[RU]

1. Соединение формулы I в которой х находится в пределах от 1 до 2.

2. Соединение по п.1, где х равен 1.

3. Соединение по п.1, где х равен 2.

4. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение по пп.1, 2 или 3.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая (а) соединение по пп.1, 2 или 3; (b) сахарозу и (с) глицин или его фармацевтически приемлемую соль.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где композиция является лиофилизированной композицией.

7. Фармацевтическая композиция, содержащая: (a) соединение по пп.1, 2 или 3; (b) от 0,5 до 2,0 мас.ч. сахарозы и (c) от 0,5 до 2,0 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания); где массовые части сахарозы и глицина основаны на массовой части соединения по пп.1, 2 или 3 (в виде эквивалента свободного основания).

8. Фармацевтическая композиция по п.6, где композиция содержит 1,0 мас.ч. сахарозы и 1,5 мас.ч. глицина.

9. Фармацевтическая композиция по п.8, где изменение чистоты соединения по пп.1, 2 или 3 (в виде эквивалента свободного основания) в фармацевтической композиции составляет меньше чем 10%, что определено высокоэффективной жидкостной хроматографией после хранения в течение 12 месяцев при температуре в пределах от 18 до 25°С.

10. Способ лечения бактериальной инфекции у пациента, включающий введение пациенту соединения по пп.1, 2 или 3.

11. Способ лечения бактериальной инфекции у пациента, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, включающей фармацевтически приемлемый носитель и соединение по пп.1, 2 или 3.

12. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для лечения бактериальной инфекции.

13. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для получения лекарственного средства.

14. Способ получения соединения по п.1, где указанный способ включает следующие стадии: (a) приготовление водной композиции, содержащей 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин и соляную кислоту в молярном соотношении от 1:1 до 1:2; (b) лиофилизация водной композиции с получением соединения по п.1.

15. Способ по п.14, где молярное соотношение составляет 1:1.

16. Способ по п.14, где молярное соотношение составляет 1:2.

17. Способ снижения распада 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина во время хранения, где способ включает (а) получение соединения по пп.1, 2 или 3 и (b) хранение соединения по пп.1, 2 или 3 при температуре в пределах от -25 до 25°С.

18. Способ по п.17, где температура находится в диапазоне от 2 до 8°С.

19. Способ снижения распада 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина во время хранения, где способ включает (а) получение фармацевтической композиции по п.8 и (b) хранение фармацевтической композиции при температуре в диапазоне от -25 до 25°С.

20. Способ по п.19, где температура находится в диапазоне от 2 до 8°С.

(57) Реферат / Формула:

1. Соединение формулы I в которой х находится в пределах от 1 до 2.

2. Соединение по п.1, где х равен 1.

3. Соединение по п.1, где х равен 2.

4. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение по пп.1, 2 или 3.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая (а) соединение по пп.1, 2 или 3; (b) сахарозу и (с) глицин или его фармацевтически приемлемую соль.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где композиция является лиофилизированной композицией.

7. Фармацевтическая композиция, содержащая: (a) соединение по пп.1, 2 или 3; (b) от 0,5 до 2,0 мас.ч. сахарозы и (c) от 0,5 до 2,0 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания); где массовые части сахарозы и глицина основаны на массовой части соединения по пп.1, 2 или 3 (в виде эквивалента свободного основания).

8. Фармацевтическая композиция по п.6, где композиция содержит 1,0 мас.ч. сахарозы и 1,5 мас.ч. глицина.

9. Фармацевтическая композиция по п.8, где изменение чистоты соединения по пп.1, 2 или 3 (в виде эквивалента свободного основания) в фармацевтической композиции составляет меньше чем 10%, что определено высокоэффективной жидкостной хроматографией после хранения в течение 12 месяцев при температуре в пределах от 18 до 25°С.

10. Способ лечения бактериальной инфекции у пациента, включающий введение пациенту соединения по пп.1, 2 или 3.

11. Способ лечения бактериальной инфекции у пациента, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, включающей фармацевтически приемлемый носитель и соединение по пп.1, 2 или 3.

12. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для лечения бактериальной инфекции.

13. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для получения лекарственного средства.

14. Способ получения соединения по п.1, где указанный способ включает следующие стадии: (a) приготовление водной композиции, содержащей 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин и соляную кислоту в молярном соотношении от 1:1 до 1:2; (b) лиофилизация водной композиции с получением соединения по п.1.

15. Способ по п.14, где молярное соотношение составляет 1:1.

16. Способ по п.14, где молярное соотношение составляет 1:2.

17. Способ снижения распада 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина во время хранения, где способ включает (а) получение соединения по пп.1, 2 или 3 и (b) хранение соединения по пп.1, 2 или 3 при температуре в пределах от -25 до 25°С.

18. Способ по п.17, где температура находится в диапазоне от 2 до 8°С.

19. Способ снижения распада 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина во время хранения, где способ включает (а) получение фармацевтической композиции по п.8 и (b) хранение фармацевтической композиции при температуре в диапазоне от -25 до 25°С.

20. Способ по п.19, где температура находится в диапазоне от 2 до 8°С.

