|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Способ лечения портальной гипертензии у субъекта, включающий идентификацию субъекта как такового, нуждающегося в снижении портального давления; введение указанному субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; и измерение портального давления у субъекта, которому вводили L-орнитин в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, для определения снижения портального давления. 2. Способ по п.1, согласно которому субъект страдает заболеванием печени. 3. Способ по п.2, согласно которому заболеванием печени является хроническое заболевание печени. 4. Способ по п.3, согласно которому хроническим заболеванием печени является цирроз. 5. Способ по п.2, согласно которому заболеванием печени является острая печеночная недостаточность. 6. Способ по п.1, согласно которому снижение портального давления достигается путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у субъекта. 7. Способ по п.1, согласно которому снижение портального давления достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота. 8. Способ по п.1, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 9. Способ по п.1, согласно которому субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 10. Способ по п.1, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 11. Способ по п.1, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 12. Способ по п.1, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 13. Способ по п.12, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 14. Способ по п.12, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 15. Способ по п.1, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 16. Способ замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии у субъекта, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; измерение портального давления у субъекта, которому вводили L-орнитин в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; и таким образом осуществления замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии. 17. Способ по п.16, согласно которому указанный субъект страдает заболеванием печени. 18. Способ по п.17, согласно которому указанным заболеванием печени является хроническое заболевание печени. 19. Способ по п.18, согласно которому указанным хроническим заболеванием печени является цирроз. 20. Способ по п.17, согласно которому указанным заболеванием печени является острая печеночная недостаточность. 21. Способ по п.16, согласно которому указанного замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии достигают путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у субъекта. 22. Способ по п.16, согласно которому указанного замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии достигают путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта. 23. Способ по п.16, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 24. Способ по п.16, согласно которому указанному субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 25. Способ по п.16, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 26. Способ по п.16, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 27. Способ по п.16, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 28. Способ по п.27, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 29. Способ по п.27, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 30. Способ по п.16, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 31. Способ лечения варикозного кровотечения, связанного с портальной гипертензией у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение варикозного кровотечения. 32. Способ по п.31, согласно которому указанное лечение варикозного кровотечения достигается путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у указанного субъекта. 33. Способ по п.31, согласно которому указанное лечение варикозного кровотечения достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта. 34. Способ по п.31, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 35. Способ по п.31, согласно которому субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 36. Способ по п.31, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 37. Способ по п.31, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 38. Способ по п.31, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 39. Способ по п.38, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 40. Способ по п.38, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 41. Способ по п.31, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 42. Способ лечения асцита, связанного с портальной гипертензией у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение проявлений асцита. 43. Способ по п.42, согласно которому указанное лечение асцита достигается путем снижения уровня провоспалительных цитокинов у указанного субъекта. 44. Способ по п.42, согласно которому указанное лечение асцита достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта. 45. Способ по п.42, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 46. Способ по п.42, согласно которому указанному субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 47. Способ по п.42, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 48. Способ по п.42, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 49. Способ по п.42, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 50. Способ по п.49, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 51. Способ по п.49, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 52. Способ по п.42, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 53. Способ по п.1, в котором снижение портального давления у субъекта составляет по меньшей мере 30%.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Способ лечения портальной гипертензии у субъекта, включающий идентификацию субъекта как такового, нуждающегося в снижении портального давления; введение указанному субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; и измерение портального давления у субъекта, которому вводили L-орнитин в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, для определения снижения портального давления. 2. Способ по п.1, согласно которому субъект страдает заболеванием печени. 3. Способ по п.2, согласно которому заболеванием печени является хроническое заболевание печени. 4. Способ по п.3, согласно которому хроническим заболеванием печени является цирроз. 5. Способ по п.2, согласно которому заболеванием печени является острая печеночная недостаточность. 6. Способ по п.1, согласно которому снижение портального давления достигается путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у субъекта. 7. Способ по п.1, согласно которому снижение портального давления достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота. 8. Способ по п.1, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 9. Способ по п.1, согласно которому субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 10. Способ по п.1, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 11. Способ по п.1, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 12. Способ по п.1, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 13. Способ по п.12, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 14. Способ по п.12, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 15. Способ по п.1, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 16. Способ замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии у субъекта, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; измерение портального давления у субъекта, которому вводили L-орнитин в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; и таким образом осуществления замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии. 17. Способ по п.16, согласно которому указанный субъект страдает заболеванием печени. 18. Способ по п.17, согласно которому указанным заболеванием печени является хроническое заболевание печени. 19. Способ по п.18, согласно которому указанным хроническим заболеванием печени является цирроз. 20. Способ по п.17, согласно которому указанным заболеванием печени является острая печеночная недостаточность. 21. Способ по п.16, согласно которому указанного замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии достигают путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у субъекта. 22. Способ по п.16, согласно которому указанного замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии достигают путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта. 23. Способ по п.16, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 24. Способ по п.16, согласно которому указанному субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 25. Способ по п.16, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 26. Способ по п.16, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 27. Способ по п.16, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 28. Способ по п.27, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 29. Способ по п.27, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 30. Способ по п.16, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 31. Способ лечения варикозного кровотечения, связанного с портальной гипертензией у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение варикозного кровотечения. 32. Способ по п.31, согласно которому указанное лечение варикозного кровотечения достигается путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у указанного субъекта. 33. Способ по п.31, согласно которому указанное лечение варикозного кровотечения достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта. 34. Способ по п.31, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 35. Способ по п.31, согласно которому субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 36. Способ по п.31, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 37. Способ по п.31, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 38. Способ по п.31, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 39. Способ по п.38, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 40. Способ по п.38, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 41. Способ по п.31, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 42. Способ лечения асцита, связанного с портальной гипертензией у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение проявлений асцита. 43. Способ по п.42, согласно которому указанное лечение асцита достигается путем снижения уровня провоспалительных цитокинов у указанного субъекта. 44. Способ по п.42, согласно которому указанное лечение асцита достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта. 45. Способ по п.42, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. 46. Способ по п.42, согласно которому указанному субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. 47. Способ по п.42, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. 48. Способ по п.42, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. 49. Способ по п.42, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением. 50. Способ по п.49, согласно которому указанное введение является внутривенным введением. 51. Способ по п.49, согласно которому указанное введение является пероральным введением. 52. Способ по п.42, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г. 53. Способ по п.1, в котором снижение портального давления у субъекта составляет по меньшей мере 30%.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
025735
(13) B1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2017.01.30
(21) Номер заявки 201171396
(22) Дата подачи заявки 2010.06.08
(51) Int. Cl.
A61K31/195 (2006.01) A61K31/19 (2006.01) A61K31/192 (2006.01) A61P 9/12 (2006.01) A61P1/16 (2006.01)
(54)
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПОРТАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ L-ОРНИТИНА В СОЧЕТАНИИ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ С ОДНИМ ИЗ СОЕДИНЕНИЙ, ВЫБРАННЫХ ИЗ ФЕНИЛАЦЕТАТА И ФЕНИЛБУТИРАТА
(31) 61/185,158; 61/240,748; 61/296,377
(32) 2009.06.08; 2009.09.09; 2010.01.19
(33) US
(43) 2012.10.30
(86) PCT/US2010/037838
(87) WO 2010/144498 2010.12.16
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ЮСиЭл БИЗНЕС ПиЭлСи (GB); ОСЕРА ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Джалан Раджив (GB), Андерсон Кит
(US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) TREBICKA J. et al. "Atorvastsin lowers portal pressure in cirrhotic rats by inhibition of RhoA/Rho-kinase and activation of endothelial nitric oxide synthase". Hepatology, 2007, 46(1), pp. 242-253 (реферат) [он-лайн]. [Найдено 2012-06-26]. Найдено из PubMed, PMID: 17596891 JALAN R. et al. L-Ornithine phenylacetate (OP): A novel treatment for hyperammonen and hepatic encephalopathy. Medical Hypotheses, 2007,
69, pp. 1064-1069
BRUHA R. et al. "Effect of carvedilol on portal hypertension depends on the degree of endothelial activation and inflammatory changes". Scand. J. Gastroenterol., 2006, 41(12), pp. 1454-1463 (реферат) [он-лайн]. [Найдено 2012-06-26].
Найдено из PubMed, PMID: 17101577
LOPEZ-TALAVERA J.C. et al. "Thalidomide inhibits tumor necrosis factor alpha, decreases nitric oxide synthesis, and ameliorates the hyperdynamic circulatory syndrome in portal-hypertensive rats". Hepatology, 1996, 23(6), pp. 1616-1621 (реферат) [он-лайн]. [Найдено 2012-06-26]. Найдено из
PubMed, PMID: 8675185
МАЕВ И.В. Применение препарата L-орнитин^-аспартата в комплексной терапии печеночной энцефалопатии у больных циррозом печени. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 2002, № 6, с. 60-66
Перекрестная ссылка на родственные заявки
В настоящей заявке заявлен приоритет по предварительным патентным заявкам США 61/185158, поданной 8 июня 2009 г., 61/240748, поданной 9 сентября 2009 г., и 61/296377, поданной 19 сентября 2010 г. Содержание каждой из указанных родственных заявок в полном объеме включено в настоящее описание в виде ссылки.
Предшествующий уровень техника Область изобретения
Настоящая заявка относится к областям фармацевтической химии, биохимии и медицины. Один из ее аспектов связан с лечением и/или предупреждением портальной гипертензии с помощью L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. Другой аспект связан с восстановлением функции печени с помощью L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата.
Описание области, с которой связано изобретение
Портальная гипертензия представляет собой повышение кровяного давления в области портальной вены и ее венозных ветвей. Это состояние, которое может развиваться у пациентов с заболеванием печени, таким как цирроз и фиброз печени. Портальная гипертензия может также быть вызвана рубцеванием печени, тромбозом или образованием сгустка в портальной вене.
В настоящее время существуют различные, в зависимости от тяжести симптомов, стратегии предупреждения, лечения и менеджмента портальной гипертензии. При этом есть необходимость в дополнительных терапевтических подходах для лечения указанных выше состояний.
Краткое содержание изобретения
В некоторых воплощениях описаны способы лечения портальной гипертензии у субъекта, предусматривающие введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит ослабление портальной гипер-тензии.
В некоторых воплощениях описаны способы замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии у субъекта, предусматривающие введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, и, таким образом, замедления возникновения портальной гипертензии.
В определенных воплощениях описаны способы восстановления функции печени у субъекта, имеющего недостаточность функции печени, предусматривающие введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит улучшение функции печени.
В определенных воплощениях описаны способы лечения варикозного кровотечения у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающие введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение варикозного кровотечения.
В определенных воплощениях описаны способы лечения асцита у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающие введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение проявлений асцита.
В определенных воплощениях описаны способы защиты от повреждения головного мозга у пациента с острой печеночной недостаточностью, при этом указанные способы включают идентификацию пациента как такового, страдающего от острой печеночной недостаточности, и введение указанному пациенту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего уменьшается вероятность того, что у такого пациента будет развиваться процесс повреждения головного мозга. В некоторых воплощениях указанное введение осуществляют сразу же после указанной идентификации. В определенных воплощениях дополнительно подключают лечение острой печеночной недостаточности. В некоторых воплощениях указанное лечение включает трансплантацию печени. Некоторые из воплощений дополнительно включают в себя лечение осложнения, вызванного острой печеночной недостаточностью. В некоторых воплощениях осложнение включает варикозное кровотечение.
В определенных воплощениях субъект страдает портальной гипертензией. В некоторых воплощениях субъект с портальной гипертензией страдает заболеванием печени, таким как цирроз. В определенных воплощениях субъект страдает заболеванием печени. В некоторых воплощениях субъект с заболеванием печени страдает также портальной гипертензией. В определенных воплощениях заболевание печени является хроническим заболеванием печени (например, цирроз) или острой печеночной недостаточностью. В определенных воплощениях лечение портальной гипертензии достигается путем снижения уровня провоспалительных цитокинов у субъекта. В определенных воплощениях лечение портальной гипертензии достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота. В некоторых воплощениях L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата. В определенных воплощениях субъекту отдельно вводят физиологически приемлемые соли L-орнитина и по меньшей мере
одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата. В определенных воплощениях L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. В определенных воплощениях по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фе-нилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. В некоторых воплощениях введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисо-судистым введением. В определенных воплощениях улучшение функции печени способствует уменьшению портальной гипертензии. В некоторых воплощениях улучшение функции печени включает увеличение кровоснабжения (перфузии) печени. В определенных воплощениях доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата составляет от 20 до 40 г.
Краткое описание графического материала
Фиг. 1A-D. Экспрессия ФНО-а в плазме и в головном мозге. Показано, что, по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное повышение ФНО-а в плазме у крыс, которым накладывали лигатуру на желчный проток (крысы BDL, bile duct ligation) (*p <0,05), которое заметно увеличивалось в результате введения липополисахарида (LPS) (##р <0,01) и улучшалось при проведении лечения L-орнитином, фенилацетатом (OP, L-ornitine, phenylacetate); В) значительное повышение ФНО-а в головном мозге у крыс BDL (*р <0,05), которое заметно увеличивалось в результате введения LPS (#р <0,05) и улучшалось при проведении лечения ОР ($р <0,05); С) близкое к достоверному повышение IL-6 в плазме у крыс BDL, которое увеличивалось в результате введения LPS (##р <0,01); и D) несмотря на сходные тенденции изменения концентраций IL-6 в головном мозге у крыс BDL и проведения лечения под действием ОР, достоверность результатов достигнута не была.
Фиг. 2А-В. Экспрессия iNOS и NFkB в головном мозге. Показано, что, по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное повышение экспрессии белка iNOS в головном мозге у крыс BDL (***р <0,01), улучшающееся при введении ОР ($р <0,01); и В) значительное повышение NFkB у крыс BDL (***р <0,05), улучшающееся при введении ОР ($$$р <0,01). Полученные данные ассоциировались со значительным снижением артериального и мозгового TNFa, IL1b и IL-6 у животных, которым проводили лечение под действием ОР.
Фиг. 3А-В. Уровни ФНО-а в плазме и в головном мозге. Показано, что, по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное повышение уровня ФНО-а в головном мозге у крыс BDL, которое было обратимо после введения ОР; и В) значительное повышение уровня ФНО-а в плазме крыс BDL, которое также было обратимо после введения ОР.
