|
|
больше ...
Термины запроса в документе
Реферат
[RU] Предложены сконструированные аминокислотные последовательности Cry1Da, обладающие улучшенной инсектицидной активностью в отношении чешуекрылых и расширенным спектром в отношении чешуекрылых по сравнению с природным белковым токсином Cry1Da. Также предложены полинуклеотидные последовательности, предназначенные для применения в экспрессии улучшенных белков в растениях. В конкретных вариантах реализации изобретения предложены композиции, содержащие инсектицидно ингибирующее количество сконструированных белков, а также рекомбинантные растения, части растений и семена, содержащие полинуклеотидные конструкции, кодирующие один или более из улучшенных сконструированных белков.
Полный текст патента
(57) Реферат / Формула:
Предложены сконструированные аминокислотные последовательности Cry1Da, обладающие улучшенной инсектицидной активностью в отношении чешуекрылых и расширенным спектром в отношении чешуекрылых по сравнению с природным белковым токсином Cry1Da. Также предложены полинуклеотидные последовательности, предназначенные для применения в экспрессии улучшенных белков в растениях. В конкретных вариантах реализации изобретения предложены композиции, содержащие инсектицидно ингибирующее количество сконструированных белков, а также рекомбинантные растения, части растений и семена, содержащие полинуклеотидные конструкции, кодирующие один или более из улучшенных сконструированных белков.
(19)
Евразийское
патентное
ведомство
(21) 201892658 (13) A1
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОЙ ЗАЯВКЕ
(43) Дата публикации заявки 2019.04.30
(22) Дата подачи заявки 2015.10.15
(51) Int. Cl.
C12N15/82 (2006.01) C07K14/325 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01)
(54)
БЕЛКИ CRY1DA1 С ВАРИАНТАМИ АМИНОКИСЛОТНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, ОБЛАДАЮЩИЕ АКТИВНОСТЬЮ ПРОТИВ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ
(31) (32) (33)
(62) (71)
(72)
(74)
62/064,994; 62/065,017 2014.10.16; 2014.10.17
201790842; 2015.10.15
Заявитель:
МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ ЛЛС
(US)
Изобретатель:
Баум Джеймс А., Черрути Томас, Фласинский Станислав, Фу Сяожань, Хау Эрлин Р., Сальвадор Сара Энн
(US)
Представитель:
Медведев В.Н. (RU)
(57) Предложены сконструированные аминокислотные последовательности Cry1Da, обладающие улучшенной инсектицидной активностью в отношении чешуекрылых и расширенным спектром в отношении чешуекрылых по сравнению с природным белковым токсином Cry1Da. Также предложены полинуклеотидные последовательности, предназначенные для применения в экспрессии улучшенных белков в растениях. В конкретных вариантах реализации изобретения предложены композиции, содержащие инсектицидно ингибирующее количество сконструированных белков, а также ре-комбинантные растения, части растений и семена, содержащие полинуклеотидные конструкции, кодирующие один или более из улучшенных сконструированных белков.
2420-554249ЕА/011 БЕЛКИ CrylDal С ВАРИАНТАМИ АМИНОКИСЛОТНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ, ОБЛАДАЮЩИЕ АКТИВНОСТЬЮ ПРОТИВ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ
ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] В данной заявке заявляется приоритет по предварительным заявкам США 62/064994, поданной 16 октября 2014 г. и 62/065017, поданной 17 октября 2014 г., которые включены в полном объеме в настоящий документ посредством ссылок.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Машиночитаемая форма перечня последовательностей подана в электронном виде. Перечень последовательностей, включенный посредством ссылки в полном объеме, содержится в файле, созданном 13 октября 2 015 г., с именем файла P34223WO00_SEQ_PCT.txt и размером 327235 байт (измерено в операционной системе MS-Windows(r)) .
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003] Изобретение в целом относится к области белков, оказывающих ингибирующее действие на насекомых. Раскрывается новый класс сконструированных белков, проявляющих инсектицидную ингибирующую активность против сельскохозяйственных вредителей сельскохозяйственных культур и семян. В частности, раскрытый класс сконструированных ингибирующий белков обладает инсектицидной активностью в отношении чешуекрылых насекомых-вредителей. Предусмотрены растения, части растений и семена, содержащие полинуклеотидный конструкт, кодирующий один или более описанных сконструированных ингибирующих белков.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0004] Helicoverpa zea является характерным чешуекрылым вредителем основных сельскохозяйственных культур, включая кукурузу, хлопчатник и сою. Известный как кукурузная совка (CEW), хлопковая совка (CBW) и коробочный червь (SPW), этот вид многоядных насекомых особенно трудно контролировать с помощью инсектицидных белков Bacillus thuringiensis (Bt) или других видов бактерий. Н. zea считается подверженным риску развития резистентности к современным способам контроля насекомых,
учитывая его способность питаться множеством различных культур и отсутствие в настоящее время стратегии контроля высоких доз. Соответственно, необходимы новые способы воздействия (СВ) для обеспечения долговечности трансгенных растений, защищенных от повреждения в результате питания Я. zea.
[0005] Белок CrylDal является чешуекрыло-активным белком,
который был впервые описан Hofte, et al. "Nucleotide sequence and deduced amino acid sequence of a new Lepidoptera-specific crystal protein gene from Bacillus thuringiensis." Nucleic Acids Res. 18(18) (1990): 5545. Данный белок проявляет отличную инсектицидную активность по отношению к видам рода Spodoptera, включая Spodoptera frugiperda (кукурузную листовую совку, FAW) , вредителя некоторых пропашных культур, включая кукурузу, хлопчатник и сою. Однако CrylDal проявляет низкую или умеренную активность по отношению к целому ряду других основных насекомых-вредителей, включая хлопковую сойку (например, Helicoverpa armigera и Я. zea) , огневок (например, Ostrinia nubilalis и Diatraea grandiosella) и соевую совку (Pseudoplusia includens) . Из-за его узкого инсектицидного спектра и его неспособности обеспечить коммерческую защиту от ряда важных чешуекрылых сельскохозяйственных вредителей, таких как CEW, инсектицидный белок CrylDal имеет ограниченное значение в качестве признака борьбы с насекомыми в трансгенных растениях. В результате никакие современные коммерческие сорта культур, защищенные от насекомых, не используют CrylDal в качестве включенного в растение средства защиты.
[0006] Несмотря на свой узкий инсектицидный спектр, CrylDal является интересным инсектицидным белком, потому что кажется, что белок CrylDal использует альтернативные СВ для борьбы с некоторыми насекомыми-вредителями. Доказательством этого служат исследования колоний насекомых с множественной устойчивостью. Например, полученные из поля колонии Plutella xylostella (капустной моли) и Pectinophora gossypiella (хлопковой моли), которые устойчивы к интоксикации CrylAc, сохраняют полную чувствительность к белку CrylDal (Tabashnik et al. "Cross-
Resistance of Pink Bollworm (Pectinophora gossypiella) to Bacillus thuringiensis toxins." Appl. Environ. Microbiol. 66 (2000) . 4582-4584; Tabashnik, et al. "Cross-Resistance to Bacillus thuringiensis Toxin CrylJa in a Strain of Diamondback Moth Adapted to Artificial Diet." J. Invert. Pathol. 76: 2000: 81-83. Эти данные свидетельствуют о том, что CrylDal распознает рецепторы средней кишки чешуекрылых, отличные от тех, которые распознаются чешуекрыло-активными белками, которые в настоящее время внедрены в трансгенные сельскохозяйственные культуры, включая CrylAc, CrylAb, CrylA.105, CrylFa, Cry2Ae и Cry2Ab2. В свете данного очевидного нового СВ оптимизация CrylDal-подобных белков для улучшения активности против более широкого спектра видов рода Helicoverpa при сохранении или увеличении их инсектицидной активности по отношению к видам рода Spodoptera могла бы создать включенную в растения, высококачественную защиту для борьбы с резистентностью насекомых. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0007] В настоящем изобретении идентифицированы несколько вариантов аминокислотных последовательностей каркасных белков TIC844 и CrylDa, которые проявляют заметно улучшенную активность
(по сравнению с нативным токсином CrylDal) по отношению к Я. zea, сохраняя при этом отличную активность по отношению к S. frugiperda. Улучшенные варианты TIC844 и CrylDa были разработаны, для экспрессии в сельскохозяйственных растениях
(например, кукурузе, сое, хлопке, сахарном тростнике), и предоставляют новые варианты для управления устойчивостью in planta (в растении) и борьбы с насекомыми-вредителями в силу очевидного уникального способа воздействия CrylDa в сочетании с улучшенной активностью против Я. zea.
[0008] Описанные в настоящем документе сконструированные токсичные белки чешуекрылых (называемые в настоящем документе "сконструированные белковые токсины", "сконструированные токсичные белки" или "сконструированные инсектицидные белки") являются производными природного инсектицидного токсина Bacillus thuringiensis CrylDal (SEQ ID NO: 2) или химерного гомолога
CrylDal, TIC844 (SEQ ID NO: 14), которые содержат основной токсин CrylDal, но имеют замененный протоксин Сгу1АЬЗ на нативный CrylDal-протоксиновый домен. Сконструированные инсектицидные белки согласно настоящему изобретению каждый содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену, одно аминокислотное присоединение или одну аминокислотную делецию по сравнению с каркасными белками, представленными в любой из SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14. Сконструированные инсектицидные белки согласно настоящему изобретению особенно токсичны для насекомых видов Helicoverpa zea (кукурузная совка, хлопковая совка, коробочный червь) и Spodoptera frugiperda (кукурузная листовая совка). Хотя белки каркасные TIC844 (SEQ ID N0: 14) и CrylDal (SEQ ID NO: 2) проявляют низкую токсичность в отношении Я. zea, инсектицидные белки, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают удивительной и неожиданно улучшенной инсектицидной активностью и улучшенным инсектицидным спектром против чешуекрылых насекомых-вредителей, включая Я. zea.
[0009] В некоторых вариантах реализации изобретения предложен инсектицидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в любой из SEQ ID N0: 44, SEQ ID N0: 40, SEQ ID N0: 12, SEQ ID N0: 26, SEQ ID N0: 4, SEQ ID N0: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID N0: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID N0: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 42, или ее фрагмент, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых. В некоторых вариантах реализации изобретения инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность в отношении видов насекомых отряда Lepidoptera (Чешуекрылые). Виды чешуекрылых вредителей, которые имеют негативное влияние на сельское хозяйство, включают, без ограничения, кукурузную листовую совку {Spodoptera frugiperda) , совку малую {Spodoptera exigua), совку латуковую {Mamestra configurata) , совку-ипсилон
{Agrotis ipsilon), совку капустную {Trichoplusia ni) , соевую совку {Chrysodeixis includens), совку бархатных бобов
{Anticarsia gemmatalis), совку клеверную {Нурепа scabra), табачную листовертку {Heliothis virescens), совку хлопковую
{Agrotis subterranea), совку луговую {Pseudaletia unipuncta), совку прямоугольную {Agrotis orthogonia), мотылька стеблевого кукурузного {Ostrinia nubilalis), бабочку-огневку {Amyelois transitella), кукурузную огневку {Crambus caliginosellus), лугового мотылька {Herpetogramma licarsisalis), огневку подсолнечниковую {Homoeosoma electellum), точильщика зернового кукурузного {Elasmopalpus lignosellus), плодожорку яблонную
{Cydia pomonella), листовертку виноградную {Endopiza viteana) , листовертку восточную персиковую {Grapholita molesta), листовертку почковую подсолнечника {Suleima helianthana), капустную моль (Plutella xylostella) , розового коробочного червя
{Pectinophora gossypiella), розовую стеблевую совку {Sesamia inferens) , шелкопряда непарного {Lymantria dispar), совку хлопковую американскую {Alabama argillacea) , листовертку плодовых деревьев {Archips argyrospila) , листовертку резанную золотистую {Archips rosana) , огневку азиатскую стеблевую или огневку желтую рисовую {Chilo suppressalis) , листовертку рисовую
{Cnaphalocrocis medinalis) , кукурузную огневку {Crambus caliginosellus) , мотылька травяного {Crambus teterrellus) , огневку кукурузную юго-западную {Diatraea grandiosella) , огневку сахарного тростника {Diatraea saccharalis), совку хлопковую египетскую {Earias insulana), совку пятнистую {Earias vittella), совку американскую {Helicoverpa armigera) , совку хлопковую или американскую кукурузную совку {Helicoverpa zea) , лугового мотылька {Herpetogramma licarsisalis) , гроздевую листовертку
{Lobesia botrana), цитрусовую минурующую моль {Phyllocnistis citrella), белянку капустную {Pieris brassicae) , репницу или белянку репную {Pieris гарае), азиатскую хлопчатниковую совку или азиатскую хлопковую совку {Spodoptera litura) и пасленового минера {Tuta absoluta) .
[0010] Также в настоящем документе раскрыт полинуклеотид, кодирующий сконструированный инсектицидный белок или его фрагмент, обладающий пестицидной активностью, причем полинуклеотид функционально связан с гетерологичным промотором, а сконструированный инсектицидный белок содержит аминокислотную последовательность, представленную в любой из SEQ ID N0: 44, SEQ
ID NO: 40, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 42.
[ООН] В другом варианте реализации изобретения, в
настоящем документе раскрыт полинуклеотид, кодирующий
сконструированный инсектицидный белок, причем полинуклеотид
содержит нуклеотидную последовательность, которая необязательно
гибридизуется в строгих условиях с обратным комплементом
полинуклеотидной последовательности, указанной в любой из SEQ ID
NO: 43, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO:
25, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ
ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID
NO: 23, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO:
37 или SEQ ID NO: 41; или кодирует сконструированный
инсектицидный белок, содержащий аминокислотную
последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 42.
[0012] Также в настоящем документе предложена клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид, представленный в любой из SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 41, причем клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактериальной клетки-хозяина или растительной клетки-хозяина. Рассматриваемые бактериальные клетки-хозяева включают бактериальные клетки-хозяева, выбранные из группы, состоящей из Agrobacteriumr Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, и Erwinia, причем вид рода Bacillus представляет собой Bacillus cereus или Bacillus thuringiensis, указанный Brevibacillus представляет собой Brevibacillus laterosperous, а указанная Escherichia
представляет собой Escherichia coli. Кроме того, предполагаемые растительные клетки-хозяева включают однодольные или двудольные растения.
[0013] В еще одном варианте реализации настоящего
изобретения предложена композиция, обладающая ингибирующей
активностью в отношении насекомых, содержащая сконструированный
инсектицидный белок, содержащий аминокислотную
последовательность, представленную в любой из SEQ ID N0: 44, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 42, или ее фрагмент, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых. Предполагается, что данная композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых может дополнительно содержать по меньшей мере один агент, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых, отличный от сконструированного инсектицидного белка. Рассматриваемые агенты, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых, включают белок, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых, молекулу дцРНК, обладающую ингибирующей активностью в отношении насекомых и химический состав, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых. Предполагается, что, по меньшей мере, один другой пестицидный агент может проявлять активность в отношении одного или нескольких видов вредителей отрядов Lepidopterar Coleopterar Hemipterar Homoptera или Thysanoptera.
[0014] Также раскрыто в настоящем документе семя, содержащее ингибирующе эффективное в отношении насекомых количество сконструированного инсектицидного белка, содержащего аминокислотную последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 42; или полинуклеотид, указанный в любой из SEQ ID NO:
43, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 41 .
[0015] Способ борьбы с чешуекрылыми насекомыми-вредителями, включающий приведение в контакт чешуекрылого насекомого-вредителя с ингибирующим количеством сконструированного инсектицидного белка, также раскрыт в настоящем документе в другом варианте реализации изобретения.
[0016] В еще одном варианте реализации изобретения, в
настоящем документе раскрыта трансгенная клетка растения,
растение или часть растения, содержащие сконструированный
инсектицидный белок. Предложены способы борьбы с чешуекрылым
насекомым-вредителем, включающие предоставление вредителю
трансгенной клетки растения, растения или части растения,
содержащих сконструированный инсектицидный белок.
Рассматриваются также товарные продукты, полученные из клетки растения, растения или части растения, содержащие сконструированный инсектицидный белок, причем продукт содержит определяемое количество сконструированного инсектицидного белка. Рассматриваемые товарные продукты включают биомассу растений, масло, муку грубого помола, корм для животных, муку, хлопья, отруби, волокно, кожуру и обработанные семена.
[0017] Другой способ, раскрытый в настоящем документе, представляет собой способ получения семени, содержащего сконструированный инсектицидный белок, включающий стадии, на которых: высаживают по меньшей мере одно семя, содержащее сконструированный инсектицидный белок; выращивают растение из указанного семени; и собирают семена от растений, причем собранное семя содержит инсектицидный белок.
[0018] Еще один способ, раскрытый в данной заявке, представляет собой способ ингибирования активности чешуекрылых насекомых-вредителей от кормления на культурном растении, включающий модификацию одного или нескольких аминокислотных остатков SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14 путем замещения одного
или более аминокислотного(-ых) остатка(-ов) для получения модифицированной SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14; и получения доступного количества обладающей ингибирующей активностью в отношении чешуекрылых модифицированной SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14 внутри, на поверхности или вблизи тканей указанного культурного растения; причем модифицированный аминокислотный остаток SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14 выбран из группы, состоящей из серина в положении 2 82, замененного лизином или валином, тирозина в положении 316, замененного серином, изолейцина в положении 3 68, замененного пролином или аргинином, серина в положении 374, замененного аргинином, аспарагина в положении 37 5, замененного гистидином и изолейцина в положении 432, замененного лейцином.
[0019] Также предложены рекомбинантные полинуклеотидные
молекулы, кодирующие сконструированные инсектицидные белки
согласно настоящему изобретению. Рассматриваемые рекомбинантные
полинуклеотидные молекулы содержат полинуклеотидную
последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID N0: 43, SEQ ID N0: 39, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 41; и, необязательно, полинуклеотидную последовательность, кодирующую агент, обладающий ингибиторной активностью в отношении насекомых, отличный от инсектицидного белка.
[0020] Другой способ, раскрытый в настоящем заявке, представляет собой способ увеличения активности в отношении чешуекрылых и усиления спектра ингибирования чешуекрылых у каркасного белка, включающий модификацию одного или более аминокислотного(-ых) остатка(-ов) SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14 путем замещения аминокислотного(-ых) остатка(-ов) для получения сконструированного инсектицидного белка, причем модифицированный аминокислотный остаток SEQ ID N0: 2 или SEQ ID N0: 14 выбран из группы, состоящей из серина в положении 2 82, замененного лизином или валином, тирозина в положении 316, замененного серином,
изолейцина в положении 3 68, замененного пролином или аргинином, серина в положении 374, замененного аргинином, аспарагина в положении 37 5, замененного гистидином и изолейцина в положении 432, замененного лейцином. В некоторых вариантах реализации данного способа сконструированный инсектицидный белок имеет по меньшей мере восьмикратно увеличенную летальность Helicoverpa zea по сравнению с каркасным белком.
[0021] Другие варианты реализации, особенности и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего подробного описания, примеров и формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0022] На Фиг. 1 представлены значения MIC50 (минимальной ингибирующей концентрации) каркасного белка TIC844 (SEQ ID N0: 14), по сравнению со сконструированным инсектицидным белком TIC844_8 (SEQ ID N0: 26) для двух различных колоний Helicoverpa zea (CEW) -"Union City" и "Benzon".
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0023] SEQ
ID NO: 1 представляет
собой
нуклеотидную
последовательность
, кодирующую белок CrylDal
[0024] SEQ
ID NO: 2 представляет
собой
аминокислотную
последовательность
белкового токсина CrylDal
[0025] SEQ
ID NO: 3 представляет
собой
нуклеотидную
последовательность
, кодирующую белок CrylDal
_3.