---

Евразийское OD 027282 (13) Bl
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 20l7.07.3l
(21) Номер заявки 201591697
(22) Дата подачи заявки 2014.03.06
(51) Int. Cl. A61K38/14 (2006.01) A61K31/545 (2006.01) C07D 501/00 (2006.01) C07K 9/00 (2006.01)
(54) ГИДРОХЛОРИДНЫЕ СОЛИ АНТИБИОТИЧЕСКОГО СОЕДИНЕНИЯ
(31) 61/779,065
(32) 20l3.03.l3
(33) US
(43) 2016.02.29
(86) PCT/US2014/021064
(87) WO 2014/158952 2014.10.02
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ТЕРЕВАНС БАЙОФАРМА АНТИБАЙОТИКС АйПи, ЭлЭлСи (US)
(72) Изобретатель:
Чжан Вэйцзянь, Чеунг Ронни, Филипов Димитар, Грин Джэк, Ли Цзюньнин (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) US-A1-2008194464
DATABASE MEDLINE [Online] US NATIONAL LIBRARY OF MEDICINE (NLM), BETHESDA, MD, US; October 2008 (2008-10), LONG DANIEL D. ET AL.: "A multivalent approach to drug discovery for novel antibiotics.", XP055120347, Database accession no. NLM19168973, cited in the application, the whole document & THE JOURNAL OF ANTIBIOTICS ОСТ. 2008, vol. 61, no. 10, October 2008 (2008-10),
pages 595-602, ISSN: 0021-8820
WO-A2-2005042568 WO-A2-2004092183
Предпосылки создания изобретения
Область изобретения.
Изобретение относится к новым гидрохлоридным солям антибиотического поперечно-сшитого соединения гликопептида-цефалоспорина и фармацевтическим композициям, содержащим такие гидро-хлоридные соли. Изобретение также относится к способам получения и способам применения таких гид-рохлоридных солей и композиций.
Существующий уровень техники.
Поперечно-сшитые антибиотики гликопептид-цефалоспорин известны в данной области техники. Например, такие антибиотики описаны в патентах США №6878868 В2; 6974797 В2; 7067481 В2; 7067482 В2; 7601690 В2; и в Long et al., J. Antibiot. 61(10): 595-602 (2008); и Long et al., J. Antibiot. 61(10): 603-614 (2008). Эти антибиотики, как сообщается, используются для лечения инфекций, вызванных грамположи-тельными бактериями, включая инфекции, вызванные устойчивым к метициллину золотистым стафилококком (MRSA). См., например, Leuthner et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2010, 54(9):3799; Hegde et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56(3): 1578; Blais et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56(3): 1584; и Tyrell et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56(4):2194.
Один из таких поперечно-сшитых антибиотиков гликопептид-цефалоспорин представляет собой 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6И,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-аза-бицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбокс-иванкомицин, который имеет химическую структуру
Это соединение, также известное как TD-1792, было описано ранее либо как трифторацетатная соль, либо как тригидрохлоридная соль. См., например, патент США №6974797 В2 со строки 60, колонка 34, до строки 20, колонка 35. Однако описанные солевые формы обладают рядом недостатков.
Во-первых, сообщалось, что перфторкарбоновые кислоты, такие как трифторуксусная кислота, оказывают неблагоприятные эффекты на печень при введении крысам. См., например, Just et al., Hepatology, 9(4), 570-581 (1989). Соответственно, соль трифторуксусной кислоты указанного соединения не может быть фармацевтически приемлемой для введения пациентам.
Кроме того, было обнаружено, что тригидрохлоридная соль этого соединения в значительной степени разлагается при хранении при комнатной температуре или даже при температуре хранения в холодильнике (от приблизительно 2 до приблизительно 8°С). Таким образом, тригидрохлоридная соль не может быть приемлемой для применения в коммерческих препаратах, поскольку фармацевтические препараты обычно хранятся в течение значительных периодов времени перед использованием.
Соответственно, существует потребность в новых фармацевтически приемлемых солевых формах этого соединения, которые обладают повышенной стабильностью при хранении.
Также представляют интерес новые фармацевтические композиции, содержащие такие соли. Особый интерес представляют новые фармацевтические композиции, которые дополнительно повышают стабильность при хранении соединения. Однако в существующей научной литературе часто присутствуют противоречия с точки зрения того, какие наполнители могут использоваться для обеспечения повышенной стабильности при хранении фармацевтических препаратов.
Например, в ЕР 0325112 А1 описано, что цефалоспорины стабилизируются путем растворения це-фалоспорина с лактозой, сахарозой, глюкозой или галактозой (и необязательно глицином), а затем суш
кой раствора.
В отличие от этого в патенте США № 5254545 указано, что фармацевтические препараты, описанные в ЕР 0325112 А1, не являются удовлетворительными для стабилизации конкретного соединения це-фалоспорина и, альтернативно, цефалоспорин смешивают с (I) лактозой, (II) лимонной кислотой или ее натриевой солью и (III) аргинином или его гидрохлоридом, или хлоридом натрия, с получением стабильного препарата.
Кроме того, в отношении использования углеводов в Burgess et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 97 (1994) указано, что распад некоторых цефалоспоринов катализируется глюкозой, галактозой, мальтозой, сахарозой, маннитом и а-метилглюкозидом в водных растворах при рН 9-11.
Недавно в публикации заявки на патент США № 2010/010278 А1 были рассмотрены преимущества и недостатки различных наполнителей, используемых для получения лиофилизированных композиций цефалоспоринов, таких как полиолы и аминокислоты (стр. 1, параграфы 004-0019), и сделаны выводы, что в научной литературе есть противоречия и она не позволяет определить, какие композиции будут обеспечивать стабильность для лиофилизированного продукта (стр. 1, параграф 0020). Этот документ описывает лиофилизированные композиции для производных цефалоспорина, содержащих по крайней мере один стабилизатор, выбранный из углеводов, многоатомных спиртов и поливинилпирролидона.
В отношении фармацевтических композиций для гликопептидов в ЕР 0438747 А1 описаны стабилизированные лиофилизированные композиции гликопептидов, такие как ориентицины A-D, хлорориен-тицины А-Е, и ванкомицин, содержащие 0,05 мас.ч. или больше одного или нескольких сахаридов.
В JP 414249 В2 описаны лиофилизированные препараты ванкомицина, содержащие аминокислоты, выбранные из аргинина, аланина, аспарагиновой кислоты, гистидина и глицина.
Кроме того, в JP 2010105965 описаны препараты ванкомицина, содержащие растворимые в воде амиды кислоты, такие как никотинамид.
Таким образом, был описан широкий ряд наполнителей для использования при придании цефалос-поринам и гликопептидам формы лекарственного препарата. Однако в научной литературе зачастую существуют противоречия с точки зрения того, какой наполнитель необходим для использования с конкретным фармацевтическим средством. В результате, определение наполнителя или сочетания наполнителей, которые повышают стабильность при хранении поперечно сшитого цефалоспорина-гликопептида, является особенно сложным, поскольку такие соединения содержат как фрагменты цефалоспорина, так и гликопептида в одной и той же молекуле.
Сущность изобретения
Изобретение относится к соединению формулы I
где х находится в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 2.
Было обнаружено, что такие гидрохлориды обладают значительно повышенной стабильностью при хранении при комнатной температуре и при температуре охлаждения по сравнению с соответствующей тригидрохлоридной солью. Кроме того, было установлено, что стабильность при хранении таких гидро-хлоридных солей дополнительно улучшена в композициях, содержащих сахарозу и глицин.
В одном из вариантов осуществления х равен приблизительно 1, т.е. соединение формулы I представляет собой моногидрохлоридную соль. В другом варианте осуществления х равен приблизительно 2, т.е. соединение формулы I представляет собой дигидрохлоридную соль.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I. В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы I. В конкретном варианте осу
ществления фармацевтическая композиция содержит сахарозу и глицин.
В еще одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит:
(a) соединение формулы I;
(b) от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мас.ч. сахарозы и
(c) от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания);
где массовые части сахарозы и глицина основаны на массовой части соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания).
В конкретном варианте осуществления фармацевтическая композиция представляет собой лиофи-лизированную композицию. В другом конкретном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит приблизительно 1,0 часть по массе сахарозы; и приблизительно 1,5 мас.ч. глицина. В еще одном конкретном варианте осуществления изменение чистоты соединения формулы I в фармацевтической композиции составляет меньше, чем приблизительно 10%, что определено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии после хранения в течение 12 месяцев при температуре в интервале от приблизительно 18 до приблизительно 25°С.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения бактериальной инфекции у пациента с использованием соединения формулы I. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения способ включает введение пациенту соединения формулы I. В другом варианте осуществления способ включает введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы I.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы I для применения в терапии. В одном из вариантов осуществления применением в терапии является лечение бактериальной инфекции.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы I для применения при получении лекарственного
средства. В одном из вариантов осуществления лекарственное средство предназначено для лечения бактериальной инфекции.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы I. В одном из вариантов осуществления способ включает стадии:
(a) получение водной композиции, содержащей 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин и хлористо-водородную кислоту в молярном соотношении от приблизительно 1:1 до приблизительно 1:2;
(b) лиофилизации водной композиции с получением соединения формулы I. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к продукту, полученному способом, описанным в настоящем документе.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу уменьшения разложения 26-[[[3-[[(Z)-[1 -(2-амино-5 -хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3 -(пиридиниометил)-5 -тиа-1 -азаби-цикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбокс-иванкомицина в процессе хранения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, способ включает (а) получение соединения формулы I и (b) хранение соединения формулы I при температуре в интервале от приблизительно -25 до приблизительно 25°С. В другом варианте осуществления соединение формулы I хранят при от приблизительно 2 до 8°С.
