|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Соединение формулы I  в которой А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота и необязательно 1 атом кислорода, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 группами, выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил и оксогруппу; R 1 обозначает С 1 -С 4 -алкил, необязательно замещенный метоксигруппой; R 2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, C 1 -С 3 -алкил, -CN, -ОМе и -CF 3 ; R 3 выбран из группы, включающей Н и -СН 3 ; R 4 выбран из группы, включающей Н, F, -СН 3 и -ОМе; R 5 выбран из группы, включающей Н, Cl, -CH 3 , -CH 2 CH 3 , -CF 3 , F и -ОМе; R 6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, C 1 -С 6 -алкил, -(CH 2 ) n C 3 -C 6 -циклоалкил, -С(О)С 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n -гетероциклил, -SO 2 -арил, SO 2 C 1 -C 6 -алкил, где указанные C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n -гетероциклил и -(CH 2 ) n C 3 -C 6 -циклоалкил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил, галоген, C 1 -С 3 -алкоксигруппу, -CF 3 , -ОН, оксогруппу, -(СН 2 ) 1-3 O(СН 2 ) 2-3 ОН и -SO 2 CH 3 , где термин "гетероциклил" означает 4-8-членный моноциклический гетероциклический радикал или 6-11-членный конденсированный бициклический, мостиковый бициклический или спироциклический гетероциклический радикал, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу; R 7 выбран из группы, включающей Н, -СН 3 , -СН 2 СН 3 , -CF 3 , F и -CN; n равно 0, 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, в котором А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 C 1 -С 3 -алкильными группами, R 1 обозначает C 1 -С 3 -алкил, R 2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, C 1 -С 3 -алкил, -CN, -ОМе и -CF 3 , R 3 выбран из группы, включающей Н и -СН 3 , R 4 выбран из группы, включающей Н и F, R 5 выбран из группы, включающей Н, Cl и -СН 3 , R 6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил, -С(О)С 1 -С 6 -алкил и -(СН 2 ) n -гетероциклил, где указанные C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n -гетероциклил и -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил, галоген, C 1 -С 3 -алкоксигруппу, -CF 3 , -ОН и -SO 2 CH 3 , R 7 обозначает Н, n равно 0, 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Соединение по п.1 или 2, в котором R 1 обозначает метил, этил или изопропил и группа  выбрана из группы, включающей  или его фармацевтически приемлемая соль. 4. Соединение по любому из пп.1-3, в котором R 2 выбран из группы, включающей -СН 3 , F, Cl и -CF 3 ; и R 6 выбран из группы, включающей Н, C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил, -С(О)С 1 -С 6 -алкил и -(СН 2 ) n -гетероциклил, где указанные C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил и -(СН 2 ) n -гетероциклил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил, галоген, C 1 -С 3 -алкоксигруппу, -CF 3 , -ОН и -SO 2 CH 3 ; или его фармацевтически приемлемая соль. 5. Соединение по любому из пп. 1-4, в котором каждый гетероциклил, указанный в определении R 6 , выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 2-оксабицикло [3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил, 1-оксаспиро[4.5]деканил и пирролидин-2-он; или его фармацевтически приемлемая соль. 6. Соединение по любому из пп.1-5, в котором R 6 обозначает -(СН 2 ) n -гетероциклил, где указанный гетероциклил выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 2-оксабицикло[3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил и 1-оксаспиро[4.5]деканил; или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение по любому из пп.1-6, в котором R 2 обозначает -СН 3 ; R 3 обозначает Н; R 4 обозначает Н или -СН 3 ; R 5 обозначает Н или -СН 3 ; R 7 находится в пара-положении по отношению к R 5 и обозначает Н, -СН 3 или -СН 2 СН 3 ; или его фармацевтически приемлемая соль. 8. Соединение по любому из пп.1-7, в котором группа  представляет собой  или его фармацевтически приемлемая соль. 9. Соединение по любому из пп.1-8, в котором R 3 обозначает Н и R 4 обозначает Н; или его фармацевтически приемлемая соль. 10. Соединение, выбранное из группы, включающей                                и их фармацевтически приемлемые соли. 11. Соединение по п.10, выбранное из группы, включающей соединения №№ 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 12, 15, 16, 18, 21, 27, 28, 30, 31, 35, 36, 39, 41, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 57, 59, 62, 68, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 88, 92, 93 и 94 и их фармацевтически приемлемые соли. 12. Соединение по п.10, выбранное из группы, включающей соединения №№ 95, 97, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 145, 146, 152, 153, 154, 155, 157, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 191, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 222, 223, 224, 225, 227, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257 и их фармацевтически приемлемые соли. 13. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 14. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 15. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 16. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 17. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 18. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 19. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 20. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 21. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 22. Соединение по п.1, где соединение представляет собой  или его фармацевтически приемлемую соль. 23. Фармацевтическая композиция для активации и/или потенциации растворимой гуанилатциклазы (рГЦ), содержащая соединение по любому из пп.1-22 и фармацевтически приемлемый инертный наполнитель или носитель. 24. Способ лечения заболевания или нарушения, течение которых можно облегчить путем активации или потенциации рГЦ, включающий введение нуждающемуся в нем пациенту соединения по любому из пп.1-22 в терапевтически эффективном количестве. 25. Способ по п.24, в котором заболевание или нарушение выбрано из группы, включающей сердечно-сосудистое заболевание, воспалительное заболевание, фиброзное нарушение печени, фиброзное нарушение почек, фиброзное нарушение легких и фиброзное нарушение сердца. 26. Способ по п.24, в котором заболевание выбрано из группы, включающей заболевание почек, гиперактивность мочевого пузыря, доброкачественную гиперплазию предстательной железы, эректильную дисфункцию, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и невропатическую боль. 27. Способ по п.24, в котором заболеванием является диабетическая нефропатия.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Соединение формулы I в которой А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота и необязательно 1 атом кислорода, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 группами, выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил и оксогруппу; R 1 обозначает С 1 -С 4 -алкил, необязательно замещенный метоксигруппой; R 2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, C 1 -С 3 -алкил, -CN, -ОМе и -CF 3 ; R 3 выбран из группы, включающей Н и -СН 3 ; R 4 выбран из группы, включающей Н, F, -СН 3 и -ОМе; R 5 выбран из группы, включающей Н, Cl, -CH 3 , -CH 2 CH 3 , -CF 3 , F и -ОМе; R 6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, C 1 -С 6 -алкил, -(CH 2 ) n C 3 -C 6 -циклоалкил, -С(О)С 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n -гетероциклил, -SO 2 -арил, SO 2 C 1 -C 6 -алкил, где указанные C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n -гетероциклил и -(CH 2 ) n C 3 -C 6 -циклоалкил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил, галоген, C 1 -С 3 -алкоксигруппу, -CF 3 , -ОН, оксогруппу, -(СН 2 ) 1-3 O(СН 2 ) 2-3 ОН и -SO 2 CH 3 , где термин "гетероциклил" означает 4-8-членный моноциклический гетероциклический радикал или 6-11-членный конденсированный бициклический, мостиковый бициклический или спироциклический гетероциклический радикал, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу; R 7 выбран из группы, включающей Н, -СН 3 , -СН 2 СН 3 , -CF 3 , F и -CN; n равно 0, 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, в котором А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 C 1 -С 3 -алкильными группами, R 1 обозначает C 1 -С 3 -алкил, R 2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, C 1 -С 3 -алкил, -CN, -ОМе и -CF 3 , R 3 выбран из группы, включающей Н и -СН 3 , R 4 выбран из группы, включающей Н и F, R 5 выбран из группы, включающей Н, Cl и -СН 3 , R 6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил, -С(О)С 1 -С 6 -алкил и -(СН 2 ) n -гетероциклил, где указанные C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n -гетероциклил и -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил, галоген, C 1 -С 3 -алкоксигруппу, -CF 3 , -ОН и -SO 2 CH 3 , R 7 обозначает Н, n равно 0, 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Соединение по п.1 или 2, в котором R 1 обозначает метил, этил или изопропил и группа выбрана из группы, включающей или его фармацевтически приемлемая соль. 4. Соединение по любому из пп.1-3, в котором R 2 выбран из группы, включающей -СН 3 , F, Cl и -CF 3 ; и R 6 выбран из группы, включающей Н, C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил, -С(О)С 1 -С 6 -алкил и -(СН 2 ) n -гетероциклил, где указанные C 1 -С 6 -алкил, -(СН 2 ) n C 3 -С 6 -циклоалкил и -(СН 2 ) n -гетероциклил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей C 1 -С 3 -алкил, галоген, C 1 -С 3 -алкоксигруппу, -CF 3 , -ОН и -SO 2 CH 3 ; или его фармацевтически приемлемая соль. 5. Соединение по любому из пп. 1-4, в котором каждый гетероциклил, указанный в определении R 6 , выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 2-оксабицикло [3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил, 1-оксаспиро[4.5]деканил и пирролидин-2-он; или его фармацевтически приемлемая соль. 6. Соединение по любому из пп.1-5, в котором R 6 обозначает -(СН 2 ) n -гетероциклил, где указанный гетероциклил выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 2-оксабицикло[3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил и 1-оксаспиро[4.5]деканил; или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение по любому из пп.1-6, в котором R 2 обозначает -СН 3 ; R 3 обозначает Н; R 4 обозначает Н или -СН 3 ; R 5 обозначает Н или -СН 3 ; R 7 находится в пара-положении по отношению к R 5 и обозначает Н, -СН 3 или -СН 2 СН 3 ; или его фармацевтически приемлемая соль. 8. Соединение по любому из пп.1-7, в котором группа представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль. 9. Соединение по любому из пп.1-8, в котором R 3 обозначает Н и R 4 обозначает Н; или его фармацевтически приемлемая соль. 10. Соединение, выбранное из группы, включающей и их фармацевтически приемлемые соли. 11. Соединение по п.10, выбранное из группы, включающей соединения №№ 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 12, 15, 16, 18, 21, 27, 28, 30, 31, 35, 36, 39, 41, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 57, 59, 62, 68, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 88, 92, 93 и 94 и их фармацевтически приемлемые соли. 12. Соединение по п.10, выбранное из группы, включающей соединения №№ 95, 97, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 145, 146, 152, 153, 154, 155, 157, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 191, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 222, 223, 224, 225, 227, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257 и их фармацевтически приемлемые соли. 13. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 14. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 15. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 16. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 17. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 18. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 19. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 20. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 21. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 22. Соединение по п.1, где соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемую соль. 23. Фармацевтическая композиция для активации и/или потенциации растворимой гуанилатциклазы (рГЦ), содержащая соединение по любому из пп.1-22 и фармацевтически приемлемый инертный наполнитель или носитель. 24. Способ лечения заболевания или нарушения, течение которых можно облегчить путем активации или потенциации рГЦ, включающий введение нуждающемуся в нем пациенту соединения по любому из пп.1-22 в терапевтически эффективном количестве. 25. Способ по п.24, в котором заболевание или нарушение выбрано из группы, включающей сердечно-сосудистое заболевание, воспалительное заболевание, фиброзное нарушение печени, фиброзное нарушение почек, фиброзное нарушение легких и фиброзное нарушение сердца. 26. Способ по п.24, в котором заболевание выбрано из группы, включающей заболевание почек, гиперактивность мочевого пузыря, доброкачественную гиперплазию предстательной железы, эректильную дисфункцию, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и невропатическую боль. 27. Способ по п.24, в котором заболеванием является диабетическая нефропатия.
Евразийское 027244 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.07.31
(21) Номер заявки 201500298
(22) Дата подачи заявки
2013.09.03
(51) Int. Cl.
C07D 401/14 (2006.01) A61K31/4439 (2006.01) A61P 9/00 (2006.01) A61P 13/00 (2006.01) A61P 25/00 (2006.01) A61P 3/00 (2006.01)
(54) АЛКОКСИПИРАЗОЛЫ В КАЧЕСТВЕ АКТИВАТОРОВ РАСТВОРИМОЙ ГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ
(31) 61/697,899
(32) 2012.09.07
(33) US
(43) 2015.08.31
(86) PCT/US2013/057826
(87) WO 2014/039434 2014.03.13
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
БЁРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГМБХ (DE)
(72) Изобретатель:
Бреннмен Джерод Бернетт, Джинн Джон Дейвид, Леу Майкл Д., Сарко
(57) Описаны соединения формулы (I)
Кристофер Роналд, Тасбер Эдуард С., Чжан Чжонхуа (US)
(74) Представитель:
Веселицкая И.А., Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б., Каксис Р.А., Белоусов Ю.В., Куликов А.В., Кузнецова Е.В., Соколов Р.А., Кузнецова Т.В. (RU)
(56) WO-A1-2009071504 WO-A1-2009032249 WO-A1-2010015653
и их фармацевтически приемлемые соли, в которой R1, R2, R3, R4, R5, R6 и R7 являются такими, как определено в настоящем изобретении. Также описаны фармацевтические композиции, содержащие эти соединения, способы применения этих соединений для лечения различных заболеваний и нарушений, способы получения этих соединений и промежуточных продуктов, применимых в этих способах.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к гетероциклическим соединениям, которые применимы в качестве активаторов растворимой гуанилатциклазы и поэтому применимы для лечения различных заболеваний, которые опосредуются или поддерживаются пониженной или ослабленной активностью растворимой гуанилатциклазы, включая сердечно-сосудистые заболевания, заболевание почек, диабет, фиброзные нарушения, урологические нарушения, неврологические нарушения и воспалительные нарушения. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, способам применения этих соединений для лечения различных заболеваний и нарушений, способам получения этих соединений и промежуточным продуктам, применимым в этих способах.
Уровень техники
Растворимая гуанилатциклаза (рГЦ) является рецептором оксида азота (NO), который содержится в цитоплазме многих типов клеток. У людей функциональная рГЦ представляет собой гетеродимер, состоящий из субъединицы а1 или а2, объединенной с субъединицей р1, которая содержит гем-простетическую группу. При условиях, не являющихся патофизиологическими, связывание NO с гемом рГЦ активирует фермент, и он катализирует превращение гуанозин-5'-трифосфата (ГТФ) в циклический гуанозинмонофосфат (цГМФ). цГМФ является вторичным мессенджером, который оказывает воздействие путем модулирования зависимых от цГМФ изоформ протеинкиназы (PKG), фосфодиэстераз и управляемых с помощью цГМФ ионных каналов. Показано, что действуя таким образом, рГЦ модулирует множество путей передачи сигналов, связанных с заболеваниями, которые включают артериальную ги-пертензию, легочную гипертензию, атеросклероз, сердечную недостаточность, цирроз печени, фиброз почек и эректильную дисфункцию (О. Evgenov et al., Nature Reviews, 2006, 5, 755-768 и Y. Wang-Rosenke et al., Curr. Med. Chem., 2008, 15, 1396-1406).
При обычных условиях содержащееся в рГЦ железо обладает степенью окисления II и может связываться с NO и монооксидом углерода (СО). Однако опубликованные результаты указывают на то, что при условиях окислительного стресса, который может наблюдаться при различных заболеваниях, содержащееся в геме железо окисляется до степени окисления III и не может быть активировано с помощью NO или СО. Предполагается, что неспособность NO передавать сигнал через рГЦ с помощью гема, содержащего окисленное железо, содействует развитию заболевания. Недавно описаны два новых класса соединений, которые потенцируют активность рГЦ зависимым от гема образом (стимуляторы рГЦ) и независимым от гема образом (активаторы рГЦ). Активность стимуляторов рГЦ синергетически с NO усиливает продуцирование цГМФ, тогда как активаторы рГЦ только аддитивно с NO повышают концентрацию цГМФ (О. Evgenov et al., Nature Reviews, 2006, 5, 755-768). В моделях заболевания на животных показано, что и стимуляторы, и активаторы рГЦ оказывают благоприятное воздействие. Активаторы рГЦ обладают тем преимуществом, что они могут селективно воздействовать на пораженную, нефункциональную форму фермента. Активаторы рГЦ включают BAY 58-2667 (цинацигуат) (J-P Stasch et al., Brit. J. Pharmacol., 2002, 136, 773-783) и HMR-1766 (атацикват) (U. Schindler et al., 2006, Mol. Pharmacol., 69,
1260-1268).
NO играет важную роль в поддержании нормальной функции клеток и тканей. Однако необходимый путь передачи сигнала NO может быть нарушен на ряде стадий. Передача сигнала NO может быть нарушена вследствие снижения концентрации ферментов синтазы оксида азота (NOS), активности NOS, биологической доступности NO, концентрации рГЦ и активности рГЦ. С помощью активаторов рГЦ, вероятно, можно обойти функциональное затруднение, возникающее вследствие всех этих нарушений. Поскольку активация рГЦ происходит в прямом направлении от синтеза NO или доступности NO, их недостаточность не влияет на активность активаторов рГЦ. Как отмечено выше, активность рГЦ, функция которой нарушена окислением содержащегося в геме железа, корректируется активаторами рГЦ. Таким образом, активаторы рГЦ, вероятно, оказывают благоприятное воздействие при многих заболеваниях, вызванных нарушением пути передачи сигнала NO.
Активация рГЦ, вероятно, оказывает благоприятное терапевтическое воздействие при атеросклерозе и артериосклерозе. Показано, что лечение цинацигуатом предупреждает неоинтимальную гиперплазию после удаления эндотелия путем повреждения сонной артерии у крыс проволокой (K. Hirschberg et al., Cardiovasc. Res., 2010, 87, Suppl. 1, S100, Abstract 343). Атацикват подавляет образование атероскле-ротических бляшек у мышей АроЕ-/-, которым дают обладающий высоким содержанием жира кормовой рацион (М. van Eickels, ВМС Pharmacology, 2007, 7, Suppl. 1, S4). Уменьшенное продуцирование NO у мышей с дефицитом эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) усиливает воспаление сосудов и резистентность к инсулину, как ответ на избыток питательных веществ. В том же исследовании показано, что ингибитор фосфодиэстеразы 5 (PDE5) силденафил уменьшает воспаление сосудов и резистентность к инсулину у мышей, которым дают обладающий высоким содержанием жира кормовой рацион (N. Rizzo et al., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 2010, 30, 758-765). Кроме того, после повреждения баллоном сонной артерии у крыс in vivo стимулятор рГЦ (YC-1) подавляет образование неоинтимы (С. Wu, J. Pharmacol. Sci., 2004, 94, 252-260.
Активация рГЦ может ослабить осложнения при диабете. Вызванное глюкозой подавление высвобождения глюкагона устраняется в панкреатических островках, в которых отсутствует PKG, что указы
вает на роль вызванного с помощью рГЦ продуцирования цГМФ при регулировании глюкозы (V. Leiss et al., ВМС Pharmacology, 2009, 9, Suppl. 1, P40).
В клинических исследованиях надежно установлено, что повышение концентрации цГМФ путем введения ингибиторов PDE5 эффективно при лечении эректильной дисфункции (ЭД). Однако 30% страдающих ЭД пациентов невосприимчивы к лечению ингибитором PDE5 (S. Gur et al., Curr. Pharm. Des., 2010, 16, 1619-1633). Стимулятор рГЦ BAY-41-2272 позволяет расслабить мышцы пещеристого тела зависимым от рГЦ образом и это позволяет предположить, что повышение активности рГЦ может оказаться полезным для страдающих ЭД пациентов (С. Teixeira et al., J. Pharmacol. & Exp. Ther., 2007, 322, 10931102). Кроме того, стимуляторы рГЦ и активаторы рГЦ при использовании по отдельности или в комбинации с ингибитором PDE5 смогли лечить ЭД в моделях на животных (WO 10/081647).
Имеются данные о том, что активация рГЦ может быть применима для предупреждения фиброза тканей, включая ткани легких, печени и почек. Установлено, что эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) и превращение фибробластов в миофибробласты играют роль в фиброзе тканей. Использование цинацигуата или BAY 41-2272 в комбинации с силденафилом ингибирует превращение фибробластов в миофибробласты в легких (Т. Dunkern et al., Eur. J. Pharm., 2007, 572, 12-22). NO может ингибировать ЭМП клеток альвеолярного эпителия (S. Vyas-Read et al., Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2007, 293, 1212-1221), и это позволяет предположить, что в этом процессе участвует активация рГЦ. Также показано, что NO ингибирует передачу сигнала гломерулярной TGF-р (Е. Dreieicher et al., J. Am. Soc. Nephrol., 2009, 20, 1963-1974), и это указывает на то, что активация рГЦ может обеспечивать подавление гломерулярного склероза. В моделях для фиброза печени с использованием сыворотки свиньи и с использованием тетрахлорида углерода активатор рГЦ (BAY 60-2260) эффективно подавляет фиброз (A. Knorr et al., Arzneimittel-Forschung, 2008, 58, 71-80).
В клинических исследованиях продемонстрирована эффективность использования активатора рГЦ цинацигуата для лечения острой декомпенсированной сердечной недостаточности (Н. Lapp et al., Circulation, 2009, 119, 2781-2788). Это согласуется с результатами исследования с использованием модели для вызванной кардиостимулятором сердечной недостаточности у собак, в которой срочное внутривенное вливание цинацигуата обеспечивает разгрузку сердца (G. Boerrigter et al., Hypertension, 2007, 49, 11281133). В модели для вызванной инфарктом миокарда хронической сердечной недостаточности у крыс HMR 1766 улучшает сердечную функцию и уменьшает фиброз сердца и его действие дополнительно усиливается рамиприлом (F. Daniela, Circulation, 2009, 120, Suppl. 2, S852-S853).
Активаторы рГЦ можно использовать для лечения гипертензии. Это явно продемонстрировано в клинических исследованиях, в которых дозу цинацигуата подбирают с учетом величины, на которую уменьшается кровяное давление (Н. Lapp et al., Circulation, 2009, 119, 2781-2788). Ранее в доклинических исследованиях с использованием цинацигуата показана возможность снижения кровяного давления путем активации рГЦ (J.-P. Stasch et al., 2006, J. Clin. Invest., 116, 2552-2561). Аналогичные данные также получены в исследованиях с использованием активатора рГЦ HMR 1766 (U. Schindler et al., 2006, Mol.
Pharmacol., 69, 1260-1268).
Активация рГЦ, вероятно, ослабляет воспаление путем воздействия на эндотелий. BAY 41-2272 и донор NO ингибируют прокатывание и адгезию лейкоцитов у мышей с дефицитом eNOS. Показано, что это опосредовано негативной регуляцией экспрессии молекулы клеточной адгезии, Р-селектина (А. Ahluwalla et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, 101, 1386-1391). Показано, что ингибиторы NOS и рГЦ повышают вызванное эндотоксином (ЛПС (липополисахарид)) экспрессирование ICAM при микроциркуляции в мезентериальных сосудах. Оно снижается с помощью донора NO зависимым от цГМФ образом. Лечение мышей ингибиторами NOS или рГЦ усиливают миграцию нейтрофилов, прокатывание и адгезию, вызванные с помощью ЛПС или каррагенином (D. Dal Secco, Nitric Oxide, 2006, 15, 77-86).
В модели in vivo и в модели изолированного сердца показано, что активация рГЦ с использованием BAY 58-2667 обеспечивает защиту от ишемического реперфузионного поражения (Т. Krieg et al., Eur. Heart J., 2009, 30, 1607-6013). Аналогичные результаты получены при использовании такого же соединения в модели на собаках для остановки сердца и экстракорпорального кровообращения (Т. Radovits et al.,
Eur J. Cardiothorac. Surg., 2010).
В некоторых исследованиях показано, что активация рГЦ обеспечивает антиноцицептивный эффект. В моделях вызванного стрептозотоцином диабета у ноцицепцивных мышей (исследование болевых судорог) и крыс (гипералгезия лапы) повышение концентрации цГМФ путем введения силденафила блокирует болевой ответ, который, в свою очередь, устраняется ингибитором NOS или рГЦ (С. Patil et al., Pharm., 2004, 72, 190-195). Показано, что ингибитор рГЦ 1Н-[1,2,4]оксадиазоло[4,3-а]хиноксалин-1-он (ОДХ) блокирует антиноцицептивное воздействие различных средств, включая мелоксикам и дифенил-диселенид, в модели для вызванной формалином боли (P. Aguirre-Banuelos et al., Eur. J. Pharmacol., 2000, 395, 9-13 и L. Savegnago et al., J. Pharmacy Pharmacol., 2008, 60, 1679-1686) и антиноцицептивное воздействие ксилазина в модели со сдавливанием лапы (Т. Romero et al., Eur. J. Pharmacol., 2009, 613, 64-67). Кроме того, атацикват обладает антиноцицептивным воздействием в модели с использованием карраге-нана для вызванной воспалением тепловой гипералгезии и модели с использованием умеренного повреждения нерва для невропатической боли у мышей (WO 09/043495).
