EA 027305B1 20170731

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000027305b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы (I) где R ₁ представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, R ₂ представляет собой атом водорода или атом фтора, R ₃ представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой метильную группу, R ₂ представляет собой атом водорода и R ₃ представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой метильную группу, R ₂ представляет собой атом водорода и R ₃ представляет собой атом водорода; или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой метильную группу, R ₂ представляет собой фтор-группу и R ₃ представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой атом водорода, R ₂ представляет собой атом водорода и R ₃ представляет собой атом водорода; или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой этильную группу, R ₂ представляет собой атом водорода и R ₃ представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой этильную группу, R ₂ представляет собой атом водорода и R ₃ представляет собой этильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение формулы (I) по п.1, где R ₁ представляет собой атом водорода, R ₂ представляет собой атом водорода и R ₃ представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Соединение формулы (I) по п.1.

10. Соединение формулы (I) по п.9, выбранное из 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты; 3-(3-(5-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты; 3-(3-(5-этил-3-метил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты; 3-(3-(1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты; 3-(3-(3,5-диэтил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты; 3-(3-(4-фтор-3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты; 3-(3-(3-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.

11. Соединение формулы (I) по п.1, представляющее собой 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляную кислоту

12. Соединение формулы (I) по п.1, представляющее собой (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляную кислоту

13. Соединение по п.1, представляющее собой соль гидрохлорид 3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.

14. Соединение по п.1, представляющее собой соль гидрохлорид (S)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.

15. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора α _v β ₆ .

16. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении фиброзных заболеваний.

17. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении идиопатического фиброза легких.

18. Способ лечения расстройств, при которых полезен антагонист рецептора α _v β ₆ , у человека, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли.

19. Способ лечения фиброзных заболеваний у человека, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли.

20. Способ лечения идиопатического фиброза легких у человека, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли.

21. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью антагонистов α _v β ₆ , содержащая соединение формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.

22. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора α _v β ₆ .

23. Применение по п.22, где заболевание или состояние, при котором показан антагонист рецептора α _v β ₆ , представляет собой фиброзное заболевание.

24. Применение по п.23, где фиброзное заболевание представляет собой идиопатический фиброз легких.

25. Соединение формулы (II) или его соль где R ₁ представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, R ₂ представляет собой атом водорода или атом фтора, R ₃ представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу и R ₄ представляет собой С ₁ -С ₆ алкильную группу.

26. Соединение формулы (II) по п.25, где R ₄ представляет собой трет-бутильную, изопропильную, этильную или метильную группу.

27. Соединение формулы (II) по п.26, представляющее собой метил-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.

28. Соединение формулы (II) по п.26, представляющее собой трет-бутил-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

9. Соединение формулы (I) по п.1.

24. Применение по п.23, где фиброзное заболевание представляет собой идиопатический фиброз легких.

