|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Способ получения соединения формулы I  где n = 3; X выбирают из группы, включающей: a) СН; b) N; который включает следующие стадии: стадия 1: введение радиоактивной метки в соединение формулы II с помощью F-18 фторирующего агента, получая соединение формулы I, если R = Н, или получая соединение формулы III, если R = PG, где используют 7,5-75,0 мкмоль соединения формулы II и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей  где R выбирают из группы, включающей: а) Н; b) PG; PG представляет собой "аминозащитную группу"; LG представляет собой уходящую группу; стадия 2: если R = PG, отщепление защитной группы PG, получая соединение формулы I; стадия 3: очистка соединения формулы I. 2. Способ в соответствии с п.1, где PG выбирают из группы, включающей: a) Вос; b) тритил; c) 4-метокситритил. 3. Способ в соответствии с п.1 или 2, где LG выбирают из группы, включающей: a) галоген; b) сульфонилокси; галоген представляет собой хлор, бром или йод. 4. Способ в соответствии с п.3, где сульфонилокси выбирают из группы, включающей: a) метансульфонилокси; b) п-толуолсульфонилокси; c) (4-нитрофенил)сульфонилокси; d) (4-бромфенил)сульфонилокси. 5. Способ в соответствии с п.1, где n = 3 и X = СН. 6. Способ в соответствии с п.1, где n = 3, X = СН, R = Вос и LG = метансульфонилокси. 7. Способ в соответствии с пп.1-6, где используют 10-50 мкмоль соединения формулы II. 8. Способ в соответствии с п.7, где используют 10-30 мкмоль соединения формулы II. 9. Способ в соответствии с пп.1-8, где способ осуществляют в виде полностью автоматизированного процесса.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Способ получения соединения формулы I где n = 3; X выбирают из группы, включающей: a) СН; b) N; который включает следующие стадии: стадия 1: введение радиоактивной метки в соединение формулы II с помощью F-18 фторирующего агента, получая соединение формулы I, если R = Н, или получая соединение формулы III, если R = PG, где используют 7,5-75,0 мкмоль соединения формулы II и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей где R выбирают из группы, включающей: а) Н; b) PG; PG представляет собой "аминозащитную группу"; LG представляет собой уходящую группу; стадия 2: если R = PG, отщепление защитной группы PG, получая соединение формулы I; стадия 3: очистка соединения формулы I. 2. Способ в соответствии с п.1, где PG выбирают из группы, включающей: a) Вос; b) тритил; c) 4-метокситритил. 3. Способ в соответствии с п.1 или 2, где LG выбирают из группы, включающей: a) галоген; b) сульфонилокси; галоген представляет собой хлор, бром или йод. 4. Способ в соответствии с п.3, где сульфонилокси выбирают из группы, включающей: a) метансульфонилокси; b) п-толуолсульфонилокси; c) (4-нитрофенил)сульфонилокси; d) (4-бромфенил)сульфонилокси. 5. Способ в соответствии с п.1, где n = 3 и X = СН. 6. Способ в соответствии с п.1, где n = 3, X = СН, R = Вос и LG = метансульфонилокси. 7. Способ в соответствии с пп.1-6, где используют 10-50 мкмоль соединения формулы II. 8. Способ в соответствии с п.7, где используют 10-30 мкмоль соединения формулы II. 9. Способ в соответствии с пп.1-8, где способ осуществляют в виде полностью автоматизированного процесса.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
025823 (13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации
и выдачи патента: 2017.02.28
(51) Int. Cl. A61K51/04 (2006.01) C07B 59/00 (2006.01)
(21) Номер заявки:
(22) Дата подачи:
201201646
2011.05.30
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ F-18 МЕЧЕНЫХ ЛИГАНДОВ БЕТА-АМИЛОИДА
(31) 10164948.1
(32) 2010.06.04
(33) EP
(43) 2013.05.30
(86) PCT/EP2011/058819
(87) WO 2011/151282 2011.12.08
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ПИРАМАЛЬ ИМЭДЖИНГ СА (CH)
(72) Изобретатель:
Берндт Матиас, Фрибе Маттиас, Хульч Кристина (DE), Самсон Фабрис, Ох Сён Юн (KR), Смуда Кристоф (CH)
(74) Представитель:
Веселицкая И.А., Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б., Каксис Р.А., Белоусов Ю.В., Куликов А.В., Кузнецова Е.В. (RU)
(56) US-A1-2010113763 US-A1-2006269473
ZHANG ET AL.: "F-18 Polyethyleneglycol stilbenes as PET imaging agents targeting Abeta aggregates in the brain", NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY, ELSEVIER, NY, US, vol. 32, no. 8, 1 November 2005 (2005-11-01), p. 799-809, XP005129336, ISSN: 0969-8051, DOI: 10.1016/J.NUCMEDBIO.2005.06.001, cited in the application, abstract, scheme 3, p. 807, column 1, paragraph 1 - p. 808, column 2, paragraph 2
WO-A1-2011003591
WANG H. ET AL.: "Facile and rapid one-step radiosynthesis of [ <18> F]BAY94-9172 with a new precursor", NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY, ELSEVIER, NY, US, vol. 38, no. 1, 1 January 2011 (2011-01-01), p. 121-127, XP027589497, ISSN: 0969-8051 [retrieved on 2010-08-16], cited in the application, p. 123, column 2, paragraph 3 - p. 124, column 1, paragraph 2
PATT M. ET AL.: "Metabolite analysis of [18F]Florbetaben (BAY 94-9172) in human subjects: a substudy within a proof of mechanism clinical trial", JOURNAL OF RADIOANALYTICAL AND NUCLEAR CHEMISTRY, KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS, DO, vol. 284, no. 3, 16 March 2010 (2010-03-16), p. 557-562, XP019792449, ISSN: 1588-2780, figure 1, p. 558, column 2, paragraph 1
LIN K. J. ET AL.: "Whole-body biodistribution and brain PET imaging with [ <18> F]AV-45, a novel amyloid imaging agent - a pilot study", NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY, ELSEVIER, NY, US, vol. 37, no. 4, 1 May 2010 (2010-05-01), p. 497-508, XP027039103, ISSN: 0969-8051 [retrieved on 2010-04-07], figure 1, p. 498, column 2, paragraph 1
WO-A2-2010000409
WO-A1-2010078370
LIU Y. ET AL.: "Optimization of automated radiosynthesis of [ <18> F]AV-45: a new PET imaging agent for Alzheimer's disease", NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY, ELSEVIER, NY, US, vol. 37, no. 8, 1 November 2010 (2010-1101), p. 917-925, XP027472064, ISSN: 0969-8051, DOI: 10.1016/J.NUCMEDBI0.2010.05.001 [retrieved on 2010-06-29], cited in the application, abstract, p. 918, column 2, paragraph 6 -p. 920, column 2, paragraph 1, scheme 1, figure 1
