|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Соединение, имеющее структуру  или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение, имеющее структуру  3. Фармацевтически приемлемая соль соединения, имеющего структуру  4. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, имеющее формулу  или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом. 5. Композиция по п.4, содержащая соединение, имеющее структуру  6. Соединение, имеющее структуру  или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение, имеющее структуру  8. Фармацевтически приемлемая соль соединения, имеющего структуру  9. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, имеющее формулу  или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом. 10. Композиция по п.9, содержащая соединение, имеющее структуру 
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Соединение, имеющее структуру или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение, имеющее структуру 3. Фармацевтически приемлемая соль соединения, имеющего структуру 4. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом. 5. Композиция по п.4, содержащая соединение, имеющее структуру 6. Соединение, имеющее структуру или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение, имеющее структуру 8. Фармацевтически приемлемая соль соединения, имеющего структуру 9. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом. 10. Композиция по п.9, содержащая соединение, имеющее структуру
Евразийское 027363 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201490919
(22) Дата подачи заявки
2012.12.14
(51) Int. Cl. C07C 69/753 (2006.01)
(54) ПРОИЗВОДНЫЕ БЕТУЛИНА
(31) 61/576,448
(32) 2011.12.16
(33) US
(43) 2014.11.28
(86) PCT/US2012/069637
(87) WO 2013/090664 2013.06.20
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ГЛАКСОСМИТКЛАЙН ЭЛЭЛСИ (US)
(72) Изобретатель:
Хэтчер Марк Эндрю, Джонс Брайан Элвин, Мартин Майкл Толар, Табет Эли Амин, Тан Цзюнь (US)
(74) Представитель:
Поликарпов А.В. (RU)
(56) WO-A1-2009082818 WO-A1-2011100308 US-A1-20110218204 US-A1-20100190795 WO-A1-2010053817 US-A1-20060205697
(57) Настоящее изобретение относится к соединениям, характеризующимся тем, что они имеют структуру в соответствии с приведенной ниже формулой I, или к их фармацевтически приемлемым солям. Соединения по настоящему изобретению пригодны для лечения или предупреждения ВИЧ-инфекции.
Перекрестная ссылка на родственные патенты и патентные заявки
Данный документ представляет собой заявку, поданную в соответствии с Договором о патентной кооперации, и заявляет приоритет по предварительной заявке на патент США № 61/576448, поданной 16 декабря 2011 г., которая тем самым включена посредством ссылки во всей своей полноте.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям, фармацевтическим композициям и способам их применения для (1) ингибирования репликации ВИЧ у субъекта, инфицированного ВИЧ, или (2) лечения субъекта, инфицированного ВИЧ, путем введения таких соединений.
Предшествующий уровень техники
Вирус иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1) вызывает синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Количество случаев заражения ВИЧ продолжает увеличиваться, и сейчас во всем мире от этого вируса страдают свыше 25 млн человек. В настоящее время длительное подавление вирусной репликации антиретровирусными лекарственными средствами представляет собой единственную возможность лечения инфекции ВИЧ-1. Фактически Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA) одобрено к применению двадцать пять лекарственных средств среди шести различных классов ингибиторов, для которых было показано значительное повышение выживаемости пациентов и качества их жизни. Тем не менее, все еще существует потребность в дополнительных терапиях ввиду наличия нежелательных межлекарственных взаимодействий, взаимодействий лекарственных средств с пищей, несоблюдения режима терапии и лекарственной устойчивости вследствие мутации целевого фермента.
В настоящее время почти все ВИЧ-положительные пациенты получают лечение согласно схемам лечения антиретровирусными лекарственными комбинациями, называемым высокоактивной антиретро-вирусной терапией (HAART). Однако применение HAART-терапии зачастую осложняется тем, что комбинация разных лекарственных средств часто должна быть введена пациенту один раз в сутки, чтобы избежать быстрого возникновения лекарственно-устойчивых вариантов ВИЧ-1. Несмотря на положительное влияние HAART на выживаемость пациентов, все еще может иметь место лекарственная устойчивость. Появление изолятов ВИЧ-1 с множественной лекарственной устойчивостью имеет серьезные клинические последствия и должно быть подавлено благодаря применению новой схемы лекарственного лечения, известной как терапия спасения.
Современные руководства рекомендуют включать в терапию спасения по меньшей мере два и предпочтительно три в полной мере активных лекарственных средства. Обычно терапии первой линии объединяют в себе три-четыре лекарственных средства, направленных на вирусные ферменты обратную транскриптазу и протеазу. Одна из возможностей терапии спасения заключается во введении различных комбинаций лекарственных средств, принадлежащих одному классу по механизму действия, которые остаются активными против резистентных изолятов. Однако возможности такого подхода часто имеют ограничения, поскольку вызывающие резистентность мутации зачастую обуславливают широкую перекрестную устойчивость к разным лекарственным средствам одного и того же класса. Не так давно благодаря разработке ингибиторов слияния, проникновения и интегразы стали доступны альтернативные терапевтические стратегии. Однако уже сейчас имеются сообщения относительно устойчивости ко всем трем новым классам лекарственных средств как у лабораторных животных, так и у пациентов. Поэтому для длительного успешного лечения ВИЧ-1-инфицированных пациентов антиретровирусными лекарственными средствами потребуется непрекращающаяся разработка новых и улучшенных лекарственных средств с новыми мишенями и механизмами действия.
В настоящее время длительное подавление вирусной репликации антиретровирусными лекарственными средствами представляет собой единственную возможность для лечения ВИЧ-1-инфекции. На сегодняшний день для ряда одобренных к применению лекарственных средств было продемонстрировано значительное повышение выживаемости пациентов. Однако применение схем лечения, известных как высокоактивная антиретровирусная терапия (HAART), зачастую осложняется тем, что для того, чтобы избежать быстрого возникновения лекарственно-устойчивых вариантов ВИЧ-1, пациенту должна быть введена комбинация разных лекарственных средств. Несмотря на положительное влияние HAART на выживаемость пациентов, все еще может иметь место лекарственная устойчивость.
Полипротеин-предшественник Gag (Pr55Gag) ВИЧ, который состоит из четырех белковых доменов -матриксного (МА), капсидного (СА), нуклеокапсидного (NC) и р6, и двух спейсерных пептидов, SP1 и SP2, представляет собой новую терапевтическую мишень. Несмотря на то, что расщепление полипротеина Gag играет центральную роль в процессе продуцирования инфекционных вирусных частиц, на сегодняшний день ни одно из антиретровирусных лекарственных средств, воздействующих на этот механизм, не одобрено к применению.
В клетках большинства типов сборка осуществляется на плазматической мембране, и связывание с мембраной опосредуется МА-доменом Gag. Сборка завершается отпочковыванием незрелой частицы от клетки. Одновременно с высвобождением частицы кодируемая вирусом PR расщепляет Gag на четыре зрелых белковых домена, MA, CA, NC и р6, и два спейсерных пептида, SP1 и SP2. Gag-Pol также расщепляется под действием PR с высвобождением вирусных ферментов PR, RT и IN. Протеолитический про
цессинг Gag индуцирует морфологическую перегруппировку внутри частицы, известную как созревание. В процессе созревания незрелая частица тороидальной формы превращается в зрелый вирион, который содержит сконденсированное коническое ядро, состоящее из СА оболочки, окружающей геномную РНК вируса, в комплексе с NC и вирусными ферментами RT и IN. Созревание готовит вирус для инфицирования новой клетки и является абсолютно необходимым для инфекционности частицы.
Бевиримат (РА-457) представляет собой ингибитор созревания, который ингибирует конечную стадию в процессинге Gag, превращение капсид-SP! (р25) в капсид, необходимое для образования инфекционных вирусных частиц. Бевиримат активен против резистентного к ART (антиретровирусная терапия) ВИЧ и ВИЧ дикого типа и демонстрирует синергизм с антиретровирусными средствами всех классов. Бевиримат снижал вирусную нагрузку ВИЧ в среднем на 1,3 log^/мл у тех пациентов, у которых минимальные уровни достигали не менее 20 мкг/мл, и которые не имели никаких ключевых исходных полиморфизмов Gag в положениях Q369, V370 или Т371. Однако принимавшие бевиримат пациенты с полиморфизмами Gag в положениях Q369, V370 или Т371 демонстрировали существенно более низкое снижение нагрузки, чем пациенты без полиморфизмов Gag в этих сайтах.
Другие примеры ингибиторов созревания можно найти в патентной заявке РСТ № WO 2011/100308, "Derivatives of Betulin"; патентной заявке РСТ № PCT/US 2012/024288, "Novel Anti-HIV Compounds and Methods of Use Thereof"; заявке РСТ Китая № PCT/CN 2011/001302, "Carbonyl Derivatives of Betulin"; заявке РСТ Китая № PCT/CN 2011/001303, "Methylene Derivatives of Betulin"; заявке РСТ Китая № PCT/CN 2011/002105 и PCT/CN 2011/002159, "Propenoate Derivatives of Betulin". Ингибиторы созревания из предшествующего уровня техники имеют недостатки в отношении областей, охваченных полиморфизмом, тем самым чрезвычайно важной оказывается как эффективность в отношении большого разнообразия клинически релевантных последовательностей gag, так и общая эффективностью в отношении клинически релевантного белка, регулирующего антивирусную активность, которые будут необходимы для надежной эффективности при долгосрочных испытаниях. На сегодняшний день ни для какого ингибитора созревания не удалось получить оптимального баланса этих свойств.
Поэтому было бы достижением в данной области техники обнаружить альтернативные соединения, характеризующиеся эффективным балансом вышеупомянутых свойств, для предупреждения и/или лечения ВИЧ-инфекций.
Сущность изобретения
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, имеющее формулу
Согласно одному из воплощений настоящего изобретения предложено соединение, имеющее структуру
лечения субъектов с риском приобретения ВИЧ-инфекции.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показана гистограмма, представляющая сравнение бевиримата и соединения 51 по их относительной способности ингибировать активность обратной транскриптазы ВИЧ для широкой панели изолятов ВИЧ-1.
На фиг. 2 показана гистограмма, представляющая сравнение соединения 51 и соединения С по их относительной способности ингибировать активность обратной транскриптазы ВИЧ для широкой панели изолятов ВИЧ-1.
На фиг. 3 показана линейная диаграмма, представляющая экстраполяцию нормализованных значений ИК50 для бевиримата к 100%-й сыворотке крови человека.
На фиг. 4 показана линейная диаграмма, представляющая экстраполяцию нормализованных значений ИК50 для соединения В к 100%-й сыворотке крови человека.
На фиг. 5 показана линейная диаграмма, представляющая экстраполяцию нормализованных значений ИК50 для соединения 51 к 100%-й сыворотке крови человека.
Подробное описание репрезентативных воплощений
По всему тексту данной заявки приведены ссылки на различные воплощения, относящиеся к соединениям, композициям и способам. Различные описанные воплощения предназначены для представления ряда иллюстративных примеров, и их не следует истолковывать как описания альтернативных разновидностей изобретения. Скорее следует отметить, что описания различных воплощений, предложенных в данном изобретении, могут перекрываться. Воплощения, рассмотренные в данном описании, являются главным образом иллюстративными и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Следует понимать, что использованная в данном описании терминология применена только для описания конкретных воплощений и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения. В этом описании и в следующей далее формуле изобретения будет сделана ссылка на ряд терминов, которые будут определены как имеющие приведенные ниже значения.
"AUC" относится к площади под кривой зависимости концентрации лекарственного средства в плазме крови (не логарифма концентрации) от времени после введения лекарственного средства.
"ЕС50" относится к концентрации лекарственного средства, которая дает ответ, равный половине максимального.
"ИК50" относится к концентрации лекарственного средства, которая дает ингибирующий эффект, равный половине максимального. Иногда также осуществляют преобразование к шкале рИК50 (-log ИК50), согласно которой более высокие значения указывают на экспоненциально более высокую эффективность.
"Филогенетическая ветвь" относится к гипотетической конструкции, основанной на экспериментальных данных. Филогенетические ветви устанавливают, используя большое число (иногда сотни) признаков для ряда видов (или образцов) и проводя их статистический анализ для обнаружения наиболее вероятного филогенетического дерева для данной группы.
"Анализ изменения характеристик (shift assay) под действием белков сыворотки крови человека" относится к анализу ВИЧ с использованием люциферазного репортера с целью определения процента ингибирования -рИК50. В этом анализе ВИЧ применяют систему совместного культивирования двух типов клеток. В этом анализе инфицированную клеточную линию J4HxB2 и индикаторную линию клеток HOS (остеосаркома человека) (5-LTR (длинный концевой повтор) + люцифераза) культивируют совместно в присутствии и в отсутствие соединения. Данный анализ разработан с целью обнаружения ингибиторов, которые предотвращают инфекцию клеток HOS клетками линии J4HxB2. В этом анализе можно обнаружить ингибиторы любой стадии цикла ВИЧ-инфекции.
Термины "соединение", "соединения", "химическая структура" и "химические структуры", использованные в данном описании, относятся к соединению, охваченному общими формулами, приведенными в данном описании, любой подгруппой этих общих формул, и к любым формам соединений в пределах таких общих формул и их подгрупп, включая рацематы, стереоизомеры и таутомеры соединения или соединений.
"Полиморфизм" относится к случаю, когда в одной и той же популяции вида, где присутствуют более чем одна форма или морфа, существуют два или более четко различающихся фенотипов. По существу, чтобы провести классификацию, морфы должны одновременно занимать одну и ту же среду обитания в одно и то же время и относиться к панмиктической популяции (популяции со случайным скрещиванием).
"Связывание с белками" относится к связыванию лекарственного средства с белками плазмы крови, тканевыми мембранами, эритроцитами и другими компонентами крови.
"Изменение характеристик под действием белков (protein shift)" относится к определению изменения характеристик связывания (binding shift) посредством сравнения величин EC50, определенных в отсутствие и в присутствии сыворотки крови человека.
"QVT" относится к аминокислотам в положениях 369, 370 и 371 соответственно, во фрагменте Sp1 в
Gag ВИЧ-1.
Термин "рацематы" относится к смеси энантиомеров. В одном из воплощений изобретения соединения по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли являются энантиомерно обогащенными по одному энантиомеру, у которого все хиральные атомы углерода находятся в одной конфигурации. В общем случае понимается, что ссылка на энантиомерно обогащенное соединение или соль указывает на то, что конкретный энантиомер будет составлять более 50 мас.% от общей массы всех энантиомеров данного соединения или соли.
"Сольват" или "сольваты" соединения относятся к таким определенным выше соединениям, которые находятся в связанном состоянии с растворителем в стехиометрическом или нестехиометрическом количестве. Сольваты соединения включают сольваты всех форм соединения. В некоторых воплощениях растворители являются летучими, нетоксичными и/или приемлемыми для введения людям в следовых количествах. Подходящие сольваты включают воду.
Термин "стереоизомер" или "стереоизомеры" относится к соединениям, которые отличаются по хи-ральности одного или более стереоцентров. Стереоизомеры включают энантиомеры и диастереомеры.
"Таутомер" относится к альтернативным формам соединения, которые отличаются по положению протона, таким как таутомеры, характеризующиеся кето-енольной и имин-енаминной таутомерией, или таутомерные формы гетероарильных групп, содержащих кольцевой атом, присоединенный как к группировке -NH- кольца, так и к группировке =N- кольца, такие как пиразолы, имидазолы, бензимидазолы, триазолы и тетразолы.
Термин "атропоизомер" относится к стереоизомеру, возникающему вследствие наличия оси асимметрии. Это может быть результатом ограничения вращения вокруг одинарной связи, когда барьер вращения достаточно высок для того, чтобы иметь возможность разделения изомерных видов, вплоть до полного выделения стабильных невзаимопревращающихся диастереомерных или энантиомерных разновидностей. Специалисту в данной области техники известно, что после введения несимметричного Rx в коровую часть молекулы возможно образование атропоизомеров. Кроме того, как только в заданную молекулу, содержащую атропоизомер, вводится второй хиральный центр, эти два хиральных элемента, взятые вместе, могут создавать диастереомерные и энантиомерные стереохимические разновидности. В зависимости от замещения вокруг оси Cx между атропоизомерами возможно может происходить или не происходить взаимопревращение, и оно может зависеть от температуры. В некоторых случаях взаимопревращение атропоизомеров может происходить быстро при комнатной температуре, и их разделение в условиях окружающей среды невозможно. Имеются другие ситуации, которые могут способствовать разделению и выделению, но взаимопревращение может осуществляться в течение периода времени от нескольких секунд до нескольких часов или даже суток либо месяцев, таким образом оптическая чистота заметно ухудшается в зависимости от времени. При этом у других разновидностей может полностью отсутствовать взаимопревращение при температуре окружающей среды и/или повышенной температуре, вследствие чего процесс разделения и выделения становится возможным и приводит к получению стабильных разновидностей. Тогда, когда это было известно, разделенным атропоизомерам давали названия с использованием номенклатуры спиралей. Для такого обозначения самыми важными считаются только два лиганда впереди и позади оси. В том случае, когда приоритетным является поворот от "переднего" лиганда (front ligand) 1 к "заднему" лиганду (rear ligand) 1 осуществляется по часовой стрелке, конфигурация называется Р-конфигурацией (от англ. plus), если против часовой стрелки, то М-конфигурацией (от англ. minus).
Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к фармацевтически приемлемым солям, происходящим из ряда органических и неорганических противоионов, хорошо известных в данной области техники, и включающим только в качестве примера соли натрия, калия, кальция, магния, аммония и тетраалкиламмония, и, когда молекула содержит основные функциональные группы, соли органических или неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, тартрат, мезилат, ацетат, малеат и оксалат. Подходящие соли включают соли, описанные в P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use; 2002.
Термин "пациент" или "субъект" относится к млекопитающим и включает в себя людей и млекопитающих, не являющихся людьми.
"Подвергание лечению" или "лечение" заболевания у пациента относится к 1) предупреждению возникновения заболевания у пациента, предрасположенного к данному заболеванию или еще не проявляющего симптомы данного заболевания; 2) подавлению заболевания или прекращению его развития или к 3) облегчению либо вызыванию регрессии заболевания.
Если рядом с одинарными связями, обозначенными сплошными линиями, находятся пунктирные линии, то они означают необязательную двойную связь в этом положении. Подобным же образом, если внутри кольцевых структур, обозначенных сплошными линиями или сплошными кругами, появляются пунктирные круги, то эти пунктирные круги означают от одной до трех необязательных двойных связей, расположенных согласно их надлежащей валентности с учетом того, имеет ли данное кольцо какие-либо необязательные замещения по всему кольцу, что известно специалисту в данной области. Например,
Аналогичным образом, показанное ниже кольцо А может представлять собой циклогексильное кольцо без каких-либо двойных связей или также может представлять собой фенильное кольцо, имеющее три двойные связи, расположенные в любом положении, которое опять же отображает надлежащую для фенильного кольца валентность. Подобным же образом в показанном ниже кольце В любой из Х1-Х5 может быть выбран из С, СН или СН2, N или NH, и пунктирный круг означает, что кольцо В может представлять собой циклогексильное или фенильное кольцо, или N-содержащий гетероцикл без каких-либо двойных связей, или N-содержащее гетероарильное кольцо, содержащее от одной до трех двойных связей, расположенных в любом положении, которое опять же отображает надлежащую валентность
Если изображены конкретные соединения или общие формулы, в которых имеются ароматические кольца, такие как арильные или гетероарильные кольца, то специалисту в данной области техники будет очевидно, что конкретное расположение любых двойных связей в ароматическом кольце представляет собой сочетание эквивалентных положений, даже если они изображены в разных местах от соединения к соединению или от формулы к формуле. Например, в двух приведенных ниже пиридиновых кольцах (А и В) двойные связи нарисованы в разных положениях, однако известно, что они представляют собой одну и ту же структуру и одно и то же соединение
Настоящее изобретение включает соединения, а также их фармацевтически приемлемые соли. Соответственно, подразумевается, что слово "или" в контексте "соединения или его фармацевтически приемлемой соли" относится либо к 1) самому соединению или соединению и его фармацевтически приемлемой соли (как альтернативы), либо к 2) соединению и его фармацевтически приемлемой соли (в комбинации).
Как изложено выше, бевиримат представляет собой все еще не разрешенное к применению лекарственное средство против ВИЧ, происходящее из подобного бетулиновой кислоте соединения, изначально выделенного из Syzygium claviflorum, произрастающего в Китае растения. Считается, что он ингиби-рует ВИЧ посредством нового механизма, так называемого ингибирования созревания. Подобно ингибиторам протеаз бевиримат и другие ингибиторы созревания препятствует протеолитическому процессингу
только что транслированного полипротеина-предшественника ВИЧ, называемого gag. Gag представляет
собой важный структурный белок вируса ВИЧ. Gag претерпевает ряд взаимодействий с самим собой, а также с другими клеточными и вирусными факторами, необходимыми для выполнения сборки инфекци-
онных вирусных частиц.
Однако у некоторых инфицированных индивидуумов присутствуют природные полиморфизмы в ВИЧ, из этого следует снижение анти-ВИЧ эффективности некоторых существующих в настоящее время терапий. В действительности, исследования показали, что наличие ряда однонуклеотидных полиморфизмов в сайте расщепления капсидного/спейсерного белка SP1 (CA/SP1) выражалось в клинической устойчивости к бевиримату у пациентов с ВИЧ. Также известно, что мутации в мотиве глутамин-валин-треонин (QVT) пептида SP1 также вызывают устойчивость к бевиримату у ВИЧ-инфицированных пациентов. Мутации в QVT-мотиве пептида SP1 представляют собой первичные прогностические факторы отсутствия ответа на бевиримат, и влияние этих мутаций было неоднократно продемонстрировано. В конечном итоге эти проблемы привели к прекращению клинических испытаний бевиримата. См. Knapp, D., et al., J. Clin. Microbiol. 49(1): 201-208(2011).
