|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Соединение, выбранное из группы, состоящей из          или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из   или его фармацевтически приемлемая соль. 4. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 5. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 8. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 9. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 10. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 11. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 12. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 13. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 14. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 15. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 16. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 17. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль. 18. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из  или его фармацевтически приемлемая соль.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Соединение, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 2. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 3. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 4. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 5. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 7. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 8. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 9. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 10. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 11. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 12. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 13. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 14. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 15. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 16. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 17. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль. 18. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль.
Евразийское 025794 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.01.30
(21) Номер заявки 201490132
(22) Дата подачи заявки 2008.06.26
(51) Int. Cl.
C07D 401/12 (2006.01) C07D 401/14 (2006.01) C07D 403/12 (2006.01) C07D 403/14 (2006.01) C07D 417/14 (2006.01) C07D 487/04 (2006.01) A61K 31/401 (2006.01) A61K31/4025 (2006.01)
A61K 31/407 (2006.01)
(54) ПРОТИВОВИРУСНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
(31) 60/937,752; 60/959,771; 61/037,988
(32) 2007.06.29; 2007.07.16; 2008.03.19
(33) US
(43) 2014.06.30
(62) 200971078; 2008.06.26
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ДЖИЛИД САЙЭНС, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Чоу Эзоп, Кларк Майкл О'Нэйл Ханрахан, Ким Чанг Ю., Линк Джон О., Пянь Хюн-цзюн, Шенг Сяонин С., Ву Кяойин (US)
(74) Представитель:
Нилова М.И. (RU)
(56) WO-A-2007044933 WO-A-2007015824 WO-A-2007001406 WO-A-2006020276 WO-A-2005095403 WO-A-2005037214 WO-A-2004094452
WO-A-2004032827
WO-A-0059929 WO-A-0009543 WO-A-2007008657 WO-A-2005070955
WO-A-2004093798
(57) Изобретение относится к противовирусным соединениям, к композициям, содержащим такие соединения, и к способам лечения, которые включают введение указанных соединений, а также к способам получения таких соединений и промежуточным соединениям, полезным для их получения.
Область изобретения
Настоящее изобретение в целом относится к соединениям, обладающим ингибирующей активностью в отношении вируса гепатита C.
Уровень техники
Установлено, что гепатит C представляет собой хроническое вирусное заболевание печени, которое характеризуется поражением печени. И хотя лекарства для направленной доставки к печени широко используются и уже показали свою эффективность, полезность этих лекарств ограничена их токсичностью и другими побочными эффектами. Ингибиторы ВГС являются полезными для ограничения заражения вирусом гепатита C (ВГС) и развития ВГС-инфекции, а также в диагностических исследованиях на заражение ВГС (вирусом гепатита C).
Существует необходимость в новых терапевтических агентах для лечения ВГС.
Краткое изложение сущности изобретения
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из группы, состоящей из
или фармацевтически приемлемую соль
Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение обеспечивает соединение, обладающее улучшенными ингибирующими или фармакокинетическими свойствами, включая повышенную активность, направленную против развития вирусной устойчивости, улучшенную пероральную биодоступность, более высокую эффективность или пролонгированное эффективное время полужизни in vivo. Некоторые соединения согласно настоящему изобретению вызывают меньше побочных эффектов, требуют менее сложных режимов дозирования или являться перорально активными.
Подробное описание изобретения
Далее приведено подробное описание изобретения со ссылкой на конкретные варианты реализации настоящего изобретения, примеры которых проиллюстрированы прилагаемыми структурами и формулами. Несмотря на то что в данном описании перечислены конкретные варианты реализации изобретения, подразумевается, что настоящее изобретение не ограничено приведенными вариантами реализации. Напротив, подразумевается, что настоящее изобретение включает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения, определенный указанными вариантами реализации.
Соединения согласно настоящему изобретению
Соединения согласно настоящему изобретению не включают ранее известные соединения. Однако применение соединений, о противовирусных свойствах которых не было известно прежде, для противовирусных целей (например, для достижения противовирусного эффекта при введении животному), входит в объем настоящего изобретения. Применительно к США, соединения или композиции, предложенные в данном изобретении, не включают соединения, которые могут попасть под действие 35 USC §102 или попадают под действие 35 USC §103.
Аккумуляция в клетках.
Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение обеспечивает соединения, способные аккумулироваться в гепатоцитах человека. С физиологической точки зрения гепатоциты являются ключевым компонентом механизма защиты от инфекции. Гепатоциты можно выделить из обычных здоровых доноров, выделенные клетки промывают (например, фосфатно-солевым буфером) и хранят в среде для замораживания. Гепатоциты можно культивировать в многолуночных планшетах. В различное время из культуры отбирают пробы, которые можно использовать для анализа либо супернатанта, либо клеток (Smith R. et al. (2003) Blood 102(7):2532-2540). Соединения согласно данному варианту реализации могут дополнительно содержать фосфонат или фосфонатное пролекарство. Чаще всего указанный
фосфонат или фосфонатное пролекарство может иметь структуру R1, такую, как определено в данном описании.
Стереоизомеры.
Соединения согласно изобретению могут содержать хиральные центры, например хиральные атомы углерода или фосфора. Соответственно соединения согласно изобретению включают рацемические смеси всех стереоизомеров, включая энантиомеры, диастереоизомеры и атропоизомеры. Кроме того, соединения согласно изобретению включают обогащенные или разделенные оптические изомеры, соответствующие любым или всем асимметричным хиральным атомам. Другими словами, если на изображении присутствуют хиральные центры, данное соединение включает как хиральные изомеры, так и их рацемические смеси. Рацемические и диастереоизомерные смеси, а также выделенные или синтезированные отдельные оптические изомеры, по существу, не содержащие своих энантиомерных или диастереоизо-мерных антиподов, включены в объем настоящего изобретения. Рацемические смеси разделяют на отдельные, по существу, оптически чистые изомеры с использованием хорошо известных методик, таких как, например, разделение диастереоизомерных солей, образованных с оптически активными адъюнктами, например кислотами или основаниями, с последующим превращением в оптически активные вещества. В большинстве случаев желаемый оптический изомер синтезируют с использованием стереоспеци-фических реакций, в которых в качестве желаемого исходного вещества используют его подходящий стереоизомер.
В некоторых случаях соединения согласно настоящему изобретению могут существовать также в виде таутомерных изомеров. Хотя может быть изображена только одна делокализованная резонансная структура, все такие формы включены в объем изобретения. Например, могут существовать ен-аминовые таутомеры пуриновой, пиримидиновой, имидазольной, гуанидиновой, амидиновой и тетразольной систем, и все их возможные таутомерные формы включены в объем изобретения.
Соли и гидраты.
Примеры физиологически приемлемых солей соединений согласно настоящему изобретению включают соли, образованные с подходящим основанием, таким как щелочной металл (например, натрий), щелочноземельный металл (например, магний), аммоний и NX4+ (где X представляет собой C1-C4 алкил). Физиологически приемлемые соли, образованные с участием атома водорода или аминогруппы включают соли органических карбоновых кислот, таких как уксусная, бензойная, молочная, фумаровая, винная, малеиновая, малоновая, яблочная, изэтионовая, лактобионовая и янтарная кислоты; органических суль-фоновых кислот, таких как метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая и пара-толуолсульфоновая кислоты; и неорганических кислот, таких как соляная, серная, фосфорная и сульфа-миновая кислоты. Физиологически приемлемые соли соединения с гидроксильной группой включают анион указанного соединения в комбинации с подходящим катионом, таким как Na+ и NX4+ (где X независимо выбран из H или C1-C4 алкильной группы).
Если речь идет о терапевтическом применении, соли соединений согласно настоящему изобретению, используемые в качестве активных ингредиентов, обычно являются физиологически приемлемыми, то есть представляют собой соли, образованные с физиологически приемлемой кислотой или основанием. Однако соли кислот или оснований, которые не являются физиологически приемлемыми, также могут найти применение, например, при получении или очистке физиологически приемлемого соединения. Все соли, независимо от того, происходят они или нет от физиологически приемлемой кислоты или основания, включены в объем настоящего изобретения.
Соли металлов обычно получают в результате взаимодействия гидроксида металла с соединением согласно настоящему изобретению. Примерами солей металлов, которые получают таким образом, являются соли, содержащие Li+, Na+ и K+. Менее растворимые соли металлов можно осаждать из раствора более растворимой соли путем добавления подходящего металл-содержащего соединения.
Кроме того, соли могут быть образованы путем присоединения кислоты (для этого могут быть использованы некоторые органические и неорганические кислоты, например HCl, HBr, H2SO4, H3PO4 или органические сульфоновые кислоты) к основным центрам, обычно аминам, или к кислотным группам. В заключение следует отметить, что композиции, приведенные в данном описании, включают соединения согласно настоящему изобретению в их неионизированной, а также в цвиттер-ионной форме, и их комбинации со стехиометрическим количеством воды, как в гидратах.
В объем настоящего изобретения также включены соли исходных соединений с одной или более аминокислотой. Для этих целей подходят любые природные или неприродные аминокислоты, особенно встречающиеся в природе аминокислоты, найденные в белках. Данные аминокислоты обычно содержит боковую цепь с основной или кислотной группой, например лизин, аргинин или глутаминовая кислота, или с нейтральной группой, например глицин, серии, треонин, аланин, изолейцин или лейцин.
Способы ингибирования ВГС.
Согласно другому аспекту изобретение относится к способам ингибирования активности ВГС, включающим стадию обработки образца, предположительно содержащего ВГС, соединением или композицией согласно настоящему изобретению.
Соединения согласно настоящему изобретению можно использовать в качестве ингибиторов ВГС, в
качестве промежуточных соединений при получении таких ингибиторов или иметь другое применение, как описано ниже. Данные ингибиторы обычно связываются с сайтами на поверхности или в полости печени. Соединения, связывающиеся в печени, могут отличаться степенью обратимости этого связывания. Соединения, связывающиеся, по существу, необратимо, являются идеальными кандидатами для применения в способах согласно настоящему изобретению. Соединения, связывающиеся, по существу, необратимо, содержащие метку, являются полезными в качестве зондов при регистрации ВГС. Соответственно изобретение относится к способам регистрации NS3 в образце, предположительно содержащем ВГС, включающим стадии обработки образца, предположительно содержащего ВГС, композицией, содержащей соединение согласно настоящему изобретению, связанное с меткой, и определения влияния образца на активность метки. Подходящие метки хорошо известны в области диагностики и включают стабильные свободные радикалы, фторофоры, радиоизотопы, ферменты, хемилюминесцентные группы и хромогены. Соединения, приведенные в данном описании, метят стандартным образом, с использованием функциональных групп, таких как гидроксил или амино. Согласно одному из вариантов реализации настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы (I), которое содержит одну или более регистрируемую метку или которое связано или соединено с такой меткой.
В контексте данного изобретения образцы, предположительно содержащие ВГС, включают вещества природного и искусственного происхождения, такие как живые организмы; ткани или клеточные культуры; биологические образцы, такие как образцы биологических веществ (крови, сыворотки, мочи, спинномозговой жидкости, слез, мокроты, слюны, образцы тканей и тому подобные); лабораторные образцы; образцы пищевых продуктов, воды или воздуха; образцы биопродуктов, такие как экстракты клеток, в особенности рекомбинантных клеток, синтезирующих желаемый гликопротеин; и тому подобное. Обычно предполагается, что образец содержит ВГС. Образцы могут находиться в любой среде, включая воду и смеси органический растворитель/вода. Образцы включают живые организмы, такие как человек, и вещества искусственного происхождения, такие как клеточные культуры.
Стадия обработки согласно настоящему изобретению включает добавление соединения согласно изобретению к образцу или включает добавление предшественника композиции к образцу. Стадия добавления включает любой путь введения, такой как описано ниже.
При желании активность ВГС после применения соединения может быть определена с помощью любой методики, включая методики примой и непрямой регистрации активности ВГС. Могут быть использованы количественные, качественные и полуколичественные методики определения активности ВГС. Обычно используют одну из описанных ниже методик скрининга, однако любые другие методики, такие как определение физиологических характеристик живого организма, также пригодны.
Многие организмы заражены ВГС. Соединения согласно настоящему изобретению являются полезными в лечении или профилактике состояний, ассоциированных с активацией ВГС в организме животного или человека.
Однако при скрининге соединений, способных ингибировать ВГС, необходимо иметь в виду, что данные ферментного анализа не всегда коррелируют с результатами анализа, выполненного на клеточной культуре. Соответственно в качестве инструмента первичного скрининга обычно следует применять клеточный анализ.
Отбор ингибиторов ВГС.
Скрининг соединений согласно настоящему изобретению на ингибирующую активность в отношении ВГС может быть выполнен с помощью любых стандартных методик оценки ферментной активности. В контексте данного изобретения обычно сначала проводят скрининг соединений на ингибирование ВГС in vitro, и затем соединения, показывающие ингибирующую активность in vitro, используют в скрининге на ингибирующую активность in vivo. Для исследования in vivo используют соединения, имеющие in vitro Ki (константы ингибирования) <~5х 10-6 М, обычно - Ki <~1х 10-7 М и предпочтительно - Ki <~5х 10-8
Полезные методики in vitro скрининга были подробно описаны ранее. Фармацевтические препараты.
Соединения согласно настоящему изобретению готовят в виде препарата со стандартными носителями и эксципиентами, которые обычно выбирают в соответствии со сложившейся практикой. Таблетки обычно содержат эксципиенты, вещества, усиливающие скольжение, наполнители, связующие вещества и тому подобное. Водные препараты готовят в стерильной форме, обычно данные препараты являются изотоническими, если не предназначены для доставки путем перорального введения. Все препараты возможно содержат эксципиенты, такие как эксципиенты, описанные в Handbook of Pharmaceutical Excipi-ents (1986). Эксципиенты включают аскорбиновую кислоту и другие антиоксиданты, хелатирующие агенты, такие как ЭДТА, углеводы, такие как декстрин, гидроксиалкилцеллюлоза, гидроксиалкилметил-целлюлоза, стеариновую кислоту и тому подобное. pH препаратов находится в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 11, но обычно в диапазоне от приблизительно 7 до 10.
Хотя активные ингредиенты можно вводить в чистом виде, предпочтительно, чтобы они были приготовлены в виде фармацевтических препаратов. Препараты для использования как в ветеринарии, так и в лечении человека согласно изобретению содержат по меньшей мере один активный ингредиент, такой
как определено выше, совместно с одним или более приемлемым носителем и возможно другими терапевтическими ингредиентами. Носитель(и) должен(ны) быть "приемлемым(и)" в том смысле, что дол-жен(ны) быть совместимым(и) с другими ингредиентами препарата и физиологически безвредным(и) для реципиента.
Препараты согласно настоящему изобретению включают препараты, подходящие для путей введения, описанных ниже. Обычно препараты могут находиться в стандартной лекарственной форме и могут быть приготовлены с использованием методик, хорошо известных в области фармацевтики. Описание данных методик и препаратов можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Такие методики включают стадию смешивания активного ингредиента с носителем, который состоит из одного или более вспомогательного ингредиента. В общем случае препараты приготавливают путем перемешивания активного ингредиента с жидкими носителями, или тонкоизмельченными твердыми носителями, или с теми и другими, до однородного состояния и, при необходимости, последующего формования данного продукта.
Препараты согласно настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут находиться в форме дискретных единиц дозирования, таких как капсулы, крахмальные облатки или таблетки, каждая из которых содержит заданное количество активного ингредиента; в форме порошка или гранул; в форме раствора или суспензии в водной или неводной жидкости: или в форме жидкой эмульсии типа масло-в-воде или жидкой эмульсии типа вода-в-масле. Активный ингредиент также может быть введен в форме болюса, электуария или пасты.
Таблетка может быть приготовлена путем прессования или формования возможно с одним или более вспомогательным ингредиентом. Прессованные таблетки можно приготовить путем прессования в подходящем устройстве активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, возможно смешанного со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки можно приготовить путем формования в подходящем устройстве смеси, содержащей порошкообразный активный ингредиент, увлажненной инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть покрыты оболочкой или иметь риску и могут быть приготовлены в виде препарата, с тем чтобы обеспечить замедленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента.
Для введения в глаза или другие внешние ткани, например в полость рта и кожу, предпочтительно использовать препараты в форме мази или крема для местного применения, содержащие активный(е) ингредиент(ы) в количестве, например, от 0,075 до 20% (мас./мас.) (включая количество активного(ых) ингредиента(ов) в диапазоне от 0,1 до 20% с инкрементом 0,1% (мас./мас.), например 0,6% (мас./мас.), 0,7% (мас./мас.) и так далее), предпочтительно от 0,2 до 15% (мас./мас.) и наиболее предпочтительно от 0,5 до 10% (мас./мас.). Когда активные ингредиенты приготовлены в форме мази, может быть использована парафиновая или смешивающаяся с водой мазевая основа. Альтернативно, активные ингредиенты можноприготовить в форме крема с кремовой основой типа масло-в-воде.
При желании водная фаза кремовой основы может включать, например, по меньшей мере 30% (мас./мас.) многоатомного спирта, то есть спирта, содержащего две или более гидроксильных группы, такого как пропиленгликоль, бутан 1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (включая ПЭГ 400) и их смеси. Может оказаться желательным, чтобы препараты для местного введения включали соединение, которые улучшает абсорбцию или проникновение активного ингредиента через кожу или другие пораженные зоны. Примеры агентов, способствующих проникновению через кожу, включают диметилсульфоксид и соответствующие аналоги.
Масляная фаза эмульсий согласно настоящему изобретению может состоять, в известной степени, из известных ингредиентов. Несмотря на то что данная фаза может содержать только эмульгатор (также известный как эмульгирующий агент), желательно, чтобы она содержала смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром, или маслом, или с жиром и маслом. Предпочтительно масляная фаза содержит гидрофильный эмульгатор совместно с липофильным эмульгатором, который действует в качестве стабилизатора. Также предпочтительно, когда масляная фаза содержит как масло, так и жир. Эмульгатор(ы), совместно со стабилизатором(ами) или без него, дают так называемый эмульгирующий воск, смесь данного воска с маслом и жиром образует так называемую эмульгирующую мазевую основу, которая формирует масляную дисперсную фазу кремовых препаратов.
Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, подходящие для использования в препарате согласно изобретению, включают Твин(r) 60, Span(r) 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.
Выбор подходящих масел или жиров, используемых в препарате, основан на том, какие желаемые косметические свойства нужно получить. Предпочтительно крем должен представлять собой нежирный, не оставляющий пятен и смывающийся продукт подходящей консистенции, которая не допускает его вытекания из тубы или других контейнеров. Можно использовать одно- или двухосновные сложные ал-киловые эфиры с нормальной или разветвленной цепью, такие как ди-изоадипат, изоцетилстеарат, про-пиленгликолевый диэфир жирных кислот кокосового масла, изопропилмиристат, децилолеат, изопро-пилпальмитат, бутилстеарат, 2-этилгексилпальмитат или смесь сложных эфиров с разветвленной цепью,
известная как Crodamol CAP, последние три эфира являются предпочтительными. Данные эфиры можно применять по одному или в комбинации, в зависимости от требуемых свойств. В качестве альтернативы используют липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или вазелиновое масло, или другие минеральные масла.
Фармацевтические препараты согласно настоящему изобретению включают одно или более соединение согласно настоящему изобретению совместно с одним или более фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом и возможно другими терапевтическими агентами. Фармацевтические препараты, содержащие указанный активный ингредиент, могут находиться в любой форме, подходящей для предполагаемого пути введения. Для перорального использования можно приготовить, например, таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сиропы или эликсиры. Композиции, предназначенные для перо-рального использования, могут быть приготовлены в соответствии с любой методикой приготовления фармацевтических композиций, известной в данной области техники; для получения препарата с приятным вкусом такие композиции могут содержать один или более агентов, включающих подслащивающие агенты, корригенты, окрашивающие агенты и консерванты. Таблетки могут содержать активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым эксципиентом, подходящим для изготовления таблеток. Такими эксципиентами могут быть, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, моногидрат лактозы, натрий-кроскармелоза, повидон, фосфат кальция или натрия; гранулирующие агенты и разрыхлители, так как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут не иметь оболочки или могут быть покрыты оболочкой с использованием известных методик, включая микрокапсулирование, с целью замедления дезинтеграции и адсорбции в желудочно-кишечном тракте, что позволяет обеспечить пролонгированное действие на протяжении длительного периода. Например, может быть использовано такое замедляющее вещество, как глицерилмоностеарат или глице-рилдистеарат, сам по себе или с воском.
Препараты для перорального использования могут находиться также в форме твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например фосфатом кальция или каолином, или в форме мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, такой как арахисовое масло, вазелиновое масло или оливковое масло.
Водные суспензии согласно настоящему изобретению содержат активные вещества в смеси с экс-ципиентами, подходящими для изготовления водных суспензий. Такие эксципиенты включают суспендирующий агент, такой как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметил-целлюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и гуммиарабик, и диспергирующие или увлажняющие агенты, такие как природный фосфатид (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с неполным эфиром, образованным жирной кислотой и ангидридом гексита (например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат). Водная суспензия также может содержать один или более консервант, такой как этил или н-пропил пара-гидрокси-бензоат, один или более окрашивающий агент, один или более корригент и один или более подслащивающий агент, такой как сахароза или сахарин.
Масляные суспензии можно приготовить в виде препарата путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как вазелиновое масло. Пероральные суспензии могут содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Для получения перорального препарата с приятным вкусом можно добавлять подслащивающие агенты, такие как указано выше, и корригенты. В данные композиции в качестве консерванта может быть добавлен антиокси-дант, такой как аскорбиновая кислота.
Диспергируемые порошки и гранулы согласно настоящему изобретению, подходящие для приготовления водной суспензии путем добавления воды, позволяют получить активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим агентом, суспендирующим агентом и одним или более консервантом. Примеры подходящих диспергирующих или увлажняющих агентов и суспендирующих агентов приведены выше. В водной суспензии также могут присутствовать дополнительные эксципиенты, например подслащивающие агенты, корригенты и окрашивающие агенты.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также могут находиться в форме эмульсий типа масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, минеральное масло, такое как вазелиновое масло, или смесь этих масел. Подходящие эмульгирующие агенты включают природные камеди, такие как гуммиарабик и трагакант, природные фосфатиды, такие как соевый лецитин, эфиры или неполные эфиры, образованные жирными кислотами и ангидридами гексита, такие как сорбитанмоноолеат, и продукты конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсия
также может содержать подслащивающие агенты и корригенты. Сиропы и эликсиры можно приготовить в виде препарата с подслащивающими агентами, такими как глицерин, сорбит или сахароза. Такие препараты также могут содержать агент, уменьшающий раздражение, консервант, корригент или окрашивающий агент.
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут находиться в форме стерильного инъекционного препарата, такого как стерильная инъекционная водная или масляная суспензия. Данная суспензия может быть приготовлена в виде препарата в соответствии с известными в данной области техники методиками с использованием подходящих диспергирующих или увлажняющих агентов и суспендирующих агентов, указанных выше. Стерильный инъекционный препарат также может представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном и приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутан-диоле, или может быть приготовлен в форме лиофилизированного порошка. Примерами приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, являются вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно можно использовать стерильные нелетучие масла. Для этой цели может быть использовано любое безвкусное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, для приготовления инъекционных препаратов могут быть использованы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
Количество активного ингредиента, который может быть смешан с веществом носителя при приготовлении лекарственной формы для однократного введения, обычно варьирует в зависимости от объекта, который лечат, и от конкретного способа введения. Например, препарат с пролонгированным действием, предназначенный для перорального введения человеку, может содержать приблизительно от 1 до 1000 мг активного вещества в смеси с подходящим и приемлемым количеством носителя, которое может составлять от приблизительно 5 до приблизительно 95% (мас./мас.) от общей массы композиции. Фармацевтическая композиция может быть приготовлена таким образом, чтобы вводимое количество препарата легко поддавалось измерению. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенной инфу-зии, может содержать от приблизительно 3 до 500 мкг активного ингредиента на 1 мл раствора, чтобы инфузию подходящего объема препарата можно было проводить со скоростью приблизительно 30 мл/ч.
Препараты, подходящие для введения в глаза, включают глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, главным образом в водном растворителе для активного ингредиента. В таких препаратах концентрация активного ингредиента составляет предпочтительно 0,5-20%, преимущественно 0,5-10%, в основном приблизительно 1,5% (мас./мас.).
Препараты, подходящие для местного введения в полость рта, включают таблетки, содержащие активный ингредиент в ароматизированной основе, обычно в сахарозе и гуммиарабике или в трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или в сахарозе и гуммиарабике; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.
Препараты для ректального введения могут находиться в форме суппозитория с подходящей основой, содержащей, например, масло какао или салицилат.
Препараты, подходящие для внутрилегочного или назального введения, содержат частицы, имеющие размер в диапазоне, например, от 0,1 до 500 мкм (включая частицы, имеющие размер в диапазоне от 0,1 до 500 мкм с инкрементом 0,5 мкм, например частицы размером 0,5, 1, 30, 35 мкм и так далее), которые вводят путем быстрой ингаляции через носовой ход или путем ингаляции через полость рта, так чтобы они достигли альвеолярных мешочков. Подходящие препараты включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Препараты, подходящие для аэрозольного введения или введения в форме сухого порошка можно приготовить в соответствии со стандартными методиками и можно вводить совместно с другими терапевтическими агентами, например с соединениями, уже используемыми в лечении или профилактике состояний, ассоциированных с ВГС-активностью.
Препараты, подходящие для вагинального введения, могут находиться в форме пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или спрея, содержащих наряду с активным ингредиентом подходящие для таких препаратов носители, известные в данной области техники.
Препараты, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферные агенты, бактериостатиче-ские вещества и растворенные вещества, которые делают препарат изотоническим с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие агенты и загустители.
Данные препараты находятся в упаковках для одноразового или многократного приема, например в герметично закрытых ампулах и пробирках, и могут храниться в лиофилизированном состоянии (после сублимационной сушки), требующем непосредственно перед использованием добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекции. Экстемпоральные инъекционные растворы и суспензии получают из стерильных порошков, гранул и таблеток, описанных выше. Предпочтительные препараты в стандартной лекарственной форме представляют собой препараты, содержащие суточную дозу или суточную субдозу активного ингредиента, такую, как указано выше, или подходящую часть таких доз.
Следует понимать, что кроме ингредиентов, упомянутых выше, препараты согласно настоящему изобретению могут содержать другие агенты, обычно используемые в данной области техники, которые пригодны для данного препарата, например агенты, подходящие для перорального введения, могут включать корригенты.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает ветеринарные композиции, содержащие по меньшей мере один активный ингредиент, такой как определено выше, совместно с носителем для ветеринарных препаратов.
Носители для ветеринарных препаратов представляют собой вещества, полезные для введения ветеринарной композиции, совместимые с активным ингредиентом и в других отношениях являющиеся нейтральными или приемлемыми для использования в ветеринарии; данные носители могут быть твердыми, жидкими или газообразными веществами. Ветеринарные композиции можно вводить перораль-ным, парентеральным или любым другим желательным путем.
Соединения согласно настоящему изобретению также можно приготовить в виде препарата с контролируемым высвобождением активного ингредиента, что позволяет реже вводить лекарство или улучшает фармакокинетический или токсический профиль активного ингредиента. Соответственно в изобретении также предложены композиции, содержащие одно или более соединение согласно настоящему изобретению, приготовленное в виде препарата с замедленным или контролируемым высвобождением.
Эффективная доза активного ингредиента зависит, по меньшей мере, от природы состояния, которое лечат, токсичности, от того, будет ли соединение использовано для профилактики (более низкие дозы), от способа доставки и фармацевтического препарата и обычно определяется лечащим врачом на основе стандартных исследований с увеличением дозы. Можно предположить, что эффективная доза будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в сутки. Обычно от приблизительно 0,01 до приблизительно 10 мг/кг массы тела в сутки. В основном от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 мг/кг массы тела в сутки. Чаще всего от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,5 мг/кг массы тела в сутки. Например, возможная суточная доза для взрослого человека с массой тела приблизительно 70 кг будет находиться в диапазоне от 1 мг до 1000 мг, предпочтительно в диапазоне от 5 мг до 500 мг, и может быть введена в форме однократных или многократных доз.
Пути введения.
Одно или более соединение согласно изобретению (в данном описании называемое активным ингредиентом) вводят любым путем, подходящим для состояния, которое лечат. Подходящие пути введения включают пероральный, ректальный, назальный, местный (включая трансбуккальный и сублин-гвальный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, ин-традермальный, интратекальный и эпидуральный) и тому подобное. Следует понимать, что предпочтительный путь введения зависит, например, от состояния реципиента. Преимущество соединений согласно настоящему изобретению заключается в том, что они являются перорально биодоступными и могут быть введены пероральным путем.
Комбинированная терапия.
Активные ингредиенты согласно изобретению также можно применять в комбинации с другими активными ингредиентами. При подборе таких комбинаций учитывают состояние, для лечения которых они предназначены, перекрестную реактивность ингредиентов и фармакологические свойства комбинации.
Кроме того, любое соединение согласно настоящему изобретению можно комбинировать с одним или более другим активным ингредиентом в стандартной лекарственной форме для одновременного или последовательно введения пациенту. Схемы комбинированной терапии включают как одновременный, так и последовательный режим введения. При последовательном введении комбинация может быть введена путем двух или более введений.
Комбинированная терапия может обеспечить "синергизм" и "синергетический эффект", данные термины означают, что эффект, получаемый при совместном использовании активных ингредиентов больше суммы эффектов при использовании каждого из соединений по отдельности. Синергетический эффект может быть достигнут, когда активные ингредиенты (1) приготовлены совместно в виде одного препарата и их вводят или доставляют одновременно в виде комбинированного препарата, (2) доставляются поочередно или одновременно в виде отдельных препаратов или (3) доставляют с использованием некоторых других режимов. При терапии с доставкой лекарственного средства по схеме чередования синергетический эффект может быть достигнут в том случае, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например в отдельных таблетках, пилюлях или капсулах или путем инъекций с использованием разных шприцов. В общем случае, при терапии с доставкой лекарственного средства по схеме чередования эффективные дозы активных ингредиентов вводят последовательно, то друг за другом, тогда как при комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят совместно.
Подходящие активные терапевтические агенты или ингредиенты, которые можно комбинировать с соединениями формулы I, могут включать интерфероны, например пегилированный rIFN-a2b, пегилиро
ванный ^FN-a^, rIFN-a2b, IFN a-2b XL, rIFN-a2a, консенсусный IFN а, инферген (infergen), ребиф, локтерон (locteron), AVI-005, ПЭГ-инферген, пегилированный IFN-p, пероральный интерферон a, ферон (feron), реаферон, интермакс (intermax) a, r-IFN-p, инферген + актиммун (actimmune), IFN-co с DUROS и альбуферон (albuferon); аналоги рибавирина, например ребетол, копегус (copegus), левовирин (levovirin) VX-497 и вирамидин (тарибавирин); ингибиторы NS5a, например A-831 и A-689; ингибиторы полимера-зы NS5b, например NM-283, валопицитабин, R1626, PSI-6130 (R1656), HCV-796, BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, PF-868554, GSK625433 и XTL-2125; ингибиторы Ш3-протеазы, например SCH-503034 (SCH-7), VX-950 (Телапревир), ITMN-191 и BILN-2065; ингибиторы а-глюкозидазы 1, например МХ-3253 (селгозивир (celgosivir)) и UT-231 В; гепатозащитные агенты, например IDN-6556, ME 3738, MitoQ и LB-84451; отличные от нуклеозидов ингибиторы ВГС, например бензимидазольные производные, бензо-1,2,4-тиадиазиновые производные и фенилаланиновые производные; и другие лекарства для лечения ВГС, например задаксин, нитазоксанид (alinea), BIVN-401 (виростат (virostat)), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, бавитуксимаб, оглуфанид, PYN-17, КРЕ02003002, актилон (actilon) (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (изаторибин), XTL-6865, ANA 971, NOV-205, тарва-цин (тарвацин), ЕНС-18 и NIM811.
Согласно еще одному варианту реализации настоящего изобретения, в данной заявке раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир, в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом и фармацевтически приемлемый носитель или эксципи-ент.
Согласно настоящему изобретению в комбинации с соединением согласно настоящему изобретению может быть использован любой терапевтический агент, оказывающий терапевтическое действие при использовании в комбинации с соединением согласно настоящему изобретению. Например, терапевтические агенты, используемые в комбинации с соединением согласно настоящему изобретению могут представлять собой интерфероны, аналоги рибавирина, ингибиторы №3-протеазы, ингибиторы полиме-разы NS5b, ингибиторы а-глюкозидазы 1, гепатозащитные агенты, ненуклеозидные ингибиторы ВГС и другие лекарства для лечения ВГС.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения в данной заявке предложены фармацевтические композиции, которые содержат соединение согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемую соль, сольват и/или сложный эфир, в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из пегилированного интерферона rIFN-a2b, пегилированного интерферона rIFN-a2а, rIFN-a2b, IFNa-2b XL, rIFN-a2a, кон-сенсусного интерферона IFN а, инфергена, ребифа, локтерона, AVI-005, ПЭГ-инфергена, пегилированного IFN-p, перорального интерферона а, ферона, реаферона, интермакса a, r-IFN-p, инфергена + ак-тиммуна, IFN-co с DUROS, альбуферона, ребетола, копегуса, левовирина, VX-497, вирамидина (тариба-вирина), A-831, A-689, NM-283, валопицитабина, R1626, PSI-6130 (R1656), ВГС-796, BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, PF-868554, GSK625433, XTL-2125, SCH-503034 (SCH-7), VX-950 (Тела-превира), ITMN-191 и BILN-2065, МХ-3253 (селгозивира), UT-231B, IDN-6556, ME 3738, MitoQ и LB-84451, бензимидазольных производных, бензо-1,2,4-тиадиазиновых производных и фенилаланиновых производных, задаксина, нитазоксанида (alinea), BIVN-401 (виростата), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, бавитуксимаба, оглуфанида, PYN-17, KPE02003002, актилона (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (изаторибина), XTL-6865, ANA 971, NOV-205, тарвацина, ЕНС-18 и NIM811, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
Согласно еще одному варианту реализации настоящего изобретения в данной заявке предложен комбинированный фармацевтический агент, содержащий:
а) первую фармацевтическую композицию, содержащую соединение согласно настоящему изобре-
тению, или фармацевтически приемлемую соль, сольват или сложный эфир указанного соединения; и
б) вторую фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере один дополнительный
терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из соединений, ингибирующих протеазу ВИЧ
(вируса иммунодефицита человека), ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ, нук-
леозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ, нуклеотидных ингибиторов обратной транскрип-
тазы ВИЧ, ингибиторов интегразы ВИЧ, ингибиторов gp41, ингибиторов CXCR4 (рецептора 4 хемокинов
СХС), ингибиторов gp120, ингибиторов CCR5 (рецептора 5 хемокинов C-C типа), интерферонов, анало-
гов рибавирина, ингибиторов №3-протеазы, ингибиторов а-глюкозидазы 1, гепатозащитных агентов,
ненуклеозидных ингибиторов ВГС и других лекарств для лечения ВГС и их комбинаций.
Могут быть подобраны комбинации соединений формулы I и дополнительных активных терапевтических агентов для лечения пациентов, инфицированных ВГС и другими инфекциями, такими как ВИЧ-инфекция. Соответственно соединения формулы I можно комбинировать с одним или более соединением, полезным в лечении ВИЧ, например с соединениями, ингибирующими протеазу ВИЧ, отличными от нуклеозидов ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ, нуклеозидными ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ, нуклеотидными ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ, ингибиторами инте
гразы ВИЧ, ингибиторами gp41, ингибиторами CXCR4, ингибиторами gp120, ингибиторами CCR5, ин-терферонами, аналогами рибавирина, ингибиторами №3-протеазы, ингибиторами полимеразы NS5b, ингибиторами а-глюкозидазы 1, гепатозащитными агентами, ненуклеозидных ингибиторами ВГС и другими лекарствами для лечения ВГС.
Более конкретно, одно или более соединение согласно настоящему изобретению можно комбинировать с одним или более соединением, выбранным из группы, состоящей из 1) ингибиторов протеазы ВИЧ, например ампренавира, атазанавира, фосампренавира, индинавира, лопинавира, ритонавира, лопи-навира + ритонавира, нелфинавира, саквинавира, типранавира, бреканавира, дарунавира, ТМС-126, ТМС-114, мозенавира (DMP-450), JE-2147 (AG1776), AG1859, DG35, L-756423, RO0334649, KNI-272, DPC-681, DPC-684 и GW640385X, DG17, PPL-100, 2) ненуклеозидного ингибитора обратной транскрип-тазы ВИЧ, например каправирина, эмивирина, делавиридина (delaviridine), эфавиренза, невирапина, (+) каланолида А, этравирина, GW5634, DPC-083, DPC-961, DPC-963, MIV-150 и ТМС-120, ТМС-278 (рил-пивирина), эфавиренза, BILR 355 BS, VRX 840773, UK-453,061, RDEA806, 3) нуклеозидного ингибитора обратной транскриптазы ВИЧ, например зидовудина, эмтрицитабина, диданозина, ставудина, зальцита-бина, ламивудина, абакавира, амдоксовира, элвуцитабина, аловудина, MIV-210, рацивира (±-FTC), D-d4FC, эмтрицитабина, фосфазида, фозивудина тидоксила (fozivudine tidoxil), фосалвудина тидоксила, априцитибина (apricitibine) (AVX754), амдоксовира, КР-1461, абакавира + ламивудина, абакавира + ла-мивудина + зидовудина, зидовудина + ламивудина, 4) нуклеотидного ингибитора обратной транскрипта-зы ВИЧ, например тенофовира, тенофовира дизопроксил фумарата + эмтрицитабина, тенофовира дизо-проксил фумарата + эмтрицитабина + эфавиренза и адефовира (adefovir), 5) ингибитора интегразы ВИЧ, например куркумина, производных куркумина, цикориевой кислоты, производных цикориевой кислоты, 3,5-дикофеил-хинной кислоты, производных 3,5-дикофеил-хинной кислоты, ауринтрикарбоновой кислоты, производных ауринтрикарбоновой кислоты, кофеиновой кислоты фенетилового эфира, производных кофеиновой кислоты фенетилового эфира, тирфостина, производных тирфостина, кверцетина, производных кверцетина, S-1360, зинтевира (zintevir) (AR-177), L-870812 и L-870810, MK-0518 (ралтегравира), BMS-707035, MK-2048, BA-011, BMS-538158, GSK364735C, 6) ингибитора gp41, например энфувиртида, сифувиртида (sifuvirtide), FB006 М, TRI-1144, SPC3, DES6, Locus gp41, CovX и REP 9, 7) ингибитора CXCR4, например AMD-070,8) ингибитора входа, например SP01A, TNX-355, 9) ингибитора gp120, например BMS-488043 и BlockAide/CR, 10) ингибитора G6PD и NADH-оксидазы, например иммунитина (immunitin), 10) ингибитора CCR5, например аплавирока, викривирока, INCB9471, PRO-140, INCB15050, PF-232798, CCR5mAb004 и маравирока, 11) интерферона, например пегилированного rIFN-a2b, пегили-рованного rIFN-a2a, rIFN-a2b, IFNa-2b XL, rIFN-a2a, консенсусного IFNa, инфергена, ребифа, локтеро-на, AVI-005, ПЭГ-инфергена, пегилированного IFN-p, перорального интерферона alpha, ферона, реафе-рона, интермакса alpha, r-IFN-p, инфергена + актиммуна, IFN-co с DUROS и альбуферона, 12) аналогов рибавирина, например ребетола, копегуса, левовирина, VX-497, и вирамидина (тарибавирина), 13) ингибиторов NS5a, например A-831 и A-689, 14) ингибиторов полимеразы NS5b, например NM-283, валопи-цитабина, R1626, PSI-6130 (R1656), ВГС-796, BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, PF-868554, GSK625433 и XTL-2125, 15) ингибиторов Ш3-протеазы, например SCH-503034 (SCH-7), VX-950 (Телапревира), ITMN-191 и BILN-2065, 16) ингибиторов а-глюкозидазы 1, например МХ-3253 (селгози-вира) и UT-231B, 17) гепатозащитных агентов, например IDN-6556, ME 3738, MitoQ и LB-84451, 18) не-нуклеозидных ингибиторов ВГС, например бензимидазольных производных, бензо-1,2,4-тиадиазиновых производных и фенилаланиновых производных, 19) других лекарств для лечения ВГС, например задак-сина, нитазоксанида (alinea), BIVN-401 (виростата), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, бави-туксимаба, оглуфанида, PYN-17, KPE02003002, актилона (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (изаторибина), XTL-6865, ANA 971, NOV-205, тарвацина, ЕНС-18 и NIM811, 19) фармакокинетиче-ских усилителей, например BAS-100 и SPI452, 20) ингибиторов РНКазы Н, например ODN-93 и ODN-112, 21) других агентов, обладающих активностью в отношении ВИЧ, например VGV-1, РА-457 (беви-римата), амплигена (ampligen), HRG214, цитолина (cytolin), полимуна (polymun), VGX-410, KD247, AMZ 0026, CYT 99007, A-221 HIV, BAY 50-4798, MDX010 (иплимумаба (iplimumab)), PBS119, ALG889 и РА-
1050040.