В еще одном варианте осуществления способ включает хранение фармацевтической композиции, содержащей (а) соединение формулы I; (b) от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мас.ч. сахарозы и (с) от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания); где массовые части сахарозы и глицина на массовую часть соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания) при температуре в пределах от приблизительно -25 до приблизительно 25°С. В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию хранят при температуре от приблизительно 2 до приблизительно 8°С.
Другие аспекты и варианты осуществления изобретения описанные в настоящем документе.
Краткое описание чертежей
Различные аспекты изобретения иллюстрируются со ссылкой на прилагаемые чертежи.
На фиг. 1 показано изменение чистоты (в процентах) в зависимости от времени (месяцы) для моно-, ди- и тригидрохлоридных солей 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6К,711)-2-карбокси-8-оксо-3 -(пиридиниометил) -5 -тиа-1 -азабицикло [4.2.0] окт-2-ен-7-ил] амино] -2 -оксоэтилиден] амино] окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина, хранящегося при температуре охлаждения;
на фиг. 2 - изменение чистоты (в процентах) в зависимости от времени (месяцы) для моно-, ди- и тригидрохлоридных солей 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил) -5 -тиа-1 -азабицикло [4.2.0] окт-2-ен-7 -ил] амино] -2-оксоэтилиден] амино] окси] пропил] амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина, хранящегося при комнатной температуре;
на фиг. 3 - изменение чистоты (в процентах) в зависимости от времени (месяцы) для композиций,
содержащих (а) моно-, ди- или тригидрохлоридные соли 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина; (b) сахарозу и (с) глицин; где композицию хранили при комнатной температуре;
на фиг. 4 - изменение чистоты (в процентах) в зависимости от времени (месяцы) для моногидрохло-ридной соли 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридинио-метил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбо-нил]-26-декарбоксиванкомицина и композиции, содержащей (а) моногидрохлоридную соль; (b) сахарозу и (с) глицин; где моногидрохлоридную соль и композицию хранили при комнатной температуре;
на фиг. 5 - изменение чистоты (в процентах) в зависимости от времени (месяцы) для дигидрохло-ридной соли 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридинио-метил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбо-нил]-26-декарбоксиванкомицина и композиции, содержащей (а) дигидрохлоридную соль; (b) сахарозу и (с) глицин; где дигидрохлоридную соль и композицию хранили при комнатной температуре.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к соединениям формулы I. Такие соединения представляют собой кислотно-аддитивные соли хлористоводородной кислоты и 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин. В соединениях формулы I любой атом, способный быть протонированным хлористо-водородной кислотой (например, аминогруппа или группа карбоновой кислоты), может быть таким образом протонирован с образованием соли, и все такие формы включены в объем настоящего изобретения, если не указано иное.
Определения.
При описании настоящего изобретения следующие термины имеют следующие значения, если не указано иное.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" означает соль, которая является приемлемой для введения пациенту или млекопитающего, такому как человек (например, соли, имеющие приемлемую безопасность для млекопитающих для данного режима дозирования). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, камфорсульфоно-вой, лимонной, этансульфоновой, эдизиловой, фумаровой, гентизиновой, глюконовой, глюкуроновой, глутаминовой, гиппуровой, бромистоводородной, хлористоводородной, изэтионовой, молочной, лакто-бионовой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, муциновой, нафталинсульфоновой, нафталин-1,5-дисульфоновой, нафталин-2,6-дисульфоновой, никотиновой, азотной, оротовой, памовой, пантотеновой, фосфорной, янтарной, серной, винной, п-толуолсульфоновой и ксинафоевой кислоты и тому подобное.
Термин "температура охлаждения" означает температуру от приблизительно 2 до приблизительно
8°С.
Термин "комнатная температура" означает температуру окружающей среды в химической лаборатории обычно от приблизительно 18 до приблизительно 25°С.
Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество, достаточное для эффективного лечения при введении пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
Термин "лечить" или "лечение" означает:
(a) предотвращение заболевания или медицинского состояния, т.е. профилактическое лечение пациента или субъекта;
(b) уменьшение интенсивности заболевания или медицинского состояния, т.е. устранение или регресс заболевания или медицинского состояния у пациента;
(c) подавления заболевания или медицинского состояния, т.е. замедление или остановка развития заболевания или медицинского состояния у пациента; или
(d) облегчение симптомов заболевания или медицинского состояния у пациента.
Общие способы синтеза.
Соединения формулы I обычно получают сначала путем обеспечения или получения водной композиции, содержащей 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пири-диниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино] карбонил]-26-декарбоксиванкомицин и от приблизительно 1 до приблизительно 2 молярных эквивалентов соляной кислоты. Затем водную композицию лиофилизируют с получением соединения формулы I.
Обычно водную композицию получают путем добавления соответствующего количества разбавленного водного раствора соляной кислоты (такого как 1н. водный раствор соляной кислоты) к водной композиции 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридинио-метил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбо-нил] -26-декарбоксиванкомицина.
Для определения количества соединения, присутствующего в водном растворе, обычно водную композицию, содержащую соединение, анализируют, например, методом ВЭЖХ. После того как количе
ство соединения определено, добавляют соответствующее количество соляной кислоты с тем, чтобы полученная водная композиция содержала от приблизительно 1 до приблизительно 2 молярных эквивалентов соляной кислоты на молярный эквивалент соединения. Обычно соляную кислоту добавляют при температуре в пределах от приблизительно -10 до приблизительно 25°С.
В некоторых случаях водный раствор может уже содержать некоторое количество соляной кислоты (например, меньше 1 молярного эквивалента), и в таких случаях количество соляной кислоты, уже присутствующей в водном растворе, учитывается при добавлении дополнительного количества соляной кислоты. Альтернативно, если водный раствор, содержащий 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин, содержит больше приблизительно 2 эквивалентов соляной кислоты, тогда водный раствор может быть нейтрализован основанием, таким как бикарбонат щелочного металла, карбонат щелочного металла и тому подобное, для установления молярного соотношения хлористоводородной кислоты к соединению в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 2. В качестве примера бикарбонат натрия может быть использован в качестве основания. Основание обычно добавляют в виде разбавленного водного раствора, например, такого как 5% водный раствор бикарбоната натрия. Основание обычно добавляют к водному раствору при температуре в пределах от приблизительно -10 до приблизительно 25°С.
При описании таких водных композиций следует учесть, что соляная кислота протонирует соединение для того, чтобы водная композиция содержала кислотно-аддитивную соль соляной кислоты и соединение. Таким образом, следует понимать, что любая ссылка на молярное соотношение соединения к соляной кислоте относится к молярному соотношению компонентов в форме кислотно-аддитивных солей.
После образования водной композиции, содержащей соединение и соляную кислоту в количестве от приблизительно 1 до приблизительно 2 молярных эквивалентов, водную композицию, обычно, лио-филизируют с получением соединения формулы I в виде лиофилизированного порошка. Лиофилизацию обычно проводят при температуре в пределах от приблизительно -60 до приблизительно -20°С при пониженном давлении в диапазоне от приблизительно 20 торр (мм ртутного столба) до приблизительно 100 торр, например от приблизительно 40 до 60 торр. Лиофилизацию обычно выполняют в течение от приблизительно 48 до приблизительно 200 ч или до удаления, в значительной степени, летучих компонентов. Лиофилизация обеспечивает соединение формулы I в виде лиофилизированного порошка.
Альтернативно, соединение формулы I может быть осаждено и выделено фильтрованием или центрифугированием. Например, для осаждения соединения формулы I из водной композиции можно использовать избыточное количество органического разбавителя. Подходящие органические растворители включают в качестве иллюстрации ацетонитрил, метанол, этанол, ацетон и тому подобное. При необходимости осадок может необязательно быть промыт подходящим органическим растворителем. Например, в случае, когда для осаждения соединения формулы I используют ацетон, полученный осадок необязательно промывают ацетоном и потом сушат. Обычно, процедуру выделения проводят при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 30°С, обычно в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 20°С, и все стадии фильтрации, промывки и сушки выполняют в инертной атмосфере, такой как азот, аргон и тому подобное.
Способы получения 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1 -азабицикло [4.2.0] окт-2-ен-7-ил] амино]-2-оксоэтилиден] амино] окси]пропил] амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина известны в данной области. Например, получение этого соединения описано в патенте США № 6974797 В2 и Long et al., J. Antibiot. 61(10): 603-614 (2008).
В качестве иллюстрации ванкомицин или его соли могут быть подвергнуты взаимодействию с соединением А, имеющим формулу
или его солью, в присутствии пептидного конденсирующего реагента с получением 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло [4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванко-мицина или его соли.
Обычно эту реакцию выполняют путем приведения в контакт ванкомицина или его соли с конденсирующим пептид реагентом в количестве от приблизительно 1 до приблизительно 1,1 молярных эквивалентов в растворителе, таком как ДМФ, ДМСО или их смесь. Это взаимодействие обычно выполняют при температуре в пределах от приблизительно -10 до приблизительно 10°С в течение от приблизительно
10 до приблизительно 60 мин или до тех пор, пока взаимодействие, по существу, не завершиться. Затем раствор соединения А или его соли в количестве от приблизительно 0,9 до приблизительно 1,1 молярных эквивалентов в растворителе, таком как ДМФ, ДМСО или их смесь, добавляют к активированному производному ванкомицина. После добавления соединения А добавляют амин, такой как диизопропилэти-ламин, в количестве, составляющем от приблизительно 2 до приблизительно 10 мольных эквивалентов (например, приблизительно 5 мольных эквивалентов). Амин обычно добавляют со скоростью, которая позволяет поддерживать температуру реакции в диапазоне от приблизительно -10 до приблизительно 5°С. Потом реакционную смесь обычно выдерживают при температуре в диапазоне от приблизительно -10 до приблизительно 5°С в течение от приблизительно 0,5 до приблизительно 3 ч или до тех пор, пока взаимодействие, по существу, не завершиться.
