет собой C-Rb или N, и w5 представляет собой C-Rc или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XII) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, w4 представляет собой C-Ra или N, и wb представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XII) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb w4 представляет собой C-Ra или N, и wb представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIII) w2 представляет собой C-Rb w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra или N, и wb представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XIII) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-Ra, и wb представляет собой C-Rb или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIV) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и wb представляет собой C-Rb или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XIV) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-R1, w2 представляет собой C-Ra или N, и w1 представляет собой C-Rb или
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XV) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, и w5 представляет собой C-Rc.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XV) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb и w5 представляет собой C-Rc.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVI) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, и w4 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XVI) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb и w4 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVII) w2 представляет собой C-Rb w5 представляет собой C-R2, и w6 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XVII) w2 представляет собой C-R2, w5 представляет собой C-Rb и w6 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIII) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, и w2 представляет собой C-Ra.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XVIII) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb и w2 представляет собой C-Ra.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIX) w3 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-R2, и wb представляет собой C-Rb.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XIX) w3 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Rb и wb представляет собой C-Rb.
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (III)
Один из вариантов применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (II):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (V):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (VI):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (VII):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (VIII):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (IX):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (X):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XII):
или его формы
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XIII):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XIV):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XV):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVI):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVII):
(XVIII) или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XIX):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (I), формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX) является применение соединения, выбранного из соединений формулы (Ia), формулы (IIa), формулы (IIIa), формулы (IVa), формулы (Va), формулы (VIa), формулы (VIIa), формулы (VIIIa), формулы (Xa), формулы (XIa), формулы (XIIa), формулы (XIIIa), формулы (XIVa), формулы (XVa), формулы (XVIa), формулы (XVIIa), формулы (XVIIIa) или формулы (XIXa), соответственно:
(XVIIIa)
или его формы.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-Rb, a другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что
если w3 представляет собой C-Rb, то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N или
если w2 представляет собой C-Rb, то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIa) один из w2, w3, w5 и w6
представляет собой C-Rb a другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что,
если w3 представляет собой C-Rb то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; или
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IVa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Rb
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Va) один из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-Rb a другой из w2, w3, w5 и w6 представляет собой C-R2, при условии, что,
если w3 представляет собой C-Rb то w6 представляет собой C-R2, w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb w2 представляет собой C-Ra или N, и w5 представляет собой C-Rc или N; или
если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2, w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N; или
если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-Rb w6 представляет собой C-Ra, и w3 представляет собой C-Ra или N.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-R1, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой
C-R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIIa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb a другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-
R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Xa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Rb то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Rb.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-R1, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой
C-R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIIa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb a другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w5 представляет собой C-
R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIVa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-R1, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой
C-R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-R1, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой
C-R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIa) один из w3 и w6 представляет собой C-R1, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-R1, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой
C-R1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIa) один из w2 и w5 представляет собой C-Rb a другой представляет собой C-R2, при условии, что если w2 представляет собой C-Rb то w5 представляет собой C-R2; или если w2 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIIa) один из w3 и w6 представляет собой C-Rb a другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIXa) один из w3 и w6 представляет собой C-Ri, а другой представляет собой C-R2, при условии, что если w3 представляет собой C-Ri, то w6 представляет собой C-R2; или если w3 представляет собой C-R2, то w6 представляет собой C-Ri.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) является применение соединения формулы (1а):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (II) является применение соединения формулы (Па):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (III) является применение соединения формулы (IIIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IV) является применение соединения формулы (IVa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (V) является применение соединения формулы (Va):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VII) является применение соединения формулы (Vila):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIII) является применение соединения формулы (Villa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (X) является применение соединения формулы (Ха):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XI) является применение соединения формулы (XIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XII) является применение соединения формулы (XIIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIII) является применение соединения формулы (XIIIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIV) является применение
соединения формулы (XIVa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XV) является применение соединения формулы (XVa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVI) является применение соединения формулы (XVIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVII) является применение соединения формулы (XVIIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIII) является применение соединения формулы (XVIIIa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIX) является применение соединения формулы (XIXa):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) является применение соединения формулы (Iai), формулы (Ia2), формулы (Ia3) или формулы (Ia4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIa) является применение соединения формулы (IIal), формулы (IIa2), формулы (IIa3) или формулы (IIa4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIIa) является применение соединения формулы (IIIal) или формулы (Ша2):
Rh Rb
Ri T X Rn R2" т X Rn
Ra О Ra О
(IIIal) или (Ша2)
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IVa) является применение соединения формулы (IVal) или формулы (IVa2):
Rb Rh
R14 JO^ яя R-^ Л ^R;
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Va) является применение соединения формулы (Val), формулы (Va2), формулы (Va3) или формулы (Va4):
(Va4)
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIa) является применение соединения формулы (VIal) или формулы (VI a2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIa) является применение соединения формулы (VIIal) или формулы (VIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIIa) является применение соединения формулы (VIIIal) или формулы (VIIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) является применение соединения формулы (IXal), формулы (1Ха2), формулы (1ХаЗ) или формулы (1Ха4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Xa) является применение соединения формулы (Xal) или формулы (Ха2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIa) является применение соединения формулы (XIal) или формулы (Х1а2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIa) является применение соединения формулы (XIIal) или формулы (ХПа2):
или его формы.
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIVa) является применение соединения формулы (XIVal) или формулы (XIVa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVa) является применение соединения формулы (XVal) или формулы (XVa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIa) является применение соединения формулы (XVIal) или формулы (XVIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIa) является применение соединения формулы (XVIIal) или формулы (XVIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIIa) является применение соединения формулы (XVIIIal) или формулы (XVIIIa2):
R-i N ]| R2 N ]j
О О (XVIIIal) или (XVIIIa2)
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIXa) является применение соединения формулы (XIXal) или формулы (Х1Ха2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) является применение соединения формулы (1а2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) является применение соединения формулы (1аЗ):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) является применение соединения формулы (Ia4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения (IIa) является применение соединения формулы (IIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIa) является применение соединения формулы (IIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIa) является применение соединения формулы (IIa3):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIIa) является применение соединения формулы (IIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIIa) является применение соединения формулы (Ша2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IVa) является применение соединения формулы (IVal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IVa) является применение соединения формулы (IVa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Va) является применение соединения формулы (Val):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Va) является применение соединения формулы (Va2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Va) является применение соединения формулы (Va3):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Va) является применение соединения формулы (Va4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIa) является применение соединения формулы (VIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIa) является применение соединения формулы (VIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIa) является применение соединения формулы (VIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIa) является применение соединения формулы (VIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIIa) является применение соединения формулы (VIIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIIIa) является применение соединения формулы (VIIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) является применение соединения формулы (IXal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) является применение соединения формулы (IXa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) является применение соединения формулы (IXa3):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) является применение соединения формулы (IXa4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Xa) является применение соединения формулы (Xal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Xa) является применение соединения формулы (Ха2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIa) является применение соединения формулы (XIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIa) является применение
соединения формулы (XIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIa) является применение соединения формулы (XIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIa) является применение соединения формулы (XIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIIa) является применение соединения формулы (XIIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIIIa) является применение соединения формулы (XIIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIVa) является применение соединения формулы (XIVal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIVa) является применение соединения формулы (XIVa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVa) является применение соединения формулы (XVal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVa) является применение соединения формулы (XVa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIa) является применение соединения формулы (XVIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIa) является применение соединения формулы (XVIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIa) является применение соединения формулы (XVIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIa) является применение соединения формулы (XVIIa2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIIa) является применение соединения формулы (XVIIIal):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIIa) является применение соединения формулы (XVIIIa2):
или его формы.
или его формы.
Группа пациентов
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму, страдающему SMA. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму вводят индивидууму, у которого имеется предрасположенность или восприимчивость к SMA. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят человеку, имеющему SMA, где SMA вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене SMNl на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMNl. В некоторых вариантах осуществления изобретения у человека, до введения ему соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции, определяют генотип для определения того, имеет ли этот индивидуум инактивирующую мутацию или делецию в теломерной копии гена SMNl на обеих хромосомах, приводящие к потере функции гена SMNl. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с SMA типа 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с SMA типа l. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с SMA типа 2. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с SMA типа 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с SMA типа 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент с
SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня включения экзона 7 SMNl и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня экспрессии белка Smn.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят человеку в возрасте приблизительно 0-6 месяцев, приблизительно 6-l2 месяцев, приблизительно 6-l8 месяцев, приблизительно l8-36 месяцев, приблизительно l-5 лет, приблизительно 5-l0 лет, приблизительно l0-l5 лет, приблизительно l5-20 лет, приблизительно 20-25 лет, приблизительно 25-30 лет, приблизительно 30-35 лет, приблизительно 35-40 лет, приблизительно 4045 лет, приблизительно 45-50 лет, приблизительно 50-55 лет, приблизительно 55-60 лет, приблизительно 60-65 лет, приблизительно 65-70 лет, приблизительно 70-75 лет, приблизительно 75-80 лет, приблизительно 80-85 лет, приблизительно 85-90 лет, приблизительно 90-95 лет или приблизительно 95-l00 лет.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят младенцу. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят ребенку раннего возраста. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят подростку. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят взрослому. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят пожилому человеку.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединение формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят пациенту с SMA, для лечения или ослабления тяжести SMA. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с SMA, для лечения или ослабления тяжести SMA. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с SMA, для предупреждения прогрессирования SMA. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с SMA для лечения или ослабления тяжести SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с SMA. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму вводят индивидууму, у которого имеется предрасположенность или восприимчивость к SMA. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят человеку с SMA, где SMA вызвана инактиви-рующими мутациями или делециями в гене SMNl на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMNl. В некоторых вариантах осуществления изобретения у человека, до введения ему соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства, определяют генотип для того, чтобы определить, имеет ли этот индивидуум инактивирующую мутацию или делецию в теломерной копии гена SMNl на обеих хромосомах, приводящие к потере функции гена SMNl. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с SMA типа 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с SMA типа l. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с SMA типа 2. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с SMA типа 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с SMA типа 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня включения экзона 7 SMNl и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня экспрессии белка Smn.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят человеку в возрасте приблизительно 0-6 месяцев, приблизительно 6-l2 месяцев, приблизительно 6-l8 месяцев, приблизительно l8-36 месяцев, приблизительно l-5 лет, приблизительно 5-l0 лет, приблизительно l0-l5 лет, приблизительно l5-20 лет, приблизительно 20-25 лет, приблизительно 25-30 лет, приблизительно 30-35 лет, приблизительно 35-40 лет, приблизительно 40-45 лет, приблизительно 45-50 лет, приблизительно 50-55 лет, приблизительно 55-60 лет, приблизительно 60-65 лет, приблизительно 65-70 лет, приблизительно 70-75 лет, приблизительно 75-80 лет, приблизительно 8085 лет, приблизительно 85-90 лет, приблизительно 90-95 лет или приблизительно 95-l00 лет.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят младенцу. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят ребенку раннего возраста. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят подростку. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят взрослому. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят пожилому человеку.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у
него SMA. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединение формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с риском развития SMA для предупреждения начала развития у него SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят пациенту с SMA для лечения или ослабления тяжести SMA. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с SMA для лечения или ослабления тяжести SMA. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с SMA для предупреждения прогрессирования SMA. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с SMA для лечения или ослабления тяжести SMA.
Способ введения
Соединение формулы (I) или его форму вводят пациенту предпочтительно в виде компонента композиции, которая необязательно содержит фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. Композиция может быть введена перорально или любым другим подходящим способом, например, путем вливания или инъекции ударной дозы, доставляемой посредством поглощения через эпителиальную или кожнослизистую выстилку (например, слизистую полости рта, прямой кишки и тонкой кишки), и такая композиция может быть введена вместе с другим биологически активным агентом. Введение может быть системным или местным. Известны различные системы доставки, например, путем инкапсуляции в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы и капсулы, и такие системы доставки могут быть использованы для введения соединения.
Способами введения являются, но не ограничиваются ими, парентеральное, чрескожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, подкожное, интраназальное, эпидуральное, пероральное, подъязычное, интраназальное, интрацеребральное, интравагинальное, трансдермальное, ректальное введение, введение путем ингаляции или местное введение, и в частности, введение в ухо, нос, глаза или нанесение на кожу. Способ введения может быть выбран по усмотрению лечащего врача. В большинстве случаев введение способствует высвобождению соединения в кровоток. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение вводят перорально.
Дозы и дозированные формы
Количество соединения формулы (I) или его формы, которое является эффективным для лечения SMA, зависит, например, от способа введения, типа SMA, общего состояния здоровья индивидуума, этнической принадлежности, возраста, массы тела и пола индивидуума, а также от режима питания, продолжительности и тяжести SMA, и такое количество должно быть определено лечащим врачом в соответствии с условиями жизни каждого пациента или индивидуума.
В конкретных вариантах осуществления изобретения термины "эффективное количество", "профилактически эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество", используемые при описании введения соединения формулы (I) или его формы, или их композиции, или лекарственного средства, означают количество соединения формулы (I), которое дает терапевтический и/или благоприятный эффект. В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения "эффективное количество", "профилактически эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество", используемые при описании введения соединения формулы (I) или его формы, или композиции, или лекарственные средства, содержащие эти соединения, вызывают один, два или более следующих эффектов:
(i) снижение или ослабление тяжести SMA;
(ii) замедление начала развития SMA;
(iii) ингибирование прогрессирования SMA;
(iv) исключение необходимости госпитализации индивидуума;
(v) снижение времени пребывания индивидуума в стационаре;
(vi) увеличение продолжительности жизни индивидуума;
(vii) повышение качества жизни индивидуума;
(viii) снижение числа симптомов, ассоциированных с SMA;
(ix) снижение или ослабление тяжести симптома(-ов), ассоциированного с SMA;
(x) уменьшение продолжительности симптома(-ов), ассоциированного с SMA;
(xi) предупреждение рецидивов симптомов, ассоциированных с SMA;
(xii) ингибирование развития или возникновения симптома SMA; и/или
(xiii) ингибирование прогрессирования симптома, ассоциированного с SMA.
В некоторых вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы
(I) или его формы представляет собой количество, которое является эффективным для повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, и увеличения уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMN2, и тем самым для достижения нужного благоприятного эффекта у индивидуума, нуждающегося в этом. В некоторых случаях нужный эффект может быть определен путем анализа или количественной оценки: (l) включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, или (2) уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMN2. Неограничивающие примеры эффективных количеств соединения формулы (I) или его формы описаны в настоящей заявке.
Так, например, эффективным количеством может быть количество, необходимое для лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, или количество, неоходимое для повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, у человека, нуждающегося в этом, или количество, неоходимое для увеличения уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMN2, у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA.
В общих чертах для пациента или индивидуума с массой тела приблизительно l кг - 200 кг, эффективное количество составляет от приблизительно 0,00l мг/кг/день до приблизительно 500 мг/кг/день. Считается, что средняя масса тела взрослого человека обычно составляет от приблизительно 70 до приблизительно l00 кг.
"Эффективное количество" соединения формулы (I) или его формы, используемое для получения лекарственного средства и фармацевтического набора, или используемое в способе лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, включает количество, составляющее в пределах от приблизительно 0,00l мг до приблизительно 35000 мг, и такое количество входит в объем настоящего изобретения. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA.
Описанные здесь композиции составляют для введения индивидууму любым способом доставки лекарственного средства, известным в данной области. Неограничивающими примерами является перо-ральное введение, внутриглазное введение, ректальное введение, трансбуккальное введение, местное введение, интраназальное введение, офтальмическое введение, подкожное введение, внутримышечное введение, внутривенное введение (введение ударной дозы и вливание), интрацеребральное введение, трансдермальное введение и внутрилегочное введение.
Фармацевтические композиции
Описанные здесь варианты осуществления включают применение соединения формулы (I) или его формы в виде фармацевтической композиции. В конкретном варианте осуществления изобретения описано применение соединения формулы (I) или его формы в виде фармацевтической композиции для лечения SMA у человека, нуждающегося в этом, где указанное применение включает введение эффективного количества соединения формулы (I) или его формы в смеси с фармацевтически приемлемым эксци-пиентом. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с SMA.
Соединение формулы (I) или его форма могут быть необязательно получены в форме композиции, содержащей соединение или его форму и необязательно носитель, эксципиент или разбавитель. Другие описанные здесь варианты осуществления относятся к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество соединения формулы (I) или его формы и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения указанные фармацевтические композиции могут быть использованы для введения животному и/или человеку. Описанные здесь фармацевтические композиции могут быть получены в любой форме, подходящей для введения такой композиции индивидууму.
