|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Соединение, имеющее формулы   или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, имеющее формулы  или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Соединение по п.1, имеющее формулу  или его фармацевтически приемлемая соль. 4. Фармацевтическая композиция для лечения артрита, содержащая соединение по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно из: фармацевтически приемлемого носителя, вспомогательного вещества или разбавителя. 5. Способ лечения артрита у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту. 6. Способ ингибирования эрозии хряща у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту. 7. Применение соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли в терапии артрита. 8. Применение соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения артрита. 9. Применение соединения, имеющего формулу  или его фармацевтически приемлемой соли для лечения артрита.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Соединение, имеющее формулы или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, имеющее формулы или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Соединение по п.1, имеющее формулу или его фармацевтически приемлемая соль. 4. Фармацевтическая композиция для лечения артрита, содержащая соединение по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно из: фармацевтически приемлемого носителя, вспомогательного вещества или разбавителя. 5. Способ лечения артрита у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту. 6. Способ ингибирования эрозии хряща у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту. 7. Применение соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли в терапии артрита. 8. Применение соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения артрита. 9. Применение соединения, имеющего формулу или его фармацевтически приемлемой соли для лечения артрита.
Евразийское 026037 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.02.28
(21) Номер заявки 201590621
(22) Дата подачи заявки 2013.10.18
(51) Int. Cl. C07D 233/76 (2006.01) A61K31/4166 (2006.01)
(54) ИНГИБИТОРЫ АГГРЕКАНАЗЫ
(31) 61/718,965
(32) 2012.10.26
(33) US
(43) 2015.07.30
(86) PCT/US2013/065591
(87) WO 2014/066151 2014.05.01
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US)
(72) Изобретатель:
Дурхам Тимоти Барретт, Маримутху Джотхираджах, Уилей Майкл Роберт
(US)
(74) Представитель:
Лыу Т.Н., Угрюмов В.М. (RU) (56) WO-A1-02096426
SHIOZAKI M. ET AL.: "Novel N-substituted 2-phenyl-1-sulfonylamino-cyclopropane carboxylates as selective ADAMTS-5 (Aggrecanase-2) inhibitors", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, PERGAMON, GB, vol. 19, no. 6, 15 March 2009 (2009-03-15), pages 1575-1580, XP026005829, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/ J.BMCL.2009.02.024 [retrieved on 2009-02-11], tables 1, 4
MAKOTO SHIOZAKI ET AL.: "Discovery of (1S,2R,3R)-2,3-Dimethyl-2-phenyl-1-sulfamidocyclopropanecarboxylates: Novel and Highly Selective Aggrecanase Inhibitors", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 54, no. 8,
28 April 2011 (2011-04-28), pages 2839-2863, XP55091217, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/
jm101609j, figure 1; tables 1-7
BURSAVICH ET AL.: "Synthesis and evaluation of aryl thioxothiazolidinone inhibitors
of ADAMTS-5 (Aggrecanase-2)", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS,
PERGAMON, GB, vol. 17, no. 5, 14 February 2007 (2007-02-14), pages 1185-1188, XP005888444, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/J.BMCL.2006.12.027, figure 1; tables 1-3
(57) Согласно настоящему изобретению предложены соединения, имеющие формулу
Формула I
где R1 выбран из метила, этила, пропила, циклопропила и диметила, или их фармацевтически приемлемая соль, наряду со способами и промежуточными соединениями для их получения и их применением.
Соединительная ткань является обязательным элементом у всех млекопитающих. Она обеспечивает жесткость, дифференцировку, соединение и в некоторых случаях эластичность. Компоненты соединительной ткани включают, например, коллаген, эластин, протеогликаны, фибронектин и ламинин. Данные биохимические соединения образуют такие структуры, как кожа, кости, зубы, сухожилия, хрящи, ба-зальные мембраны, кровеносные сосуды, роговица и стекловидное тело (или являются их компонентами). Артрит представляет собой одну из форм заболевания суставов, включающую воспаление соединительной ткани одного или более суставов. Независимо от типа артрита, общие для всех артричиских нарушений симптомы включают боль различной степени, опухание, тугоподвижность суставов и иногда постоянную тупую боль вокруг сустава (суставов).
По оценкам, половина пациентов в возрасте 65 лет и старше и почти каждый пациент в возрасте 75 лет и старше страдает остеоартритом. Существует много средств лечения остеоартрита (ОА), начиная от Тайленола до опиатов (для контроля боли при ОА), а в крайнем случае - до операции по полной замене сустава. В настоящее время не существует разрешенного лечения, которое оказывало бы влияние на про-грессирование ОА.
Артрит гораздо больше распространен среди собак, чем среди других домашних животных. Артрит является тяжким заболеванием, поскольку причиняет боль животным и ограничивает подвижность. Артрит может поразить любую собаку, хотя собаки старшего возраста и более крупные породы могут быть больше подвержены. Активные собаки, такие как рабочие или охотничьи собаки, также могут подвергаться более высокому риску из-за повышенных уровней активности.