В этой реакции могут использоваться различные конденсирующие пептиды реагенты. Типичные примеры включают гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситрипирролидинофосфония (РуВОР) с или без 1-гидрокси-7-азабензотриазола (HOAt); тетрафторборат 0-(6-хлор-1-гидроксибензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (TCTU); гексафторфосфат 0-(6-хлорбензотриазол-1-ил)-1Ч,]Ч,№,№-тетра-метилурония (HCTU); тетрафторборат 0-(бензотриазол-1-ил)-М,М,№,№-тетраметилурония (TBTU); хлорид 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолина (DMTMM); 1-этил-3-(3-диметиламино-пропил)карбодиимид (EDCI) с HOAt; диэтилцианофосфонат (DECP) и тому подобное. В одном из вариантов осуществления пептидный конденсирующий реагент представляет собой хлорид 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолина.
После завершения реакции конденсации продукт реакции выделяют и очищают с использованием обычных способов, таких как осаждение и фильтрование, колоночная хроматография, ВЭЖХ и тому подобное.
Соединение А является известным в данной области техники. Например, соединение А может быть получено способом, описанным в патенте США № 6974797 В2 (пример А, со строки 51, колонка 27, до строки 56, колонка 30,) или в Long et al., J. Antibiot. 61(10): 603-614 (2008) (CoxSynthon 18 на стр. 611612). Способы получения соединения А также описаны в примерах.
Ванкомицин также известен в данной области техники. Например, ванкомицина гидрохлорид является коммерчески доступным от фирмы Sigma-Aldrich (St. Louis, МО 63103) и от фирмы Haorui Pharma-Chem Inc. (Irvine, CA 92618).
После получения 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил] амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин, используемый в настоящем изобретении, может быть очищен с использованием обращенно-фазовой ВЭЖХ или другими хроматографическими методами.
Например, соединение может быть очищено с использованием полимера поли(стирол-дивинилбензол) (ПС-ДВБ). Обычно полимер ПС-ДВБ, используемый для очистки соединения, представляет собой макропористую смолу с жесткой структурой, имеющий размер пор в диапазоне от приблизительно 100 до приблизительно 1000 А и размер частиц в пределах от приблизительно 10 до приблизительно 50 мкм. Типичной смолой, пригодной для использования, является PLRP-S (Agilent Technologies, Santa Clara CA 95051), имеющая размер пор приблизительно 100 А и размер частиц приблизительно 50 мкм.
Обычно элюент для очистки содержит водный раствор кислоты, содержащий различные количества полярного органического растворителя. Типичные полярные органические растворители включают аце-тонитрил, этанол, изопропанол, метанол и тому подобное.
Подходящие кислоты включают уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, соляную кислоту и тому подобное. Элюент может также содержать буфер, такой как ацетатный буфер или фосфатный буфер. В одном из вариантов осуществления элюент содержит водный ацетатный буфер (100 мм), содержащий ацетонитрил в количествах от приблизительно 2% об./об. до приблизительно 13% об./об.
В зависимости от используемого способа очистки солевой обмен может быть выполнен после очистки с получением гидрохлоридной соли соединения. Например, если кислота, используемая в способе очистки, является кислотой, иной, чем соляная кислота (т.е. уксусная кислота или трифторуксусная кислота), тогда солевой обмен, как правило, выполняется с образованием соли соляной кислоты.
Обычно для очистки солевой обмен выполняется с использованием полимера ПС-ДВБ, как описано в настоящем документе. Соль соединения обычно помещают на полимер ПС-ДВБ, а затем смолу элюи-руют водным раствором соляной кислоты, содержащим различные количества полярного органического растворителя. Типичные полярные органические растворители включают ацетонитрил, этанол, изопро-панол, метанол и тому подобное. Обычно количество используемого полярного органического растворителя находится в диапазоне от приблизительно 10% об./об. до приблизительно 80% об./об.; включая от приблизительно 10% об./об. до приблизительно 50% об./об.; например, от приблизительно 10% об./об. до приблизительно 20% об./об. В одном из вариантов осуществления элюент, используемый для солевого обмена, содержит приблизительно 10 мМ водного раствора соляной кислоты, содержащего приблизительно 20% об./об. ацетонитрила.
Фармацевтические композиции.
Соединения формулы I обычно вводят пациенту в виде фармацевтической композиции. Такие фармацевтические композиции могут содержать любой приемлемый носитель или наполнитель. Выбор конкретного носителя, или сочетания носителей, будет зависеть от многих факторов, такие как способ введения, совместимость компонентов, стабильность композиции и тому подобное.
Обычные способы получения фармацевтических композиций известны в данной области техники и описаны, например, в REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (REMINGTON: THE SCIENCE & PRACTICE OF PHARMACY), Pharmaceutical Press, Philadelphia, PA; 21st Ed. (октябрь 7, 2011). Кроме того, обычные ингредиенты, необходимые для таких композиций, являются коммерчески доступными от, например, фирмы Sigma-Aldrich, St. Louis, МО 63178 и других коммерческих поставщиков.
Фармацевтическую композицию обычно получают путем тщательного и равномерного перемешивания или смешивания соединения формулы I с фармацевтически приемлемым носителем и любыми дополнительными ингредиентами.
В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция подходит для парентерального введения, в частности для внутривенного введения. Такие фармацевтические композиции обычно содержат стерильный физиологически приемлемый водный раствор носителя, содержащий соединение формулы I. В одном из вариантов осуществления композиция не содержит пирогены. Необязательно, раствор носителя может содержать другие компоненты, такие как сахара, аминокислоты, электролиты и тому подобное.
Типичные физиологически приемлемые водные носители включают в качестве примера стерильную воду для инъекций, (USP, фармакопея США); раствор декстрозы для инъекций, USP (например, 2,5, 5,0, 10, 20%-ный раствор декстрозы, включая 5% раствор декстрозы для инъекций (D5/W)); раствор декстрозы и хлорида натрия для инъекций, USP (например, декстроза в пределах от 2,5 до 10%, а хлорид натрия в пределах от 0,12 (19 мг-экв. натрия) до 0,9% (154 мг-экв. натрия)); раствор маннита для инъекций, USP, (например, 5, 10, 15, 20 и 25% маннита); раствор Рингера для инъекций, USP (например, 147 мг-экв. натрия, 4 мг-экв. калия, 4,5 мг-экв. кальция и 156 мг-экв. хлорида на литр); раствор Рингера с лактатом для инъекций, USP (например, 2,7 мг-экв. кальция, калия 4 мг-экв, 130 мг-экв. натрия и 28 мг-экв. лактата на литр); раствор хлорида натрия для инъекций, USP (например, 0,9% хлорида натрия) и тому подобное.
При введении пациенту соединение формулы I будут, обычно, разводить в от приблизительно 0,5 до приблизительно 10 мл водного носителя на мг соединения формулы I, например от приблизительно 0,6 до приблизительно 8 мл на мг.
Альтернативно, фармацевтическая композиция может быть в твердой форме, подходящей для восстановления и последующего парентерального введения. Такие композиции обычно находятся в виде стерильной лиофилизированной композиции, которую перед использованием восстанавливают с помощью стерильного физиологически приемлемого водного носителя. В этом варианте осуществления фармацевтическая композиция обычно содержит соединение формулы I и фармацевтически приемлемый носитель. Типичные носители для использования в таких фармацевтических композициях включают в качестве примера сахарозу, маннит, декстрозу, декстран, лактозу, глицин или их сочетания.
В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция содержит (а) соединение формулы I, (b) сахарозу и (с) глицин или его фармацевтически приемлемую соль. Такие композиции обычно содержат от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мас.ч., включая приблизительно 1,0 мас.ч. сахарозы на часть по массе соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания); и от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мас.ч., включая приблизительно 1,5 мас.ч., глицина (в виде эквивалента свободного основания) на часть по массе соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания). В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция содержит приблизительно 1,0 мас.ч. сахарозы и приблизительно 1,5 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания) на часть по массе соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания). Например, такие фармацевтические композиции могут содержать от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,0 мг сахарозы и приблизительно 1,0 до приблизительно 2,0 мг глицина (в виде эквивалента свободного основания) на миллиграмм соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания), например приблизительно 1,0 сахарозы и приблизительно 1,5 мг глицина (в виде эквивалента свободного основания) на миллиграмм соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания).
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит (а) от приблизительно 10 до приблизительно 60 мас.% соединения формулы I (эквивалент в чистом основании); (b) от приблизительно 10 до приблизительно 60 мас.% сахарозы; и (с) от приблизительно 10 до приблизительно 80 мас.% глицина (эквивалент в чистом основании). Например, этот вариант осуществления включает фармацевтическую композицию, содержащую (а) от приблизительно 20 до 50 мас.% соединения формулы I (эквивалент в чистом основании); (b) от приблизительно 20 до 50 мас.% сахарозы; и (с) от приблизительно 20 до приблизительно 70 мас.% глицина (эквивалент в чистом основании); такую как фармацевтическая композиция, содержащая (а) от приблизительно 25 до 35 мас.% соединения формулы I (эквивалент в чистом основании); (b) от приблизительно 25 до 35 мас.% сахарозы; и (с) от приблизительно 30 до при
близительно 50 мас.% глицина (эквивалент в чистом основании); от общей массы композиции.
В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция представляет собой лиофили-зированный порошок.
Обычно лиофилизированный порошок является стерильным и упаковывается в герметично закрытый сосуд или ампулу или аналогичный контейнер. Стабильность при хранении.
Было обнаружено, что соединения формулы I обладают значительно улучшенной стабильностью при хранении по сравнению с соответствующей тригидрохлоридной солью. Кроме того, было установлено, что стабильность при хранении соединений формулы I дополнительно улучшена в композициях, содержащих сахарозу и глицин.
Тригидрохлоридная соль 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3 -(пиридиниометил)-5-тиа-1 -азабицикло[4. 2.0]окт-2-ен-7-ил] амино] -2-оксоэтилиден]амино] окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина известна в данной области техники. Например, тригидрохлоридная соль описана в патенте США № 6974797 В2, колонка 35, строки 16-20. Тем не менее, было обнаружено, что чистота тригидрохлоридной соли существенно снижается при хранении. Например, было обнаружено, что при хранении при комнатной температуре в течение 12 месяцев, чистота три-гидрохлоридной соли снижается больше чем на 30% (как показано на фиг. 2).
