EA 027371B1 20170731

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000027371b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение, включая его фармацевтически приемлемые соли, выбранное из группы: соединение формулы I и соединение формулы II где X представляет собой фенил, замещенный 1-2 радикалами, выбранными из карбокси, фтор или циклогекс-1-енил, замещенный карбокси; Y представляет собой фенил, замещенный 1-2 радикалами, выбранными из карбокси, фтор или циклогекс-1-енил, замещенный карбокси; R ₁ выбран из 2-гидроксипроп-2-ил, 2-метоксипроп-2-ил, 1-гидроксиметилэтенил, 1-метилоксиранил, 1-метоксикарбонилэтил, амино, ацетиламино, 1,2-дигидроксипроп-2-ил, 1-гидрокси-2-метоксипроп-2-ил, 1-гидроксипроп-2-ил, 1-метоксипроп-2-ил, 1-фторпроп-2-ил, 1-гидроксиэтил, 2-метилэтенил, 1-гидроксииминоэтил, 1-(морфолин-4-ил)этил, 1-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)этил, 1-аминоэтил, 1-ацетиламиноэтил, 1-трифторацетиламиноэтил, 1-(морфолин-4-ил)этил, гидроксиацетил, метоксикарбониламино, морфолин-4-илкарбонил, метилкарбамоил, метилуреидо, пирролидин-1-илкарбониламино, 1,3,4-оксадиазол-2-ил, 1-(2-оксопироилидин-1-ил)этил, диметиламино, метиламино, гидроксиметил, трифторацетил(метил)амино, 4-(3-трифторметилиазетин-3-ил)бензоиламино, ацетил, 1-метилциклопропил или 1-(NR ₂₈ R ₂₉ )этенил; W - простая связь или -CO; R ₄ представляет собой Н; R ₅ выбран из группы, состоящей из -H, 2-диметиламиноэтил, 2-карбоксиэтил, 2-((2-гидроксиэтил)амино)этил, 3-(2-оксопиролидин-1-ил)пропил, 3-(имидазол-1-ил)пропил, 2-(карбоксиметиламино)этил, 2-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)этил, 2-(2,5-оксаазабицикло[2.2.1]гепт-5-ил)этил, метил, 2-(2-(2-метоксиэтилсульфонил)этил(метил)амино)этил, 1,1-диоксотиоморфолин-4-илацетил, 2-(4-мезилпиперидин-1-ил)этил, 2-(4-мезилпиперазин-1-ил)этил; R ₂₈ представляет собой -H, Me; R ₂₉ выбран из 2-(морфолин-4-ил)этил 2-гидроксиэтил, метил, 2-диметиламиноэтил, 2-карбоксиэтил, 3-карбоксипропаноил, 3-метоксикарбонилпропаноил.

2. Соединение, включая его фармацевтически приемлемые соли, выбранное из группы:

3. Фармацевтическая композиция, содержащая противовирусное эффективное количество одного или более соединений по п.1, совместно с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, пригодная для лечения ВИЧ-инфекции, дополнительно содержащая противовирусное эффективное количество вещества для лечения СПИД, выбранного из группы, состоящей из (а) противовирусного вещества для лечения СПИД, (b) противоинфекционного вещества, (с) иммуномодулятора и (d) другого ингибитора входа ВИЧ.

5. Способ лечения млекопитающего, инфицированного вирусом ВИЧ, включающий введение указанному млекопитающему противовирусного эффективного количества соединения по п.1, и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей или разбавителей.

6. Фармацевтическая композиция, содержащая противовирусное эффективное количество одного или более соединений по п.2, совместно с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, пригодная для лечения ВИЧ-инфекции, дополнительно содержащая противовирусное эффективное количество вещества для лечения СПИД, выбранного из группы, состоящей из (а) противовирусного вещества для лечения СПИД, (b) противоинфекционного вещества, (с) иммуномодулятора и (d) другого ингибитора входа ВИЧ.

8. Способ лечения млекопитающего, инфицированного вирусом ВИЧ, включающий введение указанному млекопитающему противовирусного эффективного количества соединения по п.2 и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей или разбавителей.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

2. Соединение, включая его фармацевтически приемлемые соли, выбранное из группы:

Евразийское (ii) 027371 d3) Bl
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201591406
(22) Дата подачи заявки
2014.02.04
(51) Int. Cl.
C07J 63/00 (2006.01) A61K 31/56 (2006.01) A61K31/18 (2006.01)
(54)
C-19 МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ТРИТЕРПЕНОИДЫ С ИНГИБИТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ СОЗРЕВАНИЯ ВИЧ
(31) (32) (33) (43)
(86) (87)
61/761,403
2013.02.06
2015.12.30
PCT/US2014/014647 WO 2014/123889 2014.08.14 (71)(73) Заявитель и патентовладелец:
БРИСТОЛ-МАЙЕРС СКВИББ КОМПАНИ (US)
(72) Изобретатель:
Свидорски Джейкоб, Венаблес Брайан Ли, Лиу Чжэн, Син Ни, Минвелл Николас А., Рэгуэйро-Рэн Алисия (US)
(74) Представитель:
Лыу Т.Н., Угрюмов В.М., Дементьев В.Н., Глухарёва А.О., Карпенко О.Ю., Клюкин В.А., Строкова О.В., Захарова Н.С., Христофоров А.А. (RU)
(56) WO-A1-2012106190 WO-A1-2012106188 WO-A1-2011153319 WO-A1-2011153315 EP-A1-0542622
EVERS MICHEL ET AL.: "Betulinic Acid Derivatives: A New Class of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Specific Inhibitors with a New Mode of Action", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 39, no. 5, 1 January 1996 (1996-01-01), pages 1056-1068, XP002184895, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/JM950670T, page 1061; tables 1, 2; compounds 16e-g, 17b, 19c, 19c,
13b, 13c
(57) Описаны соединения, имеющие лекарственные и биоактивные свойства, их фармацевтические композиции и способы применения. В частности, C-19 модифицированные тритерпеноиды, которые обладают уникальной противовирусной активностью, описаны в качестве ингибиторов созревания ВИЧ, которые представлены соединениями формул I и II
Эти соединения являются пригодными для лечения ВИЧ и СПИД.
Перекрестная ссылка на родственную заявку
Данная заявка на патент испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США № 61/761403, поданной 6 февраля 2013 г., которая включена в настоящую заявку посредством ссылки.
Область техники
Настоящее изобретение относится к новым соединениям, пригодным против ВИЧ, и, в частности, к соединениям, полученным из бетулиновой кислоты и других структурно родственных соединений, которые являются пригодными в качестве ингибиторов созревания ВИЧ, и к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, а также к способам их получения.
Уровень техники
ВИЧ-1 (вирус иммунодефицита человека 1 типа) инфекция остается одной из главных медицинских проблем, принимая во внимание, что, по оценкам, к концу 2010 г. во всем мире количество инфицированных составляло 45-50 млн человек. Число случаев ВИЧ и СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) резко возросло. В 2005 году было зарегистрировано около 5,0 млн новых инфекций, и 3,1 млн человек умерли от СПИДа. Имеющиеся в настоящее время лекарственные средства для лечения ВИЧ-инфекции включают нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (RT) или утвержденные композиции для монотерапии: зидовудин (или AZT, или RETROVIR(r)), диданозин (или VtDEX(r)), ставудин (или ZERIT(r)), ламивудин (или 3TC или EPIVIR(r)), зальцитабин (или DDC, или HTVD(r)), абакавир сукцинат (или ZIAGEN(r)), тенофовира дизопроксилфумарат соль (или VIREAD(r)), эмтрицитабин (или FTC - EMTRIVA(r)), КОМБИВИР(r) (содержит-3TC плюс AZT), TRTZTVTR(r) (содержит абакавир, ламивудин и зидовудин), EP-ZICOM(r) (содержит абакавир и ламивудин), TRUVADA(r) (содержит VIREAD(r) и EMTRIVA(r)); ненуклео-зидные ингибиторы обратной транскриптазы, невирапин (или VIRAMUNE(r)), делавирдин (или RESCRIP-TOR(r)) и эфавиренз (или SUSTIVA(r)), ATRIPLA(r) (TRUVADA(r) + SUSTIVA(r)) и этравирин, и пептидоми-метические ингибиторы протеазы или утвержденные композиции: саквинавир, индинавир, ритонавир, нелфи-навир, ампренавир, лопинавир, KALETRA(r) (лопинавир и ритонавир), дарунавир, атазанавир (REYATAZ(r)) и типранавир (APTIVUS(r)) и кобицистат, и ингибиторы интегразы, такие как ралтегравир (ISENTRESS(r)), и ингибиторы входа, такие как энфувиртид (T-20) (FUZEON(r)) и маравирок (SELZENTRY(r)).
Каждое из этих лекарственных средств может лишь временно сдерживать репликацию вируса, если используется в монотерапии. Однако при применении в комбинации эти лекарственные средства имеют огромное влияние на вирусемию и прогрессирование заболевания. В действительности, значительные снижения смертности среди пациентов, больных СПИДом, недавно были документированы как следствие широкого применения комбинированной терапии. Однако, несмотря на эти впечатляющие результаты, для 30-50% пациентов комбинированная лекарственная терапия может в конечном итоге не дать результатов. Недостаточная действенность лекарственного средства, несовместимость, ограниченное проникновение в ткани и определенные лекарственные ограничения в пределах определенных типов клеток (например, большинство аналогов нуклеозидов не могут быть фосфорилированы в дремлющих клетках) могут быть причиной неполного подавления поддающихся лечению вирусов. Кроме того, высокая скорость репликации и циркуляции ВИЧ-1 в сочетании с частым включением мутаций приводит к появлению лекарственно-устойчивых вариантов, и при неоптимальных концентрациях лекарственных средств наблюдаются терапевтические неудачи. Таким образом, новые лекарственные средства против ВИЧ, представляющие различные формы противодействия и благоприятную фармакокинетику, а также профили безопасности, являются необходимыми для обеспечения новых возможностей лечения. Улучшенные ингибиторы слияния ВИЧ и антагонисты корецепторов входа ВИЧ представляют собой два примера новых классов анти-ВИЧ агентов, которые также изучаются рядом исследователей. Ингибиторы прикрепления ВИЧ являются другим подклассом противовирусных соединений, которые связываются с поверхностным гликопротеином ВИЧ gp120, и препятствуют взаимодействию между поверхностным белком gp120 и рецептором CD4 клетки хозяина. Таким образом, они препятствуют прикреплению ВИЧ к CD4 Т-клеткам человека, и блокируют репликацию ВИЧ на первой стадии жизненного цикла ВИЧ. Свойства ингибиторов прикрепления ВИЧ были улучшены с целью получения соединений с максимальной полезностью и эффективностью в качестве противовирусных препаратов. В частности, в патентах США US 7354924 и US 7745625 демонстрируются ингибиторы прикрепления ВИЧ.
Другим перспективным классом соединений для лечения ВИЧ-инфекции являются соединения, называемые ингибиторами созревания ВИЧ. Созревание является последней из 10 или более стадий репликации ВИЧ или жизненного цикла ВИЧ, в которых ВИЧ становится инфекционным после нескольких стадий расщепления ВИЧ, опосредованных протеазой, в GAG белок, который в конечном итоге приводит к высвобождению капсидного (СА) белка. Ингибиторы созревания препятствуют правильной сборке капсида ВИЧ и созреванию, образованию защитной наружной оболочки, или выходу из клеток человека. Вместо этого образуются неинфекционные вирусы, предотвращая последующие циклы ВИЧ-инфекции.
Некоторые производные бетулиновой кислоты, как уже показано в настоящее время, обладают мощной анти-ВИЧ активностью как ингибиторы созревания ВИЧ. Например, в патенте США US 7365221 раскрываются моноацилированный бетулин и производные дигидробетулина, а также их использование в качестве анти-ВИЧ реагентов. Как отмечается в '221 ссылке, этерификация бетулиновой
кислоты (1) с некоторыми замещенными ацильными группами, такими как группы 3',3'-диметилглутарил и 3',3'-диметилсукцинил, приводит к получению производных, обладающих повышенной активностью (Kashiwada Y., et al., J. Med. Chem. 39:1016-1017 (1996)). Ацилированная бетулиновая кислота и производные дигидробетулиновой кислоты, которые являются потенциальными анти-ВИЧ реагентами, также описаны в патенте США US No. 5679828. Этерификация гидроксильных 3 углеродных атомов бетулина с янтарной кислотой также дает соединение, способное ингибировать ВИЧ-1 активность (Pokrovskii, A. G., et al., Khimiya у Interesakh Ustoichivogo Razvitiya, vol. 9, No. 3, pp. 485-491 (2001)). Другие ссылки на использование для лечения ВИЧ-инфекции соединений, полученных из бетулиновой кислоты, включают патенты США US 2005/0239748 и US 2008/0207573, а также WO 2006/053255, WO 2009/100532 и WO 2011/007230.
Одно соединение, ингибирующее созревание ВИЧ, которое находится в разработке, было идентифицировано как бевиримат (Bevirimat) или PA-457, с химической формулой C36H56O6 и обозначением по номенклатуре IUPAC 3р-(3-карбокси-3-метилбутаноилокси) луп-20 (29)-ен28-оевая кислота.
В настоящем документе также делается ссылка на предварительные заявки Bristol-Myers Squibb, озаглавленные "Модифицированные С-3 производные бетулиновой кислоты в качестве ингибиторов созревания ВИЧ" USSN 13/151,706, поданную 2 июня 2011 г. (в настоящее время US 2012-0142707) и "С-28 амиды модифицированных производных С-3 бетулиновой кислоты в качестве ингибиторов созревания ВИЧ" USSN 13/151,722, поданную 2 июня 2011 г. (в настоящее время US 2012-0142653). Также делается ссылка на предварительную заявку, озаглавленную "С-28 Амины С-3 модифицированных производных бетулиновой кислоты в качестве ингибиторов созревания ВИЧ" USSN 13/359,680, поданную 27 января 2012 г. (в настоящее время U.S. 2013-0029954). Дополнительно делается ссылка на предварительную заявку, озаглавленную "С-17 и С-3 модифицированные тритерпеноиды с ингибиторной активностью созревания ВИЧ" USSN 13/359,727, поданную 27 января 2012 г. (в настоящее время U.S. 2013-0035318), и на предварительную заявку, озаглавленную "С-17 бициклические амины тритерпеноидов с ингибиторной активностью созревания ВИЧ", USSN 13/799,479, поданную 13 марта 2013 (в настоящее время U.S. 20130296554).
То, что сейчас является необходимым в данной области, это создание новых соединений, которые являются пригодными в качестве ингибиторов созревания ВИЧ, а также новых фармацевтических композиций, содержащих эти соединения.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к нижеприведенным соединениям формул I и II, включая их фармацевтически приемлемые соли, их фармацевтические композиции и их применение для пациентов, страдающих или восприимчивых к вирусу, такому как ВИЧ. Соединения формул I и II представляют собой эффективные противовирусные вещества, в частности, в качестве ингибиторов ВИЧ. Они пригодны для лечения ВИЧ-инфекции и СПИДа.
Один вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению, включая его фармацевтически приемлемые соли, которое выбрано из группы:
соединение формулы I
и соединение формулы II
Формула II ;
где X выбран из группы, состоящей из фенила, гетероарильного кольца, C4-8 циклоалкила, C4-8 цик-лоалкенила, C4-9 спироциклоалкила, C4-9 спироциклоалкенила, C4-8 оксациклоалкила, C4-8 диоксациклоал-кила, C6-8 оксациклоалкенила, C6-8 диоксациклоалкенила, C6 циклодиалкенила, C6 оксациклодиалкенила, C6-9 оксаспироциклоалкила и C6-9 оксаспироциклоалкенильного кольца;
и, кроме того, где X является замещенным А, где А представляет собой по меньшей мере один член, выбранный из группы, состоящей из -H, -гало, -гидроксила, -C1-6 алкила, -C1-6 алкокси, -C1-6 алкил-Qb -алкилзамещенного C1-6 алкил-Qb -CN, -CF2Q1, -NR2R2, -COOR2 и -CONR2R2;
где Q1 выбран из группы, состоящей из арила, гетероарила, замещенного гетероарила, - OR2, -COOR3, -NR2R2, -SO2R7, -CONHSO2R3 и -CONHSO2NR2R2;
Y выбран из группы, состоящей из -COOR2, -C(O)NR2SO2R3 -C(O)NHSO2NR2R2, -NR2SO2R2,
-SO2NR2R2, -С3-6 циклоалкил-COOR2, -C2-6 алкенил-COOR^ -C2-6 алкинил-COOR2, -C1-6 алкил-COOR2, -алкилзамещенного C1-6 алкила, -COOR2, CF2-COOR2, -NHC(O)(CH2)n-COOR2, -SO2NR2C(O)R2, -тетразола и -CONHOH, где n = 1-6; Ri выбран из группы
W отсутствует или представляет собой -CH2 или -CO;
Z выбран из группы, состоящей из -NR28R29, -OR30, -COOR2, -CONR18R19, F, Cl, Br и I; U выбран из группы, состоящей из -NR28R29, -OR30, -COOR2, -CONR18R19, F, Cl, Br, I, арила и гете-роарила;
R2 выбран из группы, состоящей из -H, бензила, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила и -арилзамещенного C1-6 алкила;
R3 представляет собой бензил, -C1-6 алкил или -алкилзамещенный C1-6 алкил;
R4 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -С1-6 алкил-C(OR3)2-C3-6 циклоалкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6 алкил-C3-6 циклоалкила, -C1-6 алкил-Q^ -C1-6 алкил-C3-6 циклоалкил-Q2, арила, гетероарила, замещенного гетероарила, -COR6, -COCOR6, -S02R7, -S02NR2R2,
N N I I COOR2 и R2
где Q2 выбран из группы, состоящей из гетероарила, замещенного гетероарила, F, Cl, Br, I, -CF3, -OR2, -COOR2, -NR8R9, -CONR10R11 и -SO2R7;
R5 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C3-6 циклоалкила, -C1-6 алкилзамещенного алкила, -C1-6 алкил-NR8R9, -COR6, -COCOR6, -SO2R7 и -SO2NR2R2;
при условии, что R4 или R5 не могут быть -COR6 или -COCOR6, когда W представляет собой CO;
при дополнительном условии, что только один из R4 или R5 может быть выбран из группы, состоящей из -COR6, -COCOR6,-SO2R7 и -SO2NR2R2;
или когда W отсутствует или представляет собой СН2, тогда R4 и R5 могут быть взяты совместно с
соседним N с образованием v ;
R6 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C1-6 алкилзамещенного алкила, -C3-6 циклоалкила, -C3-6 замещенного циклоалкил-Q3, -C1-6 алкил-Q3, -C1-6 алкилзамещенного алкил-Q3,-C3-6 циклоалкил-Q3, арил-Q3, -NR13R14 и -OR15;
где Q3 выбран из группы, состоящей из арила, гетероарила, замещенного гетероарила, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3 и -CONHSO2NR2R2;
R7 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C3-6 циклоалкила, -CF3, арила и гетероарила;
R8 и R9 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, арила, гетероарила, замещенного арила, замещенного гетероарила и -C1-6 алкил-Q^ R8 также может представлять собой -COOR3; R8 и R9 также могут быть независимо выбраны из группы
^S02Me
" х> °\
или R8 и R9 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы
V выбран из группы, состоящей из -C,R24R25, -SO2, -О и -NR12;
М выбран из группы, состоящей из -C,HR24R25, -NR26R27, -SO2R7, -SO2NR3R3 и -ОН;
Rio и Rn независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -С1_6алкила, -Ci_6 замещенного алкила и -
C3-6 циклоалкила, или R10 и R11 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, такого как
R12 выбран из группы, состоящей из -^^алкала, -C1-6 алкил-ОН; -^^алкала, -C1-6 замещенного алкила, -C3-6циклоалкила, -COR7, -COONR18R19, -SOR7 и -SONR20R21;
Ri3 и R14 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -Ci_6 алкила, -С3.6 циклоалкила, -Ci_6 за-
R15 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C3-6 циклоалкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6-алкил-Qzb -C1-6алкил-C3-6циклоалкил-Q4 и -C1-6 замещенного алкил-Qzb
Q4 выбран из группы, состоящей из гетероарила, замещенного гетероарила, -NR2R2, -CONR2R2,
-COOR2, -OR2 и -SO2R3;
R16 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -NR2R2 и -COOR3; R11 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -COOR3 и арила;
R18 и R19 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила и -C1-6 циклоалкила;
R18 также может представлять собой -COOR3;
или R18 и R19 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы
R20 и R21 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6 алкил-Q^ -C1-6 циклоалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, Q5 выбран из группы, состоящей из галогена и SO2R3;
R24 и R25 выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, -SO2R3,
-SO2NR2R2 или -ОН, -NR2R2, -NR2SO2R3, -NR2COR3 и -NR2CONR2R2;
при условии, что только один из R24 и R25 может быть выбран из группы, состоящей из -ОН, -NR2R2,
-NR2SO2R3, -NR2COR3 и -NR2CONR2R2;
R26 и R27 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, -C1-3 алкиларила, C1-3алкилгетероарила, -CO2R2 и -SO2R7;
при условии, что только один из R26 и R27 может быть выбран из группы, состоящей из -CO2R2 или
-SO2R7;
R28 и R29 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 ал-
R30 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, - C3-6 циклоалкила и -C1-6алкил-Q6;
где Q6 выбран из группы, состоящей из -H, -OR2, -COOR2, -COCOOR2, -NR31R32;
R31 и R32 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6 замещенного алкил-OR2 и -COR3, или R31 и R32 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы
R33 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила и -C1-6 замещенного алкил-Q^
где Q7 выбран из группы, состоящей из -COOR2 и -COONR2R2.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения предлагается способ лечения млекопитающих, инфицированных вирусом, особенно если указанный вирус представляет собой ВИЧ, включающий введение указанному млекопитающему эффективного количества противовирусного соединения, которое выбрано из группы соединений вышеприведенных формул I и II, и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей или разбавителей. Необязательно, соединения формул I и/или II могут быть введены в комбинации с эффективным количеством другого противовирусного средства для лечения СПИДа, выбранного из группы, состоящей из: (а) противовирусного средства против СПИДа, (b) противоинфекционного средства; (с) иммуномодулятора и (d) других ингибиторов входа
ВИЧ.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество противовирусного соединения, которое выбрано из группы соединений формул I и II и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей и разбавителей, и, необязательно, в сочетании с эффективным количеством противовирусного средства для лечения СПИДа, выбранного из группы, состоящей из: (а) противовирусного средства против СПИДа, (b) противоинфекционного средства; (с) иммуномодулятора и (d) других ингибиторов входа
ВИЧ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения в настоящем документе предлагается один или более способов получения соединений формул I и II. Также в настоящем документе предлагаются промежуточные соединения, пригодные для приготовления соединений формул I и II, указанных
здесь.
Настоящее изобретение относится к этим, а также другим важным концевым группам, описанным ниже.
Подробное описание изобретения
Поскольку соединения по настоящему изобретению могут иметь асимметричные центры и, следовательно, встречаются в виде смесей диастереомеров и энантиомеров, настоящее изобретение включает отдельные диастереоизомерные и энантиомерные формы соединений формул I и II в дополнение к их смесям.
Определения.
Если другое не сформулировано конкретно в каком-либо месте в этой заявке, то один или более из следующих терминов могут быть использованы в настоящем документе и будут иметь следующие значения:
"H" относится к водороду, в том числе к его изотопам, таким как дейтерий. Термин "C1-6 алкил", используемый здесь и в формуле изобретения (если не указано иное) означает алкильные группы с прямой или разветвленной цепью, такие как метил-, этил-, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, амил, гексил и подобные. "C1-C4 фторалкил" относится к F-замещенному С1-С4 алкилу, в котором по меньшей мере один атом H замещен атомом F, и каждый атом H может быть независимо замещен ато
мом F;
"Галоген" относится к хлору, брому, йоду или фтору.
"Арил" или "Ar" группа относится ко всем моноциклическим или полициклическим конденсированным кольцевым (т.е. к кольцам, которые разделяют смежные пары атомов углерода) группам, имеющим полностью сопряженную пи-электронную систему. Примеры, без ограничения, арильных групп представляют собой фенил, нафталенил и антраценил. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной. В случае замещения, замещенная группа (группы), предпочтительно одна или более выбраны из алкила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероалицикло, гидрокси, алкокси, арилокси, гете-роарилокси, гетероалициклокси, тиогидрокси, тиоарилокси, тиогетероарилокси, тиогетероалициклокси, циано, галогена, нитро, карбонила, O-карбамила, N-карбамила, C-амидо, N-амидо, C-карбокси, O-карбокси, сульфинила, сульфонила, сульфонамидо, тригалометил, уреидо, амино и -NRxRy, где Rx и Ry независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, арила, карбонила, C-карбокси, сульфонила, тригалометила, и, в сочетании, пяти- или шестичленного гетероалициклического кольца. Используемый здесь термин "гетероарильная" группа относится к моноциклической или конденсированной кольцевой (т.е. кольцам, которые разделяют пары соседних атомов) группе, имеющей в кольце (кольцах) один или более атомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы и, кроме того, имеющей полностью сопряженную пи-электронную систему. Если не указано иное, то гете-роарильная группа может быть присоединена или к атому углерода, или азота в пределах гетероарильной группы. Следует отметить, что термин гетероарил, как предполагается, охватывает N-оксид исходного гетероарила, если такой N-оксид является химически возможным, как известно в данной области. Примеры, без ограничения, гетероарильных групп представляют собой фурил, тиенил, бензотиенил, тиазо-лил, имидазолил, оксазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, бензотиазолил, триазолил, тетразолил, изокса-золил, изотиазолил, пирролил, пиранил, тетрагидропиранил, пиразолил, пиридил, пиримидинил, хиноли-нил, изохинолинил, пуринил, карбазолил, бензоксазолил, бензимидазолил, индолил, изоиндолил, пира-зинил, диазинил, пиразин, триазинил, тетразинил и тетразолил. В случае замещения, замещенная груп-па(ы), предпочтительно одна или более, выбраны из алкила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероали-цикло, гидрокси, алкокси, арилокси, гетероарилокси, гетероалициклокси, тиоалкокси, тиогидрокси, тио-арилокси, тиогетероарилокси, тиогетероалициклокси, циано, галогена, нитро, карбонила, O-карбамила, N-карбамила, C-амидо, N-амидо, C-карбокси, O-карбокси, сульфинила, сульфонила, сульфонамидо, три-галометила, уреидо, амино и -NRxRy, где Rx и Ry такие, как определены выше.
Используемый здесь термин "гетероалициклическая группа" относится к моноциклической или конденсированной кольцевой группе, имеющей в кольце (кольцах) один или несколько атомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы. Кольца выбраны из тех, которые обеспечивают устойчивое распределение связей, и, как предполагается, не включают системы, которые не могли бы существовать. Кольца также могут иметь одну или несколько двойных связей. Однако кольца не имеют полностью сопряженной пи-электронной системы. Примеры, без ограничения, гетероалициклических групп представляют собой азетидинил, пиперидил, пиперазинил, имидазолинил тиазолидинил, 3-пирролидин-1-ил, тиоморфолинил и тетрагидропиранил. В случае замещения, замещенная группа, предпочтительно, одна или несколько, выбраны из алкила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероалицикло, гидрокси, алкокси, арилокси, гетероарилокси, гетероалициклокси, тиогидрокси, тиоалкокси, тиоарилок-си, тиогетероарилокси, тиогетероалициклокси, циано, галогена, нитро, карбонила, тиокарбонила, O-карбамила, N-карбамила, O-тиокарбамила, N-тиокарбамила, C-амидо, C-тиоамидо, N-амидо, C-карбокси, O-карбокси, сульфинила, сульфонила, сульфонамидо, тригалометансульфонамидо, тригалометансульфо-нила, силила, гуанила, гуанидино, уреидо, фосфонила, амино и -NRxRy, где Rx и Ry такие, как определены выше. Группа "алкил" относится к насыщенному алифатическому углеводороду, включая группы с прямыми и разветвленными цепями. Предпочтительно, алкильная группа имеет от 1 до 20 атомов углерода (когда здесь устанавливается числовой диапазон, например, "1-20", это означает, что группа, в данном случае алкильная группа, может содержать 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода и т.д. вплоть до 20 атомов углерода). Более предпочтительно она представляет собой алкил среднего размера, имеющий от 1 до 10 атомов углерода. Наиболее предпочтительно, чтобы это был низший алкил, имеющий от 1 до 4 атомов углерода. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В случае замещения, замещающая группа(ы) представляет собой предпочтительно одну или несколько групп, отдельно выбранных из тригалоалкила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероалицикло, гидрокси, алкок-си, арилокси, гетероарилокси, гетероалициклокси, тиогидрокси, тиоалкокси, тиоарилокси, тиогетероари-локси, тиогетероалициклокси, циано, гало, нитро, карбонила, тиокарбонила, O-карбамила, N-карбамила, O-тиокарбамила, N-тиокарбамила, C-амидо, C-тиоамидо, N-амидо, C-карбокси, О-карбокси, сульфинила, сульфонила, сульфонамидо, тригалометансульфонамидо, тригалометансульфонила, и, в сочетании, пяти-или шестичленного гетероалициклического кольца.
Группа "циклоалкил" относится к полностью углеродной моноциклической или конденсированной кольцевой (т.е. кольцам, которые делят смежную пару атомов углерода) группе, где одно или несколько колец не имеют полностью сопряженной пи-электронной системы. Примерами, без ограничения, "цикло-алкильной" группы являются циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклопентен, циклогексан, цикло
гексен, циклогептан, циклогептен и адамантан. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В случае замещения, замещающая группа(ы) представляет собой предпочтительно одну или несколько отдельно выбранных из алкила, арила, гетероарила, гетероалицикло, гидрокси, алкокси, ари-локси, гетероарилокси, гетероалициклокси, тиогидрокси, тиоалкокси, тиоарилокси, тиогетероарилокси, тиогетероалициклокси, циано, гало, нитро, карбонила, тиокарбонила, O-карбамила, N-карбамила, O-тиокарбамила, N-тиокарбамила, C-амидо, C-тиоамидо, N-амидо, C-карбокси, O-карбокси, сульфинила, сульфонила, сульфонамидо, тригалометансульфонамидо, тригалометансульфонила, силила, амидино, гуанидино, уреидо, фосфонила, амино и -NRxRy, где Rx и Ry такие, как определены выше.
Группа "алкенил" относится к алкильной группе, как здесь определено, имеющей по меньшей мере два атома углерода и по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь.
Группа "алкинил" относится к алкильной группе, как здесь определено, имеющей по меньшей мере два атома углерода и по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь.
Группа "гидрокси" относится к -ОН группе.
Группа "алкокси" относится как к -O-алкильной, так и к -O-циклоалкильной группе, как здесь определено.
Группа "арилокси" относится как к -O-арильной, так и к -O-гетероциклоалкильной группе, как здесь определено.
Группа "гетероарилокси" относится к гетероарил-O- группе с гетероарилом, как здесь определено. Группа "гетероалициклокси" относится к гетероалицикло-O- группе с гетероалицикло, как здесь определено.
Группа "тиогидрокси" относится к -SH группе.
Группа "тиоалкокси" относится как к S-алкильной, так и к -S-циклоалкильной группе, как здесь определено.
Группа "тиоарилокси" относится как к S-арильной, так и к -S-гетероарильной группе, как здесь определено.
Группа "тиогетероарилокси" относится к гетероарил-S- группе с гетероарилом, как здесь определено.
Группа "тиогетероалициклокси" относится к гетероалицикло-S- группе с гетероалицикло, как здесь определено.
Группа "карбонил" относится к -C(=O)-R" группе, где R" выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, арила, гетероарила (связанного посредством углеродного кольца) и гетероалициклической группы (связанной посредством углеродного кольца), как каждый определен в настоящем документе.
Группа "альдегид" относится к карбонильной группе, где R" представляет собой водород.
Группа "тиокарбонил" относится к -C(=S)-R" группе, с R" как здесь определено.
Группа "кето" относится к -СС(=О)С- группе, в которой углерод на одной, или на обеих сторонах С=О может быть алкилом, циклоалкилом, арилом или углеродом гетероарильной или гетероалицикличе-ской группы.
Группа "тригалометанкарбонил" относится к Z3CC(=О)- группе, в которой указанный Z является галогеном.
Группа "С-карбокси" относится к -C(=O)O-R", в которой R", как здесь определено. Группа "О-карбокси" относится к R"C(-O)O- группе, в которой R", как здесь определено. Группа "карбоновой кислоты" относится к C-карбоксигруппе, в которой R" представляет собой водород.
Группа "тригалометил" относится к -CZ3, группе, в которой Z представляет собой группу галогена, как здесь определено.
Группа "тригалометансульфонил" относится к Z3CS(=O)2- группам, в которых Z такой, как определен выше.
Группа "тригалометансульфонамидо" относится к Z3CS(=O)2NRx- группе в которой Z такой, как определен выше, и Rx представляет собой H или (C1-6^CCM.
Группа "сульфинил" относится к -S(=O)-R" группе, в которой R" представляет собой (C1-6)алкил.
Группа "сульфонил" относится к -S(=O)2R" группе, в которой R" представляет собой (C1-6^COUI.
Группа "S-сульфонамидо" относится к -S(=O)2NRXRY, в которой RX и RY независимо представляют собой H или (C1-6^COUI.
Группа "N-сульфонамидо" относится к R"S(=O)2NRx- группе, в которой Rx представляет собой H или (C1-6)алкил.
Группа "О-карбамил" относится к -OC(=O)NRxRy группе, в которой RX и RY независимо представляют собой H или (C1-6^COUI.
Группа "N-карбамил" относится к RxOC(=O)NRy группе, в которой RX и RY независимо представляют собой H или (C1-6^COUI.
Группа "О-тиокарбамил" относится к -OC(=S)NRxRy группе, в которой RX и RY независимо представляют собой H или ^^алюш.
Группа "N-тиокарбамил" относится к RxOC(=S)NRy- группе, в которой Rx и Ry независимо представляют собой H или (C1-6^KIUI.
Группа "амино" относится к -NH2 группе.
Группа "С-амидо" относится к -C(=O)NRxRy группе, в которой Rx и Ry независимо представляют собой H или (С1-6)алкил.
Группа "С-тиоамидо" относится к -C(=S)NRxRy группе, в которой Rx и Ry независимо представляют собой H или (C1-6^KUI.
Группа "N-амидо" относится к RxC(=O)NRy- группе, в которой Rx и Ry независимо представляют собой H или (С1-6)алкил.
Группа "уреидо" относится к -NRxC(=O)NRyRy2 группе, в которой Rx, Ry и Ry2 независимо представляют собой H или (C1-6^CCIUI.
Группа "гуанидино" относится к -RxNC(=N)NRyRy2 группе, в которой Rx, Ry и Ry2 независимо представляют собой H или (C1-6^KIUI.
Группа "амидино" относится к RxRyNC(=N)-группе, в которой Rx и Ry независимо представляют собой H или (С1-6)алкил.
Группа "циано" относится к -CN группе.
Группа "силил" относится к -Si(R")3, в которой R" представляет собой (C1-6^ccmi или фенил. Группа "фосфонил" относится к P(=O)(ORx)2 в которой Rx представляет собой (C1-6^KUI. Группа "гидразино" относится к -NRxNRyRy2 группе, в которой Rx, Ry и Ry2 независимо представляют собой H или (С1-6)алкил.
Группа "циклический N-лактам с 4-, 5- или 6-членным кольцом" относится к группе
Любые две смежные R группы могут объединяться с образованием дополнительного арильного, циклоалкильного, гетероарильного или гетероциклического кольца, конденсированного с кольцом, изначально несущим эти R группы.
Как известно в данной области, атомы азота в гетероарильных системах могут "принимать участие в гетероарильной кольцевой двойной связи", и это относится к образованию двойных связей в двух тау-томерных структурах, которые содержат пятичленное кольцо гетероарильной группы. Это определяет возможность замещения атомов азота, как хорошо понимали химики в данной области. Описание настоящего изобретения и формула изобретения основаны на известных общих принципах образования химической связи. Понятно, что формула изобретения не охватывает структуры, которые, как известно, являются нестабильными или не могут существовать, как следует из литературы.
Фармацевтически приемлемые соли и пролекарства соединений, описанных здесь, находятся в пределах объема изобретения. Термин "фармацевтически приемлемые соли", как используется здесь и в формуле изобретения, предназначен для включения нетоксичной соли присоединения основания. Подходящие соли включают соли, полученные из органических и неорганических кислот, таких как, без ограничения, хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, метансульфоновая кислота, уксусная кислота, винная кислота, молочная кислота, сульфиновая кислота, лимонная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, сорбиновая кислоты, аконитовая кислота, салициловая кислота, фталевая кислота и тому подобные. Термин "фармацевтически приемлемая соль", используемый здесь, также предназначен для включения солей кислотных групп, таких как карбоксилат, с такими противоионами как аммоний, соли щелочных металлов, в частности натрия или калия, соли щелочно-земельных металлов, в частности кальция или магния, и соли с подходящими органическими основаниями, такими как низшие алкиламины (метиламин, этиламин, циклогексиламин и подобные), или с замещенными низшими алкиламинами (например, гидроксилзамещенные алкиламины, такие как диэтаноламин, триэтаноламин или трис(гидроксиметил)аминометан), или с основаниями, такими как пиперидин или морфолин.
Как было установлено выше, соединения по изобретению включают также "пролекарства". Термин "пролекарства", используемый здесь, включает в себя как термин "пролекарственные сложные эфиры", так и термин "пролекарственные простые эфиры". Термин "С-19" и "С-3" относится к определенным позициям тритерпенового ядра, которые пронумерованы в соответствии с правилами IUPAC (позиции изображены ниже по отношению к иллюстративному тритерпену:бетулину):
Как указано выше, настоящее изобретение относится к соединению, включая его фармацевтически
С-17
приемлемые соли, которое выбрано из группы: соединение формулы I
и соединение формулы II
Формула II ;
где X выбран из группы, состоящей из фенила, гетероарильного кольца, C4-8 циклоалкила, C4-8 цик-лоалкенила, C4-9 спироциклоалкила, C4-9 спироциклоалкенила, C4-8 оксациклоалкила, C4-8 диоксациклоал-кила, C6-8 оксациклоалкенила, C6-8 диоксациклоалкенила, C6 циклодиалкенила, C6 оксациклодиалкенила, C6-9 оксаспироциклоалкила и C6-9 оксаспироциклоалкенильного кольца;
и также, где X является замещенным А, где А представляет собой по меньшей мере один член, выбранный из группы, состоящей из -H, -гало, -гидроксила, -C1-6 алкила, -C1-6 алкокси, -C1-6 алкил-Qb -алкилзамещенного C1-6 алкил-Qb -CN, -CF2Q1, -NR2R2, -COOR2 и -CONR2R2;
где Q1 выбран из группы, состоящей из арила, гетероарила, замещенного гетероарила, -OR2, -COOR3, -NR2R2, -SO2R7, -CONHSO2R3 и -CONHSO2NR2R2;
Y выбран из группы, состоящей из -COOR2, -C(O)NR2SO2R3, -C(O)NHSO2NR2R2, -NR2SO2R2, -SO2NR2R2, -С3-6 циклоалкил-COOR^ -С2-6 алкенил-COOR2, -C2-6 алкинил-COO R2, -C1-6 алкил-COOR2, -алкилзамещенного C1-6 алкила, -COOR2, CF2-COOR2, -NHC(O)(CH2)n-COOR2, -SO2NR2C(O)R2, -тетразола и -CONHOH, где n=1-6;
Rq выбран из группы
W отсутствует или представляет собой -CH2 или -CO;
Z выбран из группы, состоящей из -NR28R29, -OR30, -COOR2, -CONR18R19, F, Cl, Br и I; U выбран из группы, состоящей из -NR28R29, -OR30, -COOR2, -CONR18R19, F, Cl, Br, I, арила и гете-роарила;
R2 выбран из группы, состоящей из -H, бензила, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила и -арилзамещенного C1-6 алкила;
R3 представляет собой бензил, -C1-6 алкил или -алкилзамещенный C1-6алкил;
R4 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -С1-6 алкил-C(OR3)2-C3-6 циклоалкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6 алкил-C3-6 циклоалкила, -C1-6 алкил-Q^ -C1-6 алкил-C3-6 циклоалкил-Q2, арила, гетероарила, замещенного гетероарила, -ССЖб, -COCOR6, -S02R7, -S02NR2R2,
где Q2 выбран из группы, состоящей из гетероарила, замещенного гетероарила, F, Cl, Br, I, -CF3, -OR2, -COOR2, -NR8R9, -CONR10R11 и -SO2R7;
R5 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C3-6 циклоалкила, -C1-6 алкилзамещенного алкила, -С1-6алкил-ЖЛ, -COR6, -COCOR6, -SO2R7 и -SO2NR2R2;
при условии, что R4 или R5 не может быть COR6 или COCOR6, когда W представляет собой CO;
при дополнительном условии, что только один из R4 или R5 может быть выбран из группы, состоящей из -COR6, -COCOR6,-SO2R7 и -SO2NR2R2;
или когда W отсутствует или представляет собой CH2, тогда R4 и R5 могут быть взяты совместно с
соседним N с образованием ;
R6 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C1-6 алкилзамещенного алкила, -C3-6 циклоалкила, -C3-6 замещенного циклоалкил-Q3, -C1-6 алкил-Q3, -C1-6 алкилзамещенного алкил-Q3,-C3-6 циклоалкил-Q3, арил-Q3, -NR13R14, и -OR15;
где Q3 выбран из группы, состоящей из арила, гетероарила, замещенного гетероарила, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3 и -CONHSO2NR2R2;
R7 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C3-6 циклоалкила, -CF3, арила и гетероарила;
R8 и R9 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, арила, гетероарила, замещенного арила, замещенного гетероарила, -C1-^Kmi-Q2 и -COOR3: R8 также может представлять собой -COOR3;
S02Me
R8 и R9 также могут быть независимо выбраны из группы
l> 2
или R8 и R9 взяты со-
V выбран из группы, состоящей из -C,R24R25, -SO2, -О и -NR12;
M выбран из группы, состоящей из -C,HR24R25, -NR26R27, -SO2R7, -SO2NR3R3 и -ОН;
Rio и Rn независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -Ci_6 алкила, -Ci_6 замещенного алкила и
-С3.6 циклоалкила, или Ri0 и Rn взяты совместно с соседним N с образованием цикла, такого как ;
R12 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C1-6 алкил-ОН; -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C3-6 циклоалкила, -COR7, -COONR18R19, -SOR7 и -SONR20R21;
Ri3 и R14 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -Ci_6 алкила, -С3.6 циклоалкила, -Ci_6 за-
мещенного алкила, -C1-6 алкил-Q4, -C1-6 алкил-C3-6 циклоалкил-Q4, C1-6 замещенного алкил-Q4 и или Ri3 и Rw взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы:
NMe2
R15 выбран из группы, состоящей из -C1-6 алкила, -C3-6 циклоалкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6алкил-Q4, -C1-6алкил-C3-6циклоалкил-Q4 и -C1-6 замещенного алкил-Qzb
Q4 выбран из группы, состоящей из гетероарила, замещенного гетероарила, -NR2R2, -CONR2R2,
-COOR2, -OR2 и -SO2R3;
R16 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -NR2R2 и -COOR3;
R11 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -COOR3 и арила;
R18 и R19 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -^^замещенного алкила и -C1-6 циклоалкила;
R18 также может представлять собой -COOR3;
или R18 и R19 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы
- N
R20 и R21 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6 алкил-Q^ -C1-6 циклоалкила, арила, замещенного арила, гетероарила и замещенного гетероарила, Q5 выбран из группы, состоящей из галогена и SO2R3;
R24 и R25 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, -SO2R3, -SO2NR2R2 или -ОН, -NR2R2, -NR2SO2R3, -NR2COR3 и -NR2CONR2R2;
при условии, что только один из R24 и R25 может быть выбран из группы, состоящей из -ОН, -NR2R2,
-NR2SO2R3, -NR2COR3 и -NR2CONR2R2;
R26 и R27 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, -C1-3 алкиларила, C1-3алкилгетероарила, -CO2R2 и -SO2R7;
при условии, что только один из R26 и R27 может быть выбран из группы, состоящей из -CO2R2 или
-SO2R7;
R28 и R29 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, - C3-6 циклоалкила, -C1-6 алкил-Q6, -COC1-6 алкил-Q6, -COOR3; -COCF3; R28 также может быть выбран из -COOR3 и -CONR18R19;
или R28 и R29 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы
Г^Ъ* r~ - N ) -NO -N N-R12 - N S4 -N
S?h* • N> iF.
