EA 027325B1 20170731 Номер и дата охранного документа [PDF] EAPO2017\PDF/027325 Полный текст описания [**] EA201490803 20121018 Регистрационный номер и дата заявки US61/548,518 20111018 Регистрационные номера и даты приоритетных заявок US2012/060745 Номер международной заявки (PCT) WO2013/059410 20130425 Номер публикации международной заявки (PCT) EAB1 Код вида документа [PDF] eab21707 Номер бюллетеня [**] СОСТАВЫ ЭТАНЕРЦЕПТА, СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ КСИЛИТОМ Название документа [8] A61K 39/395 Индексы МПК [US] Мэннинг Марк, [US] Мерфи Брайан Сведения об авторах [US] КОХЕРУС БАЙОСАЙЕНСИС, ИНК. Сведения о патентообладателях [US] КОХЕРУС БАЙОСАЙЕНСИС, ИНК. Сведения о заявителях
 

Патентная документация ЕАПВ

 
Запрос:  ea000027325b*\id

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Стабилизированная водная фармацевтическая композиция, содержащая этанерцепт и стабилизатор, где стабилизатор содержит ксилит или комбинацию ксилита и меглюмина и где композиция свободна от аргинина.

2. Композиция по п.1, дополнительно содержащая один или более дополнительных компонентов, выбранных из буфера, вещества, изменяющего тоничность, и эксципиента.

3. Композиция по п.2, содержащая от 25 до 75 мг/мл этанерцепта и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор представляет собой ксилит в количестве, составляющем до 10% от массы композиции.

4. Композиция по п.1, содержащая 25-75 мг/мл этанерцепта, 1-10 мас.% ксилита, 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно до 5 мас.% меглюмина, необязательно до 100 мМ NaCl и необязательно до 5 мас.% сахарозы.

5. Композиция по п.4, содержащая 1-100 мМ NaCl, 1-5 мас.% сахарозы и где стабилизатор дополнительно содержит меглюмин в количестве, составляющем 1-5% от массы композиции.

6. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.

7. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита и 1-3 мас.% меглюмина.

8. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита, 1-3 мас.% меглюмина, 1-100 мМ хлорида натрия и 1-4 мас.% сахарозы.

9. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 6 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.

10. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 2-3 мас.% ксилита, 5% сахарозы.

11. Композиция по п.1, содержащая 25-75 мг/мл этанерцепта, 1-10 мас.% ксилита, 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно до 5 мас.% маннозилглицерата, маннозиллактата, маннозилгликолата или диглицеринфосфата, необязательно до 100 мМ NaCl и необязательно до 5 мас.% сахарозы.


Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

1. Стабилизированная водная фармацевтическая композиция, содержащая этанерцепт и стабилизатор, где стабилизатор содержит ксилит или комбинацию ксилита и меглюмина и где композиция свободна от аргинина.

2. Композиция по п.1, дополнительно содержащая один или более дополнительных компонентов, выбранных из буфера, вещества, изменяющего тоничность, и эксципиента.

3. Композиция по п.2, содержащая от 25 до 75 мг/мл этанерцепта и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор представляет собой ксилит в количестве, составляющем до 10% от массы композиции.

4. Композиция по п.1, содержащая 25-75 мг/мл этанерцепта, 1-10 мас.% ксилита, 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно до 5 мас.% меглюмина, необязательно до 100 мМ NaCl и необязательно до 5 мас.% сахарозы.

5. Композиция по п.4, содержащая 1-100 мМ NaCl, 1-5 мас.% сахарозы и где стабилизатор дополнительно содержит меглюмин в количестве, составляющем 1-5% от массы композиции.

6. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.

7. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита и 1-3 мас.% меглюмина.

8. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита, 1-3 мас.% меглюмина, 1-100 мМ хлорида натрия и 1-4 мас.% сахарозы.

9. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 6 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.

10. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 2-3 мас.% ксилита, 5% сахарозы.

11. Композиция по п.1, содержащая 25-75 мг/мл этанерцепта, 1-10 мас.% ксилита, 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно до 5 мас.% маннозилглицерата, маннозиллактата, маннозилгликолата или диглицеринфосфата, необязательно до 100 мМ NaCl и необязательно до 5 мас.% сахарозы.