Метаболиты соединений согласно настоящему изобретению.
В объем настоящего изобретения также входят продукты метаболического распада in vivo соединений, приведенных в данном описании. Такие продукты могут образовываться в результате, например, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, этерификации и так далее введенного соединения, главным образом, вследствие ферментативных реакций. Соответственно изобретение включает соединения, полученные способом, который включает осуществление контакта соединения согласно настоящему изобретению с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для образования продукта метаболического превращения. Для идентификации таких продуктов обычно используют соединение согласно настоящему изобретению, меченое радиоактивным изотопом (например, C14 или H3); обнаруживаемую дозу (например, приблизительно более 0,5 мг/кг) меченого соединения вводят парентеральным путем животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна, или человеку, и после осуществ
ления контакта соединения с реципиентом в течение времени, достаточного для метаболического распада (обычно от приблизительно 30 с до 30 ч), выделяют продукты его превращения из мочи, крови или других биологических образцов. Данные продукты могут быть легко выделены, так как они содержат метку (немеченые продукты выделяют с использованием антител, способных связываться с эпитопами, сохранившимися после метаболического превращения). Структуры выделенных метаболитов определяют с использованием стандартного анализа, например путем МС или ЯМР. Обычно анализ метаболитов выполняют таким же путем, как в стандартных исследованиях метаболизма лекарств, соответствующие методики хорошо известны специалистам в данной области техники. Продукты превращения, поскольку они не обнаруживаются in vivo, если реципиент не получал соединение, являются полезными в диагностических исследованиях для определения терапевтических доз соединений согласно настоящему изобретению, даже если эти продукты сами по себе не обладают никакой ингибирующей активностью в отношении ВГС.
Методики определения стабильности соединений в секретах суррогатного желудочно-кишечного тракта известны. В контексте данного описания соединения считаются стабильными в желудочно-кишечном тракте, если у них удалено приблизительно менее 50 молярных процентов защитных групп после инкубации в течение 1 ч при 37°C в суррогатном кишечном или желудочном соке. Тот факт, что соединения остаются стабильными в желудочно-кишечном тракте, еще не означает, что они не могут быть гидролизированы in vivo. Фосфонатные пролекарства согласно настоящему изобретению обычно стабильны в пищеварительной системе, но в значительной степени подвергаются гидролизу до исходного лекарства в просвете кишечника, печени или другом органе, где происходит метаболический распад, или внутри клеток.
Типичные способы получения соединений согласно настоящему изобретению.
Изобретение также относится к способам получения композиций согласно изобретению. Данные композиции получают с использованием любой пригодной методики органического синтеза. Многие из таких методик хорошо известны в данной области техники. Однако многие из известных методик дополнительно усовершенствованы, см. Compendium of Organic Synthetic Methods (John Wiley & Sons, New York), Vol. 1, Ian T. Harrison and Shuyen Harrison, 1971; Vol. 2, Ian T. Harrison and Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus and Leroy Wade, 1977; Vol. 4, Leroy G. Wade, Jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; и Vol. 6, Michael B. Smith; а также March, J., Advanced Organic Chemistry, Third Edition, (John Wiley & Sons, New York, 1985), Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. In 9 Volumes, Barry M. Trost, Editor-in-Chief (Pergamon Press, New York, 1993 printing). Другие методики, подходящие для получения соединений согласно настоящему изобретению, описаны в публикации международной заявки № WO 2006/020276.
Ниже предложен ряд типичных способов получения композиций согласно настоящему изобретению. Подразумевается, что предложенные способы иллюстрируют сущность получения указанных композиций и не ограничивают объем способов получения, которые можно использовать.
Обычно условия реакции, такие как температура, время проведения реакции, растворители, методики выделения и тому подобное, представляют собой стандартные условия реакции, которые используют в данной области техники для выполнения конкретных реакций. Подробное описание таких условий содержится в цитированном ссылочном материале и материале, приведенном в данной заявке. Обычно температура находится в диапазоне от -100 до 200°C, растворители являются апротонными или протонными и время выполнения реакции находится в диапазоне от 10 с до 10 суток. Выделение продукта обычно подразумевает гашение любого непрореагировавшего реагента и последующее распределение реакционной смеси между водным и органическим слоями (экстракцию) и отделение слоя, содержащего желаемый продукт.
Реакции окисления и восстановления обычно проводят при температуре, близкой к комнатной температуре (приблизительно 20°C), хотя при восстановлении гидридами металлов температуру часто понижают до 0 - -100°C, для восстановления обычно используют апротонные растворители, для окисления можно использовать либо протонные, либо апротонные растворители. Время выполнения реакции подбирают таким образом, чтобы осуществить желаемое превращение.
Реакции конденсации обычно проводят при температуре, близкой к комнатной температуре, хотя в случае неравновесных, кинетически контролируемых реакций конденсации температуру также часто понижают (0 - -100°C). Растворители могут быть либо протонными (обычно в случае равновесных реакций) или апротонными (обычно в случае кинетически контролируемых реакций).
Когда это необходимо, можно применять такие стандартные методики синтеза, как азеотропное удаление побочных продуктов реакции и использование безводных условий реакции (например, атмосферы инертного газа).
Термины "обработанный", "обрабатывать", "обработка" и т.п. применительно к химическому синтезу употребляются в значении "контактировать/осуществлять контакт", "смешивать", "взаимодействовать", "подвергать взаимодействию", "приводить в соприкосновение" и т.п., и обычно используются в данной области техники, когда необходимо указать, что одно или более химическое вещество обрабатывают таким образом, чтобы его превратить в одно или более другое химическое вещество. Это означает,
что выражение "соединение один обрабатывают соединением два" синонимично выражениям "соединение один подвергают взаимодействию с соединением два", "соединение один контактирует с соединением два", "соединение один взаимодействует с соединением два" и другим выражениям, обычно используемым в области органического синтеза, когда необходимо указать, что соединение один "обрабатывают" соединением два, соединение один "взаимодействует" с соединением два или соединение один "подвергают взаимодействию" с соединением два и так далее. Например, термин "обработка" указывает приемлемый стандартный способ, каким органические химические соединения подвергают взаимодействию. Подразумевается, что реакцию выполняют с использованием стандартных концентраций (от 0,01 до 10 М, обычно от 0, 1 до 1 М), температур (от -100 до 250°C, обычно от -78 до 150°C, чаще от -78 до 100°C, преимущественно от 0 до 100°C), реакционных сосудов (обычно стеклянных, пластмассовых, металлических), растворителей, давления, газообразной среды (обычно воздуха для реакций, нечувствительных к присутствию кислорода и воды, или азота или аргона для реакций, чувствительных к присутствию кислорода и воды) и так далее, если не указано иное. Выбор условий и устройств, которые необходимо использовать для "обработки" в соответствии с конкретной методикой, основан на знании аналогичных реакций в области органического синтеза. В частности, средний специалист в области органического синтеза на основе знаний в данной области техники может выбрать условия и устройства, предположительно необходимые для успешного осуществления химических реакций описанных здесь методик.
Модификации каждой из типичных схем и схем, описанных в примерах (в дальнейшем "типичных схем"), позволяют получить различные аналоги конкретных типичных соединений. Подходящие методики органического синтеза, описанные выше посредством ссылки на соответствующие публикации, пригодны для такой модификации.
В каждой из типичных схем бывает полезно разделить полученные продукты реакции и/или разделить продукты реакции и исходные вещества. Желаемые продукты на каждой стадии или после нескольких стадий разделяют и/или очищают (в дальнейшем разделяют) до желаемой степени гомогенности с помощью методик, которые обычно используют для этих целей в данной области техники. Обычно такое разделение включает мультифазную экстракцию, кристаллизацию из растворителя или смеси растворителей, дистилляцию, сублимацию или хроматографию. Хроматография может включать любой набор методик, в том числе, например, методики и соответствующее оборудование для обратнофазовой и нор-мальнофазовой хроматографии; гель-фильтрации; ионообменной хроматографии; жидкостной хроматографии высокого, среднего и низкого давления; методики аналитической хроматографии для маломасштабного разделения, хроматографии в псевдоподвижном слое (SMB) и препаративной тонкослойной или толстослойной хроматографии, а также методики тонкослойной хроматографии для маломасштабного разделения и флэш-хроматографии.
Другая группа методик разделения включает обработку смеси реагентом, который может избирательно связываться с желаемым продуктом, непрореагировавшим исходным веществом, побочным продуктом реакции и т.п. или обеспечивать выделение желаемого продукта другим образом. Такие реагенты включают адсорбенты или абсорбенты, такие как активированный уголь, молекулярные сита, ионообменные среды и тому подобное. Альтернативно, данные реагенты могут представлять собой кислоты, в случае основного соединения, основания в случае кислотного соединения, связующие реагенты, такие как антитела, связывающие белки, селективные хелатирующие агенты, такие как краун-эфиры, реагенты для жидкостной экстракции ионов (LIX) и тому подобное.
Выбор подходящих методик разделения зависит от природы присутствующих в реакционной смеси веществ. Например, от температуры кипения и молекулярной массы при разделении путем дистилляции и сублимации, наличия или отсутствия полярных функциональных групп при разделении путем хроматографии, стабильности веществ в кислой и щелочной среде при мультифазовой экстракции и тому подобного. Специалист в данной области техники обычно использует методики, наиболее подходящие для достижения желаемого разделения.
Отдельный стереоизомер, например энантиомер, по существу, не содержащий своего стереоизо-мерного антипода, может быть получен путем разделения рацемической смеси с помощью такой методики, как получение диастереоизомеров с использованием агентов для оптического расщепления (Stereochemistry of Carbon Compounds, (1962) E.L. Eliel, McGraw Hill; Lochmuller, С.Н., (1975) J. Chromatogr., 113, 3) 283-302). Рацемические смеси хиральных соединений согласно изобретению можно разделить с выделением отдельных стереоизомеров с помощью любой подходящей методики, включая (1) образование ионных диастереоизомерных солей с хиральными соединениями и их разделение путем фракционной кристаллизации или с использованием других методик, (2) получение диастереоизомерных соединений с использованием хиральных разделяющих реагентов, разделение данных диастереоизомеров и их превращение в чистые стереоизомеры и (3) разделение, по существу, чистых или обогащенных стерео-изомеров непосредственно в хиральных условиях.
В соответствии с методикой (1) диастереоизомерные соли могут быть получены путем взаимодействия энантиомерно чистых хиральных оснований, таких как бруцин, хинин, эфедрин, стрихнин, а-метил-p-фенилэтиламин (амфетамин) и тому подобное, с асимметрическими соединениями, содержащи
ми кислотную функциональную группу, такими как карбоновая кислота и сульфоновая кислота. Полученные диастереоизомерные соли можноразделять путем фракционной кристаллизации или ионной хроматографии. Если необходимо разделить оптические изомеры амино-соединений, диастереоизомерные соли могут быть получены путем добавления хиральных карбоновых или сульфоновых кислот, таких как камфорсульфоновая кислота, винная кислота, миндальная кислота или молочная кислота.
Альтернативно, в соответствии с методикой (2) субстрат, который требуется разделить, подвергают взаимодействию с одним энантиомером хирального соединения с получением диастереоизомерной пары (Eliel, E. and Wilen, S. (1994) Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., p. 322). Диа-стереоизомерные соединения могут быть получены в результате взаимодействия асимметрических соединений с энантиомерно чистыми хиральными разделяющими реагентами, такими как метил-производные, последующего разделения данных диастереоизомеров и их гидролиза с выходом свободного энантиомерно обогащенного ксантена. Методика определения оптической чистоты включает получение из рацемической смеси хиральных сложных эфиров, таких как метиловый эфир, например (-)метил хлорформиат (в присутствии основания), или эфир Мошера, а-метокси-а-(трифторметил)фенилацетат (Jacob III. (1982) J. Org. Chem. 47:4165), и анализ ЯМР-спектра на присутствие двух атропизомерных диастереоизомеров. Стабильные диастереоизомеры атропизомерных соединений можноразделять и выделены путем нормальнофазовой и обратнофазовой хроматографии в соответствии с методиками разделения атропизомерных нафтил-изохинолинов (Ноуе, Т., WO 96/15111). В соответствии с методикой (3) рацемическая смесь двух энантиомеров может быть разделена путем хроматографии с использованием хиральной стационарной фазы (Chiral Liquid Chromatography (1989) W.J. Lough, Ed. Chapman and Hall, New York; Okamoto, (1990) J. of Chromatogr. 513:375-378). Обогащенные или очищенные энантиомеры можно различить с помощью методик, используемых для различения других хиральных молекул с асимметрическими атомами углерода, таких как оптическое вращение и круговой дихроизм.
Примеры вариантов реализации настоящего изобретения
Конкретные значения и варианты реализации, указанные в данном описании для радикалов, заместителей и диапазонов, приведены только для иллюстрации и не исключают другие определенные в данном описании значения радикалов и заместителей или другие значения радикалов и заместителей в пределах определенных диапазонов.
Согласно одному из вариантов реализации соединение согласно изобретению выбрано из группы, состоящей из
Стадия 1.
В сухую трехгорлую круглодонную колбу (1000 мл), продуваемую аргоном, добавляли безводный дихлорметан (100 мл) и Et2Zn (28 мл, 273 ммоль) при 0°C. (Внимание: источник аргона нельзя подсоединять через иглу. Использовать только соответствующий стеклянный адаптор. К колбе также можно подсоединить второй барботер для предотвращения чрезмерного нагнетания давления.) Затем в колбу добавляли по каплям циклопентен-3-ол (10,0 мл, 119 ммоль) (выделялось большое количество газообразного этана), и данную реакционную смесь оставляли перемешиваться до тех пор, пока не прекращалось выделение газа. Затем добавляли по каплям в течение периода времени, составляющего 30 мин, дииод-метан (22 мл, 242 ммоль). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры, и перемешивание продолжали в течение ночи в принудительном потоке аргона до тех пор, пока ТСХ-анализ не показывал, что исходный спирт полностью израсходован. Затем реакционную смесь разбавляли CH2Cl2 и гасили путем добавления 2 М HCl (белый осадок должен был полностью раствориться). Полученную двухфазную смесь вливали в делительную воронку, и собирали органический слой. Растворитель удаляли при пониженном давлении, пока не оставалось 100 мл вещества.
Стадия 2.
В колбу добавляли безводный дихлорметан (525 мл), затем добавляли по каплям триэтиламин (34 мл, 245 ммоль). Все это время реакционную смесь продолжали перемешивать при комнатной температуре в принудительном потоке аргона, затем в колбу добавляли порциями дисукцинимидилкарбонат (40,7 г, 159 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться до тех пор, пока ТСХ-анализ не показывал, что исходное вещество полностью израсходовано (2-3 суток). После завершения реакции реакционную смесь гасили путем добавления 1 М HCl (200 млх2) и промывали H2O (200 млх2). Желаемое вещество экстрагировали с использованием CH2Cl2 и объединенные органические слои сушили, используя безводный MgSO4, и пропускали через силикагелевую подушку. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и полученное неочищенное вещество очищали с использованием флэш-хроматографии (Rf (фактор удерживания)=0,33, 1:1 гексан/EtOAc) с получением промежуточного соединения I (22 г, 75%): 1H ЯМР (ядерный магнитный резонанс) (300 МГц, CDCl3): 5 5. 24 (t, 1H), 3.82 (s, 4H), 2.24 (m, 2H), 2.03 (d, 2H), 1.38 (m, 2H), 0.48 (m, 1H), 0.40 (m, 1H).
2. Получение промежуточного соединения П.
?Г .
К раствору цис-3-гидроксибицикло[3,1,0]гексана (980 мг, 10 ммоль), 4-нитробензойной кислоты (2,0 г, 12 ммоль) и трифенилфосфина (3,0 г, 12 ммоль) в THF (тетрагидрофуране) (20 мл) добавляли дии-зопропилазодикарбоксилат (2,58 мл, 12 ммоль) при 0°C. Данную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре и затем концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением 2,2 г (0,96 г, 77%) указанного на схеме сложного эфира. ЖХ/МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия):=775,4 (М++1).
Полученный сложный эфир растворяли в THF (40 мл), и добавляли водный раствор гидроксида лития (2 г/20 мл). Данную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре, и затем добавляли диэтиловый эфир (30 мл). Органический слой промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до объема ~10 мл. Добавляли дихлорметан (40 мл), и снова сушили над сульфатом натрия. Полученный раствор желаемого спирта концентрировали до объема ~20 мл и как есть использовали на следующей стадии реакции. Промежуточное соединение II получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении промежуточного соединения I. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): 5 4.80 (t, 1H), 3.82 (s, 4H), 2.38 (m, 2H), 2.01 (d, 2H), 1.40 (m, 2H), 0.45 (m, 1H), 0.02 (m, 1H).
Стадия 1.
М-трет-Бос-цис-4-Гидрокси-Ь-пролина метиловый эфир (100,0 г, 407,7 ммоль) и DABCO (1,4-диазабицикло[2.2.2]октан) (1,5 экв., 68,6 г, 611,6 ммоль) растворяли в безводном толуоле (200 мл) в трех-горлой круглодонной колбе объемом 2 л, оснащенной механической мешалкой и капельной воронкой. После охлаждения полученного раствора в атмосфере N2 до 0°C через капельную воронку в течение 60 мин добавляли раствор 4-бром-бензолсульфонилхлорида (1,3 экв., 135,6 г, 530,0 ммоль) в 300 мл толуола. Данную реакционную смесь перемешивали и нагревали до комнатной температуры в течение ночи (16 ч). Смесь медленно вливали в 2 л 1 М водного раствора Na2CO3, и желаемый продукт экстрагировали EtOAc (2 л). Органическую фазу промывали 0,5н. HCl (2 л), H2O (1 л) и солевым раствором (1 л), затем сушили (MgSO4) и концентрировали с получением 195,45 г указанного на схеме брозилата в виде желтого маслянистого продукта.
К раствору указанного брозилата (407,7 ммоль) в дихлорметане (300 мл) медленно добавляли 4,0 М HCl в диоксане (500 мл, 5 экв.), и полученный раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли указанный на схеме эфир (500 мл), смесь перемешивали в течение 15 мин, и собирали путем фильтрования образовавшийся белый осадок. Полученное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром и гексаном и затем сушили под вакуумом в течение ночи с выходом указанного на схеме амина в форме HCl-соли (153,0 г, 381,8 ммоль, выход 94% после двух стадий).
Стадия 2.
К раствору Бос-трет-бутилглицина (97,0 г, 420,0 ммоль) в DMF (диметилформамиде) (200 мл) и DCM (дихлорметане) (200 мл) добавляли HATU (О-(7-азабензотриазол-1-ил)-^^№,№-тетраметилурония гексафторфосфат) (217,76 г, 572,7 ммоль) и основание Хюнига (126 мл, 1145,4 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, и затем к данной смеси (содержащей вышеуказанную кислоту) за один прием добавляли раствор полученной на предыдущей стадии HCl-соли (153,0 г, 381,8 ммоль) и основания Хюнига (126 мл, 1145,4 ммоль) в DMF (200 мл) и дихлорметане (200 мл). Данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, контролируя реакцию с помощью ЖХ/МС. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, и отфильтровывали образовавшееся белое твердое вещество. Оставшийся DMF-раствор разбавляли этилацетатом (1 л), промывали последовательно 3% водным раствором LiCl (3x650 мл), насыщенным раствором NH4Cl (2x500 мл), 0,5н. водным раствором HCl (2x600 мл), солевым раствором (500 мл), насыщенным раствором NaHCO3 (3x500 мл) и солевым раствором (500 мл). Органическую фракцию сушили (MgSO4) и концентрировали с получением неочищенного трипептида (111 г).
Стадия 3.
К раствору полученного на предыдущей стадии сложного метилового эфира (120 г, 207,8 ммоль) в THF (300 мл) и MeOH (75 мл) добавляли раствор LiOH (26, 18 г, 623,4 ммоль) в H2O (150 мл). Данный раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь подкисляли до pH приблизительно 5,5 путем добавления 3н. HCl с использованием охлаждения в ледяной бане, перемешивали в течение 10 мин, и собирали путем фильтрования образовавшееся белое твердое вещество. Твердое вещество промывали еще раз водой, диэтиловым эфиром и гексаном. Твердое вещество сушили под вакуумом при 40°C в течение ночи с получением 95,78 г (82%) указанной на схеме кислоты.
Стадия 4.
К раствору полученной карбоновой кислоты (81,4 г, 144,27 ммоль) в DMF (200 мл) и дихлорметане (200 мл) добавляли HATU (82,3 г, 216,4 ммоль) и основание Хюнига (47,5 мл, 432,8 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, и затем к данной смеси (содержащей вышеуказанную кислоту), за один прием добавляли раствор указанного на схеме
амина (158,7 ммоль) и основания Хюнига (47,5 мл, 1145,4 ммоль) в DMF (200 мл) и дихлорметане (200 мл). Данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, контролируя реакцию с помощью ЖХ/МС. Смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления дихлор-метана, и отфильтровывали образовавшееся белое твердое вещество. Оставшийся DMF-раствор разбавляли этилацетатом (600 мл) и промывали последовательно 3% водным раствором LiCl (2x550 мл), насыщенным раствором NH4Cl (500 мл), 1н. водным раствором HCl (500 мл), насыщенным раствором NaHCO3 (500 мл) и солевым раствором (300 мл). Органическую фракцию сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением неочищенного трипептида (111 г). Стадия 5.
Полученный неочищенный трипептид растворяли в 4н. HCl в диоксане (300 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 2 ч. Затем концентрировали под вакуумом, и досуха упаривали с дихлорметаном (2x 200 мл). Остаток растворяли в EtOAc (600 мл) и насыщенном водном растворе NaHCO3 (1 л). Данную смесь интенсивно перемешивали. Через 10 мин за один прием добавляли угольной кислоты (бицикло[3,1,0]гекс-3-ил) 2,5-диоксо-пирролидин-1-иловый эфир (промежуточное соединение I, 41,4 г, 173,1 ммоль). Полученную смесь перемешивали дополнительно в течение 30 мин, затем органический слой собирали и промывали солевым раствором (500 мл), сушили (Na2SO4) и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле (этилаце-тат/гексан) с выходом 94,44 г (92%) трипептидного промежуточного соединения III.
4. Получение хинолинового промежуточного соединения IV.
Стадия 1.
1-(2-Амино-3-хлор-4-гидроксифенил)этанон (70,7 г, 354 ммоль) перемешивали в 48% водном растворе HBr (500 мл) при 110°C в течение 72 ч. Данную смесь охлаждали при перемешивании до 0°C, затем твердое вещество отфильтровывали и промывали водой. Полученное твердое вещество растирали с насыщенным раствором NaHCO3 (~350 мл), фильтровали, промывали водой и сушили под вакуумом с получением ~ 40 г (61%) неочищенного продукта в виде темно-коричневого твердого вещества. ЖХ/МС=186 (М++1).
Стадия 2.
1- (2-Амино-3-хлор-4-гидроксифенил)этанон (40 г, 215 ммоль) растворяли в DMF (360 мл). Добавляли последовательно карбонат цезия (140 г, 430 ммоль) и бромацетальдегида диметилацеталь (54,5 г, 323 ммоль). Затем данную смесь интенсивно перемешивали при 65°C в течение 24 ч. После охлаждения до комнатной температуры к смеси добавляли EtOAc (1 л) и H2O (1 л). Органический слой экстрагировали EtOAc (1 x400 мл). Объединенный органический слой промывали 3% водным раствором LiCl (2x1 л), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением желаемого продукта в виде белого твердого вещества (39 г, 67%).
Стадия 3.
К смеси 1-[2-амино-3-хлор-4-(2,2-диметоксиэтокси)фенил]этанона (13 г, 47,5 ммоль) и изопропила-минотиазол-4-карбоновой кислоты гидробромида (12,64 г, 47,5 ммоль) в пиридине (150 мл) медленно добавляли оксихлорид фосфора (9,47 г, 61,8 ммоль) при -40°C. Затем данную смесь перемешивали при 0°C в течение 4 ч. После завершения реакции к смеси добавляли по каплям H2O (30 мл). Затем смесь перемешивали при 0°C дополнительно в течение 15 мин. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли EtOAc, промывали насыщенным водным раствором NaHCO3. Органический слой сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в CH2Cl2, к данному раствору медленно добавляли гексаны, начинало выпадать в осадок желтое твердое вещество. Гексаны продолжали добавлять до тех пор, пока в маточной жидкости не оставалась лишь небольшая часть продукта (18 г, 85%).
Стадия 4.
2- Изопропиламинотиазол-4-карбоновой кислоты [6-ацетил-2-хлор-3-(2,2-
диметоксиэтокси)фенил]амид (18 г, 40,7 ммоль) суспендировали в толуоле (400 мл). К данной смеси при
интенсивном перемешивании добавляли NaH (2,4 г, 61 ммоль), в процессе добавления регистрировали
выделение H2. В процессе нагревания до температуры дефлегмации смесь превращалась в прозрачный
раствор. Реакция завершалась после нагревания при температуре дефлегмации в течение 3 ч. Смесь ох-
лаждали до комнатной температуры. К смеси добавляли раствор AcOH (69,2 ммоль) в H2O (3 об.). После
интенсивного перемешивания в течение 1 ч при 0°C твердое вещество собирали путем фильтрования,
2-
В круглодонную колбу объемом 250 мл вносили смесь твердых веществ, 2-хлор-3-метоксифениламина (3,98 г, 25 ммоль) и малоновой кислоты (2,63 г, 25 ммоль), и добавляли оксихлорид фосфора (2,5 мл, 27,5 ммоль). Данную реакционную смесь нагревали до 95°C при интенсивном перемешивании, происходило слабое пенообразование, которое заканчивалось в течение 1,5 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры. В полученное темно-коричневое смолообразное вещество добавляли оксихлорид фосфора (30 мл), и нагревали до 115°C. При нагревании вещество растворялось. После нагревания при температуре дефлегмации в течение 3 ч смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли хлороформом и выливали в смесь лед/вода. pH смеси доводили до 10 путем добавления 3н. водного раствора NaOH. Водный слой экстрагировали хлороформом. Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением продукта в виде белого твердого вещества (2,75 г, выход 46% после 2 стадий). ЖХ/МС=261,9 (1УГ+1).
Смесь пиразола (3,1 г, 45,7 ммоль) и полученного на предыдущей стадии трихлорзамещенного соединения (1,2 г, 4,57 ммоль) нагревали в герметично закрытой пробирке для микроволновой печи. После плавления всех твердых веществ при 80°C из пробирки удаляли остаточную влагу с использованием централизованной вакуумной системы (house vacuum), и смесь оставляли перемешиваться при 115°C в течение 18 ч. Для растворения всех твердых веществ добавляли этилацетат и H2O. Органическую фазу промывали 0,5н. водным раствором HCl и солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Полученное твердое вещество растирали со смесью этилацетат/гексаны, собирали путем фильтрования и дополнительно сушили в условиях глубокого вакуума с получением указанного на схеме пиразола в виде бледно-желтого твердого вещества (1,28 г, с примесью небольшого количества бис-аддукта). ЖХ/МС=294,0 (IVf+l).
Полученный на предыдущей стадии продукт (650 мг, 2,2 ммоль) суспендировали в уксусной кислоте (7 мл) и ацетате натрия (2,2 г, 27 ммоль). Данную смесь нагревали при 130°C в течение 3 суток в герметично закрытой пробирке для микроволновой печи. Смесь отвердевала в процессе охлаждения до комнатной температуры. Для растворения смеси добавляли этилацетат и H2O. К органическому слою добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия, и перемешивали в течение 5 мин. Затем органический слой промывали солевым раствором и концентрировали под вакуумом. Затем остаток растирали со смесью этилацетат/гексаны. Путем фильтрования собирали промежуточное соединение V (чистое вещество согласно ВЭЖХ-анализу) (300 мг, выход 50% после 2 стадий). ЖХ/МС=276,0 (М++1).
Раздел Б.
Пример 1. Получение соединения 1.
Смесь указанных на схеме метилового эфира (0,62 г, 1,1 ммоль), гидроксихинолина (0,34 г, 1,1 ммоль) и карбоната цезия (0,39 г, 1,2 ммоль) в NMP (№метил-2-пирролидоне) (6 мл) перемешивали при 65°C в течение 16 ч. Смесь распределяли между этилацетатом (50 мл) и 3% водным раствором LiCl (50 мл). Органический слой промывали 3% водным раствором LiCl (50 мл) и затем солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хро
матографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением продукта реакции (0,45 г, 64%) в виде красно-коричневого твердого вещества. Данный продукт растворяли в THF (2 мл) и MeOH (2 мл), и полученный раствор обрабатывали гидроксидом лития в воде (0,29 мг/2 мл) в течение 3 ч при комнатной температуре и нейтрализовали путем добавления 4н. HCl. После удаления летучих растворителей данную смесь экстрагировали дихлорметаном, и экстракт концентрировали досуха с получением указанной на схеме кислоты ЖХ/МС=642,3 (IVf+l).
К раствору полученной кислоты (440 мг, 0,69 ммоль) (1Я,28)-1-амино-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты метилового эфира гидрохлорида (147 мг, 0,82 ммоль) и диизо-пропилэтиламина (0,48 мл, 2,8 ммоль) добавляли HATU (390 мг, 1,0 ммоль) при 0°C, и перемешивали в течение 30 мин. К данной смеси добавляли при перемешивании этилацетат (50 мл) и 3% водный раствор LiCl (50 мл). Органический слой отделяли и промывали 3% водным раствором LiCl (50 мл) и затем солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением продукта реакции (0,35 г, 66%) в виде красно-коричневого твердого вещества. ЖХ/МС=765,5 (М++1). Данный продукт растворяли в дихлорметане (3 мл), и полученный раствор обрабатывали 4н. HCl в диоксане (8 мл) в течение 2 ч при комнатной температуре и концентрировали досуха с получением указанного на схеме амина.
К двухфазному раствору полученного амина (38 мг, 0,054 ммоль) в дихлорметане (20 мл) и 5% водном растворе бикарбоната натрия (20 мл) добавляли порциями раствор промежуточного соединения I в дихлорметане до тех пор, пока исходное вещество не было полностью израсходовано (четыре раза с интервалом 30 мин, в целом ~25 мг/1 мл). Отбирали слой дихлорметана и концентрировали. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии), используя в качестве элюентов воду/ацетонитрил (0,05% TFA (трифторуксусная кислота)). Полученный продукт, сложный метиловый эфир, затем растворяли в смеси MeOH/вода (20 мл/2 мл). Добавляли избыток гидроксида лития (100 мг), и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Последовательно добавляли дихлорметан (40 мл) и 1н. HCl (20 мл). При перемешивании добавляли по каплям насыщенный водный раствор бикарбоната натрия до тех пор, пока pH водной фазы не достигал ~7. Слой дихлорметана концентрировали, и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, используя в качестве элюентов во-ду/ацетонитрил (0,05% TFA), с получением 14 мг (33%) соединения 1. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.75 (s, 1H), 8.24 (d, J=9.6 Гц, 1Н), 8.18 (s, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.34 (d, J=9.6 Гц, 1Н), 5.87 (dd, 1Н), 5.77 (brs, 1H), 5.28 (d, J=17.1 Гц, 1Н), 5.11 (d, J=10.5 Гц, 1Н), 4.74 (t, 1H), 4.64 (d, 1Н), 4.51 (t, 1H), 4.20 (m, 2H), 4.09 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.20 (q, 1Н), 1.95 (dd, 1H), 1.85 (dd, 1H), 1.72 (m, 2H), 1.43 (m, 2H), 1.34 (d, 6H), 1.19 (m, 2H), 1.04 (s, 9Н), 0.38 (m, 2H). ЖХ/МС=775.4 (М++1); ЖХ/МС: Rt=2.45 мин.
Пример 2. Получение соединения 2.
Соединение 2 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали карбонат II. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.75 (s, 1H), 8.28 (d, J=9.6 Гц, 1Н), 8.18 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.34 (d, J=9.6 Гц, 1Н), 5.86 (dd, 1H), 5.77 (brs, 1H), 5.28 (d, J=17.1 Гц, 1Н), 5.11 (d, J=10.5 Гц, 1Н), 4.72 (t, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.18
(m, 1H), 4.12 (m, 2H), 4.06 (s, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.20 (q, 1H), 1.93 (dd, 1H), 1.4-1.4 (m, 4H),
1.34 (d, 6Н), 1.30 (m, 2H), 1.22 (m, 2H), 1.04 (s, 9H), 0.38 (q, 1H), -0.14 (m, 1H). ЖХ/МС=775.4 (М++1); ЖХ/МС: Rt=2.33 мин.
Пример 3. Получение соединения 3.
Соединение 3 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали трипептидное промежуточное соединение, которое получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали 8-хлор-2-(2-изопропиламинотиазол-4-ил)-7-метоксихинолин-4-ол. ЖХ/МС=809,5 (М++1); ЖХ/МС Rt=4,42 мин (продолжительность хроматографии: 6 мин).
Пример 4. Получение соединения 4.
Соединение 4 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 2, за исключением того, что использовали трипептид, который получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали 8-хлор-2-(2-изопропиламинотиазол-4-ил)-7-метоксихинолин-4-ол. ЖХ/МС=809,5 (М++1); ЖХ/МС: Rt=4,38 мин (продолжительность хроматографии: 6 мин).
Пример 5. Получение соединения 5.
Соединение 5 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 3, за исключением того, что использовали указанный на схеме карбонат, который получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали экзо-бицикло[2,2,1]гептан-2-ол. ЖХ/МС=823,3 (М++1); аналитическая ВЭЖХ: Rt=5,40 мин (продолжительность хроматографии: 7 мин).
Пример 6. Получение соединения 6
Соединение 6 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 3, за исключением того, что использовали указанный на схеме карбонат, который получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали (+)-эндо-бицикло[2,2,1]гептан-2-ол. ЖХ/МС=823,3 (М++1); аналитическая ВЭЖХ: Rt=5,41 мин (продолжительность хроматографии: 7 мин).
Соединение 7 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 3, за исключением того, что использовали трипептид, который получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали (Ж,28)-1-амино-2-этилциклопропанкарбоновой кислоты метилового эфира гидрохлорид.
Указанный на схеме карбонат получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали транс-6,6-дифтор-бицикло[3,1,0]гексан-3-ол (полученный в соответствии с WO266640558, с последующим хроматографи-ческим разделением цис- и транс-изомеров на силикагеле). ЖХ/МС=847,5 (М++1); ЖХ/МС: Rt=2,76 мин.
Пример 8. Получение соединения 8.
Соединение 8 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 7, за исключением того, что использовали указанный на схеме карбонат, который получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 1, за исключением того, что использовали цис-6,6-дифтор-бицикло[3,1,0]гексан-3-ол.
ЖХ/МС=847,5 (М++1); ЖХ/МС: Rt=2,73 мин. Пример 9. Получение соединения 9.
Указанный на схеме трипептид (391 мг, 0,55 ммоль) и промежуточное соединение V (150 мг, 0,55 ммоль) растворяли в NMP (3 мл). К полученной смеси добавляли карбонат цезия (352 мг, 1,08 ммоль), и данную смесь нагревали при 70°C в течение 4 ч. К остатку добавляли этилацетат и 3% водный раствор LiCl. Органический слой промывали 3% водным раствором LiCl (х1) и солевым раствором. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в THF (1,5 мл). К данной смеси добавляли последовательно водный раствор LiOH (5,5 ммоль, 1,5 мл) и MeOH (2 мл). Реакция завершалась после интенсивного перемешивания в течение 1,5 ч при комнатной температуре. pH подводили до 5 путем добавления 4н. водного раствора HCl. К остатку добавляли этилацетат и солевой раствор, и органический слой концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, используя в качестве элюентов воду/ацетонитрил (0,05% TFA), с получением соединения 9 (120 мг, часть продукта теряли в процессе очистки вследствие плохой растворимости). 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 5 8.78 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.04 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.40 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.01 (d, J=8.4 Гц, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.64-5.77 (m, 1H), 5.58 (brs, 1H), 5.20 (d, J=17.7 Гц, 1H), 5.05 (d, J=11.4 Гц, 1H), 4.59 (t, 1H), 4.44 (t, J=8.4 Гц, 1Н), 4.33 (d, 1H), 3.94-4.07 (m, 2H), 4.02 (s, 3H), 2.48-2.60 (m, 1H), 2.20-2.35 (m, 1H), 1.85-2.11 (m, 2H), 1.72-1.85 (m, 1H), 1.50-1.51 (m, 2H), 1.05-1.35 (m, 4H), 0.93 (s, 9H), 0.39 (q, 1H), 0.25-0.38 (m, 1H). ЖХ/МС=735.4 (М++1).
Соединение 10 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 9. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d,): 5 8.78 (s, 1H), 8.31 (brs, 1H), 8.04 (d, J=9.6 Гц, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.38 (d, J=9.3 Гц, 1Н), 6.98 (d, J=9.9 Гц, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.59 (t, 1H), 4.44 (t, J=8.4 Гц, 1H), 4.33 (d, 1H), 3.94-4.07 (m, 2H), 4.02 (s, 3H), 2.48-2.60 (m, 1H), 2.20-2.35 (m, 1H), 1.85-2.11 (m, 2H), 1.40-1.60 (m, 2H), 1.06-1.30 (m, 4H), 0.93 (s, 9H), 0.90-1.05 (m, 4H), 0.39 (q, 1H), 0.250.38 (m, 1Н). ЖХ/МС=737.4 (M++1).
