EA 027386B1 20170731

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000027386b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы I где R ² имеет формулу II где А выбран из фенильной группы и С _5-7 гетероарильной группы, выбранной из фуранила, тиофенила и пиридила, и X представляет собой ; R ¹² представляет собой фенил, который содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила, морфолино и метилтиофенила; каждый из R ⁷ и R ^7' представляет собой C _1-4 алкоксигруппу; a) R ¹⁰ представляет собой Н и R ¹¹ представляет собой ОН, OR ^A , где R ^A представляет собой C _1-4 алкил; либо b) R ¹⁰ и R ¹¹ образуют двойную связь азот-углерод между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; либо с) R ¹⁰ представляет собой Н и R ¹¹ представляет собой SO _z M, где z представляет собой 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из ионов щелочных металлов и ионов аммония; R" представляет собой С _3-7 алкиленовую группу; R ^10' и R ^11' представляют собой такие же группы, как R ¹⁰ и R ¹¹ , где, если R ¹¹ и R ^11' представляют собой SO _z M, M может представлять собой двухвалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из катионов щелочно-земельных металлов.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

(19)
Евразийское
патентное
ведомство
027386
(13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201490554
(22) Дата подачи заявки
2012.10.12
(51) Int. Cl. C07D 487/04 (2006.01) C07D 519/00 (2006.01) A61K 31/5517 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)
(54) ПИРРОЛОБЕНЗОДИАЗЕПИНЫ
(31) 61/547,204
(32) 2011.10.14
(33) US
(43) 2015.06.30
(вв) PCT/EP2012/070231
(87) WO 2013/053871 2013.04.18
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
МЕДИМЬЮН ЛИМИТЕД (GB)
(72) Изобретатель:
Ховард Филип Уилсон (GB)
(74) Представитель:
Нилова М.И. (RU)
(56) WO-A1-2010043880
(57) В изобретении представлено соединение формулы I
где А выбран из фенильной группы и С5-7 гетероарильной группы, выбранной из фуранила,
тиофенила и пиридила, и X представляет собой V^NH; R12 представляет собой фенил, который содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила, морфолино и метилтиофенила; R7 и R7' представляют собой C1-4 алкоксигруппу; a) R10 представляет собой Н, и R11 представляет собой ОН, ORA, где RA представляет собой C1-4 алкил; либо (b) R10 и R11 образуют двойную связь азот-углерод между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; либо с) R10 представляет собой Н, и R11 представляет собой SOzM, где z представляет собой 2 или 3, и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из ионов щелочных металлов или ионов аммония; R" представляет собой С3-7 алкиленовую группу; R10' и R11' представляют собой такие же группы, как R10 и R11, где если R11 и R11' представляют собой SOzM, M может представлять собой двухвалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из катионов щелочноземельных металлов.
Настоящее изобретение относится к пирролобензодиазепинам (PBD), в частности к димерам пирро-лобензодиазепина, содержащим С2-С3 двойную связь и арильную группу в положении С2 в каждом мономерном звене, и их включению в конъюгаты направленного действия.
Уровень техники
Некоторые пирролобензодиазепины (PBD) способны распознавать и связываться со специфическими последовательностями ДНК; предпочтительной последовательностью является PuGPu. Первый противоопухолевый антибиотик на основе PBD, антрамицин, был открыт в 1965 году (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc, 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc, 87, 5791-5793 (1965)). После этого сообщалось о ряде природных PBD, и были разработаны многочисленные способы синтеза их различных аналогов (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow D. и Thurston D.E., Chem. Rev. 2011 111 (4), 2815-2864). Представители данного семейства включают эббимицин (abbeymycin) (Ho-chlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), чикамицин (chicamycin) (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (патент Японии 58-180 487; Thurston, et al., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tempahedron, 48, 751-758 (1992)), мазетрамицин (mazethramycin) (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), неотрамицины А и В (neothramycin) (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), по-ротрамицин (porothramycin) (Tsunakawa, et al.), J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), протракарцин (prothracarcin) (Shimizu, et al., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley и Thurston, J. Org. Chem., 52, 9197 (1987)), сибаномицин (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), сибиромицин (sibiromycin) (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc, 110, 2992-2993 (1988)) и томамицин (tomamycin) (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). PBD имеют следующую общую структуру:
Они различаются числом, типом и положением заместителей как в ароматических кольцах А, так и пиррольных кольцах С, а также степенью насыщения кольца С. В кольце В присутствуют имин (N=C), карбиноламин (NH-CH(OH)) или метиловый эфир карбиноламина (NH-CH(OMe)) в положении N10-C11, которое представляет собой электрофильный центр, ответственный за алкилирование ДНК. Все известные природные продукты имеют ^-конфигурацию хирального центра С11а, что обеспечивает правозак-рученную форму, если смотреть от кольца С в направлении кольца А. Такая форма придает им подходящую трехмерную конфигурацию для изоспиральности с малой бороздкой В-формы ДНК, что приводит к плотному соединению в месте связывания (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley и Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Их способность образовывать аддукты в малой бороздке позволяет указанным соединениям влиять на процессинг ДНК, а следовательно, и применять их в качестве противоопухолевых агентов.
Ранее было обнаружено, что биологическую активность указанных молекул можно усиливать путем объединения двух звеньев PBD посредством их С8/С'-гидроксильных функциональных групп через гибкий алкиленовый линкер (Bose D.S., et al, J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston D.E., et al., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)). Полагают, что димеры PBD вызывают селективные повреждения последовательностей ДНК, такие как поперечные сшивки палиндромных участков 5'-Pu-GATC-Py-3' цепей ДНК (Smellie, M., et al., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C, et al., Biochemistry, 44, 41354147), что считается основной причиной, определяющей их биологическую активность. Одним из примеров димера PBD, SG2000 (SJG-136)
недавно вошел в фазу II клинических испытаний в области онкологии (Gregson S., et al., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley M.C., et al., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley J.A., et al., Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)).
Позднее авторы настоящего изобретения предложили в WO 2005/085251 димерные соединения PBD, содержащие С2 арильные заместители, такие как SG2202 (ZC-207)
Было показано, что указанные соединения являются очень подходящими цитотоксическими агентами (Howard P.W., et. al., Bioorg. Med. Chem. (2009), 19 (22), 6463-6466, doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.012).
Благодаря особенности действия указанных высокоактивных соединений при поперечной сшивке ДНК указанные молекулы были получены в симметричной форме. Это обеспечивалось прямым синтезом за счет либо получения фрагментов PBD, уже содержащих линкерную группу димера, либо путем взаимодействия синтезированных фрагментов PBD с линкерной группой димера.
В WO 2010/043880 описаны несимметричные димерные соединения PBD, содержащие арильные группы в положении С2 каждого мономера, где одна из трех указанных арильных групп содержит заместитель, способный обеспечить якорь для связывания указанного соединения и другого фрагмента. В находящейся одновременно на рассмотрении международной заявке PCT/US 2011/032664, поданной 15 апреля 2011 г, опубликованной как WO 2011/130613, описано включение указанных соединений димера PBD в конъюгаты направленного действия. В находящейся одновременно на рассмотрении международной заявке PCT/US 2011/032668, поданной 15 апреля 2011 г, опубликованной как WO 2011/130616, описано несимметричное димерное соединение PBD, содержащее арильную группу в положении С2 одного из мономеров, содержащих заместитель, способный обеспечить якорь для связывания указанного соединения и другого фрагмента, и другой мономер, содержащий неароматическую группу в положении С2. Также описано включение указанных соединений в конъюгаты направленного действия.
Описание изобретения
Авторы настоящего изобретения разработали дополнительные несимметричные димерные соединения PBD для включения в конъюгаты направленного действия, в которых димер содержит арильные группы в положении С2 каждого мономера, где одна из указанных групп содержит конкретные заместители, способные обеспечить якорь для связывания указанного соединения и другого фрагмента. Указанные конкретные замещающие группы обладают преимуществами при получении применении указанных соединений, особенно в биологических свойствах, и при синтезе конъюгатов, а также биологических свойствах указанных конъюгатов.
Настоящее изобретение представляет собой соединение, имеющее формулу I
где R2 имеет формулу II
где А выбран из фенильной группы и С5-7 гетероарильной группы, выбранной из
*-N NH
фуранила, тиофенила и пиридила, и X представляет собой \-/ ;
R12 представляет собой фенил, который содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила, морфолино и метилтио-фенила;
R7 и R7 представляют собой C1-4 алкоксигруппу; либо
a) R10 представляет собой Н, и R11 представляет собой ОН, ORA, где RA представляет собой C1-4 ал-
кил;
b) R10 и R11 образуют двойную связь азот-углерод между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; либо
c) R10 представляет собой Н, и R11 представляет собой SOzM, где z представляет собой 2 или 3, и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из ионов щелочных металлов или ионов аммония;
R" представляет собой С3-7 алкиленовую группу;
R10 и R11 представляют собой такие же группы, как R10 и R11, где если R11 и R11 представляют собой SOzM, M может представлять собой двухвалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из катионов щелочно-земельных металлов.
Определения
Фармацевтически приемлемые катионы.
Примеры фармацевтически приемлемых одновалентных и двухвалентных катионов описаны в пуб
ликации Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977), содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Фармацевтически приемлемый катион может быть неорганическим или органическим.
Примеры фармацевтически приемлемых одновалентных неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Na+ и K+. Примеры фармацевтически приемлемых двухвалентных неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, катионы щелоч-но-земельных металлов, такие как Са2+ и Mg2+. Примеры фармацевтически приемлемых органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (т.е. NH4+) и замещенные ионы аммония (например, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, полученные из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бути-ламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также из аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является N(Q13)4+.
Заместители.
В настоящем описании выражение "возможно замещенный" относится к исходной группе, которая может быть незамещенной или замещенной.
Если не указано иное, в настоящем описании термин "замещенный" относится к исходной группе, которая содержит один или более заместителей. В настоящем описании термин "заместитель" используется в традиционном значении и относится к химическому фрагменту, который ковалентно присоединен или, если это возможно, конденсирован с исходной группой. Хорошо известен широкий ряд заместителей, и способы их получения и введения в разнообразные исходные группы также хорошо известны.
Примеры заместителей более подробно описаны ниже.
C1-12 алкил: в настоящем описании термин "С1-12 алкил" относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома углерода в углеводороде, содержащем от 1 до 12 атомов углерода, который может быть алифатическим или эпициклическим и который может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). Таким образом, термин "алкил" включает подклассы алкенил, алкинил, циклоалкил и т.д., описанные ниже.
Примеры насыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (C1), этил (С2), пропил (С3), бутил (С4), пентил (C5), гексил (С6) и гептил (С7).
Примеры насыщенных линейных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (C1), этил (С2), н-пропил (С3), н-бутил (С4), н-пентил (амил) (C5), н-гексил (С6) и н-гептил (С7).
Примеры насыщенных разветвленных алкильных групп включают изопропил (С3), изобутил (С4), втор-бутил (С4), трет-бутил (С4), изопентил (C5) и неопентил (C5).
С2-12 алкенил: в настоящем описании термин "С2-12 алкенил" относится к алкильной группе, содержащей одну или более двойных углерод-углеродных связей.
Примеры ненасыщенных алкенильных групп включают, но не ограничиваются ими, этенил (винил, -СН=СН2), 1-пропенил (-СН=СН-СН3), 2-пропенил (аллил, -СН-СН=СН2), изопропенил (1-метилвинил, -С(СН3)=СН2), бутенил (С4), пентенил (C5) и гексенил (С6).
С2-12 алкинил: в настоящем описании термин "С2-12 алкинил" относится к алкильной группе, содержащей одну или более тройных углерод-углеродных связей.
Примеры ненасыщенных алкинильных групп включают, но не ограничиваются ими, этинил (-С=СН) и 2-пропинил (пропаргил, -СН2-С=СН).
С3-12 циклоалкил: в настоящем описании термин "С3-12 циклоалкил" относится к алкильной группе, которая также является циклической группой; то есть представляет собой одновалентный фрагмент, полученный в результате удаления атома водорода из атома алициклического кольца циклического углеводородного соединения (карбоциклического соединения), содержащий от 3 до 7 атомов углерода, включая от 3 до 7 атомов в кольце.
Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
насыщенных моноциклических углеводородных соединений:
циклопропана (С3), циклобутана (С4), циклопентана (C5), циклогексана (С6), циклогептана (С7), ме-тилциклопропана (С4), диметилциклопропана (C5), метилциклобутана (C5), диметилциклобутана (С6), метилциклопентана (С6), диметилциклопентана (С7) и метилциклогексана (С7);
ненасыщенных моноциклических углеводородных соединений:
циклопропена (С3), циклобутена (С4), циклопентена (C5), циклогексена (С6), метилциклопропена (С4), диметилциклопропена (C5), метилциклобутена (C5), диметилциклобутена (С6), метилциклопентена (С6), диметилциклопентена (С7) и метилциклогексена (С7); и
насыщенных полициклических углеводородных соединений: норкарана (С7), норпинана (С7), нор-борнана (С7).
С3-20 гетероциклил: в настоящем описании термин "С3-20 гетероциклил" относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода из атома кольца гетероциклического соединения, при этом фрагмент содержит от 3 до 20 атомов в кольце, из которых от 1 до 10 атомов представляют собой гетероатомы кольца. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 3 до 7 атомов, среди
которых от 1 до 4 представляют собой гетероатомы кольца.