У У6
О R16
¦N/^R" . - N/^TR17 и -N )-S-R7
R30 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -алкилзамещенного C1-6 алкила, - C3-6 циклоалкила и -C1-6 алкил-Q6;
где Q6 выбран из группы, состоящей из -H,-OR2, -COOR2, -COCOOR2 и -NR31R32;
R31 и R32 независимо выбраны из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила, -C1-6 замещенного алкил-OR2 и -COR3, или R31 и R32 взяты совместно с соседним N с образованием цикла, выбранного из группы
и R33 выбран из группы, состоящей из -H, -C1-6 алкила, -C1-6 замещенного алкила и -C1-6 замещенного алкил-Q^ где Q7 выбран из группы, состоящей из -COOR2 и -COONR2R2.
В частности, предпочтительными являются соединения формул I и II, где X представляет собой фенил.
Также предпочтительными являются соединения, где А представляет собой -Н или гало, главным образом, -F.
Также предпочтительными являются соединения, где Y представляет собой -COOR2. Также предпочтительно, что R2 представляет собой -H.
Также предпочтительными являются соединения, включая их фармацевтически приемлемые соли, которые выбраны из группы
Соединения по настоящему изобретению, согласно всем различным вариантам осуществления, описанным выше, могут быть введены перорально, парентерально (включая подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные, внутригрудинные инъекции или вливания), посредством ингаляции или
ректально, и с помощью других средств, в виде композиций в единице дозирования, содержащих нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, наполнители и разбавители, имеющиеся в распоряжении специалистов в данной области. Также могут быть включены одно или более вспомогательных средств.
Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением дополнительно описывается способ лечения и фармацевтическая композиция для лечения вирусных инфекций, таких как ВИЧ-инфекция и СПИД. Лечение включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, фармацевтической композиции, которая содержит противовирусное эффективное количество одного или нескольких соединений формул I и II, вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями. Используемый здесь термин "противовирусное эффективное количество" означает общее количество каждого активного компонента композиции и способ, достаточный, чтобы показать существенное преимущество для пациента, то есть, замедление, улучшение или исцеление острого состояния, характеризующегося торможением ВИЧ-инфекции. Применительно к отдельному активному ингредиенту, вводимому отдельно, термин относится к этому одному ингредиенту. При применении к комбинации термин относится к объединенным количествам активных ингредиентов, которые в результате обеспечивают терапевтический эффект, независимо от того, вводят их в комбинации, последовательно или одновременно. Термины "терапия, лечить, лечение", используемые здесь и в формуле изобретения, означают предупреждение, облегчение или исцеление заболеваний, связанных с ВИЧ-инфекцией. Фармацевтические композиции по изобретению могут быть в форме перорально вводимых суспензий или таблеток, а также назальных спреев, стерильных инъецируемых препаратов, например, стерильных инъецируемых водной или масляной суспензий или суппозиториев. Фармацевтически приемлемые носители, наполнители или разбавители могут быть использованы в фармацевтических композициях, и являются такими, которые используются в области фармацевтических препаратов.
При пероральном введении в виде суспензии эти композиции получают с помощью технических приемов, как правило, известных в области технологии приготовления лекарственных средств, и они могут содержать микрокристаллическую целлюлозу для придания объема, альгиновую кислоту или аль-гинат натрия в качестве суспендирующего вещества, метилцеллюлозу для увеличения вязкости, и подсластители/ароматизаторы, известные в данной области. Как таблетки немедленного высвобождения, эти композиции могут содержать микрокристаллическую целлюлозу, дикальцийфосфат, крахмал, стеарат магния и лактозу и/или другие наполнители, связующие вещества, удешевляющие добавки, разрыхлители, разбавители и смазывающие вещества, известные в данной области.
Инъецируемые растворы или суспензии могут быть приготовлены в соответствии с известными в данной области способами с использованием подходящих нетоксичных, парентерально приемлемых разбавителей или растворителей, таких как маннитол, 1,3-бутандиол, вода, раствор Рингера или изотонический раствор хлорида натрия, или подходящих диспергирующих или смачивающих и суспендирующих веществ, таких как стерильные легкие нелетучие масла, включая синтетические моно- или диглицериды, и жирные кислоты, включая олеиновую кислоту.
Соединения, представленные здесь, могут быть введены человеку перорально в диапазоне доз от около 1 до 100 мг/кг массы тела небольшими дозами, как правило, в течение длительного периода времени, например дней, недель, месяцев или даже лет. Один предпочтительный диапазон доз составляет от около 1 до 10 мг/кг массы тела перорально небольшими дозами. Другой предпочтительный диапазон доз составляет около от около 1 до 20 мг/кг массы тела небольшими дозами. Следует понимать, однако, что конкретный уровень доз и частота введения дозы для каждого конкретного пациента может изменяться и будет зависеть от ряда факторов, включая активность конкретного используемого соединения, метаболическую стабильность и продолжительность действия этого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, режим и время введения, скорость выведения лекарственной комбинации, тяжесть конкретного состояния и пациента, проходящего курс лечения.
Кроме того, в настоящем изобретении описываются комбинации соединений формул I и II, предлагаемых здесь, вместе с одним или более другими веществами, используемыми при лечении СПИДа. Например, соединения по настоящему изобретению можно эффективно вводить или в периоды предъин-фекционные, и/или постконтактные, в сочетании с эффективным количеством противовирусных препаратов против СПИДа, иммуномодуляторов, противомикробных средств или вакцин, таких как показано в следующей неограничивающей таблице:
Противовирусные препараты
Наименование Производитель Показание
лекарственного средства
Альфа-интерферон
Ансамицин LM427
Антитело, которое нейтрализует рН лабильный аберрантный альфа-интерферон
AR177
Бета-фтор-ddA
BMS-234475 (CGP-61755)
CI-1012 Цидофовир
Курдлан сульфат
Цитомегаловирус Иммун глобин
Glaxo Wellcome
Adria Laboratories (Dublin, OH) Erbamont (Stamford, CT)
Advanced Biotherapy Concepts (Rockville, MD)
Aronex Pharm
Nat'l Cancer Institute
Bristol-Myers Squibb/ Novartis
Warner-Lambert Gilead Science
AJI Pharma USA Medlmmune
Саркома Капоши, ВИЧ в комбинаци с Ретровиром
ARC
СПИД, ARC
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
Спид-ассоциированный синдром
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор протеазы) ВИЧ-1 инфекция
ЦМВ ретинит, герпес, папилломавирус
ВИЧ-1 инфекция WVD ретинит
Декстран-сульфат
ddC
Дидеоксицитидин
Ueno Fine Chem. Ind. Ltd. (Osaka, Japan)
Hoffman-La Roche
СПИД, ARC ВИЧ
позитивный
бессимптомный
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
Эфавиренц
(DMP 266, Sustiva(r))
(-)6-хлор-4-(8)-
циклопропилэтинил-
4(8)-трифтор-
Bristol Myers Squibb
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ненуклеозидный RT ингибитор)
Интерферон альфа-пЗ Индинавир
ISIS 2922 KNI-272
Ламивудин, ЗТС
Лобукавир Нелфинавир
Невирапин
Новапрен Пептид Т
Последовательность октапетида
Interferon Sciences
Merck
ISIS Pharmaceuticals Nat'l Cancer Institute
Glaxo Wellcome
Bristol-Myers Squibb
Agouron Pharmaceuticals
Boeheringer Ingleheim
Novaferon Labs, Inc. (Akron, OH)
Peninsula Labs (Belmont, CA)
ARC, СПИД
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC, бессимптомный ВИЧ-положительный, также в комбинации с AZT/ddl/ddC
ЦМВ ретинит
ВИЧ-ассоциированные заболевания
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор обратной транскриптазы); также с AZT
ЦМВ инфекция
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор протеазы)
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор RT) ВИЧ ингибитор
СПИД
Тринатрий фосфоноформат
PNU-140690
Пробукол RBC-CD4
Ритонавир Саквинавир
Ставудин; d4T
Дидегидродеокси-
тимидин
Типранавир
Валацикловир
Astra Pharm. Продукте, Inc.
Pharmacia Upjohn Vyrex
Sheffield Med. Tech (Houston, TX)
Abbott
Hoffmann-LaRoche
Bristol-Myers Squibb
Boehringer Ingelheim
Glaxo Wellcome
ЦМВ ретинит, ВИЧ инфекция, другие ЦМВ инфекции
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор протеазы) ВИЧ инфекция, СПИД
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор протеазы)
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор протеазы)
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
ВИЧ инфекция, СПИД, ARC
(ингибитор протеазы)
Генитальный ВПГ и ЦМВ Инфекции
Ралтегравир
Ингибитор интегразы
GS917/JTK-303
Элвитегравир
Gilead/Japan Tobacco
ВИЧ инфекция СПИД
в стадии разработки
Наименование лекарственного средства
AS-101
Бропиримин
Ацеманнан
CL246J38
FP-21399
Гамма интерферон Гранулоцит
колониестимулирующий фактор макрофагов
Гранулоцит
колониестимулирующий фактор макрофагов
Гранулоцит
колониестимулирующий фактор макрофагов
Иммуномодуляторы
Производитель
Wyeth-Ayerst
Pharmacia Upjohn
Carrington Labs, Inc. (Irving, TX)
Wyeth Lederle Labs
Fuki ImmunoPharm
Genentech
Genetics Institute Sandoz
Hoechst-Roussel Immunex
Schering-Plough
Показание
СПИД
Запущенный СПИД СПИД, ARC
СПИД, саркома Капоши
Blocks HIV слияния с CD4+ клетки
ARC, в комбинации с TNF (фактор некроза опухоли)
СПИД СПИД СПИД,
комбинация с AZT
Кроме того, соединения по изобретению, предложенные здесь, могут применяться в комбинации с ингибиторами входа ВИЧ. Примеры таких ингибиторов входа ВИЧ обсуждаются в DRUGS OF THE FUTURE 1999, 24(12), pp. 1355-1362; CELL, vol. 9, pp. 243-246, Oct. 29, 1999; и DRUG DISCOVERY TODAY, vol. 5, No. 5, May 2000, pp. 183-194 и Inhibitors of the entry of HIV into host cells, Meanwell, Nicholas A.; Kadow, John F. Current Opinion in Drug Discovery & Development (2003), 6(4), 451-461. В частности, соединения могут быть использованы в комбинации с дополнительными ингибиторами, ингибиторами слияния и антагонистами хемокиновых рецепторов, нацеленными либо на CCR5, либо на CXCR4 коре-цептор. Дополнительные ингибиторы ВИЧ также предлагаются в патентах США US 7354924 и US 2005/0209246.
Следует иметь в виду, что объем комбинаций соединений по данному изобретению с противовирусными препаратами, иммуномодуляторами, противоинфекционными средствами, ингибиторами входа ВИЧ или вакцинами против СПИДа не ограничивается списком в Таблице выше, но включает, в принципе, любые комбинации с любой фармацевтической композицией, пригодной для лечения СПИДа.
Предпочтительные комбинации представляют собой одновременное или альтернативное лечение с соединением по настоящему изобретению и ингибитором протеазы ВИЧ и/или ненуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы ВИЧ. Необязательный четвертый компонент в комбинации представляет собой нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ, такой как AZT, 3TC, ddC или ddl. Предпочтительным ингибитором протеазы ВИЧ является REYATAZ(r) (активный ингредиент Атазанавир). Обычно доза от 300 до 600 мг вводится один раз в сутки. Она может вводиться совместно с низкой дозой ритонавира (от 50 до 500 мг). Другой предпочтительный ингибитор протеазы ВИЧ представляет собой КАЛЕТРА(r). Еще одним пригодным ингибитором протеазы ВИЧ является индинавир, который представляет собой сульфатную соль ^(2^)-гидрокси-1-^)-инданил)-2^)-фенилметил-4-^)-гидрокси-5-(1-(4-(3-пиридилметил)-2(S)-N'-(t-бутилкарбоксамидо)пиперазинил))пентанамид этанолята и синтезируется согласно патенту США U.S. 5413999. Индинавир обычно вводится в дозе 800 мг три раза в сутки. Другие предпочтительные ингибиторы протеазы представляют собой нелфинавир и ритонавир. Еще один предпочтительный ингибитор протеазы ВИЧ представляет собой саквинавир, который вводится в дозе 600 или 1200 мг три раза в сутки. Предпочтительные ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ включают эфавиренз. Эти комбинации могут иметь неожиданное влияние на ограничение распространения и степень инфицирования ВИЧ. Предпочтительные комбинации включают следующие: (1) индинавир с эфавирензом и, необязательно, с AZT и/или 3TC и/или ddI и/или DDC; (2) индинавир и любой из AZT и/или ddI, и/или ddC, и/или 3TC, в частности индинавир и AZT и 3TC; (3) ставудин и 3TC и/или зидовудин; (4) тенофовира дизопроксила фумарата соль и эмтрицитабин.
В таких комбинациях соединение по настоящему изобретению и другие активные вещества могут вводиться по отдельности или в сочетании. При этом введение одного элемента может осуществляться до, одновременно или после введения другого вещества (веществ).
Сокращения:
NBS = N-бромсукцинимид TBDMS =трет-бутилдиметилсилан PTFE = политетрафторэтилен
NMO = 4-метилморфолин-^оксид
THF = тетрагидрофуран
TLC = тонкослойная хроматография
DCM = дихлорметан
DCE = дихлорэтан
TFA = трифторуксусная кислота
ЖХ/МС = жидкостная хромато-масс-спектрометрия
Prep = препаративная
HPLC = высокоэффективная жидкостная хроматография
DAST = (диэтиламино)серы трифторид
TEA = триэтиламин
DIPEA = ^^диизопропилэтиламин
HATU = [О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат]
DMAP = диметиламинопиридин
TMS = триметилсилил
ЯМР = ядерно-магнитный резонанс
DPPA = дифенил фосфорил азид
AIBN = азобисизобутиронитрил
TBAF = тетрабутиламмоний фторид
DMF = диметилформамид
TBTU = O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония тетрафторборат мин = минута(ы) ч = час(ы)
насыщ. = насыщенный
TEA = триэтиламин
EtOAc = этилацетат
TFA = трифторуксусная кислота
PCC = пиридиний хлорхромат
TLC = тонкослойная хроматография
Tf2NPh = (трифторметилсульфонил)метансульфонамид
диоксан = 1,4-диоксан
PG = защитная группа
атм = атмосфера(ы)
моль = моль(и)
ммоль= миллимоль(и)
мг = миллиграмм(ы)
мкг = микрограмм(ы)
мкл = микролитр(ы)
мкм = микрометр(ы)
мм = миллиметр(ы)
Примеры
Следующие примеры иллюстрируют типовые синтезы соединений формул I и II, как описано, в общем, выше. Эти примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения раскрытия любым способом. Реагенты и исходные материалы легко доступны любому специалисту в данной области.
Химия.
Типовые способы и определение параметров выбранных примеров:
Если не указано иное, растворители и реагенты использовались непосредственно такими, какие были получены из коммерческих источников, и реакции проводились в атмосфере азота. Флэш-хроматография проводилась на силикагеле марки 60 (размер частиц 0,040-0,063; блок питания EM Science). Спектры 1H ЯМР записывали с помощью спектрометра Bruker DRX-500f при частоте 500 МГц (или Bruker AV 400 МГц, Bruker DPX-300B или Varian Gemini 300 при частоте 300 МГц, как указано). Химические сдвиги были приведены в ppm (миллионных долях) на шкале 5 относительно 5TMS = 0. Следующие внутренние ссылки использовались для остаточных протонов в следующих растворителях: CDCl3 (5н 7.26), CD3OD (5н 3.30), Acetic-d4 (Уксусная кислота d4) (5н 11.6, 2.07), DMSO mix или DMSO-D6_CDCl3 (5н 2.50 и 8.25) (соотношение 75%:25%), и DMSO-D6 (5н 2.50). Для описания множества образцов использовались стандартные сокращения: s (синглет), br. s (уширенный синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), m (мультиплет), b (уширенный), app (кажущийся). Константа связывания (J) измеряется в герцах. Все данные жидкостной хроматографии (ЖХ) были получены на жидкостном хроматографе Shimadzu LC-10AS с использованием детектора SPD-10AV UV-Vis с данными масс-спектроскопии (MS), полученных с использованием Micromass Platform для ЖХ в режиме электрораспыления.
Методики ЖХ/МС.
Методика 1.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 2 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 4 мл/мин Длина волны = 220 нм
Растворитель А = 95% вода, 5% метанол, 10 мМ ацетат аммония Растворитель В = 5% вода, 95% метанол, 10 мМ ацетат аммония Колонка = Xbridge C18 5 мкм 4.6x50 мм Методика 2.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 2 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 4 мл/мин Длина волны = 220 нм
Растворитель А = 95% вода, 5% метанол, 10 мМ ацетат аммония Растворитель В = 5% вода, 95% метанол, 10 мМ ацетат аммония Колонка = Phenomenex Luna C18, 5 мкм, 3.0x50 мм Методика 3.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 2 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 1 мл/мин
Длина волны = 220 нм
Растворитель А = 95% вода, 5% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония Растворитель В = 5% вода, 95% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония Колонка = Phenomenex Luna C18, 3 мкм, 2.0x30 мм Методика 4.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 2 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 1 мл/мин Длина волны = 220 нм
Растворитель А = 95% вода, 5% метанол, 10 мМ ацетат аммония Растворитель В = 5% вода, 95% метанол, 10 мМ ацетат аммония Колонка = Phenomenex Luna C18, 3 мкм, 2.0x30 мм Методика 5.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 2 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 1 мл/мин Длина волны = 220 нм
Растворитель А = 90% вода, 10% метанол, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% метанол, 0,1% TFA Колонка = Phenomenex Luna C18, 3 мкм, 2.0x30 мм Методика 6.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 2 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 1 мл/мин Длина волны = 220 нм
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA
Растворитель В = 10% ацетонитрил, 90% вода, 0,1% TFA
Колонка = Phenomenex Luna C18, 3 мкм, 2,0x30 мм
Методики препаративной ВЭЖХ:
Методика препаративной ВЭЖХ 1.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 25,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 10 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 25 мл/мин
Растворитель А = 5% MeOH - 95% H2O - 10 мМ ацетат аммония
Растворитель В = 95% MeOH - 5% H2O - 10 мМ ацетат аммония
Колонка = XBridge Phenyl 19x 100 мм S5
Методика препаративной ВЭЖХ 2
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 3. Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 15 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 4. Начальная концентрация растворителя В (%) =15,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 5. Начальная концентрация растворителя В (%) =15,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 10 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 6. Начальная концентрация растворителя В (%) =15,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 30 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 7. Начальная концентрация растворителя В (%) =15,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 95% вода, 5% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония
Растворитель В = 5% вода, 95% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония
Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм
Методика препаративной ВЭЖХ 8.
Начальная концентрация растворителя В (%) =15,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 30 мин, удерживание при 100% В в течение 15 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 9. Начальная концентрация растворителя В (%) = 25,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 10 мин, удерживание при
100% В
Растворитель А = 5% MeOH - 95% H2O - 10 мМ ацетат аммония Скорость потока = 25 мл/мин
Растворитель В = 95% MeOH - 5% H2O - 10 мМ ацетат аммония
Колонка = Waters-Sunfire OBD 19x100 мм S5
Методика препаративной ВЭЖХ 10.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 20,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 5 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 11. Начальная концентрация растворителя В (%) = 20,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 30 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0.1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0.1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 12. Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 95% вода, 5% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония
Растворитель В = 5% вода, 95% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония
Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм
Методика препаративной ВЭЖХ 13.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 15 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 95% вода, 5% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония
Растворитель В = 5% вода, 95% ацетонитрил, 10 мМ ацетат аммония
Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм
Методика препаративной ВЭЖХ 14.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 10 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 15. Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters XBridge Phenyl, 5 мкм, 30x 100 мм Методика препаративной ВЭЖХ 16. Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 30 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм Методика препаративной ВЭЖХ 17 Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 30 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 95% вода, 5% MeOH, 10 мМ бикарбонат аммония
Растворитель В = 5% вода, 95% MeOH, 10 мМ бикарбонат аммония
Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм
Методика препаративной ВЭЖХ 18.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 20,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 60 в течение градиента 10 мин, удерживание при 100% В в течение 5 мин
Скорость потока = 20 мл/мин
Растворитель А = вода - 20 мМ ацетат аммония
Растворитель В = 95% ацетонитрил - 5% H2O - 20 мМ ацетат аммония
Колонка = XBridge Phenyl C18 19x200 мм S5
Методика препаративной ВЭЖХ 19.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 0,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 40 мин, удерживание при 100% В в течение 4 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA
Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x150 мм
Методика препаративной ВЭЖХ 20.
Начальная концентрация растворителя В (%) = 30,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 15 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 25 мл/мин
Растворитель А = 5% MeOH - 95% H2O - 10 мМ ацетат аммония
Растворитель В = 95% MeOH - 5% H2O - 10 мМ ацетат аммония
Колонка = XBridge Phenyl 19x 100 мм S5
Методика препаративной ВЭЖХ 21.
Начальная концентрация растворителя В (%) =15,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 90 в течение градиента 20 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 40 мл/мин
Растворитель А = 90% вода - 10% ацетонитрил, 0.1% TFA Растворитель В = 10% вода - 90% ацетонитрил, 0.1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x100 мм Методика препаративной ВЭЖХ 22. Начальная концентрация растворителя В (%) = 25,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 90 в течение градиента 15 мин, удерживание при
100% В
Скорость потока = 40 мл/мин
Растворитель А = 90% вода - 10% ацетонитрил, 0.1% TFA Растворитель В = 10% вода - 90% ацетонитрил, 0.1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x100 мм Методика препаративной ВЭЖХ 23. Начальная концентрация растворителя В (%) = 30,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 20 мин, удерживание при 100% В в течение 10 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0.1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0.1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x100 мм Методика препаративной ВЭЖХ 24. Начальная концентрация растворителя В (%) = 30,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 12 мин, удерживание при 100% В в течение 8 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0.1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0.1% TFA Колонка = Waters Sunfire C18, 5 мкм, 30x100 мм Методика препаративной ВЭЖХ 25 Начальная концентрация растворителя В (%) = 20,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 15 мин, удерживание при 100% В в течение 5 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters XBridge Phenyl, 5 мкм, 30x 100 мм Методика препаративной ВЭЖХ 26. Начальная концентрация растворителя В (%) = 20,
Конечная концентрация растворителя В (%) = 100 в течение градиента 10 мин, удерживание при 100% В в течение 15 мин
Скорость потока =50 мл/мин
Растворитель А = 90% вода, 10% ацетонитрил, 0,1% TFA Растворитель В = 10% вода, 90% ацетонитрил, 0,1% TFA Колонка = Waters XBridge Phenyl, 5 мкм, 30x 100 мм Получение ключевых промежуточных соединений:
Промежуточные соединения 1-4 могут быть получены, как показано на следующей схеме:
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)бензил 9-гидрокси-5a,5b,8,8,11a-пента-метил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)икосагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоксилата.
К суспензии бетулиновой кислоты (12 г, 26.3 ммоль) и карбоната калия (7.26 г, 52.6 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли бензилбромид (3.28 мл, 27.6 ммоль). Смесь нагревали до 60°C в течение 3,5 ч и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество начало выпадать в осадок при охлаждении. Смесь разбавляли водой (200 мл), и образовавшиеся твердые вещества собирали фильтрованием с получением целевого соединения (13.92 г, 25.5 ммоль, выход 97%) в виде белого твердого вещества.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.39-7.28 (m, 5H), 5.16-5.06 (m, 2H), 4.71 (d, J=1.83 Гц, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.17 (ddd, J=11.44, 5.65, 5.49 Гц, 1H), 3.01 (td, J=10.99, 4.88 Гц, 1H), 2.27 (ddd, J=12.36, 3.20, 3.05 Гц, 1H), 2.21-2.13(m, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 1.71 - 0.82 (m,
20H), 0.79 (s, 3H), 0.75 (s, 3H), 0.74 (s, 3H).
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)бензил 5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-оксо-1-(npon-1 -ен-2-ил)икосагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоксилата.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)бензил 9-гидрокси-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)икосагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (7.1 г, 12.98 ммоль) в дихлорметане (100 мл) добавляли PCC (4.20 г, 19.48 ммоль). После перемешивания в течение 5 мин смесь приобрела глубокий малиновый цвет. Смесь дополнительно перемешивали в течение 5.5 ч. Смесь фильтровали через слой целита и силикагеля, который промывали дихлорметаном и затем смесью 1:1 этилацетат:гексаны. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (6.92 г, 12.7 ммоль, выход 98%) в виде белой пены.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.38-7.28 (m, 5H), 5.17-5.06 (m, 2H), 4.72 (d, J=1.83 Гц, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.01 (td, J=10.99, 4.88 Гц, 1H), 2.51-2.43 (m, 1H), 2.42-2.34 (m, 1H), 2.28 (dt, J=12.59, 3.17 Гц, 1H), 2.21 (td, J=12.28, 3.51 Гц, 1H), 1.94-1.82 (m, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 1.73-0.95 (m, 17H), 0.94 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.78 (s, 3H).
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)бензил 5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-9-(трифторметилсульфонилокси)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1 H-циклопента[a]хризен-3 а-карбоксилата.
Промежуточное соединение 1.
Раствор (1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11 aR, 11bR, 13aR, 13bR)бензил 5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-9-оксо-1 -(проп-1-ен-2-ил)икосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (29.0 г, 53.2 ммоль) в THF (200 мл) охлаждали до -78°C. К раствору добавляли KHMDS (0.5 М в толуоле) (213 мл, 106 ммоль). Желтый раствор перемешивали при -78°C в течение 25 мин и добавляли раствор 1,1,1-трифтор-К-фенил-1Ч-(трифторметил)сульфонил метансульфонамида (20.92 г, 58.6 ммоль) в THF (70 мл) и толуоле (30 мл) через канюлю. Раствор перемешивали при -78°C в течение 3 ч. Затем добавляли дополнительный 1.0 г 1,1,1-трифтор-К-фенил-К-(трифторметил)сульфонил метансульфонамида и смесь перемешивали при -78°C. После перемешивания в течение 1 ч смесь быстро охлаждали водой (300 мл), и экстрагировали ее этилацетатом (3x200 мл). Объединенные органические слои высушивали MgSO4. Высушивающее вещество удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (40.0 г, 59.1 ммоль) в виде желтого твердого вещества. Rf продукта = 0.57 путем TLC на силикагеле, 5% EtOAc в гексанах, визуализировано с использованием пятна по Hanessian.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.29-7.41 (m, 5H), 5.54 (dd, J = 6.71, 1.53 Гц, 1H), 5.13-5.18 (m, 1H), 5.05-5.12 (m, 1H), 4.72 (d, J = 1.53 Гц, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.02 (td, J = 10.99, 4.58 Гц, 1H), 2.25-2.31 (m, 1H), 2.22 (td, J = 12.21, 3.36 Гц, 1H), 2.14 (dd, J = 17.09, 6.71 Гц, 1H), 1.81-1.96 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.91-1.77 (m, 17H), 0.88 (s, 3H), 0.77 (s, 3H).
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)бензил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоксилата.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13bR)бензил 5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-9-(трифторметилсульфонилокси)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (6.21 г, 9.18 ммоль) в диоксане (25 мл) добавляли 2-пропанол (25 мл) и воду (15 мл) с последующим добавлением карбоната натрия моногидрата (3.42 г, 27.5 ммоль), 4-метоксикарбонилфенилбороновой кислоты (2.478 г, 13.77 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (0.318 г, 0.275 ммоль). Колбу присоединяли к обратному конденсатору, промывали N2 и нагревали до появления конденсации на протяжении ночи. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (75 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3x75 мл) и промывали рассолом (75 мл). Объединенные органические слои высушивали MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток адсорбировали на силикагеле и очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле, используя градиент 0-20% этилацетата в гексанах. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (4.16 г, 6.28 ммоль, выход 68.4%) в виде белой пены.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.92 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.40-7.29 (m, 5H), 7.19 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.28 (dd, J=6.10, 1.83 Гц, 1H), 5.19-5.07 (m, 2H), 4.73 (d, J=1.83 Гц, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.04 (td, J=10.91, 4.73 Гц, 1H), 2.20-2.32 (m, 2H), 2.09 (dd, J=17.24, 6.26 Гц, 1H), 1.95-1.82 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 1.75-0.87 (m, 17H), 0.82 (s, 3H).
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(метоксикар-бонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1-(проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13^ октадекагидро-1 H-циклопентаИ хризен-3 a-карбоксилата.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (3.82 г, 5.76 ммоль) в дихлорэтане (100 мл) до-
Промежуточное соединение 2.
бавляли триэтиламин (1.285 мл, 9.22 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (1.912 мл, 11.52 ммоль) и ацетат палладия (II) (0.647 г, 2.88 ммоль). Смесь промывали N2 и нагревали до 60°C. Через 2 ч реакцию охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через слой целита и силикагеля для удаления твердых веществ, которые промывали 25% EtOAc в гексанах. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением и обрабатывали уксусной кислотой (25 мл), THF (10 мл) и водой (3 мл). После перемешивания в течение 1 ч образовавшиеся твердые вещества собирали фильтрованием и промывали водой с получением целевого соединения (3.62 г, 5.27 ммоль, выход 91%) в виде белого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.94 (d, J=8.28 Гц, 2H), 7.21 (d, J=8.28 Гц, 2H), 5.30 (dd, J=6.15, 1.63 Гц, 1H), 4.75 (d, J=1.76 Гц, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.92 (s, 4H), 3.08 (td, J=10.92, 4.27 Гц, 1H), 2.352.22 (m, 2H), 2.17-2.06 (m, 1H), 2.02-1.84 (m, 2H), 1.71 (s, 3H), 1.01 (s, 6H), 0.99 (br. s., 3H), 0.98 (s, 9H), 0.94 (s, 6H), 1.78-0.90 (m, 16H), 0.32-0.28 (m, 6H).
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-цикло-пента[а]хризен-3 а-карбоновой кислоты.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(метоксикар-бонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (3.12 г, 4.54 ммоль) в диоксане (25 мл) добавляли TBAF (75 мас.%, в воде) (2.375 г, 6.81 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли 1 н. HCl (25 мл) и водой (5 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x100 мл). Объединенные органические слои высушивали над Na2SO4, фильтровали и частично концентрировали под пониженным давлением до около 10 мл по объему. В частично концентрированную смесь добавляли 1 н. HCl (50 мл). Образовавшиеся твердые вещества собирали фильтрованием и промывали водой с получением целевого соединения (2.58 г, 4.50 ммоль, выход 99%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 571.47 (М-Н)-, 3.60 мин (методика 2).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 9.80 (br. s., 1H), 7.92 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.18 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.32-5.26 (m, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.62 (br. s., 1H), 3.90 (s, 3H), 3.07-2.99 (m, 1H), 2.33-2.21 (m, 2H), 2.10 (dd, J=17.09, 6.10 Гц, 1H), 2.06-1.94 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.01 (br. s., 3H), 1.00 (br. s., 3H), 0.98 (s, 3H), 0.91 (s, 6H), 1.79-0.89 (m, 17H).
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-изоцианато-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-цикло-пента[а]хризен-9-ил)бензоата.
К кашице (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-цик-лопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (10 г, 17.46 ммоль) в 1,4-диоксане (200 мл) добавляли триэтиламин (4.38 мл, 31.4 ммоль) с последующим добавлением дифенилфосфорил азида (5.82 мл, 26.2 ммоль). Полученную в результате белую кашицу нагревали до 100°C. Через 5 ч реакцию оставляли охлаждаться до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc и промывали 1 н. NaOH (2x70 мл). Объединенный водный слой экстагировали EtOAc (2x 150 мл). Объединенный органический слой высушивали над Na2SO4? фильтровали и концентрировали до кашицы (75 мл), которую хранили в холодильнике на протяжении ночи. Кашицу фильтровали, и белое твердое вещество промывали Et2O. Жидкий фильтрат концентрировали до желтой кашицы, которую фильтровали и промывали Et2O для получения большего количества белого твердого вещества. Две порции белого твердого вещества соединяли и высушивали под вакуумом с получением целевого соединения (8.6 г, 15.09 ммоль, выход 86%) в виде белого твердого вещества.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.0 (2H, d, J=8.2 Гц), 7.2 (2H, d, J=8.2 Гц), 5.3 (1H, d, J=4.6 Гц), 4.8 (1H, s), 4.7 (1H, s), 3.9 (3H, s), 2.6 (1H, td, J=10.8, 5.8 Гц), 2.1-2.2 (2H, m), 1.8-2.0 (4 Н, m), 1.7-1.8
(1H, m), 1.7 (3H, s), 1.5-1.7 (5H, m), 1.4-1.5 (5H, m), 1.3-1.4 (2H, m), 1.2-1.3 (2H, m), 1.1 (3H, s), 1.1-1.1 (1H, m), 1.0 (3H, s), 1.0 (3H, s), 1.0 (3H, br. s.), 1.0 (3H, br. s.).
13C ЯМР (хлороформ-d) 5 ppm 14.2, 15.4, 16.2, 19.2, 19.5, 20.8, 21.0, 24.7, 27.4, 29.0, 29.2, 33.3, 36.0, 37.2, 39.0, 39.0, 40.3, 41.5, 41.8, 47.8, 49.0, 49.2, 51.7, 52.6, 66.8, 71.3, 110.2, 121.3, 123.7, 127.6, 128.2, 129.8, 146.0, 148.4, 148.6, 166.9.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаме-тил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопен-таИхризен^-ш^бензоата.
Промежуточное соединение 3.
К мутному раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-изоцианато-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадека-гидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензоата (5.47 г, 9.60 ммоль) в THF (100 мл) добавляли концентрированную соляную кислоту (19.83 мл, 240 ммоль). Полученную в результате гомогенную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч, реакционную смесь концентрировали досуха с получением метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bR)-3 a-амино-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, HCl (4.98 г, 8.58 ммоль, выход 89%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 544.5 (М+Н)+, 3.26 мин (методика 3).
1H ЯМР (500 МГц, 1:1 CDCb:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.9 (2H, d, J=8.5 Гц), 7.3 (1H, t, J=7.8 Гц), 7.2 (2H, d, J=8.5 Гц), 7.1 (1H, t, J=7.3 Гц), 5.3 (1H, d, J=4.6 Гц), 4.8 (1H, s), 4.7 (1H, br. s.), 3.9 (2H, s), 3.6 (2H, dt, J=15.6, 6.6 Гц), 3.3 (1H, dt, J=3.1, 1.6 Гц), 2.6 (1H, td, J=11.0, 6.1 Гц), 2.1 (1H, dd, J=17.1, 6.4 Гц), 2.0 (1H, d, J=13.4 Гц), 1.9-2.0 (1H, m), 1.8-1.9 (2H, m), 1.7-1.7 (3H, m), 1.6-1.7 (3H, m), 1.5-1.6 (3H, m), 1.5-1.5 (2H, m), 1.4 (1H, br. s.), 1.3-1.4 (1H, m), 1.2-1.3 (1H, m), 1.1-1.2 (2H, m), 1.1-1.1 (1H, m), 1.0 (3H, s), 1.0 (3H,
s), 0.9 (3H, s), 0.9 (3H, s).
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-4-тиоморфоли-нил)этил)амино)-1-изопропенил-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
Промежуточное соединение 4.
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-изопропенил-5a,5b,8,8,11a-^^^^^-2,3^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (600 мг, 1.10 ммоль), 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксида (600 мг, 2.56 ммоль) (получен, как описано в WO 2002045652), безводного фосфата калия (3.00 г, 14.1 ммоль) и иодида калия (10 мг, 0.060 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) помещали в 150 мл. Закрываемый сосуд под давлением AceGlass. Белую суспензию продували азотом. Сосуд герметично закрывали и нагревали до 115-125°C в течение 48 ч. Сырую реакционную смесь фильтровали через тонкий слой силикагеля и промывали этил-ацетатом. Фильтрат концентрировали под вакуумом и очищали с помощью хроматографии на силикаге-ле, элюируя этилацетатом и гексанами (0-50%), с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветной пены (566 мг, 73%).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 7.95 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.74 (d, J=1.8 Гц, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.22-2.99 (m, 9H), 2.79-2.55 (m, 4H), 2.52-2.42 (m, 1H), 2.18-2.09 (m, 1H), 1.99-1.02 (m, 20Н), 1.72 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.01 (s., 3H), 1.10 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.95 (s., 3H). ЖХ/МС: т/е 705.51 (М+Н)+, 3.01 мин (методика 4).
Промежуточное соединение 5 получали, как показано на следующей схеме:
Стадия 1: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR,13bR)бензил 9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,13^13^ октадекагидро-1 H-циклопентаИ хризен-3 a-карбоксилата.
К суспензии (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1 -ен-2-ил)-9-(трифторметилсульфонилокси)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (17.2 г, 25.4 ммоль) в 1,4-диоксане (100 мл) добавляли 2-пропанол (100 мл), воду (40 мл), карбонат натрия моногидрат (9.45 г, 76 ммоль), 4-трет-бутоксикарбонилфенилбороновую кислоту (8.46 г, 38.1 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0) (0.881 г, 0.762 ммоль). Колбу со смесью присоединяли к обратному холодильнику, промывали азотом и нагревали до появления конденсации (90°C температура масляной бани). Во время нагревания твердые вещества в смеси растворялись, и смесь приобрела малиновый цвет. Через 3.5 ч нагрева смесь охлаждали до комнатной температуры. После охлаждения образовывались кристаллы, которые, собирали фильтрованием и промывали водой. Кристаллы растворяли в DCM и EtOH и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и пропускали через слой целита и силикагеля. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением целевого вещества, (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)бензил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пен-таметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-цикло-пента[a]хризен-3a-карбоксилата (13.8 г, 19.57 ммоль, выход 77%), в виде светло-серой пены.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 7.87 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.40-7.29 (m, 5Н), 7.16 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.26 (dd, J=6.3, 1.7 Гц, 1H), 5.16 (d, J=12.2 Гц, 1H), 5.09 (d, J=12.2 Гц, 1H), 4.73 (d, J=2.1 Гц, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.03 (td, J=10.9, 4.7 Гц, 1H), 2.32-2.20 (m, 2H), 2.08 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 1.95-1.82 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.58 (s, 9H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 1.76 - 0.88 (m, 17H), 0.82 (s, 3H).
Стадия 2:
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(трет-бутокси-карбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата.
Промежуточное соединение 5.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (13.8 г, 19.57 ммоль) в DCE (200 мл) добавляли триэти-ламин (4.37 мл, 31.3 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (6.49 мл, 39.1 ммоль) и ацетат палладия (II) (1.099 г, 4.89 ммоль). Смесь промывали азотом и нагревали до 60°C. Через 3.5 ч нагрева смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой силикагеля и целита, который промывали дихлорме-таном с последующим промыванием 25% этилацетата в гексанах. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Смесь разбавляли 200 мл воды и экстрагировали дихлорметаном (3x200 мл). Объединенные органические слои высушивали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,-8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (13.75 г, 18.86 ммоль, выход 96%) в виде белой пены.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 = 7.87 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 7.16 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 5.26 (d, J=4.9 Гц, 1H), 4.73 (d, J=1.5 Гц, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.06 (td, J=10.9, 4.7 Гц, 1H), 2.31-2.22 (m, 2Н), 2.09 (dd, J=17.2, 6.3 Гц, 1H), 1.98-1.82 (m, 2Н), 1.69 (s, 3H), 1.58 (s, 9H), 0.99 (s, 6Н), 0.96 (br. s., 3H), 0.96 (s, 9Н), 0.91 (s, 6Н), 1.76-0.88 (m, 17Н), 0.28 (s, 6H).
Промежуточное соединение 6 получали, как показано на следующей схеме:
Стадия 1. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)бензил 9-(3-фтор-4-(метоксикарбо-нил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,^,13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата.