Показано, что ингибирование PDE9, фосфодиэстеразы, специфичной по отношению к цГМФ, экс-прессирующейся в головном мозге, улучшает длительную потенциацию (F. van der Staay et al., Neuro-pharmacol. 2008, 55, 908-918). В центральной нервной системе рГЦ является первичным ферментом, который катализирует образование цГМФ (K. Domek-Lopacinska et al., Mol. Neurobiol., 2010, 41, 129-137). Таким образом, активация рГЦ может оказаться благоприятной при лечении болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона.
В фазе II клинического исследования показано, что стимулятор рГЦ риоцикват обладает эффективностью при лечении хронической тромбоэмболической легочной гипертензии и легочной артериальной гипертензии (Н. Ghofrani et al., Eur. Respir. J., 2010, 36, 792-799). Эти данные дополняют данные доклинических исследований, которые показывают, что BAY 41-2272 и цинацигуат ослабляют легочную ги-пертензию в моделях на мышах (R. Dumitrascu et al., Circulation, 2006, 113, 286-295) и ягнят (О. Evgenov et al., 2007, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 176, 1138-1145). Аналогичные результаты получены с использованием HMR 1766 в модели для легочной гипертензии на мышах (N. Weissmann et al., 2009, Am. J.
Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol., 297, L658-665).
Путем активации рГЦ можно лечить хроническое заболевание почек. И BAY 58-2667, и HMR 1766 улучшают почечную функцию и структуру у крыс в модели субтотальной нефрэктомии для заболевания почек (P. Kalk et al., 2006, Brit. J. Pharmacol., 148, 853-859 и K. Benz et al., 2007, Kidney Blood Press. Res., 30, 224-233). Улучшенная функция почек и увеличенная выживаемость обеспечивается при лечении с помощью BAY 58-2667 ренин-трансгенных крыс, страдающих гипертензией (крысы TG(mRen2)27), которых лечат ингибитором NOS (J.-P. Stasch et al., 2006, J. Clin. Invest., 116, 2552-2561). Лечение с помощью BAY 41-2272 поддерживает функцию и структуру почек в модели хронического заболевания почек у крыс, вызванного удалением одной почки и лечением антителами к thyl (Y. Wang et al., 2005, Kidney
Intl., 68, 47-61).
Заболевания, вызванные избыточным свертыванием крови, можно лечить активаторами рГЦ. Активация рГЦ с использованием BAY 58-2667 может препятствовать агрегации тромбоцитов, вызванной различными стимулами ех vivo. Кроме того, это соединение препятствует образованию тромбов у мышей in vivo и продлевает период кровотечения (J.-P. Stasch et al., 2002, Brit. J. Pharmacol., 136, 773-783). В другом исследовании in vivo с использованием HMR 1766 у крыс, которых лечат стрептозотоцином, подавляется активация тромбоцитов (A. Schafer et al., 2006, Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 2006, 26, 28132818).
Активация рГЦ также может оказаться полезной для лечения урологических нарушений (WO/08138483). Это подтверждено в клинических исследованиях с использованием ингибитора PDE5 варденафила (С. Stief et al., 2008, Eur. Urol., 53, 1236-1244). Стимулятор растворимой гуанилатциклазы BAY 41-8543 может ингибировать пролиферацию клеток предстательной железы, уретры и клеток гладких мышц мочевого пузыря в исследованиях с использованием образцов, взятых у пациентов (В. Fibbi et al., 2010, J. Sex. Med., 7, 59-69), и это дополнительно свидетельствует в пользу применимости активаторов рГЦ для лечения урологических нарушений.
Указанные выше исследования свидетельствуют в пользу применимости активаторов рГЦ для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, включая гипертензию, атеросклероз, заболевание периферической артерии, рестеноз, удар, сердечную недостаточность, коронароспазм, спазм мозговых сосудов, ишемическое/реперфузионное поражение, тромбоэмболическую легочную гипертензию, легочную артериальную гипертензию, стабильную и нестабильную стенокардию, тромбоэмболические нарушения. Кроме того, активаторы рГЦ обладают перспективой применения для лечения заболевания почек, диабета, фиброзных нарушений, включая фиброзные нарушения печени, почек и легких, урологических нарушений, включая гиперактивность мочевого пузыря, доброкачественную гиперплазию предстательной железы и эректильную дисфункцию, и неврологических нарушений, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, а также невропатической боли. Лечение с применением активаторов рГЦ также может оказаться благоприятным для воспалительных нарушений, таких как псориаз, рассеянный склероз, артрит, астма и хроническое обструктивное заболевание легких.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к новым соединениям, которые активируют или потенцируют рГЦ и поэтому применимы для лечения различных заболеваний и нарушений, течение которых можно облегчить путем активации или потенциации рГЦ, включая сердечно-сосудистые, воспалительные заболевания и заболевания почек. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, способам применения этих соединений для лечения различных заболеваний и нарушений, способам получения этих соединений и промежуточным продуктам, применимым в этих способах.
Другим объектом настоящего изобретения являются активаторы растворимой гуанилатциклазы, обладающие характеристиками растворимости, соответствующими приемлемым фармакокинетическим характеристикам. Как известно в данной области техники, слабо растворимые соединения могут обладать тем недостатком, что они оказывают слабое воздействие на организм человека. Предполагается, что соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают таким воздействием, которое делает их
подходящими лекарственными средствами.
Другим объектом настоящего изобретения являются соединения, обладающие метаболической стабильностью, соответствующей приемлемым фармакокинетическим характеристикам. Как известно в данной области техники, может оказаться, что при использовании обладающих низкой метаболической стабильностью соединений не обеспечиваются необходимые для лечения концентрации. Предполагается, что соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают такой метаболической стабильностью, которая делает их подходящими лекарственными средствами.
Подробное описание изобретения
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы I
в которой
А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота и необязательно 1 атом кислорода, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 группами, выбранными из группы, включающей Q-С^алкил и оксогруппу;
R1 обозначает С1-С4-алкил, необязательно замещенный метоксигруппой;
R2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, Q-Сз-алкил, -CN, -ОМе и -CF3;
R3 выбран из группы, включающей Н и -СН3;
R4 выбран из группы, включающей Н, F, -СН3 и -ОМе;
R5 выбран из группы, включающей Н, Cl, -CH3, -CH2CH3, -CF3, F и -ОМе;
R6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, Q-05-алкил, -(СН2)nC3-C6-циклоалкил, -С(О)С1-С6-алкил, -(СН2)n-гетероциклил, -SO2-арил, SO2C1-C6-алкил, где указанные С1-С6-алкил, -(СН2)n-гетероциклил и -(СН2)nC3-C6-циклоалкил, необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей Q-С^алкил, галоген, С1-С3-алкоксигруппу, -CF3, -ОН, оксогруппу, -(СН2)1-3O(СН2)2-3OH и -SO2CH3;
R7 выбран из группы, включающей Н, -СН3, -СН2СН3, -CF3, F и -CN;
n равно 0, 1 или 2;
или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в указанном выше варианте осуществления, в которых
А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 Q-С^алкильными группами;
R1 обозначает Q-С^алкил;
R2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, Q-С^алкил, -CN, -ОМе и -CF3;
R3 выбран из группы, включающей Н и -СН3;
R4 выбран из группы, включающей Н и F;
R5 выбран из группы, включающей Н, Cl и -СН3;
R6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, Q-Q-алкил, -(СН2)nC3-C6-циклоалкил, -С(О)С1-С6-алкил и -(СН^-гетероциклил, где указанные Q-Q-алкил, -(СН2)П-гетероциклил и -^^^^-^-01100^1(^1, необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей Q-С^алкил, галоген, Q-С^алкоксигрупггу, -CF3, -ОН и -SO2CH3;
R7 обозначает Н;
n равно 0, 1 или 2;
или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых R1 обозначает метил, этил или изопропил; и группа
выбрана из группы, включающей
или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых R2 выбран из группы, включающей -СН3, F, Cl и -CF3; и
R6 выбран из группы, включающей Н, Q-Q-алкил, -(СН2)nC3-C6-циклоалкил, -С(О)С1-С6-алкил и -(СН^-гетероциклил, где указанные Q-Q-алкил, -(СН2)nC3-C6-циклоалкил и -(СН^-гетероциклил, необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей Q-С^алкил, галоген, Q-С^алкоксигруппу, -CF3, -ОН и -SO2CH3;
или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых указанный гетероциклил, который указан в определении R6, выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропира-нил, 2-оксабицикло[3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил, 1-оксаспиро[4.5]дека-нил и пирролидин-2-он; или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых R6 обозначает -(СН^-гетероциклил, где указанный гетероциклил выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропи-ранил, 2-оксабицикло[3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил и 1-оксаспиро[4.5] деканил; или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых R2 обозначает -СН3; R3 обозначает Н; R4 обозначает Н или -СН3; R5 обозначает Н или -СН3;
R7 находится в пара-положении по отношению к R5 и обозначает Н, -СН3 или -СН2СН3; или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых группа
представляет собой
или их солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, описанным в любом из указанных выше вариантов осуществления, в которых R3 обозначает Н и R4 обозначает Н; или
их солям.
В табл. 1 приведены типичные соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, которые можно получить в соответствии с общими схемами синтеза, примерами и по методикам, известным в данной области техники.
Соединение №
Структура
Соединение №
Структура
/-он
Таблица 1
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
^-OH
уСхУ "
VON
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
oVT00"
VOH
VOH
oCT0^
VOH
VOH
^^~OH
.XT00"
VOH
VOH 4°
-О-аУ F+F
4^ ^у04
VOH
VOH
4°^
VOH
VOH
VOH
100
VOH
сУ '
101
VOH
102
VOH
^рХхУ
103
VOH
104
VoH
105
106
107
108
109
110
0оУ
127
128
DxxY ^
129
VOH
130
131
132
133
VS.
^-^осУ
134
VOH
135
VOH
136
137
138
V(tm)
^г <хУ"
139
сУУ
140
141
^ххУ
142
VOH
ОххУ
143
144
145
°о <хУ
146
¦\X^
147
сузУ ^
148
^^odx1
149
<
150
ору
151
ааУ^
152
оххУ ^
153
схоУ ^
154
^(tm)
155
156
Von
157
ааХ'
158
159
VOH
160
VOH
161
VOH
162
163
164
VOH
165
ааУ
166
VOH
167
"чу1 О
168
схсУ
169
о°Х
170
VOH Ф^
171
172
VOH
173
СГ°т
174
0^9^
175
176
177
v°"
178
VOH
179
> <хаУ
180
v°"
^^осУ
181
182
V°"
^^осУ"
183
oCT00^
184
185
VOH
186
187
/-OH
188
оХхУ ^
189
^-OH
dx^
190
V(tm)
191
192
охсУ
193
гУ"
dx^ оххУ
194
VOH
195
196
197
198
199
200
201
r/X
202
cxxX
203
204
ад9
205
•о-оУ
206
207
208
209
orooJ
210
211
212
ад9
213
°> оУ
214
215
216
217
218
219
220
VOH
221
222
223
224
225
t> CXT
226
227
о-СхУ
228
229
oxxf
230
231
232
охУ
233
°юУ9
234
ОХа"
253
OX''
254
255
¦оосУ
256
•c> aj
257
258
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к любому из соединений, приведенных в табл. 1, и их фармацевтически приемлемым солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к группе соединений, приведенных в табл. 1, включающей соединения №№ 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 12, 15, 16, 18, 21, 27, 28, 30, 31, 35, 36, 39, 41, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 57, 59, 62, 68, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 88, 92, 93 и 94, и их фармацевтически приемлемым солям.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к группе соединений, приведенных в табл. 1, включающей соединения №№ 95, 97, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109,
110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 145, 146, 152, 153, 154, 155, 157, 158, 159,161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 191, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 222, 223, 224, 225, 227, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 246,
247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, и их фармацевтически приемлемым солям.
Если специально не указано иное, то в описании и прилагаемой формуле изобретения определенная химическая формула или название соединения включает его таутомеры и все стереоизомеры, оптические и геометрические изомеры (например, энантиомеры, диастереоизомеры, E/Z-изомеры и т.п.) и рацематы, а также смеси отдельных энантиомеров в разных соотношениях, смеси диастереоизомеров или смеси любых описанных выше форм, в которых существуют такие изомеры и энантиомеры, а также его соли, включая его фармацевтически приемлемые соли и его сольваты, такие как, например, гидраты, включая сольваты свободных соединений или сольваты солей соединения.
Некоторые из соединений формулы (I) могут существовать более чем в одной таутомерной форме. Настоящее изобретение включает способы, в которых применяются все такие таутомеры.
Настоящее изобретение включает фармацевтически приемлемые производные соединений формулы (I). "Фармацевтически приемлемое производное" означает любую фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир или любое другое соединение, которое после введения пациенту способно образовать (прямо или косвенно) соединение, применимое в настоящем изобретении, или его фармакологически активный метаболит или фармакологически активный остаток. Фармакологически активный метаболит следует понимать, как означающий любое соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, способное к ферментативному или химическому метаболизму. Он включает, например, гидроксилированные или окисленные производные соединений формулы (I).
При использовании в настоящем изобретении "фармацевтически приемлемые соли" означают производные раскрытых соединений, в которых исходное соединение изменено путем образования его солей с кислотой или основанием. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются только ими, соли неорганических или органических кислот с основными остатками, такими как аминогруппы; соли щелочных металлов или органических соединений с кислотными остатками, такими как карбоксигруппы, и т.п. Например, такие соли включают ацетаты, аскорбаты, бензолсульфонаты, бен-зоаты, безилаты, бикарбонаты, битартраты, бромиды/гидробромиды, этилендиаминтетраацетаты, камзи-латы, карбонаты, хлориды/гидрохлориды, цитраты, эдизилаты, этандисульфонаты, эстолаты, эзилаты, фумараты, глуцептаты, глюконаты, глутаматы, гликоляты, гликолиларснилаты, гексилрезорцинаты, гид-рабамины, гидроксималеаты, гидроксинафтоаты, йодиды, изотионаты, лактаты, лактобионаты, малаты,
малеаты, манделаты, метансульфонаты, метилбромиды, метилнитраты, метилсульфаты, мукаты, напзи-латы, нитраты, оксалаты, памоаты, пантотенаты, фенилацетаты, фосфаты/дифосфаты, полигалактурона-ты, пропионаты, салицилаты, стеараты, субацетаты, сукцинаты, сульфамиды, сульфаты, таннаты, тартра-ты, теоклаты, толуолсульфонаты, триэтиодиды, соли аммония, бензатины, хлорпрокаины, холины, ди-этаноламины, этилендиамины, меглумины и прокаины. Другие фармацевтически приемлемые соли могут быть образованы с катионами металлов, таких как алюминий, кальций, литий, магний, калий, натрий, цинк и т.п. (см. также публикацию Pharmaceutical salts, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1-19).
Фармацевтически приемлемые соли, предлагаемые в настоящем изобретении, можно синтезировать из исходного соединения, которое обладает свойствами основания или кислоты, по обычным химическим методикам. Обычно такие соли можно получить по реакции этих соединений в форме свободной кислоты или основания с достаточным количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, таком как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил, или в их смеси.
Соли других кислот, отличающиеся от указанных выше, которые, например, применимы для очистки или выделения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении (например, трифторацетаты), также являются частью настоящего изобретения.
Кроме того, в объем настоящего изобретения входит применение пролекарств соединений формулы (I). Пролекарства включают такие соединения, которые после простого химического превращения изменяются с образованием соединений, предлагаемых в настоящем изобретении. Простые химические превращения включают гидролиз, окисление и восстановление. Точнее, если пролекарство вводится пациенту, то пролекарство может превратиться в соединение, раскрытое выше в настоящем изобретении, и тем самым обеспечить необходимое фармакологическое воздействие.
Соединениями, предлагаемыми в настоящем изобретении, являются только такие, которые предполагаются "химически стабильными", что должно быть очевидно для специалистов в данной области техники. Например, соединение, которое содержит "свободную валентность", или "карбанион", не является соединением, соответствующим способам, раскрытым в настоящем изобретении.
Для всех соединений, раскрытых выше в настоящей заявке, в случае, если название будет противоречить структуре, следует понимать, что соединение определяется структурой.
Все термины при использовании в описании настоящего изобретения, если не указано иное, следует понимать в их обычных значениях, известных в данной области техники. Например, "С1-С4-алкил" означает насыщенный алифатический углеводородный одновалентный радикал, содержащий 1 -4 атома углерода, такой как метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил или трет-бутил. "С1-С4-алкоксигруппа" означает С1-С4-алкил, содержащий концевой атом кислорода, такой как метоксигруппа, этоксигруппа, пропоксигруппа, бутоксигруппа. Все алкильные, алкенильные и алкинильные группы следует понимать, как разветвленные или неразветвленные, циклизованные или нециклизованные, если это возможно в структуре и если не указано иное. Другие более конкретные определения приведены ниже.
Термин "Q-Cn-алкил", где n является целым числом, равным от 2 до n, по отдельности или в комбинации с другим радикалом, означает ациклический, насыщенный, обладающий разветвленной или линейной цепью углеводородный радикал, содержащий от 1 до n атомов С. Например, термин "C1-C5-алкил" включает радикалы Н3С-, Н3С-СН2-, Н3С-СН2-СН2-, Н3С-СН(СН3)-, Н3С-СН2-СН2-СН2-, Н3С-СН2-СН(СН3)-, Н3С-СН(СН3)-СН2-, Н3С-С(СН3)2-, Н3С-СН2-СН2-СН2-СН2-, Н3С-СН2-СН2-СН(СН3)-, Н3С-СН2-СН(СН3)-СН2-, Н3С-СН(СН3)-СН2-СН2-, Н3С-СН2-С(СН3)2-, Н3С-С(СН3)2-СН2-, Н3С-СН(СН3)-СН(СН3)- и Н3С-СН2-СН(СН2СН3)-.
Термин "C1-Cn-алкилен", где n является целым числом, равным от 1 до n, по отдельности или в комбинации с другим радикалом, означает ациклический обладающий линейной или разветвленной цепью двухвалентный алкильный радикал, содержащий от 1 до n атомов углерода. Например, термин "С1-С4-алкилен" включает -(СН2)-, -(СН2-СН2)-, -(СН(СН3))-, -(СН2-СН2-СН2)-, -(С(СН3)2)-, -(СН(СН2СН3))-, -(СН(СН3)-СН2)-, -(СН2-СН(СН3))-, -(СН2-СН2-СН2-СН2)-, -(СН2-СН2-СН(СН3))-, -(СН(СН3)-СН2-СН2)-, -(СН2-СН(СН3)-СН2)-, -(СН2-С(СН3)2)-, -(С (СН3)2-СН2)-, -(СН(СН3)-СН(СН3))-, -(СН2-СН(СН2СН3))-, -(СН(СН2СН3)-СН2)-, -(СН(СН2СН2СН3))-, -(СНСН(СН3)2)- и -С(СН3)(СН2СН3)-.
Термин "C^d-циклоалкил", где n является целым числом, равным от 4 до n, по отдельности или в комбинации с другим радикалом, означает циклический, насыщенный, обладающий неразветвленной цепью углеводородный радикал, содержащий от 3 до n атомов С. Например, термин "С3-С7-циклоалкил" включает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.
Термин "гетероатом" при использовании в настоящем изобретении следует понимать, как означающий атомы, не являющиеся атомами углерода, такие как О, N, S и Р.
Во всех алкильных группах или углеродных цепях один или большее количество атомов углерода могут быть необязательно заменены гетероатомами О, S или N, следует понимать, что, если N не является замещенным, то он представляет собой NH, также следует понимать, что в разветвленной или нераз-ветвленной углеродной цепи гетероатомы могут заменять концевые атомы углерода или внутренние атомы углерода. Такие группы могут быть замещены, как это описано выше в настоящем изобретении, группами, такими как оксогруппы, что приводит к таким определениям, но не ограничивается только
ими, как алкоксикарбонил, ацил, амидная группа и тиооксогруппа.
Термин "арил" при использовании в настоящем изобретении по отдельности или в комбинации с другим радикалом означает карбоциклическую ароматическую моноциклическую группу, содержащую 6 атомов углерода, которая может быть дополнительно сконденсирована со второй 5- или 6-членной кар-боциклической группой, которая может являться ароматической, насыщенной или ненасыщенной. Арил включает, но не ограничивается только ими, фенил, инданил, инденил, нафтил, антраценил, фенантре-нил, тетрагидронафтил и дигидронафтил.
Термин "гетероарил" означает ароматический 5-6-членный моноциклический гетероарил или ароматическое 7-11-членное гетероарильное бициклическое кольцо, где по меньшей мере одно из колец является ароматическим, где гетероарильное кольцо содержит 1-4 гетероатома, таких как N, О и S. Неограничивающие примеры 5-6-членных моноциклических гетероарильных колец включают фуранил, оксазо-лил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, пиразолил, пирролил, имидазолил, тетразолил, триазолил, ти-енил, тиадиазолил, пиридинил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, триазинил и пуринил. Неограничивающие примеры 7-11-членных бициклических гетероарильных колец включают бензимидазолил, хи-нолинил, дигидро-2Н-хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, индазолил, тиено[2,3-с1]пиримидинил, индолил, изоиндолил, бензофуранил, бензопиранил, бензодиоксолил, бензоксазолил и бензотиазолил.
Термин "гетероциклил" означает стабильный неароматический 4-8-членный моноциклический гетероциклический радикал или стабильный неароматический 6-11-членный конденсированный бицикли-ческий, мостиковый бициклический или спироциклический гетероциклический радикал. 5-11-Членный гетероцикл состоит из атомов углерода и одного или большего количества гетероатомов, предпочтительно от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу. Гетероцикл может быть насыщенным или частично ненасыщенным. Неограничивающие примеры неароматических 4-8-членных моноциклических гетероциклических радикалов включают тетрагидрофуранил, азетидинил, пирролидинил, пиранил, тетрагидропиранил, диоксанил, тиоморфолинил, 1,1-диоксо-1Х6-тиоморфолинил, морфолинил, пиперидинил, пиперазинил и азепинил. Неограничивающие примеры неароматических 6-11-членных конденсированных бициклических радикалов включают октагидроиндо-лил, октагидробензофуранил и октагидробензотиофенил. Неограничивающие примеры неароматических 6-11-членных мостиковых бициклических радикалов включают 2-азабицикло[2.2.1]гептанил, 3-азабицикло[3.1.0]гексанил и 3-азабицикло[3.2.1]октанил. Неограничивающие примеры неароматических 6-11-членных спироциклических гетероциклических радикалов включают 7-азаспиро[3,3]гептанил, 7-спиро[3,4]октанил и 7-азаспиро[3,4]октанил. Подразумевается, что термин "гетероциклил" включает все возможные изомерные формы.
Термин "галоген" при использовании в настоящем описании следует понимать, как означающий бром, хлор, фтор или йод. Определения "галогенированный", "полностью или частично галогенирован-ный"; "полностью или частично фторированный"; "замещенный одним или большим количеством атомов галогенов" включают, например, моно-, ди- или тригалогенпроизводные по одному или большему количеству атомов углерода. Для алкила неограничивающими примерами являются -CH2CHF2, -CF3 и т.п.
Каждый алкил, циклоалкил, гетероцикл, арил или гетероарил или их аналоги, описанные в настоящем изобретении, следует понимать, как необязательно частично или полностью галогенированные.
