EA 023725B1 20160729

	Патентная документация ЕАПВ
Запрос:	ea000023725b*\id
Результат:	ID\|Номер и дата охранного документа

больше ...

Термины запроса в документе

Реферат

[RU]

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль в которой R ₁ обозначает Н, -С(О)-С ₇ -С ₁₈ алкил или -С(О)-С ₁ -С ₆ алкил; R ₂ обозначает С ₇ -С ₁₈ алкил; R ₃ обозначает С ₇ -С ₁₈ алкил; L ₁ обозначает -CH ₂ OC(O)NR ₇ -; L ₂ обозначает -OC(O)NR ₇ -; R ₄ обозначает -L ₄ R ₅ ; R ₅ обозначает -P(O)(OR ₇ ) ₂ или -C(O)OR ₇ ; L ₄ обозначает -((CR ₇ R ₇ ) _p O) _q (CR ₁₀ R ₁₀ ) _p -; каждый R ₇ обозначает Н; каждый R ₁₀ обозначает Н; каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.

2. Соединение по п.1, в котором R ₁ обозначает Н, -С(О)-С ₁₀ -С ₁₈ алкил; R ₂ обозначает С ₁₀ -С ₁₈ алкил; R ₃ обозначает С ₁₀ -С ₁₈ алкил; R ₄ обозначает -L ₄ R ₅ ; R ₅ обозначает -P(O)(OR ₇ ) ₂ или -C(O)OR ₇ ; L ₄ обозначает -((CR ₇ R ₇ ) _p O) _q (CR ₁₀ R ₁₀ ) _p -; каждый R ₇ обозначает Н; каждый R ₁₀ обозначает Н; каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.

3. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₁ обозначает Н.

4. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₁ обозначает -С(О)-С ₁₅ алкил.

5. Соединение по одному из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₂ обозначает -С ₈ алкил и R ₃ обозначает -С ₈ алкил или R ₂ обозначает -С ₁₀ алкил и R ₃ обозначает -С ₁₀ алкил.

6. Соединение по одному из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₂ обозначает -С ₁₀ алкил и R ₃ обозначает -С ₁₀ алкил.

7. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₅ обозначает -С(О)ОН.

8. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₅ обозначает -Р(О)(ОН) ₂ .

9. Соединение по одному из пп.1-8, в котором L ₄ обозначает -((CR ₇ R ₇ ) _p O) _q (CR ₁₀ R ₁₀ ) _p -; каждый р независимо друг от друга выбран из 2, 3 и 4, и q обозначает 1, 2, 3 или 4.

10. Соединение по п.1, где соединение выбрано из группы, включающей ((14R,18R)-14-амино-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту; (15R,19R)-15-амино-19-((децилкарбамоил)окси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-овую кислоту; ((14R,18R)-14-амино-18-((октилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтил)фосфоновую кислоту; ((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту; ((14R,18R)-14-ацетамидо-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту; ((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-14-гептанамидо-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту и ((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-14-гексанамидо-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту.

11. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью агонистов Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), содержащая в терапевтически эффективном количестве соединение по одному из пп.1-10 и фармацевтически приемлемый носитель.

12. Применение соединения по одному из пп.1-10 для приготовления лекарственного средства для лечения у пациента заболевания, связанного с модуляцией Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), где заболевание выбирают из инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, респираторного заболевания, дерматологического заболевания и аутоиммунного заболевания.

13. Применение по п.12, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.

14. Способ лечения заболевания, связанного с модуляцией Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), выбранного из инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, респираторного заболевания, дерматологического заболевания и аутоиммунного заболевания, заключающийся в том, что вводят пациенту, нуждающемуся в таком лечении, в эффективном количестве соединение по одному из пп.1-10.

15. Способ по п.14, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.

16. Применение соединения по одному из пп.1-10 в лечении заболевания, ассоциированного с активностью Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), где заболевание представляет собой инфекционное заболевание, воспалительное заболевание, респираторное заболевание, дерматологическое заболевание или аутоиммунное заболевание.

17. Применение по п.16, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.

Полный текст патента

(57) Реферат / Формула:

3. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₁ обозначает Н.

4. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₁ обозначает -С(О)-С ₁₅ алкил.

7. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₅ обозначает -С(О)ОН.

8. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R ₅ обозначает -Р(О)(ОН) ₂ .