[0026] SEQ
ID NO: 4 представляет
собой
аминокислотную
последовательность
белкового токсина CrylDal
_3.
[0027] SEQ
ID NO: 5 представляет
собой
нуклеотидную
последовательность
, кодирующую белок CrylDal
_4 .
[0028] SEQ
ID NO: 6 представляет
собой
аминокислотную
последовательность
белкового токсина CrylDal
_4 .
[0029] SEQ
ID NO: 7 представляет
собой
нуклеотидную
последовательность
, кодирующую белок CrylDal
_5.
[0030] SEQ
ID NO: 8 представляет
собой
аминокислотную
последовательность
белкового токсина CrylDal
_5.
[0031] SEQ
ID NO: 9 представляет
собой
нуклеотидную
последовательность
, кодирующую белок CrylDal
_6.
[0032] SEQ
ID NO: 10 представляет
собой
аминокислотную
последовательность белкового токсина CrylDal_6.
[0033] SEQ ID NO: 11 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок CrylDal_7.
[0034] SEQ ID NO: 12 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_7.
[0035] SEQ ID NO: 13 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок TIC844.
[0036] SEQ ID N0: 14 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина TIC844.
[0037] SEQ ID N0: 15 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок Т1С844_2.
[0038] SEQ ID N0: 16 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина Т1С844_2.
[0039] SEQ ID N0: 17 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок Т1С844_4.
[0040] SEQ ID N0: 18 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина Т1С844_4.
[0041] SEQ ID N0: 19 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок Т1С844_5.
[0042] SEQ ID N0: 20 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина Т1С844_5.
[0043] SEQ ID N0: 21 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок Т1С844_б.
[0044] SEQ ID N0: 22 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина Т1С844_б.
[0045] SEQ ID N0: 23 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок Т1С844_7.
[0046] SEQ ID N0: 24 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина Т1С844_7.
[0047] SEQ ID N0: 25 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую белок Т1С844_8.
[0048] SEQ ID N0: 26 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина Т1С844_8.
[0049] SEQ ID N0: 27 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal в растениях.
[0050] SEQ ID NO: 28 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal.
[0051] SEQ ID NO: 2 9 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal_2.nno в растениях.
[0052] SEQ ID N0: 30 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_2.nno.
[0053] SEQ ID NO: 31 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal_3.nno в растениях.
[0054] SEQ ID N0: 32 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_3.nno.
[0055] SEQ ID NO: 33 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal_4.nno в растениях.
[0056] SEQ ID N0: 34 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_4.nno.
[0057] SEQ ID NO: 35 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal_5.nno в растениях.
[0058] SEQ ID N0: 36 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_5.nno.
[0059] SEQ ID NO: 37 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal_6.nno в растениях.
[0060] SEQ ID N0: 38 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_6.nno.
[0061] SEQ ID NO: 39 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка CrylDal_7.nno в растениях.
[0062] SEQ ID N0: 40 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина CrylDal_7.nno.
[0063] SEQ ID NO: 41 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка TIC844_9.nno в растениях.
[0064] SEQ ID N0: 42 представляет собой аминокислотную
последовательность белкового токсина TIC844_9.nno.
[0065] SEQ ID NO: 43 представляет собой полинуклеотидную последовательность, сконструированную для экспрессии белка TIC844_11.nno в растениях.
[0066] SEQ ID N0: 44 представляет собой аминокислотную последовательность белкового токсина TIC844_11.nno.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0067] В настоящем документе представлены сконструированные
инсектицидные белки, демонстрирующие удивительно более высокие
уровни токсической активности против видов отряда Чешуекрылые и
более широкий инсектицидный спектр по сравнению с другими ранее
известными инсектицидными белками чешуекрылых. Эти
сконструированные инсектицидные белки получают из каркасных инсектицидных белков, которые служат в качестве шаблонов для различных аминокислотных модификаций. Примеры таких каркасных инсектицидных белков включают, но не ограничиваются ими, CrylDal и TIC844 (гомолог CrylDal). TIC844 содержит основной токсин CrylDal (т.е. домены I, II и III), но использует домен протоксина Сгу1АЬЗ для обеспечения хорошей экспрессии в Bacillus thuringiensis (Bt). Экспрессия CrylDal в Bt является плохой при использовании родного домена протоксина CrylDal. Однако, как показано в настоящей заявке, экспрессия основного токсина CrylDal заметно улучшается в некристаллообразующих штаммах Bt, когда удаляется нативный протоксиновый домен, а сегмент кодирования основного токсина CrylDal слит с сегментом, кодирующим протоксиновый домен Сгу1АЬЗ. Примечательно, что белки TIC844 (SEQ ID N0: 14) и CrylDal (SEQ ID NO: 2) не демонстрируют коммерчески полезный спектр ингибирования чешуекрылых и улучшенную ингибирующую активность в отношении чешуекрылых, наблюдаемую у сконструированных инсектицидных белков.
[0068] Сконструированные инсектицидные белки, описанные в настоящем изобретении, связаны с модификациями аминокислот, так что модифицированные белки обладают улучшенным спектром ингибирования чешуекрылых и/или улучшенной ингибирующей активностью в отношении чешуекрылых по сравнению с исходным каркасным белком TIC844 или CrylDal. Фразы "более активный",
"улучшенная активность", "повышенная специфичность", "повышенная
токсическая активность", "повышенная токсичность", "улучшенная
ингибирующая активность в отношении чешуекрылых", "более высокая
ингибирующая активность в отношении чешуекрылых" и "усиленный
спектр ингибирования чешуекрылых" относятся к сопоставлению
активности сконструированного инсектицидного белка с активностью
каркасного белка (TIC844 или CrylDal) против насекомого-
чешуекрылого, причем активность, приписываемая
сконструированному инсектицидному белку, больше, чем активность, приписываемая каркасному белку. В некоторых вариантах реализации изобретения инсектицидные белки, предложенные в настоящем документе, обладают улучшенным спектром ингибирования чешуекрылых и/или улучшенной или большей ингибирующей активностью в отношении чешуекрылых по сравнению с активностью каркасного белка TIC844 или CrylDal, причем виды чешуекрылых-вредителей включают, но не ограничиваются ими, Helicoverpa zea и Spodoptera frugiperda.
[0069] Используемые в настоящем документе термины и фразы
"активный" или "активность"; "пестицидная активность" или
"пестицидный"; или "инсектицидная активность", "ингибирующая
инсектицидная активность", "инсектицидный" или "инсектицидно
ингибирующее количество", относятся к эффективности токсичного
агента, такого как инсектицидный белок, в ингибировании
(ингибировании роста, кормления, плодовитости или
жизнеспособности), подавлении (подавлении роста, кормления, плодовитости или жизнеспособности), контроле (контроле заражения вредителями, контроле активности кормления вредителями на определенной культуре, содержащей эффективное количество описанного инсектицидного белка) или уничтожении (вызывая заболеваемость, смертность, или снижение плодовитости) вредителя. Точно так же "количество, оказывающее ингибирующую активность на чешуекрылых" относится к количеству токсичного агента, такого как инсектицидный белок, что приводит к любому измеримому ингибированию жизнеспособности чешуекрылых, росту чешуекрылых, развитию чешуекрылых, размножению чешуекрылых, кормовому поведению чешуекрылых, брачному поведению чешуекрылых
и/или любому измеримому снижению неблагоприятных эффектов, испытываемых растением от питания чешуекрылых. Эти термины призваны включать результат обеспечения пестицидно эффективного количества токсичного агента для вредителя, при котором предоставление вредителю токсичного агента приводит к заболеваемости, смертности, снижению плодовитости или задержке роста. Эти термины также включают отталкивание вредителя от растения, ткани растения, части растения, семени, клеток растения или от конкретного географического положения, где растение может произрастать, в результате предоставления пестицидно эффективного количества токсичного агента в или на растении. В общем, пестицидная активность относится к способности токсичного агента быть эффективным в ингибировании роста, развития, жизнеспособности, кормового поведения, брачного поведения, плодовитости или любого измеримого снижения, вызванного неблагоприятными эффектами, в связи с предоставлением в рацион насекомого данного белка, фрагмента белка, сегмента белка или полинуклеотида, конкретному целевому вредителю, включая, но не ограничиваясь ими, насекомых отряда Lepidoptera. Токсичный агент может быть продуцирован растением или может быть применен к растению или в окружающей среде в том месте, где находится растение.
[0070] Пестицидно эффективное количество токсического агента, если оно предусмотрено в рационе целевого вредителя, проявляет пестицидную активность, когда токсичность попадает в организм вредителя. Токсичный агент может представлять собой пестицидный белок, или один или более химических агентов, известных в данной области техники. Пестицидные или инсектицидные химические агенты и пестицидные или инсектицидные белковые агенты могут быть использованы по отдельности или в сочетании друг с другом. Химические агенты включают, но не ограничиваются ими, молекулы дцРНК, нацеленные на специфические гены для подавления в целевом вредителе, органохлориды, органофосфаты, карбаматы, пиретроиды, неоникотиноиды и рианоиды. Пестицидные или инсектицидные белковые агенты включают сконструированные инсектицидные белки, представленные в данной
заявке, а также другие белковые токсичные агенты, включая те, которые нацелены на разновидности чешуекрылых, а также белковые токсины, которые используются для борьбы с другими вредителями растений, такие как белки Cry, доступные в данной области техники для применения при борьбе с видами родов Coleopteran, Hemipteran и Homopteran.
[0071] Термин "сегмент" или "фрагмент" используется в настоящем документе для описания последовательностей аминокислот или нуклеиновых кислот, которые короче, чем полная аминокислотная или нуклеотидная последовательность, описывающая сконструированные инсектицидные белки.
[0072] Предполагается, что упоминание вредителя, особенно
вредителя сельскохозяйственного растения, означает насекомых-
вредителей культурных растений, особенно тех чешуекрылых
насекомых-вредителей, которые контролируются описанными
инсектицидными белками. Однако упоминание вредителя может также включать насекомых-вредителей отрядов Coleoptera (Жесткокрылые), Hemiptera (Полужесткокрылые) и Homoptera (Равнокрылые), а также нематод и грибы, в случае, если токсические агенты, нацеленные на этих вредителей, совместно локализуются или присутствуют вместе с описанными инсектицидными белками.
[0073] Раскрытые сконструированные инсектицидные белки проявляют инсектицидную активность по отношению к насекомым-вредителям из видов насекомых отряда Чешуекрылые, включая имаго, куколок, личинок и новорожденных. Насекомые отряда Lepidoptera, включают, без ограничений, совок луговых, совок, листоверток, и совок из семейства Noctuidae, например, кукурузную листовую совку {Spodoptera frugiperda), совку малую {Spodoptera exigua), совку латуковую {Mamestra configurata) , совку-ипсилон {Agrotis ipsilon), совку капустную {Trichoplusia ni) , соевую совку {Pseudoplusia includens), совку бархатных бобов {Anticarsia gemmatalis), совку клеверную {Нурепа scabra), табачную листовертку {Heliothis virescens), совку хлопковую {Agrotis subterranea), совку луговую {Pseudaletia unipuncta), совку прямоугольную {Agrotis orthogonia); точильщиков, чехлоносок, бабочек, огневок Шишковых, гусениц бабочки капустницы и
пироморфид из семейства Pyralidae, например, мотылька стеблевого кукурузного (Ostrinia nubilalis), бабочку-огневку (Amyelois transitella) , кукурузную огневку {Crambus caliginosellus) , лугового мотылька {Herpetogramma licarsisalis) , огневку подсолнечниковую {Homoeosoma electellum), точильщика зернового кукурузного {Elasmopalpus lignosellus); листоверток, дымчастых листоверток, плодожорок и плодовых листоверток из семейства Tortricidae, например, плодожорку яблонную {Cydia pomonella), листовертку виноградную {Endopiza viteana), листовертку восточную персиковую {Grapholita molests), листовертку подсолнечника {Suleima helianthana); и многих других экономически важных представителей отряда Lepidoptera, например, капустную моль (Plutella xylostella), розового коробочного червя {Pectinophora gossypiella) и шелкопряда непарного {Lymantria dispar) . Другие насекомые-вредители отряда Lepidoptera включает, например, Alabama argillacea (совка хлопковая американская), Archips argyrospila (листовертка плодовых деревьев), Archips rosana (листовертая резанная золотистая) и другие виды Archips, Chilo suppressalis (огневка азиатская стеблевая или желтая рисовая огневка), Cnaphalocrocis medinalis (листовертка рисовая), Crambus caliginosellus (кукурузная огневка), Crambus teterrellus (мотылек травяной), Diatraea grandiosella (огневка кукурузная юго-западная) , Diatraea saccharalis (огневка сахарного тростника), Earias insulana (совка хлопковая египетская), Earias vittella (совка пятнистая), Helicoverpa armigera (совка американская), Helicoverpa zea (совка хлопковая или американская кукурузная совка), Heliothis virescens (табачная листовертка), Herpetogramma licarsisalis (луговой мотылек), Lobesia botrana (гроздевая листовертка), Phyllocnistis citrella (цитрусовая минурующая моль), Pieris brassicae (белянка капустная), Pieris гарае (репница или белянка репная), Plutella xylostella (капустная моль), Spodoptera exigua (совка малая), Spodoptera litura (азиатская хлопчатниковая совка, азиатская хлопковая совка) и Tuta absoluta (пасленовый минер).
[0074] Указанная в настоящей заявке "выделенная молекула ДНК" или эквивалентный термин или фраза означает, что молекула
ДНК представляет собой молекулу, которая присутствует отдельно или в сочетании с другими композициями, но не в ее естественной среде. Например, элементы нуклеиновой кислоты, такие как кодирующая последовательность, интронная последовательность, нетранслируемая лидерная последовательность, промоторная последовательность, последовательность терминации транскрипции и т.п., которые, естественно, находятся в ДНК генома организма, не считаются "выделенными" до тех пор, пока элемент находится в геноме организма и в том месте, где он находится, в естественном геноме. Тем не менее, каждый из этих элементов и их части были бы "выделенными" в рамках данного описания, если элемент не находится внутри генома организма и в том месте, где он находится, в геноме, в котором он естественным образом находится. Точно так же нуклеотидная последовательность, кодирующая инсектицидный белок или любой встречающийся в природе инсектицидный вариант этого белка, будет представлять собой выделенную нуклеотидную последовательность, если нуклеотидная последовательность не находится в ДНК бактерии, в которой естественным образом находится последовательность, кодирующая белок. Синтетическая нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность природного инсектицидного белка, будет считаться выделенной для целей настоящего описания. Для целей настоящего описания любая трансгенная нуклеотидная последовательность, то есть нуклеотидная последовательность ДНК, встроенная в геном клеток растения или бактерии или присутствующая во внехромосомном векторе, будет считаться выделенной нуклеотидной последовательностью независимо от того, присутствует ли она в плазмиде или подобной структуре, используемой для трансформации клеток, в геноме растения или бактерии, или присутствует в обнаруживаемых количествах в тканях, потомстве, биологических образцах или товарных продуктах, полученных из растения или бактерии.
[0075] Как описано далее в Примерах, повторяющиеся циклы конструирования, тестирования и отбора более двух тысяч (2000) вариантов аминокислотной последовательности TIC844 и CrylDal привели к идентификации определенных аминокислотных остатков,
которые могут быть замещены, вставлены или удалены из данного каркасного белка для получения искусственных инсектицидных белков, которые обладают расширенным спектром ингибирования чешуекрылых и/или улучшенной ингибирующей активностью в отношении чешуекрылых (т.е. более токсичным; меньшее количество инсектицидного белка, необходимо для получения того же уровня смертности) по сравнению со спектром и активностью базовых каркасных белков, TIC844 или CrylDal. Эти повторяющиеся этапы конструирования, тестирования и отбора также привели к идентификации замещений, вставок или делеций нейтральных аминокислотных остаток в каркасных белках TIC844 и CrylDal, которые не изменяют ингибирующий спектр или активность в отношении насекомых. Конкретные аминокислотные остатки в каркасе TIC844 и CrylDal, которые могут быть модифицированы для получения улучшенного спектра ингибирования чешуекрылых и/или улучшенной ингибирующей активности в отношении чешуекрылых, по сравнению с TIC844 или CrylDal, идентифицированы в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированный инсектицидный белок, предложенный в настоящем документе, может проявлять примерно восьмикратную или большую ингибирующую активность в отношении чешуекрылых против видов вредителей отряда Чешуекрылые, по сравнению с каркасным белком SEQ ID N0: 14 (TIC844) или SEQ ID N0: 2 (CrylDal).
[0076] Термин "конструирование" в этих повторяющихся циклах включал определение релевантных остатков в каркасном белке для модификации с целью создания модифицированного тестового белка и клонирование и экспрессию полученных модифицированных тестовых белков. Атомарная структура каркасных белков была использована для направления и дополнения полуслучайных подходов к выбору аминокислотных остатков для модификации при конструировании. Термин "тестирование" в этих повторяющихся циклах включал сравнение видоспецифичных видовых активностей модифицированного тестового белка с его исходным каркасным белком. Термин "отбор" в этих повторяющихся циклах включал идентификацию модифицированных тестовых белков с улучшенной активностью (улучшенные варианты) и соответствующих остатков, которые были
сконструированы для создания этих улучшенных вариантов (эти улучшенные варианты называются в настоящем документе "сконструированными инсектицидными белками").
[0077] Примерами способов тестирования и отбора сконструированных инсектицидных белков являются введение одинаковых количеств модифицированного тестового белка и каркасного белка (TIC844 или CrylDal) насекомому-вредителю в контролируемых условиях анализа и измерение, и сравнение эффективности модифицированных тестовых белков и каркасных белков. Другой способ тестирования и отбора сконструированных инсектицидных белков включает определение доз белка (например, концентрации белка в рационе) модифицированного тестового белка и каркасного белка (TIC844 или CrylDal), которые вызывают эквивалентные ответы популяции насекомых в контролируемых условиях анализа (то есть, получение кривой зависимости доза-эффект) . Для сравнения использовалась статистически значимая величина дозы, используемая для сравнения: средняя летальная концентрация (LC50), необходимая для уничтожения 50% исследуемой популяции или концентрации ингибирования линьки ("М1С50") , медианная концентрация, необходимая для ингибирования линьки на 50%) .
[0078] В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированные инсектицидные белки, описанные в настоящем документе, содержат по меньшей мере одну аминокислотную модификацию в следующих относительных положениях TIC844 (SEQ ID N0: 14) или CrylDal (SEQ ID NO: 2) : серии в положении 282 замещенный лизином или валином, тирозин в положении 316 замещенный серином, изолейцин в положении 3 68 замещенный пролином или аргинином, серии в положении 37 4 замещенный аргинином, аспарагин в положении 37 5 замещенный гистидином и изолейцин в положении 432 замещенный лейцином. Сконструированные инсектицидные белки могут также содержать по меньшей мере две, три, четыре или более из этих аминокислотных замещений или делеций в рамках одной и той же сконструированной инсектицидной последовательности белка.
[0079] Сконструированные инсектицидные белки, которые
содержат данные аминокислотные модификации, включают белки, представленные как SEQ ID N0: 4, SEQ ID N0: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40 и SEQ ID NO: 44, и их фрагменты, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых. Каждый из этих сконструированных инсектицидных белков имеет измеренную массу около 132 кДа. Отдельные характеристики инсектицидных каркасных белков TIC844 и CrylDal и сконструированных инсектицидных белков, полученных из них, представлены в Таблице 1.
