(57) Реферат / Формула:
Предложены фармацевтические композиции, содержащие этеплирсен. Также предложены способы лечения мышечного заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, включающие введение указанному субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Евразийское (21) 201892675 (13) Al
патентное
ведомство
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки (51) Int. Cl. A61K31/7125 (2006.01)
2019.04.30 A61P21/00 (2006.01)
(22) Дата подачи заявки 2017.05.24
(54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЭТЕПЛИРСЕН
(31) 62/340,947; 62/429,160
(32) 2016.05.24; 2016.12.02
(33) US
(86) PCT/US2017/034265
(87) WO 2017/213854 2017.12.14
(71) Заявитель:
САРЕПТА ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.
(US)
(72) Изобретатель: Холт Томас (US)
(74) Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Предложены фармацевтические композиции, содержащие этеплирсен. Также предложены способы лечения мышечного заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, включающие введение указанному субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
2420-553270ЕА/032 ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЭТЕПЛИРСЕН РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США № 62/340947, поданной 24 мая 2016 г., и предварительной заявке на патент США № 62/429160, поданной 2 декабря 2 016 г, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Антисмысловая технология обеспечивает возможность
модулирования экспрессии одного или более конкретных генных
продуктов, включая альтернативные продукты сплайсинга, и
является исключительно полезной в ряде терапевтических,
диагностических и исследовательских применений. Принцип, лежащий
в основе антисмысловой технологии, заключается в том, что
антисмысловое соединение, например олигонуклеотид, которое
гибридизируется с целевой нуклеиновой кислотой, модулирует
функции экспрессии гена, такие как транскрипция, сплайсинг или
трансляция, посредством любого из целого ряда антисмысловых
механизмов. Специфичность антисмысловых соединений к
последовательности делает их привлекательными в качестве инструментов для валидации мишени и генной функционализации, а также в качестве терапевтического средства для селективного модулирования экспрессии генов, вовлеченных в заболевание.
Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) вызвана дефектом экспрессии белка дистрофина. Ген, кодирующий этот белок, содержит 7 9 экзонов, расположенных в более чем 2 миллионах нуклеотидов ДНК. Любая экзонная мутация, которая изменяет рамку считывания экзона, или вводит стоп-кодон, или характеризуется удалением всего экзона или экзонов вне рамки считывания, или дупликацией одного или более экзонов, потенциально способна нарушать выработку функционального дистрофина, что приводит к МДД.
В недавних клинических исследованиях испытывали безопасность и эффективность олигонуклеотидов сплайсингового
переключения (SSO) для лечения МДД на основе технологии SSO для индуцирования альтернативного сплайсинга пре-мРНК путем стерической блокады сплайсингосомы (Cirak et al. , 2011; Goemans et al., 2011; Kinali et al. , 2009; van Deutekom et al. , 2007). Однако, несмотря на описанные успехи, фармакологические возможности, доступные для лечения МДД, ограничены.
Этеплирсен представляет собой фосфордиамидатморфолиновый олигомер (РМО), разработанный для пропуска экзона 51 гена дистрофина человека у пациентов с МДД, состояние которых поддается улучшению путем пропуска экзона 51, для восстановления рамки считывания и выработки функциональной более короткой формы белка дистрофина. Компания Sarepta Therapeutics, Inc., подала заявку на регистрацию нового лекарственного средства (NDA) в Управление по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США (FDA), ожидая одобрения способа лечения МДД у пациентов, состояние которых поддается улучшению путем пропуска экзона 51. Заявка на NDA компании Sarepta в настоящее время находится на рассмотрении в FDA.
Хотя в области антисмысловых технологий был достигнут значительный прогресс, по-прежнему существует потребность в фармацевтических композициях, содержащих олигонуклеотиды.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно настоящему изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие этеплирсен, причем концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл. Также предложены способы лечения мышечного заболевания у пациента, нуждающегося в указанном лечении, включающие введение субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Следовательно, в первом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) этеплирсен;
b) хлорид натрия;
c) хлорид калия;
d) калия дигидрофосфат;
e) натрия гидрофосфат; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
Также в состав могут входить другие вещества, известные специалисту в данной области техники.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 40-60 мг этеплирсена;
b) 6,4-9,6 мг хлорида натрия;
c) 0,16-0,24 мг хлорида калия;
d) 0,16-0,24 мг дигидрофосфата калия;
e) 0,91-1,37 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 80-120 мг этеплирсена;
b) 12,8-19,2 мг хлорида натрия;
c) 0,32-0,48 мг хлорида калия;
d) 0,32-0,48 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,02-1,54 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 400-600 мг этеплирсена;
b) 64-96 мг хлорида натрия;
c) 1,6-2,4 мг хлорида калия;
d) 1,6-2,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 9,0-14,0 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению имеют концентрацию этеплирсена примерно 50 мг/мл.
В другом аспекте предложен способ лечения мышечного заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фигуре 1 показана типичная хроматограмма
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)
синтезированной неочищенной лекарственной субстанции этеплирсена с удаленными защитными группами (AVI-4 658) (см. Пример 1).
На Фигуре 2 показана типичная хроматограмма ВЭЖХ раствора очищенной лекарственной субстанции этеплирсена (см. Пример 2).
На Фигуре 3 показана типичная хроматограмма ВЭЖХ обессоленной и лиофилизированной лекарственной субстанции этеплирсена (см. Пример 2).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Предложены фармацевтические композиции, содержащие
этеплирсен. Также предложены способы лечения мышечного
заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном лечении,
включающие введение субъекту фармацевтической композиции
согласно настоящему изобретению. Морфолиновый олигонуклеотид
согласно настоящему изобретению (этеплирсен) обладает более
сильным сродством к ДНК и РНК, при этом не теряя селективности к
последовательности, по сравнению с исходными или
немодифицированными олигонуклеотидами. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид согласно настоящему изобретению минимизирует или предотвращает расщепление под действием РНКазы Н. В некоторых вариантах реализации антисмысловой олигонуклеотид согласно настоящему изобретению не активирует РНКазу Н.
Определения
Ниже приведены определения различных терминов, применяемых в описании настоящего изобретения. Эти определения относятся к терминам, применяемым в настоящем описании и формуле изобретения, если они не ограничены иным образом в конкретных обстоятельствах, индивидуально или как часть большей группы.
Термин "связанный с подложкой" относится к химическому фрагменту, ковалентно связанному со средой подложки.
Термин "среда подложки" относится к любому материалу, включая, например, любую частицу, гранулу или поверхность, к которой олигомер может быть прикреплен или на которой синтезирован, или которая может быть модифицирована для
прикрепления или синтеза олигомера. Примеры подложек включают, без ограничения, неорганические подложки и органические подложки, такие как стекло и модифицированное или функционализированное стекло, пластики (включая акриловые, полистирол и сополимеры стирола и других материалов, полипропилен, полиэтилен, полибутилен, полиуретаны, тефлон и т.д.), полисахариды, найлон или нитроцеллюлозу, керамики, смолы, диоксид кремния или материалы на его основе, включая кремний и модифицированный кремний, углерод, металлы, неорганические стекла, пластики, пучки оптических волокон и ряд других полимеров. Особенно подходящие твердые подложки и твердые поверхности для некоторых вариантов реализации находятся в устройстве с проточной ячейкой. В некоторых вариантах реализации способов согласно настоящему изобретению среда подложки содержит полистирол с 1% сшитого дивинилбензола.
В некоторых вариантах реализации типичная среда подложки содержит по меньшей мере один активный центр для прикрепления или синтеза олигомера. Например, в некоторых вариантах реализации среда подложки согласно настоящему изобретению содержит одну или более концевых аминогрупп или гидроксильных групп, способных образовывать химическую связь с поступающим нуклеозидом или другой активированной группой для прикрепления или синтеза олигомера.