Пример 11. Получение соединения 11.
Соединение 11 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 9. ЖХ/МС=863,5 (М++1). Пример 12. Получение соединения 12.
Соединение 11 (25 мг) растворяли в 50% растворе TFA в CH2O2. Реакция завершалась после перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в CH3CN и H2O, замораживали и лиофилизировали с получением соединения 12 в виде бледно-желтого твердого вещества (20 мг). ЖХ/МС=763,5 (М++1).
Пример 13. Получение соединения 13.
Указанный на схеме сложный метиловый эфир (0,95 г, 1,08 ммоль) растворяли в CH2O2 (10 мл), и добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане (30 мл). Реакция завершалась после перемешивания при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь концентрировали под вакуумом. К остатку добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (80 мл) и CH2O2 (80 мл). Продолжали интенсивное перемешивание до тех пор, пока остаток полностью не растворился. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. 250 мг (0,322 ммоль) полученного вещества растворяли в CH2Cl2 (2 мл), и затем добавляли уксусную кислоту (56 мкл, 0,967 ммоль) и ацетон (72 мкл, 0,967). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем охлаждали до 0°C, и за один прием добавляли триацетоксиборгидрид натрия (102 мг, 0,483 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 10 ч к данной смеси добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и CH2O2. Органический слой промывали солевым раствором и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилаце
тат/гексаны) с получением продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (180 мг). Полученное твердое вещество растворяли в THF (4 мл), и добавляли LiOH (184 мг, 44 ммоль) в H2O (4 мл) и затем MeOH (4 мл). Реакция завершалась в течение 2 ч. Смесь концентрировали под вакуумом. pH доводили до 2 путем добавления TFA. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, используя в качестве элюентов воду/ацетонитрил (0,05% TFA), с получением соединения 13 в виде ярко-желтого твердого вещества (128 мг). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.66 (s, 1H), 8.22 (d, J=9.3 Гц, 1Н), 8.00 (m, 1H), 7.94 (d, J=7.5 Гц, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.58 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.14 (d, J=8.4 Гц, 1H), 5.70 (s, 1H), 4.72 (t, J=8.4 Гц, 1H), 4.54 (d, J=12.3 Гц, 1H), 4.39 (t, J=6.6 Гц, 1H), 4.01-4.25 (m, 2H), 4.13 (s, 3H), 2.73-2.83 (m, 1H), 2.50-2.62 (m, 1H), 1.85-1.92 (m, 1H), 1.60-1.80 (m, 5Н), 1.45-1.60 (3H), 1.47 (d, 6Н), 1.101.30 (m, 3H), 1.00 (s, 9Н), 0.32-0.40 (m, 1H), 0.25-0.35 (m, 1H); ЖХ/МС=805.5 (М++1). Пример 14. Получение соединения 14.
Указанный на схеме циклический трипептид (5 г, 10,4 ммоль) и пара-толуолсульфонил гидразид (14,6 г, 78,2 ммоль) растворяли в диметиловом эфире этиленгликоля (90 мл). Добавляли последовательно ацетат натрия (12,8 г, 156 ммоль) и H2O (10 мл). Затем данную суспензию нагревали до 95°C. После перемешивания в течение 8 ч смесь охлаждали до комнатной температуры. К смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Органический слой промывали 0,5н. водным раствором HCl, солевым раствором и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением желаемого продукта в виде белого твердого вещества (4,2 г, 84%). Полученное твердое вещество (4,2 г, 8,7 ммоль) и DABCO (3,2 г, 27,9 ммоль) растворяли в толуоле (12 мл). К данной смеси добавляли по каплям 4-бромбензолсульфонилхлорид (7,1 г 27,9 ммоль) в толуоле (12 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. К смеси добавляли 5% водный раствор карбоната натрия и этилацетат, и интенсивно перемешивали в течение 20 мин. Водный слой экстрагировали эти-лацетатом (х1). Объединенный органический слой промывали 5% водным раствором карбоната натрия (х 2), 1н. водным раствором HCl (х 1), солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта в виде желтоватого твердого вещества. Полученный неочищенный продукт растворяли в CH2Cl2, и добавляли 4н. HCl в 1,4-диоксане. Реакция завершалась после перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали под вакуумом и дополнительно сушили в условиях глубокого вакуума в течение ночи. К 2,5 г неочищенного остатка (~3,9 ммоль) добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Данную смесь интенсивно перемешивали до тех пор, пока не растворилось твердое вещество (поддерживая pH водного слоя > 8). К смеси добавляли P3 сукцинимидиловый эфир (1,13 г, 4,7 ммоль) в этилацетате. Реакция завершалась в течение 30 мин. Водный слой экстрагировали этилацетатом (х1). Объединенные органические слои концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением указанного на схеме брозилата в виде белого твердого вещества (2,5 г, выход 88% за 4 стадии). ЖХ/МС=724,3 (М++1).
Соединение 14 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 9, за исключением того, что использовали указанные на схеме макроцикличе-ский трипептид и хинолин. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.65 (s, 1H), 8.29 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.64 (d, J=9.6 Гц, 1H), 5.71 (s, 1H), 4.78 (d, J=8.1, 1H), 4.72 (d, 1H), 4.40-4.52 (m, 3H), 4.25 (d, 1H), 4.00-4.18 (m, 2Н), 3.85-3.89 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 2.63-2.80 (m, 2Н), 1.10-2.00 (m, 23Н), 1.35 (d, J=6.3 Гц, 6Н), 0.300.39 (m, 2Н). ЖХ/МС=851.5 (М++1).
Пример 15. Получение соединения 15.
при получении соединения 9, за исключением того, что использовали указанные на схеме макроцикличе-ский трипептид и хинолин. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.65 (s, 1H), 8.33 (d, J=9.6 Гц, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.60 (d, J=9.3 Гц, 1H), 5.72 (s, 1H), 4.75-4.82 (m, 3H), 4.58-4.70 (m, 2Н), 4.30 (d, 1H), 4.09 (d, 1H), 3.92-4.06 (brs, 4H), 3.81 (t, 2Н), 3.59 (brs, 4Н), 2.60-2.80 (m, 2Н), 1.10-2.00 (m, 23Н), 1.38 (d, J=5.4 Гц, 6Н), 0.32-0.42 (m, 2Н). ЖХ/МС=921.5 (М++1). Пример 16. Получение соединения 16.
Соединение 16 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 9. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d6): 5 8.59 (s, 1H), 8.11 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.80-7.96 (m, 4H), 7.51 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.04 (d, 1H), 5.65-5.78 (m, 1H), 5.58 (s, 1H), 5.18 (d, 1H), 5.06 (d, J=10.5 Гц), 4.62 (t, 1H), 4.45 (t, 1H), 4.32 (t, 1H), 3.90-4.20 (m, 2H), 4.04 (s, 3H), 2.50-2.65 (m, 1H), 2.22-2.38 (m, 1H), 1.78-2.10 (m, 3H), 1.42-1.60 (m, 3H), 1.10-1.38 (3H), 1.47 (d, 6H), 1.10-1.30 (m, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.23-0.48 (m, 1H); ЖХ/МС=803.5 (М++1).
Пример 17. Получение соединения 17.
В сухую круглодонную колбу (250 мл), продуваемую азотом, вносили указанный на схеме Boc-защищенный дипептид. Затем в колбу добавляли безводный CH2Cl2 (15 мл), и полученную прозрачную желтую смесь перемешивали до полностью гомогенного состояния. Затем в колбу добавляли по каплям HCl (5 мл, 4н. раствор в диоксане), и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до тех пор, пока не было полностью израсходовано исходное вещество (1,5 ч, по данным ЖХ/МС). Растворитель удаляли при пониженном давлении, и полученную соль амина использовали на следующей стадии. ЖХ/МС=473,0 (М++1).
В круглодонную колбу (500 мл), содержащую полученную соль амина, добавляли указанную на схеме аминокислоту (951,63 мг, 3,67 ммоль) и CH2Cl2 (150 мл). Затем добавляли DIPEA (N,N-диизопропилэтиламин) (2,56 мл, 14,68 ммоль), и полученную гомогенную смесь охлаждали до 0°C. Затем в колбу добавляли HATU (3,49 г, 9,18 ммоль), и данную реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь продолжали перемешивать при комнатной температуре до тех пор, пока не было полностью израсходовано исходное вещество. После перемешивания в течение ночи реакция завершалась (согласно ТСХ- и ЖХ/МС-анализу). Растворитель удаляли при пониженном давлении, и полученный трипептид использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=714,2 (М++1).
В круглодонную колбу (100 мл), содержащую полученный на предыдущей стадии трипептид, добавляли безводный CH2Cl2 (15 мл). Данную смесь оставляли перемешиваться в течение нескольких минут. Добавляли по каплям HCl (9,18 мл, 4н. раствор диоксане). Данную реакционную смесь продолжали перемешивать при комнатной температуре в течение 1,5 ч, пока ЖХ/МС-анализ не показывал, что исходное вещество полностью израсходовано. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и полученную соль амина использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=614Д (M^+l).
В круглодонную колбу (250 мл), содержащую полученную на предыдущей стадии соль амина, добавляли EtOAc (65 мл). Затем добавляли насыщенный раствор NaHCO3 (60 мл), и полученный двухфазный раствор интенсивно перемешивали в течение 1 ч, пока обе фазы не становились гомогенными. В отдельной круглодонной колбе (50 мл) готовили раствор указанного на схеме эфира угольной кислоты (1,05 г, 4,40 ммоль) в EtOAc (15 мл), данный раствор добавляли в реакционную колбу через канюлю. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, пока ЖХ/МС-анализ не показывал, что исходное вещество полностью израсходовано. Органический слой отделяли, и удаляли при пониженном давлении растворитель. Полученное неочищенное вещество очищали с использованием флэш-хроматографи (EtOAc/1:1 EtOAc/MeOH) с выходом 1,0 г (выход 37% за 4 стадии) желаемого три-
пептида. ЖХ/МС=710,2 (М++1).
В сухую грушевидную колбу (50 мл), продуваемую аргоном, вносили указанный на схеме хинолин (500 мг, 1,32 ммоль), полученный трипептид (1,00 г, 1,35 ммоль) и безводный NMP (4 мл). Колбу слегка нагревали для улучшения растворения. Затем добавляли Cs2CO3 (531,24 мг, 1,63 ммоль), и колбу помещали в предварительно нагретую до 65°C масляную баню. После перемешивания в течение 2,5 ч согласно ЖХ/МС-анализу 50% исходного вещества превращалось в желаемый продукт. Температуру маслян-ной бани увеличивали до 80°C, и реакционную смесь продолжали перемешивать еще в течение 2 ч. Затем колбу охлаждали до комнатной температуры, и добавляли последовательно раствор LiOH в H2O (10 мл, 25 ммоль) и раствор MeOH/THF (1:1; 40 мл). Затем колбу помещали в предварительно нагретую до 45°C масляную баню, и перемешивание продолжали до тех пор, пока исходное вещество не было полностью израсходовано. Через 3,5 ч растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное неочищенное вещество разбавляли EtOAc и нейтрализовали путем добавления 1 М HCl. Водный слой экстрагировали EtOAc (3x15 мл), и объединенные органические слои промывали 2% LiCl (3x10 мл) и солевым раствором (3x10 мл) и затем сушили с использованием MgSO4. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и данное неочищенное вещество очищали, используя препаративную ВЭЖХ (вода/ацетонитрил (0,05% TFA)), с получением соединения 17 (400 мг; выход 35% за 2 стадии). 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц) 5 8.62 (s, 1H), 8.28 (m, 1H), 7.67 (m, 2Н), 5.82 (m, 1H), 5.30 (m, 1H), 5.13 (m, 2Н), 4.72 (m, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.03 (m, 7Н), 3.92 (m, 6Н), 3.47 (s, 2H), 3.32 (s, 2Н), 2.83 (m, 2Н), 2.61 (m, 2Н), 1.92 (m, 2Н), 1.72 (m, 4Н), 1.56 (m, 4Н), 1.18 (m, 6Н), 0.27 (m, 2Н).
Пример 18. Получение соединения 18.
добавляли NaH (589 мг, 14,73 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Через 30 мин к смеси добавляли 2-(2-бром-этокси)тетрагидропиран (1,05 мл, 6,95 ммоль). Затем данную смесь интенсивно перемешивали при комнатной температуре, контролируя реакцию с помощью ВЭЖХ, ЖХ/МС. Через 18 ч реакционную смесь разбавляли EtOAc и 3% водным раствором LiCl и подкисляли до pH 6. Слои разделяли, и водный слой снова экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли и промывали солевым раствором, сушили (MgSO4) и концентрировали под вакуумом с получением желаемого продукта (2,61 г, 92%). ЖХ/МС=430 (М++1).
Стадии 1 и 2.
Использовали описанные выше методики. ЖХ/МС=890 (М++1). Стадия 3.
Полученную на предыдущей стадии кислоту (503,5 мг, 0,566 ммоль) растворяли в MeOH (1,80 мл) и охлаждали до 0°C. К данному раствору добавляли концентрированную HCl (1,8 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч. После завершения реакции смесь концентрировали для удаления растворителей. Данный неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом соединения 18 в виде желтого твердого вещества (159,2 мг), ЖХ/МС=805 (М++1).
Пример 19. Получение соединения 19.
Стадия 1.
Смесь указанной на схеме кислоты, пара-TsNHNH2 и NaOAc в DME (1,2-диметоксиэтане) (10 мл)/H2O (1 мл) нагревали до 95°C в течение 2 ч. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл) и 1н. HCl (до pH приблизительно 3). Слои разделяли, и выполняли обратную экстракцию водного слоя EtOAc (этилацетатом). Органические слои объединяли и концентрировали. Данный неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением желтого твердого вещества. ЖХ/МС=892 (М++1).
Стадия 2.
Полученную на предыдущей стадии кислоту растворяли в MeOH (3 мл) и охлаждали до 0°C. К данному раствору добавляли концентрированную HCl (3 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч. После завершения реакции смесь концентрировали для удаления растворителей. Данный неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением желаемого соединения 19 в виде желтого твердого вещества (187,7 мг). ЖХ/МС=807 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CDC^): 5 8.80 (b, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.9 (m, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.30 (d, 1H), 5.90-5.80 (m, 2H), 5.10 (m, 1H), 4.80-4.40 (m,4H), 4.3 (m, 3H), 4.05 (m, 3H), 3.20 (m, 1H), 3.00-2.70 (m, 1H), 2.20 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 6H), 1.50 (m, 2H), 1.3 (m, 9H), 1.10-0.90 (m, 14H), 0.50 (m, 2H).
Стадия 1.
Использовали методики, описанные выше; в качестве исходного вещества использовали указанный на схеме анилин (1,877 г), получали 2,56 г продукта. ЖХ/МС=337 (М++1).
Стадия 2.
Полученное на предыдущей стадии амидное соединенние (1,50 г, 4,45 ммоль) растворяли в трет-BuOH (12,5 мл). К данной смеси при интенсивном перемешивании добавляли трет-BuOK (9,3 мл, 4,45 ммоль). Реакция завершалась через 6 ч при 75°C. Смесь охлаждали до комнатной температуры. Подкисляли путем добавления 4н. HCl (5 мл). Данную суспензию обрабатывали NaH2PO4 (0,5н.) и фильтровали. Фильтрационный осадок промывали водой и диэтиловым эфиром и затем сушили с получением желаемого продукта (1,256 г, 89%). ЖХ/МС=319 (М++1).
Соединение 20 синтезировали с использованием методики, описанной выше. ЖХ/МС=779 (М++1).
1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.13 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.90-5.78 (m, 1H), 5.53 (b, 1H), 5.31-5.09 (dd, 2H).4.68-4.49 m, 3H), 4.21 (s, 1H), 4.07 (b, 5H), 3.22 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 2H), 1.44 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.36-1.14 (m, 4Н), 1.01 (s, 9Н), 0.97 (s, 2Н), 0.33 (m, 2Н).
Пример 21. Получение соединения 21.
Соединение 21 синтезировали с использованием методики, описанной выше. ЖХ/МС=781 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.13 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.53 (b, 1H) 4.70-4.40 (m, 3H), 4.21 (s, 1H), 4.07 (b, 5H), 3.67 (b, 2H), 2.72 (m, 1H), 2.52 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 173-1.63 (m, 2Н), 1.44 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.36-1.14 (m, 4Н), 1.01 (s, 9Н), 0.97 (s, 2Н), 0.33 (m, 2Н).
Пример 22. Получение соединения 22.
Указанный на схеме бис-фенол (600 мг, 1,79 ммоль) растворяли в DMF (18 мл) при 0°C, и к данной смеси добавляли Cs2CO3 (584 мг, 1,79 ммоль) и затем бромацетонитрил (0,15 мл). Полученную смесь нагревали до 65°C, контролируя реакцию с помощью ВЭЖХ и ЖХ/МС. Через 4 ч реакционную смесь разбавляли EtOAc и 3% водным раствором LiCl. Слои разделяли, и водный слой снова экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли и промывали солевым раствором, сушили (MgSO4) и концентрировали под вакуумом с получением указанного на схеме неочищенного продукта (536 мг, 80%). ЖХ/МС=375 (М++1).
Стадия 1.
Использовали методики, описанные выше; из 508 мг промежуточного соединения II получали 491 мг продукта. ЖХ/МС=851 (М++1). Стадия 2.
Полученный сложный метиловый эфир (491 мг, 0,578 ммоль) и NaI (1,738 г) смешивали в пиридине и нагревали до 115°C в течение 19 ч. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и подкисляли до pH 4 путем добавления 0,5н. HCl. Экстрагировали EtOAc (3х), органические фазы объединяли и сушили над MgSO4. Концентрированный неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением желаемого соединения 22 в виде желтого твердого вещества (71 мг, 14,7%), ЖХ/МС=837 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.63 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 5.69 (b, 1H), 5.38 (b, 2H), 4.73-4.50 (m, 3H), 4.16 (s, 1H), 4.20-3.98 (m, 3H), 2.80-2.58 (m, 2Н), 2.0-1.8 (m, 2Н), 1.66 (m, 4Н), 0.98 (s, 2Н), 0.34 (m, 2Н).
Пример 23. Получение соединения 23.
Стадия 1.
бис-Фенол (7 г, 23,4 ммоль) растворяли в DMF (50 мл), к данной смеси добавляли последовательно карбонат цезия (15,25 г, 46,8 ммоль) и бромацетальдегида диметилацеталь (4,13 мл, 35,1 ммоль). Затем смесь интенсивно перемешивали при 65°C, контролируя реакцию с помощью ВЭЖХ и ЖХ/МС. Добавляли еще 0,5 экв. бромацетальдегида диметилацеталя и 1 экв. карбоната цезия. Через 18 ч ЖХ/МС-анализ показывал, что исходное вещество полностью израсходовано, но образовалась большое количество бис-алкилированного побочного продукта. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc. Смесь промывали 3% водным раствором LiCl, солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя МеОН/ЕЮАс, с получением желаемого продукта (1,72 г, 19%). ЖХ/МС=390 (М++1).
Стадия 2.
К смеси указанного на схеме трипептида (1,46 г, 3,75 ммоль) и карбоната цезия (1,58 г, 4,88 ммоль) в NMP (18,5 мл) при комнатной температуре добавляли за один прием, полученный на предыдущей стадии хинолин (2,94 г, 4,12 ммоль). Данную смесь перемешивали при 65°C в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к смеси добавляли EtOAc (100 мл). Смесь промывали 3% водным раствором LiCl (1 х 100 мл), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя EtOAc/гексан, с получением желаемого продукта в виде светло-коричневого твердого вещества (2,07 г, 64%). ЖХ/МС=837 (М++18).
К раствору полученного ацеталя (1,24 г, 1,43 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (16 мл) добавляли 1,4н. HCl в H2O (6 мл). Данную смесь перемешивали при 60°C в течение 1,5 ч. После завершения реакции смесь концентрировали для удаления растворителей, выпаривали с толуолом (х2) для удаления остатка уксусной кислоты. Затем остаток растворяли в EtOAc (100 мл) и насыщенном NaHCO3 (100 мл), органический слой отделяли, промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток дополнительно сушили в условиях глубокого вакуума в течение 1 ч с получением желаемого альдегида (1,16 г) и использовали как есть на следующей стадии.
Стадия 4.
Полученный неочищенный альдегид растворяли в CH2Cl2 (16 мл), и затем при 0°C к данной смеси добавляли морфолин (164 мкл, 1,89 ммоль) и триацетоксиборгидрид натрия (462 мг, 2,18 ммоль). Затем к полученной смеси добавляли по каплям ледяную уксусную кислоту (25 мкл, 7,8 ммоль). Реакция завершалась в течение 10 мин при 0°C. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного водного раствора NaHCO3. После перемешивания в течение 20 мин органический слой промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Данный неочищенный продукт согласно ЖХ/МС-анализу был достаточно чистым для дальнейшего использования без дополнительной очистки.
ЖХ/МС=890 (М++1).
Полученный неочищенный продукт растворяли в THF (60 мл), и затем добавляли последовательно LiOH (1200 мг, 28,6 ммоль) в H2O (20 мл) и MeOH (4 мл). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. После завершения реакции pH доводили до 4 путем добавления TFA при 0°C. Смесь экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом соединения 23 в виде желтого твердого вещества (1,086 г, 73%). ЖХ/МС=876 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 7.94 (d, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.04-7.01 (m, 1H), 5.39 (m, 1H), 4.32-4.20 (m, 5Н), 3.80-3.68 (m, 4Н), 3.59 (bs, 3H), 3.40 (m, 2Н), 3.35-3.24 (m, 4Н), 3.93-3.92 (m, 2Н), 2.40-2.19 (m, 2Н), 1.65-1.47 (m, 2Н), 1.33-1.25 (m, 3H), 1.16-1.11 (m, 1H), 1.05-1.01 (m, 1H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.86-0.79 (m, 3H), 0.65 (s, 9Н), 0.57 (m,
2Н).
Стадия 1.
Смесь 2-аминооксазол-4-карбоновой кислоты этилового эфира (500 мг, 3,2 ммоль) и ацетона (2,35 мл, 32 ммоль) в THF (6 мл) перемешивали при комнатной температуре. Медленно, контролируя выделение тепла и выделение пузырьков газа, добавляли через шприц боран (BH3-SMe2) (10 М в THF, 0,64 мл, 6,4 ммоль). Затем таким же способом добавляли AcOH (0,362 мл, 6,4 ммоль). (Через 18 ч добавляли еще 2 экв. борана и AcOH). Данную смесь перемешивали в атмосфере азота, контролируя реакцию с помощью ЖХ/МС. Реакцию продолжали в течение 3 дней при комнатной температуре, затем реакционную смесь, которая все еще содержала некоторое количество SM, концентрировали под вакуумом. Полученный остаток растворяли в EtOAc (100 мл), промывали насыщенным раствором NH4Cl, 0,1 М NH4OH и солевым раствором. Органическую фазу сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Данный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле, используя для элюирования EtOAc/гексаны, с получением желаемого продукта (0,40 г, 64%). ЖХ/МС=199 (М++1).
Стадия 2.
К смеси полученного на предыдущей стадии сложного эфира, (2,5, 10,86 ммоль) EtOH (42 мл) и воды (28 мл) добавляли NaOH (3,1 г, 77,4 ммоль). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакцию контролировали с помощью ТСХ. После завершения обработки смесь охлаждали в ледяной бане и подкисляли до pH 3 путем добавления концентрированной HCl. Затем смесь концентрировали под вакуумом для удаления этанола. Оставшееся вещество экстрагировали CH2Cl2 (3х200 мл). Органические фазы объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали с получением желаемого продукта (1,86 г, 87%). ЖХ/МС=171 (М++1).
К полученной на предыдущей стадии кислоте (1,86 г, 10,94 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли CDI (1,1'-карбонилдиимидазол) (1,774 г, 10,94 ммоль). Затем данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли указанный на схеме анилин (1,446 г, 8,75 ммоль) и затем CH3SO3H (2,13 мл, 32,82 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. После завершения реакции смесь разбавляли DCM (100 мл) и промывали 1н. HCl (2x100 мл). К органической фазе добавляли K2CO3 (3,02 г, 21,88 ммоль), и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Твердое вещество удаляли путем фильтрования, и полученный фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле, используя для элюирования EtOAc/гексан, с получением желаемого продукта (863,4 мг, 22%). ЖХ/МС=382 (М++1).
Стадия 4.
Полученный на предыдущей стадии метилкетон (863,4 мг, 2,45 ммоль) суспендировали в толуоле (20 мл). К данной смеси при интенсивном перемешивании добавляли NaH (147,3 мг, 3,68 ммоль); в процессе добавления регистрировали выделение H2. Реакционную смесь подвергали дефлегмации (110°C) в течение 3 ч. Смесь не превратилась в прозрачный раствор. Согласно ЖХ/МС-анализу еще оставалось приблизительно 1/3 исходного вещества. После охлаждения осторожно добавляли приблизительно 80 мг NaH и затем, для улучшения растворения, 20 мл THF. Данную смесь нагревали дополнительно в течение 2 ч, реакция доходила почти до конца. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь гасили, доводя значение pH до приблизительно 2-3 путем добавления концентрированной HCl. Данную суспензию перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляли последовательно 10 мл CH3CN, 5 мл H2O и 20 мл диэтилового эфира. Смесь перемешивали в течение еще 0,5 ч, затем твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали диэтиловым эфиром и гексаном. Влажный фильтрационный осадок сушили до постоянной массы в условиях глубокого вакуума (390 мг HCl-соли, 840 мг, 100%). ЖХ/МС=334 (М++1).
Стадия 5.
Использовали описанные выше методики; после очистки путем препаративной ВЭЖХ получали соединение 24 в виде желтого твердого вещества (30 мг). ЖХ/МС=794 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.74 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 7.59 (m, 2H), 5.90-5.80 (m, 1H), 5.65 (bs, 1H), 5.31-5.09 (dd, 2H).4.73 (t, 1H), 4.54 (m, 1H), 4.14 (s, 3H), 4.11-3.99 (m, 5Н), 2.81-2.60 (m, 2Н), 2.2 (m, 1H), 2.00-1.60 (m, 4Н), 1.50-1.40 (m, 2Н), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.20 (m, 2Н), 1.02 (s, 9Н), 0.34 (m, 2Н).
Пример 25. Получение соединения 25.
Использовали описанные выше методики; после очистки путем препаративной ВЭЖХ получали соединение 25 в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=796 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.61 (m, 2H), 5.67 (bs, 1H), 4.73 (t, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.15 (s, 3H), 4.12 (m, 5H), 2.81-2.60 (m, 2H), 2.2 (m, 1H), 2.00-1.40 (m, 6Н), 1.36 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.23 (m, 2Н), 1.02 (s, 9Н), 0.34 (m, 2Н).
Стадия 1.
Смесь 2-оксомасляной кислоты (15 г, 147 ммоль) и пара-TsOH (300 мг) в бензоле (60 мл) и EtOH (125 мл) перемешивали при 90°C (при температуре дефлегмации) в течение 5 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали под вакуумом (температура водяной бани < 20°C). Полученный остаток растворяли в EtOAc (200 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO3 и солевым раствором. Органическую фазу сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом (температура водяной бани ниже 20°C) с получением желаемого продукта (12,2 г, 64%). 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): 5 4.30 (q, 2H), 2.85 (q, 2H), 1.35 (t, 3H), 1.11 (t, 3H).
Стадия 2.
К суспензии CuBr2 (32 г, 147, 1 ммоль) в EtOAc (500 мл) добавляли полученный на предыдущей стадии сложный эфир (6,2 г, 47,7 ммоль) в CHCl3 (200 мл). Данную смесь перемешивали при 90°C (при температуре дефлегмации) в течение 16 ч. Ход реакции контролировали с помощью ТСХ-анализа (EtOAc:гексан=1:4, Rf (коэффициент удерживания)=0,5, Rj=0,4). Смесь охлаждали до комнатной температуры и затем фильтровали через подушку силикагеля, используя для элюирования 200 мл раствора EtOAc/гексан (1:1). Фильтрат концентрировали под вакуумом (температура водяной бани < 20°C) с получением желаемого продукта (10,75 г, 108%). Данный продукт не удалась идентифицировать с помощью ЖХ/МС-анализа. 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3): 5 5.17 (q, 1H), 4.38 (q, 2H), 1.81 (t, 3H), 1.38 (t, 3H).
Стадия 3.
Смесь полученного на предыдущей стадии бромида (1,672 г, 8 ммоль) и изопропил-тиомочевины (0,944 г, 8 ммоль) в 12 мл EtOH нагревали в микроволновой печи при 50°C в течение 15 мин. Смесь охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле, используя для элюирования EtOAc/гексан, с получением желаемого
продукта. ЖХ/МС=229,9 (М++1).
Стадия 4.
К смеси полученного на предыдущей стадии сложного эфира (1,7 г, 7,45 ммоль) в EtOH (12 мл) и воде (8 мл) добавляли NaOH (1,8 г, 44,7 ммоль). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Ход реакции контролировали с помощью ТСХ-анализа. После завершения реакции смесь охлаждали в ледяной бане и подкисляли до pH 3 путем добавления концентрированной HCl. Затем смесь концентрировали под вакуумом для удаления этанола. Оставшуюся суспензию экстрагировали CH2Cl2 (3x200 мл). Органические фазы объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали с получением в качестве продукта реакции желаемой кислоты (1,2 г, 80%).
Стадия 5.
К полученной на предыдущей стадии кислоте (1,2 г, 5,99 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли CDI (972 мг, 5,99 ммоль. Затем данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли указанный на схеме анилин (792 мг, 4,89 ммоль) и затем CH3SO3H (1,17 мл, 18 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. После завершения реакции реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл) и промывали 1н. HCl (2x100 мл). К органической фазе добавляли K2CO3 (1,66 г, 12 ммоль), и данную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Твердое вещество удаляли путем фильтрования, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле, используя для элюирования EtOAc/гексан, с получением в качестве продукта реакции желаемого амида (1,46 г, 70%). ЖХ/МС=382 (М++1).
Полученный на предыдущей стадии амид (1,46 г, 3,82 ммоль) суспендировали в толуоле (30 мл). К данной смеси при интенсивном перемешивании добавляли NaH (0,23 г, 5,73 ммоль), в процессе добавления регистрировали выделение H2. Во время нагревания до температуры дефлегмации смесь превращалась в прозрачный раствор. Реакция завершалась после нагревания при температуре дефлегмации в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили путем добавления IPA (5 мл), и затем добавляли гептан (30 мл). Данную суспензию перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Образовавшееся твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали диэтиловым эфиром. Собранное твердое вещество растворяли в AcCN/H2O (2:1) и затем подкисляли путем добавления 3н. HCl. Полученную суспензию перемешивали в течение 1 ч, и твердое вещество снова собирали путем фильтрования. Влажный фильтрационный осадок сушили до постоянной массы в условиях глубокого вакуума (390 мг HCl-соли, 1,07 ммоль, 28%). ЖХ/МС=363 (М++1).
Стадия 7.
К смеси полученного на предыдущей стадии хинолина (0,39 г, 1,07 ммоль) и указанного на схеме брозилата (692 мг, 0,974 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли карбонат цезия (696 мг, 2,14 ммоль). Данную смесь перемешивали при 65°C в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к данной смеси добавляли EtOAc (60 мл) и 3% водный раствор LiCl (60 мл). Органический слой промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением желаемого сложного метилового эфира в виде желтого твердого вещества (0,59 г). ЖХ/МС=835).
Стадия 8.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир растворяли в THF (20 мл), добавляли LiOH (0,6 г) в H2O (10 мл), затем добавляли MeOH (1 мл). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. После завершения реакции pH доводили до 7 путем добавления 40% TFA в H2O при 0°C. Смесь экстрагировали EtOAc. Объединенный органический слой концентрировали под вакуумом и затем очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением желаемого соединение 26 в виде желтого твердого вещества (714 мг, 79%). ЖХ/МС=823 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.74 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.00-5.74 (m, 2H), 5.31-5.09 (dd, 2H).4.69 (t, 1H), 4.52 (dd, 1H), 4.21-3.96 (m, 10H), 2.81 (m, 5H), 2.58 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.85-1.60 (m, 4H), 1.45 (m, 1H), 1.38 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.20 (m, 2H), 1.01 (s, 9H), 0.33 (m, 2H).
Пример 27. Получение соединения 27.
Смесь соединения 26 (320 мг, 0,388 ммоль), пара-TsNHNH (542 мг, 2,91 ммоль) и NaOAc (477 мг, 5,82 ммоль) в смеси DME (10 мл) и H2O (1 мл) нагревали при 95°C в течение 2 ч. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл), и pH доводили до 3 путем добавления 1н. HCl. Органический и водный слои разделяли, и выполняли обратную экстракцию водного слоя EtOAc (этилацетатом). Органические слои объединяли и концентрировали. Данный неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением соединения 27 в виде желтого твердого вещества (252 мг, 79%). ЖХ/МС=825 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.24 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 5.72 (m, 1H), 4.71 (t, 1H), 4.58 (dd, 1H), 4.43 (t, 1H), 4.14 (s, 3H), 4.05 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 2.81 (s, 3H), 2.59 (m, 1H),2.40 (dd, 2Н), 1.94 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.64 (m, 3H), 1.52 (m, 1H),
Стадия 1.
К смеси брозилата (промежуточного соединения III) (15 г, 35 ммоль) и промежуточного соединения IV (27,5 г, 38,5 ммоль) в NMP (200 мл) добавляли карбонат цезия (25,1 г, 77 ммоль). Данную смесь перемешивали при 65°C в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к данной смеси добавляли EtOAc (600 мл) и 3% водный раствор LiCl (600 мл). Органический слой промывали 3% водным раствором LiCl (1x600 мл), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением желаемого сложного метилового эфира в виде желтого твердого вещества (23,6 г, 75%). ЖХ/МС=900, 13 (М++1).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (23,6 г, 26 ммоль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (200 мл), к данному раствору добавляли 1,4н. HCl в H2O (75 мл). Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции смесь концентрировали для удаления растворителей и упаривали с толуолом (x2) для удаления остатка уксусной кислоты. Затем полученный остаток растворяли в EtOAc (500 мл) и насыщенном водном растворе NaHCO3 (в количестве, достаточном для нейтрализации смеси); в процессе растворения регистрировали выделение CO2. Органический слой промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток дополнительно сушили в условиях глубокого вакуума в течение 1 ч и использовали как есть на следующей стадии. Полученное неочищенное вещество растворяли в CH2Cl2 (360 мл), и к данной смеси при 0°C добавляли морфолин (3,4 г, 39 ммоль) и триацетоксиборгидрид натрия (7,2 г, 34 ммоль). Затем к полученной смеси добавляли по каплям ледяную уксусную кислоту (0,47 г, 7,8 ммоль). Реакция завершалась в течение 10 мин при 0°C. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного водного раствора NaHCO3. После перемешивания в течение 20 мин органический слой промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на си-ликагеле с получением желаемого амина в виде желтого твердого вещества (12 г, 50%). ЖХ/МС=924,63
(М++1).
Стадия 3.
Полученный на предыдущей стадии амин (12 г, 13 ммоль) растворяли в THF (200 мл), добавляли LiOH (11 г, 260 ммоль), растворенный в H2O (200 мл), и затем MeOH (200 мл). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. После завершения реакции pH доводили до 7 путем добавления при 0°C 4н. HCl в H2O. Смесь экстрагировали EtOAc (2x400 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом с получением желаемого соединения 28 в виде желтого твердого вещества (11 г, 93%). ЖХ/МС=911,52 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 7.95 (d, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.31 (d, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.37 (dd, 1H), 4.20 (m, 2Н), 3.83-3.56 (m, 7Н), 3.50 (m, 2Н), 3.39 (m, 2Н), 2.45 (m, 1H), 2.27(m, 1H), 1.62 (m, 2Н), 1.50 (m, 1H), 1.33 (m, 2Н), 1.18 (m, 1H), 1.05 (m, 8Н), 0.90 (m, 3H), 0.76 (m, 11H), 0.14-0.04 (m, 2Н).
Пример 29. Получение соединения 29.
Стадия 1.
В колбу, продуваемую N2, вносили указанный на схеме бис-фенол (939 мг, 2,79 ммоль), морфолин этилхлорид (545 мг, 2,93 ммоль), Cs2CO3 (1,9 г, 5,87 ммоль) и NaI (84 мг, 0,56 ммоль). Затем к данной смеси добавляли DMF (20 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, отбирали аликвоты, и фильтровали. Из данных аликвот выделяли путем препаративной обратнофазовой ВЭЖХ желаемый продукт. В результате получали хинолиновый продукт в форме TFA-соли. Превращение в HCl-соль выполняли путем растворения данной TFA-соли в смеси MeOH:4^ HCl/диоксаны и упаривания. Данную процедуру повторяли три раза с получением 200 мг продукта (выход: 14%).
ЖХ/МС=449,32 (М++1).
Стадия 2.
В колбу, продуваемую N2, вносили полученный на предыдущей стадии хинолин (200 мг, 0,38 ммоль), указанный на схеме брозилат (323 мг, 0,456 ммоль) и Cs2CO3 (372 мг, 0,76 ммоль). Затем к данной смеси добавляли NMP (5 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане в течение 4,5 ч. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция не проходила. Добавляли еще одну порцию Cs2CO3 (124 мг, 0,25 ммоль). Через 2 ч согласно ЖХ/МС-анализу брозилат был полностью израсходован, тогда как хинолин еще оставался. К реакционной смеси добавляли еще одну порцию брозилата (68 мг, 0,095 ммоль), и нагревание продолжали в течение ночи. Согласно ЖХ/МС- и ВЭЖХ-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли CH2Cl2. Добавляли небольшой объем 5% водного раствора LiCl, слои разделяли. Выполняли обратную экстракцию водного слоя CH2Cl2 (дихлорметаном) (1 x ), и объединенные органические слои осветляли путем добавления MeOH и концентрировали. Остаток снова растворяли в MeOH, и путем обратно-фазовой ВЭЖХ выделяли 317 мг сложного метилового эфира (выход: 72%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=922,59 (NT+1).