NO: 14
TIC844 2 /NO:16
129129,85
1139
5, 048
-39,373
110
153
382
339
TIC844 4 /NO:18
129106,81
1139
5, 026
-39,539
110
153
382
340
TIC844 5 /N0:20
1291118,08
1069
5, 325
-27,535
105
136
363
321
TIC844 6 /N0:22
129252,02
1139
5, 050
-38,540
111
153
382
339
TIC844 7 /N0:24
129149,84
1139
5, 050
-38,539
111
153
381
340
TIC844 8 /N0:26
129102,82
1139
5, 026
-39,539
110
153
382
339
CrylDal/ N0:28
132481,87
1165
5,087
-39,319
113
156
388
347
CrylDal 2.nno/NO : 30
132552,95
1166
5,087
-39,319
113
156
389
347
CrylDal 3.nno/NO : 32
132476,85
1166
5,087
-39,318
113
156
389
347
CrylDal 4.nno/NO : 34
132622,06
1166
5, 112
-38,319
114
156
389
346
CrylDal 5.nno/NO : 36
132519,88
1166
5, 112
-38,318
114
156
388
347
CrylDal 6.nno/NO : 38
132501,90
1166
5, 112
-39,319
114
156
388
346
CrylDal 7.nno/NO
132472,86
1166
5,087
-39,318
113
156
389
346
: 40
TIC844 9 .nno/NO:
129253,99
1140
5, 026
-39,540
110
153
383
340
TIC844 1 1.nno/NO : 44
129173,90
1140
5, 026
-39,539
110
153
383
339
[0080] Фрагменты сконструированных инсектицидных белков, описанных в настоящем документе, могут быть укороченными формами, в которых одна или несколько аминокислот удаляются с N-конца, С-конца, середины белка, или их комбинаций без потери ингибирующей активности в отношении насекомых. Эти фрагменты должны сохранять ингибирующую активность родительского инсектицидного белка в отношении насекомых.
[0081] Белки, которые имеют сходство со сконструированными инсектицидными белками, могут быть идентифицированы путем сравнения друг с другом с использованием различных компьютерных алгоритмов, известных в данной области техники. Например, идентичность аминокислотных последовательностей белков, связанных со сконструированными белками, может быть проанализирована с использованием выравнивания Clustal W с использованием данных параметров по умолчанию: Матрица весовых оценок: blosum, штраф на внесение делеции в выравнивание: 10,0, штраф на продолжение делеции: 0,05, гидрофильные делеции: Вкл., гидрофильные остатки: GPSNDQERK, штраф на остаткоспецифичные делеции: Вкл. (Thompson, et al (1994) Nucleic Acids Research, 22:4673-4680). Процент идентичности аминокислот далее рассчитывают в виде выражения 10 0% умноженных на (идентичности аминокислот/длина искомого белка). Другие алгоритмы выравнивания также доступны в данной области техники и обеспечивают результаты, аналогичные тем, которые получены с использованием выравнивания Clustal W.
[0082] Как описано далее в Примерах данной заявки, синтетические или искусственные последовательности, кодирующие каркасные белки и сконструированные инсектицидные белки, были
в SEQ
NO:
: 27
SEQ
NO:
: 31
SEQ
NO:
: 35
SEQ
NO:
: 39
SEQ
NO:
: 43
разработаны для применения в растениях. Иллюстративные синтетические нуклеотидные последовательности, которые были разработаны для применения у растений, изложен
(CrylDal.nno), SEQ ID N0:29 (CrylDal_2.nno)
(CrylDal_3.nno) , SEQ ID N0:33 (CrylDal_4.nno
(CrylDal_5.nno) , SEQ ID N0:37 (CrylDal_6.nno
(CrylDal_7.nno) , SEQ ID N0:41 (TIC844_9.nno)
(TIC844_11.nno).
[0083] Экспрессионные кассеты и векторы, содержащие эти синтетические или искусственные нуклеотидные последовательности, конструировали и вводили в клетки растений кукурузы, хлопчатника и сои в соответствии со способами и методиками трансформации, известными в данной области техники. Трансформированные клетки регенерировали в трансформированные растения, которые, как было замечено, экспрессировали сконструированный инсектицидный белок или каркасный белок. Для проверки пестицидной активности биотесты проводили в присутствии личинок чешуекрылых-вредителей с использованием высечек из листьев растений, полученных от трансформированных растений.
[0084] Рассматриваются композиции молекул рекомбинантной нуклеиновой кислоты, которые кодируют сконструированные инсектицидные белки. Например, сконструированный инсектицидный белок может быть экспрессирован конструктами рекомбинантной ДНК, в которых полинуклеотидная молекула с 0PC (открытой рамкой считывания), кодирующая сконструированный инсектицидный белок, функционально связана с элементами генетической экспрессии, такими как промотор и любой другой регуляторный элемент, необходимый для экспрессии в системе, для которой предназначен данный конструкт. Неограничивающие примеры включают растительный функциональный промотор, функционально связанный с кодирующими последовательностями синтетических инсектицидных белков, для экспрессии сконструированного инсектицидного белка в растениях, или Bt-функциональным промотор, функционально связанный с кодирующими последовательностями синтетических инсектицидных белков, для экспрессии белка в бактерии Bt или других видах рода Bacillus. Другие элементы могут быть функционально связаны со
сконструированными кодирующими последовательностями
инсектицидного белка, включая, но не ограничиваясь ими, энхансеры, интроны, нетранслируемые лидеры, кодированные белковые иммобилизационные метки (гистидиновые метки), транслокационные пептиды (т.е. пластидные транзитные пептиды, сигнальные пептиды) полипептидные последовательности для посттрансляционных модифицирующих ферментов, сайты связывания рибосом и сайты-мишени РНКи. Приведенные в настоящем документе иллюстративные молекулы рекомбинантного полинуклеотида включают, но не ограничиваются ими, гетерологичный промотор, функционально связанный с полинуклеотидом, таким как SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:9, SEQ ID N0:11, SEQ ID N0:15, SEQ ID N0:17, SEQ ID N0:19, SEQ ID N0:21, SEQ ID N0:23, SEQ ID N0:25, SEQ ID N0:31, SEQ ID N0:33, SEQ ID N0:35, SEQ ID N0:37, SEQ ID N0:39 b SEQ ID N0:43, который кодирует полипептид или белок, имеющий аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID N0:4 (CrylDal_3), SEQ ID N0:6 (CrylDal_4), SEQ ID N0:8
(CrylDal_5), SEQ ID N0:10 (CrylDal_6), SEQ ID N0:12 (CrylDal_7), SEQ ID N0:16 (TIC844_2), SEQ ID N0:18 (TIC844_4), SEQ ID N0:20
(TIC844_5), SEQ ID N0:22 (TIC844_6), SEQ ID N0:24 (TIC844_7),
SEQ ID N0:26 (TIC844_8), SEQ ID N0:32 (CrylDal_3. nno) , SEQ ID
N0:34 (CrylDal_4.nno), SEQ ID N0:36 (CrylDal_5.nno), SEQ ID
N0:38 (CrylDal_6 .nno) , SEQ ID N0:40 (CrylDal_7. nno) и SEQ ID
N0:44 (TIC844_11.nno). Гетерологичный промотор также может быть
функционально связан с синтетическими кодирующими
последовательностями ДНК, кодирующими нацеленный на пластиду
сконструированный инсектицидный белок и нецелевой
сконструированный инсектицидный белок. Предполагается, что кодоны молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей сконструированный инсектицидный белок, описанный в настоящем документе, могут быть замещены синонимичными кодонами
(известными в данном уровне техники как молчащая замена).
[0085] Рекомбинантная молекула ДНК или конструкт, содержащие сконструированную инсектицидную кодирующую белок последовательность, может дополнительно содержать область ДНК, которая кодирует один или более токсичных агентов, которые могут
быть сконфигурированы для одновременной экспрессии или
коэкспрессии с последовательностью ДНК, кодирующей
сконструированный инсектицидный белок, белок, отличный от сконструированного инсектицидного белка, молекулу дцРНК, обладающую ингибирующей активностью в отношении насекомых или вспомогательный белок. Вспомогательные белки включают, но не ограничиваются ими, кофакторы, ферменты, партнеры по связыванию или другие агенты, которые действуют, с целью повышения эффективности агента, оказывающего ингибирующее воздействие на насекомое, например, путем облегчения его экспрессии, влияния на его стабильность в растениях, оптимизации свободной энергии для олигомеризации, увеличивая его токсичность и увеличивая спектра его активности. Вспомогательный белок может облегчать захват одного или более агентов, обладающих ингибирующим воздействием на насекомых, например, или усиливать токсический эффект токсичного агента.
[0086] Рекомбинантную молекулу ДНК или конструкт можно сформировать так, чтобы все белки или молекулы дцРНК экспрессировались от одного промотора, или каждый белок, или молекула дцРНК находилась под контролем отдельного промотора, или некоторой их комбинации. Белки согласно данному изобретению могут быть экспрессированы системой множественной экспрессии генов, в которой сконструированный инсектицидный белок экспрессируется из общего нуклеотидного сегмента, который также содержит другие открытые рамки считывания и промоторы, в зависимости от выбранного типа системы экспрессии. Например, бактериальная система множественной экспрессии генов может использовать единственный промотор для управления экспрессией многократносвязанных/тандемных открытых рамок считывания из одного оперона (т.е., полицистронной экспрессии). В другом примере растительная система множественной экспрессии генов может использовать многократнонесвязанные экспрессионные кассеты, каждая из которых экспрессирует другой белок или другой токсичный агент, такой как одна или более молекул дцРНК.
[0087] Рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты или рекомбинантные конструкты ДНК, содержащие сконструированную
кодирующую последовательность инсектицидного белка, могут быть
доставлены в клетки-хозяева при помощи векторов, например,
плазмидного, бакуловирусного, синтетической хромосомы,
вирионного, космидного, фагмидного, фагового или вирусного вектора. Такие векторы могут быть использованы для достижения стабильной или кратковременной экспрессии сконструированной кодирующей последовательности инсектицидного белка в клетке-хозяине или последующей экспрессии кодируемого полипептида. Экзогенный рекомбинантный полинуклеотид или рекомбинантный конструкт ДНК, которые содержат сконструированную инсектицидную последовательность, кодирующую последовательность белка, и которые вводят в клетку-хозяина, упоминаются в настоящем документе как "трансген".
[0088] В настоящем документе предложены трансгенные бактерии, трансгенные клетки растений, трансгенные растения и трансгенные части растений, которые содержат полинуклеотид, кодирующий любой один или более инсектицидных белков. Термин "бактериальная клетка" или "бактерия" может включать, но не ограничивается ими, клетку видов родов Agrobacteriumr Bacillusг Escherichiar Salmonellar Pseudomonas или Rhizobium. Термин "клетка растения" или "растение" может включать, но не ограничивается ими, клетку двудольного растения или клетку однодольного растения. Рассматриваемые растения и клетки растений включают, но не ограничиваются ими, люцерну, банан, ячмень, бобы, брокколи, капусту, капусту декоративную, морковь, маниок, клещевину, капусту цветную, сельдерей, нут, капусту пекинскую, цитрусовые, кокосовый орех, кофе, кукурузу, клевер, хлопчатник, тыквенные, огурец, ель Дугласа, баклажан, эвкалипт, лен, чеснок, виноград, хмель, лук-порей, салат латук, сосну Лоблолли, просо, дыни, орех, овес, маслину, лук, декоративные растения, пальму, пастбищную траву, горох, арахис, перец, голубиный горох, сосну, картофель, тополь, тыкву, сосну лучистую, редис, рапс, рис, корневищные злаки, рожь, сафлор, кустарниковые розы, сорго, сосну южную, сою, шпинат, тыкву гигантскую, клубнику, сахарную свеклу, сахарный тростник, подсолнечник, кукурузу сахарную, ликвидамбар смолоносный,
сладкий картофель, просо, чай, табак, помидор, тритикале, дерновую траву, арбуз и клетку или растение пшеницы. В некоторых вариантах реализации изобретения представлены трансгенные растения и трансгенные части растений, регенерированные из трансгенной клетки растения. В некоторых вариантах реализации изобретения трансгенные растения могут быть получены из трансгенного семени, путем черенкования, отщипывания, измельчения или иным образом разъединения части с растением. В некоторых вариантах реализации изобретения часть растения может представлять собой семя, коробочку, лист, цветок, стебель, корень или любую их часть или нерегенерируемую честь трансгенной части растения. Используемый в данном контексте термин "нерегенерируемая" часть трансгенной части растения представляет собой часть, из которой не может быть индуцировано образование целого растения, или из которой не может быть индуцировано образование целого растения, способного к половому и/или вегетативному размножению. В некоторых вариантах реализации изобретения нерегенерируемая часть части растения представляет собой часть трансгенного семени, коробочки, листа, цветка, стебля или корня.
[0089] Предложены способы получения трансгенных растений, которые содержат чешуекрыло ингибирующие количества сконструированных инсектицидных белков. Такие растения могут быть получены путем введения полинуклеотида, который кодирует сконструированные инсектицидные белки, предложенные в настоящей заявке, в растительную клетку и отбора растения (полученного из указанной растительной клетки), которое экспрессирует инсектицидно- или чешуекрыло ингибирующее количество сконструированного белка. Растения могут быть получены из клеток растений путем регенерации или методик трансформации семян, пыльцы или меристемы. Способы трансформации растений известны в данной области техники.
[0090] Растения, экспрессирующие сконструированные
инсектицидные белки, можно скрещивать путем селекции с
трансгенными трансформантами, экспрессирующими другие
инсектицидные белки и/или экспрессирующими другие трансгенные
признаки, такие как другие признаки борьбы с насекомыми, гены устойчивости к гербицидам, гены, дающие признаки урожайности или устойчивости к стрессу, и т.п., или данные черты могут быть объединены в один вектор, так чтобы все признаки были связаны между собой.
[0091] Обработанные растительные продукты, содержащие обнаруживаемое количество сконструированного инсектицидного белка, сегмент, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомого или его фрагмент, или любую отличительную его часть, также описаны в настоящей заявке. В некоторых вариантах реализации изобретения обработанный продукт выбран из группы, состоящей из частей растения, биомассы растения, масла, муки грубого помола, сахара, корма для животных, муки, хлопьев, отрубей, волокна, шелухи, обработанного семени и семени. В некоторых вариантах реализации изобретения, обработанный продукт является нерегенерируемым. Растительный продукт может содержать товарный или другие коммерческие продукты, полученные из трансгенного растения или трансгенной части растения, причем товарный или другие продукты могут быть отслежены с помощью коммерческой деятельности путем обнаружения нуклеотидных сегментов или экспрессированной РНК или белка, которые кодируют или содержат отличительные части сконструированного инсектицидного белка.
[0092] Способы борьбы с насекомыми, в частности поражение видами отряда Чешуекрылые, культурных растений, со сконструированными инсектицидными белками, также описаны в настоящей заявке. Такие способы могут включать выращивания растений, содержащих инсектицидно- или чешуекрыло-ингибирующее количество сконструированного инсектицидного белка. В некоторых вариантах реализации изобретения такие способы могут дополнительно включать одно или более из следующего: (i) применение любой композиции, содержащей или кодирующей сконструированный инсектицидный белок, к растению или семени, что приводит к образованию растения; и (ii) трансформацию растения или клетки растения, что приводит к образованию растения с полинуклеотидом, кодирующим сконструированный
инсектицидный белок. В общем, предполагается, что сконструированный инсектицидный белок может быть обеспечен в композиции, обеспечен, в микроорганизме, обеспечен, в трансгенном растении для придания ингибирующей активности в отношении насекомых отряда Чешуекрылые.
[0093] В некоторых вариантах реализации изобретения,
сконструированный инсектицидный белок является инсектицидно
активным ингредиентом композиции, обладающей ингибирующей
активностью в отношении насекомых, полученной путем
культивирования рекомбинантной Bacillus или любой другой
рекомбинантной бактериальной клетки, трансформированной, для
экспрессии сконструированного инсектицидного белка в условиях,
пригодных для экспрессии. Такая композиция может быть получена с
помощью высушивания, лиофилизации, гомогенизации, экстракции,
фильтрации, центрифугирования, осаждения или концентрации
культуры таких рекомбинантных клеток,
экспрессирующих/продуцирующих сконструированный инсектицидный
белок. Такой процесс может привести к образованию экстракта
бактериальных клеток, суспензии клеток, клеточного гомогената,
клеточного лизата, клеточного супернатанта, клеточного фильтрата
или осаждению клеток Bacillus или другого энтомопатогена.
Получив сконструированный инсектицидный белок, таким образом,
создают композицию, которая содержит сконструированный
инсектицидном белок, может содержать бактериальные клетки,
бактериальные споры, а также параспоральные тельца и может
поставляться для различных применений, включая продукты-спреи,
обладающие ингибирующей активностью в отношении
сельскохозяйственные насекомых или препараты кормовой биомассы, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых в кормовых биотестах.
[0094] В одном варианте реализации изобретения, для того, чтобы уменьшить вероятность развития устойчивости, композиция или трансгенное растение, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых, содержащие сконструированный инсектицидный белок могут дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный токсичный агент, который проявляет ингибирующей
активностью в отношении одних и тех же видов чешуекрылых
насекомых, но который отличается от сконструированного
инсектицидного белка. Возможные дополнительные токсичные агенты
для такой композиции включают молекулы белка, обладающего
ингибирующей активностью в отношении насекомых и молекулу дцРНК,
обладающую ингибирующей активностью в отношении насекомых. Одним
из примеров использования таких рибонуклеотидных
последовательностей для борьбы с насекомыми-вредителями описаны в Baum, et al. (Патентная публикация США 2006/0021087 А1). Такой дополнительный полипептид(ы) для борьбы с чешуекрылыми насекомыми-вредителями может быть выбран из группы, состоящей из белка, проявляющего ингибирующую активность в отношении насекомых, такого как, но не ограничиваясь ими, CrylA (патент США № 5880275), CrylAb, CrylAc, CrylA.105, CrylAe, CrylB (патентная публикация США № 10/525318), CrylC (патент США № 6033874), CrylD, CrylE, CrylF и химеры CrylA/F (патент США № 7070982, 6962705 и 6713063), CrylG, CrylH, Cryll, CrylJ, CrylK, CrylL, Cry2A, Cry2Ab (патент США № 7064249), Cry2Ae, Cry4B, Сгуб, Cry7, Cry8, Cry9, Cryl5, Cry43A, Cry43B, Cry51Aal, ЕТ66, TIC400, TIC800, TIC834, TIC1415, VIP3A, VIP3Ab, VIP3B, AXMI-001, AXMI-002, AXMI-030, AXMI-035, и AXMI-045 (патентная публикация США 2013-0117884 Al) , AXMI-52, AXMI-58, AXMI-88, AXMI- 97, AXMI-102, AXMI-112, AXMI-117, AXMI-100 (патентная публикация США 2013-0310543 Al), AXMI-115, AXMI-113, AXMI-005 (патентная публикация США 2013-0104259 Al) , AXMI- 134 (патентная публикация США 2013-0167264 Al) , AXMI-150 (патентная публикация США 20100160231 Al), AXMI-184 (патентная публикация США 2010-0004176 Al), AXMI-196, AXMI-204, AXMI-207, AXMI-209 (патентная публикация США 2011-0030096 Al) , AXMI-218, AXMI-220 (патентная публикация США 2014-0245491 Al), AXMI-221z, AXMI-222z, AXMI-223z, AXMI-224z, AXMI-225z (патентная публикация США 20140196175 Al), AXMI-238 (патентная публикация США 2014-0033363 Al), AXMI-270 (патентная публикация США 2014-0223598 Al) , AXMI-345 (патентная публикация США 2014-0373195 Al) , DIG-3 (патентная публикация США 2013-0219570 Al) , DIG-5 (патентная публикация США 2010-0317569 Al), DIG-11 (патентная публикация США 2010-0319093
Al) , AflP-lA и его производные (патентная публикация США 20140033361 Al), AfIP-lB и его производные (патентная публикация США 2014-0033361 Al), PIP-1APIP-1B (патентная публикация США 20140007292 Al), PSEEN317 4 (патентная публикация США 2014-0007292 Al), AECFG-592740 (патентная публикация США 2014-0007292 А1) , Pput_1063 (патентная публикация США 2014-0007292 Al) , Pput_1064 ( патентная публикация США 2014-0007292 Al), GS-135 и его производные (патентная публикация США 2012-0233726 Al) , GS153 и его производные (патентная публикация США 2012-0192310 А1) , GS154 и его производные (патентная публикация США 2012-0192310 Al) , GS155 и его производные (патентная публикация США 20120192310 Al) , SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патентной публикации США 2012-0167259 Al, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патентной публикации США 2012-0047606 Al, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патентной публикации США 2011-0154536 Al, SEQ ID NO: 2, и ее производные, как описано в патентной публикации США 2011-0112013 A, SEQ ID NO: 2 и 4, и их производные, как описано в патентной публикации США 2010-0192256 Al, SEQ ID NO: 2, и ее производные, как описано в патентной публикации США 2010-0077507 Al, SEQ ID NO: 2, и ее производные, как описано в патентной публикации США 2010-0077508 Al, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патентной публикации США 2009-0313721 Al, SEQ ID NO: 2 или 4, и их производные, как описано в патентной публикации США 2010-0269221 Al, SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патенте США № 7772465 (В2), CF161_0085 и его производные как описано в WO2014/008054 А2, токсичные белки, обладающие активностью в отношении чешуекрылых и их производные, как описано в патентных публикациях США US2008-0172762 Al, US2011-0055968 А1 и US2012-0117690 Al; SEQ ID NO: 2, и ее производные, как описано в US7510878 (В2), SEQ ID NO: 2 и ее производные, как описано в патенте США № 7812129 (В1); и тому подобное.