Евразийское
патентное
ведомство
027325
(13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201490803
(22) Дата подачи заявки
2012.10.18
(51) Int. Cl. A61K39/395 (2006.01)
(54) СОСТАВЫ ЭТАНЕРЦЕПТА, СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ КСИЛИТОМ
(31) 61/548,518; 61/669,480
(32) 2011.10.18; 2012.07.09
(33) US
(43) 2014.09.30
(86) PCT/US2012/060745
(87) WO 2013/059410 2013.04.25
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
КОХЕРУС БАЙОСАЙЕНСИС, ИНК.
(US)
(72) Изобретатель:
Мэннинг Марк, Мерфи Брайан (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-A1-20030180287 US-A1-20080311119
Methods for characterization of size-exclusion chromatography media for preparative purification of DNA restriction fragments. Article [online]. Springer Link. 2012 [retrieved on 2012-12-03]. June 1999. Retrieved from the Internet: , entire document
(57) Настоящее изобретение предоставляет стабилизированную водную фармацевтическую композицию, содержащую этанерцепт и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования, нарушающего правильную пространственную конфигурацию, и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор содержит ксилит или комбинацию ксилита и меглюмина. Определения различных технических терминов, используемых в описании, даны в разделе "Определения" и в остальном тексте настоящего описания. Стабилизированные составы этанерцепта согласно настоящему изобретению, которые необязательно и предпочтительно являются свободными от аргинина, вызывают повышение стабильности при длительном хранении.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к водным фармацевтическим композициям, стабилизированным ксилитом для длительного хранения этанерцепта, к способам изготовления указанных композиций, способам их введения и к наборам, их содержащим. Настоящее изобретение включает составы этанерцепта, которые не требуют аргинина для стабилизации.
Предпосылки создания изобретения
Полипептиды часто должны некоторое время храниться перед их использованием. Когда их хранят в течение длительного периода, полипептиды в растворе часто оказываются нестабильными (Manning et al., 1989, Pharm. Res. 6:903-918). Для продления срока их хранения разработаны дополнительные стадии обработки, такие как сушка (например, лиофилизация). Однако лиофилизированные фармацевтические композиции менее удобны для применения.
Как правило, практически улучшить стабильность полипептидов можно путем изменения концентрации составных элементов в составе или добавления эксципиентов для модифицирования состава (см., например, патенты США 5580856 и 6171586). Однако и в результате применения добавочных компонентов полипептиды все-таки могут инактивироваться. Кроме того, в случае лиофилизации в результате стадии регидратации полипептид может инактивироваться - вследствие, например, агрегации или денатурации (Hora et al., 1992, Pharm. Res., 9:33-36; Liu et al., 1991, Biotechnol. Bioeng., 37:177-184). Агрегация полипептидов нежелательна, поскольку она может приводить к иммуногенности (Cleland et al., 1993, Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems, 10:307-377; и Robbins et al., 1987, Diabetes, 36:838-845). Другим способом улучшить стабильность полипептидов является применение специфических концентраций L-
аргинина (патент США 7648702).
Одним из полипептидов, которые перед применением хранят в течение срока, достигающего двух лет, является этанерцепт (Enbrel(r) Immunex Corporation), который представляет собой димерный гибридный полипептид, состоящий из связывающей лиганды внеклеточной части человеческого рецептора фактора некроза опухолей (TNFR) с молекулярной массой 75 кДа (р75), конъюгированной с Fc-участком IgG1 человека. Он состоит из 934 аминокислот и имеет эффективную молекулярную массу приблизительно 150 кДа (Physicians Desk Reference, 2002, Medical Economics Company Inc.). Fc-компонент этанер-цепта содержит второй и третий константные домены тяжелой цепи (СН2 и СН3 соответственно) и шарнирный участок, но не содержит первого константного домена (CH1) IgG1 человека. Домен Fc может содержать только один из вышеописанных доменов или он может содержать сразу все указанные домены. Этанерцепт обычно производят по технологии рекомбинантных ДНК в клетках яичников самок китайского хомячка (СНО) в системе экспрессии клеток млекопитающих.
Настоящее изобретение предоставляет новые стабильные жидкие составы этанерцепта, способные храниться в течение длительного времени.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение представляет собой стабилизированную водную фармацевтическую композицию, содержащую этанерцепт и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования, нарушающего правильную пространственную конфигурацию, и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор содержит ксилит или комбинацию ксилита и меглюмина.
Определения различных технических терминов, используемых в нижеследующем обсуждении, даны ниже в разделе "Определения" и в остальном тексте настоящем описании.
Стабилизированные составы этанерцепта согласно настоящему изобретению, которые необязательно, но предпочтительно являются свободными от аргинина, вызывают повышение стабильности при длительном хранении, что характеризуется по меньшей мере одним из: (1) SEC анализа в условиях М3 или Т2 или Т4, согласно которому содержание мономера превышает приблизительно 90%, содержание агрегатов составляет приблизительно менее 3 мас.% и содержание фрагмента 3 составляет приблизительно менее 5 мас.%, и (2) HIC анализа в условиях М3 или Т2 или T4, согласно которому количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 3 мас.%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает 80 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее
20 мас.%.
В предпочтительных аспектах стабилизированных составов указанные составы повышают стабильность при долгосрочном хранении, что характеризуется: HIC-анализом в условиях М3 или Т2 или Т4, согласно которому количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает или равно приблизительно 95 мас.%, и, если на HIC-хроматограмме присутствует пик 3, количество композиции, представленной пиком 3, менее или равно приблизительно 3 мас.%.
Стабилизированный состав этанерцепта, как описано выше, необязательно, но предпочтительно не содержит аргинина или является по существу свободным от аргинина.
Составы согласно настоящему изобретению обладают превосходной стабильностью, как определено посредством анализа, проведенного с использованием SEC (эксклюзионной хроматографии) и HIC (гидрофобной хроматографии) после одного, двух или трех месяцев хранения при 5°С. Эти составы сравнимы с коммерчески доступным составом этанерцепта, в котором требуемым компонентом является
аргинин (или даже превосходят его). Соответственно, настоящее изобретение, кроме того, направлено на составы стабилизированного этанерцепта, как описано выше, которые не содержат аргинина или являются по существу свободными от аргинина и в которых композиция, оцениваемая при М3 или Т2 или Т4, обеспечивает стабильность при длительном хранении, что удовлетворяет одному или обоим следующим критериям: (А) стабильность, сравнимая или лучше, чем у коммерчески доступного этанерцепта, представленного на рынке под торговой маркой Enbrel(r), как измерено посредством (i) SEC-анализа количеств агрегата (ов), мономера и фрагмента 3 в композиции (как определено в описании) и (ii) HIC-анализа количеств материала в композиции, соответствующей пикам 1, 2 и 3 на HIC-хроматограмме (как определено в описании); и (В) HIC-хроматограмма, в которой (i) пик 3 отсутствует или по существу отсутствует, и (ii) пик 2 представляет приблизительно более 95% от массы композиции; SEC-хрома-тограмма, по существу не содержащая пика, соответствующего агрегату(ам); и SEC-хроматограмма, на которой содержание мономера составляет по меньшей мере приблизительно 95% от массы композиции.
В одном предпочтительном аспекте композиция согласно настоящему изобретению содержит приблизительно от 25 до приблизительно 75 мг/мл этанерцепта и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор представляет собой ксилит в количестве, составляющем приблизительно до 10% от массы композиции, и где композиция характеризуется SEC-анализом в условиях М3 или Т2 или Т4, согласно которому содержание мономера превышает приблизительно 80 мас.%, содержание агрегата(ов) составляет приблизительно менее 3 мас.%, и содержание фрагмента 3 составляет приблизительно менее 6 мас.%, и имеет рН 6,0-6,6. Композиции, удовлетворяющие этим аналитическим критериям, не требуют аргинина для стабилизации.
В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения стабилизированная состав этанерцепта дополнительно характеризуется посредством (а) SEC-анализа при М3 или Т2 или Т4, согласно которому содержание мономера превышает приблизительно 90%, и содержание агрега-та(ов) составляет приблизительно менее 3 мас.%, и (b) HIC-анализа при М3 или Т2 или Т4, согласно которому количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 4 мас.%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает приблизительно 80 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хромато-грамме, составляет приблизительно менее 20 мас.%. Составы, удовлетворяющие этим аналитическим критериям, не требуют аргинина для стабилизации.
Композиции этанерцепта согласно настоящему изобретению, кроме того, дают возможность предоставлять составы, которые содержат приемлемые уровни частиц, невидимых невооруженным глазом. Соответственно, настоящее изобретение дополнительно направлено на стабилизированные составы эта-нерцепта и имеющие (при М3 или Т2 или Т4) на миллилитр, в среднем, приблизительно не более 10000 частиц, невидимых невооруженным глазом, имеющих размер более 5 мкм.