YAO C. H. ET AL.: "GMP-compliant automated synthesis of [ <18> F]AV-45 (Florbetapir F18) for imaging beta-amyloid plaques in human brain", APPLIED RADIATION AND ISOTOPES, ELSEVIER, OXFORD, GB, vol. 68, no. 12, 1 December 2010 (2010-12-01), p. 2293-2297, XP027265706, ISSN: 0969-8043 [retrieved on 2010-07-07], cited in the application, abstract, p. 2294, column 1, paragraph 5 - column 2, paragraph 4, figure 1
PIYUSH KUMAR ET AL.: "18F-FESB: synthesis and automated radiofluorination of a novel18F-labeled pet tracer
for[beta]-amyloid plaques", JOURNAL OF LABELLED COMPOUNDS AND RADIOPHARMACEUTICALS, vol. 48,
no. 13, 1 November 2005 (2005-11-01), p. 983-996,
XP55006268, ISSN: 0362-4803, DOI: 10.1002/jlcr.1011,
abstract, p. 990, paragraph 2 - p. 992, paragraph 2
(57) Настоящее изобретение относится к способу получения соединения I, который включает стадии: введения радиоактивной метки в соединение формулы II с помощью F-18 фторирующего агента, с получением соединения формулы I, если R = Н, или получением соединения формулы III, если R = PG, где используют 7,5-75 мкмоль соединения формулы II и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей, если R = PG, отщепления защитной группы PG, с получением соединения формулы I и очистки соединения формулы I
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам, которые обеспечивают доступ к [F-Щфторпегилированным производным (арил/гетерарил винил)фенил метиламина.
Предпосылки создания изобретения
Болезнь Альцгеймера (AD) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное нарушение, характеризующееся потерей памяти, познавательных способностей и стабильности поведения. AD определяется патологически с помощью внеклеточных сенильных бляшек, состоящих из фибриллярных отложений бета-амилоидного пептида (АР) и нейрофибриллярных клубков, состоящих из спаренных спиральных филаментов гиперфосфорилированного тау. 39-43 аминокислоты, включающие Ар пептиды, имеют происхождение из более крупного предшественника амилоидного белка (АРР). В амилоидоген-ном метаболическом пути, Ар пептиды отщепляются от АРР путем последовательного протеолиза с помощью бета- и гамма-секретаз. Ap пептиды высвобождаются в виде растворимых белков и обнаруживаются в незначительных концентрациях в цереброспинальной жидкости (CSF) в нормальном стареющем головном мозге. При прогрессировании AD Ар пептиды агрегируют и образуют амилоидные отложения в паренхиме и сосудистой сети головного мозга, которые могут быть обнаружены посмертно в виде диффузных и сенильных бляшек и сосудистого амилоида при осуществлении гистологического анализа (недавний обзор см.: Blennow и др. Lancet. 2006 Jul 29; 368(9533): 387-403).
Болезнь Альцгеймера (AD) становится большой медицинской и социально-экономической проблемой во всем мире. Большие усилия направлены на разработку техник и методов для раннего обнаружения и эффективного лечения заболевания. В настоящее время, диагноз AD по академическим клиническим параметрам нарушений памяти составляет приблизительно 85-90% точности (Petrella JR и др. Radiology. 2003 226:315-36). Он основывается на исключении различных заболеваний, вызывающих сходные симптомы, и тщательном неврологическом и психиатрическом исследовании, а также на нейропсихоло-гическом тестировании.
Молекулярная визуализация является эффективной для более раннего обнаружения прогрессирова-ния заболевания или терапевтической эффективности по сравнению с другими наиболее распространенными методами в области неврологии, онкологии и кардиологии. Среди нескольких перспективных технологий молекулярной визуализации, таких как оптическая визуализация, MRI, SPECT и PET, PET представляет чрезвычайный интерес относительно разработки лекарственных средств в связи с их высокой чувствительностью и способностью обеспечивать количественные и кинетические данные.
Например, позитронно-активные изотопы включают, например углерод, йод, азот и кислород. Эти изотопы могут заменять их нерадиоактивные аналоги в целевых соединениях с получением PET индикаторов, которые обладают аналогичными биологическими свойствами. Из этих изотопов F-18 является предпочтительным изотопом для мечения в связи с его периодом полураспада 110 мин, который предоставляет возможность приготовления диагностических индикаторов и последующего изучения биохимических процессов. Дополнительно, их низкая р+ энергия (634 кэВ) также является благоприятной.
Посмертное гистологическое исследование главного мозга все еще остается единственной достоверной диагностикой болезни Альцгеймера. Таким образом, полагают, что in vivo обнаружение одной патологической характерной особенности заболевания - отложения амилоидных агрегатов в головном мозге - будет оказывать сильное влияние на ранее выявление AD и дифференциацию ее от других форм деменции. Дополнительно, большинство терапий, модифицирующих заболевание, которые разрабатываются, нацелены на снижение амилоидной нагрузки в головном мозге. Таким образом, визуализация амилоидной нагрузки в головном мозге может обеспечивать существенный инструмент для стратификации пациентов и мониторинга лечения (недавний обзор см.: Nordberg. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2008 Mar; 35 Suppl 1:S46-50). Дополнительно, также известно, что амилоидные отложения принимают участие в амилоидозах, при которых амилоидные белки (например, тау) атипично отложены в различных органах и/или тканях, вызывая заболевание. Недавний обзор см. Chiti et al. Annu Rev. Biochem. 2006;
75:333-66.
Поскольку нуклеофильное радиоактивное фторирование осуществляют с использованием нано- и суб-наномолярных количеств р-Щфторида хорошо известно, что только небольшие количества введения меченого предшественника необходимо для достаточного введения радиоактивной метки. В целом, несколько микромоль предшественника обеспечивают большой избыток по отношению к радиоактивным изотопам, что приводит к реакционным кинетикам псевдо-первого порядка (P.W. Miller et al., Ang.
Chem. Int. Ed. 47 (2008), 8998-9033).
Прямое радиоактивное фторирование фторпегилированных бис-арил/гетероарил Ар лигандов L описано в литературе.
