[RU]

1. Соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемая соль, где R ^a представляет собой изобутил; каждый R ^b3 и R ^b4 независимо представляет собой -(СН ₂ ) _р -CO ₂ H; при этом одна из карбоксильных групп необязательно образует дополнительную связь с атомом бора; р равно 0 или 1; n равно 0 или 1.

2. Соединение по п.1, описываемое формулой (III) или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п.1, описываемое формулой (IV) или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п.1 или 2, описываемое формулой (IIIa) или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по п.1 или 3, описываемое формулой (IVa) или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Кристаллическая форма 2,2'-{2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, приблизительно при 6,4, 8,3, 15,1, 16,4 и 19,1.

7. Кристаллическая форма по п.6, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, при:

8. Кристаллическая форма по п.6 или 7, имеющая температуру плавления между 191,8 и 225°С.

9. Кристаллическая форма 2,2'-{2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, приблизительно при 5,8, 7,6, 11,6, 11,9, 16,7, 18,2, 19,6, 20,0 и 22,4.

10. Кристаллическая форма по п.9, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, при:

11. Кристаллическая форма соединения по п.9 или 10, имеющая температуру плавления между 206,5 и 225°С.

12. Кристаллическая форма 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, приблизительно при 5,7, 7,6, 11,4, 11,8, 16,5, 18,1, 19,4, 19,8 и 22,2.

13. Кристаллическая форма по п.12, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, при:

14. Кристаллическая форма соединения по п.12 или 13, имеющая температуру плавления между 231,3 и 239,9°С.

15. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-14.

16. Способ по п.15, где рак представляет собой множественную миелому.

17. Способ по п.15, где рак представляет собой болезнь Ходжкина, фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому или Т-клеточную лимфому.

18. Способ по п.15, где пациент, нуждающийся в лечении, представляет собой пациента, имеющего или с высоким риском развития или испытывающего рецидив рака, выбранного из группы, состоящей из множественной миеломы, болезни Ходжкина, фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы и Т-клеточной лимфомы.

19. Способ по п.15, где соединение дополнительно вводят с ДНК-повреждающим химиотерапевтическим агентом или химиотерапевтическим агентом, нарушающим клеточную репликацию.

20. Способ по п.19, где ДНК-повреждающий химиотерапевтический агент представляет собой мелфалан.

21. Способ по п.19, где химиотерапевтический агент, нарушающий клеточную репликацию, представляет собой леналидомид.

22. Способ по п.15, где введение соединения осуществляют внутрь, парентерально, путем ингаляции, местно, ректально, капельно в нос, защечно, вагинально или путем установки импланта-депо.

23. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют внутрь.

24. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют внутривенно.

25. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют системно или местно.

26. Фармацевтическая композиция, применимая для ингибирования активности протеасом, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

27. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,2 до 12% по массе в процентах от общей массы композиции.

28. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,2 до 3% по массе в процентах от общей массы композиции.

29. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,25 до 2% по массе в процентах от общей массы композиции.

30. Фармацевтическая композиция по любому из пп.26-29, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит наполнитель; необязательно лубрикант, агент для повышения текучести или буфер.

31. Фармацевтическая композиция по п.30, где наполнитель присутствует в количестве от 86,5 до 99,8% по массе в процентах от общей массы композиции.

32. Фармацевтическая композиция по п.30, где лубрикант присутствует в количестве 1% по массе в процентах от общей массы композиции.

33. Фармацевтическая композиция по п.30, где агент для повышения текучести присутствует в количестве от 1 до 2% по массе в процентах от общей массы композиции.

34. Фармацевтическая композиция по п.30, где буфер присутствует в количестве 2% по массе в процентах от общей массы композиции.

35. Фармацевтическая композиция по п.30, где фармацевтическая композиция содержит: а) от 0,2 до 3% соединения по любому из пп.1-14, от 86,5 до 99,8% наполнителя, необязательно до 1,5% лубриканта, необязательно до 5% агента для повышения текучести и, необязательно, до 5% буфера по массе в процентах от общей массы композиции; или б) от 0,2 до 3% соединения формулы (II) по п.1, от 97 до 99,8% наполнителя и, необязательно, до 1,5% лубриканта по массе в процентах от общей массы композиции; или в) от 0,25 до 2% соединения формулы (II) по п.1 и от 98 до 99,75% наполнителя по массе в процентах от общей массы композиции.

36. Фармацевтическая композиция по п.30, где фармацевтическая композиция содержит: а) соединение по любому из пп.1-14 в количестве от 0,2 до 12% по массе в процентах от общей массы композиции; б) наполнитель в количестве от 76,5 до 99,8% по массе в процентах от общей массы композиции; в) необязательно, лубрикант в количестве до 1,5% по массе в процентах от общей массы композиции; г) необязательно, агент для повышения текучести в количестве до 5% по массе в процентах от общей массы композиции; д) необязательно буфер в количестве до 5% по массе в процентах от общей массы композиции.

37. Фармацевтическая композиция по п.30, где: а) наполнитель выбирают из группы, состоящей из порошкообразной целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы, силикатной микрокристаллической целлюлозы, натрия крахмала гликолята, прежелатинизированного крахмала и смеси данных веществ; б) лубрикант, если присутствует, выбирают из группы, состоящей из стеарата магния, глицерилбегената, гидрогенизированного растительного масла, талька, стеарата цинка, стеарата кальция, стеарата сахарозы, стеарилфумарата натрия и их смеси; в) агент для повышения текучести, если он присутствует, представляет собой тальк.

38. Фармацевтическая композиция по п.30, где наполнитель выбран из группы, состоящей из микрокристаллической целлюлозы, натрия крахмала гликолята, прежелатинизированного крахмала и смеси данных веществ; лубрикант, если присутствует, представляет собой стеарат магния; агент для повышения текучести, если присутствует, представляет собой тальк; буфер, если присутствует, представляет собой цитрат натрия или лимонную кислоту.

39. Фармацевтическая композиция по п.26, где композиция содержит соединение по п.1, увеличитель объема и буфер.

40. Фармацевтическая композиция по п.39, где увеличитель объема присутствует в количестве от 1 до 5% мас./об.

41. Фармацевтическая композиция по п.40, где увеличитель объема представляет собой глицин.

42. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция находится в форме гранулы, преципитата, взвеси частиц, порошка, таблетки, капсулы, сиропа, свечи, лекарственной формы для инъекций, эмульсии, эликсира, суспензии или раствора.

43. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой инъекционный препарат.

44. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный порошок.

45. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой твердую лекарственную форму.

46. Фармацевтическая композиция по п.45, где твердая лекарственная форма представляет собой капсулу.

47. Фармацевтическая композиция по п.46, где капсула содержит соединение формулы (II) по п.1, микрокристаллическую целлюлозу, тальк и стеарат магния.

48. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.26-47.

49. Способ по п.48, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.

50. Способ по п.48, где рак представляет собой фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, или рецидив фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы или Т-клеточной лимфомы.

51. Способ по п.48, где рак представляет собой болезнь Ходжкина или рецидив болезни Ходжкина.

52. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют внутрь или парентерально.

53. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют дополнительно с леналидомидом.

54. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют дополнительно с мелфаланом.

55. Капсула для лечения рака, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (II) по п.1; и фармацевтически приемлемый носитель.

56. Капсула по п.55, где капсула предназначена для введения внутрь.

57. Капсула по п.55, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.

58. Капсула по п.55, где рак представляет собой фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому или Т-клеточную лимфому или рецидив фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы или Т-клеточной лимфомы.

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемая соль, где R ^a представляет собой изобутил; каждый R ^b3 и R ^b4 независимо представляет собой -(СН ₂ ) _р -CO ₂ H; при этом одна из карбоксильных групп необязательно образует дополнительную связь с атомом бора; р равно 0 или 1; n равно 0 или 1.

2. Соединение по п.1, описываемое формулой (III) или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п.1, описываемое формулой (IV) или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п.1 или 2, описываемое формулой (IIIa) или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по п.1 или 3, описываемое формулой (IVa) или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Кристаллическая форма 2,2'-{2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, приблизительно при 6,4, 8,3, 15,1, 16,4 и 19,1.

7. Кристаллическая форма по п.6, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, при:

8. Кристаллическая форма по п.6 или 7, имеющая температуру плавления между 191,8 и 225°С.

9. Кристаллическая форма 2,2'-{2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, приблизительно при 5,8, 7,6, 11,6, 11,9, 16,7, 18,2, 19,6, 20,0 и 22,4.

10. Кристаллическая форма по п.9, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, при:

11. Кристаллическая форма соединения по п.9 или 10, имеющая температуру плавления между 206,5 и 225°С.

12. Кристаллическая форма 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, приблизительно при 5,7, 7,6, 11,4, 11,8, 16,5, 18,1, 19,4, 19,8 и 22,2.

13. Кристаллическая форма по п.12, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2- θ, при:

14. Кристаллическая форма соединения по п.12 или 13, имеющая температуру плавления между 231,3 и 239,9°С.

15. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-14.

16. Способ по п.15, где рак представляет собой множественную миелому.

17. Способ по п.15, где рак представляет собой болезнь Ходжкина, фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому или Т-клеточную лимфому.

18. Способ по п.15, где пациент, нуждающийся в лечении, представляет собой пациента, имеющего или с высоким риском развития или испытывающего рецидив рака, выбранного из группы, состоящей из множественной миеломы, болезни Ходжкина, фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы и Т-клеточной лимфомы.

19. Способ по п.15, где соединение дополнительно вводят с ДНК-повреждающим химиотерапевтическим агентом или химиотерапевтическим агентом, нарушающим клеточную репликацию.

20. Способ по п.19, где ДНК-повреждающий химиотерапевтический агент представляет собой мелфалан.

21. Способ по п.19, где химиотерапевтический агент, нарушающий клеточную репликацию, представляет собой леналидомид.

22. Способ по п.15, где введение соединения осуществляют внутрь, парентерально, путем ингаляции, местно, ректально, капельно в нос, защечно, вагинально или путем установки импланта-депо.

23. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют внутрь.

24. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют внутривенно.

25. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют системно или местно.

26. Фармацевтическая композиция, применимая для ингибирования активности протеасом, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

27. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,2 до 12% по массе в процентах от общей массы композиции.

28. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,2 до 3% по массе в процентах от общей массы композиции.

29. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,25 до 2% по массе в процентах от общей массы композиции.

30. Фармацевтическая композиция по любому из пп.26-29, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит наполнитель; необязательно лубрикант, агент для повышения текучести или буфер.

31. Фармацевтическая композиция по п.30, где наполнитель присутствует в количестве от 86,5 до 99,8% по массе в процентах от общей массы композиции.

32. Фармацевтическая композиция по п.30, где лубрикант присутствует в количестве 1% по массе в процентах от общей массы композиции.

33. Фармацевтическая композиция по п.30, где агент для повышения текучести присутствует в количестве от 1 до 2% по массе в процентах от общей массы композиции.

34. Фармацевтическая композиция по п.30, где буфер присутствует в количестве 2% по массе в процентах от общей массы композиции.

35. Фармацевтическая композиция по п.30, где фармацевтическая композиция содержит: а) от 0,2 до 3% соединения по любому из пп.1-14, от 86,5 до 99,8% наполнителя, необязательно до 1,5% лубриканта, необязательно до 5% агента для повышения текучести и, необязательно, до 5% буфера по массе в процентах от общей массы композиции; или б) от 0,2 до 3% соединения формулы (II) по п.1, от 97 до 99,8% наполнителя и, необязательно, до 1,5% лубриканта по массе в процентах от общей массы композиции; или в) от 0,25 до 2% соединения формулы (II) по п.1 и от 98 до 99,75% наполнителя по массе в процентах от общей массы композиции.

36. Фармацевтическая композиция по п.30, где фармацевтическая композиция содержит: а) соединение по любому из пп.1-14 в количестве от 0,2 до 12% по массе в процентах от общей массы композиции; б) наполнитель в количестве от 76,5 до 99,8% по массе в процентах от общей массы композиции; в) необязательно, лубрикант в количестве до 1,5% по массе в процентах от общей массы композиции; г) необязательно, агент для повышения текучести в количестве до 5% по массе в процентах от общей массы композиции; д) необязательно буфер в количестве до 5% по массе в процентах от общей массы композиции.

37. Фармацевтическая композиция по п.30, где: а) наполнитель выбирают из группы, состоящей из порошкообразной целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы, силикатной микрокристаллической целлюлозы, натрия крахмала гликолята, прежелатинизированного крахмала и смеси данных веществ; б) лубрикант, если присутствует, выбирают из группы, состоящей из стеарата магния, глицерилбегената, гидрогенизированного растительного масла, талька, стеарата цинка, стеарата кальция, стеарата сахарозы, стеарилфумарата натрия и их смеси; в) агент для повышения текучести, если он присутствует, представляет собой тальк.

38. Фармацевтическая композиция по п.30, где наполнитель выбран из группы, состоящей из микрокристаллической целлюлозы, натрия крахмала гликолята, прежелатинизированного крахмала и смеси данных веществ; лубрикант, если присутствует, представляет собой стеарат магния; агент для повышения текучести, если присутствует, представляет собой тальк; буфер, если присутствует, представляет собой цитрат натрия или лимонную кислоту.

39. Фармацевтическая композиция по п.26, где композиция содержит соединение по п.1, увеличитель объема и буфер.

40. Фармацевтическая композиция по п.39, где увеличитель объема присутствует в количестве от 1 до 5% мас./об.

41. Фармацевтическая композиция по п.40, где увеличитель объема представляет собой глицин.

42. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция находится в форме гранулы, преципитата, взвеси частиц, порошка, таблетки, капсулы, сиропа, свечи, лекарственной формы для инъекций, эмульсии, эликсира, суспензии или раствора.

43. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой инъекционный препарат.

44. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный порошок.

45. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой твердую лекарственную форму.

46. Фармацевтическая композиция по п.45, где твердая лекарственная форма представляет собой капсулу.

47. Фармацевтическая композиция по п.46, где капсула содержит соединение формулы (II) по п.1, микрокристаллическую целлюлозу, тальк и стеарат магния.

48. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.26-47.

49. Способ по п.48, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.

50. Способ по п.48, где рак представляет собой фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, или рецидив фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы или Т-клеточной лимфомы.

51. Способ по п.48, где рак представляет собой болезнь Ходжкина или рецидив болезни Ходжкина.

52. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют внутрь или парентерально.

53. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют дополнительно с леналидомидом.

54. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют дополнительно с мелфаланом.

55. Капсула для лечения рака, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (II) по п.1; и фармацевтически приемлемый носитель.

56. Капсула по п.55, где капсула предназначена для введения внутрь.

57. Капсула по п.55, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.

58. Капсула по п.55, где рак представляет собой фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому или Т-клеточную лимфому или рецидив фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы или Т-клеточной лимфомы.