В конкретном варианте осуществления изобретения и в этом контексте описания изобретения термин "фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель" означает носитель, эксципи-ент или разбавитель, разрешенные Федеральными регуляторными органами или правительством штата или указанные в Фармакопее США или в другой общеизвестной фармакопее, для введения животным, а более конкретно, человеку. Термин "носитель" означает разбавитель, адъювант (например, адъювант Фрейнда (полный и неполный)), эксципиент или эксципиент, который вводят вместе с терапевтическим агентом. Такими фармацевтическими носителями могут быть стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая вазелин, масло животного или растительного происхождения или синтетические масла, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Конкретным носителем для внутривенно вводимых фармацевтических композиций является вода. Жидкими носителями, которые могут быть использованы, в частности, в растворах для инъекций, также являются физиологические растворы и водные растворы декстрозы и глицерина.
Типичные композиции и дозированные формы содержат один или более эксципиентов. Подходящие эксципиенты хорошо известны специалистам-фармацевтам, и неограничивающими примерами таких эксципиентов являются крахмал, глюкоза, лактоза, сахароза, желатин, солод, рис, мука, мел, силика-гель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое сепарированное молоко, глицерин, пропиленгликоль, вода, этанол и т.п. Выбор конкретного эксципиента, подходящего для включения в фармацевтическую композицию или в дозированную форму, зависит от ряда факторов, хорошо
известных в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, способ введения дозированной формы пациенту и конкретные активные ингредиенты, входящие в состав дозированной формы. Настоящее изобретение также относится к безводным фармацевтическим композициям и дозированным формам, содержащим одно или более соединений формулы (I) или их форм, описанных в настоящей заявке. Композиции и стандартные дозированные формы для разового применения могут быть приготовлены в виде растворов или сиропов (необязательно с ароматизатором), суспензий (необязательно с ароматизатором), эмульсий, таблеток (например, таблеток для разжевывания), драже, капсул, гранул, порошка (необязательно для разведения), препаратов с замаскированным вкусом или препаратов пролонгированного высвобождения и т.п.
Описанные здесь фармацевтические композиции, которые являются подходящими для перорально-го введения, могут быть получены в виде дискретных дозированных форм, таких как, но не ограничиваясь ими, таблетки, каплеты, капсулы, гранулы, порошки и жидкости. Такие дозированные формы содержат предварительно определенное количество активных ингредиентов и могут быть получены методами, хорошо известными специалистам-фармацевтам.
Примерами эксципиентов, которые могут быть использованы в описанных здесь дозированных формах для перорального введения, являются, но не ограничиваются ими, связующие вещества, вещества, придающие объем, дезинтеграты и лубриканты.
Биомаркеры
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, используется в качестве биомаркера для SMA. В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и не включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, используется в качестве биомаркера для SMA. В других вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, используется в качестве биомаркера для пациента с SMA, подвергаемого лечению соединением, таким как соединение, описанное в настоящей заявке. В других вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и не включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, используется в качестве биомаркера для пациента с SMA, подвергаемого лечению соединением, таким как соединение, описанное в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления изобретения изменение количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, и соответствующее изменения количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и не включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, служит в качестве биомаркера у пациента, подвергаемого лечению соединением, таким как соединение, описанное в настоящей заявке. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления изобретения увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, и соответствующее снижение количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и не включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, после введения соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), означает, что такое соединение может быть эффективным для лечения SMA. В другом конкретном варианте осуществления изобретения снижение количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2 и включает экзон 7 SMN2, и соответствующее увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2 и не включает экзон 7 SMN2, после введения соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), означает, что такое соединение не является эффективным для лечения SMA. В соответствии с этими вариантами осуществления SMN-праймер(-ы) и/или SMN-зонд, описанные ниже, могут быть использованы в анализах, таких как PCR (например, qPCR) и RT-PCR (например, RT-qPCR или RT-PCR в конечной точке), проводимых для оценки и/или определения количества мРНК, которая транскрибируется из гена SMNl и/или гена SMN2 и включает или не включает экзон 7 SMNl и/или SMN2.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к SMN-праймерам и/или SMN-зондам (например, к прямому праймеру, имеющему нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: l, 7, 8, ll или l3; и/или к обратному праймеру, имеющему нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 9 или l2; и/или к SMN-зонду, такому как SEQ ID NO: 3 или l0), используемым для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих SMNl и/или SMN2 человека. Эти праймеры могут быть использованы в качестве праймеров, например, в RT-PCR (такой как RT-PCR, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR, описанные в настоящей заявке или известные специалистам), в PCR (такой как qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и в качестве зондов, используемых в гибридизационных анализах, таких как Нозерн-блот-анализ и/или Саузерн-блот-анализ. RT-PCR в конечной точке, используемая в описанных здесь Биологических примерах, представляет собой полиме-разную цепную реакцию с обратной транскриптазой, которую осуществляют за определенное число циклов амплификации (или до тех пор, пока не будут удалены исходные вещества) с последующей количественной оценкой каждого ДНК-продукта посредством, например, гель-элетрофоретического разделения, окрашивания флуоресцентным красителем, количественной оценки флуоресценции и т.п.
SEQ ID NO: l гибридизуется с ДНК или РНК, содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклео-тидам 22-40 экзона 7 SMNl и/или SMN2; SEQ ID NO: 2 гибридизуется с ДНК или РНК, содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 4-26 последовательности, кодирующей люциферазу светляка; SEQ ID NO: 7 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 32-54 экзона 7 SMNl и/или SMN2 и нуклеотидам l-4 экзона 8 SMNl и/или SMN2; SEQ ID NO: 8 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 87-lll экзона 7 SMNl и/или SMN2 и нуклеотидам l-3 экзона 8 SMNl и/или SMN2; SEQ ID NO: 9 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, с антисмысловой цепью ДНК или РНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 39-62 экзо-на 8 SMNl и/или SMN2; SEQ ID NO: ll гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 43-63 экзона 6 SMNl и/или SMN2; SEQ ID NO: l2 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, с антисмысловой цепью ДНК или РНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 5l-73 экзона 8 SMNl и/или SMN2; и SEQ ID NO: l3 гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащей нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 22-46 экзона 6 SMNl и/или SMN2.
В соответствии с этим, олигонуклеотид, соответствующий последовательностям SEQ ID NO: 9, ll, l2 и/или l3, может быть использован в реакции амплификации для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих или кодируемых SMNl и/или SMN2 человека и не содержащих экзона 7 SMNl и/или SMN2 человека, и нуклеиновой кислоты, кодирующей или кодируемой SMNl и/или SMN2 человека и включающей экзон 7 SMNl и/или SMN2 человека. В противоположность этому олигонуклеотид, соответствующий SEQ ID NO: 8 в комбинации с нижерасположенным обратным праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2), может быть использован для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих или кодируемых SMNl и/или SMN2 человека и не содержащих экзон 7 SMNl и/или SMN2 человека, а олигонуклеотид, соответствующий SEQ ID NO: l и 7 в комбинации с нижерасположенным обратным праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2), может быть использован для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих или кодируемых SMNl и/или SMN2 человека и содержащих экзон 7 SMNl и/или SMN2.
SEQ ID NO: 3 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 50-54 экзона 7 SMNl и/или SMN2 человека и нуклеотидам l-2l экзона 8 SMNl и/или SMN2 человека, a SEQ ID NO: l0 гибридизует-ся с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 7-36 экзона 8 SMNl и/или SMN2 человека. SEQ ID NO: 3 может быть использована в качестве зонда для детектирования мРНК, которая транскрибируется из ми-нигена и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, описанных в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO2009/l5l546 или в публикации заявки на патент США № 20ll/0086833 (каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки), и для детектирования мРНК, которая транскрибируется из SMNl и/или SMN2 человека и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2. Кроме того, SEQ ID NO: l0 может быть использована в качестве зонда для детектирования мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает или не включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, и для детектирования мРНК, которая транскрибируется из SMNl и/или SMN2 человека, описанных в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO2009/l5l546 или в публикации заявки на патент США № 20ll/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, SMN-праймеры, такие как SEQ ID NO: l, 7, ll или l3 и/или SEQ ID NO: 2, 9 или l2, и/или SMN-зонды, такие как SEQ ID NO: 3 или l0), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, анализ посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и если это необходимо, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в биологических примерах), для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 SMNl и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, SMN-праймеры, такие как SEQ ID NO: l, 7, ll или l3 и/или SEQ ID NO: 9 или l2, и/или SMN-зонды, такие как SEQ ID NO: 3 или l0), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, анализ посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и если это необходимо, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в биологических примерах), для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента.
В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, SMN-праймеры, такие как SEQ ID NO: l, 7, ll или l3 и/или SEQ ID NO: 9 или
l2, и/или SMN-зонды, такие как SEQ ID NO: 3 или l0), используют в анализе, таком как RT-PCR, RT-qPCR, RT-PCR в конечной точке, PCR, qPCR, анализ посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и если это необходимо, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в биологических примерах), для мониторинга ответа у пациента на соединение (например, соединение формулы (I) или его форму). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
Образец (например, проба крови, образец РВМС или образец ткани, такой как образец кожи или мышечной ткани), взятый у пациента, может быть получен методами, известными специалистам; при этом праймеры и/или зонды, описанные ниже в Биологических примерах, могут быть использованы в анализах (например, таких как PCR, RT-PCR, RT-qPCR, qPCR, RT-PCR в конечной точке, анализ посредством амплификации по типу "катящегося кольца", Нозерн-блот-анализ и Саузерн-блот-анализ) для определения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 (например, количества мРНК, которая включает экзон 7 SMN2 и транскрибируется из гена SMN2). Образец, взятый у пациента, представляет собой образец, который, после его забора у пациента, обрабатывают и/или подвергают различным манипуляциям методами, известными специалистам в данной области. Так, например, образец, взятый у пациента, может быть обработан, например, для экстракции РНК известными методами. Образец, взятый у пациента, может быть обработан, например, для экстракции РНК, которую затем подвергают обратной транскрипции с продуцированием кДНК. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3) и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца"; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и включает экзон 7 SMNl и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с
SMA.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3) и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца"; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
Количество мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2 человека и включает экзон 7 SMNl и SMN2, и количество мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2 человека и не включает экзон 7 SMNl и SMN2, могут отличаться друг от друга, например, размером фрагмента РНК или ДНК, генерируемой из мРНК SMNl и SMN2, которая включает экзон 7 SMNl и SMN2, и из мРНК SMNl и SMN2, которая не включает экзон 7 SMNl и SMN2.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца"; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или
происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с SMN-зондом, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 3 или l0), вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, в Но-зерн-блот-анализе или в Саузерн-блот-анализе, и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образ-
ца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обра-
ботаны для экстракции РНК), в контакт с описанным здесь SMN-зондом (например, SEQ ID NO: 3 или
l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-
PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплифика-
ции по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, в Нозерн-блот-анализе или в Саузерн-блот-
анализе; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2.
Количество мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2 человека и включает экзон 7
SMNl и SMN2, и количество мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2 человека и не включает экзон 7 SMNl и SMN2, могут отличаться друг от друга, например, размером фрагмента РНК или ДНК, генерируемой из мРНК SMNl и SMN2, которая включает экзон 7 SMNl и SMN2, и из мРНК SMNl и SMN2, которая не включает экзон 7 SMNl и SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с описанным здесь SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца" и, если это необходимо, в Нозерн-блот-анализе или в Саузерн-блот-анализе; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с описанным здесь SMN-зондом (например, SEQ ID NO:3 или l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца"; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным
(a)
пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с описанным здесь SMN-зондом (например, SEQ ID NO:3 или l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца"; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
Количество мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2 человека и включает экзон 7 SMNl и SMN2, и количество мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и SMN2 человека и не включает экзон 7 SMNl и SMN2, могут отличаться друг от друга, например, размером фрагмента РНК или ДНК, генерируемого из мРНК SMNl и SMN2, которая включает экзон 7 SMNl и SMN2, и из мРНК SMNl и SMN2, которая не включает экзон 7 SMNl и SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8) и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с описанным здесь SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца"; и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от пациента с SMA, обрабатывают соединением (например, описанным здесь соединением); и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что данное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней,
(1)
28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: 3 или l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой); и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl или SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или проис
(a)
ходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: 3 или l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(с) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не
содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(l) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное
соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и (с) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(a)
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3
(1)
месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR), где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой) и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(l) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного паци
ента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(а) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредст
вом амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA, к соединению, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и (с) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содер-
жит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, кото-
рая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном
образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения
или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот паци-
ент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает
благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК,
которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце,
взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или
SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же
типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного
соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому
соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у дан-
ного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осу-
ществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28
дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соедине-
ния, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуще-
ствления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2,
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого
как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изо-
- 96 -
бретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: l, 7, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: 3 или l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(l) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает
благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает: (а) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединени и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента
(1)
осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: 8, ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(a)
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и со-
держит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК,
которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в анало-
гичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соеди-
нения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) снижение количества
мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2,
в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов
SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в об-
разце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количест-
ва доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчи-
вым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или те-
рапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества
мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l
(1)
день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с SMA к соединению, где указанный способ включает:
(а) приведение образца, взятого у пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани), или
образца, происходящего от данного пациента с SMA (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", где образец, взятый у пациента с SMA или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и
(b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(1) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа у пациента с SMA на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с SMA;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым SMN-праймером, описанным ниже (например, SEQ ID NO: ll или l3), и/или с описанным здесь обратным SMN-праймером (например, SEQ ID NO: 9 или l2) и/или с SMN-зондом (например, SEQ ID NO: l0) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в анализе посредством амплификации по типу "катящегося кольца", и
(c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, где
(l) (i) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК,
которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и
(2) (i) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ii) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через l ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, l2 ч, l6 ч, 20 ч, l день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, l4 дней, 28 дней, l месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, l2 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, l0, ll, l2, l3, l4, l5, l6, l7, l8, l9, 20, 2l, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему l-5, 5-l0, l0-l5, l5-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-l00 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретных вариантах осуществления изобретения SMA у пациента вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене SMNl на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена SMNl.
Наборы
В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтическим или аналитическим наборам, содержащим описанный здесь SMN-праймер или зонд в одном или более контейнерах, и инструкции по их применению. В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор содержит, в контейнере, один или более обратных SMN-праймеров (например, SEQ ID NO: 2, 9 и/или l2) и/или один или более прямых SMN-праймеров (SEQ ID NO: l, 7, 8, ll и/или l3) и инструкции по их применению. В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор содержит, в одном контейнере, обратный SMN-праймер (например, SEQ ID NO: 2, 9 и/или l2), прямой SMN-праймер (SEQ ID NO: l, 7, 8, ll и/или l3) и инструкции по их применению.
В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор содержит, в отдельных контейнерах, один обратный SMN-праймер (например, SEQ ID NO: 2, 9 и/или l2) в одном контейнере, прямой SMN-праймер (SEQ ID NO: l, 7, 8, ll и/или l3) в другом контейнере, и инструкции по их применению.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные наборы включают соответствующие компоненты, необходимые для проведения PCR (например, qPCR), RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR) или анализа посредством амплификации по типу "катящегося кольца", такие как полимераза, дезоксинуклеозид-трифосфаты и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие наборы включают компоненты, необходимые для гибридизации. Фармацевтический или аналитический набор, содержащий такие праймеры, может быть использован в PCR и RT-PCR, например, (i) для того, чтобы определить, может ли терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 SMNl и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2; (ii) для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскрибирует- l05
ся из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и/или (iii) для мониторинга ответа у индивидуума на терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форму). В других вариантах осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек. В других вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент. В некоторых других вариантах осуществления изобретения таким пациентом является пациент с SMA.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с последовательностью SEQ ID NO: l, в одном контейнере, и обратный прай-мер с последовательностью SEQ ID NO: 2, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых человеческим минигеном SMNl или человеческим минигеном SMN2, описанными в настоящей заявке или в Международной публикации заявки WO2009/l5l546 или в публикации заявки на патент США № 20П/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 7, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В другом конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 8, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенным человеческим геном SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 7, в одном контейнере, прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 8 в другом контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: ll, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l2, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: ll, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l3, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l2, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l3, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: l2, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR), PCR (например, qPCR) или в способе амплификации по типу "катящегося кольца" для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами SMNl и SMN2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает описанный здесь SMN-зонд (например, SEQ ID NO: 3 или l0), в одном контейнере. В других вариантах осуществления изобретения указанный зонд используют, например, в гибридизационном анализе, таком как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ. В конкретном варианте осуществления изобретения указанный зонд используют в RT-qPCR или qPCR. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные наборы включают компоненты, необходимые для проведения PCR (например, qPCR), RT-PCR (например, RT-PCR в конечной точке и/или RT-qPCR) или анализа посредством амплификации по типу "катящегося кольца", такие как полимераза, дезоксинуклеозид-трифосфаты, праймеры и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие наборы включают компоненты, необходимые для гибридизации.