(19)
Евразийское
патентное
ведомство
027305
(13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201591503
(22) Дата подачи заявки 2014.03.26
(51) Int. Cl.
C07D 471/04 (2006.01) A61K31/4375 (2006.01) A61P11/00 (2006.01)
(54)
ПРОИЗВОДНЫЕ НАФТИРИДИНА, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТОВ АЛЬФА-У-БЕТА-6 ИНТЕГРИНА
(31) 1305668.4
(32) 2013.03.28
(33) GB
(43) 2016.04.29
(86) PCT/EP2014/056013
(87) WO 2014/154725 2014.10.02
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ГЛАКСОСМИТКЛАЙН ИНТЕЛЛЕКЧУАЛ ПРОПЕРТИ ДИВЕЛОПМЕНТ ЛИМИТЕД (GB)
(72) Изобретатель:
Андерсон Найалл Эндрю, Фэллон Брендан Джон, Притчард Джон Мартин (GB)
(74) Представитель:
Поликарпов А.В. (RU)
(56) US-A1-2004092454 WO-A2-0134602
(57) Соединение формулы (I) или его соль
где R1 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, R2 представляет собой атом водорода или атом фтора, R3 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу.
Область изобретения
Изобретение относится к пирролидиновым соединениям, которые являются антагонистами avp6 ин-тегрина, к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, и к их применению в терапии, в частности в лечении состояний, при которых показан антагонист avp6 интегрина, к применению соединения в изготовлении лекарственного средства для лечения состояний, при которых показан антагонист avp6 интегрина, и к способу лечения или профилактики расстройств, при которых показан антагонист avp6 интегрина, у человека, и к соединениям, которые могут быть использованы в качестве промежуточных соединений для получения таких соединений.
Предшествующий уровень техники
Белки суперсемейства интегринов представляют собой гетеродимерные клеточные поверхностные рецепторы, состоящие из альфа- и бета-субъединицы. Описано 18 альфа- и 8 бета-субъединиц, которые, как было продемонстрировано, образуют 24 различных альфа/бета-гетеродимера. Каждая цепь содержит большой внеклеточный домен (более 640 аминокислот для бета-субъединицы, более 940 аминокислот для альфа-субъединицы) с трансмембранной областью из приблизительно 20 аминокислот на цепь и, как правило, коротким цитоплазматическим хвостом из 30-50 аминокислот на цепь. Было показано, что разные интегрины участвуют во многих механизмах клеточных биологических процессов, включая адгезию клеток к внеклеточному матриксу, межклеточные взаимодействия и воздействия на миграцию, пролиферацию, дифференцировку и выживаемость клеток (Barczyk et al., Cell and Tissue Research, 2010, 339, 269).
Интегриновые рецепторы взаимодействуют со связывающими белками через небольшие белок-белок связывающие участки контакта с лигандами, и семейство интегринов может быть сгруппировано в подсемейства, которые имеют сходные мотивы распознавания связывания в таких лигандах. Главное подсемейство представляет собой RGD-интегрины, которые распознают лиганды, содержащие мотив RGD (аргинин-глицин-аспарагиновая кислота) в их белковой последовательности. В этом подсемействе имеется 8 интегринов, а именно avp1, avp3, avp5, avp6, avp8, aIIbp3, a5p1, a8p1, где система обозначений демонстрирует, что avp1, avp3, avp5, avp6, и avp8 имеют общую субъединицу V с отличающейся p-субъединицей, а avp1, a5p1 и a8p1 имеют общую p1-субъединицу с отличающейся a-субъединицей. Было показано, что p1-субъединица образует пару с 11 различными а-субъединицами, из которых только 3 из вышеуказанных обычно распознают пептидный мотив RGD. (Humphries et al., Journal of Cell Science, 2006, 119, 3901).
У 8 RGD-связывающих интегринов имеются разные аффинности связывания и специфичности к разным RGD-содержащим лигандам. Лиганды включают белки, такие как фибронектин, витронектин, остеопонтин и ассоциированные с латентностью пептиды (LAP) трансформирующего фактора роста p1 и p3 (TGFp1 и TGFp3). Было показано, что связывание с LAP TGFp1 и TGFp3 в некоторых системах делает возможной активацию биологических активностей TGFp1 и TGFp3 и последующих TGFp-запускаемых биологических процессов (Worthington et al, Trends in Biochemical Sciences, 2011, 36, 47). Специфическое связывание RGD-интегринов с такими лигандами зависит от целого ряда факторов в зависимости от фенотипа клетки. Разнообразие таких лигандов, сопряженных с паттернами экспрессии RGD-связывающих интегринов, создает многочисленные возможности для вмешательства в течение заболеваний. Такие заболевания включают фиброзные заболевания (Margadant et al., EMBO reports, 2010, 11, 97), воспалительные расстройства, рак (Desgrosellier et al., Nature Reviews Cancer, 2010, 10, 9), рестеноз и другие заболевания с ангиогенным компонентом (Weis et al., Cold Spring. Harb. Perspect Med. 2011, 1, a006478).
В литературе раскрыт целый ряд антагонистов интегрина av (Goodman et al., Trends in Pharmacological Sciences, 2012, 33, 405), включая антагонисты антитела, небольшие пептиды и соединения. Что касается антител, они включают антагонист интетумумаб pan-av, селективный антагонист avp3 этараци-зумаб и селективный антагонист avp6 STX-100. Циленгитид является циклическим пептидным антагонистом, который ингибирует как avp3, так и avp5, а SB-267268 является примером соединения (Wilkinson-Berka et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47, 1600), которое ингибирует как avp3, так и avp5. Изобретение соединений, которые действуют в качестве антагонистов различных комбинаций интегринов av, дает возможность создавать и специализировать новые агенты для лечения конкретных заболеваний.
Фиброз легких представляет собой конечную стадию некоторых интерстициальных легочных заболеваний, включая идиопатические интерстициальные пневмонии, и характеризуется чрезмерным отложением внеклеточного матрикса в интерстициальной ткани легких. Среди идиопатических интерстици-альных пневмоний идиопатический фиброз легких (IPF) представляет собой наиболее часто встречающееся и наиболее фатальное состояние со средним временем выживания от 3 до 5 лет после постановки диагноза. Фиброз при IPF обычно является прогрессирующим, невосприимчивым к современному фармакологическому вмешательству и неизбежно приводит к нарушению дыхания вследствие облитерации функциональных альвеолярных единиц. IPF поражено приблизительно 500000 человек в США и Европе. Поэтому это состояние представляет собой основную неудовлетворенную медицинскую потребность, для которой безотлагательно требуются новые терапевтические подходы (Datta A et al., Novel therapeutic approaches for pulmonary fibrosis, British Journal of Pharmacology 2011, 163:141-172).
Имеются веские иммуногистохимические данные, полученные в результате проведения экспери
ментов in vitro, на животных и пациентах с IPF, подтверждают ключевую роль эпителиально-ограниченного интегрина, ava6, в активации TGF-p1. Экспрессия этого интегрина является низкой в нормальных эпителиальных тканях и значительно повышается в травмированных и воспаленных эпителиальных тканях, включая активированный эпителий, при IPF. Следовательно, направленная доставка этого интегрина снижает теоретическую возможность вмешательства в более широкий круг гомеостатиче-ских функций TGF-p. Частичное ингибирование интегрина avp6 путем блокады антител, как было показано, предупреждает фиброз легких без обострения воспаления (Horan G.S. et al. Partial inhibition of in-tegrin avp6 prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2008, 177:56-65).
Интегрин avp3 экспрессируется на клетках нескольких типов, включая сосудистый эндотелий, где он охарактеризуется как регулятор барьера резистентности. Данные, полученные в животных моделях острого повреждения легких и сепсиса, продемонстрировали значительную роль этого интегрина в сосудистой утечке, поскольку мыши с нокаутированным геном показали заметно усиленную утечку из сосудов, приводящую к отеку легких или смерти. Кроме того, антитела, способные ингибировать функцию avp3, вызывали резкое увеличение проницаемости монослоя в легочной артерии и аллантоисной вене человека в ответ на многочисленные факторы роста. Эти данные свидетельствуют о защитной роли avp3 в сохранении целостности эндотелия сосудов после стимуляции сосудов, и о том, что ингибирование этой функции может стимулировать патогенные ответные реакции при хронических заболеваниях (Su et al. Absence of integrin avp3 enhances vascular leak in mice by inhibiting endothelial cortical actin formation Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2012 185: 58-66). Таким образом, селективность в отношении avp6 по сравнению с avp3 может обеспечивать преимущество безопасности.
Задача данного изобретения заключается в создании антагонистов avp6.
Краткое изложение сущности изобретения
В первом аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) или его соль, более конкретно соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
(I)
где R1 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу; R2 представляет собой атом водорода или атом фтора;
R3 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу.
Соединения формулы (I) и их соли обладают активностью антагонистов avp6 и, следовательно, имеют потенциальное применение для лечения или профилактики некоторых расстройств.
Во втором аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.
В третьем аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии, в частности в лечении заболевания или состояния, при котором показан антагонист интегринового рецептора aVp6.
В четвертом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения или профилактики заболевания или состояния, при котором показан антагонист интегринового рецептора avp6, У человека, нуждающегося в таком лечении, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В пятом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, при котором показан антагонист интегринового рецептора avp6.
Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все комбинации конкретных и предпочтительных групп, описанных выше.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой метильную группу.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой атом водорода.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой фтор-группу и R3 представляет собой метильную группу.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой атом водорода, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой атом водорода.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой этильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой метильную группу.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой этильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой этильную группу.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой атом водорода, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой метильную группу.
В одном из воплощений соединение выбрано из
3-(3-(3,5-диметил-1/-/-пиразол-1-ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-
1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(5-метил-1 /-/-пиразол-1 -ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты;
3-(3-(5-этил-3-метил-1/-/-пиразол-1-ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты;
3-(3-(1 Н-пиразол-1 -ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты;
3-(3-(3,5-диэтиловом-1/-/-пиразол-1-ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты;
3-(3-(4-фтор-3,5-диметил-1/-/-пиразол-1-ил)фенил)-4-((Н)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты;
3-(3-(3-метил-1 /-/-пиразол-1 -ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты; или их фармацевтически приемлемых солей. В одном из воплощений соединение представляет собой
3-(3-(3,5-диметил-1 /-/-пиразол-1 -ил)фенил)-4-((Я)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляную кислоту; или его фармацевтически приемлемую соль.
Следует иметь в виду, что настоящее изобретение охватывает соединения формулы (I) в виде свободного основания и в виде их солей, например в виде их фармацевтически приемлемых солей. В одном воплощении изобретение относится к соединениям формулы (I) или их фармацевтически приемлемым солям.
Обзор по подходящим солям смотри в Berge et al.., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977). Подходящие фармацевтически приемлемые соли перечислены в Р.Н. Stahl and GG. Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Weinheim/Surich: Wiley-VCH/VHCA, 2002. Подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли присоединения кислоты с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная кислота, бромоводородная кислота, ортофосфорная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота или серная кислота, или с органическими кислотами, такими как, например, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, яблочная кислота, янтарная кислота, салициловая кислота, малеиновая кислота, глицерофосфорная кислота, винная кислота, бензойная кислота, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота, бензолсульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота, например 2-нафталинсульфоновая кислота, гексановая кислота или ацетилсалициловая кислота. Обычно фармацевтически приемлемую соль легко можно получить с использованием желаемой кислоты или желаемого основания, по обстоятельствам. Полученная соль может быть осаждена из раствора и собрана фильтрованием, или может быть выделена путем выпаривания растворителя.
Другие, не фармацевтически приемлемые соли, например формиаты, оксалаты или трифторацетаты, могут быть использованы, например, в процессе выделения соединений формулы (I), и они входят в объем данного изобретения.
Фармацевтически приемлемая соль присоединения основания может быть образована в результате взаимодействия соединения формулы (I) с подходящим неорганическим или органическим основанием (например, триэтиламином, этаноламином, триэтаноламином, холином, аргинином, лизином или гисти-дином), возможно, в подходящем растворителе с получением соли присоединения основания, которую обычно выделяют, например, путем кристаллизации и фильтрования. Фармацевтически приемлемые основные соли включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочно-земельных металлов, такие как соли кальция и магния, и соли с органическими основаниями, включая соли первичных, вторичных и третичных аминов, такие как изопропиламин, диэтиламин, этано-ламин, триметиламин, дициклогексиламин и ^метил^-глюкамин.
В одном воплощении соединение формулы (I) находится в форме свободного основания, например 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляная кислота.
В другом воплощении соединение формулы (I) представляет собой соль гидрохлорид, например соль гидрохлорид 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.
В объем изобретения входят все возможные стехиометрические и нестехиометрические формы солей соединений формулы (I).
Следует иметь в виду, что многие органические соединения могут образовывать комплексы с растворителями, в которых их подвергают взаимодействию или из которых их осаждают или кристаллизуют. Эти комплексы известны как "сольваты". Например, комплекс с водой известен как "гидрат". Растворители с высокими точками кипения и/или способные образовывать водородные связи, такие как вода, ксилол, N-метил-пирролидинон, метанол и этанол, могут быть использованы для образования сольватов. Методы идентификации сольватов включают, без ограничения, ЯМР и микроанализ. Сольваты соединений формулы (I) входят в объем изобретения.
Соединения формулы (I) могут находиться в кристаллической или аморфной форме. К тому же некоторые кристаллические формы соединений формулы (I) могут существовать в виде полиморфов, которые входят в объем настоящего изобретения. Полиморфные формы соединений формулы (I) могут быть охарактеризованы и дифференцированы с использованием ряда общепринятых аналитических методов, включая, без ограничения, картины дифракции рентгеновских лучей на порошке (ДРЛП), инфракрасные (ИК) спектры, рамановские спектры, дифференциальную сканирующую калориметрю (ДСК), термогравиметрический анализ (ТГА) и твердотельный ядерно-магнитный резонанс (ттЯМР).
Следует иметь в виду, что кристаллические формы возможно могут быть гидратированными или сольватированными. В объем данного изобретения входят стехиометрические гидраты соединений формулы (I), а также соединения формулы (I), содержащие переменные количества воды. Подходящие сольваты включают фармацевтически приемлемые сольваты, такие как гидраты. Сольваты включают стехиометрические сольваты и нестехиометрические сольваты.
Соединения, описанные в данном документе, содержат два асимметрических центра, так что могут образоваться оптические изомеры, например диастереоизомеры. Соответственно, настоящее изобретение охватывает все изомеры соединений формулы (I), в виде индивидуальных изомеров, выделенных так, что они, по существу, не содержат другой изомер (т.е. чистых), или в виде смесей. Индивидуальный изомер, выделенный так, что он, по существу, не содержит другой изомер (т.е. чистый), может быть выделен так, что в нем присутствует менее 10%, в частности менее примерно 1%, например менее примерно 0,1% другого изомера.
Специалисту в данной области техники будет понятно, что некоторые диастереоизомеры могут быть менее активными, чем другие, и что активность индивидуального диастереоизомера может падать ниже выбранного предела.
В одном воплощении соединение формулы (I) представляет собой (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляную кислоту
В другом воплощении соединение формулы (I) представляет собой соль гидрохлорид (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты.
Разделение изомеров может быть осуществлено общепринятыми способами, известными специалисту в данной области, например фракционной кристаллизацией, хроматографией или ВЭЖХ.
Соединения формулы (I) могут существовать в одной из нескольких таутомерных форм. Следует иметь в виду, что настоящее изобретение охватывает все таутомеры соединений формулы (I), в виде индивидуальных таутомеров или в виде их смесей.
Из вышесказанного следует, что в объем изобретения входят сольваты, изомеры и полиморфные формы соединений формулы (I) и их солей.
Получение соединений
Соединения по изобретению могут быть получены различными способами, включая стандартную химию. Любая ранее определенная переменная по-прежнему будет иметь ранее определенное значение, если не указано иное. Иллюстративные общие способы синтеза изложены ниже, и затем получение конкретных соединений по изобретению описано в рабочих примерах.
Соединения структурной формулы (I) могут быть получены способом, включающим сначала удаление защитной группы соединения структурной формулы (II), т.е. отщепление сложноэфирной группы, с последующим превращением в соль
(II)
где R1, R2 и R3 такие, как определено выше, и
R4 представляет собой C1-С6алкильную группу, например трет-бутильную, изопропильную, этильную или метильную группу.
В шестом аспекте изобретения предложено соединение формулы (II). В одном из воплощений соединение формулы (II) имеет конфигурацию
Удаление защитной группы соединения структурной формулы (II), где R4 представляет собой трет-бутил, может быть осуществлено в результате кислотного гидролиза с использованием, например, соляной, бромоводородной, серной или трифторуксусной кислоты в инертном растворителе, таком как DCM, 2-метилтетрагидрофуран, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан или циклопентилметиловый эфир.
Альтернативно, удаление защитной группы соединения структурной формулы (II), где R4 представляет собой метил, может быть осуществлено в результате основного гидролиза с использованием, например, водного раствора гидроксида натрия или гидроксида калия в подходящем растворителе, таком как метанол.
После отщепления сложноэфирной группы полученный продукт может быть превращен в требуемую соль способами, хорошо известными специалистам в данной области.
В одном воплощении превращение свободного основания в соль гидрохлорид достигается в результате обработки ацетонитрильного раствора свободного основания водным раствором соляной кислоты, концентрирования полученного раствора соли и кристаллизации из ацетонитрила.
Соединения структурной формулы (II) могут быть получены каталитическим гидрированием над катализатором, таким как палладий или родий на угле, соединений структурной формулы (III), где R1, R2, R3 и R4 такие, как определено выше. Гидрирование может быть проведено при атмосферном давлении или слегка более высоком давлении газообразного водорода, например при 2-10 атмосферах (196-980 кПа), в подходящем растворителе, таком как ЕЮН, МеОН или смесь того и другого.
(Ill)
Соединения структурной формулы (III) могут быть получены способом, включающим взаимодействие соединения структурной формулы (IV) с бороновой кислотой структурной формулы (V) в присутствии подходящего катализатора, возможно в присутствии хирального лиганда при повышенной температуре и в присутствии основания.
(IV)
где R1, R2, R3 и R4 такие, как определено выше, и геометрией двойной связи может быть (Е) или смесь (Е) и (Z) изомеров, предпочтительно чистый (Е) изомер. Соединения структурной формулы (V), где R1, R2, R3 такие, как определено выше, и
R5 представляет собой либо водород, либо C1-С6алкильную группу, такую как 2,3-диметилбутан-2,3-диол (пинакол).
Соединения структурной формулы (V) могут быть использованы в виде чистой бороновой кислоты (R5 = Н) или в виде сложного эфира бороновой кислоты (R5 = алкильная группа), который может превращаться in situ в бороновую кислоту в присутствии воды и основания, такого как гидроксид калия.
(V)
Способ конденсации соединений структурных формул (IV) и (V) осуществляют в присутствии подходящего катализатора, такого как родиевый катализатор, предпочтительно хлор(1,5-циклооктадиен^одийф димер, в концентрации приблизительно 5%, и в смешивающемся с водой инертном растворителе, таком как 1,4-диоксан, в присутствии основания, такого как гидроксид калия, при повышенной температуре, такой как 50-90°С. Способ конденсации проводят в строго анаэробных условиях, где реакционную смесь продувают инертным газом, таким как азот, и откачивают его при пониженном давлении, повторяя процесс откачивания и продувания азотом несколько раз, например три раза.
Этот способ конденсации дает два диастереоизомера в соотношении приблизительно 1:1, которые могут быть разделены кристаллизацией, хроматографией или ВЭЖХ. Предпочтительным способом разделения является хиральная ВЭЖХ на хиральном носителе, таком как колонка Chiralpak.
Соотношение образовавшихся диастереоизомеров может быть существенно увеличено, например до приблизительно 80:20 в присутствии 10% добавок, таких как хиральные лиганды. Такие добавки включают энантиомерно чистые фосфиновые лиганды, например ^)-(+)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,Г-бинафталин [(R)-BINAP], который обеспечивает получение в качестве основного изомера биологически более активный диастереоизомер.
Было установлено, что соотношение диастереоизомеров зависит от размера алкильной группы R4. Так, когда R4 является третичной группой, тогда получали более высокое соотношение целевого основного изомера. Предпочтительной алкильной группой R4 является трет-бутил, который обеспечивает соотношение диастереоизомеров вплоть до 95:5. Соотношение диастереоизомеров может быть дополнительно увеличено, например до более 99:1 методом хиральной ВЭЖХ или кристаллизацией. При большем масштабе соотношение диастереоизомеров 90:10 получали, когда алкильная группа R4 представляла собой метил.
Соединение структурной формулы (VI) [(R)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридин] может быть получено способами, описанными в данном описании изобретения. В качестве иллюстрации, (R)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридин может быть получен способом, показанным на схеме 1.
Соединения структурной формулы (IV) могут быть получены в результате взаимодействия (R)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридина [соединение структурной формулы (VI)] с соединением структурной формулы (VII) в присутствии подходящего приблизительно 10%-ного палладиевого катализатора в подходящем инертном растворителе, таком как DCM, в присутствии третичного аминного основания, такого как триэтиламин или диизопропилэтиламин, и при температуре окружающей среды. Подходящие палладиевые катализаторы предпочтительно имеют бидентатный лиганд, такой как две дифенилфосфи-новые группы, например 1,1'-[бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(И) [Pd(dppf)Cl2]. Соединение структурной формулы (VI) может быть использовано в виде свободного основания, или оно может образовано in situ из соли, такой как соль гидрохлорид, в присутствии третичного аминного основания.
Соединение структурной формулы (VII) может быть получено способами, описанными в данном описании изобретения. В качестве иллюстрации соединение структурной формулы (VI), где R4 представляет собой трет-бутил, и двойная связь имеет геометрию (Е), может быть получено способом, показанным на схеме 2.
Схема 2