Определение биохимических характеристик хряща в пораженном артритом суставе демонстрирует значительную потерю двух ключевых компонентов матрикса - коллагена, в частности коллагена II типа, и аггрекана. Распад аггрекана является одним из ранних изменений, наблюдаемых при эрозии хряща, в частности при остеоартрите (ОА). Исследования показали, что аггрекан катаболизируется под действием двух протеаз внеклеточного матрикса, определенных как аггреканазы. Было установлено, что две протеа-зы, представляющие собой аггреканазы, ADAMTS-4 (дезинтегрин и металлопротеаза с мотивами тром-боспондина, аггреканаза 1) и ADAMTS-5 (аггреканаза 2), наиболее эффективно катаболизируют аггре-кан. Существует потребность в разработке более эффективного средства лечения артрита и, в частности, средства лечения ОА.
Разрушение или эрозия суставов происходит при различных заболеваниях, включая ревматоидный артрит, псориатический артрит, остеоартроз, гипертрофический артрит и остеоартрит. Более того, острое воспаление суставов может сопровождаться разрушением хряща. Примерами заболеваний, включающих острое воспаление суставов, являются артрит, вызванный иерсинией, артрит, вызванный пирофосфатами, подагра и септический артрит. Кроме того, еще одним фактором, который может способствовать разрушению или дистрофии хряща, является лечение кортизоном.
Согласно настоящему изобретению предложены соединения, которые могут быть полезны для лечения артрита и, в частности, остеоартрита, а также ингибирования эрозии хряща. Соединения согласно настоящему изобретению проявляют активность в отношении ADAMTS 4 и/или ADAMTS 5.
Формула 1а
где R1 выбран из метила, этила, пропила и циклопропила, или
V О
где R1 представляет собой диметил,
и их фармацевтически приемлемые соли.
Согласно настоящему изобретению предложены соединения формулы
и их фармацевтически приемлемые соли.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно из: фармацевтически приемлемого носителя, вспомогательного вещества или разбавителя.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложен способ ингибирования эрозии хряща, такой как эрозия, наблюдаемая при остеоартрите, у нуждающегося в этом пациента, включающий введение эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложен способ лечения артрита у нуждающегося в этом пациента, включающий введение эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложено применение соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства и, в частности, лекарственного средства для лечения артрита или ингибирования эрозии хряща.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложено соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложено соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении артрита или ингибирования эрозии хряща.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложено соединение, способ, применение или композиция согласно настоящему изобретению в комбинации с одним или большим числом других активных агентов.
Как отмечено выше, предпочтительные соединения согласно настоящему изобретению демонстрируют улучшенное связывание с аггреканазой, в частности ADAMTS4/5, и ингибируют ее/их активность. Следовательно, данные соединения могут ингибировать распад аггрекана. Ингибирование распада аггре-кана в хряще можно использовать в лечении артрита, предпочтительно ОА, и/или его/их патологических последствий или симптомов.
Термин "пациент" относится к млекопитающему и включает людей, других приматов (например, обезьян, шимпанзе и т.д.), животных-компаньонов (например, собаки, кошки, лошади и т.д.), сельскохозяйственных животных (например, козы, овцы, свиньи, крупный рогатый скот и т.д.), лабораторных животных (например, мыши, крысы и т.д.) и диких животных, животных зоопарка (например, волки, медведи, олени и т.д.). Термин "пациент" также относится к млекопитающим, страдающим от отрицательных патологических эффектов эрозии хряща, артрита и/или остеоартрита, в частности людям и/или животным-компаньонам, таким как собаки и кошки, или одомашненным животным, таким как лошади.
Термин "эффективное количество" относится к количеству соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, достаточному для лечения артрита или остеоарт-рита и/или одного или более последствий артрита или остеоартрита. Для применения у млекопитающих диапазоны для способов включают от 0,01 до 1000 мг/кг и более предпочтительно от 0,1 до 100 мг/кг массы тела млекопитающего. Частота введения будет также зависеть от нескольких факторов, и может составлять однократную дозу, вводимую один раз в сутки, один раз в неделю или один раз в месяц в течение периода, определенного лечащим врачом или ветеринаром. Совместно с соединениями согласно настоящему изобретению можно вводить дополнительные активные агенты.
В настоящем изобретении термин "фармацевтически приемлемый", например, по отношению к солям и компонентам состава, таким как носители, относится к тем солям и компонентам, которые не наносят вред пациенту и которые совместимы с другими ингредиентами, активными агентами, солями или компонентами. Термин "фармацевтически приемлемый" включает "ветеринарно приемлемый" и, таким образом, независимо включает применение как у млекопитающих, относящихся к человеку, так и у млекопитающих, не относящихся к человеку.
Термин "ингибировать" относится к общепринятому значению, которое включает профилактическое лечение пациента, склонного к возникновению эрозии хряща, и сдерживание и/или лечение имеющейся эрозии хряща у пациента. Соответственно, способ согласно настоящему изобретению включает как медицинское терапевтическое, так и/или профилактическое лечение в зависимости от ситуации.
В настоящем описании термин "введение" относится к введению эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению пациенту. Введение можно осуществлять различными способами, включая пероральное введение, парентеральное введение, такое как инъекция (внутримышечная, подкожная, внутривенная, интраперитонеальная) и т.п.; или топическое применение с или без проникновения через кожу, например.
