|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] 1. Способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающий: a) обеспечение раствора млечного сока, полученного из растения Croton lecheri, содержащего осадок; b) добавление метилэтилкетона к раствору млечного сока растения и осадку; c) отделение органического слоя и концентрирование водного слоя с получением твёрдого вещества или отделение водного слоя и концентрирование органического слоя с получением твёрдого вещества; d) растворение твёрдого вещества в водном растворителе; e) хроматографирование раствора с применением элюирующего растворителя и f) выделение проантоцианидина, содержащего Крофелемер. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап (е) хроматографирования осуществляют путем одноколоночной или двухколоночной хроматографии на колонках, выбранных из CM-Sepharose Fast Flow Column и Sephadex LH-20. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с помощью одноколоночной хроматографии на колонке CM-Sepharose Fast Flow. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с помощью двухколоночной хроматографии на колонке CM-Sepharose Fast Flow и следующей за ней Sephadex LH-20. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с применением воды и далее 30%-ного раствора ацетона в воде в качестве элюирующих растворителей.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
1. Способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающий: a) обеспечение раствора млечного сока, полученного из растения Croton lecheri, содержащего осадок; b) добавление метилэтилкетона к раствору млечного сока растения и осадку; c) отделение органического слоя и концентрирование водного слоя с получением твёрдого вещества или отделение водного слоя и концентрирование органического слоя с получением твёрдого вещества; d) растворение твёрдого вещества в водном растворителе; e) хроматографирование раствора с применением элюирующего растворителя и f) выделение проантоцианидина, содержащего Крофелемер. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап (е) хроматографирования осуществляют путем одноколоночной или двухколоночной хроматографии на колонках, выбранных из CM-Sepharose Fast Flow Column и Sephadex LH-20. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с помощью одноколоночной хроматографии на колонке CM-Sepharose Fast Flow. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с помощью двухколоночной хроматографии на колонке CM-Sepharose Fast Flow и следующей за ней Sephadex LH-20. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с применением воды и далее 30%-ного раствора ацетона в воде в качестве элюирующих растворителей.
Евразийское 023814 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2016.07.29
(21) Номер заявки 201290098
(22) Дата подачи заявки 2010.08.24
(51) Int. Cl.
A61K36/47 (2006.01) A61K31/353 (2006.01) A61P1/12 (2006.01)
(54)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМЕРНЫХ КОМПОЗИЦИЙ НА ОСНОВЕ ПРОАНТОЦИАНИДИНА ДЛЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ФОРМ
(31) 1962/MUM/2009
(32) 2009.08.26
(33) IN
(43) 2013.01.30
(86) PCT/IB2010/002060
(87) WO 2011/024049 2011.03.03
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
ГЛЕНМАРК ФАРМАСЬЮТИКАЛС ЛТД. (IN); НАПО ФАРМАСЬЮТИКАЛС ИНК. (US)
(72) Изобретатель:
Чоу Джон (US), Прадхан Нитин, Кадам Суреш Махадев (IN), Чэнь Инчжун, Тсэнг Джонатан (US), Кхан Мубин Ахмед, Пандей Випин Кумар
(IN)
(74) Представитель:
Нилова М.И. (RU)
(56) WO-A2-0047062 WO-A1-9206695 WO-A2-2007130893 WO-A1-9816111
GUPTA ET AL.: "Dragon's blood: Botany, chemistry and therapeutic uses", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, ELSEVIER SCIENTIFIC PUBLISHERS LTD, IE, vol. 115, no.3, 22 October 2007 (2007-10-22), pages 361-380, XP022401667, ISSN: 0378-8741, page 365
Секреторная диарея, также называемая водной диареей, является основной причиной заболеваемости и смертности в развивающихся странах, особенно младенцев и маленьких детей. Секреторная диарея также поражает значительную часть приезжающих из развитых в развивающиеся страны, но может поражать любого человека при посещении зарубежной страны (так называемая "диарея путешественников"). Секреторная диарея характеризуется потерей жидкости и электролитов через кишечный тракт, приводящей к серьёзному, а иногда и опасному для жизни обезвоживанию. Секреторная диарея обусловлена различными бактериальными, вирусными и протозойными патогенами, а также имеет иную, неинфекционную этиологию, такую как раковые опухоли и новообразования желудочно-кишечного тракта.
Двумя основными бактериальными источниками секреторной диареи являются Vibrio cholerae (V.cholerae) и Escherichia coli (E.coli). Энтеротоксигенные разновидности B.coli представляют собой источник секреторной диареи в развивающихся странах и являются основной причиной диареи путешественников. Другие штаммы B.coli, которые вызывают диарею, включают энтерогеморрагические, энтеро-инвазивные и энтеропатогенные и другие штаммы. Другие бактериальные агенты, которые вызывают диарею, включают другие Vibrio spp., Campylobacter spp., Salmonella spp., Aeromonas spp., Plesiomonas spp., Shigella spp., Klebsiella spp., Citrobacter spp., Yersinia spp., Clostridium spp., Bacteriodes spp., Staphylococcus spp. и Bacillus spp., а также другие кишечные бактерии. Секреторная диарея также может быть вызвана протозойными патогенами, такими как Cryptosporidium spp., например Cryptosporidium parvum. См. в основном Holland, 1990, Clin. Microbiol. Rev. 3:345; Harris, 1988, Ann. Clin. Lab. Sci. 18:102; Gracey, 1986, Clin. in Gastroent., 15:21; Ooms и Degryse, 1986, Veterinary Res. Comm. 10:355; Black, 1982, Med. Clin. Nor. Am., 66:611.
V.cholerae, энтеротоксигенные штаммы B.coli и ряд других кишечных бактерий вызывают секреторную диарею посредством сходных механизмов. Указанные патогены вырабатывают токсин, который связывается с конкретным рецептором на апикальной мембране эпителия кишечника. Связывание рецептора инициирует трансдукцию сигнала, медиированного аденилатциклазой или гуанилатциклазой, приводящую к повышению количества цАМФ или цГМФ. Указанный регуляторный каскад, по всей видимости действуя посредством фосфорилирования конкретных белков апикальной мембраны, стимулирует отток хлорида в просвет кишечника из клеток эпителия крипт кишечника и ингибирует нормальную резорбцию ионов натрия и хлора через клетки ворсинчатого эпителия кишечника. Повышенная концентрация хлорида и иона натрия осмотически высасывает воду в просвет кишечника, что приводит к обезвоживанию и потере электролитов. Агенты, которые уменьшают секрецию хлорид иона, следовательно, будут препятствовать перемещению жидкости в кишечнике и в результате выведению жидкости. Таким образом, подобные агенты особенно полезны при лечении и профилактике опасного обезвоживания и потери электролитов, вызванных секреторной диареей.
Секреторная диарея также является серьёзной проблемой для животных, не являющихся человеком, особенно для сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, свиньи, овцы (овцы и бараны), птицы (такие как куры) и лошади, и других одомашненных животных, таких как собаки и кошки. Заболевание диареей особенно часто встречается у молодых и недавно отлучённых от матери сельскохозяйственных животных. Заболевание диареей у сельскохозяйственных животных, особенно мясомолочного скота, такого как крупный рогатый скот, овцы и свиньи, часто вызвано бактериальными патогенами, такими как энтеротоксигенные, энтерогеморрагические и другие B.coli, Salmonella spp., Clostridium perfringens, Bacteriodes fragilis, Campylobacter spp. и Yersinia enterocolitica. Кроме того, протозойные патогены, особенно Cryptosporidium parvum, и вирусные агенты, особенно ротавирусы и коронавирусы, являются основными источниками диареи у сельскохозяйственных животных. Другие вирусные агенты, которые вызывают диарею у сельскохозяйственных животных, включают тогавирус, парвовирус, каль-цивирус, аденовирусы, бредавирусы и астровирусы. См. в основном Holland, 1990, Clin. Microbiology Rev. 3:345; см. также Gutzwiller и Blum, 1996, AJVR 57:560; Strombeck, 1995, Veterinary Quarterly 17 (прил. 1):S12; Vermunt, 1994, Austral. Veterinary J. 71:33; Driesen и др., 1993, Austral. Veterinary J. 70:259; Mouricout, 1991, Eur. J. Epidemiol. 7:588; Ooms и Degryse, 1986, Veterinary Res. Comm. 10:355.
Проантоцианидин и проантоцианидиновые полимеры представляют собой фенольные вещества, найденные в большом количестве разнообразных растений, особенно с древесным характером развития (например, Croton spp. и Calophyllum spp.). Общая химическая структура полимерного проантоцианидина состоит из линейных цепей, которые содержат 5,7,3',4'-тетрагидрокси или 5,7,3',5'-пентагидроксифлаван-3-оловые звенья, связанные между собой посредством связей С(4)-(6) и/или С(4)-С(8).
Биосинтетические исследования показали, что проантоцианидиновые полимеры состоят из мономерных звеньев. См. Fletcher и др., 1977, J.C.S. Perkin, 1:1628. Мономерное звено (в основном, называемое "лейкоантоцианидин") полимерной цепи может быть основано на одном из двух изомеров со стехиометрией в С-кольце, в положении 2 и/или 4, обозначаемых как цис (так называемые эпикатехины) или транс (так называемые катехины). Таким образом, полимерные цепи основаны на различных структурных звеньях, которые обуславливают широкое разнообразие полимерных проантоцианидинов и большое число возможных изомеров (Hemingway и др., 1982, J.C.S. Perkin, 1:1217). Для определения структур полимерных проантоцианидинов была применена 13С ЯМР-спектроскопия, а недавняя работа пролила свет на химический состав ди-, три- и тетрамерных проантоцианидинов. В большинстве расте
ний преобладают более крупные полимеры с флаван-3-оловыми звеньями со средней молекулярной массой более 2000 Да, содержащие 6 или более звеньев (Newman и др., 1987, Mag. Res. Chem., 25:118).
Краткое описание изобретения
В изобретении предложены способы получения полимерных композиций на основе проантоциани-дина для применения в фармацевтически эффективных лекарственных формах. В частности, в изобретении предложены способы получения фармацевтических форм полимерных композиций на основе проан-тоцианидина, которые были выделены из Croton spp. или Calophyllum spp., указанные формы могут быть эффективны, например, для лечения секреторной диареи, в частности для уменьшения потери жидкости и происходящего вследствие этого обезвоживания, которые связаны с секреторной диареей. Предложены способы получения проантоцианидинового полимера, который подходит для фармацевтических форм, имеющих высокий уровень чистоты и терапевтически эффективную концентрацию.
Изобретение относится к способам получения полимерной композиции на основе проантоцианиди-на, который имеет степень чистоты и концентрацию, подходящие для применения в терапевтически эффективных фармацевтических композициях. Полимерная композиция на основе проантоцианидина может быть получена, например, из млечного сока Croton spp., особенно Croton lechleri. Проантоцианиди-новый полимер в композиции, полученной согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, представляет собой крофелемер (USAN). Также в настоящей заявке описаны новые фармацевтические композиции, приготовленные согласно способу получения полимерной композиции на основе проанто-цианидина. Способы, описанные в настоящей заявке, обеспечивают полимерные композиции на основе проантоцианидина, содержащие более чем 90 мас.% проантоцианидинового полимера (хроматографиче-ская чистота которого может быть определена, например, посредством анализа определяемых компонентов по сравнению со стандартным образцом с применением хроматографии), более чем 95 мас.% проан-тоцианидинового полимера и или, например, от примерно 95 до примерно 100 мас.% проантоцианидино-вого полимера. Также в настоящем изобретении предложены полимерные композиции на основе проан-тоцианидина, содержащие менее чем примерно 0,2% таспина (хроматографическую чистоту которого определяют посредством анализа определяемых компонентов по сравнению со стандартным образцом с применением хроматографии). Кроме того, в изобретении также предложены полимерные композиции на основе проантоцианидина, имеющие повышенную однородность. Например, полимерные композиции на основе проантоцианидина, предложенные в настоящем изобретении, имеют значение полидисперсности, находящееся в диапазоне между примерно 1,2 и примерно 1,8, или, например, между примерно 0,9 и примерно 1,2, или от примерно 0,5 до примерно 1,5, или между примерно 0,8 и примерно 1,3.
В одном из вариантов реализации изобретения предложен способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающий (i) выдерживание млечного сока Croton spp. при температуре ниже комнатной по меньшей мере в течение 48 ч для обеспечения оседания взвешенных частиц; (ii) доведение рН млечного сока до значения в диапазоне от примерно 6,5 до примерно 8,5; (iii) фильтрацию млечного сока с получением фильтрата; (iv) доведение рН фильтрата до значения в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 5,5; (v) осуществление твердофазной экстракции фильтрата с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер; (vi) осуществление твердофазной экстракции с твёрдой фазой, отличающейся от твёрдой фазы на этапе (v), с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер и (vii) обработку элюата с получением полимерной композиции на основе проантоцианидина. Способ может включать дополнительный, необязательный этап, который представляет собой дополнительный этап обработки, подобный этапу (vii), но расположенный между этапами (v) и (vi).
В качестве альтернативы способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина может включать обеспечение или получение частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина; осуществление экстракции (например, твердофазной экстракции) частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина с получением элюата, содержащего проанто-цианидиновый полимер и обработку элюата с получением очищенной композиции на основе проанто-цианидина. В одном из вариантов реализации изобретения экстракцию осуществляют с помощью смолы для твердофазной экстракции, такой как ионообменные смолы, адсорбционные смолы, разделительные смолы, смолы для эксклюзионной хроматографии, смолы со смешанным действием и смеси более чем одного типа смолы.
В другом варианте реализации изобретения способ получения проантоцианидинового полимера включает:
a) обеспечение раствора млечного сока, полученного из растения Croton lecheri (например, неочищенного млечного сока растения, частично очищенного млечного сока растения, концентрированного неочищенного млечного сока растения или концентрированного частично очищенного млечного сока растения), содержащего осадок;
b) добавление метилэтилкетона к раствору млечного сока растения и осадку;
c) отделение органического слоя и концентрирование водного слоя с получением твёрдого вещества;
в качестве альтернативы или в качестве альтернативы отделение водного слоя и концентрирование органического слоя с получением твёрдого вещества;
d) растворение твёрдого вещества в водном растворителе;
e) хроматографирование раствора с применением элюирующего растворителя; и g) выделение проантоцианидина, содержащего Крофелемер.
В настоящем изобретении осадок означает взвесь, полученную при хранении. Неочищенный млечный сок растения может быть получен из коры Croton lecheri. Указанный млечный сок собирают и хранят в бочках при температуре 0-2°С. Взвешенные частицы, выпавшие в осадок при хранении, именуют "осадком". Указанный осадок, в основном, удаляют.
В настоящем изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе про-антоцианидина, в некоторых вариантах реализации изобретения указанный способ может включать дополнительную обработку посредством соосаждения примесей из раствора, содержащего полярный растворитель, дополнительно включающую фильтрацию материала (например, применяют метаноловый раствор с филлосиликатом (например, одним или более материалом, включающим бентонит, пренит, глинистые минералы, палыгорскит, мусковит, клинтонит и т.п. и диатомит, такой как имеющийся в продаже под названиями Celatom(r) или Celite(r), целлюлозные наполнители для сетчатого фильтра, перлит, древесный уголь, стеклянный фильтрующий элемент, песок, фильтровальная бумага, "Dowex", соль или подобные материалы) в качестве фильтровального материала и ацетат в качестве растворителя (например, метилацетат, этилацетат)), в ходе экстракции и/или промывания. Например, фильтрующие материалы, такие как филлосиликат, могут способствовать удалению примесей, например, таспина, белка и других веществ. Ацетат может способствовать растворению и впоследствии удалению вымываемых материалов, например родственных веществ с низкой молекулярной массой или фенольных соединений с низкой молекулярной массой. Дополнительная обработка может происходить до, после или вместо твердофазной экстракции. В качестве альтернативы способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина может включать способы очистки, известные в данной области, а также включает растворение частично очищенного млечного сока в спиртах (например, метаноле, этаноле, пропаноле, бутаноле и других спиртах) и экстракцию растворённого соединения с применением спирта с последующей обработкой древесным углём и фильтрацией через бентонит. Фильтрат в некоторых вариантах реализации изобретения может быть дополнительно обработан растворителем, представляющим собой ацетат, с последующей фильтрацией через плотный фильтр (например, бумагу, например, Whatman) с получением желаемого соединения, которое не содержит таспин и другие примеси.
Кроме того, способы, предложенные в настоящем изобретении, включают способы, которые подходят для производства в промышленных масштабах. Например, способы, предложенные в настоящем изобретении, могут быть применены, чтобы минимизировать потребность в утилизации токсичных материалов, растворителей, и/или могу быть применены, чтобы уменьшить объём жидкости на определённом этапе способа в промышленных масштабах производства.
В другом варианте реализации изобретения обеспечивают фармацевтическую форму, содержащую полимерную композицию на основе проантоцианидина. Предпочтительно фармацевтическая форма предназначена для перорального применения.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены способы получения фармацевтически приемлемой полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающие (i) обеспечение оседания частиц, взвешенных в млечном соке Croton spp.; (ii) доведение рН млечного сока до значения в диапазоне от примерно 6,5 до примерно 8,5; (iii) фильтрация млечного сока с получением фильтрата; (iv) доведение рН фильтрата до значения в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 5,5; (v) осуществление первой экстракции фильтрата с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер и (vi) сбор элюата, содержащего полимерную композицию на основе проантоцианидина.
В одном из вариантов реализации изобретения первая экстракция включает твердофазную экстракцию.
В одном из вариантов реализации изобретения способ дополнительно включает осуществление второй экстракции, причём вторая экстракция включает твердофазную экстракцию.
В одном из вариантов реализации изобретения вторая твёрдая фаза отличается от первой твёрдой фазы.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на содержит более чем 90% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на содержит более чем 95% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на главным образом содержит проантоцианидиновый полимер и воду.
В одном из вариантов реализации изобретения взвешенным частицам позволяют оседать по меньшей мере в течение примерно 48 ч.
В одном из вариантов реализации изобретения взвешенным частицам позволяют оседать за период времени, находящийся в диапазоне между примерно 48 ч и примерно 48 месяцами.
В одном из вариантов реализации изобретения взвешенным частицам позволяют оседать при температуре менее чем примерно 20°С; при значении температуры, находящемся между примерно 20 и примерно 0°С, между примерно 30 и примерно 20°С, между примерно 20 и примерно -20°С или между примерно 0 и 15°С.
В одном из вариантов реализации изобретения взвешенным частицам позволяют оседать при значении температуры, находящемся между примерно 0°С и 15°С, в течение по меньшей мере 2 ч.
В одном из вариантов реализации изобретения на этапе (ii) pH доводят до значения рН 8.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (iii) осуществляют с применением вспомогательного фильтровального материала.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (iii) дополнительно включает одно или более промываний водой фильтровального материала.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (iii) дополнительно включает центрифугирование млечного сока вместо фильтрации.
В одном из вариантов реализации изобретения фильтровальный материал представляет собой один или более материалов, включающих диатомит, древесный уголь, бентонит, целлюлозу, стекло, песок или фильтровальную бумагу.