18р п = 2-6
Aryl-X-Aryl-f О""4-^ X = связь, СН=СН, ОС
Мечение радиоактивном изотопом 1 мг (1,83-2,48 мкмоль) предшественника А в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение В с радиохимическим выходом 20-30% (с поправкой на разложение).
b) Индолинил- и индолилфенилацетилены D (R. et al. J. Med Chem. 50 (2007), 2415-2423)
Мечение радиоактивном изотопом предшественника С в ДМСО, используя комплекс карбонат ка-лия/криптофикс, обеспечивало получение D с радиохимическим выходом 11-16% (с поправкой на разложение).
с) Производные флавона F (M. Ono et al. Bioorg. Med. Chem. 17 (2009), 2069-2076)
Мечение радиоактивном изотопом 0,2 мг (0,35-0,42 мкмоль) предшественника Е в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение F с радиохимическим выходом 5-13% (с поправкой на разложение).
d) Производные фен-нафталина и фен-хинолина Н (WO 2008/124812)
Мечение радиоактивном изотопом 1 мг ( <2,11 мкмоль) предшественника G в ДМСО, используя комплекс карбонат калия/криптофикс, обеспечивало получение Н с радиохимическим выходом 30% (с поправкой на разложение).
е) Производные бензотиазола J (WO 2007/002540)
Мечение радиоактивном изотопом предшественника I в ДМСО, используя комплекс карбонат ка-лия/криптофикс, обеспечивало получение Н с радиохимическим выходом 11-35% (с поправкой на разложение). Исследовали влияние количества предшественника (пример n = 2), и было обнаружено, что оптимальным для этого типа превращения является 1-3 мг (1,91-5,74 мкмоль).
Также фторпегилированные (арил/гетерарил винил)фенил метиламины, такие как 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-
(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилин и 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-
фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилин метили с помощью F-18 фторида ранее, и они описаны в патентных заявках WO 2006/066104, WO 2007/126733 и представителях соответствующих патентных семейств.
4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-М-метиланилин
N О "О' ^
4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилин; 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[Р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-М-метиланилин
4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилин
a) W. Zhang et al., Nuclear Medicine and Biology 32 (2005) 799-809.
4 мг (7,47 мкмоль) предшественника 2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) в 0,2 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью HCl и нейтрализовали с помощью NaOH. Смесь экстрагировали с помощью этил ацетата. Растворитель высушивали и упаривали. Остаток растворяли в ацетонитриле и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. 20% (с поправкой на разложение), 11% (без поправки на разложение) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина получали в течение 90 мин.
b) WO 2006/066104.
4 мг (7,47 мкмоль) предшественника 2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)-(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) в 0,2 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью HCl и нейтрализовали с помощью NaOH. Смесь экстрагировали с помощью этил ацетата. Растворитель высушивали и упаривали, остаток растворяли в ацетонитриле и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. 30% (с поправкой на разложение), 17% (без поправки на разложение) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина получали через 90 мин.
В последнее время были описаны дополнительные синтезы.
a) US 20100113763.
2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)-этокси]этил метансульфонат) подвергали реакции с [F-Щфторидным реагентом в смеси 500 мкл трет-спирта и 100 мкл ацетонитрила. После фторирования растворитель упаривали и добавляли смесь HCl и ацетонитрила. После снятия защиты (нагревание при 100-120°С) смесь неочищенного продукта очищали путем ВЭЖХ (С18, 60% ацетонитрил, 40% 0,1 М формиат аммония). Показано, что при низком уровне активности [F-Щфторида (4,1 мКи = 0,15 ГБк), получали сходные выходы с 2-10 мг предшественника. В отличие от опубликованных данных, нами было обнаружено, что при более высоких уровнях активности
[F-Щфторида (например, 30-55 ГБк) выходы существенно зависят от количества предшественника (пример 2). Дополнительно и в отличие от опубликованных данных, выходы, представленные в примере 2, относится к продукту, пригодному для использования на людях, полученного с помощью полного процесса приготовления.
b) H. Wang et al., Nuclear Medicine and Biology 38 (2011).
121-127 5 мг (9,33 мкмоль) предшественника 2а (2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]этил метансульфонат) в 0,5 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью HCl и нейтрализовали с помощью NaOH. Неочищенный продукт разводили с помощью ацетонитрила/0,1 М формиата аммония (6/4) и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали, разводили водой, пропускали через С18 картридж и элюировали с помощью этанола, получая 17% (без поправки на разложение) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]^-метиланилина в течение 50 мин. В публикации, превращение незащищенного мезилатного предшественника (описано: 5 мг (11,48 мкмоль) незащищенного ме-зилатного предшественника (2-{2-[2-(4-{(Е)-2-[4-(метиламино)фенил]винил}фенокси)этокси]-этокси}этил 4-метансульфонат) в 0,5 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия. Неочищенный продукт разводили с помощью ацетонитри-ла/0,1 М формиата аммония (6/4) и очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали, разводили водой, пропускали через С18 картридж и элюировали с помощью этанола, получая 23% (без поправки на разложение) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина в течение 30 мин.
4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[Р-18]Фторэтокси)этокси]этокси)пиридин-3-ил)винил]-М-метиланилин
4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)пиридин-3-ил]-N-метиланилин.
a) S.R. Choi et al., The Journal of Nuclear Medicine, 50 (2009), 1887-1894. 1 мг предшественника (1,63 мкмоль) 2b (2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2-ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат) в 1 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью HCl и нейтрализовали с помощью NaOH. ДМСО и неорганические компоненты удаляли путем твердофазной экстракции на картридже SepPak light C18 (Waters). Неочищенный продукт очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта разводили водой и пропускали через SepPak light C18 картридж. Радиоактивный индикатор элюировали с помощью этанола. Выход для 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилина составил 10-30% (с поправкой на разложение).
b) WO 2010/078370.
1,5 мг (2,45 мкмоль) предшественника 2b (2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)-амино]фенил}винил]пиридин-2-ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат) в 2 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия. С промежуточного соединения снимали защиту с помощью HCl и разводили с помощью 1% раствора NaOH для нейтрализации. Смесь загружали на картридж с обращенной фазой. Картридж промывали водой (содержащей 5% мас./об. аскорбат натрия). Неочищенный продукт элюировали с помощью ацетонитрила в резервуар, содержащий воду +5% мас./об. аскорбат натрия и ВЭЖХ растворитель. После очистки путем полупрепаративной ВЭЖХ фракцию продукта собирали в резервуар, содержащий воду +0,5% мас./об. аскорбат натрия. Раствор пропускали через С18 картридж, картридж промывали водой (содержащей 0,5% мас./об. аскорбат натрия и конечный продукт элюировали с помощью этанола во флакон, содержащий 0,9% раствор хлорида натрия с 0,5% мас./об. аскорбатом натрия.
c) Y. Liu ]-ф., Nuclear Medicine and Biology, 37 (2010), 917-925.