Стабилизированная композиция этанерцепта по настоящему изобретению дополнительно характеризуется посредством (a) SEC-анализа при М3 или Т2 или Т4, согласно которому содержание мономера превышает приблизительно 90 мас.%, и содержание агрегата(ов) составляет приблизительно менее 3 мас.%, и (b) HIC-анализа при М3 или Т2 или Т4, согласно которому количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 3 мас.%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает 80 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 20 мас.%, и где указанный состав является свободным или по существу свободен от аргинина.
Стабильность указанных составов может быть, дополнительно охарактеризована тем, что композиции, необязательно свободные или по существу свободные от аргинина, демонстрируют результаты HIC-анализа при М3 или Т2 или Т4, согласно которым количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 1%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает приблизительно 95 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 3 мас.%.
Преимущество стабилизированных композиций согласно настоящему изобретению, предпочтительно свободных или по существу свободных от аргинина, демонстрирует HIC-анализ при М3 или Т2 или Т4, согласно которому количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 2% или предпочтительно приблизительно менее 1%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает приблизительно 95 мас.% и предпочтительно превышает приблизительно 97%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 1 мас.% и предпочтительно 0-1%. Составы, удовлетворяющие этим аналитическим критериям, не требуют аргинина для стабилизации.
Стабилизированные составы этанерцепта могут, в дополнение к ксилиту, содержать дополнительные необязательные ингредиенты меглюмин, сахарозу и хлорид натрия. Таким образом, настоящее изобретение также направлено на композиции, содержащие приблизительно 25-75 мг/мл этанерцепта, приблизительно 1-10 мас.% ксилита, приблизительно 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно приблизительно до 5 мас.% меглюмина, необязательно приблизительно до 5 мМ NaCl и необязательно приблизительно до 5 мас.% сахарозы.
В отличие от коммерчески доступного этанерцепта, предоставляемого в составе, содержащем аргинин, авторы настоящего изобретения неожиданно, в свете патента США 7648702, обнаружили, что варианты осуществления составов этанерцепта, описанных и проиллюстрированных в настоящем описании, не требуют аргинина для длительной стабилизации, хотя при желании в них можно добавлять и аргинин. Способность обеспечивать составы этанерцепта, стабилизированные без аргинина, является потенциально значительно выгодным обстоятельством для системы здравоохранения, благодаря тому, что пациентам и учреждениям здравоохранения предоставляются альтернативные составы этанерцепта, которые могут стать доступными по более низким ценам по сравнению с имеющимся в продаже составом этанер-цепта (т.е. Enbrel(r)), для стабилизации которых требуется аргинин.
Термин "нестабильность", используемый в настоящем описании, или подобные термины, означает тенденцию мономера этанерцепта к подверженности разнообразным нежелательным трансформациям при хранении. К таким трансформациям относятся образование олигомеров и агрегата(ов) с высокой молекулярной массой (далее в настоящем описании называемых просто "агрегат(ы)"), в которых множество копий по существу интактного мономера этанерцепта становятся необратимо ассоциированными друг с другом посредством множества нековалентных взаимодействий (например, электростатических взаимодействий). Нежелательные трансформации при хранении могут также включать разложение мономера этанерцепта на более мелкие фрагменты и/или усеченные формы. В идеальном случае, состав этанерцеп-та должен до максимально возможной степени минимизировать склонность этого состава образовывать при хранении агрегаты, неправильно свернутый белок, олигомеры и/или фрагменты этанерцепта. Важным преимуществом, которым является результат способности уменьшать образование нежелательных агрегатов или фрагментов, является уменьшение возможной токсичности и/или иммуногенности данного лекарственного состава.
Состав этанерцепта согласно настоящему изобретению необязательно, но предпочтительно является свободным или по существу свободен от аргинина. Термин "по существу свободный от аргинина" должен означать, что аргинин, даже если он присутствует, в такой степени не влияет на стабилизацию мономера этанерцепта в составе, так что специалист в данной области техники не сможет сделать вывод о том, что его присутствие благоприятно или необходимо для стабилизации.
Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут очевидными из нижеследующего описания, хотя в нем возможны и некоторые вариации и модификации, не отходящие от сущности и объема новых концепций настоящего изобретения.
Следует понимать, что как предшествующее общее описание, так и нижеследующее подробное описание, представляют собой только разъясняющие примеры, не ограничивающие настоящее изобретение, как заявлено в формуле изобретения.
Подробное описание изобретения
В данном разделе подробно описаны различные варианты осуществления настоящего изобретения. При использовании в настоящем описании и во всех пунктах формулы изобретения значения единственного числа включают ссылки на множественное число, если контекст явным образом не указывает иное. Кроме того, при использовании в настоящем описании и во всех пунктах формулы изобретения значение предлога "в" включает как "в", так и "на", если контекст ясным образом не указывает иное. Некоторые термины, использованные в настоящем описании, ниже дополнительно определены более конкретно.
Определения
Термины, используемые в настоящем описании, как правило, имеют свои обычные значения, принятые в данной области техники, как в контексте настоящего изобретения, так и том в конкретном контексте, где используют каждый термин. Определенные термины, использованные для описания настоящего изобретения, обсуждаются ниже или в иных местах данного описания в качестве дополнительных руководящих указаний, предоставляемых практическому специалисту, изучающему описание настоящего изобретения. Для некоторых терминов даны синонимы.
Использование одного или нескольких синонимов не исключает применения других синонимов. Использование примеров в любом разделе настоящего описания, включая примеры любых терминов, обсуждаемых в настоящем описании, является только иллюстративным и никак не ограничивает объем и сущность настоящего изобретения или любого приведенного термина. Настоящее изобретение не ограничивается теми разнообразными вариантами его осуществления, которые даны в настоящем описании.
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют тот же смысл, что обычно понимает специалист с обычной квалификацией в той области техники, к которой относится настоящее изобретение. В случае конфликта, справедливым будет признан настоящий документ, включая определения.
Как правило, термины "около", "примерно" или "приблизительно" означают "в пределах 20%", "в пределах 10%", "в пределах 5, 4, 3, 2 или 1%" указанного значения или диапазона. Указываемые численные величины являются приблизительными, что означает, что можно подразумевать термины "около", "примерно" или "приблизительно", если они не даны явным образом.
Термины "этанерцепт" или "мономер этанерцепта" или "мономер" являются синонимами названия
"Энбрел" (Enbrel(r)). Они относятся к полипептиду, который представляет собой димерный гибридный полипептид, состоящий из связывающей лиганды внеклеточной части рецептора фактора некроза опухолей (TNFR) человека с молекулярной массой 75 кДа (р75), конъюгированной с Fc-участком IgG1 человека. Он состоит из 934 аминокислот и имеет эффективную молекулярную массу приблизительно 150 кДа. Для целей настоящего изобретения термин "этанерцепт" также охватывает этанерцепт с небольшими модификациями в аминокислотной структуре (включая делеции, добавления и/или замену аминокислот), которые не оказывают существенного влияния на функцию, эффективность или авидность этанерцепта. Термин "этанерцепт" охватывает все формы и составы Enbrel", включая, но, не ограничиваясь ими, концентрированные составы, готовые для применения инъекционные составы, составы, восстанавливаемые водой, спиртом и/или другими ингредиентами, и др.
Термин "сахар" относится к моносахаридам, дисахаридам и полисахаридам. Примеры сахаров включают, но не ограничиваются ими, сахарозу, трегалозу, декстрозу и другие.
Термин "меглюмин" относится к соединению с химической формулой H3NHCH2 (CHOH)4CH2OH, также известному как 1-дезоксиметиаминосорбит, ^метил^-глюкамин и 1-дезокси-1-метиламно^-глюцитол.
Термины "маннозилглицерат", "маннозиллактат", "маннозилгликолат" и "диглицеринфосфат" хорошо известны в данной области техники и имеют свои общепринятые значения. Следующие публикации описывают эти соединения в некоторых подробностях: Faria et al., Carbohydrate Res. 2008, 343: 30253033; Borges et al., Extremophiles 2002, 6: 209-216; Faria et al., ChemBioChem 2003, 4: 734-741; Sawangwan et al., Biotechnol. J. 2010, 5: 187-191; и Pais et al., J. Mol. Biol. 2009, 394: 237-250. Настоящее описание включает посредством ссылки описания этих соединений, содержащиеся в этих публикациях.
Термин "полиол" относится к спирту, содержащему множественные гидроксильные группы. Примеры полиолов включают, но не ограничиваются ими, маннит, сорбит и другие.
Подразумевается, что термин "длительное хранение" означает, что фармацевтическую композицию можно хранить в течение трех месяцев или более, в течение шести месяцев или более и, предпочтительно в течение одного года или более. Также подразумевается, что "длительное хранение" означает, что указанную композицию хранят либо в виде жидкости при 2-8°С, либо в замороженном состоянии (например, при -20°С или при более низкой температуре). Кроме того, предполагается, что указанную композицию можно замораживать и оттаивать более одного раза.