В одном из вариантов реализации изобретения фильтрат, полученный на этапе (iii), и воду после любых необязательных промываний объединяют и обрабатывают посредством ультрафильтрации.
В одном из вариантов реализации изобретения ультрафильтрацию осуществляют с помощью полупроницаемой мембраны.
В одном из вариантов реализации изобретения полупроницаемая мембрана обеспечивает прохождение растворённых веществ, вплоть до имеющих молекулярную массу, выбранную из группы, состоящую из 500 Да, 1, 5, 10, 20 и 30 кДа.
В одном из вариантов реализации изобретения на этапе (iv) pH составляет 4.
В одном из вариантов реализации изобретения на этапе (v) твердофазную экстракцию осуществляют с применением смолы для твердофазной экстракции.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции выбрана из группы, состоящей из ионообменных смол, аффинных смол, адсорбционных смол, разделительных смол и их смесей.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции содержит кар-боксиметилмодифицированную агарозную смолу.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (v) осуществляют в периодическом режиме.
В одном из вариантов реализации изобретения способ дополнительно включает обработку элюата, полученного при первой твердофазной экстракции, с получением композиции, подвергаемой второй твердофазной экстракции.
В одном из вариантов реализации изобретения элюат, полученный при первой экстракции, производят посредством вымывания из твёрдой фазы с помощью комплекса растворителей, выбранных из группы, состоящей из воды, ацетона, метанола, этанола, гликоля и их смесей.
В одном из вариантов реализации изобретения вторую твердофазную экстракцию осуществляют с применением смолы для твердофазной экстракции.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции представляет собой одну или более смол, включающих смолы для эксклюзионной хроматографии, ионообменные смолы, аффинные смолы, адсорбционные смолы, разделительные смолы или их смеси.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции содержит модифицированный полисахарид.
В одном из вариантов реализации изобретения модифицированный полисахарид содержит гидро-ксипропилированный поперечно-связанный декстран.
В одном из вариантов реализации изобретения элюат, полученный при первой экстракции, получают посредством элюирования твёрдой фазы с помощью растворителя, выбранного из группы, состоящей из воды, ацетона, метанола, этанола, гликоля и их смесей.
В одном из вариантов реализации изобретения элюат, полученный при второй экстракции, смешивают с растворителем, выбранным из группы, состоящей из метанола, этанола, пропанола, бутанола, пентанола, гексанола, этиленгликоля, пропиленгликоля, этилацетата, дихлорметана, трихлорметана, тет-рахлорметана, дихлорэтана и их смесей.
В одном из вариантов реализации изобретения обработку на этапе (vi) выбирают из группы, состоящей из ультрафильтрации, сублимационной сушки, выпаривания с применением нагревания, выпаривания без применения нагревания, выпаривания под вакуумом, выпаривания без применения вакуума, распылительной сушки и их комбинаций.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,2% от количества композиции.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,1% от количества композиции, чистота которой определена посредством хроматографии.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания таспина определяют посредством хроматографии.
В одном из вариантов реализации изобретения значение полидисперсности проантоцианидина на
ходится в диапазоне между примерно 1,2 и примерно 1,8.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены полимерные композиции на основе проантоцианидина, содержащие проантоцианидиновый полимер, полученный согласно способу, описанному в описании и формуле настоящего изобретения.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на содержит более чем 90% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на содержит более чем примерно 95% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на содержит проантоцианидиновый полимер и воду.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены фармацевтические формы, содержащие полимерную композицию на основе проантоцианидина, причём полимерная композиция на основе проантоцианидина содержит более чем 90% проантоцианидинового полимера, и фармацевтически приемлемый носитель.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,2% от количества композиции.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,1% от количества композиции.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающие (i) получение частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина, (ii) осуществление твердофазной экстракции частично очищенной полимерной композиции с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер и (iii) обработку элюата с получением проантоцианидиновой композиции; причём этап (ii) осуществляют с применением смолы для твердофазной экстракции в качестве твёрдой фазы.
В одном из вариантов реализации изобретения частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина частично очищают способом, включающим получение млечного сока из Cro-ton spp. и осуществление твердофазной экстракции с применением смолы для твердофазной экстракции, не являющейся гидроксипропилированным поперечно-связанным декстраном.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции содержит кар-боксиметилмодифицированную агарозную смолу.
В одном из вариантов реализации изобретения частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина частично очищают способом, включающим получение млечного сока из Cro-ton spp. и осуществление твердофазной экстракции с применением смолы для твердофазной экстракции, не являющейся карбоксиметилмодифицированной агарозной смолой.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции содержит гид-роксипропилированный поперечно-связанный декстран.
В одном из вариантов реализации изобретения частично очищенная полимерная композиция на основе проантоцианидина содержит от примерно 35 до примерно 90% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения частично очищенная полимерная композиция на основе проантоцианидина содержит SB-300.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции, применяемая на этапе (ii), представляет собой модифицированный полисахарид.
В одном из вариантов реализации изобретения модифицированный полисахарид содержит гидро-ксипропилированный поперечно-связанный декстран.
В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции, применяемая на этапе (ii), содержит карбоксиметил-модифицированную агарозную смолу.
В одном из вариантов реализации изобретения очищенная полимерная композиция на основе про-антоцианидина содержит более чем примерно 90% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения очищенная полимерная композиция на основе про-антоцианидина содержит более чем примерно 95% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения очищенная полимерная композиция на основе про-антоцианидина содержит проантоцианидиновый полимер и воду.
В одном из вариантов реализации изобретения элюат смешивают с растворителем, выбранным из группы, состоящей из метанола, этанола, пропанола, бутанола, пентанола, гексанола, этиленгликоля, про-пиленгликоля, этилацетата, дихлорметана, трихлорметана, тетрахлорметана, дихлорэтана и их смесей.
В одном из вариантов реализации изобретения обработку выбирают из группы, состоящей из ультрафильтрации, сублимационной сушки, выпаривания с применением нагревания, выпаривания без применения нагревания, выпаривания под вакуумом, выпаривания без применения вакуума, распылительной сушки и их комбинаций.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,2% от количества композиции. В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в очищен
ной полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,1% от количества композиции.
В одном из вариантов реализации изобретения значение полидисперсности проантоцианидинового полимера в полимерной композиции на основе проантоцианидина находится в диапазоне между примерно 1,2 и примерно 1,8.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены полимерные композиции на основе проантоцианидина, содержащие проантоцианидиновый полимер, полученные согласно способу, который включает (i) получение частично очищенной полимерной композиции на основе проантоциани-дина, (ii) осуществление твердофазной экстракции частично очищенной полимерной композиции с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер и (iii) обработку элюата с получением проантоцианидиновой композиции; причём этап (ii) осуществляют с применением смолы для твердофазной экстракции в качестве твёрдой фазы.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на имеет степень чистоты и концентрацию, достаточные для включения в терапевтически эффективную фармацевтическую композицию.
В одном из вариантов реализации изобретения очищенная полимерная композиция на основе про-антоцианидина содержит более чем 90% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения очищенная полимерная композиция на основе про-антоцианидина содержит более чем 95% проантоцианидинового полимера.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианиди-на, главным образом, состоит из проантоцианидинового полимера и воды.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены фармацевтические формы, содержащие очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина, полученную согласно способу, который включает (i) получение частично очищенной полимерной композиции на основе про-антоцианидина, (ii) осуществление твердофазной экстракции частично очищенной полимерной композиции с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер и (iii) обработку элюата с получением проантоцианидиновой композиции, причём этап (ii) осуществляют с применением смолы для твердофазной экстракции в качестве твёрдой фазы; и фармацевтически приемлемый носитель.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,2% от количества композиции.
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания остаточного таспина в очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина составляет менее чем 0,1% от количества композиции.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающие (i) выдерживание млечного сока Croton spp. при температуре ниже комнатной по меньшей мере в течение 48 ч для обеспечения оседания взвешенных частиц и или этап (ii) (а), или этап (ii) (b), или этап (ii) (а) и этап (ii) (b) в следующем виде: (ii) (а) растворение млечного сока в воде или метаноле, добавление бентонита к раствору при перемешивании и необязательном доведении рН до значения в диапазоне от 5,0 до 7,0 и фильтрация с получением фильтрата и/или (ii) (b) добавление этилацетата и необязательно добавление воды и/или доведение рН до значения в диапазоне от 6,5 до 8,5, перемешивание и удаление слоя этилацетата с получением водной или мета-нольной фазы или твёрдого осадока, и, таким образом, получение полимерной композиции на основе проантоцианидина.
В одном из вариантов реализации изобретения способ дополнительно включает очистку водной или метанольной фазы посредством фазных экстракций с получением продукта.
В одном из вариантов реализации изобретения очистка включает твердофазную экстракцию.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (ii) (а) происходит в метаноле.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (ii) (а) повторяют от одного до двадцати раз.
В одном из вариантов реализации изобретения этап (ii) (b) повторяют от одного до двадцати раз.
В одном из вариантов реализации изобретения на этапе (ii) (а) удаляют примерно 10% или более белков, находящихся в образце до проведения этапа (ii) (а).
В одном из вариантов реализации изобретения уровень содержания таспина в млечном соке, составляющий более 250 ч./млн, снижают до менее чем примерно 250 ч./млн.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены способы получения фармацевтически приемлемой полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающие (i) обеспечение оседания частиц, взвешенных в млечном соке Croton spp.; (ii) доведение рН млечного сока до значения в диапазоне от примерно 6,5 до примерно 8,5; (iii) фильтрацию млечного сока с получением фильтрата; (iv) доведение рН фильтрата до значения в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 5,5; (v) осуществление первой твердофазной экстракции фильтрата с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер и (vi) сбор элюата, содержащего полимерную композицию на основе проантоцианидина.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены способы получения полимер
ной композиции на основе проантоцианидина, включающие а) обеспечение раствора млечного сока, полученного из растения Croton lecheri, содержащего осадок; b) добавление органического растворителя к раствору млечного сока растения и осадку; с) отделение органического слоя и концентрирование водного слоя с получением твёрдого вещества.
В одном из вариантов реализации изобретения способ дополнительно включает отделение водного слоя и концентрирование органического слоя с получением твёрдого вещества; d) растворение твёрдого вещества в водном растворителе; е) хроматографирование раствора с применением элюирующего растворителя и f) выделение проантоцианидина, содержащего Крофелемер и, таким образом, получение полимерной композиции на основе проантоцианидина.
Согласно одному из аспектов в настоящем изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающие а) обеспечение раствора млечного сока, полученного из растения Croton lecheri, содержащего осадок; b) добавление органического растворителя к раствору млечного сока растения и осадку; с) отделение органического слоя и концентрирование водного слоя с получением твёрдого вещества или в качестве альтернативы отделение водного слоя и концентрирование органического слоя с получением твёрдого вещества; d) растворение твёрдого вещества в водном растворителе; е) хроматографирование раствора с применением элюирующего растворителя и f) выделение проантоцианидина, содержащего Крофелемер и, таким образом, получение полимерной композиции на основе проантоцианидина.
В одном из вариантов реализации изобретения органический растворитель, применяемый на этапе (b), выбирают из одного или более растворителей, включающих спирты, кетоны, сложные эфиры, простые эфиры или их смеси.
В одном из вариантов реализации изобретения кетон содержит метилэтилкетон.
В одном из вариантов реализации изобретения органический растворитель, применяемый на этапе (b), выбран из смеси метанола и этилацетата.
В одном из вариантов реализации изобретения колонка, применяемая для хроматографии на этапе (е), содержит отдельную колонку или установку из двух колонок, выбранных из CM-Sepharose Fast Flow Column и Sephadex LH-20.
Другие аспекты и варианты реализации изобретения предложены ниже.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 представлен аминокислотный анализ образца частично очищенной полимерной композиции перед обработкой бентонитом в водном растворе;
на фиг. 2 - аминокислотный анализ образца частично очищенной полимерной композиции после обработки бентонитом в водном растворе;
на фиг. 3 - хроматограмма продукта в увеличенном масштабе после обработки бентонитом, соосаж-дения этилацетатом и первой фильтрации;
на фиг. 4 - аминокислотный анализ образца частично очищенной полимерной композиции перед обработкой бентонитом в растворе метанола;
на фиг. 5 - аминокислотный анализ образца частично очищенной полимерной композиции после обработки бентонитом в растворе метанола;
на фиг. 6 - блок-схема способа, предложенного в настоящем изобретении;
фиг. 7 представляет собой хроматограмму обращённо-фазовой ВЭЖХ продукта, полученного способом, предложенным в настоящем изобретении, с применением смолы LH-20.
Подробное описание изобретения
В изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе проантоциани-дина и композиция, полученная согласно указанному способу. Исходным материалом является млечный сок растения, например млечный сок Croton spp. или Calophyllum spp. В одном из вариантов реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина получают из млечного сока Croton lechleri. В другом варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоциани-дина получают из млечного сока Calophyllum inophylum. В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина, полученная способом, предложенным в настоящем изобретении, имеет более низкую концентрацию таспина, чем концентрация таспина в исходном материале, представляющем собой млечный сок.
В композиции, полученной согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, проанто-цианидиновый полимер содержит звенья, представляющие собой лейкоантоцианидины. Лейкоантоциа-нидины включают, например, мономерные флавоноиды, которые включают катехины, эпикатехины, гал-локатехины, галлоэпикатехины, флаванолы, флавонолы и флаван-3,4-диолы, лейкоцианидины и анто-цианидины. В одном из вариантов реализации изобретения проантоцианидиновый полимер содержит полимеры с количеством флавоноидных звеньев от примерно 2 до примерно 30, от примерно 2 до примерно 15, от примерно 2 до примерно 11 или в среднем от примерно 7 до примерно 8 со среднечислен-ной молекулярной массой, составляющей от примерно 2000 до примерно 3000 Да, или, например, с молекулярной массой, составляющей от примерно 1100 до примерно 2900 Да, или, например, с молекулярной массой, составляющей от примерно 1500 до примерно 3000 Да. Проантоцианидиновый полимер мо
жет быть растворён в водном растворе, также проантоцианидиновый полимер может быть растворён в других растворах и смесях водных и неводных растворов.
В композиции, полученной согласно одному из вариантов реализации изобретения, проантоциани-диновый полимер содержит крофелемер (USAN). Для получения дополнительной информации о проан-тоцианидиновых полимерах и/или крофелемере см., например, CAS, регистрационный номер 148465-456 и/или патент США № 5211944 (Tempesta).
Полимерные композиции на основе проантоцианидина, полученные способом, предложенным в настоящем изобретении, могут быть анализируемы любыми способами, известными в данной области. Например, проантоцианидиновые полимеры можно определять с помощью поглощения ультрафиолетового излучения (лямбда-max). Некоторые проантоцианидиновые мономеры и полимеры, например, имеют широкие пики, находящиеся в диапазоне от примерно 200 до примерно 300 нм, например в диапазонах между примерно 190 и примерно 215 нм (например, примерно 205-210 нм) и между примерно 260 и примерно 295 нм (например, 275-280 нм). Фракции, содержащие проантоцианидиновые полимеры, могут иметь дополнительный главный максимум поглощения УФ в диапазоне от примерно 400 до примерно 500 нм, между 425 и 475 нм и примерно 460 нм.
Получение полимерных композиций на основе проантоцианидина.
В настоящем изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе про-антоцианидина, имеющей степень чистоты и концентрацию, необходимые для применения в терапевтически эффективной фармацевтической композиции. Исходный материал содержит млечный сок, например, выделенный из Croton spp. или Calophyllum spp. Млечный сок может быть получен любым способом, известным в данной области, например, надрезанием кротонового дерева и сбором млечного сока, скапливающегося внутри или выступившего из надрезов.
Способ включает, например, один или более следующих этапов: производство или получение млечного сока, содержащего проантоцианидиновый полимер, выдерживание млечного сока (например, полученного из Croton spp.) при температуре ниже комнатной (например, от примерно 0 до примерно 20°С, постоянно или с перерывами) в течение по меньшей мере 48 ч (в диапазоне между примерно 1 ч и примерно 30 днями) для обеспечения оседания взвешенных частиц; доведение рН млечного сока до значения в диапазоне от примерно 6,5 до примерно 8,5; фильтрация млечного сока с получением фильтрата; доведение рН фильтрата до значения в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 5,5; осуществление первой экстракции фильтрата с применением фазы первой экстракции (например, твердофазной экстракции) с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер; осуществление второй экстракции с применением фазы второй экстракции (например, твёрдой фазы) с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер, и обработка элюата с получением полимерной композиции на основе проантоцианидина. Способ также может включать дополнительный, необязательный этап, такой как осуществление дополнительного этапа обработки, например, дополнительного этапа обработки между первой и второй экстракцией.
В некоторых вариантах реализации изобретения выдерживание при температуре ниже комнатной включает одно или более выдерживание материала при температуре ниже комнатной в течение всего времени, выдерживание материала при температуре ниже комнатной большую часть времени, выдерживание материала при температуре ниже комнатной с перерывами, циклическое изменение температуры материала, включающее температуру ниже комнатной. Выдерживание также может включать, например, время, необходимое для снижения температуры до температуры ниже комнатной, и время нагревания до комнатной температуры или выше.
В одном из вариантов реализации изобретения фаза второй экстракции отличается от фазы первой экстракции.
В качестве альтернативы способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина может включать получение или обеспечение частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина; осуществление первой экстракции частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина с применением фазы первой экстракции с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер, и обработку элюата с получением очищенной композиции на основе проантоцианидина, причём первую экстракцию осуществляют с применением смолы для твердофазной экстракции.
В изобретении, если не указано иное, термин "очищенный" или "чистый" означает композицию, которая содержит полимерную композицию на основе проантоцианидина, практически не содержащую примесей. Например, чистая полимерная композиция на основе проантоцианидина содержит более чем примерно 80 мас.% полимерной композиции на основе проантоцианидина и менее чем примерно 20 мас.% примесей, более предпочтительно более чем примерно 90 мас.% полимерной композиции на основе проантоцианидина и менее чем примерно 10 мас.% примесей, ещё более предпочтительно более чем примерно 95 мас.% полимерной композиции на основе проантоцианидина и менее чем примерно 5 мас.% примесей. Степень чистоты может быть определена способами, известными химику или фармацевту. Предпочтительно чистота соединений составляет более чем 99% (мас./мас.), при этом соединения, чистота которых составляет более чем 95, 90 или 85%, могут быть применены при необходимости.
В качестве альтернативы наряду с твердофазной экстракцией или вместо неё способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина может включать этап фильтрации с применением фильтровального материала (например, бентонита, древесного угля или одного или более фильтровальных материалов, указанных в настоящем изобретении), на указанном этапе млечный сок или частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина смешивают с растворителем, таким как спирт (например, метанол), вода, водная/органическая смесь или подобный перечисленным, а затем промывают или осаждают с помощью другого растворителя, например, этилацетата, метанола, этанола, пропанола, бутанола, пентанола, гексанола, этиленгликоля, пропиленгликоля, дихлорметана, трихлорме-тана, тетрахлорметана, дихлорэтана, диэтилового эфира, ацетона, диметилформамида, диметилсульфок-сида, их эфирных комбинаций и т.п.