---

Евразийское 027346 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201170036
(22) Дата подачи заявки 2009.06.16
(51) Int. Cl.
C07F 5/02 (2006.01) C07F 5/04 (2006.0l) C07F 5/06 (2006.0l) A61K38/05 (2006.01) A61P35/00 (2006.0l) A61P29/00 (2006.0l)
(54) СОЕДИНЕНИЯ БОРОНАТНОГО ЭФИРА И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ СОСТАВЫ
(31) 61/132,244; 61/211,499
(32) 2008.06.17; 2009.03.31
(33) US
(43) 2011.06.30
(вв) PCT/US2009/003602
(87) WO 2009/154737 2009.12.23
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
МИЛЛЕННИУМ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Эллиот Эрик Л., Фердоус Абу Дж., Кауфман Майкл Дж., Комар Соня А., Мазаик Дебра Л., Маккаббин Квентин Дж., Нгуйен Пхоунг М., Паланиаппан Ваитхианатхан, Скверчински Рэймонд Д., Труонг Нобель Т., Варга Ксанад М., Заванех
Питер Н. (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-A1-2002188100 US-A1-2005282742 WO-A-02059130
(57) Изобретение обеспечивает получение новых соединений формулы (II)
где заместители Ra, Rb3 и Rb4 и n такие, как указано в формуле изобретения, применимых в качестве ингибиторов протеасом. Данное изобретение также обеспечивает получение фармацевтических композиций с содержанием веществ, указанных в изобретении, а также обеспечивает способ применения данных композиций при лечении рака.
Приоритет
Заявка на данный патент испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 61/132244, поданной 17 июня 2008 г., и предварительной заявки на патент США № 61/211499, поданной 31 марта 2009 г.; обе заявки также включены в полном объеме посредством ссылок.
Область изобретения
Данное изобретение относится к области применения соединений эфира бороновой кислоты в качестве ингибиторов протеасом. Данное изобретение также включает в себя фармацевтические составы, содержащие компоненты данного изобретения, а также методы применения данных составов при лечении различных заболеваний.
Предпосылки изобретения
Бороновая кислота и соединения боронатного эфира обладают различными полезными с точки зрения фармацевтики биологическими свойствами. Шенви и соавт. (Shenvi et al.), патент США № 4499082 (1985), указывают, что пептиды бороновых кислот являются ингибиторами определенных протеолитиче-ских ферментов. Кеттнер и Шенви (Kettner and Shenvi), патент США № 5187157 (1993), патент США № 5242904 (1993), и патент США № 5250720 (1993), описывают целый класс пептидов бороновых кислот, которые ингибируют активность трипсиноподобных протеаз. Климан и соавт. (Kleeman et al.), патент США под номером 5169841 (1992), описывает свойства модифицированных в области N-конца цепи пептидов бороновых кислот ингибировать действие ренина. Киндер и соавт. (Kinder et al.), патент США № 5106948 (1992), описывает, что определенные соединения, в составе которых содержится бороновая кислота, угнетают рост раковых клеток. Мадж и соавт. (Magde et al.), патент WO 04/022070, описывает свойства соединений, в составе которых пептиды бороновой кислоты, ингибировать активность тромбина. Бучер (Boucher), заявка на патент США (номер публикации 2006/0084592) описывает различные добавки в виде щелочных солей к соединениям, в состав которых входят пептиды бороновой кислоты. Ба-ковкин и соавт. (Bachovchin et al.), патент WO 07/005991, описывает смеси пептидов бороновой кислоты, обладающие свойствами угнетать белок, активирующий фибробласты.
Бороновая кислота и смеси её эфиров в целом перспективны в плане их использования в качестве ингибиторов протеасом, являющихся катализаторами многих реакций протеазного ответа в большинстве внутриклеточных реакций с участием белков. Адамс и соавт. (Adams et al.), патент США № 5780454 (1998), описывают свойства пептидов, содержащих эфиры бороновой кислоты и саму бороновую кислоту, применяемые для использования в качестве ингибиторов протеасом. В материалах данного источника также содержится описание применения соединений бороновой кислоты и ее эфиров для снижения темпа разложения белков мышечной ткани, снижения активности фактора NF-KB в клетке, снижения скорости внутриклеточного разложения белка р53, ингибирования реакции внутриклеточного распада цикли-на, торможения роста раковых клеток, а также для торможения клеточной адгезии, опосредованной фактором NF-KB. Фурье и соавт. (Furet et al.), материалы патента WO 02/096933, Чатержи и соавт. (Chatterjee et al.), патент WO 05/016859, а также Бернадини и соавт. (Bernadini et al.), патент WO 05/021558 и патент WO 06/08660, описывают дополнительные свойства смесей боронового эфира и кислоты, которые, согласно материалам данного источника, обладают способностью угнетать протеа-сомную активность.
Сичановер (Ciechanover), в докладе "Клетка" Cell, 79:13-21 (1994), указывает, что протеасома является протеолитическим компонентом убиквитин-протеасомного цикла, в котором белки метятся для дальнейшей деградации путем связывания их со множеством молекул убиквитина. Сичановер (Ciechano-ver) также описывает важную роль убиквитин-протеасомного цикла в целом ряде важных физиологических процессов. Риветт и соавт. (Rivett et al.), в материалах Биохимического журнала (Biochem. J.). 291:1 (1993) указывает, что протеасомы отвечают за триптическую, химотриптическую и пептидглутамил-пептидазную активность. Это подразумевает, что каталитическое ядро протеасомы 26S состоит из про-теасомы 20S. МакКормак и соавт. (McCormack et al.), в материалах журнала "Биохимия" (Biochemistry) 37:7792 (1998), указывают, что целый ряд пептидных субстратов, в том числе Сук-Лей-Лей-Вал-Тир-АМК (аминометилкумарин), Цинк-Лей-Лей-Арг-АМК (аминометилкумарин), а также Цинк-Лей-Лей-Глу-2NA(2-нафтиламин) (Сук - N-сукцинил, АМК - 7-амино-4-метилкумарин, a 2-NA - это 2-нафтиамин) подвергается деградации протеасомой 20S.
Угнетение активности протеасомы является важным новым способом лечения рака. Кинг и соавт. (King et al.), в материалах журнала "Наука" (Science) 274:1652-1659 (1996), описывают первичность роли убиквитин-протеасомного пути в регуляции клеточного цикла, неопластического роста и формирования метастазов. Авторы указывают, что существует несколько ключевых регуляторных белков, в числе которых циклины и поэтому циклин-зависимые киназы р21 и p27KIP1 постоянно подвергаются деградации в клеточном цикле путем включения их в убиквитин-протеасомный путь. Описанная деградация данных белков необходима клетке для дальнейшего продолжения клеточного цикла и наступления митоза.
Более того, убиквитин-протеасомный путь необходим для регуляции транскрипции. Паломбелла и соавт. (Palombella et al.), материалы журнала "Клетка" (Cell), 78:773 (1994), указывают, что активация фактора транскрипции NF-KB регулируется протеасомно-опосредованной деградацией белка-ингибитора
IkB. В свою очередь, фактор NF-KB играет центральную роль в регуляции генов, отвечающих за иммунный и воспалительный ответ. Рид и соавт. (Read et al.), публикуясь в журнале "Иммунитет" (Immunity) 2:493-506 (1995), утверждают, что убиквитин-протеасомный путь необходим для экспрессии клеточных молекул адгезии, таких как Е-селектин, ICAM-1 и VCAM-1. Цеттер (Zetter), материалы Семинаров по биологии рака (Seminars in Cancer Biology) 4:219-229 (1993), указывает, что клеточные молекулы адгезии участвуют в процессе метастазирования опухоли и ангиогенезе in vivo путем направления адгезии и экс-травазации опухолевых клеток за пределы сосудистого русла в удаленные ткани организма. Более того, как показали Бэг и Балтимор (Beg and Baltimore), в материалах журнала "Наука" (Science) 274:782 (1996), фактор NF-KB является антиапоптотическим фактором контроля и угнетение активации NF-KB делает клетки более чувствительными к стрессовым влияниям окружающей среды и цитотоксическим агентам.
Ингибитор протеасом Велкейд (VELCADE(r)) (бортезомиб; N-2-пиразинкарбонил-Ь-фенилаланин-L-лейцин-бороновая кислота) является первым ингибитором протеасом, который был одобрен при использовании его в качестве регулирующего фактора. Митсиадес и соавт. (Mitsiades et al.), журнал Current Drug Targets (объекты воздействия лекарственных средств в настоящее время), 7:1341 (2006), приводят обзор клинических испытаний, направленных на одобрение использования бортезомиба для лечения пациентов с множественной миеломой (при условии прохождения как минимум одного курса первичной терапии). Фишер и соавт. (Fisher et al.), публикация в журнале клинической онкологии (J. Clin. Oncol.), 30:4867 (2006), описывают результаты международного многоцентрового исследования II фазы, данные которого подтверждают активность бортезомиба при лечении пациентов с рецидивирующей либо устойчивой к терапии лимфомой из клеток зоны мантии. Иши и соавт. (Ishii et al.), публикация в журнале Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (противораковые вещества в биохимии лекарственных средств), 7:359 (2007), а также Роккаро и соавт. (Roccaro et al.)., публикация в журнале Curr. Pharm. Biotech (современные фармацевтические биотехнологии), 7:1341 (2006), обсуждают целый ряд молекулярных механизмов, которые могут принимать участие в противоопухолевой активности бортезомиба.
Данные структурного анализа, приведенные Вогес и соавт. (Voges et al.), журнал Annu. Rev. Bio-chem (Ежегодный Биохимический Обзор), 68:1015 (1999) показывают, что протеасома 20S состоит из 28 субъединиц, в числе которых каталитические субъединицы (31, (32 и (35 отвечают за пептидилглутами-ловую, триптическую и химотриптическую пептидазную активность, соответственно. Риветт и соавт. (Rivett et al.), журнал Curr. Protein Pept. Sci (современные достижения науки в области изучения белков и пептидов), 5:153 (2004) описывают, что во время обработки протеасомы определенными цитокинами, в том числе IFN-Y и TNF-a, субъединицы Р1, Р2 и р5 заменяются дополнительными каталитическими субъединицами - p1i, p2i и p5i с целью формирования вариантной формы протеасомы, более известной как иммунопротеасома.
Орловский (Orlowski), публикация в журнале "Гематология" (Hematology), в рамках Образовательной программы американского гематологического общества (Am. Soc. Hematol. Educ. Program), 220 (2005), описывает свойство некоторых клеток, развившихся из гематопоэтических предшественников, постоянно экспрессировать иммунопротеасомы. Автор предполагает, что наличие специфических для протеасомы ингибиторов может дать возможность осуществлять строго специфическое лечение раковых состояний, источником которых элементы системы крови, таким образом, проводя лечение в режиме, потенциально щадящем для здоровых тканей, таких как нервные ткани и ткани желудочно-кишечного тракта, с отсутствием побочных эффектов.
К сожалению, соединение бороновой кислоты относится к разряду веществ, получить которые в аналитически чистой форме относительно сложно. Например, Снайдер и соавт. (Snyder et al.), в публикации в материалах журнала американского химического общества (J. Am. Chem. Soc.) 80: 3611 (1958), указывают, что смеси, содержащие арилбороновую кислоту, охотно формируют циклические тримерные ангидриды в условиях недостатка жидкости. Также известно, что алкилбороновые кислоты и их борок-сины часто чувствительны к воздуху. Корчек и соавт. (Korcek et al.), в материалах журнала американского химического общества (J. Am. Chem. Soc), раздел Perkin Trans. 2242 (1972), указывают, что бутилбо-роновая кислота с готовностью окислятся в присутствии воздуха и образует 1-бутанол и борную кислоту. Эти сложности ограничивают применение составов бороновой кислоты в фармацевтических целях, усложняют характеризацию фармацевтических препаратов, содержащих бороновую кислоту, ограничивая срок годности.
Пламондон и соавт. (Plamondon et al.), патент WO 02/059131 описывают возможность получить стабильную, фармацевтически приемлемую смесь, содержащую бороновую кислоту, из бороновой кислоты и сахаров. Существует потребность в обеспечении дополнительной стабильности составов, содержащих бороновую кислоту.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 - порошковая рентген-дифрактограмма 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (1-1) форма 1.
Фиг. 2 - дифференцирующая сканирующая калориметрия (DSC)/термальный гравиметрический анализ (TGA) 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (1-1) форма 1.
Фиг. 3 - порошковая рентген-дифрактограмма 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (1-1) форма 2.
Фиг. 4 - дифференцирующая сканирующая калориметрия (DSC)/термальный гравиметрический анализ (TGA) 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (1-1) форма 2.
Фиг. 5 - порошковая рентген-дифрактограмма 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (1-1) форма 2.
Фиг. 6 - дифференцирующая сканирующая калориметрия (DSC) 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты форма 2.
Описание изобретения
Данное изобретение относится к соединениям с общей формулой (I)
либо фармацевтически приемлемые соли такового соединения, где значение А составляет 0;
Р представляет собой Rc-C(O)-, где Rc представляет собой 2,5-дихлорфенил; Ra представляет собой изобутил; Ra1 представляет собой водород;
Z1 и Z2 вместе формируют часть, полученную из альфа-гидроксикарбоновой кислоты, где атом, присоединенный к атому бора, в каждом варианте является атомом кислорода; либо Z1 и Z2 вместе формируют часть, получаемую из бета-гидроксикарбоновой кислоты, где атом, присоединенный к атому бора, в каждом варианте является атомом кислорода;
причем альфа-гидроксильная кислота описывается формулой (V) Rb3 О Rb4^AQH
где каждый Rb3 и Rb4 независимо представляет собой
при этом одна из карбоксильных групп необязательно образует дополнительную связь с атомом бо-
ра;
где каждый радикал Rb1 и Rb2 представляет собой атомы водорода; каждый Rb3 и Rb4 независимо представляет собой -(СН2)р-СО2Н; при этом одна из карбоксильных групп необязательно образует дополнительную связь с атомом бо-
ра;
р равно 0 или 1.
Определения
Во избежание двусмысленности трактовки термин "протеасома" относится как к самой протеасоме, так и к иммунопротеасоме.
Термин "примерно" здесь и далее используется со значением "приблизительно", "в пределах", "грубо" либо "около". В том случае, если термин "примерно" используется в связке с числовым значением, пределы данного числового значения модифицируются в меньшую и большую стороны от указанного значения. В целом термин "примерно" здесь и далее используется с целью модификации числового зна
чения в меньшую и большую стороны с отклонением на 10%.
Здесь и далее термин "включает" обозначает "в составе данного вещества, но им не ограничивается".
Для специалиста в данной области ясно, что определенные вещества в составе данного изобретения могут существовать в виде таутомерных форм, каждая из таутомерных форм вещества рассматривается в свете данного изобретения. Если не указано иначе, описанные здесь и далее структуры подразумевают также все геометрические (либо конформационные) изомеры, т.е. (Z) и (Е) изомеры с двойными связями, а также (Z) и (Е) конформационные изомеры, равно как и стереохимические формы структуры; т.е. R- и S-конфигурации для каждого центра асимметрии. Таким образом, в данном изобретении рассматриваются единичные стереохимические изомеры наравне с энантиомерными и диастереомерными смесями данного вещества. Если смесь обогащена одним типом стереоизомера по сравнению с другим типом стерео-изомера, смесь может содержать, например, избыток энантиомерного изомера до уровня 50, 75, 90, 99
либо 99,5%.
Если на указано иначе, рассматриваемые здесь и далее также вещества считаются содержащими компоненты, отличающиеся лишь по наличию одного либо нескольких изотипически обогащенных форм. Например, вещества, имеющие данную структуру и отличающиеся лишь тем, что один из атомов водорода замещен дейтерием или тритием либо один из атомов углерода замещен изотопом 13С- либо 14С-, также рассматриваются в составе данного изобретения.
Здесь и далее термин "засевание" используется для обозначения процесса добавления кристаллического материала с целью инициации кристаллизации либо рекристаллизации.
Когда вещество кристаллизуется из раствора либо кашицы, кристаллизация может привести к образованию различных вариантов строения решетки, данное свойство именуется "полиморфизм." Каждый из образующихся кристаллов является "полиморфом." Хотя все полиморфы данного вещества имеют один и тот химический состав, они могут отличаться друг от друга по одному либо нескольким физическим свойствам, таким, как растворимость и диссоциация, истинная плотность, точка плавления, форма кристаллов, особенности уплотнения, потоковые свойства, и/или стабильность в цельном состоянии.
Здесь и далее термин "сольватный либо сольватированный" обозначает физическую связь вещества с одним либо несколькими молекулами растворителя. Эта физическая связь также подразумевает водородные связи. В определенных случаях сольват можно изолировать, как, например, в том случае, когда один либо несколько молекул растворителя внедряется в кристаллическую решетку цельного кристалла. "Сольватный либо сольватированный" относится и к жидкой фазе, и к изолируемым сольватам. Типичным представителем сольватов являются, например, гидраты, этанолаты либо метанолаты. Физические свойства сольвата в типичном случае отличаются от других сольватов и от несольватированных форм вещества. Поскольку химический состав также отличается у каждого сольвата, эти формы принято называть "псевдополиморфы".
Здесь и далее термин "гидрат" обозначает сольват, в котором молекула растворителя является молекулой Н2О, который присутствует в определенном стехиометрическом количестве и может, например, быть гемигидратом, моногидратом, дигидратом либо тригидратом. Здесь и далее термин "ангидрат" обозначает вещество, указанное в данном изобретении, при этом не содержащее молекул Н2О в своей кристаллической решетке.
Здесь и далее термин "кристаллический" обозначает цельную и высокоорганизованную химическую структуру вещества. В частности, кристаллическое вещество может образоваться в виде одной либо нескольких единых кристаллических форм вещества. В этой связи термины "единая кристаллическая форма" либо "кристаллическая форма" используются в порядке взаимозаменяемости, характеризуют кристаллы с различными свойствами (например, различные данные порошковой ренген-дифрактограммы, разные результаты дифференцирующей сканирующей калориметрии). Таким образом, здесь и далее считается, что каждый определенный полиморф и псевдополиморф определенного вещества имеет определенную кристаллическую форму.
"Значительная кристаллизация" обозначает, что в данном веществе присутствует определенный процент кристаллических форм. В частности, процентное отношение по весу может быть 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5, 99,9% либо любым числом в пределах от 10 до 100%. В некоторых воплощениях данного изобретения "значительная кристаллизация" будет обозначать, что вещество минимум на 70% кристаллизовано. В иных воплощениях данного изобретения термин "значительная кристаллизация" обозначает, что вещество минимум на 90% кристаллизовано.
Термин "значительная степень чистоты" обозначает, что в данной смеси присутствует значительный процент (по весу) чистого вещества. Значительными весовым процентным отношением считается примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% либо примерно
99,5%.
Если не указано иначе, здесь и далее подразумевается, что в структуре вещества присутствуют гидраты, ангидраты, сольваты и полиморфы такового вещества.
Здесь и далее термин "вещество (1-1)" и "4-^^)-(карбоксил)-2-(^)-1-(2-(2,5-дихлоробензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота" используются в порядке взаимозаменяемости и подразумевают наличие в составе всех кристаллических форм. Оба термина относятся к веществу, получаемому в примере 1 и примере 1А (в числе примеров, перечисленных ниже) и, в том числе, относятся к форме 1 и форме 2.
Здесь и далее термины "вещество форма 2" и "4-^^)-(карбоксиметил)-2-(^)-1-(2-(2,5-
дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота форма 2" используются в порядке взаимозаменяемости. Оба термина относятся к кристаллической форме вещества, получаемого в примере 1 форма 2 и примере 1А (в числе примеров, перечисленных ниже).
Здесь и далее термины "вещество формулы (VIII-1)" и "^)-1-((2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутилбороновая кислота" используются в порядке взаимозаменяемости. Вещество в формуле (VIII-1) описано в патенте США № 7442830, патенте WO № 09/020448.
Здесь и далее термины "вещество формулы (I-15)", "вещество (I-15)" и "(I-15)" используются в порядке взаимозаменяемости по отношению к лимоннокислому эфиру вещества (VIII-15) и по отношению к веществу, получаемому в примере 15 (в числе примеров, перечисленных ниже).
Здесь и далее подразумевается, что общий вес одной фармацевтической дозировки для приема внутрь определяется путем сложения весов всех компонентов в дозированной лекарственной форме, но значение не содержит в себе веса покрывающего материала, который может быть по желанию использован при изготовлении лекарственного формы для приема внутрь после окончания её формирования. Общий вес одной лекарственной формы для приема внутрь используется в качестве основы для расчета весового процентного отношения каждого компонента в составе лекарственной формы для приема внутрь.
Здесь и далее термин "с низким содержание влаги" используется по отношению к добавочному компоненту, такому как наполнитель, при этом означая, что добавленный компонент имеет уровень влажность в пределах от приблизительно 0,5 до приблизительно 4%. Термин "с низким содержание влаги" можно использовать в порядке взаимозаменяемости с термином "низкий уровень воды".
Здесь и далее термин "лиофилизированный порошок", "таблетка" либо "лиофилизированная таблетка" относится к любому цельному материалу, полученному в процессе лиофилизации водной смеси.
Здесь и далее термин "модификатор тоничности" обозначает агент, отвечающий за изменение ос-молярности жидкости либо раствора.
Здесь и далее термин "боронатный эфир" и "бороновый эфир" используются в порядке взаимозаменяемости и обозначают химическое вещество с содержанием фрагмента -B(Z1) (Z2), в котором Z1 и Z2 вместе формируют фрагмент, в котором атом, присоединенный к бору, в каждом из случаев является атомом кислорода.
В некоторых воплощениях данного изобретения фрагмент боронатного эфира является 5-членным кольцом. В других воплощениях данного изобретения фрагмент боронатного эфира является 6-членным кольцом. В других воплощениях данного изобретения фрагмент боронатного эфира представлен смесью 5-членных кольцевых структур с 6-членными.
Здесь и далее термин "альфа-гидроксикарбоновая кислота" обозначает вещество, содержащее гид-роксильную группу, напрямую связанную с атомом углерода альфа-позиции по отношению группе кар-боновой кислоты. Здесь и далее термин "альфа-гидроксикарбоновая кислота" не ограничивается веществами с наличием только одной гидроксильной группы и одной группы карбоновой кислоты.
Здесь и далее термин "бета-гидроксикарбоновая кислота" обозначает вещество, содержащее гидро-ксильную группу, напрямую связанную с атомом углерода в бета-позиции по отношению группе карбо-новой кислоты. Здесь и далее термин "бета-гидроксикарбоновая кислота" не ограничивается веществами с наличием только одной гидроксильной группы и одной группы карбоновой кислоты.
Здесь и далее термин "фрагмент, полученный из альфа-гидроксикарбоновой кислоты" обозначает фрагмент, образовавшийся путем удаления атома водорода из карбоновой кислоты в молекуле альфа-гидроксикарбоновой кислоты, а также путем удаления атома водорода, напрямую связанного с атомом углерода в альфа-позиции по отношению к группе карбоновой кислоты, из гидроксильной группы. Здесь и далее термин "фрагмент, полученный из бета-гидроксикарбоновой кислоты" обозначает фрагмент, образовавшийся путем удаления атома водорода из карбоновой кислоты в молекуле бета-гидроксикарбоновой кислоты, а также путем удаления атома водорода, напрямую связанного с атомом углерода в бета-позиции по отношению к группе карбоновой кислоты, из гидроксильной группы.
Детальное описание изобретения
В некоторых воплощениях настоящее изобретение относится к соединению с общей формулой (II)
С1 (Ц) или его фармацевтически приемлемой соли, где Ra представляет собой изобутил;
каждый Rb3 и Rb4 независимо представляет собой -(CH2)p-CO2H;
при этом одна из карбоксильных групп необязательно образует дополнительную связь с атомом бора;
либо к их смеси.
Известно, что, будучи не ограниченными какой-либо теорией химических связей, существуют и другие варианты описание формирования связей карбоновой кислоты с атомом бора в формулах (IIIa) (IVa).
Общая методология синтеза
Вещество с формулой (I) можно получить путем этерификации соответствующих бороновых кислот. Такой препарат бороновой кислоты можно получить общеизвестными в данной области методами. Более детальное описание см., например, в работах Адаме и соавт. (Adams et al.), материалы патента США № 5780454; Пикерсгилл и соавт. (Pickersgill et al.), опубликованный патент WO 2005/097809. Примерный алгоритм синтеза описан далее в схеме 1.
Соединение вещества i с аминокислотой ii, защищенной с N-конца, с последующим снятием защиты с N-терминального конца, приводит к образованию вещества iii либо соли такового. Среди примеров подходящей защитной группы (ЗГ) (PG) (без каких-либо ограничений в применении) ацильная ЗГ, например, формил, ацетильная ЗГ (Ас), сукцинильная ЗГ (Suc) и метилсукцинильная ЗГ; а также уретано-вые защитные группы, например, трет-бутоксикарбонил (Вос), бензилоксикарбонил (Cbz) и флуоренил-метилоксикарбонил (Fmoc). В случае если ЗГ является атом водорода, снятие защиты не обязательно. Реакция пептидного связывания может быть проведена с предварительной конверсией фрагмента карбо-новой кислоты вещества ii в активированный эфир либо галогенид кислоты, например, в 0-(N-гидроксисукцинимид) эфир с последующей обработкой веществом i. В другом способе активированный эфир может получиться in situ при контакте карбоновой кислоты с реагентом для пептидного связывания. В числе примеров подходящего реагента для пептидного связывания (без ограничений по применению) карбодиимидные реагенты, например дициклогексилкарбодиимид (DCC) либо 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (EDC); фосфониевые реагенты, например, (бензотриазол-1-илокси)трис-(диметиламино)фосфония гексафторофосфат (В(Р); а также урониевые реагенты, например, O-( 1Н-бензотиазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурониум-тетрафторборат (TBTU).
Вещество iii затем соединяется с фрагментом, блокирующим аминогруппу с целью получения вещества iv. Условия для пептидного связывания, описанные выше (для соединения веществ i и ii) также применимы для соединения веществ iii фрагментом, блокирующим аминогруппу. Снятие защиты с фрагмента бороновой кислоты фрагмент также позволяет получить вещество v. Этап снятия защиты в предпочтительном варианте проводится путем трансэтерификации в двухфазной смеси с содержанием боронового эфира (вещество iv), с органическим поглотителем бороновой кислоты и с алканолом более низкого порядка, С5-8гидрокарбонатного растворителя и водного раствора минеральной кислота. Перечень других реагентов, применимых для снятия защиты с фрагмента бороновой кислоты, содержит (без каких-либо ограничений по применению) BCl3, литий-алюминий гидрид и NaIO4.
При использовании другого способа порядок реакций соединения может быть перевернут согласно схеме 2. Таким образом, защищенная с О-конца аминокислота (vi) сначала объединяется с фрагментом, блокирующим аминогруппу, затем идет гидролиз эфира с формированием вещества vii. По желанию ЗГ может являться атом водорода, тогда гидролиз эфира не требуется, реакция происходит напрямую с образованием вещества vii. Связывание с веществом i и снятие защиты с бороновой кислоты происходят далее тем же путем, как приведено в схеме 1, с образованием вещества v.
Вещество v затем реагирует с соответствующей альфа-гидроксикарбоновой кислотой либо бета-гидроксикарбоновой кислотой с образованием вещества с формулой (I) (указано в схеме 3).
Схема 3
Конверсия вещества v в вещество с формулой (I) может быть завершена при наличии условия для этерификации, т.е. в присутствии примерного молярного эквивалента альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты в растворителе типа этил-ацетата при температуре в пределах от 40 до 80°С. Реакция конверсии вещества v в вещество с формулой (I) может также быть завершена описанным выше путем с использованием молярного избытка альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты. В числе других подходящих для данной конверсии растворителей можно назвать (для примера) метилизобутилкетон, ацетон, ацетонитрил, 2-метилтетрагидрофуран, анизол, изопропилацетат, диметоксиэтан, тетрагидрофуран, диоксан, дихлолметан, толуэн, гептан, метил-циклогексан, трет-бутилметиловый эфир либо смеси таковых. Выбор растворителя будет частично зависеть от растворимости используемых альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислот. Температура реакции конверсии вещества v в вещество с формулой (I) будет частично зависеть от точки кипения используемого растворителя либо смеси растворителей.