Бевиримат
Клинические проблемы при применении бевиримата: проблемы, связанные с полиморфизмом, и слабая эффективность;
ЕС50 для штамма NL4-3 в анализе антивирусной активности с использованием клеток МТ4 составляет 223 нМ;
ЕС50 для штамма NL4-3 с полиморфизмом V370A, полученным сайт-специфическим мутагенезом, в анализе антивирусной активности с использованием клеток МТ4 составляет 6062 нМ;
кратность изменения характеристик (fold shift) в анализе под действием сыворотки крови человека составляет 157. См. табл. 6;
Cmin целевого средства больше 20 мкг/мл*;
более 40% пациентов с филогенетической ветвью В имеют QVT-полиморфизмы*.
* (См. McCallister, et al., XVII International Drug Resistance Workshop, June 10-14, 2008, Sitges, Spain. Conference poster "HIV-1 Gag Polymorphisms Determine Treatment Response to Bevirimat (PA-457)").
После сообщения о приведенных выше клинических проблемах при лечении ВИЧ-инфекций беви-риматом были открыты несколько новых соединений, представляющих собой активные против ВИЧ ингибиторы созревания. Например, в опубликованной заявке РСТ № WO 2011/100308 и заявке РСТ с серийным № PCT/CN 2011/001302 были описаны некоторые ингибирующие созревание соединения (далее соединения "А", "В" и "С", которые показаны ниже). В дополнение к этому в настоящей заявке также описываются, среди прочих, соединения 51 и 56, которые подробно рассмотрены во всех отношениях. В настоящей заявке описываются соединения, которые являются новыми по сравнению с соединениями, описанными в опубликованной заявке РСТ № WO 2011/100308 и заявке РСТ с серийным № PCT/CN 2011/001302. Помимо этого, некоторые соединения, описанные в данной заявке, демонстрируют неожиданно превосходящие свойства по сравнению с соединениями (А, В и С), описанными в опубликованной заявке РСТ № WO 2011/100308 и заявке РСТ с серийным № PCT/CN 2011/001302.
Одно из различий между соединениями, описанными в этих двух документах, и соединениями по настоящему изобретению заключается в том, что в обоих этих документах получают соединения, предусматривающие присутствие карбонильной группы в определенном положении, тогда как настоящая заявка описывает соединения, которые не могут иметь карбонила в том же положении. Только в качестве примера данное различие "карбонил против не-карбонила" демонстрируется стрелками, показанными непосредственно ниже. Структуры соединений по настоящему изобретению подтверждают это в рамках настоящей заявки, поскольку в том случае, когда W представляет собой атом кислорода, может существовать только одинарная связь между соседним атомом углерода и W. В общем, в соединениях по настоящему изобретению, имеющих такие формулы, между W и соседним с ним атомом углерода не может быть двойной связи, такой, чтобы образовывался карбонил.
В самом деле, в настоящее время обнаружено, что это структурное отличие неожиданно улучшает многие свойства, связанные с созданием эффективного лекарственного средства для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, таких как ВИЧ. Одно или более из таких свойств некоторых соединений, описанных в настоящей заявке, включают, но не ограничиваются этим, улучшение охвата полиморфов (polymorphism coverage) вируса ВИЧ, улучшение эффективности in vitro (EC50), уменьшение прогнозируемого клинического показателя AUC для человека, возможное уменьшение любого диапазона токсичности путем снижения необходимой для эффективности дозы и уменьшение влияния связывания с белками и/или изменения характеристик под действием сыворотки (serum shift) на прогнозируемый клинический показатель AUC.
Подобные улучшения в фармакокинетике и прогнозируемом клиническом применении некоторых соединений, изложенных в данном описании, приведены более подробно в примерах 84-89 ниже.
Соединение А
или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом. Предпочтительно указанная композиция содержит соединение, имеющее структуру
или его фармацевтически приемлемая соль.
Согласно другому воплощению настоящего изобретения предложено соединение, имеющее структуру
В настоящем изобретении раскрыт способ лечения ВИЧ, включающий введение пациенту, страдающему от этого, эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли.
В настоящем изобретении раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент, где соединение присутствует в аморфной форме.
В настоящем изобретении раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент, где композиция находится в таблеточной форме.
В настоящем изобретении раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент, где соединение присутствует в виде дисперсии, высушенной распылением.
В настоящем изобретении раскрыт способ лечения ВИЧ-инфекции у субъекта, включающий введение соединения по настоящему изобретению, являющегося предметом изобретения, или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях субъектом является млекопитающее, а в других воплощениях субъектом является человек.
Также в настоящем изобретении раскрыт способ лечения ВИЧ-инфекции у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент.
Также в настоящем изобретении раскрыт способ предупреждения ВИЧ-инфекции у субъекта с риском развития ВИЧ-инфекции, включающий введение соединения по настоящему изобретению, являющегося предметом изобретения, или его фармацевтически приемлемой соли.
Также в настоящем изобретении раскрыт способ предупреждения ВИЧ-инфекции у субъекта с риском развития ВИЧ-инфекции, включающий введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент.
Также в настоящем изобретении раскрыто применение соединения или соли по настоящему изобретению в изготовлении лекарственного средства для использования в лечении ВИЧ-инфекции у человека.
Кроме того, соединения по изобретению могут существовать в конкретных геометрических или стереоизомерных формах. Изобретение охватывает все такие соединения, включая цис- и транс-изомеры, (-)- и (+)-энантиомеры, (R)- и ^)-энантиомеры, диастереомеры, ф)-изомеры, ^)-изомеры, их рацемические смеси и другие их смеси, такие как энантиомерно или диастереомерно обогащенные смеси, как попадающие в пределы объема изобретения. В таком заместителе, как алкильная группа, могут присутствовать дополнительные асимметрические атомы углерода. Подразумевается, что все такие изомеры, а также их смеси включены в данное изобретение.
Оптически активные (R)- и ^)-изомеры и d- и l-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов или разделены традиционными методами. Если, например, желателен конкретный энантиомер соединения по настоящему изобретению, его можно получить посредством асимметрического синтеза или путем образования производных с использованием хираль-ного вспомогательного вещества, при этом полученную диастереомерную смесь разделяют и отщепляют вспомогательную группу с получением чистых желаемых энантиомеров. Альтернативно, в том случае, когда молекула содержит основную функциональную группу, такую как аминогруппа, или кислотную функциональную группу, такую как карбоксильная группа, можно образовать диастереомерные соли с соответствующими оптически активными кислотой или основанием, затем разделить образованные таким образом диастереомеры фракционной кристаллизацией или хроматографическими методами, известными в данной области техники, и после этого извлечь чистые энантиомеры. Кроме того, разделение
энантиомеров и диастереомеров зачастую выполняют, используя хроматографию с применением хи-ральных неподвижных фаз, возможно в комбинации с получением производных путем химических превращений (например, с образованием карбаматов из аминов).
В другом воплощении изобретения предложено соединение по настоящему изобретению, где соединение или соль соединения используют в изготовлении лекарственного средства для применения в лечении вирусной инфекции у человека.
В другом воплощении изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый разбавитель и терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению.
В одном из воплощений фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его соль, представляет собой композицию, адаптированную для парентерального введения. В другом воплощении композиция представляет собой парентеральную композицию длительного действия. В следующем воплощении композиция представляет собой композицию на основе наночастиц.
Соединения по настоящему изобретению и их соли, сольваты или другие их фармацевтически приемлемые производные можно применять по отдельности или в комбинации с другими терапевтическими агентами. Таким образом, в других воплощениях способы лечения и/или предупреждения ВИЧ-инфекции у субъекта могут, помимо введения соединения по настоящему изобретению, также включать введение одного или более чем одного дополнительного фармацевтического агента, активного против ВИЧ, выбранного из группы, состоящей из зидовудина, диданозина, ламивудина, залцитабина, абакави-ра, ставудина, адефовира, адефовира дипивоксила, фозивудина, тодоксила, эмтрицитабина, аловудина, амдоксовира, элвуцитабина, невирапина, делавирдина, эфавиренза, ловирида, иммунокала, олтипраза, каправирина, лерсивирина, GSK2248761, ТМС-278, ТМС-125, этравирина, саквинавира, ритонавира, ин-динавира, нелфинавира, ампренавира, фосампренавира, бреканавира, дарунавира, атазанавира, типрана-вира, палинавира, ласинавира, энфувиртида, Т-20, Т-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-806, BMS-663068 и BMS-626529, 5-Helix, ралтегравира, элвитегравира, GSK1349572, GSK1265744, викривирока (Sch-C), Sch-D, TAK779, маравирока, TAK449, диданозина, тенофовира, лопинавира и дарунавира.
По сути, соединения по настоящему изобретению и любой(ые) другой(ие) фармацевтически актив-ный(ые) агент(ы) могут быть введены вместе или по отдельности, и в случае раздельного введения оно может осуществляться одновременно или последовательно в любом порядке. Количества соединений по настоящему изобретению и другого(их) фармацевтически активного(ых) агента(ов) и относительные временные интервалы введения будут выбраны с целью достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта. Введение соединения по настоящему изобретению и его солей, сольватов или других фармацевтически приемлемых производных в сочетании с другими терапевтическими агентами может осуществляться в комбинации путем одновременного введения в (1) единой фармацевтической композиции, включающей в себя оба соединения; или (2) отдельных фармацевтических композициях, каждая из которых включает в себя одно из соединений. Альтернативно, данная комбинация может быть введена по отдельности в последовательном порядке, причем один терапевтический агент вводят первым, а другой вторым или наоборот. Такое последовательное введение может осуществляться через небольшой промежуток времени или продолжительный промежуток времени. Количества соединения(ий) по изобретению или их солей и другого(их) фармацевтически активного(ых) агента(ов) и относительные временные интервалы введения будут выбраны с целью достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта.
Помимо этого, соединения по настоящему изобретению могут быть использованы в комбинации с одним или более чем одним другим агентом, полезным в предупреждении или лечении ВИЧ-инфекций. Примеры таких агентов включают
нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы, такие как зидовудин, диданозин, ламивудин, залцитабин, абакавир, ставудин, адефовир, адефовира дипивоксил, фозивудин, тодоксил, эмтрицитабин, аловудин, амдоксовир, элвуцитабин и подобные агенты;
ненуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (в том числе агент, имеющий антиоксидант-ную активность, такой как иммунокал, олтипраз и т.д.), такие как невирапин, делавирдин, эфавиренз, ловирид, иммунокал, олтипраз, каправирин, лерсивирин, GSK2248761, ТМС-278, ТМС-125, этравирин и подобные агенты;
ингибиторы протеазы, такие как саквинавир, ритонавир, индинавир, нелфинавир, ампренавир, фо-сампренавир, бреканавир, дарунавир, атазанавир, типранавир, палинавир, ласинавир и подобные агенты;
ингибиторы проникновения, присоединения и слияния, такие как энфувиртид (Т-20), Т-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-806, BMS-663068 и BMS-626529, 5-Helix и подобные агенты;
ингибиторы интегразы, такие как ралтегравир, элвитегравир, GSK1349572, GSK1265744 и подобные агенты;
ингибиторы созревания, такие как РА-344 и РА-457 и подобные агенты;
ингибиторы CXCR4 (хемокиновый рецептор семейства СХС) и/или CCR5 (хемокиновый рецептор семейства СО, такие как викривирок (Sch-C), Sch-D, TAK779, маравирок (UK 427857), TAK449, а также описанные в WO 02/74769, PCT/US 03/39644, PCT/US 03/39975, PCT/US 03/39619, PCT/US 03/39618,
PCT/US 03/39740 и PCT/US 03/39732 и подобные агенты.
Другие примеры, где соединения по настоящему изобретению могут быть использованы в комбинации с одним или более агентами, полезными в предупреждении или лечении ВИЧ-инфекции, можно найти в табл. 1.
Таблица 1
Одобренные FDA
Зарегистрированное
патентованное
название
Международное непатентованное название
Производитель
Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI)
1987
Ретровир
зидовудин, азидотимидин, AZT, ZDV
GlaxoSmith Kline
1991
Видекс
диданозин, дидезоксиинозин, ddl
Bristol-Myers Squibb
1992
Хивид
залцитабин, дидезоксицитидин, ddC
Roche
Pharmaceuticals
1994
Зерит
ставудин, d4T
Bristol-Myers Squibb
1995
Эпивир
ламивудин, ЗТС
GlaxoSmith Kline
1997
Комбивир
ламивудин + зидовудин
GlaxoSmith Kline
1998
Зиаген
абакавира сульфат, ABC
GlaxoSmith Kline
2000
Тризивир
абакавир+ ламивудин+ зидовудин
GlaxoSmith Kline
2000
Видекс ЕС
диданозин с энтеросолюбильным покрытием, ddl ЕС
Bristol-Myers Squibb
2001
Виреад
тенофовир дизопроксила фумарат, TDF
Gilead Sciences
2003
Эмтрива
эмтрицитабин, FTC
Gilead Sciences
2004
Эпзиком
абакавир+ ламивудин
GlaxoSmith Kline
2004
Трувада
эмтрицитабин +
тенофовир дизопроксила фумарат
Gilead Sciences
Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI)
1996
Вирамун
невирапин, NVP
Boehringer Ingelheim
1997
Рескриптор
делавирдин, DLV
Pfizer
1998
Сустива
эфавиренз, EFV
Bristol-Myers Squibb
2008
Интеленс
этравирин
Tibotec Therapeutics
Ингибиторы протеазы (PI)
1995
Инвираза
саквинавира мезилат, SQV
Roche
Pharmaceuticals
1996
Норвир
ритонавир, RTV
Abbott Laboratories
1996
Криксиван
индинавир, IDV
Merck
1997
Вирасепт
нелфинавира мезилат, NFV
Pfizer
1997
Фортоваза
саквинавир(более не поставляется)
Roche
Pharmaceuticals
1999
Агенераза
ампренавир, APV
GlaxoSmith Kline
2000
Калетра
лопинавир+ ритонавир, LPV/RTV
Abbott Laboratories
2003
Реатаз
атазанавира сульфат, ATV
Bristol-Myers Squibb
2003
Лексива
фосампренавир кальция, FOS-APV
GlaxoSmith Kline
2005
Аптивус
трипранавир, TPV
Boehringer Ingelheim
2006
Презиста
дарунавир
Tibotec Therapeutics
Ингибиторы
слияния
Roche
2003
Фузеон
энфувиртид, Т-20
Pharmaceuticals & Trimeris
Ингибиторы
проникновения
2007
Селзентри
маравирок
Pfizer
Ингибиторы
и н тег разы
2007
Исентресс
ралтегравир
Merck
Комбинации соединений по данному изобретению с агентами против ВИЧ не ограничиваются таковыми, упомянутыми выше, а включают в принципе любую комбинацию с любой фармацевтической композицией, полезной для лечения ВИЧ-инфекции. Как уже отмечалось, в таких комбинациях соединения по настоящему изобретению и другие агенты против ВИЧ можно вводить по отдельности или совместно. К тому же один агент может быть введен до, одновременно или после введения другого(их) аген-та(ов).
Настоящее изобретение может быть применено в комбинации с одним или более агентами, полезными в качестве фармакологических усилителей, а также с добавлением или без добавления дополнительных соединений для предупреждения или лечения ВИЧ-инфекции. Примеры таких фармакологических усилителей (или фармакокинетических бустеров) включают, но не ограничиваются этим, ритонавир, GS-9350 и SPI-452.
Ритонавир представляет собой 5-тиазолилметиловый эфир 10-гидрокси-2-метил-5-(1-метилэтил)-1-1[2-(1-метилэтил)-4-тиазолил]-3,6-диоксо-8,11-бис(фенилметил)-2,4,7,12-тетраазатридекан-13-овой кислоты [5S-(5S*,8R*,10R*,11R*)], и поставляется Abbott Laboratories из Abbott Park, Illinois, под наименованием "норвир". Ритонавир представляет собой ингибитор протеазы ВИЧ, показанный к применению вместе с другими антиретровирусными агентами для лечения ВИЧ-инфекции. Ритонавир также ингиби-рует Р450-опосредованный метаболизм лекарственных средств, а также систему клеточного транспорта с участием Р-гликопротеина (Pgp), что приводит к увеличению концентрации активного вещества внутри организма.
GS-9350 представляет собой соединение, разрабатываемое Gilead Sciences из Foster City, California, в качестве фармакологического усилителя.
SPI-452 представляет собой соединение, разрабатываемое Sequoia Pharmaceuticals из Gaithersburg, Maryland, в качестве фармакологического усилителя.
В одном из воплощений настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению используют в комбинации с ритонавиром. В одном из воплощений комбинация представляет собой комбинацию для перорального введения с фиксированной дозой. В другом воплощении на основе соединения по настоящему изобретению изготавливают препарат в виде парентеральной инъекции длительного действия, а на основе ритонавира изготавливают препарат в виде пероральной композиции. В настоящем изобретении раскрыт набор, содержащий препарат, изготовленный на основе соединения по настоящему изобретению, в виде парентеральной инъекции длительного действия и препарат, изготовленный на основе ритонавира, в виде пероральной композиции. В другом воплощении на основе соединения по настоящему изобретению изготавливают препарат в виде парентеральной инъекции длительного действия, а на основе ритонавира изготавливают препарат в виде инъекционной композиции. В настоящем изобретении также раскрыт набор, содержащий препарат, изготовленный на основе соединения по настоящему изобретению, в виде парентеральной инъекции длительного действия и препарат, изготовленный на основе ритонавира, в виде инъекционной композиции.
В другом воплощении настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению используют в комбинации с GS-9350. В одном из воплощений комбинация представляет комбинацию для перо-рального введения с фиксированной дозой. В другом воплощении на основе соединения по настоящему изобретению изготавливают препарат в виде парентеральной инъекции длительного действия, а на основе GS-9350 изготавливают препарат в виде пероральной композиции. В настоящем изобретении раскрыт набор, содержащий препарат, изготовленный на основе соединения по настоящему изобретению, в виде парентеральной инъекции длительного действия и препарат, изготовленный на основе GS-9350, в виде пероральной композиции. В другом воплощении на основе соединения по настоящему изобретению изготавливают препарат в виде парентеральной инъекции длительного действия, а на основе GS-9350 изготавливают препарат в виде инъекционной композиции. В настоящем изобретении также раскрыт набор,
содержащий препарат, изготовленный на основе соединения по настоящему изобретению, в виде парентеральной инъекции длительного действия и препарат, изготовленный на основе GS-9350, в виде инъекционной композиции.
В одном из воплощений настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению используют в комбинации с SPI-452. В одном из воплощений комбинация представляет комбинацию для перо-рального введения с фиксированной дозой. В другом воплощении на основе соединения по настоящему изобретению изготавливают препарат в виде парентеральной инъекции длительного действия, а на основе SPI-452 изготавливают препарат в виде пероральной композиции. В настоящем изобретении раскрыт набор, содержащий препарат, изготовленный на основе соединения по настоящему изобретению, в виде парентеральной инъекции длительного действия и препарат, изготовленный на основе SPI-452, в виде пероральной композиции. В другом воплощении на основе соединения по настоящему изобретению изготавливают препарат в виде парентеральной инъекции длительного действия, а на основе SPI-452 изготавливают препарат в виде инъекционной композиции. В настоящем изобретении также раскрыт набор, содержащий препарат, изготовленный на основе соединения по настоящему изобретению, в виде парентеральной инъекции длительного действия и препарат, изготовленный на основе SPI-452, в виде инъекционной композиции.
В одном из воплощений настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению используют в комбинации с соединениями, раскрытыми в ранее поданной заявке PCT/CN 2011/0013021, которая включена в данное описание посредством ссылки.
Другие вышеупомянутые терапевтические агенты, когда их применяют в комбинации с химическими соединениями, изложенными в данном описании, могут быть использованы, например, в количествах, указанных в настольном справочнике врача (Physicians' Desk Reference, PDR) или иным образом определенных специалистом в данной области.
В настоящем изобретении раскрыт способ лечения вирусной инфекции у млекопитающего, опосредованной, по меньшей мере частично, вирусом из ретровирусного семейства вирусов, включающий введение млекопитающему, которому был поставлен диагноз указанной вирусной инфекции или у которого есть риск развития указанной вирусной инфекции, соединения по настоящему изобретению.
Также в настоящем изобретении раскрыт способ лечения вирусной инфекции у млекопитающего, опосредованной, по меньшей мере частично, вирусом из ретровирусного семейства вирусов, включающий введение млекопитающему, которому был поставлен диагноз указанной вирусной инфекции или у которого есть риск развития указанной вирусной инфекции, соединения по настоящему изобретению, где указанный вирус представляет собой вирус ВИЧ. В некоторых воплощениях вирусом ВИЧ является вирус ВИЧ-1.
Также в настоящем изобретении раскрыт способ лечения вирусной инфекции у млекопитающего, опосредованной, по меньшей мере частично, вирусом из ретровирусного семейства вирусов, включающий введение млекопитающему, которому был поставлен диагноз указанной вирусной инфекции или у которого есть риск развития указанной вирусной инфекции, соединения по настоящему изобретению, дополнительно включающий введение терапевтически эффективного количества одного или более агентов, активных против вируса ВИЧ.
Также в настоящем изобретении раскрыт способ лечения вирусной инфекции у млекопитающего, опосредованной, по меньшей мере частично, вирусом из ретровирусного семейства вирусов, включающий введение млекопитающему, которому был поставлен диагноз указанной вирусной инфекции или у которого есть риск развития указанной вирусной инфекции, соединения по настоящему изобретению, дополнительно включающий введение терапевтически эффективного количества одного или более агентов, активных против вируса ВИЧ, выбранных из нуклеотидных ингибиторов обратной транскриптазы; ненуклеотидных ингибиторов обратной транскриптазы; ингибиторов протеазы; ингибиторов проникновения, присоединения и слияния; ингибиторов интегразы; ингибиторов созревания; ингибиторов CXCR4 и ингибиторов CCR5.
В следующих воплощениях соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль выбраны из соединений, приведенных в табл. 2.
Таблица 2
№ пр.
Исходная структура
Химическое название
Нэ°-ч //
4-{[(1R,2R,5R,10S,13R,14R,17S,
19R)-5-[(1R)-2-{[(4-
хлорфенил)метил][2-
(диметиламино)этил]амино}-1-
гид роксиэтил]-1,2,14,18,18-
пентаметил-7-оксо-8-(пропан-2-
ил)пентацикло-
[11.8.0.0Л{2,10}.0Л{5,9}.0Л{14,19}]-геникос-8-ен-17-ил]окси}-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота
нэс-/ ?