1 мг (1,63 мкмоль) предшественника 2b (2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2-ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензол-сульфонат) в 1 мл ДМСО подвергали реакции с комплексом [F-Щфторид/криптофикс/карбонат калия (синтез с использованием [F-Щфторида тетрабутиламмония в ацетонитриле можно найти ниже). С промежуточного соединения снимали защиту с помощью HCl и разводили с помощью 1% раствора NaOH. Смесь загружали на картридж Oasis HLB. Картридж промывали водой, высушивали в потоке аргона и продукт элюировали с помощью этанола во флакон, содержащий солевой раствор. Несмотря на то, что радиохимические примеси удаляли посредством этой процедуры, нерадиоактивные побочные продукты, образовавшие вследствие гидролиза избытка предшественника, оставались в растворе конечного продукта.
Выход для 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилина составил 34% (без поправки на разложение) в течение 50 мин на уровне радиоактивности от 10-100 мКи (370-3700 МБк).
"GMP соответствующий" процесс приготовления 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]-этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилина описан в WO 2010078370 и С.-Н. Yao et al., Applied Radiation and Isotopes 68 (2010) 2293-2297. Введение радиоактивной метки 1,63 мкмоль-2,45 ммоль осуществляли в ДМСО и для предотвращения разложения 4-[(E)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилина, аскорбат натрия добавляли к ВЭЖХ растворителю (45% ацетонитрил, 55% 20 мМ ацетат аммония, содержащий 0,5% (мас./об.) аскор-бат натрия) и конечный лекарственный препарат (0,5% (мас./об.) аскорбат натрия). Процесс позволяет получить вплоть до 18,5 ГБк (25,4+7,7%, с поправкой на разложение) 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилина. Радиохимическая чистота составила 95,3+2,2%.
До настоящего времени, максимальная активность для производного F-18 меченого фторпегилиро-ванного (арил/гетерарил винил)фенил метиламина описана на уровне 18,5 ГБк (Yao et al.). Тем не менее, еще более высокие выходы должны поддерживаться для широкого применения и доступности радиоактивного индикатора. Способ согласно настоящему изобретению обеспечивает высокий выход F-18 индикатора в широком диапазоне радиоактивности в отличие от ранее описанных процессов, в которых масштабирование ограничено.
Несмотря на информацию из литературы, количеств меньше чем 7,5 мкмоль и недавно меньше чем 12 мкмоль предшественника достаточно или даже оптимально для приготовления F-18 меченых фторпе-гилированных производных (арил/гетерарил винил)фенил метиламина, было обнаружено существенное повышение радиохимического выхода при использовании более чем 10 мкмоль или даже более чем 12 мкмоль предшественника.
Максимальная активность для F-18 меченого фторпегилированного производного (арил/гетерарил винил)фенил метиламина повышалась до 130 ГБк и было обнаружено, что масштабирование является практически линейным (см. фиг. 2), свидетельствуя о том, что даже еще более высокие количества радиоактивного индикатора могут быть синтезированы с помощью способа согласно настоящему изобретению.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает Способ получения радиоактивно меченого соединения формулы I и его подходящих солей неорганической или органической кислоты, его гидратов, комплексов, сложных эфиров, амидов, сольватов и пролекарств и необязательно фармацевтически приемлемого носителя, разбавителя, адъюванта или наполнителя.
Способ включает следующие стадии:
радиоактивное фторирование соединения формулы II;
необязательно, отщепление защитной группы;
очистка соединения формулы I
который включает несколько стадий. Стадия 1.
Введение радиоактивной метки путем взаимодействия соединения формулы II с помощью F-18 фторирующего агента, получая соединение формулы I, если R = Н, или получая соединение формулы III, если R = PG, где используют 7,5-75,0 мкмоль соединения формулы II, и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей,
Стадия 2.
Необязательно, если R = PG, отщепление защитной группы PG, получая соединение формулы I. Стадия 3.
Очистка соединения формулы I, где n = 3; X выбирают из группы, включающей:
a) СН;
b) N.
В одном предпочтительном варианте осуществления X = СН. В другом предпочтительном варианте осуществления X = N. R выбирают из группы, включающей:
a) Н;
b) PG.
PG представляет собой "аминозащитную группу".
В предпочтительном варианте осуществления PG выбирают из группы, включающей:
a) Вос;
b) тритил;
c) 4-метокситритил.
В более предпочтительном варианте осуществления R представляет собой Н.
В другом более предпочтительном варианте осуществления R представляет собой Вос.
LG представляет собой уходящую группу.
В предпочтительном варианте осуществления LG выбирают из группы, включающей:
a) галоген;
b) сульфонилокси.
В предпочтительном варианте осуществления LG содержит 0-3 атома фтора. Галоген представляет собой хлор, бром или йод. Предпочтительно галоген представляет собой бром или хлор.
В предпочтительном варианте осуществления сульфонилокси выбирают из группы, включающей метансульфонилокси, п-толуолсульфонилокси, трифторметилсульфонилокси, 4-цианофенил-сульфонилокси, 4-бромфенилсульфонилокси, 4-нитрофенилсульфонилокси, 2-нитрофенил-сульфонилокси, 4-изопропил-фенилсульфонилокси, 2,4,6-триизопропил-фенилсульфонилокси, 2,4,6-триметилфенилсульфонилокси, 4-трет-бутил-фенилсульфонилокси, 4-адамантилфенилсульфонил-окси и 4-метоксифенилсульфонилокси.
В более предпочтительном варианте осуществления сульфонилокси выбирают из группы, включающей:
a) метансульфонилокси;
b) п-толуолсульфонилокси;
c) (4-нитрофенил)сульфонилокси;
d) (4-бромфенил)сульфонилокси.
В еще более предпочтительном варианте осуществления LG представляет собой метансульфони-локси. В другом еще более предпочтительном варианте осуществления LG представляет собой п-толуолсульфонилокси.
2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]-этил метансульфонат.