Превращение вещества v в вещество с формулой (I) может катализироваться органическим амин-ным основанием, таким, как, например, триэтиламин, триэтилендиамин, пиридин, коллидин, 2,6-лютидин, 4-диметил-аминопиридин, ди-трет-бутилпиридин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, тет-раметилгуанидин, диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU), 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан, 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен, ^№диизопропилэтиламин либо смесь таковых.
Вещество с формулой v и альфа-гидроксикарбоновая кислота либо бета-гидроксикарбоновая кислота нагреваются вместе в среде выбранного растворителя в течение необходимого времени. По истечении данного промежутка времени реакционная смесь некоторое время остывает и затем вещество с формулой (I), выпадающее в осадок, отделяется фильтрацией. Охлаждение может протекать без контроля либо с аппаратным контролем (охладитель). Реакционная смесь можно помешивать во время охлаждения. При другом способе вещество формулы (I) также может быть отделено от реакционной смеси путем охлаж
дения с последующим выпариванием растворителя. Реакционную смесь можно подвергнуть кристаллизации ("высевание") с образованием кристаллов вещества (I) с целью запустить преципитацию.
Вторым растворителем может быть (некоторые из вариантов) гептан, метилциклогексан, толуол, трет-бутил-метиловый эфир, этилацетат либо смесь таковых, второй растворитель добавляется во время периода охлаждения. После добавления второго растворителя реакционная смесь подвергается дальнейшему охлаждению с преципитацией вещества с формулой (I). Другой способ: после внесения второго растворителя реакционная смесь повторно нагревается для образования гомогенного раствора, который затем охлаждается с последующей преципитацией вещества с формулой (I). Реакционная смесь обрабатывается кристаллами вещества с формулой (I) для индукции преципитации.
В других воплощениях изобретения вещество с формулой (I) выделяется в практически чистой форме. В таковых воплощениях изобретения степень чистоты примерно 80, около 85, около 90, около 91, около 92, около 93, около 94, около 95, около 96, около 97, около 98, около 99 либо примерно 99,5%.
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) выделяется в кристаллической форме. В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) выделяется в практически полностью кристаллизованной форме. В некоторых других воплощениях изобретения вещество с формулой (I) выделяется в аморфной форме.
Вещество с формулой (I) можно также получить путем лиофилизации вещества v в присутствии альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты. Данная процедура выполняется путем соединения водного раствора, содержащего вещество с формулой v с молярным избытком альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты в процессе лиофилизации. В некоторых воплощениях данного изобретения водный раствор может содержать водорастворимый растворитель. Таким дополнительным водорастворимым растворителем (из множества примеров) может быть трет-бутиловый спирт, метанол, этанол и смесь таковых смесь таковых. Совместная лиофилизация приводит к образованию состава, содержащего вещество с формулой (I) и избыток альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты.
Применение, разработка рецептуры и назначение
Данное изобретение позволяет получить вещества, являющееся сильным ингибитором протеасом. Данные вещества могут исследоваться в экспериментах in vitro либо in vivo ввиду наличия способности тормозить протеасомно-опосредованный пептидный гидролиз либо деградацию белка.
Таким образом, данное изобретение позволяет использовать методику торможения активации пеп-тидаз (одной либо целого ряда пептидаз) внутриклеточной протеасомы, осуществляемого путем контакта клетки, в которой необходимо торможение протеазы, с вышеописанным веществом либо фармацевтически приемлемой солью его, бороновым эфиром либо ангидридом бороновой кислоты.
Данное изобретение также обеспечивает методику торможения пролиферации клетки, которое осуществляется путем контакта клетки, пролиферацию которой необходимо угнетать, с вышеописанным веществом. Фраза "угнетает клеточную пролиферацию" используется для обозначения способности вещества в составе данного изобретения тормозить клеточное число либо рост клеток, контактирующих с веществом, по сравнению с группами клеток, не подвергавшихся обработке ингибитором. Оценка степени клеточной пролиферации может быть проведена путем подсчета числа клеток с использованием счетчика клеток либо путем исследования жизнеспособности клеток, например МТТ либо WST-тестов. В случае если клетки растут одним целым образованием (например, солидная опухоль либо орган), оценка пролиферации клеток может быть проведена путем измерения роста, к примеру, с использованием калиброванных измерительных приборов с последующим сравнением размеров клеток, подвергшихся обработке, с клетками, не подвергавшимися воздействию препарата.
В предпочтительном варианте рост клеток после обработки ингибитором уменьшается (как минимум) примерно на 50% по сравнению с ростом необработанных клеток. В различных воплощениях данного изобретения темп клеточной пролиферации обработанных ингибитором клеток уменьшается на (примерно) 75%, примерно на 90% либо примерно на 95% по сравнению с клетками, не подвергшимися обработке. В некоторых воплощениях данного изобретения фраза "угнетение пролиферации клеток" также подразумевает снижение числа клеток после обработки ингибитором (по сравнению с клетками, которые не подвергались обработке). Таким образом, ингибитор протеасом, угнетающий пролиферацию при контакте с клеткой, может привести к снижению темпа роста подвергшейся обработке клетки, к торможению клетки, к последующей программированной клеточной смерти (т.е. апоптозу) либо к некротической гибели клеток.
Другим аспектом данного изобретения является получение фармацевтически приемлемого состава, содержащего вещество формулы (I), либо фармацевтически приемлемой соли такового, а также фармацевтически приемлемого носителя.
В некоторых воплощениях данного изобретения в составе смеси также присутствует в свободном состоянии альфа-гидроксикарбоновая кислота либо соль таковой, или бета-гидроксикарбоновая кислота (или соль таковой). В таковых воплощениях изобретения альфа-гидроксикарбоновая кислота (или соль таковой) либо бета-гидроксикарбоновая кислота (или соль таковой) и вещество с формулой (I) присутствуют в молярном отношении (примерно) в пределах от 2:1 до 200:1. В различных воплощениях изобре
тения альфа-гидроксикарбоновая кислота (или соль таковой) либо бета-гидроксикарбоновая кислота (или её соль) и вещество с формулой (I) присутствуют в смеси в соотношении от (примерно) 2:1 до (примерно) 200:1, от (примерно) 15:1 до (примерно) 80:1 либо от (примерно) 20:1 до (примерно) 40:1.
Если в данном составе используется фармацевтически приемлемая соль вещества - компонента данного изобретения, то данная соль в предпочтительном варианте получают с применением неорганической либо органической кислоты или основания. Примеры подходящих для использования солей можно найти в, например, работах Берга и соавт. (Berge et al.), Журнал Научного Общества Фармакологов (J. Pharm. Sci.) 66:1-19 (1977) и в работах Ремингтона (Remington): Фармакология - Наука и Практика (The Science and Practice of Pharmacy), 20-e издание, под редакцией А. Женнаро (A. Gennaro), издательство Lippincott Williams & Wilkins, 2000.
Среди примеров подходящих солей указанного вещества и кислоты можно перечислить следующие: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензен сульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфо-рат, камфор сульфонат, циклопентан-пропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерилфосфат, гемисульфат, гептанат, гексонат, гидрохлорид, гидробромид, гидрой-одид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, ок-салат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканат.
Среди примеров солей, образованных добавлением щелочи к данному веществу, можно перечислить (без ограничений по применению) соли аммония, соли щелочных металлов, таких как литий, натрий и калий; соли щелочно-земельных металлов, таких как кальций и магний; соли других мультивалентных металлов, таких как цинк; соли органических оснований, таких как дициклогексиламин, N-метил^-глюкамин, t-бутиламин, этилендиамин, этаноламин и холин; а также соли аминокислот, таких как аргинин, лизин и т.д.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" здесь и далее используется по отношению к материалу, который совместим с реципиентом (в предпочтительном варианте это млекопитающее, в более предпочтительном варианте - человек) и применим для доставки действующего вещества в точку воздействия без угнетения активности такового вещества. Токсичность либо наличие побочных эффектов, связанных с применением данного носителя, в предпочтительном варианте соразмерны с соотношением риск/выгода при использовании данного действующего вещества.
Термины "носитель", "добавочное вещество" либо "транспортная основа" здесь и далее используются в порядке взаимозаменяемости, при этом к ним относятся любые (все) сольвенты, растворители и другие жидкие транспортные основы, усилители дисперсии либо взвеси, поверхностно-активные вещества, модификатора pH, изотонические агенты, загустители либо эмульсификаторы, консерванты, связующие материалы, лубриканты и им подобные, перечень которых зависит от желаемой лекарственной формы препарата. В работах Ремингтона (Remington): Фармакология - Наука и Практика (The Science and Practice of Pharmacy), 20-e издание (под редакцией А. Женнаро (A. Gennaro), издательство Lippincott Williams & Wilkins, 2000) описываются различные типы носителей. Используемые при составлении фармацевтически приемлемых смесей, а также методики приготовления таковых хорошо известны. Стрикли (Strickley), публикация в журнале Фармацевтические исследования (Pharmaceutical Research), 21(2) 201230 (2004) приводит обзор фармацевтически приемлемых транспортных добавок при использовании в коммерческих продуктах для получения растворимых форм для приема внутрь либо для парентерального введения. За исключением тех из обычно используемых носителей, которые не совместимы с веществом в данном изобретении ввиду развития нежелательных биологических эффектов либо каких-либо нежелательных взаимодействий с другими компонентами фармацевтически приемлемой лекарственной формы, применение данных транспортных добавок будет активно рассматриваться применительно к данному изобретению. Среди примеров таких материалов, которые могут послужить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, можно отметить (без ограничений по применению) ионообменные компоненты, окись алюминия, алюминия стеарат, лецитин, сывороточные белки, такие как альбумин сыворотки крови человека, буферные вещества, такие как фосфаты, карбонаты, гидроокись магния и алюминия, глицин, сорбиновая кислота, либо калия сорбат, смеси глицеридов (с частичным замещением растительными жирными кислотами), вода, апирогенная вода, соли либо электролиты, такие как протамина сульфат, двунатриевый гидрофосфат, калия гидрофосфат, натрия хлорид и соли цинка, коллоидный кремний, три-силикат магния, поливинилпирролидон, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропиленблочные полимеры, шерстяной жир, сахара, такие как лактоза, глюкоза, сукроза и маннитол, крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал, целлюлоза и ее производные, такие как натрийкарбокси-метилцеллюлоза, этилцеллюлоза и целлюлозы ацетат, порошкообразный трагакант; мальт (солод), желатин, тальк, такие добавки, как кокосовое масло и воски для суппозиториев, масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, саффлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло, гликоли, такие как пропиленгликоль и полиэтиленгликоль, эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат, агар, альгиновая кислота, изотонический раствор, раствор Рингера, спирты, такие как этанол, изопропиловый спирт, гексадециловый спирт, а также глицерин, циклодекстрины, такие как гидрокси-пропил-р-циклодекстрин и кислый бутиловый эфир р-циклодекстрина, лубриканты, такие как натрия
лаурил сульфат и магния стеарат, углеводороды нефти, такие как минеральное масло и вазелин. Красители, вещества, улучшающие высвобождение, покрывающие вещества, подсластители, ароматизаторы и отдушки, консерванты и антиокислители - все эти вещества также могут присутствовать в составе препарата, в зависимости от желания составителя рецептуры.
Фармацевтическая рецептура вещества, указанного в данном изобретении, может быть произведена методами, хорошо известным специалистам в данной области, такими как обычное формирование гранул, приготовление смесей, растворение, заключение в капсулу, лиофилизация либо приготовление эмульсии. Рецептура может производиться во множестве форм, в том числе гранулы, преципитаты, либо взвеси частиц, порошки, в том числе полученные в результате лиофильной сушки, роторной сушки либо спреевой сушки, аморфные порошки, таблетки, капсулы, сиропы, свечи, лекарственные формы для инъекций, эмульсии, эликсиры, суспензии либо растворы.
В соответствии с выбранной формой воплощения данного изобретения, фармацевтически состав, содержащий вещество, описанное в данном изобретении, разрабатывается с целью назначения млекопитающим, в предпочтительном варианте человеку. Данный фармакологический состав, содержащий компоненты данного изобретения, может быть предназначен для приема внутрь, парентерально, путем ингаляции, местно, ректально, капельно в нос, защечно, вагинально либо путем установки импланта-депо препарата. Здесь и далее термин "парентеральный" подразумевает подкожное, внутривенное, внутримышечного, внутрисуставное, интрасиновиальное, интрастернальное, интратекальное, внутрипеченочное, введение внутрь пораженных тканей и внутричерепное введение. В предпочтительном варианте данный фармацевтический состав принимается внутрь, вводится внутривенно либо подкожно. Лекарственная форма изобретения может быть разработана с коротким механизмом действия, с механизмом быстрого высвобождения либо в виде формы длительного действия. Тем не менее, данный состав также может предназначаться больше для местного применения, нежели системного, например введение в место локализации опухоли.
К числу жидких лекарственных форм, назначаемых для введения внутрь, относятся (без каких-либо ограничений по применению) фармакологически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Вместе с активными компонентами данные жидкие лекарственные формы могут содержать инертные растворители, которые обычно используются в данном производстве, например воды либо другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульсификаторы, например этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропи-ленгликоль, 1,3-бутиленгилколь, циклодекстрины, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое масло, арахисовое масло, кукурузное масло, ростковое масло, оливковое, касторовое и кунжутные масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли сорбитановые эфиры жирных кислот либо смеси таковых. Помимо инертных дилюентов, лекарственные формы для приема внутрь могут также содержать адъюванты, например, смачиватели, эмульсифицирующие и суспендирующие вещества, подсластители, ароматизаторы и отдушки. Лекарственные формы препарата для введения внутрь, например, стерильные водные/масляные суспензии для парентерального введения могут составляться согласно известным специалисту в данной области методам с применением диспергирующих агентов либо смачивателей и суспендирующих веществ. Стерильный препарат для парентерального введения может быть выполнен в виде раствора для инъекций, суспензии либо эмульсии в фармакологически приемлемом растворителе либо разбавителе, например, в растворе 1,3-бутандиола. К приемлемым транспортным добавкам и растворителям относятся вода, раствор Рингера, фармакопейные раствор натрия хлорида (Фармакопея США) и изотонический раствор натрия хлорида. Также используются стерильные фиксированные масла, обычно применяемые в качестве растворителя либо суспензионной среды. Для этих целей может быть использовано любое мягкое фиксированное масло, в том числе синтетические моно- либо диглицериды. Также при изготовлении препаратов для инъекций используются жирные кислоты, такие как олеиновая кислота. Лекарственные формы препарата могут подвергаться стерилизации путем, например, фильтрации через бактериальный фильтр, либо путем добавления стерилизующих веществ в виде цельных стерильных компонентов, которые могут быть растворены либо взвешены перед использованием в стерильной воде либо в других стерильных средах для изготовления препаратов для инъекций. Разработанные для парентерального введения составы можно вводить болюсно либо малыми порциями или в течение длительного времени.
К твердым лекарственным формам относятся капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В составе такой твердой лекарственной формы активный ингредиент смешивается с минимум одним инертным, фармацевтически приемлемым ингредиентом либо носителем, таким как цитрат натрия либо двукальция фосфатом и/или: а) наполнителем либо увеличителем объема (крахмалы, лактоза, целлюлоза, сукроза, глюкоза, маннитол и кремниевая кислота, b) связующим агентом (например, карбоксиметилцел-люлоза, альгинаты, желатин, поливинипирролидон, сукроза и гуммиарабик, с) увлажнители (например, глицерин) d) разлагающиеся агенты (такие как агар-агар, карбонат кальция, крахмал картофеля либо тапиоки, альгиновая кислота, определенные виды силикатов, кросповидон, целлюлоза, кроскармеллоза натрия, натрия крахмала гликолят и карбонат натрия, е) замедлитель загустевания раствора (например, парафин), f) ускорители всасывания (препараты четвертичного аммония), g) смачивающие вещества (на
пример, цетиловый спирт и грицерина моностеарат, h) абсорбенты (каолин и бентонитовая глина), а также i) лубриканты (тальк, стеарат кальция, стеарат магния, натрия стеарилфумарат, стеариновая кислота, цельные полиэтиленгликоли, натрия лаурилсульфат, глицерил бегенат и смеси данных препаратов. Если изготавливаются капсулы, таблетки и пилюли, в состав лекарственной формы могут входит также буферизующие компоненты (фосфаты либо карбонаты).
Препараты в твердой форме могут использоваться в качестве наполнителей для мягких либо плотно набитых желатиновых капсул, при этом также используются наполнители (например, лактоза либо молочный сахар наравне с высокомолекулярными полиэтиленгликолями и им подобными). Твердые лекарственные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул могут быть изготовлены с нанесением покрытия с использованием оболочек (кишечно-растворимая оболочка и другие виды покрытия, хорошо известные составителям фармацевтических рецептур). Также данные лекарственные формы могут содержать контрастирующие вещества и могут быть составлены таким образом, чтобы высвобождался только необходимый препарат и только в желаемом отделе кишечной трубки, возможно также придать им свойства замедленного высвобождения. Среди примеров такого вещества можно перечислить полимерные препараты и воски. Твердые лекарственные формы схожего типа также могут использоваться в качестве наполнителя для мягких либо плотно набитых желатиновых капсул, при этом также используются наполнители (например, лактоза либо молочный сахар наравне с высокомолекулярными полиэти-ленгликолями и им подобными).
Активное вещество также может находиться в микроинкапсулированной форме с добавлением одного либо нескольких наполнителей из вышеперечисленных. Твердые лекарственные формы в идее таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул могут быть изготовлены с нанесением покрытия и с использованием оболочек (кишечно-растворимая оболочка, оболочка с контролируемым высвобождением и другие виды покрытия, хорошо известные составителям фармацевтических рецептур). В таких твердых лекарственных формах активное вещество может быть смешано с минимум одним инертным компонентом, таким как сукроза, лактоза либо крахмал. Такие лекарственные формы также могут содержать в обычном порядке добавочные вещества и помимо инертных разбавителей, например, таблетирующие вещества, лубриканты и другие используемые при изготовлении таблеток вспомогательные вещества (магния стеа-рат и микрокристаллическая целлюлоза). При изготовлении капсул, таблеток и пилюль к лекарственной форме также могут быть добавлены буферные вещества. Также могут присутствовать контрастные вещества и ингредиенты, и лекарственные формы могут быть составлены таким образом, чтобы высвобождался только необходимый препарат и только в желаемом отделе кишечной трубки, возможно придать препарату также и свойства замедленного высвобождения. Среди примеров такого вещества можно перечислить полимерные препараты и воски. В некоторых воплощениях данного изобретения наполнителями либо транспортными добавками могут служить (без каких-либо ограничений по применению) натрия стеарилфумарат, карбоксиметил-целлюлоза, магния стеарат, кросповидон, этилцеллюлоза, тальк и силикатная микрокристаллическая целлюлоза.
Лекарственные формы для местного либо чрескожного назначения, содержащие компоненты данного изобретения, представлены в виде мазей, паст, кремов, лосьонов, гелей, присыпок, микстур, спреев, ингалянтов либо пластырей. Активное вещество смешивается в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым транспортным веществом и любым требуемым консервантом либо буфером по мере необходимости. Лекарственная форма для глаз, ушные капли и глазные капли также рассматриваются в данном изобретении. Также данное изобретение возможно применять и в виде трансдермальных пластырей, при этом достигается такое преимущество, как контролируемое внедрение препарата в организм. Такая лекарственная форма может быть получена путем растворения либо формирования взвеси активного вещества в подходящей среде. Можно также использовать усилители всасывания для повышения поглощения препарата кожей. Интенсивность поступления препарата можно контролировать с помощью особой мембраны либо путем нанесения препарата на полимерную матрицу либо гель.
В некоторых воплощениях данного изобретения получены лекарственные составы, содержащие вещество с формулой (I) и некоторые из вышеуказанных наполнителей. В некоторых других воплощениях изобретения получены лекарственные составы, содержащие вещество с формулой (II) и некоторые из вышеуказанных наполнителей. В иных воплощениях изобретения получены лекарственные составы, содержащие вещество с формулой (III) либо (IV) и некоторые из вышеуказанных наполнителей.
В дальнейших воплощениях данного изобретения получены лекарственные формы, содержащие лимоннокислый эфир вещества (VIII-1) и некоторые из вышеуказанных наполнителей. В других воплощениях изобретения получены лекарственные формы, содержащие лимоннокислый эфир вещества (VIII-15) и некоторые из вышеуказанных наполнителей. Также в других воплощениях изобретения получены лекарственные формы, содержащие лимоннокислый эфир вещества (VIII-18) и некоторые из вышеуказанных наполнителей.
(VIII-18)
В других воплощениях изобретения предполагается получение лекарственных форм, содержащих вещество либо кристаллическую форму такого. В другом варианте воплощениях данного изобретения предполагается получение лекарственных форм, содержащих вещество (I-15) либо кристаллическую форму такого. Ряд вариантов воплощения данного подразумевает получение лекарственных форм, содержащих вещество (I-18) либо кристаллическую форму такого.
Нижеприведенное описание фармацевтических рецептур и методов приготовления указанных фармацевтических рецептур применимо и к веществам с формулами (I), (II), (III), (IIIa), (IV) либо (IVa), здесь и далее данные формулы описываются в различных воплощениях изобретения. Следующее описание фармацевтических рецептур и методов получения указанных фармацевтических рецептур также применимы к веществам (I-15) либо (I-18).
В одном из воплощений данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I), при этом вещество с формулой (I) в значительной мере кристаллизовано. В другом варианте - вещество с формулой (I) в фармацевтической рецептуре примерно на 95, 96, 97, 98, 99, 99,5, 99,9% представлено кристаллической формой. В еще одном варианте воплощения данного изобретения вещество с формулой (I) в фармацевтической рецептуре полностью в кристаллической форме.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура изобретения позволяет получить стабильную твердую лекарственную форму для приема внутрь с содержанием активного компонента и с наполнителями (низкого уровня содержания влаги), производство таких лекарственных форм происходит с использованием технологии безводного изготовления рецептур.
В одном из воплощений данного изобретения фармацевтическая рецептура выполнена в виде лекарственной формы для приема внутрь, выбранной из группы, в составе которой капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В другом варианте фармацевтическая рецептура выполнена в виде капсул, при этом капсула выполнен на полимерной основе из материалов следующей группы: желатин, гидро-ксипропилметилцеллюлоза (НРМС), рыбный желатин и пуллулан. В иных воплощениях изобретения капсулу на основе полимера изготавливают из желатина и гидроксипропилметилцеллюлозы. В некоторых воплощениях капсула изготовлена из твердого желатина.
В одном их воплощений данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество формулы (I) либо кристаллическую такового, с добавлением наполнителя и, по желанию, лубриканта. В другом варианте фармацевтическая рецептура содержит от (примерно) 0,2 до (примерно) 3% вещества с формулой (I) либо кристаллической формы такового; от 97 до 99,8% состава является наполнитель; а также (необязательно) примерно 1,5% состава занимает лубрикант. В иных воплощения данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит от (примерно) 0,25 до 2% вещества с формулой (I) либо кристаллической формы такового; от 98 до 99,75% (примерно) составляет наполнитель.
В другом варианте воплощения изобретения фармацевтическая рецептура также содержит агент для повышения текучести, а также (по желанию) буфер. В других воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит от 0,2 до 3% (примерно) вещества с формулой (I) либо кристаллической формы такового, примерно 86,5-99,8% составляет наполнитель, (по желанию) примерно 1,5% лубрикан-та, (по желанию) до 5% агента для повышения текучести и (по желанию) до 5% (примерно) буфера (проценты указаны по отношению к общему весу).
В другом варианте воплощения данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит примерно от 0,2 до 12% вещества с формулой (I) либо кристаллической формы такового, примерно от 76,5 до 99,8% наполнителя, (по желанию) до (примерно) 1,5% лубриканта, (по желанию) до примерно 5%
агента для повышения текучести и (опционально) до 5% буфера (проценты указаны по отношению к общему весу).
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) либо кристаллическая форма такового присутствует в составе фармацевтической рецептуры в количестве (примерно) от 0,2 до 3% (проценты указаны по отношению к общему весу). В некоторых других воплощениях изобретения вещество с формулой (I) либо кристаллическая форма такового присутствует в составе фармацевтической рецептуры в количестве (примерно) от 0,25 до 2% (проценты указаны по отношению к общему весу).
К подходящим наполнителям относятся (без каких-либо ограничений по применению) порошкообразная целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, силикатная микрокристаллическая целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза высокой плотности, микрокристаллическая целлюлоза с низким уровнем содержания влаги, прежелатинизированный крахмал, натрия крахмала гликолят и смеси данных веществ. В некоторых других воплощениях изобретения наполнителем является вещество из группы, в составе которой порошкообразная целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, силикатная микрокристаллическая целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза с низким уровнем содержания влаги и смеси данных веществ. В некоторых других воплощениях изобретения наполнителем является микрокристаллическая целлюлоза с низким уровнем содержания влаги. В некоторых воплощениях изобретения наполнитель является веществом из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким уровнем содержания влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ.
В других воплощениях изобретения наполнитель в составе рецептуры занимает примерно 97-99,8% по общему весу. В некоторых других воплощениях изобретения наполнитель в рецептуре присутствует в количестве примерно от 98 до 99,75% по общему весу. В других вариантах (с добавлением лубриканта) количество наполнителя снижено на число, соответствующее процентному содержанию лубриканта. В некоторых дальнейших воплощениях изобретения наполнителя в рецептуре примерно от 86,5 до 99,8% (проценты указаны по отношению к общему весу).