Соединения согласно настоящему изобретению ингибируют аггреканазу и, таким образом, их можно с пользой применять для лечения артрита и наиболее предпочтительно для лечения ОА. В настоящем описании термин "эффективное количество" означает количество соединения согласно настоящему изобретению, т.е. соединения формулы I, которое является способным или эффективным в отношении лечения или облегчения симптомов различных патологических состояний, описанных в настоящем документе. Очевидно, что фактически вводимое количество соединения будет определяться врачом с учетом соответствующих обстоятельств и условий, таких как возраст, масса тела, развитие и тяжесть заболевания у пациента. Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно представляют в виде фармацевтических композиций, которые вводят различными путями. Наиболее предпочтительно, такие композиции предназначены для перорального введения, например, в форме таблеток, капсул, растворов или суспензий.
Таким образом, другой аспект настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей можно найти в S. M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", J. Phar. Sci, 66: 1-19 (1977) и "A Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use", Wermuth, C. G. and Stahl, P. H. (eds.) Verlag Helvtica Chimica Acta, 2002. Например, соединения согласно настоящему изобретению могут быть включены в состав совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, разбавителями или носителями, и представлены в форме таблеток, капсул, суспензий, растворов, порошков и т.п. Фармацевтические композиции и способы их получения известны в данной области техники и примеры можно найти в Remington, "The Science and Practice of Pharmacy" (A. Gennaro, et al., eds. 19th ed. Mack Publishing Co. 1995), содержание которого включено в настоящее описание посредством ссылки. Составы могут быть введены различными способами, включая пероральное введение, парентеральное введение, такое как инъекция (внутримышечная, подкожная, внутривенная, интраперитонеальная) и т.п.; топическое применение с или без проникновения через кожу. В состав, содержащий соединение согласно настоящему изобретению, могут быть включены дополнительные активные агенты.
В дополнение к фармацевтически приемлемым солям, настоящее изобретение включает и другие соли. Они могут служить в качестве промежуточных соединений при очистке соединений или при получении других фармацевтически приемлемых солей, или могут быть использованы для идентификации, получения характеристик или очистки.
Соединения согласно настоящему изобретению могут найти полезное применение для лечения артрита и сопутствующих последствий. В настоящем описании термин "артрит" включает, но не ограничивается ими, ревматоидный артрит (РА), ювенильный ревматоидный артрит, системную красную волчанку (СКВ), подагру, склеродермию, псориатический артрит, анкилозирующий спондилоартрит, остеоарт-рит (ОА) и синдром Рейтера (реактивный артрит). Соединения согласно настоящему изобретению могут найти особенно полезное применение для лечения остеоартрита (ОА).
При применении в комбинации с другим активным агентом, например, противовоспалительным агентом или агентом для облегчения боли, который может представлять собой либо стероидное, либо нестероидное средство, соединение согласно настоящему изобретению и указанный другой активный
агент могут быть введены одновременно либо в одном составе, либо в отдельных составах. В качестве альтернативы, соединение согласно настоящему изобретению и другой агент могут быть введены последовательно или согласно потребности пациента.
В настоящем описании следующие термины имеют указанные значения: "n-BuLi" относится к н-бутиллитию; "ДХМ" относится к дихлорметану; "Dibal-H" относится к диизобутилалюминийгидриду; "ДМФА" относится к ]Ч,]Ч-диметилформамиду; "ДМСО" относится к диметилсульфоксиду; "ЭДТА" относится к этилендиаминтетрауксусной кислоте; "EtOAc" относится к этилацетату; "Et2O" относится к диэтиловому эфиру; "EtOH" относится к этанолу; "Пр." относится к примеру; "IPA" относится к изопро-пиловому спирту; "LDA" относится к диизопропиламиду лития; "MeOH" относится к метанолу; "Получ." относится к получению; "t-boc или boc" относится к трет-бутоксикарбонилу; "ТФУ" относится к трифто-руксусной кислоте; "ТГФ" относится к тетрагидрофурану; в настоящем описании "X" относится к гало-генидам, т.е. I, Br, Cl или F; "IC50" относится к концентрации агента, обеспечивающей 50% от максимально возможного для данного агента ингибирующего ответа.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии с реакциями, изображенными в следующих примерах.
Пример получения 1.
(5К)-5-(аминометил)-5-циклопропилимидазолидин-2,4-дион гидрохлорид
ABS
1 этап: синтез трет-бутил-М-[2-(метокси(метил)амино)-2-оксоэтил]карбамата
К раствору Boc-Gly-OH (4250 г, 24,26 моль), N,O-диметилгидроксиламина-HCl (2839 г, 29,10 моль) и DMAP (297 г, 2,43 моль) в дихлорметане (36 л) добавляли триэтиламин (5,54 л) при 0°C в течение 90 мин с последующим добавлением EDC гидрохлорида (5674 г, 29,60 моль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч, затем нагревали до комнатной температуры в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили 1,0 М HCl до pH от 3 до 4, перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем выдерживали и разделяли. Органическую фазу последовательно промывали 1,0 М HCl (15 л), водой (15,0 л) и солевым раствором (8,0 л), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в названии (4985 г; выход 94%) в виде белого твердого вещества.