Стадия 3.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (306 мг, 0,266 ммоль) растворяли в смеси THF (1,5 мл) и MeOH (1 мл), и данный раствор охлаждали до 0°C. LiOH-H2O (45 мг, 1,06 ммоль) растворяли в dH2O (0,5 мл), и полученный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 2 ч реакция не была завершена. Добавляли еще одну порцию LiOH-H2O (23 мг, 0,54 ммоль). Через 1 ч реакция все еще не была завершена, поэтому добавляли еще одну порцию LiOH-H2O (23 мг, 0,54 ммоль). Через 3,5 ч согласно ВЭЖХ-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 29 сразу выделяли из реакционной смеси путем обратнофазовой ВЭЖХ. Соединение 29 получали в виде желтого твердого вещества (223 мг, выход: 74%). ЖХ/МС=910,53 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.33 (d, J=9.3 Гц, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.62 (d, J=9.3 Гц, 1H), 5.86 (dd, J=9.9, 16.5 Гц, 1H), 5.73 (s, 1H), 5.29 (d, J=17.1 Гц, 1H), 5.11 (d, J=10.2 Гц, 1H), 4.79 (s, 2Н), 4.70 (t, J=8.7 Гц, 1H), 4.56 (m, 2H), 4.20-3.92 (m, 8Н), 3.83 (s, 3H), 3.59 (brds, 4Н), 2.78 (dd, J=7.2, 14.1 Гц, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.21 (q, J=8.9 Гц, 1H), 1.98 (m, 1H), 1.86 (m, 1H), 1.76-1.64 (m, 2Н), 1.46 (m, 1H), 1.39 (d, J=6.3 Гц, 6Н), 1.19 (m, 2Н), 1.04 (s, 12Н), 0.38 (m, 2Н).
Пример 30. Получение соединения 30.
Стадия 1.
Указанный на схеме спирт (3,42 г, 0,015 ммоль) растворяли в THF (55 мл). К данному раствору добавляли CBr4 (5,47 г, 0,017 ммоль). Ph3P (4,46 г, 0,017 ммоль) растворяли в THF (20 мл) и медленно добавляли к данной реакционной смеси через капельную воронку. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По данным ТСХ реакция была завершена. Реакционную смесь разбавляли гексанами, и образовавшийся белый осадок удаляли путем фильтрования. В фильтрате выпадало в осадок дополнительное количество твердого вещества. Данную смесь переносили в делительную воронку, и органический слой экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (2x), dH2O (2x) и солевым раствором (1 x ). Органический слой сушили над Na2SO4 с небольшим количеством MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и из полученного фильтрата выделяли желаемый бромид (2,59 г, выход: 59%) путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюи-
Стадия 2.
В колбу, продуваемую N2, вносили полученный на предыдущей стадии бромид (738 мг, 2,5 ммоль), бис-фенол (1 г, 2,4 ммоль), Cs2CO3 (1,21 г, 3,7 ммоль) и NaI (72 мг, 0,48 ммоль). К данной смеси добавляли DMF (24 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане. Через 2 ч оставалось совсем небольшое количество бромида. К реакционной смеси добавляли еще одну порцию бромида (141 мг, 0,48 ммоль), и нагревание продолжали в течение 16 ч. На следующий день согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc. Данную смесь экстрагировали 5% водным раствором LiCl (который подщелачивали небольшим количеством насыщенного водного раствора NaHCO3) (2x) и солевым раствором (1x). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4 с небольшим количеством MgSO4. После удаления сушильных агентов путем вакуумной фильтрации из полученного фильтрата выделяли желаемый хинолин (800 мг, 61%) в виде желто-коричневого твердого вещества. ЖХ/МС=548,26 (IVf+l).
Стадия 3.
В колбу, продуваемую N2, вносили полученный на предыдущей стадии хинолин (800 мг, 1,46 ммоль), указанный на схеме брозилат (1,24 г, 1,75 ммоль) и Cs2CO3 (570 мг, 1,75 ммоль). Затем к данной смеси добавляли NMP (14,6 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане. Через 2 ч реакция находилась на стадии прогресса. Нагревание продолжали еще в течение 9 ч, и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, и полученную смесь экстрагировали 5% водным раствором LiCl (2x ) и солевым раствором (1 x ). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4 с небольшим количеством MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации. Желаемый сложный метиловый эфир выделяли из фильтрата путем колоночной хроматографии на силикагеле в виде желтовато-коричневатого твердого вещества (1,33 г, 89%). ЖХ/МС=1021,75 (М++1).
Стадия 4.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (1,33 г, 1,3 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (10 мл). Данный раствор охлаждали до 0°C, и добавляли по каплям 4н. HCl в диоксанах (3,25 мл, 13 ммоль). Затем охлаждающую баню удаляли. Реакция согласно ЖХ/МС-анализу завершалась через 2 ч. Реакционную смесь концентрировали, перерастворяли в CH2Cl2 и снова концентрировали. Остаток снова перерастворяли в CH2Cl2 и затем экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (1x). Органическую фазу сушили над Na2SO4 с небольшим количеством MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и фильтрат концентрировали с получением желаемого амина в виде желтоватой пены (1,23 г, 100%). ЖХ/МС=921,53 (М++1).
Полученный на предыдущей стадии амин (608 мг, 0,66 ммоль) растворяли в 1,2-DCE (1,2-дихлорэтилене) (7 мл). К данному раствору добавляли 37% НСНО/H^O (49 мкл, 0,66 ммоль). Затем к полученной смеси добавляли NaHB(OA^3 (560 мг, 2,64 ммоль). Через 30 мин согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного водного раствора NaHCO3. Затем реакционную смесь разбавляли EtOAc и экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4 с небольшим количеством MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Остаток перерастворяли в MeOH, и данный раствор концентрировали. Перерастворяли в MeOH и концентрировали еще 2 раза с получением указанного на схеме метиламина (569 мг, выход: 92%) в виде розово-оранжевой пены. ЖХ/МС=935,59 (М++1).
Стадия 6.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (615 мг, 0,658 ммоль) растворяли в MeOH (2,2 мл) и THF (3,3 мл). Данный раствор охлаждали до 0°C, и медленно добавляли раствор Li-OH-H2O (138 мг, 3,29 ммоль) в dH2O (0,5 мл). Затем охлаждающую баню удаляли. Через 3,5 ч реакция по данным ЖХ/МС- и ВЭЖХ-анализа завершалась. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили путем добавления 1н. HCl. Соединение 30 (590 мг, выход: 78%) выделяли из погашеной реакционной смеси путем обратнофазовой ВЭЖХ в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=921,48 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.30 (d, J=10.2 Гц, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.81(s, 1H), 7.62 (d, J=10.2 Гц, 1H), 5.86 (dt, J=9.9, 16.8 Гц, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.28 (d, J=17.1 Гц, 1H), 5.11 (d, J=10.2 Гц, 1H), 4.72 (t, J=8.4 Гц, 1H), 5.59 (d, J=5.4 Гц, 3H), 4.47 (t, J=6.3 Гц, 1H), 4.15 (s, 1H), 4.12-3.99 (m, 2Н), 3.43 (s, 4Н), 3.32-3.18 (m, 8Н), 2.93 (s, 3H), 2.80 (dd, J=6.6, 14.1 Гц, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.22 (dd, J=8.4, 9 Гц, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.86-1.60 (m, 3H), 1.46 (dd, J=5.4, 9.3 Гц, 1H), 1.38 (d, J=6.6 Гц, 6Н), 1.20 (m, 2H), 1.03 (s, 12H), 0.34 (m, 2H).
Пример 31. Получение соединения 31.
Соединение 30 (97 мг, 0,084 ммоль) растворяли в DME (2 мл). К данному раствору добавляли dH2O (200 мкл), pTolSO2NHNH2 (117 мг, 0,63 ммоль) и NaOAc (103 мг, 1,26 ммоль). Затем реакционную колбу помещали на 2 ч в предварительно нагретую до 95°C масляную баню. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли небольшое количество MeOH, чтобы получить монофазную реакционную смесь. Затем реакционную смесь фильтровали, и из полученного фильтрата путем обратнофазовой ВЭЖХ выделяли соединение 31 (69 мг, выход 71%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=923,52 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.29 (d, J=9 Гц, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.60 (d, J=9 Гц, 1H), 5.74 (s, 1H), 4.74-4.56 (m, 4Н), 4.49 (t, J=6.3 Гц, 1H), 4.15 (s, 1H), 4.18-3.99 (m, 2H), 3.53 (s, 6H), 3.47 (s, 6Н), 2.96 (s, 3H), 2.78 (dd, J=7.2, 14.1 Гц, 1H), 2.60 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.65 (m, 3H), 1.52 (t, J=7.5 Гц, 1H), 1.43 (m, 2Н), 1.39 (d, J=6.3 Гц, 6Н), 1.23 (q, J=3.9 Гц, 2Н), 1.20 (m, 1H), 1.02 (s, 14Н), 0.37 (m, 2Н).
Пример 32. Получение соединения 32.
Стадия 1.
В колбу, продуваемую N2, вносили бис-фенол (998 мг, 2,97 ммоль), указанный на схеме бромид (293 мкл, 3,11 ммоль), Cs2CO3 (2,03 г, 6,24 ммоль) и NaI (89 мг, 0,59 ммоль). Затем к данной смеси добавляли DMF (33 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C мас
ляной бане в течение 7 ч и затем охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь переносили в 100 мл EtOAc. Твердое вещество отфильтровывали и промывали 50 мл EtOAc. Органические фазы объединяли и экстрагировали 5% водным раствором LiCl (3x100 мл) и затем солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над Na2SO4, твердое вещество отфильтровывали, и удаляли при пониженном давлении растворитель. Полученное неочищенное вещество переносили в 10 мл метанола и очищали путем препаративной обратнофазовой ВЭЖХ. В результате получали хинолин в форме TFA-соли. Превращение в HCl-соль выполняли путем растворения полученной TFA-соли хиноли-на в смеси MeOH:4a HCl/диоксаны и упаривания. Данную процедуру повторяли три раза с получением 305 мг указанного на схеме хинолина (выход: 24%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=394 (М++1).
Стадия 2.
В колбу, продуваемую N2, вносили полученный на предыдущей стадии хинолин (305 мг, 0,78 ммоль), указанный на схеме брозилат (554 мг, 0,78 ммоль) и Cs2CO3 (760 мг, 2,34 ммоль). Затем к данной смеси добавляли NMP (10 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане в течение 4,5 ч. По данным ЖХ/МС-анализа реакция не проходила. Добавляли дополнительное количество Cs2CO3 (250 мг, 0,78 ммоль), и реакционную смесь нагревали в течение ночи. По данным ЖХ/МС- и ВЭЖХ-анализа реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc.
Добавляли небольшой объем 5% водного раствора LiCl, и слои разделяли. Выполняли обратную экстракцию водного слоя EtOAc (этилацетатом) (1 х ), и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток перерастворяли в DCM, и путем хроматографии на силикагеле выделяли 382 мг указанного на схеме сложного метилового эфира (выход: 57%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=868 (IVf+l).
Стадия 3.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (380 мг, 0,44 ммоль) растворяли в смеси THF (5 мл) и MeOH (2,5 мл) и охлаждали до 0°C. LiOH-H2O (32 мг, 1,32 ммоль) растворяли в dH2O (2,5 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 2 ч реакция не была завершена. Добавляли еще одну порцию LiOH-H2O (32 мг, 1,32 ммоль). Через 1 ч реакция все еще не была завершена, поэтому добавляли еще одну порцию LiOH-H2O (32 мг, 1,32 ммоль). Через 3,5 ч согласно ВЭЖХ-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 32 сразу выделяли из реакционной смеси путем обратнофазовой ВЭЖХ. Соединение 32 получали в виде желтого твердого вещества (235 мг, выход: 63%). ЖХ/МС=853 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.75 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.27 (d, J=9.4 Гц, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.68 (d, J=9.4 Гц, 1H), 5.86 (dd, J=9.1, 16.5 Гц, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.31 (d, J=17.4 Гц, 1H), 5.13 (d, J=11 Гц, 1H), 4.75 (t, J=8.9 Гц, 1H), 4.62 (d, J=12.2 Гц, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.41 (m, 1H), 4.13-4.05 (m, 4Н), 3.87 (s, 3H), 3.31 (s, 3H), 2.76 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.22 (q, J=8.7 Гц, 1H), 1.92-1.59 (m, 7Н), 1.48 (m, 1H), 1.39 (d, J=6.4 Гц, 6Н), 1.20 (m, 2Н), 1.02 (s, 9H), 0.49-0.32
(m, 3H).
Пример 33. Получение соединения 33.
В колбу, продуваемую N2, вносили указанный на схеме хинолин (810 мг, 2,05 ммоль), промежуточное соединение III (1,46 г, 2,05 ммоль) и Cs2CO3 (1,39 г, 4,3 ммоль). Затем к данной смеси добавляли NMP (10 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане в течение 16 ч. По данным ЖХ/МС- и ВЭЖХ-анализа реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc. Добавляли небольшой объем 5% водного раствора LiCl, и слои разделяли. Выполняли обратную экстракцию водного слоя EtOAc (этилацетатом) (1х), и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток перерастворяли в DCM, и путем хроматографии на силикагеле выделяли 382 мг указанного на схеме сложного метилового эфира (выход: 63%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=869 (JVT+l).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (1,12 г, 1,29 ммоль) растворяли в смеси THF (5 мл) и MeOH (2,5 мл). LiOH (309 мг, 12,9 ммоль) растворяли в dH2O (4 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 4 ч реакция была завершена на 70%. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли еще одну порцию LiOH-H2O (32 мг, 1,32 ммоль). Через 3,5 ч согласно ВЭЖХ-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 33 сразу выделяли из реакционной смеси путем обратнофазовой ВЭЖХ. Соединение 33 получали в виде желтого твердого вещества (913 мг, выход: 83%). ЖХ/МС=855 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.64 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.26 (d, J=9.5 Гц, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.67 (d, J=9.5 Гц, 1H), 5.76 (s, 1H), 4.75 (t, J=8.3 Гц, 1H), 4.62 (t, J=11.9 Гц, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.40 (m, 1H), 4.13-4.05 (m, 4Н), 3.87 (s, 3H), 3.31 (s, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 1.94-1.59 (m, 9Н), 1.48 (m, 1H), 1.38 (d, J=6.4 Гц, 6Н), 1.21 (m, 2Н), 1.01 (s, 9H), 0.360.32 (m, 3H).
Пример 34. Получение соединения 34.
HO CI ~~Y , Cs2C03(2.1 4f~\'Q4 Я "V
> =VN /WNH ^N^, 3KB.),Nal(0.2 /==\-N /WNH
^-4 У\-$ HC 9KB.),DMF, , \_J y\,k
W 65°C, 18 ч
HO HO
Стадия 1.
Стадия 2.
В колбу, продуваемую N2, вносили полученный на предыдущей стадии хинолин (180 мг, 0,375 ммоль), указанный на схеме брозилат (400 мг, 0,563 ммоль) и Cs2CO3 (366 мг, 1,13 ммоль). Затем к данной смеси добавляли NMP (5,6 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно на-
В колбу, продуваемую N2, вносили указанные на схеме бис-фенол (1,02 г, 2,98 ммоль) и хлорид (471 мг, 3,27 ммоль), Cs2CO3 (2,01 г, 6,23 ммоль) и NaI (89 мг, 0,59 ммоль). Затем к данной смеси добавляли DMF (24 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане в течение 7 ч. По данным ЖХ/МС реакция не проходила. Нагревание продолжали в течение ночи. На следующий день по данным ЖХ/МС превращение составляло 20%. Дополнительно добавляли 0,8 эквивалента NaI, и температуру увеличили до 85°C. Реакционную смесь снова нагревали в течение ночи. По данным ЖХ/МС имело место полное превращение. Реакционную смесь фильтровали через C18-картридж. Затем удаляли при пониженном давлении растворитель. Полученное неочищенное вещество переносили в 10 мл метанола. Хинолин очищали путем препаративной обратнофазовой ВЭЖХ. В результате получали хинолин в форме TFA-соли. Превращение в HCl-соль выполняли путем растворения полученной TFA-соли в смеси MeOH:4^ HCl/диоксаны и упаривания. Данную процедуру повторяли три раза с получением 327 мг HCl-соли указанного на схеме хинолина (выход: 25%). ЖХ/МС=408 (TVT+l).
гретой до 65°C масляной бане в течение 4,5 ч. По данным ЖХ/МС реакция не проходила. Добавляли дополнительное количество Cs2CO3 (150 мг, 0,45 ммоль), и реакционную смесь нагревали в течение ночи. Согласно ЖХ/МС- и ВЭЖХ-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc. Добавляли небольшой объем 5% водного раствора LiCl, и слои разделяли. Выполняли обратную экстракцию водного слоя EtOAc (этилацетатом) (1х), и объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток перерастворяли в DCM, и путем хроматографии на силикагеле выделяли 237 мг указанного на схеме сложного метилового эфира (выход: 42%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=881 (TVT+l).
Стадия 3.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (237 мг, 0,269 ммоль) растворяли в смеси THF (1,5 мл) и MeOH (1 мл). LiOH-H2O (30 мг, 1,07 ммоль) растворяли в dH2O (0,5 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 4 ч реакция была завершена на 40%. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Из данной реакционной смеси путем обратнофазовой ВЭЖХ сразу выделяли соединение 34. Соединение 34 получали в виде желтого твердого вещества (218 мг, выход: 94%). ЖХ/МС=867 (М++1).
Пример 35. Получение соединения 35.
Соединение 34 (145 мг, 0,167 ммоль) растворяли в DME (1,5 мл). К данному раствору добавляли dH2O (150 мкл), pTolSO2NHNH2 (187 мг, 1,0 ммоль) и NaOAc (150 мг, 1,84 ммоль). Затем реакционную колбу помещали на 2 ч в предварительно нагретую до 95°C масляную баню. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли небольшое количество MeOH, чтобы получить монофазную реакционную смесь. Затем реакционную смесь фильтровали, и из полученного фильтрата путем обратнофазовой ВЭЖХ выделяли соединение 35 (97 мг, 63% выход) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=868 (М++1).
Пример 36. Получение соединения 36.
Стадия 1.
Альдегид (полученный так же, как в примере 28) (1,17 г, 1,38 ммоль) растворяли в DCM (15 мл). К данному раствору добавляли указанный на схеме морфолин (239 мг, 2,07 ммоль). Затем к полученной смеси добавляли NaM^A^ (380 мг, 1,79 ммоль) и сразу же AcOH (24 мкл, 0,414 ммоль). Через 10 мин согласно ЖХ/МС-анализу реакция завершалась. Реакционную смесь гасили путем добавления полунасыщенного водного раствора NaHCO3. Затем реакционную смесь разбавляли DCM и экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Остаток перерастворяли в MeOH, и данный раствор концентрировали. Перерастворяли в MeOH и концентрировали еще 2 раза. Полученное неочищенное вещество переносили в минимальный объем DCM и очищали путем хроматографии на силикагеле с получением указанного на схеме сложного метилового эфира (908 мг, выход: 70%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=950 (М++1).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии сложный метиловый эфир (772 мг, 0,813 ммоль) растворяли в смеси THF (7 мл) и MeOH (5 мл). LiOH-H2O (171 мг, 4,07 ммоль) растворяли в dH2O (3 мл), и данный раствор медленно добавляли к полученному раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 3 ч реакция завершалась. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 36 экстрагировали в EtOAc. Затем органическую фазу экстрагировали 1н. HCl, солевым раствором и затем сушили над Na2SO4. Твердое вещество удаляли путем фильтрования, и органические растворители удаляли при пониженном давлении. Соединение 36 (701 мг) выделяли с использованием препаративной ВЭЖХ в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=936 (М++1).
Пример 37. Получение соединения 37.
Соединение 36 (701 мг, 0,748 ммоль) растворяли в DME (5 мл). К данному раствору добавляли dH2O (500 мкл), pTolSO2NHNH2 (697 мг, 3,74 ммоль) и NaOAc (613 мг, 7,48 ммоль). Затем реакционную колбу на 2 ч помещали в предварительно нагретую до 95°C масляную баню. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли небольшое количество MeOH, чтобы получить монофазную реакционную смесь. Затем реакционную смесь фильтровали, и из полученного фильтрата путем обратнофазовой ВЭЖХ выделяли соединения 37 (802 мг, выход: 92%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=938 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.26 (s, 1H), 7.98 (d, J=9.4 Гц, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.24 (d, J=9.5 Гц, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.51 (s, 6Н), 4.38-4.19 (m, 5Н), 3.82-3.45 (m, 5Н), 2.53-2.32 (m, 3H), 1.84 (m, 1H), 1.66-1.28 (m, 5Н), 1.18 (s, 7Н), 1.03 (d, J=6.5 Гц, 6Н), 0.89 (m, 1H), 0.67 (s, 14Н), 0.14-0.04 (m, 2Н).
Пример 38. Получение соединения 38.
Стадия 1.
В колбу, продуваемую Ar, вносили 60% NaH (4,26 г, 106 ммоль) и THF (60 мл). Медленно добавляли раствор указанного на схеме спирта (5 г, 26,67 ммоль) в THF (40 мл). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем добавляли диметилсульфат (5,07 мл, 53,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного водного раствор NH4Cl, которое сопровождалось интенсивным выделением газа. Данную смесь перемешивали в течение 15 мин, и затем разделяли органический и водный слои. Водный слой экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток переносили в EtOAc и промывали полунасыщенным водным раствором NaHCO3 и затем солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали, и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного желаемого метилового эфира (8,56 г, 42,03 ммоль) в виде бесцветного масла. ЖХ/МС=202 (TVf+l).
В колбу, продуваемую Ar, вносили полученный на предыдущей стадии метиловый эфир (8,56 г, 42,03 ммоль) и затем DCM (30 мл). Медленно добавляли 4,0н. HCl в диоксане (30 мл, 120 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного желаемого амина (7 г, 50 ммоль), который использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=102 (М++1).
Стадия 3.
В колбу, продуваемую Ar, вносили полученный на предыдущей стадии амин (7 г, 50 ммоль), THF (150 мл), CBz-Cl (10,7 мл, 76 ммоль), и охлаждали до 0°C с помощью ледяной бани. Медленно добавляли Et3N (21,1 мл, 150 ммоль). За ходом реакции следили с помощью ЖХ/МС. Реакция заканчивалась через 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток переносили в EtOAc и промывали 0,5н. водным раствором HCl, солевым раствором и сушили над Na2SO4. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в минимальном объеме DCM и очищали путем хроматографии на силикагеле с получением указанного на схеме карбамата (4,52 г, общий выход: 72%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС=236 (NT+1).
Стадия 4.
В колбу, продуваемую Ar, вносили полученный на предыдущей стадии карбамат (4,5 г, 19,1 ммоль) и EtOH (50 мл). Колбу откачивали и снова наполняли Ar. Данную процедуру повторяли три раза. Затем в реакционную колбу добавляли 10% Pd/C, и колбу откачивали. Затем колбу заполняли газообразным H2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере H2, контролируя ход реакции с помощью ЖХ/МС. Через 3 ч реакция завершалась. Твердое вещество удаляли путем вакуумной фильтрации с использованием PTFE (тефлонового) фильтра. Полученный фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток упаривали с EtOAc (3х50 мл) с получением неочищенного желаемого амина (2,03 г, 20,0 ммоль) в виде бесцветного масла. ЖХ/МС=102 (TVT+l).
Стадия 5.
Указанный на схеме альдегид (1,00 г, 1,17 ммоль) растворяли в DCM (15 мл), и добавляли полученный на предыдущей стадии амин (176 мг, 1,75 ммоль). Затем к данной смеси добавляли NaHB^A^ (322 мг, 1,52 ммоль) и сразу же AcOH (20 мкл, 0,3 ммоль). Через 10 мин согласно ЖХ/МС-анализу реакция завершалась. Реакционную смесь гасили путем добавления полунасыщенного водного раствора NaHCO3. Затем реакционную смесь разбавляли DCM и экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Остаток перерастворяли в MeOH, и данный раствор концентрировали. Перерастворяли в MeOH и концентрировали еще 2 раза с получением неочищенного сложного метилового эфира (968 мг, 88% выход) в виде желтого твердого
вещества. ЖХ/МС=936 (М++1).
Стадия 6.
Полученный на предыдущей стадии сложный эфир (968 мг, 1,03 ммоль) растворяли в смеси THF (10 мл) и MeOH (6 мл). LiOH (200 мг, 4,67 ммоль) растворяли в dH2O (3 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 3 ч реакция завершалась. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 38 экстрагировали в EtOAc, который затем экстрагировали 1н. HCl и солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Твердое вещество удаляли путем фильтрования, и летучие органические вещества удаляли при пониженном давлении. Соединение 38 (900 мг) выделяли в виде желтого твердого вещества.
ЖХ/МС=922 (М++1).
Пример 39. Получение соединения 39.
Соединение 38 (900 мг, 0,977 ммоль) растворяли в DME (5 мл). К данному раствору добавляли dH2O (1 мл), pTolSO2NHNH2 (920 мг, 4,93 ммоль) и NaOAc (850 мг, 10,36 ммоль). Затем реакционную колбу на 2 ч помещали в предварительно нагретую до 95°C масляную баню. Согласно ЖХ/МС-анализу, реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли небольшое количество MeOH, чтобы получить монофазную реакционную смесь. Затем реакционную смесь фильтровали, и из полученного фильтрата путем обратнофазовой ВЭЖХ выделяли соединение 39 (686 мг, выход: 76%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=924 (М++1).
Пример 40. Получение соединения 40.
Стадия 1.
Указанный на схеме альдегид (1,00 г, 1,17 ммоль) растворяли в DCM (15 мл). К данному раствору добавляли пиперидин (173 мкл, 1,75 ммоль). Затем к полученной смеси добавляли NaHB^A^ (322 мг, 1,52 ммоль) и сразу же AcOH (20 мкл, 0,3 ммоль). Через 10 мин согласно ЖХ/МС-анализу реакция завершалась. Реакционную смесь гасили путем добавления полунасыщенного водного раствора NaHCO3. Затем реакционную смесь разбавляли DCM и экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Остаток перерастворяли в MeOH, и данный раствор концентрировали. Перерастворяли в MeOH и концентрировали еще 2 раза с получением неочищенного желаемого сложного эфира (964 мг, выход: 90%) в виде желтого твердого
вещества. ЖХ/МС=920 (М++1).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии сложный эфир (964 мг, 1,02 ммоль) растворяли в смеси THF (10 мл) и MeOH (6 мл). LiOH (200 мг, 4,67 ммоль) растворяли в dH2O (3 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 3 ч реакция завершалась. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 40 экстрагировали в EtOAc, который затем экстрагировали 1н. HCl и затем солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Твердое вещество удаляли путем фильтрования, и летучие органические вещества удаляли при пониженном давлении. Соединение 40 (900 мг) выделяли в виде желтого твердого вещества.
ЖХ/МС=906 (М++1).
Пример 41. Получение соединения 41.
Соединение 40 (900 мг, 0,977 ммоль) растворяли в DME (5 мл). К данному раствору добавляли dH2O (1 мл), pTolSO2NHNH2 (920 мг, 4,93 ммоль) и NaOAc (850 мг, 10,36 ммоль). Затем реакционную колбу на 2 ч помещали в предварительно нагретую до 95°C масляную баню. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли небольшое количество MeOH, чтобы получить монофазную реакционную смесь. Затем реакционную смесь фильтровали, и из полученного фильтрата путем обратнофазовой ВЭЖХ выделяли соединение 41 (631 мг, выход: 69%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=908 (М++1).
Пример 42. Получение соединения 42.
Стадия 1.
Указанный на схеме альдегид (0,5 г, 0,584 ммоль) растворяли в DCM (8 мл). К полученному раствору добавляли указанный на схеме амин (181 мг, 0,887 ммоль). Затем к полученной смеси добавляли NaHB^A^ (161 мг, 0,76 ммоль) и сразу же AcOH (10 мкл, 0,15 ммоль). Через 10 мин согласно ЖХ/МС-анализу реакция завершалась. Реакционную смесь гасили путем добавления полунасыщенного водного раствора NaHCO3. Затем реакционную смесь разбавляли DCM и экстрагировали насыщенным водным раствором NaHCO3 (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Остаток перерастворяли в MeOH, и данный раствор концентрировали. Перерастворяли в MeOH и концентрировали еще 2 раза с получением неочищенного желаемого сложного эфира (503 мг, выход: 95%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=1003 (TVT+1).
Полученный на предыдущей стадии сложный эфир (503 мг, 0,501 ммоль) растворяли в смеси THF (5 мл) и MeOH (3 мл). LiOH (100 мг, 2,34 ммоль) растворяли в dH2O (1,5 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 3 ч реакция завершалась. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 42 экстрагировали в EtOAc, который затем экстрагировали 1н. HCl и затем солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над Na2SO4. Твердое вещество удаляли путем фильтрования, и летучие органические вещества удаляли при пониженном давлении. Соединение 42 (450 мг) выделяли в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=989 (М++1).
Пример 43. Получение соединения 43.
Соединение 42 (450 мг, 0,501 ммоль) растворяли в DME (3 мл). К данному раствору добавляли dH2O (0,5 мл), pTolSO2NHNH2 (425 мг, 2,46 ммоль) и NaOAc (425 мг, 5,17 ммоль). Затем реакционную колбу на 2 ч помещали в предварительно нагретую до 95°C масляную баню. Согласно ЖХ/МС-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и добавляли небольшое количество MeOH, чтобы получить монофазную реакционную смесь. Затем реакционную смесь фильтровали, и из полученного фильтрата путем обратнофазовой ВЭЖХ выделяли соединение 43 (334 мг, выход: 67%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=991 (М++1).
Пример 44. Получение соединения 44.
Стадия 1.
2-(2-Изопропиламинотиазол-4-ил)хинолин-4,7-диол (2 г, 6,6 ммоль) растворяли в DMF (20 мл) в атмосфере N2. Затем добавляли при 0°C NaH (60%) (0,56 г, 14,2 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин, и затем добавляли бром-ацетонитрил. Полученную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли EtOAc и промывали 1н. HCl, поддерживая pH 4. Желаемый продукт выпадал в осадок. После фильтрации получали желтое твердое вещество, которое было достаточно чистым. Данное вещество использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=341,33 (TVf+l).
Стадия 2.
К смеси полученного на предыдущей стадии хинолина (1,32 г, неочищенный) и брозилат-трипептида (2,9 г, 4,3 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли карбонат цезия (2,5 г, 7,7 ммоль). Данную смесь перемешивали при 65°C в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и затем к данной смеси добавляли EtOAc (600 мл) и 3% водный раствор LiCl. Органический слой отделяли и промывали 3% водным раствором LiCl, солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Данное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с получением желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (1,18 г, 1,49 ммоль). ЖХ/МС=790,38 (М++1).
Стадия 3.
К раствору полученного на предыдущей стадии Boc-трипептида (1,18 г, 1,5 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли 4н. HCl в диоксане (30 ммоль, 7,5 мл) при комнатной температуре. Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Согласно ЖХ/МС-анализу получали два продукта, один из которых представлял собой желаемое промежуточное соединение с удаленной Boc-группой, а другой представлял собой промежуточное соединение с удаленной Boc-группой, у которого нитрил в положении C-7 гидролизован до кислоты. Из реакционной смеси при пониженном давлении удаляли растворитель с получением указанного неочищенного вещества. К полученному неочищенному веществу в DCM добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 (15 мл), и данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли за один прием промежуточное соединение I (0,54 г, 2,25 ммоль), и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Согласно ЖХ/МС-анализу получали два продукта в соотношении 1:1; один пик соответствовал желаемому продукту, а другой пик соответствовал C-7-кислоте. Органическую фазу распределяли и промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Данное неочищенное вещество, полученное в виде желтого твердого вещества, использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=814,42 (М++1).
Стадия 4.
К полученному на предыдущей стадии неочищенному веществу в диоксане добавляли водный раствор LiOH (0,19 г, 4,5 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Согласно ЖХ/МС-анализу получали два основных соединения. Из реакционной смеси удаляли под вакуумом растворитель, и неочищенное вещество очищали путем препаративной ВЭЖХ. Соединение 44 (0,153 г, 0,183 ммоль) получали в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.30 (d, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.73 (m, 2H), 7.41 (d, 1H), 5.92-5.77 (m, 2Н), 5.28 (d, 1H), 5.11 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.73-4.55 (m, 3H), 4.19-4.06 (m, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.21 (m, 1H), 1.96 (m, 2H), 1.74-1.63 (m, 3H), 1.46 (m, 3H), 1.33 (m, 6H), 1.22 (m, 2H), 1.04 (s, 9H), 0.49-0.37 (m, 2H). ЖХ/МС=819.44
(М++1).
Пример 45. Получение соединения 45.
Стадия 1.
К смеси указанного на схеме хинолина (0,2 г, 0,53 ммоль) и брозилат-трипептида (0,412 г, 0,59 ммоль) в NMP (4 мл) добавляли карбонат цезия (0,345 г, 1,1 ммоль). Данную смесь перемешивали при 65°C в течение 7 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc, промывали 3% водным раствором LiCl и солевым раствором и затем сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с выходом желаемого продукта в виде желтого твердого вещества (0,26 г, 0,31 ммоль, 59%). ЖХ/МС=848,44
(М++1).
Стадия 2.
Смесь полученного на предыдущей стадии сложного эфира (0,26 г, 0,31 ммоль) и NaI (0,70 г, 0,45 ммоль) в пиридине (7 мл) нагревали при 110°C в течение ночи в атмосфере N2. За ходом реакции следили с помощью ЖХ-МС. Согласно ЖХ-МС превращение составляло 95%. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное неочищенное вещество очищали путем препаративной ВЭЖХ, с выходом соединения 45 (0,085 г, 0,1 ммоль, 34%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=834,41 (М++1).
Стадия 1.
К суспензии указанного на схеме амидного соединения (1,2 г, 3,41 ммоль) в толуоле (28 мл) добавляли при комнатной температуре NaH (60%) (0,20 г, 5,12 ммоль). Данную смесь нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение 2,5 ч. Согласно ЖХ-МС реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, и добавляли AcOH (0,90 мл, 5,80 ммоль) в 3 мл H2O, и данную смесь перемешивали при 0°C в течение 45 мин. В ходе перемешивания выпадало в осадок большое количество желтого твердого вещества. После фильтрации осадок на фильтре промывали H2O, Et2O и сушили в условиях глубокого вакуума. Полученное неочищенное желтое твердое вещество (1,00 г, 3,00 моль, 88%) использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=334,34 (М++1).
Стадия 2.
К суспензии полученного на предыдущей стадии неочищенного продукта в DCM (50 мл) добавляли BBr3 (1н. в DCM) (13,4 мл, 13,4 ммоль). Данную смесь нагревали до температуры дефлегмации и перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали на лед. pH доводили до 14 путем добавления 4н. NaOH. Водную фазу дважды экстрагировали DCM, и pH доводили до приблизительно 4 путем добавления 2н. HCl. Выпавшее в осадок желтое твердое вещество выделяли путем фильтрования. Осадок на фильтре промывали H2O, Et2O и сушили в условиях глубокого вакуума. Получали желтое твердое вещество (0,41 г, 1,28 ммоль, 42%), которое использовали как есть в
следующей реакции. ЖХ/МС=320,33 (М++1). Стадия 3.
К смеси полученного на предыдущей стадии бис-фенола (0,41 г, 1,28 ммоль) и 1-бром-2-метокси-этана (0,18 г, 1,28 ммоль) в DMF (3 мл) при комнатной температуре за один прием добавляли NaH (60%) (0,062 г, 2,58 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение ночи в атмосфере N2. Полученное неочищенное вещество очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом указанное на схеме желаемого соединения в виде желтого твердого вещества (0,202 г, 0,53 ммоль, 41%). ЖХ/МС=378,34 (М++1).
Стадия 4.
Смесь полученного на предыдущей стадии хинолина (0,2 г, 0,53 ммоль), Cs2CO3 (0,35 г, 1,05 ммоль) и промежуточного соединения III (0,415 г, 0,58 ммоль) в NMP (4 мл) нагревали до 65°C и перемешивали в течение 6 ч. Реакционную смесь разбавляли путем добавления EtOAc (10 мл), и данную смесь промывали H2O, 5% LiCl и солевым раствором. Сушили над Na2SO4 и концентрировали, данное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с получением указанного на схеме сложного метилового эфира (0,19 г, 0,22 ммоль, 42%). ЖХ/МС=854,08 (М++1).
Стадия 5.
К раствору полученного на предыдущей стадии сложного метилового эфира (0,19 г, 0,22 ммоль) в MeOH (1 мл) и THF (1 мл) добавляли водный раствор LiOH (0,18 г, 4,2 ммоль). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученное неочищенное вещество очищали путем
препаративной ВЭЖХ с выходом соединения 46 в виде желтого твердого вещества (0,11 г, 0,13 ммоль, 60%). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 5.69 (s, 1H), 4.72 (dd, 1H), 4.60-4.43 (m, 3H), 4.14-4.01 (m, 3H), 3.87 (s, 2Н), 3.47 (s, 2Н), 2.74 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 1.97-1.80 (m, 2Н), 1.67 (m, 3H), 1.51 (m, 1H), 1.49-1.34 (m, 7Н), 1.22 (m, 2Н), 1.02 (s, 9Н), 0.34 (m, 2Н). ЖХ/МС=841.56 (М++1).
Пример 47. Получение соединения 47.
Стадия 1.
Указанную на схеме кислоту, используемую в качестве исходного вещества (2,87 г, 19,5 ммоль), и 1-[2-амино-3-хлор-4-(2-метоксиэтокси)фенил]этанон (4,72 г, 19,5 ммоль) растворяли в пиридине (180 мл). Полученный раствор охлаждали до -30°C, и затем к раствору добавляли по каплям POCl3. После добавления реакционную смесь нагревали до -10°C в течение 30 мин и перемешивали при -10°C в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили путем добавления при 0°C 20 мл H2O, и полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 5 мин. Растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли EtOAc, и полученный раствор промывали насыщенным раствором NaHCO3, H2O и солевым раствором. Сушили над Na2SO4 и концентрировали, данное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с получением желаемого продукта (4,2 г, 11,3 ммоль, 58%). ЖХ/МС=373,01 (М++1).
Стадия 2.
Смесь полученного на предыдущей стадии амида (2,0 г, 5,4 ммоль) и изопропиламина (3,2 г, 54 ммоль) в пропан-2-оле (20 мл) нагревали до 70°C в герметично закрытой пробирке. После нагревания в течение 3,5 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в THF (15 мл), и к данному раствору добавляли 0,3н. HCl (40 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь распределяли, и органическую фазу концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением указанного на схеме амина (0,84 г, 2,13 ммоль, 40%). ЖХ/МС=396,21
(М++1).
Стадия 3.
К суспензии полученного на предыдущей стадии амина (1,38 г, 3,49 ммоль) в толуоле (20 мл) добавляли при комнатной температуре NaH (60%) (0,20 г, 5,12 ммоль). Данную смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение 2,5 ч. Согласно ЖХ-МС реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, к реакционной смеси добавляли AcOH (0,90 мл, 5,80 ммоль) в 3 мл H2O, и данную смесь перемешивали при 0°C в течение 45 мин. В ходе перемешивания выпадал в осадок хинолиновый продукт. После фильтрации осадок на фильтре промывали H2O, Et2O и сушили в условиях глубокого вакуума. Получали неочищенное желтое твердое вещество (1,18 г, 3,13 моль, 90%) достаточной чистоты которое использовали как есть в следующей реакции. ЖХ/МС=378,34 (TVT+l).
Стадия 4.