Некоторые типичные среды подложки, которые подходят для
применения в способах согласно настоящему изобретению, включают,
без ограничения, следующие материалы: стекло с контролируемой
пористостью (CPG); оксалил-стекло с контролируемой пористостью
(см., например, Alul et al., Nucleic Acids Research 1991, 19,
1527); содержащие диоксид кремния частицы, такие как пористые
стеклянные гранулы и силикагель, такой как силикагель,
получаемый при взаимодействии трихлор-[3-(4-хлорметил)-фенил]-
пропилсилана и пористых стеклянных гранул (см. Parr and
Grohmann, Angew. Chem. Internal. Ed. 1972, 11, 314; продаваемый
под торговой маркой "PORASIL Е" от Waters Associates,
Framingham, Mass., USA); сложный моноэфир 1,4-
дигидроксиметилбензола и диоксида кремния (см. Bayer and Jung,
Tetrahedron Lett. 1970, 51, 4503; продаваемый под торговой
маркой "ВЮРАК" от Waters Associates); TENTAGEL (см., например,
Wright et al. , Tetrahedron Lett. 1993, 34, 3373);
гранулированная матрица сшитого сополимера
стирола/дивинилбензола, или POROS, сополимер
полистирола/дивинилбензола (доступный от PerSeptive Biosystems); растворимая среда подложки, такая как полиэтиленгликоли (ПЭГ)
(см. Bonora et al. , Organic Process Research & Development 2000,
4, 225-231); подложка ПЭПС, которая представляет собой
полиэтиленовую (ПЭ) пленку с привитыми боковыми длинными цепями
полистирола (ПС) (см. Berg et al., J. Am. Chem. Soc. 1989, 111,
8024 и международную заявку на патент № WO 1990/02749);
сополимеры диметилакриламида, сшитого N,N'-
бисакрилоилэтилендиамином, содержащие известное количество N-трет-бутоксикарбонил-бета-аланил-N'-акрилоилгексаметилендиамина
(см. Atherton et al., J. Am. Chem. Soc. 1975, 97, 6584; Atherton et al. , Bioorg. Chem. 1979, 8, 351; и Atherton et al., J. Chem. Soc. Perkin I 1981, 538); стеклянные частицы, покрытые гидрофобным сшитым полимером стирола (см. Scott et al., J. Chrom. Sci. 1971, 9, 577); фторированный полимер этилена, на который привит полистирол (см. Kent and Merrifield, Israel J. Chem. 1978, 17, 243 и van Rietschoten в Peptides 1974, Y. Wolman, Ed., Wiley and Sons, New York, 1975, стр. 113-116); полипропиленовые мембраны с покрытием из гидроксипропилакрилата
(Daniels et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 4345); полиэтиленовые стержни с привитой на них акриловой кислотой
(Geysen et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1984, 81, 3998); "чайные пакетики", содержащие традиционно применяемые полимерные гранулы (Houghten, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1985, 82, 5131); и комбинации указанных материалов.
Термин "устройство с проточной ячейкой" относится к камере, содержащей поверхность (например, твердую поверхность), вдоль которой могут протекать один или более текучих реагентов
(например, жидкость или газ).
Термин "лечение" в настоящем описании включает лечение, устраняющее, уменьшающее или облегчающее по меньшей мере один
симптом у субъекта, или оказывающее действие, задерживающее развитие заболевания. Например, лечение может представлять собой уменьшение одного или нескольких симптомов заболевания, или полное устранение заболевания, такого как мышечная дистрофия, например, мышечная дистрофия Дюшенна. В рамках настоящего описания термин "лечить" также обозначает останавливать, задерживать наступление (т.е. период до клинической манифестации заболевания) или снижать риск развития или ухудшения заболевания. Термин "защищать" в настоящем описании обозначает предотвращать, задерживать или лечить, или все соответствующие варианты, развитие, продолжительность или утяжеление заболевания у субъекта, например, млекопитающего или человека. Термин "предотвращать" или "предотвращение" в настоящем описании включает предотвращение по меньшей мере одного симптома, связанного или вызванного состоянием, заболеванием или нарушением, которое предотвращают.
Термин "субъект" или "пациент" в настоящем описании предназначен включать животных, которые могут страдать или поражаться мышечным заболеванием или любым заболеванием, включающим, прямо или опосредованно, мышечное заболевание. Примеры субъектов включают млекопитающих, например, людей, человекообразных обезьян, прочих обезьян, собак, коров, лошадей, свиней, овец, коз, кошек, мышей, кроликов, крыс и трансгенных животных кроме человека. В одном из вариантов реализации субъект представляет собой человека, например, человека, страдающего, имеющего риск страдать или потенциально способного страдать от мышечных заболеваний.
Выражение "состояние которого поддается улучшению путем пропуска экзона 51" в настоящем описании относится к субъектам и пациентам, имеющим различные мутации в гене дистрофина, которые поддаются лечению путем пропуска экзона 51. Неограничительные примеры мутаций в следующих экзонах гена дистрофина, которые поддаются лечению путем пропуска экзона 51, включают, например: 45-50, 47-50, 48-50, 49-50, 50, 52, 52-63 (лейденская база данных мутаций, связанных с мышечной дистрофией Дюшенна, медицинский центр Лейденского университета, Нидерланды).
Определение, имеет ли пациент мутацию в гене дистрофина, которая поддается лечению пропуском экзона, входит в компетенцию специалиста в данной области техники (см., например, Aartsma-Rus et al., Hum Миt 2009, 30, 293-299).
Термины "содержащий" и "включающий" в настоящем описании применяют в открытом, неограничительном смысле, если не указано иное.
Термины в единственном числе в контексте настоящего изобретения (в частности, в контексте следующей формулы изобретения) предназначены охватывать как единственное, так и множественное число, если иное не указано или явно не предписывается контекстом. Если формы множественного числа применяют для соединений, солей и тому подобного, это также подразумевает единственное соединение, соль и тому подобное.
Термины "примерно" или "приблизительно" в целом понятны специалистам в соответствующей области техники, но в некоторых обстоятельствах могут означать в пределах ±10%, или в пределах
±5%, от указанного значения или диапазона.
"USP" относится к Фармакопее США, полностью включенной в настоящее описание посредством ссылки, и показывает, что материал, обозначенный таким образом, соответствует требованиям USP.
"NF" относится к Национальному формуляру, полностью включенному в настоящее описание посредством ссылки, и показывает, что материал, обозначенный таким образом, соответствует требованиям NF.
Олигомеры
Олигомеры на основе морфолина (включая антисмысловые олигомеры) подробно описаны, например, в патентах США №№ 5698685, 5217866, 5142047, 5034506, 5166315, 5185444, 5521063, 5506337, 8299206 и 8076476, международных опубликованных заявках на патенты №№ WO/2009/064471 и WO/2012/043730, и в работе Summerton et al., Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997, 7, 187195, каждый из указанных документов полностью включен в настоящую заявку посредством ссылки.
Этеплирсен (см., например, международную опубликованную
заявку на патент № W0 2006/000057, полностью включенную в
настоящую заявку посредством ссылки) прошел клинические
исследования для испытания его безопасности и эффективности, и
его клиническая разработка проводится в настоящее время.
Этеплирсен представляет собой фосфордиамидатморфолиновый (РМО)
антисмысловой олигонуклеотид. Терапевтическое средство для
воздействия на дистрофии "этеплирсен", также известное как "AVI-
4 658", представляет собой РМО с базовой последовательностью 5'-
С Т С СААСAT СAAG GAAGAT G G CAT Т Т С TAG-3' (SEQ ID N0:1). Этеплирсен
зарегистрирован в каталоге CAS под номером 1173755-55-9.