2 этап: синтез трет-бутил-М-(2-циклопропил-2-оксоэтил)карбамата
К раствору трет-бутил^-[2-(метокси(метил)шино)-2-оксоэтил]карбамата (2,455,3 г, 11,25 ммоль) в ТГФ (9,0 л) через капельную воронку добавляли 2,0 М изопропилмагнийхлорид в ТГФ (5,34 л, 10,69 моль) при -30°C в течение 60 мин так, чтобы внутренняя температура не превышала 0°C. Затем смесь медленно нагревали до 10°C и через капельную воронку добавляли 0,5 М циклопропилмагнийбромид в ТГФ (27,0 л, 13,50 моль) в течение 1 ч. Смесь перемешивали при комнатной температуре 24 ч. Смесь охлаждали до 0°C и гасили 1,0 М HCl до pH 5-6, затем нагревали до комнатной температуры и экстрагировали EtOAc (12 л и 10 л). Объединенную органическую фазу последовательно промывали водой (10 л) и солевым раствором (8 л), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением 2,24 кг (выход 100%) соединения, указанного в названии, в виде светло-желтого масла, которое сразу использовали на следующем этапе.
3 этап: синтез трет-бутил-М-[(4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил)метил]карбамата
Y Л^Г
О 4
Смесь соединения, представляющего собой трет-бутил^-(2-цикло1гоопил-2-оксоэтил)карбамат (4204 г, ~21,10 моль), KCN (1786 г, 27,43 моль) и (NH4)2CO3 (4866 г, 50,64 моль) в метаноле (16,0 л) и деионизированной воде (19,5 л) перемешивали при 65°C в течение 72 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением большей части метанола, а затем экстрагировали EtOAc (5x20 л). Орга
ническую фазу промывали солевым раствором (8,0 л), сушили (Na2SO4) и фильтровали. Объединенный фильтрат делили на две равные части. Каждую часть концентрировали до объема 15 л и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. Осадки фильтровали и промывали EtOAc (3x1,0 л). Полученное белое твердое вещество объединяли и сушили в вакууме при 45°C в течение 3 дней с получением соединения, указанного в названии (3605 г, выход 64,3%).
4 этап: выделение трет-бутил-N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-карбамата
ABS
Энантиомеры трет-бутил-N-[(4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил)метил]карбамата могут быть разделены с использованием хиральной колонки. Колонка: 11x33 см Chiralpak AD(r), 20 мкм; скорость потока/детектирование: 800 мл/мин/230 нм; подвижная фаза: метанол.
5 этап: синтез (5К)-5-(аминометил)-5-циклопропилимидазолидин-2,4-дион гидрохлорида
ABS
трет-Бутил-N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]карбамат (310 г, 1151 ммоль) растворяли в MeOH (3,1 л) при 6°C. Добавляли 4 М HCl в диоксане (310 мл) и смесь нагревали до 25°C. После перемешивания в течение 22 ч добавляли вторую порцию 4 М HCl в диоксане (110 мл) и продолжали перемешивать в течение еще 16 ч. Затем реакционную смесь оставляли без перемешивания на 2 дня. Затем смесь разбавляли толуолом (6 л). Соединение, указанное в названии, собирали путем фильтрации смеси в виде белого твердого вещества (180 г).
Пример 1.
(2R)-N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-2-метил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропанамид
V О
Формула 1с
Для получения вышеуказанного соединения можно использовать синтез, по существу описанный в примере 2, путем использования пропаноилхлорида вместо бутаноилхлорида. Пример 2.
(2R)-N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-2-[[4-(трифторметил) фенил] метил] бу танамид
В трехгорлую круглодонную колбу (RBF) добавляли дихлорметан (2,4 л), ^)-4-бензил-2-оксазолидинон (200 г, 1,13 моль) и ^№диметил-4-пиридинамин (13,6 г; 111,32 ммоль). Колбу охлаждали на бане с ледяной водой и по каплям добавляли триэтиламин (472 мл; 3,39 моль) при 0°C. Затем к полученному раствору по каплям добавляли бутаноилхлорид (152,2 мл; 1,46 моль) в течение 3 ч при поддержании температуры ниже 5°C. Затем реакционную смесь фильтровали, и фильтрат промывали 1 М HCl (водн.) (500 млх1) и насыщенным NaHCO3 (500 млх1). Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением соединения, указанного в названии (275 г, МС: [М+Н]+=248,1 m/z).
2 этап: синтез (4К)-4-бензил-3-[(2К)-2-[[4-(трифторметил)фенил]метил]бутаноил]оксазолидин-2-она
В 5-л трехгорлую круглодонную колбу добавляли ТГФ (2 л) и (4R)-4-бензил-3-бутаноилоксазолидин-2-он (270 г 1,09 моль) в атмосфере N2. Полученный раствор охлаждали до -68°C на бане с ацетоном и сухим льдом. К холодному раствору по каплям добавляли бис-(триметилсилил)амид натрия (1320 мл 1 М раствора в ТГФ; 1,32 моль) в течение 1,5 ч при поддержании внутренней температуры от -68 до -60°C. По завершении добавления реакционную смесь перемешивали при -68°C в течение 30 мин. Затем к холодному раствору добавляли 4-трифторметилбензилбромид (278 г; 1,16 моль) в ТГФ (1 л) в течение 30 мин при -68°C. Через 1,5 ч реакционную смесь вливали в 1 М HCl. Смесь экстрагировали этилацетатом (3 лх1). Экстракты объединяли и промывали водн. NaHCO3 (2 л х1) и солевым раствором (2 лх1). Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Твердое вещество растирали с EtOH (600 мл) при 15°C. Фильтрация позволяла получить соединение, указанное в названии, в виде твердого вещества (270 г, МС: [М+Н]+= 406 m/z).