Евразийское 023725 (13) B1
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45) Дата публикации и выдачи патента 2016.07.29
(21) Номер заявки 201201321
(22) Дата подачи заявки
2011.03.23
(51) Int. Cl.
A61K31/198 (2006.01) A61K 31/661 (2006.01) A61P11/00 (2006.01) A61P17/00 (2006.01) A61K31/17 (2006.01) A61P29/00 (2006.01) A61P31/00 (2006.01) A61P35/00 (2006.01) A61K38/10 (2006.01) C07K 5/04 (2006.01) C07C 323/60 (2006.01)
(31) 61/316,551
(32) 2010.03.23
(33) US
(43) 2013.04.30
(86) PCT/US2011/029661
(87) WO 2011/119759 2011.09.29
(71) (73) Заявитель и патентовладелец:
НОВАРТИС АГ (CH)
(72) Изобретатель:
У Том Яо-Сян, Цзоу Ефэн, Хоффман Тимоти З., Пань Цзяньфэн (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(56) WO-A2-2007063421 WO-A2-2009108762 EP-A2-0114787 EP-A2-0548024 EP-A1-0604957 US-A1-2005214359 EP-A1-2050455
JIN MI SUN ET AL.: "Crystal structure of the TLR1-TLR2 heterodimer induced by binding of a tri-acylated lipopeptide", CELL, vol. 130, no. 6, September 2007 (2007-09), pages 1071-1082, XP002641163, ISSN: 0092-8674, page 1072, left-hand column, lines 3-7
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Настоящая заявка притязает согласно 35 U.S.C. §119(е) на приоритет предварительной заявки на патент США 61/316551, зарегистрированной 23 марта 2010 г., которая полностью и для всех целей включена в настоящее описание в качестве ссылки.
Сведения о правительственной поддержке
Настоящее изобретение выполнено в частности при правительственной поддержке в рамках гранта Агентства по сокращению угроз (DTRA) № HDTRA1-07-9-0001, присужденного Министерством обороны. Правительству принадлежат определенные права на изобретение.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к модуляторам Толл-подобных рецепторов (TLR) и способам применения указанных соединений.
Предпосылки создания изобретения
Раннее выявление конкретных классов патогенов осуществляется врожденной иммунной системой с помощью паттерн-распознающих рецепторов (PRR). К выявляемым патогенам относятся вирусы, бактерии, простейшие и грибы, и каждый из них конститутивно экспрессирует набор специфических для класса устойчивых к мутациям молекул, называемых патоген-ассоциированными молекулярными паттернами (структурами) (РАМР). Эти молекулярные маркеры могут состоять из белков, углеводов, липи-дов, нуклеиновых кислот или их комбинаций, и они могут иметь внутреннюю или внешнюю локализацию. Примерами РАМР являются бактериальные углеводы (липополисахарид или LPS, манноза), нуклеиновые кислоты (бактериальная или вирусная ДНК или РНК), пептидогликаны и липотейхоевые кислоты (из грамположительных бактерий), N-формилметионин, липопротеины и грибные глюканы.
В результате эволюции паттерн-распознающие рецепторы приобрели преимущество, основанное на трех особенностях РАМР. Во-первых, конститутивная экспрессия позволяет хозяину выявлять патогены вне зависимости от стадии их жизненного цикла. Во-вторых, РАМР являются специфическими для класса, что позволяет хозяину различать патогены и, тем самым, специально приспосабливать свой ответ. В-третьих, устойчивость к мутациям позволяет хозяину распознавать патоген вне зависимости от его конкретного штамма.
Паттерн-распознающие рецепторы принимают участие не только в распознавании патогенов на основе их РАМР. Будучи связанными, паттерн-распознающие рецепторы имеют тенденцию к образованию кластеров, обеспечивают рекрутмент других внеклеточных и внутриклеточных белков в комплекс и инициируют каскады передачи сигналов, которые в конце концов оказывают воздействие на транскрипцию. Кроме того, паттерн-распознающие рецепторы участвуют в активации функций комплемента, коагуляции, фагоцитоза, воспаления и апоптоза при ответе на выявление патогена.
Паттерн-распознающие рецепторы (PRR) можно разделять на эндоцитозные PRR и сигнальные PRR. Сигнальные PRR включают крупные семейства связанных с мембраной Толл-подобных рецепторов (TLR) и цитоплазматических NOD (домен олигомеризации нуклеотидов)-подобных рецепторов, а эндо-цитозные PRR, которые усиливают присоединение, поглощение и деструкцию микроорганизмов фагоцитами без передачи внутриклеточного сигнала, обнаружены у всех фагоцитов и опосредуют удаление апоптозных клеток. Кроме того, эндоцитозные PRR распознают углеводы и включают маннозные рецепторы макрофагов, глюкановые рецепторы, которые имеются у всех фагоцитов, и рецепторы-мусорщики, которые распознают заряженные лиганды.
Краткое изложение сущности изобретения
В настоящем изобретении предложены соединения и фармацевтические композиции, которые являются агонистами Толл-подобного рецептора 2 (TLR2). Согласно конкретным вариантам осуществления изобретения указанные агонисты TLR2 являются потенциаторами иммунной системы (иммунными потенциаторами), которые связываются с содержащими алюминий адъювантами, такими, например, как (но не ограничиваясь только ими) гидроксид алюминия, оксигидроксид алюминия и гидроксифосфат алюминия. Таким образом, настоящее изобретение относится также к иммуногенным композициям, которые содержат антиген и агонист TLR2, которые связываются с содержащими алюминий адъювантами. Когда указанные иммуногенные композиции вводят индивидууму, который нуждается в этом, то агони-сты TLR2 усиливают иммунный ответ на иммуногенную композицию.
Одним из объектов изобретения являются указанные соединения и их фармацевтически приемлемые соли, которые имеют структуру, представленную в формуле (I)
NH L- R,
формула (I),
в которой R1 обозначает Н, -С(О)-С7-С18алкил или -С(О)-С1-С6алкил; R2 обозначает С7-С18алкил; R3 обозначает С7-С18алкил;
L1 обозначает-CH2OC(O)NR7-; L2 обозначает -OC(O)NR7-; R4 обозначает -L4R5;
R5 обозначает -P(O)(OR7)2 или -C(O)OR7; L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-; каждый R7 обозначает Н; каждый R10 обозначает Н;
каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6, и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей: R1 обозначает Н, -С(О)-С10-С18алкил; R2 обозначает С10-С18алкил; R3 обозначает С10-С18алкил; R4 обозначает -L4R5;
R5 обозначает -P(o)(OR7)2 или -C(O)OR7; L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-; каждый R7 обозначает Н; каждый R10 обозначает Н;
каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6, и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R1 обозначает Н. В других вариантах указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R1 обозначает -С(О)-С15алкил.
В других вариантах указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R1 обозначает -С(О) -С10-С18алкил.
В конкретных вариантах вышеуказанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R2 обозначает С10-С18алкил.
В конкретных вариантах вышеуказанных соединении и их фармацевтически приемлемых солеи R3 обозначает С10-С18алкил.
В конкретных вариантах вышеуказанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R2 обозначает -С11алкил и R3 обозначает -С11алкил; или R2 обозначает -С16алкил и R3 обозначает -С16алкил; или R2 обозначает -С16алкил и R3 обозначает -С11алкил; или R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает-С12алкил; или R2 обозначает-С7алкил и R3 обозначает-С7алкил; или R2 обозначает -С9алкил и R3 обозначает -С9алкил; или R2 обозначает -С8алкил и R3 обозначает -С8алкил; или R2 обозначает -С13алкил и R3 обозначает -С13алкил; или R2 обозначает-С12алкил и R3 обозначает-С11алкил; или R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает -С12алкил; или R2 обозначает -С10алкил и R3 обозначает -С10алкил; или R2 обозначает -С15алкил и R3 обозначает -С15алкил.
В конкретных вариантах вышеуказанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R2 обозначает-С11алкил и R3 обозначает-С11алкил.
В конкретных вариантах вышеуказанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей R5
обозначает -Р(О)(ОН)2 или -С(О)ОН.
В конкретных вариантах вышеуказанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей L4 обозначает -((CR^^O^CR^R^)^, где R10 каждый выбран из Н; р каждый независимо друг от друга выбран из 2, 3 и 4 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах осуществления изобретения вышеуказанные соединения и их фармацевтически приемлемые соли выбраны из группы, включающей
((14R,18R)-14-амино-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
(15R,19R)-15-амино-19-((децилкарбамоил)окси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-овую кислоту;
((14R,18R)-14-амино-18-((октилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтил)фосфоновую кислоту;
((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
((14R,18R)-14-ацетамидо-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-14-гептанамидо-13,21-диоксо-3.6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту; и
((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-14-гексанамидо-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту.
Каждое из указанных соединений индивидуально относится к предпочтительному варианту соединений, композиций и способов, представленных в настоящем описании.
Следующим объектом изобретения являются фармацевтические композиции, которые содержат в терапевтически эффективном количестве соединение, представляющее собой одно из вышеуказанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, а также фармацевтически приемлемый носитель. Конкретными вариантами указанных фармацевтических композиций являются фармацевтические композиции, приготовленные для внутривенного введения, введения в стекловидное тело, внутримышечного введения, орального введения, ректального введения, введения путем ингаляции, введения в нос, местного применения, введения в глаз или введения в ухо. Другими вариантами указанных фармацевтических композиций являются фармацевтические композиции в форме таблетки, пилюли, капсулы, жидкости, ингалянта, раствора назального спрея, суппозитория, раствора, эмульсии, мази, глазных капель или ушных капель.
Другим объектом изобретения является применение соединения формулы (I) по п.1 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения у пациента заболевания или нарушения, связанного с модуляцией рецептора TLR2. В конкретных вариантах осуществления этого объекта изобретения указанное заболевание или состояние представляет собой инфекционное заболевание, воспалительное заболевание, респираторное заболевание, дерматологическое заболевание или аутоиммунное заболевание. В конкретных вариантах осуществления этого объекта изобретения заболевание или состояние представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, базально-клеточную карциному, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, рак молочной железы, ВИЧ-инфекцию и обыкновенную волчанку.
Соединения по изобретению могут использоваться в способах активации рецептора TLR2, где способ заключается в том, что вводят в систему или индивидууму, нуждающемуся в этом, в терапевтически эффективном количестве соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли, или фармацевтические композиции, активируя тем самым рецептор TLR. В указанных способах соединение формулы (I) представляет собой агонист рецептора TLR2. В конкретных вариантах способов способы заключаются в том, что вводят соединение в клеточную или тканевую систему или человеку, или животному.
Следующим объектом изобретения является способ лечения заболевания или нарушения, связанного с модуляцией рецептора TLR2, где способ заключается в том, что вводят в систему или индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, в эффективном количестве соединение формулы (I) по п.1, где соединение формулы (I) представляет собой агонист рецептора TLR2. В конкретных вариантах осуществления этого объекта изобретения указанное заболевание или состояние представляет собой инфекционное заболевание, воспалительное заболевание, респираторное заболевание, дерматологическое заболевание или аутоиммунное заболевание. В конкретных вариантах осуществления этого объекта изобретения заболевание или состояние представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, базально-клеточную карциному, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, рак молочной железы, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
Другим объектом изобретения является соединение, предназначенное для лечения заболевания, ассоциированного с активностью рецептора TLR2, где заболевание представляет собой инфекционное заболевание, воспалительное заболевание, респираторное заболевание, дерматологическое заболевание или аутоиммунное заболевание. В конкретных вариантах осуществления этого объекта изобретения заболевание или состояние представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, базально-клеточную карциному, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, рак молочной железы, ВИЧ или обыкновенную волчанку.
Другим объектом изобретения являются фармацевтические композиции, которые включают в терапевтически эффективном количестве соединение формулы (I), содержащий алюминий адъювант, антиген и фармацевтически приемлемый носитель. В указанных фармацевтических композициях соединение формулы (I) присутствует в количестве, достаточном для оказания при его введении иммуностимулирующего действия. Конкретными вариантами указанных фармацевтических композиций является фармацевтическая композиция, приготовленная для внутривенного введения, введения в стекловидное тело или внутримышечного введения. В указанных композициях содержащий алюминий адъюван выбран из гидроксида алюминия, оксигидроксида алюминия и гидроксифосфата алюминия. В конкретных вариантах указанных композиций содержащий алюминий адъювант представляет собой оксигидроксид алюминия или гидроксид алюминия.
Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, которая содержит в терапевтически эффективном количестве соединение формулы (I), связанное с содержащим алюминий адъю-вантом и фармацевтически приемлемый носитель. В конкретных вариантах осуществления изобретения
указанная композиция представляет собой высушенное твердое вещество. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанная композиция представляет собой твердое лиофилизированное вещество. В указанных композициях содержащий алюминий адъювант выбран из гидроксида алюминия, окси-гидроксида алюминия и гидроксифосфата алюминия. В конкретных враиантах указанных композиция содержащий алюминий адъювант представляет собой оксигидроксид алюминия или гидроксид алюминия.
Соединения по изобретению могут использоваться в иммуногенных композициях, включающих соединение формулы (I), содержащий алюминий адъювант и антиген. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) присутствует в количестве, эффективном в отношении вызывания, индукции или усиления иммунного ответа на антиген у индивидуума, которому вводят композицию. В указанных иммуногенных композициях соединение формулы (I) присутствует в количестве, достаточном для осуществления при его введении иммуностимулирующего действия. В указанных иммуно-генных композициях содержащий алюминий адъюван выбран из гидроксида алюминия, оксигидроксида алюминия и гидроксифосфата алюминия. В конкретных вариантах указанных иммуногенных композиций содержащий алюминий адъювант представляет собой оксигидроксид алюминия или гидроксид алюминия.
В конкретных вариантах указанных иммуногенных композиций антиген представляет собой бактериальный антиген. В других вариантах указанных иммуногенных композиций антиген представляет собой вирусный антиген или грибковый антиген. В конкретных вариантах указанных иммуногенных композиций антиген представляет собой полипептид. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции содержат также дополнительный адъювант. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции представляет собой высушенное твердое вещество. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции представляет собой лиофилизированное твердое вещество.
Соединения по изобретению могут использоваться в способе повышения эффективности иммуно-генной композиции, в котором иммуногенная композиция включает содержащий алюминий адъювант, и способ заключается в том, что добавляют в эффективном количестве соединение формулы (I) в иммуно-генную композицию. В указанных способах содержащий алюминий адъювант выбирают из гидроксида алюминия, оксигидроксида алюминия и гидроксифосфата алюминия. В конкретных вариантах способов содержащий алюминий адъювант представляет собой оксигидроксид алюминия или гидроксид алюминия.
Соединения по изобретению могут использоваться в способах вызывания или индукция иммунного ответа у позвоночного животного, заключающихся в том, что вводят позвоночному животному в эффективном количестве иммуногенную композицию, предлагаемую в изобретении. Некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения являются способы вызывания или индукции ответа цитотокси-ческих Т-лимфоцитов (ЦТЛ) у позвоночного животного, заключающиеся в том, что вводят позвоночному животному в эффективном количестве иммуногенную композицию, предлагаемую в изобретении. Другими вариантами осуществления настоящего изобретения являются способы вызывания или индукции опосредованного антителами (гуморального) иммунного ответа у позвоночного животного, заключающиеся в том, что вводят позвоночному животному в эффективном количестве иммуногенную композицию, предлагаемую в изобретении.
Соединения по изобретению могут использоваться в способах получения иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании. Соединения по изобретению могут использоваться в композициях вакцин, которые содержат иммуногенную композицию, предлагаемую в изобретении.
Соединения по изобретению могут использоваться в лекарственных средствах, предназначенных для лечения пациента, имеющего заболевание или нарушение, ассоциированное с активностью рецептора TLR2, и указанные лекарственные средства включают в терапевтически эффективном количестве соединение формулы (I), где соединение формулы (I) представляет собой агонист рецептора TLR2.
Другим объектом изобретения являются способы лечения связанного с пролиферацией клеток заболевания, заключающиеся в том, что вводят в систему или индивидууму, который нуждается в таком лечении, в эффективном количестве соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемые соли, или фармацевтические композиции; где связанное с пролиферацией клеток заболевание представляет собой лимфому, остеосаркому, меланому или опухоль молочной железы, почки, предстательной железы, колоректальную опухоль, опухоль щитовидной железы, яичника, поджелудочной железы, нейронную опухоль, опухоль легкого, матки или опухоль желудочно-кишечного тракта.
Следующим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, которая включает соединение формулы (I), антиген и фармацевтически приемлемый носитель, где указанные фармацевтические композиции представляют собой иммуногенные композиции, а соединение представляет собой по-тенциатор иммунной системы и присутствует в количестве, эффективном в отношении усиления иммунного ответа на антиген у индивидуума, которому вводят композицию. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные фармацевтические композиции содержат также один или несколько им-мунорегуляторов. В конкретных вариантах осуществления изобретения один или несколько иммуноре
гуляторов включает(ют) один или несколько адъювантов. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные адъюванты выбирают из адъювантов, которые представляют собой содержащую минерал композицию, масляную эмульсию, препарат сапонина, виросому, вирусоподобную частицу, бактериальное производное, микробное производное, человеческий иммуномодулятор, биоадгезив, му-коадгезив, микрочастицу, липосому, форму простого полиоксиэтиленового эфира, форму сложного по-лиоксиэтиленового эфира, полифосфазен, мурамиловый пептид или имидазохинолоновое производное. В конкретных вариантах осуществления изобретения адъювант представляет собой масляную эмульсию. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции можно применять в качестве вакцин, и соединение присутствует в количестве, достаточном для осуществления при его введении иммуностимулирующего действия.
Подробное описание изобретения
Определения.
В контексте настоящего описания понятие "алкил" относится к насыщенному разветвленному или прямоцепочечному углеводороду. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные ал-кильные группы необязательно являются замещенными. В контексте настоящего описания понятия "С1-С3алкил", "С1-С4алкил", "С1-С5алкил", "С1-С6алкил", "С1-С7алкил" и "С1-С8алкил" относятся к алкильной группе, содержащей по меньшей мере 1 и максимум 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода соответственно. Если специально не указано иное, алкильная группа, как правило, представляет собой С1-С6алкил. В контексте настоящего описания примерами алкильных групп являются (но не ограничиваясь только ими) метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, гек-сил, гептил, октил, нонил, децил и т.п.
В контексте настоящего описания понятие "алкилен" относится к насыщенному разветвленному или прямоцепочечному двухвалентному углеводородному радикалу, полученному из алкильной группы. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные алкиленовые группы необязательно являются замещенными. В контексте настоящего описания понятия "С1-С3алкилен", "С1-С4алкилен", "С1-С5алкилен", "С1-С6алкилен", "С1-С7алкилен" и "С1-С8алкилен" относятся к алкиленовой группе, содержащей по меньшей мере 1 и максимум 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода соответственно. Если специально не указано иное, алкиленовая группа, как правило, представляет собой C1-С6алкилен. В контексте настоящего описания примерами алкиленовых групп являются (но не ограничиваясь только ими) метилен, этилен, н-пропилен, изопропилен, н-бутилен, изобутилен, втор-бутилен, трет-бутилен, н-пентилен, изо-пентилен, гексилен и т.п.
В контексте настоящего описания понятие "алкоксигруппа" относится к группе -ORa, в которой Ra обозначает указанную выше алкильную группу. Алкоксигруппа необязательно может быть замещенной. В контексте настоящего описания понятия "С1-С3алкоксигруппа", "С1-С4алкоксигруппа", "C1-С5алкоксигруппа", "C1-С6алкоксигруппа", "C1-С7алкоксигруппа" и "С1-С8алкоксигруппа" относятся в ал-коксигруппе, в которой алкильный фрагмент содержит по меньшей мере один и максимум 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов углерода. В контексте настоящего описания примерами алкоксигрупп являются (но не ограничиваясь только ими) метоксигруппа, этоксигруппа, н-пропоксигруппа, изопропоксигруппа, н-бутилоксигруппа, трет-бутилоксигруппа, пентилоксигруппа, гексилоксигруппа, гептилоксигруппа, окти-локсигруппа, нонилоксигруппа, децилоксигруппа и т.п.
В контексте настоящего описания понятие "арил" относится к моноциклической, бициклической и трициклической кольцевым системам, содержащими в целом от 5 до 14 кольцевых членов, в которых по меньшей мере одно кольцо в системе является ароматическим и в которых каждое кольцо в системе содержит 3-7 кольцевых членов. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные арильные группы необязательно являются замещенными. В контексте настоящего описания примерами арильной группы являются (но не ограничиваясь только ими) фенил, нафтил, флуоренил, инденил, азуленил, ан-траценил и т.п.
В контексте настоящего описания понятие "арилен" означает двухвалентный радикал, полученный из арильной группы. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные ариленовые группы необязательно являются замещенными.
В контексте настоящего описания понятие "циклоалкил" относится к насыщенным или частично ненасыщенным, моноциклическим, слитым бициклическим, слитым трициклическим или связанным мостиком полициклическим кольцевым системам. В контексте настоящего описания понятия "С3-С5циклоалкил", "С3-С6циклоалкил", "С3-С7циклоалкил", "С3-С8циклоалкил", "С3-С9циклоалкил" и "С3-С10циклоалкил" относятся к циклоалкильной группе, которая является насыщенной или частично ненасыщенной, моноциклической, слитой бициклической или связанной мостиком полициклической кольцевой системой, которая содержит по меньшей мере 3 и максимум 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов углерода. В конкретных вариантах осуществления изобретения циклоалкильная группа необязательно является замещенной. В контексте настоящего описания примерами циклоалкильных групп являются (но не ограничиваясь только ими) циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклопентенил, циклогексенил, декагидронафталенил, 2,3,4,5,6,7-гексагидро-1Н-инденил и т.п.
В контексте настоящего описания понятие "галоген" относится к фтору (F), хлору (Cl), брому (Br) или йоду (I).
В контексте настоящего описания понятие "гало" относится к следующим галогеновым радикалам: фтор (-F), хлор (-Cl), бром (-Br) и йод (-I).
В контексте настоящего описания понятия "галоалкил" или "замещенный галогеном алкил" относятся к алкильной группе, как она определена в контексте настоящего описания, замещенной одной или несколькими галогеновыми группами, где галогеновые группы могут быть одинаковыми или различными. Галоалкильная группа необязательно может быть замещенной. В контексте настоящего описания примерами разветвленных или прямоцепочечных галоалкильных групп являются (но не ограничиваясь только ими) метил, этил, пропил, изопропил, изобутил и н-бутил, замещенный одной или несколькими галогеновыми группами, где галогеновые группы могут быть одинаковыми или различными, включая (но не ограничиваясь только ими) трифторметил, пентафторэтил и т.п.
В контексте настоящего описания понятие "гетероарил" относится к моноциклическим, бицикличе-ским и трициклическим кольцевым системам, которые содержат в целом от 5 до 14 кольцевых членов, в которых по меньшей мере одно кольцо в системе является ароматическим, по меньшей мере одно кольцо в системе содержит один или несколько гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и в которых каждое кольцо в системе содержит 3-7 кольцевых атомов. В конкретных вариантах осуществления изобретения гстероарильные группы необязательно являются замещенными. В контексте настоящего описания примерами гетероарильных групп являются (но не ограничиваясь только ими) бензофуранил, бензофуразанил, бензоксазолил, бензопиранил, бензтиазолил, бензотиенил, бензазепинил, бензимидазо-лил, бензотиопиранил, бензо[1,3]диоксол, бензо[Ь]фурил, бензо[Ь]тиенил, циннолинил, фуразанил, фу-рил, фуропиридинил, имидазолил, индолил, индолизинил, индолин-2-он, индазолил, изоиндолил, изохи-нолинил, изоксазолил, изотиазолил, 1,8-нафтиридинил, оксазолил, оксаиндолил, оксадиазолил, пиразо-лил, пирролил, фталазинил, птеридинил, пуринил, пиридил, пиридазинил, пиразинил, пиримидинил, хи-ноксалинил, хинолинил, хиназолинил, 4Н-хинолизинил, тиазолил, тиадиазолил, тиенил, триазинил, триа-золил и тетразолил.
В контексте настоящего описания понятие "гетероарилен" означает двухвалентный радикал, полученный из гетероарильной группы. В конкретных вариантах осуществления изобретения гетероарилено-вые группы необязательно являются замещенными.
В контексте настоящего описания понятие "гетероатом" относится к одному или нескольким атомам кислорода, серы, азота, фосфора или кремния.
В контексте настоящего описания понятие "гетероциклоалкил" относится к циклоалкилу, как он определен в настоящем описании, в котором один или несколько кольцевых атомов углерода заменены фрагментом, выбранным из -О-, -N=, -NR-, -С(О)-, -S-, -S(O) - или -S(O)2-, где R обозначает водород, С1-С4алкил или защитную группу азота, при условии, что кольцо указанной группы не содержит два примыкающих друг к другу атома О или S. В конкретных вариантах осуществления изобретения гетероцик-лоалкильная группа необязательно является замещенной. В контексте настоящего описания примерами гетероциклоалкильных групп являются (но не ограничиваясь только ими) морфолиногруппа, пирролиди-нил, пирролидинил-2-он, пиперазинил, пиперидинил, пиперидинил-2-он, пиперидинил-3-он, пипериди-нил-4-он, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]дец-8-ил, 2Н-пирролил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, 1,3-диоксоланил, 2-имидазолинил, имидазолидинил. 2-пиразолинил, пиразолидинил, 1,4-диоксанил, 1,4-дитианил, тиоморфолинил, азепанил, гексагидро-1,4-диазепинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, тетрагидротиопиранил, тиоксанил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, оксепанил, тиепанил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, 2Н-пиранил, 4Н-пиранилдиоксанил, 1,3-диоксоланил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидро-фуранил, имидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3.1.0]гексанил и 3-азабицикло[4.1.0]гептанил.
В контексте настоящего описания понятие "гидроксил" относится к группе -ОН.
В контексте настоящего описания понятие "гидроксиалкил" относится к алкильной группе, как она определена в настоящем описании, замещенной одной или несколькими гидроксильными группами. В контексте настоящего описания примерами разветвленных или прямоцепочечных "С1-С6гидроксиалкильных групп" являются (но не ограничиваясь только ими) метальные, этильные, про-пильные, изопропильные, изобутильные и н-бутильные группы, замещенные одной или несколькими гидроксильными группами.
В контексте настоящего описания понятие "необязательно замещенный" означает, что указанная группа может быть не замещена или может быть замещена одной или несколькими дополнитель-ной(ыми) группой(ами), индивидуально и независимо друг от друга выбранными из алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероциклоалкила, гидроксила, алкоксигруппы, меркаптила, цианогруппы, галогена, карбонила, тиокарбонила, изоцианатогруппы, тиоцианатогруппы, изотиоциана-тогруппы, нитрогруппы, пергалоалкила, перфторалкила и аминогруппы, включая моно- и дизамещенные аминогруппы и их защищенные производные. Примерами необязательных заместителей являются (но не ограничиваясь только ими), галоген, -CN, =0, =№ОН, =N-OR, =N-R, -OR, -C(O)R, -C(O)OR, -OC(O)R, -
OC(O)OR, -C(O)NHR, -C(O)NR2, -OC(O)NHR, -OC(O)NR2, -SR-, -S(O)R, -S(O)2R, -NHR, -N(R)2, -
NHC(0)R, -NRC(0)R, -NHC(0)0R, -NRC(0)0R, S(0)2NHR, -S(0)2N(R)2, -NHS(0)2NR2, -NRS(0)2NR2, -NHS(0)2R, -NRS(0)2R, С1-С8алкил, С1-С8алкоксигруппа, арил, гетероарил, циклоалкил, гетероциклоал-кил, замещенный галогеном C1-С8алкил и замещенная галогеном C1-С8алкоксигруппа, где R каждый независимо друг от друга выбран из Н, галогена, С1-С8алкила, С1-С8алкоксигрупп^1, арила, гетероарила, циклоалкила, гетероциклоалкила, замещенного галогеном С1-С8алкила и замещенной галогеном С1-С8алкоксигруппы. Размещение и количество указанных групп заместителей определяется хорошо известными ограничениями, связанными с валентностью каждой группы, например =O можно применять в качестве заместителя алкильной группы, но не арильной группы.
В контексте настоящего описания понятие "сольват" относится к комплексу с различной стехиометрией, включающему растворенное вещество (например, соединения формулы (I) или его соли, представленные в настоящем описании) и растворитель. Примерами растворителей являются (но неограничи-ваясь только ими) вода, ацетон, метанол, этанол и уксусная кислота.
В контексте настоящего описания понятие "приемлемый" касательно препаративной формы, композиции или ингредиента означает отсутствие персистентных вредных воздействий на общее состояние здоровья пациента, подлежащего лечению.
Понятие "введение" или "вводить" индивидууму соединение означает обработку соединением формулы (I), его фармацевтически приемлемой солью, фармацевтически приемлемым сольватом или проле-карством индивидуума, который нуждается в лечении.
Понятие "антиген" относится к молекуле, содержащей один или несколько эпитопов (например, линейных, конформационных или относящихся к обоим типам), которая вызывает иммунологический ответ. Понятие можно применять взаимозаменяемо с понятием "иммуноген". "Вызывать" означает индуцировать, ускорять, усиливать или модулировать иммунный ответ или иммунную реакцию. В некоторых случаях иммунный ответ или иммунная реакция представляет собой гуморальный и/или клеточный ответ. Антиген может индуцировать, ускорять, усиливать или модулировать иммунный ответ или иммунную реакцию в клетках in vitro и/или in vivo у индивидуума и/или ex vivo в клетках или тканях индивидуума. Иммунный ответ или иммунная реакция может вызывать (но не ограничиваясь только ими) образование антител у индивидуума или создание специфических популяций лимфоцитов, вступающих в реакцию с антигеном. Антигены, как правило, представляют собой макромолекулы (например, белки, полисахариды, полинуклеотиды), которые являются чужеродными для хозяина.
В контексте настоящего описания понятие "антиген" относится также к субъединичным антигенам (т.е. антигенам, которые выделены и отделены от целого организма, с которым антиген ассоциирован в природе), а также убитые, ослабленные или инактивированные бактерии, вирусы, паразиты или другие патогены или опухолевые клетки, включая внеклеточные домены рецепторов, расположенных на клеточной поверхности, и внутриклеточные участки, содержащие Т-клеточные эпитопы. Антитела, такие как антиидиотипические антитела или их фрагменты и синтетические пептидные мимотопы, которые могут имитировать антиген или антигенную детерминанту, также подпадают под понятие "антиген", которое применяется в настоящем описании. Аналогично этому олигонуклеотид или полинуклеотид, который экспрессирует иммуногенный белок, антиген или антигенную детерминантну in vivo, такой как применяемый в генной терапии или при иммунизации нуклеиновыми кислотами, также подпадают под понятие антигена, которое применяется в настоящем описании.
Понятие "эпитоп" относится к области конкретных субстанций (например, антигенной молекулы или антигенного комплекса), которая определяет их иммунологическую специфичность. Эпитоп подпадает под представленное в настоящем описании понятие "антиген". Как правило, эпитоп представляет собой полипептид или полисахарид, который в естественных условиях присутствует в антигене. В искусственных антигенах он может представлять собой низкомолекулярную субстанцию, такую как производное арсаниловой кислоты. В-клеточный эпитоп, как правило, должен включать по меньшей мере примерно 5 аминокислот, но может состоять лишь из 3-4 аминокислот. Т-клеточный эпитоп, такой как эпи-топ, распознаваемый ЦТЛ (цитотоксические Т-лимфоциты), как правило, должен включать по меньшей мере примерно 7-9 аминокислот, а эпитоп, распознаваемый Т-клетками-хелперами, как правило, должен включать по меньшей мере примерно 12-20 аминокислот.
В контексте настоящего описания понятие "рак" относится к аномальному росту клеток, которые имеют тенденцию к неконтролируемой пролиферации и в некоторых случаях к метастазированию (распространение). Типы рака включают (но не ограничиваясь только ими) плотные (солидные) опухоли (например, мочевого пузыря, кишечника, головного мозга, молочной железы, эндометрия, сердца, почки, легкого, лимфатической ткани (лимфома), яичника, поджелудочной железы или другого органа эндокринной системы (щитовидная железа), предстательной железы, кожи (меланома)) или гематологические опухоли (например, лейкозы).
В контексте настоящего описания понятие "носитель" относится к химическим соединениям или агентам, которые облегчают включение соединения, представленного в настоящем описании, в клетки или ткани.
В контексте настоящего описания понятия "совместное введение" или "комбинированное введение" или т.п. относятся к введению выбранных терапевтических средств индивидуальному пациенту и подра
зумевается, что они включают схемы лечения, при которых агенты необязательно вводить, используя один и тот же путь введения или введение в одно и то же время.
В контексте настоящего описания понятие "дерматологическое нарушение" относится к кожному нарушению. Такие дерматологические нарушения включают (но не ограничиваясь только ими) пролифе-ративные или воспалительные кожные нарушения, такие как атопический дерматит, буллезные нарушения, коллагенозы, контактный дерматит (экзема), болезнь Кавасаки, розовые угри, синдром Шегрена-Ларссона, старческий кератоз, базально-клеточная карцинома и крапивница.
В контексте настоящего описания понятие "разбавитель" относится к химическим соединениям, которые применяют для разведения соединения, представленного в настоящем описании, перед его введением. Разбавители можно применять также для стабилизации соединений, представленных в настоящем описании.
В контексте настоящего описания понятия "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" относятся к количеству соединения, представленного в настоящем описании, которое при введении является достаточным для облегчения в некоторой степени одного или нескольких симптомов заболевания или состояния, подлежащего лечению. Результатом может являться снижение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания или другое требуемое изменение биологической системы. Например, для терапевтического применения "эффективное количество" представляет собой количество композиции, которая содержит соединение, представленное в настоящем описании, требуемое для клинически значимого снижения симптомов заболевания. Соответствующее "эффективное" количество для любого индивидуума можно определять с помощью таких методик, как опыт с использованием возрастающих доз.
В контексте настоящего описания понятия "усиление" или "усиливать" означает повышение или удлинение либо эффективности, либо продолжительности требуемого действия. Так, в контексте усиления действия терапевтических средств понятие "усиление" относится к способности повышать или пролонгировать либо эффективность, либо продолжительность действия других терапевтических средств на систему. В контексте настоящего описания понятие "усиливающее эффективное количество" относится к количеству, требуемому для усиления действия другого терапевтического средства на требуемую систему.
Понятие "эксципиент" относится к любой, в сущности, вспомогательной субстанции, которая может присутствовать в конечной лекарственной форме. Например, под понятие "эксципиент" подпадают носители, связующие агенты, разрыхлители, наполнители (разбавители), замасливатели, суспендирующие/диспергирующие агенты и т.п.
В контексте настоящего описания понятия "фиброз" или "фиброзирующее нарушение" относятся к состояниям, которые являются следствием острого или хронического воспаления и ассоциированы с аномальным накоплением клеток и/или коллагена, и включают (но не ограничиваясь только ими) фиброз индивидуальных органов или тканей, таких как сердце, почка, суставы, легкое или кожа, а также включают такие нарушения как идиопатический легочный фиброз и криптогенный фиброзирующий альвео-лит.
В контексте настоящего описания понятие "ятрогенный" относится к состоянию, нарушению или заболевания, возникшему или ухудшенному в результате лекарственного или хирургического лечения.
В контексте настоящего описания понятие "иммунологически эффективное количество" означает, что индивидууму вводят достаточное количество либо в виде одной дозы или части серий доз, которое обладает эффективностью в отношении лечения или предупреждения иммунологического заболевания или нарушения. Это количество варьируется в зависимости от состояния здоровья и физического состояния индивидуума, подлежащего лечению, возраста, таксономической группы, к которой относится индивидуум, подлежащий лечению (например, примат кроме человека, примат и т.д.), способности иммунной системы индивидуума синтезировать антитела, требуемой степени защиты, состава вакцины, оценки лечащим врачом медицинской ситуации и других соответствующих факторов. Ожидается, что количество, находящееся в относительно широком диапазоне, можно определять с помощью рутинных экспериментов.
В контексте настоящего описания понятия "иммунологический ответ" или "иммунный ответ" на антиген или композицию относятся к развитию у индивидуума гуморального и/или клеточного иммунного ответа на антиген или композицию.
Иммунные ответы включают врожденные и адаптивные (приобретенные) иммунные ответы. Врожденные иммунные ответы представляют собой быстродействующие ответы, которые обеспечивают первую линию защиты, обусловленную иммунной системой. В противоположность этому адаптивный иммунитет основан на отборе и клональной экспансии клеток иммунной системы, которые имеют гены соматически преобразованных рецепторов (например, Т- и В-клеточных рецепторов), которые распознают антигены конкретного патогена или нарушения (например, опухоли), обеспечивая тем самым специфичность и иммунологическую память. Врожденные иммунные ответы, вместе с их многочисленными действиями, приводят к быстрому выбросу воспалительных цитокинов и активации антигенпрезентирую-щих клеток (АПК), таких как макрофаги и дендритные клетки. Для того чтобы отличать патогены от
своих компонентов, врожденная иммунная система использует широкий спектр относительно неизменяемых рецепторов, которые выявляют отличительные черты патогенов, известные как ассоциированные с патогенами молекулярные паттерны или РАМР. Известно, что введение микробных компонентов в экспериментальные вакцины приводит к развитию сильных и продолжительных адаптивных иммунных ответов. Установлено, что помимо указанного потенциирования иммунных ответов механизм включает паттерн-распознающие рецепторы (PRR), которые по разному экспрессируются на различных клетках иммунной системы, включая нейтрофилы, макрофаги, дендритные клетки, естественные клетки-киллеры, В-клетки и некоторые неиммунные клетки, такие как эпителиальные и эндотелиальные клетки. Взаимодействие с PRR приводит к активации некоторых из таких клеток и секреции ими цитокинов и хемокинов, а также к созреванию и миграции других клеток. В сочетании это создает воспалительное окружение, что приводит к развитию адаптивного иммунного ответа. PRR включают нефагоцитарные рецепторы, такие как Толл-подобные рецепторы (TLR) и белки связывающего нуклеотиды домена оли-гомеризации (NOD) и рецепторы, которые индуцируют фагоцитоз, такие как рецепторы-мусорщики, маннозные рецепторы и рецепторы р-глюкана. Дендритные клетки относятся к одному из наиболее важных типов клеток касательно инициации примирования нестимулированных CD4+-Т-клеток-хелперов (TH) и индукции дифференцировки CD8+-Т-клеток в клетки-киллеры. Известно, что передача сигналов TLR играет важную роль в определении качества ответов этих Т-клеток-хелперов, например, с учетом установленной способности TLR-сигнала определять специфический тип Tjj-ответа (например, ТД-ответ или TjHZ-ответ). Комбинация антителозависимого (гуморального) и клеточного иммунитета продуцируется в качестве части ответа T^-ram, в то время как ответ T^-ram главным образом представляет собой антителозависимый ответ.
"Гуморальный иммунный ответ" означает иммунный ответ, опосредуемый молекулами антитела, а "клеточный иммунный ответ" означает иммунный ответ, опосредуемый Т-лимфоцитами и/или другими лейкоцитами. Одним из важных аспектов клеточного иммунитета является антигенспецифический ответ цитолитических Т-клеток ("ЦТЛ"). ЦТЛ обладают специфичностью в отношении пептиных антигенов, которые презентуются в ассоциации с белками, кодируемыми главным комплексом гистосовместимости (ГКГ) и экспрессируются на поверхности клеток. ЦТЛ способствуют индукции и ускорению внутриклеточной деструкции внутриклеточных микробов или лизису клеток, инфицированных указанными микробами. Другой аспект клеточного иммунитета включает антигенспецифический ответ Т-клеток-хелперов. Действие Т-клеток-хелперов основано на их свойстве способствовать стимуляции функции и фокусированию активности неспецифических эффекторных клеток в отношении клеток, презентирующих пептидные антигены в сочетании с молекулами ГКГ на их поверхности. Понятие "клеточный иммунный ответ" относится также к производству цитокинов, хемокинов и других подобных молекул, которые продуцируются активированными Т-клетками и/или другими лейкоцитами, включая полученные из CD4+- и CD8+-Т-клетки.
Таким образом, композиция, такая как иммуногенная композиция или вакцина, которая вызывает клеточный иммунный ответ, может служить для сенсибилизации позвоночного животного путем презентации антигена в сочетании с молекулами ГКГ на клеточной поверхности. Клеточно-опосредованный иммунный ответ направлен на клетки, которые презентируют антиген на своей поверхности, или на область вблизи этих клеток. Кроме того, могут образовываться антигенспецифические Т-лимфоциты, позволяющие осуществлять дополнительную защиту иммунизированного хозяина. Способность конкретного антигена или композиции стимулировать клеточно-опосредованный иммунологический ответ можно определять с помощью ряда анализов, известных в данной области, таких как анализы лимфопролиферации (активация лимфоцитов), анализы цитотоксических клеток ЦТЛ, анализируя Т-лимфоциты, специфические в отношении антигена у сенсибилизированного индивидуума, или путем измерения производства цитокинов Т-клетками в ответ на повторную стимуляцию антигеном. Указанные анализы хорошо известны в данной области (см., например, Erickson и др., J. Immunol. 151, 1993, cc. 4189-4199; Doe и др., Eur. J. Immunol. 24, 1994, c. 2369-2376). Таким образом, в контексте настоящего описания иммунологический ответ может представлять собой ответ, который стимулирует производство ЦТЛ и/или производство или активацию Т-клеток-хелперов. Представляющий интерес антиген может вызывать также антитело-обусловленный иммунный ответ. Таким образом, иммунологический ответ может включать, например, среди прочего одно или несколько следующих действий: производство антител, например, В-клетками; и/или активация Т-клеток-супрессоров и/или у5-Т-клеток, специфически направленных против антигена или антигенов, присутствующего(их) в представляющей интерес композиции или вакцине. Эти ответы могут служить для нейтрализации инфективности и/или опосредовать связанную с антителом комплемент- или антитело-обусловленную клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC), обеспечивая защиту иммунизированного хозяина. Указанные ответы можно определять с помощью стандартных иммуноанализов и анализов нейтрализации, которые хорогИмиз)вн <1тнннв1дамнойэоициигипредлагаемые в изобретении, отличаются "повышенной иммуногенно-стью" для данного антигена, когда они обладают более высокой способностью вызывать иммунный ответ по сравнению с иммунным ответом, вызываемым эквивалентным количеством антигена в другой
композиции (например, когда антиген вводят в виде растворимого белка). Так, композиция может отличаться "повышенной иммуногенностью", например, если композиция генерирует более сильный иммунный ответ или если более низкая доза или меньшее количество доз антигена необходимо для получения иммунного ответа у индивидуума, которому ее вводят. Повышенную иммуногенность можно определять, например, осуществляя введение композиций, предлагаемых в изобретении, и контрольных антигенов животным и осуществляя сравнительный анализ обоих вариантов.
В контексте настоящего описания понятие "воспалительные нарушения" относится к заболеваниям или состояниям, которые отличаются одним или несколькими признаками, такими как боль (боль (воспаление) из-за образования вредных токсических веществ и стимуляции нервов), температура (жар в результате вазодилатации), покраснение (краснота в результате вазодилатации и усиленного притока крови), опухание (опухоль в результате избыточного притока или ограниченного оттока жидкости) и снижение функции (functio laesa, которое может быть частичным или полным, временным или перманентным). Воспаление имеет множество форм и включает (но не ограничиваясь только ими) воспаление, которое имеет один или несколько следующих видов: острое, адгезивное, атрофическое, катаральное, хроническое, цирротическое, диффузное, диссеминированное, эксудативное, фибринозное, фиброзное, очаговое, грануломатозное, гиперпластическое, гипертрофическое, интерстициальное, метастатическое, некротическое, облитерирующее, паренхиматозное, пластическое, продуктивное, пролиферативное, псевдомем-ранозное, гнойное, склерозирующее, серопластическое, серозное, простое, специфическое, подострое, гноеродное, токсическое, травматическое и/или язвенное. К воспалительным нарушениям относятся также (но не ограничиваясь ими) воспаления, повреждающие кровеносные сосуды (полиартериит, преходящий артрит); суставы (артрит: кристаллический, остеоартрит, псориатический, реактивный, ревматоидный, Рейтера); желудочно-кишечный тракт (болезнь,); кожу (дерматит) или множество органов и тканей (системная красная волчанка).
В контексте настоящего описания понятие "модулирует" означает такое взаимодействие с мишенью, либо прямое, либо косвенное, которое изменяет активность мишени, включая (но не ограничиваясь только ими) повышение активности мишени, ингибирование активности мишени, ограничение активности мишени или удлинение продолжительности активности мишени.
В контексте настоящего описания понятие "модулятор" относится к молекуле, которая взаимодействует с мишенью либо прямо, либо косвенно. Взаимодействия включают (но не ограничиваясь только ими) агонистическое или антагонистическое взаимодействие.
В контексте настоящего описания понятия "глазная болезнь" или "офтальмологическое заболевание" относятся к заболеваниям, поражающим глаз или глаза, а также могут поражать окружающие ткани. Глазные или офтальмологические заболевания включают (но не ограничиваясь только ими) конъюнктивит, ретинит, склерит, увеит, аллергический конъюнктивит, вернальный конъюнктивит, папиллярный конъюнктивит и вызываемый цитомегаловирусом (CMV) ретинит.
В контексте настоящего описания понятие "олигонуклеотид" относится к полинуклеотиду, состоящему из 5-100 нуклеотидов, как правило, 5-30 нуклеотидов.
В контексте настоящего описания понятие "фармацевтически приемлемый" относится к материалу, такому как носитель или разбавитель, который не влияет на биологическую активность или свойства соединений, представленных в настоящем описании. Указанные материалы при введении индивидууму не обладают нежелательными биологическими действиями или не взаимодействуют нежелательным образом с любым из компонентов композиции, в которую они входят.
В контексте настоящего описания понятие "фармацевтически приемлемая соль" относится к форме соединения, которая не вызывает выраженного раздражения организма, в который ее вводят, и не влияет на биологическую активность и свойства соединений, представленных в настоящем описании. В контексте настоящего описания понятия "комбинация" или "фармацевтическая комбинация" означает продукт, полученный в результате смешения или объединения более одного действующего вещества, и они включают как фиксированные, так и нефиксированные комбинации действующих веществ. Понятие "фиксированная комбинация" означает, что действующие вещества, например соединение формулы (I) и дополнительное терапевтическое средство, оба вводят пациенту одновременно в виде одной целой формы или дозы. Понятие "нефиксированная комбинация" означает, что действующие вещества, например соединение формулы (I) и дополнительное терапевтическое средство, оба вводят пациенту в виде отдельных форм одновременно, совместно или последовательно, не ограничиваясь конкретными временными пределами, при этом такое введение обеспечивает уровни терапевтической эффективности двух соединений в организме пациента. Последнее относится также к основанной на применении смесей терапии, например к введению 3 или большего количества действующих веществ.
В контексте настоящего описания понятия "композиция" или "фармацевтическая композиция" относятся к смеси по меньшей мере одного соединения, например соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, по меньшей мере с одним и необязательно несколькими другими фармацевтически приемлемыми химическими компонентами, такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты, загустители и/или эксципиенты.
"Физиологическое значение рН" или "рН в физиологическом диапазоне" означает значение рН в
диапазоне примерно от 7,2 до 8,0 включительно, более предпочтительно в диапазоне примерно от 7,2 до 7,6 включительно.
В контексте настоящего описания понятие "пролекарство" относится к агенту, который превращается в родительское лекарственное средство in vivo. Примерами пролекарств соединений, представленных в настоящем описании, являются (но не ограничиваясь только ими) соединение, представленное в настоящем описании, вводимое в виде сложного эфира, который затем подвергается метаболическому гидролизу с образованием карбоновой кислоты, т.е. активной субстанции, внутри клетки. Другим примером пролекарства является короткий пептид, связанный с кислотной группой, причем пептид метаболи-зируется с образованием требуемого активного фрагмента.
В контексте настоящего описания понятия "полинуклеотид" и "нуклеиновая кислота" применяют взаимозаменяемо, и они относятся к одно- или двухцепочечному полимеру дезоксирибонуклеотидных или рибонуклеотидных оснований. Одноцепочечные полинуклеотиды включают кодирующие цепи и антисмысловые цепи. Полинуклеотиды включают РНК и ДНК и их можно выделять из природных источников, синтезировать in vitro или получать из комбинации встречающихся в естественных условиях и синтетических молекул. Примерами полинуклеотидов являются (но не ограничиваясь только ими) гены, кДНК, мРНК, самореплицирующиеся молекулы РНК, самореплицирующиеся молекулы ДНК, последовательности геномной ДНК, последовательности геномной РНК, олигонуклеотиды. Самореплицирующиеся молекулы РНК и самореплицирующиеся молекулы ДНК обладают способностью к самоамплификации при интродукции их в клетку-хозяина.
Полинуклеотид может быть линейным или нелинейным (например, содержать кольцевые, разветвленные и др. элементы). Под понятия "полинуклеотид" и "нуклеиновая кислота" подпадают модифицированные варианты (например, последовательности с делецией, добавлением и/или заменой). Модифицированные варианты могут быть получены преднамеренно, например с помощью сайтнаправленного мутагенеза, или могут быть получены случайно, например посредством встречающихся в естественных условиях мутаций.
Полинуклеотид может состоять из мономеров, которые представляют собой встречающиеся в естественных условиях нуклеотиды (такие как ДНК и РНК) или аналогов встречающихся в естественных условиях нуклеотидов или их комбинации. Модифицированные нуклеотиды могут иметь изменения в сахарных фрагментах и/или фрагментах, представляющих собой пиримидиновое или пуриновое основание. Модификации сахара включают, например, замену одной или нескольких гидроксильных групп на галогены, алкильные группы, амины и азидогруппы, или сахара могут быть функционализированы в виде простых или сложных эфиров. Кроме того, весь сахарный фрагмент может быть замещен структурами, аналогичными с позиций стеричности и электронной структуры, такими как азасахара и карбоцикли-ческие аналоги сахаров. Примерами модификаций в фрагменте, представляющем собой основание, являются алкилированные пурины и пиримидины, ацилированные пурины или пиримидины или другие хорошо известные замены на гетероциклы. Мономеры полинуклеотида могут быть сцеплены с помощью фосфодиэфирных связей или аналогов таких связей. Аналогами фосфодиэфирных связей являются фос-форотиоат, фосфородитиоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанилотиоат, фосфорнили-дат, фосфорамидат и т.п. Понятие "полинуклеотид" и "нуклеиновая кислота" относится также к так называемым "пептидным нуклеиновым кислотам", которые содержат встречающиеся в естественных условиях или модифицированные основания нуклеиновых кислот, присоединенные в полиамидному каркасу.
В контексте настоящего описания понятие "содержащие полинуклеотид субстанции" относится к молекуле, по меньшей часть которой представляет собой полинуклеотид.