[0095] В других вариантах реализации изобретения, композиция или трансгенное растение, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых, могут дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный токсичный агент, который
проявляет инсектицидную ингибирующую активность в отношении насекомых-вредителей, которые не восприимчивы к ингибирующей активности сконструированных инсектицидных белков согласно настоящему изобретению (например, жесткокрылых, полужесткокрылых и прямокрылых вредителей), для расширения полученного спектра ингибирующей активности в отношении насекомых.
[0096] Такой дополнительный токсичный агент для борьбы с жесткокрылыми насекомыми-вредителями может быть выбран из группы, состоящей из белка, обладающего ингибирующей активностью в отношении насекомых, такого как, но не ограничиваясь этим, СгуЗВЬ (патент США 6501009), варианты CrylC, варианты СгуЗА, СгуЗ, СгуЗВ, Сгу34/35, 5307, AXMI134 (патентная публикация США 2013-0167264 Al) AXMI-184 (патентная публикация США 2010-0004176 Al), AXMI-205 (патентная публикация США 2014-0298538 А1), axmi207 (патентная публикация США 2013-0303440 Al), AXMI-218, AXMI-220 (патентная публикация США 20140245491 Al) , AXMI-221z, AXMI-223z (патентная публикация США 2014-0196175 Al) , AXMI-279
(патентная публикация США 2014-0223599 Al) , AXMI-R1 и их варианты (патентная публикация США 2010-0197592 Al), TIC407, TIC417, TIC431, TIC807, TIC853, TIC901, TIC1201, TIC3131, DIG-10
(патентная публикация США 2010-0319092 Al), eHIPs (публикация заявки на патент США № 2010/0017914), IP3, и его варианты
(патентная публикация США 2012-0210462 А1) и тп-Hexatoxin-Hvla
(публикация заявки на патент США US2014-0366227 А1).
[0097] Такой дополнительный токсичный агент для борьбы с полужесткокрылыми вредителями может быть выбран из группы, состоящая из белков, обладающих активностью в отношении полужесткокрылых, таких как, но не ограничиваясь ими, TIC1415
(патентная публикация США 2013-0097735 Al) , TIC807 (патент США № 8609936), TIC834 (патентная публикация США 2013-0269060 А1), AXMI-036 (патентная публикация США 2010-0137216 А1) и AXMI-171
(патентная публикация США 2013-0055469 А1) . Дополнительные полипептиды для борьбы с жесткокрылыми, чешуекрылыми и полужесткокрылыми насекомыми-вредителями можно найти на сайте номенклатуры токсина Bacillus thuringiensis поддерживаемом Neil
Crickmore (во интернете, по адресу btnomenclature.infо).
[0098] Кодирующие последовательности сконструированного инсектицидного белка и последовательности, имеющие значительный процент идентичности со сконструированными инсектицидными белками могут быть идентифицированы с использованием способов, известных специалистам в данной области техники, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР), термическая амплификация и гибридизация. Например, сконструированные инсектицидные белки могут быть использованы для получения антител, которые специфически связываются с родственными белками, и могут быть использованы для скрининга и поиска других тесно связанных белков.
[0099] Кроме того, нуклеотидные последовательности,
кодирующие сконструированные инсектицидные белки, могут быть
использованы в качестве зондов и праймеров для скрининга с целью
выявления других представителей класса с использованием методов
термического цикла или изотермической амплификации и
гибридизации. Например, олигонуклеотиды, полученные из
последовательностей, указанных в SEQ ID N0: 3 могут быть
использованы, для определения наличие или отсутствие
сконструированного инсектицидного трансгена в образце
дезоксирибонуклеиновой кислоты, полученном из товарного
продукта. С учетом чувствительности некоторых способов
обнаружения нуклеиновых кислот, которые используют
олигонуклеотиды, предполагается, что олигонуклеотиды, полученные из последовательностей, указанных в SEQ ID N0: 3 могут быть использованы для обнаружения соответствующего сконструированную инсектицидного белка в товарных продуктов, полученных из объединенных источников, где только часть товарного продукта, получена из трансгенного растения, содержащего SEQ ID N0: 3.
[0100] Другие отличительные признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующих примеров и формулы изобретения.
ПРИМЕРЫ
[0101] Ввиду вышеизложенного специалистам в данной области техники должно быть понятно, что могут быть сделаны изменения в
конкретных аспектах, которые раскрыты и все будет получен подобный или аналогичный результат, не отходя от сущности и объема изобретения. Таким образом, конкретные структурные и функциональные детали, раскрытые в настоящем документе, не следует интерпретировать как ограничение. Следует понимать, что полное раскрытие каждой из указанных выше публикаций включено в описании настоящей заявки. ПРИМЕР 1
Разработка модифицированных тестовых белков и подготовка образцов для биологического анализа на насекомых
[0102] Данный Пример иллюстрирует способы, принятые для определения соответствующих аминокислотных остатков в каркасных белках, для модификации, для создания модифицированных тестовых белков, а также клонирование и экспрессию полученных модифицированных тестовых белков.
[0103] Некоторые методики молекулярной инженерии были
использованы в многоуровневом подходе для конструирования
улучшенных вариантов CrylDal, имеющих улучшенный спектр
ингибирующей активности в отношении чешуекрылых и/или улучшенную
ингибирующую активность в отношении чешуекрылых по сравнению с
каркасными белками CrylDal и TIC844 (гомолог CrylDal). Первый
тур, или начальный этап конструирования, в первую очередь
основан на гипотезах. Вторые и третьи туры были статистически
управляемыми этапами конструирования. Например, во втором туре
конструирования, статистически безвредные мутации были
комбинированы с предполагаемыми полезными мутациями для
получения двойных мутаций, которые удовлетворяли определенным
статистическим критериям. В третьем туре конструирования, все
данные из предыдущих испытаний были проанализированы с помощью
нескольких статистических методов. Только мутации,
продемонстрировавшие статистически значимое улучшение в более чем одном статистическом методе, были выбраны для окончательного пула мутаций. Варианты, разработанные в данном туре, содержали одну или две положительные мутации из вариантов, ранее подтвержденных как положительные. Таким образом, конструирование третьего тура существенно обогащало активные варианты по
сравнению с первым и вторым туром. Как показано в последующих Примерах, использование трехтуровой стратегии конструирования определяет как одиночные, так и синергичные мутации, которые обеспечили значительное улучшение активности против CEW для некоторых улучшенных вариантов по отношению к каркасным TIC8 4 4 и CrylDal.
[0104] Способы, которые были использованы для создания модифицированных тестовых белок включают, но не ограничены ими, полуслучайные модификации, направленные модификации отклонений в выравнивании TIC844/CrylDal с другими нативными белками Bacillus Thuringensis {Bt), и структурно/функциональное конструирование. Примеры используемых методик молекулярной инженерии включают следующие.
[0105] Связывание рецептора. Восприимчивость чешуекрылых насекомых-вредителей, в частности, совка кукурузной (CEW, Helicoverpa zea) к улучшенным вариантам CrylDal/TIC844 может быть отнесена к разным целевым кишечным рецепторам. Подходы, которые были использованы для улучшения связывания с рецепторами в кишечнике, тем самым увеличивая токсичность, включают: (1) подвергание мутации каждой позиции в апикальных петлях домена II по всем аминокислотным типам; и (2) замену всех возможных комбинаций апикальных петель домена II на те же от других гомологов CrylDal (например, CrylDbl, CrylDcl) и CEW-активных трехдоменых токсинов (например, CrylBbl, CrylJal и Сгу2АЬ2).
[0106] Подходы,. основанные на выравнивании Выравнивание CrylDal с другими гомологами (например, CrylDbl и CrylDcl) было использовано для идентификации областей изменчивости. В результате выравнивания были идентифицированы сто пятьдесят (150) позиций и двести девяносто пять (295) уникальных единичных мутаций. Эти позиции были расположены во всех трех доменах. Позиции в границах четырех (4) аминокислот друг от друга, были сгруппированы вместе. Только мутации из одинаковых исходных последовательностей были назначены для каждой группы позиций, с образованием ста тридцати двух (132) уникальных вариантов.
[0107] Подходы поверхностного мутагенеза. Полинуклеотиды, кодирующие поверхностные позиции в доменах II и III каркасных
белков, были подвергнуты мутагенезу при сканировании. В позициях каркасного белка, где не присутствовал аланин, аминокислотные остатки были заменены на аланин. Аргининовые мутации в дополнении к аланиновым были введены в поверхностных положениях, в которых нативные остатки представляли собой лизин. Рациональность мутационных замен лизина на аргинин была основан на наблюдении, что токсины, обладающие активностью в отношении чешуекрылых, как правило, имеют очень мало лизина и много аргинина и, таким образом, была выдвинута гипотеза о том, что изменение в поверхностных положениях лизина в доменах II и III на аргинин может увеличить активность модифицированного тестового белка в отношении чешуекрылых.
[0108] Изменение протеолитических событий. Существует гипотеза, что протеолитический процесс является важным аспектом деятельности трехдоменных токсинов в средней кишке чешуекрылых насекомых. Для тестирования этого было создано несколько наборов мутаций способных изменять любое протеолитическое расщепление. Потенциальные сайты расщепления расположены на N-конце и между доменом III и протоксином. Мутационные позиции включают предсказанные области петли от N-конца к началу спирали 4, и с С-конца домена III до ~40 аминокислот в протоксине. Как правило, остатки глицина гипотетически содействовали протеолизу или посредством распознавания протеолитического сайта, или за счет увеличения гибкости белка, тем самым делая его более восприимчивым к протеолитическому расщеплению. Кроме того, трипсин и химотрипсин оба представляют собой протеазы, которые широко известны в качестве жизнеспособных протеаз в средней кишке чешуекрылых. Остатки лизина обеспечивают сайты узнавания для трипсина, а остатки тирозина обеспечивают сайты узнавания для химотрипсина. Таким образом, выбранные мутационные позиции в потенциальных сайтах расщепления подвергали глициновым, лизиновым или тирозиновым мутациям.
[0109] Потенциальные горячие точки мутаций от других CEW-активных токсинов. Была проанализированы данные активности и отсутствии активности против CEW для большого набора белков (включая химер, фрагменты и нативные последовательности).
Информация, полученная из статистического анализа этих данных, была использована для выявления потенциальных специфических мутаций или позиций для мутаций, которые, вероятно, увеличат CEW-активности конечных модифицированных тестовых белков.
[ОНО] Модифицированные тестовые белки, полученные в
результате молекулярных методик инженерии, описанных выше, были
клонированы с использованием способов, известные в данной
области техники в рекомбинантный экспрессионный вектор плазмиды
Bt уменьшали экспрессию специфического промотора
спорообразование и трансформирован в некристаллообразующую клетку-хозяина Bt.
ПРИМЕР 2
Тестирование модифицированных тестовых белков в кормовых биотестах против чешуекрылых вредителей
[0111] Данный Пример иллюстрирует тестирование
модифицированных тестовых белков, созданных путем экспериментов конструирования, описанных в Примере 1.
[0112] Путем экспериментов конструирования, описанных в Примере 1, были произведены около двух тысяч пятисот (2 500) рекомбинантных штаммов Bt, экспрессирующих более двух тысяч трехсот (2300) различных модифицированных тестовых белков. Эти модифицированные тестовые белки экспрессировались Bt и испытывались на токсичность в отношении различных видов отряда Lepidoptera. Эксперименты кормления были проведены на новорожденных личинках ( <2 4 ч после вылупления) различных видов чешуекрылых, включая совку кукурузную (CEW, Helicoverpa zea) и кукурузную листовую совку (FAW, Spodoptera frugiperda) . Яйца насекомого для CEW-тестирования были получены из двух различных лабораторных колоний: Benson Research, Карлайл штат Пенсильвания и Monsanto Company, Юнион-Сити, штат Теннесси. Все экспрессированные модифицированные тестовые белки были протестированы против CEW, и некоторые из этих модифицированных тестовых белков, демонстрирующих повышенную активность против CEW по сравнению с их родительскими каркасными белками, были протестированы против FAW, в дополнении к выполнению дополнительного биотеста для подтверждения активности против
CEW.
[0113] Различные протоколы для биотестов и оценки смертности и задержке роста насекомых известны в данной области техники. Были использованы вариации способов, таких, как те, которые описаны в публикации патентной заявки РСТ № W0 2012/139004 и в патенте США № 7927598.
ПРИМЕР 3
Модифицированные тестовые белки проявляющие улучшенную активность против CEW
[0114] Данный Пример иллюстрирует открытие расширенного ингибирующего спектра в отношении чешуекрылых и/или улучшенной или увеличенной ингибирующей активности в отношении чешуекрылых для некоторых из модифицированных тестовых белков по сравнению с активностью каркасных белков TIC844 или CrylDal в нескольких этапах тестирования.
[0115] Модифицированные тестовые белки, созданные при помощи экспериментов конструирования, описанных в Примере 1, и испытанных в биотесте насекомых, как описано в Примере 2, были испытаны в повторяющихся этапах, в которых сравнивали активность в отношении видов чешуекрылых модифицированных тестовых белков с их соответствующими родительскими каркасными белками (т.е., TIC844 или CrylDal). На первом этапе триста семьдесят (370) различных модифицированных тестовых белков продемонстрировали повышенную токсичность в отношении CEW по сравнению с CMP TIC844 или CrylDal в кормовом биотесте. В каждом из этих кормовых биотестов, одинаковые количества белка (или модифицированный тестовый белок или каркасный белок) были предоставлены CEW в контролируемых условиях анализа с однократной дозой. Активность модифицированных тестов белков и каркасных белков определяли путем измерения и сравнения наблюдаемой смертности и задержки роста каждого из биотестов модифицированной тестовых белков к наблюдаемой смертности и задержке роста биотестов родительских каркасных белков.
[0116] Из трех сто семидесяти (370) модифицированных тестовых белков, которые продемонстрировали повышенную токсичность в отношении CEW по сравнению с каркасными белками в
однодозных тестах, около сто восемьдесят (180) из них были дополнительно испытаны в FAW-биотестах, чтобы определить, поддерживали или проявляли эти модифицированные тестовые белки повышенную активность по отношению к FAW по сравнению с их родительскими каркасными белками. От около сорока (40) до пятидесяти (50) из этих модифицированных тестовых белков проявляли сходную или более высокую активность в отношении FAW по сравнению с их родительскими каркасными белками. Эти дополнительно исследованные модифицированные тестовые белки были также испытаны в дополнительных CEW-биотестах, для подтверждения активности в отношении CEW. В результате этих этапов отбора и тестирования модифицированных тестовых белков, которые продемонстрировали улучшенную активность в отношении CEW при сохранении или улучшении активности в отношении FAW был получен окончательный список улучшенных вариантов (упоминаемый в настоящем документе как "сконструированные инсектицидных белки"). В Таблице 2 приводятся эти сконструированные инсектицидные белки и аминокислотные мутации в каждом сконструированном инсектицидном белке. В Таблице 2 также представлена активность каркасных и сконструированных инсектицидных белков в отношении CEW и FAW (инсектицидная активность показана в значении LC50 (концентрация токсина, необходимая, для уничтожения 50% популяции насекомых в течение заданной длительности воздействия. Чем ниже значение LC50, тем выше токсичность) и значении MIC50 (концентрация, необходимая для ингибирования линьки определенной возрастной стадии 50% личинок в течение фиксированной длительности воздействия). В данной таблице показано, что сконструированные инсектицидные белки обладают улучшенной активностью в отношении CEW, при сохранении или улучшении активности в отношении FAW.
Таблица 2. Аминокислотные мутации и данные активности для каркасных белков и сконструированных инсектицидных белков.
Белок
Аминокислотные
LC50
М1С50
(Название/SEQ ID NO.)
Мутации*
(мкг/см2) по отношению к CEW колонии Benzon в подготовительном
(мкг/см2) по отношению к CEW
Колония Benzon в
спорово-кристаллическом биотесте
подготовительном
спорово-кристаллическом
биотесте
CrylDal /NO: 2,
Отсутствует (каркасный белок)
н/д
-3,0
CrylDal 3/NO:4
CrylDal+Y316S
н/д
н/д
CrylDal 4/NO:6
CrylDal+S374R
н/д
н/д
CrylDal 5/NO:8
CrylDal+Y316S I368R
н/д
н/д
CrylDal _б/
N0:10
CrylDal+S282K Y316S I368P
н/д
н/д
CrylDal Jl
NO: 12
CrylDal+S282V Y316S I368P
н/д
н/д
Т1С844/ NO: 14
Отсутствует (каркасный белок)
41, 90
3,73
TIC844 2/NO:16
TIC844+Y316S N375H I 432L
0,81
0, 65
TIC844 4/NO:18
TIC844+Y316S
0,98
0, 57й
TIC844 5/NO:20
TIC844+S282K Y316S I 368P
0, 32
0, 33
TIC844
TIC844+S374R
4 . 09
1,39
б/NO:22
TIC844
TIC844+Y316S I368R
0, 93
0, 61
7/NO:24
TIC844
TIC844+S282V Y316S I
0,221
, 064
8/NO:26
368P
* Аминокислотные мутации идентифицированы с использованием стандартного кода IUPAC аминокислот. См., IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature. Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peptides. Eur. J. Biochem. 138:9-37(1984). Первая аббревиатура аминокислотной последовательности указывает на исходную аминокислоту в данном каркасном белке, число указывает положение аминокислоты, а вторая аббревиатура аминокислотной последовательности, указывает на аминокислоту, расположенную в этом положении в усовершенствованном варианте белка.