Такой распад представляет интерес потому, что продукты распада могут отличаться по своей биологической активности или терапевтическому эффекту по сравнению с исходной молекулой. См., например, J. Diana et al., Journal of Chromatography A, 996: 115-131 (2003), в которой рассматриваются примеси ванкомицина.
Один из продуктов распада тригидрохлоридной соли, как полагают, представляет собой соединение формулы II
или его соль. Это соединение также называют деградантом В. Соединение формулы II является изомером с двойной связью, в котором двойная связь в А-кольце фрагмента цефалоспорина изомеризо-вана из положения А3 в положение А2. А2 изомеры цефалоспориновых кислот, как сообщается, являются неактивными. См., например, Crocker et al., J. Chem. Soc. (C), 1 142 (1966); и Saab et al., J. Pharm. Sci.,
77(10), 906 (1988).
Таким образом, важно свести к минимуму образование А2 изомера во время хранения соединения. Другой деградант, как полагают, является продуктом гидролиза, имеющим формулу III
или его солью. Соединение формулы III также называется деградантом А.
В настоящее время обнаружено, что соединения формулы I являются более стабильными по сравнению с тригидрохлоридной солью при хранении при комнатной температуре или температуре охлаждения в течение 12 месяцев. См., например, фиг. 1 и 2.
Кроме того, соединения формулы I являются более стабильными при комнатной температуре, когда их объединяют в форму лекарственного препарата с сахарозой и глицином. См., например, фиг. 3-5.
В одном из вариантов осуществления изменение (или уменьшение) чистоты соединения формулы I в фармацевтической композиции составляет менее приблизительно 10%, что измерено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ("ВЭЖХ") после хранения в течение 12 месяцев при температуре в пределах от приблизительно 18 до приблизительно 25°С (комнатная температура).
В другом варианте осуществления область под кривой (AUC) для соединения формулы I уменьшается меньше чем приблизительно на 10%, что определено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ("ВЭЖХ") после хранения фармацевтической композиции в течение 12 месяцев при температуре в пределах от приблизительно 18 до приблизительно 25°С (комнатная температура).
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей:
(a) соединение формулы I;
(b) приблизительно 1,0 мас.ч. сахарозы и
(c) приблизительно 1,5 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания);
в которой массовые части сахарозы и глицина вычисляются по массовой части соединения формулы I (в виде эквивалента свободного основания); и где изменение чистоты соединения формулы I в фармацевтической композиции составляет меньше чем приблизительно 10%, что определено высокоэффективной жидкостной хроматографией после хранения в течение 12 месяцев при температуре в пределах от приблизительно 18 до приблизительно 25°С.
Полезность изобретения.
26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин и его соли используются в качестве антибиотиков или бактерицидных средств против грамположительных бактерий, включая резистентные ко многим лекарственным препаратам организмы, такие как устойчивый к метициллину золотистый стафилококк (MRSA) и обладающий промежуточной чувствительностью к ванкомицину S. aureus (VISA). См., например, Leuthner et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2010, 54(9):3799; Hegde et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56(3): 1578; Blais et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56(3): 1584; и Tyrell et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56(4):2194.
Минимальная ингибирующая концентрация (MIC) соединений формулы I против различных бактерий и бактериальных штаммов может быть определена с использованием стандартных способов, например тех, которые опубликованы Clinical and Laboratories Standards Institute (CLSI) (Wayne, PA 19087). См., например CLSI. Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobi-cally; Approved Standard - Ninth Edition. CLSI Document M07-A9. Wanye P.A.: Clinical and Laboratories Standards Institute; 2012.
Соединения формулы I обычно вводят в терапевтически эффективном количестве любым приемлемым способом введения. Обычно соединения вводят парентерально, например внутривенно. Соединения могут быть введены в виде однократной дневной дозы или в виде многократных доз в день. Схема лече
ния может потребовать введение в течение продолжительных периодов времени, например в течение нескольких дней или в течение от одной до шести недель или больше. Количество соединения, вводимое в дозе, или суммарное вводимое количество будет, как правило, определяться лечащим врачом пациента и будет зависеть от таких факторов, как природа и тяжесть инфекции, возраст и общее состояние здоровья пациента, толерантность больного к соединению, микроорганизм(ы), вызывающий(е) инфекцию, способ введения и тому подобное.
Типичные дозы находятся в диапазоне от приблизительно 0,25 до приблизительно 2,5 мг/кг/день соединения формулы I (эквивалент в чистом основании), включая от приблизительно 1 до приблизительно 2 мг/кг/день. В одном из вариантов осуществления соединение формулы I вводят в дозе приблизительно 2 мг/кг/день (эквивалент в чистом основании). Типичная схема лечения состоит из введения соединения формулы I один раз в день в дозе приблизительно 2 мг/кг/день (эквивалент в чистом основании) в течение от приблизительно 7 до приблизительно 14 дней.
При введении в физиологически приемлемом водном носителе соединение формулы I обычно вводят пациенту внутривенно в течение от приблизительно 0,5 до приблизительно 2 ч, например в течение приблизительно 1 ч.
Типичные инфекции или медицинские состояния, связанные с бактериями, которые можно лечить или предупреждать с помощью соединения формулы I, включают в качестве примера инфекции, вызванные грамположительными бактериями, включая инфекции кожи и подкожной клетчатки, пневмонию, эндокардит, менингит, сепсис, инфекции мочевыводящих путей, инфекции кровотока, остеомиелит и тому подобное. При лечении таких состояний пациент уже может быть инфицирован микроорганизмом, подлежащего лечению, или может быть восприимчив к инфекции и в этом случае антибиотик вводят профилактически.
Примеры
Следующие примеры приведены для иллюстрации различных типичных вариантов осуществления и аспектов настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения каким-либо образом, если не указано особо.
Ванкомицина гидрохлорид был приобретен у фирмы Haorui Pharma-Chem Inc., Irvine, California, USA. Хлорид 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолина (DMTMM) был приобретен у фирмы Ubichem Pic, Hampshire, UK. 1-[[(6R,7R)-7-амино-2-карбокси-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло [4.2.0]окт-2-ен-3-ил]метил]пиридиния хлорид моногидрохлорид (7-PYCA) был приобретен у фирмы Zhejiang Hengdian Apeloa Imp. & Exp. Co., Ltd., Zhejiang, China и Aurisco Pharmaceuticals Limited, Shanghai, China; или он может быть получен способом, например, описанным в патенте США 4258041, или другими опубликованными способами. Все другие реагенты, исходные вещества и растворители, используемые в следующих примерах, были получены от коммерческих поставщиков (таких как Sigma-Aldrich Chemical Company, St. Louis, МО) и были использованы без дополнительной очистки, если не указано иное.
Используются следующие аббревиатуры: ДМФ - ^^диметилформамид; ДМСО - диметилсуль-фоксид; ч - часы и мин - минуты.
Пример 1. Метод ВЭЖХ определения чистоты образцов 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил] амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина.
Испытуемые образцы исследовали на содержание 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]-окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина и его продуктов распада, используя систему ВЭЖХ с детектором с фотодиодной матрицей (ВЭЖХ система Agilent 1100 или 1200; Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA 95051), контролируемую программным обеспечением обработки хроматографических данных (Empower Software, Waters Corporation, Milford, MA 01757). Все растворители имели соответствующую чистоту для ВЭЖХ и приобретены у фирмы Honeywell Burdick & Jackson (Muskegon, MI 49442). Фосфорная кислота (85% мас./мас.) и дигидрофосфат натрия имели соответствующую чистоту для ВЭЖХ и приобретены у Fluka (Sigma-Aldrich, St. Louis, МО 63103). Все реагенты были использованы без дополнительной очистки.
Перед анализом аналитические образцы фильтровали через фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ) с диаметром пор 0,2 мкм и первый 1 мл исключали. Условия анализа ВЭЖХ представлены в табл. А.
Пробоотборный конус
0,2 5 мг/мл
Объем введенной пробы
7 мкл
Скорость потока
1,00 мл/мин
Градиент
Время (мин)
Подвижная фаза А
Подвижная фаза В
92,0% объем/объем
8,0% объем/объем
93, 0
70, 0
30, 0
98, 0
45, 0
55, 0
98, 1
5,0
95, 0
100, 1
5,0
95, 0
100,2
92, 0
8,0
105, 0
92 0
8,0
Чистоту испытуемого образца определяли исходя из суммарной площади пика (площадь под кривой или AUC) для соединения в процентах от суммы всех пиков. Концентрация (значение анализа) соединения в тестируемом образце определяли путем сравнения с эталоном.
Пример 2. Метод ГХ для определения остаточного растворителя.
Остаточные количества растворителей в аналитических образцах 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]-окт-2-ен-7-ил] амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина определяли с использованием системы газовой хроматографии (Agilent GC 6890, Agilent Technologies, Santa Clara CA 9505), оснащенной дозатором равновесного пара (Agilent 7694 Headspace Sampler). Использовали ГХ колонку DB-624 (30 м длина х 0,53 мм внутренний диаметр х 3 мкм) (Agilent, Part No. 125-1334).
Раствор внутреннего стандарта подготавливали путем добавления 1-бутанола (4 мл) в 1-литровую мерную колбу. Добавляли ДМСО (800 мл), и смесь тщательно перемешивали, и затем добавляли дополнительное количество ДМСО с получением суммарного объема, равного 1 л.
Каждый исследуемый образец (50 мг) переносили в 20-миллиметровую виалу для парофазного анализа и добавляли раствор внутреннего стандарта (1 мл) и полученную смесь энергично перемешивали до тех пор, пока образец не растворился.
Аналитические стандарты подготавливали с концентрацией 2 мг/мл в растворе внутреннего стандарта из коммерчески доступных растворителей известной чистоты. Все растворители аналитического стандарта типично объединяли в одном растворе аналитического стандарта, который подготавливали в трех экземплярах. Для каждого репликата аналитического стандарта добавляли 1 мл раствора в 20-миллиметровую виалу для парофазного анализа и герметично обжимали.
Условия ГХ-анализа приведены в табл. С.
Таблица С. Условия проведения исследования методом газовой хроматографии (ГХ)
Газ-носитель
Гелий в режиме постоянного потока при скорости 2,60 мл/мин
Термостат ГХ
Время установления равновесия = 1 мин Общее время анализа = 2 9,7 мин
Изменение
температуры
термостата