В контексте настоящего описания понятия "полипептид", "белок" и "пептид" относятся к любому полимеру, состоящему из нескольких аминокислот, вне зависимости от длины или посттрансляционной модификации (например, фосфорилирование или гликозилирование), соединенных, по меньшей мере, частично с помощью ковалентной связи (например, "белок" в контексте настоящего описания относится как к линейным полимерам (цепи) аминокислот, соединенных пептидными связями, так и к белкам, имеющим вторичную, третичную или четвертичную структуру, которые могут включать другие формы внутримолекулярной и межмолекулярной ассоциации, такие как водородные и ван-дер-ваальсовы связи, внутри или между пептидной(ыми) цепью(ями)). Примерами полипептидов являются (но не ограничиваясь только ими) белки, пептиды, олигопептиды, димеры, мультимеры, варианты и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения полипептид может быть немодифицирован, т. е. в нем могут отсутствовать модификации, такие как фосфорилирование и гликозилирование. Полипептид может содержать полный индивидуальный встречающийся в естественных условиях полипептид или его часть или может представлять собой слитый или химерный полипептид, который содержит аминокислотные последовательности из двух или большего количества встречающихся в естественных условиях полипептидов.
В контексте настоящего описания понятие "содержащие полипептид субстанции" относится к молекуле, по меньшей мере часть которой представляет собой полипептид. Примерами являются полипептиды, гликопротеины, металлопротеины, липопротеины, представляющие собой сахарид антигены, конъюгированные с белками-носителями, и т. д.
В контексте настоящего описания понятие "респираторное заболевание" относится к заболеваниям,
которые поражают органы, участвующие в дыхании, такие как нос, глотка, гортань, трахея, бронхи и легкие. Респираторные заболевания включают (но не ограничиваясь только ими) астму, респираторный дистресс-синдром взрослых и аллергическую (приобретенную) астму, неаллергическую (наследственную) астму, острую серьезную астму, хроническую астму, клиническую астму, ночную астму, индуцированную аллергеном астму, аллерген-индуцированную астму, чувствительную к аспирину астму, индуцированную физической нагрузкой астму, изокапническую гипервентиляцию, начинающуюся в детском возрасте астму, начинающуюся во взрослом возрасте астму, кашлевой вариант астмы, профессиональную астму, устойчивую к стероидам астму, сезонную астму, сезонный аллергический ринит, перениаль-ный (круглогодичный) аллергический ринит, хроническое обструктивное заболевание легких, включая хронический бронхит или эмфизему, легочную гипертензию, интерстициальный легочный фиброз и/или воспаление дыхательных путей, муковисцидоз и гипоксию.
В контексте настоящего описания понятие "индивидуум" или "пациент" относится к млекопитающим и немлекопитающим. Примерами млекопитающих являются (но не ограничиваясь только ими) люди, шимпанзе, человекообразные обезьяны, крупный рогатый скот, лошади, овцы, козы, свиньи; кролики, собаки, кошки, крысы, мыши, морские свинки и т. п. Примерами немлекопитающих являются (но не ограничиваясь только ими) птицы, рыбы и т. п. Предпочтительно индивидуум представляет собой человека и может представлять собой человека, у которого диагностировано подлежащее лечению заболевание или нарушение, указанное в настоящем описании.
В контексте настоящего описания понятие "модулятор TLR2" относится к соединению, которое модулирует рецептор TLR2.
В контексте настоящего описания понятие "TLR2-заболевание" или "заболевание или нарушение, ассоциированное с активностью TLR2" относится к любому болезненному состоянию, ассоциированному с Толл-подобным рецептором. Указанные заболевания или нарушения включают (но не ограничиваясь только ими) инфекционные заболевания, воспалительные заболевания, респираторные заболевания и аутоиммунные заболевания, такие, например, как астма, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), болезнь Крона, бронхит, дерматит, аллергический ринит, псориаз, склеродерма, крапивница, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекция и обыкновенная волчанка.
В контексте настоящего описания понятие "терапевтически эффективное количество" относится к любому количеству соединения, приводит к улучшенному по сравнению с соответствующим индивидуум, которому не вводят указанное количество, лечению, заживлению, предупреждению или облегчению заболевания, нарушения или побочного действия или снижает скорость прогрессирования заболевания или нарушения. Под понятие подпадают также количества, эффективные в отношении улучшения обычной физиологической функции.
В контексте настоящего описания понятия "лечить", "процесс лечения" и "лечение" относятся к методам облегчения, аннулирования или ослабления симптомов заболевания или состояния, предупреждения возникновения дополнительных симптомов, облегчения или предупреждения лежащих в основе симптомов метаболических нарушений, ингибирования заболевания или состояния, прекращения развития заболевания или состояния, ослабления заболевания или состояния, вызывания регресса заболевания или состояния, ослабления состояния, вызываемого заболеванием или состоянием, или прекращения симптомов заболевания или состояния или профилактически и/или терапевтически.
Понятие "векторная конструкция", как правило, относится к любой конструкции, которая обладает способностью обеспечивать экспрессию представляющей(их) интерес нуклеотидной(ых) последователь-ности(ей) или представляющего(их) интерес гена(ов). "Конструкция ДНК-вектора" относится к молекуле ДНК, которая обладает способностью обеспечивать экспрессию представляющей(их) интерес нуклео-тидной(ых) последовательности(ей) или представляющего(их) интерес гена(ов). Одним из конкретных типов конструкции ДНК-вектора является плазмида, которая представляет собой кольцевую эписомаль-ную молекулу ДНК, которая обладает способностью к автономной репликации в клетке-хозяине. Как правило, плазмида представляет собой кольцевую двухцепочечную ДНК-петлю, в которую можно встраивать путем лигирования дополнительные ДНК-сегменты. pCMV представляет собой конкретную плазмиду, хорошо известную в данной области. Известны другие конструкции ДНК-вектора, основой которых являются вирусные РНК. Указанные конструкции ДНК-вектора, как правило, содержат промотор, который функционирует в эукариотической клетке, расположенный на 5'-конце относительно последовательности кДНК, для которой продуктом транскрипции является конструкция РНК-вектора (например, репликон вектора альфавирусной РНК ), и 3'-концевую область терминации. Другими примерами векторных конструкций являются конструкции РНК-вектора (например, конструкции альфавирусных векторов) и т. п. В контексте настоящего описания "конструкция РНК-вектора", "репликон РНК-вектора" и "репликон" относятся к молекуле РНК, которая обладает способностью обеспечивать свою собственную амплификацию или саморепликацию in vivo, как правило, в клетке-мишени. Конструкцию РНК-вектора применяют непосредственно без интродукции ДНК в клетку и транспорта в ядро, где должна происходить транскрипция. При использовании РНК-вектора для непосредственного введения в цитоплазму клетки-хозяина имеет место эффективная автономная репликация и трансляция гетерологичной
нуклеотидной последовательности.
Названия соединений, представленных в настоящем описании, определяли с помощью программы ChemDraw Ultra 10.0 (CambridgeSoft(r)) или Jchem, версия 5.0.3 (фирма ChemAxon).
Другие объекты, отличительные признаки и преимущества способов, композиций и комбинацией, представленных в настоящем описании, должны стать очевидными из приведенного ниже подробного описания изобретения. Однако, как должно быть очевидно, подробное описание и конкретные примеры, характеризующие конкретные варианты осуществления изобретения, даны только с целью иллюстрации. Описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям и содержащим их фармацевтическим композициям, которые являются агонистами Толл-подобного рецептора-2 (TLR2). Изобретение относится также к соединениям, фармацевтическим композициям и способам, предназначенным для лечения заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2.
Указанные в настоящем описании агонисты TLR2 представляют собой соединения, которые имеют структуру, которая описывается формулой (I), и их фармацевтически приемлемые соли
NH L,- R2
NH I
формула ([)
в которой
R1 обозначает Н, -С(О)-С7-С18алкил или -С(О)-С1-С6алкил;
R2 обозначает С7-С18алкил;
R3 обозначает С7-С18алкил;
L1 обозначает -CH20C(0)NR7-;
L2 обозначает -0C(0)NR7-;
R4 обозначает -L4R5;
R5 обозначает -P(0)(0R7b или -C(0)0R7; L4 обозначает -((CR7R7)p0)q(CR10R10)p-; каждый R7 обозначает Н; каждый R10 обозначает Н;
каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6, и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, которые имеют структуру, представленную в формуле (VI)
формула (VI).
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R1 обозначает Н. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R1 обозначает -С(О)-С15алкил. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R1 обозначает -С(О)-С10-С18алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R2 обозначает С10-С18алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R3 обозначает С10-С18алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R2 обозначает -С11алкил и R3 обозначает -С11алкил; или
R2 обозначает -С16алкил и R3 обозначает -С16алкил; или
R2 обозначает-С16алкил и R3 обозначает-С11алкил; или
R2 обозначает-С12алкил и R3 обозначает-С12алкил; или
R2 обозначает-С7алкил и R3 обозначает -С7алкил; или
R2 обозначает -С9алкил и R3 обозначает -С9алкил; или
R2 обозначает -С8алкил и R3 обозначает -С8алкил; или
R2 обозначает -С13алкил и R3 обозначает-С13алкил; или
R2 обозначает-С12алкил и R3 обозначает-С11алкил; или
R2 обозначает-С12алкил и R3 обозначает-С12алкил; или
R2 обозначает -С10алкил и R3 обозначает -С10алкил, или R2 обозначает -С15алкил и R3 обозначает -С15алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R2 обозначает -С11алкил и R3 обозначает -С11алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), R5 обозначает -Р(О)(ОН)2 или -С(О)ОН.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I) и формуле (VI), L4 обозначает -((CR7R7)p0)q(CR10R10)p-, R10 каждый независимо друг от друга выбран из Н; р каждый независимо друг от друга выбран из 2, 3 и 4 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В указанных вариантах соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (VI)
R1 обозначает Н, -С(О)-С10-С18алкил;
R2 обозначает С10-С18алкил;
R3 обозначает С10-С18алкил;
R4 обозначает -L4R5;
R5 обозначает -P(0)(0R7)2 или -C(0)0R7; L4 обозначает -((CR7R7)p0)q(CR10R10)p-; каждый R7 обозначает Н; каждый R10 обозначает Н;
каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6, и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах соединений формул (I) и (VI) R5 обозначает -Р(О)(О-Х+ )2 или -Р(О)(О-)2Х2+; где X и Х2+ обозначают фармацевтически приемлемые катионы. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные фармацевтически приемлемые катионы выбраны из натрия, калия, кальция, цинка и магния.
В конкретных вариантах соединений формулы (I) R5 обозначает -РО3-Х3+; где Х3+ обозначает Al3+.
Содержащие алюминий адъюванты, такие как гидроксид алюминия, оксигидроксид алюминия и гидроксифосфат алюминия, применяют в вакцинах для связывания антигенов. Обсуждение содержащих алюминий адъювантов и их применения в вакцинах представлено в Expert Rev. Vaccines, 46(5), 2007, c. 685-698 и Vaccines, 25, 2007, c. 6618-6624, описание которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки.
В конкретном варианте осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, являются агонистами TLR2, которые связаны с содержащими алюминий адъюванта-ми, такими как (но не ограничиваясь только ими) гидроксид алюминия, оксигидроксид алюминия и гид-роксифосфат алюминия. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные соединения формулы (I) содержат фосфат, фосфоновую кислоту, фосфонат, фторированную фосфоновую или фторированную фосфонатную группу. В других вариантах осуществления изобретения указанные соединения формулы (I) содержат фосфат, фосфоновую кислоту, фосфонат, фторированную фосфоновую кислоту или фторированную фосфонатную группу и одну или несколько дополнительных ионизируемых групп из карбоновой кислоты и сульфата.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, объединяют с антигеном, содержащим алюминий адъювантом и необязательно с носителем, фармацевтически приемлемым эксципиентом с получением иммуногенной композиции. В других вариантах осуществления изобретения указанная иммуногенная композиция содержит соединение формулы (I) и антиген, где антиген представляет собой (но не ограничиваясь только ими) бактериальный антиген, вирусный антиген, грибной антиген, опухолевый антиген или антиген, ассоциированный с ЗППП (заболевание, передающееся половым путем), болезнью Альцгеймера, респираторными нарушениями, аутоиммунными нарушениями, такими, например, как (но не ограничиваясь только ими) ревматоидный артрит или обыкновенная волчанка, педиатрическими нарушениями и ожирением, и где количество соединения представляет собой количество, эффективное в отношении усиления иммунного ответа на антиген у индивидуума, которому вводят композицию. Приемлемые для применения в указанных иммуногенных композициях антигены представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции содержат бактериальный антиген из штамма Neisseria meningitides, например серогруппы А, С, W135, Y и/или В. Конкретные антигены, предназначенные для применения в указанных композициях, представлены в настоящем описании. В других вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции и другие представленные в настоящем описании композиции применяют в качестве вакцин; их применение для лечения нарушений, ассоциированных с входящим в композицию антигеном, представлено в настоящем описании.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают все приемлемые изотопные вариации указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, сольва-тов, N-оксидов, пролекарств и изомеров и фармацевтических композиций. Под изотопной вариацией со
единения, представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли подразумевают соединение, в котором по меньшей мере один атом заменен на атом, который имеет такое же атомное число, но атомная масса которого отличается от атомной массы, обычно встречающейся в естественных условиях. Примерами изотопов, которые можно включать в соединения, представленные в настоящем описании, и их фармацевтически приемлемые соли, являются (но не ограничиваясь только ими) изотопы водорода, углерода, азота и кислорода, такие как 2Н, 3Н, 11С, 13С, 14С, 15N, 17О, 18О, 35S, 18F, 36Cl и 123I. Определенные изотопные вариации соединений, представленных в настоящем описании, и их фармацевтически приемлемых солей, например, в которые включен радиоактивный изотоп, такой как 3Н или 14С, можно применять в качестве лекарственного средств и/или субстрата в опытах по изучению распределения в тканях. В конкретных примерах можно применять изотопы 3Н и 14С благодаря легкости их получения и простоты выявления. В других примерах замена на изотопы, такие как 2Н, может обеспечивать определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например удлиненное время полужизни in vivo или пониженные требуемые дозы. Изотопные вариации соединений и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, N-оксидов, пролекарств и изомеров и фармацетических композиций, представленных в настоящем описании, получают общепринятыми методами с использованием соответствующих изотопных вариаций приемлемых реагентов. Способы получения соединений формулы (I).
Общие процедуры получения соединений формулы (I) описаны ниже в примерах. В описанных реакциях реактивные функциональные группы, например гидроксигруппу, аминогруппу, иминогруппу, тиогруппу или карбоксигруппу, если они должны присутствовать в конечном продукте, можно защищать, препятствуя тем самым их нежелательному участию в реакциях. Можно использовать общепринятые защитные группы согласно стандартной практике (см., например, T.W. Greene и P. G. M. Wuts в: "Protective Groups in Organic Chemistry", изд-во John Wiley and Sons, 1991).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, получают в виде фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли путем взаимодействия соединения формулы (I) в форме свободного основания с фармацевтически приемлемой органической кислотой или неорганической кислотой. В других вариантах осуществления изобретения получают фармацевтически приемлемую соль присоединения основания соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, путем взаимодействия соединения формулы (I) в форме свободной кислоты с фармацевтически приемлемым органическим основанием или неорганическим основанием. В альтернативном варианте соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, в форме солей получают, используя соли исходных продуктов или промежуточных продуктов. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, находятся в форме других солей, включая (но не ограничиваясь только ими) оксалаты и трифторацетаты. В конкретных вариантах осуществления изобретения образуются полусоли кислот и оснований, например полусульфат и полукальциевые соли.
Указанные фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы (I) включают (но не ограничиваясь только ими) такие соли как гидробромид, гидрохлорид, сульфат, нитрат, сукцинат, малеат, формиат, ацетат, адипат, безилат, бикарбонат/карбонат, пропионат, фумарат, цитрат, тартрат, лактат, бензоат, салицилат, глутамат, аспартат, пара-толуолсульфонат, бензолсульфонат, метан-сульфонат, этансульфонат, нафталинсульфонат (например, 2-нафталинсульфонат), соль гексаноат, бисульфат/сульфат, борат, камсилат, цикламат, эдизилат, эзилат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, гек-сафторфосфат, гибензат, гидрохлорид/хлорид, гидробромид/бромид, гидройодит/йодит, изетионат, лак-тат, малаг, малонат, мезилат, метилсульфат, нафтилат, 2-напзилат, никотинат, оротат, оксалат, пальми-тат, памоат, фосфат/вторичный кислый фосфат/первичный кислый фосфат, пироглутамат, сахарат, стеа-рат, таннат, тозизилат, трифторацетат и ксинафоат.
Органические или неорганические соли, которые можно применять для получения определенных фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I), включают (но не ограничиваясь только ими) бромисто-водородную, соляную, серную, азотную, фосфорную, янтарную, малеиновую, муравьиную, уксусную, пропионовую, фумаровую, лимонную, винную, молочную, бензойную, салициловую, глутаминовую, аспарагиновую, паратолуолсульфоновую, бензолсульфоновую, метансульфоновую, этан-сульфоновую, нафталинсульфоновую, например 2-нафталинсульфоновую, или капроновую кислоту.
Указанные фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований соединений формулы (I) включают (но не ограничиваясь только ими) соли алюминия, аргинана, бензатина, кальция, холина, ди-этиламина, диоламина, глицина, лизина, магния, меглумина, оламина, калия, натрия, трометамина и цинка.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, в форме свободной кислоты или свободного основания получают из соответствующей соли присоединения основания или кислотно-аддитивной соли соответственно. Например, соединение формулы (I) в форме кислотно-аддитивной соли превращают в соответствующее свободное основание путем обработки приемлемым основанием (например (но не ограничиваясь только ими), раствором гидроксида аммония, гидроксида натрия и т. п.). Например, соединение формулы (I) в форме со
ли присоединения основания превращают в соответствующую свободную кислоту путем обработки приемлемой кислотой (например (но не ограничиваясь только ею) соляной кислотой).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) в неокисленной форме получают из N-оксидов соединений формулы (I) путем обработки восстановителем (например (но не ограничиваясь только ими), серой, диоксидом серы, трифенилфосфином, борогидридом лития, борогид-ридом натрия, трихлоридом фосфора, трибромидом фосфора или т. п.) в приемлемом инертном органическом растворителе (например (но не ограничиваясь только ими), в ацетонитриле, этаноле, водном ди-оксане или т. п.) при температуре от 0 до 80°С.
В конкретных вариантах осуществления изобретения производные соединений формулы (I) в виде пролекарств получают с помощью методов, хорошо известных обычным специалистам в данной области (например, см. более подробное описание у Saulnier и др., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, т. 4, 1994, с. 1985). Например, приемлемые пролекарства получают путем взаимодействия недериватизиро-ванного соединения формулы (I) с приемлемым карбамилирующим агентом (например (но не ограничиваясь только ими), 1,1-ацилоксиалкилкарбанохлоридатом, паранитрофенилкарбонатом или т.п.).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают в виде защищенных производных с помощью методов, известных обычным специалистам в данной области. Подробное описания методик, пригодных для создания защитных групп и их удаления, представлено у T.W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3-е изд., изд-во John Wiley и Sons, Inc., 1999 г.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают или они образуются в виде сольватов (например, гидратов). В конкретных вариантах осуществления изобретения гидраты соединений формулы (I) получают путем перекристаллизации из смеси водных/органических растворителей, используя такие органические растворители, как диоксин, тетрагидрофуран или метанол.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают в виде их индивидуальных стереоизомеров. В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы
(I) , представленные в настоящем описании, получают в виде индивидуальных стереоизомеров путем вза-
имодействия рацемической смеси соединения с оптически активным разделяющим агентом с получени-
ем пары диастереоизомерных соединений, разделения диастереомеров и выделения оптически чистых
энантиомеров. В конкретных вариантах осуществления изобретения разделение энантиомеров осуществ-
ляют с помощью ковалентных диастереомерных производных соединений формулы (I) или с использо-
ванием диссоциируемых комплексов (например, кристаллических диастереомерных солей). Диастерео-
меры обладают различными физическими свойствами (например, температурой плавления, температу-
рой кипения, растворимостью, реактивностью и т. д.) и их легко разделять на основе указанных разли-
чий. В конкретных вариантах осуществления изобретения диастереомеры разделяют с помощью хрома-
тографии или методов разделения/обратного растворения на основе различий в растворимости. Затем
оптически чистый энантиомер выделяют вместе с разделяющим агентом с помощью любых применяе-
мых на практике средств, которые не приводят к рацемизации. Более подробное описание методик, кото-
рые можно применять для разделения стереоизомеров соединений из их рацемической смеси, см. у Jean
Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", изд-во John Wiley And
Sons, Inc., 1981 г.
Соединения формулы (I) получают с помощью процессов, представленных в настоящем описании и проиллюстрированных в примерах. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают следующим образом:
(а) необязательно превращают соединение формулы (I) в фармацевтически приемлемую соль;
(б) необязательно превращают соль соединения формулы (I) в несолевую форму;
(в) необязательно превращают неокисленную форму соединения формулы (I) в фармацевтически
приемлемый N-оксид;
(г) необязательно превращают N-оксид соединения формулы (I) в его неокисленную форму;
(д) необязательно разделяют и выделяют индивидуальный изомер соединения формулы (I) из смеси
изомеров;
(е) необязательно превращают недериватизированное соединение формулы (I) в производное в виде
фармацевтически приемлемого пролекарства; и
(ж) необязательно превращают производное в виде пролекарства соединения формулы (I) в его не-
дериватизированную форму.
Примеры (но не ограничиваясь только ими) схем синтеза, применяемых для получения соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, проиллюстрированы на реакционных схемах (I)-
(II) .
На схеме (I) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), согласно которому получают ли-попептид I-4 путем сочетания замещенного №защищенного-^)-цистеина с различными аминами (I-2) в присутствии связывающего реагента и последующего удаления защитных групп. Дополнительное взаимодействие первичного амина липопептида I-4 приводит к получению липопептида I-5. Заместители L1, L2, R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании. "Prot." обозначает аминозащит-ную группу, такую, например, как (но не ограничиваясь только ими) Fmoc, Boc и Cbz.
На схеме (II) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2ОС(О)- и L2 обозначает -ОС(О)-. При этом путем восстановления (N-Fmoc-0tBu-Cys)2 получали N-Fmoc-OtBu-цистеин (II-2) и тиол -N-Fmoc-OtBu-цистеина (II-2) алкилировали с помощью эпоксида сложного эфира с получением N-Fmoc-0tBu-[2(R),3-дигидроксилпропил]-(R)-цистеина (II-3). Путем аци-лирования соединения (II-3) получали соединение (II-4) и последующий гидролиз сложного трет-бутилового эфира позволял получать замещенный N-Fmoc-(R)-цистеин (II-5). Липопептид (II-7) получали путем сочетания замещенного N-Fmoc-(R)-цистеина (II-5) с различными аминами (II-6) в присутствии связывающего реагента. После удаления защитной группы Fmoc получали липопептид (II-8), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (II-8) получали липопептид (II-9). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Схема (II)
На схеме (III) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -О-. При этом путем взаимодействия с трифлиновой (трифторметансульфоновой) кислотой 1,2-диалкоксилглицерина (III-1) получали трифлат (III-2), который применяли для алкилирования тиола (III-3) с получением (III-4). Путем последующего гидролиза сложного трет-бутилового эфира получали замещенную карбоновую кислоту (III-5). Липопептид (III-7) получали путем сочетания замещенный кар-боновой кислоты (III-5) с различными аминами (III-6) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитной группы Fmoc получали липопептид (III-8), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (III-8) получали липопептид (III-9). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Схема (III)
L2 обозначает -NR7C(0)-. При этом путем избирательного удаления защитных групп первичного спирта в 3-алкоксилглицерине (IV-1) получали соединение (IV-2). Путем мезилирования вторичного спирта глицерина (IV-2) получали соединение (IV-3), а после обработки NaN3 получали азид (IV-4). После удаления защитной силильной группы соединения (IV-4) с последующей обработкой трифлиновой кислотой образовавшего спирта (IV-5) получали трифлированный глицерин (IV-6). Тиол (IV-7) алкилировали трифла-том (IV-6) с получением азида (IV-8). Азид (IV-8) восстанавливали до соответствующего амина, который ацилировали с получением амида (IV-9). Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира (IV-9) получали замещенную карбоновую кислоту (IV-10). Липопептид (IV-12) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (IV-10) с различными аминами (IV-11) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитной группы Fmoc получали липопептид (IV-13), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (IV-13) получали липопептид (IV-14). Заместители Rb R2, R3, R4 и R7 имеют значения, указанные в настоящем описании.
I V-13
На схеме (VI) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2О- и
На схеме (V) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -CH2NR7 С(О)- и L2 обозначает -NR7C(0)-. При этом путем восстановления дисульфида (V-2) получали тиол (V-3), который алкилировали с помощью R-эпоксида сложного эфира с получением диола (V-4). Путем мезилирования диола (V-4) получали соединение (V-5), которое обрабатывали NaN3 с получением диазида (V-6). Диазид (V-6) восстанавливали с получением диамина (V-7) с помощью Pd(0H)2, а затем ацилировали с получением диамида (V-8). После гидролиза сложного трет-бутилового эфира (V-8) получали замещенную карбоновую кислоту (V-9). Липопептид (V-11) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (V-9) с различными аминами (V-10) в присутствии связывающего реагента. После удаления защитной группы Cbz получали липопетид (V-12), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (V-12) получали липопептид (V-13). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
L2 обозначает -ОС(О)-. При этом путем циклизации диола (VI-1) получали эпоксид (VI-2), который алкилировали тиолом с получением спирта (VI-3). После ацилирования спирта (VI-3) получали соединение (VI-4). Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира (VI-4) получали замещенную карбоновую кислоту (VI-5). Липопептид (VI-7) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (VI-5) с различными аминами (VI-6) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитных групп липопептида (VI-7) получали липопептид (VI-8), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (VI-8) получали липопептид (VI-9). Заместители Rb R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Схема (VI)
На схеме (VII) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой R1 обозначает -H-, L1 обозначает -CH20C(0)NH- и L2 обозначает -0C(0)NH-. При этом путем алкилирования тиола (VII-1) с помощью эпоксида получали диол (VII-2), который ацилировали с помощью изоцианата (VII-3) с полу-ченим бискарбамата (VII-4). Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира (VII-4) получали замещенную карбоновую кислоту (VII-5). Липопептид (VII-7) получали путем сочетания замещенной карбо-новой кислоты (VII-5) с различными аминами (VII-6) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитных групп липопептида (VII-7) получали липопептид (VII-8). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Схема (VII)
На схеме (VIII) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой R1 обозначает -С(О)-С8-С18алкил -, L1 обозначает -CH20C(0)NH- и L2 обозначает - 0C(0)NH-. При этом путем восстановления соединения VIII-1 получали свободный амин (VIII-2), который подвергали взаимодействию с RX1 (VIII-3) с получением соединения VIII-4. Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира VIII-4 получали замещенную карбоновую кислоту (VIII-5). Липопептид (VIII-7) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (VIII-5) с различными аминами (VIII-6) в присутствии связывающего реагента. Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
VII-7
Представленные в настоящем описании примеры служат для иллюстрации соединений формулы (I), представленных в настоящем описании (но не ограничены только ими), и путей получения указанных соединений.
Фармакология и полезность.
Когда чужеродный антиген опознается иммунной системой, она реагирует, запуская иммунный ответ, который характеризуется скоординированным взаимодействием систем как врожденного, так и приобретенного иммунитета. Эти две независимые системы удовлетворяют двум взаимно исключающим требованиям: быстрота (определяемая врожденной системой) и специфичность (определяемая адаптивной системой).
Врожденная иммунная система служит в качестве первой линии защиты от внедряющихся патогенов, осуществляя контроль патогена, в это время происходит подготовка (созревание) адаптивных ответов. Она запускается в течение нескольких минут после заражения независимым от антигена образом, реагируя на широкое разнообразие консервативных паттернов у патогенов (хотя они не являются неспецифическими и могут отличать свои патогены от чужих). Важно, что она создает также воспалительную и костимулирующую окружающую среду (иногда это обозначают как сигнал опасности), которая потен-циирует адаптивную иммунную систему и направляет (или поляризирует ее) в сторону клеточных или гуморальных ответов, наиболее пригодных для уничтожения инфицирующего агента. Данные о разработке модуляторов TLR, предназначенных для терапевтического направленного воздействия врожденного иммунитета, обобщены в литературе (см. Nature Medicine, 13, 2007, c. 552-559; Drug Discovery Today: Therapeutic Stategies, 3, 2006, c. 343-352 и Journal of Immunology, 174, 2005, c. 1259-1268).
Адаптивный ответ становится эффективным через несколько дней или недель, но в конце концов приобретает тонкую антигенную специфичность, необходимую для полной элиминации патогена, и создает иммунологическую память. Он опосредуется в основном Т- и В-клетками, которые подвергнуты реаранжировке зародышевого гена и отличаются специфичностью и длительной памятью. Однако, он включает также рекрутмент элементов врожденной иммунной системы, включая "профессиональные" фагоциты (макрофаги, нейтрофилы и т.д.) и гранулоциты (базофилы, эозинофилы и т.д.), которые поглощают бактерии и даже относительно крупных паразитов из числа простейших. После созревания адаптивного иммунного ответа последующее воздействие патогенов приводит к их быстрой элиминации благодаря созданным высокоспецифическим клеткам памяти, которые быстро активируются при последующем воздействии родственного антигена.
Аутоиммунные заболевания зависят от (I) гуморального ответа или образования аутоантител на свой антиген (например, как в случае (но не ограничиваясь только им) первичного гипертиреоза Грейвса, при котором образуются антитела к TSH-рецептору) или (II) клеточного ответа, при котором иммунные клетки разрушают неиммунные клетки, из которых образуется аутоантиген, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) тироциты (тиреоидит Хашимото) или поджелудочные островковые бета-клетки (диабет типа 1). Многие аутоиммунные заболевания связаны с комбинацией обоих явлений, например при тиреоидите Хашимото и диабете типа 1 также присутствуют аутоантитела, антитела к перок-сидазе щитовидной железы (ТРО) или антитела к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD)/островковой клетке. Аутоиммунные заболевания часто имеют воспалительный компонент, включая (но не ограничиваясь только ими) увеличение количества адгезионных молекул, таких, например, как (но не ограничиваясь только ими), молекулы клеточной адгезии-1 (VCAM-1), и изменение адгезии лейкоцитов к сосудистой сети, примерами таких заболеваний являются (но не ограничиваясь только ими) колит, системная волчанка, систмный склероз и сосудистые осложнения при диабете.
Толл-подобные рецепторы (TLR) представляют собой трансмембранные белки типа-I, характеризующиеся наличием внеклеточного N-концевого домена, богатого лейцином повтора (LRR), за которым расположена богатая цистеином область, ТМ-домен, и внутриклеточный (цитоплазматический) "хвост", который содержит консервативную область, обозначенную как домен рецептора Толл/ТХ-1 (TIR). TLR представляют собой паттерн-распознающие рецепторы (PRR), которые экспрессируются главным образом на иммунных клетках, таких как (но не ограничиваясь только ими) дендритные клетки, Т-лимфоциты, макрофаги, моноциты и естественные клетки-киллеры. LLR-домен является важным для
связывания лиганда и ассоциированной передачи сигналов и имеет общую структуру, характерную для PRR. TIR-домен является важным для белок-белковых взаимодействий и ассоциирован с врожденным иммунитетом. TIR-домен объединяет также более крупное суперсемейство IL-1R/TLR, которое состоит из трех подгрупп. Представители первой группы несут иммуноглобулиновые домены в их внеклеточных областях и включают рецепторы IL-1 и IL-18 и вспомогательные белки, такие как ST2. Вторая группа включает TLR. Третья группа включает внутриклеточные белки-адапторы, важные для передачи сигналов.
TLR представляют собой группу паттерн-распознающих рецепторов, которые связываются с ассоциированными с патогенами молекулярными паттернами (РАМР) из бактерий, грибов, простейших и вирусов, и действуют в качестве первой линии защиты от внедряющихся патогенов. TLR играют важную роль для индукции экспрессии генов, участвующих в воспалительных ответах, и TLR, и врожденная иммунная система представляют собой имеющую решающее значение стадию в развитии антигенспецифи-ческого приобретенного иммунитета.
Адаптивный (гуморальный или клеточно-опосредованный) иммунитет ассоциирован с механизмом передачи сигналов TLR врожденного иммунитета.
Врожденный иммунитет представляет собой защитный ответ иммунных клеток, который функционирует быстро, борясь со связанным с окружающей средой вмешательством, включающем (но не ограничиваясь только ими) бактериальные и вирусные агенты. Адаптивный иммунитет является более медленным ответом, который включает дифференцировку и активацию нестимулированных Т-лимфоцитов в такие типы клеток, как Т-клетки-хелперы 1 (Th1) или Т-клетки-хелперы 2 (Th2). ^1-10^101 главным образом усиливают клеточный иммунитет, а Th2-клетки главным образом усиливают гуморальный иммунитет. Хотя они представляют собой прежде всего защитную систему хозяина, патологическое усиление сигналов врожденного иммунитета, связанных с TLR-путем, участвует в инициации аутоиммунных-воспалительных заболеваний.
Все TLR, вероятно, функционируют либо в виде гомодимера, либо в виде гетеродимера при распознавании специфических молекулярных детерминант или набора специфических молекулярных детерминант, присутствующих на патогенных организмах, таких как бактериальные расположенные на клеточной поверхности липополисахариды, липопротеины, бактериальный флагеллин, ДНК как из бактерий, так и из вирусов, и вирусная РНК. Клеточный ответ на активацию TLR включает активацию одного или несколько факторов транскрипции, что приводит к производству и секреции цитокинов и костиму-лирующих молекул, таких как интерфероны, TNF, интерлейкины, MIP-1 и МСР-1, которые участвуют в уничтожении и клиренсе патогенной инвазии.
Пространственная экспрессия TLR совпадет с поверхностью раздела хозяина и окружающей среды. В то время как в Drosophila клонировали лишь несколько Толл-подобных белков, семейство человеческих TLR состоит по меньшей мере из 11 членов, а именно TLR1-TLR11, которые вызывают перекрывающиеся, но тем не менее различные биологические ответы из-за различий в клеточной экспрессии и в путях передачи сигналов, которые они инициируют. Каждый из TLR экспрессируется на различной субпопуляции лейкоцитов и каждый из TLR является специфическим касательно его схем экспрессии и чувствительности к РАМР и выявляет различные субпопуляции патогенов, обеспечивая "бдительный надзор" иммунной системой.
Пути передачи сигналов TLR.
TLR распределены по всей клетке. TLR1, TLR2, TLR3 и TLR4 экспрессируются на клеточной поверхности, a TLR3, TLR2, TLR8 и TLR9 экспрессируются во внутриклеточных компартментах, таких как эндосомы. Для опосредуемого TLR3, TLR2 или TLR9 распознавания их лигандов требуется созревание и процессинг эндосом. Когда макрофаги, моноциты, дендритные клетки или неиммунные клетки, которые становятя антигенпрезентирующими клетками, поглощают бактерии путем фагоцитоза, бактерии расщепляются и содержащие CpG ДНК (CpG-ДНК) высвобождаются в фагосомы-лизосомы или в эндосомы-лизосомы, где они могут взаимодействовать с TLR9, который рекрутирован из эндоплазматического ре-тикулума при неспецифическом поглощении CpG-ДНК. Кроме того, когда вирусы внедряются в клетки с помощью опосредуемого рецептором эндоцитоза, то содержимое вирусов презентуется цитоплазме путем слияния вирусной мембраны с эндосомальной мембраной. Это приводит к презентации TLR9 TLR-лигандов, таких как dsPHK, ssPHK и CpG-ДНК, в фагосомальных/лизосомальный или эндосомаль-ных/лизосомальных компартментах.
В путях передачи сигналов в прямом направлении относительно TIR-домена содержащий TIR-домен адаптор, т.е. MyD88, играет важную роль для индукции воспалительных цитокинов, таких как TNF-a и IL-12, посредством всех TLR. Хотя содержащие TIR-домен адапторные молекулы (MyD88) являются общими для всех TLR, индивидуальные пути передачи сигналов TLR являются дивергентными, и активация специфических TLR приводит к слегка различающимся схемам профилей генной экспрессии. Например (но не ограничиваясь только этим) активация путей передачи сигналов TLR3 и TLR4 приводит к индукции интерферонов типа I (IFN), в то время как активация опосредуемых TLR2 и TLR5 путей не приводит к такому действию. Однако активация путей передачи сигналов TLR2, TLR8 и TLR9 приводит также к индукции IFN типа I, хотя это происходит посредством механизма, отличного от опосредуемой
TLR3/4 индукции.
Будучи задействованным, TLR инициируют каскад трансдукции сигналов, приводящий к активации NFKB посредством гена 88 (MyD88) адаптерного белка первичного ответа миелоидной дифференциров-ки, и к рекрутменту ассоциированной с рецептором IL-1 киназы (IRAK). MyD88-зависимый путь является аналогом пути передачи сигналов рецепторами IL-1 и считается, что MyD88, несущий С-концевой TIR-домен и N-концевой домен смерти, ассоциирован с TIR-доменом TLR. При стимуляции MyD88 осуществляет рекрутмент IRAK-4 в TLR посредством взаимодействия доменов смерти обеих молекул и облегчает опосредуемое IRAK-4 фосфорилированием IRAK-1. Затем фосфорилирование IRAK-1 приводит к рекрутменту ассоциированного с TNF-рецептором фактора 6 (TRAF6), что приводят к активации двух различных путей передачи сигналов. Один путь приводит к активации факторов транскрипции АР-1 посредством активации МАР-киназ. Другой путь активирует комплекс TAK1/TАВ, что повышает активность комплекса !кВ-киназы (IKK). После активации IKK-комплекс индуцирует фосфорилирование и последующее расщепление ингибитора NFKB IKB, ЧТО приводит к ядерной транслокации фактора транскрипции NFKB И инициирует транскрипцию генов, промоторы которых содержат сайты связывания NFKB, например цитокинов. MyD88-зависимый путь играет решающую роль и имеет большое значение для производства воспалительных цитокинов посредством всех TLR.
Стимуляция экспрессирующих TLR8 клеток, таких как РВМС, приводит к производству высоких уровней IL-12, IFN-Y, IL-1, TNF-a, IL-6 и других воспалительных цитокинов. Аналогично этому, стимуляция экспрессирующих TLR2 клеток, таких как плазмацитоидные дендритные клетки, приводит к производству высоких уровней интерферона-a (IFNa) и низких уровней воспалительных цитокинов. Таким образом, следует ожидать, что в результате активации дендритных клеток и других антигенпрезенти-рующих клеток вовлечение TLR2, TLR8 или TLR9 и производство цитокинов будет активировать разнообразные механизмы врожденных и приобретенных ответов, приводящих к деструкции патогенов, зараженных клеток или опухолевых клеток.
Толл-подобный рецептор 2 (TLR2).
Для TLR2 характерен высокий уровень экспрессии на мембране дендритных клеток, которые считаются наиболее эффективным типом клеток для презентации антигена (Wetzler L.M., "The role of Tolllike receptor 2 in microbial disease and immunity", Vaccine, 21, 2003, c. 55-60; Iwasaki A., Medzhitov R., "Toll-like receptor control of the adaptive immune Responses", Nat. Immunol., 5, 2004, c. 987-995; Schmitt A., Li L., Giannopoulos K., Greiner J., Reinhardt P., Wiesneth M., Schmitt M., "Quantitative expression of Toll-like receptor-2, -4, and -9 in dendriticcells generated fromblasts of patients with acutemyeloid leukemia", Transfusion, 48, 2008, c. 861-870). TLR2 картирован на хромосоме 4q31-32 и кодирует предполагаемый состоящий из 784 (ак) белок, содержащий 19№концев1> гх LLR и имеющий рассчитанную молекулярную массу 84 кДа. TLR2 является наиболее родственным TLR6, при этом обнаружена идентичность последовательностей (31% по всей длине аминокислотной последовательности). Экспрессия мРНК TLR2 обнаружена в тканях головного мозга, сердца, легкого и селезенки и наиболее высокий ее уровень обнаружен в PBL (лимфоциты периферической крови), прежде всего миеломоноцитного происхождения. In vivo обнаружены два имеющих различный размер транскрипта TLR2, что позволяет предположить наличие альтернативного спайсинга мРНК. In vitro обнаружена повышающая регуляция экспрессии мРНК TLR2 и белка в клетках моноцитарного лейкоза (ТНР-1) при индуцированной РМА дифференцировке. Повышающая регуляция TLR2 обеспечивается аутокринным IL-6 и TNF-a, IL-1P и IL-10. Экспрессия мРНК TLR2 повышается после контакта как с грамположительными, так и с грамотрицательными бактериями.
TLR2 распознает свои лиганды в виде гетеродимера в комбинации либо с TLR-1, либо с TLR-6. TLR2 образует гетеродимеры с TLR1, TLR6 и возможно с TLR10, при этом каждый комплекс является особенно чувствительным к субпопуляциям ассоциированных с TLR2 РАМР. Основное различие между двумя типами гетеродимеров состоит в том, что димер TLR-1/TLR2 обладает способностью распознавать триацилированные липопротеины, а TLR2/TLR-6 выявляет диацилированные липопротеины и пептидог-ликаны (Wetzler L.M., "The role of Toll-like receptor 2 in microbial disease and immunity", Vaccine, 21, 2003,
c. 55-60).
Из всех TLR TLR2 распознает наиболее широкий спектр ассоциированных с патогеном молекулярных паттернов (РАМР) из большого разнообразия патогенов, прежде всего бактерий. Они включают (но не ограничиваясь только ими) липоарабиноманнан (LAM), липополисахарид (LPS), липотейхоевую кислоту (LTA), пептидогликан (PGN) и другие гликолипиды, гликопротеины и липопротеины. Включающие TLR2 комплексы обладают также способностью выявлять вирусы, включая (но не ограничиваясь только ими) вирус кори (MV), человеческий цитомегаловирус (HCMV) и вирус гепатита С (HCV), и грибковые РАМР, включая (но не ограничиваясь только им) зимозан. TLR2 распознает широкое разнообразие липопротеинов/липопетидов различных патогенов, таких как (но не ограничиваясь только ими) грамположительные бактерии, микобактерии, Trypanosoma cruzi, грибы и трепонемы. Кроме того, TLR2 распознает препараты LPS из не относящихся к энтеробактериям видов, таких, например, как (но не ограничиваясь только ими) Leptospira interrogans, Porphyromonas gingivalis и Helicobacter pylori. Включающие TLR2 комплексы обладают способностью как выявлять "чужие" паттерны, так и выявлять изменен
ные "свои" паттерны, например экспонируемые некротическими клетками. TLR2 рекрутируется в фаго-сомы и участвует в интернализации микробных продуктов клетками.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, являются агонистами активности Толл-подобного рецептора 2 и их применяют для лечения заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с указанными рецепторами TLR2.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения респираторных заболеваний и/или нарушений, включающих (но не ограничиваясь только ими) астму, бронхиальную астму, аллергическую астму, наследственную астму, приобретенную астму, индуцированную физической нагрузкой астму, индуцированную лекарственными средствами астму (например, иднуцированную аспирином и НСПВС) и индуцированную пылью астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ); бронхит, включая инфекционный и эозинофильный бронхит; эмфизему; бронхоэктаз; муковисцидоз; саркоидоз; "легкие фермера" (экзогенный аллергический альвеолит) и родственные заболевания; гиперчувствительный пневмонит; фиброз легких, включая криптогенный фиброзирующий альвеолит, идиопа-тический интерстициальный пневмонит, фиброз, представляющий собой осложнение, связанное с анти-неопластической терапией, и хроническую инфекцию, включая туберкулез и аспергиллез и другие грибковые инфекции; осложения после трансплантации легкого; васкулит и тромботические нарушения сосудистой сети легкого и легочную гипертензию; противокашлевое действие, включая лечение хронического кашля, ассоциированного с воспалительными секреторными состояниями дыхательных путей, и иатрогенный кашель; острый и хронический ринит, включая медикаментозный ринит и вазомоторный ринит; перениальный и сезонный аллергический ринит, включая ринит nervosa (сенная лихорадка); носовой полипоз; острую вирусную инфекцию, включая насморк и инфекцию, связанную с респираторно-синцитиальным вирусом, вирусом гриппа, коронавирусом (включая SARS) и аденовирусом.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения дерматологических нарушений, включая (но не ограничиваясь только ими) псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит или другие экзематозные дерматозы и реакции гиперчувствительности замедленного типа; фито-, фотодерматит; себоррейный дерматит, дерматит герпетиформный, красный плоский лишай, склеротический и атрофический лишай, гангренозную пиодермию, кожный саркоидоз, базальноклеточную карциному, старческий кератоз, дискоидную красную волчанку, пемфигус, пемфигоид, врожденный буллезный эпи-дермолиз, крапивницу, ангионевротический отек, васкулитид, токсические эритемы, кожные эозинофи-лии, гнездую алопецию, мужскую алопецию, синдром Свита, синдром Вебера-Кристиана, мулиформную эритему; целлюлит как инфекционный, так и неинфекционный; панникулит; кожные лимфомы, немела-номный рак кожи и другие диспластические повреждения кожи; индуцированные лекарственными средствами нарушения, включая фиксированную лекарственную сыпь.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения глазных болезней и/или нарушений, включая (но не ограничиваясь только ими) блефарит; конъюнктивит, включая перениальный и весенний аллергический конъюнктивит; ирит; передний и задний увеит; хороидит; аутоиммунные, дегенеративные или воспалительные нарушения, поражающие сетчатку; офтальмит, включая симпатический офтальмит; саркоидоз, инфекции, включая вирусные, грибковые и бактериальные.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения заболеваний и/или нарушений мочеполовой системы, включая (но не ограничиваясь только ими) нефрит, включая интерстици-альный и гломерулонефрит; нефротический синдром; цистит, включая острый и хронический (интерсти-циальный) цистит и язву Гуннера; острый и хронический уретрит, простатит, эпидидимит, оофорит и сальпингит; вульво-вагинит; болезнь Пейрони; эректильную дисфункцию (как мужскую, так и женскую).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения отторжения трансплантата, включая (но не ограничиваясь только ими) острое и хроническое отторжение, например, после трансплантации почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи или роговицы, или после трансфузии крови; или хроническую реакцию "трансплантат против хозяина".
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения других аутоиммунных и аллергических нарушений, включая (но не ограничиваясь только ими) ревматоидный артрит, синдром
разраженной толстой кишки, системную красную волчанку, рассеянный склероз, тиреоидит Хашимото, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника (IBD), болезнь Грейвса, болезнь Аддисона, сахарный диабет, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, эозинофильный фасцит, гипер-IgE-синдром, антифосфолипидный синдром и синдром Сезари.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, применяют для лечения рака, включая (но не ограничиваясь только ими) опухоли предстательной железы, молочной железы, легкого, яичника, поджелудочной железы, пищеварительного тракта и ободочной кишки, желудка, кожи и головного мозга и злокачественные заболевания, поражающие головной мозг (включая лейкозы), и лимфопролиферативные системы, такие как болезнь Ходжкина и не-ходжкинская лимфома; включая предупреждение и лечение метастатического заболевания и рецидивов опухолей, и паранеопластичекие синдромы. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, можно применять в качестве модуляторов активности Толл-подобного рецептора и их применяют для лечения неоплазм, включая (но не ограничиваясь только ими) базально-клеточную карциному, плоскоклеточную карциному, старческий кератоз, меланому, карциномы, саркомы, лейкозы, почечно-клеточную карциному, саркому Капоши, миелогенный лейкоз, хронический лимфолейкоз и множественную миелому.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения инфекционных болезней, включая (но не ограничиваясь только ими) вирусные заболевания, такие как генитальные бородавки, обычные бородавки, подошвенные бородавки, заболевания, вызываемые респираторным синцитиальным вирусом (RSV), вирусом гепатита В, гепатита С, вирусом Денге, вирусом герпеса простого (например (но не ограничиваясь только ими) HSV-I, HSV-II, CMV или VZV), контагиозным моллюском, вирусом коровьей оспы, натуральной оспы, лентивирусом, вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом человеческой папилломы (HPV), цитомегаловирусом (CMV), вирусом ветряной оспы (VZV), риновирусом, энтеровирусом, аденовирусом, коронавирусом (например, SARS), вирусом гриппа, пара-гриппа, вирусом эпидемического паротита, вирусом кори, паповавирусом, гепаднавирусом, флавивирусом, ретровирусом, аренавирусом (таким, например, как (но не ограничиваясь только ими) LCM (вирус лимфоцитарного хо-риоменингита), вирус Хунин, вирус Мачупо, вирус Гуанарито и вирус лихорадки Ласса) и филовирусом (таким, например, как (но не ограничиваясь только ими) вирус Эбола или вирус Марбург).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения бактериальных, грибковых и протозойных инфекций, включая (но не ограничиваясь только ими ) туберкулез и болезни, вызываемые Mycobacterium avium, проказу; пневмоцистоз, криптоспоридиоз, гистоплазмоз, токсоплазмоз, инфекцию, вызываемую трипаносомой, лейшманиоз, инфекции, вызываемые бациллами из рода Escherichia, Entero-bacter, Salmonella, Staphylococcus, Klebsiella, Proteus, Pseudomonas, Streptococcus и Chlamydia, и грибковые инфекции, такие как кандидоз, аспергиллез, гистоплазмоз, криптококковый менингит.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры применяют в качестве потенциаторов иммунной системы. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения, представленные в настоящем описании, включают в иммуногенные композиции или их применяют в сочетании с иммуно-генными композициями. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции можно применять в виде вакцин, и соединение присутствует в них в количестве, достаточном для усиления иммунного ответа на вакцину или на антиген, применяемый в смеси с соединением. Вакцина содержит по меньшей мере один антиген, который может представлять собой бактериальный антиген, или ассоциированный с раком антиген, или вирусный антиген. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, про-лекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают в терапевтические вакцины или их применяют в сочетании с терапевтическими вакцинами. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают в профилактические вакцины или применяют в сочетании с профилактическими вакцинами. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают или применяют в сочетании с терапевтическими вирусными вакцинами. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают или применяют в со
четании с противораковыми вакцинами.
В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, представленные в настоящем описании, можно применять для лечения поврежденной или старения кожи, например рубцов и морщин.
Введение и фармацевтические композиции
Для терапевтического применения соединений формулы (I), их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, N-оксидов, пролекарств и изомеров, представленных в настоящем описании, указанные соединения вводят в терапевтически эффективных количествах либо индивидуально, либо в виде части фармацевтической композиции. Таким образом, в настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, его фармацевтически приемлемые соли и/или сольваты и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов.
Кроме того, указанные соединения и композиции вводят индивидуально или в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Метод введения указанных соединений и композиций включает (но не ограничиваясь только ими) оральное введение, ректальное введение, парентеральное введегние, внутривенное введение, введение в стекловидное тело, внутримышечное введение, введение путем ингаляции, введение в нос, местное применение, введение в глаз или введение в ухо.