Подразумевается, что термин "стабильный" или "стабилизированный", использованный в отношении длительного хранения, означает, что этанерцепт, содержащийся в фармацевтической композиции, теряет не более 20% (или более предпочтительно 15%, или еще более предпочтительно 10% и наиболее предпочтительно 5%) своей активности относительно активности композиции в начале хранения.
Термин "млекопитающее" включает, но не ограничивается этим, человека.
Термин "фармацевтически приемлемый носитель" относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному веществу или эксципиенту традиционного типа. Фармацевтически приемлемый носитель является нетоксичным для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях и является совместимым с другими ингредиентами состава.
Термин "композиция" относится к смеси, которая обычно содержит носитель (такой как фармацевтически приемлемый носитель) или эксципиент, который является традиционным в данной области техники и который подходит для введения субъекту с терапевтическими, диагностическими или профилактическими целями. Она может включать клеточную культуру, в клетках или в среде которой присутствует полипептид или полинуклеотид. Например, композиции для перорального введения могут образовывать растворы, суспензии, таблетки, пилюли, капсулы, составы с замедленным высвобождением, ополаскиватели для полости рта или порошки.
Термины "фармацевтическая композиция" и "состав" используются взаимозаменяемо.
Термин "лечение" относится к любому введению или применению лекарственных средств при заболевании млекопитающего и включает торможение развития заболевания, его прекращение, облегчение заболевания (например, вызывая обратное развитие или восстанавливая утраченные, недостающие или дефектные функции, или стимулируя неэффективный процесс). Данный термин включает получение желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта, охватывая любое лечение патологического состояния или расстройства у млекопитающего. Эффект может быть профилактическим в смысле полного или частичного предупреждения расстройства или его симптома, и/или он может быть терапевтическим в смысле частичного или полного излечения расстройства и/или неблагоприятного состояния, характерного для данного расстройства. Он включает (1) предотвращение возникновения расстройства или его рецидива у субъекта, который может быть предрасположен к данному расстройству, но пока еще остается бессимптомным, (2) торможение развития расстройства такого как приостановление, (3) остановку или окончательное устранение расстройства или по меньшей мере ассоциированных с ним симптомов, так что пациент более не страдает этим расстройством или его симптомами, такими как вызывающими обратное развитие расстройства или его симптомов, например, восстанавливая или исправляя утраченные, недостающие или дефектные функции или стимулируя неэффективный процесс, или (4)
облегчая, смягчая или улучшая состояние при расстройстве или при симптомах, ассоциированных с ним, причем термин "улучшение состояния" используется в широком смысле для указания по меньшей мере на уменьшение величины некоторого параметра, такого как воспаление, боль и/или размер опухоли.
Термин "заболевание" относится к любому патологическому состоянию, инфекции, расстройству или синдрому, который требует медицинского вмешательства или для которого желательно медицинское вмешательство. Такое медицинское вмешательство может включать лечение, постановку диагноза и/или профилактическое мероприятие.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству, которое, когда его вводят некоторому живому субъекту, обеспечивает достижение желаемого эффекта у этого живого субъекта. Например, количество полипептида согласно настоящему изобретению, эффективное для введения живому субъекту, представляет собой такое количество, которое предупреждает и/или лечит заболевание, опосредуемое интегрином avp3. Точное количество будет зависеть от цели воздействия и будет установлено специалистом в данной области техники с использованием известных технических приемов. Как известно в данной области, для выбора между системной или локальной доставкой может потребоваться учет возраста, массы тела, общего состояние здоровья, пола, режима питания, времени введения, взаимодействия с другими лекарственными средствами и тяжести патологического состояния, что можно осуществить на основании обычных экспериментов, выполняемых специалистами в данной области.
Термин "T1" относится к моменту времени, когда состав этанерцепта хранили в течение приблизительно одной недели при 40°С.
Термин "Т2" относится к моменту времени, когда состав этанерцепта хранили в течение приблизительно двух недель при 40°С.
Термин "Т4" относится к моменту времени, когда состав этанерцепта хранили в течение приблизительно четырех недель при 40°С.
Термин "М3" относится, в собирательном смысле, к трем моментам времени и, в частности к аналитическому результату, наблюдаемому для состава этанерцепта после хранения в течение приблизительно одного, приблизительно двух или приблизительно трех месяцев при температуре 5°С. Например, в настоящем описании ссылку на анализ, проведенный при М3, следует понимать как означающую, что такой анализ выполнен в момент времени, когда состав этанерцепта находился на хранении в течение периода, выбранного из приблизительно одного, приблизительно двух или приблизительно трех месяцев. Таким образом, в настоящем описании заявление о том, что состав этанерцепта является причиной получения некоторого определенного аналитического значения или результата измерения при М3, является истинным, если указанное значение наблюдали в момент времени, соответствующий по меньшей мере одному из следующих сроков хранения: приблизительно одному месяцу, приблизительно двум месяцам или приблизительно трем месяцам хранения при 5°С.
Термины "пик 1", "пик 2" и "пик 3", когда они используются в настоящем описании при обсуждении результатов гидрофобной хроматографии, относятся к тем же самым пикам 1, 2 и 3, которые обсуждаются в патенте США 7294481.
Варианты осуществления настоящего изобретения
Когда фармацевтические композиции, содержащие этанерцепт (Enbrel(r)), включая водные и лиофи-лизованные составы этанерцепта, хранят на долгосрочной основе, активность этанерцепта может быть утрачена или уменьшена вследствие нестабильности мономера этанерцепта, обусловленной агрегированием и/или химическим разложением, включая образование фрагментов и олигомеров. В связи с этим, настоящее изобретение предоставляет несколько вариантов осуществления водных составов этанерцеп-та, которые дают возможность для стабильного длительного хранения, так что этанерцепт будет стабильным в течение всего срока хранения, как в жидком, так и в замороженном состоянии. Предоставляемые составы включают, но не ограничиваются ими, составы, которые не содержат аргинина и не требуют каких-либо дополнительных стадий, таких как регидратация.
Эти варианты осуществления настоящего изобретения более подробно объясняются ниже.
Этанерцепт
Все композиции согласно настоящему изобретению содержат этанерцепт (Enbrel(r)). Как объясняется в разделе настоящего изобретения "Предпосылки создания изобретения", этанерцепт представляет собой димерный гибридный полипептид, состоящий из связывающей лиганды внеклеточной части рецептора фактора некроза опухолей (TNFR) человека с молекулярной массой 75 кДа (р75), конъюгиро-ванной с Fc-участком IgG1 человека. Этанерцепт состоит из 934 аминокислот. Fc-компонент этанерцепта содержит второй и третий константные домены тяжелой цепи (СН2 и СН3 соответственно) и шарнирный участок IgG1 человека. Домен Fc может содержать только один из вышеописанных доменов или он может содержать сразу все указанные домены. Этанерцепт, подходящий для хранения в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, можно продуцировать в живых клетках-хозяевах, которые экспрессируют этанерцепт, таких как гибридомы (в случае антител) или таких как клетки-хозяева, получаемые генной инженерией для продуцирования полипептида в случае гибридных полипептидов или антител. В данной области техники хорошо известны способы продуцирования полипептидов в ген
но-инженерных клетках. См., например, Ausubel et al., eds. (1990), Current Protocols in Molecular Biology (Wiley, New York). Такие способы включают введение нуклеиновых кислот, которые кодируют полипептид и дают возможность его экспрессировать в живых клетках-хозяевах. Эти клетки-хозяева могут представлять собой бактериальные клетки, грибковые клетки или предпочтительно животные клетки, выращиваемые в культуре. Бактериальные клетки-хозяева включают, но не ограничиваются ими, клетки Escherichia coli. Примеры подходящих штаммов Е. coli включают НВ101, DH5.alpha, GM2929, JM109, KW251, NM538, NM539 и любой штамм Е. coli., который не расщепляет экзогенную ДНК. К применимым грибковым клеткам-хозяевам относятся, но не ограничиваются ими, клетки Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris и Aspergillus. Примерами линий животных клеток, которые можно использовать, являются СНО, VERO, BHK, HeLa, Cos, MDCK, 293, 3Т3 и W138. Применяя способы, хорошо известные специалистам в данной области техники, можно создавать новые линии животных клеток (например, посредством трансформации, вирусной инфекции и/или селекции). Необязательно, этанерцепт может быть секретирован в среду клетками-хозяевами.