Скорость изменения температуры (°С/мин)
Предельная темп. (°С)
Время анализа (мин)
Начальная
Изменение температуры 1
Изменение температуры 2
140
Изменение температуры 3
143
Изменение температуры 4
160
29, 7
Вход
2 0 0°С; 10:1 коэффициент разделения
Дозатор
равновесного пара
Температура в парофазном термостате = 85°С Температура в петле = 100°С Переходная линия = 110°С
Время установления равновесия в виале = 10 мин, при интенсивном встряхивании Давление в виале = 11 пси (Не) Пробоотборная петля объемом 1 мл
Детектор
Пламенно-ионизационный детектор (FID), 300°С Поток водорода - 30 мл/мин Поток воздуха = 400 мл/мин Газ-компенсатор азот при 30 мл/мин
Время удерживания ГХ для типичных растворителей по отношению к внутреннему стандарту 1-бутанолу показано в табл. D. Элюирование 1-бутанолом обычно выполняли приблизительно на 19,0 мин. Таблица D. Относительное время удерживания ГХ по сравнению с 1-бутанолом
Растворитель
Относительное время удерживания
Ацетон
0,45
Ацетонитрил
0, 50
1-Бутанол
1, 00
Диметилсульфоксид
1,38
Метил-трет-бутиловый эфир
0, 57
Количество остаточного растворителя в исследуемом образце определяли путем сравнения площадей пиков образца с площадями пиков аналитических стандартов. Пример 3. Получение трет-бутил 3-бромпропилкарбамата.
К раствору гидроксида натрия (105 г, 2625 моль) в воде (1,15 л), поддерживаемому при температуре, равной или немного ниже 10°С, добавляли раствор ди-трет-бутилдикарбоната (229 г, 1,05 моль) в гептане (1,03 л). Сосуд, содержащий раствор ди-трет-бутилдикарбоната, промывали гептаном (125 мл) и к реакционной смеси добавляли жидкость после промывки. Полученную смесь охлаждали до температуры немного ниже 10°С и добавляли раствор 3-бромпропиламина гидробромида (251 г, 1,15 моль) в воде (250 мл) по каплям со скоростью, которая позволяет поддерживать внутреннюю температуру реакционной смеси ниже приблизительно 20°С. Сосуд, содержащий раствор 3-бромпропиламина гидробромида промывали водой (20 мл) и к реакционной смеси добавляли жидкости после промывки. После того как добавление было завершено, реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры (приблизительно 22°С) и перемешивание продолжали в течение приблизительно 2 ч при комнатной температуре. Перемешивание завершали и смесь выдерживали в течение 30 мин. Нижний водный слой отделяли от органического слоя и удаляли. К органическому слою добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (250 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 5 мин. Смесь выдерживали в течение 30 мин и нижний водный слой отделяли и удаляли. Органический слой концентрировали до объема приблизительно 350 мл и этот концентрированный раствор охлаждали до 5°С и перемешивали в течение 4 ч при 5°С. Полученный осадок собирали вакуумной фильтрацией с получением указанного в заголовке соединения в виде кристаллического твердого вещества белого цвета (211 г, 84% выход). Фильтрат концентрировали и концентрированный раствор охлаждали до 5°С и перемешивали в течение 4 ч при 5°С. Полученный дополнительный осадок собирали с помощью вакуумной фильтрации с получением дополнительного количества указанного в заголовке соединения (17 г, 6,8% выход). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-с16) 5 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-с16) 5 3,50 (т, J=6,8 Гц, 2Н), 3,03 (кв, J=6,8 Гц, 2Н), 1,91 (м, J=6,8 Гц, 2Н), 1,38 (с, 9Н).
Пример 4. Получение этил (22)-2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(3-]Ч-трет-бутоксикарбониламино-пропоксиимино)ацетата.
К смеси этил 2-амино-а-(гидроксиимино)-4-тиазолацетат (139,9 г, 650 ммоль), трет-бутил 3-бромпропилкарбамата (209,0 г, 877,5 ммоль) и порошкообразного карбоната калия (157,2 г, 1137,5 ммоль) добавляли ДМФ (550 мл) и воду (24,4 мл). Полученную смесь перемешивали при 30°С в течение приблизительно 11 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли этилацетат (2,3 л) и воду (1,7 л), и полученную смесь перемешивали в течение 5 мин. Смесь выдерживали в течение 60 мин и нижний слой (водный слой) отделяли и удаляли. Добавляли водный раствор бикарбоната натрия (10 мас.%, 600 мл), и полученную смесь перемешивали в течение 5 мин. Смесь выдерживали в течение 60 мин и нижний слой (водный слой) отделяли и удаляли. Добавляли водный раствор хлорида натрия (10 мас.%, 600 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 5 мин. Смесь выдерживали в течение 60 мин и нижний слой (водный слой) отделяли и удаляли. Органический слой концентрировали до объема, равного приблизительно 600 мл. К концентрату по каплям добавляли гексаны (250 мл) с осторожным перемешиванием при 0°С в течение 1 ч с образованием осадка. Осадок собирали путем вакуумной фильтрации с получением указанного в заголовке соединения (232 г, 96% выход) в виде кристаллического твердого вещества кремового цвета. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-116) 5 7,25 (с, 2Н), 6,89 (с, 1Н), 6,82 (ушир.с, 1Н), 4,26 (кв, J=8 Гц, 2Н), 4,08 (т, J=6,4 Гц, 2Н), 2,97 (кв, J=6,4 Гц, 2Н), 1,72 (м, J=6,4 Гц, 2Н), 1,37 (с, 9Н), 1,26 (т, J=8 Гц, 3H).
При желании продукт может быть перекристаллизован. Сырой продукт от нескольких партий (1,0 кг, 91,2% чистота) растворяли в этилацетате (2 л) при 60°С и медленно добавляли гептан (1 л). Полученный раствор нагревали до 60°С в течение 1 ч при перемешивании, в процессе чего образовался осадок. Затем смесь медленно охлаждали до комнатной температуры. Осадок собирали путем вакуумной фильтрации в атмосфере сухого азота, промывали смесью гептана и этилацетата (1 л, 3:1) и сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения (770 г, 98,3% чистота).
При необходимости продукт может быть перекристаллизован. Неочищенное вещество из нескольких партий (1,0 кг, 91,2% чистота) растворяли в этилацетате (2 л) при 60°С и медленно добавляли гептан (1 л). Полученный раствор нагревали до 60°С в течение 1 ч при перемешивании, в процессе чего образовывался осадок. Затем смесь медленно охлаждали до комнатной температуры. Осадок собирали путем вакуумной фильтрации в атмосфере сухого азота, промывали смесью гептана и этилацетата (1 л, 3: 1) и сушили в вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения (770 г, 98,3% чистота).
Пример 5. Получение (22)-2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(3-М-трет-бутоксикарбониламинопропокси-имино)уксусной кислоты.
К раствору этил (22)-2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(3-М-трет-бутоксикарбониламинопропокси-имино)ацетата (232,0 г, 622,9 ммоль) в абсолютном этаноле (1,63 л) добавляли по каплям раствор гидро-ксида натрия (29,9 г, 747,4 ммоль) в воде (748 мл).
Полученную смесь нагревали при 35°С в течение приблизительно 8 ч. Затем смесь охлаждали до приблизительно -5°С и добавляли по каплям трифторуксусную кислоту (приблизительно 10 мл) до тех пор, пока значение рН смеси не стало равным приблизительно 6,0. Затем для удаления большей части
летучих компонентов смесь концентрировали в вакууме и добавляли абсолютной этанол (500 мл). Для удаления воды с помощью азеотропной смеси полученную смесь вновь концентрировали. Эту процедуру вновь повторяли при добавлении абсолютного этанола (500 мл) с последующим концентрированием с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали в следующей реакции без дополнительного выделения или очистки.
Пример 6. Получение триэтиламиновой соли (22)-2-(2-амино-5-хлортиазол-4-ил)-2-(3-Ы-трет-бутоксикарбониламинопропоксиимино)уксусной кислоты.
К смеси (22)-2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(3 -М-трет-бутоксикарбониламинопропоксиимино)уксусной кислоты (приблизительно 213 г, 627 ммоль) в метаноле (200 мл) добавляли этилацетат (2,0 л) с образованием взвеси. Добавляли N-хлорсукцинимид (108,0 г, 815 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли воду (2,5 л), хлорид натрия (514 г) и трифторуксусную кислоту (93 мл, 1254 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 15 мин. Смесь выдерживали в течение 1 ч, а затем нижний водный слой отделяли и удаляли. Органический слой концентрировали в вакууме до объема, равного приблизительно 500 мл. Добавляли ацетонитрил (1,0 л) и смесь концентрировали в вакууме. Эту процедуру повторяли путем добавления ацетонитрила (1,0 л) и концентрирования смеси в вакууме до объема, равного приблизительно 600 мл. Затем смесь фильтровали через диатомито-вый слой (целит). Добавляли триэтиламин (350 мл, 2508 ммоль) и смесь охлаждали до 0°С, при этом образовывался осадок. Осадок собирали путем вакуумной фильтрации, промывали ацетонитрил (165 мл) и сушили при комнатной температуре в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (224 г, 79% выход) в виде кристаллического твердого вещества светло-коричневого цвета. 1Н ЯМР (400 МГц, MeOH-d6) 5 4,15 (т, J=6,4 Гц, 2Н), 3,18 (м, 8Н), 1,86 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н), 1,30 (т, т=7,9Гц, 9Н).
Пример 7. Получение гидрохлорида 1-[[(6К,7Я)-7-[[(22)-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)[(3-^трет-бутоксикарбониламинопропокси)имино] ацетил] амино] -2-карбокси-8 -оксо-5 -тиа-1 -азабицикло [4.2.0] окт-2-ен-3 -1 ] метил] пиридиния.
К смеси триэтиламиновой соли (22)-2-(2-амино-5-хлортиазол-4-ил)-2-(3-^трет-бутокси-карбониламинопропоксиимино)уксусной кислоты (44,88 г, 93,5 ммоль) в диметилацетамиде (300 мл) при 20°С добавляли дитиобис(бензотиазол) (32,7 г, 98,2 ммоль). Добавляли трифенилфосфин (25,8 г, 98,2 ммоль) (незначительный экзотермический эффект) и полученную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре, в процессе чего реакционная смесь превращалась в прозрачный раствор красно-коричневого цвета. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли диизопропилэтиламин (14,8 мл, 85 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение приблизительно 5 мин, а затем добавляли 1-[[(6К,7Я)-7-амино-2-карбокси-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-3-ил]метил]пиридиния хлорид моногидрохлорид (7-русА) (34,00 г, 85,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 16 ч, а затем медленно добавляли раствор соляной кислоты в 1,4-диоксане (4,0М, 44,6 мл, 178,5 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру реакционной смеси в диапазоне от приблизительно 0 до приблизительно 5°С. Полученную смесь перемешивали в течение приблизительно 20 мин, а затем фильтровали через фильтровальную бумагу. Затем к этилацетату (2,5 л) медленно добавляли фильтрат в течение 30 мин при комнатной температуре с образованием осадка. Полученную суспензию перемешивали в течение приблизительно 1 ч при комнатной температуре, и потом осадок собирали фильтрованием в атмосфере сухого азота. Влажный осадок на фильтре промывали этилацетатом (1x300 мл) и метил-трет-бутиловым эфиром (1x300 мл), затем сушили в струе сухого азота в течение приблизительно 25 мин. Потом вещество сушили в вакуумной печи в течение 4 ч при комнатной температуре с получением указанного в заголовке соединения (56,6 г, приблизительно 85% чистота).
Пример 8. Получение дигидрохлорида 1-[[(6Я,7Я)-7-[[(22)-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)[(3-аминопропокси)имино]ацетил]амино]-2-карбокси-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-3-1]метил] пиридиния.