Суспензию (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-9-(трифторметилсульфонилокси)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (4.0 г, 5.91 ммоль), 3-фтор-4-(метоксикарбонил)фенил-бороновой кислоты (1.287 г, 6.50 ммоль), карбоната натрия моногидрата (2.198 г, 17.73 ммоль) и Pd(PPh3)4 (0.205 г, 0.177 ммоль) в 1,4-диоксане (24 мл) и воде (6 мл) промывали N2, и смесь нагревали до кипения с обратным холодильником. Через 2 ч нагрева смесь охлаждали до комнатной температуры. Смесь разбавляли водой (40 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x40 мл). Объединенные органические слои высушивали Na2SO4.
Высушивающее вещество удаляли фильтрованием, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и фильтровали через слой целита и силикагеля, промывая раствором 25% EtOAc в гексанах. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (3.59 г, 5.27 ммоль, выход 89%) в виде темно-серой пены. Сырое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.80 (1H, t, J=7.8 Гц), 7.29-7.42 (5H, m), 6.96 (1H, d, J=7.9 Гц), 6.91 (1H, d, J=11.9 Гц), 5.28-5.33 (1H, m), 5.16 (1H, d, J=12.5 Гц), 5.09 (1H, d, J=12.2 Гц), 4.73 (1H, s), 4.59 (1H, br. s.), 3.92 (3H, s), 3.03 (1H, td, J=10.8, 4.7 Гц), 2.20-2.33 (2H, m), 2.09 (1H, dd, J=17.1, 6.4 Гц), 1.81-1.97 (2Н, m), 1.68 (3H, s), 0.96 (3H, s), 0.92 (3H, s), 0.92 (3H, s), 0.91 (3H, s), 0.81 (3H, s), 0.79-1.75 (17Н, m).
Стадия 2. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(3-фтор-4-(метоксикарбо-нил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,^,13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)бензил 9-(3-фтор-4-(метоксикарбонил)фе-НИЛ^^Ь^А 11 a-пентаметил-1 -(проп-1 ^-2^-2,3^,4,5,5^,6,7^,8,11,11^11^12,13,13^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (3.59 г, 5.27 ммоль) в DCE (25 мл) добавляли TEA (1.176 мл, 8.44 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (1.749 мл, 10.54 ммоль) и ацетат палладия (II) (0.118 г, 0.527 ммоль). Смесь промывали N2 и нагревали до 60°C в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита и силикагеля (промывали 25% EtOAc в гексанах). Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток разбавляли 25 мл диоксана и добавляли TBAF (75% в воде) (2.76 г, 7.91 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре, затем разбавляли 50 мл 1 н. HCl. Образовавшиеся твердые вещества собирали фильтрованием и промывали водой с получением целевого соединения (2.95 г, 4.99 ммоль, выход 95%) в виде белого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.83 (1H, t, J=7.9 Гц), 6.90-7.00 (2Н, m), 5.34 (1H, dd, J=6.1, 1.6 Гц), 4.77 (1H, d, J=2.0 Гц), 4.64 (1H, s), 3.94 (3H, s), 3.04 (1Н, td, J=10.7, 4.8 Гц), 2.24-2.34 (2H, m), 2.13 (1H, dd, J=17.3, 6.3 Гц), 1.96-2.06 (2H, m), 1.72 (3H, s), 1.03 (3H, s), 1.02 (3H, s), 0.98 (3H, s), 0.93-0.96 (6Н,
m), 0.91-1.80 (17Н, m).
Стадия 3. Получение метил 2-фтор-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-изоцианато-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(3-фтор-4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (2.95 г, 4.99 ммоль) в толуоле (50 мл) и TEA (1.39 мл, 9.99 ммоль) добавляли дифенил фосфоразидат (1.614 мл, 7.49 ммоль) и смесь нагревали до кипения с обратным холодильником. Через 3 ч реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, адсорбировали на силикагеле и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% EtOAc в гексанах, с получением целевого соединения в виде белого твердого вещества. Вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.81 (1H, t, J=7.8 Гц), 6.96 (1H, dd, J=7.9, 1.5 Гц), 6.92 (1H, dd, J=11.9, 1.5 Гц), 5.31 (1H, dd, J=6.3, 1.7 Гц), 4.75 (1H, s), 4.64 (1H, s), 3.92 (3H, s), 2.55 (1H, td, J=10.8, 5.8 Гц), 2.05-2.16 (2H, m), 1.76-1.92 (4H, m), 1.68 (3H, s), 1.09-1.11 (3H, m), 0.97 (3H, s), 0.96 (3H, s), 0.94 (3H, s), 0.92 (3H, s), 0.88-1.75 (16H, m).
Стадия 4. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13^13b-октадекагидро-1 H-цикло-пентаИхризен^-ил^-фторбензоат дигидрохлорида.
Промежуточное соединение 6.
К раствору сырого метил 2-фтор-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-изоцианато-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-Ш-циклопента^хризен^-щОбензоата (2.93 г, 4.99 ммоль) в THF (35 мл) добавляли 12 н. HCl (10 мл, 121 ммоль). После перемешивания смеси в течение 24 ч, смесь разбавляли водой (100 мл) до осаждения твердых веществ. Твердые вещества собирали фильтрованием и промывали водой с получением указанного в заголовке соединения (2.75 г, 4.33 ммоль, выход 87%) в виде не совсем белого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ/МС: m/e 562 (М+Н)+, 1.96 мин (методика 5).
Общая схема получения C-30 аминов (примеры 1-6).
Пример 1. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(3-(2-морфолиноэтиламино)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^,11^12,13,^,13^ октадекагидро-1 Н-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты
Стадия 1:
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-
Примеры 1-6 получали либо из промежуточного соединения 2, либо 5, следуя нижеприведенной схеме:
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(метоксикар-бонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 ^-2-^^2,3^4,5^5^6,7^8,ПД^П^^^^а,^-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.315 г, 0.458 ммоль) в CCl4 (5 мл) добавляли NBS (0.102 г, 0.573 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем фильтровали через слой целита (промывали DCM), и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток загружали на 12 г колонку с силикагелем и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% этилацетата в гексанах. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пента-метил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11bД2Д3Д3аД3b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбо-ксилата (0.205 г, 0.268 ммоль, выход 58.4%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 765, 767.5 (М+Н)+, 4.78 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 7.91 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.18 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.30-5.25 (m, 1H), 5.13 (s, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.01-3.96 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.09 (td, J=11.2, 4.1 Гц, 1H), 2.31-2.24 (m, 2H), 2.17-2.05 (m, 2H), 1.86 (dd, J=12.4, 7.8 Гц, 1H), 0.96 (s, 9H), 1.80-0.76 (m, 32H), 0.31-0.27 (m, 6H).
Стадия 2:
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-3 а-карбоновой кислоты.
В колбу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилат (26 мг, 0.034 ммоль), добавляли 2-морфолиноэтиламин (0.056 мл, 0.430 ммоль). Образовавшуюся кашицу растворяли в DCE (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Через 18.5 ч перемешивания смеси при комнатной температуре ее концентрировали в потоке азота и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(3 -(2-морфолиноэтиламино)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (17.6 мг, 0.025 ммоль, выход 74.0%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 701.6 (М+Н)+, 2.37 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.91 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.17 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.27 (d, J=4.58 Гц, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.97 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.73 (t, J=4.27 Гц, 3H), 3.40-3.50 (m, 2H), 2.86-3.00 (m, 3H), 2.59-2.72 (m, 2H), 2.53 (br. s., 4H), 2.24-2.37 (m, 2H), 2.05-2.16 (m, 2H), 1.88-1.96 (m, 1H), 1.611.75 (m, 2H), 1.03-1.57 (m, 16H), 1.00 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.91 (s, 6H).
Стадия 3: Удаление защитной группы
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (17.6 мг, 0.025 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.126 мл, 0.126 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 19.5 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. К смеси добавляли 5 мл 1 н. HCl и смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1) с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-мор-фолиноэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (6.4 мг, 9.32 мкмоль, выход 37.1%) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 687.5 (М+Н)+, 1.99 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота 5 ppm 8.03 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.30 (d, J=8.55 Гц, 2H), 5.38 (d, J=4.88 Гц, 1H), 5.23 (s, 1H), 5.07 (s, 1H), 3.96 (br. s., 4H), 3.69-3.90 (m, 6H), 3.45 (br. s., 4H), 2.96-3.07 (m, 1H), 2.30-2.40 (m, 2H), 1.10 (s, 3H), 1.08-2.24 (m, 20H), 1.07 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 1-01 (s, 3H), 1-00 (s, 3H).
Пример 2.
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-1-(3-(2-гидроксиэтил-амино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты
Стадия 1:
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,За,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоксилата
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (2.0 г, 2.74 ммоль) в CCl4 (10 мл) добавляли NBS (0.57 г, 3.20 ммоль) порциями на протяжении 1 ч. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Смесь фильтровали через слой целита (промывали DCM) и концентрировали под пониженным давлением. Остаток загружали на 90 г колонку с силикагелем и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% этилацетата в гексанах.
Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (1.29 г, 1.60 ммоль, выход 58.4%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 807, 809.4 (М+Н)+, 6.31 мин (методика 1).
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1 -(3 -(2-гидроксиэтиламино)проп-1 ^^2-^)^,5^8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,-13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (2 мл) добавляли этаноламин (0.093 мл, 1.547 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20.5 ч, затем концентрировали под пониженным давлением и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (56 мг, 0.083 ммоль, выход 53.7%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 674.4 (М+Н)+, 2.45 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 7.87 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.15 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.26 (d, J=4.9 Гц, 1H), 5.15 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 3.93-3.80 (m, 2H), 3.50 (br. s., 2H), 3.07-2.90 (m, 3H), 1.58 (s, 9H), 0.99 (s, 6Н), 0.97 (s, 3H), 0.90 (s, 6Н), 2.43-0.84 (m, 22Н). Стадия 3: Удаление защитной группы
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(2-гидроксиэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,-13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты (0.025 г, 0.037 ммоль) в DCM (0.5 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16.25 ч, затем концентрировали в потоке азота. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-1-(3-(2-гидроксиэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,-13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (8.0 мг, 0.013 ммоль, выход 34.9%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 618.3 (М+Н)+, 2.00 мин (методика 1).
1H ЯМР (400 МГц, уксусная кислота^) 5 ppm 8.03 (d, J=8.03 Гц, 2H), 7.29 (d, J=8.03 Гц, 2H), 5.37 (d, J=5.27 Гц, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.02 (t, J=4.77 Гц, 2H), 3.75-3.92 (m, 2H), 3.37-3.44 (m, 2H), 2.98-3.07 (m, 1H), 2.29-2.42 (m, 2H), 1.11-2.24 (m, 20H), 1.10 (s, 3H), 1.06 (s, 6H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-пиклопента[а]хризен-3 а-карбоновой кислоты
-С4
Пример 3. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4карбоксифенил)-1-(3-(диме-тиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,13^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (1 мл) добавляли димети-ламин (2M в THF) (0.773 мл, 1.547 ммоль). Через 21 ч перемешивания смеси при комнатной температуре ее концентрировали под пониженным давлением и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(диметилами-но)проп-1-ен-2-ил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты (74 мг, 0.112 ммоль, выход 72.7%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 658.6 (М+Н)+, 2.75 мин (методика 1).
Стадия 3: К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,-11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (25 мг, 0.038 ммоль) в DCM (0.5 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16.5 ч, затем концентрировали в потоке азота. Остаток растворяли в метаноле и диок-сане и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,-6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (5.8 мг, 9.64 мкмоль, выход 25.4%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 602.4 (М+Н)+, 2.05 мин (методика 1).
1H ЯМР (400 МГц, уксусная кислота^) 5 ppm 7.99 (d, J=8.28 Гц, 2H), 7.25 (d, J=8.28 Гц, 2H), 5.38 (s, 1H), 5.33 (d, J=4.77 Гц, 1H), 5.26 (s, 1H), 3.89 (d, J=14.05 Гц, 1H), 3.73 (d, J=14.31 Гц, 1H), 2.93-3.03 (m, 1H), 2.93 (s, 6H), 0.99-2.40 (m, 22H),1.05 (s, 3H), 1.03 (s, 6H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Пример 4. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4карбоксифенил)-1-(3-((2-
(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8Д1,-
11а,11Ь,12ДЗДЗа,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1-(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,-11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (2 мл) добавляли ^^^-Триметилэтилендиамин (0.201 мл, 1.547 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем концентрировали под пониженным давлением и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aRД1aSД1bRД3aRД3bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1 -(3 -((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (64 мг, 0.090 ммоль, выход 57.9%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 713.5 (М-Н)-, 2.76 мин (методика 1).
Стадия 3: К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1-(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (0.025 г, 0.035 ммоль) в DCM (0.5 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16.5 ч, затем концентрировали в потоке азота. Остаток растворяли в метаноле и диоксане и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1 R,3 aS,5aR,5bR,7aR, 11 aS, 11 bR, 13 aR, 13bS)-9-(4-карбоксифенил)-1 -(3 -((2-(диметиламино)этил)(ме-тил)амино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (17.8 мг, 0.027 ммоль, выход 77%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 657.4 (М-Н)-, 2.16 мин (методика 1).
1H ЯМР (400 МГц, уксусная кислота^) 5 ppm 7.99 (d, J=8.28 Гц, 2H), 7.25 (d, J=8.28 Гц, 2H), 5.42 (s, 1H), 5.31-5.35 (m, 1H), 5.31 (s, 1H), 3.83-4.00 (m, 2H), 3.77 (s, 4H), 2.88-3.00 (m, 10H), 2.25-2.39 (m, 2H), 0.99-2.24 (m, 20H), 1.05 (s, 3H), 1.03 (s, 6H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Пример 5.
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-1-(3-(2-(диметилами-но)этиламино)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3 ^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-
октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоновой кислоты
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1-(3-(2-(диметиламино)этиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,-11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (2 мл) добавляли ^^диметилэтилендиамин. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 21 ч, затем концентрировали под пониженным давлением и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(2-(диметиламино)этиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,-12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (78 мг, 0.111 ммоль, выход 71.9%) в виде белой пены.
ЖХ/МС: m/e 699.5 (М-Н)-, 2.53 мин (методика 1).
Стадия 3: К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фе-нил)-1 -(3 -(2-(диметиламино)этиламино)проп-1 ^^2-^)^,5^8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты (25 мг, 0.036 ммоль) в DCM (0.5 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15.5 ч, затем концентрировали в потоке азота, и остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Продукт (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-1-(3-(2-(диметиламино)этиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновую кислоту (4.7 мг, 7.29 мкмоль, выход 20%), выделяли в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 643.4 (М-Н)-, 2.08 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота) 5 ppm 8.03 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.30 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.38 (d, J=4.88 Гц, 1H), 5.23 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 3.70-3.90 (m, 6H), 2.99 (s, 6H), 2.97-3.08 (m, 1H), 2.30-2.40 (m, 2H), 1.08-2.24 (m, 20H), 1.10 (s, 3H), 1.07 (s, 6H), 1.01 (s, 3H), 1.00 (s, 3H).
Пример 6.
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(2-карбоксиэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-9-(4-карбоксифенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро- 1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1-(3-(3-этокси-3-оксопропиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (2 мл) и триэтиламине (0.216 мл, 1.547 ммоль) добавляли бета-аланин, гидрохлорид этилового эфира (0.238 г, 1.547 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 22 ч, затем нагревали до 40°C и перемешивали в течение дополнительных 6 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 90 ч при комнатной температуре, затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(3-эток-си-3-оксопропиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,-13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (73 мг, 0.100 ммоль, выход 64.6%) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 728.5 (М-Н)-, 2.57 мин (методика 1). Стадия 3:
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(3-этокси-3-оксопропиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,-
5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (0.035 г, 0.048 ммоль) в DCM (0.5 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 21.5 ч, затем растворитель удаляли в потоке азота. Сырое вещество растворяли в 0.5 мл диоксана и добавляли к смеси 0.4 мл 1 н. NaOH. Смесь нагревали до 75°C в течение 18.25 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Смесь разбавляли 1 мл метанола и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(2-карбоксиэтиламино)проп-1-ен-2-ил)-9-(4-карбоксифенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,-5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (11 мг, 0.017 ммоль, выход 35.5%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 644.4 (М-Н)-, 1.91 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота-dO 5 ppm 8.03 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.30 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.37 (d, J=5.19 Гц, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.19 (s, 1H), 3.86-3.91 (m, 1H), 3.78-3.83 (m, 1H), 3.50 (t, J=6.71 Гц, 2H), 2.98-3.07 (m, 1H), 2.94 (t, J=6.71 Гц, 2H), 2.30-2.40 (m, 2H), 2.12-2.23 (m, 2H), 1.10-2.10 (m, 18H), 1.10 (s, 3H), 1.07 (s, 6H), 1.01 (s, 3H), 1.00 (s, 3H).
Пример 7.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bS)-3a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-1 -(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,-1 За, 1 ЗЬ-октадекагидро- 1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Стадия 1:
В виалу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикар-бонил)фенил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
Получение трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этил-карбамоил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,-11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновую кислоту (50 мг, 0.076 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M в DCM) (2 мл, 4.00 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и концентрировали под пониженным давлением два дополнительных раза. Сырое вещество разбавляли DCE (2 мл) и добавляли DIEA (0.066 мл, 0.380 ммоль), N,N-диметилэтилендиамин (0.022 мл, 0.204 ммоль) и DMAP (1 мг, 8.19 мкмоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18.5 ч, затем концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество использовали на следующей стадии без очистки.
ЖХ/МС: m/e 726.6 (М-Н)-, 2.87 мин (методика 1).
Стадия 2:
К раствору трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметил-амино)этилкарбамоил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (55.3 мг, 0.076 ммоль) в DCM (1 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, затем концентрировали в потоке азота и остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Целевой продукт, 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-1-(3-(диметиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойную кислоту (24.8 мг, 0.037 ммоль, выход 48.6%), выделяли в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 672.4 (М+Н)+, 2.10 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота^) 5 ppm 8.03 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.29 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.40 (s, 1H), 5.37 (d, J=5.19 Гц, 1H), 5.29 (s, 1H), 3.91 (d, J=14.34 Гц, 1H), 3.68-3.80 (m, 3H), 3.33-3.42 (m, 2H), 3.093.17 (m, 1H), 2.99 (s, 6H), 2.96 (s, 6H), 2.50-2.57 (m, 1H), 1.08-2.23 (m, 21H), 1.08 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример 8.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)ами-но)проп-1-ен-2-ил)-3a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Стадия 1: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1-(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8, Ha-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,-11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (2 мл) добавляли ^^№триметилэтилендиамин (0.201 мл, 1.547 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем концентрировали под пониженным давлением и очищали с
помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1 -(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1 ^^2-1^-5^5^8,8,11 a-пен-таметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (64 мг, 0.090 ммоль, выход 57.9%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 713.5 (М-Н)-, 2.76 мин (методика 1).
Стадия 2: Получение трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1 -ен-2-ил)-3a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата
В виалу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фе-нил)-1 -(3-((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновую кислоту (0.037 г, 0.052 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M В DCM) (2 мл, 4.00 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и концентрировали два дополнительных раза. Сырой остаток разбавляли DCE (2 мл) и DIEA (0.045 мл, 0.259 ммоль). Добавляли ^^диметиламиноэтиламин (0.011 мл, 0.103 ммоль) и DMAP (1 мг, 8.19 мкмоль) и смесь перемешивали в течение 18.5 ч, затем концентрировали под пониженным давлением с получением сырого вещества, которое сразу использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ/МС: m/e 786.65 (М+Н)+, 2.77 мин (методика 1).
Стадия 3:
К раствору трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-((2-(диметилами-но)этил)(метил)амино)проп-1-ен-2-ил)-3a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (40.8 мг, 0.052 ммоль) в DCM (1 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, затем концентрировали в потоке азота, и остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1 -(3 -((2-(диметиламино)этил)(метил)амино)проп-1 -ен-2-ил)-3 a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1H-циклопен-та^хризен^-ш^бензойной кислоты (27 мг, 0.037 ммоль, выход 71.2%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 729.64 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота^) 5 ppm 8.03 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.29 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.43 (s, 1H), 5.37 (d, J=4.88 Гц, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.00 (d, J=14.34 Гц, 1H), 3.88 (d, J=14.34 Гц, 1Н), 3.82 (br. s., 4H), 3.73 (t, J=5.65 Гц, 2H), 3.33-3.42 (m, 2H), 3.08-3.18 (m, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.98 (s, 6H), 2.95 (s, 6H), 2.51-2.58 (m, 1H), 2.13-2.23 (m, 2H), 1.09-2.13 (m, 19H), 1.08 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 1.00 (s,
3H).
Пример 9. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-карбоксиэтилкарбамоил)-1 -(3-(2-(диметиламино)этиламино)проп-1 ^^2-^)^,5^8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(3-(2-(диметиламино)этиламино)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты (45 мг, 0.064 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл) добавляли гидроксид натрия (1 н.) (0.25 мл, 0.250 ммоль) и Boc2O (0.030 мл, 0.128 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 17.5 ч, затем разбавляли водой (4 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x5 мл). Объединенные органические слои высушивали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в 1,4-диоксане (1 мл) и обрабатывали 1 н. гидроксидом натрия (0.2 мл, 0.2 ммоль). Смесь перемешивали в течение 97 ч, затем разбавляли метанолом и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением (1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13 aR, 13bS)-1 -(3 -(трет-бутоксикарбонил(2-(диметилами-но)этил)амино)проп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,1Ы-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 799.6 (М-Н)-, 2.76 мин (методика 1).
Стадия 2: Получение трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(трет-бутоксикарбонил(2-(диметиламино)этил)амино)проп-1 -ен-2-ил)-3 a-(3 -этокси-3 -оксопропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопен-та[а]хризен-9-ил)бензоата
В колбу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(трет-бутоксикарбонил(2-(диметиламино)этил)амино)проп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,1Ы-пентаме-тил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоно-вую кислоту (26 мг, 0.024 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M В DCM) (1 мл, 2.000 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух часов, затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и концентрировали два дополнительных раза. Сырое вещество растворяли в DCE (1 мл) и добавляли DIEA (0.021 мл, 0.122 ммоль), бета-аланин, гидрохлорид этилового эфира (7.48 мг, 0.049 ммоль), и DMAP (0.5 мг, 4.09 мкмоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч, затем реакцию быстро охлаждали водой (5 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x5 мл). Объединенные органические слои высушивали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ/МС: m/e 898.7 (М-Н)-, 2.75 мин (методика 1).
Стадия 3: Получение 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(трет-бутоксикарбонил(2-(диметиламино)этил)амино)проп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,1Ы-пентаме-тил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбо-ксамидо)пропановой кислоты
К раствору трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(трет-бутоксикарбонил(2-(диметиламино)этил)амино)проп-1-ен-2-ил)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пента-метил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бен-зоата (0.022 г, 0.024 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли NaOH (1 н.) (0.120 мл, 0.120 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 87 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ/МС: m/e 870.6 (М-Н)-, 2.46 мин (методика 1).
Стадия 4: Снятие защиты ВОС
К раствору 3-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(трет-бутоксикарбонил(2-(диметил-амино)этил)амино)проп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоксами-до)пропановой кислоты (20.93 мг, 0.024 ммоль) в дихлорметане (2 мл) добавляли TFA (0.25 мл, 3.24 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16.5 ч, затем концентрировали в потоке азота. Остаток растворяли в диоксане и метаноле и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Остаток, который содержал примеси, повторно очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 9). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bS)-3a-(2-карбоксиэтилкарбамоил)-1 -(3-(2-(диме-тиламино)этиламино)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,-13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты (6.2 мг, 8.66 мкмоль, выход 13.5% за 4 стадии) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 714.5 (М-Н)-, 1.93 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота d4) 5 ppm 8.03 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.30 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.37 (d, J=4.88 Гц, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 3.69-3.90 (m, 6H), 3.45-3.67 (m, 2H), 3.19 (t, J=12.51 Гц, 1H), 2.99 (s, 6H), 2.68 (t, J=6.41 Гц, 2H), 2.51-2.63 (m, 1H), 1.08-2.25 (m, 21H), 1.08 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.06 (s, 3H),
1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример 10. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(3-карбокси-N-метилпропанамидо)проп-1-ен-2-ил)-3a-(2-карбоксиэтилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1:
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(метиламино)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИ хризен-3 а-карбоновой кислоты!
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-трет-бутилдиметилсилил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-3 a-карбоксилата (0.125 г, 0.155 ммоль) в DCE (1 мл) добавляли метиламин (2M В THF) (0.773 мл, 1.547 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем добавляли дополнительные 0.8 мл метиламина (2M В THF), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем нагревали до 40°C и перемешивали в течение дополнительных 8 ч. Смесь концентрировали под пониженным давлением, и продукт кристаллизовался из раствора метанола, 1,4-диоксана и воды с получением сырого продукта в виде не совсем белого твердого вещества (85 мг, 0.132 ммоль, выход 85%). ЖХ/МС: m/e 644.4 (М+Н)+, 2.44 мин (методика 1).
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбо-нил)фенил)-1 -(3 -(4-метокси^-метил-4-оксобутанамидо)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен-3 a-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(3 -(метиламино)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3 a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11^11^12,13,13^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (0.04 г, 0.062 ммоль) в DCE (2 мл) добавляли DIEA (0.054 мл, 0.311 ммоль), метил 4-хлор-4-оксобутират (0.038 мл, 0.311 ммоль) и DMAP (1 мг, 8.19 мкмоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, затем разбавляли 2 мл воды и 6 мл 1 н. HCl, и экстрагировали дихлорметаном (3x7 мл). Объединенные органические слои высушивали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-100% этилацетата в гексанах с 0.1% уксусной кислотой, добавляя к смеси. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого вещества в виде белого твердого вещества (0.047 г, 0.062 ммоль, выход 50%). ЖХ/МС: m/e 758.4 (М+Н)+, 2.57 мин (методика 1).
Стадия 3: Получение трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-1-(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат
В виалу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикар-бонил)фенил)-1 -(3 -(4-метокси^-метил-4-оксобутанамидо)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-3 a-карбоновую кислоту (0.047 г, 0.062 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M В дихлорметане) (1 мл, 2.0 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем концентрировали под пониженным дав
лением. Остаток растворяли в дихлорметане и концентрировали два дополнительных раза, затем высушивали под вакуумом в течение 1 ч. Остаток растворяли в DCE (1 мл) и добавляли основание Хунига (0.032 мл, 0.186 ммоль) с последующим добавлением бета-аланина, гидрохлорида этилового эфира (0.014 г, 0.093 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 17 ч, затем концентрировали в потоке азота и очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-50% этилацетат в гек-санах и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Целевой продукт выделяли в виде белого твердого вещества (15 мг, 0.017 ммоль, выход 28%). ЖХ/МС: m/e 857.5 (М+Н)+, 2.57 мин (методика 1).
Стадия 4: Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропил-карбамоил)-1-(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
К раствору трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропил-карбамоил)-1-(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.015 г, 0.017 ммоль) в дихлорметане (1 мл) добавляли TFA (0.05 мл, 0.649 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 23 ч, затем концентрировали под пониженным давлением и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ/МС: m/e 801.4 (М+Н)+, 2.11 мин (методика 1).
Стадия 5: К раствору 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропил-карбамоил)-1-(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты (0.017 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли гидроксид натрия (1 н.) (0.1 мл, 0.100 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 72 ч, затем очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в уксусной кислоте и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(3-(3-карбокси-N-метилпропанамидо)проп-1-ен-2-ил)-3a-(2-карбоксиэтилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты (3.0 мг, 0.0037 ммоль, выход 22%) в виде прозрачной бесцветной пленки. ЖХ/МС: m/e 759.4 (М+Н)+, 1.74 мин (методика 1).
Пример 11.
Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаме-тил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты
Стадия 1: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-бензил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3 a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (3.25 г, 4.90 ммоль) в тетрахлориде углерода (25 мл) добавляли N-бромсукцинимид (1.00 г, 5.62 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и добавляли дополнительные 0.25 г N-бромсукцинимида. После перемешивания смеси в течение 18 ч при комнатной температуре ее фильтровали через слой целита (промывали DCM), и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя 160 г колонку с силикагелем и градиент 0-10% этилацетат в гексанах. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 1.44 г целевого продукта в виде белого твердого вещества. Несколько менее чистых фракций соединяли, концентрировали и повторно очищали с помощью флэш-хроматографии (0-5% этилацетат в гексанах, 90 г колонка с силикагелем). Изоляты соединяли с получением продукта (2.1 г, 2.83 ммоль, выход 57.7%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 741, 743.2 (М+Н)+, 4.13 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 5 ppm 7.93 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.44-7.31 (m, 5Н), 7.20 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.29 (dd, J=6.1, 1.5 Гц, 1H), 5.23-5.08 (m, 3H), 5.05 (s, 1H), 4.03-3.97 (m, 2Н), 3.92 (s, 3H), 3.10 (d, J=4.3 Гц, 1H), 2.34 (dt, J=12.6, 3.0 Гц, 1H), 2.27-2.19 (m, 1H), 2.15-2.05 (m, 2Н), 1.92 (dd, J=12.7, 7.8 Гц, 1H), 1.79 (t, J=11.3 Гц, 1H), 1.00 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 1.75-0.90 (m, 16Н), 0.82 (s,
3H).
Стадия 2:
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(бензилоксикарбонил)-5a,5b,8,8,11a-
пентаметил-1 -(3 -(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3 a^^^^b^^^A 11,11^11^12,13,13^13^ октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты
К суспензии NaH (60% минеральная масляная дисперсия) (0.135 г, 3.37 ммоль) в 1,4-диоксане (3 мл) добавляли 4-(2-гидроксиэтил)морфолин (0.204 мл, 1.685 ммоль) и (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-бензил 1-(3-бромпроп-1-ен-2-ил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3^,4,5,5^5^6,7^,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-3 a-карбоксилат (0.25 г, 0.337 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре, затем нагревали до 50°C в течение 20 ч. Реакцию охлаждали до комнатной температуры и быстро охлаждали водой (10 мл), затем экстрагировали дихлорметаном (3x20 мл). Объединенные органические слои высушивали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% MeOH в дихлорметане и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (0.133 г, 0.171 ммоль, выход 50.7%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 778.4 (М+Н)+, 2.44 минут (методика 1).
Стадия 3:
К раствору 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(бензилоксикарбонил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^,11^12,13,13^13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты (0.078 г, 0.00 мкмоль) в DCE (2 мл) добавляли триэтиламин (0.022 мл, 0.160 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (0.033 мл, 0.200 ммоль) и ацетат палладия (II) (0.011 г, 0.050 ммоль). Смесь промывали азотом и нагревали до 60°C в течение 5,5 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и перемешивали на протяжении ночи. Смесь фильтровали через слой целита для удаления твердых веществ (промывали дихлорметаном), и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в THF (2 мл) и обрабатывали тетрабутиламмония фторидом гидратом (0.042 г, 0.150 ммоль). Через 1.25 ч смесь разбавляли водой (5 мл) и экстрагировали ди-хлорметаном (3x7 мл). Объединенные органические слои высушивали сульфатом натрия, фильтровали и
концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали путем кристаллизации из горячего ди-оксана и воды. Образовавшиеся твердые вещества при охлаждении собирали фильтрованием и промывали водой. Твердые вещества, которые были собраны, повторно кристаллизовали из горячего этанола, медленно добавляли диоксан и воду. Образовавшиеся твердые вещества собирали фильтрованием и промывали этанолом с получением продукта (10 мг, 0.0145 ммоль, выход 14.5%) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 688.4 (М+Н)+, 2.18 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота dO 5 ppm 8.03 (d, J=8.2 Гц, 2H), 7.30 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.37 (d, J=4.3 Гц, 1H), 5.03 (br. s., 1H), 5.02 (br. s., 1H), 4.11-3.99 (m, 6H), 3.95-3.90 (m, 2H), 3.49-3.45 (m, 2H), 3.002.92 (m, 1H), 2.39-2.30 (m, 2H), 1.10 (s, 3H), 1.07 (s, 6H), 2.23-1.05 (m, 24H), 1.01 (s, 3H), 1.00 (s, 3H).
Пример 12. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-карбоксиэтилкар-бамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
Стадия 1: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-бензил 9-(4-(метоксикар-бонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,11 а, 1 lb, 12,13,13 а, 13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоксилата
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Мутный раствор 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(бензилоксикарбонил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты (0.38 г, 0.488 ммоль) в толуоле (3 мл) и метаноле (0.75 мл) охлаждали до 0°C и добавляли по каплям TMS-диазометан (2M В гексанах) (0.317 мл, 0.635 ммоль). Раствор энергично барботировали в течение 5 мин, затем барботирование прекращали. Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали. Через 4 ч перемешивания добавляли дополнительные 0.1 мл 2 н. раствора TMS-диазометана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь разбавляли 20 мл этилацетата и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия с последующим добавлением насыщенного раствора хлорида натрия. Органический слой высушивали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-5% MeOH в дихлорметане и 25 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (0.295 г, 0.350 ммоль, выход 71.7%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 792.4 (М+Н)+, 3.51 минуты (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.92 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.29-7.39 (m, 5H), 7.18 (d, J=7.93 Гц, 2H), 5.27 (d, J=5.19 Гц, 1H), 5.06-5.18 (m, 2H), 4.93 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.72 (t, J=4.58 Гц, 4H), 3.57 (t, J=5.80 Гц, 2H), 2.87-2.95 (m, 1H), 2.60 (t, J=5.80 Гц, 2H),2.52 (br. s., 4H),2.27-2.33 (m, 1H), 2.20 (td, J=12.28, 3.20 Гц, 1H),2.08 (dd, J=17.09, 6.10 Гц, 1H), 1.85-2.00 (m, 2H),73 (t, J=11.29 Гц,
1H),1.64 (d, J=16.79 Гц, 1H), 0.98-1.53 (m, 15H),0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H),0.91 (s, 3H),0.90 (s, 3H), 0.80 (s, 3H).
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)бензил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (0.288 г, 0.364 ммоль) в DCE (3.5 мл) добавляли TEA (0.081 мл, 0.582 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (0.121 мл, 0.727 ммоль) и ацетат палладия (0.020 г, 0.091 ммоль). Смесь промывали N2 и нагревали до 60°C. Через 2.5 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита для удаления твердых веществ, затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток разбавляли 5 мл THF, и к мутному раствору добавляли тетрабутиламмо-ния фторид гидрат (0.152 г, 0.545 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, разбавляли водой (15 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x15 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-5% метанол в дихлорметане и 25 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (0.188 г, 0.268 ммоль, выход 73.7%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 702.4 (М+Н)+, 2.66 минуты (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.90 (d, J=8.24 Гц, 2 Н), 7.16 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.26 (d, J=4.88 Гц, 1H), 4.92 (d, J=1.83 Гц, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.74 (t, J=4.43 Гц, 4H), 3.62 (t, J=5.49 Гц, 2H), 2.89 (td, J=10.83, 4.27 Гц, 1H), 2.58-2.74 (m, 6H), 2.21-2.32 (m, 2H), 1.99-2.13 (m, 2H), 1.91 (dd, J=12.05, 8.09 Гц, 1H), 1.72 (t, J=11.29 Гц, 1H), 1.65 (d, J=16.79 Гц, 1H), 1.01-1.56 (m, 15H), 0.99 (s, 3H), 0.98
(s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.90 (s, 6H).
Стадия 3: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,1 la, lib, 12,13,13a, 13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
В колбу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновую кислоту (0.188 г, 0.268 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M В DCM) (3 мл, 6.00 ммоль). Раствор (который барботировали в течение нескольких минут при добавлении оксалилхлорида) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и концентрировали два дополнительных раза для удаления всего оставшегося оксалил-хлорида. Сырой хлорагидрид использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
К суспензии метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(хлоркарбонил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензоата (32.2 мг, 0.0447 ммоль) в DCE (1 мл) добавляли бета-аланин, гидрохлорид этилового эфира (10.30 мг, 0.067 ммоль) и диизопропилэтиламин (0.023 мл, 0.134 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч, затем сразу очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-5% MeOH в DCM с 0.1% ацетатом аммония, до- 56
бавленным к смеси. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (32 мг, 0.040 ммоль, выход 89%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 801.4 (М+Н)+, 2.66 мин (методика 1).
Стадия 4: К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.032 г, 0.040 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли NaOH (1 н.) (0.199 мл, 0.199 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 15 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (18 мг, 0.024 ммоль, выход 59.6%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 759.4 (М+Н)+, 1.99 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.94 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.16 (d, J=8.24 Гц, 2H), 6.83 (t, J=5.49 Гц, 1H), 5.17 (d, J=4.58 Гц, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.93 (s, 1H), 3.91-4.00 (m, 2H), 3.90 (t, J=4.58 Гц, 4H), 3.783.85 (m, 1H), 3.56-3.72 (m, 3H), 3.00-3.13 (m, 6H), 2.75-2.82 (m, 1H), 2.49-2.63 (m, 2H), 2.38-2.44 (m, 1H), 2.10-2.20 (m, 2H), 1.81-2.00 (m, 3H), 1.03 (s, 3H), 1.01-1.67 (m, 16H), 0.99 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.89 (s, 6H).
Примеры 13-17.
Общая схема получения С-28 амидов с С-30 морфолино этиловым эфиром
Пример 13.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(2-гидроксиэтиламино)этилкарба-моил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(2-гидроксиэтиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата
К суспензии метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(хлоркарбонил))-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензоата (32.2 мг, 0.0447 ммоль) (синтез описан выше при получении метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата) в DCE (1 мл) добавляли 2-(2-аминоэтиламино)этанол (16 мкл, 0.158 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Через 16 ч перемешивания к смеси добавляли диизопропи-лэтиламин (0.023 мл, 0.134 ммоль). Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, затем сразу очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% метанол в дихлорметане с 0.1% гидроксида аммония, добавленным к смеси. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и
концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (19 мг, 0.024 ммоль, выход 53.9%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 788.4 (М+Н)+, 2.52 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.91 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.18 (d, J=8.24 Гц, 2H), 6.57 (br. s., 1H), 5.27 (d, J=4.58 Гц, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.74-3.80 (m, 2H), 3.70-3.74 (m, 4H), 3.39-3.63 (m, 5H), 2.88-3.06 (m, 6H), 2.59 (t, J=5.80 Гц, 2H), 2.41-2.56 (m, 5H), 1.93-2.13 (m, 3H), 1.80 (dd, J=12.21, 7.63 Гц, 1H), 0.98-1.74 (m, 17H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.87-0.93 (m, 6H).
Стадия 2:
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(2-гидроксиэтиламино)этил-карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.019 г, 0.024 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.121 мл, 0.121 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 23 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 63 ч. К реакции добавляли дополнительные 0.1 мл 1 н. NaOH и смесь нагревали до 75°C в течение 23 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (15 мг, 0.019 ммоль, выход 80%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 774.6 (М+Н)+, 2.07 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота) 5 ppm 8.03 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.29 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 5.37 (d, J=4.6 Гц, 1H), 5.01 (br. s., 1H), 5.00 (br. s., 1H), 4.09-3.96 (m, 8Н), 3.91 (br. s., 2Н), 3.78-3.71 (m, 1Н), 3.703.63 (m, 1H), 3.54-3.44 (m, 3H), 3.38-3.32 (m, 4Н), 3.04 (td, J=10.6, 3.5 Гц, 1H), 2.56-2.49 (m, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 2.24-0.97 (m, 24Н).
Пример 14. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этил-карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметилами-но)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата
К суспензии метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(хлоркарбонил))-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (40 мг, 0.056 ммоль) (синтез описан выше при получении метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата) в DCE (1 мл) добавляли ^^диметиламиноэтиламин (7.34 мг, 0.083 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем к смеси добавляли диизопропилэтиламин (0.023 мл, 0.134 ммоль). Смесь перемешивали в течение дополнительных 2 ч при комнатной температуре, затем сразу очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% MeOH в DCM с 0.1% гидроксида аммония, добавленного к смеси, и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого продукта (38.4 мг, 0.050 ммоль, выход 90%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 772.5 (М+Н)+, 2.68 мин (методика 1).
Стадия 2: К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (38.4 мг, 0.050 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.249 мл, 0.249 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 15 ч, затем очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (14 мг, 0.018 ммоль, выход 37%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 758.6 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm7.93 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.15 (d, J=7.94 Гц, 2H), 7.11 (br. s., 1H), 5.28 (d, J=4.88 Гц, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.89 (s, 1H), 3.88-3.96 (m, 2H), 3.74 (t, J=4.58 Гц, 4H), 3.59 (t,
J=5.49 Гц, 2H), 3.47-3.53 (m, 2H), 2.96-3.04 (m, 1H), 2.74-2.82 (m, 2H), 2.61-2.68 (m, 2H), 2.58 (br. s., 4H), 2.51 (s, 6H), 2.39-2.47 (m, 1H), 1.93-2.11 (m, 3H), 1.75-1.83 (m, 1H), 1.58-1.69 (m, 2H), 0.96-1.53 (m, 15H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 6H), 0.91 (s, 6H).
Пример 15. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-3a-(3-(2-оксопирролидин-1-ил)пропилкарбамоил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(3 -(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-3 a-(3-(2-оксопирролидин-1 -ил)пропилкарбамоил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата
К суспензии метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(хлоркарбонил))-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (32.2 мг, 0.0447 ммоль) (синтез описан выше при получении метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-хтиклопентаИхрюен^-и^бензоата) в DCE (1 мл) добавляли 1-(3-аминопропил)-2-пирролидинон (9.40 мкл, 0.067 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем к смеси добавляли диизопропилэтиламин (0.023 мл, 0.134 ммоль) и смесь перемешивали в течение дополнительного 1 ч при комнатной температуре. Смесь очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-5% метанол в дихлорметане с 0.1% ацетата аммония, добавленного к смеси, и 12 г колонку с силикагелем.
Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением
продукта (36.4 мг, 0.044 ммоль, выход 99%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 826.5 (М+Н)+, 2.59 мин (ме-
тодика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.92 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.18 (d, J=7.93 Гц, 2H), 6.91 (t, J=6.10 Гц, 1H), 5.28 (d, J=4.88 Гц, 1H), 4.92 (br. s., 2H), 3.95 (br. s., 2H), 3.90 (s, 3H), 3.72 (t, J=4.58 Гц, 4H), 3.58 (t, J=5.04 Гц, 2H), 3.33-3.48 (m, 3H), 3.20-3.33 (m, 2H),2.96-3.08 (m, 2H), 2.60 (t, J=5.80 Гц, 2H), 2.52 (br. s., 5H), 2.43 (t, J=8.09 Гц, 2H), 1.95-2.18 (m, 5H), 1.81 (dd, J=1 1.90, 7.93 Гц, 1H), 0.99 (s, 3H), 0.98-1.72 (m, 19H), 0.97 (s, 3H),0.95 (s, 3H), 0.91 (s, 6H).
Стадия 2: К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(3 -(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-3 a-(3-(2-оксопирролидин-1 -ил)пропилкарбамоил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.0364 г, 0.044 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.220 мл, 0.220 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 15 ч, затем очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции,
содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением
продукта (31 мг, 0.035 ммоль, выход 81%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 812.5 (М+Н)+, 2.11 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.65 (br. s., 1H), 7.94 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.17 (d, J=8.24 Гц, 2H), 6.91 (t, J=6.26 Гц, 1H), 5.25 (d, J=4.88 Гц, 1H), 4.88-4.93 (m, 2H), 3.88-3.98 (m, 2H), 3.80 (t, J=4.58 Гц, 4H), 3.67 (t, J=5.49 Гц, 2H), 3.34-3.46 (m, 3H), 3.21-3.33 (m, 2H), 3.00-3.09 (m, 2H), 2.40-2.51 (m, 3H), 2.14 (d, J=12.21 Гц, 1H), 1.96-2.10 (m, 5H), 1.80 (dd, J=11.90, 7.63 Гц, 1H), 0.96-1.71 (m, 24H), 0.95 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.90 (br. s., 6H).
Пример 16. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-(1H-имидазол-1-ил)пропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-(1H-имидазол-1-ил)пропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата
К суспензии метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(хлоркарбонил))-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (25 мг, 0.035 ммоль) (синтез описан выше при получении метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^,12,13,13^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата) в DCE (1 мл) добавляли 1-(3-аминопропил)имидазол (8 мкл, 0.067 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем добавляли дии-зопропилэтиламин (0.023 мл, 0.132 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре, затем сразу очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-5% метанол в ди-хлорметане с 0,1% добавленного гидроксида аммония, и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (10.8 мг, 0.013 ммоль, выход 38.5%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 809.4 (М+Н)+, 2.55 мин (методика
1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.91 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.18 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.69 (t, J=5.95 Гц, 1H), 5.27 (d, J=4.88 Гц, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.99 (td, J=6.94, 2.90 Гц, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.72 (t, J=4.73 Гц, 4H), 3.53-3.61 (m, 2H), 3.30-3.38 (m, 1H), 3.13-3.22 (m, 1H), 3.00 (td, J=11.14, 3.97 Гц, 1H), 2.60 (t, J=5.80 Гц, 2H), 2.42-2.55 (m, 5H), 2.09 (dd, J=17.24, 6.26 Гц, 1H), 1.94-2.04 (m, 3H), 1.88 (d, J=13.73 Гц, 1H), 0.99-1.75 (m, 18H), 0.99 (s, 3H), 0.98 (s,
3H), 0.95 (s, 3H), 0.91 (s, 6H).
Стадия 2:
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-(1H-имидазол-1-ил)пропилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.0108 г, 0.013 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.067 мл, 0.067 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 15 ч, затем смесь охлаждали до комнатной температуры. К смеси добавляли дополнительные 0.067 мкл 1 н. NaOH и ее нагревали до 75°C. Через 8 ч нагревания смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 63 ч при комнатной температуре. Смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (9 мг, 10.19 мкмоль, выход 76%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 795.5 (М+Н)+, 2.09 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.95 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.64 (s, 1H), 7.16 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.12 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.71 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.88 Гц, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.96-4.06 (m, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.73-3.81 (m, 4H), 3.61-3.67 (m, 2H), 3.34-3.46 (m, 1H), 3.11-3.20 (m, 1H), 2.97-3.05 (m, 1H), 2.59-2.76 (m, 6H), 2.45 (br. s., 1H), 1.95-2.10 (m, 4H), 1.89 (d, J=13.43 Гц, 1H), 0.96-1.74 (m, 18H), 0.97
(s, 6H), 0.94 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).
Пример 17. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(карбоксиметил-амино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(2-метокси-2-оксоэтиламино)этилкарбамоил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата
К суспензии метил 4-((1R?3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR?13aR,13bS)-3a-(хлоркарбонил))-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3 ^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-Ш-тциклопентаИхризен^-ил^ензоата (32.2 мг, 0.0447 ммоль) (синтез описан выше при получении метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR 11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(3-этокси-3-оксопропилкарбамоил)-5а,5b,8,8,1^-пентаметил-1 -(3 -(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата) в DCE (1 мл) добавляли метил 2-(2-аминоэтиламино)ацетат (8.86 мг, 0.067 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч при комнатной температуре. К смеси добавляли диизопропилэтиламин (0.023 мл, 0.134 ммоль), и смесь перемешивали в течение 3.5 ч при комнатной температуре. Добавляли дополнительные 10 мг метил 2-(2-аминоэтиламино)ацетата, и реакцию перемешивали в течение дополнительных 19 ч при комнатной температуре. К смеси добавляли дополнительные 10 мг метил 2-(2-аминоэтиламино)ацетата, и ее еще перемешивали при комнатной температуре. После перемешивания смеси в течение дополнительных 60 ч при комнатной температуре ее сразу очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% метанол в дихлорметане с 0.1% гид-роксида аммония, добавленного к смеси, и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (31 мг, 0.027 ммоль, выход 59.5%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/e 816.5 (М+Н)+, 2.57 мин (методика 1).
Стадия 2: К раствору 2-(2-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(метоксикар-бонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(3-(2-морфолиноэтокси)проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксамидо)этиламино)уксусной кислоты (30 мг, 0.026 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.2 мл, 0.200 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение 15 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (10 мг, 0.013 ммоль, выход 48.5%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 788.5 (М+Н)+, 2.01 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, уксусная кислота 5 ppm 8.03 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.29 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.37 (d, J=4.88 Гц, 1H), 5.01 (br. s., 1H), 5.00 (br. s., 1H), 3.29-4.12 (m, 20H), 3.00-3.10 (m, 1H), 2.51-2.60 (m, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.08-2.26 (m, 21H), 1.07 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример 18. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этил-карбамоил)-1-(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Стадия 1:
Получение трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этилкар-бамоил)-1 -(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,1 la, lib, 12,13,13a, 13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
В виалу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фе-нил)-1 -(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1 -ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновую кислоту (0.1 г, 0.132 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M В DCM) (2 мл, 4.00 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и концентрировали два дополнительных раза для удаления оставшегося окса-лилхлорида. После сушки остатка под вакуумом его растворяли в DCE (2 мл) и добавляли диизопропилэ-тиламин (0.069 мл, 0.396 ммоль) с последующим добавлением Ш,Ш-диметилэтан-1,2-диамина (0.022 мл, 0.198 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 67 ч, затем разбавляли 7 мл воды и экстрагировали дихлорметаном (3x7 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% метанол в дихлорметане и 12 г колонку с си-ликагелем. Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (73.4 мг, 0.089 ммоль, выход 67%) в виде не совсем белой пены. ЖХ/МС: m/e 828.6 (М+Н)+, 2.54 мин (методика 1).
Стадия 2:
К раствору трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-(2-(диметиламино)этил-карбамоил)-1-(3-(4-метокси-N-метил-4-оксобутанамидо)проп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (73 мг, 0.088 ммоль) в DCM (1 мл) добавляли TFA (0.1 мл, 1.298 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи в течение 16 ч, затем концентрировали в потоке азота. Остаток разбавляли 1,4-диоксаном (2 мл) и нагревали до 75°C. Через 22 ч нагревания смесь охлаждали до комнатной температуры. Затем ее подкисляли 1 н. HCl, нагревали тепловой пушкой и оставляли при комнатной температуре на протяжении ночи. Когда кристаллов не осталось, смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Остаток повторно очищали второй раз, используя ту же методику ВЭЖХ. Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (14 мг, 0.018 ммоль, выход 21%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 772.5 (М+Н)+, 2.05 мин (методика 1).
Примеры 19-21.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксипроп-1-ен-2-ил)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бен-зойной кислоты (пример 19), 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксипропан-2-ил)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[a]хри-зен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1 (пример 20) и 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксипропан-2-ил)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2 (пример 21)
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^,12,13,13^^4^^^^-гидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (3.02 г, 4.29 ммоль) в CCl4 (50 мл) добавляли NBS (0.954 г, 5.36 ммоль).
Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15.5 ч, затем фильтровали через слой целита для удаления твердых веществ и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя 160 г колонку с силикагелем и градиент 0-10% этилацетат в гексанах. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 2.22 г продукта в виде белой пены (чистота 70%), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 = 7.87 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.42-7.30 (m, 5Н), 7.16 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 5.26 (d, J=4.9 Гц, 1H), 5.22-5.07 (m, 3H), 5.04 (s, 1H), 4.01-3.96 (m, 2Н), 3.09 (td, J=11.1, 4.7 Гц, 1H), 1.58 (s, 9H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 6Н), 0.80 (s, 3H), 2.36-0.78 (m, 22Н).
Стадия 2: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,1 ^^Ha^^R^m(tm) 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(4-этокси-4-оксобут-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,1 Ы-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,1 la,l 1ЬД2ДЗДЗаДЗЬ-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоксилата
В сосуд, вьщерживающий давление, содержащий раствор (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-
бензил 1 -(3 -бромпроп-1 -ен-2-ил)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3^4,5,5^5^,6,7,7^8,11,11^11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (1.5 г, 1.339 ммоль) в 1,4-диоксане (20 мл) и этаноле (10 мл), добавляли карбонат калия (0.370 г, 2.68 ммоль). Смесь дегазировали в течение 10 мин барботированием азота и добавляли тетракиспалладий (0.077 г, 0.067 ммоль). Смесь откачивали и снова заполняли азотом 3 раза, затем заполняли монооксидом углерода и откачивали два раза, затем окончательно заполняли при 85 psi (фунтов на квадратный дюйм) монооксидом углерода и нагревали до 85°C на масляной бане. Через 24 ч нагревания смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли 25 мл воды и экстрагировали этилацетатом (3x25 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% EtOAc в гексанах и 90 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением основного и минорного продуктов, при этом основной продукт (0.591 г, 0.761 ммоль, выход 57%) является указанным в заголовке соединением. ЖХ/МС: m/e 794.5 (М+18), 4.08 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 = 7.87 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 7.45-7.29 (m, 5Н), 7.16 (d, J=7.6 Гц, 2Н), 5.26 (d, J=5.5 Гц, 1H), 5.20-5.05 (m, 2H), 4.97 (s, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.14 (q, J=7.1 Гц, 2Н), 3.11-2.95 (m, 3H), 2.37-2.18 (m, 2H), 2.08 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.01-1.85 (m, 2H), 1.58 (s, 9H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90
(s, 6Н), 1.72-0.88 (m, 20H), 0.80 (s, 3H).
Стадия 3: Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(4-этокси-4-оксобут-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(4-этокси-4-оксобут-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,13^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.588 г, 0.757 ммоль) в DCE (7 мл) добавляли три-этиламин (0.169 мл, 1.211 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (0.251 мл, 1.513 ммоль) и ацетат палладия (II) (0.042 г, 0.189 ммоль). Смесь промывали азотом и нагревали до 60°C. Через 5 ч нагревания смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через слой целита для удаления твердых веществ и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 = 7.86 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 7.15 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.26 (d, J=5.5 Гц, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.13 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 3.11-2.95 (m, 3H), 2.30-2.21 (m, 2H), 2.08 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.02-1.91 (m, 1H), 1.88-1.79 (m, 1H), 1.57 (s, 9H), 0.94 (s, 9Н), 1.71-0.84 (m, 35H), 0.27 (s, 6H).
Стадия 4:
Получение (1 R,3aS,5aR, 5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1 -(4-этокси-4-оксобут-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1 -(4-этокси-4-оксобут-1 -ен^-ил)^^^^,! 1 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (0.607 г, 0.757 ммоль) в THF (10 мл) добавляли тетрабутиламмония фторид гидрат (0.317 г, 1.136 ммоль). Желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3.5 ч, затем разбавляли 20 мл воды и 10 мл 1 н. HCl и экстрагировали дихлорметаном (3x30 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-50% этилацетат в гексанах и 40 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением продукта (0.485 г, 0.706 ммоль, выход 93%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 685.5 (М-Н)-, 2.90 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 = 7.87 (d, J=7.93 Гц, 2H), 7.16 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.27 (d, J=4.58 Гц, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.15 (q, J=7.02 Гц, 2H), 2.97-3.06 (m, 3H), 2.30 (d, J=12.82 Гц, 1H), 2.24 (td, J=12.13, 3.20 Гц, 1Н), 2.01-2.14(m, 2H), 1.97 (dd, J=12.51, 7.93 Гц, 1H), 1.58 (s, 9H), 1.27 (t, J=7.02 Гц, 3H), 1.01 (s, 3H), 1.00-1.72 (m, 17H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.91 (s, 6H).
Стадия 5:
Получение трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(2-(диметиламино)этил-карбамоил)-1 -(4-этокси-4-оксобут-1 -ен^-ил)^^^^, 11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата, НС1
В высушенную в печи колбу, содержащую (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)-1-(4-этокси-4-оксобут-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,1^-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновую кислоту (0.15 г, 0.218 ммоль), добавляли оксалилхлорид (2M В DCM) (5 мл, 10.00 ммоль). Смесь переме
шивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DCM и концентрировали два дополнительных раза для удаления всех избытков окса-лилхлорида. Сырое вещество растворяли в DCE (2 мл), и добавляли диизопропилэтиламин (0.114 мл, 0.655 ммоль) с последующим добавлением ^^диметилэтилендиамина (0.036 мл, 0.328 ммоль) и DMAP (1 мг, 8.19 мкмоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x10 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии, используя градиент 0-10% метанол в дихлорметане и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (0.12 г, 0.151 ммоль, выход 69.3%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 757.6 (М+Н)+, 2.29 мин (методика 6).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 = 12.41 (br. s., 1H), 7.87 (d, J=8.24 Гц, 2H), 7.73 (br. s., 1H), 7.15 (d, J=8.24 Гц, 2H), 5.24-5.28 (m, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.14 (q, J=7.32 Гц, 2H), 3.62-3.80 (m, 2H), 3.05-3.20 (m, 3H), 2.95-3.03 (m, 2H), 2.81-2.89 (m, 6H), 2.42-2.51 (m, 1H), 2.36 (d, J=14.04 Гц, 1H), 2.09 (dd, J=17.40, 6.41 Гц, 1H), 1.86-1.99 (m, 2H), 1.58 (s, 9H), 1.26 (t, J=7.17 Гц, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95-1.72 (m,
17H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.90 (s, 6H).
Стадия 6:
К раствору трет-бутил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(2-(диметиламино)этил-карбамоил)-1-(4-этокси-4-оксобут-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.115 г, 0.145 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл) добавляли 1 н. NaOH (0.725 мл, 0.725 ммоль). Смесь нагревали до 85°C в течение 39 ч. К смеси добавляли NaOH (10 н., 0.1 мл) и ее снова нагревали до 85°C. Через 22 ч нагревания смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли до рН = 1 1 н. HCl. Образовавшиеся твердые вещества собирали фильтрованием с получением 85 мг смеси продуктов, которые использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. В виалу, содержащую смесь продуктов, добавляли 3 мл 4 н. HCl в 1,4 диоксане. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч, затем концентрировали в потоке азота. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Фракции, содержащие смесь продуктов, соединяли и концентрировали под пониженным давлением. Смесь продуктов растворяли в уксусной кислоте (2 мл) и метаноле (4 мл), дегазировали азотом и добавляли 20 мг 10% Pd/C. Смесь перемешивали под давлением 1 атмосфера H2 в течение 3 ч, затем добавляли дополнительные 100 мг Pd/C, и смесь перемешивали под давлением 1 атмосфера H2. Через 21 ч перемешивания смесь фильтровали через слой целита и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 1). Три главных пика отделяли от первого очисткой с помощью препаративной ВЭЖХ. Фракции, содержащие моногидрированный продукт, соединяли, концентрировали и повторно очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 10). Каждый из двух оставшихся продуктов концентрировали с получением двух диастереомеров бис-гидроксилированного продукта.
Пример 19: (Изолят 1) 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксипроп-1-ен-2-ил)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1Н-циклопентаИхризен^-ил^ензойная кислота (4.0 мг, 0.006 ммоль, выход 4%). ЖХ/МС: m/e 675.5 (М+Н)+, 2.05 мин (методика 1).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d с тремя каплями метанола-dzi для растворения (относится к пику хлороформа при 7.27 ppm)) 5 = 7.81 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.12 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.66 (s, 1H), 3.35-3.29 (m, 2Н), 3.12 (td, J=10.7, 3.9 Гц, 1H), 2.62 (t, J=5.9 Гц, 2Н), 2.40 (s, 6H), 2.00 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.86 (s, 3H), 0.84 (br. s., 3H), 2.49 - 0.71 (m, 25Н), 0.65 (s, 3H), 0.59 (s, 3H).
Пример 20: (Изолят 2) 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксипропан-2-ил)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота, Изомер 1 (6.5 мг, 0.010 ммоль, выход 7%). ЖХ/МС: m/e 677.6 (М+Н)+, 2.19 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d с тремя каплями метанола-cLi для растворения (относится к пику хлороформа при 7.27 ppm)) 5 = 7.82 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 7.11 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 3.37 (t, J=5.2 Гц, 2Н), 2.782.70 (m, 2Н), 2.50 (s, 6Н), 2.39-2.24 (m, 3H), 2.16-2.08 (m, 2Н), 2.07-1.94 (m, 3H), 1.76-1.60 (m, 4Н), 0.88 (s, 3H), 0.84 (br. s., 6Н), 0.74 (d, J=6.1 Гц, 3H), 1.51-0.70 (m, 17Н), 0.63 (s, 3H), 0.59 (s, 3H).
Пример 21: (Изолят 3) 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксипропан-2-ил)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2 (5.5 мг, 0.008 ммоль, выход 5.5%). ЖХ/МС: m/e 677.5 (М+Н)+, 2.04 мин (методика 1).
1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d с тремя каплями метанола-dzi для растворения (относится к пику хлороформа при 7.27 ppm)) 5 = 7.89 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.19 (d, J=8.5 Гц, 2Н), 3.53-3.46 (m, 2Н), 2.96-2.88
(m, 2Н), 2.66 (br. s., 6Н), 2.48-2.31 (m, 4Н), 2.20-0.74 (m, 37Н), 0.71 (s, 3H), 0.65 (s, 3H).
Пример 22. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3 -енкарбоксилата
Раствор 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR 11aS,11bR,13aR 13bR)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты, полученной как описано в WO 13123019, (0.1 г, 0.144 ммоль) в толуоле (2 мл) и метаноле (0.5 мл), охлаждали до 0°C. К раствору добавляли по каплям TMS-диазометан (2M В простом эфире) (0.086 мл, 0.173 ммоль). После прекращения выделения газа смесь нагревали до комнатной температуры, и желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь подкисляли осторожным добавлением 1 мл уксусной кислоты, затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток разбавляли насыщенным водным бикарбонатом натрия (15 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x10 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке продукта (0.086 г, 0.121 ммоль, выход 84%) в виде не совсем белой пены.
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 = 5.35 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=5.0 Гц, 1H), 4.71 (br. s., 1H), 4.59 (br. s., 1H), 3.69 (s, 3H), 3.14-2.97 (m, 8H), 2.74-2.41 (m, 6H), 2.34-2.27 (m, 2H), 2.22-2.13 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 2.06-0.78 (m, 40H).
Стадия 2: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3 -енкарбоксилата
В колбу, содержащую метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоксилат (0.086 г, 0.121 ммоль), добавляли соль ацетилацетонат кобальта (II) (0.062 г, 0.243 ммоль). Смесь разбавляли THF (2 мл) и добавляли фенилсилан (0.060 мл, 0.485 ммоль). Смесь продували азотом, затем помещали в атмосферу баллонного кислорода. Через 1.5 ч смесь разбавляли дихлормета
ном и фильтровали через 4 г колонку с силикагелем (промывали 10% MeOH в DCM). Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток повторно очищали, используя градиент 0-8% MeOH в дихлорметане и 12 г колонку с силикагелем.
Фракции, содержащие основной изолят, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 56 мг светло-зеленого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3: К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоксилата (0.056 г, 0.077 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл) добавляли NaOH (1 н.) (0.385 мл, 0.385 ммоль), и смесь нагревали до 70°C. После нагревания смеси в течение 18 ч ее охлаждали до комнатной температуры и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 21). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-гидро-ксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты, TFA (9.2 мг, 11.1 мкмоль, выход 14%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 713.6 (М+Н)+, 1.44 мин (методика 6).
1H ЯМР (400 МГц, уксусная кислота) 5 = 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=5.8 Гц, 1H), 3.38-3.01 (m, 12H), 2.65-2.55 (m, 1H), 1.28 (s, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 2.40-0.84 (m, 38H).
Пример 23.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты
Стадия 1: Получение этил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3 -енкарбоксилата
В колбу, содержащую этил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоксилат (46.5 мг, 0.068 ммоль), получен как описано в WO 13169578, добавляли соль ацетилаце-тон кобальта (II) (34.8 мг, 0.135 ммоль). Смесь разбавляли THF (2 мл) и добавляли фенилсилан (0.033 мл, 0.271 ммоль). Смесь продували азотом, затем помещали в атмосферу баллонного кислорода. Через 4.5 ч перемешивания смесь разбавляли дихлорметаном и сразу очищали, используя градиент 0-10% MeOH в дихлорметане и 12 г колонку с силикагелем. Фракции, содержащие два основных изолята, концентрировали под пониженным давлением с получением целевого соединения (7.5 мг, 0.011 ммоль, выход 16%) в виде светло-зеленого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 705.7 (М+Н)+, 1.76 мин (методика 6).
Стадия 2: К раствору этил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоксилата (7.5 мг, 11 мкмоль) в 1,4-диоксане (0.5 мл) добавляли NaOH (1 н.) (0.074 мл, 0.074 ммоль). Смесь нагревали до 75°C в течение трех часов, затем охлаждали до комнатной температуры и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (методика 22). Фракции, содержащие целевой продукт, со
единяли и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-((1К,3а8,5аК,5ЪК,7аК,11а8,11ЪК,13аК,13Ъ8)-3а-((2-(2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты, TFA (1.8 мг, 2.3 мкмоль, выход 22%) в виде прозрачной бесцветной пленки. ЖХ/МС: m/e 677.7 (М+Н)+, 1.40 мин (методика 6).
1Н ЯМР (500 МГц, уксусная кислота) 5 = 5.39 (br. s., 1Н), 5.23 (d, J=6.3 Гц, 1Н), 4.74 (s, 1Н), 4.57 (s, 1Н), 4.23-4.16 (m, 1Н), 3.98-3.44 (m, 11Н), 2.64-2.56 (m, 1Н), 2.41-0.74 (m, 48Н). Пример А1.
Получение 4-(( 1 R,3 aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13 aR, 13bS)-3 а-((трет-бутоксикарбонил)амино)-1 -(3 -гидроксипроп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)-2-фторбензойной кислоты
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата, получен как описано в WO201206190 (1.5 г, 2.67 ммоль), и триэтиламина (0.744 мл, 5.34 ммоль) в ТОТ (30 мл) добавляли ди-трет-бутил дикарбонат (0.930 мл, 4.00 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь затем быстро охлаждали дистиллированной водой (15 мл), экстрагировали дихлорметаном (2x15 мл). Органические фазы соединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого продукта в виде бесцветного масла (1.8 г, 100%). ЖХ/МС: m/e 662.42 (М+Н)+, 3.39 мин (методика 4).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (1800 мг, 2.72 ммоль) в дихлорметане (20 мл) при 0°C добавляли 3-хлорбензопероксо кислоту (670 мг, 2.99 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при 0°C и затем нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч.
Реакционную смесь затем быстро охлаждали насыщенным водным Na2S2O3 (25 мл), экстрагировали дихлорметаном (2x30 мл), органические фазы соединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением целевого продукта в виде бесцветно
го масла. Остаток очищали на силикагеле с 0-30% этилацетатом/гексанами с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (1.0 г, 54%). ЖХ/МС: m/e 678.39 (М+Н)+, 3.69 мин (методика 4). Стадия 3.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-1-(3-гидроксипроп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)-2-фторбензоата
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (200 мг, 0.295 ммоль) и НС1 (0.516 мл, 2.065 ммоль) в THF (2 мл) перемешивали в течение 2 ч, пока ЖХ/МС не показала отсутствие исходного материала. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, остаток растворяли в аце-тонитриле (1 мл) и очищали с помощью ВЭЖХ с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (30 мг, 15%). ЖХ/МС: m/e 578.5 (М+Н)+, 1.93 мин (методика 6).
Стадия 4:
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-1-(3-гидроксипроп-1-ен-2-ил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (30 мг, 0.044 ммоль) и 1 н. NaOH (0.443 мл, 0.443 ммоль) в диоксане (1 мл) нагревали при 78°С в течение 3 ч. Реакционная смесь осаждалась после охлаждения до комнатной температуры. Белое твердое вещество отфильтровывали и промывали водой (2 мл) и ацетонитрилом (2 мл) с получением целевого продукта (19 мг, 61%). ЖХ/МС: m/e 664.5 (М+Н)+, 2.55 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, ацетон) 5 7.90 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.10 (dd, J=8.0, 1.5 Гц, 1Н), 7.02 (dd, J=11.9, 1.4 Гц, 1H), 5.38 (dd, J=6.1, 1.9 Гц, 1H), 5.01 (d, J=1.8 Гц, 1H), 4.88 (s, 1H), 4.10 (s, 2H), 2.72-1.08 (m, 23H), 1.42 (s, 9Н), 1.15 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример А2.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-амино-1-(3-гидроксипроп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопен-та[а]хризен-9-ил)-2-фторбензойной кислоты
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-амино-1-(3-гидроксипроп-1-ен-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопен-таИхризен^-ил^-фторбензоата (6 мг, 10.38 мкмоль) и 1 н. NaOH (0.104 мл, 0.104 ммоль) нагревали при 78°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем нейтрализовали 1 н. НС1 до рН~4-6, белый осадок отфильтровывали и промывали дистиллированной водой с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (4 мг, 65%). ЖХ/МС: m/e 564.18 (М+Н)+, 2.44 мин (методика 4).
1Н ЯМР (400 МГц, уксусная кислота) 5 7.92 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.04 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 6.98 (d, J=12.0 Гц, 1H), 5.38 (d, J=4.8 Гц, 1H), 5.08 (s, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.21 (s, 2Н), 2.78-2.60 (m, 1H), 2.33-1.13 (m, 22Н), 1.16 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H).
Пример A3.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(N-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензойной кислоты!
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (150 мг, 0.221 ммоль) и хлористого водорода (1.106 мл, 4.43 ммоль) в THF (3 мл) перемешивали в течение 30 ч. Реакцию останавливали и быстро охлаждали дистиллированной водой (4 мл), экстрагировали дихлорметаном (3x2 мл), объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (100 мг, 78%). ЖХ/МС: m/e 578.2 (М+Н)+, 1.98 мин (методика 4).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3 ^,4,5^,5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-октадекагидро-1H-циклопен-таИхризен^-ил^-фторбензоата (100 мг, 0.173 ммоль), 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксид (68.4 мг, 0.346 ммоль), фосфата калия (110 мг, 0.519 ммоль) и иодида калия (28.7 мг, 0.173 ммоль) в ацетонит-риле (1 мл) нагревали при 120°С в течение 2 ч. Реакционную смесь быстро охлаждали дистиллированной водой (3 мл), экстрагировали дихлорметаном (3x2 мл), объединенные органические фазы высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого вещества в виде желтого масла. Сырое вещество очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (20 мг, 16%). ЖХ/МС: m/e 739.55 (М+Н)+, 2.09 мин (методика 6).
Стадия 3.
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)ами-но)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (20 мг, 0.027 ммоль) и 1 н. NaOH (0.271 мл, 0.271 ммоль) в диоксане (1 мл) нагревали при 78°С в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотио-морфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-
2,3,3 a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,1^,11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензойной кислоты в виде бесцветного масла (10 мг, 50%). ЖХ/МС: m/e 725.55 (М+Н)+, 2.67 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, ацетонитрилч!3) 5 7.81 (t, J=8.0 Гц, 1Н), 7.04 (dd, J=8.0, 1.3 Гц, 1Н), 6.99 (dd, J=12.2, 1.4 Гц, 1H), 5.33 (dd, J=6.1, 1.9 Гц, 1H), 3.28-2.54 (m, 15H), 2.21-0.98 (m, 22H), 1.18 (s, 3H), 1.070.99 (m, 9H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
Пример А4 и пример А5.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(N-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,1Ы-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензойной кислоты (диастереоизомер 1 и диастереоизомер 2)
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата
К смеси метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хри-зен-9-ил)-2-фторбензоата (2000 мг, 3.56 ммоль) и карбоната натрия (1509 мг, 14.24 ммоль) в THF (50 мл) и воде (50 мл) при комнатной температуре добавляли (9Н-флюорен-9-ил)метил хлорформиат (1105 мг, 4.27 ммоль) в THF (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, быстро охлаждали дистиллированной водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x6 мл), объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество очищали, используя силикагель с 0-30% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (2.3 г, 81%). ЖХ/МС: m/e 784.3 (М+Н)+, 4.7 мин (методика 4).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-метилоксиран-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (950 мг, 1.212 ммоль) в дихлорметане (4 мл) при 0°С добавляли 3-хлорбензопероксокислоту (326 мг, 1.454 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч, быстро охлаждали насыщенным Na2S2O3 (25 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x30 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученное в результате желтое масло
очищали, используя силикагель с 0-30% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (780 мг, 80%). ЖХ/МС: m/e 800.29 (М+Н)+, 3.21 мин (методика 4). Стадия 3.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)мето-кси)карбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--оксопропан-2-ил)-
2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)ме-токси)карбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(2-метилоксиран-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (780 мг, 0.975 ммоль) в THF (30 мл) при комнатной температуре добавляли BF3OEt2 (0.247 мл, 1.950 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, быстро охлаждали дистиллированной водой (40 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x30 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество очищали, используя силикагель с 0-35% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереоизоме-ров (белое твердое вещество, 480 мг, 62%). ЖХ/МС: m/e 800.6 (М+Н)+, 3.40/3.61 мин (методика 6).
Стадия 4. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)мето-кси)карбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--оксопропан-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (60 мг, 0.075 ммоль) в THF (2 мл) при комнатной температуре добавляли борогидрид натрия (5.67 мг, 0.150 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, затем быстро охлаждали дистиллированной водой (2 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x2 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереомеров (белое твердое вещество, 50 мг, 83%). ЖХ/МС: m/e 802.6/802.6 (М+Н)+, 2.98/3.41 мин (методика 6). Стадия 5.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-цикло-пента[а]хризен-9-ил)-2-фторбензоата
СН20Н
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (50 мг, 0.062 ммоль) в THF (1 мл) при 20°С добавляли пиперидин (106 мг, 1.247 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при 20°С и затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в ацетонитриле (2 мл) и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением двух диастереомеров указанного в заголовке соединения: диастереомер 1 (12 мг, 33%) и диастерео-мер 2 (20 мг, 55%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/e 580.5/580.6 (М+Н)+, 1.56/1.60 мин (методика 6).
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопен-та[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (диастереомер 1), 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксида (20.46 мг, 0.103 ммоль), фосфата калия (21.97 мг, 0.103 ммоль) и иодида калия (5.73 мг, 0.034 ммоль) в ацетонитри-ле (1 мл) нагревали при 120°С в течение 15 ч. Реакционную смесь быстро охлаждали водой (2 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x2 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением метил 4-((1R,3 aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13 aR, 13bR)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)--гидро-ксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (диастереомер 1) в виде белого твердого вещества (9 мг, 35%). ЖХ/МС: m/e 741.44 (М+Н)+, 2.00 мин (методика 4).
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)ами-но)-1-(1-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 2) получали, следуя методике, аналогичной описанной выше для диастереомера 1, используя метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-гидроксипропар-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пента-метил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 2) в качестве исходного материала. Продукт выделяли в виде белого твердого вещества (22 мг, 86%). ЖХ/МС: m/e 741.4 (М+Н)+, 2.24 мин (методика 4).
Стадия 7.
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (диастереомер 1) (9 мг, 0.012 ммоль) и гидроксида натрия (0.297 мл, 0.297 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) нагревали при 80°С в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением примера А4: 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензойной кислоты (диастереомер 1) в виде белого твердого вещества (5 мг, 22%). ЖХ/МС: m/e 727.6 (М+Н)+, 1.34 мин (методика 6).
1Н ЯМР (500 МГц, уксусная кислота) 5 7.97 (t, J=8.0 Гц, 1Н), 7.10 (dd, J=8.0, 1.4 Гц, 1Н), 7.04 (dd, J=11.8, 1.3 Гц, 1H), 5.44 (d, J=4.7 Гц, 1H), 3.86 (dd, J=11.2, 5.7 Гц, 1H), 3.67-3.54 (m, 1H), 3.47-3.24 (m, 8Н), 3.22-3.00 (m, 4Н), 2.63-2.43 (m, 1H), 2.35-2.22 (m, 2Н), 2.17-1.30 (m, 21Н), 1.31 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 1.00 (d, J=6.9 Гц, 3H).
Пример А5.
4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензойную кислоту (диастереомер 2) получали, следуя методике, описанной выше для диастереомера 1, используя метил 4-((1 R,3 aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR,13bR)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)--гидро-ксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 2) в качестве исходного материала. Продукт выделяли в виде белого твердого вещества (13 мг, 57%). ЖХ/МС: m/e 727.6 (М+Н)+, 1.93 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, ацетонитрил^3) 5 7.81 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.03 (dd, J=8.0, 1.5 Гц, 1Н), 7.00-6.93 (m, 1Н), 5.31 (dd, J=6.0, 1.8 Гц, 1H), 3.34-2.89 (m, 14H), 2.65-2.47 (m, 1H), 2.18-1.05 (m, 23Н), 1.16 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.76 (d, J=6.8 Гц, 3H).
Пример А6 и пример А7. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксиэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензойной кислоты (диастереомер 1 и диастереомер 2)
Стадия 1. Получение 2-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-9-(3-фтор-4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-1-ил)пропано-вой кислоты
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-оксопропан-2-ил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (диастереомерная смесь) (150 мг, 0.187 ммоль) в tBuOH (4 мл) и THF (8 мл) при 20°С добавляли раствор дигидрогенфосфата натрия (202 мг, 1.687 ммоль) и хлорита натрия (115 мг, 1.275 ммоль) в воде (5 мл) на протяжении 0.5-1 ч. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 дополнительного часа при 20°С, быстро охлаждали водой (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x10 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереомеров (белое твердое вещество, 100 мг, 65%). ЖХ/МС: m/e 816.3 (М+Н)+, 2.68 мин (методика 4).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1-метокси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата
К раствору 2-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)меток-си)карбонил)амино)-9-(3-фтор-4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-ил)пропано
вой кислоты (100 мг, 0.123 ммоль) в дихлорметане (2 мл) при 20°С добавляли тионилхлорид (0.045 мл, 0.613 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при 20°С и затем концентрировали под пониженным давлением с получением коричневого остатка. К остатку медленно добавляли метанол (4 мл) и смесь перемешивали в течение 10 дополнительных минут. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диасте-реомеров (коричневое твердое вещество, 96 мг, 94%). ЖХ/МС: m/e 830.35/830.34 (М+Н)+, 3.59/3.83 мин (методика 4).
Стадия 3. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-метокси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (диастереомер 1 и диастереомер 2)
МеООС^^
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)--метокси-1 -оксопропан-2-ил)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (96 мг, 0.116 ммоль) в THF (1мл) при 20°С добавляли пиперидин (197 мг, 2.313 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в ацетонитриле (1 мл), и прозрачный раствор очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением двух диастереомеров указанного в заголовке соединения: метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-метокси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-^^^^^-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 1) в виде белого твердого вещества (12 мг, 17%). ЖХ/МС: m/e 607.24 (M)+/591.25(M-NH2)+, 1.88 мин (методика 4) и метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино--метокси-1 -оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 2) в виде белого твердого вещества (23 мг, 33%). ЖХ/МС: m/e 607.24 (M)+/591.25(M-NH2)+, 2.00 мин (методика 4). Стадия 4.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)--метокси-1 -оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (диастереомер 1 и диастереомер 2)
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-метокси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (диастереомер 1) (12 мг, 0.020 ммоль), фосфата калия (24.10 мг, 0.114 ммоль), 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксида (22.44 мг, 0.114 ммоль) и иодида калия (6.28 мг, 0.038 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) нагревали при 120°С в течение 15 ч. Реакционную смесь быстро охлаждали водой (2 мл), экстрагировали дихлорметаном (2x2 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS, 11 bR, 13 aR, 13bR)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)--мето-кси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоата (диастереомер 1) в виде белого твердого вещества (10 мг, 34%). ЖХ/МС: m/e 769.33 (М+Н)+, 2.24 мин (методика 4).
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-метокси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 2) получали, следуя методике, описанной выше для синтеза диастереомера 1, используя метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-1-(1-метокси-1-оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пен-тамет^^^^^^^^^^^^, 11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента^хризен^-ил)^-фторбензоат (диастереомер 2) в качестве исходного материала. Продукт выделяли в виде белого твердого вещества (16 мг, 55%). ЖХ/МС: m/e 769.33 (М+Н)+, 2.26 мин (методика 4).
Стадия 5. Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)--метокси-1 -оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензоата (диастереомер 1) (10 мг, 0.013 ммоль) и гидроксида натрия (0.130 мл, 0.130 ммоль) нагревали при 80°С в течение 2 ч.
Реакционную смесь фильтровали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS, 11 bR, 13 aR, 13bR)--карбоксиэтил)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензойной кислоты (диастереомер 1) в виде белого твердого вещества (4 мг, 39%). ЖХ/МС: m/e 741.25 (М+Н)+, 1.55 мин (методика 4).
1Н ЯМР (500 МГц, ацетонитрил-а3) 5 7.85 (t, J=7.9 Гц, 1Н), 7.08 (dd, J=8.0, 1.6 Гц, 1Н), 7.03 (dd, J=12.1, 1.3 Гц, 1Н), 5.37 (dd, J=6.2, 1.8 Гц, 1Н), 3.34-3.07 (m, 7Н), 3.06-2.88 (m, 5Н), 2.81-2.66 (m, 1Н), 2.36-2.14 (m, 2Н), 2.07-1.26 (m, 21Н), 1.22 (s, 3Н), 1.15 (d, J=7.1 Гц, 3H), 1.06 (s, 3Н), 1.05 (s, 3Н), 1.00 (s, 3Н), 0.98 (s, 3Н).
Пример А7: 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксиэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензойную кислоту (диастереомер 2) получали, следуя методике, описанной выше для синтеза 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-(1-карбоксиэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фтор-бензойной кислоты (диастереомер 1), используя метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)--метокси-1 -оксопропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)-2-фторбензоат (диастереомер 2) в качестве исходного материала. Сырое соединение выделяли в виде белого твердого вещества (7 мг, 69%). ЖХ/МС: m/e 741.5(М+Н)+, 2.21 мин (методика 4).
1Н ЯМР (500 МГц, ацетонитрил-d^ 5 7.85 (t, J=8.0 Гц, 1Н), 7.08 (dd, J=8.0, 1.5 Гц, 1Н), 7.03 (dd, J=12.1, 1.3 Гц, 1Н), 5.37 (dd, J=6.1, 1.7 Гц, 1Н), 3.31-3.08 (m, 7Н), 3.07-2.97 (m, 4Н), 2.95-2.85 (m, 1Н), 2.84-2.70 (m, 2Н), 2.18 (dd, J=17.3, 6.4 Гц, 1Н), 2.09-1.27 (m, 21Н), 1.21 (s, 3Н), 1.09 (s, 3Н), 1.08 (d, J=5.4 Гц, 3H), 1.15 (s, 3Н), 1.00 (s, 3Н), 0.98 (s, 3Н).
Пример А8.
Смесь (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-9-гидрокси-5a,5b,8,8,11a-пентаме-тиликосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (1.6 г, 3.49 ммоль), карбоната калия
Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-9-(4-кар-боксициклогекс-1 -ен-1 -mf)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоновой кислоты
(0.964 г, 6.98 ммоль) и (бромметил)бензола (0.435 мл, 3.66 ммоль) в DMF (10 мл) нагревали при 60°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 100 мл воды. Белый осадок собирали и высушивали под вакуумом с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (1.7 г, 89%). ЖХ/МС: m/e 549.3 (М+Н)+, 2.54 мин (методика 4).
Стадия 2. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bS)-3a-((бензилокси)карбонил)-9-гидрокси-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[а]хризен-1-карбоновой кислоты
К раствору гидроксида натрия (1.749 г, 43.7 ммоль) в воде (30 мл) медленно добавляли бром (0.789
мл, 15.31 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С, этот свежепри-
готовленный оранжевый раствор медленно добавляли к раствору
(1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S, 11 aR, 11bR, 13aR, 13bS)-бензил 1 -ацетил-9-гидрокси-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
икосагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (1.2 г, 2.187 ммоль) в диоксане (40 мл). Реакцион-
ную смесь перемешивали при 0°С в течение 4 ч и затем нагревали до комнатной температуры и переме-
шивали в течение 15 ч. Реакционную смесь затем нейтрализовали концентрированной НС1 до рН=3-4 и
экстрагировали дихлорметаном (2x40 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфа-
том натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество очищали,
используя силикагель с 0-60% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением целе-
вого продукта в виде белого твердого вещества (1.1 г, 91%). ЖХ/МС: m/e 549.18 (М-Н)-, 2.26 мин (мето-
дика 4).