Смесь полученного на предыдущей стадии хинолина (0,77 г, 2,03 ммоль), Cs2CO3 (1,3 г, 4 ммоль) и метилового эфира трипептида (1,6 г, 2,2 ммоль) в NMP (10 мл) нагревали до 65°C и перемешивали в течение 6 ч. Реакционную смесь разбавляли путем добавления 25 мл EtOAc, и полученную смесь промывали H2O, 5% LiCl и солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4 и концентрировали, полученное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с выходом указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (1,2 г, 1,4 ммоль, 69%). ЖХ/МС=851,84 (М++1).
Стадия 5.
К раствору полученного на предыдущей стадии сложного метилового эфира (0,5 г, 0,58 ммоль) в MeOH (5 мл) и THF (5 мл) добавляли водный раствор LiOH (0,24 г, 5,8 ммоль). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученное неочищенное вещество очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом соединения 47 в виде желтого твердого вещества (0,33 г, 0,4 ммоль, 69%). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.58 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.62 (d, 1H), 5.89 (m, 1H), 5.67 (bs, 1H), 5.29 (dd, 1H), 5.11 (m, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.54-4.49 (m, 4Н), 4.15 (s, 1H), 4.10-4.00 (m, 2Н), 3.87 (m, 2Н), 3.47 (s, 3H), 2.75 (m, 1H), 2.61(m, 1H), 2.21 (m, 2Н), 1.94 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.72-1.61 (m, 3H), 1.401.10 (m, 9Н), 1.02 (s, 9H), 0.49-0.34 (m, 2Н). ЖХ/МС=837.94 (М++1).
Пример 48. Получение соединения 48
Стадия 1.
2,4-Дихлорхинолин-7-ол (2,23 г, 10,4 ммоль) и изопропил-(Ш-пиразол-3-ил)амин (1,44 г, 11,5 ммоль) растворяли в NMP (30 мл) при комнатной температуре. Данную смесь нагревали до 115°C и перемешивали в течение 12 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали 5% LiCl и солевым раствором. Органическую фракцию сушили над Na2SO4 и концентрации, полученное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с выходом указанного на схеме соединения (1,6 г, 5,28 ммоль, 51%). ЖХ/МС=303,30 (М++1).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии хинолин (0,81 г, 2,67 ммоль) и HCl-соль (2-хлор-этил)диметиламина (0,42 г, 2,94 ммоль) растворяли в DMF (10 мл). Затем добавляли Cs2CO3 (1,74 г, 5,34 ммоль). Данную реакционную смесь нагревали до 65°C и перемешивали в течение 17 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали 5% LiCl и солевым раствором. Органическую фракцию сушили над Na2SO4 и концентрировали, полученное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле с выходом указанного на схеме соединения (0,5 г, 1,34 ммоль, 50%). ЖХ/МС=374,24 (М++1).
Стадия 3.
Трипептид в форме кислоты (0,51 г, 1,06 ммоль) растворяли в DMSO (диметилсульфоксиде) (10 мл). К полученному раствору добавляли KOtBu (0,6 г, 5,3 ммоль). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем к реакционной смеси за один прием добавляли полученный на предыдущей стадии хлорхинолин (0,44 г, 1,17 ммоль), и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли 0,5 мл AcOH, и реакционную смесь очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением соединение 48 (0,309 г, 0,37 ммоль, 36%). 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3) 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.34 (d, 1H),
7.28 (d, 1H), 6.28 (m, 1H), 5.62 (bs, 1H), 4.64 (dd, 2Н), 4.55 (m, 2Н), 4.19 (s, 1H), 4.15-3.97 (m, 2Н), 3.69 (m,
2Н), 3.30 (s, 2H), 3.02 (s, 6H), 2.90-2.53 (m, 3H), 2.02-1.80 (m, 3H), 1.71-1.98 (m, 3H), 1.51-1.34 (m, 3H),
1.29 (d, 6H), 1.23-1.06 (m, 3H), 1.02 (s, 9Н), 0.49-0.34 (m, 2Н). ЖХ/МС=817.71 (М++1).
Пример 49. Получение соединения 49
Смесь а-хлорацетона (10,4 г, 112,8 ммоль) и аминотиоксо-уксусной кислоты этилового эфира (5,0 г, 37,6 ммоль) в этаноле (100 мл) перемешивали при 80°C в течение 6 ч. Остаток, полученный после концентрирования, очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле с выходом сложного эфира (3,2 г, 50%) в виде белого твердого вещества. Затем полученный сложный этиловый эфир (1,5 г, 8,8 ммоль) растворяли в смеси THF/MeOH/вода (10 мл/10 мл/10 мл). Добавляли избыток гидроксида лития (3,0 г), и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляли этилацетат (100 мл). pH смеси доводили до 4 путем медленного добавления 1н. HCl. Слои разделяли, и органический слой сушили над MgSO4. После концентрации желаемый продукт (0,8 г, 64%) получали в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС=143,7 (TVT+l).
Стадия 2.
К смеси, полученной на предыдущей стадии кислоты (0,36 г, 2,47 ммоль) и указанного на схеме анилина (0,40 г, 1,65 ммоль) в пиридине (15 мл), медленно добавляли POCl3 (0,38 г, 2,47 ммоль) при -40°C. Затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 4 ч. После завершения реакции к смеси добавляли по каплям H2O (5 мл). Затем смесь перемешивали при 0°C дополнительно в течение 15 мин. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли EtOAc и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3. Органический слой сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле с получением амида (0,45 г, 74%) в виде твердого вещества. Полученный амид (0,45 г, 1,22 ммоль) суспендировали в трет-BuOH (10 мл). К данной смеси при интенсивном перемешивании добавляли трет-BuOK (0,29 г, 2,57 ммоль). Полученную смесь нагревали до 75°C в течение 4 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры. Смесь подкисляли, медленно добавляя 4н. HCl в диоксане (1 мл). Полученный после концентрирования неочищенный продукт вливали в 1н. KH2PO4/Н2О (50 мл). Образовавшееся твердое вещество выделяли путем фильтрования и промывали водой. После сушки в условиях глубокого вакуума в течение ночи указанный на схеме хино-лин (0,4 г, 93%) получали в виде твердого вещества. ЖХ/МС=350,8 (TVT+l).
Стадия 3.
К смеси указанного на схеме трипептида (0,20 г, 0,28 ммоль) и полученного на предыдущей стадии хинолина (0,10 г, 0,28 ммоль) в NMP (5 мл) добавляли карбонат цезия (0,18 г, 0,56 ммоль). Данную смесь перемешивали при 85°C в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к смеси добавляли EtOAc (50 мл) и 3% водный раствор LiCl (50 мл). Органический слой промывали 3% водным раствором LiCl (1x50 мл), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением в качестве продукта желаемого сложного метилового эфира в виде желтого твердого вещества (0,15 г, 65%).
Стадия 4.
Полученный сложный метиловый эфир (0,15 г, 0,18 ммоль) растворяли в THF (2 мл), добавляли раствор LiOH (0,05 г, 1,8 ммоль) в H2O (2 мл), затем добавляли MeOH (2 мл). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции pH доводили до 4 путем добавления 4н. HCl в H2O при 0°C. Данную смесь экстрагировали EtOAc (2x20 мл). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом с получением соединения 49 в виде желтого твердого вещества (0, 14 г, 95%). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.10 (d, J=9.6 Гц, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.44 (d, J=9.6 Гц, 1H), 7.36 (s, 1H), 5.82 (dd, 1H), 5.53 (brs, 1H), 5.30 (d, J=17.1 Гц, 1H), 5.12 (d, J=10.2 Гц, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.39 (m, 2H), 4.22 (s, 1H), 4.10 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 3.49 (m, 4H), 2.83 (m, 3H), 2.57 (m, 3H), 2.39 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 2.07 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.44 (m, 1H), 1.35 (m, 1H), 1.23 (m, 1H), 1.04 (s, 9H), 0.48 (m, 1H), 0.30 (m, 1H). ЖХ/МС=810.4 (М++1).
Соединение 50 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 49. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.62 (s, 1H), 8.08 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.42 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.51 (brs, 1H), 4.65-4.52 (m, 2H), 4.38 (m, 2H), 4.22 (s, 1H), 4.10 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.49 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.20 (m, 1H), 2.08 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.68 (m, 3H), 1.50-1.21 (m, 7Н), 1.02 (m, 12Н), 0.48 (m, 1H), 0.30 (m, 1H). ЖХ/МС=812.6 (М++1).
Пример 51. Получение соединения 51.
Стадия 1.
К смеси указанных на схеме трипептида (1,30 г, 1,92 ммоль) и хинолина (0,55 г, 1,53 ммоль) в NMP (15 мл) добавляли карбонат цезия (0,94 г, 2,88 ммоль). Данную смесь перемешивали при 85°C в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к смеси добавляли EtOAc (50 мл) и 3% водный раствор LiCl (50 мл). Органический слой промывали 3% водным раствором LiCl (1x50 мл), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением в качестве продукта желаемого сложного метилового эфира в виде желтого твердого вещества (0,85 г, 65%). Раствор полученного продукта в дихлорметане (10 мл) обрабатывали 4н. HCl в диоксане (20 мл) в течение 2 ч при комнатной температуре и концентрировали досуха с получением указанного на схеме аминового соединения в форме HCl-соли. ЖХ/МС=708,9 (TVT+l).
Стадия 2.
К двухфазному раствору полученного на предыдущей стадии амина (0,71 г, 1,0 ммоль) в дихлорме-тане (40 мл) и 5% водном растворе бикарбоната натрия (40 мл) добавляли за четыре приема раствор промежуточного соединения I (0,36 г, 1,5 ммоль) в дихлорметане. Данный раствор продолжали добавлять до тех пор, пока исходное вещество не было полностью израсходовано. Слой дихлорметана отбирали и концентрировали. Затем полученный сложный метиловый эфир растворяли в смеси THF/MeOH/вода (5 мл/5 мл/5 мл). Добавляли избыток гидроксида лития (240 мг), и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Добавляли этилацетат (40 мл), и pH смеси доводили до 4 путем медленного добавления 1н. HCl. После разделения слоев, органический слой концентрировали. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, используя в качестве элюентов воду/ацетонитрил (0,05% TFA), с получением соединения 51 (750 мг, 91%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.76 (s, 1H), 8.25 (d, J=9.6 Гц, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.36 (d, J=9.3 Гц, 1H), 5.91-5.82 (m, 1H), 5.77 (brs, 1H), 5.31 (d, J=15.9 Гц, 1H), 5.12 (d, J=10.2 Гц, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.36 (m, 2H), 4.25-4.05 (m, 3H), 3.87 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 2.82 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.22 (m, 2H), 1.99-1.62 (m, 5H), 1.35 (d, J=6.3 Гц, 6H), 1.49-1.21 (m, 4H), 1.02 (m, 9H), 0.48 (m, 1H), 0.34 (m, 1H). ЖХ/МС=819.5
(М++1).
К смеси соединения 51 (0,60 г, 0,73 ммоль) и ацетата натрия (0,83 г, 10,2 ммоль) в DME/H2O (9 мл/1 мл) добавляли пара-толуолсульфонгидразид (0,96 г, 5,1 ммоль). Данную смесь перемешивали при 95°C в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и к смеси добавляли EtOAc (50 мл). Органический слой промывали 0,05н. водным раствором HCl (1x50 мл), сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, используя в качестве элюентов воду/ацетонитрил (0,05% TFA), с получением соединения 52 (450 мг, 75%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.65 (s, 1H), 8.27 (d, J=9.0 Гц, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.38 (d, J=9.0 Гц, 1H), 5.77 (brs, 1H), 4.74 (t, 1H), 4.62 (d, 1H), 4.52 (t, 1H), 4.37 (m, 2H), 4.18-4.04 (m, 3H), 3.86 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 2.76 (m, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.20 (q, 1H), 1.97-1.85 (m, 2H), 1.70-1.65 (m, 3H), 1.54 (m, 1H), 1.46-1.41 (m, 2Н), 1.35 (m, 6Н), 1.22 (m, 2Н), 1.02 (m, 12Н), 0.48 (m, 1H), 0.30 (m, 1H). ЖХ/МС=821.6
(М++1).
Пример 53. Получение соединения 53.
Стадия 1.
К смеси указанных на схеме анилина (1,21 г, 6,06 ммоль) и кислоты (0,84 г, 6,09 ммоль) в пиридине (55 мл) медленно добавляли POCl3 (1,02 г, 6,68 ммоль) при -40°C. Затем данную смесь перемешивали при 0°C в течение 4 ч. После завершения реакции к смеси добавляли по каплям H2O (5 мл). Затем смесь перемешивали при 0°C дополнительно в течение 15 мин. Смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли EtOAc и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3. Органический слой сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на си-ликагеле (этилацетат/гексаны) с получением амида (1,77 г, 92%) в виде твердого вещества. Полученный амид (1,70 г, 5,3 ммоль) суспендировали в трет-BuOH (40 мл). К данной смеси при интенсивном перемешивании добавляли трет-BuOK (1,30 г, 11,2 ммоль). Полученную смесь нагревали до 75°C в течение 5 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры. Смесь подкисляли, медленно добавляя 4н. HCl в диоксане (5 мл). Полученный после концентрирования неочищенный продукт вливали в 1н. KH2PO4/H2O (100 мл). Образовавшееся твердое вещество выделяли путем фильтрования и промывали водой. После сушки в условиях глубокого вакуума в течение ночи получали указанный на схеме хинолин (1,5 г, 94%) в виде твердого вещества. ЖХ/МС=302,4 (NT+1).
Стадия 2.
Соединение 53 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 50, за исключением того, что использовали полученный на предыдущей стадии хинолин. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO): 5 12.43 (brs, 1H), 9.59 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.57 (m, 1H), 8.13 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.51 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.06 (d, J=8.7 Гц, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.60 (brs, 1H), 5.21 (d, J=18.0 Гц, 1H), 5.07 (d, J=9.9 Гц, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.04 (m, 4Н), 2.66 (s, 3H), 2.28 (m, 2Н), 2.03-1.80 (m, 4Н), 1.35-1.19 (m, 4Н), 0.95 (s, 9Н), 0.44 (m, 1H), 0.33 (m, 1H). ЖХ/МС=761.5
(М++1).
Соединение 54 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 50 и соединения 52. 1Н ЯМР (300 МГц, DMSO): 5 9.59 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.41 (m, 1H), 8.14 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.51 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.04 (d, J=8.7 Гц, 1H), 5.60 (brs, 1H), 4.68 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.04 (m, 5H), 2.67 (m, 4H), 2.28 (m, 2H), 2.03-1.80 (m, 4H), 1.581.42 (m, 4H), 0.94 (m, 12Н), 0.44 (m, 1H), 0.35 (m, 1H). ЖХ/МС=763.3 (М++1).
Пример 55. Получение соединения 55.
1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 9.01 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.37 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.70 (d, J=9.9 Гц, 1H), 5.89 (m, 1H), 5.83 (brs, 1H), 5.31 (d, J=15.3 Гц, 1H), 5.13 (d, J=9.6 Гц, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.41 (m, 1H), 4.19-4.07 (m, 5H), 3.56 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.75-1.63 (m, 2Н), 1.56 (d, J=7.2 Гц, 6Н), 1.49-1.20 (m, 5H), 0.98 (s, 9H), 0.48 (q, 1H), 0.34 (m, 1H).
ЖХ/МС=794.5 (М++1).
Пример 56. Получение соединения 56.
55. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.92 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.30 (d, J=9.6 Гц, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.63 (d, J=9.3 Гц, 1H), 5.77 (brs, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.45 (m, 1H), 4.16 (m, 5H), 3.55 (m, 1H), 2.79 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.89 (m, 1H), 1.80 (m, 3H), 1.56 (d, J=6.9 Гц, 6Н), 1.59-1.22 (m, 6H), 1.05 (m, 12Н), 0.48 (q, 1H), 0.30 (m, 1H). ЖХ/МС=796.4 (М++1). Пример 57. Получение соединения 57.
Соединение 57 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, использованным при получении соединения 52. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.33 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.65 (d, J=9.6 Гц, 1H), 5.77 (brs, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.17 (s, 3H), 4.17-4.05 (m, 3H), 2.79 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.98 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.70-1.49 (m, 4Н), 1.45-1.21 (m, 5Н), 1.38 (d, J=6.6 Гц, 6Н), 1.05 (m, 12Н), 0.48 (m, 1H), 0.30 (m, 1H). ЖХ/МС=811.4 (М++1).
К двухфазному раствору указанного на схеме амина (0,15 г, 0,19 ммоль) в дихлорметане (10 мл) и 5% водном растворе бикарбоната натрия (10 мл) добавляли раствор указанного на схеме карбоната (0,08 г, 0,29 ммоль) в дихлорметане за четыре приема, до тех пор, пока исходный амин не был полностью израсходован. Слой дихлорметана отбирали и концентрировали. Затем полученный сложный метиловый эфир растворяли в смеси THF/MeOH/вода (2 мл/2 мл/2 мл). Добавляли избыток гидроксида лития (46 мг), и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Добавляли этил-ацетат (40 мл), и pH смеси доводили до 4 путем медленного добавления 1н. HCl/H2O. После разделения слоев органический слой концентрировали. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, используя в качестве элюентов воду/ацетонитрил (0,05% TFA), с получением соединения 58 (140 мг, 88%) в виде желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.66 (m, 1H), 8.32 (m, 2H), 7.82 (s, 1H), 7.63 (d, J=9.3 Гц, 1H), 5.76 (brs, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.28-4.03 (m, 8Н), 2.84 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.08 (m, 2Н), 1.86-1.63 (m, 6Н), 1.79 (m, 1H), 1.70-1.49 (m, 3H), 1.55-1.36 (m, 2Н), 1.39 (d, J=6.9 Гц, 6Н), 1.28 (m, 2Н) 1.04 (m, 12Н), ЖХ/МС=841.4 (М++1).
Пример 59. Получение соединения 59.
К раствору указанного на схеме спирта (0,40 г, 1,1 ммоль) в DMSO (5 мл) медленно добавляли трет-бутилат калия (0,38 г, 3,3 ммоль). Затем добавляли указанный на схеме хлор-хинолин (0,32 г, 1,2 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К смеси добавляли этилацетат (50 мл), и pH доводили до 2 путем добавления 1н. HCl. После разделения слоев органический слой сушили над Na2SO4. Полученный после концентрирования неочищенный продукт сушили в условиях глубокого вакуума в течение ночи и использовали как есть на следующей стадии.
К раствору полученной на предыдущей стадии кислоты (0,60 г, в неочищенном виде, 1,1 ммоль), (1Я,28)-1-амино-2-этилциклопропанкарбоновой кислоты метилового эфира гидрохлорида (0,22 г, 1,2 ммоль) и NMM (N-метилморфолина) (0,56 г, 5,5 ммоль) добавляли при 0°C HATU (0,63 г, 1,65 ммоль). Данную реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. К смеси добавляли при перемешивании этилацетат (50 мл) и 3% водный раствор LiCl (50 мл). Органический слой отделяли и промывали 3% водным раствором LiCl (50 мл) и затем солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны) с получением указанного на схеме трипептида (0,28 г, 37%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС=692,8 (М++1).
ше. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.81 (s, 1H), 8.05 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.12 (d, J=9.0 Гц, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.53 (brs, 1H), 4.65 (m, 2Н), 4.55 (d, J=12.3 Гц, 1H), 4.22-4.16 (m, 3H), 3.95 (s, 3H), 2.75 (m, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 2.10-1.85 (m, 3H), 1.71-1.64 (m, 3H), 1.52-1.38 (m, 3H), 1.29-1.20 (m, 2Н), 1.02 (m, 12Н), 0.48 (m, 1H), 0.36 (m, 1H). ЖХ/МС=703.4 (М++1). Пример 60. Получение соединения 60.
Стадия 1.
Указанный на схеме анилин (38,3 г, 206 ммоль) и 1-хлорметил-4-метоксибензол (29,4 мл, 216 ммоль) растворяли в безводном DMF (412 мл) и обрабатывали Cs2CO3 (77,2 г, 326 ммоль), затем перемешивали в течение 90 мин при 50°C. Реакционную смесь концентрировали и затем распределяли между H2O и EtOAc с получением гомогенного раствора. Затем выпаривали EtOAc. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали и затем промывали H2O, MeOH, 30% DCM в гексане и 50% EtOAc в гексане. Твердое вещество сушили в условиях глубокого вакуума с получением РМВ (пара-метоксибензил)-
защищенного продукта (52,2 г, 83%) ЖХ/МС=306 (М++1).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии анилин (52,2 г, 171 ммоль) и указанную на схеме кислоту (29,0 г, 196 ммоль) растворяли в безводном пиридине (853 мл) и обрабатывали POCl3 (18,8 мл, 205 ммоль) при -8°C. После перемешивания в течение 60 мин реакционную смесь концентрировали и распределяли между EtOAc и 1н. HCl, затем экстрагировали EtOAc и DCM. После удаления растворителя оставшийся неочищенный продукт очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (30-80% EtOAc/гексан) с получением указанного на схеме амида (44,6 г, 60%), масса/заряд 436. (М+Н).
Стадия 3.
Полученный на предыдущей стадии амид (9,04 г, 20,8 ммоль) и изопропил амин (17,7 мл, 208 ммоль) в THF (177 мл) перемешивали в течение 4 ч при 65°C. Данную смесь концентрировали, распределяли между EtOAc и 1н. HCl и затем экстрагировали EtOAc (этилацетатом) и DCM. После удаления растворителя оставшийся неочищенный продукт очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (50-80% EtOAc/гексан) с получением указанного на схеме амина (6,06 г, 64%). ЖХ/МС=457,8 (М++1).
Стадия 4.
Полученный на предыдущей стадии амин (18,4 г, 40,3 ммоль) суспендировали в толуоле (300 мл), и затем добавляли NaH (2,42 г, 60,4 ммоль). Данную смесь перемешивали в течение 80 мин при 125°C. После охлаждения до комнатной температуры добавляли AcOH (3,76 мл, 66,4 ммоль) в H2O (300 мл). Образовавшееся твердое вещество отфильтровывали, промывали H2O и толуолом и затем сушили в условиях глубокого вакуума в течение ночи с получением указанного на схеме хинолина (15,0 г, 84%). ЖХ/МС=440 (М++1).
Стадия 5.
Полученный на предыдущей стадии хинолин (1,00 г, 2,27 ммоль), трипептид-брозилат (1,78 г, 2,50 ммоль) и Cs2CO3 (1,85 г, 5,68 ммоль) в NMP перемешивали в течение 3,5 ч при 65°C. Реакционную смесь распределяли между EtOAc и солевым раствором и затем экстрагировали EtOAc. Оставшийся после выпаривания летучих органических веществ неочищенный продукт очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (50-100% EtOAc/гексан) с получением указанного на схеме сложного эфира (1,64 г, 79%). ЖХ/МС=914 (М++1).
Стадия 6.
К полученному на предыдущей стадии сложному эфиру (6,29 г, 6,89 ммоль) в DCM (100 мл) добавляли TFA (10 мл). После перемешивания в течение 100 мин при комнатной температуре добавляли 100 мл толуола, и затем данную смесь концентрировали. Полученное неочищенное вещество распределяли между насыщенным раствором NaHCO3 и DCM и затем экстрагировали DCM. Оставшийся после удале-
Стадия 7.
Полученный фенол (520 мг, 0,655 ммоль) и указанный на схеме бромид (231 мг, 0,787 ммоль) растворяли в безводном DMF (5 мл) и обрабатывали Cs2CO3 (534 мг, 1,64 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали в течение 45 мин при 50°C. Реакционную смесь распределяли между H2O и EtOAc и экстрагировали EtOAc. Экстракт промывали солевым раствором и сушили над Na2SO4. Оставшийся после удаления летучих органических веществ неочищенный продукт очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (80-100% EtOAc/гексан) с получением указанного на схеме сложного эфира (600 мг, 91%). ЖХ/МС=1005,7 (М++1).
Стадия 8.
Полученный на предыдущей стадии сложный эфир (600 мг, 0,597 ммоль) растворяли в безводном DCM (6 мл) и затем обрабатывали 4н. HCl в диоксане (3 мл, 12,0 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре добавляли толуол (6 мл), и данную реакционную смесь концентрировали. После сушки в условиях глубокого вакуума в течение 30 мин получали твердое вещество, которое растворяли в THF (5,37 мл). К данной смеси добавляли MeOH (1,79 мл) и 2н. LiOH (3,58 мл). После перемешивания в течение 65 мин при 40°C реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь нейтрализовали путем добавления 2н. HCl (3,8 мл) и концентрировали. Полученное неочищенное вещество очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением соединения 60 (301 мг, 50%): 1Н ЯМР (CD3OD, 300 МГц): 5 8.63 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 5.805.71 (m, 1H), 5.56 (bs, 1H), 5.18 (d, 1H), 5.10 (d, 1H), 4.61 (t, 1H), 4.49-4.41 (m, 3H), 4.06-3.89 (m, 3H), 3.293.18 (m, 8Н), 3.14 (t, 2Н), 3.07 (t, 2Н), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.54-2.51 (m, 1H), 2.14-2.08 (m, 1H), 1.89-1.84 (m, 1H), 1.76-1.71 (m, 1H), 1.63-1.53 (m, 2Н), 1.38-1.31 (m, 2Н), 1.27-1.24 (d, 6Н), 1.13-1.08 (m, 2Н), 0.93 (s, 9Н), 0.29-0.23 (m, 2Н); ЖХ/МС=891 (М++1).
Пример 61. Получение соединения 61.
Стадия 1.
В колбу, продуваемую N2, вносили указанные на схеме фенол (604 мг, 0,761 ммоль) и хлорид (170 мг, 0,913 ммоль), Cs2CO3 (620 мг, 1,90 ммоль) и NaI (60 мг, 0,45 ммоль). Затем к данной смеси добавляли DMF (7 мл), и полученную гетерогенную смесь нагревали в предварительно нагретой до 65°C масляной бане. Через 30 мин реакция согласно ЖХ/МС-анализу была завершена менее чем на 40%. Через 6 ч реакция завершалась. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали (3x100 мл) 5% LiCl, полунасыщенным водным раствором NaHCO3 (100 мл) и солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4, твердое вещество удаляли путем фильтрования, и фильтрат концентрировали. Полученный неочищенный сложный метиловый эфир использовали как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=907 (М++1).
Стадия 2.
Полученный на предыдущей стадии сложный эфир (620 мг, 0,69 ммоль) растворяли в смеси THF (6 мл) и MeOH (2 мл). LiOH-H2O (143 мг, 3,41 ммоль) растворяли в dH2O (2 мл), и данный раствор медленно добавляли к раствору сложного эфира в THF/MeOH, который предварительно охлаждали до 0°C. После завершения добавления ледяную баню удаляли. Через 3 ч реакция завершалась. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и нейтрализовали путем добавления 2н. HCl. Соединение 61 сразу выделяли из реакционной смеси путем обратнофазовой ВЭЖХ с получением 472 мг (выход: 78%) желтоватого твердого вещества.
ЖХ/МС=892 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): 5 8.31 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.89 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.18-7.14 (m, 2Н), 5.53 (dd, J=9.0, 15.8 Гц, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.93 (d, J=17.4 Гц, 1H), 4.74 (d, J=10.2 Гц, 1H), 4.33 (m, 4Н), 4.11 (d, J=12.7 Гц, 1H), 3.84-3.22 (m, 12H), 2.93 (brs, 8H), 2.29 (q, J=4.5 Гц, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.66 (m, 1H), 1.55 (m, 1H), 1.35 (m, 1H), 1.14 (m, 1H), 0.97 (d, J=6.45 Гц, 6Н), 0.87 (m, 1H), 0.67 (s, 9H), 0.13-0.01 (m, 2H).
Пример 62. Получение соединения 62.
Стадия 1.
К раствору указанного на схеме фенола (1,10 г, 4,64 ммоль) в DMF (21 мл) добавляли указанный на схеме бромид (1,40 г, 4,77 ммоль, 1,2 экв.) и карбонат цезия (3,80 г, 11,6 ммоль, 2,5 экв.). Полученную смесь помещали в предварительно нагретую баню (50°C, температура масляной бани) и интенсивно перемешивали в течение 55 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой (1х). Выполняли обратную экстракцию водного слоя EtOAc (этилаце-татом) (1х). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали путем колоночной хроматографии (50%-75% EtOAc/гексаны) с получением указанного на схеме хинолина (1,71 г, 50%); ЖХ/МС: 515,28 (М++Н, рассчетное значение для С26Нз6СШ603: 515,25).
Стадия 2.
К раствору указанного на схеме трипептида в форме кислоты (303 мг, 0,634 ммоль) в DMSO (3,3 мл) добавляли трет-бутилат калия (365 мг, 3,17 ммоль, 5 экв.). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли по каплям раствор полученного на предыдущей стадии хинолина (359 мг, 0,697 ммоль, 1,1 экв.) в DMSO (3 мл). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 16,5 ч. Реакционную смесь гасили уксусной кислотой (0,3 мл) и очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ (30-90% MeCN/H2O-1% TFA) с получением указанной на схеме кислоты (100 мг, 16%); ЖХ/МС: 958,27 (М++Н, рассчетное значение для C50H72N9O10: 958,54).
Стадия 3.
К раствору полученной на предыдущей стадии кислоты (100 мг, 0,104 ммоль) в CH2Cl2 (0,2 мл) добавляли раствор 4н. HCl в диоксане (1,0 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,25 ч, концентрировали и очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ (30-90% MeCN/H2O-1%
TFA) с получением соединения 62 (10 мг, 11%): 1Н ЯМР (d3-MeOD, 400 МГц): 5 8.48 (s, 1H), 7.98 (d, 1H),
7.43 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.10 (d, 1H), 5.49 (s, 1H), 4.52-4.56 (m, 2H), 4.41 (d,
1H), 4.23 (t, 2Н), 4.10 (s, 1H), 3.97 (m, 2Н), 3.85 (t, 1H), 3.18 (q, 4H), 2.93 (t, 2H), 2.85 (m, 4H), 2.61 (m, 1H), 2.46 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.89 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.55 (t, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.35 (d, 2H), 1.19 (d, 8H), 0.92 (s, 9H); ЖХ/МС: 858.30 (M++H, C45H64N9O8 рассчетное значение: 858.49). Пример 63. Получение соединения 63.
Раствор указанной на схеме кислоты (89,5 мг, 0,115 ммоль)и (15,5 мг, 0,116 ммоль) N-хлорсукцинимида в 2 мл DMF перемешивали при 0°C в течение 20 ч, и к данной реакционной смеси дополнительно добавляли 5 мг N-хлорсукцинимида. Полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 42 ч. Данный раствор фильтровали, и затем полученный продукт очищали ненсколько раз путем препаративной ВЭЖХ и полученный очищенный продукт лиофилизировали с получением 78,4 мг соединения 63. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.63 (s, 1H), 8.30 (d, 1H, J=9.0 Гц), 7.87 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.38 (d, 1H, J=9.0 Гц), 5.76 (s, 1H), 4.62-4.74 (m, 2H), 4.55 (appt t, 1H, J=6.8 Гц), 4.13-4.24 (m, 2H), 4.05-4.13 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.75-2.85 (m, 1H), 2.55-2.67 (m, 1H), 1.82-2.05 (m, 2H), 1.60-1.72 (m, 3H), 1.37-1.58 (m, 3H), 1.32 (d, 6H, J=6.6 Гц), 1.14-1.27 (m, 3H), 0.95-1.06 (m, 12H), 0.35-0.44 (m, 2H); ЖХ/МС=811 (M++1).
Пример 64. Получение соединения 64.
Стадия 1.
Смесь указанного на схеме трипептида (1,0 г, 1,41 ммоль), хинолина (448,9 мг, 1,34 ммоль) и карбоната цезия (920 мг, 2,82 ммоль) в N-метилпирролидине перемешивали в бане (65°C) в течение 6 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и 5% водным раствором LiCl (20 мл), и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, и две фазы разделяли. Водную фракцию экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органические фракции промывали водой, объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси гексана и этилацетата в качестве элюента, с получением 864 мг (76%) трипептида, содержащего некоторое количество примесей. ЖХ/МС=808 (М++1).
Стадия 2.
Смесь сложного метилового эфира (864 мг, 1,07 ммоль) и LiOH (128,5 мг, 5,37 ммоль) в THF (5 мл), метаноле (5 мл) и воде (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 14,5 ч. Реакционную смесь концентрировали до половины начального объема с использованием роторного испарителя. Данный концентрированный раствор подкисляли путем добавления 0,83 мл (10,77 ммоль) трифторуксусной кислоты, и затем данную смесь разбавляли водой (5 мл) и метанолом (5 мл) и перемешивали бане (0°C) в течение 1 ч. Твердое вещество отфильтровывали, промывали водой и сушили под вакуумом. Твердое вещество растворяли в а диоксан-ацетонитрил-водной смеси путем нагревания и затем лиофилизировали с получением 818 мг соединения 64. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.09 (d, 1H, J=9.3 Гц), 7.72 (s, 1H), 7.40 (d, 1H, J=9.3 Гц), 7.34 (s, 1H), 5.77-5.92 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.28 (d, 1H, J=18.0 Гц), 5.10 (d, 1H, J=10.2 Гц), 4.56-4.70 (m, 2Н), 4.52 (m, 1H), 4.24 (br s, 1H), 4.00-4.16 (m, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.23 (гепт, 1Н, J=6.6 Гц), 2.72-2.82 (m, 1H), 2.45-2.58 (m, 1H), 2.07-2.26 (m, 1H), 1.92-2.06 (m, 1H), 1.76-1.92 (m, 1H), 1.62-1.76 (m, 2H), 1.26-1.50 (m, 1H), 1.41 (d, 6H, J=6.6 Гц), 1.12-1.26 (m, 2H), 1.02 (m, 9Н), 0.27-0.42 (m, 2H);
ЖХ/МС=794 (М++1).
Смесь соединения 64 (520,9 мг, 0,573 ммоль), тозилгидразида (810 мг, 4,35 ммоль) и 707 мг (8,62 ммоль) ацетата натрия в диметоксиэтан (10 мл) и воде (1 мл) перемешивали бане (95°C) в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и небольшим количеств водного раствора NaHCO3. Затем данную смесь экстрагировали этилацетатом (х2). Объединенные экстракты сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток растирали с 50% метанолом в воде при 0°C в течение 1 ч и образовавшееся твердое вещество выделяли путем фильтрования. Твердое вещество растворяли в смеси диоксана, ацетонитрила и воды, подкисляли путем добавления 2-3 капель трифторуксусной кислоты, и лиофилизировали с получением 447 мг соединения 65. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.07 (d, 1Н, J=9.0 Гц), 7.70 (s, 1H), 7.39 (d, 1H, J=9.0 Гц), 7.34 (s, 1H), 5.54 (s, 1H), 4.56-4.69 (m, 2Н), 4.51 (m, 1H), 4.23 (brs, 1H), 4.00-4.14 (m, 2Н), 4.05 (s, 3H), 3.22 (гепт, 1Н, J=6.9 Гц), 2.68-2.80 (m, 1H), 2.40-2.58 (m, 1H), 1.93-2.06 (m, 1H), 1.78-1.93 (m, 1H), 1.581.72 (m, 3H), 1.37-1.58 (m, 1H), 1.41 (d, 6Н, J=6.9 Гц), 1.27-1.37 (m, 1H), 1.10-1.27 (m, 3H), 0.94-1.10 (m, 12Н), 0.27-0.42 (m, 2Н); ЖХ/МС=796 (М++1).
Пример 66. Получение соединения 66.
Стадия 1.
Раствор указанного на схеме метилового (2,721 г, 8,13 ммоль) эфира в 100 мл CH2Cl2 перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли 42 мл (42 ммоль) BBr3 в CH2Cl2. Полученную смесь подвергали дефлегмации в бане (50°C) в течение 5 ч, и затем дополнительно добавляли 8,4 мл (8,4 ммоль) BBr3 в CH2Cl2. После нагревания в течение 2 ч при температуре дефлегмации, дополнительно добавляли 8,4 мл (8,4 ммоль) BBr3 в CH2Cl2 и полученую смесь подвергали дефлегмации в течение 18 ч.
Полученную смесь вливали в 300 г льда и данную смесь подщелачивали путем добавления ~18 г (~450 ммоль) NaOH. После разделения двух фаз водную фракцию экстрагировали водой (100 мл). Две водные фракции промывали CH2Cl2, объединяли, и pH подводили до ~6 концентрированной HCl. Полученную смесь перемешивали в ледяной бане в течение 1 ч и фильтровали. Твердое вещество промывали водой и сушили. Твердое вещество растирали в 100 мл воды при комнатной температуре в течение 1 ч и образовавшееся твердое вещество фильтровали и промывали водой, затем сушили под вакуумом с получением 2,566 г (98%) бис-фенола.
Стадия 2.
Смесь полученного бис-фенола (2,454 г, 7,65 ммоль) и 60% NaH (671 мг, 16,78 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 250 мл и добавляли 40 мл DMF при 0°C. Данную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин и затем добавляли 0,80 мл (8,51 ммоль) 2-бромэтилметилового эфира. Полученную смесь перемешивали при 4°C в течение 48 ч и разбавляли этилацетатом (120 мл) и 5% водным раствором LiCl (120 мл). Данную смесь подводили до pH 4-6 1н. HCl, дополнительно разбавлялии этилацетатом (~1 л), и затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Верхнюю органическую фракцию отделяли от нижней водной фракции, которая содержал твердое вещество. Твердое вещество в водной фракции растворяли этилацетатом (1 л) и органическую фракцию отделяли. Эти две органические фракции промывали водой (1 л), объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток растирали с 200 мл CH2Cl2 и нерастворимое вещество отфильтровывали. Полученный фильтрат концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси гексана, этилацетата и метанола в качестве элюента с получением 732 мг желаемого хинолина. ЖХ/МС=379 (IVT+l).
Смесь указанного на схеме трипептида (595 мг, 0,837 ммоль), хинолина (300 мг, 0,791 ммоль) и карбоната цезия (546 мг, 1,68 ммоль) в 4,2 мл N-метилпирролидин перемешивали в бане, нагретой при 65°C в течение 16,5 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и 5% водным раствором LiCl (20 мл) и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, и полученные две фазы разделяли. Водную фракцию экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органические фракции промывали водой (х2), объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 410 мг (61%) желаемого сложного метилового эфира, содержащего некоторое количество примесей.
ЖХ/МС=852 (М++1).
Стадия 4.
Смесь полученного сложного эфира (410 мг, 0,48 ммоль) и LiOH (115 мг, 4,81 ммоль) в THF (2 мл), метаноле (2 мл) и воде (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и затем концентрировали. Остаток растворяли в DMF и подкисляли путем добавления 0,45 мл (5,84 ммоль) трифторук-сусной кислоты. Смесь разбавляли этилацетатом (200 мл), промывали водой (х2), сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток растворяли в диоксане и лиофилизировали с получением 372 мг соединения 66. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.73 (s, 1H), 8.08 (d, 1H, J=8.6 Гц), 7.73 (s, 1H), 7.41 (d, 1H, J=9.0 Гц), 7.34 (s, 1H), 5.76-5.94 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.28 (d, 1H, J=16.8 Гц), 5.10 (d, 1Н, J=10.8 Гц), 4.57-4.70 (m, 2Н), 4.52 (m, 1H), 4.38 (br m, 2Н), 4.23 (br, 1H), 4.05-4.16 (m, 1H), 3.86 (br m, 2Н), 3.49 (s, 3H), 3.23 (гепт, 1Н, J=6.6 Гц), 2.70-2.82 (m, 1H), 2.46-2.58 (m, 1H), 2.12-2.26 (m, 1H), 1.83-2.07 (m, 2Н), 1.62-1.75 (m, 2Н), 1.37-1.48 (m, 2Н), 1.41 (d, 6Н, J=6.6 Гц), 1.26-1.37 (m, 1H), 1.19 (br, 1H), 1.02 (s, 9Н), 0.27-0.42 (m, 2Н);
ЖХ/МС=838 (М++1).