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой
2-[2-(2-{4-[(Е)-2-{4-[(трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]фенокси}этокси)этокси]-этил 4-метилбензолсульфонат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой
2-{2-[2-(4-{(Е)-2-[4-(Метиламино)фенил]винил}фенокси)этокси]этокси}этил сульфонат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой
4-метилбензол-
2-{2-[2-(4-{(Е)-2-[4-(Метиламино)фенил]винил}фенокси)этокси]этокси}этил сульфонат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой
4-метилбензол-
2-{2-[2-({5-[(Е)-2-{4-[(трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино]фенил}винил]пиридин-2-ил}окси)этокси]этокси}этил 4-метилбензолсульфонат.
Стадия 1 включает прямую реакцию введения [F-Щфтор метки в соединения формулы II для получения соединения формулы I (если R = Н) или соединение формулы III (если R = PG).
Способ введения радиоактивной метки включает стадию взаимодействия соединения формулы II с помощью F-18 фторирующего агента для получения соединения формулы III. В предпочтительном варианте осуществления производное [F-Щфторида представляет собой 4,7,13,16,21,24-гексаокса-1,10-диазабицикло[8,8,8]-гексакозан K[F-18]F (краун-эфирную соль криптофикс K[F-18]F), K[F-18]F, H[F-18]F, KH[F-18]F2, Cs[F-18]F, Na[F-18]F или тетраалкиламмониевую соль [F-18]F (например, фторид [F-18]тетрабутиламмония). Более предпочтительно фторирующий агент представляет собой K[F-18]F, H[F-18]F, фторид [F-18]тетрабутиламмония, Cs[F-18]F или KH[F-18]F2, более предпочтительно K[F-18], Cs[F-18]F или фторид [F-18]тетрабутиламмония. Еще более предпочтительный F-18 фторирующий агент представляет собой криптофикс/калийр-Щфторид, предпочтительно полученный из [F-Щфторида, криптофикса и карбоната калия.
Реакции радиоактивного фторирования осуществляют в ацетонитриле, диметилсульфоксиде или диметилформамиде или их смеси. Но также можно использовать другие растворители, которые хорошо известны специалисту в данной области техники. Вода и/или спирты могут быть задействованы в реакцию в качестве со-растворителя. Реакции радиоактивного фторирования осуществляют в течение менее чем 60 мин. Предпочтительное время реакций составляет менее чем 30 мин. Дальнейшее предпочтительное время реакций составляет менее чем 15 мин. Эти и другие условия для такого радиоактивного фторирования известны экспертам (Coenen, Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions, (2006), в: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L, (ред.), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, p. 15-50).
Радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей. В предпочтительном варианте осуществления Радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в ацетонитриле или в смеси ацетонитрила и сорас-творителей, где процент ацетонитрила составляет по меньшей мере 50%, более предпочтительно по меньшей мере 70%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90%.
В изобретении используют 7,5-75,0 мкмоль, предпочтительно 10-50 мкмоль, более предпочтительно 10-30 мкмоль и еще более предпочтительно 12-25 мкмоль и еще более предпочтительно 13-25 мкмоль соединения формулы II на стадии 1.
В другом варианте осуществления более чем 7,5 мкмоль, предпочтительно более чем 10 мкмоль, и более предпочтительно более чем 12 мкмоль и еще более предпочтительно более чем 13 мкмоль, но менее чем 75 мкмоль соединения формулы II используют на стадии 1.
В другом варианте осуществления более чем 5 мг, предпочтительно более чем 6 мг и более предпочтительно более чем 7 мг соединения формулы II используют на стадии 1.
В другом варианте осуществления 7 мг соединения формулы II используют на стадии 1.
В другом варианте осуществления 8 мг соединения формулы II используют на стадии 1.
Необязательно, если R = PG, Стадия 2 включает снятие защиты с соединения формулы III, получая соединение формулы I. Условия реакции являются известными или очевидными для специалиста в данной области техники, которые выбирают, но не ограничиваясь только ими, из условий, описанных в пособии Greene and Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, третье издание, страницы 494-653, включенном в настоящую заявку в качестве ссылки. Предпочтительные условия реакции включают добавление кислоты и перемешивание при 0-180°С; добавление основания и нагревание при 0-180°С; или их комбинацию.
Предпочтительно стадию 1 и стадию 2 осуществляют в одном реакционном сосуде. Стадия 3 включает очистку соединения формулы I.
Способы очистки радиоактивных индикаторов хорошо известны специалисту в данной области техники и включают ВЭЖХ методы, а также методы твердофазной экстракции.
В одном варианте осуществления смесь неочищенного продукта очищают с помощью ВЭЖХ и собранную фракцию продукта дополнительно пропускают через твердофазный картридж для удаления ВЭЖХ растворителя (такого как ацетонитрил) и для обеспечения соединения формулы I в инъецируемом лекарственном препарате.
В другом варианте осуществления смесь неочищенного продукта очищают с помощью ВЭЖХ, где,
смесь ВЭЖХ растворителей (например, смеси этанола и водных буферов) могут быть частью инъецируемого лекарственного препарата соединения формулы I. Собранная фракция продукта может быть разведена или смешана с другими частями лекарственного препарата.
В другом варианте осуществления смесь неочищенного продукта очищают с помощью твердофазных картриджей.
В предпочтительном варианте осуществления способ приготовления соединения формулы I осуществляют путем использования модуля (обзор: Krasikowa, Synthesis Modules and Automation in F-18 labeling (2006), в: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L, (ред.), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, p. 289-316), который предоставляет возможность автоматизированного синтеза. Более предпочтительно способ осуществляют путем использования модуля в одном сосуде. Еще более предпочтительно способ осуществляют на общеизвестных модулях некассетного типа (например, Ecker &Ziegler Modular-Lab, GE Tracerlab FX, Raytest SynChrom) и модулях кассетного типа (например, GE Tracerlab MX, GE Fastlab, IBA Synthera, Eckert &Ziegler Modular-Lab PharmTracer), необязательно, дополнительное оборудование, такое как ВЭЖХ или диспергирующие устройства, присоединены к указанным модулям.
Настоящее изобретение относится к полностью автоматизированному и/или дистанционно управляемому способу получения соединения формулы I, где соединения формулы I, II и III и стадии 1, 2 и 3 описаны выше.
В предпочтительном варианте осуществления этот способ представляет собой полностью автоматизированный процесс, соответствующий GMP принципам, который обеспечивает лекарственный препарат формулы I для применения для введения (инъекции) человеку.