Химические названия включают: РНК, [Р-дезокси-Р-
(диметиламино) ] (2', 3'-дидезокси-2', 3'-имино-2', З'-секо) (2'а-> 5') (C-m5U-C-C-A-A-C-A-m5U-C-A-A-G-G-A-A-G-A-m5U-G-G-C-A-m5U-m5U-m5U-C-m5U-A-G) (SEQ ID N0:2), 5'-[P-[4-[[2-[2-(2-гидроксиэтокси)-этокси]-этокси]-карбонил]-1-пиперазинил]-Л^ЛЬдиметилфосфонамидат] и Р, 2 ' , 3'-тридезокси-Р-(диметиламино)-5'-О-{Р-[4-(10-гидрокси-2,5,8-триоксадеканоил)-пиперазин-1-ил]-N,N-
диметилфосфонамидоил}-2',3'-имино-2',3'-секоцитидилил-(2'а^5')-Р,3'-дидезокси-Р-(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секотимидилил-
(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р-(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-
секоцитидилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р-(диметиламино)-
2',3'-имино-2',3'-секоцитидилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р-
(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секоаденилил-(2'а^5')-Р,2',3'-
тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секоаденилил-
(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-
секоцитидилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)-
2',3'-имино-2',3'-секоаденилил-(2'а^5')-Р,3'-дидезокси-Р-
(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секотимидилил-(2'а^5')-Р,2',3'-
тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секоцитидилил-
(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-
секоаденилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)-
2',3'-имино-2',3'-секоаденилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р-
(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секогуанилил-(2'а^5')-Р,2',3'-
тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секогуанилил-
(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'
секоаденилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)
2',3'-имино-2',3'-секоаденилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р-
(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секогуанилил-(2'а^5')-Р,2',3'-
тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секоаденилил
(2'а^5')-Р,3'-дидезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'
секотимидилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)
'а^5')-Р,2',3'-
- , - , - имино-2 ', 3 '-секоцитидилил-
(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'-имино-2',3'
секоаденилил-(2'а^5')-Р,3'-дидезокси-Р- (диметиламино)-2',3'
имино-2',3'-секотимидилил-(2'а^5')-Р,3'-дидезокси-Р-(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секотимидилил-(2'а^5')-Р,3'-
"° (диметиламино) -2 ', 3 ' -имино-2 ', 3 '-секотимидилил
тридезокси-Р
дидезокси-Р-(2 ' а^5' ) -Р, 2 ' , 3
диметиламино)-2',3'-имино-2',3'
секоцитидилил-(2'а^5')-]
2',3'-имино-2',3'-секогуанилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р
(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секогуанилил-(2'
тридезокси-Р- (диметиламино)-2',3'
Р,3'-дидезокси-Р-(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секотимидилил-(2'а^5')-Р,2',3'-тридезокси-Р-(диметиламино)-2',3'-имино-2',3'-секоаденилил-(2'а^5')-2',3'-дидезокси-2',3'-имино-2',3'-секогуанозин. Этеплирсен имеет следующую структуру:
НО.
В(п)
I 2'а I
В(30)
НзС чсн,
НзС Ън,
n= 1 -29
В(1-30):
C-T-C-C-A-A-C-A-T-C-A-A-G-G-A-A-G-A-T-G-G-C-A-T-T-T-C-T-A-G (SEQ Ш NO:l)
Этеплирсен также можно изобразить, как показано ниже:
Поясним, что структурная формула этеплирсена представляет собой непрерывную структурную формулу от 5' до 3', и для удобства изображения всей формулы в компактной форме, авторы настоящего изобретения включили в структурную формулу разрывы на иллюстрации, отмеченные как "РАЗРЫВ А", "РАЗРЫВ В", "РАЗРЫВ С" и "РАЗРЫВ D". Как понятно специалистам в данной области техники, например, каждая отметка "РАЗРЫВ А" показывает продолжение иллюстрации структурной формулы в указанных точках. Специалистам в данной области техники понятно, что то же самое верно в каждом случае для "РАЗРЫВ В", "РАЗРЫВ С" и "РАЗРЫВ D" в показанной выше структурной формуле этеплирсена. Однако ни один из разрывов на иллюстрации не предназначен указывать, и не может быть понят специалистами в данной области техники как указывающий, на реальную прерывистость в структурной формуле этеплирсена выше.
Олигомерные соединения согласно настоящему изобретению могут содержать асимметрические центры, хиральные оси и хиральные плоскости (как описано, например, в: Е. L. Eliel and S. Н. Wilen, Stereochemistry of Carbon Compounds, John Wiley & Sons, New York, 1994, стр. 1119-1190, и March, J., Advanced Organic Chemistry, 3d. Ed., Chap. 4, John Wiley & Sons, New York (1985)), и могут существовать в виде рацематов, рацемических
смесей и отдельных диастереомеров, со всеми возможными изомерами и смесями изомеров, включая оптические изомеры. Следует особо отметить, что олигомерные соединения согласно настоящему изобретению, без какого-либо указания на их стереохимию, должны представлять все возможные изомеры и смеси изомеров.
Соединение (С)
N-Р=0 / I
Соединение (D)
А именно, не ограничиваясь никакой конкретной теорией, олигомерные соединения согласно настоящему изобретению получают, как обсуждается в настоящей заявке, из активированных морфолиновых субъединиц, включая Соединение С, Соединение D, Соединение Е и Соединение F:
Соединение (F)
Каждое Соединение С, Соединение D, Соединение Е и Соединение F может быть получено, например, из соответствующего бета-Б-рибофуранозила, как показано ниже:
См. Summerton et al. , Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997, 7, 187-195. He ограничиваясь никакой конкретной теорией,
стереохимия двух хиральных атомов углерода сохраняется в
условиях синтеза. Не ограничиваясь никакой конкретной теорией,
можно получить ряд возможных дополнительных стереоизомеров для
каждой морфолиновой субъединицы, исходя из выбора исходного
материала, например, альфа-Ъ-рибофуранозил, альфа-D-
рибофуранозил, бета-Ъ-рибофуранозил или бета-Б-рибофуранозил. Не
ограничиваясь никакой конкретной теорией, включение, например,
от 10 до 4 0 соединений, независимо выбранных из группы,
состоящей из Соединения С, Соединения D, Соединения Е и
Соединения F, и дополнительных стереоизомеров каждой из
морфолиновых субъединиц, в олигомерное соединение, может
привести к образованию множества возможных стереоизомеров. Не
ограничиваясь никакой конкретной теорией, олигомерные соединения
согласно настоящему изобретению содержат один или более
фосфорсодержащих мостиков между субъединицами, которые создают
хиральный центр на каждом атоме фосфора, каждый из которых
обозначен конфигурацией "Sp" или "Rp", известными в данной
области техники. Не ограничиваясь никакой конкретной теорией,
благодаря этой хиральности образуются стереоизомеры, которые
имеют идентичный химический состав, но различное расположение
атомов в пространстве. Не ограничиваясь никакой конкретной
теорией, конфигурация каждого фосфорсодержащего линкера между
субъединицами определяется случайным образом в ходе синтеза,
например, олигомерных соединений согласно настоящему
изобретению. Не ограничиваясь никакой конкретной теорией, в ходе
синтеза генерируется экспоненциально большое число
стереоизомеров олигомерного соединения согласно настоящему
изобретению, поскольку олигомерные соединения согласно
настоящему изобретению состоят из многочисленных
фосфорсодержащих линкеров между субъединицами - при этом каждый фосфорсодержащий линкер между субъединицами имеет случайную хиральную конфигурацию. А именно, не ограничиваясь никакой конкретной теорией, каждый линкер между субъединицами в дополнительной морфолиновой субъединице удваивает число стереоизомеров продукта, так что при традиционном синтезе олигомерное соединение согласно настоящему изобретению
фактически представляет собой высоко гетерогенную смесь из 2м стереоизомеров, где N представляет собой число фосфорсодержащих линкеров между субъединицами.
Фармацевтические композиции
Согласно настоящему изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие этеплирсен, или его фармацевтически приемлемую соль, в которых концентрация этеплирсена составляет примерно 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации указанные композиции подходят для применения для лечения мышечного заболевания.