При использовании в настоящем изобретении "азот" или N и "сера" или S включают любую окисленную форму азота и серы и кватернизованную форму любого основного атома азота. Например, для -S-Q-Q-алкильного радикала, если не указано иное, это следует понимать и как включение -S^-Q-Q-алкила и ^(О^-С^С^алкила, аналогичным образом, -S-Ra можно представить как фенил^(О)т-, где Ra обозначает фенил и где m равно 0, 1 или 2.
Общие методики синтеза
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получить по общим методикам и в соответствии с примерами, приведенными ниже, и методикам, известным специалистам с общей подготовкой в данной области техники. Оптимальные условия проведения реакций и длительность реакций могут меняться в зависимости от конкретных использующихся реагентов. Если не указано иное, то растворители, температуры, давления и другие условия проведения реакций могут быть легко выбраны специалистом с общей подготовкой в данной области техники. Конкретные методики приведены в разделе "Примеры синтеза". Промежуточные продукты, используютсяся в приведенных ниже синтезах, или их легко получить по методикам, известным специалистам в данной области техники. За протеканием реакции можно следить с помощью обычных методик, таких как тонкослойная хроматография (ТСХ) или высокоэффективная жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ВЭЖХ-МС). Промежуточные продукты и конечные продукты можно очистить по методикам, известным в данной области техники, включая колоночную хроматографию, ВЭЖХ (высокоэффективную жидкостную хроматографию), препаративную ТСХ или перекристаллизацию.
Для получения соединений формулы I можно использовать методики, описанные ниже и в разделе "Примеры синтеза".
Соединения формулы I можно получить так, как это описано на схеме 1.
Как показано выше, сложный диэфир II (R = Me или Et) и гидразин III кипятят с обратным холодильником в подходящем растворителе, таком как этанол, с подходящим основанием, таким как карбонат калия (K2CO3), и получают гидроксипиразол IV. Соединение IV алкилируют, например, с использованием в некоторых случаях триметилсилилдиазометана или R1I и подходящего основания, такого как карбонат цезия (Cs2CO3). Альтернативно, используют условия проведения реакции Мицунобу и этанол и получают искомый алкоксипиразолхлорпиридин V (R1 = Et) Хлорпиридин V вводят в реакцию сочетания с борсодержащими соединениями VI в присутствии палладиевого катализатора, такого как тетра-кис(трифенил)фосфин(0), и подходящего основания, такого как Na2CO3, в водном растворе 1,2-ДМЭ (1,2-диметоксиэтан) при нагревании микроволновым излучением при 120°С и получают соединение VII. Промежуточный фенол VII алкилируют алкилбромидом VIII, где X = Cl, I или Br, с использованием основания, такого как карбонат цезия (Cs2CO3), в растворителе, таком как ацетон, примерно при 50°С. Последующее удаление защитной группы t-Boc с использованием подходящей кислоты, такой как трифто-руксусная кислота (ТФК), дает соединение IX. Восстановительное аминирование амина IX с использованием необходимого кетона или альдегида и подходящего источника гидрида, такого как NaBH3CN, в растворителе, таком как МеОН, содержащем органическую кислоту, такую как АсОН, проводимое примерно при 50°С, и последующий протекающий in situ гидролиз с использованием основания, такого как водный раствор LiOH, дают искомое соединение формулы I. Альтернативно, алкилирование амина IX алкилгалогенидами в присутствии подходящего основания, такого как карбонат цезия (Cs2CO3) или N,N-диизопропилэтиламин (ДИПЭА), в растворителе, таком как MeCN (ацетонитрил), и последующий гидролиз сложного эфира дают искомое соединение формулы I.
Методики УЭЖХ (ультраэффективная жидкостная хроматография)/МС.
Времена удерживания (ВУ), указанные для соединений в разделе "Примеры синтеза", определяют с помощью УЭЖХ/МС с использованием одной из приведенных ниже методик. Условия, одинаковые для всех методик, являются следующими.
Компоненты системы для УЭЖХ/МС: Acquity UPLC, снабженная детекторами PDA (с фотодиодной
матрицей), SQ (качества сигналов) и ELS (испарительный детектор светорассеяния).
Условия для PDA: детектирование: от 210 до 400 нм; скорость отбора образцов: 20 шт./с; срабатывание фильтра: быстрое.
Условия для ELSD: усиление: 1000; скорость отбора образцов: 20 шт./с; температура в пролетной трубке: 55°С; режим распыляющего устройства: охлаждение; давление газа: 41 фунт-сила/дюйм2.
Условия для МС: прибор: Acquity SQD, снабженный источником ESCi; режим ионизации: ИЭР+/-(ионизация электрораспылением); напряжение на капилляре: 3,5 кВ; напряжение на конусе: 5 В; напряжение на экстракторе: 1,3 В; температура источника: 150°С; температура десольватации: 350°С; скорость потока десольватирующего газа: 800 л/ч; скорость потока газа на конусе: 50 л/ч.
Условия, конкретные для каждой методики, являются следующими.
Методика А1.
Колонка: Waters ВЕН С18, 2,1x50 мм, размер частиц 1,7 мкм. Описание и градиентный режим: среда умеренной полярности, быстрый градиентный режим; режим ионизации ИЭР+/-, 80-1000 Да; градиентный режим: от 90% А до 100% В за 1,19 мин, выдерживание при 100% В до 1,70 мин; скорость потока 0,8 мл/мин; А = (95% воды, 5% ацетонитрила, 0,05% муравьиной кислоты); В = (ацетонитрил, 0,05% муравьиной кислоты). Инжектируемый объем образца: 1 мкл.
Методика А2.
Колонка: Waters ВЕН С18, 2,1x50 мм, размер частиц 1,7 мкм. Описание и градиентный режим: среда умеренной полярности, продолжительный градиентный режим; режим ионизации ИЭР+/-, 80-1000 Да; градиентный режим: от 90% А до 100% В за 4,45 мин, выдерживание при 100% В до 4,58 мин; скорость потока 0,8 мл/мин; А = (95% воды, 5% ацетонитрила, 0,05% муравьиной кислоты); В = (ацетонитрил, 0,05% муравьиной кислоты). Инжектируемый объем образца: 2 мкл.
Методика В1.
Колонка: CSH C18, 2,1x50 мм, размер частиц 1,7 мкм. Описание и градиентный режим: среда умеренной полярности, быстрый градиентный режим; режим ионизации ИЭР+/-, 80-1000 Да; градиентный режим: от 90% А до 100% В за 1,19 мин, выдерживание при 100% В до 1,70 мин; скорость потока 0,8 мл/мин; А = (95% воды, 5% ацетонитрила, 0,05% муравьиной кислоты); В = (ацетонитрил, 0,05% муравьиной кислоты). Инжектируемый объем образца: 1 мкл.
Методика В2.
Колонка: CSH C18, 2,1x50 мм, размер частиц 1,7 мкм. Описание и градиентный режим среда умеренной полярности, продолжительный градиентный режим, режим ионизации ИЭР+/-, 80-1000 Да, градиентный режим от 90% А до 100% В за 4,45 мин, выдерживание при 100% В до 4,58 мин, скорость потока 0,8 мл/мин, А = (95% воды, 5% ацетонитрила, 0,05% муравьиной кислоты), В = (ацетонитрил, 0,05% муравьиной кислоты) Инжектируемый объем образца 2 мкл.
Методику А1 используют для всех соединений за исключением соединений, для которых указано, что для них используют методику А2, методику В1 или методику В2.
Примеры синтеза
Конечные соединения обозначены номерами, соответствующими номерам соединений, приведенных в табл. 1 Промежуточные продукты обозначены номерами, содержащими дефис, которые соответствуют структурам, и эти номера приведены на схемах в каждом примере.
Пример 1. Получение промежуточного этилового эфира 1-[6-(2-гидрокси-3-метилфенил)пиридин-2-ил]-5-изопропокси-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (1-6)
1-е
В круглодонную колбу, содержащую EtOH (200 мл), K2CO3 (20,05 г, 55,720 ммоль) и соединение 11 (10,00 г, 69,65 ммоль), добавляют соединение 1-2 (13,95 мл, 69,65 ммоль). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают и твердое вещество собирают фильтрованием. Это твердое вещество удаляют с воронки с пористым стеклянным фильтром и помеща
ют в стакан, в который добавляют 250 мл 1,0н. раствора HCl (интенсивное выделение газа). Раствор подкисляют (рН 2) и затем добавляют дихлорметан (500 мл). Смесь перемешивают до растворения всего твердого вещества. Органический слой собирают, сушат над MgSO4 и концентрируют, получают соединение 1-3 (17,18 г) в виде почти белого твердого вещества.
Реакционную смесь, содержащую соединение 1-3 (0,50 г, 1,87 ммоль), 2-йодпропан (372,92 мкл, 3,74 ммоль), Cs2CO3 (0,91 г, 2,80 ммоль) и ДМА (]Ч,]Ч-диметилацетамид) (9,0 мл), нагревают в микроволновом реакторе при 150°С в течение 10 мин. Смесь добавляют к воде и экстрагируют с помощью EtOAc (2х). Органические слои промывают водой, рассолом, сушат над MgSO4 и концентрируют. Неочищенное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептане и получают искомый продукт 1-4 (0,41 г).
В сосуд для микроволновой печи добавляют соединение 1-4 (1,00 г, 3,29 ммоль), соединение 1-5 (0,69 г, 4,52 ммоль), Pd(PPh3)4 (0,37 г, 0,32 ммоль), ДМЭ (15,0 мл) и 2,0М раствор Na2CO3 (4,36 мл, 8,72 ммоль). Реакционную смесь нагревают в микроволновом реакторе при 120°С в течение 20 мин. Реакционную смесь экстрагируют дихлорметаном (2х), промывают водой, рассолом, сушат над Na2SO4 и концентрируют. Полученное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептане и получают искомый продукт 1-6 (0,41 г).
Пример 2. Получение промежуточного этилового эфира 1-[6-(2-гидрокси-3-метилфенил)пиридин-2-ил]-5-метокси-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (2-8)
1-3 2-7 2-8
Промежуточный продукт 1-3 (7,00 г, 26,15 ммоль) растворяют в смеси EtOAc/MeOH состава 1:1 (50,0 мл). Затем шприцем медленно добавляют 2,0М раствор TMSCHN2 в гексанах (42,70 мл, 85,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч и реакцию останавливают путем добавления уксусной кислоты (4,0 мл). Смесь перемешивают в течение 10 мин и затем концентрируют. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12100% EtOAc в гептане и получают искомый продукт 2-7 (4,460 г) в виде почти белого твердого вещества.
В сосуд для микроволновой печи добавляют соединение 2-7 (1,50 г, 5,33 ммоль), соединение 1-5 (0,890 г, 5,86 ммоль), Pd(PPh3)4 (0,62 г, 0,532 ммоль), ДМЭ (12,0 мл) и 2,0М раствор Na2CO3 (6,922 мл, 13,85 ммоль). Реакционную смесь нагревают в микроволновом реакторе при 120°С в течение 20 мин. Реакционную смесь экстрагируют дихлорметаном (2х ), промывают водой, рассолом, сушат над MgSO4 и концентрируют. Полученное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептане и получают искомый продукт 2-8 (1,17 г).
Следующие промежуточные продукты синтезируют аналогичным образом с использованием соответствующих реагентов:
2-9
2-10
F F F
2-11
(У-н
о ,
2-12
о ,
2-13
2-14
1_3 3-14 3-15
Этиловый эфир 1-(6-хлорпиридин-2-ил)-5-гидрокси-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты 1-3 (3,50 г, 13,08 ммоль) растворяют в ТГФ (тетрагидрофуран) (90,0 мл). Добавляют трифенилфосфин (3,77 г, 14,383 ммоль) и этанол (1,14 мл, 19,614 ммоль) и реакционную смесь охлаждают до 0°С. Полученная суспензия медленно растворяется при 0°С при проводимом в течение 10 мин по каплям добавлении диизопропила-зодикарбоксилата (ДИАД, 3,09 мл, 15,691 ммоль). Реакционной смеси дают нагреться до температуры окружающей среды и ее перемешивают в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток растворяют в минимальном количестве дихлорметана и обрабатывают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 3-50% EtOAc в гептане и получают искомый продукт 3-14 (3,33 г).
В сосуд для микроволновой печи добавляют соединение 3-14 (250,0 мг, 0,85 ммоль), соединение 1-5 (134,9 мг, 0,89 ммоль), Pd(PPh3)4 (60,05 мг, 0,05 ммоль), ДМЭ (5,0 мл) и 2,0М раствор Na2 Следующие промежуточные продукты синтезируют аналогичным образом с использованием соответствующих реагентов:
3-16
Xi9
3-17
3-18
- 27 -
о
Xr~°
3-19
0 ^
3-20
3-21
О
3-22
О
3-23
(г-н
о /
3-24
Пример 4. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 6-бромметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты (4-19)
Соединение 4-17 (12,50 г, 45,08 ммоль) в атмосфере азота при 25°С растворяют в сухом ТГФ (125,0 мл). Шприцем добавляют комплекс борана с ТГФ (99,17 мл, 99,17 ммоль) и смесь перемешивают при 25°С в течение 16 ч. Медленно добавляют воду (10,0 мл) и затем 2,0М раствор Na2CO3 (15,0 мл). Эту смесь перемешивают в течение 15 мин и затем разбавляют с помощью EtOAc и органические слои собирают. Органические вещества промывают 1,0М раствором HCl, сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме, получают масло. Масло очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 10-80% EtOAc в гептане и получают искомый продукт 4-18 (11,78 г) в виде белого твердого вещества.
К раствору спирта 4-18 (9,50 г, 36,08 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (ДИПЭА, 9,43 мл, 54,11 ммоль) в дихлорметане (ДХМ, 200,0 мл) при 0°С добавляют трифенилфосфиндибромид (23,79 г, 54,11 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 7-60% EtOAc в гептанах и получают искомый продукт 4-19 (8,74 г) в виде белого твердого вещества.
Следующие промежуточные продукты синтезируют аналогичным образом с использованием соответствующих реагентов:
4-20
°Т <
4-21
4-22
B"XQ
4-23
4-24
Раствор кислоты 5-23 (350,0 г, 2,10 моль) в ТГФ (1,4 л) при 0°С добавляют к взвеси АГЛ (алюмо-гидрид лития, 95,9 г, 1,40 моль) в ТГФ (2,5 л). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 ч, затем кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. Затем смесь охлаждают до 0°С и реакцию медленно останавливают путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония. Добавляют большой избыток твердого Na2SO4 и EtOAc, затем твердые вещества собирают фильтрованием. Фильтрат концентрируют в вакууме и получают неочищенное соединение 5-24 (350,0 г), которое используют на следующей стадии без обработки.
К раствору соединения 5-24 (294,0 г, 1,90 моль) в дихлорметане (2,2 л) при -10°С добавляют тио-нилхлорид (SOCl2) (460,0 г, 3,90 моль). Затем реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, затем концентрируют в вакууме и получают неочищенное соединение 5-25 (298,0 г), которое
используют на следующей стадии без обработки.
Смесь соединения 5-25 (298,0 г, 1,8 моль) и NaCN (154,5 г, 2,1 моль) в ДМФ (N,N-
диметилформамид, 1,2 л) перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч, затем экстрагируют с помощью EtOAc и Н2О. Органический слой сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир:EtOAc = 50:1) и получают промежуточный продукт 5-26 (230,0 г).
Смесь соединения 5-26 (180,0 г, 1,10 моль), Ni Ренея (40,0 г) и водного раствора аммиака (250,0 мл) в МеОН (1,0 л) перемешивают в атмосфере Н2 (50 фунт-сила/дюйм2) при комнатной температуре в течение 5 ч. Затем смесь фильтруют и концентрируют и получают соединение 5-27 (165,0 г), которое используют на следующей стадии без обработки.
Раствор соединения 5-27 (165,0 г, 1,0 моль) и водного раствора формальдегида (НСНО) (37 мас.%, 30 г, 1,0 моль) в муравьиной кислоте (НСО2Н) (1,5 л) перемешивают при 50°С в течение ночи, затем растворитель удаляют в вакууме и получают соединение 5-28 (150,0 г), которое используют на следующей стадии без обработки.
Соединение 5-28 (150,0 г, 847 ммоль) суспендируют в водном растворе HBr (48%, 1,0 л), затем нагревают при 100°С в течение ночи. Удаление растворителя в вакууме дает соединение 5-29 (195,0 г), которое используют на следующей стадии без обработки.
К раствору соединения 5-29 (195,0 г, 799 ммоль) в ТГФ (1,0 л) и Н2О (1,0 л) добавляют Et3N (242,0 г, 2,4 моль) и Вос2О (174,0 г, 799 ммоль). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем экстрагируют с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы промывают рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (с использованием смеси петролейный эфир:EtOAc состава 10:1) и получают соединение 5-30 (100,0 г).
К раствору соединения 5-30 (100,0 г, 380 ммоль) и Et3N (76,8 г, 760 ммоль) в дихлорметане (1,5 л), охлажденному до 0°С, через капельную воронку добавляют ангидрид трифторметансульфоновой кислоты (Tf2O) (107,0 г, 380 ммоль). После добавления Tf2O раствор в течение 5 ч нагревают до комнатной температуры. Затем реакционную смесь обрабатывают с помощью Н2О и дихлорметаном и органическую фазу отделяют, промывают рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле (с использованием смеси петролейный эфир:EtOAc состава 20:1) и получают соединение 5-31 (105,0 г).
Соединение 5-31 (50,0 г, 127 ммоль) объединяют с ацетатом палладия(П) (Pd(OAc)2) (5,0 г), ДФФП (дифенилфосфинопропан, 5,0 г) и Et3N (25,7 г, 254 ммоль) в EtOH (1,0 л), затем перемешивают в атмосфере СО при давлении, равном 4 МПа, при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры, затем твердые вещества удаляют фильтрованием. Фильтрат концентрируют в вакууме и полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле (с использованием смеси петролей-ный эфир:EtOAc состава 20:1) и получают соединение 5-32 (25,0 г).
К раствору АГЛ (12,5 г, 330 ммоль) в ТГФ (400 мл), охлажденному до -30°С, в течение 30 мин по каплям добавляют раствор соединения 5-32 (35,0 г, 110 ммоль) в ТГФ (400 мл). После добавления реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 30 мин, затем обрабатывают с помощью Н2О и ди-хлорметаном. Органическую фазу отделяют, промывают рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (с использованием смеси петролейный эфир:EtOAc состава 10:1) и получают искомый промежуточный продукт 5-33 (21,1 г).
К раствору спирта 5-33 (6,00 г, 21,63 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (5,65 мл, 32,45 ммоль) в дихлорметане (200,0 мл) при 0°С добавляют трифенилфосфиндибромид (14,27 г, 32,45 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 7-60% EtOAc в гепта-нах и получают искомый продукт 5-34 (6,60 г) в виде белого твердого вещества.
Пример 6. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 6-бромметил-5-хлор-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты (6-39)
К раствору ^^№-триметилэтан-1,2-диамина (45,0 г, 442,0 ммоль) в ТГФ (500 мл) в атмосфере N2 при -40°С добавляют раствор n-BuLi (177,0 мл, 442 ммоль). Смесь перемешивают при -40°С в течение 30 мин. После охлаждения смеси до -70°С к реакционной смеси добавляют соединение 6-35 (50,0 г, 368 ммоль) в ТГФ (250 мл). Смеси дают нагреться до 0°С и ее перемешивают в течение 30 мин. Затем реакционную смесь охлаждают до -78°С и добавляют n-BuLi (177,0 мл, 442 ммоль). Смеси дают нагреться до 10°С и ее охлаждают до -30°С, затем ее добавляют к раствору C2Cl6 (287,0 г, 1,1 моль) в ТГФ (600 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь выливают в 1000 мл 10% раствора HCl и экстрагируют с помощью EtOAc. Органические слои промывают рассолом, сушат над Na2SO4, концентрируют и очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают соединение 6-36 (36,7 г).
К раствору соединения 6-36 (105,0 г, 615 ммоль) в НОАс (700 мл) в атмосфере N2 при комнатной температуре добавляют NH4OAc (47,4 г, 615 ммоль). К этой реакционной смеси добавляют MeNO2 (188,0 г, 3,08 моль) и смесь нагревают при 40°С в течение 12 ч и затем перемешивают при 85°С в течение 6 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют дихлорметаном. Органические слои промывают рассолом, сушат над Na2SO4, концентрируют и очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают соединение 6-37 (97,5 г).
К раствору соединения 6-37 (48,0 г, 225 ммоль) в ТГФ (900 мл) при -20°С добавляют АГЛ (34,1 г, 899 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч и при 50°С в течение 30 мин. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют дихлорметаном. Органические слои промывают рассолом, сушат над Na2SO4 и концентрируют и получают соединение 6-38 (28,0 г), которое используют на следующей стадии без обработки.
Следующее соединение получают из промежуточного продукта 6-38 по методике, описанной в примере 5:
Промежуточный продукт 1-6 (373,0 мг, 0,88 ммоль), бромид 4-19 (287,1 мг, 0,88 ммоль) и Cs2CO3 (573,5 мг, 1,76 ммоль) объединяют в ацетоне (11,0 мл) и нагревают при 50°С в течение 5 ч. Реакционную смесь экстрагируют с помощью EtOAc, промывают рассолом, сушат над MgSO4 и концентрируют. Полученное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле (в градиентном режиме с использованием 5-100% EtOAc/гептан) и получают искомый промежуточный продукт 7-40 (502,0 мг).
Карбамат 7-40 (496,0 мг, 0,79 ммоль) растворяют в дихлорметане (4,0 мл) и при комнатной температуре обрабатывают с помощью ТФК (1,0 мл). Через 1 ч смесь нейтрализуют насыщенным раствором NaHCO3 и слои разделяют с использованием гидрофобной фритты. Органический фильтрат концентри
руют и получают соединение 7-41 (375,0 мг).
Амин 7-41 (98,0 мг, 0,19 ммоль) объединяют с молекулярными ситами 4 А (30 мг), тетрагидропи-ран-4-оном (28 мкл, 0,28 ммоль), АсОН (20 мкл) и Na(CN)BH3 (24 мг, 0,38 ммоль) в МеОН (4 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревают при 50°С в течение 12 ч. Смесь разбавляют с помощью ТГФ (1,0 мл) и водой (1 мл). К этой смеси добавляют LiOH (42,8 мг, 1,86 ммоль) и реакционную смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч. Затем смесь концентрируют в атмосфере N2, растирают со смесью МеОН/ДМСО (диметилсульфоксид) состава 1:1, фильтруют через шприцевый фильтр, обладающий порами размером 0,45 мкм, и фильтрат очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ (ОФ - обращенная фаза) с использованием прибора Gilson при элюировании в градиентном режиме (10-100% MeCN/вода + 0,1% НСО2Н).
Концентрирование в вакууме дает искомое соединение 1 (64,0 мг). МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Пример 7А. Методика аналогична методике, описанной в примере 7, но на стадии восстановительного аминирования вместо Na(OAc)3BH в дихлорметане используют NaCNBH3/AcOH/MeOH.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 2: МС, электрораспыление, m/z = 617,3 [М+Н], ВУ 0,79 мин.
Соединение 37: МС, электрораспыление, m/z = 541,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Соединение 38: МС, электрораспыление, m/z = 571,4 [М+Н], ВУ 0,76 мин.
Соединение 39: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 40: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 41: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 42: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Соединение 109: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Разделение: ChiralPak AD-H Prep, 40% изопропанола (1% iPrNH2):CO2 при 80 мл/мин, 100 бар, 25°С. Соединение 111: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Разделение: ChiralPak AD-H Prep, 40% изопропанола (1% iPrNH2):CO2 при 80 мл/мин, 100 бар, 25°С.
Соединение 113: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Разделение: Lux Cellulose 2 Prep, 60% МеОН (1% iPrNH2):CO2 при 55 мл/мин, 100 бар, 25°С.
Соединение 115: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Разделение: Lux Cellulose 2 Prep, 60% МеОН (1% iPrNH2):CO2 при 55 мл/мин, 100 бар, 25°С.
Соединение 144: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 1-6, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 43: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Соединение 44: МС, электрораспыление, m/z = 585,4 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Соединение 45: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Соединение 46: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,76 мин.
Соединение 47: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,76 мин.