В указанном контексте префиксы (например, С3-20, С3-7, C5-6 и т.д.) обозначают количество атомов в кольце или диапазон количества атомов в кольце, включая атомы углерода и гетероатомы. Например, в настоящем описании термин "C5-6 гетероциклил" относится к гетероциклильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.
Примеры моноциклических гетероциклильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
N1: азиридина (С3), азетидина (С4), пирролидина (тетрагидропиррола) (C5), пирролина (например, 3-пирролина, 2,5-дигидропиррола) (C5), 2Н-пиррола или 3Н-пиррола (изопиррола, изоазола) (C5), пиперидина (С6), дигидропиридина (С6), тетрагидропиридина (С6), азепина (С7);
O1: оксирана (С3), оксетана (С4), оксолана (тетрагидрофурана) (C5), оксола (дигидрофурана) (C5), океана (тетрагидропирана) (С6), дигидропирана (С6), пирана (С6), оксепина (С7);
S1: тиирана (С3), тиетана (С4), тиолана (тетрагидротиофена) (C5), тиана (тетрагидротиопирана) (С6), тиепана (С7);
О2: диоксолана (C5), диоксана (С6) и диоксепана (С7); О3: триоксана (С6);
N2: имидазолидина (C5), пиразолидина (диазолидина) (C5), имидазолина (C5), пиразолина (дигидро-пиразола) (C5), пиперазина (С6);
N1O1: тетрагидрооксазола (C5), дигидрооксазола (C5), тетрагидроизоксазола (C5), дигидроизоксазола (C5), морфолина (С6), тетрагидрооксазина (С6), дигидрооксазина (С6), оксазина (С6);
N1S1: тиазолина (C5), тиазолидина (C5), тиоморфолина (С6);
N2O1: оксадиазина (С6);
O1S1: оксатиола (C5) и оксатиана (тиоксана) (С6); и N1O1S1: оксатиазина (С6).
Примеры замещенных моноциклических гетероциклильных групп включают группы, полученные из сахаридов в циклической форме, например из фураноз (C5), таких как арабинофураноза, ликсофурано-за, рибофураноза и ксилофураноза, и пираноз (С6), таких как аллопираноза, альтропираноза, глюкопира-ноза, маннопираноза, гулопираноза, идопираноза, галактопираноза и талопираноза.
С5-20 арил: в настоящем описании термин "С5-20 арил" относится к одновалентному фрагменту, полученному в результате удаления атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, который содержит от 3 до 20 атомов в кольце. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 5 до 7 атомов в кольце.
В указанном контексте префиксы (например, С3-20, C5-7, C5-6 и т.д.) обозначают количество атомов в кольце или диапазон количества атомов в кольце, включая атомы углерода и гетероатомы. Например, в настоящем описании термин "C5-6 арил" относится к арильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.
Все атомы в кольце могут представлять собой атомы углерода, как в случае "карбоарильных групп".
Примеры карбоарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из бензола (т.е. фенил) (С6), нафталина (С10), азулена (С10), антрацена (С14), фенантрена (С14), нафтацена (С18) и пирена (С16).
Примеры арильных групп, которые содержат конденсированные кольца, по меньшей мере одно из которых представляет собой ароматическое кольцо, включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из индана (например, 2,3-дигидро-1Н-индена) (С9), индена (С9), изоиндена (С9), тетралина (1,2,3,4-тетрагидронафталина (С10), аценафтена (С12), флуорена (С13), феналена (С13), ацефенантрена (C15) и ацеантрена (C16).
Альтернативно, атомы кольца могут включать один или более гетероатомов, как в случае "гетероа-рильных групп". Примеры моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, полученные из
N1: пиррола (азола) (C5), пиридина (азина) (С6);
O1: фурана (оксола) (C5);
S1: тиофена (тиола) (C5);
N1O1: оксазола (C5), изоксазола (C5), изоксазина (С6);
N2O1: оксадиазола (фуразана) (C5);
N3O1: оксатриазола (C5);
N1S1: тиазола (C5), изотиазола (C5);
N2: имидазола (1,3-диазола) (C5), пиразола (1,2-диазола) (C5), пиридазина (1,2-диазина) (С6), пиримидина (1,3-диазина) (С6) (например, цитозина, тимина, урацила), пиразина (1,4-диазина) (С6); N3: триазола (C5), триазина (С6); и N4: тетразола (C5).
Примеры гетероарильных групп, содержащих конденсированные кольца, включают, но не ограничиваются ими:
С9 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из бензофурана (O1), изобензофурана
(O1), индола (N1), изоиндола (N1), индолизина (N1), индолина (N1), изоиндолина (N1), пурина (N4) (например, аденина, гуанина), бензимидазола (N2), индазола (N2), бензоксазола (N1O1), бензизоксазола (N1O1), бензодиоксола (О2), бензофуразана (N2O1), бензотриазола (N3), бензотиофурана (S1), бензотиазола (N1S1), бензотиадиазола (N2S);
С10 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из хромена (O1), изохромена (O1), хро-мана (O1), изохромана (O1), бензодиоксана (О2), хинолина (N1), изохинолина (N1), хинолизина (N1), бен-зоксазина (N1O1), бензодиазина (N2), пиридопиридина (N2), хиноксалина (N2), хиназолина (N2), цинноли-на (N2), фталазина (N2), нафтиридина (N2), птеридина (N4);
С11 (содержащие 2 конденсированных кольца), полученные из бензодиазепина (N2);
C13 (содержащие 3 конденсированных кольца), полученные из карбазола (N1), дибензофурана (O1), дибензотиофена (S1), карболина (N2), перимидина (N2), пиридоиндола (N2); и
С14 (содержащие 3 конденсированных кольца), полученные из акридина (N1), ксантена (O1), тиок-сантена (S1), оксантрена (О2), феноксатиина (O1S1), феназина (N2), феноксазина (N1O1), фенотиазина (N1S1), тиантрена (S2), фенантридина (N1), фенантролина (N2), феназина (N2).
Приведенные выше группы, по отдельности или как часть другого заместителя, могут быть замещены одной или более группами, выбранными из таких же групп и дополнительных заместителей, перечисленных ниже.
Галогены: -F, -Cl, -Br и -I.
Гидрокси: -ОН.
Простой эфир: -OR, где R представляет собой заместитель простого эфира, например C1-7 алкиль-ную группу (которую также называют С1-7 алкоксигруппой, ка описано ниже), С3-20 гетероциклильную группу (которую также называют С3-20 гетероциклилоксигруппой) или С5-20 арильную группу (которую также называют С5-20 арилоксигруппой), предпочтительно C1-7 алкильную группу.
Алкокси: -OR, где R представляет собой алкильную группу, например С1-7 алкильную группу. Примеры С1-7 алкоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОМе (метокси), -OEt (этокси), -O(nPr) (н-пропокси), -O(iPr) (изопропокси), -O(nBu) (н-бутокси), -O(sBu) (втор-бутокси), -O(iBu) (изобутокси) и -O(tBu) (трет-бутокси).
Ацеталь: -CH(OR1)(OR2), где R1 и R2 независимо представляют собой заместители ацеталя, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу, или в случае "циклической" ацетальной группы R1 и R2, взятые совместно с двумя атомами кислорода, к которым они присоединены, и атомами углерода, к которым они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Примеры ацетальных групп включают, но не ограничиваются ими, -СН(ОМе)2, -CH(OEt)2 и -CH(OMe)(OEt).
Оксогруппа (кето-, -он): =O.
Тион (тиокетон): =S.
Имино (иминная группа): =NR, где R представляет собой заместитель имина, например водород, C1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры иминов включают, но не ограничиваются ими, =NH, =NMe, =NEt и =NPh.
Ацил (кето-): -C(=O)R, где R представляет собой заместитель ацила, например С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкилацилом или С1-7алканоилом), С3-20 гетероциклильную группу (которую также называют С3-20 гетероциклилацилом) или С5-20 арильную группу (которую также называют С5-20 арилацилом), предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры ацильных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)СН3 (ацетил), -С(=О)СН2СН3 (пропионил), -С(=О)С(СН3)3 (т-бутирил) и -C(=O)Ph (бензоил, фенон).
Карбокси (карбоновая кислота): -С(=О)ОН.
Сложный эфир (карбоксилат, сложный эфир карбоновой кислоты, оксикарбонил): -C(=O)OR, где R представляет собой заместитель сложноэфирной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)ОСН3, -С(=О)ОСН2СН3, -С(=О)ОС(СН3)3 и -C(=O)OPh.
Ацилокси ("обращенный" сложный эфир): -OC(=O)R, где R представляет собой заместитель аци-локси, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры ацилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОС(=О)СН3 (ацетокси), -ОС(=О)СН2СН3, -ОС(=О)С(СН3)3, -OC(=O)Ph и -OC(=O)CH2Ph.
Оксикарбонилокси: -OC(=O)OR, где R представляет собой заместитель сложноэфирной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -ОС(=О)ОСН3, -ОС(=О)ОСН2СН2, -ОС(=О)ОС(СН3)3 и -OC(=O)OPh.
Амино: -NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, например водород, С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкиламино или ди-С1-7 алкиламино), С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно Н или С1-7 алкильную группу,
или в случае "циклической" аминогруппы R1 и R2 совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Аминогруппы могут быть первичными (-NH2), вторичными (-NHR1) или третичными (-NHR1R2), а также в случае катионной формы могут быть четвертичными (-+NR1R2R3). Примеры аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -^СН3)2, -^СН2СН3)2 и -NHPh. Примеры циклических аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, азиридино, азетидино, пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино и тиоморфолино.
Амидная группа (карбамоил, карбамил, аминокарбонил, карбоксамид): -C(=O)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры амидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 и -C(=O)N(CH2CH3)2, a также амидогруппы, в которых R1 и R2 совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую структуру, как, например, в случае пиперидинокарбонила, морфолинокарбонила, тиоморфолинокарбонила и пиперазинокарбонила.
Тиоамид (тиокарбамил): -C(=S)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры амидных групп включают, но не ограничиваются ими, -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2 и -C(=S)NHCH2CH3.
Ациламидо (ациламино): -NR1C(=O)R2, где R1 представляет собой заместитель амидной группы, например водород, С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу, и R2 представляет собой заместитель ацильной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно водород или С1-7 алкильную группу. Примеры ациламидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3 и -NHC(=O)Ph. R1 и R2, взятые вместе, могут образовывать циклическую структуру, например, как в сукцинимидиле, малеимидиле и фталимидиле
сукцинимидил малеимидил фталимидил
Аминокарбонилокси: -OC(=O)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой заместители аминогруппы, определенные для аминогрупп. Примеры аминокарбонилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2 и -OC(=O)NEt2.
Тетразолил: пятичленное ароматическое кольцо, содержащее четыре атома азота и один атом углерода
Нитро: -NO2. Нитрозо: -NO. Азидо: -N3.
Циано (нитрил, карбонитрил): -CN. Изоциано: -NC. Цианато: -OCN. Изоцианато: -NCO. Тиоциано (тиоцианато): -SCN. Изотиоциано (изотиоцианато): -NCS. Сульфгидрил (тиол, меркапто): -SH.
Простой тиоэфир (сульфид): -SR, где R представляет собой заместитель простого тиоэфира, например С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкилтиогруппой), С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры С1-7 алкилтиог-рупп включают, но не ограничиваются ими, -SCH3 и -SCH2CH3.
Дисульфид: -SS-R, где R представляет собой заместитель дисульфида, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу (которую также называют С1-7 алкилдисульфидом). Примеры С1-7 алкилдисульфидных групп включают, но не ограничиваются ими, -SSCH3 и -SSCH2CH3.
Сульфин (сульфинил, сульфоксид): -S(=O)R, где R представляет собой заместитель сульфиногруп-пы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфиновых групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)CH3 и -S(=O)CH2CH3.
Сульфон (сульфонил): -S(=O)2R, где R представляет собой заместитель сульфоновой группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу, включая, например, фторированную или перфторированную С1-7 алкиль
ную группу. Примеры сульфоновых групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)2CH3 (метан-сульфонил, мезил), -S(=O)2CF3 (трифлил), -S(=O)2CH2CH3 (эзил), -S(=O)2C4F9 (нонафлил), -S(=ObCH2CF3 (трезил), -S(=O)2CH2CH2NH2 (таурил), -S(=O)2Ph (фенилсульфонил, безил), 4-метилфенилсульфонил (то-зил), 4-хлорфенилсульфонил (хлозил), 4-бромфенилсульфонил (брозил), 4-нитрофенил (нозил), 2-нафталинсульфонат (напсил) и 5-диметиламинонафталин-1-илсульфонат (дансил).
Сернистая кислота (сульфино): -S(=O)OH, -SO2H.
Сульфокислота (сульфо): -S(=O)2OH, -SO3H.
Сульфинат (сложный эфир сернистой кислоты): -S(=O)OR; где R представляет собой заместитель сульфинатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинатных групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)OCH3 (метоксисульфинил; метилсульфинат) и -S(=O)OCH2CH3 (этоксисуль-финил; этилсульфинат).