4-{[(1R,2R,5R,10S,13R,14R,17S,
19R)-5-[(1S)-2-{[(4-
хлорфенил)метил][2-
(диметиламино)этил]амино}-1-
гид роксиэтил]-1,2,14,18,18-
пентаметил-7-оксо-8-(пропан-2-
ил)пентацикло-
[11.8.0.0Л{2,10}.0Л{5,9}.0Л{14,19}]-геникос-8-ен-17-ил]окси}-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота
Приведенные в табл. 2 соединения синтезировали в соответствии со способами синтеза, общими схемами и примерами, описанными ниже.
Способы синтеза
В способах синтеза для предложенных химических соединений применяют легкодоступные исходные вещества, используя приведенные ниже общие методы и методики. Очевидно, что там, где приведены типичные или предпочтительные условия осуществления способов (т.е. температуры и продолжительности реакций, мольные соотношения реагентов, растворители, величины давления и т.д.), также можно использовать другие условия осуществления способов, если не указано иное. Оптимальные реакционные условия могут варьировать в зависимости от конкретных используемых реагентов или растворителя, однако такие условия могут быть определены специалистом в данной области техники с помощью обычных процедур оптимизации.
Кроме того, в способах по данному изобретению могут быть использованы защитные группы, которые предотвращают вступление некоторых функциональных групп в нежелательные реакции. Подходящие защитные группы для различных функциональных групп, а также подходящие условия введения защиты и удаления защиты с конкретных функциональных групп хорошо известны в данной области техники. Например, многочисленные защитные группы описаны в Т-W. Greene and G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999 и приведенных там ссылках.
Кроме того, предложенные химические соединения могут содержать один или более хиральных центров, и такие соединения могут быть получены или выделены в виде чистых стереоизомеров, т.е. в виде индивидуальных энантиомеров или диастереомеров, либо в виде обогащенных по стереоизомеру смесей. Все такие стереоизомеры (и обогащенные смеси) включены в объем этого описания, если не указано иное. Чистые стереоизомеры (или обогащенные смеси) можно получить, используя, например, оптически активные исходные вещества или стереоселективные реагенты, хорошо известные в данной области техники. Альтернативно, рацемические смеси таких соединений можно разделить, используя, например, хиральную колоночную хроматографию, хиральные разрешающие агенты и им подобное.
Исходные вещества для приведенных ниже реакций обычно представляют собой известные соединения или могут быть получены с использованием известных методик или их очевидных модификаций. Например, большинство исходных веществ поставляются коммерческими поставщиками, такими как Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin, USA), Bachem (Torrance, California, USA), Ernka-Chemce или Sigma (St. Louis, Missouri, USA). Другие могут быть получены с использованием методик или их очевидных модификаций, описанных в стандартных справочниках, таких как Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-15 (John Wiley and Sons, 1991), Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 and Supplementals (Elsevier Science Publishers, 1989), Organic Reactions, Volumes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991), March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 4th Edition) и Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989).
Если не указано иное, реакции, изложенные в данном описании, проводят при атмосферном давлении, обычно в температурном диапазоне от -78 до 200°С. Кроме того, за исключением некоторых случаев, реализованных в примерах или конкретизированных каким-либо иным образом, подразумевается, что продолжительности и условия реакций являются приблизительными, например протекают при примерно атмосферном давлении в температурном диапазоне от примерно -78 до примерно 110°С в течение периода времени от примерно 1 до примерно 24 ч; для реакций, оставленных на ночь, средний период времени составляет примерно 16 ч.
Каждый из терминов "растворитель", "органический растворитель" и "инертный растворитель" означает растворитель, являющийся инертным в условиях описываемой с его использованием реакции,
включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран (THF), диметилформамид (DMF), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), диэтиловый эфир, метанол, N-метилпирролидон (NMP), пиридин и им подобное.
Выделение и очистку химических соединений и промежуточных соединений, описанных в данном изобретении, при желании можно осуществить любым подходящим методом разделения или очистки, таким как, например, фильтрация, экстракция, кристаллизация, колоночная хроматография, тонкослойная хроматография или толстослойная хроматография или комбинация этих методов. Конкретные иллюстрации подходящих методов разделения и выделения можно увидеть в примерах, изложенных в данном описании ниже. Однако также можно использовать другие эквивалентные методы разделения или выделения.
При желании (R)- и ^)-изомеры могут быть разделены методами, известными специалистам в данной области техники, например посредством образования диастереоизомерных солей или комплексов, которые могут быть разделены, например, кристаллизацией; посредством образования диастереоизомер-ных производных, которые могут быть разделены, например, кристаллизацией, газо-жидкостной или жидкостной хроматографией; посредством избирательного взаимодействия одного энантиомера со специфичным к энантиомеру реагентом, например, с использованием ферментативного окисления или восстановления с последующим разделением модифицированных и немодифицированных энантиомеров; или посредством газо-жидкостной или жидкостной хроматографии в хиральной среде, например на хи-ральной подложке, такой как диоксид кремния со связанным хиральным лигандом, или в присутствии хирального растворителя. Альтернативно, можно синтезировать конкретный энантиомер путем асимметрического синтеза с использованием оптически активных реагентов, субстратов, катализаторов или растворителей или путем превращения одного энантиомера в другой в результате асимметрического преобразования.
Примеры
Следующие далее примеры служат для более полного описания способа реализации и применения описанного выше изобретения. Очевидно, что эти примеры никоим образом не служат для ограничения истинного объема изобретения, а скорее приведены в целях иллюстрации. Следующие далее сокращения в приведенных ниже примерах и приведенных выше схемах синтеза имеют указанные ниже значения. Если сокращение не определено, то оно имеет свое общепринятое значение:
водн.
водный;
мкл
микролитры;
мкМ
микромолярный;
ЯМР
ядерный магнитный резонанс;
Ьос
тре/тьбутоксикарбонил;
уширенный;
Cbz
бензилоксикарбонил;
дублет;
химический сдвиг;
градусы по Цельсию;
DCM
дихлорметан;
дублет дублетов;
модифицированная Дульбекко среда Игла;
1\1,1\1-диметилформамид;
диметилсульфоксид;
этилацетат;
грамм;
часы;
вирус гепатита С;
высокоэффективная жидкостная хроматография; герц,
международные единицы;
концентрация ингибитора при 50%-ом ингибировании;
константа спин-спинового взаимодействия (приведена в Гц,
если не указано иное);
мультиплет;
м+н+
мг мин мл мМ
ммоль
млн"1
q.s.
насыщ. t
TFA
молярный;
исходная масса, соответствующая пику в спектре, плюс Н+;
миллиграмм;
минута(ы);
миллилитр;
миллимолярный;
миллимоль;
масс-спектр;
наномолярный;
число частей на миллион;
достаточное количество;
синглет;
комнатная температура;
насыщенный;
триплет;
трифторуксусная кислота.
Описание оборудования
1Н ЯМР спектры регистрировали на спектрометре Avance-III 400 от Bruker. Химические сдвиги выражали в частях на миллион (млн-1, единицы 5). Константы спин-спинового взаимодействия выражены в герцах (Гц). Картины расщепления описаны видимыми мультиплетностями и обозначены как s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), quint (квинтет), m (мультиплет), br (уширенный).
Аналитические масс-спектры (МС) низкого разрешения регистрировали на Agilent 1200 HPLC/6110 или Agilent 1200 HPLC/6130, используя колонку SunFire C18, 4,6x50 мм, 3,5 мкм, с применение метода градиентного элюирования:
растворитель А: 0,01%-ная трифторуксусная кислота (TFA) в воде;
растворитель В: 0,01%-ная TFA в ацетонитриле;
непрерывно А в течение 1,2 мин, затем 5%-95% или 20%-95% В в течение 4 мин.
Схемы и экспериментальные методики
Следующие далее схемы и методики иллюстрируют то, как можно получить соединения по настоящему изобретению. Конкретные указанные растворители и реакционные условия также приведены для иллюстрации и не предполагают ограничения. Не описанные соединения либо приобретены, либо могут быть легко получены специалистом в данной области техники с использованием доступных исходных веществ. Примеры, изложенные в данном описании, приведены только в целях иллюстрации и не подразумевают ограничения объема данного изобретения. Соединения из всех примеров демонстрировали величины LHIV ИК50 от 1 мкМ до 1 нМ при использовании анализа, изложенного в данном описании.
Для некоторых из примеров стереохимия вторичного С28-спирта, если он имеется, не была однозначно подтверждена в качестве его абсолютной конфигурации. Если не указано иное, соединения, приведенные в качестве примера в настоящей заявке, выделяли в виде оптически чистых стереоизомеров и первоначально относили к конфигурациии, которая изображена. Возможно, что некоторые из них могут быть отмечены как имеющие противоположную стереохимию относительно этого единственного положения С28, которое показано. Это никоим образом не предназначено для ограничения объема изобретения или полезности соединений формулы I. Спектроскопическими методами, хорошо известными спе
циалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь этим, методы 1D- и ^-ЯМР, колебательный круговой дихроизм и рентгеноструктурную кристаллографию, было определено, что дополнительные соединения из примеров, содержащиеся в изобретении, имели показанную конфигурацию. Эти примеры и способы получения обоих диастереомеров должны служить четкому разъяснению того, что чистые стереоизомеры как R-, так и S-конфигурации в положении С28 легко получают, разделяют и характеризуют, а неопределенные конфигурации всех остальных соединений из примеров можно легко подтвердить аналогичными методами, хорошо известными специалисту в данной области техники.
Стадия А. Промежуточное соединение 2 ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aR,13bR)-9-ацетокси-5a,5b,8,8,11 a-пентаметил-1 -(проп-1 -ен-2-ил)икозагидро-1 Н-циклопента[а]хрисен-3а-ил)метил-ацетат.
К раствору промежуточного соединения 1 (20 г; 45,2 ммоль), 4-диметиламинопиридина (DMAP; 1,66 г; 13,6 ммоль) и Et3N (63 мл; 136 ммоль) в CH2Cl2 (DCM; 100 мл) при комнатной температуре добавляли уксусный ангидрид (Ас2О; 17,1 мл; 113 ммоль). Затем его нагревали при температуре дефлегмации в течение ночи и охлаждали до комнатной температуры, реакцию гасили водой (50 мл). Затем органическую фазу промывали водой (50 мл x2) и сушили над сульфатом натрия. После удаления большей части органического растворителя при пониженном давлении добавляли безводный этанол (50 мл) и полученные осадки собирали фильтрованием в виде белого твердого вещества (промежуточное соединение 2; 20 г; 84%).
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 млн-1 4.69 (1H, m), 4.59 (1H, m), 4.51-4.43 (1H, m), 4.25 (1Н, d, J = 11,2 Гц), 3.85 (1H, d, J = 10,8 Гц), 2.49-2.40 (1H, m), 2.07 (3Н, s), 2.04 (3Н, s), 1.98-0.77 (42Н, m). ЖХ/МС: m/z рассчитано 526,4; обнаружено 527,7 (М+1)+.
Стадия В. Промежуточное соединение 3 ((3aS,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-ацетокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-3а-ил)метилацетат.
HBr в уксусной кислоте (40 мл; 33%) добавляли к суспензии промежуточного соединения 2 (20 г; 38 ммоль) в толуоле (40 мл), Ас2О (40 мл) и уксусной кислоте (АсОН; 40 мл), предварительно нагретой при 105°С. Реакционную смесь перемешивали и нагревали при этой температуре в течение 1,5 ч. После охлаждения добавляли ацетат натрия (24 г) и полученную реакционную смесь упаривали досуха. Бледно-коричневый остаток переносили в DCM (200 мл), органическую фазу промывали водой (100 млх3), сушили над сульфатом натрия и упаривали досуха при пониженном давлении, получая остаток, который затем перекристаллизовывали из этанола (EtOH; 95%-й) и DCM, получая промежуточное соединение 3 (13,8 г; 69%) в виде белого твердого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 млн-1 4.50-4.46 (1H, m), 4.02 (1H, d, J = 10,8 Гц), 3.98 (1Н, d, J = 10,8
Гц), 3.18-3.10 (1Н, m), 2.43-2.40 (1Н, m), 2.26-2.22 (2Н, m), 2.04 (3Н, s), 2.05 (3Н, s), 2.00-1.95 (1H, m),
I. 90-1.85 (1Н, m), 1.77-0.83 (39Н, m). ЖХ/МС: m/z рассчитано 526,4; обнаружено 549,2 (M+Na)+.
Стадия С. Промежуточное соединение 4 ((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-ацетокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-3а-ил)метилацетат.
Смесь промежуточного соединения 3 (7 г; 13,29 ммоль), ацетата натрия (NaOAc; 6,21 г; 76 ммоль) и дигидрата дихромата натрия (4,75 г; 15,95 ммоль) в безводном толуоле (90 мл), АсОН (119 мл) и Ас2О (29 мл) перемешивали при 60°С в течение ночи. После охлаждения реакционную смесь распределяли между водой (150 мл) и этилацетатом (EtOAc; 250 мл). Органическую фазу последовательно промывали водой (100 мл), насыщенным раствором карбоната натрия (100 млх2) и рассолом (100 млх2), затем сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая вязкое масло. Это вязкое масло растирали с МеОН (250 мл) и собирали осадки, получая промежуточное соединение 4 (6 г;
II, 1 ммоль; 83%) в виде белого твердого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 млн-1 4.52-4.46 (1H, m), 4.33 (1H, d, J = 10,8 Гц), 4.06 (1Н, d, J = 11,2 Гц), 3.21-3.16 (1H, m), 2.86 (1Н, dd, J = 12,8; 3,2 Гц), 2.42-2.36 (1Н, m), 2.05 (3Н, s), 2.00 (3Н, s), 1.94-0.84 (40Н, m). ЖХ/МС: m/z рассчитано 540,4; обнаружено 563,3 (М+№)+.
Стадия D. Промежуточное соединение 5 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(гидроксиметил)-1-изопропил-5a,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
Смесь промежуточного соединения 4 (7 г; 12,94 ммоль) и гидроксида калия (KOH; 0,872 г; 15,5 ммоль) в EtOH (200 мл) и толуоле (200 мл) энергично перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализовали водным HCl (1н.) до рН 7 и упаривали досуха. Полученный остаток переносили в воду и небольшое количество ацетона. Осадки собирали, затем промывали водой и сушили в вакууме, получая промежуточное соединение 5 (6,0 г; 93%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z рассчитано 498,4; обнаружено 499,3 (М+1)+.
Стадия Е. Промежуточное соединение 6 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
К раствору промежуточного соединения 5 (5,1 г; 10,23 ммоль) в DCM (300 мл) при комнатной температуре добавляли хлорхромат пиридиния (РСС; 6,61 г; 30,7 ммоль) и силикагель (6,6 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем реакцию гасили водой, органическую фазу промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (100 мл), сушили над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле (EtOAc:PE (петролейный эфир) от 1:10 до 1:5), получая промежуточное соединение 6 (4,2 г; 83%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z рассчитано 496,4;
обнаружено 497,2 (М+1)+.
Синтез промежуточного оксобутаноата 10 осуществляли в соответствии со следующими методиками:
° Стадия А 8 Стадия В 9
DCM /\ ?
Стадия А. Промежуточное соединение 8 4-этокси-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота.
Раствор 3,3-диметилдигидрофуран-2,5-диона 7 (25 г; 195 ммоль) в безводном EtOH (150 мл) перемешивали при 50°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли при пониженном давлении с использованием роторного испарителя и остаток растирали с гексаном при -50°С, получая промежуточное соединение 8 (25 г; 133 ммоль; 67,9%) в виде белого твердого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 млн-1 4.13-4.18 (2Н, q, J = 7,2 Гц), 2.62 (2Н, s), 1.28 (6Н, s), 1.32-1.25 (3Н, t, J = 7,6 Гц). ЖХ/МС: m/z рассчитано 174,1; обнаружено 173,1 (М-1)-.
Стадия В. Промежуточное соединение 9 1-трет-бутил-4-этил-2,2-диметилсукцинат.
К смеси промежуточного соединения 8 (20 г; 109 ммоль), сульфата магния (52,5 г; 436 ммоль) и трет-бутанола (60 мл) в DCM (480 мл) добавляли серную кислоту (8,72 мл; 164 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия (300 мл) и воду (300 мл). Для экстрагирования желаемого продукта добавляли DCM, органическую фазу промывали рассолом, сушили и концентрировали, получая промежуточное соедине
ние 9 (19 г; 83 ммоль; 80%) в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 млн-1 4.02-4.08 (2Н, q, J = 7,2 Гц), 2.46 (2Н, s), 1.07 (9Н, s), 1.14-1.20 (9Н, m). ЖХ/МС: m/z рассчитано 230,2; обнаружено 253,1 (M+Na)+.
Стадия С. Промежуточное соединение 10 4-(трет-бутокси)-3,3-диметил-4-оксобутановая кислота.
К раствору промежуточного соединения 9 (10 г; 41,3 ммоль) в EtOH (200 мл) добавляли гидроксид калия (12,86 г; 206 ммоль) в воде (100 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Значение рН реакционной смеси подводили до 3-4, используя 1н. HCl. Полученный раствор экстрагировали эфиром (300 мл), эфирную фазу сушили и концентрировали с получением неочищенного продукта, который перекристаллизовывали из гексана при -10°С, получая промежуточное соединение 10 (4 г; 19,78 ммоль; 47,9%) в виде белого твердого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 5 млн-1 2.58 (2Н, s), 1.43 (9Н, s), 1.25 (6Н, s). ЖХ/МС: m/z рассчитано 202,1; обнаружено 201,1 (М-1)-.
Синтез диастереомерных промежуточных соединений 18 и 19
Стадия А. Промежуточное соединение 11 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
К смеси (3b)-21,28-диоксолап-18-ен-3-илацетата (6) (25 г; 50,3 ммоль) и нитрометана (150 мл; 2782 ммоль), перемешиваемой при комнатной температуре, добавляли триэтиламин (75 мл; 538 ммоль) в виде одной порции. Реакционную смесь перемешивали при кт в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и промывали смесью петролейный эфир/EtOAc (2:1; 100 мл), получая продукт (24 г; 43,0 ммоль; выход 85%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z рассчитано 557,4; обнаружено 558,2 (М+1)+.
Стадия В. Промежуточное соединение 12 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-амино-1-гидроксиэтил)-1 -изопропил-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12, 13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
К раствору соединения 11 (15,0 г; 26,9 ммоль) в метаноле (300 мл) добавляли NiCl2•6Н2О (9,59 г; 40,3 ммоль) при -5°С и медленно добавляли боргидрид натрия (10,17 г; 269 ммоль) при температуре примерно 5-10°С (внутренняя температура). Реакционную смесь перемешивали при -5°С (температура бани) в течение 30 мин. Затем смесь гасили насыщенным NH4Cl (200 мл), разбавляли EtOAc (1500 мл), затем перемешивали при кт в течение ночи. Органический слой промывали насыщенным NH4Cl (50 мл), водой (800 мл), рассолом (800 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением
твердого вещества, которое промывали петролейным эфиром, получая соединение 12 (14 г; 24,40 ммоль; выход 91%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z рассчитано 527,4; обнаружено 528,3 (М+1)+.
Стадия С. Промежуточное соединение 13 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
К раствору соединения 12 (8 г; 14,58 ммоль), триэтиламина (0,813 мл; 5,83 ммоль) и MgSO4 (2,63 г; 21,87 ммоль) в метаноле (225 мл), перемешиваемому при кт, добавляли 4-хлорбензальдегид (2,056 мл; 17,50 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 2 ч, затем охлаждали до -5°С, малыми порциями в течение 10 мин добавляли NaBH4 и перемешивали в течение 30 мин. После этого добавляли Вос2О (4,06 мл; 17,50 ммоль). Реакционную смесь нагревали до кт и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду (300 мл), твердые вещества собирали и сушили, получая соединение 13 (7 г; 8,56 ммоль; выход 58,7%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/z рассчитано 751,5; обнаружено 774,3 (M+Na)+.
Стадия D. Промежуточное соединение 14 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)ацетил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4, 5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
К смеси соединения 13 (25 г; 29,9 ммоль) в дихлорметане (200 мл) добавляли РСС (50 г; 232 ммоль) и силикагель (50 г). Эту смесь перемешивали при кт в течение ночи. Твердые вещества удаляли фильтрованием с получением черного раствора, который концентрировали и очищали колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гекс./EtOAc (10:1), получая соединение 14 (20 г; 23,99 ммоль; выход 80%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС: m/z рассчитано 749,4; обнаружено 772,2
(M+Na)+.
Стадия Е. Промежуточное соединение 15 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((4хлорбензил)амино)ацетил)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,9, 10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-2-он.
К раствору соединения 14 в 1,4-диоксане (200 мл) и метаноле (200 мл), перемешиваемому при кт, добавляли конц. HCl (100 мл) в виде одной порции. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 45°С. Реакционную смесь концентрировали и промывали ацетоном, получая соединение 15 (12,5 г; 17,45 ммоль; выход 87%) в виде белой пены. ЖХ/МС: m/z рассчитано 607,38; обнаружено 608,0 (М+1)+.
Стадия F. Промежуточное соединение 16 трет-бутил-4-хлорбензил-(2-((3aR,5aR,5bR,7aR, 9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10, 11,11a, 11b, 12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-3а-ил)-2-оксоэтил)карбамат.
К раствору соединения 15 (6 г; 9,86 ммоль) и Et3N (5,50 мл; 39,5 ммоль) в дихлорметане (30 мл), перемешиваемому при кт, добавляли Вос2О (2,290 мл; 9,86 ммоль) в виде одной порции. Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 2 ч. По данным ТСХ (тонкослойная хроматография) реакция завершилась. Растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт 16 (6 г; 8,47 ммоль; выход 86%) использовали без дополнительной очистки.
Стадия G. Промежуточное соединение 17 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)ацетил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5, 5a,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат.
К раствору соединения 10 (5,14 г; 25,4 ммоль), DMAP (5,17 г; 42,3 ммоль) и соединения 16 (6 г; 8,47 ммоль) в дихлорметане (50 мл), перемешиваемому при кт, добавляли EDC (8,12 г; 42,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт до исчезновения исходного вещества, что регистрировали по ТСХ. По завершении реакции смесь разбавляли CH2Cl2 и промывали водн. NH4Cl.