Очистку экспрессированного этанерцепта можно проводить любым стандартным способом. Когда этанерцепт продуцируют внутриклеточно, корпускулярные остатки разрушенных клеток удаляют, например, центрифугированием или ультрафильтрацией. Когда этанерцепт секретируется в среду, суперна-танты из такой системы экспрессии можно сначала сконцентрировать, используя стандартные фильтры, используемые для концентрирования полипептидов. Для ингибирования протеолиза можно добавлять ингибиторы протеаз, и для предотвращения роста микроорганизмов можно включать антибиотики.
Этанерцепт может быть очищен при использовании, например, хроматографии на гидроксиапатите, гель-электрофореза, диализа и аффинной хроматографии и любой комбинации известных или пока еще не открытых технических приемов, включая, но, не ограничиваясь ими, хроматографию на белке А, фракционирование на ионообменной колонке, осаждение этанолом, ВЭЖХ с обращенной фазой, хроматографию на силикагеле, хроматографию на гепарине SEPHAROSET(r), хроматографию на анионооб-менных или катионообменных смолах (например, на колонке с полиаспарагиновой кислотой), хромато-фокусирование, SDS-PAGE и осаждение сульфатом аммония.
Этанерцепт, стабилизированный ксилитом
Настоящее изобретение предоставляет стабилизированную фармацевтическую композицию, содержащую этанерцепт и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования и/или фрагменти-рования этанерцепта, где стабилизатор содержит ксилит или комбинацию ксилита и меглюмина.
Без намерения связывания с какой бы то ни было конкретной теорией, полагают, что ксилит ослабляет склонность этанерцепта к ассоциированию в нежелательные тройные или четвертичные комплексы и поэтому он уменьшает агрегирование этанерцепта. Предположительно ксилит действует в качестве конформационного стабилизатора, тем самым снижая предрасположенность этанерцепта к агрегированию. Снижение агрегирования, как полагают, сохранится в течение длительного периода времени (например, два года или более). Стабилизирующие эффекты ксилита не ограничены уменьшением агрегатов, они могут относиться и к другим аспектам стабилизации мономера этанерцепта.
Предпочтительным стабилизированным составом этанерцепта, содержащим для стабилизации ксилит, является состав, в котором стабилизацию обеспечивает комбинация ксилита и меглюмина.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно изготавливать, комбинируя очищенный этанерцепт с ксилитом или с комбинацией ксилита и меглюмина. Кроме того, при необходимости можно добавлять буфер, вещество, изменяющее тоничность, дополнительный эксципиент и другие обычно используемые неактивные ингредиенты. Для простоты изложения, более подробно они обсуждаются ниже в настоящем описании. Специалисту в данной области техники будет понятно, что комбинирование различных компонентов, включаемых в композицию, можно выполнять в любом подходящем порядке. Например, буфер можно добавлять самым первым в начале процесса, в его середине или самым последним в его конце. Специалисту в данной области техники также будет понятно, что некоторые из этих химических веществ в определенных комбинациях могут быть несовместимыми и, соответственно, они легко могут быть заменены другими химическими веществами, имеющими сходные свойства, но совместимыми в соответствующей смеси.
Составы этанерцепта, стабилизированные ксилитом, согласно настоящему изобретению могут содержать приблизительно от 25 до 75 мг/мл этанерцепта, приблизительно 1-10 мас.% ксилита, приблизительно от 1 до 30 мМ фосфата натрия, необязательно приблизительно до 5 мас.% меглюмина, необязательно приблизительно до 5 мМ NaCl и необязательно приблизительно до 5 мас.% сахарозы.
Составы этанерцепта, стабилизированные ксилитом, которые дополнительно содержат меглюмин, хлорид натрия и сахарозу, могут в дополнение к ксилиту содержать приблизительно 1-100 мМ NaCl, приблизительно 1-5 мас.% сахарозы и меглюмин в количестве приблизительно 1-5% от массы композиции.
В одном из предпочтительных вариантов композиция содержит 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита и 1-3 мас.% меглюмина.
В другом предпочтительном варианте композиция содержит 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита, 1-3 мас.% меглюмина, 1-100 мМ хлорида натрия и 1-4 мас.% сахарозы.
В другом предпочтительном варианте композиция содержит 50 мг/мл этанерцепта, 6 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.
В другом предпочтительном варианте композиция содержит 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 2-3 мас.% ксилита, 5% сахарозы.
Вместо меглюмина настоящее изобретение также предусматривает применение маннозилглицерата, маннозиллактата, маннозилгликолата и диглицеринфосфата.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения составы этанерцепта, стабилизированные ксилитом, могут содержать приблизительно от 25 до приблизительно 75 мг/мл этанерцепта и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор представляет собой ксилит в количестве, составляющем приблизительно до 10% от массы композиции, и где композиция характеризуется SEC-анализом при Т2, согласно которому содержание мономера составляет приблизительно от 80 до приблизительно 95 мас.%, SEC-анализом при Т2, согласно которому содержание агрегата(ов) составляет приблизительно менее 4% и предпочтительно приблизительно менее 3 мас.%, и SEC-анализом при Т2, согласно которому содержание фрагмента 3 составляет приблизительно менее 8 мас.% и предпочтительно приблизительно менее 6 мас.%, где композиция имеет рН приблизительно от 6,0 до приблизительно 7,0 и более предпочтительно приблизительно от 6,0 до приблизительно 6,6, наиболее предпочтительно приблизительно от 6,3 до приблизительно 6,5.
В стабилизированных составах этанерцепта, таких как описано выше, составы, содержащие ксилит или ксилит в комбинации с меглюмином, указанные составы более предпочтительно характеризуются:
(a) SEC-анализами при Т4, согласно которым содержание мономера превышает приблизительно 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96 или 97 мас.%, и содержание агрегата(ов) составляет приблизительно менее 3, 2 или 1 мас.%; и
(b) HIC-анализами при Т2, согласно которым количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 3, 2 или 1 мас.%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает 80, 81, 82, 83, 84 или 85 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14 или 13 мас.%; и
(c) HIC-анализами при Т4, согласно которым количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 3, 2 или 1 мас.%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает 80, 81, 82, 83, 84 или 85 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет менее 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14 или 13 мас.%.
Термины "SEC", "T2", "T4", "HIC", "содержание мономера", "агрегат (ы)" и "фрагмент 3", "пик 1",
"пик 2" и "пик 3" определены в примерах, приведенных ниже.
Особо предпочтительные составы, содержащие ксилит или ксилит в комбинации с меглюмином, характеризуются тем, что согласно HIC-анализу при Т4 или Т2, количество композиции, представленной пиком 1 на HIC-хроматограмме, составляет приблизительно менее 1 мас.%, количество композиции, представленной пиком 2 на HIC-хроматограмме, превышает приблизительно 95 мас.% и предпочтительно превышает приблизительно 99 мас.%, и количество композиции, представленной пиком 3 на HIC-хроматограмме, составляет менее 1 мас.% Конкретные составы, стабилизированные ксилитом, представлены в подробно описанных примерах.
Хотя настоящее изобретение не исключает применение аргинина, составы этанерцепта, содержащие ксилит для стабилизации согласно настоящему изобретению, предпочтительно являются свободными или по существу свободны от аргинина.
Дополнительные компоненты предоставляемой фармацевтической композиции
Составы согласно настоящему изобретению могут также содержать буферные вещества, вещества, изменяющие тоничность, эксципиенты, фармацевтически приемлемые носители и другие неактивные ингредиенты, обычно используемые в фармацевтических композициях. Для простоты изложения их более полное обсуждение дается ниже в настоящем описании.
Буферные вещества поддерживают рН в желаемом диапазоне. К подходящим буферным веществам относятся гистидин, фосфат калия, цитрат натрия или калия, малеиновая кислота, ацетат аммония, трис(гидроксиметил)аминометан (Трис), различные формы ацетата и диэтаноламина. Концентрация буфера в составе предпочтительно составляет приблизительно от 1 мМ до 1 М и более предпочтительно приблизительно от 10 до 200 мМ. Буферные вещества хорошо известны в данной области техники, их производят известными способами, и они доступны от коммерческих поставщиков.
Примерами подходящих буферных веществ являются фосфат, гистидин, цитрат, малеат, тартрат, сукцинат, ацетат, трис(гидроксиметил)аминометан (Трис), бикарбонат.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения буфером является фосфат натрия.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения рН фармацевтической композиции находится на физиологических уровнях или около них. В частности, предпочтительно рН предоставляемой композиции составляет приблизительно от 5,8 до приблизительно 8,4 и еще более пред
почтительно приблизительно от 6,2 до 7,4. Специалисту в данной области техники будет понятно, что рН можно регулировать так, как это необходимо для максимальной стабильности и растворимости этанер-цепта в конкретном составе. В частности, составы этанерцепта при рН за пределами физиологических диапазонов, но еще переносимых пациентом, также входят в объем настоящего изобретения.
Вещество, изменяющее тоничность, представляет собой молекулу, которая влияет на осмоляль-ность раствора.
Осмоляльность фармацевтической композиции предпочтительно регулируют так, чтобы сделать максимальной стабильность активного ингредиента и/или чтобы сделать минимальным дискомфорт, ощущаемый пациентом после введения состава. Как правило, предпочтительно, чтобы фармацевтическая композиция была изотоничной сыворотке, т.е. имела бы такую же или сходную осмоляльность, для чего и добавляют вещество, изменяющее тоничность.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения осмоляльность предоставляемых составов составляет приблизительно от 180 до 420 мОсмоль. Однако следует понимать, что ос-моляльность может быть выше или ниже в зависимости от конкретных условий.