Фиг. 4А-С. Активность и экспрессия белка eNOS и экспрессия белка iNOS. Показано, что, по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное снижение активности eNOS у крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения ОР; В) повышение экспрессии белка eNOS у крыс BDL; и С) значительное повышение экспрессии белка iNOS у крыс BDL.
Фиг. 5А-С. Экспрессия ADMA плазмы и экспрессия церебрального белка кавеолина-1. Показано, что по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное повышение ADMA [асимметричного диметиларгинина] плазмы у крыс BDL, которое недостоверно снижалось после введения ОР; В) значительное повышение ADMA плазмы в гомогенатах мозга крыс BDL, которое достоверно снижалось после введения ОР; и С) значительное повышение уровня экспрессии церебрального белка кавеолина-1 у крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения ОР.
Фиг. 6А-С. Экспрессия и активность церебрального белка DDAH-1 и DDAH-2. Показано, что, по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное снижение экспрессии церебрального белка DDAH-1 [диметиларгинин-диметиламиногидролаза]) у крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения ОР; В) значительное повышение экспрессии церебрального белка DDAH-2 у крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения ОР; и С) значительное повышение активности DDAH в головном мозге крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения ОР.
Фиг. 7A-F. Активность и экспрессия белка eNOS, экспрессия белка DDAH-1, NFkB, печеночного кавеолина-1, и портальное давление: Показано, что, по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными, происходило А) значительное снижение активности eNOS у крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения ОР; В) значительное повышение экспрессии белка eNOS, которое также оказывалось обратимым в результате введения ОР; С) значительное повышение экспрессии белка DDAH-1 у крыс BDL, которое оказывалось обратимым в результате введения OP; D) значительное повышение экспрессии белка NFkB у крыс BDL, и указанное повышение существенно снижалось в результате введения OP; E) значительное повышение экспрессии белка кавеолина-1 у крыс BDL, и указанное повышение существенно снижалось в результате введения ОР; и F) повышение портального давления у крыс BDL, и введение ОР приводило к 30% снижению портального давления.
Подробное описание изобретения
Определения
Используемый здесь термин "субъект" относится к животному, которое является объектом лечения, наблюдения или эксперимента. "Животное" включает холоднокровных и теплокровных позвоночных и
беспозвоночных, таких как рыбы, моллюски, рептилии и, в частности, млекопитающие. "Млекопитающее" включает, не ограничиваясь перечисленным, мышей; крыс; кроликов; морских свинок; собак; кошек; овец; коз; коров; лошадей; приматов, таких как обезьяны, шимпанзе и человекообразные обезьяны, и, в частности, человека.
Используемый здесь термин "пациент" относится к субъекту, который подвергается лечению, проводимому профессиональным врачом, например, доктором медицины (то есть доктором аллопатической медицины или доктором остеопатической медицины) или ветеринарным врачом, с целью достижения выздоровления или по меньшей мере улучшения состояния, вызываемого конкретным заболеванием или расстройством, или же прежде всего с целью предупреждения возникновения заболевания или расстройства.
Используемый здесь термин "введение" или "вводить" относится к способу введения дозировки фармацевтически активного ингредиента позвоночному.
Используемая здесь "дозировка" относится к количеству терапевтического средства, вводимого пациенту.
Используемая здесь "дневная доза" относится к общему количеству терапевтического средства, вводимого пациенту в день.
Используемый здесь термин "терапевтическое средство" означает вещество, которое эффективно в лечении заболевания или состояния.
Используемое здесь "терапевтически эффективное количество" или "фармацевтически эффективное количество" означает количество терапевтического средства, которое обладает терапевтическим эффектом. Дозировки фармацевтически активного ингредиента, которые применимы для лечения, являются терапевтически эффективными количествами. Таким образом, используемое здесь "терапевтически эффективное количество" означает такие количества терапевтического средства, которые вызывают требуемый терапевтический эффект, оцениваемый по результатам клинических испытаний и/или исследований на животных моделях заболеваний человека.
Используемый здесь термин "терапевтический эффект" связан с ослаблением в некоторой степени одного или нескольких из симптомов заболевания или расстройства. Например, терапевтический эффект может наблюдаться на уровне уменьшения субъективного дискомфорта, о котором сообщает субъект (например, уменьшение дискомфорта, которое отмечает сам пациент при анкетировании).
Аббревиатуры
BDL=лигатура желчного протока (bile duct ligation); ОР=орнитин, фенилацетат; LPS=липополисахарид; iNOS=индуцибельная синтаза окиси азота; eNOS=эндотелиальная синтаза окиси азота. Портальная гипертензия
Портальная гипертензия представляет собой повышение давления внутри портальной вены (вены, которая переносит кровь от пищеварительных органов к печени). Основные симптомы и осложнения портальной гипертензии включают, но не ограничены перечисленным, желудочно-кишечное кровотечение, например, черный дегтеобразный стул или кровь в стуле, или кровавая рвота в результате спонтанного прободения и кровотечения из варикозно расширенных вен; асцит, например, накопление жидкости в брюшной полости; энцефалопатию, например, спутанность сознания и беспамятство, вызванные слабым функционированием печени и оттоком крови от печени; а также сниженные уровни тромбоцитов или пониженное количество лейкоцитов.
Портальная гипертензия может быть симптомом или результатом состояния, лежащего в ее основе (например, расстройства печени), и, следовательно, субъект может иметь портальную гипертензию, которая ассоциирована с одним или несколькими состояниями. В некоторых воплощениях портальная ги-пертензия ассоциирована с заболеванием печени.
Неограничивающие примеры заболеваний печени включают внутрипеченочный холестаз (синдром Алажиля, билиарный цирроз печени), ожирение печени (алкогольное ожирение печени, синдром Рейе, или синдром Рея), тромбоз печеночных вен, гепатолентикулярную дегенерацию, гепатомегалию, абсцесс печени (амебный абсцесс печени), цирроз печени (алкогольный, билиарный и экспериментальный), алкогольные болезни печени (ожирение печени, гепатит, цирроз), паразитарные заболевания (действующий на печень эхинококкоз, фасциолез, амебный абсцесс печени), желтуху (гемолитическая, гепатоцеллю-лярная и холестатическая), холестаз, портальную гипертензию, гипертрофию печени, асцит, гепатит (алкогольный гепатит, гепатит, связанный с животными), хронический гепатит (аутоиммунный, гепатит В, гепатит С, гепатит D, индуцированный лекарственными средствами), токсический гепатит, вирусный гепатит человека (гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е), болезнь Вильсона, гранулема-тозный гепатит, вторичный билиарный цирроз, печеночную энцефалопатию, варикозное расширение вен, первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, печеночно-клеточную ангиому, гемангиому, желчные камни, печеночную недостаточность (печеночная энцефалопатия, острая печеночная недостаточность) и новообразования печени (ангиомиолипома, обызвествленные метастазы в
печень, метастазы в кистозную печень, эпителиальные опухоли, фиброламеллярная гепатокарцинома, фокальная нодулярная гиперплазия печени, аденома печени, гепатобилиарная кистозная аденома, гепа-тобластома, печеночно-клеточная карцинома, гепатома, рак печени, печеночная гемангиоэндотелиома, мезенхимальная гамартома, мезенхимальные опухоли печени, нодулярная регенеративная гиперплазия, доброкачественные опухоли печени (кисты печени [простые кисты, поликистозная болезнь печени, гепа-тобилиарная цистаденома, киста общего желчного протока], мезенхимальные опухоли [мезенхимальная гамартома, инфантильная гемангиоэндотелиома, гемангиома, печеночная пурпура, липомы, воспалительная псевдоопухоль, смешанные опухоли], эпителиальные опухоли [опухоли эпителия желчного протока (гамартома желчного протока, аденома желчного протока), печеночная (аденома, фокальная ноду-лярная гиперплазия, нодулярная регенеративная гиперплазия)], злокачественные опухоли печени [гепа-тоцеллюлярная, гепатобластома, печеночно-клеточная карцинома, холангиогенная, холангиоцеллюляр-ная карцинома, цистаденокарцинома, опухоли кровеносных сосудов, ангиосаркома, саркома Капоши, гемангиоэндотелиома, другие опухоли, эмбриональная саркома, фибросаркома, злокачественная лейо-миома, рабдомиосаркома, карциносаркома, тератома, карциноид, сквамозная раковая опухоль, первичная лимфома]), печеночную пурпуру, порфирию эритро-гепатическую, печеночную порфирию (острая перемежающаяся порфирия, хроническая гематопорфирия), синдром Цельвегера). В некоторых воплощениях печеночным расстройством является гепатит, цирроз, холестаз или печеночная недостаточность. В некоторых воплощениях субъект, страдающий от заболевания печени, имеет печеночную энцефалопатию.
В определенных воплощениях портальная гипертензия ассоциирована с хроническим заболеванием печени. В некоторых воплощениях хроническим заболеванием печени является цирроз. При циррозе рубцовая ткань препятствует току крови через печень, что вследствие этого приводит к портальной ги-пертензии. Повышенное давление в портальной вене вызывает развитие расширения вен (варикозное расширение вен), идущих поперек пищевода и желудка, в обход блокады. Давление при варикозном расширении вен повышается, и может произойти прободение. В некоторых воплощениях ослабление портальной гипертензии уменьшает вероятность возникновения печеночной энцефалопатии.
Портальная гипертензия может быть вызвана также тромбозом или тромбообразованием в портальной вене. Портальная гипертензия у человека и лабораторных животных может быть ассоциирована с гиперкинетической циркуляцией, вазодилятацией на участках, относящихся к внутренним органам, и со спленомегалией. Спленомегалия может приводить к весьма значительной панцитопении.
Лечение портальной гипертензии
В определенных воплощениях L-орнитин вводят субъекту совместно с фенилацетатом или фенил-бутиратом для лечения и/или предупреждения портальной гипертензии. В некоторых воплощениях L-орнитин вводят субъекту совместно с фенилацетатом или фенилбутиратом, с тем, чтобы отдалить возникновение портальной гипертензии или уменьшить вероятность ее возникновения. В определенных воплощениях лечение приводит к восстановлению функции печени (например, к увеличению кровоснабжения печени) и, таким образом, улучшает состояние при портальной гипертензии. В некоторых воплощениях функция печени восстанавливается частично. В определенных воплощениях функция печени восстанавливается полностью. Восстановление функции печени (например, увеличение кровоснабжения печени) может быть определено в результате одного или нескольких из следующих измерений: проведения аланин-трансаминазного теста (ALT), аспартат-аминотрансферазного теста (AST), альфа-глутатион^-трансферазного теста (GST), альбуминового теста (Alb), определения протромбинового времени и определения суммарных баллов (например, оценка тяжести печеночной недостаточности, согласно классификации Child в модификации Pugh). Кроме того, гемодинамика печени может быть измерена путем детекции печеночного тока крови и/или портального давления.
В некоторых воплощениях совместное введение L-орнитина с фенилацетатом или фенилбутиратом приводит к модуляции активности эндотелиальной синтазы окиси азота (eNOS) и, следовательно, к излечению или улучшению одного или нескольких симптомов, ассоциированных с пониженной активностью eNOS. В некоторых воплощениях пониженная активность eNOS ассоциирована с повышением уровня эндогенных ингибиторов синтазы окиси азота, включая кавеолин-1 и асимметричный диметиларгинин (ADMA). В некоторых воплощениях пониженная активность eNOS ассоциирована с повышением NFkB. В некоторых воплощениях пониженная активность eNOS ассоциирована с повышением содержания аммиака. В некоторых воплощениях пониженная активность eNOS ассоциирована с заболеванием печени, включая хроническое заболевание печени (например, цирроз) и острую печеночную недостаточность. В некоторых воплощениях совместное введение используется для лечения воспаления печени. В некоторых воплощениях совместное введение используется для улучшения функции систем органов, которые нарушают передачу сигналов окиси азота при заболеваниях печени (например, при циррозе).
В определенных воплощениях совместное введение используется для снижения уровня провоспа-лительных цитокинов, что дополнительно способствует излечению или уменьшению вероятности возникновения портальной гипертензии. В определенных воплощениях портальную гипертензию предотвращают у пациентов с имеющимся у них хроническим заболеванием печени, таким как цирроз, путем введения указанной комбинации. Таким образом, в определенных воплощениях указанную комбинацию вводят пациенту с хроническим заболеванием печени, имеющему также портальную гипертензию. В оп
ределенных воплощениях совместное введение используется для частичного или полного восстановления функции печени.
Не желая связывать себя какой бы то ни было конкретной теорией, авторы изобретения, тем не менее, полагают, что в определенных воплощениях совместное введение предотвращает или облегчает состояние портальной гипертензии через воздействие на пути, участвующие в воспалении. В определенных воплощениях снижение уровня воспалительных цитокинов и/или iNOS (индуцибельной синтазы окиси азота) приводит к частичному или полному восстановлению функции печени и излечению портальной гипертензии.
L-орнитин и фенилацетат или фенилбутират можно вводить раздельно или в составе единой дозированной формы. В одном из воплощений указанную комбинацию вводят в виде L-орнитина с солью фенилацетата или в виде раствора L-орнитина с солью фенилацетата.
Различные формы композиции L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата (или солей фенилацетата) и фенилбутирата, описаны в публикации патента США № US 2008/0119554 и в патентной заявке США № 12/753763, поданной 2 апреля 2010 г., которые в полном объеме включены в настоящее описание в виде ссылок. В некоторых воплощениях L-орнитин и фенилацетат представлены и/или вводятся в виде L-орнитинфенилацетата или его физиологически приемлемой соли. В некоторых воплощениях L-орнитин представлен и/или вводится в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, представлено и/или вводится в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия. В некоторых воплощениях субъекту вводят физиологически приемлемую соль L-орнитина и физиологически приемлемую соль по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата.
Защита от повреждения головного мозга
В других воплощениях L-орнитин совместно с фенилацетатом или фенилбутиратом вводят субъекту с острой печеночной недостаточностью или с острой декомпенсацией печени у субъектов с хроническим заболеванием печени для защиты от повреждения головного мозга. В некоторых воплощениях указанную комбинацию вводят профилактически субъекту, у которого есть риск развития острой печеночной недостаточности (например, субъекту с передозировкой таленола, у которого еще не развилась острая печеночная недостаточность), или субъекту с хроническим заболеванием печени без острой декомпенсации печени. Не желая связывать себя какой бы то ни было конкретной теорией, авторы изобретения, тем не менее, полагают, что в определенных воплощениях раннее введение L-орнитина с фенилаце-татом или фенилбутиратом пациенту с острой печеночной недостаточностью или с острой декомпенсацией печени может предотвратить развитие повреждения головного мозга через обусловленную ими супрессию путей, участвующих в воспалении, как было описано здесь выше.