Реагенты и условия: (а) изобутилен, конц. H2SO4, диэтиловый эфир, 24 ч; (b) ацетат калия, ацето-нитрил, 60°С, 4 ч.
(Е)-4-Бромбут-2-еновую кислоту получали по методике, описанной в литературе [Т. Den Hartog, D. J. Van Dijken, A.J. Minnaard, B.L. Fennga Tetrahedron: Asymmetry 2010, 21, 1574-1584].
Соединение структурной формулы (VII), где R4 представляет собой метил, может быть получено способами, описанными в данном описании. Например, (Е)-метил-4-ацетоксибут-2-еноат может быть получен в результате взаимодействия коммерчески доступного (Е)-метил-4-бромбут-2-еноата с ацетатной солью, такой как ацетат калия или натрия, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, и при повышенной температуре, такой как 45-55°С.
Соединения структурной формулы (V) могут быть получены из соединения структурной формулы (VIII), где Ri, R2, и R3 такие, как определено выше в данном описании.
Соединения структурной формулы (V), где R5 представляет собой Н, могут быть получены трехста-дийным способом, включающим взаимодействие соединений структурной формулы (VIII) с литийорга-ническим реагентом, таким как н-бутиллитий, в инертном растворителе, таком как THF или 2-метил-тетрагидрофуран, при низкой температуре, такой как от -60 до -78°С, и в инертной атмосфере азота или аргона, с последующим взаимодействием с триалкилборатным эфиром, таким как три(изопропил)борат, и в заключение гидролиз.
Альтернативно, соединения структурной формулы (V), где R5 представляет собой пинакол, могут быть получены в результате взаимодействия соединений структурной формулы (VIII) с бис(пинаколато)дибором (доступным от Aldrich), в присутствии палладиевого катализатора, такого как трис(дибензилиденацетон)дипалладий (доступный от Aldrich), и в присутствии фосфинового лиганда, такого как 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (X-PHOS) (доступный от Aldrich), и в присутствии ацетата калия в инертном растворителе, таком как 1,4-диоксан, при повышенной температуре, например 110°С, и в инертной атмосфере, такой как атмосфера азота. Добавление воды в реакционную смесь в конце взаимодействия вызывает гидролиз полученного сложного пинаколатоэфира с образованием требуемой бороновой кислоты (V).
(3-(Ш-Пиразол-1-ил)фенил)бороновая кислота, т.е. соединение (V), где каждый из R1, R2 и R3 представляет собой водород, коммерчески доступна, например, от ABCR GmbH.
Соединения структурной формулы (VIII) могут быть получены из (3-бромфенил)гидразина (доступного от Aldrich) или гидрохлорида (3-бромфенил)гидразина (доступного от Amatek или Reddy & Reddy) в результате нагревания с подходящим дикарбонильным соединением, таким как пентан-2,4-дион, гептан-3,5-дион, 3-фтор-пентан-2,4-дион или маскированным дионом, таким как (Е)-4-(диметиламино)бут-3-ен-2-он, или кетоном ацетиленового ряда, таким как гекс-3-ин-2-он, способами, описанных в данном описании в экспериментальном разделе.
Следует иметь в виду, что в любом из путей синтеза, описанных выше, может быть полезной защита одной или более функциональных групп. Примеры защитных групп и способы их удаления можно найти в ТЛУ. Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (3rd edition, J. Wiley and Sons, 1999). Подходящие защитные группы для аминогруппы включают ацил (например ацетил, карбамат, например 2',2',2'-трихлорэтоксикарбонил, бензилоксикарбонил или трет-бутоксикарбонил) и арилакил (например бензил), которые могут быть удалены посредством гидролиза (например с использованием кислоты, такой как соляная кислота в диоксане или трифторуксусная кислота в дихлорметане) или посредством восстановления (например гидрогенолизом бензильной или бензилоксикарбонильной группы или восстановительным удалением 2',2',2'-трихлорэтоксикарбонильной группы, используя цинк в уксусной кислоте), по обстановке. Другие подходящие защитные группы для аминогруппы включают трифторацетил (-COCF3), который может быть удален гидролизом, катализируемым основанием.
Следует иметь в виду, что в любом из путей, описанных выше, точный порядок стадий синтеза, в котором различные группы и группировки вводят в молекулу, можно варьировать. Квалифицированный специалист-практик в данной области способен будет обеспечить проведение синтеза таким образом, чтобы группы или группировки, введенные на одной стадии способа, не подвергались последующим трансформациям и взаимодействиям, и выбрать порядок стадий синтеза соответствующим образом.
Некоторые соединения формул (V)-(VIII) также являются новыми и, следовательно, составляют еще один аспект изобретения.
Абсолютная конфигурация соединения (I), где R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой атом водорода, и R3 представляет собой метильную группу (пример 1), была получена после независимого энантиоселективного асимметрического синтеза, в результате которого образуется общее промежуточное соединение с известной абсолютной конфигурацией, и сравнения результатов спектроскопии, оптического вращения и аналитической хиральной ВЭЖХ общего промежуточного соединения, полученного тем и другим путями синтеза. Общее промежуточное соединение было получено в результате восстановления карбоновокислотной группы соединения примера 1 алюмогидридом лития с получением изомера 1 спиртового промежуточного соединения 33 (схема 3). Другой диастереоизомер промежуточного соединения 33 (изомер 2) был получен из второстепенного продукта промежуточного соединения 13 (изомер 2) в результате восстановления алюмогидридом лития и каталитического гидрирования полученного нафтиридинового спирта над 5% Rh на угле.
Схема 3. Реагенты и условия: (a) LiAlH4, THF; (b) Н2, 5% Rh/C, EtOH
Изомер 2
Независимый синтез начинался с превращения промежуточного соединения 9 в промежуточное соединение 35 с использованием трет-бутил-2-бромацетата, диацетата палладия, три(о-толил)фосфина и трикалийфосфата (схема 4). трет-Бутилэфирную группу удаляли с использованием TFA с получением промежуточного соединения 36, которое затем этерифицировали метанолом с получением промежуточного соединения 37. Это соединение алкилировали трет-бутил-2-бромацетатом с получением рацемического промежуточного соединения 38. Рацемат 38 разделяли на два его энантиомера, изомер 1 и изомер 2, препаративной хиральной ВЭЖХ. Изомер 1 промежуточного соединения 38 имел угол оптического вращения +81 в CHCl3, a изомер 2 имел угол оптического вращения -82. Метиловый эфир каждого энан-тиомера промежуточного соединения 38 подвергали селективному гидролизу с использованием гидро-ксида лития и перекиси водорода с получением изомера 1 и изомера 2 промежуточного соединения 39. изомер 1 имел угол оптического вращения +42, а изомер 2 имел угол оптического вращения -41.
Схема 4. Реагенты и условия: (a) Pd(OAc)2, Р(о-толил)3, K3PO4, THF, дефлегмация; (b) TFA, DCM; (с) МеОН, HCl, дефлегмация; (d) LiN(TMS)2, THF, -78°C; (e) разделение препаративной хиральной ВЭЖХ; (f) LiOH, H2O2, THF, 0°C
Абсолютную конфигурацию каждого из энантиомеров промежуточного соединения 39 получали методом независимого асимметрического синтеза, используя методологи Эванса. Так, промежуточное соединение 36 превращали в промежуточное соединение 40, используя коммерчески доступный (S)-4-бензилоксазолидин-2-он (схема 5). Промежуточное соединение 40 сначала енолизировали, используя гексаметилдисилазид лития, при -78°С и затем алкилировали трет-бутил-2-бромацетатом с получением промежуточного соединения 41 (основной изомер) в виде диастереоизомера, полученного в результате алкилирования енолята по менее затрудненной боковой цепи. Второстепенный компонент представлял собой изомер, полученный в результате алкилирования енолята по более затрудненной боковой цепи (промежуточное соединение 42). Гидролиз основного изомера (промежуточного соединения 41) с использованием гидроксида лития и перекиси водорода дал ожидаемый ^)-энантиомер промежуточного соединения 39, который имел угол оптического вращения +65. Следовательно, изомер 1 промежуточного соединения 39 имеет ^-конфигурацию.
Схема 5. Реагенты и условия: (а) пивалоилхлорид, DIPEA, THF, -78°C; (b) LiN(TMS)2, THF, -78°С; (с) LiOH, Н202, THF, 0°С
Промежуточное соединение 3 затем ацилировали ^)-энантиомером промежуточного соединения 39 (изомером 1) в присутствии EDC, N-гидроксибензтриазола и N-метилморфолина с получением промежуточного соединение 43, которое превращали в промежуточное соединение 44 путем каталитического гидрирования над 5% Rh/C (схема 6). трет-Бутилэфирную группу соединения 44 отщепляли с использованием TFA с получением промежуточного соединения 45, которое восстанавливали сначала комплек
сом боран-THF и затем алюмогидридом лития с получением промежуточного соединения 46. Спектр 1Н ЯМР при 600 МГц, оптическое вращение и результаты аналитической хиральной ВЭЖХ основного компонента промежуточного соединения 46 были идентичными данным, полученным для изомера 1 промежуточного соединения 33. Следовательно, конфигурация бензильного асимметрического центра изомера 1 промежуточного соединения 33 имеет ^-конфигурацию.
Схема 6. Реагенты и условия: (a) EDC, HOBT, NMM, DCM; (b) Н2, 5% Rh/C, EtOH; (с); TFA, DCM; (d) BFrTHF; (e) LiAlH4, THF, 60°C
соединение 46 Способы применения
Соединения формулы (I) и их соли являются ингибиторами активности интегриновых рецепторов, в частности активности рецептора ocvp6, и поэтому имеют потенциальное применение в лечении заболеваний или состояний, при которых показано соединение ocvp6.
Таким образом, согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно применять для лечения заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора ocvp6.
Таким образом, согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора ocvp6.
Также предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора ocvp6
Также предложен способ лечения заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора ocvp6, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
Подходящим субъектом, нуждающимся в лечении, является млекопитающее, конкретно человек.
Используемый в данном документе термин "эффективное количество" означает, что количество лекарственного средства или фармацевтического агента, который будет вызывать биологический или медицинский ответ ткани, системы, животного или человека, которого добивается, например, исследователь или клиницист. Кроме того, термин "терапевтически эффективное количество" означает любое количество, которое по сравнению с соответствующим субъектом, не получавшим такое количество, обеспечивает улучшенное лечение, выздоровление, предупреждение или ослабление симптомов заболевания, расстройства или ослабления побочного эффекта, или снижение скорости прогрессирования заболевания или расстройства. Этот термин также охватывает количества, эффективные для усиления нормальной физиологической функции.
В фиброзные заболевания вовлечено образование избыточной фиброзной соединительной ткани в органе или ткани в ходе репаративного или реактивного процесса. Антагонисты ocvp6 считаются полез
ными в лечении целого ряда таких заболеваний или состояний, включая заболевания и состояния, зависящие от функции интегрина covp6 и от активации трансформирующего фактора роста бета через интег-рины альфа v. Заболевания могут включать, без ограничения, фиброз легких, например идиопатический фиброз легких, неспецифическую интерстициальную пневмонию (NSIP), обычную интерстициальную пневмонию (UIP), синдром Германски-Пудлака (Hermansky-Pudlak), прогрессирующий обширный фиброз (осложнение пневмокониоза у шахтеров), фиброз легких, связанный с заболеванием соединительной ткани, фиброз дыхательных путей при астме и COPD, фиброз, ассоциированный с острым респираторным дистресс-синдромом взрослых (ARDS), острое повреждение легкого, вызванный облучением фиброз, семейный легочный фиброз, легочную гипертензию; почечный фиброз (диабетическую нефропатию, lgA-нефропатию, волчаночный нефрит; фокально-сегментарный гломерулосклероз (FSGS), нефропатию трансплантата, аутоиммунную нефропатию, нефропатию, вызванную лекарственными средствами, неф-ропатию, связанную с гипертензией, нефрогенный системный фиброз); фиброз печени (индуцированный вирусом фиброз (например вирусом гепатита С или В), аутоиммунный гепатит, первичный биллиарный цирроз, алкогольное заболевание печени, неалкогольное жировое заболевание печени, включая неалкогольный стеатогепатит (NASH), врожденный фиброз печени, первичный склерозирующий холангит, лекарственный гепатит, цирроз печени); фиброз кожи (гипертрофические рубцы, склеродермию, келоид-ные рубцы, дерматомиозит, эозинофильный фасцит, контрактуру Дюпюитрена (Dupytren), синдром Элерса-Данлоса (Ehler-Danlos), болезнь Пейрони (Peyronie), дистрофический буллезный эпидермолиз, подслизистый фиброз полости рта); фиброз глаз (AMD, диабетический макулярный отек, синдром сухого глаза, глаукому); фиброз миокарда (застойную сердечную недостаточность, эндомиокардиальный фиброз, гипертрофическую кардиомиопатию (НСМ), дилатационную кардиомиопатию (DCM), аритмоген-ную кардиомиопатию левого желудочка (ARVC), гипертензивную кардиопатию, саркоидоз сердца и другие формы сердечной недостаточности) и другие разнообразные фиброзные состояния (медиастенальный фиброз, миелофиброз, ретроперитонеальный фиброз, болезнь Крона, нейрофиброматоз, леймомиому матки (фиброиды), хроническое отторжение трансплантата органа). Это может дать дополнительные преимущества для дополнительных антагонистов otvp5 или Кроме того, можно лечить также предраковые поражения или раковые заболевания, ассоциированные с интегринами ovp6 (они могут включать, без ограничения, рак эндометрия, базальноклеточный рак, рак печени, рак толстой кишки, рак шейки матки, рак полости рта, рак поджелудочной железы, рак молочной железы и рак яичника, саркому Капоши, гигантоклеточные опухоли и рак стромы). Состояния, которые могут получать пользу от воздействий на ангиогенез, могут также получать пользу (например солидные опухоли).
Термин "заболевание или состояние, при котором показан ингибитор ovp6", охватывает любое или все указанные выше болезненные состояния.
В одном воплощении заболевания или состояния, при которых показан ингибитор ovp6, выбрано из идиопатического фиброза легких.
Композиции
Хотя возможно, что для применения в терапии соединение формулы (I), а также его фармацевтически приемлемые соли можно вводить в виде необработанного химического вещества, обычно активный ингредиент представляют в виде фармацевтической композиции.
Таким образом, в еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли такие, как описано выше. Носитель(и), разбавитель(и) или эксципиент(ы) должны быть приемлемыми в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции и не опасными для их реципиента.
Согласно другому аспекту изобретения предложен также способ изготовления фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. Фармацевтическую композицию можно применять в лечении любых состояний, описанных в данном документе.
Дополнительно предложена фармацевтическая композиция для лечения заболеваний или состояний, при которых показан ингибитор рецептора ovp6, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.
Дополнительно предложена фармацевтическая композиция, содержащая от 0,05 до 1000 мг соединения формулы (I) или его фармацевтической соли и от 0,1 до 2 г одного или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.
Так как соединения формулы (I) предназначены для использования в фармацевтических композициях, нетрудно понять, что каждое из них предпочтительно предоставляется, по существу, в чистой форме, например с чистотой по меньшей мере 60%, лучше с чистотой 75% и предпочтительно с чистотой по меньшей мере 85%, в частности с чистотой по меньшей мере 98% (% мас./мас.).
Фармацевтические композиции могут быть представлены в стандартных лекарственных формах, содержащих предопределенное количество активного ингредиента на стандартную дозу. Предпочтительные композиции в стандартной лекарственной форме представляют собой композиции, содержащие суточную дозу или субдозу или их соответствующую долю активного ингредиента. Такие стандартные дозы, следовательно, можно вводить более чем один раз в сутки. Предпочтительные композиции в стандартной лекарственной форме представляют собой композиции, содержащие суточную дозу или субдозу (для введения более чем один раз в сутки), как указано выше, или их соответствующую долю активного ингредиента.
Фармацевтические композиции могут быть адаптированы для введения любым подходящим путем, например пероральным (включая трансбуккальный или сублингвальный), ректальным, ингаляционным, интраназальным, местным (включая трансбуккальный, сублингвальный или чрескожный), вагинальным или парентеральным (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный или внутрикожный) путем. Такие композиции могут быть приготовлены любым способом, известным в области фармации, например путем объединения активного ингредиента с носителем(ями) или эксципиентом(ами).
В одном воплощении фармацевтическая композиция адаптирована для назального или ингаляционного введения.
Лекарственные формы для назального или ингаляционного введения для удобства могут быть приготовлены в виде аэрозолей, растворов, суспензий, гелей или сухих порошков.
Для композиций, подходящих и/или адаптированных для ингаляционного введения, предпочтительно, соединение по изобретению находится в форме частиц уменьшенного размера, и более предпочтительно форму уменьшенного размера получают, или она получаема, микронизацией. Предпочтительный уменьшенный размер (например микронный) частиц соединения или соли характеризуется величиной D50 от примерно 0,5 до примерно 10 мкм (при измерении, например, методом лазерной дифракции).
Аэрозольные композиции, например для ингаляционного введения, могут содержать раствор или тонкодисперсную суспензию активного вещества в фармацевтически приемлемом водном или неводном растворителе. Аэрозольные композиции могут быть представлены в однодозовом или многодозовых количествах в стерильной форме в герметично закрытом контейнере, который может иметь форму картриджа или сосуда многократного использования для распыляющего устройства или ингалятора. Альтернативно, герметично закрытый контейнер может представлять собой унитарное дозирующее устройство, такое как однодозовый назальный ингалятор или аэрозольный дозатор, оснащенный дозирующим клапаном (ингалятор отмеренной дозы), который предназначен для утилизации сразу после того, как содержимое контейнера будет израсходовано.
Если лекарственная форма представляет собой аэрозольный дозатор, то он предпочтительно содержит подходящий пропеллент под давлением, такой как сжатый воздух, диоксид углерода или органический пропеллент, такой как гидрофторуглерод (HFC). Подходящие HFC-пропелленты включают 1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан и 1,1,1,2-тетрафторэтан. Аэрозольные лекарственные формы также могут иметь форму нагнетательного пульверизатора. Аэрозоль под давлением может содержать раствор или суспензию активного соединения. В этом случае может потребоваться включение в состав дополнительных эксципиентов, например сорастворителей и/или поверхностно-активных веществ для улучшения дисперсионных характеристик и гомогенности композиций в форме суспензии. Композиции в форме раствора также могут требовать добавления сорастворителей, таких как этанол. Другие эксципиенты-модификаторы также могут быть включены в состав для улучшения, например, стабильности и/или вкуса и/или гранулометрических характеристик (количество и/или профиль) композиции.
Для фармацевтических композиций, подходящих и/или адаптированных для ингаляционного введения, фармацевтическая композиция может представлять собой сухую порошковую ингалируемую композицию. Такая композиция может содержать порошковую основу, такую как лактоза, глюкоза, тре-галоза, маннит или крахмал, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль (предпочтительно в форме с уменьшенным размером частиц, например в микронизированной форме) и возможно модификатор характеристик, такой как L-лейцин или другая аминокислота и/или соли стеариновой кислоты с металлами, такие как стеарат магния или кальция. Предпочтительно, сухая порошковая ингалируемая композиция содержит сухую порошковую смесь лактозы и соединение формулы (I) или его соль. Лактоза предпочтительно представляет собой гидрат лактозы, например моногидрат лактозы, и/или предпочтительно представляет собой лактозу сорта для ингаляций и/или лактозу высшего сорта. Предпочтительно, размер частиц лактозы характеризуется тем, что 90% или более (по массе или по объему) частиц лактозы имеют диаметр меньше 1000 мкм (микрометров) (например, 10-1000 мкм, например 30-1000 мкм), и/или 50% или более частиц лактозы имеют диаметр меньше 500 мкм (например, 10-500 мкм). Более предпочтительно, размер частиц лактозы характеризуется тем, что 90% или более частиц лактозы имеют диаметр меньше 300 мкм (например, 10-300 мкм, например 50-300 мкм), и/или 50% или более частиц лактозы имеют диаметр меньше 100 мкм. Возможно, размер частиц лактозы характеризуется тем, что 90% или более частиц лактозы имеют диаметр меньше 100-200 мкм, и/или 50% или более частиц лактозы имеют диаметр меньше 40-70 мкм. Наиболее важно и предпочтительно, от примерно 3 до примерно 30% (например, примерно 10%) (по массе или по объему) частиц имеют диаметр меньше 50
мкм или меньше 20 мкм. Например, без ограничения, подходящей лактозой сорта для ингаляций является лактоза Е9334 (10% тонкодисперсных фракций) (Borculo Domo Ingredients, Hanzeplein 25, 8017 JD Zwolle, Netherlands).
Возможно, в частности для сухих порошковых композиций для ингаляций, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения может быть помещена во множество запечатанных дозовых контейнеров (например, содержащих сухую порошковую композицию), размещенных в продольном направлении на полоске или ленте внутри подходящего ингаляционного устройства. Контейнер разрывается или открывается путем снятия предохранительной пленки при срабатывании, и доза, например, сухой порошковой композиции может быть введена ингаляцией с помощью устройства, такого как устройство DISKUS(tm), продаваемое GlaxoSmithKline. Устройство для ингаляции DISKUS(tm) описано, например, в GB 2242134 А, и в таком устройстве по меньшей мере один контейнер для фармацевтической композиции в порошковой форме (причем контейнер или контейнеры предпочтительно представляет(ют) собой множество запечатанных дозовых контейнеров, размещенных в продольном направлении на полоске или ленте) зафиксирован между двумя элементами, соединенными друг с другом с возможностью отсоединения друг от друга, и это устройство содержит средство определения местоположения открытия ука-занного(ых) контейнера или контейнеров, средство для отсоединения друг от друга указанных элементов в открывающем положении для открытия контейнера и выпускное отверстие, соединяющееся с открытым контейнером, через которое пользователь может вдыхать фармацевтическую композицию в порошковой форме из открытого контейнера.
Соединения формулы по изобретению могут быть приготовлены в виде жидкой композиции для доставки из жидкостного дозатора, например жидкостного дозатора, имеющего дозирующее сопло или дозирующую насадку, через которое(ую) отмеренная доза жидкой композиции распыляется, когда пользователь нажимает на насосный механизм жидкостного дозатора.
Такие жидкостные дозаторы, как правило, снабжены резервуаром для множества отмериваемых доз жидкой композиции, причем эти дозы распыляются при последовательных срабатываниях насоса. Дозирующее сопло или насадка может иметь конфигурацию, подходящую для введения в ноздри пользователя для распылительного дозирования жидкой композиции в носовую полость. Дозатор жидкости вышеупомянутого типа описан и проиллюстрирован в публикации WO-A-2005/044354, полное содержание которой включено в данное описание изобретения посредством ссылки. Дозатор имеет корпус, в котором находится выпускающее жидкость устройство с нагнетательным насосом, установленным на контейнере, в котором находится жидкая композиция. Корпус имеет по меньшей мере один приводимый в действие пальцами боковой рычаг, который двигается внутрь относительно корпуса, перемещая контейнер вверх в корпусе посредством эксцентрика и заставляя насос сжимать и нагнетать отмеренную дозу композиции из ствола насоса через назальное сопло корпуса. Особенно предпочтительным жидкостным дозатором является дозатор общего типа, проиллюстрированный на фиг. 30-40 в WO-A-2005/044354.