Сульфонат (сложный эфир сульфокислоты): -S(=O)2OR, где R представляет собой заместитель сульфонатной группы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонатных групп включают, но не ограничиваются ими, -S(=O)2OCH3 (метоксисульфонил; метилсульфонат) и -S(=O)2OCH2CH3 (этокси-сульфонил; этилсульфонат).
Сульфинилокси: -OS(=O)R, где R представляет собой заместитель сульфинилоксигруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфинилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OS(=O)CH3 и -OS(=O)CH2CH3.
Сульфонилокси: -OS(=O)2R, где R представляет собой заместитель сульфонилоксигруппы, например С1-7 алкильную группу, С3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно С1-7 алкильную группу. Примеры сульфонилоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -OS(=O)2CH3 (мезилат) и -OS(=O)2CH2QH (эзилат).
Алкилен.
С3-12 алкилен: в настоящем описании термин "С3-12 алкилен" относится к бидентатному фрагменту, полученному в результате удаления двух атомов водорода, обоих от одного атома углерода или по одному от каждого из двух разных атомов углерода, в углеводороде, содержащем от 3 до 12 атомов углерода (если не указано иное), который может быть алифатическим или ациклическим и который может быть насыщенным, частично ненасыщенным или полностью ненасыщенным.Таким образом, термин "алкилен" включает такие подклассы, как алкенилен, алкинилен, циклоалкилен и т.д., описанные ниже.
Примеры линейных насыщенных С3-12 алкиленовых групп включают, но не ограничиваются ими, -(СН2)П-, где n представляет собой целое число от 3 до 12, например -СН2СН2СН2- (пропилен), -СН2СН2СН2СН2- (бутилен), -СН2СН2СН2СН2СН2-(пентилен) и -СН2СН2СН2СН-2СН2СН2СН2-(гептилен).
Примеры разветвленных насыщенных С3-12 алкиленовых групп включают, но не ограничиваются
ими, -СН(СН3)СН2-, -СН(СН3)СН2СН2-, -СН(СН3) СН2СН2СН2-, -СН2СН(СН3) СН2-,
-СН2СН(СН3)СН2СН2-, -СН(СН2СН3)-, -СН(СН2СН3)СН2- и -СН2СН(СН2СН3)СН2-.
Примеры линейных частично ненасыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 алкениленовых и алки-ниленовых групп) включают, но не ограничиваются ими, -СН=СН-СН2-, -СН2-СН=СН2-, -СН=СН-СН2-
СН2-, -СН=СН-СН2-СН2-СН2-, -СН=СН-СН =СН-, -СН=СН-СН=СН-СН2-, -СН=СН-СН=СН-СН2-СН2-,
-СН=СН-СН2-СН=СН-, -СН=СН-СН2-СН2-СН=СН- и -СН2-С=С-СН2-.
Примеры разветвленных частично ненасыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 алкениленовых и алкиниленовых групп) включают, но не ограничиваются ими, -С(СН3)=СН-, -С(СН3)=СН-СН2-, -СН=СН-СЩСН3)- и -С=С-СН(СН3)-.
Примеры эпициклических насыщенных С3-12 алкиленовых групп (С3-12 циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются ими, циклопентилен (например, циклопент-1,3-илен) и циклогексилен (например, циклогекс-1,4-илен).
Примеры эпициклических частично ненасыщенных С3-12 элкиленовых групп (С3-12 циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются ими, циклопентенилен (например, 4-циклопентен-1,3-илен), циклогек-сенилен (например, 2-циклогексен-1,4-илен; 3-циклогексен-1,2-илен; 2,5-циклогексадиен-1,4-илен).
Защитные группы атома кислорода: термин "защитные группы атома кислорода" относится к фрагменту, который защищает гидроксигруппу, и такие группы хорошо известны в данной области техники. Большое число подходящих групп описано в Greene T.W. и Wuts G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999 на с. 23-100, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Классы групп, представляющие наибольший интерес, включают простые силильные эфирные группы (например, триметилсилильную группу (TMS), трет-бутилдиметилсилильную группу (TBDMS)), замещенные простые метиловые эфирные группы (например, тетрагидропиранильную группу (ТНР)) и сложноэфирные группы (например, ацетатную).
Карбаматные защитные группы атома азота: термин "карбаматные защитные группы атома азота" относится к фрагменту, который защищает атом азота иминной связи, и такие группы хорошо известны в
данной области техники. Указанные группы имеют следующую структуру:
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в Greene T.W. и Wuts G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на с. 503-549, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Гемиаминальные защитные группы атома азот: термин "гемиаминальные защитные группы атома азота" относится к группе, имеющей следующую структуру:
R'10-O^
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в Greene T.W. и Wuts G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на с. 633-647, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Конъюгаты.
В настоящем изобретении предложены конъюгаты, содержащие димер PBD, связанный со звеном лиганда через звено линкера. Согласно одному из вариантов реализации звено линкера включает удлиняющее звено (А), специфичное звено (L1) и звено-спейсер (L2). Звено линкера связано одним концом со звеном лиганда (L) и другим концом - с димерным соединением PBD (D).
Согласно одному аспекту такой конъюгат представлен ниже формулой Ша
L- (A1a-L1s-L2y-D)p (Ша)
где L представляет собой звено лиганда; и
A1a-L1s-L2y представляет собой звено линкера (LU), где
А1 представляет собой удлиняющее звено,
а представляет собой 1 или 2,
L1 представляет собой специфичное звено,
s представляет собой целое число в диапазоне от 0 до 12,
L2 представляет собой звено-спейсер,
у представляет собой 0, 1 или 2;
D представляет собой димер PBD; и
р представляет собой от 1 до 20.
L - (А1
Также его можно представить в виде
Согласно другому аспекту такой конъюгат представлен ниже формулой ШЬ
где L представляет собой звено лиганда; и A1a-L1s(L2y) представляет собой звено линкера (LU), где
А1 представляет собой удлиняющее звено, связанное с удлиняющим звеном (L2), а представляет собой 1 или 2,
L1 представляет собой специфичное звено, связанное с удлиняющим звеном (L2),
s представляет собой целое число в диапазоне от 0 до 12,
L2 представляет собой звено-спейсер,
у представляет собой 0, 1 или 2;
D представляет собой димер PBD; и
р представляет собой от 1 до 20.
Предпочтительные варианты реализации изобретения.
Представленные ниже предпочтительные варианты реализации можно применять для всех аспектов настоящего изобретения, как описано выше, или они могут относиться к одному аспекту. Предпочтительные варианты реализации можно объединять в любых комбинациях.
Согласно одному из вариантов реализации указанный конъюгат имеет формулу
где L, A1, a, L1, s, L2, D, у и р такие, как описано выше. Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда (L) представляет собой связывающийся
клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже приведена формула соединения в качестве примера
(СВА) !
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L1 и связывающийся с клетками агент, L2 представляет собой звено-спейсер, которое представляет собой ковалентную связь, саморасщепляющуюся группу, или совместно с -ОС(=О) образует саморасщепляющуюся группу, при этом L2 является необязательным. -ОС(=О)- может рассматриваться как часть L1 или L2, при необходимости.
Согласно другому варианту реализации звено лиганда (L) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже представлена формула соединения в качестве примера
СВА-А1а-1Л-1_2У-*,
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L1 и связывающийся с клетками агент, L2 представляет собой звено-спейсер, которое представляет собой ковалентную связь или саморасщепляющуюся группу, а представляет собой 1 или 2, s представляет собой 0, 1 или 2, и у представляет собой 0, 1 или 2.
Согласно вариантам реализации, проиллюстрированным выше, L1 может представлять собой способное к расщеплению специфичное звено и может называться "триггер", который при расщеплении активирует саморасщепляющуюся группу (или саморасщепляющиеся группы) в L2, в случае если саморас-щепляющаяся(иеся) группа(ы) присутствует(ют). Когда специфичное звено L1 расщепляется или линкер (т.е. ковалентная связь) между L1 и L2 расщепляется, то саморасщепляющаяся группа высвобождает звено лекарственного соединения (D).
Согласно другому варианту реализации звено лиганда (L) представляет собой связывающийся с клетками агент (СВА), который специфично связывается с молекулой-мишенью на поверхности клетки-мишени. Ниже приведена формула соединения в качестве примера
L1s
СВА - А1а- L2y- *
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения (D), СВА представляет собой связывающийся с клетками агент, L1 представляет собой специфичное звено, связанное с L2, А1 представляет собой удлиняющее звено, соединяющее L2 и связывающийся с клетками агент, L2 представляет собой саморасщепляющуюся группу, и а представляет собой 1 или 2, s представляет собой 1 или 2, и у представляет собой 1 или 2.
Согласно различным вариантам реализации, описанным в настоящем документе, природа L1 и L2 может изменяться в широких пределах. Указанные группы выбирают с учетом их характеристик, которые могут частично определяться условиями в том месте, в которое доставляется конъюгат. Если специфичное звено L1 способно к расщеплению, то структуру и/или последовательность L1 выбирают таким образом, чтобы оно расщеплялось под действием ферментов, присутствующих в целевом участке (например, в клетке-мишени). Также можно применять звенья L1, которые способны расщепляться в результате изменений рН (например, фрагменты, лабильные к действию кислоты или основания), температуры или под действием облучения (например, фотолабильные фрагменты). Звенья L1, способные расщепляться в восстановительных или окислительных условиях, также можно использовать в указанных конъюга-тах.
Согласно некоторым вариантам реализации L1 может содержать одну аминокислоту или непрерывную последовательность аминокислот. Последовательность аминокислот может представлять собой субстрат-мишень для фермента.
Согласно одному из вариантов реализации L1 способен расщепляться под действием ферментов. Согласно одному из вариантов реализации фермент представляет собой эстеразу или пептидазу. Например, L1 может расщепляться лизосомной протеазой, такой как катепсин.
Согласно одному из вариантов реализации L2 присутствует и совместно с -С(=О)О-образует саморасщепляющуюся группу или саморасщепляющиеся группы. Согласно некоторым вариантам реализации -С(=О)О- также представляет собой саморасщепляющуюся группу.
Согласно одному из вариантов реализации, где L1 способен расщепляться под действием фермента, и L2 присутствует, фермент расщепляет связь между L1 и L2, в результате чего саморасщепляющая-ся(иеся) группа(ы) высвобождает(ют) звено лекарственного соединения.
L1 и L2, в случае если присутствуют, могут быть связаны с помощью связывающей группы, выбранной из
-C(=0)NH-,
-C(=0)0-,
-NHC(=0)-,
-OC(=0)-,
-OC(=0)0-,
-NHC(=0)0-,
-OC(=0)NH-,
-NHC(=0)NH и
-О- (гликозидная связь).
Аминогруппа в L1, которая связана с L2, может представлять собой N-конец аминокислоты или может быть получена из аминогруппы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты лизин.
Карбоксильная группа в L1, которая связана с L2, может представлять собой С-конец аминокислоты или может быть получена из карбоксильной группы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты глутаминовая кислота.
Гидроксигруппа в L1, которая связана с L2, может быть получена из гидроксигруппы боковой цепи аминокислоты, например боковой цепи аминокислоты серин.
Согласно одному из вариантов реализации -С(=О)О- и L2 вместе образуют группу
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к L1, Y представляет собой -N(H)-, -О-, -C(=O)N(H)- или -С(=О)О-, и n представляет собой от 0 до 3. Фениленовое кольцо возможно замещено одним, двумя или тремя заместителями, описанными в настоящем документе.
Согласно одному из вариантов реализации Y представляет собой NH.
Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 0 или 1. Предпочтительно n представляет собой 0.
Если Y представляет собой NH, и n представляет собой 0, то саморасщепляющуюся группу можно назвать п-аминобензилкарбонильным линкером (РАВС).
Саморасщепляющаяся группа обеспечивает высвобождение звена лекарственного соединения (т.е. несимметричного PBD), если активируется удаленный участок линкера, при этом разложение происходит согласно представленному ниже уравнению (при n=0)
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, L* представляет собой активированную форму остатка линкера, высвобожденное звено лекарственного соединения не показано. Указанные группы обладают преимуществом, заключающимся в отделении места активации от лекарственного соединения.
Согласно другому варианту реализации -С(=О)О- и L2 вместе образуют группу, выбранную из
где звездочка, волнистая линия, Y и n такие, как определено выше. Каждое фениленовое кольцо возможно замещено одним, двумя или тремя заместителями, описанными в настоящем документе. Согласно одному из вариантов реализации фениленовое кольцо, содержащее заместитель Y, является возможно замещенным, и фениленовое кольцо, не содержащее заместитель Y, является незамещенным. Согласно другому варианту реализации -С(=О)О- и L2 вместе образуют группу, выбранную из
где звездочка, волнистая линия, Y и n такие, как определено выше, Е представляет собой О, S или NR, D представляет собой N, СН или CR, a F представляет собой N, СН или CR. Согласно одному из вариантов реализации D представляет собой N. Согласно одному из вариантов реализации D представляет собой СН. Согласно одному из вариантов реализации Е представляет собой О или S. Согласно одному из вариантов реализации F представляет собой СН.
Согласно предпочтительному варианту реализации ковалентная связь между L1 и L2 представляет собой связь, лабильную к действию катепсина (например, способную к расщеплению).