В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает обратный SMN-праймер (например, SEQ ID NO: 2, 9 или l2), в одном контейнере, прямой SMN-праймер (например, SEQ ID NO: l, 7, 8, ll или l3), в другом контейнере, и SMN-зонд (например, SEQ ID NO: 3 или l0), в другом контейнере, и инструкции по их применению. В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает один или более обратных SMN-праймеров (например, SEQ ID NO: 2, 9 и/или l2), в одном контейнере, один или более прямых SMN-праймеров (например, SEQ ID NO: l, 7, 8, ll и/или l3), в другом контейнере, и один или более SMN-зондов (например, SEQ ID NO: 3 и/или l0), в другом контейнере, и инструкции по их применению.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные наборы включают соответствующие компоненты, необходимые для проведения PCR, RT-PCR или амплификации по типу "катящегося кольца", такие как полимераза, дезоксинуклеозид-трифосфаты и т.п. Фармацевтический или аналитический набор, содержащий такие зонды и/или праймеры, может быть использован в PCR и RT-PCR, например, (i) для того, чтобы определить, может ли терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 SMNl и/или SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2; (ii) для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из генов SMNl и/или SMN2 и содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и количества мРНК, которая транскриби
руется из генов SMNl и/или SMN2 и не содержит экзон 7 SMNl и/или SMN2, и/или (iii) для мониторинга ответа у индивидуума на терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форму). В других вариантах осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек. В других вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент. В некоторых других вариантах осуществления изобретения таким пациентом является пациент с SMA.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, содержащему соединение формулы (I) или его форму, в контейнере, и инструкции по применению соединения или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, включающему фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (I) или его форму; фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель; и инструкции по применению указанного набора. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, включающему фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель; и инструкции по применению указанного набора. В одном из вариантов осуществления изобретения инструкции по применению указанного набора имеют одно, два или более указаний относительно дозы, способа введения, частоты введения и побочных эффектов введения соединения формулы (I) или его формы индивидууму. В других вариантах осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек. В других вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент. В некоторых других вариантах осуществления изобретения таким пациентом является пациент с SMA.
Общие методы синтеза
Как описано в настоящем описании, общие методы получения описанных здесь соединений формулы (I) или их форм представляют собой стандартную хорошо известную методику синтеза. Многие исходные вещества являются коммерчески доступными, или они могут быть получены методами, известными специалистам в данной области. Описанные здесь схемы синтеза включают множество стадий проведения реакций, каждая из которых, сама по себе, является независимой и может быть осуществлена отдельно или в комбинации с любой предшествующей или последующей стадией(-ями). Другими словами, в настоящей заявке отдельно рассматривается осуществление каждой отдельной стадии реакции указанной схемы синтеза.
Схема A
Описанные здесь соединения формулы (I), где R2 представляет собой необязательно замещенную
моноциклическую или бициклическую гетероциклическую, арильную или гетероарильную кольцевую
систему, получают, как показано ниже на схеме А.
Rb X
Ra О А1
Соединение Al (где X представляет собой различные реакционноспособные группы, которые используют для введения множества заместителей с функциональной группой Rl посредством реакции взаимодействия подходящих исходных веществ с соединением Al или последующей реакции взаимодействия с соединением A3 или соединением A4 с применением методов, известных специалистам в данной области) подвергают реакции взаимодействия с альдегидом, то есть, с соединением A2, в присутствии основания (такого как KOH и т.п.) и подходящего растворителя (такого как этанол и т.п.), а затем полученное соединение подвергают альдольной конденсации с получением соединения A3. Соединение A3, в присутствии катализатора (такого как иод и т.п.) и подходящего растворителя (такого как ДМСО и т.п.), подвергают реакции циклизации с получением соединения A4.
Схема B
Описанные здесь соединения формулы (I), где R2 представляет собой необязательно замещенную бициклическую гетероарильную кольцевую систему, получают, как показано ниже на схеме В.
В1 вз
Соединение Bl (где X определен выше) подвергают реакции взаимодействия с необязательно замещенным анилином, то есть, с соединением B2 (где Y представляет собой подходящую реакционноспо-собную группу, такую как OH, NH2, SH и т.п.) в подходящем растворителе (таком PPA и т.п.), с получением соединения B3.
Схема C - l08 -
Описанные здесь соединения формулы (I), где R2 представляет собой необязательно замещенную моноциклическую или бициклическую гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему, получают, как показано ниже на схеме С.
MeNHOMe
Rav x'
Ra О
Ra 0
0 II
MeMgBr Ra" X
бромирование
Ra о
Rb о Y^V°VsvBr
H2N
Ti чГ M
N=\Het)
Ra О
Ra 0
Карбоновую кислоту, то есть, соединение B1, подвергают реакции взаимодействия с подходящим амином (таким как N, O-диметилгидроксиламин и т.п.) в присутствии реагента сочетания (такого как CDI и т.п.) в подходящем растворителе (таком как DCM и т.п.) с получением амида Вейнреба, то есть, соединения C1. Амид C1 обрабатывают подходящим реагентом Гриньяра (таким как бромид метилме-тилмагния и т.п.) в подходящем растворителе (таком как ТГФ и т.п.) с получением соединения C2. а-метильная группа соединения C2 может быть подвергнута селективному бромированию соответствующим бромирующим реагентом (таким как Br2 или NBS и т.п.) с получением соединения C3. Соединение C3 подвергают реакции взаимодействия с необязательно замещенной моноциклической гетероциклиль-ной или гетероарильной кольцевой системой, то есть, с соединением C4 (где термин "Het" означает ами-дин-подобную молекулу, такую как, но не ограничивающуюся ими, 2-аминопиридин, 2-аминопи-римидин, 4-аминопиримидин, 2-аминопиразин, 3-аминопиридазин, 2-аминотиазол, 4-аминотиазол и т.п.), с получением соединения C5.
Конкретные примеры синтеза
Для более подробного описания и лучшего понимания настоящего изобретения ниже представлены неограничивающие примеры, которые приводятся для более полной иллюстрации объема описанных здесь соединений и не должны рассматриваться как какое-либо конкретное ограничение объема изобретения. При этом считается, что варианты описанных здесь соединений, которые могут быть уже известными или будут разработаны в будущем специалистами, компетентными в данной области, также входят в объем описанных и заявленных здесь соединений. В данных примерах проиллюстрировано получение некоторых из этих соединений. Для специалиста в данной области будет очевидно, что методы, описанные в этих примерах, представляют собой технологию, уже описанную специалистами и с успехом применяемую на практике для осуществления синтеза соединений, и такая технология включает предпочтительные способы практического синтеза. Однако в соответствии с описанием, приведенным в настоящей заявке, для специалиста в данной области будет очевидно, что в описанные здесь конкретные методы могут быть внесены изменения, в результате чего могут быть получены подобные или аналогичные результаты, не выходящие за рамки объема и сущности настоящего изобретения.
Кроме того, совершенно очевидно, что в нижеследующих примерах соединений согласно изобретению, если это не оговорено особо, все числа, выражающие количество ингредиентов, условия реакции, экспериментальные данные и т.п., используемые в описании заявки и в формуле изобретения, могут быть изменены, на что указывает слово "приблизительно". В соответствии с этим, все такие числа представляют собой приблизительные величины и могут варьироваться в зависимости от свойств, которые желательно получить посредством проведения реакции или использования различных экспериментальных условий. Поэтому, в пределах экспериментальной репродуцируемости, термин "приблизительно", относящийся к полученным данным, означает интервал данных, которые могут варьироваться в пределах стандартного отклонения от среднего. Кроме того, что касается экспериментальных данных, то полученные величины могут округляться, соответственно, как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения полученного значения без потери значащих цифр. При этом, не прибегая ни в коей мере к попытке ограничить применение доктрины эквивалентов по отношению к заявленному объему настоящего изобретения, авторы лишь отмечают, что каждый численный параметр должен быть интерпретирован в зависимости от числа значащих цифр и метода округления, применяемого специалистами.
Хотя численные интервалы и параметры, входящие в широкий объем описания настоящего изобретения, являются приблизительными, однако численные величины, указанные в нижеследующих примерах, были представлены как можно более точно. Тем не менее, любая численная величина по существу содержит некоторые ошибки, неизбежно возникающие в результате стандартного отклонения, присуще
го соответствующим экспериментальным измерениям.
Примеры соединений
Если это не оговорено особо, то сокращения, используемые выше и во всем описании изобретения,
имеют нижеследующие значения:
Абревиатура
Значение
нагревание (в химии) или делеция (в биологии)
АсОН или НОАс
уксусная кислота
ангидрид уксусной кислоты
аргон
ACN
ацетонитрил
BINAP
2,2'-бис (дифенилфосфино)-1,1'-бинафталин
В(OiPr)з
триизопропилборат
Вое
трет-бутоксикарбонил
Вос20
ди-трет-бутилдикарбонат
ВиОН
н-бутанол
градусы Цельсия
CDI
1,1-карбонилдиимидазол или N,N'-карбонилдиимидазол
(СНО)п ИЛИ (НСНО)
параформальдегид
д/ч/час/часов/МИН/ сек
день/час(ч, час или
часов)/минут(мин)/секунд(сек)
DavePhos
2-дициклогексилфосфино-2'-(N,N-диметиламино)бифенил
DCE
1,2-дихлорэтан
DCM
дихлорметан (СН2С12)
DIAD
диизопропилазодикарбоксилат
DIEA ИЛИ DIPEA
N,N-диизопропилэтиламин
DMA
диметилацетамид
DMAP
4-(диметиламино)пиридин
DME
1,2-диметоксиэтан
DMF
диметилформамид
ДМСО
диметилсульфоксид
EDC ИЛИ EDCI
гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида
EtOAc
этилацетат
EtOH
этанол
Et20
диэтиловый эфир
НСНО
формальдегид
iPrl
иодпропан
JohnPhos
(2-бифенил)-ди-трет-бутилфосфин
KOAc
ацетат калия
КОН
гидроксид калия
LAH
алюмогидрид лития
LC/MS, LCMS или LC-MS (ЖХ/МС)
жидкостная хроматография/масс-спектроскопия
LDA
диизопропиламид лития
LiHMDS или LHMDS
бис(триметилсилил)амид лития
MeOH
метанол
Mel
иодметан
Me-THF
2-метилтетрагидрофуран
Me2Zn
диметилцинк
Mn02
диоксид марганца
MS (MC)
масс-спектроскопия
NaH
гидрид натрия
NaHS
гидросульфид натрия
NaHMDS
бис(триметилсилил)амид натрия или гексаметилдисилазид натрия
Nal
иодид натрия
NaOAc
ацетат натрия
NaOMe
метоксид натрия
NBS
N-бромсукцинимид
NMP
N-метилпирролидон
ЯМР
ядерный магнитный резонанс
o/n
в течение ночи
палладий
Pd/C
палладий на угле
Pd(dba)2
бис(дибензилиденацетон)палладий
Pd2 (dba) з или Pd2dba3
трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0)
PdCl2(PhCN)2
транс-бис(бензонитрил)дихлорпалладий(II)
PdCl2(dppf), PdCl2dppf или Pd(dppf)Cl2
[1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлор-палладий(II)
Pd(OAc)2
ацетат палладия(II)
Pd (PPh3) 4 или Pd(Ph3P)4
тетракис(трифенилфосфин)палладий(0)
Pd(PPh3)2Cl2, PdCl2 (PPh3) 2 или PdCl2(Ph3P)2
дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия(II)
PHBu3BF4 или tBu3PHBF4
тетрафторборат три-трет-бутилфосфония
Phi
иодбензол
Phi(ОТFA)2
[бис(трифторацетокси)иод]бензол
PhMe
толуол
P0C13
фосфорилхлорид
PPh3
трифенилфосфин
PPA
полифосфорная кислота
PPTs
п-толуолсульфонат пиридиния
фунт/KB.дюйм
давление в фунтах/кв.дюйм
PyBOP
гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония
rt/RT (кт/КТ)
комнатная температура
S-Phos, SPhos или Sphos
2-дициклогексилфосфино-2',б'-диметоксибифенил
T3P
ангидрид пропилфосфоновой кислоты
TEA, Et3N или NEt3
триэтиламин
Tf20
ангидрид трифторуксусной кислоты
TFA
трифторуксусная кислота
THF (ТГФ)
тетрагидрофуран
TLC (TCX)
тонкослойная хроматография
TMS
триметилсилан
TMSC1
триметилхлорсилан или триметилсилилхлорид
TMS OK
триметилсиланолят калия
t-Bu
трет-бутил
TsOH, p-TsOH или pTSA
тозиловая кислота или п-толуолсульфоновая кислота
Xantphos
4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантин
Пример 1. Получение соединения 20
Стадия А. К смеси 1-(5-бром-2-гидроксифенил)этанона (2,15 г, 10 ммоль) и 3,4-диметокси-бензальдегида (1,83 г, 11 моль) в этаноле (13 мл) добавляли KOH (2,24 г, 40 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи, реакционную смесь подкисляли до рН~5 добавлением 1н HCl при 0°С. Полученный осадок фильтровали и сушили с получением (Б)-1-(5-бром-2
гидроксифенил)-3-(3,4-диметоксифенил)проп-2-ен-1-она. МС: m/z 363,1, 365,1 [M+H]+. Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия В. Каталитическое количество иода (103 мг, 0,41 ммоль) добавляли к хорошо перемешанному раствору (Б)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(3,4-диметоксифенил)проп-2-ен-1-она (3,74 г, 10,3 ммоль) в ДМСО (10 мл) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь нагревали при 130°С в течение 2 ч. Во время нагревания, реакционная смесь приобретала темную окраску. После охлаждения смеси до комнатной температуры добавляли насыщенный раствор Na2S2O3, и смесь перемешивали при комнатной температуре до исчезновения темной окраски. Желтый осадок фильтровали, промывали водой и сушили с получением 6-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она (2,8 г, 75,3%). МС: m/z 361,1, 363,1 [M+H]+.
Стадия С. Смесь 6-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она (72,2 мг, 0,2 ммоль), 1-Boc-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Pg(dba)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), Sphos (10,3 мг, 0,025 ммоль) и Cs2CO3 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) нагревали при 100°С в течение ночи. После удаления наибольшей части толуола путем выпаривания на роторном испарителе, к смеси добавляли эфир, в результате чего выпадал осадок. Полученный осадок фильтровали, промывали водой и сушили. Затем неочищенный продукт очищали хроматографией с 0-2 5% MeOH в CH2Cl2 с получением трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата. МС: m/z 467,3 [M+H]+.
Стадия D. Раствор трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата в CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл) перемешивали при 0°С в течение 2 ч. После удаления большей части TFA и CH2Cl2 путем выпаривания на роторном испарителе, к реакционной смеси добавляли охлажденный льдом насыщенный раствор NaHCO3. Смесь экстрагировали CH2Cl2. Органический слой сушили над MgSO4 и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (48,4 мг, 52% за 2 стадии). Температура плавления: 177-179°С; МС: m/z 367,1 [M+H]+.
^-ЯМР (500 МГц, ДМСО^): 5 7,67-7,70 (2Н, м), 7,59 (1Н, д, J=2,1 Гц), 7,54 (1Н, дд, J=3,2 Гц, 9,5 Гц), 7,30 (1Н, д, J=3,0 Гц), 7,13 (1Н, д, J=8,8 Гц), 6,99 (1Н, с), 3,89 (3H, с), 3,85 (3H, с), 3,11-3,13 (4Н, м),
2,85-2,87 (4Н, м).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 1 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
Пример 2. Получение соединения 8
Стадия А. Как описано на стадии А примера 1, после проведения реакции взаимодействия 1-(5-бром-2-гидроксифенил)этанона (1,23 г, 5,7 ммоль), имидазо[1,2-а]пиридин-2-карбальдегида (836,4 мг, 5,7 моль) и KOH (1,28 г, 22,9 ммоль) в этаноле (7,4 мл) получали (Б)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)проп-2-ен-1-он (2,0 г, 100%). МС: m/z 343,1, 345,1 [M+H]+.
Стадия В. Как описано на стадии В примера 1, после проведения реакции взаимодействия (E)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)проп-2-ен-1-она (2,0 г, 5,72 ммоль) и иода (58,1 мг, 0,23 ммоль) в ДМСО (10 мл), и после нагревания при 100°С в течение ночи получали 6-бром-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он (1,7 г, 87%). МС: m/z 341,1, 343,1 [M+H]+.
Стадия С. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (68,2 мг, 0,2 ммоль), 1-Boc-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Pd(dba)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), Sphos (10,3 мг, 0,025 ммоль) и Cs2CO3 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил 4-(2-(имидазо [1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилат, МС: m/z 446,4 [M+H]+.