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество-наполнитель состоит из первого наполнителя и второго наполнителя. Первый наполнитель представлен в количестве примерно от 0 до 99,8% (проценты указаны по отношению к общему весу), второй наполнитель также может присутствовать в количестве от 0 до 99,8% (проценты указаны по отношению к общему весу), с учетом того, что общее количество наполнителя не должно превышать 99,8%. В некоторых воплощениях данного изобретения первого наполнителя в рецептуре от 40 до 60% (примерно, проценты указаны по отношению к общему весу), второго наполнителя также в рецептуре от 40 до 60% (проценты указаны по отношению к общему весу), при этом общее количество наполнителя не должно превышать 99,8% (проценты указаны по отношению к общему весу).
В некоторых воплощениях данного изобретения первый наполнитель обычно является веществом из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения вторым наполнителем обычно является вещество из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелати-низированный крахмал и смеси данных веществ.
Подходящими лубрикантами являются (без каких-либо ограничений по применению) магния стеа-рат, глицерилбегенат, гидрогенизированное растительное масло, тальк, цинка стеарат, кальция стеарат, сукрозы стеарат, натрия стеарил фумарат и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения лубрикантом является магния стеарат. В одних воплощениях изобретения количество луб-риканта в рецептуре около 1,5% (проценты указаны по отношению к общему весу). В некоторых других воплощениях изобретения лубриканта в рецептуре около 1% (проценты указаны по отношению к общему весу).
Подходящим агентом для повышения текучести являются (без каких-либо ограничений по применению) кремния диоксид, тальк и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения агентом для повышения текучести является тальк. В других воплощениях изобретения агент для повышения текучести в рецептуре добавлен до уровня примерно 5% (проценты указаны по отношению к общему весу). В некоторых других воплощениях изобретения агент для повышения текучести в рецептуре добавлен до уровня 1% (проценты указаны по отношению к общему весу). Однако в некоторых других воплощениях изобретения агент для повышения текучести в рецептуре добавлен до уровня в 2% (проценты указаны по отношению к общему весу).
Перечень подходящих буферных добавок: цитрат натрия, лимонная кислота и смеси данных веществ и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения буфером является цитрат натрия. В некоторых других воплощениях изобретения количество буферных добавок в рецептуре до (примерно) 5% (проценты указаны по отношению к общему весу). В иных воплощениях изобретения количество буферных добавок в рецептуре до 2% (проценты указаны по отношению к общему весу).
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с
формулой (I) либо кристаллическую форму такового, наполнитель и (необязательно) лубрикант; при этом
наполнитель выбирается из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким уровнем содержания влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ; а также
если в рецептуре добавлен лубрикант, то это магния стеарат.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество формулы (I) либо кристаллическую форму такового, наполнитель и (по желанию) лубрикант; при этом вещество с формулой (I) - это вещество (I-1), (I-15) либо (I-18);
наполнитель - это вещество из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ; а также если в рецептуре добавлен лубрикант, то это магния стеарат.
В некоторых воплощениях данного изобретения
фармацевтическая рецептура содержит (примерно) от 0,25 до 2% вещества с формулой (I) либо кристаллической формы такового; и от 98 до 99,75% (примерно) наполнителя; при этом вещество с формулой (I) - это вещество (I-1), (I-15) либо (I-18); также
наполнитель - это вещество из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ.
В некоторых воплощениях данного фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) либо кристаллическую форму такового, наполнитель, (необязательно) лубрикант; (по желанию) агент для повышения текучести; а также (опционально) буферные добавки; при этом
альфа-гидроксикарбоновой кислотой либо бета-гидроксикарбоновой кислотой является лимонная кислота;
наполнитель представляет собой вещество из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ;
если в рецептуре добавлен лубрикант, то это магния стеарат;
агент для повышения текучести в рецептуре - тальк; также
буферная добавка (если добавлена) - это цитрат натрия.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) либо кристаллическую форму такового, наполнитель, (по желанию) лубрикант; (опционально) агент для повышения текучести; и (необязательно) буфер, при этом
вещество с формулой (I) - это вещество (I-1), (I-15) либо (I-18);
наполнитель - это вещество из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ;
если в рецептуре добавлен лубрикант, то это магния стеарат; агент для повышения текучести в рецептуре - тальк; также буферная добавка (если добавлена) - это цитрат натрия.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит от 0,2 до 3% (примерно) вещества с формулой (I) либо кристаллической формы такового, от 86,5 до 99,8% наполнителя, (необязательно) до 1,5% (примерно) лубриканта, (опционально) до 5% агента для повышения текучести и (по желанию) до 5% буферной добавки (проценты указаны по отношению к общему весу), при этом
вещество с формулой (I) - то вещество (I-1), (I-15) либо (I-18);
наполнитель - это вещество из группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ;
если в рецептуре добавлен лубрикант, то это магния стеарат; агент для повышения текучести в рецептуре - тальк; также буферная добавка (если добавлена) - это цитрат натрия.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) либо кристаллическую форму такового, наполнитель и (необязательно) лубрикант; при этом вещество с формулой (I) - это (I-1). В некоторых других воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) либо кристаллическую форму такового, наполнитель и (необязательно) лубрикант; при этом вещество с формулой (I) - это вещество (I-1); наполнитель -это вещество и группы, в составе которой микрокристаллическая целлюлоза с низким содержанием влаги, натрия крахмала гликолят, прежелатинизированный крахмал и смеси данных веществ; если в рецептуре добавлен лубрикант, то это магния стеарат.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) либо кристаллическую форму такового; при этом вещество с формулой (I) - это вещество
а кристаллическая форма - это форма 2.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой форма 2 и микрокристаллическую целлюлозу с низким содержанием влаги. В некоторых других воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой форма 2 и силикатную микрокристаллическую целлюлозу. В иных вариантах данного изобретения, фармацевтическая рецептура содержит вещество формулы форма 2, микрокристаллическую целлюлозу с низким содержанием влаги и магния стеарат. Существуют также варианты, в которых фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой формы 2, микрокристаллическую целлюлозу и магния стеарат.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой форма 2, микрокристаллическую целлюлозу с низким содержанием влаги и тальк. В некоторых других воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой
форма 2 и прежелатинизированный крахмал. В других воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой форма 2, прежелатинизированный крахмал, тальк и магния стеарат. Существуют также варианты изобретения, в которых фармацевтическая рецептура содержит вещество формулы форма 2, микрокристаллическою целлюлозу с низким содержанием влаги, тальк и магния стеарат. В некоторых воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество формулы форма 2, микрокристаллическую целлюлозу с низким содержанием влаги, тальк, магния стеарат и цитрат натрия. В некоторых других воплощениях изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой форма 2, микрокристаллическую целлюлозу с низким содержанием влаги, тальк, магния стеарат и прежелатинизированный крахмал. Существуют также варианты воплощения данного изобретения, в которых фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой
форма 2, микрокристаллическую целлюлозу с низким содержанием влаги, тальк, магния стеарат и натрия крахмала гликолят.
В случае, если вещество с формулой (I) подвергается гидролизу, эфирная часть молекулы гидролизу ется с образованием вещества формулы (VIII) в молекулярном соотношении 1:1.
Используя аналитические методы, в том числе приготовление образцов в гидролитических условиях, было проведено измерение количества вещества с формулой (VIII), присутствующего в изучаемом образце (см. метод анализа 1, описание приводится далее), путем сравнения с референсным стандартным раствором известной степени чистоты. Также количество вещество с формулой (VIII) в образце вещества с формулой (I) изучалось с использованием аналитических методов, не подвергающих образец гидролизу, использовалось сравнение с референсным стандартом известной степени чистоты (см. метода анализа 2, описание приводится далее). Таким образом, количество вещества с формулой (VIII) при использовании метода анализа 1 за вычетом количества вещества с формулой (VIII), определенного при использовании метода анализа 2, дает нам следующий показатель - количество вещества с формулой (VIII) в образце, полученное в результате гидролиза вещества с формулой (I). Учитывая молекулярное соотношение 1 к 1 при конверсии вещества с формулой (I) в вещество формулы (VIII), конверсия при известном молекулярном весе позволяет узнать количество вещества с формулой (I) в тестируемом образце.
Далее будет установлено, что использование такой аналитической методики (описание в предыдущем пункте) с данными рассматриваемого ниже экспериментального раздела равным образом применимо к любому из веществ с формулами (I), (II), (III), (IIIa), (IV) либо (IVa) в различных воплощениях изобретения с участием данных формул (описание дано ниже). Такие методы анализа, как те, что описаны в предыдущем пункте и в разделе экспериментов (дано ниже) в равной степени применимы к веществам (I-1), (I-15) либо (I-18).
В некоторых воплощениях данного изобретения количество вещества с формулой (VIII) в фармацевтической рецептуре определялось путем измерения количества вещества с формулой (VIII), присутствующего в образце, подвергшемуся воздействию условии, при которых вещество с формулой (I) гид-ролизуется с образованием вещества формулы (VIII).
В некоторых воплощениях данного изобретения количество вещества с формулой (I-1) либо кристаллической формы такового, присутствующее в фармацевтической рецептуре, выражалось в эквивалентном количестве на основании известной молярной массы вещества с формулой (VIII-1).
В некоторых воплощениях данного изобретения указана единичная дозировка фармацевтической рецептуры, в составе которой вещество формулы либо кристаллическая форма такового.
В некоторых воплощениях данного изобретения предоставляется процесс производства лекарственной формы для приема внутрь, в которой содержится вещество с формулой (I) либо кристаллическая
форма такового, при этом фармацевтическая лекарственная форма для приема внутрь представлена в виде капсулы. Данный процесс производства состоит из следующих шагов:
(а-1) смешать вместе просеянный наполнитель и просеянную форму вещества с формулой (I) либо кристаллическую форму такового в одной емкости;
(а-2) пропустить получившуюся смесь (шаг (а-1)) через сито, затем смешать;
(а-3) просеять добавляемый наполнитель через сито того же размера, поместить в ту же емкость и смешать в том же смесителе;
(а-4) повторить шаг (а-3) до двух раз;
(а-5) полученную после выполнения шага (а-4) смесь поместить в аппарат для заполнения капсул; затем
(а-6) провести сортировку полученных после выполнения шага (а-5) капсул по весу.
В некоторых воплощениях данного изобретения шаг (а-3) может повторяться три или более раз.
Если в фармацевтической рецептуре присутствует лубрикант, для данного изобретения разработан процесс производства фармацевтически приемлемой лекарственной формы, в составе которой вещество с формулой (I) либо кристаллическая форма такового (при этом лекарственная форма выполнена в виде капсулы). Процесс состоит из следующих этапов:
(b-1) смешать вместе просеянный наполнитель и просеянное вещество с формулой (I) либо кристаллическую форму такового в одной емкости;
(b-2) пропустить получившуюся после выполнения шага (b-1) смесь через сито, затем перемешать;
(b-3) просеять добавляемый наполнитель через то же сито, смешать все в одной емкости, затем перемешать в том же смесителе;
(b-4) повторить шаг (b-3) до двух раз;
(b-5) смешать смесь, полученную после выполнения шага (b-4), и просеянный лубрикант; (b-6) взять полученную после завершения шага (b-5) смесь и поместить в аппарат для заполнения капсул; а также
(b-7) провести сортировку полученных после выполнения шага (b-6) капсул по весу.
В некоторых воплощениях данного изобретения шаг (b-3) можно повторить три или более раз. При наличии в фармацевтической рецептуре дополнительных компонентов, например, буфера, второго наполнителя либо агента для повышения текучести, их можно вносить на любом из этапов ((b-1) либо (b-3)). Общее количество каждого компонента фармацевтической рецептуры может вноситься в течение одного этапа либо может быть разделено на несколько порций, которые могут быть равными по весу либо разными, добавлять их можно при каждом повторении шага (b-1) либо (b-3).
В некоторых воплощениях данного изобретения предлагается процесс производства фармацевтической лекарственной формы для приема внутрь, содержащей вещество формулы (I) либо кристаллическую форму такового, при этом фармацевтически приемлемая лекарственная форма выполнена в виде капсулы и процесс производства состоит из следующих этапов:
(с-1) просеять наполнитель через сито, затем поместить в смеситель с высоким сдвигом;
(с-2) просеять вещество формулы (I) либо кристаллическую форму такового через сито, затем поместить в тот же смеситель с высоким сдвигом;
(с-3) просеять наполнитель через сито, затем поместить в тот же смеситель с высоким сдвигом;
(с-4) смешивать компоненты в том же смесителе с высоким сдвигом менее 10 мин;
(с-5) взять полученную смесь из шага (с-4) и поместить в аппарат для наполнения капсул; затем
(с-6) провести сортировку полученных после выполнения шага (с-5) капсул по весу.
В некоторых воплощениях данного изобретения (при использовании смесителя с высоким сдвигом) добавочные компоненты, присутствующие в фармацевтической рецептуре, могут добавляться в процессе повторения шага (с-1) либо шага (с-3).
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество формулы (I), используемое в процессе изготовления твердых лекарственных форм для приема внутрь, описание которых приведено выше, выбирается из группы, в составе которой вещество (I-1), (I-15) и (I-18). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество формулы (I), используемое в процессе изготовления твердых лекарственных форм для приема внутрь, описание которых приведено выше, является веществом с формулой (I-1).
Этапы процесса, описанные выше, могут выполняться с использованием обычного для данного производства оборудования. Обзор такового оборудования можно найти, например, в следующем источнике: Ремингтон (Remington): Фармакология - Наука и Практика (The Science and Practice of Pharmacy), 21-e издание, издательство Lippincott Williams & Wilkins, 2005.
Этап смешивания, описание которого приведено выше, можно проводить с использованием обычного для данного производства оборудования. В некоторых воплощениях данного изобретения время смешивания на каждом отдельном этапе смешивания разнится от 1 мин до примерно 45 мин. В некоторых других воплощениях изобретения время смешивания на каждом отдельном этапе смешивания разнится от 1 мин до (примерно) 20. В других воплощениях изобретения время смешивания на каждом отдельном этапе смешивания разнится от 1 до примерно 15 мин.
Этап смешивания, описание которого приведено выше, можно проводить с использованием обыч
ной для данного производства полиэтиленовой емкости. В некоторых воплощениях данного изобретения этап смешивания занимает от примерно 30 с до 5 мин. В некоторых воплощениях данного изобретения этап смешивания, описание которого приведено выше, допускается проводить в контейнере из нержавеющей стали.
Этап смешивания с использованием смесителя с высоким сдвигом можно проводить с использованием обычной для данного производства аппаратуры. Примерный вариант такого смесителя с высоким сдвигом продается под торговым название Lab High Shear Granulator (производство компании Key International, Inc., расположение - Инглиштаун (Englishtown), Нью-Джерси (NJ)). В некоторых воплощениях данного изобретения смешивание производится в течение примерно 10 мин. В некоторых других воплощениях изобретения смешивание производится в течение менее 5 мин.
Этап заполнения капсул, описание которого приведено выше, может производиться и использованием любого обычного для данного производства оборудования. В некоторых воплощениях данного изобретения аппарат для заполнения капсул полуавтоматизирован и может производить малые партии препарата. Пример такового аппарата по заполнению капсул продается под торговым названием In-Cap (производство компании Isopak Limited, расположение - Линколыпир (Lincolnshire), графство Стэмфорд (Stamford), Англия (United Kingdom)). В некоторых воплощениях данного изобретения аппарат для заполнения капсул управляется вручную. Пример такого аппарата по заполнению капсул продается под торговым названием ProFill 100 (производство компании Torpac, Inc., локализация -Фэйрфилд (Fairfield), Нью-Джерси (NJ), США).
В некоторых воплощениях данного изобретения используются капсулы из твердого желатина, например, капсулы с торговым названием Coni-Snap(r) (компания Capsugel, локализация - Пипэк (Реараск), Нью-Джерси (NJ)). Специалист в данной области в состоянии выбрать подходящий цвет и размер капсул. В некоторых воплощениях данного изобретения капсулы позволяют поместить внутрь вес до 85 мг, 120 мг либо 150 мг.
Этап сортировки по весу, описание которого приведено выше, можно проводить с использованием любого из обычных для данного производства аппаратов. Примерный вариант аппарата для сортировки капсул по весу продается под торговым названием SADE SP Bench Top Tablet and Capsule Weight Sorter (производство компании AC Compacting LLC, локализация - Норт Брунсвик (North Brunswick), Нью-
Джерси (NJ), США).
В некоторых воплощениях данного изобретения капсулы упаковываются в бутылки, фольгирован-ные пакеты либо блистерные упаковки. В некоторых других воплощениях изобретения капсулы пакуются в термоформированные емкости из полиэтилена высокой плотности (HDPE) с запечатанными крышками. В другом варианте воплощения данного изобретения капсул упаковываются герметичные вакуумные фольгированные пакеты. В других воплощениях изобретения капсулы упакованы в блистеры из двух слоев фольгированного материала. В некоторых других воплощениях изобретения упаковки с капсулами содержат влагопоглотитель.
Физическая и химическая стабильность фармацевтически приемлемой лекарственной формы для приема внутрь может быть проверена обычными для данного производства способами, например, путем измерения времени растворения, времени распада, исследования на наличие продуктов распада вещества с формулой (I) после хранения при разных температурах в течение различных промежутков времени.
В некоторых других воплощениях изобретения данное изобретение предоставляет фармацевтически приемлемую рецептуру для парентерального использования. В некоторых других воплощениях изобретения данное изобретение предоставляет жидкую фармацевтически приемлемую рецептуру для парентерального введения либо приема внутрь.
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) представлено в виде лио-филизированного порошка, полученного способом, похожим на тот, что описан у Пламондона и соавт. (Plamondon et al.), материалы Патента WO 02/059131, ссылка на данный источник указывается полностью в списке литературы. В таковых воплощениях данного изобретения водная смесь, в составе которой альфа-гидроксикарбоновая кислота либо бета-гидроксикарбоновая кислота, лиофилизируется с образованием вещества формулы (I).
В некоторых воплощениях данного изобретения лиофилизированный порошок также содержит в свободном виде альфа-гидроксикарбоновую кислоту либо бета-гидроксикарбоновую кислоту. В предпочтительном варианте альфа-гидроксикарбоновая кислота либо бета-гидроксикарбоновая кислота (в свободной форме) и вещество формулы (I) присутствуют в смеси в молярном отношении, пределы которого от (примерно) 0,5:1 до 100:1, в более предпочтительном варианте - от 5:1 до 100:1 (примерно). В различных воплощениях изобретения (при том, что альфа-гидроксикарбоновая кислота либо бета-гидроксикарбоновая кислота представлены лимонной кислотой) лиофилизированный порошок содержит (в свободном состоянии) лимонную кислоту и соответствующий эфир боронатной кислоты в молярном соотношении, пределы которого от 10:1 до 100:1 (примерно), от 20:1 до 100:1 (примерно) либо от 40:1 до 100:1 (примерно).
В некоторых воплощениях данного изобретения лиофилизированный порошок содержит лимонную кислоту и вещество с формулой (I), при этом смесь обладает существенной степенью чистоты (отсутст
вуют иные компоненты). Однако данная рецептура может содержать и другие (одни либо несколько) фармацевтически приемлемые добавки, вещества-носители, разбавители, наполнители, соли, буферные добавки, присадки, стабилизаторы, солюбилизирующие добавки и другие материалы, перечень которых хорошо известен специалисту в данной области. Приготовление фармацевтически приемлемой рецептуры с содержанием данных веществ описано в следующем источнике - Ремингтон {Remington): Фармакология - Наука и Практика (The Science and Practice of Pharmacy), 20-e издание, под редакцией А. Женнаро (A. Gennaro), издательство Lippincott Williams & Wilkins, 2000, либо более позднее издание того же автора, а также Стрикли (Strickley), публикация в журнале Фармацевтические Исследования (Pharmaceutical Research), 21(2) 201-230 (2004).
После растворения в водной среде между боронатным эфиром (вещество с формулой (I)) и соответствующей бороновой кислотой (в свободной форме) устанавливается равновесие. В некоторых воплощениях данного изобретения равновесие устанавливается достаточно быстро (т.е. в пределах 1-15 мин после добавления водной среды). Относительные концентрации боронатного эфира, бороновой кислоты и любых промежуточных компонентом в точке равновесия зависят от таких параметров, как, например, pH раствора, температура, вид альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты, а также от изначального соотношения альфа-гидроксикарбоновой кислоты либо бета-гидроксикарбоновой кислоты и боронатного эфира в составе вещества с формулы (I) в лиофилизирован-ном порошке.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой^), наполнитель и буфер. В некоторых других воплощениях изобретения фармацевтически приемлемая рецептура содержит вещество с формулой (I), наполнитель и буфер, рецептура представлена в виде лиофилизированного порошка.
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество формулы (I) находится уже в готовом состоянии. В некоторых других воплощениях изобретения вещество формулы (I) образуется in situ (на месте) из соответствующего вещества бороновой кислоты в веществе с формулой (VIII). В иных воплощениях изобретения вещество (I-1) находится в уже готовом состоянии. В других же воплощениях изобретения вещество (I-15) образуется in situ из вещества (VIII-15).
Одним из подходящих наполнителей является глицин. В некоторых воплощениях данного изобретения количество наполнителя составляет от (примерно) 1% по соотношению мас./об. (м/о, м/о) до примерного 5% м/о. В некоторых других воплощениях изобретения количество наполнителя в составе рецептуры примерно 3% м/о.
Подходящими в качестве буферных веществ являются цитрат натрия, лимонная кислота и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения буфер - это цитрат натрия и лимонная кислота.
В некоторых воплощениях данного изобретения буфер добавляется в рецептуру до концентрации от 45 до 65 мМ (примерно). В некоторых других воплощениях изобретения концентрация буферных веществ от 50 до 60 мМ (примерно).
В некоторых воплощениях данного изобретения соотношение буферного вещества к веществу формулы (I) составляет примерно от 50:1 до 10:1. В некоторых других воплощениях изобретения соотношение буферного вещества к веществу формулы (I) составляет примерно от 30:1 до 10:1. В иных воплощениях изобретения соотношение буферного вещества к веществу формулы (I) составляет примерно
20:1.
В некоторых воплощениях данного изобретения уровень pH в фармацевтической рецептуре в пределах от pH 4,7 и pH 6,1. Уровень pH в фармацевтической рецептуре может корректироваться с использованием любой подходящей органической либо неорганической кислоты.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I), наполнитель и буфер; при этом
наполнителем является глицин; а также
буферным веществом являются цитрат натрия и лимонная кислота.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I), наполнитель и буферные вещества; при этом
вещество с формулой (I) представлено веществами (I-15) либо (I-18); наполнителем является глицин; а также
буферным веществом являются цитрат натрия и лимонная кислота.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество формулы (I), наполнитель и буферные вещества. Рецептура представлена в виде лиофилизированного порошка; при этом
альфа-гидроксикарбоксильная кислота либо бета-гидроксикарбоксильная кислота представлены лимонной кислотой;
наполнителем является глицин; а также
буферным веществом являются цитрат натрия и лимонная кислота.
В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтическая рецептура содержит вещество с
формулой (I), наполнитель и буфер. Рецептура представлена в виде лиофилизированного порошка; при этом
вещество формулы (I) - это вещества (I-1), (I-15) либо (I-18); наполнителем является глицин; а также
буферным веществом являются цитрат натрия и лимонная кислота.
В некоторых воплощениях данного изобретения в фармацевтической рецептуре содержится вещество (I-1) в виде лиофилизированного порошка. В некоторых других воплощениях изобретения в фармацевтической рецептуре (в виде лиофилизированного порошка) содержится вещество (I-1), глицин, цитрат натрия и лимонная кислота. В некоторых других воплощениях изобретения в фармацевтической рецептуре содержится вещество (I-15) в виде лиофилизированного порошка. В иных воплощениях изобретения в фармацевтической рецептуре (в виде лиофилизированного порошка) содержится вещество (I-15), глицин, цитрат натрия и лимонная кислота.
В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание единичной дозировки фармацевтической рецептура, в составе которой вещество с формулой (I-1), наполнитель и буферное вещество (рецептура в виде лиофилизированного порошка). В некоторых воплощениях данного изобретения единичная дозировка фармацевтической рецептуры содержит вещество с формулой (I-1), глицин, цитрат натрия и лимонную кислоту (рецептура в виде лиофилизированного порошка).
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-1) в единичной дозировке фармацевтической рецептуры дано в количестве, эквивалентном молярной массе примерно от 1 мг до 10 мг вещества с формулой (VIII-1). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-1) в единичной дозировке фармацевтической рецептуры дано в количестве, эквивалентном молярной массе примерно от 1 мг до 5 мг вещества с формулой (VIII-1). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-1) в единичной дозировке фармацевтической рецептуры дано в количестве, эквивалентном молярной массе примерно 1,0, примерно 1,5 мг, примерно 2,0 мг, примерно 2,5 мг, примерно 3,0 мг, примерно 3,5 мг, примерно 4,0 мг, примерно 4,5 мг либо примерно 5,0 мг вещества с формулой (VIII-1). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-1) в единичной дозировке фармацевтической рецептуры дано в количестве, эквивалентном молярной массе примерно 3,5 мг вещества формулы (VIII-1).
В некоторых воплощениях данного изобретения количество глицина в единичной дозировке фармацевтической рецептуры примерно от 0,01 до 0,50 г. В некоторых воплощениях данного изобретения количество глицина в единичной дозировке фармацевтической рецептуры примерно от 0,03 до 0,250 г. В некоторых воплощениях данного изобретения количество глицина в единичной дозировке фармацевтической рецептуры примерно от 0,06 до 0,125 г.