Следовательно, в одном из аспектов предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) этеплирсен;
b) хлорид натрия;
c) хлорид калия;
d) дигидрфосфат калия;
e) гидрофосфат натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 40-60 мг этеплирсена;
b) 6,4-9,6 мг хлорида натрия;
c) 0,16-0,24 мг хлорида калия;
d) 0,16-0,24 мг дигидрофосфата калия;
e) 0,91-1,37 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 1 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 50 мг этеплирсена;
b) примерно 8 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 1 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 мг этеплирсена;
b) 8 мг хлорида натрия;
c) 0,2 мг хлорида калия;
d) 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 1 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 80-120 мг этеплирсена;
b) 12,8-19,2 мг хлорида натрия;
c) 0,32-0,48 мг хлорида калия;
d) 0,32-0,48 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,02-1,54 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 2 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 100 мг этеплирсена;
b) примерно 16 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,4 мг хлорида калия;
d) примерно 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 2 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 100 мг этеплирсена;
b) 16 мг хлорида натрия;
c) 0,4 мг хлорида калия;
d) 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет 2 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 400-600 мг этеплирсена;
b) 64-96 мг хлорида натрия;
c) 1,6-2,4 мг хлорида калия;
d) 1,6-2,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 9,0-14,0 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 10 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 50 0 мг этеплирсена;
b) примерно 8 0 мг хлорида натрия;
c) примерно 2 мг хлорида калия;
d) примерно 2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 10 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 0 мг этеплирсена;
b) 8 0 мг хлорида натрия;
c) 2 мг хлорида калия;
d) 2 мг дигидрофосфата калия;
e) 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта общий объем фармацевтической композиции составляет 10 мл.
В некоторых вариантах реализации, включая, например, некоторые обсуждаемые выше варианты реализации фармацевтических композиций, концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от примерно 4 5 мг/мл до примерно 55 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от 4 5 мг/мл до 55 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от примерно 47,5 мг/мл до примерно 52,5 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от 47,5 мг/мл до 52,5 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл ± 10%. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет 50 мг/мл ± 10%. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется в пределах ± 10% от 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл ± 5%. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет 50 мг/мл ± 5%.
В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется в диапазоне ± 5% от 50
мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от примерно 45,5 мг/мл до 55 мг/мл, от примерно 4 6 мг/мл до примерно 54,5 мг/мл, от примерно 46,5 мг/мл до примерно 54 мг/мл, от примерно 47 мг/мл до примерно 53,5 мг/мл, от примерно 47,5 мг/мл до примерно 53 мг/мл, от примерно 45,5 мг/мл до примерно 52,5 мг/мл, от примерно 45,5 мг/мл до примерно 52 мг/мл, от примерно 48 мг/мл до примерно 51,5 мг/мл, от примерно 48,5 мг/мл до примерно 51 мг/мл, от примерно 49 мг/мл до примерно 50,5 мг/мл или от примерно 4 9,5 мг/мл до примерно 50 мг/мл.
В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 45 мг/мл, 45,5 мг/мл, 46 мг/мл, 46,5 мг/мл, 47 мг/мл, 47,5 мг/мл, 48 мг/мл, 4 8,5 мг/мл, 4 9 мг/мл, 4 9,5 мг/мл, 50 мг/мл, 50,5 мг/мл, 51 мг/мл, 51,5 мг/мл, 52 мг/мл, 52,5 мг/мл, 53 мг/мл, 53,5 мг/мл, 54 мг/мл, 54,5 мг/мл или 55 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет 45 мг/мл, 45,5 мг/мл, 46 мг/мл, 46,5 мг/мл, 47 мг/мл, 47,5 мг/мл, 48 мг/мл, 48,5 мг/мл, 49 мг/мл, 49,5 мг/мл, 50 мг/мл, 50,5 мг/мл, 51 мг/мл, 51,5 мг/мл, 52 мг/мл, 52,5 мг/мл, 53 мг/мл, 53,5 мг/мл, 54 мг/мл, 54,5 мг/мл или 55 мг/мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 5% масс./об. этеплирсена;
b) примерно 0,8% масс./об. хлорида натрия;
c) примерно 0,02% масс./об. хлорида калия;
d) примерно 0,02% масс./об. дигидрофосфата калия;
e) примерно 0,114% масс./об. гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., общий объем композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции
составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл.
В другом варианте реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 500 мг этеплирсена.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 5% масс./об. этеплирсена;
b) 0,8% масс./об. хлорида натрия;
c) 0,02% масс./об. хлорида калия;
d) 0,02% масс./об. дигидрофосфата калия;
e) 0,114% масс./об. гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., общий объем композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл. В другом варианте реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 0 мг этеплирсена.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
примерно
50 мг/мл этеплирсена;
примерно
8 мг/мл хлорида натрия;
примерно
0,2 мг/мл хлорида калия;
примерно
0,2 мг/мл дигидрофосфата
калия;
примерно
1,14 мг/мл гидрофосфата
натрия; и
воду.
одном из
вариантов реализации
указанного
аспекта, в
котором
указаны
определенные отношения
в мг/мл,
общий объем
композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл.
В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 500 мг этеплирсена.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 мг/мл этеплирсена;
b) 8 мг/мл хлорида натрия;
c) 0,2 мг/мл хлорида калия;
d) 0,2 мг/мл дигидрофосфата калия;
e) 1,14 мг/мл гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта, в котором указаны определенные отношения в мг/мл, общий объем композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации
общий объем композиции составляет 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 500 мг этеплирсена.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 50 мг этеплирсена;
b) примерно 8 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 1 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 мг этеплирсена;
b) 8 мг хлорида натрия;
c) 0,2 мг хлорида калия;
d) 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 1
мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 100 мг этеплирсена;
b) примерно 16 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,4 мг хлорида калия;
d) примерно 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 2 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 100 мг этеплирсена;
b) 16 мг хлорида натрия;
c) 0,4 мг хлорида калия;
d) 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 2
мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) примерно 50 0 мг этеплирсена;
b) примерно 8 0 мг хлорида натрия;
c) примерно 2 мг хлорида калия;
d) примерно 2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 10 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 0 мг этеплирсена;
b) 8 0 мг хлорида натрия;
c) 2 мг хлорида калия;
d) 2 мг дигидрофосфата калия;
e) 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 10 мл.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 мг этеплирсена;
b) 8 мг хлорида натрия, USP;
c) 0,2 мг хлорида калия, USP;
d) 0,2 мг дигидрофосфата калия, NF;
e) 1,14 мг гидрофосфата натрия безводного, USP; и
f) воду для инъекций, USP,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 1 мл, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмолялность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 100 мг этеплирсена;
b) 16 мг хлорида натрия, USP;
c) 0,4 мг хлорида калия, USP;
d) 0,4 мг дигидрофосфата калия, NF;
e) 2,28 мг гидрофосфата натрия безводного, USP; и
f) воду для инъекций, USP,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 2 мл, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмолялность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 0 мг этеплирсена;
b) 80 мг хлорида натрия, USP;
c) 2 мг хлорида калия, USP;
d) 2 мг дигидрофосфата калия, NF;
e) 11,4 мг гидрофосфата натрия безводного, USP; и
f) воду для инъекций, USP,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 10 мл, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмолялность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 мг этеплирсена;
b) 8 мг хлорида натрия;
c) 0,2 мг хлорида калия;
d) 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,14 мг гидрофосфата натрия безводного; и
f) воду для инъекций,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 1 мл, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмолялность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 100 мг этеплирсена;
b) 16 мг хлорида натрия;
c) 0,4 мг хлорида калия;
d) 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 2,2 8 мг гидрофосфата натрия безводного; и
f) воду для инъекций,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 2 мл, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмоляльность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая:
a) 50 0 мг этеплирсена;
b) 8 0 мг хлорида натрия;
c) 2 мг хлорида калия;
d) 2 мг дигидрофосфата калия;
e) 11,4 мг гидрофосфата натрия безводного; и
f) воду для инъекций,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 10 мл, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмолялность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
В некоторых вариантах реализации, включая, например, некоторые обсуждаемые выше варианты реализации, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 или равен 7,5. В некоторых вариантах реализации рН фармацевтической
композиции регулируют для достижения рН примерно 7,5 путем добавления NaOH, NF, НС1, NF или комбинации указанных соединений.
В некоторых вариантах реализации, включая, например, некоторые обсуждаемые выше варианты реализации, осмоляльность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль. В некоторых вариантах реализации рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмоляльность фармацевтической композиции варьируется в диапазоне от примерно 260 мОсмоль до примерно 320 мОсмоль.