Согласно одному из вариантов реализации L1 включает дипептид. Аминокислоты в дипептиде могут представлять собой любую комбинацию природных аминокислот и неприродных аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации дипептид содержит природные аминокислоты. Если линкер представляет собой линкер, лабильный к действию катепсина, то дипептид представляет собой участок расщепления, опосредованного катепсином. Дипептид, таким образом, является участком распознавания для катепсина.
Согласно одному из вариантов реализации группа -Xi-X2- в дипептиде, -NH-Xi-X2-CO-, выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -lle-Cit-, -Phe-Arg- и -Trp-Cit-;
где Cit представляет собой цитруллин. В указанном дипептиде -NH- представляет собой аминогруппу в X1, а СО представляет собой карбонильную группу в Х2.
Предпочтительно группа -ХГХ2- в дипептиде, -NH-X!-X2-CO-, выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys- и -Val-Cit-.
Более предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -NH-X1-X2-CO-, представляет собой -Phe-Lys-, Val-Cit или -Val-Ala-.
Другие требуемые комбинации аминокислот в дипептиде включают
-Gly-Gly-,
-Pro-Pro- и
-Val-Glu-.
Можно применять другие комбинации аминокислот в дипептиде, включая комбинации, описанные в публикации Dubowchik et al., содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Согласно одному из вариантов реализации боковая цепь аминокислоты является химически защищенной, если это необходимо. Защитная группа боковой цепи может представлять собой группу, описанную ниже. Последовательности защищенных аминокислот способны расщепляться под действием ферментов. Например, последовательность аминокислот в дипептиде, содержащем остаток Lys с Вос-защищенной боковой цепью, способна расщепляться под действием катепсина.
Защитные группы боковых цепей аминокислот хорошо известны в данной области техники и описаны в каталоге Novabiochem (Novabiochem Catalog). Дополнительные способы введения защитных групп представлены в Protective groups in Organic Synthesis, Greene и Wuts.
Ниже приведены возможные защитные группы боковых цепей аминокислот, имеющих реакционно-способные функциональные группы в боковых цепях
Arg: Z, Mtr, Tos; Asn: Trt, Xan; Asp: Bzl, t-Bu;
Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt;
Glu: Bzl, t-Bu;
Gin: Trt, Xan;
His: Boc, Dnp, Tos, Trt;
Lys: Boc, Z-CI, Fmoc, Z;
Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS;
Thr: Bz;
Trp: Boc;
Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
Согласно одному из вариантов реализации -Х2- опосредованно связан со звеном лекарственного соединения. Согласно указанному варианту реализации звено-спейсер L2 присутствует.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид применяют в комбинации с саморасщепляю-щейся(имися) группой(ами) (звено-спейсер). Саморасщепляющаяся(иеся) группа(ы) может быть соединена с -Х2-.
Если саморасщепляющаяся группа присутствует, то -Х2- связан непосредственно с саморасщепляющейся группой. Согласно одному из вариантов реализации -Х2- связан с группой Y саморасщепляющейся группы. Предпочтительно группа -Х2-СО- связана с Y, где Y представляет собой NH.
Согласно одному из вариантов реализации -Х2 связан непосредственно с А1. Предпочтительно группа -NH-X1- (N-конец X1) связана с А1. А1 может содержать функциональную группу -СО- и, тем самым, образовывать амидную связь с -Х1-.
Согласно одному из вариантов реализации L1 и L2, взятые совместно с -ОС(=О)-, содержат группу -Х1-Х2-РАВС-. Группа РАВС связана непосредственно со звеном лекарственного соединения. В одном из примеров саморасщепляющаяся группа и дипептид вместе образуют группу -Phe-Lys-PABC-, которая показана ниже
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, и волнистая линия означает место присоединения к остальной части L1 или место присоединения к А1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к А1.
Альтернативно, саморасщепляющаяся группа и дипептид вместе образуют группу -Val-Ala-PABC-, которая показана ниже
где звездочка означает место п1рисоединения к звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к A1, Y представляет собой ковалентную связь или функциональную группу, и Е представляет собой группу, которая способна к расщеплению и, тем самым, активировать саморасщепляющуюся группу.
Е выбирают таким образом, чтобы группа была способной к расщеплению, например, под действием света или фермента. Е может представлять собой -NO2 или глюкуроновую кислоту (например, р-глюкуроновую кислоту). Первая из указанных групп может быть чувствительна к действию нитроредук-тазы, а последняя - к действию р-глюкуронидазы.
Группа Y может представлять собой ковалентную связь.
Группа Y может представлять собой функциональную группу, выбранную из
где звездочка означает место присоединения в звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к A, Y представляет собой ковалентную связь или функциональную группу, и Е представляет собой глюкуроновую кислоту (например, р-глюкуроновую кислоту). Y предпочтительно представляет собой функциональную группу, выбранную из -NH-.
Согласно некоторым вариантам реализации L1 и L2, взятые вместе, представляют собой
или
где звездочка означает место присоединения к остатку L2 или звену лекарственного соединения, волнистая линия означает место присоединения к A1, Y представляет собой ковалентную связь или функциональную группу, и Е представляет собой глюкуроновую кислоту (например, р-глюкуроновую кислоту). Y предпочтительно представляет собой функциональную группу, выбранную из -NH-, -СН2-,
-О- и -S-.
Согласно некоторым дополнительным вариантам реализации Y представляет собой функциональную группу, предложенную выше, где функциональная группа связана с аминокислотой, и аминокислота связана с удлиняющим звеном А1. Согласно некоторым вариантам реализации аминокислота представляет собой р-аланин. Согласно указанному варианту реализации аминокислоту можно рассматривать в качестве эквивалента удлиняющего звена.
Специфичное звено L1 и лиганд опосредованно связаны через удлиняющее звено. L1 и А1 могут быть связаны посредством связывающей группы, выбранной из
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8. Согласно одному из вариантов реализации группа А1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
где волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, как указано выше, и звездочка означает связь с остатком группы А1 или с L1, L2 или D.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу
где волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и звездочка означает связь с остатком группы А1 или с L1, L2 или D.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу, которая, возможно взятая совместно со звеном лиганда (например, связывающегося с клетками агента), выбрана из
Из которых -С(=О)СН2- может быть предпочтительной, особенно когда указанная карбонильная группа связана с -NH-.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу, которая, возможно взятая совместно с лигандом, выбрана из
где волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда или связь с остатком группы А1, и звездочка означает другое место присоединения к звену лиганда или связь с остатком группы А1.
Другие группы, подходящие для связывания L1 со связывающимся с клетками агентом, описаны в WO 2005/082023.
Согласно одному из вариантов реализации удлиняющее звено А1 присутствует, специфичное звено L1 присутствует, и звено-спейсер L2 отсутствует. Таким образом, L1 и звено лекарственного соединения напрямую соединены посредством связи, что эквивалентно тому, что согласно указанному варианту реализации L2 представляет собой связь.
L1 и D могут быть связаны при помощи связывающей группы, выбранной из
-C(=0)N < -OC(=0)N < и -NHC(=0)N <,
где N < является частью D.
Согласно одному из вариантов реализации L1 и D предпочтительно соединены при помощи связи
-C(=0)N <
Согласно одному из вариантов реализации L1 содержит дипептид, и один из концов дипептида связан с D. Как описано выше, аминокислоты, входящие в состав дипептида, могут представлять собой любую комбинацию природных аминокислот и неприродных аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации дипептид содержит природные аминокислоты. Если линкер представляет собой линкер, лабильный к действию катепсина, то дипептид представляет собой участок расщепления, опосредованного катепсином. Дипептид, таким образом, является участком распознавания для катепсина.
Согласно одному из вариантов реализации группа -Х!-Х2- в дипептиде, -NH-X!-X2-CO-, выбрана из
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-,
-Val-Cit-,
-Phe-Cit-,
-Leu-Cit-,
-lle-Cit-,
-Phe-Arg- и
-Trp-Cit-;
где Cit представляет собой цитруллин. В указанном дипептиде -NH- представляет собой аминогруппу в X1, а СО представляет собой карбонильную группу в Х2.
Предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -NH-X1-X2-CO-, выбрана из
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-и
-Val-Cit-.
Более предпочтительно группа -Х1-Х2- в дипептиде, -NH-X1-X2-CO-, представляет собой -Phe-Lys-или -Val-Ala-.
Другие важные комбинации аминокислот в дипептиде включают -Gly-Gly-, -Pro-Pro- и -Val-Glu-.
Можно применять другие комбинации аминокислот в дипептиде, включая описанные выше. Согласно одному из вариантов реализации I^-D представляет собой
/ - NH-Xi-X2-CO-N < *,
где -NH-X1-X2-CO представляет собой дипептид, N < является частью звена лекарственного соединения, звездочка означает места присоединения к остатку звена лекарственного соединения, и волнистая линия означает место присоединения к остатку L1 или место присоединения к А1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к А1.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид представляет собой валин-аланин, a L1-D представляет собой
J н I i I
где звездочки, -N < и волнистая линия такие, как определено выше.
где звездочки, -N < и волнистая линия такие, как определено выше.
Согласно одному из вариантов реализации дипептид представляет собой валин-цитруллин. Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
Согласно одному из вариантов реализации дипептид представляет собой фенилаланин-лизин, и L1-D представляет собой:
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!.1 представляют собой:
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 7, предпочтительно от 3 до 7, более предпочтительно 3 или 7.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!,1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1-!,1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы А1^1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-!! представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, S представляет собой серосодержащую группу звена лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части звена лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, S представляет собой серосодержащую группу звена лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части звена лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой
и и
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, S представляет собой серосодержащую группу звена лиганда, волнистая линия означает место присоединения к остальной части звена лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой:
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 7, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A^L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку лиганда, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A1-L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группы L-A^L1 представляют собой
где звездочка означает место присоединения к L2 или D, волнистая линия означает место присоединения к остатку звена лиганда, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8, более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации удлиняющее звено представляет собой ацетамидное звено, имеющее формулу
/-CH2-CO-N-*.
где звездочка означает место присоединения к остатку удлиняющего звена, L1 или D, а волнистая линия означает место присоединения к звену лиганда. Линкер-лекарственное соединение.
Согласно другим вариантам реализации предложены лекарственные соединения, связанные с линкером, для конъюгации с лигандом. Согласно одному из вариантов реализации лекарственные соединения, связанные с линкером, предназначены для соединения со связывающимся с клетками агентом.
Согласно одному из вариантов реализации лекарственное соединение, связанное с линкером, имеет формулу
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, G1 представляет собой удлиняющее звено (А1) для образования связи со звеном лиганда, L1 представляет собой специфичное звено, L2 (звено-спейсер) представляет собой ковалентную связь или совместно с -ОС(=О)- образует саморасщепляющуюся(иеся) группу(ы).
Согласно другому варианту реализации лекарственное соединение, связанное с линкером, имеет формулу
G1-L1-L2- *,
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, G1 представляет собой удлиняющее звено (А1) для образования связи со звеном лиганда, L1 представляет собой специфичное звено, L2 (звено-спейсер) представляет собой ковалентную связь или саморасщепляющую-ся(иеся) группу(ы).
L1 и L2 являются такими, как определено выше. Выражение "связывание с А1" можно рассматривать в данном случае как связывание с G1.
Согласно одному из вариантов реализации, когда L1 содержит аминокислоту, боковая цепь этой аминокислоты может быть защищена. Можно использовать любые подходящие защитные группы. Согласно одному из вариантов реализации защитные группы боковой цепи способны удаляться совместно с другими защитными группами, присутствующими в соединении. Согласно другим вариантам реализации защитные группы могут быть расположены ортогонально по отношению к другим защитным группам, присутствующим в молекуле.
Подходящие защитные группы боковых цепей аминокислот включают группы, описанные в каталоге Novabiochem 2006/2007 (Novabiochem Catalog 2006/2007). Защитные группы для линкера, лабильного к действию катепсина, также описаны в источнике Dubowchik et al.
Согласно конкретным вариантам реализации группа L1 включает остаток аминокислоты Lys. Боковая цепь этой аминокислоты может быть защищена при помощи Boc- или Alloc-защитных групп. Вос-защитная группа является более предпочтительной.
Функциональная группа G1 образует связывающую группу в результате взаимодействия со звеном
лиганда (например, со связывающимся с клетками агентом).
Согласно одному из вариантов реализации функциональная группа G1 представляет собой или содержит аминокислоту, карбоновую кислоту, гидроксигруппу, тиольную или малеимидную группу для взаимодействия с соответствующей группой звена лиганда. Согласно предпочтительному варианту реализации G1 содержит малеимидную группу.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой алкилмалеимидную группу. Указанная группа подходит для взаимодействия с тиольными группами, в частности с тиольными группами цистеина, присутствующими в связывающемся с клетками агенте, например присутствующими в антителе.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
bp*
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 2, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8. Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, L2 или D, и n представляет собой от 0 до 6. Согласно одному из вариантов реализации n представляет собой 5.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 2, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8.
Согласно одному из вариантов реализации группа G1 представляет собой
n m
где звездочка означает место присоединения к L1, n представляет собой 0 или 1, и m представляет собой от 0 до 30. Согласно предпочтительному варианту реализации n представляет собой 1, и m представляет собой от 0 до 10, от 1 до 8, предпочтительно от 4 до 8 и более предпочтительно 4 или 8.