Стадия D. Как описано на стадии D примера 1, после проведения реакции взаимодействия трет-бутил-4-(2-(имидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1 -карбоксилата и CH2Cl2/ TFA (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (17,2 мг, 25% за 2 стадии). Температура плавления: 207-211°С; МС: m/z 347,2 [M+H]+. ^-ЯМР (500 МГц, CD3OD) : 58,56 (1Н, с), 8,51 (1Н, д,
Стадия А. Как описано на стадии А примера 1, после проведения реакции взаимодействия 1-(5-бром-2-гидроксифенил)этанона (215,1 мг, 1 ммоль), 4-метилтиазол-2-карбальдегида (139,9 мг, 1,1 ммоль) и KOH (228 мг, 4 ммоль) в этаноле (1,3 мл) получали (E)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(4-метилтиазол-2-ил)проп-2-ен-1-он (86,7 мг, 27%), МС: m/z 324,0, 326,0 [M+H]+.
Стадия В. Как описано на стадии В примера 1, (E)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(4-метилтиазол-2-ил)проп-2-ен-1-он (86,7 мг, 0,27 ммоль) и иод (2,74 мг, 0,011 ммоль) нагревали в ДМСО (1 мл) при 100°С в течение 3 ч и получали 6-бром-2-(4-метилтиазол-2-ил)-4Н-хромен-4-он (30 мг, 34,6%). МС: m/z 322,0,
324,0 [M+H]+.
Стадия С. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2-(4-метилтиазол-2-ил)-4Н-хромен-4-она (24,5 мг, 0,08 ммоль), 1-Boc-пиперазина (17 мг, 0,09 ммоль), Pd(dba)2 (2,2 мг, 0,004 ммоль), Sphos (3,9 мг, 0,01 ммоль) и Cs2CO3 (34,6 мг, 0,11 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(4-метилтиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилат.
Стадия D. Как описано на стадии D примера 1, после проведения реакции взаимодействия трет-бутил-4-(2-(4-метилтиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата и CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (12 мг, 49,6% за 2 стадии). Температура плавления: 179-182°С; МС: m/z 328,1 [M+H]+ . ^-ЯМР (500 МГц, ДМСО^): 5 7,76 (1Н, с), 7,65 (1Н, д, J=9,3 Гц), 7,56 (1Н, дд, J=3,1 Гц, 9,3 Гц), 7,31 (1Н, д, J=3,1 Гц), 6,90 (1Н, с), 3,13-3,15 (4Н, м), 2,85-2,87 (4Н, м),
2,50 (3H, с).
Пример 4. Получение соединения 32
Стадия А: РРА (~1 мл) добавляли к смеси 6-бромхромон-2-карбоновой кислоты (269 мг, 1 ммоль) и 2-аминотиофенола (150,2 мг, 1,2 ммоль). Смесь нагревали при 77°С в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду, и полученный осадок фильтровали и сушили. Затем неочищенный продукт очищали хроматографией с 0-6% EtOAc в CH2Cl2 с получением 2-(бензо^]тиазол-2-ил)-6-бром-4Н-хромен-4-она
(79 мг, 22%). МС: m/z 358,0, 360,0 [M+H]+.
Стадия В. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 2-(бензо^]тиазол-2-ил)-6-бром-4Н-хромен-4-она (71,6 мг, 0,2 ммоль), 1-Boc-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Pd(dba)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), Sphos (10,3 мг, 0,025 ммоль) и Cs2CO3 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(бензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилат. МС: m/z 464,3 [M+H]+.
Стадия С. Как описано на стадии D примера 1, после проведения реакции взаимодействия трет
бутил-4-(2-(бензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата и CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (59,1 мг, 81% за 2 стадии). Температура плавления: 250-254°С; МС: m/z 364,2 [M+H]+ . ^-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d,,): 5 8,31 (1Н, д, J=7,9 Гц), 8,22 (1Н, д, J=8,3 Гц), 7,72 (1Н, д, J=9,2 Гц), 7,67 (1Н, т, J=7,7 Гц), 7,60-7,63 (2Н, м), 7,33 (1Н, д, J=2,9 Гц), 7,14 (1Н, с), 3,15-3,17 (4Н, м), 2,85-2,87 (4Н, м).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 4 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
Пример 5. Получение соединения 28
Стадия А. К раствору 6-бромхромон-2-карбоновой кислоты (2,69 г, 10 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавляли 1,1-карбонилдиимидазол (1,95 г, 12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°С в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли HCl-соль N,O-диметилгидроксиламина (1,46 г, 15 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После удаления CH2Cl2 к смеси добавляли эфир. Полученный осадок фильтровали и тщательно промывали водой с получением 6-бром-N-метокси-N-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамида (2,3 г, 73,7%). МС: m/z 312,1, 314,1 [M+H]+.
Стадия В. К раствору 6-бром^-метокси-^метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамида (3,58 г, 11,5 ммоль) в ТГФ (10 мл) при 0°С по каплям добавляли бромид метилмагния (3 М в диэтиловом эфире, 4,6 мл, 13,8 ммоль). После перемешивания при 0°С в течение 1,5 ч добавляли насыщенный NH4Cl, и смесь экстрагировали CH2Cl2. Органический слой концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией с 14-63% CH2Cl2 в гексанах с получением 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-она (1,1 г, 36%). МС: m/z 267,1, 269,1 [M+H]+.
Стадия С. К раствору 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-она (542 мг, 2,03 ммоль) в CHCl2 (2 мл) добавляли Br2 (324,4 мг, 2,03 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. После удаления CH2Cl2 и избытка Br2, к смеси добавляли эфир. Полученный осадок фильтровали, промывали насыщенным раствором NaHCO3 и сушили с получением 6-бром-2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-она, который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия D. К раствору 6-бром-2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-она (неочищенный продукт стадии С, 415,2 мг, 1,2 ммоль) в EtOH (2 мл) добавляли 2-амино-4-метилпиридин (259 мг, 2,4 ммоль), и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч. После удаления EtOH при пониженном давлении, к смеси добавляли эфир. Полученный осадок фильтровали, промывали насыщенным раствором NaHCO3 и водой, а затем сушили. Остаток очищали хроматографией с 0-33% EtOAc в CH2Cl2 с получением 6-бром-2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (216,6 мг, 50,8%). МС: m/z 355,0, 357,0 [M+H]+.
Стадия Е. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (56,6 мг, 0,16 ммоль), 1-Boc-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Pg(dba)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), Sphos (10,3 мг, 0,025 ммоль) и Cs2CO3 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил) пиперазин-1-карбоксилат (56,4 мг, 77%). МС: m/z 461,3 [M+H]+.
Стадия F. Как описано на стадии D примера 1, после проведения реакции взаимодействия трет-бутил-4-(2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата (56,4 мг, 0,12 ммоль) и CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (43 мг, 97%). Температура плавления: 228-232°С; МС: m/z 361,2 [M+H]+. ^-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d,,): 5 8,59 (1Н, с), 8,51 (1Н, д, J=7,1 Гц), 7,59 (1Н, д, J=9,2 Гц), 7,54 (1Н, дд, J=3,0 Гц, 9,2 Гц), 7,44 (1Н, с), 7,32 (1Н, д, J=2,9 Гц), 6,87 (1Н, д, J=l,5 Гц, 7,0 Гц), 6,85 (1Н, с), 3,12-3,14 (4Н, м), 2,86-2,88 (4Н, м), 2, 38 (3H, с).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 5 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и усло-
Стадия А. Как описано на стадии А примера 5, после проведения реакции взаимодействия 6-бромхромон-2-карбоновой кислоты (2,69 г, 10 ммоль), 1,1-карбонилдиимидазола (1,95 г, 12 ммоль) и гидрохлорида ^О-диметилгидроксиламина (1,46 г, 15 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) получали 6-бром^-метокси-N-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамид (2,3 г, 73,7%). МС: m/z 312,1, 314,1 [M+H]+.
Стадия В. Как описано на стадии В примера 5, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-N-метокси-N-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамида (3,58 г, 11,5 ммоль) и бромида метилмагния (3М в диэтиловом эфире, 4,6 мл, 13,8 ммоль) в ТГФ (10 мл) получали 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-он (1,1 г, 36%). МС: m/z 267,1, 269,1 [M+H]+.
Стадия С. Как описано на стадии С примера 5, после проведения реакции взаимодействия 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-она (542 мг, 2,03 ммоль) и Br2 (324,4 мг, 2,03 ммоль) в CHCl3 (2 мл) получали 6-бром-2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-он, который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия D. Как описано на стадии D примера 5, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-она (неочищенный продукт, 468,2 мг, 1,35 ммоль) и 2-амино-5-метилпиразина (147,6 мг, 1,35 ммоль) в EtOH (2 мл) получали 6-бром-2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4Н-хромен-4-он (76 мг, 16%). МС: m/z 356,0, 358,0 [M+H]+.
Стадия Е. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (35,6 мг, 0,1 ммоль), 1-Boc-пиперазина (22,3 мг, 0,12 ммоль), Pd(dba)2 (3 мг, 0,005 ммоль), Sphos (5,2 мг, 0,013 ммоль) и Cs2CO3 (45,6 мг, 0,14 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1 -карбоксилат.
Стадия F. Как описано на стадии D примера 1, после проведения реакции взаимодействия трет-бутил-4-(2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата и CH2Cl2/TFA (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (6,5 мг, 18% за 2 стадии). МС: m/z 362,2 [M+H]+. 1H ЯМР (500 МГц, ДМСОч16): 5 9,12 (1Н, с), 8,73 (1Н, с), 8,49 (1Н, с), 7,64 (1Н, д, J=9,1 Гц), 7,57 (1Н, дд, J=3,1 Гц, 9,3 Гц), 7,34 (1Н, д, J=3,2 Гц), 6,95 (1Н, с), 3,17-3,19 (4H, м), 2,91-2,93 (4Н, м), 2,46 (3H, с).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 6 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
В табл. 1 представлены соединения формулы (I) в форме свободного основания, которые могут быть получены и выделены методами, описанными в указанном примере, путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций. Кроме того, рассматривается получение любых форм соединения формулы (I), представленного в виде свободного основания, таких как соль, изотополог, стереоизомер, рацемат, энантиомер, диастереомер или таутомер, и такие формы также входят в объем описания изобретения. Если соединение в форме свободного основания не было выделено из солевой формы, то предусматривается, что средний специалист в данной области может провести необходимые реакции в целях получения и выделения такого соединения в форме свободного основания.
Сокращение "Соед." означает номер соединения; сокращение "Пр." означает "номер примера" (где * указывает на то, что соответствующий пример получения этого соединения приводится выше), сокращение "Т.пл." означает "температуру плавления (°C)", сокращение "МС" означает "Масс-спектроскопический пик(-и) m/z [M+H]+, [М+2+Н]+, [М-Н]~ или [М+2-Н]-", сокращение "D" означает "разложение/разложенный", сокращение "DR" означает "степень разложения", сокращение "S" означает "мягчение", сокращение "ND" указывает на то, что данная величина "не была определена", а сокращение "NI" указывает на то, что это соединение "не было выделено".
6- (1,4-диазепан-1-ил)-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он
198-200
361,3
2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-он
188-190
375, 3
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
177-179
367, 1
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
184-186
381,3
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
188-190
395, 3
2- (3,4-диметоксифенил)-6-[ (3R) -
3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-
хромен-4-он
181-183
381,2
2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
206-208
395, 3
6- (1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-он
152-154
381,3
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-он
106-108
395, 3
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
108-110
395, 3
2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
228-232
361,2
2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
150-155
375, 3
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он
102-104
389, 4
2- (3,4-диметоксифенил)-6-[ (3S) -
3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-
хромен-4-он
172-174
381,3
4 *
2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
250-254
364, 2
2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
142-144
378, 3
2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
200-202
392, 2
2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6-(4-метилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
215-220
378, 3
2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6-[ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
140-142
378, 3
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
178-180
355, 2
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
100-102
369, 2
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил)-4Н-хромен-4-он
180-182
383, 3
2-(З-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
110-112
369, 2
2-(4-этоксифенил)-б-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
180-182
351,2
2-(4-этоксифенил)-б-[ (3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
93-94
365, 3
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-этоксифенил)-4Н-хромен-4-он
138-140
379, 2
2- (4-этоксифенил)-б-[ (3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
92-94
365, 3
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
130-132
385, 2
2- (2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
179-181
399, 2
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-он
164-166
413,2
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
180-182
399, 2
6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-он
126-128
365, 2
6-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-он
128-130
379, 2
2-(4-метокси-З-метилфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
98-100
351,2
2-(4-метокси-З-метилфенил)-6-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
174-176
365, 2
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-метокси-З-метилфенил) -4Н-хромен-4-он
186-188
379, 2
2-(4-метокси-З-метилфенил)-6-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
164-166
365, 8
2-(б-метоксипиридин-3-ил)- 6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
165-170
338,7
2-(б-метоксипиридин-3-ил)-б-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
196-200
352, 3
2-(б-метоксипиридин-3-ил)-б-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
198-200
352, 2
2-(З-хлор-4-метоксифенил)-б-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
145-150
371,2
2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
172-174
385, 2
2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
176-178
399, 2
2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3R)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
170-172
385, 2
2-(4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
166-170
337, 1
2-(4-метоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
155-160
351,2
6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-он
146-148
391, 0
6-[(3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-он
138-140
405, 1
2- (3-фторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
150-152
325, 0
6-(пиперазин-1-ил)-2-[3-
(трифторметил)фенил]-4Н-хромен-
4-он
174-176
375, 0
2-[4-метокси-З-трифторметокси)фенил]-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
104-106
421, 0
2-[4-метокси-З-
(трифторметил)фенил]-6-
(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
128-132
405, 1
2-[4-метокси-З-
трифторметокси)фенил]-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
142-146
435, 1
2-[4-метокси-З-
(трифторметил)фенил]-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
182-184
419, 1
2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
362, 2
2-(б-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-б-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
212-216
376, 1
2-(5-фторпиридин-З-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
182-184
326, 0
2- (5-фторпиридин-З-ил)-б-[(3S)-
3- метилпиперазин-1-ил]-4Н-
хромен-4-он
168-172
340, 4
2-(4-метил-1,З-тиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
179-182
328, 1
2- (3-фторфенил)-б-[ (3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
170-172
339, 2
б- [ (3S)-З-метилпиперазин-1-ил]-2-[3-(трифторметил)фенил]-4Н-хромен-4-он
150-152
389, 2
2- (3,5-дифторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он
180-190
343, 1
2- (3,5-дифторфенил)-б-[ (3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-он
175-178
357, 1
или их соль, изотополог, стереоизомер, рацемат, энантиомер, дистереомер или таутомер. Биологические примеры.
Для более подробного описания и лучшего понимания настоящего изобретения ниже представлены неограничивающие примеры, которые приводятся для более полной иллюстрации объема описанных здесь соединений и не должны рассматриваться как какое-либо конкретное ограничение объема изобретения. При этом считается, что варианты описанных здесь соединений, которые могут быть уже известными или будут разработаны в будущем специалистами, компетентными в данной области, также входят в объем описанных и заявленных здесь соединений. В данных примерах проиллюстрировано тестирование некоторых описанных здесь соединений in vivo и/или in vitro и продемонстрирована целесообразность использования этих соединений для лечения SMA путем повышения уровня включения экзона 7 гена SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2. Соединения формулы (I) повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, и повышают уровни белка Smn, продуцируемого из гена SMN2, и поэтому они могут быть использованы для лечения SMA у человека, нуждающегося в этом.
Пример 1. Конструирование минигена SMN2.
Получение конструкций минигена.
ДНК, соответствующую области гена SMN2, начинающейся от 5'-конца экзона 6 (ATAATTCCCCC) (SEQ ID NO: 14) и заканчивающейся остатком нуклеиновой кислоты 23 экзона 8 (CAGCAC) (SEQ ID NO: 15), амплифицировали посредством PCR с использованием следующих праймеров:
Прямой праймер:
5 ' -CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3 ' (SEQ ID NO: 16) и Обратный праймер:
5 т -CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3 т (SEQIDNO: 17).
5'-конец каждого праймера конструировали для присоединения сайта распознавания рестрикти-рующей эндонуклеазой BamHI у 5'-конца экзона 6 (GGATCC) (SEQ ID NO, 18) и 3'-конца за 23 нуклео-тидом экзона 8. С использованием сайтов распознавания рестриктирующей эндонуклеазой BamHI, PCR-фрагмент клонировали в производное исходного вектора pcDNA3.1/Hygro, который был модифицирован, как описано в публикации заявки на патент США US2005/0048549.