Определения
В контексте настоящего изобретения предпочтительные соли представляют собой фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с изобретением. Изобретение также включает соли, которые в связи с их частью не пригодны для фармацевтических применений, но которые могут применяться, например, для выделения или очистки соединений в соответствии с изобретением.
Фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с изобретением включают соли присоединения кислот минеральных кислот, карбоновых кислот и сульфоновых кислот, например соли соляной кислоты, бромисто-водородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоно-вой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталин дисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеи-новой кислоты и бензойной кислоты. Фармацевтически приемлемые соли соединений в соответствии с изобретением также включают соли общепринятых оснований, такие как, в качестве примера и предпочтения, соли щелочных металлов (например, соли натрия и соли калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и соли магния) и соли аммония, имеющие происхождение из аммиака или органических аминов, имеющих от 1 до 16 атомов углерода, такие как, в качестве примера и предпочтения, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтано-ламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, прокаин, дибензиламин, N метилморфолин, аргинин, лизин, этилендиамин и N метилпиперидин. Термин галоген или гало относится к Cl, Br, F или I. Термин "сульфонилокси" относится к -O-S(O)2-Q, где Q представляет собой необязательно замещенный арил или необязательно замещенный алкил.
Термин "алкил", как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, относится к C1-C10 неразветвленной или разветвленной алкильной группе, такой как, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гептил, гексил, децил или адамантил. Предпочтительно алкил представляет собой C1-C6 неразветвленный или разветвленный алкил или C7-C10 неразветвленный или разветвленный алкил. Низший алкил представляет собой C1 -C6 неразветвленный или разветвленный алкил.
Термин "арил", как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, относится к моноциклическим или бициклическим ароматическим группам, содержащим от 6 до 10 углеродов в кольцевой части, таким как фенил, нафтил или тетрагидронафтил.
Всякий раз, когда используется термин "замещенный", это обозначает, что указание о том, что один или несколько водородов на атоме, указанном в выражении с использованием "замещенный", заменен/заменены одним или несколькими компонентами из группы, включающей галоген, нитро, циано, трифторметил, алкил и О-алкил, при условии, что не превышается нормальная валентность соответствующего атома, и что замещение приводит к химически стабильному соединению, т.е. соединению, которое достаточно устойчиво для перенесения выделения до пригодной степени чистоты из реакционной смеси.
Термин "аминозащитная группа", как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, известен или очевиден для специалиста в данной области техники, который выбирают из, но не ограничиваясь только ими, класса защитных групп, а именно карбаматы, амиды, имиды, N-алкил амины, N-арил амины, имины, енамины, бораты, N-P защитные группы, N-сульфенил,
N-сульфонил и N-силил, и которые выбирают из, но не ограничиваясь только ими, групп, которые описаны в пособии Greene and Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, третье издание, страницы 494-653, включенном в настоящую заявку в качестве ссылки. Амино-защитная группа предпочтительно представляет собой карбобензилокси (Cbz), п-метоксибензил карбонил (Moz или MeOZ), трет-бутилоксикарбонил (ВОС), 9-флуоренилметилоксикарбонил (FMOC), бензил (Bn), п-метоксибензил (РМВ), 3,4-диметоксибензил (DMPM), п-метоксифенил (РМР) или защищенная аминогруппа представляет собой 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2Н-изоиндол-2-ил (фталимидо) или азидо группу.
Термин "уходящая группа", как используется в настоящем описании самостоятельно или в качестве части другой группы, известен или очевиден для специалиста в данной области техники, и обозначает, что атом или группу атомов отсоединяют от химического вещества с помощью нуклеофильного агента. Примеры представлены, например, в Synthesis (1982), стр. 85-125, табл. 2 (стр. 86; (последнюю запись этой табл. 2 необходимо откорректировать: "n-C4F9S(O)2-O-нонафлат" вместо "n-C4H9S(O)2-O-нонафлат"), Carey and Sundberg, Organische Synthese, (1995), стр. 279-281, табл. 5.8; или Netscher, Recent Res. Dev. Org. Chem., 2003, 7, 71-83, схемы 1, 2, 10 и 15 и другие). (Coenen, Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions, (2006), в: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L, (ред.), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, стр. 15-50, а именно: схема 4 стр. 25, схема 5, стр. 28, табл. 4, стр. 30, фиг. 7, стр. 33).
Если специально не указано иначе, то при ссылке на соединения формулы согласно настоящему изобретению как таковые, а также на любую их фармацевтическую композицию, настоящее изобретение включает все гидраты, соли и комплексы.
Термин "F-18" обозначает изотоп фтора 18F. Термин "F-19" обозначает изотоп фтора 19F.
Примеры
Определение радиохимической и химической чистоты
Радиохимические и химические чистоты 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}-фенил)винил]^-метиланилина и 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина определяли с помощью аналитической ВЭЖХ (колонка: Atlantis Т3; 150x4,6 мм, 3 мкм, Waters; растворитель А: 5 мМ K2HPO4 pH 2,2; растворитель В: ацетонитрил; поток: 2 мл/мин, градиент: 0:00 мин 40% В, 0:00-05:50 мин 40-90% В, 05:50-05:60 мин 90-40% В, 05:60-09:00 мин 40% В).
Время удерживания 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-винил]-N-метиланилина: 3,50-3,95 мин, в зависимости от ВЭЖХ системы, используемой для контроля качества. В связи с различным оборудованием (например, разливания по пробиркам) наблюдали отличия по времени удерживания между различными ВЭЖХ системами. Идентичность 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]^-метиланилина доказывали путем совместной инъекции с нерадиоактивным эталоном 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-19]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилином.
Время удерживания 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]-N-метиланилина: 3,47 мин. Идентичность 4-[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-р-18]фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)винил]^-метиланилина путем совместной элюции с нерадиоактивным эталоном -[(Е)-2-(6-{2-[2-(2-[F-19] фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3 -ил)винил] -N-метиланилином.
Пример 1. Сравнение радиоактивного синтеза 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-
18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]^-метиланилина на GE Tracerlab FXN, используя 3,5 мг относительно 7 мг мезилатного предшественника 2а
4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилин. Синтез 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина осуществляли на Tracerlab FXN синтезатор (фиг. 1).