Примеры подходящих веществ, изменяющих тоничность, включают, но не ограничиваются ими, аминокислоты (не включая аргинин) (например, цистеин, гистидин и глицин), соли (например, хлорид натрия, хлорид калия и цитрат натрия) и/или сахариды (например, сахароза, глюкоза и маннит).
Предпочтительными веществами, изменяющими тоничность, являются глицин, аланин, хлорид натрия, хлорид калия и сульфат натрия.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения концентрация вещества, изменяющего тоничность в составе, предпочтительно составляет приблизительно от 1 мМ до приблизительно 1 М, более предпочтительно приблизительно от 10 мМ до приблизительно 200 мМ. Вещества, изменяющие тоничность, хорошо известны в данной области техники, их производят хорошо известными способами и они доступны от коммерческих поставщиков.
В фармацевтическую композицию можно также добавлять эксципиенты, называемые также химическими добавками, совместно растворяемыми веществами, сорастворителями, которые стабилизируют полипептид в растворе (а также в высушенных или замороженных формах). Эксципиенты хорошо известны в данной области техники, их производят известными способами, и они доступны от коммерческих поставщиков.
Примеры подходящих эксципиентов включают, но не ограничиваются ими, сахара/полиолы, такие как сахароза, лактоза, глицерин, ксилит, сорбит, маннит, мальтоза, инозит, трегалоза, глюкоза; полимеры, такие как сывороточный альбумин (бычий сывороточный альбумин (BSA), человеческий SA или ре-комбинантный НА), декстран, поливиниловый спирт (PVA), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), полиэтиленимин, желатин, поливинилпирролидон (PVP), гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС); неводные растворители, такие как многоатомные спирты (например, PEG и глицерин) и диметилформамид (ДМФА); аминокислоты, такие как пролин, L-серин, натриевая соль глутаминовой кислоты, аланин, глицин, гидрохлорид лизина, саркозин и гамма-аминомасляная кислота; поверхностно-активные вещества, такие как Tween(r) -80 (полисорбат 80), Tween(r)-20 (полисорбат 20), SDS, полисорбат, полоксамеры; и прочие экс-ципиенты, такие как фосфат калия, ацетат натрия, сульфат аммония, сульфат магния, сульфат натрия, N-оксид триметиламина, бетаин, ионы металлов (например, цинка, кальция и магния), CHAPS, монолаурат, 2-О-бета-манноглицерат, или любую комбинацию вышеуказанных веществ.
Предпочтительными эксципиентами являются сахароза, лактоза, глицерин, ксилит, сорбит, маннит, мальтоза, инозит, трегалоза, глюкоза, бычий сывороточный альбумин (BSA), человеческий сывороточный альбумин (HSA), рекомбинантный альбумин, декстран, PVA, гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), полиэтиленимин, желатин, поливинилпирролидон (PVP), гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС), поли-этиленгликоль, этиленгликоль, глицерин, аланин, глицин, гидрохлорид лизина, саркозин, SDS, полисор-бат 20, полисорбат 80, полоксамер 188, N-оксид триметиламина, бетаин, ионы цинка, ионы кальция, ионы магния, CHAPS, монолаурат сахарозы и 2-О-бета-манноглицерат.
Концентрации одного или более эксципиентов в составе согласно настоящему изобретению составляют предпочтительно приблизительно от 0,001 до 5 мас.%, более предпочтительно приблизительно от
0,1 до 2 мас.%.
Способы лечения
В другом варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет способ лечения млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению, где указанное млекопитающее имеет заболевание или расстройство, которые можно благоприятным образом лечить этанерцептом.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения этанерцепт получен из того же вида млекопитающего, что и млекопитающее, которое лечат указанной композицией.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанным млекопитающим является человек.
Заболевания или расстройства, которые можно лечить предоставляемыми композициями, включают, но не ограничиваются ими, ревматоидный артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спонди
лоартрит, болезнь Вегенера (гранулематоз), болезнь Крона (или воспалительную болезнь кишечника), хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), гепатит С, эндометриоз, астму, кахексию, псориаз и атопический дерматит. Дополнительные заболевания или расстройства, которые можно лечить композициями согласно настоящему изобретению, включают заболевания, описанные в WO 00/62790, WO 01/62272, патентной заявке США № 2001/0021380 и в патенте США 7648702 В2, соответствующие части которых включены в настоящее списание посредством ссылки.
Предоставляемые фармацевтические композиции можно вводить субъекту, нуждающемуся в лечении, посредством системной инъекции, такой как внутривенная инъекция, или посредством локальной инъекции или нанесением в соответствующее место, например, посредством прямой инъекции или прямого нанесения в соответствующее место, когда это место открыто при хирургической операции; или посредством местного применения.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет способ лечения и/или предупреждения ревматоидного артрита, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества одной из предоставленных композиций этанерцепта.
Терапевтически эффективное количество этанерцепта в предоставляемых композициях будет зависеть от конкретного состояния субъекта, нуждающегося в лечении, тяжести этого состояния, предшествующей терапии и клинического анамнеза пациента и реакции на данное терапевтическое средство. Соответствующую дозу можно регулировать в соответствии с заключением лечащего врача, так чтобы ее можно было вводить пациенту однократно или в виде серийного курса.
В одном варианте осуществления количество этанерцепта, эффективное для дозы, вводимой взрослому, составляет приблизительно 1-500 мг/м2, или приблизительно 1-200 мг/м2, или приблизительно 1-40 мг/м2, или приблизительно 5-25 мг/м2.
Альтернативно, можно вводить фиксированную дозу, количество которой может быть в диапазоне 2-500 мг на дозу, 2-100 мг на дозу или приблизительно 10-80 мг на дозу.
Если дозу нужно вводить более одного раза в неделю, то обычная доза находится в том же диапазоне, что и вышеописанные диапазоны доз, или в диапазоне более низких доз, и предпочтительно ее вводят два или более раз в неделю в диапазоне доз 25-100 мг на дозу.
В другом варианте осуществления доза, приемлемая для введения посредством инъекции, содержит 80-100 мг на дозу или, альтернативно, 80 мг на дозу.
Дозу можно вводить один раз в неделю, один раз в две недели или с интервалом в несколько недель (например, 2-8 недель).
В одном варианте осуществления этанерцепт вводят посредством единичной подкожной (SC) инъекции раствора с концентрацией 25-75 мг/мл.
В некоторых случаях улучшение состояния пациента будет достигнуто посредством введения дозы, составляющей приблизительно до 100 мг фармацевтической композиции, от одного до трех раз в неделю в течение по меньшей мере трех недель. Достижение желаемой степени улучшения состояния может потребовать лечения в течение более длительных периодов. При неизлечимых хронических состояниях этот режим может продолжаться неопределенно долго. Для педиатрических пациентов (в возрасте 4-17 лет) подходящий режим может включать введение дозы этанерцепта от 0,4 до 5 мг/кг один или более раз в неделю.
В другом варианте осуществления фармацевтические составы согласно настоящему изобретению можно изготавливать в виде нерасфасованной массы, устанавливая при этом более высокий уровень компонентов фармацевтической композиции, чем требуется для введения в организм, и соответствующим образом разводя их перед введением.
Фармацевтические композиции можно вводить в виде монотерапевтического средства или, если необходимо, в комбинации с дополнительными терапевтическими средствами. В частности, в одном варианте осуществления предоставляемые способы лечения и/или предупреждения применяют в комбинации с введением терапевтически эффективного количества другого активного вещества. Другое активное вещество можно вводить перед, одновременно или после введения фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению. Другое активное вещество можно вводить либо в виде части предоставляемой композиции, либо, альтернативно, в виде отдельного состава.
Введение предоставляемых фармацевтических композиций может быть выполнено разнообразными путями, включая парентеральное, пероральное, буккальное, сублингвальное, интраназальное, ректальное, внутрибрюшинное, внутрикожное, чрескожное, подкожное, внутривенное, внутриартериальное, внутрисердечное, внутрижелудочковое, внутричерепное, интратрахеальное введение, внутримышечную инъекцию, инъекцию в стекловидное тело и местное введение.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению особенно подходят для парентерального введения, т.е. подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутрибрюшинного, интраце-реброспинального, внутрисуставного, интрасиновиального, интравитреального и/или интратекального. Парентеральное введение может быть в виде болюсной инъекции или в виде непрерывной инфузии. Фармацевтические композиции для инъекции могут быть представлены в виде единичных дозированных форм, например, в ампулах или в многодозовых контейнерах с добавленным консервантом. Кроме того,