Терапевтически эффективное количество может варьироваться в зависимости среди прочего от заболевания, для лечения которого оно показано, серьезности заболевания, возраста и относительного состояния здоровья индивидуума, эффективности вводимого соединения, пути введения и требуемого лечения. В конкретных вариантах осуществления изобретения суточная доза соединения формулы (I), обеспечивающая удовлетворительные результаты, может представлять собой системные суточные дозы, составляющие от примерно 0,03 до 2,5 мг/кг веса тела. В конкретных вариантах осуществления изобретения суточная доза соединения формулы (I), которую вводят путем ингаляции, составляет от 0,05 микрограмма на килограмм веса тела (мкг/кг) до 100 микрограммов на килограмм веса тела (мкг/кг). В других вариантах осуществления изобретения суточная доза соединения формулы (I), вводимая оральным путем, составляет от 0,01 микрограмма на килограмм веса тела (мкг/кг) до 100 микрограммов на килограмм веса тела (мкг/кг). Для более крупных млекопитающих, например людей, показанная суточная доза составляет от примерно 0,5 до примерно 100 мг соединения формулы (I), которую удобно вводить, например в виде разделенных доз вплоть до 4 раз в день, или в форме с контролируемым высвобождением. В конкретных вариантах осуществления изобретения стандартные лекарственные дозы, предназначенные для орального введения, составляют примерно от 1 до 50 мг соединения формулы (I).
Другими объектами изобретения являются способы получения фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемые соли и/или сольваты. В конкретных вариантах осуществления изобретения способы предусматривают смешение соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемых солей и/или сольватов с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат соединение формулы (I) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли или сольвата в сочетании по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом, приготавливают с использованием методов смешения, гранулирования и/или нанесения покрытия. В других вариантах осуществления изобретения указанные композиции необязательно содержат эксципиенты, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие или эмульгирующие агенты, вещества, повышающие растворимость, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. В других вариантах осуществления изобретения указанные композиции являются стерильными.
Оральные лекарственные формы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят орально в виде отдельных лекарственных форм, при этом указанные лекарственные формы представляют собой (но не ограничиваясь только ими) капсулы, желатиновые капсулы, каплетки, таблетки, жевательные таблетки, порошки, гранулы, сиропы, ароматизированные сиропы, растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях, съедобные пены или взбитые продукты и жидкие эмульсии типа масло-в-воде или жидкие эмульсии типа вода-в-масле.
Капсулы, желатиновые капсулы, каплетки, таблетки, жевательные таблеки, порошки или гранулы, применяемые для орального введения по меньшей мере одного соединения формулы (I), приготавливают путем смешения по меньшей мере одного соединения формулы (I) (действующее вещество) по меньшей мере с одним эксципиентом, используя общепринятые фармацевтические методы приготовления препаративных форм. Примерами эксципиентов, которые применяют в оральных лекарственных формах, представленных в настоящем описании, являются (но не ограничиваясь только ими) связующие вещества, наполнители, разрыхлители, замасливатели, абсорбенты, красители, корригенты, консервативы и
подслащивающие вещества.
Примерами связующих веществ являются (но не ограничиваясь только ими) кукурузный крахмал, картофельный крахмал, крахмальная паста, предварительно желированный крахмал или другие крахмалы, сахара, желатин, встречающиеся в естественных условиях или синтетические камеди, такие как гуммиарабик, альгинат натрия, альгиновая кислота и другие альгинаты, трагакант, гуаровая камедь, целлюлоза и ее производные (например (но не ограничиваясь только ими), этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, кальциевая соль карбокиметилцеллюлозы, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза и микрокристаллическая целлюлоза), алюмосиликат магния, поливи-нилпирролидон и их комбинации.
Примерами наполнителей являются (но не ограничиваясь только ими) тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическая целлюлоза, порошкообразная целлюлоза, декст-раны, каолин, маннит, кремневая кислота, сорбит, крахмал, предварительно желированный крахмал и их смеси. В конкретных вариантах осуществления изобретения связующее вещество или наполнитель в фармацевтических композициях, представленных в настоящем описании, присутствует в количестве от примерно 50 до примерно 99 мас.% в пересчете на фармацевтическую композицию или лекарственную форму.
Примерами разрыхлителей являются (но не ограничиваясь только ими) агар-агар, альгиновая кислота, альгинат натрия, карбонат кальция, карбонат натрия, микрокристаллическая целлюлоза, натриевая соль кармелозы, кросповидон, полакрилин калия, натрийгликолят крахмала, картофельный крахмал или крахмал из тапиоки, предварительно желированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгина-ты, другие производные целлюлозы, камеди и их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения разрыхлитель, применяемый в фармацевтических композициях, представленных в настоящем описании, присутствует в количестве от примерно 0,5 до примерно 15 мас.%, а в других вариантах осуществления изобретения в количестве от примерно 1 до примерно 5 мас.%.
Примерами замасливателей являются (но не ограничиваясь только ими) стеарат натрия, стеарат кальция, стеарат магния, стеариновая кислота, минеральное масло, жидкое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, полиэтиленгликоль, другие гликоли, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизиро-ванное растительное масло (например (но не ограничиваясь только ими), арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеа-рат цинка, олеат натрия, этилолеат, этиллаурат, агар, кремнезем, силодный силикагель (AEROSIL 200, производимый фирмой W.R. Grace Co., Балтимор, шт. Мэриленд), коагулированный аэросил синтетического кремнезема (поступает в продажу от фирмы Degussa Co., Планто, шт. Техас), CAB-O-SIL (пиро-генный диоксид кремния, который поступает в продажу от фирмы Cabot Co., Бостон, шт. Массачусетс) и их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения замасливатели, применяемые в фармацевтических композициях, представленных в настоящем описании, присутствуют в количестве, составляющем менее примерно 1 мас.% в пересчете на фармацевтические композиции или лекарственные формы.
Примерами разбавителей являются (но не ограничиваясь только ими) лактоза, декстроза, сахароза, маннит, сорбит, целлюлоза, глицин или их комбинации.
В конкретных вариантах осуществления таблетки и капсулы приготавливают путем однородного смешения по меньшей мере одного соединения формулы (I) (действующее вещество) с жидкими носителями, тонкоизмельченными твердыми носителями или/и обоими этими типами носителей и затем при необходимости придают продукту требуемую форму. В конкретных вариантах осуществления таблетки получают прессованием. В других вариантах осуществления таблетки получают формованием.
В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение формулы (I) вводят орально в лекарственной форме с контролируемым высвобождением. Указанные лекарственные формы применяют для замедленного или контролируемого высвобождения одного или нескольких соединений формулы (I). Для обеспечения контролируемого высвобождения применяют, например, гидроксипро-пилметилцеллюлозу, другие полимерные матрицы, гели, проницаемые мембраны, осмотические системы, многослойные покрытия, микрочастицы, липосомы, микросферы или их комбинацию. В конкретных вариантах осуществления лекарственные формы с контролируемым высвобождением применяют для удлинения активности соединения формулы (I), снижения частоты приема доз и повышения удобства для пациента.
Для введения соединений формулы (I) в виде предназначенных для орального применения жидкостей, таких как раствор, сиропы и эликсиры, их приготавливают в виде стандартных доз лекарственного средства, в которых в данном количестве раствора, сиропов или эликсиров находится предварительно определенное количество соединения формулы (I). Сиропы приготавливают путем растворения соединения в приемлемом содержащем корригенты водном растворе, а эликсиры приготавливают с использованием нетоксичного спиртового носителя. Суспензии приготавливают путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Примерами эксципиентов, применяемых в предназначенными для орального введения жидкостей, являются (но не ограничиваясь только им) солюбилизаторы, эмульгаторы, кор-ригенты, консерванты и красители. Примерами солюбилизаторов являются (но не ограничиваясь только
ими) вода, гликоли, масла, спирты, этоксилированные изостеариловые спирты и простые эфиры полиок-сиэтилена и сорбита. Примерами консервантов являются (но не ограничиваясь только ими) бензоат натрия. Примерами корригентов являются (но не ограничиваясь только ими) масло мяты перечной или встречающиеся в естественных условиях подслащивающие вещества, или сахарин, или другие искусственные подслащивающие вещества.
Парентеральные лекарственные формы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят парентерально различными путями, включая (но не ограничиваясь только ими) подкожно, внутривенно (включая болюсную инъекцию), внутримышечно и внутриартериально.
Указанные парентеральные лекарственные формы вводят в виде стерильных или подлежащих стерилизации инъецируемых растворов, суспензий, сухих и/или лиофилизированных продуктов, которые легко растворять или суспендировать в фармацевтически приемлемом наполнителе, предназначенном для инъекции (восстанавливаемый порошки), и в виде эмульсий. Наполнители, применяемые в указанных лекарственных формах, представляют собой (но неограничиваясь только ими) воду для инъекций USP; водные наполнители, такие как (но не ограничиваясь только ими) хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, декстроза для инъекций, декстроза и хлорид натрия для инъекций и лак-тированный раствор Рингера для инъекций; смешивающиеся с водой наполнители, такие как (но не ограничиваясь только ими) этиловый спирт, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль; и неводные наполнители, такие как (но не ограничиваясь только ими) кукурузное масло, хлопковое масло, арахисовое масло, кунжутное масло, этилолеат, изопропилмиристат и бензилбензоат.
Трансдермальные лекарственные формы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят трансдермально. Указанные трансдермальные лекарственные формы могут представлять собой пластыри "резервуарного типа" или "матриксного типа", которые наносят на кожу и носят в течение определенного периода времени, обеспечивающего проникновение требуемого количества соединения формулы (I). Например (но не ограничиваясь только ими) указанные трансдермальные устройства имеют форму повязки, содержащей элемент, служащий подкладкой, резервуар, содержащий соединение необязательно в сочетании с носителями, необязательно контролирующий скорость высвобождения барьер для поступления соединения на кожу хозяина с контролируемой и заранее определенной скоростью в течение продолжительного периода времени, и средства для закрепления устройства на коже. В других вариантах осуществления изобретения применяют также трансдермальные матриксные препаративные формы.
Препаративные формы, предназначенные для трансдермального введения соединения формулы (I), включают в эффективном количестве соединение формулы (I), носитель и необязательно разбавитель. Носитель представляет собой (но не ограничиваясь только ими) абсорбируемые фармакологически приемлемые растворители, способствующие проникновению через кожу хозяина, такие как вода, ацетон, этанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло и их комбинации.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные трансдермальные системы введения включают вещества, усиливающие проникновение, которые способствуют введению одного или нескольких соединений формулы (I) в ткань. Указанные вещества, усиливающие проникновение, включают (но не ограничиваясь только ими) ацетон; различные спирты, такие как этанол, олеил и тетрагидро-фурил; алкилсульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; диметилацетамид; диметилформамид; поли-этиленгликоль; пирролидоны, такие как поливинилпирролидон; различные виды коллидонов (повидон, поливидон); мочевину; и различные водорастворимые или нерастворимые сложные сахарные эфиры, такие как Твин 80 (полисорбат 80) и Спан 60 (сорбитанмоностеарат).
В других вариантах осуществления изобретения значение рН указанной трансдермальной фармацевтической композиции или лекарственной формы или ткани, на которую наносят фармацевтическую композицию или лекарственную форму, регулируют для улучшения введения одного или нескольких соединений формулы (I). В других вариантах осуществления изобретения полярность растворителя-носителя, его ионную силу или тоничность регулируют для улучшения введения. В других вариантах осуществления изобретения добавляют соединения, такие как стеараты, для требуемого изменения гид-рофильности или липофильности одного или нескольких соединений формулы (I) с целью улучшения введения. В других вариантах осуществления изобретения указанные стеараты служат в качестве липид-ного наполнителя для препаративной формы, такого как эмульгирующий агент или поверхностно-активное вещество, и в качестве усиливающего введение или усиливающего проникновения агента. В других вариантах осуществления изобретения используют различные соли, гидраты или сольваты соединений формулы (I) для дополнительного регулирования свойств образовавшейся композиции.
Лекарственные формы для местного применения.
В конкретных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I) применяют с помощью местного нанесения фармацевтической композиции, которая содержит по
меньшей мере одно соединение формулы (I), в форме лосьонов, гелей, мазей, растворов, эмульсий, суспензий или кремов. Приемлемыми препаративными формами для местного применения на кожу являются водные растворы, мази, кремы или гели, а препаративными формами для офтальмологического применения являются водные растворы. Указанные препаративные формы необязательно содержат солюби-лизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.
Указанные препарпативные формы для местного применения содержат по меньшей мере один носитель и необязательно по меньшей мере один разбавитель. Такие носители и разбавители представляют собой (но не ограничиваясь только ими) воду, ацетон, этанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло и их комбинации.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные препаративные формы для местного применения включают вещества, усиливающие проникновение, которые способствуют введению одного или нескольких соединений формулы (I) в ткань. Указанные вещества, усиливающие проникновение, включают (но не ограничиваясь только ими) ацетон; различные спирты, такие как этанол, олеил и тетрагидрофурил; алкилсульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; диметилацетамид; диметилформа-мид; полиэтиленгликоль; пирролидоны, такие как поливинилпирролидон; различные виды коллидонов (повидон, поливидон); мочевину; и различные водорастворимые или нерастворимые сложные сахарные эфиры, такие как Твин 80 (полисорбат 80) и Спан 60 (сорбитанмоностеарат).
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят путем ингаляции. Лекарственные формы для ингаляционного введения приготавливают в виде аэрозолей или сухих порошков. Аэрозольные препаративные формы для ингаляционного введения содержат раствор или тонкую суспензию по меньшей мере одного соединения формулы (I) в фармацевтически приемлемом водном или неводном растворителе. Кроме того, указанные фармацевтические композиции необязательно содержат порошкообразное основание, такое как лактоза, глюкоза, трегалоза, маннит или крахмал, и необязательно модификатор свойств, такой как L-лейцин или другую аминокислоту, и/или соли металлов и стеариновой кислоты, такие как стеарат магния или кальция.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят непосредственно в легкое путем ингаляции с помощью ингалятора с дозировочной шкалой ("MDI"), который представляет собой баллоны, содержащие приемлемый имеющий низкую температуру кипения пропеллент, например дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другой пригодный газ, или устройство в виде ингалятора для сухого порошка (DPI), в котором применяют выброс газа для создания облака сухого порошка внутри контейнера, которое затем вдыхает пациент. В конкретных вариантах осуществления изобретения изготавливают капсулы и картриджы из желатина, предназначенные для применения в ингаляторе или инсуффляторе, которые содержат порошкообразную смесь соединения формулы (I) и порошкообразного основания, такого как лактоза или крахмал. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят в легкое с помощью устройства для распыления жидкостей, такое устройство включает насадку с очень малыми отверстиями для создания аэрозоля жидких препаративных форм лекарственного средства, которые затем непосредственно вводят путем ингаляции в легкое. В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят в легкое с помощью распылительного устройства, при этом распылители создают аэрозоль жидких препаративных форм лекарственного средства на основе ультразвуковой энергии с получением тонкоизмельченных частиц, которые легко можно вдыхать. В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят в легкое с помощью электрогидродинамического ("EHD") аэрозольного устройства, при этом в указанных аэрозольных EHD-устройствах используется электрическая энергия для создания аэрозоля растворов или суспензий жидких лекарственных средств.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли или сольва-ты, представленные в настоящем описании, включает также один или несколько усилителей абсорбции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные усилители абсорбции представляют собой (но не ограничиваясь только ими) гликохолат натрия, капрат натрия, №лаурил-р^-мальтопиранозид, ЭДТК и смешенные мицеллы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят в нос. Лекарственные формы для начального введения приготавливают в виде аэрозолей, растворов, капель, гелей или сухих порошков.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят ректально в форме суппозиториев, клизм, мазей, кремов, ректальных пен или ректальных гелей. В конкретных вариантах осуществления изобретения суппозитории приготавливают из жирных эмульсий или суспензий, масла какао или других глицеридов.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), применяют в виде офтальмологического средства, такого как глазные капли. Указанные препаративные формы представляют собой водные растворы, которые необязательно содержат солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и
консерванты.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), применяют для введение в ухо в виде ушных капель. Указанные препаративные формы представляют собой водные растворы, которые необязательно содержат солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), приготавливают в виде препаратов в форме депо. Указанные препаративные формы вводят путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные препаративные формы включают полимерные или гидрофобные материалы (такие, например, как эмульсию в приемлемом масле) или ионообменные смолы, или слабо растворимые производные, например, слабо растворимую соль.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения вирусных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения инфекционных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения бактериальных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения грибковых заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения рака, ассоциированного с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для внутривенного введения для лечения рака, ассоциированного с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения связанных с отторжением трансплантата заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения заболеваний и/или нарушений мочеполовой системы, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для введения в виде глазных капель для лечения офтальмологических заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения для лечения дерматологических заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения для лечения старческого кератоза.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения в виде крема для лечения старческого кератоза.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения для лечения базально-клеточной карциномы. В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения в виде крема для лечения базально-клеточной карциномы.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения путем ингаляции для лечения респираторных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2. В конкретных вариантах осуществления изобретения респираторное заболевание представляет собой аллергическую астму.
В настоящем изобретении предложены соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и сольваты и фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты, предназначенные для применения с целью активации активности TLR2, и которые в результате применяют для предупреждения или
лечения заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2. Указанные соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и сольваты и фармацевтические композиции являются агонистами TLR2.
В настоящем описании представлены также способы лечения индивидуума, страдающего заболеванием и/или нарушением, ассоциированным с активностью TLR2, где способы заключаются в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват либо индивидуально, либо в виде компонента фармацевтической композиции, представленной в настоящем описании.
В настоящем описании представлено применение соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, ассоциированного с активностью TLR2.
Комбинированное лечение.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват, или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, вводят индивидуально (без дополнительного терапевтического средства) для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват, или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, вводят в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват, или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, включают в состав препарата в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами и вводят для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват, или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, вводят последовательно с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем описании, предусматривает введение соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), перед введением одного или нескольких дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем изобретении, предусматривает введение соединения формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), после введения одного или нескольких дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем изобретении, предусматривает введение соединения формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), одновременно с введением одного или нескольких дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем изобретении, предусматривает введение соединения формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), в виде препарата, включающего одно или несколько дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах комбинированного лечения, представленных в настоящем описании, соединения формулы (I), или их фармацевтически приемлемые соли, или сольваты являются агонистами
активности TLR2.
В конкретных вариантах комбинированного лечения, представленных в настоящем описании, соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, или их фармацевтически приемлемые соли, или сольваты и дополнительное(ые) терапевтическое(ие) средство(а) обладают аддитивным действием. В конкретных вариантах комбинированного лечения, представленных в настоящем описании, соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, или их фармацевтически приемлемые соли, или сольваты и дополнительное(ые) терапевтическое(ие) средство(а) обладают синергетическим действием.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемые соли, или сольваты, или фармацевтическую композицию, которая содержит соединение формулы (I), вводят пациенту, который ранее не подвергался или который в данное время не подвергается лечению другим терапевтическим средством.
Дополнительными терапевтическими средствами, применяемыми в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, являются (но не ограничиваясь только ими) антибиотики или антибактериальные средства, противорвотные средства, противогрибковые средства, противовоспалительные средства, противовирусные средства, иммуномодуляторные средства, цитокины, антидепрессанты, гормоны, алкилирующие средства, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, антимитотические средства, ингибиторы топоизомеразы, цитостатические средства, антиинвазивные средства, антиангио-генные средства, ингибиторы функции фактора роста, ингибиторы вирусной репликации, ингибиторы вирусных ферментов, противораковые средства, а-интерфероны, р-интерфероны, рибавирин, гормоны, цитокины и другие модуляторы Толл-подобного рецептора.
Антибиотики или антибактериальные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) валганцикловира гидрохлорид, метронидазол, бета-лактам, макролиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ази-тромицин, тобрамицин (TOBI(tm))), цефалоспорины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) цефаклор, цефадроксил, цефалексин, цефрадин, цефамандол, цефатризин, цефазедон, цефиксим, цефозопран, цефпимизол, цефуроксим, цефпирамид, цефпрозил, цефпиром, KEFLEX(tm), VELOSEF(tm), CEFTIN(tm), CEFZIL(tm), CECLOR(tm), SUPRAX(tm) и DURICEF(tm)), кларитромицин (такой, например, как (но не ограничиваясь только ими) кларитромицин и BIAXIN(tm)), эритромицин (такой, например, как (но не ограничиваясь только им) эритромицин и EMYCIN(tm)), ципрофлоксацин, CIPRO(tm), норфлоксацин (такой, например, как (но не ограничиваясь только им) NOROXIN(tm)), аминогликозидные антибиотики (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) апрамицин, арбекацин, бамбермицины, бутирозин, ди-бекацин, неомицин, ундециленат, нетилмицин, паромомицин, рибостамицин, сизомицин и спектиноми-цин), амфениколовые антибиотики (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) азидамфени-кол, хлорамфеникол, флорфеникол и тиамфеникол), анзамициновые антибиотики (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) рифамид и рифампин), карбацефемы (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) лоракарбеф), карбапенемы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) биапенем и имипенем), цефамицины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) цеф-буперазон, цефметазол и цефминокс), монобактамы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) азтреонам, карумонам и тигемонам), оксацефемы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фломоксеф и моксалактам), пенициллины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) амдиноциллин, амдиноциллина пивоксил, амоксициллин, бакампициллин, бензилпенициллиновая кислота, натрийбензилпенициллин, эпициллин, фенбенициллин, флоксациллин, пенамциллин, пенетама-та гидройодид, пенициллин o-бенетамин, пенициллин O, пенициллин V, пенициллин V бензантин, пенициллин V гидрабамин, пенимепициклин, фенцихициллин калий, V-CILLIN K(tm) и PEN VEE K(tm)), линко-замиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) клиндамицин и линкомицин), амфоми-цин, бацитрацин, капреомицин, колистин, эндурацидин, энвиомицин, тетрациклины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) апициклин, хлортетрациклин, кломоциклин и демеклоциклин), 2,4-диаминопиримидины (такой, например, как (но не ограничиваясь только им) бродимоприм), нитрофура-ны (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фуралтадон и фуразолиния хлорид), хиноло-ны и их аналоги (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фторхинолон, офлоксацин, ци-ноксацин, клинафлоксацин, флумеквин, грепаглоксацин и FLOXIN(tm)), сульфонамиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) сульфаметоксипиразина ацетил, бензилсульфамид, ноприлсульфа-мид, фталилсульфацетамид, сульфахризоидин и сульфацитин), сульфоны (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) диатимосульфон, натрий глюкосульфон и соласульфон), циклосерин, мупи-роцин, туберин и их комбинации.
Противорвотные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) метоклопрамид, домперидон, прохлорперазин,
прометазин, хлорпромазин, триметобензамид, ондасетрон, гранисетрон, гидроксизин, ацетиллейцина моноэтаноламин, ализаприд, азасетрон, бензхинамид, биетанаутин, бромоприд, буклизин, клебоприд, циклизин, дименгидринат, дифенидол, доласетрон, меклизин, металлатал, метопимазин, набилон, окси-перндил, пипамазин, скополамин, сульпирид, тетрагидроканнабинолы, тиэтилпиперазин, тиопроперазин, трописетрон и их комбинации.
Противогрибковые средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) амфотерицин В, итраконазол, кетоконазол, флуконазол, фосфлуконазол, интратекал, флуцитозин, миконазол, бутоконазол, клотримазол, нистатин, терконазол, тиоконазол, вориконазол, циклопирокс, эконазол, галопрогрин, нафтифин, тербинафин, ун-дециленат и гризеофулвин.
Противовоспалительные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, такие как салициловая кислота, ацетилсалициловая кислота, метилсалици-лат, дифлунисал, салсалат, олсалазин, сульфасалазин, ацетаминофен, индометацин, сулиндак, этодолак, мефенамовая кислота, натрия меклофенамат, толметин, кеторолак, диклофенак, ибупрофен, напрксен, натрия напроксен, фенопрофен, кетопрофен, флурбинпрофен, оксапрозин, пироксикам, мелоксикам, ам-пироксикам, дроксикам, пивоксикам, теноксикам, набуметом, фенилбутазон, оксифенбутазон, антипирин, аминопирин, апазон и нимесулид, антагонисты лейкотриена, включая (но не ограничиваясь только ими) зилеутон, ауротиоглюкозу, золото-натрий тиомалат и ауранофин, стероиды, включая (но не ограничиваясь только ими) алклометазона дипропионат, амцинонид, беклометазона дипропионат, бетаметазон, бетаметазона бензоат, бетаметазона дипропионат, бетаметазона натрия фосфат, бетаметазона валерат, клобетазола пропионат, клокорталона пивалат, гидрокортизон, производные гидрокортизона, десонид, дезоксиматазон, дексаметазон, флунизолид, флукоксинолид, флурандренолид, гальциноцид, медризон, метилпреднизолон, метпреднизолона ацетат, метилпреднизолона натрия сукцинат, мометазона фуроат, параметазона ацетат, преднизолон, преднизолона ацетат, преднизолона натрия фосфат, преднизолона тебуатат, преднизон, триамцинолон, триамцинолона ацетонид, триамцинолона диацетат и триамциноло-на гексатонид, и другие противовоспалительные средства, включая (но не ограничиваясь только ими) метотрексат, колхицин, аллопуринол, пробенецид, талидомид или его производное, 5-аминосалициловую кислоту, ретиноид, дитранол или кальципотриол, сульфинпиразон и бензбромарон.
Противовирусные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы протеаз, нуклеозид-ные/нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI), ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI), антагонисты CCR1, антагонисты CCR5 и нуклеозидные аналоги. Противовирусные средства включают (но не ограничиваясь только ими) фомивирсен, диданозин, ламивудин, ставу-дин, залцитабин, зидовудин, ацикловир, фамцикловир, валацикловир, ганцикловир, гангцикловир, цидо-фовир, заманавир, оселтамавир, видарабин, идоксуридин, трифлуридин, левовирин, вирамидин и риба-вирин, а также фоскарнет, амантадин, римантадин, саквинавир, индинавир, нелфинавир, ампренавир, лопинавир, ритонавир, а-интерфероны; р-интерфероны; адефовир, клевадин, энтекавир, плеконарил, HCV-086, EMZ702, эмтрицитабин, целгосивир, валопицитабин, ингибиторы протеазы HCV, такие как BILN 2061, SCH-503034, ITMN-191 или VX-950, ингибиторы полимеразы NS5B, такие как NM107 (и его пролекарство NM283), R1626, R7078, BILN1941, GSK625433, GILD9128 или HCV-796, эфавиренц, HBY-097, невирапин, ТМС-120 (дапивирин), ТМС-125, ВХ-471, этравирин, делавирдин, DPC-083, DPC-961, каправирин, рилпивирин, 5-{[3,5-диэтил-1-(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]окси}изофталонитрил, GW-678248, GW-695634, MIV-150, каланолид, TAK-779, SC-351125, анкривирок, викривирок, марави-рок, PRO-140, аплавирок 40, Ono-4128, AK-602), AMD-887 CMPD-167, метил-1-эндо-{8-[^)-3-(ацетиламино)-3-(3-фторфенил)пропил]-8-азабицикло[3.-2.1]окт-3-ил}-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат, метил-3-эндо-{8-[(3S)-3-(ацетамидо)-3-(3-фторфенил)пропил]-8-азабицикло[3.2.-1]окт-3-ил}-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат, этил-1-эндо-{8-[(3S)-3-(ацетиламино)-3-(3-фторфенил)пропил]-8-азабицикло[3.-2.1]окт-3-ил}-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и №{(^)-3-[3-эндо-(5-изобутирил-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,-5-с]пиридин-1-ил)-8-азабицикло[3.2.1]окт-8-ил]-1-(3-фторфенил)пропил}аце-тамид), BMS-806, BMS-488043, метиламид 5-{(1S)-2-[(2R)-4-бензоил-2-метилпиперазин-1-ил]-1-метил-2-оксоэтокси}-4-метоксипиридин-2-карбоновой кислоты и 4-{(1S)-2-[(2R)-4-бензоил-2-метилпиперазин-1-ил]-1-метил-2-оксоэтокси}-3-метокси-N-метилбензамид, энфувиртид (Т-20), сифувертид SP-01A, Т1249, PRO 542, AMD-3100, растворимый CD4, ингибиторы HMG-CoA-редуктазы, аторвастатин, 3-O-(3'3'-диметилсукцинил)бетулиновую кислоту (другое название РА-457) и aHGA.
Иммуномодуляторные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой со
лью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) азатиоприн, такролимус, циклоспорина метотрексат, лефлуномид, кортикостероиды, циклофосфамид, циклоспорин А, циклоспорин G, микофе-нолят мофетила, аскомицин, рапамицин (сиролимус), FK-506, мизорибин, дезоксиспергуалин, бреквинар, микофеноловая кислота, малононитрилоамиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только им)лефлунамид), модуляторы Т-клеточных рецепторов и модуляторы цитокиновых рецепторов, пептидные миметики и антитела (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) человеческие, гуманизированные, химерные, моноклональные, поликлональные, Fvs-, ScFvs-, Fab- или F(ab)2-фрагменты или эпитопсвязывающие фрагменты), молекулы нуклеиновой кислоты (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антисмысловые молекулы нуклеиновой кислоты и тройные спирали), низкомолекулярные соединения, органические соединения и неорганические соединения. Примерами модуляторов Т-клеточных рецепторов являются (но не ограничиваясь только ими) антитела к Т-клеточным рецепторам (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитела к CD4 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) сМ-Т412 (фирма Boehringer), IDEC-CE9.1(tm) (фирма IDEC и SKB), МАт 4162W94, Orthoclone и OKTcdr4a (фирма Janssen-Cilag)), антитела к CD3 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) Nuvion (фирма Product Design Labs), ОКТ3 (фирма Johnson & Johnson) или ритуксан (фирма IDEC)), антитела к CD5 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) имму-ноконъюгат антитело к CD5, сцепленное с рицином), антитела к CD7 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) СНН-380 (фирма Novartis)), антитела к CD8, моноклональные антитела к лиганду CD40 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) IDEC-131 (фирма IDEC)), антитела к CD52 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) CAMPATH 1H (фирма Ilex)), антитела к CD2, антитела к CD11a (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ксанелим (фирма Genentech)), антитела к В7 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) IDEC-114 (фирма IDEC)), CTLA4-иммуноглобулин и другие модуляторы Толл-подобного рецептора (TLR). Примерами модуляторов цито-киновых рецепторов являются (но не ограничиваясь только ими) растворимые рецепторы цитокинов (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) внеклеточный домен рецептора TNF-а или его фрагмент, внеклеточный домен рецептора IL-1 р или его фрагмент и внеклеточный домен рецептора IL-6 или его фрагмент), цитокины или их фрагменты (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) интерлейкин (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-a, интерферон (IFN)-a, IFN-р, IFN-Y и GM-CSF), антитела к рецепторам цитокинов (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитела к рецептору IFN, антитела к рецептору IL-2 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) зенапакс (фирма Protein Design Labs)), антитела к рецептору IL-4, антитела к рецептору IL, антитела к рецептору IL-10 и антитела к рецептору IL-12), антитела к цитокинам (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитела к IFN, антитела к TNF, антитела к IL-1 р, антитела к IL, антитела к IL-8 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ABX-IL-8 (фирма Ab-genix)) и антитела к IL-12).
Цитокины или модулятор функции цитокинов, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) интерлейкин-2 (IL-2), ин-терлейкин-3 (IL-3), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-5 (IL-5), интерлейкин-6 (IL-6), интерлейкин-7 (IL-7), интерлейкин-9 (IL-9), интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-12 (IL-12), интерлейкин-15 (IL-15), интер-лейкин-18 (IL-18), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), эритропоэтин (Еро), эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов (GM-CSF), колониестимулирующий фактор гранулоцитов (G-CSF), колониестимулирующий фактор макрофагов (M-CSF), пролактин, альфа-, бета- и гамма-интерферон, интерферон p-1a, интерферон р-1b, интерферон а-1, интерферон а-2а (роферон), интерферон a-2b, пэгилированные интерфероны (включая (но не ограничиваясь только ими) пэгинтерферон а-2а и пэгинтерферон a-2b), интрон, Пэг-интрон, пегасис, консенсусный интерферон (инферген), альбумин-интерферон а и албуферон. Антидепрессанты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) бинедалин, кароксазон, циталопрам, диметазан, фенкамин, индалпин, инделок-сазина гидрохлорид, нефопам, номифензин, окситриптан, оксипертин, пароксетин, сертралин, тиазесим, тразодон, бенмоксин, эхинопсидина йодид, этриптамин, ипоклозид, ипрониазид, изокарбоксазид, меба-назин, метфендразин, ниаламид, паргилин, октамоксин, фенелзин, фенипразин, феноксипропазин, пив-гидразин, сафразин, селегилин, 1-депренил, котинин, ролициприн, ролипрам, мапротилин, метралиндол, миансерин, миртазепин, адиназолам, амитриптилин, амитриптилиноксид, амоксапин, бутриптилин, кло-мипрамин, демексептилин, дезипрамин, дибензепин, диметакрин, дитиепин, доксепин, флуацизин, имип-рамин, имипрамина N-оксид, иприндол, лофепрамин, мелитрацен, метапрамин, нортриптилин, ноксип-тилин, опипрамол, пизотилин, пропизепин, протриптилин, квинупрамин, тианептин, тримипрамин, ад-рафинил, бенактизин, бупропион, бутацетин, диоксадрол, дулоксетин, этоперидон, фебарбамат, фемок-сетин, фенпентадиол, флуоксетин, флувоксамин, гематопорфирин, гиперицин, левофацетоперан, меди-фоксамин, милнаципран, минаприн, моклобемид, нефазодон, оксафлозан, пибералин, пролинтан, пири
сукцидеанол, ритансерин, роксиндол, рубидия хлорид, сульпирид, тандоспирон, тозалинон, тофенацин, толоксатон, транилципромин, L-триптофан, венлафаксин, вилоксазин и зимелдин.
В конкретных вариантах осуществления изобретения антидепрессанты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, представляют собой ингибиторы МАО (моно-аминооксидаза), включая (но не ограничиваясь только ими) бенмоксин, эхинопсидина йодид, этрипта-мин, ипроклозид, ипрониазид, изокарбоксазид, мебаназин, метфендразин, моклобамид, ниаламид, парги-лин, фенелзин, фенипразин, феноксипропазин, пивгидразин, сафразин, селегилин, 1-депренил, толокса-тон и транилципромин.
Гормоны, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) рилизинг-фактор лютенинизирующего гормона (LHRH), гормон роста (GH), рилизинг-фактор гормона роста, АСТН (кортикотропный гормон), соматостатин, соматотропин, соматомедин, гормон паращитовидной железы, гипоталамические рилизинг-факторы, инсулин, глюкагон, энкефалины, вазопрессин, кальцитонин, гепарин, низкомолекулярные гепарины, ге-париноиды, тимостимулин, синтетические и природные опиоиды, инсулин- и тироидстимулирующие гормоны и эндорфины.
Алкилирующие агенты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) азотистый иприт, этиленимины, метилмелами-ны, алкилсульфонаты, нитрозомочевины, кармустин, ломустин, триазены, мелфалан, мехлорэтамин, цис-платин, оксалиплатин, карбоплатин, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, гексаметил-мелаин, тиотепу, бусульфан, кармустин, стрептозоцин, даркабазин и темозоломид.
Антиметаболиты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или соль-ватом, включают (но не ограничиваясь только ими) цитарабин, гемцитабин и антифолаты, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фторпиримидины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) 5-фторурацил и тегафур), ралтитрексед, метотрексат, цитозина арабинозид и гидроксимоче-вину.
Противоопухолевые антибиотики, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) антрациклины, блеомицин, доксору-бицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин.
Антимитотические агенты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) винка-алкалоиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) винкристин, винбластин, виндесин и винорелбин), таксоиды такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) таксол, паклитаксел и таксотер) и ингибиторы киназ семейства
Polo.
Ингибиторы топоизомеразы, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) эпиподофиллотоксины, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан, иринотекан и камптоте-цин.
Цитостатические средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) антиэстрогены (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) тамоксифен, фулвестрант, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и иодокси-фен), антиандрогены (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерона ацетат), антагонисты LHRH или агонисты LHRH (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) госерелин, леупрорелин, леупролид и бусерелин), прогестогены (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) мегестрола ацетат), ингибиторы ароматазы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан) и ингибиторы 5а-редуктазы (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) финастерид).
Антиинвазивные агенты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы киназ семейства c-Src (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) 4-(6-хлор-2,3-метилендиоксианилино)-7-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]-5-тетрагидропиран-4-илоксихиназолин (AZD0530) и №(2-хлор-6-метил-фенил)-2-{6-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-2-метилпиримидин-4-иламино}тиазол-5-карбоксамид (дазатиниб, BMS-354825)) и ингибиторы металлопротеиназ (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) маримастат, ингибиторы функции активатора плазминогена урокиназного типа и антитела к
гепараназе).
Антиангиогенные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) средства, которые ингибируют воздействия сосудистого эндотелиального фактора роста, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитело к сосудистому эндотелиальному фактору роста бевацизумаб (AVASTIN(tm)), и ингибиторы тиро-зинкиназного рецептора VEGF, такие как 4-(4-бромо-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперазин-4-илметокси)хиназолин (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1-илпропокси)хиназолин (AZD2171), ваталаниб (PTK787) и SU1 1248 (сунитиниб), линомид и ингибиторы функции интегрина avp3 и ангиостатин.
Ингибиторы функции фактора роста, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) антитела к фактору роста и антитела к рецептору фактора роста (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитело к erbB2 тра-стузумаб (HERCEPTIN(tm)), антитело к EGFR панитумумаб, антитело к erbBl цетуксимаб (Erbitux, C225), ингибиторы тирозинкиназы, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы семейства эпидермального фактора роста (например, ингибиторы семейства тирозинкиназ EGFR, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ^(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-(3-орфолинопропокси)хиназолин-4-амин (гефитиниб, ZD1 839), №(3-этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб, OSI-774) и 6-акриламидо^-(3-хлор-4-фторфенил)-7-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (CI 1033), ингибиторы тирозинкиназы erbB2, такие, например, как (но не ограничиваясь только им) лапатиниб, ингибиторы семейства факторов роста гепатоцитов, ингибиторы семейства тромбоцитарных факторов роста, такие как иматиниб, GLEEVEC(tm), ингибиторы сериновых/треониновых киназ (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы передачи сигналов Ras/Raf, такие как ингибиторы фарнесилтрансферазы, например, сорафениб (BAY 439006)), ингибиторы передачи клеточных сигналов, опосредуемых киназами MEK и/или AKT, ингибиторы семейства факторов роста гепатоцитов, ингибиторы c-kit, ингибиторы киназы abl, ингибиторы киназы рецептора IGF (инсулинподобный фактор роста); ингибиторы киназы aurora (например, AZD1 152,
РН739358, VX-680, MLv8054, R763, МР235, МР529, VX-528 и АХ39459) и ингибиторы циклинзависимой
киназы, такие как ингибиторы CDK2 и/или CDK4.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват применяют в сочетании со средствами против новообразования сосудов, таким, например, как (но не ограничиваясь только им) комбретастатин А4.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват применяют в сочетании со средствами антисмысловой терапии, таким, например, как (но не ограничиваясь только им) ISIS 2503, представляющий собой антисмысловой олигонуклеотид к гену ras.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват применяют в сочетании с подходами, основанными на генной терапии, включая, например, подходы, основанные на замене аберрантных генов, таких как аберрантный ген р53 или аберрантный ген BRCA1 или BRCA2, подходы на основе GDEPT (gene-directed enzyme pro-drug s therapy (ген-направленная фермент-но-пролекарственная терапия)), такие как подходы с использованием цитозиндеаминазы, тимидинкиназы или фермента, представляющего собой бактериальную нитроредуктазу, и подходы, направленные на повышение переносимости пациентом химиотерапии или лучевой терапии, такие как генная терапия устойчивости ко многим лекарственным средствам.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват применяют в сочетании с иммунотерапевтическими подходами, включая, например, подходы ex vivo и in vivo, направленные на повышение иммуногенности опухолевых клеток пациента, такие, как осуществление трансфекции с использованием цитокинов, таких как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или колониестиму-лирующий фактор гранулоцитов и макрофагов, подходы, направленные на снижение Т-клеточной анергии, подходы с использованием трансфектированных иммунных клеток, таких как трансфектированные цитокинами дендритные клетки, подходы с использованием трансфектированных цитокинами линий опухолевых клеток и подходы с использованием антиидиотипических антител.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват применяют в сочетании с другими методами лечения, включая (но не ограничиваясь только ими) хирургическое вмешательство и лучевую терапию (у-излучение, лучевая терапия с использованием нейтронных пучков, лучевая терапия с использованием электронных пучков, протонная терапия, брахитерапия и сис
темная терапия с использованием радиоактивных изотопов).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, или их фармацевтически приемлемые соли, или сольваты вводят или включают в состав лекарственной формы в сочетании с усилителем абсорбции, включая (но не ограничиваясь только ими) гликохолат натрия, капрат натрия, №лаурил-а^-мальтопиранозид, ЭДТК и смешанные мицеллы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения мишенью таких усилителей абсорбции является лимфатическая система.
В конкретных вариантах осуществления изобретения доплнительный(е) терапевтический(е) агент(ы), применяемый(е) в комбинированной терапии, представленной в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) такие агенты, как ингибиторы фактора некроза опухоли альфа (TNF-a) (такие как моноклональные антитела к TNF (например (но не ограничиваясь только ими), реми-кад, CDP-870 и адалимумаб) и молекулы иммуноглобулина к рецептору TNF (такие как (но не ограничиваясь только им) энбрел)); неселективные ингибиторы циклооксигеназы СОХ-1/СОХ-2 (такие как (но не ограничиваясь только ими) пироксикам, диклофенак, пропионовые кислоты, такие как напроксен, флу-бипрофен, фенопрофен, кетопрофен и ибупрофен, фенаматы, такие как мефенамовая кислота, индомета-цин, сулиндак, азапропазон, пиразолоны, такие как фенилбутазон, салицилаты, такие как аспирин), ингибиторы СОХ-2 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) мелоксикам, целекоксиб, рофе-коксиб, вальдекоксиб, лумарококсиб, парекоксиб и эторикоксиб); глюкокортикостероиды, мететрексат, лефуномид, гидроксихлорохин, d-пеницилламин, ауранофин или другие парентеральные или оральные золотосодержащие препараты.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с ингибитором биосинтеза лейкотриена, ингибитором 5-липоксигеназы (5-LO) или антагонистом белка-активатора 5-липоксигеназы (FLAP), таким как зиле-утон; АВТ-761; фенлеутон; тепоксалин; Abbott-79175; Abbott-85761; №(5-замещенн1> 1е)тиофен-2-алкилсульфонамид; 2,6-ди-трет-бутилфенолгидразоны; метокситетрагидропираны, такие как ZD-2138 фирмы Zeneca; соединение SB-210661; замещенное пиридинилом 2-цианнафталиновое производное, такое как L-739,010; 2-цианхинолиновое производное, такое как L-746,530; или индоловое или хинолино-вое производное, такое как MK-591, MK-886 и BAYx1005.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с антагонистом рецепторов лейкотриенов (LT) В4, LTC4, LTD4 и LTE4, выбранным из группы, включающей фенотиазины-3-1, такие как L-651392; амиди-новые соединения, такие как CGS-25019c; бензоксаламины, такие как онтазоласт; бензолкарбоксиими-дамиды, такие как BIIL 284/260; и такие соединения, как зафирлукаст, аблукаст, монтелукаст, SINGU-LAIR(tm), пранлукаст, верлукаст (MK-679), RG-12525, Ro-245913, иралукаст (CGP 45715A) и BAYx7195.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с ингибитором фосфодиэстеразы (PDE), таким как ме-тилксантанин, включая теофиллин и аминофиллин; селективным ингибитором изофермента PDE, включая ингибитор PDE4, в том числе (но не ограничиваясь только ими) циломиласт или рофлумиласт, ингибитор изоформы PDE4D или ингибитор PDE5.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с антагонистом гистаминового рецептора типа 1, таким как цетиризин, лоратадин, дезлоратадин, фексофенадин, акривастин, терфенадин, астемизол, азеластин, левокабастин, хлорфенирамин, прометазин, циклизин или мизоластин.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с гастропротективным антагонистом гистаминового рецептора типа 2. В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с антагонистом гистаминового рецептора типа 4.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с сосудосуживающим симпатомиметиком, представляющим собой агонист адренорецепторов альфа-1/альфа-2, таким как пропилгекседрин, фенилэфрин, фенилпропаноламин, эфедрин, псевдоэфедрин, нафазолина гидрохлорид, оксиметазолина гидрохлорид, тетрагидрозолина гидрохлорид, ксилометазолина гидрохлорид, трамазолина гидрохлорид или этилнорэ-пинефрина гидрохлорид.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с антихолинергическим агентом, включая антагонисты мускаринового рецептора (M1, M2 и М3), такие как атропин, хиосцин, гликопирролат, ипратропия бромид, тиотропия бромид, окситропия бромид, пирензепин или телензепин.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с агонистом бета-адренорецептора (включая бета-рецепторы подтипов 1-4), таким как изопреналин, сальбутамол, альбутерол, формотерол, сальметерол, тербуталин, орципреналин, битолтерола мезилат и пирбутерол.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с хромоном, таким как хромогликат натрия или недо-хромил натрия.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с миметиком инсулинподобного фактора роста типа I
(IGF-I).
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с глюкокортикоидом, таким как флунизолид, триамци-нолона ацетонид, беклометазона дипропионат, будесонид, флутиказона пропионат, циклезонид или мо-метазона фуроат.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с ингибитором матриксных металлопротеаз (ММР), а именно стромелизинов, коллагеназ и желатиназ, а также аггреканазы; прежде всего коллагеназы-1 (MMP-I), коллагеназы-2 (ММР-8), коллагеназы-3 (ММР-13), стромелизина-1 (ММР-3), стромелизина-2
(ММР-10) и стромелизина-3 (ММР-11) и ММР-9 и ММР-12.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с модуляторами функции хемокинового рецептора, такими как антагонисты CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 и CCR11 (для С-С-семейства); CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 и CXCR5 (для С-Х-С-семейства) и CX3CR1 для С-Х3-С-семейства.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата с иммуноглобулином (Ig), гамма-глобулином, содержащим Ig препаратом, либо антагонистом или антителом, модулирующим функцию Ig, таким как антитело к IgE (омализумаб).
Соединения формулы (I) в качестве иммунных потенциаторов.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или фармацевтически приемлемую соль, или сольват, представляют собой иммуногенные композиции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции можно применять в качестве вакцин. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные вакцины являются профилактическими (т.е. предназначены для предупреждения инфекции), а в других вариантах осуществления изобретения указанные вакцины являются терапевтическими (т.е. предназначены для лечения инфекции).
В других вариантах осуществления изобретения соединение(я) формулы (I), представленное(ые) в настоящем описании или его(их) фармацевтически приемлемая соль, или сольват являются иммунными потенциаторами и при введении придают иммуностимулирующее действие по сравнению с иммуноген-ными препаратами, которые не содержат соединение(я) формулы (I). В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) при введении придают иммуностимулирующее действие, когда входят в иммуногенную композицию, содержащую один или несколько иммунорегуляторов, а в других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) при введении придают иммуностимулирующее действие, когда входят в иммуногенную композицию, в которой отсутствуют другие иммунорегуляторы.
Иммуностимулирующее действие в контексте настоящего описания относится, как правило, к повышению действия иммуногенной композиции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 10% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкрет
ных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 20% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 30% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 40% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного по-тенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 50% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 60% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 70% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 80% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 90% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствии иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 100% по сравнению с действием иммуно-генной композиции в отсутствии иммунного потенциатора.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение действия иммуноген-ной композиции оценивают по повышению эффективности иммуногенной композиции в отношении обеспечения защитных действий. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности оценивают по снижению вероятности того, что у индивидуума, которому вводят иммуногенную композицию, возникнет состояние, в отношении которого иммуногенная композиция должна обладать защитным действием, или по уменьшению продолжительности или серьезности проявлений указанного состояния. В других вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности оценивают по повышению титра антитела, образовавшегося под действием иммуногенной композиции у обработанного индивидуума.