После завершения указанного способа полимерная композиция на основе проантоцианидина содержит проантоцианидиновый полимер и остаточные или следовые количества, например, воды, других растворителей, применяемых в указанном способе, мономерные звенья проантоцианидинового полимера, другие компоненты природного происхождения, входившие в состав первоначального млечного сока, и т.п. В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоциани-дина, предложенная в настоящем изобретении, содержит более чем примерно 90% чистого (например, определённой посредством хроматографии чистоты) проантоцианидинового полимера. В качестве альтернативы полимерная композиция на основе проантоцианидина, полученная согласно указанному способу, содержит более чем примерно 95% чистого проантоцианидинового полимера. В другом варианте реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина содержит проантоциани-диновый полимер и остаточное количество воды. В другом варианте реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина преимущественно состоит из проантоцианидинового полимера и остаточного количества воды. В настоящем изобретении "преимущественно состоит" включает проантоцианидиновый полимер, составляющий более чем 95% чистой полимерной композиции на основе проантоцианидина, количество других компонентов которой составляет менее чем 5%, а количество любого другого отдельно взятого компонента составляет менее чем 1,0%. Процент содержания проанто-цианидинового полимера по массе может быть получен способами, известными в данной области, например посредством ВЭЖХ-анализа с применением УФ-детектора и измерением площади под кривой полученных данных. Процент по массе относится, например, к определяемым компонентам по сравнению со стандартным образцом и не зависит от количества влаги.
Нижний предел определённой, например, посредством хроматографии чистоты композиций, полученных согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, может представлять собой количество проантоцианидинового полимера, составляющее, например, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%, или любое количество в диапазоне между перечисленными количествами. Чистота композиций, полученных согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, может достигать 100% чистого проантоцианидинового полимера включительно, где количество, составляющее 100%, означает, что любые дополнительные компоненты на обнаруживаемом уровне отсутствуют. В качестве альтернативы верхний предел чистоты может представлять собой количество проантоцианидинового полимера, составляющее 99,99, 99,9 и 99% или любое количество в диапазоне между перечисленными.
В настоящем изобретении предложены способы получения полимерной композиции на основе про-антоцианидина из млечного сока, содержащего проантоцианидиновый полимер. Млечный сок выдерживают при температуре ниже комнатной (например, ниже 20°С) в течение периода времени, достаточного для обеспечения оседания взвешенных частиц (например, от примерно 1 ч до примерно 30 дней). Для оседания взвешенных частиц может быть предоставлено большее количество времени, например от примерно 30 дней до примерно 4 лет. В одном из вариантов реализации изобретения млечный сок могут настаивать при температуре приблизительно 0-15°C в течение периода времени от 48 ч до 48 месяцев, или при значении температуры или в течение периода времени в пределах соответствующего диапазона, например, при 0-10°С, 2-8°C или 5°С в течение 13, 14 или 15 дней. В одном из вариантов реализации изобретения обеспечивают отстаивание млечного сока в течение 14 дней при температуре 2-8°С. В качестве альтернативы может быть применено любое значение в вышеуказанных диапазонах.
В настоящем изобретении время, достаточное для осаждения, представляет собой время, за которое будет обеспечено оседание взвешенных частиц на или около дна сосуда, содержащего полимер. Указанное время может составлять, например, 1 ч или 30 дней. Достаточное время также может представлять собой установленное среднее время, необходимое для обеспечения достаточной степени оседания.
После истечения времени, достаточного для осаждения при температуре ниже комнатной, рН млечного сока доводят до значения в диапазоне между примерно 6,5 и примерно 8,5. рН может быть доведён с применением любого регулирующего рН агента, известного специалисту в данной области, например карбоната натрия, бикарбоната натрия, гидроксида натрия, карбоната кальция и т.п. В одном из вариантов реализации изобретения рН доводят примерно до 8. После доведения рН обеспечивают отстаивание млечного сока. Например, в одном из вариантов реализации изобретения млечный сок с установленным рН охлаждают в течение 2 ч для того, чтобы обеспечить получение и выпадение в осадок из млечного
сока твёрдых частиц или взвеси. Степень охлаждения может варьироваться от температуры ниже комнатной до температуры замерзания млечного сока. Например, значение температуры может находиться в диапазоне от примерно 0 до примерно 15°С.
После доведения рН и периода осаждения реакционную смесь пропускают через фильтровальный материал. Подходящие фильтровальные материалы содержат диатомит (доступный как Celatom(r) или Celite(r)). Другие фильтровальные материалы могут содержать целлюлозные наполнители для сетчатого фильтра, например перлит, древесный уголь, бентонит, стеклянный фильтрующий элемент, песок, фильтровальную бумагу, "Dowex", соль или подобные материалы. По окончании фильтрации твёрдый остаток на фильтровальном материале может быть промыт дополнительными аликвотами водного раствора или воды. При желании этап фильтрации может включать центрифугирование для оказания содействия на этапе фильтрации.
В одном из вариантов реализации изобретения бентонит и/или один или более других перечисленных фильтровальных материалов применяют или в качестве единственного фильтровального материала, или в комбинации с одним или более другими фильтровальными материалами в водной, метанольной, водно-органической смеси или другой системе растворителей для уменьшения уровня белка, и/или тас-пина, и/или родственных веществ, и/или примеси после проведения фильтрации. Бентонит представляет собой коммерчески доступную глину. Например, бентонит может быть приобретён у Aldrich Chemicals. Другие фильтровальные материалы могут включать целлюлозные наполнители для сетчатого фильтра, например перлит, древесный уголь, бентонит, стеклянный фильтрующий элемент, песок, фильтровальную бумагу, "Dowex", соль или подобные материалы. Не желая быть связанными с какой-либо теорией, однако полагают, что при определённом рН белок, и/или таспин, и/или родственные вещества, и/или примеси, которые могут присутствовать в исходном материале, представляющем собой млечный сок, или частично очищенных полимерных композициях на основе проантоцианидина, могут существовать в виде положительно заряженных частиц, которые взаимодействуют с отрицательным зарядом на бентоните или другом фильтровальном материале, что приводит к удалению белка, и/или таспина, и/или родственных веществ, и/или примесей вместе с бентонитом или другим фильтровальным материалом после фильтрации. В одном из вариантов реализации изобретения бентонит добавляют к водной, или мета-нольной, или водно-органической системе, содержащей частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина, и перемешивают, после чего следует фильтрация с удалением бентонита и любых материалов или осаждённых частиц, связанных с бентонитом. Количество белка, удалённого таким образом, может составлять более чем примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90 и примерно 95% и примерно любое целочисленное значение в диапазоне между указанными значениями по сравнению с количеством белка в первоначальном млечном соке. Например, применение бентонита в водной системе может способствовать удалению более чем примерно 50% белка по сравнению с количеством в млечном соке. Бентонит или другой фильтровальный материал может быть применён отдельно или в комбинации с другими этапами, упомянутыми в настоящем способе, например, твердофазной экстракцией, выпадением кристаллов из раствора и т.д.
Полученный фильтрат может быть объединён с водой, которой промывали фильтровальный материал, и объединённые водные слои могут быть обработаны для удаления избытка воды и/или подготовки раствора к дальнейшей обработке. Обработка и/или концентрирование могут быть достигнуты в вакууме или, например, посредством ультрафильтрации (например, с применением полупроницаемой мембраны). В одном из вариантов реализации изобретения концентрирование осуществляют с помощью ультрафильтрации. Не желая быть связанными с какой-либо теорией, однако считается, что ультрафильтрация обеспечивает удерживание взвешенных твёрдых частиц и растворённых веществ с высокой молекулярной массой на одной из сторон полупроницаемой мембраны, при этом вода и растворённые вещества с низкой молекулярной массой проходят через мембрану. Соответствующие полупроницаемые мембраны могут иметь порог задержки, составляющий 500 Да, 1, 5, 10, 20, 30 кДа, от 500 Да до примерно 750, от 900 Да до примерно 5 кДа или от 1 до примерно 40 кДа. При желании ультрафильтрация может происходить более одного раза, или может быть применён одновременно или последовательно более чем один тип полупроницаемой мембраны с отделением порции с помощью более высокого и более низкого порога проницаемости. С применением одного или более типов полупроницаемых мембран могут быть изменены набор химических параметров (например, количество и величина компонентов природного происхождения, входивших в состав первоначального млечного сока, за исключением проантоцианидинового полимера) и показатель полидисперсности проантоцианидинового полимера (например, молекулярно-массовое распределение полимера) полученной композиции. В одном из вариантов реализации изобретения полупроницаемая мембрана обеспечивает прохождение растворённых низкомолекулярных веществ, молекулярная масса которых не превышает 1 кДа. В качестве альтернативы полупроницаемая мембрана удержит растворённые вещества, молекулярная масса которых составляет более чем 5 кДа.
После обработки фильтрата и необязательного промывания рН полученного раствора может быть
доведён до значения в диапазоне от 3,5 до 5,5 с применением, например, раствора сильной или слабой кислоты, содержащего соляную кислоту, лимонную кислоту и т.п. В одном из вариантов реализации изобретения рН доводят примерно до 4. В качестве альтернативы рН может быть доведён перед началом ультрафильтрации способом, описанным выше.
В одном из вариантов реализации изобретения после обработки с применением бентонита или другого фильтровального материала млечный сок, или водный раствор, или раствор метанола, или водно-органическую систему, содержащую млечный сок, обрабатывают этилацетатом один или более раз. Подходящие растворители включают, например, метанол, этанол, пропанол, бутанол, пентанол, гексанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, этилацетат, дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтан, диэтиловый эфир, ацетон, диметилформамид, диметилсульфоксид, простой эфир, их комбинации и т.п. Не желая быть связанными с какой-либо теорией, однако полагают, что этилацетат удаляет низкомолекулярные родственные вещества, при этом преимущественно оставляя желаемые проантоцианидиновые полимеры. Низкомолекулярные родственные вещества могут без ограничения включать впоследствии вымываемые материалы, возможно, низкомолекулярные фенольные соединения. Обработка с помощью этилацетата может происходить один или более раз. Например, могут быть осуществлены два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять и более промываний этилацетатом. рН может быть доведён до значения в диапазоне от примерно 6,5 до примерно 8,5, например, с применением 0,5н. раствора NaOH. В одном из вариантов реализации изобретения осуществляют шесть промываний этилацетатом. Поскольку после промывания этилацетатом существует водный, или метанольный, или водно-органический слой, желаемый проантоцианидиновый полимер может оставаться в водном слое и, таким образом, может быть отделён от слоя этилацетата для осуществления очистки. В качестве альтернативы этилацетат может быть рассмотрен в качестве сорастворителя, который при добавлении сам по себе или с другими осаждающими агентами, такими как соль, вызывает осаждение из раствора. Другими словами, поскольку существует недостаток воды, или метанола, или водно-органической системы для сохранения в растворе полимерной композиции на основе проантоцианидина вследствие добавления этилацетата, может образоваться осадок, который может быть отделён от жидких слоев путем фильтрации. Также могут быть осуществлены обратимые водные экстракции этилацетата, применяемого для промываний. В одном из вариантов реализации изобретения полученная полимерная композиция на основе проантоциа-нидина имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне от примерно 2000 до примерно 3000 Да, или, например, молекулярную массу в диапазоне от примерно 1100 до примерно 2900 Да, или, например, молекулярную массу в диапазоне от примерно 1500 до примерно 3000 Да и полидисперсность в диапазоне между примерно 1,2 и примерно 1,8, или, например, между примерно 0,9 и примерно 1,2, или от примерно 0,5 до примерно 1,5, или от примерно 0,8 до примерно 1,3.
В одном из вариантов реализации изобретения осуществляют обработку и бентонитом, и этилаце-татом. В альтернативном варианте реализации изобретения обработка бентонитом и этилацетатом происходит до, после или вместо любых этапов твердофазной экстракции. Предпочтительно количество полимерной композиции на основе проантоцианидина, выделенной после обработки бентонитом и/или этилацетатом, составляет более 30 мас.% по сравнению с исходным материалом. В качестве альтернативы количество продукта может составлять более 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46,
47, 48, 49 или 50% и более.
Твердофазная экстракция раствора с установленным рН обеспечивает дополнительную очистку проантоцианидинового полимера. Твердофазная экстракция может быть осуществлена с применением различных твёрдых фаз, таких как поперечно-связанный полистирол, модифицированная агароза или модифицированный декстран. Тип твёрдой фазы не ограничен и может включать смолы, такие как ионообменные смолы, адсорбционные смолы, разделительные смолы, смолы для эксклюзионной хроматографии, смолы со смешанным действием и смеси более чем одного типа смолы. В одном из вариантов реализации изобретения твердофазную экстракцию осуществляют с применением смолы с некоторыми ионообменными свойствами, такой как карбоксиметилмодифицированная агароза. В качестве альтернативы смола для твердофазной экстракции может представлять собой модифицированный полисахарид, такой как гидроксипропилированный поперечно-связанный декстран. Коммерчески доступные носители для твердофазной экстракции включают CM-Sepharose(r), который представляет собой карбоксиметил-модифицированную агарозу, и Sephadex LH20(r), который представляет собой гидроксипропилирован-ный поперечно-связанный декстран. Твердофазная экстракция может быть осуществлена в периодическом или непрерывном режиме. В одном из вариантов реализации изобретения твердофазную экстракцию осуществляют в периодическом режиме для повышения эффективности. После экстракции твёрдую фазу извлекают с удалением из твёрдой фазы проантоцианидинового полимера. Извлечение может быть осуществлено с применением любого растворителя или смеси растворителей, удаляющих проантоциани-дин из твёрдой фазы. Например, растворители для извлечения содержат воду, ацетон, метанол, этанол, гликоль и их смеси. В одном из вариантов реализации изобретения извлечение осуществляют с применением воды и смесей воды и ацетона.
В вышеописанных способах элюат может быть подвергнут дополнительным циклам твердофазной
экстракции с применением твёрдой фазы, отличающейся от твёрдой фазы, применённой ранее. Тип твёрдой фазы не ограничен и может включать, например, смолы, такие как ионообменные смолы, адсорбционные смолы, разделительные смолы, смолы для эксклюзионной хроматографии, смолы со смешанным действием и смеси более чем одного типа смолы. Например, в случае когда CM-Sepharose(r) применяют для осуществления первой твердофазной экстракции, вторая твердофазная экстракция может быть осуществлена с применением Sephadex LH-20(r) в качестве твердого носителя, или наоборот.
После осуществления твердофазных экстракций или, в качестве альтернативы, после применения фильтровального материала, такого как бентонит, элюат, содержащий проантоцианидиновый полимер, может быть смешан с растворителем, выбранным из одного или более растворителей, включающих метанол, этанол, пропанол, бутанол, пентанол, гексанол, этилен, пропиленгликоль, этилацетат, дихлорме-тан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтан, диэтиловый эфир, ацетон, диметилформамид, диметил-сульфоксид, простой эфир, их комбинации и т.п. Не желая быть связанными с какой-либо конкретной теорией, смешивание с дополнительным растворителем может быть полезно для обеспечения дополнительного осаждения и/или дополнительного промывания слоя, содержащего проантоцианидиновый полимер. В одном из вариантов реализации изобретения растворителем, предназначенным для обработки водного концентрата, является бутанол. После необязательного смешивания с дополнительным растворителем слой, содержащий проантоцианидиновый полимер, может быть обработан посредством ультрафильтрации, выпаривания с применением или без применения нагревания, выпаривания с применением или без применения вакуума, сублимационной сушки, распылительной сушки и т.п., включая комбинации технологий обработки, с получением полимерной композиции на основе проантоцианидина.
Согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, полимерные композиции на основе проантоцианидина имеют концентрации и степени чистоты, подходящие для применения в фармацевтических композициях. Нижний предел определённой посредством хроматографии чистоты композиций, полученных согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, может представлять собой количество проантоцианидинового полимера, составляющее примерно 80, примерно 90, примерно 91, примерно 92, примерно 93, примерно 94, примерно 95, примерно 96, примерно 97, примерно 98 или примерно 99% или любое количество в диапазоне между перечисленными количествами. Определённая посредством хроматографии чистота композиций, полученных согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, может достигать 100% включительно, где количество, составляющее 100%, означает, что любые дополнительные компоненты на обнаруживаемом уровне отсутствуют. В качестве альтернативы верхний предел чистоты, определённой посредством хроматографии, может составлять примерно 99,99, примерно 99,9 и примерно 99% или любое количество в диапазоне между перечисленными. Например, количество таспина, присутствующего в исходном млечном соке, может быть уменьшено благодаря способам, предложенным в настоящем изобретении. Уровень таспина, чистоту которого определяют посредством хроматографии, в полимерной композиции на основе проантоцианидина, полученной согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, может варьироваться от 1% до количеств, находящихся ниже обнаруживаемого уровня. Например, верхний предел количества таспина, чистоту которого определяют посредством хроматографии, в полимерной композиции на основе проанто-цианидина может составлять примерно 1,0, примерно 0,9, примерно 0,8, примерно 0,7, примерно 0,6, примерно 0,5%, примерно 0,4, примерно 0,3, примерно 0,2, примерно 0,1 или примерно 0,05% или любое количество в диапазоне между перечисленными количествами или ниже вплоть до уровня обнаружения. В одном из вариантов реализации изобретения в полимерной композиции на основе проантоцианидина уровень содержания таспина, чистоту которого определяют посредством хроматографии, находится ниже примерно 0,2% (например, 2000 ч./млн). Полимерная композиция на основе проантоцианидина, полученная согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, предпочтительно содержит количество таспина, чистоту которого определяют посредством хроматографии, в диапазоне между примерно 0,1 и примерно 0% (например, не обнаруженное количество таспина).
В одном из вариантов реализации изобретения показатель полидисперности может варьироваться от приблизительно 1,2 до 1,8. В зависимости от желаемой фармацевтической формы может быть выбран узкий диапазон молекулярных масс для достижения низкого показателя полидисперсности, или может быть выбран более широкий диапазон молекулярных масс, или различные более высокие или более низкие пороговые значения. Полидисперсность определяется не только указанным этапом ультрафильтрации, но также может зависеть от других параметров способа.