К метанолу (187,5 мл, 4751,9 ммоль) при -10°С добавляли по каплям ацетилхлорид (138,8 мл, 1952,1 ммоль) при скорости, достаточной для поддержания внутренней температуры на уровне или ниже 15°С. После добавления реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Потом реакционную смесь добавляли по каплям к смеси гидрохлорида 1-[[(6Я,7Я)-7-[[(22)-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)[(3-N-трет-бутоксикарбониламинопропокси)имино]ацетил]амино]-2-карбокси-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-3-1]метил]пиридиния (50,0 г, 65,1 ммоль) в метаноле (187,5 мл), охлажденном до -10°С. Добавление выполняли со скоростью, достаточной для поддержания внутренней температуры реакционной смеси, равной или ниже 0°С.
Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение приблизительно 6 ч, а затем ее добавляли по каплям к ацетону (1,50 л). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем осадок собирали фильтрованием в атмосфере сухого азота. Влажный остаток на фильтре промывали 1:1 об./об. смесью изопропилового спирта и изопропилацетата (1x600 мл), а затем метил-трет-бутиловым эфиром (1x600 мл). Потом вещество сушили в вакуумной печи (с продувкой азотом) при комнатной температуре в течение приблизительно 4 ч с получением указанного в заголовке соединения (33,34 г, приблизительно 93,1% чистота). Вторую порцию указанного в заголовке соединения также вы
деляли из фильтрата аналогичным образом (2,6 г, приблизительно 90,6% чистота).
Пример 9. Получение тригидрохлорида 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден] амино] окси] пропил] амино] карбонил] -26-декарбоксиванкомицина.
К перемешиваемому раствору гидрохлорида ванкомицина (56,56 г, 38,07 ммоль) в смеси ДМСО (280,0 мл) и ДМФ (218,4 мл) при 0°С добавляли взвесь 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолин хлорида (12,04 г, 43,51 ммоль) в ДМСО (30,80 мл) и ДМФ (30,80 мл). Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение приблизительно 20 мин, а затем добавляли смесь дигидрохлорида 1-[[(6Я,7Я)-7-[[(22)-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)[(3-аминопропокси)имино]ацетил]амино]-2-карбокси-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-3-1]метил]пиридиния (28,00 г, 31,4 ммоль) в ДМСО (30,80 мл) и ДМФ (92,40 мл). Полученную смесь охлаждали до -10°С и перемешивали в течение 10 мин. К этой смеси добавляли ^^диизопропилэтиламин (DIPEA) (27,58 мл, 158,34 ммоль) при скорости, обеспечивающей поддержание температуры реакционной смеси ниже -5°С. После завершения добавления DIPEA реакционную смесь перемешивали при -10 до приблизительно 1 ч (при этом ВЭЖХ анализ показал, что реакция по существу завершена). К реакционной смеси добавляли 1н. водный раствор соляной кислоты (186,76 мл) при скорости, обеспечивающей поддержание температуры реакционной смеси ниже 0°С. После завершения добавления соляной кислоты, реакционную смесь нагревали до 10°С и добавляли смесь ацето-нитрила (560,0 мл) и воды (мл) 92.40. Затем к реакционной смеси добавляли ацетон (1,40 л) в течение приблизительно 1 ч и полученную взвесь перемешивали в течение приблизительно 30 мин. Потом, чтобы собрать твердый продукт (влажный осадок), взвесь фильтровали в атмосфере азота. Влажный остаток на фильтре промывали ацетоном (621,60 мл) и продували азотом до высыхания. К влажному остатку на фильтре добавляли ацетон (621,60 мл), и полученную смесь перемешивали с образованием взвеси, и затем фильтровали в атмосфере азота, чтобы собрать твердое вещество, которое продували азотом в течение приблизительно 20 мин. Потом твердое вещество сушили в вакууме при комнатной температуре в течение приблизительно 18 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде тригидрохлорид-ной соли (81,9 г, 39,12 ммоль, 92,2% выход).
Пример 10. Очистка 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил) -5 -тиа-1 -азабицикло [4.2.0] окт-2-ен-7 -ил] амино] -2-оксоэтилиден] амино] окси] пропил] амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина.
В 150-миллиметровую колонку из лабораторного стекла загружали сополимер поли(стирол-дивинилбензол) (PLRP-S, 100 А, 50 мкМ) и уравновешивали 98:2 об./об. раствором ацетатный буфер (100 мМ)/ацетонитрил в течение приблизительно 40 мин при скорости потока 15 мл/мин. Раствор тригидрохлорида 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина (9,0 г, 4,30 ммоль) в 98:2 об./об. растворе ацетатный буфер/ацетонитрил (120 мл), затем помещали на уравновешенную колонку. Колонку элюировали 98:2 об./об. раствором ацетатный буфер/ацетонитрил в течение приблизительно 10 мин при скорости потока 15 мл/мин, а затем 93:7 об./об. раствором ацетатный буфер/ацетонитрил в течение приблизительно 62 мин при скорости потока 15 мл/мин (при этом останавливалось элюирование примесей). Затем колонку элюировали последовательно (I) 92:8 об./об. раствором ацетатный буфер/ацетонитрил в течение приблизительно 80 мин; (II) 91:9 об./об. раствором ацетатный буфер/ацетонитрил в течение приблизительно 15 мин; (III) 89:11 об./об. раствором ацетатный буфер/ацетонитрил в течение приблизительно 20 мин; и (IV) 87:13 об./об. раствором ацетатный буфер/ацетонитрил в течение 20-30 мин (все при скорости потока 15 мл/мин). В процессе элюирования элюент контролировали с помощью УФ-детектора при 254 нм и собирали фракции, содержащие указанное в заголовке соединение. Фракции, содержащие указанное в заголовке соединение, объединяли с получением раствора указанного в заголовке соединения в виде три-ацетатной соли в приблизительно 1500 мл раствора ацетатный буфер/ацетонитрил.
Пример 11. Солевой обмен с получением дигидрохлорида 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил] амино] -2-оксоэтилиден] амино] окси] пропил] амино] карбонил] -26-декарбоксиванкомицина.
В 150-миллиметровую колонку из лабораторного стекла загружали сополимер поли(стирол-дивинилбензол) (PLRP-S, 100 А, 50 мкМ) и уравновешивали 98:2 об./об. раствором ацетатный буфер (100 мМ)/ацетонитрил в течение приблизительно 2,25 ч при скорости потока 15 мл/мин. Раствор указанного в заголовке соединения в виде три-ацетатной соли в растворе ацетатный буфер/ацетонитрил (приблизительно 1500 мл) разбавляли водой (4,6 л) и полученный раствор загружали в колонку при скорости потока 15-30 мл/мин в течение 4,65 ч. Колонку элюировали 98:2 об./об. 20 мМ водным раствором соляная кислота/ацетонитрил (600 мл) при скорости потока 10-15 мл/мин (приблизительно 48 мин). Затем колонку элюировали 80:20 об./об. 10 мМ водным раствором соляная кислота/ацетонитрил при скорости потока 15 мл/мин в течение 25 мин. В процессе элюирования элюент контролировали с помощью УФ-детектора при 254 нМ и элюент, содержащий указанное в заголовке соединение, собирали. Значение рН раствора, содержащего указанное в заголовке соединение, составляло 2,2 (при 13°С). Значение рН раствора устанавливали равным 4,27 (при 14°С) путем добавления 5 мас.% водного раствора бикарбоната натрия. По
лученный раствор, содержащий в основном дигидрохлоридную соль указанного в заголовке соединения, имел суммарный объем, равный 212 мл. Посредством ВЭЖХ было определено, что этот раствор содержит 26,0 мг/мл указанного в заголовке соединения (в виде эквивалента чистого основания). Раствор разбавляли холодной водой (212 мл) с получением раствора, имеющего общий объем 424 мл и содержащего 13 мг/мл в указанного в заголовке соединения (в виде эквивалента чистого основания). Пример 12. Получение стабильных образцов.
A. Моногидрохлоридная соль (формула I, где х равен приблизительно 1).
Значение рН раствора солевого обмена дигидрохлорида 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил] амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина (124 мл, 13,0 мг/мл свободного основания) доводили до рН 6,5 путем добавления 5 мас.% раствора бикарбоната натрия.
Образцы (2 мл каждая) этого раствора помещали в 21 флаконы с резиновыми пробками с отверстиями. Флаконы лиофилизировали при -40°С в вакууме (40-60 мторр) в течение приблизительно 5 дней с получением 21 флаконов, содержащих моногидрохлоридную соль (26 мг, в виде эквивалента чистого основания) (формула I, в которой x равен приблизительно 1) в виде лиофилизированного порошка.
Анализ репрезентативных флаконов показал, что образцы имели содержание воды 1,7% (по Карлу Фишеру), остаточного растворителя (ацетонитрил) 0,6% (ГХ-анализ) и чистоту 90,4% (ВЭЖХ-анализ).
B. Моногидрохлоридная соль (формула I, x равен приблизительно 1), сахароза и глицин.
К раствору моногидрохлорида 26-[[[3-[[(Z)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина (75 мл, 13,0 мг/мл, 975 мг) добавляли сахарозу (975 мг) и глицин (1,46 г). Смесь перемешивали до тех пор, пока вещество не растворилось. Значение рН полученного раствора составляло 6,7.
Образцы (2 мл каждый) этого раствора помещали в 21 флакон с резиновыми пробками с отверстиями. Флаконы лиофилизировали при -40°С в вакууме (40-60 мторр) в течение приблизительно 5 дней с получением 21 флаконов, содержащих моногидрохлоридную соль (26 мг в виде эквивалента чистого основания), сахарозу (26 мг) и глицин (39 мг) в виде лиофилизированного порошка.
Анализ репрезентативных флаконов показал, что образцы имели содержание воды 0,5% (по Карлу Фишеру), остаточного растворителя (ацетонитрил) 0,6% (ГХ-анализ) и чистоту 90,4% (ВЭЖХ-анализ).
C. Дигидрохлоридная соль (формула I, где х равен приблизительно 2).
Образцы (2 мл каждая) раствора солевого обмена дигидрохлорида 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил] амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина (124 мл, 13,0 мг/мл), имеющего рН 4,4, помещали в 21 флакон с резиновыми пробками с отверстиями.
Флаконы лиофилизировали при -40°С в вакууме (40-60 мторр) в течение приблизительно 6 дней с получением 21 флакона, содержащих дигидрохлоридную соль (26 мг в виде эквивалента чистого основания), в виде лиофилизированного порошка.
Анализ репрезентативных флаконов показал, что образцы имели содержание воды 1,1% (по Карлу Фишеру), остаточного растворителя (ацетонитрил) 0,3% (ГХ-анализ) и чистоту 90,1% (ВЭЖХ-анализ).
D. Дигидрохлоридная соль (формула I, где х равен приблизительно 2), сахароза и глицин.
К раствору солевого обмена дигидрохлорида 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина (150 мл, 13,0 мг/мл, 1,95 г) при рН 4,27 добавляли сахарозу (1,95 г) и смесь перемешивали до тех пор, пока сахароза не растворилась. К этому раствору (104 мл) добавляли глицин (2,03 г). Смесь перемешивали до тех пор, пока глицин не растворился.
Образцы (2 мл каждый) этого раствора помещали в 21 флакон с резиновыми пробками с отверстиями. Сосуды лиофилизировали при -40°С в вакууме (40-60 мторр) в течение приблизительно 6 дней с получением 21 флаконов, содержащих дигидрохлоридную соль (26 мг в виде эквивалента чистого основания), сахарозу (26 мг) и глицин (39 мг) в виде лиофилизированного порошка.
Анализ репрезентативных флаконов показал, что образцы имели содержание воды, составляющее 0,5% (по Карлу Фишеру), остаточного растворителя (ацетонитрил), составляющее 0,8% (ГХ-анализ) и чистоту 90,6% (ВЭЖХ-анализ).
E. Тригидрохлоридная соль (формула I, где х равен приблизительно 3).