Соответственно, в определенных воплощениях L-орнитин вводят совместно с фенилацетатом или фенилбутиратом перед или непосредственно после диагностирования острой печеночной недостаточности или острой декомпенсации печени, независимо от дальнейшего курса лечения, который может включать трансплантацию печени. В определенных воплощениях такое раннее введение предотвращает варикозное кровотечение, возникновение энцефалопатии, возникновение повышенного внутричерепного давления, наступление комы, необходимость в интубации и интенсивной ICU-терапии и ослабляет или вызывает обратное развитие гипераммониемии, и, таким образом, обеспечивает защиту от повреждения головного мозга, вызываемого такими осложнениями.
Фармацевтические композиции
В другом аспекте настоящее описание связано с фармацевтической композицией, содержащей физиологически приемлемые поверхностно-активные вещества, носители, разбавители, эксципиенты, сглаживающие вещества, суспендирующие вещества, вещества, образующие пленку, и вспомогательные покрывающие средства, или их сочетание; а также описанное здесь соединение. Приемлемые носители или разбавители для терапевтического применения известны специалистам в фармацевтической области и описаны, например, в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990), который в полном объеме включен в настоящее описание в виде ссылки. В указанную фармацевтическую композицию могут быть привнесены консерванты, стабилизаторы, красители, подсластители, ароматизирующие вещества, вкусовые добавки и пр. Например, в качестве консервантов могут быть добавлены бензоат натрия, аскорбиновая кислота и сложные эфиры парагидроксибензойной кислоты. Кроме того, могут быть использованы антиоксиданты и суспендирующие вещества. В различных воплощениях в качестве поверхностно-активных веществ могут быть использованы спирты, сложные эфиры, сульфатированные алифатические спирты и пр.; сахароза, глюкоза, лактоза, крахмал, кристаллическая целлюлоза, маннит, легкий безводный силикат, алюминат магния, магния метасиликата алюминат, искусственный силикат алюминия, карбонат кальция, кислый карбонат натрия, вторичный кислый фосфорнокислый кальций, кальцийкарбоксиметилцеллюлоза и пр. могут быть использованы в качестве эксципиентов; стеарат магния, тальк, гидрогенизированное масло и пр. могут быть использованы в качестве сглаживающих веществ; кокосовое масло, оливковое масло, кунжутное масло, арахисовое масло, соя могут быть использованы в качестве суспендирующих веществ или смазывающих веществ;
ацетатфталат целлюлозы как производное углевода, такого как целлюлоза или сахар, или сополимер ме-тилацетата и метакрилата как поливинильное производное могут быть использованы в качестве суспендирующих веществ; и смягчители, такие как сложные эфиры фталиевой кислоты и пр., могут быть использованы в качестве суспендирующих веществ.
Орнитин и фенилацетат и/или фенилбутират могут быть составлены для введения в составе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Орнитин и фенилацетат и/или фенилбутират могут быть составлены в виде лекарственного средства со стандартным фармацевтически приемлемым носителем (носителями) и/или эксципиентом (эксципиентами), как это обычно делается в фармацевтической области. Точная природа композиции будет зависеть от нескольких факторов, включая требуемый путь введения. Обычно орнитин и фенилацетат и/или фенилбутират составляют в композицию для перо-рального, внутривенного, внутрижелудочного, внутрисосудистого или внутрибрюшинного введения.
Термин "фармацевтическая композиция" относится к смеси соединения или соединений, описанных здесь выше, с другими химическими компонентами, такими как разбавители или носители. Фармацевтическая композиция облегчает введение соединения (соединений) в организм. В данной области существует множество технологий введения соединения, включая, но не ограничиваясь перечисленным, перо-ральное введение, введение в виде инъекции, аэрозольное, парентеральное и местное введение.
Фармацевтические композиции могут быть получены также в результате реакции соединения (соединений) с неорганическими или органическими кислотами, такими как хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, паратолуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и пр.
Термин "носитель" означает химическое соединение, которое облегчает встраивание соединения в клетки или ткани. Например, диметилсульфоксид (ДМСО) является обычно используемым носителем, поскольку он облегчает поглощение многих органических соединений клетками или тканями организма.
Термин "разбавитель" означает разбавленное в воде химическое соединение, которое будет способствовать растворению представляющего интерес соединения, а также будет способствовать стабилизации биологически активной формы указанного соединения. Соли, растворенные в буферных растворах, используют в данной области в качестве разбавителей. Одним из используемых обычно забуференных растворов является забуференный фосфатом физиологический раствор, поскольку он имитирует солевые условия человеческой крови. Поскольку буферные соли могут контролировать рН раствора при низких концентрациях, забуференный разбавитель редко модифицирует биологическую активность соединения.
Термин "физиологически приемлемый" означает носитель или разбавитель, который не аннулирует биологическую активность и свойства соединения.
Описанные здесь фармацевтические композиции могут быть введены человеку-пациенту как таковые или в виде фармацевтических композиций, в которых они смешаны с другими активными ингредиентами, в качестве комбинированной терапии, или с подходящими носителями или эксципиентами. Технологии составления и введения описанных здесь соединения или комбинации соединений можно найти в руководстве "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition, 1990.
В некоторых воплощениях предусмотрено описанное здесь соединение (соединения) или комбинация соединений в составе дозированных форм в виде таблеток, таблеток с пленочным покрытием, капсул, таблеток в форме капсул, пилюль, желатиновых капсул, гранул, бусинок или драже. Предпочтительно, чтобы описанные здесь композиции могли соответствовать качествам, благоприятствующим процессу изготовления лекарственных средств, включая, например, но не ограничиваясь перечисленным, быстрые скорости прессования таблеток, уменьшенную силу компрессии, уменьшенные усилия выталкивания, однородность гомогенизации, стандартное содержание, равномерное распределение красителя, ускоренное время разрыхления, быстрое растворение, низкую сыпучесть (предпочтительна для последующих процессов, таких как упаковка, погрузка, комплектация и упаковка, и т.п.) и физические характеристики дозированной формы (например, масса, твердость, толщина, сыпучесть), с небольшими вариациями.
Соединение (соединения) или комбинацию описанных здесь соединений можно легко составить, например, путем комбинирования веществ лекарственного средства с любым подходящим фармацевтически приемлемым эксципиентом (эксципиентами), например, но не ограничиваясь перечисленным, со связующими веществами, разбавителями, разрыхлителями, смазывающими веществами, наполнителями, носителями, покрывающими слоями, глидантами, ароматизаторами, окрашивающими добавками и пр., как указано выше. Такие композиции могут быть получены для хранения и для последующей обработки.
Эксципиенты
Приемлемые эксципиенты для терапевтического применения хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в руководствах Pharmaceutical Excipients, 5th edition (Raymond С. Rowe, Paul J. Sheskey and Sian С. Owen, eds. 2005), и Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition (Lippincott Williams & Wilkins, 2005), каждое из которых в полном объеме включено в настоящее описание в виде ссылки. Термин материал "носителя" или "эксципиента" может означать здесь любое вещество, которое как таковое не является терапевтическим средством и которое используется в качестве носителя и/или разбавителя и/или адъюванта, или наполнителя для доставки терапевтического средства субъ
екту, или добавляется в фармацевтическую композицию для улучшения ее свойств, связанных с доставкой или хранением, или для того, чтобы облегчить ее внедрение для применения, или чтобы облегчить составление единичной дозировки композиции в виде дискретного продукта, такого как капсула, таблетка, покрытая пленкой таблетка, пилюля, желатиновая капсула, гранула, бусинка или пр., подходящее для перорального введения. Эксципиенты могут включать, в порядке иллюстрации, но не для ограничения, разбавители, разрыхлители, связующие вещества, увлажнители, полимеры, вещества, способствующие скольжению, глиданты, вещества для поверхностного покрытия, подсластители, солюбилизирующие вещества, добавляемые для маскировки или нейтрализации неприятного вкуса или запаха, ароматизаторы, красители, отдушки и вещества, добавляемые для улучшения внешнего вида композиции.
Композиции и составы могут включать в себя любые другие средства, которые обеспечивают улучшенные условия для перевозки, доставки, толерантности и пр. Указанные композиции и составы могут включать в себя, например, порошки, пасты, желе, воски, масла, липиды, содержащие липид (ка-тионный или анионный) везикулы (такие как липофектин(tm)), ДНК-конъюгаты, безводные абсорбирующие пасты, эмульсии масло-в-воде и вода-в-масле, эмульсии карбовакс (полиэтиленгликоли разных молекулярных весов), полутвердые гели, а также полутвердые смеси, содержащие карбовакс.
Любая из указанных выше смесей может быть подходящей для лечения и терапии, согласно описанному выше, при условии, что активный ингредиент в композиции не подвержен инактивации под действием компонентов состава, и что указанный состав физиологически совместим и приемлем для конкретного пути введения. См. также Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance". Regul. Toxicol. Pharmacol. 32(2): 210-8 (2000), Charman WN "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts". J. Pharm. Sci. 89(8): 967-78 (2000), а также цитируемые в указанных источниках публикации в качестве дополнительной информации, связанной с композициями, эксципиентами и носителями, хорошо известной химикам-фармацевтам.
В некоторых воплощениях один или несколько эксципиентов, или же любая комбинация перечисленных эксципиентов, может быть специфическим образом включена или исключена из описанных здесь композиций и/или способов. Специалистам в данной области должно быть понятно, что количества экс-ципиентов будут определяться дозой лекарственного средства и размером лекарственной формы.
Смазывающие вещества
В некоторых воплощениях в производстве определенных лекарственных форм используются смазывающие вещества. Например, смазывающее вещество будет часто использовано при производстве таблеток. В некоторых воплощениях смазывающее вещество может быть добавлено непосредственно перед стадией таблетирования и может смешиваться с композицией в течение минимального времени, с получением надлежащего диспергирования. В определенных воплощениях могут быть использованы одно или несколько смазывающих веществ. Примеры подходящих смазывающих веществ включают в себя, но не ограничены перечисленным, стеарат магния, стеарат кальция, стеарат цинка, стеариновую кислоту, тальк, глицерилбегенат, полиэтиленгликоль, полимеры полиэтиленоксида (например, доступные под зарегистрированными торговыми марками Carbowax(r), в случае полиэтиленгликоля, и Polyox(r), в случае полиэтиленоксида от компании Dow Chemical Company, Midland, Mich.), лаурилсульфат натрия, лаурилсульфат магния, олеат натрия, стеарилфумарат натрия, DL-лейцин, коллоидный кремнезем и другие вещества, известные в данной области. Обычно смазывающими веществами являются стеарат магния, стеарат кальция, стеарат цинка и смеси стеарата магния с лаурилсульфатом натрия.
Добавки красителей
В определенных воплощениях могут быть включены также и добавки красителей. Красители могут быть использованы в количествах, достаточных для надежного визуального различения лекарственной формы. Предпочтительно, чтобы добавки красителей, одобренных для использования в лекарственных средствах (21 CFR 74, в полном объеме включено в настоящее описание в виде ссылки), добавлялись к коммерческим композициям для различения таблеток с разной интенсивностью действия. Применение других фармацевтически приемлемых красителей и их сочетаний также входит в объем, охватываемый настоящим описанием.
Связующие вещества
Связующие вещества могут быть использованы, например, для придания композиции вяжущих свойств и, таким образом, для гарантии того, что полученная лекарственная форма остается интактной после прессования. Подходящие связующие материалы включают, но не ограничены перечисленным, микрокристаллическую целлюлозу, желатин, сахара (включая, например, сахарозу, глюкозу, декстрозу и мальтодекстрин), полиэтиленгликоль, воски, природные и искусственные смолы, поливинилпирролидон, желатинированный крахмал, повидон, полимеры на основе целлюлозы (включая, например, гидрокси-пропилцеллюлозу (НРС), гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС), метилцеллюлозу, гидроксиэтилцел-люлозу и пр.), гидроксипропилцеллюлозу (НРС) и пр. Соответственно, в некоторых воплощениях описанные здесь композиции могут включать по меньшей мере одно связующее вещество для повышения прессуемости основного эксципиента (эксципиентов). В некоторых воплощениях связующее вещество (вещества) наносится (наносятся) путем распыления из раствора, например, путем мокрой грануляции,
для усиления связующей активности. Дезинтегрирующие средства
В некоторых воплощениях используются дезинтегрирующие средства, или разрыхлители, например, для облегчения дезинтеграции таблетки после ее введения, и обычно ими являются крахмалы, клеи, целлюлозы, альгины, смолы или поперечносшитые полимеры. Подходящие дезинтегрирующие средства включают, но не ограничены перечисленным, поперечносшитый поливинилпирролидон (PVP-XL), натрия гликолят крахмал, альгиновую кислоту, метакриловую кислоту DYB, микрокристаллическую целлюлозу, кросповидон, калий полакрилиновый, натрия гликолят крахмал, крахмал, прежелатинизирован-ный крахмал, кроскармеллозу натрия и пр. При необходимости фармацевтическая композиция может также содержать минорные количества нетоксичных вспомогательных материалов, таких как смачивающие или эмульгирующее вещества, рН-забуферивающие вещества и пр., например, ацетат натрия, сорби-танмонолаурат, триэтаноламинацетат натрия, олеат триэтаноламина, лаурилсульфат натрия, диоктил-сульфосукцинат натрия, полиоксиэтиленовый эфир сорбита и жирной кислоты, и т.п.
Поверхностные покрытия
В некоторых воплощениях композиции могут включать покрытие, например, покрывающую пленку. Когда в композицию включены пленочные покрытия, покрывающие вещества могут включать, например, пленкообразующий полимер, смягчитель или пр. Поверхностные покрытия могут включать также пигменты и/или замутнители. Неограничивающие примеры пленкообразующих полимеров включают в себя гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирро-лидон и крахмалы. Неограничивающие примеры смягчителей включают в себя полиэтиленгликоль, три-бутилцитрат, дибутилсебекат, касторовое масло и ацетилированный моноглицерид. Кроме того, неограничивающие примеры пигментов и замутнителей включают в себя железоокисные пигменты различной окраски, лаки-красители многих цветов, диоксид титана и пр.