В качестве альтернативы указанному выше способу способы, предложенные в настоящем изобретении, также включают получение очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина в степени чистоты и концентрации, необходимых для включения в терапевтически эффективную фармацевтическую композицию, включающее получение частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина, осуществление экстракции (например, твердофазной экстракции) частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина с получением элюата, содержащего проантоцианидиновый полимер, и обработки элюата с получением очищенной проантоцианидиновой композиции. В одном из вариантов реализации изобретения экстракцию осуществляют с применением
смолы для твердофазной экстракции в качестве твёрдой фазы. В одном из вариантов реализации изобретения частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина частично очищают способом, включающим получение млечного сока из Croton spp. и осуществление твердофазной экстракции с применением смолы для твердофазной экстракции, которая не является гидроксипропилирован-ным поперечно-связанным декстраном. В одном из вариантов реализации изобретения смола для твердофазной экстракции, применённая для выполнения частичной очистки исходного материала, представляет собой карбоксиметилмодифицированную агарозную смолу. Частично очищенная полимерная композиция на основе проантоцианидина может содержать, например, от примерно 35 до примерно 90% проантоцианидинового полимера, чистоту которого определяют посредством хроматографии. В диапазоне от примерно 35 до примерно 90% частично очищенная полимерная композиция на основе проанто-цианидина может содержать любой поддиапазон, например 40-80, 45-75, 50-70, 55-65 или примерно 60%. В качестве альтернативы частично очищенная полимерная композиция на основе проантоцианидина может содержать любое численное количество проантоцианидинового полимера в диапазоне 35-90%, например 36, 37, 38% и т.п. до 87, 88, 89 и 90% или любое значение между ними. В одном из вариантов реализации изобретения частично очищенная полимерная композиция на основе проантоцианидина может представлять собой SB-300. Кроме того, частично очищенная полимерная композиция на основе проантоцианидина может иметь уровень таспина, составляющий примерно 0,2% или выше, например примерно 0,2, примерно 0,3, примерно 0,4, примерно 0,5, примерно 0,6, примерно 0,7, примерно 0,8, примерно 0,9, примерно 1,0% или выше или любое количество в диапазоне между перечисленными значениями уровня вплоть до природного уровня в млечном соке.
Твердофазная экстракция может быть выполнена с применением одной или более смол для твердофазной экстракции. Например, такие смолы могут включать модифицированные полисахариды или подобные материалы, такие как карбоксиметилмодифицированная агароза. Модифицированные полисахариды могут включать гидроксипропилированный поперечно-связанный декстран. Коммерчески доступные носители для твердофазной экстракции включают СМ-Sepharose(r), который представляет собой карбоксиметилмодифицированную агарозу, и Sephadex LH20(r), который представляет собой гидрокси-пропилированный поперечно-связанный декстран.
После осуществления твердофазных экстракций элюат, содержащий проантоцианидиновый полимер, может быть смешан с растворителем, выбранным из одного или более растворителей, включающих метанол, этанол, пропанол, бутанол, пентанол, гексанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, этилацетат, дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтан, диэтиловый эфир, ацетон, диметилформамид, диметилсульфоксид, простой эфир, их смеси и т.п. В одном из вариантов реализации изобретения растворитель для промывания водного концентрата представляет собой бутанол. После необязательного смешивания с дополнительным растворителем слой, содержащий проантоцианидиновый полимер, может быть обработан посредством ультрафильтрации, выпаривания с применением или без применения нагревания, выпаривания с применением или без применения вакуума, сублимационной сушки, распылительной сушки и т.п., включая комбинации технологий обработки, с получением готовой полимерной композиции на основе проантоцианидина.
В способе получения проантоцианидина органические растворители выбирают из одного или более растворителей, включающих спирты, кетоны, сложные эфиры и простые эфиры. Кетоны выбирают, например, из метилэтилкетона и изобутилкетона. Сложные эфиры выбирают, например, из этилацетата, метилацетата, пропилацетата и бутилацетата. Простые эфиры выбирают, например, из диэтилового эфира, метилового эфира, диметилового эфира и др. Органические растворители также могут представлять собой смеси спиртов, кетонов, сложных эфиров и простых эфиров. Например, смесь может представлять собой комбинацию спирта и сложных эфиров, таких как метанол и этилацетат.
Система хроматографической очистки содержит, например, отдельную колонку или установку из колонок, выбранных, например, из CM-Sepharose Fast Flow Column и Sephadex LH-20. При применении нескольких колонок они могут быть применены совместно, одна за другой или по отдельности. Элюенты выбирают, например, из водных растворителей, таких как вода и растворители, смешивающиеся с водой.
В другом варианте реализации изобретения способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина может предусматривать способы очистки и может включать создание частично очищенного млечного сока, растворённого в спиртах (например, метаноле), и экстракцию растворённого соединения спиртом с последующей обработкой с применением фильтра (например, древесного угля) и фильтрацией через другой фильтрующий слой, например слой бентонита. Затем фильтрат может быть обработан ацетатом (например, этилацетатом) с последующей пропусканием через фильтр (например, Whatman) с получением проантоцианидина без примеси таспина, например, где количество таспина находится ниже обнаруживаемого уровня.
Терапевтические применения.
В изобретении описаны применения композиций, полученных согласно способам производства, изложенным в изобретении, для лечения и/или предотвращения одного или нескольких симптомов синдрома раздраженного кишечника с преобладающей диареей (СРКД) у теплокровных животных, включая
людей мужского и женского пола, указанные симптомы включают, но не ограничены только ими, боль, дискомфорт в животе, диарею, наличие неотложного позыва к мочеиспусканию, нарушение частоты и консистенции стула. Способы, описанные в настоящей заявке, как правило включают введение субъекту, нуждающемуся в лечении СРКД, полимерной композиции на основе проантоцианидина. В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина вводится перо-рально и всасывается не системно. В одном из вариантов реализации изобретения субъект включает животное. В одном из вариантов реализации изобретения субъект включает примата. В другом варианте реализации изобретения субъект включает человека. В другом варианте реализации изобретения субъект включает женщину и/или мужчину.
В одном из вариантов реализации изобретения предложены способы лечения боли и диареи, вызванных СРКД, включающие введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, полимерную композицию на основе проантоцианидина в количестве, эффективном для лечения боли и диареи, вызванных СРКД. В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены способы лечения желудочно-кишечного дискомфорта и диареи, вызванных СРКД, включающие введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, полимерную композицию на основе проантоцианидина в количестве, эффективном для лечения желудочно-кишечного дискомфорта и диареи, вызванных СРКД. В некоторых вариантах реализации изобретения определённое количество полимерной композиции на основе проантоцианидина вводят совместно с обезболивающим и/или противовоспалительные соединением, например, ингибирую-щим СОХ-2 и предпочтительно ингибирующим скорее СОХ-2, чем СОХ-1.
В других вариантах реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианиди-на вводят или одновременно, перед, во время, или после введения другой композиции.
В типичных вариантах реализации изобретения частота стула уменьшается по меньшей мере на 10, 20, 30, 40 50 60 70 80% или более по сравнению с частотой стула субъекта до начала лечения с применением полимерной композиции на основе проантоцианидина. В других вариантах реализации изобретения частота стула уменьшается по меньшей мере на одну дефекацию в сутки по сравнению с количеством до начала лечения с применением полимерной композиции на основе проантоцианидина. В других вариантах реализации изобретения консистенция стула уплотняется, например, уменьшается количество воды в стуле, по меньшей мере на 10, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70 80% или более по сравнению с консистенцией до начала лечения. В других вариантах реализации изобретения неотложный позыв к мочеиспусканию у субъекта уменьшается по меньшей мере на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% более по сравнению с позывом до начала лечения с применением полимерной композиции на основе проантоцианидина.
В другом варианте реализации изобретения предложен способ лечения диареи, обусловленной СРКД, который включает пероральное введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, полимерной композиции на основе проантоцианидина, например крофелемера с кишечно-растворимым покрытием (CAS 148465-45-6), в количестве, эффективном для лечения диареи, обусловленной СРКД, при этом указанное количество находится в диапазоне между примерно 50 мг в сутки и примерно 750 мг в сутки, и крофелемер получают способом, предложенным в настоящем изобретении. В другом варианте реализации настоящего изобретения предложен способ лечения нарушения частоты стула, нарушения консистенции стула или наличия неотложного позыва к мочеиспусканию, вызванных СРКД, включающий пе-роральное введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, крофелемера с кишечно-растворимым покрытием в количестве, эффективном для лечения нарушения частоты стула, нарушения консистенции стула или наличия неотложного позыва к мочеиспусканию, вызванных СРКД, при этом указанное количество находится в диапазоне между примерно 50 мг в сутки и примерно 750 мг в сутки, и крофелемер получают способом, предложенным в настоящем изобретении.
Фармацевтические формы, описанные в настоящей заявке, также могут быть применены для лечения синдрома раздражённого кишечника с преобладающей диареей (СРКД) у животных, не являющихся человеком, в частности сельскохозяйственных животных, таких как, но не ограничиваясь только ими, крупный рогатый скот, свиньи, овцы и бараны, птицы (такие как куры) и лошади и других домашних животных, таких как собаки и кошки. В частности, фармацевтические формы, описанные в настоящей заявке, здесь могут быть применены для лечения заболевания СРКД заболевания у животных, не являющихся человеком, в частности мясомолочного скота, такого как крупный рогатый скот, овцы и свиньи, посредством включения полимерной композиции на основе проантоцианидина или их фармацевтических композиций в корм животных.
При определении того, страдает ли субъект СРК с преобладающей диареей, для диагностики субъекта может быть применён любой способ, принятый в данной области, включая, но не ограничиваясь только ими, "Римские критерии II" для диагностики синдрома раздражённого кишечника (Thompson и др., 1999, Gut 45 (доп. II): Ih43-1147). Вкратце, диагностические "Римские критерии II" утверждают, что на протяжении последних 12 месяцев в течение по меньшей мере 12 недель, не обязательно подряд, дискомфорта или боли в животе субъект испытывает два из следующих трёх признаков: (1) облегчение при дефекации, (2) начало связано с изменением частоты стула; и (3) начало связано с изменением формы (внешнего вида) стула. Следующие симптомы суммарно подтверждают диагноз СРК: (i) нарушение частоты стула, например более чем 3 раза в сутки; (и) нарушение формы стула, например жид- 14
кий/водянистый стул и (iii) наличие неотложного позыва к мочеиспусканию (необходимость позыва для осуществления дефекации).
Степень боли и дискомфорта могут быть измерена любым способом, известным в данной области. Например, может быть применена шкала боли или дискомфорта, при этом пациент оценивает уровень боли или дискомфорта по шкале от 0 до 5, где 0 соответствует отсутствие боли или дискомфорта, а 5 соответствует высший уровень боли или дискомфорта. В некоторых вариантах реализации изобретения облегчение боли или дискомфорта определяют с помощью снижения среднего уровня боли или дискомфорта и/или увеличения количества дней без боли или дискомфорта. В некоторых вариантах реализации изобретения количество дней без боли или дискомфорта увеличивается по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90% или более по сравнению с количеством до начала лечения с применением полимерной композиции на основе проантоцианидина. В других вариантах реализации изобретения уровень боли или дискомфорта снижается по меньшей мере на 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,75, 1,0, 1,5 или 2,0 или более единиц по сравнению с уровнем до начала лечения.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены способы лечения синдрома раздражённого кишечника с преобладающими запорами (СРКЗ). Способы включают введение субъекту, нуждающемуся в лечении СРКЗ, полимерной композиции на основе проантоцианидина. В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина вводится перо-рально и всасывается не системно. В одном из вариантов реализации изобретения пациентом является человек женского пола. В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены способы лечения боли или любых других симптомов или комбинации симптомов, вызванных СРКЗ, включающие пероральное введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, крофелемера с кишечно-растворимым покрытием (CAS 148465-45-6) в количестве, эффективном для лечения боли, обусловленной СРКЗ, при этом указанное количество находится в диапазоне между примерно 500 мг в сутки и примерно 3 г в сутки, и крофелемер получают способом, предложенным в настоящем изобретении.
В другом варианте реализации изобретения предложены способы лечения секреторной диареи с применением композиции, предложенной в настоящем изобретении. Фармацевтические композиции применяют для лечения диареи путешественников и неспецифической диареи. В другом варианте реализации настоящего изобретения фармацевтические композиции, полученные согласно способам, представленным в настоящей заявке, применяют для лечения секреторных диарей, вызванных вирусными инфекциями, таких как диареи, которые обусловлены инфекцией, вызванной вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), и синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) и ротавирусной инфекцией. Почти все больные СПИДом страдают от диареи в какой-либо момент течения болезни, а 30% больных СПИДом страдают от хронической диареи. Диарея, которая вызвана СПИДом и ВИЧ-инфекцией, была названа "ВИЧ-ассоциированная хроническая диарея". Указанный диарейный компонент заболевания, вызванного ВИЧ, как полагают, обусловлен вторичными инфекциями, которые включают протозойные патогены, например, Cryptosporidium spp., самим ВИЧ или терапией, применяемой для контроля вирусной нагрузки. Фармацевтические композиции применяют для лечения вышеуказанных секреторных диарей, связанных с ВИЧ и СПИДом, у взрослых и детей. Кроме того, ротавирусная инфекция является значительной причиной диареи, в частности у младенцев и детей младшего возраста в развивающихся странах, для которой применяют фармацевтические композиции, предложенные в настоящем изобретении.
В настоящей заявке описаны применения композиций, полученных согласно способам производства, изложенным в настоящей заявке, для лечения и/или предотвращения рака толстой кишки у животных, включая людей мужского и женского пола. В частности, в настоящем изобретении предложены способы лечения или профилактики рака толстой кишки, включающие введение пациенту, нуждающемуся в такой профилактике, некоторое количество полимерной композиции на основе проантоцианидина, полученной способами, предложенными в настоящем изобретении. Например, пациент, нуждающийся в таком лечении или профилактике, включает тех пациентов, у которых обнаруживали полипы толстой кишки, или тех пациентов, у которых диагностировали рак толстой кишки (например, рак толстой кишки на любой из стадий 0, I, II, III или IV), или тех пациентов, которых ранее лечили от рака толстой кишки (например, для предотвращения рецидива), или тех пациентов, которые обладают семейной или наследственной предрасположенностью к раку толстой кишки, или пациентов, проживающих в районах, в которых заболеваемость раком толстой кишки превышает средние нормы. Другие пациенты, нуждающиеся в таком лечении или профилактике, представляют собой тех, кто подвергся биопсии толстой кишки, показывавшей предраковые изменения.
Способы, предложенные в настоящем изобретении, включают введение субъекту, нуждающемуся в лечении рака толстой кишки, полимерной композиции на основе проантоцианидина. В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиции на основе проантоцианидина вводится перорально и всасывается не системно. В одном из вариантов реализации изобретения субъект включает животное. В одном из вариантов реализации изобретения субъект включает примата. В другом варианте реализации изобретения субъект включает человека. В другом варианте реализации изобретения субъект включает женщину и/или мужчину.
В некоторых вариантах реализации изобретения для лечения рака толстой кишки определённое ко
личество полимерной композиции на основе проантоцианидина вводят совместно с обезболивающим и/или противовоспалительные соединением, например ингибирующим СОХ-2 и предпочтительно инги-бирующим скорее СОХ-2, чем СОХ-1.
При определении того, страдает ли субъект раком толстой кишки или имеет ли повышенный риск развития рака толстой кишки, может быть применён любой способ, принятый в данной области.
В некоторых вариантах реализации изобретения эффективность лечения рака толстой кишки определяют по уменьшению размера опухоли толстой кишки. В некоторых вариантах реализации изобретения размер раковой опухоли толстой кишки снижается по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90% или более по сравнению с размером до начала лечения с применением полимерной композиции на основе проантоцианидина. В других вариантах реализации изобретения эффективность лечения рака толстой кишки определяют по отсутствию увеличения роста раковой опухоли толстой кишки.
В одном из вариантов реализации изобретения пациентом является человек, например человек мужского или женского пола. В другом варианте реализации изобретения предложен способ лечения рака толстой кишки, включающий пероральное введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, крофелемера с кишечно-растворимым покрытием (CAS 148465-45-6) в количестве, эффективном для лечения рака толстой кишки, при этом указанное количество находится в диапазоне между примерно 500 мг в сутки и примерно 3 г в сутки, и крофелемер получают способом, предложенным в изобретении.
В некоторых вариантах реализации изобретения полимерные композиции на основе проантоциани-дина могут быть введены в качестве адъювантной терапии с другими известными видами терапии для лечения или профилактики рака толстой кишки. Например, композиции могут быть введены до, одновременно с или после операции, лучевой терапии, химиотерапии или биологической терапии (биологическая терапия включает иммунологическую терапию с применением сконструированных антител, таких как ERBITUX(r), AVASTIN(r), или терапию для усиления иммунного ответа на рак).
Фармацевтические дозы.
При применении форм и способов, предложенных в настоящем изобретении, для лечения патологических состояний, заболеваний и расстройств, интервал значений эффективной дозы фармацевтических форм полимерной композиции на основе проантоцианидина для перорального применения находится в диапазоне от 0,1 до 100 мг/кг в сутки, например от примерно 0,1 до примерно 40 мг/кг в сутки, от примерно 0,1 до примерно 25 мг/кг в сутки или от примерно 0,1 до примерно 10 мг/кг в сутки. Следует отметить, что соответствующая доза будет зависеть от типа и тяжести состояния или заболевания. Было установлено, что субъекты, являющиеся людьми, могут переносить по меньшей мере до 2 г полимерной композиции на основе проантоцианидина в сутки (25-30 мг/кг/сутки) в течение периода длительностью до 27 дней.
В другом варианте реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит полимерную композицию на основе проантоцианидина, полученную из Croton spp., доза которой не превышает 750 мг в сутки, предпочтительно менее 250 мг/сутки. В одном из вариантов реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина представляет собой крофелемер (CAS 148465-45-6).
В других вариантах реализации изобретения крофелемер перорально вводят в кишечно-растворимой защищенной форме (покрытую кишечно-растворимой оболочкой) в общем количестве не более примерно 750 мг/сутки. В настоящем изобретении "примерно" означает "в пределах допустимой погрешности". В конкретных вариантах реализации изобретения крофелемер, покрытый кишечно-растворимой оболочкой, перорально вводят субъекту в количестве от примерно 50 до 750 мг/сутки. В другом варианте реализации изобретения крофелемер, покрытый кишечно-растворимой оболочкой, пе-рорально вводят субъекту в общем количестве не более примерно 500 мг/сутки. В конкретных вариантах реализации изобретения крофелемер, покрытый кишечно-растворимой оболочкой, перорально вводят субъекту в количестве от примерно 50 до 500 мг/сутки. В других вариантах реализации изобретения крофелемер, покрытый кишечно-растворимой оболочкой, перорально вводят субъекту в количестве не более примерно 700, примерно 650, примерно 600, примерно 550, примерно 500, примерно 450, примерно 400, примерно 350, примерно 300, примерно 250, примерно 200, примерно 150 или примерно 100 мг/сутки. В другом варианте реализации изобретения крофелемер, покрытый кишечно-растворимой оболочкой, перорально вводят субъекту в количестве от примерно 100 до 750 мг/сутки. В других вариантах реализации изобретения крофелемер, покрытый кишечно-растворимой оболочкой, перорально вводят субъекту в количестве от примерно 125 до примерно 500 мг/сутки, от примерно 250 до примерно 500 мг/сутки, от примерно 250 до примерно 450 мг/сутки, от примерно 250 до примерно 400 мг/сутки, от примерно 250 до примерно 350 мг/сутки или примерно 250 до примерно 300 мг/сутки. В других особых вариантах реализации изобретения общая доза крофелемера, покрытого кишечно-растворимой оболочкой, перорально вводимого субъекту один, два или три раза в сутки, составляет примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95, примерно 100, примерно 105, примерно 110, примерно 115, примерно 120, примерно 125, примерно 130, примерно 135, примерно 140, примерно 145, примерно 150, примерно 155, примерно 160, примерно 165, примерно 170, примерно 175, примерно 180, примерно 185, примерно 190, примерно 195,
примерно 200, примерно 205, примерно 210, примерно 215, примерно 220, примерно 225, примерно 230, примерно 235, примерно 240, примерно 245, примерно 250, примерно 255, примерно 260, примерно 265, примерно 270, примерно 275, примерно 280, примерно 285, примерно 290, примерно 295, примерно 300, примерно 305, примерно 310, примерно 315, примерно 320, примерно 325, примерно 330, примерно 335, примерно 340, примерно 345, примерно 350, примерно 355, примерно 360, примерно 365, примерно 370, примерно 375, примерно 380, примерно 385, примерно 390, примерно 395, примерно 400, примерно 405, примерно 410, примерно 415, примерно 420, примерно 425, примерно 430, примерно 435, примерно 440, примерно 445, примерно 450, примерно 455, примерно 460, примерно 465, примерно 470, примерно 475, примерно 480, примерно 485, примерно 490, примерно 495 или примерно 500 мг в сутки.