Соединение 48: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Соединение 104: МС, электрораспыление, m/z = 597,5 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Соединение 116: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Разделение: Lux Cellulose 2 Prep, 65% МеОН (1% iPrNH2):CO2 при 60 мл/мин, 125 бар, 25°С.
Соединение 117: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Разделение: Lux Cellulose 2 Prep, 65% МеОН (1% iPrNH2):CO2 при 60 мл/мин, 125 бар, 25°С.
Соединение 122: МС, электрораспыление, m/z = 581,5 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Разделение: RegisPack Prep, 15% ИПС (изопропиловый спирт) (1% диэтиламина):СО2 при 12
мл/мин, 120 бар, 40°С.
Соединение 123: МС, электрораспыление, m/z = 581,5 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Разделение: RegisPack Prep, 15% ИПС (1% диэтиламина):СО2 при 12 мл/мин, 120 бар, 40°С.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 3: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,64 мин. Соединение 5: МС, электрораспыление, m/z = 587,2 [М-Н], ВУ 0,78 мин. Соединение 8: МС, электрораспыление, m/z = 527,2 [М+Н], ВУ 0,69 мин. Соединение 12: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,68 мин. Соединение 13: МС, электрораспыление, m/z = 513,2 [М+Н], ВУ 0,70 мин. Соединение 14: МС, электрораспыление, m/z = 541,3 [М+Н], ВУ 0,77 мин. Соединение 15: МС, электрораспыление, m/z = 541,2 [М+Н], ВУ 0,68 мин.
Соединение 23: МС, электрораспыление, m/z = 543,3 [М+Н], ВУ 0,70 мин. Соединение 24: МС, электрораспыление, m/z = 525,2 [М+Н], ВУ 0,72 мин. Соединение 25: МС, электрораспыление, m/z = 539,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин. Соединение 61: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,72 мин. Соединение 62: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,72 мин. Соединение 73: МС, электрораспыление, m/z = 611,4 [М+Н], ВУ 0,75 мин. Соединение 75: МС, электрораспыление, m/z = 593,4 [М-Н], ВУ 0,72 мин. Соединение 81: МС, электрораспыление, m/z = 585,1 [М+Н], методика А2, ВУ 1,42 мин. Соединение 86: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,78 мин. Соединение 87: МС, электрораспыление, m/z = 581,4 [М+Н], ВУ 0,80 мин. Соединение 90: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,80 мин. Соединение 91: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,83 мин. Соединение 92: МС, электрораспыление, m/z = 571,4 [М+Н], ВУ 0,79 мин. Соединение 102: МС, электрораспыление, m/z = 609,4 [М+Н], ВУ 0,83 мин. Соединение 103: МС, электрораспыление, m/z = 609,4 [М+Н], ВУ 0,89 мин. Соединение 188: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,58 мин. Соединение 192: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,58 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 4-20 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 10: МС, электрораспыление, m/z = 555,2 [М+Н], ВУ 0,82 мин.
Соединение 89: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], методика А2, ВУ 1,80 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 4-20 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 217: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], 1,45 мин (методика В2).
Соединение 218: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], 1,52 мин (методика В2).
Соединение 219: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], 1,46 мин (методика В2).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 4-21 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 59: МС, электрораспыление, m/z = 541,3 [М+Н], ВУ 0,66 мин. Соединение 85: МС, электрораспыление, m/z = 513,2 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 4-22 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 100: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 4-23 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 130: МС, электрораспыление, m/z = 571,4 [М+Н], ВУ 0,69 мин (методика В1).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 16: МС, электрораспыление, m/z = 541,2 [М+Н], ВУ 0,70 мин. Соединение 27: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,70 мин. Соединение 28: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,70 мин. Соединение 30: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,77 мин. Соединение 31: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,70 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 105: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Разделение: Chirapak AD-H, 20x250 мм; от МеОН до 30 мг/мл, 35% EtOH (1% ДЭА (диэтиламин)) в гептане за 18 мин, температура окружающей среды; сбор при 290 нм.
Соединение 106: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Разделение: Chirapak AD-H, 20x250 мм; от МеОН до 30 мг/мл, 35% EtOH (1% ДЭА) в гептане за 18 мин, температура окружающей среды; сбор при 290 нм.
Соединение 127: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,76 мин. Соединение 139: МС, электрораспыление, m/z = 585,4 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Разделение: Chiracel OD-H, 20x250 мм; 10% МеОН в СО2 при 55,5 г/мин в течение 28 мин, 140 бар,
40°С; сбор при 254 нм.
Соединение 140: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Разделение: Chiracel OD-H, 20x250 мм; 10% MeOH в СО2 при 58 г/мин в течение 30 мин, 120 бар, 40°С; сбор при 254 нм.
Соединение 141: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Разделение: Chiracel OD-H, 20x250 мм; 10% MeOH в СО2 при 58 г/мин в течение 30 мин, 120 бар, 40°С; сбор при 254 нм.
Соединение 142: МС, электрораспыление, m/z = 585,4 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Разделение: Chiracel OD-H, 20x250 мм; 10% MeOH в СО2 при 55,5 г/мин в течение 28 мин, 140 бар, 40°С; сбор при 254 нм.
Соединение 191: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,61 мин.
Соединение 198: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,66 мин (методика В1).
Разделение: LUX Amylose-2, 21x250 мм; 35% (ТЫМеОНЖЖИПС) + Et2NH:CO2, 80 мл/мин, 110
бар, 40°С.
Соединение 199: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,66 мин (методика В1). Разделение: LUX Amylose-2, 21x250 мм; 35% (ТЫМеОНЖЖИПС) + Et2NH:CO2, 80 мл/мин, 110
бар, 40°С.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-8, бромида 6-39 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 17: МС, электрораспыление, m/z = 561,2 [М+Н], ВУ 0,77 мин. Соединение 18: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин. Соединение 19: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин. Соединение 20: МС, электрораспыление, m/z = 559,3 [М+Н], ВУ 0,76 мин. Соединение 21: МС, электрораспыление, m/z = 575,3 [М+Н], ВУ 0,83 мин. Соединение 22: МС, электрораспыление, m/z = 575,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-9, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 7: МС, электрораспыление, m/z = 547,2 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-10, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 9: МС, электрораспыление, m/z = 581,2 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 83: МС, электрораспыление, m/z = 609,4 [М+Н], ВУ 0,79 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-10, бромида 4-21 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 93: МС, электрораспыление, m/z = 595,3 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-10, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 84: МС, электрораспыление, m/z = 623,4 [М+Н], ВУ 0,83 мин.
Соединение 88: МС, электрораспыление, m/z = 595,3 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Соединение 107: МС, электрораспыление, m/z = 607,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Разделение: Chirapak AD-H, 30x250 мм; 50% изопропанола:гексан с добавлением 1% изопропила-мина при 88 мл/мин, давление СО2: 100 бар, температура окружающей среды. Соединение 108: МС, электрораспыление, m/z = 607,4 [М+Н], ВУ 0,77 мин.
Разделение: Chirapak AD-H, 30x250 мм; 50% изопропанола:гексан с добавлением 1% изопропила-мина при 88 мл/мин, давление СО2: 100 бар, температура окружающей среды.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-11, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 52: МС, электрораспыление, m/z = 547,3 [М-Н], ВУ 0,70 мин.
Соединение 53: МС, электрораспыление, m/z = 575,3 [М-Н], ВУ 0,71 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-12, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 63: МС, электрораспыление, m/z = 559,3 [М+Н], ВУ 0,65 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-13, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий
проведения очистки.
Соединение 98: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,76 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 2-13, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 99: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,79 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-14, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 124: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 3-15, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 6: МС, электрораспыление, m/z = 541,2 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 32: МС, электрораспыление, m/z = 527,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 34: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 35: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 36: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин...
Соединение 110: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,75 мин....
Разделение: ChiralPak AD-H Prep, 30% EtOH:m2 при 80 мл/мин, 100 бар, 25°С.
Соединение 112: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Разделение: ChiralPak AD-H Prep, 30% EtOH:m2 при 80 мл/мин, 100 бар, 25°С.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 3-15, бромида 4-22 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 245: МС, электрораспыление, m/z = 583,1 [М+Н], ВУ 0,62 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 3-15, бромида 4-23 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 131: МС, электрораспыление, m/z = 585,4 [М+Н], ВУ 1,21 мин (методика В1).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 3-15, бромида 4-24 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 205: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В1).
Соединение 213: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В1).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7, с использованием фенола 3-15, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 114: МС, электрораспыление, m/z = 583,5 [М+Н], ВУ 0,62 мин.
Соединение 125: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 1,25 мин (методика В2).
Разделение: LUX 5u Cellulose 2 Prep, 23% MeOH (1% Et2NH) в СО2 при 78 мл/мин в течение 21 мин, 160 бар, 40°С.
Соединение 126: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 1,25 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 2 Prep, 23% MeOH (1% Et2NH) в СО2 при 78 мл/мин в течение 21 мин, 160 бар, 40°С.
Соединение 128: МС, электрораспыление, m/z = 583,5 [М+Н], ВУ 1,31 мин (методика В2).
Разделение: Chiralcel OD-H, 20x250 мм, 5,8% MeOH Et2NH) в СО2 при 85 г/мин, 160 бар, 40°С.
Соединение 129: МС, электрораспыление, m/z = 583,5 [М+Н], ВУ 1,31 мин (методика В2).
Разделение: Chiralcel OD-H, 20x250 мм, 5,8% MeOH Et2NH) в СО2 при 85 г/мин, 160 бар, 40°С.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 4-23 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 216: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,64 мин (методика В1).
Соединение 247: МС, электрораспыление, m/z = 557,1 [М+Н], ВУ 1,21 мин (методика В2).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 146: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,65 мин (методика В1). Соединение 152: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,65 мин (методика В1). Разделение: Chiralcel OD-H, 20x250 мм, 5,8% МеОН Et2NH) в СО2 при 85 г/мин, 160 бар, 40°С. Соединение 153: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,65 мин (методика В1).
Разделение: Chiralcel OD-H, 20x250 мм, 5,8% МеОН Et2NH) в СО2 при 85 г/мин, 160 бар, 40°С. Соединение 155: МС, электрораспыление, m/z = 613,4 [М+Н], ВУ 0,55 мин (методика В1). Соединение 156: МС, электрораспыление, m/z = 573,4 [М+Н], ВУ 0,43 мин (методика В1). Соединение 163: МС, электрораспыление, m/z = 625,3 [М+Н], ВУ 0,77 мин. Соединение 164: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,71 мин. Соединение 172: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 1,31 мин (методика В2). Соединение 179: МС, электрораспыление, m/z = 613,1 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В1). Соединение 189: МС, электрораспыление, m/z = 583,5 [М+Н], ВУ 0,63 мин. Соединение 193: МС, электрораспыление, m/z = 583,51 [М+Н], ВУ 0,63 мин. Соединение 208: МС, электрораспыление, m/z = 587,3 [М+Н], ВУ 1,48 мин (методика В2). Соединение 236: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 1,54 мин (методика А2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 7% EtOH:гептан при 10 мл/мин. Соединение 238: МС, электрораспыление, m/z = 569,2 [М+Н], ВУ 0,60 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-17, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 135: МС, электрораспыление, m/z = 611,5 [М+Н], ВУ 0,86 мин.
Соединение 136: МС, электрораспыление, m/z = 611,5 [М+Н], ВУ 0,83 мин.
Соединение 137: МС, электрораспыление, m/z = 597,5 [М+Н], ВУ 0,84 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-18, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 148: МС, электрораспыление, m/z = 609,4 [М+Н], ВУ 0,81 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-19, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 133: МС, электрораспыление, m/z = 597,5 [М+Н], ВУ 0,81 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-20, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 134: МС, электрораспыление, m/z = 611,5 [М+Н], ВУ 0,85 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-21, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 149: МС, электрораспыление, m/z = 613,3 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Соединение 150: МС, электрораспыление, m/z = 599,5 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Соединение 151: МС, электрораспыление, m/z = 613,3 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-22, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 183: МС, электрораспыление, m/z = 573,1 [М+Н], ВУ 0,53 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-22, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 182: МС, электрораспыление, m/z = 585,9 [М+Н], ВУ 0,55 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-22, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 181: МС, электрораспыление, m/z = 570,7 [М+Н], ВУ 0,61 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-22, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 180: МС, электрораспыление, m/z = 583,7 [М+Н], ВУ 0,64 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-22, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 209: МС, электрораспыление, m/z = 541,4 [М+Н], ВУ 0,52 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-22, бромида 5-34 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 224: МС, электрораспыление, m/z = 556,7 [М+Н], ВУ 0,52 мин.
Пример 8. Получение 5-этокси-1-(6-{2-[2-(2-фтор-1-метилэтил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-
Амин 8-42 (2,94 г, 5,74 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл), ТГФ (20 мл) и воде (10 мл). К этому раствору добавляют LiOH (0,971 г, 40,60 ммоль) и смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью колоночной хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 (в градиентном режиме с использованием в качестве растворителя 5- 95% MeCN/H2O + 0,1% ТФК) и получают соединение 60 (2,94 г). МС, электрораспыление, m/z = 485,1 [М+Н], ВУ 0,68 мин.
Аминокислоту 60 (78,0 мг, 0,15 ммоль) объединяют с молекулярными ситами 4 А (20 мг), 1-фторпропан-2-оном (100 мкл), АсОН (25,0 мкл) и Na(CN)BH3 (29,2 мг, 0,44 ммоль) в МеОН (4 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревают при 50°С в течение 12 ч. Затем концентрируют в атмосфере N2, растирают со смесью МеОН/ДМСО состава 1:1, фильтруют через шприцевый фильтр, обладающий порами размером 0,45 мкм, и фильтрат очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ с использованием прибора Gilson при элюировании в градиентном режиме (10-100% MeCN/вода + 0,1% НСО2Н). Концентрирование в вакууме дает искомое соединение 49 (70,0 мг). МС, электрораспыление, m/z = 545,3 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 8, с использованием соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 64: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,70 мин.
Соединение 65: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Соединение 66: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Соединение 67: МС, электрораспыление, m/z = 625,5 [М+Н], ВУ 0,78 мин.
Соединение 68: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,68 мин.
Соединение 69: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,70 мин.
Соединение 70: МС, электрораспыление, m/z = 605,4 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 71: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 76: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,79 мин.
Соединение 77: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,69 мин.
Соединение 78: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 79: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Соединение 80: МС, электрораспыление, m/z = 611,4 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Соединение 94: МС, электрораспыление, m/z = 587,4 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Соединение 95: МС, электрораспыление, m/z = 597,4 [М+Н], ВУ 0,82 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 8, с использованием фенола 3-16, бромида 4-19 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 50: МС, электрораспыление, m/z = 505,2 [М+Н], ВУ 0,66 мин.
Соединение 51: МС, электрораспыление, m/z = 561,3 [М+Н], ВУ 0,70 мин.
Соединение 54: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Соединение 55: МС, электрораспыление, m/z = 575,2 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 56: МС, электрораспыление, m/z = 563,3 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Соединение 57: МС, электрораспыление, m/z = 623,3 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Соединение 58: МС, электрораспыление, m/z = 563,2 [М+Н], ВУ 0,76 мин.
Перйодинан Десса-Мартина (2,6 г, 6,1 ммоль) при комнатной температуре добавляют к смеси 3,3-дифторциклобутилметанола 9-43 (0,5 г, 4,0 ммоль) и NaHCO3 (1,4 г, 16,0 ммоль) в дихлорметане (10 мл). Полученную взвесь перемешивают в темноте в течение 15 ч и затем выливают в насыщенный водный
Пример 9. Получение промежуточного 3,3-дифторциклобутанкарбальдегида (9-44)
раствор NaHCO3. Полученную смесь фильтруют через гидрофобную фритту с использованием избытка дихлорметана. Органический фильтрат промывают насыщенным водным раствором Na2S2O5 и затем отделяют с использованием другой гидрофобной фритты. Фильтрат сушат над MgSO4 и затем фильтруют через слой диатомовой земли с использованием дихлорметана. Дихлорметан удаляют путем молекулярной перегонки при атмосферном давлении (температура бани = 50°С) так, что остается примерно 5 мл. Оставшийся раствор в течение 15 мин охлаждают до -78°С для осаждения оставшегося твердого перйо-динана. Растворитель удаляют шприцем и пропускают через фильтр Millipore, обладающий порами размером 0,45 мкм. Фильтрат, содержащий неочищенный альдегид 9-44 (~0,1М раствор в дихлорметане), используют без дополнительной очистки или концентрирования.
Пример 10. Получение 1-(6-{2-[2-(3,3-дифторциклобутилметил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-илметокси]-3-метилфенил}пиридин-2-ил)-5-изопропокси-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (4)
7-41
Амин 7-41 (56,0 мг,
0,11 ммоль) объединяют с молекулярными ситами 4 А (20 мг), 3,3-дифторциклобутанкарбоксальдегидом 9-44 (100 мкл, 0,21 ммоль), АсОН (20 мкл) и Na(CN)BH3 (20,01 мг, 0,32 ммоль) в МеОН (2,0 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревают при 50°С в течение 12 ч. Смесь разбавляют с помощью ТГФ (1,0 мл) и водой (1,0 мл). К этой смеси добавляют LiOH (14,68 мг, 0,64 ммоль) и реакционную смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч. Затем концентрируют в атмосфере N2, растирают со смесью МеОН/ДМСО состава 1:1, фильтруют через шприцевый фильтр, обладающий порами размером 0,45 мкм, и фильтрат очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ с использованием прибора Gilson при элюировании в градиентном режиме (10-100% MeCN/вода + 0,1% НСО2Н). Концентрирование в вакууме дает искомое соединение 4 (40,0 мг). МС, электрораспыление, m/z = 603,4 [М+Н], ВУ 0,78 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 10, с использованием соответствующего амина, других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 26: МС, электрораспыление, m/z = 575,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин. Соединение 29: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 0,77 мин. Соединение 82: МС, электрораспыление, m/z = 561,3 [М+Н], ВУ 0,82 мин. Соединение 96: МС, электрораспыление, m/z = 589,4 [М+Н], ВУ 0,96 мин. Пример 11. Получение промежуточного 2,2-дифторциклопропанкарбальдегида (10-46)
EDCI (1,4 г, 7,1 ммоль) при комнатной температуре добавляют к смеси ^О-диметиламин-гидрохлорида (600 мг, 6,2 ммоль) и 2,2-дифторциклопропанкарбоновой кислоты 11-45 (580 мг, 4,8 ммоль) в дихлорметане (15 мл). Добавляют ^^диизопропилэтиламин (3,3 мл, 19,0 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч. Добавляют 1н. раствор HCl, затем энергично перемешивают в течение 10 мин. Органическую фазу отделяют с использованием гидрофобной фритты и непосредственно загружают в картридж Sampler, содержащий 10 г SiO2. Неочищенное вещество очищают с использованием картриджа 50 г НР-Sil SNAP (Biotage) при элюировании смесью дихлорметан/МеОН состава 9:1. Из фракций, содержащих продукт, удаляют растворитель путем молекулярной перегонки при атмосферном давлении (температура бани = 70°С) и получают соединение 11-46 (605 мг).
Раствор соединения 11-46 (605 мг, 3,66 ммоль) в дихлорметане при -78°С по каплям обрабатывают с помощью DIBAL-H (4,2 мл, 1,0М в дихлорметане) и затем перемешивают при -78°С в течение 2,5 ч. Реакцию останавливают путем добавления насыщенного водного раствора соли Рошеле. Добавляют такой же объем воды и смесь нагревают до комнатной температуры. Смесь энергично перемешивают в течение 3 ч, затем органическую фазу отделяют с использованием гидрофобной фритты. Дихлорметан удаляют путем молекулярной перегонки при атмосферном давлении (температура бани = 62°С) и получают соединение 11-47 (389 мг).
Амин 12-48 (90,0 мг, 0,18 ммоль) объединяют с молекулярными ситами 4 А (20 мг), 2,2-дифторциклопропанкарбоксальдегидом, соединением 11-47 (60,0 мг, 0,54 ммоль), АсОН (20 мкл) и Na(CN)BH3 (34,0 мг, 0,54 ммоль) в МеОН (4,0 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревают при 50°С в течение 12 ч. Смесь разбавляют с помощью ТГФ (1,0 мл) и водой (1,0 мл). К этой смеси добавляют LiOH (33,00 мг, 1,43 ммоль) и реакционную смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч. Затем концентрируют в атмосфере N2, растирают со смесью МеОН/ДМСО состава 1:1, фильтруют через шприцевый фильтр, обладающий порами размером 0,45 мкм, и фильтрат очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ с использованием прибора Gilson при элюировании в градиентном режиме (10100% МеОН/вода + 0,1% НСО2Н). Концентрирование в вакууме дает искомое соединение 72 (7,0 мг). МС, электрораспыление, m/z = 561,3 [М+Н], методика А2, ВУ 1,59 мин.
Пример 13. Получение 5-метокси-1-(6-{3-метил-2-[2-(2,2,2-трифторэтил)-1,2,3,4-тетрагидроизо-хинолин-6-илметокси]фенил}пиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (11)
2,2,2-Трифторэтилтрифлат 13-49 (36,0 мкл, 0,23 ммоль) добавляют к смеси промежуточного продукта 12-48 (106,0 мг, 0,21 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (190 мкл, 1,10 ммоль) в MeCN (5,0 мл). Смесь нагревают при 45°С в течение 4 ч и затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток повторно растворяют в 5 мл смеси ТГФ/МеОН/вода (2:2:1) и обрабатывают с помощью LiOH (25,0 мг, 1,10 ммоль). Затем смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч, затем растворители удаляют в вакууме. Оставшийся неочищенный остаток очищают с использованием картриджа 30 г КР-С18 SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме с использованием 5-95% MeCN/вода + 0,1% ТФК и получают искомое соединение 11 (103 мг). МС, электрораспыление, m/z = 553,2 [М+Н], методика А2, ВУ 1,13 мин.
Пример 14. Получение промежуточного 1-метил-5-оксопирролидин-3-карбальдегида (14-51)
В герметизированном сосуде объемом 40 мл спирт 14-50 (0,20 г, 1,55 ммоль) объединяют со связанной с подложкой из полистирола смолой IBX (5,81 г) в дихлорметане (20,0 мл) и переворачивают в течение 20 ч. Из реакционной смеси отфильтровывают смолу и смолу несколько раз промывают [сначала дихлорметаном (10 мл), затем смесью дихлорметан/МеОН состава 1:1 (20 мл), затем повторно смесью дихлорметан/МеОН состава 1:1 (20 мл) и в заключение дихлорметаном (10 мл)]. Объединенные фильтраты концентрируют в потоке N2 и получают смесь соединения 14-50 и искомого продукта 14-51.
Пример 15. Получение 5-этокси-1-(6-{3-метил-2-[2-(1-метил-5-оксопирролидин-3-илметил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-илметокси]фенил}пиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (97)
Аминокислоту 60 (40,0 мг, 0,07 ммоль) объединяют с молекулярными ситами 4 А (20 мг), соединением 14-51 (51,0 мг, 0,200 ммоль), АсОН (15,0 мкл) и Na(CN)BH3 (13,2 мг, 0,20 ммоль) в МеОН (2,0 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревают при 50°С в течение 12 ч Неочищенное вещество очищают с помощью колоночной хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 (в градиентном режиме с использованием в качестве растворителя 5-95% MeCN/Н2О + 0,1% ТФК) и получают искомое соединение 97 (27,0 мг) МС, электрораспыление, m/z = 596,4 [М+Н], ВУ 0,80 мин.
Пример 16. Получение 5-этокси-1-(6-{3-метил-2-[2-(тетрагидрофуран-2-илметил)-1,2,3,4-тетра-гидроизохинолин-6-илметокси]фенил}пиридин-2-ил)-Ш-пиразол-4-карбоновой кислоты (101)
К смеси амина 8-42 (100,0 мг, 0,20 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (0,10 мл, 0,59 ммоль) в ДМФ (1,00 мл) добавляют 2-бромметилтетрагидрофуран (8,0 мг, 0,05 ммоль) в ДМФ (0,06 мл). Смесь облучают при 100°С в течение 10 мин и охлаждают до комнатной температуры. Добавляют избыток бромида (76,0 мг) и реакционную смесь многократно облучают и затем перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат очищают с помощью ВЭЖХ (в градиентном режиме с использованием в качестве растворителя 10-95% MeCN/H2O + 0,1% муравьиной кислоты) и получают соединение 16-52 (6,0 мг).