недавно был разработан ряд новых приемов доставки лекарственных средств, и фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению подходят для введения с использованием этих новых способов, например, Inject-ease(r), Genject(r), ручки-инжекторы, такие как GenPen(r), и безыгольные устройства, такие как MediJector(r) и BioJector(r). Композицию согласно настоящему изобретению можно также адаптировать для способов введения, которые еще только будут разработаны. См. также Langer, 1990, Science, 249: 1527-1533.
Предоставляемые фармацевтические композиции, кроме того, можно оформить в виде состава-депо. Такие долгодействующие составы можно вводить посредством имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или посредством внутримышечной инъекции. Так, например, указанные составы можно модифицировать подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионообменными смолами или изготовить их в виде слаборастворимых производных, например, в виде слаборастворимой соли.
Фармацевтические композиции можно, если желательно, предоставить во флаконе, в некоторой упаковке или в устройстве типа диспенсера, которые могут содержать одну или более единичных дозированных форм, содержащих активный ингредиент. В одном варианте осуществления указанное устройство в виде диспенсера может содержать шприц, имеющий единичную дозу жидкого состава, готового для инъекции. Вместе с этим шприцем может быть инструкция по введению.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение направлено на предоставление некоторого набора или контейнера, которые содержат водную фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению. Концентрация полипептида в указанной водной фармацевтической композиции может варьировать в очень широком диапазоне, но обычно в диапазоне приблизительно от 0,05 до приблизительно 20000 мкг/мл водного состава. Вместе с этим комплектом может быть инструкция по применению.
Настоящее изобретение более конкретно описано в следующих примерах, которые предназначены только для иллюстрации, поскольку специалистам в данной области техники будут очевидны их многие модификации и вариации.
Пример
Этанерцепт, стабилизированный ксилитом
Составы этанерцепта, стабилизированные ксилитом, можно получать и испытывать, используя методики, в общем виде описанные ниже.
Каждый твердый компонент состава отвешивают в количестве, требующемся для данного объема буфера для состава. Эти компоненты соединяют в стакане или в сосуде, способном вместить и дающем возможность измерить данный объем буфера для состава. В стакан добавляют деионизированную воду в количестве, равном приблизительно 3/4 необходимого буфера для состава, и затем растворяют компоненты. рН буфера доводят до требуемого рН состава, используя 1М гидроксид натрия и/или 1М хлори-сто-водородную кислоту. Затем конечный объем буфера для состава доводят до желаемого объема добавлением деионизированной воды. Белковый раствор этанерцепта помещают в ячейку для диализа (такую как Thermo Scientific Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Unit 10000 MWCO), где в течение 12 ч при 4°С осуществляют его контакт с необходимым буфером для состава. Отношение объема буфера для состава к объему раствора белка должно составлять не менее 1000:1. Диализную ячейку и белковый раствор, содержащийся в ней, затем помещают во второй равного объема буфер для состава на дополнительные 12 часов при 4°С. Полученный белковый раствор удаляют из диализной ячейки и определяют концентрацию белка с использованием ультрафиолетовой спектроскопии. Концентрацию белка доводят до желаемого уровня, используя центрифугирование (такое как центрифужные концентраторы Amicon Ultra 10000 MWCO) и/или разведение буфером для состава.
Композиции можно испытывать на долгосрочную стабильность посредством эксклюзионной хроматографии (SEC), денатурирующей SEC (dSEC), гидрофобной хроматографии (HIC), электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE), а также испытывать на связывание и биологическую активность в различные моменты времени. Биологическую активность можно измерять любым хорошо известным аналитическим способом.
Например, техника эксклюзионной хроматографии описана в публикации Hawe et al., Pharm. Res. 2011, 28: 2302 и/или van Marrschalkerweerd et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 2011, 78: 213. Аналогично, методики денатурирующей эксклюзионной хроматографии, гидрофобной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия также хорошо известны специалистам в данной области техники.
Полагают, что композиция будет стабильной в течение двух лет или более. Композиции, примеры которых приведены ниже, не содержат аргинина.
(Состав 1:17)
Ингредиент
Концентрация
Этанерцепт (активный ингредиент)
50 мг/мл
Фосфат натрия, рН 6,3 (неактивный ингредиент)
25 мМ
Ксилит (неактивный ингредиент)
10% (масса/объем)
(Состав 2:10)
Этанерцепт (активный ингредиент)
50 мг/мл
Фосфат натрия, рН б,31 (неактивный ингредиент)
25 мМ
Ксилит (неактивный ингредиент)
6% (масса/объем)
(Состав 2:11)
Ингредиент
Концентрация
Этанерцепт (активный ингредиент)
50 мг/мл
Фосфат натрия, рН 6,3 (неактивный ингредиент)
25 мМ
Ксилит (неактивный ингредиент)
2,5% (масса/объем)
Сахароза (неактивный ингредиент)
5% (масса/объем)
(Состав 2:18)
Ингредиент
Концентрация
Этанерцепт (активный ингредиент)
50 мг/мл
Фосфат натрия, рН 6,4 (неактивный ингредиент)
25 мМ
Ксилит (неактивный ингредиент)
2,5% (масса/объем)
Меглюмин (неактивный ингредиент)
2,5% (масса/объем)
2:19)
Ингредиент
Концентрация
Этанерцепт (активный ингредиент)
50 мг/мл
Фосфат натрия, рН 6,24 (неактивный ингредиент)
10 мМ
Ксилит (неактивный ингредиент)
2,5% (масса/объем)
Меглюмин (неактивный ингредиент)
2,5% (масса/объем)
NaCl (неактивный ингредиент)
2,5% (масса/объем)
Сахароза (неактивный ингредиент)
11 (масса/объем)
Пример 2
Получение этанерцепта Стадия 1. Вьгращивание клеток
Применяя способ, известный в данной области техники, и используя клон клеток СНО, экспресси-рующих гибридный белок этанерцепт, выращивают клетки, необходимые для получения их числа, достаточного для инокулирования производственного биореактора. Продукт этого процесса выращивания (собранная клеточная культуральная жидкость) представляет собой смесь этанерцепта, обладающего правильной пространственной конфигурацией, и этанерцепта с неправильной пространственной конфигурацией и/или агрегированного этанерцепта, вместе с дополнительными загрязнениями. В собранной клеточной культуральной жидкости, содержащей такую белковую смесь, детергентами инактивируют вирусы.
Стадия 2. Аффинная хроматография
Аффинную хроматографию проводят с собранной клеточной культурой, полученной на описанной выше стадии 1, используя общепринятую аффинную колонку с белком А хорошо известным методом. Выход продукта составляет приблизительно 85%. Полученный продукт представляет собой сложную белковую смесь, содержащую этанерцепт с правильной пространственной конфигурацией, этанерцепт с неправильной пространственной конфигурацией и/или агрегаты этанерцепта с правильной и/или неправильной конфигурацией или белковые фрагменты. Продукт, полученный на этой стадии очистки после аффинной колонки с белком А, доводят до рН 3,5 и затем в нем инактивируют вирусы. После инактивации вирусов этот продукт доводят до рН 5,5 и затем дополнительно осветляют известным образом, используя капсульный фильтр, полученный коммерческим путем.
Стадия 3А. Катионообменная хроматография смешанного типа Для очистки продукта, полученного на описанной выше стадии 2, используют упакованную хроматографическую колонку GE Healthcare Cap-to MMC объемом 31,8 л (диаметр 45 см, высота слоя 20 см). Перед использованием колонку уравновешивают двумя колоночными объемами (КО) 25 мМ раствора ацетата (рН 5,5), дезинфицируют двумя КО 0,1н раствора NaOH с 1М NaCl и нейтрализуют двумя КО 25 мМ раствора ацетата с 0,7М NaCl (рН 5,5).
Затем колонку уравновешивают 5-10 КО 25 мМ раствора ацетата (рН 5,5) до тех пор, пока рН вытекающего раствора не станет равным 5,5 (3,5 мСм/см). Материал, собранный с белка А на описанной выше стадии 2, разводят до < 6 мСм/см водой для инъекций и наносят на колонку, загружая до 15 г/л среды для каждого цикла. Колонка работает при линейной скорости 200 см/ч, давая время удерживания 6 минут. После загрузки колонку промывают двумя КО 25 мМ раствора ацетата (рН 5,5). Затем продукт элюиру-ют, используя 8,5 КО раствора с градиентом от 15% 25 мМ раствора ацетата (рН 5,5) до 85% 25 мМ раствора ацетата с 0,7M NaCl (pH 5,5). Сбор продукта начинают при 0,15 ед. оптической плотности (А280, длина пути 1,0 см) и заканчивают при 50% максимуме пика. Объем элюата составляет приблизительно 5 КО. Остатки продукта и примеси смывают с колонки двумя КО 10 мМ раствора Трис с 1М NaCl (pH 8,0) и отбрасывают. Продукт, полученный с колонки смешанного типа, фильтруют, используя капсульный фильтр Millipore Opticap XL10, 0,22 мкм Durapore (0,69 м2). Выход продукта на этой стадии соответствует приблизительно 70% материала, снятого с белка А на стадии 2.
Стадия 3В. Анионообменная хроматография смешанного типа Для очистки продукта, полученного на описанной выше стадии 3А, используют упакованную хроматографическую колонку GE Healthcare Capto Adhere объемом 27,0 л (диаметр 45 см, высота слоя 17 см). Перед использованием колонку уравновешивают двумя КО 25 мМ раствора Трис с рН 8,0, дезинфицируют двумя КО 0,1н раствора NaOH с 1М NaCl, нейтрализуют и уравновешивают двумя КО 25 мМ раствора Трис с рН 8,0. Перед загрузкой продукта колонку уравновешивают тремя КО 10 мМ раствора Трис с рН 8,0. Материал, собранный с Capto MMC на описанной выше стадии 3А, доводят до рН 8,1 добавлением к каждому его килограмму приблизительно 0,045 кг 1М раствора Трис с рН 8,3. Продукт с описанной выше стадии 3А разводят на линии водой для инъекций в соотношении 1:3,8, доводя его проводимость до 12,0 мСм/см (рН 8,0). Полученный материал затем наносят на колонку, загружая до 15 г/л среды. Колонка работает при линейной скорости 170 см/ч, давая время удерживания б минут. После загрузки колонку промывают двумя КО 25 мМ раствора Трис (рН 8,0). Затем продукт элюируют, используя 10 КО раствора с градиентом от 20% 25 мМ раствора Трис (рН 8,0) до 90% 25 мМ раствора Трис с 1М NaCl (pH 8,0). Сбор продукта начинают при 0,15 ед. оптической плотности (А280, длина пути 1,0 см) и заканчивают при 25% максимуме пика. Объем элюата составляет 4-6 КО. Элюированный продукт фильтруют, используя коммерчески доступный кап-сульный фильтр, и затем известным образом отфильтровывают вирусы и подвергают фильтрованию тангенциальным потоком. Общий выход продукта со стадии 3В (включая конечные стадии вирусной фильтрации и фильтрования тангенциальным потоком) составляла приблизительно 68%. Выход продукта, измеренный до проведения стадий фильтрования, составлял приблизительно 75%. Результаты HIC, полученные с фракциями, элюированными на этой стадии, схематически представлены на фиг. 12.