Согласно способам лечения сельскохозяйственных животных от СРКД, предложенным в настоящем изобретении, фармацевтические композиции, содержащие полимерную композицию на основе про-антоцианидина, вводят субъекту в общем количестве, которое биоэквивалентно не более 750 мг/сутки перорально вводимой полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно-растворимым покрытием. В конкретных вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, содержащие полимерную композицию на основе проантоцианидина, вводят субъекту в количестве между примерно 50 и примерно 250 мг/сутки. В конкретных вариантах реализации изобретения количество может находиться в диапазоне от примерно 50 до примерно 450 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 400 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 350 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 300 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 250 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 200 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 150 мг в сутки, или от примерно 50 до примерно 100 мг в сутки.
Полимерные композиции на основе проантоцианидина могут быть объединены в фармацевтической дозе для введения однократной или дробной дозы один, два, три или четыре раза в сутки. В особом варианте реализации изобретения фармацевтическую дозу вводят дважды в сутки. В другом варианте реализации изобретения фармацевтическую дозу вводят дважды в сутки по меньшей мере в течение двух дней подряд. В другом варианте реализации изобретения фармацевтическую дозу вводят по меньшей мере в течение периода времени, выбранного из группы, состоящей из 24, 48, 72, 96 ч, одной недели, двух недель, одного месяца, двух месяцев и трёх месяцев. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую дозу принимают в течение неопределённого времени.
Фармацевтические формы.
В другом варианте реализации изобретения предложена фармацевтическая форма, содержащая полимерную композицию на основе проантоцианидина.
Способы введения полимерной композиция на основе проантоцианидина, предложенной в настоящем изобретении, включают, но не ограничены только ими, парентеральное введение (например, внут-рикожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно и подкожно) и мукозальное введение (например, интраназальные и пероральные пути). В конкретном варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина вводят внутримышечно, внутривенно или подкожно. Полимерная композиция на основе проантоцианидина может быть введена любым удобным путём, например путём инфузии или болюсной инъекции, путём всасывания через эпителиальную или кожно-слизистую выстилку (например, слизистую оболочку полости рта, прямой кишки и кишечника и т.д.) и может быть введена совместно с другими биологически активными агентами. Введение может быть общим или локальным. Предпочтительно полимерную композицию на основе проантоцианидина вводят перорально.
В одном из вариантов реализации изобретения крофелемер содержит кишечно-растворимое покрытие для защиты от разрушения кислой средой желудка и/или от взаимодействия с белками, такими как пепсин, присутствующими в желудке, например кишечно-растворимую защищенную форму. В конкретном варианте реализации изобретения крофелемер применяют в форме таблеток. В ещё одном конкретном варианте реализации изобретения таблетки покрыты кишечно-растворимой оболочкой, например EUDRAGIT(r). В одном из вариантов реализации изобретения крофелемер готовят в качестве шарика с кишечно-растворимым покрытием или гранулы в капсуле с кишечно-растворимой оболочкой. В другом варианте реализации изобретения крофелемер готовят в виде композиции с отсроченным высвобождением, например Merck GEM, Alza OROS, восковой матрицей (высвобождение задерживается преимущественно до тех пор, пока форма не пройдёт из желудка в кишечник).
В некоторых вариантах реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоциа-нидина готовят с применением соединения или соединений, которые нейтрализуют желудочную кислоту. В качестве альтернативы фармацевтическую композицию, содержащую молекулы ингибитора, вводят или одновременно с, или вслед за, или после введения фармацевтической композиции, которая нейтрализует желудочную кислоту. Соединения, такие как антациды, которые применяют для нейтрализации желудочной кислоты, включают, например, карбонат алюминия, гидроксид алюминия, субнитрат висмута, субсалицилат висмута, карбонат кальция, дигидроксиалюминия натрия карбонат, магалдрат, карбонат магния, гидроксид магния, оксид магния и их смеси. Соединения, которые способны уменьшить выделение желудочной кислоты и/или способны уменьшить кислотность желудочной жидкости, известны в данной области и включают, например, антациды (гидроксид алюминия, карбонат алюминия, глицинат алюминия, оксид магния, гидроксид магния, карбонат магния, карбонат кальция, бикарбонат натрия),
блокаторы выделения желудочной кислоты (циметидин (Tagamet(tm)), фамотидин (Mylanta(tm), Pepcid(tm)), низатидин (Axid(tm)), ранитидин (Zantac(tm)), омепразол (Zegerid(tm))) и комбинацию любых вышеперечисленных соединений. В общем, любое лекарственное средство, которое одобрено для продажи соответствующим государственным учреждением и способно уменьшить выработку желудочной кислоты и/или кислотность желудочной жидкости, может быть введено в комбинации с полимерной композицией на основе проантоцианидина, такой как крофелемер.
В других вариантах реализации изобретения полимерные композиции на основе проантоцианидина, предложенные в настоящем изобретении, вводят с другими соединениями, которые применяют для лечения диареи, боли или рака. Указанные соединения включают, но не ограничиваются только ими, ингибиторы СОХ-2, такие как 5-АСА, сульфасалазин, месаламин, APAZA, а также другие коммерчески доступные ингибиторы СОХ-2, такие как целекоксиб и рофекоксиб. Соединения для лечения рака включают синтетические и биологические лекарственные средства, которые специфически воздействуют на раковые клетки. Предпочтительно указанные соединения всасываются не системно или модифицируются для того, чтобы всасываться не системно.
В особом варианте реализации изобретения, в котором крофелемер не обладает кишечно-растворимым покрытием, крофелемер готовят с применением одного или более соединений, которые способны уменьшить выделение желудочной кислоты и/или способны уменьшить кислотность желудочной жидкости. Предпочтительно доза крофелемера в указанной форме представляет собой дозу, которая биоэквивалентна дозе перорально вводимого крофелемера с кишечно-растворимым покрытием, составляющей от примерно 50 до примерно 750 мг в сутки. В типичном варианте реализации изобретения кро-фелемер готовят в виде композиции с регулируемым высвобождением (отсроченным высвобождением).
В других вариантах реализации изобретения полимерная композиция на основе проантоцианидина может быть введена в комбинации с обезболивающими или противовоспалительным агентами. В одном из вариантов реализации изобретения обезболивающий или противовоспалительный агент готовят или модифицируют таким образом, что указанный агент, в основном, всасывается не системно, например, всасывается только 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2, 1 или 0,5% назначенной дозы.
Полимерная композиция на основе проантоцианидина, предложенная в настоящем изобретении, может быть обеспечена в любой терапевтически приемлемой фармацевтической форме. Фармацевтическая композиция может быть приготовлена для перорального введения, например, но не ограничиваясь только ими, в форме лекарственных порошков, кристаллов, гранул, микрочастиц (которые включают частицы размером порядка нескольких микрометров, такие как микросферы и микрокапсулы), частиц (которые включают частицы размером порядка нескольких миллиметров), шариков, микрошариков, пел-летов, пилюль, микротаблеток, прессованных таблеток или тритурационных таблеток, формованных таблеток или тритурационных таблеток и в капсулах, которые являются твёрдыми или мягкими и содержат композицию в форме порошка, частицы, шарика, раствора или суспензии. Фармацевтическая композиция также может быть приготовлена для перорального введения в форме раствора или суспензии в водном растворе, в форме жидкости включенной в гелевую капсулу или в любой другой форме, удобной для введения, или для ректального введения в форме суппозитория, клизмы или в другой удобной форме. Молекулы ингибитора или противораковые агенты также могут быть обеспечены в виде системы с регулируемым высвобождением (см., например, Langer, 1990, Science 249:1527-1533).
Фармацевтическая композиция может также включать любые виды фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, добавок или сред. Например, разбавители или наполнители, такие как декст-раты, фосфат дикальция, сульфат кальция, лактоза, целлюлоза, каолин, маннитол, хлорид натрия, сухой крахмал, сорбитол, сахароза, инозитол, сахарная пудра, бентонит, микрокристаллическая целлюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза, могут быть добавлены в форму для увеличения размера композиции. Кроме того, связующие вещества, такие как, но не ограниченные только ими, крахмал, желатин, сахароза, глюкоза, декстроза, патока, лактоза, аравийская камедь, альгинат натрия, экстракт ирландского мха, камедь панвар, камедь гхатти, растительный клей из шелухи семян изапгола, карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, Veegum и крахмал арабогалактан, полиэтиленгликоль, этил-целлюлоза и воски, могут быть добавлены к форме для улучшения связующих свойств. Дополнительно к форме могут быть добавлены смазывающие вещества, такие как, но не ограниченные только ими, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновая кислота, гидрогенизированные растительные масла, поли-этиленгликоль, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия, лейцин, карбовакс, лаурилсульфат натрия и лаурилсульфат магния. Кроме того, скользящие вещества, такие как, но не ограниченные только ими, коллоидный диоксид кремния или тальк, могут быть добавлены для улучшения характеристик сыпучести порошкообразной формы. Наконец, разрыхлители, такие как, но не ограниченные только ими, крахмалы, глины, целлюлозы, альгины, камеди, поперечно-связанные полимеры (например, кроскармелоза, кроспо-видон и натрия крахмала гликолат), Veegum, метилцеллюлоза, агар, бентонит, целлюлозные и древесные продукты, природная губка, катионообменные смолы, альгиновая кислота, гуаровая камедь, цитрусовая пульпа, карбоксиметилцеллюлоза или лаурилсульфат натрия с крахмалом, также могут быть добавлены для облегчения разрушения формы в кишечнике.
В одном из аспектов настоящего изобретения полимерную композицию на основе проантоциани-дина, полученную согласно способам, предложенным в настоящем изобретении, готовят для перораль-ного введения. В других аспектах изобретения фармацевтическую дозированную форму готовят для защиты полимерной композиции на основе проантоцианидина от разрушения кислой средой желудка и от взаимодействия с белками, такими как пепсин, присутствующими в желудке. Таким образом, в предпочтительном аспекте изобретения указанная форма содержит кишечно-растворимое покрытие. Например, форма с кишечно-растворимым покрытием представляет собой таблетки, шарики или гранулы, покрытые кишечно-растворимой оболочкой, которые необязательно содержат смазывающее вещество, такое как, но не ограниченное только им, стеарат магния. Формы с кишечно-растворимым покрытием включают шарики с кишечно-растворимым покрытием в капсуле, микросферы с кишечно-растворимым покрытием в капсуле, микросферы с кишечно-растворимым покрытием, обеспеченные в виде суспензии или смешанные с пищей, указанные суспензии особенно удобны для введения детям, и прессованных таблеток с кишечно-растворимым покрытием. Капсула может представлять собой капсулу с твёрдой желатиновой оболочкой или целлюлозную капсулу. В частности, фармацевтическую композицию готовят в форме капсулы с кишечно-растворимым покрытием. В одном из конкретных аспектов изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина вводят в форме таблеток, которые заполняют микрокристаллической целлюлозой.
В одном из вариантов реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоциани-дина непосредственно прессуют, то есть полимерная композиция на основе проантоцианидина с или без любых вспомогательных веществ может быть спрессована в таблетку или другую фармацевтическую форму, которая имеет фармацевтически приемлемую прочность и истираемость. Предпочтительно непосредственно прессуемая фармацевтическая композиция может быть спрессована в таблетки прочностью более 4 кп (килопондов), предпочтительно прочностью от 8 до 14 кп, более предпочтительно прочностью от 10 до 13 кп. Непосредственно прессуемая композиция может быть спрессована в таблетку, истираемость которой составляет не более 1% потери массы, предпочтительно менее 0,8% потери массы, более предпочтительно менее 0,5% потери массы.
В одном из вариантов реализации изобретения непосредственно прессуемые формы состоят из 99,93% полимерной композиции на основе проантоцианидина и 0,07% стеарата магния и покрыты сополимером с метакриловой кислотой. В другом варианте реализации изобретения фармацевтическая форма содержит непосредственно прессуемую полимерную композицию на основе проантоцианидина без вспомогательных веществ, добавок или сред за исключением кишечно-растворимого покрытия; однако форма может содержать смазывающее вещество, такое как, но не ограниченное только им, стеарат магния. Предпочтительно форму непосредственно прессуемой полимерной композиции на основе проанто-цианидина готовят в качестве таблетки фармацевтически приемлемой прочности (более 4 кп, предпочтительно 8-14 кп и более предпочтительно 10-13 кп) и истираемости (не более 1% потери массы, предпочтительно менее 0,8% потери массы, и более предпочтительно менее 0,5% потери массы).
В другом варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина покрывают кишечно-растворимой оболочкой. Кишечно-растворимые покрытия представляют собой покрытия, которые остаются неповреждёнными в желудке, но растворятся и высвободят содержимое дозированной формы, как только достигнут тонкой кишки. Большое количество кишечных покрытий готовят с применением компонентов, содержащих такие кислотные группы, которые при очень низких значениях рН в желудке, например при значениях рН от 1,5 до 2,5, не распадаются на ионы, и покрытие остаётся в недиссоциированной, нерастворимой форме. При более высоких значениях рН, таких как в среде кишечника, кишечно-растворимое покрытие превращается в ионизированную форму, которую можно растворить, чтобы высвободить молекулы ингибитора. Другие виды кишечно-растворимых покрытий остаются неповреждёнными до тех пор, пока не разлагаются энзимами в тонком кишечнике, а третьи виды покрытий распадаются после определённого воздействия влаги, такого что покрытия остаются неповреждёнными, пока не переходят в тонкий кишечник.
Полимеры, которые применяют для получения кишечно-растворимых покрытий, включают, но не ограничены только ими, шеллак, крахмал и фталаты ацетат амилозы, сополимеры стирола и малеиновой кислоты, сукцинат ацетат целлюлозы, фталат ацетат целлюлозы (ЦАФ), поливинилацетат фталат (ПВАФ), фталат гид роксипропил метил целлюлозы (марки НР-50 и НР-55), этил целлюлозу, жиры, бутил стеарат и сополимеры метакриловой кислоты и сложного эфира метакриловой кислоты с кислотными ионогенными группами (включающие "ACRYLEZE(r)" и "EUDRAGIT(r)"), такие как "EUDRAGIT(r) L 30D", "EUDRAGIT(r) RL 30D", "EUDRAGIT(r) RS 30D", "EUDRAGIT(r) L 100-55" и "EUDRAGIT(r) L 30D-55". В одном из вариантов реализации изобретения фармацевтические композиции содержат полимерную композицию на основе проантоцианидина и кишечно-растворимое покрытие, представляющее собой полимер "EUDRAGIT(r) L 30D", анионный сополимер метакриловой кислоты и метилакрилата со средней молекулярной массой, составляющей 250000 Да. В другом предпочтительном варианте реализации изобретения кишечно-растворимое покрытие, являющееся полимером, представляет собой "EU-
DRAGIT(r) L 30D-55".
Разложение кишечно-растворимого покрытия происходит или посредством гидролиза под действием кишечных энзимов, или посредством эмульгирования и диспергирования под действием солей жёлчных кислот в зависимости от вида применяемого покрытия. Например, эстеразы гидролизуют сложный эфир бутил стеарат до бутанола и стеариновой кислоты и, так как бутанол растворяется, стеариновая кислота отслаивается от лекарства. Дополнительно соли жёлчных кислот переводят в состояние эмульсии и диспергируют этилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, жиры и производные жиров. Другие виды покрытий удаляются в зависимости от времени контакта с влагой, например, покрытия, полученные из порошкообразного карнаубского воска, стеариновой кислоты и растительных волокон агара и коры вяза, разрушаются после того, как растительные волокна впитывают влагу и набухают. Время, необходимое для разложения, зависит от толщины покрытия и соотношения растительных волокон и воска.
Нанесение кишечно-растворимого покрытия проантоцианидинового полимера может быть выполнено любым способом, известным в области нанесения кишечно-растворимых покрытий. Например, но не путём ограничения, кишечно-растворимые полимеры могут быть нанесены с применением растворов на основе органического растворителя, содержащих от 5 до 10% мас./мас. полимера при нанесениях посредством распыления и до 30% мас./мас. полимера при нанесениях с применением барабана. Растворители, которые обычно применяют, включают, но не ограничены только ими, ацетон, смеси ацетона и этилацетата, смеси метиленхлорида и метанола и тройные смеси, содержащие указанные растворители. Некоторые кишечно-растворимые полимеры, такие как сополимеры метакриловой кислоты и сложного эфира метакриловой кислоты, могут быть нанесены с применением воды в качестве диспергатора. Летучесть системы растворителей должна быть специально подобрана так, чтобы предотвращать слипание вследствие вязкости и предотвращать образование высокой пористости покрытия вследствие преждевременной распылительной сушки или осаждения полимера по мере испарения растворителя.
Кроме того, в кишечно-растворимое покрытие могут быть добавлены пластификаторы для предотвращения растрескивания плёнки покрытия. Подходящие пластификаторы включают низкомолекулярные сложные эфиры фталевой кислоты, такие как диэтилфталат, ацетилированные моноглицериды, триз-тилцитрат, полиэтилгликоль, трибутилцитрат и триацетин. Как правило, пластификаторы добавляют в концентрации, составляющей 10 мас.% полимера, представляющего собой кишечно-растворимое покрытие, и определённой посредством хроматографии. Другие добавки, такие как эмульгаторы, например, детергенты и симетикон, и порошки, например тальк, могут быть добавлены в покрытие для повышения прочности и гладкости покрытия. Дополнительно в покрытие могут быть добавлены красители для придания цвета фармацевтической форме.