В другом варианте реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно содержать углевод, как описано в Han et al. , Nat. Comms. 2016, 7, 10981, содержание которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут содержать 5% углевода гексозы. Например, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может содержать 5% глюкозы, 5% фруктозы или 5% маннозы. В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут содержать 2,5% глюкозы и 2,5% фруктозы. В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут содержать углевод, выбранный из группы, состоящей из: арабинозы, присутствующей в количестве 5% по объему, глюкозы, присутствующей в количестве 5% по объему, сорбита, присутствующего в количестве 5% по объему, галактозы, присутствующей в количестве 5% по объему, фруктозы, присутствующей в количестве 5% по объему, ксилита, присутствующего в количестве 5% по объему, маннозы, присутствующей в количестве 5% по объему, комбинации глюкозы и фруктозы, каждая из которых присутствует в количестве 2,5% по объему, и комбинации глюкозы, присутствующей в количестве 5,7% по объему, фруктозы, присутствующей в количестве 2,8 6% по объему и ксилита, присутствующего в количестве 1,4% по объему.
Способы
Предложены способы лечения мышечного заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, включающие введение субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Следовательно, в одном из аспектов настоящего изобретения предложен способ лечения мышечного заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, включающие введение субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. В одном из вариантов реализации указанное мышечное заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна.
В другом аспекте предложен способ предотвращения мышечного заболевания у субъекта, нуждающегося в указанном предотвращении, включающие введение субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. В одном из вариантов реализации указанное мышечное заболевание представляет собой мышечную дистрофию Дюшенна.
В дополнительном аспекте предложен способ лечения мышечной дистрофии Дюшенна у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, причем указанный субъект имеет мутацию в гене дистрофина, которая поддается улучшению путем пропуска экзона 51, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Рассматриваемый субъект обычно представляет собой человека. Однако субъект может представлять собой любое млекопитающее, для которого желательно указанное лечение. То есть способы, описанные в настоящей заявке, можно применять как в области медицины, так и в области ветеринарии.
Следует учесть, что фармацевтические композиции согласно
настоящему изобретению можно вводить при помощи любых средств,
известных в данной области техники. Более предпочтительно,
фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению
вводят посредством внутривенного, внутриартериального,
внутрибрюшинного, внутримышечного или подкожного путей введения.
Следовательно, способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 40-60 мг этеплирсена;
b) 6,4-9,6 мг хлорида натрия;
c) 0,16-0,24 мг хлорида калия;
d) 0,16-0,24 мг дигидрофосфата калия;
e) 0,91-1,37 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 1 мл.
В другом аспекте, способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) примерно 50 мг этеплирсена;
b) примерно 8 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 1 мл.
В другом аспекте, способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 80-120 мг этеплирсена;
b) 12,8-19,2 мг хлорида натрия;
c) 0,32-0,48 мг хлорида калия;
d) 0,32-0,48 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,02-1,54 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 2 мл. В другом варианте реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет 2 мл.
В другом аспекте, способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) примерно 100 мг этеплирсена;
b) примерно 16 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,4 мг хлорида калия;
d) примерно 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 2 мл. В одном из вариантов реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет 2 мл.
В другом аспекте, способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 400-600 мг этеплирсена;
b) 64-96 мг хлорида натрия;
c) 1,6-2,4 мг хлорида калия;
d) 1,6-2,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 9,0-14,0 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 10 мл. В одном из вариантов реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит 500 мг этеплирсена. В другом варианте реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет 10 мл.
В другом аспекте, способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) примерно 50 0 мг этеплирсена;
b) примерно 8 0 мг хлорида натрия;
c) примерно 2 мг хлорида калия;
d) примерно 2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 10 мл. В одном из вариантов реализации указанного способа общий объем фармацевтической композиции составляет примерно 10 мл.
В некоторых вариантах реализации, включая, например, некоторые обсуждаемые выше варианты реализации фармацевтических композиций, концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от примерно 4 5 мг/мл до примерно 55 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от 4 5 мг/мл до 55 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от примерно 47,5 мг/мл до примерно 52,5 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от 47,5 мг/мл до 52,5 мг/мл. Например, концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от
В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл ± 10%. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет 50 мг/мл ± 10%. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется в пределах ± 10% от 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл ± 5%. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет 50 мг/мл ± 5%.
В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется в диапазоне ± 5% от 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции варьируется от примерно 45,5 мг/мл
до 55 мг/мл, от примерно 4 6 мг/мл до примерно 54,5 мг/мл, от примерно 46,5 мг/мл до примерно 54 мг/мл, от примерно 47 мг/мл до примерно 53,5 мг/мл, от примерно 47,5 мг/мл до примерно 53 мг/мл, от примерно 45,5 мг/мл до примерно 52,5 мг/мл, от примерно 45,5 мг/мл до примерно 52 мг/мл, от примерно 48 мг/мл до примерно 51,5 мг/мл, от примерно 48,5 мг/мл до примерно 51 мг/мл, от примерно 49 мг/мл до примерно 50,5 мг/мл или от примерно 4 9,5 мг/мл до примерно 50 мг/мл.
В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет примерно 45,5 мг/мл, 46 мг/мл, 4 6,5 мг/мл, 4 7 мг/мл, 4 7,5 мг/мл, 4 8 мг/мл, 4 8,5 мг/мл, 4 9 мг/мл, 4 9,5 мг/мл, 50 мг/мл, 50,5 мг/мл, 51 мг/мл, 51,5 мг/мл, 52 мг/мл, 52,5 мг/мл, 53 мг/мл, 53,5 мг/мл, 54 мг/мл, 54,5 мг/мл или 55 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация этеплирсена в фармацевтической композиции составляет 45 мг/мл, 45,5 мг/мл, 46 мг/мл, 46,5 мг/мл, 47 мг/мл, 4 7,5 мг/мл, 4 8 мг/мл, 4 8,5 мг/мл, 4 9 мг/мл, 4 9,5 мг/мл, 50 мг/мл, 50,5 мг/мл, 51 мг/мл, 51,5 мг/мл, 52 мг/мл, 52,5 мг/мл, 53 мг/мл, 53,5 мг/мл, 54 мг/мл, 54,5 мг/мл или 55 мг/мл.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
примерно
масс./об. этеплирсена;
примерно
8% масс./об. хлорида натрия;
примерно
02% масс./об. хлорида калия;
примерно
02% масс./об. дигидрофосфата калия
примерно
114% масс./об. гидрофосфата натрия
; и
воду.
одном из
вариантов реализации указанного
аспекта, в
котором
процентные
содержания указаны в масс./об.,
общий
объем
композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем
композиции составляет примерно 10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл.
В другом варианте реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 500 мг этеплирсена.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 5% масс./об. этеплирсена;
b) 0,8% масс./об. хлорида натрия;
c) 0,02% масс./об. хлорида калия;
d) 0,02% масс./об. дигидрофосфата калия;
e) 0,114% масс./об. гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., общий объем композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл. В другом варианте реализации указанного аспекта, в котором процентные содержания указаны в масс./об., фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 0 мг этеплирсена.
В другом варианте реализации указанного способа, в котором указаны определенные процентные содержания в масс./об.,
фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 0 мг этеплирсена.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) примерно 50 мг/мл этеплирсена;
b) примерно 8 мг/мл хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг/мл хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг/мл дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг/мл гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта, в котором указаны определенные отношения в мг/мл, общий объем композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет примерно 10 мл. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит примерно 50 0 мг этеплирсена.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 50 мг/мл этеплирсена;
b) 8 мг/мл хлорида натрия;
c) 0,2 мг/мл хлорида калия;
d) 0,2 мг/мл дигидрофосфата калия;
e) 1,14 мг/мл гидрофосфата натрия; и
f) воду.
В одном из вариантов реализации указанного аспекта, в котором указаны определенные отношения в мг/мл, общий объем композиции составляет 1-10 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 1 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 2 мл. В другом варианте реализации общий объем композиции составляет 10 мл. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 50 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 100 мг этеплирсена. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит 500 мг этеплирсена.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) примерно 50 мг этеплирсена;
b) примерно 8 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 1
мл.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 100 мг этеплирсена;
b) 16 мг хлорида натрия;
c) 0,4 мг хлорида калия;
d) 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 2
мл.