** Основной токсин CrylDal идентичен основному токсину TIC844 .
[0117] Далее демонстрируется улучшенный ингибирующий спектр чешуекрылых и улучшенная ингибирующая активностью в отношении чешуекрылых для сконструированных инсектицидных белков, летальность сконструированного инсектицидного белка Т1С844_8 относительно его родительского каркасного белка представлена на Фиг. 1. На гистограмме на Фиг.1 показано значения MIC50 Т1С844_8 по сравнению с каркасом белка TIC844 для двух различных колоний CEW, Union City и Benzon. Результаты биотестов, изображенные на Фиг.1, были рассчитаны из биотестов препаратов, очищенных градиентом сахарозы. Эти вторичные биотесты были проведены с препаратами белков, очищенными градиентом сахарозы вместо спорово-кристаллических препаратов белков для того, чтобы гарантировать, что улучшенная активность TIC844 8 сохраняется
при более интенсивной очистке. Кроме того, колонию Union City тестировали для подтверждения повышенной активности, наблюдаемой в колонии Benzon. Как показано на Фиг. 1, мутации в трех остатках TIC844_8 (S282V_Y316S_I368P), придавали 8-кратное улучшение летальности CEW, по сравнению с TIC844, для колонии Union City и 50-кратное улучшение летальности CEW, по сравнению с TIC844, для колонии Benzon.
[0118] Далее демонстрируется улучшенный ингибирующий спектр в отношении чешуекрылых и улучшенную ингибирующую активность в отношении чешуекрылых для сконструированных инсектицидных белков, профили активности против насекомых для TIC844 и Т1С844_8 из кормовых биотестов, проводимых в отношении широкого спектра видов насекомых-чешуекрылых, приведены в Таблице 3. Насекомые, в отношении которых проводились испытания в биотестах из Таблицы 3, включают совку ипсилон (BCW, Agrotis ipsilon), совку кукурузную (CEW, Helicoverpa zea), совку кукурузную листовую (FAW, Spodoptera frugiperda) , совку южную (SAW, Spodoptera eridiania), совку ни (CLW, Trichoplusia ni), огневку кукурузную (ЕСВ, Ostrinia nubilalis), юго-западного кукурузного мотылька (SWC, Diatraea grandiosella) , совку табачную (TBW, Heliothis virescens) , гусеницу бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis), совку соевую (SBL, Chrysodeixis includes) и огневку сахарного тростника (SCB, Diatraea saccharalis) . В данной Таблице 3 представлен улучшенный ингибирующий спектр Т1С844_8 в отношении чешуекрылых по сравнению с родительским каркасным белком TIC844, в частности, с улучшенной активностью против CEW и VBC.
Синтез генов, кодирующих инсектицидные сконструированные
* Активен в отношении указанных видов насекомых. [0119] Улучшенный ингибирующий спектр сконструированных инсектицидных белков в отношении чешуекрылых, далее продемонстрирован в Таблице 4, в которой представлен профиль активности насекомых для некоторых модифицированных инсектицидных белков из исследований кормовых биотестов. Насекомые, в отношении которых проводились испытания в биотестах из Таблицы 4, включают совку американскую (CBW, Helicoverpa armigera) , совку азиатскую хлопковую (TCW, Spodoptera litura), совку малую (BAW, Spodoptera exigua) , розового коробочного червя (PBW, Pectinophora gossypiella) , совку розовую стеблевую (PSB, Sesamia inferens) и совку пятнистую (SBW, Earias vitella) . Результаты, представленные в Таблице 4, указывают на повышенный ингибирующий спектр в отношении чешуекрылых у перечисленных сконструированных инсектицидных белков (по сравнению с каркасным белком CrylDal) в частности, с улучшенной активностью против CBW, PBW (устойчивые к CrylAc), PBW (естественного происхождения) и SBW.
белки и каркасные белки для экспрессии в растениях
[0120] Данный пример иллюстрирует синтез полинуклеотидов, кодирующих сконструированные инсектицидные белки и каркасные белки для экспрессии в растениях.
[0121] Нуклеотидные последовательности, кодирующие каркасные белки и сконструированные инсектицидные белки для экспрессии в растениях, были разработаны и синтезированы в соответствии со способами, описанными в патенте США № 5500365, избегая определенные неподходящие проблемные последовательности, таких как последовательности полиаденилирования растений, обогащенные АТТТА и А/Т, при сохранении аминокислотной последовательности исходного каркасного или сконструированного инсектицидного белка. Нуклеотидные последовательности этих генов, кодирующие сконструированные белки и каркасные белки для экспрессии в растениях, перечислены ниже в Таблице 5.
Таблица 5. Полинуклеотидных последовательностей,
сконструированные для использования в растениях, кодирующие каркасные и сконструированные инсектицидные белки.
Нуклеотидная SEQ ID NO.
БЕЛОК
ВАРИАНТ
CrylDal.nno
Отсутствует (каркасный белок)
CrylDal 2.nno
CrylDal+A2**
CrylDal 3.nno
CrylDal+Y316S+A2
CrylDal 4.nno
CrylDal+S374R+A2
CrylDal 5.nno
CrylDal+S374R+A2
CrylDal 6.nno
CrylDal+S282K Y316S I368P+A 2
CrylDal 7.nno
CrylDal+S282V Y316S I368P+A 2
TIC844 9.nno
TIC844+A2
TIC844 11.nno
TIC844+S282V Y316S I368P+A2
**0бозначение вариантов "А2" означает вставку остатка аланина в аминокислотное положении 2 по сравнению с нативной последовательностью для целей клонирования в экспрессионные векторы растений.
ПРИМЕР 5
Экспрессионные кассеты для экспрессии модифицированных инсектицидных белков в растениях
[0122] Данный пример иллюстрирует конструирование
экспрессионных кассет, содержащих полинуклеотидные
последовательности, сконструированные для использования в
растениях, кодирующие каркасные и сконструированные
инсектицидные белки.
[0123] Разнообразные растительные экспрессионные кассеты
были сконструированы с полинуклеотидной последовательностью,
кодирующей каркасные и сконструированные инсектицидные белки,
сконструированы для экспрессии в растениях, представлены в
Таблице 5. Такие экспрессионные кассеты могут быть использованы
для временной экспрессии в протопластах растений или
трансформации клеток растений. Типичные экспрессионные кассеты
были сконструированы с учетом возможного размещения белка в
клетке. Один набор экспрессионных кассет был разработан таким
образом, чтобы обеспечить трансляцию белка и его расположение в
цитозоле. Другой набор экспрессионных кассет был разработан для
получения транзитного пептида, смежного с белковым токсином, для
обеспечения ориентации на органеллы клетки, такие как хлоропласт
или пластида. Все экспрессионные кассеты были сконструированы,
чтобы начаться на 5'-конце с промотора, который может состоять
из нескольких промоторных элементов, энхансерных элементов или
других экспрессионных элементов, известных специалистам в данной
области техники, функционально связанных, для повышения
экспрессии трансгена. За промоторной последовательностью, как
правило, непрерывно следует одна или более лидерная
последовательность на З'-конце промотора. Интронная
последовательность, как правило, расположена на З'-конце лидерной
последовательности, для улучшения экспрессии трансгена. Последовательность, кодирующая токсин или транзитный пептид, и последовательность, кодирующая токсин, как правило, расположена на З'-конце функционально связанного промотора, лидера и интрона.
Последовательность З'-НТО, как правило, расположена, на З'-конце кодирующей последовательности для облегчения терминации транскрипции и обеспечения последовательности, важной для полиаденилирования получаемого транскрипта. Все элементы, описанные выше, были функционально связаны между собой и расположены последовательно, часто с дополнительными последовательностями, используемыми для конструирования экспрессионной кассеты. ПРИМЕР 6
Трансформационные векторы, содержащие экспрессионную кассету каркасного или сконструированного инсектицидного белка
[0124] Данный пример иллюстрирует включение каркасных или сконструированных инсектицидных белков в ткани растений.
[0125] Способы получения трансгенного растения, экспрессирующего сегмент нуклеиновой кислоты, кодирующий каркасный белок или сконструированный инсектицидный белок может быть осуществлен с использованием вариации способов, хорошо известных в данной области техники. В общем, способ включает преобразование пригодной клетки-хозяина с сегментом ДНК, который содержит промотор, функционально связанный с кодирующим участком, кодирующим один или более модифицированных инсектицидных белков или каркасных белков. Такой кодирующий участок, как правило, функционально связан с участком терминации транскрипции, причем промотор способен управлять транскрипцией кодирующего участка в клетке, и, следовательно, обеспечивает клетке способность продуцировать полипептид in vivo. Векторы, плазмиды, космиды, и сегменты ДНК, используемые в трансформации таких клеток, как правило, включают опероны гены или последовательности, полученные из генов, как нативные, так и полученные синтетически, в частности те, которые кодируют раскрытые сконструированные инсектицидные белки. Эти ДНК
конструкты могут дополнительно содержать структуры, такие как промоторы, энхансеры, полилинкеры или другие генные последовательности, которые могут регулировать деятельность конкретных искомых генов. Полученные трансгенные растения, части растений и клетки растений тестировали для определения экспрессии и биологической активности кодируемого белка.
[0126] Примеры способов, которые могут быть модифицированы для получения трансгенных растений, экспрессирующих белки, проявляющие активность в отношении чешуекрылых, включают описанные, например, белки CrylA (патент США № 5880275), CrylB (публикация заявки на патент США № 10/525318), CrylC (патент США № 6033874), химеры CrylA/F (патенты США № 7070982, 6962705 и 6713063), и белок Сгу2АЬ (патент США № 7064249). ПРИМЕР 7
Активность в отношении чешуекрылых сконструированного инсектицидного белка в стабильно трансформированной кукурузе
[0127] Данный пример иллюстрирует ингибиторную активность, проявляемую сконструированными инсектицидными белками в отношении чешуекрылых-вредителей, экспрессированными растениями кукурузы и предложенными в виде корма для соответствующих насекомых-вредителей.
[0128] R0 трансгенные растения кукурузы, экспрессирующие белки CrylDal и CrylDal_7.nno были получены с использованием векторов, содержащих экспрессионные кассеты, описанные в Примере 6. F1 трансгенные растения кукурузы были выращены из семян, полученных путем опыления соцветий с зародышевой плазмой коммерческих нетрансформированных растений дикого типа пыльцой от R0 трансформантов.
[0129] Трансформированные клетки индуцировали для образования растений при помощи способов, известных в данной области техники. Биотесты с использованием дисков из листьев растений были проведены аналогично тем, которые описаны в патенте США № 8344207. Нетрансформированное растение использовали для получения ткани для негативного контроля. Оценивали множество объектов трансформации для каждого бинарного вектора, и результаты были сведены в таблицу.
[0130] Инсектицидная активность трансгенных растений кукурузы, экспрессирующих белки CrylDal и CrylDal_7.nno в поколениях F1 и R0 приведена в Таблице б, в дополнении к инсектицидной активности трансгенных растений кукурузы, экспрессирующих белки CrylDal и CrylDal_7.nno на стадии F1 в полевых условиях. В частности, в Таблице б представлен профиль активности в отношении чешуекрылых для CrylDal_7.nno по сравнению с родительским каркасным белком CrylDal при тестировании против CEW, FAW и SWC. Как видно из Таблицы б, в отличие от CrylDal, CrylDal_7.nno демонстрирует активность против обоих CEW и FAW в R0 и F1 биотестах и F1 полевых испытания.
ПРИМЕР 8
Активность в отношении чешуекрылых у модифицированных инсектицидных белков в стабильно трансформированном хлопчатника
[0131] Данный пример иллюстрирует ингибиторную активность, проявляемую сконструированными инсектицидными белками в отношении чешуекрылых-вредителей, экспрессированными растениями хлопчатника и предложенными в виде корма для соответствующих насекомых-вредителей.
[0132] Растения хлопчатника, экспрессирующие белки
CrylDal_7.nno и TIC844_11.nno были получены с использованием
векторов, содержащих экспрессионные кассеты, описанные в Примере
б. Трансформированные клетки индуцировали для образования
растений при помощи способов, известных в данной области
техники. Ткань листьев хлопчатника использовали в биотесте,
описанном в Примере 7, и испытывали против CBW, F7AW, совки
табачной (TBW, Heliothis virescens) и SBL. В Таблице 7
представлена активность, наблюдаемая в отношении данных видов
чешуекрылых в стабильно трансформированном поколении Ro
хлопчатника. Как видно из Таблицы 7, CrylDal_7.nno и
TIC844_11.nno продемонстрировали активность в отношении двух или
более видов чешуекрылых-вредителей в стабильно
трансформированном поколении Ro хлопчатника.
Таблица 7. Биотест профиля активности CrylDal_7.nno и TIC844 11.nno экспрессированных в поколении Ro хлопчатника.
Токсин
CBW
FAW
TBW
SBL
CrylDal 7.nno (SEQ ID NO: 40)
TIC844 11.nno (SEQ ID NO: 44)
+ Активен в отношении видов насекомых; - Неактивен в отношении видов насекомых.
[0133] Выбранные объекты трансформации были использованы для получения Ri растений. Ri растения, экспрессирующие CrylDal_7.nno, анализировали на устойчивость к CBW, FAW и SBL. Ткани листа, бутона и коробочки использовали в биотестах, в дополнении к полевым испытаниям, проведенным в теплицах. В Таблице 8 продемонстрирована активность, наблюдаемую в данных тестах. Как показано в Таблице 8, CrylDal_7.nno продемонстрировал активность против CBW, FAW и SBL в биотестах и полевых испытаниях.
Таблица 8. Профиль инсектицидной активности CrylDal_7.nno экспрессированного в поколении Ri хлопчатника.
ПРИМЕР 9
Активность в отношении чешуекрылых у модифицированных инсектицидных белков в стабильно трансформированной сое
[0134] Данный пример иллюстрирует ингибиторную активность, проявляемую сконструированными инсектицидными белками в отношении чешуекрылых-вредителей, экспрессированными растениями сои и предложенными в виде корма для соответствующих насекомых-вредителей .
[0135] Растения сои, экспрессирующие белки CrylDal_7.nno, TIC844_9.nno и TIC844_11.nno были получены с использованием векторов, содержащих экспрессионные кассеты, описанные в Примере б. Ткань листа собирали и использовали в биотесте, как описано в Примере 7, или, в альтернативном варианте, лиофилизированную ткань использовали в рационе насекомых для биотестов. Биотест проводили в отношении различных видов чешуекрылых, в том числе SAW, SBL и совку кукурузную (SPW, Helicoverpa zea) . В Таблице 9 представлена активность, наблюдаемая в отношении данных чешуекрылых-вредителей в стабильно трансформированном поколении Ro сои. Как видно из Таблицы 9, CrylDal_7.nno и TIC844_11.nno продемонстрировали активность в отношении SPW, SAW и SBL. TIC844_9.nno (TIC844 плюс дополнительный аланин для клонирования) не продемонстрировали активность против SPW.
Таблица 9. Биотест профиля активности CrylDal_7.nno, TIC844_9.nno и TIC844_11.nno экспрессированных в поколении Ro сои.
Токсин
SPW
SAW
SBL
CrylDal 7.nno (SEQ ID NO: 40)
TIC844 11.nno (SEQ ID NO: 44)
TIC844 9.nno (SEQ ID NO: 42)
+ Активен в отношении видов насекомых; - Неактивен в отношении видов насекомых.
[0136] Выбранные объекты трансформации были использованы для получения Ri растений. Ri растения, экспрессирующие CrylDal_7.nno, анализировали на устойчивость к SAW, SBL, SPW и гусенице бархатных бобов (VBC, Anticarsia gemmatalis). Ткань листа собирали с растений поколения Ri и использовали в кормовом биотесте. В Таблице 10 продемонстрирована активность, наблюдаемую в данных тестах. Как показано в Таблице 10, CrylDal_7.nno продемонстрировал активность в отношении SPW, SAW и SBL.
Таблица 10. Биотест профиля активности CrylDal_7.nno, экспрессированного в поколении Ri сои.
Токсин
SPW
SAW
SBL
VBC
CrylDal 7.nno (SEQ ID NO: 40)
+Активен в отношении видов насекомых; - Неактивен в отношении видов насекомых.
[0137] В Таблице 11 представлены результаты полевых
испытаний, проведенных в теплицах на стабильно
трансформированных растениях сои поколения Ri, экспрессирующих
CrylDal_7.nno. Виды, использованные для заражения растений в
теплицах, включают совку черную (BLAW, Spodoptera cosmioides) ,
моль фасолевую (BSM, Crocidosema арогета), совку
южноамериканскую (SAPW, Helicoverpa gelotopoeon) , пяденицу подсолнечниковую (SFL, Rachiplusia пи) и VBC. В Таблице 11 продемонстрирована активность, наблюдаемую в данных тестах. Как показано в Таблице 11, CrylDal_7.nno продемонстрировал активность в отношении BLAW, SAPW и SFL.
Таблица 11. Профиль активности CrylDal_7.nno,
экспрессированного в поколении Ri сои протестированный в полевых испытаниях в теплице.
Токсин
BLAW
BSM
SAPW
SFL
VBC
CrylDal 7.nno (SEQ ID NO: 40)
+ Активен в отношении видов насекомых; - Неактивен в отношении видов насекомых.
[0138] Все композиции и способы, описанные и заявленные в настоящем документе, могут быть проведены и осуществлены без излишних экспериментов в свете настоящего описания. Хотя композиции настоящего изобретения были описаны с точки зрения вышеизложенных иллюстративных вариантов реализации, специалистам в данной области техники будет понятно, что варианты, изменения, модификации и перестройки могут быть применены к композиции, описанной в настоящем документе, без отступления от концепции, сущности и объема настоящего изобретения. Более конкретно, будет очевидно, что определенные агенты, которые схожи и химически, и физиологически, могут быть использованы вместо агентов, описанных в настоящем документе, достигая тех же или подобных результатов. Все такие аналогичные замены и модификации, очевидные специалистам в данной области техники, считаются не выходящими за пределы сущности, объема и концепции настоящего изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Monsanto Technology LLC Baum, James A Cerruti, Thomas Flasinski, Stanislaw Fu, Xiaoran Howe, Arlene R Salvador, Sara
<120> Белки Cry1Da1 с вариантами аминокислотной последовательности, обладающие активностью против чешуекрылых.
<130> P34223WO00/0022270.00078
<150> US 62/064994 <151> 2014-10-16
<150> US 62/065017 <151> 2014-10-17
<160> 44
<170> PatentIn версии 3.5
<210> 1 <211> 3498
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> misc_feature <222> (1)..(3498)
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая Cry1Da1, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 1
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttatgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920
gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980
ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280
gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340
gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400
gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460
acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520
cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580
gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640
acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700
tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760
catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820
atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880
attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940
gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000
gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060
aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120
ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180
aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240
gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300
aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360
tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420
aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480
ctccttatgg aggaatag 3498
<210> 2 <211> 1165 <212> ПРТ
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1165)
<223> Аминокислотная последовательность белка Cry1Da1.
<400> 2
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 3 <211> 3498 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая Cry1Da1_3, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 3
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgtagtgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920
gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980
ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280
gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340
gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400
gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460
acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520
cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580
gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640
acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700
tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760
catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820
atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880
attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940
gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000
gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060
aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120
ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180
aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240
gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300
aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360
tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420
aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480
ctccttatgg aggaatag 3498
<210> 4 <211> 1165
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_3.
<400> 4
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 5 <211> 3498 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая Cry1Da1_4, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 5
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttatgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatc gtaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920
gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980
ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280
gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340
gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400
gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460
acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520
cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580
gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640
acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700
tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760
catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820
atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880
attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940
gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000
gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060
aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120
ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180
aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240
gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300
aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360
tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420
aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta
3480
ctccttatgg aggaatag
3498
<210> 6 <211> 1165
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_4.
<400> 6
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Arg Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 7
<211> 3498
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая Cry1Da1_5, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 7
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tagaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920
gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980
ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280
gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340
gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400
gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460
acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520
cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580
gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640
acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700
tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760
catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820
atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880
attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940
gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000
gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060
aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120
ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180
aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240
gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300
aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360
tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420
aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480
ctccttatgg aggaatag 3498
<210> 8 <211> 1165
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка Cry1Da1_5.