где звездочка означает связь с остатком группы G.
Согласно одному из вариантов реализации группа, полученная из малеимида, замещена на группу
где звездочка означает связь с остатком группы G.
Согласно одному из вариантов реализации малеимидная группа замещена на группу, выбранную из
В каждом из указанных выше вариантов реализации можно использовать альтернативную функциональную группу вместо малеимидной группы, показанной ниже
Из которых -С(=О)СН2Х может быть предпочтительной, особенно когда указанная карбонильная группа связана с -NH-.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой -NH2, -NHMe, -COOH, -ОН или -SH.
Согласно одному из вариантов реализации, когда L1 присутствует, G1 представляет собой -NH2 или -NHMe. Каждая из групп может представлять собой N-конец последовательности аминокислот в L1.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, G1 представляет собой -NH2, и L1 представляет собой последовательность аминокислот -Х1-Х2-, как определено выше.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой СООН. Эта группа может представлять собой С-конец последовательности аминокислот в L1.
Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой ОН. Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой SH.
Группа G1 способна превращаться из одной функциональной группы в другую. Согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, и G1 представляет собой -NH2. Указанная группа способна превращаться в другую группу G1, содержащую малеимидную группу. Например, группу -NH2 можно подвергать взаимодействию с кислотами или активированной кислотой (например, с N-сукцинимидными формами кислот) тех групп G1, содержащих малеимидную группу, показанных выше.
Группу G1, таким образом, можно превращать в функциональную группу, которая больше подходит для взаимодействия со звеном лиганда.
Как отмечалось выше, согласно одному из вариантов реализации L1 присутствует, a G1 представляет собой -NH2, -NHMe, -COOH, -ОН или -SH. В дополнительном варианте реализации указанные группы предложены в химически защищенной форме. Химически защищенная форма, таким образом, является предшественником линкера, который содержит функциональную группу.
Согласно одному из вариантов реализации G1 представляет собой -NH2 в химически защищенной форме. Указанная группа может быть защищена карбаматной защитной группой. Карбаматная защитная группа может быть выбрана из группы, состоящей из Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Cbz и PNZ.
Предпочтительно, если G1 представляет собой -NH2, то она защищена Alloc- или Fmoc-группой. Согласно одному из вариантов реализации, если G1 представляет собой -NH2, то она защищена Fmoc-группой.
Согласно одному из вариантов реализации защитная группа является такой же, как и карбаматная защитная группа блокирующей (кэппирующей) группы.
Согласно одному из вариантов реализации защитная группа отличается от карбаматной защитной
группы блокирующей группы. Согласно указанному варианту реализации предпочтительно, чтобы защитная группа была способна удаляться в условиях, при которых не происходит удаление карбаматной защитной группы блокирующей группы.
Химическую защитную группу можно удалять для получения функциональной группы, связывающейся со звеном лиганда. Указанная функциональная группа затем необязательно может быть превращена в другую функциональную группу, описанную выше.
Согласно одному из вариантов реализации активная группа представляет собой амин. Указанный амин предпочтительно представляет собой N-терминальный амин, входящий в состав пептида, а также может представлять собой N-терминальный амин, входящий в состав предпочтительных дипептидов согласно настоящему изобретению.
Активную группу можно подвергать взаимодействию с образованием функциональной группы, предназначенной для образования связи со звеном лиганда.
Согласно другим вариантам реализации линкер представляет собой предшественник линкера, содержащего активную группу. Согласно указанному варианту реализации линкер содержит активную группу, которая защищена с помощью защитной группы. Защитную группу можно удалить для получения линкера, содержащего активную группу.
Если активная группа представляет собой амин, то защитная группа может представлять собой защитную группу аминогруппы, например, описанную в источнике Green и Wuts.
Защитная группа предпочтительно расположена ортогонально по отношению к другим защитным группам, присутствующим в звене линкера.
Согласно одному из вариантов реализации защитная группа расположена ортогонально к блокирующей группе. Таким образом, защитная группа активной группы способна удаляться с сохранением блокирующей группы. Согласно другим вариантам реализации защитная группа и блокирующая группа способны удаляться в тех же условиях, что и, например, условия для удаления блокирующей группы.
Согласно одному из вариантов реализации звено линкера представляет собой
NHBoc
где звездочка означает место присоединения к звену лекарственного соединения, и волнистая линия означает место присоединения к остатку звена линкера, если он присутствует, или место присоединения к G1. Предпочтительно волнистая линия означает место присоединения к G1.
Согласно одному из вариантов реализации звено линкера представляет собой
где звездочка и волнистая линия являются такими, как определено выше.
Другие функциональные группы, подходящие для применения для образования связи между L1 и связывающимся с клетками агентом, описаны в WO 2005/082023. Звено лиганда.
Звено лиганда может быть любым и включает белок, полипептид, пептид и непептидный агент, который специфично связывается с молекулой-мишенью. Согласно некоторым вариантам реализации звено лиганда может представлять собой белок, полипептид или пептид. Согласно некоторым вариантам реализации звено лиганда может представлять собой циклический полипептид. Указанные звенья лиган-дов могут включать антитела или фрагмент антитела, который содержит по меньшей мере один участок связывания с молекулой-мишенью, лимфокины, гормоны, факторы роста или любые другие связывающиеся с клетками молекулы или вещества, которые могут специфично связываться с мишенью. В настоящем документе звено лиганда также называют "связывающим агентом" или "нацеливающим агентом".
Термины "специфично связывается" и "специфичное связывание" относятся к связыванию антитела или другого белка, полипептида или пептида с целевой молекулой (например, с антигеном). Как правило, антитело или другая молекула связывается с аффинностью, составляющей по меньшей мере примерно 1х107 М-1, при этом аффинность связывания с целевой молекулой по меньшей мере в два раза выше аффинности связывания с другими молекулами (например, БСА, казеина), отличными от целевой молекулы или родственной ей молекулы.
Примеры звеньев лигандов включают агенты, описанные для применения в документе WO
2007/085930, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Согласно некоторым вариантам реализации звено лиганда представляет собой связывающийся с клетками агент, который связывается с внеклеточной мишенью на поверхности клетки. Указанный связывающийся с клетками агент может представлять собой белок, полипептид, пептид или непептидный агент. Согласно некоторым вариантам реализации связывающийся с клетками агент может представлять собой белок, полипептид или пептид. Согласно некоторым вариантам реализации связывающийся с клетками агент может представлять собой циклический полипептид. Связывающийся с клетками агент также может представлять собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела. Таким образом, согласно одному из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC).
Согласно одному из вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, полностью человеческое антитело или одноцепочечное антитело. Один из вариантов реализации антитела представляет собой фрагмент одного из представленных антител, имеющих биологическую активность. Примеры указанных фрагментов включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv.
Антитело может представлять собой диатело, доменное антитело (DAB) или одноцепочечное антитело.
Согласно одному из вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело.
Антитела для применения в настоящем изобретении включают антитела, описанные в документе WO 2005/082023, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Особенно предпочтительными являются антитела к опухолеассоциированным антигенам. Примеры указанных антигенов, известных в данной области техники, включают, но не ограничиваются ими, опухолеассоцииро-ванные антигены, представленные в WO 2005/082023 (см., например, с. 41-55).
Согласно некоторым вариантам реализации указанные конъюгаты предназначены для направленного действия на опухолевые клетки через антигены, расположенные на поверхности клетки. Антигены могут представлять собой антигены, расположенные на поверхности клетки, которые сверхэкспрессиру-ются или экспрессируются с отклонениями по времени или атипичными клетками. Предпочтительно антиген-мишень экспрессируется только пролиферирующими клетками (предпочтительно опухолевыми клетками); тем не менее, это явление редко наблюдают на практике. В результате антигены-мишени, как правило, выбирают на основании дифференциальной экспрессии между пролиферирующими и здоровыми тканями.
Были разработаны антитела для направленного действия на определенные опухолеассоциирован-ные антигены, включая Cripto, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, гликопротеин NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD70, CD79, CD138, PSCA, ПСМА (простатспецифический мембранный антиген) (PSMA), ВСМА, Е-селектин, EphB2, меланотрансферин (MelanoTpaHcferin), Muc 16 и TMEFF2.
Звено лиганда связано с линкером.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано с А, входящим в состав звена линкера, если А присутствует.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством простой тиоэфирной связи.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством дисульфидной связи.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством амидной связи.
Согласно одному из вариантов реализации звено лиганда связано со звеном линкера посредством сложноэфирной связи.
Согласно одному из вариантов реализации связывание звена лиганда и звена линкера осуществляется посредством связывания тиольной группы остатка цистеина в звене лиганда и малеимидной группы в звене линкера.
Остатки цистеина в звене лиганда могут быть доступны для взаимодействия с функциональными группами звена линкера для образования связи. Согласно другим вариантам реализации, например, когда звено лиганда представляет собой антитело, тиольные группы антитела могут участвовать в образовании межцепочечных дисульфидных связей. Указанные межцепочечные связи можно превращать в свободные тиольные группы, например, путем обработки антитела DTT до взаимодействия с функциональной группой звена линкера.
Согласно некоторым вариантам реализации остаток цистеина вводят в тяжелую или легкую цепь антитела. Положения ввода цистеина в результате реакции замещения в тяжелых или легких цепях антитела включают положения, описанные в публикации заявки US 2007/0092940 и публикации международной заявки WO 2008070593, содержание которых включено в настоящее описание.
Способы лечения.
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в способе терапии. Также предложен способ лечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эф
фективного количество соединения формулы I. Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество, достаточное для достижения благоприятного действия для пациента. Указанное благоприятное действие может представлять собой, по меньшей мере, облегчение по меньшей мере одного симптома. Фактическое количество вводимого соединения, а также скорость и длительность введения будут зависеть от характера и степени тяжести состояния подвергаемого лечению. Назначения для лечения, например выбор дозировки, входят в компетенцию врачей общей практики и других лечащих врачей.
Соединение можно вводить индивидуально или в комбинации с другими способами лечения, например одновременно или последовательно, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению. Примеры способов лечения и терапий включают, но не ограничиваются ими, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например, лекарственные средства, оперативное вмешательство и лучевую терапию).
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению и для применения согласно настоящему изобретению могут включать в дополнение к активному ингредиенту, т.е. к соединению формулы I, фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель, буфер, стабилизатор или другие вещества, хорошо известные специалистам в данной области техники. Указанные вещества должны быть нетоксичными и не должны снижать эффективность активного ингредиента. Конкретная природа носителя или другого вещества будет зависеть от способа введения, который может быть пероральным или представлять собой инъекцию, например, кожную, подкожную или внутривенную.
Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в форме таблеток, капсул, порошка или в жидкой форме. Таблетка может содержать твердый носитель или вспомогательное средство. Жидкие фармацевтические композиции, как правило, содержат жидкий носитель, такой как вода, минеральные, животные или растительные масла, минеральные или синтетические масла. В такую композицию может быть включен физиологический солевой раствор, раствор декстрозы или раствор другого сахарида, или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Капсула может включать твердый носитель, такой как желатин.
В случае внутривенной, кожной или подкожной инъекции или инъекции в место поражения активный ингредиент должен находиться в форме водного раствора, подходящего для парентерального введения, который является апирогенным и имеет подходящие рН, изотоничность и стабильность. Специалисты в данной области техники смогут приготовить подходящие растворы с применением, например изотонических разбавителей, таких как хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, лактат-ный раствор Рингера для инъекций. Консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки можно вводить при необходимости.
Соединения и конъюгаты можно применять для лечения пролиферативного заболевания и аутоиммунного заболевания. Термин "пролиферативное заболевание" относится к нежелательной или неконтролируемой клеточной пролиферации с избыточным содержанием клеток в организме или атипичных клеток, что представляет собой нежелательный процесс, например неопластический или гиперпластический рост in vitro или in vivo.
Примеры пролиферативных состояний включают, но не ограничиваются ими, доброкачественную, предопухолевую и злокачественную пролиферацию клеток, включая, но не ограничиваясь ими, неоплазмы и опухоли (например, гистиоцитому, глиому, астроцитому, остеому), раковые заболевания (например, рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, рак толстой кишки, карциному молочной железы, карциному яичников, рак простаты, рак яичек, рак печени, рак почек, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак мозга, саркому, остеосаркому, саркому Капоши, меланому), лейкозы, псориаз, заболевания костей, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей) и атеросклероз. Другие раковые заболевания, представляющие интерес, включают, но не ограничиваются ими, гематологические злокачественные опухоли, такие как лейкозы и лимфомы, например неходжкинскую лимфому и ее подтипы, такие как ДКВКЛ (диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома), лимфому маргинальной зоны, мантийной зоны и фолликулярную лимфо-му, лимфому Ходжкина, ОМЛ (острый миелобластный лейкоз) и другие раковые заболевания В- или Т-клеток.