В частных вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, содержащие полимерные композиции на основе проантоцианидина, обеспечены в форме шариков с кишечно-растворимым покрытием в капсулах с твёрдой желатиновой оболочкой. Шарики проантоцианидинового полимера получают посредством смешивания полимерной композиции на основе проантоцианидина с гидроксипропилметилцеллюлозой и наслаивание смеси на зёрна нонпарели (сахарные сферы). В более предпочтительном варианте реализации изобретения непосредственно прессуемый крофелемер, не содержащий любые вспомогательные вещества, добавки и среды за исключением кишечно-растворимого покрытия, измельчают и разделяют на шарики (например, такие как шарики, которые не содержат зёрна сахарной нонпарели). Шарики могут быть покрыты защитной оболочкой Opadry Clear (смешанной с водой). Предпочтительное кишечно-растворимое покрытие шариков представляет собой "EUDRAGIT(tm) L 30D" или "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", применяемое в виде водной дисперсии, содержащей 20-30% мас./мас. сухого полимерного вещества, которую обеспечивают эмульгаторы лаурил сульфат натрия NF (SLS) в количестве 0,7% и полисорбат 80 NF (Tween(tm) 20) в количестве 2,3%, к указанному покрытию добавляют пластификаторы, такие как полиэтиленгликоль и/или сложные эфиры лимонной кислоты, для повышения эластичности покрытия, и может быть добавлен тальк для предотвращения стремления полимера, применяемого в кишечно-растворимом покрытии, к слипанию при нанесении и повышения гладкости плёнки покрытия.
В конкретной форме готовая композиция шариков полимерной композиции на основе проантоциа-нидина с кишечно-растворимым покрытием, содержащих зёрна нонпарели, содержит 17,3% мас./мас. зёрен нонпарели, 64,5% мас./мас. полимерной композиции на основе проантоцианидина, 1,5% мас./мас. гидроксипропилметилцеллюлозы, 0,5% мас./мас. Opadry clear, 14,5% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D", 1,45% мас./мас. триэтилцитрата и 0,25% мас./мас. глицерилмоностеарата. Указанная фармацевтическая форма может быть получена любым способом, известным в данной области.
Конкретная форма, представляющая собой шарики полимерной композиции на основе проантоциа-нидина, не содержащие зёрна нонпарели, содержит 78% мас./мас. непосредственно прессуемой полимерной композиции на основе проантоцианидина, 0,76% мас./мас. Opadry clear, 19% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", 1,9% мас./мас. триэтилцитрата и 0,34% мас./мас. глицерилмоностеарата. Указанная фармацевтическая форма может быть получена любым способом, известным в данной области.
Другая форма содержит 54,58% мас./мас. шариков полимерной композиции на основе проантоциа-нидина (не содержащих зёрен нонпарели и приготовленных из непосредственно прессуемой полимерной
композиции на основе проантоцианидина), 1,78% мас./мас. Opadry clear, 39% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", 3,9% мас./мас. триэтилцитрата и 0,74% мас./мас. глицерилмоностеарата.
В другом варианте реализации изобретения фармацевтическую композицию, содержащую полимерную композицию на основе проантоцианидина, готовят в форме гранул или порошка (микросфер с диаметром 300-500 п) с кишечно-растворимым покрытием, обеспеченных в капсулах с твёрдой желатиновой оболочкой или взвешенных в растворе для перорального применения, предназначенном для приёма детьми. Порошок или гранулы с кишечно-растворимым покрытием могут быть смешаны с пищей, особенно при приёме детьми. Указанное приготовление может быть осуществлено с применением способов, хорошо известных в данной области.
В общем, гранулы и порошок могут быть приготовлены с применением любого способа, известного в данной области, такого как, но не ограниченного только им, кристаллизация, распылительная сушка или любой способ измельчения, предпочтительно с применением высокоскоростного смесителя-гранулятора. Примеры высокоскоростных смесителей-грануляторов включают смеситель "LITTLEFORD
LODIGE(tm)", смеситель-гранулятор "LITTLEFORD LODIGE(tm)" и смеситель-гранулятор "GRAL(tm)". Во
время перемешивания порошка с интенсивным механическим воздействием растворы гранулирующих агентов, называемых связующими, распыляют на порошок, чтобы вызвать слипание частиц порошка, таким образом получая более крупные частицы или гранулы. Гранулирующие агенты, которые применяют для приготовления гранул, включают, но не ограничены только ими, производные целлюлозы (включая карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу и этилцеллюлозу), желатин, глюкозу, поливинил-пирролидон (ПВП), крахмальную пасту, сорбитол, сахарозу, декстрозу, патоку, лактозу, акациевую камедь, альгинат натрия, экстракт ирландского мха, камедь панвар, камедь гхатти, растительный клей из шелухи семян изапгола, Veegum и арабогалактан из древесины лиственницы, полиэтиленгликоль, этил-целлюлозу и воски. Гранулирующие агенты могут быть добавлены в концентрациях в диапазоне от 1 до 30 мас.% частиц или гранул.
На порошок или гранулы предпочтительно наносят покрытие с применением оборудования с псев-доожиженным слоем. Затем гранулы или порошок могут быть покрыты защитной оболочкой Opadry Clear (смешанной с водой). Предпочтительное кишечно-растворимое покрытие представляет собой "EU-DRAGIT(tm) L 30D", применяемое в виде водной дисперсии, содержащей 30% мас./мас. сухого полимерного вещества, которую обеспечивают эмульгаторы лаурил сульфат натрия NF (SLS) в количестве 0,7% и полисорбат 80 NF (Tween(tm) 20) в количестве 2,3%, к указанному покрытию добавляют пластификаторы, такие как полиэтиленгликоль и сложные эфиры лимонной кислоты, для повышения эластичности покрытия, и тальк для предотвращения стремления полимера, применяемого в кишечно-растворимом покрытии, к слипанию в процессе нанесения и повышения гладкости плёнки покрытия. В одном из вариантов реализации изобретения готовая композиция в форме порошка с кишечно-растворимым покрытием содержит 81,8% мас./мас. полимерной композиции на основе проантоцианидина, 1,5% мас./мас. гидроксипропилметилцеллюлозы, 0,5% мас./мас. Opadry clear, 14,5% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D", 1,45% мас./мас. триэтилцитрата и 0,25% мас./мас. глицерилмоностеарата. Готовая композиция в форме гранул с кишечно-растворимым покрытием содержит 81,8% мас./мас. полимерной композиции на основе проан-тоцианидина, 10% мас./мас. поливилпирролидона, 1,5% мас./мас. гидроксипропилметилцеллюлозы, 0,5% мас./мас. Opadry clear, 14,5% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D", 1,45% мас./мас. триэтилцитрата и 0,25% мас./мас. глицерилмоностеарата.
Гранулы или частицы порошка с кишечно-растворимым покрытием могут быть дополнительно взвешены в растворе для перорального применения, особенно для приёма детьми. Суспензия может быть приготовлена из водных растворов, к которым добавляют загустители и защитные коллоиды для повышения вязкости раствора, чтобы предотвратить быстрое оседание частиц порошка или гранул, покрытых оболочкой. В качестве загустителя может быть применён любой материал, который повышает степень гидратации слоя, образовавшегося вокруг взвешенных частиц посредством молекулярных взаимодействий, и который фармацевтически совместим с полимерной композицией на основе проантоцианидина, такой как, но не ограниченный только им, желатин, натуральные камеди (например, трагакантановая, ксантановая, гуаровая, акациевая, камедь панвар, гхатти камедь и т.д.) и производные целлюлозы (например, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза и т.д.). Для улучшения действия загущающего агента необязательно может быть добавлено поверхностно-активное вещество, такое как Tween(tm). Предпочтительный раствор со взвешенными частицами содержит раствор гидроксипропилметилцеллюлозы в количестве 2% мас./мас. в воде, содержащий 0,2% Tween(tm).
Полимерная композиция на основе проантоцианидина также может быть приготовлена в форме таблеток с кишечно-растворимым покрытием. В одном из предпочтительных вариантов реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина гранулируют с применением любого фармацевтически приемлемого разбавителя (такого как вышеперечисленные) способами для приготовления гранул, описанными выше. Затем гранулы спрессовывают в таблетки с применением любого способа, хорошо известного в данной области, например, но не ограничиваясь только им, способа влажной
грануляции, способа сухой грануляции или способа непосредственного прессования. Предпочтительные разбавители включают, но не ограничены только ими, микрокристаллическую целлюлозу ("AVICEL(tm) РН 200/300") и декстраты ("EMDEX(tm)"). Дополнительно к таблетированной форме могут быть также добавлены разрыхлители, такие как вышеописанные, и смазывающие вещества, такие как вышеописанные. Предпочтительная таблетированная форма содержит 250 мг полимерной композиции на основе проанто-цианидина, 7 мг разрыхлителя "AC-DI-SOL(tm)" (поперечно-связанной натрийкарбоксиметилцеллюлозы), 1,75 мг смазывающего вещества, представляющего собой стеарат магния, и количество "AVICEL(tm) РН 200/300", необходимое для доведения массы смеси до 350 мг. Таблетки покрывают оболочкой с применением смеси, содержащей кишечно-растворимое покрытие, приготовленной из 250 г "EUDRAGIT(tm) L 30 D-55", 7,5 г триэтилцитрата, 37,5 г талька и 205 г воды. Указанная форма может быть получена любым способом, известным в данной области.
В одном из вариантов реализации изобретения непосредственно прессуемую полимерную композицию на основе проантоцианидина готовят в виде гранул посредством измельчения (например, как описано выше) и смешивают со смазывающим веществом, предпочтительно стеаратом магния. Затем смазанные гранулы спрессовывают в таблетки с применением любого способа, хорошо известного в данной области, например, но не ограничиваясь только им, способа непосредственного прессования. Предпочтительно масса каждой таблетки составляет 125 мг, содержащих 99,6% мас./мас. непосредственно прессуемой полимерной композиции на основе проантоцианидина и 0,40% мас./мас. стеарата магния. Затем таблетки предпочтительно покрывают оболочкой с применением смеси, содержащей кишечно-растворимое покрытие, указанная смесь содержит 30% суспензию (6,66 г из 22,22 г) "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", 0,67 г триэтилцитрата, 1,67 г талька и 20,44 г очищенной воды на 100 г таблетки. Таблетки могут быть получены любым способом, известным в данной области.
В более предпочтительном варианте реализации изобретения непосредственно прессуемую полимерную композицию на основе проантоцианидина готовят в виде внутренних слоев таблеток массой 125, 250 или 500 мг, содержащих 99,6% мас./мас. непосредственно прессуемой полимерной композиции на основе проантоцианидина и 0,40% мас./мас. стеарата магния. Затем таблетки предпочтительно покрывают оболочкой с применением смеси, содержащей кишечно-растворимое покрытие. Готовая композиция таблеток содержит 86,6% мас./мас. непосредственно прессуемой полимерной композиции на основе про-антоцианидина, 0,4% стеарата магния, 6,5% "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", 0,9% триэтилцитрата, 2,87% талька и 2,74% белой дисперсии. Таблетки могут быть получены любым способом, известным в данной области, например, способом, описанным ниже, но не ограничиваясь только им.
Композиции, полученные в форме микрочастиц (которые включают частицы размером порядка нескольких микрометров, такие как микросферы и микрокапсулы), частиц (которые включают частицы размером порядка нескольких миллиметров), кристаллов лекарственных средств, пеллетов, пилюль и микрошариков, могут быть покрыты оболочкой с применением способа нанесения покрытия напылением в псевдоожиженном слое. В указанном способе применяют оборудование с псевдоожиженным слоем, такое как поставляемое "GLATT(tm)", "AEROMATIC(tm)", "WURSTER(tm)" или другими компаниями, в котором внутренние слои композиции уносятся вверх в закрытом цилиндрическом сосуде с помощью потока воздуха, поступающего снизу, и кишечно-растворимый слой получают посредством распылительной сушки данного слоя на внутренних слоях во время псевдоожижения. Для покрытия таблеток или капсул оболочкой может быть применено оборудование для нанесения покрытий Accela-Cota ("MANESTY(tm)"). Согласно указанному способу таблетки или капсулы помещают во вращающийся цилиндрический барабан для нанесения покрытий с перфорированным кожухом, и внутри барабана помещают устройства для распыления, и сухой воздух пропускают через вращающиеся таблетки или капсулы. Также может быть применён любой другой тип барабана для нанесения покрытий, такой как барабан "COMPU-LAB(tm)", Hi-coat "GLATT(tm)" с обработкой погружным "мечом", Driacoater "DRIAM(tm)", оборудование "STEINBERG(tm)", оборудование "PELLEGRINI(tm)" или оборудование "WALTHER(tm)".
В другом варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина обеспечивают в форме суппозитория для ректального введения. Суппозитории могут быть приготовлены с применением любого основного вещества, которое является фармацевтически приемлемым для производства суппозиториев и совместимым с полимерной композицией на основе проантоцианидина. Поскольку ректальное введение не подвергает полимерную композицию на основе проантоцианидина воздействию среды желудка, фармацевтические формы для ректального введения не нужно готовить для защиты композиции от среды желудка. Основы, которые могут быть применены для получения суппозиториев, содержащих полимерную композицию на основе проантоцианидина, включают, но не ограничены только ими, какао-масло, желатин с глицерином, гидрогенизированные растительные масла, смеси полиэтиленгликолей или жирных кислот полиэтиленгликолей, или комбинации гликолей и поверхностно-активных веществ, или неионные поверхностно-активные вещества (такие как сложные эфиры поли-оксиэтиленсорбитана и жирных кислот (Tweens), стеараты полиоксиэтилена и смеси сложных эфиров сорбитана и жирных кислот (Span и Arlacel)). Однако из-за гидрофильности полимерной композиции на основе проантоцианидина предлагают гидрофильные основы для суппозиториев. Предпочтительную
форму полимерной композиции на основе проантоцианидина, представляющую собой суппозиторий, готовят из 91 г глицерина, 9 граммов стеарата натрия, 5 г очищенной воды, указанная форма может содержать от 5 до 50% мас./мас. полимерной композиции на основе проантоцианидина. В качестве альтернативы суппозиторий может содержать 10 г полимерной композиции на основе проантоцианидина, 20 г желатина и 70 г глицерина. Суппозитории, приготовленные из полимерной композиции на основе проан-тоцианидина, могут быть сформированы любым способом, известным в данной области, включая, но не ограничиваясь только им, прессование в форме, плавление или предпочтительно плавление в форме.
В другом варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина готовят с применением соединения или соединений, которые нейтрализуют желудочную кислоту. В качестве альтернативы фармацевтическую композицию, содержащую полимерную композицию на основе проантоцианидина, вводят одновременно с или после введения фармацевтической композиции, которая нейтрализуют желудочную кислоту. Соединения, такие как антациды, которые применяют для нейтрализации желудочной кислоты, включают, но не ограничены только ими, карбонат алюминия, гидроксид алюминия, субнитрат висмута, субсалицилат висмута, карбонат кальция, дигидроксиалюминия натрия карбонат, магалдрат, карбонат магния, гидроксид магния, оксид магния и их смеси.
В другом варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина вводят с веществом, которое инактивирует или ингибирует действие энзимов желудка, таких как пепсин. В качестве альтернативы фармацевтическую композицию, содержащую полимерную композицию на основе проантоцианидина, вводят одновременно с или после введения фармацевтической композиции для инактивации или ингибирования действия энзимов желудка. Например, но не путём ограничения, для инактивации энзимов желудка могут быть применены ингибиторы протеазы, такие как апротин.
В другом варианте реализации изобретения полимерную композицию на основе проантоцианидина готовят с применением соединения или соединений, которые ингибируют выделение желудочной кислоты. В качестве альтернативы фармацевтическую композицию, содержащую полимерную композицию на основе проантоцианидина, вводят одновременно с или после введения фармацевтической композиции для ингибирования выделения желудочной кислоты. Соединения, которые применяют для ингибирова-ния выделения желудочной кислоты, включают, но не ограничены только ими, омепразол, эзомепразол, лансопразол, рабепразол, пантапразол, ранитидин, низатидин, фамотидин, циметидин и мизопростол.
Следующие серии примеров приведены для иллюстрации и не ограничивают рамки изобретения.
Экспериментальный раздел
Сравнительный пример. Выделение частично очищенной полимерной композиции на основе про-антоцианидина.
Непосредственно прессуемую полимерную композицию на основе проантоцианидина выделяли из млечного сока растения Croton lechleri следующим образом: 460 л млечного сока Croton lechleri смешивали с 940 л очищенной воды в течение десяти минут, а затем настаивали в течение ночи (12 ч) при температуре 4°С. Надосадочную жидкость красного цвета закачивали в бак выдержки, а осадок удаляли. Затем надосадочную жидкость подвергали экстракции 200 л н-бутанола посредством перемешивания в течение десяти минут, а затем обеспечения разделения фаз. Фазу н-бутанола удаляли, а водную фазу подвергали экстракции ещё два раза, каждый раз 200 л н-бутанола. После экстракции водную фазу концентрировали посредством ультрафильтрации с применением мембраны с отрезным уровнем 1 кДа (низкое связывание белков целлюлозной мембраны), а затем ретентат сушили в центробежной сушилке при температуре примерно 37°С (±2°С).
Для очистки посредством колоночной хроматографии 6 кг высушенного экстракта растворяли в 75 л очищенной воды и перемешивали в течение 90 мин. Растворённый материал подвергали хроматографии в системе из двух хроматографических колонок, состоящей из 35-литровой колонки CM-Sepharose (слабокислотная катионообменная смола) и 70-литровой колонки LH-20 (смола для эксклюзионной хроматографии), соединённых последовательно. Материал загружали в колонку CM-Sepharose, промывали 140 л очищенной воды, а затем вымывали в колонку LH-20 375 л 30% ацетона. На данном этапе две колонки разъединяли и полимерную композицию на основе проантоцианидина вымывали из колонки LH-20 250 л 45% ацетона. Фракции собирали в 10-литровые ёмкости и осуществляли контроль с применением УФ-детектора при 460 нм. Фракции, содержащие материал, обнаруживший поглощение при 460 нм, объединяли и концентрировали посредством ультрафильтрации с применением мембраны с отрезным уровнем 1 кДа (низкое связывание белков целлюлозной мембраны). Ретентат сушили с применением роторного испарителя на водяной бане при температуре примерно 37°С (±2°С) с получением частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина.
Частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина испытывали на непосредственное прессование. Порцию полимерной композиции на основе проантоцианидина в количестве 250 мг при отсутствии любых связующих или вспомогательных веществ помещали в таблеточную машину, а затем спрессовывали в таблетки различной толщины (например, тем больше давление на композицию для получения таблетки, тем меньшую толщину имеет полученная в результате таблетка). Затем с помощью прибора для измерения твёрдости определяли прочность таблеток.
Истираемость таблеток, прочность которых составляла 8-15 кп, определяли, как описано в USP 23 (1216). Истираемость составляла менее 0,5% потери массы.
Пример 1. Получение полимерной композиции на основе проантоцианидина.