Наряду с одним или несколькими соединениями формулы (I), представленными в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью, или сольватом указанные иммуногенные композиции включают в эффективном количестве один или несколько антигенов и фармацевтически приемлемый носитель. Такие носители представляют собой (но не ограничиваясь только ими) белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, сахарозу, трегалозу, лактозу, липидные агрегаты (такие как масляные капли или липосомы) и инактивированные вирусные частицы. Иммуногенные композиции, как правило, содержат также разбавители, такие как вода, физиологический раствор и глицерин, и необязательно содержат другие эксципи-енты, такие как смачивающими или эмульгирующие агенты и забуферивающие рН субстанции.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции необязательно содержит один или несколько иммунорегуляторов. В конкретных вариантах осуществления изобретения один или несколько иммунорегуляторов включают один или несколько адъювантов. Указанные адъю-ванты представляют собой (но не ограничиваясь только ими) ТН1-адъювант и/или ТН2-адъювант, которые дополнительно будут описаны ниже. В конкретных вариантах осуществления изобретения адъюван-ты, которые применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, представляют собой (но не ограничиваясь только ими):
A) содержащие минералы композиции; Б) масляные эмульсии;
B) сапониновые формы;
Г) виросомы и вирусоподобные частицы;
Д) бактериальные или микробные производные;
Е) человеческие иммуномодуляторы;
Ж) биоадгезивы и мукоадгезивы;
З) микрочастицы;
И) липосомы;
К) препараты простого полиоксиэтиленового эфира и сложного полиоксиэтиленового эфира;
Л) полифосфазен (РСРР);
М) мурамилпептиды и
Н) имидазохинолоновые производные.
Содержащие минералы композиции, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) соли минералов, такие как соли алюминия и соли кальция. Например,
минеральные соли включают (но не ограничиваясь только ими) гидроксиды (например, оксигидроксиды, включая гидроксиды алюминия и оксигидроксиды алюминия), фосфаты (например, гидроксифосфаты и ортофосфаты, включая фосфаты алюминия, гидроксифосфаты алюминия и ортофосфаты алюминия, и фосфат кальция), сульфаты (например, сульфат алюминия) или смеси различных содержащих минералы соединений. Указанные минеральные соли находятся в любой приемлемой форме, такой, например, как (но не ограничиваясь только ими) гель, кристаллическая и аморфная формы. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные содержащие минералы композиции приготавливают в виде частиц, содержащих соли металла. В конкретных вариантах осуществления изобретения компоненты имму-ногенных композиций, представленных в настоящем описании, адсорбируют на указанных минеральных солях. В конкретных вариантах осуществления изобретения в иммуногенных комрозициях, представленных в настоящем описании, применяют в качестве адъюванта гидроксид алюминия и/или фосфат алюминия. В других вариантах осуществления изобретения антигены, которые применяют в иммуногенных композициях, адсорбируют на указанных применяемых в качестве адъювантов гидроксиде алюминия и/или фосфате алюминия. В конкретных вариантах осуществления изобретения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, в качестве адъюванта применяют фосфат кальция. В других вариантах осуществления изобретения антигены, которые применяют в иммуногенных композициях, адсорбируют на указанных используемом в качестве адъюванта фосфате кальция.
В конкретных вариантах осуществления изобретения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, в качестве адъюванта применяют фосфаты алюминия. В других вариантах осуществления изобретения фосфаты алюминия применяют в качестве адъюванта в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, при этом указанные композиции включают в качестве антигена сахарид H.influenzae. В конкретных вариантах осуществления изобретения адъювант представляет собой аморфный гидроксифосфат алюминия, в котором молярное соотношение PO4/Al составляет от 0,84 до 0,92, в частности 0,6 мг AГ3+/мл. В других вариантах осуществления изобретения применяют адсорбцию с использованием низкой дозы фосфата алюминия, составляющей, например (но не ограничиваясь только ими), от 50 до 100 мкг Al3+ на дозу конъюгата. Если в композицию входит более одного конъюгата, то не является необходимым, чтобы все конъюгаты были адсорбированы.
Масляные эмульсии, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) эмульсии сквален-вода (такие как MF59 (5% сквалена, 0,5% Твин 80 и 0,5% Спан 85, приготовленные в виде субмикронных частиц с помощью микрофлуидизатора), полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA).
Сапонины представляют собой гетерологичную группу гликозидов стеролов и гликозидов тритер-пеноидов, которые присутствуют в коре, листьях, стеблях, корнях и даже цветках широкого разнообра-зиция видов растений. Формы сапонинов, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) сапонины из коры мыльного дерева Quillaia saponaria Molina, из Smilax ornata (сарсапарилла), Gypsophilla paniculata ("вуаль невесты") и Saponaria offlcianalis (мыльный корень). В конкретных вариантах осуществления изобретения формы сапонинов, пригодные для применения в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) очищенные препараты, такие как (но не ограничиваясь только ими) QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B и QH-C. QS21, поступают в продажу под товарным знаком STIMULOM(tm). В других вариантах осуществления изобретения препараты сано-нинов включают препараты стеролов, холестерины и липидные препараты, такие как уникальные частицы, образованные из комбинаций сапонинов и холестеринов, которые называют иммуностимулирующими комплексами (ISCOM). В конкретных вариантах осуществления изобретения ISCOM включают фос-фолипид, такой как фосфатидилэтаноламин или фосфатидилхолин. Любой известный сапонин можно применять в ISCOM. В конкретных вариантах осуществления изобретения ISCOM включает один или несколько из QuilA, QHA и QHC. В других вариантах осуществления изобретения в ISCOM необязательно отсутствует дополнительный детергент.
Виросомы и вирусоподобные частицы (ВПЧ), которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) один или несколько вирусных белков, необязательно объединенных с фосфолипидом или включенных вместе с ним в препаративную форму. Указанные виросомы и ВПЧ, как правило, являются непатогенными, нереплицирующимися и, как правило, не содержат никакого нативного вирусного генома. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные белки получают методами рекомбинации, а в других вариантах осуществления изобретения вирусные белки выделяют из полных вирусов.
Вирусные белки, которые можно применять в виросомах или ВПЧ, включают (но не ограничиваясь только ими) белки, полученные из вируса гриппа (такие как НА или NA), вируса гепатита В (такие как коровые или капсидные белки), вируса гепатита Е, вируса кори, вируса Синдбис, ротавируса, вируса ящура, ретровируса, вируса Норвалка, вируса человеческой папилломы, ВИЧ, РНК-фагов, QP-фага (например, оболочечные белки), GA-фага, fr-фага, AP205-фага и Ту (например, белок p1 ретротранспозона
Ту).
Бактериальные и микробные производные, которые можно применять в качестве адъювантов,
включают (но не ограничиваясь только ими) такие бактериальные или микробные производные, как нетоксичные производные энтеробактериального липополисахарида (LPS), производные липида А, иммуностимулирующие олигонуклеотиды и АДФ-рибозилирующие токсины и их детоксицированные производные. Указанные нетоксичные производные LPS включают (но не ограничиваясь только ими) моно-фосфориллипид A (MPL) и 3-О-деацилированный MPL (3dMPL). 3dMPL представляет собой смесь 3-O-деацилированного монофосфориллипида А с 4, 5 или 6 ацилированными цепями. Другие нетоксичные производные LPS включают миметики монофосфориллипида А, такие как производные аминоалкилглю-козаминидфосфата (например, RC-529). Производные липида А включают (но не ограничиваясь только ими) производные липида А из Escherichia coli (например, ОМ-174).
Иммуностимулирующие олигонуклеотиды, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) нуклеотидные последовательности, содержащие мотив CpG (динуклеотидная последовательность, содержащая неметилированный цитозин, сцепленный фосфатной связью с гуанозином). Указанные CpG-последовательности могут быть двухцепочечными или одноцепо-чечными. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные нуклеотидные последовательности представляют собой двухцепочечные РНК или олигонуклеотиды, содержащие палиндромные или ro^(dG) последовательности. В других вариантах осуществления изобретения CpG включают нуклео-тидные модификации/аналоги, такие как фосфоротиоатные модификации.
В конкретных вариантах осуществления изобретения мишенью CpG-последовательностей является TLR9, а в других конкретных вариантах осуществления изобретения мотив представляет собой GTCGTT или TTCGTT. В конкретных вариантах осуществления изобретения CpG-последовательность является специфической в отношении индукции иммунного Thd-ответа, например (но не ограничиваясь только ими) олигодезоксинуклеотид (ODN) CpG-А, или в других вариантах осуществления изобретения CpG-последовательность является более специфической в отношении индукции В-клеточного ответа, например (но не ограничиваясь только ими) ODN CpG-B. В конкретных вариантах осуществления изобретения CpG представляет собой ODN CpG-A.
В конкретных вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид CpG конструируют таким образом, чтобы 5'-конец был доступен для распознавания рецептором. В других вариантах осуществления изобретения две олигонуклеотидные последовательности CpG необязательно присоединяют к 3'-концам с получением "иммуномеров".
Наиболее часто применяемым адъювантом на основе иммуностимулирующих олигонуклеотидов является IC-31(tm). В конкретных вариантах осуществления изобретения адъювант, который применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включает смесь (I) олигонуклеоти-да (например (но не ограничиваясь только им), состоящего из 15-40 нуклеотидов), включающего по меньшей мере один (и предпочтительно несколько) CpI-мотив (например (но не ограничиваясь только ими), цитозин, сцепленный с инозином с образованием динуклеотида), и (II) поликатионного полимера, такого, например, как (но не ограничиваясь только ими) олигопептид (например (но не ограничиваясь только им), состоящий из 5-20 аминокислот), который включает по меньшей мере одну (и предпочтительно несколько) трипептидную(ые) последовательность(и) Lys-Arg-Lys. В конкретных вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид представляет собой дезоксинуклеотид, содержащий 26-мерную последовательность 5'-(IC)13-3'. В других вариантах осуществления изобретения поликатионный полимер представляет собой пептид, содержащий 11-мерную аминокислотную последовательность
KLKLLLLLKLK.
В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные АДФ-рибозилирующие токсины и их детоксицированные производные применяют в качестве адъювантов в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные белки получают из Е. coli (чувствительный к нагреванию энтеротоксин Е coli "LT"), возбудителя холеры ("СТ") или коклюша ("РТ"). В других вариантах осуществления изобретения токсин или токсоид находится в форме голотоксина, содержащего как А-, так и В-субъединицу. В других вариантах осуществления изобретения А-субъединица содержит детоксицирующую мутацию; а В-субъединица не содержит мутации. В других вариантах осуществления изобретения адъювант представляет собой детоксици-рованный мутант LT, такой как LT-K63, LT-R72 и LT-G192.
Человеческие иммуномодуляторы, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) цитокины, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) интер-лейкины (IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12), интерфероны (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) интерферон-у), колониестимулирующий фактор макрофагов и фактор некроза опухолей.
Биоадгезивы и мукоадгезивы, которые можно применять в качестве адъювантов в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) микросферы из этерифицированной гиуалуроновой кислоты и перекрестно сшитые производные по-ли(акриловой кислоты), поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полисахариды и карбоксиметил-целлюлозу. В конкретных вариантах осуществления изобретения в композициях вакцин, представленных в настоящем описании, в качестве адъювантов применяют хитозан и его производные.
Микрочастицы, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) микрочастицы, состоящие из материалов, которые являются биоразложимыми и нетоксичными (например, поли(альфа-гидроксикислота), полигидроксимасляная кислота, сложный полиорто-эфир, полиангидрид, поликапролактон и т.д.), в сочетании с поли(лактид-ко-гликолидом). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные микрочастицы обрабатывают таким образом, чтобы они имели отрицательно заряженную поверхность (например, с использованием ДСН) или положительно заряженную поверхность (например, с использованием катионного детергента, такого как СТАВ). Микрочастицы, которые можно применять в качестве адъювантов, имеют диаметр частиц, составляющий от примерно 100 нм до примерно 150 мкм. В конкретных вариантах осуществления изобретения диаметр частиц составляет от примерно 200 нм до примерно 30 мкм, а в других вариантах осуществления изобретения диаметр частиц составляет от примерно 500 нм до 10 мкм.
Препараты простого полиоксиэтиленового эфира и сложного полиоксиэтиленового эфира, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) поверхностно-активные вещества, представляющие собой сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана, в сочетании с октоксинолом, и поверхностно-активные вещества, представляющие собой простые или сложные алки-ловые эфиры полиоксиэтилена, в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным неионогенным поверхностно-активным веществом, таким как октоксинол. В конкретных вариантах осуществления изобретения простые полиоксиэтиленовые эфиры выбирают из простого полиоксиэтилен-9-лаурилового эфира (лаурет 9), полиоксиэтилен-9-стеорилового эфира, полиоксиэтилен-8-стеорилового эфира, полиок-сиэтилен-4-лаурилового эфира, полиоксиэтилен-35-лаурилового эфира и полиоксиэтилен-23-лаурилового эфира.
Мурамилпептиды, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) ^ацетилмурамил^-треонил^-изоглутамин (thr-MDP), ^ацетил-нормурамил^-аланил^-изоглутамин (нор-MDP) и №ацетилмурамил^-аланил^-изоглутшинил^-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-s-н-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)этиламин МТР-РЕ).
В конкретных вариантах осуществления изобретения одно или несколько соединений формулы (I), применяемых в качестве иммунных потенциаторов, включают в композиции, которые содержат комбинации одного или нескольких указанных выше адъювантов. Указанные комбинации включают (но не ограничиваясь только ими)
(1) сапонин и эмульсию типа масло-в-воде;
(2) сапонин (например, QS21)+нетоксичное производное LPS (например, 3dMPL);
(3) сапонин (например, QS21)+нетоксичное производное LPS (например, 3dMPL)+холестерин;
(4) сапонин (например, QS21)+3dMPTL+IL-12 (необязательно включающий стерол);
(5) комбинации 3dMPL, например, с QS21 и/или эмульсиями типа масло-вводе;
(6) SAF, содержащий 10% сквалана, 0,4% Твин 80(tm), 5% блок-полимера плюроника L121 и thr-MDP, либо подвергнутый микропсевдоожижению с образованием субмикронной эмульсии, либо интенсивно перемешанный с образованием эмульсии с частицами более крупного размера;
(7) систему адъюванта RIBI(tm) (RAS), (фирма Ribi Immunochem), содержащую 2% сквалена, 0,2% Твин 80 и один или несколько компонентов оболочки бактериальной клетки, выбранных из группы, включающей монофосфориллипид A (MPL), димеколат трегалозы (TDM) и скелет клеточной оболочки (CWS), предпочтительно MPL+CWS (Detox(tm)); и
(8) одну или несколько минеральных солей (такую как соль алюминия salt)+нетоксичное производное LPS (такое как 3dMPL).
В других вариантах осуществления изобретения комбинации адъювантов, применяемых в иммуно-генных комбинациях, представленных в настоящем описании, включают комбинации Th1- и Th2-адъювантов, таких как (но не ограничиваясь только ими) CpG и квасцы или резиквимод и квасцы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, вызывают как клеточно-опосредованный иммунный ответ, так и гуморальный иммунный ответ. В других вариантах осуществления изобретения иммунный ответ индуцирует длительный (например, нейтрализующий) гуморальный ответ и клеточно-опосредованный иммунитет, включающий быстрые ответы при воздействии инфекционного агента.
Два типа Т-клеток, CD4+- и CD8+-клетки, как правило, необходимы для инициации и/или усиления клеточно-опосредованного иммунитета и гуморального иммунитета. CD8+-Т-клетки могут экспрессиро-вать корецептор CD8 и их обычно обозначают как цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ). CD8+-Т-клетки обладают способностью распознавать или взаимодействовать с антигенами, которые презентуются молекулами ГКГ класса I.
CD4+-Т-клетки могут экспрессировать корецептор CD4 и их обычно обозначают как Т-клетки-хелперы. CD4+-Т-клетки обладают способностью распознавать антигенные пептиды, связанные с молекулами ГКГ класса II. При взаимодействии с молекулой ГКГ класса II CD4+-клетки могут секретировать факторы, такие как цитокины. Указанные секретированные цитокины могут активировать В-клетки, ци-тотоксические Т-клетки, макрофаги и другие клетки, которые участвуют в иммунном ответе. Т-клетки
хелперы или CD4+-клетки можно подразделять также на две функционально различные подпопуляции: ТН1-фенотип и ТН2-фенотипы, которые различаются по их цитокинам и эффекторной функции.
Активированные ТН1-клетки усиливают клеточный иммунитет (включая повышение производства антигенспецифических ЦТЛ), и поэтому играют важную роль в ответах на внутриклеточные инфекции. Активированные ТН1-клетки могут секретировать один или несколько таких факторов, как IL-2, IFN-у и TNF-p. TH1-иммунный ответ может приводить к местным воспалительным реакциям путем активации макрофагов, NK-клеток (естественных киллеров) и цитотоксических CD8+^ клеток (ЦТЛ). Действием TH1-иммунного ответа может быть также расширение иммунного ответа путем стимуляции роста В- и Т-клеток с помощью IL-12. Стимулированные ТН1 В-клетки могут секретировать IgG2a.
Актированные ТН2-клетки могут повышать производство антител и поэтому играют важную роль в ответах на внеклеточные инфекции. Активированные ТН2-клетки могут секретировать один или несколько таких факторов, как IL-4, IL-5, IL-6 и IL-10. ТН2-иммунный ответ может приводить к производству IgG1, IgE, IgA и В-клеток памяти для последующей защиты.
Усиленный иммунный ответ включает один или несколько усиленных ТН1-иммунных ответов и ТН2-иммунных ответов.
ТН1-иммунный ответ включает один или несколько следующих вариантов: повышение активности ЦТЛ, повышение активности одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с ТН1-иммунным ответом (таких как IL-2, IFN-у и TNF-P), повышение уровня активированных макрофагов, повышение активности NK или повышение производства IgG2a. Предпочтительно усиленный ХШ-иммунный ответ должен включать повышение производства IgG2a.
TH1-адъюванты можно применять для вызывания TH1-иммунного ответа. TH1-адъювант может, как правило, вызывать повышенные уровни производства IgG2a по сравнению с иммунизацией антигеном без адъюванта. TH1-адъюванты, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) препараты сапонина, виросомы и вирусоподобные частицы, нетоксичные производные энтеробактериального липополисаха-рида (LPS), иммуностимулирующие олигонуклеотиды. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуностимулирующие олигонуклеотиды, которые применяют в качестве ТН1-адъювантов в им-муногенных композициях, представленных в настоящем описании, содержат CpG-мотив.
ТН2-иммунный ответ может включать повышение уровня одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с ТН2-иммунным ответом (таких как IL-4, IL-5, IL-6 и IL-10), или увеличение производства IgG1, IgE, IgA и В-клеток памяти. Предпочтительно усиленный TH2- иммунный ответ должен включать повышение производства IgG1.
ТН2-адъюванты можно применять для вызывания ТН2- иммунного ответа. ТН2-адъюванты, как правило, должны вызывать повышенные уровни производства IgG1 по сравнению с иммунизацией антигеном без адъюванта. ТН2-адъюванты, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) содержащие минералы композиции, масляные эмульсии и АДФ-риболизирующие токсины и их детоксицированные производные. В конкретных вариантах осуществления изобретения содержащие минералы композиции, применяемые в качестве ТН2-адъювантах в иммуногенных композициях, указанных в настоящем описании, представляют собой соли алюминия.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают TH1-адъювант и ТН2-адъювант. В других вариантах осуществления изобретения указанные композиции вызывают усиленный ТН1-ответ и усиленный ТН2-ответ, например, повышение производства как IgG1, так и IgG2a по сравнению со иммунизацией без адъюванта. В следующих вариантах осуществления изобретения указанные композиции, содержащие комбинацию ТН1-адъюванта и ТН2-адъюванта, вызывают повышенный ТН1- и/или повышенный ТН2-иммунный ответ по сравнению с иммунизацией одним адъювантом (т.е. по сравнению с иммунизацией только с использованием ТН1-адъюванта или иммунизацией с использованием только ТН2-адъюванта).
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммунный ответ представляет собой только ТН1-иммунный ответ, или только ТН2-ответ, или оба эти ответа. В других вариантах осуществления изобретения иммунный ответ представляет собой только усиленный ТН1-ответ и усиленный ТН2-ответ или оба эти ответа.
В конкретных вариантах осуществления изобретения усиленный иммунный ответ представляет собой только системный иммунный ответ, или только иммунный ответ слизистой оболочки, или оба эти ответа. В других вариантах осуществления изобретения иммунный ответ представляет собой только усиленный системный иммунный ответ, или только усиленный иммунный ответ слизистой оболочки, или оба эти ответа. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммунный ответ слизистой оболочки представляет собой ТН2-иммунный ответ. В конкретных вариантах осуществления изобретения имунный ответ слизистой оболочки включает повышение производства IgA.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, применяют в качестве вакцин, при этом указанные композиции включают в имму
нологически эффективном количестве один или несколько антигенов.
Антигены, предназначанные для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, могут находиться в эффективном количестве (например, в количестве, эффективном для применения в терапевтических, профилактических или диагностических методах). Например, имму-ногенные композиции, предлагаемые в изобретении, можно применять для лечения или предупреждения инфекций, вызываемых любым из перечисленных ниже патогенов.
Антигены, предназначенные для применения в иммуногенных композициях, указанных в настоящем описании, как правило, представляют собой макромолекулы (например, полипептиды, полисахариды, полинуклеотиды), которые являются чужеродными для хозяина, и они включают (но не ограничиваясь только ими) один или несколько из представленных ниже антигенов или антигенов, полученных из одного или нескольких из перечисленных ниже патогенов.
Бактериальные антигены.
Бактериальные антигены, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) белки, полисахариды, липопо-лисахариды, полинуклеотиды везикулы наружной мембраны, которые выделены, очищены или получены из бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены включают бактериальные лизаты и инактивированные препараты бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены получают путем рекомбинантной экспрессии. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены включают эпитопы, которые экспресси-руются на поверхности бактерий в течение по меньшей мере одной стадии их жизненного цикла. Бактериальные антигены предпочтительно являются консервативными для множества серотипов. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены включают антигены, полученные из одного или нескольких указанных ниже видов бактерий, а также представляют собой специфические антигены, перечисленные ниже:
Neisseria meningitidis: антигены Neisseria meningitides включают (но не ограничиваясь только ими) белки, сахариды (включая полисахарид, олигосахарид, липоолигосахарид или липополисахарид) или везикулы наружной мембраны, очищенные или полученные из серогруппы N. meningitides, такой как А, С, W135, Y, X и/или В. В конкретных вариантах осуществления изобретения белковые антигены Neisse-ria meningitides выбирают из адгезивов, автотранспортеров, токсинов, захватывающих Fe белков и ассоциированных с мембраной белков (предпочтительно интегрального (трансмембранного) белка наружной мембраны).
Streptococcus pneumoniae: антигены Streptococcus pneumoniae включают (но не ограничиваясь только ими) сахарид (включая полисахарид или олигосахарид) и/или белок из Streptococcus pneumoniae. Са-харид может представлять собой полисахарид, который имеет размер, полученный в процессе очистки сахарида из бактерий, или он может представлять собой олигосахарид, полученный в результате фрагментации указанного полисахарида. Например, в 7-валентном продукте PREVNAR(tm) 6 сахар идов присутствуют в виде интактных полисахаридов, а один (серотип 18С) присутствует в виде олигосахарида. В конкретных вариантах осуществления изобретения сахаридные антигены выбирают из одного или нескольких следующих пневмококковых серотипов: 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F. Иммуногенная композиция может включать несколько серотипов, например 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, или большее количество серотипов. В данной области уже известны 7-валентные, 9-валентные, 10-валентные, 11-валентные и 13-валентные конъюгированные комбинации, а кроме того, известна 23-валентная неконъю-гированная комбинация. Например, 10-валентная комбинация может включать сахарид из серотипов 1, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19F и 23F. 11-валентная комбинация может включать также сахарид из серотипа 3. 12-валентную комбинацию можно добавлять в смесь 10-валентных: серотипы 6А и 19А; 6А и 22F; 19А и 22F; 6А и 15В; 19А и 15В; 22F и 15В; 13-валентную комбинацию можно добавлять к смеси 11-валентных: серотипы 19А и 22F; 8 и 12F; 8 и 15В; 8 и 19А; 8 и 22F; 12F и 15В; 12F и 19А; 12F и 22F; 15В и 19А; 15В и 22F и т.д. В конкретных вариантах осуществления изобретения белковые антигены можно выбирать из белка, идентифицированного в WO 98/18931, WO 98/18930, US 6699703, US 6800744, WO 97/43303, WO 97/37026, WO 02/079241, WO 02/34773, WO 00/06737, WO 00/06738, WO 00/58475, WO 2003/082183, WO 00/37105, WO 02/22167, WO 02/22168, WO 2003/104272, WO 02/08426, WO 01/12219, WO 99/53940, WO 01/81380, WO 2004/092209, WO 00/76540, WO 2007/116322, у LeMieux и др., Infect. Imm., 74, 2006, c. 2453-2456, Hoskins и др., J. Bacteriol., 183, 2001, c. 5709-5717, Adamou и др., Infect. Im-mun., 69(2), 2001, c. 949-958, Briles и др., J. Infect. Dis., 182, 2000, c. 1694-1701, Talkington и др., Microb. Pathog., 21(1), 1996, c. 17-22, Bethe и др., FEMS Microbiol. Lett., 205(1), 2001, c. 99-104, Brown и др., Infect. Immun., 69, 2001, c. 6702-6706, Whalen и др., FEMS Immunol. Med. Microbiol., 43, 2005, c. 73-80, Jomaa и др., Vaccine, 24(24), 2006, c. 5133-5139. В других вариантах осуществления изобретения белки Streptococcus pneumoniae можно выбирать из семейства белков полигистидиновой триады (PhtX), холин-связывающих белков (CbpX), укороченных белков CbpX, семейства LytX, укороченных белков LytX, химерных белков укороченный белок CbpX-укороченный белок LytX, пневмолизина (Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125, Sp133, субъединиц Pneumococcal pilus.
Streptococcus pyogenes (стрептококк группы А): антигены стрептококка группы А включают (но не ограничиваясь только ими) белок, описанный в WO 02/34771 или WO 2005/032582 (включая GAS 40), слияния фрагментов белков GAS М (включая слияния, описанные в WO 02/094851 и Dale, Vaccine, 17, 1999, c. 193-200 и Dale, Vaccine 14(10), c. 944-948), фибронектинсвязывающий белок (Sfb1), стрептококковый гемассоциированный белок (Shp) и стрептолизин S (SagA).
Moraxella catarrhalis: антигены Moraxella catarrhalis включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, описанные в WO 02/18595 и WO 99/58562, белковые антигены наружной мембраны (HMW-OMP), С-антиген и/или LPS.
Bordetella pertussis: коклюшные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) коклюшный голотоксин (РТ) и волокнистый гемагглютинин (FHA) В.pertussis, необязательно также в сочетании с антигенами пертактина и/или агглютиногенов 2 и 3.
Burkholderia: антигены Burkholderia включают (но не ограничиваясь только ими) Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei и Burkholderia cepacia.
Staphylococcus aureus: антигены S. aureus включают (но не ограничиваясь только ими) полисахарид и/или белок из S. aureus, полисахариды S. aureus включают (но не ограничиваясь только ими) капсульные полисахариды типа 5 и типа 8 (СР5 и СР8), необязательно конъюгированные с нетоксичным рекомби-нантным экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa, такие как StaphVAXTM, полисахаридов типа 36 (336PS), полисахарид внутриклеточной адгезии (PIA, также известный как PNAG). Белки S. aureus включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из поверхностных белков, инвазинов (лейкоцидин, киназы, гиалуронидаза), поверхностных факторов, которые ингибируют фагоцитарное поглощение (капсула, белок А), каротиноидов, белков, участвующих в производстве каталазы, белка А, коагулазы, фактора свертывания и/или повреждающих мембрану токсинов (необязательно детоксициро-ванных), которые лизируют мембраны эукариотических клеток (гемолизины, лейкотоксин, лейкоцидин). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены S. aureus можно выбирать из белков, указанных в WO 02/094868, WO 2008/019162, WO 02/059148, WO 02/102829, WO 03/011899, WO 2005/079315, WO 02/077183, WO 99/27109, WO 01/70955, WO 00/12689, WO 00/12131, WO 2006/032475, WO 2006/032472, WO 2006/032500, WO 2007/113222, WO 2007/113223, WO 2007/113224. В других вариантах осуществления изобретения антигены S. aureus можно выбирать из IsdA, IsdB, IsdC, SdrC, SdrD,
SdrE, CIfA, CIfB, SasF, SasD, SasH (AdsA), Spa, EsaC, EsxA, EsxB, Emp, HIaH35L, CP5, CP8, PNAG, 336PS.
Staphylococcus epidermis: антигены S. epidermidis включают (но не ограничиваясь только ими) ассоциированный со слизью антиген (SAA).
Clostridium tetani (столбняк): антигены столбняка включают (но не ограничиваясь только ими) столбнячный токсоид (ТТ).
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные антигены применяют в качестве белка-носителя в сочетании с/конъюгированного с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании.
Clostridium perfringens: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) эпсилон-токсин из Clostridium perfringen.
Clostridium botulinums (ботулизм): антигены ботулизма включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из С. botulinum.
Cornynebacterium diphtheriae (дифтерия): дифтерийные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) дифтерийный токсин, предпочтительно детоксицированный, такой как CRM197. Дополнительные антигены, которые обладают способностью модулировать, ингибировать АДФ-рибозилирование или связанные с ним, можно применять в комбинации/для совместного введения/конъюгации с иммуно-генными композициями, представленными в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления изобретения дифтерийные токсоиды применяют в качестве белков-носителей.
Haemophilus influenzae В (Hib): антигены Hib включают (но не ограничиваясь только ими) сахарид-ный антиген Hib.
Pseudomonas aeruginosa: антигены Pseudomonas включают (но не ограничиваясь только ими) эндотоксин А, белок Wzz, LPS P. aeruginosa, LPS, выделенный из PAO1 (серотип 05) и/или белки наружной мембраны, включая белки F наружной мембраны (OprF).
Legionella pneumophila: бактерильные антигены, полученные из Legionella pneumophila.
Coxiella burnetii: бактериальные антигены, полученные из Coxiella burnetii. Brucella. Бактериальные антигены, полученные из Brucella, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены В. abortus, В. canis, В. melitensis, В. neotomae, В. ovis, В. suis и В. pinnipediae.
Francisella: бактериальные антигены, полученные из Francisella, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены из F. novicida, F. philomiragia и F. tularensis.
Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В): антигены стрептококка группы В включают (но не ограничиваясь только ими) белковые или сахаридные антигены, описанные в WO 02/34771, WO 03/093306, WO 04/041157 или WO 2005/002619 (включая белки GBS 80, GBS 104, GBS 276 и GBS 322 и включая сахаридные антигены, полученные из серотипов Ia, Ib, Ia/c, II, III, IV, V, VI, VII и VIII).
Neiserria gonorrhoeae: гонорейные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) белок Por (или порин), такой как PorB (см. Zhu и др., Vaccine, 22, 2004, c. 660-669), трансферринсвязывающий белок, такой как TbpA и TbpB (см. Price и др., Infection and Immunity, 71(1), 2004, c. 277-283), обусловливающий мутность белок (такой как Ора), модифицируемый восстановлением белок (Rmp) и препараты везикул наружной мембраны (OMV) (см. Plante и др., J Infectious Disease, 182, 2000, c. 848-855), см., например, также WO 99/24578, WO 99/36544, WO 99/57280, WO 02/079243).
Chlamydia trachomatis: антигены Chlamydia trachomatis включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из серотипов А, В, Ва и С (агенты, вызывающие трахому, которая является причиной слепоты), серотипов L1, L2 и L3 (ассоциированы с венерической лимфогранулемой) и серотипов D-K. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены Chlamydia trachomatis включают (но не ограничиваясь только ими) антиген, описанный в WO 00/37494, WO 03/049762, WO 03/068811 или WO 05/002619, включая РерА (CT045), LcrE (CT089), ArtJ (CT381), DnaK (CT396), CT398, OmpH-подобный (CT242), L7/L12 (СТ316), OmcA (CT444), AtosS (CT467), CT547, Eno (CT587), HrtA (CT823) и MurG
(CT761)
Treponema pallidum (сифилис): сифилитические антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антиген TmpA.
Haemophilus ducreyi (возбудитель мягкого шанкра): антигены Haemophilus ducreyi включают (но не ограничиваясь только ими) белок наружной мембраны (DsrA).
Enterococcus faecalis или Enterococcus faecium: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) трисахаридный повтор или другие полученные из Enterococcus антигены.
Helicobacter pylori: антигены Н. pylori включают (но не ограничиваясь только ими) Cag, Vac, Nap, HopX, HopY и/или уреазный антиген.
Staphylococcus saprophyticus: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) гемагглютинин массой 160 кДа антигена S. saprophyticus.
Yersinia enterocolitica: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) LPS.
Е. coli: антигены Е. coli можно получать из энтеротоксигенной E.coli (ЕТЕС), энтероагрегативной E.coli (EAggEC), диффузно прикрепляющейся E.coli (DAEC), энтеропатогенной E.coli (EPEC) и/или эн-терогеморрагической E.coli (EHEC). Антигены ЕхРЕС включают (но не ограничиваясь только ими) вспомогательный фактор колонизации (orf3526), orf353, белок бактериального Ig-подобного домена (группа 1) (orf405), orf1364, относящийся в семейству NodT фактор наружной мембраны - транспортер оттока липопротеина (orf1767), gspK (orf3515), gspJ (orf3516), tonB-зависимый сидерофорный рецептор (orf3597), фимбриальный белок (orf3613), upec-948, upec-1232, А-цепь предшественника типа-1 фимбри-ального белка (upec-1875), гомолог yap H (upec-2820) и гемолизин А (recp-3768).
Bacillus anthracis (сибирская язва): антигены В. anthracis включают (но не ограничиваясь только ими) А-компоненты (летальный фактор (LF) и фактор отека (EF)), каждый из которых может содержать общий В-компонент, известный как протективный антиген (РА). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены В. anthracis необязательно детоксицируют.
Yersinia pestis (чума): чумные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) капсульный антиген F1, LPS, антиген V Yersinia pestis.
Mycobacterium tuberculosis: туберкулезные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) липопротеины, LPS, антигены БЦЖ, слитый белок антигена 85В (Ag85B), ESAT-6, необязательно включенные в состав катионных липидных везикул, антигены, ассоциированные с изоцитратдегидрогеназой Mycobacterium tuberculosis (Mtb) и антигены МРТ51.
Rickettsia: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) белки наружной мембраны, включая белок А и/или В наружной мембраны (OmpB), LPS и поверхностный белковый антиген (SPA).
Listeria monocytogenes: бактериальные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из Listeria monocytogenes.
Chlamydia pneumoniae: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, указанные
в WO 02/02606.
Vibrio cholerae: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) протеиназные антигены, LPS, прежде всего липополисахариды Vibrio cholerae II, Ol Inaba О-специфические полисахариды, V. cholera 0139, антиген вакцины IEM108 и токсин Zonula occludens (Zot).
Salmonella typhi (брюшной тиф): антигены включают (но не ограничиваясь только ими) капсуляр-ные полисахариды, предпочтительно конъюгаты (Vi, т.е. vax-TyVi).
Borrelia burgdorferi (болезнь Лайма): антигены включают (но не ограничиваясь только ими) липо-протеины (такие как OspA, OspB, OspC и OspD), другие поверхностные белки, такие как OspE-связанные белки (Erps), декоринсвязывающие белки (такие как DbpA), антигенно вариабельные белки VI, такие как антигены, ассоциированные с Р39 и Р13 (интегральный мембранный белок, антигенный вариационный белок VlsE).
Porphyromonas gingivalis: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) белок наружной мембраны (ОМР) P. gingivalis.
Klebsiella: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) ОМР, включая ОМР А, или поли
сахарид, необязательно конъюгированный с токсоидом столбняка.
Другие бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) капсульные антигены, полисахарид-ные антигены, белковые антигены или полинуклеотидные антигены любой из указанных выше бактерий. Другие бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) препарат везикул наружной мембраны (OMV). Кроме того, другие бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) живые, ослабленные и/или очищенные версии любой их вышеуказанных бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают антигены, полученные из грамотрицательных, а в других вариантах осуществления изобретения их получают из грамположительных бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, получают из аэробных бактерий, а в других вариантах осуществления изобретения их получают из анаэробных бактерий.
В конкретных вариантах осуществления изобретения любые вышеуказанные полученные из бактерий сахариды (полисахариды, LPS (липополисахарид), LOS (липоолигосахарид) или олигосахариды) конъюгируют с другим агентом или антигеном, таким как белок-носитель (например, CRM197). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные конъюгаты представляют собой непосредственно связанные конъюгаты, полученные путем восстановительного аминирования карбонильных фрагментов сахарида с образованием аминогрупп белка. В других вариантах осуществления изобретения са-хариды конъюгируют через линкер, такой как сукцинамидный или другие линкеры, описанные в Biocon-jugate Techniques, 1996 и CRC, Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking, 1993.
В конкретных вариантах осуществления изобретения пригодные для применения с целью лечения или предупреждения вызываемой Neisseria инфекции и родственных заболеваний и нарушений рекомби-нантные белки из N. meningitides, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, могут представлять собой белки, упомянутые в WO 99/24578, WO 99/36544, WO 99/57280, WO 00/22430, WO 96/29412, WO 01/64920, WO 03/020756, WO 2004/048404 и WO 2004/032958. Указанные антигены можно применять индивидуально или в комбинациях. Если объединяют несколько очищенных белков, то целесообразно применять смесь из 10 или меньшего количества (например, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2) очищенных антигенов.
Наиболее пригодная комбинация антигенов для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, указана у Giuliani и др., Proc Natl Acad Sci USA, 103(29), 2006, c. 10834-10839 и в WO 2004/032958, и такая иммуногенная композиция может включать 1, 2, 3, 4 или 5 следующих компонентов: (1) белок "NadA" (известный также как GNA1994 и NMB1994); (2) белок "fHBP" (известный также как "741", LP2086, GNA1870 и NMB1870); (3) белок "936" (известный также как GNA2091 и NMB2091); (4) белок "953" (известный также как GNA1030 и NMB1030); и (5) белок "287" (известный также как GNA2132 и NMB2132). Другие возможные комбинации антигенов могут содержать трансферринсвязывающий белок (например, TbpA и/или TbpB) и антиген Hsf. Другие возможные очищенные антигены, предназначенные для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают белки, которые содержат одну из следующих аминокислотных последовательностей: SEQ ID NO: 650 из WO 99/24578; SEQ ID NO: 878 из WO 99/24578; SEQ ID NO: 884 из
WO 99/24578; SEQ ID NO: 4 из WO 99/36544; SEQ ID NO: 598 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 818 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 864 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 866 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1196 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1272 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1274 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1640 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1788 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2288 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2466 из WO
99/57280; SEQ ID NO: 2554 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2576 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2606 из WO
99/57280; SEQ ID NO: 2608 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2616 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2668 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2780 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2932 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2958 из WO
99/57280; SEQ ID NO: 2970 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2988 из WO 99/57280 (каждая из вышеуказанных аминокислотных последовательностей включена в настоящее описании путем включения в качестве ссылки процитированного документа), или полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая: (а) идентична на 50% или более (например, на 60, 70, 80, 90, 95, 99% или более) указанным последовательностям; и/или (б) содержащий фрагмент, который состоит по меньшей мере из n последовательных аминокислот из указанных последовательностей, где n обозначает 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1 50, 200, 250 или более). Предпочтительные фрагменты, указанные в подпункте (б), содержат эпитоп из соответствующей последовательности. В иммуногенные композиции можно включать более одного (например, 2, 3, 4, 5, 6) из этих полипептидов.
Антиген fHBP характеризуется наличием трех различных вариантов (WO 2004/048404). В вакцине, включающей серогруппу N. meningitides, основой которой являются иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, в которых используется одно из соединений, представленных в на
стоящем описании, может входить один вариант fHBP, но могут входить также fHBP из каждого из двух или всех трех вариантов. Таким образом, иммуногенные композиции могут включать комбинации из двух или трех различных очищенных fHBP, выбранных из: (а) первого белка, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на a% последовательности SEQ ID NO: 1, и/или который содержит аминокислотную последовательность, состоящую из фрагмента, который содержит по меньшей мере х смежных аминокислот из SEQ ID NO: 1; (б) второго белка, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на b% последовательности SEQ ID NO: 2, и/или который содержит аминокислотную последовательность, состоящую из фрагмента, который содержит по меньшей мере у смежных аминокислот из SEQ ID NO: 2; и/или (в) третьего белка, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на с% последовательности SEQ ID NO: 3, и/или который содержит аминокислотную последовательность, состоящую из фрагмента, который содержит по меньшей мере z смежных аминокислот из SEQ ID NO: 3.
SEP ID NO: 1
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGN GDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQI QDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLT YTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAAD1KPDGK.RHAVISGSVLYNQAEKGS YSLGIFGGKAQEVAGSAEVKrVNGIRHIGLAAKQ SEQ ID NO: 2
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGN GDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKI NNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYT IDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYH LALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ SEP ID NO: 3
VAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGD KDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEK
INNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHY
SIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTY
HLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ.
Значение а составляет по меньшей мере 85, например, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 или более. Значение b составляет по меньшей мере 85, например, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 или более. Значение с составляет по меньшей мере 85, например, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99, 5 или более. Значения a, b и с не зависят друг от друга.
Значение x составляет по меньшей мере 7, например, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Значение y составляет по меньшей мере 7, например, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Значение z составляет по меньшей мере 7, например, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Значения х, y и z не зависят друг от друга.
В некоторых вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать белок(и) fHB, который(е) является(ются) липидированным(и), например, на N-концевом остатке цистеина. В других вариантах осуществления изобретения они могут не быть липидированными.
Предпочтительная иммуногенная композиция, представленная в настоящем описании, включает очищенные белки, которые содержат смесь следующих компонентов: (I) первый полипептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; (II) второй полипептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и (III) третий полипептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 (см. Giuliani и др., Proc Natl Acad Sci USA, 103(29), 2006, c. 10834-10839 и в WO 2004/032958). Предпочтительная иммуногенная композиция, представленная в настоящем описании, включает очищенные белки, которые содержат смесь следующих компонентов: (I) первый полипептид, аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере на a% последовательности SEQ ID NO: 4; (II) второй полипептид, аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере на b% последовательности SEQ ID NO: 5; и (III) третий полипептид, аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере на а% последовательности SEQ ID NO: 6.
SEP Ш NO: 4
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSPGQGAPSAQGGPDMAA VSEENTGNGGAAATDKPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGN MENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQAE NNQTAGSpNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLTHCKGDSCS GNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGI NQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSG NIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPSKGEMLAGTAVYNGEVLHFHT ENGRPSPSRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGDGLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTW TENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKEQDGSGGGG ATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKJDITIPVAN LQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTA PVKLKAEKFNCYQSPMAKTEVCGGDFSTTIDRTKWGVDYLVNVGMTKSVRIDI PIEAAKQ
SEQ ID NO: 5
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGY
TPQISVVGYNRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTA
GDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATQARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQAQITQK
VSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL
TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQ
LITLESGEFQV YKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFD
KLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAA
ADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHI
GLAAKQ
SEP ID NO: 6
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAADV EADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAAL ADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFN DIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAA GTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRI DGLNATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAALS GLFQPYNVG.
Бактериальные антигены из везикул.
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать другие везикулы наружной мембраны. Указанные везикулы наружной мембраны можно получать из широкого разнообразия патогенных бактерий и применять их в качестве антигенных компонентов иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании. Везикулы, предназначенные для применения в качестве антигенных компонентов указанных иммуногенных композиций, включают любую протеолипо-сомную везикулу, полученную в результате разрушения наружной мембраны бактерий с образованием из нее везикул, которые включают белковые компоненты наружной мембраны. Таким образом, понятие OMV (иногда применяют понятие "пузырьки") относится к микровезикулам (MV, см., например, WO 02/09643) и "нативным OMV" ("NOMV", см. например, Katial и др., Infect Immun. 70, 2002, c. 702-707). Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, которые включают везикулы из одной или нескольких патогенных бактерий, можно применять для лечению или предупреждния инфекций, вызываемых указанными патогенными бактериями, и родственных заболеваний и нарушений.
MV и NOMV представляют собой встречающиеся в естественных условиях мембранные везикулы, которые спонтанно образуются в процессе роста бактерий и высвобождаются в культуральную среду. MV можно получать путем культивирования бактерий, таких как Neisseria, в культуральном бульоне, отделения целых клеток от более мелких MV в культуральном бульоне (например, путем фильтрации или низкоскоростного центрифугирования для получения дебриса клеток, но не более мелких везикул), и последующего сбора MV из истощенной клеточной среды (например, с помощью фильтрации, путем дифференцированного осаждения или агрегации MV, с помощью высокоскоростного центрифугирования с получением дебриса MV). Предназначенные для получения MV штаммы, как правило, можно отбирать на основе количества MV, получаемых в культуре (см., например, в US 6180111 и WO 01/34642 описание штаммов Neisseria, отличающихся высокой производительностью MV).
OMV получают искусственно из бактерий и их можно получать путем обработки детергентом (например, дооксихолатом) или без использования обработки детергентом (см. например, WO 04/019977). Методы получения приемлемых препаратов OMV хорошо известны в данной области. Методики получения OMV включают обработку бактерий детергентом на основе солей желчных кислот (например, солей литохолевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой, холевой кислоты, урсохолевой кислоты и т.д., при этом дезоксихолат натрия (ЕР 0011243 и Fredriksen и др., NIPH Ann., 14(2), 1991, c. 67-80) является предпочтительным для лечения вызываемой Neisseria инфекции) при значении рН достаточно высоком, чтобы не вызывать осаждение детергента (см., например, WO 01/91788). Другие методики можно осуществлять практически в отсутствии детергента (см, например, WO 04/019977) с помощью таких методов, как облучение ультразвуком, гомогенизация, микропсев-доожижение, кавитация, осмотический шок, измельчение, применение Френч-пресса, смешение и т.д. Методы, в которых не применяют детергент или применяют незначительное количество детергента, могут сохранять возможность применения антигенов, таких как NspA в OMV Neisserials. В указанном методе можно применять буфер для экстракции OMV, содержащий дезоксихолат в количестве, составляю
щем примерно 0,5% или менее, например примерно 0,2%, примерно 0,1%, <0,05%, или не содержащий дезоксихолат.
Приемлемый процесс получения OMV описан в WO 05/004908 и предусматривают ультрафильтрацию неочищенных OMV вместо высокоскоростного центрифугирования. Процесс может включать стадию ультрацентрифугирования после осуществления ультрафильтрации.
Для применения их согласно изобретению везикулы можно получать из любого патогенного штамма, например Neisseria minigtidis. Везикулы из Neisserial meningitidis серогруппы В можно получать из любого серотипа (например, 1, 2а, 2b, 4, 14, 15, 16 и т.д.), любого серосубтипа и любого иммунотипа (например, L1; L2; L3; L3,3,7; L10 и т.д.). Менингококки могут иметь происхождение из любой приемлемой линии дифференцировки, включая гиперинвазивные и гипервирулентные линии, например из следующих семи гипервирулентных линий: подгруппа I; подгруппа III; подгруппа IV 1; комплекс ЕТ 5; комплекс ЕТ 37; кластер А4; линия 3. Эти линии выявляли с помощью многолокусного электрофореза ферментов (MLEE), но для классификации менингококков можно применять также многолокусное типиро-вание последовательностей (MLST), например комплекс ЕТ 37 представляет собой комплекс ST 11 по данным MLST, комплекс ЕТ 5 представляет собой ST-32 (ЕТ-5), линия 3 представляет собой ST 41/44 и т.д. Везикулы можно получать из штаммов, имеющих один из следующих субтипов: Р1.2; P1.2,5; P1.4; Р1.5; P1.5,2; P1.5,c; P1.5c,10; P1.7,16; P1.7,16b; P1.7h,4; P1.9; P1.15; P1.9,15; P1.12,13; P1.13; P1.14;
P1.21,16; P1.22,14.
Везикулы, которые включают в иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно получать из патогенных штаммов дикого типа, например штаммов N. meningitides, или му-тантных штаммов. Например, в WO 98/56901 описаны препараты везикул, полученные из N.meningitidis с модифицированным геном fur. В WO 02/09746 описано, что экспрессию nspA можно подвергать повышающей регуляции с помощью "выключения" сопутствующего гена porA и гена cps. Другие несущие "выключенные" гены мутанты N.meningitides, пригодные для получения OMV, описаны в WO 02/0974, WO 02/062378 и WO 04/014417. В WO 06/081259 описаны везикулы, в которых происходит повышающая регуляция fHBP. У Claassen и др., 14(10), 1996, c. 1001-1008 описана конструкция везикул из штаммов, мдифицированных таким образом, что они экспрессируют шесть различных субтипов PorA. Можно применять также мутант Neisseria с низкими уровнями эндотоксина, полученный в результате "выключения" ферментов, которые участвуют в биосинтезе LPS (см., например, WO 99/10497 и Steeghs и др., 20, 2001, c. 6937-6945). Согласно изобретению можно применять все указанные или другие мутанты.