Новые UTR присоединяли к модифицированному вектору с использованием рестрикционных Hin-dlll- и BamHI-сайтов, включающих 5'DEG UTR:
5 ' -TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAAC CATTGGTAAACCCTG-3 ' (SEQ ID NO: 19),
клонированный в модифицированный вектор pcDNA3.1/Hygro вместе со старт-кодоном, расположенным выше рестрикционного BamHI-сайта, и 3' DEG UTR:
5 ' -АТС G AAAG Т AC AG G AC TAG С С Т Т С С TAG С ААС CGCGGGCTGG GAG Т С Т GAG AC AT CACTCAAGATATATGCTCGGTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCT
TATAGGG-3 ' (SEQ ID NO: 20), клонированный в модифицированный вектор pcDNA3.1/Hygro с использованием сайта распознавания рестриктирующей эндонуклеазой NotI и сайта распознавания рест-риктирующей эндонуклеазой XhoI вместе со стоп-кодоном, расположенным непосредственно за рест-рикционным NotI-сайтом. Кроме того, ген люциферазы светляка, не содержащий старт-кодона, клонировали в вектор с использованием рестрикционных BamHI- и NotI-сайтов.
Полученный миниген содержит, в направлении 5' -3': 5'-DEG UTR, старт-кодон, шесть дополнительных нуклеотидов, образующих рестрикционный BamHI-сайт, остатки нуклеиновой кислоты экзона 6, остатки нуклеиновой кислоты интрона 6 SMN2, остатки нуклеиновой кислоты экзона 7 SMN2, остатки нуклеиновой кислоты интрона 7 SMN2, и первые 23 остатка нуклеиновой кислоты экзона 8 SMN2, дополнительные шесть нуклеотидов, образующих рестрикционный BamHI-сайт, и ген люциферазы светляка, не содержащий старт-кодона.
Один адениновый остаток встраивали за нуклеотидом в положении 48 экзона 7 SMN2 посредством сайт-направленного мутагенеза. Эта конструкция минигена обозначена SMN2-A.
SMN2-транскрипты, происходящие от минигенов, содержащих экзоны 6-8 и промежуточные ин-троны, рекапитулируют сплайсинг эндогенных пре-мРНК этих транскриптов (Lorson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1999, 96 (11), 6307). Была получена конструкция "SMN2 - ген-репортер альтернативного сплайсинга", содержащая экзоны 6-8 и промежуточные интроны, за которыми следует репортерный ген люциферазы. Признаками сайленсинга этой конструкции являются отсутствие старт-кодона в гене люциферазы и инактивация терминирующего кодона (в открытой рамке считывания, кодирующей белок SMN) экзона 7, осуществляемая посредством встраивания нуклеотида за нуклеиновой кислотой в положении 48 экзона 7 и присоединения старт-кодона (ATG) непосредственно выше экзона 6. Один аденин (SMN2-A) встраивали за остатком нуклеиновой кислоты в положении 48 экзона 7.
Миниген SMN2 конструировали так, чтобы люциферазный репортер находился в одной рамке считывания со старт-кодоном ATG, расположенным непосредственно выше экзона 6, если экзон 7 присутствует в мРНК, и чтобы этот люциферазный репортер не находился в одной рамке считывания со старт-кодоном ATG, расположенным непосредственно выше экзона 6, если экзон 7 SMN2 был удален во время сплайсинга пре-мРНК. Кроме того, в отсутствие экзона 7, открытая рамка считывания, начинающаяся от старт-кодона ATG, расположенного непосредственно выше экзона 6, содержит стоп-кодон во фрагменте экзона 8 SMN. Таким образом, в присутствии соединений, которые повышают уровень включения экзона 7 SMN2 в мРНК, которая транскрибируется из гена SMN2, продуцировалось еще больше транскриптов, содержащих экзон 7, и еще больше функциональных репортеров. Это описание схематически проиллюстрировано на фиг. 1.
Последовательность ДНК минигена конструкции SMN2-A SEQ ID NO: 21 представлена на фиг. 2а. Подпоследовательности минигена SMN2-A проиллюстрированы на фиг. 2b.
Пример 2. RT-qPCR-анализ сплайсинга мРНК минигена SMN2 в культивированных клетках.
Анализ на основе количественной PCR с обратной транскриптазой (RT-qPCR) проводили для количественной оценки уровня полноразмерной мРНК минигена SMN2, содержащей экзон 7 SMN2, в клеточной линии НЕК293Н, стабильно трансфицированной указанным минигеном и обработанной тестируемым соединением.
Смесь ферментов для RT-PCR
Life Technologies, Inc. (прежнее название Applied Biosystems) Part No.: 4388520 (также включенный в набор AgPath-ID Kit Каталожный номер: 4387391)
Буфер для RT-PCR
Life Technologies, Inc. (прежнее название Applied Biosystems) Part No.: 4388519 (также включенный в набор AgPath-ID Kit Каталожный номер: 4387391)
Набор для одностадийной RT-PCR AgPath-ID
Life Technologies, Inc. (прежнее название Applied Biosystems) Каталожный номер: 4387391
Термоячейка
Life Technologies, Inc. (прежнее название Applied Biosystems) 7900HT
Протокол. Клетки НЕК293Н, стабильно трансфицированные описанной выше конструкцией минигена SMN2-A (10000 клеток/лунку), высевали в 200 мкл среды для культивирования клеток (DMEM плюс 10% FBS с 200 мкг/мл гигромицина) в 96-луночных плоскодонных планшетах, и эти планшеты сразу встряхивали для обеспечения соответствующего диспергирования клеток, образующих равномерный монослой. Клетки оставляли по меньшей мере на 4-6 ч для прикрепления. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую лунку, содержащую клетки, добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО), и планшет инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% CO2, относительная влажность 100%). Для каждой концентрации тестируемого соединения получали два репликата. Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Cells-To-Ct, и лизат хранили при -80°C.
Полноразмерную мРНК минигена SMN2-A и GAPDH количественно оценивали с использованием праймеров и зондов, представленных в табл. 3. Прямой SMN-праймер A (SEQ ID NO: 1) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 7 (нуклеотиды 22-40), обратный SMN-праймер A (SEQ ID NO: 2) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в кодирующей последовательности люцифе-разы светляка, SMN-зонд A (SEQ ID NO: 3) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзо-не 7 (нуклеотиды 50-54) и в экзоне 8 (нуклеотиды 1-21). Комбинация из этих трех олигонуклеотидов детектирует только минигены SMN1 или SMN2 (RT-qPCR), но не детектирует эндогенные гены SMN1 или
SMN2.
1Праймеры и зонды, сконструированные PTC Therapeutics, Inc.;
2Поставляемый компанией Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen).
Прямые и обратные SMN-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,4 мкМ. SMN-зонд использовали в конечной концентрации 0,15 мкМ. GAPDH-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,2 мкМ, и зонд в конечной концентрации 0,15 мкМ.
Смесь минигена SMN2 и GAPDH (общий объем 15 мкл) получали путем объединения 7,5 мкл 2х буфера для RT-PCR, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для RT-PCR, 0,75 мкл 20х смеси GAPDH-праймера и зонда, 4,0075 мкл воды, 2 мкл 10-кратно разведенного клеточного лизата, 0,06 мкл 100 мкМ прямого SMN-праймера, 0,06 мкл 100 мкМ обратного SMN-праймера и 0,225 мкл 100 мкМ SMN-зонда.
PCR осуществляли при нежеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 48°С (15 мин); стадия 2: 95°С (10 мин); стадия 3: 95°С (15 с); стадия 4: 60°С (1 мин); с последующим повторением стадий 3 и 4, всего 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит миниген SMN2-A и наборы GAPDH-праймеров/зонд (мультиплексную конструкцию), что позволяет осуществлять одновременное измерение уровней двух транс-криптов.
Два сплайсированных продукта SMN получали из минигена SMN2. Первый сплайсированный продукт, содержащий экзон 7, соответствующий полноразмерной мРНК SMN2, обозначен здесь как "миниген SMN2 FL". Второй сплайсированный продукт, не содержащий экзона 7, обозначен здесь как "миниген SMN2 А7".
Повышение уровня мРНК минигена SMN2 FL по сравнению с уровнем указанной мРНК в клетках, обработанных носителем, используемым в качестве контроля, определяли с использованием данных PCR в реальном времени, используя модифицированный метод AACt (как описано в публикации Livak и Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (E) определяли по наклону кривой амплификации для мРНК минигена SMN2 FL и GAPDH, взятых по отдельности. Количество мРНК ми-нигена SMN2 FL и GAPDH вычисляли как (1+E)-Ct, где Ct представляет собой пороговую величину для каждого ампликона. Количество мРНК минигена SMN2 FL нормализовали по количеству GAPDH. Нормализованное количество минигена SMN2 FL в образцах, обработанных тестируемым соединением, делили на нормализованное количество минигена SMN2 FL в клетках, обработанных носителем, и определяли уровень мРНК минигена SMN2 FL по отношению к носителю, используемому в качестве контроля.
Результаты. Как показано на фиг. 3, в клетках, обработанных соединением 17 (фиг. 3a) и соединением 38 (фиг. 3b), наблюдался повышенный уровень мРНК минигена SMN2 FL при низких концентрациях соединений. Эти два тестируемых соединения обеспечивали полное восстановление включения экзона 7 по сравнению с необработанными клетками.
Для описанных здесь соединений формулы (I) или их форм, в табл. 4 представлена EC15x для продуцирования полноразмерной мРНК SMN2, которая была вычислена по кривой, построенной для каждого тестируемого соединения по 7 значениям концентраций в соответствии с процедурой, описанной в биологическом примере 2. Термин "EC15x для продуцирования полноразмерной мРНК SMN2" означает концентрацию тестируемого соединения, которая является эффективной для увеличения количества полноразмерной мРНК SMN2 до уровня, который в 1,5 раз превышает уровень указанной мРНК в клетках, обработанных носителем. EC15x для продуцирования полноразмерной мРНК SMN2, составляющая от > 3 мкМ до <30 мкМ, показана одной звездочкой (*), EC15x, составляющая от > 1 мкМ до <3 мкМ, показана двумя звездочками (**), EC15x, составляющая от > 0,3 мкМ до <1 мкМ, показана тремя звездочками (***), EC15x, составляющая от > 0,1 мкМ до <0,3 мкМ, показана четырьмя звездочками (****), и EC15x, составляющая <0,1 мкМ, показана пятью звездочками (*****).
Таблица 4
Cpd
ECl.5x
Cpd
ECl.5x
Cpd
ECl.5x
***
***
***
***
*****
*****
*****
****
***
***
****
***
****
***
****
****
***
***
*****
****
****
****
****
***
***
***
***
***
****
*****
***
*****
*****
***
***
****
***
****
***
***
Cpd - соединение
Пример 3. RT-qPCR-анализ сплайсинга мРНК эндогенного SMN2 в культивированных клетках.
Анализ на основе количественной PCR с обратной транскриптазой (RT-qPCR) проводили для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК SMN2 и А7 в первичных клетках и в клеточных линиях, содержащих ген SMN2 и обработанных тестируемым соединением.
Протокол. Клетки пациента с SMA GM03813 (5000 клеток/лунку) высевали в 200 мкл среды для культивирования клеток (DMEM плюс 10% FBS) в 96-луночных плоскодонных планшетах, и эти планшеты сразу встряхивали для обеспечения соответствующего диспергирования клеток, образующих равномерный монослой. Клетки оставляли по меньшей мере на 4-6 ч для прикрепления. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО), и в каждую контрольную лунку добавляли 1 мкл ДМСО. Планшет инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% CO2, относительная влажность 100%). Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Cells-To-Ct, и лизат хранили при -80°С.
SMN2-специфические сплайсированные продукты и мРНК GAPDH идентифицировали с использованием праймеров и зондов, представленных в табл. 5. Прямой SMN-праймер FL В (SEQ ID NO: 7) гиб-ридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 7 (нуклеотиды 32-54) и в экзоне 8 (нуклеоти-ды 1-4), прямой SMN-праймер А7 В (SEQ ID NO: 8) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (нуклеотиды 87-111) и в экзоне 8 (нуклеотиды 1-3), обратный SMN-праймер В (SEQ ID NO: 9) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8 (нуклеотиды 39-62), а SMN-зонд В (SEQ ID NO: 10) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8 (нуклеотиды 7-36). Эти прай-меры и зонды гибридизуются с нуклеотидными последовательностями, которые являются общими для
1Праймеры и зонды, сконструированные PTC Therapeutics, Inc.;
2Поставляемый компанией Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen).
Прямые и обратные SMN-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,4 мкМ. SMN-зонд использовали в конечной концентрации 0,15 мкМ. GAPDH-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,1 мкМ, и зонд в конечной концентрации 0,075 мкМ.
Смесь SMN-GAPDH (общий объем 10 мкл) получали путем объединения 5 мкл 2х буфера для RT-PCR, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для RT-PCR, 0,25 мкл 20х смеси GAPDH-праймера и зонда, 1,755 мкл воды, 2,5 мкл клеточного лизата, 0,04 мкл 100 мкМ прямого SMN-праймера FL или SMN-праймера А7, 0,04 мкл 100 мкМ обратного SMN-праймера и 0,015 мкл 100 мкМ зонда.
PCR осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 48°С (15 мин); стадия 2: 95°С (10 мин); стадия 3: 95°С (15 с); стадия 4: 60°С (1 мин); с последующим повторением стадий 3 и 4, всего 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит либо SMN2 FL и GAPDH, либо SMN2 А7, и наборы GAPDH-праймеров/зонд (мультиплексную конструкцию), что позволяет осуществлять одновременное измерение уровней двух транскриптов.
Эндогенный ген SMN2 продуцировал две альтернативно сплайсированных мРНК. Полноразмерная мРНК SMN2, содержащая экзон 7, обозначена здесь как "SMN2 FL". Усеченная мРНК, не содержащая экзона 7, обозначена здесь как "SMN2 А7".
Повышение уровня мРНК SMN2 FL и снижение уровня мРНК SMN2 А7 по сравнению с уровнем указанной мРНК в клетках, обработанных носителем, используемым в качестве контроля, определяли по данным PCR в реальном времени, используя модифицированный метод АА^ (как описано в публикации Livak и Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (E) определяли по наклону кривой амплификации для SMN2 FL, SMN2 А7 и GAPDH, взятых по отдельности. Количество мРНК SMN2 FL, SMN2 А7 и GAPDH вычисляли как (1+E)-Ct, где Ct представляет собой пороговую величину для каждого ампликона. Количество мРНК SMN2 FL и SMN2 А7 нормальзовали по количеству мРНК GAPDH. Нормализованное количество мРНК SMN2 FL и SMN2 А7 в образцах, обработанных тестируемым соединением, делили на нормализованное количество мРНК SMN2 FL и SMN2 А7, соответственно, в клетках, обработанных носителем, и определяли уровни мРНК SMN2 FL и SMN2 А7 по отношению к носителю, используемому в качестве контроля.
Результаты. Как показано на фиг. 4, клетки, обработанные повышенными концентрациями соединения 38, содержали значительно большее количество мРНК SMN2 FL и меньшее количество мРНК SMN2 А7 по сравнению с количеством мРНК, наблюдаемым в клетках, обработанных носителем, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN2.
Пример 4.
Полуколичественный RT-PCR-анализ в конечной точке на сплайсинг мРНК эндогенного SMN2 в культивированных клетках.
Анализ на сплайсинг, проводимый с помощью PCR с обратной транскриптазой в конечной точке, осуществляли для визуализации и количественной оценки уровней полноразмерной мРНК SMN2 и А7 в
первичных клетках и в клеточных линиях, содержащих ген SMN2 и обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал
Источник
Клетки человека с SMA типа 1
GM03813 (Coriell Institute)
Буфер для лизиса клеток Cells-To-Ct
Life Technologies. Inc. (прежнее название Applied Biosystems) Каталожный номер: 4399002
DMEM
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: 11960-044
9 6-луночные плоскодонные планшеты
Becton Dickinson Каталожный номер: 353 072
Смесь ДНК-полимераз Super Mix Platinum Taq HiFi
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: 11304-016
Набор ферментов для RT iScript
BioRad: Каталожный номер: 170-8890
Двойная комбинация 2% агарозных гелей Е с этидийбромидом в 48-луночных планшетах
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: G8008-021
Задокументированная система гелей
Визуализирующая система UVP Gel Doc It 310
Протокол. Клетки пациента с SMA GM03813 (5000 клеток/лунку) высевали в 200 мкл среды для культивирования клеток (DMEM плюс 10% FBS) в 96-луночных плоскодонных планшетах, и эти планшеты сразу встряхивали для обеспечения соответствующего диспергирования клеток, образующих равномерный монослой. Клетки оставляли по меньшей мере на 4-6 ч для прикрепления. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО), и в каждую контрольную лунку добавляли 1 мкл ДМСО. Планшет инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% CO2, относительная влажность 100%). Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Cells-To-Ct, и лизат хранили при -80°С.
мРНК SMN FL и А7 идентифицировали с использованием праймеров, представленных в табл. 6. Эти праймеры гибридизуются с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (прямой SMN-праймер С, SEQ ID NO:11) (нуклеотиды 43-63) и в экзоне 8 (обратный SMN-праймер С, SEQ ID NO:12) (нуклеотиды 51-73), которые являются общими для мРНК SMN1 и SMN2 человека. Поскольку клетки пациента с SMA, используемые в примере 4, содержат только ген SMN2, то RT-PCR позволяет визуализировать и количественно определить только полноразмерную мРНК SMN2 и SMN2 А7.