В другом аспекте способы согласно настоящему изобретению включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей:
a) 50 0 мг этеплирсена;
b) 8 0 мг хлорида натрия;
c) 2 мг хлорида калия;
d) 2 мг дигидрофосфата калия;
e) 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем общий объем фармацевтической композиции составляет 10 мл.
В некоторых вариантах реализации, включая, например, некоторые обсуждаемые выше варианты реализации, рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 или равен 7,5. В некоторых вариантах реализации рН фармацевтической композиции регулируют для достижения рН примерно 7,5 путем добавления NaOH, NF, НС1, NF или комбинации указанных соединений.
В некоторых вариантах реализации, включая, например, некоторые обсуждаемые выше варианты реализации, осмоляльность фармацевтической композиции варьируется от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 320 мОсмоль. В некоторых вариантах реализации рН фармацевтической композиции составляет примерно 7,5 и осмоляльность фармацевтической композиции варьируется в диапазоне от примерно 260 мОсмоль до примерно 320 мОсмоль.
В другом варианте реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить совместно с введением углевода в способах согласно настоящему изобретению, в одном составе или в отдельных составах, как описано в Han et al., Nat. Comms. 2016, 7, 10981, содержание которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить совместно с введением 5% углевода гексозы. Например, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить совместно с введением 5% глюкозы, 5% фруктозы или 5% маннозы. В некоторых вариантах
реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить совместно с введением 2,5% глюкозы и 2,5% фруктозы. В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно вводить совместно с введением углевода, выбранного из группы, состоящей из: арабинозы, присутствующей в количестве 5% по объему, глюкозы, присутствующей в количестве 5% по объему, сорбита, присутствующего в количестве 5% по объему, галактозы, присутствующей в количестве 5% по объему, фруктозы, присутствующей в количестве 5% по объему, ксилита, присутствующего в количестве 5% по объему, маннозы, присутствующей в количестве 5% по объему, комбинации глюкозы и фруктозы, каждая из которых присутствует в количестве 2,5% по объему, и комбинации глюкозы, присутствующей в количестве 5,7% по объему, фруктозы, присутствующей в количестве 2,8 6% по объему и ксилита, присутствующего в количестве 1,4% по объему. Наборы
В других вариантах реализации предложены наборы. Наборы согласно настоящему изобретению включают упаковку(и), содержащую этеплирсен или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации наборы содержат этеплирсен или его фармацевтически приемлемую соль.
Выражение "упаковка" обозначает любой сосуд, содержащий олигонуклеотиды или композиции согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации упаковка может представлять собой коробку или сверток. Упаковочные материалы для применения для упаковки фармацевтических продуктов хорошо известны специалистам в данной области техники. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают, без ограничения, бутылки, тубы, ингаляторы, помповые дозаторы, пакеты, флаконы, контейнеры, шприцы и любые упаковочные материалы, подходящие для выбранного состава и предполагаемого режима введения и лечения.
Набор также может содержать предметы, не содержащиеся в упаковке, а прикрепленные снаружи упаковки, например, пипетки.
Кроме того, наборы могут содержать инструкции по введению пациенту этеплирсена или фармацевтических композиций согласно
настоящему изобретению. Наборы также могут содержать инструкции для применений этеплирсена, одобренных органами государственного регулирования, такими как Управление по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США. Наборы также могут содержать этикетку или листок-вкладыш к этеплирсену. Сами упаковки или любые листки-вкладыши, или оба указанных варианта, могут быть одобрены органами государственного регулирования. Наборы могут содержать этеплирсен в твердой фазе или в жидкой фазе (такой как предложенные буферные растворы) в упаковке. Наборы также могут содержать буферные агенты для приготовления растворов для осуществления способов, и пипетки для переноса жидкостей из одного контейнера в другой. ПРИМЕРЫ
Ниже приведены примеры с целью иллюстрации и описания некоторых конкретных вариантов реализации изобретения. Однако приведенные примеры никоим образом не ограничивают объем формулы изобретения. Различные изменения и модификации описанных вариантов реализации будут понятны специалистам в данной области техники, и такие изменения и модификации включают, без ограничения, изменения и модификации, относящиеся к химическим структурам, заместителям, производным, составам или способам согласно настоящему изобретению, которые могут быть осуществлены не выходя за рамки сущности настоящего изобретения и объема прилагаемой формулы изобретения. Определения переменных в структурах на схемах, приведенных в настоящем описании, согласуются с соответствующими положениями в приведенных формулах.
Пример 1: 50L Твердофазный синтез неочищенной лекарственной субстанции этеплирсена
1. Материалы
конъюгированным с олигомером, например, на его 3'- или 5'-конце:
EG3
Химические структуры исходных материалов: А. Активированный конец EG3
Соединение (В)
В. Активированная субъединица С (Синтез см. в US 8067571
\ ?'
N-Р=0
Y Y
Соединение (С)
С. Активированная субъединица А (Синтез см. в US 8067,571
Соединение (D)
D. Активированная субъединица DPG 2009/064471)
(Синтез
Соединение (Е)
Е. Активированная субъединица Т (Синтез 2013/082551)
Формула (I)
где R1 представляет собой среду подложки
силанизированный реактор объемом 50 л и перемешивали в течение 3
часов. Сливали НМП и промывали смолу дважды по 5,5 л ДХМ и дважды по 5,5 л 30% ТФЭ/ДХМ.
B. Цикл 0: Связывание конца EG3
Смолу промывали трижды по 5,5 л 30% ТФЭ/ДХМ и сливали. 5,5 л раствора ЦИТФУК заливали на 15 минут, сливали и повторно заливали 5,5 л раствора ЦИТФУК на 15 минут, после чего, не сливая, добавляли в реактор 122 мл 1:1 НЭМ/ДХМ, перемешивали суспензию в течение 2 минут и сливали. Смолу промывали дважды по 5,5 л Нейтрализующего раствора в течение 5 минут и сливали, затем промывали дважды по 5,5 л ДХМ и сливали. К смоле приливали раствор 706,2 г активированного конца EG3 (MW 765,85) и 234 мл НЭМ в 3 л ДМИ, перемешивали в течение 3 часов при КТ и сливали. Смолу промывали дважды по 5,5 л Нейтрализующего раствора в течение 5 минут каждая промывка, и один раз 5,5 л ДХМ, и сливали. Добавляли раствор 374,8 г бензойного ангидрида и 195 мл НЭМ в 2680 мл НМП, перемешивали в течение 15 минут и сливали. Смолу перемешивали с 5,5 л Нейтрализующего раствора в течение 5 минут, затем промывали один раз 5,5 л ДХМ и дважды по 5,5 л 30% ТФЭ/ДХМ. Затем смолу суспендировали в 5,5 л 30% ТФЭ/ДХМ и выдерживали в течение 14 часов.
C. Циклы связывания субъединиц 1-3 0
i. Обработки перед связыванием
Перед каждым циклом связывания, как описано в Таблице 3, смолу обрабатывали: 1) промывали 30% ТФЭ/ДХМ; 2) а) обрабатывали раствором ЦИТФУК в течение 15 минут и сливали, и Ь) обрабатывали раствором ЦИТФУК в течение 15 минут, в который добавляли 1:1 НЭМ/ДХМ, перемешивали и сливали; 3) трижды перемешивали с Нейтрализующим раствором; и 4) дважды промывали ДХМ. См. Таблицу 3.
ii. Обработки после связывания
После сливания раствора каждой из субъединиц, как описано в Таблице 3, смолу обрабатывали: 1) промывали ДХМ; и 2) дважды промывали 3 0% ТФЭ/ДХМ. Если смолу выдерживали в течение некоторого времени перед следующим циклом связывания, вторую промывку ТФЭ/ДХМ не сливали и оставляли смолу в указанном промывочном растворе ТФЭ/ДХМ. См. Таблицу 3.
iii. Циклы связывания активированных субъединиц
Циклы связывания осуществляли, как описано в Таблице 3.
iv. Конечная промывка ИПС
Смолу промывали 8 раз по 19,5 л ИПС, высушивали в вакууме при комнатной температуре в течение примерно 63,5 часов, получая сухую массу 557 9,8 г.