Стадия 3. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((азидокар-бонил)амино)-9-гидрокси-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметиликосагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоксилата
Смесь (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bS)-3a-((бензилокси)карбонил)-9-гидрокси-
5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновой кислоты (1100 мг, 1.997 ммоль), дифенил фосфоразидата (1.076 мл, 4.99 ммоль) и триэтиламина (0.835 мл, 5.99 ммоль) в диокса-не (30 мл) нагревали при 75°С в течение 2 ч, пока ТЬС не показала израсходование исходного материала. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, и остаток очищали, используя сили-кагель с 0-42% этилацетат/гексаны в качестве подвижной фазы, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (1.2 г, 100%). ЖХ/МС: m/e 589.29 (М-Н)-, 2.40 мин (методика 4).
Стадия 4. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((азидокарбо-нил)амино)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-9-оксоикосагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоксилата
Смесь (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((азидокарбонил)амино)-9-гидро-кси-5a,5b,8,8,11a-пентаметиликосагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (1.2 г, 2.031 ммоль) и РСС (1.095 г, 5.08 ммоль) в THF (20 мл) перемешивали при 20°С в течение 17 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, и остаток очищали на силикагеле с 0-35% этилацета-том/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением продукта в виде бесцветного масла (1.15 г, 96%). ЖХ/МС: m/e 589.29 (М+Н)+, 2.48 мин (методика 4).
К раствору (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((азидокарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-оксоикосагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (1.15 г, 1.953 ммоль) в THF (20 мл) добавляли 1 н. гидроксид натрия (9.77 мл, 9.77 ммоль). Реакционную смесь пере-
Стадия 5. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-оксоикосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата
мешивали в течение 1 ч, пока не был израсходован исходный материал. К реакционной смеси добавляли НС1 (0.593 мл, 19.53 ммоль), реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 2 ч и экстрагировали дихлорметаном (3x15 мл), объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (1.0 г, 96%). ЖХ/МС: m/e 520.28 (М+Н)+, 2.30 мин (методика 4).
Стадия 6. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((трет-бутокси-карбонил)амино)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-9-оксоикосагидро-1Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоксилата
Смесь (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-оксоикосагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (97055-013, 011) (1.05 г, 2.020 ммоль), ди-трет-бутил дикарбоната (0.704 мл, 3.03 ммоль) и триэтиламина (0.845 мл, 6.06 ммоль) в THF (10 мл) перемешивали при 20°С в течение 48 ч. Реакционную смесь быстро охлаждали дистиллированной водой (15 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x15 мл), органические слои соединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого вещества, сырое вещество очищали, используя силикагель с 0-40% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением продукта в виде белого твердого вещества (0.83 г, 66%).
1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 7.47-7.31 (m, 5Н), 5.14 (d, J=6.5 Гц, 2Н), 2.63-2.47 (m, 1Н), 2.462.36 (m, 1Н), 2.29 (d, J=12.0 Гц, 1H), 2.23-2.12 (m, 2Н), 2.01-1.90 (m, 1H), 1.86 (dd, J=12.5, 7.9 Гц, 1H), 1.75-1.64 (m, 1H), 1.62-1.09 (m, 17H), 1.46 (s, 9H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.75
(s, 3H).
Стадия 7. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-(((трифторметил)сульфонил)окси)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,1 la,l lb, 12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоксилата
К раствору (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-оксоикосагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (0.83 г, 1.339 ммоль) в THF (10 мл) добавляли бис(триметилсилил)амид калия (2.94 мл, 2.68 ммоль) при -78°С. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 15 мин, добавляли 1ДД-трифтор-К-фенил-1Ч-((трифторметил)сульфонил)метансульфонамид (0.526 г, 1.473 ммоль) в 4 мл THF. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при -78°С. Реакционную смесь быстро охлаждали дистиллированной водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x 20 мл). Органические фазы соединяли, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество очищали, используя си-ликагель с 0-33% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла, которое высушивали под вакуумом с получением белого пенистого твердого вещества (0.5 г, 50%).
1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 7.49-7.30 (m, 5Н), 5.58 (dd, J=6.7, 1.8 Гц, 1Н), 5.14 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 2.29 (d, J=12.0 Гц, 1Н), 2.24-2.12 (m, 3Н), 1.99-1.07 (m, 19Н), 1.46 (s, 9Н), 1.13 (s, 3Н), 1.03 (s, 3Н),
0.93 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.73 (s, 3H).
Стадия 8. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aRД1aSД1bRД3aRД3bR)бензил 1-((трет-бутокси-карбонил)амино)-9-(4-(этоксикарбонил)циклогекс-1 -ен-1 -ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,За,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,1 la, lib, 12,13,13а, 13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-3 а-карбоксилата
Смесь этил 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-енкарбоксилата (149 мг, 0.532 ммоль), (1R,3aR,5aR,5bR,7aRД1aRД1bRД3aRД3bR)-бензил 1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-9-(((трифторметил)сульфонил)окси)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11bД2Д3Д3аД3b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (200 мг, 0.266 ммоль), тетракис(три-фенилфосфин)палладия (0) (15.37 мг, 0.013 ммоль) и бикарбоната натрия (112 мг, 1.330 ммоль) в диоксане (5 мл) и воде (5 мл) нагревали при 76°С в течение 3 ч. Реакционную смесь быстро охлаждали дистиллированной водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x10 мл). Экстракты соединяли, высушивали над
сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырое вещество очищали, используя силикагель с 0-25% этилацетатом/гексанами в качестве подвижной фазы, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (0.15 г, 75%). ЖХ/МС: m/e 778.65 (M+Na)+, 3.77 мин (методика 6).
Стадия 9. Получение (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-9-(4-(этоксикарбонил)циклогекс-1-ен-1-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,^,13^ октадекагидро- 1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты
Смесь (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-9-(4-(этокси-карбонил)циклогекс-1-ен-1-ил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоксилата (80 мг, 0.106 ммоль), трет-бутилдиметилсилана (24.61 мг, 0.212 ммоль), ацетата палладия (II) (11.88 мг, 0.053 ммоль) и триэтиламина (0.044 мл, 0.317 ммоль) в дихлорэтане (2 мл) нагревали при 60°С в течение 3 ч. Затем смесь фильтровали через слой силикагеля для удаления палла-диевого катализатора, фильтраты концентрировали под пониженным давлением с получением сырого вещества в виде желтого масла. Это желтое масло растворяли в 2 мл THF и обрабатывали TBAF (111 мг, 0.317 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 ч, пока не был израсходован исходный материал. Реакционную смесь обрабатывали 1 н. НС1 до достижения рН 4. Добавляли воду (2 мл), и образовывался белый осадок. Осадок собирали и высушивали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого
твердого вещества (45 мг, 64%). ЖХ/МС: m/e 688.6 (M+Na)+, 2.71 мин (методика 6).
Стадия 10. Раствор (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-9-(4-(этоксикарбонил)циклогекс-1-ен-1-ил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,^,13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбоновой кислоты (6 мг, 9.01 мкмоль) и гидроксида натрия (0.090 мл, 0.090 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) нагревали при 80°С в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали и очищали с помощью ВЭЖХ с получением (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-9-(4-карбоксициклогекс-1 -ен-1 -mi)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества (1.5 мг, 25%). ЖХ/МС: m/e 636.23 (М-Н)-, 2.28 мин (методика 4).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 5.39 (br. s., 1Н), 5.21 (t, J=5.6 Гц, 1Н), 2.80-1.04 (m, 30Н), 1.46 (s, 9Н), 1.01-0.77 (m, 15Н).
Пример А9. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикар-бонил)амино)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоновой кислоты
Стадия 1. Получение этил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)циклогекс-3-енкарбоксилата
К раствору (1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-9-(4-(этоксикарбонил)циклогекс-1 -ен-1 -ил)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (10 мг, 0.015 ммоль) в дихлорметане (1 мл) добавляли оксалилдихлорид (0.015 мл, 0.030 ммоль)
при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч, пока не был израсходован исходный материал. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением и высушивали под вакуумом в течение 2 ч с получением промежуточного соединения хлорангидрида в виде желтого масла. К раствору №,М-диметилэтан-1,2-диамина (1.986 мг, 0.023 ммоль) и основания Хунига (5.25 мкл, 0.030 ммоль) в дихлорметане (1 мл) добавляли предварительно приготовленный хлорангидрид в дихлорметане (1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч, быстро охлаждали дистиллированной водой (2 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x2 мл), объединенные органические фазы промывали рассолом (3 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла (6 мг, 54%). ЖХ/МС: m/e 736.6 (М+Н)+, 3.02 мин (методика 3).
Стадия 2. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикар-бонил)амино)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3 ^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,1^,11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен^-ил^иклогекс-3-енкарбоновой кислоты
Смесь этил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-3a-((2-(диметиламино)этил)карбамоил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3 ^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,1^,11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен^-ил^иклогекс-3-енкарбоксилата (6 мг, 8.15 мкмоль) и NaOH (0.082 мл, 0.082 ммоль) в диоксане (1 мл) нагревали при 80°С в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали и очищали с помощью ВЭЖХ с получением целевого продукта в виде бесцветного масла (1.1 мг, 18%). ЖХ/МС: m/e 708.5 (М+Н)+, 1.76 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.51 (s, 1Н), 5.48-5.31 (m, 1Н), 5.20 (d, J=6.3 Гц, 1Н), 3.84-3.46 (m, 2Н), 3.19 (d, J=5.5 Гц, 2Н), 2.86 (br. s., 6H), 2.60 (br. s., 1H), 2.42-1.04 (m, 29Н), 1.44 (s, 9Н), 1.01-0.76
(m, 15Н).
Пример В1.
Получение 4-(( 1 R,3 aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR,13bS)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-гидрокси-1-метоксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1 ^П^^^Ва,^-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1:
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^П^^^Ва,^-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (Изомер 1) и
метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR 11aS,11bR 13aR, 13bS)-1 -(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1 -диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-Ш-циклопентаИхризен^-ш^бензоата (Изомер 2).
К смеси метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-4-тиомор-фолинил)этил)амино)-1-изопропенил-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,1Щ^^Иа,^-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (1.11 г, 1.57 ммоль), лимонной кислоты моногидрата (0.662 г, 3.15 ммоль) и 4-метилморфолин N-оксида (0.203 г, 1.73 ммоль) добавляли трет-бутанол (30 мл) с последующим добавлением воды (30 мл). Затем добавляли тетроксид осмия, 2.5% в трет-бутаноле (0.800 г, 0.988 мл, 0.079 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 27 ч. Оливково-зеленый раствор концентрировали под вакуумом до остатка, и затем повторно растворяли в THF (150 мл). Раствор промывали рассолом (75 мл), затем органические вещества дважды промывали смесью рассола (50 мл) и 1 н. водным NaOH (10 мл), и затем еще раз рассолом (50 мл). Объединенные водные экстракты подвергали обратной экстракции с THF (75 мл), и органические фазы соединяли. К органическим веществам добавляли силикагель (11 г), и смесь концентрировали под вакуумом до сво-боднотекучего порошка, который помещали в вакуумную печь при 50°С в течение 16 ч. Свободнотеку-чий порошок загружали на 80 г колонку с силикагелем. Градиентным элюированием от 100% DCM до 9:1 DCM:MeOH получали разделение на два диастереомера указанного в заголовке соединения. Первый из двух изомеров указанного в заголовке соединения, элюируемый из колонки, представлял собой отмеченный Изомер 1 (0.232 г, выход 20%), и второй из двух изомеров указанного в заголовке соединения, элюируемый из колонки, представлял собой отмеченный изомер 2 (0.476 г, выход 41%).
Аналитические данные для метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (Изомер 1): ЖХ/МС: m/e 739.7 (М+Н)+, 2.12 мин (методика 5).
1Н ЯМР (500 МГц, 1:1 CDC13:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.96-7.87 (m, J=8.1 Гц, 2H), 7.27-7.17 (m, J=8.1 Гц, 2H), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.51 (d, J=11.2 Гц, 1H), 3.19-3.08 (m, 6H), 3.08-2.96 (m, 2H), 2.80-2.63 (m, 2H), 2.63-2.50 (m, 1H), 2.50-2.35 (m, 1H), 2.23-2.05 (m, 2H), 1.98-1.86 (m, 2H), 1.86-1.61 (m, 6H), 1.60-1.40 (m, 7H), 1.39-1.24 (m, 4H), 1.17 (s, 3H), 1.15-1.08 (m, 1H), 1.05 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Аналитические данные для метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (Изомер 2): ЖХ/МС: m/e 739.7 (М+Н)+, 2.13 мин (методика 5).
1Н ЯМР (500 МГц, 1:1 CDC13:MeOD, MeOD lock) 5 ppm7.94-7.87 (m, J=8.3 Гц, 2H), 7.25-7.18 (m, J=8.3 Гц, 2H), 5.30 (d, J=4.9 Гц, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.49 (d, J=10.8 Гц, 1H), 3.40 (d, J=11.0 Гц, 1H), 3.18-2.97 (m, 8H), 2.78-2.64 (m, 2H), 2.61-2.49 (m, 1H), 2.49-2.38 (m, 1H), 2.16 (dd, J=17.2, 6.2 Гц, 1H), 2.06-1.98 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 1H), 1.91-1.83 (m, 1H), 1.83-1.62 (m, 7H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.31-1.24 (m, 2H), 1.18 (s, 3H), 1.16 (br. s., 3H), 1.15-1.06 (m, 2H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (br. s., 3H).
Стадия 2: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-га^
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,1 la,l 1Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
К перемешанной смеси метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (Изомер 2) (0.020 г, 0.027 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридина (0.028 г, 0.135 ммоль) в хлороформе (0.5 мл) добавляли метил трифторметансульфонат (0.022 г, 0.135 ммоль). Виалу, содержащую раствор, герметично закрывали и нагревали до 70°С в течение 18 ч. Добавляли дополнительный метил трифторметансульфонат (0.022 г, 0.135 ммоль), и смесь снова нагревали до 70°С в течение 30 мин. Смесь разбавляли хлороформом (2 мл) и промывали насыщенным водным хлоридом аммония (3x1 мл). Органическую фазу концентрировали в потоке азота и очищали с помощью обращенно-фазовой препаратив
ной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением указанного в заголовке соединения (0.0094 г, выход 35.4%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 753.8 (М+Н)+, 2.31 мин (методика 5).
!И ЯМР (400 МГц, ацетон da) 5 ppm 8.00-7.90 (m, 2Н), 7.35-7.25 (m, J=8.6 Гц, 2Н), 5.34 (dd, J=6.1, 1.7 Гц, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.43-3.35 (m, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.32 (dd, J=7.5, 2.3 Гц, 2Н), 3.29-3.24 (m, 2H), 3.24-3.11 (m, 6H), 3.11-3.01 (m, 2H), 2.45-2.36 (m, 1H), 2.35-2.27 (m, 1H), 2.27-2.18 (m, 2H), 2.18-2.11 (m, 1H), 2.001.92 (m, 3H), 1.88-1.79 (m, 2H), 1.79-1.70 (m, 2H), 1.69-1.53 (m, 6H), 1.53-1.41 (m, 4H), 1.36 (s, 3H), 1.32 (d, J=11.0 Гц, 2Н), 1.19 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H).
Стадия 3: Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(2-гидрокси-1 -метоксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11 a-пентаметил-2,3^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13Ь-ктадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.094 г, 0.0096 ммоль), гидроксида лития моногидрата (0.0040 г, 0.096 ммоль), метанола (0.3 мл), THF (0.3 мл) и воды (0.3 мл) нагревали с перемешиванием до 75°C в течение 80 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением указанного в заголовке соединения (0.0104 г, выход > 100%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 739.6 (М+Н)+, 2.08 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетон d6) 5 ppm 8.03-7.92 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.34-7.25 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.39-5.29 (m, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.42-3.36 (m, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.33-3.29 (m, 2H), 3.29-3.24 (m, 2H), 3.24-3.12 (m, 6Н), 3.11-3.02 (m, 2H), 2.44-2.36 (m, 1H), 2.36-2.27 (m, 1H), 2.27-2.10 (m, 3H), 2.01-1.89 (m, 3H), 1.88-1.79 (m, 2H), 1.79-1.70 (m, 2H), 1.69-1.53 (m, 6H), 1.53-1.42 (m, 4H), 1.36 (s, 3H), 1.32 (d, J=12.7 Гц, 2H), 1.19 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H).
Пример В2. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-диметоксипропан-2-mi)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен^-шОбензойной
кислоты
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-диметоксипропан-2-mi)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3 a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11 a, lib, 12,13,13 а, 1 ЗЬ-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
К перемешанной смеси метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидро-ксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3^,4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (Изомер 2) (0.020 г, 0.027 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридина (0.056 г, 0.271 ммоль) в хлороформе (0.5 мл) добавляли метил трифторметансульфонат (0.058 г, 0.352 ммоль). Виалу, содержащую раствор, герметично закрывали и нагревали до 70°C в течение 4 ч. Смесь разбавляли хлороформом (1.5 мл) и промывали насыщенным водным хлоридом аммония (1 мл). Водный промывочный раствор подвергали обратной экстракции хлороформом (2x1 мл), и органические фазы соединяли. Объединенную органическую фазу концентрировали в потоке азота и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением указанного в заголовке соединения (0.010 г, выход 48.2%). ЖХ/МС: m/e 767.7 (М+Н)+, 2.34 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетон d6) 5 ppm 8.00-7.90 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.35-7.25 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.35 (dd, J=6.0, 1.3 Гц, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.40 (s, 2Н), 3.39-3.34 (m, 2Н), 3.33 (s, 3H), 3.32-3.26 (m, 1H), 3.22 (br. s.,
3H), 3.19 (s, 4H), 3.17-3.12 (m, 2H), 3.12-3.01 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.36 (dd, J=12.0, 8.8 Гц, 1H), 2.282.17 (m, 2H), 2.15-2.09 (m, 1H), 2.03-1.92 (m, 2H), 1.91-1.79 (m, 3H), 1.78 (s, 1H), 1.76-1.68 (m, 1H), 1.661.54 (m, 6H), 1.54-1.38 (m, 4H), 1.34 (s, 4H), 1.31 (br. s., 1H), 1.15 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s,
3H), 0.98 (s, 3H).
Стадия 2: Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-диметоксипропан-2-ил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-диметоксипропан-2-ил)-3а-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.0155 г, 0.016 ммоль), гидроксида лития моногидрата (0.0065 г, 0.156 ммоль), метанола (0.3 мл), THF (0.3 мл) и воды (0.3 мл) нагревали с перемешиванием до 75°C в течение 80 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением указанного в заголовке соединения (0.0118 г, выход 76%). ЖХ/МС: m/e 753.6 (М+Н)+, 2.19 мин (методика
5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетон d6) 5 ppm 7.98 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.30 (d, J=8.1 Гц, 2H), 5.35 (d, J=4.9 Гц, 1H), 3.43-3.25 (m, 9H), 3.25-3.11 (m, 9H), 3.11-2.98 (m, 2H), 2.58 (t, J=8.4 Гц, 1H), 2.35 (dd, J=11.9, 8.7 Гц, 1H), 2.29-2.16 (m, 2H), 2.16-2.09 (m, 1H), 2.03-1.90 (m, 2H), 1.90-1.84 (m, 1H), 1.80 (d, J=18.1 Гц, 3H), 1.751.67 (m, 1H), 1.60 (dd, J=15.9, 7.8 Гц, 6H), 1.54-1.38 (m, 4Н), 1.35 (s, 4Н), 1.31 (br. s., 1H), 1.17-1.12 (m, 6H), 1.10 (s, 3H), 1-00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример В3.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-1 -(2-гидроксипропан-2 -mi)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11 a, lib, 12,13,13а, 1 ЗЬ-октадекагидро- 1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
К перемешанной смеси метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-4-тиоморфолинил)этил)амино)-1 -изопропенил-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.050 г, 0.071 ммоль) и ацетилацетоната кобальта (II) (3.7 мг, 0.014 ммоль) в сухом THF (1 мл) добавляли фенилси-лан (0.015 г, 0.142 ммоль). Над поверхностью смеси создавали атмосферу газообразного кислорода и виалу герметично закрывали и смесь нагревали до 70°C в течение 69 ч. Смесь удаляли от источника теп- 83
ла. Добавляли дополнительные ацетилацетонат кобальта (II) (24 мг, 0.11 ммоль) и фенилсилан (0.015 г, 0.142 ммоль), виалу соединяли с баллоном с газообразным кислородом, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Очисткой с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4) получали сырое соединение (0.0196 г, выход 29%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 723.6 (М+Н)+, 2.20 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 ppm 8.00-7.92 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.26-7.17 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.32 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.35-3.10 (m, 8H), 3.10-2.99 (m, 2Н), 2.93 (d, J=13.2 Гц, 1H), 2.89-2.77 (m, 1H), 2.28-2.12 (m, 2H), 2.12-1.91 (m, 4H), 1.87 (dd, J=13.8, 5.3 Гц, 1H), 1.83-1.76 (m, 1H), 1.76-1.63 (m, 4H), 1.631.34 (m, 11H), 1.29 (s, 4Н), 1.25 (s, 4H), 1.18 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Стадия 2: Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.0195 г, 0.021 ммоль), гидроксида лития моногидрата (0.0103 г, 0.246 ммоль), метанола (0.3 мл), THF (0.3 мл) и воды (0.3 мл) нагревали с перемешиванием до 75°C в течение 80 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением указанного в заголовке соединения (0.0186 г, выход 96%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 709.6 (М+Н)+, 2.01 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 CDCl3:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.96-7.89 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.24-7.16 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.37 (s, 1H), 3.32-3.14 (m, 6H), 3.14-2.99 (m, 6H), 2.232.11 (m, 2H), 2.11-1.99 (m, 2H), 1.95-1.81 (m, 4H), 1.81-1.68 (m, 3H), 1.67-1.53 (m, 5H), 1.53-1.36 (m, 6H), 1.31-1.25 (m, 2H), 1.24 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (br. s.,
3H).
Пример В4. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-1-(2-метоксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1: Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-метоксипроп^
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,1 la, lib, 12,13,13a, 13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
К перемешанной смеси метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.020 г, 0.021 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридина (0.043 г, 0.210 ммоль) в хлороформе (0.5 мл) добавляли метил трифторметансульфонат (0.035 г, 0.210 ммоль). Виалу, содержащую раствор, герметич-
но закрывали и нагревали до 70°C в течение 80 мин. Сырую смесь концентрировали в потоке азота и
очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4) с получением указанного в заголовке соединения (0.0164 г, выход 81%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 737.7 (М+Н)+, 2.34 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетон^6) 5 ppm 7.99-7.91 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.34-7.27 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.34 (dd, J=6.1, 1.7 Гц, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.43-3.27 (m, 4Н), 3.27-3.15 (m, 6Н), 3.13 (s, 3H), 3.11-3.01 (m, 2Н), 2.44 (t, J=8.1 Гц, 1H), 2.27-2.18 (m, 2H), 2.18-2.09 (m, 2H), 2.04-1.95 (m, 2H), 1.89-1.80 (m, 3H), 1.80-1.71 (m, 2H), 1.67-1.53 (m, 6H), 1.53-1.44 (m, 3H), 1.41 (d, J=11.2 Гц, 1H), 1.38-1.28 (m, 5H), 1.17-1.14 (m, 6H), 1.13 (s,
3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H). Стадия 2:
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-1-(2-метоксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.0162 г, 0.017 ммоль), гидроксида лития моногидрата (0.0084 г, 0.201 ммоль), метанола (0.35 мл), THF (0.35 мл) и воды (0.2 мл) нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 20 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 5) с получением указанного в заголовке соединения (0.0151 г, выход 91%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 723.7 (М+Н)+, 2.18 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетонч16) 5 ppm 8.04-7.90 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.35-7.24 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.35 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.43-3.26 (m, 4Н), 3.26-3.21 (m, 3H), 3.18 (d, J=9.0 Гц, 3H), 3.13 (s, 3H), 3.11-3.00 (m, 2Н), 2.46 (t, J=7.9 Гц, 1H), 2.29-2.19 (m, 2Н), 2.19-2.11 (m, 2Н), 2.03-1.88 (m, 3H), 1.88-1.70 (m, 6Н), 1.67-1.44 (m, 9Н), 1.41 (d, J=11.0 Гц, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.34-1.28 (m, 2Н), 1.15 (s, 6H), 1.13 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00
(s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример В 5. Получение 4-(( 1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты (Изомер 1).
Раствор метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-4-тиомор-фолинил)этил)амино)-1 -^ОПРО^НИЛ^^Ь^^,! 1 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.100 г, 0.142 ммоль) в THF (1 мл) охлаждали на ледяной бане и медленно обрабатывали комплексом боран-тетрагидрофуран, 1.0 М в THF (0.340 мл, 0.340 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем при 70°C в течение 30 мин. Смесь снова охлаждали на ледяной бане и к ней добавляли этанол (0.180 мл, 3.1 ммоль) и насыщенный водный ацетат натрия (0.066 мл) с последующим медленным добавлением 30% пероксида водорода (0.092 мл, 0.90 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4) с получением белого твердого вещества (56.7 мг), которое содержало основной изомерный продукт реакции. Минорный изомер не выделяли. Порцию этого твердого вещества (20.0 мг, 35.3% от общего выделенного количества) растворяли в смеси MeOH (0.25 мл) и THF (0.25 мл) и обрабатывали 1.0 М водным LiOH (0.252 мл, 0.252 ммоль) при 70°C в течение 45 мин. Очисткой этой смеси с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4) с последующей обработкой фракции продукта 1 М водным HCl и последующим концентрированием под вакуумом получали Изомер 1 указанного в заголовке соединения как бис-HCl соль в виде белого твердого вещества (0.0138 г, общий выход 33.9%). ЖХ/МС: m/e 709.7 (М+Н)+, 1.95 мин (методика 5).
!H ЯМР (400 МГц, 1:1 CDCl3:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.96-7.88 (m, J=8.3 Гц, 2H), 7.24-7.17 (m, J=8.1 Гц, 2H), 5.31 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.28 (br. s., 3H), 3.65 (dd, J= 10.9, 6.2 Гц, 1H), 3.46 (dd, J=11.1, 6.2 Гц, 1H), 3.31-3.24 (m, 3H), 3.23-3.13 (m, 2H), 3.13-2.99 (m, 5H), 2.42-2.25 (m, 2H), 2.17 (dd, J=17.2, 6.2 Гц, 1H), 2.09-2.01 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 2H), 1.90-1.78 (m, 3H), 1.78-1.67 (m, 3H), 1.66-1.38 (m, 11H), 1.33-1.23 (m, 2H), 1.20 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.99-0.90 (m, 9H).
Пример В6. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)--гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты (Изомер 2).
Раствор метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-4-тиоморфо-линил)этил)амино)-1-изопропенил-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3 a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (1.00 г, 1.42 ммоль) в THF (10 мл) охлаждали на ледяной бане и медленно обрабатывали комплексом бо-ран-тетрагидрофуран, 1.0 М в THF (3.40 мл, 3.40 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем при 70°C в течение 30 мин. Смесь снова охлаждали на ледяной бане и к ней добавляли этанол (0.90 мл, 15.4 ммоль) и насыщенный водный ацетат натрия (0.33 мл) с последующим медленным добавлением 30% пероксида водорода (0.46 мл, 4.5 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч. К органическим веществам добавляли сили-кагель (11 г), и смесь концентрировали под вакуумом до свободнотекучего порошка, который помещали в вакуумную печь при 50°C в течение 16 ч. Свободнотекучий порошок загружали на 160 г колонку с силикагелем. Градиентным элюированием от 100% DCM до 9:1 DCM:MeOH получали разделение двух диастереомеров. Главный изомер реакции, метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(1-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3 a^^^^b^^^^, ПД^П^^^^а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (Изомер 1), элюировали из колонки первым (0.458 г, выход 44.6%). ЖХ/МС: m/e 723.6 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 5).
!H ЯМР (400 МГц, 1:1 CDCl3:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.94- .88 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.25-7.18 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33-5.26 (m, 1H), 4.25 (br. s., 1H), 3.91 (s, 3H), 3.74 (dd, J=10.5, 4.2 Гц, 1H), 3.17-2.95 (m, 9H), 2.78-2.62 (m, 2H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.47-2.38 (m, 1H), 2.14 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.00-1.80 (m, 4H), 1.80-1.71 (m, 2H), 1.71-1.48 (m, 10H), 1.48-1.32 (m, 5H), 1.30-1.18 (m, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.09 (d, J=14.9 Гц, 2H), 1.01 (s, 6H), 0.98 (d, J=6.8 Гц, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Минорный из двух изомеров, образовавшихся в реакции, элюировали из колонки после главного изомера и был смешан с примесями. Эти фракции с примесями, содержащие минорный изомер, повторно очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 6) с получением твердого вещества (53.8 мг). Порцию этого твердого вещества (25 мг, 46.5% от общего) растворяли в смеси MeOH (0.3 мл) и THF (0.3 мл) и обрабатывали 1.0 М водным LiOH (0.263 мл, 0.263 ммоль) при 70°C в течение 45 мин. Очисткой этой смеси с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 7) получали Изомер 2 указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, щелочная форма (0.0115 г, общий выход 5.2%). ЖХ/МС: m/e 710.5 (М+Н)+, 2.18 мин (методика 5).
!H ЯМР (400 МГц, 1:1 CDCb:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.86 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.13 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.27 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.43-3.35 (m, 2H), 3.18-2.97 (m, 8H), 2.80-2.65 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 1H), 2.54-2.43 (m, 1H), 2.12 (dd, J=16.9, 5.9 Гц, 2H), 1.94 (s, 4H), 1.92-1.84 (m, 2H), 1.79 (dd, J=12.7, 7.1 Гц, 1H), 1.75-1.66 (m, 2H), 1.65-1.36 (m, 11H), 1.35-1.20 (m, 4H), 1.15 (s, 3H), 1.11 (d, J=13.9 Гц, 1H), 1.02 (s, 6H), 0.94 (s, 6H), 0.81 (d, J=6.8 Гц, 3H).
Пример В7. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотио-морфолино)этил)амино)-1-(1-метоксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3 a^^^^b^^^^, ПД^П^^^^а, 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Раствор 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидо-4-тиоморфоли-нил)этил)амино)-1 -изопропенил-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3 a^^^^b^^^^, ПД^П^^^^а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.100 г, 0.142 ммоль) в THF (1 мл) охлаждали на ледяной бане и медленно обрабатывали комплексом боран-тетрагидрофуран, 1.0 М в THF (0.340 мл, 0.340 ммоль).
Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем при 70°C в течение 30 мин. Смесь снова охлаждали на ледяной бане и к ней добавляли этанол (0.180 мл, 3.1 ммоль) и насыщенный водный ацетат натрия (0.066 мл) с последующим медленным добавлением 30% пероксида водорода (0.092 мл, 0.90 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 6) с получением белого твердого вещества (56.7 мг), которое содержало основной изомерный продукт реакции. Минорный изомер не выделяли. Порцию этого твердого вещества (30.0 мг, 52.9% от общего выделенного количества) растворяли в хлороформе (0.5 мл) и обрабатывали 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридином (0.065 г, 0.315 ммоль) и метил трифторметансульфонатом (0.052 г, 0.315
ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем при 70°C в течение 30 мин. Очисткой этой смеси с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ получали (Методика препаративной ВЭЖХ 3) сырое соединение бис TFA соль в виде бесцветного стеклообразного твердого вещества (0.0177 г, общий выход 24.0%). ЖХ/МС: m/e 737.7 (М+Н)+, 2.34 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетон о^) 5 ppm 8.03-7.93 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.35-7.26 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 5.40-5.30 (m, 1H), 3.50 (dd, J=9.5, 6.8 Гц, 1H), 3.36-3.06 (m, 17Н), 2.45-2.28 (m, 2H), 2.28-2.19 (m, 2H), 2.19-2.12 (m, 2H), 1.96-1.69 (m, 6H), 1.69-1.39 (m, 12H), 1.39-1.34 (m, 1H), 1.33 (s, 4H), 1.13 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.90 (d, J=6.8 Гц, 3H).
Пример В8. Получение 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)--фторпропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11 а-пентаметил-
2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1: Получение метил 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидроксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата (Изомер 1).
Раствор 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидо-4-тиоморфолинил)этил)амино)-1-изопропенил-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11a,11Ь,12,13,13а,13Ь-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (1.00 г, 1.42 ммоль) в THF (10 мл) охлаждали на ледяной бане и медленно обрабатывали комплексом бо-ран-тетрагидрофуран, 1.0 М в THF (3.40 мл, 3.40 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем при 70°C в течение 30 мин. Смесь снова охлаждали на ледяной бане, и к ней добавляли этанол (0.90 мл, 15.4 ммоль) и насыщенный водный ацетат натрия (0.33 мл) с последующим медленным добавлением 30% пероксида водорода (0.46 мл, 4.5 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2.5 ч. К органическим веществам добавляли сили-кагель (11 г), и смесь концентрировали под вакуумом до свободнотекучего порошка, который помещали в вакуумную печь при 50°C в течение 16 ч. Свободнотекучий порошок загружали на 160 г колонку с си-ликагелем. Градиентным элюированием от 100% DCM до 9:1 DCM:MeOH проводили разделение двух диастереомеров. Главный изомер из реакции метил 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидроксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11a,11Ь,12,13,13а,13Ь-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1, элюировали из колонки первым (0.458 г, выход 44.6%). ЖХ/МС: m/e 723.6 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 CDCl3:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.94-7.88 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.25-7.18 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33-5.26 (m, 1H), 4.25 (Ьг. s., 1H), 3.91 (s, 3H), 3.74 (dd, J=10.5, 4.2 Гц, 1H), 3.17-2.95 (m, 9H), 2.78-2.62 (m, 2H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.47-2.38 (m, 1H), 2.14 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.00-1.80 (m, 4H), 1.80-1.71 (m, 2H), 1.71-1.48 (m, 10H), 1.48-1.32 (m, 5H), 1.30-1.18 (m, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.09 (d, J=14.9 Гц, 2H), 1.01 (s, 6H), 0.98 (d, J=6.8 Гц, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Стадия 2: Получение метил 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-фторпропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
Раствор метил 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)--гидроксипропан-2 -ил)-5а,5Ь,8,8,11 а-пентаметил-
2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а, 13Ь-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1, (0.025 г, 0.035 ммоль) в DCM (1 мл) охлаждали до -78°C и обрабатывали DA8T (0.0078 г, 0.048 ммоль). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 21 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 8) с получением указанного в заголовке соединения (0.0097 г, выход 29%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 725.6 (М+Н)+, 2.35 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 ppm 8.05-7.87 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 7.26-7.12 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 5.32 (d, J=4.9 Гц, 1H), 4.58-4.28 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.39-3.11 (m, 8H), 3.11-2.98 (m, 2H), 2.91 (d, J=12.0 Гц, 2Н), 2.38-2.22 (m, 2H), 2.22-2.11 (m, 2H), 1.95 (d, J=10.5 Гц, 4Н), 1.84-1.61 (m, 5H), 1.55 (s, 2H), 1.57 (s, 3H), 1.51-1.31 (m, 6H), 1.31-1.15 (m, 5H), 1.06 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.97 (Ьг. s., 3H), 0.95 (Ьг. s., 3H), 0.91 (d, J=6.6
Гц, 3H).
Стадия 3: Смесь метил 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13ЬЯ)-3а-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-1-(1-фторпропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-
2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а, 13Ь-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.0095 г, 0.010 ммоль), 1.0 М водного гидроксида лития моногидрата (0.100 мл, 0.100 ммоль), метанола (0.3 мл) и THF (0.3 мл) нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 45 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением указанного в заголовке соединения (0.0152 г, выход > 100%) в виде бис-TFA соли. ЖХ/МС: m/e 711.4 (М+Н)+, 2.19 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 CDCl3:MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.96-7.88 (m, J=8.3 Гц, 2H), 7.25-7.17 (m, J=8.1 Гц, 2H), 5.31 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.49-4.38 (m, 1H), 3.30-3.00 (m, 13H), 2.33-2.21 (m, 2H), 2.21-2.11 (m, 2H), 2.11-2.03 (m, 2H), 2.02-1.95 (m, 1H), 1.94-1.78 (m, 3H), 1.76 (Ьг. s., 1H), 1.74-1.65 (m, 2H), 1.65-1.55 (m, 4H), 1.52 (dd, J=14.1, 3.1 Гц, 3H), 1.47 (Ьг. s., 3H), 1.45-1.37 (m, 2H), 1.32-1.24 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (d, J=6.8 Гц, 3H).
Пример В9. Получение 4-((1Я,3а8,5аЯ,5ЬЯ,7аЯ,11а8,11ЬЯ,13аЯ,13Ь8)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-
2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1.
Стадия 1. Получение метил 4-((1Я,3a8,5aЯ,5ЬЯ,7aЯ,11a8,11ЬЯ,13aЯ,13ЬЯ)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5а,5Ь,8,8,11 а-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)-
2,3,3 а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11 a, lib, 12,13,13а, 1 ЗЬ-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
В колбу, содержащую промежуточное соединение 3 (4.00 г, 6.89 ммоль), добавляли бикарбонат натрия (2.90 г, 34.5 ммоль). Смесь разбавляли THF (80 мл) и водой (25 мл), затем добавляли 9-флюоренилметоксикарбонил-хлорид (2.140 г, 8.27 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 2 ч перемешивания TLC показала завершение реакции. Смесь разбавляли 350 мл EtOAc и промывали водой (3x100 мл). Органические вещества высушивали над Mg8O4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток (приблизительно 5.5 г не совсем белого твердого вещества) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 96:4 гексаны:EtOAc до 65:35 гексаны:EtOAc 10 объемами колонки) с получением продукта в виде белого твердого вещества. Общее полученное количество = 4.25 г (выход 80%).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.96 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.80 (d, J=7.6 Гц, 2Н), 7.64 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 7.44 (td, J=7.2, 4.0 Гц, 2Н), 7.35 (tdd, J=7.5, 2.9, 1.0 Гц, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.32 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.76 (Ьг. s., 1H), 4.65 (Ьг. s., 1H), 4.63-4.54 (m, 2H), 4.36-4.22 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 2.61-2.34 (m, 3H), 2.13 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.04-1.85 (m, 1H), 1.81-1.60 (m, 7Н), 1.61-1.40 (m, 8Н), 1.39-1.20 (m, 6Н), 1.18-1.06 (m, 4Н), 1.03 (s, 3H), 1.01 (Ьг. s., 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Стадия 2.
Получение метил 4-((1Я,3a8,5aЯ,5ЬЯ,7aЯ,11a8,11ЬЯ,13aЯ,13Ь8)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)мето-кси)карбонил)амино)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-
2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а, 13Ь-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата,
Изомер 1 и метил 4-((1Я,3a8,5aЯ,5ЬЯ,7aЯ,11a8,11ЬЯ,13aЯ,13Ь8)-3a-((((9H-флюорен-9-
ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-
2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а, 13Ь-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата,
Изомер 2.
В 20 мл сцинтилляционной виале с PTFE завинчивающейся крышкой и мешалкой соединяли метил 4-((1Я,3a8,5aЯ,5ЬЯ,7aЯ,11a8,11ЬЯ,13aЯ,13ЬЯ)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-Ш-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоат (2.50 г, 3.26 ммоль) с NMO (0.765 г, 6.53 ммоль) в THF (60 мл) и воде (10 мл). Затем вводили твердый тетроксид осмия (0.415 г, 1.632 ммоль). Смесь промывали азотом, герметично закрывали и перемешивали при комнатной температуре в течение 7 дней. Желтую смесь разбавляли этилацетатом (700 мл) и водой (300 мл) и встряхивали, и разделяли фазы. Органические вещества снова промывали водой (2x250 мл) и затем рассолом (50 мл). Органические вещества высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом до коричневого твердого вещества. Сырое твердое вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% гексаны до 40% EtOAc в гексанах, удерживание 40% EtOAc в гексанах 4 объемами колонки, затем градиент до 50% EtOAc в гексанах). Выделяли два продукта. Минорный продукт (Изомер 2) был первым из двух изомеров элюирован из колонки. Изомер 2 выделяли в виде серого твердого вещества (0.183 г, выход 7.0%).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.96 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.80 (d, J=7.6 Гц, 2Н), 7.64 (t, J=6.8 Гц, 2Н),
7.47- 7.39 (m, 2Н), 7.38-7.31 (m, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.67 (Ьг. s., 1H), 4.55 (dd, J=10.3, 6.8 Гц, 1H), 4.37-4.28 (m, 1H), 4.28-4.21 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.58-3.41 (m, 2H), 2.60 (d, J=13.7 Гц, 1H), 2.40-2.28 (m, 1H), 2.21-2.11 (m, 1H), 2.10-2.06 (m, 1H), 2.02-1.89 (m, 3H), 1.88-1.68 (m, 4Н), 1.69-1.31 (m, 12Н), 1.26-1.16 (m, 2Н), 1.11 (Ьг. s., 6H), 1.04 (s, 6H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H). Главный продукт (Изомер 1) был вторым из двух изомеров элюирован из колонки с силикагелем. Изомер 1 выделяли в виде серого твердого вещества (1.165 г, выход 44.6%).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 8.00-7.93 (m, 2Н), 7.80 (d, J=7.6 Гц, 2Н), 7.64 (t, J=6.7 Гц, 2Н),
7.48- 7.39 (m, 2Н), 7.38-7.31 (m, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.39-5.29 (m, 1H), 4.65 (Ьг. s., 1H), 4.55 (dd, J=10.5, 6.8 Гц, 1H), 4.43-4.29 (m, 1H), 4.28-4.22 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.66 (d, J=10.8 Гц, 1H), 3.46 (d, J=9.3 Гц, 1H), 2.59 (d, J=10.5 Гц, 1H), 2.37-2.26 (m, 1H), 2.16 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.03-1.77 (m, 6H), 1.76-1.31 (m, 13H), 1.24 (s, 3H), 1.10 (Ьг. s., 4H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (Ьг. s., 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Стадия 3. Получение метил 4-((1Я,3a8,5aЯ,5ЬЯ,7aЯ,11a8,11ЬЯ,13aЯ,13Ь8)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1.