Композиции для ингаляционного или интраназального введения можно также вводить в легкое и другие области дыхательных путей пульверизацией. Такие композиции могут представлять собой водные растворы или суспензии. Растворы для ингаляции пульверизацией могут быть приготовлены с добавлением таких агентов, как кислота или щелочь, буферные соли, агенты, регулирующие изотонич-ность, поверхностно-активные вещества или противомикробные агенты, такие как хлорид бензалкония (ВАС). Композиция может быть стерильной и не содержащей противомикробного консерванта. Они могут быть стерилизованы, например, фильтрацией или нагреванием в автоклаве. Они могут быть представлены в виде нестерильного раствора. Однократная стандартная доза терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению может быть представлена в виде предварительно смешанной, предварительно отмеренной композиции в одном контейнере.
В другом воплощении фармацевтическая композиция адаптирована для перорального введения.
Фармацевтические композиции, адаптированные для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевые пенки или муссы; или жидкие эмульсии масло-вводе или жидкие эмульсии вода-в-масле.
Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный лекарственный компонент может быть объединен с пероральным нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки, подходящие для включения в состав таблеток или капсул, могут быть приготовлены путем измельчения соединения до подходящего тонкого размера (например, посредством мкмизации) и смешивания с аналогично приготовленным фармацевтическим носителем, таким как пищевой углевод, такой как, например, крахмал или маннит. Также могут присутствовать корригент, консервант, диспергирующий агент и краситель.
Капсулы могут быть изготовлены путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнением ею сформованных желатиновых оболочек. Скользящие вещества и смазывающие вещества, такие как коллоидный диоксид кремния, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или твердый полиэти-ленгликоль, могут быть добавлены в порошковую смесь перед операцией заполнения капсул. Разрыхляющий или солюбизирующий агент, такой как агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия, также
может быть добавлен для улучшения доступности лекарственного средства при проглатывании капсулы.
Кроме того, если желательно или необходимо, подходящие связующие вещества, скользящие вещества, смазывающие вещества, подсластители, корригенты, разрыхляющие агенты и красители также могут быть включены в состав смеси. Подходящие связующие вещества включают крахмал, желатин, натуральные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, кукурузные подсластители, натуральные и синтетические камеди, такие как в аравийская камедь, трагакант или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, воски и т.п.
Смазывающие вещества, используемые в этих лекарственных формах, включают олеат натрия, сте-арат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п.
Разрыхлители включают, без ограничения, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Таблетки изготавливают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или комкования, добавления смазывающего вещества и разрыхлителя и прессования в таблетки. Порошковую смесь получают путем смешивания соединения, соответствующим образом измельченного, с разбавителем или основой, как описано выше, и возможно со связующим веществом, таким как карбок-симетилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как парафин, ускорителем ресорбции, таким как четвертичная аммониевая соль, и/или агентом всасывания, таким как бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковая смесь может быть подвергнута гранулированию путем смачивания связующим веществом, таким как сироп, крахмальная паста, акадиевое клейкое вещество или растворы целлюлозных или полимерных веществ, и протирания через сито. В качестве альтернативы гранулированию порошковая смесь может быть пропущена через таблеточную машину с получением в результате неидеально сформованных комков, раздробленных на гранулы. Гранулы могут быть смазаны для предотвращения прилипания к матрицам для формования таблеток добавлением стеариновой кислоты, соли стеариновой кислоты, талька или минерального масла. Смазанную смесь затем прессуют в таблетки. Соединения по настоящему изобретению также могут быть объединены с сыпучим инертным носителем и сразу спрессованы в таблетки, минуя стадии гранулирования или комкования. Может быть нанесено прозрачное или матовое защитное покрытие, состоящее из водонепроницаемого слоя шеллака, покрытие из сахара или полимерного вещества и глянцевое покрытие из воска. В эти покрытия могут быть добавлены красители, чтобы различать разные стандартные дозировки.
Пероральные жидкости, такие как растворы, сиропы и эликсиры могут быть приготовлены в стандартной лекарственной форме, где данное количество содержит предопределенное количество соединения. Сиропы могут быть приготовлены путем растворения соединения в соответственно коррелированном водном растворе, а эликсиры готовят с использованием нетоксического спиртового носителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксическом носителе. Могут быть добавлены также солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленсорбитоловые эфиры, консерванты, корригенты, такие как масло мяты перечной, или натуральные подсластители, или сахарин или другие искусственные подсластители и т.п.
Когда это целесообразно, композиции единиц дозирования для перорального введения могут быть микроинкарсулированы. Может быть также приготовлена композиция для пролонгированного или длительного высвобождения, например, путем нанесения покрытия или встраивания дисперсного вещества в полимеры, воск или т.п.
Соединения по изобретению можно вводить также в форме липосомальных систем доставки, таких как небольшие однослойные везикулы, большие однослойные везикулы и многослойные везикулы. Ли-посомы могут быть образованы из различных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.
Фармацевтические композиции, адаптированные для трансдермального введения, могут быть представлены в виде отдельных пластырей, которые остаются в тесном контакте с эпидермисом реципиента в течение продолжительного периода время.
Фармацевтические композиции, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.
Для лечения глаз или других наружных тканей, например полости рта и кожи, композиции предпочтительно наносят в виде местной мази или крема. При приготовлении в форме мази активный ингредиент может быть использован либо с парафиновой, либо со смешиваемой с водой основой мази. Альтернативно, активный ингредиент может быть приготовлен в форме крема с основой масло-в-воде или с основой вода-в-масле.
Фармацевтические композиции, адаптированные для местного введения в глаз, включают глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в частности в водном растворителе.
Фармацевтические композиции, адаптированные для местного введения в полости рта, включают леденцы, пастилки и полоскания для рта.
Фармацевтические композиции, адаптированные для ректального введения, могут быть представлены в виде суппозиториев или в виде клизм.
Фармацевтические композиции, адаптированные для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или распыляемых композиций.
Фармацевтические композиции, адаптированные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы для подкожного, внутривенного или внутримышечного введения, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают композицию изотоничной крови намеченного реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие агенты и загустители. Композиции могут быть представлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, например в запаянных ампулах и флаконах, и могут храниться в сублимированном (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии для немедленного введения могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.
Терапевтически эффективное количество соединения по изобретению будет зависеть от целого ряда факторов, включая, например, возраст и массу тела субъекта, точного состояния, требующего лечения, и его тяжести, природы композиции и пути введения и, в конечном счете, будет находиться на усмотрении лечащего врача или ветеринара. В фармацевтической композиции каждая единица дозирования для перорального или парентерального введения предпочтительно содержит от 0,01 до 3000 мг, более предпочтительно от 0,5 до 1000 мг соединения по изобретению в расчете на свободное основание.
Каждая единица дозирования для назального или ингаляционного введения предпочтительно содержит от 0,001 до 50 мг, более предпочтительно от 0,01 до 5 мг, еще более предпочтительно от 1 до 50 мг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в расчете на свободное основание.
Для введения распыляемого раствора или суспензии единица дозирования обычно содержит от 1 до 15 мг, например от 2 до 10 мг или от 4 до 6 мг, которые можно доставлять один раз в сутки, два раза в сутки или более двух раз в сутки. Соединение по настоящему изобретению может быть предоставлено в виде сухого или лиофилизированного порошка для разведения в аптеке или пациентом, или может быть предоставлено, например, в виде водного солевого раствора.
Фармацевтически приемлемые соединения по изобретению можно вводить в суточной дозе (для взрослого пациента), например пероральной или парентеральной дозе от 0,01 до 3000 мг в сутки, от 0,5 до 1000 мг в сутки или назальной или ингаляционной дозе от 0,001 до 50 мг в сутки или от 0,01 до 5 мг в сутки или от 10 до 50 мг в сутки соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в расчете на свободное основание. Это количество можно вводить одной дозой в сутки или чаще, несколькими (например, двумя, тремя, четырьмя, пятью или шестью) субдозами в сутки, так чтобы суммарная суточная доза была той же самой. Эффективное количество соли может быть определено как количество, пропорциональной эффективному количеству непосредственно самого соединения формулы (I).
Соединения по изобретению можно использовать сами по себе или в комбинации с другими терапевтическими агентами. Так, комбинированные терапии согласно настоящему изобретению включают введение по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и использование по меньшей мере одного другого фармацевтически активного агента. Предпочтительно, комбинированные терапии согласно настоящему изобретению включают введение по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одного другого фармацевтически активного агента. Соединение(я) по изобретению и другой(ие) терапевтически активный(ые) агент(ы) можно вводить вместе в одной фармацевтической композиции или раздельно, и раздельное введение можно осуществлять одновременно или последовательно в любом порядке. Количества соединения(й) по изобретению и другого(их) фармацевтически активного(ых) агента(ов) и относительное распределение по времени введения должны быть такими, чтобы достигался целевой совокупный терапевтический эффект.
Таким образом, в еще одном аспекте предложена комбинация, содержащая соединение по изобретению и по меньшей мере один другой фармацевтически активный агент.
Таким образом, в одном аспекте соединение и фармацевтические композиции по изобретению можно применять в комбинации с одним или более другими терапевтическими агентами или включать их. Следует иметь в виду, что, когда соединение по настоящему изобретению вводят в комбинации с одним или более другими терапевтически активными агентами, вводимыми обычно ингаляционным, внутривенным, пероральным или интраназальным путем, тогда результирующую фармацевтическую композицию можно вводить посредством одним и тем же путем. Альтернативно, индивидуальные компоненты композиции можно вводить разными путями.
Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять в комбинации с одним или более другими агентами, которые могут быть полезными в предупреждении или лечении аллергического заболевания, воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, например с антигенными иммунотерапевтическими средствами, антигистаминными средствами, кортикостероидами (такими как флутиказона пропионат, флутиказона фуроат, беклометазона дипропионат, будесонид, цикле-зонид, мометазона фуроат, триамцинолон, флунизолид), NSAID, модуляторами лейкотриенов (такими
как монтелукаст, зафирлукаст, пранлукаст), ингибиторами iNOS, ингибиторами триптазы, ингибиторами
IKK2, ингибиторами р38, ингибиторами Syk, ингибиторами эластазы, антагонистами бета-2 интегрина,
агонистами аденозина а2а, антагонистами хемокинов, такими как антагонисты CCR3 или антагонисты
CCR4, ингибиторами высвобождения медиатора, такими как натрия хромогликат, ингибиторами 5-
липоксигеназы (зифло), антагонистами DP1, антагонистами DP2, ингибиторами pBK-дельта, ингибито-
рами ITK, ингибиторами LP (липофосфатидные) или ингибиторами FLAP (белка, активирующего 5-
липоксигеназу) (например, 3-(3-(трет-бутилтио)-1-(4-(6-этоксипиридин-3-ил)бензил)-5-((5-
метилпиридин-2-ил)метокси)-1Н-индол-2-ил)-2,2-диметилпропаноат натрия), метотрексатом и аналогичными агентами; в комбинации с терапией моноклональными антителами, например терапией анти-IgE, анти-TNF, анти-П^-5, анти-IL-6, анти-IL-12, анти-П^-1 и подобными агентами; с рецепторными терапевтическими средствами, например этанерцептом и подобными агентами; с антигенными неспецифическими иммунотерапевтическими средствами (например, интерфероном или другими цитокина-ми/хемокинами, модуляторами цитокиновых/хемокиновых рецепторов, агонистами или антагонистами цитокинов, агонистами TLR и подобными агентами)), ингибиторами синтеза TGFp, например пирфени-доном, ингибиторами тирозинкиназы, направленно воздействующими на киназы сосудистого эндотели-ального фактора роста (VEGF), тромбоцитарного фактора роста (PDGF) и фактора роста фибробластов (FGF), например интеданибом (BIBF-1120) и иматиниба мезилатом (гливек), антагонистами эндотелино-вых рецепторов, например амбрисентаном или мацитентаном, антиоксидантами, такими как N-ацетилцистеин (NAC или флуимуцил), антибиотиками широкого спектра действия, такими как тетрацик-лины, например миноциклина гидрохлорид, ингибиторами фосфодиэстеразы 5 (PDE5), например силде-нафилом. Альтернативно, в комбинации могут быть использованы антитела против ovp6, например мо-ноклональные антитела, такие как антитела, описанные в WO 2003100033A2.
Специалисту в данной области техники будет ясно, что когда это целесообразно, другой(ие) тера-певтический(ие) ингредиент(ы) могут быть использованы в форме солей, например в виде солей щелочных металлов или солей с аминами, или в виде солей присоединения кислоты, или в виде пролекарств, или в виде сложных эфиров, например низших алкиловых эфиров, или в виде сольватов, например гидратов, для оптимизации активности и/или стабильности и/или физических характеристик, таких как растворимость, терапевтического ингредиента. Также должно быть ясно, что, когда это целесообразно, терапевтические ингредиенты могут быть использованы в оптически чистой форме.
Комбинации, упомянутые выше, для удобства могут быть представлены для применения в форме фармацевтической композиции, и поэтому фармацевтические композиции, содержащие комбинацию, как определено выше, вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, представляют собой еще один аспект изобретения.
Индивидуальные соединения таких комбинаций можно вводить либо последовательно, либо одновременно в отдельных или объединенных фармацевтических композициях. Предпочтительно, индивидуальные соединения вводят одновременно в объединенной фармацевтической композиции. Специалист в данной области без труда определит подходящие дозы известных терапевтических агентов.
Сокращения
В приведенном ниже списке представлены определения некоторых сокращений, которые использованы в данном описании изобретения. Следует иметь в виду, что список не является исчерпывающим, а значения тех сокращений, которые не определены ниже в данном описании, будут очевидны специалисту в данной области.
Ас (ацетил)
BCECF-AM (2',7'-бис-(2-карбоксиэтил)-5-(и-6)-карбоксифлуоресцеина AM (ацетоксиметиловый) эфир) Bu (бутил)
CHAPS (3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1 -пропансульфонат)
КО (колоночный объем)
DCM (дихлорметан)
DMF (Л/,Л/-диметилформамид)
DMSO (диметилсульфоксид)
ДСК (дифференциальная сканирующая калориметрия)
Et (этил)
ЕЮН (этанол)
EtOAc (этилацетат)
ч (час/часы)
HCI (соляная кислота)
HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота)
л (литры)
М (молярный)
МУАП (масс-управляемая автопрепаративная ВЭЖХ)
Me (метил)
МеОН (метанол)
мин (минута/минуты)
МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир)
Ph (фенил)
"Рг (изопропил)
(R)-BINAP ((Я?)-(+)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1 '-бинафталин) Si (диоксид кремния) SPE (твердофазная экстракция) TEA (триэтиламин) TFA (трифторуксусная кислота) THF (тетрагидрофуран) ТСХ (тонкослойная хроматография) ДРЛП (дифракция рентгеновских лучей на порошке) Все ссылки на рассол относятся к насыщенному водному раствору хлорида натрия.
Подробности экспериментов
Аналитическая ЖХ/МС.
Аналитическую ЖХ/МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия) проводили на одной из описанных ниже систем А, В или С.
УФ-детектирование для всех систем представляло собой усредненный сигнал длины волны от 220 нм до 350 нм, и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре, используя электрораспылительную ионизацию в режиме попеременной регистрации положительных и отрицательных ионов.
Подробности экспериментов с использованием систем А-В ЖХ/МС, на которые дается ссылка в данном описании, следующие.
Система А.
Колонка: 50 мм х 2,1 мм ВД (внутренний диаметр), 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН С18. Скорость потока: 1 мл/мин. Температура: 40°С. Растворители:
А: 10 мМ бикарбоната аммония в воде с рН, доведенным до рН 10 раствором аммиака.
В: Ацетонитрил.
Градиент: Время (мин) А% В%
0 99 1
1,5 3 97
1,9 3 97
2,0 0 100
Система В.
Колонка: 50 мм х 2,1 мм ВД, 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН C18. Скорость потока: 1 мл/мин. Температура: 40°С. Растворители:
А: 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацето нитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0 97 3
1,5 0 100
1,9 0 100
2,0 97 3
Система С.
Колонка: 50 мм х 2,1 мм ВД, 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН С18. Скорость потока: 1 мл/мин. Температура: 40°С. Растворители:
А: 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде.
В: 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацето нитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0 97 3
1,5 0 100
1,9 0 100
2,0 97 3
Масс-управляемая автопрепаративная ВЭЖХ.
Неочищенные продукты очищали посредством МУАП ВЭЖХ одним из методом способов А-С. Время прогона составляло 15 мин, если не указано иное. УФ-детектирование для всех систем представляло собой усредненный сигнал длины волны от 210 до 350 нм, и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре, используя электрораспылительную ионизацию в режиме попеременной регистрации положительных и отрицательных ионов.
Метод А.
Метод А проводили на колонке XBridge C18 (обычно 100 мм х 30 мм ВД, диаметр упаковки 5 мкм) при температуре окружающей среды. Использовали следующие растворители.
А - 10 мМ водный бикарбонат аммония с рН, доведенным до рН 10 раствором аммиака, В - ацетонитрил.
Использовали следующий градиент:
Время (мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
% В
Метод В.
Метод А проводили на колонке X Bridge C18 (обычно 100 мм х 30 мм ВД, диаметр упаковки 5 мкм) при температуре окружающей среды. Использовали следующие растворители:
А - 10 мМ водный бикарбонат аммония с рН, доведенным до рН 10 раствором аммиака, В - ацетонитрил.
Использовали следующий градиент:
Время (мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
% В
Метод С.
Метод С проводили на колонке XBridge C18 (обычно 150 мм х 30 мм ВД, диаметр упаковки 5 мкм) при температуре окружающей среды. Использовали следующие растворители: А - 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде, В - 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле. Использовали следующий градиент:
Время(мин)
Скорость потока (мл/мин)
% А
% В
10,5
УФ-детектирование для всех систем представляло собой усредненный сигнал длины волны от 210 до 350 нм.
Получение промежуточных соединений
Промежуточное соединение 1. (Я)-трет-Бутил-3-(йодметил)-пирролидин-1-карбоксилат.
В 5-литровый стеклянный реакционный сосуд с вакуумной рубашкой (Radley's LARA) загружали DCM (2 л), затем трифенилфосфин (339 г, 1,29 моль) и имидазол (88 г, 1,29 моль) и температуру снижали до 0°С. Затем добавляли порциями йод (328 г, 1,29 моль) в течение 30 мин, поддерживая температуру реакционной смеси 0-5°С, чтобы контролировать экзотермический эффект. Во время добавления образовывался густой коричневый осадок. Осадок оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 15 мин и затем перемешивали при комнатной температуре в течение еще 30 мин. Порциями добавляли раствор (R)-трет-бутил-3-(гидроксиметилпирролидин-1-карбоксилата (200 г, 994 ммоль) (доступный от Fluorochem или BePharm Ltd.) в DCM (200 мл) в течение 15 мин, поддерживая температуру реакционной смеси 24-30°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем разбавляли ТВМЕ (8 л) и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток (700 г) растирали с диэтиловым эфиром (2 л) в бане лед-вода с получением 333 г неочищенного продукта. Порцию 27 г неочищенного продукта очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (100 г), элюируя с градиентом 050% этилацетата-циклогексан в течение 30 мин. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (16,33 г, 5%) в виде желтого масла. Остальное неочищенное вещество (примерно 306 г) очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (1,5 кг), элюируя с градиентом 0-30% этилацетата-циклогексан за 9,5 колоночных объемов. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (233,94 г, 76%) в виде бледно-желтого масла: ЖХ/МС (система A) RT = 1,19 мин, 100%, ЭРИ+ (электрораспылительная ионизация с регистрацией положительных ионов) m/z 312 (М+Н)+; [a]D20 = + 23 (с=1,00 в EtOH).
Промежуточное соединение 2. (R)-трет-Бутил-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-карбоксилат.
Перемешиваемый раствор 2-метил-1,8-нафтиридина (57,5 г, 399 ммоль) (доступный от Manchester Organics) и (R)-трет-бутил-3-(йодметил)пирролидин-1-карбоксилата (124,2 г, 399 ммоль) (промежуточное соединение 1) в THF (1 л) охлаждали до 0°С и обрабатывали в атмосфере азота раствором бис(триметилсилил)амида лития в THF (1М, 399 мл, 399 ммоль) в течение 20 мин и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором хлорида аммония (500 мл) и водой (500 мл) и добавляли этилацетат (1 л). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали дополнительным количеством этилацетата (1 л). Объединенные органические слои сушили (MgSO4), фильтровали и упаривали в вакууме. Остаточное коричневое масло (162 г) очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (750 г), элюируя с градиентом 0-100% [этилацетат в (5% МеОН-95% этилацетата)] за 8 колоночных объемов. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (46,65 г, 36%) в виде оранжевого твердого вещества: ЖХ/МС (система A) RT = 0,99 мин, 97%, ЭРИ+ m/z 328 (М+Н)+, [a]D20 = + 22(с=1,00 в EtOH).
Промежуточное соединение 3. Соль дигидрохлорид ^)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридина.
Раствор ^)-трет-бутил-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -карбоксилата (104,71 г, 320 ммоль) в DCM (500 мл) медленно обрабатывали HCl (4M в 1,4-диоксане (200 мл, 800 ммоль)) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и за это время в колбе образовался крупный твердый комок. Добавляли МеОН (~100 мл) для содействия растворению твердого вещества и продолжали перемешивание. ЖХ/МС показала ~72% продукта и ~25% исходного вещества. Добавляли дополнительное количество 4М HCl в 1,4-диоксане (100 мл) и продолжали перемешивание в течение 1 ч. Растворитель выпаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (89,66 г, 93%) в виде твердого вещества пурпурного цвета: ЖХ/МС (система В) RT = 0,34 мин, 100%, ЭРИ+m/z 228 (M+H)+.
Промежуточное соединение 4. (Е)-трет-Бутил-4-бромбут-2-еноат.
Газобразный изобутилен (363 мл, 3,82 моль) барботировали через перемешиваемый раствор (Е)-4-бромбут-2-еноевой кислоты (210 г, 1,27 ммоль) [Т. Den Hartog, D.J. Van Dijken, A.J. Minnaard, B.L. Ferin-ga Tetrahedron Asymmet. 2010, 21, 1574-1584] и концентрированной H2SO4 (20,35 мл, 382 ммоль) в диэти-ловом эфире (1 л) при -40°С в течение 30 мин в стальном автоклаве. Смесь плотно закрывали в автоклаве и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, затем подщелачивали триэтиламином (250 мл) и экстрагировали DCM (3х 200 мл). Органический слой сушили и концентрировали в вакууме. Остаток растирали в н-пентане (200 мл) с получением указанного в заголовке соединения (140 г, 50%) в виде коричневого сиропа: 1Н ЯМР 5 (CDCl3, 400 МГц) 6.89 (dt, J=15, 7,5 Гц, 1Н), 5.95 (dt, J=15,1 Гц, 1Н), 3.99 (dd, J=7,5, 1 Гц, 2Н), 1.48 (s, 9Н). Водный слой подкисляли 2М HCl до рН 2, экстрагировали EtOAc (2 х 250 мл) и объединенные органические слои промывали водой (2 х 500 мл), сушили над Na2SO4 и упаривали в вакууме с получением непрореагировавшего исходного вещества (50 г) в виде не совсем белого твердого вещества.