Соединение 16-52 (6,0 мг) разбавляют с помощью ТГФ (1,0 мл), воды (1,0 мл) и МеОН (1,0 мл). К смеси добавляют LiOH (5,0 мг) и реакционную смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, подкисляют 4н. раствором HCl в 1,4-диоксане и фильтруют. Фильтрат очищают с помощью ВЭЖХ (в градиентном режиме с использованием в качестве растворителя 10-95% MeCN/H2O + 0,1% муравьиной кислоты) и получают соединение 101 (1,0 мг). МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,88 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 16, с использованием соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 138: МС, электрораспыление, m/z = 639,4 [М+Н], ВУ 1,16 мин.
Соединение 160: МС, электрораспыление, m/z = 563,3 [М+Н], ВУ 0,96 мин.
Пример 17. Получение 1-(6-{2-[2-(2-гидрокси-2-метилпропил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-илметокси] -3 -метилфенил}пиридин-2-ил)-5 -метокси- Ш-пиразол-4-карбоновой кислоты (33)
Промежуточный продукт 12-48 (90,0 мг, 0,18 ммоль) растворяют в MeCN (5,0 мл) и к нему добавляют Cs2CO3 (117,9 мг, 0,36 ммоль) и хлорид 17-53 (29,5 мг, 0,27 ммоль). Смесь нагревают при 50°С в течение 10 ч. Реакционную смесь охлаждают, экстрагируют с помощью EtOAc, промывают рассолом,
сушат над MgSO4 и концентрируют. Полученное вещество очищают с использованием картриджа 30 г КР-С18 SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме с использованием 15-65% MeCN/вода + 0,1% ТФК и получают промежуточный сложный эфир. Сложный эфир растворяют в 5 мл смеси ТГФ/МеОН/вода (2:2:1) и обрабатывают с помощью LiOH (25,0 мг, 1,10 ммоль). Затем смесь нагревают при 50°С в течение 2 ч, затем растворители удаляют в вакууме. Оставшийся неочищенный остаток очищают с использованием картриджа 30 г КР-С18 SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме с использованием 15-65% MeCN/вода + 0,1% ТФК и получают искомое соединение 33 (103,0 мг). МС, электрораспыление, m/z = 543,2 [М+Н], ВУ 0,68 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 17, с использованием соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 74. МС, электрораспыление, m/z = 577,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин.
Соединение 168: МС, электрораспыление, m/z = 587,3 [М+Н], ВУ 0,70 мин.
Пример 18. Получение трет-бутилового эфира 6-бромметил-8-трифторметил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты (18-10)
18-8 18-9 18-10
Имеющуюся в продаже кислоту 18-1 (5,0 г, 22,7 ммоль) при КТ растворяют в ТГФ (30 мл). Шприцем по каплям добавляют 1М раствор борана в ТГФ (34,0 мл, 34,0 ммоль). Затем смесь нагревают при 55 °С в течение ночи, затем охлаждают до КТ и реакцию останавливают водой (5 мл). После перемешивания в течение 5 мин добавляют 12 мл 2н. раствора HCl и смесь перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют дихлорметан (50 мл) и воду (50 мл) и образовавшиеся фазы разделяют с использованием гидрофобной фритты. Затем органический слой сушат над Na2SO4, затем повторно фильтруют.
Концентрируют в вакууме и получают масло, которое очищают с использованием картриджа 100 г KP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-100% EtOAc/гептан). Концентрирование содержащих продукт фракций дает промежуточный продукт 18,2 (3,2 г). Тионилхлорид (SOCl2) (2,3 мл, 31,5 ммоль) в атмосфере N2 при -10°С добавляют к раствору спирта 18-2 (3,2 г, 15,5 ммоль) в дихлорметане (20 мл). Через 5 мин охлаждающую баню удаляют и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 6 ч. Полученный раствор охлаждают до КТ и концентрируют в вакууме. Затем полученный остаток подвергают азеотропной перегонке с PhMe (2x10 мл) и затем растворяют в ДМФ (20 мл). Добавляют твердый NaCN (840 мг, 17,1 ммоль) и смесь нагревают при 45°С в течение ночи. После охлаждения до КТ смесь разбавляют водой (25 мл), рассолом (25 мл) и с помощью EtOAc (50 мл). Слои разделяют и органические вещества сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают с использованием картриджа 100 г KP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в гра
диентном режиме (5-100% EtOAc/гептан). Содержащие продукт фракции концентрируют в вакууме и получают соединение 18-3 (3,0 г).
1М Раствор борана в ТГФ (35 мл, 35 ммоль) при КТ шприцем по каплям добавляют к раствору соединения 18-3 (3,0 г, 13,9 ммоль) в ТГФ (25 мл). Затем смесь нагревают при 55°С в течение ночи, затем охлаждают до КТ и реакцию останавливают водой (5 мл). После перемешивания в течение 5 мин добавляют концентрированную HCl (8 мл) и перемешивание продолжают в течение 1 ч. Затем смесь разбавляют водой (20 мл) и обрабатывают твердым NaOH до обеспечения щелочной среды. Добавляют ди-хлорметан (50 мл) и рассол (25 мл), затем слои разделяют с использованием гидрофобной фритты. Неочищенный амин очищают с использованием картриджа 120 г KP-08 SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-95% MeCN/вода + 0,1% ТФК). Концентрирование фракций в вакууме дает соль промежуточного продукта с ТФК (2,93 г), которую растворяют в НСО2Н (30 мл) и обрабатывают 37% водным раствором НСНО (0,66 мл, 8,8 ммоль). Смесь перемешивают при 50°С в течение ночи, затем концентрируют в вакууме и получают неочищенное твердое вещество, которое сразу растворяют в 48% водном растворе HBr (25 мл). Этот раствор нагревают при 100°С в течение ночи, затем концентрируют в вакууме.
Неочищенное вещество подвергают азеотропной перегонке с PhMe (3x15 мл), затем суспендируют в дихлорметане (50 мл) и ДМФ (10 мл). Добавляют Et3N (1,9 мл, 0,82 ммоль) и несколько кристаллов 4-ДМАП (4^^-диметилшинопиридин). Одной порцией добавляют Вос2О (2,0 г, 9,1 ммоль) и смесь перемешивают при КТ в течение ночи. Добавляют насыщенный раствор NH4Cl (50 мл) и слои разделяют с использованием гидрофобной фритты. Органический слой концентрируют в вакууме и получают неочищенный остаток, который очищают с использованием картриджа 100 г KP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-100% EtOAc/гептан). Концентрирование содержащих продукт фракций в вакууме дает соединение 18-5 (540 мг).
Tf2O (0,27 мл, 1,6 ммоль) шприцем добавляют к смеси соединения 18-5 (540 мг, 1,46 ммоль), Et3N (0,31 мл, 2,2 ммоль) и 4-ДМАП (18 мг, 0,15 ммоль) в дихлорметане (25 мл), охлажденной до 0°С. Смесь перемешивают в течение ночи, нагревая ее до КТ, и затем реакцию останавливают насыщенным раствором NaHCO3 (30 мл). Полученные слои разделяют с использованием гидрофобной фритты и органические вещества концентрируют в атмосфере N2. Неочищенный остаток очищают с использованием картриджа 50 г HP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-30% EtOAc/гептан). Концентрирование содержащих продукт фракций в вакууме дает соединение 18-6 (460 мг).
Трифлат 18-6 (460 мг, 1,02 ммоль) объединяют с комплексом винилбороновой кислоты с пиридином (250 мг, 1,04 ммоль) и Pd(PPh3)4 (60 мг, 0,05 ммоль) в смеси ДМЭ (9 мл) и 2М водного раствора Na2CO3. Смесь облучают в микроволновом реакторе Biotage при 120°С в течение 40 мин. После охлаждения смесь концентрируют в атмосфере N2 и неочищенные твердые вещества растирают с дихлормета-ном. Затем содержащий дихлорметан фильтрат очищают с использованием картриджа 50 г HP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-80% EtOAc/гептан). Содержащие продукт фракции концентрируют в вакууме и получают соединение 18-7 (275 мг).
Стирол 18-7 (275 мг, 0,84 ммоль) и NaIO4 (630 мг, 2,95 ммоль) при КТ объединяют в смеси ТГФ (12 мл) и воды (3 мл). Шприцем добавляют OSO4 (0,13 мл, 0,017 ммоль, 4 мас.% в Н2О) и полученную взвесь энергично перемешивают при КТ в течение ночи. Затем взвесь фильтруют через фритту и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в дихлорметане (20 мл) и промывают насыщенным водным раствором тиосульфата (25 мл). Затем слои разделяют с использованием гидрофобной фритты и органический слой концентрируют в вакууме. Очистка неочищенного остатка с использованием картриджа 25 г HP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-60% EtOAc/гептан) дает соединение 18-8 (228 мг).
Альдегид 18-8 (225 мг, 0,683 ммоль) растворяют в ТГФ (5 мл) и затем в МеОН (5 мл). Добавляют твердый NaBH4 (40 мг, 1,1 ммоль) и смесь перемешивают при КТ в течение 20 мин. Добавляют насыщенный водный раствор NH4Cl (примерно 50 мл) и смесь перемешивают в течение 15 мин. Добавляют EtOAc (100 мл) и рассол (100 мл), затем слои разделяют. Органический слой сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают с использованием картриджа 50 г HP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-100% EtOAc/гептан). Концентрирование содержащих продукт фракций в вакууме дает соединение 18-9 (225 мг).
Твердый Ph3PBr2 (450 мг, 1,02 ммоль) при 0°С добавляют к смеси соединения 18-9 (225 мг, 0,68 ммоль) и ДИПЭА (0,21 мл, 1,2 ммоль) в дихлорметане. Смесь перемешивают в течение 1 ч и затем концентрируют в вакууме. Неочищенный бромид очищают с использованием картриджа 25 г НР-SIl SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-40% EtOAc/гептаны) и получают соединение 18-10
(248 мг).
Аналогичным образом, следующие бромиды получают так, как описано в примере 18, с использованием соответствующих исходных веществ:
18-11
' Y
18-12
18-13
F-X-F
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 18-10 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 158: МС, электрораспыление, m/z = 623,3 [М+Н], ВУ 1,34 мин (методика В2).
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 18-10 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 157: МС, электрораспыление, m/z = 637,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В2).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 18-11 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 201: МС, электрораспыление, m/z = 573,3 [М+Н], ВУ 1,14 мин (методика В2).
Соединение 202: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 1,14 мин (методика В2).
Соединение 229: МС, электрораспыление, m/z = 587,3 [М+Н], ВУ 1,46 мин (методика В2).
Разделение: LUX 5u Cellulose 3 Prep, 14% (1:1:1 МеОН^Ю^ИПСкСО^ 40°С, 110 бар, 80 мл/мин.
Соединение 230: МС, электрораспыление, m/z = 559,3 [М+Н], ВУ 1,46 мин (методика В2).
Разделение: LUX 5u Cellulose 3 Prep, 14% (1:1:1 МеОН^КЖИПСкСОь 40°С, 110 бар, 80 мл/мин.
Соединение 253: MC, электрораспыление, m/z = 559,4 [М+Н], ВУ 1,20 мин (методика А2) (среда умеренной полярности, продолжительный градиентный режим).
Соединение 254: МС, электрораспыление, m/z = 559,3 [М+Н], ВУ 1,20 мин (методика А2) (среда умеренной полярности, продолжительный градиентный режим).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 18-12 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 177: МС, электрораспыление, m/z = 545,2 [М+Н], ВУ 0,68 мин (методика В1). Соединение 187: МС, электрораспыление, m/z = 575,3 [М+Н], ВУ 1,13 мин (методика В2). Соединение 231: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 1,26 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (1:1:1 МеОН^КЖИПС (0,1% Et2NH)):CO2 при 75 мл/мин, 130 бар, 40°С;
Соединение 234: МС, электрораспыление, m/z = 589,3 [М+Н], ВУ 1,26 мин (методика В2); Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (1:1:1 МеОН^ЮйИПС (0,1% Et2NH)):CO2 при 75
мл/мин, 130 бар, 40°С.
Соединение 251: МС, электрораспыление, m/z = 559,4 [М+Н], ВУ 1,18 мин (методика А2) (среда умеренной полярности, продолжительный градиентный режим).
Разделение: ChiralPak AD-H Prep, 45% (3:1 гексан:EtOH (1% iPrNH2)):CO2 при 80 мл/мин, 100 бар,
25°С.
Соединение 252: МС, электрораспыление, m/z = 559,3 [М+Н], ВУ 1,18 мин (методика А2) (среда умеренной полярности, продолжительный градиентный режим).
Разделение: ChiralPak AD-H Prep, 45% (3:1 гексан:EtOH (1% iPrNH2)):CO2 при 80 мл/мин, 100 бар,
25°С.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 18-13 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 166: МС, электрораспыление, m/z = 623,3 [М+Н], ВУ 1,30 мин (методика В2). Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с
использованием фенола 3-15, бромида 18-12 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 159: МС, электрораспыление, m/z = 587,3 [М+Н], ВУ 0,61 мин (методика В1).
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 18-13 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 165: МС, электрораспыление, m/z = 637,3 [М+Н], ВУ 1,42 мин (методика В2). Пример 19. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 7-гидроксиметил-6-метил-1,2,4,5-тетрагидробензо[с1]азепин-3-карбоновой кислоты (19-14)
Раствор соединения 19-1 (100 г, 0,465 моль) в ТГФ (800,000 мл) при 0°С добавляют к смеси АГЛ (166 г, 1,395 моль) и безводного ТГФ (200 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 ч, затем кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. К смеси медленно добавляют насыщенный водный раствор NH4Cl (200 мл). Затем добавляют EtOAc и Na2SO4. Смесь перемешивают в течение 1 ч и затем фильтруют и промывают с помощью ПЭ (петролейный эфир) и получают соединение 19-2.
К раствору соединения 19-2 (360,000 г, 2,365 моль) в дихлорметане (3000,000 мл) при -10°С добавляют SOCl2 (562,980 г, 4,731 моль). Затем реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. Смесь концентрируют и получают неочищенное соединение 19-3, которое используют на следующей стадии без обработки.
Смесь соединения 19-3 (334,000 г, 1,957 моль) и NaCN (168,096 г, 2,290 моль) в ДМФ (1000,000 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь экстрагируют с помощью EtOAc и Н2О. Органический слой сушат и концентрируют и очищают с помощью хроматографии на силикагеле (ПЭ:ЭА (этилацетат) = 50:1) и получают соединение 19-4 в виде желтого масла.
Смесь соединения 19-4 (1608,000 г, 9,975 моль), КОН (1117,221 г, 19,950 моль) и EtOH (15000,000 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Значение рН остатка доводят до равного 1. Смесь фильтруют и осадок на фильтре сушат и получают соединение 19-5.
Соединение 19-5 (737,000 г, 4,090 моль) при перемешивании в атмосфере N2 добавляют к раствору (COCl)2 (8,180 моль) и ДМФ (70,000 мл) в дихлорметане (7370,000 мл), затем перемешивают в течение 2 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Затем смесь выпаривают. Остаток при перемешивании при комнатной температуре в течение 2 ч добавляют к раствору 2,2-диметоксиэтил-1-амина (429,996 г, 4,090 моль) и Et3N (454,388 г, 4,499 моль) в дихлорметане (1000 мл). ТСХ показывает, что реакция завершается. Смесь выпаривают и остаток очищают на колонке и получают соединение 19-6.
Раствор соединения 19-6 (1053 г, 3,939 моль) в АсОН (2 л) и HCl (2 л) перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Смесь выпаривают. Остаток
кристаллизуют, промывают с помощью Н2О и EtOH и затем твердое вещество отфильтровывают и сушат и получают соединение 19-7.
Смесь Pd/C (4 г) и соединения 19-7 (40,000 г, 0,197 моль) в АсОН (2 л) перемешивают в атмосфере Н2 при комнатной температуре в течение 16 ч. ЖХМС (жидкостная хроматография-масс-спектрометрия) показывает, что реакция завершается. Смесь фильтруют, выпаривают и остаток кристаллизуют из EtOH. Твердое вещество отфильтровывают и сушат и получают соединение 19-8.
При перемешивании к раствору соединения 19-8 (130,000 г, 0,633 моль) в ТГФ (1300,000 мл) в атмосфере N2 медленно добавляют BMS (127,000 мл, 1,267 моль), поддерживая температуру ниже -5°С, затем перемешивают в течение 16 ч. ЖХМС показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают концентрированной HCl и затем смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Растворитель выпаривают и остаток подвергают распределению между дихлорметаном и Н2О. Значение рН водной фазы доводят до равного 9 и твердое вещество отфильтровывают и сушат и получают соединение
19-9.
Раствор соединения 19-9 (220,000 г, 1,150 моль) в 48% водном растворе HBr (1800,000 мл) перемешивают в атмосфере N2 при 110°С в течение 4 ч. ЖХМС показывает, что реакция завершается. Смесь выпаривают и получают неочищенное соединение 19-10.
Смесь соединения 19-10 (267,000 г, 1,506 моль), Вос2О (492,595 г, 2,260 моль) и ТЭА (триэтиламин) (380,368 г, 3,766 моль) в дихлорметане (2670,000 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. За протеканием реакции следят с помощью ТСХ. После израсходования соединения 19-10 реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии и получают соединение 19-11.
Смесь соединения 19-11 (267,000 г, 0,963 моль) и Tf2O (271,468 г, 0,963 моль) в ДХМ (2670,000 мл) перемешивают в атмосфере N2 при комнатной температуре в течение 2 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток очищают на колонке и получают соединение 19-12.
Смесь соединения 19-12 (20,000 г, 0,049 моль), ДФФП (2,000 г), Pd(OAc)2 (2,000 г) и ТЭА (9,868 г, 0,098 моль) в EtOH (400,000 мл) перемешивают в атмосфере СО при 80°С в течение 12 ч. За протеканием реакции следят с помощью ТСХ. После завершения реакции реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии и получают соединение 19-13.
При перемешивании к раствору соединения 19-13 (22,000 г, 0,066 моль) в ТГФ (300,000 мл) медленно добавляют АГЛ (2,507 г, 0,066 моль), поддерживая температуру ниже -40°С. После завершения добавления смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается и реакцию останавливают с помощью Н2О. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток подвергают распределению между дихлорметаном и H2O, органическую фазу сушат над безводным Na2SO4 и выпаривают. Остаток очищают на колонке и получают соединение 19-14.
Бромирование спирта проводят по методике, аналогичной описанной в примере 4, и получают промежуточный трет-бутиловый эфир 7-бромметил-6-метил-1,2,4,5-тетрагидробензоВДазепин-3-карбоновой кислоты 19-15.
t 1
19-15
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 19-15 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 176: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 1,19 мин (методика В2). Соединение 184: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,24 мин (методика В2). Соединение 206: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 1,26 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (МеОНЕЮ^ИПС (1:1:1) (0,1% Et2NH)) в CO2 при 705
мл/мин, 130 бар, 40°С.
Соединение 207: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 1,26 мин (методика В2); Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (МеОНЕЮ^ИПС (1:1:1) (0,1% Et2NH)) в CO2 при 705
мл/мин, 130 бар, 40°С.
Соединение 222: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,40 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 12% (МеОН:ИПС (1% Et2NH)) в СО2 при 70 мл/мин, 105 бар,
40°С.
Соединение 223: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 1,42 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 12% (МеОН:ИПС (1% Et2NH)) в СО2 при 70 мл/мин, 105 бар,
40°С.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 19-15 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 162: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 1,34 мин (методика В2). Соединение 175: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 1,31 мин (методика В2). Соединение 190: МС, электрораспыление, m/z = 597,2 [М+Н], ВУ 0,63 мин (методика В1). Соединение 196: МС, электрораспыление, m/z = 585,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В1). Соединение 203: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В1). Разделение: Chirapak AD-H, 20x250 мм; 20% EtOH:гептан при 8 мл/мин, температура окружающей среды.
Соединение 204: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], ВУ 0,67 мин (методика В1). Разделение: Chirapak AD-H, 20x250 мм; 20% EtOH:гептан при 8 мл/мин, температура окружающей среды.
Соединение 211: МС, электрораспыление, m/z = 613,3 [М+Н], ВУ 1,43 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 20% (ИПС + Et2NH):гептан при 9 мл/мин. Соединение 212: МС, электрораспыление, m/z = 613,3 [М+Н], ВУ 1,43 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 20% (ИПС + Et2NH):гептан при 9 мл/мин. Соединение 214: МС, электрораспыление, m/z = 611,3 [М+Н], ВУ 1,61 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 30% ИПС:СО2, 110 бар, 75 мл/мин, 40°С. Соединение 215: МС, электрораспыление, m/z = 611,3 [М+Н], ВУ 1,61 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 30% ИПС:СО2, 110 бар, 75 мл/мин, 40°С. Соединение 225: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,41 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (1:1:1 МеОН^Ю^ИПС (0,1% Et2NH)):CO2 при 75 г/мин, 110 бар, 40°С.
Соединение 226: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,44 мин (методика В2). Разделение: ESI Industries CC4 Prep, 55% (1:1 гексан:МеОН (3% iPrOH, 0,1% iPrNH2)):CO2 при 80
мл/мин, 100 бар, 25°С.
Соединение 227: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,41 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (1:1:1 МеОН^Ю^ИПС (0,1% Et2NH)):CO2 при 75 г/мин, 110 бар, 40°С.
Соединение 235: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,41 мин (методика В2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% (1:1:1 МеОН^Ю^ИПС (0,1% Et2NH)):CO2 при 75 г/мин, 110 бар, 40°С.
Соединение 228: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,44 мин (методика В2). Разделение: ESI Industries CC4 Prep, 55% (1:1 гексан:МеОН (3% iPrOH, 0,1% iPrNH2)):CO2 при 80
мл/мин, 100 бар, 25°С.
Соединение 232: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 1,54 мин (методика А2). Разделение: LUX 5u Cellulose 1 Prep, 7% EtOH:гептан при 10 мл/мин. Соединение 233: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 1,50 мин (методика А2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% EtOH:CO2, 80 мл/мин, 110 бар, 40°С. Соединение 235: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 1,50 мин (методика А2). Разделение: LUX 5u Cellulose 4 Prep, 20% EtOH:CO2, 80 мл/мин, 110 бар, 40°С. Пример 20. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 5-бромметил-4,7-диметил-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты (20-4)
20-1 20-2 20-3 20-4
В круглодонную колбу объемом 100 мл добавляют амин 20-1 (0,500 г, 4,13 ммоль), который растворяют в дихлорметане (15,0 мл). Реакционную смесь охлаждают до 0°С и добавляют триэтиламин (1,15 мл, 8,25 ммоль) и ВОС2О (1,35 г, 6,19 ммоль). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь экстрагируют дихлорметаном, промывают водой и рассолом, сушат над MgSO4 и концентрируют. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептанах. Искомые фракции собирают и концентрируют и получают масло (0,556 г).
Пропаргиловый спирт (0,579 мл, 9,94 ммоль) при 0°С по каплям добавляют к раствору диацетилена 20-2 (0,550 г, 2,49 ммоль) в безводном этаноле (15,0 мл). Добавляют катализатор Вилкинсона (0,229 г, 0,249 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Неочищенную реакционную смесь концентрируют и обрабатывают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном
режиме с использованием 10-80% EtOAc в гептанах. Искомые фракции собирают и концентрируют и получают почти белое твердое вещество (0,125 г).