Пример 67. Получение соединения 67.
Стадия 1.
Смесь промежуточного соединения III (628 мг, 0,881 ммоль), хинолина (317 мг, 0,837 ммоль) и карбоната цезия (632 мг, 1,94 ммоль) в 4,4 мл N-метилпирролидина перемешивали в бане, нагретой при 65°C в течение 16 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и 5% водным раствором LiCl (20 мл), и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, и две фазы разделяли. Водную фракцию экстрагировали этилацетатом (20 мл). Органические фракции промывали водой (х2), объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 504 мг (71%) сложного эфира. ЖХ/МС=854 (М++1).
Стадия 2.
Смесь полученного сложного эфира (504 мг, 0,59 ммоль) и LiOH (71 мг, 2,96 ммоль) в THF (2 мл), метаноле (2 мл) и воде (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Дополнительно добавляли LiOH (71 мг, 2,96 ммоль) и данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Данный раствор концентрировали, и затем остаток растворяли в этилацетате и подкисляли путем добавления трифторуксусной кислоты. Полученный раствор промывали водой (х2), сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток растирали в 50% водном растворе метанола (5 мл) при 0°C в течение 2 ч и фильтровали. Затем полученное твердое вещество промывали водой, сушили под вакуумом с выходом 535 мг (95%) соединения 67. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.09 (d, 1H, J=8.7 Гц), 7.74 (s, 1H), 7.42 (d, 1H, J=8.7 Гц), 7.37 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 4.48-4.70 (m, 3H), 4.39 (m, 2Н), 4.22 (m, 1H), 4.04-4.16 (m, 1H), 3.86 (m, 2Н), 3.49 (s, 3H), 3.23 (гепт, 1Н, J=6.9 Гц), 2.69-2.82 (m, 1H), 2.46-2.60 (m, 1H), 1.76-2.08 (m, 2Н), 1.27-1.76 (m, 6Н), 1.41 (d, 6H, J=6.9 Гц), 1.22 (m, 3H), 1.01 (s, 9H), 0.90-1.10 (m, 3H), 0.28-0.42 (m, 2Н); ЖХ/МС=840
(М++1).
Стадия 1.
Суспензию указанной на схеме кислоты (2,000 г, 9,62 ммоль) в метаноле (20 мл) и толуоле (20 мл) перемешивали при 0°C, добавляя по каплям 8 мл (16 ммоль) 2,0 М TMSCHN2 в диэтиловом эфире. Выдерживали 30 мин при 0°C и 10 мин при комнатной температуре, полученный раствор концентрировали с использованием роторного испарителя с температурой бани <30°C, и полученный остаток дополнительно сушили под вакуумом. К остатку ресуспензированном в метаноле (15 мл) добавляли 3,75 мл (16,4 ммоль) 25% метилата натрия в метаноле и полученный раствор подвергали дефлегмации в бане, нагретой при 70°C в течение 1 ч. Данный раствор концентрировали, и затем остаток адсорбировали на силика-геле и очищали путем хроматографии с получением 997 мг желаемого сложного эфира. ЖХ/МС=174
(М++1).
Стадия 2.
Раствор полученного сложного эфира (992 мг) и LiOH (274 мг, 11,44 ммоль) в THF (9 мл), метаноле (3 мл) и воде (3 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь концентрировали до ~1/3 объем, разбавляли водой (25 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (25 мл). Органический слой экстрагировали водой (1х25 мл). Водные фракции объединяли и подкисляли путем добавления 1н. HCl (15 мл) и продукт экстрагировали этилацетатом (3х30 мл). Объединенные экстракты сушили (MgSO4) и концентрировали с получением 835 мг (92%) желаемой кислоты. ЖХ/МС=160 (М++1).
Стадия 3.
Раствор желаемой кислоты (824 мг) и LiOH (274 мг, 5,18 ммоль) в пиридине (50 мл) перемешивали при -30 мин. Полученную смесь перемешивали в морозильнике в течение 2,5 ч и затем гасили путем добавления 2,5 мл воды и концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате и насыщенном водном растворе NaHCO3. Водную фракцию экстрагировали водой (1х1). Водные фракции сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получениемм 495 мг (28%) желаемой кислоты. ЖХ/МС=341 (М++1).
Стадия 4.
Смесь полученного на предыдущей стадии амида (495 мг, 1,45 ммоль) и трет-бутилата калия (350 мг, 3,12 ммоль) в трет-BuOH (7,3 мл) перемешивали при 75°C в течение 7,5 ч. Добавляли 1,5 мл (6 ммоль) 4н. HCl в диоксане, затем смесь концентрировали. Остаток растирали с 1н. NaH2PO4 (25 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч и фильтровали. Твердое вещество промывали водой и затем эфиром и сушили под вакуумом с получением 423 мг желаемого хинолина. ЖХ/МС=323 (IVT+l).
Стадия 5.
Смесь трипептида (302 мг, 0,424 ммоль), хинолина (130 мг, 0,402 ммоль) и карбоната цезия (304 мг, 0,932 ммоль) в 3 мл N-метилпирролидина перемешивали в бане, нагретой при 65°C в течение 16 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и 5% водным раствором LiCl (15 мл), и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, и две фазы разделяли после дополнительного разбавления водой и этилацетатом. Органическую фракцию промывали водой (х 1), сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 199 мг (62%) желаемого сложного эфира содержащ некоторое количество примесей. ЖХ/МС=798 (М++1).
Стадия 6.
Смесь промежуточного соединения III (302 мг, 0,424 ммоль), хинолина (130 мг 0,402 ммоль) и (карбоната цезия 304 мг, 0,932 ммоль) в 3 мл N-метилпирролидина перемешивали в бане, нагретой при 65°C в течение 16 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и 5% водным раствором LiCl (15 мл), и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и две фазы разделяли после дополнительного разбавления водой и этилацетатом. Органическую фракцию промывали
водой (х1), сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии с использованием combi-flash гексаном-этилацетатом с получением 199 мг (62%) сложного эфира, содержащего некоторое количество примесей. ЖХ/МС=798 (М++1).
Смесь полученного сложного эфира (199 мг, 0,25 ммоль) и LiOH (59 мг, 2,48 ммоль) в THF (4 мл), метаноле (2 мл) и воде (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч и концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате и воде и подкисляли путем добавления 0,3 мл (4,04 ммоль) триф-торуксусной кислоты. После разделения двух фаз водную фракцию экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали, и затем остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением 132 мг соединения 68. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.48 (s, 1H), 8.08 (d, 1H, J=9.6 Гц), 7.86 (s, 1H), 7.63 (d, 1H, J=9.6 Гц), 5.76 (br, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.45 (t, 1H), 4.31 (s, 3H), 4.17 (s, 3H), 4.15 (m, 1H), 4.03-4.12 (m, 1H), 2.74-2.85 (m, 1H), 2.55-2.67 (m, 1H), 1.862.02 (m, 1H), 1.74-1.86 (m, 1H), 1.28-1.74 (m, 6H), 1.12-1.28 (m, 3H), 1.02 (m, 9H), 0.96-1.12 (m, 3H), 0.300.44 (m, 2H); ЖХ/МС=784 (М++1).
Пример 69. Получение соединения 69.
Смесь трипептида (101 мг, 0,142 ммоль), указанного на схеме хинолина (44 мг, 0,136 ммоль) и карбоната цезия (104 мг, 0,320 ммоль) перемешивали в 1 мл N-метилпирролидина в нагретой до 65°C бане в течение 16 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (5 мл) и 5% водным раствором LiCl (5 мл), и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученные две фазы разделяли после дополнительноого разбавления водой и этилацетатом. Органическую фракцию промывали водой (х 1), сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силика-геле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 71 мг желаемого сложного эфира, содержащего некоторое количество примесей. ЖХ/МС=796 (М++1).
Смесь полученного сложного эфира (71 мг, 0,090 ммоль) и LiOH (21 мг, 0,881 ммоль) в THF (2 мл), метаноле (1 мл) и воде (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч и затем концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате и воде и подкисляли путем добавления 0,1 мл трифторук-сусной кислоты. После разделения двух фаз, водную фракцию экстрагировали этилацетатом. Органические фракции объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали, и затем остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением 54 мг соединения 69. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.75 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.31 (d, 1H, J=9.6 Гц), 7.86 (s, 1H), 7.63 (d, 1H, J=9.0 Гц), 5.86 (m, 1H), 5.77 (br, 1H), 5.29 (d, 1H, J=17.1 Гц), 5.12 (d, 1H, J=10.8 Гц), 4.73 (m, 1H), 4.60 (m, 1H),), 4.45 (m, 1H), 4.31 (s, 3H), 4.17 (s, 3H), 4.15 (m, 1H), 4.05-4.13 (m, 1H), 2.74-2.92 (m, 1H), 2.54-2.66 (m, 1H), 2.14-2.27 (m, 1H), 1.87-2.02 (m, 2H), 1.761.87 (m, 1H), 1.69-1.76 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 1.42-1.50 (m, 1H), 1.28-1.42 (m, 1H), 1.19 (br, 1H), 1.03 (m,
9Н), 0.30-0.44 (m, 2H); ЖХ/МС=782 (М++1).
Пример 70. Получение соединения 70.
Стадия 1.
Раствор указанного на схеме сложного эфира (7,413 г, 42,22 ммоль) в THF (45 мл) перемешивали в охлажденной до 0°C бане, добавляя 1н. LiOH (45 мл) в течение 30 мин. После добавления раствор перемешивали при 0°C в течение 2 ч и подкисляли путем добавления 13 мл (52 ммоль) 4н. HCl. Полученную смесь концентрировали до половины начального объема при пониженном давлении. Концентрированную смесь разбавляли водой, и затем продукт экстрагировали этилацетатом (100 млх 2). Экстракты объединяли, промывали солевым раствором (50 мл х1), сушили (MgSO4) и концентрировали с получением 5,972 (96%) желаемой кислоты.
Стадия 2.
Смесь неочищенного фенола, указанного на схеме (3,345 г, 18,02 ммоль), и карбоната цезия (7,055 г, 21,65 ммоль) в DMF (30 мл) перемешивали при комнатной температуре, добавляя 2
бромэтилметиловый эфир (1,9 мл, 20,22 ммоль). Смесь перемешивали при 65°C в течение 5 ч и разбавляли этилацетатом (500 мл) и 5% водным раствором LiCl (250 мл). После разделения двух слоев, водную фракцию экстрагировали этилацетатом (300 мл), и органические фракции промывали водой (300 мл), Органические фракции объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 3,611 г (82%) желаемого анилина. ЖХ/МС=244 (М++1). Стадия 3.
В смесь указанной на схеме кислоты (778 мг, 5,28 ммоль) и полученного на предыдущей стадии анилина (1,157 г, 4,75 ммоль) в DMF (30 мл) при перемешивании в охлажденной до -25°C бане добавляли POCl3 (1,9 мл, 5,90 ммоль). Смесь перемешивали при -5 -15°C в течение 3 ч и затем 2,5 мл) и 5% водный раствор LiCl (250 мл). Через 5 мин данную смесь концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси гексана и этилацетата в качестве элюента, с получением 1, 131 г (64%) амида. ЖХ/МС=373 (М++1).
Стадия 4.
Смесь полученного на предыдущей стадии амида (1,031 г, 2,76 ммоль) в THF (9,5 мл) и циклопро-пиламине (1,9 мл, 27,42 ммоль) помещали в сосуд, выдерживающем повышенное давление, перемешивали в нагретой до 65°C бане в течение 5 ч и концентрировали. Остаток смешивали с водой, и затем данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, и затем разбавляли насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл). Полученный продукт затем экстрагировали этилацетатом (100 млх2). Органические экстракты объединяли, промывали водой (100 мл), сушили (MgSO4) и концентрировали, продукт очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с выходом 769 мг (71%) желаемого амина. ЖХ/МС=394 (М++1).
Стадия 5.
Суспензию полученного на предыдущей стадии амина (767 мг, 1,95 ммоль) и NaH (119 мг, 2,98 ммоль, 60% дисперсия в вазелиновом масле) в толуоле (11,5 мл) подвергали дефлегмации в нагретой до 110°C бане в течение 3 ч, затем дополнительно добавляли 41 мг NaH (1,03 ммоль, 60%). Смесь подвергали дефлегмации в течение 2 ч, и затем дополнительно добавляли 80 мг NaH (2,0 ммоль, 60%) и подвергали дефлегмации в течение 1 ч, и затем охлаждали до комнатной температуры. К данной суспензии добавляли раствор 0,38 мл (6,64 ммоль) уксусной кислоты в 2,3 мл воды, и полученую смесь перемешивали в охлажденной до 0°C бане в течение 30 мин и фильтровали. Собранное твердое вещество промывали водой и сушили под вакуумом с выходом 612 мг (84%) желаемого хинолина. ЖХ/МС=376 (IVT+l).
Стадия 6.
Смесь трипептида III (663 мг, 0,930 ммоль), указанного на схеме хинолина (332 мг, 0,883 ммоль) и карбоната цезия (674 мг, 2,07 ммоль) в 6,6 мл N-метилпирролидина перемешивали в нагретой до 65°C бане в течение 16 ч. Данную смесь разбавляли этилацетатом (15 мл) и 5% водным раствором LiCl (26 мл), и затем полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, дополнительно добавляли 5% водный раствор LiCl и этилацетат, и две фракции разделяли. Водную фракцию экстрагировали этилацетатом (х 1) и две органические фракции промывали водой (х 1), объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 359 мг желаемого сложного эфира. ЖХ/МС=851
(М++1).
Стадия 7.
Смесь полученного на предыдущей стадии сложного эфира (359 мг, 0,423 ммоль) и LiOH (200 мг, 8,35 ммоль) в THF (5 мл), метаноле (5 мл) и воде (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Данный раствор подкисляли путем добавления трифторуксусной кислоты, и затем данную смесь концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате, промывали водой, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, и собиранный продукт лиофилизировали с трифторуксусной кислотой с получением 261 мг соединения 70. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.66 (s, 1H), 8.27 (d, 1H, J=9.7 Гц), 7.70 (s, 1H), 7.64 (d, 1H, J=9.7 Гц), 5.68 (s, 1H), 4.35-4.78 (m, 4H), 4.02-4.20 (m, 2H), 3.87 (br, 2H), 3.47 (s, 3H), 2.4-2.9 (m, 2H), 1.89-2.04 (m, 1H), 1.77-1.89 (m, 1H), 1.28-1.77 (m, 4H), 1.23 (m, 3H), 0.94-1.11 (m, 12H), 0.85-0.94 (m, 2H), 0.70 (br, 2H), 0.28-0.44 (m, 2H); ЖХ/МС=837 (М++1).
Смесь указанного на схеме трипептида (557 мг, 0,784 ммоль), хинолина (279 мг, 0,741 ммоль) и карбоната цезия (563 мг, 1,73 ммоль) в 5,6 мл N-метилпирролидине перемешивали в нагретой до 65°C бане в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли этилацета-том (5 мл) и 5% водным раствором LiCl (20 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и две фазы разделяли после дополнительного разбавления 5% водным раствор LiCl (30 мл) и этилацетатом (50 мл). Водную фракцию экстрагировали этилацетатом (х1) и две органические фракции промывали водой (х 1), объединяли, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, с получением 288 мг (46%) желаемого сложного эфира. ЖХ/МС=849 (М++1).
Смесь полученного сложного эфира (288 мг, 0,339 ммоль) и LiOH (41 мг, 1,71 ммоль) в THF (4 мл), метаноле (4 мл) и воде (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Данный раствор подкисляли путем добавления трифторуксусной кислоты, и затем данную смесь концентрировали. Остаток растворяли в этилацетате, промывали водой, сушили (MgSO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и этилацетата, и соби-ранный продукт лиофилизировали с трифторуксусной кислотой с получением 238 мг соединения 71. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.58 (s, 1H), 8.24 (d, 1H, J=8.7 Гц), 7.64 (s, 1H), 7.60 (d, 1H, J=8.7 Гц), 5.77-5.96 (m, 1H), 5.66 (s, 1H), 5.29 (d, 1H, J=17.4 Гц), 5.11 (d, 1Н, J=9.9 Гц), 4.71 (m, 1H), 4.42-4.62 (m, 3H), 4.044.20 (m, 2Н), 3.87 (br, 2Н), 3.47 (s, 3H), 2.54-2.88 (m, 2Н), 2.10-2.30 (m, 1H), 1.55-2.06 (m, 5Н), 1.27-1.50 (m, 3H), 1.21 (m, 3H), 1.03 (m, 9Н), 0.80-0.93 (m, 2Н), 0.69 (br, 2Н), 0.30-0.44 (m, 2Н); ЖХ/МС=835 (М++1).
Пример 72. Получение соединения 72.
Стадия 1.
2-(2-Гидроксиэтиламино)-2-метилпропан-1-ол получали из 2-амино-2-метилпропан-1-ола в соответствии с модифицированной методикой Cottle et al., J. Chem. Soc. 1946, 289. К раствору 2-амино-2-метилпропан-1-ола (250 мл, 2,61 моль 1,76 экв.) в H2O (400 мл) при -5°C (температура NaCl/ледяной бани) добавляли этиленоксид (65,25 г, 1,48 моль, конденсация при -78°C). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч; за это время температура повышалась до комнатной температуры. H2O удаляли под вакуумом и оставшейся 2-амино-2-метилпропан-1-ол подвергали дистилляции. Неочищенный остаток растворяли в кипящем EtOAc, продукт осаждали добавленим гексанов с получением 2-(2-Гидрокси-этиламино)-2-метилпропан-1-ола (145,5 г, 74%) в виде бесцветных кристаллов. ЖХ/МС: 134,03 (М++Н, C6H16NO2 рассчетное значение: 134,12).
Стадия 2.
3,3-Диметилморфолин получали из 2-(2-гидроксиэтиламино)-2-метилпропан-1-ола в соответствии с модифицированной методикой Cottle et al., J. Chem. Soc. 1946, 289. К H2SO4 (110 мл, 2,06 моль, 1,85 экв.) при 3°C (температура ледяной бани) медленно порциями добавляли 2-(2-гидроксиэтиламино)-2-метилпропан-1-ол (145,5 г, 1,09 моль). Температура внутри реакционной смеси повышалась до 70°C. Полученный раствор нагревали до 185°C (температура масляной бани) в течение 2 ч; за это время раствор становился коричневым. После охлаждения до комнатной температуры добавляли H2O (250 мл) и затем медленно добавляли твердый NaOH до получения раствором щелочного pH. Данный раствор разбавляли EtOAc (500 мл) и полученную двухфазную смесь интенсивно перемешивали в течение 15 ч. Затем данный раствор фильтровали через целит и промывали H2O и EtOAc. Органический слой отделяли и промывали солевым раствором. Водные слои снова дважды экстрагировали EtOAc. Полученные органические слои объединяли, сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом (давление > 80 тор (10640 н/м2)). Полученный неочищенный продукт подвергали дистилляции (76°C, 98 тор (13034 н/м2)) с получением 3,3-диметилморфолина (46,0 г, 36%) в виде бесцветного масла. ЖХ/МС: 116,04 (М++Н, C6H14NO рас-счетное значение: 116,11).
В сосуд, вьщерживающий повышенное давление, содержащий 3,3-диметилморфолин (12,15 г, 106 ммоль) в MeOH (17 мл) при -78°C (внешняя температура, ацетон/СО2^)) добавляли этиленоксид (6,2 мл, 125 ммоль, 1,2 экв., конденсация при -78°C). Полученный раствор герметезировали и перемешивали в течение 20 ч; за это время температура повышалась до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и данный неочищенный продукт подвергали дистилляции (75°C, 0,5 тор (66,5 н/м2)) с получением 2-(3,3-диметилморфолин-4-ил)этанола (14 г, 82%) в виде бесцветного масла с примесью 3,3-диметилморфолина (~15%). ЖХ/МС: 160, 10 (М++Н, C8H18NO2 рассчетное значение:
160,13).
Стадия 4.
К раствору 2-(3,3-диметилморфолин-4-ил)этанола (7,2 г, 45 ммоль) и CBr4 (16,4 г, 49 ммоль, 1,1 экв.) в THF (150 мл) добавляли по каплям раствор PPh3 (12,9 г, 49 ммоль, 1,1 экв.) в THF (75 мл). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч, затем суспензию разбавляли гексанами и фильтровали. Полученный фильтрат концентрировали под вакуумом, и полученное масло разбавляли CH2Cl2. Затем данный раствор промывали дважды насыщенным водным раствором NaHCO3 и солевым раствором. Водные слои снова экстрагировали CH2Cl2 и объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали. Полученный неочищенный продукт подвергали дистилляции (65°C, 0,5 тор) с выходом 4-(2-бром-этил)-3,3-диметилморфолина (5,4 г, 54%) в виде желтого масла. 1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц) 5 3.69 (t, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.70 (t, 2H), 2.58 (t, 2H), 0.99 (s, 6H); ЖХ/МС: 222.02 (M++H, C8H17BrNO рассчетное значение: 222.05).
Стадия 5.
К раствору трипептидого промежуточного соединения (504 мг, 0,63 ммоль) в DMF (6 мл) добавляли 4-(2-бромэтил)-3,3-диметилморфолин (165 мг, 0,74 ммоль, 1,2 экв.) и Cs2CO3 (520 мг, 1,59 ммоль, 2,5 экв.). Суспензию нагревали до 50°C (температура масляной бани) в течение 45 мин. Порциями добавляли дополнительное количество 4-(2-бромэтил)-3,3-диметилморфолин (410 мг, 1,84 ммоль, 3 экв.) до тех пор, пока путем ВЭЖХ не будет доказано, что реакция завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали солевым раствором. Водный слой снова экстрагировали EtOAc и объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт растворяли в смеси THF (4 мл) и MeOH (1,2 мл), затем к данной смеси добавляли водный раствор LiOH (1н., 3,2 мл, 5 экв.). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, затем добавляли HCl (1н., 3,2 мл) и данный раствор концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ (30-95% MeCN/H2O/0,1% TFA) с выходом соединения 72 (498 мг, 85%) в виде желтого порошка. 1Н ЯМР (d3-MeOD, 400 МГц, 4:1 смесь ротомеров) основной ротомер): 5 8.70 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 5.86 (dt, 1H), 5.59 (s, 1H), 5.28 (dd, 1H), 5.10 (dd, 1H), 4.69 (m, 3H), 4.48 (d, 1H), 3.95-4.21 (m, 4Н), 3.75 (m, 3H), 2.67 (m, 3H), 2.17 (m, 1H), 2.04 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.65-1.73 (m, 2Н), 1.53 (s, 6H), 1.43-1.53 (m, 2Н), 1.40 (m, 1H) 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.21-1.27 (m, 2Н), 1.06 (m, 2Н), 1.04 (s, 9Н), 0.39 (m, 2Н); ЖХ/МС: 920.15 (М++Н, C47H63ClN7O10 рассчетное значение: 920.43).
Пример 73. Получение соединения 73.
К раствору соединения 72 (164 мг, 0,18 ммоль) в DME (3,6 мл) и H2O (0,4 мл) добавляли пара-толуолсульфонил гидразид (251 мг, 1,35 ммоль, 7,5 экв.) и NaOAc (221 мг, 2,69 ммоль, 15 экв.). Реакционную смесь нагревали до 95°C (температура масляной бани) в течение 1,25 ч. Полученный раствор охлаждали до комнатной температуры и разбавляли MeOH и фильтровали. Полученный фильтрат очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ (20-65% MeCN/H2O/0,1% TFA) с выходом соединения 73 (35 мг, 21%) в виде желтого порошка. 1Н ЯМР (d3-MeOD, 400 МГц, 4:1 смесь ротомеров) Основной ротомер: 5 8.59 (s,
1H), 8.43 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 5.59 (s, 1H), 4.66 (m, 3H), 4.47 (d, 1H), 3.95-4.21 (m, 4Н), 3.75 (m, 4Н), 2.67 (m, 4Н), 2.22 (m, 2Н), 2.01 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.65-1.73 (m, 4Н), 1.53 (s, 6Н), 1.43-1.53 (m, 4Н), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.21-1.27 (m, 3H), 1.04 (s, 9Н), 0.39 (m, 2Н); ЖХ/МС: 922.15 (М++Н, C47H65ClN7O10 рассчетное значение: 922.45). Пример 74. Получение соединения 74.
Стадия 1.
В трехгорлую колбу, оснащенную подвесной мешалкой и дефлегматором, добавляли малоновую кислоту (25,4 г, 244 ммоль) и мета-анизидин (27 мл, 244 ммоль). Затем добавляли порциями оксихлорид фосфора (33,5 мл, 366 ммоль). После прекращения выделения газа суспензию медленно нагревали до 95°C и перемешивали в течение 30 мин. Полученную пену затем охлаждали до комнатной температуры, и добавляли оксихлорид фосфора (100 мл, 732 ммоль). Смесь нагревали до 120°C и перемешивали в течение 3 ч. После охлаждения в ледяной бане медленно добавляли ледяную воду, чтобы погасить оставшийся оксихлорид фосфора, и затем добавляли 5н. NaOH до тех пор, пока pH раствора не достигагал значение=8. Затем данную смесь разбавляли этилацетатом, и собирали органический слой. Затем органическую фазу промывали водой и солевым раствором. После сушки над сульфатом натрия и концентрирования полученный неочищенный остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (CH2Cl2) с выходом желаемого дихлорида.
Стадия 2.
Полученный дихлорид растворяли в серной кислоте (150 мл) и нагревали в масляной бане при 160°C в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры данную смесь вливали в охлаждённую до 0°C воду. Суспензию разбавляли этилацетатом, затем органическую фазу промывали водой и насыщенным водным раствором NaHCO3. Затем органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого фенола (18,4 г, 35% после двух стадий).
Стадия 3.
К полученному фенолу (2,13 г, 9,95 ммоль) в 1-метил 2-пирролидоне (5 мл) добавляли пиразол (1,37 г, 10,9 ммоль) и данную смесь нагревали до 115°C в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры данную реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением желаемого продукта (2,92 г, 97%).
Стадия 4.
Раствор фенола полученного на предыдущей стадии (2,92 г, 9,68 ммоль), 4-(2-хлорэтил) морфолин гидрохлорида (2,16 г, 11,6 ммоль), Cs2CO3 (6,94 г, 21,3 ммоль) и NaI (200 мг, 1,33 ммоль) нагревали до 65°C в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли эти-лацетатом и затем промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 и солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над сульфатом натрия, концентрировали и очищали путем ВЭЖХ с получением хинолинового промежуточного соединения (1,54 г, 38%).
Стадия 5.
Указанный на схеме трипептид (500 мг, 1,04 ммоль) растворяли в безводном DMSO (10 мл) и затем обрабатывали твердым KOtBu (350 мг, 3,12 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре добавляли указанное на схеме хинолиновое промежуточное соединение (380 мг, 1,97 ммоль) и данную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили уксусной кислотой (700 мкл) и очищали путем ВЭЖХ с получением соединения 74 (161 мг, 18%). 1Н ЯМР (CD3OD, 300 МГц) 5 8.57 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.18 (dd, 1H), 6.17 (d, 1H), 5.56 (m, 1H), 4.71 (t, 1H), 4.64 (t, 1H), 4.59-4.55 (m, 2H), 4.50 (d, 1H), 4.17 (s, 1H), 4.10-3.78 (m, 6H), 3.75-3.71 (m, 2H), 3.64-3.28 (m, 4H), 2.72-2.53 (m, 2H), 2.05-1.88 (m, 2Н), 1.73-1.61 (m, 3H), 1.50 (dd, 1H), 2.53 (dd, 1H), 1.38-1.02 (m, 5H), 1.29 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.02 (s, 9H), 0.40-0.37 (m, 2H); LRMS рассчитано для
C45H63N8O9 [M+H]+: 859.5, найдено: 859,2. Пример 75. Получение соединения 75.
Указанный на схеме трипептид (450 мг, 0,94 ммоль) растворяли в безводном DMSO (10 мл) и обрабатывали твердым KOtBu (582 мг, 5,18 ммоль). После выдерживания в течение 1 ч при комнатной температуре добавляли указанный на схеме хинолин (437 мг, 1,04 ммоль) и данную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили уксусной кислотой (400 мкл), затем очищали путем ВЭЖХ с получением соединения 75 (632 мг, 80%). 1Н ЯМР (CD3OD, 400 МГц) 5 8.68 (s, 1H), 8.58 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.19 (dd, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.86-5.79 (m, 1H), 5.57 (m, 1H), 5.26 (dd, 1H), 5.09 (dd, 1H), 4.70 (t, 1H), 4.64 (t, 1H), 4.59-4.56 (m, 2Н), 4.51 (d, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.13-3.84 (m, 6Н), 3.75-3.73 (m, 2Н), 3.30-3.65 (m, 4Н), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.58-2.51 (m, 1H), 2.22-2.16 (m, 1H), 2.051.98 (m, 1H), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.73-1.64 (m, 2Н), 1.52 (d, 1H), 1.44 (dd, 1H), 1.29 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.261.18 (m, 2Н), 1.03 (s, 9H), 0.40-0.37 (m, 2Н); LRMS рассчитано для C45H61N8O9 [M+H]+: 857.5, найдено:
857,2.
Пример 76. Получение соединения 76.
Смесь 1-[2-(бицикло [3, 1,0]гекс-3 -илоксикарбониламино)-3,3-диметилбутирил] -4-(4-бром-
бензолсульфонилокси)пирролидин-2-карбонил]амино}-2-винилциклопропанкарбоновой кислоты метилового эфира (100 мг, 0,14 ммоль), 2-(5-изопропиламино-[1,3,4]тиадиазол-2-ил)-7-метоксихинолин-4-ола (62 мг, 0,18 ммоль) и карбоната цезия (60 мг, 0,18 ммоль) в NMP (1 мл) перемешивали при 65°C в течение 3 ч. Смесь нейтрализовали путем добавления TFA (0,16 мл) и очищали путем ВЭЖХ с получением желаемого сложного эфира, растворяли в метаноле (10 мл), THF (15 мл) и водном растворе гидроксида лития (120 мг/3 мл). Смесь перемешивали при 45°C в течение 1 ч, концентрировали с целью удаления летучих растворителей, нейтрализовали путем добавления 1н. HCl и экстрагировали этилацетатом. Органический экстракт концентрировали и очищали путем ВЭЖХ с получением соединения 76 (5,5 мг, 5%). ЖХ/МС=810,5 (М++1).
Пример 77. Получение соединения 77.
ii он
Стадия 1.
К смеси Ш-пиразол-3-иламина (8,3 г, 100 ммоль), ацетона (7,4 мл, 100 ммоль) и уксусной кислоты (12 мл, 200 ммоль) в THF (280 мл) порциями добавляли триацетоксиборгидрид натрия (27 г, 120 ммоль) при охлаждении в бане с ледяной водой. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем при 50°C в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли по каплям 10н. NaOH (40 мл), и осторожно перемешивали в течение 1 ч. Прозрачный раствор выделяли путем декантации. Полученный вязкий остаток промывали THF (2x50 мл). Весь THF-раствор, полученный после помывок, объединяли и концентрировали. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc), с получением изо1гоопил-(Ш-пиразол-3-ил)амина (8,5 г, 68%) в виде бесцветного масла. 1Н
ЯМР (300 МГц, CDCl3): 5 7.34 (d, 1H), 5.62 (d, 1H), 3.58 (m, 1H), 1.22 (d, 6H). Стадия 2.
Смесь 2,4-дихлор-7-метоксихинолина (1,34 г, 5,88 ммоль) и изопропил-(Ш-пиразол-3-ил)амина (1,10 г, 8,80 ммоль) нагревали при 115°C в течение 3 ч при перемешивании в герметично закрытой пробирке. После нагревания в течение ~20 мин (давление в пробирке увеличивалось) пробирку разгермети-зовали иглой. Затем полученную смесь растворяли в дихлорметане и загружали на колонку силикагеля. В результате элюции дихлорметаном и метанолом получали [1-(4-хлор-7-метоксихинолин-2-ил)-Ш-пиразол-3-ил]изопропиламин (1,53 г, 82%). ЖХ/МС=317,2 (М++1).
Стадия 3.
Смесь [1-(4-хлор-7-метоксихинолин-2-ил)-1H-пиразол-3-ил]изопропиламина (0,52 г, 1,6 ммоль) и моногидрата ацетата натрия (1,0 г) в уксусной кислоте (5 мл) перемешивали при 130°C в течение 2 суток. Смесь концентрировали и затем распределяли между этилацетатом (50 мл) и водой (50 мл). Органический слой концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем колоночной хроматографии на сили-кагеле (этилацетат/гексаны), с получением [1-(4-гидрокси-7-метоксихинолин-2-ил)-Ш-пиразол-3-ил]изоггоопиламина (0,09 г, 19%). ЖХ/МС=299,1 (М++1).
Стадия 4.
Смесь указанного на схеме трипептида (420 мг, 0,59 ммоль), [1-(4-гидрокси-7-метоксихинолин-2-ил)-1H-пиразол-3-ил]изопропиламина (174 мг, 0,58 ммоль) и карбоната цезия (0,22 мг, 0,68 ммоль) в NMP (2 мл) перемешивали при 65°C в течение 16 ч. К данной смеси добавляли раствор гидрата LiOH (400 мг) в воде (3 мл). При перемешивании при 40°C добавляли метанол до тех пор, пока смесь не стала почти гомогенной, затем эту смесь перемешивали в течение 2 ч. После удаления летучих растворителей, смесь распределяли между этилацетатом и 3% водном раствором LiCl. Водный раствор нейтрализовали путем добавления 1н. HCl, затем отбирали органический слой. Водный слой экстрагировали этилацета-том. Этилацетатные слои объединяли и концентрировали. Остаток очищали путем ВЭЖХ с получением соединения 77 (260 мг, 51%) в виде соли TFA. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.60 (d, J=3.0 Гц, 1H), 8.07 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.17 (d, J=9.3 Гц, 1H), 6.26 (d, J=2.7 Гц, 1H), 5.85 (m, 1H), 5.63 (brs, 1H), 5.28 (d, J=16.2 Гц, 1H), 5.11 (d, J=10.5 Гц, 1H), 4.69 (t, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.21 (q, 1H), 1.98 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.70 (m, 2H), 1.44 (m, 2H), 1.31 (d, 6H), 1.21 (m, 2H), 1.04 (s, 9H), 0.98 (m, 2H), 0.34 (m, 2H). ЖХ/МС=758.5 (М++1).
Пример 78. Получение соединения 78.
Получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам получения соединения 77, за исключением того, что использовали промежуточное соединени III, соединение 78. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.65 (s, 1H, подлежащий обмену), 8.61 (d, J=2.7 Гц, 1H), 8.09 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.17 (d, J=9.6 Гц, 1H), 6.25 (d, J=2.7 Гц, 1H), 5.63 (brs, 1H), 4.69 (t, 1H), 4.55 (m, 2Н), 4.18 (m, 1H), 4.05 (m, 2Н), 4.00 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.65 (m, 2Н), 1.41 (m, 4Н), 1.30 (d, 6Н), 1.22 (m, 4Н), 1.02 (s, 9Н), 0.98 (m, 2Н), 0.35 (m, 2Н). ЖХ/МС=760.5 (М++1).
Соединение 79 получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам, описанным выше. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.68 (s, 1H, подлежащий обмену), 8.62 (d, J=3.0 Гц, 1H), 8.07 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.19 (d, J=8.7 Гц, 1H), 6.26 (d, J=2.7 Гц, 1H), 5.62 (brs, 1H), 4.69 (t, 1H), 4.54 (m, 2Н), 4.30 (m, 2Н), 4.17 (s, 1H), 4.03 (m, 2Н), 3.84 (m, 2Н), 3.46 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.68 (m, 3H), 1.52 (t, 1H), 1.42 (m, 2Н), 1.30 (d, 6Н), 1.22 (m, 4Н), 1.02 (s, 9Н), 0.98 (m, 2Н), 0.35 (m, 2Н). ЖХ/МС=804.7 (М++1).
Пример 80. Получение соединения 80.
Стадия 1.
Смесь указанного на схеме трипептида (830 мг, 1,2 ммоль), 2-(3-изопропиламинопиразол-1-ил)-7-(2-метоксиэтокси)хинолин-4-ола (410 мг, 1,2 ммоль) и карбоната цезия (440 мг, 1,35 ммоль) в NMP (4 мл) перемешивали при 65°C в течение 16 ч. Смесь распределяли между этилацетатом (30 мл) и 3% LiCl (30 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x 30 мл). Этилацетатные экстракты объединяли и концентрировали.
Стадия 2.
Неочищенное соединение, полученное на предыдущей стадии, растворяли в дихлорметане (20 мл) и добавляли 4н. HCl в диоксане (20 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре и концентрировали досуха. Остаток распределяли между этилацетатом и насыщенным раствором бикарбоната натрия. К полученному двухфазному раствору добавляли по каплям раствор промежуточного соединения I (344 мг, 1,4 ммоль) в этилацетате (3 мл), осторожно перемешивая. Этилацетатный слой отбирали и концентрировали.
Стадия 3.
Затем полученный остаток повторно растворяли в THF (20 мл), MeOH (20 мл) и воде (10 мл), содержащей LiOH моногидрат (1,0 г), и перемешивали при 45°C в течение 1 ч. После удаления летучих растворителей раствор нейтрализовали путем добавления 1н. HCl до pH ~5 и экстрагировали этилацета-том (50 мл). Органический экстракт концентрировали и очищали путем ВЭЖХ с получением после лио-филизации отобранной фракции соединения 80 (632 мг, TFA-соль, 57%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.75 (s, 1H, подлежащий обмену), 8.57 (d, J=2.7 Гц, 1H), 8.05 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.16 (d, J=9.0 Гц, 1H), 6.24 (d, J=2.7 Гц, 1H), 5.86 (m, 1H), 5.58 (brs, 1H), 5.28 (d, J=15.9 Гц, 1H), 5.11 (d, J=10.5 Гц, 1H), 4.71 (t, 1H), 4.54 (m, 2Н), 4.28 (m, 2Н), 4.18 (s, 1H), 4.03 (m, 2Н), 3.83 (m, 2Н), 3.46 (s, 3H), 2.74 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.68 (m, 2Н), 1.42 (m, 2Н), 1.30 (d, 6Н), 1.22 (m, 1H), 1.02 (s, 9Н), 0.98 (m, 2Н), 0.36 (m, 2Н). ЖХ/МС=802.7
(М++1).