Разбавители
В некоторых воплощениях используются разбавители, и обычно их выбирают из одного или нескольких из соединений сахарозы, фруктозы, глюкозы, галактозы, лактозы, мальтозы, инвертированного сахара, карбоната кальция, лактозы, крахмала, микрокристаллической целлюлозы, моногидрата лактозы, вторичного кислого фосфорнокислого кальция, безводного вторичного кислого фосфорнокислого кальция, фармацевтически приемлемого полиола, такого как ксилит, сорбит, малтит, маннит, изомальта и глицерина, полидекстрозы, крахмала или пр., или любой их смеси.
Поверхностно-активные вещества
В некоторых воплощениях используются поверхностно-активные вещества. Применение поверхностно-активных соединений в качестве смачивающих веществ в пероральных формах лекарственных средств описано в литературе, например у Н. Sucker, P. Fuchs, P. Speiser, Pharmazeutische Technologie, 2nd edition, Thieme 1989, p. 260. Из других статей, таких как публикации в Advanced Drug Delivery Reviews (1997), 23, pp. 163-183, известно, что поверхностно-активные вещества можно использовать также, помимо прочего, и для улучшения проницаемости и биодоступности фармацевтически активных соединений. Примеры поверхностно-активных соединений включают в себя, но не ограничены перечисленным, анионные поверхностно-активные вещества, неанионные поверхностно-активные вещества, цвиттерион-ные поверхностно-активные вещества и их смеси. Предпочтительно, чтобы поверхностно-активные соединения были выбраны из группы, состоящей из поли(оксиэтиленового) эфира сорбита и жирной кислоты, поли(оксиэтиленового) стеарата, поли(оксиэтиленового) алкилового эфира, полигликолированно-го глицерида, поли(оксиэтиленового) касторового масла, эфира сорбита и жирной кислоты, полоксамера, соли жирной кислоты, соли желчной кислоты, алкилсульфата, лецитина, смешанных мицелл соли желчной кислоты и лецитина, сложного эфира глюкозы и витамина Е TPGS (D-а-токоферил-полиэтилен-гликоль-1000-сукцинат), лаурилсульфата натрия и пр., а также их смесей.
Глиданты (скользящие вещества)
В определенных воплощениях используются скользящие вещества. Примеры скользящих веществ, которые могут быть использованы, включают в себя, но не ограничены перечисленным, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, порошкообразную целлюлозу, крахмал, тальк и фосфат кальция или подобные им вещества, а также их смеси.
Подходящие пути введения включают, например, пероральное, ректальное введение, введение через слизистую, местное или интестинальное введение; парентеральную доставку, включая внутримышечные, подкожные, внутривенные, интрамедуллярные инъекции, также как и интратекальные, прямые интравентрикулярные, внутрибрюшинные, интраназальные или внутриглазные инъекции. Описанное здесь соединение или комбинация соединений могут быть введены также в составе дозированных форм с непрерывным или контролируемым высвобождением, включая инъекцию веществ замедленного всасывания, осмотические насосы, пилюли, трансдермальные пластыри (включая электропереносные) и пр., для пролонгированного и/или синхронизированного введения, введения в импульсном режиме с предопределенной скоростью.
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут быть изготовлены способом, который известен как таковой, например, путем обычного смешивания, растворения, грануляции, изготовления
драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсуляции, захвата с помощью улавливателей или процесса изготовления таблеток.
Фармацевтические композиции для применения в соответствии с настоящим изобретением могут, таким образом, быть получены общепринятым способом с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, содержащих эксципиенты и вспомогательные средства, которые облегчают технологические операции с активными соединениями в составе препаратов, которые являются фармацевтически приемлемыми для применения. Собственно состав композиции зависит от выбранного пути введения. Могут быть использованы любые подходящие и хорошо известные в данной области технологии, носители и эксципиенты; например, такие, которые указаны, как было сказано выше, в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences.
Инъецируемые препараты могут быть получены в обычных формах, либо в виде жидких растворов или суспензий, либо в твердых формах, подходящих для растворения или суспендирования в жидкости непосредственно перед инъекцией, или же в виде эмульсий. Подходящими эксципиентами являются, например, вода, физиологический раствор, декстроза, маннит, лактоза, лецитин, альбумин, глутамат натрия, цистеингидрохлорид и пр. Кроме того, в случае необходимости, инъецируемые фармацевтические композиции могут содержать минорные количества нетоксичных вспомогательных материалов, таких как смачивающие или эмульгирующие вещества, рН-забуферивающие вещества и пр. Физиологически приемлемые буферы включают, но не ограничены перечисленным, раствор Хэнкса, раствор Рингера или забуференный физиологический раствор. В случае необходимости, могут быть использованы усиливающие абсорбцию препараты (например, липосомы).
Для введения через слизистую, в композиции могут быть использованы пенетранты (проникающие вещества), в соответствии конкретно с тем барьером, который предстоит преодолеть.
Фармацевтические композиции для парентерального введения, например, посредством болюсной инъекции или непрерывной инфузии, включают водные растворы активных соединений в водорастворимой форме. Кроме того, суспензии активных соединений могут быть получены в виде приемлемых масляных инъецируемых суспензий. Подходящие липофильные растворители или наполнители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или другие органические масла, такие как масло соевых бобов, грейпфрутовое или миндальное масла, или же искусственные эфиры жирных кислот, такие как эти-лолеат или триглицериды, или липосомы. Водные инъецируемые суспензии могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как натриевая карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или дек-стран. Необязательно, такие суспензии могут содержать также соответствующие стабилизаторы или средства, которые повышают растворимость соединений, давая возможность изготавливать высококонцентрированные растворы. Составы для инъекций могут быть представлены в единичной дозированной форме, например, в ампулах, или же в контейнерах, содержащих мультидозы, с добавленными консервантами. Композиции могут принимать такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных наполнителях, и могут содержать средства, формирующие композицию, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства. Альтернативно, активный ингредиент может быть представлен в виде порошка, с тем, чтобы перед использованием его можно было бы вводить в состав с подходящим наполнителем, например, стерильной апирогенной водой.
Для перорального введения описанные здесь соединение (соединения) или комбинация соединений могут быть легко составлены путем объединения активного соединения с фармацевтически приемлемыми носителями, хорошо известными в данной области. Такие носители позволяют осуществить включение описанного здесь соединения или комбинации соединений в состав таблеток, покрывающих таблетки пленок, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, наборных капсул, гранул, бусинок, сиропов, кашиц, суспензий и пр., для перорального проглатывания подвергающимся лечению пациентом. Фармацевтические композиции для перорального применения могут быть получены путем объединения активного соединения с твердым эксципиентом, необязательного измельчения полученной смеси и превращения полученной смеси в гранулы, после добавления, в случае необходимости, соответствующих вспомогательных веществ, с получением таблеток или драже, содержащего сердцевину. Подходящими для этого экс-ципиентами являются, в частности, наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; препараты целлюлозы, такие, например, как кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, гидроксипро-пилметилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон (PVP). В случае необходимости, могут быть добавлены дезинтегрирующие вещества, такие как поперечносшитый поливи-нилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия. Драже, содержащее сердцевину, производят с соответствующими покрытиями. Для этих целей могут быть использованы концентрированные растворы сахаров, которые могут необязательно содержать гуммиарабик, тальк, по-ливинилпирролидон, карбополевый гель, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, лакирующие растворы и соответствующие органические растворители или смеси растворителей. Окрашивающие вещества или пигменты могут быть добавлены к покрывающим составам таблеток или драже для идентификации или для того, чтобы можно было различать разные комбинации доз активных соединений. Для этих целей могут быть использованы концентрированные растворы сахаров, которые необязательно могут со
держать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, карбополевый гель, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, лакирующие растворы и соответствующие органические растворители или смеси растворителей. Окрашивающие вещества или пигменты могут быть добавлены к покрывающим составам таблеток или драже для идентификации или для того, чтобы можно было различать разные комбинации доз активных соединений. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Все композиции для перораль-ного введения должны быть представлены в дозах, подходящих для такого способа введения. В некоторых воплощениях описаны составы описанных здесь соединений (соединения) или комбинаций соединений с приемлемым профилем растворения при немедленном высвобождении, а также надежный, масштабный способ производства.
Фармацевтические препараты, которые могут быть использованы для перорального введения, включают "push-fit''-капсулы (капсулы, вручную выдвигающиеся из упаковки), сделанные из желатина, а также твердые, герметичные капсулы, сделанные из желатина и смягчителя, такого как глицерин или сорбит. "Push-fit''-капсулы могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, связующими веществами, такими как крахмалы, и/или смазывающими веществами, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в соответствующих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Все композиции для перорального введения должны быть представлены в дозировках, приемлемых для такого способа введения.
В случае буккального введения композиции могут быть представлены в виде составленных обычным способом таблеток или пластинок.
Для введения путем ингаляции описанные здесь соединение или комбинация соединений обычно доставляются в виде распыляемого аэрозоля, подаваемого из спрессованных герметичных упаковок или из небулайзера с помощью соответствующего пропеллента, например, дихлордифторметана, трихлор-фторметана, дихлортетрафторэтана, двуокиси углерода или другого подходящего газа. В случае спрессованного распыляемого аэрозоля дозированную единицу можно определить, обеспечив клапан для доставки определенного отмеренного количества. Капсулы и картриджи, например, из желатина, для использования в ингаляторе или инсуффляторе могут быть составлены таким образом, чтобы они содержали порошковую смесь соединения с соответствующей порошковой основой, такой как лактоза или крахмал.
Кроме того, здесь описаны различные фармацевтические композиции, хорошо известные в области фармацевтической промышленности, для таких применений, которые включают внутриглазную, интра-назальную и внутриушную доставку. Подходящие для таких применений проникающие вещества в основном известны в данной области. Фармацевтические композиции для внутриглазной доставки включают водные офтальмические растворы активных соединений в растворенной в воде форме, такие как глазные капли, или в виде геллановой камеди (Shedden et al., Clin. Ther., 23(3): 440-50 (2001)) или гидрогелей (Mayer et al., Ophthalmologica, 210(2): 101-3 (1996)); в виде офтальмических мазей; офтальмических суспензий, например, микрочастиц, малых полимерных частиц, содержащих лекарственное средство, которые суспендированы в жидкой среде-носителе (Joshi, A., J. Ocul. Pharmacol., 10(1): 29-45 (1994)), в виде жирорастворимых композиций (Aim et al., Prog. Clin. Biol. Res., 312: 447-58 (1989)), и микросфер (Mordenti, Toxicol. Sci., 52(1): 101-6 (1999)); а также глазные приспособления. Все указанные выше публикации в полном объеме включены в настоящее описание в виде ссылок. Подходящие для указанных случаев фармацевтические композиции чаще всего и предпочтительно составляют в виде стерильных изотонических и забуференных композиций для повышения стабильности и комфорта. Фармацевтические композиции для интраназальной доставки могут включать также капли и спреи, часто изготавливаемые для всевозможной стимуляции носовой секреции, с тем, чтобы обеспечить поддержание нормального реснитчатого механизма. Как описано в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990), которое в полном объеме включено в настоящее описание в виде ссылки и хорошо знакомо специалистам в данной области, подходящие для этого фармацевтические композиции чаще всего и предпочтительно представляют собой изотонические и слегка забуферен-ные композиции для поддержания рН в диапазоне от 5,5 до 6,5, и которые чаще всего включают проти-вомикробные консерванты и соответствующие стабилизаторы лекарственных средств.
Фармацевтические композиции для внутриушной доставки включают суспензии и мази для местного нанесения в ухо. Обычные растворители для таких ушных композиций включают глицерин и воду.
Описанные здесь соединения (соединение) или комбинации соединений могут также входить в состав ректальных композиций, таких как суппозитории или удерживающие клизмы, например, содержащие обычные вещества-основы для таких суппозиториев, такие как масло какао или другие глицериды.
Помимо описанных здесь ранее композиций, описанные здесь соединения или комбинации соединений могут быть составлены также в виде депонируемого препарата. Такие композиции длительного действия могут быть введены путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Таким образом, например, описанные здесь соединение или комбинации соединений могут быть составлены также с соответствующими полимерными или гидрофобными мате
риалами (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или с ионообменными смолами, или в виде медленно растворимых производных, например, в виде медленно растворимой соли.
В случае гидрофобных соединений подходящим фармацевтическим носителем может служить система сорастворителя, содержащая бензиловый спирт, неполярное поверхностно-активное вещество, водорастворимый органический полимер и водную фазу. Обычно используемой системой сорастворителя является система сорастворителя VPD, которая представляет собой раствор 3% вес./об. бензилового спирта, 8% вес./об. неполярного поверхностно-активного полисорбата-80(tm) и 65% вес./об. полиэтиленг-ликоля-300, доводимый до полного объема абсолютным этанолом. Разумеется, указанные соотношения системы сорастворителя можно существенно варьировать, не нарушая ее растворимости и свойств, связанных с ее токсичностью. Более того, может изменяться также идентичность компонентов системы со-растворителя: например, вместо полисорбата-80(tm) могут быть использованы другие низкотоксичные неполярные поверхностно-активные соединения; может варьировать относительное содержание полиэти-ленгликоля; полиэтиленгликоль могут заменить другие биосовместимые полимеры, например, поливи-нилпирролидон; также как и другие сахара или полисахариды могут заменить декстрозу.
Альтернативно, могут быть использованы и другие системы доставки гидрофобных фармацевтических соединений. Липосомы и эмульсии являются удачными примерами наполнителей или носителей для доставки гидрофобных лекарственных средств. Могут быть использованы также и определенные органические растворители, такие как диметилсульфоксид, хотя и, как правило, за счет более высокой токсичности. Кроме того, указанные соединения могут быть доставлены с помощью систем с непрерывным высвобождением, таких как полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащие терапевтическое средство. Созданы различные вещества с непрерывным высвобождением, и такие материалы хорошо известны специалистам в данной области. Капсулы с непрерывным высвобождением могут, в зависимости от их химической природы, высвобождать соединения в течение периода от нескольких недель до 100 дней и более. В зависимости от химической природы и биологической стабильности терапевтического реагента, для стабилизации белков могут быть использованы и дополнительные стратегии.