В некоторых воплощениях данного изобретения цитрат натрия и лимонная кислота в единичной дозировке фармацевтической рецептуры даны в количестве, эквивалентном примерно от 0,005 до 0,250 г цитрат-иона. В некоторых воплощениях данного изобретения цитрат натрия и лимонная кислота в единичной дозировке фармацевтической рецептуры даны в количестве, эквивалентном примерно от 0,025 до 0,125 г цитрат-иона.
В некоторых воплощениях данного изобретения приводится описание единичной дозировки фармацевтической рецептуры, в составе которой вещество с формулой (I-15), наполнитель и буферное вещество (рецептура в виде лиофилизированного порошка). В некоторых воплощениях такового изобретения единичная дозировка фармацевтической рецептуры содержит вещество формулы (I-15), глицин, цитрат натрия и лимонную кислоту (рецептура в виде лиофилизированного порошка).
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-15) дано в единичной дозировке фармацевтической рецептуры в количестве, эквивалентном молярной массе примерно от 1 мг до 10 мг вещества с формулой (VIII-15). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-15) дано в единичной дозировке фармацевтической рецептуры в количестве, эквивалентном молярной массе примерно от 1 мг до 5 мг вещества с формулой (VIII-15). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I-15) дано в единичной дозировке фармацевтической рецептуры в количестве, эквивалентном молярной массе примерно 1,0 мг, примерно 1,5 мг, примерно 2,0 мг, примерно 2,5 мг, примерно 3,5 мг, примерно 4,0 мг, примерно 4,5 мг, примерно 5, 0 мг вещества с формулой (VIII-15). В других воплощениях данного вещество с формулой (I-15) дано в единичной дозировке фармацевтической рецептуры в количестве, эквивалентном молярной массе примерно 3.5 вещества с формулой (VIII-15).
В некоторых воплощениях данного изобретения количество глицина в единичной дозировке фармацевтической рецептуры примерно от 0,01 до 0,50 г. В некоторых воплощениях данного изобретения количество глицина в единичной дозировке фармацевтической рецептуры примерно от 0,03 до 0,250 г. В некоторых воплощениях данного изобретения количество глицина в единичной дозировке фармацевтической рецептуры примерно от 0,06 до 0,125 г.
В некоторых воплощениях данного изобретения цитрат натрия и лимонная кислота в единичной дозировке фармацевтической рецептуры даны в количестве, эквивалентном примерно от 0,005 до 0,250 г цитрат-иона. В некоторых воплощениях данного изобретения цитрат натрия и лимонная кислота в еди
ничной дозировке фармацевтической рецептуры даны в количестве, эквивалентном примерно от 0,025 до 0,125 г цитрат-иона.
Другим аспектом данного изобретение является методика приготовления вещества с формулой (I) в виде лиофилизированного порошка; методика состоит из следующих этапов: (d-1) смешивание:
i) растворителя на водной основе;
ii) вещества с формулой (I);
iii) наполнителя; также
iv) буферного вещества, получив смесь; затем (d-2) провести лиофилизацию смеси.
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) образуется in situ из соответствующего количества вещества формулы (VIII). Таким образом, в данном изобретении также описан метод получения вещества с формулой (I) в виде лиофилизированного порошка; данный процесс состоит из следующих этапов:
(е-1) смешивание:
i) растворителя на водной основе;
ii) вещество с формулой (VIII);
iii) наполнитель; а также
iv) альфа-гидроксикарбоновую кислоту либо соль таковой; либо бета-гидроксикарбоновую кислоту или соль таковой; либо смеси данных веществ; получить смесь; далее
(е-2) провести лиофилизацию смеси.
В некоторых воплощениях данного изобретения растворитель на водной основе содержит один или несколько сорастворителей с добавлением воды. В некоторых воплощениях данного изобретения сорас-творитель смешивается с водой. В некоторых других воплощениях изобретения сорастворитель - это спирт, например, этанол, трет-бутиловый спирт и смеси данных веществ. В некоторых других воплощениях изобретения сорастворитель - это трет-бутиловый спирт.
В некоторых воплощениях данного изобретения смесь растворителей на водной основе содержит примерно от 1 до 40% спирта (соотношение по объему). В некоторых других воплощениях изобретения смесь растворителей на водной основе содержит примерно от 3 до 10% спирта (соотношение по объему). В некоторых других воплощениях изобретения смесь растворителей на водной основе содержит примерно от 3 до 6% спирта (соотношение по объему). В иных воплощениях изобретения смесь растворителей на водной основе содержит примерно от 3 до 6% трет-бутилового (соотношение по объему). В других воплощениях изобретения смесь растворителей на водной основе содержит примерно 5% трет-бутилового спирта (соотношение по объему).
В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления вещества (I-1) в виде лиофилизированного порошка, метод состоит из следующих этапов:
(f-1) смешивание:
i) воды;
ii) вещества (I-1);
iii) глицина;
iv) цитрата натрия; также
v) лимонной кислоты; получают смесь; далее (f-2) подвергают смесь лиофилизации.
В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления вещества (I-15) в виде лиофилизированного порошка, метод состоит из следующих этапов: (g-1) смешать:
i) смесь растворителей (содержит воду и трет-бутиловый спирт);
ii) вещество (VIII-15);
iii) глицин;
iv) цитрат натрия; также
v) лимонную кислоту; получить смесь; далее (g-2) провести лиофилизацию смеси.
В некоторых других воплощениях изобретения (применительно к вышеописанной методике) количество трет-бутилового спирта в смеси растворителей от примерно 3 до 6% (соотношение по объему).
Лиофилизация либо лиофильная сушка может проводиться с использованием любого обычного для такого производства оборудования для лиофилизации либо низкотемпературной сушки в вакууме. В некоторых воплощениях данного изобретения лиофилизация проходит согласно нескольким этапам: (i) загрузка жидкой смеси (приготовленной согласно указанным выше схемам) и заморозка; (ii) отжиг; (iii) второй цикл заморозки; (iv) сушка в вакууме; далее (v) повторное высушивание. Температура и время каждого цикла будут зависеть от каждого индивидуального аппарата для лиофилизации либо лиофиль-ной сушки.
В некоторых воплощениях данного изобретения полученный лиофилизированный порошок имеет
содержание влаги менее 2% (примерно). В некоторых других воплощениях изобретения полученный лиофилизированный порошок имеет содержание влаги менее 1% (примерно).
Другим аспектом данного изобретения является методика приготовления фармацевтической рецептуры вещества с формулой (I) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом указанный метод заключается в восстановлении лиофилизированного порошка вещества с формулой (I) с использованием растворителя на водной основе, пригодного для применения в фармацевтически приемлемых лекарственных формах. Примерами такого растворителя могут быть вода, солевой раствор, фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБР) (PBS) и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения растворителем, используемым для восстановления, может быть, вода для инъекций, солевой раствор и смеси данных растворителей. В некоторых других воплощениях изобретения восстановителем служит вода для инъекций. После проведения восстановления жидкая фармацевтически приемлемая лекарственная форма содержит вещество с формулой (I) в концентрациях, значения которых указаны далее.
В некоторых воплощениях данного изобретения описан метод приготовления фармацевтической рецептуры вещества (I-1) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом данный метод заключается в восстановлении лиофилизированного порошка вещества (I-1) по указанной ранее методике с использованием растворителя на водной основе, пригодного для применения в фармацевтически приемлемых лекарственных формах. В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления фармацевтической рецептуры вещества (I-1) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом данный метод заключается в восстановлении лио-филизированного порошка вещества (I-1) по указанной ранее методике с использованием воды для инъекций либо изотонического солевого раствора. В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления фармацевтической рецептуры вещества (I-1) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом данный метод заключается в восстановлении лио-филизированного порошка вещества (I-1) по указанной ранее методике с использованием воды для инъекций.
В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления фармацевтической рецептуры вещества (I-15) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом данный метод заключается в восстановлении лиофилизированного порошка вещества (I-15) по указанной ранее методике с использованием растворителя на водной основе, пригодного для применения в фармацевтически приемлемых лекарственных формах. В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления фармацевтической рецептуры вещества (I-15) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом данный метод заключается в восстановлении лиофилизированного порошка вещества (I-15) по указанной ранее методике с использованием воды для инъекций либо изотонического раствора. В некоторых воплощениях данного изобретения дано описание метода приготовления фармацевтической рецептуры вещества (I-15) в виде жидкой фармацевтически приемлемой лекарственной формы, при этом данный метод заключается в восстановлении лиофилизиро-ванного порошка вещества (I-15) по указанной ранее методике с использованием воды для инъекций.
После завершения восстановления среде растворителя между веществом с формулой (I) и соответствующей бороновой кислотой с формулой (VIII) в растворе устанавливается равновесие. В типичном случае точка равновесия устанавливается быстро (в течение примерно 10-15 мин после внесения среды растворителя). Относительные концентрации боронатного эфира и бороновой кислота в данной точке равновесия зависят от pH раствора, температуры и соотношения между альфа-гидроксильной либо бета-гидроксильной кислотами по отношению к бороновой кислоте.
Другим аспектом данного изобретение является получение жидкой фармацевтически приемлемой рецептуры с содержанием вещества с формулой (I) и добавочных компонентов (описание приведено выше). В некоторых воплощениях данного изобретения жидкая фармацевтически приемлемая рецептура пригодна для парентерального введения. В некоторых других воплощениях изобретения жидкая фармацевтическая рецептура применима для приема внутрь.
В таковых воплощениях изобретения жидкая фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) буфер и (по желанию) модификатор тоничности.
В некоторых воплощениях данного изобретения соотношение буферного вещества к веществу с формулой (I) колеблется в пределах от 50:1 до 10:1 (примерно). В некоторых других воплощениях изобретения соотношение буферного вещества к веществу с формулой (I) в пределах от 30:1 до 10:1 (примерно). В иных воплощениях изобретения соотношение буферного вещества к веществу с формулой (I) установлено в пределах 20:1.
В некоторых воплощениях данного изобретения количество буферных веществ добавлено в концентрации от (примерно) 45 до 65 мМ. В некоторых других воплощениях изобретения количество буферных веществ добавлено в концентрации (примерно) от 50 до 60 мМ.
К подходящим буферным веществам относятся цитрат натрия, лимонная кислота и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения буфер - это цитрат натрия и лимонная кислота.
К подходящим модификаторам тоничности относятся, например, аминокислоты, такие как аргинин,
гистидин и глицин; соли, такие как натрия хлорид, калия хлорид, цитрат натрия, пропиленгликоль и смеси данных веществ. В некоторых воплощениях данного изобретения модификатором тоничности является пропиленгликоль. В некоторых других воплощениях изобретения модификатором тоничности является натрия хлорид.
После восстановления в растворителе на водной основе между веществом с формулой (I) и соответствующей бороновой кислотой с формулой (VIII) в растворе устанавливается равновесие. В типичном случае точка равновесия устанавливается быстро (в течение примерно 10-15 мин после внесения среды растворителя). Таким образом, как вещество с формулой (I), так и вещество с формулой (VIII) может быть использовано для приготовления жидкой фармацевтической рецептуры. В типичном случае точка равновесия устанавливается быстро (в течение примерно 10-15 мин после внесения среды растворителя). Относительные концентрации боронатного эфира и бороновой кислота в данной точке равновесия зависят от pH раствора, температуры и соотношения между альфа-гидроксильной либо бета-гидроксильной кислотами по отношению к бороновой кислоте. В некоторых воплощениях данного изобретения избыток альфа-гидроксильной либо бета-гидроксильной кислоты может выступать в роли стабилизатора, сдвигающего точку равновесия в сторону боронатного эфира. В некоторых воплощениях данного изобретения модификатор тоничности может также служить стабилизатором.
В некоторых воплощениях данного изобретения жидкая лекарственная форма (опционально) содержит консервант.
В некоторых воплощениях данного изобретения жидкая фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I), буфер и (по желанию) модификатор тоничности; при этом буферное вещество - это цитрат натрия и лимонная кислота; также модификатор тоничности (при его наличии) - натрия хлорид.
В некоторых воплощениях данного изобретения жидкая фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I), буфер и (по желанию) модификатор тоничности; при этом вещество с формулой (I) - это вещества (I-15) либо (I-18); буферное вещество - это цитрат натрия и лимонная кислота; также модификатор тоничности (при его наличии) - натрия хлорид.
В некоторых воплощениях данного изобретения, в случае, когда альфа-гидроксикарбоновая либо бета-гидроксикарбоновая кислоты представлены лимонной кислотой, жидкая фармацевтическая рецептура вещества с формулой (I) содержит вещество формулы (I), воду, лимонную кислоту, цитрат натрия и натрия хлорид. В некоторых других воплощениях изобретения, в которых альфа-гидроксикарбоновая либо бета-гидроксикарбоновая кислоты представлены лимонной кислотой, жидкая фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I), воду, лимонную кислоту и пропиленгликоль. В иных воплощениях изобретения, жидкая фармацевтическая рецептура содержит вещество с формулой (I) (при этом вещество с формулой (I) представлено веществом (I-1)), воду, лимонную кислоту, цитрат натрия и натрия хлорид.
В таковых воплощениях изобретения (в которых альфа-гидроксикарбоновая либо бета-гидроксикарбоновая кислоты представлены лимонной кислотой, жидкая фармацевтическая лекарственная форма вещества формулы (I) имеет уровень pH в пределах от 3 до 7 (примерно). В определенных воплощениях изобретения уровень pH в пределах от 4,9 до 6,7 (примерно). В других подобного воплощениях изобретения уровень pH в пределах от 5,5 до 6,5 (примерно).
В некоторых воплощениях данного изобретения (в которых альфа-гидроксикарбоновая либо бета-гидроксикарбоновая кислоты представлены лимонной кислотой) жидкая фармацевтическая рецептура вещества с формулой (I) образуется in situ из исходного раствора с необходимыми компонентами (в том числе и вещество с формулой (VIII)). В некоторых воплощениях данного изобретения исходный раствор содержит воду, лимонную кислоту, цитрат натрия и пропиленгликоль. В таких воплощениях изобретения полученный раствор может быть в дальнейшем разбавлен исходным раствором либо раствором натрия хлорида с образованием жидкой фармацевтической рецептуры вещества с формулой (I) требуемых концентраций.
Еще одним аспектом данного изобретение является получение единичной дозировки жидкой фармацевтически приемлемой рецептуры, в составе которой вещество с формулой (I), буфер и (необязательно) модификатор тоничности. В некоторых воплощениях данного изобретения единичная дозированная жидкая фармацевтически приемлемая рецептура содержит вещество с формулой (I), буферное вещество и (необязательно) модификатор тоничности, при этом вещество формулы (I) представлено веществом (I-1). В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) присутствует в единичной дозированной жидкой фармацевтически приемлемой рецептуре в концентрации от 0,5 мг/мл до 3 мг/мл (примерно) вещества с формулой (VIII). В некоторых других воплощениях изобретения вещество с формулой (I) присутствует в единичной дозированной жидкой фармацевтически приемлемой рецептуре в концентрации 1 мг/мл (примерно) вещества с формулой (VIII). В некоторых других воплощениях изобретения (в которых вещество формулы (I) представлено веществом (I-1)), вещество (I-1) в единичной дозировке жидкой фармацевтически приемлемой рецептуры присутствует в концентрации от 0,5 мг/мл до 3 мг/мл (примерно) вещества формулы (VIII-1). В иных же воплощениях изобретения (в которых ве
щество формулы (I) представлено веществом (I-1)), вещество (I-1) в единичной дозировке жидкой фармацевтически приемлемой рецептуры присутствует в концентрации 1 мг/мл (примерно) вещества формулы (VIII-1). В других воплощениях изобретения (в которых вещество формулы (I) представлено веществом (I-15)), вещество (I-15) в единичной дозировке жидкой фармацевтически приемлемой рецептуры присутствует в концентрации 1 мг/мл (примерно) вещества с формулой (VIII-15).
В некоторых воплощениях изобретения (в единичной дозированной форме жидкой фармацевтической рецептуры) цитрат натрия и лимонная кислота присутствуют в количестве, эквивалентном примерно от 0,005 до примерно 0,250 г цитрат-иона. В некоторых воплощениях изобретения (в единичной дозированной форме жидкой фармацевтической рецептуры) цитрат натрия и лимонная кислота присутствуют в количестве, эквивалентном примерно от 0,025 до примерно 0,125 г цитрат-иона.
В некоторых воплощениях изобретения (в единичной дозированной форме жидкой фармацевтической рецептуры) натрия хлорид добавлен в количестве примерно от 0,0045 до примерно 0,09 г. В некоторых воплощениях изобретения (в единичной дозированной форме жидкой фармацевтической рецептуры) натрия хлорид присутствует в количестве примерно от 0,01 до 0,04 г.
В некоторых воплощениях изобретения (в случае изготовления единичных дозированных форм жидкой фармацевтической рецептуры) каждая дозированная форма жидкой фармацевтической рецептуры до момента использования хранится в замороженном виде.
Другим аспектом данного изобретения является метод получения вещества с формулой (I) в виде дозированных форм жидкой фармацевтической рецептуры; этот процесс состоит из следующих этапов:
(h-1) растворение буферного вещества в растворителе на водной основе;
(h-2) растворение вещества формулы (I) либо кристаллической формы такового в смеси из пункта
(h-1);
(h-3) растворение модификатора тоничности в смеси из пункта (h-2);
(h-4) внесение дополнительного растворителя на водной основе до получения требуемого объема;
затем
(h-5) наполнение флаконов необходимым количеством смеси из пункта (h-4).
В некоторых воплощениях данного изобретения флаконы запечатываются после выполнения пункта (h-5). В некоторых других воплощениях изобретения сквозь смесь пропускаются пузырьки газообразного азота перед выполнением пункта (h-5). В некоторых других воплощениях изобретения после выполнения пункта (h-5) жидкость во флаконах может быть накрыта прослойкой газообразного азота перед запечатыванием.
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество с формулой (I) образуется in situ из вещества с формулой (VIII). В таковых воплощениях изобретения (во время выполнения пункта (h-2)) к смеси добавляется вещество с формулой (VIII) либо кристаллическая форма такового. В некоторых воплощениях данного изобретения альфа-гидроксильная кислота либо бета-гидроксильная кислота вносятся во время выполнения пункта (h-2). В некоторых других воплощениях изобретения альфа-гидроксильная либо бета-гидроксильная кислоты уже присутствуют на этапе (h-1) в виде буферного вещества.
Фармацевтические рецептуры в данном изобретении (в предпочтительном варианте) составляются с целью назначения пациенту с протеасомно-опосредованным заболеванием либо угрозой рецидива такового, либо страдающего от рецидива такового. Здесь и далее термин "пациент" обозначает животное (в предпочтительном варианте - млекопитающее, в более предпочтительном варианте -человек). Предпочтительным вариантом фармацевтической рецептуры данного изобретения являются лекарственные формы для приема внутрь, внутривенного введения либо подкожного введения. Однако любая из вышеуказанных лекарственных форм, содержащая терапевтически эффективное количество вещества из данного изобретения, подлежит испытанию в обычной серии экспериментов и, таким образом, подлежит изучению, результаты которого описаны в данном изобретении. В некоторых воплощениях данного изобретения фармацевтически приемлемая лекарственная форма изобретения может также содержать и другой терапевтический агент. В некоторых воплощениях данного изобретения такие терапевтические агенты является веществом, в обычном порядке назначаемым пациентам с заболеванием либо состоянием, требующим лечения.
Под "терапевтически эффективным количеством" понимается количество препарата, достаточное для того, чтобы проявились заметные признаки снижения активности протеасом либо тяжести протеа-сомно-опосредованного расстройства. Необходимое количество ингибитора протеасом будет зависеть от эффективности ингибитора по отношению к данному типу клеток и периода времени, требуемого для коррекции расстройства. Следует также понимать, что режим дозирования и курс лечения для каждого отдельного пациента будут зависеть от множества факторов, в том числе и активность используемого специфического компонента, возраст, масса тела, общее состояние здоровья, пол и режим питания пациента, время назначения препарата, скорость выведения, сочетание с другими препаратами, оценка эффективности со стороны лечащего врача и степень тяжести заболевания, требующего лечения. Количество дополнительных терапевтических агентов в составе рецептуры в данном изобретении в типичном случае не будет превышать то количество, которое назначается в обычном порядке в составе рецептуры, подразумевая, что терапевтический агент является единственным активным веществом. В предпочти
тельном варианте количество добавочных терапевтических агентов по массе должно быть в пределах от 50 до 100% (примерно) от того количества, которое присутствует в рецептуре в обычном порядке (подразумевая, что терапевтический агент является единственным активным веществом).
Другим аспектом данного изобретения является метод лечения пациента, страдающего от протеа-сомно-опосредованного нарушения либо имеющего высокую степень риска рецидива такового (или страдающего от рецидива протеасомно-опосредованного расстройства). Здесь и далее термин "протеа-сомно-опосредованное нарушение" обозначает большую группу нарушений нормальной жизнедеятельность, заболеваний либо состояний, которые вызваны либо характеризуются повышением экспрессии или активности протеасом, при которых происходит активация протеасом. Термин "протеасомно-опосредованное нарушение" также обозначает любые расстройства, заболевания либо состояния, при которых торможение активности протеасом дает положительный эффект.
Например, вещества и фармацевтически приемлемые рецептуры в составе данного изобретение применимы при лечении расстройств, опосредованных белками (например, NF-KB, p27Kip p21WAF/CIP1 p53), которые регулируются активностью протеасом. Среди таковых расстройств воспалительные процессы (например, ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника, астма, хроническая обструктивная болезнь легких (COPD), остеоартрит, дерматоз (например, атопический дерматит, псориаз)), пролиферативные сосудистые расстройства (например, атеросклероз, рестеноз), пролиферативные расстройства зрительного аппарата (например, диабетическая ретинопатия), доброкачественные проли-феративные состояния (например, гемангиомы), аутоиммунные заболевания (например, множественный склероз, отторжение тканей и органов), а также воспалительные процессы инфекционного генеза (например, иммунный ответ), нейродегенеративные расстройства (например, болезнь Альгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь моторных нейронов, нейропатическая боль, болезнь экспансии тринуклеотидных повторов, астроцитома и дегенерация нервной ткани на фоне алкогольной болезни печени), ишемические повреждения (например, инсульт) и кахексия (например, ускоренное разрушение белков мышечной ткани на фоне различных физиологических либо патологических состояний (например, повреждение нерва, голодание, лихорадка, ацидоз, ВИЧ-инфицирование, действие раковой опухоли и некоторые эндокрино-патии)).
Вещества и фармацевтические рецептуры в составе данного изобретения частично применимы при лечении рака. Здесь и далее термин "рак" обозначает расстройство на клеточном уровне, характеризующееся бесконтрольным либо нерегулируемым размножением клеток, снижением степени клеточной дифференциации, избыточной способностью внедряться в окружающие ткани и/или способности вызвать рост очагов эктопии. Термин "рак" также подразумевает (но этим не ограничен) наличие цельных опухолей либо метастазов. Под термином "рак" подразумевается ряд болезней кожи, тканей, органов, костной, хрящевой ткани, крови и сосудов. Термин "рак" также обозначает наличие первичного очага и метастазов.
В числе множества примеров цельных опухолевых образований, которые можно лечить указанными ингибиторами протеасом либо фармацевтическими рецептурами данных веществ: рак поджелудочной железы; рак мочевого пузыря; рак прямой кишки и толстого кишечника; рак груди, в том числе и метастатический рак молочной железы; рак простаты, в том числе и андроген-зависимый, а также андроген-независимый рак простаты; рак почки, в том числе, например, метастазирующая почечно-клеточная карцинома; печеночно-клеточный рак; рак легкого, в том числе немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), бронхоальвеолярная карцинома (ВАС) и аденокарцинома легкого; рак яичника, в том числе, прогрессирующий эпителиальный рак либо первично-перитонеальный рак; рак шейки матки; рак желудка; рак пищевода; рак области шеи и головы, в том числе, чешуйчато-клеточная карцинома головы и шеи; мелано-ма; нейроэндокринные злокачественные опухоли, в том числе и метастатические нейроэндокринные опухоли; опухоли мозга, в том числе глиомы, анапластические олигодендроглиомы, мультиформные глиобластомы взрослых и анапластические астроцитомы у взрослых; рак костной ткани; также саркомы мягких тканей.
Среди множества примеров злокачественных новообразований системы крови, по отношению к которым можно применить ингибиторы протеасом либо фармацевтические рецептуры данного изобретения: острый миелолейкоз (AML); хронический миелогенный лейкоз (CML, ХМЛ), в том числе и обострение ХМЛ и бластные фазы ХМЛ (CML-BP); острый лимфобластный лейкоз (ALL); хронический лим-фолейкоз (CLL); болезнь Ходжкина (HD); нехождкинские лимфомы (NHL), в том числе фолликулярная лимфома и лимфома из клеток зоны мантии; В-клеточная лимфома; Т-клеточная лимфома; множественная миелома (ММ); макроглобулинемия Вальденстрема; миелопластические синдромы (MDS), в том числе рефрактерная анемия (RA), рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (RARS), (рефрактерная анемия с избытком бластов (RAEB), а также RAEB в стадии трансформации (RAEB-T); а также миелопролиферативные синдромы.
В некоторых воплощениях данного изобретения вещество либо фармацевтическая рецептура изобретения применяются для лечения пациентов с высоким риском рецидива рака (либо с наступившим рецидивом), а также таких заболеваний, как множественная миелома и лимфома из клеток области мантии.
В некоторых воплощениях данного изобретения ингибитор протеасом либо фармацевтически приемлемая рецептура в составе данного изобретения назначается в сочетании с другим терапевтическим агентом. Другой терапевтический агент может также угнетать активность протеасом либо может иметь другой механизм действия. В некоторых воплощениях данного изобретения другой терапевтический агент представлен препаратом, который при обычных условиях назначается пациентам с признаками данной болезни либо данного состояния, требующего лечения. Ингибитор протеасом в данном изобретении может назначаться в сочетании с другими терапевтическими агентами в виде одной лекарственной формы либо в виде разных лекарственных форм. Если препараты назначаются в виде отдельных лекарственных форм, то другой терапевтический агент может назначаться до приема ингибитора протеасом в составе данного изобретения, одновременно с ним либо после приема такового.
В некоторых воплощениях данного изобретения ингибитор протеасом с формулой (I) либо фармацевтически рецептура вещества с формулой (I) назначается вместе с противораковым препаратом. Здесь и далее термин "противораковый препарат" обозначает любой препарат, назначаемый пациенту с раком с целью лечения данного состояния.