3 этап: синтез (2К)-2-[[4-(трифторметил)фенил]метил]бутановой кислоты
В трехгорлую круглодонную колбу добавляли тетрагидрофуран (4,2 л) и воду (0,8 л). Добавляли (4R)-4-бензил-3-(2-(бензилокси)-3-(4-(трифторметил)фенил)пропаноил)оксазолидин-2-он (250 г; 616,65 ммоль) и раствор охлаждали до 0°C. По каплям добавляли пероксид водорода (4,93 моль; 500,30 мл) в течение 45 мин. По каплям добавляли LiOH (1,08 моль; 45,28 г) в 1,2 л воды в течение 1 ч. Затем полученную смесь перемешивали при 2°C в течение 1 ч. Растворяли сульфит натрия (2,47 моль; 310,90 г) в 2 л воды и полученный раствор по каплям добавляли к реакционной смеси в течение 1 ч. По завершении добавления смесь промывали ДХМ (2х2 л; 1 лх1). Затем водную фазу подкисляли концентрированной HCl (100 мл) до pH 1. Полученную суспензию экстрагировали ЕА (2 лх2). Органические экстракты объединяли, промывали раствором Na2SO3 (2 лх1) и солевым раствором I (2 лх1), сушили над Na2SO4 и фильтровали с получением соединения, указанного в названии (140 г, МС: [М+Н]+ = 247 m/z).
Формула 1е
В трехгорлую круглодонную колбу (2L) добавляли дихлорметан (996 мл), диметилформамид (200 мл), (2R)-2-[[4-(трифторметил)фенил]метил]бутановую кислоту (53 г, 215 ммоль) и О-(7-азабензотриазол-1-ил)-^^№,№-тетраметилурония гексафторфосфат (215 ммоль; 81,84 г) при температуре окружающей среды в атмосфере азота. К смеси одной порцией добавляли ^^диметилэтанамин (1,08 моль; 116,80 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин. К полученному раствору одной порцией добавляли (5R)-5-(аминометил)-5-циклопропилимидазолидин-2,4-дион гидрохлорид (237 ммоль; 49 г). Полученный раствор перемешивали в течение 2,5 ч. Затем прекращали перемешивание, и смесь оставляли открытой под воздействием воздуха на 16 ч. Затем реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл) и промывали 2 М HCl (водн.) (200 млх2), 5% NaHCO3 (водн.) (200 млх2) и солевым раствором (500 мл). Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали с получением масла. Масло разбавляли CH2Cl2 (250 мл), в результате чего белое твердое вещество выпадало в осадок. Указанное твердое вещество собирали путем фильтрации и промывали петролейным эфиром (100 млх 2) с получением соединения, указанного в названии (55 г; МС: [М+Н]+= 398 m/z).
Пример 3.
(2R)-2-циклопропил-N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-3-[4-(трифторметил)фенил]пропанамид
Формула Ш
Для получения вышеуказанного соединения можно использовать синтез, по существу описанный в примере 2, путем использования 2-циклопропилацетилхлорида вместо бутаноилхлорида. Пример 4.
(2R)-N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-3-метил-2-[[4-(трифторметил) фенил] метил] бу танамид
Формула Ii
Для получения вышеуказанного соединения можно использовать синтез, по существу описанный в примере 2, путем использования 2-метилбутаноилхлорида вместо бутаноилхлорида. Пример 5.
N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-2,2-диметил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропанамид
V О
Этил-2-диэтоксифосфорилпропаноат (5,24 г, 22 ммоль) и 4-(трифторметил)бензальдегид (3,48 г, 20 ммоль) растворяли в сухом ТГФ (50 мл) в атмосфере азота. Полученный раствор охлаждали до 0°C. Осторожно добавляли 60 мас.% NaH (960 мг, 24 ммоль). Давали нагреться до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 12 ч. Концентрировали реакционную смесь. Остаток очищали с использованием флэш-хроматографии (5% EtOAc/петролейный эфир) с получением соединения, указанного в названии (4,18 г).
2 этап: синтез этил-2-метил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропаноата
В круглодонной колбе растворяли этил-(Е)-2-метил-3-[4-(трифторметил)фенил]проп-2-еноат (2,58 г, 10 ммоль) в суспензии 10 мас.% Pd-C (258 мг)/MeOH (20 мл) в атмосфере азота, поскольку воздействие кислорода на Pd-C может привести к возгоранию. Колбу осторожно продували водородом и полученную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм.) в течение 16 ч. Колбу продували азотом и дегазировали растворитель с удалением всего водорода перед подверганием воздействию воздуха. Фильтровали суспензию через слой целита. Фильтрат концентрировали с получением соединения, указанного в названии (2,39 г).
3 этап: синтез этил-2,2-диметил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропаноата
К раствору LDA (2,9 мл 2 М) в ТГФ (30 мл) при -78°C добавляли этил-2-метил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропаноат (1 г, 3,85 ммоль). Перемешивали в течение 10 мин, затем добавляли метилиодид (1,48 г, 10,4 ммоль) и перемешивали в течение еще 15 мин. Реакционную смесь гасили 10 мл 1 Н HCl и давали нагреться до температуры окружающей среды. Экстрагировали EtOAc (50 мл). Экстракт промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (5% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения, указанного в названии (475 мг).