Таблица 6
Праймер
Последовательность
Источник
Прямой SMN-праймер С
SEQ ID N0:11:
GATGCTGATGCTTTGGGAAGT
PTC1
Обратный SMN-праймер С
SEQ ID N0:12:
CGCTTCACATTCCAGATCTGTC
PTC1
1Праймеры, сконструированные PTC Therapeutics, Inc.
Для синтеза кДНК, 5 мкл лизата, 4 мкл 5х реакционной смеси iScript, 1 мкл обратной транскрипта-зы и 10 мкл воды объединяли и инкубировали в течение 5 мин при 25°С, а затем 30 мин при 42°С и затем 5 мин при 85°С. Раствор кДНК хранили при -20°С.
Для осуществления PCR в конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной смеси Supermix объединяли в 96-луночном PCR-планшете с половинным объемом лунок. PCR осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 94°С (2 мин); стадия 2: 94°С (30 с); стадия 3: 55°С (30 с); стадия 4: 68°С (1 мин); с последующим повторением стадий 2-4, всего 33 цикла, и выдерживанием при 4°С.
10 мкл каждого PCR-образца подвергали электрофоретическому разделению на 2% агарозном Е-геле в течение 14 мин, окрашивали реагентами, используемыми для окрашивания на присутствие двух-цепочечной ДНК (дцДНК) (например, этидийбромидом), и визуализировали на гелевом визуализаторе.
Результаты. Как видно на фиг. 5, клетки, обработанные повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 5а) и соединения 38 (фиг. 5b), содержали значительно большее количество мРНК SMN2 FL и
меньшее количество мРНК SMN2 А7, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN2. Пример 5. RT-qPCR-анализ на сплайсинг мРНК SMN2 в тканях животных.
Анализ, проводимый с помощью количественной PCR с обратной транскриптазой (RT-qPCR), осуществляли для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК SMN2 и мРНК А7 в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением.
Протокол. SMA-мышей с С/С-аллелем обрабатывали через пероральный зонд два раза в день (BID) в течение 10 дней тестируемыми соединениями, ресуспендированными в 0,5% гидроксипропилметил-целлюлозе (НРМС) и 0,1% Tween-80. Образцы тканей собирали и быстро замораживали для очистки
РНК.
Образцы тканей (20-40 мг) гомогенизировали в реагенте для лизиса QIAzol в течение 2 мин при 20 Гц в TissueLyser II с использованием одной сферы из нержавеющей стали. После добавления хлороформа, гомогенат разделяли на водную и органическую фазы путем центрифугирования. РНК, распределенную по верхней водной фазе, экстрагировали, и добавляли этанол для создания соответствующих условий связывания. Затем образец наносили на центрифужную колонку RNeasy из мининабора RNeasy Mini Kit, где вся РНК связывается с мембраной. РНК элюировали в воде, не содержащей РНКазы, а затем хранили при -20°С, после чего анализировали с помощью RT-qPCR TaqMan на термоячейке 7900НТ Ther-mocycler. Всю РНК 10-кратно разводили, и 2,5 мкл разведенного образца добавляли к RT-qPCR-смеси TaqMan.
Сплайсированные SMN2-продукты идентифицировали с использованием праймеров и зондов, представленных в табл. 7. Прямой SMN-праймер FL В (SEQ ID NO: 7) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзонах 7 и 8, прямой SMN-праймер А7 В (SEQ ID NO: 8) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзонах 6 и 8, обратный SMN-праймер В (SEQ ID NO: 9) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8, и SMN-зонд В (SEQ ID NO: 10) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8. Эти праймеры и зонды гибридизуются с нуклеотидными последовательностями, которые являются общими для мРНК SMN1 и SMN2 человека. Поскольку клетки пациента с SMA, используемые в примере 5, содержат только ген SMN2, то RT-qPCR позволяет количественно определить только полноразмерную мРНК SMN2 и мРНК А7.
Таблица 7
Праймеры/Зонды
Последовательность
Источник
Прямой SMN-праймер FL В
SEQ ID N0:7:
GCTСАСАТ ТССТ ТАААТTAAGGAGAAA
PTC1
Прямой SMN-праймер А7 В
SEQ ID N0:8:
TGGCTATCATACTGGCTATTATATGGAA
PTC1
Обратный SMN-праймер В
SEQ ID NO:9:
TCCAGATCTGTCTGATCGTTTCTT
PTC1
Прямой SMN-зонд
SEQ ID N0:10: 6FAM-
C T G G CATAGAGCAGCAC TAAATGACACCAC-
TAMRA
PTC1
1Праймеры и зонды, сконструированные PTC Therapeutics, Inc.
Прямые и обратные SMN-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,4 мкМ. SMN-зонд использовали в конечной концентрации 0,15 мкМ. Смесь SMN-GAPDH (общий объем 10 мкл) получали путем объединения 5 мкл 2х буфера для RT-PCR, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для RT-PCR, 0,5 мкл 20х смеси GAPDH-праймера и зонда, 1,505 мкл воды, 2,5 мкл раствора РНК, 0,04 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,04 мкл 100 мкМ обратного праймера и 0,015 мкл 100 мкМ SMN-зонда.
Каждый PCR-цикл осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 48°С (15 мин); стадия 2: 95°С (10 мин); стадия 3: 95°С (15 с); стадия 4: 60°С (1 мин); с последующим повторением стадий 3 и 4, всего 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит либо SMN2 FL и mGAPDH, либо SMN2 А7, и наборы mGAPDH-праймеров/зонд (мультиплексную конструкцию), что позволяет осуществлять одновременное измерение уровней двух транскриптов.
Повышение уровня мРНК SMN2 FL и снижение уровня мРНК SMN2 А7 по сравнению с уровнем указанной мРНК в тканях животных, обработанных носителем, используемым в качестве контроля, определяли по данным PCR в реальном времени, используя модифицированный метод ААО; (как описано в публикации Livak и Schmittgen, Methods, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (E) определяли по наклону кривой амплификации для SMN2 FL, SMN2 А7 и GAPDH, взятых по отдельности. Количество SMN2 FL, SMN2 А7 и GAPDH вычисляли как (1+E)-Ct, где Ct представляет собой пороговую величину для каждого ампликона. Количество мРНК SMN2 FL и SMN2 А7 нормальзовали по количеству мРНК GAPDH. Нормализованное количество мРНК SMN2 FL и SMN2 А7 в образцах, обработанных тестируемым соединением, делили на нормализованное количество мРНК SMN2 FL и SMN2 А7, соответственно, в клетках, обработанных носителем, и определяли уровни мРНК SMN2 FL и SMN2 А7 по отношению к носителю, используемому в качестве контроля.
Пример 6. Полуколичественный RT-PCR-анализ в конечной точке на сплайсинг мРНК эндогенного SMN2 в тканях животных.
Анализ на сплайсинг, проводимый с помощью PCR с обратной транскриптазой в конечной точке (RT-PCR), осуществляли для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК SMN2 и А7 в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением.
Протокол. SMA-мышей с С/С-аллелем обрабатывали через пероральный зонд два раза в день (BID) в течение 10 дней тестируемыми соединениями в 0,5% НРМС и 0,1% Tween-80. Образцы тканей собирали и быстро замораживали для очистки РНК.
Образцы тканей (20-40 мг) гомогенизировали в реагенте для лизиса QIAzol в течение 2 мин при 20 Гц в TissueLyser II с использованием одной сферы из нержавеющей стали. После добавления хлороформа, гомогенат разделяли на водную и органическую фазы путем центрифугирования. РНК, распределенную по верхней водной фазе, экстрагировали, и добавляли этанол для создания соответствующих условий связывания. Затем образец наносили на центрифужную колонку RNeasy из мининабора RNeasy Mini Kit, где вся РНК связывается с мембраной. РНК элюировали в воде, не содержащей РНКазы, а затем хранили при -20°С.
Сплайсированные SMN2-продукты идентифицировали с использованием праймеров для амплификации, представленных в табл. 8. Эти праймеры гибридизуются с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (прямой SMN-праймер D, SEQ ID NO:13) (нуклеотиды 22-46) и в экзоне 8 (обратный SMN-праймер С, SEQ ID NO:12), которые являются общими для мРНК SMN1 и SMN2 человека.
1Праймеры, сконструированные PTC Therapeutics, Inc.
Для синтеза кДНК объединяли 1 мкл раствора РНК (25-50 нг), 4 мкл 5х реакционной смеси iScript, 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды, и смесь инкубировали в течение 5 мин при 25°С, а затем 30 мин при 42°С и затем 5 мин при 85°С. Раствор кДНК хранили при -20°С.
Для осуществления PCR в конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной смеси Supermix объединяли в 96-луночном PCR-планшете с половинным объемом лунок. PCR осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 94°С (2 мин); стадия 2: 94°С (30 с); стадия 3: 55°С (30 с); стадия 4: 68°С (1 мин); с последующим повторением стадий 2-4, всего 33 цикла, и выдерживанием при 4°С.
10 мкл каждого PCR-образца подвергали электрофоретическому разделению на 2% агарозном Е-геле в течение 14 мин, окрашивали реагентами, используемыми для окрашивания на присутствие двух-цепочечной ДНК (дцДНК) (например, этидийбромидом), и визуализировали на гелевом визуализаторе.
Пример 7. Анализ белка Smn в культивированных клетках.
Протокол. Клетки оттаивали и культивировали в DMEM-10% FBS в течение 72 ч. Затем клетки обрабатывали трипсином, подсчитывали и ресуспендировали до концентрации 25000 клеток/мл в DMEM-10% FBS. Клеточную суспензию высевали при плотности 5000 клеток на лунку в 96-луночном микро
Анализ Smn, проводимый с помощью HTRF (гомогенная флуоресценция с временным разрешением), осуществляли для количественной оценки уровня белка Smn в фибробластах пациента с SMA, обработанных тестируемыми соединениями. Результаты анализа представлены в табл. 9.
титрационном планшете и инкубировали в течение 3-5 ч. Для получения контрольного сигнала, в три (3) лунки 96-луночного планшета клетки не добавляли, то есть, эти лунки служили в качестве слепого контроля. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В лунки, содержащие клетки, переносили 1 мкл раствора тестируемого соединения, и эти клетки инкубировали в течение 48 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% CO2, относительная влажность 100%). Образцы с тремя повторностями приготавливали для каждой концентрации тестируемого соединения. Через 48 ч, из лунок удаляли супернатант, и в эти лунки добавляли 25 мкл буфера для лизиса RIPA, содержащего ингибиторы протеазы, а затем инкубировали со встряхиванием при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляли 25 мкл разбавителя, после чего в 384-луночный планшет переносили 35 мкл полученного лизата, где каждая лунка содержала 5 мкл раствора антитела (разведение анти-SMN d2 и анти-SMN криптата в буфере для разведения SMN составляло 1:100). Планшет центрифугировали в течение 1 мин для осаждения раствора на дно лунок, а затем инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. Флуоресценцию для каждой лунки планшета измеряли при 665 нм и 620 нм на планшет-ридере Envision Multilabel (Perkin-Elmer).
Нормализованный флуоресцентный сигнал вычисляли для каждого образца, то есть, для лунок со слепым контролем и для лунок с контролем-носителем путем деления сигнала при 665 нм на сигнал при 620 нм. Нормализацию сигнала проводили из-за возможного гашения флуоресценции, вызываемого матричным эффектом лизата. Величину AF (количество белка Smn измеряли как процентную величину) для каждой лунки с образцом вычисляли путем вычитания нормализованной средней флуоресценции для лунок со слепым контролем из нормализованной флуоресценции для каждой лунки с образцом, а затем полученную величину делили на нормализованную среднюю флуоресценцию для лунок со слепым контролем, и результат умножали на 100. Величина AF для каждой лунки с образцом представляет собой количество белка Smn в образцах, обработанных тестируемым соединением. Величину AF для каждой лунки с образцом делили на величину AF для лунок с контролем-носителем в целях вычисления кратного увеличения количества белка Smn по сравнению с контролем-носителем.
Результаты. Как показано на фиг. 6, фибробласты пациента с SMA типа 1, обработанные соединением 17 (фиг. 6а) и соединением 38 (фиг. 6b), обнаруживали дозозависимое повышение уровня экспрессии белка Smn, как было оценено в HTRF-анализе SMN.
Для описанных здесь соединений формулы (I) или их форм, в табл. 9 представлена EC15x для экспрессии белка Smn, которая была вычислена по кривой, построенной для каждого тестируемого соединения по 7 значениям концентраций в соответствии с процедурой, описанной в биологическом примере 7. Термин "EC15x для экспрессии белка Smn" означает концентрацию тестируемого соединения, которая является эффективной для 1,5-кратного увеличения количества белка Smn в фибробластах пациента с SMA, по сравнению с количеством, продуцируемым в случае обработки ДМСО-носителем, используемым в качестве контроля. EC15x для экспрессии белка Smn, составляющая от > 3 мкМ до <10 мкМ, показана одной звездочкой (*), EC15x, составляющая от > 1 мкМ до <3 мкМ, показана двумя звездочками (**), EC15x, составляющая от > 0,3 мкМ до <1 мкМ, показана тремя звездочками (***), a EC15x, составляющая <0,3 мкМ, показана четырьмя звездочками (****).
Таблица 9
Cpd ЕС15х Cpd ЕС15х Cpd ЕС15х
****
Для соединений формулы (I) или их форм, в таблице 10 представлена максимальная кратность (Fold) увеличения количества белка Smn, которая была вычислена по кривой, построенной для каждого тестируемого соединения по 7 значениям концентраций в соответствии с процедурой, описанной в биологическом примере 7. Максимально кратное увеличение, составляющее <1,2, показано одной звездочкой (*), кратное увеличение, составляющее от > 1,2 до <1,35, показано двумя звездочками (**), кратное увеличение, составляющее от > 1,35 до <1,5, показано тремя звездочками (***), кратное увеличение, составляющее от > 1,5 до <1,65, показано четырьмя звездочками (****), и кратное увеличение, составляющее > 1,65, показано пятью звездочками (*****).
Пример 8. Оценка числа гемов (количества Smn-зависимых ядерных включений).
Уровень белка Smn непосредственно коррелирует с количеством ядерных включений, также известных как гемы, продуцируемые после окрашивания клетки флуоресцентно меченным анти-Smn антителом (Liu and Dreyfuss, EMBO J., 1996, 15:3555). Гемы представляют собой мультибелковые комплексы, образование которых инициируется белком Smn, и оценку числа гемов проводят для определения уровня белка Smn в клетке. Как описано в настоящей заявке, оценку числа гемов проводят для количественного определения уровня белка Smn в фибробластах пациента с SMA, обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал
Источник
Клетки человека с SMA типа 1
GM03813 (Coriell Institute)
"Первичное" антитело - клон мышиного анти-SMN антитела 2В1
Sigma Каталожный номер: S2944
"Вторичное" антитело -антимышиное антитело Alexa Fluor 555
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: А21422
Альбумин бычьей сыворотки (BSA)
Sigma Каталожный номер: А3294
4% параформальдегид
Electron Microscopy Sciences Каталожный номер: 15710
Бортезомиб
LCLabs, Каталожный номер: В-1408
0,05% Тритон Х-100
Sigma Каталожный номер: 93443 (100 мл)
Заливочная среда -противообесцвечивающий реагент ProLong Gold с DAPI
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: Р7481 и Р36935
Стерильные покровные стекла 22x22 #1
Fisher Каталожный номер: 12-548-В
DMEM
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: 11960-044
PBS
Life Technologies, Inc. (прежнее название Invitrogen) Каталожный номер: 10010-03
Бесцветный лак для ногтей
Торговый знак Revlon, Каталожный номер: 12 71-7 6
Флуоресцентный микроскоп Zeiss Axovert 135
Zeiss
Протокол. Клетки оттаивали и инкубировали в DMEM-10% FBS в течение 72 ч, после чего эти клетки обрабатывали трипсином, подсчитывали и ресуспендировали до концентрации 100000 клеток/мл в DMEM-10% FBS. Клеточную суспензию (2 мл) высевали в б-луночный планшет для культивирования клеток, покрытый стерильным покровным стеклом, и инкубировали в течение 3-5 ч. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую разведения по 7 точкам. В каждую лунку, содержащую клетки, добавляли 10 мкл раствора тестируемого соединения, и эти клетки инкубировали в течение 48 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% СО2, относительная влажность 100%). Образцы с двумя повторностями приготавливали для каждой концентрации тестируемого соединения. Клетки, содержащие ДМСО в конечной концентрации 0,5%, использовали в качестве контроля.
Среду для культивирования клеток подвергали аспирации из лунок, покрытых покровными стеклами, и осторожно промывали три раза холодным PBS. Клетки фиксировали путем 20-минутного инкубирования при комнатной температуре в параформальдегиде.