Органический слой сушили с использованием Na2SO4 и растворитель удаляли в вакууме. Вещество очищали хроматографией на силикагеле (re^^OAc, от 12:1 до 5:1), получая соединение 17 (5,4 г; 6,05 ммоль; выход 71,4%) в виде светло-белого твердого вещества. Протонный ЯМР показал, что оно состоит из смеси ротамеров.
1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 5 7.34-7.24 (m, 2Н), 7.23-7.08 (m, 2Н), 4.63-4.29 (m, 3Н), 4.11-3.39 (m, 2Н), 3.28-3.06 (m, 1Н), 2.69-0.69 (m, 68Н).
Стадия Н. Промежуточные соединения 18 и 19 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-(трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат (18) и 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5a,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат (19).
К раствору и соединения 17 (1,5 г; 1,680 ммоль) в метаноле (10 мл), и THF (10,00 мл), перемешиваемому при 0°С, добавляли NaBH4 (0,127 г; 3,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С до исчезновения исходного вещества (примерно 2 ч), что регистрировали по ТСХ. По завершении смесь разбавляли водой, экстрагировали EtOAc и органический слой сушили с использованием Na2SO4. Оста- 21
ток очищали хроматографией на силикагеле (гекс:ЕТОАс, от 7:1 до 5:1), получая диастереомер с S-конфигурацией 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((S)-2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлор-бензил)амино)-1 -гидроксиэтил)-1 -изопропил-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10, 11,11a,11b,12,13,13 а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1 -трет-бутил-2,2-диметилсукцината (18) (700 мг; 0,782 ммоль; выход 46,6%) и диастереомер с R-конфигурацией 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцината (19) (500 мг; 0,559 ммоль; выход 33,3%), оба в виде беловатых твердых веществ.
Для соединения 18: 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 7.40-7.24 (m, 2H), 7.18 (d, J = 8,3 Гц, 2Н), 4.87-4.57 (m, 1Н), 4.51 (dd, J = 5,3; 11,0 Гц, 1Н), 4.42-4.13 (m, 2Н), 3.43-3.05 (m, 3Н), 2.97-2.78 (m, 1H), 2.62-2.47 (m, 2Н), 2.47-2.29 (m, 1H), 2.01-0.70 (m, 64Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 893,6; обнаружено 916,5 (M+Na)+.
Для соединения 19: 1Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 7.36-7.23 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8,3 Гц, 2Н), 4.56-4.14 (m, 4Н), 3.45-3.18 (m, 1Н), 3.15-2.97 (m, 1Н), 2.76-0.71 (m, 69Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 893,6; обнаружено 916,7 (M+Na)+.
Пример 14. Соединение 46 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)ами-но)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b, 12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота
К раствору 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7, 7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1 -трет-бутил-2,2-диметил-сукцината (19) (300 мг; 0,335 ммоль) в DCM (30 мл), перемешиваемому при кт, добавляли TFA (15 мл; 195 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт, пока ЖХ-МС и ТСХ не показывали исчезновение исходного вещества (SM). Растворитель удаляли в вакууме и остаток очищали препаративной ВЭЖХ, получая 4-(((3 aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11 aR, 11 bR, 13 aS)-3 а-(^)-2-((4-хлорбензил)амино)-1 -гидроксиэтил)-1
изо^опил^^^^,! 1а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11bД2Д3Д3а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановую кислоту (46) (100 мг; 0,135 ммоль; выход 40,4%) в виде соли TFA.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 равны 7.38-7.18 (m, 4Н), 4.54-4.42 (m, 1Н), 4.28-4.14 (m, 1Н), 3.93-3.70 (m, 2Н), 3.19-3.00 (m, 1Н), 2.75-0.69 (m, 52Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 737,4; обнаружено 738,2 (М+1)+.
Пример 15. Соединение 47 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((S)-2-((4-хлорбензил)ами-но)-1 -гидроксиэтил)-1 -изопропил-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,9,10,1 lj^llb, 12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота
К раствору 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-((трет-бутоксикарбонил)-(4-хлорбензил)амино)-1 -гидроксиэтил)-1 -изопропил-5a,5b,8,8,11 а-пентаметил-2-оксо-3 ^,4,5^,5^6,7^,8, 9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1 -трет-бутил-2,2-диметил-сукцината (18) (130 мг; 0,145 ммоль) в DCM (30 мл), перемешиваемому при кт, добавляли TFA (15 мл; 195 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт, пока ЖХ-МС и ТСХ не показывали изчезновение исходного вещества. Растворитель выпаривали, затем добавляли CH3CN и H2O и вещество лиофилизиро-вали, получая соль трифторуксусной кислоты 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-((4-хлорбензил)амино)-1 -гидроксиэтил)-1 -изопропил-5а,5b,8,8,11 а-пентаметил-2-оксо-3 ^,4,5^,5^6,7^, 8,9,10,11,1^,11^12,13,13 а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобута-новую кислоту (47) (120 мг; 0,139 ммоль; выход 96%).
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 равны 10.30 (br. s., 1H), 8.08 (br. s., 1H), 7.38 (s, 4Н), 4.73-4.33 (m, 2Н), 4.28-4.07 (m, 2Н), 3.34-3.06 (m, 2Н), 2.99-2.74 (m, 2Н), 2.73-2.50 (m, 2Н), 2.48-2.29 (m, 1H), 2.05-0.64 (m, 47H); ЖХ/МС: m/z рассчитано 737,4; обнаружено 738,3 (M+l)+.
Пример 18. Соединение 51 4-(((3aR,5aR,5bR, 7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а, 5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота
К раствору гидрохлорида 2-(диметиламино)ацетальдегида (6,75 г; 54,6 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли соль трифторуксусной кислоты 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1 -гидроксиэтил)-1 -ИЗО^ОПИЛ^^Ь^^, 11 а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а, 8,9,10,11,11а,11b,12,13,13 а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобута-новую кислоту (46) (9,5 г; 10,92 ммоль). Значение рН подводили до 7-8, используя Et3N. Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 2 ч. Затем добавляли цианоборгидрид натрия (0,686 г; 10,92 ммоль) и смесь перемешивали при кт в течение ночи. После завершения реакции добавляли воду (15 мл) и EtOAc (15 мл), затем органическую фазу удаляли и концентрировали при пониженном давлении. Продукт экстрагировали EtOAc (80 млх3), объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили и концентрировали. Продукт очищали флэш-хроматографией (DCM:EtOAc, от 2:1 до 1:1; затем DCM:MeOH, от 100:1 до 20:1), получая 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4
хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13 а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановую кислоту (51) (6 г; 7,41 ммоль; выход 67,9%) в виде белого твердого вещества. Несколько партий этого вещества объединяли (общим весом 95 г), растворяли в 600 мл дихлорме-тана, промывали NaHCO3 (400 мл х3) и органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Твердые вещества промывали смесью EtOAc:петролейный эфир (600 мл) и фильтровали, получая после лиофилизации 62 г конечного указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-сЦ) 8 равны 7.47-7.29 (m, 4H), 4.48 (dd, J = 5,8; 10,3 Гц, 1Н), 4.15-4.04 (m, 1Н), 3.80 (d, J = 13,8 Гц, 1Н), 3.57 (d, J=14,1 Гц, 1Н), 3.21-2.82 (m, 5H), 2.72-2.41 (m, 9H), 2.37-2.05 (m, 4H), 2.05-0.74 (m, 45H); ЖХ/МС: m/z рассчитано 808,5; обнаружено 809,5 (M+l)+.
Пример 19. Соединение 56 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а, 5b,6,7,7a,8,9,10,11,11 a,11b,12,13,13a-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота
Стадия А. Соединение 52 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)ацетил)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-3,3а,4,5,5a,5b, 6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13 а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-2-он.
К раствору 2-(диметиламино)ацетальдегида (4,79 г; 38,8 ммоль) в метаноле (50 мл) и 1,2-дихлорэтане (DCE) (25 мл) добавляли paR^aR^bRJaR^SJlaRJlb^DaS)^-^-^-хлорбензиламино)ацетил)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-3а,4,5,5а,6,7,7а,8,9,10,11, 11а,11b,12,13,13а-гексадекагидро-3Н-циклопента[а]хрисен-2(5bH)-он (15) (5 г; 7,75 ммоль) при 0°С. Зна
чение рН подводили до 7, используя Et3N. Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 1 ч. Добавляли цианоборгидрид натрия (0,487 г; 7,75 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой (40 мл) и экстрагировали DCM (60 млх3). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над сульфатом натрия и фильтровали, получая неочищенный продукт (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-(2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)аце-тил)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-3а,4,5,5а,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-гексадекагидро-3Н-циклопента[а]хрисен-2(5bH)-он (52) (5 г; 5,89 ммоль, выход 76%) в виде светло-желтого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии. ЖХ/МС: m/z рассчитано 678,5; обнаружено 679,3 (М+1)+.
Стадия В. Соединение 53 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)ацетил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
К раствору 4-(трет-бутокси)-3,3-диметил-4-оксобутановой кислоты (11,91 г; 58,9 ммоль), N,N-диметилпиридин-4-амина (4,50 г; 36,8 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли EDC (11,29 г; 58,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 1 ч. Затем добавляли (3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aS)-3a-(2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)ацетил)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-2-он (52) (5 г; 7,36 ммоль). По завершении смесь промывали 2М HCl, водой и рассолом. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали, получая неочищенный продукт. Продукт очищали на колонке с силикагелем с использованием смеси дихлорметан/метанол (20:1), получая 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-(2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил) амино)ацетил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12, 13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (53) (1,8 г; 1,917 ммоль; выход 26,1%) в виде масла.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 равны 7.27 (s, 4H), 4.60-4.39 (m, 1H), 3.82 (d, J = 13,8 Гц, 1Н), 3.59 (d, J = 13,8 Гц, 1Н), 3.50-3.05 (m, 3Н), 2.82-2.63 (m, 2Н), 2.63-0.53 (m, 67Н).
Стадия С. Соединения 54 и 55 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5a,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (54) и 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((S)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5, 5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметил-сукцинат (55) К раствору 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-(2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)ацетил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а, 8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината (53) (1,5 г; 1,737 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли NaBH4 (0,131 г; 3,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 1 ч. Затем смесь экстрагировали DCM, промывали водой и рассолом. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали, получая неочищенный продукт. Его очищали препаративной ВЭЖХ, затем очищали СФЭ (сверхкритическая флюидная хроматография), получая соединение 54 (230 мг; 15%) и соединение 55 (360 мг; 23%).
Для соединения 54: !Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 равны 7.45-7.18 (m, 4H), 4.49 (dd, J = 5,6; 10,7 Гц, 1Н), 4.04 (d, J = 9,8 Гц, 1Н), 3.92-3.47 (m, 3Н), 3.46-0.45 (m, 72Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 864,6; обнаружено 865,4 (М+1)+.
Для соединения 55: !Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) 8 равны 7.37-7.19 (m, 4H), 4.50 (dd, J = 5,5; 10,5 Гц, 1Н), 4.18-3.98 (m, 1Н), 3.75 (d, J = 13,3 Гц, 1Н), 3.55 (d, J = 13,3 Гц, 1Н), 3.29-3.10 (m, 1Н), 3.102.97 (m, 1Н), 2.81-0.63 (m, 70Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 864,6; обнаружено 865,9 (М+1)+.
Стадия D. Соединение 56 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а, 5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота.
К раствору соединения 55 (360 мг; 0,416 ммоль) в DCM (5 мл), перемешиваемому при кт, добавляли TFA (2 мл; 26,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 1 ч. Смесь упаривали с получением неочищенного продукта. Это вещество очищали препаративной ВЭЖХ, получая указанное в заголовке соединение 56 как соль TFA (300 мг; 0,285 ммоль; выход 68,6%) в виде белого твердого вещества.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-d.,) 8 равны 7.58-7.34 (m, 4Н), 4.50 (dd, J = 5,0; 11,0 Гц, 1Н), 4.23-4.10 (m, 1Н), 4.09-3.74 (m, 2Н), 3.58-3.12 (m, 3Н), 3.12-2.37 (m, 10Н), 2.12-0.67 (m, 50Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 808,5; обнаружено 809,3 (М+1)+.
Стадия А. Промежуточное соединение 566 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадека-гидро-2Н-циклопента[а] хрисен-3а-карбальдегид.
(3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5a,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3^,4,5^,5^6,7^,8,9,10,11,1^,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат (50 г) помещали в круглодонную колбу с метанолом (500 мл; 10 об.) и DCM (дихлорметан; 200 мл; 4 об.) и перемешивали при температуре окружающей среды, добавляя при этом порциями твердый ZrCl4 (23,4 г; 1 экв.).
Реакционную смесь нагревали приблизительно до 60°С и выдерживали в общей сложности в течение 16 ч. Завершение реакции контролировали посредством ВЭЖХ (по исходному веществу и образованному в ходе реакции продукту - ацетальному производному). По завершении взаимодействия реакционную смесь обрабатывали водой (5 экв.) и выдерживали при 60° в течение приблизительно 30 мин.
Далее реакционную смесь охлаждали и упаривали под вакуумом при температуре бани приблизительно 40°С до 200 мл (4 об.). Добавляли этилацетат (500 мл; 10 об.) и после этого реакционную смесь обрабатывали 1н. HCl (250 мл; 5 об.). Затем реакционную смесь тщательно перемешивали и слои оставляли разделяться. Нижний водный слой сливали и еще раз промывали свежей порцией этилацетата (100 мл; 2 об.).
Объединенный органический слой промывали 1н. HCl (250 мл, 5 об.) и упаривали под вакуумом при температуре бани 40°С до 200 мл (4 об.) и затем обрабатывали ацетонитрилом (500 мл; 10 об.). После этого реакционную смесь упаривали до конечного объема приблизительно 150 мл (3 об.). Затем добавляли ацетонитрил (500 мл; 10 об.) и реакционную смесь нагревали до 60°С с образованием раствора. Далее медленно добавляли 3н. HCl (100 мл; 2 об.), что приводило к образованию осадка (см. примечание 2). Затем реакционную смесь оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды и после этого фильтровали. Отфильтрованное твердое вещество далее промывали ацетонитрилом (2 об.) и сушили в вакууме, получая по массе 33,0 г (выход 72%) (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,1 ^^^^а-о^^дека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-3а-карбальдегида.
Примечание 1. Выделенные твердые вещества содержали примесь в виде небольшого количества диметилацеталя продукта, что требовало проведения повторного суспендирования в нагретой смеси аце-тонитрил/3н. HCl для завершения гидролиза и приводило к потере продукта (после повторной обработки извлекали 27 г). Было установлено, что в процессе мониторинга реакционных суспензий во время заключительного гидролиза необходимо проведение фильтрования аликвоты реакционной смеси для обнаружения оставшегося диметилацеталя. Разбавление неочищенного реакционного раствора, содержащего ацетонитрил/водный HCl, для ВЭЖХ-мониторинга приводит к искусственно заниженным наблюдаемым уровням диметилацеталя вследствие гидролиза в препарате образца.
Примечание 2. Предпочтительная методика будет заключаться в добавлении части 3н. HCl (0,5 об.) и проведении реакции в растворе при приблизительно 60°С до завершения гидролиза диметилацеталя, затем добавлении остальной части (1,5 об.) 3н. HCl и охлаждении до температуры окружающей среды во время фильтрования. Ожидаемый выход составляет 72%.
Стадия В. Промежуточное соединение 567 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
(3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-3а-карбальдегид (26,9 г; 1 экв.), 4-(трет-бутокси)-3,3-диметил-4-оксобутановую кислоту (14,96 г; 1,25 экв.) и THF (538 мл; 20 об.) загружали в колбу. Добавляли бензоилхлорид (10,4 г; 1,25 экв.), затем медленно добавляли три-этиламин (14,97 г; 2,5 экв.) с образованием густой суспензии. Добавляли DMAP (0,1,81 г; 0,25 экв.) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение приблизительно 18 ч до завершения реакции по данным ВЭЖХ. Затем в реакционную смесь загружали этилаце-тат (538 мл; 20 об.) и воду (269 мл; 10 об.), хорошо перемешивали и оставляли отстаиваться. Водную фазу удаляли и органическую фазу промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 х10 об.), затем водой (269 мл; 10 об.). Реакционный раствор упаривали под вакуумом до приблизительно 4 об., получая твердые вещества. Дополнительно добавляли гексаны (269 мл; 10 об.), реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации, достигая почти полного растворения и медленно охлаждали до температуры окружающей среды (с внесением затравки желаемого продукта), оставляли перемешиваться в течение 15 мин, затем охлаждали до 0°С в течение приблизительно 2 ч и твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество промывали гексанами (2х10 об.) и сушили при 50°С под вакуумом, получая по массе 32,15 г (выход 85%) 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината.
Стадия С. Промежуточное соединение 569 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a, 8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
В реакционную смесь загружали 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9SД1aRД1bRД3aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (15,75 г; 1 экв.), трет-бутанол (157 мл; 10 об.) и толуол (47 мл; 3 об.) и перемешивали при температуре окружающей среды. Добавляли лиганд (N1,N2-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)этан-1,2-диамин, являющийся производным ^)-камфоры; 0,492 г; 0,06 экв.), и моногидрат ацетата меди(11) (0,246 г; 0,05 экв.) в виде одной порции и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение по меньшей мере 2,5 ч (см. примечание 1). В реакционную смесь загружали нитрометан (7,52 г; 5 экв.) и основание Хюнига ^^-диизопропилэтиламин; 3,82 г; 1,2 экв.) и оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение приблизительно 5 суток (см. примечание 2). Реакционную смесь концентрировали под вакуумом при температуре бани не более 35°С до приблизительно 2 об. (см. примечание 3). В реакционную смесь загружали толуол (236 мл; 15 об.) и снова концентрировали под вакуумом до приблизительно 3 об. Добавляли дополнительное количество толуола (95 мл; 3 об.), получая конечный объем реакционной смеси, равный приблизительно 6 об. К раствору медленно добавляли гептан (158 мл; 10 об.). После внесения затравки продукт начинал кристаллизоваться из раствора. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 1-2 ч, твердые вещества собирали фильтрованием и промывали 10 об. гептана. Твердые вещества сушили до массы 14,3 г (выход 83%). Чистота выделенного твердого вещества обычно составляет приблизительно 90-95% при диастереомерном соотношении 98/2 в пользу 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината как основного диастереомера.
Стадия D. Промежуточное соединение 570 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11, 1 la, 1 lb, 12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат.
1-трет-Бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопро
пил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (12,9 г; 18,4 ммоль) помещали в реактор с лопастной мешалкой емкостью 1 л затем добавляли 22 об. 90% THF-HOAc и перемешивали при температуре окружающей среды для растворения. Реактор 3 раза продували азотом, затем добавляли водную суспензию и затем промывали (рН приблизительно 8-9) катализатором RaNi (никель Ренея; 50% воды, 2,6 мл суспензии катализатора, 1,3 г в пересчете на RaNi) и далее помещали в атмосферу водорода при давлении 0,3 бар (30 кПа) на 3 ч, затем давление повышали до 2 бар (200 кПа) и оставляли перемешиваться в течение 18 ч. К этому времени реакция завершалась приблизительно на 20%. Температуру поднимали до 35°С, затем реакционную смесь перемешивали в течение еще 7 ч и отбирали пробу. К этому времени реакция завершалась приблизительно на 31%. Давление водорода в реакторе увеличивали до 4 бар (400 кПа) и перемешивание продолжали при 35°С в течение 20 ч. К этому времени реакция завершалась приблизительно на 75%, и никаких изменений в профиле примесей не наблюдали. Добавляли еще 0,15 мас.% RaNi (3,0 мл 50%-й суспензии), доводя общую загрузку RaNi до 25 мас.% и реакционную смесь оставляли перемешиваться при 35°С при давлении водорода 4 бар (400 кПа) в течение еще 24 ч. Далее используя ВЭЖХ подтверждали завершение реакции.
Затем реакционную смесь фильтровали через встроенный 4-микронный фильтр, промывая THF (50 мл). Упаривали до приблизительно 3 об., добавляли этилацетат (195 мл; 15 об.), промывали 1н. раствором NaOH (3х10 об.) и проверяли, чтобы значение рН заключительной промывки было щелочным. (Примечание: для получения эффективного разделения требовалось добавить для второй и третьей промывок по 0,5 об. насыщенного раствора NaCl). Промывали насыщенным раствором хлорида натрия (5 об.) и упаривали до состояния твердой пены, которую подвергали азеотропной перегонке с дихлормета-ном (2х5 об.) для получения твердой пены. Сушили, используя высоковакуумный насос, до массы 11,1 г (выход 90%).
Указанный выше образец (10,5 г) перекристаллизовывали путем растворения в метаноле (147 мл; 14 об.) при температуре дефлегмации и последующем охлаждении с внесением затравки до температуры окружающей среды и оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Далее смесь охлаждали до 15° и фильтровали. Твердые вещества собирали фильтрованием, промывали метанолом (1 об.) и сушили при 50° в вакууме, получая 7,5 г (выход 71% при перекристаллизации) 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2, 2 -диметилсукцината.
Стадия Е и F. Соединение 46 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8, 9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8, 11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат и пара-О-бензальдегид (1,1 экв.) помещали в кругло-донную колбу с EtOH (10 об.), добавляли порошок Na2CO3 (2,5 экв.) и оставляли перемешиваться в течение ночи (16 ч). На следующий день реакционную суспензию охлаждали до приблизительно 10°, к ней добавляли NaBH4 в виде одной порции и реакционную смесь оставляли перемешиваться с медленным нагреванием до температуры окружающей среды. Полученные данные ВЭЖХ показали, по существу, полное превращение в желаемый продукт через 45 мин, а также присутствие пара-О-бензилового спирта (с использованием поглощения на длине волны 220 нм). Затем реакционную смесь разбавляли метилен-хлоридом (30 мл; 10 об.) и водой (30 мл; 10 об.) и слои оставляли разделяться. Далее слой DCM промывали дополнительным количеством воды (10 об.), упаривали до минимального объема на роторном испарителе, снова добавляли DCM (10 об.), обрабатывали трифторуксусной кислотой (6 мл; 2 об.) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды. Реакция практически завершалась через 1 ч, но реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. По данным ВЭЖХ реакция завершалась через 18 ч и реакционную смесь упаривали до состояния масла.