<400> 8
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Arg
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 9 <211> 3498 <212>
ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая Cry1Da1_6, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 9
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 3 60
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaaaatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920
gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980
ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280
gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340
gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400
gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460
acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520
cacgcacgac tagggaatct agagtttctc gaagagaaac cattattagg agaagcacta 2580
gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg agagacaaac gcgaaacatt acaattggaa 2640
acaactatcg tttataaaga ggcaaaagaa tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa 2700
tatgatagat tacaagcgga tacgaacatc gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt 2760
catagaattc gagaagcgta tctgccggag ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct 2820
atttttgaag aattagaaga gcgtattttc actgcatttt ccctatatga tgcgagaaat 2880
attattaaaa atggcgattt caataatggc ttattatgct ggaacgtgaa agggcatgta 2940
gaggtagaag aacaaaacaa tcaccgttca gtcctggtta tcccagaatg ggaggcagaa 3000
gtgtcacaag aggttcgtgt ctgtccaggt cgtggctata tccttcgtgt tacagcgtac 3060
aaagagggat atggagaagg ttgcgtaacg atccatgaga tcgagaacaa tacagacgaa 3120
ctgaaattca acaactgtgt agaagaggaa gtatatccaa acaacacggt aacgtgtatt 3180
aattatactg cgactcaaga agaatatgag ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat 3240
gacgaagcct atggtaataa cccttccgta ccagctgatt atgcgtcagt ctatgaagaa 3300
aaatcgtata cagatagacg aagagagaat ccttgtgaat ctaacagagg atatggagat 3360
tacacaccac taccagctgg ttatgtaaca aaggaattag agtacttccc agagaccgat 3420
aaggtatgga ttgagattgg agaaacagaa ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta 3480
ctccttatgg aggaatag 3498
<210> 10 <211> 1165
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_6. <400> 10
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 11 <211> 3498
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая Cry1Da1_7, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 11
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcagtatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cgcaaaaggt ggtgaatgcc ctgtttacgt ctacaaacca actagggcta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caggtatcca atctagttgc gtgtttatcg 1920
gatgaatttt gtctggatga aaagagagaa ttgtccgaga aagttaaaca tgcaaagcga 1980
ctcagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttca gagggatcaa taggcaacca 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt actatccaag gaggagatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctacc gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttatc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgttacaatg caaaacacga aatagtaaat 2280
gtaccaggta caggaagttt atggcctctt tctgtagaaa atcaaattgg accttgtgga 2340
gaaccgaatc gatgcgcgcc acaccttgaa tggaatcctg atttacactg ttcctgcaga 2400
gacggggaaa aatgtgcaca tcattctcat catttctctt tggacattga tgttggatgt 2460
acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg gtgatattca agattaagac gcaagatggc 2520
cacgcacgac gctcgtgtga acaactatcg tatgatagat catagaattc atttttgaag attattaaaa gaggtagaag gtgtcacaag aaagagggat ctgaaattca aattatactg gacgaagcct aaatcgtata tacacaccac aaggtatgga ctccttatgg tagggaatct aaagagcgga tttataaaga tacaagcgga gagaagcgta aattagaaga atggcgattt aacaaaacaa aggttcgtgt atggagaagg acaactgtgt cgactcaaga atggtaataa cagatagacg taccagctgg ttgagattgg aggaatag agagtttctc gaaaaaatgg ggcaaaagaa tacgaacatc tctgccggag gcgtattttc caataatggc tcaccgttca ctgtccaggt ttgcgtaacg agaagaggaa agaatatgag cccttccgta aagagagaat ttatgtaaca agaaacagaa gaagagaaac agagacaaac tctgtagatg gcgatgattc ctgtctgtga actgcatttt ttattatgct gtcctggtta cgtggctata atccatgaga gtatatccaa ggtacgtaca ccagctgatt ccttgtgaat aaggaattag ggaacattca cattattagg gcgaaacatt ctttatttgt atgcggcaga ttccgggtgt ccctatatga ggaacgtgaa tcccagaatg tccttcgtgt tcgagaacaa acaacacggt cttctcgtaa atgcgtcagt ctaacagagg agtacttccc tcgtggacag agaagcacta acaattggaa aaactctcaa taaacgcgtt caatgcggct tgcgagaaat agggcatgta ggaggcagaa tacagcgtac tacagacgaa aacgtgtatt tcgaggatat ctatgaagaa atatggagat agagaccgat cgtggaatta
2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3498
<210> 12 <211> 1165
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_7. <400> 12
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 13 <211> 3420
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 13
atggagatca acaaccagaa ccagtgcgtc ccgtacaact gcctgagcaa ccctaaggag 60
atcatcctgg gtgaggaacg cctggagacc ggcaacaccg tagccgacat tagcctgggc 120
ctcatcaact tcctctacag caacttcgtg cccggcggtg gcttcatcgt gggcctcctg 180
gagcttatct ggggcttcat cggcccgtcc cagtgggaca tcttcctcgc ccagatcgag 240
caactgatca gccagcggat cgaggagttc gctaggaacc aggccatctc ccgcctggag 300
ggactctcca acctctacaa ggtgtacgtg cgcgcgttca gcgactggga gaaggacccg 360
accaacccgg ccctccgcga ggaaatgcgt atccagttca acgatatgaa ctcggccctc 420
atcaccgcca tcccgctctt ccgcgtgcag aactacgagg tggccctcct gtccgtgtac 480
gttcaagccg ccaacctcca cctctccatc ctccgcgacg tgagcgtgtt cggcgagcgc 540
tggggctacg acaccgccac catcaacaac cgctactccg acctcacctc cctcatccac 600
gtttacacca accactgcgt ggacacgtac aaccagggcc tccgccgcct ggagggccgc 660
ttcctctccg actggatcgt gtacaaccgc ttccgccgcc agctcaccat ctccgtcctg 720
gacatcgtcg ccttctttcc caactacgac atccgcacct accctatcca gaccgccacc 780
cagctcaccc gcgaggtcta cctcgacctc ccgttcatca acgagaacct cagcccggcc 840
gccagctacc cgaccttctc cgccgctgag tccgccatca ttcgcagccc gcacctcgtg 900
gacttcctca actccttcac catctacacc gactccctcg cccgctacgc ctactggggc 960
ggtcacctcg tgaactcctt ccgcaccggc accactacca acctcatccg cagcccgctc 1020
tacggccgcg agggcaacac cgagcgcccg gtgaccatca ccgccagccc gagcgtgccc 1080
atcttccgca ccctcagcta catcaccggc ctggacaaca gcaaccctgt ggcgggcatc 1140
gagggcgtgg agttccagaa caccatctcc aggagcatct accgcaagag cggccctatc 1200
gacagcttca gcgagctgcc tcctcaggac gccagcgtga gccctgccat cggctacagc 12 60
cacaggctgt gccacgccac cttcctggag cgcatcagcg gccctcgcat cgcgggcacc 1320
gtgttctcgt ggacccaccg cagcgcctct cctacgaacg aggtgtctcc tagtcgcatc 1380
acccagatcc cttgggtcaa ggcccacacc ctggctagtg gcgctagtgt catcaagggc 1440
cctggcttca ccggtggtga catcctgacc aggaactcta tgggcgagct gggcactctg 1500
agggtcactt tcactggccg cctgcctcag tcttactaca tccgcttccg ctacgctagt 1560
gtcgctaacc gctctggtac tttccgctac tctcagcctc cgtcttacgg tatctctttc 1620
cctaagacta tggacgctgg tgagcctctg accagtagga gcttcgctca cactactctg 1680
ttcactccta tcactttctc tagggctcag gaggagttcg acctgtacat ccagtctggt 1740
gtgtacatcg acaggatcga gttcatcccc gtgaccgcca cgttcgaggc cgagtacgac 1800
cttgagcgcg cccagaaggc tgtcaatgag ctcttcacgt ccagcaatca gatcggcctg 1860
aagaccgacg tcactgacta ccacatcgac caagtctcca acctcgtgga gtgcctctcc 1920
gatgagttct gcctcgacga gaagaaggag ctgtccgaga aggtgaagca tgccaagcgt 1980
ctcagcgacg agaggaatct cctccaggac cccaatttcc gcggcatcaa caggcagctc 2040
gaccgcggct ggcgcggcag caccgacatc acgatccagg gcggcgacga tgtgttcaag 2100
gagaactacg tgactctcct gggcactttc gacgagtgct accctaccta cttgtaccag 2160
aagatcgatg agtccaagct caaggcttac actcgctacc agctccgcgg ctacatcgaa 2220
gacagccaag acctcgagat ttacctgatc cgctacaacg ccaagcacga gaccgtcaac 2280
gtgcccggta ctggttccct ctggccgctg agcgccccca gcccgatcgg caagtgtgcc 2340
caccacagcc accacttctc cttggacatc gatgtgggct gcaccgacct gaacgaggac 2400
ctcggagtct gggtcatctt caagatcaag acccaggacg gccacgcgcg cctgggcaac 2460
ctggagttcc tcgaggagaa gcccctggtc ggtgaggctc tggccagggt caagagggct 2520
gagaagaagt ggagggacaa gcgcgagaag ctcgagtggg agaccaacat cgtttacaag 2580
gaggccaagg agagcgtcga cgccctgttc gtgaactccc agtacgaccg cctgcaggcc 2640
gacaccaaca tcgccatgat ccacgctgcc gacaagaggg tgcacagcat tcgcgaggcc 2700
tacctgcctg agctgtccgt gatccctggt gtgaacgctg ccatctttga ggagctggag 2760
ggccgcatct ttaccgcatt ctccctgtac gacgcccgca acgtgatcaa gaacggtgac 2820
ttcaacaatg gcctcagctg ctggaacgtc aagggccacg tggacgtcga ggaacagaac 2880
aaccaccgct ccgtcctggt cgtcccagag tgggaggctg aggtctccca agaggtccgc 2940
gtctgcccag gccgcggcta cattctcagg gtcaccgctt acaaggaggg ctacggtgag 3000
ggctgtgtga ccatccacga gatcgagaac aacaccgacg agcttaagtt ctccaactgc 3060
gtggaggagg aggtgtaccc aaacaacacc gttacttgca acgactacac cgccacccag 3120
gaggagtacg agggcaccta cacttccagg aacaggggct acgatggtgc ctacgagagc 3180
aacagcagcg ttcctgctga ctacgcttcc gcctacgagg agaaggccta cacggatggc 3240
cgcagggaca acccttgcga gagcaaccgc ggctacggcg actacactcc cctgcccgcc 3300
ggctacgtta ccaaggagct ggagtacttc ccggagactg acaaggtgtg gatcgagatc 3360
ggcgagaccg agggcacctt catcgtggac agcgtggagc tgctcctgat ggaggagtag 3420
<210> 14
<211> 1139
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность химерного белка TIC844.
<400> 14
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835 840 845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945 950 955 960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> <211> <212> 15
3420 ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844_2, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 15
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt cacatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggttaagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920
gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980
cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280
gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340
catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400
ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460
ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2 52 0
gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580
gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640
gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700
tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760
gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820
tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880
aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940
gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000
ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060
gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120
gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180
aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240
cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300
ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360
ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420
<210> 16 <211> 1139 <212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного химерного
белка TIC844_2. <400> 16
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser His Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Leu
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835 840 845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945 950 955 960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> 17 <211> 3420
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844_4, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 17
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgtagtgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920
gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980
cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280
gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340
catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400
ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460
ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2 52 0
gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580
gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640
gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700
tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760
gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820
tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880
aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940
gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000
ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060
gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120
gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180
aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240
cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300
ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360
ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420
<210> 18
<211> 1139
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного
химерного
белка TIC844_4.
<400> 18
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325
330
335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580
585
590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835
840
845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945 950 955 960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> 19 <211> 3420
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844_5, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 19
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaaaatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920
gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980
cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280
gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340
catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400
ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460
ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520
gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580
gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640
gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700
tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760
gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820
tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880
aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940
gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000
ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060
gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120
gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180
aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240
cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300
ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 33 60
ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420
<210> 20
<211> 1139
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного химерного
белка TIC844_5.
<400> 20
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835 840 845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945 950 955 960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> 21
<211> 3420
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844_6,
используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 21
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttatgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tattacaggc cttgacaatc gtaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920
gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980
cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280
gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340
catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400
ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460
ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520
gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580
gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640
gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700
tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760
gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820
tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880
aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940
gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000
ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060
gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120
gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180
aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240
cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300
ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360
ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420
<210> 22
<211> 1139
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного
химерного
белка TIC844_6.
<400> 22
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Arg Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835 840 845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945 950 955 960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> 23 <211> 3420
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844_7, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 23
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcaagctatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tagaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920
gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980
cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280
gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340
catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400
ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460
ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520
gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580
gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2 640
gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700
tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760
gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820
tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880
aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940
gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000
ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060
gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120
gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180
aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240
cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300
ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 3360
ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420
<210> 24
<211> 1139
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного
химерного
белка TIC844_7.
<400> 24
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Arg
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835 840 845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945 950 955 960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> 25 <211> 3420
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая TIC844_8, используемая для экспрессии в бактериальной клетке.
<400> 25
atggaaataa ataatcaaaa ccaatgtgtg ccttacaatt gtttaagtaa tcctaaggag 60
ataatattag gcgaggaaag gctagaaaca gggaatactg tagcagacat ttcattaggg 120
cttattaatt ttctatattc taattttgta ccaggaggag gatttatagt aggtttacta 180
gaattaatat ggggatttat agggccttcg caatgggata tttttttagc tcaaattgag 240
caattgatta gtcaaagaat agaagaattt gctaggaatc aggcaatttc aagattggag 300
gggctaagca atctttataa ggtctatgtt agagcgttta gcgactggga gaaagatcct 360
actaatcctg ctttaaggga agaaatgcgt atacaattta atgacatgaa tagtgctctc 420
ataacggcta ttccactttt tagagttcaa aattatgaag ttgctctttt atctgtatat 480
gttcaagccg caaacttaca tttatctatt ttaagggatg tttcagtttt cggagaaaga 540
tggggatatg atacagcgac tatcaataat cgctatagtg atctgactag ccttattcat 600
gtttatacta accattgtgt ggatacgtat aatcagggat taaggcgttt ggaaggtcgt 660
tttcttagcg attggattgt atataatcgt ttccggagac aattgacaat ttcagtatta 720
gatattgttg cgttttttcc aaattatgat attagaacat atccaattca aacagctact 780
cagctaacga gggaagtcta tctggattta ccttttatta atgaaaatct ttctcctgca 840
gcagtatatc caaccttttc agctgctgaa agtgctataa ttagaagtcc tcatttagta 900
gactttttaa atagctttac catttataca gatagtctgg cacgttctgc atattgggga 960
gggcacttgg taaattcttt ccgcacagga accactacta atttgataag atccccttta 1020
tatggaaggg aaggaaatac agagcgcccc gtaactatta ccgcatcacc tagcgtacca 1080
atatttagaa cactttcata tccaacaggc cttgacaatt caaatcctgt agctggaatc 1140
gagggagtgg aattccaaaa tactataagt agaagtatct atcgtaaaag cggtccaata 1200
gattctttta gtgaattacc acctcaagat gccagcgtat ctcctgcaat tgggtatagt 1260
caccgtttat gccatgcaac atttttagaa cggattagtg gaccaagaat agcaggcacc 1320
gtattttctt ggacacaccg tagtgccagc cctactaacg aagtaagtcc atctagaatt 1380
acacaaattc catgggtaaa ggcgcatact cttgcatctg gtgcctccgt cattaaaggt 1440
cctggattta caggtggaga tattctgact aggaatagta tgggcgagct ggggacctta 1500
cgagtaacct tcacaggaag attaccacaa agttattata tacgtttccg ttatgcttcg 1560
gtagcaaata ggagtggtac atttagatat tcacagccac cttcgtatgg aatttcattt 1620
ccaaaaacta tggacgcagg tgaaccacta acatctcgtt cgttcgctca tacaacactc 1680
ttcactccaa taaccttttc acgagctcaa gaagaatttg atctatacat ccaatcgggt 1740
gtttatatag atcgaattga atttataccg gttactgcaa catttgaggc agaatatgat 1800
ttagaaagag cacaaaaggc ggtgaatgag ctgtttactt cttccaatca aatcgggtta 1860
aaaacagatg tgacggatta tcatattgat caagtatcca atttagttga gtgtttatct 1920
gatgaatttt gtctggatga aaaaaaagaa ttgtccgaga aagtcaaaca tgcgaagcga 1980
cttagtgatg agcggaattt acttcaagat ccaaacttta gagggatcaa tagacaacta 2040
gaccgtggct ggagaggaag tacggatatt accatccaag gaggcgatga cgtattcaaa 2100
gagaattacg ttacgctatt gggtaccttt gatgagtgct atccaacgta tttatatcaa 2160
aaaatagatg agtcgaaatt aaaagcctat acccgttacc aattaagagg gtatatcgaa 2220
gatagtcaag acttagaaat ctatttaatt cgctacaatg ccaaacacga aacagtaaat 2280
gtgccaggta cgggttcctt atggccgctt tcagccccaa gtccaatcgg aaaatgtgcc 2340
catcattccc atcatttctc cttggacatt gatgttggat gtacagactt aaatgaggac 2400
ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag acgcaagatg gccatgcaag actaggaaat 2460
ctagaatttc tcgaagagaa accattagta ggagaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg 2520
gagaaaaaat ggagagacaa acgtgaaaaa ttggaatggg aaacaaatat tgtttataaa 2580
gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt gtaaactctc aatatgatag attacaagcg 2640
gataccaaca tcgcgatgat tcatgcggca gataaacgcg ttcatagcat tcgagaagct 2700
tatctgcctg agctgtctgt gattccgggt gtcaatgcgg ctatttttga agaattagaa 2760
gggcgtattt tcactgcatt ctccctatat gatgcgagaa atgtcattaa aaatggtgat 2820
tttaataatg gcttatcctg ctggaacgtg aaagggcatg tagatgtaga agaacaaaac 2880
aaccaccgtt cggtccttgt tgttccggaa tgggaagcag aagtgtcaca agaagttcgt 2940
gtctgtccgg gtcgtggcta tatccttcgt gtcacagcgt acaaggaggg atatggagaa 3000
ggttgcgtaa ccattcatga gatcgagaac aatacagacg aactgaagtt tagcaactgt 3060
gtagaagagg aagtatatcc aaacaacacg gtaacgtgta atgattatac tgcgactcaa 3120
gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt aatcgaggat atgacggagc ctatgaaagc 3180
aattcttctg taccagctga ttatgcatca gcctatgaag aaaaagcata tacagatgga 3240
cgaagagaca atccttgtga atctaacaga ggatatgggg attacacacc actaccagct 3300
ggctatgtga caaaagaatt agagtacttc ccagaaaccg ataaggtatg gattgagatc 33 60
ggagaaacgg aaggaacatt catcgtggac agcgtggaat tacttcttat ggaggaatag 3420
<210> 26
<211> 1139
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного химерного
белка TIC844_8.