Средства, предназначенные для внутриклеточного введения, можно вводить с помощью технологий, хорошо известных рядовым специалистам в данной области. Например, такие средства могут быть инкапсулированы в липосомы. Все молекулы, присутствующие в водном растворе во время образования липосом, оказываются включенными во внутреннюю водную фазу липосом. С одной стороны, содержимое липосом защищено от внешней микросреды, а с другой стороны, поскольку липосомы сливаются с клеточными мембранами, оно эффективно доставляется в цитоплазму клеток. Липосома может быть покрыта тканеспецифичным антителом. Липосомы будут нацелены на определенные органы и будут селективно ими поглощаться. Альтернативно, низкомолекулярные гидрофобные органические молекулы могут быть непосредственно введены внутриклеточно.
В фармацевтические композиции могут быть включены дополнительные терапевтические или диагностические средства. Альтернативно, или дополнительно, фармацевтические композиции можно комбинировать с другими композициями, которые содержат другие терапевтические или диагностические средства.
Способы введения
Описанные здесь соединения (соединение) или комбинации соединений, или фармацевтические композиции могут быть введены пациенту любым из подходящих способов. Неограничивающие примеры способов введения включают в себя, помимо прочих, (а) введение через оральные пути, которые включают введение капсул, таблеток, гранул, аэрозоля, сиропа или прочих подобных форм; (b) введение не через оральные пути, такое как ректальное, вагинальное, интрауретральное, внутриглазное, интрана-зальное или внутриушное, которое включает введение в виде водной суспензии, масляного препарата или прочего, или же капельным способом, в виде аэрозоля, суппозитория, мази, притирки или т.п.; (с) введение путем инъекции, подкожно, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, интрадермально, интраорбитально, интракапсулярно, интраспинально, интрастернально или прочим образом, включая доставку через инфузионный насос; (d) локальное введение, например, путем инъекции непосредственно в область почки или в кардиальную область, например, путем имплантации композиции пролонгированного действия; а также (е) местное введение; приведение описанного здесь соединения или комбинации соединений, в случаях, когда специалисты в данной области находят это уместным, в контакт с живой тканью.
Фармацевтические композиции, подходящие для введения, включают композиции, в которых описанное здесь соединение (соединения) или комбинации соединений содержатся в количестве, эффективном для достижения намеченной цели. Терапевтически эффективное количество описанного здесь соединения или комбинации соединений, необходимое в качестве одинарной дозы, будет зависеть от пути введения, типа животного, включая человека, подвергающегося лечению, и физических характеристик специфического испытуемого животного. Указанная доза может быть специально подобрана для достижения требуемого эффекта, но она будет зависеть от таких факторов, как вес, диета, совместное лечение,
и других факторов, которые известны специалистам в области медицины. Более конкретно, терапевтически эффективное количество означает количество соединения, эффективное для предотвращения, облегчения или смягчения симптомов заболевания или увеличения срока выживания субъекта, подвергающегося лечению. Определение терапевтически эффективного количества находится в рамках компетентности специалистов в данной области, особенно в свете приведенного здесь подробного описания.
Как должно быть понятно специалистам в данной области, эффективная in vivo дозировка, которую следует вводить, и конкретный способ введения будут варьировать в зависимости от возраста, веса и вида подвергаемого лечению млекопитающего, и специфического применения, для которого используется описанное здесь соединение или комбинация соединений. Определение эффективных уровней дозировки, то есть уровней дозировки, необходимой для достижения требуемого результата, может быть осуществлено специалистом в данной области с помощью рутинных фармакологических методов. Обычно клиническое применение продуктов в отношении человека начинают с низких уровней дозировок, с повышением дозы до тех пор, пока не будет достигнут требуемый эффект. Альтернативно, могут быть использованы приемлемые исследования in vitro с целью установления эффективнх доз и путей введения композиций, идентифицируемых описанными здесь способами с использованием установленных фармакологических методов.
Используемый здесь термин "дозировка" относится к суммарному количеству активных ингредиентов (например, L-орнитина и фенилацетата или фенилбутирата).
При исследовании животных, отличных от человека, применение потенциальных продуктов начинают с более высоких уровней дозировок, с последующим уменьшением дозы до тех пор, пока требуемый эффект уже перестанет достигаться или исчезнут побочные нежелательные эффекты. Дозировка может варьировать в широких пределах, в зависимости от требуемых эффектов и от терапевтических показаний. Обычно дозировки могут приблизительно составлять от 0,1 до 4000 мг/кг веса тела, предпочтительно приблизительно от 80 до 1600 мг/кг веса тела. Альтернативно, дозировки, как считают специалисты в данной области, могут быть основаны и рассчитаны по площади поверхности пациента.
В зависимости от степени тяжести и реактивности состояния, подвергаемого лечению, введение доз может представлять собой также единственное введение композиции с замедленным высвобождением, с курсом лечения, длящимся от нескольких дней до нескольких недель или до тех пор, пока не будет достигнуто выздоровление или ослабление болезненного состояния. Количество композиции, которое следует вводить, будет, конечно, зависеть от многих факторов, включая конкретного субъекта, подвергаемого лечению, тяжести заболевания, способа введения, правильности предписания лечащего врача. Описанные здесь соединения или комбинация соединений могут быть введены перорально или путем инъекции в дозе от 0,1 до 4000 мг/кг веса тела пациента в день. Интервал доз для взрослого человека обычно варьирует от 1 г до 100 г/день. Таблетки или другие формы представления, обеспечиваемые в виде дискретных единиц, обычно могут содержать количество описанного здесь соединения или комбинации соединений, которое является эффективным при такой дозировке или при многократном ее введении, например, при единичных дозах, составляющих от 1 г до 60 г (например, приблизительно от 5 г до 20 г, приблизительно от 10 г до 50 г, приблизительно от 20 г до 40 г, или приблизительно от 25 г до 35 г). Предписанное количество соединения, вводимого пациенту, будет на ответственности лечащего врача. Однако используемая доза будет зависеть от целого ряда факторов, включая возраст и пол пациента, конкретное расстройство, подвергаемое лечению, и степень его тяжести. Может варьировать также и путь введения, в зависимости от состояния и степени его тяжести. Типичная доза орнитина или фенил-ацетата, или фенилбутирата, в зависимости от указанных параметров, составляет от 0,02 г до 1,25 г на кг веса тела, например, от 0,1 г до 0,5 г на кг веса тела. В некоторых воплощениях доза орнитина или фе-нилацетата, или фенилбутирата может составлять от 1 г до 100 г, например, от 10 г до 80 г, от 15 г до 60 г, от 20 г до 40 г или от 25 г до 35 г. В некоторых воплощениях орнитин и фенилацетат/фенилбутират может быть введен в весовом соотношении от 10:1 до 1:10, например, от 5:1 до 1:5, от 4:1 до 1:4, от 3:1 до 1:3, от 2:1 до 1:2 или приблизительно 1:1. Врач сможет определить требуемую дозировку орнитина и фенилацетата или фенилбутирата для любого конкретного субъекта.
Точный состав, путь введения и дозировку фармацевтических композиций описанного здесь соединения или комбинации соединений могут быть выбраны индивидуальным врачом в зависимости от состояния пациента (см., например, Fingl et al. 1975, "The Pharmacological Basis of Therapeutics", который включен в настоящее описание в виде ссылки, в частности, см. главу 1). Обычно диапазон доз вводимой пациенту композиции может составлять приблизительно от 0,1 примерно до 4000 мг/кг веса тела пациента. Дозировка может быть однократной или может состоять из серии, состоящей из двух или более дозировок, вводимых в курсе лечения, составляющем один или несколько дней, в зависимости от нужд пациента. В случаях, когда дозировки соединений для человека установлены по меньшей мере для некоторых состояний, в настоящем описании будет предписано использовать те же самые дозировки или дозировки, которые составляют приблизительно от 0,1% и примерно до 5000%, более предпочтительно приблизительно от 25% и примерно до 1000% от установленной дозы для человека. Когда доза для человека не установлена, как это будет иметь место в случае вновь изобретенных фармацевтических соединений, соответствующая дозировка для человека может быть выведена на основании значений ED50 или ID50,
или других соответствующих значений, полученных на основании исследований in vitro или in vivo, которые квалифицируются как исследования токсичности и эффективности препаратов на животных.
Следует отметить, что лечащему врачу должно быть известно, как и когда закончить, прервать или внести поправку в лечение, в зависимости от токсичности или органных дисфункций. И наоборот, лечащему врачу должно быть известно, как и когда довести лечение до более высоких уровней, если клинический ответ был неадекватным (исключающих токсичность). Величина вводимой дозы при лечении представляющего интерес расстройства будет варьировать в зависимости от тяжести подвергаемого лечению состояния и от пути введения. Тяжесть состояния может быть оценена, например, отчасти на основании стандартных методов прогностических оценок. Кроме того, доза и, возможно, частота введения доз также будут варьировать в зависимости от возраста, веса тела и реактивности индивидуального пациента. Программа, сравнимая с таковой, описанной выше, может быть использована в ветеринарной практике.
Хотя точная дозировка будет определяться в зависимости от конкретного лекарственного средства, в большинстве случаев могут быть сделаны некоторые обобщения относительно дозировки. В случаях введения фармацевтически приемлемой соли дозировки могут быть рассчитаны как для свободного основания. В некоторых воплощениях композицию вводят от 1 до 4 раз в день. Альтернативно, описанная здесь композиция соединения или комбинация соединений может быть введена путем непрерывной внутривенной инфузии, предпочтительно при дозе каждого активного ингредиента, составляющей вплоть до 100 г в день. Как должно быть понятно специалистам в данной области, в определенных ситуациях может оказаться необходимым введение описанного здесь соединения в количестве, превышающем или даже значительно превышающем указанные выше предпочтительные диапазоны доз, с тем, чтобы осуществить эффективное и интенсивное лечение, в частности, агрессивных заболеваний или инфекций. В некоторых воплощениях описанное здесь соединение или комбинация соединений будет вводиться в течение некоторого периода непрерывной терапии, например, в течение недели или более или же в течение месяцев или лет.
В некоторых воплощениях режимом дозирования описанного здесь соединения (соединений) или комбинации соединений является введение в течение периода времени, где указанный период может составлять, например, по меньшей мере приблизительно от 1 недели до по меньшей мере приблизительно 4 недель, по меньшей мере приблизительно от 4 недель до по меньшей мере приблизительно 8 недель, по меньшей мере приблизительно от 4 недель до по меньшей мере приблизительно 12 недель, по меньшей мере приблизительно от 4 недель до по меньшей мере приблизительно 16 или более недель. Режим дозирования описанного здесь соединения (соединений) или комбинации соединений может соответствовать трехкратному введению в день, двукратному введению в день, ежедневному введению, введению через день, трехкратному введению в неделю, введению раз в две недели, трехкратному введению в месяц, однократному введению в месяц, непрерывному или по существу непрерывному.
В определенных воплощениях предусмотрен способ применения эффективного количества описанного здесь соединения (соединений) или комбинации соединений при лечении портальной гипертензии и/или восстановлении функции печени у пациента, предусматривающий введение указанному пациенту дозировки описанного здесь соединения (соединений) или комбинации соединений, содержащей количество, приблизительно составляющее от 1 г до примерно 100 г лекарственного средства на дозу описанного здесь соединения или комбинации соединений, перорально три раза в месяц, один раз в месяц, один раз в неделю, один раз каждые три дня, один раз каждые два дня, один раз в день, два раза в день или три раза в день, непрерывно или, по существу, непрерывно, в течение периода, необходимого для лечения.
В определенных воплощениях предусмотрен способ применения эффективного количества описанного здесь соединения (соединений) или комбинации соединений при лечении портальной гипертензии и/или восстановлении функции печени у пациента, предусматривающий введение указанному пациенту дозировки описанного здесь соединения или комбинации соединений, содержащей количество приблизительно от 0,1 мг до примерно 4000 мг лекарственного средства на килограмм веса тела на дозу описанного здесь соединения или комбинации соединений, перорально три раза в месяц, один раз в месяц, один раз в неделю, один раз каждые три дня, один раз каждые два дня, один раз в день, два раза в день или три раза в день, непрерывно или, по существу, непрерывно, в течение периода, необходимого для лечения.
Количество дозировки и интервал могут быть откорректированы индивидуально с целью обеспечения уровней активного компонента в плазме, которых достаточно для поддержания модулирующих эффектов или минимальной эффективной концентрации (МЕС). Показатель МЕС будет варьировать для каждого соединения, но он может быть установлен на основании данных in vitro. Дозировки, необходимые для достижения МЕС, будут зависеть от индивидуальных характеристик и пути введения. Однако анализы ВЭЖХ или биоанализы могут быть использованы для определения концентраций в плазме.
Диапазоны доз также могут быть определены с помощью показателя МЕС. В определенных воплощениях композиции могут вводиться в режиме, который способствует поддержанию уровней в плазме выше значения МЕС в течение 10-90% времени, например, в течение 15-30%, 20-45%, 25-50%, 30-55%, 35-60%, 40-65%, 45-70%, 50-75%, 55-80%, 60-90%, 65-75%, 70-80%, 75-85%, 15-90%, 20-90%, 25-90%, 3090%, 35-90%, 40-90%, 45-90%, 50-90%, 55-90%, 60-90%, 65-90%, 70-90%, 75-90% или 80-90% времени. В
некоторых воплощениях композиции могут вводиться в режиме, который способствует поддержанию уровней в плазме выше значения МЕС в течение 20-90% времени. В определенных воплощениях композиции могут вводиться в режиме, который способствует поддержанию уровней в плазме выше значения МЕС в течение 30-90% времени, в течение 40-90%, а чаще всего, в течение 50-90% времени.
В случаях локального введения или селективного поглощения эффективная локальная концентрация лекарственного средства может быть не связана с концентрацией в плазме.
Количество вводимой композиции может зависеть от подвергаемого лечению конкретного субъекта, от веса субъекта, тяжести поражения, способа введения и решения лечащего врача.