В 20 мл сцинтилляционной виале с PTFE завинчивающейся крышкой растворяли метил 4-((1Я,3a8,5aЯ,5ЬЯ,7aЯ,11a8,11ЬЯ,13aЯ,13Ь8)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-5а,5Ь,8,8,11а-пентаметил-2,3,3а,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1 (0.30 г, 0.375 ммоль), в хлороформе (5 мл). К смеси добавляли пиридин (0.243 мл, 3.00 ммоль) с последующим добавлением ацетилхлорида (0.133 мл, 1.875 ммоль). Наблюдалось выделение тепла. TLC подтвердила, что реакция завершилась в течение 5 мин. Сырую смесь растворяли в минимальном количестве CHCl3 и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% гексанов до 50% EtOAc в гексанах на протяжении 6 объемов колонки, удерживание при 50% EtOAc в гексанах на протяжении 6 объемов колонки). Главный продукт выделяли таким образом в виде белого твердого вещества. Общее количество = 0.260 г
(выход 82%).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.96 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.80 (d, J=7.6 Гц, 2Н), 7.64 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 7.47-7.39 (m, 2Н), 7.37-7.30 (m, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.63 (Ьг. s., 1H), 4.57 (dd, J=10.3, 6.8 Гц, 1H), 4.35 (Ьг. s., 1H), 4.28-4.21 (m, 1H), 4.11-4.02 (m, 2Н), 3.94 (s, 3H), 2.58 (d, J=11.2 Гц, 1H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.20-2.09 (m, 4Н), 1.98 (d, J=6.4 Гц, 1H), 1.93-1.82 (m, 3H), 1.82-1.32 (m, 14Н), 1.26
(d, J=5.4 Гц, 4Н), 1.09 (br. s., 4Н), 1.03 (d, J=4.2 Гц, 6Н), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Стадия 4. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3 ^,4,5^,5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен^-ш^бензоата, Изомер 1.
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11а,11^12,13,13^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1 (0.260 г, 0.309 ммоль), растворяли в хлороформе (5 мл) и добавляли пиперидин (0.5 мл, 5.05 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакцию концентрировали под вакуумом, и сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% DCM до 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки, удерживание при 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки). Одинаковые фракции продукта соединяли и концентрировали под вакуумом с получением 0.1809 г (выход 95%) слегка желтого пенистого твердого вещества.
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.95 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.32 (dd, J=6.2, 1.8 Гц, 1H), 4.14-4.01 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.14 (s, 6H), 1.99-1.76 (m, 4H), 1.76-1.44 (m, 11Н), 1.43-1.17 (m, 11H), 1.15 (s, 3H), 1.02 (s, 6H), 0.96 (s, 6H).
Стадия 5. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3 ^,4,5^,5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен^-щОбензоата, Изомер 1.
В 75 мл виалу для среднего давления, содержащую метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)--ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-амино-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1 H-циклопен-таИхризен^-ил^ензоат, Изомер 1 (0.180 г, 0.290 ммоль), добавляли 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксид (0.150 г, 0.759 ммоль), калиевую соль фосфорной кислоты (0.229 г, 1.079 ммоль) и KI (0.110 г, 0.663 ммоль). Смесь разбавляли ацетонитрилом (12 мл). Сосуд затем промывали N2 и герметично закрывали и нагревали до 110°C на масляной бане в течение 16 ч. Смесь разбавляли EtOAc (100 мл) и водой (50 мл), встряхивали и разделяли фазы. Органическую фазу высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом до остатка. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силика-геле (градиентным элюированием от 100%DCM до 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки, удерживание при 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки) с получением желтого масла (0.297 г), которое переносили на следующую стадию без дополнительной очистки. ЖХ/МС: m/z = 781.7 (М+Н)+, 2.21 мин (методика 5).
Стадия 6: В 20 мл сцинтилляционной виале соединяли сырой метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13 aR, 13bS)-1-(1 -ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-((2-( 1, 1 -диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензоат, Изомер 1 (0.227 г, 0.290 ммоль), и гидроксида лития моногидрат (0.085 г, 2.030 ммоль) с тетрагидрофураном (4 мл), MeOH (3 мл) и водой (2 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 75°C с перемешиванием в течение 2 ч. Добавляли дополнительный гидроксид лития моногидрат (36 мг, 0.857 ммоль) и смесь повторно нагревали до 75°C в течение еще 45 мин. Смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты, Изомер 1 (0.173 г, выход 61.2%) в виде белого порошка, TFA соль. ЖХ/МС: m/z = 725.6 (М+Н)+, 1.94 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.68-3.57 (m, 2H), 3.48-3.39 (m, 2H), 3.31-3.14 (m, 6H), 3.08 (br. s., 6H), 2.26 (d, J=8.8 Гц, 2Н), 2.18 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.09-1.96 (m, 2H), 1.91-1.67 (m, 6H), 1.661.36 (m, 11H), 1.28 (d, J=10.5 Гц, 1H), 1.22 (s, 3H), 1.21-1.16 (m, 6H), 1.14 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (br. s.,
3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В10. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8, Ha-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 2.
В 20 мл сцинтилляционной виале растворяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2 (0.169, 0.211 ммоль), в хлороформе (5 мл). К смеси добавляли пиридин (0.137 мл, 1.690 ммоль). Смесь охлаждали на ледяной бане, и медленно добавляли ацетилхлорид (0.075 мл, 1.056 ммоль). PTFE завинчивающуюся крышку прикрепляли к виале, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Смесь затем концентрировали под вакуумом. Сырую смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% гексанов до 40% EtOAc в гексанах на протяжении 10 объемов колонки, удерживание при 40% EtOAc в гексанах на протяжении 10 объемов колонки) с получением слегка желтого твердого вещества, 0.1386 г (выход 78%).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.96 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.80 (d, J=7.3 Гц, 2Н), 7.64 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 7.47-7.40 (m, 2H), 7.38-7.32 (m, 2H), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33 (d, J=4.9 Гц, 1H), 4.66-4.56 (m, 2H), 4.394.29 (m, 1H), 4.28-4.22 (m, 1H), 4.10-3.99 (m, 2Н), 3.94 (s, 3H), 2.58 (d, J=11.5 Гц, 1H), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.21-2.11 (m, 4Н), 2.08-1.94 (m, 1H), 1.90 (s, 1H), 1.86-1.64 (m, 5Н), 1.63-1.17 (m, 14Н), 1.13 (s, 3H), 1.09 (br. s., 3H), 1.04 (s, 6H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-амино-5a,5b,8,8, Ha-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата,
Изомер 2.
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((((9H-флюорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2 (0.135 г, 0.160 ммоль), растворяли в хлороформе (5 мл) и добавляли пиперидин (0.5 мл, 5.05 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь концентрировали в потоке азота, затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% DCM до 9:1 DCM:MeOH на протяжении 8 объемов колонки, удерживание при 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки) с получением слегка желтого твердого вещества (0.0848 г, выход 85%).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.95 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.32 (dd, J=6.1, 1.5 Гц, 1H), 4.15-3.96 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.21-2.10 (m, 5Н), 2.09-1.75 (m, 5Н), 1.71 (d, J=16.9 Гц, 1H), 1.671.44 (m, 10Н), 1.44-1.30 (m, 5Н), 1.30-1.18 (m, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.14 (s, 4H), 1.04 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.96
(s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Стадия 3. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,1Ы-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 2.
В 15 мл сосуде среднего давления соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2 (0.082 г, 0.132 ммоль), 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксид (0.065 г, 0.331 ммоль), калиевую соль фосфорной кислоты (0.098 г, 0.463 ммоль) и KI (0.055 г, 0.331 ммоль). Смесь разбавляли ацето-нитрилом (6 мл). Сосуд затем промывали N2 и герметично закрывали и нагревали до 110°C на масляной бане на протяжении ночи. Смесь разбавляли хлороформом (50 мл) и фильтровали для удаления твердых веществ. Сырую смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% DCM до 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки, удерживание при 9:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки) с получением очень светлого желтого масла (0.099 г, выход 96%). ЖХ/МС: m/z = 781.6 (М+Н)+, 2.16 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.95 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.32 (dd, J=6.0, 1.6 Гц, 1H), 4.13-3.96 (m, 2Н), 3.93 (s, 3H), 3.16-2.97 (m, 12Н), 2.77-2.61 (m, 2Н), 2.60-2.49 (m, 1H), 2.49-2.39 (m, 1H), 2.25-2.07 (m, 5Н), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.95-1.83 (m, 2Н), 1.82 (s, 1H), 1.79-1.63 (m, 4Н), 1.62-1.36 (m, 9Н), 1.35-1.20 (m, 4Н), 1.16 (s, 3H), 1.14 (s, 4H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Стадия 4:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетокси-2-гидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2 (0.025 г, 0.032 ммоль), и гидроксида лития моногидрат (0.016 г, 0.384 ммоль) с тетрагидрофу-раном (0.4 мл), MeOH (0.4 мл) и воду (0.4 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 75°C с перемешиванием в течение 2 ч. Сырую смесь очищали с помощью обращен-но-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты, Изомер 2 (0.026 г, выход 84%), в виде белого стеклообразного твердого вещества, TFA соли. ЖХ/МС: m/z = 725.6 (М+Н)+, 1.95 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.4 Гц, 1H), 3.53 (d, J=11.2 Гц, 1H), 3.32-3.23 (m, 5Н), 3.23-3.14 (m, 2H), 3.13-3.00 (m, 6H), 2.40 (t, J=8.6 Гц, 1H), 2.23-2.03 (m, 3H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.89-1.77 (m, 3H), 1.73 (d,
J=16.9 Гц, 1H), 1.69-1.36 (m, 12H), 1.32-1.24 (m, 2Н), 1.21 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.09-1.05 (m, 3H), 1.05-1.01 (m, 3H), 0.98-0.96 (m, 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Примеры В11 и В12. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -((R)-1 -гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1, и 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфо-лино)этил)амино)-1 -((R)-1 -гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,За,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,1 la, lib, 12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
Смесь двух изомеров метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2-дигидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.280 г, 0.379 ммоль) и периодата натрия (0.324 г, 1.515 ммоль) растворяли в смеси THF (10 мл) и воды (2 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч и затем разбавляли THF (75 мл) и рассолом (30 мл) и полученную в результате смесь встряхивали и разделяли фазы. Водные слои экстагировали THF (2x50 мл) и затем хлороформом (2x50 мл). Органические вещества соединяли, и полученный в результате мутный раствор концентрировали до приблизительно 30 мл. Метанол добавляли до полного растворения органических веществ, затем добавляли силикагель (3 г), и смесь концентрировали до свободнотекучего порошка, который помещали в вакуумную печь на протяжении ночи. Поршок закружали на DCM предварительно откалиброванный 25 г силикагелевый картридж. Элюированием (градиент от 100% DCM до 40% 9:1 смесью DCM:MeOH) получали продукт (0.2462 г, выход 92%) в виде слегка не совсем белого стеклообразного твердого вещества. ЖХ/МС: m/z = 707.6 (М+Н)+, 2.25 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.29 (d, J=4.9 Гц, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.33 (s, 5H), 3.07-2.97 (m, 2H), 2.92 (td, J=11.0, 5.1 Гц, 1H), 2.76-2.66 (m, 2H), 2.66-2.57 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.17-2.01 (m, 3H), 1.94 (d, J=13.9 Гц, 1H), 1.87 (dd, J=12.7, 7.8 Гц, 1H), 1.75-1.63 (m, 2H), 1.62-1.41 (m, 8H), 1.39-1.18 (m, 5H), 1.15 (d, J=2.0 Гц, 1H), 1.12 (s, 4H), 1.08 (d, J=4.9 Гц, 1H), 1.04 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)--гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) с PTFE завинчивающейся крышкой соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.020 г, 0.028 ммоль) с борогидридом натрия (0.00535 г, 0.141 ммоль) в абсолютном этаноле (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, но смесь растворилась не полностью. Добавляли THF (1 мл) и свежеприготовленный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Сырую смесь частично очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4) с получением 0.026 г вещества в виде соли TFA как смесь изомеров, которую переносили на следующую стадию без дальнейшей обработки. ЖХ/МС: m/z = 709.5 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 5).
Стадия 3:
В виале (1 dram) с PTFE завинчивающейся крышкой соединяли вещество со стадии 2, содержащее TFA соль метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-1 -((R)-1 -гидроксиэтил)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.026 г, 0.014 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом 1.0 М водным раствором (0.280 мл, 0.28 ммоль), и тетрагидрофуран (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 45 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Выделяли два отдельных вещества. Элюированное первым вещество представляло собой главный продукт и было помечено как 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидро-^^^1^^,5^8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота, Изомер 1 (0.0169 г, выход 61.5%, в виде белого порошка, TFA соль). Минорный продукт элюировали вторым и пометили как 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,1 ^ПаД^^^ПаЛ 3b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ш^бензойная кислота, Изомер 2 (0.0051 г, выход 18.6%, в виде белого порошка, TFA соль).
Аналитические данные для 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1: ЖХ/МС: m/z = 695.4 (М+Н)+, 1.95 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=5.1 Гц, 1H), 3.88 (d, J=6.4 Гц, 2Н), 3.27 (d, J=1.2 Гц, 2Н), 3.22-2.97 (m, 8H), 2.24-1.84 (m, 9H), 1.82-1.69 (m, 3H), 1.68-1.32 (m, 12H), 1.32-1.24 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.16 (d, J=6.4 Гц, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.00-0.96 (m, 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Аналитические данные для 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2: ЖХ/МС: m/z = 695.4 (М+Н)+, 2.01 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.34-5.27 (m, 1H), 4.07 (dd, J=6.2, 4.5 Гц, 1H), 3.31-2.99 (m, 11H), 2.60-2.48 (m, 1H), 2.17 (dd, J=16.8, 6.2 Гц, 1H), 2.12-1.95 (m, 3H), 1.94-1.84 (m, 1H), 1.79-1.68 (m, 3H), 1.67-1.38 (m, 11H), 1.32-1.24 (m, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.07-1.06 (m, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В13. Получение 4-((3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-1 -этилиден-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)--гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3^,4,5^,5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1, и метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)--гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3^,4,5^,5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 2.
В 7 мл сцинтилляционной виале с резиновой мембраной в атмосфере азота соединяли метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11 aS, 11 bR, 13aR, 13bS)-1 -ацетил-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.100 г, 0.141 ммоль) с борогидридом натрия (0.021 г, 0.566 ммоль) в смеси этанола (2 мл) и сухого THF (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. К смеси добавляли насыщенный хлорид аммония по каплям, пока не прекратилось газовыделение. Смесь разбавляли малым количеством THF и фильтровали.
Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 10). Материал, элюированный первым, представлял собой главный продукт; этот главный продукт был помечен как Изомер 1 и его выделяли в виде белого порошка (0.0547 г, выход 41.3%), TFA соль. Материал, элюированный вторым, представлял собой минорный продукт; этот минорный продукт был помечен как Изомер 2 и его выделяли в виде белого порошка (0.0219 г, выход 16.5%), TFA соль. Порция непрореагировавшего исходного материала (0.0328 г, 24.8%) представляла собой третий элюированный материал.
Изомер 1 растворяли в 1:1 смеси DCM и метанола и загружали на 1 граммовый Waters Oasis MCX катионообменный картридж. Картридж прополаскивали 1:1 DCM:MeOH (20 мл) и затем MeOH (10 мл). Изомер 1 затем элюировали из картриджа с помощью 2.0 М аммиаком в метаноле (20 мл). Изомер 1 был также получен количественно как свободное основание в виде не совсем белого твердого вещества.
Аналитические данные для метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)--гидроксиэтил)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3^,4,5^,5^6,7^,8,11,1^,11^12,13,^,13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1: ЖХ/МС: m/z = 709.4 (М+Н)+, 2.18 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.95-3.83 (m, 4H), 3.20-2.98 (m, 8H), 2.88-2.46 (m, 4H), 2.15 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 1.95-1.83 (m, 3H), 1.83-1.63 (m, 5H), 1.63-1.41 (m, 9H), 1.41-1.22 (m, 4H), 1.20-1.10 (m, 7H), 1.04 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Стадия 2. Получение метил 4-((3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -этилиден-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11 a, 1 lb, 12,13,1 За, 1 ЗЬ-октадекагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
В виалу (1 dram) с резиновой заглушкой помещали свободное основание метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -((R)-1 -гидроксиэтил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,1^,11^12,13,^,13b-октадекагидро-Ш-циклопента^хризен^-ил^ензоат, Изомер 1 (0.025 г, 0.035 ммоль) в DCM (1 мл). Смесь охлаждали на бане сухой лед/ацетон до -78 градусов С и к перемешанной смеси добавляли DAST (6.99 мкл, 0.053 ммоль). Охлаждающую баню удаляли, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали в потоке азота до остатка, который повторно растворяли в минимальном количестве смеси THF:MeOH (приблизительно 4 к 1) и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 11). Продукт выделяли таким образом в виде белого твердого вещества (0.0139 г, выход 43%), TFA соль. ЖХ/МС: m/z = 691.3 (М+Н)+, 2.31 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.96 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.23 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 5.72-5.58 (m, 1H), 5.36-5.29 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.42-3.29 (m, 1H), 3.25-2.95 (m, 10Н), 2.94-2.83 (m, 1H), 2.60-2.47 (m, 1H), 2.38-2.25 (m, 2Н), 2.23-1.97 (m, 6Н), 1.80 (br. s., 1H), 1.78-1.70 (m, 2Н), 1.69-1.37 (m, 12Н), 1.31-1.24 (m, 2Н), 1.23-1.18 (m, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Стадия 3: В виале (1 dram) соединяли метил 4-((3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-этилиден-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.0139 г, 0.015 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом 1.0 М водным раствором (0.151 мл, 0.151 ммоль) и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающеся крышкой, и смесь нагревали до 70градусов С в течение 35 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4) с получением 4-((3 aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -этилиден-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты в виде белого твердого вещества (0.0092 г, выход 61.8%), TFA соль. ЖХ/МС: m/z = 677.4 (М+Н)+, 2.17 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, Ацетон) 5 7.98 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.30 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.68 (d, J=5.1 Гц, 1H), 5.35 (dd, J=6.4, 1.5 Гц, 1H), 3.26 (d, J=5.1 Гц, 9Н), 2.63-2.44 (m, 3H), 2.43-2.29 (m, 2Н), 2.25-2.14 (m, 4Н), 1.88 -1.72 (m, 4Н), 1.70-1.51 (m, 10Н), 1.24 (br. s., 8Н), 1.14 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример В14 и пример В15.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)--(гидроксиимино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1 и 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)--(гидроксиимино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-1-(1-(гидроксиимино)эти^
2,3,За,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Нщиклопента[а]хризен-9-ил)бензо
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2.
В виале (1 dram) с PTFE завинчивающейся крышкой соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопен-таИхризен^-ил^ензоат (0.028 г, 0.040 ммоль) с гидроксиламином гидрохлоридом (0.028 г, 0.396 ммоль) и ацетатом натрия (0.049 г, 0.594 ммоль) в смеси сухого метанола (2.3 мл) и тетрагидрофурана (1.5 мл). Суспензию быстро перемешивали в течение 5 дней и затем концентрировали в потоке азота. Смесь по-
вторно растворяли в минимальном количестве смеси THF и метанола и очищали с помощью обращенно-
фазовой препаративной ВЭЖХ (методика препаративной ВЭЖХ 12) Продукт получали таким образом в виде белого твердого вещества (0.0248 г, выход 87%). ЖХ/МС: m/z = 722.4 (М+Н)+, 2.15 мин (методика
5).
1H ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.95 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (dd, J=6.0, 1.6 Гц, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.18-2.97 (m, 8H), 2.86 (br. s., 1H), 2.76-2.55 (m, 3H), 2.49 (br. s., 1Н), 2.13 (dd, J=17.2,
6.5 Гц, 1H), 1.96-1.80 (m, 7H), 1.69 (d, J=17.1 Гц, 3H), 1.64-1.40 (m, 10Н), 1.36 (td, J=12.7, 2.6 Гц, 2Н), 1.291.20 (m, 3H), 1.12 (br. s., 4H), 1.01 (s, 6H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (br. s., 3H). Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-((Е)-1-(гидроксиимино)этил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.020 г, 0.028 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водным раствором (0.277 мл, 0.277 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70градусов С с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 12). Собирали два пика. Материал, элюированный первым с помощью препаративной ВЭЖХ, был помечен как 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-(гидро-ксиимино)этил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота, Изомер 1 (0.0041 г, выход 20.7%) и был загрязнен главным изомером 2 продукта. Материал, элюированный вторым с помощью препаративной ВЭЖХ, представлял собой главный продукт, помеченный как 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(1-(гидроксиимино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота, Изомер 2, и был выделен в чистом виде в виде белого порошка (0.0119 г, выход 60.1%).
Аналитические данные для 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-(гидроксиимино)этил)-5a,5b,8,8,1Ы-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1: ВЭЖХ показала, что этот материал представлял собой смесь 73:27 оксима Изомера 1 к оксиму Изомера 2. ЖХ/МС: m/z = 708.4 (М+Н)+, 1.95 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, Ацетон) 5 7.98 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.29 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.33 (dd, J=5.6, 1.2 Гц, 1H), 3.94-3.78 (m, 1H), 3.19-3.01 (m, 11H), 2.25-2.13 (m, 1H), 2.12-2.09 (m, 2Н), 2.02 (d, J=2.2 Гц, 3H), 1.951.87 (m, 2Н), 1.80 (s, 6Н), 1.65-1.45 (m, 8Н), 1.40-1.26 (m, 6Н), 1.22 (s, 3H), 1.19-1.10 (m, 2Н), 1.07 (d, J=1.5 Гц, 6Н), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H).
Аналитические данные для 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-(гидроксиимино)этил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2: ВЭЖХ показала, что этот материал представлял собой одно чистое соединение. ЖХ/МС: m/z = 708.4 (М+Н)+, 1.99 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, ацетон) 5 7.98 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.29 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.33 (dd, J=6.0, 1.6 Гц, 1H), 3.16-2.98 (m, 10Н), 2.85 (dt, J=10.8, 5.2 Гц, 3H), 2.77-2.70 (m, 3H), 2.69-2.61 (m, 2Н), 2.57-2.47 (m, 1Н), 2.18 (dd, J=17.0, 6.5 Гц, 1H), 1.98 (br. s., 1H), 1.96 (br. s., 1H), 1.93-1.84 (m, 1H), 1.79 (s, 4Н), 1.77-1.71 (m, 2Н), 1.67 (d, J=14.4 Гц, 1H), 1.63-1.57 (m, 2Н), 1.47 (d, J=5.4 Гц, 4Н), 1.45-1.27 (m, 5Н), 1.27-1.22 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.10 (d, J=13.9 Гц, 1H), 1.06 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.98 (s, 3H).
Пример В16. Получение 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-морфолинопропан-2-ил)-
о Пример В16
Стадия 1. Получение метил 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--морфолинопропан-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В виале (1 dram) с резиновой мембраной и мешалкой соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(1-гидро-ксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1 (0.025 г, 0.035 ммоль), и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридин (0.021 г, 0.104 ммоль) в сухом хлороформе (1 мл). К перемешанному раствору добавляли по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0.013 г, 0.045 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем к смеси добавляли морфолин (0.030 мл, 0.346 ммоль), и полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревали до 60 °C в течение 90 мин. Реакционную смесь концентрировали в потоке азота и повторно растворяли в минимальном количестве смеси THF и MeOH. Очисткой с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) получали целевое соединение в виде белого порошка (0.0199 г, выход 50.7%), TFA соль. ЖХ/МС: m/z = 792.7 (М+Н)+, 1.97 мин (методика 5).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-морфолинопропан-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.0192 г, 0.019 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водным раствором (0.188 мл, 0.188 ммоль) в тетрагидрофуране (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 40 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-морфолинопропан-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0139 г, выход 73%). ЖХ/МС: m/z = 778.7 (М+Н)+, 1.75 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dz^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (s, 2H), 5.31 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.96 (br. s., 4H), 3.31-2.95 (m, 16H), 2.38 (br. s., 1H), 2.17 (dd, J=17.1, 6.1 Гц, 2Н), 2.07 (d, J=13.9 Гц, 1H), 2.03-1.89 (m, 3H), 1.89-1.82 (m, 1H), 1.81-1.72 (m, 2Н), 1.72-1.40 (m, 12Н), 1.39-1.25 (m, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.15 (d, J=6.4 Гц, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (br. s., 3H), 0.96 (br. s.,
3H).
Пример В17. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4карбоксифенил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-1-карбоновой
кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-оксопроп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В 75 мл сосуде под давлением Chemglass соединяли Промежуточное соединение 4 метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bR)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (1.50 г, 2.13 ммоль) с диоксидом селена (0.295 г, 2.66 ммоль) и уксусной кислотой (30 мл). Сосуд герметично закрывали, и смесь нагревали до 100°C в течение 45 мин. Смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и добавляли дополнительные 0.25 экв. диоксида селена (0.059 г, 0.67 ммоль). Сосуд повторно нагревали до 100°C в течение 15 мин. Смесь фильтровали через воронку с мелкой фриттой для удаления тонкого черного твердого вещества, и фильтрат концентрировали под вакуумом до оранжевого пенистого остатка. Сырую смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиентным элюированием от 100% гексанов до 3:1 гексаны:ацетон на протяжении 6 объемов колонки, удерживание при 3:1 гексаны:ацетон на протяжении 6 объемов колонки). Фракции продукта соединяли и концентрировали с получением продукта в виде не совсем белого твердого вещества: 0.747 г (выход 48.8%). ЖХ/МС: m/z = 719.6 (М+Н)+, 2.56 мин (методика 3).
Стадия 2. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-1 -карбоновой кислоты
В 100 мл круглодонной колбе, герметично закрытой резиновой заглушкой, соединяли метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13 aR, 13bS)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5^5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(3-оксопроп-1 ^^2-^^2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.590 г, 0.821 ммоль) с моногидратом лимонной кислоты (0.345 г, 1.64 ммоль). Затем добавляли трет-бутанол (18 мл) с последующим добавлением воды (15 мл). К перемешанной смеси добавляли NMO, 50 мас.% раствор в воде (0.374 мл, 1.81 ммоль), с последующим добавлением тетроксида осмия, 2.5% в трет-бутаноле (0.515 мл, 0.041 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30.5 ч. К смеси добавляли твердый периодат натрия (1.229 г, 5.74 ммоль). Твердые вещества начали выпадать в осадок из раствора за 5 мин. После перемешивания в течение 90 мин реакционную смесь разбавляли 125 мл воды, что вызвало появление тяжелого мелкого осадка. Суспензию фильтровали до отделения мелкого сероватого твердого вещества, которое очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 13) с получением не совсем белого порошка: 0.2386 г (выход 41.0%). ЖХ/МС: m/z = 709.5 (М+Н)+, 1.68 мин (методика 3).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33-5.26 (m, 1Н), 3.91 (s, 3H), 3.19-2.99 (m, 8H), 2.79-2.58 (m, 4H), 2.55-2.46 (m, 1H), 2.13 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 2H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.94 (d, J=12.7 Гц, 1H), 1.87 (dd, J=12.7, 7.8 Гц, 1H), 1.82-1.76 (m, 1H), 1.76-1.66 (m, 2H), 1.65-1.41 (m, 9H), 1.41-1.32 (m, 2H), 1.31-1.21 (m, 2H), 1.17 (br. s., 1H), 1.14 (s, 3H), 1.11-1.08 (m, 1H), 1.04 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
Стадия 3:
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.020 г, 0.028 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.282 мл, 0.282 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Фракции продукта соединяли и концентрировали под вакуумом с получением (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-9-(4-карбоксифенил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновой кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0212 мг, выход 80%). ЖХ/МС: m/z = 695.4 (М+Н)+, 1.93 мин (методика 5).
Стадия 1. Получение метил 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)--диоксидотиоморфолино)пропан-2-ил)-5 a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) с резиновой мембраной и мешалкой соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(1-гидро-ксипропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-ро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1 (0.150 г, 0.207 ммоль), и сухой хлороформ (2 мл). Смесь охлаждали на бане лед/соль, и к охлажденной до -10°C перемешанной кашице добавляли триф-торметансульфоновый ангидрид (0.046 мл, 0.270 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали при -10°C в течение 1 ч, затем к смеси добавляли тиоморфолин 1,1-диоксид (0.280 г, 2.075 ммоль) и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием. Сырую смесь концентрировали и повторно растворяли в минимальном количестве THF и MeOH и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Продукт выделяли таким образом в виде белого стеклообразного твердого вещества, TFA соль (0.0105 г, выход 4.3%). ЖХ/МС: m/z = 840.6 (М+Н)+, 2.16 мин (методика 5).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)--диоксидотиоморфолино)пропан-2-ил)-5 a,5b,8,8,11 a-пен-таметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.0106 г, 9.92 мкмоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.099 мл, 0.099 ммоль), в тетрагидрофуране (0.5 мл) и MeOH (0.5 мл). Смесь нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 60 мин. Сырую реакционную смесь концентрировали в потоке азота, затем повторно растворяли в ацетонитриле/метаноле, фильтровали и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)--диоксидотиоморфолино)пропан-2-ил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаме-^№2,3^4,5^5^6,7^8,11,11a,11b, 12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0080 г, выход 65.6%). ЖХ/МС: m/z = 826.6 (М+Н)+, 1.94 мин (методика 5).
1H ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.35-5.27 (m, 1H), 3.28 (d, J=1.5 Гц, 4Н), 3.23-3.02 (m, 13H), 3.01-2.93 (m, 2H), 2.55 (dd, J=13.3, 4.0 Гц, 1H), 2.36-2.24 (m, 2H), 2.17 (dd, J=17.2, 6.5 Гц, 1H), 2.13-1.97 (m, 3H), 1.96-1.85 (m, 3H), 1.81-1.67 (m, 4H), 1.66-1.54 (m, 5H), 1.53-1.40 (m, 5H), 1.34-1.24 (m, 4H), 1.22 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.99 (d, J=6.8 Гц, 3H), 0.98-0.97 (m, 3H), 0.96 (br. s., 3H).
Пример В19. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,1Щ^^На,^-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1.
В 20 мл сцинтилляционной виале соединяли хлорид титана (III), 20 мас.%, раствор в 3% HCl (0.766 мл, 1.21 ммоль) и ацетат натрия (0.099 г, 1.212 ммоль) в этаноле (1 мл). Полученный в результате раствор цвета лаванды охлаждали на ледяной бане и добавляли THF (2 мл) с последующим добавлением метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13 aR, 13bS)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)--(гидро-ксиимино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^,11^12,13,^,13Ыоктадека-гидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензоата (0.175 г, 0.242 ммоль). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и полученную в результате суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем концентрировали в потоке азота до твердого вещества и помещали под высокий вакуум при комнатной температуре на протяжении ночи. Добавляли THF (2 мл) и этанол (1 мл), затем медленно добавляли твердый борогидрид натрия (0.092 г, 2.424 ммоль), что привело к значительному газовыделению из реакционной смеси. Через 130 мин добавляли избыток борогидрида натрия (шпателем, приблизительно еще 10 эквивалентов или более), немедленно происходило значительное газовыделение, и смесь перемешивали при комнатной температуре в общем в течение 16 ч. К реакционной смеси медленно добавляли водный хлорид аммония, чтобы остановить реакцию. Смесь концентрировали в потоке азота до остатка и затем повторно растворяли в минимальном количестве смеси ацетонит-рил/метанол/вода, фильтровали и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением целевого вещества как единичного изомера в виде бежевого твердого вещества, TFA соль (0.079 г, выход 31%). ЖХ/МС: m/z = 708.5 (М+Н)+, 2.06 мин (методика
5).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((R)-1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3 ^,4,5^,5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1 Н-циклопентаИхризен^-иОбензоат, Изомер 1, TFA соль (0.040 г, 0.038 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.381 мл, 0.381 ммоль) в тетрагидрофуране (0.5 мл) и MeOH (0.5 мл). Смесь нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 30 мин. Сырую реакционную смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением 4-((1 R,3 aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR,13bS)-1-(1 -аминоэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хри-зен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1, в виде белого порошка, TFA соль (0.040 г, выход 99%). ЖХ/МС: m/z = 694.5 (М+Н)+, 1.83 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.9 Гц, 1H), 3.43 (q, J=6.6 Гц, 1H), 3.31-3.23 (m, 4H), 3.23-3.13 (m, 3H), 3.13-3.00 (m, 5H), 2.51 (t, J=9.7 Гц, 1H), 2.17 (dd, J=17.0, 6.2 Гц, 1H), 2.11-2.02 (m, 2H), 2.02-1.91 (m, 3H), 1.89-1.77 (m, 2H), 1.74 (d, J=17.4 Гц, 1H), 1.68-1.53 (m, 7H), 1.52-1.44 (m, 4Н), 1.43-1.35 (m, J=16.3, 7.5 Гц, 1H), 1.30 (d, J=6.8 Гц, 4Н), 1.22 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H).
Пример В20. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--морфолиноэтил)-
2,3 ^,4,5^,5^6,7,7^8,11,11^11^12,13,^, 13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В 20 мл сцинтилляционной виале соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.020 г, 0.019 ммоль), с 1-бром-2-(2-бромэтокси)этаном (0.00883 г, 0.038 ммоль) и триэтила-мином (0.016 мл, 0.114 ммоль) в 1,4-диоксане (0.5 мл). Смесь нагревали до 85°C в течение 30 мин, что не привело к появлению реакции. Смесь переносили в 5 мл микроволновый сосуд и разбавляли сухим аце-тонитрилом (2 мл). К смеси добавляли дополнительный 1-бром-2-(2-бромэтокси)этан (еще 10 экв.; 0.0445 г, 0.190 ммоль), а также 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридин (0.023 г, 0.114 ммоль). Полученную в результате смесь нагревали в микроволнах до 120°C в течение 90 мин. Содержимое сосуда концентрировали в потоке азота, повторно растворяли в небольшом количестве смеси THF, ацетонитрила и метанола, фильтровали и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Целевой продукт получали таким образом в виде белого твердого вещества и сразу переносили на следующую стадию. ЖХ/МС: m/z = 778.6 (М+Н)+, 2.13 мин (методика 5).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-морфолиноэтил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.021 г, 0.019 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.190 мл, 0.190 ммоль) в тетрагидрофуране (0.5 мл) и MeOH (0.5 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 14) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11 aS, 11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-морфолиноэтил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0182 г, выход 86% за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 764.6 (М+Н)+, 1.85 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=5.1 Гц, 1H), 3.88 (br. s., 4H), 3.30-2.96 (m, 16H), 2.41 (br. s., 2H), 2.17 (dd, J=17.0, 6.5 Гц, 1H), 2.09 (d, J=15.7 Гц, 1H), 2.04-1.86 (m, 4H), 1.86-1.69 (m, 3H), 1.67-1.55 (m, 6H), 1.541.42 (m, 5H), 1.33-1.24 (m, 5H), 1.22 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.96 (br. s., 3H).
Пример В21. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетамидоэтил)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Пример В21
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-ацетамидоэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11Д1 аД 1ЬД 2 Д 3 Д За, 1 ЗЬ-октадекагидро- 1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
В виале (1 dram) с PTFE завинчивающейся крышкой и мешалкой соединяли метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)-1 -(1 -аминоэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.019 г, 0.018 ммоль), с TEA (0.025 мл, 0.181 ммоль) в сухом хлороформе (1 мл). Затем добавляли ацетилхлорид (1.930 мкл, 0.027 ммоль) весь сразу и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали в потоке азота и сразу переносили на следующую стадию без очистки. ЖХ/МС: m/z = 750.5 (М+Н)+, 2.17 мин (методика 5).
Стадия 2:
В виале (1 dram) с PTFE завинчивающейся крышкой соединяли сырую смесь, содержащую метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)-1 -(1 -ацетамидоэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.014 г, 0.018 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.180 мл, 0.180 ммоль) в тетрагидрофуране (0.5 мл) и MeOH (0.5 мл). Смесь нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ в одной пробе (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Таким образом получали 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)-1 -(1 -ацетамидоэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0108 г, выход 61.6%). ЖХ/МС: m/z = 736.5 (М+Н)+, 1.94 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.35-5.28 (m, 1Н), 4.25 (qum, J=7.2 Гц, 1H), 3.30-2.99 (m, 12H), 2.27-2.11 (m, 2H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.90-1.76 (m, 5H), 1.76-1.54 (m, 7H), 1.53-1.32 (m, 6H), 1.31-1.23 (m, 2H), 1.20 (s, 3H), 1.12 (d, J=6.8 Гц, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Пример В22 и пример В23. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-
диоксидотиоморфолино)этил)амино)--((метоксикарбонил)амино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3^,4,5^,5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13a, 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты и 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-
но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(1 -(2,2,2-трифторацетамидо)этил)-
2,3^,4,5^,5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13^ 13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-1-(1-((метоксикарбонил)амино)этил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3^4,5,5^5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата и метил 4-(( 1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил- 1 -(1-(2,2,2-трифторацетамидо)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
В 20 мл сцинтилляционной виале с мешалкой помещали метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1 -аминоэтил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.019 г, 0.018 ммоль) с TEA (0.025 мл, 0.181 ммоль) в сухом хлороформе (1 мл). К смеси добавляли метилхлорформат (2.102 мкл, 0.027 ммоль) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Сырую реакционную смесь концентрировали в потоке азота до остатка, который сразу переносили на следующую стадию. ЖХ/МС: m/z = 766.5 (М+Н)+, 2.24 мин и 804.5 (М+Н)+, 2.32 мин (методика 5).
Стадия 2:
В виале (1 dram) с PTFE завинчивающейся крышкой соединяли сырую смесь, содержащую метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR,13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(1 -((мето-ксикарбонил)амино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^,11^12,13,13^13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, и метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-(2,2,2-трифторацетамидо)этил)-2,3^4,5,5^5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.018 ммоль общее количество) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.180 мл, 0.180 ммоль) в тетрагидрофуране (0.5 мл) и MeOH (0.5 мл). Смесь нагревали с перемешиванием до 70°C в течение 25 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Таким образом выделяли два указанных в заголовке соединения: 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR,13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(1 -((мето-ксикарбонил)амино)этил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^,11^12,13,13^13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота: выделяли в виде белого порошка, TFA соль (0.0039 г, выход 21.9%). ЖХ/МС: m/z = 752.5 (М+Н)+, 2.03 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.97-7.89 (m, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 6.42 (d, J=9.3 Гц, 1H), 5.32 (dd, J=6.0, 1.3 Гц, 1H), 4.01-3.89 (m, 1Н), 3.65 (s, 2Н), 3.292.98 (m, 12H), 2.27 (d, J=8.1 Гц, 1H), 2.21-2.10 (m, 1H), 2.09-2.01 (m, 1H), 2.00-1.92 (m, 1Н), 1.91-1.62 (m, 9H), 1.62-1.38 (m, 8H), 1.33-1.24 (m, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.15 (d, J=6.8 Гц, 3H), 1.05 (s, 6H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
4-(( 1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11 aS, 11 bR, 13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-1 -(1-(2,2,2-трифторацетамидо)этил)-2,3^,4,5,5^,6,7^8,11,1^11^12,13,^13^ октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота: выделяли в виде белого порошка, TFA соль (0.0066 г, выход 35.7%). ЖХ/МС: m/z = 790.5 (М+Н)+, 2.12 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d^ 5 7.93 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.35-5.27 (m, 1Н), 4.33
(t, J=8.3 Гц, 1H), 3.30 (br. s., 7H), 3.13-3.00 (m, 5H), 2.50-2.40 (m, 1H), 2.17 (dd, J=16.9, 6.4 Гц, 1H), 2.091.90 (m, 4H), 1.73 (d, J=2.2 Гц, 3H), 1.71-1.55 (m, 6H), 1.55-1.42 (m, 5H), 1.37-1.26 (m, 3H), 1.24 (d, J=6.8 Гц, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H).
Пример В24 и пример В25. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-(сульфиноокси)ацетил)-2,3^4,5,5^5^6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты и 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-гидро-ксиацетил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В виалу (1 dram) с мешалкой помещали гидроксид натрия, 3.0 М водный (0.471 мл, 1.414 ммоль). Виалу охлаждали до -10°C на бане лед/ацетон. К перемешанному раствору добавляли бром (0.026 мл, 0.495 ммоль) по каплям на протяжении 2 мин. Полученный в результате желто-зеленый раствор перемешивали в течение 10 мин на холодной бане, затем очень медленно добавляли по каплям 1,4-диоксан (0.30 мл), и полученный в результате желтый раствор перемешивали еще 5 мин холодным. Холодный желтый раствор гипобромита добавляли по каплям к охлажденной до 0°C суспензии метил 4-((1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)-1 -ацетил-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопен-та[a]хризен-9-ил)бензоата (0.050 г, 0.071 ммоль) в 1,4-диоксане (1.15 мл) и воде (0.20 мл). Полученную в результате желтую суспензию немедленно оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 80 мин. К смеси добавляли 0.2 мл насыщенного водного раствора сульфита натрия, и смесь нагревали до 80°C в течение 25 мин. Смесь концентрировали до твердого остатка в потоке азота. К остатку добавляли THF (2 мл), метанол (0.5 мл), воду (0.3 мл) и ацетонитрил (0.3 мл). Виалу встряхивали, и содержимое фильтровали для удаления твердых веществ. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Фракции, содержащие целевые соединения, соединяли и повторно очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 12). Таким образом выделяли два указанных в заголовке соединения: 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2-(сульфиноокси)ацетил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота: выделяли в виде белого порошка (0.0091 г, выход 12.6%). ЖХ/МС: m/z = 773.4 (М+Н)+, 2.03 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, уксусная кислота) 5 7.93 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.18 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.32 (d, J=5.4 Гц, 1H), 3.85 (td, J=10.8, 5.6 Гц, 1H), 3.47-3.08 (m, 13Н), 2.67 (t, J=11.7 Гц, 1H), 2.57-2.40 (m, 1H), 2.18 (d, J=3.9 Гц, 3H), 1.99-1.93 (m, 2H), 1.84-1.71 (m, 3H), 1.70-1.38 (m, 12H), 1.33 (br. s., 3H), 1.28-1.19 (m, 4H), 1.16 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
4-(( 1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -(2-гидроксиацетил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13^13b-октадекагид-ро-Ш-циклопентаИхризен^-ш^бензойная кислота: выделяли в виде белого порошка (0.0042 г, выход 6.2%). ЖХ/МС: m/z = 709.4 (М+Н)+, 1.96 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.19 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.29 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.28 (d, J=4.4 Гц, 2Н), 3.19-3.07 (m, 5H), 3.07-2.98 (m, 2H), 2.94 (td, J=10.9, 4.8 Гц, 2Н), 2.78-2.58 (m, 3H), 2.45 (dt, J=11.6, 3.9 Гц, 1H), 2.20 (t, J=11.4 Гц, 1H), 2.15-2.04 (m, 2H), 2.01 (s, 1H), 1.98-1.82 (m, 2H), 1.75-1.63 (m, 2H), 1.62-1.20 (m, 12H), 1.20-1.06 (m, 5H), 1.04 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.95 (br. s., 3H), 0.94 (br. s., 3H).