К смеси брозилата метилового эфир (1,41 г, 1,95 ммоль) и карбоната цезия (1,90 г, 5,82 ммоль) в NMP (6,5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,35 мл, 5,82 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем при 65°C в течение 16 ч. Смесь распределяли между этилацетатом (40 мл) и 3% водным растором LiCl (40 мл). Этилацетатный слой концентрировали досуха, и полученный остаток повторно растворяли в метаноле (20 мл) и THF (20 мл). Добавляли раствор гидро-ксида лития (1,0 г/10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Дополнительно добавляли раствор гидроксида лития (0,5 г/5 мл) и перемешивали при 45°C в течение 2 ч. После удаления летучих растворителей добавляли этилацетат (40 мл). Водный слой нейтрализовали до pH ~2 путем добавления 6 н. HCl. Затем этилацетатный слой промывали солевым раствором и концентрировали досуха, с получением желаемого спирта (920 мг, 96%) в виде бесцветного твердого вещества. ЖХ/МС=490,3 (М-1).
Стадия 2.
К раствору полученного спирта (420 мг, 0,85 ммоль) в DMSO (10 мл) добавляли 1,0 М трет-бутилат калия в THF и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли раствор {1-[4-хлор-7-(2-морфолин-4-ил-этокси)хинолин-2-ил]-1H-пиразол-3-ил}изопропиламина (440 мг, 1,06 ммоль) в THF (2 мл). Затем данную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре, нейтрализовали уксусной кислотой и концентрировали с целью удаления летучих растворителей. Остаток подвергали очистке путем ВЭЖХ, с получением после лиофилизации соединения 81 (340 мг в виде TFA соли, 35%) в виде желтоватого твердого вещества. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.62 (d, J=2.7 Гц, 1H), 8.17 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.23 (d, J=9.3 Гц, 1H), 6.25 (d, J=2.4 Гц, 1H), 5.62 (brs, 1H), 4.75 (m, 2H), 4.67 (s, 1H), 4.59 (m, 2H), 4.33 (d, J=6.6 Гц, 1H), 3.8-4.1 (m, 6H), 3.75 (m, 2H), 3.49 (brs, 4H) 2.68 (m, 2H), 1.1-2.1 (m, 28Н, включая дублет J=6.3 Гц при 1.30 м.д. для изопропил-Ме), 0.39 (m, 2H). ЖХ/МС=871.6 (М++1).
Пример 82. Получение соединения 82.
Стадия 1.
Указанный на схеме амид (18,8 г, 0,078 ммоль) растворяли в EtOH (75 мл). К данному раствору добавляли 12н. водный раствор HCl. Затем данную реакционную смесь помещали в предварительно нагретую до 115°C баню и перемешивали в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем дополнительно охлаждали с помощью ледяной бани. Образовавшиеся небольшие белые иглы выделяли путем вакуумной фильтрации, промывали Et2O и выдерживали в условиях глубокого вакуума в течение 16 ч. Выход указанной на схеме гидрохлоридной соли составлял 10,1 г (67%). ЖХ/МС=158,3 (М++1).
Стадия 2.
Указанный на схеме амин (10,1 г, 0,052 моль) растворяли в 1 М растворе BBr3 в CH2Cl2 (163 мл, 0,163 моль). Это приводило к образованию большого количества дыма и газа. Реакционную смесь помещали в предварительно нагретую до 40°C баню. Реакционную смесь из N2 line переносили в сушилку заполненную CaSO4. Реакционную смесь нагревали в течение 8 ч и затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. На следкующий день реакция согласно ЖХ/МС-анализу завершилась. Реакционную смесь помещали в ледяную баню и очень медленно добавляли MeOH, при этом образовалось большое количество газообразного HBr. В реакционной смеси, в конечном счете, получили очень густую белую суспензию. К данной суспензии добавляли дополнительное количество MeOH до тех пор, пока все вещество не перейдет в раствор, и затем концентрировали с получением белого сиропа, растворяли в dH2O и данный раствор экстрагировали EtOAc (2х). Органические экстракты отставляли, поскольку они
содержат чистый фенол. Водный слой затем подводили до pH 7 твердым NaHCO3 и дополнительно экстрагировали EtOAc (2х). Эти органические фракции объединяли, экстрагировали солевым раствором и сушили над Na2SO4. Сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Желаемый фенол выделяли из данного остатка путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь EtOAc и гексанов. Полученное вещество смешивали с исходным EtOAc экстрактом, содержащем чистый фенол, с выходом 7,07 г (95%) слегка желтоватого твердого вещества. ЖХ/МС=144,3 (М++1).
MeOEtBr,
Стадия 3.
В колбу, содержащую указанный на схеме фенол (3,5 г, 0,024 моль) и Cs2CO3 (9,4 г, 0,029 моль) добавляли DMF (120 мл) и затем MeOEtBr (2,52 мл, 0,027 моль). Затем данную смесь помещали в предварительно нагретую до 65°C баню. Реакционную смесь перемешивали в течение 4,25 ч, добавляли дополнительно MeOEtBr (200 мкл, 0,0021 моль). Реакционную смесь дополнительно перемешивали в течение 1 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь распределяли между EtOAc и 5% водным раствором LiCl. Образовавшееся твердое вещество растворяли путем добавления к данной смеси dH2O. Слои разделяли, и органический слой промывали дополнительно 5% водным раствором LiCl (2х) и солевым раствором (1 х ). Затем органический слой сушили над Na2SO4. Сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации и полученный фильтрат концентрировали. Желаемый феноловый эфир выделяли из данного остатка путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь ЕЮАс и гексанов, в виде бесцветной жидкости (4,7 г, 98%). ЖХ/МС=202,2 (TVf+l).
'-тиокарбонилди-: пиридон,
Стадия 4.
Указанный на схеме анилин (4,7 г, 0,023 моль) растворяли в CH2Cl2 (125 мл). К данному раствору добавляли 1Д'-тиокарбонилди-2(Ш)-пиридон (5,58 г, 0,023 моль) за один прием. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь концентрировали, при этом из раствора выпадало белое твердое вещество. Весь выпавший осадок повторно растворяли в CH2Cl2 и после колоночной хроматографии на силикагеле с использованием для элюирования смеси EtOAc и гексанов желаемый изотиоцианат выделяли в виде белого твердого вещества (5,36 г, 96%). 1Н ЯМР (400 МГц, (CD3)2SO): 5 7.35 (t, J=8 Гц, 1H), 7.19 (dd, J=8.8, 4.6 Гц, 1H), 7.14 (dd, J=8, 1.6 Гц, Ш), 4.22 (m, 2H), 3.69 (m, 2H), 3.32 (s, ЗН).
Стадия 5.
К суспензии NaH (60% дисперсия в вазелиновом масле, 1,06 г, 0,026 моль) в THF (120 мл) охлажденной в ледяной бане добавляли по каплям диэтилмалонат (3,34 мл, 0,022 моль). Ледяную баню затем удаляли и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем реакционную смесь охлаждали в ледяной бане и медленно но непрерывной струей добавляли раствор изотиоцианата (5,36 г, 0,022 моль) в THF (80 мл). Колбу, в которой содержался раствор изотиоцианата в THF, промывали еще раз THF (20 мл) и полученный раствор также добавляли к реакционной смеси. Затем охлаждающую баню удаляли и полученную реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч. Затем реакционную смесь концентрировали и полученную желтую пену выдерживали в условиях глубокого вакуума в течение ночи.
Раствор вышеупомянутого синтезированного продукта в DMF (100 мл) охлаждали до -45°C. К данной реакционной смеси медленно капельным способом добавляли этилиодид (2,13 мл, 0,026 моль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч в охлаждаемой при -45°C бане и затем при перемешивании оставляли нагреваться в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли dH2O, в результате смесь становилась непрозрачной и выпадал белый осадок. Затем погашенную реакционную смесь экстрагировали смесью Et2O:гексаны (1:1), и затем Et2O, и затем EtOAc. Полученные EtOAc-экстракты объединяли и снова экстрагировали 5% водным раствором LiCl (2х). Органические экстракты объединяли и экстрагировали солевым раствором и затем сушили над Na2SO4. Затем сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации и полученный фильтрат концентрировали. Смесь S-алкилированных и N-алкилированных соединений выделяли из данного остатка путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь EtOAc и гексанов, в виде восковидного кристаллического твердого вещества (9,11 г,
96%). ЖХ/МС (RT=3,95)=432,2 (TVT+1); ЖХ/МС (RT=4,02)=432,0 (M++1).
CO,Et
О CI Et C02Et
L--'0^r'NYJvCO2EI
Стадия 6.
Смесь S-алкилированных и N-алкилированных соединений (9,1 г, 0,021 моль) растворяли в Ph2O (80 мл). Полученный раствор помещали в предварительно нагретую до 320°C песочную баню. Через 17 мин (температура внутри реакционной смеси=220°C) согласно ТСХ-анализу реакция была завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и полученный хинолин выделяли после загрузки реакционной смеси прямо на колонку силикагеля. С колонки смывали Ph2O, используя в качестве элюен-та 100% гексаны. Затем указанный на схеме хинолин смывали с колонки, используя градиентный элюент при содержании EtOAc=35%. Полученный хинолин выделяли в виде белого, кристаллического твердого вещества (6,8 г, 84%). ЖХ/МС=386,2 (М++1).
Стадия 7.
Полученный хинолин (6,8 г, 0,0176 моль) смешивали с THF (40 мл). Затем добавляли MeOH (40 мл), и затем добавляли за один прием 1н. водный раствор NaOH (88 мл, 0,088 моль). Из данных реагентов получали раствор, и реакционную смесь нагревали. Затем данную реакционную смесь помещали в предварительно нагретую до 85°C баню и перемешивали в течение 19,5 ч и проверяли с помощью ЖХ/МС. Реакция была не завершена, поэтому дополнительно добавляли NaOH (1,2 г в 20 мл dH2O) и данную реакционную смесь продолжали перемешивать. Еще через 4 ч дефлегматор удаляли и данную реакционную смесь концентрировали путем выпаривания органических растворителей из реакционной смеси. Затем дефлегматор снова устанавливали на реакционную колбу и нагревание продолжали дополнительно в течение 10 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакция согласно ЖХ/МС-анализу завершалась. Реакционную смесь помещали в ледяную баню и pH подводили 4н. HCl до 4. Погашенная таким образом реакционная смесь становилась густой, образовался осадок, который экстрагировали CH2Cl2. Органические фазы концентрировали и остаток суспендировали в MeOH. Полученное белое твердое вещество выделяли путем вакуумной фильтрации, с выходом желаемой карбоновой кислоты в виде блестящего белого твердого вещества (3,84 г, 61%). ЖХ/МС=358,1 (М++1).
Стадия 8.
Полученную карбоновую кислоту (3,84 г, 0,0107 моль) суспендировали в Ph2O (32 мл). Данную смесь помещали в предварительно нагретую до 310°C песочную баню. Когда температура внутри смеси достигала 150°C, карбоновая кислота переходила в раствор. Температуру внутри реакционной смеси поддерживали при 250°C в течение 15 мин, и затем смесь охлаждали до комнатной температуры. При охлаждении из раствора выпадал твердый осадок. Это твердое вещество выделяли путем вакуумной фильтрации, осадок промывали на фильтре гексанами, с получением желаемого декарбоксилированного хинолина в виде бледно-желтого твердого вещества (3,19 г, 94%). ЖХ/МС=314,2 (TVT+1). or' CI PMBCI,
Стадия 9.
Полученный декарбоксилированный хинолин (2,59 г, 0,0083 моль) растворяли в DMF (28 мл). К данному раствору добавляли Cs2CO3 (8, 1 г, 0,0249 моль) и через 3 мин PMBCI (1,69 мл, 0,01245 моль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Завершение реакции определяли с помощью ЖХ/МС. Реакционную смесь гасили путем добавления 5% водного раствора LiCl и
EtOAc.
Водный слой разбавляли dH2O и образовавшиеся слои разделяли. Органический слой экстрагировали dH2O (1 х), 5% водным раствором LiCl (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над смесью Na2SO4 и MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации и полученный фильтрат концентрировали. Желаемый РМВ-защищенный хинолин выделяли из данного остатка путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь EtOAc и гексанов
(2,04 г, 56%). ЖХ/МС=434,1 (М++1).
Стадия 10.
Полученный РМВ-защищенный хинолин (2,0 г, 0,00461 моль) растворяли в CH2Cl2 (46 мл). К данному раствору добавляли mCPBA (4,59 г, 0,00922 моль) за один прием. За ходом реакции следили с помощью ЖХ/МС. Через 30 мин к данной реакционной смеси добавляли дополнительное количество mCPBA (700 мг), а через 3 ч еще (180 мг). За ходом реакции следили с помощью ЖХ/МС. Через 3,5 ч реакционную смесь разбавляли CH2Cl2, и к данной реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор NaHSO3. Все твердое вещество растворяли в этом двухслойном растворителе. Слои разделяли, и органический слой промывали насыщенным водным раствором NaHSO3 (1х) и 2н. NaOH (2х). Органическую фазу сушили над Na2SO4. Сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации и полученный фильтрат концентрировали с выходом желаемого сульфона (2,19 г, 100%) в виде белого кристаллического твердого вещества. ЖХ/МС=466Д (TVT+1), 488,2 (М++23).
Стадия 11.
В колбу, содержащую полученный сульфон (600 мг, 0,00129 моль) добавляли iPr-аминопиразол (1,6 г, 0,01288 моль). Реакционную колбу помещали в масляную баню предварительно нагретую до 115°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь распределяли между dH2O и EtOAc. Органическую фазу экстрагировали dH2O (1х), солевым раствором (1 х ) и затем сушили над Na2SO4. Сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации и полученный хинолиновый продукт предварительно очищали сначала путем удаления большей части примесей путем хроматографии на силикагеле, используя для элюирования EtOAc и гексаны, и затем на промываемой колонке смесью MeOH и CH2Cl2 с выходом все еще неочищенного продукта. Очистку заканчивали путем обратнофазовой ВЭЖХ с выходом в качестве продукта указанного на схеме хинолина (250 мг, 51%) в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС=377,1 (TVT+l).
Стадия 12.
В круглодонную колбу вносили полученный хинолин (236 мг, 0,626 ммоль), промежуточное соединение III (446 мг, 0,626 ммоль) и Cs2CO3 (358 мг, 1,10 ммоль). Добавляли NMP (3,2 мл), и колбу, содержащую реакционную смесь, помещали в масляную баню при 65°C. За ходом реакции следили с помощью ЖХ/МС. Через 5,5 ч реакция остановилась. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и распределяли между EtOAc и dH2O. Слои разделяли и затем органическую фазу экстрагировали dH2O (1х), 5% водным раствором LiCl (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над смесью Na2SO4 и MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали. Продукт приведенной на схеме реакции выделяли путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь EtOAc и гексанов, в виде белого твердого вещества (465 мг, 87%). ЖХ/МС=852,1 (NT+1).
Стадия 13.
Полученный сложный метиловый эфир (465 мг, 0,542 ммоль) растворяли в THF (2,7 мл) и MeOH (1,8 мл). В другой колбе готовили раствор LiOH (114 мг, 2,71 ммоль) в dH2O (900 мкл) и добавляли в первую колбу при комнатной температуре. Затем реакционную колбу помещали в масляную баню при
32°C. За ходом реакции следили с помощью ЖХ/МС. Через 6 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь нейтрализовали путем добавления 2н. HCl и осветляли MeOH. Смесь хранили в хоодильнике в течение ночи. Соединение 82 выделяли из этой смеси путем обратнофа-зовой ВЭЖХ и затем подвергали лиофильной сушки с получением желтого порошка (434 мг, 86%). ЖХ/МС=839,0 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN): 5 8.65 (d, J=2.8 Гц, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.01 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.31 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.21 (d, J=2.8 Гц, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.67 (t, J=8 Гц, 1H), 4.58 (t, J=6.8 Гц, 1H), 4.49 (d, J=11.6 Гц, 1H), 4.37 (t, J=4.4 Гц, 2Н), 4.20 (s, 1H), 4.05 (d, J=9.2 Гц, 1H), 3.86 (m, 1H), 3.85 (t, J=4.4 Гц, 1H), 3.48 (s, 3H), 2.70 (dd, J=13.6, 8 Гц, 1H), 2.56 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.88(m, 1H), 1.67 (m, 3H), 1.51 (квинтет, J=8 Гц, 1H), 1.39 (m, 2H), 1.32 (d, J=6.8 Гц, 6Н), 1.22 (dd, J=9.2, 4.4 Гц, 2Н), 1.18 (m, 1H), 1.01 (m, 12Н), 0.38 (m, 1H), 0.33 (m, 1H). Пример 83. Получение соединения 83.
Стадия 1.
В круглодонную колбу вносили указанный на схеме хинолин (288 мг, 0,918 ммоль), промежуточное соединение III (654 мг, 0,917 ммоль) и Cs2CO3 (523 мг, 1,61 ммоль). Затем данную смесь суспендировали в NMP. Затем реакционную смесь помещали в баню нагретую до 65°C и перемешивали в течение 7,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и распределяли между dH2O и EtOAc. Затем органический слой экстрагировали dH2O (1х), 5% водным раствором LiCl (3х) и солевым раствором (1х). Затем органическую фазу сушили над смесью Na2SO4 и MgSO4. Сушильные агенты удаляли путем вакуумной фильтрации и полученный фильтрат концентрировали. Указанный на схеме продукт реакции выделяли из данного остатка путем колоночной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь EtOAc и гексанов, с выходом в виде белого твердого вещества (590 мг, 82%). ЖХ/МС=787,7 (М++1).
Стадия 2.
Указанный на схеме сложный метиловый эфир (590 мг, 0,749 ммоль) растворяли в THF (3,75 мл) и MeOH (2,5 мл). Полученный раствор охлаждали в ледяной бане и затем добавляли по каплям раствор LiOH (157 мг, 3,74 ммоль) в dH2O (3,75 мл). Затем ледяную баню удаляли и данную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь снова охлаждали в ледяной бане и pH реакционной смеси подводили до 1-2 с использованием 1н. HCl. Полученный раствор становился мутным (мелкие белые частиц твердого вещества). Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2х ) и объединенные органические слои экстрагировали солевым раствором и сушили над Na2SO4. Сушильный агент удаляли путем вакуумной фильтрации, и полученный фильтрат концентрировали с получением соединения 83 в виде белой пены (598 мг). 106 мг неочищенного продукта соединения 83 очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ и затем лиофилизировали с получением белого порошка (88 мг). ЖХ/МС=773,5 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3CN): 5 7.51 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.82 (d, J=9.2 Гц, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.95 (d, J=8.4 Гц, 1H), 5.33 (dt, J=19.6, 9.6 Гц, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.89 (d, J=11.2 Гц, 1H), 4.71 (d, J=11.2 Гц, 1H), 4.31 (t, J=6.4 Гц, 1H), 4.08 (t, J=8.8 Гц, 1H), 3.99 (d, J=12 Гц, 1H), 3.93 (d, J=3.2 Гц, 2Н), 3.86 (m, 1H), 3.55 (d, J=10.4 Гц, 1H), 3.39 (t, J=10.4 Гц, 2Н), 3.02 (s, 3H), 2.98 (квартет, J=7.2 Гц, 2Н), 2.16 (dd, J=14.4, 7.2 Гц, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.77, (квартет, J=8.8 Гц, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.56 (квинтет., J=2.4 Гц, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.32 (dd, J=7.6, 5.6 Гц, 1H), 1.24 (d, J=14.4 Гц, 1H), 1.06 (t, J=7.6 Гц, 3H), 0.97 (m,
2Н), 0.80 (m, 2Н), 0.58 (s, 9Н), -0.02 (m, 2Н).
Соединение 83 (490 мг, 0,634 ммоль) растворяли в DME (6,34 мл). К данному раствору добавляли dH2O (634 мкл), pTolSO2NHNH2 (884 мг, 4,75 ммоль), и затем NaOAc (780 мг, 9,51 ммоль). Затем реакционную смесь помещали в баню с температурой 95°C и перемешивали в течение 1,75 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и соединение 84 очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ и затем лиофилизировали с получением желтоватого порошка (270 мг, 55%). ЖХ/МС=775,7 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3COD): 5 7.99 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.33 (d, J=9.2 Гц, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.51 (s, 1H), 4.64 (t, J=8.4 Гц, 1H), 4.52 (t, J=7.2 Гц, 1H), 4.48 (d, J=13.6 Гц, 1H), 4.38 (d, J=3.2 Гц, 2H), 4.16 (s, 1H), 4.00 (dd, J=14, 4.4 Гц, 1H), 3.84 (t, J=4.4 Гц, 2Н), 3.47 (s, 3H), 3.44 (dd, J=6.8, 2 Гц, 2Н), 2.69 (dd, J=14.4, 8 Гц, 1H), 2.49 (ddd, J=14.4, 9.6, 4.4 Гц, 1H), 1.98 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.65 (dt, J=14.8, 7.6 Гц, 3H), 1.50 (t, J=7.6 Гц, 4Н), 1.40 (dd, J=8, 4.8 Гц, 1H), 1.34 (d, J=14.4 Гц, 1H), 1.20 (m, 3H), 1.00 (s, 12H), 0.36 (m, 1H), 0.32 (квинтет., J=4 Гц, 1H).
Пример 85. Получение соединения 85.
Стадия 1.
К раствору указанного на схеме хинолина (450 мг, 0,965 ммоль) в THF (5,0 мл) медленно добавляли 21% NaOEt в этаноле (1,10 мл, 2,89 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, и затем добавляли 2н. HCl (10 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 5 мин, разбавляли EtOAc (10 мл) и перемешивали в течение 5 мин. После разделения слоев, водный слой экстрагировали EtOAc (10 мл). Объединенные органические фракции сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексанов и этилацетата, с получением 385 мг (96%) РМВ-защищенного этокси хинолина. ЖХ/МС=418 (М++1).
Стадия 2.
Раствор полученного РМВ-защищенного хинолина 385 мг (0,923 ммоль) в дихлорметане (5,0 мл) и TFA (5,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Цвет этого раствора по мере продвижения реакции менялся от бесцветного к пурпурному. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении, pH доводили до 8 путем добавления 5% бикарбоната натрия, затем экстрагировали EtOAc (20 млх 2). Объединенные органические экстракты сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексанов и этил-ацетата, с получением 254 мг (92%) желаемого гидроксил хинолина. ЖХ/МС=298 (TVT+l).
Стадия 3.
Смесь промежуточного соединения III (800 мг, 1,12 ммоль), хинолина (332 мг, 1,12 ммоль) и карбоната цезия (802 мг, 2,46 ммоль) в NMP (5 мл) перемешивали при 65°C в течение 16 ч. Затем данную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и 5% LiCl (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Два образовавшихся слоя разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенные органические фракции промывали 5% LiCl (3х20 мл), водой и затем солевым раствором. Органическую фракцию сушили (Na2SO4) и концентрировали. Полученное неочищенное вещество очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексанов и этилацетата, с получением
685 мг (79%) желаемого сложного эфира. ЖХ/МС=773 (М++1). Стадия 4.
К смеси сложного эфира (685 мг, 0,88 ммоль) в THF (3 мл) и метаноле (5 мл), добавляли раствор моногидрата LiOH (210 мг, 5,0 ммоль) в воде (3 мл). Смесь перемешивали при 35°C в течение 3 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении и pH доводили до 2 10% HCl. К данной смеси добавляли метанол (5 мл), и смесь очищали путем обратнофазовой препаративной ВЭЖХ с использованием смеси ацетонитрила 0,1% TFA и воды в качестве элюента с получением 323 мг (48%) со- 83
единения 85. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 (м.д.) 7.85 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.15 (d, J=9.2 Гц, 1H), 6.37 (s, 1H), 5.34 (br, 1H), 4.53-4.35 (br, 5H), 4.24 (br, 2H), 4.08 (s, 1H), 3.99-3.87 (br, 1H), 3.74-3.72 (m, 2Н), 3.36 (s, 3H), 2.60 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.82 (m, 2Н), 1.58-1.52 (br, 4H), 1.43-1.36 (br, 4H), 1.31-1.21 (br, 2H), 1.13-1.03 (br, 3H), 0.91 (s, 9H), 0.84 (s, 1H), 0.21-0.02 (br, 2H). ЖХ/МС=760 (М++1). Пример 86. Получение соединения 86.
Стадия 1.
К смеси NaH (214 мг, 5,35 ммоль) в THF (3,5 мл) добавляли по каплям 2-метоксиэтиловый спирт (253 мкл, 3,21 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, и затем добавляли раствор указанного на схеме хинолина (534 мг, 1,07 ммоль) в THF (1,5 мл), и полученный раствор перемешивали в течение 10 мин. Реакционную смесь гасили путем добавления 2н. HCl (10 мл) и полученую смесь перемешивали в течение 5 мин. Данную смесь разбавляли EtOAc (20 мл), перемешивали в течение 5 мин и затем два слоя разделяли и водную фракцию экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенные органические фракции сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексанов и этилацетата, с получением 504 мг (98%) РМВ-защищенного бис-метоксиэтокси хинолина. ЖХ/МС=448 (М++1).
Стадия 2.
Раствор полученного РМВ-защищенного хинолина 504 мг (1,12 ммоль) в дихлорметане (5,0 мл) и TFA (5,0 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Цвет раствора менялся по мере продвижения реакции от бесцветного до пурпурного. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении, pH доводили до 8 путем добавления 5% бикарбоната натрия, затем экстрагировали EtOAc (2х 10 мл). Объединенные органические фракции сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексанов и этилацета-та, с получением 367 мг (100%) желаемого гидроксил хинолина. ЖХ/МС=328 (TVT+l).
Стадия 3.
Смесь промежуточного соединения III (800 мг, 1,12 ммоль), указанного на схеме хинолина (367 мг, 1,12 ммоль) и карбоната цезия (802 мг, 2,46 ммоль) в NMP (5 мл) перемешивали при 65°C в течение 16 ч. Затем данную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и 5% LiCl (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Два образовавшихся слоя разделяли, и водную фракцию экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенные органические фракции промывали LiCl (3х20 мл) и затем водой, и затем солевым раствором, полученные фракции сушили (Na2SO4) и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексанов и этилацетата, с получением 829 мг
(92%) желаемого сложного эфира. ЖХ/МС=803 (М++1). Стадия 4.
К смеси полученного сложного эфира (829 мг, 1,02 ммоль) в THF (3 мл) и метаноле (5 мл) добавляли раствор моногидрата LiOH (210 мг, 5,0 ммоль) в воде (3 мл). Смесь перемешивали при 35°C в течение 3 ч. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении, и pH раствора доводили до 2 10% HCl. К данной смеси добавляли метанол (5 мл) и полученную смесь очищали путем обратнофазовой препаративной ВЭЖХ, используя смесь ацетонитрила, 0,1% TFA и воды в качестве элюента с получением 528 мг (66%) соединения 86. 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 (м.д.) 7.81 (d, J=8.99 Гц, 1H), 7.10 (d, J=9.2 Гц, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.28 (br, 1H), 4.59-4.36 (br, 5Н), 4.22 (br, 2Н), 4.08 (s, 1H), 3.89-3.85 (br, 1H), 3.75-3.70 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 2.58 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.82 (m, H), 1.58-1.50 (br, 4H), 1.42-1.23 (br, 4H), 1.1-1.05 (br, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.82 (s, 1H), 0.19-0.2 (br, 2H). ЖХ/МС=790 (М++1).
Пример 87. Получение соединения 87.
Стадия 1.
Указанный на схеме дигидроксихинолин (2 г, 6,6 ммоль) растворяли в DMF (50 мл) при 0°C и порциями добавляли NaH (792 мг, 19,8 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин, затем добавляли 4-(2-хлорэтил)-морфолин гидроксихлорил (1,36 г, 7,3 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C в те- 84
чение 5 ч, затем при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли EtOAc и 3% водным раствором LiCl. Два образовавшихся слоя разделяли и водную фракцию снова экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали солевым раствором, сушили (MgSO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси МеОН/ЕЮАс с получением 1,46 г (43%) желаемого продукта. ЖХ/МС=415 (TVT+l).
Стадия 2.
Соединение 87 (570 мг в виде TFA-соли, 74% чистоты) получали в соответствии с методиками, аналогичными методикам получения соединения 82 с использованием указанного на схеме макроцикличе-ского трипептида (1,2 г мг, 1,7 ммоль, содержащего > 30% примесей) и указанного на схеме хинолина (500 мг, 0,965, 20% примесей). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.41 (dd, 1H), 5.7 (b, 1H), 4.78-4.62 (m, 5H), 4.30 (d, 1H), 4.29-4.07 (m, 7H), 3.79 (t, 2H), 3.54 (brs, 4H), 2.80-2.60 (m, 2H), 1.10-2.04 (m, 34H), 0.97-0.92 (m, 1H), 0.32-0.42 (m, 2H). ЖХ/МС=888.7
(М++1).
Стадия 1.
Смесь указанного на схеме защищенного гидроксипролина (10 г, 40,8 ммоль), PDC (23,0 г, 61,2 ммоль) и 10 г 4А молекулярны сит в дихлорметане (150 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 суток. Полученную смесь фильтровали через а подушку целита, подушку промывали дихлор-метаном. Полученный фильтрат концентрировали, и остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле смесью EtOAc/гексан с получением 7,86 г (79%) желаемого кетона. ЖХ/МС=144 (М++1-Boc).
Стадия 2.
Смесь полученного кетона (4,3 г, 17,7 ммоль) в дихлорметане (80 мл) перемешивали при -78°C в атмосфере N2, медленно добавляя DAST (5,8 мл, 44,25 ммоль). Данную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 24 ч. Реакционную смесь гасили ледяной водой. После разделения двух слоев водную фракцию экстрагировали дихлорметаном (300 мл) и объединенные органические фракции сушили (MgSO4) и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением 4,37 г (93%) желаемого дифторного соединения. ЖХ/МС=166 (TVL++1-Boc).
Стадия 3.
Смесь полученного дифтор-сложного эфира (4,37 г, 16,5 ммоль) в THF (50 мл) перемешивали при -78°C в атмосфере N2, добавляли по каплям в течение 30 мин 1 М DIBAL в THF (36,3 мл, 36,3 ммоль). Данную смесь осавляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 48 ч. Смесь разбавляли EtOAc (100 мл) и насыщенным натрий калий тартратом (100 мл), и полученую смесь интенсивно перемешивали в течение 30 мин до тех пор, пока две фазы не разделялись. После разделения двух слоев, водную фракцию экстрагировали EtOAc (2x100 мл) и объединенные органические фракции промывали солевым раствором, сушили (MgSO4) и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением 1,56 г (40%) желаемого спирта. ЖХ/МС=138 (NT+1-Вос).
Стадия 4.
Смесь указанного на схеме трипептида (500 мг, 0,616 ммоль) и спирта (175 мг, 0,739 ммоль), полученного на предыдущей стадии, PPh3 (261 мг, 0,986 ммоль) и DIAD (0,191 мл, 0,986 ммоль) в THF (10 мл) подвергали дефлегмации в течение 3 ч. Данную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали, и затем остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением 628 мг (99%) желаемого продукта. ЖХ/МС=1031,3 (М++1).
Стадия 5.
Указанное на схеме Boc-защищенное соединение растворяли в 4н. HCl в диоксане (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта. ЖХ/МС=930,2 (М++1).
Стадия 6.
Вышеуказанное соединени растворяли в THF (3 мл), MeOH (3 мл) и воде (10 мл), содержащей LiOH (462 мг, 11,56 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Полученный раствор подкисляли путем добавления TFA и затем концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом 500,8 мг (76% за две стадии) соединения 88 в виде бис-TFA соли. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 5.72 (b, 1H), 4.90-4.55 (m, 5H), 4.22-4.13 (m, 2H), 4.00-3.88 (m, 2H), 3.00-2.60 (m, 3H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.70-1.65 (m, 2H), 1.57-1.40 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.22 (m, 2H), 1.03-0.92 (m, 10H), 0.35 (m, 2H). ЖХ/МС=916.2 (М++1).
Пример 89. Получение соединения 89.
Стадия 1.
Приведенную выше схему снятия Boc-защитной группы реализовали с помощью методики примера 88, стадии 5. Стадия 2.
К раствору вышеупомянутою de-Boc соединения в 1,2-дихлорэтане (6 мл) добавляли NaBH^A^ (520 мг, 2,45 ммоль) и формальдегид (37% в воде, 0,1 мл, 1,23 ммоль) при комнатной температуре. Через 1 ч данную смесь концентрировали, разбавляли EtOAc (100 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO3 и солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного метилированного соединения. ЖХ/МС=944,2 (М++1).
Стадия 3.
Вышеуказанное метилированное соединение растворяли в THF (3 мл), MeOH (3 мл) и воде (10 мл), содержащей LiOH (500 мг) и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Полученный раствор подкисляли путем добавления TFA и затем концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом 510 мг (69% за 3 стадии) соединения 89 в виде бис-TFA соли. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.62 (d, 1H), 5.72 (b, 1H), 4.90-4.50 (m, 5H), 4.30-3.68 (m, 7H), 3.20 (s, 3H), 3.05-2.60 (m, 3H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.70-1.63 (m, 2H), 1.54-1.40 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.22 (m, 2Н), 1.03-0.92 (m, 10H), 0.34 (m, 2H). ЖХ/МС=930.2 (М++1).
Пример 90. Получение соединения 90.
Стадия 1.
Смесь указанного на схеме реагента (1,17 г, 1,44 ммоль) и 3-гидроксиметил-морфолин-4-карбоновой кислоты трет-бутилового эфира (376 мг, 1,73 ммоль), PPh3 (604 мг, 2,30 ммоль) и DIAD (0,445 мл, 2,30 ммоль) в THF (15 мл) подвергали дефлегмации в течение 3 ч. Согласно ЖХ/МС получен желаемый продукт вместе побочным продуктом и оставалась часть исходного вещества. Добавляли еще раз исходные реагенты в количнстве половины от исходного добавления и полученную смесь подвергали
дефлегмации в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO3 и солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле EtOAc/гексан и затем препаративном ВЭЖХ с получением 142 мг (10%) желаемого продукта. ЖХ/МС=1010,3 (NT+1).
Стадия 2.
Вышеуказанное Boc-защищенное соединение (55 мг, 0,054 ммоль) растворяли в 4н. HCl в диоксане (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь разбавляли EtOAc (20 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO3 и солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного деблокированного продукта ЖХ/МС=910,3 (М++1).
Стадия 3.
Вышеуказанное соединение и LiOH (50 мг) растворяли в THF (5 мл), MeOH (0,5 мл) и воде (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Полученный раствор подкисляли путем добавления TFA и затем концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта, который очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом 17 мг (28% за две стадии) соединения 90. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.68-7.55 (m, 4H), 5.72 (b, 1H), 4.794.47 (m, 5H), 4.25-3.84 (m, 10H), 3.50-3.39 (m, 2H), 2.86-2.60 (m, 2H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.70-1.62 (m, 2H), 1.54-1.40 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.34-1.20 (m, 4H), 1.03-0.92 (m, 10H), 0.35 (m, 2H). ЖХ/МС=896.2 (М++1).
Пример 91. Получение соединения 91.
Соединение 91 получали в соответствии с методиками, описанными в примере 89. После очистки путем препаративной ВЭЖХ, 25,5 мг (27%) соединения 91 получали в виде бис-TFA соли. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (m, 1H), 5.72 (b, 1H), 4.79-4.47 (m, 5Н), 4.30-3.95 (m, 10H), 3.61-3.43 (m, 2Н), 3.17 (s, 3H), 2.86-2.50 (m, 2Н), 2.00-1.80 (m, 2Н), 1.70-1.61 (m, 2Н), 1.57-1.40 (m, 2Н), 1.40 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.34-1.20 (m, 4Н), 1.05-0.90 (m, 10H), 0.35 (m, 2Н). ЖХ/МС=910.3 (М++1).
Пример 92. Получение соединения 92.
Соединение 92 получали в соответствии с методиками, описанными в примере 90. После очистки путем препаративной ВЭЖХ 17,4 мг соединения 92 получали в виде бис-TFA соли. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.64 (s, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 5.71 (b, 1H), 4.73-4.49 (m, 5H), 4.25-3.84 (m, 10H), 3.50-3.39 (m, 2H), 2.86-2.60 (m, 2H), 2.00-1.80 (m, 2H), 1.70-1.62 (m, 2H), 1.54-1.40 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.30-1.20 (m, 4H), 1.05-0.91 (m, 10H), 0.33 (m, 2H). ЖХ/МС=896.2 (М++1).
Соединение 93 получали в соответствии с методиками, описанными в примере 89. После очистки путем препаративной ВЭЖХ 16,0 мг соединения 93 получали в виде бис TFA соли. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.63 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 5.72 (b, 1H), 4.75-4.47 (m, 5Н), 4.20-3.92 (m, 10H), 3.61-3.40 (m, 2Н), 3.18 (s, 3H), 2.80-2.55 (m, 2Н), 2.00-1.80 (m, 2Н), 1.70-1.62 (m, 2Н), 1.50-1.40 (m, 2Н), 1.40 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.20-1.10 (m, 4Н), 1.05-0.97 (m, 10H), 0.35 (m, 2Н).
ЖХ/МС=910.3 (М++1).
Пример 94. Получение соединения 94.
Стадия 1.
К раствору 1-[2-амино-3-хлор-4-(2,2-диметоксиэтокси)фенил]этанона (2 г, 7,3 ммоль) в пиридине (20 мл) медленно добавляли циклогексанкарбонил хлорид (1,12 г, 7,7 ммоль) при 0°C. Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем к данной смеси добавляли H2O (10 мл). Полученный продукт экстрагировали EtOAc, промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением 1,9 г, (65%) желаемого амида в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС=383,8 (М++1).
Стадия 2.
Полученный амид (1,9 г, 5,0 ммоль) и трет-BuOK (0,62 г, 0,55 ммоль) растворяли в трет-BuOH (20 мл) при комнатной температуре и перемешивали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. После завершения реакции к данной реакционной смеси добавляли 3н. HCl, чтобы подвести pH приблизительно до 3; в результате желаемый продукт выпадал в осадок. Твердое вещество отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили в условиях глубокого вакуума с получением желаемого хинолина в виде белого твердого вещества (1,6 г, 100%). ЖХ/МС=366,1 (ТУГ+1).
Стадия 3.
Соединение 94 (170 мг) синтезировали в соответствии с некоторыми из методик, описанными выше для приготовления соединение 82. ЖХ/МС=852,9 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.06 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.45 (b, 2H), 4.34 (dd, 1H), 4.25 (d, 1H), 4.15 (dd, 1H), 3.79-2.98 (m, 11H), 2.42 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 1.75-1.61 (m, 3H), 1.54-1.45 (m, 3H), 1.35-1.00 (m, 10H), 0.91-0.84 (m, 2H), 0.73-0.61 (m, 12H), 0.14-0.03 (m, 2H).
Пример 95. Получение соединения 95.
Стадии 1 и 2.
Полученный хинолин синтезировали в соответствии с методиками, описанными выше в примере 94. ЖХ/МС=324,2 (М++1).
Стадия 3.