4 этап: синтез 2,2-диметил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропановой кислоты
Растворяли этил-2,2-диметил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропаноат (400 мг, 1,46 ммоль) в MeOH (2 мл) и добавляли водный раствор NaOH (3 мл 3 Н). Нагревали до 80°C и перемешивали в течение 3 ч. Охлаждали до температуры окружающей среды и подкисляли 1 Н HCl до pH "4. Экстрагировали EtOAc. Органические экстракты объединяли, промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением соединения, указанного в названии (272 мг).
5 этап: синтез N-[[(4R)-4-циклопропил-2,5-диоксоимидазолидин-4-ил]метил]-2,2-диметил-3-[4
V о
(трифторметил)фенил]пропанамида
К раствору амина (205 мг, 1 ммоль) в 15 мл сухого ацетонитрила добавляли N,N-диизопропилэтиламин (387 мг, 3 ммоль). К полученному раствору добавляли 2,2-диметил-3-[4-(трифторметил)фенил]пропановую кислоту (246 мг, 1 ммоль), EDCI (229 мг, 1,2 ммоль) и НОАТ (163 мг, 1,2 ммоль). Перемешивали в течение 12 ч при температуре окружающей среды. Использовали препаративную ВЭЖХ с выделением соединения, указанного в названии (282 мг).
Пример
ЭР/МС [М+Н]+ m/z
384,2
398,0
410,0
412,2
398,0
Следующие протоколы и результаты анализов, дополнительно демонстрирующие полезность и эффективность соединений и/или способов согласно настоящему изобретению, приведены для иллюстрации и никоим образом не являются ограничивающими. Все лиганды, радиоактивные метки, растворители и реагенты, используемые в следующих анализах, легко доступны в коммерческих источниках или могут быть легко синтезированы специалистом в данной области.
Выполняли тесты на связывание аггреканазы для того, чтобы показать, что соединения, включенные в настоящее изобретение, демонстрируют аффинность к аггреканазе. В частности, предпочтительные соединения согласно настоящему изобретению демонстрируют повышенную аффинность к аггрека-назе, и примером этого является их аффинность связывания в анализах ADAMTS-4 и ADAMTS-5 по технологии AlphaScreen.
Известно, что матриксные металлопротеиназы (ММР) участвуют в некоторых гомеостатических процессах, включая ремоделирование ткани, активность шеддазы и эндоцитоз. Ингибиторов широкого спектра ММР, протестированных в клинических условиях, связывали с фиброплазией и тугоподвижно-стью суставов, и родственными побочными эффектами, в совокупности называемыми скелетно-мышечным синдромом (MSS). Поэтому желательной является селективность в отношении аггреканазы по сравнению с ММР в целом. Аналогично, в случае семейства ADAMTS, некоторых его членов связывали с критическими функциями, отличными от желаемого ингибирования аггреканазы. Соединения согласно настоящему изобретению также проявляют активность (т.е. ингибируют ADAMTS-4 и ADAMTS-5) в плазме крови и/или повышенную селективность в отношении ADAMTS-4 и ADAMTS-5 по сравнению с ММР-2 и ММР-14. Анализ ADAMTS-4 и ADAMTS-5 по технологии AlphaScreen:
Соединения согласно настоящему изобретению можно оценить с использованием теста AlphaScreen на аггреканазу ADAMTS-4 и ADAMTS-5 (Miller J. A., et al., Anal. Biochem. 2003, 314, 260-265) со следующими модификациями: как правило, 3 или 4 нм ADAMTS-4 или 2,1 нМ ADAMTS-5 инкубировали совместно с 80 нМ 43-мерным пептидным субстратом +/- ингибиторы (1% конечная концентрация ДМСО) в течение 3 ч при комнатной температуре в белом 96-луночном планшете с несвязывающей поверхностью (Corning 3990). Готовили серийные 3-кратные разведения ингибиторов и тестировали их в конечных исходных концентрациях приблизительно до 100 мкМ. Затем исследуемый образец гасили коктейлем, содержащим ЭДТА (62,5 мМ), 50 мМ трис-(гидроксиметил)аминометан (Трис), (pH 7,5), 10 мМ хлорид кальция, 100 мМ хлорид натрия, 0,2% Бридж(r) 35 (основной компонент полиоксиэтиленово-го (23) эфира лаурилового спирта), 0,1% бычий сывороточный альбумин (BSA), надосадочную жидкость гибридомы, содержащую моноклональные антитела ВС3 (конечное разведение 1:2000), донорные гранулы, конъюгированные со стрептавидином, и акцепторные гранулы, конъюгированные с антителами к IgG мыши (конечная концентрация для обоих типов гранул 15 мкг/мл). Планшет закрывали алюминиевой фольгой и оставляли для инкубирования на ночь, чтобы произошло связывание. Затем планшет прочитывали на ридере AlphaScreen Fusion Alpha от Perkin Elmer. Данные анализировали с использованием программного обеспечения ActivityBase(tm) (IDBS, Аламеда, Калифорния). Подобный анализ использовали в случае очищенного фермента ADAMTS-4 собаки. Данные для типичных соединений согласно настоящему изобретению приведены в табл. 1.