Растворяли с нагреванием до приблизительно 45° в этилацетате (60 мл; 20 об.) и промывали раствором NaHCO3 (2х10 об.) для удаления оставшейся TFA. Затем промывали этилацетатом и полунасыщенным раствором NaCl, упаривали досуха и азеотропно сушили с изопропанолом (2х5 об.). Растворяли в изопропаноле (5 об.), разбавляли ацетонитрилом до точки помутнения (10 об.) и затем оставляли кристаллизоваться в течение ночи. Получали мутную смесь, но без отделяемых фильтрованием твердых веществ. Между тем в результате контрольной кристаллизации первоначально выделенного раствора соли TFA из смеси этилацетат-гептан получали хорошие твердые кристаллы.
Затем реакционную смесь целиком упаривали досуха и осуществяли азеотропную перегонку на роторном испарителе с несколькими порциями этилацетата (3х10 об.) для удаления всего изопропанола и ацетонитрила. Реакционную смесь растворяли с нагреванием до температуры дефлегмации в этилацетате (30 мл; 10 об.). Добавляли 1 экв. трифторуксусной кислоты (0,51 г) и медленно разбавляли гептаном до точки помутнения (15 мл; 3 об.). Вносили затравки с указанной выше контрольной кристаллизации. В
результате этого почти незамедлительно образовывались хорошие кристаллы. Перемешивали с охлаждением до температуры окружающей среды. Твердые вещества отфильтровывали и промывали гептаном (15 мл; 3 об.). Сушили на воронке до массы 2,55 г (выход 67%) 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5, 5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты.
Альтернативная методика
4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-Амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8, 8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат (7 г; 1 экв.) помещали в круглодонную колбу, добавляли порошок MgSO4 (2,5 экв.), Et3N (0,8 экв.), парахлорбензальдегид и МеОН (10 об.) и оставляли перемешиваться в течение ночи (16 ч). По прошествии этого времени отбирали аликвоту (0,5 мл) белой суспензии, обрабатывали приблизительно 25 мг NaBH4 и оставляли перемешиваться в течение 5 мин. Полученные данные ВЭЖХ для этой аликвоты показывали полное расходование исходного вещества, содержащего аминогруппу. Реакционную смесь охлаждали до 0° в бане с ледяным рассолом, обрабатывали твердым NaBH4 в виде одной порции (475 мг; 1,2 экв.) и оставляли перемешиваться при 0° в течение приблизительно 45 мин. По прошествии этого времени данные ВЭЖХ показывали завершение реакции. Реакционную смесь быстро нагревали до температуры окружающей среды и фильтровали через набивку целита. Твердое вещество дополнительно промывали метанолом (35 мл; 5 об.) и затем дихлорметаном (70 мл; 10 об.). Фильтрат/промывку затем обрабатывали водой (70 мл; 10 об.) и встряхивали в делительной воронке. Верхний водный слой хорошо промывали дополнительным количеством дихлорметана (3х5 об.) и затем объединенные органические слои промывали рассолом (10 об.). Органическую фазу упаривали до состояния твердой пены и осуществляли азеотропную перегонку с дихлорметаном. Растворяли в дихлорметане (70 мл; 10 об.), обрабатывали трифторуксусной кислотой (14 мл; 2 об.) и оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды. Реакция завершалась почти полностью приблизительно за 2 ч.
Реакционную смесь оставляли на выходные, и к этому моменту реакция завершалась. Реакционную смесь оставляли испаряться до минимального объема, затем добавляли этилацетат (10 об.) и снова упаривали до минимального объема. Эту процедуру упаривания до минимального объема повторяли и затем остаток растворяли в общей сложности в 10 об. этилацетата. Нагревали до температуры, близкой к температуре дефлегмации, разбавляли гептаном (5 об.) и перемешивали с охлаждением до температуры окружающей среды, при этом образовывались твердые вещества. Перемешивали в течение 30 мин и фильтровали. Промывали гептаном (3 об.) и сушили до получения 4,85 г (выход 63%) 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 1 laR, 11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты за две стадии.
Пример 498. Соединение 51
Стадия А. Промежуточное соединение 566 (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-3а-карбальдегид.
Соединение (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пента-метил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат (400 г; 0,81 моль) помещали в колбу с метанолом (4 л) и DCM (1,6 л) и перемешивали при температуре окружающей среды, добавляя при этом порциями твердый ZrCl4 (225,2 г; 0,97 моль). Реакционную смесь нагревали до приблизительно 45-55°С и выдерживали в общей сложности в течение приблизительно 30-36 ч. Завершение реакции контролировали по ВЭЖХ. По завершении взаимодействия реакционную смесь обрабатывали водой (5 экв.) и выдерживали при 60° в течение приблизительно 30 мин.
По завершении реакции реакционную смесь далее обрабатывали водой (120 мл) и выдерживали при приблизительно 45-55°С в течение приблизительно 30-60 мин. Затем реакционную смесь охлаждали и упаривали под вакуумом (при температуре бани приблизительно 40°С) до объема 1200 мл. Добавляли дихлорметан (4 л), реакционную смесь обрабатывали 1н. HCl (2 л), тщательно перемешивали и слои оставляли разделяться. После этого верхний водный слой промывали свежей порцией дихлорметана (800 мл). Далее объединенный органический слой промывали 1н. HCl (2 л), упаривали под вакуумом (при температуре бани 40°С) до объема 800 мл и обрабатывали ацетонитрилом (4 л).
Затем реакционную смесь упаривали (при температуре бани 40°С) до конечного объема приблизительно 800 мл. Добавляли ацетонитрил (3,2 л) и реакционную смесь нагревали до приблизительно 50-60°С, в результате чего образовывался раствор. Далее медленно добавляли 3н. HCl (100 мл), что приводило к образованию осадка, и продолжали проводить реакцию в растворе при приблизительно 50-60°С, пока не завершался гидролиз диметилацеталя, после чего добавляли воду (4,8 л).
Реакционную смесь оставляли охлаждаться до 0-10°С, затем смесь фильтровали и полученное твердое вещество промывали смесью ацетонитрил/вода (1/1; 800 мл). Твердое вещество затем суспендировали в 10 об. гептана при приблизительно 85-100°С в течение приблизительно 1-3 ч. Затем суспензию охлаждали до температуры окружающей среды и фильтровали. Осадок на фильтре промывали 800 мл гептана, затем сушили в вакууме при приблизительно 40-50°С, получая 286 г 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11 bR, 13aS)-3а-формил-1 -изо^опил^^^^,! 1 а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11, 11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината. Выход с поправкой на анализ составляет 72,6%.
!Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 равны 9.33 (s, 1H), 3.20-3.28 (m, 2H), 2.57 (d, J = 1Н), 2.36-2.42 (m, 2Н),
2.04-2.08 (m, 2Н), 1.86-1.90 (m, 2Н), 1.75-1.78 (m, 1Н), 1.23-1.66 (m, 35Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 454,3; обнаружено 455,4 (М+1)+.
Стадия В. Промежуточное соединение 567 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
Исходное вещество (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-3а-карбальдегид (32,4 г; 71 ммоль), 4-(трет-бутокси)-3,3-диметил-4-оксобутановую кислоту (18 г; 89 ммоль) и THF (648 мл) загружали в колбу. Добавляли бензоилхлорид (12,5 г; 89 ммоль), затем медленно добавляли триэтиламин (18 г; 178 ммоль) с образованием густой суспензии. Добавляли DMAP (2,17 г; 18 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение приблизительно 24-30 ч до завершения реакции по данным ВЭЖХ. Затем в реакционную смесь загружали этилацетат (648 мл) и воду (324 мл), хорошо перемешивали и оставляли отстаиваться. Водную фазу удаляли и органическую фазу промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (2х324 мл), затем водой (324 мл).
Затем реакционный раствор упаривали под вакуумом до приблизительно 129 мл, получая твердые вещества. Дополнительно добавляли гептан (324 мл) и реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации, достигая почти полного растворения, медленно охлаждали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 15 мин, затем охлаждали до 0°С в течение приблизительно 2 ч и твердые вещества отфильтровывали. Твердые вещества далее промывали гептаном (2х324 мл) и сушили при 50°С под вакуумом, получая желаемое соединение 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR, 13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11a-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b, 12,13,13a-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат в виде беловатого твердого вещества (36,8 г; выход составляет 80%).
!Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 равны 9.24 (s, 1Н), 4.41-4.45 (m, 1Н), 3.19-3.20 (m, 1Н), 2.33-2.48 (m, 5Н), 0.96-1.60 (m, 37Н), 0.77-0.87 (m, 17Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 638,4; обнаружено 639,4 (М+1)+.
Стадия С. Промежуточное соединение 569 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 9,10,11,1 la, 11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
В реакционную смесь загружали 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (50 г; 78 ммоль), трет-бутанол (500 мл) и толуол (150 мл) и температуру подводили до 20-25°С. Добавляли лиганд (Ш,№-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)этан-1,2-диамин) (1,56 г; 4,7 ммоль) и ацетат меди(1) (0,48 г; 3,9 ммоль) в виде одной порции и реакционную смесь далее перемешивали при 20-25°С в течение 3-5 ч.
Затем реакционную смесь оставляли охлаждаться до 7-13°С. В реакционную смесь далее загружали нитрометан (33 г; 0,55 ммоль) и ^^диизопропилэтиламин (12,1 г; 94 ммоль) и оставляли перемешиваться при 7-13°С в течение приблизительно 30 ч. В реакционную смесь снова загружали нитрометан (17 г; 0,3 ммоль) и оставляли перемешиваться при 7-13°С в течение приблизительно 40 ч. В реакционную смесь еще раз загружали нитрометан (17 г; 0,3 ммоль) и оставляли перемешиваться при 7-13°С в течение приблизительно 20 ч.
Далее в реакционную смесь загружали МТВЕ (трет-бутилметиловый эфир) (750 мл) и 15%-й раствор хлорида аммония (300 мл), оставляли перемешиваться в течение 30 мин и после этого проводили разделение на две фазы. Органическую фазу промывали водой (250 мл), затем рассолом (200 мл). Органическую фазу затем концентрировали до 100 мл и добавляли МТВЕ (25 мл). Далее медленно добавляли н-гептан (500 мл) и затем перемешивали при 10-20°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь фильтровали, промывали н-гептаном и затем сушили под вакуумом при 50-55°С, получая 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пента-метил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат в виде беловатого твердого вещества (41,6 г). Выход составляет 75,9%.
!Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 равны 4.85 (bd, 1Н), 4.51-4.55 (dd, 1Н), 4.08-4.20 (m, 2Н), 3.15-3.22 (m, 1Н), 2.35-2.83 (m, 6Н), 0.80-2.03 (m, 54Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 699,4; обнаружено 700,4 (М+1)+.
Стадия D. Промежуточное соединение 570 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a, 11,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат.
К 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинату (30 г; 42,6 ммоль) в THF (600 мл) и АсОН (30 мл) в атмосфере N2 при комнатной температуре добавляли Ni Ренея (30 г; 5%). Реакционную смесь перемешивали при 45-55°С в атмосфере газообразного водорода (0,30-0,40 МПа) в течение 10-12 ч. Реакционную смесь фильтровали через устройство для фильтрации, промывая THF (2х90 мл), и рН фильтрата подво
дили до 7-8, используя 5%-й водный K2CO3.
Далее к реакционной смеси добавляли этилацетат (450 мл) и две фазы разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (150 мл). Объединенную органическую фазу дважды промывали 7,5%-м водным NaCl (300 мл) и затем промывали 17%-м водным NaCl (300 мл). Органическую фазу концентрировали под вакуумом, получая 25,7 г 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13, 13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцината. Выход составляет 92%.
!Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8 равны 4.40-4.44 (dd, 1H), 3.79-3.80 (bd, 1Н), 3.59-3.62 (m, 2Н), 3.123.17 (m, 2Н), 2.60-2.75 (m, 1Н), 2.22-2.34 (m, 2Н), 2.19-2.22 (m, 2Н), 1.37-1.84 (m, 25Н), 1.08-1.11 (m, 17Н), 0.81-0.91 (m, 13Н); ЖХ/МС: m/z рассчитано 669,5; обнаружено 670,4 (М+1)+.
Стадия Е. Промежуточное соединение 571 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5, 5а,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметил-сукцинат.
К раствору 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцината в THF (5 г; 7,6 ммоль в 100 мл THF) добавляли 4-хлорбензальдегид (0,96 г; 6,84 ммоль) и затем перемешивали при температуре от -2 до 2°С в течение 0,5 ч. Далее к реакционной смеси добавляли NaHB(OAc)3 (3,53 г; 16,7 ммоль) и перемешивали при температуре от -2 до 2°С в течение 0,5 ч. Реакционую смесь затем нагревали до 3-7°С и снова перемешивали при 3-7°С в течение 10-15 ч и далее перемешивали при 8-12°С в течение 5-8 ч.
Реакцию гасили насыщенным NH4Cl (водным) (50 мл) и водой (20 мл) и затем перемешивали при приблизительно 10-20°С в течение 0,5 ч. Реакционную смесь далее экстрагировали МТВЕ (75 мл) и водный слой экстрагировали МТВЕ (25 мл). Объединенную органическую фазу промывали водой (25 мл) и рН подводили до 7-8, используя 5%-й водный K2CO3. Органическую фазу отделяли и дважды промывали 7,5%-м водным NaCl (50 мл) и затем промывали 20%-м водным NaCl (50 мл). Органическую фазу снова концентрировали под вакуумом до приблизительно 20 мл. Добавляли дополнительно DCM (60 мл) и концентрировали под вакуумом до приблизительно 20 мл. Вновь добавляли дополнительное количество DCM (60 мл) и концентрировали под вакуумом до приблизительно 20 мл. Вновь добавляли дополнительное количество DCM (60 мл) и концентрировали под вакуумом до приблизительно 20 мл. Затем загружали 50 мл МеОН и еще раз концентрировали под вакуумом до приблизительно 20 мл. Загружали дополнительно 50 мл МеОН, получая раствор 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8, 9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината в МеОН. Эту смесь использовали непосредственно на следующей стадии.
!Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8 равны 0.81-1.78 (m, 49Н),1.91 (s, 6Н), 2.18-2.20 (m, 2Н), 2.32-2.37 (m, 3Н), 3.02-3.08 (m, 2Н), 3.56-3.62 (m, 4Н), 4.00-4.04 (d, 1H), 4.12-4.15 (d, 1H), 4.27-4.40 (m,1H), 4.39-4.43 (m, 1H), 7.43-7.45 (d, 2Н), 7.52-7.54 (d, 2H). ЖХ/МС: m/z рассчитано 793,5; обнаружено 794,4 (М+1)+.
Стадия F. Промежуточное соединение 54 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5a,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хри-сен-9 -ил) -2, 2 -диметилсукцинат.
В реактор добавляли раствор 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлорбензил) амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а, 11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината (55 г; 69,3 ммоль), растворенного в метаноле (825 мл), соль гидросульфита натрия диметиламиноацетальдегида (66,8 г; 0,35 моль) и Et3N (38,7 г; 0,38 моль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2-3 ч при 30-40°С под защитой азота. Добавляли NaBH3CN (8,8 г; 0,14 моль) и перемешивали при 30-40°С под защитой азота в течение 13-15 ч. Далее температуру реакционной смеси доводили до 50-60°С и перемешивали в течение 3-5 ч. Затем реакционную смесь концентрировали до 275 мл и после этого добавляли DCM (550 мл), далее воду (440 мл). Две фазы разделяли и водную фазу экстрагировали DCM (дважды, используя каждый раз по 385 мл). Органическую фазу промывали водой (дважды, используя каждый раз по 358 мл). Далее органическую фазу концентрировали, получая 43 г 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината в виде масла. Выход составляет 71%.
!Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) 8 7.27-7.29 (m, 4H), 4.46-4.50 (m, 1H), 4.08-4.13 (m, 2H), 4.00-4.02 (m, 1H), 3.59-3.60 (m, 1H), 3.09 (m, 1Н), 2.03-2.67 (m, 14H), 0.62-1.42 (m, 57H). ЖХ/МС: m/z рассчитано 864,5; обнаружено 865,6 (М+1)+.
Стадия G. Соединение 51 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2
(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5a, 5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13a-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота.
1-трет-Бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино) этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10, 11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (0,8 г; 0,92 ммоль) с предыдущей стадии растворяли в 3,2 мл DCM, затем в раствор загружали 1,6 мл TFA.
Затем реакционную смесь перемешивали при 15-25°С в течение приблизительно 1-3 ч. Далее в реакционную смесь загружали 4 мл DCM и 4 мл воды, хорошо перемешивали и затем оставляли отстаиваться. После этого водную фазу удаляли и органическую фазу дважды промывали водой (каждый раз по 4 мл). Затем водную фазу экстрагировали DCM (1,6 мл). Объединенную органическую фазу далее промывали насыщенным бикарбонатом натрия до рН в диапазоне 7-8, затем выполняли еще две промывки водой (каждый раз по 4 мл).
Далее органическую фазу упаривали под вакуумом, получая 0,69 г неочищенного продукта. Затем неочищенный продукт растворяли в 4,8 мл изопропанола и нагревали до температуры дефлегмации для растворения всего вещества. Добавляли ацетонитрил (19 мл), доводили до слабого кипения (с обратным холодильником) и оставляли охлаждаться, внося 2 мг вещества затравки при 45°С. Затем смесь перемешивали при 45°С в течение 2 ч. Начинали образовываться твердые вещества, их охлаждали до приблизительно 10-20°С и перемешивали в течение 3 ч. Находящиеся в растворе твердые вещества отфильтровывали и затем промывали дважды, используя каждый раз по 1 г ацетонитрила.
Затем твердые вещества сушили в вакуумном сушильном шкафу при 45°С в течение 18 ч, получая желаемый продукт 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R))-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметил-амино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8, 9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобута-новую кислоту (0,59 г; выход составлял 78%).
Пример 499. Соединение 51
Методики для стадий А и D, ниже, не включены и аналогичны тем, которые приведены в предыдущих примерах и будут понятны специалисту в данной области техники.
Стадия В. Промежуточное соединение 567 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
Исходное вещество (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-9-гидрокси-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хри-сен-3а-карбальдегид (5 г; 11 ммоль), 4-(трет-бутокси)-3,3-диметил-4-оксобутановую кислоту (3,4 г; 16,5 ммоль), THF (тетрагидрофуран; 100 мл) и триэтиламин (3,4 г; 33 ммоль) загружали в колбу.
Затем смесь перемешивали в течение приблизительно 20-30 мин при приблизительно 0-5°С. После этого через капельную воронку добавляли 4-метоксибензоилхлорид (2,8 г; 16,5 ммоль), поддерживая температуру реакционной смеси на уровне приблизительно 0-5°С. Далее реакционную смесь перемешивали в течение еще 1 ч, затем добавляли DMAP (диметиламинопиридин; 0,2 г; 1,65 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение приблизительно 24-30 ч до завершения реакции по данным ВЭЖХ.
Далее в реакционную смесь загружали этилацетат (100 мл) и воду (50 мл), хорошо перемешивали и оставляли отстаиваться. Водную фазу удаляли и органическую фазу промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (2х50 мл), затем водой (50 мл). Реакционный раствор упаривали под вакуумом до приблизительно 5-10 мл с получением твердых веществ. Добавляли дополнительное количество гептана (50 мл) и реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации, достигая почти полного растворения, медленно охлаждали до температуры окружающей среды и оставляли перемешиваться в течение 15 мин, затем охлаждали до 0°С в течение приблизительно 2 ч и твердые вещества отфильтровывали. Далее твердые вещества промывали гептаном (2х 50 мл) и сушили при 50°С под вакуумом, получая желаемое соединение 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хри-сен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат в виде беловатого твердого вещества (4,7 г; выход составляет 67%).
Стадия С. Промежуточное соединение 569 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8, 9,10,11,1 la, 11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
В реакционную смесь загружали 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (6 г; 9,4 ммоль), трет-бутанол (60 мл) и толуол (18 мл) и температуру подводили до 20-25°С. Добавляли лиганд (Ш,№-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)этан-1,2-диамин (0,2 г; 0,57 ммоль)) и ацетат меди(1) (0,06 г; 0,47 ммоль) в виде одной порции и реакционную смесь оставляли перемешиваться при 20-25°С в течение 3-5 ч.
Затем реакционную смесь охлаждали до температуры 7-13°С. После этого в реакционную смесь загружали нитрометан (3,9 г; 63 ммоль) и оставляли перемешиваться при 7-13°С в течение приблизительно 30 ч. В реакционную смесь загружали дополнительное количество нитрометана (2,2 г; 35,7 ммоль) и оставляли перемешиваться при 7-13°С в течение приблизительно 40 ч. В реакционную смесь снова загружали дополнительное количество нитрометана (2,2 г; 35,7 ммоль) и оставляли перемешиваться при 7-13°С в течение приблизительно 20 ч.
Далее в реакционную смесь загружали МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир; 90 мл) и 15%-й раствор хлорида аммония (36 мл), оставляли перемешиваться в течение 30 мин и затем оставляли разделяться на две фазы. Органическую фазу промывали водой (30 мл), после чего рассолом (24 мл). Затем органическую фазу концентрировали до 12 мл и добавляли МТВЕ (3 мл). Далее медленно добавляли н-гептан (60 мл) и затем перемешивали при 10-20°С в течение 2 ч. После этого раствор фильтровали и промывали н-гептаном, осадок на фильтре затем сушили под вакуумом при 50-55°С, получая 4,27 г 4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пента-метил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината в виде беловатого твердого вещества (выход 65%).
Стадия Е. Промежуточное соединение 571 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат.
4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8, 8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-9-ил)-1-трет-бутил-2,2-диметилсукцинат (15 г; 22,4 ммоль) помещали в круглодонную колбу и затем в нее также добавляли следующее: порошок MgSO4 (8,1 г; 56 ммоль) и Et3N (3,6 г; 35,8 ммоль) и добавляли п-хлорбензальдегид (5,05 г; 29,1 ммоль) и МеОН (300 мл). После этого реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 2 ч.