Описанные здесь соединения (соединение) или комбинации соединений с помощью известных методов могут быть оценены в отношении их эффективности и токсичности. Например, токсикология описанных здесь соединений или комбинации соединений может быть установлена путем определения токсичности in vitro в отношении клеточной линии, например, линии клеток млекопитающего, а предпочтительно линии клеток человека. Результаты таких исследований часто являются предсказательными в отношении токсичности на животных, таких как млекопитающие или, более конкретно, человек. Альтернативно, токсичность описанного здесь соединения или комбинации соединений на животных моделях, таких как мыши, крысы, кролики или обезьяны, может быть определена с помощью известных методов. Эффективность описанного здесь соединения или комбинации соединений может быть установлена с помощью нескольких известных способов, таких как методы in vitro, животные модели или клинические испытания на человеке. Известные модели in vitro существуют почти для каждого класса состояний, включая, но не ограничиваясь ими, злокачественные опухоли, сердечно-сосудистые заболевания и различного рода иммунные дисфункции. Сходным образом, для установления эффективности химических соединений в отношении лечения таких состояний могут быть использованы приемлемые животные модели. При выборе модели для определения эффективности специалисты в данной области могут воспользоваться достижениями предшествующего уровня техники для выбора соответствующей модели, дозы, а также пути и режима введения. Безусловно, клинические испытания на человеке также могут быть использованы для определения эффективности соединения в отношении организма человека.
В случае необходимости композиции могут быть представлены в упаковке или в кассетном контейнере, который может содержать одну или несколько форм дозированных единиц, содержащих активный ингредиент. Указанная упаковка может, например, содержать металлическую или пластиковую фольгу, такую как блистерная упаковка. Указанная упаковка или кассетный контейнер могут быть снабжены инструкциями в отношении введения. Указанная упаковка или кассетный контейнер могут также быть снабжены связанной с контейнером заметкой в виде предписания правительственного учреждения, контролирующего производство, применение или продажу фармацевтических препаратов, в которой будет отражено, что данный препарат одобрен указанным учреждением в виде лекарственного средства, предназначенного для введения человеку или для ветеринарного применения. Такой заметкой может быть, например, этикетка, одобренная Управлением США по контролю за продуктами и лекарствами в отношении отпускаемых по рецепту лекарственных средств, или вкладыш, уведомляющий о том, что данный продукт одобрен. Композиции, содержащие описанное здесь соединение или комбинацию соединений, составленные в совместимом фармацевтическом носителе, могут быть также получены, помещены в соответствующий контейнер и снабжены этикеткой с инструкциями в отношении лечения указанного состояния.
Эффективное количество описанного здесь соединения (соединений) или комбинации соединений может быть определено специалистом в данной области. Должно быть очевидно, что специфический уровень дозировки и частота введения дозировок для любого конкретного субъекта может варьировать и будет зависеть от различных факторов, включая активность используемого специфического соединения, метаболическую стабильность и продолжительность действия указанного соединения, а также вид, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и диета субъекта, характер и время введения, скорость экскреции, комбинация лекарственных средств и степень тяжести конкретного состояния. Предпочтительные для лечения субъекты включают животных, наиболее предпочтительно млекопитающих, таких как человек и домашние животные, например, собаки, кошки и пр., подверженные портальной гипертензии.
Таким образом, здесь описаны также фармацевтические композиции, содержащие в эффективном количестве описанное здесь соединение (соединения) или комбинации соединений и способные лечить портальную гипертензию, и содержащие также фармацевтически приемлемый наполнитель или разбавитель. Композиции, представленные в настоящем описании, могут, как описано выше, содержать также и другие терапевтические средства и могут быть составлены, например, с использованием стандартных твердых или жидких наполнителей или разбавителей, а также фармацевтических добавок того типа, который соответствует требуемому способу введения (например, эксципиентов, связующих веществ, консервантов, стабилизаторов, вкусовых добавок и т.п.), в соответствии с технологиями, которые хорошо известны в области фармацевтического производства или которые предусмотрены общепринятой фармацевтической промышленностью.
Описанное здесь соединение (соединения) или комбинации соединений могут быть введены любым подходящим способом, например, перорально, например, в виде таблеток, капсул, гранул или порошков;
подъязычно; буккально; парентерально, например, подкожно, внутривенно, внутримышечно или интра-стернально путем инъекции или с использованием инфузионных технологий (например, в виде стерильно инъецируемых водных или неводных растворов или суспензий); назально, например, путем распылительной ингаляции; местно, например, в виде крема или мази; или ректально, например, в виде суппозиториев; в виде композиций в однократной дозировке, содержащих нетоксические фармацевтически приемлемые наполнители или разбавители.
Описанное здесь соединение (соединения) или комбинации соединений могут быть введены, например, в виде композиций, подходящих для немедленного высвобождения или для длительного высвобождения. Немедленное высвобождение или длительное высвобождение могут быть достигнуты применением соответствующих фармацевтических композиций, содержащих соединение (соединения) или комбинации соединений, или - в частности, в случае замедленного высвобождения - с использованием таких устройств, как подкожные имплантаты или осмотические насосы.
Описанные здесь соединение (соединения) или комбинации соединений могут быть введены также липосомально. Например, активное вещество может быть использовано в композиции, такой как таблетка, капсула, раствор или суспензия, содержащей описанное здесь соединение или комбинацию соединений, или в виде композиции для местного введения для ранозаживления (содержащей от 0,01 до 5 вес.% описанного здесь соединения или комбинации соединений, от 1 до 5 обработок в день).
Описанные здесь соединение (соединения) или комбинация соединений могут быть стандартным образом объединены с физиологически приемлемым наполнителем или носителем, эксципиентом, связующим веществом, консервантом, стабилизатором, вкусовой добавкой и т.п., или с носителем для местного применения.
Описанные здесь соединение (соединения) или комбинация соединений могут быть также составлены в композиции, такие как стерильные растворы или суспензии для парентерального введения. Описанные здесь соединение или комбинация соединений могут быть объединены с физиологически приемлемым наполнителем, носителем, эксципиентом, связующим веществом, консервантом, стабилизатором и т.п., в составе единичной дозированной формы, как предусмотрено общепринятой фармацевтической практикой.
Количество активного вещества в указанных композициях или препаратах является предпочтительно таким, чтобы была получена дозировка в пределах указанной области.
Типичные композиции для перорального введения включают суспензии, которые могут содержать, например, микрокристаллическую целлюлозу для придания объема, альгиновую кислоту или альгинат натрия в качестве суспендирующего компонента, метилцеллюлозу в качестве средства-усилителя вязкости и подсластители или вкусовые добавки, такие как те, которые известны в данной области; и таблетки с немедленным высвобождением, которые могут содержать, например, микрокристаллическую целлюлозу, вторичный кислый фосфат кальция, крахмал, стеарат магния и/или лактозу, и/или другие эксципиен-ты, связующие вещества, добавки наполнителей, разрыхлители, разбавители и смазывающие вещества, такие как те, которые известны в данной области. Формованные таблетки, прессованные таблетки или лиофилизированные таблетки являются примерными формами, которые могут быть использованы. Примерные композиции включают такие, которые составлены из описанного здесь соединения или комбинации соединений с быстрорастворимыми разбавителями, такими как маннит, лактоза, сахароза и/или цик-лодекстрины. В такие композиции могут быть включены также и высокомолекулярные эксципиенты, такие как целлюлозы (авицел) или полиэтиленгликоли (ПЭГ). Такие композиции могут также включать эксципиент для усиления адгезии на слизистой оболочке, такой как гидроксипропилцеллюлоза (НРС), гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС), натрийкарбоксиметилцеллюлоза (SCMC), сополимер малеи-нового ангидрида (например, Gantrez), и средства, контролирующие высвобождение, такие как полиакриловый сополимер (например, Carbopol 934). Смазывающие вещества, скользящие вещества, вкусовые добавки, красители и стабилизаторы также могут быть добавлены для облегчения производства и применения.
Типичные композиции для введения назального аэрозоля или ингаляции включают растворы в физиологическом растворе, который может содержать, например, бензиловый спирт или другие подходящие консерванты, промоторы абсорбции для усиления биодоступности и/или другие солюбилизирующие или диспергирующие средства, такие как те, которые известны в данной области.
Типичные композиции для парентерального введения включают инъецируемые растворы или суспензии, которые могут содержать, например, подходящие нетоксичные парентерально приемлемые разбавители или растворители, такие как маннит, 1,3-бутандиол, вода, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия или другие подходящие диспергирующие или увлажняющие суспендирующие средства, включая синтетические моно- или диглицериды и жирные кислоты, включая олеиновую кислоту.
Типичные композиции для ректального введения включают суппозитории, которые могут содержать, например, подходящий нераздражающий эксципиент, такой как масло какао, синтетические слож-ноэфирные глицериды или полиэтиленгликоли, которые являются твердыми при обычных температурах, но разжижаются и/или растворяются в ректальной полости, с высвобождением лекарственного средства.
Типичные композиции для местного введения включают носитель для местного введения, такой как Plastibase (минеральное масло, желатинизированное полиэтиленом). Например, описанные здесь соединение или комбинация соединений могут быть введены местно для лечения заболеваний периферических сосудов и как таковые могут быть составлены в виде крема или мази.
Описанные здесь соединение или комбинация соединений могут быть использованы отдельно или в сочетании с другими подходящими терапевтическими средствами, применимыми при лечении портальной гипертензии или при восстановлении функции печени. Например, описанные здесь соединение или комбинация соединений могут быть введены в сочетании с вазопрессивными аналогами, такими как тер-липрессин, орнипрессин и вазопрессин; соматостатином и его аналогами, такими как октреотид; неселективными бета-блокаторами, такими как пропранолол и надолол; сосудорасширяющими бета-блокаторами, такими как карведилол; нитратами, такими как изосорбидмононитрат и глицеринтринит-рат; и статинами, такими как аторвастатин, флувастатин, ловастатин и симвастатин.
Другие указанные выше терапевтические средства, при их применении в сочетании с описанными здесь соединением или комбинацией соединений, могут быть использованы, например, в тех количествах, которые указаны в справочнике практического врача (PDR), или же в тех количествах, которые иным способом определяются рядовым специалистом в данной области.
Примеры
В следующих примерах более подробно описаны воплощения настоящего изобретения, которые никоим образом не предназначены для ограничения объема, охватываемого настоящим изобретением. Пример 1
В данном примере эксперименты проводились на клинически релевантных крысах, которым накладывали лигатуру на желчный проток (крысы BDL), которые являются крысиной моделью цирроза, у которых проявляются клинические характеристики слабовыраженного системного и мозгового провоспа-лительного состояния, на которое указывают повышенные уровни цитокинов, таких как фактор некроза опухоли-альфа (ФНО-а), а также слабовыраженный отек головного мозга. У крыс BDL введение бактериального липополисахарида (LPS) приводит к развитию клинической ситуации, которая имитирует клиническую острую и хроническую недостаточность печени (ACLF).
Показано, что у "наивных" крыс, в ответ на воздействие аммония с последующим внутривенным введением LPS, развивался воспалительный ответ, церебральная вазодилятация и внутричерепная гипер-тензия, чего не возникало у животных, которым вводили один только LPS, что указывает на важную роль аммония в "примировании" головного мозга в отношении повреждающего действия LPS. Происходит усиление как системного, так и мозгового воспалительного ответа, что приводит к ухудшению цитоток-сического отека головного мозга, приводящего к расстройству сознания до прекоматозной/коматозной стадий.
Экспериментальные модели на животных
Было использовано тридцать четыре самца крыс Sprague-Dawley, вес тела 200-250 г. Все крысы были помещены в клетку и имели неограниченный доступ к пище и воде, с 12-часовым циклом света-темноты, при температуре 19-23°С и влажности, приблизительно составляющей 50%.
Лигатура желчного протока (BDL): Крысам под действием анестезии - внутривенно (в/в) диазепам (1 мг/кг), с последующим внутримышечным введением 150 мкл/кг Hypnorm(r) (Janssen Pharmaceutica, Belgium) - накладывали лигатуру желчного протока, чтобы индуцировать билиарный цирроз.
Ложно-оперированные (sham): Крыс под действием анестезии подвергали ложной операции. Крыс BDL сажали на диету с высоким содержанием белка/аммония в течение 7 дней перед тем, как они были включены в данное исследование. Диета состояла из жидкого корма для грызунов (Bioserve, Frenchtown, NJ 08825, USA) и специально изготовленной смеси, имитирующей аминокислотную композицию молекулы гемоглобина (4 г/кг/день Nutricia, Cuijk, The Netherlands), смешанной с коммерчески доступным желатином для предотвращения седиментации. Такой режим вызывает хроническую гипераммониемию.
План исследования
Эффект лечения наложившейся гипераммониемии, указывающей на наличие ACLF, изучали путем введения ОР. Через четыре недели после операции крыс BDL рандомизировали на группы, получавшие внутрибрюшинно (в/б) по 3 дня подряд инъекции ОР (0,3 г/кг), мышиное химерное моноклональное ан-ти-ФНО-а-антитело или физиологический раствор (плацебо). За три часа до завершения всем крысам BDL в/б вводили 1 мг/кг LPS (Sigma. Poole, UK). В качестве контроля, ложно-оперированным крысам в/б вводили только физиологический раствор. Исследуемыми группами были 1) ложно-оперированные (n=6), 2) BDL+физиологический раствор (n=6), 3) BDL+LPS (n=6) и 4) BDL+OP+LPS (n=6).
Дополнительное исследование проводили с целью определения снижающего аммоний эффекта ОР в отношении воспалительных ответов головного мозга у крыс только с BDL (не обработанных LPS). Через четыре недели после операции крыс BDL рандомизировали на группы, получавшие внутрибрюшинно (в/б) по 3 дня подряд инъекции ОР (0,3 г/кг) и/или физиологический раствор (плацебо). В качестве контроля, ложно-оперированным крысам в/б вводили только физиологический раствор. Исследуемыми группами были 1) ложно-оперированные (n=6), 2) BDL+физиологический раствор (n=6) и 3) BDL+OP
(n=6). Согласно протоколу, крысы имели неограниченный доступ к пище и воде в течение 3-часового периода после вмешательства и содержались при контролируемой температуре окружающей среды, после чего их умерщвляли путем обескровливания под действием анестезии - в/в Hypnorm(r) (200 мкл/кг), через 20 мин после в/в введения диазепама (1 мг/кг). Кровь выводили через нисходящую часть дуги аорты и немедленно вносили в очень холодные пробирки, содержащие гепарин/ЭДТА (до полного обескровливания), центрифугировали при 3120xg и 4°С, и полученную плазму собирали и хранили при -80°С до последующего анализа.