Таким образом, штаммы N. meningitidis серогруппы В, которые включают в иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут в некоторых вариантах осуществления изобретения экспрессировать более одного субтипа PorA. Ранее были сконструированы шестивалентные и девятивалентные штаммы PorA. Штамм может экспрессировать 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 субтипов PorA: P1.7,16; P1.5-1,2-2; P1.19,15-1; P1.5-2,10; P1.12 1,13; P1.7-2,4; P1.22,14; P1.7-1,1 и/или P1.18-1,3,6. В других вариантах осуществления изобретения штамм может отличаться отрицательной регуляцией экспрессии PorA, например нем количество PorA может быть снижено по меньшей мере на 20% (например, > 30, > 40, > 50, > 60, > 70, > 80, > 90, > 95% и т.д.), или даже полностью отсутствовать по сравнению с уровнями в штаммах дикого типа (например, относительно штамма Н44/76, описанного в WO 03/105890).
В некоторых вариантах осуществления изобретения в штаммах N. meningitidis серогруппы В может иметь место сверхэкспрессия (по сравнению с соответствующим штаммом дикого типа) конкретных белков. Например, в штаммах может происходить сверхэкспрессия NspA, белка 287 (который обозначают также как NMB2132 и GNA2132, WO 01/52885), одного или нескольких fHBP (который обозначают также как белок 741, NMB1870 и GNA1870, WO 06/081259 и публикация патента США 2008/0248065), TbpA и/или TbpB (WO 00/25811), Cu,Zn-супероксиддисмутазы (WO 00/25811) и т.д.
В некоторых вариантах осуществления изобретения штаммы N. meningitidiss серогруппы В могут иметь одну или несколько приводящих к "выключению" гена и/или приводящих к сверхэкспрессии мутаций. Предпочтительными генами для понижающей регуляции и/или "выключения" являются: (a) Cps,
CtrA, CtrB, CtrC, CtrD, FrpB, GalE, HtrB/MsbB, LbpA, LbpB, LpxK, Opa, Opc, PilC, PorB, SiaA, SiaB, SiaC,
SiaD, TbpA и/или TbpB (WO 01/09350); (б) CtrA, CtrB, CtrC, CtrD, FrpB, GalE, HtrB/MsbB, LbpA, LbpB,
LpxK, Opa, Opc, PhoP, PilC, PmrE, PmrF, SiaA, SiaB, SiaC, SiaD, TbpA и/или TbpB (WO 02/09746); (в) ExbB, ExbD, rmpM, CtrA, CtrB, CtrD, GalE, LbpA, LpbB, Opa, Opc, PilC, PorB, SiaA, SiaB, SiaC, SiaD, TbpA и/или TbpB (WO 02/062378); и (г) CtrA, CtrB, CtrD, FrpB, OpA, OpC, PilC, PorB, SiaD, SynA, SynB и/или SynC (WO 04/014417).
Если применяют мутантный штамм, то в некоторых вариантах осуществления изобретения он может иметь одну или несколько или все следующие характеристики: (I) понижающая регуляция или "выключение" LgtB и/или GalE, что приводит к укороченной форме LOS менингококка; (II) повышающая регуляция TbpA; (III) повышающая регуляция Hsf; (IV) повышающая регуляция Omp85; (V) повышающая регуляция LbpA; (VI) повышающая регуляция NspA; (VII) "выключение" PorA; (VIII) понижающая регуляция FrpB; (IX) понижающая регуляция или "выключение" Ора; (X) понижающая регуляция или "выключение" Орс; (XI) делеция комплекса гена cps. Укороченная форма LOS может представлять собой форму, в которой отсутствует эпитоп сиалиллакто-^неотетраозы, например, может представлять собой
LOS с дефицитом галактозы. LOS может не иметь а-цепи.
Если LOS присутствует в везикуле, то можно обрабатывать везикулу таким образом, что связывать ее LOS и белковые компоненты ("внутрипуз^1рьковый" конъюгат (WO 04/014417)).
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать смеси из различных штаммов. Например, в WO 03/105890 описана вакцина, содержащая многовалентные везикулярные композиции из менингококков, которые содержат первую везикулу, полученную из штамма менингококка с серосубтипом, превалирующим в стране применения, и вторую везикулу, полученную из штамма, который не должен иметь серосубтип, использование которого в стране применения предотвращается. В WO 06/024946 описаны пригодные комбинации различных везикул. Комбинацию везикулы из штаммов, каждый из которых имеет иммунотипы L2 и L3, можно применять в некоторых вариантах осуществления изобретения.
Антигены, основой которых являются везикулы, можно получать из серогрупп N. meningitides, отличных от серогруппы В (например, в WO 01/91788 описан процесс для серогруппы А). Таким образом, иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать везикулы, полученные из серогрупп, отличных от В (например А, С, W135 и/или Y) и из бактериальных патогенов, отличных от Neisseria.
Вирусные антигены.
Вирусные антигены, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) инактивированный (или убитый) вирус, ослабленный вирус, сплит-формы (формы на основе расщепленного вируса), формы на основе очищенной субъединицы, вирусные белки, которые можно выделять, очищать или получать из вируса, вирусоподобные частицы (ВПЧ) и полинуклеотидные антигены, которые можно выщелять, очищать или получать из вируса или синтезировать с помощью методов рекомбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные антигены получают из вирусов, выращенных на клеточной культуре или на другом субстрате. В других вариантах осуществления изобретения вирусные антигены рекомбинант-но экспрессируют. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные антигены предпочтительно включают эпитопы, находящиеся на поверхности вируса в процессе по меньшей мере одной стадии его жизненного цикла. Вирусные антигены предпочтительно являются консервативными для множества серотипов или изолятов. Вирусные антигены, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из одного или нескольких указанных ниже вирусов, а также представлять собой конкретные антигены, примеры которых приведены ниже.
Ортомиксовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортомикосвируса, такого как вирус гриппа А, В и С. В конкретных вариантах осуществления изобретения ортомиксовирусные антигены выбраны из одного или нескольких вирусных белков, таких как гемагглютинин (НА), нейраминидаза (NA), нуклеопротеин (NP), матриксный белок (M1), мембранный белок (М2), один или несколько компонентов траскриптазы (РВ1, РВ2 и РА). В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусный антиген включает НА и NA. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены вируса гриппа получают из межпандемических (ежегодных) штаммов вируса гриппа, а в других вариантах осуществления изобретения антигены вируса гриппа получают из штаммов, обладающих потенциалом в отношении вызывания пандемической вспышки (т.е. штаммов вируса гриппа с новым гемагглютинином по сравнению с гемагглютинином в штаммах, циркулирующих в настоящее время, или штаммов вируса гриппа, патогенных для птиц и обладающих потенциалом для горизонтальной передачи в человеческой популяции, или штаммов вируса гриппа, патогенных для человека.
Вирусы сем. Paramyxoviridae: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из вирусов сем. Paramyxoviridae, таких как пневмовирусы (RSV), парамиксовирусы (PIV), метапневмовирусы и морбилливирусы (возбудитель кори).
Пневмовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из пневмовируса, такого как респираторно-синцитиальный вирус (RSV), респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота, вирус мышиной пневмонии и вирус ринотрахеита индеек. Предпочтительно пневмовирус представляет собой RSV. В конкретных вариантах осуществления изобретения пневмовирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков, включая слитые поверхностные белки (F), гликопротеин (G) и малый гидрофобный белок (SH), матриксные белки М и М2, нуклеокапсидные белки N, Р и L и неструктурные белки NS1 и NS2. В других вариантах осуществления изобретения пневмовирусные антигены включают F, G и М. В конкретных вариантах осуществления изобретения пневмовирусные антигены также включают в препаративную форму или получают из химерных вирусов, таких как (но не ограничиваясь только ими) химерные вирусы RSV/PIV, которые содержат компоненты как RSV, так и PIV.
Парамиксовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из парамиксовируса, такого как вирус парагриппа типов 1-4 (PIV), вирус эпидемического паротита, вирус Седаи, обезьяний вирус-5, вирус парагриппа крупного рогатого скота, вирус Нипах, генипави
рус и вирус ньюкаслской болезни. В конкретных вариантах осуществления изобретения парамиксовирус представляет собой PIV или вирус эпидемического паротита. В конкретных вариантах осуществления изобретения парамиксовирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков: ге-магглютинин-нейраминидаза (HN), слитые белки F1 и F2, нуклеопротеин (NP), фосфопротеин (Р), большой белок (L) и матриксный белок (М). В других вариантах осуществления изобретения парамиксови-русные белки включают HN, F1 и F2. В конкретных вариантах осуществления изобретения парамиксо-вирусные антигены также включают в препаративную форму или получают из химерных вирусов, таких как (но не ограничиваясь только ими) химерные вирусы RSV/PIV, которые содержат компоненты как RSV, так и PIV. Поступающие в продажу вакцины против эпидемического паротита содержат живой ослабленный вирус эпидемического паротита либо в моновалентной форме, либо в сочетании с вакцинами против кори и краснухи (MMR). В других вариантах осуществления изобретения парамиксовирус представляет собой вирус Нипах или генипавирус и антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков: слитый белок (F), гликопротеин (G), матриксный белок (М), нуклеокапсид (N), большой белок (L) и фосфопротеин (Р).
Вирусы сем. Poxviridae: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортопоксвируса, такого как вирус натуральной оспы Variola vera, включая (но не ограничиваясь только ими) Variola major и Variola minor.
Метапневмовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) метапневмови-рус, такой как человеческий метапневмовирус (hMPV) и птичий метапневмовирусе (aMPV). В конкретных вариантах осуществления изобретения метапневмовирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков, таких как: поверхностные слитые белки (F), гликопротеин (G) и малый гидрофобный белок (SH), матриксные белки М и М2, нуклеокапсидные белки N, Р и L. В других вариантах осуществления изобретения метапневмовирусные антигены включают F, G и М. В конкретных вариантах осуществления изобретения метапневмовирусные антигены также включают в препаративные формы или получают из химерных вирусов.
Морбилливирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из морбилливируса, такого как вирус кори. В конкретных вариантах осуществления изобретения морбилливирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков: гемагглютинин (Н), гликопротеин (G), фактор слияния (F), большой белок (L), нуклеопротеин (NP), полимеразный фос-форопротеин (Р) и матриксный белок (М). Поступающие в продажу вакцины против кори включают живой ослабленный вирус кори, как правило, в сочетании с вирусами эпидемического паротита и краснухи
(MMR).
Пикорновирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из пикорновирусов, таких как энтеровирусы, риновирусы, гепарнавирусы, кардиовирусы и афто-вирусы. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из энтеровирусов, а в других вариантах осуществления изобретения энтеровирус представляет собой полиовирус. В следующих вариантах осуществления изобретения антигены получают из риновирусов. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Энтеровирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из энтеровируса, такого как полиовирус типов 1,2 или 3, вирус Коксаки типов 1-22 и 24, вирус Кок-саки В типов 1-6, эховирус (ЕСНО-вирус) типов 1-9, 11-27 и 29-34 и энтеровирус 68-71. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из энтеровирусов, а в других вариантах осуществления изобретения энтеровирус представляет собой полиовирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения энтеровирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих капсид-ных белков VP0, VP1, VP2, VP3 и VP4. Поступающие в продажу полиовакцины включают инактивиро-ванную полиовакцину (IPV) и оральную полиовирусную вакцину (OPV). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц.
Буньявирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортобуньявируса, такого как вирус Калифорнийского энцефалита, флебовируса, такого как вирус лихорадки Рифт-Валли, или найровируса, такого как вирус геморрагической лихорадки Крым-Конго.
Риновирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из риновируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения риновирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих капсидных белков: VP0, VP1, VP2, VP2 и VP4. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц.
Гепарнавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из гепарнавируса, такого как (но не ограничиваясь только ими) вирус гепатита A (HAV). Поступающие в продажу вакцины против HAV включают вакцину на основе инактивированного вируса HAV.
Тогавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из тогавируса, такого как рубивирус, альфавирус или артеривирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из рубивируса, такого, например, как вирус краснухи. В конкретных вариантах осуществления изобретения тогавирусные антигены выбирают из Е1, Е2, Е3, С, NSP-1, NSPO-2, NSP-3 или NSP-4. В конкретных вариантах осуществления изобретения тогавирусные антигены выби
рают из E1, E2 или Е3. Поступающие в продажу вакцины против краснухи включают живой прошедший холодовую адаптацию вирус, как правило, в сочетании с вакцинами против эпидемического паротита и кори (MMR).
Флавивирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из флавивируса, такого как вирус клещевого энцефалита (ТВЕ), вирус Денге (типы 1, 2, 3 или 4), вирус желтой лихорадки, вирус японского энцефалита, вирус болезни Кьясанурского леса, вирус энцефалита западного Нила, вирус сент-луисского энцефалита, вирус русского весенне-летнего энцефалита, вирус энцефалита Повассан. В конкретных вариантах осуществления изобретения флавивирусные антигены выбирают из PrM, М, С, Е, NS-1, NS-2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b и NS5. В конкретных вариантах осуществления изобретения флавивирусные антигены выбирают из PrM, М и Е. Поступающие в продажу вакцины против ТВЕ представляют собой вакцины на основе инактивированного вируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Пестивирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из пестивируса, такого как вирус диареи крупного рогатого скота (BVDV), вирус классической лихорадки свиней (CSFV) или вирус пограничной болезни (BDV).
Гепаднавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из гепаднавируса, такого как вирус гепатита В. В конкретных вариантах осуществления изобретения гепаднавирусные антигены выбирают из поверхностных антигенов (L, М и S), коровых антигенов (НВс, НВе). Поступающие в продажу вакцины против HBV представляют собой субъединичные вакцины, содержащие в качестве антигена S-белок.
Вирус гепатита С: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из вируса гепатита С (HCV). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены HCV выбирают из одной или нескольких следующих субстанций: E1, E2, Е1/Е2, плипротеин NS345, NS 345-коровый полипротеин и/или пептиды из неструктурных областей. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены вируса гепатита С включают одну или несколько следующих субстанций: белки HCV Е1 и/или Е2, гетеродимерные комплексы Е1/Е2, коровые белки и неструктурные белки или фрагменты этих антигенов, где неструктурные белки необязательно можно модифицировать таким образом, чтобы устранять у них ферментативную активность, но сохранять иммуногенность. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Рабдовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из рабдовируса, такого как лиссавирус (вирус бешенства) и везикуловирус (VSV). Рабдовирусные антигены можно выбирать из гликопротеина (G), нуклеопротеина (N), большого белка (L), неструктурных белков (NS). Поступающая в продажу вакцина против бешества включает убитый вирус, выращенный на диплоидных человеческих клетках или клетках легкого плода макака резус.
Вирус сем. Caliciviridae: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из вирусов сем. Calciviridae, таких как вирус Норволк и Норволк-подобные вирусы, такие как гавайский вирус и вирус Снежных гор. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Коронавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из коронавируса, вируса SARS, человеческого респираторного коронавируса, вируса инфекционного бронхита птиц (IBV), вируса гепатита мышей (MHV) и вируса инфекционного гастроэнтерита свиней (TGEV). В конкретных вариантах осуществления изобретения коронавирусные антигены можно выбирать из антигена шипов (S), антигена оболочки (Е), матриксного антигена (М), нуклеокапсидного антигена (N) и гемагглютининэстеразного гликопротеина (НЕ). В конкретных вариантах осуществления изобретения коронавирусный антиген получают из вируса SARS. В конкретных вариантах осуществления изобретения коронавирусный антиген получают из антигена вируса SARS, описанного в WO 04/92360.
Ретровирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ретровируса, такого как онковирус, лентивирус или спумавирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения онковирусные антигены получают из HTLV-1, HTLV-2 или HTLV-5. В конкретных вариантах осуществления изобретения лентивирусные антигены получают из HIV-1 (ВИЧ-1) или HIV-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получат из подтипов HIV-1 (или кладов), включая (но не ограничиваясь только ими) подтипы HIV-1 (или клады) А, В, С, D, F, G, H, J, K, О. В других вариантах осуществления изобретения антигены получают из циркулирующих рекомбинантных форм HIV-1 (CRF), включая (но не ограничиваясь только ими) А/В, А/Е, A/G, A/G/I и т.д. В конкретных вариантах осуществления изобретения ретровирусные антигены выбирают из gag, pol, env, tax, tat, rex, rev, nef, vif, vpu и vpr. В конкретных вариантах осуществления изобретения HIV-антигены выбирают из gag (p24gag и p55gag), env (gp160 и gp41), pol, tat, nef, rev vpu, минибелков (предпочтительно с делецией р55 gag и gpl40v). В конкретных вариантах осуществления изобретения HIV-антигены получают из одного или нескольких следующих штаммов: HIVIIIb, HIVSF2, HIVLAV, HIVLAI, HIVMN, HIV-1CM235, HIV-1US4, HIV-1SF162, HIV-1TV1, HIV-1MJ4. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из эндогенных человеческих ретровирусов, включая (но не ограничиваясь только ими), HERV-K ("старый" HERV-K и "новый" HERV-K).
Реовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из реовируса, такого как ортореовирус, ротавирус, орбивирус или колтивирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения реовирусные антигены выбирают из структурных белков Я1, Я2, Я3, ц.1, ц.2, a1, а2 или а3 или неструктурных белков aNS, LINS или a 1s. В конкретных вариантах осуществления изобретения реовирусные антигены получают из ротавируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения ротавирусные антигены выбирают из VP1, VP2, VP3, VP4 (или расщепленного продукта VP5 и VP8), NSP 1, VP6, NSP3, NSP2, VP7, NSP4 или NSP5. В конкретных вариантах осуществления изобретения ротавирусные антигены включают VP4 (или расщепленный продукт VP5 и VP8) и VP7.
Парвовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из парвовируса, такого как парвовирус В19. В конкретных вариантах осуществления изобретения парвовирусные антигены выбирают из VP-1, VP-2, VP-3, NS-1 и NS-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения парвовирусный антиген представляет собой капсидный белок VP1 или VP-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Вирус гепатита дельта (HDV): вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из HDV, прежде всего у 5-антиген из HDV.
Вирус гепатита Е (HEV): вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из HEV.
Вирус гепатита G (HGV): вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из HGV.
Человеческий герпесвирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из человеческого герпесвируса, такого, например, как вирусы герпеса простого (HSV), вирус опоясывающего лишая (VZV), вирус Эпштейна-Барра (EBV), цитомегаловирус (CMV), герпесви-рус-6 человека (HHV6), герпесвирус-7 человека (HHV7) и герпесвирус-8 человека (HHV8). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены герпесвируса человека можно выбирать из немедленно-ранних белков (а), ранних белков (Р) и поздних белков (у). В конкретных вариантах осуществления изобретения HSV-антигены получают из штаммов HSV-1 или HSV-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения HSV-антигены выбирают из гликопротеинов gB, gC, gD и gH, слитого белка (gB) или белков иммунного избегания (gC, gE или gI). В конкретных вариантах осуществления изобретения VZV-антигены выбирают из корового, нуклеокапсидного белка, белка внутренней оболочки или наружной оболочки. В продаже имеется вакцина на основе живого ослабленного VZV. В конкретных вариантах осуществления изобретения EBV-антигены выбирают из белков раннего антигена (ЕА), вирусного кап-сидного антигена (VCA) и гликопротеинов мембранного антигена (МА). В конкретных вариантах осуществления изобретения CMV-антигены можно выбирать из капсидных белков, гликопротеинов наружной оболочки (таких как gB и gH) и белков внутренней оболочки. В других вариантах осуществления изобретения CMV- антигены можно выбирать из следующих белков: рр65, IE1, gB, gD, gH, gL, gM, gN, gO, UL128, UL129, gUL130, UL150, UL131, UL33, UL78, US27, US28, RL5A, RL6, RL10, RL11, RL12, RL13, UL1, UL2, UL4, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL10, UL11, UL14, UL15A, UL16, UL17, UL18, UL22A, UL38, UL40, UL41A, UL42, UL116, UL119, UL120, UL121, UL124, UL132, UL147A, UL148, UL142,
UL144, UL141, UL140, UL135, UL136, UL138, UL139, UL133, UL135, UL148A, UL148B, UL148C,
UL148D, US2, US3, US6, US7, US8, US9, US10, US11, US12, US13, US14, US15, US16, US17, US18, US19, US20, US21, US29, US30 и US34A. CMV-антигены можно сливать также с одним или несколькими белками CMV, такими, например, как pp65/IE1 (Reap и др., Vaccine, 25, 2007, c. 7441-7449). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Паповавирусы: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из па-повавирусов, таких как вирусы папилломы и вирусы полиомы. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусы папилломы включают HPV серотипов 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 13, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 41, 42, 47, 51, 57, 58, 63 и 65. В конкретных вариантах осуществления изобретения HPV-антигены получают из серотипов 6, 11, 16 или 18. В конкретных вариантах осуществления изобретения HPV-антигены выбирают из капсидных белков (L1) и (L2) или Е1-Е7 или их гибридов. В конкретных вариантах осуществления изобретения HPV-антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ). В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусы полиомы включают BK-вирус и JK-вирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены вируса полиомы выбирают из VP1, VP2 или VP3.
Аденовирус: антигены включают антигены, полученные из аденовируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения аденовирусные антигены получают из аденовируса серотипа 36 (Ad-36). В конкретных вариантах осуществления изобретения антиген получают из белковой или пептидной последовательности оболочечного белка Ad-36 или его фрагмента (WO 2007/120362).
Кроме того, изобретение относится к антигенам, композициям, методам и микробам, которые описаны в: Vaccines, 4-е изд., под ред. Plotkin и Orenstein, 2004); Medical Microbiology, 4-е изд., под ред. Murray и др., 2002; Virology, 3-е изд., под ред. W.K. Joklik, 1988; Fundamental Virology, 2-е изд., под ред. B.N. Fields и D.M. Knipe, 1991, которые можно применять в сочетании с иммуногенными композициями,
представленными в настоящем описании. Грибковые антигены.
Грибковые антигены, предназначенные для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из одного или нескольких приведенных ниже грибов.
Грибковые антигены получают из дерматофитных грибов, включая: Epidermophyton floccusum, Mi-crosporum audouini, Microsporum canis, Microsporum distortum, Microsporum equinum, Microsporum gypsum, Microsporum nanum, Trichophyton concentricum, Trichophyton equinum, Trichophyton gallinae, Tricho-phyton gypseum, Trichophyton megnini, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton quinckeanum, Trichophy-ton rubrum, Trichophyton schoenleini, Trichophyton tonsurans, Trichophyton verrucosum, T. verrucosum var. album, var. discoides, var. ochraceum, Trichophyton violaceum и/или Trichophyton faviforme. Грибковые патогены получают также из Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans, Aspergillus terreus, Aspergillus sydowi, Aspergillus flavatus, Aspergillus glaucus, Blastoschizomyces capitatus, Candida albicans, Candida enolase, Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida stellatoidea, Candida kusei, Candida parakwsei, Candida lusitaniae, Candida pseudotropicalis, Candida guilliermondi, Cladosporium carrionii, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatidis, Cryptococcus neoformans, Geotrichum clavatum, Histoplasma capsulatum, Klebsiella pneumoniae, Microsporidia, Encephali-tozoon spp., Septata intestinalis и Enterocytozoon bieneusi; реже их получают из Brachiola spp, Microsporid-ium spp., Nosema spp., Pleistophora spp., Trachipleistophora spp., Vittaforma spp., Paracoccidioides brasiliensis, Pneumocystis carinii, Pythiumn insidiosum, Pityrosporum ovale, Sacharomyces cerevisae, Sac-charomyces boulardii, Saccharomyces pombe, Scedosporium apiosperum, Sporothrix schenckii, Trichosporon beigelii, Toxoplasma gondii, Penicillium marneffei, Malassezia spp , Fonsecaea spp., Wangiella spp., Sporothrix spp., Basidiobolus spp., Conidiobolus spp., Rhizopus spp., Mucor spp., Absidia spp., Mortierella spp., Cunning-hamella spp., Saksenaea spp., Alternaria spp., Curvularia spp., Helminthosporium spp., Fusarium spp., Aspergil-lus spp., Penicillium spp., Monolinia spp., Rhizoctonia spp., Paecilomyces spp., Pithomyces spp. и Cladospo-rium spp.
В конкретных вариантах осуществления изобретения процесс получения грибкового антигена заключается в том, что солюбилизированную фракцию экстрагируют и отделяют от нерастворимой фракции, полученной из клеток гриба, из которых клеточная оболочка практически удалена или, по меньшей мере, частично удалена, при этом процесс отличается тем, что включает стадии, на которых получают живые клетки гриба; получают клетки гриба, клеточная оболочка которых практически удалена или, по меньшей мере, частично удалена; разрушают клетки гриба, клеточная оболочка которых практически удалена или, по меньшей мере, частично удалена; получают нерастворимую фракцию и экстрагируют и отделяют солюбилизированную фракцию от нерастворимой фракции.
Антигены/патогены простейших.
Антигены/патогены простейшх, которые применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены/патогены, полученные из одного или нескольких следующих видов простйших: Entamoeba histolytica, Giardia lambli, Crypto-sporidium parvum, Cyclospora cayatanensis и токсоплазма.
Растительные антигены/патогены.
Растительные антигены/патогены, которые применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены/патогены, полученные из Ricinvs communis.
Антигены возбудителей ЗППП.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, полученных из возбудителей заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные антигены применяют для профилактики ЗППП, таких как хламидиоз, генитальный герпес, гепатит (такой как гепатит, вызываемый HCV), генитальные бородавки, гонорея, сифилис и/или мягкий шанкр. В других вариантах осуществления изобретения указанные антигены применяют для лечения ЗППП, таких как хламидиоз, генитальный герпес, гепатит (такой как гепатит, вызываемый HCV), гени-тальные бородавки, гонорея, сифилис и/или мягкий шанкр. Указанные антигены получают из одного или нескольких вирусных или бактериальных возбудителей ЗППП. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные антигены возбудителей ЗППП получают из ВИЧ (HIV), вируса герпеса простого (HSV-1 и HSV-2), вируса человеческой папиллломы (HPV) и гапатита (HCV). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены бактериальных возбудителей ЗППП получают из Neiserria gonor-rhoeae, Chlamydia trachomatis, Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi, E. coli и Streptococcus agalactiae. Примеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
Респираторные антигены.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, полученных из патогенов, которые вызывают респираторные заболевания. Примером указанных респираторных антигенов являются (но не
ограничиваясь только ими) антигены, полученные из респираторного вируса, такого как ортомиксовиру-сы (грипп), пневмовирус (RSV), парамиксовирус (PIV), морбилливирус (корь), тогавирус (краснуха), VZV и коронавирус (SARS). В конкретных вариантах осуществления изобретения респираторные антигены получают из бактерий, которые вызывают респираторное заболевание, таких, например, как (но не ограничиваясь только ими) Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Bordetella pertussis, Myco-bacterium tuberculosis, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Bacillus anthracis и Moraxella catar-rhalis. Примеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше. Антигены педиатрических вакцин.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, которые можно применять для детей. Дети, которым можно вводить педиатрические вакцины, как правило, имеют возраст менее примерно 3 лет, или менее примерно 2 лет, или менее примерно 1 года. Педиатрические антигены вводят несколько раз в течение 6 месяцев, 1, 2 или 3 лет. Педиатрические антигены можно получать из вируса, поражающего популяции детей, и/или вируса, заражению которым подвержены популяции детей. Педиатрические вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортомик-совируса (грипп), пневмовируса (RSV), парамиксовируса (PIV и эпидемический паротит), морбилливи-руса (корь), тогавируса (краснуха), энтеровируса (полиомиелит), HBV, коронавируса (SARS) и вируса опоясывающего лишая (VZV), вируса Эпштейна-Барра (EBV). Педиатрические бактериальные антигены включают антигены, полученные из одного или нескольких следующих видов Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides, Streptococcus pyogenes (стрептококк группы A), Moraxella catarrhalis, Bordetella pertussis, Staphylococcus aureus, Clostridium tetani (столбняк), Cornynebacterium diphtheriae (дифтерия), Haemophilus influenzae В (Hib), Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В) и Е. coli. Примеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
Антигены, которые можно применять для престарелых индивидуумов или индивидуумов с нарушениями иммунной системы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, которые можно использовать для престарелых индивидуумов или индивидуумов с нарушениями иммунной системы. Такие индивидуумы могут нуждаться в более частой вакцинации, вакцинации с использованием более высоких доз или препаратами с добавлением адъювантов для повышения их иммунного ответа на антигены-мишени. Антигены-мишени, которые можно применять для престарелых индивидуумов или индивидуумов с нарушениями иммунной системы, включают антигены, полученные из одного или нескольких следующих патогенов: Neisseria meningitides, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes (стреатококк группы A), Moraxella catarrhalis, Bordetella pertussis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis, Clostridium tetani (столбняк), Cornynebacterium diphtheriae (дифтерия), Haemophilus influenzae В (Hib), Pseudomonas aerugi-nosa, Legionella pneumophila, Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В), Enterococcus faecalis, Hel-icobacter pylori, Chlamydia pneumoniae, ортомиксовирус (грипп), пневмовирус (RSV), парамиксовирус (PIV и эпидемический паротит), морбилливирус (корь), тогавирус (краснуха), энтеровирус (полиомиелит), HBV, коронавирус (SARS), вирус опоясывающего лишая (VZV), вирус Эпштейна-Барра (EBV), ци-томегаловирус (CMV). Примеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
Антигены, которые можно применять в вакцинах для подростков.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, которые можно применять для подростков. Подростки могут нуждаться в повторной иммунизации ранее применявшимся педиатрическим антигеном. Педиатрические антигены, которые можно применять для подростков, описаны выше. Кроме того, подросткам можно вводить антигены, полученные из вызывающего ЗППП патогена, для обеспечения защитного или терапевтического иммунитета перед началом периода половой активности. Антигены из возбудителей ЗППП, которые можно применять для подростков, описаны выше.
Опухолевые антигены.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевый антиген или раковый антиген применяют в сочетании с иммуногенными композицияями, представленными в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены представляют собой пептидсо-держащие опухолевые антигены, такие как полипептидный опухолевый антиген или гликопротеиновые опухолевые антигены. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевый антиген представляет собой сахаридсодержащий опухолевый антиген, такой как гликолипидный опухолевый антиген или ганглиозидный опухолевый антиген. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевый антиген представляет собой полинуклеотидсодержащий опухолевый антиген, который экспрессиру-ет полипептидсодержащий опухолевый антиген, например РНК-векторную конструкцию или ДНК-векторную конструкцию, такую как плазмидная ДНК.
Опухолевые антигены, которые можно применять в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании, включают широкое разнообразие молекул, таких как (а) поли
пептидсодержащие опухолевые антигены, включая полипептиды (которые состоят, например, из 8-20 аминокислот, хотя встречаются также длины, находящиеся вне указанного диапазона), липополипептиды и гликопротеины, (б) сахаридсодержащие опухолевые антигены, включая полисахариды, муцины, ганг-лиозиды, гликолипиды и гликопротеины, и (в) полинуклеотиды, которые экспрессируют антигенные полипептиды.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены представляют собой, например, (а) полноразмерные молекулы, связанные с раковыми клетками, (б) их гомологи и модифицированные формы, включая молекулы с удаленными в результате делеции, добавленными и/или замененными фрагментами, и (в) их фрагменты. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены находятся в рекомбинантной форме. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены включают, например, антигены класса II, распознаваемые CD4-лимфоцитами.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены включают (но не ограничиваясь только ими) (а) антигены рака яичка, такие как NY-ESO-1, SSX2, SCP1, а также полипептиды семейств RAGE, BAGE, GAGE и MAGE, например, GAGE-1, GAGE-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6 и MAGE-12 (которые можно применять, например, для вакцинации против меланомы, опухолей легкого, головы и шеи, NSCLC, опухолей молочной железы, желудочно-кишечного тракта и мочевого пузыря), (б) мутантные антигены, например, р53 (ассоциированный с многими плотными (солидными) опухолями, например, со злокачественными опухолями ободочной кишки и прямой кишки, легкого, головы и шеи), p21/Ras (ассоциированный, например, с меланомой, раком поджелудочной железы и колоректальным раком), CDK4 (ассоциированный, например, с меланомой), MUM1 (ассоциированный, например, с меланомой), каспаза-8 (ассоциированная, например, с раком головы и шеи), CIA 0205 (ассоциированный, например, с раком мочевого пузыря), HLA-A2-R1701, бета-катенин (ассоциированный, например, с меланомой), TCR (ассоциированный, например, с Т-клеточной неходжкин-ской лимфомой), BCR-abl (ассоциированный, например, с хроническим миелолейкозом), триозофосфати-зомераза, KIA 0205, CDC-27 и LDLR-FUT, (в) сверхэкспрессируемые антигены, например галектин-4 (ассоциированный, например, с колоректальным раком), галектин-9 (ассоциированный, например, с болезнью Ходжкина), протеиназа-3 (ассоциированная, например, с хроническим миелолейкозом), WT 1 (ассоциированный, например, с различными лейкозами), карбоангидраза (ассоциированная, например, с раком почки), альдолаза А (ассоциированная, например, с раком легкого), PRAME (ассоциированный, например, с меланомой), HER-2/neu (ассоциированный, например, с раком молочной железы, ободочной кишки, легкого и яичника), альфа-фетопротеин (ассоциированный, например, с гепатомой), KSA (ассоциированный, например, с колоректальным раком), гастрин (ассоциированный, например, с раком поджелудочной железы и желудка), теломеразный каталитический белок, MUC-1 (ассоциированный, например, с раком молочной железы и яичника), G-250 (ассоциированный, например, с почечно-клеточной карциномой), р53 (ассоциированный, например, с раком молочной железы и ободочной кишки) и карци-ноэмбриональный антиген (ассоциированный, например, с раком молочной железы, раком легкого и злокачественными опухолями желудочно-кишечного тракта, такими как колоректальный рак), (г) общие антигены, например, антигены меланомы-дифференцировки меланоцитов, такие как MART-1/Melan A, gp100, MC1R, рецептор меланоцитстимулирующего гормона, тирозиназа, связанный с тирозиназой бе-лок-1/TRP! и связанный с тирозиназой белок-2/ТРР2 (ассоциированные, например, с меланомой), (д) ассоциированные с предстательной железой антигены, такие как PAP, PSA, PSMA, PSH-P1, PSM-P1, PSM-P2, ассоциированные, например, с раком предстательной железы, (е) иммуноглобулиновые идиоти-пы (ассоциированные, например, с миеломой и В-клеточными лимфомами), и (ж) другие опухолевые антигены, такие как полипептид- и сахаридсодержащие антигены, включая (I) гликопротеины, такие как сиалил-Tn и сиалил-Le х (ассоциированные, например, с раком молочной железы и колоректальным раком), а также различные муцины; гликопротеины могут быть связаны с белком-носителем (например, MUC-1 может быть связан с KLH); (II) липополипептиды (например, MUC-1, связанный с липидным фрагментом); (III) полисахариды (например, синтетический гексасахарид Globo Н), которые могут быть связаны с белком-носителем (например, с KLH), (IV) ганглиозиды, такие как GM2, GM12, GD2, GD3 (ассоциированные, например, со злокачественными опухолями головного мозга, легкого, меланомой), которые также могут быть связаны с белком-носителем (например, с KLH).
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены включают (но не ограничиваясь только ими) р15, Hom/Mel-40, H-Ras, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, антигены вируса Эпштейна-Барра, EBNA, антигены вируса папилломы человека (HPV), включая Е6 и Е7, антигены вирусов гепатита В и С, антигены лимфотропного вируса Т-клеток человека, TSP-180, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, mn-23H1, TAG-72-4, CA 19-9, СА 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, p16, TAGE, PSCA, CT7, 43-9F, 5T4, 791 Tgp72, бета-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3 (CA 27.29BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68/KP1, CO-029, FGF-5, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90 (Mac-2-связывающий белок/циклофилин С-ассоциированный белок), TAAL6, TAG72, TLP, TPS и т.п.
Полинуклеотидсодержащие антигены, которые применяют в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании, включают полинуклеотиды, которые кодируют поли
пептидные раковые антигены, например, перечисленные выше. В конкретных вариантах осуществления изобретения полинуклеотидсодержащие антигены включают (но не ограничиваясь только ими) ДНК-или РНК-векторые конструкции, такие как плазмидные векторы (например, pCMV), которые могут экс-прессировать полипептидные раковые антигены in vivo.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены получают из мутантных или измененных клеточных компонентов. После внесения изменений клеточные компоненты больше не выполняют своих регуляторных функций, и, следовательно, клетка может неконтролируемо расти. Репрезентативными примерами измененных клеточных компонентов являются (но не ограничиваясь только ими) ras, p53, Rb, измененный белок, кодируемый геном опухоли Вилмса, убиквитин, муцин, белок, кодируемый генами DCC, АРС и MCC, а также рецепторы или рецептороподобные структуры, такие как neu, рецептор тиреоидного гормона, рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGF), рецептор инсулина, рецептор эпидермального фактора роста (EGF) и рецептор колониестимулирующего фактора
(CSF).
Кроме того, бактериальные и вирусные антигены применяют в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании, для лечения рака. В конкретных вариантах осуществления изобретения белки-носители, такие как CRM197, столбнячный анатоксин или антиген Salmonella typhimurium применяют в сочетании/в виде конъюгатов с соединениями, представленными в настоящем описании, для лечения рака. Комбинированные терапевтические средства на основе антигенов злокачественных опухолей обладают повышенной эффективностью и биологической доступностью по сравнению с существующими терапевтическими средствами.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают капсульные сахариды по меньшей мере из двух серогрупп А, С, W135 и Y Neisseria meningitides. В других вариантах осуществления изобретения указанные вацины содержат также антиген, выбранный из одного или нескольких следующих антигенов: (а) серогруппа В N. meningitidis; (б) Haemophilus influenzae типа В и/или (в) Streptococcus pneumoniae.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают серогруппы С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают серогруппы А, В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы С, W135 & Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы А, С, W135 и Y N. men-ingitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруп-
пы А, В, С, W135 и Y N. meningitides.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы С, W135 и Y N. men-ingitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы
A, В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа
B, S. pneumoniae и серогруппы С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В, S. pneumoniae и серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммзшогенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н, influenzae типа В, S. pneumoniae и серогруппы В. С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В, S. pneumoniae и серогруппы А, В, С, W135 и Y N. meningitidis.
Наборы.
В настоящем изобретении предложены также фармацевтические упаковки или наборы, которые включают один или несколько контейнеров, содержащих соединение формулы (I), которое можно применять для лечения или предупреждения заболевания или нарушения, ассоциированного с Толл
подобными рецепторами. В других вариантах осуществления изобретения указанные фармацевтические упаковки или наборы включают один или несколько контейнеров, содержащих соединение формулы (I), которое можно применять для лечения или предупреждения заболевания или нарушения, ассоциированного с Толл-подобными рецепторами, и один или несколько контейнеров, содержащих дополнительное терапевтическое средство, включая (но не ограничиваясь только ими) перечисленные выше средства. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные фармацевтические упаковки или наборы необязательно включают инструкции по применению соединения формулы (I), представленного в настоящем описании. В некоторых вариантах указанных наборов соединение формулы (I) находится в форме композиции вакцины, представленной в настоящем описании, и необязательно включает шприц с композицией вакцины для инъекции индивидууму.
Способы лечения, предупреждения и применения вакцин.
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем изобретении, можно применять в сочетании с вакцинами для повышения иммуногенности вакцины, или когда иммуногенная композиция включает один или несколько антигенов, то иммуногенную композицию можно применять в качестве вакцины. Таким образом, в конкретном варианте осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно применять в способе для индукции или усиления иммунного ответа у млекопитающего, который включает стадии, на которых вводят в эффективном количестве иммуногенную композицию, представленную в настоящем описании. Иммунный ответ предпочтительно представляет собой защитный ответ и предпочтительно включает гуморальный и/или кле-точно-опосредованный иммунитет. Способ может включать получение вторичного иммунного ответа.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно применять в качестве лекарственного средства, например, предназначенного для индукции или усиления иммунного ответа у млекопитающего.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для индукции иммунного ответа у млекопитающего.
Изобретение относится также к устройству для введения, предварительно заполненному иммуно-генной композицией, представленной в настоящем описании.
Путем индукции иммунного ответа у млекопитающего с помощью вариантов применения и способов можно уменьшать или даже предотвращать заражение млекопитающего патогенами, которые содержат антиген, включенный в иммуногенную композицию или введенный в сочетании с иммуногенной композицией. Млекопитающее предпочтительно представляет собой человека, но может, например, представлять собой корову, свинью, курицу, кошку или собаку, поскольку патогены, подпадающие под объем изобретения, могут вызывать проблемы у широкого разнообразия видов. Если вакцину применяют с целью профилактики, то человек предпочтительно представляет собой ребенка (например, ребенка, начинающего ходить, или младенца) или подростка; если вакцину применяют для терапевтических целей, то человек предпочтительно представляет собой подростка или взрослого. Вакцину, предназначенную для детей, можно вводить взрослому человеку, например, для оценки безопасности, определения дозы, иммуногенности и т.д.
Одним из путей оценки эффективности терапевтической обработки является мониторинг вызываемой патогеном инфекции после введения иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании. Одним из путей оценки эффективности профилактической обработки является мониторинг иммунных ответов, системно (например, мониторинг уровня производства IgG1 и IgG2a) и/или в слизистых оболочках (например, мониторинг уровня производства IgA), в отношении антигенов, включенных или вводимых в сочетании с иммуногенными композициями, которые представлены в настоящем описании, после введения иммуногенной композиции (и антигена, если его вводят отдельно). Как правило, гуморальные ответы в виде производства специфических для антигена сывороточных антител определяют после введения, но перед осуществлением контрольного заражения, а специфические для антигена гуморальные ответы в виде производства антител в слизистых оболочках определяют после иммунизации и после осуществления контрольного заражения.
Другой путь оценки иммуногенности иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании, в которых антиген представляет собой белок, включает рекомбинантную экспрессию белков для скрининга сыворотки пациента или слизистых секреций методом иммуноблоттинга и/или с помощью микромассивов. Положительная реакция между белком и образом из организма пациента свидетельствует о том, что у пациента возник иммунный ответ на рассматриваемый белок. Этот метод можно применять также для идентификации иммунодоминантных антигенов и/или эпитопов в белковых антигенах.
Эффективность иммуногенных композиций можно определять также in vivo путем контрольного заражения соответствующих животных моделей патогеном, который вызывает представляющую интерес инфекцию.
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, как правило, вводят индивидууму непосредственно. Для непосредственного введения можно применять парентеральную инъекцию (например, подкожную, внутрибрюшинную, внутривенную, внутримышечную или в интерстициальное
пространство ткани) или в слизистые оболочки, например ректально, орально (например, с помощью таблетки, спрея), вагинально, местно, трансдермально или чрескожно, в нос, в глаз, в ухо, в легкое, или можно использовать другой вариант введения в слизистые оболочки.
Иммуногенные композиции можно применять для вызывания системного иммунитета и/или защитных свойств слизистых оболочек, предпочтительно для вызывания усиленного системного иммунитета и/или усиления защитных свойств слизистых оболочек.
Предпочтительно усиленный системный иммунитет и/или усиление защитных свойств слизистых оболочек выражается в усиленном иммунном TH1- и/или ТН2-ответе. Предпочтительно усиленный иммунный ответ включает повышение производства IgG1, и/или IgG2a, и/или IgA.
Дозирование может представлять собой схему введения, основанную на применении однократных доз, или схему введения, основанную на применении нескольких доз. Несколько доз можно использовать в схеме первичной вакцинации и/или в схеме бустер-иммунизации. При использовании схемы, основанной на применении нескольких доз, различные дозы можно вводить одинаковыми или различными путями, например парентеаральная первичная вакцинации и бустер-иммунизация в слизистые оболочки, первичная вакцинация в слизистые оболочки и парентеральная бустер-иммунизация и т.д. Несколько доз, как правило, вводят с интервалом, составляющим по меньшей мере 1 неделю (например, примерно через 2 недели, примерно 3 недели, примерно 4 недели, примерно 6 недель, примерно 8 недель, примерно 10 недель, примерно 12 недель, примерно 16 недель и т.д.).
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, которые включают один или несколько антигенов или которые применяют в сочетании с одним или несколькими антигенами, можно использовать для лечения как детей, так и взрослых. Таким образом, человек может иметь возраст менее 1 года, 1-5 лет, 5-15 лет, 15-55 лет или по меньшей мере 55 лет. Предпочтительными индивидуумами для обработки указанными иммуногенными композициями являются престарелые люди (например, возрастом > 50 лет, > 60 лет и предпочтительно > 65 лет), молодые люди (например, возрастом <5 лет), госпитализированные пациенты, сотрудники службы медико-санитарной помощи, медицинской службы армии и военный персонал, беременные женщины и пациенты, страдающие хроническим заболеванием, или пациенты с иммунодефицитом. Однако иммуногенные композиции можно применять не только для указанных групп, их можно применять для более широкой популяции.
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, которые включают один или несколько антигенов или которые применяют в сочетании с одним или несколькими антигенами, можно использовать для обработки пациентов практически одновременно (например, в процессе одной медицинской консультации или визита к специалисту по медико-санитарной помощи или в центр по вакцинации) с другими вакцинами, например практически одновременно с вакциной против кори, вакциной против эпидемического паротита, вакциной против краснухи, вакциной против MMR, вакциной против ветряной оспы, MMRV-вакциной, вакциной против дифтерита, вакциной против столбняка, вакциной против коклюша, DTP-вакциной (коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина), объединенной с вакциной против Н. influenzae типа b, инактивированной вакциной против полимиелита, вакциной против вируса гепатита В, менингококковой конъюгатной вакциной (такой как четырехвалентная А С W135 Y вакцина), вакциной против респираторного синцитиального вируса и т.д.
Соединения формулы (I), включенные в состав препарата в сочетании с содержащими алюминий адъювантами.
В конкретных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват объединяют с содержащим алюминий адъювантом и взятым(и) в эффективном количестве одним или несколькими антигенами, в результате чего получают иммуногенную композицию. В конкретных вариантах таких иммуногенных композиций соединение формулы (I) связывают с содержащим алюминий адъ-ювантом. В таких иммуногенных композициях антиген представляет собой любой из антигенов, представленных в настоящем описании. С помощью таких иммуногенных композиций антиген и соединение формулы (I), являющееся агонистом TLR2, совместно доставляют в требуемую область.
В конкретных вариантах таких иммуногенных композиций связывание соединения формулы (I) с содержащим алюминий адъювантом не препятствует связыванию антигена с содержащим алюминий адъювантом.
В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции можно применять в качестве вакцин. В конкретных вариантах осуществления изобретения такие вакцины являются профилактическими (т.е. они предназначены для предупреждения инфекции), в то время как в других вариантах осуществления изобретения такие вакцины являются терапевтическими (т.е. они предназначены для лечения инфекции).
Соединение(я) формулы (I), представленное(ые) в настоящем описании, или его(их) фармацевтически приемлемая соль, или сольват являются агонистами TLR2 и иммунными потенциаторами, которые оказывают иммуностимулирующее действие после введения, по сравнению с иммуногенными препаратами, которые не содержат соединение(я) формулы (I). В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) оказывают иммуностимулирующее действие после введения, когда они
включены в состав иммуногенной композиции, содержащей одно или несколько иммунорегуляторных средств, в то время как в других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) оказывают иммуностимулирующее действие после введения, когда они входят в состав иммуногенной композиции, которая не содержит других иммунорегуляторных средств.
В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции повышают иммунный ответ в результате удерживания соединения формулы (I) в области инъекции.
В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции включают фармацевтически приемлемый носитель, такой как (но не ограничиваясь только ими) белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, сахарозу, трегалозу, лактозу, липидные агрегаты (такие как масляные капли или липосомы) и неактивные вирусные частицы. Иммуногенные композиции, как правило, содержат также разбавители, такие как вода, физиологический раствор и глицерин, и необязательно содержат и другие эксципиенты, такие как смачивающие агенты или эмульгаторы, и рН-забуферивающие субстанции. В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции включают один или несколько дополнительных адъювантов, представленных в настоящем описании.
Примеры
Представленные ниже примеры приведены для иллюстрации соединений формулы (I), предлагаемых в изобретении, и получения указанных соединений, но не они не направлены на ограничение объема изобретения.
Синтез исходных соединений.
Получение (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6)
Стадия 1. (R)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8).
Раствор, содержащий (N-Fmoc-Cys-OtBu)2 (7, 1 экв.), NEt3 (3 экв.) и ДТЭ (1,4-дитиоэритритол, 2,5 экв.) в дихлорметане (ДХМ, 0,1M), перемешивали при комнатной температуре до полного восстановления (1,5 ч). Реакционную смесь разводили в ДХМ, промывали трижды 5%-ным раствором лимонной кислоты, дважды водой и один раз соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2. (R)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипро-пилтио)пропаноат (10).
Раствор, содержащий (2S)-(+)-глицидил-4-нитробензоат (9, 1,1 экв.) и 1М NaOH (1,1 экв.) в tBuOH (0,1 М), перемешивали при комнатной температуре до полного гидролиза нитробензоата (30 мин). В образовавшуюся смесь вносили раствор (R)-трет-бутил-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноата (8, 1 экв.) в tBuOH (1M). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления tBuOH и растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды водой и один раз соляным раствором. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-90% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропил-тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат (11).