В числе многих примеров ДНК-повреждающих химиотерапевтических агентов можно отметить ингибиторы топоизомеразы I (например, иринотекан, топотекан, камптотецин и его аналоги (либо метаболиты такового), а также доксорубицин); ингибиторы топоизомеразы II (например, этопозид, тенипозид и даунорубицин); алкилирующие агенты (например, мелфалан, хлорамбуцил, бусулфан, тиотепа, ифосфа-мид, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин, декарбазин, метотрексат, митомицин С и циклофос-фамид); ДНК-интеркаляторы (например, цисплатин, оксиплатин и карбоплатин); ДНК-интеркаляторы и генераторы свободных радикалов, такие как блеомицин; а также антиметаболиты (например, 5-фторурацил, капецитабин, гемцитабин, флударабин, цитарабин, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин и гидроксимочевина).
Химиотерапевтические агенты, нарушающие клеточную репликацию: паклитаксел, доцетаксел и аналоги такового; винкристин, винбластин и аналоги такового; талидомид, леналидомид и аналоги такового (например, СС-5013 и СС-4047); белковые ингибиторы тирозин-киназы (например, иматиниба ме-зилат и гефитиниб); ингибиторы протеасом (например, бортезомиб); ингибиторы NF-KB, в том числе ингибиторы IkB-киназы; антитела. Которые связываются с белками, избыточно экспрессирующимися при раках, тем самым, угнетая клеточную репликацию (например, трастузумаб, ритуксимаб, цетуксимаб и бевацизумаб); а также другие ингибиторы белков либо ферментов, активность либо экспрессия которых повышена при раке (угнетение активности которых снижает темп клеточной репликации).
Для более полного понимания данного изобретения были подготовлены нижеуказанные образцы и проведены тесты с их использованием. Эти примеры наглядно показывают, как создавать или проводить тестирование каждого отдельного вещества; следует учитывать, что этими примерами область применения данного изобретения не ограничивается.
Примеры
Сокращения
ДХМ DIPEA DMF EDCI гидрохлорид EtOAc
метиленхлорид
N, N' -диизопропилэтиламин
N,N'-диметилформамид
N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида этилацетат
ВЭЖХ MIBK ПЭС TBTU тетрафторборат TFA ТГФ HOBt LCMS мин
жидкостная хроматография высокого разрешения
метилизобутилкетон
полиэфирсульфон
0- бензотриазол-1-ил-Ы,N,N',N'-тетраметилурония
трифторуксусная кислота тетрагидрофуран
1- гидроксибензотриазол
масс-спектральная жидкостная хроматография минуты
Общие методы.
1Н-ЯМР: данные исследования спектра получаются при температуре окружающей среды с исполь-зованием-ЯМР-спектрометра JOEL ЕСХ-400 при частоте 400 МГц в режиме 1Н-ЯМР. Полученные данные затухания свободных колебаний (FID) вносятся в ПК и обрабатываются с помощью программного
обеспечения NUTS для-ЯМР (разработка компании Acorn-ЯМР Inc). Химические сдвиги калибруются по растворителю диметилсульфоксида ДМСО, 2,50 миллионных долей. Холостой образец - ~0,75 мл ДМСО-с16 вносится в пробирку для-ЯМР. После получения данных спектра 1Н по холостому образцу растворителя в пробирку добавляется образец с последующим полным растворением.
Масс-спектрометрия: масс-спектрометрические исследования проводятся на масс-спектрометре с ионной ловушкой Thermo-Finnigan LCQ Deca-XP. Электрораспыляемый источник ионов используется как в положительном, так и в отрицательном режимах с высоким напряжением (5 кВ), с интенсивностью газового потока в трубе в 35 единиц поглощения, капиллярная температура 275°С, капиллярное напряжение 9 В и смещение линз трубы в 35 В. Анализируемый образец растворяют в ацетонитриле до получения раствора с концентрацией 0,5 мг/мл. Для потоковой масс-спектрометрии в режиме жидкостной хроматографии используется система Agilent 1100 HPLC. Частота потока составляет 1,0 мл/мин. 10 мкл каждого раствора образца вводятся из автоматического подающего устройства в Т-образное соединение.
Примерно 2% раствора из Т-соединения вводятся в масс-спектрометр.
Рентгеновская порошковая дифрактометрия (РПДГ): данные порошковых дифрактограмм получают с использованием:
i) дифрактометра Bruker AXS D8Advance. Данные собираются при измерении с углом от 2,9° до
29,6° 28 при непрерывном режиме сканирования с размером шага в 0,05° 28 с длительностью шага в 2
секунды. Образец прогоняется при условиях окружающей среды (условия подготовки образца - плоская
поверхность, порошок, полученный без измельчения); а также
ii) дифрактометра PANalytical X'Pert Pro. Каждый образец анализируется с использованием Cu-
излучающего анода с системой фокусирования излучения источника Optix. Для фокусировки Cu-K-a
рентгеновских лучей сквозь образец по направлению к детектору используется эллиптическое калибро-
ванное многослойное зеркало. Образец помещается между двумя тонкими пленками (толщина 3 мкм) и
анализируется в режиме геометрической передачи, образец также вращается для оптимизации простран-
ственной статистики. Для минимизации фонового излучения вследствие рассеивания воздуха использу-
ется ограничитель луча. Гелий и противорассеивающее разрешение в данном эксперименте не использу-
ется. Для минимизации осевого отклонения случайных либо преломленных лучей используется щелевой
соллер. Рефрактограммы получаются путем фиксации осевого отклонения в сканирующей позиции с
использованием чувствительного детектора в сканирующем положении (марка X'Celerator) на расстоя-
нии 240 мм от образца. Перед проведением исследования для получения стандартизированных данных
(пик кремния 111) используется образец кремния (стандартный референсный материал NIST 640с).
Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК, DSC): данные дифференциальной сканирующей калориметрия (ДСК, DSC) получены с помощью:
i) аппарата для ДСК - ТА Instruments Q100 с 50-позиционным автосэмплером. Энергия и температура калибруются по индию. Образцы нагреваются со скоростью 10°С/мин в пределах от 25 до 300°С. Поток азота подается с целью очистки со скоростью 50 мл/мин в течение всего сканирования. Анализируется количество вещества в пределах от 1 и 3 мг. Все образцы измельчаются и помещаются в герметично запечатанную алюминиевую емкость с точечным отверстием для стравливания давления, создаваемого парами растворителя, и затем дробятся; либо
ii) аппарата для ДСК - ТА Instruments 2920. Образец помещается в алюминиевый контейнер калориметра, при этом вес образца записывается максимально точно. Емкость закрывается крышкой. Затем образцы дробятся. Емкость для образца калибруется при 25°С, и прогревается при азотной продувке со скоростью 10°С/мин. Калибровочным стандартом служит индий.
Термальный гравиметрический анализ (TGA): данные термального гравиметрического анализа (TGA) получаются посредством аппарата ТА Instruments Q500, калиброванном смесью никеля и алюме-ля, работающем при скорости 10°С/мин. Азотная продувка со скоростью 60 мл/мин проводится в течение всего времени измерения. В типичном случае образец (от 5 мг до 15 мг образца) помещается на предварительно тарированный платиновый тигель.
К смеси NaOH (12 г, 300 ммоль) и глицина (18 г, 239 ммоль) в воде (120 мл) по каплям добавляется в течение 45 мин раствор 2, 5-дихлорбензоил хлорида (10 г, 48 ммоль) в ТГФ (15 мл) с поддержанием внутренней температуры ниже 25°С. Спустя час смесь подкисляют добавлением 2,0 М HCl (125 мл) с поддержанием внутренней температуры ниже 5°С. Полученный осадок собирается вакуумной фильтрацией. Необработанный продукт рекристаллизируется с получением 2,5-[(дихлорбензоил)амино]уксусной кислоты в виде белого кристаллического вещества (6,1 г, 52%). Точка плавления 173,3°С.
Данные ^-ЯМР сканирования (300 МГц, ДМСО-16, 5): 12,72 (bs, 1Н), 8,89 (t, J=6,0 Гц, 1Н), 7,54 (m, 2Н), 7,48 (m, 1Н), 3,93 (d, J=6,0 Гц).
Данные 13С-ЯМР-сканирования (75 МГц, ДМСО-16, 5): 41,6, 129,3, 129,6, 131,4, 132,2, 138,2, 171,4,
165,9.
Данные масс-спектрометрии (MS) (м/г): [М+Н] расчетное для C9H8Cl2NO3 - 248,0; полученное значение - 248,0; [M+Na] расчетное для C9H7Cl2NNaO3 - 270,0; полученное значение - 270,2.
2,5-[(Дихлорбензоил)амино]уксусную кислоту получают следующим путем: к смеси глицина (21,5 г, 286 ммоль) в воде (437 мл) добавляют 2,0 М NaOH (130 мл), полученный раствор охлаждается до 0°С. Раствор 2,5-дихлорбензоил хлорида (50,0 г, 239 ммоль) в ТГФ (75 мл) по каплям добавляется при условии, что внутренняя температура смеси поддерживается на уровне 0±1°С. Во время внесения реагента уровень pH поддерживается в пределах 11,0±0,2 с использованием pH-корректора, титрованного с помощью 2,0 М NaOH. После завершения процесса смесь помешивается при 0±1°С еще 2 ч. Затем смесь подкисляют 2,0 М HCl (176 мл) до уровня pH 2,5. Полученный осадок собирается фильтрацией, промывается холодной водой (125 мл) и высушивается при 45°С в вакууме с получением 2,5-[(дихлорбензоил)амино]уксусной кислоты в виде белого вещества (57,6 г, 97,3%).
Этап 2: 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-3-метил-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метано-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамид.
К раствору 2,5-[(дихлорбензоил)амино]уксусной кислоты (6,10 г, 24,6 ммоль) и TBTU (8,34 г, 26,0 ммоль) в DMF (40 мл) при температуре ниже 5°С добавляется (1R)-3-метил-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метано-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]-1-амино TFA (9,35 г, 24,7 ммоль). DIPEA (13 мл, 75 ммоль) добавляется по капле в течение 2 ч при температуре ниже 5°С. Спустя 40 мин смесь разбавляют EtOAc (90 мл), промывают 5% NaCl (150 мл), дважды промывают 10% NaCl (2x40 мл), и еще раз 2% K2CO3 (1x40 мл), затем промывают 1% H3PO4 (1x40 мл) и 10% NaCl (1x40 мл). Полученный слой органического вещества концентрируется до густого маслянистого субстрата, разводится гептаном (40 мл) и выпаривается до получения 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-3-метил-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метано-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества, которое используется в следующем этапе без проведения очистки.
Этап 3: N,N',N''- {бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1 R)-3 -метилбутан-1, 1 -диил] имино(2-оксоэтан-2,1 -диил)]} -трис-(2,5-дихлорбензамид).
К раствору 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-3-метил-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3а,5,5-триметилгексагидро-4,6-метано-1,3,2-бензодиоксаборол-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (12,2 г, 24,6 ммоль) в метано-ле/гексане (1:1) (250 мл) добавляются 1N HCl (30 мл, 30 ммоль) и (2-метилпропил)бороновая кислота (6,5 г, 64 ммоль). Реакционная смесь перемешивается в течение ночи. Фазы разделяются, слой метанола дважды промывается дополнительным объемом гептана (2x55 мл). Полученный органический слой концен
трируется до объема 10 мл и разделяется в присутствии 2,0 М NaOH (30 мл) и ДХМ (25 мл). Слой с ДХМ затем промывается добавочным объемом 2,0 М NaOH (5 мл). Нижние водные слои собираются, дважды промываются ДХМ (2x25 мл) и подкисляются 1 М HCl (60 мл). Полученная смесь разводится ДХМ (40 мл), слои снова отделяются, полученный водный слой трижды промывается ДХМ (3x10 мл). Общая взвесь слоев с ДХМ высушивается с добавлением мг SO4 (25 г) и выпаривается до густого маслянистого вещества. Итоговый продукт осаждается гептаном (50 мл) и собирается фильтрацией с получением N,N,,N"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) в виде белого вещества (6,6 г, 74%).
Данные ^-ЯМР (300 МГц, ДМСО-о!6, 5): 8,93 (t, J=6,0 Гц, 1Н), 8,68 (bs, 1Н), 7,63 (m, 1Н), 7,52 (m, 2Н), 4,00 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 2,62 (m, 1Н), 1,59 (m, 1Н), 1,33 (m, 1Н), 1,24 (m, 1Н), 0,81 (d, J=5,9 Гц, 6Н).
Данные 13С-ЯМР (125 МГц, ДМСОч16, 5): 23,2, 25,8, 40,1, 40,7, 43,0, 129,0, 130,0, 131,0, 137,5, 165,0,
172,5.
Данные масс-спектрометрии (MS) (м/г) в CH3CN: [M+H] рассчитывается для C42H52B3Cl6N6O9, расчетное значение - 1027,2; полученное значение - 1027,3; [M+Na] рассчитывается для C42H51B3Cl6N6NaO9, расчетное значение - 1049,2; полученное значение - 1049,5.
Этап 4: 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота
Форма 1. К раствору лимонной кислоты (2,75 г, 14,3 ммоль) в EtOAc (85 мл) при температуре примерно 74°С добавляется N,N,,N"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамид) (5,00 г, 4,87 ммоль) (сразу всё количество вещества). Раствор затем охлаждается до температуры примерно 25°С, затем смесь помешивается в течение ночи. Полученный осадок собирается фильтрацией с получением 2,2'-{2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислота (форма 1) в виде кристаллического вещества (6,65 г, 88%).
Данные 1Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-16, 5 110°С): 10,08 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 7,61 (s, 1Н), 7,52 (d, J=1,3 Гц, 2Н), 4,26 (d, J=5,5 Гц, 2Н), 2,70 (q, J=14,5 Гц, 4Н), 2,70 (bs, 1H), 1,72 (sept, J=6,5 Гц, 1Н), 1,42 (ddd, J=5,2 Гц, J=8,6 Гц, J=13,9 Гц, 1Н), 1,28 (ddd, J=5,3, J=9,4 Гц, J=14,3 Гц, 1Н), 0,91 (dd, J=3,3 Гц, J=6,6 Гц,
6Н).
Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C20H23BCl2NaO9, расчетное значение - 539,1; полученное значение - 539,1.
Данные РПДГ вещества I-1 (форма 1) отображения на фиг. 1 и в табл. 1.
Данные дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) вещества I-1 (форма 1) отображены на фиг. 2. Профиль характеризуется эндотермическим переходом при температуре 191,8°С и расплавлением при 198,8°С. Второй эндотермический переход, указывающий на распад вещества, зафиксирован при температуре 225°С. Погрешность температур ±5°С.
Данные термального гравиметрического анализа (TGA) вещества I-1 (форма 1) отображены на фиг. 1. В данном профиле отображено процентное снижение веса образца при воздействии температуры, скорость изменения температуры примерно 10°С/мин. График потери массы указывает на потерю примерно 0,72% веса образца при смене температуры от 50 до 200°С. Погрешность температур ±5°С.
Форма 2. К раствору лимонной кислоты (10,1 г, 52,6 ммоль) в EtOAc (300 мл) с температурой смеси
примерно 74°С добавляется раствор К,К',К"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1Я)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (20,0 г, 19,5 ммоль) в EtOAc (60 мл). Затем раствор медленного охлаждается (примерно 0,33°С/мин) до температуры смеси примерно 60°С, затем смесь помешивается в течение 3 ч. Полученная кашица медленно охлаждается (скорость примерно 0,12°С/мин) до температуры смеси примерно 25°С, потом смесь помешивается в течение ночи. Полученный осадок собирается фильтрацией с получением 4-(Я,8)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2, 5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (форма 2) в виде кристаллического вещества (26,7 д, 98%).
Данные 1Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО- <16, 5 110°С): 10,08 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,52 (d, J=1,3 Гц, 2Н), 4,26 (d, J=5,5 Гц, 2Н), 2,70 (q, J=14,5 Гц, 4Н), 2,70 (bs, 1Н), 1,72 (sept, J - 6,5 Гц, 1Н), 1,42 (ddd, J=5,2 Гц, J=8,6 Гц, J=13,9 Гц, 1Н), 1,28 (ddd, J=5,3, J=9,4 Гц, J=14,3 Гц, 1Н), 0,91 (dd, J=3,3 Гц, J=6,6 Гц,
6H).
13С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-d6, 5 100°С): 21,65, 23,34, 25,09, 38,39, 38,98, 42,07, 76,25, 128,97, 129,14, 130,94, 131,48, 131,73, 137,05, 165,44, 170,23, 175,74, 177,43.
Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C20H23BCl2N2NaO9, расчетное значение 539,1; полученное значение - 539,1.
4-(Я,8)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2, 5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота (форма 2) также получается путем добавления раствора лимонной кислоты (21 г, 0,11 ммоль) в ТГФ (80 мл) к раствору ^^^-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1Я)-З-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (40 г, 0,11 ммоль) в ТГФ (80 мл) при 60°С. Затем раствор обрабатывают кристаллами формы 2 (400 мг). После помешивания в течение 30 мин при 60°С, EtOAc (400 мл) добавляется в течение 9 ч. После полного внесения EtOAc температура смеси понижается до 20°С в течение 5 ч. Полученная суспензия фильтруется с целью собрать 4-(Я,8)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновую кислоту (форма 2) в виде кристаллического вещества (40 г, 70%).
4-(Я,8)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновую кислоту (форма 2) получают при условиях, описание которых дано в табл.
4-(Я,8)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота (форма 2) также получается путем растворения в ацетоне с последующим добавлением EtOAc в качестве антирастворителя.
Данные РПДГ вещества I-1 (форма 2) даны на фиг. 3 и в табл. 3.
Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC) вещества I-1 (форма 2) описана на фиг. 4. Профиль характеризуется эндотермическим переходом при температуре 206,5°С с точкой плавления 219,9°С. Второй эндотермический переход соответствует распаду вещества при температуре 225°С. Погрешность температур ±5°С.
Данные термального гравиметрического анализа (TGA) вещества I-1 (форма 2) даны на фиг. 4. Данное изображение обозначает процентную потерю массы образца в результате воздействия температуры, при этом скорость смены температур примерно 10°С/мин. Данные указывают на потерю примерно 1,1% массы образца в диапазоне температур от 50 до 200°С. Погрешность температур ±5°С.
Пример 1А.
Другой вариант синтеза 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((R)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (I-1) (форма 2).
50-литровый стеклянный реактор с устройством для помешивания, воронкой для внесения реагентов, индикатором температур - контролем нагрева/охлаждения (азотным) заполняется фильтрованным (поры фильтра - 1,2 мкм) EtOAc (18,9 кг) и безводной лимонной кислотой (0,561 кг, 2,9 моль). Смесь нагревается до 71°С с образованием раствора. N,N,,N"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамид) (1,109 кг, 3,1 моль) растворяется в EtOAc (4,0 кг) очищается поточным фильтром (диаметр пор - 1,2 мкм) и затем раствор добавляется в реакционную смесь при помешивании (193 об/мин) в течение 20 мин при температуре 73 до 75°С. Скорость помешивания уменьшается до 96 об/мин, смесь охлаждается следующим путем: (1) смесь выдерживается при 73-75°С 25 мин; (2) смесь пошагово охлаждается до 40°С со скоростью примерно 5°С/30 мин; (3) смесь остывает в течение ночи до температуры окружающей среды с помешиванием. Продукт реакции отделяют фильтрацией, промывают на фильтре (диаметр пор - 1,2 мкм), остатки EtOAc (2x1,2 кг) высушивают в вакууме при 40-41°С в течение ночи (22 ч) с получением 1,458 кг (92%) вышеуказанного вещества.
Данные 1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-с16, 5): 12,13 (s, 2H), 10,69 (s, 1H), 9,11 (t, J=5,6 Гц, 1Н), 7,66 (t, J=1,2 Гц, 1Н), 7,56 (d, J=1,2 Гц, 2Н), 4,27 (bs, 2H), 2,9-2,55 (m, 5H), 1,67 (bs, 1H), 1,4-1,15 (bs, 2H), 0,86 (d, J=6,4 Гц, 6Н).
Данные РПДГ вещества (форма 2) приведены на фиг. 5 и в табл. 6.
Профиль характеризуется наличием двух эндотермических переходов; первый - с точкой плавления примерно 231,3°С и второй - с точкой плавления примерно при 239,9°С. Погрешность температур ±5°С. Ссылочный пример 2.
Синтез 2,5-дихлор-1Ч-(2- {[(1 R)-3 -метил-1 -(4-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бутил]амино} -2-
оксоэтил)бензамида (I-2).
К раствору гликолевой кислота (0,041 г, 0,54 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор N,N,,N"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,199 г, 0,19 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры примерно 25°С, затем растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-(2-{[(1R)-3-метил-1-(4-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бутил]амино}-2
оксоэтил)бензамида в виде белого вещества (0,215 г, 95%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C22H35BCl2N3O5, расчетное значение 502,2; полученное значение - 502,0. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C16H18BCl2N2O5, расчетное значение - 399,1; полученное значение - 399,0. Ссылочный пример 3.
Синтез {(4S)-2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил}уксусной кислоты (I-3).
К раствору L-яблочной кислоты (0,0958 г, 0,714 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,239 г, 0,233 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры примерно 25°С, затем растворитель удаляется выпариванием с получением {(4S)-2-[(1R)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил}уксусной кислоты в виде белого вещества (0,307 г, 96%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М+E^N+H] рассчитывается для C24H37BCl2N3O7, расчетное значение 560,1; полученное значение - 560,1. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C18H20BCl2N2O7, расчетное значение - 457,1; полученное значение - 457,1.
Ссылочный пример 4.
Синтез 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-циклогексил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (I-4).
К раствору ^)-гексагидроминдальной кислоты (0,0881 г, 0,557 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры примерно 25°С, затем растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-циклогексил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества (0,251 г, 93%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C28H45BCl2N3O5, расчетное значение - 584,3; полученное значение - 584,1. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C22H28BCl2N2O5, расчетное значение - 481,1; полученное значение - 481,1.
Ссылочный пример 5.
Синтез 2,5-дихлор-N-(2-{[(1R)-1-(4,4-диметил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-метилбутил] амино } -2-оксоэтил)бензамида (I-5).
К раствору 2-гидроксиизомасляной кислоты (0,0567 г, 0,545 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-(2-{[(1R)-1-(4,4-диметил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3-метилбутил]амино}-2-оксоэтил)бензамида в виде белого вещества (0,225 г, 96%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М+E^N+H] рассчитывается для C24H39BCl2N3O5, расчетное значение - 530,2; полученное значение - 530,0. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C18H22BCl2N2O5, расчетное значение - 427,1; полученное значение - 427,0.
Ссылочный пример 6.
Синтез 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-3-метил-1-[(5R)-4-оксо-5-фенил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (I-6).
К раствору ^-миндальной кислоты (0,168 г, 1,10 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,382 г, 0,37 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры примерно 25°С, полученный осадок собирается фильтрацией с получением 2,5-дихлор-№[2- ({(1R)-3-метил-1-[(5R)-4-оксо-5-фенил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества (0,343 г, 65%).
Данные ^-ЯМР (300 МГц, ДМСО-dfe 5): 10,88 (s, 1H), 9,22 (m, 1H), 7,68-7,27 (m, 8Н), 5,15 (s, 1Н), 4,33 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 2,8-2,76 (m, 1Н), 1,71-1,62 (m, 1Н), 1,50-1,28 (m, 2Н), 0,89 (m, 6Н).
Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C28H39BCl2N3O5, расчетное значение - 578,2; полученное значение - 578,1.
Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C22H22BCl2N2O5, расчетное значение - 475,1; полученное значение - 475,1.
Ссылочный пример 7.
Синтез 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-3-метил-1-[(4S)-4-метил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (I-7).
К раствору L-молочной кислоты (0,675 г, 7,34 ммоль) в EtOAc (3,0 мл) с температурой смеси примерно 70°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (2,50 г, 2,43 ммоль) в EtOAc (7,5 мл). Раствор остывает до температуры примерно 60°С. Спустя 30 мин добавляется гептан (11,5 мл) до помут
нения раствора. Суспензию нагревают до температуры смеси примерно 70°С, при этом получается гомогенный раствор. Раствор охлаждается со скоростью 0,17°С/мин то температуры смеси примерно 30°С, затем раствор остывает до температуры смеси примерно 0°С. Полученный осадок собирается фильтрацией с получением 2,5-дихлор-К-[2-({(1Я)-3-метил-1-[(48)-4-метил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого кристаллического вещества (2,32 г, 81%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C23H37BCl2N3O5, расчетное значение - 515,9; получено значение - 516,0. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C17H20BCl2N2O5, расчетное значение - 413,1; получено значение 413,0. Данные РПДГ вещества I-7 приведены в табл. 4.
Ссылочный пример 8.
Синтез 2,5-дихлор-^ [2-({(1 R)-3 -метил-1-[(4 Б)-4-метил-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-2-
ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (I-8).
К раствору (Б)-3-гидроксимасляной кислоты (0,0598 г, 0,566 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор N,N,,N"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры примерно 25°С, растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-3-метил-1-[(4S)-4-метил-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества (0,225 г, 95%).
Данные ^-ЯМР (300 МГц, ДМСО- <16, 5): 10,45 (s, 1Н), 9,11 (t, J=6,0 Гц, 1Н), 7,65 (m, 1Н), 7,55 (m, 2Н), 4,21 (d, J=6,0 Гц, 2Н), 3,98 - 3,90 (m, 1Н), 2,51 (m, 1Н), 2,33 (dd, Ji=19,2 Гц, J=2,7 Гц, 1Н), 2,24-2,21 (m, 1Н), 1,61-1,52 (m, 1Н), 1,33-1,19 (m, 2Н), 1,07-1,04 (m, 3Н), 0,84 (m, 6Н).
Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C24H39BCl2N3O5, расчетное значение - 530,2; получено значение 530,0.
Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C18H22BCl2N2O5, расчетное значение - 427,1; получено значение 427,1.
Ссылочный пример 9.
Синтез 2,5-дихлор-N-(2-{[(1R)-1-(4,4-диметил-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-2-ил)-3-метилбутил] амино } -2-оксоэтил)бензамид (I-9).
К раствору р-гидроксиизовалериановой кислоты (0,0841 г, 0,712 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,260 г, 0,253 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, затем растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-(2-{[(1R)-1-(4,4-диметил-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-2-ил)-3-метилбутил]амино}-2-оксоэтил)бензамида в виде белого вещества (0,296 г, 95%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C25H41BCl2N3O5, расчетное значение - 544,3; полученное значение - 544,0. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C19H24BCl2N2O5, расчетное значение - 441,1; полученное значение - 441,0.
Ссылочный пример 10.
Синтез 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-трет-бутил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (I-10).
К раствору ^)-2-гидрокси-3,3-диметилмасляной кислоты (0,0712 г, 0,553 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамид) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, затем растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-трет-бутил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества (0,245 г, 97%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C26H43BCl2N3O5, расчетное значение - 558,3; полученное значение - 558,0. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C20H26BCl2N2O5, расчетное значение - 455,1; получено значение 455,0.
Ссылочный пример 11.
Синтез 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-изопропил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида 1).
К раствору ^)-2-гидрокси-3-метилмасляной кислоты (0,0659 г, 0,558 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавлен раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-З-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-изопропил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества (0,246 г, 99%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C19H25BCl2N2NaO5, расчетное значение -465,1; полученное значение - 465,1. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C19H24BCl2N2O5, расчетное значение - 441,1; полученное значение - 441,0.
Ссылочный пример 12.
Синтез 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-изобутил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида (I-12).
К раствору 2-гидроксиизокапроновой кислоты (0,0752 г, 0,569 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавлен раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-тртл-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, растворитель удаляется выпариванием с получением 2,5-дихлор-N-[2-({(1R)-1-[(4S)-4-изобутил-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]-3-метилбутил}амино)-2-оксоэтил]бензамида в виде белого вещества (0,253 г, 95%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C20H27BCl2N2NaO5, расчетное значение -479,1; полученное значение - 479,1. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C20H26BCl2N2O5, расчетное значение - 455,1; полученное значение - 455,1.
Ссылочный пример 13.
Синтез 2,5-дихлор-№(2-{ [(1R)-3 -метил-1-(4-оксо-4Н-1,3,2-бензодиоксаборинин-2-ил)бутил]амино } -2-оксоэтил)бензамида (I-13).
К раствору салициловой кислоты (0,0758 г, 0,549 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется раствор ^№,№'-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(Ж)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл). Раствор остывает до температуры примерно 25°С, полученный осадок собирается фильтрацией с получением 2,5-дихлор-N-(2-{[(1R)-3-метил-1-(4-оксо-4Н-1,3,2-бензодиоксаборинин-2-ил)бутил]амино}-2-оксоэтил)бензамида в виде белого вещества (0,198 г, 78%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C21H21BCl2N2NaO5, расчетное значение - 485,1; полученное значение - 485,1. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М-Н] рассчитывается для C21H20BCl2N2O5, расчетное значение 461,1; полученное значение - 461,0.