Цитокины плазмы и коры головного мозга
Образцы плазмы и коры головного мозга моментально замораживали и хранили при -80°С. Перед выполнением анализа 100 мкг коры головного мозга гомогенизировали и депротеинизировали (с помощью стеклянного гомогенизатора с тефлонным пестиком) в 300 мкл ледяного раствора буфера для лизиса клеток. После центрифугирования при 12000xg в течение 10 мин при 4°С супернатанты собирали для проведения дальнейшего исследования. После количественного определения концентрации белка, в уравновешенных образцах головного мозга и супернатантов плазмы (50 мкл) определяли уровни цито-кинов (в пг/мл) методом проточной цитометрии с использованием набора cytometric bead array (CBA) компании Becton Dickinson (BD(tm) biosciences) для определения воспалительных цитокинов у крыс, в соответствии с инструкциями производителя. В их число входили провоспалительные цитокины ФНО-а и интерлейкин-6 (IL-6). Образцы анализировали путем измерения флуоресценции, продуцируемой бусинками СВА на системе проточной цитометрии FACS Canto(tm) II (BD(tm) Sciences), и полученные данные анализировали с помощью компьютерной программы BD(tm) СТА.
Анализ вестерн-блоттинга
Быстрозамороженные и хранившиеся при -80°С образцы коры головного мозга в 100 мкг гомогенизировали и депротеинизировали (с помощью стеклянного гомогенизатора с тефлонным пестиком) в 300 мкл ледяного раствора буфера для лизиса клеток. После центрифугирования при 12000xg в течение 10 мин при 4°С супернатанты собирали для проведения дальнейшего исследования. После количественного определения концентрации белка в образцах (50 мкл уравновешенной фронтальной области ткани коры головного мозга) предпринимали вестерн-блоттинг подготовленных образцов для отделения белка и переноса его с помощью системы NuPAGE(R) pre-cast gel system (Invitrogen Ltd, UK). Специфические белковые полосы детектировали с помощью первичного мышиного iNOS (BD Biosciences, UK) и вторичного козьего поликлонального антитела против мышиного IgG, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) (Hycult biotechnology, Netherlands), и р65 NFkB - первичного кроличьего (cell signalling, UK) и вторичного козьего поликлонального антитела против кроличьего IgG, конъюгированного с HRP (Hycult biotechnology, Netherlands). Для того чтобы установить точные различия в экспрессии полного белка между образцами тканей, проводили количественное определение антитела против альфа-тубулина (а-тубулин; Santa Cruz Biotechnology, Inc. USA), повсеместного белка цитоскелета; для определения требовалось также вторичное козье поликлональное антитело против мышиного IgG, конъюгированного с HRP (Hycult biotechnology, Netherlands). Все антитела были использованы при разведении 1:1000. Белковые полосы визуализировали с помощью усовершенствованных реагентов для детекции вестерн-блоттинга Amersham ECL(tm), а также Hyperfilm(tm) (GE Healthcare, UK). Денситометрические измерения проводили с помощью компьютерной программы Image-J (freeware; rsbweb.nih.gov/ij).
Статистика
Данные выражали в виде среднего ±SEM. Достоверность различий проверяли по критерию множественного сравнения Newman-Keuls или двустороннему тесту ANOVA; значение р <0,05 считали статистически достоверным. В соответствующих случаях, для сравнения двух групп использовали парный двухвыборочный t-тест или одновыборочный критерий Вилкоксона. В отношении групп животных с различным воздействием, на время развития прекоматозного/коматозного состояния был использован анализ выживаемости Каплана-Мейера, и для статистического анализа данных по сравнению кривых выживаемости был использован однофакторный анализ (log-rank test). Используемая компьютерная программа включала Microsoft Excel 2003 (Microsoft Corp., Redmond, WA) и GraphPad Prism 4.0 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA).
Результаты
После оперативного вмешательства все крысы продолжали набирать вес. По конечному весу, определяемому непосредственно перед умерщвлением, крысы BDL (среднее ± SEM; 342 г ± 42) статистически не достоверно отличались от ложно-оперированных контролей (среднее ± SEM; 380 г ± 38). Как было показано ранее, системная гемодинамика у крыс BDL поддерживалась на должном уровне.
Цитокины плазмы и коры головного мозга
Во всех исследованных группах средние уровни цитокинов в ткани фронтальной области коры головного мозга были приблизительно в 10 раз выше, чем их уровни в соответствующих образцах циркулирующей плазмы (фиг. 1A-D и табл. 1). Анализ множественного сравнения групп выявил следующее:
Цитокины плазмы: При сравнении с ложно-оперированными крысами выяснилось, что лигатура желчного протока ассоциирована со статистически достоверным подъемом уровней провоспалительных
цитокинов ФНО-а в плазме ((р <0,05) (фиг. 1А). У крыс BDL стимуляция липополисахаридом достоверно повышала уровни ФНО-а и IL-6 в плазме по сравнению с ложно-оперированными контрольными животными (р <0,001, соответственно) и обработанными физиологическим раствором BDL-контролями (р <0,01, соответственно) (фиг. 1В-С). По сравнению с крысами BDL+LPS, имело место достоверное снижение уровней ФНО-а в плазме (р <0,01) и тенденция к снижению уровня IL-6 после введения ОР (фиг. 1B-D).
Цитокины коры головного мозга: По сравнению с ложно-оперированными крысами, лигатура желчного протока ассоциирована с достоверным подъемом уровней ФНО-а в мозге (р> 0,05, табл. 1), которые дополнительно повышались под действием LPS (р <0,001). У крыс BDL, обработанных LPS, введение ОР улучшало повышенные уровни ФНО-а в ткани коры головного мозга (р <0,05). Сходную тенденцию проявляли мозговые уровни IL-6 после вмешательств с наложением лигатуры желчного протока и обработкой.
Цитокины плазмы и коры головного мозга
Цитокины плазмы: По сравнению с ложно-оперированными крысами (114,8+40,4 пг/мл), лигатура желчного протока ассоциирована с достоверным подъемом уровней ФНО-а в плазме (902,2+176,1 пг/мл; р <0,001), который достоверно снижался в результате предварительного введения ОР (270,5+59,4 пг/мл;
р <0,001).
Цитокины коры головного мозга: По сравнению с ложно-оперированными крысами (34,2+4,6 пг/мл), лигатура желчного протока ассоциирована с достоверным подъемом уровней ФНО-а в головном мозге (178,7+62,9 пг/мл; р <0,05), который достоверно снижался в результате предварительного введения ОР (54,7+15,3 пг/мл; р <0,05).
Экспрессия iNOS
По сравнению с ложно-оперированными крысами (1,46+0,17; фиг. 2А), при наложении лигатуры желчного протока имело место достоверное повышение уровня iNOS в головном мозге (2,87+0,14; р <0,001), которое уменьшалось в результате предварительного введения ОР (2,32+0,17; р <0,05).
Таблица 1. Экспрессия NFkB
Уровни цитокинов (пмоль/л)
Ложная операция
BDL
BDL+LPS
ФНО-а в плазме
90±25
1859±417*
4143±528***
1919±828ss
IL-6 В плазме
153±52
1470±422
4135+560***/"
3730±832
Фно-a в мозге
45±13
237±79*
402±57***
165±125
IL-6 в мозге
26±5
144±99
285±104
126+84
Данные выражены в виде среднего + стандартная ошибка среднего (SEM). Символы представляют собой следующее: *р <0,05 и ***р <0,001 по сравнению с ложно-оперированными контрольными крысами; $р <0,05 и $$р <0,01 по сравнению с крысами BDL+LPS; и ##р <0,01 по сравнению с крысами BDL. Аббревиатуры: BDL -лигатура желчного протока. LPS - липополисахарид.
По сравнению с ложно-оперированными крысами (2,65+0,17; фиг. 2В), при наложении лигатуры желчного протока имело место достоверное повышение уровня NFkB в головном мозге (4,25+0,13; р <0,001), которое заметно снижалось после предварительного введения ОР (2,52+0,19; р <0,001).
В данном примере у крыс с BDL в течение 4 недель до начала исследования регистрировали наличие хронического заболевания печени с гипераммониемией и провоспалительным состоянием, на которое указывали повышенные уровни артериальных цитокинов и уровни цитокинов в головном мозге. Кроме того, введение LPS этой модели животных вызывает наложение второй реакции и в этом контексте представляет собой инфекционный эпизод с признаками преувеличенного воспалительного ответа, проявляющегося в виде повышения уровней ФНО-а и IL-6. В головном мозге при циррозе проявляется классический "цитотоксический отек" даже в группе, обработанной LPS. Аммоний и воспаление работают одновременно (и синергично), вызывая отек головного мозга и кому.
Наблюдалось, что введение ОР ассоциируется также и с уменьшением уровня провоспалительных цитокинов в плазме и в головном мозге.
Модуляция активности eNOS головного мозга
Пример 2
Асимметричный диметиларгинин (ADMA) является эндогенным ингибитором eNOS, уровни кото
рого повышены при печеночной недостаточности. Исследование проводили с целью определения того, действует ли введение комбинации L-орнитина и фенилацетата на путь обмена NO. В данном примере решаются следующие вопросы: (а) понижена ли активность eNOS в головном мозге при циррозе, (b) повышен ли уровень ADMA и понижен ли уровень диметиларгинин-диметиламиногидролазы (DDAH) (DDAH, фермент, который вызывает деградацию ADMA) в головном мозге при циррозе; (с) изменены ли другие регуляторы активности eNOS в головном мозге при циррозе, и восстанавливаются ли они под действием L-орнитина в сочетании с фенилацетатом (ОР)?
Крыс Sprague-Dawley изучали через 4 недели после лигатуры желчного протока (BDL) (n=16) или ложной операции (n=8) и рандомизировали на группы плацебо или ОР (0,6 мг/кг) в/б. Перед умерщвлением собирали артериальную кровь, ткань фронтальной области головного мозга и мочу. Аммоний и аминокислоты измеряли в плазме, соответственно, с помощью Cobas-MiraS и ВЭЖХ. Содержание воды в головном мозге измеряли с помощью технологии оценки сухого веса. Фенилацетилглутамин в моче и ADMA в плазме и в головном мозге измеряли с помощью LCMS. Активность eNOS измеряли с помощью радиактивно меченного 1Н-аргинина, а экспрессию белков eNOS, DDAH-1 и кавеолина определяли с помощью вестерн-блоттинга.
Лечение крыс BDL посредством ОР приводило к нормализации содержания артериального аммония (р <0,001), воды в головном мозге (р <0,001) и повышенного фенилацетилглутамина в моче (р <0,01). Активность eNOS была значительно ниже, но экспрессия белка eNOS была выше у животных с BDL по сравнению с ложно-оперированными контролями, и у крыс с BDL, которым вводили ОР, эти показатели восстанавливались до уровней, наблюдаемых у ложно-оперированных животных. Уровни ADMA в головном мозге были достоверно выше у крыс BDL, чем у ложно-оперированных крыс, а уровень DDAH-1 был достоверно ниже, и эти показатели восстанавливались под действием ОР. Кавеолин головного мозга был достоверно ниже у животных с BDL, и под действием ОР этот показатель восстанавливался до уровней, наблюдаемых у ложно-оперированных животных.
Данный пример показывает, что гипераммониемия оказывает отрицательное влияние на путь обмена окиси азота в головном мозге, который может быть восстановлен под действием ОР. Полученные результаты показали, что ОР может быть использован для лечения тех органных систем при циррозе, в которых нарушена передача сигнала NO.
Пример 3
Ложно-оперированных крыс Sprague-Dawley (n=10) и крыс BDL (n=10) сравнивали в течение четырех недель после хирургического вмешательства в связи с BDL, а также с дополнительной группой BDL (n=6), которой два раза в день в течение 5 дней в/б вводили по 3 г/кг ОР. Аммоний и аминокислоты измеряли в плазме, соответственно, с помощью Cobas-MiraS и ВЭЖХ. Содержание воды в головном мозге измеряли с помощью технологии оценки сухого веса. Уровни ФНО-а измеряли с использованием FACS-анализа (FACS bead array). Фенилацетилглутамин в моче, а также ADMA в плазме и в головном мозге измеряли, соответственно, с использованием методов LC-MS/MS. Активность eNOS и DDAH измеряли радиометрически. Экспрессию белков eNOS, DDAH-1 &2 и кавеолина определяли с помощью вестерн-блоттинга.
Как показано ниже, уровни ФНО-а в плазме (фиг. 3А) и в головном мозге (фиг. 3В) были достоверно повышены у крыс BDL по сравнению с ложно-оперированными крысами (р <0,01, для тех и других). Обработка ОР возвращает указанные изменения почти до уровней, характерных для ложно-оперированных крыс, и эти изменения являются достоверными по сравнению с таковыми у крыс, воздействие на которых было ограничено только BDL (р <0,05; р <0,01, соответственно).
Как показано на фиг. 4, активность eNOS (фиг. 4А) была достоверно снижена в головном мозге крыс BDL по сравнению с ложно-оперированными крысами, несмотря на повышенную экспрессию белка eNOS (фиг. 4В). После лечения под действием ОР, активность eNOS возвращалась к уровням, наблюдаемым у ложно-оперированных крыс, со сходной нормализацией экспрессии белка eNOS. Белок iNOS также был достоверно повышен у крыс BDL (фиг. 4С). Обработка ОР существенно понизила уровень белка iNOS по сравнению с крысами, воздействие на которых было ограничено только BDL (фиг. 4С).
Как показано на фиг. 5, плазматический ADMA (фиг. 5А) был достоверно повышен в плазме (р <0,01) и гомогенатах головного мозга (фиг. 5В) (р <0,05) крыс BDL по сравнению с таковыми у ложно-оперированных животных. После лечения под действием ОР имело место недостоверное уменьшение ADMA в плазме, но достоверное уменьшение концентрации ADMA в головном мозге по сравнению с таковыми у крыс BDL. Более того, экспрессия церебрального белка кавеолина-1 (фиг. 5С) была достоверно повышена у крыс BDL по сравнению с таковой ложно-оперированных крыс (р <0,01). Лечение под действием ОР способствовало возвращению белка кавеолина-1 к уровням, наблюдаемым у ложно-оперированных крыс (р <0,05).
Как показано на фиг. 6, экспрессия церебрального белка DDAH-1 (фиг. 6А) у крыс BDL была достоверно понижена (р <0,05). И наоборот, наблюдалось достоверное повышение (р <0,05) экспрессии церебрального белка DDAH-2 (фиг. 6В) по сравнению с таковой у ложно-оперированных крыс. После введения ОР наблюдалось достоверное повышение DDAH-1 (р <0,05) и достоверное снижение экспрессии
белка DDAH-2 (р <0,05) по сравнению с BDL. Кроме того, активность DDAH (фиг. 6С) была достоверно повышена в головном мозге крыс BDL по сравнению с таковой у ложно-оперированных животных. Лечение под действием ОР способствовало достоверному (р <0,01) снижению активности DDAH по сравнению с крысами, воздействие на которых было ограничено только BDL (р <0,01).