К раствору спирта 20-3 (125 мг, 0,451 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (0,118 мл, 0,676 ммоль) в дихлорметане (5,0 мл) при 0°С добавляют трифенилфосфиндибромид (297 мг, 0,676 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 7-60% EtOAc в гепта-нах и получают искомый продукт 20-4 (35,0 мг) в виде белого твердого вещества.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 20-4 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 145: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин. Соединение 246: МС, электрораспыление, m/z = 585,0 [М+Н], ВУ 1,40 мин (методика В2). Пример 21. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 6-бромметил-5,8-диметил-3,4-дигидро-Ш-изохинолин-2-карбоновой кислоты (21-8)
Кетон 21-1 (14,00 г, 70,27 ммоль) и пирролидин (8,71 мл, 106,0 ммоль) растворяют в толуоле (60 мл) и смесь кипятят с обратным холодильником в аппарате Дина-Штарка в течение 24 ч. Затем реакционную смесь концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в толуоле (60 мл) и обрабатывают 4-гексен-3-оном (8,32 мл, 70,27 ммоль) и гидрохиноном (0,080 г, 0,727 ммоль). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 24 ч и затем разбавляют с помощью EtOAc и промывают 1н. раствором HCl. Объединенные органические вещества сушат и концентрируют в вакууме и получают вязкое масло. Вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 20100% EtOAc в гептанах и получают желтое твердое вещество (11,74 г).
1,0М Раствор LiHMDS (42,95 мл) при -78°С по каплям добавляют к раствору промежуточного продукта 21-2 (10,00 г, 35,79 ммоль) в ТГФ (50,0 мл). Эту смесь перемешивают при -78°С в течение еще 30 мин. По каплям добавляют TMSCl (5,45 мл, 42,95 ммоль) и перемешивают при -78°С в течение 2 ч. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и разбавляют диэтиловым эфиром (200 мл). Эту смесь добавляют к насыщенному раствору Na2CO3 и фазы разделяют. Объединенные органические вещества сушат и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в АЦН (ацетонитрил) (50,0 мл) и добавляют Pd(OAc)2 (8,04 г, 35,79 ммоль). Полученную смесь охлаждают на водяной бане для поддержания температуры реакционной смеси ниже 35°С и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через целит и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток переносят в 200 мл EtOAc, затем обрабатывают 1,0М раствором ТБАФ (тетрабутиламмонийфторид) (50,0 мл). Эту смесь перемешивают в течение 30 мин и затем промывают 1 н. раствором HCl и 10% раствором тиосульфата натрия. Органические вещества сушат и концентрируют. Вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 20-80% EtOAc в гептанах и получают почти белое твердое вещество (6,11 г).
К раствору исходного вещества 21-3 (1,50 г, 5,41 ммоль) в дихлорметане (25,0 мл) при комнатной температуре добавляют пиридин (0,871 мл, 10,82 ммоль). Раствор охлаждают до -30°С и по каплям добавляют Tf2O (1,00 мл, 5,95 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при -30°С в течение 1 ч и затем нагревают до комнатной температуры. Ее концентрируют в вакууме и остаток разбавляют с помощью EtOAc, промывают 1н. раствором HCl, насыщенным раствором NaHCO3, рассолом, сушат над MgSO4 и концентрируют. Полученное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептанах и получают белое твердое вещество (1,61 г).
Трифлат 21-4 (1,00 г, 2,44 ммоль) объединяют с боронатом (0,647 г, 2,69 ммоль) и Pd(PPh3)4 (0,144 г, 0,124 ммоль) в смеси ДМЭ (15,0 мл) и 2,0М раствора Na2CO3 (1,27 мл). Реакционную смесь облучают в
микроволновом реакторе при 120°С в течение 40 мин. Ее концентрируют в атмосфере N2 и очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в геп-танах. Искомые фракции концентрируют и получают белое твердое вещество (0,662 г).
Соединение 21-5 (1,029 г, 3,58 ммоль), NaIO4 (2,34 г, 10,94 ммоль), 2,5 мас.% раствор OsO4 в t-BuOH (1,0 мл), ТГФ (12,4 мл) и Н2О (2,4 мл) объединяют при комнатной температуре, затем перемешивают в темноте в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и дихлорметаном. Слои разделяют с использованием гидрофобной фритты. Органические вещества сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептанах и получают янтарное масло (0,786 г).
Альдегид 21-6 (0,785 г, 2,71 ммоль) растворяют в ТГФ (5,0 мл) и МеОН (5,0 мл). Смесь охлаждают до 0°С и добавляют NaBH4 (0,156 г, 4,07 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакцию останавливают водным раствором NH4Cl и смесь перемешивают в течение 10 мин. Ее экстрагируют с помощью EtOAc, промывают с помощью NH4Cl, рассолом, сушат над MgSO4 и концентрируют. Полученное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептанах. Искомые фракции собирают и получают искомый продукт 21-7 (0,626 г) в виде белого твердого вещества.
К раствору спирта 21-7 (0,300 г, 1,030 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (0,269 мл, 1,54 ммоль) в дихлорметане (10,0 мл) при 0°С добавляют трифенилфосфиндибромид (0,679 г, 1,54 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 7-60% EtOAc в гепта-нах и получают искомый продукт 21-8 (0,338 г) в виде белого твердого вещества.
Аналогичным образом, следующий бромид получают из соответствующих исходных веществ так, как описано в примере 21.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 21-8 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 120: МС, электрораспыление, m/z = 583,5 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Соединение 178: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,64 мин (методика В1).
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 21-8 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 132: МС, электрораспыление, m/z = 597,5 [М+Н], ВУ 0,83 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 21-9 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 154: МС, электрораспыление, m/z = 597,7 [М+Н], ВУ 0,81 мин.
Пример 22. Получение промежуточных трет-бутилового эфира 5-бромметил-4-метил-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты (22-5) и трет-бутилового эфира 6-бромметил-4-метил-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты (22-6)
При перемешивании к раствору Вос-амина 22-1 (2,00 г, 12,89 ммоль) в ТГФ (30,0 мл) и тетрабутил-аммониййодиде (ТБАЙ) (0,476 г, 1,29 ммоль) добавляют 0,5М раствор KHMDS (25,8 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. По каплям добавляют бромид (1,69 мл, 19,33 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и затем кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакцию останавливают насыщенным раствором NH4Cl и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Объединенные органические вещества сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме. Неочищенное вещество очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном ре
жиме с использованием 5-40% EtOAc в гептанах и получают искомый продукт (2,13 г) в виде бесцветного масла.
Пропаргиловый спирт (2,39 мл, 41,11 ммоль) при 0°С по каплям добавляют к раствору диацетилена 22-2 (2,13 г, 10,28 ммоль) в безводном этаноле (50,0 мл). К смеси добавляют катализатор Вилкинсона (0,95 г, 1,028 ммоль) и ее перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь концентрируют в вакууме и обрабатывают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 10-80% EtOAc в гептанах. Искомые фракции собирают и концентрируют и получают оба региоизомера 22-3 и 22-4 (1,93 г). Смесь используют на следующей стадии.
К раствору смесь спиртов 22-3 и 22-4 (1,93 г, 7,33 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (1,91 мл, 10,98 ммоль) в дихлорметане (50,0 мл) при 0°С добавляют трифенилфосфиндибромид (4,73 г, 10,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 7-60% EtOAc в гептанах и получают смесь региоизомеров 22-5 и 22-6 (2,12 г) в виде белого твердого вещества.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 22-5 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 256: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 1,13 мин (методика А2).
Соединение 257: МС, электрораспыление, m/z = 527,3 [М+Н], ВУ 1,12 мин (методика А2).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 22-6 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 255: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 1,15 мин (методика А2).
Соединение 258: МС, электрораспыление, m/z = 527,3 [М+Н], ВУ 1,16 мин (методика А2).
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 22-5 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 119: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 1,13 мин (методика А2).
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 22-6 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 118: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 1,11 мин (методика А2). Пример 23. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 5-бромметил-6-метил-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоновой кислоты (23-3)
Спирт (0,968 мл, 12,94 ммоль) при 0°С по каплям добавляют к раствору диацетилена 23-1 (500 мг, 2,59 ммоль) в безводном этаноле (12,0 мл). К смеси добавляют катализатор Вилкинсона (239,4 мг, 0,259 ммоль) и ее перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь концентрируют в вакууме и обрабатывают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 10-80% EtOAc в гептанах. Искомые фракции собирают и концентрируют и получают твердое вещество (105 мг).
К раствору спирта 23-2 (105 мг, 0,399 ммоль) и ^^диизопропилэтиламина (0,104 мл, 0,598 ммоль) в дихлорметане (7,0 мл) при 0°С добавляют трифенилфосфиндибромид (263 мг, 0,598 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 7-60% EtOAc в гепта-нах и получают соединение 23-3.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 23-3 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 143: МС, электрораспыление, m/z = 555,4 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Пример 24. Получение 5-этокси-1-(6-{3-метил-2-[5-метил-2-(тетрагидропиран-4-карбонил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-илметокси]фенил}пиридин-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты (соединение 147)
Амин 12-48 (122 мг, 0,232 ммоль) при КТ объединяют с ДМАП (2 мг, 0,02 ммоль) и ДИПЭА (60 мкл, 0,34 ммоль) в дихлорметане (5 мл). Добавляют тетрагидро-2Н-пиран-4-карбонилхлорид (40 мкл, 0,23 ммоль) и смесь перемешивают при КТ в течение ночи. Смесь непосредственно загружают в картридж Samplet и затем очищают с использованием картриджа 50 г HP-Sil SNAP (Biotage) при элюировании с помощью 100% дихлорметана. Концентрирование в вакууме дает промежуточный сложный эфир (31 мг), который непосредственно используют на следующей стадии.
Сложный эфир (30 мг) растворяют в смеси EtOH/Н2О/ТГФ (1, 0,5, 0,5 мл) и обрабатывают с помощью LiOH (26 мг, 1,2 ммоль). Смесь перемешивают при 45°С в течение ночи и затем концентрируют в атмосфере N2. Затем остаток очищают с использованием картриджа 12 г KP-08 SNAP (Biotage) при элюировании в градиентном режиме (5-95% MeCN/вода + 0,1% ТФК). Продукт концентрируют в вакууме и получают соединение 150 (26 мг).
Соединение 147: МС, электрораспыление, m/z = 611,3 [М+Н], ВУ 1,04 мин (методика В1).
Пример 25. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 6-бромметил-8-метил-3,4-дигидро-Ш-изохинолин-2-карбоновой кислоты (25-14)
К смеси соединения 25-01 (185 г; 0,940 моль), K2CO3 (437 г, 3,17 моль) в ацетоне (2 л) добавляют MeI (424 г, 2,99 моль). Смесь перемешивают при 40°С в течение 16 ч. После фильтрования смесь очищают на колонке с силикагелем (ПЭ:EtOAc = 500:1) и получают 1-бром-3-метокси-5-метилбензол 25-02 (189 г) в виде светло-желтого масла.
К смеси соединения 25-02 (200 г, 0,995 моль) и сухого ТГФ (1,70 л) при -70°С по каплям добавляют n-BuLi (438 мл; 1,09 моль). После перемешивания при -70°С в течение 1 ч при -70°С по каплям добавляют сухой ДМФ (76,3 г, 1,04 моль) и перемешивают при -70°С в течение 1 ч. Смесь выливают в NH4Cl (1,00 л) и экстрагируют с помощью EtOAc (500 мл х 3), промывают рассолом (500 мл х 2), сушат над Na2SO4 и концентрируют и получают 3-метокси-5-метилбензальдегид 25-03 (147 г) в виде желтого масла.
Смесь соединения 25-03 (150 г, 0,999 моль) и NH4OAc (30,8 г, 0,40 моль) в MeNO2 (1,5 л) кипятят с обратным холодильником в течение 16 ч. Смесь концентрируют, затем разбавляют с помощью EtOAc (1000 мл), промывают водой (1 л), рассолом (100 мл), органические слои сушат над Na2SO4 и концентрируют. Смесь растирают со смесью ПЭ:EtOAc = 10:1 в течение 10 мин, фильтруют и получают 1-метокси-3-метил-5-((Е)-2-нитровинил)бензол 25-04 (80 г) в виде желтого твердого вещества.
К смеси LiAlH4 (78,6 г, 2,00 моль) и сухого ТГФ (1 л) при 0°С порциями добавляют соединение 2504 (78 г, 0,404 моль) в ТГФ (200 мл) и перемешивают при 70°С в течение 16 ч. Смесь охлаждают до 0°С, реакцию медленно останавливают водой (78 мл), 15% раствором NaOH (78 мл) и водой (235 мл). После фильтрования смесь концентрируют и получают 2-(3-метокси-5-метилфенил)этиламин 25-05 (40 г) в виде светло-желтого масла.
Смесь соединения 25-05 (66 г, 0,40 моль) и муравьиной кислоты (73,5 г, 1,60 моль) в диоксане (600 мл) перемешивают при 90°С в течение 16 ч. Смесь концентрируют и получают №[2-(3-метокси-5-метилфенил)этил]формамид 25-06 (77 г) в виде желтого твердого вещества.
К раствору соединения 25-06 (76,0 г, 0,354 моль) в дихлорметане (2,5 л) при 15°С добавляют POCl3 (155 г, 1,01 моль) и кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Раствор концентрируют, к остатку добавляют воду (1,5 л), толуол (1,5 л) и 20% раствор NaOH (500 мл), затем кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч и охлаждают. Смесь разбавляют с помощью EtOAc (500 мл х 3), промывают водой (1 л х 2), рассолом (100 мл х 2), объединенные органические вещества сушат над Na2SO4 и концентрируют. Вещество очищают на колонке с силикагелем (ПЭ:EtOAc = 10:1) и получают 6-метокси-8-метил-3,4-дигидроизохинолин 25-07 (58,5 г) в виде коричневого масла.
К раствору соединения 25-07 (58,5 г, 0,334 моль) в МеОН (500 мл) при 0°С добавляют NaBH4 (63,3 г, 1,67 моль) и смесь выдерживают при 0°С в течение 4 ч. Реакцию останавливают 1н. раствором HCl (100 мл), значение рН доводят до равного 8 путем добавления NaHCO3, смесь экстрагируют дихлормета-ном (300 мл х 2), объединенные органические вещества сушат над Na2SO4 и концентрируют и получают 6-метокси-8-метил-3,4-дигидроизохинолин 25-08 (83 г, неочищенный) в виде коричневого масла.
Раствор неочищенного соединения 25-08 (83 г, 0,47 моль) в HBr (40% раствор в воде, 500 мл) нагревают при 90°С в течение 12 ч. Раствор выпаривают при пониженном давлении и получают 8-метил-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-олгидробромид 25-09. К этому неочищенному остатку добавляют Вос2О (72 г, 0,33 моль) и триэтиламин (63 г, 0,62 моль) и полученную смесь перемешивают при 15°С в течение 12 ч, затем разбавляют дихлорметаном (1500 мл) и водой (100 мл). Органический слой промывают 0,5н. раствором HCl (100 мл) и рассолом (100 мл), сушат, концентрируют и очищают на колонке с силикаге-лем (ПЭ:EtOAc = 30:1) и получают трет-бутиловый эфир 6-гидрокси-8-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 25-10 (33,4 г) в виде белого твердого вещества.
К раствору соединения 25-10 (33 г; 0,113 моль) и пиридина (20,1 г, 0,254 моль) в сухом дихлорме-тане (300 мл) при -30°С по каплям добавляют Tf2O (39,4 г, 0,139 моль) и перемешивают при -30°С в течение 1 ч. Затем раствор нагревают до 15°С и перемешивают в течение 8 ч. Смесь разбавляют дихлорме-таном (500 мл) и водой (100 мл) и объединенные органические вещества концентрируют и затем очищают на колонке с силикагелем (ПЭ:EtOAc =50:1) и получают трет-бутиловый эфир 8-метил-6-трифторметансульфонилокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 25-11 (43 г) в виде белого твердого вещества.
Раствор соединения 25-11 (43 г, 0,109 моль), Et3N (33,0 г, 0,327 моль), ДФФП (4,53 г) и Pd(OAc)2 (5 г) в МеОН (500 мл) перемешивают при давлении СО, равном 3 МПа, при 90°С в течение 2 дней. После фильтрования и концентрирования остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле (ПЭ:EtOAc =50:1) и получают 2-трет-бутиловый эфир,6-метиловый эфир 8-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2,6-дикарбоновой кислоты 25-12 (21 г) в виде бесцветного масла.
К раствору соединения 25-12 (21 г, 0,693 моль) в сухом ТГФ (500 мл) при -50°С добавляют LiAlH4 (7,4 г, 208 ммоль). Смесь перемешивают при -50°С в течение 1 ч и затем при 0°С в течение 30 мин. Реакцию медленно останавливают с помощью Н2О (7,4 мл), 15% раствором NaOH (7,4 мл) и с помощью Н2О (22,2 мл) и затем смесь фильтруют. Фильтрат концентрируют и очищают с помощью препаративной ВЭЖХ и концентрируют. Остаток экстрагируют дихлорметаном (1 л х 2), объединенные органические вещества сушат над Na2SO4 и концентрируют и получают трет-бутиловый эфир 6-гидроксиметил-8-метил-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 25-13 (14,8 г) в виде бесцветного масла.
К раствору соединения 25-13 (13,4 г, 0,485 моль) и ДИЭА (диизопропилэтиламин) (11,8 мл, 0,679 моль) в дихлорметане (200 мл) при -30°С добавляют трифенилфосфиндибромид (26,6 г, 0,606 моль). Полученную смесь перемешивают в течение 1 ч, за это время охлаждающей бане дают нагреться до -10°С. Из смеси при -10°С удаляют летучие вещества, остаток суспендируют в дихлорметане (50 мл) и фильтрат очищают с помощью хроматографии (силикагель, 5-40% EtOAc в гептане) и получают искомый промежуточный продукт 25-14 (16,2 г) в виде белого твердого вещества.
Аналогичным образом следующий бромид получают из соответствующих исходных веществ так, как описано в примере 25:
25-15
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 1-6, бромида 25-14 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 161: МС, электрораспыление, m/z = 597,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 25-14 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 171: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,68 мин.
Соединение 186: МС, электрораспыление, m/z = 541,3 [М+Н], ВУ 0,60 мин.
Соединение 237: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,60 мин.
Соединение 239: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,60 мин.
Соединение 240: МС, электрораспыление, m/z = 585,2 [М+Н], ВУ 0,60 мин.
Соединение 242: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,59 мин.
Соединение 244: МС, электрораспыление, m/z = 557,3 [М+Н], ВУ 0,62 мин.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 25-14 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 169: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,73 мин.
Соединение 173: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,74 мин.
Соединение 174: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Соединение 195: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Разделение: колонка IC, 15% (1:1:1 МеОН^Ю^ИПС + диэтиламин):СО2, 3 мл/мин, 40°С, 200 бар. Соединение 197: МС, электрораспыление, m/z = 583,4 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Разделение: колонка IC, 15% (1:1:1 МеОН^Ю^ИПС + диэтиламин):СО2, 3 мл/мин, 40°С, 200 бар. Соединение 200: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 0,63 мин (методика В1). Соединение 210: МС, электрораспыление, m/z = 571,1 [М+Н], ВУ 0,70 мин (методика В1). Соединение 241: МС, электрораспыление, m/z = 569,3 [М+Н], ВУ 0,62 мин. Соединение 243: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], ВУ 0,63 мин.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 25-15 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 121: МС, электрораспыление, m/z = 569,4 [М+Н], ВУ 0,72 мин.
Пример 26. Получение промежуточного трет-бутилового эфира 6-бромметил-8-метил-3,4-дигидро-Ш-изохинолин-2-карбоновой кислоты (26-12).
г, 43,2 ммоль), комплекс 2,4,6-тривинилциклотрибороксан с пиридином (11,4 г, 47,5 ммоль), тетра-кис(трифенилфосфин)палладий (2,49 г, 2,16 ммоль), 2,0М водный раствор карбоната натрия (25,9 мл, 51,7 ммоль) и 1,2-диметоксиэтан (50 мл), деоксигенируют путем поочередного проведения вакуумирова-ния и продувки аргоном (3х) и кипятят с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение 3 ч и затем перемешивают при температуре окружающей среды в течение 18 ч. Летучие вещества удаляют в вакууме, остаток суспендируют в 1н. растворе HCl (800 мл) и экстрагируют с помощью EtOAc (600 мл, 300 мл и затем 300 мл). Объединенные органические экстракты промывают рассолом, сушат над NaSO4 и очищают с помощью хроматографии (силикагель, 5-30% EtOAc в гептане) и получают 2-гидрокси-4-винилбензойную кислоту 26-02 (3,70 г) и метиловый эфир 2-гидрокси-4-винилбензойной кислоты (0,300 г).
К раствору соединения 26-02 (3,70 г, 22,0 ммоль) и метилового эфира 2-гидрокси-4-винилбензойной кислоты (0,300 г, 1,69 ммоль) в МеОН (50 мл) добавляют H2SO4 (4,0 мл, 75 ммоль). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 16 ч и затем ей дают охладиться до комнатной температуры. Добавляют лед (100 г) и смесь перемешивают. После того как лед полностью растаял, МеОН удаляют при пониженном давлении и водный остаток экстрагируют с помощью ДХМ (2х 100 мл). Объединенные органические экстракты объединяют, концентрируют в вакууме и очищают с помощью хроматографии (силикагель, 0-5% EtOAc в гептане) и получают метиловый эфир 2-гидрокси-4-винилбензойной кислоты 26-03 (3,75 г) в виде прозрачного масла.
При перемешивании к смеси соединения 26-03 (3,75 г, 21 ммоль) и метаперйодата натрия (13,8 г, 64,3 ммоль) в ТГФ (80 мл) и воде (20 мл) добавляют 4 мас.% раствор тетраоксида осмия в воде (3,69 мл, 0,47 ммоль). Реакционную колбу (которая нагревается в ходе добавления содержащего осмий реагента) оборачивают алюминиевой фольгой для защиты содержимого от света и взвесь перемешивают в течение 16 ч. Летучие вещества удаляют при пониженном давлении, остаток разбавляют насыщенным водным раствором NaHCO3 (700 мл) и экстрагируют с помощью EtOAc (700 мл, 200 мл и затем 200 мл). Объединенные органические экстракты концентрируют в вакууме и затем очищают с помощью хроматографии (силикагель, 0-50% EtOAc в гептане) и получают метиловый эфир 4-формил-2-гидроксибензойной кислоты 26-04 (2,25 г) в виде желтого твердого вещества.
В круглодонной колбе с присоединенной ловушкой Дина-Штарка соединение 26-04 (2,25 г, 12 ммоль) и диметилацеталь аминоацетальдегида (1,31 г, 12 ммоль) в толуоле кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и получают неочищенный метиловый эфир 4-{[2,2-диметоксиэтилимино]метил}-2-гидроксибензойной кислоты 26-05 (3,33 г, 12,4 ммоль) в виде коричневого масла. В это неочищенное масло помещают большой стержень для перемешивания, добавляют полифосфорную кислоту (25,0 г) и пентаоксид фосфора (33,0 г, 232 ммоль). Полученную вязкую смолу перемешивают при 80°С в течение 5 ч. Реакционную смесь разбавляют с помощью Н2О (600 мл), переносят в колбу Эрленмейера объемом 5 л и при энергичном перемешивании смесь осторожно обрабатывают небольшими порциями твердого NaHCO3, пока указанное добавление не перестанет приводить к вспениванию смеси. Затем основную водную смесь экстрагируют с помощью ДХМ (5x200 мл). Объединенные органические экстракты промывают с помощью H2O (2х50 мл), сушат над Na2SO4, концентрируют в вакууме и затем очищают с помощью хроматографии (силикагель, 0-100% EtOAc в гептане) и получают метиловый эфир 5-гидроксиизохинолин-6-карбоновой кислоты 26-06 (0,520 г).