D. Отщепление
Полученную выше смолу со связанной неочищенной лекарственной субстанцией этеплирсена делили на две части, каждую из которых обрабатывали следующим образом. Партию 2789,9 г смолы: 1) перемешивали с 10 л НМП в течение 2 часов, затем сливал НМП; 2) промывали трижды по 10 л 30% ТФЭ/ДХМ; 3) обрабатывали 10 л раствора ЦИТФУК в течение 15 минут; и 4) 10 л раствора ЦИТФУК в течение 15 минут, в который затем добавляли 130 мл 1:1 НЭМ/ДХМ, перемешивали в течение 2 минут и сливали. Затем смолу обрабатывали трижды по 10 л Нейтрализующего раствора, промывали шесть раз по 10 л ДХМ и восемь раз по 10 л НМП. Смолу обрабатывали Отщепляющим раствором из 1530,4 г ДТТ и 2980 ДБУ в 6,96 л НМП в течение 2 часов для отсоединения неочищенной лекарственной субстанции этеплирсена от смолы. Отщепляющий раствор сливали и хранили в отдельном сосуде. Реактор и смолу промывали 4,97 л НМП, который объединяли с Отщепляющим раствором.
Ь) 5,5 л,
122 мл
мл НЭМ; 3,2 л
ДМИ
2 :Т
7,0 л
a) 7
b) 7
158 мл
3x7 л
2x7 л
468,2 г и 195
мл НЭМ 3,2 л ДМИ
4,25
7 л
2x7 л1
3 :С
8 л
a) 8
b) 8
182 мл
3x8 л
2x8 л
536, 7 г; 195 мл НЭМ; 3,4 л
ДМИ
4,25
8 л
2x8 л
4 :С
9 л
a) 9
b) 9
206 мл
3x9 л
2x9 л
536, 7 г; 195 мл НЭМ; 3, 6 л
ДМИ
4,25
9 л
2x9 л2
5 :А
9,5 л
а) 9,5 л
Ь) 9,5
л, 220
3x9,5 л
2x9, 5 л
555, 2 г; 195 мл НЭМ; 3,4 л
ДМИ
4,25
9,5
2x9,5 л
6 :А
10 л
a) 10
b) 10
232
3x10 л
2x10 л
555, 2 г; 195 мл НЭМ; 3,45 л ДМИ
4,25
10 л
2x10 л3
ТФЭ/ДХМ промывк а
ор ЦИТФУ К
ующий раствор
пром ывка
ество
(г) НЭМ
(л) ДМИ
(л)
связью
ания при КТ (ч)
про мыв ка
ТФЭ/ДХМ промывка
7 :С
11 л
a) 11
b) 11
256
3x11 л
2x11 л
536,7 г; 195 мл НЭМ; 3,57 л ДМИ
4, 25
11 л
2x11 л
8 :А
11 л
a) 11
b) 11
256
3x11 л
2x11 л
555, 2 г; 195 мл НЭМ; 3, 64 л ДМИ
4, 25
2x11 л4
9:Т
11,5 л
а) 11, 5 л Ь) 11, 5
л 268 мл
3x11,5 л
2х 11, 5 л
468, 2 г; 195 мл НЭМ; 3,72 л ДМИ
4, 25
11,
5 л
2x11,5 л
10 :С
12 л
a) 12
b) 12
280 мл
3x12 л
2x12 л
536,7 г; 195 мл НЭМ; 3, 96 л ДМИ
4, 25
12 л
2x12 л5
11 :А
13,5 л
13, 5 л Ь)
13, 5 л, 204 мл
3x13,5 л
2х 13, 5 л
721,7 г; 253 мл НЭМ; 4, 02 л ДМИ
4, 25
13,
5 л
2x13,5 л
12 :А
13,5 л
а) 13, 5
3x13,5 л
2х 13, 5
721,7 г;
4, 25
13,
5 л
2x13,5 л6
цикла: Субъед иница (СЕ)
Обработка перед связыванием
Цикл связывания
Обработка
после связывания
30% ТФЭ/Д
ХМ промы
вка
Раств
ор ЦИТФУ К
Нейтрализ ующий раствор
ДХМ пром ывка
Колич ество
(г)
НЭМ
(л) ДМИ
(л)
Время связью
ания при КТ (ч)
ДХМ про мыв ка
30% ТФЭ/ДХМ промывк а
13:DPG
14 л
a) 14
b) 14
216 мл
3x14 л
2x14 л
941, 9 г; 253 мл НЭМ; 4, 02 л ДМИ
4, 25
14 л
2x14 л
14:DPG
14, 5
14, 5 л Ь)
14, 5 л, 228 мл
3x14,5 л
2х 14, 5 л
941, 9 г; 253 мл НЭМ; 4,1л ДМИ
4, 25
14,
5 л
2x14,5
15 :А
15, 5
15, 5 л Ь)
15, 5 л, 254 мл
3x15.5 л
2х 15, 5 л
721, 7 г;
253 мл НЭМ; 4,26 л ДМИ
4, 25
15,
5 л
2x15,5 л
1б:А
15, 5
а) 15, 5
Ь) 15, 5
3x15,5 л
2х 15, 5 л
721, 7
253
мл НЭМ;
4, 25
15,
5 л
2x15,5
цикла: Субъед иница
Обработка перед связыванием
Цикл связывания
Обработка
после связывания
(СЕ)
Количе
Врем
30%
30% ТФЭ/ДХ М
промыв ка
Раств
ор ЦИТФУ К
Нейтрализ ующий раствор
ДХМ про мыв ка
ство СЕ (г) НЭМ (л) ДМИ
свяя зыва ния при КТ (ч)
ДХМ промывка
ТФЭ /ДХ
про мыв
(л)
16,5
608, 7
л Ь) 16,5 л,
378 мл
г; 253 мл НЭМ; 4, 57 л
ДМИ
2x1
19:Т
16,5 л
3x16,5 л
16,
5 л
4, 25
16,5 л
6,5
а) 17
941, 9
г; 253
20:DPG
17 л
Ь) 17 л,
390 мл
3x17 л
2x1 7 л
мл НЭМ; 4, 57 л
ДМИ
4, 75
17 л
2x17
21:DPG
17 л
a) 17
b) 17
3x17 л
2x1 7 л
1159,2 г; 311 мл
4, 25
17 л
2x1 7 л
цикла: Субъед иница (СЕ)
Обработка перед связыванием
Цикл связывания
Обработка
после связывания
30% ТФЭ/Д
ХМ промы
Раст вор
ЦИТФ УК
Нейтрализу ющий раствор
ДХМ про мыв ка
Количе
ство СЕ (г) НЭМ
Врем я
связ ыван
ДХМ промы вка
30% ТФЭ/ДХ
промыв
вка
(л) ДМИ (л)
ия при КТ (ч)
25 :Т
18 л
а) 18 л
л, 414
3x18 л
2x1 8 л
749, 1 г; 311 мл НЭМ; 5,1 л ДМИ
4, 25
18 л
2x18 л
2б:Т
18, 5
а) 18,5
Ь) 18,5
л, 426
3x18,5 л
2х 18, 5 л
749, 1 г; 311 мл НЭМ; 5,1 л ДМИ
4, 25
18, 5
2x18,5
л10
27 :С
18, 5
а) 18,5
Ь) 18,5
л, 426
3x18,5 л
2х 18, 5 л
858, 7 г; 311 мл НЭМ; 5,25 л ДМИ
4, 25
18, 5
2x18,5 л
28 :Т
19 л
а) 19 л
л, 438
3x19 л
2x1 9 л
749, 1 г; 311 мл НЭМ; 5,25 л ДМИ
4, 25
19 л
2x19 л15
29:А
19 л
а) 19 л
л, 438
3x19 л
2x1 9 л
888,3 г; 311 мл НЭМ; 5,41л ДМИ
4, 25
19 л
2x19 л
30:DPG
19,5 л
а) 19, 5
Ь) 19, 5
л, 450
3x19,5 л
2х 19, 5 л
1159,2 г; 311 мл НЭМ; 5,44 л ДМИ
4, 75
19,5 л
2x19,5 л
Е. Снятие защиты
Объединенные Отщепляющий раствор и НМП переносили в сосуд высокого давления, в который добавляли 39,8 л NH4OH, охлажденного до температуры от -10 °С до -2 5 °С в морозильнике. Затем сосуд герметично закрывали и нагревали при 45 °С в течение 16 ч, после чего оставляли остыть до 25 "С. Раствор для снятия защиты, содержащий неочищенную лекарственную субстанцию этеплирсена, разбавляли 3:1 очищенной водой и доводили рН до 3,0 при помощи 2 М фосфорной кислоты, а затем доводили рН до 8,03 при помощи NH4OH. ВЭЖХ (С18) 73-74% (Фигура 1).