Анализ изменений в плазме крови крыс и собак с использованием теста AlphaScreen(r).
Модифицировали анализ AlphaScreen так, чтобы он включал тестирование ингибиторов ADAMTS-5 в присутствии 50% плазмы крови крыс Льюиса, для определения влияния связывания с белками плазмы крови на активность ингибитора. Рассчитывали соотношение между IC50 ингибитора ADAMTS-5 в 50% плазме крови крыс Льюиса и IC50 указанного ингибитора в буфере, и рассматривали его как изменение в плазме крови, характерное для ингибитора. Анализ завершали таким же образом с использованием 10 нм ADAMTS-5 вместо 2,1 нМ. Подобный анализ использовали в случае ADAMTS-4 собаки в присутствии 25% плазмы крови собаки. Данные для типичных соединений согласно настоящему изобретению приведены в табл. 2.
Флуоресцентный анализ активности ММР-2 in vitro.
Использовали непрерывный анализ, в котором субстрат представлял собой синтетический пептид, содержащий флуоресцентную группу (7-метоксикумарин, Мса), которая гасилась в результате переноса энергии на 2,4-динитрофенильную группу. Субстрат представлял собой пептид Мса-PQGL-(3-[2,4-динитрофенил]-L-2,3-диаминопропионил)-AR-ОН. Когда указанный пептид расщеплялся под действием ММР, наблюдали значительное увеличение флуоресценции. Источником фермента для данного анализа являлась полноразмерная рекомбинантная про-ММР-2 человека, экспрессированная в клетках яичника китайского хомячка (СНО), которую затем активировали ртутьорганическим соединением, 4-аминофенилмеркурацетатом (АРМА). АРМА удаляли на обессоливающей колонке (ММР-2 Calbiochem(r), номер по каталогу PF023). Буфер для анализа состоял из 100 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl2 и 10 мкМ сывороточного альбумина человека. Каждая лунка в 96-луночных планшетах состояла из 100 мкл реакционной смеси, состоящей из буфера для анализа, ММР (конечная концентрация 0,2 нМ, полученная путем разведения в буфере для анализа) и различных концентраций ингибитора (полученных путем серийного разведения конкретного ингибитора в ДМСО в 96-луночном полипропиленовом планшете с использованием 10-точечной или 11-точечной схемы разведения). Ферментативные реакции инициировали путем добавления субстрата до конечной концентрации 20 мкМ. Конечная концентрация ДМСО в анализе составляла 1,0%. Планшет инкубировали в течение 2-4 ч при комнатной температуре и расщепление субстрата определяли при комнатной температуре с помощью планшет-ридера для измерения флуоресценции (возбуждающий фильтр 320 и эмиссионный фильтр 436) на LJL Analyst(r) или Wallac Envision(r).
Данные анализировали с использованием программного обеспечения ActivityBase(r), версия 5,3, с использованием модельного уравнения соответствия 4 параметров 205, из которого получали относительные значения IC50. Максимальный сигнал вычисляли в лунках, необработанных ингибитором, но содержащих фермент, субстрат и 1,0% ДМСО. Минимальный сигнал вычисляли в лунках, содержащих только буфер (отсутствие фермента), субстрат и 1,0% ДМСО. Флуоресцентный анализ активности другой ММР in vitro.
Для анализов остальных ММР использовали по существу ту же процедуру, что и в анализе ММР-2 выше, или известную в данной области техники. Например, для ММР-14 источником фермента являлся каталитический домен ММР-14 (МТ1-ММР), полученный путем активации рекомбинантной растворимой проформы фермента, выделенной из периплазмы. Он состоял из аминокислотных остатков Tyr89 -Gly265 зрелого МТ1-ММР человека (Calbiochem(r), номер по каталогу 475935). Конечная концентрация в каждой лунке составляла 0,5 нМ, а не 0,2 нМ как в анализе ММР-2. Данные для типичных соединений
ФД-модель у крыс с использованием инъекции монойодацетата (MIA).
Может быть использован анализ, описанный в Swearingen et al., Osteoarthritis and Cartilage 18 (2010) 1159-1166. Получали свежий MIA (Sigma, № по каталогу 12512, натриевая соль) в день применения в количестве 3 мг в 50 мкл стерильного 0,9% физиологического раствора. 7-8-недельных самцов крыс Льюиса анестезировали и вводили им интраартикулярно MIA путем инъекции в правое колено (чтобы индуцировать активность эндогенной аггреканазы и высвобождение фрагментов аггрекана в синовиальную жидкость) и физиологический раствор в левое (противоположное) колено в 0 день. Перорально вводили ингибитор аггреканазы (3, 10 или 30 мг/кг) или носитель [1% гидроксиэтилцеллюлоза (ГЭЦ); 0,25% Твин 80; 0,05% пеногаситель] два раза в сутки, начиная с 3 дня. В 7 день вводили однократную дозу соединения, через 4 ч животных умерщвляли и промывали коленные суставы 200 мкл физиологического раствора. Синовиальную промывную жидкость анализировали на предмет расщепленных аггреканазой фрагментов аггрекана с использованием твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) "сэндвич"-типа NITEGE. Количество фрагментов аггрекана, присутствующих в синовиальной промывной жидкости, определяли на основе стандартной кривой, полученной для расщепленного аггреканазой аггрекана крыс. Статистический анализ осуществляли с использованием критерия Даннетта.