<400> 26
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180
185
190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260 265 270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Pro
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435
440
445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515 520 525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val
595 600 605
Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser His
770 775 780
His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp
785 790 795 800
Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala
805 810 815
Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly Glu
820 825 830
Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg
835 840 845
Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu
850 855 860
Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala
865 870 875 880
Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Ser
885 890 895
Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn
900 905 910
Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser
915 920 925
Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly
930 935 940
Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn
945
950
955
960
Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser
965 970 975
Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr
980 985 990
Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile
995 1000 1005
Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu
1010 1015 1020
Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr Ala
1025 1030 1035
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1040 1045 1050
Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp Tyr
1055 1060 1065
Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Asp
1070 1075 1080
Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1085 1090 1095
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr
1100 1105 1110
Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile
1115 1120 1125
Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1130 1135
<210> 27 <211> 3498 <212>
ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 27
atggagatca acaaccagaa ccagtgcgtc ccgtacaact gcctgagcaa ccctaaggag 60
atcatcctgg gtgaggaacg cctggagacc ggcaacaccg tagccgacat tagcctgggc
120
ctcatcaact tcctctacag caacttcgtg cccggcggtg gcttcatcgt gggcctcctg 180
gagcttatct ggggcttcat cggcccgtcc cagtgggaca tcttcctcgc ccagatcgag 240
caactgatca gccagcggat cgaggagttc gctaggaacc aggccatctc ccgcctggag 300
ggactctcca acctctacaa ggtgtacgtg cgcgcgttca gcgactggga gaaggacccg 360
accaacccgg ccctccgcga ggaaatgcgt atccagttca acgatatgaa ctcggccctc 420
atcaccgcca tcccgctctt ccgcgtgcag aactacgagg tggccctcct gtccgtgtac 480
gttcaagccg ccaacctcca cctctccatc ctccgcgacg tgagcgtgtt cggcgagcgc 540
tggggctacg acaccgccac catcaacaac cgctactccg acctcacctc cctcatccac 600
gtttacacca accactgcgt ggacacgtac aaccagggcc tccgccgcct ggagggccgc 660
ttcctctccg actggatcgt gtacaaccgc ttccgccgcc agctcaccat ctccgtcctg 720
gacatcgtcg ccttctttcc caactacgac atccgcacct accctatcca gaccgccacc 780
cagctcaccc gcgaggtcta cctcgacctc ccgttcatca acgagaacct cagcccggcc 840
gccagctacc cgaccttctc cgccgctgag tccgccatca ttcgcagccc gcacctcgtg 900
gacttcctca actccttcac catctacacc gactccctcg cccgctacgc ctactggggc 960
ggtcacctcg tgaactcctt ccgcaccggc accactacca acctcatccg cagcccgctc 1020
tacggccgcg agggcaacac cgagcgcccg gtgaccatca ccgccagccc gagcgtgccc 1080
atcttccgca ccctcagcta catcaccggc ctggacaaca gcaaccctgt ggcgggcatc 1140
gagggcgtgg agttccagaa caccatctcc aggagcatct accgcaagag cggccctatc 1200
gacagcttca gcgagctgcc tcctcaggac gccagcgtga gccctgccat cggctacagc 1260
cacaggctgt gccacgccac cttcctggag cgcatcagcg gccctcgcat cgcgggcacc 1320
gtgttctcgt ggacccaccg cagcgcctct cctacgaacg aggtgtctcc tagtcgcatc 1380
acccagatcc cttgggtcaa ggcccacacc ctggctagtg gcgctagtgt catcaagggc 1440
cctggcttca ccggtggtga catcctgacc aggaactcta tgggcgagct gggcactctg 1500
agggtcactt tcactggccg cctgcctcag tcttactaca tccgcttccg ctacgctagt 1560
gtcgctaacc gctctggtac tttccgctac tctcagcctc cgtcttacgg tatctctttc 1620
cctaagacta tggacgctgg tgagcctctg accagtagga gcttcgctca cactactctg 1680
ttcactccta tcactttctc tagggctcag gaggagttcg acctgtacat ccagtctggt 1740
gtgtacatcg acaggatcga gttcatcccc gtgaccgcca cgttcgaggc cgagtacgac 1800
cttgagcgcg cccagaaggt ggtgaacgcc ctcttcacta gcactaacca gctaggcctg 1860
aagactgacg tgaccgacta ccacatcgac caagtgagca acctagtggc ctgcctctcc 1920
gacgagttct gcctcgacga gaagcgcgag ctgtccgaga aggtgaagca cgccaagcgc 1980
ctctccgacg agcgcaacct gctccaggac cccaacttca ggggcatcaa caggcagccc 2040
gaccgcggct ggcgcggctc caccgacatc accatccagg gcggtgacga cgtattcaag 2100
gagaactacg ttaccctccc cggcaccttc gacgagtgtt accccaccta cctctaccag 2160
aagatcgacg agtccaagct gaaggcctac acccgctacc agctccgcgg ctacatcgag 2220
gactcccagg acctggaaat ctacctcatc cgctacaacg ccaagcacga gatcgtgaac 2280
gtgcctggca ccggcagcct ctggcctctc agcgtggaga accagatcgg cccttgcggc 2340
gagcctaacc gctgcgcccc tcacctcgag tggaaccctg acctccactg ctcgtgcagg 2400
gacggcgaga agtgcgccca ccatagccac cacttctctc tggacatcga cgtgggctgc 2460
accgacctga acgaggacct gggcgtgtgg gttatcttca agatcaagac ccaggacggt 2520
cacgccaggc tgggtaacct ggagttcctt gaggaaaagc ctctgctggg tgaggccctg 2580
gccagggtca agagggctga gaagaaatgg agggataaga gggagaccct gcagctggag 2640
accactatcg tctacaagga ggctaaggag tctgtcgatg ctctgttcgt caactctcag 2700
tacgatagac tgcaagctga taccaacatc gctatgatcc acgctgcgga taagcgggtc 2760
caccggatcc gggaggctta ccttccggag ctttctgtca tcccgggtgt caacgctgcg 2820
atcttcgagg aacttgagga acggatcttc actgcgttta gtctttacga tgcgcggaac 2880
atcatcaaga acggggactt caacaatggt ctgctgtgct ggaacgtcaa gggtcatgtc 2940
gaggtcgagg aacaaaacaa tcatcgtagt gtccttgtca ttcctgagtg ggaggcggag 3000
gtctctcaag aggtccgtgt ttgcccgggg cgtgggtaca ttcttcgtgt tactgcgtac 3060
aaggaggggt acggggaggg gtgcgttact attcatgaga ttgagaacaa tactgatgag 3120
cttaagttca acaattgtgt tgaggaggag gtttacccga acaatactgt tacgtgcatc 3180
aactacacgg caacgcaaga ggaatacgag gggacgtaca cctcgcgtaa tagagggtat 3240
gatgaggcgt acggaaacaa cccgtcggtt ccagcagatt atgcctcggt ttatgaggag 3300
aagtcgtaca cggatagacg acgcgagaat ccatgtgagt caaatcgagg atacggagat 3360
tacacaccat taccagcagg atacgttaca aaggagttgg aatacttccc ggaaacagat 3420
aaagtttgga ttgaaatcgg agaaacagaa ggaacattca tcgtcgactc agtagaattg 3480
ttgttgatgg aagaatga 3498
<210> 28 <211> 1165 <212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность Cry1Da1, кодируемая синтетической последовательностью ДНК.
<400> 28
Met Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser Asn
35 40 45
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile Trp
50 55 60
Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile Glu
65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile
85 90 95
Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg Ala
100 105 110
Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu Glu
115 120 125
Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala Ile
130 135 140
Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser Val
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg Tyr
180 185 190
Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val Asp
195 200 205
Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser Asp
210 215 220
Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro Phe
260
265
270
Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser Ala
275 280 285
Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu Asn
290 295 300
Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp Gly
305 310 315 320
Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu Ile
325 330 335
Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val Thr
340 345 350
Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr Ile
355 360 365
Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val Glu
370 375 380
Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro Ile
385 390 395 400
Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro Ala
405 410 415
Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg Ile
420 425 430
Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser
435 440 445
Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile Pro
450 455 460
Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys Gly
465 470 475 480
Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly Glu
485 490 495
Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser Tyr
500 505 510
Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr Phe
515
520
525
Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr Met
530 535 540
Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr Leu
545 550 555 560
Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu Tyr
565 570 575
Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val Thr
580 585 590
Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val Val
595 600 605
Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val
610 615 620
Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu Ser
625 630 635 640
Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys
645 650 655
His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn
660 665 670
Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr
675 680 685
Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val
690 695 700
Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln
705 710 715 720
Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu Arg
725 730 735
Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr
740 745 750
Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp
755 760 765
Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn Arg
770 775 780
Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys Arg
785 790 795 800
Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile
805 810 815
Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile
820 825 830
Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu
835 840 845
Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys
850 855 860
Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu Glu
865 870 875 880
Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe
885 890 895
Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met
900 905 910
Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu
915 920 925
Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu
930 935 940
Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn
945 950 955 960
Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val
965 970 975
Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu
980 985 990
Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys
995 1000 1005
Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly
1010 1015 1020
Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn Thr
1025 1030 1035
Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro
1040 1045 1050
Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu Glu
1055 1060 1065
Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu Ala
1070 1075 1080
Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val Tyr
1085 1090 1095
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu
1100 1105 1110
Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr
1115 1120 1125
Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp
1130 1135 1140
Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val
1145 1150 1155
Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 29 <211> 3501
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 29
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc
420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcta cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860
ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920
tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980
cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040
cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100
aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160
cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220
gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280
aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340
ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400
agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460
tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2 52 0
ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580
ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640
gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700
cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 27 60
gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820
gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880
aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940
gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000
gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060
tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120
gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180
atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240
tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300
gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360
gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420
gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480
ttgttgttga tggaagaatg a 3501
<210> 30 <211> 1166
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность Cry1Da1,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 30
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Ile Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val
595 600 605
Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn
770 775 780
Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys
785 790 795 800
Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp
805 810 815
Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val
820 825 830
Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu
835 840 845
Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val
850 855 860
Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu
865 870 875 880
Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu
885 890 895
Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala
900 905 910
Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr
915 920 925
Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu
930 935 940
Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg
945 950 955 960
Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn
965 970 975
Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val
980 985 990
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val
995 1000 1005
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu
1010 1015 1020
Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn
1025 1030 1035
Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr
1040 1045 1050
Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu
1055 1060 1065
Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu
1070 1075 1080
Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val
1085 1090 1095
Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys
1100 1105 1110
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly
1115 1120 1125
Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val
1130 1135 1140
Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser
1145 1150 1155
Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 31
<211> 3501
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1_3
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 31
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860
ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920
tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980
cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040
cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100
aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160
cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220
gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280
aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340
ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400
agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460
tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520
ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580
ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640
gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700
cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 27 60
gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820
gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880
aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940
gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000
gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060
tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120
gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180
atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240
tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300
gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360
gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420
gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480
ttgttgttga tggaagaatg a 3501
<210> 32 <211> 1166
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_3,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 32
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Ile Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val
595 600 605
Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn
770 775 780
Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys
785 790 795 800
Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp
805 810 815
Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val
820 825 830
Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu
835 840 845
Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val
850 855 860
Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu
865 870 875 880
Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu
885 890 895
Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala
900 905 910
Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr
915 920 925
Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu
930 935 940
Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg
945 950 955 960
Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn
965 970 975
Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val
980 985 990
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val
995 1000 1005
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu
1010 1015 1020
Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn
1025 1030 1035
Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr
1040 1045 1050
Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu
1055 1060 1065
Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu
1070 1075 1080
Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val
1085 1090 1095
Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys
1100 1105 1110
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly
1115 1120 1125
Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val
1130 1135 1140
Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser
1145 1150 1155
Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 33
<211> 3501
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1_4
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 33
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcta cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acaggaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860
ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920
tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980
cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040
cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100
aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160
cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220
gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280
aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340
ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400
agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460
tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520
ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580
ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640
gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700
cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760
gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820
gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880
aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940
gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000
gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060
tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120
gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180
atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240
tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300
gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360
gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420
gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480
ttgttgttga tggaagaatg a 3501
<210> 34 <211> 1166
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_4,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 34
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115
120
125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Ile Thr Gly Leu Asp Asn Arg Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val
595 600 605
Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu
625
630
635
640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn
770 775 780
Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys
785 790 795 800
Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp
805 810 815
Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val
820 825 830
Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu
835 840 845
Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val
850 855 860
Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu
865 870 875 880
Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu
885
890
895
Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala
900 905 910
Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr
915 920 925
Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu
930 935 940
Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg
945 950 955 960
Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn
965 970 975
Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val
980 985 990
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val
995 1000 1005
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu
1010 1015 1020
Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn
1025 1030 1035
Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr
1040 1045 1050
Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu
1055 1060 1065
Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu
1070 1075 1080
Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val
1085 1090 1095
Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys
1100 1105 1110
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly
1115 1120 1125
Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val
1130 1135 1140
Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser
1145 1150 1155
Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 35 <211> 3501 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1_5
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 35
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctaccgcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860
ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920
tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980
cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040
cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100
aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160
cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220
gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280
aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340
ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400
agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460
tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520
ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580
ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640
gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700
cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760
gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820
gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880
aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940
gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000
gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060
tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120
gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180
atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg
3240
tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300
gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 33 60
gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420
gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480
ttgttgttga tggaagaatg a 3501
<210> 36 <211> 1166
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_5,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 36
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Arg Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val
595 600 605
Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn
770 775 780
Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys
785 790 795 800
Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp
805 810 815
Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val
820 825 830
Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu
835 840 845
Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val
850 855 860
Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu
865 870 875 880
Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu
885 890 895
Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala
900 905 910
Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr
915 920 925
Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu
930 935 940
Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg
945 950 955 960
Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn
965 970 975
Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val
980 985 990
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val
995 1000 1005
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu
1010 1015 1020
Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn
1025 1030 1035
Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr
1040 1045 1050
Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu
1055 1060 1065
Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu
1070 1075 1080
Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val
1085 1090 1095
Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys
1100 1105 1110
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly
1115 1120 1125
Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val
1130 1135 1140
Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser
1145 1150 1155
Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 37 <211> 3501 <212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1_6
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 37
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccaagt acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctaccccacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860
ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920
tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980
cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040
cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100
aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160
cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220
gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280
aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340
ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400
agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460
tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520
ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580
ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640
gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700
cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760
gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820
gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880
aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940
gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000
gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060
tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120
gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180
atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240
tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300
gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360
gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420
gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480
ttgttgttga tggaagaatg a
3501
<210> 38
<211> 1166
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка
Cry1Da1_6,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 38
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Lys Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Pro Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val
595 600 605
Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn
770 775 780
Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys
785 790 795 800
Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp
805 810 815
Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val
820 825 830
Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu
835 840 845
Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val
850 855 860
Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu
865 870 875 880
Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu
885 890 895
Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala
900 905 910
Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr
915 920 925
Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu
930 935 940
Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg
945 950 955 960
Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn
965 970 975
Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val
980 985 990
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val
995 1000 1005
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu
1010 1015 1020
Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn
1025 1030 1035
Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr
1040 1045 1050
Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu
1055 1060 1065
Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu
1070 1075 1080
Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val
1085 1090 1095
Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys
1100 1105 1110
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly
1115 1120 1125
Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val
1130 1135 1140
Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser
1145 1150 1155
Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 39
<211> 3501
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая Cry1Da1_7
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 39
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccgtct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctaccccacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggtggtgaac gccctcttca ctagcactaa ccagctaggc 1860
ctgaagactg acgtgaccga ctaccacatc gaccaagtga gcaacctagt ggcctgcctc 1920
tccgacgagt tctgcctcga cgagaagcgc gagctgtccg agaaggtgaa gcacgccaag 1980
cgcctctccg acgagcgcaa cctgctccag gaccccaact tcaggggcat caacaggcag 2040
cccgaccgcg gctggcgcgg ctccaccgac atcaccatcc agggcggtga cgacgtattc 2100
aaggagaact acgttaccct ccccggcacc ttcgacgagt gttaccccac ctacctctac 2160
cagaagatcg acgagtccaa gctgaaggcc tacacccgct accagctccg cggctacatc 2220
gaggactccc aggacctgga aatctacctc atccgctaca acgccaagca cgagatcgtg 2280
aacgtgcctg gcaccggcag cctctggcct ctcagcgtgg agaaccagat cggcccttgc 2340
ggcgagccta accgctgcgc ccctcacctc gagtggaacc ctgacctcca ctgctcgtgc 2400
agggacggcg agaagtgcgc ccaccatagc caccacttct ctctggacat cgacgtgggc 2460
tgcaccgacc tgaacgagga cctgggcgtg tgggttatct tcaagatcaa gacccaggac 2520
ggtcacgcca ggctgggtaa cctggagttc cttgaggaaa agcctctgct gggtgaggcc 2580
ctggccaggg tcaagagggc tgagaagaaa tggagggata agagggagac cctgcagctg 2640
gagaccacta tcgtctacaa ggaggctaag gagtctgtcg atgctctgtt cgtcaactct 2700
cagtacgata gactgcaagc tgataccaac atcgctatga tccacgctgc ggataagcgg 2760
gtccaccgga tccgggaggc ttaccttccg gagctttctg tcatcccggg tgtcaacgct 2820
gcgatcttcg aggaacttga ggaacggatc ttcactgcgt ttagtcttta cgatgcgcgg 2880
aacatcatca agaacgggga cttcaacaat ggtctgctgt gctggaacgt caagggtcat 2940
gtcgaggtcg aggaacaaaa caatcatcgt agtgtccttg tcattcctga gtgggaggcg 3000
gaggtctctc aagaggtccg tgtttgcccg gggcgtgggt acattcttcg tgttactgcg 3060
tacaaggagg ggtacgggga ggggtgcgtt actattcatg agattgagaa caatactgat 3120
gagcttaagt tcaacaattg tgttgaggag gaggtttacc cgaacaatac tgttacgtgc 3180
atcaactaca cggcaacgca agaggaatac gaggggacgt acacctcgcg taatagaggg 3240
tatgatgagg cgtacggaaa caacccgtcg gttccagcag attatgcctc ggtttatgag 3300
gagaagtcgt acacggatag acgacgcgag aatccatgtg agtcaaatcg aggatacgga 3360
gattacacac cattaccagc aggatacgtt acaaaggagt tggaatactt cccggaaaca 3420
gataaagttt ggattgaaat cggagaaaca gaaggaacat tcatcgtcga ctcagtagaa 3480
ttgttgttga tggaagaatg a 3501
<210> 40 <211> 1166 <212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного белка Cry1Da1_7
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 40
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Pro Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Val
595 600 605
Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Ala Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Val Glu Asn Gln Ile Gly Pro Cys Gly Glu Pro Asn
770 775 780
Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu His Cys Ser Cys
785 790 795 800
Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His Phe Ser Leu Asp
805 810 815
Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val
820 825 830
Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu
835 840 845
Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val
850 855 860
Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Thr Leu Gln Leu
865 870 875 880
Glu Thr Thr Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu
885 890 895
Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala
900 905 910
Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr
915 920 925
Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu
930 935 940
Glu Leu Glu Glu Arg Ile Phe Thr Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg
945 950 955 960
Asn Ile Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn
965 970 975
Val Lys Gly His Val Glu Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val
980 985 990
Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val
995 1000 1005
Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu
1010 1015 1020
Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asn Asn
1025 1030 1035
Thr Asp Glu Leu Lys Phe Asn Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr
1040 1045 1050
Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Ile Asn Tyr Thr Ala Thr Gln Glu
1055 1060 1065
Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly Tyr Asp Glu
1070 1075 1080
Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr Ala Ser Val
1085 1090 1095
Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys
1100 1105 1110
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly
1115 1120 1125
Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val
1130 1135 1140
Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser
1145 1150 1155
Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu 1160 1165
<210> 41
<211> 3423
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая TIC844
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 41
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60 gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc
180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccagct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcta cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctacatcacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggctgtcaat gagctcttca cgtccagcaa tcagatcggc 1860
ctgaagaccg acgtcactga ctaccacatc gaccaagtct ccaacctcgt ggagtgcctc 1920
tccgatgagt tctgcctcga cgagaagaag gagctgtccg agaaggtgaa gcatgccaag 1980
cgtctcagcg acgagaggaa tctcctccag gaccccaatt tccgcggcat caacaggcag 2040
ctcgaccgcg gctggcgcgg cagcaccgac atcacgatcc agggcggcga cgatgtgttc 2100
aaggagaact acgtgactct cctgggcact ttcgacgagt gctaccctac ctacttgtac 2160
cagaagatcg atgagtccaa gctcaaggct tacactcgct accagctccg cggctacatc 2220
gaagacagcc aagacctcga gatttacctg atccgctaca acgccaagca cgagaccgtc 2280
aacgtgcccg gtactggttc cctctggccg ctgagcgccc ccagcccgat cggcaagtgt 2340
gcccaccaca gccaccactt ctccttggac atcgatgtgg gctgcaccga cctgaacgag 2400
gacctcggag tctgggtcat cttcaagatc aagacccagg acggccacgc gcgcctgggc 2460
aacctggagt tcctcgagga gaagcccctg gtcggtgagg ctctggccag ggtcaagagg 2520
gctgagaaga agtggaggga caagcgcgag aagctcgagt gggagaccaa catcgtttac 2580
aaggaggcca aggagagcgt cgacgccctg ttcgtgaact cccagtacga ccgcctgcag 2640
gccgacacca acatcgccat gatccacgct gccgacaaga gggtgcacag cattcgcgag 2700
gcctacctgc ctgagctgtc cgtgatccct ggtgtgaacg ctgccatctt tgaggagctg 2760
gagggccgca tctttaccgc attctccctg tacgacgccc gcaacgtgat caagaacggt 2820
gacttcaaca atggcctcag ctgctggaac gtcaagggcc acgtggacgt cgaggaacag 2880
aacaaccacc gctccgtcct ggtcgtccca gagtgggagg ctgaggtctc ccaagaggtc 2940
cgcgtctgcc caggccgcgg ctacattctc agggtcaccg cttacaagga gggctacggt 3000
gagggctgtg tgaccatcca cgagatcgag aacaacaccg acgagcttaa gttctccaac 3060
tgcgtggagg aggaggtgta cccaaacaac accgttactt gcaacgacta caccgccacc 3120
caggaggagt acgagggcac ctacacttcc aggaacaggg gctacgatgg tgcctacgag 3180
agcaacagca gcgttcctgc tgactacgct tccgcctacg aggagaaggc ctacacggat 3240
ggccgcaggg acaacccttg cgagagcaac cgcggctacg gcgactacac tcccctgccc 3300
gccggctacg ttaccaagga gctggagtac ttcccggaga ctgacaaggt gtggatcgag 3360
atcggcgaga ccgagggcac cttcatcgtg gacagcgtgg agctgctcct gatggaggag 3420
tag 3423
<210> 42 <211> 1140
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность химерного белка TIC844,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2,
кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 42
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Ser Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Ile Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala
595 600 605
Val Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser
770 775 780
His His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu
785 790 795 800
Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His
805 810 815
Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly
820 825 830
Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys
835 840 845
Arg Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys
850 855 860
Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln
865 870 875 880
Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His
885 890 895
Ser Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val
900 905 910
Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe
915 920 925
Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn
930 935 940
Gly Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln
945 950 955 960
Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val
965 970 975
Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val
980 985 990
Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu
995 1000 1005
Ile Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu
1010 1015 1020
Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr
1025 1030 1035
Ala Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg
1040 1045 1050
Gly Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp
1055 1060 1065
Tyr Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg
1070 1075 1080
Asp Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro
1085 1090 1095
Leu Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu
1100 1105 1110
Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe
1115 1120 1125
Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
1130 1135 1140
<210> 43 <211> 3423 <212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Синтетическая последовательность ДНК, кодирующая TIC844_8
с дополнительным остатком аланина, встроенным в положение 2, предназначенная для экспрессии в растении.