Соединение 26-06 (0,520 г, 2,46 ммоль) растворяют в МеОН (15 мл) и затем добавляют 4н. раствор HCl в диоксане (6,15 мл, 24 ммоль). Смесь гидрируют в аппарате H-Cube путем постоянного пропускания раствора через содержащий PtO2 картридж при скорости, равной 1 мл/мин, при давлении Н2, равном 10 мбар, в течение 5 ч, затем при давлении Н2, равном 50 мбар, в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и получают неочищенный гидрохлорид метилового эфира 5-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-карбоновой кислоты 26-07 (0,90 г) в виде красного твердого вещества. Это неочищенное твердое вещество растворяют в ДХМ (30 мл) и охлаждают до 0°С и затем добавляют триэтиламин (1,65 мл, 11 ммоль) и затем ди-трет-бутилдикарбонат (1,70 мл, 7,39 ммоль). Реакционную смесь извлекают из охлаждающей бани, перемешивают в течение 16 ч, концентрируют при пониженном давлении и очищают с помощью хроматографии (силикагель, 0-50% EtOAc в гептане). Искомый промежуточный 2-трет-бутиловый эфир,6-метиловый эфир 5-гидрокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2,6-дикарбоновой кислоты 26-08 (0,492 г) элюируется вместе с ди-трет-бутилдикарбонатом (1,61 г). Смесь (2,1 г) растворяют в МеОН (50 мл), добавляют K2CO3 (2,21 г, 16 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 16 ч. Из реакционной колбы удаляют надосадочную жидкость и осадок растирают с МеОН (2х 10 мл). Объединенные метанольные надосадочные жидкости концентрируют при пониженном давлении, растворяют в EtOAc (50 мл), промывают 1н. раствором HCl (3х30 мл), рассолом (10 мл), сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме и получают соединение 26-08 (0,422 г). Этот остаток объединяют с йодметаном (1,0 мл, 16 ммоль), K2CO3 (0,20 г, 1,5 ммоль), Cs2CO3 (0,40 г, 1,5 ммоль) и ацетоном (4,0 мл) и облучают в микроволновом реакторе при 70°С в течение 7 ч. Смесь концентрируют при пониженном давлении и очищают с помощью хроматографии (силикагель, 0-100% EtOAc) и получают неочищенный 2-трет-бутиловый эфир,6-метиловый эфир 5-метокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2,6-дикарбоновой кислоты 26-09 (0,245 г), который используют без обработки.
Неочищенное соединение 26-09 (0,240 г, 0,51 ммоль) объединяют с гидроксидом лития (1,22 г, 5,1 ммоль) в ТГФ (4,0 мл), МеОН (4,0 мл) и воде (2,0 мл). Смесь нагревают при 55°С в течение 45 мин и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в EtOAc (20 мл), промывают 1н. раствором HCl (3x50 мл), рассолом (10 мл), сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме и получают неочищенный 2-трет-бутиловый эфир 5-метокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2,6-дикарбоновой кислоты 26-10 (0,177 г) в виде белого твердого вещества.
К раствору неочищенного соединения 26-10 (0,177 г, 0,58 ммоль) в ТГФ (3 мл) добавляют 1М раствор борана в ТГФ (1,27 мл, 1,27 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и очищают с помощью хроматографии с обращенной фазой (С18, силикагель, 5-95% MeCN в H2O с добавлением 0,1% ТФК) и получают трет-бутиловый эфир 6-гидроксиметил-5-метокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 26-11 (0,125 г) в виде прозрачного бесцветного остатка.
Соединение 26-11 (0,125 г, 0,43 ммоль) и ^^диизопропилэтиламин (0,111 мл, 0,64 ммоль) растворяют в ДХМ (4,0 мл) полученную смесь деоксигенируют путем поочередного проведения продувки аргоном и вакуумирования (3х) и затем охлаждают до -30°С. Добавляют трифенилфосфиндибромид (0,262 г, 0,60 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч, при этом охлаждающая баня нагревается до -15°С. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии (силикагель, 5-50% EtOAc в гептане) и получают искомый промежуточный трет-бутиловый эфир 6-бромметил-5-метокси-3,4-дигидро-1Н-изохинолин-2-карбоновой кислоты 26-12 (0,103 г).
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 3-15, бромида 26-12 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 220: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Соединение 221: МС, электрораспыление, m/z = 571,3 [М+Н], ВУ 0,71 мин.
Пример 27. 5-Метокси-1-(6-{3-метил-2-[5-метил-1-оксо-2-(тетрагидропиран-4-ил)-1,2,3,4-тетра-гидроизохинолин-6-илметокси] фенил}пиридин-2-ил)- Ш-пиразол-4-карбоновая кислота
К суспензии соединения 27 (0,065 г, 0,11 ммоль) в смеси 1,1,2,2,-тетрахлорэтан:вода состава 4:1 (1,2 мл) добавляют хлорит натрия (0,035 г, 0,39 ммоль). Смесь нагревают при 55°С в течение 2 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и смесь очищают с помощью флэш-хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 и получают искомое соединение (0,009 г).
Соединение 167: МС, электрораспыление, m/z = 584,8 [М+Н], ВУ 1,01 мин.
Следующее соединение получают по описанной выше методике с использованием в качестве соответствующего исходного вещества соединения 114 и соответствующих условия проведения очистки. Соединение 194: МС, электрораспыление, m/z = 597,22 [М+Н], ВУ 1,02 мин.
Пример 28. Получение 1-{6-[2-(2-(8)-1-[1,4]диоксан-2-илметил-5-метил-1,2,3,4-тетрагидроизо-хинолин-6-илметокси)-3-метилфенил]пиридин-2-ил}-5-этокси-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты
ченный остаток обрабатывают с помощью хроматографии на силикагеле в градиентном режиме с использованием 12-100% EtOAc в гептанах. Искомые фракции собирают и концентрируют и получают продукт (43,0 мг).
К раствору эпоксида 28-1 (43,0 мг, 0,074 ммоль) в ДХЭ (дихлорэтан) (2,0 мл) добавляют 2-хлорэтанол (0,005 мл, 0,081 ммоль), затем раствор BF3Et2O (0,01 мл) в ДХЭ. Реакционную смесь перемешивают при 45°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют. Полученное вещество используют на следующей стадии без очистки.
К исходному веществу 28-2 (40,0 мг) добавляют 2,0М раствор NaOH (2,0 мл). Этот раствор нагревают при 90°С и он становится однородным. Его перемешивают в течение 3 ч и реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Смесь вводят в колонку С18 (20-80% АЦН в воде с добавлением 0,1% ТФК). Искомые фракции собирают и концентрируют и получают искомое соединение 18 (19,1 мг).
Соединение 185: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], ВУ 0,75 мин, методика В1.
Следующее соединение получают по методике, описанной в примере 28, с использованием соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 170: МС, электрораспыление, m/z = 599,3 [М+Н], ВУ 0,63 мин, методика В1.
Пример 29. трет-Бутил-8-этил-6(гидроксиметил)-3,4-дигидроизохинолин-2(Ш)-карбоксилат (29-13)
К смеси соединения 29-1 (300 г, 1,6 моль) и K2CO3 (665 г, 4,8 моль) в ДМФ (2000 мл) при комнатной температуре по каплям добавляют MeI (250 г, 1,8 моль). Смесь перемешивают в течение ночи. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют, выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-2 (165 г, выход 52%).
Раствор соединения 29-2 (100 г, 497,4 ммоль), NBS (N-бромсукцинимид) (88,5 г, 497,4 ммоль) и АИБН (азо-бис-изобутиронитрил) (10 г, 10%) в CCl4 (700 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 12 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. После охлаждения до комнатной температуры реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-3 (48 г, выход 42%).
Раствор соединения 29-3 (80 г, 285,7 ммоль) и TMSCN (28,2 г, 285,7 ммоль) в АЦН (600 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 ч. К реакционной смеси при охлаждении льдом добавляют ТБАФ (74,6 г, 285,7 ммоль) и смесь перемешивают в течение 12 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный про
дукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-4 (39 г, выход 60%).
Раствор соединения 29-4 (12 г, 53,1 ммоль) и Ni (10 г) в МеОН (80 мл) и NH3-H2O (80 мл) перемешивают в атмосфере H2 при давлении, равном 50 фунт-сила/дюйм2, при комнатной температуре в течение 5 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Смесь фильтруют и фильтрат концентрируют с использованием вакуумного насоса и получают неочищенный продукт (8 г), который используют на следующей стадии без обработки.
Раствор соединения 29-5 (75 г, 326,08 ммоль) и НСНО (8,8 г, 293,47 ммоль) в НСО2Н (500 мл) перемешивают в атмосфере N2 при 50°С в течение ночи. ЖХМС показывает, что реакция завершается. Растворитель удаляют при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-6 (54 г, выход за 2 стадии 64%).
Раствор соединения 29-6 (45 г, 186 ммоль) в водном растворе HBr (400 мл) перемешивают при 90°С в течение 12 ч. ЖХМС показывает, что реакция завершается. Растворитель удаляют при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикаге-ле, и получают соединение 29-7 (20,75 г, выход 53%).
Раствор соединения 29-7 (20 г, 87,7 ммоль), Вос2О (19,1 г, 87,7 ммоль) и ТЭА (17,7 г, 175,4 ммоль) в смеси ТГФ/Н2О (1:1) (200 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-8 (20 г, выход 70%).
Раствор соединения 29-8 (14 г, 42,7 ммоль), K2CO3 (17,66 г, 128 ммоль), Pd(dppf)Cl2 (2,5 г), Pd(PPh3)4 (2,5 г) и соединения 29-8В (7,22 г, 46,9 ммоль) в ДМФ (150 мл) перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение ночи. ТСХ показывает, что реакция завершается. После фильтрования фильтрат концентрируют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают соединение 29-9 (7,2 г, выход 61%).
Раствор соединения 29-9 (7,2 г, 26,2 ммоль) и Pd-C (2 г) в МеОН (100 мл) перемешивают в атмосфере H2 при давлении, равном 50 фунт-сила/дюйм2, при комнатной температуре в течение 12 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Смесь фильтруют и фильтрат концентрируют и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-10
(5,8 г, выход 80%).
Раствор соединения 29-10 (5,8 г, 20,9 ммоль), Tf2O (5,9 г, 20,9 ммоль) и ТЭА (6,3 г, 62,7 ммоль) в ДХМ (70 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 29-11 (7 г,
выход 82%).
Смесь соединения 29-11 (7 г, 17,1 ммоль), Pd(OAc)2 (1,4 г), ДФФП (1,4 г) и Et3N (5,2 г, 51,3 ммоль) в МеОН (80 мл) перемешивают при 80°С в атмосфере СО при давлении, равном 3 МПа, в течение 2 дней. Твердое вещество отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают соединение 29-12 (4,8 г, выход 88%).
К раствору LiAlH4 (1,1 г, 30,1 ммоль) в ТГФ (10 мл) при -50°С в течение 30 мин по каплям добавляют раствор соединения 29-12 (4,8 г, 15,0 ммоль) в ТГФ (50 мл). После добавления реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2,5 ч. Затем реакционную смесь обрабатывают с помощью Н2О и ДХМ. Органический слой отделяют, промывают рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают соединение 29-13 (4,1 г, выход 92%).
По методике, аналогичной описанной в примере 25, из соединения 29-13 получают бромид, соединение 29-14.
Следующие соединения, приведенные в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 29-14 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 248: МС, электрораспыление, m/z = 583,3 [М+Н], ВУ 1,29 мин (методика А2). Соединение 249: МС, электрораспыление, m/z = 555,3 [М+Н], ВУ 1,37 мин (методика А2). Пример 30: трет-Бутил-8-циано-6-(гидроксиметил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-карбоксилат (30-12)
К смеси соединения 30-1 (300 г, 1,6 моль) и K2CO3 (665 г, 4,8 моль) в ДМФ (2000 мл) при комнатной температуре по каплям добавляют MeI (250 г, 1,8 моль). Смесь перемешивают в течение ночи ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют, выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 30-2 (165 г, выход 52%).
Раствор соединения 30-2 (100 г, 497,4 ммоль), NBS (88,5 г, 497,4 ммоль) и АИБН (10 г, 10%) в CCl4 (700 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 12 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. После охлаждения до комнатной температуры реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 30-3 (48 г, выход 42%).
Раствор соединения 30-3 (80 г, 285,7 ммоль) и TMSCN (28,2 г, 285,7 ммоль) в АЦН (600 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 ч. К реакционной смеси при охлаждении льдом добавляют ТБАФ (74,6 г, 285,7 ммоль) и смесь перемешивают в течение 12 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 30-4 (39 г, выход 60%).
Раствор соединения 30-4 (12 г, 53,1 ммоль) и Ni (10 г) в МеОН (80 мл) и NH3-H2O (80 мл) перемешивают в атмосфере H2 при давлении, равном 50 фунт-сила/дюйм2, при комнатной температуре в течение 5 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Смесь фильтруют и фильтрат концентрируют с использованием вакуумного насоса и получают неочищенный продукт (8 г), который используют на следующей стадии без обработки.
Раствор соединения 30-5 (75 г, 326,08 ммоль) и НСНО (8,8 г, 293,47 ммоль) в НСО2Н (500 мл) перемешивают в атмосфере N2 при 50°С в течение ночи. ЖХМС показывает, что реакция завершается. Растворитель удаляют при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 30-6 (54 г, выход за 2 стадии 64%).
Раствор соединения 30-6 (45 г, 186 ммоль) в водном растворе HBr (400 мл) перемешивают при 90°С в течение 12 ч. ЖХМС показывает, что реакция завершается. Растворитель удаляют при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикаге-ле, и получают соединение 30-7 (20,75 г, выход 53%).
Раствор соединения 30-7 (20 г, 87,7 ммоль), Вос2О (19,1 г, 87,7 ммоль) и ТЭА (17,7 г, 175,4 ммоль) в смеси ТГФ/Н2О (1:1) (200 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 30-8 (20 г, выход 70%).
Раствор соединения 30-8 (11 г, 34,8 ммоль), Pd(dppf)Cl2 (2,5 г), Pd(PPh3)4 (2,5 г), ZnCN (2,8 г, 31,3 ммоль), Zn (1,1 г, 17,4 ммоль) в ДМФ (110 мл) перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение ночи. ТСХ показывает, что реакция завершается. После фильтрования фильтрат концентрируют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают
соединение 30-9 (6,5 г, выход 71%).
Раствор соединения 30-9 (12 г, 43,7 ммоль), Tf2O (12,3 г, 43,7 ммоль) и ТЭА (13,3 г, 131,23 ммоль) в ДХМ (120 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. ТСХ показывает, что реакция завершается. Реакцию останавливают с помощью Н2О и смесь экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой сушат, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении и получают неочищенный продукт, который очищают с помощью хроматографии на силикагеле, и получают соединение 30-10 (9 г, выход 51%).
Смесь соединения 30-10 (9,5 г, 23,4 ммоль), Pd(OAc)2 (1,9 г), ДФФП (1,9 г) и Et3N (7,1 г, 70,1 ммоль) в МеОН (90 мл) перемешивают в атмосфере СО при давлении, равном 3 МПа, при 80°С в течение 2 дней. Твердое вещество отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают соединение 30-11 (6 г, выход 80%).
К раствору LiAlH4 (1,4 г, 37,9 ммоль) в ТГФ (10 мл) при -50°С в течение 30 мин по каплям добавляют раствор соединения 30-11 (6 г, 19,0 ммоль) в ТГФ (50 мл). После добавления реакционную смесь перемешивают при -20°С в течение 4,5 ч. Затем реакционную смесь обрабатывают с помощью Н2О и ДХМ. Органический слой отделяют, промывают рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле и получают 30-12 (4,1 г, выход 74%).
По методике, аналогичной описанной в примере 25, из соединения 30-12 получают бромид, соединение 30-13.
Следующее соединение, приведенное в табл. 1, получают по методике, описанной в примере 7А, с использованием фенола 2-8, бромида 30-13 и других соответствующих исходных веществ и условий проведения очистки.
Соединение 250: МС, электрораспыление, m/z = 580,2 [М+Н], ВУ 0,61 мин.
Оценка биологической активности
Исследование в клетках.
Исследование активатора рГЦ в клетках проводят в присутствии и при отсутствии 50% сыворотки человека (СЧ) с использованием клеток яичника китайского хомячка, которые стабильно трансфициро-ваны для экспрессирования субъединицы а1 и Р1 растворимой гуанилатциклазы (рГЦ) человека. Клетки предварительно в течение 1 ч инкубируют с 40 мМ 1Н-[1,2,4]оксадиазоло[4,3-а]хиноксалин-1-она (ОДХ), ингибитора рГЦ, в буфере, содержащем 0,1% бычий сывороточный альбумин и 3-изобутил-1-метил-ксантин (ИБМК). Зависимости концентрация-ответ получают для исследуемых соединений в ДМСО. Промежуточное разведение соединений проводят в буфере, содержащем ИБМК или СЧ типа АВ, содержащую ИБМК. Разведения соединений добавляют к клеткам и их инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Концентрацию цГМФ определяют с помощью набора CisBio для исследования однородной флуоресценции с разрешением по времени и для каждого соединения рассчитывают значение EC50.
В приведенном выше исследовании определяют активность типичных соединений, предлагаемых в настоящем изобретении. По данным приведенного выше исследования предпочтительные соединения обладают ЕС50 <1,000 нМ и более предпочтительные соединения обладают ЕС50 <200 нМ. В табл. 2 в качестве примеров приведены данные, полученные для типичных соединений, представленных в табл. 1.
Таблица 2
Номер соединения
ЕС50 (нМ)
Номер соединения
ЕС5" (нМ)
130
131
410
132
133
134
135
136
137
138
139
8,4
140
141
180
142
143
160
144
460
145
146
147
450
148
149
150
151
130
152
153
154
155
156
720
157
3,5
158
159
160
170
161
162
163
164
165
120
166
6,6
167
168
580
169
170
171
130
172
173
174
175
176
9,7
177
178
990
179
180
170
181
182
370
183
980
184
820
185
186
187
188
8,6
189
190
191
3,3
192
193
194
195
4,7
320
196
197
198
5,3
180
199
200
201
250
202
203
4,4
204
4,5
160
205
206
7,4
207
9,2
208
209
200
410
210
211
212
213
214
215
216
217
150
218
219
140
220
150
221
210
222
5,4
223
8,5
224
225
226
270
227
160
228
100
170
229
3,9
101
230
102
231
4,6
103
232
9,5
104
233
105
234
106
235
107
236
108
237
4,9
109
238
5,1
239
6,5
111
240
7,9
112
241
113
242
114
243
115
244
116
245
280
117
246
6,5
118
247
8,6
119
248
4,2
120
249
4,6
121
250
122
251
123
252
124
253
125
254
126
255
9,5
127
7,5
256
128
257
129
258
Оценка растворимости
Растворимость определяют по приведенной ниже методике.
1. Приготовление образца.
По 100 мкл 10 мМ исходных растворов каждого соединения в ДМСО помещают в 96-луночный планшет. В эксперименте проводят однократные измерения при трех значениях рН (2,2, 4,5 и 6,8). Для образцов при каждом значении рН и одного эталонного образца используют 40 мкл каждого соединения.
Приготовление буфера.
Буфер Мак-Ильвена рН 2,2: к 2,076 г моногидрата лимонной кислоты и 0,043 г Na2HPO4x2H2O добавляют 100 мл деионизированной воды.
Буфер Мак-Ильвена рН 4,5: к 1,166 г моногидрата лимонной кислоты и 1,585 г Na2HPO4x2H2O добавляют 100 мл деионизированной воды.
Буфер Мак-Ильвена рН 6,8: к 0,476 г моногидрата лимонной кислоты и 2,753 г Na2HPO4x2H2O добавляют 100 мл деионизированной воды.
С помощью устройства для операций с жидкостями (Multipette(r) или устройство для операций с жидкостями) 390 мкл каждого буферного раствора и 10 мкл соединения добавляют в каждую лунку 96-луночного планшета с глубокими лунками. Планшеты плотно закрывают и встряхивают во встряхивающем устройстве с подвесной системой (при 54 об/мин) при комнатной температуре в течение 24 ч. Содержание ДМСО в конечном буфере составляет 2,5% об./об.
Через 24 ч планшеты центрифугируют (при 2500 об/мин в течение ~5 мин) для удаления мелких капель на крышке, затем открывают.
Фильтрование проводят в вакууме с использованием 96-луночного фильтрующего планшета Milli-pore. Фильтрат собирают в планшет с глубокими лунками и переносят в планшет, подходящий для анализа с помощью УЭЖХ.
Планшет с эталонными образцами готовят путем проводимого в 96-луночном планшете с глубокими лунками добавления 10 мкл соединения к 390 мкл смеси ацетонитрил/вода состава 50:50 и переноса в планшет, подходящий для анализа с помощью УЭЖХ. В лунках визуально определяют выпадение осадка, и если он содержится, то это отмечают в примечаниях к представленным результатам.
2. Анализ образцов.
Образцы анализируют с помощью УЭЖХ-УФ с использованием описанной ниже хроматографиче-ской методики.
Неподвижная фаза
Waters ACQUITY UPLC(r) ВЕН С18, 1,7 мкм, 2,5x50 мм
Подвижная фаза
Растворитель А
0,1% муравьиной кислоты (рН 3)
Растворитель В
ацетонитрил с добавлением 0,1% муравьиной кислоты
Градиентный режим
0 мин
5% В
1,0 мин
95% В
1,3 мин
95% В
1,4 мин
5% В
1,7 мин
5% В
Температура колонки
40°С
Скорость потока
0,8 мл/мин
Продолжительность/время
1,7 мин/2,7 мин
проведения цикла
Инжектируемый объем
2 мкл
Температура образца
20°С
Детектирование с
обеспечивает ЗО-данные
помощью PDA (детектор с
фотодиодной матрицей)
Длина волны
254 нм
Скорость отбора образцов
40 шт/с
Разрешение
4,8 нм
Для создания Sample Sets (соответствует расположению в планшете), Sample Set Methods и Instrument Methods используют программное обеспечение Waters Empower(r)2.
Один Sample Set включает методики для трех 96-луночных планшетов (1 планшет с эталонными образцами и 2 планшета с образцами) и включает один Sample Set Method и один Instrument Method.
3. Обработка данных и анализ.
Хроматограммы, полученные с помощью УФ-детектора при 254 нм, интегрируют и обрабатывают. Предполагается, что соединение полностью растворяется в эталонном растворе (ацетонитрил/вода 50:50).
В представленной ниже табл. 3 приведены данные по растворимости (мкг/мл) для соединений, приведенных в табл. 1.
Таблица 3
Номер соединения
(рН 2,2)
(РН4.5)
(рН 6,8)
100
<0,1
100
100
100
100
100
100
120
100
111
117
100
130
100
120
100
100
100
100
120
100
120
130
100
100
100
150
110
150
120
100
110
101
102
103
104
110
105
106
107
108
109
130
120
112
110
113
114
120
100
115
116
117
102
118
110
119
110
120
110
121
110
122
100
123
100
124
100
8,6
125
126
127
130
100
128
129
130
130
100
131
130
132
130
133
120
100
134
110
100
135
110
100
136
120
100
137
110
138
139
130
120
140
140
120
120
141
130
142
120
143
160
150
160
144
145
146
100
147
1,2
3,1
148
100
149
150
100
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
<0,1
0,93
161
162
100
163
164
100
165
120
166
167
2,1
5,9
168
169
120
100
170
120
171
120
172
173
130
174
175
176
100
177
178
100
179
180
100
181
182
183
184
185
100
186
187
100
188
189
190
100
191
100
192
193
100
194
0,68
2,5
195
196
197
198
120
100
199
120
200
100
201
202
203
204
205
206
207
208
209
210
211
212
213
214
215
216
217
218
120
219
220
100
221
100
222
223
224
225
226
227
228
229
100
230
100
231
120
232
233
234
120
235
100
236
237
238
239
240
241
100
242
243
100
244
120
245
100
246
247
248
249
250
251
100
252
253
100
254
100
255
256
257
258
Оценка метаболической стабильности
Задача.
Для исследования метаболизма соединения in vitro разработано высокопроизводительное исследование метаболической стабильности при 5 моментах времени с использованием микросом печени человека (МПЧ). Соединения инкубируют с МПЧ при концентрации, равной 1 мкМ, при 37°С в течение всего 60 мин. Выраженное в процентах количество соединения, оставшегося через 5, 15, 30 и 60 мин, используют для расчета t1/2 (мин), CLint (мл/мин/кг), CLh (мл/мин/кг) и Qh (%). В исследовании используют 96-луночные планшеты и в один планшет (n=1) можно поместить до 92 соединений.
Инкубирование.