Затем клетки два раза промывали холодным PBS, после чего инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре с 0,05% тритоном Х-100 в PBS для сообщения клеткам проницаемости. Затем фиксированные клетки три раза промывали холодным PBS и блокировали 10% FBS в течение 1 ч. После этого добавляли 60 мкл "первичного" антитела, разведенного 1:1000 в блокирующем буфере, и смесь инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. Клетки три раза промывали PBS, и добавляли 60 мкл "вторичного" антитела, разведенного 1:5000 в блокирующем буфере, и смесь инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. На предметные стекла помещали покровные стекла с помощью заливочной среды и оставляли на ночь для сушки. По бокам покровного стекла наносили лак для ногтей, и предметные стекла хранили в защищенном от света месте. Иммунофлуоресцент-ное детектирование и подсчет клеток проводили на микроскопе Zeiss Axovert 135 с 63х Plan-Apochromat, с объективом NA=1,4. Число гемов подсчитывали на > 150 ядрах, а % активации вычисляли с использованием ДМСО и 10 нМ бортезомиба в качестве контроля. Для каждого теституемого соединения, клетки анализировали на всех длинах волн в целях идентификации теституемых соединений с природной флуоресценцией.
Результаты. Как показано на фиг. 7, клетки пациента с SMA типа 1, обработанные соединением 38, содержали значительно большее число гемов, чем клетки, обработанные ДМСО. Пример 9. Анализ белка Smn в человеческих мотонейронах.
Иммунофлуоресцентную конфокальную микроскопию Smn проводили для количественной оценки уровня белка Smn в человеческих мотонейронах, обработанных тестируемыми соединениями.
Протокол. Человеческие мотонейроны, происходящие от клеток SMA iPS (Ebert et al., Nature, 2009, 457:2770; и Rubin et al., BMC Biology, 2011, 9:42), обрабатывали тестируемым соединением в различных концентрациях в течение 72 ч. Уровень белка Smn в клеточном ядре количественно оценивали методом иммунологического окрашивания Smn и конфокальной флуоресцентной микроскопии, в основном, как описано в публикации Makhortova et al., Nature Chemical Biology, 2011, 7:544. Уровень белка Smn в образцах, обработанных соединением, нормализовали по уровню белка в образцах, обработанных носителем, и по полученным данным строили график зависимости от концентрации соединения.
Пример 10. Анализ белка Smn в тканях животных.
Анализ белка Smn HTRF проводили для количественной оценки уровня белка Smn в тканях мыши.
Протокол. Образцы ткани в трубках с безопасным покрытием взвешивали, и добавляли соответствующий объем буфера RIPA, содержащего смесь ингибиторов протеазы, исходя из отношения масса/объем для ткани каждого типа: головного мозга (50 мг/мл), мышц (50 мг/мл) и спинного мозга (25 мг/мл).
Ткани гомогенизировали на устройстве для лизиса тканей TissueLyzer путем измельчения сферами. К образцу добавляли сферы из нержавеющей стали диаметром 5 мм, и смесь интенсивно встряхивали в течение 5 мин при 30 Гц в TissueLyzer. Затем образцы центрифугировали в течение 20 мин при 14000xg в микроцентрифуге, и гомогенаты переносили в PCR-планшет. Гомогенаты разводили в буфере RIPA до приблизительно 1 мг/мл для HTRF и приблизительно 0,5 мг/мл для измерения уровня общего белка с помощью анализа белка ВСА. Для HTRF-анализа SMN, 35 мкл тканевого гомогената переносили в 384-луночный планшет, содержащий 5 мкл раствора антитела (разведение каждого из анти-SMNd2 и анти-SMN криптата в буфере для разведения составляло 1:100). Для получения контрольного сигнала, в три (3) лунки планшета добавляли только буфер для лизиса RIPA, то есть, эти лунки служили в качестве слепого контроля. Планшет центрифугировали в течение 1 мин для осаждения раствора на дно лунок, и затем инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. Флуоресценцию для каждой лунки планшета измеряли при 665 нм и 620 нм на планшет-ридере Envision Multilabel (Perkin-Elmer). Общий белок в тканевом гомогенате измеряли с помощью анализа ВСА в соответствии с протоколом производителей. Нормализованный флуоресцентный сигнал вычисляли для каждого образца, для лунок со слепым контролем и для лунок с контролем-носителем путем деления сигнала при 665 нм на сигнал при 620 нм.
Нормализацию сигнала проводили из-за возможного гашения флуоресценции, вызываемого матричным эффектом тканевого гомогената. Величину AF (количество белка Smn измеряли как процентную величину) для каждой лунки с образцом ткани вычисляли путем вычитания нормализованной средней флуоресценции для лунок со слепым контролем из нормализованной флуоресценции для каждой лунки с образцом ткани, и затем полученную величину делили на нормализованную среднюю флуоресценцию для лунок со слепым контролем, и результат умножали на 100. Величину AF для каждой лунки с образцом ткани делили на общее количество белка (определенное с помощью анализа ВСА) для данного образца ткани. Изменение количества белка Smn для данного образца ткани по сравнению с контролем-носителем вычисляли как разницу (в процентах) величины AF для образца ткани в присутствии тестируемого соединения и усредненной величины AF сигнала с контролем-носителем, деленной на усредненную величину AF сигнала с контролем-носителем.
Пример 11. Анализ белка Smn в тканях взрослых SMA-мышей с С/С-аллелем.
Образцы тканей, используемые для количественной оценки белка Smn у взрослых SMA-мышей с С/С-аллелем, получали в соответствии с примером 10. Этот анализ проводили для того, чтобы определить, может ли 10-дневная обработка SMA-мышей, имеющих С/С-аллель, тестируемым соединением приводить к повышению уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMN2 и гибридного мышиного гена Smn1-SMN2.
Протокол. SMA-мышам с С/С-аллелем два раза в день (BID) вводили пероральную дозу (в 0,5% НРМС с 0,1% Tween-80) тестируемого соединения или носителя в количестве 10 мг/кг в течение 10 дней. Гетерозиготным мышам соответствующего возраста вводили дозу носителя, используемого в качестве контроля. Затем брали ткани для анализа уровней белка в соответствии с примером 10.
Пример 12. Белок Smn в тканях новорожденных SMA-A7-мышей.
Образцы тканей, используемые для количественной оценки белка Smn у новорожденных SMA-A7-мышей, получали в соответствии с примером 10. Этот анализ проводили для того, чтобы определить, может ли обработка новорожденных SMA-A7-мышей тестируемым соединением в течение 7 дней приводить к повышению уровней белка Smn, продуцируемого из гена SMN2.
Протокол. Дефицитным (нокаут) SMA-мышам, гомозиготным по A7, один раз в день (QD), начиная с дня 3 и до дня 9 после рождения (PND), внутрибрюшинно (IP) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО). Ткани брали для анализа уровней белка в соответствии с примером 10.
Пример 13. Масса тела новорожденных SMA^^En^.
По изменению массы тела новорожденных SMA-A7-мышей определяли, может ли обработка тестируемым соединением приводить к повышению массы тела.
Протокол. Дефицитным (нокаут) SMA-мышам, гомозиготным по A7, один раз в день (QD), начиная с дня 3 после рождения (PND), внутрибрюшинно (IP) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО), а затем проводили другую схему введения доз, то есть, два раза в день (BID) вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% Tween-80, которая в 3,16 раз превышала IP-дозу. После этого каждый день регистрировали массу тела SMA-A7-мышей, обработанных тестируемым соединением или носителем, и гетерозиготных мышей соответствующего возраста.
Пример 14. Рефлекс выпрямления туловища у новорожденных SMA^^En^.
По функциональным изменениям рефлекса выпрямления туловища у новорожденных SMA-A7-мышей определяли, может ли обработка тестируемым соединением приводить к улучшению рефлекса выпрямления туловища.
Протокол. Дефицитным (нокаут) A7-гомозиготным мышам с SMA один раз в день (QD), начиная с дня 3 после рождения (PND), внутрибрюшинно (IP) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО), а затем проводили другую схему введения доз, то есть, два раза в день (BID) вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% Tween-80, которая в 3,16 раз превышала IP-дозу. Время рефлекса выпрямления туловища измеряли как время, которое необходимо мыши, лежащей на спине, для вставания на лапы. Время рефлекса выпрямления туловища измеряли пять раз для каждой мыши (максимально допустимое время для каждой попытки 30 секунд) с 5-минутными интервалами между каждым измерением. Время рефлекса выпрямления туловища у A7-гомозиготных нокаутных мышей с SMA, обработанных тестируемым соединением или носителем, и у гетерозиготных мышей соответствующего возраста измеряли на дни 10, 14 и 18 после рождения (PND), и по этим данным строили график.
Пример 15. Выживаемость новорожденных SMA-A7-мышей.
По изменению числа выживших мышей за определенный период времени определяли, может ли обработка тестируемым соединением приводить к повышению выживаемости.
Протокол. Дефицитным (нокаут) SMA-мышам, гомозиготным по A7, один раз в день (QD), начиная с дня 3 после рождения (PND), внутрибрюшинно (IP) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО), а затем проводили другую схему введения доз, то есть, два раза в день (BID) вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% Tween-80, которая в 3,16 раз превышала IP-дозу, после чего один раз в день вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% Tween-80, которая в 6,32 раза превышала IP-дозу. Число выживших мышей в каждой группе регистрировали каждый день, и по этим данным строили график процента выживших мышей от общего числа мышей.
Пример 16. Полуколичественный RT-PCR-анализ в конечной точке сплайсинга мРНК минигена человеческого SMN1 в культивированных клетках.
RT-PCR-анализ проводили для визуализации и количественной оценки уровней полноразмерной мРНК минигена человеческого SMN2 и мРНК A7 в первичных клетках и в клеточных линиях, экспресси-рующих конструкцию минигена человеческого SMN1 и обработанных тестируемым соединением.
Конструкция минигена SMN1. Получение конструкции минигена.
В соответствии с процедурой получения конструкции минигена SMN2, описанной в биологическом примере 1, вариант минигена SMN1 получали путем замены шестого нуклеотида экзона 7 (тиминового остатка) конструкции минигена SMN2-A на цитозин посредством сайт-направленного мутагенеза. Таким образом, как и конструкция минигена SMN2-A, конструкция минигена SMN1 имеет один адениновый остаток, встроенный за нуклеотидным остатком в положении 48 экзона 7. Конструкция минигена SMN1 обозначена SMN1-A.
Протокол. Клетки НЕК293Н (10000 клеток/лунку/199 мкл) трансфицировали с использованием реагента FuGENE-6 в 96-луночном планшете 15 нг репортерной плазмиды минигена SMN1-A на лунку. Клетки инкубировали в течение 24 ч после трансфекции. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО). В каждую контрольную лунку добавляли 1 мкл ДМСО. Планшет инкубировали в течение 7 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% СО2, относительная влажность 100%). Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Cells-To-Ct, и лизат хранили при -80°С.
Две сплайсированные мРНК SMN получали из минигена SMN1. Термин "миниген SMN1 FL" означает первый сплайсированный продукт, содержащий экзон 7, соответствующий полноразмерной мРНК SMN1. Термин "миниген SMN1 A7" означает второй продукт, не содержащий экзона 7.
мРНК минигена SMN1 FL и минигена SMN1 A7 амплифицировали с использованием праймеров, представленных в табл. 11. Прямой SMN-праймер С (SEQ ID NO:11) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (нуклеотиды 43-63), а обратный SMN-праймер A (SEQ ID NO:2) гибриди-зуется с нуклеотидной последовательностью в кодирующией последовательности люциферазы светляка. Комбинация этих двух олигонуклеотидов позволяет детектировать только минигены SMN1 или SMN2 (RT-PCR), но не эндогенные гены SMN1 или SMN2. Поскольку клетки НЕК293Н, используемые в примере 16, были трансфицированы только человеческим минигеном SMN1, то RT-PCR позволяет визуализировать и количественно определить только мРНК минигена SMN1 FL и минигена SMN1 A7.
1Праймеры, сконструированные PTC Therapeutics, Inc.
Для синтеза кДНК, 5 мкл лизата, 4 мкл 5х реакционной смеси iScript, 1 мкл обратной транскрипта-зы и 10 мкл воды объединяли и инкубировали в течение 5 мин при 25°С, а затем 30 мин при 42°С и 5 мин при 85°С. Раствор кДНК хранили при -20°С.
Для осуществления PCR в конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной смеси Supermix объединяли в 96-луночном PCR-планшете с половинным объемом лунок. PCR осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 94°С (2 мин); стадия 2: 94°С (30 с); стадия 3: 55°С (30 с); стадия 4: 68°С (1 мин); с последующим повторением стадий 2-4, всего 33 цикла, и выдерживанием при 4°С.
10 мкл каждого PCR-образца подвергали электрофоретическому разделению на 2% агарозном Е-геле в течение 14 мин, окрашивали реагентами, используемыми для окрашивания на присутствие дцДНК (например, этидийбромидом) и визуализировали на гелевом визуализаторе.
Результаты. Как видно на фиг. 8, клетки, обработанные повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 8а) и соединения 38 (фиг. 8b), содержали значительно большее количество мРНК минигена SMN1 FL и меньшее количество мРНК минигена SMN1 A7, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга SMN1.
Независимо от того, был ли документ конкретно и отдельно указан в настоящем описании посредством ссылки, все цитируемые здесь документы включены в настоящее описание посредством ссылки в любых и во всех целях так, как если бы каждый из этих документов во всей своей полноте был включен в настоящее описание посредством ссылки.
Хотя некоторые варианты осуществления изобретения были подробно описаны выше, однако для специалиста в данной области совершеннно очевидно, что в эти варианты может быть внесено множество модификаций, не выходящих за рамки идеи изобретения. Все эти модификации входят в объем представленной здесь формулы изобретения.