этеплирсена
Раствор для снятия защиты из Примера 1, содержащий неочищенную лекарственную субстанцию этеплирсена, помещали в колонку с анионообменной смолой ToyoPearl Super-Q 650S (Tosoh Bioscience) и элюировали с градиентом 0-35% 0-35% В на 17 объемов колонки (Буфер А: 10 мМ гидроксида натрия; Буфер В: 1 М хлорида натрия в 10 мМ гидроксида натрия), фракции приемлемой чистоты (С18 и SCX ВЭЖХ) собирали в раствор очищенного
лекарственного препарата. ВЭЖХ: 97,74% (С18) 94,58% (SCX; Фигура 2) .
Раствор очищенной лекарственной субстанции обессоливали и лиофилизировали, получая 1959 г очищенной лекарственной субстанции этеплирсена. Выход: 61,4%; ВЭЖХ: 97,7% (С18) 94,6% (SCX; Фигура 3).
Таблица 8.
Пример Композиции 1: Общий объем 1 мл
Этеплирсен
50 мг
Хлорид натрия, USP
8 мг
Хлорид калия, USP
0, 2 мг
Дигидрофосфат калия, NF
0, 2 мг
Гидрофосфат натрия безводный, USP
1,14 мг
Вода для инъекций, USP
q.s. (достаточное количество)
Пример Композиции 2: Общий объем 2 мл
Этеплирсен
100 мг
Хлорид натрия, USP
1 б мг
Хлорид калия, USP
0, 4 мг
Дигидрофосфат калия, NF
0, 4 мг
Гидрофосфат натрия безводный, USP
2,28 мг
Вода для инъекций, USP
q.s.
Пример Композиции б: Общий объем 10 мл
Этеплирсен
500 мг
Хлорид натрия
8 0 мг
Хлорид калия
2 мг
Дигидрофосфат калия
2 мг
Гидрофосфат натрия безводный
11,4 мг
Вода для инъекций
q.s.
Для каждого из Примеров Композиций 1-6 (Таблица 8) количество содержащейся воды было достаточным для получения концентрации этеплирсена в фармацевтической композиции примерно 50 мг/мл. Кроме того, рН Примеров Композиций составлял примерно 7,5, и осмоляльность Примеров Композиций варьировалась от примерно 2 60 мОсмоль до примерно 32 0 мОсмоль.
Включение посредством ссылки
Содержание всех ссылок (включая ссылки на литературу, выданные патенты, опубликованные заявки на патенты и находящиеся на одновременном рассмотрении заявки на патенты), на которые ссылаются в настоящей заявке, тем самым прямо включено в настоящую заявку во всей своей полноте. Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в настоящей заявке, соответствуют значениям, широко известным средним специалистам в соответствующих областях техники.
Эквиваленты
Специалисты в данной области техники поймут или будут способны установить с помощью не более чем стандартных экспериментов множество эквивалентов конкретных вариантов реализации настоящего изобретения. Подразумевается, что такие эквиваленты входят в объем нижеследующей формулы изобретения.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Фармацевтическая композиция, содержащая:
a) этеплирсен;
b) хлорид натрия;
c) хлорид калия;
d) дигидрофосфат калия;
e) гидрофосфат натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
a) 40-60 мг этеплирсена;
b) 6,4-9,6 мг хлорида натрия;
c) 0,16-0,24 мг хлорида калия;
d) 0,16-0,24 мг дигидрофосфата калия;
e) 0,91-1,37 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
3. Фармацевтическая композиция по п. 2, содержащая примерно 50 мг этеплирсена.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
a) примерно 50 мг этеплирсена;
b) примерно 8 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
5. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
a) 80-120 мг этеплирсена;
b) 12,8-19,2 мг хлорида натрия;
c) 0,32-0,48 мг хлорида калия;
d) 0,32-0,48 мг дигидрофосфата калия;
e) 1,02-1,54 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
6. Фармацевтическая композиция по п. 5, содержащая примерно 100 мг этеплирсена.
7. Фармацевтическая композиция по п. 5, содержащая:
a) примерно 100 мг этеплирсена;
b) примерно 16 мг хлорида натрия;
c) примерно 0,4 мг хлорида калия;
d) примерно 0,4 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 2,2 8 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
8. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
a) 400-600 мг этеплирсена;
b) 64-96 мг хлорида натрия;
c) 1,6-2,4 мг хлорида калия;
d) 1,6-2,4 мг дигидрофосфата калия;
e) 9,0-14,0 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
9. Фармацевтическая композиция по п. 8, содержащая примерно 500 мг этеплирсена.
10. Фармацевтическая композиция по п. 8, содержащая:
a) примерно 50 0 мг этеплирсена;
b) примерно 8 0 мг хлорида натрия;
c) примерно 2 мг хлорида калия;
d) примерно 2 мг дигидрофосфата калия;
e) примерно 11,4 мг гидрофосфата натрия; и
f) воду,
причем концентрация этеплирсена в указанной
фармацевтической композиции составляет примерно 50 мг/мл.
11. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая: а) примерно 5% масс./об. этеплирсена;
11.
b) примерно 0,8% масс./об. хлорида натрия;
c) примерно 0,02% масс./об. хлорида калия;
d) примерно 0,02% масс./об. дигидрофосфата калия;
e) примерно 0,114% масс./об. гидрофосфата натрия; и
f) воду.
12. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
a) примерно 50 мг/мл этеплирсена;
b) примерно 8 мг/мл хлорида натрия;
c) примерно 0,2 мг/мл хлорида калия;
d) примерно 0,2 мг/мл дигидрофосфата калия;
e) примерно 1,14 мг/мл гидрофосфата натрия; и
f) воду.
13. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-12, отличающаяся тем, что рН указанной фармацевтической композиции составляет примерно 7,5, а осмоляльность варьируется в диапазоне от примерно 260 мОсмоль до примерно 320 мОсмоль.
14. Способ лечения мышечной дистрофии Дюшенна (МДД) у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, причем указанный субъект имеет мутацию в гене дистрофина, которая поддается лечению путем пропуска экзона 51, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13.
15. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13 для получения лекарственного средства для лечения мышечной дистрофии Дюшенна (МДД) у субъекта, нуждающегося в указанном лечении, причем указанный субъект имеет мутацию в гене дистрофина, которая поддается лечению путем пропуска экзона 51.
По доверенности
553270
11001000
800600* 400
200мУЕП
-1O0-I
МИН
5.0
10.0
15,0
20.0
25.0
12.0 13.0
мин
!-° ,~~| 1 -г^тТ"'?=^ I 1 ~*~Т~~' i ' у---i-T-^-TI , , f ..q-^-,--г-:,,,: ,,, г--( I i p=^=y 1 r , , 1
AGO 6.00 6.2S 7.50 8.75 10,00 И 25 12.50 13.75 15.00
Фиг. 3
Смолу выдерживали на этой стадии Уг дня
3 Смолу выдерживали на этой стадии Уг дня
5 Смолу выдерживали на этой стадии 2,5 дня
6 Смолу выдерживали на этой стадии Уг дня
8 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
10 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
-v
-v
4 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
4 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
7 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
7 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
9 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
9 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
11 Смолу выдерживали на этой стадии 0,3 дня
11 Смолу выдерживали на этой стадии 0,3 дня
13 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
13 Смолу выдерживали на этой стадии 0,4 дня
15 Смолу выдерживали на этой стадии 0,3 дня
15 Смолу выдерживали на этой стадии 0,3 дня
1/3
1/3
1/3
1/3
1/3
1/3
1/3
1/3
1/3
1/3