Biomek FX, снабженный нагревающим устройством/встряхивающим устройством Peltier, с использованием 96-луночной многоканальной насадки программируют для проведения следующих стадий.
1. В каждую из 96 конических насадок (Analytical Sales and Products, catalog number 96PL05), которые вставляются в планшет с нагревающим устройством/встряхивающим устройством Peltier (планшет для инкубации), пипеткой добавляют 175 мкл микросом при концентрации 1,15 мг/мл.
2. Из планшета для исследования отбирают 5 мкл соединений и добавляют к микросомам и смесь встряхивают при 600 об/мин и при 42,1 °С в течение 10 мин (для инкубирования образцов при 37°С в устройстве Peltier необходимо установить температуру, равную 42,1°С).
3. Через 10 мин для инициирования реакции на крышку помещают планшет с NADPH (никотина-мидадениндинуклеотидфосфат) и из планшета с NADPH добавляют 20 мкл в планшет для инкубации.
4. В планшеты, в которых останавливают реакцию при 0, 5, 15, 30 и 60 мин, добавляют 215 мкл 100% холодного ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт (стандарты).
5. Для остановки реакции при времени инкубации, равном 0, 5, 15, 30 и 60 мин, из инкубируемой смеси отсасывают 12 мкл и добавляют в раствор, в котором останавливают реакцию.
6. В планшеты, в которых останавливают реакцию при 0, 5, 15, 30 и 60 мин, добавляют 185 мкл воды, обладающей чистотой для ВЭЖХ, для разведения соединений до концентрации, подходящей для анализа с использованием масс-спектрометра.
После завершения эксперимента при всех моментах времени планшеты, в которых остановлена реакция, герметизируют пленками для 96-луночных планшетов, в которых можно проделать отверстия, или термосваривающейся пленкой и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин и получают таблетку микросом.
Анализ.
Планшеты анализируют с помощью ЖХ/МС/МС с ионизацией электрораспылением (ИЭР) и ранее определенных переходов для ММР (мониторинг множества реакций). Методика ЖХ включает следующие параметры:
инжектируемый объем: 5 мкл;
подвижные фазы: 0,1% муравьиной кислоты в воде (А) и 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле
(В) (чистота для ВЭЖХ);
температура в левой и правой камере: 35°С;
длительность процедуры: 4,0 мин;
колонка: Thermo Scientific, Aquasil C18, 50x2,1 мм, 5 мкм, part number 77505-052130 или эквивалентная колонка;
насос для ЖХ, градиентный режим:
Общее время (мин)
Скорость потока (мкл/мин)
% А
% В
500
90,0
10,0
0,5
500
90,0
10,0
1,5
500
1,0
99,0
2,5
500
1,0
99,0
3,3
500
90,0
10,0
4,0
500
90,0
10,0
Если форма пика неудовлетворительная и его невозможно проинтегрировать надлежащим образом, то можно использовать следующую методику ЖХ: инжектируемый объем: 5 мкл;
подвижные фазы: 2,5 мМ бикарбоната аммония (А) и 100% ацетонитрила (В) (чистота для ВЭЖХ);
водный промывочный раствор: 90% воды, 10% ацетонитрила (чистота для ВЭЖХ);
органический промывочный раствор: 90% ацетонитрила, 10% воды (чистота для ВЭЖХ);
температура в левой и правой камере: 35°С;
длительность процедуры: 4,5 мин;
колонка: Phenomex Luna 3u С 18(2), 100 А, 50x2,00 мм;
насос для ЖХ, градиентный режим:
Общее время (мин)
Скорость потока (мкл/мин)
% А
% В
500
90,0
10,0
0,5
500
90,0
10,0
1,5
500
1,0
99,0
2,5
500
1,0
99,0
3,30
500
90,0
10,0
4,50
500
90,0
10,0
С использованием шаблона Excel и программного обеспечения Activitybase для расчета выраженного в процентах количества оставшегося соединения с использованием приведенного уравнения площади пиков, соответствующие 5, 15, 30 и 60 мин, сравнивают с площадью пика при 0 мин.
Выраженное в процентах количество оставшегося соединения = (ППК (площадь под кривой) при времени t мин/ППК при времени 0 мин) x 100,
где t = 0, 5, 15, 30 или 60 мин.
Для определения наклона строят зависимость времени (мин) от натурального логарифма (Ln) выраженного в процентах количества оставшегося соединения. Наклон используют для расчета t1/2 (мин) с использованием следующего уравнения:
t1/2 = 0,693/наклон
CLint, собственный клиренс
0,693/t1/2 x средняя масса печени [г]/средняя масса тела [кг] * ци)/концентрация белка при инкубировании [мг/мл] * масса микросомного белка [мг]/масса печени [г] 0,693/t1/2 * 26 г/кг * 1/1,0 мг/мл * 45 мг/г CLh, печеночный клиренс
печеночный кровоток * f(u) * О^Дпеченочный кровоток + f(u) * CLint) Qh, печеночный кровоток (%) (CLi/печеночный кровоток) x 100.
В представленной ниже табл. 4 приведены данные по метаболической стабильности (Qh, %) для соединений, приведенных в табл. 1.
Предпочтительные соединения обладают значением Qh (%), составляющим менее 24.
Номер соединения
МПЧ (Qh, %)
Номер соединения
МПЧ (Q," %)
<24
130
<24
131
<24
132
<24
<24
133
<24
<24
134
<24
135
<24
136
<24
<24
137
<24
<24
138
139
<24
140
<24
<24
141
<24
<24
142
<24
143
<24
<24
144
<24
<24
145
<24
146
<24
<24
147
<24
148
<24
149
<24
<24
150
<24
151
<24
<24
152
<24
<24
153
<24
154
<24
155
<24
<24
156
<24
<24
157
158
<24
<24
159
<24
<24
160
<24
161
<24
<24
162
<24
163
<24
<24
164
<24
<24
165
<24
<24
166
<24
167
<24
<24
168
<24
<24
169
<24
<24
170
<24
<24
171
<24
172
<24
<24
173
<24
<24
174
<24
<24
175
<24
176
<24
177
<24
178
<24
179
<24
<24
180
<24
<24
181
<24
<24
182
<24
<24
183
<24
<24
184
<24
<24
185
<24
<24
186
<24
<24
187
<24
<24
188
<24
<24
189
<24
190
<24
191
<24
<24
192
<24
<24
193
<24
<24
194
<24
<24
195
<24
<24
196
<24
<24
197
<24
<24
198
<24
<24
199
<24
<24
200
201
<24
202
<24
<24
203
<24
204
<24
<24
205
<24
<24
206
<24
<24
207
<24
<24
208
<24
<24
209
<24
<24
210
<24
<24
211
<24
<24
212
<24
<24
213
<24
Таблица 4
<24
214
<24
<24
215
<24
<24
216
<24
<24
217
218
<24
219
<24
220
<24
<24
221
<24
<24
222
<24
<24
223
<24
<24
224
<24
225
<24
<24
226
227
<24
228
100
229
101
<24
230
<24
102
<24
231
<24
103
232
<24
104
233
105
<24
234
<24
106
<24
235
107
<24
236
<24
108
<24
237
<24
109
<24
238
<24
<24
239
111
<24
240
<24
112
<24
241
<24
113
<24
242
<24
114
<24
243
<24
115
244
<24
116
<24
245
<24
117
246
<24
118
<24
247
<24
119
<24
248
<24
120
<24
249
<24
121
<24
250
<24
122
<24
251
<24
123
<24
252
<24
124
<24
253
<24
125
<24
254
<24
126
<24
255
<24
127
<24
256
<24
Способы применения в терапии
Соединения, раскрытые в настоящем изобретении, эффективно активируют растворимую гуанилат-циклазу. Активация или потенциация растворимой гуанилатциклазы является привлекательным способом предупреждения и лечения различных заболеваний или патологических состояний, связанных с недостаточной активацией рГЦ. Таким образом, один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способам лечения заболеваний, течение которых можно облегчить путем активации или по-тенциации рГЦ. Они включают следующее.
Сердечно-сосудистые и родственные заболевания, включая гипертензию, атеросклероз, заболевание периферической артерии, рестеноз, удар, сердечную недостаточность, коронароспазм, спазм мозговых сосудов, ишемическое/реперфузионное поражение, тромбоэмболическую легочную гипертензию, легочную артериальную гипертензию, стабильную и нестабильную стенокардию и тромбоэмболические нарушения.
Воспалительные заболевания, включая псориаз, рассеянный склероз, артрит, астму и хроническое обструктивное заболевание легких.
Фиброзные нарушения печени, включая, но не ограничиваясь только ими, цирроз любой этиологии или фиброз конкретных участков печени, такой как перипортальный фиброз, который может быть вызван иммунологическим нарушением, гемодинамическими эффектами и/или другими причинами.
Фиброзные нарушения почек, включая, но не ограничиваясь только ими, гломерулосклероз, очаговый гломерулосклероз, мезангиальный фиброз, интерстициальный фиброз, вызванный иммунологическим нарушением, гемодинамическими эффектами, диабет (типа 1 и 2), диабетическую нефропатию, IgA-нефропатию, волчаночную нефропатию, мембранозную нефропатию, гипертензию, гемолитико-уремический синдром, множественные гломерулонефриты, интерстициальный нефрит, трубчатый ин-терстициальный нефрит, также вызванные иммунологическими и неиммунологическими причинами.
Фиброзные нарушения легких, диффузные и локализованные, вызванные иммунологическими и неиммунологическими причинами, включая, но не ограничиваясь только ими, идиопатический фиброз легких, фиброз легких вследствие употребления токсических веществ, химических веществ, лекарственных средств, и муковисцидоз.
Фиброзные нарушения сердца, вызванные иммунологическими и неиммунологическими причинами, включая ишемическое заболевание сердца (заболевание коронарной артерии) и временное и/или устойчивое замедление кровообращения в одном или большем количестве коронарных сосудов, включая, возможно, связанные с вмешательством в коронарные артерии или вены, связанные с операцией на серд
це и/или с процедурами с использованием аппарата искусственного кровообращения, и миокардит, вызванный вирусными и невирусными причинами, а также связанное с иммунологическим нарушением миокардиальное поражение, вероятно, вследствие перекрестной реактивности по отношению к другим антигенам, воздействию которых подвергается организм человека.
Другие заболевания, по меньшей мере частично, опосредуемые ослабленной или пониженной активностью растворимой гуанилатциклазы, такие как заболевание почек, диабет, урологические нарушения, включая гиперактивность мочевого пузыря, доброкачественную гиперплазию предстательной железы и эректильную дисфункцию, и неврологические нарушения, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и невропатическую боль.
Эти нарушения хорошо охарактеризованы у людей, но при аналогичной этиологии наблюдаются и у других млекопитающих и их можно лечить с помощью фармацевтических композиций, предлагаемых в настоящем изобретении.
При терапевтическом применении соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно вводить в любой обычной дозированной форме любым общепринятым образом. Обычные дозированные формы обычно включают фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для конкретной выбранной дозированной формы. Пути введения включают, но не ограничиваются только ими, внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутрисуставной, путем вливания, сублингвальный, чрескожный, перо-ральный, местный или путем ингаляции. Предпочтительными путями введения являются пероральный и внутривенный.
Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно вводить по отдельности или в комбинации со вспомогательными веществами, которые повышают стабильность ингибиторов, облегчают введение содержащих их фармацевтических композиций в некоторых вариантах осуществления, обеспечивают улучшенное растворение или диспергирование, повышают ингибирующую активность, обеспечивают вспомогательное лечение и т.п., включая другие активные ингредиенты. В одном варианте осуществления, например, можно вводить несколько соединений, предлагаемых в настоящем изобретении. Благоприятно, что в таких комбинированных средствах используются меньшие дозы обычных лекарственных средств, что исключает возможную токсичность и неблагоприятные побочные эффекты, проявляющиеся при использовании таких средств в качестве монотерапии. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно механически объединить с обычными лекарственными средствами или другими вспомогательными веществами в одной фармацевтической композиции. Благоприятно, что эти соединения затем можно вводить совместно в виде одной дозированной формы. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие такие комбинации соединений, содержат не менее примерно 5%, но более предпочтительно не менее примерно 20%, соединения формулы (I) (мас./мас.) или его комбинации. Оптимальное содержание (мас./мас.) соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, может меняться и выбирается в соответствии с компетенцией специалистов в данной области техники. Альтернативно, соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, и обычные лекарственные средства или другие вспомогательные вещества можно вводить по отдельности (последовательно или одновременно). Введение по отдельности обеспечивает более значительную гибкость дозировочного режима.
Как отмечено выше, дозированные формы соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, могут включать фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества, известные специалистам с общей подготовкой в данной области техники и подходящие для дозированных форм. Эти носители и вспомогательные вещества включают, например, ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, буферные вещества, воду, соли или электролиты и вещества на основе целлюлозы. Предпочтительные дозированные формы включают таблетки, капсулы, таблетки в форме капсул, жидкости, растворы, суспензии, эмульсии, лепешки, сиропы, восстанавливающиеся порошки, гранулы, суппозитории и чрескожные пластыри. Методики приготовления таких дозированных форм известны (см., например, Н.С. Ansel andN.G. Popovish, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5th ed., Lea and Febiger (1990)). Дозировки и требования для соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, могут быть выбраны специалистом с общей подготовкой в данной области техники из числа имеющихся методик и подходов, подходящих для конкретного пациента. В некоторых вариантах осуществления доза находится в диапазоне примерно 1-1000 мг/доза для пациента массой 70 кг. Хотя может быть достаточной одна доза в сутки, можно вводить до 5 доз в сутки. При пероральном введении может потребоваться доза, составляющая до 2000 мг/сутки. Как должен понимать специалист в данной области техники, в зависимости от конкретных факторов могут потребоваться более значительные или меньшие дозы. Например, конкретные дозы и режимы лечения будут зависеть от таких факторов, как общее состояние здоровья пациента, тяжесть и течение заболевания или предрасположенность к нему пациента и решение лечащего врача.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы I
в которой
А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота и необязательно 1 атом кислорода, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 группами, выбранными из группы, включающей С1-С3-алкил и оксогруппу;
R1 обозначает С1-С4-алкил, необязательно замещенный метоксигруппой;
R2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, С1-С3-алкил, -CN, -ОМе и -CF3;
R3 выбран из группы, включающей Н и -СН3;
R4 выбран из группы, включающей Н, F, -СН3 и -ОМе;
R5 выбран из группы, включающей Н, Cl, -CH3, -CH2CH3, -CF3, F и -ОМе;
R6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, Q-Q-алкил, -(CH^Q-Q-циклоалкил, -С(О)С1-С6-алкил, -(СН2)n-гетероциклил, -SO2-арил, SO^-Q-алкил, где указанные C1-С6-алкил, -(СН^-гетероциклил и -(CH2)nC3-C6-циклоалкил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей Q-С^алкил, галоген, Q-С^алкоксигруппу, -CF3, -ОН, оксогруппу, -(СН2)1-30(СН2)2-3ОН и -SO2CH3, где термин "гетероциклил" означает 4-8-членный моноциклический гетероциклический радикал или 6-11-членный конденсированный бициклический, мос-тиковый бициклический или спироциклический гетероциклический радикал, содержащий от 1 до 4 гете-роатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу;
R7 выбран из группы, включающей Н, -СН3, -СН2СН3, -CF3, F и -CN;
n равно 0, 1 или 2,
или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, в котором
А обозначает 5-7-членную насыщенную гетероциклильную группу, содержащую 1 атом азота, где 1 атом углерода указанной гетероциклильной группы необязательно замещен 1 или 2 Q-Q-алкильными
группами,
R1 обозначает Q-С^алкил, R2 выбран из группы, включающей Н, F, Cl, Q-С^алкил, -CN, -ОМе и -CF3, R3 выбран из группы, включающей Н и -СН3, R4 выбран из группы, включающей Н и F, R5 выбран из группы, включающей Н, Cl и -СН3,
R6 присоединен к атому азота группы А и выбран из группы, включающей Н, C1-С6-алкил, -(СН2)nC3-С6-циклоалкил, -С(О)С1-С6-алкил и -(СН^-гетероциклил, где указанные C1-С6-алкил, -(СН2)П-гетероциклил и -(СН2)nC3-С6-циклоалкил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей Q-С^алкил, галоген, Q-С^алкоксигруппу, -CF3, -ОН и -S02CH3,
R7 обозначает Н,
n равно 0, 1 или 2,
или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п.1 или 2, в котором
R1 обозначает метил, этил или изопропил и группа
выбрана из группы, включающей
или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение по любому из пп.1-3, в котором
R2 выбран из группы, включающей -СН3, F, Cl и -CF3; и
R6 выбран из группы, включающей Н, Q-Q-алкил, -(СН^О^С^циклоалкил, -С(О)С1-С6-алкил и -(СН^-гетероциклил, где указанные Q-Q^K^I, -(СН2)nC3-С6-циклоалкил и -(СН^-гетероциклил необязательно замещены 1-4 группами, независимо выбранными из группы, включающей Q-Q-алкил, галоген, Q-Q-алкоксигруппу, -CF3, -ОН и -S02CH3;
или его фармацевтически приемлемая соль.
5. Соединение по любому из пп. 1-4, в котором каждый гетероциклил, указанный в определении R6, выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 2-оксабицикло [3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил, 1-оксаспиро[4.5]деканил и пирролидин-2-он; или его фармацевтически приемлемая соль.
6. Соединение по любому из пп.1-5, в котором R6 обозначает -(СН^-гетероциклил, где указанный гетероциклил выбран из группы, включающей оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, 2-оксабицикло[3.2.0]гептанил, [1,4]диоксанил, 8-оксабицикло[3.2.1]октанил и 1-оксаспиро[4.5]деканил; или его фармацевтически приемлемая соль.
7. Соединение по любому из пп.1-6, в котором R2 обозначает -СН3;
R3 обозначает Н;
R4 обозначает Н или -СН3;
R5 обозначает Н или -СН3;
R7 находится в пара-положении по отношению к R5 и обозначает Н, -СН3 или -СН2СН3; или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Соединение по любому из пп.1-7, в котором группа
представляет собой
или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Соединение по любому из пп.1-8, в котором R3 обозначает Н и R4 обозначает Н; или его фарма-
цевтически приемлемая соль.
10. Соединение, выбранное из группы, включающей
Соединение №
Структура
Соединение №
Структура
_%ои
> -он 4о
VOH
VoH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
o^Ou
VOH
VOH
a^o^
VOH
^он
Cl o"^p
VOH
VOH
У-ои 4o
/-он
У OH
VOH
VOH
VOH
> 0H
VOH
VOH
VOH
УУОУ
VOH
ЯХСУ
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
Кон
VOH
VOH
узУ"
VOH
VOH
я-осУ
VOH
VOH
VOH
^ocx1
> OH HN^X^^
VOH
^ -
VOH
^осУ
> OH
!^ОСУ
> 0H
^^осУ
_VOH
о^осУ
<
(Ар
VOH
^оУ 01
V°H
VOH
VOH
64 *аУ '
VOH
Кон
^^осУ
VOH
VOH
^уэУ
VOH
•Ox
VOH
VOH X
ОоОсУ
Кон
VOH X
уса"0"
_VOH
-tfx
VOH
VOH 4o
VOH
VOH
VOH
VOH
VOH
¦Ox
VOH
VOH
VOH
JKOH
VOH
VOH
VOH
°> С(У
VOH "У> о
VOH
VOH
"У> о
VOH 4o
VOH
VOH
VOH
сизУ'
VOH
oca1 f+f
Кон
,узУ
%-он
%\ 64
VOH
рдсхСО^
У~он
ух У*
о=Оч^ОО^
VOH
VOH
100
VOH
аУ'
101
/~ои
102
VOH
103
Кон
104
Кон
105
106
107
108
109
112
113
114
115
116
фО(У
117
118
119
о-осУ
120
ОХ''
121
122
123
124
125
126
127
схоХ
128
129
130
131
132
133
134
j-^осУ
135
136
137
138
139
<У
140
ааУ;'
141
142
143
очхУ
144
а.аУ
145
146
ОиаУ
147
148
149
150
151
152
153
154
^^аУ9
155
156
157
а/'
158
159
160
,J4
o'4o
161
162
163
164
165
166
167
o^) о
168
с~аУ ~
169
170
ОХхУ ^
171
172
схосУ
173
174
175
<юУ ^
176
177
178
<4
179
180
VOH
181
VOH
182
v" <4
183
crooJ
184
185
186
187
188
<хсхУ
189
190
191
<4
192
193
194
195
0оУ;1
196
р-схХ'
197
198
oxtx
199
200
чх <Х
201
202
203
°-сХ
204
205
•осХ
206
207
Xtj
208
209
асо>
210
211
212
213
о <ХУ
214
215
<Х ^сУ9
216
217
X cpj
218
айХ
219
220
а.УУ^
221
<Х уХ
222
Й <*У
223
УУУ
224
0оУ
225
о <уУ^
226
^оУ9
227
228
^сУ9
229
0x7
230
Си07
231
232
охУ9
233
X: W9
234
F <^*у
ОХсУ
235
236
237
238
239
240
241
Уан
242
VOH
243
cX-oX
244
245
246
247
248
249
250
251
252
с.,оУ
253
254
255
o-Jf
256
о-осУ
257
258
и их фармацевтически приемлемые соли.
11. Соединение по п.10, выбранное из группы, включающей соединения №№ 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 12,
15, 16, 18, 21, 27, 28, 30, 31, 35, 36, 39, 41, 42, 44, 45, 46, 47, 48, 57, 59, 62, 68, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 85,
86, 88, 92, 93 и 94 и их фармацевтически приемлемые соли.
12. Соединение по п.10, выбранное из группы, включающей соединения №№ 95, 97, 100, 101, 102,
103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 145, 146, 152, 153, 154, 155, 157, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 191, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 222, 223, 224, 225, 227, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238,
239, 240, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257 и их фармацевтически приемлемые соли.
или его фармацевтически приемлемую соль.
14. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
15. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
13. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
16. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
17. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
18. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
19. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
22. Соединение по п.1, где соединение представляет собой
или его фармацевтически приемлемую соль.
23. Фармацевтическая композиция для активации и/или потенциации растворимой гуанилатциклазы (рГЦ), содержащая соединение по любому из пп.1-22 и фармацевтически приемлемый инертный наполнитель или носитель.
24. Способ лечения заболевания или нарушения, течение которых можно облегчить путем активации или потенциации рГЦ, включающий введение нуждающемуся в нем пациенту соединения по любому из пп.1-22 в терапевтически эффективном количестве.
25. Способ по п.24, в котором заболевание или нарушение выбрано из группы, включающей сердечно-сосудистое заболевание, воспалительное заболевание, фиброзное нарушение печени, фиброзное нарушение почек, фиброзное нарушение легких и фиброзное нарушение сердца.
23.
26. Способ по п.24, в котором заболевание выбрано из группы, включающей заболевание почек, гиперактивность мочевого пузыря, доброкачественную гиперплазию предстательной железы, эректильную дисфункцию, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и невропатическую боль.
27. Способ по п.24, в котором заболеванием является диабетическая нефропатия.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
027244
027244
- 1 -
- 1 -
(19)
027244
027244
- 1 -
- 1 -
(19)
027244
027244
- 1 -
- 1 -
(19)
027244
027244
- 1 -
- 1 -
(19)
027244
027244
- 1 -
- 1 -
(19)
027244
027244
- 4 -
- 3 -
027244
027244
- 5 -
- 5 -
027244
027244
- 5 -
- 5 -
027244
027244
- 6 -
- 6 -
027244
027244
027244
027244
- 10 -
- 10 -
027244
027244
- 21 -
- 21 -
027244
027244
- 26 -
027244
027244
- 29 -
- 29 -
027244
027244
- 59 -
- 59 -
027244
027244
- 60 -
- 60 -
027244
027244
- 62 -
- 62 -
027244
027244
- 64 -
- 64 -
027244
027244
- 66 -
- 66 -
027244
027244
- 67 -
- 67 -
027244
027244
- 71 -
- 71 -
027244
027244
- 86 -
- 86 -
027244
027244
- 87 -
- 87 -
027244
027244
- 88 -
- 88 -
|