Промежуточное соединение 5. (Е)-трет-Бутил-4-ацетоксибут-2-еноат.
Перемешиваемый раствор (Е)-трет-бутил-4-бромбут-2-еноата (280 г, 1,27 моль) в ацетонитриле (1,2 л) обрабатывали ацетатом калия (186 г, 1,9 моль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 60°С в течение 4 ч и протекание реакции контролировали методом ТСХ (10% диэтилового эфира в пет-ролейном эфире, Rf = 0,4, УФ-детектирование). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, твердое вещество удаляли фильтрованием и промывали диэтиловым эфиром (600 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле, элю-ируя 10% диэтиловым эфиром в петролейном эфире. Соответствующие фракции объединяли и упаривали с получением указанного в заголовке соединения (148 г, выход 58%) в виде бледно-желтой жидкости: 1Н ЯМР 5 (CDCl3, 400 МГц) 6.82 (dt, J=15,5, 5 Гц, 1Н), 5.94 (dt, J=15,5, 2 Гц, 1Н), 4.71 (dd, J=5,2 Гц, 2Н), 2.11 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).
Промежуточное соединение 6. 1-(3-Бромфенил)-5-метил-Ш-пиразол.
Раствор гидрохлорида (3-бромфенил)гидразина (доступного от Amatek) (300 г, 1,34 моль) в уксусной кислоте (2,2 л) обрабатывали диизопропилэтиламином (234 мл, 1,34 моль), затем обрабатывали (Е)-4-(диметиламино)-бут-3-ен-2-оном (доступным от Acros) (152 г, 1,34 моль) и реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток вливали в насыщенный раствор NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом (2х1 л). Органическую фазу отделяли и сушили над Na2SO4. Фильтрат упаривали в вакууме и остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (100-200 меш), используя смесь 0-4,5% этилацетата в петролейном эфире. Соответствующие фракции собирали и концентрировали при пониженном давлении с получением 1-(3-бромфенил)-3-метил-Ш-пиразола (промежуточное соединение 29) (40 г, 13%). Дополнительное элюирование колонки смесью 20-40% этилацетата в петролейном эфире дало указанное в заголовке соединение (205 г, 64%) в виде желтой жидкости: 1Н ЯМР 5 (CDCl3; 600 МГц) 7.67 (t, J=1,9 Гц, 1Н), 7.59 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 7.54-7.49 (m, 1Н), 7.43-7.40 (m, 1Н), 7.37-7.32 (m, 1Н), 6.21 (d, J=0,7 Гц, 1Н), 2.38 (s, 3Н).
Промежуточное соединение 7. (3-(5-Метил-Ш-пиразол-1-ил)-фенил)бороновая кислота.
Раствор 1-(3-бромфенил)-5-метил-Ш-пиразола (промежуточное соединение 6) (200 г, 844 ммоль) в THF (2 л) медленно обрабатывали триизопропилборатом (доступным от Avra) (294 мл, 1,265 моль), затем охлаждали до -78°С и добавляли н-бутиллитий (844 мл, 2109 ммоль) в течение 30 мин при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 2 ч. Протекание реакции контролировали методом ТСХ (подвижная фаза: 30% EtOAc в петролейном эфире). Реакционную смесь вливали в 2М HCl и удаляли THF при пониженном давлении. Остаток подщелачивали 2М NaOH и экстрагировали этилацетатом (2 х 700 мл). Водный слой нейтрализовали (рН~7) 2М HCl и экстрагировали этилацетатом (2 х 1 л). Органические слои объединяли, сушили над безводным Na2SO4 и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (120 г, 69%) в виде белого твердого вещества. MS ЭРИ+ m/z 203 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 8. 1-(3-Бромфенил)-3,5-диметил-Ш-пиразол.
Раствор гидрохлорида (3-бромфенил)гидразина (доступного от Reddy & Reddy) (45 г, 200 ммоль) и пентан-2,4-диона (Aldrich) (30,2 г, 302 ммоль) в DCM.
(225 мл) обрабатывали по каплям концентрированной H2SO4 (1,073 мл, 20,13 ммоль) и перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM
(500 мл) и промывали водой (2 х 250 мл). Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (100-200 меш), элюируя смесью 5% этилацетата в гексанах с получением указанного в заголовке соединения (30 г, 59%) в виде светло-коричневой жидкости: 1Н ЯМР 5 (CDCl3, 400 МГц) 7.71 (t, J=2 Гц, 1Н), 7.57-7.49 (m, 2Н), 7.46-7.40 (t, J=8 Гц, 1Н), 6.07 (s, 1H), 2.31 (s, 3Н), 2.18 (s, 3Н).
Промежуточное соединение 9. (3-(3,5-Диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновая кислота.
Раствор 1-(3-бромфенил)-3,5-диметил-Ш-пиразола (промежуточное соединение 8) (30 г, 119 ммоль) в THF (500 мл) обрабатывали триизопропилборатом (доступным от Avra) (41,6 мл, 179 ммоль), охлаждали до -78°С, обрабатывали по каплям 2,5М n-BuLi (119 мл, 299 ммоль) в течение 1 ч в атмосфере аргона и перемешивали в течение 2 ч при -78°С. Реакционную смесь гасили водным раствором HCl (2М, 150 мл), нейтрализовали 2М раствором NaOH и экстрагировали этилацетатом (2 х 300 мл). Объединенные органические растворы сушили над Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растирали с пентаном и диэтиловым эфиром (1:1) и твердое вещество собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (15 г, 57%) в виде не совсем белого твердого вещества: MS ЭРИ+m/z 217(M+H)+.
Промежуточное соединение 10. 1-(3-Бромфенил)-5-этил-3-метил-Ш-пиразол.
Суспензию гидрохлорида (3-бромфенил)гидразина (полученного от Anichem) (2,0 г, 8,9 ммоль) и триэтиламина (1,25 мл, 8,9 ммоль) в EtOH (20 мл) быстро перемешивали до гомогенного состояния и затем добавляли гекс-3-ин-2-он (доступный от МР Biomedicals или Alfa Aesar) (0,887 г, 8,9 ммоль) и эту смесь нагревали до 50°С в течение 10 мин. Смесь обрабатывали концентрированной HCl (12М, 2,5 мл) и нагревали до 100°С в течение 20 мин. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток распределяли между этилацетатом и водным раствором бикарбоната натрия. Органический раствор промывали водным NaHCO3, рассолом, сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (330 г), элюируя с градиентом 0-100% DCM-циклогексан за 10 КО. Соответствующие фракции объединяли и упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,95 г, 82%) в виде оранжевого масла: 1Н ЯМР 5 (DMSO-d6, 400 МГц) 7.67 (t, J=2 Гц, 1Н), 7.58 (dt, J=8,2 Гц, 1Н), 7.49 (m, 1Н), 7.47-7.42 (m, 1Н), 6.11 (s, 1Н), 2.66 (q, J=7,5 Гц, 2Н), 2.19 (s, 3Н), 1.13 (t, J=7,5 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 11. (3-(5-Этил-3-метил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бороновая кислота.
Смесь 1-(3-бромфенил)-5-этил-3-метил-Ш-пиразола (промежуточного соединения 10) (2,795 г, 10,54 ммоль) и триизопропилбората (полученного от Aldrich) (2,4 г, 12,7 ммоль) обрабатывали при -78°С n-BuLi (1,6М, 13,2 мл) по каплям, поддерживая температуру ниже -60°С. Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Затем смесь гасили 2М раствором HCl (11 мл, до рН 7) и добавляли этилацетат. Органический раствор промывали рассолом и сушили (MgSO4). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаточное масло растирали со смесью циклогексан-петролейный эфир (40-60°) с получением твердого вещества. Это твердое вещество собирали фильтрованием, промывали петролейным эфиром, затем небольшим количеством воды, сушили на воздухе и затем сушили в вакууме при 60°С с получением указанного в заголовке соединения (623 мг, 26%) в виде желтого твердого вещества: MS ЭРИ+ m/z 231 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 12. (R,Е)-трет-Бутил-4-(3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бут-2-еноат.
Смесь (Е)-трет-бутил-4-ацетоксибут-2-еноата (промежуточное соединение 5) (14,20 г, 70,9 ммоль) и 1Д'-[бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(П) [Pd(dppf)Cl2] (4,72 г, 6,45 ммоль) в DCM (100 мл) перемешивали в течение 15 мин в атмосфере азота, после чего добавляли раствор дигидрохлорида ^)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридина (промежуточное соединение 3) (17 г, 57 ммоль) в дии-зопропилэтиламине (56,3 мл, 322 ммоль) и DCM (200 мл). Получали прозрачный красный раствор, который перемешивали в атмосфере азота в течение 24 ч. Смесь распределяли между DCM и водой (3 х 170 мл). Органическую фазу пропускали через картридж фазоразделителя и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаточное масло (27 г) загружали в DCM на аминопропильный картридж (900 г) и очищали хроматографией на CombiFlash Companion XL, используя градиент от 0 до 100% этилацетата-циклогексан за 10 колоночных объемов. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (17,62 г, 85%) в виде коричневого масла, которое затвердевало при стоянии: ЖХ/МС (система A) RT = 1,05 мин, 100%; ЭРИ+ m/z 368 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 13. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил )этил )пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат.
Раствор (3-(3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (промежуточное соединение 9) (44,7 г, 207 ммоль) в KOH (3,8 М, 54,4 мл, 207 ммоль) обрабатывали раствором ^,Е)-трет-бутил-4-(3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бут-2-еноата (промежуточное соединение 12) (40 г, 103 ммоль) в 1,4-диоксане (300 мл) и дегазировали несколько раз, используя вакуум и азот, в течение 5 мин. Добавляли хлор(1,5-циклооктадиен)родий(1) димер (2,55 г, 5,17 ммоль), затем добавляли (R)-BINAP (6,44 г, 10,3 ммоль) и смесь дегазировали в течение еще 5 мин. Раствор нагревали при 90°С в течение 60 мин.
После охлаждения реакционную смесь распределяли между DCM (250 мл) и водой (200 мл). Водную фазу дополнительно экстрагировали DCM (200 мл) и объединенные органические растворы упаривали в вакууме. Остаточное масло (95 г) растворяли в DCM и очищали хроматографией на аминопропильном картридже KPNH (900 г), элюируя с градиентом 0-50% этилацетата-циклогексан за 10 КО. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением коричневого масла (39 г). Аналитическая хиральная ВЭЖХ на колонке Chiralpak AD-H (250 мм х4,6 мм) с изократическим элюированием смесью 20% EtOH (содержащего 0,2% изопропиламина)-гептан, скорость потока = 1,0 мл/мин, детектирование при 215 нм, показала, что масло представляет собой смесь двух диастереоизомеров: пик 1 RT = 7,87 мин, 90,4 %; пик 2 RT = 9,78 мин, 9,6%. Смесь разделяли хиральной препаративной ВЭЖХ на колонке Chiralpak AD (50 мм х 200 мм), элюируя смесью 20% этанола (содержащего 0,2% изопропилами-на)-гептаны, скорость потока=50 мл/мин, детектирование при 240 нм, собирая фракции основного компонента при RT = 11-16 мин. Объединенные фракции упаривали при пониженном давлении с получением основного изомера указанного в заголовке соединения (изомер 1) (25,1 г, 45%) в виде коричневого масла: ЖХ/МС (система A) RT= 1,25 мин, ЭРИ+ m/z 540 (М+Н)+; аналитическая хиральная ВЭЖХ на колонке Chiralpak AD-Н RT = 7,87 мин, > 99,5%; 1Н ЯМР 5 (CDCl3; 600 МГц) 9.07 (dd, J=4,2, 2,0 Гц, 1Н), 8.15 (dd, J=8,0, 1,9 Гц, 1Н), 8.08 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7.43 (dd, J=8,0, 4,3 Гц, 1Н), 7.37 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7.377.33 (m, 1Н), 7.27 (d, J=1,1 Гц, 1Н), 7.27-7.25 (m, 1Н), 7.21 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 5.98 (s, 1Н), 3.31 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 3.10-2.95 (m, 2Н), 2.85 (dd, J=15,4, 5,7 Гц, 1Н), 2.84-2.79 (m, 1Н), 2.78-2.71 (m, 1Н), 2.75-2.67 (m, 1Н), 2.55-2.47 (m, 1Н), 2.48-2.41 (m, 1Н), 2.43-2.35 (m, 1Н), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.26-2.18 (m, 1Н), 2.232.13 (m, 1Н), 2.02-1.95 (m, 1Н), 1.98-1.91 (m, 2Н), 1.50-1.42 (m, 1Н), 1.30 (s, 9H). Фракции, содержащие неосновной компонент (RT=19-25 мин), объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением изомера 2 указанного в заголовке соединения (2,03 г, 4%) в виде коричневого масла: ЖХ/МС (система A) RT= 1,25 мин, ЭРИ+ m/z 540 (М+Н)+; аналитическая хиральная ВЭЖХ на колонке Chiralpak
AD-H RT=9,78 мин, > 99,5%.
Промежуточное соединение 14. трет-Бутил-3-(3-(3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
Раствор трет-бутил-4-(^)-3-(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3-(3-(3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноата (изомер 1) (промежуточное соединение 13) (8,0 г, 14,8 ммоль) в этаноле (200 мл) быстро перемешивали над 10% Pd/C (1,58 г) в атмосфере газа водорода при комнатной температуре в течение ночи. Катализатор удаляли фильтрованием через целит и промывали этанолом. Объединенный фильтрат и промывочные растворы упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (7,19 г, 89%) в виде коричневого масла. ЖХ/МС (система A) RT = 1,44 мин,
ЭРИ+ m/z 544 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 15. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил )этил )пирролидин-1-ил )-3-(3-(5 -метил-Ш-пиразол-1 -ил)фенил)бутаноат.
Раствор (3-(5-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (промежуточное соединение 7) (12,53 г, 55,8 ммоль) в водном KOH (3,8 М, 14,69 мл, 55,8 ммоль) обрабатывали раствором ^,Е)-трет-бутил-4-(3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бут-2-еноата (промежуточное соединение 12) (11,4 г, 27,9 ммоль) в 1,4-диоксане (196 мл) и раствор дегазировали несколько раз, используя вакуум и азот, в течение 5 мин. В смесь добавляли хлор(1,5-1щклооктадиен)родий(!) димер (0,688 г, 1,396 ммоль) и (R)-BINAP (1,738 г, 2,79 ммоль) и раствор дегазировали в течение еще 5 мин. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 60 мин. После охлаждения реакционную смесь упаривали в вакууме и остаток распределяли между DCM и водой. Водную фазу дополнительно экстрагировали DCM и объединенные органические растворы упаривали в вакууме. Остаточное масло (21,53 г) растворяли в DCM и очищали хроматографией на аминопропильном картридже (375 г) на CombiFlash Companion XL, элюируя с градиентом от 0 до 100% этилацетата-циклогексан за 12 колоночных объемов. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением коричневого масла (13,56 г). Аналитическая хиральная ВЭЖХ на колонке Chiralpak OD-H (250 мм х4,6 мм) с изократическим элюированием смесью 20% EtOH-гептан, скорость потока = 1,0 мл/мин, детектирование при 215 нм, показала, что масло представляет собой смесь двух диастереоизомеров: пик 1 RT = 15,1 мин, 8,2%; пик 2 RT = 22,6 мин, 91,8 %. Смесь разделяли хиральной препаративной ВЭЖХ на колонке Chiralpak AD (50 мм х 200 мм), элюируя смесью 30% этанола-гептаны, скорость потока 50 мл/мин, детектирование при 215 нм, собирая фракции основного компонента при RT = 37-50 мин. Объединенные фракции упаривали при пониженном давлении и остаток дополнительно очищали на аминопропильном картридже (375 г), элюируя с градиентом 0-100% этилаце-тата-циклогексан за 12 колоночных объемов. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением изомера 1 указанного в заголовке соединения (9,06 г, 62%) в виде коричневого масла: ЖХ/МС (система A) RT=1,20 мин, 97%, ЭРИ+ m/z 526 (М+Н)+. Другие соответствующие фракции упаривали при пониженном давлении с получением неосновного изомера (изомера 2) указанного в заголовке соединения (1,83 г, 12%): ЖХ/МС (система A) RT=1,21 мин, ЭРИ+ m/z 526 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 16. трет-Бутил-3-(3-(5-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
Раствор трет-бутил-4-(^)-3 -(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(5-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноата (изомер 1) (промежуточное соединение 15) (9,06 г, 17,2 ммоль) в этаноле (250 мл) гидрировали над 10% Pd/C (1,834 г) при комнатной температуре в течение 48 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через целит и промывали этанолом. Объединенные фильтрат и промывочные растворы упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (7,68 г, 84%) в виде
желтого масла: ЖХ/МС (система A) RT = 1,40 мин, 95%, ЭРИ+ m/z 530 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 17. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3-(3-(5-этил-3-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат.
Смесь ^,Е)-трет-бутил-4-(3-(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)бут-2-еноата (промежуточное соединение 12) (360 мг, 0,980 ммоль), (3-(5-этил-3-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (промежуточное соединение 10) (676 мг, 2,94 ммоль), водного KOH (3,8 М, 0,516 мл, 1,96 ммоль), хлор(1,5-циклооктадиен)родия(1) димера (48,3 мг, 0,098 ммоль), (R)-BINAP (122 мг, 0,196 ммоль) в 1,4-диоксане (15 мл) нагревали в течение 3 ч при 95°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и распределяли между DCM (25 мл) и водой (25 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали дополнительным количеством DCM (25 мл) и объединенные органические растворы концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в DCM и очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (50 г), элюируя смесью 0-25% MeOH-DCM. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (158 мг, 29%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система A) RT = 1,31 мин, 81%, ЭРИ+ m/z 554 (М+Н)+; аналитическая хиральная ВЭЖХ Chiralpak AD (250 мм х 4,6 мм) 15% EtOH-гептан, изократически, скорость потока 1 мл/мин, детектирование при 215 нм. RT = 10,5 мин, 92,6% (основной изомер) и 14,8 мин, 7,4% (неосновной изомер); 1Н ЯМР 5 (CDCl3; 600 МГц) 9.10 (dd, J=4,2, 2,0 Гц, 1Н), 8.17 (dd, J=8,1, 2,2 Гц, 1Н), 8.11 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7.46 (dd, J=8,1, 4,4 Гц, 1Н), 7.41-7.34 (m, 2H), 7.31-7.21 (m, 3Н), 6.03 (s, 1Н), 3.74 (q, J=7,0 Гц, 1Н), 3.33 (br. S., 1H), 3.11-2.97 (m, 2Н), 2.91-2.70 (m, 4Н), 2.63 (q, J=7,7 Гц, 2Н), 2.56-2.38 (m, 3Н), 2.33 (s, 3Н), 2.27-2.14 (m, 2Н), 2.06-1.92 (m, 3Н), 1.51-1.45 (m, 1Н), 1.36-1.31 (m, 9Н), 1.19 (t, J=7,5 Гц, 3Н).
Промежуточное соединение 18. трет-Бутил-3-(3-(5-этил-3-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
трет-Бутил-4-(^)-3 -(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(5-этил-3 -метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат (промежуточное соединение 17) (158 мг, 0,285 ммоль) гидрировали над 10% Pd/C (30 мг) в этаноле (10 мл) в течение 18 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через целит (10 г) и промывали этанолом. Объединенные фильтрат и промывочные растворы упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (130 мг, 82%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система A) RT = 1,49 мин, ЭРИ+ m/z 558 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 19. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат.
Смесь ^,Е)-трет-бутил-4-(3-(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)бут-2-еноата (промежуточное соединение 12) (333 мг, 0,906 ммоль), (3-(Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (доступной от ABCR GmbH) (511 мг, 2,72 ммоль), водного KOH (3,8 М, 0,477 мл, 1,81 ммоль), хлор(1,5-хщклооктадиенОродия^) димера (44,7 мг, 0,091 ммоль), (R)-BINAP (113 мг, 0,196 ммоль) в 1,4-диоксане (15 мл) нагревали в течение 3 ч при 95°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и распределяли между DCM (25 мл) и водой (25 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали дополнительным количеством DCM (25 мл) и объединенные органические растворы концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в DCM и очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (50 г), элюируя 0-25% MeOH-DCM. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (128 мг, 28%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система A): RT = 1,22 мин, ЭРИ+ m/z 512 (М+Н)+; аналитическая хиральная ВЭЖХ Chiralpak AD (250 мм х 4,6 мм), изократическое элюи-рование смесью 30% EtOH-гептан, содержащей 0,1% изопропиламина, скорость потока 1 мл/мин, детектирование при 235 нм: RT = 7,05 мин, 95% (основной изомер) и 12,2 мин, 5% (неосновной изомер).
Промежуточное соединение 20. трет-Бутил-3-(3-(Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
трет-Бутил-4-(^)-3 -(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(Ш-пиразол-1 -ил)фенил)бутаноат (промежуточное соединение 19) (128 мг, 0,25 ммоль) гидрировали над 10% Pd/C (53 мг) в этаноле (10 мл) в течение 18 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через целит (10 г) и промывали этанолом. Объединенные фильтрат и промывочные растворы упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (100 мг, 78%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система A) RT = 1,45 мин, ЭРИ+ m/z 516 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 21. 1-(3-Бромфенил)-3,5-диэтил-Ш-пиразол.
Гептан-3,5-дион (доступный от Aldrich) (3,60 г, 28,1 ммоль) и (3-бромфенил)гидразин (доступный от Anichem Inc.) (3,50 г, 18,7 ммоль) растворяли в DCM (20 мл). Добавляли концентрированную H2SO4 (18М, 0,100 мл, 1,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и распределяли между DCM (25 мл) и водой (25 мл),
водную фазу отделяли и экстрагировали дополнительным количеством DCM (25 мл). Объединенные органические фазы концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (3,64 г, 70%): ЖХ/МС (система A): RT = 1,31 мин, ЭРИ+ m/z 279/281 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 22. (3-(3,5-Диэтил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновая кислота.
Смесь 1-(3-бромфенил)-3,5-диэтил-Ш-пиразола (промежуточное соединение 21) (3,637 г, 13,03 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (X-PHOS) (доступного от Aldrich) (298 мг, 0,625 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия (доступного от Aldrich) (179 мг, 0,195 ммоль), ацетата калия (3,20 г, 32,6 ммоль) и бис(пинаколато)дибора (доступного от Aldrich) (3,64 г, 14,3 ммоль) в 1,4-диоксане (75 мл) нагревали до 110°С в течение 4 ч. В реакционную смесь добавляли воду и этилаце-тат и слои разделяли. Водный слой дополнительно экстрагировали дважды EtOAc. Объединенные органические экстракты пропускали через гидрофобную фритту и фильтрат упаривали в вакууме. Остаток растворяли в ацетонитриле и очищали обращенно-фазовой хроматографией (100 г), элюируя с градиентом 25-85% ацетонитрила-вода, содержащая 0,1% муравьиной кислоты, за 10 КО. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (1,055 г, 33%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,86 мин, ЭРИ+ m/z 245 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 23. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(3,5-диэтил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат.
Смесь ^,Е)-трет-бутил-4-(3-(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)бут-2-еноата (промежуточное соединение 12) (210 мг, 0,571 ммоль), (3-(3,5-диэтил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (промежуточное соединение 22) (283 мг, 1,16 ммоль), водного KOH (3,8 М, 0,3 мл, 1,14 ммоль), хлор(1,5-циклооктадиен)родия(1) димера (14,1 мг, 0,03 ммоль), (R)-BINAP (35,6 мг, 0,06 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл) нагревали в течение 4 ч при 95°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и распределяли между EtOAc (100 мл) и водой (100 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали дополнительным количеством EtOAc (100 мл) и объединенные органические растворы концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на аминопропильном картридже SPE (50 г), элюируя смесью 0100% EtOAc-циклогексан в течение 1 ч. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (130 мг, 40%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система С): RT = 0,97 мин, ЭРИ+ m/z 568 (М+Н)+; Аналитическая хиральная ВЭЖХ, Chiralpak AD (250 мм х 4,6 мм), изократическое элюирование смесью 10% EtOH-гептан, содержащей 0,1% изопропиламина, скорость потока 1 мл/мин, детектирование при 215 нм: RT = 10,5 мин, 86% (основной изомер) и 13,7 мин, 13% (неосновной изомер). Диастереоизомеры разделяли препаративной хиральной ВЭЖХ на Chiralpak AD (250 мм х 30 мм), элюируя изократически смесью 10% EtOH-гептан, содержащей 0,2% изопропиламина, скорость потока 30 мл/мин, детектирование при 215 нм. Соответствующие фракции объединяли и упаривали при пониженном давлении с получением основного изомера указанного в заголовке соединения (изомера 1) (53 мг, 41%): ЖХ/МС (система С) RT = 0,95 мин, ЭРИ+ m/z 568 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CDCl3; 400 МГц) 9.08 (dd, J=4,2 Гц, 1Н), 8.15 (dd, J=8,2 Гц, 1Н), 8.09 (d, J=8 Гц, 1Н), 7.44 (dd, J=8,4 Гц, 1Н), 7.38 (d, J=8 Гц, 1Н), 7.37-7.34 (m, 1Н), 7.27-7.24 (m, 2Н), 7.22 (br. d, J=8 Гц, 1Н), 6.05 (s, 1H), 3.373.25 (уширенный, 1Н), 3.09-2.97 (m, 2Н), 2.86 (dd, J=15, 5,5 Гц, 1Н), 2.83-2.79 (m, 1Н), 2.78-2.71 (m, 1Н), 2.70 (q, J=l Гц, 2Н), 2.75-2.67 (m, 1Н), 2.62 (q, J=7 Гц, 2Н), 2.55-2.35 (m, 3Н), 2.30-2.13 (m, 2H), 2.05-1.92 (m, 2H), 1.72-1.58 (m, 1H), 1.50-1.42 (m, 1H), 1.31 (s, 9H), 1.29 (t, J=7 Гц, 3Н), 1.19 (t, J=7 Гц, 3Н). Упаривание других соответствующих фракций дало неосновной диастереоизомер указанного в заголовке соединения (изомер 2) (5 мг, 4%): ЖХ/МС (система С) RT = 0,96 мин, ЭРИ+ m/z 568 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 24. трет-Бутил-3-(3-(3,5-диэтил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