Значение рН раствора солевого обмена дигидрохлорида 26-[[[3-[[^)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6R,7R)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил] амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина доводили до 2,0 путем добавления 1н. водного раствора соляной кислоты.
Образцы (2 мл каждый) этого раствора помещали в 21 флакон с резиновыми пробками с отверстиями. Сосуды лиофилизировали при -40°С в вакууме (40-60 мторр) в течение приблизительно 6 дней с получением 21 флакона, содержащих тригидрохлоридную соль (26 мг в виде эквивалента чистого основа- 16
ния) в виде лиофилизированного порошка.
Анализ репрезентативных флаконов показал, что образцы имеют содержание воды, составляющее <0,8% (Karl Fisher), остаточного растворителя (ацетонитрил), составляющее 0,3% (ГХ-анализ), и чистоту 84,5% (ВЭЖХ-анализ).
F. Тригидрохлоридная соль (формула I, где х равен приблизительно 3), сахароза и глицин.
Значение рН раствора дигидрохлорида 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден] амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина (13,0 мг/мл), сахарозы (13,0 мг/мл) и глицина (19,5 мг/мл) доводили до 2,0 путем добавления по каплям 1н. водного раствора соляной кислоты.
Образцы (2 мл каждый) этого раствора помещали в 21 флакон с резиновыми пробками с отверстиями. Сосуды лиофилизировали при -40°С в вакууме (40-60 мторр) в течение приблизительно 5 дней с получением 21 флаконов, содержащих тригидрохлоридную соль (26 мг в виде эквивалента чистого основания), сахарозу (26 мг) и глицин (39 мг) в виде лиофилизированного порошка.
Анализ репрезентативных флаконов показал, что образцы имели содержание воды 0,5% (Karl Fisher), остаточного растворителя (ацетонитрил), составлял 0,1% (ГХ-анализ) и чистоту 91,3% (ВЭЖХ-анализ).
Пример 13. Хранение и анализ стабильных образцов.
Подготавливали две подставки, содержащие по шесть флаконов каждого типа стабильного образца (примеры 12A-F; 6x6=36 флаконов). Одну подставку хранили в защищенном от света ящике при комнатной температуре, а другую хранили в холодильнике при температуре в диапазоне от 2 до 8°С. Репрезентативный сосуд каждого типа с стабильным образцом анализировали методом ВЭЖХ после хранения в течение 1, 3, 6 и 12 месяцев для определения чистоты. Результаты показаны в табл. 1-6.
Таблица 1. Стабильность соединений формулы I при хранении при температуре охлаждения
Время (М)1
Моногидрохлорид
Дигидрохлорид
Тригидрохлорид
Чистота
(%)2
Чистота
(%)
Чистота
(%)
90, 4
90, 1
84,5
90, 0
-0,4
89, 9
-0,2
84,0
-0,5
90, 2
-0,2
89, 4
-0,7
80,7
-3, 8
90, 4
0, 0
90, 8
0,7
79, 4
-5,1
87, 4
-3,0
87,2
-2,9
76, 0
-8, 6
1 Время в месяцах.
2 Чистота образца, вычисляемая по площади ВЭЖХ, выраженная в процентах.
3 Изменение чистоты, выраженной в процентах, начиная с момента времени = 0. Данные в табл. 1 показывают, что чистота тригидрохлоридной соли (формула I, где х равен приблизительно 3) снизилась значительно больше, чем чистота любой моно- или дигидрохлоридной соли при хранении солей при температуре в пределах от 2 до 8°С в течение 12 месяцев. Чистота тригидрохлорид-ной соли снизилась на 8,6% по сравнению с 3,0 и 2,9% для моно- и дигидрохлоридной соли соответственно. Эти результаты представлены на фиг. 1.
Таблица 2. Стабильность соединений формулы I при хранении при комнатной температуре
Время (М) 1
Моногидрохлорид
Дигидрохлорид
Тригидрохлорид
Чистота
(%)2
Чистота
(%)
Чистота
(%)
90, 4
90, 1
84,5
89, 3
-1,1
85, 3
-4,8
74,8
-9, 7
82, 0
-8,4
82, 5
-7, 6
69, 5
-15, 0
79, 9
-10,5
81,4
-8,7
56, 5
-28,0
67, 0
-23,4
69, 6
-20,5
50, 4
-34, 2
Время в месяцах.
2 Чистота образца, вычисляемая по площади ВЭЖХ, выраженная в процентах.
3 Изменение чистоты, выраженной в процентах, начиная с момента времени = 0. Данные в табл. 2 показывают, что чистота тригидрохлоридной соли (формула I, где х равен приблизительно 3) снизилась значительно больше, чем чистота любой моно- или дигидрохлоридной соли, при хранении солей при комнатной температуре в течение 12 месяцев. Чистота тригидрохлоридной соли снизилась на 34,2% по сравнению с 23,4 и 20,5% для моно- и дигидрохлоридной соли соответственно. Эти результаты показаны на фиг. 2.
Время в месяцах.
2 Чистота образца, вычисляемая по площади ВЭЖХ, выраженная в процентах.
3 Изменение чистоты, выраженной в процентах, начиная с момента времени = 0. Данные в табл. 3 показывают, что чистота моно-, ди- и тригидрохлоридных солей (формула I, где х
равно приблизительно 1, 2 и 3 соответственно) понизилась на такое же количество процентов, когда соли объединяли в композиции с сахарозой и глицином, и хранили при температуре в диапазоне от 2 до 8°С в течение 12 месяцев. Чистота моно-, ди- и тригидрохлоридных солей уменьшалась на 1,9, 2,9 и 1,2% соответственно.
Таблица 4. Стабильность соединений формулы I при хранении при комнатной температуре в композиции, содержащей сахарозу и глицин
Время (М)1
Моногидрохлорид
Дигидрохлорид
Тригидрохлорид
Чистота
(%)2
Чистота
(%)
Чистот
а(%)
90,4
90, 6
91, 3
89, 0
-1,4
89, 8
-0, 8
89,2
-2,1
86,9
-3,5
87,7
-2,9
84,4
-6,9
87,9
-2,5
90, 8
0,2
82, 5
-8,8
81,5
-8,9
83, 8
-б, 8
65, 0
-26, 3
Время в месяцах.
2 Чистота образца, вычисляемая по площади ВЭЖХ, выраженная в процентах.
3 Изменение чистоты, выраженной в процентах, начиная с момента времени = 0. Данные в табл. 4 показывают, что чистота тригидрохлоридной соли (формула I, где х равен приблизительно 3) снизилась значительно больше, чем чистота любой моно- или дигидрохлоридной соли, когда соли объединяли в композиции с сахарозой и глицином, и хранили при комнатной температуре в течение 12 месяцев. Чистота тригидрохлоридной соли снизились на 26,3% по сравнению с 8,9 и 6,8% для моно- и дигидрохлоридных солей соответственно. Эти результаты показаны на фиг. 3.
Таблица 5. Стабильность моногидрохлоридной соли (формула I, где х равен приблизительно 1)
при хранении при комнатной температуре
Время (М) 1
Моно НС1
Моно НС1+Сахароза+Глицин
Чистота
(%)2
Чистота
(%)
90, 4
90, 4
89, 3
-1,1
89, 0
-1,4
82, 0
-8,4
86, 9
-3,5
79, 9
-10,5
87,9
-2,5
67, 0
-23,4
81,5
-8,9
Время в месяцах.
2 Чистота образца, вычисляемая по площади ВЭЖХ, выраженная в процентах.
3 Изменение чистоты, выраженной в процентах, начиная с момента времени = 0. Данные в табл. 5, показывают, что чистота моногидрохлоридной соли (формула I, где х равно приблизительно 1) снизились значительно меньше в случае, когда соль объединяли в композицию с сахарозой и глицином, и хранили при комнатной температуре в течение 12 месяцев. Чистоте моногидрохло-ридной соли снизились на 23,4% по сравнению с 8,9% для моногидрохлорида, объединенного в композиции с сахарозой и глицином. Эти результаты показаны на фиг. 4.
1 Время в месяцах.
2 Чистота образца, вычисляемая по площади ВЭЖХ, выраженная в процентах.
3 Изменение чистоты, выраженной в процентах, начиная с момента времени = 0. Данные в табл. 6 показывают, что чистота дигидрохлоридной соли (формула I, где х равен приблизительно 2) снизилась значительно меньше в случае, когда соль объединена в композиции с сахарозой и глицином, и хранили при комнатной температуре в течение 12 месяцев. Чистота дигидрохлоридной соли снизились на 20,5% по сравнению с 6,8% для дигидрохлорида, объединенного в композиции с сахарозой и глицином. Эти результаты показаны на фиг. 5.
Таким образом, соединения формулы I, где х равен приблизительно 1 и приблизительно 2, т.е. моно- и дигидрохлоридные соли, значительно более стабильны, чем тригидрохлоридная соль, при хранении солей в течение 12 месяцев или при комнатной температуре или при температуре в диапазоне от 2 до 8°С. Кроме того, моно- и дигидрохлоридные соли являются более стабильными при хранении при комнатной температуре в течение 12 месяцев в случае, когда такие соли объединены в композиции с сахарозой и глицином.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы I
в которой х находится в пределах от 1 до 2.
2. Соединение по п.1, где х равен 1.
3. Соединение по п.1, где х равен 2.
4. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение по пп.1, 2 или 3.
5. Фармацевтическая композиция, содержащая (а) соединение по пп.1, 2 или 3; (b) сахарозу и (с) глицин или его фармацевтически приемлемую соль.
6. Фармацевтическая композиция по п.5, где композиция является лиофилизированной композицией.
7. Фармацевтическая композиция, содержащая:
(a) соединение по пп.1, 2 или 3;
(b) от 0,5 до 2,0 мас.ч. сахарозы и
(c) от 0,5 до 2,0 мас.ч. глицина (в виде эквивалента свободного основания);
где массовые части сахарозы и глицина основаны на массовой части соединения по пп.1, 2 или 3 (в виде эквивалента свободного основания).
8. Фармацевтическая композиция по п.6, где композиция содержит 1,0 мас.ч. сахарозы и 1,5 мас.ч.
глицина.
9. Фармацевтическая композиция по п.8, где изменение чистоты соединения по пп.1, 2 или 3 (в виде
эквивалента свободного основания) в фармацевтической композиции составляет меньше чем 10%, что
определено высокоэффективной жидкостной хроматографией после хранения в течение 12 месяцев при
температуре в пределах от 18 до 25°С.
10. Способ лечения бактериальной инфекции у пациента, включающий введение пациенту соединения по пп.1, 2 или 3.
11. Способ лечения бактериальной инфекции у пациента, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, включающей фармацевтически приемлемый носитель и соединение по пп.1, 2 или 3.
12. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для лечения бактериальной инфекции.
13. Применение соединения по пп.1, 2 или 3 для получения лекарственного средства.
14. Способ получения соединения по п.1, где указанный способ включает следующие стадии:
(a) приготовление водной композиции, содержащей 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксо-этилиден]амино]окси]пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицин и соляную кислоту в молярном соотношении от 1:1 до 1:2;
(b) лиофилизация водной композиции с получением соединения по п.1.
15. Способ по п.14, где молярное соотношение составляет 1:1.
16. Способ по п.14, где молярное соотношение составляет 1:2.
17. Способ снижения распада 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина во время хранения, где способ включает (а) полу-
чение соединения по пп.1, 2 или 3 и (b) хранение соединения по пп.1, 2 или 3 при температуре в пределах
от -25 до 25°С.
18. Способ по п.17, где температура находится в диапазоне от 2 до 8°С.
19. Способ снижения распада 26-[[[3-[[(2)-[1-(2-амино-5-хлор-4-тиазолил)-2-[[(6Я,7Я)-2-карбокси-8-оксо-3-(пиридиниометил)-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-7-ил]амино]-2-оксоэтилиден]амино]окси] пропил]амино]карбонил]-26-декарбоксиванкомицина во время хранения, где способ включает (а) получение фармацевтической композиции по п.8 и (b) хранение фармацевтической композиции при температуре в диапазоне от -25 до 25°С.
20. Способ по п.19, где температура находится в диапазоне от 2 до 8°С.
18.
18.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027282
027282
- 1 -
- 1 -
027282
027282
- 1 -
- 1 -
027282
027282
- 1 -
- 1 -
027282
027282
- 4 -
- 3 -
027282
027282
- 15 -
027282
027282
- 18 -
- 18 -
027282
027282
- 19 -
027282
027282
- 21 -
027282
027282
- 22 -
- 22 -