Примеры аутоиммунных заболеваний включают следующие: ревматоидный артрит, аутоиммунные демиелинизирующие нарушения (например, рассеянный склероз, аллергический энцефаломиелит), псо-риатический артрит, эндокринную офтальмопатию, увеоретинит, системную красную волчанку, тяжелую миастению, болезнь Грейвса, гломерулонефрит, аутоиммунные нарушения печени, воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона), анафилаксию, аллергические реакции, синдром Шегрена, сахарный диабет I типа, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, фибромиалгию, полимиозит, дерматомиозит, множественную эндокринную недостаточность, синдром Шмидта, аутоиммунный увеит, болезнь Аддисона, адреналит, тироидит, тироидит Хашимото, аутоиммунный тироидит, пер-нициозную анемию, атрофию желудка, хронический гепатит, волчаночный гепатит, атеросклероз, подо-струю кожную красную волчанку, гипопаратиреоз, синдром Дресслера, аутоиммунную тромбоцитопе-нию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, гемолитическую анемию, вульгарную пузырчат
ку, пузырчатку, герпетиформный дерматит, алопецию Ареата, пемфигоид, склеродермию, прогрессирующий системный склероз, CREST-синдром (кальциноз, синдром Рейно, нарушение моторики пищевода, склеродактилия и телеангиэктазия), мужское и женское аутоиммунное бесплодие, анкилозирующий спондилит, язвенный колит, смешанное заболевание соединительной ткани, нодозный полиартериит, системный некротизирующий васкулит, атопический дерматит, атопический ринит, синдром Гудпасчера, болезнь Шагаса, саркоидоз, ревматическую лихорадку, астму, привычный выкидыш, антифосфолипид-ный синдром, "легкое фермера", мультиформную эритему, посткардиотомный синдром, синдром Ку-шинга, аутоиммунный хронический активный гепатит, "легкое птицевода", токсический эпидермальный некролиз, синдром Альпорта, альеволит, аллергический альвеолит, фиброзный альвеолит, интерстици-альное заболевание легких, нодозную эритему, гангренозную пиодермию, трансфузионную реакцию, артериит Такаясу, ревматоидную полимиалгию, темпоральный артериит, шистосомоз, гигантоклеточный артериит, аскариаз, аспергиллез, синдром Самптера, экзему, лимфоматоидный гранулематоз, болезнь Бехчета, синдром Каплана, болезнь Кавасаки, лихорадку денге, энцефаломиелит, эндокардит, фиброз эндомиокарда, эндофтальмит, стойкую возвышающуюся эритему, псориаз, эритробластоз плода, эози-нофильный фасциит, синдром Шульмана, синдром Фелти, филариаз, циклит, хронический циклит, гетерохромный циклит, циклит Фукса, нефропатию IgA, пурпуру Геноха-Шенлейна, реакцию "трансплантат против хозяина", отторжение трансплантата, кардиомиопатию, синдром Итона-Ламберта, рецидивирующий полихондрит, криоглобулинемию, макроглобулинемию Вальденстрема, синдром Эванса и аутоиммунную гонадную недостаточность.
Согласно некоторым вариантам реализации аутоиммунное заболевание представляет собой нарушение, связанное с В лимфоцитами (например, системную красную волчанку, синдром Гудпасчера, ревматоидный артрит и диабет I типа), Th1-лимфоцитами (например, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз, синдром Шегрена, тироидит Хашимото, болезнь Грейвса, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, туберкулез или заболевание "трансплантат против хозяина") или Th2-лимфоцитами (например, атопический дерматит, системную красную волчанку, атопическую астму, ри-ноконъюнктивит, аллергический ринит, синдром Оменна, системный склероз или хроническое заболевание "трансплантат против хозяина"). В целом, нарушения, связанные с дендритными клетками, включают нарушения, связанные с Th1-лимфоцитами и Th2-лимфоцитами. Согласно некоторым вариантам реализации аутоиммунное нарушение представляет собой нарушение иммунной системы, опосредованное Т-клетками.
Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 10 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,01 до примерно 5 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 5 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 5 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 4 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,05 до примерно 3 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 3 мг/кг на дозу. Согласно некоторым вариантам реализации количество вводимого конъюгата находится в диапазоне от примерно 0,1 до примерно 2 мг/кг на дозу.
Другие формы.
Если не указано иное, предложенные выше заместители включают хорошо известные ионные формы, соли, сольваты и защищенные формы указанных заместителей. Например, ссылка на карбоновую кислоту (-СООН) также включает анионную (карбоксилатную) форму (-СОО"), соль или сольват кислоты, а также традиционные защищенные формы. Аналогично, ссылка на аминогруппу включает протони-рованную форму (-N+HR1R2), соль или сольват аминогруппы, например гидрохлоридную соль, а также традиционные защищенные формы аминогруппы. Аналогично, ссылка на гидроксильную группу также включает анионную форму (-О"), соль или сольват указанной группы, а также традиционные защищенные формы.
Соли.
Могут быть удобными или желательными получение, очистка и/или обращение с соответствующей солью активного соединения (конъюгата), например фармацевтически приемлемой солью. Примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Например, если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая
может быть анионной (например, -СООН может представлять собой -СОО-), в данном случае возможно
образование соли с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают,
но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Na+ и K+, катионы щелочно-земельных
металлов, такие как , и другие катионы, такие как Al3+. Примеры подходящих органических
катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (NH4+) и замещенные ионы аммония (например, NH3R+, NH2R2+, NHR3,+ NR4+). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония
являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутилами-на, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также из аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является N(Ql3)4+.
Если соединение является катионным или содержит функциональную группу, которая может быть катионной (например, -NH2 может представлять собой -NH3+), тогда возможно образование соли с подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих неорганических кислот: хлороводородной, бромоводородной, йодоводородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой.
Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих органических кислот: 2-ацетилоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспараги-новой, бензойной, камфорсульфокислоты, коричной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этанди-сульфокислоты, этансульфокислоты, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, глико-левой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изетионовой, молочной, лактобионовой, ла-уриновой, малеиновой, яблочной, метансульфокислоты, муциновой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памовой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфокислоты, пропионовой, виноградной, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, винной, толуолсульфокислоты и валериановой. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются ими, анионы, полученные из следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.
Сольваты.
Могут быть удобными или желательными получение, очистка и/или обращение с соответствующим сольватом активного соединения. Термин "сольват" используют в настоящем изобретении в общепринятом значении для обозначения комплекса растворенного вещества (например, активного соединения, соли активного соединения) и растворителя. Если растворитель представляет собой воду, то сольват обычно называют гидратом, например моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.
Карбиноламины.
Изобретение включает соединения, в которых присоединение растворителя проходит по иминной связи фрагмента PBD, что показано ниже, где растворитель представляет собой воду или спирт (RAOH, где RA представляет собой С 1.4 алкил):
Указанные формы можно назвать карбиноламинной и простой эфирной карбиноламинной формой PBD. Равновесие в указанных реакциях зависит от условий, в которых находятся соединения, а также от природы самого фрагмента.
Указанные конкретные соединения можно выделить в твердом виде, например, путем лиофилиза-
ции.
Изомеры.
Конкретные соединения могут существовать в одной или более конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, атропоизмерных, стереоизомерных, таутомер-ных, конформационных или аномерных формах, включая, но не ограничиваясь ими, цис- и трансформы; Е- и Z-формы; с-, t- и r-формы; эндо- и экзоформы; R-, S- и мезоформы; D- и L-формы; d- и 1-формы; (+) и (-)-формы; кето-, -енольные и -енолятные формы; син- и антиформы; синклинальные и антиклинальные формы; а- и (3-формы; аксиальные и экваториальные формы; конформации "ванна", "кресло", "твист", "конверт" и "полукресло"; а также их комбинации, которые далее в целом называют "изомерами" (или "изомерными формами").
Необходимо отметить, что за исключением описанного ниже для таутомерных форм, из термина "изомеры", используемого в настоящем документе, специально исключены структурные (или конституционные) изомеры (т.е. изомеры, имеющие различные связи между атомами, а не только различное положение атомов в пространстве). Например, ссылку на метоксигруппу -ОСН3 не следует рассматривать как ссылку на ее структурный изомер, гидроксиметильную группу -СН2ОН. Аналогично, ссылку на орто-хлорфенил не следует рассматривать как ссылку на его структурный изомер, метахлорфенил. Тем не менее, ссылка на класс структур вполне может включать структурные изомерные формы, входящие в указанный класс (например, С1-7 алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и параметоксифенил).
Указанное выше исключение не относится к таутомерным формам, например, кето-, -енольным и -енолятным формам, как, например, в случае следующих таутомерных пар: кето/енол (показано ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/ентиол, N-нитрозо/гидроксиазо и нитро/ацинитро.
Следует отметить, что в термин "изомер" специально включены соединения с замещением одного или более атомов изотопами. Например, Н может представлять собой любой изотоп, включая 1Н, 2Н (D) и 3Н (Т); С может представлять собой любой изотоп, включая 12С, 13С и 14С; О может представлять собой любой изотоп, включая 16О и 18О; и т.п.
Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение включает все указанные изомерные формы, включая (полностью или частично) рацемические и другие смеси. Способы получения (например, асимметрический синтез) и разделения (например, фракционная кристаллизация и хроматографические методы) указанных изомерных форм или известны из уровня техники, или легкодоступны за счет известной адаптации известным образом способов, описанных в настоящем документе, или известных способов.
Общие способы синтеза.
Синтез соединений PBD широко представлен в следующих источниках, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки:
a) WO 00/12508 (с.14-30);
b) WO 2005/023814 (с.3-10);
c) WO 2004/043963 (с.28, 29) и
d) WO 2005/085251 (с.30-39). Способ синтеза.
Конъюгаты согласно настоящему изобретению, где R10 и R11 образуют двойную азот-углеродную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, можно синтезировать из соединения формулы 2
О R R о
где R2, R6, R7, R9, R6', R7, R9', R12, X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы I, ProtN представляет собой защитную группу атома азота для проведения синтеза, и Prot° представляет собой защищенную кислородсодержащую группу для проведения синтеза или оксогруппу путем снятия защиты иминной связи при помощи стандартных методов.
Получаемое соединение может быть в карбиноламинной форме или простой эфирной карбиноламинной форме в зависимости от используемых растворителей. Например, если ProtN представляет собой Alloc и Prot° представляет собой защитную группу атома кислорода для проведения синтеза, то снятие защиты проводят с применением палладия с удалением защитной группы N10, с последующим удалением защитной группы атома кислорода для проведения синтеза. Например, если ProtN представляет собой Troc, a Prot° представляет собой защитную группу атома кислорода для проведения синтеза, то снятие защиты проводят с применением пары Cd/Pb с получением соединения формулы (I). Если ProtN представляет собой SEM или аналогичную группу, и Prot° представляет собой оксогруппу, тогда оксогруппу можно удалить путем восстановления, которое приводит к образованию промежуточного защищенного карбиноламина, который затем можно обработать для удаления SEM-защитной группы, а с последующим удаленим воды. Восстановление соединения формулы 2 можно проводить, например, при помощи тетраборгидрида лития, в то же время подходящим способом удаления SEM-защитной группы является обработка силикагелем.
Соединения формулы 2 можно синтезировать из соединения формулы За
R R
OR" FT о
где R2, R6, R7, R9, R6', R7, R9', X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания с металлорганическим производным, содержащим R12, например с борорганическим производным. Борорганическое производное может представлять собой боронат или бороновую кислоту.
Соединения формулы 2 можно синтезировать из соединения формулы ЗЬ
где R12, R6, R7, R9, R6', R7', R9', X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания с металлорганическим производным, содержащим R2, например с борорганическим производным. Борорганическое производное может представлять собой боронат или бороновую кислоту.
Соединения формул За и ЗЬ можно синтезировать из соединения формулы 4
Формула 4
ТГО' ^ \\ 16- 'в // ^ "OTf
О R R о
где R2, R6, R7, R9, R6', R7, R9', X, X' и R" являются такими, как определено для соединений формулы 2, путем сочетания примерно с одним эквивалентом (например, от 0,9 или 1 до 1,1 или 1,2) металлорга-нического производного, например борорганического производного, содержащего R2 или R12.
Сочетание, описанное выше, как правило, проводят в присутствии палладиевого катализатора, например Pd(PPh3)4, Pd(OCOCH3)2, PdCl2 или Pd2(dba)3. Реакцию сочетания можно проводить в обычных условиях, но также можно проводить в условиях микроволнового излучения.
Две стадии реакции сочетания, как правило, проводят последовательно. Их можно проводить с проведением или без проведения очистки между двумя стадиями. Если очистку не проводят, то две стадии можно проводить в одном реакционном сосуде. Проведение очистки обычно требуется после второй стадии реакции сочетания. Очистку соединения от нежелательных побочных продуктов можно проводить путем колоночной хроматографии или ион-обменного разделения.
Синтез соединений формулы 4, где Prot° представляет собой оксогруппу, a ProtN представляет собой SEM, подробно описан в документе WO 00/12508, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. В частности, в настоящем описании приведена ссылка на схему 7 на с.24, где предложенное выше соединение обозначено как промежуточное вещество Р. Этот способ синтеза также описан в WO 2004/043963.
Синтез соединений формулы 4, где Prot° представляет собой защищенную кислородсодержащую группу, описан в документе WO 2005/085251, в котором описан синтез, включенный в настоящее описание посредством ссылки.
Соединения формулы I, где R10 и R10' представляют собой Н, и R11 и R11' представляют собой SOzM, можно синтезировать из соединений формулы I, где R10 и R11 образуют двойную азот-углеродную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, путем присоединения подходящей би-сульфитной соли или сульфинатной соли и последующей стадии соответствующей очистки. Дополнительные способы описаны в документе GB 2053894, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Защитные группы атома азота для проведения синтеза.