Данные РПДГ вещества I-13 даны в табл. 5.
Ссылочный пример 14.
Синтез 2,5-дихлор-К-(2-([(1К)-3-метил-1-(5-оксо-4,4-дифенил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бутил] амино } -2-оксоэтил)бензамида (I-14).
К раствору бензиловой кислоты (0,126 г, 0,552 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси при-
мерно 60°С добавляется раствор К,К',К"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1К)-3-метилбутан-1,1-
диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида) (0,200 г, 0,195 ммоль) в EtOAc (1,0 мл).
Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, затем растворитель удаляется выпариванием с
получением 2,5-дихлор-М-(2- {[(1 Я)-3-метил-1 -(5-оксо-4,4-дифенил-1,3,2-диоксаборолан-2-
ил)бутил]амино}-2-оксоэтил)бензамида в виде белого вещества (0,291 г, 95%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C28H27BCl2N2NaO5, расчетное значение -575,1; полученное значение - 575,2. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М-Н] рассчитывается для C28H26BCl2N2O5, расчетное значение - 551,1; полученное значение - 551,1.
Ссылочный пример 15.
Синтез 4-(Я,Б)-(карбоксиметил)-2- [(1 R)-3 -метил-1-({(2 S)-3 -фенил-2- [(пиразин-2-
илкарбонил)амино]пропаноил}амино)бутил]-6-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-карбоновой кислоты (I-15).
К раствору лимонной кислоты (0,257 г, 1,34 ммоль) в EtOAc (7,4 мл) с температурой смеси примерно 74°С добавляется N,N,,N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамид (0,500 г, 0,455 ммоль) цельной партией. Полученный раствор остывает до температуры примерно 25°С и подвергся выпариванию с получением 4
^^)-(карбоксиметил)-2-[(Ш)-3 -метил-1 -({(2S)-3 -фенил-2-[(пиразин-2-
илкарбонил)амино]пропаноил}амино)бутил]-6-оксо-1, 3,2-диоксаборолан-карбоновой кислоты в виде белого вещества (0,730 г, 99%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Et3N+H] рассчитывается для C31H45BN5O9, расчетное значение 642,3; полученное значение - 642,2. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М-Н] рассчитывается для C25H28BN4O9, расчетное значение - 539,2; полученное значение - 539,2. Ссылочный пример 16.
Синтез N-[(1S)-1-бензил-2-({(1R)-3-метил-1-[(5R)-4-оксо-5-фенил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]пиразин-2-карбоксамида (I-16).
К раствору ^-миндальной кислоты (0,0738 г, 0,485 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамид (0,178 г, 0,162 ммоль) цельной партией. Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, полученный осадок был собран фильтрацией с получением N-[(1S)-1-бензил-2-({(1R)-3-метил-1-[(5R)-4-оксо-5-фенил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]пиразин-2-карбоксамида в виде белого вещества (0,195 г, 80%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C37H29BN4NaO5, расчетное значение - 523,2; полученное значение - 523,2. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C27H28BN4O5, расчетное значение - 499,2; полученное значение -499,2.
Ссылочный пример 17.
Синтез N-[(1S)-1-бензил-2-({(1R)-3-метил-1-[(5R)-4-метил-6-оксо-1,3,2-диоксаборолан-2-ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]пиразин-2-карбоксамида (I-17).
К раствору ^)-3-гидрокси-масляной кислоты (0,0509 г, 0,489 ммоль) в EtOAc (2,0 мл) с температурой смеси примерно 60°С добавляется N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамид (0,179 г, 0,163 ммоль) цельной партией. Раствор остывает до температуры смеси примерно 25°С, растворитель удаляется выпариванием с получением №[(^)-1-бензил -2-({(Ж)-3-метил-1-[^)-4-метил-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-
2- ил]бутил}амино)-2-оксоэтил]пиразин-2-карбоксамида в виде белого вещества (0,213 г, 96%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M+Na] рассчитывается для C23H29BN4NaO5, расчетное значение - 475,2; полученное значение - 475,2. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [M-H] рассчитывается для C23H28BN4O5, расчетное значение - 451,2; полученное значение - 451,1.
Пример 18.
Приготовление рецептур 4-^^)-(карбоксиметил)-2-(^)-1-(2-(2, 5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота для парентерального введения либо для приема внутрь.
Рецептура А: в резервуар помещают 90 мл воды и моногидрата лимонной кислоты (0,08 г), а также дигидрат цитрата натрия (1,5 г) с помешиванием до полного растворения. В эту смесь добавили 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-(^)-1 -(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3 -метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновую кислоту (форма 2) (0,142 г), затем смесь помешивается до получения прозрачного раствора. К данному раствору добавляют натрия хлорид (0,45 г), уровень pH корректируется до pH 5,45 с использованием 2N HCl. Конечный объем полученного раствора доводится 100 мл водой и фильтруется через 0,2 мкм ПЭС-мембрану с получением рецептуры А, которая в дальнейшем хранится при температуре -20°С.
Рецептура В готовится также, как и рецептура А, но уровень pH доводится до pH 6,2 (с использованием 2N NaOH).
Рецептура С: в сосуд загружают 90 мл воды и моногидрат лимонной кислоты (0,08 г), затем вносят дигидрат цитрата натрия (1,5 г) и пропиленгликоль (1,0 г) с помешиванием до полного растворения. К данному раствору добавляется 4-^^)-(карбоксиметил)-2-(^)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота (форма 2) (0,142 г), а затем смесь помешивается до получения прозрачного раствора. Уровень pH доводится до 6,2 (с использованием 2N NaOH), конечный объем полученного раствора доводится до 100 мл водой и фильтруется через 0,2 мкм ПЭС-мембрану с получением рецептуры С, которая хранится при -20°С.
Пример 19.
Получение in situ рецептуры 4-^^)-(карбоксиметил)-2-(^)-1-(2-(2,5-дихлорбензшидо)ацетамидо)-
3- метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты для парентерального введения либо для приема внутрь.
Приготовление транспортного компонента: в сосуд загружают приблизительно 160 мл воды и моногидрата лимонной кислоты (0,714 г), а также дигидрат цитрата натрия (2,24 г) с помешиванием до полного растворения. К данному раствору добавляется пропиленгликоль (2,0 г), смесь помешивается до получения гомогенного раствора. Уровень pH смеси - 5,14. Конечный вес полученного раствора доводится до 200 г (подразумевая плотность 1г/мл) водой и фильтруется через 0,2 мкм ПЭС-мембрану, затем помещается на хранение при температуре в пределах от 2 до 8°С.
Основная рецептура (1 мг/мл): в сосуд вносят 0,105 грамм (при чистоте приблизительно 95,4%) N,N',N"-{бороксин-2,4,6-триил-трис-[[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино(2-оксоэтан-2,1-диил)]}-трис-(2,5-дихлорбензамида). К данному веществу добавляют приблизительно 90 г транспортного вещества, затем полученная смесь помешивается в течение 48 ч при отсутствии света. Конечный уровень pH 5,12. Конечный вес полученного раствора доводится до 100 г (подразумевая плотность 1 г/мл) транспортной рецептурой и фильтруется через 0,2 мкм ПЭС-мембранный фильтр, хранится рецептура в темноте при температуре от 2 до 8°С.
Рецептура D: вышеописанная основная рецептура разводится до концентраций 0,05 мг/мл и 0,1 мг/мл транспортной рецептурой (непосредственного перед использованием).
Рецептура Е: основная рецептура разводится до концентраций 0,05 мг/мл и 0,1 мг/мл 0,9% раствором натрия хлорида непосредственного перед использованием.
Пример 20.
Исследование протеасомы 20S.
К 1 мкл тестируемого вещества, растворенного в ДМСО в лунках 384-луночного черного микропланшета, добавляется 25 мкл буфера для исследования при 37°С (буфер содержит человеческий активатор РА28 (производство Boston Biochem, конечное количество 12 нМ)) с веществом Ac-WLA-AMC ф5-селективный субстрат) (конечное количество -15 мкм), затем вносится 25 мкл буфера для исследования (37°С), содержащего взвесь протеасом 20S человека (производство Boston Biochem, конечное количества 0,25 нМ).
Буферный раствор для исследования содержит 20 мМ HEPES, 0,5 мМ ЭДТА и 0,01% БСА (бычий сывороточный альбумин) и имеет pH 7,4. Реакция отслеживается с использованием планшетного ридера BMG Galaxy (условия - 37°С, длина исходящей волны - 380 нм, прием на фильтр - 460 нм, считывание -20). Процент ингибирования рассчитывается по отношению к 0% (ДМСО) и 100% (10 мкм бортезомиба), данные вещества выступали в качестве контролей.
Пример 21.
Исследование на угнетение пролиферации.
Опухолевые клетки НСТ-116 (1000) либо другие опухолевые клетки в 100 мкл в подходящей куль-туральной среде (среда МакКой 5А для культуры НСТ-116, производство Invitrogen) с содержанием 10% фетальной бычьей сыворотки (производство Invitrogen) вносятся в лунки 9б-луночного культурального планшета и инкубируются в течение ночи при 37°С. Тестируемые вещества вносятся в лунки с последующей инкубацией в течение 96 ч при 37°С. Реагент МТТ либо WST (10 мкл, производство Roche) вносится в каждую лунку с последующей инкубацией в течение 4 ч при 37°С (инструкция производителя). При выполнении МТТ-теста метаболизированный краситель растворяется в течение ночи (согласно ист-рукции производителя - Roche). Оптическая плотность каждой лунки считывается при 595 нм (первично) и 690 нм (референсная длина волны) при МТТ-тесте, а также при 450 нм в тесте WST с использованием спектрофотометра (производство Molecular Devices). В тесте МТТ значения, полученные на референсной длине волны, вычитаются из значений, полученных на первичной длине волны. Процента ингибирования рассчитывается по контролю - ДМСО (значение в 100%).
Пример 22.
Тест эффективности действия на опухолевые клетки в модели in vivo.
Свежевыделенные клетки культуры НСТ-116 (с содержанием 2-5х106 клеток) либо другие опухолевые клетки в 100 мкл среды РПМИ-1640 (производство - Sigma-Aldrich) в асептических условиях вводятся в подкожное пространство правой стороны спины самок голых мышей линии CD-1 (возраст - 5-8 недель, поставщик Charles River) с использованием 1 мл вещества (длина иглы - 26, диаметр - 3/8, производство Becton Dickinson номер в каталоге #309625). В ряде похожих экспериментов с использованием ксенотрансплантантов требуются множественные введения фрагментов опухоли. В данных эксперимента маленькие фрагменты опухолевой ткани (приблизительно 1 мм3) имплантируются подкожно в правую часть спины (анестезия - 3-5% смесь изофлуран/кислород) мышам серии C.B-17/SCID (возраст 5-8 недель, поставщик - Charles River) через троакар диаметром 13-ga (производство - Popper & Sons, номер в каталоге 7927). Начиная с 7-го дня (после инокуляции) опухоль измеряется дважды в неделю с использованием калибратора с верньерами. Объем опухоли высчитывается по стандартной процедуре (0,5х(длинах ширина2)). Когда опухоли достигают объема приблизительно 200 мм3, группу мышей случайным образом делят на группы по признаку проводимого лечения и начинают введение препаратов. Режим дозирования и график для каждого эксперимента определяются, исходя из данных прошлых экспериментов по определению фармакокинетики/фармакодинамики, а также согласно данным исследований по определению максимальной переносимой дозы. Контрольной группе вводится транспортная среда без препарата. В типичном случае тестируемое вещество (100-200 мкл) назначается внутривенно (размер иглы - 27-ga), внутрь (зонд диаметром 20-ga) либо подкожно (игла диаметром 27-ga) в различных дозах и в разном режиме. Размер опухоли и вес тела замеряются дважды в неделю, исследование прекращается, когда размер опухолей в контрольной группе составляет приблизительно 2000 мм3.
Пример 23.
Синтез N-((S)-1-((R)-3-метил-1 -(4-оксо-4Н-бензо[д] [ 1,3,2]диоксаборинин-2-ил)бутиламино)-1-оксо-3 -фенилпропан-2 -ил)пиразин-2-карбоксамида (I-19).
Смесь N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамида (0,250 г, 0,228 ммоль) и салициловой кислоты (269,6 мг, 0,68 ммоль) добавляется в EtOAc (10 мл). Далее смесь нагревается с образованием раствора. Раствор остывает до температур примерно 25°С. Добавляется гептан (16 мл). Белое вещество выпадает в осадок. Получившаяся кашица встряхивается при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Кашицу фильтруют с получением вещества N-((S)-1-((R)-3-метил-1-(4-оксо-4Н-бензо[d][1,3,2]диоксаборинин-2-ил)бутиламино)-1-оксо-3-фенилпропан-2-ил)пиразин-2-карбоксамида (0,249 г, 75%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М+Н] рассчитывается для C26H28BN4O5, расчетное значение 487,2153; полученное значение - 487,3.
Пример 24.
Синтез 2-((S)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (I-20).
Смесь N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамида (0,500 г, 0,455 ммоль) и L-молочной кислоты (213,6 мг, 0,55 ммоль) смешивают в ТГФ (5 мл). Далее смесь нагревается до получения раствора. Раствор остывает до температуры примерно 25°С. Белое вещество выпадает в осадок, полученную кашицу встряхивают при температуре окружающей среды в течение 1 часа. Далее кашицу фильтруют, получая вещество 2-((S)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (0,625 г, 95%). Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М+Н] рассчитывается для C23H28BN4O7, расчетное значение - 483,2051; полученное значение - 483,2.
Пример 25.
Синтез 2-((R)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (I-21).
Смесь N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенил-пропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамида (0,305 г, 0,278 ммоль) и D-яблочной кислоты (130,3 мг, 0,33 ммоль) помещают в ацетон (3 мл). Далее смесь нагревается до получения раствора. Раствор остывает до температуры примерно 25°С. Белое вещество выпадает в осадок, получившаяся кашица встряхивается при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Кашицу фильтруют, собирая вещество 2-((R)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (0,410 г, 100%). [М+Н] рассчитывается для C23H28BN4O7, расчетное значение - 483,2051; полученное значение - 483,2.
Пример 26.
Синтез (R)-2-гидрокси-2-((R)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (I-22).
Смесь N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамида (0,270 г, 0,246 ммоль) и L-винной кислоты (149,5 мг, 0,33 ммоль) смешивается в ацетоне (3 мл). Далее смесь нагревается до получения раствора. Раствор остывает до температуры примерно 25°С, далее добавляется гептан (2,5 мл). Белое вещество выпадает в осадок, получившаяся кашица встряхивается при температуре окружающей среды в течение 1,5 ч. Далее кашица фильтруется с целью сбора вещества ^)-2-гидрокси-2-(^)-2-(^)-3-метил-1-(^)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (0,388 г), которое также содержит вещество в двумерной форме. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М+Н] рассчитывается для C23H28BN4O8, расчетное значение 499,2000; полученное значение -499,2.
Пример 27.
Синтез (S)-2-гидрокси-2-((S)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (I-23).
Смесь N,N',N"-(бороксин-2,4,6-триил-трис-{[(1R)-3-метилбутан-1,1-диил]имино[(2S)-1-оксо-3-фенилпропан-1,2-диил]})трипиразин-2-карбоксамида (0,180 г, 0,164 ммоль) и D-формы винной кислоты (147,5 мг, 0,33 ммоль) вносится в ацетон (4 мл). Далее смесь нагревается до получения гомогенного раствора. Раствор остывает до температуры примерно 25°С. Далее добавляется гептан (8 мл). Смесь выпаривается с получением вещества (S)-2-гидрокси-2-((S)-2-((R)-3-метил-1-((S)-3-фенил-2-(пиразин-2-карбоксамидо)пропанамидо)бутил)-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4-ил)уксусной кислоты (0,447 г), которая также содержит вещество в двумерной форме. Данные масс-спектрометрии (м/г) в среде CH3CN: [М+Н] рассчитывается для C23H28BN4O8, расчетное значение 499,2000; полученное значение - 499,2.
Пример 28.
Фармацевтическая рецептура 1. Состав капсулы показан далее в табл. 7.
Компонент
Функция
мг/в капсуле
Вещество с формулой (1-1) (Форма 2)
0,29
Микрокристаллическая целлюлоза (с низким содержанием влаги)
наполнитель
89,71
Общее вес содержимого капсулы, мг
90, 00
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
Пример 29.
Фармацевтическая рецептура 2.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 8.
Пример 30.
Фармацевтическая рецептура 3.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 9.
Пример 31.
Фармацевтическая рецептура 4.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 10.
Пример 32.
Фармацевтическая рецептура 5.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 11.
Компонент
Функция
мг/Капсула
Вещество с формулой (1-1) (Форма 2)
0,29
Микрокристаллическая целлюлоза (с низким содержанием влаги)
наполнитель
84,71
Общий вес содержимого капсулы, мг
85, 00
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
Пример 33.
Фармацевтическая рецептура 6.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 12.
Пример 34.
Фармацевтическая рецептура 7.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 13.
Пример 35.
Фармацевтическая рецептура 8.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 14.
с низким содержанием влаги)
Микрокристаллическая целлюлоза, марка NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
500
21,25
Микрокристаллическая целлюлоза, марка NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
900
38,25
Общий вес
2000,0
85, 00
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
Партия изготавливается по следующим этапам.
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #2) просеивают через сито с порами в 40 мкм.
Просеянный материал из этапа 1) помещают в измельчитель РК и измельчают в течение 2 мин.
Вещество с формулой (форма 2) просеивается через сито с порами в 60 мкм, затем распределяется по навескам (номер #1).
Вещество с формулой (форма 2) из шага 3), а также микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90 с низким содержанием влаги) (номер #3) смешивается в полиэтиленовой емкости, затем емкость встряхивают; затем содержимое полиэтиленовой емкости пропускают через то же сито с порами в 40 мкм, что использовалось на этапе 1).
Полученный на этапе 4) материал помещается в измельчитель РК и измельчается в течение 15 мин.
Микрокристаллическую целлюлозу NF (марки Emcocel(r) XLM90 с низким содержанием влаги) (номер #4) просеивают через то же сито с порами в 40 мкм, что использовалось на этапе 4) и встряхивают в полиэтиленовой емкости.
Полученный на этапе 6) материал помещается в измельчитель РК, в котором все еще находился материал из этапа 5) и измельчается в течение 10 мин.
Микрокристаллическую целлюлозу NF (марки Emcocel(r) XLM90, с низким содержанием влаги) (номер #5) просеивают через то же сито с порами в 40 мкм и помещают в тот полиэтиленовый контейнер, что используется на этапах 4) и 6), затем встряхивают.
Полученный на этапе 8) материал помещается в измельчитель РК, в котором все еще находится материал из этапов 5) и 7), затем измельчается в течение 10 мин.
Микрокристаллическую целлюлозу NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #6) просеивают через то же сито с порами в 40 мкм и помещают в тот полиэтиленовый контейнер, что используется на этапах 4), 6) и 8), затем встряхивают.
Полученный на этапе 10) материал помещается в измельчитель РК, в котором все еще находится материал из этапов 5), 7) и 9), затем измельчается в течение 10 мин.
Полученный в измельчителе материал помещают в белые непрозрачные желатиновые капсулы 4 размера с применением системы In-Cap.
Капсулы очищают от налета порошка и проводят сортировку по весу.
Пример 36.
Фармацевтическая рецептура 9.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 15.
Пример 37.
Фармацевтическая рецептура 10.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 16.
Компонент
Функция
мг/Капсула
Вещество с формулой (1-1) (Форма 2)
0,3
Прежелатинизированный крахмал (марка Starch 1500)
Наполнитель
124, 7
Общий вес содержимого капсулы, мг
125,00
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
Пример 38.
Фармацевтическая рецептура 11.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 17.
Пример 39.
Фармацевтическая рецептура 12.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 18.
Пример 40.
Фармацевтическая рецептура 13.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 19.
Компонент
Функция
мг/Капсула
Вещество с формулой (1-1) (Форма 2)
0,3
Микрокристаллическая целлюлоза (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
наполнитель
88, 35
Тальк
Агент для повышения текучести
0,9
Магния стеарат
Лубрикант
0,45
Общий вес содержимого капсулы, мг
90, 00
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
Пример 41.
Фармацевтическая рецептура 14.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 20.
Пример 42.
Фармацевтическая рецептура 15.
Рецептура капсулы приведена далее в табл. 21.
Пример 43.
Фармацевтическая рецептура 16.
Рецептура партии приведена далее в табл. 22.
Номер
Компонент
г/партия
мг/капсула
Вещество с формулой (1-1) (Форма 2)
0, 33
0,30
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
5, 00
4, 50
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
8,17
7, 35
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
14,00
12, 60
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
25, 00
22, 50
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
44,00
39, 60
Тальк
1,00
0, 90
Цитрат натрия
2,00
1,80
Магния стеарат
0, 50
0,45
Общий вес
100,00
90, 00
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
Производство данной партии проводится в соответствии со следующим порядком действий.
1) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #2) просеивается через сито с диаметром пор 40 мкм.
2) Просеянный материал из пункта 1) помещается в измельчитель РК и измельчается в течение 2
мин.
3) Вещество с формулой (форма 2), просеянное через сито с диаметром пор 60 мкм, фасуется по партиям (номер #1).
4) Вещество с формулой (форма 2) из пункта 3), а также микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #3) помещаются в полиэтиленовый контейнер, далее этот полиэтиленовый контейнер интенсивно встряхивается; затем содержимое полиэтиленового контейнера пропускается через то же сито с диаметром пор 40 мкм, что используется в пункте 1).
5) Материал из пункта 4) помещается в измельчитель РК и измельчается в течение 15 мин.
6) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #4) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм, затем ее помещают в тот же полиэтиленовый контейнер, что и в пункте 4), затем содержимое полиэтиленового контейнера интенсивно встряхивается.
7) Тальк (номер #7) и цитрат натрия (номер #8) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
8) Материалы из пункта 6) и 7) смешиваются в измельчителе РК, в котором содержится материал из пункта 5), далее производится измельчение в течение 10 мин.
9) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #5) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм, помещается в тот же полиэтиленовый контейнер, что и в пункте 4) и 6), затем полиэтиленовый контейнер встряхивается.
10) Материал, полученный после выполнения пункта 9) помещается в измельчитель РК, в котором также находятся вещества из пунктов 5) и 8), затем производится измельчение в течение 10 мин.
11) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #6) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм, помещается в тот же полиэти
10)
леновый контейнер, что используется в пунктах 4), 6) и 9), затем полиэтиленовый контейнер встряхивается.
12) Материал, полученный в пункте 11), помещается в измельчитель РК с веществами из пунктов 5), 8) и 10), затем производится измельчение в течение 10 мин.
13) Стеарат магния (номер #9) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
14) Материал, полученный после выполнения пункта 13), помещается в измельчитель РК, в котором содержатся вещества из пунктов 5), 8), 10) и 12), далее выполняется измельчение в течение 5 мин.
15) Полученный после измельчения материал помещается в капсулы (размер 4, белые непрозрачные, материал - желатин) с использованием системы Profill.
16) Капсулы очищаются от порошкового налета и проходят сортировку по весу.
Пример 44.
Фармацевтическая рецептура 17.
Рецептура партии приведена далее в табл. 23.
XLM90; с низким содержанием влаги)
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
500
21,25
Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги)
800
Магния стеарат Общий вес
Белая непрозрачная желатиновая капсула, размер 4
10 2000
0,43
Производство данной партии проводится в соответствии со следующим порядком действий.
1) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #2) просеивается через сито с диаметром пор 40 мкм.
2) Материал, полученный после выполнения пункта 1) добавляется в малый измельчитель РК, измельчение проводится в течение 2 мин.
3) Вещество с формулой (форма 2), которое просеивается через сито диаметром пор 60 мкм, далее распределяется по навескам (номер #1).
4) Вещество с формулой (форма 2) из пункта 3), а также микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #3), смешиваются вместе и просеиваются через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм, что используется в пункте 1).
5) Материал, полученный после выполнения пункта 4), добавляется в малый измельчитель РК, измельчение проводится в течение 30 мин.
6) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #4) и тальк (номер #5) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
7) Материал, полученный после выполнения пункта 6), добавляется в малый измельчитель РК с материалом из пункта 5) измельчение проводится в течение 15 мин.
8) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #6) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм, помещается во второй (большего размера) измельчитель РК, измельчение проводится в течение 2.
9) Содержимое малого измельчителя РК (этап 5) и 7)) помещается в полиэтиленовый контейнер, затем переносится в большего размера измельчитель РК (пункт 8)).
10) Тальк (номер #7) и микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #8) просеиваются через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
11) Половина материала из пункта 10) добавляется в малый измельчитель РК с материалом из пунктов 5) и 7), измельчение производится в течение 3 мин, затем весь материал переносится в тот же полиэтиленовый контейнер, что используется в пункте 9), далее полиэтиленовый контейнер встряхивается.
12) Материал, полученный после выполнения пункта 11), помещается в больший измельчитель РК, все еще содержащий материалы из пунктов 8) и 9).
13) Вторая половина материала из пункта 10) помещается в малый измельчитель РК, содержащий материалы из пунктов 5), 7) и 11), измельчение производится в течение 3 мин, затем материал переносится в тот же полиэтиленовый контейнер, что используется в пунктах 9) и 11), далее полиэтиленовый контейнер встряхивается.
14) Материал, полученный после выполнения пункта 13) добавляется в измельчитель РК (больший), содержащий материалы из пунктов 8), 9) и 12), измельчение производится в течение 10 мин.
15) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #9) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм, переносится в тот же полиэтиленовый контейнер, что используется в пунктах 9), 11) и 13), далее полиэтиленовый контейнер встряхивается.
16) Материал, полученный после выполнения пункта 15) добавляется в тот же измельчитель РК (больший), содержащий материалы из пунктов 8), 9), 12) и 14), измельчение производится в течение 10 мин.
17) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #10) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
18) Материал, полученный после выполнения пункта 17) добавляется в тот же измельчитель РК
10)
(больший), содержащий материалы из пунктов 8), 9), 12), 14) и 16), измельчение производится в течение 10 мин.
19) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #11) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
20) Материал, полученный после выполнения пункта 19) добавляется в тот же измельчитель РК (больший), содержащий материалы из пунктов 8), 9), 12), 14), 16) и 18), измельчение производится в течение 10 мин.
21) Магния стеарат (номер #12) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм.
22) Материал, полученный после выполнения пункта 21) добавляется в тот же измельчитель РК (больший), содержащий материалы из пунктов 8), 9), 12), 14), 16), 18) и 20), измельчение производится в течение 5 мин.
23) Полученный после измельчения материал помещается в желатиновые капсулы (размер - 4, белого цвета, непрозрачные) с использованием системы Incap.
24) Капсулы очищаются от порошкового налета и сортируются по весу.
Пример 45.
Фармацевтическая рецептура 18.
Рецептура партии приведена далее в табл. 24.
Процесс изготовления данной партии происходит в соответствии со следующим порядком действий.
1) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #2) просеивается через сито с диаметром пор 40 мкм и помещается в смеситель с высоким сдвигом.
2) Вещество с формулой (форма 2) просеивается через сито с диаметром пор 60 мкм и взвешивается (номер #1), затем навеска вещества вносится в тот же самый смеситель с высоким сдвигом (пункт