(Ial)
или его свободная кислота, свободное основание или фармацевтически приемлемая соль, где R1 представляет собой гетероциклил;
R1 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R3 и необязательно одним дополнительным заместителем R4 или
R1 необязательно замещен одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями R3;
R2 представляет собой фенил, фуранил, пирролил, 2Н-пирролил, 3Н-пирролил, пиразолил, 1Н-пиразолил, имидазолил, 1Н-имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксазолил, 1,3-тиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, индолил, 1Н-индолил, индазолил, 1Н-индазолил, 2Н-индазолил, индолизинил, изоиндолил, бензофура-нил, бензотиенил, бензоимидазолил, 1Н-бензоимидазолил, 1,3-бензотиазолил, 1,3-бензоксазолил, пури-нил, 9Н-пуринил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,3-диазинил, 1,2-диазинил, 1,2-диазолил, 1,4-диазанафталенил, акридинил, ФУРО[3,2-Ь]ПИРИДИНИЛ, фуро^Д-^пиридинил, фуро[2,3-c]пиридинил, 6Н-тиено[2,3-b]пирролил, тиено[3,2-c]пиридинил, тиено[2,3-с1]пиримидинил, 1Н-пирроло [2,3-b] пиридинил, 1 Н-пирроло [2,3-С] пиридинил, 1 Н-пирроло [3,2-b] пиридинил, пирроло [1,2-а] пиразинил, пирроло [1,2-b] пиридазинил, пиразоло [1,5-а] пиридинил, пиразоло [1,5-а] пиразинил, имидазо [1,2-а] пиридинил, 3H-имидазо[4,5-b]пиридинил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, имидазо[1,2-с]пиримидинил, имидазо [ 1,2-b]пиридазинил, имидазо [ 1,2-а]пиразинил, имидазо [2,1-b] [1,3]тиазолил, имидазо [2,1-b][1,3,4]тиади-азолил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинил или [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинил;
R2 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями R6 и необязательно одним дополнительным заместителем R7;
Ra представляет собой водород;
Rb представляет собой водород;
Rc представляет собой водород;
R3, в каждом случае, независимо выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, ^^алтата, галоген-С1-8 алкила, С1-8алкилкарбонила, C1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, C^^ra-ксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино, амино-C1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-C1-8алкиламино, С1-8алкиламино-C1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (C1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(C1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (С1-8алкил-амино-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино, [(C1-8алкил)2-амино-C1-8алкил](C1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8ал-киламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, C1-8алкилкар-бониламино, C1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидро-кси-C1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-C1-8алкил)(C1-8алкил)амино;
R4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-Cb 8алкил, арил-C1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-C1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-C1-8алкил, где в каждом случае С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями R5;
R5 в каждом случае независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, C1-8алкила, галоген-С1-8 алкила, C1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио;
R6 в каждом случае независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, C1-8алкила, С2-8алкени-ла, галоген-C1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-C1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, амино, С1-8алкиламино, (C1-8алкил)2-амино или C1-8алкилтио;
R7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил,
где в каждом случае гетероциклил выбран из оксиранила, оксетанила, азетидинила, тетрагидрофуранила,
пирролинила, пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, изо-
ксазолинила, изоксазолидинила, изотиазолинила, изотиазолидинила, оксазолинила, оксазолидинила, тиа-
золинила, тиазолидинила, триазолинила, триазолидинила, оксадиазолинила, оксадиазолидинила, тиадиа-
золинила, тиадиазолидинила, тетразолинила, тетразолидинила, пиранила, дигидро-2Н-пиранила, тиопи-
ранила, 1,3-диоксанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, пиперидинила,
пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, 1,4-диазепанила, 1,3-бензодиоксолила, бензо[ <С][1,3]диок-
солила, 1,4-бензодиоксанила, 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинила, 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксинила,
гексагидропирроло [3,4-b] пиррол-( 1 Н)-ила, (3 aS,6aS)-гексагидропирроло [3,4-b] пиррол-( 1 Н)-ила,
(3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирролоРД-ЭДпиррол-^Щ-ила, (3aS,6aS)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2Н)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло[3,4-b]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aS)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3aR,6aR)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло [3,2-c]пиридинила, октагид-ро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aR,7aR)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-b]пиридинила, (4aS,7aS)-октагидро-6Н-пирроло [3,4-b]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7R,8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aS)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8aR)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, октагидро-2Н-пиридо[1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0]гексила, (1R,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло [3.2.1]октила, (1R,5S)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (Ж^)-8-азаби-цикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1R,5S)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазаби-цикло[2.2.1]гептила, (^^)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диаза-бицикло[3.2.1]октила, (Ж^)-3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспи-ро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила;
где в каждом случае арил выбирают из фенила, нафтила, антраценила, флуоренила, азуленила или фенантренила и
в каждом случае гетероарил выбирают из 1,3-бензотиазолила, имидазо[1,2-а]пиридинила, тразоли-ла, 1Н-1,2,3-триазолила, фуранила, тиенила, пирролила, 2Н-пирролила, 3Н-пирролила, пиразолила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, изоксазолила, изотиазолила, оксазолила, 1,3-тиазолила, оксадиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, тиадиазолила, 1Н-тетразолила, 2Н-тетразолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, триазинила, 1Н-индолила, индазолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, изоиндолила, бензофуранила, бензотиенила, бензотиофенила, бензоимидазо-лила, 1Н-бензоимидазолила, 1,3-бензоксазолила, 1,3-бензооксазолила, 9Н-пуринила, хинолинила, изохи-нолинила, хиназолинила, хиноксалинила, 1,3-диазинила, 1,2-диазинила, 1,2-диазолила, 1,4-диазанаф-таленила, акридинила, фуро[3,2-b]пиридинила, фуро[3,2-c]пиридинила, фуро[2,3-c]пиридинила, 6Н-тиенор^-^пирролила, тиено[3,2-c]пиридинила, тиено[2,3-сС]пиримидинила, 1Н-ПИРРОЛО[2,3-Ь]ПИРИ-динила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, 1Н-пирроло[3,2-b]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пир-роло[1,2-b]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пири-динила, 3H-имидазо[4,5-b]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-c]пиримидинила, имидазо[1,2-b]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо[2,1-b][1,3]тиазолила, имидазо[2,14)] [1,3,4]тиадиазолила, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинила или [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинила.
2. Соединение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является хлорид, гидробромид, гид-
рохлорид, дигидрохлорид, ацетат, трифторацетат или соль трифторуксусной кислоты.
3. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из
6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-[4-(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -2-(пиридин-3 -ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(имидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -2-(имидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(7-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(7-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
2-(4-этоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(4-этоксифенил)-6-[(3S)-3 -метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-этоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
2-(4-этоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3R)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-она;
6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-она;
2-(4-метокси-3-метилфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(4-метокси-3 -метилфенил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-метокси-3-метилфенил)-4Н-хромен-4-она;
2-(4-метокси-3 -метилфенил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(6-метоксипиридин-3-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(6-метоксипиридин-3 -ил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(6-метоксипиридин-3 -ил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3 -хлор-4-метоксифенил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3R,5S)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
2-(3 -хлор-4-метоксифенил)-6-[(3R)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(4-метоксифенил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-она;
6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-она;
2-(3-фторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
6-(пиперазин-1-ил)-2-[3-(трифторметил)фенил]-4Н-хромен-4-она;
2-[4-метокси-3 -(трифторметокси)фенил] -6-(пиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
2-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-[4-метокси-3-(трифторметокси)фенил]-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
2-[4-метокси-3 -(трифторметил)фенил] -6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(6-метилимидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(5-фторпиридин-3-ил)-6-[(3S)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
2-(4-метил-1,3-тиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
2-(3 -фторфенил)-6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
6-[(3 S)-3 -метилпиперазин-1-ил] -2-[3 -(трифторметил)фенил] -4Н-хромен-4-она;
2-(3,5-дифторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она и
2-(3,5-дифторфенил)-6-[^)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она,
или его фармацевтически приемлемая соль, изотополог или таутомер.
4. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.
5. Фармацевтическая композиция по п.4, применяемая для лечения спинальной мышечной атрофии (SMA).
6. Способ повышения уровня включения экзона 7 SMN2 в мРНК, транскрибируемую из гена SMN2, включающий приведение человеческой клетки в контакт с соединением по п.1.
7. Способ увеличения количества белка Smn, включающий приведение человеческой клетки в кон
такт с соединением по п.1.
8. Способ по п.6 или 7, где указанной человеческой клеткой является человеческая клетка, происходящая от пациента со спинальной мышечной атрофией.
9. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у человека, нуждающегося в этом, включающий введение человеку эффективного количества соединения по п.1.
10. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у человека, нуждающегося в этом, включаю-
щий введение человеку фармацевтической композиции по п.4.
tagcttcttacccgtactccaccgttggcagcacgatcgcacgtcccacgtgaaccattggtaaaccctgatgggatccataattcccccaccacctccc atatgtccagattctcttgatgatgctgatgctttgggaagtatgttaatttcatggtacatgagtggctatcatactggctattatatggtaagtaatcac tcagcatcttttcctgacaatttttttgtagttatgtgactttgttttgtaaatttataaaatactacttgcttctctctttatattactaaaaaataaaaataa a a a a a ta са a ctgtctgaggctta a a tta ctettgca ttgtrc^
atacacttttgaattgaaattatactttttctaaataatgttttaatctctgatttgaaattgattgtagggaatggaaaagatgggataatttttcataaa tgaaaaatgaaattcttttttttttttttttttttttgagacggagtcttgctctgttgcccaggctggagtgcaatggcgtgatcttggctcacagcaagct ctgcctcctggattcacgccattctcctgcctcagcctcagaggtagctgggactacaggtgcctgccaccacgcctgtctaattttttgtatttttttgtaa agacagggtttcactgtgttagccaggatggtctcaatctcctgaccccgtgatccacccgcctcggccttccaagagaaatgaaatttttttaatgcac aaagatctggggtaatgtgtaccacattgaaccttggggagtatggcttcaaacttgtcactttatacgttagtctcctacggacatgttctattgtatttt agtcagaacatttaaaattattttattttattttattttttttttttttttgagacggagtctcgctctgtcacccaggctggagtacagtggcgcagtctcgg ctcactgcaagctccgcctcccgggttcacgccattctcctgcctcagcctctccgagtagctgggactacaggcgcccgccaccacgcccggctaattt ttttttatttttagtagagacggggtttcaccgtggtctcgatctcctgacctcgtgatccacccgcctcggcctcccaaagtgctgggattacaagcgtg a gcca ccgcgeccggceta a a a tta ttttta a a agt^ ^
atagaagaaacaactgacttaaaggtgtatgtttttaaatgtatcatctgtgtgtgcccccattaatattcttatttaaaagttaaggccagacatggtgg
cttacaactgtaatcccaacagtttgtgaggccgaggcaggcagatcacttgaggtcaggagtttgagaccagcctggccaacatgatgaaaccttgt
ctctactaaaaataccaaaaaaaatttagccaggcatggtggcacatgcctgtaatccgagctacttgggaggctgtggcaggaaaattgctttaatct
gggaggcagaggttgcagtgagttgagattgtgccactgcactccacccttggtgacagagtgagattccatctcaaaaaaagaaaaaggcctggca
cggtggctcacacctataatcccagtactttgggaggtagaggcaggtggatcacttgaggttaggagttcaggaccagcctggccaacatggtgact
actccatttctactaaatacacaaaacttagcccagtggcgggcagttgtaatcccagctacttgagaggttgaggcaggagaatcacttgaacctgg
gaggcagaggttgcagtgagccgagatcacaccgctgcactctagcctggccaacagagtgagaatttgcggagggaaaaaaaagtcacgcttcag
ttgttgtagtataaccttggtatattgtatgtatcatgaatt^
atctgactgtaacacfcgtaggcttttgtgttfctU^^
ataactttcttgagaaataattcacatggtgtgcagtttacctttgaaagtatacaagttggctgggcacaatggctcacgcctgtaatcccagcacttt
gggaggccagggcaggtggatcacgaggtcaggagatcgagaccatcctggctaacatggtgaaaccccgtctctactaaaagtacaaaaacaaat
tagccgggcatgttggcgggcaccttttgtcccagctgctcgggaggctgaggcaggagagtggcgtgaacccaggaggtggagcttgcagtgagcc
gagattgtgccagtgcactccagectgggcgaca^
teagttatgcaaecatcactacaatttaagaacatttteato
tctgtetctatgaatttgtetattttagatattata^^^
attcatccatgctgtagaatgcaccagtactgcattccttcttattgctgaatattctgttgtttggttatatcacattttatccattcatcagttcatggaca tttaggttgtttttatttttgggctataatgaataa
tgagacagtcttgctctgtctcctaagctggagtgcagtggcatgatcttggcttactgcaagctctgcctcccgggttcacaccattctcctgcctcagc
ccgacaagtagctgggactacaggcgtgtgccaccatgcacggctaattttttgtatttttagtagagatggggtttcaccgtgttagccaggatggtct
cgatctcctgacctcgtgatctgcctgcctaggcctcccaaagtgctgggattacaggcgtgagccactgcacctggccttaagtgtttttaatacgtcat
tgccttaagctaacaattcttaacctttgttctactgaagccacgtggttgagataggctctgagtctagcttttaacctctatctttttgtcttagaaaEct
aagcagaatgcaaatgactaagaataatgttgttgaaataacataaaataggttataactttgatactcattagtaacaaatctttcaatacatcttac
ggtctgttaggtgtagattagtaatgaagtgggaagccactgcaagctagtatacatgtagggaaagatagaaagcattgaagccagaagagagac
agaggacatttgggctagatctgacaagaaaaacaaatgttttagtattaatttttgactttaaattwtttttatttagtgaatactggtgtttaa
tcattttaataagtatgacacaggtagtttaaggtcatatattttatttgatgaaaataaggtataggccgggcacggtggctcacacctgtaatcccag
cactttgggaggccgaggcaggcggatcacctgaggtcgggagttagagactagcctcaacatggagaaaccccgtctctactaaaaaaaatacaa
aattaggcgggcgtggt
ggtgcatgcctgtaatcccagctactcaggaggctgaggcaggagaattgcttgaacctgggaggtggaggttgcggtgagccgagatcacctcattg
cactccagcctgggcaacaagagcaaaactccatctcaaaaaaaaaaaaataaggtataagcgggctcaggaacatcattggacatactgaaaga
agaaaaatcagctgggcgcagtggctcacgccggtaatcccaacactttgggaggccaaggcaggcgaatcacctgaagtcgggagttccagatca
gectgaccaacatggagaaaccctgtctcfcactaaaaatac^^
geaggagaattgcttgaacegagaaggcggaggttgcggtgagra^
aaaaaaaaaaggaagaaaaatatttttttaaattaattagtttatttattttttaagatggagttttgccctgtcacccaggctggggtgca
atctcggctcactgcaacctccgcctcctgggttcaagtgattctcctgcctcagcttcccgagtagctgtgattacagccatatgccaccacgcccagc
cagttttgtgttttgttttgttttttgttttttttttttgagagggtgtcttgctctgtcccccaagctggagtgcagcggcgcgatcttg
ctgcctcccaggttcacaccattctcttgcctcagcctcccgagtagctgggactacaggtgcccgccaccacacccggctaatttttttgtgtttttagta
gagatggggtttcactgtgttagccaggatggtctcgatctcctgaccttttgatccacccgcctcagcctccccaagtgctgggattataggcgtgagc
cactgtgcccggcctagtcttgtatttttagtagagtcgggatttctccatgttggtcaggctgttctccaaatccgacctcaggtgatccgcccgccttgg
cctccaaaagtgcaaggcaaggcattacaggcatgagccactg^
tcactctattgetcaggetggagtgeaagggcacattca^
agctgggactacagtgataatgccactgcacctggctaatttttatttttatttatttatttttttttgagacagagtcttgctctgtcacccaggctggag gcagtggtgtaaatctcagctcactgcagccta
accatgcctggctaattttttgtactttcagtagaaacggggttttgccatgttggccaggctgttctcgaactcctgagctcaggtgatccaactgtctcg
gcctcccaaagtgctgggattacaggcgtgagccactgtgcctagcctgagccaccacgccggcctaatttttaaattttttgtagagacagggtctcat
tatgttgcccagggtggtgteaagctccaggtcto
accttaactgcagcctaataattgttttctttgggata^
gtaaaatgtcttgtgaaacaaaatgctttttaacatccatataaagctatrt^
ccttacagggttttagacaaaateaaaaagaaggaaggtgctca^
ttgtaaaactttatggtttgtggaaaacaaatg^^
agaattUgatgccaaaactattagataaaaggttaatc^
aataaagagetttaggatatgatgceatttta^
gtacactetgacatatgaagtgctctagtcaagtH
ttgcaggaaatgctggeatagagcagcaeggatccgaagac^^
ctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgcectggtt^
gaatacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtga
attctttatgccggtgttgggcgcgttaUtat^
cgcagcctaccgtagtgtttgm^
ctaaaacggattaceagggatttcagtcgatgtacaegtte^^
cgtgacaaaaeaattgcactgataatgaattcctctggat^
atgceagagatectatttttggcaatcaaatcatta
atttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgta^
ccaacectatttteattcttcgcea^
agtcggggaagcggttgcaaaacgcttccatcttccagggatacgacaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagg gggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcagaga ggcgaattatgtgtcagaggacetatgattatgtccggtta^
ggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatagttgaccgcttgaagtctttaattaaatacaaaggatatcaggtggcc cccgctgaattggaatcgatattgttacaacacra
gttgttgttttggagcacggaaagacgatgacggaaaaagagatcgtggatiacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggagga gttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaag tccaaattgcgcggccgctaaatcgaaagtacaggactagccttcctagcaaccgcgggctgggagtctgagacatcactcaagatatatgctcggt^ acgtatgctctagccatctaactattccctatgtcttataggg
SEQ ID NO: 21 Фиг. 2a
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
028382
028382
- 1 -
- 1 -
028382
028382
- 1 -
- 1 -
028382
028382
- 1 -
- 1 -
028382
028382
- 1 -
- 1 -
028382
028382
- 1 -
- 1 -
028382
028382
- 1 -
- 1 -
028382
028382
- 4 -
- 3 -
028382
028382
- 4l -
- 40 -
028382
028382
- 4l -
- 40 -
028382
028382
- 43 -
- 43 -
028382
028382
- 5l -
- 50 -
028382
028382
- 53 -
- 53 -
028382
028382
- 60 -
028382
028382
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (IV)
- 63 -
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (IV)
- 63 -
028382
028382
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XI):
- 64 -
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XI):
- 64 -
028382
028382
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVIII):
- 65 -
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVIII):
- 65 -
028382
028382
028382
028382
- 67 -
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VI) является применение соединения формулы (VIa):
- 68 -
028382
028382
- 70 -
- 70 -
028382
028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) является применение соединения формулы (Ial):
- 73 -
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ia) является применение соединения формулы (Ial):
- 73 -
028382
028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIa) является применение соединения формулы (IIa4):
- 74 -
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IIa) является применение соединения формулы (IIa4):
- 74 -
028382
028382
- 75 -
- 75 -
028382
028382
- 8l -
- 80 -
028382
028382
- 83 -
- 83 -
028382
028382
- 9l -
- 90 -
028382
028382
- 93 -
- 93 -
028382
028382
- 95 -
028382
028382
- 98 -
- 98 -
028382
028382
- l00 -
- l00 -
028382
028382
- l0l -
- l0l -
028382
028382
- l02 -
- l02 -
028382
028382
- l04 -
028382
028382
- l07 -
- l07 -
028382
028382
028382
028382
- 109 -
- 109 -
028382
028382
- 111 -
- 111 -
028382
028382
- 112 -
- 112 -
028382
028382
- 117 -
- 117 -
028382
028382
- 122 -
- 122 -
028382
028382
- 141 -
142
028382
028382
- 143 -
142
028382
028382
- 144 -
- 144 -