Затем реакционную смесь охлаждали до 0°С в бане с ледяным рассолом, обрабатывали твердым NaBH4 (1,61 г; 42,56 ммоль) при 10°С и оставляли перемешиваться при 20° в течение приблизительно 45 мин. По прошествии этого времени данные ВЭЖХ показывали завершение реакции. Затем реакционную смесь фильтровали через набивку Celite(tm). Твердые вещества промывали дополнительно метанолом (75 мл) и затем дихлорметаном (150 мл). Фильтрат/промывку обрабатывали водой (150 мл) и встряхивали в делительной воронке. Органические слои затем промывали водой (150 мл). Далее органическую фазу
упаривали, получая 15 г 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил) амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11, 11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцината в виде пенообразного твердого вещества с выходом 84%. Неочищенный продукт использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия F. Соединение 46 соль 2,2,2-трифторуксусной кислоты (1:1) 4-(((3aR,5aR,5bR, 7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хри-сен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота.
Растворяли 1-трет-бутил-4-((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12, 13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)-2,2-диметилсукцинат (15 г; 18,9 ммоль) в дихлор-метане (150 мл), обрабатывали трифторуксусной кислотой (30 мл) и оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды. Реакция завершалась приблизительно через 10 ч. Далее реакционную смесь промывали водой (2х 150 мл), органическую фазу упаривали до минимального объема, добавляли этилацетат (об. 150 мл) и затем снова упаривали до минимального объема. Еще раз упаривали до минимального объема и затем содержимое растворяли в объеме 150 мл этилацетата.
Далее полученный раствор нагревали до температуры, близкой к температуре дефлегмации, затем разбавляли гептаном (90 мл) и перемешивали, охлаждая до температуры окружающей среды, при которой образовывались твердые вещества. Затем раствор перемешивали в течение 30 мин и фильтровали. Отфильтрованные твердые вещества промывали гептаном (30 мл) и сушили, получая 13 г соли 2,2,2-трифторуксусной кислоты (1:1) 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)ами-но)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11a, 11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты с выходом 81%.
!Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8 равны 0.60-1.89 (m, 46H), 2.16-2.19 (d, 1Н), 2.32-2.68 (m, 4Н), 3.023.11 (m, 1Н), 4.10-4.26 (m, 3Н), 4.38-4.42 (dd, 1H), 5.93 (s, 1H), 7.51 (s, 4H), 8.80-8.98 (d, 2H); LC-MS: m/z рассчитано (свободное основание) 737,4; обнаружено 738,1 (М+1)+.
Стадия G. Соединение 51 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а, 5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислота.
Соль трифторуксусной кислоты 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4-хлор-бензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9, 10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты с приведенной выше стадии F (9,0 г; 10,56 ммоль) помещали в круглодонную колбу, добавляли соль гидросульфита диметиламиноацетальдегида (5,05 г; 26,4 ммоль) и CH3COONa (3,46 г; 42,23 ммоль), добавляли МеОН (180 мл) и оставляли перемешиваться в течение 1 ч.
К реакционной смеси добавляли NaBH3CN (2,65 г; 42,23 ммоль) и оставляли перемешиваться при 25°С в течение приблизительно 36 ч. По прошествии этого времени данные ВЭЖХ показали завершение реакции. Далее реакционную смесь фильтровали через набивку Celite(tm). Твердые вещества затем промывали дополнительно метанолом (45 мл) и затем дихлорметаном (90 мл). Фильтрат/промывку обрабатывали водой (45 мл) и встряхивали в делительной воронке. Затем органические слои промывали NaHCO3 (4 раза, каждый раз по 45 мл) и водой (два раза, каждый раз по 45 мл).
Затем органическую фазу упаривали до минимального объема, добавляли i-PrOH (36 мл) и нагревали до 75°С в течение 2 ч. Полученный раствор далее разбавляли CH3CN (45 мл) при 75°С. После этого раствор затем охлаждали до 5°С в течение 4 ч. Затем раствор перемешивали при 5°С в течение 2 ч и фильтровали. Далее фильтрат промывали CH3CN (9 мл) и сушили, получая неочищенную 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,За,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12, 13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановую кислоту (5,6 г; выход 65%).
Перекристаллизация
Неочищенную 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((R)-2-((4-хлорбензил)-(2-(диметил-амино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а, 8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобута-новую кислоту (5,6 г) с приведенной выше стадии G помещали в круглодонную колбу, добавляли i-PrOH (36 мл) и нагревали до 75°С в течение 2 ч. Далее реакционную смесь разбавляли CH3CN (45 мл) при 75°С. Затем реакционную смесь охлаждали до 5°С в течение 4 ч.
Затем реакционную смесь перемешивали при 5°С в течение 2 ч и фильтровали. Фильтрат далее промывали CH3CN (9 мл) и сушили, получая 4,8 г 4-(((3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((R)-2-((4
хлорбензил)-(2-(диметиламино)этил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-ил)окси)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты с выходом 84%.
!Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 8 равны 0.80-0.29 (m, 14H), 0.97-1.17 (m, 21Н), 1.32-1.91 (m, 13), 2.082.23 (m, 12Н), 2.27-2.38 (m, 3Н), 2.40-2.46 (m, 1Н), 2.51-2.20 (m, 1Н), 2.66-2.70 (m, 1Н), 3.00-3.04 (m, 1.0Н), 3.71-3.78(m, 1Н), 3.89-3.91(d, 1Н), 4.37-4.41(dd, 1Н), 7.31-7.37 (m, 4Н); LC-MS: m/z рассчитано 808,5; обнаружено 809,1 (М+1)+.
Лиганд 572 на
основе (Я)-камфоры
(3aR,5aR,5bR,7aR,9S, 11 aR 11 bR, 13aS)-3а-((S)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-9-илацетат.
(3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-формил-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат (2,0 г; 4,03 ммоль) помещали в колбу с н-BuOH (10 мл) с диаминным катализатором, являющимся производным от диаминного катализатора ^)-камфоры, (Ш^2-бис(1,7,7-триметилбицикло[2.2Л]гептан-2-ил)этан-1,2-диамином; 0,08 г; 0,242 ммоль) и Cu(ОАс)2 (0,037 г; 0,201 ммоль) и перемешивали приблизительно 16 ч при температуре окружающей среды. Затем реакционную смесь охлаждали до приблизительно 0°С и обрабатывали нитрометаном (1,23 г; 20,1 ммоль) и основанием Хюнига (^^диизопропилэтиламин; 0,053 г; 0,40 ммоль) и выдерживали при 5°С в течение 24 ч. Добавляли дополнительное количество BuOH (25 мл) и основания Хюнига (^^диизопропилэтиламин) и реакционную смесь выдерживали при -10°С в течение 24 ч и затем при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Твердые вещества, присутствующие в реакционной смеси, отфильтровывали, получая указанное в заголовке соединение в виде беловатого твердого вещества (1,1 г; 49% в виде смеси диастереомеров в соотношении приблизительно 95:5).
!Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 8 равны 4.89 (bd, 1Н), 4.57 (d, 1H), 4.49 (dd, 1H), 4.34 (dd, 1H), 3.21 (m, 1H), 2.94 (dd, 1H), 2.38 (m, 2Н), от 2.08 до 0.8 (m, 54H)*. Примечание: в области от 2.4 до 0.8 ввиду наличия примесей в образце наблюдается полное слияние спектра.
(3aR,5aR,5bR, 7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3а-((S)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а, 5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента [а]хрисен-9-илацетат.
В колбу, содержащую (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-1-гидрокси-2-нитроэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат (приблизительно на 95% единственный диастереомер с предыдущей стадии получения промежуточного соединения 11S; 0,5 г; 0,89 ммоль) в метаноле, и охлажденную до -5°С, добавляли NiCl2 (0,232 г; 1,79 ммоль). Содержимое перемешивали и обрабатывали NaBH4 (0,475 г; 12,5 ммоль), который медленно добавляли порциями в течение 30 мин, поддерживая температуру приблизительно -5°С.
Сильная экзотермическая реакция приводила к некоторой потере вещества. Реакционную смесь медленно в течение 30 мин нагревали до температуры окружающей среды и оставляли перемешиваться в течение приблизительно 2 ч. Затем реакционную смесь гасили раствором NH4Cl и разбавляли метилен-хлоридом. Слои жидкостей разделяли и органический слой несколько раз промывали раствором NH4Cl. Далее органический слой упаривали досуха, остаток хроматографировали на колонке с силикагелем и элюировали 10%-м метанолом в дихлорметане. Фракции, содержащие продукт, упаривали, получая указанное в заголовке соединение в виде серого твердого вещества (250 мг; выход 53%). Образец использовали на следующей стадии без дальнейшего определения характеристик.
(3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-((4-хлорбензил)амино)-1-гидроксиэтил)-1-изопро-пил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,9,10,11,11a,11b,12,13,13а-октадекагидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат.
В колбу, содержащую (3aR,5aR,5bR,7aR,9S,11aR,11bR,13aS)-3a-((S)-2-амино-1-гидроксиэтил)-1-изопропил-5а,5b,8,8,11а-пентаметил-2-оксо-3,3а,4,5,5а,5b,6,7,7а,8,9,10,11,11а,11b,12,13,13а-октадека-гидро-2Н-циклопента[а]хрисен-9-илацетат (200 мг; 379 ммоль) и метанол (15 мл), добавляли триэтила-мин (15 мг; 0,152 ммоль), сульфат магния (68 мг; 0,168 ммоль) и 4-хлорбензальдегид (64 мг; 0,455 ммоль). Содержимое оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение приблизительно 2 ч. К полученной смеси добавляли боргидрид натрия (17 мг; 455 ммоль) в виде одной порции и реакционную смесь оставляли перемешиваться при температуре окружающей среды в течение двух с половиной суток. Затем в реакционную смесь загружали дополнительно 20%-й избыток п-Cl-бензальдегида и боргидрида натрия и оставляли перемешиваться в течение еще 2 ч. По окончании реакционную смесь гасили водой, оставляли перемешиваться в течение 15 мин и твердые вещества отфильтровывали, получая указанное в заголовке соединение, загрязненное примесями. ЖХ/МС: m/z рассчитано 651,4; обнаружено 652 (М+1)+.
Стадия А. ^№-бис(изоборнил)этилендиимин (573).
Изопропилат титана(1У) (235,4 г; 830 ммоль; 1,04 экв.) добавляли в колбу, содержащую (1S)-(-)-камфору (121,43 г; 798 ммоль; 1 экв.) при температуре окружающей среды. Затем реакционную смесь нагревали до приблизительно 50°С. Далее в реакционную смесь загружали этилендиамин (31,2 г; 518 ммоль; 0,65 экв.). При этом в процессе добавления температуру поддерживали выше 45°С. Затем реакционную смесь нагревали до приблизительно 91°С в течение 17 ч. Далее реакционную смесь охлаждали до 20-25°С и добавляли гептан (1,2 л). Добавляли воду (29,9 г; 1659 ммоль; 2,08 экв.) в течение по меньшей мере 15 мин. Затем суспензию перемешивали в течение 20 мин при температуре окружающей среды, охлаждали до приблизительно 0°С и перемешивали в течение 30 мин при приблизительно 0°С. Затем суспензию фильтровали и твердые вещества промывали гептаном (607 мл). Раствор диимина выдерживали при приблизительно 5°С в течение ночи. Затем раствор нагревали до температуры окружающей среды и фильтровали для удаления дополнительно выпавших солей. Далее раствор частично концентрировали и фильтровали через Celite(tm). Наконец, раствор концентрировали до объема приблизительно 608 мл и использовали в таком виде в следующей реакции.
Стадия В. ^№-бис(изоборнил)этилендиамин лиганд (568).
В лабораторный реактор с рубашкой (JLR) емкостью 1 л добавляли указанный выше раствор диимина, затем 5%-ный Pt/C (Johnson-Matthey; В501018-5; 6,6 г). Реакционную смесь гидрировали в течение приблизительно 15 ч при давлении 4 бар (400 кПа) при температуре окружающей среды. Реакционную смесь фильтровали и промывали гептаном (300 мл). Раствор концентрировали, получая белое твердое вещество (115,07 г). Эту двухстадийную методику повторяли. Обе партии объединяли. Попытки кристаллизовать вещество из i-PrOH и воды не увенчались успехом. Продукт экстрагировали гептаном. Геп-тановый слой затем промывали водой, рассолом, сушили над сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали на роторном испарителе и затем в высоком вакууме. Продукт 568 (222,18 г) получали в виде белого твердого вещества и использовали в таком виде в асимметрической реакции Генри при проведении стадии присоединения лиганда на основе камфоры.
!Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) 8 равны 2.69-2.61 (m, 1H), 2.53-2.47 (m, 2Н), 1.71-1.63 (m, 2Н), 1.6-1.43 (m, 3Н), 1.1-1.01 (m, 2Н), 1.01-0.98 (m, 3Н), 0.89-0.83 (m, 3Н), 0.81-0.78 (m, 3Н).
Синтез хирального диаминного лиганда 572 на основе (Я)-камфоры
\/ 1) 5% Р1/С, Н2100 ф/кв.
1) этилендиамин (0,65 экв.) |\. ДЮЙМ (690 кПа)
Ti(Oi-Pr)4, кипяч. с обр. хол. f -^--^
2) гептан, Н20
-^/Ч ^ \Х
N N Tetrahedron: Asymmetry,
(1 R)-(+)-KaMcpopa 574 Это вещество получали, используя модификации способов, изложенных 14 (2003) 1451-1454.
Стадия А. ^№бис(изоборнил)этилендиимин (574).
Изопропилат титана (100 мл; 341 ммоль; 1,04 экв.) загружали в круглодонную колбу, содержащую (Ж)-(+)-камфору (50 г; 328 ммоль) при 20-25°С. Затем реакционную смесь нагревали до 50°С и в это время в реакционную смесь загружали этилендиамин (14,3 мл; 213 ммоль; 0,65 экв.). Примечание: добавление этилендиамина вызывало экзотермический эффект, но чтобы предотвратить отвердевание реакционной смеси вследствие образования комплексов титан/этилендиамин, важно проводить загрузку при температуре выше 45°С. Затем раствор нагревали до температуры дефлегмации (приблизительно 90-92°С) в течение 20-24 ч. На тот момент реакционную смесь охлаждали до 20-25°С и разбавляли гептаном (500 мл), затем медленно добавляли Н2О (12,3 мл; 2,08 экв.) в течение приблизительно 15 мин для стимуляции образования TiO2 в реакционной смеси (и последующего выпадения в осадок из нее). Суспензию перемешивали в течение 20 мин при 20-25°С, охлаждали до 0°С и перемешивали в течение 20 мин при 0°С. Наконец, осадок отфильтровывали и промывали гептаном (250 мл), получая раствор диимина (573) в гептане, который концентрировали до 250 мл гептана (приблизительно 4,6 об.) перед применением на последующей стадии гидрирования.
Стадия В. ^№бис(изоборнил)этилендиаминный лиганд (572).
Катализатор из желтого набора от Johnson-Matthey № 28 (5%-ная Pt/C, В501018-5) (2,7 г; 5 мас.% относительно соединения 6) загружали в сосуд Парра, после чего добавляли раствор диимина (6) в гептане (приблизительно 54 г в 250 мл гептана). Реакционную смесь гидрировали в течение 15 ч при давлении Н2 100 ф/кв.дюйм (690 кПа) и 20°С, после чего по данным ЖХ-МС обнаруживали только продукт. Затем смесь фильтровали через набивку целита и промывали гептаном (130 мл). Растворитель в фильтрате заменяли с гептанов на изопропанол (270 мл; 5 об.), после чего загружали воду (86 мл; 1,5 об.) и реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации для растворения всего продукта. Медленное охлаждение раствора до 20°С вызывало кристаллизацию продукта. Загружали дополнительное количество воды (200 мл; 3,7 об.) в течение 15 мин и реакционную смесь выдерживали в течение еще 20 мин. Затем суспензию охлаждали до 0°С и выдерживали в течение 30 мин, после чего продукт отфильтровывали и промывали при 0°С смесью 1:1 вода/изопропанол (130 мл), получая после сушки в течение ночи 46,05 г
соединения (572) (84,3%).
Указанные выше промежуточные соединения 11S, 12S и 13S служат для демонстрации применения асимметрической реакции Генри на стадии с использованием лиганда на основе камфоры для получения S-спиртовой группы на полезном промежуточном соединении с выходом и селективностью, соответствующими более ранним примерам для получения R-диастереомерного спирта. Специалисту в данной области будет очевидно, что эту методологию можно применять в сочетании с соответствующими каркасами на основе тритерпенов для получения либо R-, либо S-диастереомера после выбора соответствующего диаминного хирального лиганда на основе камфоры в условиях, приведенных в данном описании. Кроме того, показано, что вышеупомянутые промежуточные нитроспирты, как в виде смеси диастерео-мерных спиртов, так и в оптически обогащенной форме, являются полезными для получения соединений по настоящему изобретению.
После приведенного выше описания методик синтеза соединений, изложенных в данном описании, в соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения соединения по настоящему изобретению, имеющего структуру
включающий стадии:
(1) омыление соединения, имеющего структуру
(2) взаимодействие соединения, являющегося продуктом стадии (1), с соединением, имеющим структуру
в присутствии хлорангидрида кислоты и третичного амина с получением соединения, имеющего структуру
(3) взаимодействие нитрометана с соединением, являющимся продуктом стадии (2), в присутствии хирального лиганда, необязательного основания и второго металлического катализатора с получением соединения, имеющего структуру
(6) подкисление соединения, являющегося продуктом стадии (5), в присутствии кислоты с получением соединения, имеющего структуру
(7) взаимодействие соединения, являющегося продуктом стадии (6), с соединением, имеющим структуру, соответствующую формуле III
где А1 или возможно отсутствует, или выбран из группы, состоящей из -Н, метила и этила; и А2 выбран из группы, состоящей из -Н, метокси, этокси, гидроксила и -SO3-Na+, в присутствии гидрида металла с получением соединения, имеющего структуру
Как будет известно специалисту в данной области техники после ознакомления с методиками синтеза, изложенными в данном описании, и стадиями способа, описанными выше и ниже, для осуществления стадий этого способа могут быть использованы различные подходящие химические компоненты. Такие подходящие химические компоненты могут быть использованы взаимозаменяемо с использованием описания любой стадии способа, изложенного в данном изобретении, в соответствии с информацией, известной из данной области техники.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где одну или более чем одну из стадий (1)-(7) проводят в присутствии растворителя.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где одну или более чем одну из стадий (1)-(7) проводят в присутствии органического растворителя.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где одну или более чем одну из стадий (1)-(7) проводят в присутствии растворителя, выбранного из группы, состоящей из воды, дихлорметила, метанола, тетрагидрофурана, тетрагидрофурана ацетата, этанола, этилацетата, гептана, изопропанола, трет-бутанола, толуола, ацетонитрила и трет-бутилметилового эфира.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где первый металлический катализатор со стадии (1) представляет собой галогенид металла.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения
указанного выше соединения по настоящему изобретению, где первый металлический катализатор со стадии (1) представляет собой тетрахлорид циркония.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где хлорангидрид кислоты со стадии (2) выбран из группы, состоящей из бензоилхлорида и метоксибензоилхлорида.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где хлорангидрид кислоты со стадии (2) представляет собой метоксибензоилхлорид.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (2) представляет собой третичный амин, являющийся агентом сочетания.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (2) выбран из группы, состоящей из триэтиламина, ^^диизопропилэтиламина и гидрохлорида 1-этил-3-[3-диметил-аминопропил]карбодиимида.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (2) представляет собой гидрохлорид 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (2) представляет собой триэтиламин.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где второй металлический катализатор со стадии (3) представляет собой соединение, содержащее металл, выбранный из группы, состоящей из Zn, Co, Cu, Mg и Cr.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где второй металлический катализатор со стадии (3) представляет собой соединение, содержащее металл, выбранный из группы, состоящей из Cu(I) и Cu(II).
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где второй металлический катализатор со стадии (3) представляет собой соединение, содержащее Cu(I).
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где второй металлический катализатор со стадии (3) выбран из группы, состоящей из ацетата меди(!) и ацетата Cu(II).
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где второй металлический катализатор со стадии (3) представляет собой ацетат меди(!).
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где второй металлический катализатор со стадии (3) представляет собой ацетат меди(П).