Модуляция активности печеночной eNOS
Пример 4
При циррозе портальная гипертензия ассоциирована с воспалением печени, которое вносит свой вклад в снижение внутрипеченочной активности эндотелиальной синтазы окиси азота (eNOS), которое ассоциировано с увеличением эндогенных ингибиторов NOS, кавеолина-1 и асимметричного диметилар-гинина (ADMA). Данный пример связан с определением того, может ли лечение под действием комбинаций L-орнитина и фенилацетата (ОР) снижать NFkB и повышать внутрипеченочную доступность NO через модуляцию этих зависимых от воспаления ингибиторов эндотелиальной NOS и, тем самым, уменьшать портальное давление.
Крыс Sprague-Dawley изучали в течение 4 недель после хирургического вмешательства в связи с BDL (n=16) или с ложной операцией (n=8) и рандомизировали на группы лечения либо плацебо, либо OP (0,6 мг/кг), в/б, в течение 5 дней перед началом исследования. К моменту умерщвления крыс под действием анестезии подвергали прямому измерению портального давления, и плазму, а также печеночную ткань отбирали для последующего анализа. Определение аммония и биохимический анализ в плазме производили с помощью анализатора Cobas-MiraS, а активность eNOS определяли радиометрически. Количественное определение экспрессии белка eNOS, DDAH-1, кавеолина-1 и NFkB производили с помощью вестерн-блоттинга.
Обработка животных под действием ОР приводила к уменьшению гипераммониемии (р <0,001), приближающемуся к значениям, соответствующим таковым у ложно-оперированных животных, и к повышению печеночной активности eNOS, приближающейся к уровням, наблюдаемым у ложно-оперированных животных. Указанные изменения были ассоциированы с достоверным снижением портального давления по сравнению с таковым в группе, обработанной плацебо (11 +0,4 вместо 14+0,7 мм Hg, р=0,01). Кроме того, обработка животных под действием ОР приводила к достоверному снижению экспрессии кавеолина-1 (р <0,05) и повышению экспрессии диметиларгинин-диметиламиногидролазы-1 (р <0,05) [DDAH 1 отвечает за метаболизм ADMA], и в то же время также и к достоверному снижению экспрессии печеночного фосфорилированного NFkB по сравнению с группой животных, обработанных плацебо.
Данный пример показывает, что воздействие ОР при гипераммониемии приводит к уменьшению степени тяжести портальной гипертензии у клинически релевантных моделей цирроза через восстановление активности печеночной eNOS путем модуляции NFkB и экспрессии регуляторов eNOS, DDAH1-ADMA и кавеолина-1.
Пример 5
Через 4 недели после BDL и ложной операции на крысах Sprague-Dawley, крысам BDL в/б два раза в день вводили по 3 г/кг ОР или только носитель (П=14/ГРУППУ), и такую обработку проводили в течение 5 дней. После обработки на 5-ый день, перед умерщвлением, всех крыс подвергли прямому измерению портального давления под действием анестезии. Плазму и печеночную ткань отбирали для последующего анализа. Определение аммония и биохимический анализ в плазме производили с помощью анализатора Cobas-MiraS. ФНО-а в плазме измеряли с использованием FACS-анализа (FACS bead array). Активность eNOS определяли радиометрически. Количественное определение экспрессии белков eNOS, DDAH-1, кавеолина-1 и NFkB производили с помощью стандартной технологии вестерн-блоттинга.
Влияние ОР на артериальный аммоний и биохимию плазмы у крыс BDL показано в табл. 2. Статистическую значимость рассчитывали, используя t-критерий Стьюдента и сравнительный критерий Ман-на-Уитни. * - Р <0,01 против ложно-оперированных; ** - Р <0,001 против ложно-оперированных; t -Р <0,01 против BDL;§ - Р <0,05 против BDL; NS - недостоверно.
Таблица 2
Параметры
Ложная операция
BDL
BDL+OP+LPS
Аммоний(мкмоль/л)
55,86+4,05
222,3+24,01**
127,1±4,8т
ALT(Ед./л)
26,88±2,61
159,8±10,81**
108,3±5,66т
Билирубин(мкмоль/л)
32,52±2,43
304,9±25,97**
267,7±14,5NS
Креатинин(мкмоль/л)
23,07±0,94
40,88±2,37*
32,38±1,44S
ФНО-а (пг/мл)
121,9+46,4
822,9±203,1*
270,5±59,4§
Как показано на фиг. 7А и 7В, активность eNOS достоверно снижена у животных с BDL по сравнению с ложно-оперированными (р <0,05), несмотря на повышенную экспрессию белка eNOS (p <0,01). По
сле введения ОР активность eNOS возвращалась к уровню, обнаруживаемому у ложно-оперированных животных, со сходной нормализацией экспрессии белка eNOS (Р <0,05). Как показано на фиг. 7С, экспрессия белка DDAH-1 была достоверно выше у ложно-оперированных животных по сравнению с крысами BDL (р <0,01). После введения ОР крысам BDL экспрессия белка DDAH-1 достоверно увеличивалась и возвращалась к уровню, определяемому у ложно-оперированных животных (р <0,05). Как показано на фиг. 7D, белковая экспрессия NFkB была достоверно повышена у крыс BDL по сравнению с ложно-оперированными животными (р <0,01). Введение ОР вызывало значительное уменьшение уровня экспрессии NFkB по сравнению с крысами BDL (р=0,05). Как показано на фиг. 7Е, экспрессия кавеолина-1 была достоверно повышена у крыс BDL по сравнению с ложно-оперированными животными (р <0,01). После введения ОР экспрессия кавеолина-1 достоверно снижалась (р <0,05) по сравнению с крысами, которые претерпели только BDL. Как показано на фиг. 7С, портальное давление было достоверно повышено у крыс BDL по сравнению с ложно-оперированными (р <0,0001). Введение ОР приводило к 30% снижению портального давления по сравнению с крысами BDL (р <0,01). Пример 6
Данный пример призван определить, улучшает ли обработка комбинациями L-орнитина и фенил-ацетата (ОР) функцию печени (например, ее кровоснабжение).
Крыс Sprague-Dawley изучали через 4 недели после наложения лигатуры желчного протока (BDL) и рандомизировали на группы, которые обрабатывали плацебо или ОР. Функцию печени крыс BDL измеряли различными способами. Например, повреждение печени детектировали в аланин-трансаминазном тесте (ALT), аспартат-аминотрансферазном тесте (AST) и/или альфа-глутатион^-трансферазном тесте (GST). Функцию печени измеряли посредством альбуминового теста (Alb); в тесте протромбинового времени; и/или и определения суммарных баллов, например, согласно классификации Child-Pugh по шкале MELD. Гемодинамику печени измеряли путем детекции печеночного тока крови и/или портального давления.
Введение ОР эффективно в улучшении и/или восстановлении функции печени, например, повышении кровоснабжения печени, у крыс BDL. Введение OP эффективно также в снижении портального давления у крыс BDL.
Пример 7
Данный пример связан с определением того, снижает ли обработка комбинациями L-орнитина и фенилацетата (ОР) варикозное кровотечение у крыс BDL с портальной гипертензией.
Крыс Sprague-Dawley изучали через 4 недели после наложения лигатуры желчного протока (BDL) и рандомизировали на группы, которые обрабатывали либо плацебо, либо ОР. У крыс BDL измеряли портальное давление. У крыс BDL проводили также детекцию варикозного кровотечения, и степень выраженности варикозного кровотечения измеряли у крыс BDL.
Введение ОР является эффективным в снижении портального давления и снижения варикозного кровотечения у крыс BDL.
Пример 8
Данный пример связан с определением того, уменьшает ли обработка комбинациями L-орнитина и фенилацетата (ОР) асцит у крыс BDL с портальной гипертензией.
Крыс Sprague-Dawley изучали через 4 недели после наложения лигатуры желчного протока (BDL) и рандомизировали на группы, которые обрабатывали либо плацебо, либо ОР. У крыс BDL измеряли портальное давление. У крыс BDL проводили также детекцию асцита, и степень выраженности асцита измеряли у крыс BDL.
Введение ОР является эффективным в отношении снижения портального давления асцита у крыс
BDL.
Несмотря на то что настоящее изобретение описано со ссылкой на некоторые воплощения и примеры, следует понимать, что возможен целый ряд различных модификаций, не выходящих за рамки основной концепции настоящего изобретения.
Соответственно, данное описание следует считать ограниченным только объемом, определяемым прилагаемой формулы изобретения.
Все указанные здесь ссылки, включая патенты, патентные заявки, статьи, книги и пр., считаются в полном объеме включенными в настоящее описание в виде ссылок. В настоящей заявке предусмотрены ситуации, когда один или несколько из включенных в нее литературных и сходных материалов отличается или противоречит данной заявке, включая, но не ограничиваясь перечисленным, определенные термины, применение терминов, описание технологий и пр.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ лечения портальной гипертензии у субъекта, включающий
идентификацию субъекта как такового, нуждающегося в снижении портального давления; введение указанному субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата; и
измерение портального давления у субъекта, которому вводили L-орнитин в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, для определения снижения портального давления.
2. Способ по п.1, согласно которому субъект страдает заболеванием печени.
3. Способ по п.2, согласно которому заболеванием печени является хроническое заболевание печени.
4. Способ по п.3, согласно которому хроническим заболеванием печени является цирроз.
5. Способ по п.2, согласно которому заболеванием печени является острая печеночная недостаточность.
6. Способ по п.1, согласно которому снижение портального давления достигается путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у субъекта.
7. Способ по п.1, согласно которому снижение портального давления достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота.
8. Способ по п.1, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата.
9. Способ по п.1, согласно которому субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенил-бутирата.
10. Способ по п.1, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли.
11. Способ по п.1, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенил-ацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия.
12. Способ по п.1, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением.
13. Способ по п.12, согласно которому указанное введение является внутривенным введением.
14. Способ по п.12, согласно которому указанное введение является пероральным введением.
15. Способ по п.1, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбути-рата составляет от 20 до 40 г.
16. Способ замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии у субъекта, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата;
измерение портального давления у субъекта, которому вводили L-орнитин в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата;
и таким образом осуществления замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии.
17. Способ по п.16, согласно которому указанный субъект страдает заболеванием печени.
18. Способ по п.17, согласно которому указанным заболеванием печени является хроническое заболевание печени.
19. Способ по п.18, согласно которому указанным хроническим заболеванием печени является цирроз.
20. Способ по п.17, согласно которому указанным заболеванием печени является острая печеночная недостаточность.
21. Способ по п.16, согласно которому указанного замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии достигают путем уменьшения уровня провоспалительных цитоки-нов у субъекта.
22. Способ по п.16, согласно которому указанного замедления или уменьшения вероятности возникновения портальной гипертензии достигают путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта.
23. Способ по п.16, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата.
24. Способ по п.16, согласно которому указанному субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенил-ацетата и фенилбутирата.
25. Способ по п.16, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли.
26. Способ по п.16, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенил-ацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия.
27. Способ по п.16, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением.
28. Способ по п.27, согласно которому указанное введение является внутривенным введением.
29. Способ по п.27, согласно которому указанное введение является пероральным введением.
30. Способ по п.16, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбути
17.
рата составляет от 20 до 40 г.
31. Способ лечения варикозного кровотечения, связанного с портальной гипертензией у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение варикозного кровотечения.
32. Способ по п.31, согласно которому указанное лечение варикозного кровотечения достигается путем уменьшения уровня провоспалительных цитокинов у указанного субъекта.
33. Способ по п.31, согласно которому указанное лечение варикозного кровотечения достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта.
34. Способ по п.31, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата.
35. Способ по п.31, согласно которому субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенилацетата и фенил-бутирата.
36. Способ по п.31, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли.
37. Способ по п.31, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенил-ацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия.
38. Способ по п.31, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением.
39. Способ по п.38, согласно которому указанное введение является внутривенным введением.
40. Способ по п.38, согласно которому указанное введение является пероральным введением.
41. Способ по п.31, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбути-рата составляет от 20 до 40 г.
42. Способ лечения асцита, связанного с портальной гипертензией у субъекта, страдающего портальной гипертензией, предусматривающий введение субъекту L-орнитина в сочетании по меньшей мере с одним из соединений, выбранных из фенилацетата и фенилбутирата, в результате чего происходит уменьшение проявлений асцита.
43. Способ по п.42, согласно которому указанное лечение асцита достигается путем снижения уровня провоспалительных цитокинов у указанного субъекта.
44. Способ по п.42, согласно которому указанное лечение асцита достигается путем повышения активности эндотелиальной синтазы окиси азота у указанного субъекта.
45. Способ по п.42, согласно которому указанный L-орнитин и фенилацетат вводят в виде L-орнитинфенилацетата.
46. Способ по п.42, согласно которому указанному субъекту вводят отдельно физиологически приемлемые соли указанного L-орнитина и по меньшей мере одного из соединений, выбранных из фенил-ацетата и фенилбутирата.
47. Способ по п.42, согласно которому указанный L-орнитин вводят в виде свободной мономерной аминокислоты или ее физиологически приемлемой соли.
48. Способ по п.42, согласно которому по меньшей мере одно из соединений, выбранных из фенил-ацетата и фенилбутирата, вводят в виде фенилацетата натрия или фенилбутирата натрия.
49. Способ по п.42, согласно которому указанное введение является пероральным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрижелудочным или внутрисосудистым введением.
50. Способ по п.49, согласно которому указанное введение является внутривенным введением.
51. Способ по п.49, согласно которому указанное введение является пероральным введением.
52. Способ по п.42, согласно которому доза вводимого L-орнитина и фенилацетата или фенилбути-рата составляет от 20 до 40 г.
53. Способ по п.1, в котором снижение портального давления у субъекта составляет по меньшей мере 30%.
31.
31.
31.
А. Печеночная активность eNOS В. Печеночная экспрессия белка
eNOS
D. Печеночная экспрессия белка NFkB
РО.01 Р <0 05
Staa BDL ЕЮЧОР
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
025735
- 1 -
025735
- 1 -
025735
- 1 -
025735
- 1 -
025735
- 4 -
025735
- 24 -
025735
- 26 -
025735
- 27 -
025735
- 27 -
|