?н3
Установки синтезатора и результаты обобщены в табл. 1. [F-ЩФторид захватывали на QMA картридж (С1, фиг. 1). Активность элюировали с помощью смеси карбонат калия/криптофикс (из "V1") в реактор. Растворитель удаляли, в это же время нагревали под мягким потоком азота и вакуумом. Высушивание повторяли после добавления ацетонитрила (из "V2"). Раствор 2а (из "V3") добавляли к высушенному остатку и смесь нагревали в течение 8 мин при 120°С. После охлаждения до 60°С добавляли смесь HCl/ацетонитрил (из "V4") и раствор нагревали в течение 4 мин при 110°С. Неочищенный продукт переносили в "Микс-флакон" и разводили смесью гидроксид натрия/формиат аммония из "V6". Неочищенный продукт очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали в "колбу", содержащую 30 мл воды, раствор пропускали через tC18 plus картридж (С3). Картридж промывали 20% этанолом в воде из "V9" и 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилин элюировали с помощью 1,5 мл этанола во флакон с продуктом, содержащим 8,5 мл основы Лекарственного препарата (состоящей из фосфатного буфера, PEG400 и аскорбиновой кислоты).
Таблица 1
Установки Tracerlab FXN для синтеза 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-
N-метиланилина
3,5 мг предшественника
7,0 мг предшественника
Флакон V1
1,5 мг карбоната калия, 5 мг криптофикса в 0,075 мл воды и 1,425 мл ацетонитрила
Флакон V2
1 мл ацетонитрила для высушивания
Флакон V3
3,5 мг {6,53 мкмоль) предшественника 2а в 1 мл ацетонитрила
7 мг (13,1 мкмоль) предшественника 2а в 1 мл ацетонитрила
Флакон V4
0,5 мл 2М HCI и 0,5 мл ацетонитрила
Флакон V6
1 мл 1М NaOH и 2 мл формиата аммония (0,1 М)
Флакон V8
1,5 мл этанола
Флакон V9
5 мл (20% этанол в воде) + 10 мг аскорбиновой кислоты
Картридж С1
QMA light (Waters)
Картридж СЗ
Ю18 plus (Waters)
Колба
30 мл воды + 60 мг аскорбиновой кислоты
ВЭЖХ колонка
Zorbax Bonus RP, 9,4*250 мм; 5um; (Agilent)
ВЭЖХ растворитель
55% ацетонитрил, 45% формиат аммония (0,1 М)
ВЭЖХ поток
4 мл/мин
Исходная активность[F-18]фторида
54000 МБк
36600 МБк
Активность продукта
12600 МБк
18000 МБк
Радиохимический выход
23% (без поправки на разложение)
49% (без поправки на разложение)
Существенное повышение радиохимического выхода для 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-р-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-^метиланилина было обнаружено после повышения количества предшественника от 3,5 до 7,0 мг.
Пример 2. Сравнение радиоактивного синтеза 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-
18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-^метиланилина на Eckert & Ziegler ModularLab, используя 4,0 мг относительно 7,4 мг мезилатного предшественника с использованием растворителя трет-амиловый спирт для фторирования
Синтез 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина осуществляли на Eckert & Ziegler ModularLab синтезаторе, используя трет-амиловый спирт в качестве растворителя для фторирования. Установки синтезатора и результаты обобщены в табл. 2.
[F-ЩФторид захватывали на QMA картридж (С1). Активность элюировали с помощью смеси криптофикса (из "V1") в реактор. Растворитель удаляли, в это же время нагревали под мягким потоком азота и вакуумом. Высушивание повторяли после добавления ацетонитрила (из "V2"). К высушенному остатку добавляли раствор предшественника (из "V3") и смесь нагревали в течение 12 мин при 120°С.
Растворитель для фторирования удаляли в вакууме в течение 6 мин при 120°С. После охлаждения до 40°С добавляли смесь HCl/ацетонитрил (из "V4") и раствор нагревали в течение 8 мин при 120°С.
Смесь неочищенного продукта разводили с помощью 1,5 мл 2 М NaOH и 0,3 мл формиата аммония (1М) из "V5" и после этого непосредственно переносили в ВЭЖХ флакон ("Микс-флакон"). Для избежания осаждения и разделения фаз смеси вследствие трет-амилового спирта, "Микс-флакон" содержал предварительно 1 мл ацетонитрила и 1 мл этанола.
Смесь очищали путем полупрепаративной ВЭЖХ. Фракцию продукта собирали в "колбу", содержащую 16 мл воды. Раствор пропускали через a tC18 environmental cartridge (C2). Картридж промывали 20% этанолом в воде из "V6" и 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилин элюировали с помощью 1,5 мл этанола из "V7" во флакон с продуктом, содержащим 8,5 мл основы Лекарственного препарата (состоящей из фосфатного буфера, PEG400 и аскорбиновой кислоты).
Более высокий радиохимический выход 38% (без поправки на разложение) получали при использовании 7,4 мг предшественника по сравнению с процессом с использованием 4,0 мг предшественника, что обеспечивает 15% (без поправки на разложение) 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18] фторэтокси)этокси] этокси} фенил)винил] -N-метиланилина.
Таблица 2
4,0 мг предшественника
7,4 мг предшественника
Флакон V1
22 мг криптофикса 700 мкл метанола 10 мкл трет-бутил карбоната аммония 40% 100 мкл мезилата калия 0,2М
Флакон V2
100 мкл ацетонитрила для высушивания
Флакон V3
4,0 мг предшественника в 100 мкл ацетонитрила и 1,0 мл трет-амилового спирта
7,4 мг предшественника в 140 мкл ацетонитрила и 1,0 мл трет-амилового спирта
Флакон V4
2 мл HCI 1,5 М 1 мл ацетонитрила 30 мг аскорбата натрия
Флакон V5
1,5 мл NaOH 2,0 М 300 мкл формиата аммония 1 М 500 мкл этанола
Флакон V6
8 мл этанола 20% 80 мг аскорбата натрия
Флакон V7
1,5 мл этанола
Картридж С1
QMA light (waters), кондиционированный с мезилатом калия 0,2М
Картридж С2
tC18 environmental (Waters)
Микс-флакон
1 мл ацетонитрила 1 мл этанола
Колба
16 мл воды 160 мг аскорбата натрия
ВЭЖХ колонка
Gemini С18, 10*250 мм, 5pm, Phenomenex
ВЭЖХ растворитель
60% ацетонитрил, 40% фосфатный буфер 50 мм рН 4
ВЭЖХ поток
3 мл/мин.