Защитные группы азота для проведения синтеза хорошо известны в данной области техники. В настоящем изобретении особенно важны карбаматные защитные группы азота и гемиаминальные защитные группы азота.
Карбаматные защитные группы азота имеют следующую структуру:
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в Greene T.W. и Wuts G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, с. 503-549, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Особенно предпочтительные защитные группы включают Troc, Teoc, Fmoc, BOC, Doc, Hoc, TcBOC, 1-Adoc и 2-Adoc.
Другими возможными группами являются нитробензилоксикарбонил (например, 4-нитробензилоксикарбонил) и 2-(фенилсульфонил)этоксикарбонил.
Защитные группы, которые можно удалить с помощью палладиевого катализа, например Alloc, не являются предпочтительными.
Гемиаминальные защитные группы азота имеют следующую структуру:
где R'10 представляет собой R, определенный выше. Большое число подходящих групп описано в качестве защитных групп амидной группы в Greene T.W. и Wuts G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на с. 633-647, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Группы, описанные в настоящем документе, можно применять для соединений для применения согласно настоящему изобретению. Указанные группы включают, но не ограничиваются ими, SEM, MOM, MTM, MEM, BOM, нитро- или метоксизамещенный ВОМ и Q3CCH2OCH2-.
Защищенные группы кислорода для проведения синтеза.
Защищенные группы кислорода для проведения синтеза хорошо известны в данной области техники. Большое число подходящих защитных групп кислорода описано в Greene T.W. и Wuts G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc., 1999, на с. 23-200, содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Особенно важные классы таких групп включают простые силильные эфиры, простые метиловые эфиры, простые алкильные эфиры, простые бензиловые эфиры, сложные эфиры, ацетаты, бензоаты, карбонаты и сульфонаты.
Предпочтительные защитные группы атома кислорода включают ацетаты, TBS и ТНР.
Синтез конъюгатов лекарственного вещества.
Конъюгаты могут быть получены так, как описано ранее. Линкеры, содержащие малеимидильную группу (А), пептидную группу (L1) и саморасщепляющуюся группу (L2) могут быть получены, как описано в патенте США № 6214345, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Линкеры, содержащие малеимидильную группу (А) и пептидную группу (L1), могут быть получены, как описано в публикации WO 2009/0117531, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. Другие линкеры могут быть получены согласно ссылкам, приведенным в настоящем документе, или методам, известным специалисту в данной области техники.
Лекарственные соединения, связанные с линкером, могут быть получены согласно способам, известным в данной области техники. Связывание заместителей X на основе аминов (звено лекарственного соединения димера PDB) с активными группами звеньев линкера можно осуществить согласно способам, в целом, описанным в патентах США № 6214345 и 7498298 и WO 20090117531, или а также известны специалисту в данной области техники.
Антитела могут быть конъюгированы с лекарственными соединениями, связанными с линкером, как описано в Doronina et al., Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784). Вкратце, антитела (4-5 мг/мл) в PBS, содержащем 50 нМ бората натрия при рН 7,4, восстанавливают гидрохлоридом трис(карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) при 37°С. Протекание реакции, в результате которой восстанавливаются межцепочечные дисульфиды, контролируют путем взаимодействия с 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойной кислотой) и оставляют до достижения требуемого уровня тиолов/mAb. Затем восстановленное антитело охлаждают до 0°С и алкилируют 1,5 экв. малеимидного лекарственного соединения, связанного с линкером, на тиол антитела. Через 1 ч реакцию гасят путем добавления 5 экв. N-ацетилцистеина. Гашеное лекарственное соединение, связанное с линкером, удаляют с помощью фильтрации в геле через колонку PD-10. Затем ADC стерильно фильтровали через 0,22 мкм шприцевой фильтр. Концентрация белка может быть определена с помощью спектрального анализа при 280 и 329 нм соответственно с поправкой на поглощение лекарственного соединения при 280 нм. Эксклюзионную хроматографию можно использовать для определения чрезмерной агрегации антител, и RP-HPLC (обра-щенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография) можно использовать для определения содержания оставшегося NAC-гашеного лекарственного соединения, связанного с линкером.
Антитела с введенными остатками цистеина можно конъюгировать с соединениями линкер-лекарственное соединение как описано в международной публикации на патент WO 2008070593, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки. Антитела, содержащие введенный остаток цистеина в основной цепи, постностью восстанавливают путем добавления 10 экв. ТСЕР и 1 мМ ЭДТА и доводят рН до 7,4 с помощью 1М Трис буфера (рН 9,0). После 1 ч инкубации при 37°С реакционную смесь охлаждают до 22°С и добавляют 30 экв. дегидроаскорбиновой кислоты для селективного повторного окисления исходных дисульфидов, сохраняя введенный цистеин в восстановленном состоянии. рН доводят до 6,5 с помощью 1М Трис буфера (рН 3,7), и реакцию оставляют протекать в течение 1 ч при 22°С. Затем рН раствора опять повышают до 7,4 путем добавления 1М Трис буфера (рН 9,0). 3,5 экв. линкера лекарственного соединения PBD в ДМСО помещают в подходящий контейнер для разбавления пропиленгликолем до добавления к реакционной смеси. Для сохранения растворимости линкера лекарственного соединения PBD само антитело сначала разбавляют пропиленгликолем до конечной концентрации 33% (например, если раствор антитела имел реакционный объем 60 мл, добавляют 30 мл про-пиленгликоля). Такой же объем пропиленгликоля (30 мл а данном примере) добавляют к линкеру лекарственного соединения PBD в качестве разбавителя. После перемешивания раствор линкера лекарственного соединения PBD в пропиленгликоле добавляют к раствору антитела для проведения конъюгации; конечная концентрация пропиленгликоля составляла 50%. Реакцию оставляют протекать в течение 30 мин и затем гасят путем добавления 5 экв. N-ацетилцистеина. ADC очищают с помощью ультрафильтрации через 30 kD мембрану. (Следует отметить, что концентрацию пропиленгликоля, используемого в реакции, можно уменьшить для любого конкретного PBD, поскольку он только решает проблему сохранения растворимости линкера лекарственного соединения в водной среде).
Для соединений линкер-лекарственное соединение на основе галогенацетамида конъюгацию можно проводить, в целом, следующим образом. К раствору восстановленных и повторно окисленных антител (содержащих введенные цистеины в основную цепь) в 10 мМ Трис (рН 7,4), 50 мМ NaCl и 2 мМ DTPA добавляют 0,5 объемов пропиленгликоля. 10 мМ раствор соединения линкер-лекарственное соединение
на основе галогенацетамида в диметилацетамиде получают непосредственно перед конъюгацией. Эквивалентное количество пропиленгликоля, добавленного к раствору антитела, добавляют к 6-кратному молярному избытку соединения линкер-лекарственное соединение. Разбавленный раствор линкер-лекарственное соединение добавляют к раствору антитела, и рН доводят до 8-8,5 с использованием 1М Трис (рН 9). Реакцию конъюгации проводят в течение 45 мин при 37°С. Конъюгацию контролируют по восстановлению и денатурированию обращенно-фазовой PLRP-S хроматографии, избыток соединения линкер-лекарственное соединение удаляют с помощью смолы Quadrasil MP, и буфер заменяют на 10 мМ Трис (рН 7,4), 50 мМ NaCl и 5% пропиленгликоля с использованиема колонки для обессоливания PD-10. Примеры схем синтеза линкеров лекарственного соединения.
Следующие схемы являются иллюстративными способами синтеза линкеров лекарственного соединения - димер PBD показан с конкретными заместителями и димерными связями, однако они могут варьироваться с рамках объема настоящего изобретения.
Схема А
Промежуточное вещество глюкоронидного линкера S1 (ссылка: Jeffrey et al., Bioconjugate Chemistry, 2006, 17, 831-840) можно обработать дифосгеном в дихлорметане при -78°С с получением хлорформиата глюкоронида, который затем подвергают взаимодействию с димером PBD S2, растворенным в CH2Cl2 путем добавления по каплям. Нагревание реакционной смеси до 0°С в течение 2 ч с последующей экстракцией приводит к получению соединения S3. Обработка раствора S3 в соответствующей смеси растворителей МеОН, тетрагидрофурана и воды (охлажденной до 0°С) моногидратом гидроксида лития в течение 4 ч с последующим взаимодействием с ледяной уксусной кислотой приводит к получению соединения S4. Добавление сложного эфира малеимидокапроила и NHS к раствору S4 в ДМФА с последующим добавлением диизопропилэтиламина и перемешиваем при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2 ч приводит к получению требуемого линкера лекарственного соединения S5.
Схема В
проил-N- гидроксисукцинимида и H-Val-Ala-OH, может быть связан с типичными соединениями, S2, в присутствии EEDQ в безводном дихлорметане.
Схема С
Линкер S8 может быть связан с типичными соединениями, S2 в присутствии EEDQ в 5% метано-ле/дихлорметане. Снятие защиты S9 можно проводить с использованием Ph3P, пирролидина и тетракис палладия в безводном дихлорметане. S10 можно преобразовать в требуемые продукты путем добавления сложного эфира малеимидокапроила и NHS в присутствии DIPEA в ДМФА.
Дополнительные предпочтительные варианты реализации.
Предложенные ниже предпочтительные варианты реализации можно применять ко всем аспектам изобретения, описанным выше, или они могут относиться к одному аспекту. Предпочтительные варианты реализации можно объединять в любой комбинации.
Согласно некоторым вариантам реализации R6, R7, R9, R10, R11 и Y' предпочтительно являются такими же, как R6, R7, R9, R10, R11 и Y соответственно.
Линкер в димере.
Y и Y' предпочтительно представляют собой О.
R" предпочтительно представляет собой С3-7 алкиленовую группу, не содержащую заместителей. Более предпочтительно R" представляет собой С3, C5 или С7 алкилен. Более предпочтительно R" представляет собой С3 или C5 алкилен.
R9-R9
R9 предпочтительно представляет собой Н.
R6 предпочтительно выбран из Н, ОН, OR, SH, NH2, нитрогруппы и галогена, более предпочтительно из Н или галогена и более предпочтительно представляет собой Н.
R7 предпочтительно выбран из Н, ОН, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' и галогена и более предпочтительно независимо выбран из Н, ОН и OR, где R предпочтительно выбран из необязательно замещенных С1-7 алкильной, С3-10 гетероциклильной и C5-10 арильной групп. Более предпочтительно R может представлять собой C1-4 алкильную группу, которая может быть замещенной или незамещенной. Заместитель, представляющий интерес, представляет собой C5-6 арильную группу (например, фенил). Особенно предпочтительными заместителями в положении 7 являются ОМе и OCH2Ph. Другие важные заместители представляют собой диметиламино (т.е.-NMe^; -(OC2H4)qOMe, где q составляет от 0 до 2; азотсодержащие С6 гетероциклилы, в том числе морфолино, пиперидинил и N-метилпиперазинил.
Указанные предпочтительные варианты реализации относятся к R9, R6 и R7 соответственно.
А в R2 может представлять собой фенильную группу или С5-7 гетероарильную группу, например фуранил, тиофенил и пиридил. Согласно некоторым вариантам реализации А предпочтительно представляет собой фенил. Согласно другим вариантам реализации А предпочтительно представляет собой тиофенил, например тиофен-2-ил и тиофен-3-ил.
X представляет собой группу, выбранную из списка, включающего NHNH2, CONHNH2,
Согласно некоторым вариантам реализации X может быть предпочтительно
выбран из NHNH2 и CONHNH2. Согласно другим вариантам реализации X может быть предпочтительно
- выбран из N-/ и N-/
Q2-X может быть на любом из доступных атомов в кольце С5-7 арильной группы, но предпочтительно на атоме в кольце, который не расположен рядом со связью с остатком соединения, т.е. предпочтительно находится в р- или у-положении относительно связи с остатком соединения. Следовательно, когда С5-7 арильная группа (А) представляет собой фенил, заместитель (Q2-X), то заместитель предпочтительно находится в мета- или пара-положениях, и более предпочтительно в пара-положении.
Согласно некоторым вариантам реализации Q1 представляет собой одинарную связь. Согласно указанным вариантам реализации Q2 выбран из одинарной связи и -Z-(CH2)n-, где Z выбран из одинарной связи, О, S и NH и составляет от 1 до 3. Согласно некоторым вариантам реализации Q2 представляет собой одинарную связь. Согласно другим вариантам реализации Q2 представляет собой -Z-(CH2)n-. Согласно указанным вариантам реализации Z может представлять собой О или S, и n может представлять собой 1 или n может представлять собой 2. Согласно другим указанным вариантам реализации Z может представлять собой одинарную связь и n может представлять собой 1.
Согласно другим вариантам реализации Q1 представляет собой -СН=СН-.
Согласно некоторым вариантам реализации R2 может представлять собой -А-СН2-Х и -А-Х. Со-
NH "-N NH
гласно указанным вариантам реализации X может представлять собой \-' и N-/ . Согласно
*-N \и
особенно предпочтительным вариантам реализации X может представлять собой \-^
R12 может представлять собой С5-7 арильную группу. С5-7 арильная группа может представлять собой фенильную группу или С5-7 гетероарильную группу, например фуранил, тиофенил и пиридил. Согласно некоторым вариантам реализации R12 предпочтительно представляет собой фенил. Согласно другим вариантам реализации R12 предпочтительно представляет собой тиофенил, например тиофен-2-ил и тиофен-3-ил.