Анализ: Конечный профильтрованный продукт, полученный в этом примере, как было найдено, имеет приблизительно более 90 мас.%, этанерцепта с правильной пространственной конфигурацией (как определено посредством HIC), менее 5 мас.% форм этанерцепта с неправильной пространственной конфигурацией (как определено посредством HIC), приблизительно менее 3 мас.%, расщепленного материала (по данным HIC-анализа) (полагают, что это фрагменты этанерцепта, в которых отсечен участок TNFR), и общее количество этанерцепта с правильной и неправильной пространственной конфигурацией превышает 95 мас.% (как определено посредством эксклюзионной хроматографии).
Анализ составов этанерцепта
A. Термостабильность при хранении
После диализа и концентрирования образцы составов этанерцепта, примеры которых описаны выше, стерильно фильтровали в боксе биологической безопасности. Используя стерилизованные пипетки и автоклавированные наконечники пипеток, образцы составов этанерцепта переносили в помеченные и автоклавированные лиофилизационные флаконы объемом 1 мл. Флаконы закупоривали стерильными пробками из бутилкаучука и обжимали алюминиевыми колпачками. Все флаконы затем переносили в термошкафы. Образцы подвергали двум режимам проверки термической стабильности: (1) две недели при 40°С и (2) четыре недели при 25°С. Во всем тексте настоящего описания эти два температурных режима обозначены как "Т2" и "Т4" соответственно.
B. Эксклюзионная хроматография (SEC)
Составы этанерцепта, раскрытые в настоящем описании, анализировали, применяя хорошо известную технику эксклюзионной хроматографии (SEC), методику высокоэффективной жидкостной хроматографии, в которой анализируемые компоненты разделяют по размеру (см. Rogner, M. (2000). Size Exclusion Chromatography. Protein Liquid Chromatography. M. Kastner. Amsterdam, Elsevier. 61: 89-145.). Чтобы оценить термостабильность образцов этанерцепта, описанных выше, образцы исследовали по методике SEC, основанной на литературных данных (van Maarschalkerweerd, A., G. J. Wolbink, et al. (2011). "Comparison of analytical methods to detect instability of etanercept during thermal stress testing" European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 78 (2): 213-221). Готовили буфер подвижной фазы, содержащий 50 мМ моногидрата однозамещенного фосфата натрия и 150 мМ аргинина. рН доводили до 6,5 добавлением 1М HCl. Все разведения проводили, используя предохранительную колонку Tosoh TSK-Gel SWxl размером 6 ммх4 см (кат. № 8543), линейно присоединенную к колонке Tosoh TSK-Gel G4000 SWxl размером
7,8 ммх30 см (кат. № 8542). Для проведения разделения колонки при комнатной температуре (23°С) уравновешивали с подвижной фазой при скорости потока 0,5 мл/мин. Используя автосэмплер, на колонку инъецировали 5 мкл состава этанерцепта с концентрацией 50 мг/мл. Разделение осуществлялось в течение 30 мин при скорости потока 0,5 мл/мин. В течение этого времени элюент с колонки подвергали мониторингу при длине волны 280 нм.
C. Интегрирование хроматограмм эксклюзионной хроматографии Все процедуры интегрирования проводили, используя программу Chromeleon (Dionex). Перед интегрированием из всех хроматограмм вычитали SEC-хроматограмму для буфера, не содержащего этанерцепта. Все интегрирование проводили в интервале времени удерживания от 12 до 26 мин. Для определения пика использовали несколько параметров. Минимум площади детектируемого пика устанавливали при 0,05 мЛи-мин. Двухмерную чувствительность для детектирования пика устанавливали при 0,01 мЛи и 75 с. Плечи пиков добавляли вручную, используя инструмент ручного интегрирования. Ручную доводку всех детектированных пиков осуществляли в две стадии. Во-первых, базовые линии пиков (нижние границы пиков) выравнивали по горизонтали. Во-вторых, положения базовых линий пиков по вертикали смещали к уровню базовой линии хроматограммы. Базовую линию хроматограммы определяли как величину сигнала при отсутствии анализируемого вещества. Сигнал при отсутствии анализируемого вещества определяли как оптическую плотность (в мЛи), зарегистрированную при времени удерживания 12 мин.
D. SEC-фракции составов этанерцепта
При SEC-анализе составов этанерцепта, описанных выше, были идентифицированы и изучены три SEC-хроматографические фракции. Проанализированные фракции были следующими (в порядке элюи-рования с SEC-колонки): (1) фракция с большой молекулярной массой, представляющая собой агрегаты интактного гибридного белка этанерцепта (TNFR:FC), вероятно, образованные посредством нековалент-ного электростатического взаимного притяжения молекул интактного этанерцепта (далее в настоящем описании они приведены просто как "агрегат(ы)" или в выражении "содержание агрегата(ов)"); (2) фракция мономера, представляющая собой интактный гибридный белок этанерцепта (TNFR:FC) (далее в настоящем описании эта фракция приведена просто как "мономер" или в выражении "содержание мономера"); (3) фракция, по-видимому, представляющая собой один фрагмент или популяцию фрагментов молекул этанерцепта, в которых одна часть гибридного белка TNFR с другой молекулой отщеплена от мономера с утратой участка Fab-фрагмента гибридного белка в шарнирной части молекулы. Наиболее многочисленные виды фрагментов или расщепленных форм, измеренные посредством SEC, обозначены как фрагмент 3. При проведении SEC-анализа элюирование агрегатов наблюдается первой, за ними следует мономер, после него фрагмент 3.
В следующих таблицах показаны относительные количества агрегатов, мономера и фрагмента 3, определенные посредством SEC-анализа, как описано выше.
Таблица I
HIC-анализ составов этанерцепта
HIC-хроматографию можно проводить по методике, известной в данной области техники и в общем виде описанной в патенте США 7294481, включенном в настоящее описание посредством ссылки. Образцы оценивали при to (не позднее 24 ч после изготовления при 5°С) и еще раз либо после двух недель хранения при 25°С (t2), либо после 4 недель хранения 25°С. Как полагают, пик 1 на HIC-хроматограмме представляет собой или включает "фрагмент 3", который идентифицирован и количественно определен с использованием SEC, как указано выше при обсуждении данных SEC; пик 2 представляет собой мономер этанерцепта, как указано выше при обсуждении данных SEC; и пик 3 включает "агрегат(ы)", как указано выше при обсуждении данных SEC. Кроме того, следует понимать, что термины "пик 1", "пик 2" и "пик 3", используемые в настоящем описании, также относятся и к HIC-пику 1, пику 2 и пику 3, рассмотренным и раскрытым на фиг. 4 патента США 7294481, включенного в настоящее описание посредством ссылки.
Из анализа настоящего описания и практики применения настоящего изобретения, раскрытой в настоящем описании, специалистам в данной области будут очевидны и другие варианты его осуществления. Настоящее описание и примеры предназначены только для рассмотрения в качестве иллюстраций, и истинный объем и сущность настоящего изобретения указаны в приведенных ниже прилагаемых пунктах формулы изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Стабилизированная водная фармацевтическая композиция, содержащая этанерцепт и стабилизатор, где стабилизатор содержит ксилит или комбинацию ксилита и меглюмина и где композиция свободна от аргинина.
2. Композиция по п.1, дополнительно содержащая один или более дополнительных компонентов, выбранных из буфера, вещества, изменяющего тоничность, и эксципиента.
3. Композиция по п.2, содержащая от 25 до 75 мг/мл этанерцепта и стабилизатор для подавления нестабильности, агрегирования и/или фрагментирования этанерцепта, где стабилизатор представляет собой ксилит в количестве, составляющем до 10% от массы композиции.
4. Композиция по п.1, содержащая 25-75 мг/мл этанерцепта, 1-10 мас.% ксилита, 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно до 5 мас.% меглюмина, необязательно до 100 мМ NaCl и необязательно до 5 мас.% сахарозы.
5. Композиция по п.4, содержащая 1-100 мМ NaCl, 1-5 мас.% сахарозы и где стабилизатор дополнительно содержит меглюмин в количестве, составляющем 1-5% от массы композиции.
6. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.
7. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита и 1-3 мас.% меглюмина.
8. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 1-3 мас.% ксилита, 1-3 мас.% меглюмина, 1-100 мМ хлорида натрия и 1-4 мас.% сахарозы.
9. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 6 мас.% ксилита и 10-30 мМ фосфата натрия.
10. Композиция по п.4, содержащая 50 мг/мл этанерцепта, 10-30 мМ фосфата натрия, 2-3 мас.% ксилита, 5% сахарозы.
11. Композиция по п.1, содержащая 25-75 мг/мл этанерцепта, 1-10 мас.% ксилита, 1-30 мМ фосфата натрия, необязательно до 5 мас.% маннозилглицерата, маннозиллактата, маннозилгликолата или дигли-церинфосфата, необязательно до 100 мМ NaCl и необязательно до 5 мас.% сахарозы.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027325
- 1 -
027325
- 1 -
027325
- 1 -
027325
- 1 -
027325
- 4 -