Раствор, содержащий (R)-трет-бутил-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноат (10,1 экв.) в ДХМ (0,1М), охлаждали в ледяной бане. Добавляли пиридин (3,7 экв.), а затем додеканоилхлорид (3,7 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, промывали насыщенным водным раствором NH4Cl. Водную фазу повторно экстрагировали ДХМ. Объединенные органические фазы промывали Н2О и водную фазу повторно экстрагировали ДХМ. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 4. (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновая кислота (6).
Раствор, содержащий (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат (11) в 40%-ном растворе ТФК в ДХМ (0,3 М), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в метил-трет-бутиловом эфире (МТБЭ), промывали трижды 1M лимонной кислотой (значение рН доводили до 3) и один раз смесью (1:2) 1н. HCl/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный воскообразный твердый продукт использовали без дополнительной очистки.
Синтез соединений из примеров.
Пример 1. Синтез (R)-3-((R)-2-амино-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)-пропан-1,2-диилдидодеканоата.
Стадия 1. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(1-(гидроксиметил)цикло-пропиламино)-3 -оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (гексафторфосфат О-бензотриазол-^^№,№-тетраметилурония, 1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем гидрохлорид (1-аминоциклопропил)метанола (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 30-50% EtOAc/Hex, в результате чего получали (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропил-тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Стадия 2. (R)-3 -(^)-2-амино-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(1 -(гидроксиметил)цикло-пропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшийся гель разводили ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. Смесь добавляли к толуолу и затем концентрировали в вакууме.
Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (R)-3 -(^)-2-амино-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидоде-каноат в виде твердого вещества беловатого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 7,85 (br s, 1H), 5,11-5,18 (m, 1Н), 4,36 (dd, 1Н), 4,14 (dd, 1H), 4,05 (br s, 1H), 3,59 (q, 2H), 3,50 (dd, 1H), 3,06 (dd, 1H), 2,80 (dd, 1H), 2,68-2,76 (m, 2H), 2,32 (q, 4H), 1,51-1,68 (m, 4H), 1,191,35 (m, 32H), 0,90-0,94 (m, 2H), 0,88 (t, 6H), 0,79-0,83 (m, 2H). MCHP (масс-спектр низкого разрешения)
[М+Н]=629,5.
Пример 2. Синтез 3-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)про-пилфосфоновой кислоты
Стадия 1. Диэтил-3-азидопропилфосфонат.
К раствору диэтил-3-бромпропилфосфоната (1 экв.) в EtOH (2M) добавляли азид натрия (5 экв.) в воде (4М). Реакционную смесь выщерживали при температуре дефлегмации в течение ночи. Затем смесь разводили водой, трижды экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 80100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2. Диэтил-3-аминопропилфосфонат.
Диэтил-3-азидопропилфосфонат (1 экв.) растворяли в EtOH (0,1M). К реакционной смеси добавляли Pd(OH)2 (0,02 экв.). Вводили газообразный водород из баллона, и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 2 ч при комнатной температуре, фильтровали через целит и промывали метанолом. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН в ДХМ, содержащего 0,5% NH3 в МеОН, в результате чего получали продукт в виде
бесцветного масла.
Стадия 3. Сложный диэтиловый эфир 3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфорила.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) в ДХМ (0,1М), добавляли диэтил-3-аминопропилфосфонат (1,3 экв.), диизопропилэтиламин (ДИЭА, 2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 70-100% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 4. Сложный диэтиловый эфир 3-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил-тио)пропанамидо)пропилфосфорила.
К раствору сложного диэтилового эфира 3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфорила (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь разводили дихлорметаном и облучали ультразвуком в течение 3 мин. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма IS-CO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде желтоватого масла.
Стадия 5. 3 -(^)-2-амино-3 -((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфо-новая кислота.
К раствору сложного диэтилового эфира 3-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)про-пилтио)пропанамидо)пропилфосфорила (1 экв.) в ДХМ (0,1M) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO d-6): 5 8,51 (t, 1Н), 5,10-5,17 (m, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,12 (dd, 1H), 3,86 (t, 1H), 3,083,24 (m, 2H), 2,96 (dd, 1H), 2,83 (dd, 2H), 2,74 (dd, 1H), 2,23-2,31 (m, 4H), 1,58-1,70 (m, 2H), 1,44-1,58 (m, 6H), 1,13-1,32 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=681,4.
Пример 3. Синтез (8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-аза-гексакозилфосфоновой кислоты
Стадия 1. Диэтил-2-(2-бромэтокси)этилфосфонат.
1-Бром-2-(2-бромэтокси)этан (1,0 экв.) смешивали с триэтилфосфатом (1 экв.) и затем нагревали до 160°С в течение 20 мин с помощью микроволновой печи. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 70-100% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2. Диэтил-2-(2-азидоэтокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-бромэтокси)этилфосфоната (1 экв.) в EtOH (0,3M) добавляли азид натрия (5 экв.) в воде (2М). Реакционную смесь выдерживали при температуре дефлегмации в течение ночи. Затем смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным NaHCO3, водой и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очщали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 80-100% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 3. Диэтил-2-(2-аминоэтокси)этилфосфонат.
Диэтил-2-(2-азидоэтокси)этилфосфонат (1 экв.) растворяли в EtOH (0,1М). К реакционной смеси добавляли Pd(OH)2 (0,05 экв.). Вводили газообразный водород из баллона и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали через целит и промывали с помощью МеОН. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, содержащем 2% NH3 в метаноле, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 4. Сложный диэтиловый эфир (8R,12R)-8-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6,1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2
аминоэтокси)этилфосфонат (1,3 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 50-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. Сложный диэтиловый эфир ((8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила.
К раствору сложного диэтилового эфира (8R,12R)-8-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь разводили с помощью ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 6. ((8R, 12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозил-фосфоновая кислота.
К раствору сложного диэтилового эфира (8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO d-6): 5 9,16 (br s, 1H), 5,09 (br, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,11 (dd, 1H), 3,44-3,70 (m, 3H), 3,25-3,27 (m, 2H), 3,17-3,25 (m, 1H), 3,03-3,15 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,83 (dd, 1H), 2,61-2,76 (m, 2H), 2,222,23 (m, 4H), 1,58-1,75 (m, 2H), 1,45-1,56 (m, 4H), 1,15-1,34 (m, 32H), 0,86 (t, 6H). MCHP [M+H]=711,4.
Пример 4. Синтез (12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. Диэтил-1,1-дифтор-3-(2-(2-йодэтокси)этокси)пропилфосфонат.
К раствору диизопропиламина (1,6 экв.) в ТГФ (1,28М) медленно добавляли по каплям н-бутиллитий (1,5М в циклогексане, 1,5 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 40 мин. Затем смесь охлаждали до -78°С и к раствору медленно добавляли диэтилдифторметилфос-фонат (1 экв.) в ГМПК (2-гидрокси-2-метилпропановая кислота) (2,1М). Затем смесь перемешивали при -78°С в течение 40 мин и к образовавшемуся раствору быстро добавляли охлажденный раствор 1,2-бис(2-йодэтокси)этана (12,8М в ТГФ, 4 экв.). Через 1,5 ч реакцию прекращали, сливая смесь в насыщенный раствор NH4Cl. Водные фазы трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 10-100% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт в виде масла желтого цвета.
Стадия 2. Диэтил-3-(2-(2-азидоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфонат.
К раствору диэтил-1,1-дифтор-3-(2-(2-йодэтокси)этокси)пропилфосфоната (1 экв.) в ДМФ (0,5М) добавляли азид натрия (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Смесь разводили этилацетатом и промывали водой. Водные фазы повторно экстрагировали этил-ацетатом. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 10-50% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3. Гидрохлорид диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната.
К раствору диэтил-3-(2-(2-азидоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1 экв.) в растворе EtOH (2M) добавляли гидроксид палладия (0,05 экв.) и 2М HCl в простом эфире (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (при давлении 1 атм) в течение ночи. Палладий отфильтровывали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь использовали для осуществления следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия 4. Диэтил-(12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфонат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6,1 экв.) в ДХМ (0,1M) добавляли гидрохлорид диэтил 3-(2-(2
аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1,3 экв.), ДИЭА (3,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 30-80% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. Диэтил-(12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфонат.
К раствору диэтил-(12R,16R)-12-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16-(додеканоило-кси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь перемешивали при 25°С до исчезновения исходных продуктов. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма IS-CO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 6. (12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтил-(12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1M) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9), в результате чего получали (12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоно-вую кислоту.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,47 (br s, 1H), 5,10-5,23 (m, 1Н), 4,32 (dd, 1Н), 4,18-4,26 (m, 1Н), 4,12 (dd, 1H), 3,68-3,86 (m, 2Н), 3,44-3,68 (m, 6Н), 3,20-3,36 (m, 1Н), 2,96-3,16 (m, 2Н), 2,76-2,85 (m, 1Н), 2,68-2,76 (m, 1Н), 2,21-2,38 (m, 4Н), 2,12-2,07 (m, 2Н), 1,52-1,65 (m, 4Н), 1,36-1,15 (m, 32Н), 0,87 (t, 6H). МСНР
[М+Н]=805,5.
Пример 5. (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азано-накозилфосфоновая кислота
Стадия 1. Диэтил-2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этилфосфонат.
1,2-бис(2-йодэтокси)этан (1,0 экв.) смешивали с триэтилфосфатом (1 экв.), затем нагревали до 160°С в течение 20 мин с помощью микроволновой печи. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 85-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали диэтил-2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этилфосфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 2. Диэтил-2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этилфосфоната (1 экв.) в EtOH (0,2М) добавляли азид натрия (5 экв.) в воде (1,4М). Реакционную смесь выщерживали при температуре дефлегмации в течение ночи. Затем смесь разводили водой, экстрагировали с помощью EtOAc (3 раза). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали диэтил-2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этилфосфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 3. Диэтил-2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этилфосфонат.
Диэтил-2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этилфосфонат (1 экв.) растворяли в EtOH (0,1М). К реакционной смеси добавляли Pd(OH)2 (0,05 экв.). Вводили газообразный водород из баллона и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали через целит и промывали с помощью МеОН. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием смеси 0-10% Ме-ОН/ДХМ с 0,5% NH3, в результате чего получали диэтил-2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этилфосфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 4. Сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6,1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этилфосфонат (1,3 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экс
пресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 70-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозил-
фосфорила.
Стадия 5. Сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила.
К раствору сложного диэтилового эфира (11R,15R)-11-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозил-фосфорила (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь разводили с помощью ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% ЕА (этилацетат), а затем 0-10% МеОН в ДХМ, в результате чего получали сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила.
Стадия 6. (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанона-козилфосфоновая кислота.
К раствору сложного диэтилового эфира (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9), в результате чего получали (1Ж,^)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозил фосфоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO d-6): 5 8,70 (br t, 1Н), 5,05-5,14 (m, 1H), 4,28 (dd, 1H), 4,10 (dd, 1H), 3,79 (t, 2H), 3,20-3,69 (m, 8H), 3,04-3,13 (m, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,83 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,64-2,72 (m, 1H), 2,21-2,30 (m, 4H), 1,61-1,72 (m, 2H), 1,43-1,55 (m, 4H), 1,15-1,32 (m, 32H), 0,84 (t, 6H). MCHP |M+H]=755,5.
Пример 6. (R)-3-((R)-2-амино-3-оксо-3-(2-(пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диил-дидодеканоат
Стадия 1. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-оксо-3-(2-пиридин-3-ил)эти-ламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли 3-(2-аминоэтил)пиридин (1,2 экв.), затем дии-зопропилэтиламин (2,0 экв.), и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикаге-лем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-оксо-3-(2-пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Стадия 2. (R)-3 -(^)-2-амино-3 -оксо-3 -(2-(пиридин-3 -ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диил-дидодеканоат.
Раствор (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-оксо-3-(2-пиридин-3-ил)эти-ламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования неочищенную реакционную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH(r) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ (осуществляя мониторинг путем окрашивания нингидрином), в результате чего получали (R)-3-((R)-2-амино-3-оксо-3 -(2-(пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,49 (m, 2H), 7,53 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 4,36-4,40 (dd, 1H), 4,11-4,19 (dd, 2H), 3,54 (m, 2H), 3,50 (m, 1H), 3,09 (dd, 1H), 2,83 (t, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,29-2,38 (q, 4H), 1,60-1,71 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 32H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H]=664,5.
Пример 7. (R)-3-((R)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидоде-
каноат
Стадия 1. (12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,11-диоксо-2-окса-14-тиа-4,10-диазагептадекан-16,17-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли защищенный с помощью Fmoc гидрохлорид 1,5-диаминопентана (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.), и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (12R,16R)-12-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,11-диоксо-2-окса-14-тиа-4,10-диазагептадекан-16,17-диилдидодеканоат.
Стадия 2. (R)-3-((R)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидо-
деканоат.
Раствор (12R, 16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,11-диоксо-2-окса-14-тиа-4,10-диазагептадекан-16,17-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%), и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH(r) с использованием градиента 0-20% МеОН (1% Мгу/ДХМ, в результате чего получали да-3-(^)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
1Н ЯМР (DMSO d-6): 5 7,91 (t, 1Н), 5,09 (m, 1H), 4,26-4,32 (dd, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 3,24-3,36 (m, 8H), 3,05-3,08 (m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,74 (t, 1H), 2,67 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 2,29-2,34 (q, 4H), 1,48-1,54 (m, 4H), 1,32-1,40 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 32H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H]=645,1.
Пример 8. ((2R,6R)-6,20-flHaMHHO-7-OKCO-12,17-диокса-4-тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоат
Стадия 1. (19R, 23R)-19-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,18-диоксо-2,8,13-триокса-21-тиа-4,17-диазатетракозан-23,24-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1M) при комнатной температуре. После этого добавляли гидрохлорид 1-(Fmoc-амино)-4,9-диокса-12-додеканамина (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.), и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (19R, 23R)-19-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3, 18-диоксо-2,8,13 -триокса-21 -тиа-4,17-диазатетракозан-23,24-диилдидодеканоат.
Стадия 2. (R)-3-((R)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидо-
деканоат.
Раствор (19R,23R)-19-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1 -(9Н-флуорен-9-ил)-3,18-диоксо-2,8,13-триокса-21-тиа-4,17-диазатетракозан-23,24-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%), и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью ЖХВР с управлением от масс-спектрометра (mass triggered HPLC) с использованием градиента 50-100% MeCN в Н2О (0,1% ТФК), в результате чего получали ^)-3-(^)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат).
1Н ЯМР (DMSO d-6): 5 8,49 (t, 1Н), 5,12 (m, 1H), 4,26-4,32 (dd, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 3,85 (t, 1H), 3,32-3,41 (m, 7H), 3,20 (m, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,91 (dd, 1H), 2,82 (m, 4H), 2,73 (m, 1H), 2,52 (m, 2H), 2,292,34 (q, 4H), 1,71-1,79 (m, 2H), 1,62-1,68 (m, 2H), 1,49-1,52 (m, 8H), 1,21-1,34 (m, 32H), 1,18-1,21 (t, 2H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H]=747,1.
Пример 9. (20R,24R)-2,20-диамино-1-меркапто-3,19-диоксо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18-диазапе-нтакозан-24,25-диилдидодеканоат
Стадия 1. (20R,24R)-20-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-2,2-диметил-4,19-диоксо-3,9,14-триокса-22-тиа-5,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли Вос-1-амино-4,7,10-триокса-13-тридеканамин (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.), и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (20R,24R)-20-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-2,2-диметил-4,19-диоксо-3,9,14-триокса-22-тиа-5,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат.
Стадия 2. (2R,6R)-6-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-20-амино-7-оксо-12,17-диокса-4-тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоат.
(20R,24R)-20-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-2,2-диметил-4,19-диоксо-3,9,14-триокса-22-тиа-5,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат перемешивали в 30% ТФК/ДХМ в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и промывали 1М лимонной кислотой (рН 3). После этого органические слои сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали, в результате чего получали (2R,6R)-6-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-20-амино-7-оксо-12,17-диокса-4-тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоат.
Стадия 3. (23R,27R)-23-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,6,22-триоксо-5-(тритилтиометил)-2,11,14,17-тетраокса-25-тиа-4,7,21-триазаоктакозан-27,28-диилдидодекано-ат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли Fmoc-Cys(Trt)-OH (1,2 экв.), а затем диизо-пропилэтиламин (2,0 экв.), и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикаге-лем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (23R,27R)-23-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,6,22-триоксо-5-(тритилтиометил)-2,11,14,17-тетраокса-25-тиа-4,7,21-триазаоктакозан-27,28-диилдидодеканоат.
Стадия 4. (22R,26R)-4,22-диамино-5,21-диоксо-1,1,1-трифенил-10,13,16-триокса-2,24-дитиа-6,20-диазагептакозан-26,27-диилдидодеканоат.
Раствор (23R,27R)-23-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1 -(9Н-флуорен-9-ил)-3,6,22-триоксо-5-(тритилтиометил)-2,11,14,17-тетраокса-25-тиа-4,7,21-триазаоктакозан-27,28-диилдидодекано-ата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%), и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH(r), используя начальный градиент 0-100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (22R,26R)-4,22-диамино-5,21-диоксо-1,1,1-трифенил-10,13,16-триокса-2,24-дитиа-6,20-диазагептакозан-26,27-диилдидодеканоат.
Стадия 5. (20R,24R)-2,20-диамино-1-меркапто-3, 19-диоксо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18-диазапен-такозан-24,25-диилдидодеканоат.
(22R,26R)-4,22-диамино-5,21-диоксо-1,1,1-трифенил-10,13,16-триокса-2,24-дитиа-6,20-диазагеп-такозан-26,27-диилдидодеканоат перемешивали в ТФК (0,1М), содержащей 5% триизопропилсилана, при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH(r) с использованием градиента 0-20% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (20R,24R)-2,20-диамино-1-меркапто-3,19-диоксо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат.
1H ЯМР (DMSO d-6): 5 8,51 (t, 1H), 8,49 (t, 1H), 5,12 (m, 1Н), 4,26-4,32 (dd, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 3,86 (q, 2Н), 3,46-3,52 (m, 8Н), 3,40 (t, 4Н), 3,35 (br s, 4Н), 3,12-3,25 (m, 4Н), 2,82-2,94 (m, 6Н), 2,72-2,79 (dd, 1H), 2,29-2,34 (q, 4Н), 1,68-1,72 (q, 4Н), 1,49-1,52 (m, 4Н), 1,21-1,34 (m, 32Н), 0,86 (t, 6Н). МСНР
[М+Н]=866,3.
Стадия 1. (R)-2,3-бис(гексадецилокси)пропилтрифторметансульфонат.
К раствору, содержащему ^)-2,3-бис(гексадецилокси)пропан-1-ол (1 экв.) и пиридин (4 экв.) в ДХМ (0,1М), добавляли при 0°С Tf2O (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, и реакцию прекращали с помощью Н2О. Водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали Н2О, и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали насыщенным NaHCO3 и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Hex, в результате чего получали (R)-2,3-бис(гексадецилокси)пропилтрифторметансульфонат в виде бесцветного
масла.
Стадия 2. (5R,9R)-трет-бутил-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат.
Смесь, содержащую ^)-2,3-бис(гексадецилокси)пропил трифторметансульфонат (1 экв.), да-трет-6утил 2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 2 экв.) и K2CO3 (1 экв.) в EtOH (0,1М), перемешивали в течение 30 мин при 60°С. Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Hex, в результате чего получали (5R,9R)-трет-6утил-1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2.11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат в виде бесцветного масла.
Стадия 3. (5R,9R)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагепта-козан-5-карбоновая кислота.
Раствор (5R,9R)-трет-бутил 1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилата в 40% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (рН 3) и один раз смесью (1:2) HCl (3М)/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Образовавшееся воскообразное твердое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4. (4R,7S,10R,14R)-бензил-10-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-оат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоновую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли гидрохлорид ^)-бензил-5-амино-4-(^)-2-аминобутанамидо)-5-оксопентаноата (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.), и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Нех, 100% EtOAc, в результате чего получали (4R,7S, 10R, ^)-бензил-10-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-оат.
Стадия 5. (4R,7S,10R,14R)-10-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овая кислота.
Смесь, содержащую (4R,7S,10R,14R)-бензил-10-(((9H-флуорен-9-ил)метокси) карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-оат) и Pd(OH)2 (1,2 экв.) в EtOH (0,1М), перемешивали в течение ночи при 25°С в атмосфере H2 (1 атм). Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (4R,7S, 10R, 14R)-10-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 6. (4R,7S,10R,14R)-10-амино-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овая кислота.
Раствор (4R,7S,10R,14R)-10-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овой кислоты в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%), и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали
с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH(r) с использованием градиента 010% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (4R,7S,10R,14R)-10-амино-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овую кислоту.
1H ЯМР (DMSO d-6): 5 12,12 (br, s, 1H), 8,56(d, 1H), 8,14 (t, 2H), 8,12 (d, 1Н), 7,25 (s, 1Н), 7,05 (s, 1H), 4,21-4,34 (m, 2Н), 3,95-3,97 (m, 1Н), 3,44-3,52 (m, 3Н), 3,32-3,40 (m, 3Н), 2,96 (dd, 1H), 2,66-2,78 (m. 4H), 2,19 (t, 2H), 1,89-1,98 (m, 2H), 1,67-1,76 (m, 4H), 1,56-1,64 (m, 2H), 1,42-1,50 (m, 4H), 1,21-1,28 (m, 48H), 0,83-0,89 (m, 9H). MCHP [M+H]=857,7.
Пример 11. N-((R)-1 -(^)-2-амино-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропилтио)-3 -(гексадецилокси)пропан-2-ил)додеканамид
Стадия 1. (S)-1 -(трет-бутилдиметилсилилокси)-3 -(гексадецилокси)пропан-2-ол.
Раствор, содержащий ^)-3-(гексадецилокси)пропан-1,2-диол (1 экв.), TBDMSCl (трет-бутилдиметилсилилхлорид, 1,4 экв.), NEt3 (1,4 экв.) и ДМАП (0,05 экв.) в ДХМ (0,5М) перемешивали при 25°С в течение ночи. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и дважды с помощью Н2О, и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ол в виде бесцветного масла.
Стадия 2. Метансульфонат (S)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ила.
К раствору (S)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ола (1 экв.) в пиридине (0,5М) при 0°С добавляли MsCl (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, и реакцию прекращали с помощью Н2О. Водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали Н2О, и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали насыщенным NaHCO3 и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-15% EtOAc/Нех, в результате чего получали метансульфонат ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадеци-локси)пропан-2-ила в виде бесцветного масла.
Стадия 3. (R)-(2-азидо-3-(гексадецилокси)пропокси)(трет-бутил)диметилсилан.
Смесь, содержащую метансульфонат ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецило-кси)пропан-2-ила (1 экв.) и NaN3 (5 экв.) в ДМФ (0,5М), перемешивали при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-15% EtOAc/Нех, в результате чего получали ^)-(2-азидо-3-(гексадецилокси)пропокси)(трет-бутил)диметилсилан в виде бесцветного масла.
Стадия 4. ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропан-1-ол.
Раствор, содержащий (R)-(2-азидо-3-(гексадецилокси)пропокси)(трет-бутил)диметилсилан (1 экв.) и 1M ТБАФ (тетрабутиламмонийфторид) в ТГФ (1,1 экв.), в ТГФ (0,2М) перемешивали при 25°С в течение 20 мин. Реакционную смесь разводили Et2O и промывали насыщенным NH4Cl, H2O и соляным раствором. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Нех, в результате чего получали ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропан-1-ол в виде бесцветного масла.
Стадия 5. Трифторметансульфонат ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропила.
К раствору, содержащему ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропан-1-ол (1 экв.) и пиридин (4 экв.) в ДХМ (0,1 М), при 0°С добавляли Tf2O (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, и реакцию прекращали с помощью Н2О. Водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали Н2О, и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали насыщенным NaHCO3 и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Нех, в результате чего получали трифторметансульфонат ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропила.
Стадия 6. (5R,9R)-трет-бутил-9-азидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагепта-козан-5-карбоксилат.
Смесь, содержащую трифторметансульфонат ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропила (1 экв.), (R)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 2 экв.) и K2CO3 (1 экв.) в EtOH (0,1М), перемешивали в течение 30 мин при 60°С. Реакционную смесь фильтровали и про
мывали ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали (5R,9R)-трет-бутил-9-азидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат.
Стадия 7. (5R,9R)-трет-бутил 9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат.
Смесь, содержащую (5R,9R)-трет-бутил-9-азидо-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат (1,0 экв.), Pd(OH)2 (0,5 экв.), додеканоилхлорид (2,4 экв.) и ДИЭА (4,8 экв.) в EtOAc (0,01 М), перемешивали в атмосфере H2 (1 атм.) при 25°С в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали (5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат в виде бесцветного масла.
Стадия 8. (5R,9R)-9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоновая кислота.
Раствор (5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилата в 40% ТФК в ДХМ (0,3 М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1M лимонной кислотой (рН 3) и один раз смесью (1:2) HCl (3М)/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме, в результате чего получали (5R,9R)-9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоновую
кислоту.
Стадия 9. (9Н-флуорен-9-ил)метил-^)-3-((R)-2-додеканамидо-3-(гексадецилокси)пропилтио)-1 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-додеканамидо-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-
4-азагептакозан-5-карбоновую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06 М), добавляли ДИЭА (3,5
экв.), а затем гидрохлорид (1-аминоциклопропил)метанола (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали
при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-
хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 30-50% EtOAc/Нех, в ре-
зультате чего получали (9Н-флуорен-9-ил)метил ^)-3-(^)-2-додеканамидо-3-
(гексадецилокси)пропилтио)-1-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
Стадия 10. №(^)-1-(^)-2-амино-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропилтио)-3 -(гексадецилокси)пропан-2-ил)додеканамид.
К раствору (9H-флуорен-9-ил)метил (R)-3-((R)-2-додеканамидо-3-(гексадецилокси)пропилтио)-1-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-1-оксопропан-2-илкарбамата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшийся гель разводили с помощью ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. Смесь добавляли к толуолу и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали N-((R)-1-((R)-2-амино-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропилтио)-3 -(гексадецилокси)пропан-2-ил)доде-
канамид.
1Н ЯМР (DMSO d-6): 5 8,13 (s, 2H), 7,73 (d, 2H), 4,68 (t, 2H), 3,89-3,97 (m, 2H), 3,35-3,44 (m, 5H), 3,20-3,24 (m, 1H),2,59-2,74 (m, 4H), 2,32-2,34 (m, 1H), 2,05 (t, 2H), 1,42-1,50 (m, 4H), 1,21-1,28 (m, 40H),
0,85 (t, 6H), 0,67 (dd, 2H), 0,56 (dd, 2H). MCHP [M+H]=670,6.
Пример 12. Синтез N,N'-((R)-3-((R)-2-амино-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопро-пилтио)пропан-1,2-диил)дидодеканамида
Стадия 1. (N-Cbz-Cys-OtBu)2.
Раствор, содержащий (N-H-Cys-OtBu)2 (1 экв.), CbzCl (2,2 экв.) и ДИЭА (5 экв.) в ДХМ (0,1М), перемешивали при 25°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, затем промывали последовательно 1M HCl, насыщенным NaHCO3 и соляным раствором. Затем органическую фазу сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-60% EtOAc/Hex , в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде смолы белого
цвета.
Стадия 2. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-меркаптопропаноат.
Раствор, содержащий (N-Cbz-Cys-OtBu)2 (1 экв.), NEt3 (3 экв.) и ДТЭ (1,4-дитиоэритритол, 2,5 экв.) в ДХМ (0,1М), перемешивали при комнатной температуре до завершения восстановления (1,5 ч). Затем реакционную смесь разводили в ДХМ, промывали трижды 5%-ным раствором лимонной кислоты, дважды водой и один раз соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((S)-2,3-дигидроксипропилтио)пропа-
ноат.
Раствор, содержащий (2R)-(-)-глицидил-4-нитробензоат (1,1 экв.) и 1М NaOH (1,1 экв.) в tBuOH (0,1 M), перемешивали при комнатной температуре до достижения полного гидролиза нитробензоата (30 мин). К образовавшейся смеси добавляли раствор ^)-трет-бутил 2-(бензилоксикарбониламино)-3-меркаптопропаноата (1 экв.) в tBuOH (1M). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч и концентрировали в вакууме для удаления tBuOH; затем образовавшийся остаток растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды с помощью Н2О, а затем один раз с помощью соляного раствора. Органический слой сушили над безводным Na2SO4, затем концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-90% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 4. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((S)-2,3-бис(метилсульфонилокси)про-пилтио)пропаноат.
Раствор (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((S)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (1 экв.) перемешивали в безводном ДХМ (0,1M) в ледяной бане (0°С) в атмосфере N2. Затем осторожно при 0°С добавляли пиридин (8,0 экв.). Добавляли метансульфонилхлорид (4,0 экв.) и ДМАП (4-(N,N-диметиламино)пиридин, 0,1 экв.), при этом реакционной смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры, после чего осуществляли перемешивание в течение ночи. После этого неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-20% EtOAc/Hex, 20-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде масла.
Стадия 5. ^)-трет-бутил 2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-диазидопропилтио)пропаноат.
(R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((S)-2,3-бис(метилсульфонилокси)пропилтио)про-паноат (1 экв.) перемешивали в ДМФ (0,05М) при комнатной температуре в пузырьке вместимостью 40 мл. Затем осторожно добавляли NaN3 (8,0 экв.). После этого реакционный сосуд переносили в масляную баню и перемешивали при 50°С в течение 16 ч в открытом для доступа воздуха состоянии. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разводили с помощью ДХМ. Осадившиеся твердые частицы белого цвета отфильтровывали, и фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали указанное в заголовке соединениев виде беловатого твердого вещества.
Стадия 6. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-диаминопропилтио)пропаноат.
(R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-диазидопропилтио)пропаноат (1 экв.) перемешивали в безводном EtOH (0,05M) в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем добавляли Pd(OH)2 (0,5 экв.) в виде одной порции. Реакционную смесь продували и затем перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем неочищенный продукт дважды фильтровали через целит и хлопковую пробку. Органический продукт концентрировали и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 7. (5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1-фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрико-зан-5-карбоксилат.
(R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-диаминопропилтио)пропаноат (1 экв.) перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) в ледяной бане (0°С). После этого добавляли пиридин (3,7 экв.), а затем лауроилхлорид (3,7 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 5 мин, после чего нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Неочищенную реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, затем промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным NaHCO3 и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4, затем концентрировали в вакууме, неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50%EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 8. (5R,9R)-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1-фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрикозан-5-карбо-новая кислота.
(5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1-фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрикозан-5-карбо
ксилат перемешивали в растворе, содержащем 30% ТФК/ДХМ (0,05М), в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь концентрировали и разводили ДХМ. Органическую фазу промывали один раз 1М лимонной кислотой (рН 3), затем сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде вязкого масла, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 9. Бензил-^)-3 -(^)-2,3-дидодеканшидоггоопилтио)-1 -(1 -(гидроксиметил)циклопропил амино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
К раствору (5R,9R)-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1-фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрикозан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1M) добавляли гидрохлорид (1-аминоциклопропил)метанола (1,3 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% EtOAc/Нех, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде беловатого твердого вещества.
Стадия 10. N,N'-((R)-3 -(^)-2-амино-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3 -оксопропил-тио)пропан-1,2-диил)дидодеканамид.
Бензил-^)-3 -(^)-2,3-дидодеканшидоггоопилтио)-1-( 1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-1 -оксопропан-2-илкарбамат (1 экв.) перемешивали в безводном EtOH (0,05M) в атмосфере N2 при комнатной температуре. Затем добавляли Pd(OH)2 (2,1 экв.) в виде одной порции. Затем реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) до полного восстановления. Неочищенную реакционную смесь фильтровали дважды через целит и хлопковую пробку, затем органический продукт концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали ^№-(^)-3-(^)-2-амино-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диил)дидодеканамид в виде масла.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,02 (s, 1H), 6,83 (t, 1H), 6,70 (t, 1H), 3,50-3,71 (m, 6H), 3,00-3,12 (m, 3H), 2,882,94 (m, 2Н), 2,21 (t, 4Н), 1,64 (t, 4Н), 1,21-1,35 (m, 32Н), 0,93 (m, 4Н), 0,82 (t, 6Н). МСНР [М+Н]=628,0.
Пример 13. Синтез (5S,8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-5-этил-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозан-1-овой кислоты
Стадия 1. ^)-трет-бутил-1-гидроксибутан-2-илкарбамат.
К раствору ^)-2-аминобутан-1-ола (1 экв.) в ТГФ (0,26М) при 0°С добавляли ди-трет-бутилкарбонат (1 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме; и остаток разводили в этилацетате. Органический раствор промывали водой (2х), соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2. (S)-трет-бутил-2-(2-(трет-бутоксикарбониламино)бутокси)ацетат.
К раствору ^)-трет-бутил 1-гидроксибутан-2-илкарбамата (1 экв., полученного на предыдущей стадии) в ТГФ (0,23М) при 0°С добавляли порциями 60 мас.% NaH (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, а затем добавляли по каплям раствор трет-бутил-2-бромацетата (1 экв.) в ТГФ (0,12М). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Реакцию прекращали путем медленного добавления насыщенного водного раствора NH4Cl и разводили-простым эфиром. Органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-40% этилацета-та в гексанах, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 3. ^)-трет-бутил-2-(2-аминобутокси)ацетат.
К раствору ^)-трет-бутил 2-(2-(трет-бутоксикарбониламино)бутокси)ацетата (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ДХМ (0,4M) при комнатной температуре добавляли раствор 4M HCl в диоксане (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего добавляли еще одну порцию 4М HCl в диоксане (3 экв.) и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали продукт в виде масла. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4. (8S,11R,15R)-11-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-8-этил-2,2-диметил-4,10-диоксо-3,6-диокса-13-тиа-9-азагексадекан-15,16-диилдидодеканоат.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.) и ^)-трет-бутил-2-(2-шинобутокси)ацетат (1,5 экв., полученный на предыдущей стадии) в смеси (2:1) ТГФ/ДМФ (0,13М), добавляли ЭДКИ (1-этил
3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, 1,3 экв.), ГОБТ (1-гидроксибензотриазол, 1,3 экв.) и ДИЭА (5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разводили этилацетатом. Органический слой промывали смесью (2:1) насыщенный водный раствор NaHCO3/вода, соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма IS-CO) с использованием градиента 0-40% этилацетата в гексанах, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. (5S,8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-5-этил-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-аза-гексакозан-1-овая кислота.
Раствор (8S,11R,15R)-11-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-8-этил-2,2-диметил-4,10-диоксо-3,6-диокса-13-тиа-9-азагексадекан-15,16-диилдидодеканоата (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в 50% ТФК в ДХМ (0,05М) перемешивали на открытом воздухе при 40°С в течение 1,5 ч. Смесь сушили в потоке воздуха и быстро упаривали в условиях глубокого вакуума. Образовавшееся масло растворяли в 20%-ном растворе пиперидина в ТГФ (0,1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разводили этилацетатом. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% метанола в ДХМ, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества.
1H ЯМР (DMSO-d6): 5 8,30 (d, 1H), 5,11 (m, 1H), 4,27 (dd, 1H), 4,09 (dd, 1H), 3,96 (s, 2H), 3,67-3,76 (m, 2H), 3,37-3,48 (m, 2H), 2,71-2,95 (m, 4H), 2,25-2,28 (m, 4H), 1,23-1,62 (m, 41H), 0,83-0,88 (m, 6H).
MCHP [M+H]=689,4.
Пример 14. Синтез (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты
Стадия 1. ^)-трет-бутил-1-гидрокси1фопан-2-илкарбамат.
К раствору ^)-2-аминопропан-1-ола (1 экв.) в ТГФ (0,3М) добавляли при комнатной температуре ди-трет-бутилкарбонат (1 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме; остаток разводили в этил-ацетате. Органический раствор промывали водой (2х), смесью (1:1) насыщенный водный раствор МгЦО/вода и соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2. ^)-трет-бутил-1 -(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)пропан-2-илкарбамат.
К раствору ^)-трет-бутил-1-гидроксипропан-2-илкарбамат (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ТГФ (0,1М) при комнатной температуре добавляли KOH (5 экв.), тетрабутиламмонийбромид (0,1 экв.) и диэтил-3-бромпропилфосфонат (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и затем вносили в смесь ДХМ/вода. Водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (2х). Объединенные органические слои сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% этилаце-тата в гексанах, а затем 100% этилацетата, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 3. Диэтиловый эфир (6S,9R,13R)-9-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты.
К раствору ^)-трет-бутил 1-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)пропан-2-илкарбамата (1,3 экв., полученный на предыдущей стадии) в ДХМ (0,22М) при комнатной температуре добавляли 4М раствор HCl в диоксане (20 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, получая масло, которое быстро упаривали в условиях глубокого вакуума. Полученный остаток вносили в ДХМ (0,1М). К этому раствору добавляли (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6,1 экв.), ГБТУ (1,2 экв.) и ДИЭА (4 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% этилацетата в гексанах, а затем 100% этилацетата, в результате чего получали продукт
в виде масла.
Стадия 4. Диэтиловый эфир (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты.
Диэтиловый эфир (6S,9R,13R)-9-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-13-(додеканоило-кси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты (1 экв., полученный на предыдущей стадии) растворяли в 20%-ном растворе пиперидина в ТГФ (0,1M) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Вязкую реакционную смесь разводили в простом метил-трет
бутиловом эфире и этилацетате. Органический слой промывали смесью (1:1) насыщенный водный раствор NHzjCl/вода (2х), соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-5% метанола в ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. (6S,9R,13R)-9 -амино -13 -(додекано ило кси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11 -тиа-7 -азагептакозилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ДХМ (0,1 M) добавляли ТМСБ (TMSBr, триметилсилилбромид, 10 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-80% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9). Содержащие продукт фракции объединяли и лиофилизировали, в результате чего получали требуемый продукт в виде твердого вещества.
1H ЯМР (DMSO-d6): 5 7,97 (d, 1H), 5,09 (m, 1H), 4,27 (dd, 1H), 4,09 (dd, 1H), 3,86 (m, 1H), 3,20-3,43 (m, 5H), 2,59-2,85 (m, 4H), 2,24-2,27 (m, 4H), 1,62-1,69 (m, 2H), 1,23-1,51 (m, 38H), 1,14 (d, 3H), 0,83-0,88
(m, 6H). MCHP [M+H]=739,4.
Пример 15. Синтез 3-((1-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-циклопропил)метокси)пропилфос фоновой кислоты
0 "но-?' он
Стадия 1. трет-Бутил-1-(гидроксиметил)циклопропилкарбамат.
К раствору гидрохлорида этил-1-аминоциклопропанкарбоксилата (1 экв.) в EtOH (0,3 M) при комнатной температуре добавляли ди-трет-бутилкарбонат (1,5 экв.), триэтиламин (2 экв.) и ДМАП (0,05 экв.). Реационную смсь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали в вакууме; и остаток разводили в этилацетате. Органический раствор промывали смесью (1:1) насыщенный водный раствор МгЦО/вода, соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Продукт растворяли в ТГФ (0,3 М) и охлаждали до 0°С. К полученному раствору добавляли 2М LiBH4 в ТГФ (4 экв.). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч, после чего добавляли еще одну порцию 2М LiBH4 (1,3 экв.) и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и реакцию медленно прекращали, добавляя в течение 10 мин МеОН, а затем воду. Раствор перемешивали в течение 10 мин, в результате чего появлялся осадок. Осадившийся продукт фильтровали и промывали этилацетатом. Фильтрат промывали водой, соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-75% этилацетата в гексанах, в результате чего получали продукт.
Стадия 2. трет-Бутил-1-((3-(диэтоксифосфорил)пропокси)метил)циклопропилкарбамат.
К раствору трет-бутил-1-(гидроксиметил)циклопропилкарбамата (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ТГФ (0,1М) при комнатной температуре добавляли KOH (5 экв.), тетрабутиламмонийбро-мид (0,1 экв.) и диэтил-3-бромпропилфосфонат (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и затем растворяли в смеси ДХМ/вода. Водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (2х ). Объединенные органические слои сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% этилацетата в гексанах, а затем 100% этилацетата, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 3. Диэтиловый эфир 3-((1-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты.
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной в примере 14, стадия 3, но с использованием трет-бутил-1-((3-(диэтоксифосфорил)пропокси)метил)циклопропилкарбамата (полученного на предыдущей стадии) в качестве исходного продукта.
Стадия 4. Диэтиловый эфир 3-((1-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)про-панамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты.
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной в примере 14, стадия 4, но с использованием диэтилового эфира 3-((1-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты (полученного на предыдущей стадии) в качестве исходного продукта.
Стадия 5. 3 -((1-(^)-2-амино-3 -((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопро-пил)метокси)пропилфосфоновая кислота.
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной в примере 14, стадия 5, но с использованием диэтилового эфира 3-((1-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)-пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты (полученного на предыдущей стадии) в качестве исходного продукта.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,61 (d, 1H), 5,07 (m, 1H), 4,26 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,14-3,61 (m, 5H), 2,592,81 (m, 4H), 2,24-2,27 (m, 4H), 1,23-1,69 (m, 40H), 0,83-0,86 (m, 6H), 0,62-0,63 (m, 4H). MCHP
[M+H]=751,4.
Пример 16. Синтез 3-(4-(2-((R)-2-амино-3-((R)-2,3бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-этил)фенокси)пропилфосфоновой кислоты
Стадия 1. трет-Бутил-4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтилкарбамат.
К раствору трет-бутил-4-гидроксифенэтилкарбамата (1 экв.) в ДМФ (0,17М) добавляли карбонат цезия (5 экв.). Образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в реакционную смесь добавляли диэтил-3-бромпропилфосфонат (1,2 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 4 ч до поглощения трет-бутил-4-гидроксифенэтилкарбамата. Затем смесь разводили этилацетатом и промывали трижды 5%-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором NaHCO3, водой и соляным раствором. Затем органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 80100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2. Диэтил-3-(4-(2-аминоэтил)фенокси)пропилфосфонат.
К раствору трет-бутил-4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтилкарбамата (1 экв.) в ДХМ (0,14 М) добавляли 4M HCl в диоксане (50 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-15% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(4-(3-(диэтоксифосфорил)-пропокси)фенэтиламино)-3 -оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6,1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-3-(4-(2-аминоэтил)фенокси)пропилфосфонат (1,1 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,1 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь разводили этилацетатом и промывали дважды 5%-ным раствором лимонной кислоты, дважды насыщенным раствором NaHCO3, водой и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 60-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 4. (R)-3-((R)-2-амино-3-(4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтиламино)-3-оксопропил-тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(4-(3-(диэтоксифосфо-рил)пропокси)фенэтиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до исчезновения исходного продукта. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 5. 3-(4-(2-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)этил)фено-кси)пропилфосфоновая кислота.
К раствору (R)-3 -(^)-2-амино-3 -(4-(3 -(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтиламино)-3 -оксопро-пилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) в ДХМ (0,1M) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 50-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9), в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 7,13 (d, 2Н), 6,85 (d, 2Н), 5,10-5,19 (m, 2Н), 4,28 (dd, 1Н), 4,12 (dd, 1H), 3,97 (t, 1H), 3,81-3,90 (m, 1H), 2,93 (dd, 1H), 2,70-2,86 (m, 3H), 2,64-2,70 (m, 2H), 2,31-2,35 (m, 2H), 2,24-2,31 (m,
Стадия 1. Бензил-6-(трет-бутоксикарбониламино)гексаноат.
К раствору 6-(трет-бутоксикарбониламино)капроновой кислоты (1 экв.) в ацетоне (0,2М) добавляли карбонат калия (2 экв.) и (бромметил)бензол (2 экв.) в ацетоне (2М). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к реакционной смеси добавляли дополнительно порцию ДМФ для облегчения растворения карбоната калия. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 30 мин. Затем смесь разводили этилацетатом и промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты, водой и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 10-40% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 2. Гидрохлорид бензил-6-аминогексаноата.
К раствору бензил-6-(трет-бутоксикарбониламино)гексаноата (1 экв.) в ДХМ (0,17М) добавляли 4М HCl в диоксане (30 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в ДХМ и осаждали в простом ди-этиловом эфире, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 3. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(6-(бензилокси)-6-оксоге-ксиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДМФ (0,2М) добавляли ДИЭА (5 экв.), ЭДКИ (1,3 экв.) и ГОБТ (1,3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, после чего добавляли гидрохлорид бензил-6-аминогексаноата (1,2 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разводили этилацетатом и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и соляным расвтором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт.
Стадия 4. (R)-3-((R)-2-амино-3-(6-(бензилокси)-6-оксогексиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(6-(бензилокси)-6-оксоге-ксиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до завершения удаления защитных групп. Смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. 6-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)капроновая кислота.
К раствору (R)-3-((R)-2-амино-3-(6-(бензилокси)-6-оксогексиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата в EtOH (0,1M) добавляли палладиевую чернь (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи в атмосфере водорода (1 атм). Палладий отфильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 7,33 (t, 1H), 5,06-5,15 (m, 1H), 4,30 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,43 (dd, 1H), 3,20-3,31 (m, 1H), 3,09-3,19 (m, 1H), 3,04 (dd, 1H), 2,61-2,74 (m, 3H), 2,21-2,31 (m, 6H), 1,84-2,06 (m, 3H), 1,40-1,63 (m, 8H), 1,28-1,37 (m, 2H), 1,12-1,28 (m, 32H), 0,81 (t, 6H). MCHP [M+H]=673,5.
Пример 18. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. 1-Йод-2-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этокси)этан.
К раствору 1-хлор-2-(2-(2-(2-хлорэтокси)этокси)этокси)этана (1 экв.) в ацетоне (0,25М) добавляли йодид натрия (4 экв.). Смесь выдерживали при 80°С в закрытом пузырьке в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь суспендировали в ДХМ и фильтровали. После этого фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 2. Диэтил-2-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат.
1-Йод-2-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этокси)этан (1 экв.) смешивали с триэтилфосфатом (1 экв.), после чего нагревали до 160°С в течение 20 мин посредством микроволнового облучения. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3. Диэтил-2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-(2-(2-йодоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1 экв.) в ДМФ (0,5М) добавляли азид натрия (3 экв.). Реакционную смесь выдерживали при 50°С в течение ночи. Затем смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали бесцветное масло.
Стадия 4. Диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1 экв.) в EtOH (0,1M) добавляли Pd(OH)2 (0,05 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение 4 ч. Смесь фильтровали черз целит и промывали с помощью МеОН. Растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% смеси МеОН/ДХМ, содержащей 0,5% NH3, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 5. Диэтил-(14R,18R)-14-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфонат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6,1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,1 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% Ме-ОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 6. Диэтиловый эфир (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору диэтил-(14R,18R)-14-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додекано-илокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до завершения удаления защитных групп. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма IS-CO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 7. (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилси-лилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, а затем концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Н ЯМР (CDCl3): 5 8,80 (br s, 1Н), 5,13-5,24 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H), 4,15 (dd, 1H), 3,45-3,88 (m, 15H), 3,31-3,45 (m, 2H), 3,03-3,17 (m, 2H), 2,82-2,96 (m, 1H), 2,76 (dd, 1H), 2,30 (q, 4H), 1,78-2,00 (m, 2H), 1,511,66 (m, 4H), 1,17-1,37 (m, 32H), 0,86 (t, 6H). MCHP [M+H]=99,5.