Соединение 95 (550 мг) синтезировали с использованием методик, описанных выше для приготовления соединение 82. ЖХ/МС=810,5 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.33 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 5.69 (bs, 1H), 4.78 (b, 2H), 4.66 (dd, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.13-3.31(m, 11H), 2.96-2.68 (m, 2H), 2.572.49 (m, 1H), 2.01-1.81 (m, 2H), 1.69-1.35 (m, 10H), 1.24-1.10 (m, 2H), 1.05-0.94 (m, 12H), 0.36-0.33 (m, 2H).
Пример 96. Получение соединения 96.
Стадии 1 и 2.
Полученный хинолин синтезировали с использованием методик, описанных выше в примере 94. ЖХ/МС=342,7 (М++1).
Стадия 3.
Соединение 96 (260 мг) синтезировали с использованием методик, описанных выше для приготовления соединение 82. ЖХ/МС=829,4 (М++1).
Пример 97. Получение соединения 97.
Стадия 1.
Указанная на схеме соль имидазола (2,99 г, 16 ммоль) и указанный на схеме анилин (2 г, 14,5 ммоль) растворяли в этаноле (7 мл) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при 30°C в течение ночи. Данную смесь фильтровали, и затем полученный фильтрат концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с выходом желаемого продукта конденсации в виде бесцветного
масла (3,6 г, 87%). ЖХ/МС=285,9 (М++1).
Раствор продукта конденсации (3,6 г, 87%) в дифениловом эфире (36 мл) помещали в горячую песочную баню (300°C) и данную смесь оставляли перемешиваться в течение 12 мин, поддерживая температуру раствора приблизительно 240-250°C. Смесь охлаждали до комнатной температуры, и желаемый продукт осаждали в виде коричневого твердого вещества. Твердое вещество отфильтровывали, промывали гексаном и сушили в условиях глубокого вакуума с получением желаемого хинолина (2,33 г, 9,7
ммоль, 77%). ЖХ/МС=240,0 (М++1).
Стадия 3.
К раствору полученного хинолина (2,33 г, 9,7 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли карбонат цезия (12,64 г, 39 ммоль) и 2-бром-1,1-диметоксиэтан (2,6 г, 15 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 65°C в течение 10 ч. Данную смесь фильтровали, фильтрат разбавляли EtOAc и H2O и затем pH доводили до 3. путем добавления 3н. HCl Отделенную органическую фракцию промывали 5% LiCl и солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением 8-хлор-7-(2,2-диметоксиэтокси)-2-этоксихинолин-4-ола в виде белого твердого вещества (1,27 г, 3,87 ммоль, 40%). ЖХ/МС=328,1 (NT+1).
Стадия 4.
Соединение 97 (754 мг) синтезировали с использованием методик, описанных выше для приготовления соединение 82. ЖХ/МС=814,6 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 7.61 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.41-4.30 (m, 1H), 4.29-4.19 (m, 3H), 4.15-4.01 (m, 2H), 3.95-2.95(m, 12H), 2.30 (m, 1H), 2.10 (m, 1H), 2.84-0.59 (m, 19Н), 0.2-0.04 (m, 2H).
Пример 98. Получение соединения 98.
Стадия 1.
К смеси указанного на схеме брозилата (1,1 г, 1,52 ммоль) и карбоната цезия (0,99 г, 3,04 ммоль) в NMP (10 мл) добавляли указанный на схеме хинолин (0,40 г, 1,22 ммоль) при комнатной температуре за один прием. Смесь перемешивали при 85°C в течение 3 ч, охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (100 мл). Смесь промывали 3% водным раствором LiCl (1x100 мл), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силика-геле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением желаемого продукта в виде светло-коричневого твердого вещества (0,70 г, 71%). ЖХ/МС=813 (М++1).
Стадия 2.
К раствору полученного сложного эфира (0,70 г, 0,86 ммоль) в НОАс (10 мл) добавляли 1,4н. водный раствор HCl (5 мл) и полученный раствор перемешивали при 60°C в течение 1,5 ч. После завершения реакции данную смесь концентрировали с целью удаления растворителя. Остаток растворяли в EtOAc (100 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3, и затем органический слой сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением желаемого неочищенного альдегида. К раствору полученного неочищенного продукта альдегида в CH2Cl2 (20 мл) добавляли морфолин (112 мкл, 1,29 ммоль) и триаце-токсиборгидрид натрия (237 мг, 1,12 ммоль) при 0°C. Затем к данной смеси добавляли по каплям ледя
ную уксусную кислоту (25 мкл, 7,8 ммоль). Реакция завершалась в течение 10 мин при 0°C. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного раствора NaHCO3. После перемешивания данной смеси в течение 20 мин слои отделяли, органические слои промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт был достаточной чистоты для использования как есть (согласно ЖХ/МС). ЖХ/МС=838 (М++1). Стадия 3.
К раствору полученного неочищенного продукта в THF (6 мл), добавляли раствор LiOH (384 мг, 16 ммоль) в H2O (6 мл) и затем MeOH (6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. После завершения реакции добавляли TFA при 0°C, чтобы pH подвести до 4, и продукт экстрагировали EtOAc (2x100 мл). Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Полученный продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ с выходом соединения 98 в виде белого твердого вещества (0,51 г, 53%). ЖХ/МС=824 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 8.05 (d, J=8.8 Гц 1H), 7.21 (d, J=9.2 Гц, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.61 (m, 1H), 5.39 (m, 2H), 4.87 (m, 1H), 4.63-4.54 (m, 5H), 4.26 (m, 1H), 4.07 (m, 2Н), 4.01 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 3.76 (m, 3H), 3.48 (m, 2H), 2.63-2.54 (m, 1H), 2.54-2.47 (m, 2H), 2.33-2.67 (m, 1H), 2.04-1.89 (m, 3H), 1.87 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.67-1.59 (m, 3H), 1.55 (m, 2H), 1.46-1.37 (m, 8H), 1.29-1.14 (m, 4H), 0.39 (m, 2H).
Пример 99. Получение соединения 99.
Соединение 98 (0,20 г, 0,24 ммоль) и пара-толуолсульфонил гидразид (0,31 г, 1,68 ммоль) растворяли в диметиловом эфире этиленгликоля (2 мл) и добавляли ацетат натрия (0,28 г, 3,36 ммоль) и H2O (0,2 мл). Затем данную суспензию нагревали при 95°C при перемешивании в течение 3 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли DMF (4 мл) и очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением соединения 99 в виде белого твердого вещества (0,12 г, 60%). ЖХ/МС=826 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 8.03 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.23 (d, J=9.2), 3.42 (m, 2H), 2.59 (m, 2H), 2.04-1.89 (m, 3H), 1.87 (m, 1H), Hz, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.38 (bs, 1H), 4.75-4.69 (m, 2H), 4.61-4.54 (m, 6H), 4.49 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.083.98 (m, 5H), 3.75 (m, 5H 1.75 (m, 2H), 1.67-1.59 (m, 3H), 1.55 (m, 2H), 1.46-1.37 (m, 8H), 1.29-1.14 (m, 4H), 0.37 (m, 2H).
Пример 100. Получение соединения 100.
Стадия 1.
2,4,8-Трихлор-7-метоксихинолин (0,32 г, 1,19 ммоль) растворяли в изопропиламине (4 мл) в герметично закрытой пробирке и перемешивали при 50°C в течение 10 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, промывали H2O, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с получением желаемого дихлорхинолина (0,231 г, 0,81 ммоль, 68%).
ЖХ/МС=285,1 (М++1).
Стадия 2.
Стадия 3.
Соединение 100 (110 мг) синтезировали с использованием методик, описанных выше для приготовления соединение 82. ЖХ/МС=728,4 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.02 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 6.45
Смесь полученного дихлорхинолина (0,145 г, 0,51 ммоль) и ацетата натрия (0,625 г, 7,6 ммоль) в НОАс (2 мл) помещали в герметично закрываемую пробирку и перемешивали при 130°C в течение 17 ч. Данную смесь охлаждали до комнатной температуры, и затем твердеющюю смесь растворяли путем добавления EtOAc и промывали H2O и насыщенн раствором NaHCO3 (3x). В ходе промывки насыщенным раствором NaHCO3, желаем продукт выпадал в осадок и его отфильтровывали. Осадок на фильтре обрабатывали толуолом и концентрировали (3x) с получением 8-хлор-2-изопропиламино-7-метоксихинолин-4-ола (0,09 г, 67%). ЖХ/МС=267,1 (М++1).
(bs, 1H), 5.61 (bs, 1H), 5.06 (bs, 1H), 4.68 (dd, 1H), 4.56-4.45 (m, 2H), 4.25-3.97(m, 6H), 3.32 (s, 1H), 2.762.68 (m, 2H), 2.56-2.49 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 1.99-1.78 (m, 2H), 1.68-1.64 (m, 3H), 1.53-1.16 (m,6H), 1.050.94 (m, 14H), 0.37-0.30 (m, 2H).
Стадии 1 и 2.
Желаемый хинолин синтезировали с использованием методик, аналогичных описанным выше в примере 100. ЖХ/МС=283,1 (TVT+1).
Пример 101. Получение соединения 101.
Стадия 3. Соединение 101 (82 мг) синтезировали с использованием методик, описанных выше для приготовления соединение 82. ЖХ/МС=744,4 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.02 (d, 1H), 7.306 (d, 1H), 6.51-6.37 (m, 1H), 5.58-5.45 (m, 1H), 4.68 (dd, 1H), 4.56-4.44 (m, 2H), 4.15-3.96(m, 5H), 3.79 (m, 4H), 3.55-3.47 (m, 2H), 3.31 (m, 1H), 2.72-2.49 (m, 2H), 2.14 (m, 1H), 1.99-1.78 (m, 2H), 1.68-1.64 (m, 3H), 1.531.22 (m,6H), 1.20-0.94 (m, 14H), 0.37-0.30 (m, 2H).
Пример 102. Получение соединения 102.
Стадия 1.
Смесь 2,4,8-трихлор-7-метоксихинолина (100 мг, 0,38 ммоль), 4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-тиола (44 мг, 0,38 ммоль) и карбоната цезия (185 мг, 0,57 ммоль) в DMF (2 мл) перемешивали при 50°C в течение 22 ч. Согласно ЖХ/МС получили часть продукта вместе с промежуточными продуктами. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (100 мл) и промывали 3% LiCl и солевым раствором. Органический слой и нерастворимое вещество объединяли и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением 89 мг (67%) желаемого однозамещенного продукта. ЖХ/МС=341,2 (М++1).
Стадия 2.
Смесь вышеупомянутого дихлорхинолина (48 мг, 0,14 ммоль) и NaOAc (173 мг, 2,11 ммоль) в НО-Ас (2 мл) перемешивали при 130°C в течение 36 ч в герметично закрытой пробирке. После охлаждения до комнатной температуры данную смесь разбавляли EtOAc (20 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3 и солевым раствором. Органический слой и нерастворимое веществ объединяли и концентрировали под вакуумом с получением желаемого гидроксихинолина, чистого, в виде белого твердого вещества, используемого как есть на следующей стадии. ЖХ/МС=323,11 (М++1).
Стадия 3.
Смесь промежуточного соединения III (130 мг, 0,182 ммоль), полученного гидроксихинолина и карбоната цезия (137 мг, 0,42 ммоль) в NMP (2 мл) перемешивали при 65°C в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры данную смесь разбавляли THF (5 мл) и MeOH (1 мл) и к данной смеси добавляли гидроксид лития (100 мг) в воде (3 мл). Смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре и нейтрализовали путем добавления TFA. После удаления летучих растворителей остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением 53 мг (42% за две стадии) соединения 102 в виде TFA соли. 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.85 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.81 (b, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.3-4.0 (m, 4H), 4.06 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.47 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.75-1.1.79 (m, 10H),
Стадия 1.
К смеси промежуточного соединения III (0,15 г, 0,21 ммоль) и карбоната цезия (0,14 г, 0,42 ммоль) в NMP (5 мл) добавляли указанный на схеме хинолин (0,05 г, 0,21 ммоль) при комнатной температуре за один прием. Смесь перемешивали при 85°C в течение 3 ч, охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (30 мл). Смесь промывали 3% водным раствором LiCl (1x20 мл), солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением желаемого продукта в виде светло-коричневого твердого вещества (0,09 г, 60%). ЖХ/МС=710 (М++1).
Стадия 2.
Полученный сложный эфир (0,06 г, 0,085 ммоль) и иодид натрия (0,25 г, 1,67 ммоль) растворяли в пиридине (3 мл) и нагревали до 115°C в течение 7 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали с целью удаления большей части пиридина. Остаток растворяли в DMF (2 мл) и очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением соединения 103 в виде твердого веществаэ (0,02 г, 35%). ЖХ/МС=696 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.15 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.57 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.40 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.51-4.41 (m, 2Н), 4.16 (m, 1H), 4.08(s, 3H), 4.01 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.49 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.69 (m, 2Н), 1.50 (m, 1H), 1.43-1.36 (m, 3H), 1.25-1.13 (m, 3H), 1.04-0.95 (m, 12Н), 0.35-0.27 (m, 2Н).
Пример 104. Получение соединения 104.
Стадия 1.
Указанный на схеме сложный метиловый эфир хинолина (0,20 г, 0,75 ммоль) растворяли в THF (5 мл) при охлаждении до 0°C добавляли 1 М DIBAL в гексане (2,3 мл, 2,30 ммоль). Данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем к данной смеси медленно добавляли H2O (2 мл). pH смеси доводили до 2 путем добавления 1н. HCl. Полученное твердое вещество отфильтровывали и сушили под вакуумом в течение ночи с выходом желаемого спирта (180 мг, 93%). ЖХ/МС=240 (IVT+l).
Стадия 2.
Соединение 104 (0,31 г, 56%) синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 82. ЖХ/МС=701 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.41 (d, J=9.9 Гц, 1H), 7.74 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.16 (s, 2Н), 4.73 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 4.19 (s, 3H), 4.09 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.94(m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.69 (m, 2Н), 1.50 (m, 1H), 1.43-1.36 (m, 3H), 1.25-1.13 (m, 3H), 1.04-0.95 (m, 12Н), 0.38-0.31 (m, 2Н).
Стадия 1.
В раствор указанного на схеме анилина (0,30 г, 1,5 ммоль) и пиридина (0,24 г, 3,0 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при 0°C при перемешивании в течение 15 мин добавляли 3,3-диметилакрилоил хлорид (0,24 г, 2,0 ммоль), и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Данную смесь концентрировали, и затем остаток растворяли в EtOAc (50 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3, 1н. HCl, и солевым раствором. Органическую фракцию сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле EtOAc/гексан с получением желаемого амида в виде светло-коричневого твердого вещества (0,35 г, 80,3%). ЖХ/МС=282 (М++1).
Стадия 2.
В раствор амида (0,32 г, 1,1 ммоль) в трет-BuOH (10 мл) при интенсивном перемешивании добавляли трет-BuOK (0,27 г, 2,4 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 75°C в течение 3 ч и охлаждали до комнатной температуры. Данную смесь подкисляли путем добавления 4н. HCl (1 мл) и концентрировали, и затем остаток растворяли в EtOAc (30) и промывали H2O (10 мл) и солевым раствором (10 мл). Органическую фракцию сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением желаемого хинолина в виде светло-коричневого твердого вещества (0,11 г, 37%). ЖХ/МС=264 (М++1).
Стадия 3.
Соединение 105 (0,10 г, 66%) синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 82. ЖХ/МС=725 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) 5 8.35 (s, J=9.6 Гц, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.67 (d, J=9.6 Гц, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.73 (s, 1H), 4.76 (t, J=8.8 Гц, 1H), 4.64 (d, J=12.4 Гц, 1H), 4.30 (t, J=10.8 Гц, 1H), 4.16 (s, 1H), 4.08-4.01 (m, 2Н), 2.80 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.22(d, J=12.8 Гц, 6Н), 1.92 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.74-1.40 (m, 6Н), 1.27-1.13 (m, 4Н), 1.04-0.96 (m, 12Н), 0.36-0.32 (m, 2Н).
Пример 106. Получение соединения 106.
Стадия 1.
В раствор указанного на схеме анилина (8,0 г, 29,3 ммоль) и пиридина (4,6 г, 58,6 ммоль) в дихлор-метане (100 мл) при перемешивании при 0°C в течение 15 мин добавляли 3,3-диметилакрилоил хлорид (4,2 г, 35,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученную смесь концентрировали, и затем остаток растворяли в EtOAc (200 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3, 1н. HCl и солевым раствором. Органическую фракцию сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением желаемого амида в виде светло-коричневого твердого вещества (6,0 г, 57,6%). ЖХ/МС=355
(М++1).
Стадия 2.
В раствор полученного амида (6,0 г, 16,9 ммоль) в трет-BuOH (120 мл) при интенсивном перемешивании добавляли трет-BuOK (3,9 г, 35,4 ммоль). Смесь нагревали при 75°C в течение 3 ч и охлаждали до комнатной температуры. Данную смесь подкисляли путем добавления 4н. HCl (10 мл) и концентрировали, затем остаток растворяли в EtOAc (200 мл) и промывали H2O (50 мл) и солевым раствором (100 мл). Органическую фракцию сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан с получением желаемого хинолина в виде светло-коричневого твердого вещества (1,62 г, 28%). ЖХ/МС=338 (М++1).
Стадия 3.
Соединение 106 (0,51 г, 75%) синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 98. ЖХ/МС=824 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD) 5 8.30 (s, J=9.3 Гц, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.57 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.74-4.67 (m, 3H), 4.58-4.52 (m, 2Н), 4.16 (m, 1H), 4.08-3.99 (m, 6Н), 3.79 (m, 2Н), 3.57 (m, 4Н), 2.80 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.02 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.69 (m, 3H), 1.50 (m, 1H), 1.43-1.36 (m, 2Н), 1.24-1.13 (m, 3H), 1.04-0.96 (m, 12Н),
0.36-0.32 (m, 2Н).
Пример 107. Получение соединения 107.
Соединение 107 (0,14 г, 70%) синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 98. ЖХ/МС=836 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 8.41 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.68 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.78(s, 1H), 5.74 (bs, 1H), 4.81-4.72 (m, 5H), 4.48 (m, 1H), 4.24(m, 1H), 4.06-3.99 (m, 4H), 4.08-3.98 (m, 5H), 3.82 (m, 2H), 3.57 (m, 4H), 2.74-2.67(m, 2H), 2.24 (d, J=21.2 Гц, 6Н), 2.04-1.89 (m, 2H), 1.87 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.67-1.59 (m, 3H), 1.55 (m, 2H), 1.46-1.37 (m, 4H), 1.29-1.14 (m, 4H), 0.37 (m, 2H).
Пример 108. Получение соединения 108.
Соединение 108 (0,17 г, 60%) синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 98. ЖХ/МС=834 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 8.43 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.66 (d, J=9.6 Гц, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.78(s, 1H), 5.77 (bs, 1H), 5.62 (m, 1H), 5.38 (m, 1H), 4.81 (m, 4H), 4.72 (t, J=8.0 Гц, 1H), 4.39 (t, J=6.8 Гц, 1H), 4.13 (m, 1H), 4.05-3.99 (m, 4H), 3.82 (m, 2H), 3.56 (m, 3H), 2.74-2.67(m, 2H), 2.22 (d, J=16.0 Гц, 6Н), 1.93-1.88 (m, 2H), 1.78-1.74 (m, 2H), 1.67-1.59 (m, 3H), 1.55 (m, 2H), 1.46-1.37 (m, 4H), 1.29-1.14 (m, 4H), 0.35 (m, 2H).
Соединение 109 синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 98. ЖХ/МС=820,55 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.00 (d, 1H), 7.23 (d, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.37 (b, 1H), 5.29 (m, 1H), 5.04 (dd, 1H), 4.42-4.31 (m, 5Н), 4.19 (dd, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.71-3.65 (m, 5Н), 3.47 (m, 1H), 3.24 (m, 4Н), 2.98 (m,3H), 2.37 (m, 2Н), 2.27-2.15 (m, 2Н), 1.96 (m, 1H), 1.67-1.44 (m, 2Н), 1.34-1.07 (m, 10H), 0.93-0.82 (m, 2Н), 0.05-0.00 (m, 1H).
Пример ПО. Получение соединения ПО.
Соединение 110 синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 99. ЖХ/МС=822,38 (М++1). 1Н ЯМР (300 МГц, CD3OD): 5 8.23 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.59 (s, 1H), 4.68-4.61 (m, 3H), 4.52 (dd, 1H), 4.45 (dd, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.95-3.80 (m, 4Н), 3.71 (m, 2Н), 3.48 (b, 3H), 3.22 (m, 1H), 2.69-2.52 (m, 3H), 1.91-1.84 (m, 1H), 1.79-1.64 (m,3H), 1.59-1.08 (m, 20Н), 0.31-0.24 (m,
1H).
Стадия 1.
Смесь 2,4,8-трихлор-7-метоксихинолина (2,48 мг, 9,45 ммоль) и H2SO4 (20 мл) герметизировали в пробирке для микроволновой печи и нагревали при 150°C в течение 1 ч в микроволновой печи химического реактора. После охлаждения до комнатной температуры смесь медленно при интенсивном перемешивании вливали в смесь вода/лед. Коричневое твердое вещество отфильтровывали, промывали холодной водой и сушили с получением 1,54 г (66%) желаемого продукта. ЖХ/МС=350,24 (М++3).
Стадия 2.
К раствору 2,4,8-трихлорхинолин-7-ола (1,74 г, 7,0 ммоль) в DMF (70 мл) добавляли Cs2CO3 (10,26 г, 31,5 ммоль) и NaI (210 мг, 1,4 ммоль). Смесь нагревали до 65°C в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры, данную смесь разбавляли EtOAc и 3% водным раствором LiCl. После разделения двух слоев, органическую фракцию сушили (Na2SO4) и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан, затем МеОН/ЕЮАс в качестве элюентов с получением 1,9 г (75%) желаемого продукта. ЖХ/МС=363,0 (ТУГ+З).
o^J \j^J
Стадия 3.
Смесь 2,4,8-трихлор-7-(2-морфолин-4-ил-этокси)хинолина (900 мг, 2,49 ммоль) и изопропиламина (30 мл) герметизировали в пробирке и нагревали до 50°C в течение 10 ч. Данную смесь концентрировали,
и затем остаток очищали путем флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc/гексан в качестве элюента с получением 930 мг (97%) желаемого продукта. ЖХ/МС=384,0 (М++1). Стадия 4.
Раствор вышеупомянутую 4,8-дихлорхинолина (930 мг, 2,42 ммоль) и ацетата натрия (3,0 г, 36,3 ммоль) в уксусной кислоте (12 мл) нагревали до 130°C в течение 18 ч. Данную смесь концентрировали под вакуумом, и затем остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ с получением 882 мг (76%) желаемого гидроксихинолинового продукта. ЖХ/МС=366,0 (TVT+l).
Стадия 5. Соединение 111 (400 мг) синтезировали с использованием описанной выше методики получения соединения 98. ЖХ/МС=837,4 (М++1). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD): 5 8.63 (s, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.16 (b, 1H), 5.29 (m, 2H), 5.03 (t, 1H), 4.37 (m, 4H), 4.23 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 3.70 (m, 4H), 3.45 (t, 2H), 3.21 (b, 3H), 2.98 (s, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.20 (m, 2H), 1.98 (q, 1H), 1.631.28 (m, 6H), 1.20-1.07 (m, 10H), 1.04-0.84 (m, 2H), 0.39 (m, 2H).
Пример 115.
Далее даны иллюстрации типичных фармацевтических лекарственных форм, содержащих соединение формулы I ("соединение X"), для терапевтического или профилактического применения у человека.
(1) Таблетка 1 Соединение Х= Лактоза Повидон
Кроскармелоза натрия Микрокристаллическая целлюлоза Стеарат магния
(2) Таблетка 2 Соединение Х=
Микрокристаллическая целлюлоза Крахмал
Натриевая соль гликолята крахмала Стеарат магния
(3) Капсула Соединение Х= Коллоидный диоксид кремния Лактоза
Прежелатинизированный крахмал Стеарат магния
(4) Инъекция 1(1 мг/мл)
Соединение Х= (в форме свободной кислоты) Первичный кислый фосфат натрия Вторичный кислый фосфат натрия Натрия хлорид
1,0 н. Раствор гидроксида натрия (подведение рН до 7,0-7,5) Вода для инъекций
мг/таблетку
100,0
77,5
15,0
12,0
92,5
3,0
300,0
мг/таблетку
20,0
410,0
50,0
15,0
5,0
500,0
мг/капсулу
10,0
1,5
465,5
120,0
3,0
600,0 мг/мл
1,0
12,0
0,7
4,5
сколько требуется сколько требуется до 1 мл
(5) Инъекция 2 (10 мг/мл) мг/мл Соединение Х= (в форме свободной кислоты) 10,0 Вторичный кислый фосфат натрия 0,3 Первичный кислый фосфат натрия 1,1 Полиэтиленгликоль 400 200,0
01 н. раствор гидроксида натрия сколько требуется
(подведение рН до 7,0-7,5)
Вода для инъекций сколько требуется до 1 мл
(6) Аэрозоль мг/баллон Соединение Х= 20,0 Олеиновая кислота 10,0 Трихлормонофторметан 5,000,0 Дихлордифторметан 10,000,0 Дихлортетрафторэтан 5,000,0
Вышеуказанные препараты можно приготовить с использованием стандартных методик, хорошо известных в области фармацевтики. Биологические способы анализа. Активность NS3-фермента.
Комплекс очищенной №3-протеазы и пептида NS4A инкубировали с последовательными разведениями соединений согласно настоящему изобретению в DMSO (в качестве растворителя). Реакции запускали путем добавления меченого пептидного субстрата, и измеряли кинетику увеличения флуоресценции. Для вычисления ИК50 строили кривую скорости увеличения флуоресценции с использованием модели нелинейной регрессии. Сначала анализировали активность в отношении протеазы генотипа 1b. В зависимости от эффективности, полученной с использованием протеазы 1b, дополнительно можно проанализировать протеазы других генотипов (1a, 2a, 3) и/или ферменты, устойчивые к ингибиторам протеаз (мутанты D168Y, D168V или А156Т). При всех анализах в качестве контроля использовали BILN-2061. Данный способ анализа применяли для оценки соединений, полученных в примерах, найденные значения ИК50 составляли менее чем приблизительно 1 мкМ.
Эффективность репликации и цитотоксичность.
Клетки Huh-luc (стабильно реплицирующийся репликон Bartenschlager's I389luc-ubi-neo/NS3-3'/ЕТ с генотипом 1b) в течение 72 ч обрабатывали соединениями согласно настоящему изобретению, используя последовательные разведения указанных соединений (в качестве растворителя использовали DMSO). Количество копий репликона измеряли с помощью биолюминесценции, вычисление EC50 выполняли с использованием нелинейной регрессионной модели. Параллельно по планшетам, которые обрабатывали теми же соединениями, используя те же разведения, определяли цитотоксичность соединений с применением системы анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo (Promega). В зависимости от эффективности ингибирования репликона 1b, соединения можно проанализировать с использованием репликона с генотипом 1а и/или устойчивых к ингибиторам репликонов, кодирующих мутации D168Y или А156Т. При всех анализах в качестве контроля использовали BILN-2061. Данный способ анализа использовали для оценки соединений, полученных в примерах 1-81, найденные значения EC50 обычно составляли приблизительно менее 5 мкМ.
Влияние белков сыворотки на эффективность репликации.
Анализ репликации выполняли в обычной среде для клеточных культур (DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) + 10% FBS (эмбриональная сыворотка телят)) с добавлением сывороточного альбумина человека (40 мг/мл) или гликопротеина а-кислоты (1 мг/мл) в физиологических концентрациях. Для определения относительной эффективности репликации EC50 в присутствии белков сыворотки человека сравнивали с EC50 при использовании обычной среды.
Ферментативная селективность.
Степень ингибирования протеаз млекопитающих, включая панкреатическую эластазу свиньи, лейкоцитарную эластазу человека, протеазу 3 и катепсин D, измеряли при концентрации Km, используя соответствующие субстраты для каждого из ферментов. Количественную оценку избирательности получали путем сравнения значений ИК50 для каждого из указанных ферментов со значением ИК50, полученным для NS3 Ш-протеазы.
Цитотоксичность, измеренная на МТ-4 клетках.
Клетки МТ4 в течение 5 суток обрабатывали соединениями согласно настоящему изобретению, с использованием последовательных разведений указанных соединений. По окончании обработки измеряли жизнеспособность клеток с применением системы анализа CellTiter-Glo (Promega), вычисление EC50 выполняли с использованием модели нелинейной регрессии.
Концентрация соединений, ассоциированных с клетками, при EC50.
Культуры Huh-luc инкубировали с добавлением соединением в концентрации, равной EC50. В по
следовательные моменты времени (в интервале 0-72 ч) клеточные пробы промывали (2х) холодной средой и экстрагировали 85% ацетонитрилом, в эти же моменты времени также экстрагировали пробы среды. Клеточные экстракты и экстракты среды анализировали с помощью ЖХ/МС/МС для определения молярной концентрации соединений в каждой фракции. Растворимость и стабильность.
Растворимость определяли путем отбора аликвоты из исходного 10 мМ раствора в DMSO и приготовления тест-раствора (PBS (фосфатно-солевой буфер), pH 7,4 и 0,1н. HCl, pH 1,5), содержащего соединение в конечной концентрации 100 мкМ и DMSO в конечной концентрации 1%. Полученные тест-растворы инкубировали при комнатной температуре с перемешиванием в течение 1 ч. Затем растворы центрифугировали, и полученные супернатанты анализировали с использованием ВЭЖХ/УФ. Растворимость вычисляли путем сравнения количества соединения, обнаруживаемого в тест-растворе, с количеством соединения, обнаруживаемым в DMSO при той концентрации. Также определяли стабильность соединений после инкубации в течение 1 ч в среде для тестирования при 37°C.
Стабильность в криоконсервированных гепатоцитах человека, собаки и крысы.
Каждое соединение инкубировали в течение 1 ч в суспензии гепатоцитов (100 мкл, 80000 клеток на лунку) при 37°C. Криоконсервированные гепатоциты ресуспендировали в культуральной среде без сыворотки. Суспензию переносили в 96-луночные планшеты (50 мкл/на лунку). Соединения разбавляли инкубационной средой до концентрации 2 мкМ и добавляли к суспензии гепатоцитов в момент начала инкубации. Пробы отбирали через 0, 10, 30 и 60 мин после начала инкубации, реакцию останавливали путем добавления 0,3% муравьиной кислоты в смеси, состоящей из 90% ацетонитрила и 10% воды. Концентрацию соединения в каждой пробе анализировали с использованием ЖХ/МС/МС. Время полуудаления соединения в суспензии гепатоцитов определяли путем аппроксимации кривой концентрация-время с применением однопараметрической экспоненциальной функции. Полученные данные также пересчитывали для оценки внутрипеченочного клиренса и/или общего печеночного клиренса.
Стабильность во фракции S9 печени человека, собаки и крысы.
Каждое соединение инкубировали в течение 1 ч в S9-суспензии (500 мкл, 3 мг белка/мл) при 37°C (n=3). Отсчет времени начинали с момента добавления соединения в S9-суспензию. Пробы отбирали через 0, 10, 30 и 60 мин после начала инкубации. Концентрацию соединения в каждой пробе анализировали с использованием ЖХ/МС/МС. Время полуудаления соединения в S9-суспензии определяли путем аппроксимации кривой концентрация-время однопараметрической с применением экспоненциальной функции.
Сасо-2-проницаемость.
Измеряли как прямую (А-в-В), так и обратную (В-в-А) проницаемость. Монослои Caco-2 выращивали до конфлюентности клеток в 12-луночных планшетах Costar Transwell(r) на микропористых поликарбонатных мембранах, покрытых коллагеном. Дозы соединений наносили на апикальную сторону для измерения прямой проницаемости (А-в-В) или на базолатеральную сторону для измерения обратной проницаемости (В-в-А). Клетки инкубировали при 37°C в термостате во влажной атмосфере, содержащей 5% CO2. В начале инкубации, через 1 ч и через 2 ч после начала инкубации из приемной камеры отбирали аликвоты объемом 200 мкл и заменяли их свежим буфером для анализа. Концентрацию соединения в каждой пробе определяли с использованием ЖХ/МС/МС. Вычисляли кажущуюся проницаемость
(Papp).
Связывание с белками плазмы крови.
Связывание с белками плазмы измеряли с использованием равновесного диализа. Каждое соединение инокулировали в плазму до конечной концентрации 2 мкМ. Инокулированную плазму и фосфатный буфер размещали с противоположных сторон собранных диализных ячеек, которые затем медленно вращали в водяной бане (37°C). В конце инкубации определяли концентрацию соединения в плазме и фосфатном буфере. Используя следующее уравнение, вычисляли процент несвязанного соединения
где Cf и Cb - концентрации свободного и связанного соединения, которые представляют собой по-следиализные концентрации соединения в буфере и плазме соответственно. CYP450-профиль.
Каждое соединение инкубировали с каждым из 5 рекомбинантных ферментов CYP450 человека, включая CYP1A2, CYP2C9, CYP3A4, CYP2D6 и CYP2C19, в присутствии НАДФ(Н) (восстановленного никотинамидадениндинуклеотидфосфата) или без НАДФ(Н). Пробы последовательно отбирали из инкубационной смеси в начальный момент и через 5, 15, 30, 45 и 60 мин после начала инкубации. Концентрацию соединения в инкубационной смеси определяли с помощью ЖХ/МС/МС. Долю соединения, которая остается после инкубации в течение указанных периодов времени, вычисляли путем сравнивания с пробой, взятой в начале инкубации.
Стабильность в плазме крови крысы, собаки, обезьяны и человека.
Соединения инкубировали в плазме (крысы, собаки, обезьяны и человека) при 37°C в течение 2 ч. Соединения добавляли в плазму до конечной концентрации 1 и 10 мкг/мл. Аликвоты отбирали через 0, 5, 15, 30, 60 и 120 мин после добавления соединения. Концентрацию соединений и его основных метаболитов в каждой из аликвот, отобранных в указанные моменты времени, измеряли путем ЖХ/МС/МС.
Все публикации, патенты и патентные документы включены в данное описании посредством ссылки, как если бы для каждой публикации, патента или патентного документа в отдельности было указано, что она/он включена/включен в данное описание посредством ссылки. Изобретение описано посредством ссылки на различные конкретные и предпочтительные воплощения и методики. Однако следует понимать, что может быть сделано много других вариаций и модификаций, которые не выходят за пределы существа и объема изобретения.
или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
5. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
или его фармацевтически приемлемая соль.
6. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
или его фармацевтически приемлемая соль.
7. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
или его фармацевтически приемлемая соль.
10. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
или его фармацевтически приемлемая соль.
12. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
или его фармацевтически приемлемая соль.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
025794
025794
- 1 -
- 1 -
(19)
025794
025794
- 1 -
- 1 -
(19)
025794
025794
- 1 -
- 1 -
(19)
025794
025794
- 2 -
- 1 -
(19)
025794
025794
- 4 -
- 3 -
025794
025794
- 6 -
- 6 -
025794
025794
- 18 -
- 18 -
025794
025794
- 24 -
- 24 -
025794
Пример 7. Получение соединения 7.
025794
Пример 7. Получение соединения 7.
- 30 -
- 30 -
025794
Пример 10. Получение соединения 10.
025794
Пример 10. Получение соединения 10.
- 31 -
- 31 -
025794
025794
- 32 -
- 32 -
025794
025794
Пример 20. Получение соединения 20.
- 35 -
- 36 -
025794
Стадия 3.
025794
Стадия 3.
- 38 -
- 38 -
025794
Пример 26. Получение соединения 26.
025794
Пример 26. Получение соединения 26.
025794
Стадия 6.
025794
Стадия 6.
- 41 -
- 41 -
025794
025794
- 42 -
025794
Стадия 5.
025794
Стадия 5.
- 45 -
- 45 -
025794
Стадия 1.
025794
- 47 -
- 46 -
025794
025794
Стадия 2.
- 49 -
- 50 -
025794
Стадия 2.
025794
- 53 -
- 52 -
025794
Пример 46. Получение соединения 46.
025794
Пример 46. Получение соединения 46.
- 55 -
- 55 -
025794
025794
- 56 -
- 56 -
025794
Стадия 1.
025794
Стадия 1.
- 58 -
- 58 -
025794
Пример 50. Получение соединения 50.
025794
Пример 50. Получение соединения 50.
- 59 -
- 59 -
025794
Пример 52. Получение соединения 52.
025794
Пример 52. Получение соединения 52.
- 60 -
- 60 -
025794
Пример 54. Получение соединения 54.
025794
Пример 54. Получение соединения 54.
- 61 -
- 61 -
025794
Пример 58. Получение соединения 58.
025794
Пример 58. Получение соединения 58.
- 62 -
- 62 -
025794
025794
- 63 -
- 63 -
025794
025794
- 64 -
025794
Пример 65. Получение соединения 65.
025794
Пример 65. Получение соединения 65.
- 67 -
- 67 -
025794
Стадия 3.
025794
Стадия 3.
- 68 -
- 68 -
025794
Пример 68. Получение соединения 68.
025794
Пример 68. Получение соединения 68.
- 69 -
- 69 -
025794
025794
- 70 -
- 70 -
025794
Пример 71. Получение соединения 71.
025794
Пример 71. Получение соединения 71.
- 72 -
- 72 -
025794
Стадия 3.
025794
Стадия 3.
025794
025794
- 74 -
- 74 -
025794
Пример 79. Получение соединения 79.
025794
Пример 79. Получение соединения 79.
- 77 -
- 77 -
025794
Стадия 1.
025794
Стадия 1.
- 78 -
- 78 -
025794
025794
- 79 -
- 79 -
025794
025794
- 80 -
- 80 -
025794
025794
- 80 -
- 80 -
025794
Пример 84. Получение соединения 84.
025794
Пример 84. Получение соединения 84.
025794
025794
025794
025794
- 85 -
- 85 -
025794
025794
Пример 93. Получение соединения 93.
- 87 -
- 88 -
025794
Стадия 2.
025794
Стадия 2.
- 90 -
- 90 -
025794
025794
- 91 -
- 91 -
025794
025794
Пример 105. Получение соединения 105.
- 93 -
- 94 -
025794
Пример 109. Получение соединения 109.
025794
Пример 109. Получение соединения 109.
- 96 -
- 96 -
025794
025794
- 97 -
- 97 -
025794
025794
- 97 -
- 97 -
025794
025794
- 98 -
- 98 -
025794
025794
- 101 -
- 101 -
025794
025794
или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 106 -
или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 106 -
025794
025794
или его фармацевтически приемлемая соль.
- 107 -
или его фармацевтически приемлемая соль.
- 107 -
025794
025794
или его фармацевтически приемлемая соль.
8. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 109 -
- 108 -
025794
025794
- 111 -
- 111 -
025794
025794
или его фармацевтически приемлемая соль.
13. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 112 -
или его фармацевтически приемлемая соль.
13. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 112 -
025794
025794
или его фармацевтически приемлемая соль.
- 113 -
или его фармацевтически приемлемая соль.
- 113 -
025794
025794
или его фармацевтически приемлемая соль.
17. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 114 -
или его фармацевтически приемлемая соль.
17. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из
- 114 -
025794
025794
- 115 -
- 115 -
|