Анализ ELISA "сэндвич"-типа: для ELISA NITEGE, моноклональное антитело а-NITEGE иммобилизовали в белых планшетах ELISA с сильным связыванием (Nunc) в течение ночи при 4°C. После блокирования в планшет добавляли образцы синовиальной промывной жидкости крыс и фиксировали фрагменты с С-концевой последовательностью NITEGE. Фиксированные фрагменты детектировали с использованием HRP-конъюгированного моноклонального антитела a-HABR. Сигнал ELISA измеряли с использованием субстрата максимальной чувствительности SuperSignal ELISA femto (Pierce) и прочитывали на люминометре Victor. Количество фрагментов аггрекана, присутствующих в образце, определяли на основе стандартной кривой, полученной для расщепленного аггреканазой аггрекана хондросаркомы крыс (850 мг/мл исходного раствора, разведенного в буфере для разведения антител). Данные представлены в табл. 4.
Исследование биомаркера ARGN в плазме крови у собак с остеоартритом.
Задачей данного исследования являлось определение ответа биомаркера ARGN в плазме крови у собак с остеоартритом (ОА) на соединение согласно настоящему изобретению в диапазоне доз после ежедневного перорального введения в течение 21 дня. В данное исследование включали шестнадцать (16) взрослых лабораторных собак породы бигль в возрасте > 8 лет с рентгенографическим подтверждением ОА в тазобедренном суставе (суставах) и 4 контрольных собаки породы бигль без ОА в соответствующей возрастной группе.
У всех собак забирали образцы крови для определения исходных концентраций ARGN в плазме крови в 30, 28 и 26 день до начала введения доз. 16 собак с ОА рандомизировали блоками по средним исходным концентрациям ARGN в плазме крови в 1 из 4 групп лечения: плацебо, 0,1, 1 и 10 мг/кг соеди
нения из примера 2. Всех 4 контрольных собак без ОА в соответствующей возрастной группе определяли в группу лечения плацебо. Начиная с 0 дня, собакам один раз в сутки вводили через желудочный зонд соединение из примера 2 в растворе/суспензии в течение 3 недель в соответствии с определенной для них группой лечения. Образцы крови для определения концентрации ARGN и соединения из примера 2 в плазме крови забирали перед первым введением дозы и 3 раза в неделю в течение еще 4 недель (28 день). Дополнительные образцы крови для определения концентрации ARGN и соединения из примера 2 в плазме крови забирали перед и через 1, 2, 6, 12 и 24 ч после введения последней дозы (20 день). Концентрации ARGN в плазме крови определяли путем иммунологического анализа с использованием протокола ELISA "сэндвич"-типа, и концентрацию соединения из примера 2 в плазме крови определяли с использованием метода ЖХ-МС/МС. Рассчитывали сводную статистику концентраций ARGN и соединения из примера 2 в плазме крови и проводили фармакокинетический анализ концентраций соединения из примера 2 без учета компартментов.
Ингибирование концентраций ARGN в плазме крови происходило дозозависимым образом со средними значениями ингибирования в 21 день, составляющими 33,8, 70,7 и 80,3%, после ежедневного введения 0,1, 1 и 10 мг/кг соединения из примера 2 соответственно. Ингибирование ARGN у здоровых собак и собак с ОА, получавших лечение плацебо, было сравнительно слабым, в диапазоне от -1,30 до 13,4%. Концентрации ARGN, по существу, не различались среди здоровых собак и собак с OA из группы плацебо. Концентрации соединения из примера 2 в плазме крови увеличивались с дозой субпропорциональным образом и быстро достигали минимальных равновесных концентраций. Очевидно, что увеличение доз и системного воздействия соединения из примера 2 приводило к повышенному ингибированию концентраций ARGN в плазме крови. Таким образом, соединение из примера 2 ингибировало целевую аг-греканазу у собак с ОА естественного происхождения после перорального введения один раз в сутки.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение, имеющее формулы
или его фармацевтически приемлемая соль.
Формула 1е
или его фармацевтически приемлемой соли для лечения артрита.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
4. Фармацевтическая композиция для лечения артрита, содержащая соединение по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно из: фармацевтически приемлемого носителя, вспомогательного вещества или разбавителя.
5. Способ лечения артрита у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту.
6. Способ ингибирования эрозии хряща у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли указанному пациенту.
7. Применение соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли в терапии артрита.
8. Применение соединения по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения артрита.
9. Применение соединения, имеющего формулу
026037
026037
- 1 -
- 1 -
(19)
026037
026037
- 1 -
- 1 -
(19)
026037
026037
- 1 -
- 1 -
(19)
026037
026037
- 4 -
- 3 -
(19)
026037
026037
- 2 -
- 2 -
026037
026037
- 3 -
- 4 -
026037
026037
- 3 -
- 4 -
026037
026037
- 6 -
- 6 -
026037
026037
- 6 -
- 6 -
026037
026037
- 6 -
- 6 -
026037
026037
- 15 -
- 15 -
026037
026037
- 16 -
- 16 -
|