R12 может представлять собой С8-10 арил, например хинолинильную или изохинолинильную группу. Хинолинильная или изохинолинильная группа может быть связана с ядром PBD через любой доступный атом кольца. Например, хинолинил может представлять собой хинолин-2-ил, хинолин-3-ил, хинолин-4-ил, хинолин-5-ил, хинолин-6-ил, хинолин-7-ил и хинолин-8-ил. Среди указанных групп хинолин-3-ил и хинолин-6-ил могут быть предпочтительными. Изохинолинил может представлять собой изохинолин-1-ил, изохинолин-3-ил, изохинолин-4-ил, изохинолин-5-ил, изохинолин-6-ил, изохинолин-7-ил и изохино-лин-8-ил. Среди указанных групп изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил могут быть предпочтительными.
R12 может содержать любое число замещающих групп. Предпочтительно он содержит от 1 до 3 замещающих групп, при этом 1 и 2 являются более предпочтительными, замещенные одним заместителем являются наиболее предпочтительными. Заместители могут находиться в любом положении.
Когда R12 представляет собой С5-7 арильную группу, то единственный заместитель предпочтительно расположен у атома кольца, который не расположен рядом со связью с остатком соединения, т.е. предпочтительно находится в р- или у-положении относительно связи с остатком соединения. Таким образом, если С5-7 арильная группа представляет собой фенил, то заместитель предпочтительно находится в мета-или пара-положениях и более предпочтительно в пара-положении.
Когда R12 представляет собой С8-10 арильную группу, например хинолинил или изохинолинил, он может содержать любое число заместителей в любом положении хинолинового или изохинолинового колец. Согласно некоторым вариантам реализации он содержит один, два или три заместителя, которые могут быть расположены в проксимальном или дистальном кольце или на обоих кольцах (если содержит более одного заместителя).
Заместители R12.
Если заместитель на R12 представляет собой галоген, то предпочтительно он представляет собой F или Cl, более предпочтительно Cl.
Если заместитель на R12 представляет собой простую эфирную группу, то согласно некоторым вариантам реализации он может представлять собой алкоксигруппу, например C1-7 алкоксигруппу (например, метокси, этокси), или согласно некоторым вариантам реализации он может представлять собой С5-7 арилоксигруппу (например, фенокси, пиридилокси, фуранилокси). Алкоксигруппа может быть сама дополнительно замещена, например, аминогруппой (например, диметиламино).
Если заместитель на R12 представляет собой С1-7 алкил, то он предпочтительно может представлять собой C1-4 алкильную группу (например, метил, этил, пропил, бутил).
Если заместитель на R12 представляет собой С3-7 гетероциклил, согласно некоторым вариантам реализации он может представлять собой С6 азотсодержащую гетероциклильную группу, например морфо-лино, тиоморфолино, пиперидинил, пиперазинил. Указанные группы могут быть связаны с остальной частью фрагмента PBD через атом азота. Указанные группы могут быть дополнительно замещены, на
пример, C1-4 алкильными группами. Если С6 азотсодержащая гетероциклильная группа представляет собой пиперазинил, то указанный дополнительный заместитель может быть расположен на втором атоме азота в кольце.
Если заместитель на R12 представляет собой бис-окси-С1-3 алкилен, то предпочтительно он представляет собой бис-окси-метилен или бис-окси-этилен.
Особенно предпочтительные заместители для R12 включают метокси, этокси, фтор, хлор, циано, бис-окси-метилен, метилпиперазинил, морфолино и метилтиофенил. Другим особенно предпочтительным заместителем в R12 является диметиламинопропилокси.
Группы R12.
Особенно предпочтительные замещенные группы R12 включают, но не ограничиваются ими, 4-метоксифенил, 3-метоксифенил, 4-этоксифенил, 3-этоксифенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил, 3,4-бисоксиметиленфенил, 4-метилтиофенил, 4-цианофенил, 4-феноксифенил, хинолин-3-ил и хинолин-6-ил, изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил, 2-тиенил, 2-фуранил, метоксинафтил и нафтил. Другой возможной замещенной группой R12 является 4-нитрофенил.
M и z.
Предпочтительно М и М' представляют собой одновалентные фармацевтически приемлемые катионы и более предпочтительно Na+.
z предпочтительно представляет собой 3.
где
n представляет собой 1 или 3; R1a представляет собой метил или фенил; R12a выбран из
Особенно предпочтительными соединениями согласно настоящему изобретению являются соединения формулы 1а
3-й аспект.
Предпочтительные варианты, указанные выше для первого аспекта, можно применять по отношению к соединениям данного аспекта в соответствующих случаях.
Когда R10 представляет собой карбаматную защитную группу азота, он может предпочтительно представлять собой Теос, Fmoc и Troc и более предпочтительно представлять собой Troc.
Когда R11 представляет собой O-Prot°, где Prot° представляет собой защитную группу кислорода, Prot° может предпочтительно представлять собой TBS или ТНР и более предпочтительно представлять собой TBS.
Когда R10 представляет собой гемиаминальную защитную группу азота, он может предпочтительно представлять собой MOM, BOM или SEM и более предпочтительно представлять собой SEM.
Предпочтительные варианты для соединения формулы I применимы в соответствующих случаях к D в шестом аспекте изобретения.
Примеры
Общие методы проведения экспериментов.
Оптическое вращение измеряли на поляриметре ADP 220 (Bellingham Stanley Ltd.), концентрации (с) представлены в виде г/100 мл. Температуру плавления измеряли при помощи цифрового измерителя температуры плавления (Electrothermal). ИК-спектры записывали на ИК-спектрометре Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT. Спектры 1Н и 13С ЯМР получали при 300 К на ЯМР спектрометре Bruker Advance при 400 и 100 МГц соответственно. Химические сдвиги представлены относительно TMS (5=0,0 ppm), сигналы обозначены как s (синглет), d (дублет), t (триплет), dt (двойной триплет), dd (дублет дублетов), ddd (двойной дублет дублетов) или m (мультиплет), константы спин-спинового взаимодействия даны в герцах (Гц). Данные масс-спектрометрического анализа (МС) получали на оборудования Водой s Micromass ZQ, соединенного с ВЭЖХ хроматографом Waters 2695 и детектором Водой s 2996 PDA. Использовались следующие параметры системы Waters Micromass ZQ: капилляр (кВ), 3,38; конус (В), 35; экстрактор (В), 3,0; температура источника (°С), 100; температура десольватации (°С), 200; скорость потока подвижной фазы (л/ч), 50; расход десольватированного потока (л/ч), 250. Масс-спектрометрию высокого разрешения (HRMS) проводили в системе Waters Micromass QTOF Global в положительном W-режиме с использова
нием наконечников из борсиликатного стекла с металлическим покрытием для введения образцов в прибор. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на алюминиевых пластинах с силикагелем (Merck 60, F254), а для флэш-хроматографии использовали силикагель (Merck 60, 230-400 меш ASTM). За исключением HOBt (NovaBiochem) и реагентов на твердой подложке (Argonaut) все остальные химические реактивы и растворители приобретали в Sigma-Aldrich, и их применяли в поставляемом виде без дополнительной очистки. Безводные растворители получали путем перегонки в атмосфере сухого азота в присутствии соответствующего осушителя и хранили над молекулярными ситами 4А или над натриевой проволокой. Петролейный эфир представляет собой фракцию, кипящую при 40-60°С.
Соединение 1 синтезировали, как описано в WO 2010/043880 (соединение 17), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки.
Общие условия ЖХ/МС.
ВЭЖХ (Waters Alliance 2695) проводили с применением подвижных фаз: воды (А) (муравьиная кислота 0,1%) и ацетонитрила (В) (муравьиная кислота 0,1%). Градиент: начальный состав - 5% В, через1,0 мин, затем 5% В до 95% В, в течение 3 мин. Состав подвижной фазы сохраняли в течение 0,5 мин на уровне 95% В, а затем возвращали к уровню 5% В за 0,3 мин. Общее время градиентного анализа составляет 5 мин. Скорость потока 3,0 мл/мин, 400 мкл вводили при помощи тройника с нулевым мертвым объемом в масс-спектрометр. Диапазон длин волн детектирования: 220-400 нм. Режим: диодная матрица (535 сканов). Колонка: Phenomenex(r) Onyx Monolithic C18 50x4,60 мм.
Пример 1.
а) Бензил-4-(4-((S)-7-метокси-8-(3-(((S)-7-метокси-2-(4-метоксифенил)-5,11-диоксо-10-((2-(триме-тилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11 а-тетрагидро-1Н-бензо [е]пирроло [ 1,2-а] [ 1,4]диазепин-8-ил)окси)про-покси)-5,11 -диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11 а-тетрагидро-1Н-бензо[е]пирро-ло[1,2-а][1,4]диазепин-2-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилат (3).
(S)-2-(4-метоксифенил)-7-метокси-8-(3-((S)-7-метокси-2-(трифторметилсульфонил)-5,11-диоксо-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-5,10,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси)пропилокси)-10-((2-(триметилсилил)этокси)метил)-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5,11(10Н,11аН)-дион (1 - Соединение 17 в WO 2010/043880)(0,093 г, 0,086 ммоль), бензил-4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилат (2)(0,047 г, 0,110 ммоль, 1,3 экв.) и карбонат натрия (0,009 г, 0,140 ммоль, 1,5 экв.) суспендировали в этаноле (1,5 мл), толуоле (3 мл) и воде (1,5 мл) в атмосфере азота. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,002 г, 0,002 ммоль, 0,02 экв.) к указанной смеси, и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. К смеси добавляли EtOAc (10 ml), и органическую фазу промывали солевым раствором (15 мл) и сушили над MgSO4, и растворитель удаляют с помощью ротационного выпаривания при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали с помощью колоночной флеш-хроматографии (силикагель, градиент 20% EtOAc/80% гексан-100% EtOAc). Соединение 3 получали в виде желтого твердого вещества (0,0549 г, 52%); Rf 0.21 [50% ЕЮАс-50% гексан]; ЖХ-МС (5 мин) 3,92 мин, ES+ 1221.39.
b) Требуемое соединение А, выше, можно синтезировать из соединения 3 путем удаления Cbz защитной группы и восстановления SEM дилактама, как описано выше. Пример 2. Определение цитотоксичности in vitro.
Клетки K562 человеческого хронического миелоидного лейкоза выдерживали в среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина при 37 °С во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2, и инкубировали с определенной дозой лекарственного средства в течение 96 ч
при 37°С в темноте. Инкубирование прекращали путем центрифугирования (5 мин, 300 g), и клетки промывали один раз средой, не содержащей лекарственное средство. После соответствующей обработки лекарственным средством клетки переносили в 96-луночные микротитрационные планшеты (104 клеток на лунку, 8 лунок на образец). Планшеты затем выдерживали в темноте при 37 °С во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2. Исследование основано на способности жизнеспособных клеток восстанавливать желтую растворимую соль тетразолия, бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2H-тетразолия (МТТ, Aldrich-Sigma), до нерастворимого пурпурного осадка формазана. После инкубирования планшетов в течение 4 дней (для достижения примерно 10-кратного увеличения числа контрольных клеток) 20 мкл раствора МТТ (5 мг/мл в фосфатном солевом буфере) добавляли в каждую лунку, и планшеты дополнительно инкубировали в течение 5 ч. Планшеты затем центрифугировали в течение 5 мин при 300 г и отбирали среду из клеточной массы, оставляя в лунке 10-20 мкл. ДМСО (200 мкл) добавляли в каждую лунку, и образцы перемешивали для достижения полного перемешивания. Затем определяли оптическую плотность при длине волны 550 нм на планшетном анализаторе Titertek Multiscan ELISA и строили кривую зависимости "доза-эффект". Для каждой кривой определяли значение IC50 как дозу, необходимую для снижения итоговой оптической плотности до 50% относительно контрольного значения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соединение формулы I
где R2 имеет формулу II
где А выбран из фенильной группы и С5.7 гетероарильной группы, выбранной из
*-N NH
фуранила, тиофенила и пиридила, и X представляет собой ^-/ ;
R12 представляет собой фенил, который содержит от одной до трех замещающих групп, выбранных из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила, морфолино и метилтио-фенила;
каждый из R7 и R7 представляет собой C1-4 алкоксигруппу;
a) R10 представляет собой Н и R11 представляет собой ОН, ORA, где RA представляет собой C1-4 ал-
кил;
либо
b) R10 и R11 образуют двойную связь азот-углерод между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; либо
c) R10 представляет собой Н и R11 представляет собой SOzM, где z представляет собой 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из ионов щелочных металлов и ионов аммония;
R" представляет собой С3-7 алкиленовую группу;
R10 и R11 представляют собой такие же группы, как R10 и R11, где, если R11 и R11 представляют собой SOzM, M может представлять собой двухвалентный фармацевтически приемлемый катион, выбранный из катионов щелочно-земельных металлов.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027386
- 1 -
027386
- 1 -
027386
- 1 -
027386
- 1 -
027386
- 4 -
027386
- 8 -