трет-Бутил-4-((R)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3-(3-(3,5-диэтиловом-1H-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат (изомер 1) (промежуточное соединение 23) (144 мг, 0,25 ммоль) гидрировали над 10% Pd/C (27 мг) в этаноле (10 мл) в течение 18 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через целит (10 г) и промывали этанолом. Объединенные фильтрат и промывочные растворы упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (116 мг, 80%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система A) RT = 1,61 мин, ЭРИ+ m/z 572 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 25. 1-(3-Бромфенил)-4-фтор-3,5-диметил-1Н-пиразол.
3-Фторпентан-2,4-дион (доступный от Fluorochem) (2,84 г, 24,1 ммоль), (3-бромфенил)гидразин (доступный от Anichem Inc.) (3,0 г, 16 ммоль) растворяли в DCM (20 мл). Добавляли концентрированную H2SO4 (0,171 мл, 3,21 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и распределяли между DCM (25 мл) и водой (25 мл), водную фазу отделяли и экстрагировали дополнительным количеством DCM (25 мл). Затем объединенные органические фазы концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (2,61 г, 60%): ЖХ/МС (система A) RT = 1,22 мин, ЭРИ+ m/z 269/271 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 26. (3-(4-Фтор-3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бороновая кислота.
Смесь 1 -(3-бромфенил)-4-фтор-3,5-диметил-Ш-пиразол (промежуточное соединение 25) (2,61 г, 9,70 ммоль), 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (X-PHOS) (доступного от Aldrich)
(222 мг, 0,466 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия (доступного от Aldrich) (133 мг, 0,146 ммоль), ацетата калия (2,38 г, 24,3 ммоль) и бис(пинаколато)дибора (доступного от Aldrich) (2,71 г, 10,67 ммоль) в 1,4-диоксане (75 мл) нагревали до 110°С в течение 4 ч. В реакционную смесь добавляли воду и этилацетат и слои разделяли. Водный слой дополнительно экстрагировали EtOAc. Объединенные органические экстракты пропускали через гидрофобную фритту и фильтрат упаривали в вакууме. Остаток растворяли в ацетонитриле и очищали обращенно-фазовой хроматографией (картридж 100 г), используя градиент 25-85% ацетонитрила-вода, содержащая 0,1% муравьиной кислоты, за 10 КО. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (400 мг, 18%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,77 мин, 3PM+m/z 235 (M+H)+.
Промежуточное соединение 27. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(4-фтор-3,5-диметил-Ш-пиразол-1 -ил)фенил)бутаноат.
Раствор (3-(4-фтор-3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (промежуточное соединение 26) (382 мг, 1,63 ммоль), циклооктадиен-хлорида родия(!) димера (121 мг, 0,245 ммоль), водного KOH (3,8 М, 0,430 мл, 1,63 ммоль) в 1,4-диоксане (6 мл) перемешивали при температуре окружающей среды в течение 5 мин в атмосфере азота, после чего добавляли ^Д?)-трет-бутил-4-(3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бут-2-еноат-циклооктадиен (промежуточное соединение 12) (300 мг, 0,82 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 95°С в течение 1 ч и затем распределяли между водой (20 мл) и EtOAc (20 мл). Органический слой концентрировали при пониженном давлении, растворяли в МеОН (5 мл) и наносили на 10 г аминопропильный картридж SPE, который предварительно обрабатывали МеОН (1 КО). Колонку промывали МеОН (3 КО) и фракции концентрировали при пониженном давлении. Остаток (385 мг) очищали обращенно-фазовой хроматографией на картридже С18 (30 г), элю-ируя смесью 50-80% ацетонитрила (содержащего 0,1% аммиака) в 10 мМ водном растворе бикарбоната аммония. Соответствующие фракции концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереоизомеров (70 мг, 15%): ЖХ/МС (система A) RT = 1,34 мин, ЭРИ+ m/z 558 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 28. трет-Бутил-3-(3-(4-фтор-3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3 -(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)бутаноат.
трет-Бутил-4-(^)-3 -(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(4-фтор-3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат (промежуточное соединение 27) (70 мг, 0,063 ммоль) гидрировали над 10% Pd/C (13,4 мг) в этаноле (4 мл) в течение 4 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через целит и промывали этилацетатом. Объединенные фильтрат и промывочные растворы концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (70 мг, 35%) в виде желтого масла: ЖХ/МС (система А) RT = 1,50 мин, ЭРИ+ m/z 562 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 29. 1-(3-Бромфенил)-3-метил-Ш-пиразол.
Раствор бут-3-ин-2-она (1,75 мл, 22,4 ммоль), гидрохлорида (3-бромфенил)гидразина (5,0 г, 22,4 ммоль) в МеОН (20 мл) обрабатывали концентрированной HCl (0,680 мл, 22,4 ммоль) и реакционную смесь нагревали в герметично закрытом флаконе для микроволновой печи в течение 2 мин при 120°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и распределяли между DCM (25 мл) и водой (25 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали дополнительным количеством DCM (25 мл). Объединенные органические растворы концентрировали и очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния SPE (100 г), элюируя с градиентом 0-100% DCM-циклогексан. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (2,39 г, 45%): ЖХ/МС (система A) RT = 1,15 мин, ЭРИ+ m/z 237/239 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CDCl3; 600 МГц) 7.85 (t, J=2,0 Гц, 1Н), 7.75 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 7.54 (ddd, J=8,2, 2,1, 0,9 Гц, 1Н), 7.35-7.31 (m, 1Н), 7.26-7.21 (m, 1Н), 6.23 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 2.35 (s, 3Н) и его региоизомера 1-(3-бромфенил)-5-метил-Ш-пиразола (промежуточное соединение 6) (1,7 г, 32%): ЖХ/МС (система A) RT = 1,05 мин, ЭРИ+ m/z 237/239 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 30. (3-(3-Метил-1Н-пиразол-1-ил)-фенил)бороновая кислота.
Получали способом, аналогичным способу, описанному для получения промежуточного соединения 26, начиная с промежуточного соединения 29 (2,39 г, 10,1 ммоль), с получением указанного в заголовке соединения (2,23 г, 100%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,60 мин, ЭРИ+ m/z 203 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 31. трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(3 -метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат.
Получали способом, аналогичным способу, описанному для получения промежуточного соединения 27, начиная с промежуточного соединения 12 (336 мг, 0,914 ммоль) и промежуточного соединения 30 (554 мг, 2,74 ммоль), с получением указанного в заголовке соединения (212 мг, 44%): ЖХ/МС (система A) RT = 1,26 мин, ЭРИ+ m/z 526 (М+Н)+; аналитическая хиральная ВЭЖХ, Chiralcel OD (250 мм х 4,6 мм), изократическое элюирование смесью 40% EtOH-гептан, скорость потока 1 мл/мин, детектирование при 215 нм: RT = 10,1 мин, 16,7% (неосновной изомер) и RT = 14,1 мин, 83,3% (основной изомер).
Промежуточное соединение 32. трет-Бутил-3-(3-(3-метил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
Раствор трет-бутил-4-(^)-3 -(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3 -(3 -(3 -метил-Ш
пиразол-1-ил)фенил)бутаноата (промежуточное соединение 31) (212 мг, 0,403 ммоль) в EtOH (10 мл) гидрировали над Pd/C (42,9 мг) в течение 18 ч. Катализатор собирали фильтрованием через целит и промывали EtOH. Объединенные фильтрат и промывочные растворы концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (171 мг, 80%) в виде оранжевого масла: ЖХ/МС (система A): RT= 1,46 мин, ЭРИ+ m/z 530 (М+Н)+.
Примеры получения соединений по изобретению Пример 1. 3-(3-(3,5-Диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляная кислота
Раствор трет-бутил-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноата (промежуточное соединение 14) (100 мг, 0,184 ммоль) в 2-метил-ТНР (0,5 мл) обрабатывали концентрированной HCl (12М, 0,077 мл, 0,92 ммоль) и перемешивали при 40°С в течение 2 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и остаточное масло растворяли в этаноле (2 мл) и наносили на ионообменный картридж SCX-2 (5 г) и элюировали этанолом (2 КО) и затем 2М раствором аммиака в МеОН (2 КО). Аммиачные фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (79 мг, 88%) в виде не совсем белого твердого вещества: ЖХ/МС (система A) RT= 0,86 мин, 100%, ЭРИ+ m/z 488 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CDCl3; 600 МГц): 7.42-7.37 (m, 1H), 7.31 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 7.29 (d, J=0,9 Гц, 1Н), 7.23 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 7.21 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.31 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 5.99 (s, 1Н), 3.55 (уширенный синглет, 1Н), 3.60-3.52 (m, 1Н), 3.45 (t, J=5,4 Гц, 2Н), 3.27 (t, J=10,6 Гц, 1Н), 3.09 (уширенный синглет,1Н), 2.93-2.86 (m, 1Н), 2.82 (d, J=10,1 Гц, 1Н), 2.86-2.75 (m, 2Н), 2.72 (t, J=6,2 Гц, 1Н), 2.74-2.67 (m, 2Н), 2.75 (d, J=9,0 Гц, 1Н), 2.61-2.50 (m, 1Н), 2.31 (s, 3Н), 2.29 (s, 3Н), 2.33-2.26 (m, 1Н), 2.24-2.11 (m, 1Н), 1.94-1.86 (m, 2Н), 1.94-1.84 (m, 1Н), 1.78-1.66 (m, 1Н), 1.65-1.51 (m,
1Н).
Соединение примера 1 идентифицировали способом, описанным выше, как ^)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляную кислоту.
Раствор трет-бутил-3-(3-(5-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноата (промежуточное соединение 16) (2,80 г, 5,29 ммоль) в 2-метил-ТГФ (15 мл) обрабатывали концентрированной HCl (12М, 3,96 мл, 47,6 ммоль) и перемешивали
при 40°С в течение 2 ч. Растворитель выпаривали в вакууме, остаток (3,8 г) растворяли в этаноле (2 мл) и очищали посредством ионообменной хроматографии на картридже SCX-2 (70 г), элюируя этанолом (1 КО) и затем 2М раствором аммиака в МеОН (1 КО). Аммиачные фракции выпаривали в вакууме и оста-
ток растворяли в DCM и дополнительно очищали на аминопропильном картридже (100 г), элюируя с
градиентом 0-25% МеОН-DCM в течение 30 мин. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (2,01 г, 80%) в виде белой пены: ЖХ/МС (система A) RT = 0,83 мин, 100%, ЭРИ+ m/z 474 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (DMSO-d6; 600 МГц) 7.55 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 7.47-7.41 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.34 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 7.30 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 7.02 (d, J=7,0 Гц, 1Н), 6.32-6.22 (m, 3Н), 3.35-3.26 (m, 2Н), 3.26-3.20 (m, 2Н), 2.92-2.75 (m, 3Н), 2.73-2.65 (m, 1Н), 2.63-2.52 (m, 4Н), 2.47 (dd, J=15,8, 7,3 Гц, 1Н), 2.41 (t, J=7,7 Гц, 2Н), 2.33 (s, 3Н), 2.28 (dd, J=9,0, 7,5 Гц, 1Н), 2.10-1.96 (m, 1Н), 1.94-1.85 (m, 1Н), 1.79-1.71 (m, 2Н), 1.68-1.54 (m, 2Н), 1.34 (dd, J=12,3, 7,9 Гц, 1Н).
Пример 3. 3-(3-(5-Этил-3-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляная кислота
трет-Бутил-3-(3-(5-этил-3-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат (промежуточное соединение 18) (130 мг, 0,233 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (5 мл), добавляли концентрированную HCl (37%, 0,038 мл, 0,466 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь концентрировали в вакууме и образец растворяли в DMSO (1 мл) и очищали масс-управляемой авто-препаративной ВЭЖХ (Метод В) на колонке Xbridge, используя смесь ацетонитрил-вода с аммиачно-карбонатным буфером. Растворитель удаляли в потоке азота в продувочном аппарате Radleys с получением указанного в заголовке соединения (20 мг, 17%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,90 мин, 95%, ЭРИ+ m/z 502 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CD3OD; 400 МГц) 7.48 (t, J=8 Гц, 1Н), 7.39-7.32 (m, 2Н), 7.30 (br d, J=8 Гц, 1Н), 7.14 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6.38 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6.10 (s, 1Н), 3.62-3.45 (m, 2Н), 3.39-3.32 (m, 4Н), 3.25 (dd, J=12, 3 Гц, 1Н), 3.08 (br. t, J=9 Гц, 1Н), 2.86 (dd, J=16, 10 Гц, 1Н), 2.71-2.53 (m, 7Н), 2.38-2.26 (m, 1Н), 2.25 (s, 3Н), 2.24-2.16 (m, 1Н), 1.90-1.63 (m, 5Н), 1.16 (t, J=7,5 Гц, 3Н).
Пример 4. 3-(3-(1Н-Пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляная кислота
трет-Бутил-3-(3-(1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат (промежуточное соединение 20) (100 мг, 0,19 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (5 мл), добавляли концентрированную HCl (37%, 0,032 мл, 0,39 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь концентрировали в вакууме и образец растворяли в DMSO-MeOH (1:1; 1 мл) и очищали посредством масс-управляемой автопрепаративной ВЭЖХ (метод А) на колонке Xbridge, используя смесь ацетонитрил-вода с аммиачно-карбонатным буфером. Растворитель удаляли в потоке азота продувочном аппарате Radleys с получением указанного в заголовке соединения (10 мг, 11%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,82 мин, 98,6%, ЭРИ+ m/z 460 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CD3OD; 400 МГц) 8.23 (d, J=2,5 Гц, 1Н), 7.72 (уширенный d, J=2 Гц, 1Н), 7.68 (m, 1H), 7.63 (br. d, J=8 Гц, 1Н), 7.46 (t, J=8 Гц, 1Н), 7.25 (уширенный d, J=7,5 Гц, 1H), 7.15 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6.52 (m, 1H), 6.38 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 3.64-3.45 (m, 2H), 3.39-3.32 (m, 4H), 3.26 (затемненный CHD2OD, 1H), 3.15-3.06 (m, 1H), 2.88 (dd, J=16,5, 10 Гц, 1Н), 2.71-2.61 (m, 3Н), 2.56 (t, J=8 Гц, 2Н), 2.40-2.28 (m, 1H), 2.26-2.16 (m, 1H), 1.90-1.61 (m, 5H).
Пример 5. 3-(3-(3.5-Диэтил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-
нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляная кислота
трет-Бутил-3-(3-(3,5-диэтил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат (116 мг, 0,203 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (5 мл) и затем обрабатывали концентрированной HCl (0,033 мл, 0,406 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в DMSO (1 мл) и очищали посредством масс-управляемой автопрепаративной ВЭЖХ (метод А) на колонке Xbridge, используя смесь ацетонитрил-вода с аммиачно-карбонатным буфером. Растворитель сушили в потоке азота в продувочном аппарате Radleys с получением указанного в заголовке соединения (27 мг, 26%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,94 мин, ЭРИ+ m/z 516 (М+Н)+: 1Н ЯМР 5 (CD3OD; 600 МГц) 7.49 (t, J=8,0 Гц, 1Н), 7.37 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7.34 (br. s, 1H), 7.31 (br. d, J=8,0 Гц, 1H), 7.14 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.38 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.14 (s, 1H), 3.57 (dd, J=12,5, 9,4 Гц, 1H), 3.53-3.47 (m, 1Н), 3.39-3.33 (m, 3Н), 3.32-3.29 (m, 2Н), 3.25 (dd, J=12,6, 3,6 Гц, 1H), 3.10-3.01 (m, 1Н), 2.86 (dd, J=16,4, 10,4 Гц, 1H), 2.68 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 2.67-2.61 (m, 1H), 2.66-2.58 (m, 4H), 2.56 (t, J=7,8 Гц, 2Н), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.21 (d, J=6,8 Гц, 1Н), 1.88-1.83 (m, 2H), 1.83-1.72 (m, 2H), 1.67 (dd, J=13,0, 8,4 Гц, 1Н), 1.25 (t, J=7,7 Гц, 3Н), 1.17 (t, J=7,6 Гц, 3Н).
Пример 6. 3-(3-(4-Фтор-3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил )-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляная кислота
трет-Бутил-3-(3-(4-фтор-3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат (промежуточное соединение 28) (70 мг, 0,125 ммоль) растворяли в ацетонитриле (1 мл) и добавляли 4М HCl в диоксане (0,093 мл, 0,37 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. ЖХ/МС в этот момент времени показала очень низкое превращение в продукт, поэтому опять добавляли 4М HCl в диоксане (0,093 мл, 0,37 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 8 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, растворяли в смеси MeOH-DMSO (1:1; 2 мл) и очищали методом МУАП (метод А). Соответствующие фракции объединяли и концентрировали в потоке азота в продувочной установке с получением указанного в заголовке соединения (30 мг, 48%) в виде оранжевой смолы: ЖХ/МС (система A) RT = 0,90 мин, 98.5%, ЭРИ+ m/z 506 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CD3OD; 400 МГц) 7.49 (t, J=8 Гц, 1Н), 7.40-7.31 (m, 3Н), 7.13 (t, J=8 Гц, 1Н), 6.38 (m, 1Н), 3.61-3.46 (m, 3Н), 3.44-3.32 (m, 4Н), 3.28-3.21 (m, 2Н), 2.90-2.80 (m, 2Н), 2.74-2.50 (m, 5Н), 2.41-2.28 (m, 1Н), 2.25 (d, J=9 Гц, 6Н), 2.22-2.14 (m, 1Н), 1.901.66 (m, 4Н).
Пример 7. 3-(3-(3-Метил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляная кислота
трет-Бутил-3-(3-(3-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат (промежуточное соединение 32) (92 мг, 0,17 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (5 мл) и затем обрабатывали концентрированной HCl (0,029 мл, 0,35 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в DMSO (1 мл) и очищали масс-управляемой авто-препаративной ВЭЖХ (метод А). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в потоке газа азота в продувочном аппарате Radleys с получением указанного в заголовке соединения (18 мг, 22%): ЖХ/МС (система A) RT = 0,84 мин, ЭРИ+ m/z 474 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (CD3OD; 400 МГц) 9.15 (d, J=2,5 Гц, 1Н), 8.46 (t, J=1,5 Гц, 1Н), 8.40 (dd, J=8, 1,5 Гц, 1Н), 8.16 (t, J=8 Гц, 1Н), 7.93 (уширенный дублет, J=8 Гц, 1Н), 7.81 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 7.11 (d, J=2 Гц, 1Н), 7.09-7.06 (m, 1Н), 7.04 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 4.11-4.00 (m, 3Н), 3.72-3.57 (m, 3Н), 3.54-3.46 (m, 1Н), 3.45-3.32 (m, 4Н), 3.29-3.16 (m, 3Н), 3.15-3.09 (m, 1), 3.07 (s, 3Н), 2.87-2.77 (m, 1Н), 2.75-2.65 (m, 1Н), 2.58-2.50 (m, 2Н), 2.46-2.35 (m, 2Н), 2.19-2.09 (m, 1Н).
Пример 8. Соль гидрохлорид ^)-3-(3-(3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.
3-(3-(3,5-Диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляную кислоту (пример 1) (37,89 г, 78 ммоль) дополнительно очищали препаративной хиральной ВЭЖХ. Ее растворяли в этаноле (4 мл) и раствор разбавляли гептаном (6 мл). Раствор оставляли стоять в течение 30 мин и затем фильтровали. Фильтрат впрыскивали (1 г на впрыскивание) в колонку Chiralpak AD (20 мкм, 75 мм х 250 мм) и изократически элюировали смесью 30% этанола (содержащего 0,1% изопропиламина)-70% гептана (содержащего 0,1% изопропиламина). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением чистого соединения примера 1 (31,87 г) в виде не совсем белой пены. Различные другие партии очищали аналогичным образом.
Крупномасштабное получение соединения примера 8. Соль гидрохлорид (S)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.
Крупномасштабное получение соединения примера 8 представлено на схеме ниже
Промежуточное соединение 1. ^)-трет-Бутил-3-(йодметил)пирролидин-1-карбоксилат, стадии 1 и 2 (альтернативный способ).
В реактор под азотом загружали 2-метилтетрагидрофуран (145 кг), КДЧ-диизопропилэтиламин (16,6 кг) и ^)-трет-бутил-3-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилат (16,5 кг). Эту партию охлаждали до 0-10°С и добавляли метансульфонилхлорид (11,6 кг), затем добавляли 2-метилтетрагидрофуран (8 кг) и реакционную смесь перемешивали в течение примерно 5 ч. Добавляли дополнительное количество ме-тансульфонилхлорида (2,4 кг) с последующим добавлением 2-метилтетрагидрофурана (5,2 кг) и реакционную смесь перемешивали в течение примерно 4,5 ч. Реакционную смесь промывали последовательно 10% водным раствором гидроксида натрия (80 кг), водой (85 кг), 1 н. водным раствором хлорида аммония (101 кг), водой (100 кг) и 25% водным раствором NaCl (100 кг). Органическую фазу дистиллировали до 2-3 об. при пониженном давлении и разбавляли этанолом (78 кг). Смесь дистиллировали до 2-3 об. при пониженном давлении и разбавляли этанолом (72 кг). Смесь дистиллировали до 2-3 об. при пониженном давлении и разбавляли этанолом (77 кг). В смесь добавляли этанол (72 кг) и йодид калия (70 кг) и реакционную смесь нагревали до 70-80°С в течение 16 ч, после чего охлаждали до 40-50°С. Реакционную смесь нагревали до 70-80°С в течение 8 ч, после чего охлаждали до 40-50°С. Реакционную смесь нагревали до 70-80°С в течение 4 ч, затем охлаждали до 40-50°С. Смесь дистиллировали до 2-3 об. при пониженном давлении. В концентрат добавляли воду (180 кг) и этилацетат (80 кг) и органический слой промывали последовательно водой (90 кг) и 25% водным раствором хлорида натрия (98 кг). Оставшуюся органическую фазу дистиллировали до 1-3 об. при пониженном давлении и разбавляли ТГФ (76 кг). Смесь дистиллировали до 1-3 об. при пониженном давлении и разбавляли ТГФ (76 кг). Смесь дистиллировали до 1-3 об. при пониженном давлении и разбавляли ТГФ (33 кг). Смесь дистиллировали до 1-3 об. при пониженном давлении и разбавляли ТГФ (34 кг). Смесь разбавляли ТГФ (31 кг) с получением раствора продукта, который напрямую использовали на следующей стадии (89,6 кг, 22,4% мас./мас., согласно анализу, 80% теоретический).
ВЭЖХ RT = 15,15 мин, 86,1%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 3,5 мкм Agilent Zorbax SB-C8. Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 210 нм. Растворители:
А: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 95 5
15,0 5 95
18,0 5 9
18,0 95 5
Промежуточное соединение 2. (R)-трет-Бутил-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-карбоксилат, стадия 3.
Приготовление раствора 1. Раствор (R)-трет-бутил-3-(йодметил)пирролидин-1-карбоксилата (промежуточное соединение 1) (89,6 кг, 22,4% согласно анализу, 20,1 кг активные) дистиллировали при пониженном давлении до 1-2 об., разбавляли ТГФ (180 кг) и добавляли 2-метилнафтиридин (9,2 кг) и раствор охлаждали до 5-7°С в атмосфере азота.
Приготовление раствора 2. Раствор бис(триметилсилил)амида лития в ТГФ (59,2 кг) охлаждали до 5-7°С в атмосфере азота.
Реакцию проводили путем прокачивания растворов 1 и 2, приготовленных как указано выше, через статическую смесь и проточный реактор согласно условиям, указанным ниже, с выпускаемой реакционной смесью, которая гасится погружением в раствор воды (80 кг) и уксусной кислоты (42 кг).
Продолжительность обработки
Температура
Длина трубопровода
Объем трубопровода
Объем смесителя
Внутренний
диаметр
трубы
12 мин
5-7°С
48,05 м
564 мл
1-2 мл
0,386 см
Головной трубопрово д насоса
Материал трубопровода
Смеситель
Скорость потока Насоса 1
Скорость потока Насоса 2
Общее время реакции
Тефлон в силиконе
Тефлон
Статический смеситель*2 из
нержавею-
35,945 мл/мин
11,054 мл/мин
96 ч
Обработка.
Смесь обрабатывали 2н. раствором NaOH (347 кг) и экстрагировали МТВЕ (160 кг). МТВЕ-фазу обрабатывали 1н. раствором HCl (196 кг) при 0-10°С и органический слой отбрасывали. Кислотно-водный слой промывали МТВЕ дважды (142 кг и 146 кг) и затем доводили до рН до 5-6 добавлением 2н. водного раствора NaOH (80 кг). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (162 кг) и рН водной фазы доводили до значения 5-6 добавлением NaOH (14 кг). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (166 кг) и рН водной фазы доводили до значения 5-6 добавлением NaOH (10 кг). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (176 кг) и объединенные EtOAc-фазы промывали водой (210 кг) и 25% водным раствором хлорида натрия (210 кг). Органический раствор дистиллировали при пониженном давлении до 2-4 об. и разбавляли МТВЕ (80 кг). Смесь дистиллировали при пониженном давлении до 2-4 об. и разбавляли н-гептаном (80 кг). Смесь дистиллировали при пониженном давлении до 2-4 об. и разбавляли н-гептаном (80 кг). Смесь дистиллировали при пониженном давлении до 2-4 об. и разбавляли МТВЕ (16 кг). Смесь охлаждали до 5-10°С и обрабатывали н-гептаном (40 кг). Твердый продукт собирали фильтрованием (центрифуга), промывали н-гептаном (10 кг) и сушили при 50-60°С в вакууме с получением указанного в заголовке продукта в виде твердого вещества (4,3 кг).
Фильтрат обрабатывали EtOAc (203 кг) и дистиллировали до 100-150 л при пониженном давлении. Смесь разбавляли МТВЕ (80 кг) и дистиллировали до 80 л при пониженном давлении. Смесь разбавляли н-гептаном (60 кг) и дистиллировали до 60 л при пониженном давлении. Смесь разбавляли н-гептаном (23 кг) и дистиллировали до 60 л при пониженном давлении. Смесь разбавляли МТВЕ (16 кг) и дистиллировали до 80 л при пониженном давлении. Смесь разбавляли МТВЕ (8 кг) и дистиллировали до 60-80 л при пониженном давлении. Смесь разбавляли МТВЕ (8 кг) и охлаждали до 5-10°С в атмосфере азота. Смесь обрабатывали н-гептаном (21 кг) и перемешивали в течение примерно одного часа. Твердый продукт собирали фильтрованием (центрифуга), промывали н-гептаном (5 кг) и сушили при 50-60°С в вакууме с получением второй порции указанного в заголовке продукта в виде твердого вещества (3,65 кг).
Суммарный выход: 7,95 кг, 36% теоретический
ВЭЖХ 1-я порция: RT = 9,33 мин, 97,6%.
ВЭЖХ 2-я порция: RT = 9,27 мин, 99,1%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 3,5 мкм Agilent Zorbax SB-C8.
Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 210 нм. Растворители:
А: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 80 20
15,0 5 95
18.0 5 95
18.1 80 20
Хиральная ВЭЖХ совместная: RT = 28,95 мин, 98,8%. Колонка: 250 мм х 4,6 мм ВД, Chiralpak IC. Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 30°С.
Детектирование при длине волны: 218 нм. Растворители:
А: 0,1% об./об. раствор изобутиламина в н-гептане. В: 0,1% об./об. раствор изобутиламина в этаноле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 70 30
40 70 30
Промежуточное соединение 51. (Е)-Метил 4-ацетоксибут-2-еноат, стадия 10.
В реактор загружали ацетонитрил (140 кг), ацетат калия (10 кг), (Е)-метил-4-бромбут-2-еноат (18 кг, 1 мас.) и ацетонитрил (3 кг). Смесь перемешивали при 45-55°С в течение примерно 12,5 ч и охлаждали до 20-30°С. Смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали этилацетатом (14 кг). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении до 2-3 об. и разбавляли этилацетатом (90 кг). Раствор промывали 4 раза водой (2х91 кг, 2х92 кг) и 11% водным раствором хлорида натрия (99 кг). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении до 1-2 об. и добавляли DCM (80 кг). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении до 1-2 об. и добавляли DCM (80 кг). Органическую фазу концентрировали при пониженном давлении до 1-2 об. с получением раствора указанного в заголовке соединения в DCM (14,8 кг, 53,4% согласно анализу, 78% теоретический).
ВЭЖХ RT = 10,37 мин, 83,9%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 3,5 мкм Agilent Zorbax SB-C8. Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 210 нм. Растворители:
А: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 95 5
15,0 5 95
18.0 5 95
18.1 95 5
Промежуточное соединение 47. (R,Е)-Метил-4-(3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бут-2-еноат, стадии 4 и 5
Раствор HCl в МеОН получали путем пропускания газообразного HCl в метанол (40 кг) при температуре от -10 до 0°С до достижения концентрации 4,6 моль/л. В этот раствор добавляли раствор Промежуточного соединения 2 (8 кг, 1 мас.) в МеОН (24 кг) и нагревали до 35-45°С в течение примерно 4,5 ч в атмосфере азота. Реакционную смесь дистиллировали при пониженном давлении до 2-3 об. Добавляли МеОН (21 кг) и смесь концентрировали при пониженном давлении до 2-3 об. Добавляли МеОН (24 кг) и смесь концентрировали при пониженном давлении до 2-3 об. Добавляли DCM (64 кг) и смесь концентрировали при пониженном давлении до 2-3 об. Добавляли DCM (64 кг) и смесь концентрировали при пониженном давлении до 2-3 об. Добавляли DCM (64 кг), температуру смеси доводили до 10-20°С и смесь обрабатывали по каплям ^^диизопропилэтиламином (20 кг), поддерживая температуру <30°С, с получением раствора соли гидрохлорид ДО-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридина (промежуточное соединение 3). В другой реактор загружали DCM (61 кг), (Е)-метил-4-ацетоксибут-2-еноат (промежуточное соединение 51) (53% мас./мас., раствор в DCM, 8,8 кг, 4,7 кг активного) и хлорид 1,1'
[бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(П) (2,1 кг) и свободное пространство реактора над реакционной смесью продували азотом и смесь перемешивали при 20-30°С в течение 30 мин. В эту смесь добавляли раствор соли гидрохлорид ^)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридина (промежуточное соединение 3), полученной выше и смесь перемешивали при 20-30°С в течение примерно 22 ч. Реакционную смесь обрабатывали водой (85 кг) и фильтровали через диатомит (6 кг; предварительно смоченный DCM (22 кг)), промывая DCM (19 кг). Органическую фазу промывали водой (80 кг), охлаждали до 5-10°С и подкисляли 0,5н. HCl (204 кг). Водный слой промывали DCM (60 кг), разбавляли DCM (123 кг) и нейтрализовали 1н. раствором NaOH (78 кг). Водный слой экстрагировали DCM (59 кг). Объединенные DCM-фазы промывали 25% раствором NaCl (46 кг) и концентрировали при пониженном давлении до 1-2 об. Добавляли толуол (34 кг) и смесь концентрировали при пониженном давлении до 35-45 л с получением раствора указанного в заголовке соединения (42,15 кг, 13,4% согласно анализу, 76% теоретический выход). Здесь анализ не выполняли, так как вещество было нестабильным, поэтому его напрямую использовали на следующей стадии.
Промежуточное соединение 9. (3-(3,5-Диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бороновая кислота, стадии 11 и 12.
В реактор загружали гидрохлорид 3-бромфенилгидразина (6 кг), ацетилацетон (4031,7 г) и ледяную уксусную кислоту (18 л) и смесь нагревали до 90-100°С и перемешивали в течение 3-4 ч. Реакционную смесь концентрировали до масла, разбавляли водой (20 л), доводили до рН~7 добавлением 5,5М водного раствора NaOH (10 л) и экстрагировали МТВЕ (20 л). МТВЕ-слой промывали водой (15 л) и рассолом (10 л) и концентрировали с получением масла. К этому маслу добавляли изопропилборат (B(OiPr)3) (6058,6 г) и ТГФ (40 л) и смесь охлаждали до температуры от-75 до -60°С. Добавляли по каплям n-BuLi (2,5М, 12,9 л) при температуре от -70 до -60°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь нагревали до температуры от -10 до 0°С и добавляли воду (24 л), затем концентрированную HCl (4 л) и смесь перемешивали в течение 10 мин и разделяли. Водную фазу доводили до рН 5-6 1н. раствором NaOH и экстрагировали EtOAc (2х10 л). Объединенные органические фазы промывали раствором NaHCO3 и рассолом и концентрировали с получением масла. Это масло разбавляли гептанами (20 л) и охлаждали до 0-10°С с получением белого твердого вещества, которое выделяли фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (4530 г, 71% теоретический выход).
ВЭЖХ RT = 6,53 мин, 98,7%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 3,5 мкм Agilent Zorbax Bonus RP. Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 220 нм. Растворители:
А: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,05%) об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 90 10
15,0 5 95
18.0 5 95
18.1 90 10
Промежуточное соединение 48. Метил-4-((R)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бутаноат, стадия 6.
В реактор загружали толуол (25 кг), (R,Е)-метил-4-(3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бут-2-еноат (промежуточное соединение 47 в толуоле (42,15 кг, 13,4% согласно анализу, 5,6 кг (1 масс.) активного), 17% мас./мас., водный раствор KOH (10 кг), (3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бороновую кислоту (промежуточное соединение 9) (8,4 кг), хлор-(1,5-циклооктадиен)родий(!) димер (0,433 кг) и ^)-(+)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,Г-бинафтил (1,3 кг). Реактор продували азотом, нагревали до 75-85°С и смесь перемешивали в атмосфере азота в течение примерно 5 ч. Смесь дистиллировали при пониженном давлении до 1-3 об. и охлаждали до 20-30°С. Смесь обрабатывали DCM (166 кг) и водой (57 кг), перемешивали и водную фазу отбрасывали. Органическую фазу подкисляли 0,5н. водным раствором HCl (141 кг), разделяли и водную фазу промывали дважды DCM (45 и 43 кг). Этилацетат (57 кг) добавляли в водную фазу и смесь нейтрализовали до рН 7-8 1н. водным раствором NaOH (56 кг). Органический слой собирали и водный слой экстрагировали дважды этилацетатом (2х28 кг). Объединенные экстракты EtOAc промывали 25% водным раствором NaCl (32 кг) и дистиллировали при пониженном давлении до 1-2 об. Смесь разбавляли МеОН (25 кг) и дистиллировали при пониженном давлении до 1-2 об. Остаток разбавляли МеОН (29 кг) с получением раствора указанного в заголовке соединения в МеОН (~9:1 dr, 49,4 кг, 9,0% согласно анализу, 51% теоретический выход).
ВЭЖХ RT = 11,68 мин, 90,9%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 3,5 мкм Agilent Zorbax SB-C8.
Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 210 нм. Растворители:
А: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,05% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В% 0,0
95 5 15,0 30
70 18,0 5 95
20.0 5 95
20.1 95 5
Хиральная ВЭЖХ RT = 10,27 мин, 90,0%.
Колонка: 250 мм х 4,6 мм ВД, 5 мкм CHIRALPAK AD-H. Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 248 нм. Растворители:
А: 0,1% об./об. раствор диэтиламина в н-гексане.
В: 0,1% об./об. раствор диэтиламина в этаноле
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 80 20
40 80 20
Промежуточное соединение 49. Метил-3-(3-(3,5-диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат, стадия 7.
В сосуд для гидрирования добавляли раствор метил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)-3-(3 -(3,5-диметил-1 Н-пиразол-1 -ил)фенил)бутаноата (промежуточное соединение 48) в МеОН (49,4 кг, 9,0% согласно анализу, 4,4 кг (1 мас.) активного) и Rh/C (1,1 кг) и сосуд продували азотом. Реакционную смесь помещали в атмосферу водорода (0,3 МПа) и перемешивали при 35-45°С в течение примерно 26 ч. Реакционную атмосферу заменяли азотом и охлаждали до 20-30°С. Реакционную смесь фильтровали и твердый остаток промывали МеОН (3х13 кг). Объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении до 100-200 л, фильтровали, промывая МеОН (20 кг) и дополнительно концентрировали с получением раствора указанного в заголовке соединения в метаноле
(27,2 кг).
ВЭЖХ RT = 23,63 мин, 85,%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 2,5 мкм Waters XSELECT HSS C18, Скорость потока: 0,6 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 245 нм. Растворители:
А: 0,2% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде. В: 0,2% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
40,1 90 10
Промежуточное соединение 50. 3-(3-(3,5-Диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляная кислота, стадия 8.
Раствор метил-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноата (промежуточное соединение 50) в метаноле (27,2 кг, 4,4 кг (1 мас.) активного), полученного в стадии 7, дистиллировали до 1-2 об. при пониженном давлении и разбавляли МеОН (26 кг). В этот раствор добавляли функционализированный тиолом диоксид кремния (0,5 кг) и рН смеси доводили до значения ~1 добавлением HCl/MeOH (3,5 М, 8 кг). Смесь перемешивали при 60-70°С в течение 10 ч, охлаждали до 20-30°С и фильтровали. Осадок на фильтре промывали метанолом (4 кг, затем 2х5 кг). Фильтрат концентрировали до ~6-8 об., разбавляли МеОН (4 кг) и загружали функционализированный тиолом диоксид кремния (0,5 кг). После доведения рН до ~1 добавлением HCl/MeOH (3,5М, 2 кг) раствор перемешивали при 60-70°С в течение 10 ч. Смесь охлаждали до 20-30°С,
фильтровали и осадок на фильтре промывали метанолом (5 кг, затем 2х4 кг) и фильтрат концентрировали до ~6-8 об. при <45°С при пониженном давлении. Остаток разбавляли МеОН (13 кг) и дополнительно концентрировали до 1-2 об. при <45°С при пониженном давлении. Остаток разбавляли МеОН (13 кг) и добавляли 2М водного раствора NaOH (22 кг) с получением смеси с рН> 14, которую перемешивали при 30-40°С в течение 11 ч, затем разбавляли МеОН (4 кг) и концентрировали до 4-5 об. при <45°С при пониженном давлении. рН доводили до 8-9 добавлением HCl (3М водн., 6 кг) и смесь обрабатывали DCM (20 кг) и рН водной фазы доводили до рН 8-9 добавлением NaOH (2М водн., 5,7 кг). Водную фазу экстрагировали четыре раза DCM (2х30 кг, 31 кг, 30 кг). Объединенную органическую фазу промывали смесью воды (10 кг) и HCl (3М водн., 6 кг) и водную фазу экстрагировали дважды DCM (30 кг, 31 кг). Объединенные органические фазы концентрировали до 1-2 об. при <40°С при пониженном давлении и разбавляли DCM (10 кг) с получением раствора указанного в заголовке соединения в DCM (16,8 кг, 22,4% согласно анализу, 87% теоретический выход за две стадии). ВЭЖХ RT = 20,69 мин, 87,8%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 2,5 мкм Waters XSELECT HSS C18. Скорость потока: = 0,6 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 245 нм. Растворители:
А: 0,2% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,2% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,0 90 10
25,0 50 50
35,0 5 95
40,0 5 95
40,0 90 10
Хиральное разделение.
Раствор 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты (промежуточное соединение 50) в DCM со стадии 8 концентрировали при пониженном давлении и добавляли МеОН с получением 100 мг/мл раствора, который фильтровали. Раствор использовали при сверхкритической флюидной хроматографии (SFC) для хираль-ного разделения. Параметры разделения методом SFC были следующими:
Препаративная колонка
CHIRALPAK OJ, 250*50 мм (ВД)
Подвижная фаза А
сверхкритический СОг
Подвижная фаза В
МеОН (0,1%DEA, об./об.)
Соотношение А: В
70:30
Скорость потока
250 г/мин
Детектирование
220 нм
Колонка
40°С
Обратное давление
100,0 бар (100 кПа)
Впрыскиваемый объем
-0,5 г
Интервал впрыскиваний
4,5 мин
Целевой продукт
Второй главный пик
Фракции, содержащие целевой изомер, концентрировали при 30°С при пониженном давлении с получением (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты (пример 1) в виде раствора в смеси МеОН/диэтиламин (12,2 кг, 22,9% согласно анализу, 74% теоретический выход).
Пример 9. Соль гидрохлорид (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты, стадия 9.
Раствор (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты (пример 1) в метаноле (12,1 кг, 22,9% согласно анализу, 2,8 кг (1 мас.) активного) разбавляли DCM (3 кг) и концентрировали до 1-3 об. при <35°С при пониженном давлении. Полученный раствор разбавляли DCM (36 кг) и дважды промывали 33% водным раствором хлорида аммония (14 кг х 2) до содержания остаточного диэтиламина <0,5%. Органическую фазу разбавляли DCM (4 кг), сушили над безводным Na2SO4 (2,8 кг), фильтровали и осадок промы
вали DCM (5 кг х 3). Объединенные фильтраты концентрировали до 1-3 об. при <55°С при пониженном давлении. Загружали ацетонитрил (6 кг) и смесь дистиллировали до 1-3 об. при <45°С при пониженном давлении для удаления остаточного метанола. Остаток разбавляли ацетонитрилом (20 кг) и затем загружали водный раствор HCl (3М, 1,9 кг). После перемешивали в течение 40 мин при 35°С смесь фильтровали в сосуд для кристаллизации через фильтр-картридж, промывая MeCN (3 кг). Раствор дистиллировали до ~4 об. при <45°С при пониженном давлении с получением раствора указанного в заголовке соединения в ацетонитриле. Добавляли четыре порции ацетонитрила (8 кг х 2, 14 кг, 19 кг) и дистиллировали до 3-5 об. при <45°С при пониженном давлении для удаления остаточной воды. Загружали ацетонитрил (17 кг) для разбавления неочищенного продукта и полученный раствор перемешивали при 50-55°С в течение 16 ч в атмосфере азота. Партию охлаждали до 0-5°С в течение 5 ч и перемешивали при 0-5°С в течение ~4 ч в атмосфере азота. Партию нагревали до 50-55°С и перемешивали при 50-55°С в течение ~4 ч в атмосфере азота. Партию охлаждали до -10 - -8°С в течение 6 ч и перемешивали при -10 - -8°С в течение ~23 ч в атмосфере азота. После подтверждения формы методами ДРЛП и ДСК суспензию фильтровали и осадок на фильтре промывали ацетонитрилом (6 кг) в атмосфере азота. Влажное твердое вещество сушили при 20-35°С в течение 20 ч при пониженном давлении, затем температуру повышали до 45-55°С еще на 50 ч. После просеивания вещества его сушили при 45-55°С в течение еще 20 ч с получением указанного в заголовке соединения (1,966 кг, 66% теоретический выход). Тпл: 197-202°С.
1Н ЯМР (DMSO-d6; 500 МГц) 5 млн-1 13-11 (уширенный синглет, 1Н), 7.43-7.51 (m, 2Н), 7.35-7.41 (m, 2Н), 7.18 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 7.02 (br. s., 1Н), 6.35 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.07 (s, 1Н), 3.54-3.64 (m, 1Н), 3.47 (dd, J=12,8, 7,2 Гц, 1Н), 3.25-3.37 (m, 4Н), 3.18 (уширенный синглет, 1Н), 3.05-3.13 (m, 1Н), 3.00 (dd, J=16,3, 5,6 Гц, 1Н), 2.86 (t, J=9,5 Гц, 1Н), 2.56-2.68 (m, 3Н), 2.41-2.49 (m, 2Н), 2.30 (s, 3Н), 2.14-2.27 (m, 1Н), 2.18 (s, 3Н), 1.98-2.10 (m, 1Н), 1.72-1.81 (m, 2Н), 1.61-1.72 (m, 2Н), 1.56 (dq, J=12,7, 8,2 Гц, 1Н).
ВЭЖХ RT = 20,56 мин, 99,4%.
Колонка: 150 мм х 4,6 мм ВД, 2,5 мкм Waters XSELECT HSS C18. Скорость потока: 0,6 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 245 нм. Растворители:
А: 0,2% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде.
В: 0,2%) об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0 90 10
25 50 50
35 5 95
40 5 95
40,1 90 10
52 Стоп Хиральная ВЭЖХ RT = 34,8 мин, 100% согласно анализу. Колонка: 250 мм х 4,6 мм ВД, 5 мкм CHIRALPAK AS-H. Скорость потока: 1,0 мл/мин. Температура: 40°С.
Детектирование при длине волны: 319 нм. Растворители:
А: 0,2% об./об. раствор триэтиламина в н-гептане. В: 0,2%) об./об. раствор триэтиламина в этаноле.
Градиент: Время (мин) А% В%
0,01 92 8
100 Стоп Определение абсолютной конфигурации соединения примера 1. Восстановление соединения примера 1 и его диастереоизомера.
Промежуточное соединение 33, изомер 1. 3-(3-(3,5-Диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутан-1-ол.
Суспензию гидрохлорида 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты (соединение примера 8, которое представляет собой соль гидрохлорид соединения примера 1) (238 мг, 0,454 ммоль) в ТГФ (5 мл) обрабатывали при 20°С раствором LiAlH4 в эфире (1М, 1,5 мл) и смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 1,5 ч. ЖХ/МС показала завершение реакции. Реакционную смесь гасили добавлением 2М раствора NaOH (0,8 мл) и этилацетата. Смесь расслаивали и органический раствор промывали раствором NaHCO3, рассолом, сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в сме
си 1:1 MeOH-DMSO (2 мл) и очищали методом МУАП (метод А), собирая фракции с RT=6,6-9,4 мин. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (157 мг, 73%) в виде бесцветного масла: ЯМР 5 (DMSO-d6, 600 МГц) 5 7.40-7.36 (m, 1Н), 7.28-7.26 (m, 1Н), 7.28-7.25 (m, 1Н), 7.20 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 6.99 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.22 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 6.20 (уширенный синглет, 1Н), 6.05 (s, 1Н), 3.32-3.28 (m, 1Н), 3.25-3.21 (m, 1Н), 3.24-3.18 (m, 2Н), 2.97-2.90 (m, 1Н), 2.71 (t, J=8,2 Гц, 1Н), 2.64 (dd, J=11,8, 7,8 Гц, 1Н), 2.59 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 2.57-2.53 (m, 1Н), 2.54-2.50 (m, 1Н), 2.392.34 (m, 2Н), 2.37-2.32 (m, 1Н), 2.26 (s, 3Н), 2.17 (s, 3Н), 2.07-2.01 (m, 1Н), 1.94 (dd, J=13,1, 7,4 Гц, 1Н), 1.97-1.88 (m, 1Н), 1.87-1.79 (m, 1Н), 1.74 (dt, J=11,5, 6,0 Гц, 2Н), 1.67-1.59 (m, 1Н), 1.60-1.53 (m, 2Н), 1.311.24 (m, 1Н); [a]D 20 = + 17 (c=1,56 в CHCl3).
Промежуточное соединение 34. 4-((R)-3-(2-(1,8-Нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)-3-(3-(3,5-диметил-1 Н-пиразол-1 -ил)фенил)бутан-1 -ол.
Раствор трет-бутил-4-(^)-3-(2-( 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бутаноата (промежуточное соединение 13, изомер 2) (155 мг, 0,287 ммоль) в 2-ме-ТГФ (3 мл) охлаждали на льду до 5°С и затем осторожно обрабатывали раствором алюмогидрида лития в ТГФ (1М, 1,5 мл). Смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 2 ч и ЖХ/МС показала завершение реакции. Реакционную смесь гасили добавлением 2М раствора NaOH (0,3 мл) и смесь перемешивали в течение 0,5 ч. Добавляли этилацетат и твердый сульфат натрия и смесь перемешивали в течение 5 мин, фильтровали, промывали твердое вещество этилацетатом и упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в DMSO-MeOH (1:1, 2 мл) и очищали методом МУАП (метод А), собирая фракцию с RT=5,09 мин. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, остаток растворяли в МеОН и повторно упаривали при пониженном давлении с получением двух фракций с примесями. Эти две фракции объединяли (31 мг) и повторно очищали методом МУАП 25 мин (высокий рН), собирая фракцию с RT=6,41 мин, m/z 470, упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (16,4 мг, 12%) в виде бесцветного масла: ЖХ/МС (метод A) RT=0,94 мин, 91%, ЭРИ+ m/z 470 (М+Н)+; [a]D 20 =-14 (с=1,64 в CHCl3).
Промежуточное соединение 33, изомер 2. 3-(3-(3,5-Диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил )бутан-1-ол.
Раствор 4-((R)-3 -(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)-3 -(3-(3,5-диметил- 1Н-пиразол-1 -ил)фенил)бутан-1-ола (промежуточное соединение 34) (8 мг, 0,02 ммоль) в этаноле (5 мл) гидрировали над влажным катализатором 5% Rh/C (5 мг) в течение 2,5 суток. Реакционную смесь фильтровали через целит и катализатор промывали этанолом. Фильтрат и промывочные растворы упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (7 мг, 87%) в виде бесцветного масла: ЯМР 5 (DMSO-d6, 600 МГц): 7.37 (t, J=7,8 Гц, 1Н), 7.26-7.28 (m, 1Н), 7.24-7.27 (m, 1Н), 7.20 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 6.99 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.21 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 6.19 (уширенный синглет, 1Н), 6.04 (s, 1Н), 4.61 (br. s., 1Н), 3.27-3.30 (m, 1Н), 3.21-3.23 (m, 2Н), 3.19-3.25 (m, 1Н), 2.90-2.98 (m, 1Н), 2.68 (t, J=8,1 Гц, 1Н), 2.572.61 (m, 2Н), 2.56-2.61 (m, 2Н), 2.51-2.56 (m, 1Н), 2.35-2.41 (m, 1 2.32-2.39 (m, 2Н), 2.26 (s, 3Н), 2.17 (s, 3Н), 2.03 (dd, J=8,5, 7,1 Гц, 1Н), 1.88-1.99 (H),m, 2Н), 1.78-1.87 (m, 1Н), 1.73 (квинтет, J=5,9 Гц, 2Н), 1.601.66 (m, 1Н), 1.51-1.58 (m, 2Н), 1.24-1.30 (m, 1Н); [a]D 20 = -19 (с=0,689 в CHCl3).
Получение промежуточного соединения 39, изомера 1 и изомера 2.
Промежуточное соединение 35. трет-Бутил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетат
Смесь (3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)бороновой кислоты (промежуточное соединение 9) (10,8 г, 50 ммоль), трет-бутил-2-бромацетата (14,6 г, 75 ммоль), три-орто-толилфосфина (1,5 г, 4,93 ммоль), Pd(OAc)2 (700 мг, 3,12 ммоль), порошкообразного трикалийфосфата (42,5 г, 200 ммоль) и тетра-гидрофурана (100 мл) дегазировали циклами атмосфера азота/вакуум и нагревали при температуре дефлегмации в течение 16 ч. Анализ методом ЖХ/МС показал ~70%-ную конверсию. Снова добавляли ацетат палладия (300 мг) и трет-бутил-2-бромацетат (3 г) и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 6 ч. ЖХ/МС показала отсутствие исходного вещества и присутствие продукта. Смесь распределяли между водой (200 мл) и EtOAc (2 х 200 мл) и сушили (MgSO4). Органическую фазу упаривали и остаток очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (330 г), элюируя смесью 0-40% этилацетата-циклогексан (15 КО) с получением указанного в заголовке соединения (10,4 г, 72%) в виде желтого масла: ЖХ/МС (метод С) RT=1,18 мин, ЭРИ+m/z 287(М+Н)+.
Промежуточное соединение 36. 2-(3-(3,5-Диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетат
Раствор трет-бутил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетата (промежуточное соединение 35) (10 г, 28 ммоль) в дихлорметане (10 мл) медленно обрабатывали TFA (20 мл, 260 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Анализ методом ЖХ/МС показал завершение реакции. Раствор упаривали при пониженном давлении и остаток растворяли в 2н. NaOH (100 мл) и промывали диэтиловым эфиром (2 х 100 мл). Водный фазу подкисляли 2н. раствором HCl и охлажденную суспензию экстрагировали EtOAc (2 х 150 мл). Органический раствор сушили (MgSO4) и упаривали. Остаток (~7 г) растирали с диэтиловым эфиром (40 мл) и собирали фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (5,2 г, 81%) в виде твердого вещества бежевого цвета: ЖХ/МС (метод С) RT=0,76 мин, 100%, ЭРИ+ m/z 231 (М+Н)+; ЯМР 5 (CDCl3, 400 МГц) 7.51-7.44 (1Н, m), 7.41-7.30 (3Н, т), 6.08 (1Н, s), 3.70 (2Н, s), 2.29 (3Н, s), 2.26 (3Н, s).
Промежуточное соединение 37. Метил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетат
Раствор 2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)уксусной кислоты (промежуточное соединение 36) (460 мг, 2 ммоль) растворяли в МеОН (70 мл) и обрабатывали раствором хлористого водорода в цик-лопентилметиловом эфире (3М, 10 мл) и смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение 2 ч.
Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток распределяли между этилацетатом и би-
карбонатом натрия. Органическую фазу промывали рассолом, сушили над MgSO4 и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (20 г), элюи-руя с градиентом 0-25% этилацетата-циклогексан за 20 мин. Соответствующие фракции, содержащие основной компонент, объединяли и упаривали с получением указанного в заголовке соединения (251 мг, 51%) в виде бесцветного масла: ЯМР 5 (CDCl3) 7.43-7.37 (2Н, m), 7.33 (1Н, уширенный дублет, J=8 Гц), 7.29-7.24 (1Н, m, скрытый CHCb), 5.99 (1Н, s), 3.70 (3Н, s), 3.68 (2Н, s), 2.31 (3Н, s) и 2.30 (3Н, s).
Промежуточное соединение 38. 4-трет-Бутил-1-метил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)сукцинат