Исходная активность [Р-18]фторида
55,0 ГБк
30,4 ГБк
Активность продукта
8,4 ГБк
11,6 ГБк
Product purity (RCP)
97%
99%
Радиохи мический выход
15% (без поправки на разложение)
38% (без поправки на разложение)
Существенное повышение радиохимического выхода для 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]^-метиланилина было обнаружено после повышения количества предшественника от 4,0 до 7,4 мг.
Пример 3. Синтез 4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилина on Tracerlab FXN
4-[(Е)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]-N-метиланилин.
Синтез осуществляли на Tracerlab FXN синтезаторе. [F-18]Фторид (6,85 ГБк) захватывали на QMA картридж. Активность элюировали с помощью смеси карбонат калия/криптофикс/ацетонитрил/вода в реактор. Растворитель удаляли, в это же время нагревали под мягким потоком азота и вакуумом. Высушивание повторяли после добавления ацетонитрила. Раствор 8 мг 2с в 1,5 мл ацетонитрила добавляли к высушенному остатку и смесь нагревали в течение 10 мин при 120°С. После охлаждения до 60°С неочищенный продукт разводили с помощью 4 мл ВЭЖХ элюент и переносили на полупрепаративную ВЭЖХ колонку (Synergy Hydro-RP, 250x10 мм, Phenomenex). Смесь 60% этанола и 40% аскорбатного буфера (5 г/л аскорбата натрия и 50 мг/л аскорбиновой кислоты, pH 7,0) продували через колонку со скоростью 3 мл/мин. Фракцию продукта при и 12 мин. Непосредственно собирали в течение 100 с и смешивали с 15 мл основы Лекарственного препарата (фосфатный буфер, аскорбиновая кислота, PEG400).
2,54 ГБк (37% без поправки на разложение) получали через 53 мин суммарного времени синтеза. Радиохимическая чистота (определенная с помощью ВЭЖХ, tR = 3,78 мин) составляла > 99%.
Пример 4. Масштабирование синтеза 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]-этокси}фенил)винил]^-метиланилина Масштабирование синтеза 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)винил]^-метиланилина осуществляли на двух различных синтезаторах (Eckert & о Ziegler модульной лаборатории и GE tracerlab MX) путем взаимодействия 8 мг предшественника 2а в ацетонитриле при 100-120°С в течение 10 мин с комплексом карбонат ка-лия/криптофикс/р-Щфторид. N-Вос защитную группу удаляли путем нагревания с HCl (1,5-2 М). Смесь неочищенного продукта, полученную после снятия защиты, нейтрализовали с помощью смеси 2М NaOH и 0,1 М формиат аммония, разводили с помощью ацетонитрила и этанола и инъецировали в полупрепаративную ВЭЖХ (колонка: например, Gemini C18, 10x250 мм, 5 мкм, Phenomenex или Synergi Hydro-RP, 250x10 мм, 10 ЦГП 80A, Phenomenex или Synergi Hydro-RP, 250x10 мм, 4 мкм 80A, Phenomenex; растворитель: 60-70% этанол, 40-30% аскорбатный буфер и 5 мг/мл аскорбата; поток 3, или 4, или 6 мл/мин). Фракции продукта непосредственно собирали во флаконы, содержащие "основу лекарственного препарата" (содержащий PEG400, фосфатный буфер и аскорбиновую кислоту), получая 10-24 мл конечного лекарственного препарата. Время снижения пикового значения корректировали с помощью программного обеспечения для получения лекарственного препарата, содержащего 15% EtOH.
Результаты (83 экспериментов) обобщены на фиг. 2, где каждая точка представляет собой результаты одного отдельного эксперимента. Радиохимические чистоты радиоактивного индикатора определяли с помощью ВЭЖХ и было обнаружено, что они составляют 98,9+1,6%. Почти линейные прямые на графике, указывающие тенденции, свидетельствуют от том, что аналогичные результаты (радиохимический выход 37,1+5,7% без поправки на разложение) получали в пределах широкого диапазона радиоактивности (активность продукта в интервале от 1,3 до 130,8 ГБк) и что еще более высокие активности продукта получали с помощью способа согласно настоящему изобретению.
Описание фигур
Фиг. 1 - установки Tracerlab FXN (адаптированные с помощью программного обеспечения tracerlab). Фиг. 2 - масштабирование синтеза 4-[(E)-2-(4-{2-[2-(2-[F-18]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-винил] -N-метиланилина.
где n = 3;
X выбирают из группы, включающей:
a) СН;
b) N;
который включает следующие стадии:
стадия 1: введение радиоактивной метки в соединение формулы II с помощью F-18 фторирующего агента, получая соединение формулы I, если R = Н, или получая соединение формулы III, если R = PG, где используют 7,5-75,0 мкмоль соединения формулы II и где радиоактивное фторирование соединения формулы II осуществляют в непротонном растворителе или в смеси непротонных растворителей
где R выбирают из группы, включающей:
a) Н;
b) PG;
PG представляет собой "аминозащитную группу"; LG представляет собой уходящую группу;
стадия 2: если R = PG, отщепление защитной группы PG, получая соединение формулы I; стадия 3: очистка соединения формулы I.
2. Способ в соответствии с п.1, где PG выбирают из группы, включающей:
a) Вос;
b) тритил;
c) 4-метокситритил.
3. Способ в соответствии с п.1 или 2, где LG выбирают из группы, включающей:
a) галоген;
b) сульфонилокси;
галоген представляет собой хлор, бром или йод.
4. Способ в соответствии с п.3, где сульфонилокси выбирают из группы, включающей:
a) метансульфонилокси;
b) п-толуолсульфонилокси;
c) (4-нитрофенил)сульфонилокси;
d) (4-бромфенил)сульфонилокси.
5. Способ в соответствии с п.1, где n = 3 и X = СН.
6. Способ в соответствии с п.1, где n = 3, X = СН, R = Вос и LG = метансульфонилокси.
7. Способ в соответствии с пп.1-6, где используют 10-50 мкмоль соединения формулы II.
8. Способ в соответствии с п.7, где используют 10-30 мкмоль соединения формулы II.
9. Способ в соответствии с пп.1-8, где способ осуществляют в виде полностью автоматизированного процесса.
5.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
025823
025823
- 1 -
- 1 -
025823
025823
- 1 -
- 1 -
025823
025823
- 1 -
- 1 -
025823
025823
- 2 -
- 1 -
025823
025823
- 4 -
- 3 -
025823
025823
- 5 -
- 4 -
025823
025823
- 7 -
- 7 -
025823
025823
- 15 -
- 15 -
|