Пример В26. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-1 -((метоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.025 г, 0.035 ммоль) с триэтиламином (8.85 мкл, 0.063 ммоль) и дифенилфосфорил азидом (0.011 мл, 0.053 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (0.5 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 100°C в течение 75 мин. К смеси при комнатной температуре добавляли метоксид натрия, 0.5 М раствор в метаноле (0.705 мл, 0.353 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь концентрировали в потоке азота, и сырой остаток переносили далее на следующую стадию для гидролиза сложного эфира. ЖХ/МС: m/z = 738.7 (М+Н)+, 2.25 мин (методика 3).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-((метоксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.026 г, 0.035 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.352 мл, 0.352 ммоль), и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 20 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением метил 4-((1 R,3 aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR,13bS)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1 -((мето-ксикарбонил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадека-гидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата в виде белого порошка, TFA соль (0.0113 г, выход 32.7%). ЖХ/МС: m/z = 724.4 (М+Н)+, 1.96 мин (методика 3).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол-dzt lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 6.87 (d, J=8.3 Гц, 1H), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 4.11-3.96 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.27-2.87 (m, 12Н), 2.38-2.23 (m, 1H), 2.22-2.04 (m, 3H), 2.03-1.82 (m, 3H), 1.76 (t, J=16.5 Гц, 3H), 1.69-1.37 (m, 10H), 1.36-1.23 (m, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В27. Получение 4-((lR,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(морфолин-4-карбонил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(морфолин-4-карбонил)-
2,33M?5,5a,5b,6 J,7a,8J 1Д 1аД 1ЬД2ДЗДЗаДЗЬ-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.025 г, 0.035 ммоль) с морфолином (3.99 мкл, 0.046 ммоль), HATU (0.017 г, 0.046 ммоль) и DI-PEA (0.020 мл, 0.113 ммоль) в хлороформе (1 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Смесь концентриро-
вали в потоке азота, затем повторно растворяли в минимальном количестве смеси ацетонитрила и мета-
нола. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 5) с получением продукта в виде белого твердого вещества TFA соль (0.0276 г). ЖХ/МС: m/z = 778.5 (М+Н)+, 2.26 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.73-3.50 (m, 8H), 3.29-3.14 (m, 8H), 3.14-2.96 (m, 5H), 2.71 (t, J=11.7 Гц, 1H), 2.35-2.22 (m, 1H), 2.19-2.04 (m, 3H), 1.90-1.64 (m, 5Н), 1.64-1.52 (m, 5Н), 1.47 (d, J=12.0 Гц, 4Н), 1.28 (d, J=10.3 Гц, 2Н), 1.20 (s, 3H), 1.14 (s, 4H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(морфолин-4-карбонил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.027 г, 0.027 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.134 мл, 0.134 ммоль), и тетрагидрофуран (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 60°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением 4-((1R,3aS,5 aR,5bR,7aR, 11aS, 11 bR, 13 aR, 13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(морфолин-4-карбонил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0323 г, выход 92% за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 764.5 (М+Н)+, 2.06 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.73-3.52 (m, 8H), 3.28-3.13 (m, 8H), 3.12-2.95 (m, 5H), 2.71 (t, J=11.6 Гц, 1H), 2.34-2.22 (m, 1H), 2.20-2.04 (m, 3H), 1.79 (d, J=4.2 Гц, 2Н), 1.65 (br. s., 3H), 1.64-1.35 (m, 9H), 1.33-1.23 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.14 (s, 4H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Пример В28. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино) - 5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(метилкарбамоил) -
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метилкарбамоил)-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,11а,11Ь,12,13,1 За,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метилкарбамоил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат получали способом, аналогичным описанному для получения метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пен-таметил-1 -(морфолин-4-карбонил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,ПЛ^И^^^^аЛ3b-октадекагидро-1 Н-цикло-пента[a]хризен-9-ил)бензоата, за исключением того, что метиламин, 2.0 М в THF (0.176 мл, 0.353 ммоль), использовали вместо морфолина. Также, после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ материал повторно очищали с использованием других условий (методика препаративной ВЭЖХ 12) с получением целевого продукта в виде белого порошка (0.0142 г, выход 55.8%). ЖХ/МС: m/z = 722.6 (М+Н)+, 2.02 мин (методика 3).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.44-7.36 (m, 1Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.29 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.19-2.95 (m, 8H), 2.75-2.68 (m, 5Н), 2.67-2.58 (m, 1H), 2.57-2.40 (m, 2H), 2.16-1.88 (m, 4H), 1.83 (dd, J=12.8, 7.9 Гц, 1H), 1.78-1.66 (m, 2H), 1.65-1.42 (m, 8H), 1.42-1.29 (m, 4H), 1.29-1.21 (m, 2H), 1.21-1.14 (m, 1H), 1.12 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(метилкарбамоил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.0142 г, 0.020 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.197 мл, 0.197 ммоль), и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 60°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(метилкарбамоил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8, ПЛ^И^^^^аЛ 3Ь-ОКШ-декагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ш^бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0171 мг, выход 92%). ЖХ/МС: m/z = 708.4 (М+Н)+, 1.98 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.26-3.04 (m, 10Н), 3.00 (d, J=4.2 Гц, 2Н), 2.85 (br. s., 1H), 2.75 (s, 3H), 2.51 (t, J=11.6 Гц, 1H), 2.21-2.07 (m, 3H), 2.06-1.97 (m, 1H), 1.90-1.67 (m, 5H), 1.65-1.34 (m, 10Н), 1.21 (br. s., 2H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Пример В29. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-метилмочевина)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1.
Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((азидокарбонил)амино)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.085 г, 0.120 ммоль) с триэтиламином (0.030 мл, 0.216 ммоль) и дифенилфосфорил азидом (0.028 мл, 0.132 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (2 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 100 мин, затем нагревали до 100°C и перемешивали в течение 2 ч. К смеси добавляли еще дифенилфосфорил азид (0.028 мл, 0.132 ммоль), и смесь повторно нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 ч. Сырую смесь сразу переносили на следующую стадию без очистки. ЖХ/МС: m/z = 749.6 (М+Н)+, 2.30 мин (методика 3).
Стадия 2.
Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфо-лино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-метилмочевина)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,ll,lla,llb,12,13,13a,13b^
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((азидокарбонил)амино)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.030 г, 0.040 ммоль) с метанамином, 1.0 М в THF (0.400 мл, 0.400 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением целевого продукта в виде белого порошка, TFA соль (0.0193 г, выход 50% за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 737.4 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.9 Гц, 1Н), 4.12-4.01 (m, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.31-3.01 (m, 11Н), 2.97 (d, J=11.2 Гц, 1H), 2.71 (s, 3Н), 2.36-2.21 (m, 1Н), 2.15 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.11-2.02 (m, 2Н), 2.01-1.92 (m, 1Н), 1.91-1.79 (m, 2Н), 1.79-1.37 (m, 13Н), 1.33-1.22 (m, 2H), 1.18 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (s,
3H), 0.94 (s, 3H).
Стадия 3:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-метилмочевина)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.019 г, 0.020 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.197 мл,
0.197 ммоль), и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 60°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(3-метилмочевина)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Щ-щклопента^хризен^-и^бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0203 г, выход 106%). ЖХ/МС: m/z = 723.4 (М+Н)+, 1.93 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 4.16-3.99 (m, 1Н), 3.28-3.00 (m, 11Н), 3.00-2.86 (m, 1Н), 2.72 (s, 3Н), 2.38-2.21 (m, 1Н), 2.16 (dd, J=17.2, 6.5 Гц, 1H), 2.12-2.01 (m, 2Н), 2.01-1.93 (m, 1Н), 1.90-1.55 (m, 10Н), 1.35 (d, J=11.7 Гц, 6H), 1.29 (d, J=10.8 Гц, 2H), 1.18 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В30. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(пирролидин-1-карбоксамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(пирролидин-1-карбоксамидо)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,l 1,11аД 1ЬД2ДЗДЗаДЗЬ-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((азидокарбонил)амино)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.030 г, 0.040 ммоль) с пирролидином (0.033 мл, 0.400 ммоль). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Целевой продукт получали таким образом в виде белого порошка, TFA соль (0.0178 г, выход 44.3%). ЖХ/МС: m/z = 777.5 (М+Н)+, 2.16 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол-dzt lock) 5 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.9 Гц, 1Н), 4.16 (br. s., 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.31-3.00 (m, 12Н), 2.94 (br. s., 1H), 2.38-2.21 (m, 2H), 2.16 (dd, J=17.0, 6.2 Гц, 1H), 2.09 (d, J=14.7 Гц, 1H), 2.01-1.66 (m, 12H), 1.65-1.34 (m, 10H), 1.33-1.22 (m, 2H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(пирролидин-1-карбоксамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.019 г, 0.019 ммоль), с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.189 мл, 0.189 ммоль), и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завин
чивающейся крышкой и смесь нагревали до 60°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь
очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получе-
нием 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-
5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(пирролидин-1-карбоксамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11^12,13,^,^4^^-
декагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0163 г, выход
85%). ЖХ/МС: m/z = 763.4 (М+Н)+, 2.04 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.9 Гц, 1Н), 4.21-4.08 (m, 1Н), 3.27-3.00 (m, 12Н), 2.93 (d, J=9.3 Гц, 1H), 2.28 (t, J=11.4 Гц, 2Н), 2.16 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.09 (d, J=15.4 Гц, 1H), 1.99-1.90 (m, 5Н), 1.90-1.80 (m, 2Н), 1.79-1.66 (m, 4Н), 1.66-1.54 (m, 4Н), 1.54-1.34 (m, 6Н), 1.33-1.22 (m, 3Н), 1.18 (s, 3Н), 1.10 (s, 3Н), 1.04 (s, 3Н), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В31. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-,3,4-оксадиазол-2-ил)-
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-формилгидразинкарбони^
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,1 1,1 la, 11ЬД2Д ЗДЗаДЗЬ-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.050 г, 0.071 ммоль) с гидразидом муравьиной кислоты (8.47 мг, 0.141 ммоль), HATU (0.035 г, 0.092 ммоль) и DIPEA (0.039 мл, 0.226 ммоль) в хлороформе (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 26 ч. Смесь концентрировали в потоке азота, затем повторно растворяли в минимальном количестве смеси ацетонитрил/MeOH, фильтровали и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Целевой продукт выделяли таким образом в виде белого твердого вещества, TFA соль (0.0396 г, выход 57.4%). ЖХ/МС: m/z = 751.4 (М+Н)+, 2.11 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 8.04 (s, 1Н), 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.29 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.27-3.04 (m, 10Н), 3.03-2.88 (m, 3Н), 2.57 (t, J=11.9 Гц, 1H), 2.32-2.18 (m, 1Н), 2.18-2.02 (m, 3Н), 1.95-1.65 (m, 5Н), 1.64-1.32 (m, 10Н), 1.31-1.21 (m, 2Н), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-
диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(2-формилгидразинкарбонил)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.020 г, 0.020 ммоль), и DIPEA (0.036 мл, 0.204 ммоль) с ацетонитрилом (0.5 мл). К смеси добавляли р-толуолсульфонил хлорид (0.031 г, 0.163 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 12). Таким образом получали целевой продукт (0.0084 г, выход 56.1%). ЖХ/МС: m/z = 733.7 (М+Н)+, 2.32 мин (методика 3).
Стадия 3:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.0084 г, 0.011 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.115 мл, 0.115 ммоль), и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0106 г, выход 97%). ЖХ/МС: m/z = 719.4 (М+Н)+, 1.92 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 8.70 (s, 1Н), 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.19 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.32-5.21 (m, 1Н), 3.75 (td, J=11.1, 3.7 Гц, 1Н), 3.27-2.92 (m, 11Н), 2.65 (t, J=12.0 Гц, 1H), 2.57-2.42 (m, 1Н), 2.26-1.76 (m, 7Н), 1.72-1.33 (m, 10Н), 1.26 (br. s., 3H), 1.20 (s, 3H), 1.16 - 1.05 (m, 4H), 1.02 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.91 - 0.84 (m, 1H).
Пример В32. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--(2-оксопирролидин-1 -ил)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--(2-оксопирролидин-1 -ил)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В 5 мл микроволновой виале соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.025 г, 0.035 ммоль) с 4-хлорбутаноил хлоридом (5.94 мкл, 0.053 ммоль) и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридином (0.029 г, 0.141 ммоль) в смеси ацетонитрила (0.5 мл) и 1,4-диоксана (0.5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и затем нагревали до 120°C в микроволновом реакторе в течение 1 ч. Смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, затем дисперсию гидрида натрия 60% NaH в минеральном масле (избыток, приблизительно 20 мг) добавляли к смеси, вызвав значительное газовыделение. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Сырую смесь переносили на следующую стадию без дополнительной обработки. ЖХ/МС: m/z = 776.5 (М+Н)+, 2.18 мин (методика 5). Стадия 2:
Сырую реакционную смесь, содержащую метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(1-(2-оксопирролидин-1 -ил)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.027 г, 0.035 ммоль) и избыток гидрида натрия в THF, останавливали медленным добавлением воды (1 мл), что привело к энергичному выделению газа. Затем добавляли метанол (1 мл), и полученную в результате смесь нагревали до 60°C в течение 30 мин. Смесь концентрировали в потоке азота до приблизительно 0.5 мл, разбавляли ацетонитрилом (1 мл) и метанолом (1 мл), затем фильтровали и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-(2-оксопирролидин-1-ил)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0270 г, выход 76% за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 762.5 (М+Н)+, 1.98 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.9 Гц, 1Н), 4.38-4.28 (m, 1Н), 3.62-3.53 (m, 1Н), 3.49-3.40 (m, 1Н), 3.272.93 (m, 11Н), 2.49-2.29 (m, 2Н), 2.29-2.12 (m, 2Н), 1.98 (br. s., 4H), 1.95-1.79 (m, 5H), 1.78-1.68 (m, 2H), 1.52 (d, J=6.1 Гц, 6Н), 1.50-1.32 (m, 5H), 1.31-1.25 (m, 2H), 1.22 (br. s., 3H), 1.21 (s, 3H), 1.05 (s, 6H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В33. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил) амино) - 5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В 20 мл сцинтилляционной виале соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту, соль триэтиламмония (0.100 г, 0.123 ммоль) с дифенилфосфорил азидом (0.080 мл, 0.370 ммоль) и триэтиламином (0.034 мл, 0.247 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (5 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 80°C в течение 2 ч. Смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и оставляли при комнатной температуре в течение 1.5 ч. К быстро перемешанной смеси добавляли гидроксид натрия, 1.0 М водный (4.93 мл, 4.93 ммоль) весь сразу. Полученную в результате мутную смесь быстро перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь концентрировали в потоке азота и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 15). Целевой продукт выделяли таким образом в виде белого твердого вещества, TFA соль (0.0739 г, выход 59.5%). ЖХ/МС: m/z = 666.3 (М+Н)+, 1.79 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.9 Гц, 1Н), 3.85 (t, J=8.6 Гц, 1Н), 3.27-3.12 (m, 6Н), 3.11-2.83 (m, 6Н), 2.48 (br. s., 1Н), 2.23-1.97 (m, 5Н), 1.93-1.80 (m, 2Н), 1.75 (d, J=16.1 Гц, 2H), 1.69-1.34 (m, 11Н), 1.33-1.24 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Пример В34. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(диметиламино)-3a-((2-((2-((2-метоксиэтил)сульфонил)этил)(метил)амино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1.
Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1 -диоксидотио-морфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.150 г, 0.212 ммоль) с дифенилфосфорил азидом (0.114 мл, 0.529 ммоль) и триэтиламином (0.118 мл, 0.846 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (2 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 80°C в течение 45 мин. Добавляли дополнительный дифенилфосфорил азид (0.057 мл, 0.265 ммоль) и смесь нагревали до 85°C в течение еще 20 мин. Смесь удаляли от источника тепла, оставляли охлаждаться до комнатной температуры и к ней добавляли гидроксид натрия, 3.0 М водный (1.41 мл, 4.23 ммоль). Через 45 мин перемешивания смесь охлаждали на ледяной бане, и к ней медленно добавляли соляную кислоту, 12 М (0.353 мл, 4.23 ммоль). Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3). Целевой продукт выделяли в виде белого порошка, TFA соль (0.0558 г, выход 25.8%). ЖХ/МС: m/z = 680.4 (М+Н)+, 1.93 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.95-3.81 (m, 4Н), 3.30-2.84 (m, 12Н), 2.59-2.37 (m, 1Н), 2.322.21 (m, 1Н), 2.21-2.01 (m, 4Н), 2.00-1.70 (m, 4Н), 1.69-1.33 (m, 12Н), 1.33-1.24 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Стадия 2.
Получение 4-(2-(((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(диметиламино)-9-(4-(метоксикар-бонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-ил)амино)этил)-4-метилтиоморфолин-4-ий 1,1 -диоксида.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3а-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.021 г, 0.021 ммоль), с 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридином (0.042 г, 0.205 ммоль) в хлороформе (0.5 мл). К этой перемешанной смеси добавляли метилтрифторметансульфонат (0.011 мл, 0.103 ммоль). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь перемешивали при 70°C в течение 30 мин. Добавляли еще 5 экв. метил трифторметансульфоната (0.011 мл, 0.103 ммоль) и смесь повторно нагревали до 70°C в течение дополнительных 105 мин. Смесь концентрировали в потоке азота и повторно растворяли в минимальном количестве метанола с добавлением малого количества THF. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной
ВЭЖХ 2). Продукт, выделенный таким образом, сразу переносили на следующую стадию. ЖХ/МС: m/z = 722.4 (М+Н)+, 2.04 мин (методика 5). Стадия 3:
В виале (1 dram) соединяли 4-(2-(((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(диметиламино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-ил)амино)этил)-4-метилтиоморфолин-4-ий 1, 1 -диоксид (0.010 г, 9.12 мкмоль) с 1.0 М водным гидроксидом лития гидратом (0.091 мл, 0.091 ммоль) и тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR 11aS,11bR,13aR,13bS)-1 -(диметиламино)-3a-((2-((2-((2-метоксиэтил)сульфонил)этил)(ме-тил)амино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Щ-циклопеотаИхризен^-ил^ензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0048 г, выход 20% за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 740.4 (М+Н)+, 1.88 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (dd, J=6.0, 1.3 Гц, 1Н), 4.24-4.10 (m, 1Н), 3.84 (t, J=4.6 Гц, 2Н), 3.67-3.56 (m, 2Н), 3.49-3.43 (m, J=6.2, 6.2 Гц, 2Н), 3.25-3.12 (m, 3Н), 3.01-2.74 (m, 8Н), 2.72 (s, 3Н), 2.35-2.21 (m, 1Н), 2.21-2.06 (m, 2Н), 2.06-1.97 (m, 2Н), 1.95-1.85 (m, 2Н), 1.73 (d, J=17.1 Гц, 1Н), 1.68-1.42 (m, 12Н), 1.35-1.20 (m, 8Н), 1.17 (s, 3Н), 1.07 (s, 3Н), 1.05 (s, 3Н), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В35. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-(метиламино)этил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1.
Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-(метиламино)этил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.020 г, 0.028 ммоль) с 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридином (0.029 г, 0.141 ммоль) в хлороформе (0.5 мл). К этой перемешанной смеси добавляли метил трифторметансульфонат (4.98 мкл, 0.045 ммоль) и закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. К смеси добавляли еще метил трифторметансульфонат (7 мкл, приблизительно 0.063 ммоль, 2.25 эквивалента) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1.5 ч. К смеси добавляли 1.0 М аммиак в THF, затем смесь концентрировали в потоке азота до остатка, повторно растворяли в минимальном количестве смеси 1:1 THF/MeOH и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 12). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяли и по
вторно очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3) с получением целевого продукта в виде белого порошка, TFA соль (0.0123 г, выход 40.9%). ЖХ/МС: m/z = 722.3 (М+Н)+, 2.01 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.4 Гц, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.28-2.96 (m, 12Н), 2.74 (s, 3Н), 2.50 (td, J=10.9, 2.6 Гц, 1H), 2.21-1.91 (m, 6Н), 1.90-1.68 (m, 4Н), 1.68-1.37 (m, 11Н), 1.34 (s, 3H), 1.31 -1.24 (m, 2Н), 1.21 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-(метиламино)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.0093 г, 8.74 мкмоль), с 1.0 М водным гидроксидом лития гидратом (0.087 мл, 0.087 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS, 11bR, 13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-(метиламино)этил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты в виде белого стеклообразного твердого вещества, TFA соль (0.0078 г, выход 80%). ЖХ/МС: m/z = 708.4 (М+Н)+, 1.79 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.31 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.27-2.95 (m, 12Н), 2.74 (s, 3Н), 2.57-2.44 (m, 1Н), 2.23-1.92 (m, 6Н), 1.90-1.68 (m, 4Н), 1.68-1.40 (m, 11Н), 1.34 (d, J=6.6 Гц, 3H), 1.31-1.24 (m, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (br. s., 3H), 0.96 (br. s., 3H).
Пример В36. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетамидо-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновую кислоту (0.020 г, 0.028 ммоль) с дифенилфосфорил азидом (0.015 мл, 0.071 ммоль) и триэтиламином (0.016 мл, 0.113 ммоль) в сухом 1,4-диоксане (1 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 80°C в течение 20 мин. Реакционную смесь затем добавляли с помощью пипетки сразу в 80°C виалу, содержащую гидроксид натрия, 3.0 М водный (0.235 мл, 0.705 ммоль). Через 1 минуту смесь удаляли от источника тепла. Смесь обрабатывали уксусным ангидридом (0.135 г, 1.33 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали до 70°C в течение 10 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16) с получением целевого продукта в виде бесцветного твердого вещества, TFA соль (0.0149 г, выход 54%). ЖХ/МС: m/z = 708.3 (М+Н)+, 1.92 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-dzb метанол^4 lock) 5 8.08 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (dd, J=6.0, 1.3 Гц, 1Н), 4.25 (q, J=11.2 Гц, 1Н), 3.27-3.00 (m, 11Н), 2.91 (dt, J=14.6, 7.2 Гц, 1H), 2.38-2.23 (m, 1Н), 2.22-2.05 (m, 3Н), 2.05-1.96 (m, 1Н), 1.92 (s, 3Н), 1.90-1.66 (m, 5Н), 1.65-1.35 (m, 11Н), 1.34-1.22 (m, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H).
Пример В37 и пример В38. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метиламино)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты и 4-(( 1 R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR,13bS)-1 -(диметиламино)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метиламино)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата и метил 4-(( 1 R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS, 11 bR, 13aR, 13bS)-1 -(диметиламино)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
Проводили два отдельных эксперимента в две стадии - стадия 1 и стадия 2. Полученные в результате конечные сырые реакционные смеси после стадии 2 из обоих экспериментов соединяли и очищали с получением указанных в заголовке соединений.
Эксперимент 1: В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5^^,6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.021 г, 0.021 ммоль), с 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридином (0.042 г, 0.205 ммоль) в хлороформе (0.5 мл). К этой перемешанной смеси добавляли метил трифторметансульфонат (0.011 мл, 0.103 ммоль). Закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16). Смесь двух целевых продуктов получали таким образом в виде TFA солей (0.0123 г) путем препаративной ВЭЖХ. Вещество сразу переносили на следующую стадию (стадия 2, эксперимент 1). ЖХ/МС: m/z = 694.6 (М+Н)+, 1.92 мин и 708.6 (М+Н)+, 2.07 мин (методика 3).
Эксперимент 2: В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3^4,5^^,6,7,7^8,11,11^11^12,13,13^13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.021 г, 0.021 ммоль) с 2,6-ди-трет-бутил-4-метилпиридином (0.042 г, 0.205 ммоль) в хлороформе (0.5 мл). К этой перемешанной смеси добавляли метил трифторметансульфонат (0.011 мл, 0.103 ммоль). Закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C в течение 30 мин. Дополнительный метил трифторметансульфонат (0.011 мл, 0.103 ммоль) добавляли и смесь нагревали до 70°C в течение 105 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2). Смесь двух целевых продуктов получали таким образом в виде TFA солей (0.010 г) путем препаративной ВЭЖХ. Вещество сразу переносили на следующую стадию (стадия 2, эксперимент 2).
Стадия 2:
Эксперимент 1: В виале (1 dram) соединяли смесь со стадии 1, эксперимент 1, содержащую метил 4-((1 R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метиламино)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопентаИхризен^-и^бензоат, TFA соль, и метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(диметиламино)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3^4,5^^,6,7^,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.0123 г, 0.012 ммоль), с 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.117 мл, 0.117 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16).
Эксперимент 2: В виале (1 dram) соединяли смесь со стадии 1, эксперимент 2, содержащую метил 4-((1 R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)
5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метиламино)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопентаИхризен^-ил^ензоат, TFA соль, и метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(диметиламино)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.010 г, 9.52 мкмоль), с гидроксидом лития гидратом (0.095 мл, 0.095 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3).
Повторная очистка объединенных остатков со стадии 2, эксперимент 1, и стадии 2, эксперимент 2: Фракции, содержащие продукт после очисток с помощью препаративной ВЭЖХ со стадии 2, эксперимент 1, и стадии 2, эксперимент 2, соединяли и повторно очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 17). Концентрированные одинаковые фракции продукта были преобразованы в TFA соли обработкой смесью 88% ацетонитрила, 10% воды, 2% TFA с последующей реконцентрацией под вакуумом. Таким образом получали отдельные целевые продукты в виде TFA солей.
4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS, 11bR, 13 aR, 13bS)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(метиламино)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойная кислота (пример В37): Это вещество получали в виде бесцветного твердого вещества, TFA соль (0.0086 г, 18% объединенный выход за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 680.4 (М+Н)+, 1.73 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.31 (dd, J=5.6, 1.2 Гц, 1Н), 3.77-3.66 (m, 1Н), 3.25-3.01 (m, 8Н), 3.00-2.82 (m, 4Н), 2.71 (s, 3Н), 2.42-2.26 (m, 1Н), 2.23-2.12 (m, 1Н), 2.11-1.92 (m, 4Н), 1.80-1.70 (m, 2Н), 1.70-1.43 (m, 10Н), 1.43-1.34 (m, 1Н), 1.33-1.23 (m, 4Н), 1.20 (s, 3Н), 1.08 (s, 3Н), 1.06 (s, 3Н), 0.97 (s, 3Н), 0.96 (br. s., 3H).
4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13 aR, 13bS)-1 -(диметиламино)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота (пример В38): Это вещество получали в виде бесцветного твердого вещества, TFA соль (0.0097 г, 21% объединенный выход за 2 стадии). ЖХ/МС: m/z = 694.4 (М+Н)+, 1.76 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.93 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.37-5.24 (m, 1Н), 4.22-4.07 (m, 1Н), 3.28-3.03 (m, 8Н), 3.03-2.89 (m, 4Н), 2.85 (s, 6Н), 2.35-2.22 (m, 1Н), 2.21-1.99 (m, 6Н), 1.81-1.34 (m, 14Н), 1.33-1.24 (m, 2Н), 1.20 (s, 3Н), 1.12 (s, 3Н), 1.05 (s, 3Н), 0.97 (br. s., 3H), 0.96 (br. s., 3H).
Пример В39. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-(диметиламино)этил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-(диметиламино)этил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1, и метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-(диметиламино)этил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 2.
В 15 мл сосуде под давлением раствор метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.100 г, 0.141 ммоль) в MeOH (1 мл) обрабатывали диметиламином, 2.0 М в THF (1.061 мл, 2.122 ммоль), уксусной кислотой (0.121 мл, 2.122 ммоль) и цианоборогидридом натрия (0.019 г, 0.283 ммоль). Сосуд герметично закрывали, и смесь нагревали на масляной бане до 110°C в течение 6 дней. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16). Таким образом выделяли целевые продукты: Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-(диметиламино)этил)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1, представлял собой главный продукт и был получен в виде белого твердого вещества, TFA соль (0.0246 г, выход 16.1%). ЖХ/МС: m/z = 736.4 (М+Н)+, 2.05 мин (методика 5).
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR,13aR,13bS)-1 -(1 -(диметиламино)этил)-3a-((2-( 1, 1 -диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-жОбензоат, Изомер 2, представлял собой минорный продукт и был получен в виде белого клейкого твердого вещества, TFA соль (0.0116 г, выход 7.6%).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((R)-1-(диметиламино)этил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 1, TFA соль (0.0246 г, 0.023 ммоль), с 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.228 мл, 0.228 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 80°C с перемешиванием в течение 20 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16). Было необходимо объединить фракции продукта и повторно очистить с помощью обращено-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 15) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-(диметиламино)этил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 1, в виде белого стеклообразного твердого вещества, TFA соль (0.0151 г, выход 62.2%). ЖХ/МС: m/z = 722.4 (М+Н)+, 1.80 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-d^ 5 7.95 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.25 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.34 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.56-3.45 (m, 1Н), 3.30-3.05 (m, 10Н), 3.04-2.78 (m, 7Н), 2.63-2.50 (m, 1Н), 2.29-1.97 (m, 6Н), 1.93-1.75 (m, 4Н), 1.73-1.48 (m, 11Н), 1.40 (d, J=6.8 Гц, 3H), 1.38-1.30 (m, 2Н), 1.29 (s, 3Н), 1.20 (s, 3Н), 1.11 (s, 3Н), 1.01 (s, 3Н), 0.99 (s, 3Н).
Пример В40. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-(диметиламино)этил)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((R)-1-(диметиламино)этил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2, TFA соль (0.0116 г, 10.76 мкмоль), с 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.108 мл, 0.108 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 80°C с перемешиванием в течение 20 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 3). Целевой продукт выделяли в виде клейкой смолы, TFA соль (0.0053 г, выход 46.3%). ЖХ/МС: m/z = 722.4 (М+Н)+, 1.82 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, метанол^) 5 7.95 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.25 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.34 (d, J=4.4 Гц, 1Н), 3.55 (d, J=7.1 Гц, 1Н), 3.29-3.18 (m, 8Н), 3.14 (br. s., 4Н), 2.91 (br. s., 6Н), 2.26-1.98 (m, 6Н), 1.95-1.73 (m, 5Н), 1.72-1.47 (m, 13Н), 1.41 (d, J=6.6 Гц, 4Н), 1.35-1.23 (m, 13Н), 1.14 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.96-0.86 (m, 3H).
Пример В41.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотио-
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3 ^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, Изомер 1 и метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8, Ha-пентаметил-
2,3,3 ^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата,
Изомер 2.
К раствору метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-((2-(1,1-диоксидо-тиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (0.050 г, 0.071 ммоль) в MeOH (0.5 мл) и THF (0.5 мл) добавляли ацетат аммония (0.055 г, 0.707 ммоль) и цианоборогидрид натрия (7.02 мг, 0.106 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч и затем нагревали до 70°C в течение 6 дней. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16) с получением целевых продуктов: Метил 4-((1 R,3 aS,5aR,5bR,7aR 11 aS, 11 bR, 13 aR, 13bS)-1-(1 -аминоэтил)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хри-зен-9-ил)бензоат, Изомер 1: выделяли в виде бесцветного твердого вещества, TFA соль (0.0233 г, выход 31.4%). ЖХ/МС: m/z = 708.4 (М+Н)+, 2.01 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.49-3.39 (m, 1Н), 3.30-2.92 (m, 12Н), 2.44 (dd, J=8.9, 6.2 Гц, 1H), 2.16 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 2.11-1.92 (m, 5Н), 1.90-1.77 (m, 2Н), 1.73 (d, J=17.1 Гц, 1H), 1.69-1.35 (m, 13Н), 1.33-1.24 (m, 5H), 1.21 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиомор-фолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октаде-кагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2: выделяли в виде бесцветного твердого вещества, TFA соль (0.0090 г, выход 12.1%). ЖХ/МС: m/z = 708.4 (М+Н)+, 2.06 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.22 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.30 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 3.58-3.47 (m, 1Н), 3.28-3.12 (m, 8Н), 3.12-2.95 (m, 4Н), 2.75-2.62 (m, 1Н), 2.23-2.05 (m, 3Н), 2.05-1.84 (m, 3Н), 1.83-1.39 (m, 15Н), 1.35-1.23 (m, 7Н), 1.21 (s, 3Н), 1.09 (s, 3Н), 1.05 (s, 3Н), 0.96 (s, 3Н), 0.95 (br. s., 3H).
Стадия 2.
Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотио-морфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты, Изомер 2.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-((R)-1-аминоэтил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, Изомер 2, TFA соль (0.0081 г, 7.71 мкмоль), с 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.077 мл, 0.077 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 80°C с перемешиванием в течение 20 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16). Целевое соединение выделяли в виде белого стеклообразного твердого вещества, TFA соль (0.0076 г, выход 93%). ЖХ/МС: m/z = 694.4 (М+Н)+, 1.83 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, метанол^4) 5 7.95 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.25 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.34 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.58 (q, J=6.3 Гц, 1Н), 3.30-3.17 (m, 8Н), 3.17-3.04 (m, 3Н), 2.98 (d, J=5.1 Гц, 1Н), 2.66 (br. s., 1Н), 2.28-2.10 (m, 3Н), 2.09-1.99 (m, 1Н), 1.77 (br. s., 5Н), 1.75-1.45 (m, 11Н), 1.44-1.29 (m, 7H), 1.27 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H).
Пример В42. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-1 -(гидроксиметил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1. Получение (пропионового) ангидрида (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновой
кислоты.
В виале (1 dram) соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновой кислоты триэтиламмониевую соль (0.020 г, 0.025 ммоль) с этилхлорформатом (0.014 мл, 0.148 ммоль) и триэтиламином (6.87 мкл, 0.049 ммоль) в сухом хлороформе. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Сырую реакционную смесь сразу использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: m/z = 781.4 (М+Н)+, 2.30 мин (методика 5).
Сырую смесь, содержащую (пропионовый) (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-1-карбоновой кислоты ангидрид (0.020 г, 0.025 ммоль) в хлороформе (1 мл), разбавляли THF (0.75 мл) и обрабатывали борогидридом натрия (9.46 мг, 0.250 ммоль). Через 5 мин не наблюдалось выделения газа, и твердый бо-рогидрид натрия оставался плавать в смеси. К смеси добавляли сухой метанол (0.75 мл) и немедленно происходило вспенивание. Через 15 мин добавляли дополнительный борогидрид натрия (9.46 мг, 0.250 ммоль), и смесь перемешивали на протяжении ночи в атмосфере азота. Сырую смесь концентрировали в потоке азота и затем повторно растворяли в минимальном количестве смеси MeOH и THF и очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 12). Целевой продукт получали в виде белого стеклообразного твердого вещества (0.0080 г, выход 93%). ЖХ/МС: m/z = 695.4 (М+Н)+, 2.20 мин (методика 5).
Стадия 3:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(гидроксиметил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.008 г, 0.012 ммоль) с 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.115 мл, 0.115 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 80°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 18) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-1-(гидро-ксиметил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопентаИхризен^-шОбензойной кислоты (0.0055 г, выход 52.6%). ЖХ/МС: m/z = 681.6 (М+Н)+, 1.99 мин (методика 5).
1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 5 7.97 (s, 1Н), 7.88 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.24 (d, J=7.9 Гц, 2Н), 5.28 (d, J=5.2 Гц, 1Н), 4.63 (br. s., 1Н), 3.56-3.48 (m, 1Н), 3.21-3.03 (m, 12Н), 2.13 (dd, J=17.2, 6.6 Гц, 1H), 2.03 (br. s., 2H), 1.84 (d, J=7.0 Гц, 3H), 1.78-1.64 (m, 3H), 1.61-1.39 (m, 10H), 1.34 (d, J=16.2 Гц, 1H), 1.30-1.20 (m, 4H), 1.11 (s, 3H), 1.00 (br. s., 3H), 0.98 (br. s., 3H), 0.92 (br. s., 6H).
Пример В43 и пример В44. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2,2,2-трифторацетамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты и 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2,2,2-трифтор-N-метилацетамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,1^,11^12,13,^,13^ октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1.
Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1-диоксидотио-морфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата и метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(метиламино)-2,3,За,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11аД1Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хрюен-9-ил)бензоата.
В 100 мл круглодонной колбе соединяли 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты TFA соль (0.410 г, 0.407 ммоль) с сухим DCM (15 мл) и метанолом (15 мл). К раствору добавляли TMS-диазометан (1.424 мл, 2.85 ммоль). Небольшое выделение тепла и значительное газовыделение последовадо после добавления приблизительно половины раствора диазометана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали под вакуумом до твердого остатка. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 4). Смесь двух целевых продуктов получали таким образом в виде слегка желтого твердого вещества, TFA соль (0.259 г, выход 70.2%). Смесь сразу переносили на следующую стадию. ЖХ/МС: m/z = 680.5 (М+Н)+ и 694.6 (М+Н)+, 2.04 мин (методика 5).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2,2,2-трифторацетамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата и метил 4-((1R,3aR,5 aR, 5bR, 7aR,11aS,11 bR, 13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2,2,2-трифтор-N-метилацетам
2,3,За,4,5,5а,5Ь,6,7,7а,8,11,11а,11Ь,12,13,13а,13Ь-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бе
Получали стандартный раствор оксалилдихлорида (14.0 мг; 0.110 ммоль) в сухом THF (1 мл). В виале (1 dram) соединяли смесь со стадии 1, содержащую метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль, и метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1-(метиламино)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат, TFA соль (0.020 г, 0.022 ммоль), с DIPEA (0.019 мл, 0.110 ммоль) в сухом THF (0.5 мл). К этой смеси добавляли 0.1 мл стандартного раствора оксалилдихлорид/THF, который содержал оксалилдихлорид (1.396 мг, 0.011 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч.
К смеси добавляли еще эквивалент оксалилдихлорида (1.396 мг, 0.011 ммоль) (0.1 мл стандартного раствора). Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, и затем добавляли еще эквивалент оксалилдихлорида (1.396 мг, 0.011 ммоль) (0.1 мл стандартного раствора) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин.
Смесь концентрировали в потоке азота, и сырой остаток сразу переносили на следующую стадию как есть. ЖХ/МС: m/z = 776.5 (М+Н)+, 2.28 мин и m/z = 790.6 (М+Н)+, 2.47 мин (методика 5).
Стадия 3:
В виале (1 dram) сырую реакционную смесь со стадии 2, содержащую метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bS)-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-1-(2,2,2-трифторацетамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат и метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3а-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(2,2,2-трифтор-N-метилацетамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат
(0.017 г, 0.022 ммоль), обрабатывали 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.176 мл, 0.176 ммоль) и добавляли MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 30 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 6). Таким образом получали два целе-
вых продукта.
4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-1-(2,2,2-трифторацетамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойная кислота являлась первым соединением, элюиро-ванным с помощью препаративной ВЭЖХ. Этот продукт выделяли в виде белого порошка, TFA соль (0.0110 г, выход 50%). ЖХ/МС: m/z = 762.4 (М+Н)+, 2.11 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock)) 5 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 5.31 (s, 1Н), 4.39 (td, J=11.2, 2.8 Гц, 1Н), 3.27-2.82 (m, 12Н), 2.45-2.28 (m, 2Н), 2.211.99 (m, 3Н), 1.98-1.85 (m, 2Н), 1.84-1.70 (m, 3Н), 1.67-1.36 (m, 10Н), 1.33-1.24 (m, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (br. s., 3H).
4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-1-(2,2,2-трифтор-N-метилацетамидо)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойная кислота являлась вторым соединением, элюированным с помощью препаративной ВЭЖХ. Этот продукт выделяли в виде белого порошка, TFA соль (0.0042 г, выход 18%). ЖХ/МС: m/z = 776.5 (М+Н)+, 2.13 мин (методика 5).
Пример В45. Получение 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидот-иоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(4-(3-(трифторметил)-3H-диазирин-3-ил)бенза-мидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(4-(3-(трифторметил)-3H-диазирин-3-ил)бензамидо)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-амино-3a-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил) амино) ^,5^8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.025 г, 0.037 ммоль) и 4-(3-(трифторметил)-3Н-диазирин-3-ил)бензойную кислоту (11.00 мг, 0.048 ммоль) с HATU (0.022 г, 0.059 ммоль) и DIPEA (0.019 мл, 0.110 ммоль) в хлороформе (1 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, заворачивали в алюминиевую фольгу, и содержимое перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Сырую смесь концентрировали в потоке азота до остатка, затем смесь повторно растворяли в минимальном количестве метанола.
Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16). Целевой продукт выделяли в виде белого твердого вещества, TFA соль (0.0290 г, выход 80%). ЖХ/МС: m/z = 892.6 (М+Н)+, 2.41 мин (методика 5).
Стадия 2: В виале (1 dram) метил 4-((1R,3aR,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(4-(3-(трифторметил)-3H-диазирин-3-ил)бензамидо)-2,3,3^4,5,5^5^6,7,7^8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.0295 г, 0.033 ммоль) растворяли в смеси тетрагидрофурана (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл), и смесь затем обрабатывали 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.132 мл, 0.132 ммоль). Виалу заворачивали в алюминиевую фольгу для защиты от света, герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 45 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 19) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества TFA соль (0.0190 г, выход 53.9%). ЖХ/МС: m/z = 878.6 (М+Н)+, 2.25 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 8.63 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.85 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 7.28 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.19 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.27 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 4.50 (br. s., 1Н), 3.30-2.87 (m, 12Н), 2.53-2.33 (m, 2H), 2.20-1.75 (m, 8H), 1.75-1.64 (m, 2H), 1.64-1.35 (m, 9H), 1.26 (br. s., 3H), 1.19 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.95 (br. s., 3H), 0.94 (br. s., 3H).
Пример В46. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1Н-циклопен-та[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1Н-циклопен-та[а]хризен-9-ил)бензоата.