Раствор гексаметилдисилазида лития в ТГФ (1М, 1,85 мл) охлаждали до -78°С и обрабатывали раствором метил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетата (промежуточное соединение 37) (453 мг, 1,85 ммоль) в ТГФ (2 мл). Через 5 мин реакционную смесь обрабатывали трет-бутил-2-бромацетатом (0,82 мл, 5,6 ммоль) в ТГФ (2 мл) и после 30 мин при -78°С смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 2,5 ч и затем гасили водным раствором HCl (0,2М, 10 мл) и экстрагировали этилацетатом. Органический раствор промывали водным раствором NaHCO3, 0,2М HCl, рассолом, сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (50 г), элюируя смесью 0-25% EtOAc-циклогексан. Фракции, содержащие главный пик, объединяли и упаривали при пониженном давлении с получением бесцветного масла (780 мг), которое дополнительно очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (70 г), элюируя смесью 0-50% ТВМЕ-циклогексан, с получением указанного в заголовке соединения (479 мг, 72%) в виде бесцветного масла: ЯМР 5 (CDCl3) 7.43-7.33 (3Н, m), 7.29-7.25 (1Н, m), 6.00 (1Н, s), 4.09 (1Н, dd, J=10,0, 5,5 Гц), 3.69 (3Н, s), 3.13 (1Н, dd, J=16,7, 10,0 Гц), 2.64 (1Н, dd, J=16,7, 5,5 Гц), 2.30 (6Н, s), 1.42 (9Н, s). Два энантиомера этого соединения разделяли препаративной хиральной ВЭЖХ на колонке Chiralcel OD-H (30 мм х 250 мм), элюируя смесью 5% IPA-гексан, скорость потока = 20 мл/мин, с получением изомера 1 (267 мг) в виде бесцветного масла: [a]D 22 + 81 (с=1,028 в CHCl3); аналитическая хи-ральная ВЭЖХ на колонке Chiralcel OJ-H (4,6 мм ВД х 250 мм) RT=7,75 мин, 99,3% (содержит другой энантиомер, RT=9,35 мин, 0,7%) и изомера 2 (230 мг) в виде бесцветного масла: [a]D 22-82 (с=1,016 в CHCl3); аналитическая хиральная ВЭЖХ RT=9,35 мин, 98,6% (содержит другой энантиомер, RT=7,75
мин, 1,4%).
Промежуточное соединение 39, изомер 1. 4-(трет-Бутокси)-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил )фе
нил )-4-оксомасляная кислота
Раствор изомера 1 4-трет-бутил-1-метил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)сукцината (промежуточное соединение 38, изомер 1) (257 мг, 0,72 ммоль) растворяли в ТГФ (2 мл) и охлаждали до 0°С (охлаждение льдом), после чего добавляли 30%-ную перекись водорода (0,366 мл, 3,6 ммоль) и 1М раствор LiOH в воде (1М, 2,15 мл). После выдерживания в холодильнике в течение ночи реакционную смесь обрабатывали водным раствором метабисульфита натрия (1М, 3 мл) и затем подкисляли до рН 1 2М раствором HCl. Реакционную смесь экстрагировали три раза этилацетатом и органический раствор сушили над MgSO4. Раствор упаривали при пониженном давлении и остаточную белую пену очищали методом МУАП (метод С). Соответствующие фракции упаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (140 мг, 57%) в виде бесцветного масла: 1Н ЯМР 5 (400 МГц; CDCl3) 7.38-7.32 (2Н, m), 7.30-7.24 (2Н, m), 5.98 (1Н, s), 4.05 (1Н, dd, J=9,5, 6 Гц), 3.09 (1Н, dd, J=16,5, 9,5 Гц), 2.63 (1Н, dd, J=16,5, 6 Гц), 2.31 (3Н, s), 2.24 (3Н, s), 1.38 (9Н, s). [a]D 20 + 42 (с=1,037 в CHCb).
Промежуточное соединение 39, изомер 2. 4-(трет-Бутокси)-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксомасляная кислота
Раствор изомера 2 4-трет-бутил-1-метил-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)сукцината (промежуточное соединение 38, изомер 2) (220 мг, 0,61 ммоль) растворяли в 2-Ме-ТГФ (5 мл) и охлаждали до 0°С (охлаждение льдом), после чего добавляли 30%-ную перекись водорода (0,313 мл, 3,1 ммоль) и 0,2М раствор LiOH в воде (0,2М, 9,21 мл, 1,84 ммоль). ЖХ/МС показала, что реакция дошла до завершения через 6 суток. Реакционную смесь обрабатывали раствором тиосульфата натрия (1М, 3 мл) и раствором бикарбоната натрия (0,5М, 8 мл) и смесь (рН 8) перемешивали в течение 10 мин и затем подкисляли до рН 1 6М раствором HCl. Реакционную смесь экстрагировали три раза этилацетатом и органический раствор сушили над MgSO4. Упаривание при пониженном давлении дало белое твердое вещество, которое очищали методом МУАП (метод С). Упаривание соответствующих фракций при пониженном давлении дало указанное в заголовке соединение (105 мг, 50%) в виде бесцветного масла: Н ЯМР 5 (400 МГц; CDCb) 7.38-7.32 (2Н, m), 7.30-7.22 (2Н, m), 5.99 (ш, s), 4.05 (1Н, dd, J=9,5, 6 Гц), 3.09 (1Н, dd, J=16,5, 9,5 Гц), 2.63 (1Н, dd, J=16,5, 6 Гц), 2.31 (3Н, s), 2.24 (3Н, s), 1.38 (9Н, s). [a]D20-41 (с=1,482 в CHCl3).
Определение абсолютной конфигурации ^)-изомера 1 промежуточного соединения 39 (метод Эванса).
Промежуточное соединение 40. ^)-(+)-4-Бензил-3-(2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетил)оксазолидин-2-он
2-(3-(3,5-Диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)уксусную кислоту (промежуточное соединение 36) (2,3 г, 9,99 ммоль) растворяли в ТГФ (70 мл) и обрабатывали при помощи DIPEA (2,268 мл, 12,99 ммоль). К перемешиваемому раствору в атмосфере азота добавляли шприцем пивалоилхлорид (1,229 мл, 9,99 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 45 мин и затем повторно охлаждали до -78°С с получением белой суспензии.
Тем временем, в делительном сосуде ^)-4-бензилоксазолидин-2-он (3,19 г, 17,98 ммоль) растворяли в ТГФ (50 мл) и охлаждали до -78°С при перемешивании. К этому раствору добавляли 1,6М n-BuLi в гексанах (11,24 мл, 17,98 ммоль) и смесь перемешивали при -78°С в течение 0,5 ч. Металлированный оксазолидинон добавляли к перемешиваемому ангидриду, используя канюлю. Полученную суспензию перемешивали в течение 1 ч при -78°С и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры на протяжении выходных дней. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония
(40 мл), разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали рассолом, сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаточное масло растворяли в DCM и очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (100 г), элюируя с градиентом 0-50% этилацетата в циклогексане в течение 40 мин. Фракции, содержащие основной компонент, объединяли и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (2,1 г, 54%) в виде бесцветного масла: 1Н ЯМР 5 (600 МГц, DMSO-d6) 7.48-7.44 (m, 1Н), 7.43 (s, 1Н), 7.41-7.38 (m, 1Н), 7.29 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7.28-7.25(m, 2Н), 7.25-7.21 (m, 1Н), 7.17-7.13 (m, 2Н), 6.07 (s, 1Н), 4.69 (tt, J=7,8, 3,0 Гц, 1Н), 4.36 (t, J=8,5 Гц, 1Н), 4.36-4.32 (m, 1Н), 4.26-4.20 (m, 1Н), 4.23-4.18 (m, 1Н), 3.03-2.97 (m, 1Н), 2.952.90 (m, 1Н), 2.29 (s, 3Н), 2.18 (s, 3Н); [a]D 20 = + 49 (с=1,64 в CHCl3).
Промежуточное соединение 41 ^)-трет-бутил-4-((5)-4-бензил-2-оксооксазолидин-3-ил)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксобутаноат и промежуточное соединение 42 ^)-трет-бутил-4-(^)-4-бензил-2-оксооксазолидин-3-ил)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксобутаноат
Раствор гексаметилдисилазида лития в ТГФ (1М, 5,7 мл) добавляли к раствору ^)-4-бензил-3-(2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)ацетил)-оксазолидин-2-она (промежуточное соединение 40) (2,0 г, 5,14 ммоль) в ТГФ (10 мл) при -78°С и смесь перемешивали при -78°С в течение 60 мин, после чего добавляли трет-бутил-2-бромацетат (2,3 мл, 15 ммоль). Смесь перемешивали при -78°С в течение 3 ч и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 суток, затем гасили добавлением насыщенного водного раствора хлорида аммония. Смесь экстрагировали этилацетатом, органическую фазу отделяли, промывали рассолом (дважды), сушили над MgSO4 и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (100 г), элюи-руя смесью 0-50% этилацетата-циклогексан в течение 1 ч с получением продукта (1,2 г, 46%) в виде желтого масла, который представлял собой смесь двух диастереоизомеров: ЖХ/МС (метод С) RT=1,32 мин, 11%, ЭРИ+ m/z 504 и RT=1,36 мин, 53%, ЭРИ+ m/z 504 (М+Н)+. Порцию диастереоизомерной смеси ожидаемого продукта (200 мг) дополнительно очищали методом МУАП (метод С), собирая основную фракцию при RT=9,56 мин с получением ^)-трет-бутил-4-(^)-4-бензил-2-оксооксазолидин-3-ил)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксобутаноата (промежуточное соединение 41) (69 мг) в виде бесцветного масла: ЖХ/МС (метод С) RT=1,36 мин, ЭРИ+ m/z 504 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (400 МГц, CDCl3) 7.47 (1Н, уширенный синглет), 7.43-7.28 (8Н, m), 6.00 (1Н, s), 5.56 (1Н, dd, J=11,4 Гц), 4.67-4.59 (1Н, m), 4.15-4.06 (2Н, m), 3.42-3.30 (2Н, m), 2.83 (1Н, dd, J=13, 10 Гц), 2.67 (1Н, dd, J=17,4 Гц), 2.32 (3Н, s), 2.30 (3Н, s), 1.46 (9Н, s); = [a]D20 = +102 (с=1,20 в CHCl3). Неосновную фракцию после очистки методом МУ-АП при RT=9,2 мин упаривали в потоке азоте в продувочной установке с получением ^)-трет-бутил-4-(^)-4-бензил-2-оксооксазолидин-3 -ил)-3 -(3 -(3,5-диметил-1Н-пиразол-1 -ил)фенил)-4-оксобутаноата (промежуточное соединение 42) (7 мг): ЖХ/МС (метод С) RT=1,32 мин, ЭРИ+ m/z 504 (М+Н)+; 1Н ЯМР 5 (400 МГц, CDCl3) 7.51 (1Н, уширенный синглет), 7.46-7.38 (3Н, m), 7.21-7.15 (3Н, m), 6.99-6.94 (2Н, m), 5.97 (1Н, s), 5.46(1 Н, dd, J=11,4 Гц), 4.81-4.73 (1Н, m), 4.24 (1Н, t, J=8,5 Гц), 4.10 (ш, dd, J=9,3 Гц), 3.33 (1Н, dd, J=17, 11 Гц), 3.08 (1Н, dd, J=13,5, 3 Гц), 2.66-2.59 (2Н, m), 2.29 (3Н, s), 2.28 (3Н, s), 1.43 (9Н, s);
[a]D20 =-37 (с=0,71 в CHCl3).
Промежуточное соединение 39, изомер 1. ^)-(+)-4-(трет-Бутокси)-2-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксомасляная кислота
Раствор ^)-трет-бутил-4-(^)-4-бензил-2-оксооксазолидин-3 -ил)-3 -(3 -(3,5-диметил-1Н-пиразол-1 -ил)фенил)-4-оксобутаноата (промежуточное соединение 41) (69 мг, 0,14 ммоль) в ТГФ (1 мл) обрабатывали 30%-ной перекисью водорода (8,8М, 0,078 мл, 0,68 ммоль) при 4°С, затем добавляли водный раствор гидроксида лития (1М, 0,411 мл) и смесь перемешивали на ледяной бане в течение 2 ч. Реакционную смесь выдерживали в холодильнике в течение ночи и затем гасили добавлением водного раствора метабисульфита натрия, затем через 10 мин добавлением 2М HCl. Через 2 ч смесь экстрагировали этил-ацетатом и водный слой снова экстрагировали EtOAc. Объединенные органические растворы промывали рассолом, сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в DMSO (1 мл) и
очищали методом МУАП (метод С), собирая пик с RT=8,3-9,9 мин, m/z 345. Соответствующие фракции упаривали в потоке азота в продувочной установке с получением указанного в заголовке соединения (22 мг, 47%) в виде бесцветного масла: 1Н ЯМР 5 (CDCl3) 7.36-7.31 (2Н, m), 7.28-7.23 (2Н, m), 5.96 (1Н, s), 4.04 (1Н, dd, J=9,5, 6 Гц), 3.08 (1Н, dd, J=16,5, 9,5 Гц), 2.62 (1Н, dd, J=16,5, 6 Гц), 2.29 (3Н, s), 2.23 (3Н, s), 1.37 (9Н, s); [a]D20 = + 65 (с=2,08 в CHCl3).
Синтез промежуточного соединения 46 и изомера 1 промежуточного соединения 33 и демонстрация того, что они представляют собой один и тот же изомер.
Промежуточное соединение 43. (8)-(+)-трет-Бутил-4-(^)-3-(2-(1,8-нафтиридин-2-
ил)этил)пирролидин-1 -ил)-3 -(3 -(3,5 -диметил-1Н-пиразол-1 -ил)фенил)-4-оксобутаноат
Раствор 4-трет-бутил-1-метил-2-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)сукцината (промежуточное соединение 39, изомер 1) (107 мг, 0,31 ммоль) в DCM (1 мл) обрабатывали гидрохлоридом N-[3-(диметиламино)гфопил]-№-этилкарбодиимида (77 мг, 0,40 ммоль) и гидратом N-гидроксибензтриазола (62 мг, 0,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, после чего добавляли раствор (R)-2-(2-(пирролидин-3-ил)этил)-1,8-нафтиридина (промежуточное соединение 3) (100 мг, 0,44 ммоль) в DCM (3 мл) и N-Ме-морфолин (0,102 мл, 0,93 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь разбавляли водой и фазы разделяли в фазоразделителе с фриттой и органическую фазу упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали методом МУАП (метод С), собирая фракции с m/z 554. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (160 мг, 93%) в виде бесцветного масла: ЖХ/МС (метод С) RT= 0,99 мин, 98,5%, ЭРИ+ m/z 554 (М+Н)+; [a]D20= +41 (с=1,720 в CHCl3); аналитическая хиральная ВЭЖХ, Chiralcel OD-H (4,6 мм х 250 мм), элюирование смесью 10% EtOH-гептан, содержащей 0,1% изопропиламина, детектирование при 235 нм, скорость потока=1 мл/мин, RT=30,4 мин, 77,3% и RT=37,6 мин, 22,7%.
Промежуточное соединение 44. (S)-трет-Бутил-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксо-4-((R)-3 -(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)бутаноат
Раствор ^)-трет-бутил-4-(^)-3 -(2-(1,8-нафтиридин-2-ил)этил)-пирролидин-1 -ил)-3 -(3-(3,5 -диметил-Ш-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксобутаноата (промежуточное соединение 43) (107 мг, 0,19 ммоль) в этаноле (20 мл) гидрировали над 5% Rh/C (28 мг) в течение 4 суток. Снова добавляли катализатор (5 мг) и смесь гидрировали в течение еще одних суток. Катализатор удаляли фильтрованием через целит и промывали этанолом. Объединенные фильтрат и промывочные растворы концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (101 мг, 94%): ЖХ/МС (метод С) RT=0,86 мин,
98%, ЭРИ+ m/z 558 (М+Н)+.
Промежуточное соединение 45. (S)-(+)-3-(3-(3,5-Диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксо-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляная кислота
Раствор (S)-трет-бутил-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксо-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноата (промежуточное соединение 44) (101 мг, 0,18 ммоль) в CHCl3 (5 мл) обрабатывали TFA (3 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривали при пониженном давлении и остаток растворяли в DCM и повторно упаривали при пониженном давлении три раза. Остаток (200 мг) растворяли в ацетонитриле и пропускали через картридж SCX-2 (10 г), который был предварительно обработан MeCN. Соединение промывали MeCN и элюировали 2М раствором аммиака в МеОН. Аммиачные фракции выпаривали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (80 мг, 88%) в виде белой пены: ЖХ/МС (метод А)
Раствор (S)-3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-оксо-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты (промежуточное соединение 45) (65 мг, 0,13 ммоль) в ТГФ (1 мл) обрабатывали при комнатной температуре раствором комплекса боран-ТГФ в ТГФ (1М, 2 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Утром добавляли АсОН (0,5 мл), чтобы погасить избыток борана, затем добавляли 2М раствор NaOH (1 мл) для разложения борановых комплексов. Смесь разбавляли эфиром и дважды промывали 2М NaOH, затем промывали рассолом, сушили (MgSO4) и упаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт (100 мг) растворяли в ТГФ (1 мл) и обрабатывали раствором LiAlH4 в диэтиловом эфире (1М, 1,5 мл) при 20°С в атмосфере азота. Смесь выдерживали при 20°С в течение 30 мин и затем нагревали до 50°С в течение 2 ч. Снова добавляли раствор LiAlH4 (1М, 0,7 мл) и смесь нагревали до 60°С в течение 45 мин. ЖХ/МС (метод A) RT=1,12 мин, 58%, m/z 474 (М+Н)+ для продукта и RT=1,23 мин, 27%, m/z 488 (М+Н)+ для амида. Температуру поднимали до 80°С в течение еще 1 ч, однако, как оказалось, что реакция прекратилась. Реакционную смесь гасили добавлением 2М раствора NaOH (1 мл) и диэтилового эфира. Белое твердое вещество собирали фильтрованием, промывали эфиром и этилацетатом. Фильтрат и промывочные растворы упаривали при пониженном давлении. Остаток (58 мг) очищали методом МУ-АП (метод А) с получением указанного в заголовке соединения (30 мг, 49%) в виде желтой смолы: ЖХ/МС (метод A) RT=1,10 мин, 93%, ЭРИ+ m/z 474 (М+Н)+; [a]D20 = + 7,0 (с=0,859 в CHCl3); 1Н ЯМР (DMSO-d6 ,600 МГц) 5 7.40-7.36 (m, 1H), 7.28-7.26 (m, 1Н), 7.28-7.25 (m, 1Н), 7.20 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 6.99 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 6.22 (d, J=7,2 Гц, 1Н), 6.20 (уширенный синглет, 1Н), 6.05 (s, 1H), 3.32-3.28 (m, 1Н), 3.25-3.21 (m, 1Н), 3.24-3.18 (m, 2Н), 2.97-2.90 (m, 1Н), 2.71 (t, J=8,2 Гц, 1Н), 2.64 (dd, J=11,8, 7,8 Гц, 1Н), 2.59 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 2.57-2.53 (m, 1Н), 2.54-2.50 (m, 1Н), 2.39-2.34 (m, 2Н), 2.37-2.32 (m, 1Н), 2.26 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.07-2.01 (m, 1Н), 1.94 (dd, J=13,1, 7,4 Гц, 1Н), 1.97-1.88 (m, 1Н), 1.87-1.79 (m, 1Н), 1.74 (dt, J=11,5, 6,0 Гц, 2Н), 1.67-1.59 (m, 1Н), 1.60-1.53 (m, 2Н), 1.31-1.24 (m, 1Н). Спектр 1Н ЯМР показал смесь ~3:1 близкородственных сигналов, соответствующую смеси диастереоизомеров указанного в заголовке соединения. Основной компонент соответствовал изомеру 1 промежуточного соединения 33, неосновной компонент соответствовал изомеру 2 промежуточного соединения 33. Аналитическая хиральная ВЭЖХ (4,6 мм х 250 мм Chiralpaki AD), элюирование смесью 10% EtOH-гептан, содержащей 0,1% изопропила-мина, скорость потока = 1 мл/мин, впрыскиваемый объем 15 мкл, детектирование при 235 нм RT=22,5 мин, 78,9% и RT=26,9 мин, 21,1%.
Растворимость.
Кинетическую растворимость измеряли методом хемилюминесцентного детектирования азота (CLND) согласно N. Bhattachar et. al. J. Pharm. Biomed. Anal. 2006, 41, 152-157 и установили, что она составляет: для примера 1, 504 мкМ; для примера 2, 249 мкМ; для примера 3, 276 мкМ; для примера 4, 388 мкМ; для примера 5, 470 мкМ; для примера 6, 437 мкМ; для примера 7, 349 мкМ.
Биологические анализы.
Анализы адгезии. Использовали реагенты и методы, как описано в Ludbrook et al., Biochem. J. 2003, 369, 311, со следующими далее пояснениями. Использовали следующие клеточные линии с лигандами, указанными в скобках): K562-a5p1 (фибронектин), K562-avp3 (LAP-b1), K562-avp3 (витронектин), K562-avp6 (LAP-b1), K562-avp8 (LAP-b1). Двухвалентный катион, используемый для способствования адгезии, представлял собой 2 мМ MgCl2. Адгезию количественно оценивали методом мечения клеток флуоресцентным красителем BCECF-AM (Life Technologies), где клеточные суспензии в концентрации 6х106 клеток/мл инкубировали с 0,66 мл/мл 30 мМ BCECF-AM при 37°С в течение 10 мин, после чего дозировали в аналитический планшет. При завершении анализа клетки, которые приклеились, подвергали лизису, используя 50 мкл на лунку 0,5% Тритон Х-100 в Н2О для высвобождения флуоресценции. Интенсивность флуоресценции детектировали, используя планшет-ридер Envision(r) (Perkin Elmer). Для активных антагонистов в данном анализе для определения IC50 выполняли подгонку данных с использованием 4-параметрического логистического уравнения.
Определение связывания человеческого растворимого белка avp6 с RGD-содержащим пептидом по результатам анализа поляризации флуоресценции.
Внеклеточные домены av и p6 со-экспрессировали из двойственной конструкции pFastBac с использованием бакуловирусной системы экспрессии. Экспрессированный белок содержал аминокислоты 31987 из av, за которыми следовали сайт расщепления Tev, Fos-эпитопная метка и 6His-метка, аминокисло
ты 21-707 из p6, затем сайт прецизионной протеазы, Jun-эпитопная метка и FLAG-метка. Белок секрети-ровался в среду при экспрессии; его очищали, используя диафильтрацию, с последующей очисткой с использованием His-метки, с последующей очисткой с использованием FLAG-метки и затем посредством гель-хроматографии. Это дало вещество, имеющее чистоту выше 95%. Флуоресцентный связывающий пептид на основе LAPp3, синтезировали химическим путем, с последовательностью Ас-GRRGDLGRLK(Cy3B)-NH2. Для анализа использовали буфер, содержащий 25 мМ HEPES рН7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ CHAPS и 400 мМ MgCl2. В черные малообъемные 384-луночные планшеты добавляли 0,1 мл на лунку тестируемого соединения в 100% DMSO с последующим добавлением 10 нМ белка avp6 по 3 мл на лунку. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин, затем добавляли по 3 мл на лунку 4 нМ флуоресцентного RGD-содержащего пептида. Планшеты инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре и поляризацию флуоресценции детектировали, используя планшет-ридер Envision(r) (Perkin Elmer), при длине волны возбуждения 531 нм и эмиссию измеряли при 590 нм. Для активных антагонистов в данном анализе для определения IC50 выполняли подгонку данных с использованием 4-параметрического логистического уравнения.
Аффинность (pIC50) к белку avp6 человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 1 составляла 8,1, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,4; к avp3 pIC50 = 6; к avp5 pIC50 = 6,9; к avp8 pIC50 = 7,7.
Аффинность (pIC50) к белку avp6 человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 2 представляла собой 7,8, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,4; к avp3 pIC50 = 6; к avp5 pIC50 = 6,8; к avp8 pIC50 = 7,7.
Аффинность (pIC50) к белку avp6 человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 3 составляла 8,2, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,2; к avp3 pIC50 = 6; к avp5 pIC50 = 6,9; к avp8 pIC50= 7,7.
Аффинность (pIC50) к белку человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 4 составляла 8,2, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,6; к avp3 pIC50 = 6,9; к avp5 pIC50 = 7,5; к avp8 pIC50 = 7,8.
Аффинность (pIC50) к белку avp6 человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 5 составляла 7,8, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,1; к avp3 pIC50 = 6,1; к avp5 pIC50 = 6,6; к avp8 pIC50 = 7,4.
Аффинность (pIC50) к белку avp6 человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 6 составляла 7,7, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,1; к avp3 pIC50 = 5,8; к avp5 pIC50 = 6,6; к avp8 pIC50 = 7,3.
Аффинность (pIC50) к белку avp6 человека в анализе поляризации флуоресценции у соединения примера 7 составляла 7,8, тогда как его аффинность в анализах клеточной адгезии составляла: к avp6 pIC50 = 8,4; к avp3 pIC50 = 6,7; к avp5 pIC50 = 7,4; к avp8 pIC50 = 7,3.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы (I)
(I)
где R1 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, R2 представляет собой атом водорода или атом фтора,
R3 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой атом водорода; или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой метильную группу, R2 представляет собой фтор-группу и R3 представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.
2.
5. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой атом водорода, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой атом водорода; или его фармацевтически приемлемая соль.
6. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой этильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.
7. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой этильную группу, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой этильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Соединение формулы (I) по п.1, где R1 представляет собой атом водорода, R2 представляет собой атом водорода и R3 представляет собой метильную группу; или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Соединение формулы (I) по п.1.
10. Соединение формулы (I) по п.9, выбранное из
3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(5-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(5-этил-3-метил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(3,5-диэтил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(4-фтор-3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты;
3-(3-(3-метил-1H-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)масляной кислоты.
11. Соединение формулы (I) по п.1, представляющее собой 3-(3-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-
ты.
14. Соединение по п.1, представляющее собой соль гидрохлорид ^)-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1 -ил)фенил)-4-(^)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро- 1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)масляной кислоты.
15. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора avp6.
14.
16. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении фиброзных заболеваний.
17. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении идиопатического фиброза легких.
18. Способ лечения расстройств, при которых полезен антагонист рецептора avp6, у человека, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы: (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли.
19. Способ лечения фиброзных заболеваний у человека, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли.
20. Способ лечения идиопатического фиброза легких у человека, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли.
21. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью антагонистов avp6, содержащая соединение формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.
22. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, при котором показан антагонист рецептора avp6.
23. Применение по п.22, где заболевание или состояние, при котором показан антагонист рецептора avp6, представляет собой фиброзное заболевание.
24. Применение по п.23, где фиброзное заболевание представляет собой идиопатический фиброз легких.
25. Соединение формулы (II) или его соль
(II)
где R1 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, R2 представляет собой атом водорода или атом фтора,
R3 представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу и R4 представляет собой С1-С6алкильную группу.
26. Соединение формулы: (II) по п.25, где R4 представляет собой трет-бутильную, изопропильную, этильную или метильную группу.
27. Соединение формулы (II) по п.26, представляющее собой метил-3-(3-(3,5-диметил-1Н-пиразол-1-ил)фенил)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1-ил)бутаноат.
28. Соединение формулы: (II) по п.26, представляющее собой трет-бутил-3-(3-(3,5-диметил-Ш-пиразол-1 -ил)фенил)-4-(^)-3 -(2-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)этил)пирролидин-1 -ил)бутаноат.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027305
027305
- 1 -
- 1 -
027305
027305
- 1 -
- 1 -
027305
027305
- 1 -
- 1 -
027305
027305
- 1 -
- 1 -
027305
027305
- 1 -
- 1 -
027305
027305
- 1 -
- 1 -
027305
027305
- 4 -
- 3 -
027305
027305
- 38 -
027305
027305
- 41 -
- 41 -