<400> 43
atggctgaga tcaacaacca gaaccagtgc gtcccgtaca actgcctgag caaccctaag 60
gagatcatcc tgggtgagga acgcctggag accggcaaca ccgtagccga cattagcctg 120
ggcctcatca acttcctcta cagcaacttc gtgcccggcg gtggcttcat cgtgggcctc 180
ctggagctta tctggggctt catcggcccg tcccagtggg acatcttcct cgcccagatc 240
gagcaactga tcagccagcg gatcgaggag ttcgctagga accaggccat ctcccgcctg 300
gagggactct ccaacctcta caaggtgtac gtgcgcgcgt tcagcgactg ggagaaggac 360
ccgaccaacc cggccctccg cgaggaaatg cgtatccagt tcaacgatat gaactcggcc 420
ctcatcaccg ccatcccgct cttccgcgtg cagaactacg aggtggccct cctgtccgtg 480
tacgttcaag ccgccaacct ccacctctcc atcctccgcg acgtgagcgt gttcggcgag 540
cgctggggct acgacaccgc caccatcaac aaccgctact ccgacctcac ctccctcatc 600
cacgtttaca ccaaccactg cgtggacacg tacaaccagg gcctccgccg cctggagggc 660
cgcttcctct ccgactggat cgtgtacaac cgcttccgcc gccagctcac catctccgtc 720
ctggacatcg tcgccttctt tcccaactac gacatccgca cctaccctat ccagaccgcc 780
acccagctca cccgcgaggt ctacctcgac ctcccgttca tcaacgagaa cctcagcccg 840
gccgccgtct acccgacctt ctccgccgct gagtccgcca tcattcgcag cccgcacctc 900
gtggacttcc tcaactcctt caccatctac accgactccc tcgcccgcag cgcctactgg 960
ggcggtcacc tcgtgaactc cttccgcacc ggcaccacta ccaacctcat ccgcagcccg 1020
ctctacggcc gcgagggcaa caccgagcgc ccggtgacca tcaccgccag cccgagcgtg 1080
cccatcttcc gcaccctcag ctaccccacc ggcctggaca acagcaaccc tgtggcgggc 1140
atcgagggcg tggagttcca gaacaccatc tccaggagca tctaccgcaa gagcggccct 1200
atcgacagct tcagcgagct gcctcctcag gacgccagcg tgagccctgc catcggctac 1260
agccacaggc tgtgccacgc caccttcctg gagcgcatca gcggccctcg catcgcgggc 1320
accgtgttct cgtggaccca ccgcagcgcc tctcctacga acgaggtgtc tcctagtcgc 1380
atcacccaga tcccttgggt caaggcccac accctggcta gtggcgctag tgtcatcaag 1440
ggccctggct tcaccggtgg tgacatcctg accaggaact ctatgggcga gctgggcact 1500
ctgagggtca ctttcactgg ccgcctgcct cagtcttact acatccgctt ccgctacgct 1560
agtgtcgcta accgctctgg tactttccgc tactctcagc ctccgtctta cggtatctct 1620
ttccctaaga ctatggacgc tggtgagcct ctgaccagta ggagcttcgc tcacactact 1680
ctgttcactc ctatcacttt ctctagggct caggaggagt tcgacctgta catccagtct 1740
ggtgtgtaca tcgacaggat cgagttcatc cccgtgaccg ccacgttcga ggccgagtac 1800
gaccttgagc gcgcccagaa ggctgtcaat gagctcttca cgtccagcaa tcagatcggc 1860
ctgaagaccg acgtcactga ctaccacatc gaccaagtct ccaacctcgt ggagtgcctc 1920
tccgatgagt tctgcctcga cgagaagaag gagctgtccg agaaggtgaa gcatgccaag 1980
cgtctcagcg acgagaggaa tctcctccag gaccccaatt tccgcggcat caacaggcag 2040
ctcgaccgcg gctggcgcgg cagcaccgac atcacgatcc agggcggcga cgatgtgttc 2100
aaggagaact acgtgactct cctgggcact ttcgacgagt gctaccctac ctacttgtac 2160
cagaagatcg atgagtccaa gctcaaggct tacactcgct accagctccg cggctacatc 2220
gaagacagcc aagacctcga gatttacctg atccgctaca acgccaagca cgagaccgtc 2280
aacgtgcccg gtactggttc cctctggccg ctgagcgccc ccagcccgat cggcaagtgt 2340
gcccaccaca gccaccactt ctccttggac atcgatgtgg gctgcaccga cctgaacgag 2400
gacctcggag tctgggtcat cttcaagatc aagacccagg acggccacgc gcgcctgggc 2460
aacctggagt tcctcgagga gaagcccctg gtcggtgagg ctctggccag ggtcaagagg 2520
gctgagaaga agtggaggga caagcgcgag aagctcgagt gggagaccaa catcgtttac 2580
aaggaggcca aggagagcgt cgacgccctg ttcgtgaact cccagtacga ccgcctgcag 2640
gccgacacca acatcgccat gatccacgct gccgacaaga gggtgcacag cattcgcgag 2700
gcctacctgc ctgagctgtc cgtgatccct ggtgtgaacg ctgccatctt tgaggagctg 2760
gagggccgca tctttaccgc attctccctg tacgacgccc gcaacgtgat caagaacggt 2820
gacttcaaca atggcctcag ctgctggaac gtcaagggcc acgtggacgt cgaggaacag 2880
aacaaccacc gctccgtcct ggtcgtccca gagtgggagg ctgaggtctc ccaagaggtc 2940
cgcgtctgcc caggccgcgg ctacattctc agggtcaccg cttacaagga gggctacggt 3000
gagggctgtg tgaccatcca cgagatcgag aacaacaccg acgagcttaa gttctccaac 3060
tgcgtggagg aggaggtgta cccaaacaac accgttactt gcaacgacta caccgccacc 3120
caggaggagt acgagggcac ctacacttcc aggaacaggg gctacgatgg tgcctacgag 3180
agcaacagca gcgttcctgc tgactacgct tccgcctacg aggagaaggc ctacacggat 3240
ggccgcaggg acaacccttg cgagagcaac cgcggctacg gcgactacac tcccctgccc 3300
gccggctacg ttaccaagga gctggagtac ttcccggaga ctgacaaggt gtggatcgag 3360
atcggcgaga ccgagggcac cttcatcgtg gacagcgtgg agctgctcct gatggaggag 3420
tag 3423
<210> 44
<211> 1140
<212> ПРТ
<213> Искусственная
<220>
<223> Аминокислотная последовательность модифицированного инсектицидного химерного белка TIC844_8,
в котором дополнительный остаток аланина встроен в положение 2, кодируемого синтетической последовательностью ДНК.
<400> 44
Met Ala Glu Ile Asn Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
1 5 10 15
Ser Asn Pro Lys Glu Ile Ile Leu Gly Glu Glu Arg Leu Glu Thr Gly
20 25 30
Asn Thr Val Ala Asp Ile Ser Leu Gly Leu Ile Asn Phe Leu Tyr Ser
35 40 45
Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Ile Val Gly Leu Leu Glu Leu Ile
50 55 60
Trp Gly Phe Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ile Phe Leu Ala Gln Ile
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Lys Val Tyr Val Arg
100 105 110
Ala Phe Ser Asp Trp Glu Lys Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Ile Thr Ala
130 135 140
Ile Pro Leu Phe Arg Val Gln Asn Tyr Glu Val Ala Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Ile Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
Val Phe Gly Glu Arg Trp Gly Tyr Asp Thr Ala Thr Ile Asn Asn Arg
180 185 190
Tyr Ser Asp Leu Thr Ser Leu Ile His Val Tyr Thr Asn His Cys Val
195 200 205
Asp Thr Tyr Asn Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Gly Arg Phe Leu Ser
210 215 220
Asp Trp Ile Val Tyr Asn Arg Phe Arg Arg Gln Leu Thr Ile Ser Val
225 230 235 240
Leu Asp Ile Val Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Ile Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
Ile Gln Thr Ala Thr Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Leu Asp Leu Pro
260 265 270
Phe Ile Asn Glu Asn Leu Ser Pro Ala Ala Val Tyr Pro Thr Phe Ser
275 280 285
Ala Ala Glu Ser Ala Ile Ile Arg Ser Pro His Leu Val Asp Phe Leu
290 295 300
Asn Ser Phe Thr Ile Tyr Thr Asp Ser Leu Ala Arg Ser Ala Tyr Trp
305 310 315 320
Gly Gly His Leu Val Asn Ser Phe Arg Thr Gly Thr Thr Thr Asn Leu
325 330 335
Ile Arg Ser Pro Leu Tyr Gly Arg Glu Gly Asn Thr Glu Arg Pro Val
340 345 350
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Ser Val Pro Ile Phe Arg Thr Leu Ser Tyr
355 360 365
Pro Thr Gly Leu Asp Asn Ser Asn Pro Val Ala Gly Ile Glu Gly Val
370 375 380
Glu Phe Gln Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ile Tyr Arg Lys Ser Gly Pro
385 390 395 400
Ile Asp Ser Phe Ser Glu Leu Pro Pro Gln Asp Ala Ser Val Ser Pro
405 410 415
Ala Ile Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Leu Glu Arg
420 425 430
Ile Ser Gly Pro Arg Ile Ala Gly Thr Val Phe Ser Trp Thr His Arg
435 440 445
Ser Ala Ser Pro Thr Asn Glu Val Ser Pro Ser Arg Ile Thr Gln Ile
450 455 460
Pro Trp Val Lys Ala His Thr Leu Ala Ser Gly Ala Ser Val Ile Lys
465 470 475 480
Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Thr Arg Asn Ser Met Gly
485 490 495
Glu Leu Gly Thr Leu Arg Val Thr Phe Thr Gly Arg Leu Pro Gln Ser
500 505 510
Tyr Tyr Ile Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Val Ala Asn Arg Ser Gly Thr
515 520 525
Phe Arg Tyr Ser Gln Pro Pro Ser Tyr Gly Ile Ser Phe Pro Lys Thr
530 535 540
Met Asp Ala Gly Glu Pro Leu Thr Ser Arg Ser Phe Ala His Thr Thr
545 550 555 560
Leu Phe Thr Pro Ile Thr Phe Ser Arg Ala Gln Glu Glu Phe Asp Leu
565 570 575
Tyr Ile Gln Ser Gly Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe Ile Pro Val
580 585 590
Thr Ala Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala
595 600 605
Val Asn Glu Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp
610 615 620
Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu
625 630 635 640
Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Lys Glu Leu Ser Glu Lys Val
645 650 655
Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro
660 665 670
Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Leu Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser
675 680 685
Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr
690 695 700
Val Thr Leu Leu Gly Thr Phe Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr
705 710 715 720
Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Gln Leu
725 730 735
Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg
740 745 750
Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu
755 760 765
Trp Pro Leu Ser Ala Pro Ser Pro Ile Gly Lys Cys Ala His His Ser
770 775 780
His His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu
785 790 795 800
Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His
805 810 815
Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Val Gly
820 825 830
Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys
835 840 845
Arg Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys
850 855 860
Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln
865 870 875 880
Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His
885 890 895
Ser Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val
900 905 910
Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Phe
915 920 925
Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn
930 935 940
Gly Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln
945 950 955 960
Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val
965 970 975
Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val
980 985 990
Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu
995 1000 1005
Ile Glu Asn Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu
1010 1015 1020
Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asp Tyr Thr
1025 1030 1035
Ala Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg
1040 1045 1050
Gly Tyr Asp Gly Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val Pro Ala Asp
1055 1060 1065
Tyr Ala Ser Ala Tyr Glu Glu Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Arg Arg
1070 1075 1080
Asp Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro
1085 1090 1095
Leu Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu
1100 1105 1110
Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe
1115 1120 1125
Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
1130 1135 1140
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Сконструированный инсектицидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID N0: 44, отличающийся тем, что сконструированный инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность против видов насекомых отряда Lepidoptera.
2. Сконструированный инсектицидный белок по п. 1, отличающийся тем, что виды отряда Lepidoptera выбраны из группы, состоящей из родов Spodoptera и Helicoverpa.
3. Сконструированный инсектицидный белок по п. 1, отличающийся тем, что виды отряда Lepidoptera выбраны из группы, состоящей из видов Helicoverpa zea и Spodoptera frugiperda.
4. Полинуклеотид, кодирующий сконструированный инсектицидный белок, причем полинуклеотид функционально связан с гетерологичным промотором, а сконструированный инсектицидный белок содержит аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID N0: 44, где сконструированный инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность против видов насекомых отряда Lepidoptera.
5. Полинуклеотид, кодирующий сконструированный инсектицидный белок, отличающийся тем, что полинуклеотид содержит SEQ ID N0: 43, где сконструированный инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность против видов насекомых отряда Lepidoptera.
6. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид, представленный SEQ ID N0: 43, причем клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактериальной клетки-хозяина или растительной клетки-хозяина.
7. Клетка-хозяин по п. б, отличающаяся тем, что выбрана из группы, состоящей из Agrobacteriumr Rhizobium, Bacillus, Brevibacillus, Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, и Erwinia.
8. Клетка-хозяин по п. б, отличающаяся тем, что растительная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из однодольных и двудольных растений.
9. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в
отношении насекомых, содержащая сконструированную инсектицидный
белок, содержащий аминокислотную последовательность,
представленную SEQ ID N0: 44, где сконструированный инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность против видов насекомых отряда Lepidoptera.
10. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых по п. 9, дополнительно содержащая по меньшей мере один агент, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых, отличный от сконструированного инсектицидного белка, выбранный из группы, состоящей из белка, обладающего ингибирующей активностью в отношении насекомых, и молекулы дцРНК, обладающей ингибирующей активностью в отношении насекомых.
11. Композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении насекомых по п. 10, отличающаяся тем, что по меньшей мере один другой пестицидный агент проявляет активность в отношении одного или более видов вредителей отрядов Lepidoptera, Coleoptera, Hemiptera, Homoptera или Thysanoptera.
12. Семя, содержащее ингибирующе эффективное в отношении насекомых количество:
a. сконструированного инсектицидного белка, содержащего
аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID N0: 44;
или
b. полинуклеотид, представленный SEQ ID N0: 43; и,
где сконструированный инсектицидный белок проявляет ингибирующую активность против видов насекомых отряда Lepidoptera.
13. Способ борьбы с чешуекрылым-вредителем, включающий приведение в контакт чешуекрылого-вредителя с ингибирующим количеством сконструированного инсектицидного белка по п. 1.
14. Трансгенное растение или часть растения, содержащие сконструированный инсектицидный белок по п. 1.
15. Способ борьбы с чешуекрылым-вредителем, включающий воздействие трансгенным растением или частью растения по п. 14 на вредителя, причем клетка растения, растение или часть растения экспрессируют ингибирующее в отношении чешуекрылых количество сконструированного инсектицидного белка.
13.
16. Способ получения семени, содержащего сконструированный инсектицидный белок по п. 1, включающий:
a. посадку по меньшей мере одного семени, содержащего сконструированный инсектицидный белок по п. 1;
b. выращивание растений из указанных семян; и
c. сбор семени от указанных растений, причем указанное собранное семя содержит сконструированный инсектицидный белок по п. 1.
По доверености
1/1
значения МИК
10000
3281,7
50Х
1000
100
247,6
29,5
62,6
1 •
Т1С844 ПС844 8 Т1С844 Т1С844 8
Union City
Benzon
ФИГ. 1
Electronic data base oonaurted during the international search (name ot data base and, where practicable, search terms used)
EPO-Internal, WPI Data, BIOSIS, EMBASE, EMBL, Sequence Search, CHEM ABS Data
Special categories of cited documents :
"A" document defining the general state of (heart which ia not considered to be of particular relevance
'?' earlier application or patent but published on or after the internationnl filing date
V document which may throw doubts on priority ctaim(s) or which is oitedto establish the publication date of another citation or other special reason (as specified)
"O" document referring to an oral disclosure, use, exhibition or other means
P' doournent published prior to the international tiling date but later than the priority date claimed
"7" later document published after the international filing data or priority date and not in conflict with the application but ofted to understand the principle or theory underlying the invention
"X* document of particular relevance; the claimed invention cannot be considered novel or cannot be considered to Involve an inventive step when the document is taken atone
"V* or.,.--.; merit of particu lar relevance; the olaimed invention cannot be considered to involve an inventive step when the document is combined with one or more other suoh doournenta, suoh combination being obvious to a person skilled in the art
"5" document member of the same patent family
Date of the actual completion of the international search
7 June 2016
Date of mailing of the international search report
20/06/2016
Name and mailing address of the ISA/
European Patent Office, P.B. 5818 Patenllaan 2
№•2280 HV Rijswijk
Tel. (+31-70) 340-2040, Fax: (+31-70) 340-3016
Authorized officer
Bucka, Alexander
Foim PCT/ISA/210 jsecond sheel) (April ZOOS!
INTERNATIONAL SEARCH REPORT
International application No
PCT/US2015/055779
<220>
<220>
<220>
<220>
page i of 4
page i of 4
page i of 4
page i of 4
page i of 4
page i of 4
page 3 of 4
page 3 of 4
page 3 of 4
page 3 of 4
|