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где необязательное основание со стадии (3) выбрано из группы, состоящей из гидроксидов щелочных металлов, алкоголятов, карбонатов, фторид-анионов и неионных органических аминных оснований.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где необязательное основание со стадии (3) представляет собой изо-Рг^Б1.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где хиральный лиганд со стадии (3) представляет собой производное S-камфоры.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третий металлический катализатор со стадии (4) выбран из группы, состоящей из никеля Ренея, никеля, хлорида никеля, алюминия, палладия,
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где хиральный лиганд со стадии (3) представляет собой соединение, имеющее структуру
меди, цинка, хрома, иридия, родия, платины и их комбинаций.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третий металлический катализатор со стадии (4) представляет собой никель Ренея.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где водород со стадии (4) представляет собой газообразный водород.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) представляет собой боргидрид.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) выбран из группы, состоящей из NaBH4 и NaBH(OAc)3.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) представляет собой NaBH4.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) представляет собой NaBH(OAc)3.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где кислота со стадии (6) выбрана из группы, состоящей из трифторуксусной кислоты, HCl и трихлоруксусной кислоты.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где кислота со стадии (6) представляет собой трифторуксусную кислоту.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где А2 со стадии (7) представляет собой -SO3Na.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где А2 со стадии (7) представляет собой -Н.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где А1 со стадии (7) отсутствует.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где А1 со стадии (7) представляет собой -Н.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где соединение формулы III со стадии (7) имеет следующую структуру:
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где соединение формулы III со стадии (7) имеет следующую структуру:
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где соединение формулы III со стадии (7) имеет следующую структуру:
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где соединение формулы III со стадии (7) имеет следующую структуру:
указанного выше соединения по настоящему изобретению, где соединение формулы III со стадии (7) имеет следующую структуру:
,о-сн2сн3
4N'~
о-сн2сн3
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (7) представляет собой боргидрид.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (7) представляет собой NaBH3CN.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения соединения по настоящему изобретению, имеющего структуру
включающий стадии:
(1) омыление соединения, имеющего структуру
в присутствии первого металлического катализатора с получением соединения, имеющего структуру
(2) взаимодействие соединения, являющегося продуктом стадии (1), с соединением, имеющим структуру
в присутствии хлорангидрида кислоты и третичного амина с получением соединения, имеющего структуру
(3) взаимодействие нитрометана с соединением, являющимся продуктом стадии (2), в присутствии хирального лиганда и основания и второго металлического катализатора с получением соединения, имеющего структуру
где А1 или возможно отсутствует, или выбран из группы, состоящей из -Н, метила и этила; и А2 выбран из группы, состоящей из -Н, метокси, этокси, гидроксила и -SO3-Na+, в присутствии гидрида металла с получением соединения, имеющего структуру
Применительно к методикам синтеза в данном описании и в соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения также предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где одну или более чем одну из стадий (1)-(7) проводят в присутствии растворителя.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где одну или более чем одну из стадий (1)-(7) проводят в присутствии органического растворителя.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где одну или более чем одну из стадий (1)-(7) проводят в присутствии растворителя, выбранного из группы, состоящей из воды, дихлорметила, метанола, тетрагидрофурана, тетрагидрофурана ацетата, этанола, этилацетата, гептана, изопропанола, трет-бутанола, толуола, ацетонитрила и трет-бутилметилового эфира.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где основание со стадии (3) выбрано из группы, состоящей из гидроксидов щелочных металлов, алкоголятов, карбонатов, фторид-анионов и неионных органических аминных оснований.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где основание со стадии (3) представляет собой изо-Рг2№;1
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (5) выбран из группы, состоящей из триэтиламина и гидрохлорида 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (5) представляет собой триэтиламин.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) представляет собой боргидрид.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) выбран из группы, состоящей из NaBH4 и NaBH(OAc)3.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где гидрид металла со стадии (5) представляет собой NaBH4.
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения указанного выше соединения по настоящему изобретению, где третичный амин со стадии (6) представляет собой триэтиламин.
включающий стадии:
(1) взаимодействие соединения, имеющего структуру
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения предложен способ получения соединения по настоящему изобретению, имеющего структуру
где А1 или возможно отсутствует, или выбран из группы, состоящей из -Н, метила и этила; и А2 выбран из группы, состоящей из -Н, метокси, этокси, гидроксила и -SO3-Na+, в присутствии гидрида металла с получением соединения, имеющего структуру
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения и подходящими компонентами для стадий способа, перечисленными выше, предложен способ получения соединения по настоящему изобретению, имеющего структуру
включающий стадии:
в присутствии кислоты с получением соединения, имеющего структуру
(1) подкисление соединения, имеющего структуру
в присутствии гидрида металла с получением соединения, имеющего структуру
включающий стадии:
(1) восстановление соединения, имеющего структуру
включающий стадии:
(1) взаимодействие нитрометана с соединением, имеющим структуру
в присутствии хирального лиганда и металлического катализатора с получением соединения, имеющего структуру
для стадий способа, перечисленными выше, раскрыт способ получения соединения, имеющего структуру
включающий стадии: (1) взаимодействие соединения, имеющего структуру
в присутствии хлорангидрида кислоты и третичного амина с получением соединения, имеющего струк-
туру
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения и подходящими компонентами для стадий способа, перечисленными выше, раскрыт способ получения соединения, имеющего структуру
включающий стадии: (1) омыление соединения, имеющего структуру
в присутствии металлического катализатора с получением соединения, имеющего структуру
В соответствии с другими воплощениями настоящего изобретения и подходящими компонентами для стадий способа, перечисленными выше, предложен способ получения соединения по настоящему изобретению, имеющего структуру
включающий стадии согласно приведенной ниже схеме синтеза. Как будет известно специалисту в данной области техники, перечисленные выше в других схемах синтеза реагенты могут быть заменены в рамках приведенной ниже схемы синтеза, как описано выше.
Введение композиций и технология их изготовления
В другом воплощении предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый разбавитель и терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли.
Соединения по настоящему изобретению могут поставляться в форме фармацевтически приемлемой соли. Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Соответственно, подразумевается, что слово "или" в контексте "соединения или его фармацевтически приемлемой соли" относится либо
к соединению или его фармацевтически приемлемой соли (как альтернативы), либо к соединению и его фармацевтически приемлемой соли (в комбинации).
Использованный в данном описании термин "фармацевтически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и лекарственным формам, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без излишних токсичности, раздражения или других проблем или осложнений. Специалисту в данной области будет очевидно, что можно получить фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению. Такие фармацевтически приемлемые соли могут быть получены in situ в процессе конечного выделения и очистки соединения или в результате взаимодействия по отдельности очищенного соединения в форме своей свободной кислоты или своего свободного основания с подходящими основанием или кислотой соответственно.
Иллюстративные фармацевтически приемлемые получаемые присоединением кислоты соли соединений по настоящему изобретению могут быть получены из следующих кислот, включая, без ограничения, муравьиную, уксусную, пропионовую, бензойную, янтарную, гликолевую, глюконовую, молочную, малеиновую, яблочную, винную, лимонную, азотную, аскорбиновую, глюкуроновую, малеиновую, фу-маровую, пировиноградную, аспарагиновую, глутаминовую, бензойную, соляную, бромисто-водородную, йодисто-водородную, изолимонную, трифторуксусную, памовую, пропионовую, антрани-ловую, мезиловую, щавелевоуксусную, олеиновую, стеариновую, салициловую, п-гидроксибензойную, никотиновую, фенилуксусную, миндальную, эмбоновую (памовую), метансульфоновую, ортофосфор-ную, фосфоновую, этансульфоновую, бензолсульфоновую, пантотеновую, толуолсульфоновую, 2-гидроксиэтансульфоновую, сульфаниловую, серную, салициловую, циклогексиламиносульфоновую, альгеновую, р-гидроксимасляную, галактуровую и галактуроновую кислоты. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли включают соли соляной кислоты и трифторуксусной кислоты.
Иллюстративные фармацевтически приемлемые, получаемые присоединением неорганических оснований соли соединений по настоящему изобретению включают ионы металлов. Более предпочтительные ионы металлов включают, но не ограничиваются этим, соответствующие соли щелочных металлов, соли щелочно-земельных металлов и других физиологически приемлемых ионов металлов. Соли, происходящие из неорганических оснований, включают соли алюминия, аммония, кальция, меди, трехвалентного железа, двухвалентного железа, лития, магния, манганаты, соли двухвалентного марганца, калия, натрия, цинка и тому подобного и в их обычных валентностях. Типичные основные соли включают соли алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия и цинка. Другие типичные основные соли включают соли аммония, кальция, магния, калия и натрия. Следующие типичные основные соли включают, например, гидроксиды, карбонаты, гидриды и алкоголяты, включая соли на основе NaOH, KOH, Na2CO3, K2CO3, NaH и трет-бутилата калия.
Соли, происходящие из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, в том числе триметиламина, диэтиламина, ^№-дибензилэтилендиамина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамиана, меглумина (N-метилглюкамина) и прокаина; замещенных аминов, в том числе природных замещенных аминов; циклических аминов; четвертичных катионов аммония; и основных ионообменных смол, такие как соли аргинина, бетаина, кофеина, холина, ^^дибензилэтилендиамина, диэтиламина, 2-диэтиламиноэтанола, 2-диметиламиноэтанола, этаноламина, этилендиамина, N-этилморфолина, N-этилпиперидина, глюкамина, глюкозамина, гистидина, гидрабамина, изопропиламина, лизина, метилглюкамина, морфолина, пипера-зина, пиперидина, полиаминных смол, прокаина, пуринов, теобромина, триэтиламина, триметиламина, трипропиламина, трометамина и им подобные.
Все вышеупомянутые соли могут быть получены специалистами в данной области техники традиционными способами из соответствующего соединения по настоящему изобретению. Например, фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению могут быть синтезированы традиционными химическими методами из исходного соединения, содержащего основную или кислотную группировку. В общем случае такие соли могут быть получены в результате взаимодействия этих соединений в формах свободной кислоты или свободного основания со стехиометрическим количеством соответствующе-го(ей) основания или кислоты в воде либо в органическом растворителе или в смеси их обоих; как правило, предпочтительными являются неводные среды типа простого эфира, этилацетата, этанола, изопро-панола или ацетонитрила. Соль можно осаждать из раствора и собирать фильтрованием или можно извлекать путем выпаривания растворителя. Степень диссоциации соли может варьировать от полностью диссоциированной до практически недиссоциированной формы. Перечни подходящих солей находятся в работе Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, описание которой тем самым включено посредством ссылки только в отношении перечней подходящих солей.
Соединения по изобретению могут существовать как в несольватированной, так и в сольватирован-ной формах. Термин "сольват" используется в данном описании для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение по изобретению и одну или большее число молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола. Термин "гидрат" применяют в случае, когда указанным раство
рителем является вода. Фармацевтически приемлемые сольваты включают гидраты и другие сольваты, причем растворителем для кристаллизации может быть изотопно замещенный растворитель, например D2O, (^-ацетон, d6-DMSO.
Соединения по настоящему изобретению содержат один или более асимметрических атомов углерода и могут существовать в виде двух или более стереоизомеров. Когда соединение по настоящему изобретению содержит алкенильную или алкениленовую группу или циклоалкильную группу, возможны геометрические цис/транс- (или Z/E) изомеры. Когда соединение содержит, например, группу кето или оксима либо ароматическую группировку, может иметь место таутомерная изомерия (таутомерия). Из этого следует, что индивидуальное соединение может иметь более одного типа изомерии.
В пределы объема заявленных соединений по настоящему изобретению включены все стереоизоме-ры, геометрические изомеры и таутомерные формы соединений по настоящему изобретению, в том числе соединения, демонстрирующие более одного типа изомерии, и смеси одного или более из них. Также включены соли присоединения кислоты или соли с основаниями, где противоион является оптически активным, например, как в солях D-лактата или L-лизина, или рацемическим, например, как в солях DL-тартрата или DL-аргинина.
цис/транс-Изомеры могут быть разделены традиционными методами, хорошо известными специалистам в данной области техники, например хроматографией и фракционной кристаллизацией.
Традиционные методы получения/выделения индивидуальных энантиомеров включают хиральный синтез из подходящего оптически чистого предшественника или разделение рацемата (или рацемата соли или производного) с использованием, например, хиральной жидкостной хроматографии высокого давления (ВЭЖХ).
Альтернативно, рацемат (или рацемический предшественник) может быть приведен во взаимодействие с подходящим оптически активным соединением, например спиртом или, когда соединение по настоящему изобретению содержит кислотную или основную группировку, с кислотой или основанием, такими как винная кислота или 1-фенилэтиламин. Полученную диастереомерную смесь можно разделить хроматографией и/или фракционной кристаллизацией и один или оба из диастереоизомеров можно превратить в соответствующий(ие) чистый(ые) энантиомер(ы) способами, хорошо известными специалисту.
Хиральные соединения по изобретению (и их хиральные предшественники) можно получить в энантиомерно обогащенной форме, используя хроматографию, обычно ВЭЖХ, на смоле с асимметрической неподвижной фазой и с подвижной фазой, состоящей из углеводорода, обычно гептана или гексана, содержащего 0-50% изопропанола, обычно 2-20%, и 0-5% алкиламина, обычно 0,1% диэтиламина. После концентрирования элюата получают обогащенную смесь.
Смеси стереоизомеров могут быть разделены традиционными методами, известными специалистам в данной области техники (см., например, E.L. Eliel, "Stereochemistry of Organic Compounds" (Wiley, New York, 1994).)
Настоящее изобретение включает все фармацевтически приемлемые меченные изотопом соединения по настоящему изобретению, в которых один или более атомов заменены атомами, имеющими один и тот же атомный номер, но атомную массу или массовое число, отличающиеся от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе.
Примеры изотопов, подходящих для включения в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, такие как 2Н и 3Н, углерода, такие как !1С, 13С и 14С, хлора, такие как 36Cl, фтора, такие как 18F, йода, такие как 123I и 125I, азота, такие как 13N и 15N, кислорода, такие как 15О, 17О и 18О, фосфора, такие как 32Р, и серы, такие как 35S.
Некоторые меченные изотопом соединения по настоящему изобретению, например те, в которые включен радиоактивный изотоп, полезны в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Радиоактивные изотопы трития, т.е. 3Н, и углерода-14, т.е. 14С, особенно полезны для этой цели ввиду простоты их включения и доступных средств обнаружения.
Замена на более тяжелые изотопы, такие как дейтерий, т.е. 2Н, может давать некоторые терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например увеличенный in vivo период полувыведения или снижение дозировки, и поэтому может быть предпочтительной в некоторых обстоятельствах.
В общем случае, меченные изотопом соединения по настоящему изобретению могут быть получены традиционными методами, известными специалистам в данной области техники, или способами, аналогичными описанным в сопроводительных примерах и подготовительных примерах, в которых вместо ранее используемого немеченого реагента применяют соответствующие меченные изотопом реагенты.
Соединения по настоящему изобретению можно вводить в виде пролекарств. Так, некоторые производные соединений по настоящему изобретению, которые сами по себе могут обладать незначительной или не обладать никакой фармакологической активностью, при введении в организм или нанесении на тело будут превращаться в соединения по настоящему изобретению, как это делают "про лекарства".
Введение химических соединений, описанных в данном изобретении, может быть осуществлено любым из способов введения, принятых для средств, используемых при аналогичных состояниях, в том числе, но не ограничиваясь этим, перорально, сублингвально, подкожно, внутривенно, интраназально,
местно, трансдермально, внутрибрюшинно, внутримышечно, внутрилегочно, внутривлагалищно, рек-тально или интраокулярно. В некоторых воплощениях используют пероральное или парентеральное введение.
Фармацевтические композиции или препараты включают твердые, полутвердые, жидкие и аэрозольные лекарственные формы, такие как, например, таблетки, капсулы, порошки, жидкости, суспензии, суппозитории, аэрозоли или им подобные. Химические соединения также можно вводить в лекарственных формах с длительным или контролируемым высвобождением, включая инъекционные депо-препараты, осмотические насосы, пилюли, трансдермальные (включая электротранспортные) пластыри и им подобное, для пролонгированного и/или рассчитанного по времени, импульсного введения с заданной скоростью. В некоторых воплощениях предложены композиции в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точной дозы.
Химические соединения, описанные в данном изобретении, можно вводить или отдельно, или, что более типично, в комбинации с традиционным фармацевтическим носителем, эксципиентом или им подобным (например, маннитом, лактозой, крахмалом, стеаратом магния, сахарином натрия, тальком, целлюлозой, кроскармелозой натрия, глюкозой, желатином, сахарозой, карбонатом магния и им подобным). При желании, фармацевтическая композиция также может содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как увлажняющие агенты, эмульгирующие агенты, солюбили-зирующие агенты, рН буферные агенты и им подобные (например, ацетат натрия, цитрат натрия, производные циклодекстрина, монолаурат сорбитана, ацетат триэтаноламина, олеат триэтаноламина и им подобное). Как правило, в зависимости от предполагаемого способа введения фармацевтическая композиция будет содержать примерно от 0,005 до 95%, в некоторых воплощениях примерно от 0,5 до 50 мас.% химического соединения. Существующие способы изготовления таких лекарственных форм известны или будут очевидны специалистам в данной области; например, см. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.
В некоторых воплощениях композиции будут иметь форму пилюли или таблетки, и такая композиция будет содержать вместе с активным ингредиентом разбавитель, такой как лактоза, сахароза, дикаль-ция фосфат или им подобное, смазывающее вещество, такое как стеарат магния или тому подобное, и связующее вещество, такое как крахмал, аравийская камедь, поливинилпирролидин, желатин, целлюлоза, производные целлюлозы или им подобное. В другой твердой лекарственной форме порошок, сферические частицы, раствор или суспензия (например, в пропиленкарбонате, растительных маслах или триг-лицеридах) инкапсулированы в желатиновую капсулу.
Вводимые в виде жидкостей фармацевтические композиции, например, могут быть изготовлены путем растворения, диспергирования и т.д. по меньшей мере одного химического соединения и возможных фармацевтических адъювантов в носителе (например, воде, физиологическом растворе, водной декстрозе, глицерине, гликолях, этаноле или им подобном) с образованием раствора или суспензии. Инъекционные композиции могут быть изготовлены в традиционных формах, либо в виде жидких растворов или в виде суспензий, представляющих собой эмульсии, либо в твердых формах, подходящих для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией. Процентное содержание химических соединений в таких парентеральных композициях сильно зависит от их конкретной природы, а также активности химических соединений и потребностей субъекта. Тем не менее, реально используют процентные содержания активного ингредиента от 0,01 до 10% в растворе, и они будут выше, если композиция находится в твердой форме, которая впоследствии будет разбавлена до указанных выше процентных содержаний. В некоторых воплощениях композиция будет содержать от примерно 0,2 до 2% активного агента в растворе.
Фармацевтические композиции на основе химических соединений, описанных в данном изобретении, также можно вводить в дыхательные пути в виде аэрозоля или раствора для небулайзера или в виде микроизмельченного порошка для инсуффляции, по отдельности или в комбинации с инертным носителем, таким как лактоз. В таком случае частицы фармацевтической композиции имеют диаметры менее 50 мкм, в некоторых воплощениях менее 10 мкм.
В общем случае предложенные химические соединения будут введены в терапевтически эффективном количестве любым из способов введения, приемлемых для средств, используемых при аналогичных состояниях. Реальное количество химического соединения, т.е. активного ингредиента, будет зависеть от многочисленных факторов, таких как тяжесть подлежащего лечению заболевания, возраст и относительное состояние здоровья субъекта, эффективность используемого химического соединения, способ и форма введения и другие факторы. Данное лекарственное средство можно вводить более одного раза в сутки, например один раз или два раза в сутки.
Терапевтически эффективные количества химических соединений, описанных в данном изобретении, могут находиться в диапазоне от приблизительно 0,01 до 200 мг на 1 кг массы тела реципиента в сутки; как, например, приблизительно 0,01-100 мг/кг/сутки, например от приблизительно 0,1 до 50 мг/кг/сутки. Так, для введения субъекту массой 70 кг диапазон дозировок может составлять приблизительно 7-3500 мг в сутки.
В общем случае химические соединения будут введены в виде фармацевтических композиций лю
бым из следующих способов: путем перорального, системного (например, трансдермального, интрана-зального или посредством суппозиториев) или парентерального (например, внутримышечного, внутривенного или подкожного) введения. В некоторых воплощениях может быть использовано пероральное введение с удобным режимом ежесуточного дозирования, которое может быть откорректировано в соответствии со степенью заболевания. Композиции могут иметь форму таблеток, пилюль, капсул, полутвердых веществ, порошков, композиций с непрерывным высвобождением, растворов, суспензий, эликсиров, аэрозолей или любых других соответствующих композиций. Другим способом введения предложенных химических соединений является ингаляция.
Выбор технологии изготовления зависит от различных факторов, таких как способ лекарственного введения и биодоступность лекарственного вещества. Для доставки ингаляцией химическое соединение может быть изготовлено в виде жидкого раствора, суспензий, аэрозольных пропеллентов или сухого порошка и загружено в диспенсер, подходящий для введения. Существует несколько типов фармацевтических ингаляторных устройств - небулайзеры, дозированные ингаляторы (MDI) и ингаляторы сухого порошка (DPI). Небулайзеры обеспечивают получение струи воздуха высокой скорости, и это приводит к тому, что терапевтические агенты (изготовленные в жидкой форме) распыляются в виде аэрозоля в дыхательные пути пациента. В MDI обычно используют композицию, упакованную со сжатым газом. После приведения устройства в действие происходит выброс отмеренного количества терапевтического агента под действием сжатого газа, обеспечивающий тем самым надежный способ введения установленного количества агента. DPI распыляет терапевтические агенты в форме свободнотекучего порошка, который посредством использования данного устройства может быть диспергирован в струю вдыхаемого пациентом воздуха в процессе дыхания. Чтобы добиться состояния свободнотекучего порошка, терапевтический агент комбинируют вместе с таким эксципиентом, как лактоза. Отмеренное количество терапевтического агента хранят в капсулярной форме и распыляют во время каждого акта приведения в действие.
Недавно для лекарственных средств с плохой биодоступностью были разработаны фармацевтические композиции, в основе которых лежит принцип возможного повышения биодоступности путем увеличения площади поверхности, т.е. уменьшения размера частиц. Например, в патенте США № 4107288 описана фармацевтическая композиция с частицами в диапазоне размеров от 10 до 1000 нм, в которых активное вещество закреплено на перекрестно-сшитой матрице из макромолекул. В патенте США № 5145684 описано изготовление фармацевтической композиции, при котором лекарственное вещество измельчают до наночастиц (средний размер частиц 400 нм) в присутствии модификатора поверхности и затем диспергируют в жидкой среде с получением фармацевтической композиции, демонстрирующей замечательно высокую биодоступность.
В общем случае композиции состоят по меньшей мере из одного химического соединения, описанного в данном изобретении, в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым экс-ципиентом. Приемлемые эксципиенты являются нетоксичными, помогают введению и не оказывают неблагоприятного действия на терапевтический эффект по меньшей мере одного химического соединения, описанного в данном изобретении. Таким эксципиентом может быть любой твердый, жидкий, полутвердый или, в случае аэрозольной композиции, газообразный эксципиент, который как правило является доступным специалисту в данной области техники.
Твердые фармацевтические эксципиенты включают крахмал, целлюлозу, тальк, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат магния, стеарат натрия, моностеарат глицерина, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко и им подобные. Жидкие и полутвердые эксципиенты могут быть выбраны из глицерина, пропиленгликоля, воды, этанола и различных масел, включая масла, получаемые из нефти, масла животного, растительного или синтетического происхождения, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.д. Жидкие носители для инъекционных растворов включают воду, физиологический раствор, водный раствор декстрозы и гликоли.
Для диспергирования описанного в данном изобретении химического соединения в аэрозольной форме можно использовать сжатые газы. Инертными газами, подходящими для этой цели, являются азот, углекислый газ и т.д. Другие подходящие фармацевтические эксципиенты и их составы описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences под редакцией E.W. Martin (Mack Publishing Company, 18-e изд., 1990).