Частично очищенную полимерную композицию на основе проантоцианидина, полученную согласно сравнительному примеру, взвешивали и измельчали в стеклянном стакане с применением стеклянной палочки. Измельчённую полимерную композицию растворяли и титровали 0,5н. раствором NaOH до рН 8-8,1, а затем шесть раз обрабатывали дихлорметаном. Водный слой подвергали действию бани при температуре 60°С без применения вакуума для удаления любого количества оставшегося дихлорметана. Остаток титровали до рН 4 с применением 1н. раствора HCl. Для получения 10% раствора ацетона добавляли достаточное количество ацетона. Смолу LH-20 уравновешивали дистиллированной водой при рН 4, помещали в воронку Бюхнера и удаляли избыточную жидкость. Водно-ацетоновый остаток, содержащий проантоцианидиновый полимер, смешивали с равным количеством полувысушенной смолы LH-20 и позволяли отстаиваться в течение 30 мин. LH-20 в количестве, равном первоначальной аликвоте LH-20, предварительно отрегулированную таким же способом, фильтровали на воронке Бюхнера через фильтровальную бумагу Whatman 42 для удаления избыточной жидкости. Комбинацию LH-20 и проантоциа-нидинового полимера помещали поверх слоя LH-20 в воронку Бюхнера и позволяли настаиваться в течение 30 мин. После отстаивания 140 мл 10% мас./мас. раствора ацетона в деионизированной воде при рН 4 добавляли в верхнюю часть воронки Бюхнера. Для начала сбора элюата создавали незначительный вакуум. Данную операцию повторяли ещё 5 раз с получением в общей сложности 6 фракций по 140 мл каждая. В общей сложности применяли 840 мл растворителя с 10% мас./мас. вымыванием. Дополнительные вымывания осуществляли с применением 25% мас./мас. раствора ацетона (10x140 мл), 32% мас./мас. раствора ацетона (6x140 мл), 39% мас./мас. раствора ацетона (6x140 мл), 45% мас./мас. раствора ацетона (6x140 мл) и 54% мас./мас. раствора ацетона (6x140 мл). Фракции, содержащие проантоцианидиновый полимер, объединяли и сушили в вакуум-сушильном шкафу при температуре 60°С с получением полимерной композиции на основе проантоцианидина с выходом, составляющим 16,59%. Сравнение чистоты композиции примера 1 с композицией сравнительного примера продемонстрировано в следующей таблице.
В качестве альтернативы колонки могли быть разделены и не работали последовательно. Пример работы разделённых колонок следует ниже. Например, колонки могли быть запущены в качестве двух или более отдельных объектов. Например, 6 кг растворённого вещества загружали в первую колонку (например, CM-Sepharose) и собирали раствор "А". Ввиду того что колонку промывали водой, собирали раствор "В". Затем ввиду того что колонку промывали примерно 30% раствором ацетона, собирали раствор "С".
Затем указанные растворы (растворы А, В и С) последовательно (например, "раствор А", затем "раствор В", а затем "раствор С") загружали во вторую колонку (например, LH-20). Затем крофелемер вымывали из колонки (например, LH-20) примерно 45% раствором ацетона.
Пример 2.
Этап 1. К неочищенному раствору млечного сока растения (500 мл), содержащему осадок, добавляли такой же объём метилэтилкетона, осторожно перемешивали и сохраняли без движения в течение 2 ч. Органический слой отделяли и процесс повторяли два раза. Водный слой концентрировали с получением на стадии А 60 г композиции.
Размер порции
Слой
Выход (%)
Крофелемер (чистота %)
Таспин (частей на миллион)
50 мл
Водный
65.9
45178
50 мл
Водный
62.0
42026
50 мл
Водный
63.3
42704
0,5 л
Водный
64.3
55141
100 л
Водный
77.2
35039
Этап 2. 10 г композиции, полученной на стадии А, растворяли в 120 мл воды и перемешивали в течение 1 ч при температуре 30-35°С, после чего выдерживали при комнатной температуре в течение ещё 1 ч. Массу фильтровали через фильтровальную бумагу whatman под вакуумом и фильтрат подвергали воздействию в колонке Sepharose (11 см, внутренний диаметр 3 см), последовательно соединённой с колонкой Sephadex (22 см, внутренний диаметр 3 см). Вымывание проводили 250 мл воды, затем 30%-ным раствором ацетона в воде (600 мл). После вымывания 30% раствором ацетона колонку Sepharose отсо
единяли и промывали колонку Sephadex 45% раствором ацетона в воде. Первые 110 мл фракции отбраковывали, а затем 100 мл тёмноокрашенного элюата отбирали и концентрировали с обеспечением 1,3-1,5 г крофелемера.
Размер порции
Выход (%)
Крофелемер (чистота %)
Таспин (частей на миллион)
91,0
НПО
2586
1,41
96,0
НПО
2700
1,41
*НПО - ниже предела обнаружения; *Mn - молекулярная масса, *PD - полидисперсность. Пример 3.
Стадия 1. К неочищенному раствору млечного сока растения (500 мл), содержащему осадок, добавляли два объёма метилэтилкетона, осторожно перемешивали и сохраняли без движения в течение 2 ч. Органический слой отделяли и процесс повторяли ещё три раза. Объединённые органические слои концентрировали с получением на стадии А 50 г композиции.
Размер порции (литры)
Слой
Выход
(%)
Крофелемер (чистота %)
Таспин (частей на миллион)
0,2
МЭК
54,1
9608
0,2
МЭК
47,0
12465
0,2
МЭК
69,8
16571
0,5
МЭК
53,5
134281
2,0
МЭК
61,7
16612
Стадия 2. 50 г композиции, полученной на стадии А, растворяли в 10 об. дистиллированной воды и перемешивали в течение 1 ч при температуре 30-35°С. Раствор выдерживали при комнатной температуре в течение ещё 1 ч. Указанный раствор подвергали воздействию в колонке Sepharose (6 об.). Вымывание проводили 30 об. воды, затем 30 об. раствора ацетона в воде. Вымываемое посредством воды и 8 об. органической смеси (30% ацетона) отбраковывали с последующим вымыванием элюата тёмного цвета, фракции с большим содержанием продукта (15 об). Фракцию с большим содержанием продукта отбирали и концентрировали с обеспечением выхода крофелемера, составляющего 7,5-8,0 г.
Размер порции (г)
Выход (%)
Крофелемер (чистота %)
Таспин (частей на миллион)
94,5
НПО
2378
1,31
96,0
НПО
2384
1,39
Пример 4.
Стадия 1. К неочищенному раствору млечного сока растения (500 мл), содержащему осадок, добавляли 2 об. метанола и четыре об. этилацетата, перемешивали в течение 4 ч и сохраняли без движения в течение 2 ч. Органический слой отделяли и фильтровали через фильтровальную бумагу Whatman. Фильтрат концентрировали с получением на стадии А 90 г композиции.
Размер порции (литры)
Выход
(%)
Крофелемер (чистота %)
Таспин (частей на миллион)
0,5
64,6
27837
0,5
18,4
65,11
28181
0,5
65,09
27812
Стадия 2. 50 г композиции, полученной на стадии А, растворяли в 12 об. дистиллированной воды и перемешивали в течение 1 ч при температуре 30-35°С. Раствор выдерживали при комнатной температуре в течение ещё 1 ч. Указанный раствор подвергали воздействию в колонке Sepharose (6 об.). Вымывание проводили 30 об. воды, затем 25 об. раствора ацетона в воде. Вымываемое посредством воды и 8 об. органической смеси (30% ацетона) отбраковывали с последующим вымыванием элюата тёмного цвета, фракции с большим содержанием продукта (15 об.). Фракцию с большим содержанием продукта отбирали и концентрировали с обеспечением выхода крофелемера, составляющего 12,0-13,0 г.
Размер порции (г)
Выход (%)
Крофелемер (чистота %)
Таспин (частей на миллион)
98,25
НПО
2032
1,03
25,4
98,64
НПО
2417
1,01
24,6
100,9
НПО
2401
1,01
Пример 5.
Способ очистки крофелемера посредством обработки древесным углём в метаноле/этилацетате способом осаждения.
Необработанное проантоцианидиновое соединение (100 г) растворяли в метаноле (1000 мл) и фильтровали через воронку из спечённого стекла. Нерастворившиеся твёрдые вещества подвергали повторной экстракции метанолом (200 мл) с последующим объединением двух фильтров и объединённые фильтраты обрабатывали 30 г древесного угля при перемешивании в течение 60 мин. Соединение дважды фильтровали через слой бентонита, а остаток удаляли. Фильтрат обрабатывали с применением 6,2 мл этилаце-тата и перемешивали в течение 60 мин, после чего пропускали через слой бумаги Whatman толщиной 2 мм. Получили 52 г твёрдого вещества коричневого цвета с чистотой 99,81% и содержанием примеси тас-пина ниже предела обнаружения.
Применение бентонита для удаления белка в водном растворе.
3,3520 г частично очищенной полимерной композиции на основе проантоцианидина взвешивали и помещали в пластиковую трубку с крышкой объёмом 50 мл, для растворения всего количества частично очищенной полимерной композиции добавляли 30 мл деионизированной воды (рН которой предварительно доведён до рН 8,8) при встряхивании. рН полученного раствора составлял 6,12 и был доведён 5,5 посредством 1н. раствора HCl. Затем раствор поровну распределяли по двум трубкам (некоторое количество пены, оставшееся в первоначальной трубке, удаляли).
Одну из трубок встряхивали в течение 1 ч, а затем сохраняли при комнатной температуре в течение 22 ч. Полученный раствор фильтровали через воронку с мелкоячеистым фильтром. Образец фильтрата объёмом 100 мкл извлекали, сушили с получением 9,7 мг твёрдого вещества и испытывали посредством аминокислотного анализа для применения в качестве не обработанного бентонитом образца, подвергнутого АКА. рН фильтрата доводили до рН 8,0 посредством 0,5н. раствора NaOH. 50 мкл образца извлекали, сушили и испытывали посредством ВЭЖХ и определяли молекулярно-массовое распределение образца, не обработанного бентонитом.
Во вторую трубку добавляли 600 мг бентонита. Трубку закрывали и встряхивали в течение 1 ч, а затем сохраняли при комнатной температуре в течение 22 ч. Полученный раствор фильтровали через воронку с мелкоячеистым фильтром. Образец фильтрата объёмом 100 мкл извлекали, сушили с получением 10,3 мг твёрдого вещества и испытывали посредством аминокислотного анализа для применения в качестве обработанного бентонитом образца, подвергнутого АКА. рН фильтрата доводили до рН 8,0 посредством 0,5н. раствора NaOH. 50 мкл образца извлекали, сушили и испытывали посредством ВЭЖХ и определяли молекулярно-массовое распределение образца, обработанного бентонитом.
Применение этилацетата для обработки частично очищенной полимерной композиции.
1,6704 г частично очищенной полимерной композиции взвешивали и медленно добавляли в сцин-тилляционный флакон с мешателем для магнитной мешалки и 15 мл деионизированной воды (рН которой предварительно доведён до рН 8.62). Флакон закрывали и перемешивали содержимое до тех пор, пока всё количество частично очищенной полимерной композиции не было растворено. рН полученного раствора составлял 6,49, а затем был доведён до 8 посредством 0,5н. раствора NaOH. 200 мкл образца извлекали, сушили и испытывали посредством ВЭЖХ и определяли молекулярно-массовое распределение образца перед проведением экстракции посредством EtOAc.
Раствор частично очищенной полимерной композиции, рН которого составлял 8, шесть раз подвергали экстракции 20 мл EtOAc. Во время экстракции, подобной экстракции дихлорметаном, отмечали образование межфазного слоя. 200 мкл образца извлекали из полученной водной фазы, сушили и испытывали посредством ВЭЖХ и определяли молекулярно-массовое распределение образца после проведения экстракции посредством EtOAc.
Применение бентонита и MeOH/EtOAc для обработки материалов частично очищенной полимерной композиции.
Величина порции 2,5 г.
2,5 г частично очищенной полимерной композиции помещали в полипропиленовую трубку с крышкой объёмом 50 мл и добавляли 25 г (~32 мл) МеОН. Трубку закрывали и помещали во встряхиватель для встряхивания в течение 10 мин, пока все твёрдые вещества не были растворены. Образец данного раствора в количестве 130 мкл сушили в сушильном шкафу под вакуумом при комнатной температуре (КТ) и подвергали испытаниям.
К раствору частично очищенной полимерной композиции в метаноле добавляли 750 мг бентонита, а затем трубка закрывали и встряхивали в течение 1 ч. Раствор фильтровали через фильтровальную бумагу с применением воронки Бюхнера на колбе Эрленмейера. Бентонит совместно с адсорбированным на нём материалом удаляли. 130 мкл образца извлекали из фильтрата, сушили под вакуумом в сушильном шкафу при комнатной температуре, а затем анализировали.
Вышеуказанный фильтрат (32 мл) помещали в полипропиленовую бутылку ёмкостью 250 мл, после чего добавляли пятикратный объём EtOAc (160 мл). Обнаруживали немедленное выпадение осадка коричневого цвета. Бутылку закрывали и встряхивали в течение 10 мин.
Смесь фильтровали посредством фильтровальной бумаги с применением воронки Бюхнера. Твёр
дое вещество сушили под вакуумом при комнатной температуре с получением 930,2 мг продукта, образец продукта был проанализирован. Некоторое количество частиц прошло через фильтровальную бумагу и проникло в фильтрат. Указанный фильтрат центрифугировали и осаждённое твёрдое вещество отфильтровывали и промывали EtOAc, сушили под вакуумом при комнатной температуре с получением ещё 194,8 мг твёрдого вещества. Из указанного твёрдого вещества брали образец. Чистый фильтрат и промывочный раствор EtOAc объединяли и сушили посредством роторного испарителя при температуре 40°С с получением 538,7 мг твёрдого вещества. Из указанного твёрдого вещества также брали образец. Величина порции 12,5 г.
Описанный выше способ был осуществлён при применении повышенного количества частично очищенной полимерной композиции, составлявшего 12,5 г. После добавления EtOAc с выпадением в осадок целевых продуктов смесь фильтровали через фильтровальную бумагу. Твёрдое вещество поверх фильтровальной бумаги сушили под вакуумом при комнатной температуре с получением 4,4896 г твёрдого вещества. Из указанного твёрдого вещества брали образец. Подобно способу, осуществлённому в меньшем масштабе, фильтрат по-прежнему содержал некоторое количество твёрдого вещества, и указанный фильтрат оставляли в холодильнике на ночь. Затем полученный раствор, содержавший осадок, медленно наливали в воронку Бюхнера через фильтровальную бумагу, на этот раз твёрдое вещество не прошло через фильтровальную бумагу. Оставшееся твёрдое вещество сушили под вакуумом при комнатной температуре с получением 1,4221 г твёрдого вещества. Образец вещества был взят.
Изучение удаления белка при величине порции 2,5 г.
Предварительно образцы для аминокислотного анализа до и после обработки бентонитом взяты не были, эксперименты повторили и указанный объём растворов, представляющих собой образцы для аминокислотного анализа, извлекали до и после обработки бентонитом и сушили. После обработки бентонитом раствор перед взятием образца фильтровали. Чтобы исключить эффект удаления белка только посредством фильтрации, перед обработкой бентонитом раствор также фильтровали перед взятием образца. Таким образом, разница в уровне белка в двух указанных образцах должна быть связана с обработкой бентонитом.
Получение фармацевтических форм.
В изобретении описаны иллюстративные способы производства и фасовки фармацевтических форм полимерной композиции на основе проантоцианидина, полученной из Clechleri согласно способам, предложенным в изобретении.
Шарики с кишечно-растворимым покрытием, заключённые в капсулы.
Ниже приведены описания способов, применяемых для получения полимерной композиции на основе проантоцианидина в форме шарика с кишечно-растворимым покрытием, заключённого в капсулу, на основе сахарных сфер. Каждая капсула с твёрдой желатиновой оболочкой содержала 250 мг шариков полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно-растворимым покрытием. Капсулы были расфасованы в HDPE бутылки, содержавшие шестнадцать (16) капсул массой 250 мг каждая. Форма, представляющая собой шарики полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно-растворимым покрытием, содержала 17,3% (мас./мас.) зёрен нонпарели (сахарные сферы 40/60 меш, Pau-laur, серия № 60084060), 64,5% полимерной композиции на основе проантоцианидина из Clechleri, 1,5% гидроксипропилметилцеллюлозы (Methocel E5 Premium, Dow Chemical Co, серия № MM9410162E), 0,5% Opadry Clear (Colorcon, серия № S83563), 14,5% "EUDRAGIT(tm) L 30D" (Rohm Tech., серия № 1250514132), 1,45% триэтилцитрата (Morflex, серия № N5X291), глицерилмоностеарат (Imwitor-900, Rohm Tech, серия № 502-229) и очищенную воду (USP).
Раствор для нанесения покрытия, содержавший полимерную композицию на основе проантоциани-дина, готовили посредством добавления гидроксипропилметилцеллюлозы и полимерной композиции на основе проантоцианидина к очищенной воде (USP) и перемешивания до полного растворения. Зёрна нонпарели загружали в камеру сушилки с псевдоожиженным слоем (установки для прецизионного нанесения покрытий Nior). Затем раствор полимера слоями наносили на зёрна нонпарели посредством распыления раствора на псевдоожиженные зёрна нонпарели при целевой температуре слоя, составляющей 3035 °С. После того как нанесение слоев проантоцианидинового полимера была завершено, наносили защитное покрытие с применением Opadry Clear (приготовленную посредством смешивания Opadry Clear с очищенной водой, USP) при целевой температуре слоя, составляющей 30-35°С. После того как защитное покрытие было нанесено, пеллеты удаляли и просеивали через мембрану с параметрами 1000 t и 425 ц, и наслоённые сферы, параметры которых больше 425 ц и меньше 1000 ц, засыпали обратно в сушилку с псевдоожиженным слоем. Между тем, раствор кишечно-растворимого покрытия готовили посредством смешивания триэтилцитрата и глицерилмоностеарата с водой, которую нагревали до 65°С, и последующего смешивания указанного раствора с "EUDRAGIT(tm) L 30D-55". Полученный раствор кишечно-растворимого покрытия затем распыляли на наслоённые сферы в сушилке с псевдоожиженным слоем при температуре слоя, составляющей 30-35°С, до тех пор пока весь раствор кишечно-растворимого покрытия не наносили на шарики. Шарики с кишечно-растворимым покрытием вручную засыпали в капсулы с твёрдой желатиновой оболочкой размером №0 для обеспечения дозы, составляющей 250 мг, а затем
расфасовывали в подходящие бутылки HDPE с крышкой, запаянной изнутри с применением индукционного нагрева.
Состав порции.
Продукт: шарики проантоцианидинового полимера с кишечно-растворимым покрытием.
Размер порции: 578,0 г.
Сырьё: количество на порцию.
Сахарные сферы, нонпарель, NF (40/60): 100,0 г.
Полимерная композиция на основе проантоцианидина: 372,8 г.
Гидроксипропилметилцеллюлоза Е5, USP (К29/32): 8,7 г.
Opadry Clear (YS-1-19025A): 2,9 г.
"EUDRAGIT(tm) L 30D-55" (30% твёрдых веществ): 279,4 г.
Триэтилцитрат, NF: 8,4 г.
Глицеринмоностеарат: 1,4 г.
Вода, USP (удаленная при обработке): 1284,8 г.
Шарики с кишечно-растворимым покрытием, заключённые в капсулы.
Ниже описаны способы получения шариков с кишечно-растворимым покрытием, заключённых в капсулы, которые не содержат сахарные сферы, представляющие собой нонпарель. Одна форма содержит 83,3% мас./мас. полимерной композиции на основе проантоцианидина, 0,5% мас./мас. Opadry clear, 14,5% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", 1,9% мас./мас. триэтилцитрата и 0,34% глицерилмоностеарата.