1).
3) Микрокристаллическая целлюлоза NF (марки Emcocel(r) XLM90; с низким содержанием влаги) (номер #3) просеивается через то же самое сито с диаметром пор 40 мкм и вносится в тот же самый смеситель с высоким сдвигом (пункт 1) и 2)).
4) После выполнения этапов 1), 2) и 3) смеситель запускается на 4 мин.
5) Материал из смесителя с высоким сдвигом фасуется в белые непрозрачные желатиновые капсулы 4 размера с помощью системы Incap.
6) Капсулы очищаются от порошкового налета и сортируются по весу.
Пример 46.
Лиофилизированный порошок 1.
В чистом контейнере готовится раствор со следующим соотношением компонентов: 40% трет-бутилового спирта/60% воды для инъекций. Сначала требуемое количество трет-бутилового спирта прогревается до 35°С, затем вносится вода для инъекций. Полученный раствор охлаждается до 15-30°С. Часть требуемого количества (60% от общего количества в партии) смеси трет-бутилового спирта/воды для инъекций добавляется в контейнер для предподготовки. Приблизительно 40% смеси оставляется для промывания. Лимонная кислота (30% от общего количества в партии) вносится в контейнер для пред-подготовки (с помешиванием). После этого контейнер промывается оставленной частью смеси трет-бутилового спирта и воды, жидкость после промывки сливается в контейнер для предподготовки. Смесь помешивается до полного растворения лимонной кислоты. Цитрат натрия (30% от общего количества в партии) добавляется в тот же контейнер для предподготовки (с помешиванием). Далее контейнер промывается оставленной частью смеси трет-бутилового спирта и воды, жидкость после промывки сливается в
контейнер для предподготовки. Смесь помешивается до полного растворения цитрата натрия. N-(2-пиразин) карбонил-Ь-фенил-Ь-лейцин бороновая кислота (VIII-15) вносится в контейнер для предподготовки (с помешиванием). Далее контейнер промывается оставленной частью смеси трет-бутилового спирта и воды, жидкость после промывки сливается в контейнер для предподготовки. Смесь помешивается до полного растворения бороновой кислоты. Далее лимонная кислота, цитрат натрия и бороновая кислота из контейнера для предподготовки переносится в основную емкость для приготовления состава. Контейнер для предподготовки промывается водой для инъекций, жидкость после промывки сливается в основную емкость для приготовления состава. Лимонная кислота (70% от общего количества в партии) также вносится в основную емкость для приготовления состава (с помешиванием). Контейнер промывается водой, жидкость после промывки сливается в основную емкость для приготовления состава. Смесь помешивается до полного растворения лимонной кислоты. Цитрат натрия (70% от общего количества в партии) добавляется в основную емкость для приготовления состава (с помешиванием). Контейнер промывается водой, жидкость после промывки сливается в контейнер для предподготовки. Смесь помешивается до полного растворения цитрата натрия. В основную емкость для приготовления состава вносится глицин, остатки глицина смываются водой, жидкость после промывки сливается в основную емкость для приготовления состава. Смесь помешивается до полного растворения глицина. Далее добавляется вода до того момента, пока процентное содержание спирта не снизилось до 4,7% (соотношение по объему). Смесь фильтруется (диаметр пор 0,22 мкм). Аликвоты фильтрованного раствора помещаются во флаконы. Флаконы запечатываются стопорами и помещаются в камеры для лиофильной сушки при 20°С. Полки лиофилизационной камеры охлаждаются до -45°С соответствующей скоростью движения рампы и в данном температурном режиме выдерживаются в течение 200 мин. Затем полки нагревают до -20°С соответствующей скоростью движения рампы и в данном температурном режиме выдерживаются в течение 480 мин. Далее следует повторное охлаждение полок до -45°С соответствующей скоростью движения рампы, далее процесс идет при данной температуре. Спустя 200 мин лиофилизационную камеру опорожняют, а давление в камере доводят до 150 мкм газообразным азотом. Полки камеры подогреваются до -25°С соответствующей скоростью движения рампы и в данном температурном режиме выдерживали в течение 3000 мин. После того, как термопара каждого образца выдает показания -25°С или выше, полки прогревают до 27°С и в данном температурном режиме выдерживают в течение 600 мин. В конце терминальной фазы сушки давление в камере восстанавливается газообразным азотом, флаконы запечатываются и вынимаются. Предлиофилизированный раствор содержит: 52 мМ цитрата, 3% глицина, 4,7% трет-бутилового спирта (как указано далее в табл. 25). Пример 47.
Лиофилизированный порошок 2.
Процесс приготовления идентичен примеру 46.
Предлиофилизированный раствор содержит: 52 мМ цитрата; 3% глицина; и 4,7% трет-бутилового спирта (как указано далее в табл. 26).
Лиофилизированный порошок 3.
Рецептура готовится согласно примеру 46, но цикл лиофилизации изменяется. Флаконы закрываются стопорами и помещаются на полки камеры лиофилизации при температуре 20°С. Далее полки камеры лиофилизации охлаждаются -45°С соответствующей скоростью движения рампы и выдерживают при данной температуре в течение 200 мин. Далее полки нагреваются до -20°С соответствующей скоростью движения рампы и выдерживают при данной температуре в течение 480 мин. Потом полки повторно охлаждаются до -45°С соответствующей скоростью движения рампы и выдерживаются при данной температуре. Спустя 200 мин лиофилизационную камеру опорожняют, давление в камере доводится до 150 мкм газообразным азотом. Полки камеры прогреваются до -15°С с соответствующей скоростью движения рампы и выдерживают при данной температуре в течение 2700 мин. После того, как показатели каждой термопары доходят до -15°С или выше, полки прогреваются до 37°С и выдерживаются при данной температуре в течение 300 мин. По окончанию последнего этапа сушки давление в камере восстанавливают газообразным азотом, флаконы запечатываются и вынимаются. Предлиофилизированный раствор содержит: 52 мМ цитрата; 3% глицина; и 4,7% трет-бутилового спирта (как указано далее в табл. 27).
произв.USP/EP
Трет-бутиловый спирт, произв. ACS grade
н/д
н/д
47,0 мл
0,1645 мл
Вода для инъекций, произв. USP/EP
н/д
н/д
До объема партии
н/д
Общий объем
н/д
н/д
1000 мл
3, 5 мл
Уровень рН (конечная фаза)
н/д
н/д
5, 05
н/д
Пример 49.
Лиофилизированный порошок 4.
В чистый сосуд загружают воду для инъекций. Лимонная кислота и цитрат натрия добавляются к воде с помешиванием до полного растворения. В данный раствор вносится 1Ч-(2-пиразин)карбонил-Ь-фенил-Ь-лейционбороновая кислота (VIII-15) с помешиванием до полного растворения. В сосуд добавляется навеска глицина, остатки глицина смываются водой, жидкость после промывки вносится в основной сосуд. Далее смесь помешивается до полного растворения глицина. Потом добавляется вода до объема партии. Смесь фильтруется через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм. Аликвоты профильтрованного раствора помещаются во флаконы. Флаконы запечатываются стопорами и помещаются на полки камеры лиофилизации при температуре 20°С. Полки камеры лиофилизации охлаждаются до -45°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается в течение 200 мин. Далее полки прогреваются до -20°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается в течение 480 мин. Полки повторно охлаждаются до -45°С соответствующей скоростью движения рампы и выдерживают в данном температурном режиме. Спустя 200 мин камера лиофилизации опорожняется, давление в камере доводится до 150 мкм газообразными азотом. Полки камеры подогреваются до -25°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается в течение 3000 мин. После того, как данные каждой отдельной термопары показывают -25°С либо выше, полки прогревают до 27°С, данный температурный режим выдерживается в течение 600 мин. По окончанию последней фазы сушки давление в камере нормализовывается газообразными азотом, флаконы запечатываются и извлекаются. Предлиофилизированный раствор содержит: 52 мМ цитрата; 3% глицина (как указано далее в табл. 28).
Пример 50.
Лиофилизированный порошок 5.
Готовится аналогично пример 49. Предлиофилизированный раствор содержит: 52 мМ цитрата; 3% глицина (как описано далее в табл. 29). В данном примере уровень pH предлиофилизированного раствора доводится до конечного замеренного уровня pH добавлением 2N HCl.
No.
Компонент
Количество/мл
Партия
Количество во флаконе
Вещество (VIII-15)
0,001 г
2,6
0,30 г
3, 5 мг
Лимонная кислота (моногидрат), произв. USP/EP
0,00168 г
8,0
0,504 г
5,88 мг
Дигидрат цитрата натрия, произв. USP/EP
0,01294 г
44,0
3,882 г
45,2 9 мг
Глицин, произв. USP/EP
0, 03 г
399, 6
9, 0 г
105 мг
Вода для инъекций, произв. USP/EP
н/д
н/д
объема партии
н/д
Общий объем партии
н/д
н/д
300 мл
3,5 мл
Уровень рН (конечная фаза)
н/д
н/д
5,84
н/д
Пример 50.
Лиофилизированный порошок 6.
В чистый сосуд помещается вода для инъекций. Далее добавляются лимонная кислота и цитрат натрия с помешиванием до полного растворения. К данному раствору добавляется 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((К)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота с помешиванием до полного растворения. В сосуд добавляется навеска глицина, остаток глицина промывается водой, жидкость после промывки сливается в основную емкость. Далее смесь помешивается до полного растворения глицина. Потом добавляется вода до объема партии. Смесь фильтруется через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм. Аликвоты профильтрованного раствора помещаются в стерилизованные флаконы. Флаконы запечатываются стопорами и помещаются на полки камеры лиофилизатора при температуре 20°С. Полки камеры лиофилизации охлаждаются -45°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается в течение 200 мин. Далее полки подогреваются до -20°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается в течение 480 мин. Потом полки повторно охлаждаются до -45°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается оставшееся время. Спустя 200 мин камеру лиофилизатора опорожняют, а давление доводят 150 мкм газообразным азотом. Полки камер прогревают до -25°С соответствующей скоростью движения рампы, данный температурный режим выдерживается в течение 3000 мин. После того, как данные каждой отдельной термопары показывает -25°С либо выше, полки прогреваются до 27°С, данный температурный режим выдерживается в течение 600 мин. По окончанию последней фазы сушки давление в камере нормализовываются газообразными азотом, флаконы запечатываются и извлекаются. Рецептура предлиофилизированного раствора содержит 55 мМ цитрата; 3% глицина (как указано далее в табл. 30).
No.
Компонент
Количество/мл
Партия
Количество во флаконе
Вещество (1-1) [выражается в виде количества вещества (VIII-1) ]
0,001 г
2,75
0,50 г
3,5 мг
Лимонная кислота (моногидрат), произв.USP/EP
0,0012 г
5, 5
0, 578
4,2 мг
Дигидрат цитрата натрия, произв. USP/EP
0,0147 г
49, 5
7,279
51,45 мг
Глицин, произв. USP/EP
0, 03 г
399, 6
15, 0 г
105 мг
Вода для инъекций,
н/д
н/д
До объема
н/д
Пример 51.
Восстановление лиофилизированных порошков.
Лиофилизированные порошки (например, приготовленные по методике в примерах 46-50) анализируются с использованием РПДГ, ДСК, газовой хроматографии и анализа (по методу Карла Фишера (Karl Fisher)) осадка на фильтре, стабильности фильтрата, остаточного растворителя, и остаточного содержания влаги, соответственно. Лиофилизированные порошки подвергаются восстановлению соответствующим количеством стерильной воды для инъекций либо стерильным 0,9% раствором натрия хлорида для инъекций. Восстановленные растворы также подвергаются анализу с применение высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ (HPLC) и-ЯМР на предмет чистоты и процентного содержания эфира.
Пример 52.
Приготовление рецептуры 4-(Я,8)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-боксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты (форма 2) для парентерального введения либо для приема внутрь.
В сосуд загружают воду и моногидрат лимонной кислоты, а также дигидрат цитрата натрия (последний вносится с помешиванием до полного растворения). К данному раствору добавляется 4-(R,S)-(карбоксиметил)-2-((Я)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновая кислота (I-1) (форма 2), затем смесь помешивается до полного растворения. К данному раствору с помешиванием (до полного растворения) добавляется натрия хлорид. Далее вносят воду в достаточном количестве до получения необходимого расчетного объема партии, затем раствор фильтруют через ПЭС-мембрану (0,2 мкм). Аликвоты фильтрованного раствора помещаются во флаконы. Флаконы запечатываются стопорами и хранятся при -20°С. Рецептура партии и каждого отдельного флакона приведены далее в табл. 31.
Аналитические тесты - методика 1.
ВЭЖХ с обратной фазой проводится с использованием колонны С8 при 25°С с ультрафиолетовой детекцией при 225 нм.
Мобильная фаза: система градиентов начинается при 85% мобильной фазы А (0,01% трифторксус-ная кислота в воде) и при 15% мобильной фазы В (0,01% трифторуксусная кислота в ацетонитриле), заканчивается при 75% мобильной фазы В спустя 40 мин.
Тестируемый образец получается путем растворения содержимого капсул в растворителе, которым является ацетонитрил и 20 мМ цитратный буфер в соотношении 15:85 (объемное соотношение). При данных условиях среды-растворителя вещество с формулой полностью гидролизует эфирную (цит-ратную) часть молекулы с получением вещества с формулой (VIII-1) в молекулярном соотношении 1:1. Присутствие вещества с формулой (VIII-I) в исследуемом образце подтверждается путем сравнения времени удержания образца с таковым у референсного стандарта. Количество вещества с формулой (VIII-1) в образце рассчитывается по области под пиком хроматограммы, по весовому соотношению (в том числе и по перерасчету молекулярной массы) с областью под пиком при исследовании референсного стандарта. Используемый референсный стандарт имеет известное количество вещества с формулой известную степень чистоты, приготовлен при тех же условиях (среда гидролиза), что и испытываемый образец. Предел точности количественного определения при данном методе 0,05%, расчетный предел обнаружение имеет погрешность 0,02%.
Пример 54.
Аналитические тесты - методика 2.
ВЭЖХ с нормальной фазой проводится с использованием изократной элюции с мобильной фазой 40/60/0,1 (объемное соотношение) ТГФ/н-гексан/TFA на цианидной колонке для ВЭЖХ при 25°С в течение 8 мин, с детекией в УФ-спектре при длине волны 230 нм.
Исследуемый образец получается путем растворения содержимого капсулы ТГФ/н-гексане (соотношение 40/60 по объему). При данных условиях вещество с формулой (I-1) не гидролизуется до вещества с формулой (VIII-1). Количество вещества с формулой (VIII-1) в образце рассчитывается по области под пиком хроматограммы (с использованием весового сравнения) по сравнению с областью под пиком на хроматограмме референсного стандарта. Референсный стандарт в данном случае имеет известное количество вещества с формулой (VIII-1), известную степень чистоты при приготовлении при тех же условиях, что и образец. Предел точности количественного определения вещества с формулой (I-1) при данном методе 0,2%.
Чтобы рассчитать количество вещества с формулой в образце, используются результаты обоих аналитических методов. Аналитическая методика 1 используется для расчета количества на основе массы вещества с формулой (VIII-1) в образце, содержащем вещество с формулой (I-1). Аналитическая Методика 2 также используется для расчета количества вещества с формулой (VIII-1) в образце (содержащем вещества с формулой (I-1)) без применения гидролиза.
Количество вещества с формулой (VIII-1), полученное при использовании аналитической методики 1, минус количество вещества с формулой (VIII-1), полученного при использовании аналитической методики 2, позволяет получить точное количество вещества с формулой (VIII-1), образующееся при вызывании гидролиза вещества с формулой (I-1) в исследуемом образце. Взяв за основу молекулярное соотношение 1 к 1, после расчета молекулярной массы можно получить количество вещества с формулой (I-1) в образце.
В то время как вышеизложенное изобретение было описано в некоторых деталях с целью ясности
понимания, данные частные варианты воплощения изобретения следует воспринимать в показательном
плане, а не как ограничительные рамки применения данного изобретения. Специалист в данной области
после прочтения данного изложения сможет оценить то множество вариантов и изменений (без отклонения от сути изобретения), перечень которых будет скорее определен прилагаемыми заявленными поло-
жениями патентной формулы, нежели числом специфических воплощений изобретения.
Данный патент и конкретные литературные источники, ссылки на которые даны в тексте, устанавливают уровень осведомленности, доступный специалисту в данной области. Если не указано иначе, следует считать, что все технические и научные термины, используемые здесь и далее, имеют то же значение, что и в общепринятом употреблении (для специалистов в области, к которой относится изобретение). Изданные патенты, заявки и ссылки на литературные источники, указанные здесь и далее, объединены тем, что имеют непосредственное, сугубо специфическое и индивидуальное отношение к области изобретения. В случае несоответствия, данное изложение изобретения, в том числе и касательно использованных определений, подлежит контролю.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы (II)
или его фармацевтически приемлемая соль, где Ra представляет собой изобутил;
каждый Rb3 и Rb4 независимо представляет собой -(СН2)р-CO2H;
при этом одна из карбоксильных групп необязательно образует дополнительную связь с атомом бо-
ра;
р равно 0 или 1; n равно 0 или 1.
или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п. 1, описываемое формулой (IV)
или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение по п. 1 или 2, описываемое формулой (Ша)
или его фармацевтически приемлемая соль.
5. Соединение по п.1 или 3, описываемое формулой (IVa)
2. Соединение по п. 1, описываемое формулой (III)
или его фармацевтически приемлемая соль.
6. Кристаллическая форма 2,2'-{2-[(1Я)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-
метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислоты, имеющая рентгеновскую по-
рошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2-0, при-
близительно при 6,4, 8,3, 15,1, 16,4 и 19,1.
7. Кристаллическая форма по п.6, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, вклю-
чающую характеристические пики, выраженные в градусах 2-0, при:
Угол 2-9, 0
Интенсивность, %
6,441
100
8, 304
29, 5
10,35
11,619
5,1
12,695
13, 6
15,077
28, 2
16,352
28, 7
17,504
16, 3
18,231
19,086
21, 4
20,405
11, 7
21,231
7,6
21,916
7,6
25,371
15, 2
27,588
6,2
8. Кристаллическая форма по п.6 или 7, имеющая температуру плавления между 191,8 и 225°С.
9. Кристаллическая форма 2,2'-{2-[(1Я)-1-({[(2,5-дихлорбензоил)амино]ацетил}амино)-3-
метилбутил]-5-оксо-1,3,2-диоксаборолан-4,4-диил}диуксусной кислоты, имеющая рентгеновскую по-
рошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2-0, при-
близительно при 5,8, 7,6, 11,6, 11,9, 16,7, 18,2, 19,6, 20,0 и 22,4.
10. Кристаллическая форма по п.9, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, вклю-
чающую характеристические пики, выраженные в градусах 2-0, при:
Угол 2-0, 0
Интенсивность, %
5, 817
100
7, 614
93,4
11,575
71, 1
11,896
67, 1
12,571
24, 3
14,43
32, 2
16,689
65, 8
17,362
17, 8
18,232
53, 9
19,596
77, 6
19,959
63, 8
20,376
36,2
20,998
32, 2
21, 5
40,1
21,764
43, 4
22,407
77, 6
23, 12
33, 6
23,901
26, 3
24,402
20,4
24,882
19, 7
25,764
19, 1
26,464
39, 5
27,347
21, 7
27, 65
17, 1
27,979
16,4
29,41
20,4
11. Кристаллическая форма соединения по п.9 или 10, имеющая температуру плавления между 206,5 и 225°С.
12. Кристаллическая форма 4-(К,8)-(карбоксиметил)-2-((К)-1-(2-(2,5-дихлорбензамидо)ацетамидо)-3-метилбутил)-6-оксо-1,3,2-диоксаборинан-4-карбоновой кислоты, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2-0, приблизительно при 5,7, 7,6, 11,4, 11,8, 16,5, 18,1, 19,4, 19,8 и 22,2.
13. Кристаллическая форма по п.12, имеющая рентгеновскую порошковую дифрактограмму, включающую характеристические пики, выраженные в градусах 2-0, при:
11.
Угол 2-G, 0
Интенсивность, %
5, 69
100
7, 64
9, 66
11, 22
11, 42
11, 79
12, 41
14, 23
15, 60
16, 53
17, 15
18, 07
19, 39
19, 79
20,24
20, 79
21, 36
21,61
22, 23
22, 55
22, 97
23, 22
23,67
23, 90
24, 19
24, 74
24, 97
25, 64
26,31
26, 64
27,21
27,40
27, 88
28,25
29, 27
29, 72
14. Кристаллическая форма соединения по п.12 или 13, имеющая температуру плавления между 231,3 и 239,9°С.
15. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-14.
16. Способ по п.15, где рак представляет собой множественную миелому.
17. Способ по п.15, где рак представляет собой болезнь Ходжкина, фолликулярную лимфому, лим-фому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому или Т-клеточную лимфому.
18. Способ по п.15, где пациент, нуждающийся в лечении, представляет собой пациента, имеющего или с высоким риском развития или испытывающего рецидив рака, выбранного из группы, состоящей из множественной миеломы, болезни Ходжкина, фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы и Т-клеточной лимфомы.
19. Способ по п.15, где соединение дополнительно вводят с ДНК-повреждающим химиотерапевти-ческим агентом или химиотерапевтическим агентом, нарушающим клеточную репликацию.
20. Способ по п.19, где ДНК-повреждающий химиотерапевтический агент представляет собой мел
14.
фалан.
21. Способ по п.19, где химиотерапевтический агент, нарушающий клеточную репликацию, представляет собой леналидомид.
22. Способ по п.15, где введение соединения осуществляют внутрь, парентерально, путем ингаляции, местно, ректально, капельно в нос, защечно, вагинально или путем установки импланта-депо.
23. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют внутрь.
24. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют внутривенно.
25. Способ по п.22, где введение соединения осуществляют системно или местно.
26. Фармацевтическая композиция, применимая для ингибирования активности протеасом, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
27. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,2 до 12% по массе в процентах от общей массы композиции.
28. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,2 до 3% по массе в процентах от общей массы композиции.
29. Фармацевтическая композиция по п.26, где соединение присутствует в количестве от 0,25 до 2% по массе в процентах от общей массы композиции.
30. Фармацевтическая композиция по любому из пп.26-29, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит наполнитель; необязательно лубрикант, агент для повышения текучести или буфер.
31. Фармацевтическая композиция по п.30, где наполнитель присутствует в количестве от 86,5 до 99,8% по массе в процентах от общей массы композиции.
32. Фармацевтическая композиция по п.30, где лубрикант присутствует в количестве 1% по массе в процентах от общей массы композиции.
33. Фармацевтическая композиция по п.30, где агент для повышения текучести присутствует в количестве от 1 до 2% по массе в процентах от общей массы композиции.
34. Фармацевтическая композиция по п.30, где буфер присутствует в количестве 2% по массе в процентах от общей массы композиции.
35. Фармацевтическая композиция по п.30, где фармацевтическая композиция содержит:
а) от 0,2 до 3% соединения по любому из пп.1-14, от 86,5 до 99,8% наполнителя, необязательно до
1,5% лубриканта, необязательно до 5% агента для повышения текучести и, необязательно, до 5% буфера
по массе в процентах от общей массы композиции; или
б) от 0,2 до 3% соединения формулы (II) по п.1, от 97 до 99,8% наполнителя и, необязательно, до
1,5% лубриканта по массе в процентах от общей массы композиции; или
в) от 0,25 до 2% соединения формулы (II) по п.1 и от 98 до 99,75% наполнителя по массе в процен-
тах от общей массы композиции.
36. Фармацевтическая композиция по п.30, где фармацевтическая композиция содержит:
а) соединение по любому из пп.1-14 в количестве от 0,2 до 12% по массе в процентах от общей мас-
сы композиции;
б) наполнитель в количестве от 76,5 до 99,8% по массе в процентах от общей массы композиции;
в) необязательно, лубрикант в количестве до 1,5% по массе в процентах от общей массы компози-
ции;
г) необязательно, агент для повышения текучести в количестве до 5% по массе в процентах от об-
щей массы композиции;
д) необязательно буфер в количестве до 5% по массе в процентах от общей массы композиции.
37. Фармацевтическая композиция по п.30, где:
а) наполнитель выбирают из группы, состоящей из порошкообразной целлюлозы, микрокристалли-
ческой целлюлозы, силикатной микрокристаллической целлюлозы, натрия крахмала гликолята, прежела-
тинизированного крахмала и смеси данных веществ;
б) лубрикант, если присутствует, выбирают из группы, состоящей из стеарата магния, глицерилбе-
гената, гидрогенизированного растительного масла, талька, стеарата цинка, стеарата кальция, стеарата
сахарозы, стеарилфумарата натрия и их смеси;
в) агент для повышения текучести, если он присутствует, представляет собой тальк.
38. Фармацевтическая композиция по п.30, где
наполнитель выбран из группы, состоящей из микрокристаллической целлюлозы, натрия крахмала гликолята, прежелатинизированного крахмала и смеси данных веществ; лубрикант, если присутствует, представляет собой стеарат магния; агент для повышения текучести, если присутствует, представляет собой тальк; буфер, если присутствует, представляет собой цитрат натрия или лимонную кислоту.
39. Фармацевтическая композиция по п.26, где композиция содержит соединение по п.1, увеличитель объема и буфер.
40. Фармацевтическая композиция по п.39, где увеличитель объема присутствует в количестве от 1
39.
до 5% мас./об.
41. Фармацевтическая композиция по п.40, где увеличитель объема представляет собой глицин.
42. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция находится в форме гранулы, преципитата, взвеси частиц, порошка, таблетки, капсулы, сиропа, свечи, лекарственной формы для инъекций, эмульсии, эликсира, суспензии или раствора.
43. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой инъекционный препарат.
44. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный порошок.
45. Фармацевтическая композиция по п.26, где фармацевтическая композиция представляет собой твердую лекарственную форму.
46. Фармацевтическая композиция по п.45, где твердая лекарственная форма представляет собой капсулу.
47. Фармацевтическая композиция по п.46, где капсула содержит соединение формулы (II) по п.1, микрокристаллическую целлюлозу, тальк и стеарат магния.
48. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.26-47.
49. Способ по п.48, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.
50. Способ по п.48, где рак представляет собой фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, или рецидив фолликулярной лимфомы, лимфо-мы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы или Т-клеточной лимфомы.
51. Способ по п.48, где рак представляет собой болезнь Ходжкина или рецидив болезни Ходжкина.
52. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют внутрь или парентерально.
53. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют дополнительно с леналидомидом.
54. Способ по п.48, где введение композиции осуществляют дополнительно с мелфаланом.
55. Капсула для лечения рака, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (II) по п.1; и фармацевтически приемлемый носитель.
56. Капсула по п.55, где капсула предназначена для введения внутрь.
57. Капсула по п.55, где рак представляет собой множественную миелому или рецидив множественной миеломы.
58. Капсула по п.55, где рак представляет собой фолликулярную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, В-клеточную лимфому или Т-клеточную лимфому или рецидив фолликулярной лимфомы, лим-фомы из клеток зоны мантии, В-клеточной лимфомы или Т-клеточной лимфомы.
360 350
зад ззо
320 310 300 290 2S0 270 260
1.0
^§1) Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027346
027346
- 1 -
- 1 -
(19)
027346
027346
- 1 -
- 1 -
(19)
027346
027346
- 1 -
- 1 -
(19)
027346
027346
- 4 -
- 3 -
(19)
027346
027346
- 26 -
- 26 -
027346
027346
- 26 -
- 26 -
027346
Таблица 7
Состав капсулы
027346
Таблица 7
Состав капсулы
- 40 -
- 40 -
027346
Таблица 11
Рецептура капсулы
027346
Таблица 11
Рецептура капсулы
- 41 -
- 41 -
027346
027346
- 42 -
- 42 -
027346
Таблица 16
Рецептура капсулы
027346
Таблица 16
Рецептура капсулы
- 43 -
- 43 -
027346
Таблица 19
Рецептура капсулы
027346
Таблица 19
Рецептура капсулы
- 44 -
- 44 -
027346
Таблица 22
Рецептура партии
027346
Таблица 22
Рецептура партии
- 45 -
- 45 -
027346
027346
- 46 -
- 46 -
027346
027346
Таблица 26
Рецептура партии
- 49 -
- 50 -
027346
Таблица 29
Рецептура партии
027346
Таблица 29
Рецептура партии
- 52 -
- 52 -
027346
Таблица 30
Рецептура партии
027346
Таблица 30
Рецептура партии
- 53 -
- 53 -
027346
Таблица 31
Рецептура партии
027346
Таблица 31
Рецептура партии
- 54 -
- 54 -
027346
027346
- 55 -
- 55 -
027346
027346
- 62 -
- 62 -
027346
027346
- 63 -
- 63 -