Пример 19. Синтез 4-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфоновой кислоты
СцН23
Стадия 1. Диэтил-1,1-дифтор-4-йодбутилфосфонат.
К раствору диизопропиламина (1,6 экв.) в ТГФ (1,28М) медленно по каплям добавляли н-бутиллитий (1,5М в циклогексане, 1,5 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 40 мин. Затем смесь охлаждали до -78°С и к реакционной смеси медленно добавляли диэтилдифтор-метилфосфонат (1 экв.) в ГМПК (гексаметилфосфорамид, 2,1М). После этого смесь перемешивали при -78°С в течение 40 мин и к полученному раствору быстро добавляли охлажденный раствор 1,3-дийодпропана (12,8М в ТГФ, 4 экв.). Через 1,5 ч реакцию прекращали путем сливания смеси в насыщений раствор NH4Cl. Водную фазу трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 10-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде масла желтого цвета.
Стадия 2. Диэтил-4-азидо-1,1-дифторбутилфосфонат.
К раствору диэтил-1,1-дифтор-4-йодобутилфосфоната (1 экв.) в ДМФ (0,27М) добавляли азид натрия (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Смесь разводили этилацетатом и промывали водой. Водную фазу повторно экстрагировали этилацетатом. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 10-50% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3. Гидрохлорид диэтил-4-амино-1,1-дифторбутилфосфоната.
К раствору диэтил-4-азидо-1,1-дифторбутилфосфоната (1 экв.) в EtOH (2M) добавляли гидроксид палладия (0,05 экв.) и 2М HCl в простом эфире (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи в атмосфере водорода (1 атм). Палладий отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь использовали при осуществлении следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия 4. Диэтил-4-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-бис(додекано-илокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфонат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1M) добавляли гидрохлорид диэтил-4-амино-1,1-дифторбутилфосфоната (1,1 экв.), ДИЭА (3,5 экв.) и ГБТУ (1,1 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 30-70% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. Диэтил-4-(^)-2-амино-3 -((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1 -дифторбутилфосфонат.
К раствору диэтил-(4-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-бис(додекано-илокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до завершения удаления защитных групп. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 6. 4-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифтор-бутилфосфоновая кислота.
К раствору диэтил-4-((R)-2-амино-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 30-80% MeCN/10 мМ NH4OAC (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,74 (br s, 1Н), 5,07-5,17 (m, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,19 (dd, 1H), 3,66-3,78 (m, 1H), 2,25-3,51 (m, 4H), 2,66-2,98 (m, 4H), 2,23-2,36 (m, 4H), 1,05-1,84 (m, 2H), 1,60-1,84 (m, 2H), 1,44-1,58 (m, 4H), 1,17-1,34 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=731,4.
Пример 20. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12
азадотриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. ^)-((2,3-бис(додецилокси)пропокси)метил)бензол.
К раствору ^)-3-(бензилокси)пропан-1,2-диола (1 экв.) в ТГФ (0,3М) добавляли н-тетрабутиламмонийбромид (0,2 экв.), 1-бромдодекан (4 экв.) и гидроксид калия (5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разводили простым этиловым эфиром, промывали водой, 1н. соляной кислотой, водой и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь was очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 2. ^)-2,3-бис(додецилокси)пропан-1-ол.
К раствору (R)-((2,3-бис(додецилокси)пропокси)метил)бензола (1 экв.) в EtOH (0,1M) добавляли гидроксид палладия (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение ночи. Палладий отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 3. (R)-2,3-бис(додецилокси)пропилтрифторметансульфонат.
К раствору ^)-2,3-бис(додецилокси)пропан-1-ола (1 экв.) в ДХМ (0,12М) медленно добавляли пиридин (4 экв.) и трифторметансульфоновый ангидрид (2 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 20 мин. Смесь разводили с помощью ДХМ, промывали водой, насыщенным раствором сульфата меди, водой и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт (перед осуществлением экспресс-хроматографии проводили деактивацию силикагеля с использованием МеОН).
Стадия 4. (5R,9R)-трет-бутил-9-(додецилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоксилат.
К раствору ^)-2,3-бис(додецилокси)гфопилтрифторметансульфоната (1 экв.) в этаноле (0,15М) добавляли (R)-трет-бутил-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 1,5 экв.) и карбонат калия (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 30 мин. Отфильтровывали соль из реакционной смеси и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-40% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 5. (R)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3-бис(додецилокси)про-пил)тио)пропановая кислота.
Раствор (5R,9R)-трет-бутил-9-(додецилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоксилата в 50% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (30 мин). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3) и один раз смесью (1:2) 1н. HCl/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученное воскообразное твердое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 6. Диэтил-(14R,18R)-14-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфонат.
К раствору (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3-бис(додецилокси)про-пил)тио)пропановой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,3 экв., полученный согласно методу, описанному в примере 18, стадия 4), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 7. Диэтил-(14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфонат.
К раствору диэтил-(14R,18R)-14-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до полного удаления защитной группы. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 8. (14R,18R)-14 -амино -18 -(додецило кси)-13-оксо-3,6,9,20 -тетраокса-16 -тиа-12 -азадотри-аконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтил-(14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (20 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 50-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,73 (br s, 1Н), 4,17 (br s, 1Н), 3,70-3,83 (m, 3Н), 3,57-3,70 (m, 10Н), 3,50-3,57 (m, 4Н), 3,45-3,50 (m, 2Н), 3,33-3,45 (m, 4Н), 3,02-3,16 (m, 2Н), 2,65-2,79 (m, 2Н), 1,90 (dd, 2H), 1,47-1,61 (m, 4Н), 1,16-1,36 (m, 36Н), 0,88 (t, 6Н). МСНР [М+Н]=71,5.
Пример 21. Синтез (9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты
Стадия 1. Диэтил-3-(2-бромэтокси)-1,1-дифторпропилфосфонат.
Раствор диизопропиламина (2 экв.) в безводном ТГФ (1М) охлаждали в бане со смесью ацетон-сухой лед. К раствору добавляли по каплям с помощью шприца н-бутиллитий (1,5М в циклогексане, 1,6 экв.). После осуществления добавления реакционную смесь нагревали в бане с ледяной водой и перемешивали в течение 30 мин. Затем реакционную смесь снова охлаждали до -78°С в бане со смесью ацетон-сухой лед и обрабатывали с помощью шприца раствором диэтилдифторметилфосфоната (1 экв.) в ГМПК (1:1 об./об.). Цвет реакционной смеси мгновенно изменялся с темно-коричневого на светло-желтый. Смеси давали перемешиваться в течение одного часа. К указанной выше реакционной смеси быстро добавляли с помощью шприца охлажденный раствор 1-бром-2-(2-бромэтокси)этана (3 экв.) в ТГФ (0,6М) и реакционной смеси давали перемешиваться еще в течение 3 ч, после чего реакцию прекращали с помощью 1н. HCl. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, значение рН доводили до <4 с помощью 1н. HCl и трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-70% EtOAc/Hex, а затем с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на 08-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 20-50% MeCN (0,035% ТФК) в Н2О (0,05% ТФК), в результате чего получали продукт в виде масла светло-желтого цвета.
Стадии 2 и 3. Гидрохлорид диэтил-3-(2-аминоэтокси)-1,1-дифторпропилфосфоната.
Указанный в заголовке продукт получали из диэтил-3-(2-бромэтокси)-1,1-дифторпропилфосфоната с помощью процедуры, описанной в примере 4, стадии 2 и 3.
Стадии 4-6. (9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6,1 экв.) и гидрохлорида диэтил-3-(2-аминоэтокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 19, стадии 4-6.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,08 (br s, 1Н), 5,11-5,24 (m, 1H), 4,31 (dd, 1H), 4,08-4,25 (m, 2H), 3,64-3,80 (m, 3H), 3,48-3,64 (m, 2H), 2,99-3,19 (m, 3H), 2,82 (dd, 1H), 2,72 (dd, 1H), 2,23-2,37 (m, 6H), 1,51-1,64 (m, 4H), 1,16-1,36 (m, 32H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H]=761,4.
Пример 22. Синтез (12R,16R)-12-амино-16-(додецилокси)-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты
Стадии 1-3. Гидрохлорид диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната. Продукт получали из 1,2-бис(2-йодоэтокси)этана с помощью процедуры, описанной в примере 19, стадии 1-3.
Стадии 4-6. (12R,16R)-12-амино-16-(додецилокси)-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной согласно процедуре,
описанной в примере 20, стадия 5) и гидрохлорида диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 19, стадии 4-6.
1Н ЯМР (CDCb): 5 9,15 (br s, 1H), 4,16 (br s, 1H), 3,48-3,77 (m, 9H), 3,34-3,48 (m, 4H), 3,07-3,17 (m, 2H), 2,93-3,07 (m, 2H), 2,67-2,82 (m, 2H), 2,25-2,41 (m, 2H), 1,62-1,71 (m, 2H), 1,45-1,60 (m, 4H), 1,04-1,35 (m, 36H), 0,87 (t, 6H). МСНР [М+Н]=777,5.
Пример 23. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(октаноилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азаоктакозилфосфоновой кислоты
Стадия 1. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопро-пилтио)пропан-1,2-диилдиоктаноат.
Продукт получали из ^)-трет-6утил 2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (10, 1 экв.) и октаноилхлорида (3,7 экв.) с помощью процедуры, описанной для соединения 11.
Стадия 2. (5R,9R)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(октаноилокси)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азанонадекан-5-карбоновая кислота.
Продукт получали из (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдиоктаноата с помощью процедуры, описанной для соединения 6.
Стадии 3-5. (14R,18R)-14-амино-18-(октаноилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азаокиакозилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(октаноилокси)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азанонадекан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) и диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1,3 экв., из примера 18, стадия 4) с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадии 6-8.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,18 (t, 1H), 5,04-5,11 (m, 1H), 4,27 (dd, 1H), 4,10 (dd, 1H), 3,46-3,56 (m, 8H), 3,38-3,56 (m, 4H), 3,27-3,36 (m,1H), 3,18-3,25 (m, 2H), 2,74-2,83 (m, 2H), 2,68 (dd, 1H), 2,57 (dd, 1H), 2,212,33 (m, 4H), 1,55-1,67 (m, 2H), 1,44-1,55 (m, 4H), 1,16-1,32 (m, 16H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=687,4.
Пример 24. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(деканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азатриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. (R)-3-((R)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопро-пилтио)пропан-1,2-диилбис(деканоат).
Продукт получали из (R)-трет-бутил-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (10,1 экв.) и деканоилхлорида (3,7 экв.) с помощью процедуры, описанной для соединения 11.
Стадия 2. (5R,9R)-9-(деканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагеникозан-5-карбоновая кислота.
Продукт получали из (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилбис(деканоата) с помощью процедуры, описанной для соединения 6.
Стадии 3-5. (14R,18R)-14-амино-18-(деканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азатриаконтилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-9-(деканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагеникозан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) и диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1,3 экв., полученного согласно процедуре, описанной в примере 18, стадия 4) с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадии 6-8.
1Н ЯМР (CDCb): 8 8,67 (br s, 1H), 5,07-5,16 (m, 1H), 3,29 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,40-3,73 (m, 13H), 3,26-3,38 (m, 2Н), 3,02 (dd, 1Н), 2,87-2,97 (m, 1Н), 2,78 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,18-2,29 (m, 4H), 1,75-1,89 (m, 2H), 1,46-1,59 (m, 4H), 1,10-1,31 (m, 24H), 0,81 (t, 6H). MCHP [М+Н]=743,5.
Пример 25. Синтез (14R,18R)-14-амино-13,21-диоксо-18-(тетрадеканоилокси)-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азатетратриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. (R)-3 -(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3 -трет-бутокси-3 -оксопро-пилтио)пропан-1,2-диилдитетрадеканоат.
Продукт получали из ^)-трет-бутил 2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (10, 1 экв.) и тетрадеканоилхлорида (3,7 экв.) с помощью процедуры, описанной для соединения 11.
Стадия 2. (5R,9R)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-9-(тетрадеканоилокси)-2,11-диокса-7-тиа-4-азапентакозан-5-карбоновая кислота.
Продукт получали из (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдитетрадеканоата с помощью процедуры, описанной для соединения 6.
Стадии 3-5. (14R,18R)-14-амино-13,21-диоксо-18-(тетрадеканоилокси)-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азатетратриаконтилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-9-(тетрадеканоилокси)-2,11-диокса-7-тиа-4-азапентакозан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) и диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1,3 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4) с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадии 6-8.
1H ЯМР (CDCl3): 5 7,30 (br s, 1H), 5,13-5,23 (m, 2H), 4,30-4,43 (m, 2H), 4,07-4,20 (m, 2H), 3,44-3,87 (m, 11Н), 2,92-3,13 (m, 3Н), 2,68-2,92 (m, 4Н), 2,22-2,38 (m, 4Н), 1,69-2,17 (m, 8Н), 1,52-1,67 (m, 4Н), 1,101,36 (m, 32Н), 0,88 (t, 6Н). МСНР [М+Н]=855,6.
Пример 26. Синтез ((14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадии 1-8. (R)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановая кислота..
Указанный в заголовке продукт получали из ^)-3-(додецилокси)пропан-1,2-диола с помощью процедуры, описанной в примере 11, стадии 1-8.
Стадия 9. (9Н-флуорен-9-ил)метил-((14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамат.
К раствору, содержащему да-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((^)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем диэтил-(2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)-этил)фосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 10. Диэтил((14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфонат.
К раствору ((9Н-флуорен-9-ил)метил ((14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додеканамидо-13 -оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в смеси (4:1) ТГФ/ДМФ. Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при 25°С и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 11. (14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриа-контил)фосфоновая кислота.
К раствору диэтил((14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего после лиофилизации получали ((14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислот в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,84 (s, 2Н), 6,54 (d, 2Н), 4,20 (t, 2Н), 4,07-4,11 (m, 2Н), 3,49-3,70 (m, 12Н), 3,313,36 (m, 4Н), 3,00-3,02 (m, 4Н), 2,72 (d, 4H), 2,15 (t, 2H), 1,43-1,55 (m, 6H), 1,16-1,22 (m, 32H), 0,80 (t, 6H).
MCHP [М+Н]=784,5.
Пример 27. Синтез ((14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадия 1. ^)-2-((додецилокси)метил)оксиран.
Раствор ^)-3-(додецилокси)пропан-1,2-диола (1 экв.) в смеси HBr/АсОН (33 мас.%, 0,4М) перемешивали при 35°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, разводили с помощью ДХМ и значение рН доводили до 7 путем добавления насыщенного раствора Na2CO3. Органический слой отделяли, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в МеОН (0,5М), охлаждали до 0°С и обрабатывали с помощью NaOH (3н. раствор в МеОН, 2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и разводили с помощью Et2O. Органический слой отделяли, промывали Н2О и соляным раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла без дополнительной очистки.
Стадия 2. ^)-трет-бутил 2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-3-(додецилокси)-
2- гидроксипропил)тио)пропаноат.
Раствор, содержащий ^)-2-((додецилокси)метил)оксиран (1,1 экв.), да-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 1 экв.) и 1М K2CO3 (1,1 экв.) в tBuOH (0,1М), перемешивали при 25°С в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления tBuOH и растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды водой и один раз соляным раствором. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3. (5R,9R)-5 -(трет-бутоксикарбонил)-1 -(9Н-флуорен-9-ил)-3 -оксо-2,11 -диокса-7-тиа-4-азатрикозан-9-илдодеканоат.
Раствор (R)-трет-бутил-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-3-(додецилокси)-2-гидроксипропил)тио)пропаноата (1 экв.) в ДХМ (0,1М) охлаждали в ледяной бане. Добавляли пиридин (3,0 экв.), а затем додеканоилхлорид (3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и промывали с помощью насыщенного водного раствора NH4Cl. Водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 4. (R)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2-(додеканоилокси)-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановая кислота.
Раствор ((5R,9R)-5-(трет-бутоксикарбонил)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-9-илдодеканоата в 40% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3) и один раз смесью (1:2) 1н. HCl/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученное воскообразное твердое вещество использовали без дополнительной очистки.
Стадии 5-7. ((14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-
3- (((R)-2-(додеканоилокси)-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадии 9-11.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,82 (t, 2Н), 7,11 (br s, 4Н), 5,00-5,05 (m, 2Н), 3,76 (t, 2Н), 3,16-3,60 (m, 12Н), 2,92 (dd, 2H), 2,73-2,81 (m, 2H), 2,62-2,67 (m, 2H), 2,32-2,34 (m, 1H), 2,28 (t, 2H), 1,68-1,77 (m, 3H), 1,431,54 (m, 5H), 1,23-1,27 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=785,5.
Пример 28. Синтез (11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил) фосфоновой кислоты
ОС12Н25
NH2 f О
Стадия 1. ^)-трет-бутил-( 1 -(2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этокси)пропан-2-ил)кар-бамат.
Суспензию, содержащую (S)-трет-бутил-(1-гидроксипропан-2-ил)карбамат (1 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 14, стадия 1), диэтил-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)-этил)фосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 5, стадия 1), KOH (3
экв.) и BuNBr (0,11 экв.) в ТГФ (0,1М), перемешивали при 25°С в течение ночи. Реакционную смесь разводили с помощью EtOAc. Органический слой отделяли, промывали Н2О, насыщенным раствором NH4Cl и соляным раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2. (S)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)этокси)этил)фосфонат.
Раствор (S)-трет-бутил-(1-(2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этокси)пропан-2-ил)карбамата (1 экв.) в смеси 4н. HCl/диоксан (0,4М) перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3. (9Н-флуорен-9-ил)метил ((11S,14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамат.
К раствору, содержащему (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановую кислоту (1 экв., полученную с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем ^)-диэтил (2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)этокси)этил)фосфонат (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадии 4 и 5. ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (9H-флуорен-9-ил)метил((11S,14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамата с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадии 10 и 11.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,63 (s, 2Н), 6,59 (d, 2Н), 4,04-4,13 (m, 4Н), 3,45-3,72 (m, 11Н), 3,43 (d, 2H), 3,323,36 (m, 4Н), 3,00-3,13 (m, 4Н), 2,72 (d, 2Н), 2,13 (t, 2Н), 1,44-1,55 (m, 6Н), 1,17-1,22 (m, 32Н), 1,12 (d, 3H), 0,81 (t, 6H). МСНР [М+Н]=798,5.
Пример 29. Синтез (11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил) фосфоновой кислоты
Стадии 1-3. ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадия 5) и ^)-диэтил(2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)-этокси)этил)фосфоната (1,2 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадия 2) с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадии 3-5.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,21 (br s, 1Н), 4,10-4,16 (m, 3Н), 3,36-3,82 (m, 18Н), 3,06 (dd, 2H), 2,91 (dd, 2H), 2,02-2,06 (m, 4H), 1,84-1,89 (m, 2H), 1,51-1,58 (m, 8H), 1,13-1,23 (m, 32H), 1,17 (d, 3H), 0,81 (t, 6H). MCHP
[M+H]=785,5.
Пример 30. Синтез ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9Д2-диазадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадия 1. ^)-трет-бутил-( 1 -((2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)токси)этокси)этил)амино)-1 -оксопропан-2-ил)карбамат.
К раствору, содержащему ^)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропановую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем диэтил-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-этил)фосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 5, стадия 3). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого мас-
ла.
Стадия 2. (S)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропанамидо)этокси)этокси)этил)фосфонат.
Раствор ^)-трет-бутил-( 1 -((2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этил)амино)-1 -окаопропан-2
ил)карбамата (1 экв.) в смеси 4н. HCl/диоксан (0,4 М) перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадии 3-5. (9Н-флуорен-9-ил)метил-(11S, 14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-(додецилокси)-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9,12-диазадотриаконтан-14-ил)карбамат.
Указанный в заголовке продукт получали из ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадия 5) и (S)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)этокси)-этил)фосфоната (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадии 3-5.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 9,28 (br s, 1Н), 8,16 (t, 1H), 4,18-4,25 (m, 1H), 3,08-3,65 (m, 16H), 2,93 (dd, 2H), 2,76 (dd, 2H), 2,59-2,67 (m, 4H), 2,32-2,34 (m, 2H), 1,66-1,75 (m, 4H), 1,43-1,48 (m, 4H), 1,21-1,29 (m, 35H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=798,5.
Пример 31. Синтез ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9Д2-диазадотриаконтил)фосфоновой кислоты
^ОС|гН25
Стадии 1-3. ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9,12-диазадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и ^)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)-этокси)этил)фосфоната (1,2 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 30, стадия 2) с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадии 3-5.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 9,38 (br s, 1Н), 8,14 (t, 2Н), 4,18-4,25 (m, 1Н), 3,92-4,00 (m, 1Н), 3,06-3,67 (m, 15Н), 2,92 (dd, 2H), 2,79 (dd, 2H), 2,59-2,73 (m, 4H), 2,07 (t, 2H), 1,65-1,75 (m, 2H), 1,42-1,50 (m, 4H), 1,211,28 (m, 35H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=811,5.
Пример 32. Синтез (15R,19R)-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-овой кислоты
Стадия 1. (15R, 19R)-трет-бутил-15-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-19-(додеци-локси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-оат.
К раствору, содержащему ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((^)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановую кислоту (1 экв., полученную с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадия 5) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем трет-бутил-3-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)пропаноат (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 2. (15R,19R)-трет-бутил-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-оат.
К раствору (15R, 19R)-трет-бутил-15-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-оата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в смеси (4:1) ТГФ/ДМФ. Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при 25°С и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 3. (15R,19R)-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатри-триаконтан-1-овая кислота.
Раствор (15R, 19R)-трет-бутил-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-оата в смеси (1:1) ТФК/ДХМ (0,1М) перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего после лиофилизации получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвет.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,04 (t, 1Н), 7,36 (s, 1Н), 5,04 (d, 2Н), 3,58 (t, 2Н), 3,19-3,50 (m, 20Н), 2,77 (dd,
Стадии 1-3. (15R,19R)-15-амино-19-додеканамидо-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатри-триаконтан-1-овая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и трет-бутил-3-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)-пропаноата (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 32, стадии 1-3.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,06 (t, 1Н), 7,78 (d, 1Н), 5,05 (br s, 2Н), 3,90-3,98 (m, 1Н), 3,58 (t, 2Н), 3,193,50 (m, 15Н), 2,77 (dd, 2H), 2,62 (dd, 2H), 2,39 (t, 2H), 2,05 (t, 2H), 1,42-1,48 (m, 4H), 1,21-1,29 (m, 36H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H]=748,5.
Пример 34. Синтез ((14R,18R)-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконгил)фосфоновой кислоты
Стадия 1. (14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-13-оксо-14-пальмитамидо-3,6,9-триокса-16-тиа-12-азанонадекан-18,19-диилдидодеканоат.
Раствор диэтилового эфира (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 6) в ДХМ (0,1М) охлаждали в ледяной бане. Добавляли пиридин (1,2 экв.), а затем пальмитоилхлорид (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, промывали насыщенным водным раствором NH4Cl. Водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием 0-10% Ме-ОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого
цвета.
Стадия 2. ((14R,18R)-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
К раствору (14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-13-оксо-14-пальмитамидо-3,6,9-триокса-16-тиа-12-азанонадекан-18,19-диилдидодеканоата (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/ЮмМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (рН 9), в результате чего после лиофилизации получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): 5 8,09 (br s, 2Н), 5,18 (d, 2Н), 4,62-4,70 (m, 2Н), 4,36 (d, 2H), 4,13 (dd, 2H), 3,40-3,80 (m, 13Н), 2,70-3,05 (m, 8Н), 2,27-2,32 (m, 6Н), 1,54-1,62 (m, 6Н), 1,20-1,32 (m, 56Н), 0,88 (t, 9H). МСНР
[М+Н]=1037,7.
Пример 35. Синтез (12R,16R)-12-амино-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. Диэтиловый эфир (12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты.
Указанное в заголовке соединение получали из ^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)-2-додеканшидо-3-(додецилокси)ггоопилтио) пропановой кислоты (1,0 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1,2 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 22, стадия 3) с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 9.
Стадия 2. Диэтил-((12R,16R)-12-амино-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтил)фосфонат.
Раствор диэтилового эфира (12R,16R)-12-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты в ацето-нитриле (0,1M) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После осуществления концентрирования неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% EtOAc/Нех, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества беловатого цвета.
Стадия 3. (12R, 16R)-12-амино-16-додеканамидо-1, 1 -дифтор-11 -оксо-4,7,18-триокса- 14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновая кислота.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием диэтил-((12R,16R)-12-амино-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтил)фосфоната (1 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 14, стадия 5.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,53 (t, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 3,98 (m, 1Н), 3,62 (t, 2Н), 3,55 (t, 2Н), 3,20-3,50 (m, 14Н), 2,76 (dd, 1Н), 2,62 (m, 2Н), 2,58 (m, 1Н), 2,52 (m, 2Н), 2,02-2,20 (m, 3Н), 1,49 (m, 4Н), 1,21-1,42 (m, 34Н), 0,82 (t, 6H). MCHP [M+H]=790,5.
Пример 36. Синтез (14R, 18R)-14-амино-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа- 12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты
Получение исходного соединения, а именно ^)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтиопропановой кислоты (15)
/~отв мы(tm) ^0Н OCN-C,0H;, ,0^"N'Cl°H"
f> NHCte r' NHCbz f OH
-t . CV^S^AQH - 'V^S^AA .C,0H2,
NaOH L... ДМАП 1 H
NaOH ^ ДМАП
(0gOH бензол 13 40°C
ТФК/ДХМ
oANx10H2,
о H
Стадия 1. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноат
(13).
Раствор, содержащий (2S)-(+)-глицидил-4-нитробензоат (1,1 экв.) и 1М NaOH (1,1 экв.) в tBuOH (0,1М), перемешивали при комнатной температуре до тех пор, пока не обнаруживали, что произошел полный гидролиз нитробензоата (30 мин). В полученную смесь вносили раствор ^)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-меркаптопропаноата (12, 1 экв.) в tBuOH (1M), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления tBuOH, после чего растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды водой, один раз соляным раствором, затем сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-90% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)про-пилтио)пропаноат (14).
Раствор (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (13) перемешивали в безводном бензоле (0,1М) в атмосфере азота при комнатной температуре. Добавляли децилизоцианат (2,02 экв.) и ДМАП (диметиламинопиридин, 2,02 экв.), и полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали для удаления бензола, после чего восстанавливали в ДХМ и очищали на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-50% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 3. (R)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)про-пановая кислота (15).
Раствор (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси) пропил-тио)пропаноата (14) в 30% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота. Затем остаток разводили в МТБЭ и промывали с помощью 1М лимонной
кислоты (значение рН доводили до 3). Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме, в результате чего получали ^)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропановую кислоту (15) в виде воскообразного твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 1. Диэтиловый эфир (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(децилкарбамоилокси)-
13.21- диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору, содержащему (R)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)-пропилтио)пропановую кислоту (15,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде прозрачного вязкого масла.
Стадия 2. (14R,18R)-14-амино-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-
12.22- диазадотриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(децилкарбамо-илокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ при 0°С (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 32°С в течение ночи, затем охлаждали до комнатной температуры, разводили с помощью ДХМ и концентрировали. Неочищенный продукт сушили в условиях глубокого вакуума в течение 2 ч, затем очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали (14R,18R)-14-амино-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,49 (t, 1Н), 7,32 (m, 2Н), 4,78 (m, 1Н), 4,01 (m, 2Н), 3,0-3,6 (m, 18Н), 2,88 (m, 4Н), 2,52-2,81 (m, 5Н), 1,54 (m, 2Н), 1,34 (m, 4Н), 1,12-1,24 (m, 28Н), 0,81 (t, 6H). MCHP [M+H]=801,5.
Пример 37. Синтез (15R,19R)-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23 -диазатритриаконтан-1 -овая кислота
Стадия 1. (15R,19R)-трет-бутил-15-(бензилоксикарбониламино)-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23 -диазатритриаконтан-1-оат.
К раствору, содержащему ^)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(де1цилкарбамо-илокси)пропилтио)пропановую кислоту (15,1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем трет-бутил-3-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)пропаноат (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0100% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества беловатого цвета.
Стадия 2. (15R,19R)-трет-бутил-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-оат.
Раствор (15R,19R)-трет-бутил-15-(бензилоксикарбониламино)-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-оата в MeOH (0,1М) перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем добавляли небольшую порцию (каталитическое количество) Pd/C и перемешивали. После этого добавляли раствор формиата аммония (8 экв.) в смеси (9:1) МеОН/вода, реакционный сосуд продували азотом и нагревали до 40°С в течение 4 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разводили с помощью EtOAc. Реакционную смесь фильтровали через целит, затем сушили над Na2SO4 и концентрировали, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде масла светло-желтого цвета. Сконцентрированный продукт использовали без дополнительной очистки.
Стадия 3. (15R,19R)-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23 -диазатритриаконтан-1-овая кислота.
Раствор (15R,19R)-трет-бутил-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-оата в 30%-ном растворе ТФК в ДХМ (0,3М) перемешива
ли при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота, затем очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ с 0,5% АсОН, в результате чего получали (15R,19R)-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазагритриаконтан-1-овую кислоту в виде прозрачного масла.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 12,21 (br s, 1Н), 8,22 (t, 1H), 7,23 (m, 2H), 4,92 (m, 1H), 4,18 (dd, 2H), 3,94 (m, 1H), 3,57 (t, 2H), 3,30-3,54 (m, 12H), 3,37 (t, 2H), 2,90-3,08 (m, 4H), 2,60-2,82 (m, 4H), 2,48 (t, 2H), 1,32 (m, 4H), 1,22-1,28 (m, 28H), 0,79 (t, 6H). MCHP [M+H]=765,5.
Пример 38. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1. (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(октилкарбамоилокси) про-пилтио)пропаноат.
Раствор (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (13) перемешивали в безводном бензоле (0,1М) в атмосфере азота при комнатной температуре. Добавляли октилизоцианат (2,02 экв.) и ДМАП (диметиламинопиридин, 2,02 экв.), и полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали для удаления бензола, затем восстанавливали в ДХМ и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB-FLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-50% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2. (R)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(октилкарбамоилокси)пропилтио)про-пановая кислота.
Раствор (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(октилкарбамоилокси) пропил-тио)пропаноата в 30% ТФК а ДХМ (0,3 М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота. Затем реакционную смесь разводили в МТБЭ и однократно промывали 1M лимонной кислотой (значение рН доводили до 3). Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный воскообразный твердый продукт использовали без дополнительной очистки.
Стадия 3. Диэтиловый эфир (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(октилкарбамоилокси)-
13.21- диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору, содержащему (R)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)-пропилтио)пропановую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде непрозрачного масла.
Стадия 4. (14R, 18R)-14-амино-18-(октилкарбамоилокси)-13,21 -диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-
12.22- диазатриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (14R, 18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 32°С в течение ночи, затем охлаждали до комнатной температуры, разводили с помощью ДХМ и концентрировали. Неочищенный продукт сушили в условиях глубокого вакуума в течение 2 ч, затем очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ OT^OAc (95:5) в 10 мМ MH^OAc (рН 9), в результате чего получали (14R, 18R)-14-амино-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 8,57 (t, 1Н), 7,42 (m, 2Н), 4,78 (m, 1Н), 4,01(m, 2Н), 3,0-3,6 (m, 18Н), 2,88 (m,
4Н), 2,52-2,81 (m, 5Н), 1,68 (m, 2Н), 1,54 (m, 2Н), 1,40 (m, 2Н), 1,12-1,24 (m, 20Н), 0,82 (t, 6H). МСНР [М+Н]=745,4.
Пример 39. Синтез (14R,18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты
с,5н3, NH j" О н HN. Н
но он
Стадия 1. (R)-трет-бутил-2-амино-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноат.
Раствор (R)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)про-пилтио)пропаноата (14) в МеОН (0,1М) перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем добавляли небольшую порцию (каталитическое количество) Pd/C и перемешивали. После этого добавляли раствор формиата аммония (8 экв.) в смеси (9:1) МеОН/вода, реакционный сосуд продували азотом и нагревали до 40°С в течение 4 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разводили с помощью EtOAc. Реакционную смесь фильтровали через целит, затем сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-60% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла.
Стадия 2. (R)-трет-бутил-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидо-пропаноат.
К раствору (R)-трет-бутил-2-амино-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноата в безводном ДХМ (0,1 M) при 0°С добавляли ДИЭА (1,2 экв.) и пальмитоилхлорид (1,1 экв.). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры, после чего перемешивали в течение 16 ч. Затем неочищенную реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-60% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 3. (R)-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидопропановая кислота.
Раствор (R)-трет-бутил-3-((R)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидопропаноата в 30% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота. Затем реакционную смесь разводили в МТБЭ и однократно промывали 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3). Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали. Полученное соединение использовали без дополнительной очистки.
Стадия 4. Диэтиловый эфир (14R,18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору, содержащему ^)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидо-пропановую кислоту и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде масла беловатого цвета.
Стадия 5. (14R, 18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21 -диоксо- 14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновая кислота.
Раствор диэтилового эфира (14R,18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) перемешивали при 0°С. Добавляли триметилсилилбромид (10 экв.) и давали нагреться до комнатной температуры. После этого реакционную смесь нагревали до 32°С и перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота, после чего очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH(r) (фирма ISCO) с использованием градиента 010% МеОН/ДХМ с 0,5% АсОН, в результате чего получали (14R, 18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновую кислоту в виде бесцветного масла.
1Н ЯМР (DMSO-d6): 5 7,32 (t, 1Н), 6,65 (t, 1Н), 5,63 (t, 1Н), 5,24 (t, 1Н), 5,16 (t, 1Н), 4,68 (m, 1Н), 4,48 (m, 1Н), 3,46-3,78 (m, 15Н), 3,17 (m, 4H), 2,75-2,95 (m, 4H), 2,15-2,35 (m, 4H), 1,56 (m, 4H), 1,49 (m, 4H), 1,20-1,45 (m, 52H), 0,87 (t, 9H). MCHP [M+H]=1039,7.
В табл. 1 представлены соединения формулы (I) с соответствующими физическими данными и данными, полученными в результате анализа, которые получали с использованием соответствующих исходных продуктов путем повторения процедур, описанных в приведенных выше примерах.
Соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, анализировали с целью оценки их способности модулировать Толл-подобный рецептор 2.
Анализ с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека.
Биологическую активность соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, тестировали с помощью анализа с использованием человеческой периферической крови (человеческие РВМС) с использованием панели образцов, полученных от независимых здоровых доноров, согласно руководствам, утвержденным наблюдательным комитетом в области здравоохранения. Человеческие РВМС выделяли из свежей периферической крови с использованием градиента плотности фиколла (фирма GE healthcare, 17-1440-03). 30-35 мл человеческой периферической крови наслаивали на 15 мл фиколла в конических пробирках вместимостью 50 мл, после чего их центрифугировали при 1800 об/мин (центрифуга фирмы Eppendorf 5810R, снабженная обеспечивающими биобезопасность крышками, закрывающими стаканы для пробирок) при комнатной температуре в течение 30 мин без ускорения и торможения. Затем собирали слои лейкоцитарных пленок и переносили в новые конические пробирки вместимостью 50 мл и дважды промывали полной средой, которая представляла собой среду RPMI 1640 (11875085, фирма Invitrogen Corporation, Карлсбад, шт. Калифорния), дополненную 10% инактивирован-ной тепловой обработкой фетальной телячьей сыворотки (фирма Gibco, 10099-141), 1% Pen-Strep (фирма Gibco, № 15140-122), 1 мМ заменимыми аминокислотами (фирма Gibco № 11140-050), 1 мМ пируватом натрия (фирма Gibco № 11360-070), 2мМ L-глутамином (фирма Gibco № 25030-081) и 1мМ HEPES (фирма Gibco № 15630-080). После этого подсчитывали жизнеспособные клетки с использованием окрашивания трипановым синим, высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты (фирма Becton Dickinson, № 353070) с плотностью 2х105 клеток/лунку в общем объеме 200 мкл полной среды. Затем добавляли соединения с использованием 10-точечного формата для получения дозовой зависимости, применяя 3-кратные разведения, начиная с концентрации 100 мкМ. Для отрицательных контролей использовали взятый в эквивалентной концентрации DMSO. Супернатанты культур собирали после инкубации в течение 18-24 ч при 37°С, 5% СО2, их хранили при -20°С до дальнейшего использования.
Уровни IL-6 в супернатантах культур измеряли с использованием набора Luminex (фирма Biorad). Анализ данных осуществляли с помощью программного обеспечения Prism фирмы GraphPad (Сан-Диего, Калифорния). Для каждого соединения строили кривые дозовой зависимости и определяли значения ЕС50 как концентрации, при которых величина сигнала составляла 50% от максимальной.
Анализ репортерного гена.
Линию клеток почек эмбриона человека 293 (HEK 293) стабильно трансфектировали человеческим TLR2 и вектором, содержащим репортерный ген люциферазы под контролем NF-KB (pNifty-люцифераза). В контрольном анализе применяли здоровые Hek 293-клетки, трансфектированные pNifty-Luc. Клетки культивировали в среде DMEM, дополненной 2мМ L-глутамином, 10% инактивированной тепловой обработкой FBS, 1% пенницилина и стрептомицина, 2 мкг/мл пуромицина (фирма InvivoGen, № ant-pr-5) и 5 мкг/мл бластицидина (фирма Invitrogen, № 46-1120). Буфер и субстрат для анализа люциферазы Bright-Glo(tm) получали от фирмы Promega (каталожные номера № Е263В и № Е264В субстрата и буфера соответственно). 384-луночные планшеты с прозрачным дном получали от фирмы Greiner bio-one (№ 789163-G) и они представляли собой сделанные на заказ снабженные штрих-кодом планшеты.
Клетки высевали из расчета 25000 клеток/лунку в 384-луночные планшеты в конечном объеме 50 мкл среды. Клеткам давали прикрепиться к планшетам путем культивирования в течение ночи (18 ч) при 37°С и 5% СО2. Затем в каждую лунку вносили серийные разведения тестируемых и служащих в качестве положительного контроля соединений и инкубировали в течение 7 ч при 37°С и 5% СО2. В качестве отрицательных контролей служили клетки, стимулированные только одним DMSO. После инкубации в каждую лунку добавляли в соответствии с инструкциями производителя по 30 мкл премикса буфера для анализа и субстратного буфера. Люминисцентный сигнал считывали с помощью устройства CLIPR, при этом время интегрирования составляло 20 с на один планшет.
Для каждого соединения строили кривые дозовой зависимости и определяли значения ЕС50 как концентрацию, при которой сигнал составлял 50% от максимального. Значения ЕС50 получали в виде величин, стандартизованных относительно активности резиквимода, которую принимали за 100%. Значения ЕС50 и % эффективности в отношении стимуляции TLR2 соединениями формулы (I) представлены в табл. 1.
°уС"Н23
o^Cs^X0XCIIH2J
689,4
6,5 (118%)
Оу°11н2з
°Y^SXO^C11H23
739,4
0,0192 (153%)
ОуС"Н23
751,4
0,165 (96%)
ОуС"Н23
"V*
801,5
0,41 (107%)
oYC,H2J
ОуСзХ0АС1НИ
673,5
0,108 (121%)
°гс"Ни
°Y^S^OAC"H23
799,5
0,27 (96%)
0 <уС"Н23
HNv
но'он
731,5
0,25(110%)
°Y^S^°C,2H25 "I о "°Г
771,5
0,552 (84%)
ОуС"Н23
0^A^s^CoXC|iH23
761,4
0,014 (122%)
NH2 f°C"H*
°Y^S^> OC,2H25
777,5
2,45 (60%)
cy^sXOACRHI5
687,4
3,04 (73%)
Оус> н19 NH2 r"0 0
743,4
1,45 (66%)
°YC"H2'
NH2 f° О
855,6
0,0063 (99%)
,OC12H25
V^-AA,,
784,5
1,75 (28%)
/OC12H25 NH2 Г О
V^S^OAC"H23
785,5
0,61 (77%)
НТ о Ho.9"
^^o^ *o
798,5
0,99 (37%)
°Y^S^> OC12H25
НТ о ноГ
o^^ ^^^o^ *o
785,5
1,85 (74%)
NH2 f00*"*
798,5
0,92 (59%)
NH2 ^OC12H25
HV-^A° H0.9"
811,5
2,91 (35%)
NH2 ,-0C"H"
735,6
9,13 (78%)
748,5
3,85 48%)
с,5н31 °YC"H23
(AlH Г° 0 Н\ 0 "°Г
1037,7
> 100 (47%)
NH2 /0C12H25
н% С11н2Лро
k°^°^x>
790,5
0,77(15%)
ОуМНС10Н21
Оу^8^оАмнс"нг, Н\ о
801,5
0,822 (76%)
O^NHC10H2i
A2 ii
°Y'^^S^X> NHC10H2)
Х~~л
765,5
6,21 (7%)
OyNHC8H17
0yXs-^X0ANHCiHij
"I О "°Г
745,4
7,03 (107%)
C,5H31 YHC*
0ANH Г0 О
°YX-SNA0ANHC|OH2I
HN\ о H.9"
1039,7
2,64 (92%)
СуС"ня
1128,8
0,096 (25%)
ОуСцН23
"Vx^.
767,5
15,3 (61%)
ОуС"Н23
HPS 0
729,5
4,40(101%)
ОуС"Н23
oyAtsX0ACIIH23
631,5
15,5 (54%)
ОуС"Н23
°Y^S^CAC,,H23
749,5
8,17(72%)
0^С"Н23
617,5
22,2(50%)
ОуС"Н23
о^ХзХ0АС Н
617,5
1,56(116%)
1107,7
0,565 (88%)
А,,.,
ОуХзХ> 0 ACISHK
хх"
869,5
1,36 (106%)
679,5
> 21(51%)
OyC"H23
679,5
2,09(118%)
ОуС"н23
о A2 s 1°А
679,5
4,69(102%)
О^СиНгз
HN^/
663,5
9,9 (57%)
Оус"н23
663,5
1,37 (93%)
ОуС"Н23 NH2 |-° О
Xo^^°^^NH2
690,5
1,29(101%)
NH Г° О
^NH2
602,5
5,24 (66%)
NH2 0
o^A> .A0AC|iH23
HN^
^ ^NH2
658,5
1,22 (107%)
OyC"Ha
°y 630,5
1,04 (111%)
ОуС"Н23
664,5
0,145 (117%)
OyC"H23 NH О
686,5
0,71 (121%)
°yC11H23
666,5
0,41 (119%)
°yC11H23
Y^sX0ACIH2J
616,5
1,96 (55%)
OyCnHjj
664,5
0,0044 (102%)
ОуС"Н"
645,5
0,0718 (96%)
ОуС"Н23
OyCssJ."AIIHA
NH2
762,6
0,498 (124%)
ОуС"Н23
692,5
0,04 (91%)
ОуС"Н23
о^Х^^^Х н
HNXO
691,5
0,16(93%)
ОуСПН23
Х-Ах Хо
739,5
0,068 (64%)
ОуС11Нгз
HN^ax)*
755,5
4,08 (77%)
Оу^З^С0ХС1Ня
700,6
0,257 (118%)
ОуС"Н2э
659,5
0,033 (92%)
ОуС"Н23
603,4
0,024 (95%)
ОуС"Н"
Оу1^'5А> 0Ас"Н2з HN^
673,5
30,7 (49%)
OyCi,H"
677,5
0,81 (115%)
ОуС"Н2э
HNxx
657,5
0,19(105%)
c,iHsycx:ii;;
997,7
0,96 (58%)
NH2 !--ос1еНзз
OyXsXOCieHj3
HN~] HO °H о'^'°^^о'^-^р*о
883,7
3,45 (109%)
843,5
0,038 (100%)
°YI^SAOC,2H2!
815,6
1,43 (35%)
°X-^SXNH
828,6
1,86 (20%)
OYXSX0Ci2H2j
814,5
1,91 (52%)
827,5
1,97 (30%)
-X ir
^XP'-OH
844,1
0,83 (84%)
O^/X^, S V^YQ ^X N , С, oH г i
^-x
802,0
0,82 (76%)
682,0
5,56 (72%)
O=S~OH
914,2
2,17(71%)
NH2 ГХ"Н-
763.5
0,90 (84%)
1001,7
38 (30%)
-он 0
850,5
0,0092 (145%)
Д"Н" оЛс"ня
1088,8
4,94 (104%)
C12H25
A)-^ ^ Л0Н
787,1
> 100 (47%)
NH2 Г0^^Н-0Y,-Sv^.oAC1,Ha
0" OH
727,5
0,061 (120%)
j? "X X10H21 CjH,, NH Г 0 H
P-OH
900,2
0,28 (99%)
*%Eff относительно РашзСБК4. Оценка % связывания с квасцами.
Связывание конкретных соединений формулы (I) с содержащими алюминий адъювантами при рН 6,5 оценивали с помощью ЖХВР-МС/МС для выявления присутствия соединения формулы (I) в супер-натанте.
Оценка связывания при рН 6,5.
К смеси соединения (4 мг/мл) в свободной от эндотоксинов воде добавляли 1М NaOH (2,1 экв.) до получения прозрачного раствора. Смесь, содержащую полученный раствор (0,5 мл), свободную от эндотоксинов воду (0,86 мл), 100 мМ гистидиновый буфер (0,2 мл) и служащий в качестве адъюванта гидроксид алюминия (13,78 мг/мл, 0,44 мл) перемешивали при 25°С в течение ночи, в результате чего получали препарат с концентрацией 1 мг/мл. Дополнительно в качестве контроля приготавливали препарат с концентрацией 1 мг/мл в 10 мМ гистидиновом буфере без гидроксида алюминия.
Три аликвоты по 50 мкл каждого препарата (в гистидиновом буфере, содержащем гидроксид алюминия, и без него) центрифугировали при 14000 об/мин в течение 10 мин при 4°С. Супернатант разводили, обрабатывали внутренним стандартом и анализировали с помощью ЖХВР-МС/МС с использованием баллистического градиента (от 50% CH3CN-1,0%NH4OH до 95% CH3CN-1,0%NH4OH в течение 1,5 мин) на С8-колонке (50 смх2,1 мм) фирмы Waters XBridge при температуре окружающей среды. Для каждого препарата определяли концентрацию в супернатанте. Фракцию содержащего гидроксид алюминия препарата, связанного с квасцами, рассчитывали следующим образом:
% связывания с квасцами=100% - (концентрация в супернатанте содержащего квасцы препара-та)/(концентрация в супернатанте гистидинового буфера)
Величины % связывания с квасцами для конкретных репрезентативных примеров фосфонатных соединений, предлагаемых в изобретении, представлены в табл. 2.
Следует понимать, что примеры и варианты осуществления изобретения, представленные в настоящем описании, даны только для целей иллюстрации, и что специалисты в данной области могут предложить на его основе различные модификации или изменения, которые соответствуют сущности и подпадают под сферу действия настоящего описания и объем изобретения, который определяется прилагаемой формулой изобретения. Все публикации, патенты и заявки на патент, процитированные в настоящем описании, включены в настоящее описание в качестве ссылки для всех целей.
Перечень последовательностей
<110> АЙРМ ЛЛК
<120> СОЕДИНЕНИЯ (ЛИПОПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ ЦИСТЕИНА) И КОМПОЗИЦИИ В КАЧЕСТВЕ АГОНИСТОВ TLR2, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ, ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ, РЕСПИРАТОРНЫХ И ДРУГИХ
<130> PAT054111-WO-PCT
<160> 6
<П0> Patent In, версия 3.5
<210> 1 <211> 248 <212> PRT
<213> neisseria meningitidis < 4 0 0> 1
Val Ala Ala Asp lie Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro
15 10 15
Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gin Ser Leu Thr Leu Asp Gin Ser
20 25 30
Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu ALa Ala Gin Gly Ala Glu Lys
35 40 45
Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp
50 55 60
Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe lie Arg Gin lie Glu Val Asp Gly Gin
65 70 75 80
Leu He Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gin Val Tyr Lys Gin Ser His
85 90 95
Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gin Thr Glu Gin He Gin Asp Ser Glu His
100 105 110
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль
R] I
NH L,-R2
(I),
в которой R1 обозначает Н, -С(О)-С7-С18алкил или -С(О)-С1-С6алкил;
R2 обозначает С7-С18алкил;
R3 обозначает С7-С18алкил;
L1 обозначает -CH2OC(O)NR7-;
L2 обозначает -OC(O)NR7-;
R4 обозначает -L4R5;
R5 обозначает -P(O)(OR7)2 или -C(O)OR7; L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-; каждый R7 обозначает Н; каждый R10 обозначает Н;
каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
2. Соединение по п.1, в котором
R1 обозначает Н, -С(О)-С10-С18алкил; R2 обозначает С10-С18алкил; R3 обозначает С10-С18алкил; R4 обозначает -L4R5;
R5 обозначает -P(O)(OR7)2 или -C(O)OR7; L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-; каждый R7 обозначает Н; каждый R10 обозначает Н;
каждый р независимо друг от друга выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
3. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R1 обозначает Н.
4. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R1 обозначает -С(О)-С15алкил.
5. Соединение по одному из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором
R2 обозначает -С8алкил и R3 обозначает -С8алкил
или R2 обозначает -С10алкил и R3 обозначает -С10алкил.
6. Соединение по одному из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R2 обозначает -С10алкил и R3 обозначает -С10алкил.
7. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R5 обозначает -С(О)ОН.
8. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R5 обозначает -Р(О)(ОН)2.
9. Соединение по одному из пп.1-8, в котором L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-; каждый р независимо друг от друга выбран из 2, 3 и 4, и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
10. Соединение по п.1, где соединение выбрано из группы, включающей
((14R,18R)-14-амино-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
(15R,19R)-15-амино-19-((децилкарбамоил)окси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-овую кислоту;
((14R,18R)-14-амино-18-((октилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтил)фосфоновую кислоту;
((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
((14R,18R)-14-ацетамидо-18-((децилкарбамоил)окси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-14-гептанамидо-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту и
((14R,18R)-18-((децилкарбамоил)окси)-14-гексанамидо-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту.
11. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью агонистов Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), содержащая в терапевтически эффективном количестве соединение по одному из пп.1-10 и фармацевтически приемлемый носитель.
12. Применение соединения по одному из пп.1-10 для приготовления лекарственного средства для
лечения у пациента заболевания, связанного с модуляцией Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), где заболевание выбирают из инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, респираторного заболевания, дерматологического заболевания и аутоиммунного заболевания.
13. Применение по п.12, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструк-тивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
14. Способ лечения заболевания, связанного с модуляцией Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), выбранного из инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, респираторного заболевания, дерматологического заболевания и аутоиммунного заболевания, заключающийся в том, что вводят пациенту, нуждающемуся в таком лечении, в эффективном количестве соединение по одному из пп.1-10.
15. Способ по п.14, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
16. Применение соединения по одному из пп.1-10 в лечении заболевания, ассоциированного с активностью Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), где заболевание представляет собой инфекционное заболевание, воспалительное заболевание, респираторное заболевание, дерматологическое заболевание или аутоиммунное заболевание.
17. Применение по п.16, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструк-тивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
023725
023725
- 1 -
- 1 -
(19)
023725
023725
- 1 -
- 1 -
(19)
023725
023725
- 1 -
- 1 -
(19)
023725
023725
- 4 -
- 3 -
023725
023725
- 65 -
023725
023725
- 74 -
- 74 -
023725
023725
- 87 -
- 87 -
023725
023725
- 87 -
- 87 -
023725
023725
- 92 -
- 92 -
023725
023725
- 97 -
- 97 -
023725
023725
- 99 -
- 99 -
023725
023725
- 104 -
- 104 -
023725
023725
- 105 -
- 105 -