Смесь диоловых диастереомеров метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-(1,2^ игидроксипропан-2-ил)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^ 13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата (12.26 г, 16.59 ммоль) растворяли в смеси THF (450 мл) и воды (150 мл) и полученный в результате раствор охлаждали на ледяной бане. Добавляли периодат натрия (7.10 г, 33.2 ммоль). Прозрачный раствор быстро становился мутным, и белое хлопьевидное твердое вещество выпадало в осадок. Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и затем разбавляли хлороформом (1200 мл) и водой (500 мл), и полученную в результате смесь встряхивали и разделяли фазы. Водную фазу снова экстрагировали хлороформом (2x400 мл). Органические вещества соединяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очисткой остатка с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (300 г силикагеля, градиентное элюирование от 100% DCM до 20:1 DCM:MeOH на протяжении 6 объемов колонки, удерживание при 20:1 DCM:MeOH на протяжении 8 объемов колонки), получали целевой продукт в виде белого твердого вещества (1.70 г, выход 18.8%). ЖХ/МС: m/z = 546.4 (М+Н)+, 2.36 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.21 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 5.29 (dd, J=6.2, 1.6 Гц, 1Н), 3.91 (s, 3Н), 2.90 (td, J=11.3, 5.7 Гц, 1Н), 2.43-2.19 (m, 5Н), 2.18-2.06 (m, 1Н), 2.00-1.91 (m, 2Н), 1.85-1.44 (m, 12Н), 1.44-1.34 (m, 4Н), 1.27 (d, J=10.0 Гц, 1H), 1.14 (s, 3Н), 1.13-1.08 (m, 1Н), 1.07 (s, 3Н), 1.02 (s, 3Н), 0.95 (s, 3Н), 0.94 (s, 3Н).
Стадия 2:
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.035 г, 0.064 ммоль) со смесью тетрагидрофурана (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл), и смесь затем обрабатывали 1 М водным гидроксидом лития гидратом (0.257 мл, 0.257 ммоль). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой, и смесь нагревали до 70°C с перемеши
ванием в течение 45 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 16) с получением 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-амино-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13^октадека-гидро-Ш-циклопента^хризен^-ил^ензойной кислоты в виде белого порошка, TFA соль (0.0253 г, выход 60%). ЖХ/МС: m/z = 532 (М+Н)+, 2.11 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 5.29 (dd, J=6.1, 1.5 Гц, 1Н), 2.88 (td, J=11.2, 6.1 Гц, 1Н), 2.36 (t, J=11.7 Гц, 1Н), 2.312.20 (m, 4Н), 2.13 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1Н), 2.00-1.89 (m, 2Н), 1.87-1.47 (m, 11Н), 1.47-1.33 (m, 3Н), 1.311.23 (m, 1Н), 1.14 (s, 3Н), 1.10 (br. s., 1H), 1.07 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Пример В47. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8, Ha-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
В виале (1 dram) соединяли метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)-1-ацетил-3а-((2-(1,1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11 a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^ 13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоат (0.0262 г, 0.028 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом, 1.0 М водный раствор (0.249 мл, 0.249 ммоль), тетрагидрофураном (0.3 мл) и MeOH (0.3 мл). Виалу герметично закрывали PTFE завинчивающейся крышкой и смесь нагревали до 70°C с перемешиванием в течение 35 мин. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 2) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка, TFA соль (0.0208 г, выход 80%). ЖХ/МС: m/z = 693.6 (М+Н)+, 2.16 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь хлороформа-d и метанола-d^ метанол^4 lock) 5 7.92 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.20 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.33-5.26 (m, 1Н), 3.31-2.98 (m, 12Н), 2.57 (t, J=11.6 Гц, 1H), 2.44-2.33 (m, 1Н), 2.26 (s, 3Н), 2.19-2.01 (m, 3Н), 1.88-1.75 (m, 2Н), 1.75-1.64 (m, 3Н), 1.64-1.50 (m, 5Н), 1.50-1.38 (m, 4Н), 1.321.23 (m, 2Н), 1.19 (s, 3Н), 1.16-1.06 (m, 5Н), 1.03 (s, 3Н), 0.96 (s, 3Н), 0.95 (s, 3Н).
Пример В48. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4карбоксифенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13^окта-декагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-3а-карбоновой кислоты.
Стадия 1. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)бензил 1-((S)-2,2-дибром-1-метилциклопропил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3а-карбокси-лата.
Раствор (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(проп-1-ен-2-ил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (11.0 г, 16.6 ммоль) и №бензил-^№ диэтилэтанаминия бромида (0.903 г, 3.32 ммоль) в бромоформе (29.0 мл, 332 ммоль) быстро перемешивали и медленно обрабатывали водным (50 мл) раствором гидроксида натрия (13.3 г, 332 ммоль).
Полученную в результате двухфазную смесь нагревали до 63°C с быстрым перемешиванием. Добавляли дополнительный бромоформ (29.0 мл, 332 ммоль) и водный (50 мл) NaOH (13.3 г, 332 ммоль), и смесь быстро перемешивали при 63°C в течение 60 ч. Смесь медленно разбавляли водой (700 мл) и промывали DCM (3x200 мл). Органические экстракты соединяли и концентрировали под вакуумом до светло-коричневого масла. Очисткой с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (градиент от 100% гексанов до 30:1 гексаны:EtOAc) получали 6.85 г (выход 49.5%) белого твердого вещества.
1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 7.95-7.89 (m, J=8.2 Гц, 2Н), 7.40-7.28 (m, 5Н), 7.22-7.16 (m, J=8.2 Гц, 2Н), 5.29 (dd, J=6.1, 1.5 Гц, 1Н), 5.17 (d, J=12.2 Гц, 1Н), 5.03 (d, J=12.2 Гц, 1Н), 3.90 (s, 3Н), 2.352.23 (m, 3Н), 2.20-2.06 (m, 2Н), 1.98 (dd, J=12.5, 7.6 Гц, 1Н), 1.71-1.55 (m, 5Н), 1.55 (s, 3Н), 1.51-1.27 (m, 12Н), 1.26 (s, 5Н), 1.20 (dd, J=10.8, 2.9 Гц, 1H), 1.18-1.07 (m, 2Н), 0.98 (s, 3Н), 0.95 (s, 3Н), 0.91 (d, J=2.4 Гц, 6Н), 0.88 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 0.81 (s, 3Н).
Стадия 2. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-бензил 9-(4-(метокси-карбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3а-карбокси-лата.
Раствор (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bS)бензил 1-(^)-2,2-дибром-1-метилциклопропил)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (6.82 г, 8.17 ммоль) в толуоле (100 мл) обрабатывали три-н-бутилолово гидридом (14.3 г, 13.1 мл, 49.0 ммоль) с последующим добавлением AIBN (0.067 г, 0.409 ммоль). Смесь нагревали при 100°C с перемешиванием в течение 18 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (градиент от 100% гексанов до 25:1 гексаны:EtOAc). Фракции продукта соединяли и концентрировали под вакуумом, затем остаток повторно растворяли в DCM и пропускали через колонку, содержащую 90% силикагеля и 10% KF по массе с использованием DCM в качестве элюента. Концентрированием под вакуумом получали 5.48 г (99%) белого пенистого твердого вещества.
1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.00-7.91 (m, J=8.2 Гц, 2Н), 7.42-7.31 (m, 5Н), 7.26-7.18 (m, J=8.2 Гц, 2Н), 5.36-5.29 (m, 1Н), 5.15 (d, J=12.2 Гц, 1Н), 5.08 (d, J=12.5 Гц, 1Н), 3.94 (s, 3Н), 2.32-2.24 (m, 1Н), 2.24-2.11 (m, 2Н), 2.07-1.97 (m, 1Н), 1.94-1.87 (m, 1Н), 1.87-1.78 (m, 1Н), 1.77-1.67 (m, 2Н), 1.67-1.59 (m, 1Н), 1.56-1.36 (m, 10Н), 1.36-1.26 (m, 2Н), 1.26-1.20 (m, 2Н), 1.19-1.13 (m, 1Н), 1.02 (s, 3Н), 1.00 (s, 3Н), 0.95 (br. s., 3H), 0.95 (br. s., 3H), 0.94 (br. s., 3H), 0.85 (s, 3H), 0.46-0.40 (m, 1H), 0.38 (dt, J=9.2, 4.7 Гц, 1H), 0.31-0.20 (m, 2H).
Стадия 3. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(1-метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбокси-лата.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)бензил 9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (5.34 г, 7.89 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (100 мл) добавляли триэтиламин (1.76 мл, 12.6 ммоль), трет-бутилдиметилсилан (2.62 мл, 1.84 г, 15.8 ммоль) и ацетат палладия (II) (0.443 г, 1.97 ммоль). Смесь нагревали до 60°C в течение 22 ч. Сырую реакционную смесь пропускали через пробку из силикагеля/целита с 10:1 гексанами:EtOAc в качестве элюента. Концентрированием под вакуумом получали 6.34 г (выход > 100%) белое твердое вещество, которое переносили на следующую стадию без дополнительной очистки.
Стадия 4. Получение (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-За-карбоновой кислоты.
К раствору (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-трет-бутилдиметилсилил 9-(4-(метокси-карбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а, 13b-ктадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-3a-карбоксилата (5.53 г, 7.89 ммоль) в 1,4-диоксане (100 мл) добавляли TBAF, 1.0 М в THF (11.8 мл, 11.8 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2.5 ч, затем добавляли 400 мл 1 М водной HCl, и полученную в результате суспензию белого твердого вещества перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Твердый осадок выделяли фильтрованием и высушивали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (4.43 г, выход 96%). ЖХ/МС: m/e 587.4 (М+Н)+, 4.58 мин (методика 5).
1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 9.61 (br. s., 1Н), 8.01-7.90 (m, 2Н), 7.26-7.18 (m, 2Н), 5.33 (dd, J=6.3, 1.7 Гц, 1H), 3.94 (s, 3Н), 2.34-2.23 (m, 1Н), 2.23-2.13 (m, 2Н), 2.08-1.99 (m, 1Н), 1.99-1.90 (m, 2Н), 1.80-1.62 (m, 3Н), 1.60-1.36 (m, 12Н), 1.34-1.19 (m, 4Н), 1.05 (s, 3H), 1.04-0.99 (m, 6Н), 0.98-0.93 (m, 9Н), 0.47-0.41 (m, 1H), 0.41-0.36 (m, 1H), 0.33-0.22 (m, 2Н).
Стадия 5:
В 20 мл сцинтилляционной виале соединяли (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-3a-карбоновую кислоту (0.080 г, 0.136 ммоль) с гидроксидом лития моногидратом (0.023 г, 0.545 ммоль) в THF (1 мл), метанолом (1 мл) и водой (0.5 мл). Суспендированную смесь нагревали до 60°C в течение 1 ч. Сырую смесь очищали с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (Методика препаративной ВЭЖХ 26). Целевой продукт получали в виде белого порошка (0.042 г, выход 51.6%). ЖХ/МС: m/e 571.7 (М-Н)-, 2.35 мин (методика 3).
1Н ЯМР (500 МГц, 1:1 смесь CDCb и MeOD, MeOD lock) 5 7.88 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 7.16 (d, J=8.2 Гц, 2Н), 5.29-5.21 (m, 1H), 2.21-2.13 (m, 2H), 2.10 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 1.99-1.91 (m, 1H), 1.88-1.78 (m, 2H), 1.67 (d, J=17.1 Гц, 1H), 1.65-1.53 (m, 2H), 1.51-1.38 (m, 8H), 1.38-1.26 (m, 4H), 1.25-1.12 (m, 4H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (br. s., 3H), 0.88 (s, 4H), 0.88 (br. s., 3H), 0.38-0.27 (m, 2H), 0.23-0.12 (m, 2H).
Пример В49. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-изоцианато-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоата.
К кашице (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-(4-(метоксикарбонил)фенил)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H
циклопента[a]хризен-3a-карбоновой кислоты (3.50 г, 5.96 ммоль) в 1,4-диоксане (60 мл) добавляли три-этиламин (1.50 мл, 10.7 ммоль) и дифенилфосфорил азид (1.93 мл, 2.46 г, 8.95 ммоль). Полученную в результате кашицу нагревали до 100°C в течение 5 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали 1 н. NaOH (2x70 мл) и затем рассолом (25 мл). Твердые вещества выпадали в осадок из органической фазы, и их отделяли фильтрованием. Концентрированием фильтрата получали еще порцию осадка. Две исходных порции осадка представляли собой один и тот же материал, и его высушивали до белого порошка (2.25 г, выход 64.6%).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.01-7.92 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.26-7.18 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.34 (dd, J=6.1, 1.7 Гц, 1Н), 3.93 (s, 3Н), 2.18 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1Н), 2.13-1.99 (m, 2Н), 1.92-1.64 (m, 6Н), 1.631.36 (m, 11Н), 1.32-1.18 (m, 4Н), 1.13 (s, 3Н), 1.04 (s, 3Н), 1.01 (s, 3Н), 0.97 (s, 3Н), 0.96 (s, 3Н), 0.95 (s, 3Н), 0.46-0.38 (m, 2Н), 0.38-0.25 (m, 2Н).
Стадия 2. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[а]хризен-9-ил)бензоат гидрохлорида.
Раствор метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-изоцианато-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1H-циклопентаЩхризен^-ил^ензоата (2.24 г, 3.84 ммоль) в THF (40 мл) обрабатывали концентрированной HCl (7.93 мл, 96 ммоль). Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Смесь фильтровали для удаления твердых веществ, и фильтрат затем концентрировали под вакуумом до белого порошка (2.30 г, выход 100%). ЖХ/МС: m/e 559 (М+Н)+, 2.12 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.07 (br. s., 2Н), 7.98-7.91 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 7.26-7.17 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 5.34 (d, J=5.1 Гц, 1H), 3.93 (s, 3Н), 2.43 (dd, J=12.7, 9.0 Гц, 1H), 2.31-2.10 (m, 4Н), 2.06-1.83 (m, 4Н), 1.78-1.67 (m, 4Н), 1.65-1.44 (m, 11Н), 1.30 (br. s., 6Н), 1.06 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (br. s., 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.96 (br. s., 3H), 0.54 (br. s., 1H), 0.42 (d, J=5.1 Гц, 2H), 0.35-0.23 (m, 1H).
Стадия 3:
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопен-таИхризен^-ш^бензоата гидрохлорида (0.050 г, 0.090 ммоль) и гидроксида лития моногидрата, 1.0 М водный (0.359 мл, 0.359 ммоль) в THF (0.8 мл) и MeOH (0.8 мл) в герметично закрытой виале нагревали до 75°C с получением гомогенного раствора. Смесь удаляли от источника тепла через 1 ч. Очисткой сырой смеси с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 24 получали 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопентаИхризен^-ил^ензойную кислоту в виде светло-желтого порошка (48.5 мг, выход 79%). ЖХ/МС: m/e 544.7 (М+Н)+, 1.94 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCl3 и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 6.68 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.96 (d, J=8.0 Гц, 2Н), 4.14-4.00 (m, 1H), 2.09 (dt, J=3.2, 1.5 Гц, 1H), 1.00-0.86 (m, 2H), 0.86-0.64 (m, 2H), 0.60-0.44 (m, 5H), 0.43-0.22 (m, 10H), 0.18-0.02 (m, 4H), -0.04 - -0.14 (m, 4H), -0.17 (s, 3H), -0.20 (s, 3H), -0.27 (s, 4H), -
0.28 (s, 3H), -0.29 (br. s., 3H), -0.73 - -0.87 (m, 2H), -0.87 - -0.97 (m, 2H).
Пример В50. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-3a-(метиламино)-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-po- 1Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1H-циклопен-та[a]хризен-9-ил)бензоата гидрохлорида (50 мг, 0.084 ммоль) и карбоната калия (23.3 мг, 0.168 ммоль) в DMF (1 мл) в герметично закрытой виале обрабатывали метил иодидом (0.016 мл, 0.036 г, 0.25 ммоль) и нагревали до 75°C в течение 3 ч. Смесь разбавляли THF и рассолом. Смесь встряхивали и разделяли фазы. Органическую фазу концентрировали под вакуумом до остатка. Продукт выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием методики препаративной ВЭЖХ 25 в виде стеклообразного белого твердого вещества (57.2 мг, выход 99%), моно TFA соль. ЖХ/МС: m/e 572.6 (М+Н)+, 2.18 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.02-7.88 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 7.26-7.17 (m, J=8.1 Гц, 2Н), 5.33 (d, J=4.6 Гц, 1Н), 3.93 (s, 3Н), 2.65 (br. s., 3Н), 2.27-2.09 (m, 3Н), 2.09-1.99 (m, 1Н), 1.95 (dd, J=13.8, 8.4 Гц, 1H), 1.89-1.74 (m, 3Н), 1.72-1.69 (m, 1Н), 1.66 (d, J=2.9 Гц, 1H), 1.61-1.39 (m, 10Н), 1.38-1.24 (m, 4Н), 1.14 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.99-0.91 (m, 9Н), 0.49-0.40 (m, 2Н), 0.40-0.35 (m, 1H), 0.35-0.27 (m, 1H).
Стадия 2:
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-3a-(метил-амино)-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, TFA соль (57 мг, 0.083 ммоль), 1.0 М водного LiOH (0.417 мл, 0.417 ммоль), THF (0.8 мл) и метанола (0.8 мл) в герметично закрытой виале нагревали до 75°C в течение 1 ч, затем при 60°C в течение 18 ч. Сырое соединение, 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-3a-(метиламино)-1-(1-метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойную кислоту, выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 24 в виде белого твердого вещества (44.1 мг, выход 69%), моно TFA соль. ЖХ/МС: m/e 558.7 (М+Н)+, 1.98 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCl3 и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 6.69 (d, J=8.0 Гц, 2Н), 5.97 (d, J=8.0 Гц, 2Н), 4.07 (d, J=4.8 Гц, 1H), 2.09 (dt, J=3.2, 1.5 Гц, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.01-0.86 (m, 2H), 0.86-0.72 (m, 2H), 0.72-0.56 (m, 3H), 0.52 (d, J=16.3 Гц, 2H), 0.39-0.10 (m, 11H), 0.05 (dd, J=10.9, 6.7 Гц, 1H), -0.01 - -0.07 (m, 1H), -0.08 (s, 3H), -0.15 (s, 3H), -0.19 (s, 3H), -0.26 (s, 3H), -0.28 (br. s., 3H), -0.29 (br. s., 3H), -0.72 - -0.81 (m, 1H), -0.83 (dd, J=6.7, 3.9 Гц, 1H), -0.86 - -0.96 (m, 2H).
Пример В51. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(2-(1,1-диоксидотио-морфолино)ацетамидо)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(2-(1,1-диоксидотиоморфолино)ацетамидо)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,1 Ы-пентаметил-!-(1 -метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1 Н-циклопен-таИхризен^-ш^бензоата гидрохлорида (50 мг, 0.084 ммоль) и 2-(1,1-диоксидотиоморфолино)уксусной кислоты (0.023 г, 0.117 ммоль) в DCM (1 мл) обрабатывали HATU (0.044 г, 0.117 ммоль) и DIPEA (0.063 мл, 0.359 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь концентрировали в потоке азота до остатка, затем повторно растворяли в смеси метанола и THF. Продукт выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием методики препаративной ВЭЖХ 25 в виде стеклообразного не совсем белого твердого вещества (44.9 мг, выход 59%), моно TFA соль. ЖХ/МС: m/e 733.6 (М+Н)+, 2.66 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.01-7.90 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.26-7.18 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.34 (dd, J=6.1, 1.7 Гц, 1Н), 3.94 (s, 3Н), 3.35-3.20 (m, 6Н), 3.12 (d, J=5.1 Гц, 4Н), 2.71-2.56 (m, 1Н), 2.46 (dd, J=12.5, 8.3 Гц, 1Н), 2.19 (dd, J=17.0, 6.5 Гц, 1Н), 2.13-2.01 (m, 1Н), 1.87-1.69 (m, 3Н), 1.64-1.62 (m, 1Н), 1.61-1.34 (m, 12Н), 1.32-1.26 (m, 2Н), 1.23-1.13 (m, 1Н), 1.06 (s, 3Н), 1.04 (s, 3Н), 1.03 (br. s., 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 6Н), 0.54-0.44 (m, 1H), 0.41-0.32 (m, 2Н), 0.32-0.23 (m, 1H).
Стадия 2:
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(2-(1,1-диоксидотиоморфо-лино)ацетамидо)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата, соли трифторуксусной кислоты (0.0449 г, 0.053 ммоль) и 1 М водного гидроксида лития (0.265 мл, 0.265 ммоль) с THF (0.5 мл) и MeOH (0.5 мл) в герметично закрытой виале нагревали до 75°C в течение 1 ч. Сырое соединение, 4-(( 1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13aR, 13bR)-3a-(2-( 1, 1 -диоксидотиоморфоли-но^етами^)^^^^, 11 a-пентаметил--метилциклопропил)-
2,3 ^,4,5^,5^6,7^,8,11,1^,11^12,13,^,13b-октадекагидро-1 H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойную кислоту, выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 24 в виде белого твердого вещества (37.6 мг, выход 83%), моно TFA соль. ЖХ/МС: m/e 719.7 (М+Н)+, 2.32 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCl3 и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 6.65 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 5.94 (d, J=8.3 Гц, 2H), 4.04 (d, J=4.6 Гц, 1H), 1.94 (br. s., 6H), 1.86 (d, J=5.6 Гц, 4Н), 1.31 (d, J=13.0 Гц, 1H), 1.13 (dd, J=12.7, 8.1 Гц, 1H), 0.90 (dd, J=17.1, 6.4 Гц, 1H), 0.84 (d, J=10.8 Гц, 1H), 0.58-0.45 (m, 2H), 0.44-0.20 (m, 9H), 0.20- -0.08 (m, 7H), -0.13 (d, J=12.7 Гц, 1H), -0.21 (s, 3H), -0.22 (s, 3H), -0.24 (s, 4H), -0.31 (s, 3H), -0.32- -0.36 (m, 6H), -0.76 - -0.85 (m, 1H), -0.85 - -0.93 (m, 1H), -0.93 - -1.04 (m, 2H).
Пример В52. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотио-морфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-
Стадия 1. Получение метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диокси-дотиоморфолино)этил)амино)-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-
2,3 ^,4,5^,5^6,7^,8,11,1^,11^12,13,^,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата.
2,3 ^,4,5^,5^6,7^,8,11,1^,11^12,13,^,13b-октадекагидро-1 Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Сосуд под давлением, содержащий метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-Ш-цикшопентаИхризен^-ил^ензоат гидрохлорид (100 мг, 0.168 ммоль), 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксид гидрохлорид (0.122 мг, 0.522 ммоль) (получен как описано в WO 1002045652), фосфат калия, трехосновный (0.157 г, 0.740 ммоль) и иодид калия (0.075 г, 0.454 ммоль) в ацетонитриле (3 мл), герметично закрывали и нагревали до 120°C в течение 64 ч. Сырую смесь разбавляли THF и фильтровали для удаления твердых веществ. Фильтрат концентрировали, и продукт выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 25 в виде белого твердого вещества (0.0982 мг, выход 61.6%), бис TFA соль. ЖХ/МС: m/e 719.7 (М+Н)+, 2.10 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 ppm 8.02-7.88 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 7.26-7.17 (m, J=8.3 Гц, 2Н), 5.415.26 (m, 1Н), 3.94 (s, 3Н), 3.33-3.10 (m, 8Н), 3.10-2.99 (m, 2Н), 2.98-2.83 (m, 2Н), 2.25-2.04 (m, 3Н), 2.021.80 (m, 5Н), 1.79-1.69 (m, 2Н), 1.66-1.36 (m, 11Н), 1.27 (d, J=9.0 Гц, 2Н), 1.21 (s, 3Н), 1.11 (s, 3Н), 1.05 (s, 3Н), 0.97 (br. s., 3H), 0.96 (s, 6Н), 0.49-0.40 (m, 2Н), 0.40-0.27 (m, 2Н).
Стадия 2:
Смесь метил 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфоли-но)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензоата,
соли трифторуксусной кислоты (0.098 г, 0.118 ммоль) и 1 М водного гидроксида лития (0.588 мл, 0.588
ммоль) с THF (1 мл) и MeOH (1 мл) в герметично закрытой виале нагревали до 75°C в течение 1 ч. Сырое соеди-
нение, 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этил)амино)-
5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагид-
ро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойную кислоту, выделяли после очистки с помощью обращенно-
фазовой ВЭЖХ с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 24 в виде белого твердого вещества
(89.9 мг, выход 79%), бис TFA соль. ЖХ/МС: m/e 705.8 (М+Н)+, 1.93 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCb и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.91 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.19 (d, J=8.1 Гц, 2H), 5.29 (d, J=4.4 Гц, 1H), 3.28-3.09 (m, 7H), 3.09-2.89 (m, 5H), 2.16 (dd, J=17.0, 6.2 Гц, 1H), 2.07 (d, J=14.7 Гц, 3H), 1.98-1.89 (m, 1H), 1.89-1.78 (m, 3H), 1.78-1.64 (m, 2H), 1.63-1.36 (m, 12H), 1.35-1.25 (m, 2H), 1.17 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.95 (br. s., 3H), 0.94 (br. s., 3H), 0.93 (br. s., 3H), 0.47-0.37 (m,
2H), 0.37-0.24 (m, 2H).
Пример В53. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1 -метилциклопропил)-3 a-(2-(4-(метилсульфонил)пиперидин-1 -ил)этиламино)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной
кислоты.
Сырое соединение получали с помощью такого же двухстадийного способа, применяемого при получении 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11bR, 13aR, 13bR)-3a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, кроме того, что 1-(2-хлорэтил)-4-(метилсульфонил)пиперидин (0.152 г, 0.673 ммоль) применяли вместо 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксида гидрохлорида на стадии 1. Сырое соединение выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ реакционной смеси со стадии 2 с использованием методики препаративной ВЭЖХ 24 в виде белого твердого вещества (70.5 мг, выход 71.5%), бис TFA соль. ЖХ/МС: m/e 733.6 (М+Н)+, 2.28 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCb и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.97-7.87 (m, J=8.3 Гц, 2H), 7.257.15 (m, J=8.6 Гц, 2Н), 5.31 (dd, J=6.0, 1.6 Гц, 1H), 3.26 (t, J=11.7 Гц, 2Н), 3.21-3.16 (m, 2H), 3.16-3.02 (m, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.92-2.83 (m, 1H), 2.56 (t, J=11.2 Гц, 1H), 2.42 (t, J=12.0 Гц, 1H), 2.27-2.13 (m, 3H), 2.13
1.94 (m, 5H), 1.94-1.83 (m, 3H), 1.82-1.66 (m, 3H), 1.63-1.38 (m, 11H), 1.35 (d, J=12.2 Гц, 1H), 1.31-1.23 (m, 1H), 1.20 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.50-0.39 (m, 2H), 0.39-0.26 (m, 2Н).
Пример В54. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1 -(1 -метилциклопропил)икосагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Смесь 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1H-циклопен-таМхризен^-шОбензойной кислоты (0.036 г, 0.055 ммоль) и этилацетата (2 мл) продували газообразным азотом, затем добавляли 10% палладий на угле (0.023 г, 0.022 ммоль). К колбе присоединяли баллон с газообразным водородом, и смесь быстро перемешивали в атмосфере водорода в течение 18 ч. Смесь фильтровали для удаления катализатора и концентрировали под вакуумом. Сырое соединение выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ реакционной смеси с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 24 в виде белого твердого вещества (13.1 мг, выход 36.4%), моно TFA соль. ЖХ/МС: m/e 546.7 (М+Н)+, 1.95 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCl3 и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.89 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2H), 2.42 (dd, J=13.1, 2.8 Гц, 1H), 2.19-2.08 (m, 2H), 2.04-1.97 (m, 1H), 1.92-1.71 (m, 5H), 1.66-1.40 (m, 11H), 1.39-1.28 (m, 3H), 1.24 (br. s., 1H), 1.10 (s, 5H), 1.06 (s, 4H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 4H), 0.76 (s, 3H), 0.70 (s, 3H), 0.49-0.41 (m, 1H), 0.41-0.34 (m, 1H), 0.34-0.26 (m, 2H).
Пример В55. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-3а-(метиламино)-1 -(1 -метилциклопропил)икосагидро-1 Н-циклопента[а]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Сырое соединение получали, следуя способу, аналогичному описанному для синтеза 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aS,9S,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопро-пил^косагидро-Ш-циклопентаИхризен^-ил^ензойной кислоты, кроме того, что 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-3a-(метиламино)-1-(1-метилцикло-пропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензой-ную кислоту (0.034 г, 0.051 ммоль) использовали вместо 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-амино-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1-метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-окта-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты. Очисткой сырой смеси с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с использованием Методики препаративной ВЭЖХ 23 получали сырое соединение в виде белого твердого вещества (25.5 мг, выход 63.6%), моно TFA соль. ЖХ/МС: m/e 560.8 (М+Н)+, 2.14 мин (методика 6).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCb и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.89 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 7.23 (d, J=8.3 Гц, 2Н), 2.56 (s, 3H), 2.42 (dd, J=13.2, 2.9 Гц, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H), 2.05-1.77 (m, 6H), 1.73-1.54 (m, 4H), 1.54-1.28 (m, 10H), 1.21-1.13 (m, 1H), 1.11 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (br. s., 1H), 0.99 (s, 3H), 0.96 (s, 4H), 0.76 (s, 3H), 0.70 (s, 3H), 0.50-0.42 (m, 1H), 0.42-0.35 (m, 1H), 0.35-0.25 (m, 2H).
Пример В56. Получение 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-пентаметил-1-(1 -метилциклопропил)-3 a-(2-(4-(метилсульфонил)пиперазин-1 -ил)этиламино)-
2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11a,11b,12,13,13а,13b-октадекагидро-1Н-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты.
Сырое соединение получали с помощью такого же двухстадийного способа, применяемого при получении 4-(( 1 R,3aS,5aR,5bR,7aR, 11aS,11 bR, 13 aR, 13bR)-3 a-((2-( 1, 1 -диоксидотиоморфолино)этил)амино)-5^5b,8,8,11 a-пентаметил--метилциклопропил)-2,3,3a,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,11,11^11^12,13,13^13Ь-ОКШ-декагидро-1H-циклопента[a]хризен-9-ил)бензойной кислоты, за исключением того, что 1-(2-хлорэтил)-4-(метилсульфонил)пиперазин (0.118 г, 0.522 ммоль) использовали вместо 4-(2-хлорэтил)тиоморфолин 1,1-диоксида гидрохлорида на Стадии 1. Сырое соединение выделяли после очистки с помощью обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ реакционной смеси со стадии 2 с использованием методики препаративной ВЭЖХ 4 в виде белого твердого вещества (58.7 мг, выход 59.2%), бис TFA соль. ЖХ/МС: m/e 734.4 (М+Н)+, 2.30 мин (методика 5).
1Н ЯМР (400 МГц, 1:1 смесь CDCb и MeOD, MeOD lock) 5 ppm 7.93 (d, J=8.3 Гц, 2H), 7.21 (d, J=8.3 Гц, 2H), 5.32 (d, J=4.6 Гц, 1H), 3.31-3.21 (m, 2H), 3.21-3.10 (m, 2H), 3.10-2.99 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.832.66 (m, 6H), 2.18 (dd, J=17.0, 6.2 Гц, 1H), 2.14-2.02 (m, 2H), 2.02-1.82 (m, 3H), 1.82-1.68 (m, 2H), 1.68-1.39 (m, 12H), 1.37 (d, J=11.7 Гц, 1H), 1.33-1.23 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 6H), 0.51-0.42 (m, 2H), 0.42-0.27 (m, 2H).
Биологические данные для примеров
• "мкМ" означает микромоль;
• "мл" означает миллилитр;
• "мкл" означает микролитр;
• "мг" означает миллиграмм;
• "мкг" означает микрограмм.
Материалы и экспериментальные способы, используемые для получения результатов, представленных в табл. 1, описаны ниже.
Анализ культуры клеток ВИЧ - МТ-2 клетки и 293Т клетки были получены по программе исследования NTH СПИД и референтных реагентов. МТ-2 клетки были размножены в среде RPMI 1640, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной бычьей сывороткой, 100 мкг/мл пенициллина G и до 100 единиц/мл стрептомицина. 293Т клетки были размножены в среде DMEM, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной бычьей сывороткой (FBS), 100 единиц/мл пенициллина G и 100 мкг/мл стрептомицина. Клон провирусной ДНК NL4-3 был получен по Программе исследования NIH СПИД и референтных реагентов. Рекомбинантный вирус NL4-3, в котором часть nef гена из NL4-3 была заменена на ген люциферазы Renilla, применялся в качестве эталонного вируса. Дополнительно, остаток Gag P373 был преобразован в P373S. В нескольких словах, рекомбинантный вирус получали путем трансфекции измененного провирусного клона NL4-3. Трансфекции проводили в клетках 293Т с использованием LipofectAMINE PLUS от Invitrogen (Carlsbad, CA), в соответствии с инструкцией изготовителя. Вирус титровали в МТ-2 клетках с использованием ферментативной активности люциферазы в качестве маркера. Количественный анализ люциферазы проводили с использованием двойного набора люциферазы от Promega (Madison, WI), с изменениями в протоколе производителя. Разбавленный раствор Passive Lysis предварительно смешивали с повторно суспендированным химическим реагентом люциферазы и повторно суспендированным субстратом Stop & Glo (соотношение 2:1:1). Пятьдесят (50) мкл смеси добавляли в каждую аспирированную лунку на аналитических планшетах и сразу же измеряли активность люциферазы на Wallac TriLux (Perkin-Elmer). Противовирусные активности ингибиторов по отношению к рекомбинантному вирусу количественно определяли путем измерения активности люци-феразы в клетках, инфицированных в течение 4-5 дней NLRluc рекомбинантами в присутствии серийных разведений ингибитора. Значения EC50 для соединений показаны в таблице.
=^4 он
0.14
0.10
\|-
1.42E-03
\|-
Xt "
0.16
--N
V"0H
^нД~^ 0
4.00
5.40E-04
1.49E-03
\l-
X(tm)
o^A^J *H OH
0.09
-С4
ftp,
o^A^ OH
2.00
0.02
0.14
он он
1.97Е-03
7.20Е-04
1.83Е-03
хфл?^Х>
2.48Е-03
0.08
^4^4^^ HNk
1.87Е-03
ч СН2ОН
f JL f 1 ^ JTN/V4V/
НООС Диастереомер 2
6.89E-03
СООН
\ ^^so2
| Г|Тн у ПН
НООС^^^ Диастереомер 1
0.39
СООН
\ /~~~ЪОг
НООС^^^ Диастереомер 2
0.11
Вое
НООС^^^
6.56E-03
Вое
НООС^^^
1.15E-03
1.19E-03
1.05E-03
H3v/ 0
1.30E-03
-ЗУ о
2.06E-03
0^/"\^ Изомер 1
1.15Е-03
0^/*^?^ Изомер 2 OH
3.75Е-03
^JfTfiJ=
9.45Е-04
6н СГЪ
2.51 Е-03
JTI^M^ H
HO JCTA^
^"rf^- Изомер 1
2.15Е-03
В10
HO^JL-^
j| Изомер 2
6.67Е-03
В11
HO Изомер 1
2.18Е-03
В12
\ЛО^Л^> Изомер 2
3.95Е-03
В13
0.01
В14
H°Y^^ Изомер 1
3.75E-03
В15
^JTHJ Ј
В16
8.27E-04
В17
но-Л 0
2.07
В18
0,,?
Л/ 0
1.57E-03
В19
NH2
^[^"^ Изомер 1
0.03
В20
2.05E-03
В21
8.18E-03
В22
1.02E-03
В23
1.16E-03
В24
1.00
В25
но 9
0.11
В26
2.85E-03
В27
8.11E-03
В28
0.11
В29
0.03
ВЗО
2.96E-03
В31
0.03
В32
2.84E-03
ВЗЗ
H2N, О
0.13
В34
0.02
В35
NNH
4.24E-03
В36
6.29E-03
В37
0.04
В38
HO.JQJ
0.01
В39
но^-Ч/ Изомер 1
4.33E-03
В40
HOv^/V/ Изомер 2
0.04
В41
NH2
. riX^N'^^'N
T Изомер 2
0.04
В42
НО-ч 0 "
0.04
В43
H\ 0
2.12E-03
В44
5.92E-03
В45
0.05
В46
! X ! X ^ J^NH2
0.29
В47
Хгл
^XJ^X^ H
0.01
В48
0.01
В49
. fjX^NH2
o^U^
9.85E-04
В50
1.36E-03
В51
1.10E-03
В52
9.24E-04
В53
1.03E-03
В54
5.77E-04
В55
1.51E-03
В56
2.51 E-03
Вышеизложенное описание является всего лишь иллюстративным и в любом случае не должно по
ниматься как ограничение объема или основных принципов изобретения. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые показаны и описаны здесь, станут очевидными для специалистов в данной области из следующих примеров и приведенного выше описания. Такие модификации также находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, включая его фармацевтически приемлемые соли, выбранное из группы: соединение формулы I
и соединение формулы II
где X представляет собой фенил, замещенный 1-2 радикалами, выбранными из карбокси, фтор или циклогекс-1-енил, замещенный карбокси;
Y представляет собой фенил, замещенный 1 -2 радикалами, выбранными из карбокси, фтор или цик-логекс-1-енил, замещенный карбокси;
R1 выбран из 2-гидроксипроп-2-ил, 2-метоксипроп-2-ил, 1-гидроксиметилэтенил, 1-метилоксиранил, 1-метоксикарбонилэтил, амино, ацетиламино, 1,2-дигидроксипроп-2-ил, 1-гидрокси-2-метоксипроп-2-ил, 1-гидроксипроп-2-ил, 1-метоксипроп-2-ил, 1-фторпроп-2-ил, 1-гидроксиэтил, 2-метилэтенил, 1-гидроксииминоэтил, 1-(морфолин-4-ил)этил, 1-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)этил, 1-аминоэтил, 1-ацетиламиноэтил, 1-трифторацетиламиноэтил, 1-(морфолин-4-ил)этил, гидроксиацетил, метоксикарбониламино, морфолин-4-илкарбонил, метилкарбамоил, метилуреидо, пирролидин-1-илкарбониламино, 1,3,4-оксадиазол-2-ил, 1-(2-оксопироилидин-1-ил)этил, диметиламино, метиламино, гидроксиметил, трифторацетил(метил)амино, 4-(3-трифторметилиазетин-3-ил)бензоиламино, ацетил, 1-метилциклопропил или 1-(КЯ28Я29)этенил;
W - простая связь или -CO;
R4 представляет собой Н;
R5 выбран из группы, состоящей из -H, 2-диметиламиноэтил, 2-карбоксиэтил, 2-((2-гидроксиэтил)амино)этил, 3-(2-оксопиролидин-1-ил)пропил, 3-(имидазол-1-ил)пропил, 2-(карбокси-метиламино)этил, 2-(1,1-диоксотиоморфолин-4-ил)этил, 2-(2,5-оксаазабицикло[2.2.1]гепт-5-ил)этил, метил, 2-(2-(2-метоксиэтилсульфонил)этил(метил)амино)этил, 1,1-диоксотиоморфолин-4-илацетил, 2-(4-мезилпиперидин-1-ил)этил, 2-(4-мезилпиперазин-1-ил)этил;
R28 представляет собой -H, Me;
R29 выбран из 2-(морфолин-4-ил)этил 2-гидроксиэтил, метил, 2-диметиламиноэтил, 2-карбоксиэтил, 3-карбоксипропаноил, 3-метоксикарбонилпропаноил.
2. Соединение, включая его фармацевтически приемлемые соли, выбранное из группы:
3. Фармацевтическая композиция, содержащая противовирусное эффективное количество одного или более соединений по п.1, совместно с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями.
4. Фармацевтическая композиция по п.3, пригодная для лечения ВИЧ-инфекции, дополнительно содержащая противовирусное эффективное количество вещества для лечения СПИД, выбранного из группы, состоящей из (а) противовирусного вещества для лечения СПИД, (b) противоинфекционного вещества, (с) иммуномодулятора и (d) другого ингибитора входа ВИЧ.
5. Способ лечения млекопитающего, инфицированного вирусом ВИЧ, включающий введение ука-
занному млекопитающему противовирусного эффективного количества соединения по п.1, и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей или разбавителей.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая противовирусное эффективное количество одного или более соединений по п.2, совместно с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями.
7. Фармацевтическая композиция по п.6, пригодная для лечения ВИЧ-инфекции, дополнительно содержащая противовирусное эффективное количество вещества для лечения СПИД, выбранного из группы, состоящей из (а) противовирусного вещества для лечения СПИД, (b) противоинфекционного вещества, (с) иммуномодулятора и (d) другого ингибитора входа ВИЧ.
8. Способ лечения млекопитающего, инфицированного вирусом ВИЧ, включающий введение указанному млекопитающему противовирусного эффективного количества соединения по п.2 и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей или разбавителей.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027371
027371
- 1 -
- 1 -
(19)
027371
027371
- 1 -
- 1 -
(19)
027371
027371
- 1 -
- 1 -
(19)
027371
027371
- 4 -
- 3 -
(19)
027371
027371
- 9 -
- 10 -
027371
027371
- 9 -
- 10 -
027371
027371
- 11 -
- 10 -
027371
027371
- 11 -
- 10 -
027371
- 13 -
- 12 -
027371
- 13 -
- 14 -
027371
027371
- 15 -
- 15 -
027371
027371
- 16 -
- 16 -
027371
027371
- 23 -
- 23 -
027371
027371
- 29 -
- 29 -
027371
027371
- 55 -
027371
027371
- 58 -
- 58 -
027371
027371
- 69 -
027371
027371
- 72 -
- 72 -
027371
027371
- 82 -
027371
027371
- 85 -
- 85 -
027371
027371
- 88 -
027371
027371
- 91 -
- 91 -
027371
027371
- 93 -
027371
027371
- 96 -
- 96 -
027371
027371
- 98 -
027371
027371
- 101 -
- 101 -
027371
027371
121
121
027371
027371
- 123 -
- 123 -
027371
027371
- 136 -
- 136 -
027371
027371
- 145 -
146
027371
027371
- 147 -
146
- 148 -
- 148 -
027371
027371
- 149 -
- 149 -