Шарики покрывали первым защитным слоем с применением 5% раствора Opadry clear в 16-литровой сушилке aeromatic MP-1 с псевдоожиженным слоем и 50 мм колонкой Вюрстера. Параметры нанесения защитного покрытия представляли собой температуру на входе от 50 до 60°С, температуру на выходе от 25 до 40°С, объём перемещаемого воздуха от 30 до 40 м3/ч, скорость распыления от 6 до 12 г/мин и давление воздуха 2,5 бар. После того как защитное покрытие было нанесено, шарики удаляли и просеивали для отбирая шарики, параметры которых больше 425 ц и меньше 10001.
Затем шарики подходящего размера засыпали обратно в сушилку с псевдоожиженным слоем для нанесения кишечно-растворимого покрытия. Для каждых 1000 г шариков полимерной композиции на основе проантоцианидина суспензию кишечно-растворимого покрытия готовили из 811,97 г "EU-DRAGIT(tm) L 30D-55", 24,36 г триэтилцитрата, 4,36 г глицерилмоностеарата и 248,55 г очищенной воды. Указанную суспензию готовили посредством непрерывного осторожного перемешивания суспензии "EUDRAGIT(tm) L 30D-55", а также получения взвеси и гомогенизации в отдельной ёмкости триэтилцит-рата и талька в очищенной воде. Затем смесь триэтилцитрата и талька добавляли к суспензии "EU-DRAGIT(tm) L 30D-55" и полученную дисперсию покрытия перемешивали во время распыления, чтобы избежать оседания. Затем шарики покрывали оболочкой в сушилке с псевдоожиженным слоем при следующих параметрах: температура на входе составляла от 42 до 47°С, температура на выходе составляла от 28 до 34°С, расход воздуха составлял 30-40 м3/ч, скорость распыления составляла 6-12 г/мин, и давление воздуха составляло 2,5 бар. Затем полученные шарики с кишечно-растворимым покрытием засыпали в капсулы с твёрдой желатиновой оболочкой размером №0.
Гранулы и порошок с кишечно-растворимым покрытием.
Ниже изложен способ приготовления полимерной композиции на основе проантоцианидина в форме гранул или порошка с кишечно-растворимым покрытием, заключённых в капсулы с твёрдой желатиновой оболочкой или взвешенных в растворе для перорального применения. Частицы порошка полимерной композиции на основе проантоцианидина готовили посредством перемешивания с интенсивным механическим воздействием порошка полимерной композиции на основе проантоцианидина и гидрокси-пропилметилцеллюлозы в высокоскоростном смесителе-грануляторе. Гранулы полимерной композиции на основе проантоцианидина готовили посредством распыления поливинилпирролидона на порошок в высокоскоростном смесителе-грануляторе, так что частицы порошка слипались в более крупные гранулы. Затем гранулы или порошок покрывали защитным слоем Opadry Clear (смешанным с водой) с применением оборудования с псевдоожиженным слоем, а затем покрывали кишечно-растворимой оболочкой "EUDRAGIT(tm) L 30D", наносимой в виде водной дисперсии, содержавшей 30% мас./мас. сухого метак-рилатного полимера, которую обеспечивали эмульгаторы лаурил сульфат натрия NF (SLS) в количестве 0,7% и полисорбат 80 NF (Tween(tm) 20) в количестве 2,3%, к указанному покрытию добавляли пластификаторы, триэтилцитрат и глицерилмоностеарат, для повышения эластичности покрытия. Готовая композиция порошка с кишечно-растворимым покрытием содержала 81,8% мас./мас. полимерной композиции на основе проантоцианидина, 1,5% мас./мас. гидроксипропилметилцеллюлозы, 0,5% мас./мас. Opadry clear, 14,5% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D", 1,45% мас./мас. триэтилцитрата и 0,25% мас./мас. глице-рилмоностеарата. Готовая композиция гранул с кишечно-растворимым покрытием содержала 81,8% мас./мас. полимерной композиции на основе проантоцианидина, 10% поливилпирролидона, 1,5% мас./мас. гидроксипропилметилцеллюлозы, 0,5% мас./мас. Opadry clear, 14,5% мас./мас. "EUDRAGIT(tm) L 30D", 1,45% мас./мас. триэтилцитрата и 0,25% мас./мас. глицерилмоностеарата.
Гранулы или частицы полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно
растворимым покрытием могут быть засыпаны в капсулы с твёрдой желатиновой оболочкой в количестве, которое обеспечивает подходящую дозу лекарственного средства. Гранулы или частицы порошка полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно-растворимым покрытием также могут быть взвешены в растворе для перорального применения, особенно для приёма детьми. Раствор со взвесью готовили посредством размачивания 2 г гидроксипропилметилцеллюлозы в 97,8 мл дистиллированной воды и 0,2 г Tween(tm) 80, перемешивания указанного препарата до однородного состояния посредством ультразвука, нагревая раствор до 40°С и перемешивая в течение трёх часов, а затем добавления гранул или частиц полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно-растворимым покрытием к однородному раствору.
Ниже описан способ приготовления полимерной композиции на основе проантоцианидина с применением разбавителя в форме таблеток с кишечно-растворимым покрытием. Для каждой таблетки массой 350, 250 мг полимерной композиции на основе проантоцианидина гранулировали с применением 7 мг поперечно-связанной натрийкарбоксиметилцеллюлозы ("AC-DI-SOL(tm)") и массы микрокристаллической целлюлозы ("AVICEL(tm) РН 200/300"), достаточной для доведения общей массы до 350 мг. Указанные компоненты перемешивали в течение периода времени, составлявшего от 20 до 30 мин, в V-образном смесителе. После перемешивания, составлявшего от 20 до 30 мин, добавляли 1,75 мг стеарата магния и перемешивали смесь в течение дополнительного периода времени, составлявшего от 4 до 5 мин. Полученные гранулы спрессовывали на роторном таблеточном прессе с применением 5/16 дюймовых стандартных вогнутых пуансонов. Таблетки покрывали смесью, представлявшей собой кишечно-растворимое покрытие, приготовленной из 250 г "EUDRAGIT(tm) L 30 D-55", 7,5 г триэтилцитрата, 37,5 г талька и 205 г воды. Затем таблетки помещали в перфорированный барабан для нанесения покрытий (например, системы "ACCELACOTA(tm)") и вращали со скоростью 15 об./мин при температуре 40°С. Кишеч-но-растворимое покрытие распыляли при следующих параметрах: температура входящего воздуха составляла 44-48°С, температура отработанного воздуха составляла 29-32°С, температура продукта составляла 26-30°С, диаметр распылительного сопла составлял 1 мм, скорость вращения барабана составляла от 30 до 32 об/мин, расход воздуха составлял 30-32 куб. футов/мин и давление распыления составляло 20 фунтов/кв. дюйм. Наконец, таблетки выдерживали в течение 30 мин при вращении барабана со скоростью 15 об/мин и при температуре входящего воздуха, составлявшей 60°С, а затем после прекращения подачи тепла таблетки вращали со скоростью 15 об/мин до тех пор, пока таблетки не охлаждались до комнатной температуры.
Таблетки с кишечно-растворимым покрытием, полученные прямым прессованием.
Способ приготовления полимерной композиции на основе проантоцианидина в форме таблеток с кишечно-растворимым покрытием без применения разбавителя был выполнен как описано ниже. Была получена полимерная композиция для прямого прессования на основе проантоцианидина. Таблетки массой 125 мг готовили посредством смешивания 99,6% мас./мас. полимерной композиции для прямого прессования на основе проантоцианидина с 0,40% мас./мас. стеарата магния в течение двух минут, с последующим прямым прессованием материала в таблетки массой 125 мг на роторном прессе с применением стандартных круглых пуансонов с вогнутой поверхностью диаметром 1/4 дюйма до достижения прочности 4-10 кп.
Испытание ядер таблеток показало, что средняя прочность (n = 10) составила 4-10 кп, истираемость (n = 20) составила менее 0,7%, средняя масса таблетки (n = 10) составила 125 мг ± 7 мг, средняя толщина (n = 10) составлила от 3,9 до 4,1 мм, а распадаемость (n = 6) составила не более 20 мин.
Дисперсию для нанесения покрытия готовили посредством смешивания, при этом для получения 100 г таблеток, 22,22 г 30% мас./мас. суспензии "EUDRAGIT(tm) L 30D-55" осторожно смешивали со смесью, состоящей из 0,67 г триэтилцитрата, 1,67 г талька и 20,44 г очищенной воды, перемешивая до однородного состояния. Дисперсию для нанесения покрытия постоянно перемешивали, чтобы избежать оседания.
На таблетки (порциями по 100000) наносили дисперсию покрытия в барабане Compu-Lab 24 дюйма/30 л. Таблетки перемешивали в барабане со скоростью 3-5 об/мин и предварительно нагревали до температуры, составлявшей от 35 до 40°С. Затем на таблетки наносили дисперсию кишечно-растворимого покрытия до достижения прироста массы таблетки, составлявшего от 6 до 8%, при следующих параметрах: температура на входе составляла 45-65°С, температура отработанного воздуха составляла 27-34°С, температура продукта составляла 28-32°C, скорость вращения барабана составляла от 8 до 14 об/мин, расход воздуха составлял от 180 до 240 куб. футов/мин, давление распыления составляло 10-20 фунтов на квадратный дюйм, начальная интенсивность распыления составляла от 3 до 4 г/мин/кг, а конечная интенсивность распыления составляла от 4 до 8 г/мин/кг. Затем таблетку выдерживали в барабане в течение 30 мин при температуре на входе, составлявшей 45 до 50°С, и скорости вращения барабана от 3 до 5 об/мин. Наконец, таблеткам позволяли охлаждаться до комнатной температуры в барабане со скоростью вращения от 3 до 5 об/мин. Затем четыре таблетки массой 125 мг засыпали в непрозрачную желатиновую капсулу, окрашенную Swedish orange, размером №0.
Таблетки полимерной композиции на основе проантоцианидина с кишечно-растворимым покрытием испытывали на однородность состава, высвобождение и стабильность, проводили микробиологиче
ские испытания, а также выполняли некоторые аналитические технологические испытания. В исследованиях стабильности полимерная композиция на основе проантоцианидина оставалась стабильной после шести месяцев хранения при комнатной температуре, а также при увеличении температуры и влажности. Наконец, внутренний слой таблеток испытывали и установили, что средняя прочность (n = 10) составляла 4-10 кп, истираемость (n = 20) составляла менее 0,7%, средняя масса таблетки (n = 10) составляла 125 мг ± 7 мг, средняя толщина (n = 10) составляла от 3,9 до 4,1 мм, а распадаемость (n = 6) составляла не более 20 мин.
Таблетки с кишечно-растворимым покрытием, полученные прямым прессованием.
Формы полимерной композиции на основе проантоцианидина без разбавителя, описанные в изобретении, представляющие собой таблетки с кишечно-растворимым покрытием, производили как описано ниже. Ядра таблеток готовили посредством измельчения полимерной композиции на основе проантоцианидина в количестве 250 мг на таблетку (всего примерно 16 кг) в Quadro Comil с ситом 024R (30 меш), а затем смешивания измельченной композиции в V-образном смесителе Patterson Kelley объёмом 2 кубических фута. Затем к композиции в смесителе добавляли стеарат магния (Spectrum Quality Products, Inc., New Brunswick, N.J) в количестве 1 мг на таблетку и перемешивали в течение 2 мин. Затем на роторном таблеточном прессе смесь спрессовывали в таблетки массой 251 мг (содержавшие 250 мг полимерной композиции на основе проантоцианидина) с прочностью 8-15 кп и истираемостью менее 0,5%.
Дисперсию покрытия готовили посредством первого перемешивания в первом сосуде 25 г (7,5 г твёрдых частиц) дисперсии "EUDRAGIT(tm) L 30 D-55" (Huls America, Inc., Somerset, N.J.) (масса указана на 115 г таблеток, покрытых оболочкой). Дисперсию красителя готовили посредством последовательного добавления во второй контейнер при постоянном перемешивании 39,59 г очищенной воды, 3,30 г талька (Alphafil(tm) 500) (Whittaker, Clark & Daniels, Inc., South Plainfield, N.J.), 6,06 г (3,15 г твёрдых частиц) белой дисперсии (окрашивающего материала) (Warner-Jenkinson, Inc., St. Louis, Mo.), а затем 1,05 г триэтилцитрата (Morflex, Inc., Greensboro, N.C.). Затем смесь гомогенизировали в течение 15 мин или до достижения однородной консистенции. При медленном перемешивании дисперсию красителя добавляли к дисперсии "EUDRAGIT(tm) L 30 D-55", а затем перемешивали в течение 30 мин перед распылением. Также перемешивание продолжали во время обработки распылением, чтобы избежать оседания.
Таблетки покрывали оболочкой порциями по 50000 таблеток в барабане Compu-Lab 24 дюйма/30 л со следующими параметрами: давления воздуха распыла составляло 10-20 фунтов на квадратный дюйм, температура воздуха, поступающего в барабан, составляла 35-60°С, расстояние от наконечника сопла до слоя таблеток составляло от 5 до 6 дюймов и количество перегородок/сопел составляло 4/2. После добавления таблеток барабан вращали со скоростью от 3 до 5 об/мин и нагревали до температуры, составлявшей 40°С. Затем на таблетки распыляли покрытие до достижения прироста массы таблетки, составлявшего от 11 до 13%, при следующих параметрах: целевая температура отработанного воздуха (достигнутая в течение десяти минут распыления) составляла 27-33°С; скорость вращения барабана составляла от 8 до 12 об/мин, расход воздуха составлял от 180 до 240 кубических футов/мин и интенсивность распыления составляла 2-5 г/мин/кг. После достижения желаемого прироста массы нагревание останавливали и вращали барабан со скоростью 3-5 об/мин до тех пор, пока таблетки не охлаждались до температуры ниже 30°C. Таблетки заключали в непрозрачные желатиновые капсулы DB, окрашенные Swedish Orange, размером АА (Capsugel, Greenwood, S.C.). Таблетки массой 500 мг также получали, как описано выше, за исключением того, что покрытие готовили на порцию из 25000 таблеток с приростом массы таблетки, составлявшим от 8 до 10%.
Сухой порошок для пероральной суспензии.
Полимерную композицию на основе проантоцианидина (1,6 г), бензоат натрия (0,06 г), микрокристаллическую целлюлозу и натрийкарбоксиметилцеллюлозу (AVICEL CL 611, 0,04 г), коллоидный кремния диоксид (0,01 г), вкусовую добавку Tutti Frutti (0,03 г) и сахар фармацевтического класса (9,25 г) по отдельности просеивали через сито ASTM № 40, смешивали в геометрической пропорции, а затем перемешивали в смесителе. Сухая смесь (общей массой примерно 11 г) представляла собой сыпучий порошок от светло-коричневого до коричневого цвета и имела объёмную плотность, составлявшую 0,78 г/мл.
Сухая смесь при восстановлении с применением 23 мл очищенной воды образовывала суспензию коричневого цвета (примерно 30 мл), рН которой составлял 5,2. Каждые 5 мл восстановленной суспензии содержали 250 мг полимерной композиции на основе проантоцианидина.
Изобретение, описанное и заявленное в настоящей заявке, не ограничено рамками конкретных вариантов реализации, предложенных в настоящей заявке. Варианты реализации изобретения предназначены в качестве примеров нескольких аспектов и вариантов реализации. Любые равноценные варианты реализации находятся в рамках настоящего изобретения. Различные варианты изобретения в дополнение к представленным и описанным в настоящей заявке станут очевидны специалистам в данной области из вышеизложенного описания. Указанные варианты также подпадают под прилагаемую формулу изобретения. Все публикации, цитированные в настоящей заявке, включены в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ получения полимерной композиции на основе проантоцианидина, включающий:
a) обеспечение раствора млечного сока, полученного из растения Croton lecheri, содержащего осадок;
b) добавление метилэтилкетона к раствору млечного сока растения и осадку;
c) отделение органического слоя и концентрирование водного слоя с получением твёрдого вещества или отделение водного слоя и концентрирование органического слоя с получением твёрдого вещества;
d) растворение твёрдого вещества в водном растворителе;
e) хроматографирование раствора с применением элюирующего растворителя и
f) выделение проантоцианидина, содержащего Крофелемер.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап (е) хроматографирования осуществляют путем одно-колоночной или двухколоночной хроматографии на колонках, выбранных из CM-Sepharose Fast Flow Column и Sephadex LH-20.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с помощью одноколоночной хроматографии на колонке CM-Sepharose Fast Flow.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с помощью двухколоночной хроматографии на колонке CM-Sepharose Fast Flow и следующей за ней Sephadex
Фиг. 1
LH-20.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографирование на этапе (е) осуществляют с применением воды и далее 30%-ного раствора ацетона в воде в качестве элюирующих растворителей.
5.
Результат АКА образца частично очищенной полимерной композиции после обработки бентонитом в водном растворе
Фиг. 2
Повышенное количество продукта после обработки бентонитом, соосаждения EtOAc и первой фильтрации Автоматически масштабируемая хроматограмма
площадь 0iV*c)
время удержания (мин)
Mz+1
полидисперсность
152211214
16.222
2487
3776
3870
4946
6060
1.518334
Фиг. 3
Результат АКА образца частично очищенной полимерной композиции перед обработкой бентонитом в растворе метанола
Фиг. 4
Фиг. 5
Результат АКА образца частично очищенной полимерной композиции после обработки бентонитом в растворе метанола
Блок-схема способа, предложенного в изобретении Исходный материал млечный сок (промышленный масштаб)
Выдерживание при 2-8°С 14 дней Доведение рН до -6.5-8.5 Выдерживание на холоде 2 часа Фильтрация через слой Celatom
Остаток
^ Промывание водой Вода после промывания Celatom I Объединение
-Обработка ультрафильтрацией (необязательно заменённая субобработкой МеОН/водой-бентонитом-этилацетатом как показано ниже)
Ретентат
- Доведение рН до ~4 (необязательно до ультрафильтрации)
- Твердофазная экстракция (ТФЭ) с применением CM-Sepharose в порционном режиме
- Необязательное осуществление одной или более следующих субобработок (до, после или вместо любой из двух или обеих твердофазных экстракций):
Растворение ретентата в метаноле, воде и т.п. Добавление бентонита и фильтрация с удалением бентонита
Добавление этилацетата и т.п для вызывания осаждения Фильтрация и сушка осадка (необязательно пропуск остальных этапов)
- Твердофазная экстракция с применением LH-20, необязательно в порционном режиме
- Объединение и обработка фракций, содержащих проантоцианидиновый полимер, с применением ультрафильтрации и ротационного выпаривания
'' (необязательно)
- Обработка бутанолом или другим растворителем (необязательно) Водная фракция
- Сушка
Полимерная композиция на основе проантоцианидина
Фиг. 6
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
023814
023814
- 1 -
- 1 -
(19)
023814
023814
- 1 -
- 1 -
(19)
023814
023814
- 1 -
- 1 -
(19)
023814
023814
- 4 -
- 3 -
023814
023814
- 13 -
023814
023814
- 16 -
- 16 -
023814
023814
- 32 -
- 32 -
023814
023814
- 35 -
- 35 -
|