Количество химического соединения в композиции может варьировать в пределах всего диапазона, используемого специалистами в данной области. Обычно композиция будет содержать на основании процента по массе, примерно 0,01-99,99 мас.% по меньшей мере одного химического соединения, описанного в данном изобретении, из расчета на общую композицию, при этом остальную часть будут составлять один или более подходящих фармацевтических эксципиентов. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно химическое соединение, описанное в данном изобретении, присутствует на уровне примерно 1-80 мас.%.
Пример 84. Анализ антивирусной активности на МТ4-клетках.
Экспериментальная методика.
Антивирусную активность в отношении ВИЧ и индуцированную соединением цитотоксичность измеряли одновременно с помощью методики, основанной на применении иодида пропидия, в линии клеток МТ4, трансфицированных Т-клеточным лимфотропным вирусом человека. Выполняли серийные
разведения аликвот тестируемых соединений в среде (RPMI 1640, 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и гентамицин) в 96-луночных планшетах (Costar 3598), используя систему Cetus Pro/Pette. Клетки МТ4 собирали в экспоненциальной фазе роста и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин на центрифуге Jouan (модель CR 4 12). Клеточные осадки после центрифугирования ресуспендировали в свежей порции среды (RPMI 1640, 20% FCS, 20% IL-2 (интерлейкин-2) и гентамицин) до концентрации 5х105 клеток/мл. Аликвоты клеток инфицировали, добавляя ВИЧ-1 (штамм IIIB), разведенный для получения множественности вирусной инфекции 100xTCID50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани). Аналогичную аликвоту клеток разбавляли средой для получения имитирующего заражение контроля. Заражение клеток проводили в течение 1 ч при 37°С в инкубаторе для тканевых культур в увлажненной атмосфере 5% СО2. Через 1 ч инкубации суспензии вируса с клетками разбавляли в 6 раз свежей средой и в каждую лунку планшета, содержащую предварительно разбавленное соединение, добавляли по 125 мкл клеточной суспензии. Затем планшеты помещали в инкубатор для тканевых культур в увлажненную атмосферу 5% СО2 на 5 суток. По окончании периода инкубации количество клеток и, следовательно, ВИЧ-индуцированный цитопатический эффект оценивали, используя либо (А) метод окрашивания иодидом пропидия, либо (В) окрашивание MTS-тетразолием (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолий).
Чтобы получить данные в случае использования иодида пропидия, в каждую лунку инкубируемого планшета добавляли по 27 мкл 5%-го Nonidet-40. После тщательного перемешивания с использованием многоканального пипеточного дозатора Costar по 60 мкл смеси переносили в 96-луночные планшеты с встроенным в дно фильтром. Планшеты анализировали на автоматизированном приборе для анализа (Screen Machine, Idexx Laboratories). В качестве контроля и стандарта использовали 3'-азидо-3'-дезокситимидин, тестируемый в диапазоне концентраций 0,01-1 мкМ в каждом анализе. Ожидаемый диапазон значений ИК50 для 3'-азидо-3'-дезокситимидина составляет 0,04-0,12 мкМ. В данном анализе используют краситель иодид пропидия для оценки содержания ДНК в каждой лунке.
Чтобы получить данные в случае использования MTS, в каждую лунку добавляли по 20 мкл раствора реагента CellTiter 96 AQ One Solution (Promega, № G3582). Через 75 мин после добавления MTS-реагента считывали поглощение при 492 нМ, используя 96-луночный планшетный ридер Tecan Sunrise.
Анализ.
Антивирусный эффект тестируемого соединения выражают в виде EC50, т.е. ингибирующей концентрации, которая будет приводить к 50%-му уменьшению ВИЧ-индуцированного цитопатического эффекта. Этот эффект измеряют по количеству тестируемого соединения, необходимого для восстановления 50% клеточного роста ВИЧ-инфицированных МТ4-клеток в сравнении с неинфицированными контрольными МТ4-клетками. ИК50 рассчитывали, используя автоматизированную программу аппроксимации кривых по точкам RoboSage версии 5.00 от 10 июля 1995 г.
Для каждого используемого в анализе планшета проводили усреднение результатов (в относительных единицах флуоресценции (rfU) или величинах OD (оптическая плотность)) для лунок, содержащих не инфицированные клетки или инфицированные клетки и не содержащих никакого соединения соответственно. При измерениях индуцированной соединением цитотоксичности результаты для лунок, содержащих соединение в различных концентрациях и неинфицированные клетки, сравнивали со средними показателями для неинфицированных клеток, не обработанных соединением. Процент оставшихся клеток определяют по следующей формуле:
процент оставшихся клеток = (обработанные соединением неинфицированные клетки (величины rfU или OD)/необработанные неинфицированные клетки) х 100.
Процент оставшихся на уровне 79% или меньше клеток указывает на значительный уровень индуцированной непосредственно соединением цитотоксичности для соединения в такой концентрации. При выполнении этого условия результаты для обработанных соединением инфицированных лунок в этой концентрации не включаются в расчет EC50.
При измерениях антивирусной активности соединений результаты для лунок, содержащих соединение в различных концентрациях и инфицированные клетки, сравнивают со средними показателями для неинфицированных и инфицированных клеток, не обработанных соединением. Процент ингибирования вируса определяют по следующей формуле:
процент ингибирования вируса = (1-((средн. для необработанных неинфицированных клеток -средн. для обработанных инфицированных клеток)/(средн. для необработанных неинфицированных клеток - средн. для необработанных инфицированных клеток)))х 100.
Результаты.
Соединения по настоящему изобретению обладают анти-ВИЧ активностью со значениямиЕС50, указанными в табл. 3.
В табл. 3 показаны значения EC50 для репрезентативных соединений из табл. 2 после проведения анализа антивирусной активности в отношении ВИЧ на МТ4-клетках согласно примеру 84.
Таблица 3
Номер примера
ЕС5о для NL4-3 дикого типа (wt) (нМ)
ЕС50 Для V370A (нМ)
0,8
0,7
3,9
4,1
Пример 86.
В этом примере демонстрируется выраженная в EC50 эффективность бевиримата, соединения 51, соединения А и соединения В в отношении ВИЧ дикого типа, сайт-специфических мутантов ВИЧ и клинических изолятов ВИЧ. Как можно видеть из табл. 5, соединение 51 демонстрирует более высокую эффективность, чем другие соединения, при измерении в отношении ВИЧ дикого типа, некоторых сайт-специфических мутантов и в отношении отдельных клинических изолятов ВИЧ. Неожиданно соединение 51 продолжает проявлять отличную эффективность в отношении ВИЧ по сравнению с другими соединениями, когда учитывается связывание с белками, как можно видеть из табл. 6.
Результаты, представленные в табл. 5 и 6, демонстрируют неожиданный результат для соединения 51, полученный в сравнении с бевириматом и соединениями А и В. Результаты в приведенных ниже таблицах свидетельствуют о непредсказуемости при разработке анти-ВИЧ соединений, когда едва уловимое изменение в химической структуре может оказывать большое влияние на клинический результат. В то время как соединения А и В демонстрируют изменение эффективности, выраженной величинами EC50, в обоих случаях в отношении полиморфизма и связывания с белками, соединение 51 не показывает никакой такой вариабельности и ввиду этого неожиданно является более совершенным с точки зрения возможной клинической применимости. Прямое сравнение соединения 51 с соединениями А и В демонстрирует, как едва уловимые химические замены могут оказывать существенное влияние на эффективность in vitro предполагаемого анти-ВИЧ соединения.
Аналогичное преимущество соединения 51 можно видеть из табл. 6, в которой сравнивают изменение характеристик под действием связывания с белками и под действием сыворотки для приведенных выше соединений. В этой таблице показано как значительное уменьшение EC50, так и сниженное влияние сыворотки для соединения 51 в сравнении с к другими тестируемыми соединениями.
Таблица 5
Таблица 6
a Характерная величина изменения характеристик под действием белков, определенная с использованием ЛПК (лимфоциты периферической крови) посредством титрования в SRI, составляет 1Х.
HuS означает сыворотку крови человека. Пример 87.
Существует предположение, что многие анти-ВИЧ соединения потенциально менее эффективны в лечении пациентов, применение к которым ранее схемы лечения ингибитором протеазы оказалось неудачным и у чьих вирусов развилась лекарственная устойчивость, обусловленная мутациями в гене про-теазы.
Основным препятствием для долгосрочной эффективности анти-ВИЧ терапий стало возникновение устойчивости к современным антиретровирусным лекарственным средствам. Одним из способов сравнения эффективности анти-ВИЧ соединений является характеристика их действия на полиморфы, имеющие сайты, определяющим лекарственную устойчивость.
Сравнение соединения 51 и бевиримата (BVM) в отношении широкой панели изолятов ВИЧ показано на фиг. 1. Из фиг. 1 можно видеть, что соединение 51 демонстрирует более совершенную картину в отношении полиморфов по всей этой панели изолятов ВИЧ по сравнению с бевириматом. Аналогичным образом, соединение 51 демонстрирует более совершенную картину в отношении полиморфов по сравнению с соединением С, как показано на фиг. 2.
Задачу согласно данному примеру решали, как приведено ниже. Неочищенные мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) человека собирали от здоровых доноров посредством лейкафере-за и устанавливали, что они негативны в отношении ВИЧ и целого ряда других инфекционных заболеваний. МКПК выделяли, используя разделение в градиенте плотности фиколл-гипак с последующей аспирацией собравшихся в зону лейкоцитов из градиента. Очищенные МКПК от 10 индивидуальных доноров объединяли и подвергали криоконсервации в жидком азоте в виде пула МКПК. Использовали различные
пулы МКПК.
Из разных источников получали различные изоляты ВИЧ-1. Используя пул CD4+ МКПК, нарабатывали запас вируса и замораживали. Репликацию вируса для каждого вирусного штамма измеряли на обработанных ФГА (фитогемагглютинин) пулах МКПК для определения соответствующего проникновения вируса при проведении анализов антивирусной активности. Для каждого изолята определяли последовательности gag в ВИЧ, используя секвенирование дидезокси-методом по Сэнгеру.
Подвергнутые криоконсервации пулы МКПК размораживали и стимулировали с использованием ФГА в концентрации 2 мкг/мл в среде (RPMI 1640, 20% FBS, 10% фактора роста Т-клеток, антибиотики) в течение 3 суток. Затем бластные клетки промывали, подсчитывали и культивировали при концентрации 2х106 клеток/мл в среде с рекомбинантным IL-2 в концентрации 10 ед/мл в течение еще 24 ч. Стимулированные МКПК подсчитывали, определяя жизнеспособность по вытеснению трипанового синего, и рассевали в 96-луночные круглодонные планшеты с конечной концентрацией 1х106 клеток/лунка. К клеткам добавляли объем дозы лекарственного средства в серийных разведениях с последующим добавлением предварительно определенного количества вируса. Планшеты инкубировали в течение 7 суток при 37°С, 5% СО2, давая возможность осуществиться вирусной репликации и ингибированию соединением, для оценки антивирусной эффективности.
Чтобы определить антивирусную эффективность, измеряли активность обратной транскриптазы ВИЧ в супернатантах клеточной культуры как меру вирусной репликации в присутствии или в отсутствие соединения. По окончании периода инкубации по пятьдесят (50) мкл культуральных супернатантов МКПК переносили в новый 96-луночный планшет; добавляли 10 мкл буфера для экстракции обратной транскриптазы (RT) с последующим добавлением 40 мкл буфера для анализа RT. Содержимое планшетов с RT тщательно перемешивали и планшеты помещали в инкубатор с увлажнением на 37°С, 5% СО2 на 2 ч. В вакуумный коллектор помещали 96-луночные планшеты DE-81 и по 100 мкл RT-содержащей реакционной среды переносили в планшеты для ионообменной хроматографии. После нанесения жидкой фазы RT-содержащей реакционной смеси на планшет DE-81 далее его промывали один раз приготовленным 5%-м раствором Na2HPO4, после чего промывали dH2O. Затем планшеты оставляли высыхать в течение ночи при комнатной температуре. В планшеты добавляли по 50 мкл сцинтилляционной жидкости и герметично закрывали, после чего производили измерения на люминометре Topcount (Packard) в режиме 10 с/лунка.
Ниже приведены конкретные изоляты ВИЧ-1, результаты тестирования которых показаны на фиг. 1.
1- HIV-1 AJJG275
2- HIV-1 АЕ_42368
3- HIV-1 C_97/ZA/009
4- HIV-1 С_ЕТН2220
5- HIV-1 C_ZAM18
6- HIV-1 С 1-2516
7- HIV-1 В_СС1/85
8- HIV-1 B_ASJM108
9- HIV-1 В SF162
10-
-HIV-1 В_
_92US657
11-
-HIV-1 В_
_BR92030
12-
-HIV-1 В_
_ASM42
13-
-HIV-1 В_
_BR92023
14-
-HIV-1 В_
_ASM44
15-
-HIV-1 В_
_92US660
16-
-HIV-1 в_
JHA92014
17-
-HIV-1 в_
JIIB
18-
-HIV-1 в_
_301596
19-
-HIV-1 в_
_ASM34
20-
-HIV-1 в_
_BK132
21-
-HIV-1 в_
_ASM57
22-
-HIV-1 в_
_ASM54
23-
-HIV-1 в_
_92HT599
24-
-HIV-1 в_
_CM237
25-
-HIV-1 в_
_92HT593
26-
-HIV-1 в_
_BZ167
27-
-HIV-1 в_
_92US723
Ниже приведены конкретные изоляты ВИЧ-1, результаты тестирования которых показаны на фиг. 2.
1- HIV-1 AJJG275
2- HIV-1 АЕ_42368
3- HIV-1 В_301596
4- HIV-1 В_92НТ593
5- HIV-1 В_92НТ599
6- HIV-1 B_92US657
7- HIV-1 B_92US660
8- HIV-1 B_92US723
9- HIV-1 B_ASJM108
10- HIV-1 B_ASM34
11- HIV-1 B_ASM42
12- HIV-1 B_ASM44
13- HIV-1 B_ASM54
14- HIV-1 B_BK132
15- HIV-1 B_BZ167
16- HIV-1 B_CC1/85
17- HIV-1 B_CM237
18- HIV-1 BJIIB
19- HIV-1 B_SF162
20- HIV-1 C_97/ZA/009
21- HIV-1 C_ETH2220
22- HIV-1 C_ZAM18
Пример 88.
В этом примере в табл. 7 приведено прямое сравнение соединения 51, соединения 56 и соединения С. Собственная эффективность соединения 51 в отношении ВИЧ дикого типа примерно в 10 раз лучше по сравнению с соединением С (0,8 нМ против 6 нМ). В отношении штамма ВИЧ с полиморфизмом V370A эффективность соединения 51 по сравнению с соединением С еще более существенна (0,7 нМ против 19 нМ). Эффективность, выраженная в виде изменения характеристик под действием белков человека, что приведено в этом примере в колонке "сыворотка крови человека" (HS), представлена еще
одним показателем, который у соединения 51 в 10 раз лучше, чем у соединения С (кратность изменения 5,5 против кратности изменения 48,9).
Из совокупности данных, которые представлены в табл. 7, видно, что для соединения 51 в сравнении с соединением С имеется 238-кратное улучшение по показателю Ctrough (минимальная концентрация) целевого средства, который представляет собой РАЕС50 (скорректированная на связывание с белками ЕС50) (или РАЕС90, который представляет собой сходный фактор, но больший по величине в 3-4 раза). Фактически, приведенная в табл. 7 кратность изменения характеристик для 40%-й сыворотки крови человека в основанном на применении репортерного гена и разработанном для многоклеточных организмов анализе полного жизненного цикла (multicell full life cycle reporter based assay) ВИЧ, составляет 5,5.
Из табл. 7, в которой также представлены скорректированные на связывание с белками значения EC50 для вируса с полиморфизмом V370A (который представлен в филогенетической ветви В и возможно в большем количестве за пределами филогенетической ветви В у 40% пациентов включительно), можно видеть, что эффективность соединения 51 неожиданно является более высокой со значением 3,9 нМ, в то время как эффективность соединения С является более низкой со значением 929 нМ.
Таблица 7
Название соединения
MI4ECsn для ВИЧ wt
М|4ЕС50
ДЛЯ
V370A
Кратность изменения хар-к под действием сыворотки крови человека**
PAECsn
ДЛЯ
V370A***
Соединение 51
('232)
0,8 нМ
0,7 нМ
5,5Х
3,9 нМ
Соединение 56
('233)
4 нМ
4 нМ
16.2Х
65 нМ
Соединение С
('363)
6 нМ
19 нМ
48,9Х
929 нМ
**Величины кратности изменения характеристик под действием сыворотки крови человека, определенные с использованием 40%-й сыворотки крови человека в разработанном для многоклеточных организмов анализе полного жизненного цикла ВИЧ. ***РАЕС50 для V370A определяют по значению MT4EC50 для продукта V370A и величине кратности изменения характеристик под действием сыворотки крови человека.
Пример 89.
В этом примере проводили анализ с использованием ЛПК, как приведено ниже, с целью изучения влияния сыворотки крови человека на антивирусную активность в отношении ВИЧ определенных соединений. В частности, влияние присутствия сыворотки крови человека на антивирусную активность соединения 51 и бевиримата (BVM) оценивали в модифицированном анализе с использованием МКПК.
В стандартном анализе, МКПК, стимулированные ФГАЛТ-2, (5х104 клеток/лунка) инкубировали с вирусом и соединением 51 или BVM (оба тестируемых соединения в диапазоне концентраций от 0,06 нМ до 25 мМ) в течение 7 суток.
В модифицированном анализе с использованием МКПК, МКПК, стимулированные ФГАЛТ-2, предварительно инкубировали со штаммом JR-CSF ВИЧ-1, после чего добавляли соединение 51 или BVM и сыворотку крови человека. В этом анализе 8х106 клеток из объединенных пулов от доноров инкубировали с вирусом в течение 1 ч, а затем центрифугировали в течение 1 ч. Далее клетки осторожно ресуспен-дировали и инкубировали в течение еще 2 ч. Во время этого второго инкубационного периода в 60 лунок 96-луночного планшета добавляли по 2,5 х104 неинфицированных МКПК из объединенных пулов от доноров, после чего в соответствующие лунки добавляли соединение 51 или BVM (оба тестируемых соединения в диапазоне концентраций от 0,06 нМ до 25 мМ) и сыворотку крови человека (10%, 20%, 30% и 40%). По окончании второго периода инкубации инфицированные клетки разбавляли в среде (5х105 клеток/мл) (без отмывания от вируса), в каждую лунку планшета добавляли по 50 мл (2,5 х104 клеток) и инкубировали в течение 7 суток.
После инкубации как в стандартном, так и в модифицированном анализах супернатанты анализировали по активности обратной транскриптазы (RT) и содержанию р24-антигена посредством ИФА (имму-ноферментный анализ) и спектрофотометрического анализа при 450 нМ.
Соединение 51 сохраняло антивирусную активность в присутствии сыворотки крови человека при всех протестированных концентрациях сыворотки, без какого-либо кажущегося изменения значений ИК50 (в диапазоне: 0,52-3,07 нМ) по сравнению со значением ИК50 (0,69 нМ) в стандартном анализе (0%
сыворотки). Эти результаты указывают на то, что белки сыворотки оказывают минимальное воздействие или не оказывают вообще никакого воздействия на ингибирующую активность соединения 51. После экстраполяции нормализованных значений ИК50, наблюдаемых в присутствии сыворотки крови человека в разных концентрациях, получали оценочное значение ИК50, равное 0,33 нМ, для 100%-й сыворотки крови человека (в предположении наличия линейной зависимости). BVM также сохранял антивирусную активность в присутствии сыворотки крови человека при всех концентрациях, однако имело место значительное возрастание значений ИК50 (в диапазоне от 1,38 до 13 мМ), ассоциированное с возрастанием концентрации сыворотки крови человека, в сравнении со стандартным анализом (9,76 нМ). После экстраполяции нормализованных значений ИК50, наблюдаемых в присутствии сыворотки крови человека в разных концентрациях, получали 2310-кратное изменение величины ИК50 в присутствии 100%-й сыворотки (в сравнении с контрольным экспериментом), что является подтверждением того, что BVM сильно связывается белками сыворотки крови.
Влияние сыворотки крови человека на антивирусную активность соединения 51 и BVM также оценивали в LHIV-анализе. При использовании того же формата, что и в стандартном LHIV-анализе, добавление 40%-й сыворотки крови человека приводило к 5,6-кратному изменению значения ИК50 (10,6 нМ) для соединения 51 и 174,9-кратному изменению значения ИК50 (3,88 мМ) для BVM.
Однако при определении в анализе с использованием ЛПК, включающем разведения сыворотки крови человека от 0 до 40%, кратность для полученного экстраполяцией значения составляет 1 или меньше. Ввиду этого, преимущество соединения 51 по сравнению с соединением С с точки зрения повышения эффективности в присутствии сыворотки крови человека вероятно является более чем 1300-кратным, когда учитывается более типичная базовая линия. См. фиг. 3, 4 и 5.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом.
5. Композиция по п.4, содержащая соединение, имеющее структуру
или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение, имеющее структуру
или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым эксципиентом.
10. Композиция по п.9, содержащая соединение, имеющее структуру
Изоляты ВИЧ-1
Фиг. 2
Экстраполяция нормализованных значений ИК50 для бевиримата на 100% сыворотку крови человека
20000
мата
15000
s а
-12000
иля б"
8000
40GC
+ 1
30 S0 90
Human Serum Concentration (¦ &':
Экстраполяция ИК5о для бевиримата на 100% сыворотку крови человека приводит к значению 22,558 нМ (2310-кратное изменение)
Фиг. 3
Экстраполяция ИК50 для соединения В на 100% сыворотку крови человека приводит к значению 82,0 нМ (17-кратное изменение)
Фиг. 4
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027363
- 1 -
(19)
027363
- 1 -
(19)
027363
- 1 -
(19)
027363
- 4 -
027363
027363
027363
- 23 -
027363
- 38 -
027363
- 38 -
027363
- 47 -
027363
- 48 -
027363
- 61 -
027363
- 61 -
027363
- 62 -
|
